CN117586375A - 一种制备司美格鲁肽的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种制备司美格鲁肽的方法，涉及多肽药物合成领域，该方法具体包括：在分别用司美格鲁肽前体Arg34GLP‑1(9‑37)、Arg34GLP‑1(10‑37)和Arg34GLP‑1(11‑37)合成司美格鲁肽31肽主链时，His的主链胺基采用Troc保护。Troc保护基通过锌粉和酸性溶液温和地脱除，避免多肽偶联当中His主链上的Fmoc被脱除而带来的杂质，同时避免了用三氟乙酸脱除多肽保护基造成的潜在风险。

Description

一种制备司美格鲁肽的方法
技术领域
本发明涉及多肽药物合成领域，具体涉及一种制备司美格鲁肽的方法。
背景技术
索马鲁肽，又名司美格鲁肽，它是一种长效GLP-1受体激动剂，每周只须注射1次。它是继艾塞那肽、利拉鲁肽、阿必鲁肽、度拉糖肽、利司那肽、贝那鲁肽之后，全球第7个上市的GLP-1受体激动剂。索马鲁肽降糖和减肥双重疗效，2型糖尿病患者接受每周1次索马鲁肽注射治疗后的降糖和减重效果明显优于安慰剂、西格列汀、甘精胰岛素U100或缓释艾塞那肽。索马鲁肽在减肥方面的表现甚至优于同门药物Saxenda（利拉鲁肽3mg）。
索马鲁肽的多肽序列如下：
H-His7-Aib8-Glu9-Gly10-Thr11-Phe12-Thr13-Ser14-Asp15-Val16-Ser17-Ser18-Tyr19-Leu20-Glu21-Gly22-Gln23-Ala24-Ala25-Lys26(AEEA-AEEA-γ-Glu-OctadecanedioicAcid)-Glu27-Phe28-Ile29-Ala30- Trp31- Leu32-Val33-Arg34-Gly35-Arg36-Gly37-OH。
其中，Lys26(AEEA-AEEA-γ-Glu-Octadecanedioic Acid)结构示意式如下：
。
原研专利WO2009083549A1采用基因重组-生物发酵联合化学合成来制备司美格鲁肽。其工艺采用Fmoc-His-Aib-OSu与Lys26已接好侧链的主链29肽或Fmoc-His-Aib-Glu-Gly-OSu与Lys26已接好侧链的主链27肽反应得到Fmoc-司美格鲁肽，然后用哌啶脱除Fmoc得到司美格鲁肽粗品。本专利发明人重复Fmoc-His-Aib-OSu与Lys26已接好侧链的主链29肽的合成工艺发现存在12-17%的33肽杂质，即His-Aib-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-OctadecanedioicAcid)- Glu-Phe-Ile-Ala- Trp -Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH。本杂质产生的原因可能是因为活泼脂长时间在碱性环境中与主链反应Fmoc发生了部分脱除，然后多偶联了Fmoc-His-Aib上去。由于本杂质的存在，还要导致后续制备柱纯化时收率降低。
原研专利WO2009083549A1、CN115197312A、CN113801233A和CN111153983A等现有技术还采用Boc保护的片段来与主链偶联，然后再通过50%以上的TFA脱除Boc、Trt、tBu保护基。多肽切割这一步除了不环保外，还要出现额外的杂质，并且用醚类溶剂沉淀粗品时还会造成产品流失。
针对现有技术存在的问题，寻找一种环保、杂质少、超率高的制备司美格鲁肽的方法十分必要。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种环保、杂质少、超率高的制备司美格鲁肽的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明使用的缩写及英文所对应的含义如表1所示：
表1 本发明使用的缩写及英文所对应的含义
本发明提供了一种制备司美格鲁肽的方法，也即司美格鲁肽前体合成司美格鲁肽31肽主链时，His的主链胺基采用Troc保护；
所述司美格鲁肽前体包括Arg34GLP-1(9-37)、Arg34GLP-1 (10-37)和Arg34GLP-1(11-37)中的一种或多种。
也即，所述方法包括以下步骤：将His主链胺基用Troc保护的二肽、三肽或四肽的活泼脂与Lys26侧链已经引入了司美格鲁肽侧链的主链27、28或29肽在碱性溶液中反应，得到Troc-司美格鲁肽。Troc-司美格鲁肽在酸性条件下用锌粉脱除Troc得到司美格鲁肽粗品。Lys26的侧链参照原研专利WO2009083549A1引入化合物基团Ⅲ，化合物基团Ⅲ结构式如下：
。
进一步地，所述的方法，包括以下步骤：
步骤1：Troc-His-Aib-Q与化合物Ⅰ反应得到化合物Ⅱ，反应式如下：
；
上式中单字母代表氨基酸，此为本领域现有技术已知内容，如A为丙氨酸。
其中，Q为OR或AA1-OR；
R为琥珀酰亚胺基、五氟苯基、5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺基；
AA1为Glu、Glu-Gly；AA2为Glu-Gly、Gly、H；
步骤2：化合物Ⅱ用锌粉还原脱除Troc保护基得到司美格鲁肽粗品；
步骤3：司美格鲁肽粗品经过精制、冻干，得到司美格鲁肽纯品。
在一些具体的实施方式中，所述的方法，包括以下步骤：
步骤1：Troc-His-Aib-Q在碱性溶液中，室温下与化合物Ⅰ反应得到Troc-司美格鲁肽。
步骤2：步骤1含Troc-司美格鲁肽的溶液用无机酸调pH到7.0，然后加入锌粉，再用有机酸调反应体系的pH到2.0-5.0。经过HPLC检测Troc保护基完全被脱除后，滤掉锌粉，滤液中加入EDTA，搅拌一段时间后，用水稀释10倍，再用纳滤除盐和大部分溶剂得到含司美格鲁肽的水溶液。
步骤3：步骤2含司美格鲁肽的水溶液用制备柱纯化，所得馏分再经过脱盐、冻干后即得司美格鲁肽纯品。
进一步地，步骤1中所述反应在碱性溶液中进行，碱性溶液的pH=7.5-9.5；步骤2中所述还原在酸性溶液中进行。
进一步地，所述碱性溶液包括四氢呋喃、DMF、NMP和乙腈中的一种或多种的水溶液，所述酸性溶液中的酸包括醋酸、三氟醋酸、丙酸、草酸和丙二酸中的一种或多种。
进一步地，步骤2中化合物Ⅱ和锌粉的摩尔当量比例为1:（2-30）。
优选地，步骤2中化合物Ⅱ和锌粉的摩尔当量比例为1:（5-10）。
