CN117563049A - 用于后巩膜加固的眼科生物补片及其制备 - Google Patents

用于后巩膜加固的眼科生物补片及其制备 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种用于后巩膜加固的眼科生物补片，所述眼科生物补片在3%应变下的切线模量大于等于4.5MPa，7%应变下的切线模量大于等于9.3MPa，拉伸变形率为10‑30%。本发明还公开其制备方法。本发明提供的生物补片用于临床，阻止患者眼球延长的同时，未发生钙化且影像评价表明眼球周向延展正常，未发生畸变，植入组织与患者自体组织融合良好。

Description

用于后巩膜加固的眼科生物补片及其制备
技术领域
本发明涉及一种用于后巩膜加固的眼科生物补片及其制备方法。
背景技术
病理性近视有别于单纯近视，已有临床研究结果表明其主要病理改变是由于眼轴的过度延长，使后巩膜葡萄肿以及多种眼底改变为主要特征。病理性近视影响因素广，并发症多，且终身进展，故而防治难度大。
病理性近视系致盲性眼病，同时也是眼底器质性病变疾病，随眼轴长度的不断增加、近视度数不断加深为主要表现，并多伴有视网膜脉络膜受损。在病理性近视的发生、发展过程中，巩膜的改变至关重要。巩膜组织骨架主要为胶原纤维，正常人巩膜的组织胶原纤维排列为由前至后，趋近后极部的巩膜组织胶原纤维排列较丰厚和致密，而病理性近视患者的后巩膜组织，随着眼轴的不断延长，其后极部的巩膜胶原组织排列随之变薄，一旦后极部巩膜胶原组织开始变薄，病情常不可逆转的进行性加重，视网膜血管丛减少，脉络膜视网膜萎缩，进而导致诸如后巩膜葡萄肿、视网膜劈裂，视网膜脱离及黄斑孔等，致使视力和视觉质量受到进行性损害，严重者导致视力完全丧失。
后巩膜加固的作用机理包括：①机械加固作用。后巩膜加固术应用一定材料加固变薄的后极部巩膜，术中植入的材料经过一定时间可与巩膜结合成一体，通过机械作用增强后巩膜薄弱部分抵抗变形的能力，从而在一定程度上阻止眼轴进一步加长，抑制近视进一步发展。②改善血供。后巩膜加固术后，局部巩膜受到植片刺激，可发生炎症反应和毛细血管网重建，从而改善后极部巩膜血液供应。③促进胶原增生。后巩膜加固术后，患者免疫系统对异体巩膜产生组织反应，宿主细胞特别是成纤维细胞长入、分裂、分化，进而合成并分泌组织胶原实现组织的重构。研究表明后巩膜加固术后巩膜胶原总量显著增多，胶原亚型也随之发生改变，这一变化可加厚受体巩膜，限制眼轴的进一步延长。④减轻牵拉作用:相关报道显示，后巩膜加固术有对眼轴的轻度缩短作用，能减轻后极部玻璃体对视网膜和脉络膜的牵拉，从而有效地减轻了病理性近视的并发症。
早在1930年，Shevelev首次提出通过手术实施后巩膜加固以求防治病理性近视。1972和1978年，Snyder和Thompson分别对该手术的疗效进行了报道，之后该手术又被称为Snyder-Thompson后巩膜加固术。手术最初是采用移植物加固眼球后极部薄弱巩膜的方法，从而阻止巩膜后葡萄肿的进展和眼轴长度的增加，在一定程度上控制了病理性近视的恶化，但是存在材料钙化、降解、眼球发育不良、重新致盲的问题，这些长期以来一直没有得到解决，导致该技术无法在临床中推广。
为了改善和克服以上问题，人们尝试使用异体巩膜、异体硬脑膜、胎儿脐带、阔筋膜、脱细胞异体真皮以及胶原海绵、聚四氟乙烯、多孔聚合物、涤纶网的非生物类材料用于植入，其中，文献《Comparative evaluation of the results of various methods ofscleroplasty in progressive myopia Vestn Oftalmol》显示，Korovenkov RI等在1990年曾尝试将牛心包用于后巩膜加固术，但是仍然未解决材料钙化、眼球发育不良、重新致盲的问题。
发明内容
为了至少部分地解决现有技术存在的上述问题，本发明提供一种用于后巩膜加固的眼科生物补片。
作为本发明的一个方面，涉及一种用于后巩膜加固的眼科生物补片，所述眼科生物补片在3%应变下的切线模量大于等于4.5MPa，7%应变下的切线模量大于等于9.3MPa，拉伸变形率为10-30%。
具体实施方式中，上述眼科生物补片含有戊二醛单元。
具体实施方式中，上述眼科生物补片含有铬、铝或铁元素。
