CN117546730A - 一种丛枝菌根真菌的分段扩繁方法 - Google Patents
一种丛枝菌根真菌的分段扩繁方法 Download PDFInfo
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Abstract
本申请属于真菌扩繁技术领域，具体涉及一种丛枝菌根真菌的分段扩繁方法。本申请所述的分段扩繁方法，使用沸石和磷矿粉作为培养基质，显著降低了丛枝菌根真菌培养基质的制备成本，在寄主植物生长阶段、丛枝菌根真菌侵染段、丛枝菌根真菌产孢段添加不同的外源物，或进一步控制每个阶段的湿度，提高寄主植物的根冠比，促进丛枝菌根真菌侵染和产孢，缩短了丛枝菌根真菌菌剂的生产周期，提高了丛枝菌根真菌菌剂的繁殖体，从而高效、低成本地获得了高产量、高质量的丛枝菌根真菌菌剂。
Description
技术领域
本申请属于真菌扩繁技术领域，具体涉及一种丛枝菌根真菌的分段扩繁方法。
背景技术
菌根(mycorrhiza)是自然界中一种普遍的植物共生现象，是土壤中的菌根真菌与高等植物根系形成的一种共生体。丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi，AMF)在自然界中分布广泛，具有非常广泛的寄主，能与多数单、双子叶植物的根系形成互利共生体，是一类广泛定殖在植物根系，对植物生长发育起着重要作用的共生内生真菌。丛枝菌根真菌具有功能多样性，可提高寄主植物对矿质元素的吸收，促进寄主植物的生长发育，改善植物的根际微生物环境，提高寄主植物对干旱、盐碱、极端温度、湿度、重金属的耐受性，并能增强寄主植物对细菌、真菌、线虫等病原微生物的胁迫抗性能力，从而改善寄主植物的生长状况。此外，丛枝菌根真菌能够在减少化肥和农药施用、减少环境污染的同时改善土壤，在维持农业生态平衡中起重要作用。近年来，已有报道，丛枝菌根真菌在改良盐碱、抗病、促生等方面起着显著的作用，且有些相关的机理已被阐明。
因此，将丛枝菌根真菌通过高效的扩繁体系进行标准化、规模化的生产，成为一种新型的微生物肥料具有很高的应用价值；将其制成微生物菌剂成为当前人们研究的热点。
利用温室盆栽的扩繁培养法是目前丛枝菌根真菌菌剂规模化生产的主要方式，操作简单，方法可靠。采用温室盆栽培养时，丛枝菌根真菌生长受寄主植物、扩繁基质、湿度、温度、营养等多种因素的影响，对于不同的寄主植物丛枝菌根真菌的侵染和产孢会产生不同的响应。此外，现在丛枝菌根真菌的生产中存在菌剂生产数量有限、繁殖体数量少、扩繁过程中易污染、菌剂产品质量不稳定等问题，因此，开发一种效率高、操作简单、成本低、科学的，且适用于规模繁育的扩繁方法在生产实践中具有重要作用。
发明内容
本申请的目的在于提供一种可大幅提高丛枝菌根真菌繁殖体的高效分段扩繁方法，对大规模生产丛枝菌根真菌菌剂进行标准化，该方法成本低、产量高，可提供高品质的丛枝菌根真菌菌剂产品。
本申请提供一种丛枝菌根真菌的分段扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1段-寄主植物生长：将寄主植物的种子播种到培养基质中，出苗5-10天后，浇灌吲哚乙酸溶液、矿源黄腐酸钾溶液和Hoagland营养液；
S2段-接种丛枝菌根真菌：待寄主植物长出真叶2-5片后，接种丛枝菌根真菌菌剂；
S3段-丛枝菌根真菌侵染段：接种后，浇灌脱落酸溶液和缺磷的Hoagland营养液；
S4段-丛枝菌根真菌产孢段：接种2-4周后，浇灌黄酮类物质和缺磷的Hoagland营养液；
S5段-丛枝菌根真菌产品收获：接种10-16周后，停止浇灌，至扩繁基质干燥后剪掉地上部分，收获得到丛枝菌根真菌的繁殖体。
本申请收获得到的繁殖体包括植物根系、菌丝、孢子和培养基质。
本申请所述扩繁方法中，S1和S2段中，培养基质的相对湿度为40-60％；S3和S4段中，培养基质的相对湿度为15-30％。
本申请所述扩繁方法，优选采用温室盆栽培养；优选地，培养容器使用前进行消毒处理，更优选地，使用消毒液进行消毒。可使用长方形塑料筐进行扩繁，优选底长为45cm，筐宽为32cm，高度为15cm。本申请扩繁温度为玉米适宜生长温度，采用自然光照射或采用日光灯(如飞利浦36W)补充自然光照；优选地，扩繁日间温度为20-30℃，夜间温度为15-25℃，每天光照培养时间为12-15h；更优选地，扩繁日间温度为25-30℃，夜间温度为20-25℃。
本申请所述寄主植物优选为玉米、高粱。寄主植物种子的播种密度为40-60cm2/颗，优选为45-55cm2/颗，更优选为50cm2/颗，以建立高密度的寄主植物体，提高空间利用率。播种前，将种子进行消毒，清水清洗干净，再用清水浸泡进行催芽处理；优选地，使用10％H2O2消毒10分钟，清水清洗干净，清水浸泡12h进行催芽处理。
本申请扩繁的丛枝菌根真菌优选为异形根孢囊霉(Rhizophagus irregulris)、根内根孢囊霉(Rhizophagus intraradice)、摩西球囊霉(Glomus mosseae)、幼明近套球囊霉(Glomus etunicatum)。