进一步地，步骤1中所述Troc-His-Aib-Q包括以下结构：Troc-His-Aib-OR、Troc-His-Aib-Glu-OR和Troc-His-Aib-Glu-Gly-OR；
其中，R为琥珀酰亚胺基、对硝基苯氧基、五氟苯基或5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺基。
进一步地，所述Troc-His-Aib-OR的制备方法包括以下步骤：
（1）Troc-His(Trt)-OH和H-Aib-OBzl.HCl在溶剂中通过缩合剂或组合试剂、有机碱缩合得到Troc-His(Trt)-Aib-OBzl；
（2）Troc-His(Trt)-Aib-OBzl用钯碳催化氢化脱除Bzl得到Troc-His(Trt)-Aib-OH；
（3）Troc-His(Trt)-Aib-OH、缩合剂和H-R反应，或者Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH与活泼脂偶联试剂得到Troc-His(Trt)-Aib-OR；
（4）Troc-His(Trt)-Aib-OR脱除Trt保护基得到Troc-His-Aib-OR；
所述Troc-His-Aib-Glu-OR的制备方法包括以下步骤：
S1：Fmoc-Glu(OtBu)-OH与2，4-双十八烷氧基苄醇在溶剂中通过DIC和Oxyma pure偶联得到Fmoc-Glu(OtBu)-O-TAG1；
S2：Fmoc-Glu(OtBu)-O-TAG1在溶剂中用有机碱脱除Fmoc得到H-Glu(OtBu)-O-TAG1；
S3：Fmoc-Aib-OH、H-Glu(OtBu)-O-TAG1在溶剂中通过DIC和Oxyma pure偶联得到Fmoc-Aib- Glu(OtBu)- O-TAG1；
S4：重复步骤S2和S3，得到Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH；
S5：Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH、缩合剂和H-R反应，或者Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH与活泼脂偶联试剂，得到Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OR；
S6：Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OR脱除Trt保护基得到Troc-His-Aib-Glu-OR。
进一步地，所述Troc-His-Aib-Glu-Gly-OR的制备方法参照Troc-His-Aib-Glu-OR的制备方法进行。
进一步地，步骤（1）中所述缩合剂或组合试剂包括DIC和Oxyma pure、EDC.HCl和HOBt、HBTU和HOBt、T3P、COMU中的一种或多种，所述有机碱包括TEA、DIEA和NMM中的一种或多种，所述溶剂包括DMF、DCM、四氢呋喃、NMP和乙腈中的一种或多种；步骤（3）中所述缩合剂包括DCC、DIC、T3P和T4P中的一种或多种，所述活泼脂偶联试剂包括TSTU和/或TFA-OPfp；所述溶剂包括DMF和DCM和四氢呋喃中的一种或多种，所述H-R包括HOSu、HONB、对硝基苯酚和五氟苯酚；
进一步地，步骤S1中所述溶剂包括DCM、THF和氯仿中的一种或多种；步骤S2中所述溶剂包括DCM、THF和氯仿中的一种或多种；步骤S2中所述有机碱包括哌啶、哌嗪、DBU、DBU和哌啶中的一种或多种；步骤S3中所述溶剂包括DCM；步骤S5中所述H-R包括HOSu、HONB、对硝基苯酚和五氟苯酚，所述缩合剂包括包括DCC、DIC、T3P和T4P中的一种或多种，所述活泼脂偶联试剂包括TSTU和/或TFA-OPfp；所述溶剂包括DMF、DCM和四氢呋喃中的一种或多种。
进一步地，步骤（1）中所述Troc-His(Trt)-OH、H-Aib-OBzl.HCl、缩合剂或组合试剂、有机碱的摩尔比为1:（1-2）:（1-2）:（3-6）；步骤（3）中所述Troc-His(Trt)-Aib-OH、缩合剂和H-R的摩尔比为1:（1-3）:（1-3）；
优选地，步骤S1中所述2，4-双十八烷氧基苄醇、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、DIC、Oxymapure的摩尔比为1:（1.2-2）:（1.2-2）:（1.2-2）；步骤S3中所述H-Glu(OtBu)-O-TAG1、Fmoc-Aib-OH、DIC、Oxyma pure的摩尔比为1:（1.2-2）:（1.2-2）:（1.2-2）。
进一步地，步骤（4）、步骤S6中所述脱除Trt保护基用切割溶液(三异丙基硅烷、TFA和DCM，v/v/v)脱除。
进一步地，本发明还提供了上述的方法制得的司美格鲁肽。
本发明所取得的技术效果是：
1.本发明通过Troc-His-Aib-Q制备Troc-司美格鲁肽，避免了原研专利偶联过程中产生脱除Fmoc的情形，仅合成主链这一步就提高产率15%左右。
2.本发明的Troc-司美格鲁肽在脱除Troc的时候条件温和，不会损伤肽链，产生的杂质大幅小于需要切除保护基的制备工艺。
3.本发明的方法产生杂质较少，在粗肽纯化这一步收率还要高于原研专利和需要酸脱除保护基的工艺，导致总收率大幅高出原研专利和需要脱除保护基的工艺。
4.相对于需要酸脱除保护基的制造工艺，本发明的方法没有沉淀这一步造成的损失，另外不会产生TFA废液。
附图说明
图1为实施例1中粗品的HPLC谱图；
图2为实施例1中纯品的HPLC谱图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
值得说明的是，本发明中使用的Arg34GLP-1(9-37)、Arg34GLP-1(10-37)、Arg34GLP-1(11-37)均购自重庆派金生物科技有限公司，其余原料均为普通市售产品，因此对其来源不做具体限定。
基础实验1 Troc-His-Aib-OSu的制备
1）Troc-His(Trt)-Aib-OBzl的合成
Troc-His(Trt)-OH 40 g(69.8mmol)、H-Aib-OBzl.HCl 16g(139.6mmol)和NMM31.4ml(280mmol，溶解到200ml DMF中，冷却到0℃，一次性加入EDC.HCl 13.4g(69.8mmol)，然后在0-10℃反应0.5小时，室温反应1小时。反应液倒入到800ml水中，产生油状物。此油状物用水漂洗一次，然后溶于200ml DCM，所得溶液用水洗涤(100ml×2)，再用无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，得到43.2g油状物Troc-His(Trt)-Aib-OBzl，收率83%。
