CN117442612A - 一种磺胺衍生物在治疗白血病中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种磺胺衍生物在治疗白血病中的应用。具体地，本发明提供了一种如式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药的用途，用于制备用于治疗和/或缓解白血病的药物组合物。
Description
技术领域
本发明属于生命科学和医药领域，具体地涉及式(I)化合物在治疗白血病中的应用。
背景技术
RBPMS基因属于RNA结合蛋白家族中的一员，于1996年被克隆得到，在其N端区域有一个保守的RNA识别区域(RRM域)，该序列与果蝇蛋白质Couch potato的RRM高度同源，这个RNA识别区域富含RNA结合的结构域，在脊椎动物中高度保守并且在基因表达转录后的mRNA和rRNA的转运，定位和稳定性有重要作用。RBPMS在心脏、前列腺、肠道和卵巢中表达较高，在骨骼肌、脾脏、胸腺、大脑和外周血白细胞中表达较低。
RBPMS家族由RBPMS1/Hermes和RBPMS2组成，基于基因库序列数据,人源的RBPMS有三种构型，这三种构型在N端有相同的RNA识别区域，然而三种构型的C末端主要在其长度和氨基酸构成上有一定差异。RBPMS主要通过形成同源二聚体特异性识别并结合含有串CAC三核苷酸的mRNA，识别方式式主要取决于串联的CAC三核苷酸之间的距离。
与其他mRNA结合蛋白类似，RBPMS蛋白家族在氧化应激条件下会重新定位到细胞质应激颗粒中，提示其可以影响大细胞或多核细胞中mRNA的定位。有研究报道ERG通过与RNA结合蛋白RBPMS相互作用被招募到mRNA中，并通过结合CNOT2(CCR4-NOT脱腺苷酸复合体)促进Aurora信号相关mRNA亚群的降解。有研究者利用全基因组关联研究(GWASs)分析并证明RBPMS在斑马鱼体内有强烈的促红细胞生成效应，并证明RBPMS是红细胞生成的调节因子。另外有研究证明RBPMS参与并调控转化生长因子-β(TGF-β)/Smad介导的转录激活。作者发现RBPMS在体外和体内都与Smad2、Smad3和Smad4发生相互作用，并且TGF-β的存在增加了RBPMS与这些Smad蛋白的结合。RBPMS与TGF-β受体I型(TβR-I)相互作用，增加Smad2和Smad3中c端SSXS区域的磷酸化，并促进Smad蛋白的核积累，但RBPMS不能增强Smad2和Smad3的转录活性。已有研究表明RBPMS在视网膜神经节细胞突触密度和轴突树突的形成中扮演重要角色，并且在低氧条件下，RBPMS定位于内网状层的视网膜神经节细胞树突。此外，作者证实了RBPMS定位于视网膜外植体神经纤维层退化的RGCs轴突。有研究发现RBPMS在分化的血管平滑肌细胞(SMCs)中是一个关键的剪接调节因子，RBPMS与其增强子协作直接调控肌动蛋白细胞骨架和黏着机制的众多组分的剪接。
RBPMS在肿瘤中的作用研究较少，大部分研究表明RBPMS作为抑癌基因在肿瘤中发挥重要的调控作用。例如在多发性骨髓瘤(MM)中通过对ChIP-seq数据集和H3K27me3芯片的分析发现，EZH2蛋白直接调控RBPMS的表达。敲低RBPMS促进Bcl2和Myc蛋白的表达从而使MM细胞产生耐药性，而通过miR-138过表达上调RBPMS表达可使耐药细胞对药物再次敏感。在乳腺癌细胞中RBPMS异构体RBPMSA和RBPMSC的C端和RNA识别基序(RRM)，与cFos蛋白碱性亮氨酸拉链(bZIP)域相互作用抑制cFos/cJun异源二聚体的形成从而影响AP-1的转录活性。此外，RBPMS1A-C与转录因子Smad3相互作用阻断了Smad3/cJun复合物的形成，从而抑制c-Fos或smad3介导的AP-1反式激活和AP-1靶基因的表达，这些靶基因包括血管内皮生长因子以及肿瘤生长和进展的关键调控因子cyclin D1。在细胞和小鼠异种移植模型中，RBPMS通过c-Fos或Smad3抑制乳腺癌细胞的生长和迁移。这些数据表明，RBPMS是AP-1信号的关键抑制因子，RBPMS1的激活可能是一种有用的癌症治疗策略。最近有研究发现RBPMS水平高的卵巢癌患者比RBPMS水平低的患者活得更长并且RBPMS敲除组克隆比对照组克隆生长更快，具有更强的侵袭性并且可诱导卵巢癌细胞衰老，这些结果提示RBPMS作为抑癌基因影响卵巢癌细胞的生理活动。
