CN117562181A - 一种改善对虾体色的海藻型饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及水产养殖业饲料添加剂技术领域，且公开了一种改善对虾体色的海藻型饲料添加剂及其制备方法，海藻中富含高蛋白、碳水化合物和脂类，具有高营养价值和抗氧化能力；水提法从海藻中提取的硫酸基海藻多糖，强化了虾体的肠道微生态稳定性和免疫功能；通过酶提法从雨生红球藻中提取的微藻虾青素粉，一部分可作为营养物质被虾体利用，另一部分在虾皮层、肌肉和外壳等处沉积，改善对虾体色异常，体色变浅甚至发蓝的问题，具有卓越的增色作用；同时浓缩棉籽蛋白的适量添加会显著促进对虾的生长，饲料添加剂中各组分协同增效，促进对虾的生长和改善对虾体色，有利于对虾养殖的可持续健康发展。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖业饲料添加剂技术领域，具体为一种改善对虾体色的海藻型饲料添加剂及其制备方法。
背景技术
凡纳滨对虾原产于太平洋沿岸海域，是目前世界上产量最高的对虾养殖品种之一，由于壳薄体肥，环境适应能力好、抗病力强，深受大众喜欢，具有较高的经济价值和营养价值，可进行高密度、集约化养殖；然而随着对虾工厂化养殖的兴起，养殖对虾体色异常，体色变浅甚至发蓝的问题也随之暴露；随着人们生活水平的逐步提高与健康意识的增强，对水产品品质的要求也越来越高，因此开发高品质的饲料添加剂用于改善对虾的体色、肉质及风味，是凡纳滨对虾产业可持续发展的当务之急。
对虾的体色主要是色素细胞内的色素体对光线的吸收、散射和折射等作用后呈现出不同的颜色，由于消费者对于对虾颜色有一定的偏好，导致颜色正常的对虾价格高于颜色异常的，虾青素是一种端基为酮基的类胡萝卜素，大量研究表明，虾青素可以改善水产品体色，保证水产动物具有良好的市场价值，而且虾青素还是这些动物正常生长和存活所必需的营养物质，但是由于虾自身不能够合成类胡萝卜素，而又由于水产养殖过程中的食物链过于单一，因此水产饲料中需要人工添加适量的虾青素来保证动物体内虾青素的含量维持在正常水平；现有技术中市场上的虾青素95％以上是化学合成，人工合成虾青素存在安全性低、环境污染大且产品活性低等问题。
雨生红球藻是自然界中最好的虾青素本源，从雨生红球藻中提取虾青素已经成为研究热点，具有良好的经济效益和前景；本发明通过酶解法对雨生红球藻进行虾青素提取，采用超声提取法对棉籽粕粉进行提取，水提法得到硫酸海藻多糖，并与壳聚糖、纤维素等复合，制备出海藻型饲料添加剂，应用于对虾的饲料中，具有改善对虾体色、提高对虾抵抗力和生长活性的功能。
发明内容
本发明解决的技术问题为：
针对现有技术的不足，本发明提供了一种改善对虾体色的海藻型饲料添加剂及其制备方法，开发出了一种高品质的饲料添加剂，可用于改善对虾的体色，促进对虾的生长。
本发明采取的技术方案为：
一种改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，所述制备方法按以下步骤进行：将磷虾粉、浓缩棉籽蛋白、磷酸二氢钙、复合维生素用粉碎机粉碎，过80-100目筛，然后加入啤酒酵母、硫酸基海藻多糖于混合机中，混合发酵，接着放入饲料搅拌机中搅拌10-40min，依次加入壳聚糖、微藻虾青素粉继续搅拌1-2h，用饲料制粒机进行制粒，得到改善对虾体色的海藻型饲料添加剂。
进一步的，所述按重量份数计，磷虾粉为15-25份、浓缩棉籽蛋白为20-45份、磷酸二氢钙为1.5-3份，复合维生素为2-4份、啤酒酵母为2-5份、硫酸基海藻多糖为1-5份、壳聚糖为0.5-2份、微藻虾青素粉为2-10份。