2）Troc-His(Trt)-Aib-OH合成
43.2g Troc-His(Trt)-Aib-OBzl溶于300ml DCM，加入4g 10%钯碳，氢化2小时，滤除钯碳，减压蒸干滤液，得到40g固体产品Troc-His(Trt)-Aib-OH。
3）Troc-His(Trt)-Aib-OSu合成
Troc-His(Trt)-Aib-OH 20g(30.4mmol)、TSTU 13.75g(45.6mmol)溶解到100mlDCM，室温下反应36小时，TLC检测显示约70% Troc-His(Trt)-Aib-OH转化成Troc-His(Trt)-Aib-OSu。DCM溶液用水洗（20ml×3），再用无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，得到22g油状物Troc-His(Trt)-Aib-OSu和Troc-His(Trt)-Aib-OH的混合物。
4）Troc-His-Aib-OSu合成
Troc-His(Trt)-Aib-OSu和Troc-His(Trt)-Aib-OH的混合物22g(29mmol)溶于250ml切割溶液(三异丙基硅烷、TFA和DCM，5:50:45，v/v/v)，室温下搅拌3小时，减压蒸出DCM和部分TFA，所得残留物用50ml甲苯溶解，再减压旋蒸蒸除TFA和甲苯，重复2次将TFA清除干净，得到的油状用50ml DCM溶解，所得溶液快速搅拌下倒入200ml石油醚中，产生油状物，该油状物用50ml DCM溶解，减压蒸干溶剂得到12g固体的标题化合物，收率80%。
ESI-MS:1258.41 [M+1]。
基础实验2 Troc-His-Aib-OPfp的制备
1） Troc-His(Trt)-Aib-OPfp合成
基础实验1得到的Troc-His(Trt)-Aib-OH 20g (30.4mmol)、TFA-OPfp 8.5g(30.4mmol)溶于100ml DCM，室温下搅拌40小时，TLC检测显示约80% Troc-His(Trt)-Aib-OH转化成Troc-His(Trt)-Aib-OPfp。反应液用饱和碳酸钠洗涤(50ml×2)，水洗(50ml×2)，再用无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂，得到22g油状物Troc-His(Trt)-Aib-OPfp和Troc-His(Trt)-Aib-OH的混合物。
2) Troc-His-Aib-OPfp合成
Troc-His(Trt)-Aib-OPfp和Troc-His(Trt)-Aib-OH的混合物22g(27mmol)溶于300ml切割溶液(三异丙基硅烷/TFA/DCM，1:40: 59，v/v/v)，室温下搅拌2小时，减压蒸出DCM和部分TFA，所得残留物用50ml甲苯溶解，再减压旋蒸蒸除TFA和甲苯，重复2次将TFA清除干净，得到的油状用50ml DCM溶解，所得溶液快速搅拌下倒入200ml石油醚中，产生油状物，该油状物用50ml DCM溶解，减压蒸干溶剂得到13g固体的标题化合物，收率84%。
HPLC纯度:97.8%，ESI-MS: 846.7 [M+1]。
基础实验3 Troc-His-Aib-Glu-Gly-对硝基酚脂的制备
1) Fmoc-Gly-O-TAG1的合成
Fmoc-Gly-OH 18.45g(62mmol)、HO-TAG 120g(31mmol)、DIC 7.8g(62mmol)、Oxymapue 8.8g(62mmol)溶解到200ml DCM中，室温下反应3小时，减压蒸干溶剂，残留物与200ml乙腈混合，搅拌均匀形成固体，打浆20分钟，过滤，重复打浆2次，过滤、真空干燥得到27gFmoc-Gly-O-TAG1，收率94%。
注：从本步开始，每步得到的产物全部数量用于下一步反应。
2) H-Gly-O-TAG1的合成
Fmoc-Gly-O-TAG 127g(29.22mmol)溶解到200ml DCM中，反应液冷却到5℃，加入4ml 哌啶和6.5ml DBU，室温下搅拌0.5小时，加入2.5ml 85%磷酸，减压蒸干溶剂，残留物先用200ml乙腈打浆，过滤，滤饼再用200ml水打浆，最后用乙腈打浆(200ml×2)，过滤、真空干燥得到19g H-Gly-O-TAG1，收率93%。
3）Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-O-TAG1
Fmoc-Glu(OtBu)-OH 13.78g(32.4mmol)、H-Gly-O-TAG1 19g(27mmol)、HBTU12.1g(32.0mmol)、HOBt 4.37g(32.4mmol)分别溶于150ml四氢呋喃中，室温搅拌1小时，减压蒸干四氢呋喃，残留物用200ml乙腈搅拌成固体，过滤，滤饼用乙腈打浆(200ml×2)，过滤，真空干燥得到27g Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-O-TAG1，收率90%。
4）Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-O-TAG1制备
参照步骤2）脱Fmoc和步骤3)偶联的方法，其中，引入His采用Troc-His(Trt)-OH这个中间体。得到Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-O-TAG 134g。
5）Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH合成
Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-O-TAG 134g溶于150ml 1%三异丙基硅烷/2%TFA/DCM溶液，室温下搅拌1小时，得到紫红色反应液，所得反应液倒入500ml石油醚中形成沉淀，过滤，滤饼用石油醚打浆(80ml×3)，过滤，滤饼真空干燥得到17g Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH，本步收率85%。
6）Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-对硝基苯酚脂
Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH 9g(10mmol)、DCC 1.26g(10mmol)、对硝基苯酚2.78g(20mmol)、DMAP 0.12g(1mmol)溶解在50ml DCM当中，室温下搅拌过夜。过滤，滤饼用DCM洗涤一次，合并2次滤液，所得滤液用水洗涤(30ml×2)，再用无水硫酸钠干燥，然后将DCM溶液直接上硅胶柱纯化，得到8g Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-对硝基苯酚脂，纯度约95%，约含有5% Troc-His (Trt) -Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH。
7)Troc-His-Aib-Glu-Gly-对硝基酚脂合成
Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-对硝基酚脂8g(7.8mmol)溶于80ml切割溶液(三异丙基硅烷、TFA和DCM，1:49:50，v/v/v)，室温下搅拌3小时，减压蒸出DCM和部分TFA，所得残留物用50ml甲苯溶解，再减压旋蒸蒸除TFA和甲苯，重复2次将TFA清除干净，得到的油状用30ml DCM溶解，所得溶液快速搅拌下倒入200ml石油醚中，产生油状物，该油状物用30ml DCM溶解，减压蒸干溶剂得到4.5g固体的标题化合物，收率82%。
基础实验4 Troc-His-Aib-Glu-OSu的制备
1) Troc-His-Aib-Glu-OH合成
参照基础实验3中步骤2）脱Fmoc、步骤3)偶联和步骤5）脱TAG1的方法，其中，HO-TAG1的投料mol数与基础实验3步骤2）相同，引入His采用Troc-His(Trt)-OH这个中间体。得到Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH 14g。
2）Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OSu
Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH 14g(16.6mmol)、T3P 5.4g(17mmol)、HOSu3.8g(33mmol)、DMAP 0.2g(1.6mmol)溶解在60ml DCM当中，室温下搅拌过夜。过滤，滤饼用DCM洗涤一次，合并2次滤液，所得滤液用水洗涤(50ml×2)，再用无水硫酸钠干燥，然后减压蒸干溶剂，得到15g Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OSu，纯度94%，杂质主要为未反应的Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH。
3）Troc-His-Aib-Glu-OSu
Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OSu 15g(15.9mmol)溶于150ml切割溶液(三异丙基硅烷、TFA和DCM，1:49:50，v/v/v)，室温下搅拌3小时，减压蒸出DCM和部分TFA，所得残留物用50ml甲苯溶解，再减压旋蒸蒸除TFA和甲苯，重复2次将TFA清除干净，得到的油状用50ml DCM溶解，所得溶液快速搅拌下倒入300ml石油醚中，产生油状物，该油状物用50mlDCM溶解，减压蒸干溶剂得到7.5g固体的标题化合物，收率74.2%。
实施例1 Troc-His-Aib-OSu与化合物Ⅰ-29肽制备司美格鲁肽
步骤1：司美格鲁肽粗品合成
化合物Ⅰ-29肽1g(0.31mmol)溶解到20ml NMP中，加入30% Troc-His-Aib-OSu0.1g(0.2mmol)，然后用DIEA调pH值到8.0，中途添加DIEA维持反应体系的pH值在8.0附近。分2批加入余下的Troc-His-Aib-OSu，同样维持反应体系的pH值在8.0附近，pH过高会造成OSu分解过快。
主链偶联完成，向反应溶液中加入20ml水，再用6N盐酸调pH到中性。加入0.1g锌粉，反应体系的pH值用醋酸调节到3.0，搅拌1小时，HPLC监控显示Troc被脱除完全。滤除锌粉，向滤液中加入0.2g EDTA，再搅拌30分钟。向反应液中加入80ml水，得到的稀溶液用口径小于1nm的陶瓷纳滤膜处理，得到100ml脱除盐分和绝大部分NMP的溶液。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:6.43 min/0.54，7.74min/1.21，7.86 min/4.66，8.17min/0.14，9.52min/0.58，10.41min/0.64，10.97min/0.44，10.41min/0.64，12.84min/0.59，13.0min/86.25，13.55min/0.27，21.13min/0.19，24.22min/1.18；
粗品的HPLC谱图见图1。
步骤2：司美格鲁肽精制
步骤1得到的浓缩液用制备柱纯化；
制备柱填料为RP18-OBD，制备柱为400mm×50mm，检测波长214nm，流动相A：5mmol/L碳酸氢铵水溶液；流动相B：乙腈；流速：40mL/min。
梯度：B％：20-50％-90％-90％-20％-20％，0-15-20-25-26-35min。
收集目的组分后，冷冻干燥，得到1.06g成品，HPLC纯度99.66%。
经过原子吸收检测样品中锌离子的浓度为0.21ppm。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:7.83 min/0.13，9.75 min/0.12，12.87 min/0.07，13.2min/99.66，13.55min/0.02；
纯品的HPLC谱图见图2。
ESI/MS：1029.4(M+4)/4，1372.2(M+3)/3。
实施例2 Troc-His-Aib-OPfp与化合物Ⅰ-29肽制备司美格鲁肽
步骤1：司美格鲁肽粗品合成
化合物Ⅰ-29肽1g(0.25mmol)溶解到20ml DMF中，加入Troc-His-Aib-OPfp 0.1g(0.2mmol)，然后用DIEA调pH值到8.0，中途添加DIEA维持反应体系的pH值在8.0附近。分批加入Troc-His-Aib-OPfp，同样维持反应体系的pH值在8.0附近，直到化合物Ⅰ-29肽被消耗完全。
