CN117643311A - 一种组合物、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种组合物、制备方法及应用，本发明提供了一种组合物，包括溶菌酶、表面活性剂、螯合剂、还原剂、磷酸盐，在进一步复配的组合物中还添加了核酸酶，在更进一步复配的组合物中还添加了季铵盐阳离子去污剂。本发明还提供了该组合物的制备方法及在制备消毒产品和/或抑制病原体产品中的应用，本发明还提供了组合物在快速抑制和/或灭杀病原体中的应用。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种组合物、制备方法及应用。
背景技术
消毒剂主要应用于医疗、工业、公共设施以及家庭防护领域，起到医疗消毒、公共环境消毒除臭、室内环境消毒杀菌等作用。使用消毒剂可以有效杀灭生活环境中的一些病菌，减少环境中的病菌对人体的侵害。近年来，消毒剂迅速走进普通家庭，成为多数家庭中必备防护用品。目前市面上的消毒剂，根据化学成分不同主要分为无机消毒剂、有机消毒剂以及生物消毒剂三大类。生物消毒剂主要包含的一些生物活性成分如生物酶等，绿色环保、使用安全、无毒无味，随着人们的环保意识以及对生活质量的要求逐渐提高，生物消毒剂已经越来越受到吹捧。但是在实际使用中，单纯生物消毒剂，其杀菌消毒效力有限，也存在稳定性不佳的缺点，无法满足一些使用场合的杀菌消毒需求。
发明内容
为了解决现有技术中存在的技术问题，提供了以下技术方案：
本发明提供了一种组合物的制备方法，所述制备方法包括将以重量计：0.1-2份溶菌酶、0.1-1份表面活性剂、0.03-0.3份螯合剂、0.01-0.5份还原剂、0.1-1份磷酸盐混合的步骤。
进一步，所述制备方法包括将以重量计：0.1-0.5份溶菌酶、0.1-0.2份表面活性剂、0.05-0.08份螯合剂、0.05-0.1份还原剂、0.1-0.2份磷酸盐混合的步骤。
进一步，所述溶菌酶包括噬菌体T4溶菌酶、植物源溶菌酶、微生物溶菌酶或动物源溶菌酶。
进一步，所述溶菌酶为重组溶菌酶。
在某些具体的实施方案中，所述溶菌酶为以重量计的0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1.0份、1.1份、1.2份、1.3份、1.4份、1.5份、1.6份、1.7份、1.8份、1.9份、2.0份的添加量。在某些更具体的实施方案中，所述溶菌酶为以重量计的0.2份的添加量。在某些具体的实施方案中，所述溶菌酶包括噬菌体T4溶菌酶、植物源溶菌酶、微生物溶菌酶和动物源溶菌酶。
在某个具体的实施方案中，所述溶菌酶为N-乙酰胞壁质酶(N-acetylmuramidase)。术语“N-acetylmuramidase”或“N-乙酰胞壁质酶”是指作用于细菌细胞壁所含肽聚糖的N-乙酰胞壁酸(N-acetylmuramic acid，NAM)的1位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine，NAG)的4位碳原子之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁的不溶性聚多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁结构被破坏，细菌破裂死亡。
在某些具体的实施方案中，所述溶菌酶还可为N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶(N-acetylmuraxnyl-L-alanine amidase)和/或内肽酶(endopeptidase)。术语“N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶”又称MA酰胺酶，可分解N-乙酰胞壁酸其乳酸基与五肽侧链上1位氨基酸残基之间的酰胺键。该酶受阳离子肽的影响，对于微生物细胞的自溶具有重要作用。目前多来源于噬菌体，如T7噬菌体、蜡状芽孢杆菌噬菌体12826和TP21等。