进一步的，所述复合维生素包括维生素A、维生素C和维生素E的一种或多种。
进一步的，所述浓缩棉籽蛋白的制备方法按以下步骤进行：向反应烧瓶中加入按重量份数计的110-140份pH为11-12的氢氧化钠水溶液和100份棉籽粕粉，搅拌均匀后，置于超声波发生器中进行超声提取，提取结束后，趁热过滤，加入盐酸调节pH为4.5-5，静置10-20min，析出蛋白沉淀，离心分离，干燥后得到浓缩棉籽蛋白。
进一步的，所述超声提取温度为55-70℃，超声提取时间为30-60min。
进一步的，所述硫酸基海藻多糖的制备方法按以下步骤进行：向反应烧瓶中加入100份海藻粉和80-120份去离子水，搅拌分散均匀，进行水提反应，反应结束后，趁热过滤，收集滤液，滤渣用5-6倍体积的去离子水提取3-8h，合并滤液，减压浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，干燥后得到硫酸基海藻多糖。
进一步的，所述水提反应温度为75-100℃，水提反应时间为8-16h。
进一步的，所述微藻虾青素粉的制备方法按以下步骤进行：向反应烧瓶中加入按重量份数计的100份雨生红球藻粉和150-250份去离子水，在震荡器中震摇20-40min，用质量分数为5-10％的柠檬酸调节pH为4-5，加入1-3份纤维素酶，进行酶解反应，反应结束后，过滤，乙醇提取，提取温度为40-50℃，提取时间为30-60min，合并提取液，减压浓缩，干燥后得到微藻虾青素粉。
进一步的，所述酶解反应温度为35-60℃，反应时间为10-25h。
进一步的，所述饲料的制备方法按以下步骤进行：将按重量份数计的15-20份磷虾粉，5-10份鱼粉，10-12份去皮豆粕，8-10份玉米蛋白粉，25-30份小麦粉，3-6份花生粕、1-3份大豆磷脂油，1-2份鱼油，0.5-1份氯化胆碱、1-2份复合矿物、0.2-0.5份复合氨基酸、1-2份磷酸二氢钙和3-1 5份海藻型饲料添加剂混合均匀，研磨过50-80目筛，加入到双螺杆挤出机中进行挤出，接着在烘箱中于50-65℃熟化30-50min，自然风干后得到改善对虾体色的海藻型饲料。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果为：
本发明通过在饲料中加入添加剂改善对虾的生长性能，利用超声波提取法，从棉籽粕粉中提取得到浓缩棉籽蛋白，接着采用水提法从海藻中提取有效成分，得到硫酸基海藻多糖，然后对雨生红球藻粉进行酶解反应，采用酶法提取虾青素成分，得到微藻虾青素粉，接着与复合维生素、啤酒酵母和壳聚糖等混合，得到改善对虾体色的海藻型饲料添加剂，最后将海藻型添加剂加入到由磷虾粉、鱼粉、去皮豆粕、玉米蛋白粉、小麦粉等组成的饲料中，得到改善对虾体色的海藻型饲料。
海藻中富含高蛋白、碳水化合物和脂类，广泛应用于对虾的不同生长阶段，是虾体生长必需的营养物质，具有高营养价值、抗氧化能力和抗病能力。本发明通过对海藻中的有效成分进行提取，发挥微生物的作用，最大的节约成本，提取的浓缩棉籽蛋白是由棉籽为原料制成的新型植物蛋白源，具有高蛋白和低抗营养因子，适量添加会显著促进对虾的生长，增强对虾的肠道和肠道消化酶活性，促进对虾的生理机能稳定；从海藻中提取的海藻多糖，分子结构中富含硫酸基团阴离子活性位点，具有抗氧化、抗菌作用，功能性的海藻多糖可促进对虾体内微生物菌群的增殖、改善肠道微生态稳定性，同时结合吸附外源致病菌，阻止其黏附在消化道内壁，从而减少有害菌的生态位，抑制条件致病菌的大量繁殖，进而强化虾体的免疫功能，维持正常肠道形态并恢复肠道功能。
