CN117695300A - 一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用 - Google Patents
一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117695300A CN117695300A CN202311645883.7A CN202311645883A CN117695300A CN 117695300 A CN117695300 A CN 117695300A CN 202311645883 A CN202311645883 A CN 202311645883A CN 117695300 A CN117695300 A CN 117695300A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cgs21680
- yap
- adenosine
- corneal
- hours
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 4
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 title abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 4
- 101000759453 Homo sapiens YY1-associated protein 1 Proteins 0.000 claims abstract description 83
- 102100023267 YY1-associated protein 1 Human genes 0.000 claims abstract description 83
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims abstract description 44
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 26
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 claims abstract description 22
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 claims abstract description 22
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims abstract description 15
- 101000597045 Homo sapiens Transcriptional enhancer factor TEF-3 Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102100035148 Transcriptional enhancer factor TEF-3 Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 208000022873 Ocular disease Diseases 0.000 claims abstract description 7
- PAOANWZGLPPROA-RQXXJAGISA-N CGS-21680 Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C(=O)NCC)O[C@H]1N1C2=NC(NCCC=3C=CC(CCC(O)=O)=CC=3)=NC(N)=C2N=C1 PAOANWZGLPPROA-RQXXJAGISA-N 0.000 claims description 125
- 210000003560 epithelium corneal Anatomy 0.000 claims description 35
- 208000028006 Corneal injury Diseases 0.000 claims description 12
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 7
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 claims description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 32
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 12
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 abstract description 10
- 238000013508 migration Methods 0.000 abstract description 8
- 230000005012 migration Effects 0.000 abstract description 7
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000030648 nucleus localization Effects 0.000 abstract description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 abstract description 3
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 abstract description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 46
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 34
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 28
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 24
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 21
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 20
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 19
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 15
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 14
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 12