作为本发明的另一个方面，涉及制备上述用于后巩膜加固的眼科生物补片的方法，包括：
a)去除牛心包材料中的免疫原性分子；
b)在戊二醛溶液中浸泡；
c)配位化合物交联：
在0.0625mol/dm3，OH/Al为0.5的羟基铝溶液中进行交联，或在0.0625mol/dm3，OH/Fe为0.5的羟基铁溶液中进行交联，或在0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液中进行交联。
具体实施例中，所述步骤a）中，使用Tween80或SDS去除牛心包材料中的免疫原性分子。
具体实施例中，所述步骤b）中，戊二醛溶液的浓度为0.5%，浸泡时间为4h。
具体实施例中，所述步骤c）中，戊二醛溶液中浸泡的牛心包组织置于0.0625mol/dm3，OH/Al为0.5的羟基铝溶液中，或0.0625mol/dm3，OH/Fe为0.5的羟基铁溶液中，或0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液中，在水浴条件下，用NaHCO3以每次提高0.4pH单位的标准，调节溶液pH值至4.0。
具体实施例中，所述步骤c）中，0.0625mol/dm3，OH/Al为0.5的羟基铝溶液通过如下方法配制：AlCl3·6H2O和NaOH固体溶解于水。
具体实施例中，所述步骤c）中，0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液通过如下方法配制：CrCl3·6H2O和NaOH固体溶解于水。
具体实施例中，所述步骤c）中，0.0625mol/dm3，OH/Fe为0.5的羟基铁溶液通过如下方法配制：FeCl3·6H2O和NaOH固体溶解于水。
本发明提供的生物补片用于临床，阻止患者眼球延长的同时，未发生钙化且影像评价表明眼球周向延展正常，未发生畸变，植入组织与患者自体组织融合良好。
具体实施方式
发明人从2005年开始尝试研究将牛心包用于后巩膜加固，起初采用高交联度牛心包材料，但发现仍存在材料钙化、眼球发育不良、重新致盲问题。
发明人试图降低牛心包材料的刚性，提高韧性，以解决问题。从材料处理的角度，即降低材料的交联度。发明人提供了高交联度（热皱缩温度为87℃）和中交联度（热皱缩温度为80℃）的组织材料进行对比，动物实验结果记载于周希彬等发表的《牛心包生物补片在后巩膜加固区生物力学特性及其作用机制》(武警医学，2015年6月第26卷第6期)。该研究发现，高交联度牛心包材料有利于提高材料刚度降低降解度，但发明人在随后的临床实验中发现，患者后巩膜在植入一年后发生钙化，同时90%的患者眼球周向出现畸形生长，其中20-30%患者甚至致盲，且无法与自身组织融合。
发明人认为，这些问题可能与材料的本构特性相关。论文中所用高交联度牛心包材料拉伸变形率为3%，其变形率过低，导致以上临床问题。而论文所用中交联度牛心包材料在3%应变下的切线模量为2.5MPa，在7%应变下的切线模量为6.3MPa，切线模量过低导致术后眼球继续延长，无法达到临床治疗效果。
发明人参照专利文献（CN110353856B）制作变形率小于3%的牛心包补片植入兔眼内，发现眼球周向延展变形受到眼球发育不良、后巩膜钙化的严重术后并发症。
随后发明人根据加州眼科中心披露的人体后巩膜特性数据（Joseph Park etc.,Material properties and effect of preconditioning of human sclera, opticnerve, and optic nerve sheath, Biomechanics and Modeling in Mechanobiologyhttps://doi.org/10.1007/s10237-021-01448-2）进行了材料的特性匹配处理，利用牛心包制备3%应变下的切线模量4.5MPa，在7%应变下的切线模量9.3MPa，其拉伸强度变形率在8%的生物补片进行实验，发现，在临床中仍存在钙化和眼球周向出现畸形生长问题。
发明人经过进一步研究发现，在满足切线模量大于等于自体巩膜数值（3%应变下的切线模量4.5MPa，在7%应变下的切线模量9.3MPa）的基础上，如果将拉伸变形率范围调整到10-30%，则临床表现较好。