本申请所述培养基质为沸石和磷矿粉的混合基质，优选为沸石和磷矿粉按照体积比6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1的混合基质，优选为不同目数沸石和磷矿粉的混合基质。在一个具体实施方式中，培养基质为20-40目沸石、40-60目沸石、60-80目沸石、和磷矿粉的混合基质，体积比优选为(1-3)：(4-6)：(1-3)：1，更优选为2:5:2:1。本申请所述混合基质成本低，且可以提升培养基质持水能力，缓和湿度变化剧烈程度，延长基质浇水周期等物理特性，有利于菌丝生长、延伸，有利于水气交换，从而为丛枝菌根真菌繁殖提供良好的微环境。优选地，培养基质在使用前进行灭菌处理，更优选地，使用消毒液进行灭菌处理，晾干待用。
在所述S1段，浇灌吲哚乙酸溶液和矿源黄腐酸钾溶液能够促进寄主植物根系的生长，提高根冠比。所述吲哚乙酸溶液、矿源黄腐酸钾溶液和Hoagland营养液，是指重量为培养基质10-20％的含有50μmol/L-100μmol/L吲哚乙酸、0.3％～2wt％矿源黄腐酸钾和20wt％Hoagland营养液的水溶液。
优选，浇灌重量为培养基质15％的水溶液。浇灌的水溶液中吲哚乙酸的浓度优选为50、60、70、80、90、100μmol/L，矿源黄腐酸钾的浓度优选为0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2wt％。
在所述S1段，培养基质的相对湿度控制在40-60％，优选40-50％。
所述Hoagland营养液的具体组成为：硫酸钾607mg/L，磷酸氢二铵115mg/L、硫酸镁493mg/L、EDTA铁钠盐20mg/L、硫酸亚铁2.86mg/L、硼砂4.5mg/L、硫酸锰2.13mg/L、硫酸铜0.05mg/L、硫酸锌0.22mg/L、硫酸铵0.02mg/L，硝酸钙0.945g/L，其余成分为水，总体积为1L。
所述S1段中，所述浇灌是指：(1)浇灌吲哚乙酸溶液、矿源黄腐酸钾溶液和Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(2)在培养基质相对湿度低于40％后，再次浇灌吲哚乙酸溶液、矿源黄腐酸钾溶液和Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(3)视需要重复步骤(2)。
在所述S2段，在寄主植物长出真叶3-4片后，接种丛枝菌根真菌菌剂。优选地，接种培养基质1-2wt％的丛枝菌根真菌菌剂，菌剂繁殖体数大于70个/mL。
在所述S3段，浇灌脱落酸溶液能够促进丛枝菌根真菌侵染率。所述脱落酸溶液和缺磷的Hoagland营养液，是指重量为培养基质10-20％的含有50μmol/L-100μmol/L脱落酸和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液。
优选，浇灌重量为培养基质15％的水溶液。浇灌的水溶液中脱落酸的浓度优选为50、60、70、80、90、100μmol/L。
在所述S3段，培养基质的相对湿度控制在15-30％，优选15-25％。
所述S3段中，所述浇灌是指：(1)浇灌脱落酸溶液和缺磷的Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌脱落酸溶液和缺磷的Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)。
在所述S4段，浇灌黄酮类物质能够促进丛枝菌根真菌孢子的产生。所述黄酮类物质和缺磷的Hoagland营养液，是指重量为培养基质10-20％的含有100nM-200nM黄酮类物质和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液。
优选，浇灌重量为培养基质15％的水溶液。浇灌的水溶液中黄酮类物质的浓度优选为100、120、150、180、200nM。
在所述S4段，培养基质的相对湿度控制在15-30％，优选15-25％。
所述S4段中，所述浇灌是指：(1)浇灌黄酮类物质和缺磷的Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌黄酮类物质和缺磷的Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)。
所述S3、S4段中，所述缺磷的Hoagland营养液的组成为：硫酸钾607mg/L，磷酸氢二铵115mg/L、硫酸镁493mg/L、EDTA铁钠盐20mg/L、硫酸亚铁2.86mg/L、硼砂4.5mg/L、硫酸锰2.13mg/L、硫酸铜0.05mg/L、硫酸锌0.22mg/L、硫酸铵0.02mg/L，硝酸钙0.945g/L，其余成分为水，总体积为1L。
在所述S5段，在停止浇罐后，将其放置在温度、湿度相对稳定的环境下干燥1-2周，待扩繁基质完全干燥后去掉地上部，收获得到丛枝菌根的繁殖体。
