CN117482031A - 一种紧致抗皱精华液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种紧致抗皱精华液及其制备方法，涉及化妆品技术领域，其包括以下组分：丁二醇3‑10％；1,2‑己二醇0.4‑4％；皮肤调理剂Ⅰ3‑8％；保湿剂1‑6％；抗氧化剂0.3‑4％；螯合剂0.01‑0.2％；润肤剂22‑70％；水余量。本发明具有渗透性好，易吸收，有效补水保湿，修复皮肤皱纹，抑制皱纹再生，延缓皮肤衰老、抗皱的作用。

Description

一种紧致抗皱精华液及其制备方法

技术领域

本发明涉及化妆品的技术领域，尤其是涉及一种紧致抗皱精华液及其制备方法。

背景技术

青春期是人一生中最俊美靓丽的时期，此时皮肤柔滑、光泽、丰满、富有弹性、白里透红。到了25岁以后，新陈代谢开始减慢，水分和皮下脂肪减少，弹性纤维逐渐变粗，皮肤变皱、光泽消退。40岁以后，体内激素平衡失调，角蛋白降低，弹性纤维断裂，皮肤松弛、粗糙、皱纹增多，逐渐进入老化期。皮肤老化是整个机体衰老的突出表现，其中脸部皮肤老化尤为明显，人体内成纤维细胞的数量逐渐减少，其分泌的胶原蛋白和弹力纤维蛋白也因为被氧化逐渐减少、断裂，对表皮的支撑作用就消失，造成不均一的塌陷，真皮层开始变薄，皮肤弹性变差，皱纹也开始逐渐产生。

皮肤老化除了受年龄、遗传等客观因素影响外，还受日光、环境、健康等多种因素影响。过分日晒或暴晒，不但加速皮肤老化，还易产生色素斑；长期生活在污染严重的环境中或过多接触对皮肤有害的化学物质，都会使皮肤受损，加速老化；营养不良、精神不振、疾病缠身，皮肤更易过早老化。

虽然皮肤老化是不可逆的生理现象，但其进程却可以延缓或减慢。针对脸部皱纹，常见的祛皱方法为手术除皱、注射祛皱和抗皱化妆品。手术除皱和注射祛皱的治疗成本高、风险大，并不是每一位消费者都可以承受，而抗皱化妆品是一个很好的选择。抗皱化妆品又分为抗皱面膜、洁面乳，抗皱爽肤水、面霜、精华液等多种，抗皱面膜、洁面乳在脸部的停留时间短，效果不明显，需要长期使用，且使用过程也不方便；抗皱爽肤水、面霜中活性成分的含量相对较低，其抗皱效果也不明显，而精华液含有的营养物质和活性成分较爽肤水、面霜要高更多，其功效强大，抗皱效果显著，但是目前的精华液普遍存在渗透性差、不易吸收等问题，且抗皱效果还有待提高。

因此，有必要研发一种其渗透性好，易吸收，有效补水保湿，修复皮肤皱纹，抑制皱纹再生，延缓皮肤衰老抗皱精华液。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的一种紧致抗皱精华液及其制备方法，具有渗透性好，易吸收，有效补水保湿，修复皮肤皱纹，抑制皱纹再生，延缓皮肤衰老、抗皱的作用。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种紧致抗皱精华液，其特征在于：包括以下组分：

通过采用上述技术方案，丁二醇与1,2-己二醇不仅具有较好的保湿效果，而且丁二醇能与水及其他有机溶剂互溶，在体系中能作为一种较好的溶剂，帮助一些难溶的活性物质溶解在体系中，进而帮助活性物质起到较好的效果；通过皮肤调理剂Ⅰ、保湿剂、抗氧化剂和润肤剂的共同作用对皮肤进行改善，修复皮肤皱纹、抑制皱纹再生，延缓皮肤衰老、抗皱的作用。

优选地，所述润肤剂包括异壬酸异壬酯、霍霍巴籽油、山茶籽油、辛酸/癸酸甘油三酯。

通过采用上述技术方案，异壬酸异壬酯属于合成酯，添加该成分的产品会较易涂抹，有干爽和极度柔软的手感，是极佳的柔润剂，并且异壬酸异壬酯在霍霍巴籽油、山茶籽油、辛酸/癸酸甘油三酯、丁二醇与1,2-己二醇中具有较好的稳定性。霍霍巴籽油不易被氧化，耐高温、高压、黏度变化小，其触觉和延展性也比其他植物油好，对皮肤有柔软弹性感，且易被皮肤吸收。山茶籽油含多种不饱和脂肪酸，皮肤相容性好，茶多酚、山茶芝素、茶皂醇等成分，维生素E含量极高。辛酸/癸酸甘油三酯它和人体皮肤有兼容的特征，它有着不油腻质感，加入乳霜或乳液中可改进其延伸性，有润滑和使肌肤柔软的效果并有过滤紫外光的功能、促进渗透的作用。