术语“内肽酶”则指作用于多肽侧链中的肽键，也可在葡聚糖酶的协同作用下促进真菌细胞壁的溶解。目前已发现许多微生物来源的内肽酶，如仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans)产生的溶葡球菌素(Lysostaphin)、球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)产生的变溶菌素中含有的内肽酶、米氏链球菌(Streptococcus milleri)所产的内肽酶“millericin B”等。
进一步，所述表面活性剂包括吐温80、吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温81、吐温85。
进一步，所述表面活性剂为吐温80。
在某些具体的实施方案中，所述表面活性剂为以重量计的0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1.0份的添加量。在某些更具体的实施方案中，所述溶菌酶为以重量计的0.1份的添加量。
术语“表面活性剂”指表面活性化合物，例如阴离子、阳离子、非离子和两性表面活性剂、嵌段聚合物、聚电解质及其混合物。在某些具体的实施方案中，阴离子表面活性剂可以为磺酸盐、有机硫酸盐、磷酸盐、羧酸盐的碱、碱土或铵盐，及其混合物。磺酸盐的实例为烷基芳基磺酸盐、二苯基磺酸盐、α-烯烃磺酸盐、脂肪酸和油的磺酸盐、乙氧基化烷基苯酚的磺酸盐、烷氧基化芳基苯酚的磺酸盐、缩合萘的磺酸盐、十二烷基-和十三烷基苯的磺酸盐、萘和烷基萘的磺酸盐、磺基琥珀酸盐或磺基琥珀酰胺酸盐。硫酸盐的实例为脂肪酸和油、乙氧基化烷基酚、醇、乙氧基化醇或脂肪酸酯的硫酸盐。磷酸盐的实例为磷酸酯。羧酸盐的实例为烷基羧酸盐和羧酸化醇或烷基酚乙氧基化物。
在某些具体的实施方案中，非离子表面活性剂可以为烷氧基化物、N-取代脂肪酸酰胺、氧化胺、酯、糖基表面活性剂、聚合物表面活性剂及其混合物。烷氧基化物的实例为被1-50当量的烷氧基化的化合物如醇、烷基酚、胺、酰胺、芳基酚、脂肪酸或脂肪酸酯。氧化乙烯和/或氧化丙烯可用于烷氧基化，优选氧化乙烯。N-取代脂肪酸酰胺的实例为脂肪酸葡糖酰胺或脂肪酸链烷醇酰胺。酯的实例为脂肪酸酯、甘油酯或单酸甘油酯。糖基表面活性剂的实例为脱水山梨糖醇、乙氧基化脱水山梨糖醇、蔗糖和蔗糖酯或烷基糖苷。聚合物表面活性剂的实例为乙烯基吡咯烷酮、乙烯基醇或乙酸乙烯酯的均聚物或共聚物。
在某些具体的实施方案中，阳离子表面活性剂可以为季铵化表面活性剂，例如具有1或2个疏水基团的季铵化合物，或长链伯胺的盐。合适的两性表面活性剂为烷基甜菜碱和咪唑啉。合适的嵌段聚合物为包含聚氧化乙烯和聚氧化丙烯嵌段的A-B或A-B-A型或包含链烷醇、聚氧化乙烯和聚氧化丙烯的A-B-C型嵌段聚合物。合适的聚电解质为多酸或多碱。多酸的实例为碱性盐。多碱的实例为聚乙烯基胺或聚乙烯胺。
进一步，所述螯合剂包括EDTA、DTPMPA、HEDP或柠檬酸盐。
进一步，所述螯合剂包括EDTA。
术语“螯合剂(chelating agent或chelator)”是指与某些金属离子形成分子的化学品，从而使这些离子失活使之不能与其他元素进行反应，因此是通过形成螯合物而抑制化学活性的一种结合剂。螯合是在配体与单一中心原子之间形成或存在的两种或更多种单独的结合。配体可以是任何有机化合物、硅酸盐或磷酸盐。在本文上下文中，术语“螯合剂(chelating agent)”包括可与金属离子(如钙和镁)形成水溶性复合物的螯合剂、络合剂。螯合作用描述螯合配体对金属离子的亲和力相对于类似的一组非螯合配体对相同金属的亲和力的增强。螯合剂具有与金属离子(特别是钙(Ca2+)离子)结合的能力，并且已经被广泛用在通常用于洗涤(如衣物洗涤或餐具洗涤)的洗涤剂和组合物中。然而，螯合剂显示其自身会抑制酶活性。术语螯合剂与“络合剂”或“螯合剂”在本文中可互换使用。
