CN117629999A - 一种长柄扁桃花粉活力检测方法 - Google Patents
一种长柄扁桃花粉活力检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种长柄扁桃花粉活力检测方法，包括以下步骤：配置混合培养液；所述混合培养液是由以下组分配置而成：氟源1～6mg/L、碳源10～30g/L、槲皮素10～30mg/L、丙氨酸1～5g/L、γ‑氨基丁酸10～30mg/L、长柄扁桃花粉5～6g/L、稳定剂1～2g/L，其余为水；将配置的混合培养液加至载玻片上，恒温培养，使花粉萌发；培养完成后，显微镜下镜检。本发明的方法能够有效使显微镜下萌发的花粉管显形、显著提高镜检效率且准确率高、在短时间内检测出长柄扁桃花粉活力，解决长柄扁桃花粉萌发后在光学显微镜下不易观察的问题。
Description
技术领域
本发明涉及植物育种技术领域，具体涉及一种长柄扁桃花粉活力检测方法。
背景技术
长柄扁桃(Prunuspedunculatuspall)是一种新型木本油料作物，具有耐寒、耐旱和耐瘠薄等特性，主要分布在我国西北部地区。长柄扁桃营养价值高，核仁可制作食用油、生物柴油、蛋白粉、活性炭、动物饲料和化妆品等产品，核仁中的苦杏仁苷成分还具有药用价值。长柄扁桃在作为生态树种进行沙漠化防治的同时，还兼具经济收益，是一种有发展前景的优良经济树种。
长柄扁桃雌雄同花且自交不亲和，杂交育种是其选育优种的有效方法。杂交授粉是实现杂交育种的途径之一。自然情况下，长柄扁桃杂交授粉的亲本之间花期不同且间隔时间长，还有的亲本之间地理距离相隔远，等等诸多因素都是影响杂交授粉的问题所在。对长柄扁桃花粉贮藏，待时机合适，进行人工授粉是解决上述问题的有效方法。花粉活力是影响杂交育种的关键因素之一，对新鲜花粉以及贮藏后的花粉活力有效检测，也是必不可少的关键步骤。
用萌发培养基对长柄扁桃花粉培养，待花粉萌发生长出花粉管后，在显微镜下镜检以判断其活力，是一种有效的方法。但长柄扁桃花粉小，萌发后花粉管在常规光学显微镜下不易观察，镜检统计效率低且误差大。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
为了解决长柄扁桃花粉萌发后在光学显微镜下不易观察的问题，本发明的目的在于提供一种长柄扁桃花粉活力检测方法。本发明的方法能够有效使显微镜下萌发的花粉管显形、显著提高镜检效率且准确率高、在短时间内检测出长柄扁桃花粉活力。
本发明提供的检测方法，对新鲜花粉和贮藏花粉都可适用，可以有效解决长柄扁桃花粉萌发后在光学显微镜下不易观察的问题，有效提高镜检准确率，是一种高效且科学的方法。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下。
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，包括以下步骤：
配置混合培养液；所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源1～6mg/L、碳源10～30g/L、槲皮素10～30mg/L、丙氨酸1～5g/L、γ-氨基丁酸10～30mg/L、长柄扁桃花粉5～6g/L、稳定剂1～2g/L，其余为水；
将配置的混合培养液加至载玻片上，恒温培养，使花粉萌发；
培养完成后，显微镜下镜检。
进一步，所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源、碳源、槲皮素、丙氨酸、γ-氨基丁酸加入水中，混合均匀后，加入长柄扁桃花粉，然后加入稳定剂，分散均匀，得到混合培养液。
本发明中，氟源能够影响花粉萌发过程中酸性磷酸酯酶等酶活性，尤其是提高萌发前期40～80min时酸性磷酸酯酶的活性，从而提高花粉管的生长速率。其中，酸性磷酸酯酶的活性与花粉管的生长速率相关，而酸性磷酸酯酶能够参与磷酸酯的代谢，而磷酸酯代谢过程中产生的肌醇能够转化成花粉管壁前体，参与花粉管生长的调节。
碳源为花粉萌发提供能量。
槲皮素能够促进花粉萌发和花粉管的伸长。
丙氨酸能够提高花粉活力；γ-氨基丁酸能够增加花粉萌发过程中的酶活性。通过丙氨酸与γ-氨基丁酸的协同作用，有助于提高花粉活力。
稳定剂包括黄原胶与吐温-80，黄原胶能够与花粉混合，提高花粉分散效率。通过黄原胶与吐温-80的协同作用，在促进花粉分散均匀的同时，能够形成稳定的凝胶态，方便精准记录花粉萌发率。
更进一步，所述氟源为氟化钠或氟化钾，碳源为葡萄糖或乳糖。
更进一步，所述稳定剂为0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80的混合物。
更进一步，所述稳定剂中，0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80的质量比10：0.1～0.3。
进一步，所述分散均匀是在转速3000～10000rpm下均质5～15min。
进一步，所述混合均匀是在转速800～1000rpm下搅拌混合10～30min。
进一步，所述载玻片为凹槽载玻片。
进一步，所述恒温培养是在28±7℃条件下暗配养3～6h。
更进一步，所述恒温培养是将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内进行恒温培养。
进一步，所述镜检的具体操作如下：
配置花粉管染色剂；所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.3～0.5mg/L、碘化钾10～20g/L、碘2～5g/L，其余为水；
取出载玻片，在载玻片表面加入染色剂，染色5～10min，之后去除多余的染色剂，显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
更进一步，所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加水定容，得到花粉管染色剂。
本发明中，长柄扁桃花粉粒小且颜色淡，萌发出的花粉管在常规光学显微镜下不易观察，因此通过配制花粉管染色剂染色，然后再观察的方式，将萌发出的花粉管染色，使其在光学显微镜下更容易被观察到。
