CN117412761A - 使用mate技术的用于递送细胞毒性药剂的抗体药物缀合物 - Google Patents

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Abstract

除其它外，本公开提供了用于将各种所关注部分与靶药剂定点缀合的技术。在一些实施例中，本公开利用靶结合部分来提供高缀合效率和选择性。在一些实施例中，所提供的技术可用于制备抗体缀合物。

Description

使用MATE技术的用于递送细胞毒性药剂的抗体药物缀合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2021年5月19日提交的美国申请第63/190,703号的优先权，所述美国申请特此通过引用整体并入。
背景技术
抗体-药物缀合物，可用于各种目的，例如，作为诊断试剂、治疗剂(例如，抗原靶向治疗剂)等。现有药物抗体缀合技术可能面临各种挑战。例如，将所关注部分(例如，检测部分、药物部分等)与靶分子(例如，用于抗体-药物缀合物的抗体)缀合的反应可能效率低和/或选择性低(例如，在靶分子的各种位置(例如，抗体的各种氨基酸残基)处缀合)，并且产物缀合物组合物通常是高度异质的，包括多个单独的缀合物类型，所述多个缀合物类型各自独立地具有其自己的所关注部分拷贝数、缀合位置(例如，蛋白质的不同的氨基酸残基)等。
用于向癌症细胞递送细胞毒性药剂的经批准的抗体药物缀合物包含PADCEV(恩弗妥单抗维多汀(enfortumab vedotin))是ADCETRIS(本妥昔单抗维多汀(brentuximabvedotin))，两者都可用于递送一甲基澳瑞他汀E(MMAE)。目前的药物抗体缀合技术包含通过赖氨酸残基缀合、通过还原链间二硫键缀合和通过工程化半胱氨酸残基缀合。图1。这些技术中的每种技术都有缺点。通过赖氨酸缀合产生广泛的药物抗体比率(DAR)，其中每种赖氨酸标记统计学概率。结果是数百万种可能的药物抗体缀合物。高DAR指定容易出现CMC问题，如聚合。一些物种可能容易释放其缀合药物，导致毒性。通过还原链间二硫键缀合也产生各种抗体缀合物种。药物连接可以随时间的推移而逆转，从而释放游离药物。通过工程化半胱氨酸缀合的现有技术涉及广泛的抗体操纵或工程化。
需要具有可预测DAR和不会“泄漏”缀合药物的缀合位点的药物抗体缀合物，并且不需要广泛的抗体工程化。本公开满足了所述需求并且具有另外的优点。
发明内容
本公开提供了包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)并能够形成抗体药物缀合物的双官能分子，其中缀合发生在抗体上有限且可预测的位点处。
在一些实施例中，缀合物的制造涉及多个步骤并且包含各种反应，如还原、氧化、水解等，并且此类反应可能引起不期望的转化，例如，在靶药剂部分的一个或多个位置处(例如，在抗体部分的一个或多个残基和/或一种或多种修饰(例如，聚糖)处)。此类不期望的转化可以进一步降低效率和/或增加产物缀合物组合物的异质性，使表征、评估和/或纯化过程复杂化并增加产物成本。
在一些实施例中，本公开提供了用于将各种所关注部分与靶标(例如，蛋白质)缀合的缀合技术。在一些实施例中，所提供的技术提供了定向缀合，因为所关注部分在靶标(例如，蛋白质，如抗体)的某些位置处选择性地缀合。在一些实施例中，所提供的技术利用更少的步骤。在一些实施例中，所提供的技术利用温和的反应条件。在一些实施例中，所提供的技术不包含如还原、氧化和/或水解等反应条件。在一些实施例中，所提供的技术包含基本上不从包括靶药剂部分和所关注部分的缀合物分子切割(例如，不从靶药剂部分、所关注部分和/或接头部分切割基团)。在一些实施例中，所关注部分是可检测部分(例如，FITC)。在一些实施例中，所关注部分是药物部分(例如，抗体-药物缀合物中利用的各种药物部分)。在一些实施例中，所关注部分是蛋白质部分(例如，与其它抗体药剂缀合的抗体药剂(作为靶药剂部分))。在一些实施例中，所关注部分是或包括反应基团。在一些实施例中，所关注部分是或包括反应基团，使得其它所关注部分可以通过反应基团处的反应进一步并入。
本公开的技术可以提供各种优势。在一些实施例中，本公开提供了提高的效率和/或选择性、降低的异质性水平和/或降低的不期望的转化(例如，通过更少的反应步骤(在一些实施例中，仅一个反应步骤)，避免某些反应条件(例如，还原、氧化、水解等)。
在一些实施例中，本公开提供了包括在靶药剂部分的某些位置处缀合的所关注部分的药剂。在一些实施例中，本公开提供了与来自参考技术(例如，如所提供的方法中所描述的不使用靶结合部分(例如，LG)的技术)的组合物相比，均质性增加的组合物。
在一些实施例中，本公开提供了技术，例如mAb治疗增强剂(MATETM)技术，所述技术可以提供与“现成”治疗性抗体药剂(例如，各种mAb)的高效定点化学缀合，并允许开发各种双特异性治疗剂。除其它外，本公开的技术，例如MATE技术，提供抗体药剂的化学工程化，例如各种现有抗体，而不需要产生新的DNA载体或主细胞系的基因工程。在一些实施例中，所提供的技术的优点包含1)定点缀合特异性，和/或2)与某些现有方法相比，不需要基因工程化，所述现有技术1)通过不加选择地与可用的氨基酸残基结合/缀合而缺乏定点缀合特异性，和/或2)需要基因工程化来产生缀合物标签。MATE技术的示意图示出于图2和3中。
附图说明
图1：现有药物抗体技术图。A.通过赖氨酸残基缀合。B.通过还原链间二硫键缀合。C.通过工程化半胱氨酸残基缀合。
图2：MATE技术的示意图。携带反应性靶结合部分、反应性基团的反应配偶体，所述反应性基团通过接头与和靶标(抗体)特异性结合的MOI连接。反应性基团连接在抗体赖氨酸残基处，从而释放靶结合部分。
图3：在抗体的反应性基团与抗体重链赖氨酸反应后与所述抗体特异性结合的反应性靶部分的化学图。反应性靶结合部分包括环肽靶结合部分、氟苯基反应性部分、PEG接头和肽MOI。
图4：化合物1101的残留有效载荷分析的标准曲线(图4A)；化合物1101的残留试剂分析(图4B)；以及残留uABT分析(图4C)。
图5：化合物1101有效载荷分析的HPLC迹线和峰面积。示出了10μM(最大峰值)、5μM、2μM和1μM的有效载荷的连续迹线。
图6：化合物1101残留试剂分析的HPLC迹线和峰面积。示出了10μM(最大峰值)、5μM、2μM和1μM的有效载荷的连续迹线。
图7：uABT分析的HPLC迹线。示出了14μM(最大峰值)、7μM、3.5μM、1.75μM和0.7μM的有效载荷的连续迹线。
具体实施方式
1.定义
本公开的化合物包含本文总体上描述的化合物并且通过本文公开的类别、子类和种类进一步说明。除非另有指示，否则如本文中所用，以下定义应适用。出于本公开的目的，化学元素是根据元素周期表(Periodic Table of the Elements)，CAS版本，《化学和物理学手册(Handbook of Chemistry and Physics)》，第75版来标识的。此外，有机化学的一般原理描述于“有机化学(Organic Chemistry)”，托马斯索雷尔(Thomas Sorrell)，大学科学书籍(University Science Books)，索萨利托：1999以及“玛奇高等有机化学(March'sAdvanced Organic Chemistry)”,第5版,编辑:Smith,M.B.和March,J.,约翰·威立父子出版公司(John Wiley&Sons),纽约(New York):2001。
如本文所使用的，除非在上下文中另有说明，否则(i)术语“一个(a)”或“一种(an)”可以理解为意指“至少一个”；(ii)术语“或”可以理解为意指“和/或”；(iii)术语“包括(comprising)”、“包括(comprise)”、“包含(including)”(无论是否与“不限于”一起使用)和“包含(include)”(无论是否与“不限于”一起使用)可以理解为涵盖逐项列出的组分或步骤，无论是单独呈现还是与一个或多个另外的组分或步骤一起呈现；(iv)开放式过渡短语“包括(comprising)”(以及其它开放式过渡短语，如“包括(comprise)”、“包含(including)”和“包含(include)”)涵盖和包含中间短语和封闭式短语“基本上由……组成”和“由……组成”，除非上下文另有说明，否则具有开放式短语的权利要求可以修改为中间或封闭式过渡短语；(v)术语“另一个”可以理解为意指至少一个另外的/第二个或多个；(v)术语“约”和“大约”可以理解为允许标准变化，如本领域普通技术人员将理解的；并且(vi)在提供范围的情况下，包含端点。除非另有说明，本文所描述的化合物可以以盐形式提供和/或利用，具体地是药学上可接受的盐形式。
药剂：术语“药剂”可以用于指任何化学类别的化合物或实体，包含例如多肽、核酸、糖类、脂质、小分子、金属或其组合或络合物。在适当情况下，如本领域的技术人员从上下文中清楚的，所述术语可以用于指作为或包括细胞或生物体或其级分、萃取物或组分的实体。可替代地或另外，如上下文将清楚的，所述术语可以用于指天然产物，因为其存在于自然中和/或从自然中获得。在一些情况下，再次如根据上下文将清楚的，该术语可以用来指一个或多个人造实体，因为其是通过人手的动作设计、工程化和/或生产的和/或不存在于自然中。在一些实施例中，可以利用药剂的分离或纯形式；在一些实施例中，可以利用药剂的粗形式。在一些实施例中，可能的药剂可以作为例如可以被筛选以鉴定或表征其内的活性剂的集合或库的形式提供。在一些情况下，术语“药剂”可以指作为或包括聚合物的化合物或实体；在一些情况下，所述术语可以指包括一个或多个聚合部分的化合物或实体。在一些实施例中，术语“药剂”可以是指不是聚合物和/或基本上不含任何聚合物和/或一或多种特定聚合部分的化合物或实体。在一些实施例中，所述术语可以是指缺少或基本上不含任何聚合部分的化合物或实体。在一些实施例中，药剂是化合物(例如，小分子、蛋白质、核酸等)。在一些实施例中，药剂是化合物的单价、二价或多价部分(例如，通过从化合物中去除一个(对于单价部分)或多个(对于二价或多价部分)氢原子和/或其它单价基团)。
脂肪族：如本文所使用的，“脂肪族”意指完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元的直链的(即，无支链的)或有支链的、经取代的或未经取代的烃链，或者完全饱和或含有一个或多个不饱和单元(但非芳香族)的经取代或未经取代的单环、双环或多环烃环，或其组合。在一些实施例中，脂肪族基团含有1-50个脂肪族碳原子。在一些实施例中，脂肪族基团含有1-20个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1-10个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1-9个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1-8个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1-7个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1-6个脂肪族碳原子。在仍其它实施例中，脂肪族基团含有1-5个脂肪族碳原子，并且在又其它实施例中，脂肪族基团含有1个、2个、3个或4个脂肪族碳原子。合适的脂肪族基团包含但不限于直链或支链的经取代的或未经取代的烷基、烯基、炔基和其杂化物，如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
烯基：如本文所使用的，术语“烯基”是指如本文所定义的具有一个或多个双键的脂肪族基团。
烷基：“烷基”被赋予其在所属领域中的普通含义，并且可以包含饱和脂肪族基团，包含直链烷基、支链烷基、环烷基(脂环族)、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。在一些实施例中，烷基具有1-100个碳原子。在某些实施例中，直链或支链烷基在其主链中具有约1-20个碳原子(例如，对于直链，C1-C20；对于支链，C2-C20)，并且可替代地约1-10个。在一些实施例中，环烷基环在其环结构中具有约3-10个碳原子，其中这种环是单环、双环或多环，并且可替代地环烷基环在其环结构中具有约5个、6个或7个碳。在一些实施例中，烷基可以是低级烷基，其中低级烷基包括1-4个碳原子(例如，对于直链低级烷基，C1-C4)。
炔基：“炔基”是如本文所定义的具有一个或多个三键的脂肪族基团。
芳基：单独使用或作为较大部分的一部分使用如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中使用的术语“芳基”是指具有共五到三十个环成员的单环、双环或多环体系，其中所述体系中的至少一个环是芳香族的。在一些实施例中，芳基是具有总共五个到十四个环成员的单环、双环或多环系统，其中所述系统中的至少一个环是芳香族的，并且其中所述系统中的每个环含有3至7个环成员。在一些实施例中，芳基是联芳基。术语“芳基”可以与术语“芳基环”可互换地使用。在本公开的某些实施例中，“芳基”是指包含但不限于可以携带一或多个取代基的苯基、联苯基、萘基、联萘基、蒽基等的芳香族环体系。如其在本文中所用，术语“芳基”的范围内还包含芳香族环与一或多个非芳香族环稠合的基团，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。
抗体：术语“抗体”是指包含足以赋予特定靶抗原特异性结合的规范免疫球蛋白序列元件的多肽。如本领域已知的，天然产生的完整抗体是包含彼此缔合成通常被称为“Y形”结构的两个相同的重链多肽(各自约50kD)和两个相同的轻链多肽(各自约25kD)的大约150kD的四聚体药剂。每个重链包含至少四个结构域(各自长约110个氨基酸)—氨基末端可变(VH)结构域(定位于Y结构的尖端处)，之后是三个恒定结构域：CH1、CH2和羧基末端CH3(定位在Y的主干的基部处)。被称为“开关”的短区连接重链可变区和恒定区。“铰链”将CH2结构域和CH3结构域与抗体的其余部分连接。此铰链区中的两个二硫键将完整抗体中的两个重链多肽彼此连接。每个轻链包含通过另一个“开关”彼此分开的两个结构域—氨基末端可变(VL)结构域，之后是羧基末端恒定(CL)结构域。完整抗体四聚体包括两个重链-轻链二聚体，其中重链和轻链通过单个二硫键彼此连接，两个其它二硫键将重链铰接区彼此连接，使得二聚体彼此连接并且四聚体形成。天然产生的抗体通常在CH2结构域上也被糖基化。天然抗体中的每个结构域具有特征在于由在压缩的反平行β桶中彼此压紧的两个β片层(例如，3链、4链或5链片层)形成的“免疫球蛋白折叠”的结构。每个可变结构域含有被称为“互补决定区”的三个高变环(CDR1、CDR2和CDR3)和四个稍微不变的“框架”区(FR1、FR2、FR3和FR4)。当天然抗体折叠时，FR区形成为结构域提供结构框架的β片层，并且将来自重链和轻链两者的CDR环区一起置于三维空间中，使得其形成位于Y结构的尖端处的单个高变抗原结合位点。天然存在的抗体的Fc区与互补系统的元件结合并且还与效应细胞上的受体结合，所述效应细胞包含例如介导细胞毒性的效应细胞。如本领域已知的，可以通过糖基化或其它修饰来调节Fc受体的Fc区的亲和力和/或其它结合属性。在一些实施例中，根据本公开产生和/或利用的抗体包含糖基化Fc结构域，包含具有经修饰的或经工程化的此糖基化的Fc结构域。出于本公开的目的，在某些实施例中，包含如存在于天然抗体中的足够的免疫球蛋白结构域序列的任何多肽或多肽复合物可以被称为和/或被用作“抗体”，无论此多肽是天然产生的(例如，通过生物体与抗原反应产生的)还是通过重组工程化、化学合成或其它人工系统或方法产生的。在一些实施例中，抗体是多克隆的；在一些实施例中，抗体是单克隆的。在一些实施例中，抗体具有带小鼠、兔、灵长类动物或人类抗体特性的恒定区序列。在一些实施例中，如本领域中已知的，抗体序列元件是人源化的、灵长化的、嵌合的等。此外，如本文所使用的，在适当的实施例中(除非另有说明或根据上下文清楚的)，术语“抗体”可以指用于在替代性呈现中利用抗体结构和功能特征的本领域已知的或开发的构造或格式中的任一种。例如，在一些实施例中，根据本公开利用的抗体呈选自但不限于以下的形式：完整IgA抗体、IgG抗体、IgE抗体或IgM抗体；双特异性或多特异性抗体(例如，描述于以下中的双特异性或多特异性抗体：Ulrich Brinkmann和Roland E.Kontermann(2017)双特异性抗体的制备(The making of bispecific antibodies)《mAb》,9:2,182-212,doi:10.1080/19420862.2016.1268307等)；如Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fd'片段、Fd片段和分离的CDR或其集合等抗体片段；单链Fv；多肽-Fc融合体；单结构域抗体(例如，如IgNAR或其片段等鲨鱼单结构域抗体)；骆驼科(cameloid)抗体；掩蔽抗体(例如，)；小模块化免疫制药(“SMIPsTM”)；单链双抗体或串联双抗体/>VHH；/>微抗体；/>锚蛋白重复蛋白或DART；TCR样抗体；/> 微量蛋白；/>CovX-抗体；以及CrossMab。在一些实施例中，抗体可以具有增强的Fc结构域。在一些实施例中，抗体可以包括一个或多个非天然氨基酸残基。在一些实施例中，抗体可能缺乏在天然产生时其将会具有的共价修饰(例如，多糖的附接)。在一些实施例中，抗体是无岩藻糖基化的抗体。在一些实施例中，抗体与另一个实体缀合。在一些实施例中，抗体可以含有共价修饰(例如，多糖的附接)、有效载荷[例如，可检测部分、治疗部分、催化部分等]或其它侧基[例如，聚乙二醇等])。
相当：术语“相当”是指可能彼此不完全相同但足够类似以允许在其之间进行比较使得本领域的技术人员将了解可以基于所观察到的差异或相似性而合理地得出结论的两种或两种以上药剂、实体、情形、条件组等。在一些实施例中，相当的条件组、情形、个体或群体由多个基本上相同的特征和一个或小数量的不同特征表征。本领域的普通技术人员将理解，在上下文中，对于两个或两个以上此类药剂、实体、情形、条件组等，在任何给定情况下被视为相当所需的同一性程度如何。例如，本领域的普通技术人员将了解，当通过足以保证以下合理结论的数量和类型的基本上相同的特征表征时，多组情形、个体或群体彼此相当：在不同组情形、个体或群体下或利用不同组情形、个体或群体获得的结果或观察到的现象的差异由被改变的那些特征的变化引起或指示所述变化。
脂环族：术语“脂环族”、“碳环”、“碳环基”、“碳环自由基”和“碳环”可互换使用，并且是指饱和或部分不饱和但非芳香族的如本文所描述的除非另有说明，否则具有3个至30个环成员的环状脂肪族单环、双环或多环系统。脂环族基团包含但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基、环辛基、环辛烯基、降冰片基、金刚烷基和环辛二烯基。在一些实施例中，脂环族基团有具有3-6个碳原子。在一些实施例中，脂环族基团是饱和的并且是环烷基。术语“脂环族”还可以包含与一个或多个芳香族或非芳香族环稠合的脂肪族环，如十氢萘基或四氢萘基。在一些实施例中，脂环族基团是双环的。在一些实施例中，脂环族基团是三环的。在一些实施例中，脂环族基团是多环的。在一些实施例中，“脂环族”是指完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元但不是芳香族的与分子的其余部分具有单个连接点的C3-C6单环烃或C8-C10双环或多环烃，或者完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元但不是芳香族的与分子的其余部分具有单个连接点的C9-C16多环烃。
卤代烷基和卤代烷氧基：术语“卤代烷基”是指被一或多个卤素原子取代的C1-4直链或支链烷基，实例是三氟甲基、二氟甲基和二氯甲基。术语“卤代烷氧基”是通过-O-键与其取代的基团连接的卤代烷基。实例包含三氟甲氧基和二氟甲氧基。
杂脂肪族：术语“杂脂肪族”在本领域具有其普通并且是指如本文所描述的脂肪族基团，其中一个或多个碳原子独立地被一个或多个杂原子(例如，氧、氮、硫、硅、磷等)替代。在一些实施例中，一个或多个选自C、CH、CH2和CH3的单元独立地被一个或多个杂原子(包含其氧化和/或取代形式)替代。在一些实施例中，杂脂肪族基团是杂烷基。在一些实施例中，杂脂肪族基团是杂烯基。
杂烷基：术语“杂烷基”在本领域具有其普通并且是指如本文所描述的烷基，其中一个或多个碳原子独立地被一个或多个杂原子(例如，氧、氮、硫、硅、磷等)替代。杂烷基的实例包含但不限于烷氧基、聚(乙二醇)-、经烷基取代的氨基、四氢呋喃基、哌啶基、吗啉基等。
杂芳基：单独或作为较大部分的部分使用的术语“杂芳基”，例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”，是指具有总共五个到三十个环成员的单环、双环或多环系统，其中所述体系中的至少一个环是芳香族的并且至少一个芳香族环原子是杂原子。在一些实施例中，杂芳基是具有5个至10个环原子(即，单环、双环或多环)的基团，在一些实施例中具有5、6、9或10个环原子。在一些实施例中，杂芳基具有在环状阵列中共享的6个、10个或14个π电子；并且除碳原子外，还具有一个到五个杂原子。杂芳基包含但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、中氮茚基、嘌呤基、二氮杂萘基和蝶啶基。在一些实施例中，杂芳基是杂联芳基，如联吡啶等。如本文所使用的，术语“杂芳基”还包含杂芳香族环与一或多个芳基、脂环族或杂环基环融合的基团，其中自由基或连接点位于杂芳香族环上。非限制性实例包含：吲哚基、异吲哚基、苯噻嗯基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可以是单环、双环或多环的。术语“杂芳基(heteroaryl)”可以与术语“杂芳基环”、“杂芳基团(heteroaryl group)”或“杂芳香族”可互换使用，所述术语中的任何术语包含任选地经取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基，其中烷基和杂芳基部分独立地是任选地经取代的。
杂原子：术语“杂原子”意指不是碳或氢的原子。在一些实施例中，杂原子是硼、氧、硫、氮、磷或硅(包含此类原子的各种形式，如氧化形式(例如，氮、硫、磷或硅的氧化形式)、碱性氮或杂环的可取代氮的季铵化形式(例如，N，如3,4-二氢-2H-吡咯基)、NH(如吡咯烷基)或NR+(如N-取代的吡咯烷基)等)。在一些实施例中，杂原子是氧、硫或氮。
杂环：如本文所使用的，术语“杂环”、“杂环基”、“杂环自由基”和“杂环”可互换使用，并且是指饱和或部分不饱和的并且具有一个或多个杂原子环原子的单环、双环或多环部分(例如，3-30元)。在一些实施例中，杂环基是饱和或部分不饱和的并且除碳原子外还具有一或多个，优选地一到四个杂原子的稳定的5元至7元单环或7元至10元双环杂环部分，如上文所定义的。当关于杂环的环原子使用时，术语“氮”包含经取代的氮。作为实例，在具有0-3个选自氧、硫和氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以是N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或+NR(如在N取代的吡咯烷基中)。杂环可以在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与其侧基连接，并且环原子中的任何环原子可以是任选地经取代的。此类饱和或部分不饱和杂环自由基的实例包含但不限于：四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧戊环基、二氮杂环基、氧氮杂环基、硫氮杂环基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基环”、“杂环基团(heterocyclic group)”、“杂环部分”和“杂环自由基”在本文中可互换地使用并且还包含杂环基环与一或多个芳基环、杂芳基环或脂环族环稠合的基团，如二氢吲哚基、3H-吲哚基、苯并二氢吡喃基、菲啶基或四氢喹啉基。杂环基可以是单环、双环或多环的。术语“杂环烷基”是指被杂环基取代的烷基，其中烷基和杂环基部分独立地是任选地经取代的。
任选地经取代的：如本文所描述的，本公开的化合物可以含有任选地经取代的部分和/或经取代的部分。通常，术语“经取代的”，无论前面是否有术语“任选地”，都意味着指定部分的一个或多个氢被合适的取代基替代。除非另有说明，否则“任选地经取代的”基团可以在基团的每个可取代定位处具有核酸的取代基，并且在任何给定结构中的多于一个定位可以被多于一个选自指定组的取代基取代时，在每个定位处，取代基可以是相同的或不同的。在一些实施例中，任选地经取代的基团是未经取代的。本公开所设想的取代基组合优选地是导致形成稳定或化学上可行的化合物的取代基组合。如本文所使用的，术语“稳定的”是指其在经受允许其产生、检测并且在某些实施例中回收、纯化并且用于本文所公开的目的中的一或多个目的的条件时基本上不会发生变化的化合物。下文描述了某些取代基。
可取代原子上合适的单价取代基，例如合适的碳原子独立地是卤素；-(CH2)0-4Ro；-(CH2)0-4ORo；-O(CH2)0-4Ro；-O-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4CH(ORo)2；-(CH2)0-4Ph，其可以被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph，其可以被Ro取代；-CH＝CHPh，其可以被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基，其可以被Ro取代；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(Ro)2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)C(S)Ro；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)C(S)NRo 2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)ORo；-N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)Ro；-C(S)Ro；-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)SRo；-(CH2)0-4C(O)OSiRo 3；-(CH2)0-4OC(O)Ro；-OC(O)(CH2)0-4SRo；-SC(S)SRo；-(CH2)0-4SC(O)Ro；-(CH2)0-4C(O)NRo 2；-C(S)NRo 2；-C(S)SRo；-(CH2)0-4OC(O)NRo 2；-C(O)N(ORo)Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-C(NORo)Ro；-(CH2)0-4SSRo；-(CH2)0-4S(O)2Ro；-(CH2)0-4S(O)2ORo；-(CH2)0-4OS(O)2Ro；-S(O)2NRo 2；-(CH2)0-4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2NRo 2；-N(Ro)S(O)2Ro；-N(ORo)Ro；-C(NH)NRo 2；-Si(Ro)3；-OSi(Ro)3；-B(Ro)2；-OB(Ro)2；-OB(ORo)2；-P(Ro)2；-P(ORo)2；-P(Ro)(ORo)；-OP(Ro)2；-OP(ORo)2；-OP(Ro)(ORo)；-P(O)(Ro)2；-P(O)(ORo)2；-OP(O)(Ro)2；-OP(O)(ORo)2；-OP(O)(ORo)(SRo)；-SP(O)(Ro)2；-SP(O)(ORo)2；-N(Ro)P(O)(Ro)2；-N(Ro)P(O)(ORo)2；-P(Ro)2[B(Ro)3]；-P(ORo)2[B(Ro)3]；-OP(Ro)2[B(Ro)3]；-OP(ORo)2[B(Ro)3]；-(C1-4直链或支链亚烷基)O-N(Ro)2；或-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)O-N(Ro)2，其中每个Ro可以如本文所定义地被取代，并且独立地是氢；C1-20脂肪族；具有1-5个独立选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的C1-20杂脂肪族；-CH2-(C6-14芳基)；-O(CH2)0-1(C6-14芳基)；-CH2-(5-14元杂芳基环)；具有0-5个独立地选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的5-20元饱和的、部分不饱和的单环、双环或多环或芳基环，或者尽管上文进行了定义，但是两个独立出现的Ro与其中间原子一起形成具有0-5个独立地选自氮、氧、硫、硅和磷的杂原子的5-20元饱和的、部分不饱和的单环、双环或多环或芳基环，所述杂原子可以如下文所定义的被取代。
Ro上合适的单价取代基(或通过两个独立出现的Ro与其中间原子一起形成的环)独立地是卤素；-(CH2)0-2R●；-(卤代R●)；-(CH2)0-2OH；-(CH2)0-2OR●；-(CH2)0-2CH(OR·)2；-O(卤代R·)；-CN；-N3；-(CH2)0-2C(O)R·；-(CH2)0-2C(O)OH；-(CH2)0-2C(O)OR·；-(CH2)0-2SR·；-(CH2)0- 2SH；-(CH2)0-2NH2；-(CH2)0-2NHR·；-(CH2)0-2NR· 2；-NO2；-SiR· 3；-OSiR· 3；-C(O)SR·；-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)OR·；或-SSR·，其中每个R·是未经取代的或者在前面带有“卤代”的情况下仅被一个或多个卤素取代，并且独立地选自C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳基环。Ro的饱和碳原子上的适当的二价取代基包含＝O和＝S。
例如在合适的碳原子上的合适的二价取代基独立地是以下：＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R* 2))2-3O-或-S(C(R* 2))2-3S-，其中每个独立出现的R*选自：氢；可以如下文所定义的被取代的C1-6脂肪族；以及具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的未经取代的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳基环。与“任选地经取代的”基团的邻位可取代碳结合的合适的二价取代基包含：-O(CR* 2)2-3O-，其中每个独立出现的R*选自：氢；可以如下文所定义的被取代的C1-6脂肪族；以及具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的未经取代的5-6元饱和环、部分不饱和环和芳基环。
R*的脂肪族基团上的合适的取代基独立的是：卤素、-R·、-(卤代R·)、-OH、-OR·、-O(卤代R·)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR·、-NH2、-NHR·、-NR· 2或-NO2，其中每个R·是未经取代的或者在前面有“卤代”的情况下仅被一或多个卤素取代，并且独立地是C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元饱和的、部分不饱和的或芳基环。
在一些实施例中，可取代氮上的合适的取代基独立地是 或其中每个/>独立地是氢、可以如下文所定义的经取代的C1-6脂肪族、未经取代的-OPh或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的未经取代的5-6元饱和环、部分不饱和环或芳基环，或者，尽管有上述定义，但两个独立出现的/>连同其中间原子一起，形成具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的未经取代的3-12元饱和环、部分不饱和环或芳基单环或双环。
的脂肪族基团上的合适的取代基独立的是：卤素、-R·、-(卤代R·)、-OH、-OR·、-O(卤代R·)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR·、-NH2、-NHR·、-NR· 2或-NO2，其中每个R·是未经取代的或者在前面有“卤代”的情况下仅被一或多个卤素取代，并且独立地是C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元饱和的、部分不饱和的或芳基环。
部分不饱和的：如本文所使用的，术语“部分不饱和的”是指包含至少一个双键或三键的环部分。术语“部分不饱和的”旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但不旨在包含芳基或杂芳基部分，如本文所定义的。
药物组合物：如本文所使用的，术语“药物组合物”是指与一种或多种药学上可接受的载体一起配制的活性剂。在一些实施例中，活性剂以适合于在施用给相关群体时显示出实现预定治疗效果的统计学显著概率的治疗方案中施用的单位剂量存在。在一些实施例中，可以特别地配制药物组合物以用于以固体形式或液体形式施用，包含适于以下的那些：口服施用，例如浸液(水性或非水性溶液或悬浮液)、片剂例如靶向用于口腔、舌下和全身吸收的那些、大丸剂、粉剂、颗粒剂、用于向舌施用的糊剂；肠胃外施用，例如通过皮下、肌内、静脉内或硬膜外注射，作为例如无菌溶液或悬浮液或者持续释放调配物；局部施用，例如作为乳膏、软膏或受控释放的贴剂或施用于皮肤、肺或口腔的喷雾；阴道内地或直肠内地，例如，作为阴道栓、乳膏或泡沫；舌下地；经眼地；经皮地；或鼻腔地、肺的和向其它粘膜表面。
药学上可接受的：如本文所使用的，短语“药学上可接受的”是指在正确医学判断的范围内适合于与人类和动物的组织接触使用而不会产生过多毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症的与合理的益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
药学上可接受的载体：如本文所使用的，术语“药学上可接受的载体”是指如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂或溶剂包囊材料等涉及将主题化合物从一个器官或身体的一部分承载或运输到另一个器官或身体的另一部分的药学上可接受的材料、组合物或媒剂。在与调配物的其它成分相容并且对患者无害的意义上来讲，每种载体必须是“可接受的”。可以充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包含：糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇以及聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；pH缓冲溶液；聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；以及药物调配物中采用的其它无毒的相容物质。
药学上可接受的盐：如本文所使用的，术语“药学上可接受的盐”是指适合于在药物环境中使用的这种化合物的盐，即在合理的医学判断范围内适合于与人类和低等动物的组织接触使用而不会产生异常毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的益处/风险比相称的盐。药学上可接受的盐是本领域众所周知的。例如，药学上可接受的盐的列表可以在G.Steffen Paulekuhn等人的药物化学杂志(Journal of Medicinal Chemistry)》2007,50,6665和《药物盐手册：特性、选择和用途(Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use),P.Heinrich Stahl和Camille G.Wermuth编辑,Wiley-VCH,2002中发现。
在一些实施例中，药学上可接受的盐包含但不限于：无毒的酸加成盐，其是使用如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸等无机酸或使用如乙酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸等有机酸或通过使用所属领域中所使用的其它方法如离子交换形成的具有氨基的盐。在一些实施例中，药学上可接受的盐包含但不限于：己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐(lactobionate)、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。在一些实施例中，所提供的化合物包括一个或多个酸性基团并且药学上可接受的盐是碱金属、碱土金属或铵(例如，N(R)3的铵盐，其中每个R在本公开中独立地定义和描述)盐。代表性碱或碱土金属盐包含钠、锂、钾、钙、镁等。在一些实施例中，药学上可接受的盐是钠盐。在一些实施例中，药学上可接受的盐是钾盐。在一些实施例中，药学上可接受的盐是钙盐。在一些实施例中，药学上可接受的盐包含：在适当时，使用抗衡离子如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、具有1个至6个碳原子的烷基、磺酸根以及芳基磺酸根形成的无毒的铵、季铵以及胺阳离子。在一些实施例中，所提供的化合物包括超过一个酸基团。在一些实施例中，此类化合物的药学上可接受的盐，或通常地盐，包括两个或更多个可以相同或不同的阳离子。在一些实施例中，在药学上可接受的盐(或通常地盐)中，酸性基团中的所有可离子化氢(例如，在pKa不大于约11、10、9、8、7、6、5、4、3或2的水溶液中；在一些实施例中，不大于约7；在一些实施例中，不大于约6；在一些实施例中，不大于约5；在一些实施例中，不大于约4；在一些实施例中，不大于约3)被阳离子替代。
保护基团：术语“保护基团”在本领域中是众所周知的，并且包含在《有机合成中的保护基团(Protecting Groups in Organic Synthesis)》,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,约翰·威立父子出版公司,1999中详细描述的那些，所述文献的全部内容通过引用并入本文。还包含那些特别适用于以下中描述的核苷和核苷酸化学的保护基团：《核酸化学实验室指南(Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry)》,由Serge L.Beaucage等人编辑06/2012，第2章的全部内容通过引用并入本文。合适的氨基保护基团包含氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、氨基甲酸9-芴基甲酯(Fmoc)、氨基甲酸9-(2-磺基)芴基甲酯、氨基甲酸9-(2,7-二溴)氟烯基甲酯、氨基甲酸2,7-二叔丁基-[9-(10,10-二氧代-10,10,10,10-四氢噻吨基)]甲酯(DBD-Tmoc)、氨基甲酸4-甲氧基苯甲酰甲酯(Phenoc)、氨基甲酸2,2,2-三氯乙酯(Troc)、氨基甲酸2-三甲基甲硅烷基乙酯(Teoc)、氨基甲酸2-苯乙酯(hZ)、氨基甲酸1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙酯(Adpoc)、氨基甲酸1,1-二甲基-2-卤代乙酯、氨基甲酸1,1-二甲基-2,2-二溴乙酯(DB-t-BOC)、氨基甲酸1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙酯(TCBOC)、氨基甲酸1-甲基-1-(4-联苯基)乙酯(Bpoc)、氨基甲酸1-(3,5-二叔丁基苯基)-1-甲基乙酯(t-Bumeoc)、氨基甲酸2-(2'-和4'-吡啶基)乙酯(Pyoc)、氨基甲酸2-(N,N-二环己基甲酰胺基)乙酯、氨基甲酸叔丁酯(BOC)、氨基甲酸1-金刚烷酯(Adoc)、氨基甲酸乙烯酯(Voc)、氨基甲酸烯丙酯(Alloc)、氨基甲酸1-异丙基烯丙酯(Ipaoc)、氨基甲酸肉桂酯(Coc)、氨基甲酸4-硝基肉桂酯(Noc)、氨基甲酸8-喹啉酯、氨基甲酸N-羟基哌啶酯、氨基甲酸烷基二硫代酯、氨基甲酸苄酯(Cbz)、氨基甲酸对甲氧基苄酯(Moz)、氨基甲酸对硝基苄酯、氨基甲酸对溴苄酯、氨基甲酸对氯苄酯、氨基甲酸2,4-二氯苄酯、氨基甲酸4-甲基亚磺酰基苄酯(Msz)、氨基甲酸9-蒽基甲酯、氨基甲酸二苯基甲酯、氨基甲酸2-甲基硫代乙酯、氨基甲酸2-甲基磺酰基乙酯、氨基甲酸2-(对甲苯磺酰基)乙酯、氨基甲酸[2-(1,3-二噻吩基)]甲酯(Dmoc)、氨基甲酸4-甲基苯硫酯(Mtpc)、氨基甲酸2,4-二甲基苯硫酯(Bmpc)、氨基甲酸2-膦酰乙酯(Peoc)、氨基甲酸2-三苯基异丙酯(Ppoc)、氨基甲酸1,1-二甲基-2-氰基乙酯、氨基甲酸间-氯-对-酰氧基苄酯、氨基甲酸对-(二羟基硼基)苄酯、氨基甲酸5-苯并异噁唑基甲酯、氨基甲酸2-(三氟甲基)-6-色壬基甲酯(Tcroc)、氨基甲酸间硝基苯酯、氨基甲酸3,5-二甲氧基苄酯、氨基甲酸邻硝基苄酯、氨基甲酸3,4-二甲氧基-6-硝基苄酯、氨基甲酸苯基(邻硝基苯基)甲酯、吩噻嗪基-(10)-羰基衍生物、N'-对甲苯磺酰基氨基羰基衍生物、N'-苯基氨基硫代羰基衍生物、氨基甲酸叔戊酯、S-硫代氨基甲酸苄酯、氨基甲酸对氰基苄酯、氨基甲酸环丁酯、氨基甲酸环己酯、氨基甲酸环戊酯、氨基甲酸环丙基甲酯、氨基甲酸对癸氧基苄酯、氨基甲酸2,2-二甲氧基羰基乙烯酯、氨基甲酸邻-(N,N-二甲基甲酰胺基)苄酯、氨基甲酸1,1-二甲基-3-(N,N-二甲基甲酰胺基)丙酯、氨基甲酸1,1-二甲基丙炔酯、氨基甲酸二(2-吡啶基)甲酯、氨基甲酸2-呋喃基甲酯、氨基甲酸2-碘乙酯、氨基甲酸异冰片酯、氨基甲酸异丁酯、氨基甲酸异烟碱、氨基甲酸对-(p'-甲氧基苯基偶氮)苄酯、氨基甲酸1-甲基环丁酯、氨基甲酸1-甲基环己酯、氨基甲酸1-甲基-1-环丙基甲酯、氨基甲酸1-甲基-1-(3,5-二甲氧基苯基)乙酯、氨基甲酸1-甲基-1-(对苯基偶氮苯基)乙酯、氨基甲酸1-甲基-1-苯基乙酯、氨基甲酸1-甲基-1-(4-吡啶基)乙酯、氨基甲酸苯酯、氨基甲酸对-(苯基偶氮)苄酯、氨基甲酸2,4,6-三叔丁基苯酯、氨基甲酸4-(三甲基铵)苄酯、氨基甲酸2,4,6-三甲基苄酯、甲酰胺、乙酰胺、氯乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、苯乙酰胺、3-苯丙酰胺、吡啶酰胺、3-吡啶基甲酰胺、N-苯甲酰基苯丙氨酰衍生物、苯甲酰胺、对苯甲酰胺、邻硝基苯乙酰胺、邻硝基苯氧基乙酰胺、乙酰乙酰胺、(N'-二硫代苄氧基羰基氨基)乙酰胺、3-(对羟基苯基)丙酰胺、3-(邻硝基苯基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻硝基苯氧基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻苯基偶氮苯氧基)丙酰胺、4-氯丁酰胺、3-甲基-3-硝基丁酰胺、邻硝基肉桂酰胺、N-乙酰甲硫氨酸衍生物、邻硝基苯甲酰胺、邻-(苯甲酰氧基甲基)苯甲酰胺、4,5-二苯基-3-噁唑啉基-2-酮、N-邻苯二甲酰亚胺、N-二硫代琥珀酰亚胺(Dts)、N-2,3-二苯基马来酰亚胺、N-2,5-二甲基吡咯、N-1,1,4,4-四甲基二甲硅烷基氮杂环戊烷加合物(STABASE)、5-取代的1,3-二甲基-1,3,5-三氮杂环己烷-2-酮、5-取代的1,3-二苄基-1,3,5-三氮杂环己烷-2-酮、1-取代的3,5-二硝基-4-吡啶酮、N-甲胺、N-烯丙胺、N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲胺(SEM)、N-3-乙酰氧基丙胺、N-(1-异丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)胺、季铵盐、N-苄胺、N-二(4-甲氧基苯基)甲胺、N-5-二苯并琥珀胺、N-三苯基甲胺(Tr)、N-[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]胺(MMTr)、N-9-苯基芴胺(PhF)、N-2,7-二氯代-9-芴基亚甲胺、N-二茂铁基甲基氨基(Fcm)、N-2-吡啶基甲基氨基N'-氧化物、N-1,1-二甲基硫亚甲胺、N-亚苄基胺、N-对甲氧基苯亚甲胺、N-二苯基亚甲胺、N-[(2-吡啶基)苯亚甲基]亚甲胺、N-(N',N'-二甲基氨基亚甲基)胺、N,N'-异亚丙基二胺、N-对硝基苯亚甲胺、N-亚水杨基胺、N-5-氯亚水杨基胺、N-(5-氯代-2-羟基苯基)苯基亚甲胺、N-亚环己胺、N-(5,5-二甲基-3-氧代-1-环己烯基)胺、N-硼烷衍生物、N-二苯基硼酸衍生物、N-[苯基(五酰基铬-或钨)酰基]胺、N-铜螯合物、N-锌螯合物、N-硝基胺、N-亚硝胺、胺N-氧化物、二苯基膦酰胺(Dpp)、二甲基硫代膦酰胺(Mpt)、二苯基硫代膦酰胺(Ppt)、二烷基氨基磷酸酯、二苄基氨基磷酸酯、二苯基氨基磷酸酯、苯亚磺酰胺、邻硝基苯亚磺酰胺(Nps)、2,4-二硝基苯亚磺酰胺、五氯苯亚磺酰胺、2-硝基-4-甲氧基苯亚磺酰胺、三苯基甲基亚磺酰胺、3-硝基吡啶亚磺酰胺(Npys)、对甲苯磺酰胺(Ts)、苯磺酰胺、2,3,6,-三甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Mtr)、2,4,6-三甲氧基苯磺酰胺(Mtb)、2,6-二甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Pme)、2,3,5,6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Mte)、4-甲氧基苯磺酰胺(Mbs)、2,4,6-三甲基苯磺酰胺(Mts)、2,6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰胺(iMds)、2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰胺(Pmc)、甲磺酰胺(Ms)、β-三甲基硅烷基乙烷磺酰胺(SES)、9-蒽磺酰胺、4-(4',8'-二甲氧基萘基甲基)苯磺酰胺(DNMBS)、苄基磺酰胺、三氟甲基磺酰胺以及苯甲酰磺酰胺。
适当保护的羧酸进一步包含但不限于甲硅烷基-、烷基-、烯基-、芳基-和芳烷基-保护的羧酸。合适的甲硅烷基的实例包含三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基等。合适的烷基的实例包含甲基、苄基、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、三苯甲基、叔丁基、四氢吡喃-2-基。合适的烯基的实例包含烯丙基。合适的芳基的实例包含任选地经取代的苯基、联苯基或萘基。合适的芳烷基的实例包含任选地经取代的苄基(例如，对甲氧基苄基(MPM)、3,4-二甲氧基苄基、O-硝基苄基、对硝基苄基、对卤代苄基、2,6-二氯苄基、对氰基苄基)和2-和4-吡啶甲基。
合适的羟基保护基团包含甲基、甲氧基甲基(MOM)、甲硫基甲基(MTM)、叔丁基硫代甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基(SMOM)、苯甲氧基甲基(BOM)、对甲氧基苯甲氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、愈创木酚甲基(GUM)、叔丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基(POM)、甲硅烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、双(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEMOR)、四氢吡喃基(THP)、3-溴四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-甲氧基环己基、4-甲氧基四氢吡喃基(MTHP)、4-甲氧基四氢噻喃基、4-甲氧基四氢噻喃基S,S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP)、1,4-二噁烷-2-基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢-7,8,8-三甲基-4,7-亚甲基苯并呋喃-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苄氧基乙基、1-甲基-1-苄氧基-2-氟乙基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-(苯基硒基)乙基、叔丁基、烯丙基、对氯苯基、对甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苄基、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、对卤代苄基、2,6-二氯苄基、对氰基苄基、对苯基苄基、2-吡啶甲基、4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基N-氧化物、二苯基甲基、p,p'-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚、三苯甲基、α-萘基二苯甲基、对甲氧基苯基二苯甲基、二(对甲氧基苯基)苯甲基、三(对甲氧基苯基)甲基、4-(4'-溴代苯酰甲基苯氧基)二苯基甲基、4,4',4"-三(4,5-二氯邻苯二甲酰亚氨基苯基)甲基、4,4',4"-三(乙酰氧基苯基)甲基、4,4',4"-三(苯甲酰氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)双(4',4"-二甲氧基苯基)甲基、1,1-双(4-甲氧基苯基)-1'-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)氧杂蒽基、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基、1,3-苯并二硫杂环戊烷-2-基、苯并异噻唑基S,S-二氧化基、三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、三异丙基甲硅烷基(TIPS)、二甲基异丙基甲硅烷基(IPDMS)、二乙基异丙基甲硅烷基(DEIPS)、二甲基乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)、三苄基甲硅烷基、三对二甲苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基(DPMS)、叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基(TBMPS)、甲酸酯、甲酸苯甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯丙酸酯、4-氧代戊酸酯(乙酰丙酸酯)、4,4-(乙二硫代)戊酸酯(左旋二酰基二硫缩醛)、新戊酸酯、金刚烷、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苯甲酸苯甲酸酯、2,4,6-苯甲酸三甲酯(甲基苯甲酸酯)、碳酸烷基甲酯、碳酸9-芴基甲酯(Fmoc)、碳酸烷基乙酯、碳酸2,2,2-三氯乙酯(Troc)、碳酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯(TMSEC)、碳酸2-(苯磺酰基)乙酯(Psec)、碳酸2-(三苯基膦)乙酯(Peoc)、碳酸烷基异丁酯、碳酸烷基乙烯酯、碳酸烷基烯丙酯、碳酸烷基对硝基苯酯、碳酸烷基苄酯、碳酸烷基对甲氧基苄基酯、碳酸烷基3,4-二甲氧基苄酯、碳酸烷基邻硝基苄酯、碳酸烷基对硝基苄酯、S-硫代碳酸苄酯、4-乙氧基-1-碳酸萘酯、二硫代碳酸甲酯、2-碘苯甲酸酯、4-叠氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、邻-(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲酰基苯磺酸酯、2-(甲基硫代甲氧基)乙基酯、4-(甲基硫代甲氧基)丁酸酯、2-(甲基硫代甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-双(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯代二苯乙酸酯、异丁酸酯、单琥珀酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯、邻-(甲氧基羰基)苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、烷基N,N,N',N'-四甲基磷酰二胺酯、烷基N-氨基甲酸苯酯、硼酸盐、二甲基硫代膦酰基、烷基2,4-二硝基苯基亚磺酸酯、硫酸盐、甲磺酸盐(甲磺酸盐)、苄基磺酸盐和甲苯磺酸盐(Ts)。为了保护1,2-或1,3-二醇，保护基团包含亚甲基缩醛、亚乙基缩醛、1-叔丁基亚乙基缩酮、1-苯基亚乙基缩酮、(4-甲氧基苯基)亚乙基缩醛、2,2,2-三氯亚乙基缩醛、丙酮、亚环戊基缩酮、亚环己基缩酮、环庚基缩酮、亚苄基乙缩醛、对甲氧基亚苄基乙缩醛、2,4-二甲氧基亚苄基缩酮、3,4-二甲氧基亚苄基乙缩醛、2-硝基亚苄基乙缩醛、甲氧基亚甲基乙缩醛、乙氧基亚甲基乙缩醛、二甲氧基亚甲基原酸酯、1-甲氧基亚乙基原酸酯、1-乙氧基亚乙基原酸酯、1,2-二甲氧基亚乙基原酸酯、α-甲氧基亚苄基原酸酯、1-(N,N-二甲氨基)亚乙基衍生物、α-(N,N'-二甲氨基)亚苄基衍生物、2-氧杂环戊基原酸酯、二叔丁基甲硅烷基(DTBS)、1,3-(1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷)衍生物(TIPDS)、四叔丁氧基二硅氧烷-1,3-二亚甲基衍生物(TBDS)、环状碳酸酯、环状硼酸酯、硼酸乙酯和硼酸苯酯。
在一些实施例中，羟基保护基团是乙酰基、叔丁基、叔丁氧基甲基、甲氧基甲基、四氢吡喃基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、对氯苯基、2,4-二硝基苯基、苄基、苯甲酰基、对苯基苯甲酰基、2,6-二氯苄基、二苯基甲基、对硝基苄基、三苯甲基(triphenylmethyl)(三苯甲基(trityl))、4,4'-二甲氧基三苯甲基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、苯甲酰基甲酸酯、氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基、新戊酰基、碳酸9-芴基甲酯、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯、三苯甲基、单甲氧基三苯甲基(MMTr)、4,4'-二甲氧基三苯甲基(DMTr)和4,4',4"-三甲氧基三苯甲基(TMTr)、2-氰乙基(CE或Cne)、2-(三甲基甲硅烷基)乙基(TSE)、2-(2-硝基苯基)乙基、2-(4-氰苯基)乙基、2-(4-硝基苯基)乙基(NPE)、2-(4-硝基苯基磺酰基)乙基、3,5-二氯苯基、2,4-二甲基苯基、2-硝基苯基、4-硝基苯基、2,4,6-三甲基苯基、2-(2-硝基苯基)乙基、丁硫基羰基、4,4',4"-三(苯甲酰氧基)三苯甲基、二苯基氨基甲酰基、乙酰丙酰基、2-(二溴甲基)苯甲酰基(Dbmb)、苯基呫吨-9-基(皮克斯基(pixyl)或9-(对甲氧基苯基)黄嘌呤-9-基(MOX)。在一些实施例中，每个羟基保护基团独立地选自乙酰基、苄基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基和4,4'-二甲氧基三苯甲基。在一些实施例中，羟基保护基团选自由三苯甲基、单甲氧基三苯甲基和4,4'-二甲氧基三苯甲基组成的组。在一些Dbmb)、2-(异丙基硫代甲氧基甲基)苯甲酰基(Ptmt)9-实施例中，磷键保护基团是在寡核苷酸合成过程中与磷键(例如，核苷酸间键)连接的基团。在一些实施例中，保护基团与硫代磷酸酯基团的硫原子连接。在一些实施例中，保护基团与核苷酸间硫代磷酸酯键的氧原子连接。在一些实施例中，保护基团与核苷酸间磷酸键的氧原子连接。在一些实施例中，保护基团是2-氰乙基(CE或Cne)、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-硝基乙基、2-磺酰基乙基、甲基、苄基、邻硝基苄基、2-(对硝基苯基)乙基(NPE或Npe)、2-苯乙基、3-(N-叔丁基甲酰胺基)-1-丙基、4-氧代戊基、4-甲硫基-l-丁基、2-氰基-1,1-二甲基乙基、4-N-甲基氨基丁基、3-(2-吡啶基)-1-丙基、2-[N-甲基-N-(2-吡啶基)]氨基乙基、2-(N-甲酰基,N-甲基)氨基乙基或4-[N-甲基-N-(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]丁基。
