CN117338717A - 一种黄芩素外用制剂及其在特应性皮炎治疗中的应用 - Google Patents

一种黄芩素外用制剂及其在特应性皮炎治疗中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种黄芩素外用制剂及其在特应性皮炎治疗中的应用，该制剂有效成分为黄芩素，配合药用辅料制成能够外用于皮肤和粘膜上的剂型。该外用制剂能够用于特应性皮炎的治疗应用，具有使用方便、起效显著的特点，具有广阔的应用前景。

Description

一种黄芩素外用制剂及其在特应性皮炎治疗中的应用
技术领域
本发明属于医药制剂和应用，具体涉及一种黄芩素外用制剂及其在特应性皮炎治疗中的应用。
背景技术
特应性皮炎是一种慢性、易复发的炎症性皮肤疾病，最基本特征是皮肤干燥、慢性湿疹样皮肤损伤，并伴有明显瘙痒。在过去的几十年中，特应性皮炎的患病率和发病率不断增加。有数据显示，全球儿童的患病率为15％至20％，成人的患病率高达10％，特应性皮炎已成为第15位最常见的非致命性疾病和疾病负担最高的皮肤病。根据《中国特应性皮炎诊疗指南》(2020版)用药推荐，药物治疗分为外用药物治疗和系统药物治疗。外用药物治疗的一线用药为糖皮质激素，但长期大面积使用糖皮质激素会导致皮肤和系统的不良反应。外用药物治疗的维持疗法为外用抗炎药物，如中弱效糖皮质激素或钙调神经磷酸酶抑制剂减小复发，其不良反应主要为局部灼烧感和刺激感。系统药物治疗主要用于特应性皮炎的辅助治疗，为口服抗组胺药物、免疫抑制剂、糖皮质激素。基于此，一种可用于特应性皮炎治疗，安全且有效的外用药物制剂为社会亟需。
黄芩素(Baicalein)系从中药黄芩中提取分离所得单体化合物，化学名为5，6，7-trihydroxyflavone(5，6，7-三羟基黄酮)，分子式为C15H10O5(MW.270.24)。黄芩素具有抗菌，抗病毒，抗过敏，免疫调节等多种药理作用，是黄芩中含量最高的黄酮类化合物之一。
目前，尚无专利报道黄芩素外用制剂在治疗特应性皮炎的应用。本发明设计采用外用制剂剂型，探索黄芩素在特应性皮炎的治疗应用。
发明内容
发明目的：本发明的目的是提供一种黄芩素外用制剂并且证明其在特应性皮炎治疗中的应用效果良好。
本发明所述化合物黄芩素，其结构式如下式所示：
技术方案：本发明所述的黄芩素的外用制剂，是以PEG300、PEG400、丙二醇、乙醇中任意一种溶剂或多种溶剂混合所得的澄清溶液溶解黄芩素或其药学上可接受的盐的原料药粉末所制得的药物液体制剂。
所述黄芩素的外用制剂，所述药物液体制剂为喷雾剂。
所述黄芩素的外用制剂，药物液体制剂倾倒并封闭在单一开口的容器中，所述药物液体制剂通过该开口容器的配件并以大气压强的方式从容器中释放到大气环境，所述药物液体制剂进入大气环境后能够形成粒径为微米级别的液体颗粒，所述液体颗粒能够附着在生物体角质细胞外层或黏膜上皮细胞上。
所述黄芩素的外用制剂，所述药物液体制剂或再进一步增加药用辅料提高制剂的粘稠度后制成软膏剂、凝胶剂。优选地，进一步改变制剂的粘稠度，从而可以不通过大气压原理构成的特定容器和装置实现制剂在角质细胞和粘膜细胞层上的附着。
所述黄芩素的外用制剂，所述药用辅料包括溶剂、油相基质、乳化剂、增稠剂、pH调节剂、抑菌剂中的一种或几种；其中，溶剂包括甘油、水，油相基质包括液体石蜡、凡士林、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白蜂蜡，乳化剂包括吐温80、聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40，增稠剂包括羧甲基纤维素钠、黄原胶、羟丙甲纤维素钠、水性凝胶基质卡波姆、壳聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素钠，pH调节剂包括三乙醇胺、醋酸、盐酸，抑菌剂包括苯扎氯铵。
