CN117617246A - 一种农用杀菌剂及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种农用杀菌剂，其包括活性成分和助剂；所述活性成分为对伞花烃或D‑柠檬烯或L‑柠檬烯；所述助剂为农药学上可接受的农药助剂；其中，活性成分的重量百分比为0.5%~95.0%。通过活性成分抑制柑橘溃疡病病原菌与猕猴桃溃疡病病原菌的生长繁殖，进而控制柑橘溃疡病与猕猴桃溃疡病的发生，起效快，无残留，有助于提高柑橘和猕猴桃品质。
Description
技术领域
本发明属于农药技术领域，具体涉及一种农用杀菌剂及应用。
背景技术
植物病原菌的危害严重威胁环境农作物的产量和质量，其中细菌性病害如柑橘黄龙病、番茄青枯病、猕猴桃溃疡病和柑橘溃疡病等对产业影响特别严重，不仅导致减产失收，而且还可能毁园绝收。目前，防控细菌性病害主要有无机铜、有机铜、抗生素类和微生物农药等。生产上广泛应用细菌性病害的铜制剂，包括氢氧化铜、王铜、碱式硫酸铜等，活性成分作用靶标单一，长期使用病菌已产生很高的抗药性。另外，高温时使用无机铜制剂容易产生药害，刺激红蜘蛛的发生；细菌性病害对有机铜制剂喹啉铜等与无机铜制剂表现交互抗性，田间防治效果不佳；微生物农药如枯草芽孢杆菌等防效极不稳定，速效性差；抗生素类药剂如四霉素、春雷霉素、中生菌素等耐雨水冲刷能力弱，渗透性不佳，对南方连续多雨条件的作物保护效果不突出，还不能与碱性农药混用。现有产品登记的剂型主要是可湿性粉剂、乳油、水剂、可溶液剂、水分散粒剂等，这些剂型无法将活性成分传导到韧皮层，渗透性和耐雨水冲刷能力皆不理想，对细菌性病原菌病害防效不佳。因此开发作用机制独特、生物活性卓越的杀菌剂一直是新农药领域研究热点，尤其是挖掘高抑菌活性植物源活性成分并开发环境友好的农用杀菌剂极具前景。
对伞花烃、D-柠檬烯、L-柠檬烯均是从植物原料中提取的活性精油成分，具有多种生物学功能，包括抑菌、除虫、消毒、抗氧化、防腐等，且作为一种纯天然的植物源提取物，符合有机绿色生产标准。D-柠檬烯、L-柠檬烯是柠檬烯的光学异构体，为右旋和左旋萜二烯，互为对映体，化学名称为1-甲基-4-(1-甲基乙烯基)环己烯。对伞花烃为柠檬烯衍生化产物，其化学名称为4-异丙基甲苯。
中国发明专利申请CN110367252A公开了一种含有对伞花烃的增效农药组合物，所述农药组合物的活性成分为A和B，A和B的质量比例为1:100～100:1；其中A为对伞花烃，B为农药化合物或农药组合物，利用对伞花烃作为增效剂，增加农药的杀虫杀菌效果，减少害虫对杀虫/菌剂的抗药性。中国发明专利申请CN116806833A公开了一种含D-柠檬烯和春雷霉素的复配杀菌剂，通过组合D-柠檬烯和春雷霉素的抑菌优势，协同增效，达到防治农业细菌病害的目的。中国发明专利申请CN1480042A公开了一种杀虫剂组合物D-柠檬烯生物增效杀虫剂，通过D-柠檬烯与拟除虫菊酯复配，达到杀虫的目的。中国发明专利申请CN116686842A公开了一种含苦参碱和D-柠檬烯组合物的杀虫剂，通过复配具有杀虫效果好、安全性高、对环境无污染等优势。5％ D-柠檬烯可溶液剂已获得中国农药登记(中国农药信息网，登记证号PD20184008)，但登记用途和防治对象限于柑橘红蜘蛛、番茄烟粉虱，以及人参灰霉病、草莓炭疽病和黄瓜白粉病等真菌病害。综上所述，对伞花烃仅有作为农药增效剂应用，未见直接作为杀菌剂活性成分的报道，D-柠檬烯亦未有直接防治柑橘溃疡病和猕猴桃溃疡病细菌病害的报道，此外，L-柠檬烯亦未见应用于农药的报道。
中国发明专利CN108835110B公开了一种农药缓释微球及其制备方法，所述农药缓释微球由质量比为1:(1～6)的芯材和壁材构成，所述芯材为农药原药，壁材由聚乳酸(PLA)和聚丁二酸丁二醇酯(PBS)(质量比为1:1～9)组成；用PLA+PBS制备的壁材容易成囊，但制备的微胶囊形貌不规则，容易出现孔洞，包封率下降，药物释放快，持效期短。
发明内容
针对上述技术问题，本发明提供一种农用杀菌剂及应用，可用于防治植物细菌性病原菌危害，特别是柑橘溃疡病与猕猴桃溃疡病的防治。