受试者：如本文所使用的，术语“受试者”是指根据本公开的对其施用化合物或组合物例如以便实现实验、诊断、预防和/或治疗目的的任何生物体。典型的受试者包含动物(例如，如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物和人等哺乳动物；昆虫；蠕虫；等等)和植物。在一些实施例中，受试者是人。在一些实施例中，受试者可能患有和/或易患疾病、病症和/或病状。
基本上：如本文所使用的，术语“基本上”是指表现出所关注的特征或性质的全部或接近全部的范围或程度的定性条件。本领域的普通技术人员应当理解的是生物学以及化学现象很少(如果有的话)会达到完成和/或进行到完成或实现或避免一个绝对的结果。因此，术语“基本上”被用在本文来获得在许多生物学和/或化学现象中潜在地缺少的内在的完全性。
治疗剂：术语“治疗剂”通常是指当施用于受试者时引起期望效果(例如，期望的生物学、临床或药理学效果)的任何药剂。在一些实施例中，如果药剂跨适当的群体表现出统计学显著的效果，则认为所述药剂是治疗剂。在一些实施例中，适当的群体是患有和/或易患疾病、病症或病状的受试者群体。在一些实施例中，适当的群体是模型生物体的群体。在一些实施例中，适当的群体可以通过一个或多个标准来定义，如年龄组、性别、遗传背景、先前存在的临床病状、先前的疗法暴露。在一些实施例中，治疗剂是当以有效量施用于受试者时减轻、改善、缓解、抑制、预防、延迟受试者的疾病、病症和/或病状的一种或多种症状或特征的发作、降低其严重性和/或降低其发生率的物质。在一些实施例中，“治疗剂”是已经或需要由政府机构批准才能将其销售给人类施用的药剂。在一些实施例中，“治疗剂”是需要医疗处方才能给人类施用的药剂。在一些实施例中，治疗剂是本文所描述的化合物。
治疗有效量：术语“治疗有效量”是指在作为治疗方案的一部分施用时引起期望生物反应的物质(例如，治疗剂、组合物和/或配制品)的量。在一些实施例中，物质的治疗有效量是在施用给患有或易患疾病、病症和/或病状的受试者时，足以对该疾病、病症和/或病状进行治疗、诊断、预防和/或延迟其发作的量。如本领域普通技术人员将理解的，物质的有效量可以根据如期望的生物学端点、要递送的物质、靶细胞或组织等因素而变化。例如，用于治疗疾病、病症和/或病状的调配物中的化合物的有效量是减轻、改善、缓解、抑制、预防、延迟疾病、病症和/或病状的一个或多个症状或特征的发作、降低其严重性和/或降低其发生率的量。在一些实施例中，以单个剂施用治疗有效量；在一些实施例中，递送治疗有效量需要多个单位剂量。
治疗：术语“治疗(treat、treatment或treating)”是指用于对疾病、病症和/或病状的一种或多种症状或特征进行部分或完全减轻、改善、缓解、抑制、预防、延迟其发作、降低其严重程度和/或降低其发病率的任何方法。可以对未展现出疾病、病症和/或病状迹象的受试者施用治疗。在一些实施例中，可以对仅展现出疾病、病症和/或病状的早期迹象的受试者施用治疗，例如以便实现降低患上与疾病、病症和/或病状相关联的病理的风险。
不饱和的：如本文所使用的，术语“不饱和的”意味着某一部分具有一或多个不饱和单元。
除非另有说明，否则本文描述的结构也意味着包含结构的所有异构(例如，对映体、非对映体和几何体(或构象))形式；例如，每个不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明的化合物的单一立体化学异构体以及对映、非对映和几何(或构象)混合物处于本公开的范围内。除非另有说明，否则化合物的所有互变异构形式均在本公开的范围内。此外，除非另外说明，否则本文所描绘的结构也意在包含不同之处仅为存在一或多个同位素富集原子的化合物。例如，具有包含由氘或氚置换氢或由13C-或14C-富集碳置换碳的本发明结构的化合物处于本公开的范围内。根据本公开，此类化合物可用作例如分析工具、生物测定中的探针或治疗剂。
2.示例性实施例的描述：
如本文所描述的，在一些实施例中，本公开提供了可以以高效率、高选择性和/或减少的副转化(例如，由于化学反应的数量和/或化学反应的条件/类型)将所关注部分与靶标缀合的技术。在一些实施例中，本公开提供了用于缀合的有用试剂和方法，并且提供了具有增强的均质性(例如，10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多倍，在靶药剂的一个或多个期望的位点处的修饰/缀合增加，和/或10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多倍，在靶药剂的一个或多个不期望的位点处的修饰/缀合减少)、纯度和/或减少的不期望的修饰(例如，作为副反应的结果对某些蛋白质残基的修饰)的产物组合物。在一些实施例中，本公开提供了如本文所描述的式R-I化合物或其盐。在一些实施例中，式R-I化合物或其盐可用于在反应的一个步骤中将所关注部分引入到靶标。在一些实施例中，本公开提供了式P-I或P-II的药剂或其盐。在一些实施例中，一种产物组合物包括多种药剂，所述多种药剂具有式P-I或P-II的结构，或其盐，其中与参考产物组合物相比，所述产物组合物具有更高水平的所述药剂的均质性(例如，一种方法的产物组合物，其中式R-I的化合物或其盐用具有与式R-I的化合物或其盐相同的结构的化合物替代，除了每个靶结合部分用-H替代)。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，所述方法包括以下步骤：
1)使靶药剂，如抗体与反应配偶体接触，所述反应配偶体包括：
包括与靶药剂结合的靶结合部分的第一基团，
反应性基团；
所关注部分，所述所关注部分是或包括MMAE；以及
任选地一个或多个接头部分；
2)形成药剂，所述药剂包括：
靶药剂部分；
所关注部分，所述所关注部分是或包括MMAE；以及
任选地一个或多个接头部分。
一甲基澳瑞他汀E(MMAE)，CAS注册号474645-27-7，是一种具有以下化学式的化合物：
在本公开的方法中，靶结合部分与靶药剂特异性地结合，并且反应性基团与靶药剂的特异性位点反应，如靶药剂抗体的特定赖氨酸残基，使得通过所述方法形成的药剂包括具有任选地通过接头与特异性位点选择性地的MMAE的靶药剂。
在一些实施例中，反应性基团定位于第一基团与所关注部分之间，并且独立地且任选地通过接头部分与第一基团和所关注部分连接。在一些实施例中，反应配偶体是式R-I的化合物或其盐。在一些实施例中，第一基团是或包括如本文所描述的LG基团。在一些实施例中，第一基团是或包括如本文所描述的LG基团。
在一些实施例中，本公开提供了一种化合物，其具有式R-I的结构：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与靶药剂结合的靶结合部分的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分。
在一些实施例中，本公开提供了一种化合物，其具有式R-I的结构：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是RLG-LLG；
RLG是Rc-(Xaa)z-、核酸部分或小分子部分；
每个Xaa独立地是氨基酸或氨基酸类似物的残基；
t是0-50；
z是1-50；
每个Rc独立地是-La-R'；
每个La独立地是共价键、或选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-；
每个-Cy-独立地是任选地经取代的二价单环、双环或多环基团，其中每个单环独立地选自C3-20脂环族环、C6-20芳基环、具有1-10个杂原子的5-20元杂芳基环和具有1-10个杂原子的3-20元杂环基环；
LLG是-LLG1-、-LLG1-LLG2-、-LLG1-LLG2-LLG3-或-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-；
RG是-LRG1-LRG2-、-LLG4-LRG1-LRG2-、-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-、-LLG2-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-；
LLG1、LLG2、LLG3、LLG4、LRG1、LRG2和LRM中的每一个独立地是L；
每个L独立地是共价键、或二价任选地经取代的直链或支链C1-100基团，所述基团包括一个或多个脂肪族部分、芳基部分、各自独立地具有1-20个杂原子的杂脂肪族部分、各自独立地具有1-20个杂原子的杂芳香族部分或此类部分中的任何一个或多个的任何组合，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、具有1-5个杂原子的二价C1-6杂脂肪族基团、-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-20；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R；
每个R独立地是-H，或任选地经取代的基团，所述基团选自C1-30脂肪族、具有1-10个杂原子的C1-30杂脂肪族、C6-30芳基、C6-30芳基脂肪族、具有1-10个杂原子的C6-30芳基杂脂肪族、具有1-10个杂原子的5-30元杂芳基和具有1-10个杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与所述原子一起形成除所述原子外还具有0-10个杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与其中间原子一起形成除所述中间原子外还具有0-10个杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分。
在一些实施例中，本公开提供了一种方法，所述方法包括以下步骤：
1)使靶药剂与具有式R-I的结构的反应配偶体接触：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与靶药剂结合的靶结合结构域的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI为是或包括MMAE的所关注部分；以及
2)形成具有式P-I的结构的药剂：
P-LPM-MOI，
(P-I)
或其盐，其中：
P是靶药剂部分；
LPM是接头；并且
MOI为是或包括MMAE的所关注部分。
在一些实施例中，靶药剂是抗体。在一些实施例中，靶药剂是IgG抗体。例如，抗体可以是抗CD30单克隆抗体，如本妥昔单抗，或抗粘连蛋白-4抗体，如恩弗妥单抗。在一些实施例中，靶标是蛋白质，并且所关注部分在一个或多个赖氨酸残基处缀合。在一些实施例中，式P-I的药剂或其盐是式P-II的药剂或其盐。
在一些实施例中，本公开提供了一种制造具有P-II的结构的药剂的方法：
P-N-LPM-MOI，
(P-II)
其中：
P-N是包括赖氨酸残基的蛋白药剂部分；
LPM是接头；并且
MOI是所关注部分；
所述方法包括：
使P-N与具有式R-I的结构的反应配偶体接触：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与P-N结合的蛋白结合结构域的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI为是或包括MMAE的所关注部分。
在一些实施例中，如本文所例示的，接触在赖氨酸残基N足以与RG原子反应并形成键并释放LG的条件下进行并持续足够的时间。
靶标
本领域技术人员在阅读本公开之后将理解本文所提供的技术可用于将各种靶药剂与许多类型的所关注部分缀合。在一些实施例中，所提供的技术对于将蛋白药剂与各种所关注部分缀合特别有用。在一些实施例中，靶药剂是或包括核酸。
在一些实施例中，靶药剂是或包括蛋白药剂。在一些实施例中，靶药剂是蛋白药剂。在一些实施例中，靶药剂是细胞、组织、器官或生物体中的天然蛋白质。在一些实施例中，靶药剂是内源性蛋白。在一些实施例中，靶药剂是外源性蛋白。在一些实施例中，靶药剂是制造的蛋白质，例如使用各种生物技术产生的蛋白质。在一些实施例中，靶药剂是抗体药剂。在一些实施例中，靶药剂是可用作治疗剂的抗体。各种此类抗体在本领域中是已知的并且可以用作靶药剂。在一些实施例中，抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，抗体是多克隆抗体。在一些实施例中，抗体是IgG抗体。在一些实施例中，抗体是IVIG(在一些实施例中，从健康供体汇集)。在一些实施例中，蛋白质包括Fc区。在一些实施例中，抗体包括Fc区。在一些实施例中，Fc区包括单个重链或其片段。在一些实施例中，Fc区包括两个重链或其片段。在一些实施例中，抗体是人抗体。在一些实施例中，抗体是嵌合抗体。在一些实施例中，抗体是人源化抗体。在一些实施例中，抗体是小鼠抗体。
在一些实施例中，当表征多克隆抗体药剂或IVIG药剂时，在缀合之前、期间或之后进行消化，例如使用IdeZ、IdeS等的酶消化，使得去除抗体(例如，Fab)的某些区以提供具有用于表征的改进的均匀性的组合物(例如，通过MS)。
在一些实施例中，抗体是治疗性抗体，例如FDA批准的用于治疗用途的抗体。在一些实施例中，治疗性抗体可用于治疗癌症。在一些实施例中，抗体是阿达木单抗(adalimumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿特朱单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、巴利昔单抗(basiliximab)、本妥昔单抗、恩弗妥单抗、伊匹单抗(ipilimumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、达土木单抗(daratumumab)、地努图希单抗(dinutuximab)、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、替伊莫单(ibritumomab tiuxetan)、伊马曲单抗(imgatuzumab)、英利昔单抗(infliximab)、妥珠单抗(necitumumab)、奥比努单抗(obinutuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、瑞替珠单抗(reslizumab)、利妥昔单抗(rituximab,)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、莫加木珠单抗(mogamulizumab)、AMP-224、FS-102、GSK-2857916、ARGX-111、ARGX-110、AFM-13、APN-301、BI-836826、BI-836858、依诺珠单抗(enoblituzumab)、奥特乐单抗(otlertuzumab)、维妥珠单抗(veltuzumab)、KHK-4083、BIW-8962、ALT-803、卡罗妥昔单抗(carotuximab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、英特单抗(inebilizumab)、艾沙妥昔单抗(isatuximab)、玛格图单抗(margetuximab)、MOR-208、奥卡拉单抗(ocaratuzumab)、他拉库珠单抗(talacotuzumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、贝那利珠单抗(benralizumab)、鲁昔单抗(lumiliximab)、MOR-208、伊巴妥珠单抗(Ifibatuzumab)、GSK2831781、SEA-CD40、KHK-2823或BI836858。在一些实施例中，抗体是司妥昔单抗(siltuximab)、达利珠单抗(daclizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、奥马珠单抗(omalizumab)、依法珠单抗(efalizumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、那他珠单抗(natalizumab)、托珠单抗(tocilizumab)、依库丽单抗(eculizumab)、维多珠单抗(vedolizumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、美泊利单抗(mepolizumab)、伊克珠单抗(ixekizumab)、帕尼单抗(panitumumab)、戈利木单抗(golimumab)、乌司奴单抗(ustekinumab)、康纳单抗(canakinumab)、地诺单抗(denosumab)、贝利单抗(belimumab)、瑞西巴库单抗(raxibacumab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、纳武单抗(nivolumab)、苏金单抗(secukinumab)、依伏库单抗(evolocumab)、阿利库单抗(alirocumab)、布罗达鲁单抗(brodalumab)或奥拉曲单抗(olaratumab)。在一些实施例中，抗体是本妥昔单抗或恩弗妥单抗。在一些实施例中，抗体是西妥昔单抗。在一些实施例中，所提供的包括抗体药剂部分的化合物或药剂可用于治疗可以由抗体药剂治疗的病状、病症或疾病。
可以根据本公开以多种技术制备抗体。在一些实施例中，与天然免疫球蛋白相比，抗体可以具有工程化结构。在一些实施例中，抗体可以包括用于纯化、鉴定、评估等的某些标签。在一些实施例中，抗体可以含有片段(例如，CDR和/或Fc等)而不是完整的免疫球蛋白。本领域技术人员理解，当在本公开中叙述抗体的位点时(例如，K246、K248、K288、K290、K317等；除非另有说明，按照EU编号的人抗体)，氨基酸残基可以不在确切编号的位点处，但可以在与按例如EU编号和/或序列同源性(例如，相同或不同物种的同源物)的所述编号位点相对应的位点处。
如本领域技术人员将理解的，除其它外，所提供的技术可以提供与天然靶标例如天然抗体的定向缀合。在一些实施例中，靶药剂是或包括天然抗体药剂。在一些实施例中，靶药剂是或包括工程化的抗体药剂。在一些实施例中，靶药剂，例如抗体不包括工程化的非天然氨基酸残基。
配偶体化合物
在一些实施例中，本公开提供了化合物，所述化合物各自独立地包括包含与靶药剂结合的靶结合部分的第一基团、反应性基团、所关注部分和任选地一个或多个连接此类基团/部分的接头部分。在一些实施例中，此类化合物可用作用于将所关注部分与靶标缀合的反应配偶体。在一些实施例中，本公开提供了用于将所关注部分与靶标例如各种蛋白质缀合的化合物。在一些实施例中，所提供的化合物各自包括所关注部分、反应性基团、靶结合部分和任选地一个或多个连接此类部分的接头部分(接头)。在一些实施例中，靶结合部分是离去基团的一部分，在此类化合物与靶标接触并使化合物的反应性基团与靶标的反应性基团(例如，靶蛋白的Lys残基的-NH2)反应时释放所述离去基团。如本文所展示的，除其它外，所提供的化合物可以提供改进的缀合效率、高选择性和更少的步骤(在某些情况下，单步)缀合产物。在一些实施例中，所提供的化合物具有式R-I的结构或其盐：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与靶药剂结合的靶结合部分的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI为是或包括MMAE的所关注部分。
在一些实施例中，第一基团是LG。
在一些实施例中，LG是或包括可以与靶药剂结合的靶结合部分，以及任选地接头部分。
如在本公开中使用的，部分通常是指分子的一部分，例如，在酯RCOOR'中，醇部分是RO-。在一些实施例中，化合物的部分(例如，靶药剂、蛋白药剂、抗体药剂等)保留化合物的一个或多个或所有期望的结构特征、特性、功能和/或活性。例如，在一些实施例中，靶结合部分可以任选地以相当的方式与靶标结合，作为其对应靶结合化合物；在一些实施例中，靶药剂部分维持与其对应靶药剂化合物相当的一个或多个期望结构特征、特性、功能和/或特性；在一些实施例中，抗体药剂部分维持与其对应抗体药剂化合物相当的一个或多个期望结构特征、特性、功能和/或特性(例如，3维结构、抗原特异性、抗原结合能力和/或免疫功能等)。在一些实施例中，化合物的部分，例如靶药剂部分、蛋白药剂部分、抗体药剂部分等是化合物，例如靶药剂化合物(用于靶药剂部分)、蛋白药剂化合物(用于蛋白药剂部分)、抗体药剂化合物(用于抗体药剂部分)等的单价(对于单价部分)、二价(对于二价部分)或多价(对于多价部分)自由基。在一些实施例中，通过从化合物中去除单价部分(例如氢、卤素、另一个单价基团如烷基、芳基等)形成单价自由基。在一些实施例中，通过从化合物中除去一个或多个单价(例如氢、卤素、单价基团如烷基、芳基等)、二价和/或多价部分形成二价或多价自由基。在一些实施例中，自由基是通过去除氢原子形成的。在一些实施例中，部分是单价的。在一些实施例中，部分是二价的。在一些实施例中，部分是多价的。
在一些实施例中，LG是或包括RLG-LLG-，其中RLG是或包括靶结合部分，并且LLG是如本文所描述的LLG1。在一些实施例中，LLG是-LLG1-LLG2-，其中LLG1和LLG2中的每一个独立地如本文所描述的。在一些实施例中，LLG是-LLG1-LLG2-LLG3-，其中LLG1、LLG2和LLG3中的每一个独立地如本文所描述的。在一些实施例中，LLG是-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-，其中LLG1、LLG2、LLG3和LLG4中的每一个独立地如本文所描述的。在一些实施例中，LLG1与RLG键合。在一些实施例中，LLG1与所关注部分键合。在一些实施例中，LLG是-LLG1-，并且反应性基团包括LLG2、LLG3和LLG4。在一些实施例中，LLG是-LLG1-LLG2-，并且反应性基团包括LLG3和LLG4。在一些实施例中，LLG是-LLG1-LLG2-LLG3-，并且反应性基团包括LLG4。
在一些实施例中，靶结合部分、第一基团和/或LG在反应之后释放，例如在配偶体化合物与靶药剂反应之后。在一些实施例中，第一基团在反应之后释放。在一些实施例中，靶结合部分在反应之后释放。在一些实施例中，LG在反应之后释放。在一些实施例中，第一基团作为具有LG-H结构的化合物或其盐的一部分释放。在一些实施例中，靶结合部分作为具有LG-H结构的化合物或其盐的一部分释放。在一些实施例中，LG作为具有LG-H的结构的化合物或其盐的一部分释放。在一些实施例中，第一基团作为具有RLG-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-H结构的化合物或其盐的一部分释放。在一些实施例中，靶结合部分作为具有RLG-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-H结构的化合物或其盐的一部分释放。在一些实施例中，靶结合部分作为具有RLG-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-H结构的化合物或其盐的一部分释放，其中RLG是或包括靶结合部分。在一些实施例中，LG作为具有RLG-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-H结构的化合物或其盐的一部分释放，其中LG是RLG-LLG，并且LLG是-LLG1-、-LLG1-LLG2-、-LLG1-LLG2-LLG3-或-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-。在一些实施例中，LG作为具有RLG-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-H结构的化合物或其盐的一部分释放，其中LG是RLG-LLG1-。在一些实施例中，LG作为具有RLG-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-H结构的化合物或其盐的一部分释放，其中LG是RLG-LLG1-LLG2。在一些实施例中，LG作为具有RLG-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-H结构的化合物或其盐的一部分释放，其中LG是RLG-LLG1-LLG2-LLG3。在一些实施例中，LG作为具有RLG-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-H结构的化合物或其盐的一部分释放，其中LG是RLG-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4。
在一些实施例中，L是共价键或二价任选地经取代的直链或支链C1-100基团，所述基团包括一个或多个脂肪族部分、芳基部分、各自独立地具有1-20个杂原子的杂脂肪族部分、各自独立地具有1-20个杂原子的杂芳香族部分或此类部分中的任何一个或多个部分的任何组合，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、具有1-5个杂原子的二价C1-6杂脂肪族基团、-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-20。在一些实施例中，L是共价键、或二价任选地经取代的直链或支链C1-100脂肪族或杂脂肪族基团1-20个杂原子，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-20。在一些实施例中，L是共价键或二价任选地经取代的直链或支链C1、C2、C3、C4、C5、C10、C15、C20、C25、C30、C40、C50、C60、C1-2、C1-5、C1-10、C1-15、C1-20、C1-30、C1-40、C1-50、C1-60、C1-70、C1-80或C1-90脂肪族或杂脂肪族基团1-10个杂原子，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-20。在一些实施例中，L是共价键或二价任选地经取代的直链或支链C1、C2、C3、C4、C5、C10、C15、C20、C25、C30、C40、C50、C60、C1-2、C1-5、C1-10、C1-15、C1-20、C1-30、C1-40、C1-50、C1-60、C1-70、C1-80或C1-90脂肪族或杂脂肪族基团1-10个杂原子，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-10。在一些实施例中，L是共价键或二价任选地经取代的直链或支链C1、C2、C3、C4、C5、C10、C15、C20、C25、C30、C40、C50、C60、C1-2、C1-5、C1-10、C1-15、C1-20、C1-30、C1-40、C1-50、C1-60、C1-70、C1-80或C1-90脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-O-、-N(R')-、-C(O)-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-10。在一些实施例中，L是共价键或二价任选地经取代的直链或支链C1、C2、C3、C4、C5、C10、C15、C20、C25、C30、C40、C50、C60、C1-2、C1-5、C1-10、C1-15、C1-20、C1-30、C1-40、C1-50、C1-60、C1-70、C1-80或C1-90脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-O-、-N(R')-、-C(O)-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-10。在一些实施例中，L是共价键或二价任选地经取代的直链或支链C1-10脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-O-、-N(R')-、-C(O)-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-Cy-或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-10。在一些实施例中，L是共价键或二价任选地经取代的直链或支链C1-10脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-O-、-N(R')-、-C(O)-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-10。在一些实施例中，L不包括-C(O)O-。在一些实施例中，L不包括-C(O)-N(R')-。在一些实施例中，L不包括-S-。在一些实施例中，L不包括-S-Cy-。在一些实施例中，L不包括-S-S-。在一些实施例中，L不含有-C(O)O-、-C(O)-N(R')-、-S-和-S-S-中的一个或多个或任一个。在一些实施例中，L不含有-C(O)O-、-C(O)-N(R')-、-S-Cy-和-S-S-中的一个或多个或任一个。在一些实施例中，L不含有-C(O)O-、-S-和-S-S-中的一个或多个或任一个。在一些实施例中，L不含有-C(O)O-、-S-Cy-和-S-S-中的一个或多个或任一个。在一些实施例中，L不含有-C(O)O-、-S-和-S-S-中的任一个。在一些实施例中，L不含有-C(O)O-、-S-Cy-和-S-S-中的任一个。在一些实施例中，L不含有-C(O)O-和-S-S-中的任一个。
在一些实施例中，每个氨基酸残基独立地是具有式A-I的结构的氨基酸或其盐的残基。在一些实施例中，每个氨基酸残基独立地具有-N(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-CO-或其盐形式的结构。在一些实施例中，每个氨基酸残基独立地具有-N(Ra1)-C(Ra2)(Ra3)-CO-或其盐形式的结构。
在一些实施例中，L是共价键。在一些实施例中，L不是共价键。
在一些实施例中，LLG1是共价键。在一些实施例中，LLG1不是共价键。在一些实施例中，LLG1是或包括-(CH2CH2O)n-。在一些实施例中，LLG1是或包括-(CH2)n-O-(CH2CH2O)n-(CH2)n-，其中每个n独立地如本文所描述，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。在一些实施例中，LLG1是-(CH2)n-O-(CH2CH2O)n-(CH2)n-，其中每个n独立地如本文所描述，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。在一些实施例中，LLG1是-(CH2)2-O-(CH2CH2O)n-(CH2)2-，其中n如本文所描述，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。在一些实施例中，LLG1是-(CH2)2-O-(CH2CH2O)n-(CH2)2-，其中n如本文所描述。
在一些实施例中，LLG1是-CH2-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2)2-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2)2-C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2)2-C(O)-NH-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2)3-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2)3NH-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2)3NH-C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-C(O)-(CH2)3NH-C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-C(O)-(CH2)3-。在一些实施例中，LLG1是-NH-C(O)-(CH2)3-。在一些实施例中，LLG1是-NHC(O)-(CH2)3NH-C(O)-。在一些实施例中，-CH2-与靶结合部分键合。
在一些实施例中，LLG1是-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-。在一些实施例中，LLG1是-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(O)NH-。在一些实施例中，LLG1是-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(O)NH-CH2-。在一些实施例中，-CH2CH2-与靶结合部分键合。
在一些实施例中，LLG1是-(CH2CH2O)n-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2CH2O)n-CH2-CH2-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2CH2O)n-CH2-CH2-C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2CH2O)2-CH2-CH2-C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2CH2O)4-CH2-CH2-C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-(CH2CH2O)8-CH2-CH2-C(O)-。在一些实施例中，-C(O)-与靶结合部分键合。
在一些实施例中，LLG1是-N(R')-。在一些实施例中，LLG1是-NH-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]n-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]n-CH2CH2-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]n-CH2CH2-NH-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]n-CH2CH2-NH-C(O)-。在一些实施例中，n是1。在一些实施例中，n是2。在一些实施例中，n是3。在一些实施例中，n是4。在一些实施例中，n是5。在一些实施例中，LLG1是-NH-CH2CH2-O-。在一些实施例中，LLG1是-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-。在一些实施例中，LLG1是-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-。在一些实施例中，LLG1是-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-C(O)-。
在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]2-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]2-CH2CH2-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]2-CH2CH2-NH-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]2-CH2CH2-NH-C(O)-。
在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]3-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]3-CH2CH2-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]3-CH2CH2-NH-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]3-CH2CH2-NH-C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]4-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]4-CH2CH2-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]4-CH2CH2-NH-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]4-CH2CH2-NH-C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]5-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]5-CH2CH2-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]5-CH2CH2-NH-。在一些实施例中，LLG1是-NH-[(-CH2CH2-O-)]5-CH2CH2-NH-C(O)-。在一些实施例中，-NH-与靶结合部分键合。
在一些实施例中，LLG1是-CH2-。在一些实施例中，LLG1是-CH2CH2-。在一些实施例中，LLG1是-CH2CH2NH-。在一些实施例中，LLG1是-CH2CH2NH-(CO)-。在一些实施例中，-CH2-与靶结合部分键合。
在一些实施例中，LLG1是-CH2-。在一些实施例中，LLG1是-CH2C(O)-。在一些实施例中，LLG1是-CH2C(O)NH-。在一些实施例中，LLG1是-CH2(CO)NHCH2-。在一些实施例中，-CH2-C(O)-与靶结合部分在-CH2-处键合。
在一些实施例中，LLG2是共价键。在一些实施例中，LLG2不是共价键。在一些实施例中，LLG2是-N(R')C(O)-。在一些实施例中，LLG2是-NHC(O)-。在一些实施例中，LLG2是-(CH2)n-N(R')C(O)-，其中-(CH2)n-任选地被取代。在一些实施例中，LLG2是-(CH2)n-OC(O)-，其中-(CH2)n-任选地被取代。在一些实施例中，LLG2是-(CH2)n-OC(O)N(R')-，其中-(CH2)n-任选地被取代。在一些实施例中，LLG2是-(CH2)n-OC(O)NH-，其中-(CH2)n-是任选地经取代的。在一些实施例中，n是1-10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施例中，n是1。在一些实施例中，n是2。在一些实施例中，n是3。在一些实施例中，-(CH2)n-被取代。在一些实施例中，-(CH2)n-未被取代。在一些实施例中，LLG2是-CH2N(CH2CH2CH2S(O)2OH)-C(O)-。在一些实施例中，LLG2是-C(O)-NHCH2-。在一些实施例中，LLG2是-C(O)-NHCH2CH2-。在一些实施例中，LLG2是-C(O)O-CH2-。在一些实施例中，LLG2是-NH-C(O)O-CH2-。在一些实施例中，-C(O)-与LLG3键合。在一些实施例中，-N(R')-、-NH-或(任选地经取代的-(CH2)n-的)任选地经取代的-CH2-单元与LLG3键合。
在一些实施例中，LLG2是-N(R')-。在一些实施例中，LLG2是-N(R)-。在一些实施例中，LLG2是-NH-。
在一些实施例中，LLG2是任选地经取代的二价C1-6脂肪族。在一些实施例中，LLG2是-CH2-。在一些实施例中，LLG2是-CH2NH-。在一些实施例中，LLG2是-CH2NH-C(O)-。在一些实施例中，LLG2是-CH2NH-C(O)-CH2-。
在一些实施例中，LLG3是或包括任选地经取代的芳基环。在一些实施例中，LLG3是或包括任选地经取代的苯基环。在一些实施例中，LLG3是被一个或多个吸电子基团取代的苯基环。如本领域技术人员所理解的，各种吸电子基团在本领域中是已知的并且可以根据本公开使用。在一些实施例中，吸电子基团是卤素。在一些实施例中，吸电子基团是-F。在一些实施例中，吸电子基团是-Cl。在一些实施例中，吸电子基团是-Br。在一些实施例中，吸电子基团是-I。在一些实施例中，吸电子基团包括X＝Y双键，其中X与吸电子基团是取代基的基团键合，并且X和Y中的至少一个是杂原子。在一些实施例中，X是杂原子。在一些实施例中，Y是杂原子。在一些实施例中，X和Y中的每一个独立地是杂原子。在一些实施例中，Y是O。在一些实施例中，Y是S。在一些实施例中，X是C。在一些实施例中，X是N。在一些实施例中，X是P。在一些实施例中，X是S。在一些实施例中，X＝Y是C＝O。在一些实施例中，X＝Y是N＝O。在一些实施例中，X＝Y是S＝O。在一些实施例中，X＝Y是P＝O。在一些实施例中，吸电子基团是-C(O)-L-R'。在一些实施例中，吸电子基团是-C(O)-R'。在一些实施例中，吸电子基团是-NO2。在一些实施例中，吸电子基团是-S(O)-L-R'。在一些实施例中，吸电子基团是-S(O)-R'。在一些实施例中，吸电子基团是-S(O)2-L-R'。在一些实施例中，吸电子基团是-S(O)2-O-R'。在一些实施例中，吸电子基团是-S(O)2-N(R')2。在一些实施例中，吸电子基团是-P(O)(-L-R')2。在一些实施例中，吸电子基团是-P(O)(R')2。在一些实施例中，吸电子基团是-P(O)(OR')2。在一些实施例中，吸电子基团是-P(O)[N(R')2]2。
在一些实施例中，LLG3是-LLG3a-LLG3b-，其中LLG3a是共价键或-C(O)O-CH2-，其中-CH2-任选地被取代，并且LLG3b是任选地经取代的芳基环。在一些实施例中，LLG3a与LLG2键合，并且LLG3b与LLG4键合。
在一些实施例中，LLG3a是共价键。在一些实施例中，LLG3a是-C(O)O-CH2-，其中-CH2-任选地被取代。在一些实施例中，LLG3a是-C(O)O-CH2-，其中-CH2被取代。在一些实施例中，LLG3a是-C(O)O-CH2-，其中-CH2-未被取代。
在一些实施例中，第一基团、靶结合部分和/或LG作为具有RLG-LLG1-LLG2-H结构的化合物或其盐的一部分释放。
在一些实施例中，LLG3b是任选地经取代的苯基环。在一些实施例中，至少一个取代基是如本文所描述的吸电子基团。
在一些实施例中，LLG3是其中s是0-4，每个Rs独立地是卤素、-NO2、-L-R'、-C(O)-L-R'、-S(O)-L-R'、-S(O)2-L-R'或-P(O)(-L-R')2。在一些实施例中，C1与LLG4键合。在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是/>
在一些实施例中，LLG3b是其中s是0-4，每个Rs独立地是卤素、-NO2、-L-R'、-C(O)-L-R'、-S(O)-L-R'、-S(O)2-L-R'或-P(O)(-L-R')2。在一些实施例中，C1与LLG4键合。在一些实施例中，LLG3b是/>在一些实施例中，LLG3b是/>在一些实施例中，LLG3b是/>在一些实施例中，LLG3b是/>在一些实施例中，LLG3b是在一些实施例中，LLG3b是/>
在一些实施例中，s是0。在一些实施例中，s是1-4。在一些实施例中，s是1。在一些实施例中，s是2。在一些实施例中，s是3。在一些实施例中，s是4。
在一些实施例中，s是1-4，并且至少一个Rs是吸电子基团，例如上文所描述的吸电子基团。在一些实施例中，至少一个Rs是-NO2。在一些实施例中，至少一个Rs是-F。在一些实施例中，每个Rs独立地是吸电子基团。在一些实施例中，每个Rs是-NO2。在一些实施例中，每个Rs是-F。
在一些实施例中，吸电子基团或Rs处于C2处。在一些实施例中，吸电子基团或Rs处于C3处。在一些实施例中，吸电子基团或Rs处于C4处。在一些实施例中，吸电子基团或Rs处于C2和C5处。
在一些实施例中，LLG3是在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是/>在一些实施例中，LLG3是/>/>
在一些实施例中，LLG3b是在一些实施例中，LLG3b是/>在一些实施例中，LLG3b是/>在一些实施例中，LLG3b是/>在一些实施例中，LLG3b是在一些实施例中，LLG3b是/>在一些实施例中，LLG3b是/>在一些实施例中，LLG3b是/>
在一些实施例中，LLG3b是任选地经取代的在一些实施例中，氮原子与作为-O-的LLG4结合。在一些实施例中，氮原子与作为-O-的LLG4结合，并且-LRG1-LRG2-是-C(O)-。
在一些实施例中，-LLG4-LRG1-LRG2-是-O-C(O)-。在一些实施例中，-LLG4-LRG1-LRG2-是-S-C(O)-。在一些实施例中，-LLG4-LRG1-LRG2-是-S-C(O)-。
在一些实施例中，LLG4是共价键。在一些实施例中，LLG4不是共价键。在一些实施例中，LLG4是-O-。在一些实施例中，LLG4是-N(R')-。在一些实施例中，LLG4是-NH-。在一些实施例中，LLG4是-N(CH3)-。在一些实施例中，LLG4是-N(R')-，并且LLG3是-O-。在一些实施例中，R'是任选地经取代的C1-6烷基。在一些实施例中，LLG4是-S-。
靶结合部分
如本领域技术人员所理解的，可以根据本公开使用各种靶结合部分。各种技术在本领域中也可用于开发和评估靶结合部分并且可以根据本公开使用。
在一些实施例中，靶结合部分是或包括小分子部分。在一些实施例中，靶结合部分是或包括聚合物部分。在一些实施例中，靶结合部分是或包括核酸或其片段。在一些实施例中，靶结合部分是或包括肽部分。在一些实施例中，靶结合部分是多肽部分。
在一些实施例中，所提供的技术包括一个且不超过一个靶结合部分。在一些实施例中，所提供的技术包括两个或更多个靶结合部分。例如，在一些实施例中，所提供的化合物可以包括两个或更多个可以与靶抗体药剂结合的靶结合部分。
a.小分子
在一些实施例中，靶结合部分是或包括可以选择性地与靶药剂结合的小分子部分。与包含各种蛋白药剂的靶药剂的小分子结合体在本领域中是广为人知的并且可以根据本公开使用。在一些实施例中，小分子结合体是或是治疗剂例如药物、抗体-药物缀合物等的一部分。
在一些实施例中，靶结合部分是小分子部分。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过8000、7000、6000、5000、4000、3000、2000、1500、1000、900、800、700或600。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过8000。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过7000。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过6000。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过5000。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过4000。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过3000。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过2000。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过1500。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过1000。在一些实施例中，小分子部分的分子量不超过900。
b.肽药剂
在一些实施例中，靶结合部分是或包括肽药剂。在一些实施例中，靶结合部分是肽部分。在一些实施例中，肽部分可以是线性的或环状的。在一些实施例中，靶结合部分是或包括环状肽部分。各种肽靶结合部分是本领域已知的并且可以根据本公开使用。
在一些实施例中，靶结合部分是或包括肽适体药剂。
如本文所描述的，在一些实施例中，RLG是或包括靶结合部分。在一些实施例中，RLG是或包括蛋白结合部分。在一些实施例中，RLG是或包括抗体结合部分。在一些实施例中，RLG是靶结合部分。在一些实施例中，RLG是蛋白结合部分。在一些实施例中，RLG是抗体结合部分。
c.适体药剂
在一些实施例中，靶结合部分是或包括核酸药剂。在一些实施例中，靶结合部分是或包括寡核苷酸部分。在一些实施例中，靶结合部分是或包括适体药剂。各种适体药剂在本领域中是已知的或者可以使用普通技术容易地开发，并且可以用于根据本公开的所提供的技术中。
在一些实施例中，靶结合部分是抗体结合部分。除其它外，此类靶结合部分还用于将所关注部分与抗体药剂缀合。
抗体结合部分
在一些实施例中，靶标是抗体药剂。在一些实施例中，靶结合部分是抗体结合部分。在一些实施例中，所提供的化合物和/或药剂包括抗体结合部分。根据本公开，可以使用各种抗体结合部分。在一些实施例中，抗体结合部分是通用抗体结合部分，其可以与具有不同Fab区和不同特异性的抗体结合。除其它外，包括此类抗体结合部分的化合物可以用于与具有不同特异性的抗体缀合。在一些实施例中，本公开的抗体结合部分，例如通用抗体结合部分，与Fc区结合。在一些实施例中，抗体结合部分与Fc区的结合可以与Fc受体(例如，CD16a)与相同Fc区的结合同时发生(例如，可以在相同Fc区的不同位置/氨基酸残基处)。在一些实施例中，在结合抗体结合部分，例如在所提供的药剂、化合物、方法等中的那些时，Fc区仍然可以与Fc受体相互作用并执行其免疫活性中的一种或多种或所有免疫活性，包含免疫细胞的募集(例如，如NK细胞等效应细胞)，和/或触发、产生、鼓励和/或增强针对靶细胞、组织、物体和/或实体的免疫系统活性，例如，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或ADCP。
根据本公开，可以利用包含通用抗体结合部分的各种抗体结合部分。某些抗体结合部分和用于鉴定和/或评估抗体结合部分的技术描述于WO/2019/023501和WO/2019/136442中，并通过引用并入本文。本领域技术人员理解，本领域中的另外的技术可以适用于根据本公开鉴定和/或评估抗体结合部分。在一些实施例中，抗体结合部分包括一个或多个氨基酸残基，每个氨基酸残基独立地是天然的或非天然的。
在一些实施例中，靶结合部分，例如蛋白结合部分部分(例如，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分))具有或其盐形式的结构，其中：
R1、R3和R5中的每一个独立地是氢或选自以下的任选地经取代的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和的单环碳环；苯基；8-10元双环芳香族碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳香族环；或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳香族环；或者：
R1和R1'任选地与其中间碳原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元任选地经取代的饱和或部分不饱和的螺环碳环或3-8元饱和或部分不饱和的螺环杂环；
R3和R3'任选地与其中间碳原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元任选地经取代的饱和或部分不饱和的螺环碳环或3-8元饱和或部分不饱和的螺环杂环；
R5基团和与相同碳原子连接的R5'基团任选地与其中间碳原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元任选地经取代的饱和或部分不饱和的螺环碳环或3-8元饱和或部分不饱和的螺环杂环；或者
两个R5基团任选地与其中间原子一起形成C1-10任选地经取代的二价直链或支链饱和或不饱和的烃链，其中链的1-3个亚甲基单元独立地且任选地被以下替代：-S-、-SS-、-N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-或-Cy1-，其中每个-Cy1-独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基；
R1'、R3'和R5'中的每一个独立地是氢或任选地经取代的C1-3脂肪族；
R2、R4和R6中的每一个独立地是氢或任选地经取代的C1-4脂肪族，或者：
R2和R1任选地与其中间原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元任选地经取代的饱和或部分不饱和的单环杂环；
R4和R3任选地与其中间原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元任选地经取代的饱和或部分不饱和的单环杂环；或者
R6基团和其相邻的R5基团任选地与其中间原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元任选地经取代的饱和或部分不饱和的单环杂环；
L1是三价接头部分；并且
m和n中的每一个独立地是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在一些实施例中，L1是选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的三价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-。
在一些实施例中，靶结合部分，例如蛋白结合部分(例如，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分))具有或其盐形式的结构，其中：
R7中的每一个独立地是氢或选自以下的任选地经取代的基团：C1-6脂肪族；3-8元饱和或部分不饱和的单环碳环；苯基；8-10元双环芳香族碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳香族环；或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳香族环；或者：
R7基团和与相同碳原子连接的R7'基团任选地与其中间碳原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元任选地经取代的饱和或部分不饱和的螺环碳环或3-8元任选地经取代的饱和或部分不饱和的螺环杂环；
R7'中的每一个独立地是氢或任选地经取代的C1-3脂肪族；
R8中的每一个独立地是氢或任选地经取代的C1-4脂肪族，或者：
R8基团和其相邻的R7基团任选地与其中间原子一起形成具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元任选地经取代的饱和或部分不饱和的单环杂环；并且
R9是氢、任选地经取代的C1-3脂肪族或-C(O)-。
在一些实施例中，抗体结合部分，例如通用抗体结合部分是或包括肽部分，例如具有Rc-(Xaa)z-的结构或其盐形式的部分，其中Rc、z和Xaa中的每一个独立地如本文所描述。在一些实施例中，一个或多个Xaa独立地是非天然氨基酸残基。在一些实施例中，两个或更多个氨基酸残基的侧链可以连接在一起形成桥。例如，在一些实施例中，两个半胱氨酸残基的侧链可以形成包括-S-S-的二硫桥(在许多蛋白质中，其可以由两个-SH基团形成)。