主链偶联完成，向反应溶液中加入20ml水，再用6N盐酸调pH到中性。加入0.1g锌粉，反应体系的pH值用醋酸调节到4.0，搅拌1小时，HPLC监控显示Troc被脱除完全。滤除锌粉，向滤液中加入0.2g EDTA，再搅拌30分钟。向反应液中加入80ml水，得到的稀溶液用口径小于1nm的陶瓷纳滤膜处理，得到100ml脱除盐分和大部分绝大部分DMF的溶液。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:6.40 min/0.64，7.77min/1.01，7.84 min/4.96，9.32min/0.38，10.44min/0.74，10.92min/0.49，10.47min/0.76，12.70min/0.57，13.0min/85.05，13.53min/0.29，21.13min/0.17，24.22min/1.24。
步骤2：司美格鲁肽精制
步骤1得到的浓缩液用制备柱纯化
制备柱填料为RP18-OBD，制备柱为400mm×50mm，检测波长214nm，流动相A：5mmol/L碳酸氢铵水溶液；流动相B：乙腈；
流速：40mL/min。
梯度：B％：20-50％-90％-90％-20％-20％，0-15-20-25-26-35min。
收集目的组分后，冷冻干燥，得到0.85g成品，HPLC纯度99.61%。
经过原子吸收检测样品中锌离子的浓度为0.19ppm。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度: 40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:7.83 min/0.14，9.77 min/0.15，12.87 min/0.08，13.2min/99.61，13.55min/0.02；
ESI/MS：1029.4(M+4)/4，1372.2(M+3)/3。
实施例3 Troc-His-Aib-Glu-ONB与化合物Ⅰ-28肽制备司美格鲁肽
步骤1：司美格鲁肽粗品合成
化合物Ⅰ-28肽1g(0.25mmol)溶解到20ml DMF中，加入Troc-His-Aib-Glu-ONB0.11g(0.2mmol)，然后用DIEA调pH值到8.0，中途添加DIEA维持反应体系的pH值在8.0附近。分批加入Troc-His -Aib-Glu-ONB，同样维持反应体系的pH值在8.0附近，直到化合物Ⅰ-28肽被消耗完全。
主链偶联完成，向反应溶液中加入20ml水，再用6N盐酸调pH到中性。加入0.1g锌粉，反应体系的pH值用醋酸调节到4.0，搅拌1小时，HPLC监控显示Troc被脱除完全。滤除锌粉，向滤液中加入0.2 g EDTA，再搅拌30分钟。向反应液中加入80ml水，得到的稀溶液用口径小于1nm的陶瓷纳滤膜处理，得到100ml脱除盐分和大部分绝大部分DMF的溶液。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:4.60 min/0.36，6.62 min/0.57，7.71min/1.21，7.84min/5.56，9.33min/0.78，10.47min/0.79，10.97min/0.38，10.47min/0.79，12.72min/0.59，13.0min/83.05，13.58min/0.18，21.18min/0.19，24.27min/1.36；
步骤2：司美格鲁肽精制
步骤1得到的浓缩液用制备柱纯化
制备柱填料为RP18-OBD，制备柱为400mm×50mm，检测波长214nm，流动相A：5mmol/L碳酸氢铵水溶液；流动相B：乙腈；流速：40mL/min。
梯度：B％：20-50％-90％-90％-20％-20％，0-15-20-25-26-35min。
收集目的组分后，冷冻干燥，得到0.82g成品，HPLC纯度99.59%。
经过原子吸收检测样品中锌离子的浓度为0.25ppm。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）: 7.81 min/0.15，9.78 min/0.15，12.87 min/0.09，13.2min/99.59，13.55min/0.02；
ESI/MS：1029.4(M+4)/4，1372.2(M+3)/3。
实施例4 Troc-His-Aib-Glu-Gly-对硝基苯脂与化合物Ⅰ-27肽制备司美格鲁肽
步骤1：司美格鲁肽粗品合成
化合物Ⅰ-27肽1 g(0.25mmol)溶解到20ml NMP中，加入Troc-His-Aib-Glu-Gly-对硝基苯脂0.11 g(0.2mmol)，然后用DIEA调pH值到9.0，中途添加TEA维持反应体系的pH值在9.0附近。分批加入Troc-His-Aib-Glu-Gly-对硝基苯脂，同样维持反应体系的pH值在9.0附近，直到化合物Ⅰ-28肽被消耗完全。
主链偶联完成，向反应溶液中加入20ml水，再用6N盐酸调pH到中性。加入0.1g锌粉，反应体系的pH值用醋酸调节到4.0，搅拌1小时，HPLC监控显示Troc被脱除完全。滤除锌粉，向滤液中加入0.2 g EDTA，再搅拌30分钟。向反应液中加入80ml水，得到的稀溶液用口径小于1nm的陶瓷纳滤膜处理，得到100ml脱除盐分和大部分绝大部分NMP的溶液。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:6.65 min/0.67，7.73min/1.11，7.91 min/4.67，9.35min/0.79，10.43min/0.73，10.95min/0.44，10.32min/0.61，10.47min/0.43，12.82min/0.34，13.0min/85.15，13.07min/0.12，20.11min/0.14，23.07min/1.47；
步骤2：司美格鲁肽精制
步骤1得到的浓缩液用制备柱纯化
制备柱填料为RP18-OBD，制备柱为400mm×50mm，检测波长214nm，流动相A：5mmol/L碳酸氢铵水溶液；流动相B：乙腈；
流速：40mL/min。
梯度：B％：20-50％-90％-90％-20％-20％，0-15-20-25-26-35min。
收集目的组分后，冷冻干燥，得到0.78g成品，HPLC纯度99.65%。