以下，以具体实施例的形式详细公开本发明技术方案的获取过程。实施例中对于细胞和免疫原性物质的去除属于本领域的常规技术操作，为实现本发明，本领域技术人员可以采用本领域的任意常规技术手段实现细胞和免疫原性物质的去除。
本发明实施例所用的配位化合物溶液的制备：
取分析纯的AlCl3·6H2O和NaOH固体，加水配制成Al3+离子浓度为0.0625mol/dm3，OH/Al为0.5的羟基铝溶液备用。
取分析纯的CrCl3·6H2O和NaOH固体，加水配制成Cr3+离子浓度为0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液备用。
取分析纯的FeCl3·6H2O和NaOH固体，加水配制成Fe3+离子浓度为0.0625mol/dm3，OH/Fe为0.5的羟基铁溶液备用。
实施例1
①将新鲜获取的牛心包组织浸于低渗Hank′s液中，经水浴震荡多次反复更换低渗Hank′s液，以充分溶胀和破碎存在组织内的各种细胞；
②用生理盐水反复漂洗经上述处理后的组织片，每次漂洗30分钟至1小时，每次更换生理盐水，总漂洗次数依据组织片镜下看不到有形细胞或细胞成分及细胞碎片，并且进行蛋白与核酸定量测定直至检不出可溶性蛋白与核酸为止；
③用表面活性剂溶液Tween80去除组织片内的磷酯和非结构蛋白以及部分组织基质如通明质酸、各种硫酸软骨素和粘多糖等免疫原性分子；
④浸泡在浓度为0.5%的戊二醛溶液中4小时；
⑤配位化合物交联：将预处理后的组织材料置于0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液中，42℃水浴振荡5小时；检测材料处理液的pH并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，然后再在46℃水浴振荡60分钟；再测定材料处理液的pH，并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，46℃水浴振荡60分钟；继续用10％NaHCO3调节溶液pH值至4.0，50℃水浴振荡5小时。
本实施例获得的眼科生物补片利用材料性能测试试验机，检测参数为：组织片拉伸强度变形率为8%，在3%应变下的切线模量为4.5MPa，在7%应变下的切线模量为9.3MPa。
实施例2
①将新鲜获取的牛心包组织浸于低渗Hank′s液中，经水浴震荡多次反复更换低渗Hank′s液，以充分溶胀和破碎存在组织内的各种细胞；
②用生理盐水反复漂洗经上述处理后的组织片，每次漂洗30分钟至1小时，每次更换生理盐水，总漂洗次数依据组织片镜下看不到有形细胞或细胞成分及细胞碎片，并且进行蛋白与核酸定量测定直至检不出可溶性蛋白与核酸为止；
③用表面活性剂溶液Tween80去除组织片内的磷酯和非结构蛋白以及部分组织基质如通明质酸、各种硫酸软骨素和粘多糖等免疫原性分子；
④浸泡在浓度为0.5%的戊二醛溶液中4小时；
⑤配位化合物交联：将预处理后的组织材料置于0.0625mol/dm3，OH/Al为0.5的羟基铬溶液中，32℃水浴振荡3.5小时；检测材料处理液的pH并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，然后再在36℃水浴振荡45分钟；再测定材料处理液的pH，并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，36℃水浴振荡45分钟；继续用10％NaHCO3调节溶液pH值至4.0，40℃水浴振荡1.5小时。
本实施例获得的眼科生物补片利用材料性能测试试验机，检测参数为组织片断裂伸长率达到10%，在3%应变下的切线模量为8.5MPa，在7%应变下的切线模量大于13.3MPa。
实施例3
①将新鲜获取的牛心包组织浸于低渗Hank′s液中，经水浴震荡多次反复更换低渗Hank′s液，以充分溶胀和破碎存在组织内的各种细胞；
②用生理盐水反复漂洗经上述处理后的组织片，每次漂洗30分钟至1小时，每次更换生理盐水，总漂洗次数依据组织片镜下看不到有形细胞或细胞成分及细胞碎片，并且进行蛋白与核酸定量测定直至检不出可溶性蛋白与核酸为止；
③用表面活性剂溶液Tween80去除组织片内的磷酯和非结构蛋白以及部分组织基质如通明质酸、各种硫酸软骨素和粘多糖等免疫原性分子；