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 10
- 230000009841 epithelial lesion Effects 0.000 description 9
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 8
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 8
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 7
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 7
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 7
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 7
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 7
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 5
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 5
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 5
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 5
- 230000008378 epithelial damage Effects 0.000 description 5
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 5
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 4
- 101150090155 R gene Proteins 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 230000004410 intraocular pressure Effects 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 4
- 108700026215 vpr Genes Proteins 0.000 description 4
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 3
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 3
- GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N Levofloxacin Chemical compound C([C@@H](N1C2=C(C(C(C(O)=O)=C1)=O)C=C1F)C)OC2=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N Procaine hydrochloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 HCBIBCJNVBAKAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940020947 fluorescein sodium Drugs 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 3
- 229960003376 levofloxacin Drugs 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 229960001309 procaine hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 3
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N tribromoethanol Chemical compound OCC(Br)(Br)Br YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229950004616 tribromoethanol Drugs 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- WUCQGGOGHZRELS-LSCFUAHRSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-[6-amino-2-[2-(4-chlorophenyl)ethoxy]purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound N=1C=2N([C@H]3[C@@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C=NC=2C(N)=NC=1OCCC1=CC=C(Cl)C=C1 WUCQGGOGHZRELS-LSCFUAHRSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010011026 Corneal lesion Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 101000658547 Escherichia coli (strain K12) Type I restriction enzyme EcoKI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000658543 Escherichia coli Type I restriction enzyme EcoAI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000658546 Escherichia coli Type I restriction enzyme EcoEI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000658530 Escherichia coli Type I restriction enzyme EcoR124II endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000658540 Escherichia coli Type I restriction enzyme EcoprrI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000658545 