在一些实施例中，靶结合部分，例如蛋白结合部分(例如，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分))是或包括环状肽部分，例如具有或其盐形式的结构的部分，其中：
每个Xaa独立地是氨基酸或氨基酸类似物的残基；
t是0-50；
z是1-50；
L是接头部分；
每个Rc独立地是-La-R'；
每个La独立地是共价键、或选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-；
每个-Cy-独立地是任选地经取代的二价单环、双环或多环基团，其中每个单环独立地选自C3-20脂环族环、C6-20芳基环、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环和具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选地经取代的基团，所述任选地经取代的基团选自C1-30脂肪族、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族、C6-30芳基、C6-30芳基脂肪族、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与所述原子一起形成除所述原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与其中间原子一起形成除所述中间原子外还具有0-10个杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环。
在一些实施例中，杂原子独立地选自氧、氮、硫、磷和硅。
在一些实施例中，靶结合部分是或包括Rc-(Xaa)z-或其盐形式，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，蛋白结合部分是或包括Rc-(Xaa)z-或其盐形式，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，抗体结合部分，例如通用抗体结合部分是或包括Rc-(Xaa)z-或其盐形式，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，靶结合部分是或包括或其盐形式，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，蛋白结合部分是或包括/>或其盐形式，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，抗体结合部分，例如通用抗体结合部分是或包括/>或其盐形式，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，抗体结合部分，例如通用抗体结合部分是Rc-(Xaa)z-或或其盐形式，并且是或包括肽单元。在一些实施例中，-(Xaa)z-是或包括肽单元。在一些实施例中，氨基酸残基可以形成桥，例如，任选地通过接头部分(例如，L)由侧链形成的连接；例如，与许多多肽一样，半胱氨酸残基可以形成二硫桥。在一些实施例中，肽单元包括氨基酸残基(例如，在约7.4的生理pH下，“带正电荷的氨基酸残基”，XaaP)，例如，具有带正电荷的侧链的式A-I的氨基酸的残基。在一些实施例中，肽单元包括R。在一些实施例中，至少一个Xaa是R。在一些实施例中，肽单元是或包括APAR。在一些实施例中，肽单元是或包括RAPA。在一些实施例中，肽单元包括氨基酸残基，例如式A-I的氨基酸的残基，其具有包括芳香族基团的侧链(“芳香族氨基酸残基”，XaaA)。在一些实施例中，肽单元包括带正电荷的氨基酸残基和芳香族氨基酸残基。在一些实施例中，肽单元包括W。在一些实施例中，肽单元包括带正电荷的氨基酸残基和芳香族氨基酸残基。在一些实施例中，肽单元是或包括XaaAXaaXaaPXaaP。在一些实施例中，肽单元是或包括XaaPXaaPXaaXaaA。在一些实施例中，肽单元是或包括XaaPXaaAXaaP。在一些实施例中，肽单元是或包括两个或更多个XaaPXaaAXaaP。在一些实施例中，肽单元是或包括XaaPXaaAXaaPXaaXaaPXaaAXaaP。在一些实施例中，肽单元是或包括XaaPXaaPXaaAXaaAXaaP。在一些实施例中，肽单元是或包括XaaPXaaPXaaPXaaA。在一些实施例中，肽单元是或包括两个或更多个XaaAXaaAXaaP。在一些实施例中，肽残基包括一个或多个脯氨酸残基。在一些实施例中，肽单元是或包括HWRGWA(SEQ ID NO:1)。在一些实施例中，肽单元是或包括WGRR(SEQ ID NO:2)。在一些实施例中，肽单元是或包括RRGW(SEQID NO:3)。在一些实施例中，肽单元是或包括NKFRGKYK(SEQ ID NO:4)。在一些实施例中，肽单元是或包括NRFRGKYK(SEQ ID NO:5)。在一些实施例中，肽单元是或包括NARKFYK(SEQ IDNO:6)。在一些实施例中，肽单元是或包括NARKFYKG(SEQ ID NO:7)。在一些实施例中，肽单元是或包括HWRGWV(SEQ ID NO:8)。在一些实施例中，肽单元是或包括KHFRNKD(SEQ ID NO:9)。在一些实施例中，肽单元包括带正电荷的氨基酸残基、芳香族氨基酸残基和具有带负电荷的侧链的氨基酸残基，例如式A-I的氨基酸残基(例如，在约7.4的生理pH下，“带负电荷的氨基酸残基”，XaaN)。在一些实施例中，肽单元包括RHRFNKD(SEQ ID NO:10)。在一些实施例中，肽单元是RHRFNKD(SEQ ID NO:10)。在一些实施例中，肽单元包括TY。在一些实施例中，肽单元是TY。在一些实施例中，肽单元包括TYK。在一些实施例中，肽单元是TYK。在一些实施例中，肽单元包括RTY。在一些实施例中，肽单元是RTY。在一些实施例中，肽单元包括RTYK(SEQ ID NO:11)。在一些实施例中，肽单元是RTYK(SEQ ID NO:11)。在一些实施例中，肽单元是或包括选自PAM的序列。在一些实施例中，肽单元包括WHL。在一些实施例中，肽单元是WHL。在一些实施例中，肽单元是或包括WXL，其中X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分连接的氨基酸残基(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)。在一些实施例中，肽单元包括WDL。在一些实施例中，肽单元是WDL。在一些实施例中，肽单元包括ELVW(SEQ ID NO:12)。在一些实施例中，肽单元是ELVW(SEQ ID NO:12)。在一些实施例中，肽单元包括GELVW(SEQ ID NO:13)。在一些实施例中，肽单元是GELVW(SEQ ID NO:13)。在一些实施例中，肽单元是或包括选自AWHLGELVW(SEQ ID NO:14)的序列。在一些实施例中，肽单元是或包括AWHLGELVW(SEQ ID NO:14)。在一些实施例中，肽单元是或包括选自AWDLGELVW(SEQ ID NO:15)的序列。在一些实施例中，肽单元是或包括AWDLGELVW(SEQ IDNO:15)。在一些实施例中，肽单元是或包括AWXLGELVW(SEQ ID NO:16)，其中X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分连接的氨基酸残基(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)。在一些实施例中，肽单元是或包括选自DCAWHLGELVWCT(SEQID NO:17)的序列，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括DCAWHLGELVWCT(SEQ ID NO:17)，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括选自DCAWXLGELVWCT(SEQ ID NO:18)的序列，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于在天然蛋白质中的二硫键，并且X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)连接的氨基酸残基。在一些实施例中，肽单元是或包括DCAWXLGELVWCT(SEQ ID NO:18)，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键，并且X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分连接的氨基酸残基(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)。在一些实施例中，X在其侧链中包括-COOH或其盐或活化形式。在一些实施例中，肽单元是或包括选自DCAWDLGELVWCT(SEQ ID NO:19)的序列，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括DCAWDLGELVWCT(SEQ ID NO:19)，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括选自Fc-III的序列。在一些实施例中，肽单元是或包括Fc-III。在一些实施例中，肽单元是或包括选自DpLpAWXLGELVW(SEQ ID NO:20)的序列，其中X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分连接的氨基酸残基(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)。在一些实施例中，肽单元是或包括DpLpAWXLGELVW(SEQ ID NO:20)，其中X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分连接的氨基酸残基(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)。在一些实施例中，肽单元是或包括选自DpLpAWDLGELVW(SEQ ID NO:21)的序列。在一些实施例中，肽单元是或包括DpLpAWDLGELVW(SEQ ID NO:21)。在一些实施例中，肽单元是或包括选自DpLpAWHLGELVW(SEQ ID NO:22)的序列，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括DpLpAWHLGELVW(SEQ ID NO:22)(例如，FcBP-1)，其中两个半胱氨酸残基可以形成天然蛋白质中发现的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括选自FcBP-1的序列。在一些实施例中，肽单元是或包括选自DpLpDCAWXLGELVWCT(SEQ ID NO:23)的序列，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于在天然蛋白质中的二硫键，并且X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)连接的氨基酸残基。在一些实施例中，肽单元是或包括DpLpDCAWXLGELVWCT(SEQ ID NO:23)，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键，并且X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分连接的氨基酸残基(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)。在一些实施例中，肽单元是或包括选自DpLpDCAWHLGELVWCT(SEQ ID NO:24)的序列，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括DpLpDCAWHLGELVWCT(SEQ ID NO:24)(例如，FcBP-2)，其中两个半胱氨酸残基可以形成天然蛋白质中发现的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括选自DpLpDCAWDLGELVWCT(SEQ ID NO:25)的序列，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括DpLpDCAWDLGELVWCT(SEQ ID NO:25)，其中两个半胱氨酸残基可以形成如存在于天然蛋白质中的二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括选自FcBP-2的序列。在一些实施例中，肽单元是或包括选自CDCAWXLGELVWCTC(SEQ ID NO:26)的序列，其中第一个和最后一个半胱氨酸以及序列中间的两个半胱氨酸可以像天然蛋白质一样各自独立地形成二硫键，并且X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)连接的氨基酸残基。在一些实施例中，肽单元是或包括CDCAWXLGELVWCTC(SEQ ID NO:26)，其中第一个和最后一个半胱氨酸以及序列中间的两个半胱氨酸可以像天然蛋白质一样各自独立地形成二硫键，并且X是如本文所描述的氨基酸残基，例如适合与另一个部分连接的氨基酸残基(例如，包括-COOH或其盐或活化形式如D、E等的氨基酸残基)。在一些实施例中，肽单元是或包括选自CDCAWHLGELVWCTC(SEQ ID NO:27)的序列，其中第一个和最后一个半胱氨酸以及序列中间的两个半胱氨酸可以像天然蛋白质一样各自独立地形成二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括CDCAWHLGELVWCTC(SEQID NO:27)，其中第一个和最后一个半胱氨酸以及序列中间的两个半胱氨酸可以像天然蛋白质一样各自独立地形成二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括选自CDCAWDLGELVWCTC(SEQ ID NO:28)的序列，其中第一个和最后一个半胱氨酸以及序列中间的两个半胱氨酸可以像天然蛋白质一样各自独立地形成二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括CDCAWDLGELVWCTC(SEQ ID NO:28)，其中第一个和最后一个半胱氨酸以及序列中间的两个半胱氨酸可以像天然蛋白质一样各自独立地形成二硫键。在一些实施例中，肽单元是或包括选自Fc-III-4c的序列。在一些实施例中，肽单元是或包括选自FcRM的序列。在一些实施例中，肽单元是或包括环状肽单元。在一些实施例中，环状肽单元包括由侧链的氨基和C端-COOH形成的酰胺基团。本领域技术人员可以理解，在各个实施例中，当肽单元与另一个部分连接时，肽单元的氨基酸残基可以通过各个定位例如其主链、其侧链等连接。在一些实施例中，氨基酸残基被修饰用于连接。在一些实施例中，氨基酸残基被另一个合适的残基替代以用于连接，同时维持肽单元的一种或多种特性和/或活性(例如，与本文所描述的抗体结合)。例如，在一些实施例中，氨基酸残基被具有包括-COOH或其盐或活化形式的侧链(例如，侧链是-CH2-COOH或其盐或活化形式)的氨基酸残基替代。如本文所例示的，在各个序列中，H可以用D替代(例如，在包括WHL的各个肽单元中)。在一些实施例中，肽单元通过-COOH或其盐或活化形式与另一个部分连接，例如通过形成例如-CON(R')-。在一些实施例中，R'是-H。在一些实施例中，-COOH位于氨基酸残基的侧链中。在一些实施例中，在本文所描述的序列(例如，DCAWHLGELVWCT)(SEQ ID NO:17)中，1-5(例如，1、2、3、4或5)个氨基酸残基可以独立地且任选地被另一个氨基酸残基替代，1-5(例如，1、2、3、4或5)个氨基酸残基可以独立地且任选地被缺失，和/或1-5(例如，1、2、3、4或5)个氨基酸残基可以独立地且任选地被插入。在一些实施例中，肽部分通过其N端与分子的其余部分连接。在一些实施例中，其通过其C端与分子的其余部分连接。在一些实施例中，其通过氨基酸残基(例如，本公开中描述的各个X残基)的侧链与分子的其余部分连接。在一些实施例中，两个半胱氨酸残基可以独立地且任选地形成二硫键。在一些实施例中，替代、缺失和插入的总数不超过10(例如，0，或不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。在一些实施例中，总数是0。在一些实施例中，总数不超过1。在一些实施例中，总数不超过2。在一些实施例中，总数不超过3。在一些实施例中，总数不超过4。在一些实施例中，总数不超过5。在一些实施例中，总数不超过6。在一些实施例中，总数不超过7。在一些实施例中，总数不超过8。在一些实施例中，总数不超过9。在一些实施例中，总数不超过10。在一些实施例中，不存在插入。在一些实施例中，不存在缺失。
在一些实施例中，-(Xaa)z-是或包括[X1]p1[X2]p2-X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-[X13]p13-[X14]p14[X15]p15[X16]p16，其中X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12和X13中的每一个独立地是例如式A-I的氨基酸的氨基酸残基，并且p1、p2、p13、p14、p15和p16中的每一个独立地是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施例中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12和X13中的每一个独立地是式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施例中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12和X13中的每一个独立地是天然氨基酸残基。在一些实施例中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12和X13中的一个或多个独立地是如本公开中所描述的非天然氨基酸残基。
在一些实施例中，肽单元包括氨基酸残基中的官能团，所述官能团可以与另一个氨基酸残基的官能团反应。在一些实施例中，肽单元包括具有侧链的氨基酸残基，所述侧链包括可以与另一个氨基酸残基的侧链的另一个官能团反应以形成键的官能团(例如，参见表A-1、实例8等中描述的部分)。在一些实施例中，一个氨基酸残基的一个官能团与另一个氨基酸残基的官能团连接形成键(或桥)。键与肽单元的主链原子键合，并且不包括主链原子。在一些实施例中，肽单元包括由非相邻氨基酸残基的两条侧链形成的键。在一些实施例中，键与两个不相邻的氨基酸残基的两个主链原子键合。在一些实施例中，与键键合的两个主链原子都是碳原子。在一些实施例中，键具有Lb结构，其中Lb是如本公开所描述的La，其中La不是共价键。在一些实施例中，La包括-Cy-。在一些实施例中，La包括-Cy-，其中-Cy-是任选地经取代的杂芳基。在一些实施例中，-Cy-是在一些实施例中，La是在一些实施例中，此类La可以由一个氨基酸残基的侧链的-N3基团和另一个氨基酸残基的侧链的-≡-形成。在一些实施例中，通过连接两个硫醇基团，例如两个半胱氨酸残基形成键。在一些实施例中，La包括-S-S-。在一些实施例中，La是-CH2-S-S-CH2-。在一些实施例中，通过连接氨基(例如，赖氨酸残基的侧链中的-NH2)和羧酸基团(例如，天冬氨酸或谷氨酸残基的侧链中的-COOH)形成键。在一些实施例中，La包括-C(O)-N(R')-。在一些实施例中，La包括-C(O)-NH-。在一些实施例中，La是-CH2CONH-(CH2)3-。在一些实施例中，La包括-C(O)-N(R')-，其中R'是R，并且与肽主链上的R基团一起形成环(例如，在A-34中)。在一些实施例中，La是-(CH2)2-N(R')-CO--(CH2)2-。在一些实施例中，-Cy-是任选地经取代的亚苯基。在一些实施例中，-Cy-是任选地经取代的1,2-亚苯基。在一些实施例中，La是/>在一些实施例中，La是/>在一些实施例中，La是任选地经取代的二价C2-20二价脂肪族。在一些实施例中，La是任选地经取代的-(CH2)9-CH＝CH-(CH2)9-。在一些实施例中，La是-(CH2)3-CH＝CH-(CH2)3-。
在一些实施例中，与键键合的两个氨基酸残基被其之间的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或超过15个氨基酸残基隔开(不包括与键键合的两个氨基酸残基)。在一些实施例中，数量是1。在一些实施例中，数量是2。在一些实施例中，数量是3。在一些实施例中，数量是4。在一些实施例中，数量是5。在一些实施例中，数量是6。在一些实施例中，数量是7。在一些实施例中，数量是8。在一些实施例中，数量是9。在一些实施例中，数量是10。在一些实施例中，数量是11。在一些实施例中，数量是12。在一些实施例中，数量是13。在一些实施例中，数量是14。在一些实施例中，数量是15。
在一些实施例中，p1、p2、p13、p14、p15和p16中的每一个是0。在一些实施例中，-(Xaa)z-是或包括-X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12中的每一个独立地是氨基酸残基；
X6是XaaA或XaaP；
X9是XaaN；并且
X12是XaaA或XaaP。
在一些实施例中，X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12中的每一个独立地是如本公开中所描述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施例中，X5是XaaA或XaaP。在一些实施例中，X5是XaaA。在一些实施例中，X5是XaaP。在一些实施例中，X5是其侧链包括任选地经取代的饱和、部分饱和或芳香族环的氨基酸残基。在一些实施例中，X5是在一些实施例中，X5是/>在一些实施例中，X6是XaaA。在一些实施例中，X6是XaaP。在一些实施例中，X6是His。在一些实施例中，X12是XaaA。在一些实施例中，X12是XaaP。在一些实施例中，X9是Asp。在一些实施例中，X9是Glu。在一些实施例中，X12是/>在一些实施例中，X12是/>在一些实施例中，X7、X10和X11中的每一个独立地是具有疏水侧链的氨基酸残基(“疏水氨基酸残基”，XaaH)。在一些实施例中，X7是XaaH。在一些实施例中，X7是/>在一些实施例中，X7是Val。在一些实施例中，X10是XaaH。在一些实施例中，X10是Met。在一些实施例中，X10是/>在一些实施例中，X11是XaaH。在一些实施例中，X11是在一些实施例中，X8是Gly。在一些实施例中，X4是Pro。在一些实施例中，X3是Lys。在一些实施例中，X12的-COOH与Lys(X3)的侧链氨基形成酰胺键，并且Lys(X3)的另一个氨基与接头部分连接，并且然后与靶结合部分连接。
在一些实施例中，-(Xaa)z-是或包括-X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12中的每一个独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过一个或多个键Lb连接；
Lb是选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-，其中Lb与一个氨基酸残基的主链原子和另一个氨基酸残基的主链原子键合，并且不包括主链原子；
X6是XaaA或XaaP；
X9是XaaN；并且
X12是XaaA或XaaP。
在一些实施例中，X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12中的每一个独立地是如本公开中所描述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施例中，两个不相邻的氨基酸残基由Lb连接。在一些实施例中，X5和X10由Lb连接。在一些实施例中，存在一个键Lb。在一些实施例中，X6是XaaA。在一些实施例中，X6是XaaP。在一些实施例中，X6是His。在一些实施例中，X9是Asp。在一些实施例中，X9是Glu。在一些实施例中，X12是XaaA。在一些实施例中，X12是在一些实施例中，X12是/>在一些实施例中，X12是在一些实施例中，X4、X7和X11中的每一个独立地是XaaH。在一些实施例中，X4是XaaH。在一些实施例中，X4是Ala。在一些实施例中，X7是XaaH。在一些实施例中，X7是在一些实施例中，X11是XaaH。在一些实施例中，X11是/>在一些实施例中，X8是Gly。在一些实施例中，X3是Lys。在一些实施例中，X12的-COOH与Lys(X3)的侧链氨基形成酰胺键，并且Lys(X3)的另一个氨基与接头部分连接，并且然后与靶结合部分连接。在一些实施例中，Lb是/>在一些实施例中，Lb是/>在一些实施例中，Lb连接两个不同氨基酸残基的两个α-碳原子。在一些实施例中，X5和X10两者均是Cys，并且其侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。
在一些实施例中，-(Xaa)z-是或包括-X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12中的每一个独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过一个或多个键Lb连接；
Lb是选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-，其中Lb与一个氨基酸残基的主链原子和另一个氨基酸残基的主链原子键合，并且不包括主链原子；
X4是XaaA；
X5是XaaA或XaaP；
X8是XaaN；并且
X11是XaaA。
在一些实施例中，X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12中的每一个独立地是如本公开中所描述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施例中，两个不相邻的氨基酸残基由Lb连接。在一些实施例中，存在一个键Lb。在一些实施例中，X2和X12由Lb连接。在一些实施例中，Lb是-CH2-S-S-CH2-。在一些实施例中，Lb是-CH2-CH2-S-CH2-。在一些实施例中，Lb是在一些实施例中，Lb是/>在一些实施例中，Lb是-CH2CH2CO-N(R')-CH2CH2-。在一些实施例中，R'与和-N(R')-CH2CH2-键合的主链原子上的R基团一起形成环，例如，如在A-34中。在一些实施例中，所形成的环是3元、4元、5元、6元、7元或8元的。在一些实施例中，所形成的环是单环的。在一些实施例中，所形成的环是饱和的。在一些实施例中，Lb是/>在一些实施例中，Lb连接两个不同氨基酸残基的两个α-碳原子。在一些实施例中，X4是XaaA。在一些实施例中，X4是Tyr。在一些实施例中，X5是XaaA。在一些实施例中，X5是XaaP。在一些实施例中，X5是His。在一些实施例中，X8是Asp。在一些实施例中，X8是Glu。X11是Tyr。在一些实施例中，X2和X12两者均是Cys，并且其侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。在一些实施例中，X3、X6、X9和X10中的每一个独立地是XaaH。在一些实施例中，X3是XaaH。在一些实施例中，X3是Ala。在一些实施例中，X6是XaaH。在一些实施例中，X6是Leu。在一些实施例中，X9是XaaH。在一些实施例中，X9是Leu。在一些实施例中，X9是/>在一些实施例中，X10是XaaH。在一些实施例中，X10是Val。在一些实施例中，X10是/>在一些实施例中，X7是Gly。在一些实施例中，p1是1。在一些实施例中，X1是Asp。在一些实施例中，p13是1。在一些实施例中，p14、p15和p16是0。在一些实施例中，X13是包括极性不带电侧链的氨基酸残基(例如，在生理pH下，“极性不带电氨基酸残基”，XaaL)。在一些实施例中，X13是Thr。在一些实施例中，X13是Val。在一些实施例中，p13是0。在一些实施例中，Rc是-NHCH2CH(OH)CH3。在一些实施例中，Rc是(R)-NHCH2CH(OH)CH3。在一些实施例中，Rc是(S)-NHCH2CH(OH)CH3。
在一些实施例中，-(Xaa)z-是或包括-X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12-，其中：
X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12中的每一个独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过一个或多个键Lb连接；
Lb是选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-，其中Lb与一个氨基酸残基的主链原子和另一个氨基酸残基的主链原子键合，并且不包括主链原子；
X5是XaaA或XaaP；
X8是XaaN；并且
X11是XaaA。
在一些实施例中，X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12中的每一个独立地是如本公开中所描述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施例中，两个不相邻的氨基酸残基由Lb连接。在一些实施例中，存在一个键Lb。在一些实施例中，存在两个或更多个键Lb。在一些实施例中，存在两个键Lb。在一些实施例中，X2和X12由Lb连接。在一些实施例中，X4和X9由Lb连接。在一些实施例中，X4和X10由Lb连接。在一些实施例中，Lb是-CH2-S-S-CH2-。在一些实施例中，Lb是在一些实施例中，Lb是/>在一些实施例中，X2和X12两者均是Cys，并且其侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。在一些实施例中，X4和X10两者均是Cys，并且其侧链的两个-SH基团形成-S-S-(Lb是-CH2-S-S-CH2-)。在一些实施例中，X4和X9由Lb连接，其中Lb是/>在一些实施例中，X4和X9由Lb连接，其中Lb是/>在一些实施例中，X5是XaaA。在一些实施例中，X5是XaaP。在一些实施例中，X5是His。在一些实施例中，X8是Asp。在一些实施例中，X8是Glu。在一些实施例中，X11是Tyr。在一些实施例中，X11是/>在一些实施例中，X2和X12由Lb连接，其中Lb是-CH2-S-CH2CH2-。在一些实施例中，Lb连接两个不同氨基酸残基的两个α-碳原子。在一些实施例中，X3、X6和X9中的每一个独立地是XaaH。在一些实施例中，X3是XaaH。在一些实施例中，X3是Ala。在一些实施例中，X6是XaaH。在一些实施例中，X6是Leu。在一些实施例中，X6是/>在一些实施例中，X9是XaaH。在一些实施例中，X9是Leu。在一些实施例中，X9是/>在一些实施例中，X10是XaaH。在一些实施例中，X10是Val。在一些实施例中，X7是Gly。在一些实施例中，p1是1。在一些实施例中，X1是XaaN。在一些实施例中，X1是Asp。在一些实施例中，X1是Glu。在一些实施例中，p13是1。在一些实施例中，p14、p15和p16是0。在一些实施例中，X13是XaaL。在一些实施例中，X13是Thr。在一些实施例中，X13是Val。
在一些实施例中，-(Xaa)z-是或包括-X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16-，其中：
X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15和X16中的每一个独立地是氨基酸残基；
至少两个氨基酸残基通过键Lb连接；
Lb是选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-，其中Lb与一个氨基酸残基的主链原子和另一个氨基酸残基的主链原子键合，并且不包括主链原子；
X3是XaaN；
X6是XaaA；
X7是XaaA或XaaP；
X9是XaaN；并且
X13是XaaA。
在一些实施例中，X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11和X12中的每一个独立地是如本公开中所描述的式A-I的氨基酸的氨基酸残基。在一些实施例中，两个不相邻的氨基酸残基由Lb连接。在一些实施例中，存在一个键Lb。如本领域技术人员所理解的，一个氨基酸残基可以被另一个具有类似特性的氨基酸残基替代，例如一个XaaH(例如Val、Leu等)可以被另一个XaaH(例如Leu、Ile、Ala等)替代，一个XaaA可以被另一个XaaA替代，一个XaaP可以被另一个XaaP替代，一个XaaN可以被另一个XaaN替代，一个XaaL可以被另一个XaaL替代，等等。
在一些实施例中，靶结合部分是或包括表A-1的任选地经取代的部分。在一些实施例中，蛋白结合部分是或包括表A-1的任选地经取代的部分。在一些实施例中，抗体结合部分，例如通用抗体结合部分是或包括表A-1的任选地经取代的部分。在一些实施例中，靶结合部分选自表A-1。在一些实施例中，蛋白结合部分选自表A-1。在一些实施例中，抗体结合部分，例如通用抗体结合部分选自表A-1。在一些实施例中，C端和/或N端任选地被封端(例如，对于C端，通过将-COOH转化为-C(O)N(R')2，如-C(O)NH2；对于N端，通过将R'C(O)-，如CH3C(O)-添加到氨基上)。
表A-1：示例性抗体结合部分。
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在一些实施例中，靶结合部分是本文所描述的抗体结合部分。在一些实施例中，蛋白结合部分是本文所描述的抗体结合部分。在一些实施例中，-COOH和/或氨基酸残基的氨基，例如在C端或N端的那些，任选地被封端。例如，在一些实施例中，-COOH基团(例如，C端-COOH)被酰胺化(例如，转化为-CON(R')2，例如，-C(O)NHR(例如，-C(O)NH2))，并且在一些实施例中，氨基，例如-NH2(例如，N端-NH2)被R'-或R'C(O)-封端(例如，在一些实施例中，通过将-NH2转化为-NHR'(例如，-NHC(O)R，(例如，-NHC(O)CH3))。
在一些实施例中，靶结合部分是或包括任选地经取代的A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-10、A-11、A-12、A-13、A-14、A-15、A-16、A-17、A-18、A-19、A-20、A-21、A-22、A-23、A-24、A-25、A-26、A-27、A-28、A-29、A-30、A-31、A-32、A-33、A-34、A-35、A-36、A-37、A-38、A-39、A-40、A-41、A-42、A-43、A-44、A-45、A-46、A-47、A-48、A-49或A-50，其中的每一个任选地被取代。在一些实施例中，此类靶结合部分是抗体结合部分。在一些实施例中，此类靶结合部分是通用抗体结合部分。
在一些实施例中，靶结合部分，例如蛋白结合部分(例如，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分))包括肽单元，并且通过肽单元的C端与接头部分连接。在一些实施例中，其通过肽单元的N端与接头部分连接。在一些实施例中，其通过肽单元的侧链基团与接头连接。在一些实施例中，抗体结合部分，例如通用抗体结合部分包括肽单元，并且任选地通过接头部分通过肽单元的C端与靶结合部分连接。在一些实施例中，靶结合部分，例如蛋白结合部分(例如，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分))包括肽单元，并且任选地通过接头部分通过肽单元的N端与靶结合部分连接。在一些实施例中，在一些实施例中，靶结合部分，例如蛋白结合部分(例如，抗体结合部分(例如，通用抗体结合部分))包括肽单元，并且任选地通过接头部分通过肽单元的侧链与靶结合部分连接。
在一些实施例中，靶结合部分是或包括(DCAWHLGELVWCT，(SEQ ID NO:17))-，其中1-5(例如，1、2、3、4或5)个氨基酸残基可以独立地且任选地被另一个氨基酸残基替代，1-5(例如，1、2、3、4或5)个氨基酸残基可以独立地且任选地被缺失，和/或1-5(例如，1、2、3、4或5)个氨基酸残基可以独立地且任选地被插入。在一些实施例中，其通过其N端与分子的其余部分连接。在一些实施例中，其通过其C端与分子的其余部分连接。在一些实施例中，其通过氨基酸残基(例如，本公开中描述的各个X残基)的侧链与分子的其余部分连接。在一些实施例中，两个半胱氨酸残基形成二硫键。在一些实施例中，靶结合部分是或包括(SEQ ID NO:18)、/>(SEQ ID NO:17)、(SEQ ID NO:18)或/>(SEQ ID NO:17)，其中X是与化合物或药剂的其余部分键合的氨基酸残基，并且其中1-5(例如，1、2、3、4或5)个氨基酸残基可以独立地且任选地被另一个氨基酸残基替代，1-5(例如，1、2、3、4或5)个氨基酸残基可以独立地且任选地被缺失，和/或1-5(例如，1、2、3、4或5)个氨基酸残基可以独立地且任选地被插入。在一些实施例中，替代、缺失和插入的总数不超过10(例如，0，或不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。在一些实施例中，总数是0。在一些实施例中，总数不超过1。在一些实施例中，总数不超过2。在一些实施例中，总数不超过3。在一些实施例中，总数不超过4。在一些实施例中，总数不超过5。在一些实施例中，总数不超过6。在一些实施例中，总数不超过7。在一些实施例中，总数不超过8。在一些实施例中，总数不超过9。在一些实施例中，总数不超过10。在一些实施例中，不存在插入。在一些实施例中，不存在缺失。在一些实施例中，不存在替代。在一些实施例中，X是X是与化合物或药剂的其余部分键合的氨基酸残基。在一些实施例中，X是-N(R')-CH(-)-C(O)-。在一些实施例中，X是-N(R')-CH(-LLG1-)-C(O)-。在一些实施例中，X是-N(R')-CH(-LLG1-LLG2-)-C(O)-。在一些实施例中，X是-N(R')-CH(-LLG1-LLG2-LLG3-)-C(O)-。在一些实施例中，X是-N(R')-CH(-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-)-C(O)-。
在一些实施例中，X是以下中的任一种的残基：
以及/>
在一些实施例中，X是K。在一些实施例中，X是D。在一些实施例中，X是Dab的残基。在一些实施例中，X是E。
在一些实施例中，抗体结合部分，例如通用抗体结合部分是或包括小分子实体，所述小分子实体的分子量例如小于10000、9000、8000、7000、6000、5000、4000、3000、2000、1500、1000等。合适的此类抗体结合部分包含小分子Fc结合部分，例如US 9,745,339、US201/30131321等中描述的那些。在一些实施例中，抗体结合部分具有此类结构，即其对应的化合物是US 9,745,339或US2013/0131321中描述的化合物，所述文献中的每个文献的化合物通过引用独立地并入本文。在一些实施例中，抗体结合部分ABT具有此类结构，即H-ABT是US 9,745,339或US2013/0131321中描述的化合物，所述文献中的每个文献的化合物通过引用独立地并入本文。在一些实施例中，这种化合物可以与抗体结合。在一些实施例中，这种化合物可以与抗体的Fc区结合。
在一些实施例中，靶结合部分是或包括以下中的任一个，其中的每一个任选地被取代：
在一些实施例中，靶结合部分是或包括以下中的任一个，其中的每一个任选地被取代：
其中R可以是例如氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基。
在一些实施例中，靶结合部分是或包括以下中的任一个：
在一些实施例中，靶结合部分是或包括
其中每个变量独立地如本文所描述的。在一些实施例中，m是4至13。
在一些实施例中，靶结合部分是或包括其中b是1-20，并且每个其它变量独立地如本文所描述。
在一些实施例中，b是4-13。在一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括以下中的任一个：
其中R是例如H或C1-C4烷基，并且R'是例如H或C1-C4烷基。
在一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括如/>在
一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括如/>
在一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括
在一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括以下中的任一个：例如/>
在一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括
在一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括
在一些实施例中，-NH-与Rc基团键合。在一些实施例中，Rc是R-C(O)-。在一些实施例中，Rc是CH3C(O)-。在一些实施例中，此类靶结合部分是抗体结合部分。
在一些实施例中，靶结合部分，例如或Rc-(Xaa)z-是或包括以下中的任一个：/>
/>
在一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括Z33肽部分。在一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括-FNMQQQRRFYEALHDPNLNEEQRNAKIKSIRDD-NH2(SEQ ID NO:29)或其片段。在一些实施例中，靶结合部分，例如Rc-(Xaa)z-是或包括FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNAKIKSIRDDC(SEQ ID NO:30)或其片段。在一些实施例中，靶结合部分，例如或Rc-(Xaa)z-是或包括如以下的肽的部分：FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNAKIKSIRDDC(SEQ ID NO:30)、RGNCAYHRGQLVWCTYH(SEQ ID NO:31)、RGNCAYHKGQLVWCTYH、RGNCKYHRGQLVWCTYH(SEQ ID NO:32)、RGNCAWHRGKLVWCTYH(SEQ IDNO:33)、RGNCAWHRGKLVWCTYH(SEQ ID NO:34)、RGNCKWHRGELVWCTYH(SEQ ID NO:35)、RGNCKWHRGQLVWCTYH(SEQ ID NO:36)、RGNCKYHLGELVWCTYH(SEQ ID NO:37)、RGNCKYHLGQLVWCTYH(SEQ ID NO:38)、DCKWHLGELVWCT(SEQ ID NO:39)、DCKYHLGELVWCT(SEQID NO:40)、DCKWHRGELVWCT(SEQ ID NO:41)、DCKWHLGQLVWCT(SEQ ID NO:42)、DCKYHRGELVWCT(SEQ ID NO:43)、DCKYHLGQLVWCT(SEQ ID NO:44)、DCKWHRGQLVWCT(SEQ IDNO:45)、DCKYHRGQLVWCT(SEQ ID NO:46)、FNKQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ IDNO:47)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIKDDC(SEQ ID NO:48)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNKEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:49)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:50)、RGNCAWHLGQLVWCKYH(SEQ ID NO:51)、RGNCAWHLGELVWCKYH(SEQ ID NO:52)、RGNCAYHLGQLVWCTKH(SEQ ID NO:53)、RGNCAYHLGQLVWCTYK(SEQ ID NO:54)、RGNCAYHRGQLVWCTKH(SEQ ID NO:55)、KNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:56)、FNMQCQKRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:57)、FNMQCQRRFYEAKHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:58)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRKARIRSIRDDC(SEQ ID NO:59)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNKEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:49)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIKDDC(SEQ ID NO:48)、FNKQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:47)、FNMQCKRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:60)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRKDC(SEQ ID NO:61)、Fc-III、FcBP-2、Fc-III-4C/>(X＝K或R，SEQ ID NO:62)等，其中两个半胱氨酸残基可以任选地形成二硫键。在一些实施例中，在本文所描述的肽中，两个半胱氨酸残基形成二硫键。在一些实施例中，肽，如Z33，FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNAKIKSIRDDC(SEQ ID NO:30)、RGNCAYHRGQLVWCTYH(SEQ ID NO:31)、RGNCKYHRGQLVWCTYH(SEQ ID NO:33)、RGNCAYHKGQLVWCTYH(SEQ ID NO:32)、RGNCAWHRGKLVWCTYH(SEQ ID NO:34)、RGNCKWHRGQLVWCTYH(SEQ ID NO:36)、RGNCKWHRGELVWCTYH(SEQ ID NO:34)、RGNCKYHLGELVWCTYH(SEQ ID NO:37)、RGNCKYHLGQLVWCTYH(SEQ ID NO:38)、DCKWHLGELVWCT(SEQ ID NO:39)、DCKYHLGELVWCT(SEQID NO:40)、DCKWHRGELVWCT(SEQ ID NO:41)、DCKWHLGQLVWCT(SEQ ID NO:42)、DCKYHRGELVWCT(SEQ ID NO:43)、DCKYHLGQLVWCT(SEQ ID NO:44)、DCKWHRGQLVWCT(SEQ IDNO:45)、DCKYHRGQLVWCT(SEQ ID NO:46)、FNKQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ IDNO:47)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIKDDC(SEQ ID NO:48)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNKEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:49)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:50)、RGNCAWHLGQLVWCKYH(SEQ ID NO:51)、RGNCAWHLGELVWCKYH(SEQ ID NO:52)、RGNCAYHLGQLVWCTKH(SEQ ID NO:53)、RGNCAYHLGQLVWCTYK(SEQ ID NO:54)、RGNCAYHRGQLVWCTKH(SEQ ID NO:55)、KNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:56)、FNMQCQKRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:57)、FNMQCQRRFYEAKHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:58)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRKARIRSIRDDC(SEQ ID NO:59)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNKEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:49)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIKDDC(SEQ ID NO:48)、FNKQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:47)、FNMQCKRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:60)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRKDC(SEQ ID NO:61)、Fc-III、FcBP-2、Fc-III-4C、/>(X＝K或R，SEQ ID NO:62)等通过RGNCAYHKGQLVWCTYH(SEQ ID NO:32)、RGNCKYHRGQLVWCTYH(SEQ ID NO:33)、RGNCAWHRGKLVWCTYH(SEQ ID NO:34)、RGNCKWHRGELVWCTYH(SEQ ID NO:35)、RGNCKWHRGQLVWCTYH(SEQ ID NO:36)、RGNCKYHLGELVWCTYH(SEQ ID NO:37)、RGNCKYHLGQLVWCTYH(SEQ ID NO:38)、DCKWHLGELVWCT(SEQ ID NO:39)、DCKYHLGELVWCT(SEQID NO:40)、DCKWHRGELVWCT(SEQ ID NO:41)、DCKWHLGQLVWCT(SEQ ID NO:42)、DCKYHRGELVWCT(SEQ ID NO:43)、DCKYHLGQLVWCT(SEQ ID NO:44)、DCKWHRGQLVWCT(SEQ IDNO:45)、DCKYHRGQLVWCT(SEQ ID NO:46)、RGNCAWHLGQLVWCKYH(SEQ ID NO:51)、FNKQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:47)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIKDDC(SEQ ID NO:48)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNKEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:49)、RGNCAWHLGELVWCKYH(SEQ ID NO:52)、RGNCAYHLGQLVWCTKH(SEQ ID NO:53)、RGNCAYHLGQLVWCTYK(SEQ ID NO:54)、RGNCAYHRGQLVWCTKH(SEQ ID NO:55)、KNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:56)、FNMQCQKRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQID NO:57)、FNMQCQRRFYEAKHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:58)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRKARIRSIRDDC(SEQ ID NO:59)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNKEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:49)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIKDDC(SEQ ID NO:48)、FNKQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:47)、FNMQCKRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRDDC(SEQ ID NO:60)、FNMQCQRRFYEALHDPNLNEEQRNARIRSIRKDC(SEQ ID NO:61)等中的带下划线的例如K残基)中的例如K)的其N端、C端或侧链连接。在一些实施例中，如本文所描述的，序列的一个或多个氨基酸残基可以独立地且任选地被替代(例如，1-5)、缺失(例如，1-5)和/或插入(例如，1-5)。在一些实施例中，靶结合部分，例如/>或Rc-(Xaa)z-是或包括-CXYHXXXLVWC-(SEQ ID NO:63)、-XCXYHXXXLVWC-(SEQ ID NO:64)、-CXYHXXXLVWCX-(SEQ ID NO:65)、-X0- 3CXYHXXXLVWCX0-3(SEQ ID NO:66)、-XCXYHXXXLVWCXXX(SEQ ID NO:67)、--XXXCXYHXXXLVWCXXX(SEQ ID NO:66)-，其中每个X独立地是氨基酸残基，并且两个C残基任选地形成二硫键。在一些实施例中，X8(H之后的X)是Orn。在一些实施例中，X8是Dab。在一些实施例中，X8是Lys(Ac)。在一些实施例中，X8是Orn(Ac)。在一些实施例中，X8是Dab(Ac)。在一些实施例中，X8是Arg。在一些实施例中，X8是Nle。在一些实施例中，X8是Nva。在一些实施例中，X8是Val。在一些实施例中，X8是Tle。在一些实施例中，X8是Leu。在一些实施例中，X8是Ala(tBu)。在一些实施例中，X8是Cha。在一些实施例中，X8是Phe。在一些实施例中，靶结合部分，例如/>或Rc-(Xaa)z-是或包括DCAWHLGELVWCT(SEQ ID NO:17)。在一些实施例中，蛋白药剂/肽药剂部分的C端和/或N端被独立地封端(例如，RC(O)-如CH3C(O)-用于N端，-N(R')2如-NH2用于C端，等等)。在一些实施例中，此类靶结合部分是抗体结合部分。在一些实施例中，如本文所描述的，残基可以被修饰或替代以与另一个部分连接，例如，在一些实施例中，H可以被包括含有-COOH或其盐或活化形式的侧链的氨基酸残基(例如，D)替代。