其中，碘是本发明中花粉管专用染色剂的核心染料成分，其原理是长柄扁桃花粉管中含有淀粉，淀粉遇碘变蓝色，因此用染色剂染色后，花粉管在常规光学显微镜下更易被观察到。
碘在水中的溶解度很小，碘化钾易溶于水，而碘在碘化钾的水溶液中溶解度显著增大，因此在配制花粉管染色剂时，要先将适量碘化钾粉末溶于去离子水中，再将碘溶解掉。
因为水的张力使得碘-碘化钾溶液在培养基表面聚集成团，无法铺展开、无法渗透，影响花粉管染色，而吐温-80是一种亲水性的表面活性剂，加入吐温-80可以降低水的张力，使染色剂在培养基表面铺展开，便于渗透进入花粉管染色。
更进一步，花粉萌发率的计算公式如下：
花粉萌发率＝(镜检下萌发出花粉管的花粉数/镜检花粉总数)×100％。
本发明中，镜检花粉总数应不小于100；萌发率在60％以上的花粉活力强，萌发率在30～60％的花粉活力中等，萌发率在30％以下的花粉活力弱。
本发明的有益效果：
1、本发明的方法中通过黄原胶与吐温-80的相互配合，在促进花粉分散均匀的同时，能够形成稳定的凝胶态，方便精准记录花粉萌发率。
2、本发明的方法中各原料组分相互配合，能够更好的起到促进花粉萌发的作用。本发明的方法能够在短时间内对新鲜花粉或贮藏花粉进行活力检测，同时还能提高检测结果的准确率。
3、本发明通过混合培养液培养花粉萌发，再滴加花粉管染色剂促使花粉管显形的方法，利用花粉管染色剂对花粉进行染色处理，能够有助于花粉显色，方便准确记录花粉萌发率，解决了长柄扁桃花粉管在常规光学显微镜下不易被观察的问题。
附图说明
图1是未染色(A)和染色后(B)在显微镜下同一视野下花粉萌发的对比照片。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述各实施例中，以氟化钾为氟源，以葡萄糖为碳源，用以进行长柄扁桃花粉的活力检测。
下述各实施例中，使用的载玻片的尺寸为25.4mm×76.2mm，厚度1mm、培养皿直径为90mm、圆形滤纸直径为90mm。
下述各实施例中所述实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到。
实施例1
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，包括以下步骤：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例2
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S1稳定剂的配比不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.1混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例3
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S1稳定剂的配比不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.3混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例4
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S2、混合培养液的配比不同，具体为稳定剂的含量不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.1g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例5
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S2、混合培养液的配比不同；具体为稳定剂的含量不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂2g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.2g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例6
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S2、混合培养液的配比不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源6mg/L、碳源30g/L、槲皮素10mg/L、丙氨酸5g/L、γ-氨基丁酸30mg/L、长柄扁桃花粉6g/L、稳定剂2g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.6mg、碳源3g、槲皮素1mg、丙氨酸0.5g、γ-氨基丁酸3mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合30min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.6g，然后加入稳定剂0.2g，在转速10000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例7
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S2、混合培养液的配比不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源1mg/L、碳源10g/L、槲皮素30mg/L、丙氨酸2g/L、γ-氨基丁酸12mg/L、长柄扁桃花粉5g/L、稳定剂1g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.1mg、碳源1g、槲皮素3mg、丙氨酸0.2g、γ-氨基丁酸1.2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合10min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.5g，然后加入稳定剂0.1g，在转速5000rpm下均质5min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例8