有研究者对284例宫颈癌临床病例的宫颈癌基因组图谱(TCGA)进行了多平台整合分析，确定了宫颈癌的驱动基因和可能的分类。最后作者在宫颈癌中发现了10个潜在的驱动基因其中包括RBPMS，这揭示RBPMS可能作为原癌基因影响宫颈癌的发生发展。另外有作者利用TCGA和TARGET队列的表达谱分别在成人和儿童高危急性髓系细胞白血病(AML)中构建了基于RBP的上调基因调控网络。作者发现MLLT3和RBPMS两种RBPs及其circRNA靶点PTK2和NRIP1与成年人AML的总生存期(OS)显著负相关(p≤0.01)。这表明RBPMS可能作为原癌基因在AML中发挥重要的调控作用，这与我们的研究结果一致。以上这些研究表明RBPMS在肿瘤中可能发挥双重作用，作为原癌基因和抑癌基因参与下游基因的调控进而影响疾病的进展。急性髓细胞白血病(acute myelogenous leukemia,AML)是成年人最常见的急性白血病,它的治疗仍以化疗为主,但有70％左右获得缓解的患者最终复发并演变为难治性白血病,导致治疗失败而死亡。
因此，开展急性髓细胞白血病的新药研发有助于填补相应药物研发领域的空白，具有显著的治疗价值和社会意义。
发明内容
本发明的目的就是提供一种治疗急性髓细胞白血病的化合物或含有所述化合物的制剂及其作用机制。
具体地，本发明提供了式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药在治疗白血病方面的作用机制和应用。即式(I)所示的化合物通过在白血病细胞中有效地抑制RBPMS蛋白的功能，从而抑制白血病细胞增殖并诱导白血病细胞凋亡，进而抑制白血病的发展，为白血病的治疗提供了崭新的机制和方法。
本发明的第一方面，提供了一种如式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药的用途；
用于制备用于治疗和/或缓解白血病的药物组合物。
在另一优选例中，所述药物组合物还用于抑制RBPMS蛋白的功能。
在另一优选例中，所述式(I)化合物与His-RBPMS蛋白特异性结合。
在另一优选例中，所述式(I)化合物还用于抑制His-RBPMS与5’label-biotin-FOXO1 mRNA的结合。
在另一优选例中，所述式(I)化合物还用于抑制白血病细胞中RBPMS靶基因FOXO1的转录水平和翻译水平。
在另一优选例中，所述式(I)化合物还用于抑制白血病细胞增殖。
在另一优选例中，所述式(I)化合物还用于诱导白血病细胞凋亡。
在另一优选例中，所述式(I)化合物还用于诱导白血病原代细胞凋亡和/或抑制白血病原代细胞的自我更新能力。
在本发明的第二方面，提供了一种如式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药的用途；
用于制备抑制RBPMS蛋白的功能的药物组合物。
在本发明的第三方面，提供了一种治疗和/或缓解白血病的方法，包括步骤：给需要的对象施用安全有效量的式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，其中所述的式(I)化合物如权利要求1中所述。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1是式(I)化合物的设计与筛选实验结果图。(A)是RBPMS小分子抑制剂的筛选流程图。(B)是式(I)化合物的结构式。(C)是在不同时间，用不同浓度的式(I)化合物处理Kasumi-1细胞的细胞增殖水平。(D和E)是式(I)化合物与His-RBPMS蛋白特异性结合的表面等离子体共振实验结果图。(F)是式(I)化合物抑制His-RBPMS与5’label-biotin-FOXO1mRNA结合的凝胶迁移实验验证图。(G)是式(I)化合物抑制Kasumi-1细胞中RBPMS靶基因FOXO1的转录水平和翻译水平。