在一些实施例中，靶结合部分，例如或Rc-(Xaa)z-是或包括(X1-3)-C-(X2)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(X1-3)(SEQ ID NO:68)，其中X和Xaa中的每一个独立地是氨基酸残基，并且任选地不是半胱氨酸残基。在一些实施例中，Xaa1是R、L、L、D、E、2-氨基辛二酸残基或二氨基丙酸残基。在一些实施例中，Xaa2是L、D、E、N或Q。在一些实施例中，Xaa1是赖氨酸残基、半胱氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、2-氨基辛二酸残基或二氨基丙酸残基。在一些实施例中，Xaa2是谷氨酸残基或天冬氨酸残基。在一些实施例中，Xaa1是精氨酸残基或亮氨酸残基。在一些实施例中，Xaa2是赖氨酸残基、谷氨酰胺残基或天冬氨酸残基。在一些实施例中，此类靶结合部分是抗体结合部分。
在一些实施例中，靶结合部分，例如或Rc-(Xaa)z-是或包括(X1-3)-C-(Xaa3)-(xaa4)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7)(SEQ ID NO:68)，其中X和Xaa中的每一个独立地是氨基酸残基并且任选地不是半胱氨酸残基。在一些实施例中，Xaa3是丙氨酸残基或赖氨酸残基。在一些实施例中，Xaa4是色氨酸残基或酪氨酸残基。在一些实施例中，Xaa1是精氨酸残基、亮氨酸残基、赖氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、2-氨基辛二酸残基或二氨基丙酸残基。在一些实施例中，Xaa2是赖氨酸残基、谷氨酰胺残基、谷氨酸残基、天冬酰胺残基或天冬氨酸残基。在一些实施例中，Xaa5是苏氨酸残基或赖氨酸残基。在一些实施例中，Xaa6是酪氨酸残基、赖氨酸残基或不存在。在一些实施例中，Xaa7是组氨酸残基、赖氨酸残基或不存在。在一些实施例中，此类靶结合部分是抗体结合部分。
在一些实施例中，靶结合部分，例如或Rc-(Xaa)z-是或包括D-C-(Xaa3)-(Xaa4)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7)(SEQ ID NO:69)，其中X和Xaa中的每一个独立地是氨基酸残基并且任选地不是半胱氨酸残基。在一些实施例中，Xaa3是丙氨酸残基或赖氨酸残基。在一些实施例中，Xaa4是色氨酸残基或酪氨酸残基。在一些实施例中，Xaa1是精氨酸残基、亮氨酸残基、赖氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、2-氨基辛二酸残基或二氨基丙酸残基。在一些实施例中，Xaa2是赖氨酸残基、谷氨酰胺残基、谷氨酸残基、天冬酰胺残基或天冬氨酸残基。在一些实施例中，Xaa5是苏氨酸残基或赖氨酸残基。在一些实施例中，Xaa6是酪氨酸残基、赖氨酸残基或不存在。在一些实施例中，Xaa7是组氨酸残基、赖氨酸残基或不存在。在一些实施例中，此类靶结合部分是抗体结合部分。
在一些实施例中，靶结合部分，例如或Rc-(Xaa)z-是或包括D-C-(Xaa3)-(Xaa4)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-T(SEQ ID NO:70)，其中X和Xaa中的每一个独立地是氨基酸残基并且任选地不是半胱氨酸残基。在一些实施例中，Xaa3是丙氨酸残基或赖氨酸残基。在一些实施例中，Xaa4是色氨酸残基或酪氨酸残基。在一些实施例中，Xaa1是精氨酸残基、亮氨酸残基、赖氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、2-氨基辛二酸残基或二氨基丙酸残基。在一些实施例中，Xaa2是赖氨酸残基、谷氨酰胺残基、谷氨酸残基、天冬酰胺残基或天冬氨酸残基。在一些实施例中，此类靶结合部分是抗体结合部分。
在一些实施例中，靶结合部分，例如或Rc-(Xaa)z-是或包括R-G-N-C-(Xaa3)-(Xaa4)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7)(SEQ ID NO:71)，其中X和Xaa中的每一个独立地是氨基酸残基并且任选地不是半胱氨酸残基。在一些实施例中，Xaa3是丙氨酸残基或赖氨酸残基。在一些实施例中，Xaa4是色氨酸残基或酪氨酸残基。在一些实施例中，Xaa1是精氨酸残基、亮氨酸残基、赖氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、2-氨基辛二酸残基或二氨基丙酸残基。在一些实施例中，Xaa2是赖氨酸残基、谷氨酰胺残基、谷氨酸残基、天冬酰胺残基或天冬氨酸残基。在一些实施例中，Xaa5是苏氨酸残基或赖氨酸残基。在一些实施例中，Xaa6是酪氨酸残基、赖氨酸残基或不存在。在一些实施例中，Xaa7是组氨酸残基、赖氨酸残基或不存在。在一些实施例中，此类靶结合部分是抗体结合部分。
在一些实施例中，靶结合部分，例如上文所描述的各种靶结合部分，是蛋白结合部分。在一些实施例中，靶结合部分是抗体结合部分。在一些实施例中，LG是或包括此类靶结合部分。在一些实施例中，LG是或包括蛋白结合部分。在一些实施例中，LG是或包括抗体结合部分。
在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分是或包括例如如以下中所描述的衔接蛋白药剂：Hui等人,《生物缀合化学》2015,26,1456-1460,doi:10.1021/acs.bioconjchem.5b00275。在一些实施例中，当根据本公开利用时，衔接蛋白不需要反应性残基(例如，BPA)来实现一个或多个或所有优点。
在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分是或包括三嗪部分，例如US2009/0286693中描述的三嗪部分。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分具有此类结构，即其对应的化合物是US2009/0286693中描述的化合物，所述文献中的化合物通过引用独立地并入本文。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分是ABT。在一些实施例中，ABT具有此类结构，即H-ABT是US2009/0286693中描述的化合物，所述文献中的化合物通过引用独立地并入本文。在一些实施例中，这种化合物可以与抗体结合。在一些实施例中，这种化合物可以与抗体的Fc区结合。
在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分是或包括三嗪部分，例如以下中描述的三嗪部分：Teng等人,一种用于产生用于亲和力色谱法的仿生配体的策略(Astrategy for the generation of biomimetic ligands for affinitychromatography.)IgG结合配体的组合合成和生物学评价(Combinatorial synthesis andbiological evaluation of an IgG binding ligand),《分子识别杂志(J.Mol.Recognit.)》1999；12:67-75(“Teng”)。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分具有此类结构，即其对应的化合物是Teng中描述的化合物，所述文献中的化合物通过引用独立地并入本文。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分ABT具有此类结构，即H-ABT是Teng中描述的化合物，所述文献中的化合物通过引用独立地并入本文。在一些实施例中，这种化合物可以与抗体结合。在一些实施例中，这种化合物可以与抗体的Fc区结合。
在一些实施例中，v靶结合部分，例如，抗体结合部分是三嗪部分，例如以下中描述的三嗪部分：Uttamchandani等人,标记的组合三嗪文库微阵列在发现人IgG的小分子配体中的作用(Microarrays of Tagged Combinatorial Triazine Libraries in theDiscovery of Small-Molecule Ligands of Human IgG)《组合化学杂志(J Comb Chem.)》2004年11月-12月；6(6):862-8(“Uttamchandani”)。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分具有此类结构，即其对应的化合物是Uttamchandani中描述的化合物，所述文献中的化合物通过引用独立地并入本文。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分ABT具有此类结构，即H-ABT是Uttamchandani中描述的化合物，所述文献中的化合物通过引用独立地并入本文。在一些实施例中，这种化合物可以与抗体结合。在一些实施例中，这种化合物可以与抗体的Fc区结合。
在一些实施例中，抗体结合部分与蛋白质A的一个或多个结合位点结合。在一些实施例中，抗体结合部分与蛋白质G的一个或多个结合位点结合。在一些实施例中，抗体结合部分与蛋白L的一个或多个结合位点结合。在一些实施例中，抗体结合部分与蛋白质Z的一个或多个结合位点结合。在一些实施例中，抗体结合部分与蛋白质LG的一个或多个结合位点结合。在一些实施例中，抗体结合部分与蛋白质LA的一个或多个结合位点结合。在一些实施例中，抗体结合部分与蛋白质AG的一个或多个结合位点结合。
在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分可以与核苷酸结合位点结合。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分是可以与核苷酸结合位点结合的小分子部分。在一些实施例中，小分子是色胺。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分，ABT具有此类结构，即H-ABT是色胺。
在一些实施例中，抗体结合部分是可以选择性地与IgG结合的部分(例如，小分子部分、肽部分、核酸部分等)，并且当用于所提供的技术时可以提供和/或刺激ADCC和/或ADCP。在一些实施例中，肽展示技术(例如，相位展示、非细胞展示等)可以用于鉴定抗体结合部分。在一些实施例中，抗体结合部分是可以与IgG结合并且任选地可以与已知的抗体结合体，例如蛋白质A、蛋白质G、蛋白质L等竞争的部分(例如，小分子部分、肽部分、核酸部分等)。
如本领域技术人员所理解的，本公开中描述的抗体结合部分可以靶向具有各种特性和活性的抗体(例如，识别不同抗原、具有任选的修饰等的抗体)。在一些实施例中，此类抗体包含施用于受试者例如用于治疗目的的抗体。在一些实施例中，本文所描述的抗体结合部分可以结合针对不同抗原的抗体并且可用于将所关注部分与各种抗体缀合。
在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分是或包括中间位药剂部分。在一些实施例中，中间位药剂描述于例如US2019/0111149中。
在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分可以与人IgG结合。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分可以与兔IgG结合。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分与IgG1结合。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分与IgG2结合。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分与IgG3结合。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分与IgG4结合。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分与IgG1、IgG2和/或IgG4结合。在一些实施例中，靶结合部分，例如抗体结合部分与IgG1、IgG2和IgG4结合。
在一些实施例中，靶结合部分(例如，抗体结合部分)与靶标(例如，用于抗体结合部分的抗体药剂)结合的Kd为约1mM-1pM或更小。在一些实施例中，Kd为约1mM、0.5mM、0.2mM、0.1mM、0.05mM、0.02mM、0.01mM、0.005mM、0.002mM、0.001mM、500nM、200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、5nM、2nM、1nM、0.5nM、0.2nM、0.1nM或更小。在一些实施例中，Kd为约1mM或更小。在一些实施例中，Kd为约0.5mM或更小。在一些实施例中，Kd为约0.1mM或更小。在一些实施例中，Kd为约0.05mM或更小。在一些实施例中，Kd为约0.01mM或更小。在一些实施例中，Kd为约0.005mM或更小。在一些实施例中，Kd为约0.001mM或更小。在一些实施例中，Kd为约500nM或更小。在一些实施例中，Kd为约200nM或更小。在一些实施例中，Kd为约100nM或更小。在一些实施例中，Kd为约50nM或更小。在一些实施例中，Kd为约20nM或更小。在一些实施例中，Kd为约10nM或更小。在一些实施例中，Kd为约5nM或更小。在一些实施例中，Kd为约2nM或更小。在一些实施例中，Kd为约1nM或更小。例如，在一些实施例中，抗体结合部分与具有本文所描述的Kd的IgG抗体药剂结合。
氨基酸
在一些实施例中，所提供的化合物和药剂可以包括一个或多个氨基酸部分，例如在抗体结合部分、接头部分等中。氨基酸部分可以是天然氨基酸或非天然氨基酸的那些氨基酸部分。在一些实施例中，氨基酸具有式A-I的结构：
NH(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-COOH，
A-I
或其盐，其中：
Ra1、Ra2和Ra3中的每一个独立地是-La-R'或氨基酸侧链；
La1和La2中的每一个独立地是La；
每个La独立地是共价键、或选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-；
每个-Cy-独立地是任选地经取代的二价单环、双环或多环基团，其中每个单环独立地选自C3-20脂环族环、C6-20芳基环、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-20元杂芳基环和具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-20元杂环基环；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R；
每个R独立地是-H或任选地经取代的基团，所述任选地经取代的基团选自C1-30脂肪族、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C1-30杂脂肪族、C6-30芳基、C6-30芳基脂肪族、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的C6-30芳基杂脂肪族、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基以及具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与所述原子一起形成除所述原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与其中间原子一起形成除所述中间原子外还具有0-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环。
在一些实施例中，例如具有式A-I的结构的氨基酸的氨基酸残基具有-N(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-CO-结构。在一些实施例中，肽中的每个氨基酸残基独立地具有-N(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-CO-结构。
在一些实施例中，本公开提供了式A-I的氨基酸或其盐的衍生物。在一些实施例中，衍生物是酯。在一些实施例中，本公开提供了一种具有式NH(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-COORCT的化合物或其盐，其中RCT是R'并且每个其它变量独立地如本文所描述。在一些实施例中，RCT是R。在一些实施例中，RCT是任选地经取代的脂肪族。在一些实施例中，RCT是叔丁基。
在一些实施例中，La1是共价键。在一些实施例中，式A-I的化合物具有结构NH(Ra1)-C(Ra2)(Ra3)-La2-COOH。在一些实施例中，La2是-CH2SCH2-。
在一些实施例中，La2是共价键。在一些实施例中，式A-I的化合物具有结构NH(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-COOH。在一些实施例中，氨基酸残基具有-N(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-CO-结构。在一些实施例中，La1是-CH2CH2S-。在一些实施例中，La1是-CH2CH2S-，其中CH2与NH(Ra1)键合。
在一些实施例中，La1是共价键，并且La2是共价键。在一些实施例中，式A-I的化合物具有结构NH(Ra1)-C(Ra2)(Ra3)-COOH；NH(Ra1)-CH(Ra2)-COOH；NH(Ra1)-CH(Ra3)-COOH；NH2-CH(Ra2)-COOH；NH2-CH(Ra3)-COOH；-N(Ra1)-C(Ra2)(Ra3)-CO-；N(Ra1)-CH(Ra2)-CO-；-N(Ra1)-CH(Ra3)-CO-；-NH-CH(Ra2)-CO-；或-NH-CH(Ra3)-CO-。
在一些实施例中，La是共价键；La是任选地经取代的C1-6二价脂肪族；La是任选地经取代的C1-6亚烷基；La是-CH2-；La是-CH2CH2-；或者La是-CH2CH2CH2-。
在一些实施例中，La是二价的任选地经取代的C1-20脂肪族，其中一个或多个亚甲基单元独立地被-C(O)-、-N(R')-、-Cy-和/或-O-替代。在一些实施例中，La是二价的任选地经取代的C1-20脂肪族，其中一个或多个亚甲基单元独立地被-C(O)N(R')-、-Cy-和-O-替代。在一些实施例中，La是二价的任选地经取代的C1-20脂肪族，其中两个或更多个亚甲基单元独立地被除其它任选的替代外的-C(O)N(R')-和-Cy-替代。在一些实施例中，-Cy-任选地被取代。在一些实施例中，-Cy-任选地被如本文所描述的吸电子基团取代。在一些实施例中，-Cy-被一个或多个-F取代。在一些实施例中，-Cy-是任选地经取代的1,3-亚苯基。在一些实施例中，-Cy-是任选地经取代的1,4-亚苯基。在一些实施例中，La是或包括在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括/>在一些实施例中，La是或包括在一些实施例中，La是或包括/>
在一些实施例中，R'是R。在一些实施例中，Ra1是R，其中R如本公开中所描述。在一些实施例中，Ra1是R，其中R甲基。在一些实施例中，Ra2是R，其中R如本公开中所描述。在一些实施例中，Ra3是R，其中R如本公开中所描述。在一些实施例中，Ra1、Ra2和Ra3中的每一个独立地是R，其中R如本公开中所描述。
在一些实施例中，Ra1是氢。在一些实施例中，Ra1是保护基。在一些实施例中，Ra1是-Fmoc。在一些实施例中，Ra1是-Dde。
在一些实施例中，Ra1、Ra2和Ra3中的每一个独立地是-La-R'。
在一些实施例中，Ra2是氢。在一些实施例中，Ra3是氢。在一些实施例中，Ra1是氢，Ra2和Ra3中的至少一个是氢。在一些实施例中，Ra1是氢，Ra2和Ra3中的一个是氢，并且另一个不是氢。在一些实施例中，Ra2是-La-R并且Ra3是-H。在一些实施例中，Ra3是-La-R并且Ra2是-H。在一些实施例中，Ra2是-CH2-R并且Ra3是-H。在一些实施例中，Ra3是-CH2-R并且Ra2是-H。在一些实施例中，Ra2是R并且Ra3是-H。在一些实施例中，Ra3是R并且Ra2是-H。
在一些实施例中，Ra2是-La-R，其中R如本公开中所描述。在一些实施例中，Ra2是-La-R，其中R是任选地经取代的基团，所述任选地经取代的基团选自C3-30脂环族、C5-30芳基、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基和具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基。在一些实施例中，Ra2是-La-R，其中R是选自C6-30芳基和具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基的任选地经取代的基团。在一些实施例中，Ra2是氨基酸的侧链。在一些实施例中，Ra2是标准氨基酸的侧链。
在一些实施例中，Ra3是-La-R，其中R如本公开中所描述。在一些实施例中，Ra3是-La-R，其中R是任选地经取代的基团，所述任选地经取代的基团选自C3-30脂环族、C5-30芳基、具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基和具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的3-30元杂环基。在一些实施例中，Ra3是-La-R，其中R是选自C6-30芳基和具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的5-30元杂芳基的任选地经取代的基团。在一些实施例中，Ra3是氨基酸的侧链。在一些实施例中，Ra3是标准氨基酸的侧链。
在一些实施例中，一或Ra2和Ra3是-H。在一些实施例中，一或Ra2和Ra3是-La-R，其中La如本文所描述。在一些实施例中，La不是共价键。在一些实施例中，La的一个或多个亚甲基单元独立地且任选地如本文所描述的被例如-C(O)-、-N(R')-、-O-、-C(O)-N(R')-和/或-Cy-等替代。在一些实施例中，La是或包括-C(O)-、-N(R')-和-Cy-。在一些实施例中，La是或包括-C(O)N(R')-和-Cy-。在一些实施例中，如本文所描述的，-Cy-被取代并且一个或多个取代基独立地是吸电子基团。
在一些实施例中，氨基酸侧链是Ra2或Ra3。在一些实施例中，氨基酸侧链是或包括-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-H。在一些实施例中，氨基酸侧链是或包括-LLG2-LLG3-LLG4-H。在一些实施例中，氨基酸侧链是或包括-LLG3-LLG4-H。在一些实施例中，氨基酸侧链是或包括-LLG4-H。在一些实施例中，此类侧链是在一些实施例中，此类侧链是在一些实施例中，此类侧链是/>在一些实施例中，此类侧链是/>
在一些实施例中，R是任选地经取代的C1-6脂肪族。在一些实施例中，R是任选地经取代的C1-6烷基。在一些实施例中，R是-CH3。在一些实施例中，R是任选地经取代的戊基。在一些实施例中，R是正戊基。
在一些实施例中，R是环状基团。在一些实施例中，R是任选地经取代的C3-30脂环族基团。在一些实施例中，R是环丙基。
在一些实施例中，R是任选地经取代的芳香族基团，并且式A-I的氨基酸的氨基酸残基是XaaA。在一些实施例中，Ra2或Ra3是-CH2-R，其中R是任选地经取代的芳基或杂芳基。在一些实施例中，R是任选地经取代的苯基。在一些实施例中，R是苯基。在一些实施例中，R是任选地经取代的苯基。在一些实施例中，R是4-三氟甲基苯基。在一些实施例中，R是4-苯基苯基。在一些实施例中，R是具有1-10个独立地选自氧、氮、硫、磷和硅的杂原子的任选地经取代的5-30元杂芳基。在一些实施例中，R是具有1-5个独立地选自氧、氮和硫的杂原子的任选地经取代的5-14元杂芳基。在一些实施例中，R是在一些实施例中，R是任选地经取代的吡啶基。在一些实施例中，R是1-吡啶基。在一些实施例中，R是2-吡啶基。在一些实施例中，R是3-吡啶基。在一些实施例中，R是/>
在一些实施例中，R'是-COOH。在一些实施例中，式A-I的氨基酸的氨基酸残基的化合物是XaaN。
在一些实施例中，R'是-NH2。在一些实施例中，式A-I的氨基酸的氨基酸残基的化合物是XaaP。
在一些实施例中，Ra2或Ra3是R，其中R是如本公开中所描述的C1-20脂肪族。在一些实施例中，式A-I的氨基酸的氨基酸残基的化合物是XaaH。在一些实施例中，R是-CH3。在一些实施例中，R是乙基。在一些实施例中，R是丙基。在一些实施例中，R是正丙基。在一些实施例中，R是丁基。在一些实施例中，R是正丁基。在一些实施例中，R是戊基。在一些实施例中，R是正戊基。在一些实施例中，R是环丙基。
在一些实施例中，Ra1、Ra2和Ra3中的两个或更多个是R，并且一起形成如本公开中所描述的任选地经取代的环。
在一些实施例中，Ra1以及Ra2和Ra3之一是R，并且一起形成除与Ra1键合的氮原子外不具有另外的环杂原子的任选地经取代的3-6元环。在一些实施例中，形成的环是脯氨酸中的5元环。
在一些实施例中，Ra2和Ra3是R，并且一起形成如本公开中所描述的任选地经取代的3-6元环。在一些实施例中，Ra2和Ra3是R，并且一起形成具有一个或多个氮环原子的任选地经取代的3-6元环。在一些实施例中，Ra2和Ra3是R，并且一起形成具有一个且不超过一个是氮原子的环杂原子的任选地经取代的3-6元环。在一些实施例中，环是饱和环。
在一些实施例中，氨基酸是天然氨基酸。在一些实施例中，氨基酸是非天然氨基酸。在一些实施例中，氨基酸是α-氨基酸。在一些实施例中，氨基酸是β-氨基酸。在一些实施例中，式A-I化合物是天然氨基酸。在一些实施例中，式A-I化合物是非天然氨基酸。
在一些实施例中，氨基酸包括疏水侧链。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是A、V、I、L、M、F、Y或W。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是A、V、I、L、M或F。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是A、V、I、L或M。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是A、V、I或L。在一些实施例中，疏水侧链是R，其中R是C1-10脂肪族。在一些实施例中，R是C1-10烷基。在一些实施例中，R是甲基。在一些实施例中，R是乙基。在一些实施例中，R是丙基。在一些实施例中，R是丁基。在一些实施例中，R是戊基。在一些实施例中，R是正戊基。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是NH2CH(CH2CH2CH2CH2CH3)COOH。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是(S)-NH2CH(CH2CH2CH2CH2CH3)COOH。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是(R)-NH2CH(CH2CH2CH2CH2CH3)COOH。在一些实施例中，疏水侧链是-CH2R，其中R是任选地经取代的苯基。在一些实施例中，R是苯基。在一些实施例中，R是被一个或多个烃基取代的苯基。在一些实施例中，R是4-苯基苯基。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是NH2CH(CH2-4-苯基苯基)COOH。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是(S)-NH2CH(CH2-4-苯基苯基)COOH。在一些实施例中，具有疏水侧链的氨基酸是(R)-NH2CH(CH2-4-苯基苯基)COOH。
在一些实施例中，氨基酸包括如本文所描述的带正电荷的侧链(例如，在生理pH下)。在一些实施例中，此类氨基酸在其侧链中包括碱性氮。在一些实施例中，此类氨基酸是Arg、His或Lys。在一些实施例中，此类氨基酸是Arg。在一些实施例中，此类氨基酸是His。在一些实施例中，此类氨基酸是Lys。
在一些实施例中，氨基酸包括如本文所描述的带负电荷的侧链(例如，在生理pH下)。在一些实施例中，此类氨基酸在其侧链中包括-COOH。在一些实施例中，此类氨基酸是Asp。在一些实施例中，此类氨基酸是Glu。
在一些实施例中，氨基酸包括包含如本文所描述的芳香族基团的侧链。在一些实施例中，此类氨基酸是Phe、Tyr、Trp或His。在一些实施例中，此类氨基酸是Phe。在一些实施例中，此类氨基酸是Tyr。在一些实施例中，此类氨基酸是Trp。在一些实施例中，此类氨基酸是His。在一些实施例中，此类氨基酸是NH2-CH(CH2-4-苯基苯基)-COOH。在一些实施例中，此类氨基酸是(S)-NH2-CH(CH2-4-苯基苯基)-COOH。在一些实施例中，此类氨基酸是(R)-NH2-CH(CH2-4-苯基苯基)-COOH。
在一些实施例中，氨基酸是或其盐。在一些实施例中，氨基酸是/>或其盐。在一些实施例中，氨基酸是或其盐。在一些实施例中，氨基酸是/>或其盐。在一些实施例中，氨基酸是/>或其盐。在一些实施例中，氨基酸是/>或其盐。在一些实施例中，氨基酸是或其盐。在一些实施例中，氨基酸是/>或其盐。在一些实施例中，所提供的化合物是/>在一些实施例中，本公开提供了包括一个或多个在本公开中描述的氨基酸残基的多肽药剂。
反应性基团
在一些实施例中，所提供的化合物，例如可用作反应配偶体的那些，包括反应性基团(例如，RG)。如本文所例示的，在许多实施例中，在所提供的化合物中，反应性基团(例如，RG)定位于第一基团(例如，LG)与所关注部分(例如，MOI)之间，并且通过接头任选地且独立地与第一基团和所关注部分连接。在一些实施例中，RG是如本文所描述的反应基团。
在一些实施例中，如本文所展示的，当在不包括靶结合部分的化合物中利用时，反应性基团反应缓慢并且在一些实施例中提供低水平的、基本上不与靶药剂缀合的所关注部分。如本文所展示的，反应性基团与相同化合物中的(例如，如式R-I化合物或其盐中的)靶结合部分的组合，除其它外，可以促进反应性基团与靶药剂之间的反应，增强反应效率，减少副反应，和/或提高反应选择性(例如，就其中所关注部分与靶药剂发生缀合的靶位点而言)。
提供的化合物中的反应性基团可以与靶药剂中的各种类型的基团反应。在一些实施例中，所提供的化合物中的反应性基团选择性地与靶药剂的氨基反应，例如蛋白质的赖氨酸残基的侧链上的-NH2基团。在一些实施例中，当在所提供的化合物，例如式R-I化合物或其盐的那些化合物中被利用时，反应性基团选择性地与靶药剂的特定位点反应，例如，如本文实例中所示，IgG1的K246、K248、K288、K290、K317等、IgG2的K251、K 253等、IgG4的K239、K241，等等中的一个或多个。在一些实施例中，位点是抗体重链的K246或K248。在一些实施例中，位点是抗体重链的K246和/或K248。在一些实施例中，位点是抗体重链的K246。在一些实施例中，位点是抗体重链的K248。在一些实施例中，位点是抗体重链的K288或K290。在一些实施例中，位点是抗体重链的K288。在一些实施例中，位点是抗体重链的K290。在一些实施例中，位点是K317。在一些实施例中，位点是抗体重链的K414。在一些实施例中，位点是抗体轻链的K185。在一些实施例中，位点是抗体轻链的K187。在一些实施例中，位点是IgG2重链的K251和/或K253。在一些实施例中，位点是IgG2重链的K251。在一些实施例中，位点是IgG2重链的K253。在一些实施例中，位点是IgG4重链的K239和/或K241。在一些实施例中，位点是IgG4重链的K239。在一些实施例中，位点是IgG4重链的K241。在一些实施例中，缀合选择性地发生在一个或多个重链位点而不是轻链位点。在一些实施例中，对于没有靶结合部分的技术，在轻链位点发生的缀合多于重链位点(例如，参见图15)。
在一些实施例中，反应性基团，例如RG是或包括酯基团。在一些实施例中，反应性基团，例如RG是或包括亲电基团，例如迈克尔受体。
在一些实施例中，反应性基团例如RG是或包括-LRG1-LRG2-，其中LRG1和LRG2中的每一个独立地是如本文所描述的L。在一些实施例中，反应性基团例如RG是或包括-LLG4-LRG1-LRG2-，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，反应性基团例如RG是或包括-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，反应性基团例如RG是或包括-LLG2-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，反应性基团例如RG是或包括-LLG4-LRG2-，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，反应性基团例如RG是或包括-LLG3-LLG4-LRG2-，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，反应性基团例如RG是或包括-LLG2-LLG3-LLG4-LRG2-，其中每个变量如本文所描述。
在一些实施例中，如本文所描述的，LLG4是-O-。在一些实施例中，LLG4是-N(R)-。在一些实施例中，LLG4是-NH-。
在一些实施例中，如本文所描述的，LLG3是或包括任选地经取代的芳基环。在一些实施例中，LLG3是或包括苯基环。在一些实施例中，芳基或苯环被取代。在一些实施例中，取代基是如本文所描述的吸电子基团，例如-NO2、-F等。
在一些实施例中，LRG1是共价键。在一些实施例中，LRG1不是共价键。在一些实施例中，LRG1是-S(O)2-。
在一些实施例中，LRG2是-C(O)-。在一些实施例中，反应性基团是或包括-LLG4-C(O)-，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，反应性基团是或包括-LLG3-LLG4-C(O)-，其中每个变量如本文所描述。在一些实施例中，反应性基团是或包括-LLG2-LLG3-LLG4-C(O)-，其中每个变量如本文所描述。
在一些实施例中，LRG2是-LRG3-C(＝CRRG1RRG2)-CRRG3RRG4-，其中RRG1、RRG2、RRG3和RRG4中的每一个独立地是-L-R'，并且LRG3是-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-或-P(O)(N(R')2)-。在一些实施例中，RRG1、RRG2、RRG3和RRG4中的每一个独立地是R'。在一些实施例中，RRG1、RRG2、RRG3和RRG4中的一个或多个独立地是-H。在一些实施例中，LRG3是-C(O)-。在一些实施例中，LRG3是-C(O)O-。在一些实施例中，LRG3的-O-、-N(R')-等与LPM键合。
在一些实施例中，RRG1是-H。在一些实施例中，RRG3是-H。
在一些实施例中，LRG2是任选地经取代的-LRG3-C(＝CHRRG2)-CHRRG4-，其中每个变量如本文所描述。
在一些实施例中，RRG2和RRG4与其中间原子一起形成如本文所描述的任选地经取代的环。在一些实施例中，所形成的环是具有0-5个杂原子的任选地经取代的3-10元单环或双环。在一些实施例中，所形成的环是任选地经取代的3-10元脂环族环。在一些实施例中，所形成的环是任选地经取代的3-8元脂环族环。在一些实施例中，形成的环是任选地经取代的5-8元脂环族环。在一些实施例中，所形成的环是任选地经取代的5元脂环族环。在一些实施例中，形成的环是任选地经取代的6元脂环族环。在一些实施例中，形成的环是任选地经取代的7元脂环族环。在一些实施例中，所形成的环被取代。在一些实施例中，所形成的环未被取代。在一些实施例中，除C(＝CHRRG2)或C(＝CRRG1RRG2)中的双键外，形成的环不含有另外的不饱和度。
在一些实施例中，-C(＝CHRRG2)-CHRRG4或-C(＝CRRG1RRG2)-CRRG3RRG4是任选地经取代的在一些实施例中，-C(＝CHRRG2)-CHRRG4或-C(＝CRRG1RRG2)-CRRG3RRG4是/>在一些实施例中，-C(＝CHRRG2)-CHRRG4-LRG3-或-C(＝CRRG1RRG2)-CRRG3RRG4-LRG3-是任选地经取代的/>在一些实施例中，-C(＝CHRRG2)-CHRRG4-LRG3-或-C(＝CRRG1RRG2)-CRRG3RRG4-LRG3-是/>在一些实施例中，-LRG1-C(＝CHRRG2)-CHRRG4-LRG3-或-LRG1-C(＝CRRG1RRG2)-CRRG3RRG4-LRG3-是任选地经取代的/>在一些实施例中，-LRG1-C(＝CHRRG2)-CHRRG4-LRG3-或-LRG1-C(＝CRRG1RRG2)-CRRG3RRG4-LRG3-是任选地经取代的/>
在一些实施例中，反应性基团是选自下表的结构。在一些实施例中，-LLG2-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-是选自下表的结构。在一些实施例中，-LLG2-LLG3-LLG4-RG-是选自下表的结构。
表RG-1：作为实例的某些结构。
在一些实施例中，-LLG4-LRG2-是-O-C(O)-。在一些实施例中，-LLG4-LRG2-是-S-C(O)-。在一些实施例中，-LLG4-LRG1-LRG2-是-S-C(O)-。
在一些实施例中，-LLG4-LRG2-是-N(-)-C(O)-，其中N是任选地经取代的杂芳基环的环原子。在一些实施例中，-LLG4-LRG2-是-N(-)-C(O)-，其中N为是或包括任选地经取代的杂芳基环的LLG4的环原子。在一些实施例中，-LLG4-LRG2-是-N(-)-C(O)-O-，其中N为是或包括任选地经取代的杂芳基环的LLG4的环原子。
在一些实施例中，LRG2是任选地经取代的-CH2-C(O)-，其中-CH2-与包括靶结合部分或与所述靶结合部分连接的吸电子基团键合。在一些实施例中，LRG2是与包括靶结合部分或与所述靶结合部分连接的吸电子基团键合的任选地经取代的-CH2-。在一些实施例中，LRG1是吸电子基团。在一些实施例中，LRG1是-C(O)-。在一些实施例中，LRG1是-S(O)-。在一些实施例中，LRG1是-S(O)2-。在一些实施例中，LRG1是-P(O(OR)-。在一些实施例中，LRG1是-P(O(SR)-。在一些实施例中，LRG1是-P(O(N(R)2)-。在一些实施例中，LRG1是-OP(O(OR)-。在一些实施例中，LRG1是-OP(O(SR)-。在一些实施例中，LRG1是-OP(O(N(R)2)-。
在一些实施例中，LRG2是任选地经取代的-CH2-C(O)-，其中-CH2-与包括靶结合部分或与所述靶结合部分连接的离去基团键合。在一些实施例中，LRG2是与包括靶结合部分或与所述靶结合部分连接的离去基团键合的任选地经取代的-CH2-。在一些实施例中，LRG1是-O-C(O)-。在一些实施例中，LRG1是-OS(O)2-。在一些实施例中，LRG1是-OP(O(OR)-。在一些实施例中，LRG1是-OP(O(SR)-。在一些实施例中，LRG1是-OP(O(N(R)2)-。
在一些实施例中，反应性基团与靶药剂的氨基反应。在一些实施例中，氨基是赖氨酸残基的侧链的-NH2。
在一些实施例中，靶药剂是蛋白药剂。在一些实施例中，靶药剂是抗体药剂。在一些实施例中，反应性基团与此类蛋白质或抗体药剂的氨基酸残基反应。在一些实施例中，氨基酸残基是赖氨酸残基。在一些实施例中，反应性基团与赖氨酸残基的侧链的-NH2反应。在一些实施例中，反应性基团是或包括-C(O)-O-，所述反应性基团与(例如，赖氨酸残基的侧链的)-NH2反应，并且与-NH2形成酰胺基团-C(O)-O-。
接头部分
在一些实施例中，部分任选地通过接头部分彼此连接。例如，在一些实施例中，反应性基团例如RG通过接头例如LRM与所关注部分例如MOI连接。在一些实施例中，部分，例如LG还可以包括一个或多个接头例如LLG1、LLG2、LLG3、LLG4等，以连接各个部分。在一些实施例中，LLG是本文所描述的接头部分。在一些实施例中，LLG1是本文所描述的接头部分。在一些实施例中，LLG2是本文所描述的接头部分。在一些实施例中，LLG3是本文所描述的接头部分。在一些实施例中，LLG4是本文所描述的接头部分。在一些实施例中，LRM是本文所描述的接头部分。在一些实施例中，LPM是如本文所描述的L。在一些实施例中，LPM是本文所描述的接头部分。在一些实施例中，LPM是如本文所描述的L。
可以根据本公开利用各种类型和/或用于各种目的的接头部分，例如用于抗体-药物缀合物等的接头部分。
接头部分可以是二价或多价的，这取决于其使用方式。在一些实施例中，接头部分是二价的。在一些实施例中，接头是多价的并且连接超过两个部分。
在一些实施例中，接头部分，例如Lz(其中z表示上标文本；例如LPM、LRM、LLG、LLG1等)是或包括L。
在一些实施例中，L是共价键或二价或多价任选地经取代的直链或支链C1-100基团，所述基团包括一个或多个脂肪族、芳基、具有1-20个杂原子的杂脂肪族、具有1-20个杂原子的杂芳香族或其任何组合，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、具有1-5个杂原子的二价C1-6杂脂肪族基团、-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-20。在一些实施例中，每个氨基酸残基独立地是具有式A-I的结构的氨基酸或其盐的残基。在一些实施例中，每个氨基酸残基独立地具有-N(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-CO-或其盐形式的结构。
在一些实施例中，L是二价的。在一些实施例中，L是共价键。
在一些实施例中，L是选自具有1-50个杂原子的C1-00脂肪族和C1-100杂脂肪族的二价或任选地经取代的直链或支链基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、具有1-5个杂原子的二价C1-6杂脂肪族基团、-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-。
在一些实施例中，L是选自具有1-10个杂原子的C1-20脂肪族和C1-20杂脂肪族的二价或任选地经取代的直链或支链基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、具有1-5个杂原子的二价C1-6杂脂肪族基团、-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-。
在一些实施例中，L是选自C1-20脂肪族的二价或任选地经取代的直链或支链基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-。
在一些实施例中，L是选自C1-20脂肪族的二价或任选地经取代的直链或支链基团，其中所述基团中的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-。
在一些实施例中，L是选自C1-20脂肪族的二价或任选地经取代的直链或支链基团，其中所述基团中的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-。
在一些实施例中，接头部分例如L、LPM、LRM等包括酸性基团，例如，-S(O)2OH。
在一些实施例中，L是或包括-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-。在一些实施例中，L是或包括-[(-O-CH2-CH2-)n]-。在一些实施例中，L是-[(-CH2-CH2-O)6]-CH2-CH2-。在一些实施例中，L是-[(-CH2-CH2-O)8]-CH2-CH2-。在一些实施例中，-CH2-CH2-O-与靶结合部分在-CH2-处键合。在一些实施例中，-CH2-CH2-O-与所关注部分在-CH2-处键合。在一些实施例中，LPM是如本文所描述的此类L。在一些实施例中，LRM是如本文所描述的这种L。
在一些实施例中，接头部分是三价的或多价的。例如，在一些实施例中，接头部分是如本文所描述的L并且L是三价或多价的。在一些实施例中，L是三价的。例如，在一些实施例中，L是-CH2-N(-CH2-)-C(O)-。
在一些实施例中，L是或包括生物正交或酶促反应产物部分。在一些实施例中，L是或包括任选地经取代的三唑部分(其任选地是双环或多环系统的一部分)。在一些实施例中，L是或包括LPXTG。在一些实施例中，L是或包括LPETG。在一些实施例中，L是或包括LPXT(G)n，其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施例中，L是或包括LPET(G)n，其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在一些实施例中，所提供的化合物/药剂(例如，反应配偶体、药剂(例如，所提供的方法和/或其中的步骤的产物))不包括可以在基本上不会损害或转化靶药剂和/或包括靶药剂部分的药剂(例如，包括靶药剂部分的缀合产物)的条件下切割的可切割基团(除了其中的一个或多个反应性基团和/或部分)。在一些实施例中，所提供的化合物/药剂(例如，反应配偶体、药剂(例如，所提供的方法和/或其中的步骤的产物))不包括可以在不会使靶药剂和/或包括靶药剂部分的药剂(例如，包括靶药剂部分的缀合产物)对一种或多种用途(例如，用作诊断剂、治疗剂等)无效的条件下被切割的可切割基团(除了其中的一个或多个反应性基团和/或部分)。在一些实施例中，所提供的化合物/药剂(例如，反应配偶体、药剂(例如，所提供的方法和/或其中的步骤的产物)不包括可以在生物正交条件下切割的可切割基团。在一些实施例中，所提供的化合物/药剂(例如，反应配偶体、药剂(例如，所提供的方法和/或其中的步骤的产物)不包括可以在没有基本上损伤和/或转化蛋白质的情况下被切割的可切割基团。在一些实施例中，可切割基团是或包括-S-、-S-S-、-S-Cy-、-C(O)-O-、-C(O)-S-、缩醛部分、-N＝N-、亚胺部分、-CH＝N-、-P(O)(OR)O-部分、-P(O)(OR)-N(R)-部分、--C(O)-CH2-C(COOH)＝CHC(O)-部分、-CHOH-CHOH-部分、-Se-部分、与两个氧原子键合的Si、-C(O)-CH2-、其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环被-NO2-、-C(O)-CH2-取代，其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环在o定位处被-NO2-或-C(O)-N(-)-部分取代，其中N是杂芳基环的环原子。在一些实施例中，可切割基团是或包括-S-S-、-S-CH2-Cy-、-S-Cy-、-C(O)-O-、-C(O)-S-、缩醛部分、-N＝N-、亚胺部分、-CH＝N-、-P(O)(OR)O-部分、-P(O)(OR)-N(R)-部分、--C(O)-CH2-C(COOH)＝CHC(O)-部分、-CHOH-CHOH-部分、-Se-部分、与两个氧原子键合的Si、-C(O)-CH2-、其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环被-NO2-、-C(O)-CH2-取代，其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环在o定位处被-NO2-或-C(O)-N(-)-部分取代，其中N是杂芳基环的环原子。
在一些实施例中，接头部分不含有上述切割基团。在一些实施例中，接头部分不含有以下部分中的一个或多个或任何部分：-S-、-S-S-、-S-CH2-Cy-、-S-Cy-、-C(O)-O-、-C(O)-S-、缩醛部分、-N＝N-、亚胺部分、-CH＝N-、-P(O)(OR)O-部分、-P(O)(OR)-N(R)-部分、--C(O)-CH2-C(COOH)＝CHC(O)-部分、-CHOH-CHOH-部分、-Se-部分、与两个氧原子键合的Si、-C(O)-CH2-、其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环被-NO2-、-C(O)-CH2-取代，其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环在o定位处被-NO2-或-C(O)-N(-)-部分取代，其中N是杂芳基环的环原子。在一些实施例中，接头部分不含有以下部分中的一个或多个或任何部分：-S-S-、-S-CH2-Cy-、-S-Cy-、-C(O)-O-、-C(O)-S-、缩醛部分、-N＝N-、亚胺部分、-CH＝N-、-P(O)(OR)O-部分、-P(O)(OR)-N(R)-部分、-C(O)-CH2-C(COOH)＝CHC(O)-部分、-CHOH-CHOH-部分、-Se-部分、与两个氧原子键合的Si、-C(O)-CH2-、其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环被-NO2-、-C(O)-CH2-取代，其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环在o定位处被-NO2-或-C(O)-N(-)-部分取代，其中N是杂芳基环的环原子。在一些实施例中，接头部分不包括-S-。在一些实施例中，接头部分不包括-S-S-(任选地，由两个氨基酸残基形成的二硫键部分除外，在一些实施例中，任选地，由两个半胱氨酸残基形成的二硫键部分除外)。在一些实施例中，接头部分不包括-S-Cy-。在一些实施例中，接头部分不包括-S-CH2-Cy-。在一些实施例中，接头部分不包括-C(O)-O-。在一些实施例中，接头部分不包括-C(O)-S-。在一些实施例中，接头部分不包括缩醛部分。在一些实施例中，接头部分不包括-N＝N-。在一些实施例中，接头部分不包括亚胺部分。在一些实施例中，接头部分不包括-CH＝N-(任选地在环中除外，在一些实施例中，任选地在杂芳基环中除外)。在一些实施例中，接头部分不包括-P(O)(OR)O-部分。在一些实施例中，接头部分不包括-P(O)(OR)-N(R)-部分。在一些实施例中，接头部分不包括-C(O)-CH2-C(COOH)＝CHC(O)-部分。在一些实施例中，接头部分不包括-CHOH-CHOH-部分。在一些实施例中，接头部分不包括-Se-部分。在一些实施例中，接头部分不包括与两个氧原子键合的Si。在一些实施例中，接头部分不包括-C(O)-CH2-，其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环被-NO2-取代。在一些实施例中，接头部分不包括-C(O)-CH2-，其中-CH2-与苄基碳键合，其中苄基的苯环在o定位处被-NO2-取代。在一些实施例中，接头部分不包括-C(O)-N(-)-部分，其中N是杂芳基环的环原子。在一些实施例中，接头部分不含有这些基团中的任何基团。在一些实施例中，LRM是此类接头部分。在一些实施例中，LPM是此类接头部分。在一些实施例中，LLG是此类接头部分。在一些实施例中，本公开的药剂不含有此类部分中的一个或多个或所有部分。
在一些实施例中，L是共价键。在一些实施例中，L是任选地经取代的二价、直链或支链C1-100脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被替代。在一些实施例中，L是任选地经取代的二价、直链或支链C6-100芳基脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被替代。在一些实施例中，L是具有1-20个杂原子的任选地经取代的二价、直链或支链C5-100杂芳基脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被替代。在一些实施例中，L是具有1-20个杂原子的任选地经取代的二价、直链或支链C1-100杂脂肪族基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被替代。
在一些实施例中，接头部分(例如，L)是或包括一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个)聚乙二醇单元。在一些实施例中，接头部分是或包括-(CH2CH2O)n-，其中n如本公开中所描述。在一些实施例中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被-(CH2CH2O)n-替代。
如本文所描述的，在一些实施例中，n是1。在一些实施例中，n是2。在一些实施例中，n是3。在一些实施例中，n是4。在一些实施例中，n是5。在一些实施例中，n是6。在一些实施例中，n是7。在一些实施例中，n是8。在一些实施例中，n是9。在一些实施例中，n是10。在一些实施例中，n是11。在一些实施例中，n是12。在一些实施例中，n是13。在一些实施例中，n是14。在一些实施例中，n是15。在一些实施例中，n是16。在一些实施例中，n是17。在一些实施例中，n是18。在一些实施例中，n是19。在一些实施例中，n是20。
在一些实施例中，接头部分(例如，L)是或包括一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个)氨基酸残基。如本公开中所使用的，“一个或多个”可以是1-100、1-50、1-40、1-30、1-20、1-10、1-5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20或更多个。在一些实施例中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被氨基酸残基替代。在一些实施例中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被氨基酸残基替代，其中所述氨基酸残基属于式A-I的氨基酸或其盐。在一些实施例中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被氨基酸残基替代，其中每个氨基酸残基独立地具有-N(Ra1)-La1-C(Ra2)(Ra3)-La2-CO-或其盐形式的结构。
在一些实施例中，接头部分包括可以用于与其它部分连接的一个或多个部分，例如氨基、羰基等。在一些实施例中，接头部分包括一个或多个-NR'-，其中R'如本公开中所描述。在一些实施例中，-NR'-提高溶解度。在一些实施例中，-NR'-用作与另一个部分的连接点。在一些实施例中，R'是-H。在一些实施例中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被-NR'-替代，其中R'如本公开中所描述。
在一些实施例中，接头部分，例如L，包括-C(O)-基团，其可以用于与部分连接。在一些实施例中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被-C(O)-替代。
在一些实施例中，接头部分，例如L，包括-NR'-基团，其可以用于与部分连接。在一些实施例中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被-N(R')-替代。
在一些实施例中，接头部分，例如L，包括-C(O)NR'-基团，其可以用于与部分连接。在一些实施例中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被-C(O)N(R')-替代。
在一些实施例中，接头部分，例如L，包括-C(R')2-基团。在一些实施例中，L的一个或多个亚甲基单元独立地被-C(R')2-替代。在一些实施例中，-C(R')2-是-CHR'-。在一些实施例中，R'是-(CH2)2C(O)NH(CH2)11COOH。在一些实施例中，R'是-(CH2)2COOH。在一些实施例中，R'是-COOH。
在一些实施例中，接头部分是或包括一个或多个环部分，例如，L的一个或多个亚甲基单元被-Cy-替代。在一些实施例中，接头部分，例如L，包括芳基环。在一些实施例中，接头部分，例如L，包括杂芳基环。在一些实施例中，接头部分，例如L，包括脂肪族环。在一些实施例中，接头部分，例如L，包括杂环基环。在一些实施例中，接头部分，例如L，包括多环。在一些实施例中，接头部分例如L中的环是3-20元的。在一些实施例中，环是5元的。在一些实施例中，环是6元的。在一些实施例中，接头中的环是用于将不同部分连接在一起的环加成反应(例如，点击化学和其变体)的产物。