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Type I restriction enyme HindI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 101000658548 Methanocaldococcus jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM 10045 / NBRC 100440) Putative type I restriction enzyme MjaIXP endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000658542 Methanocaldococcus jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM 10045 / NBRC 100440) Putative type I restriction enzyme MjaVIIIP endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000658529 Methanocaldococcus jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM 10045 / NBRC 100440) Putative type I restriction enzyme MjaVIIP endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 101001042773 Staphylococcus aureus (strain COL) Type I restriction enzyme SauCOLORF180P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000838760 Staphylococcus aureus (strain MRSA252) Type I restriction enzyme SauMRSORF196P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000838761 Staphylococcus aureus (strain MSSA476) Type I restriction enzyme SauMSSORF170P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000838758 Staphylococcus aureus (strain MW2) Type I restriction enzyme SauMW2ORF169P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101001042566 Staphylococcus aureus (strain Mu50 / ATCC 700699) Type I restriction enzyme SauMu50ORF195P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000838763 Staphylococcus aureus (strain N315) Type I restriction enzyme SauN315I endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000838759 Staphylococcus epidermidis (strain ATCC 35984 / RP62A) Type I restriction enzyme SepRPIP endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000838756 Staphylococcus saprophyticus subsp. saprophyticus (strain ATCC 15305 / DSM 20229 / NCIMB 8711 / NCTC 7292 / S-41) Type I restriction enzyme SsaAORF53P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000017945 hippo signaling cascade Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000001477 Deubiquitinating Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010093668 Deubiquitinating Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 230000004655 Hippo pathway Effects 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100040396 Transcobalamin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710124861 Transcobalamin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007711 cytoplasmic localization Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- NJDNXYGOVLYJHP-UHFFFAOYSA-L disodium;2-(3-oxido-6-oxoxanthen-9-yl)benzoate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC(=O)C=C2OC2=CC([O-])=CC=C21 NJDNXYGOVLYJHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 230000007275 epithelial homeostasis Effects 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000003137 locomotive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 108091006108 transcriptional coactivators Proteins 0.000 description 1
