CN117417435B - 一种疏水性重组人源胶原蛋白及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种疏水性重组人源胶原蛋白及其制备方法与应用，涉及胶原改性技术领域。本发明提供的制备方法，包括以下步骤：S1.将重组人源胶原蛋白与磷酸盐配置成重组胶原蛋白磷酸盐溶液；S2.调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值；S3.将疏水改性剂与有机溶剂混合制成改性剂溶液；S4.将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，搅拌混合后进行提纯和冻干，即得疏水性重组人源胶原蛋白；步骤S3中的疏水改性剂为脂肪酸N‑羟基琥珀酰亚胺酯。本发明制得的疏水性重组人源胶原蛋白具有良好的生物安全性，可增强与烷烃类油脂及植物油脂的兼容性和分散稳定性。

Description

一种疏水性重组人源胶原蛋白及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及胶原改性技术领域，具体涉及一种疏水性重组人源胶原蛋白及其制备方法与应用。
背景技术
重组胶原蛋白是利用DNA重组技术制备的胶原蛋白，其氨基酸序列可根据需求进行设计改进，如重组人源化胶原蛋白的重复单元与人胶原蛋白氨基酸序列特定功能区相同。这种制备方式可实现定制化合成，即不仅可合成不同类型的胶原，还可筛选出不同型别胶原分子的特定功能区并根据需要进行定制组合。
由于重组胶原自身的结构和特殊生物活性，在化妆品应用中，其存在着原料配伍性能较差等缺点，而在以油性基质为主的彩妆中，其必需通过以水溶解后再添加的方式加入产品中，其溶解性差异容易导致各种负面效果，且胶原稳定性不强。根据疏水缔合聚合物理论以及疏水作用对胶原稳定性的贡献，通过疏水改性增强胶原分子的疏水缔合作用，能够赋予胶原良好的耐溶剂、耐温和耐剪切性能，而且疏水改性胶原由于其分子上的亲水和亲油基团的存在，增强其配伍性。
目前胶原疏水改性剂(酸酐、酰氯、脂肪醛等)存在固/液反应不均匀，改性反应速率难以控制，酰氯可以与多种基团发生反应，无法精确控制，以及使用的有机溶剂(如中国专利CN111320563B使用二甲基亚砜做溶剂)易引入毒性，同时反应pH较高，改性速率过快且反应时间久，容易造成重组胶原蛋白解旋失活；此外还有改性效率低(如中国专利CN105670000B)等问题。
中国专利CN108691243B公布了一种用缩水甘油酯改性胶原蛋白制备造纸施胶剂的方法，选用了一种缩水甘油酯做交联剂，对废弃皮胶原蛋白进行改性，缩水甘油酯分子结构中含有活泼的环氧基团，环氧基中电荷极化和环张力的存在，使得环氧基表现出很高的反应活性，容易与-NH2、酚羟基、-COOH、-SH、-OH、-C(＝O)-NH2等活泼基团发生反应，并且对细胞毒性要远远小于醛类，但反应中使用的丙烯酸类疏水性单体容易残留，该反应需要引发剂，副产物较多且难纯化。带有活化的NHS酯的疏水改性剂和标记蛋白化合物在弱碱性条件下与伯胺反应，产生稳定的酰胺键，该反应释放N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，可通过透析或脱盐轻易去除。
基于此，需要寻求一种疏水性重组人源胶原蛋白及其制备方法与应用以解决上述问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种疏水性重组人源胶原蛋白及其制备方法与应用，通过疏水改性剂脂肪酸N-羟基琥珀酰亚胺酯增强重组胶原的疏水性，定向基团的疏水改性不会过于影响重组胶原的生物活性，制得的疏水性重组人源胶原蛋白分散于油脂中，具有穿过皮肤屏障的能力。
第一方面，提供一种疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
S1.将重组人源胶原蛋白与磷酸盐配置成重组胶原蛋白磷酸盐溶液；
S2.调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为7-9；
S3.将疏水改性剂与有机溶剂混合制成改性剂溶液；
S4.将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，搅拌混合后进行提纯和冻干，即得疏水性重组人源胶原蛋白；
其中，步骤S3中的疏水改性剂为脂肪酸N-羟基琥珀酰亚胺酯，脂肪酸N-羟基琥珀酰亚胺酯的化学结构式如式(1)所示：
R为C11-C18的长直烷基链。
优选的，步骤S2为加入NaOH调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为7-9。
进一步的，所述的脂肪酸N-羟基琥珀酰亚胺酯为月桂酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、棕榈酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、硬脂酸N-羟基琥珀酰亚胺酯中的一种或多种。
