CN117677369A - 屏障保护技术 - Google Patents
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Abstract
本发明一般涉及对改善皮肤屏障功能和减少皮肤发红有用的方法和组合物。组合物包含胆固醇、神经酰胺II和乳木果油或胆固醇、神经酰胺II、乳木果油、糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣籽提取物。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年5月28日提交的美国临时专利申请序列号63/194,759的优先权权益,其通过引用整体并入本文。
发明背景
A.技术领域
本发明一般涉及能够用于改善皮肤的状况和/或视觉外观的组合物。在一些方面,本发明的组合物可以包含例如改善皮肤屏障功能和减少皮肤发红的成分的组合。
B.相关技术说明
皮肤由几个不同的层组成,皮肤的水分屏障层在一定程度上起到了阻止刺激物进入和保持皮肤水分的作用。皮肤屏障很容易受损,导致失水、干燥和皮肤刺激。常见的皮肤屏障损伤可以来自各种来源,包括用刺激性清洁剂剥离皮肤的天然油脂、过度去角质、甚至是压力和衰老等内在因素。
通常,很难确定皮肤屏障功能受损的原因,然而,受损的皮肤屏障相对容易识别。皮肤屏障功能受损的皮肤会出现鳞屑和红色,皮肤感觉发痒、刺激和发炎。一些化妆品可以用来修正皮肤发红和干燥,但重要的是要解决屏障活性受损或不足的根本问题。
发明内容
发明人已经确定了可以局部使用以改善皮肤屏障功能和减少皮肤发红的新型组合物。解决方案在于胆固醇、神经酰胺II和乳木果油的组合,以及胆固醇、神经酰胺II、乳木果油、糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣(Phoenix dactylifera)籽提取物的组合。在一些情况下,胆固醇、神经酰胺II和乳木果油存在的质量比为3:1:1。这些成分的组合可用于产生局部用皮肤组合物,以改善皮肤屏障功能、减少皮肤发红、减少促炎细胞因子的表达、减少促炎趋化因子的表达、减少诱导型一氧化氮合酶(INOS)的表达、增加一种或多于一种紧密连接相关蛋白的表达、增加闭合蛋白1的表达和/或增加丝聚蛋白的表达。
在一些方面,公开了局部用组合物。在一些方面,局部用组合物包含胆固醇、神经酰胺II和乳木果油中的任一种、任意组合或全部。组合物中成分的量可以改变(例如,量可以低如0.000001重量/重量%至高如98重量/重量%,或为其间的任意范围)。在一些方面,胆固醇、神经酰胺II和乳木果油以3:1:1的重量比提供。在一些方面,组合物还包含浮游生物提取物。在一些方面,浮游生物提取物包括糖类同分异构体。在一些方面,组合物还包含羟苯基丙酰胺苯甲酸。在一些方面,组合物还包含海枣籽提取物。在一些方面,组合物还包含天然保湿因子(NMF)。在一些方面,组合物还包含一种或多于一种诱导型一氧化氮合酶抑制剂。在一些方面,组合物还包含一种或多于一种α-肾上腺素受体激动剂。在一些方面,组合物还包含水。在一些方面,组合物包含25重量%至98重量%的水。在一些方面,组合物被配制为乳状液。在一些方面,组合物被配制为霜剂。组合物还可以包含本文所描述的一种或多于一种成分。例如,组合物可以包含选自一种或多于一种调理剂、保湿剂、pH调节剂、结构化剂、无机盐和防腐剂的一种或多于一种附加成分。
在一些方面,本文所公开的组合物的任何一种用于通过将本文所公开的任何一种组合物施用于皮肤上来改善皮肤的状况或外观。上述组合物还可以包含本文所描述的一种或多于一种成分。例如,组合物可以包含选自一种或多于一种调理剂、保湿剂、pH调节剂、结构化剂、无机盐和防腐剂的一种或多于一种附加成分。
还公开了本文公开的组合物的使用方法。在一些方面,公开了改善皮肤的状况或外观的方法,包括将本文所公开的任何一种组合物施用于有需要的皮肤。在一些方面,本文所公开的组合物用于通过将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤来增强皮肤屏障功能,其中皮肤的屏障功能被增强。在一些方面,所公开的组合物用于减少皮肤发红,包括将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤,其中皮肤的发红程度降低。在一些方面,本文所公开的组合物中的任何一种被施用至皮肤,并且组合物被留在皮肤上、或者一段时间后被从皮肤上除去。
还公开了使用本文公开的组合物以改变皮肤中蛋白质的产生的方法。在一些方面,本文所公开的组合物用于通过将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤来减少促炎细胞因子的表达,其中促炎细胞因子的表达被减少。在一些方面,本文所公开的组合物用于通过将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤来减少促炎趋化因子的表达,其中促炎趋化因子的表达减少。在一些方面,本文所公开的组合物用于通过将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤来减少诱导型一氧化氮合酶(INOS)的表达,其中诱导型一氧化氮合酶的表达减少。在一些方面,本文所公开的组合物用于通过将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤来增加一种或多于一种紧密连接相关蛋白的表达,其中一种或多于一种紧密连接相关蛋白的表达增加。在一些方面,本文所公开的组合物用于通过将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤来增加闭合蛋白1的表达,其中闭合蛋白1的表达增加。在一些方面,本文所公开的组合物用于通过将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤来增加丝聚蛋白的表达,其中丝聚蛋白的表达增加。
还公开了使用本文公开的组合物以对皮肤或毛发提供额外益处的方法。在一些方面,本文所公开的组合物用于通过将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤来减少皮肤中的炎症,其中皮肤中的炎症减少。在一些方面,本文所公开的组合物用于通过将本文所公开的组合物中的任何一种施用于皮肤来减少对皮肤的氧化损伤和/或增加皮肤的氧化能力,其中对皮肤的氧化损伤减少和/或皮肤的氧化能力增加。
在具体的方面,本发明的组合物被配制为局部皮肤用组合物。组合物可以包含用于化合物、组合物和提取物的皮肤病学可接受的载剂或载体。组合物还可以包含保湿剂或湿润剂、表面活性剂、含硅酮的化合物、UV剂、油和/或本说明书所确定的其他成分或本领域中已知的成分。组合物可以是乳液、霜剂、凝胶、精华、乳状液(例如,水包油、油包水、水包硅酮、硅酮包水、水包油包水、油包水包油、硅酮包水包油等)、溶液(例如,水溶液或水-醇溶液)、无水基质(例如,唇膏或粉剂)、软膏、乳液、膏剂、气雾剂、固体形式、眼部啫喱等。组合物可以以粉末形式存在(例如,干燥的、冻干的、颗粒的等)。组合物可以被配制用于在使用期间每天局部皮肤施用至少1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次或多于7次。在本发明的其他方面,组合物可以是储存稳定或颜色稳定的,或是两者。还期望可以选择组合物的黏度以达到希望的结果,例如根据希望的组合物类型,组合物的黏度可以为约1cps到远超过1百万cps,或其间可衍生的任意范围或整数(例如,在25℃使用TC轴以2.5rpm在布氏黏度计上测量的2cps、3cps、4cps、5cps、6cps、7cps、8cps、9cps、10cps、20cps、30cps、40cps、50cps、60cps、70cps、80cps、90cps、100cps、200cps、300cps、400cps、500cps、600cps、700cps、800cps、900cps、1000cps、2000cps、3000cps、4000cps、5000cps、6000cps、7000cps、8000cps、9000cps、10000cps、20000cps、30000cps、40000cps、50000cps、60000cps、70000cps、80000cps、90000cps、100000cps、200000cps、300000cps、400000cps、500000cps、600000cps、700000cps、800000cps、900000cps、1000000cps、2000000cps、3000000cps、4000000cps、5000000cps、10000000cps等)。
本发明的组合物还可以改性以具有希望的氧自由基吸收能力(ORAC)值。在某些非限制性方面,在本说明书全文中所确定的本发明的组合物或其组分或提取物可以改性以具有每毫克至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、95、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、15000、20000、30000、50000、100000或多于100000,或者其中可得到的任意范围的ORAC值。
该组合物在非限制性方面的pH可以为约6至约9。在其他方面,pH可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14。组合物可以包含甘油三酯。非限制性实例包括短链、中链和长链甘油三酯。在某些方面,甘油三酯是中链甘油三酯(例如辛癸酸甘油酯)。组合物还可以包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯的混合物。在一些方面,防腐剂不是对羟基苯甲酸酯。在一些方面,组合物不含对羟基苯甲酸酯。
本发明的组合物可以具有UVA和UVB吸收性质。组合物的防晒指数(SPF)可以为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或大于60,或是其间的任意整数或可衍生的整数。组合物可以是防晒乳、防晒喷雾或防晒霜。
本发明的组合物还可以包含以下附加成分中的任何一种、任意组合或全部:水、螯合剂、保湿剂、防腐剂、增稠剂、含硅酮的化合物、精油、结构化剂、维生素、药物成分或抗氧化剂,或这类成分的任意组合或这类成分的混合物。在特定的方面,该组合物可以包含在前句中确定的这些附加成分中的至少二种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或全部。这些附加成分的非限制性实例在本说明书全文确定,并通过引用并入本章节。此类成分的量可以为组合物重量或体积的0.0001%至99.9%,或者是在如本说明书其他章节中所公开的范围之间的任何整数或范围,其通过引用并入本段。
还预期了包含本发明的组合物的试剂盒。在特定的实施方案中,该组合物包含在容器中。该容器可以是瓶子、分配器或包装。容器可以分配预定量的组合物。在某些方面,该组合物以喷雾、薄雾、团块或液体的形式分配。该容器可以在其表面上包括标记。标记可以是单词、缩写、图片或符号。
还预期本说明书通篇所公开的组合物可以被用作免洗型或冲洗型组合物。举例来说,免洗型组合物可以是被局部地施用至皮肤并在皮肤上保留一段时间(例如,至少5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、20分钟或30分钟,或至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时或24小时,或者过夜或全天)的组合物。或者,冲洗型组合物可以是指施用至皮肤,然后在一段时间如小于5分钟、4分钟、3分钟、2分钟或1分钟内从皮肤去除或洗去(例如用水)的产品。冲洗型组合物的实例可以是皮肤清洁剂、洗发水、护发素或肥皂。免洗型组合物的实例可以是皮肤保湿剂、防晒剂、面膜、晚霜或日霜。
预期对于本发明的任何方法或组合物,可以实施本说明书中所讨论的任何实施方案,反之亦然。此外,本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。
在本发明的上下文中,描述了至少以下19个方面。方面1包括包含胆固醇、神经酰胺II和乳木果油的局部用组合物。方面2引用方面1,其中组合物还包含浮游生物提取物。方面3引用方面2,其中浮游生物提取物包括糖类同分异构体。方面4引用方面1至3中的任一方面,其中组合物还包含羟苯基丙酰胺苯甲酸。方面5引用方面1至4中的任一方面,其中组合物还包含海枣籽提取物。方面6引用方面1至5中的任一方面,其中组合物还包含天然保湿因子(NMF)。方面7引用方面1至6中的任一方面,其中组合物还包含一种或多于一种一氧化氮合酶抑制剂。方面8引用方面1至7中的任一方面,其中组合物还包含一种或多于一种α-肾上腺素受体激动剂。方面9引用方面1至8中的任一方面,其中组合物还包含水。方面10引用方面1至9中的任一方面,其中组合物包含25重量%至98重量%的水。方面11引用方面1至10中的任一方面,其中胆固醇、神经酰胺II和乳木果油以3:1:1的重量比提供。方面12引用方面1至11中的任一方面,其中组合物包含糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣籽提取物。方面13引用方面1至12中的任一方面,其中海枣籽提取物为水溶性提取物。方面14引用方面1至13中的任一方面,其中组合物被配制为乳状液。方面15引用方面14,其中组合物物配制为霜剂。方面16包括改善皮肤的状况或外观的方法。方法包括将方面1至15中任一方面所述的组合物施用至有需要的皮肤。方面17包括增强皮肤屏障功能的方法。方法包括将方面1至15中任一方面所述的组合物施用至皮肤,从而增强皮肤屏障。方面18包括减少皮肤发红的方法。方法包括将方面1至15中任一方面的组合物施用于皮肤,从而减少皮肤的发红。方面19包括处理皮肤的方法。方法包括将方面1至15中任一方面所述的组合物施用于皮肤,从而导致促炎细胞因子的表达减少、促炎趋化因子的表达减少、一氧化氮合酶的表达减少、一种或多于一种紧密连接相关蛋白的表达增加、闭合蛋白1的表达增加和/或丝聚蛋白的表达增加。
在一个实施方案中,本发明的组合物可以是药用高品质的或化妆用高品质的,或可以具有舒适的触觉特性。“药用高品质的”、“化妆用高品质的”和/或“舒适的触觉特性”描述具有令皮肤感觉舒适的特定的触觉性质的组合物(例如,不是太水或太油的组合物、具有丝滑质地的组合物、非黏性或黏性的组合物等)。药用高品质的或化妆用高品质的还可以涉及组合物的乳脂状或润滑性能,或组合物的水分保留性能。