④浸泡在浓度为0.5%的戊二醛溶液中4小时；
⑤配位化合物交联：将预处理后的组织材料置于0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液中，32℃水浴振荡3.5小时；检测材料处理液的pH并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，然后再在36℃水浴振荡45分钟；再测定材料处理液的pH，并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，36℃水浴振荡45分钟；继续用10％NaHCO3调节溶液pH值至4.0，40℃水浴振荡1.5小时。
本实施例获得的眼科生物补片利用材料性能测试试验机，检测参数为组织片断裂伸长率达到17%，在3%应变下的切线模量为6.8MPa，在7%应变下的切线模量大于16.3MPa。
实施例4
①将新鲜获取的牛心包组织浸于低渗Hank′s液中，经水浴震荡多次反复更换低渗Hank′s液，以充分溶胀和破碎存在组织内的各种细胞；
②用生理盐水反复漂洗经上述处理后的组织片，每次漂洗30分钟至1小时，每次更换生理盐水，总漂洗次数依据组织片镜下看不到有形细胞或细胞成分及细胞碎片，并且进行蛋白与核酸定量测定直至检不出可溶性蛋白与核酸为止；
③用表面活性剂溶液Tween80去除组织片内的磷酯和非结构蛋白以及部分组织基质如通明质酸、各种硫酸软骨素和粘多糖等免疫原性分子；
④浸泡在浓度为0.5%的戊二醛溶液中4小时；
⑤配位化合物交联：将预处理后的组织材料置于0.0625mol/dm3，OH/Fe为0.5的羟基铬溶液中，32℃水浴振荡3.5小时；检测材料处理液的pH并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，然后再在36℃水浴振荡45分钟；再测定材料处理液的pH，并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，36℃水浴振荡45分钟；继续用10％NaHCO3调节溶液pH值至4.0，40℃水浴振荡1.5小时。
本实施例获得的眼科生物补片利用材料性能测试试验机，检测参数为组织片断裂伸长率达到23%，在3%应变下的切线模量为8.8MPa，在7%应变下的切线模量大于19.7MPa。
实施例5
①将新鲜获取的牛心包组织浸于低渗Hank′s液中，经水浴震荡多次反复更换低渗Hank′s液，以充分溶胀和破碎存在组织内的各种细胞；
②用生理盐水反复漂洗经上述处理后的组织片，每次漂洗30分钟至1小时，每次更换生理盐水，总漂洗次数依据组织片镜下看不到有形细胞或细胞成分及细胞碎片，并且进行蛋白与核酸定量测定直至检不出可溶性蛋白与核酸为止；
③用表面活性剂溶液Tween80去除组织片内的磷酯和非结构蛋白以及部分组织基质如通明质酸、各种硫酸软骨素和粘多糖等免疫原性分子；
④浸泡在浓度为0.5%的戊二醛溶液中4小时；
⑤配位化合物交联：将预处理后的组织材料置于0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液中，28℃水浴振荡3.5小时；检测材料处理液的pH并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，然后再在26℃水浴振荡45分钟；再测定材料处理液的pH，并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，32℃水浴振荡45分钟；继续用10％NaHCO3调节溶液pH值至4.0，38℃水浴振荡1.5小时。
本实施例获得的眼科生物补片利用材料性能测试试验机，检测参数为组织片断裂伸长率达到10%，在3%应变下的切线模量为4.5MPa，在7%应变下的切线模量大于9.3MPa。
实施例6
①将新鲜获取的牛心包组织浸于低渗Hank′s液中，经水浴震荡多次反复更换低渗Hank′s液，以充分溶胀和破碎存在组织内的各种细胞；
②用生理盐水反复漂洗经上述处理后的组织片，每次漂洗30分钟至1小时，每次更换生理盐水，总漂洗次数依据组织片镜下看不到有形细胞或细胞成分及细胞碎片，并且进行蛋白与核酸定量测定直至检不出可溶性蛋白与核酸为止；