优选地，所述皮肤调理剂Ⅰ包括以下组分：胶原、1,2-己二醇、1,2-戊二醇和水。

通过采用上述技术方案，1,2-己二醇、1,2-戊二醇溶解难溶的胶原，性能优异的保湿剂，同时具有防腐作用。胶原蛋白具有美容、防皱、保湿的作用，是由三条肽链拧成的螺旋形纤维状蛋白质，在本申请体系中的稳定性较好。

优选地，所述紧致抗皱精华液还包括1-6％皮肤调理剂Ⅱ，所述皮肤调理剂Ⅱ包括以下组分：丁二醇、甘油、金黄洋甘菊提取物、香叶天竺葵提取物、田野薄荷叶提取物、马齿苋提取物、库拉索芦荟提取物、苦参根提取物、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮。

通过采用上述技术方案，甘油具有较好的保湿作用，与水及其他有机溶剂的混溶效果好。金黄洋甘菊提取物具有抗氧化、舒敏、抗炎的效果。香叶天竺葵提取物具有抗菌作用和玫瑰的香味。田野薄荷叶提取物能够改善气味，给人清凉感。具有收缩毛孔，排除体内毒素，舒缓发痒，柔软皮肤，消除粉刺黑头。马齿苋提取物有抗氧化的作用；也有良好的皮肤保湿性。库拉索芦荟提取物对胶原蛋白的合成以及对自由基的清除作用，有很好的活肤、抗老化作用，并且能对本申请中加入的胶原具有较好的保护作用，也能进一步促进胶原的吸收利用。苦参根提取物对胶原蛋白生产具有促进作用，并且能对本申请中加入的胶原具有较好的保护作用，对成纤维细胞的增殖也有促进作用，可用作皮肤抗衰老；同时具有保湿的功效。对羟基苯乙酮具有抗氧化和舒缓作用的多功能化妆品成分。金黄洋甘菊提取物、香叶天竺葵提取物、田野薄荷叶提取物、马齿苋提取物、库拉索芦荟提取物、苦参根提取物、对羟基苯乙酮、1,2-己二醇、1,2-戊二醇共同配合具有较好的防腐抗菌效果，能替代传统的防腐剂，减小对皮肤的刺激和影响。同时金黄洋甘菊提取物、香叶天竺葵提取物、田野薄荷叶提取物、马齿苋提取物、库拉索芦荟提取物、苦参根提取物也能提供令人舒适的香味。

优选地，所述紧致抗皱精华液还包括0.01-0.2％皮肤调理剂Ⅲ，所述皮肤调理剂Ⅲ包括以下组分：珍珠母提取物和水。

通过采用上述技术方案，珍珠母提取物给肌肤补充营养、有效改善皱纹、塑造干净的弹润美肌，并且能在一定程度上能对本申请中加入的胶原具有较好的保护作用。

优选地，所述紧致抗皱精华液还包括1-5％皮肤调理剂Ⅳ，所述皮肤调理剂Ⅳ包括以下组分：稻胚芽油、蜂生假丝酵母/葡萄糖/油菜籽油酸甲酯发酵产物、姜黄根提取物。

通过采用上述技术方案，稻胚芽油对胆固醇和神经酰胺的生成有促进作用，胆固醇和神经酰胺是皮脂的重要组成部分，他们含量的增多有助于提高皮肤的柔润度，因此具有调理的作用；对谷胱甘肽还原酶有活化的作用，结合它的抗氧化性，具有活肤作用，可用于抗衰老。蜂生假丝酵母/葡萄糖/油菜籽油酸甲酯发酵产物富含多种蛋白质和维生素。并且稻胚芽油、蜂生假丝酵母/葡萄糖/油菜籽油酸甲酯发酵产物、姜黄根提取物结合于本体系中配合后具有更好的抗菌防腐效果。