在某些具体的实施方案中，所述螯合剂的非限制性实例是EDTA、DTPMPA、HEDP和柠檬酸盐。如在此使用的术语“EDTA”，是指乙二胺-四-乙酸。如在此使用的术语“DTPMPA”，是指二亚乙基三氨基五甲基磷酸。DTPMPA可以抑制碳酸根、硫酸根和磷酸根的结垢。如在此使用的术语“HEDP”，是指羟基-乙烷二膦酸。
在某些具体的实施方案中，所述螯合剂为以重量计的0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份、0.15份、0.2份、0.25份、0.3份的添加量。在某些更具体的实施方案中，所述螯合剂为以重量计的0.07份的添加量。
在某些具体的实施方案中，所述螯合剂为金属离子螯合剂，包括沉淀型螯合剂、络合型螯合剂、磷酸盐类螯合剂和有机多元磷酸类螯合剂等。
进一步，所述还原剂包括半胱氨酸、半胱胺、二硫苏糖醇、2-硫醇基乙醇、TCEP及其相关盐类。
进一步，所述还原剂包括半胱氨酸。
术语“还原剂”是指将电子提供给另一化学物质的化学物质。示例性的还原剂包括半胱氨酸、半胱胺、二硫苏糖醇(DTT)、2-硫醇基乙醇(2-ME)和三(2-羧乙基)膦(TCEP)，以及它们的相关盐类(例如，TCEP-盐酸盐)。
在某些具体的实施方案中，所述还原剂为以重量计的0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份、0.15份、0.2份、0.25份、0.3份、0.35份、0.4份、0.45份、0.5份的添加量。在某些更具体的实施方案中，所述还原剂为以重量计的0.06份的添加量。
进一步，所述磷酸盐包括磷酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸铵、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、或其组合。
进一步，所述磷酸盐包括磷酸二氢钠。
在某些具体的实施方案中，所述磷酸盐为以重量计的0.1份、0.15份、0.2份、0.25份、0.3份、0.35份、0.4份、0.45份、0.5份、0.55份、0.6份、0.65份、0.7份、0.75份、0.8份、0.85份、0.9份、0.95份、1.0份的添加量。在某些更具体的实施方案中，所述磷酸盐为以重量计的0.15份的添加量。
进一步，所述制备方法还包括添加以重量计的0.001-0.02份核酸酶。
进一步，所述核酸酶的浓度范围为2.5-50U/mL。
在某些具体的实施方案中，所述核酸酶的浓度为2.5U/mL、3U/mL、3.5U/mL、4U/mL、4.5U/mL、5U/mL、5.5U/mL、6U/mL、6.5U/mL、7U/mL、7.5U/mL、8U/mL、8.5U/mL、9U/mL、9.5U/mL、10U/mL、12U/mL、14U/mL、16U/mL、18U/mL、20U/mL、25U/mL、30U/mL、35U/mL、40U/mL、45U/mL、50U/mL。
进一步，所述核酸酶包括重组表达的全能核酸酶。
术语“核酸酶”等同于“核酸降解酶”，其中用于降解DNA的核酸酶被称为DNA酶，而降解RNA的核酸酶被称为RNA酶。这些酶主要用于体外分离纯化DNA，RNA或蛋白质。全能核酸酶是一种能同时降解DNA和RNA的核酸酶，而DNA酶(DNase)仅能降解DNA。
在某些具体的实施方案中，所述核酸酶是水解核酸的酶。核酸酶可以分类为核酸内切酶或核酸外切酶。核酸内切酶是催化DNA或RNA分子内部核酸之间化学键水解的任何一组酶。核酸外切酶是催化单个核苷酸从DNA或RNA链末端水解的任何一组酶。还可以基于它们是否特异性水解DNA或RNA对核酸酶分类。特异性催化DNA水解的核酸酶可以称为脱氧核糖核酸酶或DNA酶，而特异性催化RNA水解的核酸酶可以称为核糖核酸酶或RNA酶。一些核酸酶对单链或双链核酸序列是特异的。一些酶具有核酸外切酶和核酸内切酶两者的性质。另外，一些酶能够消化DNA和RNA两者的序列。术语“核酸酶”在本文中用于一般地表示水解核酸序列的任何酶。