进一步的，步骤S1的重组人源胶原蛋白与步骤S3的疏水改性剂的质量比为1：(0.05-20)。
进一步的，所述的有机溶剂选自丙酮、四氢呋喃、乙醇、乙酸乙酯中的一种或多种；步骤S3的有机溶剂体积为步骤S1制得的重组胶原蛋白磷酸盐溶液体积的5-15％。
进一步的，步骤S4中，搅拌混合的时间为1-12h，搅拌混合的温度为10-30℃。
进一步的，步骤S4的提纯包括PBS缓冲液透析、过滤、分液萃取和纯水透析中的至少一种。
进一步的，所述的PBS缓冲液透析的透析时间为24-26h；所述的过滤的精度为300-500目。
进一步的，所述的分液萃取使用的萃取剂为石油醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙醚中的一种或多种；所述的纯水透析的透析温度为2-8℃。
第二方面，提供一种疏水性重组人源胶原蛋白，由第一方面所述的疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法制得。
优选的，所述的疏水性重组人源胶原蛋白的分子量为27-30kDa。
第三方面，提供如第二方面所述的疏水性重组人源胶原蛋白在彩妆制备中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明提供一种疏水性重组人源胶原蛋白及其制备方法与应用，由于改性剂与胶原的极性差别及在水中溶解性差异，因此在通常情况下将疏水基团引入亲水性非常好的重组胶原较难，通过加入少量溶剂可以增加疏水改性剂的溶解性，对提高NHS酯的活性基团跟胶原分子侧链氨基的反应效率十分有益。本发明基于分子结构设计，通过疏水改性剂脂肪酸N-羟基琥珀酰亚胺酯增强重组胶原的疏水性，而定向基团的疏水改性不会过于影响重组胶原的生物活性，比现有技术中的酰氯、酸酐等疏水改性剂更为绿色和稳定可控，通过酰氯的改性方式容易加大胶原变性作用。本发明得到的疏水性重组人源胶原蛋白生物安全性良好，与烷烃类油脂及植物油脂兼容性良好。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例5产物与未改性重组胶原蛋白玻璃化转变温度测试图；
图2为本发明重组胶原蛋白、实施例2产物和实施例5产物细胞毒性检测结果；
图3为本发明实施例5和对比例的细胞迁移实验结果；
图4为本发明实施例5产物的平行实验的荧光显微镜图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
实施例1
一种疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
S1.将1g重组人源胶原蛋白与磷酸盐配置成1000mL重组胶原蛋白磷酸盐溶液；
S2.加入pH为12.0的NaOH调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为8.0；
S3.将10g月桂酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与50mL的四氢呋喃混合制成改性剂溶液；
S4.将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，搅拌混合的时间为1h，搅拌混合的温度为10℃，搅拌混合后进行提纯和冻干，提纯包括PBS缓冲液透析、分液萃取和纯水透析，具体为以0.2M的PBS缓冲液透析24h后，加入100mL的乙酸乙酯作为萃取剂进行分液萃取，将其下层清液继续进行纯水透析24h，透析温度为4℃，得到透析液；冻干具体为在-80℃的条件下冻干透析液，即得实施例1的疏水性重组人源胶原蛋白。
实施例2
一种疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
S1.将1g重组人源胶原蛋白与磷酸盐配置成1000mL重组胶原蛋白磷酸盐溶液；
S2.加入pH为12.0的NaOH调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为7.5；
S3.将0.05g棕榈酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与50mL的乙醇混合制成改性剂溶液；
S4.将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，搅拌混合的时间为1h，搅拌混合的温度为30℃，搅拌混合后进行提纯和冻干，提纯包括PBS缓冲液透析、分液萃取和纯水透析，具体为以0.2M的PBS缓冲液透析24h后，加入100mL石油醚萃取作为萃取剂进行分液萃取，将其下层清液继续以纯水透析24h，透析温度4℃，得到透析液；冻干具体为在-80℃的条件下冻干透析液，即得实施例2的疏水性重组人源胶原蛋白。
实施例3
一种疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