在一些实施例中，接头部分(例如，L)是或包括在一些实施例中，L的亚甲基单元被/>替代。在一些实施例中，L的亚甲基单元被-Cy-替代。在一些实施例中，-Cy-是/>
在一些实施例中，接头部分(例如，L)是或包括-Cy-。在一些实施例中，L的亚甲基单元被-Cy-替代。在一些实施例中，-Cy-是在一些实施例中，-Cy-是在一些实施例中，-Cy-是/>
在一些实施例中，接头部分，例如L包括
在一些实施例中，LRM是共价键。在一些实施例中，LRM不是共价键。在一些实施例中，LRM是或包括-(CH2CH2O)n-。在一些实施例中，LRM是或包括-(CH2)n-O-(CH2CH2O)n-(CH2)n-，其中每个n独立地如本文所描述，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。在一些实施例中，LRM是-(CH2)n-O-(CH2CH2O)n-(CH2)n-，其中每个n独立地如本文所描述，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。在一些实施例中，LRM是-(CH2)2-O-(CH2CH2O)n-(CH2)2-，其中n如本文所描述，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。在一些实施例中，LRM是-(CH2)2-O-(CH2CH2O)n-(CH2)2-，其中n如本文所描述。
在一些实施例中，LPM是共价键。在一些实施例中，LPM不是共价键。在一些实施例中，LPM是或包括-(CH2CH2O)n-。在一些实施例中，LPM是或包括-(CH2)n-O-(CH2CH2O)n-(CH2)n-，其中每个n独立地如本文所描述，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。在一些实施例中，LPM是-(CH2)n-O-(CH2CH2O)n-(CH2)n-，其中每个n独立地如本文所描述，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。在一些实施例中，LPM是-(CH2)2-O-(CH2CH2O)n-(CH2)2-，其中n如本文所描述，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。在一些实施例中，LPM是-(CH2)2-O-(CH2CH2O)n-(CH2)2-，其中n如本文所描述。
在一些实施例中，(例如，第一药剂和第二药剂的产物中的)LPM是或包括形成第一反应性部分和第二反应性部分的反应产物部分。
在一些实施例中，接头部分(例如，第一药剂和第二药剂的产物中的LPM)是或包括在一些实施例中，接头部分，例如L或可以是L的接头部分(例如，LRM、LPM等)的亚甲基单元被-Cy-替代。在一些实施例中，-Cy-是任选地经取代的/>在一些实施例中，-Cy-是/>在一些实施例中，-Cy-是/>在一些实施例中，-Cy-是在一些实施例中，-Cy-是/>
所关注部分
阅读本公开的本领域技术人员将理解，根据本公开，各种类型的所关注部分可以用于各种目的。对于本公开，所关注部分是或包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)或MMAE的紧密类似物。
在本公开的一些实施例中，所关注部分是或包括MMAE。MMAE是一种用于药物-抗体缀合物，例如MAB-MMAE缀合物的抗肿瘤剂。MMAE通过连接结构与单克隆抗体连接，一旦药物-抗体缀合物附着到肿瘤细胞，所述连接结构就可以被切割。连接结构包含组织蛋白酶可切割序列(缬氨酸-瓜氨酸)和间隔子。间隔子可以变化。
在一些实施例中，所关注部分是或包括MMAD。
在一些实施例中，所关注部分是或包括MMAF，即一甲基澳瑞他汀F或去甲基澳瑞他汀F，其连接结构如下所示。
在一些实施例中，所提供的方法进一步包括：
使包括例如第一所关注部分中的第一反应性部分的第一药剂与包括第二反应性部分的第二药剂反应。在各个实施例中，第一反应性部分处于第一所关注部分中，例如，其可以通过本文所描述的方法并入(例如，通过与具有式R-I的结构的化合物或其盐接触)。
在一些实施例中，第二所关注部分处于不包括靶结合部分的化合物中。在一些实施例中，第二所关注部分处于式P-I或P-II化合物或其盐中。在一些实施例中，第二所关注部分处于R-I化合物或其盐中。在一些实施例中，第二药剂具有式P-I或P-II的结构或其盐。在一些实施例中，第二反应性部分处于第二药剂的所关注部分中。在一些实施例中，第二药剂包括如本文所描述的靶药剂部分。例如，在一些实施例中，第二药剂中的靶药剂部分是或包括肽部分。在一些实施例中，第二药剂中的靶药剂部分是或包括如本文所描述的抗体药剂部分。在一些实施例中，靶药剂部分包括scFv部分。在一些实施例中，与第一药剂相比，第二药剂中的靶药剂部分提供不同的特异性。在一些实施例中，此类第一药剂和第二药剂彼此反应以提供各种产物药剂，所述产物药剂包括具有如本文所描述的不同特异性的部分。
在一些实施例中，第一反应性部分与第二反应性部分之间的反应是生物正交反应。在一些实施例中，反应是环加成反应。在一些实施例中，反应是[3+2]反应。合适的此类反应和对应的第一反应性部分和第二反应性部分在本领域中是众所周知的并且可以根据本公开利用。在一些实施例中，第一反应性部分是或包括-N3，并且第二反应性部分是或包括-≡-(例如，适用于点击化学的炔烃部分，包含适用于无金属点击化学的那些)。在一些实施例中，第二反应性部分是或包括-N3，并且第一反应性部分是或包括-≡-(例如，适用于点击化学的炔烃部分，包含适用于无金属点击化学的那些)。
如本文所描述的，在一些实施例中，第一反应性部分与第二反应性部分之间的反应是酶促反应。在一些实施例中，反应是分选酶介导的反应。在一些实施例中，第一反应性部分与第二反应性部分中的每个反应性部分独立地是或包括用于反应例如酶促反应的底物部分。例如，在一些实施例中，对于分选酶介导的缀合，反应性部分是或包括(G)n(例如，n是3、4、5等)，并且反应性部分是或包括LPXTG(例如，LPETG)。在一些实施例中，反应性部分是或包括LPXTG-(X)n(例如，LPETG-(X)n、LPETG-XX等)。阅读本公开的本领域技术人员将理解，可以根据本公开通过酶和/或非酶途径将各种反应性部分用于缀合。
在一些实施例中，第二药剂是或包括作为如本文所描述的所关注部分的第二所关注部分。在一些实施例中，第二反应性部分与第二所关注部分通过接头(例如，如本文所描述的接头(例如，如本文所描述的LPM、L等))连接。在一些实施例中，第二所关注部分如本文所描述(例如，检测部分、治疗部分、可以相互作用、识别和/或结合蛋白质、核酸、免疫细胞、疾病细胞等的所关注部分)。在一些实施例中，第二所关注部分是或包括抗体药剂。在一些实施例中，第二所关注部分是或包括scFv抗体药剂。在一些实施例中，此类抗体药剂与初始靶抗体药剂相比具有不同的特异性。因此，在一些实施例中，本公开提供了双特异性抗体药剂、组合物和其方法。在一些实施例中，靶药剂是或包括第一抗体药剂，并且其与包括第一反应性部分的所关注部分缀合。在一些实施例中，使包括第一抗体药剂和第一反应性部分的药剂与包括第二反应性部分和第二所关注部分的第二药剂反应，所述第二所关注部分是或包括第二抗体药剂，以提供包括第一抗体药剂和第二抗体药剂的药剂。在一些实施例中，第一抗体药剂和第二抗体药剂是不同的。在一些实施例中，第一抗体药剂和第二抗体药剂是相同的。
在一些实施例中，药剂包括两个或更多个抗体药剂部分。在一些实施例中，单个药剂分子中的抗体药剂部分具有不同的靶特异性。在一些实施例中，单个药剂分子中的一些或所有抗体药剂部分具有相同的靶特异性。在一些实施例中，本文所描述的药剂是或包括具有不同靶特异性的部分(例如，具有不同靶特异性的抗体部分)。在一些实施例中，药剂是双特异性抗体药剂。在一些实施例中，药剂包括第一部分(例如，第一抗体药剂部分)和第二部分(例如，第二抗体药剂部分)。在一些实施例中，第一部分(例如，第一抗体药剂部分)是或包括IgG或其片段。在一些实施例中，第一部分(例如，第一抗体药剂部分)是或包括靶结合部分可以结合的抗体药剂部分或其片段(例如，Fc区或其片段)。在一些实施例中，第二部分(例如，第二抗体药剂部分)是或包括IgG或其片段。在一些实施例中，第二部分(例如，第二抗体药剂部分)是或包括靶结合部分可以结合的抗体药剂部分或其片段(例如，Fc区或其片段)。在一些实施例中，抗体药剂部分，例如第二抗体药剂部分，不包括靶结合部分可以结合的部分。在一些实施例中，抗体药剂部分，例如第二抗体药剂部分，不包括靶结合部分可以结合的Fc部分。在一些实施例中，抗体药剂部分，例如第二抗体药剂部分，是或包括scFv。在一些实施例中，第一部分是或包括第一药剂的药剂部分。在一些实施例中，第二部分是或包括第二药剂的所关注部分。在一些实施例中，使第一药剂，例如，包括第一抗体药剂部分的药剂与第二药剂，例如，包括第二抗体药剂部分的药剂接触，以提供包括两个或更多个具有靶特异性的部分(例如，抗体药剂部分)的药剂。
在一些实施例中，部分，例如第一部分，是或包括与和病状、病症或疾病(例如，癌症)相关的靶标(例如，蛋白质、脂质、碳水化合物、物体等)结合的抗体药剂部分。在一些实施例中，部分，例如第一部分，是或包括适合于预防或治疗病状、病症或疾病例如癌症的抗体药剂的部分。在一些实施例中，部分，例如第一部分，是或包括靶向癌细胞、组织、器官等的抗体药剂的部分。例如，在一些实施例中，第一部分是或包括抗CD20抗体或其片段的部分。在一些实施例中，第一部分是或包括利妥昔单抗或其片段。在一些实施例中，部分，例如第二部分，是第二所关注部分。在一些实施例中，部分，例如第二部分，是或包括可以募集和/或活化免疫活性例如一种或多种免疫细胞的抗体药剂部分。在一些实施例中，部分，例如第二部分，是或包括可以募集和/或活化T细胞的抗体药剂部分。在一些实施例中，部分，例如第二部分是或包括抗CD3抗体或其片段的部分。在一些实施例中，抗CD3抗体是CD3定向的scFv。在一些实施例中，部分，例如，第一部分，是靶药剂部分。在一些实施例中，所提供的药剂包括抗CD20部分和抗CD3部分。在一些实施例中，所提供的药剂包括抗CD20部分和抗CD3部分，其中所述两个部分通过接头连接。在一些实施例中，接头包括不是氨基酸残基的部分。在一些实施例中，接头包括不是天然蛋白原氨基酸残基的部分。在一些实施例中，接头是如本文所描述的接头部分。本领域技术人员将理解，包括两个或更多个靶特异性部分(例如，抗体药剂部分)的药剂可以根据本公开制备具有各种益处和特性，例如高位点特异性、高同质性、低水平的损害、低水平或基本没有降低的期望的特性和/或活性(例如，靶结合、免疫活性的募集和/或活化等)等。本领域技术人员还将理解，所提供的技术可以容易地将抗体药剂，例如那些可容易获得的抗体药剂(例如，“现成的”治疗性抗体)与其它部分，例如，在一些实施例中其它抗体药剂缀合，以例如产生双特异性药剂。在一些实施例中，第一部分和第二部分通过如本文所描述的接头连接。
在一些实施例中，所提供的产物药剂包括连接靶药剂部分和第二所关注部分(例如，两个抗体药剂部分)的接头部分。在一些实施例中，接头是或包括LRG2、LPM或其片段中的一个或多个，以及由第一反应性部分和第二反应性部分形成的一个或多个部分(例如，对于点击化学，三唑部分)。在一些实施例中，接头是或包括产物接头部分，例如，由第一反应性部分与第二反应性部分之间的反应形成的接头部分。在一些实施例中，产物接头部分是或包括LPXTG。在一些实施例中，产物接头部分是或包括LPXT(G)n，其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施例中，产物接头部分是或包括生物正交反应产物部分，例如点击化学反应产物部分。
在一些实施例中，使用本文提供的技术制备包括第二反应性部分和第二所关注部分的药剂。在一些实施例中，第二所关注部分是或包括蛋白药剂部分。在一些实施例中，第二所关注部分是或包括抗体药剂部分。在一些实施例中，第二所关注部分(例如，蛋白药剂(例如，抗体药剂))可以用作靶药剂部分，并且第二反应性部分可以用作所关注部分(例如，式R-I化合物或其盐中的MOI)，用于利用某些提供的方法(例如，所述方法包括使靶药剂(例如，蛋白药剂(例如，抗体药剂等))与包括所关注部分(例如，那些是或包括第二反应性的那些部分)、反应性基团和可以与靶药剂结合以提供第二药剂的靶结合部分的反应配偶体反应)。
在一些实施例中，第一药剂和第二药剂中的每一种独立地且任选地是式P-I或P-II药剂或其盐。在一些实施例中，第一药剂和第二药剂中的每一种独立地是式P-I或P-II药剂或其盐。在一些实施例中，使用本公开的方法制备第一药剂和第二药剂中的至少一种药剂。在一些实施例中，使用本公开的方法独立地制备第一药剂和第二药剂中的每种药剂。在一些实施例中，第一药剂的靶药剂部分是抗体药剂。在一些实施例中，第一药剂的所关注部分是或包括第一反应性部分。在一些实施例中，第二药剂的靶药剂部分抗体药剂部分。在一些实施例中，第二药剂的所关注部分是或包括第二反应性部分。如本文所描述的，在一些实施例中，第一反应性部分和第二反应性部分可以各自反应以提供产物药剂。在一些实施例中，第一反应性部分与第二反应性部分之间的反应是或包括与第一药剂和第二药剂中的靶药剂相容的反应，例如，与蛋白药剂(例如抗体药剂)相容的反应。在一些实施例中，此类反应是生物正交反应。在一些实施例中，此类反应是环加成反应。在一些实施例中，此类反应是点击反应。在一些实施例中，此类反应是无金属点击反应。在一些实施例中，产物药剂具有式P-I或P-II，或其盐。在一些实施例中，在式P-I或P-II产物药剂或其盐中，靶药剂部分是蛋白药剂(例如，抗体药剂)，并且在一些实施例中，是第一药剂的靶药剂部分。在一些实施例中，在式P-I或P-II产物药剂或其盐中，所关注部分是蛋白药剂(例如，抗体药剂)，并且在一些实施例中，是第二药剂的靶药剂部分。在一些实施例中，产物药剂包括两种或更多种抗体药剂。在一些实施例中，两种或更多种抗体药剂具有不同的抗原特异性。在一些实施例中，两种或更多种抗体药剂针对不同的抗原。在一些实施例中，所提供的方法包括：
使具有式P-I或P-II的结构的第一药剂或其盐与具有式P-I或P-II的结构的第二药剂或其盐反应以提供产物药剂。
方法和产物
在一些实施例中，所提供的技术包括使靶药剂(例如，将要连接所关注部分的靶药剂)与反应配偶体接触。在一些实施例中，接触在一定条件下和一定时间内进行，使得靶药剂与反应配偶体反应以形成药剂作为产物。根据本公开，如果适于期望目的，则可以评估和利用本领域的许多反应条件/反应时间；某些此类条件、反应时间、评估等在实例中进行了描述。
在一些实施例中，形成的药剂包括靶药剂部分、所关注部分和任选地连接靶药剂部分和所关注部分的接头部分。在一些实施例中，靶药剂部分源自靶药剂(例如，通过从靶药剂中去除一个或多个-H)。在一些实施例中，靶药剂部分维持靶药剂的一种或多种、大部分或基本上所有的结构特征和/或生物学功能。例如，在一些实施例中，靶药剂是抗体药剂，并且所形成的药剂中的靶药剂部分是对应的抗体药剂部分并维持抗体药剂的主要功能，例如与各种受体(例如，Fc受体如FcRn)相互作用，识别具有特异性的抗原，触发、促进和/或增强对患病细胞等的免疫活性，作为抗体药剂。在一些实施例中，所形成的药剂提供超出靶药剂的一种或多种功能，例如，来自所关注部分和/或所形成的药剂作为一个整体。
在一些实施例中，所形成的药剂具有式P-I或P-II的结构或其盐。在一些实施例中，所形成的药剂中的所关注部分(例如，式P-I或P-II的MOI，或其盐)与用于制备所形成的药剂的反应配偶体中的所关注部分(例如，式R-I的MOI或其盐)相同。在一些实施例中，P是蛋白质部分。在一些实施例中，P是抗体部分。
在一些实施例中，与所关注部分连接的接头部分(或其一部分)也可以从反应配偶体(例如，式R-I的LRM或其盐)转移。在一些实施例中，所形成的药剂中的接头部分(例如，LPM)是或包括反应配偶体中的接头部分(例如，反应性基团与所关注部分之间的接头部分，例如LRM)。在一些实施例中，LPM是或包括LRM。在一些实施例中，LPM是-LRM-LRG2-。在一些实施例中，LRG2是-C(O)-。在一些实施例中，LRG2是-C(O)-，并且与靶药剂部分的-NH-键合，例如在蛋白质部分的赖氨酸残基的侧链中的-NH-，其在一些实施例中，是抗体部分。
反应配偶体，例如式R-I化合物或其盐，通常不含有在反应性基团与靶药剂反应的条件下可以与反应性基团反应的部分。在一些实施例中，就反应配偶体中的一些部分可以在反应性基团与靶药剂反应的条件下与反应性基团反应的程度而言，与反应性基团与靶药剂之间的反应相比，此类部分和反应性基团之间的反应显著更慢和/或效率更低。在一些实施例中，此类部分与反应性基团之间的反应不会显著降低(例如，不超过约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的降低)反应性基团与靶药剂之间的反应的效率、产率、速率和/或转化率等。在一些实施例中，反应性基团(例如，酯基、活化的羧酸衍生物等)与靶药剂(例如，蛋白药剂如抗体药剂)的氨基(例如，-NH2基团)反应。在一些实施例中，反应配偶体，例如式R-I化合物或其盐，不含有胺基团。在一些实施例中，式R-I化合物或其盐(或其部分，如RLG、LLG、LLG1、LLG2、LLG3、LLG4、LRG1、LRG2、LRM和/或MOI)不含有胺基团。在一些实施例中，其不含有伯胺基团(-NH2)。在一些实施例中，其不含有-CH2NH2。在一些实施例中，其不含有-CH2CH2NH2。在一些实施例中，其不含有-CH2CH2CH2NH2。在一些实施例中，其不含有-CH2CH2CH2CH2NH2。在一些实施例中，胺基团，例如伯胺基团，被封端(例如，通过引入酰基(例如，R-C(O)-(例如，乙酰基))以形成酰胺基团)以防止或减少不期望的反应。
在一些实施例中，反应在缓冲系统中进行。在一些实施例中，本公开的缓冲系统维持靶药剂、所关注部分等的结构和/或功能。在一些实施例中，缓冲液是磷酸盐缓冲液。在一些实施例中，缓冲液是PBS缓冲液。在一些实施例中，缓冲液是硼酸盐缓冲液。在一些实施例中，本公开的缓冲液提供并任选地维持一定的pH值或范围。例如，在一些实施例中，有用的pH为约7-9，例如7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、9.0等。在一些实施例中，pH为7.4。在一些实施例中，pH为7.5。在一些实施例中，pH为7.8。在一些实施例中，pH为8.0。在一些实施例中，pH为8.2。在一些实施例中，pH为8.3。
所提供的技术可以提供各种优势。除其它外，在一些实施例中，所提供的反应配偶体中的所关注部分(例如，包括定位于第一基团与所关注部分之间的反应性基团的化合物(例如，式R-I化合物或其盐))与靶药剂的连接和在所提供的反应配偶体中的靶结合部分的释放可以在一个反应和/或一个锅中实现。因此，在一些实施例中，不进行单独的反应/步骤以去除靶结合部分。如本领域技术人员所理解的，通过在单一反应/操作中进行所关注部分的连接和靶结合部分的释放，所提供的技术可以避免用于去除靶结合部分的单独步骤并且可以提高整体效率(例如，通过简化操作、增加总产率等)、降低制造成本、提高产物纯度(例如，通过避免暴露于靶结合部分去除条件，这通常涉及还原、氧化、(例如，酯基团的)水解等条件中的一种或多种条件)，并且可能损害靶药剂部分(例如，对于蛋白药剂部分、蛋白质氨基酸残基、整体结构和/或其翻译后修饰(例如，抗体的聚糖))。实际上，如本文所展示的，具体地与其中使用不含靶结合部分的反应配偶体，不引入去除靶结合部分的步骤(例如，靶结合部分在与所关注部分缀合的相同步骤中去除)的参考技术相比，除其它外，所提供的技术可以提供改进的效率(例如，在反应速率和/或转化百分比方面)、增加的产率、增加的纯度/均质性和/或增加的选择性。
在一些实施例中，本公开提供了所提供方法的产物，除其它外，与包括为去除靶结合部分但不为基本所关注部分缀合而执行的步骤的方法相比，其含有对靶药剂部分的低水平损伤。在一些实施例中，所提供的产物组合物与参考产物组合物(例如，那些来自不使用靶结合部分或利用额外步骤去除靶结合部分的技术(例如，不利用本文所描述的包括定位于靶结合部分与所关注部分之间的反应性基团的反应配偶体)的产物组合物)相比具有高同质性。
在一些实施例中，产物药剂是包括以下的药剂：
靶药剂部分；
所关注部分，如MMAD；以及
任选地一个或多个接头部分。
在一些实施例中，靶药剂部分是蛋白药剂部分。在一些实施例中，靶药剂部分是抗体药剂部分。在一些实施例中，抗体药剂部分包括IgG Fc区。在一些实施例中，靶药剂部分通过氨基任选地通过接头与所关注部分连接。在一些实施例中，所述靶药剂部分是通过赖氨酸残基的，其中侧链的氨基任选地通过接头与所关注部分连接(例如，形成-NH-C(O)-作为酰胺基团、氨基甲酸酯基团等的一部分)。
在一些实施例中，靶药剂的所选位置用于缀合。例如，在一些实施例中，抗体药剂的K246或K248(EU编号或对应残基)是缀合位置。在一些实施例中，缀合位置是重链的K246(除非另有说明，本文中的位置包含例如经修饰的序列(例如，更长、更短、重排等序列)中的对应残基)。在一些实施例中，位置是重链的K248。在一些实施例中，位置是重链的K288或K290。在一些实施例中，位置是重链的K288。在一些实施例中，位置是重链的K290。在一些实施例中，位置是K317。
在一些实施例中，当靶药剂是抗体药剂时，重链相对于轻链被选择性地标记。
除其它外，本公开可以提供受控的所关注部分/靶药剂比率(例如，对于抗体-药物缀合物，药物/抗体比率(DAR))。例如，在一些实施例中，比率为约0.5-6，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5等。在一些实施例中，比率为约0.5-2.5。在一些实施例中，比率为约0.5-2。在一些实施例中，比率为约1-2。在一些实施例中，比率为约1.5-2。在一些实施例中，比率是与靶药剂部分缀合的所关注部分和与所关注部分缀合的靶药剂部分的比率。在一些实施例中，比率是与靶药剂部分缀合的所关注部分和组合物中的所有靶药剂部分的比率。
在一些实施例中，在所提供的药剂(例如，式P-I或P-II药剂，或其盐)中，靶药剂部分的基本上所有缀合位点具有相同的修饰(例如，全部共享相同的所关注部分，任选地通过相同的接头部分连接)。在一些实施例中，没有缀合位点携带不同修饰(例如，不同的所关注部分和/或没有所关注部分和/或不同的接头部分)。
在一些实施例中，在包括多种所提供的药剂(例如，式P-I或P-II药剂，或其盐)的所提供的组合物中，靶药剂部分的基本上所有缀合位点具有相同的修饰(例如，全部共享相同的所关注部分，任选地通过相同的接头部分连接)。在一些实施例中，没有缀合位点携带不同修饰(例如，不同的所关注部分和/或没有所关注部分和/或不同的接头部分)。在一些实施例中，此类组合物不含有共享相同(或基本上相同)靶药剂部分但具有不同修饰(例如，不同的所关注部分和/或没有所关注部分和/或不同的接头部分)的药剂。在一些实施例中，共享相同(或基本上相同)的靶药剂部分但不同修饰(例如，不同的所关注部分和/或没有所关注部分和/或不同的接头部分)的药剂是最终产物药剂的多步制备(例如，除用于所关注部分缀合的步骤外，包括用于去除靶结合部分的步骤)的中间体。
在一些实施例中，本公开提供了一种组合物，其包括多种药剂，所述药剂中的每种药剂独立地包括：
靶药剂部分；
所关注部分；以及
任选地接头部分，所述接头部分连接靶药剂部分和所关注部分；
其中所述多种药剂中的药剂共享相同或基本上相同的靶药剂部分以及独立地在至少一个共同位置处的共同修饰；并且
其中包括靶药剂部分和所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。
在一些实施例中，靶药剂部分是或包括蛋白质部分。在一些实施例中，多个药剂在至少一个氨基酸残基上独立地共享共同修饰(例如，所关注部分任选地通过接头部分的缀合)。在一些实施例中，多种药剂各自独立地具有式P-I或P-II，或其盐。
在一些实施例中，本公开提供了一种组合物，其包括多种药剂，所述药剂中的每种药剂独立地包括：
蛋白药剂部分；
所关注部分；以及
任选地接头部分，所述接头部分连接蛋白药剂部分和所关注部分，
其中所述多种药剂中的药剂的蛋白药剂部分包括共同氨基酸序列，并且所述多种药剂中的药剂共享独立地在蛋白药剂部分的至少一个共同氨基酸残基处的共同修饰；并且
其中包括包含所述共同氨基酸序列的蛋白药剂部分以及所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。
在一些实施例中，多种药剂各自独立地具有式P-I或P-II，或其盐。在一些实施例中，每个蛋白药剂部分独立地是抗体药剂部分。
在一些实施例中，本公开提供了一种组合物，其包括多种药剂，所述药剂中的每种药剂独立地包括：
抗体药剂部分；
所关注部分；以及
任选地接头部分，所述接头部分连接抗体药剂部分和所关注部分；
其中所述多种药剂中的药剂的抗体药剂部分包括共同氨基酸序列或可以与共同抗原结合，并且所述多种药剂中的药剂共享独立地在蛋白药剂部分的至少一个共同氨基酸残基处的共同修饰；并且
其中包括包含所述共同氨基酸序列或可以与所述共同抗原结合的抗体药剂部分以及所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。
在一些实施例中，多种药剂各自独立地具有式P-I或P-II，或其盐。在一些实施例中，多种药剂中的药剂的抗体药剂部分包括共同的氨基酸序列。在一些实施例中，多种药剂中的药剂的抗体药剂部分包括Fc区中的共同的氨基酸序列。在一些实施例中，多种药剂中的药剂的抗体药剂部分包括共同的Fc区。在一些实施例中，多种药剂中的药剂的抗体药剂部分可以特异性结合共同的抗原。在一些实施例中，抗体药剂部分是单克隆抗体部分。在一些实施例中，抗体药剂部分是多克隆抗体部分。在一些实施例中，抗体药剂部分与两种或更多种不同的抗原结合。在一些实施例中，抗体药剂部分与两种或更多种不同的蛋白质结合。在一些实施例中，抗体药剂部分是IVIG部分。
如本公开中所使用的，在一些实施例中，“至少一个”或“一个或多个”为1-1000、1-500、1-200、1-100、1-90、1-80、1-70、1-60、1-50、1-40、1-30、1-20、1-10、1-5或约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个。在一些实施例中，其是一个。在一些实施例中，其是两个或更多个。在一些实施例中，其是约3个。在一些实施例中，其是约4个。在一些实施例中，其是约5个。在一些实施例中，其是约6个。在一些实施例中，其是约7个。在一些实施例中，其是约8个。在一些实施例中，其是约9个。在一些实施例中，其是约10个。在一些实施例中，其是约10个或更多个。
在一些实施例中，共同的氨基酸序列包括1-1000、1-500、1-400、1-300、1-200、1-100、1-50、10-1000、10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、20-1000、20-500、20-400、20-300、20-200、20-100、20-50、50-1000、50-500、50-400、50-300、50-200、50-100、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、200、250、300、400、500、600或更多个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少5个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少10个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少50个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少100个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少150个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少200个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少300个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少400个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少500个氨基酸残基。在一些实施例中，长度为至少600个氨基酸残基。
在一些实施例中，共同的氨基酸序列是靶药剂部分、蛋白药剂部分、抗体药剂部分等的氨基酸序列的至少10％-100％、50％-100％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施例中，其是100％。
在一些实施例中，蛋白药剂部分共享高百分比的氨基酸序列同源性。在一些实施例中，其是50％-100％。在一些实施例中，其是50％。在一些实施例中，其是60％。在一些实施例中，其是70％。在一些实施例中，其是80％。在一些实施例中，其是90％。在一些实施例中，其是91％。在一些实施例中，其是50％。在一些实施例中，其是92％。在一些实施例中，其是93％。在一些实施例中，其是94％。在一些实施例中，其是95％。在一些实施例中，其是96％。在一些实施例中，其是97％。在一些实施例中，其是98％。在一些实施例中，其是99％。在一些实施例中，其是100％。在一些实施例中，其是至少50％。在一些实施例中，其是至少60％。在一些实施例中，其是至少70％。在一些实施例中，其是至少80％。在一些实施例中，其是至少90％。在一些实施例中，其是至少91％。在一些实施例中，其是至少50％。在一些实施例中，其是至少92％。在一些实施例中，其是至少93％。在一些实施例中，其是至少94％。在一些实施例中，其是至少95％。在一些实施例中，其是至少96％。在一些实施例中，其是至少97％。在一些实施例中，其是至少98％。在一些实施例中，其是至少99％。
在一些实施例中，蛋白药剂部分或抗体药剂部分是或包括蛋白质复合物。在一些实施例中，至少一条或每条单独的链共享共同的氨基酸序列和/或具有如本文所描述的同源性。
在一些实施例中，多种药剂中的药剂共享共同的所关注部分。在一些实施例中，多种药剂中的每种药剂独立地是式P-I或P-II药剂或其盐。在一些实施例中，多种药剂中的每种药剂独立地是式P-I或P-II药剂或其盐，其中对于多种药剂中的每种药剂，MOI都是相同的。在一些实施例中，多种药剂中的药剂是本文所描述的方法的产物。在一些实施例中，包括多种药剂中的药剂的组合物是本文所描述的方法的产物。
在一些实施例中，修饰是或包括所关注部分和任选地接头。在一些实施例中，修饰是或包括-LPM-MOI。
在一些实施例中，多种药剂中的药剂共享独立地在至少一个位置处的共同修饰。在一些实施例中，修饰是或包括所关注部分和任选地连接所关注部分的接头。如本文所描述的，每个位置独立地具有其共同修饰。在一些实施例中，在两个或更多个或所有位置处的共同修饰包括共同的所关注部分。在一些实施例中，共同修饰是相同的。在一些实施例中，多种药剂中的药剂在每个位置处共享共同修饰，所述修饰具有是或包括所关注部分和任选地接头的修饰。在一些实施例中，多种药剂中的药剂在每个位置处共享共同修饰，所述修饰具有是或包括-LPM-MOI的修饰。
在一些实施例中，蛋白药剂(例如，抗体药剂)共享至少一个氨基酸残基处的共同修饰。在一些实施例中，多种药剂中的药剂在每个位置处共享共同修饰，所述修饰具有是或包括所关注部分和任选地接头的修饰。在一些实施例中，多种药剂中的药剂在每个位置处共享共同修饰，所述修饰具有是或包括-LPM-MOI的修饰。
在一些实施例中，位置选自抗体药剂的K246、K248、K288、K290、K317和与其对应的位置。在一些实施例中，位置选自K246和K248，以及与其相对应的位置。在一些实施例中，位置选自K288和K290，以及与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是K246或与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是K248或与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是K288或与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是K290或与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是K317或与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是轻链的K185或与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是轻链的K187或与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是重链的K133或与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是重链的K246或K248或与其相对应的位置。在一些实施例中，位置是重链的K414或与其相对应的位置。
在一些实施例中，包括靶药剂部分和所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。在一些实施例中，包括包含所述共同氨基酸序列的蛋白药剂部分以及所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。在一些实施例中，包括包含所述共同氨基酸序列或能够与所述共同抗原结合的抗体药剂部分以及所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。在一些实施例中，包括靶药剂部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。在一些实施例中，包括包含所述共同氨基酸序列的蛋白药剂部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。在一些实施例中，包括包含所述共同氨基酸序列或可以与所述共同抗原结合的抗体药剂部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。在一些实施例中，其是50％-100％。在一些实施例中，其是50％。在一些实施例中，其是60％。在一些实施例中，其是70％。在一些实施例中，其是80％。在一些实施例中，其是90％。在一些实施例中，其是91％。在一些实施例中，其是50％。在一些实施例中，其是92％。在一些实施例中，其是93％。在一些实施例中，其是94％。在一些实施例中，其是95％。在一些实施例中，其是96％。在一些实施例中，其是97％。在一些实施例中，其是98％。在一些实施例中，其是99％。在一些实施例中，其是100％。在一些实施例中，其是至少50％。在一些实施例中，其是至少60％。在一些实施例中，其是至少70％。在一些实施例中，其是至少80％。在一些实施例中，其是至少90％。在一些实施例中，其是至少91％。在一些实施例中，其是至少50％。在一些实施例中，其是至少92％。在一些实施例中，其是至少93％。在一些实施例中，其是至少94％。在一些实施例中，其是至少95％。在一些实施例中，其是至少96％。在一些实施例中，其是至少97％。在一些实施例中，其是至少98％。在一些实施例中，其是至少99％。
在一些实施例中，所提供的药剂、化合物等，例如式R-I、P-I、P-II等的那些和其盐具有高纯度。在一些实施例中，其是50％-100％。在一些实施例中，其是50％。在一些实施例中，其是60％。在一些实施例中，其是70％。在一些实施例中，其是80％。在一些实施例中，其是90％。在一些实施例中，其是91％。在一些实施例中，其是50％。在一些实施例中，其是92％。在一些实施例中，其是93％。在一些实施例中，其是94％。在一些实施例中，其是95％。在一些实施例中，其是96％。在一些实施例中，其是97％。在一些实施例中，其是98％。在一些实施例中，其是99％。在一些实施例中，其是100％。在一些实施例中，其是至少50％。在一些实施例中，其是至少60％。在一些实施例中，其是至少70％。在一些实施例中，其是至少80％。在一些实施例中，其是至少90％。在一些实施例中，其是至少91％。在一些实施例中，其是至少50％。在一些实施例中，其是至少92％。在一些实施例中，其是至少93％。在一些实施例中，其是至少94％。在一些实施例中，其是至少95％。在一些实施例中，其是至少96％。在一些实施例中，其是至少97％。在一些实施例中，其是至少98％。在一些实施例中，其是至少99％。
在一些实施例中，本公开提供了包括产物药剂(例如，式P-I或P-II药剂，或其盐)的产物药剂组合物。在一些实施例中，产物药剂组合物(例如，由某些方法形成的药剂组合物)包括产物药剂，所述产物药剂包括靶药剂部分和所关注部分以及任选地接头(例如，式P-I或P-II药剂，或其盐)；释放的靶结合部分(例如，包括RLG-(LLG1)0-1-(LLG2)0-1-(LLG3)0-1-(LLG4)0-1-的化合物)或包括释放的靶结合部分的化合物(例如，具有RLG-(LLG1)0-1-(LLG2)0-1-(LLG3)0-1-(LLG4)0-1-H结构的化合物或其盐)；以及反应配偶体(例如，式R-I化合物或其盐)。在一些实施例中，释放的靶结合部分可以与靶药剂和/或所形成的产物药剂中的靶药剂部分结合。根据本公开，各种技术可用于将释放的靶结合部分与靶药剂部分分离，例如，在一些实施例中，使组合物与包括在特定pH的甘氨酸的组合物接触。
变量的某些实施例
作为实例，在整个本公开中描述了变量的示例性实施例。如本领域技术人员所理解的，可以任选地组合用于不同变量的实施例。
在一些实施例中，ABT是如本文所描述的抗体结合部分。在一些实施例，ABT是选自以下的化合物的ABT：MMAE-1、MMAE-2、MMAE-3、MMAE-4、MMAE-5、MMAE-6和MMAE-7。在一些实施例中，ABT是选自表A-1的部分。
在一些实施例，L是选自以下的化合物中描述的那些的化合物的接头部分：MMAE-1、MMAE-2、MMAE-3、MMAE-4、MMAE-5、MMAE-6和MMAE-7。
一般方法、药剂和条件
根据本公开，可以利用各种技术来提供本文的化合物和药剂。
在一些实施例中，在描绘了特定保护基团(“PG”)、离去基团(“LG”)或转化条件的情况下，本领域的普通技术人员将认识到其它保护基团、离去基团和转化条件也是合适的并且是预期的。此类基团和转化在以下文献中详细描述：《玛奇高等有机化学：反应、机理与结构(March's Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure)》,M.B.Smith和J.March,第5版,约翰·威立父子出版公司,2001；《综合有机转化(Comprehensive Organic Transformations)》,R.C.Larock,第2版,约翰·威立父子出版公司,1999；以及《有机合成中的保护基团(Protecting Groups in Organic Synthesis)》,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,约翰·威立父子出版公司,1999，所述文献中的每个文献的全部内容特此通过引用并入本文。
在一些实施例中，离去基团包含但不限于卤素(例如，氟化物、氯化物、溴化物、碘化物)、磺酸酯(例如，甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、硝基苯磺酯、三氟甲磺酸酯)、重氮基等。
在一些实施例中，氧保护基团包含例如羰基保护基团、羟基保护基团等。羟基保护基团在本领域中是众所周知的，并且包含在《有机合成中的保护基团》,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,约翰·威立父子出版公司,1999中详细描述的那些，所述文献的全部内容通过引用并入本文。合适的羟基保护基团的实例包含但不限于：酯、烯丙基醚、醚、甲硅烷基醚、烷基醚、芳基烷基醚和烷氧基烷基醚。此类酯的实例包含甲酸盐、乙酸盐、碳酸盐和磺酸盐。具体实例包含：甲酸盐、苯酰甲酸酯、氯醋酸盐、三氟醋酸盐、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸钠、3-苯基丙酸乙酯、4-氧代戊酸甲脂、4,4-(亚乙基二硫代)戊酸盐、新戊酸酯(三甲基乙酰基)、巴豆酸酯、4-甲氧基-巴豆酸酯、苯酸盐、对苯甲酸苄酯(p-benylbenzoate)、2,4,6-三甲基苯甲酸乙酯、如甲基、9-芴基甲基、乙基、2,2,2-三氯乙酯、2-(三甲硅烷基)乙基、2-(苯磺酰)乙基、乙烯基、烯丙基和对硝基苄基的碳酸盐。此类甲硅烷基醚的实例包含：三甲硅烷基、三乙基硅烷、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、三异丙基氯硅烷和其它三烷基甲硅烷基醚。烷基醚包含：甲基、苄基、对甲氧苯甲基、3,4-二甲氧基苄基、三苯甲基、叔丁基、烯丙基和烯丙氧基羰基醚或衍生物。烷氧基烷基醚包含：缩醛，如甲氧基甲基醚、甲基硫代甲基醚、(2-甲氧基乙氧基)甲基醚、苄氧基甲基醚、β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚以及四氢吡喃醚。芳基烷基醚的实例包含：苄基、对甲氧基苄基(MPM)、3,4-二甲氧基苄基、O-硝基苄基、对硝基苄基、对卤代苄基、2,6-二氯苄基、对氰基苄基以及2-吡啶甲基和4-吡啶甲基。
氨基保护基团在本领域中是众所周知的，并且包含在《有机合成中的保护基团》,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,约翰·威立父子出版公司,1999中详细描述的那些，所述文献的全部内容通过引用并入本文。合适的氨基保护基团包含但不限于：芳烷基胺、氨基甲酸酯、环状酰亚胺、烯丙胺、酰胺等。此类基团的实例包含：叔丁氧羰基(BOC)、乙氧羰基、甲氧羰基、三氯乙氧基羰基、烯丙氧基羰基(Alloc)、苄氧羰基(CBZ)、烯丙基、邻苯二甲酰亚胺、苄基(Bn)、芴基甲基羰基(Fmoc)、甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、苯乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基等。
本领域的技术人员应理解，化合物/药剂可以含有一或多个立体中心，并且可以以外消旋或非对映异构混合物的形式存在。本领域的技术人员还应理解，本领域中存在已知用于分离异构体以获得那些化合物的立体富集的(stereoenriched)或立体纯的(stereopure)异构体的许多方法，包含但不限于HPLC、手性HPLC、非对映异构盐的分步结晶、动力学酶拆分(例如，通过真菌源性、细菌源性或动物源性脂酶或酯酶)以及使用对映体富集的试剂形成共价非对映异构衍生物。
本领域的技术人员应理解，本公开的化合物中存在的如脂肪族基团、醇、羧酸、酯、酰胺、醛、卤素和腈等各种官能团可以通过本领域熟知的技术相互转化，所述技术包含但不限于还原、氧化、酯化、水解、部分氧化、部分还原、卤化、脱水、部分水合和水合。“玛奇高等有机化学”,第5版,编者:Smith,M.B.和March,J.,约翰·威立父子出版公司,纽约:2001，所述文献的全部内容通过引用并入本文。此类相互转化可能需要上述技术中的一或多种，并且下文在例示中描述了用于合成本公开的化合物的某些方法。
用途、调配物和施用
本公开的化合物、药剂、组合物等可以根据期望用途以各种形式提供。在一些实施例中，其以药物组合物的形式提供。如本领域技术人员所理解的，在许多情况下，药物组合物包括受控量并且被制造用于施用于受试者例如人类患者。在一些实施例中，本公开提供了包括本文所描述的化合物、药剂和/或组合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体的组合物。在一些实施例中，本公开提供了一种药物组合物，其包括本公开的化合物、药剂或组合物以及药学上可接受的载体。在一些实施例中，本公开提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的本公开的化合物、药剂或组合物以及药学上可接受的载体。在一些实施例中，包装药物组合物以及用于储存、运输、施用等。在一些实施例中，药物组合物不含有显著量的有机溶剂(例如，有机溶剂的总量不超过药物组合物重量和/或体积的50％、40％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％或1％)。
在一些实施例中，药学上可接受的载体是或包括不会破坏与其一起调配的化合物的药理活性的无毒的载体、佐剂或媒剂。药学上可接受的载体、佐剂或媒剂可以包含但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、如人血清白蛋白等血清蛋白、如磷酸盐等缓冲物质、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
在一些实施例中，药学上可接受的衍生物是化合物的在向接受者施用后能够直接或间接提供化合物或其活性代谢物或残余物的任何无毒盐、酯、酯盐或其它衍生物。
组合物可以通过口服方式、肠胃外方式、吸入喷雾方式、局部方式、直肠方式、鼻腔方式、口腔方式、阴道方式或通过植入的贮器施用。在一些实施例中，肠胃外施用包含皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内以及颅内注射或输注技术。在一些实施例中，组合物经口、腹膜内或静脉内施用。组合物的无菌注射形式可以是水性或含油悬浮液。这些悬浮液可以使用适当的分散剂或湿润剂以及悬浮剂根据本领域中已知的技术进行调配。无菌可注射制剂还可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中例如作为1,3-丁二醇中的溶液的无菌可注射溶液或悬浮液。可以采用的可接受的媒剂和溶剂中有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油照常规用作溶剂或悬浮介质。
在一些实施例中，可以采用任何温和的不挥发性油，包含合成的甘油单酯或甘油二酯。如油酸等脂肪酸以及其甘油酯衍生物可用于制备可注射物，天然的药学上可接受的油如橄榄油或蓖麻油，尤其是以其聚氧乙烯化形式也是如此。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或通常用于调配药学上可接受的剂型(包含乳液和悬浮液)的类似分散剂。出于调配目的，还可以使用其它常用的表面活性剂如吐温(Tween)、司盘(Span)和其它乳化剂或通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其它剂型的生物利用度增强剂。
药学上可接受的组合物可以以任何口服可接受的剂型口服施用，所述剂型包含但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于口服使用的片剂的情况下，常用的载体包含乳糖和玉米淀粉。通常还添加了如硬脂酸镁等润滑剂。对于呈胶囊形式的口服施用，有用的稀释剂包含乳糖和干玉米淀粉。当口服使用需要水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果期望的话，还可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
在一些实施例中，药学上可接受的组合物可以以直肠施用的栓剂形式施用。在一些实施例中，可以通过将药剂与合适的非刺激性赋形剂混合来制备这些栓剂，所述赋形剂在室温下呈固体但在直肠温度下呈液体并且因此将在直肠中融化以释放药物。此类材料包含可可脂、蜂蜡以及聚乙二醇。
在一些实施例中，药学上可接受的组合物可以局部施用，尤其是在治疗靶标包含易于通过局部施涂接近的区域或器官时，包含眼部、皮肤或下部肠道的疾病。用于这些区域或器官中的每一个的适当的局部调配物是易于制备的。
针对下部肠道的局部施涂可以以直肠栓剂调配品(见上文)或适当的灌肠剂调配物的形式实现。还可以使用局部透皮贴剂。
对于局部施涂，药学上可接受的组合物可以在含有悬浮或溶解于一或多种载体中的活性组分的适当软膏中调配。用于局部施用本公开的化合物的载体包含但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。可替代地，提供的药学上可接受的组合物可以在含有悬浮或溶解于一或多种药学上可接受的载体中的活性组分的合适的洗液或乳膏中调配。合适的载体包含但不限于矿物油、山梨醇酐单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
对于眼科使用，药学上可接受的组合物可以调配为等渗的、pH调节的无菌盐水中的微粒化悬浮液，或优选地等渗的、pH调节的无菌盐水中的溶液(具有或不具有如苯扎氯铵等防腐剂)。可替代地，对于眼科使用，可以将药学上可接受的组合物在如凡士林等软膏中调配。
药学上可接受的组合物还可以通过鼻用气溶胶或通过吸入施用。此类组合物根据药物调配领域中熟知的技术制备并且可以采用苯甲醇或其它合适的防腐剂、用于增强生物利用度的吸收促进剂、氟碳化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂制备成盐水中的溶液。
在一些实施例中，药学上可接受的组合物被配制成用于口服施用。此类调配物可以与或不与食物一起施用。在一些实施例中，药学上可接受的组合物不与食物一起施用。在其它实施例中，药学上可接受的组合物与食物一起施用。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的组合物的化合物的量将根据被治疗的主体、特定的施用方式而有所不同。在一些实施例中，所提供的组合物被调配成使得可以向接受这些组合物的患者施用0.01-100mg/kg体重/天之间的剂量的抑制剂。
在一些实施例中，本发明涉及包含疗法增强剂药剂的组合物，所述疗法增强剂药剂含有在特定位置处与靶药剂部分缀合的所关注部分。
在一实施例中，提供了一种组合物，所述组合物包含：
第一化合物，所述第一化合物具有式(P-II)的结构：
P-N-LPM-MOI(P-II)，
其中：
P-N是包含赖氨酸残基的蛋白药剂部分；
LPM是接头；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分；以及
第二化合物，所述第二化合物具有以下结构：
LG-OH(LG-I)，
其中LG是包含与靶药剂结合的靶结合部分的基团。
在另一实施例中，提供了一种组合物，所述组合物进一步包含：
第三化合物，所述第三化合物具有式(R-I)：
LG-RG-LRM-MOI(R-I)
LG是包含与靶药剂结合的靶结合部分的基团，所述基团与式(LG-I)中的LG相同；
RG是反应性基团；
LRM是接头，所述接头与式(P-II)中的接头相同；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分，
第四化合物，所述第四化合物具有式(R-III)：
HO-RG-LRM-MOI(R-III)
或其组合。
在一些实施例中，组合物可以包含等摩尔量的第一化合物和第二化合物。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物和第二化合物的总摩尔数，第二化合物的量可以是50摩尔百分比(摩尔％)或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物和第二化合物的总摩尔数，第二化合物的量可以是50摩尔％或更少、45摩尔％或更少、40摩尔％或更少、35摩尔％或更少、30摩尔％或更少、25摩尔％或更少、20摩尔％或更少、15摩尔％或更少、10摩尔％或更少或5摩尔％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物和第二化合物的总摩尔数，第二化合物的量可以是5％或更少、4％或更少、3％或更少、2％或更少或1％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物和第二化合物的总摩尔数，第二化合物的量可以是1.0％或更少、0.9％或更少、0.8％或更少、0.7％或更少、0.6％或更少、0.5％或更少、0.4％或更少、0.3％或更少、0.2％或更少、0.1％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物和第二化合物的总摩尔数，第二化合物的量可以是0.10％或更少、0.09％或更少、0.08％或更少、0.07％或更少、0.06％或更少、0.05％或更少、0.04％或更少、0.03％或更少、0.02％或更少、0.01％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物和第二化合物的总摩尔数，第二化合物的量可以是0.010％或更少、0.009％或更少、0.008％或更少、0.007％或更少、0.006％或更少、0.005％或更少、0.004％或更少、0.003％或更少、0.002％或更少、0.001％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物和第二化合物的总摩尔数，第二化合物的量可以是0.0010％或更少、0.0009％或更少、0.0008％或更少、0.0007％或更少、0.0006％或更少、0.0005％或更少、0.0004％或更少、0.0003％或更少、0.0002％或更少、0.0001％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物和第二化合物的总摩尔数，第二化合物的量可以是0.00010％或更少、0.00009％或更少、0.00008％或更少、0.00007％或更少、0.00006％或更少、0.00005％或更少、0.00004％或更少、0.00003％或更少、0.00002％或更少、0.00001％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物和第二化合物的总摩尔数，第二化合物的量可以是0.000010％或更少、0.000009％或更少、0.000008％或更少、0.000007％或更少、0.000006％或更少、0.000005％或更少、0.000004％或更少、0.000003％或更少、0.000002％或更少、0.000001％或更少。
在一些实施例中，组合物可以进一步包含第三化合物、第四化合物或其组合。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物的摩尔数，第三化合物、第四化合物或其组合的量可以是5％或更少、4％或更少、3％或更少、2％或更少或1％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物的摩尔数，第三化合物、第四化合物或其组合的量可以是1.0％或更少、0.9％或更少、0.8％或更少、0.7％或更少、0.6％或更少、0.5％或更少、0.4％或更少、0.3％或更少、0.2％或更少、0.1％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物的摩尔数，第三化合物、第四化合物或其组合的量可以是0.10％或更少、0.09％或更少、0.08％或更少、0.07％或更少、0.06％或更少、0.05％或更少、0.04％或更少、0.03％或更少、0.02％或更少、0.01％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物的摩尔数，第三化合物、第四化合物或其组合的量可以是0.010％或更少、0.009％或更少、0.008％或更少、0.007％或更少、0.006％或更少、0.005％或更少、0.004％或更少、0.003％或更少、0.002％或更少、0.001％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物的摩尔数，第三化合物、第四化合物或其组合的量可以是0.0010％或更少、0.0009％或更少、0.0008％或更少、0.0007％或更少、0.0006％或更少、0.0005％或更少、0.0004％或更少、0.0003％或更少、0.0002％或更少、0.0001％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物的摩尔数，第三化合物、第四化合物或其组合的量可以是0.00010％或更少、0.00009％或更少、0.00008％或更少、0.00007％或更少、0.00006％或更少、0.00005％或更少、0.00004％或更少、0.00003％或更少、0.00002％或更少、0.00001％或更少。在一些实施例中，基于组合物中的第一化合物的摩尔数，第三化合物、第四化合物或其组合的量可以是0.000010％或更少、0.000009％或更少、0.000008％或更少、0.000007％或更少、0.000006％或更少、0.000005％或更少、0.000004％或更少、0.000003％或更少、0.000002％或更少、0.000001％或更少。