还预期了一种包含本发明的组合物的产品。在非限制性方面,产品可以是化妆品。该化妆品可以是本说明书其他章节所述的那些,或是本领域技术人员已知的那些。产品的非限制性实例包括保湿剂、霜剂、乳液、皮肤软化剂、凝胶、洗剂、清洁剂、粉底、晚霜、日霜和眼霜、唇膏、清洁剂、爽肤水、防晒霜、面膜、抗老化产品、除臭剂、止汗剂、香水、古龙水等。
“局部施用”是指将组合物施用或涂敷到嘴唇或角质组织的表面上。“局部皮肤用组合物”包括适合在嘴唇或角质组织局部施用的组合物。这类组合物一般为皮肤病学可接受的,这是因为当施用到嘴唇或皮肤时,其不具有异常毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等。本发明的局部护肤组合物可以具有选定的黏度以避免施用到皮肤后明显的滴落或淤积。
“角质组织”包括作为哺乳动物最外层保护的含有角质的层,并且包括但不限于嘴唇、皮肤、毛发和指甲。
术语“大约”或“约”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于,并且在一个非限制性实施方案中该术语定义为偏差在10%以内,优选偏差在5%以内,更优选偏差在1%以内,最优选偏差在0.5%以内。
术语“基本上”及其变体定义为如本领域普通技术人员所理解的大部分但不必全部地为指定的事物,并且在一个非限定性实施方案中基本上涉及的范围偏差在10%以内、偏差在5%以内、偏差在1%以内或偏差在0.5%以内。
术语“抑制”或“减少”或这些术语的任何变体包括实现期望结果的任何可测量的减少或完全的抑制。术语“促进”或“增加”或这些术语的任何变体包含为了达到预期结果的任何可测量的增加或蛋白质或分子(举例来说,基质蛋白,例如纤维黏连蛋白、层黏连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白,或者分子,例如透明质酸)的产生。术语“改变”在说明书中用来表示“引起改变”,并且可以表示抑制或减少。
作为本说明书和/或权利要求所使用的术语,术语“有效的”表示适于实现希望的、期望的或预期的结果。
当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”一起使用时,要素前面不使用数量词可以表示“一个”,但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。
如本说明书和权利要求所使用的,单词“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的,并且不排除附加的、未列举的要素或方法步骤。
使用的组合物和方法可以“包含”、“基本上组成为”或“组成为”本说明书通篇所公开的任何成分或步骤。关于短语“基本上组成为”,本公开的组合物和方法的基本且新颖的性质是能够生产可施用于皮肤的组合物,该组合物在某些情况下能够改善皮肤屏障功能并减少皮肤发红。
本发明的其他目的、特征和优点通过下面的具体实施方式会变得明显。然而,应该理解的是,具体实施方案和实施例虽然说明了本发明的特定实施方案,但仅以说明的方式给出。另外,期望通过具体实施方式,预期在本发明的精神和范围内的变化和修改对于本领域技术人员将变得明显。
具体实施方式
如上所述,本发明的几个独特方面是在局部用化妆品组合物中组合胆固醇、神经酰胺II和乳木果油,或胆固醇、神经酰胺II、乳木果油、糖类同分异构体、羟基苯丙酰胺苯甲酸和海枣(Phoenix dactylifera)籽提取物。在一些情况下,胆固醇、神经酰胺II和乳木果油以3:1:1的质量比存在。本文所公开的化妆品组合物的局部施用允许对皮肤的多种益处,包括增强皮肤屏障功能、减少皮肤发红、减少促炎细胞因子的表达、减少促炎趋化因子的表达、减少诱导型一氧化氮合酶的表达、增加一种或多于一种紧密连接相关蛋白的表达、增加闭合蛋白1的表达和/或增加丝聚蛋白的表达。
以下子章节更详细地描述本发明的非限制性方面。
本发明的特定实施方案被设计为用作霜剂组合物,尤其是面霜组合物或眼霜。在一些情况下,面霜或眼霜可以帮助增强皮肤屏障功能,减少皮肤发红。该组合物依赖于胆固醇、神经酰胺II和乳木果油的独特组合,以及胆固醇、神经酰胺II、乳木果油与糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣籽提取物的中任何一种、任意组合或全部的组合。在一些情况下,胆固醇、神经酰胺II和乳木果油以3:1:1质量比存在。组合物的实例如实施例1、表1所示。
上述组合物可以施用于皮肤,并保留在皮肤上一段时间(例如至少1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟或60分钟或长于60分钟)。其后如果需要组合物可以从皮肤洗去或从皮肤去除。
A.活性成分
本发明的前提是确定活性成分的组合——胆固醇、神经酰胺II和乳木果油或胆固醇、神经酰胺II、乳木果油、糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣籽提取物,其中在一些情况下,胆固醇、神经酰胺II和乳木果油以3:1:1的质量比存在——可以用来增强皮肤的屏障功能并减少皮肤发红。作为非限制性实例,当以上成分组合时,可以减少促炎细胞因子和趋化因子的产生、减少诱导型一氧化氮合酶的表达、增加如闭合蛋白1的紧密连接相关蛋白的表达、并增加如丝聚蛋白的结构蛋白的表达。
附加的活性成分也可以与上述活性成分组合使用。在一些情况下,活性成分包括一种或多于一种糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和/或海枣籽提取物、天然保湿因子、一种或多于一种诱导型一氧化氮合酶抑制剂、以及一种或多于一种α-肾上腺素受体激动剂。附加的活性成分可以用于改善皮肤视觉外观。作为非限制性实例,这些成分可以增加保水和防止脱水、减少皮肤刺激和瘙痒、改善皮肤弹性、减少炎症、以及减少皮肤刺激。
成分的组合可以用于不同的产品以处理各种皮肤状况。通非限制性实例,眼霜可以有助于紧致皮肤、增加微循环以减少下眼袋的出现、减少黑眼圈的出现、和/或预防和/或解决衰老的迹象,日霜可以有助于保湿和防止紫外线和/或预防和/或解决衰老的迹象,晚霜可以保湿和/或预防和/或解决衰老的迹象,清洁剂可以清除皮肤死皮、清洁皮肤和/或毛发的多余油脂、皮脂和/或颗粒,和/或预防或解决衰老的迹象。
胆固醇是存在于机体所有组织中的天然化合物。其有助于细胞膜的流动性和/或刚性,是类固醇激素的前体。在化妆品应用中,胆固醇起到皮肤调理剂和乳化剂的作用。胆固醇有助于支持皮肤的天然屏障功能,并改善水分含量。胆固醇可以从商业来源获得。作为非限制性实例,胆固醇可以作为Cholesterol NF从Croda获得。
神经酰胺II为天然蜡质脂质化合物,其包括与鞘氨醇骨架结合的脂肪酸。神经酰胺II能够捕获并结合表皮所需的水分,以保持柔软、光滑和保湿。神经酰胺还可以抗皮肤衰老,保持皮肤的年轻。神经酰胺II可以从商业来源获得。作为非限制性实例,神经酰胺II可以作为Ceramide II从Givaudan-Soliance获得。
乳木果油是从非洲乳木果树(Vitellaria paradoxa或Butyrospermum parkii)的坚果中提取的脂肪。其包括许多饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸,包括花生四烯酸、亚油酸、亚麻酸、油酸、棕榈酸和硬脂酸。乳木果油具有皮肤保湿和修复的效果。其通过帮助皮肤保持水分来减少皮肤干燥。其还有助于恢复和加强皮肤的屏障功能。乳木果油可以从商业来源获得。作为非限制性实例,乳木果油可以作为Shea Butter Ultra Refined从Hallstar获得。
糖类同分异构体是由溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)合成的胞外多糖,是从浮游生物中培养出来的海洋细菌。糖类同分异构体是保湿剂,模仿皮肤表层的天然碳水化合物部分。糖类同分异构体与皮肤的结合比其他保湿霜更牢固、更持久,因此可以比平时更长时间地保持皮肤的水份。糖类同分异构体可以从商业来源获得。作为非限制性实例,糖类同分异构体可以作为Benoiderm从Barnet获得。
浮游生物提取物是从海洋生物质提取的提取物。其为皮肤提供脂肪酸、抗氧化剂和锌,并被用作皮肤调节剂。浮游生物提取物减少皮肤炎症,并保护皮肤免受阳光的伤害。浮游生物提取物也是糖类同分异构体的来源。
羟苯基丙酰胺苯甲酸衍生自燕麦(Avena sativa)的活性成分。羟苯基丙酰胺苯甲酸可减少皮肤发红和发炎,并具有抗氧化特性。羟苯基丙酰胺苯甲酸可以从商业来源获得。作为非限制性实例,羟苯基丙酰胺苯甲酸可以作为Symcalmin从Symrise获得。
海枣籽提取物包括多种具有抗氧化和抗炎作用的化合物。这些化合物包括生物碱类、酚类、多酚类胡萝卜素、单宁类和固醇类。海枣籽提取物通过减缓细胞增殖来影响内在衰老,并通过提供抗氧化保护来减缓环境衰老因素来影响外在衰老。用海枣籽提取物处理皮肤可以改善皮肤弹性、减少色素沉着、减少发红、增加水分。在一些情况下,海枣籽提取物是来自海枣籽的水溶性提取物。海枣籽提取物可以从商业来源获得。作为非限制性实例,海枣籽提取物可以作为从LucasMeyer获得,其是在甘油和水中的海枣籽提取物。
天然保湿因子(NMF)是皮肤中天然存在的多种成分的总称。NMF主要由游离氨基酸、以及这些氨基酸的各种衍生物,如吡咯烷酮羧酸(PCA)、尿刊酸(紫外[UV]光的天然吸收剂)、无机盐、糖以及乳酸和尿素组成。NMF组分是可以吸引和结合大气中的水分,将其吸引到皮肤表面的高效保湿剂。NMF有助于使皮肤看起来健康和柔软,并有助于防止因机械压力而产生的皲裂或剥落。
诱导型一氧化氮合酶(iNOS)是催化L-精氨酸产生一氧化氮(NO)的酶。iNOS通过诱导毒性过氧亚硝酸基和其他活性氮氧化物(RNOS)的形成而导致炎症。iNOS的上调与多种炎症性皮肤病、如银屑病和特应性皮炎有关。抑制iNOS可以通过减少促炎RNOS的产生来减轻炎症。
α-肾上腺素受体激动剂用于治疗慢性炎症性皮肤病,如酒渣鼻。皮肤炎症增加与血管舒张有关,α-肾上腺素受体激动剂具有血管收缩作用,可用于减轻皮肤炎症。
本文中所述的提取物可以是通过本领域中已知的提取方法和其组合所制备的提取物。提取方法的非限制性实例包括使用液-液提取、固相提取、水提取、乙酸乙酯提取、乙醇提取、丙酮提取、油提取、超临界二氧化碳提取、加热提取、压力提取、压降提取、超声提取等。提取物可以是液体、固体、经干燥的液体、经重悬的固体等。
B.成分的量
预期本发明所述的组合物可以包含任意量的本说明书所讨论成分。组合物还可以包含任意数目的在本说明书全文中所描述的附加成分的组合(例如,颜料或附加的化妆品或药物成分)。在该组合物中任意成分的浓度可以改变。例如,在非限制性实施方案中,组合物在其最终形式中可以包含、主要组成为或组成为以下组分:例如至少约0.0001%、0.0002%、0.0003%、0.0004%、0.0005%、0.0006%、0.0007%、0.0008%、0.0009%、0.0010%、0.0011%、0.0012%、0.0013%、0.0014%、0.0015%、0.0016%、0.0017%、0.0018%、0.0019%、0.0020%、0.0021%、0.0022%、0.0023%、0.0024%、0.0025%、0.0026%、0.0027%、0.0028%、0.0029%、0.0030%、0.0031%、0.0032%、0.0033%、0.0034%、0.0035%、0.0036%、0.0037%、0.0038%、0.0039%、0.0040%、0.0041%、0.0042%、0.0043%、0.0044%、0.0045%、0.0046%、0.0047%、0.0048%、0.0049%、0.0050%、0.0051%、0.0052%、0.0053%、0.0054%、0.0055%、0.0056%、0.0057%、0.0058%、0.0059%、0.0060%、0.0061%、0.0062%、0.0063%、0.0064%、0.0065%、0.0066%、0.0067%、0.0068%、0.0069%、0.0070%、0.0071%、0.0072%、0.0073%、0.0074%、0.0075%、0.0076%、0.0077%、0.0078%、0.0079%、0.0080%、0.0081%、0.0082%、0.0083%、0.0084%、0.0085%、0.0086%、0.0087%、0.0088%、0.0089%、0.0090%、0.0091%、0.0092%、0.0093%、0.0094%、0.0095%、0.0096%、0.0097%、0.0098%、0.0099%、0.0100%、0.0200%、0.0250%、0.0275%、0.0300%、0.0325%、0.0350%、0.0375%、0.0400%、0.0425%、0.0450%、0.0475%、0.0500%、0.0525%、0.0550%、0.0575%、0.0600%、0.0625%、0.0650%、0.0675%、0.0700%、0.0725%、0.0750%、0.0775%、0.0800%、0.0825%、0.0850%、0.0875%、0.0900%、0.0925%、0.0950%、0.0975%、0.1000%、0.1250%、0.1500%、0.1750%、0.2000%、0.2250%、0.2500%、0.2750%、0.3000%、0.3250%、0.3500%、0.3750%、0.4000%、0.4250%、0.4500%、0.4750%、0.5000%、0.5250%、0.0550%、0.5750%、0.6000%、0.6250%、0.6500%、0.6750%、0.7000%、0.7250%、0.7500%、0.7750%、0.8000%、0.8250%、0.8500%、0.8750%、0.9000%、0.9250%、0.9500%、0.9750%、1.0%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2.0%、2.1%、2.2%、2.3%、2.4%、2.5%、2.6%、2.7%、2.8%、2.9%、3.0%、3.1%、3.2%、3.3%、3.4%、3.5%、3.6%、3.7%、3.8%、3.9%、4.0%、4.1%、4.2%、4.3%、4.4%、4.5%、4.6%、4.7%、4.8%、4.9%、5.0%、5.1%、5.2%、5.3%、5.4%、5.5%、5.6%、5.7%、5.8%、5.9%、6.0%、6.1%、6.2%、6.3%、6.4%、6.5%、6.6%、6.7%、6.8%、6.9%、7.0%、7.1%、7.2%、7.3%、7.4%、7.5%、7.6%、7.7%、7.8%、7.9%、8.0%、8.1%、8.2%、8.3%、8.4%、8.5%、8.6%、8.7%、8.8%、8.9%、9.0%、9.1%、9.2%、9.3%、9.4%、9.5%、9.6%、9.7%、9.8%、9.9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%或其中可获得的任何范围的至少一种在本说明书的全文和权利要求中所提及的成分。在非限制性方面,百分比可以按整个组合物的重量或体积进行计算。本领域普通技术人员会理解,给定组合物中的浓度可以根据成分的加入、替换和/或减少而改变。