本发明采用以下技术方案：
一种农用杀菌剂，其包括活性成分和助剂；所述活性成分为对伞花烃或D-柠檬烯或L-柠檬烯；所述助剂为农药学上可接受的农药助剂；其中，活性成分的重量百分比为0.5％～95.0％。
所述活性成分对伞花烃、柠檬烯(D-柠檬烯、L-柠檬烯)是常见的单萜类化合物，具有消炎、抗感染抑菌的效果，发明人在研究中发现，与市场常见的春雷霉素、铜制剂相比，这三种活性成分对柑橘溃疡病病原菌与猕猴桃溃疡病病原菌的生长繁殖有较好的抑制效果；将对伞花烃、D-柠檬烯、L-柠檬烯分别作为农药活性成分，添加助剂制成杀菌剂，亦具有较佳的田间防治效果。
优选地，所述活性成分的重量百分比为1.0％～50.0％。
更优选地，所述活性成分的重量百分比为5.0％～25.0％。
进一步地，所述农药助剂为表面活性剂、填充剂、溶剂、载体、乳化剂、分散剂、发泡剂、消泡剂、润湿剂、增稠剂、渗透剂、稳定剂、防冻剂、成膜剂、色浆、香精的一种或多种。
在本发明的一些实施例中，所述稳定剂为低温稳定剂、防腐剂、抗氧化剂、光稳定剂的一种或多种。
进一步地，将所述活性成分与助剂混合制成适合农业上使用的剂型，所述剂型可选为水乳剂、微乳剂、油乳剂、乳油、乳胶、糊剂、膏剂、可分散液剂、可溶液剂、可溶胶剂、油剂、颗粒剂、可湿性粉剂、水分散粒剂﹑悬浮剂、微囊悬浮剂、油悬浮剂、可分散油悬浮剂、种子处理悬浮剂的一种或多种。
在本发明的一些实施例中，所述杀菌剂的剂型为微囊悬浮剂，其中微胶囊由质量比为1:5～5:1的芯材和壁材构成，所述芯材为活性成分，所述壁材由质量比为1:4～4:1的聚丁二酸丁二醇酯、聚羟基丁酸酯组成。
优选地，所述芯材和壁材的质量比为2:1。
在本发明的一些实施例中，所述活性成分为对伞花烃，所述聚丁二酸丁二醇酯、聚羟基丁酸酯的质量比为1:1。
在本发明的一些实施例中，所述活性成分为D-柠檬烯，所述聚丁二酸丁二醇酯、聚羟基丁酸酯的质量比为3:2。
在本发明的一些实施例中，所述活性成分为L-柠檬烯，所述聚丁二酸丁二醇酯、聚羟基丁酸酯的质量比为4:1。
本发明中的3种活性成分属于植物提取物，自然条件下极易氧化及易挥发，在田间应用中直接施用暴露在空气中，会由于活性成分降解或逸失，导致作用于靶标的量较少，生物活性降低。将活性成分制成微囊悬浮剂，能够将有效成分包裹，避免挥发和紫外线引起的降解，提高生物利用率，显著提升田间防效。采用聚羟基丁酸酯(PHB)与聚丁二酸丁二醇酯(PBS)制备的微胶囊较其他壁材相比包封率和载药量更高，形貌规则，成囊情况好，表现出更佳的药效。
本发明还提供了上述农用杀菌剂在防治柑橘溃疡病或猕猴桃溃疡病中的应用。
进一步地，所述杀菌剂中活性成分对伞花烃、D-柠檬烯和L-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌的EC50值分别为4.0～8.0mg/L、10.0～15.0mg/L、7.5～12.5mg/L，所述杀菌剂中活性成分对伞花烃、D-柠檬烯和L-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌的EC50值分别为5.0～10.0mg/L、5.0～10.0mg/L、8.0～16.0mg/L。
在本发明的一个实施例中，活性成分对伞花烃对猕猴桃溃疡病病原菌的EC50值为4.99mg/L。
在本发明的一个实施例中，活性成分D-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌的EC50值为12.99mg/L。
在本发明的一个实施例中，活性成分L-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌的EC50值为8.01mg/L。
上述杀菌剂中活性成分的EC50值为通过比浊法测定活性成分对猕猴桃病原菌生长的抑制率得到。
在本发明的一个实施例中，活性成分对伞花烃对柑橘溃疡病病原菌的EC50值为5.88mg/L。
在本发明的一个实施例中，活性成分D-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌的EC50值为5.03mg/L。