壳聚糖作为一种可食性高分子多糖体，可以提高虾体的免疫能力，保护肝胰腺；天然虾青素具有强烈的抗氧化活性、增强免疫力和显色作用等，从富含虾青素的雨生红球藻中提取虾青素，提取率高且生态环保，当对虾从饲料中吸收虾青素后一部分在虾体内可转化为维生素A，作为营养物质被虾体利用，另一部分在虾皮层、肌肉和外壳等处沉积，改善对虾体色异常，体色变浅甚至发蓝的问题，具有卓越的增色作用。
本发明在对虾饲料中添加适量的硫酸基海藻多糖、微藻虾青素粉等海藻型添加剂，通过它们的协同作用，能明显提高消化酶活性、改善肠道微生态稳定性，促进对虾的生长和改善对虾体色，具有良好的经济效益和社会效益，有利于对虾养殖的可持续健康发展。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
(1)向反应烧瓶中加入按重量份数计的130份pH为11的氢氧化钠水溶液和100份棉籽粕粉，搅拌均匀后，置于超声波发生器中，在65℃下超声提取45min后，趁热过滤，加入盐酸调节pH为5，静置15min，析出蛋白沉淀，离心分离，干燥后得到浓缩棉籽蛋白。
(2)向反应烧瓶中加入100份海藻粉和110份去离子水，搅拌分散均匀，在85℃水提15h后，趁热过滤，收集滤液，滤渣用6倍体积的去离子水提取7h，合并滤液，减压浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，干燥后得到硫酸基海藻多糖。
(3)向反应烧瓶中加入按重量份数计的100份雨生红球藻粉和200份去离子水，在震荡器中震摇30min，用质量分数为8％的柠檬酸调节pH为4.5，加入2份纤维素酶，在55℃反应24h后，过滤，乙醇提取，提取温度为45℃，提取时间为40min，合并提取液，减压浓缩，干燥后得到微藻虾青素粉。
(4)将按重量份数计的20份磷虾粉、35份浓缩棉籽蛋白、2份磷酸二氢钙、3份维生素A和维生素C，用粉碎机粉碎，过90目筛，然后加入3份啤酒酵母、1份硫酸基海藻多糖于混合机中，混合发酵，接着放入饲料搅拌机中搅拌20min，依次加入1.5份壳聚糖、2份微藻虾青素粉继续搅拌1.5h，用饲料制粒机进行制粒，得到改善对虾体色的海藻型饲料添加剂。
(5)将按重量份数计的20份磷虾粉，8份鱼粉，12份去皮豆粕，9份玉米蛋白粉，25份小麦粉，5份花生粕、2份大豆磷脂油，1份鱼油，0.5份氯化胆碱、2份复合矿物、0.3份复合氨基酸、2份磷酸二氢钙和3份海藻型饲料添加剂混合均匀，研磨过60目筛，加入到双螺杆挤出机中进行挤出，接着在烘箱中于55℃熟化40min，自然风干后得到改善对虾体色的海藻型饲料。
实施例2
(1)向反应烧瓶中加入按重量份数计的140份pH为12的氢氧化钠水溶液和100份棉籽粕粉，搅拌均匀后，置于超声波发生器中，在55℃下超声提取60min后，趁热过滤，加入盐酸调节pH为4.5，静置10min，析出蛋白沉淀，离心分离，干燥后得到浓缩棉籽蛋白。
(2)向反应烧瓶中加入100份海藻粉和120份去离子水，搅拌分散均匀，在75℃水提16h后，趁热过滤，收集滤液，滤渣用6倍体积的去离子水提取8h，合并滤液，减压浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，干燥后得到硫酸基海藻多糖。
(3)向反应烧瓶中加入按重量份数计的100份雨生红球藻粉和250份去离子水，在震荡器中震摇40min，用质量分数为5％的柠檬酸调节pH为5，加入3份纤维素酶，在35℃反应25h后，过滤，乙醇提取，提取温度为40℃，提取时间为60min，合并提取液，减压浓缩，干燥后得到微藻虾青素粉。