C.载剂
本发明的组合物可以包含或被并入到所有类型的载剂和载体中。载剂或载体可以是药学上或皮肤病学上可接受的载剂或载体。载剂或载体的非限制性实例包括水、甘油、酒精、油、含硅酮的化合物、硅酮化合物和蜡。变型和其他合适的载剂对于熟练技术人员是明显的,并且适用于本发明。在某些方面,化合物、成分和试剂的浓度和组合以使得组合物是化学相容的并且不形成从最终产品中沉淀出来的络合物的方式进行选择。
D.结构
本发明的组合物可以被构造或配制成各种不同的形式。非限制性实例包括乳状液(例如,油包水、水包油包水、水包油、水包硅酮、硅酮包水、油包水包油、硅酮包水包油的乳状液)、霜剂、乳液、溶液(水溶液和水-醇溶液)、无水基质(如唇膏和粉剂)、凝胶、面膜、剥脱剂和软膏。变体和其他结构对于熟练技术人员是明显的,并且适用于本发明。
E.附加成分
除了本发明所公开成分的组合之外,组合物还可以包含附加成分,例如化妆品成分和药物有效成分。这些附加成分的非限制性实例在以下子章节中进行描述。
1.化妆品成分
CTFA国际化妆品成分词典和手册(2004和2008)描述了多种可以在本发明的环境下使用的非限制性化妆品成分。这些成分类别的实例包括:芳香剂(人造的和天然的;例如葡糖酸、苯氧乙醇和三乙醇胺)、染料和着色成分(例如蓝色1号、蓝色1号色淀、红色40号、二氧化钛、D&C蓝色4号、D&C绿色5号、D&C橙色4号、D&C红色17号、D&C红色33号、D&C紫色2号、D&C黄色10号和D&C黄色11号)、调味剂/香味剂(例如甜叶菊(Stevia rebaudiana)提取物和薄荷醇)、吸附剂、润滑剂、溶剂、保湿剂(包括例如润肤剂、湿润剂、成膜剂、闭塞剂和影响皮肤天然保湿机制的试剂)、拒水剂、UV吸收剂和/或反射剂(物理和化学吸收剂,例如对氨基苯甲酸(“PABA”)和相应的PABA衍生物、二氧化钛、氧化锌等)、精油、维生素(例如A、B、C、D、E和K)、微量金属(例如锌、钙和硒)、抗刺激物(例如类固醇和非类固醇抗炎药)、植物提取物(例如芦荟(Aloe vera)、柑橘、黄瓜提取物、银杏(Ginkgo biloba)、人参和迷迭香)、抗菌剂、抗氧化剂(例如BHT和生育酚)、螯合剂(例如EDTA二钠和EDTA四钠)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、pH调节剂(例如氢氧化钠和柠檬酸)、吸收剂(例如淀粉辛基烯琥珀酸铝、高岭土、玉米淀粉、燕麦淀粉、环糊精、滑石和沸石)、皮肤漂白和美白剂(例如氢醌和烟酰胺乳酸盐/酯)、湿润剂(例如山梨醇、尿素、甲基葡糖醇聚醚-20、糖类同分异构体和甘露醇)、去角质剂、防水剂(例如氢氧化钠镁/铝硬脂酸盐)、皮肤调节剂(例如芦荟提取物、尿囊素、没药醇、神经酰胺、聚二甲基硅氧烷、透明质酸、生物糖胶-1、乙基己基甘油、戊二醇、氢化聚癸烯、油酸辛基十二烷醇酯和甘草酸二钾)。这些附加成分中一些的非限制性实例在以下子章节中提供。
a.UV吸收和/或反射剂
可以与本发明的组合物组合使用的UV吸收和/或反射剂包括化学和物理防晒物质。可以使用的化学防晒物质的非限制性实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、PABA酯(PABA甘油酯、PABA戊基二甲醇酯和PABA辛基二甲醇酯)、PABA丁酯、PABA乙酯、PABA乙基二羟基丙醇酯、二苯甲酮(氧苯酮、磺异苯酮、二苯甲酮和二苯甲酮-1至二苯甲酮-12)、肉桂酸盐/酯(甲氧基肉桂酸辛酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯、肉桂酸辛基甲氧基酯、西诺沙酯、肉桂酸二异丙基甲酯、DEA甲氧基肉桂酸盐、二异丙基肉桂酸乙酯、甘油辛酸酯二甲氧基肉桂酸酯和甲氧基肉桂酸乙酯)、肉桂酸酯、水杨酸酯(水杨酸均甲基酯、水杨酸苄酯、水杨酸乙二醇酯、水杨酸异丙基苄酯等)、邻氨基苯甲酸盐/酯、尿刊酸乙酯、胡莫柳酯、水杨酸辛酯、二苯甲酰基甲烷衍生物(例如阿伏苯宗)、奥克立林、辛基三嗪酮、棓酰棓酸三油酸酯、氨基苯甲酸甘油酯、2-羟基-1,4-萘醌和二羟基丙酮、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、苯亚甲基丙二酸脂聚硅氧烷、对苯二亚甲基二莰酮磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯、双二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸酯、双苯并唑基苯基乙基己基亚氨基三嗪、甲酚曲唑三硅氧烷、亚甲基双苯并三唑基四甲基丁基苯酚和双乙基己基氧苯酚甲氧苯基三嗪、4-甲基苯亚甲基莰酮和4-甲氧基肉桂酸异戊酯。物理防晒物质的非限制性实例包括高岭土、滑石、凡士林和金属氧化物(例如二氧化钛和氧化锌)。
b.保湿剂
可以与本发明的组合物一起使用的保湿剂的非限制性实例包括氨基酸、硫酸软骨素、双甘油、赤藓糖醇、果糖、葡萄糖、甘油、甘油聚合物、乙二醇、1,2,6-己三醇、蜂蜜、透明质酸、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、肌醇、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、天然保湿因子、PEG-15丁二醇、聚甘油山梨醇、糖类同分异构体、吡咯烷酮羧酸的盐、PCA钾、丙二醇、葡糖醛酸钠、PCA钠、山梨醇、蔗糖、海藻糖、尿素和木糖醇。
其他实例包括乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、丙氨酸、藻类提取物、库拉索芦荟(Aloe barbadensis)、库拉索芦荟提取物、库拉索芦荟凝胶、药蜀葵(Althea officinalis)提取物、杏(Prunus armeniaca)仁油、精氨酸、精氨酸天冬氨酸盐、山金车花(Arnicamontana)提取物、天冬氨酸、鳄梨(Persea gratissima)油、屏障鞘脂、丁醇、蜂蜡、山嵛醇、β-谷甾醇、白桦(Betula alba)树皮提取物、琉璃苣(Borago officinalis)提取物、假叶树(Ruscus aculeatus)提取物、丁二醇、金盏花(Calendula officinalis)提取物、金盏花油、小烛树(Euphorbia cerifera)蜡、芥花油、辛/癸酸甘油酯、小豆蔻(Elettariacardamomum)油、巴西棕榈(Copernicia cerifera)蜡、胡萝卜(Daucus carota sativa)油、蓖麻(Ricinus communis)油、神经酰胺、地蜡、鲸蜡硬脂醇聚醚-5、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇辛酸酯、鲸蜡醇聚醚-20、鲸蜡醇聚醚-24、鲸蜡醇乙酸酯、鲸蜡醇辛酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、洋甘菊(Anthemis nobilis)油、胆固醇、胆固醇酯、胆甾醇羟基硬脂酸酯、柠檬酸、鼠尾草(Salvia sclarea)油、可可(Theobroma cacao)脂、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、椰子(Cocos nucifera)油、胶原蛋白、胶原蛋白氨基酸、玉米(Zea mays)油、脂肪酸、油酸癸酯、聚二甲基硅氧烷共聚醇、、聚二甲基硅氧烷醇、己二酸二辛酯、琥珀酸二辛酯、二聚季戊四醇六辛酸酯/六癸酸酯、DNA、赤藓糖醇、乙氧基二乙二醇、亚油酸乙酯、蓝桉(Eucalyptus globulus)油、月见草(Oenothera biennis)油、脂肪酸、斑点老鹳草(Geranium maculatum)油、葡萄糖胺、葡糖谷氨酸酯、谷氨酸、甘油聚醚-26、甘油、丙三醇、二硬脂酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、硬脂酸酯甘油SE、甘氨酸、乙二醇硬酯酸酯、乙二醇硬酯酸酯SE、葡糖氨基葡聚糖、葡萄(Vitis vinifera)籽油、美洲榛(Corylus americana)坚果油、欧榛(Corylus americana)坚果油、己二醇、透明质酸、杂交红花(Carthamus tinctorius)油、氢化蓖麻油、氢化椰油酸甘油酯、氢化椰子油、氢化羊毛脂、氢化卵磷脂、氢化棕榈油甘油酯、氢化棕榈仁油、氢化大豆油、氢化牛脂酸甘油酯、氢化植物油、水解胶原蛋白、水解弹性蛋白、水解葡糖氨基葡聚糖、水解角蛋白、水解大豆蛋白、羟基化羊毛脂、羟基脯氨酸、硬脂酸异鲸蜡醇酯、异鲸蜡醇硬脂酰基硬脂酸酯、油酸异癸酯、异硬脂酸异丙酯、羊毛脂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、异硬脂酰胺DEA、异硬脂酸、异硬脂醇乳酸酯、异硬脂醇新戊酸酯、茉莉花(Jasminum officinale)油、霍霍巴(Buxus chinensis)油、巨型海藻、石栗(Aleurites moluccana)坚果油、乳酰胺MEA、羊毛脂醇聚醚-16、羊毛脂醇聚醚-10乙酸酯、羊毛脂、羊毛脂酸、羊毛脂醇、羊毛脂油、羊毛脂蜡、薰衣草(Lavandulaangustifolia)油、卵磷脂、柠檬(Citrus medica limonum)油、亚油酸、亚麻酸、澳洲坚果(Macadamia ternifolia)油、麦芽糖醇、母菊(Chamomilla recutita)油、甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯、甲基硅烷醇PCA、矿物油、貂油、被孢霉油、肉豆蔻醇乳酸酯、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻醇丙酸酯、新戊二醇二辛酸酯/二癸酸酯、辛基月桂醇、辛基月桂醇肉豆蔻酸酯、辛基月桂醇硬脂酰基硬脂酸酯、羟基硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、水杨酸辛酯、硬脂酸辛酯、油酸、油橄榄(Olea europaea)油、橙(Citrus aurantium dulcis)油、棕榈(Elaeisguineensis)油、棕榈酸、泛硫乙胺、泛醇、泛醇基乙基醚、石蜡、PCA、桃(Prunus persica)仁油、花生(Arachis hypogaea)油、PEG-8C12-18酯、PEG-15椰油胺、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-60甘油异硬脂酸酯、PEG-5甘油硬脂酸酯、PEG-30甘油硬脂酸酯、PEG-7氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG40失水山梨醇全油酸酯、PEG-5大豆甾醇、PEG-10大豆甾醇、PEG-2硬脂酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-20硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-50硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-150硬脂酸酯、十五内酯、薄荷(Mentha piperita)油、凡士林、磷脂、浮游生物提取物、多氨基酸多糖缩合物、聚甘油-3二异硬脂酸酯、聚季铵盐-24、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、肉豆蔻酸钾、棕榈酸钾、丙二醇、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯SE、PVP、吡哆醇二棕榈酸酯、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯、米(Oryza sativa)糠油、RNA、迷迭香(Rosmarinus officinalis)油、玫瑰油、红花(Carthamus tinctorius)油、鼠尾草(Salviaofficinalis)油、檀香(Santalum album)油、丝氨酸、血清蛋白、芝麻(Sesamum indicum)油、乳木果油(Butyrospermum parkii)、蚕丝粉、软骨素硫酸钠、透明质酸钠、乳酸钠、棕榈酸钠、PCA钠、聚谷氨酸钠、可溶胶原、失水山梨醇月桂酸酯、失水山梨醇油酸酯、失水山梨醇棕榈酸酯、失水山梨醇倍半油酸酯、失水山梨醇硬脂酸酯、山梨醇、大豆(Glycine soja)油、鞘脂、角鲨烷、角鲨烯、硬脂酰胺MEA-硬脂酸酯、硬脂酸、硬脂氧基聚二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷、硬脂醇、硬脂醇甘草亭酸酯、硬脂醇庚酸酯、硬脂醇硬脂酸酯、向日葵(Helianthus annuus)籽油、甜扁桃(Prunus amygdalus dulcis)油、合成蜂蜡、生育酚、乙酸生育酚酯、生育酚亚油酸酯、三山嵛精、十三烷醇新戊酸酯、十三烷醇硬脂酸酯、三乙醇胺、三硬脂酸精、尿素、植物油、水、蜡、小麦(Triticum vulgare)胚芽油和依兰(Canangaodorata)油。
c.抗氧化剂