在某些具体的实施方案中，所述核酸酶为以重量计的0.001份、0.0015份、0.002份、0.0025份、0.003份、0.0035份、0.004份、0.0045份、0.005份、0.0055份、0.006份、0.0065份、0.007份、0.0075份、0.008份、0.0085份、0.009份、0.0095份、0.01份、0.015份、0.02份的添加量。在某些更具体的实施方案中，所述核酸酶为以重量计的0.0015份的添加量。
进一步，所述制备方法还包括添加以重量计的0.01-1份季铵盐类阳离子去污剂。
进一步，所述制备方法还包括添加以重量计的0.01-0.5份季铵盐类阳离子去污剂。
术语“季铵盐阳离子”包括四乙基铵，四丁基铵，烷基三乙基铵，烷基三丁基铵等。
进一步，所述季铵盐阳离子去污剂包括四乙基铵、四丁基铵、烷基三乙基铵、烷基三丁基铵、苯扎氯铵。
进一步，所述季铵盐类阳离子去污剂包括苯扎氯铵。
进一步，所述苯扎氯铵的添加量为按重量计0.01-0.1份。
在某些具体的实施方案中，所述季铵盐阳离子去污剂为以重量计的0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份、0.15份、0.2份、0.25份、0.3份、0.35份、0.4份、0.45份、0.5份、0.55份、0.6份、0.65份、0.7份、0.75份、0.8份、0.85份、0.9份、0.95份、1.0份的添加量。在某些更具体的实施方案中，所述季铵盐阳离子去污剂为以重量计的0.05份的添加量。在某个具体的实施方案中，所述季铵盐阳离子去污剂为苯扎氯铵。
本发明提供了一种组合物，所述组合物由前面所述的制备方法制备得到。
进一步，所述组合物由溶菌酶、表面活性剂、螯合剂、还原剂、磷酸盐组成。
进一步，所述组合物由溶菌酶、表面活性剂、螯合剂、还原剂、磷酸盐、核酸酶组成。
进一步，所述组合物由溶菌酶、表面活性剂、螯合剂、还原剂、磷酸盐、核酸酶、季铵盐阳离子去污剂组成。
在某些具体的实施方案中，所述组合物还可添加其他消毒剂活性成分或稳定剂成分以组成衍生配方。所述稳定剂可选择例如阿拉伯树胶、明胶、瓜尔胶、鹿角菜胶和果胶等生物聚合物稳定剂。
术语“由……组成”应理解为“专门地由……组成”，但是，允许存在不会与其他组分发生化学相互作用的化学惰性材料，和/或允许存在痕量的其他物质，所述痕量为来自于生产浓缩物组分的副产品，这种副产品仅以比如低于10ppm范围的非常小的浓度存在。
本发明提供了前面所述的制备方法、前面所述的组合物在制备消毒产品和/或抑制病原体产品中的应用。
进一步，所述消毒产品为杀灭病原体的产品。
进一步，所述消毒产品包括物体表面消毒剂、医疗器械消毒剂、空气消毒剂、手消毒剂、皮肤消毒剂、黏膜消毒剂、疫源地消毒剂。
在某些具体的实施方案中，所述消毒产品指任何需杀灭病原体的地点、空间使用的产品，包括但不限于物体表面消毒剂、医疗器械消毒剂、空气消毒剂、手消毒剂、皮肤消毒剂、黏膜消毒剂、疫源地消毒剂，消毒产品实例为动物杀菌除味剂、脚部杀菌除味剂、植物表面消毒剂、空间杀菌消毒剂等。
术语“物体”是指具有宏观形状、宏观体积或宏观质量的物质。尺寸大于10-10米的物质即可称为物体。物体由物质构成的，占有一定空间的个体都称为物体。通过人类感觉器官可感觉到物体存在的客观现实。
进一步，所述抑制病原体产品包括除臭剂、洗手剂、瓜果蔬菜清洗剂、洗碗剂、沐浴剂、阴道清洗剂、阴囊清洗剂、洗衣剂、洗发剂、洗脸剂，但不限于此。
在某些具体的实施方案中，所述抑制病原体产品中含有不同含量的本发明所述的组合物。
本发明提供了前面所述的制备方法、前面所述的组合物在快速抑制和/或灭杀病原体中的应用。
如本文所用，术语“灭杀”、“杀灭”同义，是指能够杀死病原体；术语“抑制”是指能够抑制病原体生长和繁殖。