在一种实施方式中，本申请所述的分段扩繁方法，包括以下步骤：
S1段-寄主植物生长：将寄主植物玉米的种子以40-60cm2/颗的播种密度播种到培养基质中，出苗1周后，(1)浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L吲哚乙酸、0.3％～2wt％矿源黄腐酸钾和20wt％Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(2)在培养基质相对湿度低于40％后，再次浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L吲哚乙酸、0.3％～2wt％矿源黄腐酸钾和20wt％Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(3)视需要重复步骤(2)；
S2段-接种丛枝菌根真菌：待寄主植物长出真叶3-4片后，接种丛枝菌根真菌菌剂；
S3段-丛枝菌根真菌侵染段：接种后，(1)浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L脱落酸和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L脱落酸和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)；
S4段-丛枝菌根真菌产孢段：接种2-4周后，(1)浇灌重量为培养基质15％的含有100nM-200nM黄酮类物质和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌重量为培养基质15％的含有100nM-200nM黄酮类物质和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)；
S5段-产品收获：接种丛枝菌根真菌菌种10-16周后，停止浇灌，将其放置在温度、湿度相对稳定的环境下干燥1-2周，至扩繁基质干燥后剪掉地上部分，收获得到丛枝菌根真菌的繁殖体；
所述方法的扩繁温度为玉米适宜生长温度，采用自然光照射或采用日光灯补充自然光照；优选地，扩繁日间温度为20-30℃，夜间温度为15-25℃，每天光照培养时间为12-15h；更优选日间温度为25-30℃，夜间温度为20-25℃；
所述培养基质为20-40目沸石、40-60目沸石、60-80目沸石、和磷矿粉体积比为2:5:2:1的混合基质。
本申请所述的扩繁方法中，在寄主植物生长至花粒期阶段，进行去头处理，可以改变植物的根冠比，抑制寄主植物的高度，调控营养生长，抑制生殖生长，减少生殖生长对植物营养的消耗。
本申请所述的浇灌，优选为根施法浇灌。
本申请所述的扩繁方法，可以在产孢段随机取寄主植物根系和混合扩繁基质，检测丛枝菌根真菌的侵染和产孢效果。如分别在接种丛枝菌根真菌菌种第6周、10周、15周随机取寄主植物根系和混合扩繁基质，检测丛枝菌根真菌的侵染和产孢效果。
本申请，采用phillips和Haymann曲利苯蓝染色法测定侵染率；采用湿筛倾析技术并结合糖离心法测定产孢量。
本申请中所述的浇灌的水溶液、丛枝菌根真菌菌剂接种量均是指与播种前培养基质的比例。
与现在技术相比，本申请有如下有益效果：
本申请所述的分段扩繁方法，缩短了菌剂的生产周期，可以低成本、高效地获得高产量、高品质的丛枝菌根真菌菌剂产品，菌剂中繁殖体可高达1000个/mL以上。
1.本申请采用分段扩繁方法，在寄主植物生长段、丛枝菌根真菌侵染段和产孢段添加不同的外源物质，以促进各阶段中寄主植物根系的生长、丛枝菌根真菌的侵染和产孢，提高真菌菌剂中的孢子含量，提高产品质量。
2.本申请使用沸石和磷矿粉的混合基质，一方面成本低，另一方面可提高持水能力，缓和湿度变化剧烈程度，延长浇水周期，有利于菌丝生长、延伸。
3.本申请进一步通过控制各阶段如寄主植物生长段、丛枝菌根真菌侵染段和产孢段的湿度等，更能促进寄主植物根系的生长以及丛枝菌根真菌的侵染和产孢，有利于高效地获得高产量、高品质的菌剂产品。
具体实施方式
以下对本申请的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本申请，并不用于限制本申请。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本申请的术语“包括”和“包含”以及它们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1：
采用温室盆栽扩繁，培养温度为日间温度为25℃～30℃，夜间温度为20-25℃，在整个培养期间，采用自然光照或视需要补充日光灯(飞利浦36W)照射，每天光照培养时间为12-15h。
培养容器使用前用消毒液对培养容器进行消毒。培养容器为长方形塑料筐，筐底长为45cm，筐宽为32cm，高度为15cm。