经过原子吸收检测样品中锌离子的浓度为0.33ppm。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度: 40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:7.91 min/0.10，9.35 min/0.16，12.82 min/0.09，13.2min/99.65；
ESI/MS：1029.4(M+4)/4，1372.2(M+3)/3。
实施例5 Troc-His-Aib-Glu-Gly-OSu与化合物Ⅰ-27肽制备司美格鲁肽
步骤1：司美格鲁肽粗品合成
化合物Ⅰ-27肽1 g(0.25mmol)溶解到20ml NMP中，加入Troc-His-Aib-Glu-Gly-OSu 0.1g(0.2mmol)，然后用DIEA调pH值到9.0，中途添加NMM维持反应体系的pH值在9.0附近。分批加入Troc-His-Aib-Glu-Gly-对硝基苯脂，同样维持反应体系的pH值在9.0附近，直到化合物Ⅰ-28肽被消耗完全。
主链偶联完成，向反应溶液中加入20ml水，再用6N盐酸调pH到中性。加入0.1g锌粉，反应体系的pH值用醋酸调节到4.0，搅拌1小时，HPLC监控显示Troc被脱除完全。滤除锌粉，向滤液中加入0.2 g EDTA，再搅拌30分钟。向反应液中加入80ml水，得到的稀溶液用口径小于1nm的陶瓷纳滤膜处理，得到100ml脱除盐分和大部分绝大部分NMP的溶液。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm
柱温：30℃
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:6.64 min/0.64，7.72min/1.12，7.87 min/4.69，9.33min/0.75，10.40min/0.71，10.95min/0.47，10.31min/0.68，10.42min/0.44，12.81min/0.33，13.0min/84.36，13.04min/0.11，20.08min/0.18，22.98min/1.43。
步骤2：司美格鲁肽精制
步骤1得到的浓缩液用制备柱纯化
制备柱填料为RP18-OBD，制备柱为400mm×50mm，检测波长214nm，流动相A：5mmol/L碳酸氢铵水溶液；流动相B：乙腈；流速：40mL/min。
梯度：B％：20-50％-90％-90％-20％-20％，0-15-20-25-26-35min。
收集目的组分后，冷冻干燥，得到0.87g成品，HPLC纯度99.55%。
经过原子吸收检测样品中锌离子的浓度为0.41ppm。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:7.90 min/0.11，9.33 min/0.17，12.81 min/0.16，13.2min/99.55；
ESI/MS：1029.4(M+4)/4，1372.2(M+3)/3。
实施例6 Troc-His-Aib-Glu-OSu与化合物Ⅰ-28肽制备司美格鲁肽
步骤1：司美格鲁肽粗品合成
化合物Ⅰ-28肽1 g(0.25mmol)溶解到20ml NMP中，加入Troc-His-Aib-Glu-OSu0.11g(0.2mmol)，然后用DIEA调pH值到8.0，中途添加DIEA维持反应体系的pH值在8.0附近。分批加入Troc-His -Aib-Glu-ONB，同样维持反应体系的pH值在8.0附近，直到化合物Ⅰ-28肽被消耗完全。
主链偶联完成，向反应溶液中加入20ml水，再用6N盐酸调pH到中性。加入0.1g锌粉，反应体系的pH值用醋酸调节到4.0，搅拌1小时，HPLC监控显示Troc被脱除完全。滤除锌粉，向滤液中加入0.2 g EDTA，再搅拌30分钟。向反应液中加入80ml水，得到的稀溶液用口径小于1nm的陶瓷纳滤膜处理，得到100ml脱除盐分和大部分绝大部分NMP的溶液。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:4.32 min/1.74，6.73min/0.18，7.71 min/1.35，9.28min/4.79，10.43min/0.73，10.95min/0.47，10.33min/1.67，10.47min/0.43，12.80min/0.34，13.0min/81.15，13.07min/0.12，20.11min/0.14，23.07min/1.47。
步骤2：司美格鲁肽精制
步骤1得到的浓缩液用制备柱纯化
制备柱填料为RP18-OBD，制备柱为400mm×50mm，检测波长214nm，流动相A：5mmol/L碳酸氢铵水溶液；流动相B：乙腈；
流速：40mL/min。
梯度：B％：20-50％-90％-90％-20％-20％，0-15-20-25-26-35min。
收集目的组分后，冷冻干燥，得到0.83g成品，HPLC纯度99.72%。
经过原子吸收检测样品中锌离子的浓度为0.32ppm。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:9.31 min/0.11，12.81 min/0.17，13.2min/99.72；
ESI/MS：1029.4(M+4)/4，1372.2(M+3)/3。
对比例1
参照CN115322250A方法，用Boc-His(Trt)-Aib-OSu替代实施例1的Troc-His-Aib-OSu，化合物2与Boc-His(Trt)-Aib-OSu反应得到化合物4，化合物4再经过酸切割，得到司美格鲁肽粗品。具体操作流程如下：
将Boc-His(Trt)-Aib-OSu粗品0.33g和1g化合物2溶解于20mL N，N-二甲基乙酰胺中，并加入2mL N ，N-二异丙基乙胺，并在室温下反应8h，得到纯度为71.16％的化合物4。将100mg 51.16％的化合物4，加入5℃的1mL裂解液(三氟乙酸：1 ，2-乙二硫醇：三异丙基硅烷＝95:2:3)中。并在室温下反应3h，加入10mL冷甲叔醚，析出白色固体，离心后产物加入甲叔醚洗涤3次，之后10mL乙酸乙酯洗涤2次，干燥，得到87mg纯度为56.99％的司美格鲁肽粗品。
HPLC检测条件及结果：
色谱柱:HPLC(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm柱)；
流量:1.0mL/min；
检测波长:λ＝214nm；
柱温：30℃；
A流动相:0.1%TFA乙腈，B流动相:0.1%TFA水；