- 230000004143 urea cycle Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- ZQFGRJWRSLZCSQ-ZSFNYQMMSA-N verteporfin Chemical compound C=1C([C@@]2([C@H](C(=O)OC)C(=CC=C22)C(=O)OC)C)=NC2=CC(C(=C2C=C)C)=NC2=CC(C(=C2CCC(O)=O)C)=NC2=CC2=NC=1C(C)=C2CCC(=O)OC ZQFGRJWRSLZCSQ-ZSFNYQMMSA-N 0.000 description 1
- 229960003895 verteporfin Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用，其特征在于：所述医药组合物包含腺苷A2A受体的激动剂。与现有技术相比，本发明的优点在于：揭示了在角膜上皮细胞内，腺苷A2A受体的激动剂通过激活腺苷A2A受体，从而促进YAP蛋白的去磷酸化和细胞核定位，进而激活YAP通路；YAP通路被激活后，下游的TEAD4表达上调，从而促进细胞的增殖和迁移；本发明揭示了腺苷A2A受体的激动剂促进角膜上皮细胞增殖的机理，为腺苷A2A受体的激动剂提供一种新的、在治疗眼部疾病中的应用途径。
Description
技术领域
本发明涉及医药生物技术领域，具体涉及一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用。
背景技术
腺苷A2A受体(缩写为A2AR)是重要的药物靶点，腺苷A2A受体的拮抗剂可用于治疗帕金森病(2019年美国FDA批准)，并且用于肿瘤治疗的多项临床试验。
腺苷A2A受体的激动剂也可用于治疗疾病，如Montesinoset报道的腺苷A2A受体的激动剂CGS21680可显著提高非糖尿病大鼠和糖尿病大鼠皮肤的伤口愈合速度；另有研究发现腺苷A2A受体的激动剂CGS21680和MRE0094比对照组和贝卡普勒明(becablermin，用于治疗人类愈合不良伤口的人血小板衍生生长因子)凝胶更快速地促进损伤修复(VictorVega，Desai，Montesinos，&Cronstein，2002)；此外，还有研究采用凝胶包裹的MRE0094治疗糖尿病性足溃疡，遗憾的是，该研究由于2期临床试验注册人数不足而被终止。如一申请号为201610729571.8(公布号CN106377540A)的中国发明专利申请公开了腺苷A2A受体激动剂CGS21680可以缓解亨廷顿舞蹈症(Huntington’sdisease)的症状，并且，CGS21680已被证实可以通过增强泛素蛋白酶系统(ubiquitin-proteasome system)的活性来解决亨廷顿舞蹈症中尿素循环缺陷的问题。
然而目前腺苷A2A受体的激动剂在治疗眼部疾病，特别是角膜损伤修复中的作用尚未见报道；并且在上述专利申请中还公开了CGS21680除了既有的副作用外，更会引发免疫抑制作用，因此并不适合于临床上的运用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用，其特征在于：所述医药组合物包含腺苷A2A受体的激动剂。
优选地，所述腺苷A2A受体的激动剂为CGS21680。腺苷A2A受体的激动剂有多种，根据本发明揭示的机理，只要是能激活腺苷A2A受体的物质均有实现上述应用的可能。
优选地，所述眼部疾病包含角膜损伤。可采用局部、外用给药的方式治疗角膜损伤，而如此可以降低CGS21680的免疫抑制等副作用。
优选地，所述CGS21680通过激活YAP信号通路来促进角膜上皮的生长。
优选地，所述CGS21680通过激活YAP信号通路来增加TEAD4表达以促进角膜上皮的生长。
为了便于使用，所述医药组合物为液体制剂。
优选地，所述液体制剂中CGS21680的浓度为10～200nM。
优选地，所述液体制剂中CGS21680的浓度为100nM。
与现有技术相比，本发明的优点在于：揭示了在角膜上皮细胞内，腺苷A2A受体的激动剂通过激活腺苷A2A受体，从而促进YAP蛋白的去磷酸化和细胞核定位，进而激活YAP通路；YAP通路被激活后，下游的TEAD4表达上调，从而促进细胞的增殖和迁移；本发明揭示了腺苷A2A受体的激动剂促进角膜上皮细胞增殖的机理，为腺苷A2A受体的激动剂提供一种新的、在治疗眼部疾病中的应用途径。
附图说明
图1A为本发明实施例1中小鼠角膜上皮组织中A2AR免疫荧光染色的结果图；
图1B为本发明实施例1中小鼠角膜未损伤、损伤36小时和损伤96小时状态下角膜上皮组织中A2AR的mRNA表达的结果图；
图1C为本发明实施例1中小鼠角膜未损伤、损伤36小时和损伤96小时状态下角膜上皮组织中A2AR的蛋白表达的结果图；
图1D为本发明实施例1中小鼠角膜未损伤、损伤36小时和损伤96小时状态下角膜上皮组织中A2AR的蛋白含量的结果图；
图2A为本发明实施例2中对小鼠角膜上皮损伤用不同浓度CGS21680处理后的小鼠角膜上皮图；
图2B为本发明实施例2中对小鼠角膜上皮损伤用不同浓度CGS21680处理后的小鼠角膜上皮剩余损伤面积的结果图；
图3A为本发明实施例2中对小鼠角膜上皮损伤分别用rhEGF、CGS21680和PBS处理后的小鼠角膜上皮图；
图3B为本发明实施例2中对小鼠角膜上皮损伤分别用rhEGF、CGS21680和PBS处理后的小鼠角膜上皮剩余损伤面积的结果图；
图4A为本发明实施例2中对小鼠角膜上皮损伤分别用KW6002、CGS21680和PBS处理后的小鼠角膜上皮图；
图4B为本发明实施例2中对小鼠角膜上皮损伤分别用KW6002、CGS21680和PBS处理后的小鼠角膜上皮剩余损伤面积的结果图；
图5A为本发明实施例3中对小鼠角膜上皮损伤用CGS21680处理后的对小鼠眼压的影响结果图；
图5B为本发明实施例3中对小鼠角膜上皮损伤用CGS21680处理后的对小鼠运动情况的影响结果图；
图6A为本发明实施例4中hCECs的DAPI和Ki-67免疫荧光染色结果图；
图6B为本发明实施例4中hCECs的Ki-67阳性细胞数量的统计结果图；
图6C为本发明实施例4中hCECs细胞划痕后，各组伤口闭合的结果图；
图6D为本发明实施例4中hCECs细胞划痕后，各组伤口闭合率的统计结果图；
图7A为本发明实施例5中添加CGS21680后1小时和12小时，hCECs中磷酸化YAP蛋白和YAP总蛋白的蛋白质印迹结果图；
图7B为本发明实施例5中添加CGS21680后1小时和12小时，hCECs中磷酸化YAP蛋白和YAP总蛋白含量比值的结果图；
图7C为本发明实施例5中siA2AR转染后，hCECs中磷酸化YAP蛋白和YAP总蛋白的蛋白质印迹结果图；
图7D为本发明实施例5中siA2AR转染后，hCECs中磷酸化YAP蛋白和YAP总蛋白含量比值的结果图；
图7E为本发明实施例5中添加CGS21680后1小时和12小时，hCECs中YAP免疫荧光染色结果图；
图7F为本发明实施例5中添加CGS21680后1小时和12小时，hCECs中YAP在细胞核内含量与细胞质内含量比值的结果图；
图7G为本发明实施例5中小鼠角膜切片的YAP免疫荧光染色结果图；
图7H为本发明实施例5中小鼠角膜切片中YAP在细胞核内含量与细胞质内含量比值的结果图；
图8A为本发明实施例6中对小鼠角膜上皮损伤给药处理后，各组小鼠角膜上皮剩余损伤面积的结果图；