图2是式(I)化合物处理Kasumi-1细胞后的流式分析结果。(A)是通过Annexin V-APC/PI流式分析来检测细胞的凋亡水平。(B)是流式分析的统计结果。
图3是式(I)化合物处理急性髓系白血病病人原代细胞后的结果。(A)是通过Annexin V-APC/PI流式分析来检测原代细胞的凋亡水平。(B)是流式分析的统计结果。(C)是原代细胞进行克隆集落形成实验的结果图。
图4A是不同浓度式(I)化合物处理Kasumi-1细胞、MOLM13细胞、THP1细胞和CD34+细胞72小时后的细胞增殖水平图。
图4B是式(I)化合物处理CD34+细胞的克隆集落形成实验的结果图。
图5A是式(I)化合物给药中间时间点的给药组和对照组白血病小鼠的GFP+白血病细胞、白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板的数目。
图5B是式(I)化合物给药组和对照组白血病小鼠的生存时间图。
图5C是式(I)化合物给药组和对照组白血病小鼠的体重变化图。
图5D是给药组和对照组白血病小鼠的白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板的数目。
图5E是给药组和对照组白血病小鼠的外周血、骨髓和脾脏中GFP+白血病细胞百分比。
图5F是给药组和对照组白血病小鼠的外周血的瑞氏染色结果。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外的发现了一类可有效治疗白血病的活性成分，即式(I)所示的化合物、或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。实验表明，式(I)所示化合物通过有效地抑制RBPMS蛋白的功能，从而抑制白血病细胞增殖并诱导白血病细胞凋亡，进而抑制白血病的发展。在此基础上，完成了本发明。
治疗白血病的活性成分
本发明中，提供了一种可以治疗白血病的活性成分。该活性成分为式(I)化合物，如下式所示，
所述的化合物可以用于制备治疗白血病的药物组合物，或用于施用于有需要的对象从而治疗或缓解所述对象的白血病病症。
药物组合物和应用
本发明提供了式(I)所示的化合物、或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药中的一种或多种的混合物为有效成分在制备治疗和/或缓解白血病等相关疾病的药物中的应用。
本发明所提供的药物组合物优选含有重量比为0.001-99wt％的活性成份，优选的比例是式(I)化合物作为活性成分占总重量的0.1wt％～90wt％，其余部分为药学可接受的载体、稀释液或溶液或盐溶液。
需要的时候，在本发明药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
本发明所提供的化合物和药物组合物可以是多种形式，如片剂、胶囊、粉剂、糖浆、溶液状、悬浮液和气雾剂等，并可以存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中和适宜的用于注射或滴注的消毒器具中。
本发明的药物组合物的各种剂型可按照药学领域的常规制备方法制备。其制剂配方的单位计量中通常包含0.05-400mg式(I)化合物，优选地，制剂配方的单位计量中包含1mg-500mg式(I)化合物。
本发明的化合物和药物组合物可对哺乳动物临床使用，包括人和动物，可以通过口、鼻、皮肤、肺或者胃肠道等的给药途径。最优选为口服。最优选日剂量为0.01-400mg/kg体重，一次性服用，或0.01-200mg/kg体重分次服用。不管用何种服用方法，个人的最佳剂量应依据具体的治疗而定。通常情况下是从小剂量开始，逐渐增加剂量一直到找到最适合的剂量。
本发明的药物或抑制剂可通过各种不同方式施用，例如可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹导入机体。
本发明优点包括：
(1)本发明实验表明，式(I)化合物通过有效地抑制RBPMS蛋白的功能，从而抑制白血病细胞增殖并诱导白血病细胞凋亡，进而抑制白血病的发展。