还应当理解的是，用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于各种因素，包含所采用的具体化合物的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄率、药物组合和治疗医师的判断以及被治疗的特定疾病的严重程度。组合物中的本公开的化合物的量还将取决于组合物中的特定化合物。
本公开的技术(例如，化合物、药剂、组合物)可以用于各种目的，例如，检测、诊断、治疗等。在一些实施例中，所提供的技术可用于治疗病状、病症或疾病，例如各种癌症。在一些实施例中，所提供的技术包括可以结合癌细胞抗原的靶结合部分，例如抗体药剂部分。在一些实施例中，靶结合部分是抗体药剂部分。在一些实施例中，抗体药剂是治疗剂。除其它外，各种抗体药剂，包含许多开发和/或批准(例如，FDA、EMA等)作为治疗剂的抗体药剂可以根据本公开用于提供各种疾病的治疗剂。
除其它外，本公开提供了以下实施例：
1.一种化合物，其具有式R-I的结构：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是RLG-LLG；
RLG是Rc-(Xaa)z-、核酸部分或小分子部分；/>
每个Xaa独立地是氨基酸或氨基酸类似物的残基；
t是0-50；
z是1-50；
每个Rc独立地是-La-R'；
a和b中的每一个独立地是1-200；
每个La独立地是共价键、或选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-；
每个-Cy-独立地是任选地经取代的二价单环、双环或多环基团，其中每个单环独立地选自C3-20脂环族环、C6-20芳基环、具有1-10个杂原子的5-20元杂芳基环和具有1-10个杂原子的3-20元杂环基环；
LLG是-LLG1-、-LLG1-LLG2-、-LLG1-LLG2-LLG3-或-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-；
RG是-LRG1-LRG2-、-LLG4-LRG1-LRG2-、-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-、-LLG2-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-；
LLG1、LLG2、LLG3、LLG4、LRG1、LRG2和LRM中的每一个独立地是L；
每个L独立地是共价键、或二价任选地经取代的直链或支链C1-100基团，所述基团包括一个或多个脂肪族部分、芳基部分、各自独立地具有1-20个杂原子的杂脂肪族部分、各自独立地具有1-20个杂原子的杂芳香族部分或此类部分中的任何一个或多个的任何组合，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、具有1-5个杂原子的二价C1-6杂脂肪族基团、-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-20；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R；
每个R独立地是-H，或任选地经取代的基团，所述基团选自C1-30脂肪族、具有1-10个杂原子的C1-30杂脂肪族、C6-30芳基、C6-30芳基脂肪族、具有1-10个杂原子的C6-30芳基杂脂肪族、具有1-10个杂原子的5-30元杂芳基和具有1-10个杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与所述原子一起形成除所述原子外还具有0-10个杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与其中间原子一起形成除所述中间原子外还具有0-10个杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环；并且
MOI是所关注部分，其是或包括维多汀(vedotin)(MMAD、MMAE或MMAF)、维多汀、奥佐米星(ozogamicin)、莫福汀(mafodotin)、德鲁替康(deruxtecan)、埃姆坦辛(emtansine)、戈维坦(govitecan)、替西林(tesirine)、杜卡马嗪(duocarmazine)、索拉夫坦辛(soravtansine)、拉夫坦辛(ravtansine)。
2.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LG是或包括与靶药剂结合的靶结合部分，其中靶药剂是蛋白药剂。
3.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LG是或包括与靶药剂结合的靶结合部分，其中所述靶药剂是抗体药剂。
4.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LG是或包括与Fc区或抗体药剂结合的靶结合部分。
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或盐，其中LG是或包括与靶药剂结合的靶结合部分，其中所述靶药剂是抗体药剂，所述抗体药剂是或包括恩弗妥单抗、本妥昔单抗、贝兰他单抗(belantamab)、沃瑟妥珠单抗(vorsetuzumab)、伊珠单抗(inotuzumab)、曲妥珠单抗、吉妥单抗(gemtuzumab)、泊洛妥珠单抗(polatuzumab)、戈沙妥珠单抗(Sacituzumab)、特兹单抗(tisotumab)、替朗妥昔单抗(loncastuximab)、达他单抗(datopotamab)、德帕妥昔组单抗(depatuxizumab)、米妥昔单抗(mirvetuximab)、特赛妥单抗(tusamitamab)、阿奈妥单抗(anetumab)、替卡利尤单抗(camidanlumab)、柯妥昔单抗(coltuximab)、迪西妥单抗(disitamab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、纬拉妥珠单抗(ladiratuzumab)、利发单抗(lifastuzumab)、那妥昔单抗(naratuximab)、西妥珠单抗(cirmtuzumab)、帕曲妥单抗(patritumab)、维匹那妥单抗(pinatuzumab)、泊洛妥珠单抗、埃万妥珠单抗(enapotamab)、阿奈妥单抗或奥博妥单抗(omburtamab)。
6.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中每个L独立地是共价键，或具有1-10个杂原子的二价任选地经取代的直链或支链脂肪族基团或杂脂肪族基团，其中所述基团中的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C≡C-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-20。
7.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LG是RLG-LLG-，其中RLG是或包括靶结合部分，其中LLG是LLG1，其中LLG1是L。
8.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RG是或包括-LLG2-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-，其中LLG2、LLG3、LLG4、LRG1、LRG2中的每一个独立地是L。
9.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LG是RLG-LLG-，其中RLG是或包括靶结合部分，其中LLG是LLG1-LLG2-。
10.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RG是或包括-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-。
11.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LG是RLG-LLG-，其中RLG是或包括靶结合部分，其中LLG是LLG1-LLG2-LLG3-。
12.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RG是或包括-LLG4-LRG1-LRG2-。
13.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LG是RLG-LLG-，其中RLG是或包括靶结合部分，其中LLG是LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-。
14.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RG是或包括-LRG1-LRG2-。
15.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RLG是或Rc-(Xaa)z-。
16.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RLG是或包括WXL，其中X是氨基酸残基。
17.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RLG是或包括AWXLGELVW(SEQ IDNO:16)，其中X是氨基酸残基。
18.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RLG是或包括DpLpAWXLGELVW(SEQID NO:20)，其中X是氨基酸残基。
19.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RLG是或包括DCAWXLGELVWCT(SEQID NO:18)，其中两个半胱氨酸残基任选地形成二硫键，并且X是氨基酸残基。
20.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RLG是或包括DpLpDCAWXLGELVWCT(SEQ ID NO:23)，其中两个半胱氨酸残基任选地形成二硫键，并且X是氨基酸残基。
21.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中RLG是或包括CDCAWXLGELVWCTC(SEQ ID NO:26)，其中序列的第一个和最后一个半胱氨酸以及中间的两个半胱氨酸各自独立地且任选地形成二硫键，并且X是氨基酸残基。
22.根据实施例16至21中任一项所述的化合物，其中RLG是或包括WXL，其中X是氨基酸残基。
23.根据实施例15所述的化合物，其中RLG选自表A-1中的A-1至A-50。
24.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
25.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是/>
26.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
27.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
28.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是/>
29.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
30.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
31.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是/>
32.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
33.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
34.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
35.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是/>
36.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
37.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
38.根据实施例15所述的化合物，其中RLG是
39.根据实施例33至37中任一项所述的化合物，其中Rc是R-C(O)-，其中R是任选地经取代的C1-6脂肪族。
40.根据实施例33至37中任一项所述的化合物，其中Rc是CH3C(O)-。
41.根据实施例1至14中任一项所述的化合物，其中RLG是小分子部分。
42.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LLG1是共价键。
43.根据实施例1至14中任一项所述的化合物，其中LLG1是或包括-(CH2CH2O)n-。
44.根据实施例1至14中任一项所述的化合物，其中LLG1是或包括-(CH2)n-O-(CH2CH2O)n-(CH2)n-，其中每个n独立地是1-10，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。
45.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LLG2是或包括-NR'-。
46.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LLG2是或包括-C(O)-。
47.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LLG2是或包括-NR'C(O)-。
48.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LLG2是或包括-(CH2)n-OC(O)N(R')-，其中-(CH2)n-任选地被取代。
49.根据实施例1至60中任一项所述的化合物，其中LLG2是共价键。
50.根据实施例1至60中任一项所述的化合物，其中LLG2是-CH2N(CH2CH2CH2S(O)2OH)-C(O)-。
51.根据实施例1至60中任一项所述的化合物，其中LLG2是-C(O)-NHCH2-。
52.根据实施例1至60中任一项所述的化合物，其中LLG2是-C(O)O-CH2-。
53.根据实施例1至60中任一项所述的化合物，其中LLG2是-NH-C(O)O-CH2-。
54.根据实施例62至63和66至69中任一项所述的化合物，其中-C(O)-与LLG3键合。
55.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LLG3是或包括任选地经取代的芳基环。
56.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LLG3是或包括任选地经取代的苯基环。
57.根据实施例71至72中任一项所述的化合物，其中所述环被取代，并且一个或多个取代基独立地是吸电子基团。
58.根据实施例73所述的化合物，其中取代基是-F。
59.根据实施例73所述的化合物，其中取代基是-NO2。
60.根据实施例1至75中任一项所述的化合物，其中LLG3是其中s是0-4，每个Rs独立地是卤素、-NO2、-L-R'、-C(O)-L-R'、-S(O)-L-R'、-S(O)2-L-R'或-P(O)(-L-R')2。
61.根据实施例1至75中任一项所述的化合物，其中LLG3是
62.根据实施例1至75中任一项所述的化合物，其中LLG3是
63.根据实施例1至71中任一项所述的化合物，其中LLG3是
64.根据实施例1至71中任一项所述的化合物，其中LLG3是
65.根据实施例76至80中任一项所述的化合物，其中C1与LLG4键合。
66.根据实施例1至70中任一项所述的化合物，其中LLG3是共价键。
67.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LLG4是或包括-O-。
68.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LLG4是或包括-NR'-。
69.根据实施例1至83中任一项所述的化合物，其中LLG4是-O-。
70.根据实施例1至83中任一项所述的化合物，其中LLG4是-NH-。
71.根据实施例1至83中任一项所述的化合物，其中LLG4是共价键。
72.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LRG1是共价键。
73.根据实施例1至88中任一项所述的化合物，其中LRG1是或包括-S(O)2-。
74.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LRG2是或包括-C(O)-。
75.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LRG2是或包括-LRG3-C(＝CRRG1RRG2)-CRRG3RRG4-，其中RRG1、RRG2、RRG3和RRG4中的每一个独立地是-L-R'，并且LRG3是-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-或-P(O)(N(R')2)-。
76.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LRG2是或包括任选地经取代的-LRG3-C(＝CHRRG2)-CHRRG4-。
77.根据实施例91或92所述的化合物，其中RRG2和RRG4与其中间原子一起形成具有0-5个杂原子的任选地经取代的3-10元单环或双环。
78.根据实施例91或92所述的化合物，其中-C(＝CHRRG2)-CHRRG4或-C(＝CRRG1RRG2)-CRRG3RRG4是任选地经取代的
79.根据实施例1至89中任一项所述的化合物，其中LRG2是-C(O)-。
80.根据实施例1至89中任一项所述的化合物，其中LRG2是
81.根据实施例1至89中任一项所述的化合物，其中-LLG1-LRG2-是-C(O)-。
82.根据实施例1至89中任一项所述的化合物，其中-LLG1-LRG2-是
83.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LPM是或包括-(CH2CH2O)n-。
84.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中LPM是或包括-(CH2)n-O-(CH2CH2O)n-(CH2)n-，其中每个n独立地是1-10，并且每个-CH2-是独立地任选地经取代的。
85.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所关注部分是或包括细胞毒性剂，如MMAD、MMAE和MMAF。
86.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所关注部分是或包括肽部分，所述肽部分是或包括MMAD、MMAE或MMAF。
87.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所关注部分是或包括除MMAD、MMAE或MMAF外的反应性部分。
88.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所关注部分是或包括适用于生物正交反应的反应性部分。
89.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所述化合物不包括其切割可以释放LG的可切割基团，除了任选地在RG中的一个或多个。
90.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中除RG或MOI外，所述化合物不包括-S-S-、缩醛或亚胺基团。
91.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所述化合物不包括-S-S-、缩醛或亚胺基团，除了所述化合物可以具有由两个氨基酸残基形成的-S-S-。
92.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所述化合物不包括-S-S-、缩醛或亚胺基团，除了所述化合物可以具有由半胱氨酸残基形成的-S-S-。
93.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所述化合物不包括-S-S-、缩醛或亚胺基团。
94.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所述化合物包括选自以下的一个或多个基团：
95.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所述化合物包括选自以下的结构：
96.根据实施例1至94中任一项所述的化合物，其包括反应性基团，其中所述反应性基团包括或是实施例95中所示的基团。
97.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中所述化合物包括两个或更多个靶结合部分。
98.一种方法，其包括以下步骤：
1)使靶药剂与反应配偶体接触，所述反应配偶体包括：
包括与靶药剂结合的靶结合部分的第一基团，
反应性基团；
所关注部分，所述所关注部分是或包括MMAD、MMAE或MMAF；以及
任选地一个或多个接头部分；
2)形成药剂，所述药剂包括：
靶药剂部分；
所关注部分；以及
任选地一个或多个接头部分。
99.根据实施例98所述的方法，其中反应性基团定位于第一基团与所关注部分之间，并且独立地且任选地通过接头部分与第一基团和所关注部分连接。
100.一种制备具有P-I的结构的药剂的方法：
P-LPM-MOI，
(P-I)
或其盐，其中：
P是靶药剂部分；
LPM是接头；并且
MOI为是或包括MMAD、MMAE或MMAF的所关注部分，
所述方法包括以下步骤：
1)使靶药剂与具有式R-I的结构的反应配偶体接触：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与靶药剂结合的靶结合部分的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI为是或包括MMAD、MMAE或MMAF的所述所关注部分；并且
2)形成具有式P-I的结构的药剂。
101.一种制备具有P-II的结构的药剂的方法：
P-N-LPM-MOI，
(P-II)
其中：
P-N是包括赖氨酸残基的蛋白药剂部分；
LPM是接头；并且
MOI为是或包括MMAD、MMAE或MMAF的所述所关注部分；
所述方法包括：
使P-N与具有式R-I的结构的反应配偶体接触：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与P-N结合的蛋白结合部分的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI为是或包括MMAD、MMAE或MMAF的所述所关注部分。
102.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中靶药剂是或包括蛋白药剂。
103.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中靶药剂是或包括抗体药剂，如恩弗妥单抗、本妥昔单抗、贝兰他单抗、沃瑟妥珠单抗、伊珠单抗、曲妥珠单抗、吉妥单抗、泊洛妥珠单抗、戈沙妥珠单抗、特兹单抗、替朗妥昔单抗、达他单抗、德帕妥昔组单抗、米妥昔单抗、特赛妥单抗、阿奈妥单抗、替卡利尤单抗、柯妥昔单抗、迪西妥单抗、拉贝珠单抗、纬拉妥珠单抗、利发单抗、那妥昔单抗、西妥珠单抗、帕曲妥单抗、维匹那妥单抗、泊洛妥珠单抗、埃万妥珠单抗、阿奈妥单抗或奥博妥单抗。
104.根据实施例103所述的方法，其中所关注部分在K246或K248或对应位置处选择性地与所述抗体药剂连接。
105.根据实施例103所述的方法，其中所关注部分在K288或K290或对应位置处选择性地与所述抗体药剂连接。
106.根据实施例103所述的方法，其中所关注部分在IgG2重链的K251或K253或对应位置处选择性地与所述抗体药剂连接。
107.根据实施例103所述的方法，其中所关注部分在IgG4重链的K239或K241或对应位置处选择性地与所述抗体药剂连接。
108.根据实施例103所述的方法，其中所关注部分在K317或对应位置处选择性地与所述抗体药剂连接。
109.根据实施例103所述的方法，其中所关注部分在重链残基而不是轻链残基处选择性地与所述抗体药剂连接。
110.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中靶药剂是或包括IgG抗体药剂。
111.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中靶药剂是或包括Fc区。
112.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中反应配偶体是实施例1至98中任一项的化合物。
113.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述接触步骤和形成步骤在一个锅中进行。
114.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述接触步骤和形成步骤在一个化学反应中进行。
115.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法不包括主要针对在包括靶药剂部分的药剂中的官能团的切割的反应。
116.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法不包括主要针对在LRM或LPM中的官能团的切割的反应。
117.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法不包括主要针对在包括靶药剂部分的药剂中的官能团的还原的反应。
118.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法不包括主要针对在LRM或LPM中的官能团的还原的反应。
119.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法不包括主要针对在包括靶药剂部分的药剂中的官能团的氧化的反应。
120.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法不包括主要针对在LRM或LPM中的官能团的氧化的反应。
121.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法不包括主要针对在包括靶药剂部分的药剂中的官能团的水解的反应。
122.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法不包括主要针对在LRM或LPM中的官能团的水解的反应。
123.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述方法不包括主要针对在LRM或LPM中的酯基的水解的反应。
124.根据实施例164至172中任一项所述的方法，其中靶药剂部分是蛋白药剂部分。
125.根据实施例164至172中任一项所述的方法，其中靶药剂部分是抗体药剂部分。
126.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中在足以使靶药剂的赖氨酸残基与反应配偶体的反应性基团反应的条件和时间下进行接触。
127.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中在足以使靶药剂的赖氨酸残基反应并与RG的原子形成键并释放LG的条件和时间下进行接触。
128.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述药剂和所述反应配偶体共享相同的所关注部分。
129.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所关注部分是或包括抗体药剂。
130.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所关注部分是或包括反应性部分。
131.根据前述实施例中任一项所述的方法，其包括使包括第一所关注部分中的第一反应性部分的第一药剂与包括第二反应性部分的第二药剂反应。
132.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中第二药剂包括第二反应性部分和肽部分。
133.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中第二药剂包括第二反应性部分和蛋白质部分。
134.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中第二药剂包括第二反应性部分和抗体药剂部分。
135.根据前述实施例中任一项所述的方法，其包括使包括第一所关注部分中的第一反应性部分的第一药剂与包括第二所关注部分中的第二反应性部分的第二药剂反应。
136.根据实施例132至135中任一项所述的方法，其中所述第一药剂是根据实施例99至131中任一项所述的方法的产物。
137.根据实施例132至135中任一项所述的方法，其中所述第二药剂是根据实施例99至131中任一项所述的方法的产物。
138.根据实施例132至135中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和所述第二药剂中的每一种独立地是根据实施例99至131中任一项所述的方法的产物。
139.一种方法，其包括使包括第一所关注部分中的第一反应性部分的第一药剂与包括第二所关注部分中的第二反应性部分的第二药剂反应，其中所述第一药剂通过实施例99至131中任一项所述的方法制备。
140.一种方法，其包括使包括第一所关注部分中的第一反应性部分的第一药剂与包括第二所关注部分中的第二反应性部分的第二药剂反应，其中所述第二药剂通过实施例99至131中任一项所述的方法制备。
141.一种方法，其包括使包括第一所关注部分中的第一反应性部分的第一药剂与包括第二所关注部分中的第二反应性部分的第二药剂反应，其中所述第一药剂和所述第二药剂中的每一种独立地通过实施例99至131中任一项所述的方法制备。
142.根据实施例132至141中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和所述第二药剂中的每一种独立地具有式P-I或P-II或其盐的结构。
143.根据实施例132至142中任一项所述的方法，其中所述第一药剂的所述靶药剂部分是抗体药剂部分。
144.根据实施例132至143中任一项所述的方法，其中所述第二药剂的所述靶药剂部分是抗体药剂部分。
145.根据实施例143至144中任一项所述的方法，其中所述第一靶部分和所述第二靶部分独立地是针对不同抗原的抗体药剂部分。
146.根据实施例143至144中任一项所述的方法，其中所述第一靶部分和所述第二靶部分独立地是针对不同蛋白质的抗体药剂部分。
147.根据实施例132至146中任一项所述的方法，其中所述第一药剂包括抗CD30抗体，如本妥昔单抗或抗粘连蛋白-4-单克隆抗体，如恩弗妥单抗。
148.根据实施例132至147中任一项所述的方法，其中所述第二药剂包括抗CD3药剂部分。
149.根据实施例132至147中任一项所述的方法，其中所述第二药剂包括scFv。
150.根据实施例184至202中任一项所述的方法，其中所述第二药剂包括西妥昔单抗。
151.根据实施例224的产物，其中所述产物是或包括式P-I或P-II的药剂或其盐。
152.根据实施例224的产物，其中所述产物是包括式P-I或P-II的药剂或其盐的组合物。
153.根据实施例151至152中任一项的产物，其中所述药剂不含-S-Cy-，其中-Cy-是任选地经取代的5元单环，不含不是由半胱氨酸残基形成的-S-S-并且不含不具有半胱氨酸残基的-SH或其盐形式。
154.根据实施例151至153中任一项的产物，其中所述产物是药物组合物。
155.一种组合物，其提供多种药剂，所述多种药剂中的每一种独立地包括：
靶药剂部分；
所关注部分，所述所关注部分是或包括MMAD、MMAE或MMAF；以及
任选地接头部分，所述接头部分连接靶药剂部分和所关注部分；
其中所述多种药剂中的药剂共享相同或基本上相同的靶药剂部分以及独立地在至少一个共同位置处的共同修饰；并且
其中包括靶药剂部分和所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。
156.一种组合物，其提供多种药剂，所述多种药剂中的每一种独立地包括：
蛋白药剂部分；
所关注部分，所述所关注部分是或包括MMAD、MMAE或MMAF；以及
任选地接头部分，所述接头部分连接蛋白药剂部分和所关注部分；
其中所述多种药剂中的药剂的蛋白药剂部分包括共同氨基酸序列，并且所述多种药剂中的药剂共享独立地在蛋白药剂部分的至少一个共同氨基酸残基处的共同修饰；并且
其中包括包含所述共同氨基酸序列的蛋白药剂部分以及所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。
157.一种组合物，其提供多种药剂，所述多种药剂中的每一种独立地包括：
抗体药剂部分；
所关注部分，所述所关注部分例如是或包括MMAD、MMAE或MMAF；以及
任选地接头部分，所述接头部分连接抗体药剂部分和所关注部分；
其中所述多种药剂中的药剂的抗体药剂部分包括共同氨基酸序列或可以与共同抗原结合，并且所述多种药剂中的药剂共享独立地在蛋白药剂部分的至少一个共同氨基酸残基处的共同修饰；并且
其中包括包含所述共同氨基酸序列或可以与所述共同抗原结合的抗体药剂部分以及所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。
158.根据实施例157所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的抗体药剂部分可以与共同抗原结合。
159.根据实施例157所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的抗体药剂部分可以与两种或更多种不同的抗原结合。
160.根据实施例157至159中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的抗体药剂部分包括共同的氨基酸序列。
161.根据实施例157至159中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的抗体药剂部分包括Fc区中的共同的氨基酸序列。
162.根据实施例157至159中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的抗体药剂部分包括共同的Fc区。
163.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中靶标、蛋白质或抗体药剂部分是或包括抗CD30或抗粘连蛋白-4药剂部分。
164.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中靶标、蛋白质或抗体药剂部分是或包括本妥昔单抗或恩弗妥单抗。
165.根据实施例159至162中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的抗体药剂部分是IVIG部分。
166.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂包括共同的所关注部分。
167.根据实施例155至166中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的每种药剂独立地是式P-I或P-II的药剂或其盐。
168.根据实施例155至167中任一项所述的组合物，其中所关注部分是或包括可检测部分。
169.根据实施例155至167中任一项所述的组合物，其中所关注部分是或包括反应性部分。
170.根据实施例155至167中任一项所述的组合物，其中所关注部分是或包括不与靶药剂部分、蛋白药剂部分或抗体部分药剂反应的反应性部分。
171.根据实施例155至167中任一项所述的组合物，其中所关注部分是或包括不与抗体部分药剂反应的反应性部分。
172.根据实施例155至167中任一项所述的组合物，其中所关注部分是或包括治疗剂部分，如细胞毒性部分，如MMAD、MMAE或MMAF。
173.根据实施例155至172中任一项所述的组合物，其中所述接头不是天然氨基酸肽接头。
174.根据实施例155至173中任一项所述的组合物，其中接头包括一个或多个-CH2-CH2-O-。
175.根据组合物或实施例174，其中接头是或包括-(CH2CH2O)n-，其中n在每次出现时独立地选自整数2、3、4、5、6、7和8。
176.根据组合物或实施例174，其中接头是或包括-(CH2CH2O)n-(CH2)n-NHC(O)-(CH2)n-、-[(CH2CH2O)n-(CH2)n-NHC(O)]m-(CH2)n-和-(CH2CH2O)n-(CH2)n-N((CH2CH2O)n-(CH2)n-)((CH2CH2O)n-(CH2)n-)，其中m在每次出现时独立地选自整数1、2、3和4。
177.根据实施例156至176中任一项所述的组合物，其中所述蛋白药剂部分的所述共同的氨基酸序列包括一个或多个选自以下的氨基酸残基：IgG1重链的K246和K248以及与其相对应的氨基酸残基、IgG2重链的K251和K253以及与其相对应的氨基酸残基以及IgG4重链的K239和K241以及与其相对应的氨基酸残基。
178.根据实施例156至177中任一项所述的组合物，其中所述共同的氨基酸序列是所述蛋白质或抗体药剂部分的氨基酸序列的至少10％-100％。
179.根据实施例156至177中任一项所述的组合物，其中所述共同的氨基酸序列是所述蛋白质或抗体药剂部分的氨基酸序列的至少50％-100％。
180.根据实施例156至177中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的所述蛋白药剂部分或所述抗体药剂部分具有至少50％的氨基酸序列同源性。
181.根据实施例156至177中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的所述蛋白药剂部分或所述抗体药剂部分具有至少80％的氨基酸序列同源性。
182.根据实施例156至177中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的所述蛋白药剂部分或所述抗体药剂部分具有至少90％的氨基酸序列同源性。
183.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中共同修饰是或包括所关注部分和任选地接头。
184.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中所有共同修饰包括所关注共同部分和任选地共同接头。
185.根据实施例156至184中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体重链的K246或与其相对应的氨基酸残基。
186.根据实施例156至185中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体重链的K248或与其相对应的氨基酸残基。
187.根据实施例156至186中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体重链的K288或与其相对应的氨基酸残基。
188.根据实施例156至187中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体重链的K290或与其相对应的氨基酸残基。
189.根据实施例156至188中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体重链的K317或与其相对应的氨基酸残基。
190.根据实施例156至189中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体重链的K133或与其相对应的氨基酸残基。
191.根据实施例156至190中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体重链的K144或与其相对应的氨基酸残基。
192.根据实施例156至191中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体重链的K133或与其相对应的氨基酸残基。
193.根据实施例156至192中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体轻链的K185或与其相对应的氨基酸残基。
194.根据实施例156至193中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是抗体轻链的K187或与其相对应的氨基酸残基。
195.根据实施例156至194中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是IgG2抗体重链的K251或与其相对应的氨基酸残基。
196.根据实施例156至195中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是IgG2抗体重链的K253或与其相对应的氨基酸残基。
197.根据实施例156至196中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是IgG4抗体重链的K239或与其相对应的氨基酸残基。
198.根据实施例156至197中任一项所述的组合物，其中共同的氨基酸残基是IgG4抗体重链的K241或与其相对应的氨基酸残基。
199.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中包括靶药剂部分和所关注部分的所有药剂中的至少约2％是所述多种药剂中的药剂，或者包括包含所述共同的氨基酸序列的蛋白药剂部分和所关注部分的所有药剂中的至少约2％是所述多种药剂中的药剂，或者包括包含所述共同的氨基酸序列或可以与所述共同抗原结合的抗体药剂部分和所关注部分的所有药剂中的至少约2％是所述多种药剂中的药剂。
200.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中包括靶药剂部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂，或者包括包含所述共同的氨基酸序列的蛋白药剂部分的所有药剂中的至少约1％-100％是所述多种药剂中的药剂，或者包括包含所述共同的氨基酸序列或可以与所述共同抗原结合的抗体药剂部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。
201.根据实施例199至200中任一项所述的组合物，其中百分比为至少约5％。
202.根据实施例199至200中任一项所述的组合物，其中百分比为至少约10％。
203.根据实施例199至200中任一项所述的组合物，其中百分比为至少约20％。
204.根据实施例199至200中任一项所述的组合物，其中百分比为至少约25％。
205.根据实施例199至200中任一项所述的组合物，其中百分比为至少约50％。
206.根据实施例199至200中任一项所述的组合物，其中百分比为至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
207.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的每种药剂不含-S-Cy-，其中-Cy-是任选地经取代的5元单环，不含不是由半胱氨酸残基形成的-S-S-并且不含不具有半胱氨酸残基的-SH或其盐形式。
208.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的每种药剂不含-S-CH2-CH2-。
209.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的每种药剂不含可以与抗体药剂特异性结合的部分。
210.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中所述多种药剂中的每种药剂独立地包括抗体药剂部分，并且每种药剂可以独立地与Fc受体结合。
211.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中所述组合物是根据前述实施例中任一项所述的方法的产物。
212.根据前述实施例中任一项所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。
213.一种药剂，其中所述药剂是实施例155至211中任一项的所述多种药剂中的药剂。
214.一种药物组合物，其包括根据实施例213所述的药剂和药学上可接受的载体。
215.根据实施例212或214所述的组合物，其中所述组合物呈固体形式。
216.根据实施例212或214所述的组合物，其中所述组合物呈液体形式，并且含有不超过5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％(v/v)的有机溶剂。
217.根据前述实施例中任一项的方法、产物、组合物或药剂，其中与靶药剂部分缀合的所关注部分与靶药剂部分的比率，或与蛋白药剂部分缀合的所关注部分与蛋白药剂部分的比率，或与抗体药剂部分缀合的所关注部分与抗体药剂部分的比率为约0.5-6。
218.根据任何实施例217的方法、产物、组合物或药剂，其中所述比率为约0.5-2.5。
219.根据任何实施例217的方法、产物、组合物或药剂，其中所述比率为约0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.5或3。
220.根据前述实施例中任一项的化合物、方法、产物、组合物或药剂，其中每个杂原子独立地选自氧、氮、硫、磷和硅。
221.一种药剂，其包括以下化合物中的任一种的氨基酸残基，或以下化合物中的任一种的酯的氨基酸残基：
222.根据实施例221所述的药剂，其中所述药剂具有式R-I的结构或其盐。
223.一种多肽药剂，其包括实施例221中任一项的化合物的氨基酸残基。
224.一种用于制备化合物的方法，其包括提供实施例221中任一项的化合物。225.一种化合物，其具有式R-I的结构：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与靶药剂结合的靶结合部分的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分。
226.一种组合物，其包含：
第一化合物，所述第一化合物具有式(P-II)的结构：
P-N-LPM-MOI(P-II)，
其中：
P-N是包含赖氨酸残基的蛋白药剂部分；
LPM是接头；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分；以及
第二化合物，所述第二化合物具有以下结构：
LG-OH(LG-I)，
其中LG是包含与靶药剂结合的靶结合部分的基团。
227.根据实施例226所述的组合物，其进一步包含：
第三化合物，所述第三化合物具有式(R-I)：
LG-RG-LRM-MOI(R-I)
LG是包含与靶药剂结合的靶结合部分的基团，所述基团与式(LG-I)中的LG相同；
RG是反应性基团；
LRM是接头，所述接头与式(P-II)中的接头相同；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分，
第四化合物，所述第四化合物具有式(R-III)：
HO-RG-LRM-MOI(R-III)
或其组合。
实例
如在下文的实例中描绘的，在某些示例性实施例中，化合物、药剂、组合物等根据以下程序作为实例进行制备和/或评估。应理解的是，尽管一般方法描绘了本公开的某些化合物、药剂、组合物的合成，但是以下一般方法以及本领域普通技术人员已知的其它方法可以应用于根据本公开的以提供本公开的技术。
缩写
以下缩写用于以下实例中：
DCM 二氯甲烷
DIC N,N'-二异丙基碳二亚胺
DIEA N,N-二异丙基乙胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF 二甲基呋喃
EDCI 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺
Fmoc 芴基甲氧羰基氯
HATU 六氟磷酸氮杂苯并三唑四甲基脲
HBTU (1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)-N,N-二甲基甲亚铵六氟磷酸盐
HOBt 羟基苯并三唑
NMM N-甲基吗啉
SPPS 固相肽合成
TEA 三乙胺
THF 四氢呋喃
TFA 三氟乙酸
实例1：含3-氟-4-羟基苄胺的反应性基团(化合物4)的合成
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将中间体1(10g，64.45mmol)于HBr/H2O(40％HBr，总计300mL)中的混合物在140℃下搅拌16小时。将溶剂在70℃下在减压下去除，将残留物在MeCN(50mL)中研磨10分钟。在过滤之后，将固体在冻干下干燥，以得到呈棕色固体的中间体2(13.0g，58.5mmol，90.8％产率，HBr盐)。1H NMR:(400MHz DMSO-d6)δppm 10.04(s,1H)8.18(s,3H)7.32(dd,J＝12.17,1.88Hz,1H)7.11(dd,J＝8.28,1.51Hz,1H)6.96-7.03(m,1H)3.93(q,J＝5.52Hz,2H)。
在15℃下向中间体2(13.0g，58.5mmol，1当量，HBr)、中间体2a(24.1g，58.5mmol，1当量)、DIEA(3.78g，29.2mmol，5.10mL，0.5当量)和HOBt(11.87g，87.8mmol，1.5当量)于DMF(200mL)中的混合物中添加EDCI(12.35g，64.4mmol，1.1当量)，将混合物在15℃下搅拌3小时。然后将混合物逐滴添加到0.5M HCl(冷，1L)中，并且白色固体沉淀。在过滤之后，将固体在冻干下干燥，以得到呈白色固体的中间体3(31g，粗品)。
可替代地，反应可以在20℃下用60.0g化合物2起始材料进行。在用HCl沉淀并过滤之后，可以将固体溶解于DCM中(2L)，用0.5M HCl(800mL)、H2O(800mL)、盐水(800mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱(DCM/MeOH＝1/0至20/1)纯化，以得到呈白色固体的中间体化合物3(120.0g，90％纯度，含有少量DMF，83.3％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.70(s,1H)8.34(t,J＝5.77Hz,1H)7.90(d,J＝7.53Hz,2H)7.71(d,J＝7.53Hz,2H)7.61(d,J＝8.28Hz,1H)7.39-7.47(m,2H)7.29-7.36(m,2H)7.02(d,J＝12.30Hz,1H)6.85-6.92(m,2H)4.20-4.39(m,4H)4.11-4.19(m,2H)1.36(s,9H)。
将化合物3(30g，56.12mmol，1.0当量)于TFA(300mL)和DCM(300mL)中的混合物在15℃下搅拌0.5小时。将溶剂在减压下去除。将残留物通过快速C18(120gC18快速柱，0至90％MeCN/H2O梯度洗脱液，在75毫升/分钟下)直接纯化，以得到呈白色固体的化合物4(18g，37.6mmol，67.0％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.69(s,1H)8.34(t,J＝5.90Hz,1H)7.90(d,J＝7.28Hz,2H)7.71(d,J＝7.53Hz,2H)7.54(d,J＝6.53Hz,1H)7.42(t,J＝7.40Hz,2H)7.27-7.37(m,1H)7.27-7.37(m,1H)7.02(d,J＝12.05Hz,1H)6.82-6.93(m,2H)4.35-4.43(m,1H)4.20-4.31(m,3H)4.13-4.19(m,2H)。
实例2：与反应性基团偶联的抗体结合部分的制备程序(中间体化合物5a)
使用标准Fmoc化学合成肽。
1)树脂制备：向在含有CTC树脂(3.0mmol，3.0g，1.00mmol/g)和含Fmoc-Thr(tBu)-OH(1.19g，3.0mmol，1.00当量)的DCM(30mL)的容器中逐滴添加DIEA(4.00当量)并在15℃下用N2鼓泡混合2小时。然后添加MeOH(3.0mL)并用N2鼓泡另外30分钟。将树脂用DMF(60mL)洗涤，然后添加含20％哌啶的DMF(60mL)，并在15℃下用N2鼓泡30分钟进行Fmoc脱保护。将混合物过滤并在进行下一步骤之前将树脂用DMF(60mL)洗涤。可替代地，此反应可以在20℃下进行。
2)偶联：将Fmoc-Cys(Trt)-OH(5.25g，3.00当量)、HBTU(3.24g，2.85当量)于DMF(30mL)中的溶液添加到树脂中，并用N2鼓泡。然后将DIEA(6.00当量)逐滴添加到混合物中，并在15℃(或20℃)下用N2鼓泡30分钟。通过茚三酮测试监测偶联反应，如果显示无色，则偶联完成。然后将树脂用DMF(60mL)洗涤。
3)脱保护：将含20％哌啶的DMF(60mL)添加到树脂中，并在15℃下用N2使混合物鼓泡30分钟。通过茚三酮测试监测脱保护反应，如果反应显示蓝色或其它棕红色，则反应完成。然后将树脂用DMF(60mL)洗涤。
4)对氨基酸重复步骤2和3：(下表中的3-13)。
5)对化合物进行偶联：将化合物4(2.87g，2.00当量)、DIC(0.76g，2.00当量)和HOBt(0.82g，2.00当量)于DMF(30mL)中的溶液添加到树脂中，用N2在15℃下鼓泡60分钟。通过茚三酮测试监测偶联反应，如果显示无色，则偶联完成。然后将树脂用DMF(60mL)洗涤。
6)重复步骤3进行Fmoc脱保护。
7)对氨基酸重复步骤5和6(下表中的10-13)。
8)乙酰化：将10％Ac2O/5％NMM/85％DMF(60mL)溶液添加到树脂中，并将混合物用N2鼓泡20分钟。通过茚三酮测试监测偶联反应，如果显示无色，则偶联完成。然后将树脂用DMF(60mL)洗涤，以得到中间体5a。
9)将含3％肼的DMF(60mL)添加到树脂中，用N2鼓泡15分钟以释放化合物4上的羟基，并且然后将树脂用DMF(60mL)洗涤。
肽切割和纯化：
1)在室温下将切割缓冲液(95％TFA/2.5％TIS/2.5％H2O，60.0mL)添加到含有侧链保护的肽树脂的烧瓶中并搅拌1小时。
2)收集滤液。
3)将肽用冷的异丙醚(300mL)沉淀并进行离心(在3000rpm下3分钟)。
4)将异丙醚再洗涤两次，并将粗肽在真空下干燥2小时。
5)获得呈白色固体的化合物5a(4.2g，粗品)。
实例3：将化合物5a与含乙氧基的接头偶联