图8B为图8A中各组小鼠角膜上皮损伤已愈合面积的统计结果图；
图8C为本发明实施例6中给药处理后，各组hCECs在450nm处的光密度值；的细胞活性
图8D为本发明实施例6中给药处理后，各组hCECs中TEAD4的蛋白表达的结果图；
图8E为本发明实施例6中给药处理后，各组hCECs中TEAD4的蛋白含量的结果图；
图8F为本发明实施例6中对小鼠角膜上皮损伤分别给药处理后的小鼠角膜上皮图；
图8G为本发明实施例6中对小鼠角膜上皮损伤分别给药处理后的小鼠角膜上皮剩余损伤面积的结果图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1角膜损伤后A2AR表达上调
1.1A2AR在角膜上皮中的分布和表达
实验流程如下：(1)敲除正常小鼠的A2AR基因获得A2AR敲除小鼠；(2)分别取A2AR敲除小鼠和A2AR野生型小鼠的角膜上皮组织；(3)分别对A2AR敲除小鼠和A2AR野生型小鼠的角膜上皮组织进行A2AR和角蛋白K12免疫荧光染色。其中角蛋白K12为角膜上皮标志物。
结果如图1A所示，A2AR敲除小鼠和A2AR野生型小鼠角膜上皮组织中的细胞质中都表达有角蛋白K12；但是，在A2AR野生型小鼠的角膜上皮中观察到A2AR的阳性表达，而在A2AR敲除小鼠中未观察到A2AR表达。在以往的研究中并没有发现A2AR基因在角膜上皮细胞中表达，本发明发现A2AR基因在角膜上皮细胞中表达，为基于A2AR的眼部疾病治疗的研究提供方向。
1.2角膜损伤导致A2AR表达上调
(1)A2AR的mRNA表达上调
实验流程：按照未受损、损伤36小时和损伤96小时对小鼠角膜上皮组织分组，每组样本为5个，并进行RNA提取；将各组RNA逆转录成cDNA；根据编码A2AR的基因设计引物，对各组cDNA进行荧光定量PCR，选用GAPDH作为内参基因，计算分析A2AR的mRNA相对表达水平在各组中差异。
结果如图1B所示，未受损和损伤96小时两组中，A2AR的mRNA含量为内参基因含量的1倍，而损伤36小时的组别中，A2AR的mRNA含量为内参基因含量的6倍。所以在角膜损伤36小时后A2AR的mRNA表达显著升高，而在96小时后降低至与未损伤组相同的水平。
(2)A2AR的蛋白表达上调
实验流程：按照未受损、损伤36小时和损伤96小时对小鼠角膜上皮组织分组，每组样本为6个，并对各组细胞进行蛋白质印迹定量分析，检测各组中A2AR蛋白的表达量；采用β-actin作为内参蛋白。
如图1C所示为各组表达的A2AR蛋白质印迹分析图，如图1D所示为图1C中A2AR蛋白的定量结果，可以看出在角膜损伤36小时后A2AR蛋白表达显著升高，而在96小时降低至与未损伤组相同的水平。
因此，实施例1的结果表明，A2AR可能在角膜上皮损伤愈合过程中发挥作用，值得进一步研究。
实施例2局部施用CGS21680促进角膜上皮损伤后的伤口愈合
2.1角膜上皮损伤后，不同浓度的CGS21680对伤口愈合的影响
实验流程：将小鼠按照0.02mL/g标准腹腔注射1.2％ Avertin进行麻醉，再用盐酸丙美卡因滴眼液对小鼠右眼行角膜表面麻醉；将直径为2mm的角膜环钻置于角膜正中央后微旋一周形成压痕；接着使用已消毒的Alger brushⅡ去角膜上皮刀刮除直径为2mm范围的角膜上皮层，同时保持角膜缘区上皮完整；术后使用生理盐水冲洗结膜囊并用左氧氟沙星滴眼液滴眼预防感染。将角膜损伤的小鼠随机分成4组，每组样本为5个，在各组小鼠眼睛内分别滴加10nM的CGS21680、100nM的CGS21680、1μΜ的CGS21680和PBS缓冲液，一日4次，共3日，并分别在0、1、2、3日异氟烷气体麻醉后用荧光素钠点染，在裂隙灯下拍照记录，用ImageJ分析剩余损伤区域的面积。
结果如图2A所示，中间的圆形为初始损伤的区域，损伤发生后，随着时间的推移小鼠角膜上皮会逐渐愈合，剩余的损伤面积会越来越小；而滴加了适宜浓度的CGS21680的小鼠角膜上皮比滴加PBS缓冲液的小鼠角膜上皮愈合的速度快；特别是滴加了100nM的CGS21680的小鼠角膜上皮，其伤口在72小时内闭合。如图2B是对图2A中剩余损伤区域的面积的定量，纵坐标是剩余损伤区域的面积占原有损伤区域的比值，比值越小，小鼠角膜上皮愈合得越好；同样可以看出与其他CGS21680浓度相比，滴加100nM的CGS21680可明显加快伤口愈合。
此外，本发明还验证了200nM的CGS21680促进小鼠角膜损伤愈合速度约为100nM的CGS21680促进小鼠角膜损伤愈合速度的60％。
2.2CGS21680与临床药物rhEGF促角膜上皮伤口愈合效果的对比
重组人表皮生长因子(rhEGF)滴眼液是通常用于治疗角膜上皮伤口的临床药物。
实验流程：将小鼠按照0.02mL/g标准腹腔注射1.2％ Avertin进行麻醉，再用盐酸丙美卡因滴眼液对小鼠右眼行角膜表面麻醉；将直径为2mm的角膜环钻置于角膜正中央后微旋一周形成压痕；接着使用已消毒的Alger brushⅡ去角膜上皮刀刮除直径为2mm范围的角膜上皮层，同时保持角膜缘区上皮完整。术后使用生理盐水冲洗结膜囊并用左氧氟沙星滴眼液滴眼预防感染。将角膜损伤的小鼠随机分成3组，每组样本为7个，在各组小鼠眼睛内分别滴加100nM的CGS21680、rhEGF(按说明书剂量)和PBS缓冲液，一日4次，共3日，并分别在0、1、2、3日异氟烷气体麻醉后用荧光素钠点染，在裂隙灯下拍照记录，用ImageJ分析损伤区域的面积。
结果如图3A所示，中间的圆形为初始损伤的区域，损伤发生后，随着时间的推移小鼠角膜上皮会逐渐愈合，剩余的损伤面积会越来越小；CGS21680和rhEGF治疗的角膜伤口均在72小时内闭合，两者的愈合速度比用PBS缓冲液治疗的角膜损伤的愈合速度快得多；此外，如图3B是对图3A中剩余损伤区域的面积的定量，纵坐标是剩余损伤区域的面积占原有损伤区域的比值，比值越小，小鼠角膜上皮愈合得越好，如图3B所示，在角膜损伤1天后和2天后，CGS21680组的伤口面积明显小于rhEGF组，说明在角膜损伤第1、2天内CGS21680促角膜上皮伤口愈合的效果比rhEGF好。
2.3角膜上皮损伤后，局部施用A2AR特异性拮抗剂对伤口愈合的影响
KW6002为A2AR拮抗剂。
实验流程：将小鼠按照0.02mL/g标准腹腔注射1.2％ Avertin进行麻醉，再用盐酸丙美卡因滴眼液对小鼠右眼行角膜表面麻醉；将直径为2mm的角膜环钻置于角膜正中央后微旋一周形成压痕；接着使用已消毒的Alger brushⅡ去角膜上皮刀刮除直径为2mm范围的角膜上皮层，同时保持角膜缘区上皮完整；术后使用生理盐水冲洗结膜囊并用左氧氟沙星滴眼液滴眼预防感染。将角膜损伤的小鼠随机分成3组，每组样本为5个，在各组小鼠眼睛内分别滴加100nM的CGS21680、500nM的KW6002和PBS缓冲液，一日4次，共3日，并分别在0、1、2、3日异氟烷气体麻醉后用荧光素钠点染，在裂隙灯下拍照记录，用ImageJ分析剩余损伤区域的面积。