在本发明的一个实施例中，活性成分L-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌的EC50值为9.02mg/L。
上述杀菌剂中活性成分的EC50值为直接通过比浊法测定活性成分对柑橘病原菌生长的抑制率得到。
进一步地，所述农用杀菌剂在防治猕猴桃/柑橘溃疡病的田间试验应用中，所述杀菌剂活性成分为对伞花烃，活性成分的质量百分比浓度为10％，所述杀菌剂施药的质量浓度为300～700mg/L。
优选地，在防治猕猴桃溃疡病的田间试验应用中，所述杀菌剂施药的最佳质量浓度为500mg/L。
优选地，在防治柑橘溃疡病的田间试验应用中，所述杀菌剂施药的最佳质量浓度为400mg/L。
所述农用杀菌剂可直接对植物或植物部位进行处理，或者使活性成分对伞花烃或D-柠檬烯或L-柠檬烯作用于植物的环境、生境或储存空间而进行，如浸渍、喷雾、弥雾、滴灌、注射、冲施、蒸发、散播、涂抹、包衣(例如对种子施用)或拌种等。
本发明的有益效果是：通过活性成分(对伞花烃或D-柠檬烯或L-柠檬烯)抑制柑橘溃疡病与猕猴桃溃疡病病原菌的生长繁殖，进而控制柑橘溃疡病与猕猴桃溃疡病的发生，使其能够有效抑制柑橘溃疡病菌和猕猴桃溃疡病病原菌，起效快，无残留，提高柑橘和猕猴桃品质，绿色环保且防控效果好。
说明书附图
图1为对伞花烃对猕猴桃溃疡病病原菌的离体抑制活性测试结果图。
图2为D-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌的离体抑制活性测试结果图。
图3为L-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌的离体抑制活性测试结果图。
图4为对伞花烃对柑橘溃疡病病原菌的离体抑制活性测试结果图。
图5为D-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌的离体抑制活性测试结果图。
图6为L-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌的离体抑制活性测试结果图。
图7为10％对伞花烃微囊悬浮剂用于防治猕猴桃溃疡病用药后图片。
图8为4％春雷霉素水剂用于防治猕猴桃溃疡病用药后图片。
图9为10％对伞花烃微囊悬浮剂用于防治柑橘溃疡病用药后图片。
图10为77％碱式硫酸铜水分散粒剂用于防治柑橘溃疡病用药后图片。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所使用的药剂均可通过商业途径或已知公开的方法制备得到。除非另有定义，实施例中所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。
实施例1对伞花烃对猕猴桃溃疡病病原菌的离体抑制活性测试
本实施例用到的猕猴桃溃疡病病原菌(丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.Actinidiae,Psa)由发明人采集分离鉴定。使用前将丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种的菌种活化于LB固体培养基上，28℃倒置培养3天后备用。
具体步骤如下：
1、LB液体培养基配制
取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，使用蒸馏水定容至1000ml，使用NaOH调节pH至7.4。
2、菌悬液制备：
猕猴桃溃疡病病原菌菌悬液制备：将活化的菌株在超净工作台上用移液枪枪头管口轻轻刮取少量菌落于LB液体培养基中，于恒温摇床上在28℃，200rpm条件下振荡培养至菌落完全散开无块状沉淀，之后用无菌水将猕猴桃溃疡病病原菌培养液稀释成活菌数为1×108CFU/mL的菌悬液，此时在紫外分光光度计600nm下，测得的吸光值为0.1(OD600＝0.1)。