③用表面活性剂溶液Tween80去除组织片内的磷酯和非结构蛋白以及部分组织基质如通明质酸、各种硫酸软骨素和粘多糖等免疫原性分子；
④浸泡在浓度为0.5%的戊二醛溶液中4小时；
⑤配位化合物交联：将预处理后的组织材料置于0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液中，32℃水浴振荡5.5小时；检测材料处理液的pH并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，然后再在38℃水浴振荡35分钟；再测定材料处理液的pH，并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，36℃水浴振荡55分钟；继续用10％NaHCO3调节溶液pH值至4.0，40℃水浴振荡3.5小时。
本实施例获得的眼科生物补片利用材料性能测试试验机，检测参数为组织片断裂伸长率达到15%，在3%应变下的切线模量为5.2MPa，在7%应变下的切线模量大于10.8MPa。
实施例7
①将新鲜获取的牛心包组织浸于低渗Hank′s液中，经水浴震荡多次反复更换低渗Hank′s液，以充分溶胀和破碎存在组织内的各种细胞；
②用生理盐水反复漂洗经上述处理后的组织片，每次漂洗30分钟至1小时，每次更换生理盐水，总漂洗次数依据组织片镜下看不到有形细胞或细胞成分及细胞碎片，并且进行蛋白与核酸定量测定直至检不出可溶性蛋白与核酸为止；
③用表面活性剂溶液Tween80去除组织片内的磷酯和非结构蛋白以及部分组织基质如通明质酸、各种硫酸软骨素和粘多糖等免疫原性分子；
④浸泡在浓度为0.5%的戊二醛溶液中4小时；
⑤配位化合物交联：将预处理后的组织材料置于0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液中，34℃水浴振荡4.5小时；检测材料处理液的pH并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，然后再在38℃水浴振荡35分钟；再测定材料处理液的pH，并用10％NaHCO3提高0.4pH单位，36℃水浴振荡60分钟；继续用10％NaHCO3调节溶液pH值至4.0，38℃水浴振荡1.5小时。
本实施例获得的眼科生物补片利用材料性能测试试验机，检测参数为组织片断裂伸长率达到30%，在3%应变下的切线模量为10.9MPa，在7%应变下的切线模量大于17.8MPa。
以上实施例中，步骤①-④均相同，主要是对材料进行脱细胞和免疫原性物质并进行戊二醛固定。实施例1、3、5、6和7都是在步骤①-④之后采用了OH/Cr-羟基铬溶液进行交联和抗钙化处理。实施例2采用的是OH/Alr-羟基铬溶液进行交联和抗钙化处理。实施例4采用的是OH/Fer-羟基铬溶液进行交联和抗钙化处理。
所有实施例所得的生物补片都通过临床进行了验证。实施例1所得的生物补片虽然可以达到阻止患者眼球轴向延长的效果，但影像评价表明眼球周向延展异常，局部发生畸变，治疗效果不及预期。实施例2-7所得生物补片植入患者眼球后巩膜处，在有效阻止患者眼球延长的同时，术后12个月未观察到钙化，且影像评价表明眼球周向延展正常，未发生畸变，植入组织与患者自体组织融合良好。尤其是实施例3所得生物补片效果最好，术后36个月未观察到钙化，且补片与组织完全融合，无法区分。
随后，为了进一步验证实施例3所制备生物补片的效果，进行了产品注册前的临床试验，结果充分显示了其在病理性近视治疗中的安全性有效性。
眼外科生物补片临床试验自2020年5月启动入组，至2022年4月完成全部患者入组。试验总计入组101例，患者人群分布包含未成年人和成年人，全部诊断为病理性近视患者。患者年龄分布情况：3-5岁，28人；6-10岁，21人；11-18岁，10人；19-30岁，7人；30岁以上，35人。
根据患者不同情况，其中36例患者双眼手术，65例患者为单眼手术，总计术眼137只。术后即刻手术成功率100%，根据临床试验研究方案的研究指标对目前已有数据进行初步分析。
术中植入补片简易，无不良事件。术后随访，无患者的条带脱出或取出。
眼轴变化
临床试验设定了术后4个阶段，分别在1个月、3个月、6个月和12个月时随访，对不同阶段的眼轴变化进行分析，术后1个月，患者眼轴有较术前明显缩短，术后3-6个月开始恢复至原先水平，之后延缓眼轴的进一步增长。