所述黄芩素的外用制剂，所述喷雾剂为澄清透明溶液。
所述黄芩素的外用制剂，所述澄清透明溶液为肉眼见无色、浅黄色、明黄色、深黄色的溶液。
所述黄芩素的外用制剂在特应性皮炎药物中的应用。
所述应用，所述特应性皮炎为生物体接触不明物质或不明原因所致炎症反应并表现在皮肤或粘膜表面的病理现象。
所述应用，在接触生物体具有特应性皮炎的角质细胞或粘膜细胞层后发挥对炎症的抑制作用。
所述黄芩素的外用制剂中，黄芩素与其它溶剂或辅料的质量体积比为0.005-0.015g/mL，优选0.01g/mL。
将黄芩素制备为可用于特应性皮炎的外用制剂，黄芩素外用制剂的抗炎、抗菌的药理作用有利于慢性湿疹样皮肤损伤的恢复，同时黄芩素的抗过敏作用和免疫调节作用，也有利于减轻特应性皮炎的瘙痒的临床症状。
有益效果：该外用制剂可显著改善特应性皮炎皮肤组织病理指征，降低病变部位炎症因子的转录水平，显著降低小鼠特应性皮炎皮肤组织病变部位经皮失水程度，修复皮肤屏障，其效果优于特应性皮炎常用药左西替利嗪。与现有技术相比，黄芩素外用制剂对黄芩素常用的给药途径(口服)在特应性皮炎上具有更显著的治疗作用。本发明通过实验证明，黄芩素外用制剂具有显著的治疗特应性皮炎的效果。
附图说明
图1为实施例4中黄芩素外用制剂外观、性状图片；
图2为实施例5中黄芩素外用制剂对特应性皮炎样小鼠皮肤的影响结果；
图3为实施例5中黄芩素外用制剂对特应性皮炎样小鼠皮肤组织病理变化的影响结果；
图4为实施例5中黄芩素外用制剂对特应性皮炎样小鼠皮肤中肥大细胞浸润的影响；
图5为对比例1中黄芩素灌胃及外用制剂对湿疹样小鼠表皮内披蛋白及丝聚蛋白的影响；
图6为对比例1中黄芩素灌胃及外用制剂对湿疹样小鼠皮肤肥大细胞浸润的影响。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
一种黄芩素喷雾剂外用制剂的制备方法
黄芩素疏水性强，水溶性差。本实施例对黄芩素在不同辅料中的溶解性进行了系统研究。
研究方法：
方法一：取原料药黄芩素(批号：HR228W3)过量置于适量辅料或辅料溶液中，超声观察溶解现象。采用10000rpm离心10min后，取上清液经0.45μm PES滤膜过滤，取滤液经稀释或不稀释采用HPLC方法或紫外分光光度法进行含量检测。
方法二：称取原料药黄芩素(批号：HR228W3)，加入至辅料中，超声观察溶解现象，若溶清，继续加入，记录加入的原料药用量。
表1黄芩素在不同辅料或辅料溶液中的饱和溶解度
介质 饱和溶解度(mg/mL)
单亚油酸甘油酯 0.2351
单油酸甘油酯 0.2148
中链甘油酸酯 0.0625
Labrasol 3.2761
丙二醇 11.67
5％吐温80 0.9673
PEG300【1】 ＞50mg/mL
PEG400【1】 ＞50mg/mL
50％乙醇 1.45mg/mL
75％乙醇 5.9mg/mL
备注【1】：除此辅料采用方法二外，其余辅料均采用方法一。
以上结果(表1)表明：黄芩素在PEG300、PEG400、丙二醇、75％乙醇中具有较高的溶解度，因此本发明采用PEG300、丙二醇、乙醇为溶剂制备黄芩素喷雾剂。
按下列处方工艺制备：
表2黄芩素喷雾剂处方(按300mL装)
制备方法：
1、量取处方量PEG300、丙二醇(若处方中有)、乙醇(若处方中有)混合均匀，得混合物1；
2、称定处方量黄芩素，加入至混合物1中，搅拌均匀后超声5～30min，溶清后，得混合物2；
3、量取处方量纯化水，加入至混合物2中，搅拌均匀，得黄褐色澄清溶液，即得。
表3黄芩素喷雾剂涂抹感
以上结果(表3)表明：丙二醇的用量增加时，涂抹的黏腻感增加；当乙醇用量增加时，涂抹感较清爽。考虑到特应性皮炎患者的基本皮肤症状为：皮肤干燥，慢性湿疹状，临床上用药需注意保湿性。而丙二醇性质与甘油性质接近，保湿性良好，因此将喷雾剂1作为最优处方。