可以与本发明的组合物一起使用的抗氧化剂的非限制性实例包括乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、BHA、BHT、叔丁基氢醌、半胱氨酸、半胱氨酸HCI、二戊基氢醌、二叔丁基氢醌、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、二油基生育酚甲基硅烷醇、抗坏血酸硫酸酯二钠、二硬脂醇硫代二丙酸酯、双十三烷醇硫代二丙酸酯、没食子酸月桂醇酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、没食子酸酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸酯镁、甲基硅烷醇抗坏血酸酯、天然植物抗氧化剂例如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、没食子酸辛酯、苯巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、亚硫酸钾、没食子酸丙酯、醌类、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、硫二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、生育酚聚醚-5、生育酚聚醚-10、生育酚聚醚-12、生育酚聚醚-18、生育酚聚醚-50、生育酚、托可索伦、生育酚乙酸酯、生育酚亚油酸酯、生育酚烟酸酯、生育酚琥珀酸酯和三(壬基苯酚)亚磷酸酯。
d.结构化剂
在其他非限制性方面,本发明的组合物可以包含结构化剂。在某些方面,结构化剂帮助向组合物提供流变学特征以促进组合物的稳定性。在其他方面,结构化剂还可以起乳化剂或表面活性剂的作用。结构化剂的非限制性实例包括硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、硬脂酸、棕榈酸、具有平均约1个至约21个亚乙基氧单元的硬脂醇的聚乙二醇醚、具有平均约1个至约5个亚乙基氧单元的鲸蜡醇的聚乙二醇醚、及其混合物。
e.乳化剂
在本发明的特定方面,组合物不包含乳化剂。然而,在其他方面,组合物可以包含一种或多于一种乳化剂。乳化剂可以降低相间表面张力并改善乳液的剂型和稳定性。乳化剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的和两性离子的乳化剂(参见McCutcheon's(1986);美国专利第5011681号、第4421769号、第3755560号)。非限制性实例包括甘油酯、丙二醇酯、聚乙二醇的脂肪酸酯、聚丙二醇的脂肪酸酯、山梨醇的酯、失水山梨醇酐酯、羧酸共聚物、葡萄糖的酯和醚、乙氧基化的酯、乙氧基化的醇、磷酸烷基酯、聚氧乙烯脂肪醚磷酸酯、脂肪酸酰胺、乳酸酰酯、脂肪酸盐、TEA硬脂酸酯、DEA油醇聚醚-3磷酸酯、聚乙二醇20失水山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯20)、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-21、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、C12-13链烷醇聚醚-3、PPG-2甲基葡萄糖醚二硬脂酸酯、PPG-5-鲸蜡硬脂醇聚醚-20、双-PEG/PPG-20/20二甲硅酮、鲸蜡醇聚醚-10、聚山梨醇酯80、鲸蜡醇磷酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、二乙醇胺鲸蜡醇磷酸酯、聚山梨醇酯60、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、花生醇、花生醇葡糖苷、及其混合物。
f.含硅酮的化合物
在非限制性方面,含硅酮的化合物包括分子主链由交替的硅和氧原子与连接在硅原子上的侧基组成的聚合产物家族中的任何成员。通过改变-Si-O-链的长度、侧基和交联,硅酮可以合成为各种各样的材料。它们的稠度可以从液体到凝胶到固体改变。
可以在本发明的环境下使用的含硅酮的化合物包括在本说明书中所描述的或本领域普通技术人员已知的那些。非限制性实例包括硅油(例如挥发性油和非挥发性油)、硅胶和硅酮固体。在特定的方面,含硅的化合物包括硅油,例如聚有机硅氧烷。聚有机硅氧烷的非限制性实例包括聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚硅氧烷-11、苯基聚三甲基硅氧烷、三甲基硅烷基氨端聚二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷或它们与其他任何给定比例的有机硅氧烷材料的混合物,以根据预期的应用(例如,施用至特定区域例如皮肤、毛发或眼睛)达到期望的稠度和应用特征。“挥发性硅油”包括具有低气化热的硅油,即通常低于约每克硅油50卡。挥发性硅油的非限制性实例包括:环聚二甲基硅氧烷,例如道康宁344流体、道康宁345流体、道康宁244流体和道康宁245流体、挥发硅7207(Union Carbide Corp.,Danbury,Conn.);低黏度聚二甲基硅氧烷,即黏度约为50cst或低于50cst的聚二甲基硅氧烷(例如,聚二甲基硅氧烷如道康宁200cst至0.5cst流体)。道康宁流体可以从密歇根州米德兰的Dow Corning Corporation购得。在CTFA化妆品成分词典的第三版中(通过引用并入),环聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷分别被描述为环状二甲基聚硅氧烷化合物和用三甲基硅氧基单元封端的完全甲基化的线性硅氧烷的混合物。可以在本发明的上下文中使用的其他非限制性挥发性硅油包括从General Electric Co.、Silicone Products Div.、Waterford,N.Y.和密歇根州阿德里安的Stauffer Chemical Co.的SWS Silicones Div.购得的那些。
g.去角质剂
去角质剂包含去除皮肤外表面上的死皮肤细胞的成分。这些试剂可以通过机械、化学和或其他方式起作用。机械去角质剂的非限制性实例包括磨砂剂例如浮石、二氧化硅、织物、纸、贝壳、玻璃珠、固体晶体、固体聚合物等。化学去角质剂的非限制性实例包括酸和酶去角质剂。可以用作去角质剂的酸包括但不限于乙醇酸、乳酸、柠檬酸、α羟基酸、β羟基酸等。还预期本领域技术人员熟知的其他试剂在本发明的上下文中是有用的。
h.精油
精油包括来自药草、花朵、树木和其他植物的油。这类油一般以植物细胞间微小的液滴存在,并可以用本领域技术人员已知的若干方法进行提取(例如,蒸气蒸馏、花香提取(即使用脂肪提取)、浸渍、溶剂提取或机械压榨)。当这些类型的油暴露于空气时,其趋于挥发(即挥发性油)。因此,虽然许多精油是无色的,但是随着时间其被氧化并且颜色变得更深。精油不溶于水,但溶于醇、醚、固定油(植物的)和其他有机溶剂。在精油中发现的典型物理特征包括约160℃至240℃的沸点和约0.759至约1.096的密度。
精油一般通过油被发现的来源植物命名。例如,玫瑰油或薄荷油分别来自玫瑰或薄荷植物。可以在本发明的环境下使用的精油的非限制性实例包括芝麻油、澳洲坚果油、茶树油、月见草油、西班牙鼠尾草油、西班牙迷迭香油、芫荽油、百里香油、麝香草油、玫瑰油、大茴香油、凤仙花油、香柠檬油、玫瑰木油、香柏油、甘菊油、鼠尾草油、香紫苏油、丁香油、柏木油、桉油、茴香油、海茴香油、乳香油、香叶油、姜油、葡萄柚油、茉莉油、杜松子油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、梨莓油、橘子油、甘牛至油、没药油、苦橙花油、橙油、绿叶油、胡椒油、黑胡椒油、苦橙叶油、松油、奥图玫瑰油、迷迭香油、檀香油、绿薄荷油、甘松油、香根草油、冬青油或依兰。还预期本领域技术人员已知的其他精油在本发明的环境下是有用的。
i.增稠剂
包括增稠剂或胶凝剂在内的增稠剂,包括可以增加组合物黏度的物质。增稠剂包括可以增加组合物黏度而基本上不改变组合物内活性成分功效的那些。增稠剂还可以增加本发明的组合物的稳定性。在本发明的一些方面,增稠剂包括氢化聚异丁烯、三羟基硬脂酸甘油酯、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/vp共聚物、或其混合物。
可以在本发明的环境下使用的另外的增稠剂的非限制性实例包括羧酸聚合物、交联的聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖和胶。羧酸聚合物的实例包括含有一种或多于一种衍生自丙烯酸的单体的交联化合物、经取代的丙烯酸和这些丙烯酸和经取代的丙烯酸的盐和酯,其中所述交联剂含有两个或多于两个碳-碳双键,并衍生自多元醇(参见美国专利第5087445号、第4509949号、第2798053号、CTFA国际化妆品成分词典,第四版,1991,第12和80页)。市售的羧酸聚合物的实例包括卡波姆,其为丙烯酸与蔗糖或季戊四醇的烯丙基醚交联的均聚物(例如,购自B.F.Goodrich的CarbopolTM900系列)。
交联的聚丙烯酸酯聚合物的非限制性实例包括阳离子型和非离子型聚合物。实例描述于美国专利第5100660号、第4849484号、第4835206号、第4628078号、第4599379号。
聚丙烯酰胺聚合物(包括非离子的聚丙烯酰胺聚合物,其包括经取代的支化的或非支化的聚合物)的非限制性实例包括聚丙烯酰胺、异构烷烃和月桂醇聚醚-7、丙烯酰胺和经取代的丙烯酰胺与丙烯酸和经取代的丙烯酸的多嵌段共聚物。
多糖的非限制性实例包括纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、乙酸丙酸羧酸纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、纤维素硫酸钠及其混合物。其他实例为烷基取代的纤维素,其中纤维素聚合物的羟基被羟烷基化(优选地羟乙基化或羟丙基化)以形成羟烷基化的纤维素,其然后用C10至C30直链或支链烷基基团通过醚键进行进一步改性。一般这些聚合物为C10至C30直链或支链醇与羟烷基纤维素的醚。其他有用的多糖包括硬葡聚糖类,其包含每三个单元具有一个(1-6)连接的葡萄糖的(1-3)连接的葡萄糖单元的直链。
本发明可以使用的胶的非限制性实例包括阿拉伯树胶、琼脂、藻胶、藻酸、藻酸铵、支链淀粉、藻酸钙、角叉菜胶钙、肉毒碱、角叉菜胶、糊精、明胶、结冷胶、瓜尔豆胶、瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵、锂蒙脱石、透明质酸、水合二氧化硅、羟丙基壳聚糖、羟丙基瓜尔胶、卡拉亚胶、巨藻、角豆胶、纳豆胶、藻酸钾、角叉菜胶钾、藻酸丙二醇酯、菌核胶、羧甲基葡聚糖钠、角叉菜胶钠、黄蓍胶、黄原胶、及其混合物。
j.防腐剂
可以在本发明的环境下使用的防腐剂的非限制性实例包括季铵盐防腐剂(例如聚季铵盐-1和苄烷铵卤化物(例如苯扎氯铵(“BAC”)和苯扎溴铵))、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、苯氧乙醇、苄醇、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒、或其组合。
2.药物成分
还预期药物活性剂对本发明的组合物是有用的。药物活性剂的非限制性实例包括抗粉刺剂、用于处理酒渣鼻的试剂、止痛剂、麻醉剂、肛门直肠剂、抗组胺药、α-肾上腺素受体激动剂、包括非甾族消炎药在内的消炎剂、抗生素、抗菌剂、抗病毒素、抗微生物剂、抗癌活性剂、抗疥螨剂、灭虱剂、抗肿瘤药、防汗药、止痒剂、抗牛皮癣药、抗脂溢剂、生物活性蛋白质和多肽、烧伤处理剂、烧灼剂、脱色剂、脱毛剂、尿布疹处理剂、酶、毛发生长刺激剂、包括DFMO及其盐和类似物在内的毛发生长抑制剂、止血剂、角质分离剂、口疮处理剂、唇疱疹处理剂、牙科或牙周处理剂、光敏感活性物、皮肤保护剂/屏障剂、包括激素和皮质激素的类固醇、晒伤处理剂、遮光剂、经皮活性剂、鼻活性剂、阴道活性剂、血管收缩剂、疣处理剂、创伤处理剂、创伤愈合剂等。
F.试剂盒
还预期试剂盒用于本发明的特定方面。例如,本发明的组合物可以包括在试剂盒内。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层压管、塑料管、分配器、高压容器、阻隔性容器、包装、分室、口红容器、压缩容器、能够保存化妆品组合物的化妆品盘或其他类型的容器,例如注射或吹塑成型的塑料容器,其中保存分散体或组合物或期望的瓶子、分配器或包装。试剂盒和/或容器在其表面可包含标记。举例来说,标记可以是字词、短语、缩写、图片或符号。
所述容器可以分配预定量的组合物。在其他实施方案中,可以挤压容器(例如金属、层压或塑料管)以分配期望量的组合物。组合物可以分配为喷雾、气溶胶、液体、流体或半固体。容器可以具有喷雾、抽吸或挤压机构。试剂盒还可以包含使用试剂盒组分以及使用任何包含于容器内的组合物的说明书。说明书可以包含如何施用、使用和保存组合物的说明。
实施例
列出了以下实施例以说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应理解以下实施例中所公开的技术能代表本发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术,因此能够认为其构成用于其实践的优选实施方式。然而,根据本公开,本领域技术人员应理解,在不脱离本发明的精神和范围的情况下,在所公开的具体实方案中可以做许多改变,并仍获得相同或相似的结果。
实施例1
本文所公开的活性成分的组合可以包含在多种皮肤局部产品配方中。实施例1的组合物可制备为外用皮肤组合物。在一些方面,表1中的组合物可以制备为霜剂。
本文所公开和要求保护的所有组合物和方法根据本公开可以不需要过多的实验即可作出和实现。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述,但是对于本领域技术人员明显的是,在不脱离本发明的概念、构思和范围的情况下,可以对所述组合物和方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化。更具体地,明显地,化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂,同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的构思、范围和概念内。
表1
成分 |
胆固醇 |
神经酰胺II |
乳木果油 |
表2
成分 |
胆固醇 |
神经酰胺II |
乳木果油 |
糖类同分异构体提取物 |