(4)将按重量份数计的25份磷虾粉、20份浓缩棉籽蛋白、1.5份磷酸二氢钙、2份维生素E，用粉碎机粉碎，过80目筛，然后加入2份啤酒酵母、2份硫酸基海藻多糖于混合机中，混合发酵，接着放入饲料搅拌机中搅拌40min，依次加入2份壳聚糖、4份微藻虾青素粉继续搅拌1 h，用饲料制粒机进行制粒，得到改善对虾体色的海藻型饲料添加剂。
(5)将按重量份数计的15份磷虾粉，10份鱼粉，12份去皮豆粕，8份玉米蛋白粉，25份小麦粉，6份花生粕、1份大豆磷脂油，2份鱼油，0.8份氯化胆碱、2份复合矿物、0.5份复合氨基酸、1份磷酸二氢钙和6份海藻型饲料添加剂混合均匀，研磨过70目筛，加入到双螺杆挤出机中进行挤出，接着在烘箱中于50℃熟化50min，自然风干后得到改善对虾体色的海藻型饲料。
实施例3
(1)向反应烧瓶中加入按重量份数计的110份pH为12的氢氧化钠水溶液和100份棉籽粕粉，搅拌均匀后，置于超声波发生器中，在70℃下超声提取30min后，趁热过滤，加入盐酸调节pH为5，静置10min，析出蛋白沉淀，离心分离，干燥后得到浓缩棉籽蛋白。
(2)向反应烧瓶中加入100份海藻粉和80份去离子水，搅拌分散均匀，在100℃水提8h后，趁热过滤，收集滤液，滤渣用5倍体积的去离子水提取3h，合并滤液，减压浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，干燥后得到硫酸基海藻多糖。
(3)向反应烧瓶中加入按重量份数计的100份雨生红球藻粉和150份去离子水，在震荡器中震摇20min，用质量分数为10％的柠檬酸调节pH为4，加入1份纤维素酶，在60℃反应10h后，过滤，乙醇提取，提取温度为50℃，提取时间为30min，合并提取液，减压浓缩，干燥后得到微藻虾青素粉。
(4)将按重量份数计的15份磷虾粉、45份浓缩棉籽蛋白、3份磷酸二氢钙、4份维生素C和维生素E，用粉碎机粉碎，过85目筛，然后加入2份啤酒酵母、3份硫酸基海藻多糖于混合机中，混合发酵，接着放入饲料搅拌机中搅拌40min，依次加入0.5份壳聚糖、6份微藻虾青素粉继续搅拌2h，用饲料制粒机进行制粒，得到改善对虾体色的海藻型饲料添加剂。
(5)将按重量份数计的20份磷虾粉，5份鱼粉，10份去皮豆粕，10份玉米蛋白粉，30份小麦粉，3份花生粕、3份大豆磷脂油，1份鱼油，1份氯化胆碱、1.5份复合矿物、0.5份复合氨基酸、1份磷酸二氢钙和9份海藻型饲料添加剂混合均匀，研磨过50目筛，加入到双螺杆挤出机中进行挤出，接着在烘箱中于65℃熟化30min，自然风干后得到改善对虾体色的海藻型饲料。
实施例4
(1)向反应烧瓶中加入按重量份数计的125份pH为11的氢氧化钠水溶液和100份棉籽粕粉，搅拌均匀后，置于超声波发生器中，在60℃下超声提取50min后，趁热过滤，加入盐酸调节pH为4.5，静置15min，析出蛋白沉淀，离心分离，干燥后得到浓缩棉籽蛋白。
(2)向反应烧瓶中加入100份海藻粉和100份去离子水，搅拌分散均匀，在95℃水提10h后，趁热过滤，收集滤液，滤渣用5.5倍体积的去离子水提取6h，合并滤液，减压浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，干燥后得到硫酸基海藻多糖。