优选地，所述紧致抗皱精华液还包括以下组分：

通过采用上述技术方案，甜菜碱有优秀的保湿能力，并且使用时没有黏糊糊的感觉。使用后能使面部更光滑，并且它和本申请中的具有抗菌舒敏抗氧化的其他成分结合还能用于减轻皮肤过敏，是理想的镇静保湿剂。也能平衡细胞渗透压，在肌肤遭遇恶劣环境，细胞渗透压失衡、细胞失水时协助细胞回复平衡和保湿状态。二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐是一种模拟蛇毒血清的合成胜肽，可阻止乙酰胆碱的神经传导，达到放松肌肉的效果，从而改善动态性皱纹。肌肽不仅是营养剂，同时又能促进细胞的新陈代谢，延缓衰老，并且能有效防止本申请中胶原的氧化，对其起到较好的保护作用，也具有较好的促进渗透吸收作用。乙酰基六肽-8是一种生物活性多肽，该成分既可减少已有的面部皱纹，又可有效防止新的皱纹产生。通过抑制神经传导素乙酰胆碱(acetylcholine)的释放，来减少肌肉的收缩，从而达到减少动态纹、表情纹的产生。四氢甲基嘧啶羧酸对细胞在逆环境中有稳定性的保护作用，也能稳定生物体内酶蛋白的结构，有活肤抗衰的功能；可提供良好的保湿和防晒功能，并有美白皮肤的作用；四氢甲基嘧啶羧酸也有抗炎作用。泛醇又称维生素原B5，主要用作保湿剂和皮肤调理剂，与蜂生假丝酵母/葡萄糖/油菜籽油酸甲酯发酵产物中提供的维生素B6一起使用，经皮肤吸收后可增加皮肤中透明质酸含量，促进人体蛋白质、脂肪、糖类的代谢，保护皮肤和黏膜，防治小皱纹，炎症、日晒，是不黏腻的保湿成分，具有强效保湿效果，且与皮肤皮脂膜相近，易于吸收渗透及浸润肌肤表面的角质层，使肌肤柔软，有效预防肌肤粗糙现象，达到肌肤保湿与组织修复的功效，给予皮肤光泽。

优选地，所述紧致抗皱精华液还包括以下组分：

银耳多糖 0.01-0.2％；

透明质酸钠 0.01-0.2％。

通过采用上述技术方案，银耳多糖是一种植物源性类透明质酸物质，是一种高效保湿剂。并且可以提高化妆品的稳定性，降低界面张力。透明质酸钠在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂，与本申请中其他营养成分配合使用，可以起到促进营养吸收的更理想效果。

优选地，所述紧致抗皱精华液还包括以下组分：

泛醌 0.1-0.5％；

白花春黄菊花油 0.01％-0.5％。

通过采用上述技术方案，泛醌对于预防光老化和皱纹有很好效果，特别是眼部的鱼尾纹。其作用机理为：参与细胞的基本生化反应，主要作用于氧化磷酸化反应中的电子传导，其分子中的苯醌结构能可逆地加氢还原而形成对苯二酚的衍生物，是生物氧化反应中的一种“递氢体”辅酶，主要能提高皮肤的生物利用率。泛醌遇光易分解，如波长为360nm的紫外线或透进玻璃的光，颜色就会变深，本申请中辛酸/癸酸甘油三酯具有过滤紫外线的作用，能在一定程度上保护泛醌。

根据权利要求1-9任一所述的紧致抗皱精华液的制备方法，包括以下步骤：

S1：将A相加入乳锅搅拌升温至85-90度，均质3分钟至无颗粒，搅拌保温20分钟；

S2：降温至42度将B相加入乳化锅搅拌均匀，再加入C相(单独溶解好)搅拌均匀；

S3：降温至38℃，检验合格后，进行灌装；

其中，A相为水、丁二醇、保湿剂、1,2-己二醇、抗氧化剂、螯合剂、银耳多糖、透明质酸钠；B相为皮肤调理剂Ⅰ、皮肤调理剂Ⅱ、皮肤调理剂Ⅲ、甜菜碱、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、肌肽、乙酰基六肽-8、四氢甲基嘧啶羧酸、泛醇；C相为润肤剂、皮肤调理剂Ⅳ、泛醌、白花春黄菊花油。