实施例2
一种黄芩素通过大气压装置的外用制剂的稳定性考察
按实施例1中最优处方配制外用制剂，置于加速条件(40℃±2℃，RH 75％±5％)、长期条件(25℃±2℃，RH 60％±5％)下，分别于0、5、9、15天取样检测含量和有关物质，其中有关物质统计方法为面积归一化法。
表4黄芩素大气压装置的喷雾剂外用制剂6处方(按300ml装)
制备工艺：量取处方量PEG300、丙二醇混合均匀，得混合物1；称定处方量黄芩素，加入至混合物1中，搅拌均匀后超声5～30min，溶清后，得混合物2；量取处方量纯化水，加入至混合物2中，搅拌均匀，得黄褐色澄清溶液，即得。
表5黄芩素大气压装置的喷雾剂外用制剂6稳定性测试结果
以上结果(表5)表明外用制剂在加速条件(40℃±2℃，RH 75％±5％)、长期条件(25℃±2℃，RH 60％±5％)15天内含量、有关物质均较稳定。
实施例3
一种黄芩素进一步添加药物辅料后的外用制剂的制备方法之一
黄芩素原料药颜色较深，通过大气压释放制剂液体颗粒的形式易沾染衣物，不便清洗，粘附性低。考虑到临床病人使用的顺应性、使用便利性，本实施例尝试将该制剂进一步添加合适的药用辅料，改良制剂的粘稠度，增加药物的粘附性，并使药物可以不通过大气压装置进行释放。按下表处方、工艺制备：
表6黄芩素进一步添加药物辅料后的外用制剂处方
制备方法：
1、油相制备：称定处方量油相，75℃加热融化备用；
2、含药溶液制备：称定处方量API、PEG300、丙二醇、乙醇，混合均匀，75℃加热溶清，作为含药溶液；备用；
3、水相制备：称定处方量纯化水，加热至75℃后加入羧甲基纤维素钠，溶解后，加入聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40，备用；
4、制剂制备：保持温度75℃，缓慢将油相加入至水相中，边加入边高剪切3000rpm～6000rpm，时间5～30min。得均匀制剂后，将含药溶液缓慢加入，继续高剪切，3000rpm～6000rpm，时间5～30min。降温即得。
表7制剂外观性状
以上结果(表7)表明，制剂2～4均可制备出冷却后粘度适中，均匀不分层。
实施例4
一种黄芩素乳膏剂进一步添加药物辅料后的外用制剂的制备方法之二
为了增加制剂的易涂展、舒适感、无油腻、易洗除、不妨碍皮肤的正常生理功能的优势，基于此，本实施例提供一种新型制剂的制备方法，探索其可行性。
按下列处方、工艺制备：
表8黄芩素进一步添加药物辅料后的外用制剂处方
制备方法：
1、称定处方量卡波姆加入至处方量水中，放置过夜，待自然溶胀开后，加入处方量三乙醇胺，边加边搅拌后，形成透明胶状液体；
2、含药溶液制备：称定处方量黄芩素、PEG300、丙二醇(若处方中有)、甘油(若处方中有)、乙醇(若处方中有)，搅拌均匀后，超声5～30min，溶清后，加入处方量50％苯扎氯铵乙醇溶液，混合均匀即得，备用；
3、将含药溶液加入至“步骤1”中胶状液体，边加边搅拌，混合均匀，成黄色透明凝胶，即得。
表9制剂涂抹感
对比制剂不同处方的外观性状(图1)、涂抹感受(表9)，结果表明，制剂8可获得较好的外观性状和较舒适的涂抹感受。
实施例5
黄芩素外用制剂在治疗特应性皮炎中的主要药效学作用研究
1.实验材料
(1)药物
实施例1制备的黄芩素外用制剂(10mg/ml)
(2)实验动物
C57BL/6J小鼠，雌性，8周龄，饲养于SPF环境，温度20～25℃，相对湿度30～70％，12：12h光暗照明；自由饮水及采食。
(3)试剂
1)卡泊三醇(Calcipotriol/MC903)：MCE公司，货号：HY-10001。
2)阳性药：左西替利嗪：MCE公司，货号：HY-B0814。