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S2、混合培养液的配比不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源2mg/L、碳源15g/L、槲皮素18mg/L、丙氨酸1g/L、γ-氨基丁酸10mg/L、长柄扁桃花粉5.8g/L、稳定剂1.6g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.2mg、碳源1.5g、槲皮素1.8mg、丙氨酸0.1g、γ-氨基丁酸1mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合10min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.58g，然后加入稳定剂0.16g，在转速3000rpm下均质15min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例9
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S3、恒温培养条件不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±5℃条件下暗配养3h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例10
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S3、恒温培养条件不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±7℃条件下暗配养6h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例11
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S4、花粉管染色剂的配比不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.5mg/L、碘化钾12g/L、碘5g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例12
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S4、花粉管染色剂的配比不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.3mg/L、碘化钾10g/L、碘2g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例13
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S4、花粉管染色剂的配比不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾20g/L、碘5g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色6min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例14
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S5、镜检条件不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色10min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
实施例15
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S5、镜检条件不同；具体方法如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是由质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80按照质量比10：0.15混合而成。
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
S3、恒温培养；
将S2配置的混合培养液滴加至凹槽载玻片的凹槽内，将滤纸用去离子水浸润，然后铺设在培养皿内，再将加有混合培养液的载玻片置于培养皿内，然后将培养皿转移至培养箱内，在28±3℃条件下暗配养5h，使花粉萌发。
S4、配置花粉管染色剂；
所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.4mg/L、碘化钾16g/L、碘3g/L，其余为去离子水；
所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于去离子水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加去离子水定容，得到花粉管染色剂。
S5、镜检；
培养完成后，取出载玻片，在载玻片表面滴加染色剂，染色5min，之后用滤纸吸附，以去除多余的染色剂，在16×4倍显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
对比例1
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S1、稳定剂不同，具体如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是质量分数0.18％(wt.)的黄原胶。
对比例2
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S1、稳定剂不同，具体如下：
S1、配置稳定剂；
所述稳定剂是吐温-80。
对比例3