如本文所用，术语“病原体”通常是指能够引起(感染性)病害的任何类型的感染剂，并且包括但不限于病毒、细菌、原生动物、朊病毒、类病毒、或真菌(包括酵母)。如本文所用，术语“病原体”是本领域技术人员熟知的。术语“病原体”的实例包括诸如Schmallenberg病毒、甲型流感病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒(Porcine Respiratory and ReproductiveSyndrome Virus)、猪环状病毒(PorcineCircovirus)、古典猪瘟病毒(Classical SwineFever Virus)、非洲猪瘟病毒(AfricanSwine Fever Virus)、戊型肝炎病毒(Hepatitis EVirus)、牛病毒性腹泻病毒(BovineViral Diarrhea Virus)、狂犬病病毒(Rabies Virus)、Feline Morbillivirus、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、胸膜炎肺炎放线杆菌(ActinobacillusPleuropneumoniae)。
进一步，所述病原体包括金黄葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、白色念珠菌、EV71、H1N1、Bat SARS-like COV病毒。
术语“Bat SARS-like COV病毒”是指蝙蝠SARS样冠状病毒。
本发明提供了一种含有前面所述的组合物和水的消毒剂，所述组合物以0.1-5重量％的浓度存在于所述消毒剂中，所述消毒剂的pH值控制在7.0-9.0。
进一步，所述组合物以0.1-1重量％的浓度存在于所述消毒剂中。
进一步，所述消毒剂的pH值控制在8.0-8.5。
在某些具体的实施方案中，所述组合物以重量计0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2％、2.2％、2.4％、2.6％、2.8％、3％、3.2％、3.4％、3.6％、3.8％、4％、4.2％、4.4％、4.6％、4.8％、5％存在于配制成的消毒剂中。
本发明具备的有益效果：
1、杀菌速度快效率高-本发明的消毒剂在30s内即可对多种病毒菌杀灭效果显著，杀灭绝对值大于5；
2、抑菌广泛-本发明的消毒剂能有效杀灭日常生活中多种细菌、真菌及病毒微生物的各种污染物；
3、安全性高-本发明的消毒剂以生物活性酶作为主要成分，安全无毒，不对环境造成危害；且不含酒精等易挥发、易燃易爆等成分，方便运输保存；
4、应用广泛-本发明的消毒剂能用于手部、皮肤、物体表面等日常生活的消毒，还能用于医疗设备器戒、医疗环境等的消毒等。
附图说明
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1消毒剂的配制
1、实验材料
溶菌酶：为本实验室用毕氏酵母重组表达的人源溶菌酶，经纯化提纯得到的冻干粉；吐温80为Macklin药用级试剂，批号为：C135119235；EDTA为天津市鼎盛鑫化工分析纯试剂，批号为:20230330；半胱氨酸为天津科密欧化工分析纯试剂，批号为：20160425；磷酸氢二钠为国药化学试剂公司分析纯试剂，批号为：20161128；核酸酶为本实验室重组表达的全能核酸酶，250KU/ml，批号为SL06-20230505；苯扎氯铵为Macklin分析纯试剂，批号为：C13033952。
2、实验内容
按照以下实验例以及对比例配制不同类型的消毒剂：
实验例1：称取溶菌酶按重量0.1-2％，表面活性剂吐温80按重量0.1-1％，螯合剂EDTA按重量0.03-0.3％，还原剂按重量0.01-0.5％及磷酸盐按重量0.1-1％，混合均匀后，pH 7.0-9.0。实验例1中更具体地各组分浓度为溶菌酶为重组溶菌酶按重量0.1-0.5％；表面活性剂为吐温80按重量0.1-0.2％，螯合剂EDTA按重量0.05-0.08％，还原剂为半胱氨酸按重量0.05-0.1％；磷酸盐为磷酸二氢钠按重量0.1-0.2％；pH值为8.0-8.5。
实验例2：按实验例1的配制方法配好消毒剂后，加入核酸酶，加入核酸酶后核酸酶在消毒剂中的终浓度范围为2.5-50U/mL；具体的加入的核酸酶为重组表达的全能核酸酶，更具体的加入250KU/ml核酸酶母液，加入量为按重量计0.001-0.02％。