3)PBS溶液：NaCl 8.0g、KH2PO4 2.0g、Na2HPO4H2O 1.56g、KCl 0.20g，用1000mL超纯水溶解，高压蒸汽灭菌，4℃保存。
2.实验方法：
选取19只模型小鼠按体重随机分为5组，分别为空白对照组、模型+溶剂对照组、阳性药对照组、黄芩素低剂量组和黄芩素高剂量组，每组6只。分组情况见下表：
表10动物分组
除空白组外，其余各组小鼠左耳皮肤涂抹MC903 10nmol，建立小鼠特应性皮炎模型。造模后按分组给予不同剂量的受试样品进行治疗，受试样品组通过涂抹小鼠患处皮肤给药，每天给药1次，连续给药13天，阳性药对照组灌胃给药，每天给药1次，连续给药13天，给药体积为0.1mL/10g。实验前七天每三天检测一次小鼠的耳缘厚度，实验后七天每两天检测一次。在实验最后一天，脱颈椎处死小鼠，取相同面积的耳组织称量其重量。
通过HE染色分析小鼠耳组织病理变化情况，计算统计其表皮厚度。
通过实时荧光定量PCR检测小鼠造模皮肤组织中IL-4和TSLP的转录水平。
3.统计学方法：
所有计量数据以表示，多组间比较采用单因素方差(ANOVA)分析。P＜0.05认为差异有统计学意义。
4.实验结果：
表11外用黄芩素对小鼠耳缘厚度的影响(n＝6)
#P＜0.05，####P＜0.0001与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001与模型+溶剂对照组比较。
表12外用黄芩素对小鼠耳缘厚度的影响(n＝6)
#P＜0.05，####P＜0.0001与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001与模型+溶剂对照组比较。
表13外用黄芩素对特应性皮炎样小鼠表皮厚度的影响
#P＜0.05，####P＜0.0001与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001与模型+溶剂对照组比较。
表14外用黄芩素对特应性皮炎小鼠特定细胞因子表达的影响(n＝6)
#P＜0.05，####P＜0.0001与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001与模型+溶剂对照组比较。
表15外用黄芩素对特应性皮炎样小鼠皮肤中肥大细胞浸润的影响
#P＜0.05，####P＜0.0001与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001与模型+溶剂对照组比较。
外用黄芩素对MC903诱导的特应性皮炎样症状(图2)表明，外用黄芩素可显著缓解特应性皮炎样症状。
外用黄芩素对小鼠的耳缘厚度测量结果(表11、表12)表明，对照组小鼠耳缘厚度在实验期间保持在一定范围内波动，并无明显增厚；模型组小鼠耳缘厚度随着造模时间的推移耳缘厚度明显增加；黄芩素外用制剂在一定程度上抑制了小鼠耳缘厚度的增加，且作用效果与阳性药相当。
外用黄芩素对小鼠耳组织病理变化(图3和表13)表明，外用黄芩素能显著抑制小鼠表皮的增厚。
外用黄芩素对IL-4和TSLP的转录水平情况(表14)表明，相比与空白对照组，模型组中的IL-4和TSLP的转录水平显著增加。在外用黄芩素治疗的组别中，黄芩素显著降低了IL-4和TSLP的转录水平，达到了降低了特异性细胞因子的水平，改善特应性皮炎症状的作用。
外用黄芩素对特应性皮炎样小鼠皮肤中肥大细胞浸润结果(表15、图4)表明，相比与空白对照组，模型组中的肥大细胞水平显著增加，在外用黄芩素治疗的组别中，黄芩素显著降低了肥大细胞水平，且作用与阳性药相当。
综上结果表明，黄芩素外用制剂可以发挥治疗特应性皮炎的作用。
对比例1