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，以去离子水替换实施例1的稳定剂；具体如下：
S1、以去离子水替换实施例1的稳定剂；
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
对比例4
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S2、混合培养液不同，未加入氟源，具体如下：
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
对比例5
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S2、混合培养液不同，未加入槲皮素，具体如下：
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、丙氨酸3g/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、丙氨酸0.3g、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
对比例6
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S2、混合培养液不同，未加入丙氨酸，具体如下：
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、γ-氨基丁酸20mg/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、γ-氨基丁酸2mg加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
对比例7
一种长柄扁桃花粉活力检测方法，与实施例1的方法基本相同，其不同之处在于，S2、混合培养液不同，未加入γ-氨基丁酸，具体如下：
S2、配置混合培养液；
所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源5mg/L、碳源25g/L、槲皮素20mg/L、丙氨酸3g/L、长柄扁桃花粉5.6g/L、稳定剂1.8g/L，其余为去离子水；
所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源0.5mg、碳源2.5g、槲皮素2mg、丙氨酸0.3g，加入80mL去离子水中，在转速800～1000rpm下搅拌混合15min，之后在搅拌下加入长柄扁桃花粉0.56g，然后加入稳定剂0.18g，在转速8000rpm下均质10min，加去离子水定容至100mL，继续均质5min，使分散均匀，得到混合培养液。
下面我们按照上述实施例提供的方法进行长柄扁桃花粉活力检测。
一、不同时期花粉的花粉活力检测
以新鲜花粉、4℃贮藏3天的花粉、4℃贮藏5天的花粉、4℃贮藏7天的花粉、4℃贮藏20天的花粉、-20℃贮藏3天的花粉、-20℃贮藏7天的花粉、-20℃贮藏20天的花粉，按照实施例1的方法进行长柄扁桃花粉活力检测。
其中，新鲜花粉是在长柄扁桃花期晴天的上午8.00～11.00间采集花蕾，取出花药置于2000Lx的日光灯下晾干，24h后，取少量花药用指尖轻轻碾压，可见淡黄色的新鲜花粉从花药中散出，收集新鲜花粉，备用。
4℃贮藏3天的花粉是将新鲜采集的花药搜集于玻璃瓶或离心管中，于4℃密封贮藏，3天后取出，室温下放置30min复温，备用。
4℃贮藏5天的花粉是将新鲜采集的花药搜集于玻璃瓶或离心管中，于4℃密封贮藏，5天后取出，室温下放置30min复温，备用。
4℃贮藏7天的花粉是将新鲜采集的花药搜集于玻璃瓶或离心管中，于4℃密封贮藏，7天后取出，室温下放置30min复温，备用。
4℃贮藏20天的花粉是将新鲜采集的花药搜集于玻璃瓶或离心管中，于4℃密封贮藏，20天后取出，室温下放置30min复温，备用。
-20℃贮藏3天的花粉是将新鲜采集的花药搜集于玻璃瓶或离心管中，于-20℃密封贮藏，3天后取出，室温下放置30min复温，备用。
-20℃贮藏7天的花粉是将新鲜采集的花药搜集于玻璃瓶或离心管中，于-20℃密封贮藏，7天后取出，室温下放置30min复温，备用。
-20℃贮藏20天的花粉是将新鲜采集的花药搜集于玻璃瓶或离心管中，于-20℃密封贮藏，20天后取出，室温下放置30min复温，备用。
不同时期花粉的花粉活力检测结果见表1。
表1不同时期花粉的花粉活力检测结果
注：花粉萌发率的计算公式如下：
花粉萌发率＝(镜检下萌发出花粉管的花粉数/镜检花粉总数)×100％。
其中，镜检花粉总数应不小于100；萌发率在60％以上的花粉活力强，萌发率在30～60％的花粉活力中等，萌发率在30％以下的花粉活力弱。
由表1结果可以看出，4℃贮藏3天的花粉的活力与长柄扁桃花新鲜花粉的活力相当，而在，4℃贮藏超过3天之后，花粉活力均有所下降，在4℃贮藏20天时，花粉活力仍然可以达到中等水平。-20℃贮藏3天的花粉，其花粉活力比4℃贮藏7天的花粉的活力还要更低，且随着贮藏时间的延长，花粉活力呈下降趋势，-20℃贮藏20天时，花粉活力仍然可以达到中等水平。由此说明，试验过程中可以采用4℃贮藏3天以内的花粉进行花粉活力检测。
二、不同稳定剂对花粉萌发的影响
以4℃贮藏超过3天的花粉进行不同稳定剂对花粉萌发的影响试验，结果见表2。
表2不同稳定剂对花粉萌发的影响
| 质量比a | 稳定剂用量 | 花粉萌发率/％ | |
| 实施例1 | 10：0.15 | 1.8g/L | 60.17 |
| 实施例2 | 10：0.1 | 1.8g/L | 60.12 |
| 实施例3 | 10：0.3 | 1.8g/L | 60.15 |
| 实施例4 | 10：0.15 | 1g/L | 60.05 |
| 实施例5 | 10：0.15 | 2g/L | 60.10 |
| 对比例1 | 0.18％(wt.)的黄原胶 | 1.8g/L | - |
| 对比例2 | 吐温-80 | 1.8g/L | - |
| 对比例3 | 去离子水 | - | - |
注：a表示质量分数0.18％(wt.)的黄原胶与吐温-80的质量比。