(3)向反应烧瓶中加入按重量份数计的100份雨生红球藻粉和220份去离子水，在震荡器中震摇25min，用质量分数为8％的柠檬酸调节pH为4，加入2份纤维素酶，在50℃反应20h后，过滤，乙醇提取，提取温度为50℃，提取时间为35min，合并提取液，减压浓缩，干燥后得到微藻虾青素粉。
(4)将按重量份数计的20份磷虾粉、35份浓缩棉籽蛋白、2份磷酸二氢钙、3份维生素A、维生素C和维生素E，用粉碎机粉碎，过90目筛，然后加入3份啤酒酵母、4份硫酸基海藻多糖于混合机中，混合发酵，接着放入饲料搅拌机中搅拌25min，依次加入2份壳聚糖、8份微藻虾青素粉继续搅拌1.5h，用饲料制粒机进行制粒，得到改善对虾体色的海藻型饲料添加剂。
(5)将按重量份数计的15份磷虾粉，10份鱼粉，12份去皮豆粕，8份玉米蛋白粉，25份小麦粉，5份花生粕、2份大豆磷脂油，2份鱼油，0.5份氯化胆碱、2份复合矿物、0.5份复合氨基酸、1份磷酸二氢钙和12份海藻型饲料添加剂混合均匀，研磨过60目筛，加入到双螺杆挤出机中进行挤出，接着在烘箱中于60℃熟化35min，自然风干后得到改善对虾体色的海藻型饲料。
实施例5
(1)向反应烧瓶中加入按重量份数计的130份pH为11的氢氧化钠水溶液和100份棉籽粕粉，搅拌均匀后，置于超声波发生器中，在65℃下超声提取55min后，趁热过滤，加入盐酸调节pH为5，静置20min，析出蛋白沉淀，离心分离，干燥后得到浓缩棉籽蛋白。
(2)向反应烧瓶中加入100份海藻粉和90份去离子水，搅拌分散均匀，在85℃水提15h后，趁热过滤，收集滤液，滤渣用6倍体积的去离子水提取5h，合并滤液，减压浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，干燥后得到硫酸基海藻多糖。
(3)向反应烧瓶中加入按重量份数计的100份雨生红球藻粉和180份去离子水，在震荡器中震摇35min，用质量分数为9％的柠檬酸调节pH为5，加入3份纤维素酶，在50℃反应16h后，过滤，乙醇提取，提取温度为40℃，提取时间为60min，合并提取液，减压浓缩，干燥后得到微藻虾青素粉。
(4)将按重量份数计的25份磷虾粉、25份浓缩棉籽蛋白、2份磷酸二氢钙、4份维生素A和维生素E，用粉碎机粉碎，过100目筛，然后加入5份啤酒酵母、5份硫酸基海藻多糖于混合机中，混合发酵，接着放入饲料搅拌机中搅拌30min，依次加入0.5份壳聚糖、10份微藻虾青素粉继续搅拌1h，用饲料制粒机进行制粒，得到改善对虾体色的海藻型饲料添加剂。
(5)将按重量份数计的15份磷虾粉，5份鱼粉，11份去皮豆粕，9份玉米蛋白粉，30份小麦粉，6份花生粕、1份大豆磷脂油，2份鱼油，1份氯化胆碱、2份复合矿物、0.4份复合氨基酸、2份磷酸二氢钙和15份海藻型饲料添加剂混合均匀，研磨过65目筛，加入到双螺杆挤出机中进行挤出，接着在烘箱中于55℃熟化40min，自然风干后得到改善对虾体色的海藻型饲料。
对比例1
(1)将按重量份数计的20份磷虾粉、35份浓缩棉籽蛋白、2份磷酸二氢钙、3份维生素A和维生素C，用粉碎机粉碎，过90目筛，然后加入3份啤酒酵母于混合机中，混合发酵，接着放入饲料搅拌机中搅拌20min，依次加入1.5份壳聚糖、2份微藻虾青素粉继续搅拌1.5h，用饲料制粒机进行制粒，得到改善对虾体色的饲料添加剂。
(2)将按重量份数计的20份磷虾粉，8份鱼粉，12份去皮豆粕，9份玉米蛋白粉，25份小麦粉，5份花生粕、2份大豆磷脂油，1份鱼油，0.5份氯化胆碱、2份复合矿物、0.3份复合氨基酸、2份磷酸二氢钙和3份饲料添加剂混合均匀，研磨过60目筛，加入到双螺杆挤出机中进行挤出，接着在烘箱中于55℃熟化40min，自然风干后得到改善对虾体色的饲料。