黄芩素常用的口服给药途径和本发明的黄芩素外用制剂(实施例1)的对比试验。动物的实验研究结果显示，黄芩素口服给药和外用给药对特应性皮炎皆具有显著的抑制作用，但黄芩素外用制剂的治疗效果更佳，其在小鼠皮肤厚度上的抑制作用(表16)、对小鼠表皮内披蛋白及丝聚蛋白的影响(图5)及对小鼠皮肤肥大细胞浸润的抑制能力(图6)均优于黄芩素常用的口服给药途径。
表16黄芩素灌胃给药与皮肤制剂在AD样小鼠模型的药效对比
#P＜0.05，####P＜0.0001与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001与模型对照组比较。
对比例2
已公开技术曾揭露了一种黄芩素外用制剂(后称“制剂BE”)在特应性皮炎上的应用[Therapeutic effects of Baicalein on atopic dermatitis-like skin lesions ofNC/Nga mice induced by dermatophagoides pteronyssinus，IntImmunopharmacol.2010 Sep；10(9)：1142-8.doi：10.1016/j.intimp.2010.06.020.Epub2010 Jul 9.]。该技术数据结果显示，制剂BE对特应性皮炎中炎症指标IL-4的降低水平为31.16％，低于本技术实现的92.61％的降低水平。说明本技术制备的黄芩素外用制剂所产生的治疗效果相比现有技术具有更明显的优越性。

Claims (10)

1.一种黄芩素的外用制剂，其特征在于，是以PEG300、PEG400、丙二醇、乙醇中任意一种溶剂或多种溶剂混合所得的澄清溶液溶解黄芩素或其药学上可接受的盐的原料药粉末所制得的药物液体制剂。
2.根据权利要求1所述黄芩素的外用制剂，其特征在于，所述药物液体制剂为喷雾剂。
3.根据权利要求2所述黄芩素的外用制剂，其特征在于，药物液体制剂倾倒并封闭在单一开口的容器中，所述药物液体制剂通过该开口容器的配件并以大气压强的方式从容器中释放到大气环境，所述药物液体制剂进入大气环境后能够形成粒径为微米级别的液体颗粒，所述液体颗粒能够附着在生物体角质细胞外层或黏膜上皮细胞上。
4.根据权利要求1所述黄芩素的外用制剂，其特征在于，所述药物液体制剂或再进一步增加药用辅料提高制剂的粘稠度后制成软膏剂、凝胶剂。
5.根据权利要求4所述黄芩素的外用制剂，其特征在于，所述药用辅料包括溶剂、油相基质、乳化剂、增稠剂、pH调节剂、抑菌剂中的一种或几种；其中，溶剂包括甘油、水，油相基质包括液体石蜡、凡士林、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白蜂蜡，乳化剂包括吐温80、聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40，增稠剂包括羧甲基纤维素钠、黄原胶、羟丙甲纤维素钠、水性凝胶基质卡波姆、壳聚糖、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素钠，pH调节剂包括三乙醇胺、醋酸、盐酸，抑菌剂包括苯扎氯铵。
6.根据权利要求2所述黄芩素的外用制剂，其特征在于，所述喷雾剂为澄清透明溶液。
7.根据权利要求6所述黄芩素的外用制剂，其特征在于，所述澄清透明溶液为肉眼见无色、浅黄色、明黄色、深黄色的溶液。
8.权利要求1-7任一项所述黄芩素的外用制剂在特应性皮炎药物中的应用。
9.根据权利要求8所述应用，其特征在于，所述特应性皮炎为生物体接触不明物质或不明原因所致炎症反应并表现在皮肤或粘膜表面的病理现象。
10.根据权利要求8所述应用，其特征在于，在接触生物体具有特应性皮炎的角质细胞或粘膜细胞层后发挥对炎症的抑制作用。
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