培养基质为20-40目的沸石、40-60目的沸石、60-80目的沸石、磷矿粉按照体积比2:5:2：1混合得到的混合基质。使用前用消毒液消毒，晾干。在培养容器中装入2/3体积的培养基质。
将玉米种子在播种前用10％ H2O2消毒10min后，清水清洗干净，再用清水浸泡12h待用。
S1段-寄主植物生长段：将28颗玉米种子均匀播种到培养基质中，出苗1周后，(1)浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L吲哚乙酸、0.3％～2wt％矿源黄腐酸钾和20wt％Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(2)在培养基质相对湿度低于40％后，再次浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L吲哚乙酸、0.3％～2wt％矿源黄腐酸钾和20wt％Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(3)视需要重复步骤(2)；
S2段-接种丛枝菌根真菌菌种：待玉米长出真叶3-4片后，接种异形根孢囊霉(Rhizophagus irregulris)商品化菌剂，接种量为培养基质的1wt％，菌剂繁殖体数大于70个/mL；
S3段-丛枝菌根真菌侵染段：接种，(1)浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L脱落酸和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L脱落酸和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)；
S4-丛枝菌根真菌产孢段：接种2周后，(1)浇灌重量为培养基质15％的含有100nM-200nM黄酮类物质和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌重量为培养基质15％的含有100nM-200nM黄酮类物质和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)；
S5-丛枝菌根真菌产品收获：在玉米生长15周后，停止浇灌，至扩繁基质干燥后剪掉地上部分，约1周后收获得到丛枝菌根真菌的繁殖体(包括植物根系、菌丝、孢子和基质)。
产品质检：分别在接种丛枝菌根真菌菌种第6周、10周、15周随机取寄主植物根系和混合扩繁基质，检测丛枝菌根真菌的侵染和产孢效果。采用phillips和Haymann曲利苯蓝染色法测定侵染率；采用湿筛倾析技术并结合糖离心法测定产孢量。
实施例2：在温室中扩繁根内根孢囊霉(Rhizophagus intraradice)、摩西球囊霉(Glomus mosseae)，扩繁具体实施方式同实施例1。
对比例1-1：
在温室中扩繁异形根孢囊霉(Rhizophagus irregulris)，与实施例1不同的S1段-寄主植生长段未添加吲哚乙酸，其余扩繁和管理方式同实施例1。
对比例1-2：
在温室中扩繁异形根孢囊霉(Rhizophagus irregulris)，与实施例1不同的S3段-侵染段未添加脱落酸溶液，其余扩繁和管理方式同实施例1。
对比例1-3：
在温室中扩繁异形根孢囊霉(Rhizophagus irregulris)，与实施例1不同的是步骤S4-产孢段中未加入黄酮类物质，其余扩繁和管理方式同实施例1。
对比例1-4：
在温室中扩繁异形根孢囊霉(Rhizophagus irregulris)，与实施例1不同的是控制步骤S1-寄主植物生长段的培养基质相对湿度为15％～20％，其余扩繁和管理方式同实施例1。
结果分析：
每段不同处理对丛枝菌根真菌侵染的影响：
分别按照实施例1、对比例1-1、对比例1-2、对比例1-3、对比例1-4的方法培养6周、10周、15周后取玉米根系和扩繁基质，检测侵染和产孢效果，异形根孢囊霉侵染效果测定结果如表1所示。异形根孢囊霉产孢效果测定结果如表2所示。
表1：异形根孢囊霉侵染效果测定结果
由上述表1数据可得，实施例1、对比例1-1、对比例1-2、对比例1-3、对比例1-4在第6周时，侵染率分别为48.78％、33.13％、28.56％、38.77％、31.27；在第10周时，侵染率分别达到76.87％、57.37、48.44、55.22、50.89，在第15周时，侵染率分别达到91.62％、72.43％、58.74％、69.62、61.82％，实施例1与其他对比例存在显著差异。
每段不同处理对丛枝菌根真菌孢子数的影响：
表2：异形根孢囊霉扩繁基质中孢子数测定结果
由上述表2数据可得，实施例1、对比例1-1、对比例1-2、对比例1-3、对比例1-4在第6周时，扩繁基质中的孢子数分别为234个、119个、108个、98个、102个；在第10周时，扩繁基质中的孢子数分别为508个、234个、255个、212个、187个，在第15周时，扩繁基质中的孢子数分别为982个、327个、301个、289个、277个，实施例1与其他对比例存在显著差异。