通过采用上述技术方案，采用上述制备方法能较好地将各组分进行融合，形成稳定的精华液体系，进而保证精华液中各组分的功效。

综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：

1.丁二醇与1,2-己二醇不仅具有较好的保湿效果，而且丁二醇能与水及其他有机溶剂互溶，在体系中能作为一种较好的溶剂，帮助一些难溶的活性物质溶解在体系中，进而帮助活性物质起到较好的效果；通过皮肤调理剂Ⅰ、保湿剂、抗氧化剂和润肤剂的共同作用对皮肤进行改善，修复皮肤皱纹、抑制皱纹再生，延缓皮肤衰老、抗皱的作用；

2.金黄洋甘菊提取物、香叶天竺葵提取物、田野薄荷叶提取物、马齿苋提取物、库拉索芦荟提取物、苦参根提取物、对羟基苯乙酮、1,2-己二醇、1,2-戊二醇共同配合具有较好的防腐抗菌效果，能替代传统的防腐剂，减小对皮肤的刺激和影响；

3.同时金黄洋甘菊提取物、香叶天竺葵提取物、田野薄荷叶提取物、马齿苋提取物、库拉索芦荟提取物、苦参根提取物也能提供令人舒适的香味。

附图说明

图1为实施例1抗皱紧致效果的测试过程流程图；

具体实施方式

以下对本发明作进一步详细说明。

本申请所用的试剂除水外均为市售采购所得。

润肤剂的制备例

制备例1-3

质量百分比(％)	制备例1	制备例2	制备例3
				异壬酸异壬酯	50	60	70
霍霍巴籽油	30	25	20
				山茶籽油	15	9	3
辛酸/葵酸甘油三酯	5	6	7

皮肤调理剂Ⅰ的制备例

制备例4-6

质量百分比(％)	制备例4	制备例5	制备例6
				胶原	20	25	30
1,2-己二醇	10	15	20
				1,2-戊二醇	10	15	20
水	余量	余量	余量

皮肤调理剂Ⅱ的制备例

制备例7-9

皮肤调理剂Ⅲ的制备例

制备例10-12

质量百分比(％)	制备例10	制备例11	制备例12
				珍珠母提取物	5	10	15
水	95	90	85

皮肤调理剂Ⅳ的制备例

制备例13-15

保湿剂的制备例

制备例16-18

质量百分比(％)	制备例16	制备例17	制备例18
				甘油	30	35	40
水	70	65	60

紧致抗皱精华液的实施例

实施例1

S1：将A相加入乳锅搅拌升温至85-90度，均质3分钟至无颗粒，搅拌保温20分钟

S2：降温至42度将B相加入乳化锅搅拌均匀，再加入C相(单独溶解好)搅拌均匀；

S3：降温至38℃，检验合格后，进行灌装；

其中，A相为水、丁二醇、保湿剂(选自制备例16中制备得到的保湿剂)、1,2-己二醇、抗氧化剂(选用对羟基苯乙酮)、螯合剂(选用EDTA二钠)、银耳多糖、透明质酸钠；B相为皮肤调理剂Ⅰ(选用制备例4制备得到的皮肤调理剂Ⅰ)、皮肤调理剂Ⅱ(选用制备例7制备得到的皮肤调理剂Ⅱ)、皮肤调理剂Ⅲ(选用制备例10制备得到的皮肤调理剂Ⅲ)、甜菜碱、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、肌肽、乙酰基六肽-8、四氢甲基嘧啶羧酸、泛醇；C相为润肤剂(选用制备例1得到的润肤剂)、皮肤调理剂Ⅳ(选用制备例13制备得到的皮肤调理剂Ⅳ)、泛醌、白花春黄菊花油。以上各组分的质量百分比如下：

丁二醇7％；1,2-己二醇2％；皮肤调理剂Ⅰ6％；保湿剂4％；抗氧化剂2％；螯合剂0.1％；润肤剂46％；甜菜碱2.5％；二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐0.005％；肌肽0.6％；乙酰基六肽-8 0.005％；四氢甲基嘧啶羧酸1.6％；泛醇0.5％；银耳多糖0.1％；透明质酸钠0.1％；泛醌0.3％；白花春黄菊花油0.25％；水余量。