S1.将1g重组人源胶原蛋白与磷酸盐配置成1000mL重组胶原蛋白磷酸盐溶液；
S2.加入pH为12.0的NaOH调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为9.0；
S3.将0.5g硬脂酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与150mL的丙酮混合制成改性剂溶液；
S4.将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，搅拌混合的时间为1h，搅拌混合的温度为20℃，搅拌混合后进行提纯和冻干，提纯包括PBS缓冲液透析、分液萃取和纯水透析，具体为以0.2M的PBS缓冲液透析24h后，加入100mL乙醚作为萃取剂进行分液萃取，将其下层清液继续以纯水透析24h，透析温度4℃，得到透析液；冻干具体为在-80℃的条件下冻干透析液，即得实施例3的疏水性重组人源胶原蛋白。
实施例4
一种疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
S1.将1g重组人源胶原蛋白与磷酸盐配置成1000mL重组胶原蛋白磷酸盐溶液；
S2.加入pH为12.0的NaOH调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为7.0；
S3.将0.05g棕榈酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与100mL的丙酮溶解混合制成改性剂溶液；
S4.将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，搅拌混合的时间为1h，搅拌混合的温度为20℃，搅拌混合后进行提纯和冻干，提纯包括PBS缓冲液透析、分液萃取和纯水透析，具体为以0.2M的PBS缓冲液透析24h后，加入100mL乙醚作为萃取剂进行分液萃取，将其下层清液继续以纯水透析24h，透析温度4℃，得到透析液；冻干具体为在-80℃的条件下冻干透析液，即得实施例4的疏水性重组人源胶原蛋白。
实施例5
一种疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
S1.将1g重组人源胶原蛋白与磷酸盐配置成1000mL重组胶原蛋白磷酸盐溶液；
S2.加入pH为12.0的NaOH调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为7.5；
S3.将0.5g棕榈酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与100mL的丙酮混合制成改性剂溶液；
S4.将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，搅拌混合的时间为4h，搅拌混合的温度为20℃，搅拌混合后进行提纯和冻干，提纯包括过滤和纯水透析，具体为以500目滤布进行过滤，收集下层液体继续以纯水透析24h，透析温度4℃，得到透析液；冻干具体为在-80℃的条件下冻干透析液，即得实施例5的疏水性重组人源胶原蛋白。
对比例1
对比例1与实施例5相比，区别之处在于所用的疏水改性剂为辛酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯，其余条件均相同。
对比例2
对比例2与实施例5相比，区别之处在于步骤S2为加入pH为12.0的NaOH调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为6.0，其余条件均相同。
对比例3
对比例3与实施例5相比，区别之处在于步骤S2为加入pH为12.0的NaOH调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为10.0，其余条件均相同。
对比例4
对比例4与实施例5相比，区别之处在于步骤S3为将0.5g棕榈酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与20mL的丙酮混合制成改性剂溶液，其余条件均相同。
对比例5
对比例4与实施例5相比，区别之处在于步骤S3为将0.5g棕榈酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与200mL的丙酮混合制成改性剂溶液，其余条件均相同。
对比例6
一种疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
S1.将1g重组人源胶原蛋白与磷酸盐配置成1000mL重组胶原蛋白磷酸盐溶液；
S2.加入pH为12.0的NaOH调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为7.5；
S3.将0.05g棕榈酰氯与200mL的丙酮混合制成改性剂溶液；