梯度:40-55％-90％-90％-20％，0-15-20-25-30min；
检测结果（Rt/面积％）:2.72 min/3.73，6.84 min/0.13，7.57 min/1.31，9.55min/ 4.19，10.31min/0.73，10.72min/0.49，10.37min/7.62，12.78min/1.03，12.81min /14.16，13.0min/56.99，13.31min/8.22，13.24 min/1.15，22.13min/1.36，23.07min/1.89。
通过实施例1和对比例1的对比可知，对比例1由于用到Boc-His(Trt)-Aib- OSu，结构中Trt位阻大，严重影响偶联速率，导致副反应较多，再次多肽用浓酸切割保护基时会带来一些副反应，综合下来对比例1的粗品纯度要比实施例1低很多。
对比例2
参照CN111732651A方法的实施例5合成，投料摩尔比例和操作流程与实施例5一致，得到粗品10.9g，粗品纯度（HPLC）38.58%。
HPLC检测条件同实施例1，检测数据如下：
（Rt/面积％）:3.92 min/0.71，5.83 min/0.13，7.51 min/1.31，9.35min/ 2.19，10.43min/0.73，10.62min/0.49，11.35min/11.62，12.78min/22.73，12.91min/ 6.39，13.0min/38.58，13.11min/3.12，13.24 min/20.17，22.13min/0.36，23.07min/1.47。
通过实施例1和对比例2的对比可知，对比例2的主峰前后紧贴着3个杂峰，导致纯化难度很大和产品收率下降。而实施例1主峰前后杂质分离较大，纯化容易，产品收率也高。
对比例3
使用Fmoc-His-Aib-OSu二肽替代本发明实施例1中的Troc-His-Aib-OSu二肽，Fmoc-His-Aib-OSu参照原研专利CN101910193A中实施例28制备得到。
化合物Ⅰ-29肽1g(0.31mmol)溶解到20ml NMP中，加入30% Fmoc-His-Aib-OSu0.12g(0.2mmol)，然后用DIEA调pH值到8.0，中途添加DIEA维持反应体系的pH值在8.0附近。分3批加入余下的Fmoc-His-Aib-OSu，同样维持反应体系的pH值在8.0附近搅拌36小时，直到化合物Ⅰ-29肽90%以上被消耗掉。然后向反应液中加入1.2ml哌啶和0.4ml DBU，室温搅拌3小时，观察到主链上的Fmoc被脱除完全。再往反应液中加入30m乙腈，得到的稀溶液用口径小于1nm的陶瓷纳滤膜过滤，中途用氨水乙腈溶液稀释(氨水:乙腈:水=1:80:19)，得到60ml脱除盐分和NMP的溶液。此溶液冻干后得到司美格鲁肽粗品0.87g，纯度：68.93%(HPLC)。
HPLC检测条件同实施例1，检测数据如下：
（Rt/面积％）:6.43 min/0.64，7.74 min/1.28，7.86 min/4.77，8.17min/0.19，9.56min/0.51，10.43min/0.68，10.97min/0.44，10.47min/0.94，12.84min/0.51，13.1min/68.93，13.85min/16.26，15.66min/3.37，21.14min/0.15，24.28min/1.33。
通过实施例1和对比例3的对比可知，对比例3的主峰后出现2个较大杂峰，因为反应得到的Fmoc-司美格鲁肽长时间与碱性溶液接触，可能导致Fmoc脱落，然后继续与Fmoc-His-Aib-OSu反应生成33肽。而实施例1通过把Fmoc改成Troc，则避免了此副反应的发生。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (11)

1.一种制备司美格鲁肽的方法，其特征在于：司美格鲁肽前体合成司美格鲁肽31肽主链时，His的主链胺基采用Troc保护；
所述司美格鲁肽前体包括Arg34GLP-1(9-37)、Arg34GLP-1(10-37)和Arg34GLP-1(11-37)中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1：Troc-His-Aib-Q与化合物Ⅰ反应得到化合物Ⅱ，反应式如下：
；
其中，Q为OR或AA1-OR；
R为琥珀酰亚胺基、五氟苯基、5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺基；
AA1为Glu、Glu-Gly；AA2为Glu-Gly、Gly、H；
步骤2：化合物Ⅱ用锌粉还原脱除Troc保护基得到司美格鲁肽粗品；
步骤3：司美格鲁肽粗品经过精制、冻干，得到司美格鲁肽纯品。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤1中所述反应在碱性溶液中进行，碱性溶液的pH=7.5-9.5；步骤2中所述还原在酸性溶液中进行。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述碱性溶液包括四氢呋喃、DMF、NMP和乙腈中的一种或多种的水溶液，所述酸性溶液中的酸包括醋酸、三氟醋酸、丙酸、草酸和丙二酸中的一种或多种。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤2中化合物Ⅱ和锌粉的摩尔当量比例为1:（2-30）。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤2中化合物Ⅱ和锌粉的摩尔当量比例为1:（5-10）。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤1中所述Troc-His-Aib-Q包括以下结构：Troc-His-Aib-OR、Troc-His-Aib-Glu-OR和Troc-His-Aib-Glu-Gly-OR；
其中，R为琥珀酰亚胺基、对硝基苯氧基、五氟苯基或5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺基。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述Troc-His-Aib-OR的制备方法包括以下步骤：
（1）Troc-His(Trt)-OH和H-Aib-OBzl.HCl在溶剂中通过缩合剂或组合试剂、有机碱缩合得到Troc-His(Trt)-Aib-OBzl；