对比例2
(1)将按重量份数计的20份磷虾粉、35份浓缩棉籽蛋白、2份磷酸二氢钙、3份维生素A和维生素C，用粉碎机粉碎，过90目筛，然后加入3份啤酒酵母、1份硫酸基海藻多糖于混合机中，混合发酵，接着放入饲料搅拌机中搅拌20min，加入1.5份壳聚糖继续搅拌1.5h，用饲料制粒机进行制粒，得到改善对虾体色的饲料添加剂。
(2)将按重量份数计的20份磷虾粉，8份鱼粉，12份去皮豆粕，9份玉米蛋白粉，25份小麦粉，5份花生粕、2份大豆磷脂油，1份鱼油，0.5份氯化胆碱、2份复合矿物、0.3份复合氨基酸、2份磷酸二氢钙和3份饲料添加剂混合均匀，研磨过60目筛，加入到双螺杆挤出机中进行挤出，接着在烘箱中于55℃熟化40min，自然风干后得到改善对虾体色的饲料。
实验所用凡纳滨对虾体质量为(6.82±0.03)g，先在实验室的养殖桶中暂养7d，然后随机选取体长均匀、体格健康、规格相当的幼虾700尾用于实验，设置7个实验组，分别投喂实施例和对比例的饲料；每个实验组设置5个重复，每个重复20尾，养殖时间为8周。
在养殖过程中，对虾的摄食量按其体重的8-10％计算，同时也根据天气、水质、水温和对虾的活力进行调整。每天定时投喂，分别于07:00、12:00、17:30、21:30进行投喂，投料时将投喂的饲料均匀遍洒至养殖桶底部，喂养40-60min后观察对虾摄食情况与残饵情况，每次投喂2h后虹吸出水体中的粪便残饵，每日换水，换水量是养殖桶水量的1/3到1/2；养殖期间养殖水体持续充氧，系统内水温26-28℃，盐度波动范围为26-28，氨氮质量浓度低于0.3mg/L，pH值范围为7.7-8.0，溶解氧质量浓度高于6mg/L。
数据统计：使用SPSS软件19.0进行统计，数据表示为平均值±标准误
对虾体组分测试：将对虾样品在105℃烘干至恒质量测定水分，粗蛋白质采用全自动凯氏定氮仪测定，粗脂肪采用氯仿甲醇法测定，粗灰分采用550℃马弗炉灼烧法测定。
| 粗蛋白质(％) | 粗脂肪(％) | 粗灰分(％) | |
| 实施例1 | 73.65±1.16 | 13.95±0.24 | 11.41±0.32 |
| 实施例2 | 74.78±1.18 | 14.16±0.50 | 11.56±0.30 |
| 实施例3 | 75.65±0.81 | 14.39±0.45 | 11.88±0.27 |
| 实施例4 | 75.09±1.23 | 14.52±0.12 | 12.04±0.54 |
| 实施例5 | 73.68±1.30 | 14.46±0.26 | 12.00±0.36 |
| 对比例1 | 71.51±1.56 | 11.10±1.21 | 10.56±0.39 |
| 对比例2 | 70.32±1.47 | 10.32±1.35 | 10.32±0.84 |
由上表测试结果可知，饲料中添加适量的硫酸基海藻多糖和微藻虾青素粉后，实施例中对虾的体组分中粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分含量高于对比例，表明海藻型饲料添加剂的加入可有效改善对虾的生长性能，这是因为与硫酸基海藻多糖、浓缩棉籽蛋白中富含各种矿物质元素、有机酸、多糖和天然抗生素，这些丰富的活性物质有助于增强对虾体内中的蛋白质合成，从而促进生长，对比例2中不含硫酸基海藻多糖，其体组分含量低于实施例。
对虾体色测试：将虾放入冰水桶中直至死亡，而后使用NR-200型色差仪分别测量对虾的甲壳(腹部2-3节)处的体色，对虾体色采用国际发光照明委员会的标准由L*(亮度值)、a*(红色值)、b*(黄色值)表示。