在上述步骤9之后，当肽仍与其固相支持物偶联时，或者在肽切割和纯化之后，3-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)乙基接头可以与5偶联。将3-(2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基)丙酸(1.54g，9.0mmol，3.00当量)、DIC(1.13g，3.00当量)、HOBt(1.23g，3.00当量)和DMAP(1.10g，3.00当量)的溶液添加到树脂中并且将混合物用N2鼓泡持续36小时。在微切割之后通过LCMS监测偶联反应，几乎50％是期望的MS。然后将树脂用DMF(60mL)、MeOH(60mL)洗涤，并且然后在真空下干燥。
实例4：MMAE1/化合物1100的制备程序
制备化合物1100的完整反应方案示出于图4中。
A.中间体5的制备
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使用来自实例1的树脂制备(1)、偶联(2)和脱保护步骤(3)来制备中间体化合物5a。
重复步骤2和3以获得以下氨基酸延伸：编号：3-13，表1。
4)乙酰化：将Ac2O/NMM/DMF(10/5/85，v/v/v，2L)溶液添加到树脂中，并用N2使混合物鼓泡20分钟。通过茚三酮测试监测偶联反应，其显示无色，表明偶联已完成。然后将树脂用DMF(2L)洗涤，以得到中间体5a。
5)将含3％肼的DMF(2L)添加到树脂中，用N2鼓泡15分钟以释放中间体5a上的羟基，然后将树脂用DMF(2L)洗涤。
6)与苯酚偶联：将Boc-NH-PEG2-CH2CH2COOH(55.4g，200.0mmol，2.00当量)、DIC(25.2g，200.0mmol，2.00当量)、HOBt(27.0g，200.0mmol，2.00当量)和DMAP(12.2g，200.0mmol，2.00当量)的溶液添加到树脂中并且将混合物用N2鼓泡持续36小时。在微切割之后通过LCMS监测偶联反应，几乎70％是期望的MS。然后将树脂用DMF(2L)、MeOH(2L)洗涤，并在减压下干燥，以得到中间体5b(CTC树脂，100.0mmol)。
肽切割和环化：
1)切割：在室温下将切割溶液(TFA/Tis/H2O，95/2.5/2.5，v/v/v，2L)添加到含有侧链保护的肽的烧瓶中，并搅拌1小时。在过滤之后，用异丙醚(冷，10L)沉淀滤液。在过滤之后，将固体用异丙醚(冷，1L)再洗涤两次，并在减压下干燥2小时，以得到呈白色固体的中间体5c(140.5g，粗品)。
2)环化：向粗肽(中间体5c)于HOAc/MeCN/H2O(4/3/3，v/v/v，80L)中的混合物中逐滴添加0.1M I2/AcOH，直到黄色持续存在，然后将混合物在20℃下搅拌5分钟。通过逐滴添加0.1M Na2S2O3水溶液使混合物淬灭，直至黄色消失。在过滤之后，将滤液通过制备型HPLC(A：0.075％TFA/H2O，B：MeCN)纯化，随后冻干，以得到呈白色固体的中间体5(22.0g，93.3％纯度，12.0％产率)。LCMS:RT＝0.907分钟，MS计算值：Mav＝1833.02，观察到的质量：[M+H]+＝1833.81,[M+2H]2+＝917.00。
B.中间体7的制备
将中间体6(500.0mg，44.5μmol，1.00当量)、DIEA(11.5mg，89.0μmol，2.00当量)于DMF(10.0mL)中的混合物在0℃下逐滴添加到化合物6a(700.0mg，2.15mmol，4.80当量)于DMF(10.0mL)中的溶液中。将混合物在20℃下搅拌10分钟。LCMS显示出起始材料被完全消耗。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)直接纯化，以得到呈白色固体的化合物7(490.0mg，36.8μmol，82.6％产率)。LCMS:RT＝0.942分钟，MS计算值：Mav＝1334.6,[M+2H]2+＝668.3。
C.化合物1100的制备
向中间体5(14.42mg，7.87umol，1.05当量)、中间体7(10mg，7.49umol，1.00当量)于DMSO(500μL)中的溶液中添加DIEA(4.84mg，37.46μmol，6.53μL，5.00当量)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS显示出中间体7被完全消耗并示出一个具有所期望m/z的主峰。将反应过滤，并将滤液通过制备型HPLC(TFA条件)直接纯化，然后冻干，以得到呈白色固体的化合物1100(9.7mg，3.18μmol，42.4％产率)。LCMS:RT＝1.16分钟，MS计算值：Mav＝3052.53,[M+2H]2+＝1526.5。
实例5：化合物1101的制备程序
制备化合物1101的完整反应方案示出于图5中。
A.中间体9的制备
向中间体8(1.56g，5.64mmol，1.00当量)于DMF(5mL)中的溶液中添加2,3,4,6-四氟苯酚(2.81g，16.93mmol，3.00当量)、EDCI(1.62g，8.47mmol，1.50当量)。将反应在20℃下搅拌16小时。LCMS表明中间体8被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过预闪蒸(C18，TFA条件)纯化，以得到呈黄色油的中间体9(2.00g，4.70mmol，95.9％纯度，83.3％产率)。LCMS:RT＝1.30分钟，MS计算值：Mav＝425.37,[M+Na]+＝447.99。
B.中间体10的制备
将含中间体5(300.0mg，163.66μmol，1.00当量)、中间体9(90.5mg，212.76μmol、1.30当量)、DIEA(105.7mg，818.32μmol，142.54μL，5.00当量)的DMSO(9mL)在15℃下搅拌1小时。LCMS表明主峰具有所期望MS。将混合物通过快速C18(120g/>C18快速柱，0至90％MeCN/H2O醚梯度洗脱液，在75毫升/分钟下)直接纯化，以得到呈白色固体的中间体10(200.0mg，95.59μmol，58.40％产率)。LCMS:RT＝1.05分钟，MS计算值：Mav＝2092.32,[M+2H]2+＝1046.60。
C.中间体11的制备
将中间体10(200.0mg，95.59umol，1.00当量)于TFA/DCM(3/7，4mL)中的混合物在0℃下搅拌0.5小时。LCMS表明中间体10被完全消耗并示出具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)直接纯化，然后冻干，以得到呈白色固体的中间体11(120.0mg，60.23μmol，63.0％产率)。LCMS:RT＝0.95分钟，MS计算值：Mav＝1992.20,[M+2H]2+＝996.60。
D.化合物1101的制备
化合物1101结构被分成两部分。虚线指示1101结构的上部部分与下部部分之间共享的共价键。
在20℃下向中间体11(29.85mg，14.99μmol，1.00当量)、DIEA(9.68mg，74.93μmol，13.05μL，5.00当量)于DMSO(1.0mL)中的混合物中添加中间体7(20.0mg，14.99μmol，1.00当量)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS表明中间体7被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，以得到呈白色固体的化合物1101(22.8mg，98.6％纯度，47.3％产率)。LCMS:RT＝1.10分钟，MS计算值：Mav＝3211.71,[M+2H]2+＝1606.50。
实例6：化合物1102的制备程序
制备化合物1102的完整反应方案示出于图6中。
中间体13的制备
向中间体12(0.50g，1.37mmol，1.00当量)于DMF(3mL)中的溶液中添加2,3,4,6-四氟苯酚(568.09mg，3.42mmol，2.50当量)、EDCI(393.46mg，2.05mmol，1.50当量)。将反应在20℃下搅拌16小时。LCMS表明中间体12被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过预闪蒸(C18，TFA条件)纯化，以得到呈黄色油的中间体13(0.625g，1.22mmol，88.96％产率)。LCMS:RT＝1.16分钟，MS计算值：Mav＝513.48,[M+Na]+＝536.1,[M+H]+＝514.1。
中间体14的制备：
将含中间体5(300.0mg，163.66μmol，1.00当量)、中间体13(9.25mg，212.76μmol、1.30当量)、DIEA(105.76mg，818.32μmol，142.54μL，5.00当量)的DMSO(9mL)在20℃下搅拌1小时。LCMS表明主峰具有所期望MS。将混合物通过快速C18(120g/>C18快速柱，0至90％MeCN/H2O醚梯度洗脱液，在75毫升/分钟下)直接纯化，以得到呈白色固体的中间体14(200.0mg，86.22μmol，52.6％产率，94.0％纯度)。LCMS:RT＝1.013分钟，MS计算值：Mav＝2180.42,[M-Boc+2H]2+＝1090.60,[M-Boc+2H]2+＝1040.50。
中间体15的制备：
将中间体14(200.0mg，95.59μmol，1.00当量)于TFA/DCM(3/7，4mL)中的混合物在0℃下搅拌0.5小时。LCMS表明中间体14被完全消耗并示出具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)直接纯化，然后冻干，以得到呈白色固体的中间体15(150.0mg，68.36μmol，74.5％产率，TFA盐)。LCMS:RT＝0.95分钟，MS计算值：Mav＝2080.31,[M+2H]2+＝1040.59。
化合物1102的制备：
在20℃下向中间体15(29.85mg，14.99μmol，1.00当量)、DIEA(9.68mg，74.93μmol，13.05μL，5.00当量)于DMSO(1.0mL)中的混合物中添加中间体7(20.0mg，14.99μmol，1.00当量)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS表明中间体7被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，以得到呈白色固体的化合物1102(30.5mg，98.6％纯度，63.2％产率)。LCMS:RT＝1.10分钟，MS计算值：Mav＝3299.82,[M+2H]2+＝1650.41,[M+3H]3+＝1100.50。化合物1102的结构中的虚线指示顶部与底部结构之间的单个共价。
实例7：化合物1103的制备程序
制备化合物1103的完整反应方案示出于图7中。
中间体17的制备：
向中间体16(1.00g，1.85mmol，1.00当量)于DMF(3mL)中的溶液中添加2,3,4,6-四氟苯酚(919.86mg，5.54mmol，3.00当量)、EDCI(530.91mg，2.77mmol，1.50当量)。将反应在20℃下搅拌16小时。LCMS表明中间体16被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过预闪蒸(C18，TFA条件)纯化，以得到呈无色油的中间体17(1.10g，1.59mmol，86.4％产率)。LCMS:RT＝1.152分钟，MS计算值：Mav＝689.69,[M+H]+＝690.1,[M+Na]+＝707.2。
中间体18的制备：
将含中间体5(300.0mg，163.66μmol，1.00当量)、中间体17(112.8mg，163.66μmol、1.10当量)、DIEA(105.76mg，818.32μmol，142.54μL，5.00当量)的DMSO(9mL)在20℃下搅拌1小时。LCMS表明主峰具有所期望MS。将混合物通过快速C18(120g/>C18快速柱，0至90％MeCN/H2O醚梯度洗脱液，在75毫升/分钟下)直接纯化，以得到呈白色固体的中间体18(200.0mg，84.87μmol，51.8％产率)。LCMS:RT＝1.05分钟，MS计算值：Mav＝2356.63,[M+2H]2+＝1179.10,[M–Boc+2H]2+＝1129.20。
中间体19的制备：
将中间体18(200.0mg，84.87μmol，1.00当量)于TFA/DCM(3/7，4mL)中的混合物在0℃下搅拌0.5小时。LCMS表明中间体18被完全消耗并示出具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)直接纯化，然后冻干，以得到呈白色固体的中间体19(160.0mg，67.50μmol，79.5％产率，TFA盐)。LCMS:RT＝0.95分钟，MS计算值：Mav＝2256.52,[M+2H]2+＝1128.79,[M+3H]3+＝752.89。
化合物1103的制备：
在20℃下向中间体19(37.20mg，16.48μmol，1.10当量)、DIEA(9.68mg，74.93μmol，13.05μL，5.00当量)于DMSO(1.0mL)中的混合物中添加中间体7(20.0mg，14.99μmol，1.00当量)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS表明中间体7被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，以得到呈白色固体的化合物1103(31.4mg，9.03μmol，60.2％产率)。LCMS:RT＝1.09分钟，MS计算值：Mav＝3476.03,[M+2H]2+＝1738.51,[M+3H]3+＝1159.23。化合物1103的结构中的虚线指示顶部与底部结构之间的单个共价。
实例8：化合物1104的制备程序
制备化合物1104的完整反应方案示出于图8中。
中间体21的制备
向DMSO(7.84g，100mmol，2.50当量)于DCM(150mL)中的溶液中添加草酰氯(10.20g，80.2mmol，2.00当量)于DCM(50mL)中的溶液，然后将反应混合物在-70℃下搅拌10分钟，然后逐滴添加中间体20(10.0g，40.1mmol，1.00当量)于DCM(50mL)中的溶液。在-70℃下搅拌50分钟之后，添加TEA(32.5g，320mmol，8.00当量)，并将反应混合物温热至20℃并搅拌15小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1，Rf＝0.48)显示反应物被完全消耗并且形成一个新的斑点。将反应混合物用H2O(50mL)淬灭，并用DCM(300mL)萃取水相。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到残留物。将残留物通过硅胶柱(DCM/EtOAc：95/5至50/50)纯化，以得到呈黄色油的中间体21(5.10g，20.6mmol，51.4％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 9.71-9.77(m,1H)3.39-3.90(m,8H)3.25-3.36(m,2H)1.40-1.52(m,9H)。
中间体22的制备：
在20℃下向中间体21(5.02g，20.3mmol，1.00当量)、中间体21a(1.20g，6.77mmol，0.40当量)于MeOH(40mL)中的溶液中缓慢添加NaBH3OAc(2.15g，10.2mmol，0.60当量)。在添加之后，将反应混合物在20℃下搅拌4小时。LCMS实测期望MS。将反应混合物逐滴用H2O(10mL)淬灭。在过滤之后，将滤液在减压下浓缩。将残留物通过制备型HPLC(柱：WelchUltimate XB-C18 250*50mm，10μm，120A+Welch Ultimate 250*50mm，10μm，120A；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：24％-54％，24分钟)，以得到呈黄色油的中间体22(0.80g，1.25μmol，18.5％产率)。LCMS:RT＝0.833分钟，MS计算值：Mav＝639.78,[M+H]+＝640.5.1H NMR(400MHz,DEUTERIUM OXIDE)δppm 7.87(s,1H)7.37(br d,J＝7.53Hz,1H)3.79-3.91(m,4H)3.70-3.79(m,4H)3.60-3.70(m,12H)3.45-3.58(m,8H)2.99-3.40(m,6H)2.59(t,J＝5.52Hz,2H)1.36(s,18H)。
中间体23(侧链保护的树脂结合肽)的制备：
中间体23是按照第[0008]-[0009]节(第3页-第5页)中提到的程序，通过中间体22的处理合成的。0.50mmol CTC树脂得到呈白色固体的中间体23(20.0mg，91.4％纯度，2.0％产率)。LCMS:RT＝1.61分钟，MS计算值：Mav＝2095.37,[M+H]+＝2095.0,[M+2H]2+＝1048.47。
KP-0002645/化合物1104的制备：
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在20℃下向中间体23(17.0mg，8.11μmol，1.00当量)、DIEA(40.49mg，81.13μmol，14.3μL，10.00当量)于DMSO(500μL)中的溶液中添加中间体7(21.66mg，16.23μmol，2.00当量)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS表明反应物被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，以得到呈白色固体的化合物1104(9.1mg，1.95μmol，97.2％纯度，24.0％产率)。LCMS:RT＝1.092分钟，MS计算值：Mav＝4534.39,[M+3H]3+＝1511.90,[M+4H]4+＝1134.10。
实例9：化合物1105的制备程序
制备化合物1105的完整反应方案示出于图9中。
中间体25的制备：
向DMSO(4.92g，62.98mmol，4.92mL，2.50当量)于DCM(50mL)中的溶液中添加草酰氯(6.40g，50.38mmol，4.41mL，2.00当量)于DCM(50mL)中的溶液，然后将反应混合物在-70℃下搅拌10分钟，然后逐滴添加中间体24(8.50g，25.19mmol，1.00当量)于DCM(50mL)中的溶液。在-70℃下搅拌50分钟之后，添加TEA(20.39g，201.54mmol，28.05mL，8.00当量)，并将反应混合物温热至20℃并搅拌15小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10:1，Rf＝0.48)显示反应物被完全消耗并且形成一个新的斑点。将反应混合物用H2O(50mL)淬灭，并用DCM(300mL*3)萃取水相。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到残留物。将残留物通过硅胶柱(DCM/EtOAc：95/5至50/50)纯化，以得到呈黄色油的中间体25(3.91g，11.66mmol，46.3％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 9.71-9.77(m,1H)3.39-3.90(m,8H)3.25-3.36(m,2H)1.40-1.52(m,9H)。
中间体26的制备：
在20℃下向中间体25(3.79g，11.29mmol，2.50当量)、中间体21a(0.8g，4.51mmol，1.00当量)于MeOH(40mL)中的溶液中缓慢添加NaBH3OAc(1.44g，6.77mmol，1.50当量)。在添加之后，将反应混合物在20℃下搅拌4小时。LCMS实测期望MS。将反应混合物逐滴用H2O(10mL)淬灭。在过滤之后，将滤液在减压下浓缩。将残留物通过制备型HPLC(柱：WelchUltimate XB-C18 250*50mm，10μm，120A+Welch Ultimate 250*50mm，10μm，120A；移动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：24％-54％，24分钟)，以得到呈黄色油的中间体26(2.41g，2.95mmol，65.4％产率)。LCMS:RT＝0.833分钟，MS计算值：Mav＝815.99,[M+H]+＝816.5.1HNMR(400MHz,DEUTERIUM OXIDE)δppm 7.87(s,1H)7.37(br d,J＝7.53Hz,1H)3.79-3.91(m,4H)3.70-3.79(m,4H)3.60-3.70(m,12H)3.45-3.58(m,8H)2.99-3.40(m,6H)2.59(t,J＝5.52Hz,2H)1.36(s,18H)。
中间体27的制备：
中间体27是按照第[0008]-[0009]节(第3页-第5页)中提到的程序，通过中间体26的处理合成的。0.50mmol CTC树脂得到呈白色固体的中间体27(50.0mg，2.0％产率)。LCMS:RT＝1.61分钟，MS计算值：Mav＝2271.58,[M+2H]2+＝1137.64,[M+3H]3+＝758.50。
化合物1105的制备：
/>
在20℃下向中间体27(17.3mg，7.62μmol，1.00当量)、DIEA(9.84mg，76.16μmol，13.27μL，10.00当量)于DMSO(600μL)中的溶液中添加中间体7(20.84mg，15.61μ摩尔，2.05等量)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS表明反应物被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，以得到呈白色固体的化合物1105(17.1mg，47.7％产率，97.2％纯度)。LCMS:RT＝1.092分钟，MS计算值：Mav＝4710.60,[M+3H]3+＝1570.71,[M+4H]4+＝1178.40,[M+5H]5+＝942.69。
实例7：化合物1106的制备程序
中间体28的制备：
使用标准Fmoc化学合成肽(CTC树脂)。
1)树脂制备：向含有CTC树脂(2.00mmol，2.00g，1.00mmol/g)和含Fmoc-HN-PEG2-CH2CH2COOH(798.0mg，2.00mmol，1.00当量)的DCM(20mL)的容器中添加DIEA(4.00当量)，并在20℃下用N2鼓泡混合2小时。然后添加MeOH(2mL)并用N2鼓泡另外30分钟。将树脂用DMF(40mL)洗涤。然后添加含20％哌啶的DMF(40mL)，并在20℃下用N2使混合物鼓泡30分钟。然后将混合物过滤以获得树脂。在进行下一步骤之前，将树脂用DMF(40mL)洗涤。
2)偶联：在N2鼓泡的情况下，将Fmoc-D-Lys(Fmoc)-OH(2.21g，6.00mmol，3.00当量)、HBTU(2.19g，2.85当量)于DMF(20mL)中的溶液添加到树脂中。然后将DIEA(6.00当量)逐滴添加到混合物中，并在20℃下用N2鼓泡30分钟。通过茚三酮测试监测偶联反应，如果显示无色，则偶联完成。然后将树脂用DMF(40mL)洗涤。
3)脱保护：将含20％哌啶的DMF(40mL)添加到树脂中，并在20℃下用N2使混合物鼓泡30分钟。然后用DMF(40L)洗涤树脂。通过茚三酮测试监测脱保护反应，如果显示蓝色或棕红色，则反应完成。
4)偶联：在N2鼓泡的情况下，将Fmoc-HN-PEG8-CH2CH2COOH(5.30g，8.00mmol，4.00当量)、HATU(2.93g，3.80当量)于DMF(20mL)中的溶液添加到树脂中。然后将DIEA(8.00当量)逐滴添加到混合物中，并在20℃下用N2鼓泡30分钟。通过茚三酮测试监测偶联反应，如果显示无色，则偶联完成。然后将树脂用DMF(20mL)洗涤。
5)步骤3)重复一次。
6)Boc保护：将Boc2O(2.59g，12.00mmol，6.00当量)和DIEA(12.00当量)的溶液添加到树脂中，并用N2使混合物鼓泡20分钟。通过茚三酮测试监测偶联反应，其显示无色，偶联已完成。然后将树脂用DMF(40mL)、MeOH(40mL)洗涤，并且在减压下干燥。
肽切割：
1)切割：在室温下将切割溶液(20％HFIP/H2O，v/v，50mL)添加到含有侧链保护的肽的烧瓶中并搅拌1小时。在过滤之后，收集滤液。
2)将合并的滤液在减压下浓缩，然后冻干，以得到呈无色油的中间体28(1.7g，粗品)。LCMS:RT＝0.95分钟，MS计算值：Mav＝1352.60,[M+H]+＝1352.86。
中间体29(侧链保护的树脂结合肽)的制备：
中间体29是按照第[0008]-[0009]节(第3页-第5页)中提到的程序，通过中间体28的处理合成的。0.50mmol CTC树脂得到呈白色固体的中间体29(300.0mg，91.4％纯度，9.7％产率)。LCMS:RT＝0.872分钟，MS计算值：Mav＝2808.19,[M+2H]2+＝1404.79,[M+3H]3+＝936.52,[M+4H]4+＝702.73。
化合物1106的制备：
/>
在20℃下向中间体29(20.0mg，7.12umol，1.00当量)、DIEA(9.20mg，71.22μmol，12.41μL，10.00当量)于DMSO(400μL)中的混合物中添加中间体7(19.9mg，14.96μmol，2.10当量)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS表明反应物被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，以得到呈白色固体的化合物1106(16.7mg，3.02μmol，95.0％纯度，42.4％产率)。LCMS:RT＝1.61分钟，MS计算值：Mav＝5247.21,[M+3H]3+＝1749.87,[M+4H]4+＝1312.53,[M+5H]5+＝1050.28,[M+6H]6+＝875.27。
实例10：化合物1199的制备程序
中间体32的制备：
/>
使用标准Fmoc化学合成肽(CTC树脂)。
1)按照实例4中提及的步骤合成中间体5a(0.50mmol，肽树脂)。
2)偶联：在N2鼓泡的情况下在20℃下向化合物5a(CTC树脂，0.50mmol)、DIEA(387.7mg，3.00mmol，522.53uL，6.00当量)、DMAP(183.26mg，1.50mmol，3.00当量)于无水DMF(10mL)中的混合物中添加二氢-2H-吡喃-2,6(3H)-二酮(342.3mg，3.00mmol，6.00当量)。然后通过N2使混合物鼓泡2小时。在微切割测试之后，LCMS显示出反应已经完成。将肽树脂(中间体30)用DMF(20mL)洗涤，直接用于下一步骤。LCMS:RT＝1.21分钟，MS计算值：Mav＝1789.95,[M+2H]2+＝896.48。
3)TFP酯形成：在N2鼓泡的情况下，在20℃下将TFP(830.37mg，5.00mmol，10.00当量)和DIC(631.00mg，5.00mmol，774.23μL，10.00等量)于无水DMF(5mL)中的溶液添加到树脂结合肽(中间体30)中。然后通过N2使混合物鼓泡2小时。在微切割测试之后，LCMS显示出反应已经完成。将树脂用DMF(20mL)、2-异丙氧基丙烷(20mL)洗涤，通过N2鼓泡干燥，以得到呈亮黄色固体的中间体31(CTC树脂，0.5mmol)。
4)切割：在室温下将切割溶液(TFA/Tis/H2O，95/2.5/2.5，v/v/v，20mL)添加到含有侧链保护的肽的烧瓶中，并搅拌1小时。在过滤之后，用异丙醚(冷，100L)沉淀滤液。在过滤之后，将固体用异丙醚(冷，50mL)再洗涤两次，并在减压下干燥2小时。
5)环化：将粗肽溶解于HOAc/MeCN/H2O(4/3/3，v/v/v，500mL)中。然后向混合物逐滴添加0.1M I2/AcOH，直至黄色持续存在，然后将混合物在20℃下搅拌5分钟。通过逐滴添加0.1M Na2S2O3水溶液使混合物淬灭，直至黄色消失。在过滤之后，将滤液通过制备型HPLC(A：0.075％TFA/H2O，B：MeCN)，随后冻干，以得到呈白色固体的中间体32(73.0mg，89.2％纯度，6.7％产率)。LCMS:RT＝1.31分钟，MS计算值：Mav＝1935.99,[M+2H]2+＝968.03。
化合物1199的制备：
/>
在20℃下向中间体6(vcMMAE，11.9mg，10.6μmol，1.00当量)于DMSO(400μL)中的溶液中添加中间体32(20.0mg，10.6μmol，1.00当量)和DIEA(6.82mg，53.0μmol，5.00当量)。将混合物在20℃下搅拌2小时。LC-MS显示出起始材料被完全消耗。将溶剂在减压下去除。将残留物通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，以得到呈白色固体的化合物1199(16.8mg，5.89μmol，55.8％产率，96.8％纯度)。LCMS:RT＝1.118分钟，MS计算值：Mav＝2893.35,[M+2H]2+＝1447.20,[M+3H]3+＝965.15。
实例11：化合物1434的制备程序
中间体36的制备：
使用标准Fmoc化学合成肽(CTC树脂)。
1)树脂制备：向含有CTC树脂(1.00mmol，1.00g，1.00mmol/g)和含Fmoc-HN-PEG2-CH2CH2COOH(399.0mg，1.00mmol，1.00当量)的DCM(10mL)的容器中添加DIEA(4.00当量)，并在20℃下用N2鼓泡混合2小时。然后添加MeOH(1mL)并用N2鼓泡另外30分钟。将树脂用DMF(20mL)洗涤。然后添加含20％哌啶的DMF(20mL)，并在20℃下用N2使混合物鼓泡30分钟。然后将混合物过滤以获得树脂。在进行下一步骤之前，将树脂用DMF(20mL)洗涤。
2)脱保护：将含20％哌啶的DMF(20mL)添加到树脂中，并在20℃下用N2使混合物鼓泡30分钟。然后用DMF(20mL)洗涤树脂。通过茚三酮测试监测脱保护反应，如果显示蓝色或棕红色，则反应完成，以得到中间体33。
3)偶联：将二氢-2H-吡喃-2,6(3H)-二酮(684.0mg，6.00mmol，6.00当量)和DIEA(12.00当量)的溶液添加到树脂中，并用N2使混合物鼓泡20分钟。通过茚三酮测试监测偶联反应，其显示无色，偶联已完成。然后将树脂用DMF(20mL)洗涤，以得到中间体34。
4)TFP酯形成：在N2鼓泡的情况下，在20℃下将2,3,5,6-四氟苯酚(1.65g，10.00mmol，10.00当量)和DIC(1.26g，10.00mmol，774.23μL，10.00等量)于无水DMF(10mL)中的溶液添加到肽树脂(中间体34)中。然后通过N2使混合物鼓泡2小时。在微切割测试之后，LCMS显示出反应已经完成。将树脂用DMF(20mL)、2-异丙氧基丙烷(20mL)、异丙醚(20mL)洗涤，通过N2鼓泡干燥，以得到中间体35(CTC树脂，1.0mmol)。
肽切割和纯化：
1)切割：将1％TFA/DCM(v/v，40mL)溶液添加到树脂结合的肽(中间体35)中，并在20℃下搅拌5分钟。在过滤之后，在减压下浓缩滤液。
2)纯化：将残留物通过制备型HPLC(A:0.075％TFA/H2O；B：MeCN)直接纯化，以得到呈无色油的中间体36(250.0mg，41.8％产率)。LCMS:RT＝0.947分钟，MS计算值：Mav＝439.36，观察到的质量：[M+H]+＝440.23,[M+Na]+＝462.11。
化合物1434的制备：
在20℃下向中间体36(39.1mg，89.02μmol，2.00当量)和中间体6(vcMMAE，50.0mg，44.51μmol，1.00当量)于DMF(1mL)中的混合物中一次性添加DIEA(23.01mg，178.04μmol，31.01μL，4.00当量)。将混合物在20℃下搅拌30分钟。将混合物通过制备型HPLC(A：0.075％TFA/H2O；B：MeCN)直接纯化，然后冻干，以得到呈白色固体的化合物1434(36.9mg，26.34μmol，59.2％产率，99.7％纯度)。LCMS:RT＝1.955分钟，MS计算值：Mav＝1396.71，观察到的质量：[M+H]+＝1398.1,[M+2H]2+＝699.6。虚线指示化合物1434的上部部分与下部部分之间共享的单个共价键。
化合物1435、化合物1436、化合物1437通过按照化合物1434的程序合成。虚线指示每个化合物的结构的上部部分与下部部分之间共享的单个共价键。
获得呈白色固体的化合物1435(39.9mg，25.6μmol，99.9％纯度，50.8％产率)。LCMS:RT＝1.941分钟，MS计算值：Mav＝1555.89,[M+H]+＝1557.0,[M+2H]2+＝778.6。
获得呈白色固体的化合物1436(41.8mg，25.4μmol，99.6％纯度，57.9％产率)。LCMS:RT＝1.934分钟，MS计算值：Mav＝1644.00,[M+H]+＝1645.3,[M+2H]2+＝822.8。
获得呈白色固体的化合物1437(49.4mg，27.1μmol，99.8％纯度，49.9％产率)。LCMS:RT＝1.937分钟，MS计算值：Mav＝1820.21,[M+H]+＝1821.4,[M+2H]2+＝910.8,[M+3H]3+＝607.7。
实例12：化合物1438的制备程序
中间体37的制备：
将中间体22(0.10g)于TFA/DCM(3/7，v/v，2mL)中的混合物在20℃下搅拌0.5小时。将溶剂在减压下去除。将残留物冻干，以得到呈无色油的中间体37(0.10g，粗品，TFA盐)。
化合物1438的制备：
在20℃下向中间体37(3.00mg，6.83μmol，1.00当量)、DIEA(5.29mg，40.95μmol，7.13μL，6.00当量)于DMF(0.5mL)中的溶液中添加中间体7(27.33mg，20.48μmol，3.00当量)。然后将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物通过制备型HPLC(A：0.075％TFA/H2O；B：MeCN)直接纯化，随后冻干，以得到呈白色固体的化合物1438(6.3mg，2.19μmol，96.5％纯度，32.0％产率)。LCMS:RT＝1.709分钟，MS计算值：Mav＝2878.57,[M+2H]2+＝1440.3,[M+3H]3+＝960.5。
中间体37的制备：
将中间体22(0.10g)于TFA/DCM(3/7，v/v，2mL)中的混合物在20℃下搅拌0.5小时。将溶剂在减压下去除。将残留物冻干，以得到呈无色油的中间体37(0.10g，粗品，TFA盐)。
化合物1438的制备：
/>
在20℃下向中间体37(3.00mg，6.83μmol，1.00当量)、DIEA(5.29mg，40.95μmol，7.13μL，6.00当量)于DMF(0.5mL)中的溶液中添加中间体7(27.33mg，20.48μmol，3.00当量)。然后将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物通过制备型HPLC(A：0.075％TFA/H2O；B：MeCN)直接纯化，随后冻干，以得到呈白色固体的化合物1438(6.3mg，2.19μmol，96.5％纯度，32.0％产率)。LCMS:RT＝1.709分钟，MS计算值：Mav＝2878.57,[M+2H]2+＝1440.3,[M+3H]3+＝960.5。
实例13：化合物1439的制备程序
中间体38的制备：
将中间体26(0.10g)于TFA/DCM(3/7，v/v，2mL)中的混合物在20℃下搅拌0.5小时。将溶剂在减压下去除。将残留物冻干，以得到呈无色油的中间体38(0.10g，粗品，TFA盐)。
化合物1439的制备：
/>
在20℃下向中间体38(20.0mg，32.48μmol，1.00当量)、DIEA(25.19mg，194.88μmol，33.95μL，6.00当量)于DMF(2mL)中的溶液中添加中间体7(130.0mg，97.44μmol，3.00当量)。然后将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物通过制备型HPLC(A：0.075％TFA/H2O；B：MeCN)直接纯化，然后冻干，以得到呈白色固体的化合物1439(10.8mg，3.54μmol，97.1％纯度，10.8％产率)。LCMS:RT＝2.221分钟，MS计算值：Mav＝3054.78,[M+2H]2+＝1528.4,[M+3H]3+＝1019.1,[M+4H]4+＝764.7。
实例14：化合物1440的制备程序
中间体39的制备：
将中间体28(0.30g)于TFA/DCM(3/7，v/v，6mL)中的混合物在20℃下搅拌0.5小时。将溶剂在减压下去除。将残留物冻干，以得到呈无色油的中间体39(0.20g，粗品，TFA盐)。LCMS:RT＝0.637分钟，MS计算值：Mav＝1152.37,[M+H]+＝1152.7,[M+2H]2+＝576.99。
化合物1440：
/>
在20℃下向中间体39(17.27mg，14.99μmol，1.00当量)、DIEA(9.68mg，74.93μmol，13.05μL，6.00当量)于DMF(0.5mL)中的溶液中添加中间体7(50.0mg，37.46μmol，2.50当量)。然后将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物通过制备型HPLC(A：0.075％TFA/H2O；B：MeCN)直接纯化，然后冻干，以得到呈白色固体的化合物1440(31.7mg，8.68μmol，57.9％产率，98.3％纯度)。LCMS:RT＝1.689分钟，MS计算值：Mav＝3591.39,[M+2H]2+＝1797.0,[M+3H]3+＝1197.9,[M+4H]4+＝898.8,[M+5H]5+＝719.8。
实例15：化合物1441的制备程序
将二氢-2H-吡喃-2,6(3H)-二酮(6.09mg，53.41μmol，1.50当量)、中间体6(vcMMAE，40.00mg，35.61μmol，1.00当量)、DIEA(13.81mg，106.82μmol，18.61μL，3.00当量)于DMF(0.4mL)中的混合物在20℃下搅拌0.5小时。将混合物通过制备型HPLC(A：0.075％TFA/H2O；B：MeCN)直接纯化，随后冻干，以得到呈白色固体的化合物1441(34.5mg，27.26μmol，76.5％产率，97.8％纯度)。LCMS:RT＝1.983分钟，MS计算值：Mav＝1237.83,[M+H]+＝1238.8,[M+2H]2+＝619.6。
实例16：化合物1574的制备程序
中间体40的制备：
中间体40按照化合物1106的合成程序合成。
3.0mmol树脂得到呈白色固体的中间体40(2.46g，粗品)。LCMS:RT＝0.484分钟，MS计算值：Mav＝823.97,[M+H]+＝825.49,[M–Boc+H]+＝724.37。
中间体41的制备：
中间体41是按照中间体5的合成中提及的步骤，通过中间体40的处理合成的。0.50mmol CTC树脂得到呈白色固体的中间体41(148.1mg，90.0％纯度，12.9％产率)。
化合物1574的制备：
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在20℃下向中间体41(50.00mg，23.58μmol，1.00当量)、DIEA(18.29mg，141.48μmol，24.64μL，6.00当量)于DMSO(600μL)中的混合物中添加中间体7(77.49mg，51.88μmol，2.20当量)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS表明反应物被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，以得到呈白色固体的化合物1574(85.0mg，17.49μmol，74.1％产率，97.1％纯度)。LCMS:RT＝1.856分钟，MS计算值：Mav＝4718.58,[M+3H]3+＝1573.8,[M+4H]4+＝1180.6,[M+5H]5+＝944.7。
实例17：化合物1575的制备程序
中间体42的制备：
将中间体40(0.20g)于TFA/DCM(3/7，v/v，4mL)中的混合物在20℃下搅拌0.5小时。将溶剂在减压下去除。将残留物冻干，以得到呈无色油的中间体42(0.20g，粗品，TFA盐)。LCMS:RT＝0.637分钟，MS计算值：Mav＝623.74,[M+H]+＝624.5。
化合物1575的制备：
在20℃下向中间体42(10.00mg，16.03μmol，1.00当量)、DIEA(12.43mg，96.19μmol，16.76μL，6.00当量)于DMSO(600uL)中的混合物中添加中间体7(47.07mg，35.27μmol，2.20当量)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS表明反应物被完全消耗并示出一个具有所期望MS的主峰。将混合物通过制备型HPLC(TFA条件)纯化，以得到呈白色固体的化合物1575(28.90mg，9.22μmol，57.5％产率，97.7％纯度)。LCMS:RT＝1.728分钟，MS计算值：Mav＝3062.76,[M+2H]2+＝1532.8,[M+3H]3+＝1021.8,[M+4H]4+＝766.7。
实例18：接头的合成
用于制备化合物44的一般程序：
向化合物43(16g，43.19mmol，1当量)于DCM(70mL)中的溶液中添加Na(29.79mg，1.30mmol，30.71uL，0.03当量)和丙烯酸叔丁酯(5.54g，43.19mmol，6.27mL，1当量)。将混合物在25℃下搅拌12小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1Rf＝0.43)显示反应完成。将反应混合物在减压下浓缩以去除DCM。将残留物用100mL H2O稀释，并且用EtOAc(200mL*3)萃取。将组合的有机层用盐水(300mL*1)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到残余物。获得呈黄色油的化合物44(16g，35.20mmol，81.49％产率)。
用于制备化合物15的一般程序：
向化合物44(17g，34.10mmol，1当量)于DCM(130mL)中的溶液中添加MsCl(5.86g，51.14mmol，3.96mL，1.5当量)和TEA(10.35g，102.29mmol，14.24mL，3当量)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1Rf＝0.6)显示反应完成。将残余物用300mL H2O稀释，并用DCM(200mL*2)萃取。将组合的有机层用0.5M HCl(200mL*2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到残余物。获得呈黄色油的化合物45(19g，32.95mmol，96.63％产率)。
用于制备化合物46的一般程序：
向化合物45(19g，32.95mmol，1当量)于DMF(190mL)中的溶液中添加NaN3(4.28g，65.89mmol，2当量)和NaI(9.88g，65.89mmol，2当量)。将混合物在90℃下搅拌12小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1Rf＝0.6)显示反应完成。将残余物用500mL H2O稀释，并且用EtOAc(500mL*3)萃取。将组合的有机层用盐水(500mL*1)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到残余物。获得呈黄色油的化合物46(17g，32.47mmol，98.54％产率)。
用于制备化合物47的一般程序：
三个反应平行进行。向化合物46(6g，11.46mmol，1当量)于DCM(120mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，48.00mL，16.76当量)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1Rf＝0.1)显示反应完成。三个反应一起进行。将反应混合物在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱法(SiO2，DCM:MeOH＝200/1至1/1)纯化。获得呈黄色油的化合物7(10g，21.39mmol，62.22％产率)。
实例19：另外的接头的合成
化合物48的制备：
在0℃下将化合物47(140mg，369.00umol，1当量)、SOCl2(131.70mg，1.11mmol，80.30uL，3当量)于DCM(2mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，并且然后在N2大气下在0至20℃下将混合物搅拌0.5小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1Rf＝0.46)指示化合物47被完全消耗。将反应混合物浓缩以得到产物。获得呈黄色油的化合物48(146.81mg，粗的)。
实例6：用接头制备二氟苯基反应性基团
化合物50的制备：
将BH3-THF(1M，25.79mL，4当量)小心地添加到化合物49(1g，6.45mmol，1当量)于无水THF(70mL)中的溶液中。将所得溶液搅拌并加热至回流持续10小时(70℃)。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，Rf＝0.01)指示化合物49被完全消耗，并且形成了一个新的斑点。在混合物冷却之后，将6N HCl(2mL)小心地添加到溶液中，并且继续加热回流持续30分钟。将混合物在减压下浓缩，以得到残留物。获得呈白色固体的化合物50(2.5g，粗的，HCl)。
用于制备化合物51的程序
将化合物50(270mg，690.20umol，1当量，HCl)、乙酸酐(84.55mg，828.25umol，77.57uL，1.2当量)于NaHCO3(5mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，并且然后在N2大气下在20℃下将混合物搅拌24小时。LCMS显示出起始材料被完全消耗。TLC指示化合物50被完全消耗。用1M HCl将反应混合物酸化至pH 4-5。将反应混合物用EtOAc(30mL*2)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到残留物。将残留物通过柱色谱法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:3)。获得呈白色固体的化合物51(67mg，333.05umol，48.25％产率)。LCMS:RT＝0.609分钟，MS计算值：201.0,[M+H]+＝202.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm9.99(s,1H)8.28(br s,1H)6.83-6.93(m,2H)4.12(d,J＝5.95Hz,2H)1.84(s,3H)。
化合物52的制备：
向化合物51(67mg，333.05umol，1当量)于DCM(1mL)中的溶液中添加TEA(101.10mg，999.16umol，139.07uL，3当量)，并且然后在0℃下添加含化合物48(145.76mg，366.36umol，1.1当量)的DCM(1mL)。将所得混合物在20℃下搅拌2小时。LCMS显示出起始材料被完全消耗。将反应混合物过滤，并将滤液浓缩。将粗产物通过反相HPLC(柱：WelchUltimate AQ-C18 150*30mm*5um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：35％-65％，12分钟)纯化。获得呈黄色油的化合物52(100mg，177.76umol，53.37％产率)。LCMS:RT＝2.129分钟，MS计算值：562.2,[M+H]+＝563.3。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 6.84(d,J＝7.95Hz,2H)5.86(br s,1H)4.33(d,J＝6.11Hz,2H)3.81(t,J＝6.42Hz,2H)3.53-3.64(m,23H)3.32(br t,J＝5.01Hz,3H)2.85(t,J＝6.36Hz,2H)1.99(s,3H)1.50(s,2H)。
化合物53的制备：
在N2下向化合物52(100mg，177.76umol，1当量)于THF(3mL)中的溶液中添加HCl(0.5M，711.04uL，2当量)和Pd/C(100mg，177.76umol，10％纯度，1.00当量)。将悬浮液在真空下脱气，并用H2吹扫几次。将混合物在H2(15psi)下在20℃下搅拌0.2小时。LCMS显示出起始材料被完全消耗。将反应混合物过滤，并将滤液浓缩。将粗产物通过反相HPLC(柱：WelchUltimate AQ-C18 150*30mm*5um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％-45％，12分钟)纯化。获得呈白色油的化合物53(60mg，111.82umol，62.91％产率)。LCMS:RT＝1.272分钟，MS计算值：536.2,[M+H]+＝537.3。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.79(br s,3H)6.98(br d,J＝8.19Hz,2H)6.72(br s,1H)4.42(d,J＝5.99Hz,2H)3.88(t,J＝5.93Hz,2H)3.80-3.85(m,2H)3.72-3.76(m,2H)3.65-3.71(m,12H)3.13(br s,2H)2.92(t,J＝5.87Hz,2H)2.68(br s,4H)2.08(s,3H)。
实例20：用接头制备二氟苯基反应性基团
化合物24的制备：
将化合物2(1g，2.82mmol，1当量，HCl)、乙酸乙酰脂(316.15mg，3.10mmol，290.04uL，1.1当量)于NaHCO3(10mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，并且然后在N2大气下在20℃下将混合物搅拌8小时。LCMS显示出起始材料被完全消耗。TLC指示化合物2被完全消耗。用1M HCl将反应混合物酸化至pH 4-5。将反应混合物用EtOAc(30mL*2)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到残留物。将残留物通过柱色谱法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝20:1至1:2)纯化。获得呈白色固体的化合物54(250mg，1.36mmol，48.48％产率)。LCMS:RT＝0.413分钟，MS计算值：183.0,[M+H]+＝184.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm9.76(s,1H)8.32(br s,1H)7.03-7.09(m,1H)6.90-6.95(m,2H)4.19(d,J＝5.87Hz,2H)1.91(s,3H)。
化合物55的制备：
在0℃下向化合物(18(酰氯PEG接头)，104mg，261.40umol，1当量)于DCM(1mL)中的溶液中添加TEA(79.35mg，784.20umol，109.15uL，3当量)，并且然后在0℃下添加含化合物54(47.88mg，261.40umol，1当量)的DCM(1mL)。将所得混合物在20℃下搅拌2小时。LCMS显示出期望产物的形成。将反应混合物过滤，并将滤液浓缩。将粗产物通过反相HPLC(柱：WelchUltimate AQ-C18 150*30mm*5um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％-55％，12分钟)纯化。获得呈白色油的化合物55(82mg，150.58umol，57.60％产率)。LCMS:RT＝1.789分钟，MS计算值：544.2,[M+H]+＝545.5。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.04-7.17(m,3H)5.92(br s,1H)4.44(d,J＝5.87Hz,2H)3.89(t,J＝6.36Hz,2H)3.60-3.73(m,24H)3.40(br t,J＝5.07Hz,3H)2.90(t,J＝6.36Hz,2H)2.44(br s,2H)2.07(s,3H)。
化合物56的制备：
在N2下向化合物55(82mg，150.58umol，1当量)于THF(5mL)中的溶液中添加HCl(1M，301.16uL，2当量)和Pd/C(150.58umol，10％纯度，1当量)。将悬浮液在真空下脱气，并用H2吹扫几次。将混合物在20℃下在H2(15psi)下搅拌10分钟。LCMS显示出起始材料被完全消耗。将反应混合物在氮气下干燥。将粗产物通过反相HPLC(柱：Welch Ultimate AQ-C18150*30mm*5um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：12％-42％，12分钟)纯化。获得呈白色油的化合物26(4mg，7.71umol，5.12％产率)。LCMS:RT＝1.356分钟，MS计算值：518.2,[M+H]+＝519.2。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.94(br s,1H)7.05-7.18(m,1H)6.31(br s,1H)4.43(d,J＝5.75Hz,1H)3.78-3.91(m,2H)3.56-3.77(m,10H)3.11(br s,1H)2.88(t,J＝5.93Hz,1H)2.06(s,1H)。
实例21：用于递送MMAE的抗体药物缀合物
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实例22：用于评估药物抗体比率的方法
除其它外，所提供的技术可以提供用于将一甲基澳瑞他汀，如MMAE与靶药剂缀合的增加的效率(例如，更高的速率和/或产率)和/或选择性。本文提供来自某些评估的数据作为实例。
在一些实施例中，靶药剂是蛋白药剂。在一些实施例中，靶药剂是抗体药剂。在一些实施例中，本公开提供了用于将所关注部分与抗体例如本妥昔单抗、恩弗妥单抗等缀合的技术。
在一些实施例中，将反应配偶体，例如式R-I的化合物或其盐，或更特别是如以下实例8所示的MMAE-1-MMAE-7溶解于DMSO至5mM的储备溶液中。
在一些实施例中，用300微克抗体建立反应。在一些实施例中，可以使用各种条件，包含各种缓冲液、试剂当量、反应时间、反应温度和反应浓度。
作为实例，一种反应是300微升与1mg/mL的抗体在PBS中的反应。将本公开的反应配偶体，如MMAE-1(1微升5mM DMSO储备液，相对于达土木单抗为2.5摩尔当量)在284微升的PBS缓冲液(10mM磷酸盐，150mM氯化钠，pH 7.4)中稀释，然后将15微升的抗CD30抗体，如达土木单抗(20mg/mL储备液)添加到反应混合物中，然后在室温下在黑暗中温育。4小时之后，使用Amicon Ultra离心过滤器(30KDa MWCO，0.5mL体积)更换反应缓冲液。首先，甘氨酸缓冲液(100mM，pH 2.1)用于缓冲液更换，以确保反应之后靶结合部分的解离。然后，磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)用于进一步的缓冲液更换和储存。
在另一个实例，反应是300微升与1mg/mL的抗体在硼酸盐缓冲液中的反应。反应配偶体(1.2微升5mM储备液于DMSO中，相对于MAB为3.0摩尔当量)在284微升的硼酸盐缓冲液(100mM硼酸盐，pH 8.3)中稀释，然后将15微升的达土木单抗(20mg/mL储备液)添加到反应混合物中，然后在室温下在黑暗中温育。20小时之后，使用Amicon Ultra离心过滤器(30KDaMWCO，0.5mL体积)更换反应缓冲液。首先，甘氨酸缓冲液(100mM，pH 2.1)用于缓冲液更换，以确保反应之后靶结合部分的解离。然后，磷酸盐缓冲盐水(10mM磷酸盐，150mM氯化钠，pH7.4)用于进一步的缓冲液更换和储存。