实施例2-3

实施例2-3与实施例1的区别在于丁二醇含量不同，实施例2中丁二醇的质量百分比为3％，实施例3中丁二醇的质量百分比为10％。

实施例4-5

实施例4-5与实施例1的区别在于1,2-己二醇含量不同，实施例4中1,2-己二醇的质量百分比为0.4％，实施例5中1,2-己二醇的质量百分比为4％。

实施例6-7

实施例6-7与实施例1的区别在于皮肤调理剂Ⅰ含量不同，实施例6中皮肤调理剂Ⅰ的质量百分比为3％，实施例7中皮肤调理剂Ⅰ的质量百分比为8％。

实施例8-9

实施例8-9与实施例1的区别在于保湿剂含量不同，实施例8中保湿剂的质量百分比为1％，实施例9中保湿剂的质量百分比为6％。

实施例10-11

实施例10-11与实施例1的区别在于抗氧化剂含量不同，实施例10中抗氧化剂的质量百分比为0.3％，实施例11中抗氧化剂的质量百分比为4％。

实施例12-13

实施例12-13与实施例1的区别在于螯合剂含量不同，实施例12中螯合剂的质量百分比为0.01％，实施例13中螯合剂的质量百分比为0.2％。

实施例14-15

实施例14-15与实施例1的区别在于润肤剂含量不同，实施例14中润肤剂的质量百分比为22％，实施例15中润肤剂的质量百分比为70％。

实施例16-17

实施例16-17与实施例1的区别在于甜菜碱含量不同，实施例16中甜菜碱的质量百分比为0.5％，实施例17中甜菜碱的质量百分比为5％。

实施例18-19

实施例18-19与实施例1的区别在于二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐含量不同，实施例18中二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量百分比为0.0001％，实施例19中二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的质量百分比为0.01％。

实施例20-21

实施例20-21与实施例1的区别在于肌肽含量不同，实施例20中肌肽的质量百分比为0.3％，实施例21中肌肽的质量百分比为1％。

实施例22-23

实施例22-23与实施例1的区别在于乙酰基六肽-8含量不同，实施例22中乙酰基六肽-8的质量百分比为0.0001％，实施例23中乙酰基六肽-8的质量百分比为0.01％。

实施例24-25

实施例24-25与实施例1的区别在于四氢甲基嘧啶羧酸含量不同，实施例24中四氢甲基嘧啶羧酸的质量百分比为0.3％，实施例25中四氢甲基嘧啶羧酸的质量百分比3％。

实施例26-27

实施例26-27与实施例1的区别在于泛醇含量不同，实施例26中泛醇的质量百分比为0.1％，实施例27中泛醇的质量百分比为1％.

实施例28-29

实施例28-29与实施例1的区别在于银耳多糖含量不同，实施例28中银耳多糖的质量百分比为0.01％，实施例29中银耳多糖的质量百分比为0.2％。

实施例30-31

实施例30-31与实施例1的区别在于透明质酸钠含量不同，实施例30中透明质酸钠的质量百分比为0.01％，实施例31中透明质酸钠的质量百分比为0.2％。

实施例32-33

实施例32-33与实施例1的区别在于泛醌含量不同，实施例32中泛醌的质量百分比为0.1％，实施例33中泛醌的质量百分比为0.5％。

实施例34-35

实施例34-35与实施例1的区别在于白花春黄菊花油含量不同，实施例34中白花春黄菊花油的质量百分比为0.01％，实施例35中白花春黄菊花油的质量百分比为0.5％。

实施例36-37

实施例36-37与实施例1的区别在于使用的润肤剂不同，实施例36中使用的润肤剂为制备例2制备所得，实施例37中使用的润肤剂为制备例2制备所得。

实施例38-39

实施例38-39与实施例1的区别在于使用的皮肤调理剂Ⅰ不同，实施例38中使用的皮肤调理剂Ⅰ为制备例5制备所得，实施例39中使用的皮肤调理剂Ⅰ为制备例6制备所得。

实施例40-41

实施例40-41与实施例1的区别在于使用的皮肤调理剂Ⅱ不同，实施例40中使用的皮肤调理剂Ⅱ为制备例8制备所得，实施例41中使用的皮肤调理剂Ⅱ位制备例9制备所得。

实施例42-43

实施例42-43与实施例1的区别在于使用的皮肤调理剂Ⅲ不同，实施例42中使用的皮肤调理剂Ⅲ为制备例11制备所得，实施例43中使用的皮肤调理剂Ⅲ为制备例12制备所得。

实施例44-45

实施例44-45与实施例1的区别在于使用的皮肤调理剂Ⅳ不同，实施例44中使用的皮肤调理剂Ⅳ为制备例14制备所得，实施例45中使用的皮肤调理剂Ⅳ为制备例15制备所得。