(2)本发明化合物的毒副作用低，成药性好。
(3)本发明为白血病的治疗提供了新靶点与新机制。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
通用方法
1.流式染色及凋亡、周期检测
本发明所涉及到的流式分析分别为小鼠给药移植外周血细胞流式染色分析，细胞凋亡和周期分析，小鼠外周血细胞染色和细胞凋亡数据采用FlowJo V10.0软件分析。流式分析方法步骤如下：
(1)细胞凋亡
吸取300μL式(I)化合物处理24h或48h的细胞，800rpm离心3min，用1×PBS重悬细胞洗一遍，然后加入120μL 1×binding buffer(含有1μL的Annexin V-APC和0.5μL的PI)，室温避光孵育10min左右。然后再加入50μL的1×binding buffer，流式上机分析。
(2)白血病模型检测
取发病小鼠的外周血(需ACK裂红)，脾脏细胞及骨髓细胞，2000rpm离心5min，用1×PBS重悬细胞洗一遍，然后加入100μL 1×PBS(含有0.3μL的c-Kit-PE cy7、0.3μL的Mac1-APC、0.3μL的CD45-PE)4℃避光孵育30min，然后加入2mL 1×PBS洗一次，弃上清，加入150μL1×PBS重悬细胞，流式上机分析。
(3)造血干祖细胞分析
取6-8周左右的对照组小鼠与式(I)化合物处理组小鼠的骨髓细胞，加入500μLACK裂解液去除红细胞，在加入3mL 1×PBS洗一次，弃上清。加入各系标志抗体Ter119、Gr1、CD11b、B220、CD3、CD4、CD5、CD8和CD127(按照2：1：1：1：1：0.5：0.5：0.5：0.5的比例，5μL抗体/5x106细胞)，室温避光孵育15min，然后分三组分别加入2mL 1×PBS洗一次，弃上清。第一组约有2x106细胞分析HSC：加入150μL 1×PBS(含lin-Streptavidin APC-cy7、Sca1BV510、c-Kit PEcy7、CD48 APC、CD150 PE各1μL)；第二组约有1x106细胞分析HPC：加入100μL 1×PBS(含lin-Streptavidin APC-cy7、Sca1 BV510、cKit PEcy7、CD16/32PE、CD34AF647各0.5μL)；第三组约有2x106细胞分析CLP：加入150μL 1×PBS(含lin(无CD127)-Streptavidin APC-cy7、Sca1 BV510、cKit PEcy7、CD127 PE各1μL)，4℃避光孵育30min，然后加入1mL 1×PBS洗一次，弃上清，加入150-200μL 1×PBS重悬细胞，流式上机分析。
(4)髓系、B系、T系检测
取对照组小鼠与式(I)化合物处理组小鼠的外周血，脾脏细胞及骨髓细胞，加入500μL ACK裂解液去除红细胞，再加入3mL 1×PBS洗一次，弃上清。150μL 1×PBS重悬细胞(含有Mac1 APC、Gr1 PE、CD3e PEcy7、B220 FITC抗体各0.3μL)。4℃避光孵育30min，然后加入1mL 1×PBS洗一次，再加入150μL 1×PBS重悬细胞，流式上机分析。
(5)红系分化检测
取对照组小鼠与式(I)化合物处理组小鼠的外周血细胞，脾脏细胞及骨髓细胞，3mL 1×PBS洗一次，加入0.3μL Ter119 APC和0.3μL CD71，4℃避光孵育30min，然后加入1mL 1×PBS洗一次，再加入150μL 1×PBS重悬细胞，流式上机分析。
2.CD34+细胞的分离、纯化和培养
本发明涉及到的CD34+细胞均来源于脐带血，取7mL淋巴细胞分离液(Ficoll，Norway)加入到15mL离心管中，脐带血以1:1等体积缓慢加入至Ficoll上层中，采用密度梯度2000rpm 4度离心20分钟，缓慢降速后取中间白色分层的单个核细胞，PBS稀释取出的细胞混合液，混匀后2000rpm离心5分钟再用PBS清洗细胞后得到脐带血单个核细胞，然后通过美天旎人源CD34磁珠分选试剂盒(MACS，Miltenyi Biotec)纯化并富集到CD34+细胞(磁珠分选方法见Kit使用说明书)。通过分离纯化后得到富集的CD34+细胞，将CD34+细胞培养在如下CD34+全配培养基中，培养3天扩增后开展后续实验。