由上表测试数据可知，随着海藻型饲料添加剂的加入，对虾腹部甲壳的亮度值呈下降趋势，红色值无明显差别，黄色值呈下降趋势，L*a*b*颜色体系中，L*越小，颜色越深；a*越大，颜色越倾向于红色；b*越小，颜色越倾向于蓝色；从对虾的体色来看，随着海藻型饲料添加含量的提高，其L*逐渐降低，体色变深，表明生虾青灰色呈逐渐变深的趋势，改善了对虾体色；这是因为制备的饲料添加剂中含有虾青素，它是一种高效的自由基清除剂，可以清除细胞内部积聚的自由基，结构中的羟基和酮基的存在，使虾青素极性结构易于氧化，从而赋予其对细胞的抗氧化性能，当对虾从饲料中吸收虾青素后，一部分在虾体内可转化为维生素A，作为营养物质被虾体利用，另一部分在虾皮层、肌肉和外壳等处沉积，从而改变对虾的色泽。
血清生化指标和酶活性测试：用预冷却的PBS(0.01M，pH＝7.4)洗涤肠组织，加入PBS溶液(1∶9)混合，冰上操作研磨肠道组织，以5000r/min离心匀浆液5分钟，提取上清液，使用微板光度计和紫外-可见分光光度计对血清生化指标和酶活性进行测定，每份样本平行测试三次。
血清生化是对虾机体功能的重要生理指标，血清中抗氧化能力高低清除代谢废物、维持内环境平衡的重要因素；超氧化物歧化酶SOD是机体内重要的抗氧化物酶，催化自由基的歧化反应，在维持机体抗氧化稳定中扮演着重要角色；过氧化氢酶CAT是过氧化物酶体的标记酶，分解过氧化氢，从而防止过氧化氢对机体的损伤；酚氧化酶PO主要参与酚类代谢系统中一些与抗性相关的抗氧化酶反应，在抵抗病原微生物侵袭过程中发挥重要作用；碱性磷酸酶AKP和酸性磷酸酶ACP是对虾生长和免疫功能的主要指标，在细胞调节和营养物质转运中发挥重要作用，改善了对虾的生长性能。
由上表测试结果可知，随着饲料中海藻型添加剂的加入，实施例中的血清生化指标相较于对比例，均有明显的增长，表明海藻型添加剂的加入增强了对虾血清中的非特异性免疫活力，在维持机体抗氧化稳定中起到十分重要的作用。
消化功能依赖于胃肠组织的机械运动和消化酶的化学消解作用，对虾的消化道相对简单，消化能力较弱，而消化酶在食物消化和营养吸收中扮演着关键的角色，硫酸基海藻多糖中所含的多糖不能被对虾所消化和吸收，但可以被肠道中的微生物分解，硫酸基海藻多糖可促进对虾体内微生物菌群的增殖、改善肠道微生态稳定性，同时结合吸附外源致病菌，阻止其黏附在消化道内壁，从而减少有害菌的生态位，抑制条件致病菌的大量繁殖，进而强化虾体的免疫功能，维持正常肠道形态并恢复肠道功能，使得对虾的生长性能和肠道消化能力得到改善。
由上表测试结果可知，海藻型饲料添加剂的加入使得对虾肠道内消化酶的活性得到增强，对比例1中不含硫酸基海藻多糖，对比比例2中不含微藻虾青素粉，其肠道酶活性不及实施例。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，则本发明也意图包含这些改动和变形。
Claims (10)
1.一种改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法按以下步骤进行：将磷虾粉、浓缩棉籽蛋白、磷酸二氢钙、复合维生素用粉碎机粉碎，过80-100目筛，然后加入啤酒酵母、硫酸基海藻多糖于混合机中，混合发酵，接着放入饲料搅拌机中搅拌10-40min，依次加入壳聚糖、微藻虾青素粉继续搅拌1-2h，用饲料制粒机进行制粒，得到改善对虾体色的海藻型饲料添加剂。