羟苯基丙酰胺苯甲酸 |
海枣籽提取物 |
实施例2
(通用配方)
活性成分的组合可以包含在用于皮肤和/或头发的多种局部用产品配方中。表3和表4描述了可掺入活性成分的通用配方或皮肤测试配方。这些配方也可用于确定可归因于活性成分的皮肤益处的类型。以使得由对皮肤局部施用所述制剂所产生的所有皮肤益处都可以直接归因于正在试验的活性成分的方式制备这些制剂。在本发明的方面的上下文中,可以测试的活性成分可以是胆固醇、神经酰胺II和乳木果油、糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸、海枣籽提取物或其任意组合,或所有这些活性成分,或至少1种、2种、3种、4种、5种和/或6种这些活性成分。应认识到,也可以使用其他标准试验载剂以确定活性成分的皮肤益处性能,以下制剂是非限制性试验载剂。
表3*
成分 | %浓度(以重量计) |
相A | |
水 | 84.80 |
黄原胶 | 0.1 |
对羟基苯甲酸甲酯 | 0.15 |
对羟基苯甲酸丙酯 | 0.1 |
柠檬酸 | 0.1 |
相B | |
鲸蜡醇 | 4.0 |
硬脂酸甘油酯+PEG 100 | 4.0 |
棕榈酸辛酯 | 4.0 |
聚二甲基硅氧烷 | 1.0 |
生育酚乙酸酯 | 0.2 |
相C | |
活性成分** | 2.0 |
总计 | 100 |
*制备组合物的过程:将黄原胶撒入水中并混合10分钟。然后,加入相A中的所有成分并加热至70℃至75℃。加入相B中的所有成分至单独的烧杯中并加热到70℃至75℃。在70℃至75℃下混合相A和相B。继续搅拌并使组合物冷却到30℃。然后,边搅拌边加入相C的成分。
**本说明书全文所确定的活性成分可以作为活性成分并入组合物中。活性成分可以单独用于或组合用于组合物中。根据预期或需要,可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。
表4*
*将相A中的成分加入到烧杯中并边搅拌边加热到70℃至75℃。然后,将相B的成分与相A加入到一起并随着搅拌冷却到30℃。然后,边搅拌边加入相C的成分。
**本说明书全文所确定的活性成分可以作为活性成分并入组合物中。活性成分可以单独用于或组合用于组合物中。根据预期或需要,可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。
表5包括本发明的组合物的非限制性实例。组合物可以配制为乳状液(例如o/w、w/o、o/w/o、w/o/w等),本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表5的组合物中(例如通过调节组合物的含水量)。此外,可以根据希望的制剂(例如霜剂、乳液、保湿剂、清洁剂等)改变表5中所确定的成分的浓度范围。
表5
*说明书全文所确定的活性成分可以作为活性成分并入组合物中。活性成分可以单独用于或组合用于组合物中。根据预期或需要,可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。
**可以使用本说明书中所确定的或本领域已知的所有防腐剂。
表6包括本发明的组合物的非限制性实例。组合物可以配制为乳状液(例如o/w、w/o、o/w/o、w/o/w等),本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表6的组合物中(例如通过调节组合物的含水量)。此外,可以根据希望的制剂(例如霜剂、乳液、保湿剂、清洁剂等)改变表6中所确定的成分的浓度范围。在具体的实施方案中,表6的组合物可以是保湿剂。
表6
/>
*说明书全文所确定的活性成分可以作为活性成分并入组合物中。活性成分可以单独用于或组合用于组合物中。根据预期或需要,可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。
表7包括本发明的组合物的非限制性实例。组合物可以配制为乳状液(例如o/w、w/o、o/w/o、w/o/w等),本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表7的组合物中(例如通过调节组合物的含水量)。此外,可以根据希望的制剂(例如霜剂、乳液、保湿剂、清洁剂等)改变表7中所确定的成分的浓度范围。在具体的实施方案中,表7的组合物可以是保湿剂。
表7
/>
*说明书全文所确定的活性成分可以作为活性成分并入组合物中。活性成分可以单独用于或组合用于组合物中。根据预期或需要,可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。
表8包括本发明的组合物的非限制性实例。组合物可以配制为乳状液(例如o/w、w/o、o/w/o、w/o/w等),本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表8的组合物中(例如通过调节组合物的含水量)。此外,可以根据希望的制剂(例如霜剂、乳液、保湿剂、清洁剂等)改变表8中所确定的成分的浓度范围。在具体的实施方案中,表8的组合物可以是防晒剂。
表8
*说明书全文所确定的活性成分可以作为活性成分并入组合物中。活性成分可以单独用于或组合用于组合物中。根据预期或需要,可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。
**防晒成分可以是本说明书中所确定的或本领域普通技术人员已知的任何防晒成分(例如,UV吸收剂和/或反射剂)或这些成分的组合。在一个实施方案中,防晒成分是氧化锌和二氧化钛的组合。
表9包括本发明的组合物的非限制性实例。本说明书全文所确定的附加成分可以包含到表9的组合物中(例如通过调节组合物的含水量)。此外,可以根据希望的制剂(例如霜剂、乳液、保湿剂、清洁剂等)改变表9中所确定的成分的浓度范围。在具体的实施方案中,表9的组合物可以是清洁剂。
表9
成分 | %浓度(以重量计) |
水 | 适量 |
活性成分* | 0.1%至10% |
EDTA二钠 | 0.0001%至10% |
柠檬酸 | 0.0001%至10% |
戊二醇 | 0.0001%至10% |
辛二醇 | 0.0001%至10% |
甲基椰油酰基牛磺酸钠 | 10%至30% |
椰油酰两性二乙酸钠 | 1%至10% |
总计 | 100 |
*说明书全文所确定的活性成分可以作为活性成分并入组合物中。活性成分可以单独用于或组合用于组合物中。根据预期或需要,可以通过增加或减少水的量来调整活性成分(或活性成分的组合)的浓度范围。
实施例3
(成分的临床功效)
成分的临床功效通过以下方法确定。以下是可以在本发明的上下文中使用的非限制性分析。应认识到,可以使用其他测试过程,包括例如客观的和主观的过程。
结果表明,与未经处理的对照组相比,经胆固醇、神经酰胺II、乳木果油、糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣籽提取物组合处理的皮肤,显著改善了皮肤屏障的修复。与基线发红程度相比,这一组合也显示出脸颊皮肤发红程度的显著降低。定量结果和用于确定成分性质的方法总结如下。
经皮水分散失—用胶带剥离的活体健康人体皮肤作为研究屏障受损皮肤的模型。该模型已被用于研究炎症性皮肤病的几个方面,检查化合物在皮肤中的渗透,增加局部用产品在更深的表皮层的生物利用度,以及产生受损的皮肤屏障以研究皮肤屏障修复的生物过程。在一周的洗涤期后,用D-Squame胶带剥离前臂腹侧的一块区域来破坏对象的角质层(SC)。经皮水分散失(TEWL)是指水分从体内通过表皮进入大气的损失。测量在基线、剥离后即刻、剥离后3小时和24小时的TEWL(克水/m2/小时)。在剥离胶带后,在TEWL测量后立即应用测试产品。剥离后TEWL值较低与失水较少和皮肤屏障功能恢复有关。
表10
经胆固醇、神经酰胺II、乳木果油、糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣籽提取物处理的皮肤显示出比对照(仅胶带条)更快的皮肤屏障功能恢复。在3小时的时间点上,经胆固醇、糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣籽提取物处理的皮肤显示出较低的水分散失,这显示出比未处理的皮肤(仅胶带条)显著改善的皮肤屏障修复。
红斑试验:皮肤发红减少的测定使用Minolta Chromometer进行评估。皮肤红斑可以通过在对象前臂施用0.2%的十二烷基硫酸钠溶液来引发。该区域用封闭的贴片保护24小时。24小时后,除去贴片,使用Minolta Chroma Meter的a*值在基线评估刺激引起的发红。a*值测量皮肤色调在红色区域的变化。在读取后,立即用说明书中公开的活性成分、任一种成分组合、或具有所述组合的组合物来处理该区域。在两周至四周进行重复测量以确定制剂减少发红和刺激的能力。
表11
如表11所示,与基线相比,胆固醇、糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣籽提取物的组合在第2周显著减少了皮肤发红程度。该效果持续到第4周,此时皮肤发红的减少程度仍明显低于基线。
实施例4
(附加测定)
可用于确定在本说明书全文和权利要求书中所公开的包含所述成分任一种、或任意成分的组合或具有所述成分组合的组合物的功效的测定可通过本领域普通技术人员已知的方法确定。以下是可以在本发明的环境中使用的非限制性测定。应认识到,可以使用其他测试过程,包括例如客观的和主观的过程。
抗氧化(AO)测定:可以在皮肤细胞(例如,表皮角质形成细胞、成纤维细胞和/或真皮内皮细胞)上进行抗氧化测试,以确定本说明中所公开的成分中的任一种、成分的组合或具有所述组合的组合物通过抑制(2,2'-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐])被高铁肌红蛋白氧化成/>来提供抗氧化能力(TEAC)的能力。活生物体的抗氧化系统包含酶,例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶;高分子,例如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白;和大量小分子,包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。内源性和源自食物的抗氧化剂的总数表示细胞外液的总抗氧化能力。所有不同抗氧化剂的协同作用可以提供比单独的任何单个化合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此,总的抗氧化能力与测量单独组分获得的相比可以给出更相关的生物信息,因为其考虑了血浆和体液中存在的所有抗氧化剂的累积效应。可以将组合物中成分防止ABTS氧化的能力与水溶性生育酚类似物Trolox的能力进行比较,并以Trolox的摩尔当量进行定量。可以使用来自Cayman Chemical(密歇根州安娜堡,USA)的抗氧化能力试剂盒#709001测量总抗氧化能力。
B16色素沉着测定:黑素生成是黑素细胞产生黑色素的过程,黑色素是一种天然产生的给予皮肤、毛发和眼睛颜色的色素。抑制黑素生成有益于预防皮肤变黑和淡化与老化有关的黑斑。这种生物分析采用永生化的小鼠黑色素瘤细胞系B16-F1黑素细胞(ATCC)来分析化合物对黑素生成的效果。测定的终点是黑色素产生和细胞活力的分光光度测量。可以在37℃下10%的CO2中利用10%的胎牛血清(Mediatech)在标准DMEM生长培养基中培养B16-F1黑素细胞,然后用本说明书中所公开任何一种活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物处理。孵育之后,通过在405nm处的吸光度测量黑色素分泌并定量细胞活力。
胶原蛋白刺激测定:胶原蛋白是对皮肤结构关键的细胞外基质蛋白。增加胶原蛋白的合成有助于改善皮肤紧致度和弹性。这种生物测定可以用来检测本说明书中所公开的何一种活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物对人表皮纤维母细胞的前胶原肽(胶原蛋白的前体)产生的影响。该测定的终点是反映前胶原肽的存在和细胞活力的分光光度测量。该测定采用定量夹心酶免疫分析技术,因此将对原胶原蛋白肽特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。可以将标准品和样品移液到孔中,存在的所有前胶原肽被固定的抗体结合。洗掉所有未结合的物质后,将对前胶原肽具有特异性的酶联多克隆抗体加入到孔中。在洗涤以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后,可以将底物溶液加入到孔中,并使用酶标仪在450nm处检测,以使与初始步骤中结合的前胶原蛋白肽的量成比例的显色。可以停止显色,并测量颜色的强度。为了产生样品和对照,将近汇合的正常人类成熟体表皮成纤维细胞(Cascade Biologics)在37℃和10%的CO2中在含有10%胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中培养,然后使用说明书中所公开的成分的组合或具有所述组合的组合物的每一种处理3天。孵育之后,可以收集细胞培养基,并可以使用来自Takara(#MK101)的夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)定量前胶原肽的分泌量。
弹性蛋白刺激测定:弹性蛋白是结缔组织蛋白,其可帮助皮肤在拉伸或收缩后恢复形状。弹性蛋白也是重要的用于需要储存机械能的地方的承载蛋白。弹性蛋白通过在赖氨酰氧化酶催化的反应中连接许多可溶性原弹性蛋白分子来产生。通过使用抗弹性蛋白的免疫荧光抗体对培养的人成纤维细胞进行染色,可以在培养的人成纤维细胞中监测弹性蛋白分泌和弹性蛋白纤维。
层黏连蛋白刺激测定:层黏连蛋白和纤维黏连蛋白是真皮-表皮连接(DEJ)(也被称为基膜)中主要的蛋白质。DEJ位于真皮和表皮互锁之间,形成称为网脊的指状突出。表皮细胞从真皮的血管中获取养分。网脊增大暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织隔室的黏连,并控制皮肤的结构完整性。层黏连蛋白和纤维黏连蛋白是位于DEJ中的两种结构糖蛋白。就像将细胞保持在一起的胶,真皮成纤维细胞分泌层黏连蛋白和纤维黏连蛋白以帮助促进表皮细胞到DEJ的细胞内和细胞间黏连。通过在含有或不含有1.0%最终浓度的测试成分的培养基处理3天,可以定量培养的人成纤维细胞的细胞上清液中的层黏连蛋白来监测层黏连蛋白分泌。孵育后,可以使用酶联免疫吸附测定(ELISA)中的抗层黏连蛋白的免疫荧光抗体来测定层黏连蛋白的含量。通过3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑(MTS)的生物转化确定细胞代谢活性,对该测量进行归一化。