根据本公开，可以利用各种技术来评估反应结果。
除其它外，所提供的技术可以提供增加的缀合效率和选择性，而无需额外的反应步骤。在一些实施例中，所提供的技术可以在抗体药剂的选择性残基处选择性地缀合期望的所关注部分。除其它外，本公开的技术可以高效地提供具有改进的特性和/或活性(例如，改进的纯度、均匀性等)的药剂。
在一些实施例中，一项有用的技术是基于吸光度的DAR分析。对于各种抗体缀合物，例如在各种试剂筛选/评估方法中，可以计算DAR(药物抗体定量，所关注部分与靶药剂部分(例如，抗体药剂部分)的比率)。与具有相同反应性基团但没有靶结合部分的试剂相比，评估了包括靶结合部分的各种药剂作为与靶标(例如，蛋白药剂，如抗体药剂)的反应配偶体的缀合效率。在各种比率确定中，“药物”/所关注部分是与靶药剂(例如抗体药剂)缀合的异硫氰酸荧光素(FITC)染料。DAR摩尔比定义为药物/所关注部分的摩尔数与靶药剂/抗体的摩尔数的比率。使用Beer-Lambert定律从FITC(A485)和抗体(A280)的缀合产物的吸光度以及FITC和抗体的消光系数计算摩尔浓度。校正系数0.35用于校正FITC在280nm处的吸光度。Biotek Synergy H1酶标仪和Take3微量板用于吸光度测量。抗体的浓度应为至少3mg/mL，以获得读段中的最佳信噪比。
实例23：确定抗体缀合位点的技术
E.所提供的技术提供了显著提高的选择性。
除其它外，当靶药剂具有多个可用于缀合的位点时，所提供的技术可以提供显著提高的缀合位点的选择性。例如，如本文所展示的，在各种条件下，各种所提供的技术选择性地缀合在抗体药剂的某些链和/或抗体药剂的选择性残基上。
在一些实施例中，蛋白质印迹用于评估抗体缀合位置(例如，重链、轻链等)。某些数据呈现在图中。如所示出的，本公开的技术可以提供各种水平的选择性。在一些实施例中，各种技术提供重链对轻链的选择性。
在一些实施例中，对于蛋白质印迹，样品首先在NuPage变性凝胶(例如，英杰公司(Invitrogen)，NP0321)上运行。每孔以50ng的量加载样品。在条带分离之后，使用iBlot将凝胶转移到硝酸纤维素膜(英杰公司，IB23002)上。膜用PBST缓冲液中的5％奶粉封闭(PBSpH 7.4，含0.1％Tween 20)。在一些实施例中，对于荧光素缀合的轻链和重链的检测，初级抗体是1:2500稀释的小鼠抗荧光素抗体(EMD密理博公司(EMD Millipore)，MAB045)，并且次级抗体是1:20000稀释的与HRP结合的山羊抗小鼠IgG(南方生物技术公司(SouthernBiotech)，1038-05)。使用SuperSignal West Femto化学发光底物(赛默飞世尔公司(Thermo Fisher)，34096)完成硝酸纤维素膜上抗体的检测试剂。膜在Azure Biosystemsc500上成像以获得化学发光信号。
在一些实施例中，用于评估所提供技术的技术是或包括质谱法，任选地与色谱技术(例如，HPLC、UPLC等)。例如，通过质谱法评估各种产物药剂，例如在一些实施例中，使用配备有Agilent ZORBAX RRHD(300SB-C8，2.1×50mm，1.8um)柱的Sciex X500QTOF系统。在一些实施例中，液相色谱法与MS一起使用。在一个实例中：流动相缓冲液为A＝0.1％甲酸水溶液，B＝乙腈。方案条件为0-1分钟，2％B；1-7分钟，2-40％B；7-7.5分钟，40-80％B；7.5-9分钟，80％B；9-9.5分钟，80-2％B；9.5-10.5分钟，2％B；流速为0.25毫升/分钟；缀合物的浓度为0.1毫克/分钟；注射体积为0.01mL。在一些实施例中，BioTool试剂盒用于完整的质量分析。在一些实施例中，质量范围为147,000-155,000和m/z 2200-3400。
在一些实施例中，肽作图分析用于评估所提供的技术。在一些实施例中，使用胰蛋白酶将经缀合和未经缀合的抗体消化成肽，并通过离子质量对包括缀合的肽进行定量。
在一些实施例中，胰蛋白酶消化如下进行：
1.将25-50mcg的总蛋白样品等分到干净的蛋白质低结合Eppendorf管中。
2.使用赛默飞世尔科技公司提供的7kDa MWCO凝胶过滤柱和方案将样品缓冲液更换为智能消化缓冲液。
3.将任何必要的智能消化缓冲液添加到缓冲液更换样品中，以达到100mcl的最终体积。
4.将5mcL的智能胰蛋白酶溶液添加到缓冲液更换样品中。
5.在70℃的干浴中消化蛋白质15分钟(向孔中添加水以确保适当的热转移到样品中)。
6.从浴中取出样品并使其冷却至室温。
7.将1mcL的TCEP Bond Breaker溶液添加到蛋白质样品中。
8.在室温下温育30分钟(避光)。
9.将10mcL的5％水性TFA添加到样品中以酸化和涡旋。
10.在台式离心机中以12,000rcf离心样品3分钟。
11.将样品转移到干净的自动采样器管中，小心不要打扰任何未消化的蛋白质颗粒。
在一些实施例中，用于分析的仪器条件为：
LC:Waters Acquity I级UPLC
流动相：A：0.05％水性TFA；B：含0.05％TFA的乙腈
柱：ACQUITY UPLC肽BEH C18柱，1.7μm，2.1mm X 100mm
梯度：第1分钟保持2％B；2-65％B超过1-60分钟
MS：Thermo LTQ Orbitrap Velos Pro MS1，母离子，在400Da时分辨率为30000；范围：300-2000Da，使用锁定质量确保精度在5ppm内
具有20000总离子计数阈值的数据相关方法触发母离子碎裂。35eV的碰撞能量(肽图分析的标准碰撞能量)
在一些实施例中，缀合选择性地出现在抗体重链的K246/K248处。在一些实施例中，缀合位点包含重链的K246。在一些实施例中，缀合位点包含重链的K248。在一些实施例中，缀合位点包含重链的K288/K290。在一些实施例中，缀合位点包含重链的K288。在一些实施例中，缀合位点包含重链的K290。在一些实施例中，缀合位点包含轻链的K185。在一些实施例中，缀合位点包含轻链的K187。在一些实施例中，缀合位点包含重链的K414。
另外的数据证实，所提供的技术可以提供与各种类型抗体药剂(例如，单克隆抗体药剂、多克隆抗体药剂、合并的抗体药剂如IVIG、IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4抗体药剂等)的高效和/或选择性缀合。阅读本公开的本领域技术人员将理解，各种类型的抗体也可以根据本公开以高效和/或选择性缀合(例如，使用包括此类抗体的合适靶结合部分和如本文所描述的各种反应性部分和任选地接头部分的化合物和方法)。下文以有用的肽图谱分析方案作为实例进行描述；本领域技术人员认为，根据本公开也可以使用其它方案，包含下文描述的方案的各种修改和变化：
1.定量蛋白质，例如，使用Pierce 660试剂。
2.在低结合Eppendorf管中，将10ug的样品稀释到100uL的Tris 50mM pH8.0中。
3.通过添加10mM DTT(二硫苏糖醇)，在60℃下在加热块中保持15分钟以减少蛋白质。
4.添加15mM碘乙酰胺，在室温下避光烷基化30分钟。
5.通过添加10mM DTT淬灭反应。
6.用0.33μg的α-胰凝乳蛋白酶(西格玛公司(Sigma))在恒温器中在37℃下过夜消化蛋白质。
7.用2uL的100％甲酸酸化样品。
8.在Strata-X反相SPE(菲罗门(Phenomenex))上纯化肽。用含2％甲酸的60％乙腈洗脱肽。
9.在氮气流下干燥洗脱的肽。
10.在25uL的流动相A中重构肽。
11.在LC-MS上注射之前，在流动相A中稀释肽1:10，例如，根据以下参数。
以用于分析的仪器作为实例：
LC:Eksigent microLC200(Sciex)
流动相：A：含0.2％甲酸和3％DMSO的水溶液；B：含0.2％甲酸和3％DMSO的乙醇溶液
柱：Luna Omega PS柱0.3mm内径，3μm颗粒，100mm(菲罗门)
梯度：2-48％B超过25分钟，流速为6微升/分钟。
MS：ABSciex TripleTOF 6600+
MS1(范围350-1250Da)，分辨率35000
阈值为500cps的DDA方法。
如本文所描述的，所提供的技术可以为各种类型的抗体药剂(例如，单克隆抗体药剂、多克隆抗体药剂或合并的抗体药剂如IVIG)提供(例如，关于缀合位点的)高效和/或选择性缀合。除其它外，本公开提供的数据证实本公开的技术可以提供IgG2和IgG4抗体的高效和/或选择性缀合。在一些实施例中，反应在硼酸盐缓冲液pH 8.2，2.5M当量的针对抗体的试剂，20小时，25℃下进行。阅读本公开的本领域技术人员将理解，其它类型的抗体也可以根据本公开以高效和/或选择性缀合(例如，使用包括此类抗体的合适靶结合部分和如本文所描述的各种反应性部分和任选地接头部分的化合物和方法)。
实例24：所提供的产物药剂维持靶药剂的特性和功能。
除其它外，所提供的技术利用温和的条件、短的途径(例如，不单独去除靶结合部分)等，并提供在定向位点处的缀合和维持靶药剂的一种或多种或所有期望的特性和/或活性的产物药剂(例如，抗体药剂)。所提供的包括抗体药剂部分的药剂可以维持与Fc受体(例如，FcRn)的相互作用。
各种技术可用于评估靶药剂(例如，抗体药剂)的特性和/或活性。例如，在一些实施例中，ELISA测定可以用于评估所提供的药剂与FcRn受体之间的结合。例如，高结合96孔板(例如，Costar 3922)在PBS缓冲液(pH 7.4)中涂覆有中性抗生物素蛋白(赛默飞世尔公司，31000)，用PBST缓冲液pH 7.4(PBS缓冲液pH 7.4，含0.05％tween20)中的5％牛血清白蛋白封闭，然后将Avi标记的FcRn蛋白(百普赛斯(Acro Biosystems)，FCM-H82W4)固定在PBST缓冲液pH 6.0中。在用PBST pH 6.0洗涤之后，抗体(例如，本妥昔单抗等)和其缀合物在PBST pH 6.0中与板上的FcRn结合。使用与HRP缀合的抗人F(ab)2抗体在PBST pH 6.0中检测所有结合的抗体和缀合物。检测试剂是SuperSignal ELISA Pico化学发光底物(赛默飞世尔公司，37069)，然后在Biotek Synergy H1酶标仪上进行发光读段。
实例25：所提供的技术提供高效的反应和靶结合部分的去除。
除其它外，本公开提供了用于从反应产物(例如，包括抗体部分或其片段的产物)中去除包括靶结合部分(例如，包括在反应之后释放的靶结合部分的反应产物)的药剂的技术。在一些实施例中，一种方法包括使包括药剂的组合物与酸性溶液接触，所述药剂包括靶结合部分和反应产物，其中所述靶结合部分与所述反应产物相互作用。在一些实施例中，在与酸性溶液接触之后，将包括靶结合部分的药剂与反应产物分离。在一些实施例中，溶液的pH为约1、2、3或4。在一些实施例中，pH为1。在一些实施例中，pH为2。在一些实施例中，pH为3。在一些实施例中，pH为4。如图23中所证实的，包括从I-44与达土木单抗之间的反应释放的靶结合部分的药剂可以被有效去除，例如在pH 2下。下文以方案作为实例进行描述。
在一些实施例中，甲醇沉淀的抗体缀合物的质谱分析用于评估来自所提供技术的抗体缀合物。在一些实施例中，在缀合之后，使用不同pH的缓冲液从抗体(例如，抗体缀合物产物)中去除结合的离去基团。在一些实施例中甲醇沉淀如下进行：
1.将一体积的纯化抗体缀合物和3体积的甲醇组合。
2.将样品在4℃下温育1小时。
3.在4℃下，以15,500x g离心10分钟。
4.回收上清液并在高速真空中干燥。
5.重悬于0.1％水性甲酸至30uL。
在一些实施例中，用于分析的仪器条件为：
LC:ExionLC
流动相：A：0.1％水性甲酸；B：含0.1％甲酸的95％乙腈
柱：Phenomenex Luna C18(2)柱(100X 2，3um，)
梯度：第1分钟保持5％B；5-50％B超过1-7分钟
MS：Sciex X500B QTOF系统
使用CDS系统通过正校准物进行校准。ESI电压为5.5kV，离子源气体1和2为40psi，气帘气体30(任意单位)，CAD气体7(任意单位)。源温度350℃，DP 100V，累积时间0.25秒，CE0V。TOF-MS在剖面模式下从m/z 300至m/z 5000进行全扫描。
用于采集的Sciex OS1.4。
实例26：缀合方法
用50mM HEPES缓冲液pH 7.5将期望抗体(A＝本妥昔单抗和B＝恩弗妥单抗)缓冲液交换超过8个稀释体积(DV)。缓冲液交换后的靶抗体浓度为>14mg/mL。然后为每种缀合试剂制备DMSO中的10mM储备溶液。将合适的试剂与抗体(A或B)在25℃下用4当量试剂在50mMHEPES缓冲液(pH 7.5)和20％(v/v)DMSO中以10mg/mL的靶抗体浓度缀合1-7天。每24小时通过LC-MS分析缀合反应的药物与抗体比率(DAR)。当DAR达到>1.9(对于线性试剂)或>3.8(对于支化试剂)时，通过UFDF对pH 7.4的PBS进行缓冲液交换超过30个DV以达到大约5-9mg/mL的最终浓度范围。然后分析ADC在各种条件下的质量。结果在表5中列出。
/>
实例27：残留有效载荷分析的代表性实例
残留有效载荷，即失去定向基团(“uABT”)后未缀合的MATE试剂的量，但在缀合反应后未与抗体缀合，可以如下进行定量。溶剂缓冲液I是通过向预混合的有机溶剂(6mLMeOH和10mL CAN)中添加2g NaCl来制备的。将缓冲液混合并搅拌至少1小时，使用前使缓冲液静置至少1小时。上清液是饱和氯化钠溶液。标准缓冲液II是通过将250μL DMSO、700μLPBS和1000μL 6mg/mL赫赛汀(Herceptin)在PBS中混合来制备的。将添加的PBS和DMSO添加到样品中以产生含有15％(v/v)DMSO的3mg/mL(例如，化合物1199或1101)或5mg/mL。然后将100uL样品溶液与150μL溶剂I(样品:沉淀物：1:1.5v/v)混合。将涡旋溶液在室温下温育10分钟。将溶液在室温下以16,000rcf离心10分钟。立即将上清液取出到玻璃瓶中以供分析。有效载荷标准储备溶液(10mM)在使用前储存在-80℃下。用DMSO将参考标准品稀释至1000μM。将10μL的1000μM uABT添加到最终浓度为25μM的390μL的缓冲液II中。标准样品的制备如表6所示。
取200μL每个标准样品，并添加300ul溶剂缓冲液I，以产生最终标准曲线的标准品(10μM、5μM、2μM、1μM、0.5μM、0.2μM、0.1μM)。将涡旋溶液在室温下温育10分钟。将溶液在室温下以16,000rcf离心10分钟。立即将上清液取出到玻璃瓶中以供分析。
有效载荷分析的标准曲线示出于图4A中。可用于化合物1101的有效载荷分析和峰面积的HPLC迹线示出于图5中。使用Luna Omega 1.6μm Polar C18 100A柱收集数据，其中流动相A是含0.1％TFA的H2O，并且流动相B是含0.1％TFA的ACN。
标准曲线和残留有效载荷分析的HPLC条件示出于表7中。
残留有效载荷通过下式进行定量。
/>
其中STD＝最接近测试样品面积的标准样品，C残留＝游离有效载荷的浓度(μmol/L)，并且C蛋白质＝蛋白质的浓度(μmol/L)。
实例28：残留试剂分析
与残留有效载荷分析类似地执行残留试剂分析。溶剂缓冲液I是通过向预混合的有机溶剂6mL MeOH和10mL CAN中添加2g NaCl来制备的。将缓冲液I混合并搅拌至少1小时，并在使用前使溶液静置至少1小时，上清液是饱和氯化钠溶液。溶剂缓冲液II是通过将250μL DMSO、700μL PBS和1000μL 6mg/mL赫赛汀混合来制备的。样品是通过将PBS和DMSO添加到样品中以产生含有15％(v/v)DMSO的3mg/mL来制备的。然后将100uL 3mg/mL溶液与150μL溶剂I(样品:沉淀物：1:1.5v/v)混合。将涡旋溶液在室温下温育10分钟。将溶液在室温下以16,000rcf离心10分钟。将上清液立即取出到玻璃瓶中以供分析。试剂参考标准品由试剂标准储备溶液(10mM)构成。标准品在使用前储存在-80℃下。参考标准品用DMSO稀释至1000μM。将10μL的1000μMuABT添加到最终浓度为25μM的390μL的缓冲液II中。根据表8制备试剂标准曲线样品。
为了创建最终标准曲线，取200μL每个标准样品，并添加300ul溶剂缓冲液I以用于最终标准曲线点(10μM、5μM、2μM、1μM、0.5μM、0.2μM、0.1μM)。将涡旋溶液在室温下温育10分钟。将溶液在室温下以16,000rcf离心10分钟。立即将上清液取出到玻璃瓶中以供分析。除梯度外，残留试剂分析的HPLC参数与前述实例中残留有效载荷分析的参数相同。残留试剂分析的HPLC梯度在表9中提供。残留试剂分析的标准曲线示出于图4B中。用于化合物1101的残留试剂分析和峰面积的HPLC痕量示出于图6中。
使用以下式计算残留试剂。
/>
在残留试剂等式中，STD＝最接近测试样品面积的标准样品，C残留＝游离试剂的浓度(μmol/L)，并且C蛋白质＝蛋白质的浓度(μmol/L)。
实例29：所有抗体药物缀合物(ADS)的残留uABT分析
溶剂缓冲液I和II与用于残留试剂分析的缓冲液I、II相同。样品是通过添加PBS和DMSO以使样品在3mg/mL含有15％(v/v)DMSO来制备的。然后将100uL 3mg/mL溶液与150μL溶剂I混合，并在室温下涡旋10分钟。将溶液在室温下以16,000rcf离心10分钟。将上清液立即取出到玻璃瓶中以供分析。uABT标准储备溶液(10mM)在使用前制备并储存在-80℃下。将参考标准储备溶液用DMSO稀释至1400μM。对于参考标准品，将10μL的1400μM uABT添加到最终浓度为35μM的390μL的缓冲液II中。表10示出了uABT分析标准样品的组成。uABT样品是通过将200μL每个标准样品和300ul的溶剂缓冲液I合并，以提供最终标准曲线(14μM、7μM、3.5μM、1.75μM、0.7μM、0.35μM、0.21μM)。将样品溶液在室温下涡旋10分钟，并在室温下以16,000rcf离心10分钟。立即分析上清液。残留uABT分析的HPLC参数与实例7中给出的残留有效载荷分析的参数相同。
使用以下式计算残留uABT。
在上述uABT式中，STD＝最接近测试样品面积的标准样品，C残留＝游离uABT的浓度(μmol/L)并且C蛋白质＝蛋白质的浓度(μmol/L)。残留uABT分析的标准曲线示出于图4C中。残留uABT分析和峰面积的HPLC痕量示出于图7中。
实例30：DAR分析方法
DAR分析的HPLC和MS参数分别在表11和12中给出。
以下式用于DAR分析。
虽然已经描述了许多实施例，但显而易见的是，可以改变基本实例以提供利用本公开的技术(例如，化合物、药剂、组合物、方法等)的其它实施例。
序列表
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Trp Gly Arg Arg
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Asp Pro Leu Pro Ala Trp Asp Leu Gly Glu Leu Val Trp
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<220>
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<220>
<221> SITE
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<220>
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Asp Pro Leu Pro Ala Trp His Leu Gly Glu Leu Val Trp
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<223> D脯氨酸
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<220>
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<223> X是任何氨基酸
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<221> SITE
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<223> D脯氨酸
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<400> 24
Asp Pro Leu Pro Asp Cys Ala Trp His Leu Gly Glu Leu Val Trp Cys
1 5 10 15
Thr
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<222> (6)..(16)
<223> D脯氨酸
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<223> X是氨基酸
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Cys Asp Cys Ala Trp Xaa Leu Gly Glu Leu Val Trp Cys Thr Cys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
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Phe Asn Met Gln Gln Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Lys Ile Lys Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
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<222> (5)..(34)
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Phe Asn Met Gln Cys Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Lys Ile Lys Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp Cys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
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Arg Gly Asn Cys Ala Tyr His Arg Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr Tyr
1 5 10 15
His
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
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Arg Gly Asn Cys Ala Tyr His Lys Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr Tyr
1 5 10 15
His
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 33
Arg Gly Asn Cys Lys Tyr His Arg Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr Tyr
1 5 10 15
His
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 34
Arg Gly Asn Cys Ala Trp His Arg Gly Lys Leu Val Trp Cys Thr Tyr
1 5 10 15
His
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 35
Arg Gly Asn Cys Lys Trp His Arg Gly Glu Leu Val Trp Cys Thr Tyr
1 5 10 15
His
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 36
Arg Gly Asn Cys Lys Trp His Arg Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr Tyr
1 5 10 15
His
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 37
Arg Gly Asn Cys Lys Tyr His Leu Gly Glu Leu Val Trp Cys Thr Tyr
1 5 10 15
His
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 38
Arg Gly Asn Cys Lys Tyr His Leu Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr Tyr
1 5 10 15
His
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
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Asp Cys Lys Trp His Leu Gly Glu Leu Val Trp Cys Thr
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
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Asp Cys Lys Tyr His Leu Gly Glu Leu Val Trp Cys Thr
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
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Asp Cys Lys Trp His Arg Gly Glu Leu Val Trp Cys Thr
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<223> 合成
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<221> disulfid
<222> (2)..(12)
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Asp Cys Lys Trp His Leu Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr
1 5 10
<210> 43
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
<400> 43
Asp Cys Lys Tyr His Arg Gly Glu Leu Val Trp Cys Thr
1 5 10
<210> 44
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
<400> 44
Asp Cys Lys Tyr His Leu Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr
1 5 10
<210> 45
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
<400> 45
Asp Cys Lys Trp His Arg Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr
1 5 10
<210> 46
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
<400> 46
Asp Cys Lys Tyr His Arg Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr
1 5 10
<210> 47
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 47
Phe Asn Lys Gln Cys Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Arg Ile Arg Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp Cys
<210> 48
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 48
Phe Asn Met Gln Cys Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Arg Ile Arg Ser Ile Lys Asp
20 25 30
Asp Cys
<210> 49
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 49
Phe Asn Met Gln Cys Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Lys Glu Gln Arg Asn Ala Arg Ile Arg Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp Cys
<210> 50
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 50
Phe Asn Met Gln Cys Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Arg Ile Arg Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp Cys
<210> 51
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 51
Arg Gly Asn Cys Ala Trp His Leu Gly Gln Leu Val Trp Cys Lys Tyr
1 5 10 15
His
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 52
Arg Gly Asn Cys Ala Trp His Leu Gly Glu Leu Val Trp Cys Lys Tyr
1 5 10 15
His
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 53
Arg Gly Asn Cys Ala Tyr His Leu Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr Lys
1 5 10 15
His
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 54
Arg Gly Asn Cys Ala Tyr His Leu Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr Tyr
1 5 10 15
Lys
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<400> 55
Arg Gly Asn Cys Ala Tyr His Arg Gly Gln Leu Val Trp Cys Thr Lys
1 5 10 15
His
<210> 56
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 56
Lys Asn Met Gln Cys Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Arg Ile Arg Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp Cys
<210> 57
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 57
Phe Asn Met Gln Cys Gln Lys Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Arg Ile Arg Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp Cys
<210> 58
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 58
Phe Asn Met Gln Cys Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Lys His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Arg Ile Arg Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp Cys
<210> 59
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 59
Phe Asn Met Gln Cys Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Lys Ala Arg Ile Arg Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp Cys
<210> 60
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 60
Phe Asn Met Gln Cys Lys Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Arg Ile Arg Ser Ile Arg Asp
20 25 30
Asp Cys
<210> 61
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (5)..(34)
<400> 61
Phe Asn Met Gln Cys Gln Arg Arg Phe Tyr Glu Ala Leu His Asp Pro
1 5 10 15
Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Arg Ile Arg Ser Ile Arg Lys
20 25 30
Asp Cys
<210> 62
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> Acetylation
<222> (1)..(1)
<220>
<221> Disulfid
<222> (4)..(14)
<223> X是任何K或R
<220>
<221> SITE
<222> (8)..(8)
<223> X是任何K或R
<400> 62
Gly Pro Asp Cys Ala Tyr His Xaa Gly Glu Leu Val Trp Cys Thr Phe
1 5 10 15
His
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (1)..(11)
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> SITE
<222> (5)..(7)
<223> X是任何氨基酸
<400> 63
Cys Xaa Tyr His Xaa Xaa Xaa Leu Val Trp Cys
1 5 10
<210> 64
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(1)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
<220>
<221> SITE
<222> (3)..(3)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> SITE
<222> (6)..(8)
<223> X是任何氨基酸
<400> 64
Xaa Cys Xaa Tyr His Xaa Xaa Xaa Leu Val Trp Cys
1 5 10
<210> 65
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (1)..(11)
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> SITE
<222> (5)..(7)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> SITE
<222> (12)..(12)
<223> X是任何氨基酸
<400> 65
Cys Xaa Tyr His Xaa Xaa Xaa Leu Val Trp Cys Xaa
1 5 10
<210> 66
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> site
<222> (1)..(3)
<223> X是任何氨基酸，并且至多三个可以不存在
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<220>
<221> site
<222> (5)..(5)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (8)..(10)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (15)..(17)
<223> X是任何氨基酸，并且至多三个可以不存在
<400> 66
Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Tyr His Xaa Xaa Xaa Leu Val Trp Cys Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa
<210> 67
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> site
<222> (1)..(1)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
<220>
<221> site
<222> (3)..(3)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (6)..(8)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (13)..(15)
<223> X是任何氨基酸
<400> 67
Xaa Cys Xaa Tyr His Xaa Xaa Xaa Leu Val Trp Cys Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
<210> 68
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> site
<222> (1)..(3)
<223> X是任何氨基酸，并且其中的至多两个可以不存在
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<220>
<221> site
<222> (5)..(6)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (8)..(8)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (10)..(10)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (15)..(17)
<223> X是任何氨基酸，并且其中的至多两个可以不存在
<400> 68
Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa His Xaa Gly Xaa Leu Val Trp Cys Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa
<210> 69
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
<220>
<221> site
<222> (2)..(4)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (6)..(6)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (8)..(8)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (13)..(15)
<223> X是任何氨基酸
<400> 69
Asp Cys Xaa Xaa His Xaa Gly Xaa Leu Val Trp Cys Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
<210> 70
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (2)..(12)
<220>
<221> site
<222> (3)..(4)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (6)..(6)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (8)..(8)
<223> X是任何氨基酸
<400> 70
Asp Cys Xaa Xaa His Xaa Gly Xaa Leu Val Trp Cys Thr
1 5 10
<210> 71
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> disulfid
<222> (4)..(14)
<220>
<221> site
<222> (5)..(6)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (8)..(8)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (10)..(10)
<223> X是任何氨基酸
<220>
<221> site
<222> (15)..(17)
<223> X是任何氨基酸
<400> 71
Arg Gly Asn Cys Xaa Xaa His Xaa Gly Xaa Leu Val Trp Cys Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa

Claims (30)

1.一种化合物，其具有式R-I的结构：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是RLG-LLG；
RLG是Rc-(Xaa)z-、核酸部分或小分子部分；
每个Xaa独立地是氨基酸或氨基酸类似物的残基；
t是0-50；
z是1-50；
每个Rc独立地是-La-R'；
每个La独立地是共价键、或选自具有1-5个杂原子的C1-C20脂肪族或C1-C20杂脂肪族的任选地经取代的二价基团，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-或-C(O)O-；
每个-Cy-独立地是任选地经取代的二价单环、双环或多环基团，其中每个单环独立地选自C3-20脂环族环、C6-20芳基环、具有1-10个杂原子的5-20元杂芳基环和具有1-10个杂原子的3-20元杂环基环；
LLG是-LLG1-、-LLG1-LLG2-、-LLG1-LLG2-LLG3-或-LLG1-LLG2-LLG3-LLG4-；
RG是-LRG1-LRG2-、-LLG4-LRG1-LRG2-、-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-、-LLG2-LLG3-LLG4-LRG1-LRG2-；
LLG1、LLG2、LLG3、LLG4、LRG1、LRG2和LRM中的每一个独立地是L；
每个L独立地是共价键、或二价任选地经取代的直链或支链C1-100基团，所述基团包括一个或多个脂肪族部分、芳基部分、各自独立地具有1-20个杂原子的杂脂肪族部分、各自独立地具有1-20个杂原子的杂芳香族部分或此类部分中的任何一个或多个的任何组合，其中所述基团的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：C1-6亚烷基、C1-6亚烯基、具有1-5个杂原子的二价C1-6杂脂肪族基团、-c≡c-、-Cy-、-C(R')2-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-C(O)C(R')2N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)O-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-C(O)S-、-C(O)O-、-P(O)(OR')-、-P(O)(SR')-、-P(O)(R')-、-P(O)(NR')-、-P(S)(OR')-、-P(S)(SR')-、-P(S)(R')-、-P(S)(NR')-、-P(R')-、-P(OR')-、-P(SR')-、-P(NR')-、氨基酸残基或-[(-O-C(R')2-C(R')2-)n]-，其中n是1-20；
每个R'独立地是-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R；
每个R独立地是-H，或任选地经取代的基团，所述基团选自C1-30脂肪族、具有1-10个杂原子的C1-30杂脂肪族、C6-30芳基、C6-30芳基脂肪族、具有1-10个杂原子的C6-30芳基杂脂肪族、具有1-10个杂原子的5-30元杂芳基和具有1-10个杂原子的3-30元杂环基，或者
两个R基团任选地且独立地一起形成共价键，或者：
同一原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与所述原子一起形成除所述原子外还具有0-10个杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环；或者
两个或更多个原子上的两个或更多个R基团任选地且独立地与其中间原子一起形成除所述中间原子外还具有0-10个杂原子的任选地经取代的3-30元单环、双环或多环；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分。
2.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中LG是或包括与靶药剂结合的靶结合部分，其中所述靶药剂是抗体药剂。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或盐，其中LG是或包括与抗体药剂的Fc区结合的靶结合部分。
4.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或盐，其中LG是或包括与靶药剂结合的靶结合部分，其中所述靶药剂是抗体药剂，所述抗体药剂是或包括恩弗妥单抗(enfortumab)、本妥昔单抗(brentuximab)或曲妥珠单抗(trastuzumab)。
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或盐，其中LG是或包括选自表A-1中的A-1至A-50中的任一个的基团。
6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或盐，其中RLG是或包括DCAWXLGELVWCT(SEQ ID NO:18)，其中两个半胱氨酸残基任选地形成二硫键，并且X是氨基酸残基。
7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或盐，其中所述化合物包括选自以下的一个或多个基团：
8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或盐，其中LRM是或包括-(CH2CH2O)n-，其中n在每次出现时独立地选自整数2、3、4、5、6、7和8。
9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或盐，其中LRM是或包括-(CH2CH2O)n-(CH2)n-NHC(O)-(CH2)n-、-[(CH2CH2O)n-(CH2)n-NHC(O)]m-(CH2)n-和-(CH2CH2O)n-(CH2)n-N((CH2CH2O)n-(CH2)n-)((CH2CH2O)n-(CH2)n-)，其中m在每次出现时独立地选自整数1、2、3和4。
10.一种制备具有P-I的结构的药剂的方法：
P-LPM-MOI，
(P-I)
或其盐，其中：
P是靶药剂部分；
LPM是接头；并且
MOI为是或包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分，
所述方法包括以下步骤：
1)使靶药剂与具有式R-I的结构的反应配偶体接触：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与靶药剂结合的靶结合部分的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI为是或包括MMAE的所述所关注部分，以及
2)形成具有式P-I的结构的药剂；或者
一种制备具有P-II的结构的药剂的方法：
P-N-LPM-MOI，
(P-II)
其中：
P-N是包括赖氨酸残基的蛋白药剂部分；
LPM是接头；并且
MOI为是或包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分；
所述方法包括：
使P-N与具有式R-I的结构的反应配偶体接触：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与P-N结合的蛋白结合部分的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI为是或包括MMAE的所述所关注部分。
11.根据权利要求10所述的方法，其中靶药剂是或包括抗体药剂。
12.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗体药剂是或包括抗CD30单克隆抗体，如本妥昔单抗或抗粘连蛋白-4-单克隆抗体，如恩弗妥单抗。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述所关注部分在IgG1重链的K246或K248或对应位置处选择性地与所述抗体药剂连接。
14.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述所关注部分在IgG2重链的K251或K253或对应位置处选择性地与所述抗体药剂连接。
15.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述所关注部分在IgG4重链的K239或K241或对应位置处选择性地与所述抗体药剂连接。
16.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中所述接触和形成步骤在一个化学反应中进行。
17.一种组合物，其提供多种药剂，所述多种药剂中的每一种独立地包括：
抗体药剂部分；
所关注部分，所述所关注部分是或包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)；以及
任选地接头部分，所述接头部分连接所述抗体药剂部分和所述所关注部分；
其中所述多种药剂中的所述抗体药剂部分包括共同氨基酸序列或能够与共同抗原结合，并且所述多种药剂中的药剂共享独立地在所述抗体药剂部分的至少一个共同氨基酸残基处的共同修饰；并且
其中包括包含所述共同氨基酸序列或能够与所述共同抗原结合的抗体药剂部分以及所述所关注部分的所有药剂中的约1％-100％是所述多种药剂中的药剂。
18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述多种药剂中的药剂的抗体药剂部分能够与共同抗原结合。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中共同氨基酸残基是IgG1抗体重链的K246或K248或与其相对应的氨基酸残基。
20.根据权利要求18所述的组合物，其中共同氨基酸残基是IgG2抗体重链的K251或K253或与其相对应的氨基酸残基。
21.根据权利要求18所述的组合物，其中共同氨基酸残基是IgG4抗体重链的K239或K241或与其相对应的氨基酸残基。
22.根据权利要求18所述的组合物，其中所述多种药剂中的每种药剂不含-S-Cy-，其中-Cy-是任选地经取代的5元单环，不含不是由半胱氨酸残基形成的-S-S-并且不含不具有半胱氨酸残基的-SH或其盐形式。
23.根据权利要求18所述的组合物，其中所述多种药剂中的每种药剂不含-S-CH2-CH2-。
24.根据权利要求18所述的组合物，其包括选自以下的一个或多个基团：
25.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中RLG是
肽或包括以下化合物中的至少一种的氨基酸残基的Rc-(Xaa)z-：
或其盐。
26.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中所述化合物选自以下：
/>
27.一种化合物，其具有式R-I的结构：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与靶药剂结合的靶结合部分的基团，RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI是包括MMAE的所关注部分，
其中所述靶药剂是包括包含K246或K248的IgG重链的抗体，并且
其中所述靶结合部分被配置成结合所述抗体以使所述反应性基团与所述IgG重链的K246或K248接近，从而使得K246或K248与所述反应性基团之间能够发生反应，所述反应引起包括LRM-MOI的部分与K246或K248连接并将含靶结合部分的基团从所述化合物中排出。
28.一种化合物，其具有式R-I的结构：
LG-RG-LRM-MOI，
(R-I)
或其盐，其中：
LG是包括与靶药剂结合的靶结合部分的基团，
RG是反应性基团；
LRM是接头；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分。
29.一种组合物，其包括：
第一化合物，所述第一化合物具有式(P-II)的结构：
P-N-LPM-MOI(P-II)，
其中：
P-N是包括赖氨酸残基的蛋白药剂部分；
LPM是接头；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分；以及
第二化合物，所述第二化合物具有以下结构：
LG-OH(LG-I)，
其中LG是包括与靶药剂结合的靶结合部分的基团。
30.根据权利要求1所述的组合物，其进一步包括：
第三化合物，所述第三化合物具有式(R-I)：
LG-RG-LRM-MOI(R-I)
其中：
LG是包括与靶药剂结合的靶结合部分的基团，所述基团与式(LG-I)中的LG相同；
RG是反应性基团；
LRM是接头，所述接头与式(P-II)中的接头相同；并且
MOI是包括一甲基澳瑞他汀E(MMAE)的所关注部分；
第四化合物，所述第四化合物具有式(R-III)：
HO-RG-LRM-MOI(R-III)
或其组合。
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