2.根据权利要求1所述的改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述按重量份数计，磷虾粉为15-25份、浓缩棉籽蛋白为20-45份、磷酸二氢钙为1.5-3份，复合维生素为2-4份、啤酒酵母为2-5份、硫酸基海藻多糖为1-5份、壳聚糖为0.5-2份、微藻虾青素粉为2-10份。
3.根据权利要求1所述的改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述复合维生素包括维生素A、维生素C和维生素E的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述浓缩棉籽蛋白的制备方法按以下步骤进行：向反应烧瓶中加入按重量份数计的110-140份pH为11-12的氢氧化钠水溶液和100份棉籽粕粉，搅拌均匀后，置于超声波发生器中进行超声提取，提取结束后，趁热过滤，加入盐酸调节pH为4.5-5，静置10-20min，析出蛋白沉淀，离心分离，干燥后得到浓缩棉籽蛋白。
5.根据权利要求4所述的改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述超声提取温度为55-70℃，超声提取时间为30-60min。
6.根据权利要求1所述的改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述硫酸基海藻多糖的制备方法按以下步骤进行：向反应烧瓶中加入100份海藻粉和80-120份去离子水，搅拌分散均匀，进行水提反应，反应结束后，趁热过滤，收集滤液，滤渣用5-6倍体积的去离子水提取3-8h，合并滤液，减压浓缩，加入乙醇沉淀，过滤，干燥后得到硫酸基海藻多糖。
7.根据权利要求6所述的改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述水提反应温度为75-100℃，水提反应时间为8-16h。
8.根据权利要求1所述的改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述微藻虾青素粉的制备方法按以下步骤进行：向反应烧瓶中加入按重量份数计的100份雨生红球藻粉和150-250份去离子水，在震荡器中震摇20-40min，用质量分数为5-10％的柠檬酸调节pH为4-5，加入1-3份纤维素酶，进行酶解反应，反应结束后，过滤，乙醇提取，提取温度为40-50℃，提取时间为30-60min，合并提取液，减压浓缩，干燥后得到微藻虾青素粉。
9.根据权利要求8所述的改善对虾体色的海藻型饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述酶解反应温度为35-60℃，反应时间为10-25h。
10.一种如权利要求1-9任一项所述的制备方法得到的改善对虾体色的海藻型饲料添加剂在饲料中的应用，其特征在于，所述饲料的制备方法按以下步骤进行：将按重量份数计的15-20份磷虾粉，5-10份鱼粉，10-12份去皮豆粕，8-10份玉米蛋白粉，25-30份小麦粉，3-6份花生粕、1-3份大豆磷脂油，1-2份鱼油，0.5-1份氯化胆碱、1-2份复合矿物、0.2-0.5份复合氨基酸、1-2份磷酸二氢钙和3-15份海藻型饲料添加剂混合均匀，研磨过50-80目筛，加入到双螺杆挤出机中进行挤出，接着在烘箱中于50-65℃熟化30-50min，自然风干后得到改善对虾体色的海藻型饲料。
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