基质金属蛋白酶1(MMP-1)酶活性测定:MMP是胞外蛋白酶,其凭借宽的底物特异性在许多正常状态和疾病状态中起作用。MMP-1底物包括胶原蛋白IV。可以使用MolecularProbes Enz/Chek明胶酶/胶原酶测定试剂盒(#E12055)检测MMP-1酶活性,并利用荧光明胶底物检测纯化的MMP-1酶对底物的蛋白水解酶切割。在底物的蛋白水解酶切割后,显示亮绿色荧光,并可以使用荧光酶标仪监测以测量酶活性。在纯化的酶和底物存在或不存的条件下培养测试材料或对照试剂以确定其蛋白酶抑制能力。
基质金属蛋白酶3和9(MMP-3;MMP-9)酶活性测定:MMP是胞外蛋白酶,其凭借宽的底物特异性在许多正常状态和疾病状态中起作用。MMP-3底物包括胶原蛋白、纤维黏连蛋白和层黏连蛋白;而MMP-9底物包括胶原蛋白VII、纤维黏连蛋白和层黏连蛋白。可以使用来自BioMol International的用于MMP-3(AK-400)和MMP-9(AK-410)的Colorimetric DrugDiscovery试剂盒测量MMP的蛋白酶活性,使用含硫多肽作为显色底物(Ac-PLG-[2-巯基-4-甲基-戊酰基]-LG-OC2H5)5,6。MMP裂解位点的肽键由含硫多肽中的硫酯键替代。MMP对该键的水解产生了巯基,巯基与DTNB[5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸),埃尔曼试剂]反应生成2-硝基-5-硫代苯甲酸,可以通过其在412nm处的吸光度进行检测(在pH 6.0和高于7时,ε=13600M-1cm-1)。
脂氧合酶(LO)测定:可以使用脂氧合酶测定来确定本说明书中所公开活性成分的任一种、成分的组合或具有所述组合的组合物抑制脂氧合酶(LO)表达的能力。LO是非血红素的含铁的加双氧酶,其催化分子氧加成到脂肪酸。亚油酸盐/酯和花生四烯酸盐/酯是植物中和动物中LO的主要底物。然后,花生四烯酸可以转换为羟基二十烷三烯(HETE)酸衍生物,其随后转换为有效的炎症介质白三烯。通过测量脂氧合酶(5-LO、12-LO或15-LO)与花生四烯酸孵育产生的过氧化氢,可以实现准确而方便的筛选脂氧合酶抑制剂的方法。可以使用比色LO抑制剂筛选试剂盒(#760700,Cayman Chemical)用于确定组合物的成分抑制酶活性的能力。
可以将经纯化的15-脂氧合酶和测试成分在分析缓冲液中混合,并在室温下摇动孵育10分钟。孵育之后,加入花生四烯酸以引发反应,混合物可以在室温下再孵育另外10分钟。加入比色底物以终止催化,通过在490nm的荧光板读取评估颜色变化。与未经处理的对照组相比,可以计算脂氧化酶活性的抑制百分比,以确定组合物的成分抑制经纯化的酶的活性的能力。
肿瘤坏死因子α(TNF-α)测定:TNF超家族的原型配体TNF-α是一种在炎症中起主要作用的多效细胞因子。其表达的增加与促炎活性上调有关。该生物测定可以用来检测本说明书中所公开活性成分的任何一种、成分的组合或具有所述组合的组合物对人类表皮角质形成细胞的TNF-α的产生的影响。该测定的终点可以是反映TNF-α的存在和细胞活力的分光光度测量。该测定采用定量的三明治酶免疫分析技术,因此已经将对TNF-α特异的单克隆抗体预先涂覆在微孔板上。可以将标准品和样品移液到孔中,存在的所有TNF-α由固定化的抗体结合。洗掉所有未结合的物质后,可以将对TNF-α具有特异性的酶联多克隆抗体加入到孔。在洗涤除去所有未结合的抗体-酶试剂之后,可以将底物溶液加入到孔中,并使用酶标仪在450nm处检测,显色与初始步骤中结合的TNF-α的量成比例。可以停止显色,并测量颜色的强度。可以将在37℃下5%的CO2中在EpiLife标准生长培养基(Cascade Biologics)中培养的近汇合的正常人类成熟角质形成细胞(Cascade Biologics)用佛波醇12-豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA,10ng/ml,Sigma Chemical,#P1585-1MG)和本说明书中所公开的活性成分的任何一种、成分的组合或具有所述组合的组合物处理6小时。PMA已经显示导致TNF-α分泌明显的增加,所述TNF-α分泌在处理6小时后达到峰值。孵育之后,可以收集细胞培养基,并使用来自R&D Systems(#DTA00C)的夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)定量TNF-α分泌的量。
纤维黏连蛋白刺激测定:纤维黏连蛋白是真皮-表皮连接(DEJ)(也被称为基膜)中主要的蛋白质。DEJ位于真皮和表皮联结之间,形成叫做网脊的指状突出。细胞和表皮从真皮的血管中接收其养分。网脊增大暴露于这些血管和所需养分的表皮的表面积。DEJ提供两种组织隔室的黏连,并控制皮肤的结构完整性。纤维黏连蛋白是位于DEJ中的结构糖蛋白。层黏连蛋白和纤维黏连蛋白被认为是将细胞保持在一起的胶,真皮成纤维细胞分泌两者以帮助促进表皮细胞到DEJ的细胞内和细胞间黏连。
可以通过量化用含有或不含1.0%终浓度的测试成分的培养基处理3天的培养的人成纤维细胞的细胞上清液中的纤维黏连蛋白来监测纤维黏连蛋白分泌。孵育后,可以使用酶联免疫吸附测定(ELISA)中针对纤维黏连蛋白的免疫荧光抗体来测量每种蛋白质的含量。
赖氨酰氧化酶测定:可以在皮肤细胞(例如,表皮角质形成细胞、成纤维细胞和/或真皮内皮细胞)上进行赖氨酰氧化酶测定,以确定本说明中所公开的成分中的任一种、成分的组合或具有所述组合的组合物刺激皮肤中赖氨酰氧化酶表达的能力。赖氨酰氧化酶可以催化弹性蛋白和胶原蛋白的交联,从而为皮肤提供更具结构刚性的基质。通过增加赖氨酰氧化酶的表达,可以增加弹性蛋白和胶原蛋白的交联度,这有助于减少皮肤细纹、皱纹、松弛和/或无弹性皮肤。
抗氧化(AO)测定:体外生物分析测量本说明中所公开的任何一种成分、成分的组合或具有所述组合的组合物的总抗氧化能力。所述测定依赖样品中抗氧化剂的抑制(2,2'-联氮基-双-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐])被正铁肌红蛋白氧化成/>的能力。活生物体的抗氧化系统包含酶,例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶;大分子,例如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白;和大量小分子,包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。内源性和食物来源的抗氧化剂的总数表示细胞外液的总抗氧化能力。所有不同抗氧化剂的协同作用提供比单独的任何单个化合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此,总的抗氧化能力与测量单独组分获得的信息相比可以提供更相关的生物信息,因为其考虑了血浆和体液中存在的所有抗氧化剂的累积效应。样品中抗氧化剂预防ABTS氧化的能力与水溶性生育酚类似物Trolox的能力进行比较,并以Trolox的摩尔当量进行定量。可以使用来自Cayman Chemical(Ann Arbor,Michigan USA)的抗氧化能力试剂盒#709001作为体外生物测定来测量本说明中所公开的任何一种成分、成分的组合或具有所述组合的组合物的总抗氧化能力。方案可以根据制造商的建议进行。所述测定依赖样品中的抗氧化剂抑制/>(2,2'-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐])被正铁肌红蛋白氧化成/>的能力。可以将样品中抗氧化剂预防ABTS氧化的能力与水溶性生育酚类似物Trolox的能力进行比较,并可以以Trolox的摩尔当量进行定量。
ORAC测定:本说明书公开的活性成分的任一种、活性成分的组合或含有所述组合的组合物的氧自由基吸收能力(ORAC)也可以通过测量这些成分或组合物的抗氧化活性测试。抗氧化活性是指还原氧化剂的能力。该测定定量了抑制例如已知导致损害细胞(例如皮肤细胞)的氧自由基等氧化剂的作用的程度及所用时间。本说明书公开的活性成分的任一种、活性成分的组合或含有所述组合的组合物的ORAC值可以通过本领域普通技术人员已知的方法进行确定(参见美国专利申请第2004/0109905号和第2005/0163880号;和商业上可获得的试剂盒如Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒(#AOX-2))。Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒测量了由于AAPH(2,2'-偶氮二-2-甲基丙基咪二盐酸盐)分解形成过氧化氢-自由基而导致的随时间的荧光素荧光的损失。水溶性维生素E类似物Trolox用作阳性对照,其以剂量依赖的方式抑制荧光素衰减。
透明质酸的产生:可以测量由于本说明书中公开的每种活性成分、任何成分组合或含有所述组合的组合物引起的人真皮成纤维细胞中透明质酸(HA)的产生的变化。HA是参与稳定基质结构的多糖,并且涉及向组织和细胞提供膨涨压力。作为一个非限制性实例,可以使用来自R&D Systems(DY3614)的Hyaluronan DuoSet ELISA试剂盒测定经处理的和未经处理的成人真皮成纤维细胞(HDFa)细胞中的HA产生。在该测定中,为了制备样品,处理前,来自Cascade Biologics(C-13-5C)的近汇合HDFa细胞在37℃和10%的CO2下于饥饿培养基(在Dulbecco改良的Eagle培养基中含有0.15%胎牛血清和1%青霉素链霉素溶液)中孵育72小时。然后将细胞与新鲜饥饿培养基一起与测试化合物、阳性对照(来自Sigma-Aldrich的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(P1585)和来自Sigma-Aldrich的血小板衍生生长因子(P3201))或不含添加物一起孵育24小时。然后收集培养基并在-80℃下冷冻直至用于ELISA测定。
简略来说,ELISA测定采用定量夹心酶免疫测定技术,由此可以将对HA特异性的捕获抗体预先包被在微板上。将来自经处理的和未经处理细胞的标准品和培养基移液到微孔板孔中,使得存在的任何HA能够与固定化抗体结合。洗掉所有未结合的物质后,加入对HA具有特异性的酶联检测抗体到孔中。在洗涤除去任何未结合的抗体-酶试剂后,将底物溶液加入孔中以使与初始步骤中结合的HA量成比例的显色。在特定时间停止显色,并且可以使用酶标仪测量450nm处的颜色强度。
闭合蛋白的产生:可以测量由于本说明书中公开的每种活性成分、任何成分组合或含有所述组合的组合物引起的角质形成细胞中闭合蛋白的产生的变化。闭合蛋白是对紧密连接的形成和皮肤的水分屏障功能至关重要的蛋白质。经处理和未经处理的角质形成细胞中闭合蛋白产生的非限制性实例是通过使用分析角质形成细胞裂解物中的闭合蛋白浓度的生物试验法。可以使用SIMONTM蛋白质印迹方案进行生物测定。对于样品,来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角质形成细胞(HEKa)可在37℃和5%的CO2下于Epilife生长培养基中生长24小时,培养基中含有来自Life Technologies(M-EP-500)-CA)的钙辅以Life Technologies(S-101-5)的角质形成细胞生长补充剂(HKGS)。然后将HEKa在含有测试化合物/提取物的生长培养基中、作为阴性对照的无化合物/提取物的生长培养基、作为阳性对照的1mM CaCl2的生长培养基中孵育24小时至48小时。然后洗涤、收集HEKa并将其储存在冰或冷水中直至使用裂解缓冲液和超声处理在冰上溶解。可以确定样品的蛋白质浓度并用于标准化样品。将裂解物储存在-80℃下直至用于生物测定。
SIMONTM蛋白质印迹生物测定分析采用定量蛋白质印迹免疫测定技术,其中使用对闭合蛋白特异性的抗体定量检测测试样品中的闭合蛋白。裂解细胞样品并标准化蛋白质浓度。然后上样标准化的样品和分子量标准品,并使用毛细血管电泳在变性的蛋白质分离凝胶上运行。然后固定化凝胶中的蛋白质并使用对闭合蛋白特异性的一抗进行免疫探针标记。用结合一抗的酶联检测抗体对固定的蛋白质进行免疫探针标记。然后将化学发光底物溶液加入到固定的蛋白质中,以使化学发光显影与固定化中结合的闭合蛋白的量成比例。可以在特定时间停止化学发光显影,并且可以测定化学发光信号的强度并与阳性对照和阴性对照进行比较。
角质形成细胞单层渗透性:可以测量由于本说明书中公开的每种活性成分、任何成分组合或含有所述组合的组合物引起的角质形成细胞单层渗透性的变化。角质形成细胞单层渗透性是皮肤屏障完整性的量度。作为非限制性实例,可以使用Millipore(ECM642)的体外血管渗透性测定法确定经处理的和未经处理的角质形成细胞中的角质形成细胞单层渗透性。该测定分析内皮细胞的吸附、转运和渗透性。简略来说,来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角质形成细胞可以接种到收集孔内的多孔胶原包覆的膜上。然后将角质形成细胞在37℃和5%的CO2下于Epilife生长培养基中培养24小时,培养基中含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙辅以来自Life Technologies(S-101-5)的角质形成细胞生长补充剂(HKGS)。该孵育时间允许细胞形成单层并堵塞膜孔。然后将培养基替换为含测试化合物/提取物(测试样品)或不含测试化合物/提取物(未经处理的对照)的新鲜培养基,并将角质形成细胞在37℃和5%的CO2下再孵育48小时。为了测定含/不含测试化合物/提取物孵育后的角质形成细胞单层的渗透性,将培养基替换为含有高分子量异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖的新鲜培养基,并将角质形成细胞在37℃、5%的CO2下孵育4小时。在4小时孵育期间,FITC可以以与单层渗透性成比例的速率通过角质形成细胞单层和多孔膜进入收集孔。孵育4小时后,可以确定收集孔中的细胞活力和FITC的含量。对于FITC含量,收集收集孔中的培养基,当在520nm激发时,在480nm(Em)下测定培养基的荧光。与未经处理的对照相比,渗透百分比和百分比变化可通过以下等式确定:渗透百分比=((测试样品的平均Ex/Em)/未经处理的对照的平均Ex/Em)×100;百分比变化=测试样品的渗透率百分比-未经处理的对照的渗透率百分比。