实验例3：按实验例2的配制方法配好消毒剂后，加入季铵盐类阳离子去污剂按重量0.01-0.5％；更具体的加入苯扎氯铵按重量0.01-0.1％。
对比例1：称取表面活性剂吐温80按重量0.1％，螯合剂EDTA按重量0.07％，还原剂按重量0.06％及磷酸盐按重量0.15％，混合均匀后，pH 8.0。
对比例2：称取表面活性剂吐温80按重量0.1％，螯合剂EDTA按重量0.07％，还原剂按重量0.06％及磷酸盐按重量0.15％，加入核酸酶按重量为0.0015％，混合均匀后，pH8.0。
对比例3：称取重组溶菌酶按重量0.2％，磷酸盐按重量0.15％，混合均匀后，pH8.0。
对比例4：称取磷酸盐按重量0.15％，加入核酸酶按重量为0.0015％，混合均匀后，pH 8.0。
对比例5：称取季铵盐类阳离子去污剂苯扎氯铵按重量为0.05％，加入磷酸盐按重量0.15％，混合均匀后，pH 8.0。
对比例6：称取季铵盐类阳离子去污剂苯扎氯铵按重量为0.05％，加入磷酸盐按重量0.15％，加入核酸酶按重量为0.0015％，混合均匀后，pH 8.0。
具体实验例与对比例配置表如表1所示。
表1
实施例2杀菌实验
按照《消毒技术规范》(卫生部2002年版)第二部分2.1.1中定量杀灭实验的悬液定量杀菌试验操作程序，使用实验例1中的各个实验例和对比例消毒剂进行细菌和真菌的定量杀灭实验，处理时间30s、1min和5min。实验菌株为：金黄色葡萄球菌ATCC6538、铜绿假单胞菌ATCC15442、大肠杆菌8099、白色念珠菌ATCC10231。
定量杀灭实验结果(平均杀灭对数值)如表2所示。
表2
由表2结果可以看出：本发明的三种消毒剂在30s内即可对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌的杀灭对数值均可大于5，即可杀灭99.999％以上的菌；对白色念珠菌，1min以内杀灭对数值也可大于5，杀菌效果显著，且杀灭时间短，及其高效。且实验例中逐步加入核酸酶及阳离子季铵盐，杀灭效果递进变化，效果显著，说明后加入的物质能起到很好的协调效应，进一步的提高了杀菌效果。
实施例3杀毒实验
按照《消毒技术规范》(卫生部2002年版)第二部分2.1.1中定量杀灭实验的悬液定量杀菌试验操作程序，在细胞模型上进行病毒灭活实验，病毒模型选择肠道病毒EV71、呼吸道病毒H1N1和冠状病毒bat SARS-like CoV。
定量杀灭实验结果(平均灭活对数值)如表3所示。
表3
由表3结果可以看出：本发明的三种消毒剂可对肠道病毒EV71、呼吸道病毒H1N1、冠状病毒bat SARS-like CoV均能有效的杀伤；尤其对呼吸道病毒H1N1、冠状病毒batSARS-like CoV，灭活对数值也可大于3，及99.9％的病毒可在30S内杀灭，效果极其显著，及其高效。且实验例中逐步加入核酸酶及阳离子季铵盐，杀灭效果递进变化，效果显著，说明后加入的物质能起到很好的协调效应，进一步的提高了病毒灭活效果，对呼吸道病毒H1N1、冠状病毒bat SARS-like CoV的灭活效果可达99.99％；对难以灭活的肠道病毒EV71，灭活效果也可达99％以上。
实施例4稳定性试验
按《消毒技术规范》的稳定性评价方法进行消毒剂的稳定性测试，将实验例1-3在37℃放置90天进行加速稳定性试验，取样测定有效物质含量，含量降低小于10％。将加速稳定性后的样品进行杀菌实验，处理时间30s、1min。实验菌株为：金黄色葡萄球菌ATCC6538、铜绿假单胞菌ATCC15442、大肠杆菌8099、白色念珠菌ATCC10231。
定量杀灭实验结果(平均杀灭对数值)如表4所示。
表4
由表4结果可知，经过37℃放置90天后的消毒剂，有效物质含量降低小于10％，消毒效果无显著变化，根据《消毒技术规范》可认为室温保质期达到2年，是一种稳定可靠的消毒剂。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (10)