| IMDM | BIT 9500 20％ | FLT3 100ng/mL |
| SCF 100ng/mL | TPO 100ng/mL | IL-6 20ng/mL |
3.克隆形成实验
(1)人正常造血干细胞CFU：CD34+细胞来源于脐带血，取7mL淋巴细胞分离液(Ficoll，Norway)加入到15mL离心管中，脐带血以1:1等体积缓慢加入至Ficoll上层中，采用密度梯度2000rpm 4度离心20分钟，缓慢降速后取中间白色分层的单个核细胞，PBS稀释取出的细胞混合液，混匀后2000rpm离心5分钟再用PBS清洗细胞后得到脐带血单个核细胞，然后通过美天旎人源CD34磁珠分选试剂盒(MACS，Miltenyi Biotec)纯化并富集到CD34+细胞(磁珠分选方法见Kit使用说明书)。收集、重悬和计数CD34+细胞，分别将2000个CD34+细胞种植在Methocult GF-H4435培养基(Stem Cell Technologies)中，并分别以DMSO和10μMUF146加入培养基中培养7天后，显微镜计数克隆数目分析式(I)化合物对正常造血干细胞的影响。
(2)AML病人骨髓细胞CFU：收集和分离AML病人来源的骨髓细胞。分别将10000个AML病人骨髓细胞种植在Methocult GF-H4435培养基(Stem Cell Technologies)中，并分别以DMSO和10μM式(I)化合物加入培养基中培养7天后，显微镜计数克隆数目分析式(I)化合物对AML病人骨髓细胞克隆形成能力的影响。
4.抑制剂小鼠体内治疗实验
取AE9a原代细胞移植发病的小鼠脾脏，分离得到AE9a小鼠脾细胞，计数1×106AE9a脾细胞尾静脉移植到经半致死剂量(4.75Gy)辐照的受体小鼠体内，移植3天后，对小鼠进行式(I)化合物腹腔注射给药，剂量为30mg/kg，每2天给药一次并且记录体重变化，小鼠发病前一周对受体小鼠外周血随访，检测外周血细胞数目变化和GFP比例的变化，分别记录小鼠生存期和小鼠随访数据分析式(I)化合物对AE9a小鼠白血病发展的影响。
5.瑞氏染色
用免疫组化笔圈起血涂片上的细胞，在圈内加入1-2滴瑞氏染色液1后，静置1min。然后滴2-4滴瑞氏染色液2，并用吸耳球其吹匀后静置6-8min。将玻片在细流水下冲洗1min左右，置于显微镜下观察。玻片自然干燥后用中性树脂封片后，随后用显微镜拍照观察。
6.组织切片
固定超过2周的样品可用来进行石蜡包埋，石蜡切片制作过程如下：洗涤与脱水、透明化、浸蜡、包埋。随后用石蜡切片机切片(4-6μm切片厚度均可)，然后进行HE染色，染色结束后，用中性树脂封片，晾干后用显微镜拍照观察。
7.统计学分析
本发明中所有的统计分析都是通过Graphpad Prism软件处理分析的，实验数据用Mean±SD表示，unpaired two-tailed t test进行显著性分析，其中p<0.05(*)，p<0.01(**)，p<0.005(***)，p<0.001(****)均代表组间数据存在显著性差异
实施例1：RBPMS小分子抑制剂的设计与筛选
本发明研究结果显示RBPMS蛋白在急性髓系白血病发生过程中存在重要的调控作用。敲低或敲除RBPMS显著延缓t(8；21)急性髓系白血病的进展并且抑制了白血病干祖细胞的自我更新能力，但对正常造血系统功能和造血干祖细胞的功能影响很小。因此，我们认为RBPMS可能是治疗急性髓系白血病的一个新的潜在药物靶点，并且可作为AML患者预后的分子标志物。有研究报道，RBPMS通过形成同源二聚体识别并结合带有串联的CAC三核苷酸序列的RNA，根据RBPMS蛋白与RNA结合的生物学功能以及结合的特异性，我们设计并筛选出RBPMS蛋白的特异性小分子抑制剂，并检测该抑制剂能否在白血病细胞中有效地抑制RBPMS蛋白的功能。