3、对伞花烃的抑菌测试
将对伞花烃按5个浓度梯度组(2mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、10mg/L)分别添加至100mL的LB液体培养基中，以不添加对伞花烃的LB液体培养基作为空白对照组，分别加入上述配制好的猕猴桃溃疡病病原菌菌悬液100μL，放入恒温摇床中以28℃、180r/min的条件培养24h，每个测试组做3个重复。需要说明的是，浓度梯度根据预实验测得的EC50值的模糊区间设置，下同。
采用比浊法测定对伞花烃对猕猴桃溃疡病病原菌生长的抑制率，使用紫外光度分光计在600nm下测定菌液浓度(图1)，可见随着药物浓度的增加菌液颜色逐渐清澈，表明高浓度的对伞花烃能够明显抑制住猕猴桃溃疡病病菌的生长繁殖。
通过DPS数据处理系统计算毒力回归方程、EC50值及相关系数，结果见表1。
实施例2D-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌的离体抑制活性测试
本实施例与实施例1的区别在于将对伞花烃替换为D-柠檬烯，设置的5个浓度梯度组分别为5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L，其他步骤与实施例1一致。
采用比浊法测定D-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌生长的抑制率，使用紫外光度分光计在600nm下测定菌液浓度(图2)，可见随着药物浓度的增加菌液颜色逐渐清澈，表明高浓度的D-柠檬烯能够明显抑制住猕猴桃溃疡病病菌的生长繁殖。
通过DPS数据处理系统计算毒力回归方程、EC50值及相关系数，结果见表1。
实施例3L-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌的离体抑制活性测试
本实施例与实施例1的区别在于将对伞花烃替换为L-柠檬烯，设置的5个浓度梯度组分别为2mg/L、6mg/L、10mg/L、14mg/L、18mg/L，其他步骤与实施例1一致。
采用比浊法测定L-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌生长的抑制率，使用紫外光度分光计在600nm下测定菌液浓度(图3)，可见随着药物浓度的增加菌液颜色逐渐清澈，表明高浓度的L-柠檬烯能够明显抑制住猕猴桃溃疡病病菌的生长繁殖。
通过DPS数据处理系统计算毒力回归方程、EC50值及相关系数，结果见表1。
实施例4对伞花烃对柑橘溃疡病病原菌的离体抑制活性测试
本实施例用到的柑橘溃疡病病原菌(黄单胞柑橘亚种(Xanthomonas citrisubsp.citri,Xcc)LYGJ3-5)由发明人采集分离鉴定。使用前将黄单胞柑橘亚种的菌种活化于LB固体培养基上，28℃倒置培养3天后备用。
具体步骤如下：
1、LB液体培养基配制
取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，使用蒸馏水定容至1000ml，使用NaOH调节pH至7.4。
2、菌悬液制备：
柑橘溃疡病病原菌菌悬液制备：将活化的菌株在超净工作台上用移液枪枪头管口轻轻刮取少量菌落于LB液体培养基中，于恒温摇床上在28℃，200rpm条件下振荡培养至菌落完全散开无块状沉淀，之后用无菌水将柑橘溃疡病病原菌培养液稀释成活菌数为1×108CFU/mL的菌悬液，此时在紫外分光光度计600nm下，测得的吸光值为0.1(OD600＝0.1)。
3、对伞花烃的抑菌测试
将对伞花烃按5个浓度梯度组(2mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、10mg/L)分别添加至100mL的LB液体培养基中，以不添加对伞花烃的LB液体培养基作为空白对照组，分别加入上述配制好的柑橘溃疡病病原菌菌悬液100μL，放入恒温摇床中以28℃、180r/min的条件培养24h，每个测试组做3个重复。