蘑菇酪氨酸酶活性测定:在哺乳动物细胞中,酪氨酸酶在来自酪氨酸(和来自多巴色素聚合)的黑色素生物合成中催化两个步骤。酪氨酸酶位于黑素细胞中,并产生给予皮肤、毛发和眼睛颜色的黑色素(芳香醌化合物)。可以将蘑菇络氨酸酶(Sigma)在存在或不存本说明书所公开的每种活性成分、成分的组合中的任何一种或具有所述组合的组合的情况下与其底物L-Dopa(Fisher)一起孵育。可以在490nm处通过比色板读数来评估色素形成。蘑菇络氨酸酶活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照相比较来计算,以确定测试成分或其组合抑制经纯化的酶的活性的能力。将测试提取物的抑制与曲酸(Sigma)的抑制进行比较。
环氧合酶(COX)测定:体外环氧合酶-1和-2(COX-1、-2)抑制分析。COX是一种展现环氧合酶和过氧化物酶两者活性的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转换为过氧化氢内过氧化物(前列腺素G2;PGG2),过氧化物酶组分将内过氧化物(前列腺素H2;PGH2)还原为相应的醇,前列腺素、血栓素和环前列腺素的前体。该COX抑制筛选分析测量环氧合酶的过氧化物酶组分。过氧化物酶活性通过监测氧化的N,N,N',N'-四甲基-对苯二胺(TMPD)的出现用比色法进行分析。该抑制筛选分析包括COX-1和COX-2酶两者,以筛选同工酶特异性抑制剂。可以使用比色COX(绵羊)抑制剂筛选分析(#760111,Cayman Chemical)来分析本说明书中所公开的每种活性成分、成分的组合、或具有所述组合的组合物对纯化的环氧合酶(COX-1或COX-2)的影响。根据制造商的指示,可以将经纯化的酶、血红素和测试提取物在分析缓冲液中混合,并在室温下摇动孵育15分钟。孵育之后,可以加入花生四烯酸和比色底物开始反应。颜色变化可以通过在590nm的比色板进行评估。COX-1或COX-2活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照比较进行计算,以确定试验提取物抑制经纯化的酶活性的能力。
脂氧合酶(LO)测定:体外的脂氧合酶抑制分析。LO是非血红素的含铁的加双氧酶,其催化分子氧加成到脂肪酸。亚油酸盐/酯和花生四烯酸盐/酯是植物中和动物中LO的主要底物。然后,花生四烯酸可以转换为羟基二十三烯(HETE)酸衍生物,其随后转换为有效的炎症介质白三烯。该分析通过测量利用花生四烯酸培养的脂氧合酶(5-LO、12-LO或15-LO)产生的氢过氧化物筛选脂氧合酶抑制剂的精确的和方便的方法。可以使用比色的LO抑制剂筛选试剂盒(#760700,Cayman Chemical)来确定本说明书中所公开的每种活性成分、任何一种成分的组合、或具有所述组合的组合物抑制酶活性的能力。可以将经纯化的15-脂氧合酶和测试成分在分析缓冲液中混合,并在室温下摇动孵育10分钟。孵育之后,可以加入花生四烯酸开始反应,混合物可以在室温下再孵育另外10分钟。可以加入比色底物终止催化,可以通过在490nm测定的荧光板评估颜色变化。与未处理的对照组相比,可以计算脂氧合酶活性的抑制百分比,以确定本说明书中所公开的每种活性成分、任何一种成分的组合、或具有所述组合的组合物的任一种抑制经纯化的酶的活性的能力。
弹性蛋白酶测定:可以使用Molecular Probes(Eugene,Oregon USA)的Elastase Assay(试剂盒#E-12056)用作体外酶抑制测定,用于测量本说明书中所公开的每种活性成分、任何一种成分的组合或具有所述组合的组合物的弹性蛋白酶活性抑制。EnzChek试剂盒包含可以用染料标记的可溶性牛颈韧带弹性蛋白,从而使结合物的荧光能够猝灭。非荧光的底物可以被弹性蛋白酶或其他蛋白酶消化以产生高荧光的片段。产生的荧光增强可以用荧光微孔板测定仪进行监测。来自弹性蛋白底物的消化产物在约505nm处具有吸收最大值,在约515nm处具有荧光发射最大值。当使用EnzChek弹性蛋白酶分析试剂盒以筛选弹性蛋白酶抑制剂时,可以将肽、N-甲氧基琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-氯甲基酮用作选择性的、共同的弹性蛋白酶抑制剂。
控油测定:用于测量皮脂腺中皮脂分泌的减少和/或皮脂腺中皮脂产生的减少的分析可以通过使用本领域普通技术人员已知的标准技术进行分析。在一些情况中,可以使用前额。可以将本说明书中所公开的每种活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物的任一种每日一次或两次地施用到前额的一部分一段固定的天数(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或多于14天),而前额的其他部分不用该组合物处理。在一段固定的天数期满后,皮脂分泌可以通过将优质吸墨纸施用到处理过的和未处理的前额皮肤上进行分析。这是通过首先用湿的和干的布从处理过的和未处理的区域去除所有皮脂完成的。然后将吸墨纸施用到处理过的和未处理的前额区域,可以绕着前额放置橡皮筋以轻轻地将吸墨纸压到皮肤上。2小时后,吸墨纸可以移去,使其干燥,然后进行透照。越深的吸墨纸对应于越多的皮脂分泌(或较浅的吸墨纸对应于减少的皮脂分泌。
皮肤水分/水合测定:皮肤水分/水合的有益效果可以通过利用以Nova DermalPhase Meter进行的阻抗测量进行测量。阻抗计测量皮肤水分含量的变化。皮肤外层具有不同的电性质。当皮肤干燥时,其导电很差。当其变得更加含水时,产生增加的导电性。因此,皮肤阻抗(与导电性有关)的变化可以用于评价皮肤水合的变化。装置可以根据仪器说明针对每个测试日进行校准。还可以对温度和相对湿度进行标记。对对象可以进行如下评估:测量前其可以在具有确定湿度(例如,30%至50%)和温度(例如,68℃至72℃)的室内进行平衡。在脸的每一侧进行三个独立的阻抗测定,并对其进行记录和平均。阻抗计可以使用T5设定,其对施用到脸上每五秒的阻抗值进行平均。变化可以以统计方差和显著性进行报道。根据该方法可以测试本说明书中公开的每种活性成分、任何成分组合或含有所述组合的组合物。
皮肤清透度和雀斑与老年斑减少的分析:皮肤清透度和雀斑与老年斑减少使用Minolta Chromometer进行评价。肤色的变化可以使用Minolta Chroma Meter的a*值进行评估以确定由于产品处理引起刺激的可能性。a*值测量肤色在红色区域的变化。这用于确定本说明书中公开的每种活性成分、任何成分组合或含有所述组合的组合物是否减少刺激。测量可以在脸的每一侧进行并进行平均,作为左边和右边脸的值。皮肤清透度也可以使用Minolta Meter进行测量。测量是Minolta Meter的a*、b、和L值的组合,并与皮肤的亮度有关,而且非常好地对应皮肤的光滑度和水合。皮肤测定如上进行。在一个非限制性方面,皮肤清透度可以描述为L/C,其中C是色度并定义为(a2+b2)1/2。
皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色分析:皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色可以用临床评分技术进行评估。例如,皮肤干燥的临床评分可以通过五点标准Kligmanscale进行确定:(0)皮肤是柔软和湿润的;(1)皮肤呈现正常而没有可见的干燥;(2)皮肤触摸感觉轻微干燥而没有可见的剥落;(3)皮肤感觉干燥、坚韧并且具有带有一些鳞屑的发白的外观;以及(4)皮肤感觉非常干燥、粗糙并且具有带有鳞屑的发白的外观。评估可以由两个临床医师独立进行并进行平均。
肤色临床评分测定:肤色的临床评分可以通过十点模拟数值刻度实施:(10)平滑的均匀的皮肤、粉棕色的颜色。手持放大镜检查时没有暗的、发红的或鳞状的斑块。皮肤的微观纹理摸上去非常均匀;(7)不用放大镜观察均匀的肤色。没有鳞状区域,但是有由于色素淀积或红斑引起的疹斑。没有直径大于1cm的疹斑;(4)轻易地注意到皮肤疹斑和不均匀的纹理。少量鳞片。某些区域摸上去粗糙的皮肤;以及(1)不均匀的皮肤着色和纹理。多个区域的鳞片和疹斑,色素减退型、发红的或黑色的斑点。大面积的直径超过1cm的不均匀着色。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。
皮肤平滑度的临床评分分析:皮肤光滑度的临床评分可以通过十点模拟数值刻度进行分析:(10)光滑的,皮肤是湿润的和有光泽的,手指划过表面时没有阻力;(7)一定程度光滑的,微小的阻力;(4)粗糙的、可见地改变的,摩擦时有摩擦力;以及(1)粗糙的、片状的、不均匀的表面。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。
用Packman等人(1978)公开的方法进行的皮肤光滑度和皱纹减少测定:皮肤光滑度和皱纹的减少也可以通过使用Packman等人(1978)公开的方法进行可视化评估。例如,每一对象就诊时,对每一对象的表面面线(SFL)的深度、浅度和总数量都可以进行认真的评分和记录。通过将数量因子乘以深度/宽度/长度因子得到数字的分数。获得眼睛区域和嘴巴区域(左侧和右侧)的分数,加到一起作为总的皱纹分数。
用Hargens Ballistometer进行的皮肤紧致度测定:皮肤紧致度可以用HargensBallistometer评估,Hargens Ballistometer是一种通过在皮肤上落下一个小物体并记录前两个反弹峰来评估皮肤弹性和紧致度的装置。Ballistometry是使用相对钝的探头(4平方毫米-接触面积)的小的轻量探测器。探测器轻轻地穿透进入皮肤,导致依赖于皮肤外层性质的测量,皮肤外层包括角质层和外表皮以及部分真皮层。
用气体轴承电测力计进行的皮肤柔软度/柔韧性分析:皮肤柔软度/柔韧性可以使用气体轴承电测力计(Gas Bearing Electrodynamometer)进行评估,气体轴承电测力计是测量皮肤压力/张力性质的仪器。皮肤的黏弹性与皮肤保湿有关。可以通过用双面胶将探测器附着在皮肤表面实现对脸颊区域特定位点的测量。大约3.5gm的力平行施加于皮肤表面,精确地测量皮肤的位移。然后可以计算皮肤的柔韧性,并表达为DSR(动态弹簧刚度,以gm/mm计)。
用复制品进行的纹路和皱纹的显现分析:皮肤上纹路和皱纹的显现可以使用复制品进行评估,所述复制品是皮肤表面的印模。可以使用如硅橡胶的材料。复制品可以通过图像分析进行分析。纹路和皱纹可见性的变化可以通过利用硅复制品形成对象的脸并用计算机图像分析系统分析复制品图像进行客观地定量。复制品可以从眼睛区域和颈部区域获得,并用数码相机以低照明入射角进行拍摄。数字图像可以用图像处理程序进行分析并确定复制品被皱纹和细纹覆盖的区域。
用表面光度仪/记录针的方法进行的皮肤表面轮廓分析:皮肤表面轮廓可以通过使用表面光度仪/记录针的方法进行测量。这包括闪光或拖动记录针穿过复制品表面。记录针的垂直位移通过距离传感器可以录入计算机,在扫描复制品的一定距离后,皮肤轮廓的分析可以以二维曲面产生。该扫描可以沿着固定的轴重复任意次数以产生模拟的皮肤3-D图像。使用记录针技术可以获得十个随机的复制品截面,并组合产生平均值。感兴趣的值包括Ra,其为通过积分相对于平局轮廓高度的轮廓高度计算得到的所有粗糙度(高度)值的算术平均数。Rt,其为最高峰和最低谷之间的最大垂直距离,以及Rz,其为平均峰振幅减去平均峰高度。数值以用mm为单位标定的数值给出。设备应在每次使用前通过扫描已知数值的金属标准物进行标准化。Ra值可以通过下式计算:Ra=标准化粗糙度;lm=横向(扫描)长度;以及y=轮廓位置相对于平均轮廓高度的绝对值(x-轴)。
MELANODERMTM测定:在其他非限制性方面,可通过使用皮肤模拟例如MELANODERMTM来评价本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的功效。黑素细胞是皮肤类似物中细胞之一,当暴露于黑色素前体L-二羟苯基丙氨酸(L-DOPA)时明确地染色。皮肤类似物MELANODERMTM可以用含有说明书中公开的每种活性成分、成分的任何组合或含有所述组合的组合物的多种基质进行处理或将基质单独作为对照进行处理。或者,可以使用未处理的皮肤类似物样品作为对照物。
丝聚蛋白的产生-可以测量由于本说明书中公开的每种活性成分、任何成分组合或含有所述组合的组合物引起的角质形成细胞中丝聚蛋白的产生的变化。丝聚蛋白是皮肤中天然保湿因子(NMF)的前体。NMF增加会增加皮肤的水分含量。可以通过使用分析角质形成细胞细胞裂解物中的丝聚蛋白浓度的生物测定来确定在经处理和未经处理的角质形成细胞中丝聚蛋白的产生。可用于定量丝聚蛋白生成的生物测定的非限制性实例是SIMONTM蛋白质印迹方案。对于每个样品,正常人表皮角质形成细胞(NHEK)在具有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙的EPI-200-Mattek />生长培养基中生长。在处理之前,将NHEK在37℃、5%的CO2下于生长培养基中过夜孵育。然后将NHEK在含有1%测试化合物/提取物或不含化合物/提取物(阴性对照)的生长培养基中孵育24小时至36小时。然后可以洗涤、收集NHEK并将其储存在冰或冷水中直至使用裂解缓冲液和超声处理在冰上溶解。可以确定样品的蛋白质浓度并用于标准化样品。裂解物可以储存在-80℃下直至用于定量测定。
SimonTM蛋白质印迹生物测定分析采用定量蛋白质印迹免疫测定技术,其中使用对丝聚蛋白特异性的抗体定量检测测试样品中的丝聚蛋白。裂解细胞样品并标准化蛋白质浓度。然后可以使用毛细管电泳将标准化样品和分子量标准品在变性蛋白质分离凝胶上装载和运行。固定化凝胶中的蛋白质并使用对丝聚蛋白特异性的一抗进行免疫探针标记。然后可以用结合一抗的酶联检测抗体对固定的蛋白质进行免疫探针标记。然后可以将化学发光底物溶液加入到固定的蛋白质中,以使化学发光的显影与固定化中结合的丝聚蛋白的量成比例。在特定时间停止化学发光显影,并且可以测定量学发光信号的强度并与阳性和阴性对照进行比较。