同一条件对不同丛枝菌根真菌生长的影响
表3：同一条件下不同丛枝菌根真菌侵染率和产孢数的测定结果
由上述表3数据可得：利用本发明提供的分段扩繁方法培养异性根孢囊霉(Rhizophagus irregulris)、根内根孢囊霉(Rhizophagus intraradice)和摩西球囊霉(Glomus mosseae)，每种菌种的侵染率和产孢数均很高。
由上述结果可见，实施例1为本发明提供的最佳的分段扩繁方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，应当指出，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进、替代、组合，这些改进、替代、组合也应视为本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本申请对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本申请的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本申请的思想，其同样应当视为本申请所公开的内容。
Claims (18)
1.一种丛枝菌根真菌的分段扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1段-寄主植物生长：将寄主植物的种子播种到培养基质中，出苗5-10天后，浇灌吲哚乙酸溶液、矿源黄腐酸钾溶液和Hoagland营养液；
S2段-接种丛枝菌根真菌：待寄主植物长出真叶2-5片后，接种丛枝菌根真菌菌剂；
S3段-丛枝菌根真菌侵染段：接种后，浇灌脱落酸溶液和缺磷的Hoagland营养液；
S4段-丛枝菌根真菌产孢段：接种2-4周后，浇灌黄酮类物质和缺磷的Hoagland营养液；
S5段-丛枝菌根真菌产品收获：接种丛枝菌根真菌菌种10-16周后，停止浇灌，至扩繁基质干燥后剪掉地上部分，收获得到丛枝菌根真菌的繁殖体。
2.根据权利要求1所述的分段扩繁方法，其特征在于，S1和S2段中，培养基质的相对湿度为40-60％；S3和S4段中，培养基质的相对湿度为15-30％。
3.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，扩繁温度为玉米适宜生长温度，采用自然光照射或采用日光灯补充自然光照；优选地，扩繁日间温度为20-30℃，夜间温度为15-25℃，每天光照培养时间为12-15h。
4.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，所述寄主植物为玉米、高粱。
5.根据权利要求4所述的分段扩繁方法，其特征在于，S1段中种子的播种密度为40-60cm2/颗，优选为45-55cm2/颗，更优选为50cm2/颗。
6.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，所述丛枝菌根真菌为异形根孢囊霉Rhizophagus irregulris、根内根孢囊霉Rhizophagus intraradice、摩西球囊霉Glomus mosseae、或幼明近套球囊霉Glomus etunicatum。
7.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，所述培养基质为沸石和磷矿粉的混合基质，优选为不同目数沸石和磷矿粉的混合基质。
8.根据权利要求7所述的分段扩繁方法，其特征在于，所述培养基质为20-40目沸石、40-60目沸石、60-80目沸石、和磷矿粉的混合基质；优选地，培养基质为20-40目沸石、40-60目沸石、60-80目沸石、和磷矿粉体积比为(1-3)：(4-6)：(1-3)：1的混合基质，体积比更优选为2:5:2:1。
9.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，S1段中，所述吲哚乙酸溶液、矿源黄腐酸钾溶液和Hoagland营养液，是指重量为培养基质10-20％的含有50μmol/L-100μmol/L吲哚乙酸、0.3％～2wt％矿源黄腐酸钾和20wt％Hoagland营养液的水溶液。
10.根据权利要求9所述的分段扩繁方法，其特征在于，S1段中，所述浇灌是指：(1)浇灌吲哚乙酸溶液、矿源黄腐酸钾溶液和Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(2)在培养基质相对湿度低于40％后，再次浇灌吲哚乙酸溶液、矿源黄腐酸钾溶液和Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(3)视需要重复步骤(2)。
11.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，S2段中，接种培养基质1-2wt％的丛枝菌根真菌菌剂，菌剂繁殖体数大于70个/mL。