本实施例的操作步骤与实施例1一致，区别仅在于，将实施例1中的猕猴桃溃疡病病原菌替换为柑橘溃疡病病原菌。
采用比浊法测定对伞花烃对柑橘溃疡病病原菌生长的抑制率，使用紫外光度分光计在600nm下测定菌液浓度(图4)，可见随着药物浓度的增加菌液颜色逐渐清澈，表明高浓度的对伞花烃能够明显抑制住柑橘溃疡病病菌的生长繁殖。
通过DPS数据处理系统计算毒力回归方程、EC50值及相关系数，结果见表1。
实施例5D-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌的离体抑制活性测试
本实施例的操作步骤与实施例4一致，区别在于将对伞花烃替换为D-柠檬烯，设置的5个浓度梯度组分别为2mg/L、5mg/L、8mg/L、11mg/L、14mg/L。
采用比浊法测定D-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌生长的抑制率，使用紫外光度分光计在600nm下测定菌液浓度(图5)，可见随着药物浓度的增加菌液颜色逐渐清澈，表明高浓度的D-柠檬烯能够明显抑制住柑橘溃疡病病菌的生长繁殖。
通过DPS数据处理系统计算毒力回归方程、EC50值及相关系数，结果见表1。
实施例6L-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌的离体抑制活性测试
本实施例的操作步骤与实施例4一致，区别在于将对伞花烃替换为L-柠檬烯，设置的5个浓度梯度组分别为4mg/L、8mg/L、12mg/L、16mg/L、20mg/L。
采用比浊法测定L-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌生长的抑制率，使用紫外光度分光计在600nm下测定菌液浓度(图6)，可见随着药物浓度的增加菌液颜色逐渐清澈，表明高浓度的L-柠檬烯能够明显抑制住柑橘溃疡病病菌的生长繁殖。
通过DPS数据处理系统计算毒力回归方程、EC50值及相关系数，结果见表1。
对比例1春雷霉素对猕猴桃溃疡病病原菌的离体抑制活性测试
本实施例将实施例1中的对伞花烃替换为4％春雷霉素水剂，对应设置5个浓度梯度组(50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L、250mg/L)，分别添加至100mL的LB液体培养基中，以不添加4％春雷霉素水剂的LB液体培养基作为空白对照组，其他步骤与实施例1一致。
采用比浊法测定4％春雷霉素水剂对猕猴桃溃疡病病原菌生长的抑制率，使用紫外光度分光计在600nm下测定菌液浓度，通过DPS数据处理系统计算毒力回归方程、EC50值及相关系数，结果见表1。
对比例2碱式硫酸铜对柑橘溃疡病病原菌的离体抑制活性测试
本实施例将实施例4中的对伞花烃替换为70％碱式硫酸铜水分散粒剂，对应设置5个浓度梯度组(100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L)，分别添加至100mL的LB液体培养基中，以不添加70％碱式硫酸铜水分散粒剂的LB液体培养基作为空白对照组，其他步骤与实施例4一致。
采用比浊法测定70％碱式硫酸铜水分散粒剂对柑橘溃疡病病原菌生长的抑制率，使用紫外光度分光计在600nm下测定菌液浓度，通过DPS数据处理系统计算毒力回归方程、EC50值及相关系数，结果见表1。
生长抑制率的计算公式如下：
生长抑制率(％)＝[(对照菌液的OD值-处理菌液的OD值)/处理菌液的OD值]*100％
表1不同活性成分对猕猴桃/柑橘溃疡病病原菌的离体抑制活性测试结果
由表1结果可得，在对猕猴桃溃疡病病原菌的离体抑制活性测试中，对伞花烃、D-柠檬烯、L-柠檬烯的EC50值分别为4.99mg/L、12.99mg/L、8.01mg/L，远低于4％春雷霉素水剂的EC50值(149.20mg/L)；在对柑橘溃疡病病原菌的离体抑制活性测试中，对伞花烃、D-柠檬烯、L-柠檬烯的EC50值分别为5.88mg/L、5.03mg/L、9.02mg/L，远低于70％碱式硫酸铜水分散粒剂的EC50值(382.37mg/L)，证明对伞花烃、D-柠檬烯、L-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌、柑橘溃疡病病原菌表现出很好的抑制效果。