S4.将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，补充加入NaOH维持pH不变，搅拌混合的时间为4h，搅拌混合的温度为20℃，搅拌混合后进行提纯和冻干，提纯包括过滤和纯水透析，具体为以500目滤布进行过滤，收集下层液体继续以纯水透析24h，透析温度4℃，得到透析液；冻干具体为在-80℃的条件下冻干透析液，即得对比例6的疏水性重组人源胶原蛋白。
对比例7
对比例7与实施例5相比，区别之处在于步骤S3的有机溶剂为DMSO(二甲基亚砜)，其余条件均相同。
对比例8
对比例8与实施例5相比，区别之处在于步骤S3为0.01g棕榈酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与100mL的丙酮混合制成改性剂溶液，其余条件均相同。
对比例9
对比例9与实施例5相比，区别之处在于S4中将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，搅拌混合的温度为5℃，其余条件均相同。
疏水性重组人源胶原蛋白改性反应程度检测：
OPA(邻苯二甲醛)法测定蛋白质游离氨基，其原理是OPA在β-巯基乙醇的存在下会与自由氨基形成黄色化合物，其在340nm处有牧征吸收，用紫外分光光度计可检测其OD值。
将7.620g硼砂和200mg十二烷基硫酸钠完全溶解于150ml去离子水中。将160mg邻苯二甲醛溶解于4ml无水乙醇中。溶解完全后将此OPA溶液转移至上述硼砂溶液中，随后称取176mgβ-巯基乙醇加入到溶液中，定容至200ml。将同等量的实施例和对比例样品配制成溶液，并稀释一定倍数。吸取600uL溶液或者水于10ml离心管中，加入4.5ml OPA试剂，上下翻转两次混匀，精确静置反应2min后，测定A340 nm，样品做3个平行取平均吸光值。并套用下式计算改性反应程度。
改性反应程度＝(未疏水改性胶原蛋白的OD值-疏水改性胶原蛋白的OD值)/未疏水改性胶原蛋白的OD值×100％。具体数据参见表1。
表1实施例1-5、对比例1-9疏水性重组人源胶原蛋白改性反应程度
测试样品 改性反应程度(％)
空白样 /
实施例1产物 6.85
实施例2产物 8.33
实施例3产物 7.62
实施例4产物 7.95
实施例5产物 10.21
对比例1产物 6.52
对比例2产物 1.15
对比例3产物 2.27
对比例4产物 1.89
对比例5产物 4.38
对比例6产物 3.42
对比例7产物 5.42
对比例8产物 0.56
对比例9产物 0.67
由表1测试结果可知，对比例1的改性反应程度结果表明未采用本申请的疏水改性剂会导致改性程度的降低。对比例2和对比例3的结果表明pH的变化对反应影响较大，过低过高都会降低改性反应程度。对比例4和对比例5与实施例5的区别之处在于有机溶剂的用量，对比例8与实施例5的区别之处在于疏水改性剂的用量，随着反应时间的延长，改性反应程度越来越高，有机溶剂和疏水改性剂的添加量并不是越多越好，对比例5的有机溶剂添加量过高反而容易造成蛋白失活。对比例4由于有机溶剂添加量少，所以疏水改性剂在水中溶解度低，不利于反应的进行。对比例9表明反应温度的降低将直接导致改性反应度下降。
DSC检测：
将实施例5制备得到的疏水性重组人源胶原蛋白与未改性重组胶原蛋白一同进行DSC检测玻璃化转变温度，具体过程如下：取5-10mg冻干样放入检测池，氮气吹扫，升温速率3℃/min，测温范围25-150℃，其结果见图1，图1为本发明实施例5产物与未改性重组胶原蛋白玻璃化转变温度测试图，从图中可以看出，本发明实施例5的疏水性重组人源胶原蛋白改性后玻璃化转变温度的下降，说明改性剂成功接枝到重组胶原上。
细胞毒性测试：
将对数生长期的L929细胞消化、计数并进行稀释；将稀释的细胞悬浮液接种到96孔板中(100μL/wells，1x 104cells，37℃、5％ CO2条件下培养24小时；取各组原液，使用新鲜的DMEM稀释一定倍数(0倍，2倍，5倍，10倍)，加入到98孔板中，空白对照组加入等量新鲜DMEM，在37℃、5％ CO2条件下继续培养24小时后，按照说明书将配制号的CCK-8溶液加入到96孔板中(100μL/wells)，在培养箱中培养2小时。随后，每孔吸取培养液至一个新的96孔板相应位置的孔中，并置于酶标仪上，振板3分钟，测定各孔在450nm处的OD值，计算三个复孔的平均OD值作为各个样品在不同浓度的OD值，并计算细胞相对存活率。图2为重组胶原蛋白、实施例2产物和实施例5产物细胞毒性检测结果，从图2中可以看出，本发明实施例2和实施例5的产物在20ppm浓度下使用生物安全性良好。
细胞迁移实验
将对数生长的L929细胞种植于六孔板中，细胞密度约为5x 105，使用含有10％胎牛血清的完全培养基培养24h后使细胞贴壁形成单层细胞，使用200μL移液管尖与细胞上垂直划三道痕迹，用PBS清洗三次，除去漂浮细胞；然后使用含有完全降解液的0.1％胎牛血清的培养基培养细胞；孵育12h和24h后，用倒置显微镜观察并拍照记录，并用ImageJ和分析软件对细胞迁移率进行定量分析。使用以下公式进行计算：迁移率(％)＝(初始划痕宽度-划痕宽度)/初始划痕宽度x100％。对实施例5和对比例1的产物分别做细胞迁移实验，图3为本发明实施例5和对比例的细胞迁移实验结果，从图3中可以看出，本发明疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法制得的疏水性重组人源胶原蛋白具有良好的促修复效果。