实施例46-47与实施例1的区别在于使用的保湿剂不同，实施例46中使用的保湿剂为制备例17制备所得，实施例47中使用的保湿剂为制备例18制备所得。

检验检测

采用斑马鱼I型胶原蛋白基因表达促进测试来对抗皱紧致功效进行检测，由水中银(国际)生物科技有限公司检测。

实验方法

1受试生物

应用来源可靠(如中国国家斑马鱼资源中心)的野生型AB品系斑马鱼(Daniorerio)产卵测试。亲鱼应具有较好的繁殖能力–鱼龄以6～12月最佳。传代尽量使用侧交以保持遗传多样性，纯品系亲鱼繁殖5代后需更换新一批亲鱼。亲鱼不应该有明显可见的感染和疾病特征，且在2个月内没有经历过药物治疗。在繁殖产卵测试前，亲鱼应在引入实验室后驯养14天以上。

2受试物准备

水溶性化妆品原料/产品：用鱼胚胎培养液直接将受试物溶解配制成测试溶液。

非水溶性化妆品原料/产品：可选常用溶剂如甲醇、二甲基亚砜、乙醇等助溶。溶剂于测试溶液中的浓度不要超过0.1％。

注意事项

受试物测试浓度需保证对斑马鱼胚胎的死亡率10％。测试时可根据需要设置多个浓度组。

3测试步骤(流程图请见图1)

将36尾6天大斑马鱼分3组暴露于5g/L实施例1溶液中，同时设置空白对照组，暴露24h后，对斑马鱼进行RNA提取，cDNA合成，实时PCR扩增，以β-actin作为管家基因，Ct作为扩增结果，计算col1a1a,col1a1b和col1a2的相对表达量并进行统计分析。

具体步骤如下：

挑选健康的受精后6天大的斑马鱼。

1测试分组

测试需设置空白对照组(鱼胚胎培养液)、阳性对照组(乙酰基六肽-8)和受试物组(受试物)。如用有机溶剂助溶，各组溶液中溶剂浓度需相同。

1.1空白对照组设置

随机挑选36尾斑马鱼，平均分配到24-孔板中，设3个孔，每孔含12尾斑马鱼和2.5mL鱼胚胎培养液。

1.2阳性对照组设置

随机挑选36尾斑马鱼，平均分配到24-孔板中，设3个孔，每孔含12尾斑马鱼和2.5mL乙酰基六肽-8工作液。

1.3受试物处理

随机挑选36尾斑马鱼，平均分配到24-孔板中，设3个孔，每孔含12尾斑马鱼和2.5mL受试物溶液。

放置于28℃±1℃恒温箱中培养24h±1h。

收集每孔中的12尾斑马鱼于1.5mL管中，除去溶液，加入0.5mL RNAlater溶液，冰冻储存。

2RNA提取

除去RNAlater溶液，用PBS溶液冲洗3次。置于冰浴，除去PBS溶液，加入500μLTRIzol试剂。用颗粒杵对胚胎进行均质化，置于冰浴10min。加入100μL三氯甲烷，涡旋1min，置于冰浴5min。离心样本20min，转移上层溶液至1.5mL离心管，加入250μL异丙醇，涡旋1min，置于冰浴10min，离心样本20min。除去所有上清液，加入500μL乙醇，涡旋1min，离心样本5min，置于冰浴10min。重复此步骤3次。除去乙醇，离心样本5min，在通风橱中打开盖子风干样品10min。加入10μL无DNase/RNase超纯蒸馏水，55℃加热15min。

3cDNA合成

用无DNase/RNase超纯蒸馏水将RNA样本稀释至1000ng/7μL。用含gDNA Eraser的PrimerScript RT试剂盒(Takara；Cat no.RR047A)将RNA合成为cDNA，冰冻储存。

4进行实时RT-PCR

为每个引物准备引物混合物及实时PCR主混合物。用无DNase/RNase超纯蒸馏水将cDNA样本稀释10倍。每孔PCR用96孔板加入9μL PCR主混合物及1μL稀释cDNA样本。用光学胶膜密封PCR用96孔板，离心孔板5min，进行实时PCR扩增。

5数据和结果计算

6结果报告

样品在5g/L测试浓度下对斑马鱼col1a1a,col1a1b和col1a2基因表达的促进率分别为17％(p＝0.0070),121％(p＝0.0035),111％(p＝0.000044)。