12.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，S3段中，所述脱落酸溶液和缺磷的Hoagland营养液，是指重量为培养基质10-20％的含有50μmol/L-100μmol/L脱落酸和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液。
13.根据权利要求12所述的分段扩繁方法，其特征在于，S3段中，所述浇灌是指：(1)浇灌脱落酸溶液和缺磷的Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌脱落酸溶液和缺磷的Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)。
14.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，S4段中，所述黄酮类物质和缺磷的Hoagland营养液，是指重量为培养基质10-20％的含有100nM-200nM黄酮类物质和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液。
15.根据权利要求14所述的分段扩繁方法，其特征在于，S4段中，所述浇灌是指：(1)浇灌黄酮类物质和缺磷的Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌黄酮类物质和缺磷的Hoagland营养液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)。
16.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，S5段中，在停止浇罐后，将其放置在温度、湿度相对稳定的环境下干燥1-2周。
17.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，在寄主植物生长至花粒期阶段，进行去头处理。
18.根据权利要求1或2所述的分段扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1段-寄主植物生长：将寄主植物玉米的种子以40-60cm2/颗的播种密度播种到培养基质中，出苗1周后，(1)浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L吲哚乙酸、0.3％～2wt％矿源黄腐酸钾和20wt％Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(2)在培养基质相对湿度低于40％后，再次浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L吲哚乙酸、0.3％～2wt％矿源黄腐酸钾和20wt％Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为40-60％；(3)视需要重复步骤(2)；
S2段-接种丛枝菌根真菌：待寄主植物长出真叶3-4片后，接种丛枝菌根真菌菌剂；
S3段-丛枝菌根真菌侵染段：接种后，(1)浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L脱落酸和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌重量为培养基质15％的含有50μmol/L-100μmol/L脱落酸和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)；
S4段-丛枝菌根真菌产孢段：接种2-4周后，(1)浇灌重量为培养基质15％的含有100nM-200nM黄酮类物质和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(2)在培养基质相对湿度低于15％时，再次浇灌重量为培养基质15％的含有100nM-200nM黄酮类物质和20％缺磷的Hoagland营养液的水溶液，并视需要补浇水以控制培养基质的相对湿度为15-30％；(3)视需要重复步骤(2)；
S5段-产品收获：接种丛枝菌根真菌菌种10-16周后，停止浇灌，将其放置在温度、湿度相对稳定的环境下干燥1-2周，至扩繁基质干燥后剪掉地上部分，收获得到丛枝菌根真菌的繁殖体；
所述方法的扩繁温度为玉米适宜生长温度，采用自然光照射或采用日光灯补充自然光照；优选地，扩繁日间温度为20-30℃，夜间温度为15-25℃，每天光照培养时间为12-15h；
所述培养基质为20-40目沸石、40-60目沸石、60-80目沸石、和磷矿粉体积比为2:5:2:1的混合基质。
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