由表2结果发现，不同配比的稳定剂对花粉萌发率影响不大。但是，在显微镜下，可以明显观察到，对比例1采用单一的稳定剂(0.18％(wt.)的黄原胶)时，花粉虽然可以混合均匀，也未见花粉沉淀，但是培养液呈流动状态，很容易出现花粉的流动态，很难精准观察并记录花粉萌发率。对比例2采用单一的稳定剂(吐温-80)，花粉有少量沉淀出现，且培养液呈流动的液态，很容易出现花粉的流动态，很难精准观察并记录花粉萌发率。对比例3采用去离子水替换稳定剂，出现大量花粉沉淀，且培养液呈流动的液态，很容易出现花粉的流动态，很难精准观察并记录花粉萌发率。
与对比例1～3相比，本发明实施例1～5的方法能够形成稳定的凝胶态，且花粉分散均匀，未见沉淀，可以精准观察并记录花粉萌发率。由此说明，本发明实施例主要通过0.18％(wt.)的黄原胶和吐温-80的相互配合，在促进花粉分散均匀的同时，能够形成稳定的凝胶态，方便精准记录花粉萌发率。
三、不同混合培养液对花粉萌发率的影响
以4℃贮藏超过3天的花粉进行不同混合培养液对花粉萌发率的影响试验，结果见表3。
表3不同混合培养液对花粉萌发率的影响
| 氟源 | 碳源 | 槲皮素 | 丙氨酸 | γ-氨基丁酸 | 花粉萌发率/％ | |
| 实施例1 | 5mg/L | 25g/L | 20mg/L | 3g/L | 20mg/L | 60.17 |
| 实施例6 | 6mg/L | 30g/L | 10mg/L | 5g/L | 30mg/L | 60.13 |
| 实施例7 | 1mg/L | 10g/L | 30mg/L | 2g/L | 12mg/L | 60.01 |
| 实施例8 | 2mg/L | 15g/L | 18mg/L | 1g/L | 10mg/L | 60.05 |
| 对比例4 | - | 25g/L | 20mg/L | 3g/L | 20mg/L | 56.31 |
| 对比例5 | 5mg/L | 25g/L | - | 3g/L | 20mg/L | 53.28 |
| 对比例6 | 5mg/L | 25g/L | 20mg/L | - | 20mg/L | 50.25 |
| 对比例7 | 5mg/L | 25g/L | 20mg/L | 3g/L | - | 58.74 |
由表3结果可以看出，与对比例4～7相比，本发明实施例提供的混合培养液具有促进花粉萌发的效果，且各原料组分相互配合，能够更好的起到促进花粉萌发的作用。
图1是未染色(A)和染色后(B)在显微镜下同一视野下花粉萌发的对比照片。由图1结果可以看出，经染色后在显微镜下能够清晰的观察到花粉萌发状态，与未染色相比，染色后的图片更为清晰，由此说明，利用花粉管染色剂对花粉进行染色处理，能够有助于花粉显色，方便准确记录花粉萌发率。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
配置混合培养液；所述混合培养液是由以下组分配置而成：
氟源1～6mg/L、碳源10～30g/L、槲皮素10～30mg/L、丙氨酸1～5g/L、γ-氨基丁酸10～30mg/L、长柄扁桃花粉5～6g/L、稳定剂1～2g/L，其余为水；
将配置的混合培养液加至载玻片上，恒温培养，使花粉萌发；
培养完成后，显微镜下镜检。
2.根据权利要求1所述的长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，所述混合培养液的配置方法如下：
将氟源、碳源、槲皮素、丙氨酸、γ-氨基丁酸加入水中，混合均匀后，加入长柄扁桃花粉，然后加入稳定剂，分散均匀，得到混合培养液。
3.根据权利要求1或2所述的长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，所述氟源为氟化钠或氟化钾，碳源为葡萄糖或乳糖。
4.根据权利要求1或2所述的长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，所述稳定剂为0.18wt.％的黄原胶与吐温-80的混合物。
5.根据权利要求4所述的长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，所述稳定剂中，0.18wt.％的黄原胶与吐温-80的质量比10：0.1～0.3。
6.根据权利要求2所述的长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，所述分散均匀是在转速3000～10000rpm下均质5～15min；
所述混合均匀是在转速800～1000rpm下搅拌混合10～30min。
7.根据权利要求1所述的长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，所述载玻片为凹槽载玻片。
8.根据权利要求1所述的长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，所述恒温培养是在28±7℃条件下暗配养3～6h。
9.根据权利要求1所述的长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，所述镜检的具体操作如下：
配置花粉管染色剂；所述花粉管染色剂是由以下组分配置而成：
吐温-80 0.3～0.5mg/L、碘化钾10～20g/L、碘2～5g/L，其余为水；
取出载玻片，在载玻片表面加入染色剂，染色5～10min，之后去除多余的染色剂，显微镜下镜检，观察记录视野内的花粉萌发率。
10.根据权利要求9所述的长柄扁桃花粉活力检测方法，其特征在于，所述花粉管染色剂的具体配置过程如下：
将碘化钾溶解于水中，之后在搅拌下加入碘和吐温-80，加水定容，得到花粉管染色剂。
Priority Applications (1)
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| CN202311655324.4A CN117629999A (zh) | 2023-12-05 | 2023-12-05 | 一种长柄扁桃花粉活力检测方法 |
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