（2）Troc-His(Trt)-Aib-OBzl用钯碳催化氢化脱除Bzl得到Troc-His(Trt)-Aib-OH；
（3）Troc-His(Trt)-Aib-OH、缩合剂和H-R反应，或Troc-His(Trt)-Aib-OH与活泼脂偶联试剂反应得到Troc-His(Trt)-Aib-OR；
（4）Troc-His(Trt)-Aib-OR脱除Trt保护基得到Troc-His-Aib-OR；
所述Troc-His-Aib-Glu-OR的制备方法包括以下步骤：
S1：Fmoc-Glu(OtBu)-OH与2，4-双十八烷氧基苄醇在溶剂中通过DIC和Oxyma pure偶联得到Fmoc-Glu(OtBu)-O-TAG1；
S2：Fmoc-Glu(OtBu)-O-TAG1在溶剂中用有机碱脱除Fmoc得到H-Glu(OtBu)-O-TAG1；
S3：Fmoc-Aib-OH、H-Glu(OtBu)-O-TAG1在溶剂中通过DIC/Oxyma pure偶联得到Fmoc-Aib-Glu(OtBu)-O-TAG1；
S4：重复步骤S2和S3，得到Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH；
S5：Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH、缩合剂和H-R反应，或Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OH与活泼脂偶联试剂反应得到Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OR；
S6：Troc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-OR脱除Trt保护基得到Troc-His-Aib-Glu-OR。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤（1）中所述缩合剂或组合试剂包括DIC和Oxyma pure、EDC.HCl和HOBt、HBTU和HOBt、T3P、COMU中的一种或多种，所述有机碱包括TEA、DIEA和NMM中的一种或多种，所述溶剂包括DMF、DCM、四氢呋喃、NMP和乙腈中的一种或多种；步骤（3）中所述缩合剂包括DCC、DIC、T3P和T4P中的一种或多种，所述活泼脂偶联试剂包括TSTU和/或TFA-OPfp，所述溶剂包括DMF和DCM和四氢呋喃中的一种或多种，所述H-R包括HOSu、HONB、对硝基苯酚和五氟苯酚中的一种或多种；
步骤S1中所述溶剂包括DCM、THF和氯仿中的一种或多种；步骤S2中所述溶剂包括DCM、THF和氯仿中的一种或多种；步骤S2中所述有机碱包括哌啶、哌嗪、DBU、DBU和哌啶中的一种或多种；步骤S3中所述溶剂包括DCM；步骤S5中所述H-R包括HOSu、HONB、对硝基苯酚和五氟苯酚中的一种或多种，所述缩合剂包括DCC、DIC、T3P和T4P中的一种或多种，所述活泼脂偶联试剂包括TSTU和/或TFA-OPfp，所述溶剂包括DMF、DCM和四氢呋喃中的一种或多种。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤（1）中所述Troc-His(Trt)-OH、H-Aib-OBzl.HCl、缩合剂或组合试剂、有机碱的摩尔比为1:（1-2）:（1-2）:（3-6）；步骤（3）中所述Troc-His(Trt)-Aib-OH、缩合剂和H-R的摩尔比为1:（1-3）:（1-3）；
步骤S1中所述2，4-双十八烷氧基苄醇、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、DIC、Oxyma pure的摩尔比为1:（1.2-2）:（1.2-2）:（1.2-2）；步骤S3中所述H-Glu(OtBu)-O-TAG1、Fmoc-Aib-OH、DIC、Oxyma pure的摩尔比为1:（1.2-2）:（1.2-2）:（1.2-2）。
11.如权利要求1-10任一项所述的方法制得的司美格鲁肽。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106749613A (zh) * 2016-12-02 2017-05-31 江苏诺泰生物制药股份有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
US20170320927A1 (en) * 2014-11-27 2017-11-09 Novo Nordisk A/S GLP-1 Derivatives and Uses Thereof
US20180258153A1 (en) * 2014-12-17 2018-09-13 Novo Nordisk A/S GLP-1 Derivatives and Uses Thereof
CN111732651A (zh) * 2020-08-04 2020-10-02 苏州金顶生物有限公司 一种连续流固相反应制备索马鲁肽的方法
CN115322250A (zh) * 2022-06-16 2022-11-11 南京汉欣医药科技有限公司 一种司美格鲁肽的合成方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170320927A1 (en) * 2014-11-27 2017-11-09 Novo Nordisk A/S GLP-1 Derivatives and Uses Thereof
US20180258153A1 (en) * 2014-12-17 2018-09-13 Novo Nordisk A/S GLP-1 Derivatives and Uses Thereof
CN106749613A (zh) * 2016-12-02 2017-05-31 江苏诺泰生物制药股份有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN111732651A (zh) * 2020-08-04 2020-10-02 苏州金顶生物有限公司 一种连续流固相反应制备索马鲁肽的方法
CN115322250A (zh) * 2022-06-16 2022-11-11 南京汉欣医药科技有限公司 一种司美格鲁肽的合成方法

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