术后视力变化
分析86例患者120只眼，等效球镜度数在术后12月改善或维持不变，占比45%，等效球镜度数增长小于-1.00D，占比40%，年增长大于等于-1.00D占比15%，病理性近视患者的等效球镜度数得到有效控制。
术后眼底变化
为确认病理性近视患者的眼底劈裂改善程度，对88例患者的125只术眼进行分析，术前存在劈裂24只眼，术后改善 9只眼，占比37.5%，维持劈裂程度不变14只眼，占比58.33%， 加重1只眼，占比4.17%；术前无劈裂101眼，术后发生劈裂2只眼，占比1.98%；其中小于18岁实际纳入统计49例患者共75只眼，术前术后均无劈裂发生。
该眼科补片在后巩膜加固术中有效阻止患者眼球延长的同时，未发生钙化，且影像评价表明眼球周向延展正常，未发生畸变，植入组织与患者自体组织融合良好。
尽管本发明的描述已经相当详尽且特别对几个所述实施例进行了描述，但其并非旨在局限于任何这些细节或实施例或任何特殊实施例，从而有效地涵盖本发明的预定范围。此外，上文以发明人可预见的实施例对本发明进行描述，其目的是为了提供有用的描述，而那些目前尚未预见的对本发明的非实质性改动仍可代表本发明的等效改动。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种用于后巩膜加固的眼科生物补片，其特征在于，所述眼科生物补片在3%应变下的切线模量大于等于4.5MPa，7%应变下的切线模量大于等于9.3MPa，拉伸变形率为10-30%。
2.权利要求1所述用于后巩膜加固的眼科生物补片，其特征在于，所述眼科生物补片含有戊二醛单元。
3.权利要求1所述用于后巩膜加固的眼科生物补片，其特征在于，所述眼科生物补片含有铬、铝或铁元素。
4.制备权利要求1-3任一所述用于后巩膜加固的眼科生物补片的方法，其特征在于，包括：
a)去除牛心包材料中的免疫原性分子；
b)在戊二醛溶液中浸泡；
c)配位化合物交联：
在0.0625mol/dm3，OH/Al为0.5的羟基铝溶液中进行交联，或在0.0625mol/dm3，OH/Fe为0.5的羟基铁溶液中进行交联，或在0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液中进行交联。
5.权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤a）中，使用Tween80或SDS去除牛心包材料中的免疫原性分子。
6.权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤b）中，戊二醛溶液的浓度为0.5%。
7.权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤c）中，戊二醛溶液中浸泡的牛心包组织置于0.0625mol/dm3，OH/Al为0.5的羟基铝溶液中，或0.0625mol/dm3，OH/Fe为0.5的羟基铁溶液中，或0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液中，在水浴条件下，用NaHCO3以每次提高0.4pH单位的标准，调节溶液pH值至4.0。
8.权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤c）中，0.0625mol/dm3，OH/Al为0.5的羟基铝溶液通过如下方法配制：
AlCl3·6H2O和NaOH固体溶解于水。
9.权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤c）中，0.0625mol/dm3，OH/Cr为0.5的羟基铬溶液通过如下方法配制：
CrCl3·6H2O和NaOH固体溶解于水。
10.权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤c）中，0.0625mol/dm3，OH/Fe为0.5的羟基铁溶液通过如下方法配制：
FeCl3·6H2O和NaOH固体溶解于水。
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