实施例7含不同活性成分的杀菌剂的制备与应用
1.含对伞花烃的杀菌剂的制备
(以重量份计)去离子水98份、聚乙烯醇2份、对伞花烃10份、聚丁二酸丁二醇酯(PBS)2.5份、聚羟基丁酸酯(PHB)2.5份、二氯甲烷30份。
制备时，量取98g去离子水于锥形瓶中，缓慢加入2g聚乙烯醇，采用数显磁力(加热板)搅拌器加热至60℃并且恒温高速搅拌使其完全溶解，待其冷却至室温，制备得到水相。以PBS:PHB(1:1)为壁材，以活性成分对伞花烃作为芯材，芯壁比为2:1。将聚丁二酸丁二醇酯(PBS)2.5g与聚羟基丁酸酯(PHB)2.5g溶于30mL二氯甲烷中，在磁力搅拌器上充分搅拌，再向其中加入活性成分对伞花烃继续搅拌溶解，可得到油相。将油相倒入水相后，采用T25数显分散器以8000r/min的速度乳化剪切5min，便可制备稳定的水包油型混合乳液，在磁力搅拌器上以600r/min的速度搅拌6～7h，直至溶剂二氯甲烷完全挥发完，使微胶囊固化。分离微胶囊，测定活性成分载药量。按微囊悬浮剂配比计量微胶囊、湿润剂、分散剂、增稠剂、增渗剂和稳定剂质量，合并在容器中经剪切分散调制成制剂。
2.含D-柠檬烯的杀菌剂的制备
(以重量份计)去离子水98份、聚乙烯醇2份、D-柠檬烯10份、聚丁二酸丁二醇酯(PBS)3份、聚羟基丁酸酯(PHB)2份、二氯甲烷30份。
制备时，量取98g去离子水于锥形瓶中，缓慢加入2g聚乙烯醇，采用数显磁力(加热板)搅拌器加热至60℃并且恒温高速搅拌使其完全溶解，待其冷却至室温，制备得到水相。以PBS：PHB(3:2)为壁材，以活性成分作为芯材，芯壁比为2:1。将聚丁二酸丁二醇酯(PBS)3g与聚羟基丁酸酯(PHB)2g溶于30mL二氯甲烷中，在磁力搅拌器上充分搅拌，再向其中加入活性成分继续搅拌溶解，可得到油相。将油相倒入水相后，采用T25数显分散器以8000r/min的速度乳化剪切5min，便可制备稳定的水包油型混合乳液，在磁力搅拌器上以600r/min的速度搅拌6～7h，直至溶剂二氯甲烷完全挥发完，使微胶囊固化。分离微胶囊，测定活性成分载药量。按微囊悬浮剂配比计量微胶囊、湿润剂、分散剂、增稠剂、增渗剂和稳定剂质量，合并在容器中经剪切分散调制成制剂。
3.含L-柠檬烯的农用杀菌剂的制备
(以重量份计)去离子水98份、聚乙烯醇2份、L-柠檬烯10份、聚丁二酸丁二醇酯(PBS)4份、聚羟基丁酸酯(PHB)1份、二氯甲烷30份。
制备时，量取98g去离子水于锥形瓶中，缓慢加入2g聚乙烯醇，采用数显磁力(加热板)搅拌器加热至60℃并且恒温高速搅拌使其完全溶解，待其冷却至室温，制备得到水相。以PBS:PHB(4:1)为壁材，以活性成分L-柠檬烯作为芯材，芯壁比为2:1。将聚丁二酸丁二醇酯(PBS)4g与聚羟基丁酸酯(PHB)2g溶于30mL二氯甲烷中，在磁力搅拌器上充分搅拌，再向其中加入活性成分L-柠檬烯继续搅拌溶解，可得到油相。将油相倒入水相后，采用T25数显分散器以8000r/min的速度乳化剪切5min，便可制备稳定的水包油型混合乳液，在磁力搅拌器上以600r/min的速度搅拌6～7h，直至溶剂二氯甲烷完全挥发完，使微胶囊固化。分离微胶囊，测定活性成分载药量。按微囊悬浮剂配比计量微胶囊、湿润剂、分散剂、增稠剂、增渗剂和稳定剂质量，合并在容器中经剪切分散调制成制剂。
4、在防治猕猴桃/柑橘溃疡病中的应用
在实际应用中，将上述制得的杀菌剂和水按质量比1:200的比例进行稀释，然后喷雾即可。以制得的含对伞花烃的杀菌剂为例，进行田间防治试验。
(1)在防治猕猴桃溃疡病中的应用
使用上述制得的含对伞花烃的杀菌剂(10％对伞花烃微囊悬浮剂)进行田间试验，设置4％春雷霉素水剂进行对照试验，使用时将两者试剂和水按质量比1:200的比例进行稀释，然后对植株喷雾。