故能得出实施例1中的液体能显著促进斑马鱼I型胶原蛋白基因表达，具有促进I型胶原蛋白再生效果，支持抗皱和紧致功效宣称。

在完成上述结果证明后，实施例2-47也根据志愿者人体功效评价的主观评估结果，得出有较好抗皱紧致功效的结论。

同时，丁二醇与1,2-己二醇不仅具有较好的保湿效果，而且丁二醇能与水及其他有机溶剂互溶，在体系中能作为一种较好的溶剂，帮助一些难溶的活性物质溶解在体系中，进而帮助活性物质起到较好的效果。

通过皮肤调理剂Ⅰ、保湿剂、抗氧化剂和润肤剂的共同作用对皮肤进行改善，修复皮肤皱纹、抑制皱纹再生，延缓皮肤衰老、抗皱的作用。

金黄洋甘菊提取物、香叶天竺葵提取物、田野薄荷叶提取物、马齿苋提取物、库拉索芦荟提取物、苦参根提取物、对羟基苯乙酮、1,2-己二醇、1,2-戊二醇共同配合具有较好的防腐抗菌效果，能替代传统的防腐剂，减小对皮肤的刺激和影响。

金黄洋甘菊提取物、香叶天竺葵提取物、田野薄荷叶提取物、马齿苋提取物、库拉索芦荟提取物、苦参根提取物也能提供令人舒适愉悦的香味。

本具体实施例仅仅是对本申请的解释，并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例作出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种紧致抗皱精华液，其特征在于：包括以下组分：

2.根据权利要求1所述的紧致抗皱精华液，其特征在于：所述润肤剂包括异壬酸异壬酯、霍霍巴籽油、山茶籽油、辛酸/癸酸甘油三酯。

3.根据权利要求1所述的紧致抗皱精华液，其特征在于：所述皮肤调理剂Ⅰ包括以下组分：胶原、1,2-己二醇、1,2-戊二醇和水。

4.根据权利要求1所述的紧致抗皱精华液，其特征在于：所述紧致抗皱精华液还包括1-6％皮肤调理剂Ⅱ，所述皮肤调理剂Ⅱ包括以下组分：丁二醇、甘油、金黄洋甘菊提取物、香叶天竺葵提取物、田野薄荷叶提取物、马齿苋提取物、库拉索芦荟提取物、苦参根提取物、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮。

5.根据权利要求1所述的紧致抗皱精华液，其特征在于：所述紧致抗皱精华液还包括0.01-0.2％皮肤调理剂Ⅲ，所述皮肤调理剂Ⅲ包括以下组分：珍珠母提取物和水。

6.根据权利要求1所述的紧致抗皱精华液，其特征在于：所述紧致抗皱精华液还包括1-5％皮肤调理剂Ⅳ，所述皮肤调理剂Ⅳ包括以下组分：稻胚芽油、蜂生假丝酵母/葡萄糖/油菜籽油酸甲酯发酵产物、姜黄根提取物。

7.根据权利要求1所述的紧致抗皱精华液，其特征在于：所述紧致抗皱精华液还包括以下组分：

8.根据权利要求1所述的紧致抗皱精华液，其特征在于：所述紧致抗皱精华液还包括以下组分：

银耳多糖 0.01-0.2％；

透明质酸钠 0.01-0.2％。

9.根据权利要求1所述的紧致抗皱精华液，其特征在于：所述紧致抗皱精华液还包括以下组分：

泛醌 0.1-0.5％；

白花春黄菊花油 0.01％-0.5％。

10.根据权利要求1-9任一所述的紧致抗皱精华液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：将A相加入乳锅搅拌升温至85-90度，均质3分钟至无颗粒，搅拌保温20分钟；

S2：降温至42度将B相加入乳化锅搅拌均匀，再加入C相(单独溶解好)搅拌均匀；

S3：降温至38℃，检验合格后，进行灌装；

其中，A相为水、丁二醇、保湿剂、1,2-己二醇、抗氧化剂、螯合剂、银耳多糖、透明质酸钠；B相为皮肤调理剂Ⅰ、皮肤调理剂Ⅱ、皮肤调理剂Ⅲ、甜菜碱、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、肌肽、乙酰基六肽-8、四氢甲基嘧啶羧酸、泛醇；C相为润肤剂、皮肤调理剂Ⅳ、泛醌、白花春黄菊花油。