角质形成细胞单层渗透性—可以测量由于本说明书中公开的每种活性成分、任何成分组合或含有所述组合的组合物引起的角质形成细胞单层渗透性的变化。角质形成细胞单层渗透性是皮肤屏障完整性的量度。作为非限制性实例,可以使用Millipore(ECM642)的体外血管渗透性测定法确定经处理的和未经处理的角质形成细胞中的角质形成细胞单层渗透性。该测定分析内皮细胞的吸附、转运和渗透性。简略来说,来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角质形成细胞可以接种到收集孔内的多孔胶原包覆的膜上。然后将角质形成细胞在37℃和5%的CO2下的含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙辅以来自Life Technologies(S-101-5)的角质形成细胞生长补充剂(HKGS)的Epilife生长培养基中孵育24小时。该孵育时间允许细胞形成单层并堵塞膜孔。然后用将培养基替换为含有测试化合物/提取物(测试样品)或不含(未经处理的对照)测试化合物/提取物的新鲜培养基,并将角质形成细胞在37℃和5%的CO2下再孵育48小时。为了测定在含/不含测试化合物/提取物孵育后角质形成细胞单层的渗透性,将培养基更换为含有高分子量异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖的新鲜培养基,并将角质形成细胞在37℃、5%的CO2下孵育4小时。在4小时孵育期间,FITC可以以与单层渗透性成比例的速率通过角质形成细胞单层和多孔膜进入收集孔。孵育4小时后,可以确定收集孔中的细胞活力和FITC的含量。对于FITC含量,收集孔中的介质被收集并在520nm激发时在480nm(Em)确定介质的荧光。与未经处理的对照组相比,渗透百分比和百分比变化可通过以下等式确定:渗透百分比=((测试样品的平均Ex/Em)/未经处理的对照的平均Ex/Em)×100;百分比变化=测试样品的渗透率百分比-未经处理的对照的渗透率百分比。
透明质酸的产生—可以测量由于本说明书中公开的每种活性成分、任何成分组合或含有所述组合的组合物引起的人真皮成纤维细胞中透明质酸的产生的变化。HA是参与稳定基质结构的多糖,并且涉及向组织和细胞提供膨压。作为一个非限制性实例,可以使用来自R&D Systems(DY3614)的Hyaluronan DuoSet ELISA试剂盒测定经处理的和未经处理的成人真皮成纤维细胞(HDFa)细胞中的HA产生。在该测定中,为了产生样品,处理前,将来自Cascade Biologics(C-13-5C)的近汇合HDFa细胞在37℃和10%的CO2下于饥饿培养基中(在Dulbecco改良的Eagle培养基中含有0.15%胎牛血清和1%青霉素链霉素溶液)孵育72小时。然后将细胞与含有测试化合物、阳性对照(来自Sigma-Aldrich(P1585)的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯和来自Sigma-Aldrich(P3201)的血小板衍生生长因子)或不含添加物的新鲜培养基一起孵育24小时。然后收集培养基并在-80℃下冷冻直至用于ELISA测定。
简略来说,ELISA测定采用定量夹心酶免疫测定技术,由此可以将对HA特异性的捕获抗体预先包被在微板上。将来自经处理的和未经处理细胞的标准品和培养基移液到微孔板孔中,使得存在的任何HA能够与固定化抗体结合。冲走所有未结合的物质后,加入对HA具有特异性的酶联检测抗体到孔中。在洗涤除去任何未结合的抗体-酶试剂后,将底物溶液加入孔中以使与初始步骤中结合的HA量成比例的显色。在特定时间停止显色,并且可以使用酶标仪测量450nm处的颜色强度。
丝聚蛋白的产生:可以测量由于本说明书中公开的每种活性成分、任何成分的组合或含有所述组合的组合物引起的角质形成细胞中丝聚蛋白的产生的变化。丝聚蛋白是皮肤中天然保湿因子(NMF)的前体。NMF增加会增加皮肤的水分含量。可以通过使用分析角质形成细胞裂解物中的丝聚蛋白浓度的生物测定来确定在经处理和未经处理的角质形成细胞中闭合蛋白的产生。可用于定量丝聚蛋白产生的生物测定的非限制性实例是SIMONTM蛋白质印迹方案。对于每个样品,正常人表皮角质形成细胞(NHEK)在具有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙的EPI-200-Mattek EPILIFETM生长培养基中生长。在处理之前,将NHEK在37℃、5%的CO2下于生长培养基中过夜孵育。然后将NHEK在含有1%测试化合物/提取物或不含化合物/提取物(阴性对照)的生长培养基中孵育24小时至36小时。然后可以洗涤、收集NHEK并将其储存在冰或冷水中直至使用裂解缓冲液和超声处理在冰上溶解。可以确定样品的蛋白质浓度并用于标准化样品。裂解物可以储存在-80℃下直至用于定量测定。
SIMONTM蛋白质印迹生物测定分析采用定量蛋白质印迹免疫测定技术,其中使用对丝聚蛋白特异性的抗体定量检测测试样品中的丝聚蛋白。裂解细胞样品并标准化蛋白质浓度。然后可以使用毛细管电泳将标准化样品和分子量标准品在变性蛋白质分离凝胶上装载和运行。固定化凝胶中的蛋白质并使用对丝聚蛋白特异性的一抗进行免疫探针标记。然后可以用结合一抗的酶联检测抗体对固定的蛋白质进行免疫探针标记。然后可以将化学发光底物溶液加入到固定的蛋白质中,以使化学发光的显影与固定化中结合的丝聚蛋白的量成比例。在特定时间停止化学发光显影,并且可以测定量学发光信号的强度并与阳性和阴性对照进行比较。
透明质酸酶活性的抑制-可以测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、任何一种成分组合或含有所述组合的组合物引起的角质形成细胞中透明质酸酶的活性变化。透明质酸酶是降解HA的酶。HA是参与稳定基质结构的多糖,并且涉及向组织和细胞提供膨压。作为一个非限制性实例,可以使用从Sigma-Aldrich方案#EC 3.2.1.35改良的体外方案确定透明质酸酶活性。简略来说,将来自Sigma-Aldrich(H3506)的1-S型透明质酸酶加入到含有测试化合物或对照组的微孔板反应孔中。可以使用鞣酸作为阳性对照抑制剂,对照酶不能加入测试化合物,可以使用具有测试化合物或阳性对照但不含透明质酸酶的孔为背景的阴性对照。将孔在37℃下孵育10分钟,然后加入底物(HA)。加入底物并将反应在37℃下孵育45分钟。然后将每个反应溶液的一部分转移到乙酸钠和乙酸pH 3.75的溶液中并轻轻混合,以停止该部分反应(停止孔)。在将一部分反应溶液加入到停止孔中之后,停止孔和反应孔都应含有相同体积的溶液。将反应孔和停止孔在室温下孵育10分钟。然后测量反应孔和停止孔在600nm处的吸光度。抑制可以使用以下公式计算:抑制剂(或对照)活性=(抑制剂停止孔在600nm处的吸光度-抑制剂反应孔在600nm处的吸光度);初始活性=对照酶在600nm处的吸光度;抑制百分比=[(初始活性/抑制剂活性)×100]-100。
过氧化物酶体增殖物激活的受体γ(PPAR-γ)活性—可以测量由于本说明书中公开的每种活性成分、任何成分组合或含有所述组合的组合物引起的PPAR-γ的活性变化。PPAR-γ是对皮脂产生至关重要的受体。作为一个非限制性实例,可以使用分析测试化合物或组合物抑制配体结合的能力的生物测定来确定PPAR-γ的活性。简略来说,可以将可从Life Technologies(PV4894)获得的荧光小分子pan-PPAR配体FLUORMONETMPan-PPAR Green用于确定测试化合物或组合物是否能够抑制配体与PPAR-γ的结合。样品孔包括PPAR-γ和荧光配体,以及:测试化合物或组合物(测试);参考抑制剂罗格列酮(阳性对照);或不含测试化合物(阴性对照)。将孔孵育一段时间以使配体有机会结合PPAR-γ。然后可以测量每个样品孔的荧光偏振并与阴性对照孔比较以确定测试化合物或组合物的抑制百分比。
细胞因子阵列:人类表皮角质形成细胞被培养至70%至80%的汇合度。吸出板中的培养基,并加入0.025%的胰蛋白酶/EDTA。当细胞变成圆形时,轻拍培养皿以释放细胞。从培养皿中取出含胰蛋白酶/EDTA的细胞并中和。将细胞以180×g离心5分钟以形成细胞沉淀。吸出上清液。将所得沉淀重悬于EPILIFETM培养基(Cascade Biologics)。将细胞在约10%至20%的汇合度接种在6孔板中。当细胞汇合约80%后,吸出培养基,将1.0mlEPILIFETM以及佛波醇13-豆蔻酸12-乙酸酯(“PMA”)(已知的炎症诱导剂)和测试组合物稀释液添加到两个复制孔(即将1.0%(100μl的100×储备液)和0.1%(10μl的100×储备液)测试组合物稀释至最终体积为1ml的EpiLife生长培养基)。轻轻旋转培养基以确保混合充分。另外,在有或没有其他PMA的情况下,将1.0ml EPILIFETM添加至对照孔。给料后,在37±1℃和5.0±1%的CO2下将板孵育大约5小时。孵育5小时后,将所有培养基收集在锥形管中,并于-70℃冷冻。
为了分析,将16格的杂交盒连接到16格的FAST基片,该基片一式三份与16种抗细胞因子抗体和实验对照(Whatman BioSciences)一起排列,然后将其放入FASTFrame(每框架4个基片)中进行处理。用70ml S&S蛋白分析封闭缓冲液(Whatman Schleicher andScheull)将阵列在室温下封闭15分钟。除去封闭缓冲液并将每种上清样品70ml加入每个阵列。将阵列在室温下伴随温和搅拌孵育3小时。用TBS-T洗涤阵列3次。用70ml含一种生物素化的抗体的抗体混合物处理阵列,所述生物素化的抗体对应于每个阵列的捕获抗体。将阵列在室温温和搅拌下孵育1小时。用TBS-T洗涤阵列3次。将阵列与70ml含有链霉亲和素-Cy5缀合物的溶液在室温温和搅拌下孵育1小时。用TBS-T洗涤阵列3次,快速在去离子水中冲洗,并干燥。
基片可以在Perkin-Elmer ScanArray 4000激光共聚焦成像系统中成像。保存阵列图像并用Imaging Research ArrayVision软件分析。简言之,通过减去背景信号来确定点强度。将来自每个样品条件的斑点重复值取平均,然后与适合的对照对比。
内皮管形成:内皮管形成与血管生成和微血管毛细血管形成有关。毛细血管形成和血管生成可能导致皮肤发红的酒糟鼻。可以使用在细胞培养系统中具有预先形成的原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行毛细血管破裂测定来确定存在或不存在测试提取物和化合物的情况下内皮细胞形成管的能力。
简略来说,HUVEC体外培养在细胞外基质上,其刺激内皮细胞的附着和管状形态发生以形成毛细血管样腔结构。这些体外形成的毛细血管在许多方面与人血管的毛细血管相似。毛细血管试验基于该现象并用于评估潜在的脉管系统靶向剂。
HUVEC培养物在5%的CO2、37℃的细胞培养箱中生长。HUVEC的完全生长培养基是补充有2%胎牛血清(FBS)、12μg/ml牛脑提取物、1μg/ml的氢化可的松和1μg/ml GA-1000(庆大霉素-两性霉素)的内皮细胞基础培养基(EBM)。可将第3代和第8代之间的HUVEC培养物用于所有测定实验。
用荧光剂钙黄绿素AM预先标记HUVEC,并使用其完全生长培养基将其接种于细胞外基质涂覆的96孔培养板中。在形态发生过程约4小时后,应形成内皮毛细血管。然后,将设计剂量为50μl的测试剂作为处理条件施加到形成的毛细血管培养物中。可以将未处理的对照添加到测试剂的载体中。可以包括一种浓度的FDA批准的抗血管生成药物舒尼替(Sutent)作为测定性能对照。处理约6小时后,通过显微镜检查每个孔中的内皮小管形态、成像、并且可以定量分析处理条件下的毛细血管破坏活性。每个测试条件都可以在复制孔中进行,包括对照组。
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本文中所公开和要求保护的所有组合物和/或方法可以根据本公开不需要过度的实验即制成和实现。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选的实施方案进行了描述,但是对于本领域技术人员明显的是,可以对所述组合物和/或方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化,而不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地,明显地,化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂,同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。
Claims (19)
1.一种局部用组合物,其包含胆固醇、神经酰胺II和乳木果油。
2.根据权利要求1所述的组合物,其还包含浮游生物提取物。
3.根据权利要求2所述的组合物,其中浮游生物提取物包括糖类同分异构体。
4.根据权利要求1所述的组合物,其还包含羟苯基丙酰胺苯甲酸。
5.根据权利要求1所述的组合物,其还包含海枣籽提取物。
6.根据权利要求1所述的组合物,其还包含天然保湿因子(NMF)。
7.根据权利要求1所述的组合物,其还包含一种或多于一种一氧化氮合酶抑制剂。
8.根据权利要求1所述的组合物,其还包含一种或多于一种α-肾上腺素受体激动剂。
9.根据权利要求1所述的组合物,其还包含水。
10.根据权利要求9所述的组合物,其包含25重量%至98重量%的水。
11.根据权利要求1所述的组合物,其中胆固醇、神经酰胺II和乳木果油以3:1:1的重量比提供。
12.根据权利要求1所述的组合物,其还包含糖类同分异构体、羟苯基丙酰胺苯甲酸和海枣籽提取物。
13.根据权利要求5所述的组合物,其中海枣籽提取物为水溶性提取物。
14.根据权利要求1所述的组合物,其中组合物被配制为乳状液。
15.根据权利要求14所述的组合物,其中组合物被配制为霜剂。
16.一种改善皮肤的状况或外观的方法,其包括将根据权利要求1所述的组合物施用至有需要的皮肤。
17.一种增强皮肤屏障功能的方法,其包括将根据权利要求1所述的组合物施用于皮肤,其中皮肤屏障被增强。
18.一种减少皮肤发红的方法,其包括将根据权利要求1所述的组合物施用于皮肤,其中皮肤的发红减少。
19.一种处理皮肤的方法,其包括将根据权利要求1所述的组合物施用于皮肤,其中促炎细胞因子的表达减少、促炎趋化因子的表达减少、一氧化氮合酶的表达减少、一种或多于一种紧密连接相关蛋白的表达增加、闭合蛋白1的表达增加和/或丝聚蛋白的表达增加。
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