结果如图4A所示，中间的圆形为初始损伤的区域，损伤发生后，随着时间的推移小鼠角膜上皮会逐渐愈合，剩余的损伤面积会越来越小；滴加了100nM的CGS21680的小鼠角膜上皮比滴加PBS缓冲液的小鼠角膜上皮愈合的速度快，而滴加了KW6002的小鼠角膜上皮比滴加了PBS缓冲液的小鼠角膜上皮愈合的速度慢，说明KW6002显著延迟了角膜上皮损伤愈合；如图4B是对图4A中剩余损伤区域的面积的定量，纵坐标是剩余损伤区域的面积占原有损伤区域的比值，比值越小，小鼠角膜上皮愈合得越好；同样可以看出CGS21680促进小鼠角膜上皮愈合，而KW6002延迟了角膜上皮损伤愈合。同时也可以说明，A2AR是促进角膜上皮损伤愈合的重要作用靶点。
实施例三局部施用CGS21680的安全性验证
3.1局部施用CGS21680对小鼠眼压的影响
选择5个角膜损伤的小鼠为样本，在各小鼠眼睛分别滴加100nM的CGS21680，一日4次，共4日，每次滴加CGS21680后使用手持式压平眼压计测量眼压。结果如图5A所示，说明给药后眼压无异常。
3.2局部施用CGS21680对小鼠运动情况的影响
在以往动物实验中，全身施用A2AR激动剂时会发生心血管效应，特别是低血压。为了验证局部施用CGS21680是否对小鼠产生副作用，所以本发明将角膜损伤的小鼠随机分成2组，每组样本为6个，在小鼠眼睛分别滴加CGS21680和PBS缓冲液后再进行开放旷场实验。具体操作为：采用长、宽、高均为40cm的正方体白色箱子作为开放旷场，箱体放入封闭隔音的操作箱内，旷场中心顶端有摄像头记录小鼠运动状态。每只小鼠单次实验持续10分钟，利用Etho Vision XT系统分析小鼠总运动路程及在旷场中心区停留的时长。结果如图5B所示，滴加CGS21680和PBS缓冲液的两组小鼠，在开放旷场实验中行进的总距离没有差异，这证明局部给药CGS21680不会影响小鼠的正常活动，进而证明局部给药CGS21680对小鼠的心血管影响较小。
实施例四CGS21680在体外加速hCECs的细胞增殖和迁移
为了进一步探究CGS21680对人角膜损伤的作用，我们研究了CGS21680对体外人角膜上皮细胞(缩写hCECs)增殖和迁移的影响。
4.1CGS21680促进hCECs的细胞增殖
Ki-67为细胞核内与分裂增殖相关的蛋白，是细胞增殖活性的可靠标记。
实验流程：取状态良好的hCECs细胞进行消化、离心，然后用DMEM/F12培养基重新悬浮细胞，稀释细胞密度至1×105个/mL，将1mL的细胞悬液加入放有圆形细胞爬片的12孔板的各孔中，置于培养箱中培养。待细胞完全贴壁后，实验组用100nM的CGS21680处理，对照组用等体积的PBS缓冲液处理，最终对实验组和对照组的hCECs均进行DAPI和Ki-67免疫荧光染色。
免疫荧光染色结果如图6A所示，可以看出CGS21680处理后的hCECs密度较对照组增加，且CGS21680处理后的hCECs也表现出更多的Ki-67阳性细胞；图6B为图6A中Ki-67阳性细胞数量的统计结果图，CGS21680处理Ki-67阳性细胞数量，比PBS缓冲液处理的Ki-67阳性细胞数量多约30％；因此CGS21680能促进hCECs的细胞增殖。
4.2CGS21680促进hCECs的细胞迁移
细胞划痕实验：取状态良好的hCECs细胞进行消化、离心，然后用DMEM/F12培养基重新悬浮细胞，稀释细胞密度至6×105个/mL，将2mL的细胞悬液加入6孔板的各孔中，置于培养箱中培养；待细胞完全贴壁后，使用灭菌的枪头在细胞上划直线，用PBS缓冲液冲洗后换入新的培养基放回培养箱中继续培养，实验组的培养基中添加了100nM的CGS21680，对照组的培养基中添加了等体积的PBS缓冲液；并在0、12和24小时拍照记录细胞迁移情况，根据剩余伤口面积A计算伤口闭合率(％)＝(A0小时–A12/24小时)/A0小时×100％。
hCECs的细胞迁移结果如图6C所示，随着时间的推移，伤口逐渐闭合，其中CGS21680组伤口闭合的速度比PBS组更快；图6D为图6C中伤口闭合率的统计结果图，CGS21680组在12和24小时伤口闭合率分别为57.39％和86.23％，显著高于PBS组的41.63％和62.80％。因此，CGS21680能促进hCECs的细胞迁移。
实施例五探究CGS21680促进角膜上皮损伤后伤口愈合的机理
5.1CGS21680对YAP信号分子的影响
Hippo通路是一种进化上保守的信号通路，在上皮稳态、组织再生和损伤愈合中起关键作用。许多上游信号(如细胞粘附、极性、机械应力和可溶性因子)通过激酶级联调节Hippo信号通路，这些上游信号导致具有PDZ结合基序(TAZ)的转录共激活因子YAP的细胞质/核定位发生变化，然后YAP将上游信号传递到核心Hippo信号。需要说明的是，本申请中所说的YAP磷酸化和非磷酸化发生在Ser127位点，其中磷酸化的YAP可能进入细胞质内或直接被溶酶体降解，而非磷酸化的YAP可以进入细胞核内促进下游的蛋白激活并进一步促进细胞的增殖。
为了检验A2AR通过影响YAP活性从而促进角膜上皮损伤愈合的假设，在添加CGS21680后1小时和12小时评估CGS21680对hCECs中磷酸化YAP水平的影响。
磷酸化YAP蛋白和YAP总蛋白的蛋白质印迹结果如图7A所示，β-actin用作内参蛋白；添加CGS21680后1小时，hCECs中磷酸化YAP增多，而添加CGS21680后12小时，hCECs中磷酸化YAP减少；1小时后磷酸化YAP迅速增加，与先前关于Gαs偶联GPCRs与YAP之间关系的研究结果一致；然而与CGS21680处理1小时后获得的结果相反，CGS21680处理12小时后hCECs中YAP的磷酸化被抑制。如图7B所示，磷酸化YAP与非磷酸化YAP的蛋白含量比值更能说明上述结论，该实验中，采用Image J进行蛋白定量，样品数量为6个。
5.2A2AR对YAP信号分子的影响
为了进一步确定A2AR和YAP之间的联系，使用siRNA降低A2AR的表达，再评估低表达A2AR的hCECs中，给药12小时后YAP磷酸化水平，实验中分别建立4个给药组，分别是PBS缓冲液、siA2AR、CGS21680和CGS21680+siA2AR。
各组别的磷酸化YAP蛋白和YAP总蛋白的蛋白质印迹结果如图7C所示，β-actin用作内参蛋白。其中，添加CGS21680与不添加CGS21680相比，12小时后hCECs中YAP磷酸化水平明显降低，说明添加CGS21680后YAP的磷酸化被抑制；添加CGS21680后12小时，与正常hCECs中添加CGS21680组相比，低表达A2AR的hCECs中添加CGS21680组的YAP磷酸化水平显著升高，说明A2AR表达降低后会进一步影响YAP的磷酸化水平，CGS21680可以通过A2AR进而调控下游YAP信号分子。统计结果图7D中，磷酸化YAP的蛋白量与YAP总蛋白量的比值更能说明上述结论，该实验中采用Image J进行蛋白定量，样品数量为7个。
5.3YAP在hCECs细胞内的定位
磷酸化的YAP可能进入细胞质内或直接被溶酶体降解，而非磷酸化的YAP可以进入细胞核内促进下游的蛋白激活并进一步促进细胞的增殖。
对hCECs进行YAP免疫荧光染色，以检测CGS21680处理1小时或12小时后的YAP的核定位情况。
hCECs中YAP的免疫荧光染色结果如图7E所示，与不添加CGS21680相比，添加CGS21680后1小时，hCECs中YAP的主要以磷酸化YAP形式存在于细胞质内；添加CGS21680后12小时，hCECs细胞质内磷酸化YAP发生去磷酸化并向细胞核内迁移并积累。因此，添加CGS21680的1小时后，YAP发生磷酸化，存在于细胞质内；而添加CGS21680的12小时后，YAP发生去磷酸化，同时向细胞核内转移。