相容性测试：
取等量的实施例及对比例制得的疏水性重组人源胶原蛋白样品，在50-60℃的条件下均质分散于表2中的溶剂中(0.05％)，分散后样品于室温下储存30天，观察稳定性情况，表2为实施例1-5、对比例1-9的相容性测试结果：
表2实施例1-5、对比例1-9的相容性测试结果
由表2测试结果表明。本发明实施例的疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法制得的产物与烷烃类及植物油脂兼容性良好。
体外透皮测试
本次试验基于猪皮皮肤模型(1个月龄巴马香猪皮)，采用表面给药方式，选离体的完整皮肤切成适宜大小，固定在扩散池之间，接收池选用生理盐水作为采纳液，扩散池加入样品，使皮肤表面完全接处到样品。将样品均匀涂抹于模型表面，12h后检测样品在模型中的荧光强度，根据荧光信号的分布评价待测样品的渗透性。标记荧光素：FITC，给药浓度1mg/ml；将实施例5所得胶原蛋白用荧光素标记，透析后冻干再分散于白池花籽油中。图4为本发明实施例5产物的平行实验的荧光显微镜图，从图中可以看出本发明实施例制备方法制得的疏水性重组人源胶原蛋白分散在油脂中具有渗透效果，大部分重组胶原位于角质层。
本发明提供的疏水性重组人源胶原蛋白及其制备方法与应用，基于分子结构设计，通过疏水改性剂脂肪酸N-羟基琥珀酰亚胺酯增强重组胶原的疏水性，而定向基团的疏水改性不会过于影响重组胶原的生物活性，比现有技术中的酰氯、酸酐等疏水改性剂更为绿色和稳定可控，通过酰氯的改性方式容易加大胶原变性作用。本发明制得的疏水性重组人源胶原蛋白具有良好的生物安全性，同时增强其与烷烃类油脂及植物油脂的兼容性和分散稳定性，可以拓展重组胶原蛋白在彩妆中的应用。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求的保护范围为准。

Claims (7)

1.一种疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将重组人源胶原蛋白与磷酸盐配置成重组胶原蛋白磷酸盐溶液；
S2.调节重组胶原蛋白磷酸盐溶液的pH值为7-9；
S3.将疏水改性剂与有机溶剂混合制成改性剂溶液；
S4.将步骤S3制得的改性剂溶液加入至步骤S2调节pH后的重组胶原蛋白磷酸盐溶液中进行搅拌混合，搅拌混合后进行提纯和冻干，即得疏水性重组人源胶原蛋白；
其中，步骤S3中的疏水改性剂为脂肪酸N-羟基琥珀酰亚胺酯，脂肪酸N-羟基琥珀酰亚胺酯的化学结构式如式（1）所示：
式（1）；
R为C12-C18的长直烷基链；
步骤S1的重组人源胶原蛋白与步骤S3的疏水改性剂的质量比为1：（0.05-20）；
所述的有机溶剂选自丙酮、四氢呋喃、乙醇中的一种；步骤S3的有机溶剂体积为步骤S1制得的重组胶原蛋白磷酸盐溶液体积的5-15%；
步骤S4中，搅拌混合的时间为1-12h，搅拌混合的温度为10-30℃。
2.如权利要求1所述的疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述的脂肪酸N-羟基琥珀酰亚胺酯为月桂酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、棕榈酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、硬脂酸N-羟基琥珀酰亚胺酯中的一种。
3.如权利要求1所述的疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤S4的提纯包括PBS缓冲液透析、过滤、分液萃取和纯水透析中的至少一种。
4.如权利要求3所述的疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述的PBS缓冲液透析的透析时间为24-26h；所述的过滤的精度为300-500目。
5.如权利要求4所述的疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述的分液萃取使用的萃取剂为石油醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙醚中的一种或多种；所述的纯水透析的透析温度为2-8℃。
6.一种疏水性重组人源胶原蛋白，其特征在于，由权利要求1-5任意一项所述的疏水性重组人源胶原蛋白的制备方法制得。
7.如权利要求6所述的疏水性重组人源胶原蛋白在彩妆制备中的应用。
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