首先，基于结构虚拟筛选出137个RBPMS的小分子抑制剂(参见图1A)，其中，式II化合物与式III化合物的结构如下所示，
我们在Kasumi-1(人急性原粒细胞白血病细胞)细胞上进行MTT实验检测小分子抑制剂对细胞活力的影响。在相同实验条件下，使用式(I)化合物、式(II)化合物与式(III)化合物处理Kasumi-1细胞48h时的半数抑制浓度(IC50)值见下表：
| 化合物 | 抗增殖活性IC50(μM) |
| I | 2.2 |
| II | >100 |
| III | >100 |
初步筛选出能显著抑制细胞增殖且IC50较低的一些潜在的小分子抑制剂,我们选出式(I)化合物作为RBPMS的候选小分子抑制剂进行后续的功能实验(参见图1B和图1C)。首先我们通过表面等离子体共振SPR(Surface plasmon resonance)验证式(I)化合物与His-RBPMS蛋白特异性结合，其KD值为402nM(参见图1D和图1E)。后续通过EMSA实验体外验证式(I)化合物能够抑制His-RBPMS与5’label-biotin-FOXO1 mRNA的结合(参见图1F)，并且我们发现式(I)化合物显著抑制Kasumi-1细胞中RBPMS靶基因FOXO1的转录水平和翻译水平(参见图1G)。
实施例2：RBPMS小分子抑制剂影响Kasumi-1细胞的增殖和凋亡
在Kasumi-1细胞系上分别使用1.25,2.5,5,10,15,20μM的式(I)化合物处理24,48和72小时，然后通过MTT实验对细胞增殖进行检测。结果表明式(I)化合物对Kasumi-1细胞系增殖的抑制具有时间和浓度梯度依赖性。式(I)化合物处理Kasumi-1细胞48h时的半数抑制浓度(IC50)为2.20μM(参见图1C)。为了验证式(I)化合物对Kasumi-1细胞增殖的抑制是否由细胞凋亡所致，我们分别使用2.5和5μM的式(I)化合物处理Kasumi-1细胞24小时，通过Annexin V-APC/PI流式染色检测了式(I)化合物处理对Kasumi-1细胞凋亡的影响，与RBPMS敲低结果相一致，式(I)化合物能够诱导Kasumi-1细胞的凋亡(参见图2A和图2B)。
实施例3：RBPMS小分子抑制剂影响急性髓系白血病病人原代细胞的凋亡和自我更新
为了研究式(I)化合物对急性髓系白血病病人原代细胞的影响，我们在体外使用RBPMS小分子抑制剂式(I)化合物处理急性髓系白血病病人来源的原代细胞。取急性髓系白血病患者的骨髓样本，我们使用10和20μM的式(I)化合物处理病人原代细胞24小时，通过Annexin V-APC/PI流式染色检测了式(I)化合物处理对白血病病人细胞凋亡的影响，与RBPMS敲低结果相一致，式(I)化合物能够诱导急性髓系白血病病人原代细胞的凋亡(参见图3A和图3B)。
为了研究RBPMS小分子抑制剂式(I)化合物对急性髓系白血病病人原代细胞自我更新能力的影响，我们使用甲基纤维素培养基对病人原代细胞进行细胞集落形成实验。结果显示，与对照相比，式(I)化合物处理组的白血病病人原代细胞形成的克隆数量更少(参见图3C)，这表明小分子抑制剂式(I)化合物能够显著抑制急性髓系白血病病人原代细胞的自我更新能力。
以上结果体现了小分子抑制剂式(I)化合物能够促进急性髓系白血病病人原代细胞的凋亡以及白血病病人原代细胞的自我更新能力。
实施例4：RBPMS小分子抑制剂不影响CD34+HSPC细胞的增殖和自我更新能力
式(I)化合物显著抑制了Kasumi-1细胞的增殖(图1C)和AML原代病人细胞的自我更新能力(参见图3C)，相比之下，该抑制剂对正常人CD34+HSPC(人造血干细胞)细胞的增殖影响很小。式(I)化合物处理CD34+HSPC细胞72h时的半数抑制浓度(IC50)为12.93μM，约为Kasumi-1细胞的27倍(参见图4A)，并且正常人CD34+HSPC细胞的菌落形成能力不受抑制剂的影响(参见图4B)。
以上结果表明RBPMS小分子抑制剂式(I)化合物不影响CD34+HSPC细胞的增殖和自我更新能力，提示该分子被用作治疗剂情况下用药窗口较宽。
实施例5：RBPMS小分子抑制剂延缓t(8；21)急性髓系白血病小鼠疾病的进展