防治效果见表2、图7(10％对伞花烃微囊悬浮剂)、图8(4％春雷霉素水剂)，可见对伞花烃制剂用药后植株上无明显溃疡病危害症状，而春雷霉素用药后叶片上有明显的溃疡病危害症状，表明对伞花烃制剂有明显的预防效果，能很好地抑制猕猴桃溃疡病的发生。
(2)在防治柑橘溃疡病中的应用
使用上述制得的含对伞花烃的杀菌剂(10％对伞花烃微囊悬浮剂)进行田间试验，设置77％碱式硫酸铜水分散粒剂作为对照组进行对照试，将10％对伞花烃微囊悬浮剂用水稀释250倍，77％碱式硫酸铜水分散粒剂用水稀释800倍，然后对植株喷雾使用。
防治效果见表2、图9(10％对伞花烃微囊悬浮剂)、图10(77％碱式硫酸铜水分散粒剂)，可见对伞花烃制剂用药后植株上无明显溃疡病危害症状，而77％碱式硫酸铜水分散粒剂用药后叶片上有明显的溃疡病危害症状，表明对伞花烃制剂相较有明显的预防效果，能很好地抑制柑橘溃疡病的发生。
表2对伞花烃制剂对猕猴桃/柑橘溃疡病的田间药效调查结果
上述实施例阐明的内容应当理解为这些实施例仅用于更清楚地说明本发明，而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落入本申请所附权利要求所限定的范围。
Claims (11)
1.一种农用杀菌剂，其特征在于，包括活性成分和助剂；
所述活性成分为对伞花烃或D-柠檬烯或L-柠檬烯；
所述助剂为农药学上可接受的农药助剂；
其中，活性成分的质量百分比为0.5%~95.0%。
2.根据权利要求1所述的农用杀菌剂，其特征在于，所述活性成分的质量百分比为1.0%~50.0%，优选地，所述活性成分的质量百分比为5.0%~25.0%。
3.根据权利要求1所述的农用杀菌剂，其特征在于，将所述活性成分与助剂混合制成适合农业上使用的剂型，所述剂型可选为水乳剂、微乳剂、油乳剂、乳油、乳胶、糊剂、膏剂、可分散液剂、可溶液剂、可溶胶剂、油剂、颗粒剂、可湿性粉剂、水分散粒剂﹑悬浮剂、微囊悬浮剂、油悬浮剂、可分散油悬浮剂、种子处理悬浮剂的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的农用杀菌剂，其特征在于，所述剂型为微囊悬浮剂，其中微胶囊由质量比为1:5~5:1的芯材和壁材构成，所述芯材为活性成分，所述壁材由质量比为1:4~4:1的聚丁二酸丁二醇酯、聚羟基丁酸酯组成。
5.根据权利要求4所述的农用杀菌剂，其特征在于，所述芯材和壁材的质量比为2:1。
6.根据权利要求4所述的农用杀菌剂，其特征在于，所述活性成分为对伞花烃，所述聚丁二酸丁二醇酯、聚羟基丁酸酯的质量比为1:1。
7.根据权利要求4所述的农用杀菌剂，其特征在于，所述活性成分为D-柠檬烯，所述聚丁二酸丁二醇酯、聚羟基丁酸酯的质量比为3:2。
8.根据权利要求4所述的农用杀菌剂，其特征在于，所述活性成分为L-柠檬烯，所述聚丁二酸丁二醇酯、聚羟基丁酸酯的质量比为4:1。
9.根据权利要求1-8任一项所述的农用杀菌剂在防治植物细菌性病害的应用，其中，所述植物细菌性病害包括猕猴桃溃疡病和柑橘溃疡病。
10.根据权利要求9所述的农用杀菌剂在防治植物细菌性病害的应用，其特征在于，所述杀菌剂中活性成分对伞花烃、D-柠檬烯和L-柠檬烯对猕猴桃溃疡病病原菌的EC50值分别为4.0~8.0 mg/L、10.0~15.0 mg/L、7.5~12.5 mg/L，所述杀菌剂中活性成分对伞花烃、D-柠檬烯和L-柠檬烯对柑橘溃疡病病原菌的EC50值分别为5.0~10.0 mg/L、5.0~10.0 mg/L、8.0~16.0 mg/L。
11.根据权利要求9所述的农用杀菌剂在防治植物细菌性病害的应用，其特征在于，所述杀菌剂活性成分为对伞花烃，活性成分的质量百分比浓度为10%，所述杀菌剂田间施药的质量浓度为300~700 mg/L；优选地，在防治猕猴桃溃疡病的应用中，所述杀菌剂田间施药的最佳质量浓度为500 mg/L；优选地，在防治柑橘溃疡病的应用中，所述杀菌剂田间施药的最佳质量浓度为400 mg/L。
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