1.一种组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将以重量计：0.1-2份溶菌酶、0.1-1份表面活性剂、0.03-0.3份螯合剂、0.01-0.5份还原剂、0.1-1份磷酸盐混合的步骤。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将以重量计：0.1-0.5份溶菌酶、0.1-0.2份表面活性剂、0.05-0.08份螯合剂、0.05-0.1份还原剂、0.1-0.2份磷酸盐混合的步骤；
优选地，所述溶菌酶包括噬菌体T4溶菌酶、植物源溶菌酶、微生物溶菌酶或动物源溶菌酶；
优选地，所述溶菌酶为重组溶菌酶；
优选地，所述表面活性剂包括吐温80、吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温81、吐温85；
优选地，所述表面活性剂为吐温80；
优选地，所述螯合剂包括EDTA、DTPMPA、HEDP或柠檬酸盐；
优选地，所述螯合剂为EDTA；
优选地，所述还原剂包括半胱氨酸、半胱胺、二硫苏糖醇、2-硫醇基乙醇、TCEP及其相关盐类；
优选地，所述还原剂包括半胱氨酸；
优选地，所述磷酸盐包括磷酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸铵、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、或其组合；
优选地，所述磷酸盐包括磷酸二氢钠。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括添加以重量计的0.001-0.02份核酸酶；
优选地，所述核酸酶的浓度范围为2.5-50U/mL；
优选地，所述核酸酶包括重组表达的全能核酸酶。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括添加以重量计的0.01-1份季铵盐类阳离子去污剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括添加以重量计的0.01-0.5份季铵盐类阳离子去污剂；
优选地，所述季铵盐阳离子去污剂包括四乙基铵、四丁基铵、烷基三乙基铵、烷基三丁基铵、苯扎氯铵；
优选地，所述季铵盐阳离子去污剂包括苯扎氯铵；
优选地，所述苯扎氯铵的添加量为按重量计0.01-0.1份。
6.一种组合物，其特征在于，所述组合物由权利要求1-5任一项所述的制备方法制备得到；
优选地，所述组合物由溶菌酶、表面活性剂、螯合剂、还原剂、磷酸盐组成；
优选地，所述组合物由溶菌酶、表面活性剂、螯合剂、还原剂、磷酸盐、核酸酶组成；
优选地，所述组合物由溶菌酶、表面活性剂、螯合剂、还原剂、磷酸盐、核酸酶、季铵盐阳离子去污剂组成。
7.权利要求1-5任一项所述的制备方法、权利要求6所述的组合物在制备消毒产品和/或抑制病原体产品中的应用；
优选地，所述消毒产品为杀灭病原体的产品。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述消毒产品包括物体表面消毒剂、医疗器械消毒剂、空气消毒剂、手消毒剂、皮肤消毒剂、黏膜消毒剂、疫源地消毒剂，所述抑制病原体产品包括除臭剂、洗手剂、瓜果蔬菜清洗剂、洗碗剂、沐浴剂、阴道清洗剂、阴囊清洗剂、洗衣剂、洗发剂、洗脸剂。
9.权利要求1-5任一项所述的制备方法、权利要求6所述的组合物在快速抑制和/或灭杀病原体中的应用。
10.一种含有权利要求6所述的组合物和水的消毒剂，其特征在于，所述组合物以0.1-5重量％的浓度存在于所述消毒剂中，所述消毒剂的pH值控制在7.0-9.0；
优选地，所述组合物以0.1-1重量％的浓度存在于所述消毒剂中；
优选地，所述消毒剂的pH值控制在8.0-8.5。
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