如图7F所示为细胞核内YAP与细胞质内YAP的含量比，添加CGS21680的12小时后，hCECs中细胞核内YAP含量约为细胞质内YAP含量的10倍以上，也说明YAP向细胞核内迁移并积累。
5.4YAP在小鼠角膜上皮细胞内的定位
此外，对添加CGS21680和添加等量PBS缓冲液12小时后的小鼠角膜上皮细胞进行YAP免疫荧光染色，结果如图7G所示，CGS21680组小鼠角膜上皮细胞核中YAP染色阳性细胞的百分比明显高于PBS缓冲液组；如图7H所示，添加CGS21680后12小时，小鼠角膜上皮细胞的细胞核内YAP含量约为细胞质内YAP含量的3倍。
实施例5的实验结果表明，长时间暴露于CGS21680可以通过诱导YAP的去磷酸化和YAP的核定位来有效抑制YAP。
实施例六CGS21680对YAP信号转导的影响
为了检测CGS21680对角膜上皮损伤愈合的影响是否依赖于YAP信号转导，采用YAP抑制剂VP(维替泊芬)特异性抑制YAP信号转导。
6.1VP抑制hCECs的迁移和增殖
首先，如实施例4中进行细胞划痕实验，评估VP是否可以减轻CGS21680对hCECs迁移和增殖的影响，实验中建立4个给药组，分别为PBS缓冲液、CGS21680、CGS21680+VP和VP，并观察和测定给药12小时和24小时后剩余的损伤面积。结果如图8A所示，与CGS21680+VP组相比，CGS21680组hCECs在12小时和24小时后剩余的损伤面积更小；如图8B是对图8A中已愈合损伤面积的统计结果图，同样也说明，与CGS21680+VP组相比，CGS21680组hCECs在12小时和24小时的愈合速度明显更快。因此，VP减轻了CGS21680对hCECs迁移和增殖的促进作用。
然后，使用CCK-8测定评估VP是否可以减轻CGS21680对hCECs细胞活性的影响。实验流程：使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)进行细胞增殖试验，hCECs细胞消化后接种到96孔板中，初始密度为每孔1×104个细胞，并在100μL培养基中培养；分别培养12、24、36小时，根据所示的分析时间点，吸掉旧培养基，用PBS缓冲液洗涤三次去除细胞代谢产物后，将10μL的CCK-8溶液加入到每孔新加的100μL培养基中，然后在37℃、5％CO2培养箱中培养1.5～2小时，注意全程避光。以单纯加入100μL提前混匀的检测试剂为背景对照使用。VERSA Maxmicroplate reader(MDS Analytical Technologies)和SoftMax Pro软件测量450nm处的光密度(OD)。实验中建立4个给药组，分别为PBS缓冲液、CGS21680、CGS21680+VP和VP，测定给药12、24和36小时后的细胞活性。CCK-8测定结果如图8C所示，以hCECs在450nm处的光密度值来表征hCECs的细胞活性，结果CGS21680组的hCECs细胞活性显著高于CGS21680+VP组。
总之，YAP抑制剂VP减轻了CGS21680对hCECs的迁移和增殖作用。
6.2VP对TEAD4表达的影响
Hippo信号通路主要由上游的激酶复合物，下游的转录辅因子YAP/TAZ和转录因子TEADs(TEAD1/2/3/4)组成，而YAP的下游转录因子TEAD4(转录增强关联结构域4)具有调节细胞增殖和干细胞功能。
实验中对hCECs建立4个给药组，分别为PBS缓冲液、CGS21680、CGS21680+VP和VP，对各组hCECs中的TEAD4蛋白进行蛋白质印迹和蛋白含量测定，β-actin用作内参蛋白，实验结果如图8D、8E所示，CGS21680组的TEAD4表达增多，而CGS21680+VP组的TEAD4表达相对于CGS21680组减少，说明TEAD4的表达被CGS21680上调，且这种上调作用会被VP阻断。
6.3VP对角膜上皮损伤愈合的影响
接下来，为了验证VP对小鼠角膜上皮内YAP信号传导的阻断作用，在角膜上皮损伤后局部给予药物，实验中建立4个给药组，分别为PBS缓冲液、CGS21680、CGS21680+VP和VP，在各组小鼠眼睛内分别滴加PBS缓冲液、CGS21680、CGS21680+VP和VP，一日4次，共3日，并在0、1、2、3日分别用荧光素钠点染，在裂隙灯下拍照记录，用Image J分析损伤区域的面积。结果如图8F、8G所示，图8F中，中间的圆形为初始损伤的区域，8G是对图8F中损伤的区域的定量；与PBS缓冲液，CGS21680+VP，VP组相比，CGS21680组的角膜上皮损伤愈合显著增加；与CGS21680组相比，CGS21680+VP组的损伤愈合明显延迟。总体而言，这些发现提供了证据，证明CGS21680通过激活YAP信号通路促进角膜上皮的生长。
Claims (8)
1.一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用，其特征在于：所述医药组合物包含腺苷A2A受体的激动剂。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述腺苷A2A受体的激动剂为CGS21680。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述眼部疾病包含角膜损伤。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述CGS21680通过激活YAP信号通路来促进角膜上皮的生长。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述CGS21680通过激活YAP信号通路来增加TEAD4表达以促进角膜上皮的生长。
6.根据权利要求1～5任一权利要求所述的应用，其特征在于：所述医药组合物为液体制剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述液体制剂中CGS21680的浓度为10～200nM。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述液体制剂中CGS21680的浓度为100nM。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311645883.7A CN117695300A (zh) | 2023-12-04 | 2023-12-04 | 一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311645883.7A CN117695300A (zh) | 2023-12-04 | 2023-12-04 | 一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117695300A true CN117695300A (zh) | 2024-03-15 |
Family
ID=90154435