为了研究式(I)化合物对t(8；21)急性髓系白血病小鼠疾病的影响，我们进行了二代移植实验，取冻存的AE9a原代移植发病晚期老鼠的脾脏细胞，以1x10^6cells/只的数目移植到亚致死辐射小鼠体内，移植第三天时将二代移植的小鼠随机分为两组，以此为day0每隔一天腹腔注射30mg/kg式(I)化合物，并对小鼠的体重进行称量直到实验终点，这期间需定期随访观察并记录小鼠的生存期等。
为了检测RBPMS小分子抑制剂式(I)化合物对白血病治疗情况，我们在式(I)化合物给药的中间时间点进行外周血随访，我们取了15μL外周血进行血象检测，结果显示在式(I)化合物处理组的移植受体小鼠的外周血中，GFP+白血病细胞和白细胞数目显著减少，并且在式(I)化合物处理组小鼠外周血中的红细胞、血红蛋白和血小板的数目是显著增加的(参见图5A)。随后的生存期表明RBPMS小分子抑制剂式(I)化合物能够显著延长了AE9a小鼠的生存时间(参见图5B)，并且在腹腔注射30mg/kg式(I)化合物过程中两组小鼠的体重没有显著差异(参见图5C)。
此外，为了更好地观察白血病进展情况，我们同时取出3只对照组和式(I)化合物处理组的移植受体小鼠检测白血病发病情况。结果显示，在式(I)化合物处理组的二代移植受体小鼠的外周血中白细胞数目显著减少，并且式(I)化合物处理组小鼠外周血中红细胞、血红蛋白和血小板的数目是显著增加的(参见图5D)。同时在式(I)化合物处理组的白血病小鼠外周血和脾脏细胞中GFP+白血病细胞比例显著下调(参见图5E)。外周血血涂片结果显示，式(I)化合物处理组小鼠外周血的白血病细胞比对照组显著减少(参见图5F)。
综上，研究结果表明，式(I)化合物能够显著抑制小鼠急性髓系白血病的进展，延长白血病小鼠的生存期。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种如式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药的用途；
其特征在于，用于制备用于治疗和/或缓解白血病的药物组合物。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物组合物还用于抑制RBPMS蛋白的功能。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述式(I)化合物与His-RBPMS蛋白特异性结合。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述式(I)化合物还用于抑制His-RBPMS与5’label-biotin-FOXO1 mRNA的结合。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述式(I)化合物还用于抑制白血病细胞中RBPMS靶基因FOXO1的转录水平和翻译水平。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述式(I)化合物还用于抑制白血病细胞增殖。
7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述式(I)化合物还用于诱导白血病细胞凋亡。
8.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述式(I)化合物还用于诱导白血病原代细胞凋亡和/或抑制白血病原代细胞的自我更新能力。
9.一种如式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药的用途；
其特征在于，用于制备抑制RBPMS蛋白的功能的药物组合物。
10.一种治疗和/或缓解白血病的方法，其特征在于，包括步骤：给需要的对象施用安全有效量的式(I)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，其中所述的式(I)化合物如权利要求1中所述。
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