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311645883.7A Pending CN117695300A (zh) | 2023-12-04 | 2023-12-04 | 一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117695300A (zh) |
-
2023
- 2023-12-04 CN CN202311645883.7A patent/CN117695300A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Inoue et al. | Rho-associated kinase inhibitors: a novel glaucoma therapy | |
| Torricelli et al. | The corneal fibrosis response to epithelial–stromal injury | |
| Yan et al. | Targeting imbalance between IL-1β and IL-1 receptor antagonist ameliorates delayed epithelium wound healing in diabetic mouse corneas | |
| Okada et al. | Sensory nerve supports epithelial stem cell function in healing of corneal epithelium in mice: the role of trigeminal nerve transient receptor potential vanilloid 4 | |
| Sharma et al. | Trichostatin a inhibits corneal haze in vitro and in vivo | |
| TWI658828B (zh) | 用於舒緩及減輕近視之醫藥組合物及其製備方法與用途 | |
| Li et al. | Inhibition of miR-21 ameliorates excessive astrocyte activation and promotes axon regeneration following optic nerve crush | |
| Gao et al. | Activation of mGluR1 contributes to neuronal hyperexcitability in the rat anterior cingulate cortex via inhibition of HCN channels | |
| Rodger et al. | cAMP regulates axon outgrowth and guidance during optic nerve regeneration in goldfish | |
| Liu et al. | Activation of epidermal growth factor receptor causes astrocytes to form cribriform structures | |
| Yu et al. | Osteopontin activates retinal microglia causing retinal ganglion cells loss via p38 MAPK signaling pathway in glaucoma | |
| Beltran et al. | Intravitreal injection of ciliary neurotrophic factor (CNTF) causes peripheral remodeling and does not prevent photoreceptor loss in canine RPGR mutant retina | |
| US20080260644A1 (en) | Chloride transport upregulation for the treatment of traumatic brain injury | |
| US11291684B2 (en) | Treatment of glaucoma | |
| Park et al. | Effects of nuclear factor-κB small interfering RNA on posterior capsule opacification | |
| Szeto et al. | Impact of systemic versus intratympanic dexamethasone administration on the perilymph proteome | |
| Yun et al. | Inhibitory effect of topical cartilage acellular matrix suspension treatment on neovascularization in a rabbit corneal model | |
| D'Onofrio et al. | Gene therapy for traumatic central nervous system injury and stroke using an engineered zinc finger protein that upregulates VEGF-A | |
| Zhang et al. | Plumbagin inhibits proliferation, migration, and invasion of retinal pigment epithelial cells induced by FGF-2 | |
| Wang et al. | Artesunate inhibits the development of PVR by suppressing the TGF-β/Smad signaling pathway | |
| CN117695300A (zh) | 一种医药组合物在制备用于治疗眼部疾病的药物中的应用 | |
| Quan et al. | Inhibition of the leucine‑rich repeat protein lingo‑1 enhances RGC survival in optic nerve injury | |
| Han et al. | Netrin-1 promotes epithelium repair in corneal injury | |
| US20210379104A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising isolated mitochondria for preventing or treating tendinopathy | |
| CN105188731B (zh) | 用于治疗眼部疾病的蛋白质slurp-1 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |