CN117337178A - 化合物及其用途 - Google Patents

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CN117337178A
CN117337178A CN202280034477.4A CN202280034477A CN117337178A CN 117337178 A CN117337178 A CN 117337178A CN 202280034477 A CN202280034477 A CN 202280034477A CN 117337178 A CN117337178 A CN 117337178A
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cancer
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M·内瑟顿
F·布鲁赛尔
J·邓
J·H·沃伊格特
K·J·威尔逊
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Fuhong Treatment Co
Original Assignee
Fuhong Treatment Co
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Abstract

本公开的特征在于可用于治疗BAF复合物相关病症的化合物。

Description

化合物及其用途
背景技术
本发明涉及可用于调节BRG1或BRM相关因子(BAF)复合物的化合物。具体地，本发明涉及可用于治疗与BAF复合物功能相关的病症的化合物。
染色质调控对于基因表达至关重要，并且ATP依赖性染色质重塑是此类基因表达发生的机制。人转换/蔗糖非发酵性(SWI/SNF)染色质重塑复合物(也称为BAF复合物)具有两种SWI2样ATP酶，称为BRG1(Brahma相关基因-1)和BRM(Brahma)。转录激活因子BRG1(也称为ATP依赖性染色质重塑因子SMARCA4)由染色体19上的SMARCA4编码。BRG1在一些癌症肿瘤中过表达，并且是癌细胞增殖所必需的。BRM(也称为可能的全局转录激活因子SNF2L2和/或ATP依赖性染色质重塑因子SMARCA2)由染色体9上的SMARCA2基因编码，并且已被证明对于以BRG1功能缺失突变为特征的细胞中的肿瘤细胞生长是必需的。BRG和/或BRM的失活导致细胞中的下游效应，包括细胞周期停滞和肿瘤抑制。
发明内容
本发明的特征在于可用于调节BAF复合物的化合物。在一些实施方案中，该化合物可用于治疗与BAF复合物的改变相关的病症，例如与BRG1和BRM蛋白之一或两者的改变相关的病症。本发明的化合物单独或与其他药物活性剂组合可用于治疗此类病症。
一方面，本发明的特征在于具有式I或II的结构的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
环系A为5元至9元杂环基或杂芳基；
m为0、1、2或3；
k为0、1或2；
每个R1独立地为卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C8环烷基或任选取代的C2-C9杂环基；
每个X独立地为卤素；
L为接头；并且
B为降解部分。
在一些实施方案中，
环系A为5元至9元杂环基或杂芳基；
m为0、1、2或3；
k为0、1或2；
每个X独立地为卤素；
L为接头；并且
B为降解部分。
在一些实施方案中，化合物具有式I-A或II-A的结构：
其中虚线键表示单键或双键。
在一些实施方案中，化合物具有式I-B的结构：
在一些实施方案中，化合物具有式I-C的结构：
其中每个R1独立地为任选取代的C1-C6烷基。
在一些实施方案中，化合物具有式I-D的结构：
其中每个R1独立地为任选取代的C1-C6烷基。
在一些实施方案中，化合物具有式I-E的结构：
在一些实施方案中，化合物具有式I-F的结构：
在一些实施方案中，m为0。
在一些实施方案中，化合物具有式I-G或II-G的结构：
在一些实施方案中，化合物具有式I-H或II-H的结构：
在一些实施方案中，降解部分B具有式A-1的结构：
其中
Y1为
RA5为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RA6为H或任选取代的C1-C6烷基；并且RA7为H或任选取代的C1-C6烷基；或者RA6和RA7与各自键合的碳原子一起结合形成任选取代的C3-C6碳环基或任选取代的C2-C5杂环基；或者RA6和RA7与各自键合的碳原子一起结合形成任选取代的C3-C6碳环基或任选取代的C2-C5杂环基；
RA8为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RA1、RA2、RA3和RA4中的每一者独立地为H、A2、卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C2-C9杂环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C2-C9杂芳基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、任选取代的-O-C3-C6碳环基、羟基、硫醇或任选取代的氨基；或者RA1和RA2、RA2和RA3、和/或RA3和RA4与各自所连接的碳原子一起组合形成并且/>为任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C2-C9杂芳基或C2-C9杂环基，它们中的任一者任选地被A2取代，
其中RA1、RA2、RA3和RA4中的一者为A2，或者被A2取代；并且
A2为降解部分和接头之间的键。
在一些实施方案中，RA5为H或甲基。在一些实施方案中，RA5为H。
在一些实施方案中，RA1、RA2、RA3和RA4中的每一者独立地为H或A2。
在一些实施方案中，RA1为A2，并且RA2、RA3和RA4中的每一者为H。
在一些实施方案中，RA2为A2，并且RA1、RA3和RA4中的每一者为H。
在一些实施方案中，RA3为A2，并且RA1、RA2和RA4中的每一者为H。
在一些实施方案中，RA4为A2，并且RA1、RA2和RA3中的每一者为H。
在一些实施方案中，Y1为
在一些实施方案中，RA6为H。在一些实施方案中，RA7为H。
在一些实施方案中，Y1为
在一些实施方案中，RA8为H或任选取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，RA8为H或甲基。在一些实施方案中，RA8为甲基。
在一些实施方案中，降解部分包括式A2的结构：
在一些实施方案中，其中降解部分为
在一些实施方案中，降解部分包括式A4的结构：
在一些实施方案中，降解部分为
在一些实施方案中，降解部分包括式A5的结构：
在一些实施方案中，降解部分包括式A6的结构：
在一些实施方案中，降解部分包括式A8的结构：
在一些实施方案中，降解部分包括式A10的结构：
在一些实施方案中，降解部分包括的结构。
在一些实施方案中，降解部分包括的结构。
在一些实施方案中，降解部分具有式C的结构或其药学上可接受的盐：
其中
L4为-N(RB1)(RB2)、
RB1为H、A2、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RB2为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RB3为A2、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C1-C6烷基C3-C10碳环基、或任选取代的C1-C6烷基C6-C10芳基；
RB4为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C1-C6烷基C3-C10碳环基、或任选取代的C1-C6烷基C6-C10芳基；
RB5为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
v2为0、1、2、3或4；
每个RB6独立地为A2、卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C2-C9杂环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C2-C9杂芳基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、羟基、硫醇或任选取代的氨基；
RB7和RB8中的每一者独立地为H、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C6-C10芳基；
RB9为H或任选取代的C1-C6烷基；并且
A2为降解部分和接头之间的键；
其中RB1、RB3和RB6中的一者且仅一者为A2。
在一些实施方案中，降解部分具有式C’的结构或其药学上可接受的盐：
其中
L4为-N(RB1)(RB2)、
RB1为H、A2、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RB2为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RB3为A2、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C2-C9杂环基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C1-C6烷基C3-C10碳环基、或任选取代的C1-C6烷基C6-C10芳基；
RB4为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C1-C6烷基C3-C10碳环基、或任选取代的C1-C6烷基C6-C10芳基；
RB5为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
v2为0、1、2、3或4；
每个RB6独立地为A2、卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C2-C9杂环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C2-C9杂芳基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、羟基、硫醇或任选取代的氨基；
RB7和RB8中的每一者独立地为H、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C6-C10芳基；
RB9为H或任选取代的C1-C6烷基；并且
A2为降解部分和接头之间的键；
其中RB1、RB3和RB6中的一者且仅一者为A2。
在一些实施方案中，降解部分具有式C1的结构：
在一些实施方案中，降解部分为
在一些实施方案中，降解部分为
在一些实施方案中，降解部分为
在一些实施方案中，降解部分具有式C2的结构：
在一些实施方案中，RB9为任选取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，RB9为甲基。
在一些实施方案中，RB9与(S)-立体中心键合。
在一些实施方案中，降解部分为
在一些实施方案中，接头具有式III的结构或其药学上可接受的盐：
A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-(D)-(B3)i-(C2)j-(B4)k–A2，
式III，
其中
A1为接头和环系A之间的键；
A2为降解部分和接头之间的键；
B1、B2、B3和B4中的每一者独立地为任选取代的C1-C4烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C6-C10芳基C1-4烷基、任选取代的C1-C4杂烷基、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C2-C6杂环基、O、S、S(O)2或NRN；
每个RN独立地为H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C2-4烯基、任选取代的C2-4炔基、任选取代的C2-6杂环基、任选取代的C6-12芳基或任选取代的C1-7杂烷基；
C1和C2中的每一者独立地为羰基、硫代羰基、磺酰基或磷酰基；
f、g、h、i、j和k中的每一者独立地为0或1；并且
D为任选取代的C1-10烷基、任选取代的C2-10烯基、任选取代的C2-10炔基、任选取代的C2-6杂环基、任选取代的C6-12芳基、任选取代的C2-C10聚乙二醇或任选取代的C1-10杂烷基或将A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-连接到-(B3)i-(C2)j-(B4)k–A2的化学键。
在一些实施方案中，接头具有式III的结构或其药学上可接受的盐：
A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-(D)-(B3)i-(C2)j-(B4)k–A2，
式III，
其中
A1为接头和环系A之间的键；
A2为降解部分和接头之间的键；
B1、B2、B3和B4中的每一者独立地为任选取代的C1-C4烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C6-C10芳基C1-4烷基、任选取代的C1-C4杂烷基、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C2-C6杂环基、任选取代的C2-C9杂芳基、O、S、S(O)2或NRN；
每个RN独立地为H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C2-4烯基、任选取代的C2-4炔基、任选取代的C2-6杂环基、任选取代的C6-12芳基或任选取代的C1-7杂烷基；
C1和C2中的每一者独立地为羰基、硫代羰基、磺酰基或磷酰基；
f、g、h、i、j和k中的每一者独立地为0或1；并且
D为任选取代的C1-10烷基、任选取代的C2-10烯基、任选取代的C2-10炔基、任选取代的C2-6杂环基、任选取代的C6-12芳基、任选取代的C2-C10聚乙二醇或任选取代的C1-10杂烷基或将A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-连接到-(B3)i-(C2)j-(B4)k–A2的化学键。
在一些实施方案中，B1、B2、B3和B4中的每一者独立地为任选取代的C1-C2烷基、任选取代的C1-C3杂烷基、任选取代的C2-C6杂环基或NRN。
在一些实施方案中，每个RN独立地为H或任选取代的C1–C4烷基。
在一些实施方案中，每个RN独立地为H或CH3。
在一些实施方案中，B1和B4中的每一者独立地为
/>
在一些实施方案中，B1和B4中的每一者独立地为
在一些实施方案中，B1为
在一些实施方案中，B1为
在一些实施方案中，B4为 />
在一些实施方案中，B4为O、
在一些实施方案中，C1和C2中的每一者独立地为
在一些实施方案中，C1为
在一些实施方案中，C2为
在一些实施方案中，B2为任选取代的C1-C4烷基。在一些实施方案中，B2为任选取代的C2-C6杂环基。
在一些实施方案中，B2为
在一些实施方案中，B2为任选取代的C2-C9杂芳基。在一些实施方案中，B2为
在一些实施方案中，B3为任选取代的C3-C10环烷基。在一些实施方案中，B3为
在一些实施方案中，D为任选取代的C1-C10烷基。
在一些实施方案中，f为1。在一些实施方案中，g为0。在一些实施方案中，g为1。在一些实施方案中，h为0。在一些实施方案中，h为1。在一些实施方案中，i为0。在一些实施方案中，i为1。在一些实施方案中，j为0。在一些实施方案中，j为1。在一些实施方案中，k为0。在一些实施方案中，k为1。
在一些实施方案中，接头具有/>
/>
/>
的结构。
在一些实施方案中，接头具有
/>
/>
/>
的结构。
在一些实施方案中，连接接头的两个化合价的最短原子链为2至10个原子长。
在一些实施方案中，连接接头的两个化合价的最短原子链为6个原子长。
在一些实施方案中，接头具有 的结构。
一方面，本发明的特征在于选自表1中的1-33的化合物及其药学上可接受的盐。一方面，本发明的特征在于选自表1中的1-115的化合物及其药学上可接受的盐。
表1.本发明的化合物
/>
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在一些实施方案中，化合物具有至少5的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，化合物具有至少7的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，化合物具有至少10的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，化合物具有至少15的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，化合物具有至少20的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，化合物具有至少25的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，化合物具有至少30的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
一方面，本发明的特征在于包含任何前述化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
另一方面，本发明的特征在于降低细胞中BAF复合物活性的方法，该方法包括使细胞与有效量的任何前述化合物或其药物组合物接触。
在一些实施方案中，所述细胞是癌细胞。
另一方面，本发明的特征在于治疗有需要的受试者的BAF复合物相关病症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的任何前述化合物(例如，BRM/BRG1双重抑制剂化合物或BRM选择性化合物)或其药物组合物。
在一些实施方案中，BAF复合物相关病症是癌症。
另一方面，本发明的特征在于抑制BRM的方法，该方法包括使细胞与有效量的任何前述化合物(例如，BRM/BRG1双重抑制剂化合物或BRM选择性化合物)或其药物组合物接触。
在一些实施方案中，所述细胞是癌细胞。
另一方面，本发明的特征在于抑制BRG1的方法，该方法包括使细胞与有效量的任何前述化合物或其药物组合物接触。
在一些实施方案中，所述细胞是癌细胞。
另一方面，本发明的特征在于抑制BRM和BRG1的方法，该方法包括使细胞与有效量的任何前述化合物或其药物组合物接触。
在一些实施方案中，所述细胞是癌细胞。
另一方面，本发明的特征在于治疗有需要的受试者的与BRG1功能缺失突变相关的病症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的任何前述化合物(例如，BRM/BRG1双重抑制剂化合物或BRM选择性化合物)或其药物组合物。
在一些实施方案中，与BRG1功能缺失突变相关的病症是癌症。在其他实施方案中，受试者被确定为患有BRG1功能缺失病症，例如，受试者被确定为患有BRG1功能缺失癌症(例如，癌症已被确定为包括具有BRG1功能缺失的癌细胞)。
另一方面，本发明的特征在于诱导细胞凋亡的方法，该方法包括使细胞与有效量的任何前述化合物(例如，BRM/BRG1双重抑制剂化合物或BRM选择性化合物)或其药物组合物接触。
在一些实施方案中，所述细胞是癌细胞。
另一方面，本发明的特征在于治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的任何前述化合物(例如，BRM/BRG1双重抑制剂化合物或BRM选择性化合物)或其药物组合物。
在任何前述方法的一些实施方案中，癌症是非小细胞肺癌、结直肠癌、膀胱癌、原发灶不明的癌症、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌、食管胃癌、胰腺癌、肝胆管癌、软组织肉瘤、卵巢癌、头颈癌、肾细胞癌、骨癌、非霍奇金淋巴瘤、小细胞肺癌、前列腺癌、胚胎肿瘤、生殖细胞瘤、宫颈癌、甲状腺癌、唾液腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、子宫肉瘤、胃肠道间质瘤、CNS癌、胸腺肿瘤、肾上腺皮质癌、阑尾癌、小肠癌或阴茎癌。
在任何前述方法的一些实施方案中，癌症是非小细胞肺癌、结直肠癌、膀胱癌、原发灶不明的癌症、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌或阴茎癌。
在任何前述方法的一些实施方案中，癌症是耐药性癌或对先前疗法(例如，维莫非尼、达卡巴嗪、CTLA4抑制剂、PD1抑制剂、干扰素疗法、BRAF抑制剂、MEK抑制剂、放射疗法、替莫唑胺、伊立替康、CAR-T疗法、他莫昔芬、/>多西他赛、铂剂诸如卡铂、紫杉烷诸如紫杉醇和多烯紫杉醇、ALK抑制剂、MET抑制剂、吉西他滨、/>来那替尼、PARP抑制剂、ARN810、mTOR抑制剂、拓扑替康、/>VEGFR2抑制剂、叶酸受体拮抗药、登赛珠单抗、康普瑞汀或PDL1抑制剂)没有反应。
在任何前述方法的一些实施方案中，癌症已具有或已被确定为具有BRG1突变。在任何前述方法的一些实施方案中，BRG1突变是纯合的。在任何前述方法的一些实施方案中，癌症不具有或已被确定为不具有表皮生长因子受体(EGFR)突变。在任何前述方法的一些实施方案中，癌症不具有或已被确定为不具有间变性淋巴瘤激酶(ALK)驱动突变。在任何前述方法的一些实施方案中，癌症具有或已被确定为具有KRAS突变。在任何前述方法的一些实施方案中，BRG1突变在蛋白质的ATP酶催化结构域中。在任何前述方法的一些实施方案中，BRG1突变是在BRG1的C末端处的缺失。
另一方面，本公开提供了治疗有需要的受试者的与BAF相关的病症(例如，癌症或病毒感染)的方法。该方法包括使细胞与有效量的任何前述化合物(例如，BRM/BRG1双重抑制剂化合物或BRM选择性化合物)或其药学上可接受的盐或任何前述药物组合物接触。在一些实施方案中，病症是病毒感染，是逆转录病毒科的病毒造成的感染，诸如慢病毒(例如，人免疫缺陷病毒(HIV)和δ逆转录病毒(例如，人T细胞白血病病毒I(HTLV-I)、人T细胞白血病病毒II(HTLV-II))、嗜肝病毒科(例如，乙肝病毒(HBV))、黄病毒科(例如，丙肝病毒(HCV))、腺病毒科(例如，人腺病毒)、疱疹病毒科(例如，人巨细胞病毒(HCMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒、单纯疱疹病毒1(HSV-1)、单纯疱疹病毒2(HSV-2)、人疱疹病毒6(HHV-6)、疱疹病毒K*、CMV、水痘-带状疱疹病毒)、乳头瘤病毒科(例如，人乳头瘤病毒(HPV、HPV E1))、细小病毒科(例如，细小病毒B19)、多瘤病毒科(例如，JC病毒和BK病毒)、副粘病毒科(例如，麻疹病毒)、披盖病毒科(例如，风疹病毒)。在一些实施方案中，病症是Coffin Siris、神经纤维瘤病(例如，NF-1、NF-2或神经鞘瘤病)或多发性脑膜瘤。
另一方面，本公开提供了用于治疗有需要的受试者的病毒感染的方法。该方法包括向受试者施用有效量的任何前述化合物(例如，BRM/BRG1双重抑制剂化合物或BRM选择性化合物)或其药学上可接受的盐或任何前述药物组合物。在一些实施方案中，病毒感染是逆转录病毒科的病毒造成的感染，诸如慢病毒(例如，人免疫缺陷病毒(HIV)和δ逆转录病毒(例如，人T细胞白血病病毒I(HTLV-I)、人T细胞白血病病毒II(HTLV-II))、嗜肝病毒科(例如，乙肝病毒(HBV))、黄病毒科(例如，丙肝病毒(HCV))、腺病毒科(例如，人腺病毒)、疱疹病毒科(例如，人巨细胞病毒(HCMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒、单纯疱疹病毒1(HSV-1)、单纯疱疹病毒2(HSV-2)、人疱疹病毒6(HHV-6)、疱疹病毒K*、CMV、水痘-带状疱疹病毒)、乳头瘤病毒科(例如，人乳头瘤病毒(HPV、HPV E1))、细小病毒科(例如，细小病毒B19)、多瘤病毒科(例如，JC病毒和BK病毒)、副粘病毒科(例如，麻疹病毒)或披盖病毒科(例如，风疹病毒)。
在任何前述方面的一些实施方案中，化合物是BRM选择性化合物。在一些实施方案中，BRM选择性化合物抑制BRM的水平和/或活性为该化合物抑制BRG1的水平和/或活性的至少10倍，并且/或者该化合物与BRM的结合为该化合物与BRG1的结合的至少10倍。例如，在一些实施方案中，BRM选择性化合物的IC50或IP50为对BRG1的IC50或IP50的至多1/10。在任何前述方面的一些实施方案中，化合物是BRM/BRG1双重抑制剂化合物。在一些实施方案中，BRM/BRG1双重抑制剂化合物对BRM和BRG1两者具有类似活性(例如，化合物对BRM和BRG1的活性在10倍以内(例如，小于5倍、小于2倍))。在一些实施方案中，BRM/BRG1双重抑制剂化合物对BRM的活性更高。在一些实施方案中，BRM/BRG1双重抑制剂化合物对BRG1的活性更高。例如，在一些实施方案中，BRM/BRG1双重抑制剂化合物对BRM的IC50或IP50在对BRG1的IC50或IP50的10倍以内。
另一方面，本发明的特征在于治疗有需要的受试者的黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液学癌症的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的任何前述化合物或其药物组合物。
另一方面，本发明的特征在于在有需要的受试者中减少黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液学癌症的肿瘤生长的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的任何前述化合物或其药物组合物。
另一方面，本发明的特征在于抑制受试者中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液学癌症的转移性进展的方法，该方法包括施用有效量的任何前述化合物或其药物组合物。
另一方面，本发明的特征在于抑制受试者中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液学癌症的转移性定殖的方法，该方法包括施用有效量的任何前述化合物或其药物组合物。
另一方面，本发明的特征在于降低黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液学癌症细胞中BRG1和/或BRM的水平和/或活性的方法，该方法包括使该细胞与有效量的任何前述化合物或其药物组合物接触。
在任何上述方面的一些实施方案中，黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液细胞存在于受试者中。
在任何上述方面的一些实施方案中，与参照相比，有效量的化合物使BRG1的水平和/或活性降低至少5％(例如，6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)。在一些实施方案中，与参照相比，有效量的化合物使BRG1的水平和/或活性降低至少50％(例如，55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)。在一些实施方案中，有效量的化合物使BRG1的水平和/或活性降低至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)。
在一些实施方案中，与参照相比，有效量的化合物使BRG1的水平和/或活性降低至少5％(例如，6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)持续至少12小时(例如，14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、30小时、36小时、48小时、72小时或更长)。在一些实施方案中，与参照相比，有效量的化合物使BRG1的水平和/或活性降低至少5％(例如，6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)持续至少4天(例如，5天、6天、7天、14天、28天或更长)。
在任何上述方面的一些实施方案中，与参照相比，有效量的化合物使BRM的水平和/或活性降低至少5％(例如，6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)。在一些实施方案中，与参照相比，有效量的化合物使BRM的水平和/或活性降低至少50％(例如，55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)。在一些实施方案中，有效量的化合物使BRM的水平和/或活性降低至少90％(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)。
在一些实施方案中，与参照相比，有效量的化合物使BRM的水平和/或活性降低至少5％(例如，6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)持续至少12小时(例如，14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、30小时、36小时、48小时、72小时或更长)。在一些实施方案中，与参照相比，有效量的化合物使BRM的水平和/或活性降低至少5％(例如，6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)持续至少4天(例如，5天、6天、7天、14天、28天或更长)。
在一些实施方案中，受试者患有癌症。在一些实施方案中，癌症表达BRG1和/或BRM蛋白，并且/或者细胞或受试者已被鉴定为表达BRG1和/或BRM。在一些实施方案中，癌症表达BRG1蛋白，并且/或者细胞或受试者已被鉴定为表达BRG1。在一些实施方案中，癌症表达BRM蛋白，并且/或者细胞或受试者已被鉴定为表达BRM。在一些实施方案中，癌症是黑素瘤(例如，葡萄膜黑素瘤、粘膜黑素瘤或皮肤黑素瘤)。在一些实施方案中，癌症是前列腺癌。在一些实施方案中，癌症是血液学癌症，例如，多发性骨髓瘤、大细胞淋巴瘤、急性T细胞白血病、急性髓样白血病、骨髓增生异常综合征、免疫球蛋白Aλ骨髓瘤、弥漫性混合组织细胞性和淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞白血病(例如，T细胞急性淋巴细胞白血病或B细胞急性淋巴细胞白血病)、弥漫性大细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌(例如，ER阳性乳腺癌、ER阴性乳腺癌、三阳性乳腺癌或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，癌症是骨癌(例如，尤因肉瘤)。在一些实施方案中，癌症是肾细胞癌(例如，小眼畸形转录因子(MITF)家族易位肾细胞癌(tRCC))。在一些实施方案中，癌症是转移性的(例如，癌症已扩散到肝脏)。转移性癌可包括表现出迁移细胞的迁移和/或侵袭的细胞和/或包括表现出内皮募集和/或血管生成的细胞。在其他实施方案中，迁移性癌是细胞迁移癌。在又一些实施方案中，细胞迁移癌是非转移性细胞迁移癌。转移性癌可以是通过接种腹膜、胸膜、心包或蛛网膜下腔的表面而扩散的癌症。另选地，转移性癌可以是通过淋巴系统扩散的癌症，或血行扩散的癌症。在一些实施方案中，降低BRG1和/或BRM的水平和/或活性的药剂的有效量是有效抑制癌症向肝脏的转移性定殖的量。
在一些实施方案中，癌症具有GNAQ中的突变。在一些实施方案中，癌症具有GNA11中的突变。在一些实施方案中，癌症具有PLCB4中的突变。在一些实施方案中，癌症具有CYSLTR2中的突变。在一些实施方案中，癌症具有BAP1中的突变。在一些实施方案中，癌症具有SF3B1中的突变。在一些实施方案中，癌症具有EIF1AX中的突变。在一些实施方案中，癌症具有TFE3易位。在一些实施方案中，癌症具有TFEB易位。在一些实施方案中，癌症具有MITF易位。在一些实施方案中，癌症具有EZH2突变。在一些实施方案中，癌症具有SUZ12突变。在一些实施方案中，癌症具有EED突变。
在一些实施方案中，该方法还包括向受试者施用抗癌疗法(例如，化疗剂或细胞毒性剂)、免疫疗法、手术、放射疗法、温热疗法或光凝法或使细胞与之接触。在一些实施方案中，抗癌疗法是化疗剂或细胞毒性剂，例如，抗代谢药、抗有丝分裂剂、抗肿瘤抗生素、天冬酰胺特异性酶、双膦酸盐、抗肿瘤剂、烷化剂、DNA修复酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、皮质类固醇、去甲基化剂、免疫调节剂、janus-相关激酶抑制剂、磷酸肌醇3-激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂或酪氨酸激酶抑制剂。
在一些实施方案中，本发明的化合物与用于治疗葡萄膜黑素瘤的另一种抗癌疗法诸如手术、MEK抑制剂和/或PKC抑制剂组合使用。例如，在一些实施方案中，方法还包括在施用本发明的化合物之前、之后或同时进行手术。在一些实施方案中，方法还包括在施用本发明的化合物之前、之后或同时施用MEK抑制剂和/或PKC抑制剂。
在一些实施方案中，抗癌疗法和本发明的化合物彼此在28天内并且各自以一起有效治疗受试者的量施用。
在一些实施方案中，受试者或癌症具有和/或已被鉴定为具有BRG1功能缺失突变。
在一些实施方案中，癌症对一种或多种化疗剂或细胞毒性剂具有抗性(例如，癌症已例如通过遗传标记被确定为对化疗剂或细胞毒性剂具有抗性，或者可能对化疗剂或细胞毒性剂具有抗性，诸如对化疗剂或细胞毒性剂没有反应的癌症)。在一些实施方案中，癌症对一种或多种化疗剂或细胞毒性剂没有反应。在一些实施方案中，癌症对达卡巴嗪、替莫唑胺、顺铂、曲奥舒凡、福莫司汀、IMCgp100、CTLA-4抑制剂(例如，易普利姆玛)、PD-1抑制剂(例如，纳武单抗或派姆单抗)、PD-L1抑制剂(例如，阿特朱单抗、阿维鲁单抗或度伐鲁单抗)、丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂(例如，司美替尼、贝美替尼或曲美替尼)和/或蛋白激酶C(PKC)抑制剂(例如，索曲妥林或IDE196)有抗性或没有反应。
在一些实施方案中，癌症对先前施用的用于治疗葡萄膜黑素瘤的治疗剂(诸如MEK抑制剂或PKC抑制剂)有抗性或没有反应。例如，在一些实施方案中，癌症对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂(例如，司美替尼、贝美替尼或曲美替尼)和/或蛋白激酶C(PKC)抑制剂(例如，索曲妥林或IDE196)有抗性或没有反应。
化学术语
在此所采用的术语用于以下目的：描述具体实施方案并非旨在进行限制。
对于任何以下化学定义，原子符号后的数字表示特定化学部分中存在的该元素的原子总数。如将理解的，如本文所述的其他原子诸如H原子或取代基可根据需要存在以满足原子的化合价。例如，未取代的C2烷基具有式–CH2CH3。当与本文所定义的基团一起使用时，提及碳原子的数目包括缩醛和缩酮基团中的二价碳，但不包括酰基、酯、碳酸酯或氨基甲酸酯基团中的羰基碳。提及杂芳基中的氧、氮或硫原子的数目仅包括形成杂环的一部分的那些原子。
如本文所用，术语“酰基”表示通过本文所定义的羰基连接到母体分子基团上的H或烷基，并且以甲酰基(即，甲醛基团)、乙酰基、三氟乙酰基、丙酰基和丁酰基为例。示例性的未取代的酰基包括1至6、1至11或1至21个碳。
如本文所用，术语“烷基”是指具有1至20个碳原子(例如，1至16个碳原子、1至10个碳原子、1至6个碳原子或1至3个碳原子)的支链或直链一价饱和脂族烃基团。
亚烷基是二价烷基。如本文所用，单独或与其他基团组合的术语“烯基”是指具有碳-碳双键并且具有2至20个碳原子(例如，2至16个碳原子、2至10个碳原子、2至6个碳原子或2个碳原子)的直链或支链烃残基。
如本文所用，单独或与其他基团组合的术语“炔基”是指具有碳-碳三键并且具有2至20个碳原子(例如，2至16个碳原子、2至10个碳原子、2至6个碳原子或2个碳原子)的直链或支链烃残基。
如本文所用，术语“氨基”表示–N(RN1)2，其中每个RN1独立地为H、OH、NO2、N(RN2)2、SO2ORN2、SO2RN2、SORN2、N-保护基、烷基、烷氧基、芳基、芳基烷基、环烷基、酰基(例如，乙酰基、三氟乙酰基或本文所述的其他基团)，其中这些列举的RN1基团中的每一者可以是任选取代的；或者两个RN1组合形成亚烷基或亚杂烷基，并且其中每个RN2独立地为H、烷基或芳基。本发明的氨基可以是未取代的氨基(即，-NH2)或取代的氨基(即，–N(RN1)2)。
如本文所用，术语“芳基”是指具有至少一个芳环的6至12个碳原子的芳族单碳环或多碳环基团。此类基团的示例包括但不限于苯基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、1,2-二氢萘基、茚满基和1H-茚基。
如本文所用，术语“芳基烷基”表示被芳基取代的烷基。示例性的未取代芳基烷基为7至30个碳(例如，7至16个或7至20个碳，诸如C1-C6烷基C6-C10芳基、C1-C10烷基C6-C10芳基或C1-C20烷基C6-C10芳基)，诸如苄基和苯乙基。在一些实施方案中，烷基和芳基各自可进一步被1、2、3或4个如本文针对相应基团所定义的取代基取代。
如本文所用，术语“叠氮基”表示-N3基团。
如本文所用，术语“桥连多环烷基”是指含有1至3个桥的5至20个碳的桥连多环基团。
如本文所用，术语“氰基”表示-CN基团。
如本文所用，术语“碳环基”是指非芳族C3-C12单环、双环或三环结构，其中这些环由碳原子形成。碳环基结构包括环烷基和不饱和碳环基团。
如本文所用，术语“环烷基”是指3至10个、优选3至6个碳原子的饱和、非芳族和单价单碳环或多碳环基团。该术语进一步示例为基团诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、降冰片基和金刚烷基。
如本文所用，术语“卤素”是指氟(氟代)、氯(氯代)、溴(溴代)或碘(碘代)基团。
如本文所用，术语“杂烷基”是指如本文所定义的烷基，其中一个或多个组成碳原子已被氮、氧或硫取代。在一些实施方案中，杂烷基可进一步被1、2、3或4个如本文针对烷基所述的取代基取代。杂烷基的示例是“烷氧基”，如本文所用，其是指烷基-O-(例如，甲氧基和乙氧基)。亚杂烷基为二价杂烷基。如本文所用，术语“杂烯基”是指如本文所定义的烯基，其中一个或多个组成碳原子已被氮、氧或硫取代。在一些实施方案中，杂烯基可进一步被1、2、3或4个如本文针对烯基所述的取代基取代。杂烯基的示例是“烯氧基”，如本文所用，其是指烯基–O–。亚杂烯基是二价杂烯基。如本文所用，术语“杂炔基”是指如本文所定义的炔基，其中一个或多个组成碳原子已被氮、氧或硫取代。在一些实施方案中，杂炔基可进一步被1、2、3或4个如本文针对炔基所述的取代基取代。杂炔基的示例是“炔氧基”，如本文所用，其是指炔基–O–。亚杂炔基是二价杂炔基。
如本文所用，术语“杂芳基”是指具有至少一个芳环并且含有1、2或3个选自氮、氧和硫的环原子且其余环原子为碳的5至12个原子的单环或多环基团。杂芳基的一个或两个环碳原子可被羰基取代。杂芳基的示例是吡啶基、吡唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、咪唑基、噁唑基和噻唑基。
如本文所用，术语“杂芳基烷基”表示被杂芳基取代的烷基。示例性的未取代杂芳基烷基为7至30个碳(例如，7至16个或7至20个碳，诸如C1-C6烷基C2-C9杂芳基、C1-C10烷基C2-C9杂芳基或C1-C20烷基C2-C9杂芳基)。在一些实施方案中，烷基和杂芳基各自可进一步被1、2、3或4个如本文针对相应基团所定义的取代基取代。
如本文所用，术语“杂环基”是指具有3至12个原子的单环或多环基团，其具有至少一个含有1、2、3或4个选自N、O或S的环原子的环，其中没有环是芳族的。杂环基的示例包括但不限于吗啉基、硫代吗啉基、呋喃基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基和1,3-二噁烷基。
如本文所用，术语“杂环基烷基”表示被杂环基取代的烷基。示例性的未取代杂环基烷基为7至30个碳(例如，7至16个或7至20个碳，诸如C1-C6烷基C2-C9杂环基、C1-C10烷基C2-C9杂环基或C1-C20烷基C2-C9杂环基)。在一些实施方案中，烷基和杂环基各自可进一步被1、2、3或4个如本文针对相应基团所定义的取代基取代。
如本文所用，术语“羟烷基”表示被–OH基团取代的烷基。
如本文所用，术语“羟基”表示-OH基团。
如本文所用，术语“N-保护基”表示在合成过程中旨在保护氨基不发生不希望的反应的那些基团。常用的N-保护基公开于Greene，“Protective Groups in OrganicSynthesis”，第3版(John Wiley&Sons，New York，1999)中。N-保护基包括但不限于酰基、芳酰基或氨基甲酰基诸如甲酰基、乙酰基、丙酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻苯二甲酰基、邻硝基苯氧基乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基和手性助剂诸如受保护或未受保护的D-氨基酸、L-氨基酸或D,L-氨基酸诸如丙氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸；含磺酰基的基团诸如苯磺酰基和对甲苯磺酰基；氨基甲酸酯形成基团，诸如苄氧基羰基、对氯苄氧基羰基、对甲氧基苄氧基羰基、对硝基苄氧基羰基、2-硝基苄氧基羰基、对溴苄氧基羰基、3,4-二甲氧基苄氧基羰基、3,5-二甲氧基苄氧基羰基、2,4-20二甲氧基苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、2-硝基-4,5-二甲氧基苄氧基羰基、3,4,5-三甲氧基苄氧基羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苄氧基羰基、二苯甲基氧基羰基、叔丁氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基、异丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基、环戊氧基羰基、金刚烷氧基羰基、环己氧基羰基和苯基硫代羰基；芳基烷基诸如苄基、三苯基甲基和苄氧基甲基；甲硅烷基诸如三甲基甲硅烷基。优选的N-保护基是alloc、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、丙氨酰基、苯基磺酰基、苄基、叔丁氧基羰基(Boc)和苄氧基羰基(Cbz)。
如本文所用，术语“硝基”表示-NO2基团。
如本文所用，术语“氧代基”代表二价氧原子(例如，氧代基的结构可显示为＝O)。例如，羰基是被氧代基取代的碳(例如，烷基碳、烯基碳、炔基碳、杂烷基碳、杂烯基碳、杂炔基碳、碳环基碳等)。另选地，硫可被一个或两个氧代基取代(例如，取代的杂烷基、杂烯基、杂炔基或杂环基内的-SO-或-SO2-)。
如本文所用，术语“硫醇”表示-SH基团。
烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、碳环基(例如，环烷基)、芳基、杂芳基和杂环基可以是取代的或未取代的。当被取代时，除非另有说明，通常存在1至4个取代基。取代基包括，例如：烷基(例如，未取代的和取代的，其中取代基包括本文所述的任何基团，例如芳基、卤素、羟基)、芳基(例如，取代的和未取代的苯基)、碳环基(例如，取代的和未取代的环烷基)、卤素(例如，氟)、羟基、杂烷基(例如，取代的和未取代的甲氧基、乙氧基或硫代烷氧基)、杂芳基、杂环基、氨基(例如，NH2或单烷基或二烷基氨基)、叠氮基、氰基、硝基或硫醇。另一个示例性取代基是氧代基。例如，羰基是被氧代基取代的碳(例如，烷基碳、烯基碳、炔基碳、杂烷基碳、杂烯基碳、杂炔基碳、碳环基碳等)。另选地，硫可被一个或两个氧代基取代(例如，取代的杂烷基、杂烯基、杂炔基或杂环基内的-SO-或-SO2-)。芳基、碳环基(例如，环烷基)、杂芳基和杂环基也可被烷基(未取代的和取代的，诸如芳基烷基(例如，取代的和未取代的苄基))取代。在一些实施方案中，烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基和杂炔基任选地被1、2、3、4或5个独立地选自以下基团的取代基取代：芳基(例如，取代的和未取代的苯基)、碳环基(例如，取代的和未取代的环烷基)、卤素(例如，氟)、羟基、杂芳基、杂环基、氨基(例如，NH2或单烷基或二烷基氨基)、叠氮基、氰基、硝基、硫醇和氧代基。在一些实施方案中，取代基本身是未取代的。
在一些实施方案中，烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、碳环基(例如，环烷基)、芳基、杂芳基和杂环基可以是取代的或未取代的。当被取代时，除非另有说明，否则在化合价允许的情况下将存在1、2、3、4或5个取代基。这1至5个取代基各自独立地选自酰基、烷基(例如，未取代的和取代的，其中取代基包括本文所述的任何基团，例如芳基、卤素、羟基)、烯基、炔基、芳基(例如，取代的和未取代的苯基)、环烷基(例如，取代的和未取代的环烷基)、卤素(例如，氟)、羟基、杂烷基(例如，取代的和未取代的甲氧基、乙氧基或硫代烷氧基)、杂烯基、杂炔基、杂芳基、杂环基、氨基(例如，NH2或单烷基或二烷基氨基)、叠氮基、氰基、硝基、硫醇和氧代基。每个取代基是未取代的或被如本文针对每个相应基团所定义的未取代的取代基取代。在一些实施方案中，烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基和杂炔基任选地被1、2、3、4或5个独立地选自以下基团的取代基取代：芳基(例如，取代的和未取代的苯基)、环烷基(例如，取代的和未取代的环烷基)、卤素(例如，氟)、羟基、杂芳基、杂环基、氨基(例如，NH2或单烷基或二烷基氨基)、叠氮基、氰基、硝基、硫醇和氧代基。每个取代基是未取代的或被如本文针对每个相应基团所定义的未取代的取代基取代。在一些实施方案中，取代基本身是未取代的。
本发明的化合物可具有一个或多个不对称碳原子，并且可以光学纯的对映体、对映体的混合物(例如，外消旋物)、光学纯的非对映体、非对映体的混合物、非对映的外消旋物、或非对映的外消旋物的混合物的形式存在。光学活性形式可例如通过外消旋物的拆分、通过不对称合成或不对称色谱法(使用手性吸附剂或洗脱剂的色谱法)获得。即，某些公开的化合物可以各种立体异构形式存在。立体异构体是仅在空间排列上不同的化合物。对映体是镜像不可重叠的立体异构体对，最常见的原因是它们含有不对称取代的碳原子作为手性中心。“对映体”是指互为镜像且不可重叠的一对分子之一。非对映体是没有镜像关系的立体异构体，最常见的原因是它们含有两个或更多个不对称取代的碳原子并且代表围绕一个或多个手性碳原子的取代基构型。化合物的对映体可例如通过使用一种或多种众所周知的技术和方法(例如，手性色谱法和基于其的分离方法)从外消旋物分离出对映体来制备。本领域技术人员可容易地确定用于从外消旋混合物分离出本文所述化合物的对映体的合适技术和/或方法。“外消旋物”或“外消旋混合物”是指含有两种对映体的化合物，其中此类混合物不表现出光学活性；即，它们不旋转偏振光的平面。“几何异构体”是指取代基原子相对于碳-碳双键、环烷基环或桥连双环系的取向不同的异构体。碳-碳双键每一侧上的原子(除H以外)可以是E(取代基在碳-碳双键的相对侧上)构型或Z(取代基在相同侧上取向)构型。“R”、“S”、“S*”、“R*”、“E”、“Z”、“顺式”和“反式”表示相对于核心分子的构型。某些公开的化合物可以阻转异构体的形式存在。阻转异构体由围绕单键的受阻旋转产生的立体异构体，其中旋转的空间应变势垒足够高以允许构象异构体的分离。本发明的化合物可通过异构体特异性合成或从异构体混合物拆分而制备为单独的异构体。常规拆分技术包括使用光学活性酸形成异构体对的每种异构体的游离碱的盐(随后进行游离碱的分级结晶和再生)，使用光学活性胺形成异构体对的每种异构体的酸形式的盐(随后进行游离酸的分级结晶和再生)，使用光学纯的酸、胺或醇形成异构体对的每种异构体的酯或酰胺(随后进行色谱分离并除去手性助剂)，或使用各种公知的色谱方法拆分起始材料或最终产物的异构体混合物。当所公开的化合物的立体化学按结构命名或描述时，所命名或描述的立体异构体相对于其他立体异构体按重量计为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％。当单一对映体按结构命名或描述时，所描述或命名的对映体按重量计为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％光学纯。当单一非对映体按结构命名或描述时，所描述或命名的非对映体按重量计为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％纯。光学纯度百分比是对映体的重量或与对映体的重量加上其光学异构体的重量的比率。按重量计的非对映体纯度是一种非对映体的重量或与所有非对映体的重量的比率。当所公开的化合物的立体化学按结构命名或描述时，所命名或描述的立体异构体相对于其他立体异构体按摩尔分数计为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％纯。当单一对映体按结构命名或描述时，所描述或命名的对映体按摩尔分数计为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％纯。当单一非对映体按结构命名或描述时，所描述或命名的非对映体按摩尔分数计为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％纯。按摩尔分数计的纯度百分比是对映体的摩尔或与对映体的摩尔加上其光学异构体的摩尔的比率。类似地，按摩尔分数计的纯度百分比是非对映体的摩尔或与非对映体的摩尔加上其异构体的摩尔的比率。当所公开的化合物按结构命名或描述而不指示立体化学并且该化合物具有至少一个手性中心时，应当理解该名称或结构涵盖不含对应光学异构体的化合物的对映体、该化合物的外消旋混合物或相对于其对应光学异构体富集一种对映体的混合物。当所公开的化合物按结构命名或描述而不指示立体化学并且具有两个或更多个手性中心时，应当理解该名称或结构涵盖不含其他非对映体的非对映异构体、不含其他非对映体对的许多非对映体、非对映体的混合物、非对映体对的混合物、其中一种非对映体相对于其他非对映体富集的非对映体的混合物、或其中一种或多种非对映体相对于其他非对映体富集的非对映体的混合物。本发明包括所有这些形式。
本公开的化合物还包括在中间体或最终化合物中出现的原子的所有同位素。“同位素”是指具有相同原子序数但由于原子核中不同数量的中子造成的不同质量数的原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。
除非另有说明，本文描述的结构还意在包括仅在一种或多种同位素富集的原子存在方面不同的化合物。可掺入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，诸如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I和125I。同位素标记的化合物(例如，用3H和14C标记的那些化合物)可用于化合物或底物组织分布测定。氚化的(即，3H)和碳-14(即，14C)同位素可因其易于制备和可检测性而非常有用。此外，用更重的同位素诸如氘(即，2H)取代可提供某些治疗优势，这是由于更高的代谢稳定性(例如，增加的体内半衰期或减少的剂量需求)。在一些实施方案中，一个或多个氢原子被2H或3H取代，或者一个或多个碳原子被13C或14C富集的碳取代。正电子发射同位素诸如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究，以检查底物受体占用情况。同位素标记的化合物的制备是本领域技术人员已知的。例如，同位素标记的化合物通常可通过以下类似于针对本文所述的本发明化合物所公开的那些程序的程序，通过用同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂来制备。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。本文描述了用于本公开的方法和材料；也可使用本领域已知的其他合适的方法和材料。这些材料、方法和实施例仅是说明性的并非旨在进行限制。本文所提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其他参考文献以引用方式整体并入。在发生冲突的情况下，应以本说明书(包含定义)为准。
定义
在本申请中，除非上下文另有明确说明，(i)术语“一个”可理解为“至少一个”；(ii)术语“或”可理解为表示“和/或”；并且(iii)术语“包含”和“包括”可理解为涵盖逐项列出的组分或步骤，无论是单独存在还是与一个或多个额外的组分或步骤一起存在。
如本文所用，术语“约”和“大约”是指高于或低于所述值10％以内的值。例如，术语“约5nM”表示4.5nM至5.5nM的范围。
如本文所用，术语“施用”是指向受试者或系统施用组合物(例如，化合物或包含如本文所述的化合物的制剂)。可通过任何合适的途径向动物受试者(例如，人)施用。例如，在一些实施方案中，施用可通过支气管(包括通过支气管滴注)、口含、肠内、皮间、动脉内、真皮内、胃内、髓内、肌内、鼻内、腹膜内、鞘内、肿瘤内、静脉内、心室内、粘膜内、经鼻、口、直肠、皮下、舌下、局部、气管(包括通过气管内滴注)、经皮、阴道和玻璃体。
如本文所用，术语“BAF复合物”是指人类细胞中的BRG1或HRBM相关因子复合物。
如本文所用，术语“BAF复合物相关病症”是指由BAF复合物的活性水平引起或影响的病症。
如本文所用，术语“BRG1功能缺失突变”是指BRG1中导致蛋白质活性降低(例如，BRG1活性降低至少1％，例如BRG1活性降低2％、5％、10％、25％、50％或100％)的突变。示例性的BRG1功能缺失突变包括但不限于纯合BRG1突变和在BRG1的C末端的缺失。
如本文所用，术语“BRG1功能缺失病症”是指表现出BRG1活性降低(例如，BRG1活性降低至少1％，例如BRG1活性降低2％、5％、10％、25％、50％或100％)的病症(例如，癌症)。
术语“癌症”是指由恶性肿瘤细胞的增殖引起的状况，诸如肿瘤、赘生物、癌、肉瘤、白血病和淋巴瘤。
如本文所用，“组合疗法”或“组合施用”是指将两种(或更多种)不同的药剂或治疗作为特定疾病或状况的规定治疗方案的一部分施用于受试者。治疗方案规定了每种药剂的剂量和施用周期，使得各种药剂对受试者的作用重叠。在一些实施方案中，两种或更多种药剂的递送是同时的或并行的，并且药剂可共同配制。在一些实施方案中，两种或更多种药剂不是共同配制的，而是作为处方方案的一部分以顺序方式施用。在一些实施方案中，组合施用两种或更多种药剂或治疗使得症状或与病症相关的其他参数的减轻大于在一种药剂或治疗单独递送或在另一种药剂或治疗不存在的情况下所观察到的减轻。两种治疗的效果可以是部分相加的、完全相加的或大于相加的(例如，协同的)。每种治疗剂的顺序或基本上同时施用可通过任何合适的途径实现，包括但不限于口服途径、静脉内途径、肌内途径和通过粘膜组织的直接吸收。治疗剂可通过相同的途径或通过不同的途径施用。例如，组合的第一治疗剂可通过静脉内注射施用，而组合的第二治疗剂可通过口服施用。
所谓“测定蛋白质或RNA的水平”是指通过本领域已知的方法直接或间接检测蛋白质或RNA。“直接测定”意指执行过程(例如，对样品进行测定或测试或“分析样品”，如该术语在本文中所定义的)以获得物理实体或值。“间接测定”是指从另一方或来源(例如，直接获取物理实体或值的第三方实验室)接收物理实体或值。测量蛋白质水平的方法通常包括但不限于：蛋白质印迹、免疫印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫沉淀、免疫荧光、表面等离子共振、化学发光、荧光偏振、磷光、免疫组织化学分析、基质辅助激光解吸/电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱、液相色谱(LC)-质谱、微量细胞术(microcytometry)、显微镜、荧光激活细胞分选(FACS)和流式细胞术，以及基于蛋白质性质的测定，蛋白质性质包括但不限于酶活性或与其他蛋白质伴侣的相互作用。测量RNA水平的方法是本领域已知的，包括但不限于定量聚合酶链式反应(qPCR)和RNA印迹分析。
所谓“降低BAF复合物的活性”是指降低与BAF复合物相关的活性水平或相关的下游效应。降低BAF复合物活性的非限制性示例是Sox2活化。BAF复合物的活性水平可使用本领域已知的任何方法来测量，例如Kadoch等人，Cell，2013年，第153卷，第71-85页中描述的方法，其方法以引用方式并入本文。
如本文所用，术语“降解剂”是指包括降解部分的小分子化合物，其中该化合物与蛋白质(例如，BRG1和/或BRM)以导致蛋白质降解的方式相互作用，例如，该化合物的结合导致例如细胞或受试者中蛋白质水平降低至少5％。
如本文所用，术语“降解部分”是指其结合导致蛋白质(例如，BRG1和/或BRM)降解的部分。在一个示例中，该部分与代谢该蛋白质的蛋白酶或泛素连接酶结合，例如BRG1和/或BRM。
所谓“调节降低BAF复合物的活性”是指改变与BAF复合物(例如，GBAF)相关的活性水平或相关的下游效应。BAF复合物的活性水平可使用本领域已知的任何方法来测量，例如Kadoch等人，Cell，第153卷，第71-85页(2013年)中描述的方法，其方法以引用方式并入本文。
所谓“降低BRG1和/或BRM的活性”是指降低与BRG1和/或BRM相关的活性水平或相关的下游效应。抑制BRG1和/或BRM活性的非限制性示例是降低细胞中BAF复合物的水平。BRG1和/或BRM的活性水平可使用本领域已知的任何方法测量。在一些实施方案中，降低BRG1和/或BRM活性的药剂是小分子BRG1和/或BRM降解剂。
所谓“降低BRG1和/或BRM的水平”是指降低细胞或受试者中BRG1和/或BRM的水平。BRG1和/或BRM的水平可使用本领域已知的任何方法测量。
所谓“水平”是指蛋白质或编码该蛋白质的mRNA与参照相比的水平。参照可以是如本文所定义的任何有用的参照。蛋白质的“降低的水平”或“增加的水平”是指与参照相比蛋白质水平的降低或增加(例如，降低或增加约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％、约150％、约200％、约300％、约400％、约500％或更多；与参照相比，降低或增加超过约10％、约15％、约20％、约50％、约75％、约100％或约200％；降低或增加小于约0.01倍、约0.02倍、约0.1倍、约0.3倍、约0.5倍、约0.8倍或更少；或增加超过约1.2倍、约1.4倍、约1.5倍、约1.8倍、约2.0倍、约3.0倍、约3.5倍、约4.5倍、约5.0倍、约10倍、约15倍、约20倍、约30倍、约40倍、约50倍、约100倍、约1000倍或更多)。蛋白质的水平可以相对于样品中的总蛋白质或mRNA的质量/体积(例如，g/dL、mg/mL、μg/mL、ng/mL)或百分比表示。
如本文所用，术语“抑制BRM”是指阻断或降低蛋白质的ATP酶催化结合结构域或溴结构域的水平或活性。BRM抑制可使用本领域已知的方法测定，例如BRM ATP酶测定、NanoDSF测定或BRM荧光素酶细胞测定。
如本文所用，术语“药物组合物”表示含有本文所述的化合物的组合物，该化合物与药学上可接受的赋形剂一起配制并且适于施用于哺乳动物，例如人。通常，药物组合物在政府管理机构的批准下制造或销售，作为用于治疗哺乳动物疾病的治疗方案的一部分。药物组合物可被配制成例如用于以单位剂型(例如，片剂、胶囊、囊片、凝胶囊(gel cap)或糖浆)口服施用；用于局部施用(例如，作为霜剂、凝胶剂、洗剂或软膏剂)；用于静脉内施用(例如，作为不含颗粒栓塞物并且在适合静脉内使用的溶剂体系中的无菌溶液)；或用于任何其他药学上可接受的配制物。
如本文所用，“药学上可接受的赋形剂”是指除本文所述的化合物以外的任何成分(例如，能够悬浮或溶解活性化合物的溶媒)，并且具有对患者基本上无毒和非炎性的性质。赋形剂可包括，例如：防粘剂、抗氧化剂、粘合剂、包衣、压缩助剂、崩解剂、染料(色素)、润肤剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、调味剂、芳香剂、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、防腐剂、印刷油墨、吸附剂、悬浮剂或分散剂、甜味剂和水合水。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指化合物的任何药学上可接受的盐，例如式I或II的任何化合物。本文所述的任何化合物的药学上可接受的盐可包括在合理医学判断范围内、适用于与人和动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激、过敏反应并且与合理的效/险比相称的盐。药学上可接受的盐是本领域众所周知的。例如，药学上可接受的盐描述于：Berge等人，J.Pharmaceutical Sciences，第66卷：第1-19页，1977年和Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(P.H.Stahl和C.G.Wermuth编辑)，Wiley-VCH，2008年。盐可在本文所述化合物的最终分离和纯化期间原位制备或通过使游离碱基团与合适的有机酸反应而单独制备。
本发明的化合物可具有可离子化的基团，以便能够制备为药学上可接受的盐。这些盐可以是涉及无机酸或有机酸的酸加成盐，或者在本发明化合物的酸性形式的情况下，这些盐可由无机碱或有机碱制备。通常，这些化合物以药学上可接受的盐形式制备或使用，这些盐以药学上可接受的酸或碱的加成产物形式制备。合适的药学上可接受的酸和碱以及制备合适的盐的方法是本领域公知的。盐可由药学上可接受的无毒酸和碱(包括无机和有机酸和碱)制备。
所谓“参照”是指用于比较蛋白质或RNA水平的任何有用参照。参照可以是用于比较目的的任何样品、标准品、标准曲线或水平。参照可以是正常的参照样品或参照标准或水平。“参照样品”可以是例如对照，例如预定的阴性对照值诸如“正常对照”或取自相同受试者的先前样品；来自正常健康受试者的样品，诸如正常细胞或正常组织；来自未患疾病的受试者的样品(例如，细胞或组织)；来自被诊断患有疾病但尚未用本发明的化合物治疗的受试者的样品；来自已用本发明的化合物治疗的受试者的样品；或已知正常浓度的纯化蛋白质或RNA的(例如，任何本文所述的)样品。“参照标准或水平”是指来源于参照样品的值或数。“正常对照值”是指示非疾病状态的预定值，例如在健康对照受试者中预期的值。通常，正常控制值被表示为范围(“X与Y之间”)、高阈值(“不高于X”)或低阈值(“不低于X”)。具有在特定生物标记的正常对照值内的测量值的受试者通常被称为在该生物标记的“正常限度内”。正常参考标准或水平可以是来自未患有疾病或病症(例如，癌症)的正常受试者；已用本发明的化合物治疗的受试者的值或数字。在优选的实施方案中，参照样品、标准或水平通过以下标准中的至少一者与受试者样品匹配：年龄、体重、性别、疾病阶段和总体健康状况。在正常参考范围内的纯化蛋白质或RNA(例如，本文所述的任何纯化蛋白或RNA)的水平的标准曲线也可用作参照。
如本文所用，术语“受试者”是指可施用根据本发明的组合物以例如用于实验、诊断、预防和/或治疗目的的任何生物体。典型的受试者包括任何动物(例如，哺乳动物诸如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类和人)。受试者可寻求或需要治疗、要求治疗、正在接受治疗、将在未来接受治疗，或者是由受过训练的专业人员针对特定疾病或状况进行护理的人或动物。
如本文所用，术语“治疗”是指治疗性治疗或其目的是减缓(减轻)不期望的生理状况、病症或疾病或获得有益或期望的临床结果的任何措施。有益的或期望的临床结果包括但不限于：症状的减轻；状况、病症或疾病的程度减轻；状况、病症或疾病的稳定(即，不恶化)状态；状况、病症或疾病进展的发作延迟或减缓；状况、病症或疾病状态的改善或缓解(无论是部分还是全部)；至少一项可测量的身体参数的改善，但患者不一定能察觉；或者状况、病症或疾病的增强或改善。治疗包括在没有过度副作用的情况下引发临床上显著的反应。治疗还包括与未接受治疗的情况下的预期生存期相比，生存期延长。本发明的化合物还可用于，例如，在罹患病症的风险增加的受试者中“预防性治疗”或“预防”该病症。
本发明的一个或多个实施方案的细节在下面的描述中阐述。本发明的其他特征、目的和优点将通过以下描述以及通过权利要求书变得显而易见。
具体实施方式
本公开的特征在于用于抑制BRG1和任选的BRM的化合物。这些化合物可用于调节BAF复合物的活性，例如用于治疗BAF相关病症，诸如癌症(例如，BRG1功能缺失病症)。本文所述的示例性化合物包括具有根据式I的结构的化合物或其药学上可接受的盐。
式I：
其中
环系A为5元至9元杂环基或杂芳基；
m为0、1、2或3；
k为0、1或2；
每个R1独立地为卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C8环烷基或任选取代的C2-C9杂环基；
每个X独立地为卤素；
L为接头；并且
B为降解部分。
本文所述的示例性化合物包括具有根据式II的结构的化合物或其药学上可接受的盐。
式II：
其中
环系A为5元至9元杂环基或杂芳基；
m为0、1、2或3；
k为0、1或2；
每个R1独立地为卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C8环烷基或任选取代的C2-C9杂环基；
每个X独立地为卤素；
L为接头；并且
B为降解部分。
在式I或II的一些实施方案中，
环系A为5元至9元杂环基或杂芳基；
m为0、1、2或3；
k为0、1或2；
每个X独立地为卤素；
L为接头；并且
B为降解部分。
在一些实施方案中，该化合物具有表1中化合物1-66中任一种的结构，或其药学上可接受的盐。
本文描述了其他实施方案以及用于合成生产这些化合物的示例性方法。
药物用途
本文所述的化合物可用于本发明的方法中，并且尽管不受理论束缚，但据信会发挥其调节BAF复合物的水平、状态和/或活性的能力，即通过抑制哺乳动物中BAF复合物内的BRG1和/或BRM蛋白的活性来发挥能力。BAF复合物相关病症包括但不限于BRG1功能缺失突变相关病症。
本发明的一个方面涉及治疗有需要的受试者的BRG1功能缺失突变相关病症的方法，这些病症诸如癌症(例如，非小细胞肺癌、结直肠癌、膀胱癌、原发灶不明的癌症、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌或阴茎癌)。在一些实施方案中，以有效导致以下情况的一者或多者(例如，两者或更多者、三者或更多者、四者或更多者)的量和时间施用化合物：(a)减小的肿瘤大小，(b)减小的肿瘤生长速率，(c)增加的肿瘤细胞死亡，(d)减小的肿瘤进展，(e)减小的转移数目，(f)减小的转移速率，(g)减小的肿瘤复发，(h)增加的受试者存活率，(i)延长的受试者无进展生存期。
治疗癌症可导致肿瘤大小或体积的减小。例如，治疗后，肿瘤大小相对于其治疗前的大小减小5％或更多(例如，10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多)。肿瘤的大小可通过任何可重复的测量手段来测量。例如，肿瘤的大小可被测量为肿瘤的直径。
治疗癌症可进一步导致肿瘤数目的减少。例如，治疗后，肿瘤数目相对于治疗前的数目减少5％或更多(例如，10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多)。肿瘤的数目可通过任何可重复的测量手段来测量，例如，肿瘤的数目可通过计数肉眼可见的或在指定的放大倍数(例如，2x、3x、4x、5x、10x或50x)下可见的肿瘤来测量。
治疗癌症可导致远离原发性肿瘤部位的其他组织或器官中的转移性结节数目的减少。例如，治疗后，转移性结节的数目相对于治疗前的数目减少5％或更多(例如，10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多)。转移性结节的数目可通过任何可重复的测量手段来测量。例如，可通过计数肉眼可见的或在指定的放大倍数(例如，2x、10x或50x)下可见的转移结节来测量转移性结节的数目。
与未治疗的受试者群体相比，治疗癌症可导致根据本发明治疗的受试者群体的平均生存时间延长。例如，平均生存时间延长超过30天(超过60天、90天或120天)。群体平均生存时间的延长可通过任何可重复的手段测量。群体平均生存时间的延长可例如通过计算在开始用本发明的化合物治疗后群体的平均生存时长来测量。群体平均生存时间的延长也可例如通过计算在用本发明的药学上可接受的盐完成第一轮治疗后群体的平均生存时长来测量。
与未治疗的群体相比，治疗癌症还可导致治疗的受试者群体的死亡率降低。例如，死亡率降低超过2％(例如，超过5％、10％或25％)。治疗的受试者群体死亡率的降低可通过任何可重复的手段来测量，例如，通过计算在开始用本发明的药学上可接受的盐治疗后每单位时间群体的疾病相关死亡的平均数目。群体死亡率的降低也可例如通过计算在用本发明的药学上可接受的盐完成第一轮治疗后群体每单位时间疾病相关死亡的平均数目来测量。
可通过本发明治疗的示例性癌症包括但不限于非小细胞肺癌、小细胞肺癌、结直肠癌、膀胱癌、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌、食管胃癌、胰腺癌、肝胆管癌、软组织肉瘤、卵巢癌、头颈癌、肾细胞癌、骨癌、非霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、胚胎肿瘤、生殖细胞瘤、宫颈癌、甲状腺癌、唾液腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、子宫肉瘤、胃肠道间质瘤、CNS癌、胸腺肿瘤、肾上腺皮质癌、阑尾癌、小肠癌或阴茎癌。
组合配制物及其用途
本发明的化合物可与一种或多种治疗剂组合。具体地，治疗剂可以是治疗或预防性治疗本文所述的任何癌症的治疗剂。
组合疗法
本发明的化合物可单独使用或与另外的治疗剂(例如，治疗癌症或与其相关的症状的其他药剂)组合使用，或与其他类型的治疗组合使用来治疗癌症。在组合治疗中，一种或多种治疗化合物的剂量可从单独施用时的标准剂量减少。例如，剂量可根据药物组合和排列凭经验确定，或者可通过等辐射分析推导(例如，Black等人，Neurology，第65卷：第S3-S6页，2005年)。在这种情况下，当组合时化合物的剂量应提供治疗效果。
在一些实施方案中，第二治疗剂是化疗剂(例如，细胞毒性剂或可用于治疗癌症的其他化合物)。这些化疗剂包括烷化剂、抗代谢药、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物和相关抑制剂、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配位络合物、蒽二酮取代的脲、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺皮质类固醇、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素和促性腺激素释放激素类似物。还包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸(LV)、irenotecan、奥沙利铂、卡培他滨、紫杉醇和doxetaxel。化疗剂的非限制性示例包括烷化剂，诸如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸盐诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类诸如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌、美妥替派(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；聚乙酰精宁(尤其是泡番荔枝辛(bullatacin)和泡番荔枝辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康)；苔藓虫素；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；隐藻素(尤其是隐藻素1和隐藻素8)；海兔毒素；多卡霉素(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；五加素；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇；海绵抑制素；氮芥类诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯膦酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸甲氧氮芥、美法仑、新恩比兴、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔类抗生素(例如卡奇霉素，特别是卡奇霉素gammall和卡奇霉素omegall(参见例如Agnew，Chem.Intl.Ed Engl.，第33卷：第183-186页(1994年))；达内霉素，包括达内霉素A；双膦酸盐，诸如氯膦酸盐；埃斯培拉霉素；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、氨茴霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、cactinomycin、carabicin、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、(多柔比星，包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉代-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素诸如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢药，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、曲美沙特；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素，诸如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾丸酯；抗肾上腺素类，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；阿莫司汀；比生群；依达曲沙；得弗伐胺；秋水仙胺；地吖醌；elfomithine；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登素类，诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫匹丹莫(mopidanmol)；nitraerine；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼毒酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；/>多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.)；雷佐生；根霉素；sizofuran；锗螺胺；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素类(特别是T-2毒素、verracurin A、漆斑菌素A和蛇形菌素)；尿烷；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌血生；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷类，例如/>紫杉醇(Bristol-Myers SquibbOncology,Princeton,N.J.)、/>不含氢化蓖麻油、紫杉醇的白蛋白工程化纳米颗粒配制物(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)和/>紫杉醇(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；/>吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂配位络合物，诸如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；/>长春瑞滨；诺消灵；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；伊立替康(例如，CPT-11)；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇类诸如视黄酸；卡培他滨；以及任何上述物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。两种或更多种化疗剂可用于与本文所述的第一治疗剂组合施用的混合物中。组合化疗的合适给药方案是本领域已知的，并且描述于例如Saltz等人，(1999年)Proc ASCO，第18卷：第233a页和Douillard等人，(2000年)Lancet，第355卷：第1041-1047页。
在一些实施方案中，第二治疗剂是用于癌症治疗的生物制剂如细胞因子(例如，干扰素或白介素(例如，IL-2))的治疗剂。在一些实施方案中，生物制剂是抗血管生成剂，诸如抗VEGF剂，例如贝伐珠单抗在一些实施方案中，生物制剂是基于免疫球蛋白的生物制剂，例如单克隆抗体(例如，人源化抗体、完全人抗体、Fc融合蛋白或其功能片段)，其激动靶标以刺激抗癌反应或拮抗对癌症重要的抗原。此类药剂包括美罗华(利妥昔单抗)；赛尼哌(达利珠单抗)；Simulect(巴利昔单抗)；Synagis(帕利珠单抗)；类克(英夫利昔单抗)；赫赛汀(曲妥珠单抗)；Mylotarg(吉妥珠单抗奥佐米星)；Campath(阿仑单抗)；Zevalin(替伊莫单抗)；修美乐(阿达木单抗)；索雷尔(奥马珠单抗)；Bexxar(托西莫单抗-I-131)；Raptiva(依法利珠单抗)；爱必妥(西妥昔单抗)；阿瓦斯汀(贝伐珠单抗)；Tysabri(那他珠单抗)；Actemba(托珠单抗)；Vectibix(帕尼单抗)；Lucentis(兰尼单抗)；Soliris(依库丽单抗)；Cimzia(赛妥珠单抗)；Simponi(戈利木单抗)；Ilaris(卡那单抗)；Stelara(优特克单抗)；Arzerra(奥法木单抗)；Prolia(狄诺塞麦)；Numax(莫维珠单抗)；ABThrax(雷昔库单抗)；Benlysta(贝利尤单抗)；Yervoy(易普利姆玛)；Adcetris(本妥昔单抗)；Perjeta(帕妥珠单抗)；Kadcyla(ado曲妥珠单抗)；和Gazyva(奥滨尤妥珠单抗)。还包括抗体-药物缀合物。
第二药剂可以是非药物治疗的治疗剂。例如，第二治疗剂是放射疗法、冷冻疗法、热疗和/或肿瘤组织的手术切除。
第二药剂可以是检查点抑制剂。在一个实施方案中，检查点的抑制剂是抑制性抗体(例如，单特异性抗体诸如单克隆抗体)。抗体可以是例如人源化的或完全人的。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是融合蛋白，例如Fc受体融合蛋白。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是与检查点蛋白相互作用的药剂诸如抗体。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是与检查点蛋白的配体相互作用的药剂诸如抗体。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是CTLA-4的抑制剂(例如，抑制性抗体或小分子抑制剂)(例如，抗CTLA4抗体诸如易普利姆玛/Yervoy或曲美木单抗)。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是PD-1的抑制剂(例如，抑制性抗体或小分子抑制剂)(例如，纳武单抗/派姆单抗//>匹地利珠单抗/CT-011)。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是PDL1的抑制剂(例如，抑制性抗体或小分子抑制剂)(例如，MPDL3280A/RG7446；MEDI4736；MSB0010718C；BMS 936559)。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是PDL2(例如，PDL2/Ig融合蛋白诸如AMP 224)的抑制剂(例如，抑制性抗体或Fc融合体或小分子抑制剂)。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是B7-H3(例如，MGA271)、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配体或其组合的抑制剂(例如，抑制性抗体或小分子抑制剂)。
在本文所述的任何组合实施方案中，第一治疗剂和第二治疗剂同时或以任一顺序相继施用。第一治疗剂可在第二治疗剂之前或之后最多1小时、最多2小时、最多3小时、最多4小时、最多5小时、最多6小时、最多7小时、最多8小时、最多9小时、最多10小时、最多11小时、最多12小时、最多13小时、最多14小时、最多16小时、最多17小时、最多18小时、最多19小时、最多20小时、最多21小时、最多22小时、最多23小时、最多24小时或最多1-7天、1-14天、1-21天或1-30天立即施用。
药物组合物
本发明的化合物优选以适于体内施用的生物相容性形式配制成用于施用于哺乳动物、优选施用于人的药物组合物。因此，一方面，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含与合适的稀释剂、载体或赋形剂混合的本发明的化合物。
本发明的化合物可以游离碱的形式、以盐、溶剂化物的形式和作为前药使用。所有形式都在本发明的范围内。根据本发明的方法，所述化合物或其盐、溶剂化物或前药可以多种形式施用于患者，具体取决于所选择的施用途径，如本领域技术人员所理解的。本发明的化合物可例如通过口服、肠胃外、口含、舌下、经鼻、直肠、贴剂、泵或经皮施用来施用，并且可相应地配制药物组合物。肠胃外施用包括静脉内、腹膜内、皮下、肌内、经上皮、经鼻、肺内、鞘内、直肠和局部施用方式。肠胃外施用可以是在选定的时间段内连续输注。
本发明的化合物可例如与惰性稀释剂或与可同化的食用载体一起口服施用，或者可将其包封在硬壳或软壳明胶胶囊中，或者可将其压制成片剂，或者可将其直接与饮食的食物混合。对于口服治疗施用，本发明的化合物可与赋形剂混合并以可摄取片剂、口含片剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆和薄片的形式使用。本发明的化合物还可肠胃外施用。本发明化合物的溶液可在适当地与表面活性剂诸如羟丙基纤维素混合的水中制备。分散体也可在甘油、液体聚乙二醇、DMSO及其混合物(有或没有醇)和油中制备。在通常的储存和使用条件下，这些制剂可含有防腐剂以防止微生物的生长。用于选择和制备合适配制物的常规程序和成分描述于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences(2003年，第20版)和1999年出版的The United States Pharmacopeia:The National Formulary(USP 24NF19)中。适于注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散液以及用于临时制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。在所有情况下，该剂型必须是无菌的，并且必须是达到可通过注射器轻松施用程度的流体。供经鼻施用的组合物可方便地配制成气雾剂、滴剂、凝胶和粉剂。气雾剂配制物通常包含活性物质在生理学上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或细悬浮液，并且通常以单剂量或多剂量的量以无菌形式存在于密封容器中，该容器可采用与雾化装置一起使用的药筒或再装剂的形式。另选地，密封容器可为一体配送装置诸如单剂量鼻用吸入器或装配用于在使用后丢弃第计量阀的气雾剂配送器。当剂型包括气雾剂配送器时，它将含有推进剂，其可以是压缩气体诸如压缩空气，或有机推进剂诸如氟氯烃。气雾剂剂型也可呈泵压雾化器形式。适合于口含或舌下施用的组合物包括片剂、含片和锭剂，其中活性成分与载体诸如糖、阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶和甘油状物一起配制。用于直肠施用的组合物方便地为含有常规栓剂基质诸如可可脂的栓剂形式。本文所述的化合物可肿瘤内施用，例如作为肿瘤内注射。肿瘤内注射是直接注射到肿瘤脉管系统中，并且特别考虑用于离散的、实体的、可触及的肿瘤。局部、区域或全身施用也可能是合适的。可有利地通过向肿瘤施用一次或多次注射(例如以大约1cm的间隔)来接触本文所述的化合物。在手术介入的情况下，本发明可在手术前使用，诸如使无法手术的肿瘤接受切除。在适当的情况下也可应用连续施用，例如，通过将导管植入肿瘤或肿瘤脉管系统中。
如本文所述，本发明的化合物可单独或与药学上可接受的载体组合施用于动物，例如人，其比例由化合物的溶解度和化学性质、所选择的施用途径和标准药学实践决定。
剂量
本发明化合物和/或包含本发明化合物的组合物的剂量可根据许多因素而变化，诸如化合物的药效学性质；施用模式；接受者的年龄、健康状况和体重；症状的性质和程度；治疗的频率和同时治疗的类型，如果有的话；以及化合物在待治疗动物体内的清除率。本领域技术人员可基于上述因素确定合适的剂量。本发明的化合物可最初以合适的剂量施用，该剂量可根据临床反应按需要进行调整。通常，当本发明的化合物以例如0.05mg至3000mg(以固体形式测量)的日剂量施用于人时，可获得令人满意的结果。剂量范围包括例如10mg至1000mg(例如50mg至800mg)。在一些实施方案中，施用50mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg或1000mg的化合物。
另选地，可使用患者的体重来计算剂量。例如，施用于患者的化合物或其药物组合物的剂量范围可为0.1mg/kg至100mg/kg(例如0.25mg/kg至25mg/kg)。在示例性非限制性实施方案中，剂量范围可为0.5mg/kg至5.0mg/kg(例如，0.5mg/kg、1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、3.0mg/kg、3.5mg/kg、4.0mg/kg、4.5mg/kg或5.0mg/kg)或5.0mg/kg至20mg/kg(例如，5.5mg/kg、6.0mg/kg、6.5mg/kg、7.0mg/kg、7.5mg/kg、8.0mg/kg、8.5mg/kg、9.0mg/kg、9.5mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg或20mg/kg)。
实施例
下面的实施例中使用了以下缩写。
Ac 乙酰基
ACN或MeCN 乙腈
AcOH 乙酸
Ac2O 乙酸酐
aq. 水溶液
Boc 叔丁氧基羰基
Bu或n-Bu 丁基
CDI 1,1'-羰基二咪唑
DCE或1,2-DCE 1,2-二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DIAD 偶氮二羧酸二异丙酯
DIPEA或DIEA N,N-二异丙基乙胺
DMAP 4-(二甲基氨基)吡啶
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EA或EtOAc 乙酸乙酯
EDCI N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐
equiv 当量
Et3N或TEA 三乙胺
EtOH 乙醇
FA 甲酸
h或hr 小时
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HOBt或HOBT 1-羟基苯并三唑水合物
iPr 异丙基
MeOH 甲醇
Me4t-BuXphos 二叔丁基-[2,3,4,5-四甲基-6-(2,4,6-三异丙基苯基)苯基]磷烷
min 分钟
MTBE 叔丁基甲基醚
n-BuLi 正丁基锂
NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮
OAc 乙酸酯
Pd/C 碳载钯
PDC 重铬酸吡啶鎓
PdCl2(dtbpf)或 二氯[1,1'-双(二叔丁基膦基)二茂铁]钯(II)
Pd(dtbpf)Cl2
PdCl2(dppf)或 [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)
Pd(dppf)Cl2
Pd2(dba)3 三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)钯(0)
Pd(PPh3)2Cl2 二氯双(三苯基膦)钯(II)
PE 石油醚
PPh3 三苯基膦
Pr 正丙基
Py 吡啶
rac 外消旋
Rf 保留因子
r.t.或rt 室温
sat. 饱和
SFC 超临界流体色谱法
t-Bu 叔丁基
tBuXphos-Pd-G3或 [2-(2-氨基苯基)苯基]-甲基磺酰氧基钯；二叔丁基-[2-
tBuXphosPdG3或 (2,4,6-三异丙基苯基)苯基]磷烷
t-BuXphos-Pd(第3代)
TFA 三氟乙酸
Tf2O 三氟甲磺酸酐
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
Xantphos-Pd-G3 [2-(2-氨基苯基)苯基]-甲基磺酰氧基-钯；(5-二苯基磷烷基-9,9-二甲基-呫吨-4-基)-二苯基-磷烷
实施例1.化合物的制备
2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(I-1)的制备
步骤1：2-(3-溴异噁唑-5-基)乙-1-醇的制备
将3-丁炔-1-醇(552.89g，7888.26mmol，4当量)和KHCO3(592.30g，5916.197mmol，3当量)在EtOAc(2600mL)和H2O(260mL)中的溶液在室温下搅拌。在室温下，在60分钟内向上述混合物中逐滴加入1-溴-N-羟基甲烷碳酰亚胺溴(400.00g的EA溶液(840mL)，1972.066mmol，1.00当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用水(500mL×2)洗涤，并且合并的有机层经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EtOAc(30:1)洗脱，得到中间体标题化合物(338.2g，88.98％)，为灰白色固体。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝192.
步骤2：2-(3-溴异噁唑-5-基)乙酸的制备
将2-(3-溴异噁唑-5-基)乙-1-醇(360.00g)在丙酮(3600mL)中的溶液在0℃和氮气气氛下搅拌。在0℃下在1小时内向上述混合物中逐滴加入琼斯试剂(1760mL)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。在0℃下，将反应物用水/冰猝灭。将所得混合物用EtOAc(1000mL×3)萃取。将合并的有机层用水(500mL×2)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到标题化合物(348.6g，粗品)，为绿色固体，其无需进一步纯化即可直接使用。(LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝206.
步骤3：2-(3-溴异噁唑-5-基)乙酸乙酯的制备
将2-(3-溴异噁唑-5-基)乙酸(397.6g，1930.144mmol，1.00当量)和H2SO4(18.92g，193.014mmol，0.1当量)在EtOH(2000mL)中的溶液在70℃下搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩。将残余物用EtOAc(3000mL)稀释，用水(500mL×2)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EtOAc(35:1)洗脱，得到标题化合物(355g，78.61％)，为无色油状物。(LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝234.
步骤4：2-(3-溴异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸乙酯的制备
在0℃和氮气气氛下，向t-BuOK(244.51g，2179.031mmol，1.5当量)和2-(3-溴异噁唑-5-基)乙酸乙酯(340.00g，1452.687mmol，1.00当量)在THF(2000mL)中的搅拌溶液中逐滴加入2-碘丙烷(321.03g，1888.493mmol，1.3当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜，然后在0℃下用水/冰稀释。将所得混合物用EtOAc(1000mL×2)萃取。将合并的有机层用水(500mL×1)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/THF(10:1)洗脱，得到标题化合物(284.1g，70.82％)，为无色油状物。(LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝276.
步骤5：2-(3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的制备
在0℃下，向制备2-(3-溴异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸乙酯(90.00g，325.933mmol，1.00当量)在MeOH(270mL)中的搅拌溶液中加入KOH(274.30g，4888.995mmol，15.00当量)在MeOH(210mL)中的溶液。将反应混合物在80℃下搅拌过夜。将所得溶液用1M HCl溶液(水溶液)酸化至pH 4并减压浓缩。将所得混合物用EtOAc(1800mL)稀释并过滤。用EtOAc(100mL×3)洗涤滤饼。将滤液减压浓缩，得到标题化合物(62.9g，96.88％)，为黄色油状物，其无需进一步纯化即可直接使用。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝200.
步骤6：2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸的制备
在室温下，向2-(3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(62.90g，315.754mmol，1.00当量)在HOAc(450.00mL)中的搅拌溶液中加入48％HBr(450.00mL)。将所得混合物在60℃下搅拌16小时。将所得混合物减压浓缩，并将残余物通过快速C18-快速色谱法纯化，洗脱梯度为0％至100％MeCN的水溶液(含有0.05％FA)。将纯级分蒸发至干，得到标题化合物(43.3g，74.05％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝186.
步骤7：2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(I-1)的制备
在0℃下，向2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(20g，108.004mmol，1.00当量)在MeOH(72mL)中的搅拌溶液中加入SOCl2(35.26mL，486.059mmol，4.50当量)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将所得混合物减压浓缩，并将残余物用水(30mL)稀释，并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和NaCl水溶液(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，洗脱梯度为0％至100％THF/石油醚。将纯级分蒸发至干，得到化合物I-1(15.1g，70.18％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.24(s,1H),5.95(s,1H),3.71–3.58(m,4H),2.32–2.20(m,1H),0.88(dd,J＝34.2,6.7Hz,6H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝200.
(2S,4R)-1-{2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基}-4- 羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-2)的制备。
步骤1：2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯的制备
向2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(I-1，7g，35.140mmol，1.00当量)和2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(7.62g，38.654mmol，1.1当量)在DMF(70mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(9.71g，70.280mmol，2当量)。将所得混合物在80℃下搅拌过夜，然后冷却至室温并用EtOAc(300mL)稀释。将有机层用水(300mL)洗涤，接着用盐水(300mL)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(5.2g，46.92％)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝316.
步骤2：2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸
将2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(5.2g，16.489mmol，1.00当量)和LiOH(1.97g，82.445mmol，5当量)在MeOH(15mL)和H2O(45mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用浓HCl酸化至pH 5，然后用EtOAc(300mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将粗产物混合物无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝302.
步骤3：(2S,4R)-1-((R)-2-(3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰 基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(I-2)。
向2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(4.95g，16.427mmol，1.00当量)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(5.44g，16.427mmol，1当量)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中加入HATU(6.87g，18.070mmol，1.1当量)和DIEA(6.37g，49.281mmol，3当量)。将所得混合物在室温下搅拌2小时，然后用EtOAc(300mL)稀释。将有机层用水(300mL)洗涤，接着用盐水(300mL)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EA(1:1)洗脱，得到粗产物。将粗产物(6.2g)通过手性SFC纯化，柱：CHIRAL ART Amylose-SA,，3*25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH--HPLC；流速：50mL/分钟；梯度：等度40％B；柱温(℃)：35，得到I-2(2.8g，27.73％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.99(d,J＝3.4Hz,1H),8.43(d,J＝7.7Hz,1H),7.49–7.41(m,2H),7.41–7.31(m,2H),6.14(s,1H),5.10(d,J＝3.6Hz,1H),4.97–4.87(m,1H),4.81(t,J＝5.2Hz,1H),4.37(t,J＝7.9Hz,1H),4.32–4.23(m,1H),4.09(d,J＝5.3Hz,2H),3.73–3.49(m,6H),3.45(d,J＝10.8Hz,1H),2.46(d,J＝2.1Hz,3H),2.31–2.15(m,1H),2.03(ddd,J＝11.9,8.1,3.0Hz,1H),1.78(ddd,J＝12.8,8.0,4.7Hz,1H),1.41(dd,J＝29.6,7.0Hz,3H),1.13(t,J＝7.0Hz,6H),0.96(t,J＝6.4Hz,3H),0.81(dd,J＝14.4,6.7Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝615.35.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基)丁酰基)- N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(I-3)的制备
在室温下，向H2SO4(1M)(6.00mL)和THF(6.00mL)的搅拌溶液中加入(2S,4R)-1-((R)-2-(3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(300.00mg，0.499mmol，1.00当量)。将所得混合物在50℃下搅拌8小时。在0℃下，将反应物用水/冰猝灭，然后用饱和NaHCO3(水溶液)将混合物碱化至pH 7。将所得混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩，得到I-3(256mg，97.3％)，为白色固体，其无需进一步纯化即可直接使用。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝541.
以2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯和合适的烷基溴为原料，以与中间体I-3的制备中所述类似的方式来制备表2中的以下中间体。
表2.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(2-(3-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6- 基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑- 5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
步骤1：3-[2-(3,6-二氯哒嗪-4-基)乙炔基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
在室温和氮气气氛下，向3,6-二氯-4-碘哒嗪(200mg，0.728mmol，1.00当量)和3-乙炔基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(145.06mg，0.801mmol，1.1当量)在甲苯(5.00mL)中的搅拌混合物中加入Pd(PPh3)2Cl2(76.61mg，0.109mmol，0.15当量)、CuI(27.71mg，0.146mmol，0.2当量)和TEA(220.88mg，2.184mmol，3当量)。将所得混合物在室温下搅拌2小时，然后过滤。将滤液减压浓缩，并将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度从40％到60％。这得到标题化合物(170mg，64.07％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝328.
步骤2：3-{3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基}氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
在室温和氮气气氛下，向3-[2-(3,6-二氯哒嗪-4-基)乙炔基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(160mg，0.488mmol，1.00当量)在NMP(5mL)中的搅拌混合物中加入硫氢化钠(32.80mg，0.586mmol，1.2当量)。将所得混合物在100℃下搅拌2小时，冷却并过滤。将滤液通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度从30％到50％。这得到标题化合物(122mg，71.43％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝326.
步骤3：3-[3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯 的制备
在室温和氮气气氛下，向3-{3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基}氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(122mg，0.374mmol，1.00当量)和2-羟基苯基硼酸(154.94mg，1.122mmol，3当量)在二噁烷(4mL)和H2O(1mL)中的搅拌混合物中加入Cs2CO3(244.01mg，0.748mmol，2当量)和XPhos Pd G3(63.39mg，0.075mmol，0.2当量)。将所得混合物在80℃下搅拌2小时，然后过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度从40％到60％。这得到标题化合物(85mg，53.28％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝384.
步骤4：2-[6-(氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚的制备
在室温和氮气气氛下，向3-[3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(85mg，0.222mmol，1.00当量)在DCM(4mL)中的搅拌混合物中逐滴加入TFA(1mL)。将所得混合物搅拌2小时，然后减压浓缩。将粗产物无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝284.
步骤2：(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(2-(3-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒 嗪-6-基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基 噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
向2-[6-(氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(15mg，0.053mmol，1.00当量)和2-[6-(氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(28.62mg，0.053mmol，1当量)在DCM(1mL)和MeOH(1mL)中的搅拌溶液中加入NaBH3CN(9.98mg，0.159mmol，3当量)和AcOH(0.15mL)。将混合物在室温和氮气气氛下搅拌1小时。无需任何附加处理，将混合物通过反相快速柱色谱法纯化，并且所得粗产物通过手性制备型HPLC纯化，条件如下(NB-Prep-HPLC-01)：柱，XBridge Shield RP18OBD柱，19*150mm，5μm；流动相，水(10mmol/L NH4HCO3)和ACN(49％ACN，至多55％，6分钟，得到标题化合物(15mg，35.07％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.40(s,1H),8.99(s,1H),8.73(d,J＝4.9Hz,1H),8.41(d,J＝7.7Hz,1H),8.09–7.94(m,1H),7.51–7.41(m,3H),7.41–7.31(m,3H),7.09–6.95(m,2H),6.02(d,J＝50.5Hz,1H),5.10(s,1H),4.92(t,J＝7.2Hz,1H),4.38(t,J＝7.8Hz,1H),4.29(s,1H),4.18(t,J＝5.3Hz,2H),4.15–4.03(m,1H),3.84–3.61(m,4H),3.52–3.42(m,1H),3.42–3.35(m,2H),2.85(t,J＝5.4Hz,2H),2.46(d,J＝3.1Hz,3H),2.30–2.18(m,1H),2.10–1.72(m,2H),1.49–1.33(m,3H),0.97(d,J＝6.7,3.7Hz,3H),0.82(d,J＝10.1,6.6Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝808.6.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(2-(4-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6- 基)哌啶-1-基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基) 苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
步骤1：4-((3,6-二氯哒嗪-4-基)乙炔基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体2)的制备。
在室温和氮气气氛下，向4-乙炔基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.00g，4.778mmol，1.00当量)和4-溴-3,6-二氯哒嗪(1.20g，5.256mmol，1.1当量)在甲苯(10.00mL)中的搅拌混合物中加入Pd(PPh3)2Cl2(0.50g，0.717mmol，0.15当量)、CuI(0.18g，0.956mmol，0.2当量)和TEA(1.45g，14.334mmol，3当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩。将残余物溶解于DMF(15.00mL)中并通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度从0％到100％，25分钟，得到中间体2(596mg，33.61％)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝356.25
步骤2：4-(3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体3)的制备。
在室温下，向中间体2(596.00mg，1.673mmol，1.00当量)在NMP(10.00mL)中的搅拌溶液中加入NaSH(93.79mg，1.673mmol，1.0当量)。将所得混合物在100℃下搅拌1小时，然后使其冷却至室温。将所得混合物用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物溶解于DMF(10.00mL)中并通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％；得到中间体3(356mg，49.91％)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝353.87.
步骤3：4-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间 体4)的制备。
向中间体3(350.00mg，0.989mmol，1.00当量)和2-羟基苯基硼酸(204.63mg，1.484mmol，1.5当量)在二噁烷(5.00mL)和H2O(1.00mL)中的溶液中加入Cs2CO3(644.51mg，1.978mmol，2.0当量)和XPhos Pd G3(83.72mg，0.099mmol，0.1当量)。在90℃和氮气气氛下搅拌过夜后，将混合物减压浓缩。将残余物溶解于DMF(10.00mL)中并通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度在20分钟内从0％到100％；得到中间体4(188mg，44.85％)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝411.52.
步骤4：2-(6-(哌啶-4-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基)苯酚(中间体5)的制备。
在室温下，向中间体4(188.00mg，0.457mmol，1.00当量)在DCM(9.00mL)中的搅拌溶液中加入TFA(3.00mL)。将所得混合物搅拌4小时，然后减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeCN的水溶液(0.05FA)，梯度在20分钟内从0％到100％；得到中间体5(130mg，91.38％)，为浅棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝311.40.
步骤5：(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(2-(4-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒 嗪-6-基)哌啶-1-基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑- 5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备。
将中间体5(10.37mg，0.034mmol，1.2当量)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-3，15.00mg，0.028mmol，1.00当量)在MeOH(1.00mL)和DCM(1.00mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟。然后在室温下加入NaBH3CN(5.23mg，0.084mmol，3.0当量)和AcOH(0.01mL)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩，并将残余物通过制备型HPLC纯化，条件如下(柱：Xselect CSH F-Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.05％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在7分钟内从20％B到51％B，得到标题化合物(5.8mg，23.58％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.37(s,1H),8.98(s,1H),8.72(d,J＝2.8Hz,1H),8.41(d,J＝7.7Hz,1H),8.01(dd,J＝8.0,1.7Hz,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,2H),7.37(dd,J＝8.4,3.4Hz,4H),7.02(dd,J＝12.4,7.8Hz,2H),6.13(s,1H),5.10(d,J＝3.7Hz,1H),4.91(t,J＝7.3Hz,1H),4.38(d,J＝7.8Hz,1H),4.29(s,3H),3.74–3.64(m,2H),3.45(d,J＝9.9Hz,1H),3.16–3.01(m,3H),2.82–2.70(m,2H),2.46(s,3H),2.29–2.15(m,3H),2.13–1.98(m,3H),1.86–1.72(m,3H),1.38(d,3H),0.97(d,J＝6.2Hz,3H),0.83(d,J＝14.1,6.7Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝836.50
使用与上述那些程序类似的程序，使用合适的胺和醛(或酮)来制备表3中的化合物。
表3.
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(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2S)- 3-甲基-2-[3-(哌嗪-1-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-4)和
(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)- 3-甲基-2-[3-(哌嗪-1-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-5)的制备
步骤1：3-甲基-2-[3-[(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷磺酰基)氧基]-1,2-噁唑- 5-基]丁酸甲酯(中间体2)的制备。
在室温下，向2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(100.00mg，0.502mmol，1.00当量)在MeCN(0.50mL)中的搅拌溶液中加入全氟丁磺酰氟(303.29mg，1.004mmol，2.00当量)和K2CO3(208.13mg，1.506mmol，3.00当量)。将所得混合物搅拌3小时，然后在0℃下用水小心猝灭。将所得混合物用EA(2×50mL)萃取，并将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EA(2/1)洗脱，得到中间体2(217mg，粗品)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝482.
步骤2：4-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1,2-噁唑-3-基]哌嗪-1-羧酸 叔丁酯(中间体3)的制备。
在室温下，向中间体2(217.00mg，0.451mmol，1.00当量)在DMF(3.00mL)中的搅拌溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(83.98mg，0.451mmol，1.00当量)。将所得混合物在130℃下搅拌1小时。使混合物冷却至室温。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％。这得到中间体3(54mg，32.59％)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝368.
步骤3：2-[3-[4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基]-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(中间 体4)的制备。
在室温下，向中间体3(54.00mg，0.147mmol，1.00当量)在MeOH(0.80mL)中的搅拌溶液中加入THF(0.80mL)和H2O(0.80mL)，然后加入LiOH.H2O(18.50mg，0.441mmol，3.00当量)。将所得混合物在室温下再搅拌1小时。将混合物用HCl(1M，水溶液)酸化至pH 6，然后用EA(2×50mL)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。这得到中间体4(52mg，粗品)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝354.
步骤4：4-(5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯 基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁唑-3-基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯(中间体6)的制备。
在室温下，向中间体4(52.00mg，0.119mmol，1.00当量)在DMF(2.00mL)中的搅拌溶液中加入HATU(135.56mg，0.357mmol，3.00当量)和DIEA(76.80mg，0.595mmol，5.00当量)。在室温下，向上述混合物中加入(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(70.90mg，0.214mmol，1.80当量)。将所得混合物再搅拌1小时。将混合物直接通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％。这得到中间体6(73mg，92.12％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝667.
步骤5：(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1- [(2R)-3-甲基-2-[3-(哌嗪-1-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(中间体7)； (2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2S)-3-甲基- 2-[3-(哌嗪-1-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(中间体8)的制备。
将中间体6(73mg)通过SFC纯化，条件如下：柱，CHIRAL ART Amylose-C NEO，3*25cm，5μm；流动相，MeOH。这得到中间体7(37mg，第二峰)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝667，和中间体8(34mg，第一峰)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝667.
步骤6：(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1- [(2R)-3-甲基-2-[3-(哌嗪-1-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-4)的制 备。
在0℃下，向中间体7(37.00mg，0.055mmol，1.00当量)在DCM(1.50mL)中的搅拌溶液中加入HCl的1,4-二噁烷(1.50mL，26.276mmol，473.57当量)溶液。将所得混合物在室温下搅拌1小时，然后减压浓缩。这得到I-4(45mg，粗品)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝567.
步骤7：(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1- [(2S)-3-甲基-2-[3-(哌嗪-1-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-5)的制 备。
/>
在0℃下，向中间体8(34.00mg，0.051mmol，1.00当量)在DCM(1.50mL)中的搅拌溶液中加入HC的1,4-二噁烷(1.50mL，26.276mmol，515.35当量)溶液。将所得混合物在室温下搅拌1小时，然后减压浓缩。这得到I-5(45mg，粗品)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝567.
(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[4-(2-{3-[3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒 嗪-6-基]氮杂环丁烷-1-基}乙酰基)哌嗪-1-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-N- [(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
步骤1：2-(3-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)氮杂环丁烷-1-基)乙酸 叔丁酯(中间体2)的制备
在室温下，向2-[6-(氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(30mg，0.106mmol，1.00当量)和K2CO3(43.90mg，0.318mmol，3当量)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中分批加入2-溴乙酸叔丁酯(24.78mg，0.127mmol，1.2当量)。将所得混合物在80℃下搅拌1小时，并将所得混合物用水(3mL)稀释，随后用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×5mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩，得到中间体2(46mg，粗品)，为黄色固体。(LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝398.
步骤2：2-(3-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)氮杂环丁烷-1-基)乙酸 (中间体3)的制备
/>
在室温和氮气气氛下，向2-{3-[3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]氮杂环丁烷-1-基}乙酸叔丁酯(40mg，0.101mmol，1.00当量)和TFA(0.4mL)在DCM(2mL)中的溶液搅拌1小时。将所得混合物减压浓缩，得到中间体3(34.3mg，粗品)，为棕色固体。(LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝342.
步骤3：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[4-(2-{3-[3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3- c]哒嗪-6-基]氮杂环丁烷-1-基}乙酰基)哌嗪-1-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-N- [(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物3)的制备
向{3-[3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]氮杂环丁烷-1-基}乙酸(34.3mg，0.100mmol，1.00当量)和(2S,4R)-4-甲基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(哌嗪-1-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-4，42.56mg，0.075mmol，0.75当量)在DMF(1.5mL)中的搅拌溶液中加入EDCI(38.52mg，0.200mmol，2当量)、HOBT(27.15mg，0.200mmol，2当量)和DIEA(51.94mg，0.400mmol，4当量)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。无需任何附加处理，将混合物通过反相快速色谱法纯化，条件如下(柱：Xselect CSH F-Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.05％FA)，流动相B：MeOH--HPLC；流速：25mL/分钟；梯度：在8分钟内从40％B到71％B，保持71％B；得到标题化合物(10.2mg，11.41％)，为浅黄色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.70(s,1H),9.00(s,1H),8.80(d,J＝8.3Hz,1H),8.40(d,J＝7.7Hz,1H),8.04(d,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.71(d,J＝18.1Hz,1H),7.48–7.35(m,5H),7.10–6.97(m,2H),6.25(s,1H),4.92(t,J＝7.2Hz,1H),4.75–4.24(m,9H),3.91–3.62(m,1H),3.66–3.55(m,4H),3.36–3.27(m,3H),3.26–3.18(m,3H),2.46(s,3H),2.32–2.23(m,1H),2.11–1.99(m,1H),1.87–1.70(m,1H),1.39(d,J＝6.9Hz,3H),0.98(d,3H),0.82(d,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝890.55.
使用与上述用于化合物3的制备的那些程序类似的程序，使用合适的胺和羧酸来制备表4中的化合物。
表4.
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1-{5-[(2R)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-{[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯 基]乙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁唑-3-基}哌啶-4-羧 酸(I-6)的制备。
步骤1：1-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1,2-噁唑-3-基]哌啶-4-羧酸 叔丁酯(中间体2)的制备。
在室温下，向3-甲基-2-[3-[(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷磺酰基)氧基]-1,2-噁唑-5-基]丁酸甲酯(300.00mg，0.623mmol，1.00当量)和哌啶-4-羧酸叔丁酯盐酸盐(414.63mg，1.869mmol，3.00当量)在DMF(3.00mL)中的搅拌溶液中加入DIEA(402.80mg，3.115mmol，5.00当量)。将所得混合物在130℃下搅拌1小时。将混合物冷却至室温，并且将所得混合物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％。这产生中间体2(78mg，34.15％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝367.
步骤2：2-[3-[4-(叔丁氧基羰基)哌啶-1-基]-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(中间 体3)的制备。
在室温下，向中间体2(78.00mg，0.199mmol，1.00当量)在MeOH(1.00mL)和H2O(1.00mL)中的搅拌溶液中加入LiOH·H2O(25.08mg，0.597mmol，3.00当量)。将所得混合物在室温下搅拌5小时。然后将混合物用1M HCl(水溶液)酸化至pH 6。将混合物直接通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％，得到中间体3(63mg，89.74％)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝353.
步骤3：1-(5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯 基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁唑-3-基)哌啶-4-羧 酸叔丁酯(中间体4)的制备。
/>
在室温下，向中间体3(63.00mg，0.179mmol，1.00当量)在DMF(2.00mL)中的搅拌溶液中加入HATU(203.91mg，0.537mmol，3.00当量)和DIEA(115.52mg，0.895mmol，5.00当量)。向上述混合物中加入(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(118.37mg，0.322mmol，1.80当量)，并将所得混合物再搅拌1小时。将混合物直接通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％；得到中间体4(93mg，78.13％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝666.
步骤4：1-{5-[(2R)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-{[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5- 基)苯基]乙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁唑-3-基}哌 啶-4-羧酸叔丁酯(中间体5)和1-{5-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-{[(1S)-1-[4-(4-甲基- 1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁 唑-3-基}哌啶-4-羧酸叔丁酯(中间体5’)的制备
将中间体4(93mg)通过SFC纯化，条件如下：柱，NB_CHIRALPAK AD-H，3*25cm，5μm；流动相，MeOH；检测器，UV 254/220nm。这产生中间体5(峰1，41mg，44.09％)，为白色固体，LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝666；和5’(峰2，35mg，37.63％)，为白色固体，LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝666。
步骤5：1-{5-[(2R)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-{[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5- 基)苯基]乙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁唑-3-基}哌 啶-4-羧酸(I-6)和1-{5-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-{[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑- 5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁唑-3-基}哌 啶-4-羧酸(I-7)的制备。
/>
在室温下，向中间体5(41.00mg，0.048mmol，1.00当量)在DCM(2.00mL)中的搅拌溶液中加入TFA(1.00mL)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。将所得混合物减压浓缩。这产生I-6(35mg，粗品)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝610.
使用相同的方法获得中间体I-7(29mg，粗品)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝610.
(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-(3-(4-(3-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6- 基)氮杂环丁烷-1-羰基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基 噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
向1-(5-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)哌啶-4-羧酸(I-7，10.0mg，0.016mmol，1.00当量)和2-[6-(氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(4.7mg，0.016mmol，1.00当量)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入EDCI(6.3mg，0.032mmol，2.00当量)、HOBT(4.4mg，0.032mmol，2.00当量)和DIEA(20.6mg，0.160mmol，10.00当量)。将所得混合物搅拌2小时。将粗混合物直接通过制备型HPLC纯化，条件如下(柱：XBridge PrepOBD C18柱，30*150mm，5μm；流动相A：水，含有10mM NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在8分钟内从32％B到60％B，保持60％B；得到标题化合物(1.3mg，8.89％)，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.88(s,1H),8.68(s,1H),7.98(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),7.55–7.30(m,6H),7.10–6.95(m,2H),6.16(s,1H),5.01(q,J＝6.9Hz,1H),4.83–4.78(m,1H),4.64–4.33(m,5H),4.28–4.15(m,1H),3.82–3.59(m,5H),3.01–2.81(m,2H),2.57(s,1H),2.48(s,3H),2.46–2.34(m,1H),2.28–2.17(m,1H),2.07–1.93(m,1H),1.88–1.69(m,4H),1.56(dd,J＝28.2,7.0Hz,3H),1.07(d,J＝6.6Hz,3H),1.00–0.83(m,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝875.55
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(4-(3-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6- 基)氮杂环丁烷-1-羰基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基 噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
向1-(5-((R)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)哌啶-4-羧酸(I-6，15.0mg，0.025mmol，1.00当量)和2-[6-(氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(10.5mg，0.037mmol，1.50当量)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入EDCI(9.4mg，0.050mmol，2.00当量)、HOBT(6.7mg，0.050mmol，2.00当量)和DIEA(31.8mg，0.250mmol，10.00当量)。将所得混合物搅拌2小时。将粗产物通过制备型HPLC纯化，条件如下(柱：XBridge Prep OBDC18柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在8分钟内从32％B到60％B，得到标题化合物(2.1mg，9.65％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.89(s,1H),8.68(s,1H),8.04–7.94(m,1H),7.56–7.31(m,6H),7.16–6.95(m,2H),6.13(s,1H),5.05(q,J＝6.8Hz,1H),4.83–4.74(m,1H),4.60–4.32(m,5H),4.28–4.16(m,1H),3.91–3.70(m,3H),3.67–3.46(m,2H),3.01–2.85(m,2H),2.69–2.52(m,1H),2.49(s,3H),2.46–2.28(m,1H),2.25–2.13(m,1H),2.06–1.91(m,1H),1.88–1.72(m,4H),1.63–1.48(m,3H),1.07(d,J＝6.5Hz,3H),0.97–0.85(m,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝875.50.
(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[4-(2-{3-[3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒 嗪-6-基]氮杂环丁烷-1-基}-2-氧代乙基)哌嗪-1-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]- N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
步骤1：2-(4-{5-[(2R)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-{[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑- 5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁唑-3-基}哌 嗪-1-基)乙酸叔丁酯(中间体2)的制备
将(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(哌嗪-1-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(80mg，0.141mmol，1.00当量)、2-溴乙酸叔丁酯(1.0当量)和K2CO3(39.02mg，0.282mmol，2当量)在DMF(2mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将混合物通过反相快速色谱法直接纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，ACN的水溶液，梯度在20分钟内从0％到100％；得到中间体2(42mg，43.70％)，为灰白色固体。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝670.
步骤2：(4-{5-[(2R)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-{[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5- 基)苯基]乙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁唑-3-基}哌 嗪-1-基)乙酸(I-8)的制备
将中间体2(37mg，0.054mmol，1.00当量)和TFA(0.5mL)在DCM(1.5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。无需任何附加处理，将所得混合物减压浓缩，得到I-8(33mg，粗品)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝625.
步骤3：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[4-(2-{3-[3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3- c]哒嗪-6-基]氮杂环丁烷-1-基}-2-氧代乙基)哌嗪-1-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰 基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物6)的制 备
将I-8(27mg，0.043mmol，1.00当量)、EDCI(16.57mg，0.086mmol，2当量)、HOBT(11.68mg，0.086mmol，2当量)和DIEA(55.85mg，0.430mmol，10当量)在DMF(1mL)中的混合物在室温下搅拌5分钟。然后加入2-[6-(氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(14.69mg，0.052mmol，1.2当量)，并将所得混合物在室温下搅拌2小时。无需任何附加处理，将粗产物通过制备型HPLC纯化，条件如下(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在8分钟内从40％B到48％B；得到标题化合物(8.1mg，20.78％)，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.21(s,1H),8.99(s,1H),8.75(s,1H),8.40(d,J＝7.7Hz,1H),8.02(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.58(s,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,2H),7.41–7.33(m,3H),7.04–6.97(m,2H),6.16(s,1H),5.11(s,1H),4.99–4.88(m,1H),4.85–4.62(m,1H),4.53–4.32(m,4H),4.29(s,1H),4.14–4.01(m,1H),3.72(dd,J＝10.5,4.4Hz,1H),3.58(d,J＝9.9Hz,1H),3.49–3.39(m,1H),3.26–3.16(m,4H),3.16–3.04(m,2H),2.61–2.54(m,4H),2.46(d,J＝1.6Hz,3H),2.27–2.11(m,1H),2.10–1.92(m,1H),1.79–1.72(m,1H),1.42(dd,J＝22.2,7.0Hz,3H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H),0.81(d,J＝6.4Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝890.10.
使用与上述用于化合物6的制备的那些程序类似的程序，使用合适的胺和羧酸来制备表5中的化合物。
表5.
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(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-(4-甲酰基哌啶-1-基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰 基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-9) 的制备。
步骤1：4-(1,3-二氧戊环-2-基)哌啶-1-羧酸苄酯(中间体2)的制备。
在室温下，向4-甲酰基哌啶-1-羧酸苄酯(2.00g，8.088mmol，1.00当量)和乙二醇(2.00mL)在甲苯(40.00mL)中的搅拌溶液中加入p-TsOH·H2O(153.71mg，0.809mmol，0.10当量)。将所得混合物在110℃下搅拌1小时。使混合物冷却至室温，并减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％。这得到中间体2(3.4g，粗品)，为棕黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝292.
步骤2：4-(1,3-二氧戊环-2-基)哌啶(中间体3)的制备。
在室温下，向中间体2(3.4g，11.670mmol，1.00当量)在MeOH(40mL，987.956mmol，84.66当量)中的搅拌溶液中加入10％Pd/C(2.00g，18.793mmol，1.61当量)。将所得混合物在1atm氢气下搅拌3小时。将所得混合物过滤，并将滤饼用MeOH洗涤。将滤液减压浓缩，得到中间体3(1.7g，92.66％)，为灰色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝158.
步骤3：2-{3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)哌啶-1-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酸 甲酯(中间体4)的制备。
在室温下，向3-甲基-2-{3-[(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷磺酰基)氧基]-1,2-噁唑-5-基}丁酸甲酯(1.50g，3.117mmol，1.00当量)在DMF(10.00mL)中的搅拌溶液中加入中间体3(979.95mg，6.234mmol，2.00当量)。将所得混合物在130℃下搅拌1小时，然后使其冷却至室温。将混合物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％；得到中间体4(298mg，28.26％)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝339.
步骤4：2-{3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)哌啶-1-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酸 (中间体5)的制备。
在室温下，向中间体4(298mg，0.851mmol，1.00当量)在MeOH(5.00mL)和H2O(5.00mL)中的搅拌溶液中加入LiOH.H2O(107.14mg，2.553mmol，3.00当量)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物用HCl水溶液(1M)酸化至pH 6并用EA(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO干燥并过滤。将滤液减压浓缩，得到中间体5(376mg，粗品)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝325.
步骤5：(2S,4R)-1-[2-{3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)哌啶-1-基]-1,2-噁唑-5- 基}-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷- 2-甲酰胺(中间体6)的制备。
在室温下，向中间体5(376mg，1.116mmol，1.00当量)在DMF(5.00mL)中的搅拌溶液中加入HATU(1.30g，3.348mmol，3.00当量)和DIEA(721.17mg，5.580mmol，5.00当量)。向上述混合物中加入(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(492.67mg，1.339mmol，1.20当量)，将所得混合物再搅拌1小时。将混合物直接通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％；得到中间体6(330mg，46.36％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝638.
步骤6：(2S,4R)-1-[(2R)-2-{3-[4-(1,3-二氧戊环-2-基)哌啶-1-基]-1,2-噁唑- 5-基}-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯 烷-2-甲酰胺(中间体7)的制备。
将中间体6(330mg)通过SFC纯化，条件如下：柱，CHIRAL ART Amylose-C NED，3*25cm，5μm；流动相，MeOH；检测器，UV 254/220nm。这得到中间体7(洗脱的第二个峰，142mg，43.03％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝638.
步骤7：(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-(4-甲酰基哌啶-1-基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基 丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺 (I-9)的制备。
在室温下，向中间体7(137mg，0.215mmol，1.00当量)在THF(3mL)中的搅拌溶液中加入H2SO4(3.00mL，1.0mol/L)。将所得混合物在50℃下搅拌3小时，然后冷却至室温。将混合物用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8，并用EA萃取(2×100mL)。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。这得到中间体I-9(176mg，粗品)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝594.
以3-甲基-2-[3-[(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷磺酰基)氧基]-1,2-噁唑-5-基]丁酸甲酯和合适的胺为原料，以与中间体I-9的制备中所述类似的方式来制备表6中的以下中间体。
表6.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(4-((3-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-6- 基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4- 甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
在室温下，向(2S,4R)-1-((R)-2-(3-(4-甲酰基哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(I-9，15.00mg，0.025mmol，1.00当量)在MeOH(0.50mL)和DCM(0.50mL)中的搅拌溶液中加入2-[6-(氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(7.16mg，0.025mmol，1.00当量)。将所得混合物搅拌30分钟，随后加入NaBH3CN(7.94mg，0.125mmol，5.00当量)和AcOH(100.00mg，1.665mmol，65.91当量)。将所得混合物在室温下再搅拌1小时，然后在0℃下用水猝灭。将所得混合物减压浓缩，并将粗产物通过手性制备型HPLC纯化，条件如下：柱，Kinetex EVO C18柱，21.2*150，5μm；流动相，水(10mmol/L NH4HCO3)和ACN(ACN在7分钟内从44％达到62％)；得到标题化合物(11.8mg，53.75％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.43(s,1H),8.98(s,1H),8.72(s,1H),8.39(d,J＝7.7Hz,1H),8.02(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.48–7.41(m,3H),7.40–7.33(m,3H),7.06–6.98(m,2H),6.12(s,1H),5.10(d,J＝3.7Hz,1H),4.97–4.86(m,1H),4.37(t,J＝7.8Hz,1H),4.32–4.25(m,1H),4.08–4.00(m,1H)),3.76–3.52(m,6H),3.48–3.37(m,1H),3.30–3.24(m,3H),2.80–2.69(m,2H),2.46(s,3H),2.41–2.35(m,2H),2.28–2.12(m,1H),2.08–1.96(m,1H),1.84–1.72(m,3H),1.56–1.43(m,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),1.27–1.12(m,2H),0.96(t,J＝6.7Hz,3H),0.81(d,J＝6.7Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝861.50.
叔丁基(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1- (2R)-3-甲基-2-[3-(哌啶-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-80)的制备
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步骤1：4-[(1E)-(羟基亚氨基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体2)的制备
在0℃下，向4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(5g，23.4mmol，1.00当量)在MeOH(10mL)和H2O(10mL)中的搅拌溶液中加入羟胺盐酸盐(1.95g，28.133mmol，1.2当量)和Na2CO3(1.24g，11.722mmol，0.5当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩。将所得混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体2(6g，粗品)，为无色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝229.
步骤2：4-[(1Z)-氯(羟基亚氨基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体3)的制备
将中间体2和NCS(3.5g，26.282mmol，1.0当量)在DMF(20mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。所需产物可通过LCMS检测。将所得混合物用水(50.00mL)稀释，并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体3(7.8g，粗品)，为无色油状物。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝263.
步骤3：4-[5-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-1,2-噁唑-3-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间 体4)的制备
将中间体3(7.8g，粗品)和NaHCO3(3.8g，45.675mmol，1.5当量)在EtOAc(100mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟。在0℃下，向上述混合物中加入3-丁炔酸甲酯(2.99g，30.450mmol，1当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。所需产物可通过LCMS检测。将所得混合物减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％；检测器，UV 254nm。将所得混合物减压浓缩，得到中间体4(4.1g，41.51％)，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝325.
步骤4：4-[5-(1-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1,2-噁唑-3-基]哌啶-1-羧酸 叔丁酯(中间体5)的制备
在0℃和干燥氮气气氛下，向中间体4(1.0g，3.083mmol，1.5当量)和Na2SO4(1.0g)在THF(10mL)中的混合物中加入t-BuOK(518.90mg，4.625mmol，1.5当量)和2-碘丙烷(628.87mg，3.700mmol，1.2当量)。将所得混合物在0℃和干燥氮气气氛下搅拌3小时。所需产物可通过LCMS检测。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％；检测器，UV 254nm。将所得混合物减压浓缩，得到中间体5(330mg，29.21％)，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝367.
步骤5：2-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酸(中间 体6)的制备
在室温下，向中间体5(320mg，0.873mmol，1.00当量)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入LiOH(62.74mg，2.619mmol，3当量)在H2O(5mL)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌3小时。所需产物可通过LCMS检测。将所得混合物减压浓缩。向上述混合物中加入HCl(6M)水溶液，调节pH至约5。将所得混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体6(316mg粗品)，为灰白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝353.
步骤6：4-(5-{1-[(2S,4R)-4-羟基-2-{[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯 基]乙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基}-1,2-噁唑-3-基)哌啶-1-羧 酸叔丁酯(中间体7)的制备
将中间体6(310mg，0.880mmol，1.00当量)和HATU(668.90mg，1.760mmol，2当量)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟。在室温下，向上述混合物中加入(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(291.53mg，0.880mmol，1当量)。将所得混合物在室温下再搅拌2小时。所需产物可通过LCMS检测。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％；检测器，UV 254nm。将所得混合物减压浓缩，得到中间体7(242mg，37.31％)，为浅棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝666.
步骤7：4-{5-[(2R)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-{[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5- 基)苯基]乙基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁-2-基]-1,2-噁唑-3-基}哌 啶-1-羧酸叔丁酯(中间体8)的制备
中间体7通过制备型SFC纯化，条件如下(柱：CHIRAL ART Amylose-SA，3*25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH--HPLC；流速：50mL/分钟；梯度：等度45％B；柱温(℃)：35；背压(bar)：100；波长：205nm；RT1(分钟)：3.65；RT2(分钟)：4.88；样品溶剂：MeOH--HPLC；注射体积：1mL)，得到中间体8(第二个峰)(208.1mg，43.52％)，为浅棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝666.
步骤8：(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1- [(2R)-3-甲基-2-[3-(哌啶-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺叔丁基(I- 80)的制备
在室温下，向中间体8(200mg，0.300mmol，1.00当量)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入1M HCl在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌1小时。所需产物可通过LCMS检测。将所得混合物减压浓缩，得到I-80(247.5mg)，为浅黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝566.
2-((5-((R)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(2-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基) 氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)氧基)乙酸(I-67)的制 备
在0℃下，向(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(30.00mg，0.055mmol，1.00当量)和2-甲基-2-丁烯(0.78mg，0.011mmol，0.20当量)在叔丁醇(2mL)中的搅拌溶液中逐滴加入NaClO2(50.19mg，0.550mmol，10.00当量)和NaH2PO4(78.77mg，0.550mmol，10.00当量)在水(2.00mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌0.5小时，然后升温至室温并搅拌1.5小时。将反应物通过加入饱和Na2S2O3溶液和盐水的混合物来猝灭，用CHCl3萃取(20mL×3)。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩并通过硅胶色谱法(PE/EtOAc＝1:1至1:3)纯化。这得到中间体I-67(15.80mg，49.93％)，为无色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝557.
(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-[3-(2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c] 哒嗪-6-基]哌啶-1-基}乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲 基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
步骤1：4-((3,6-二氯哒嗪-4-基)乙炔基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体2)的制备
在氮气气氛下，向4-乙炔基哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.00g，38.225mmol，1.00当量)和4-溴-3,6-二氯哒嗪(10.45g，45.870mmol，1.20当量)在甲苯(80mL)中的混合物中加入Pd(PPh3)2Cl2(4.02g，5.734mmol，0.15当量)、CuI(14.56g，76.450mmol，2.00当量)和TEA(11.60g，114.675mmol，3.00当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用EtOAc的石油醚溶液从0％至50％洗脱，得到中间体2(5.00g，36.7％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝356.
步骤2：4-(3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体3)的制备。
向中间体2(5.00g，14.035mmol，1.00当量)在NMP(50mL)中的混合物中加入NaSH(0.79g，14.035mmol，1.0当量)。将所得混合物在100℃下搅拌一小时，冷凝并过滤。将滤液通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeOH的水溶液，梯度在10分钟内从10％到50％；得到中间体3(1.80g，36.2％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝354.
步骤3：4-(5-溴-3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体4)的 制备。
向中间体3(1.80g，5.087mmol，1.00当量)在CHCl3(20mL)中的混合物中加入Br2(8.13g，50.870mmol，10.00当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜，然后用NaHCO3水溶液碱化。然后加入Boc2O(2.21g，10.174mmol，2.00当量)并将混合物搅拌2小时。将混合物用EtOAc(3×100mL)萃取，并将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeOH的水溶液，梯度在10分钟内从10％到50％；得到中间体4(710.0mg，32.4％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝432.
步骤4：4-(3-氯-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体5) 的制备。
向中间体4(710.0mg，1.641mmol，1.00当量)、K3PO4(696.50mg，3.282mmol，2.00当量)和Pd(AMPhos)Cl2(174.25mg，0.246mmol，0.15当量)在二噁烷(10mL)和H2O(2mL)中的混合物中加入三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼烷(411.90mg，3.282mmol，2.00当量)，并将所得混合物在60℃和氮气气氛下搅拌一小时。将反应混合物通过短硅藻土垫过滤，并用EtOAc洗脱。将滤液真空浓缩，并将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeOH的水溶液，梯度在10分钟内从10％到50％；得到中间体5(450.0mg，74.5％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝368.
步骤5：4-(3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)哌啶-1-羧酸叔丁 酯(中间体6)的制备
向中间体5(450.0mg，1.223mmol，1.00当量)和2-羟基苯基硼酸(337.43mg，2.446mmol，2.00当量)在二噁烷(10mL)和H2O(2mL)中的混合物中加入XPhos Pd G3(155.31mg，0.183mmol，0.15当量)和Cs2CO3(1.2g，3.669mmol，3.00当量)，并将所得混合物在100℃和氮气气氛下搅拌一小时。将反应混合物通过短硅藻土垫过滤，并用EtOAc洗脱。将滤液真空浓缩，并将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeOH的水溶液，梯度在10分钟内从10％到50％；得到中间体6(380.0mg，73.0％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝426.
步骤6：2-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基)苯酚(I-10)的制备。
向中间体6(380.0mg，0.893mmol，1.00当量)在DCM(6mL)中的混合物中加入TFA(3mL，40.389mmol，45.23当量)，并将所得混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩，并将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18；流动相，MeOH的水溶液，梯度在10分钟内从10％到50％；得到I-10(246.4mg，84.7％)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,1H),8.22–8.11(m,1H),7.43–7.34(m,1H),7.07–6.99(m,2H),3.67–3.53(m,1H),3.43–3.35(m,2H),3.10–3.00(m,2H),2.46(s,3H),2.13–2.04(m,2H),1.91–1.78(m,2H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝326.10.
步骤7：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-[3-(2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并 [2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4- (4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
在室温下，向(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(I-3，15.00mg，0.028mmol，1.00当量)和化合物I-10(10.83mg，0.034mmol，1.2当量)在DCM(1.00mL)和MeOH(1.00mL)中的搅拌混合物中加入NaBH3CN(5.23mg，0.084mmol，3.0当量)和AcOH(0.02mL，0.349mmol，12.58当量)。将所得混合物在室温下搅拌12小时，然后减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化，条件如下(柱：XBridge Prep Phenyl OBD柱，19*150mm，5μm13nm；流动相A：水(0.05％NH3H2O)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在7分钟内从50％B到63％B；得到标题化合物(4.4mg，18.53％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.71(d,J＝65.8Hz,1H),8.98(s,1H),8.70(s,1H),8.40(d,J＝7.8Hz,1H),8.16(d,J＝7.9Hz,1H),7.51–7.31(m,5H),7.03(d,J＝7.9Hz,2H),6.15(s,1H),5.11(d,J＝3.5Hz,1H),4.92(t,J＝7.3Hz,1H),4.60–4.50(m,1H),4.42–4.23(m,3H),3.80–3.55(m,4H),3.48(t,J＝12.2Hz,2H),3.12–2.99(m,1H),2.83–2.73(m,1H),2.46(s,6H),2.31–2.16(m,3H),2.10–1.85(m,4H),1.83–1.64(m,2H),1.43(d,J＝7.0Hz,3H),0.97(d,J＝6.5Hz,3H),0.84(d,J＝6.6Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝850.40.
使用与上述用于化合物8的制备的那些程序类似的程序，使用合适的胺和醛(或酮)来制备表7中的化合物。
表7.
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(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-[3-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c] 哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲 基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物34)和(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)- 2-[3-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁基)-1, 2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯 烷-2-甲酰胺(化合物114)的制备
步骤1：(3,3-二甲氧基环丁基)甲醇(中间体2)的制备
在0℃下，向3,3-二甲氧基环丁烷-1-羧酸甲酯(10g，57.407mmol，1当量)在THF(100mL)中的溶液中加入LiAlH4(3.27g，86.111mmol，1.5当量)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将混合物用10％w/v氢氧化钠(水溶液)猝灭。将混合物过滤并将滤液减压浓缩，得到中间体2(8.3g，粗品)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝147.
步骤2：3,3-二甲氧基环丁烷-1-甲醛(中间体3)的制备
在-78℃下，向(COCl)2(13.9g，109.448mmol，2当量)在DCM(120mL)中的溶液中加入DMSO(8.55g，109.448mmol，2当量)在DCM(10mL)中的溶液。将所得溶液在-78℃下搅拌5分钟。在-78℃下，将中间体2(8g，54.724mmol，1当量)的DCM(20mL)溶液加入到混合物中，并将所得溶液在-78℃下搅拌30分钟。向上述溶液中加入TEA(27.68g，273.61mmol，5当量)，并将所得溶液在室温下搅拌1小时。将混合物用DCM(400mL)稀释并用水(3×400mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到中间体3(7.66g，粗品)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝145.
步骤3：(E)-N-[(3,3-二甲氧基环丁基)亚甲基]羟胺(中间体4)的制备
向中间体3(7.66g，53.132mmol，1当量)和盐羟胺盐酸盐(7.38g，106.264mmol，2当量)在EtOH(60mL)中的溶液中加入Na2CO3(16.89g，159.396mmol，3当量)。将所得混合物在25℃下搅拌6小时。将混合物用EtOAc(400mL)稀释并用水(3×400mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到中间体4(4.72g，粗品)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝160.
步骤4：(Z)-N-羟基-3,3-二甲氧基环丁烷-1-碳酰亚胺基氯(中间体5)的制备
向中间体4(4.72g，29.651mmol，1当量)在DMF(50mL)中的溶液中加入NCS(5.94g，44.477mmol，1.5当量)。将所得溶液在25℃下搅拌6小时。将混合物用EtOAc(300mL)稀释并用水(3×300mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到中间体5(6.57g，粗品)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝194.
步骤5：2-[3-(3,3-二甲氧基环丁基)-1,2-噁唑-5-基]乙酸甲酯(中间体6)的制备
向中间体5(6.57g，33.931mmol，1当量)和3-丁炔酸甲酯(3.99g，40.717mmol，1.2当量)在EtOAc(50mL)中的溶液中加入NaHCO3(5.70g，67.862mmol，2当量)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc(300mL)稀释并用水(3×300mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过反相快速C18色谱法纯化，洗脱梯度为0％至53％ACN的H2O溶液，得到中间体6(2.4g，27.71％)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝256.
步骤6：2-[3-(3,3-二甲氧基环丁基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(中间体 7)的制备
向中间体6(2.4g，9.402mmol，1当量)和2-碘丙烷(3.20g，18.804mmol，2当量)在THF(20mL)中的溶液中加入Cs2CO3(6.13g，18.804mmol，2当量)。将所得混合物在60℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc(300mL)稀释并用水(3×300mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过反相快速C18色谱法纯化，洗脱梯度为0％至48％ACN的H2O溶液，得到中间体7(538mg，19.24％)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝298.
步骤7：3-甲基-2-[3-(3-氧代环丁基)-1,2-噁唑-5-基]丁酸甲酯(中间体8)的制 备
向中间体7(538mg，1.809mmol，1当量)在EtOH(5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中加入TsOH(311.56mg，1.809mmol，1当量)。将所得溶液在25℃下搅拌6小时。将混合物用EtOAc(200mL)稀释并用水(3×200mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过反相快速C18色谱法纯化，洗脱梯度为0％至45％ACN的H2O溶液，得到中间体8(368mg，80.94％)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝252.
步骤8：2-[3-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1- 基}环丁基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(中间体9)的制备
向中间体8(180mg，0.716mmol，1当量)和2-[5-甲基-6-(哌啶-4-基)噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基]苯酚(349.67mg，1.074mmol，1.5当量)在MeOH(2mL)和DCM(2mL)中的溶液中加入AcOH(0.1mL，1.745mmol，2.44当量)和NaBH3CN(90.03mg，1.432mmol，2当量)。将所得溶液在25℃下搅拌3小时。将混合物用EtOAc(200mL)稀释并用水(3×200mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过反相快速C18色谱法纯化，洗脱梯度为0％至53％ACN的H2O溶液，得到中间体9(165mg，41.08％)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝561.
步骤9：2-[3-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1- 基}环丁基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(中间体10)的制备
向中间体9(165mg，0.294mmol，1当量)在MeOH(2mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中加入LiOH(35.24mg，1.470mmol，5当量)。将所得溶液在25℃下搅拌6小时。将混合物用HCl(1M于H2O溶液中)酸化至pH 5-6。将混合物用EtOAc(200mL)稀释并用水(3×200mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过反相快速C18色谱法纯化，洗脱梯度为0％至53％ACN的H2O溶液，得到中间体10(182mg，粗品)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝547.
步骤10：(2S,4R)-4-羟基-1-{2-[3-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3- c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基}-N-[(1S)-1-[4-(4-甲 基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(中间体11)的制备
向中间体10(180mg，0.329mmol，1当量)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(109.12mg，0.329mmol，1当量)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中加入PyBOP(342mg，0.658mmol，2当量)。将所得溶液在25℃下搅拌10分钟，然后向混合物中加入DIEA(212.78mg，1.645mmol，5当量)。将所得溶液在25℃下搅拌6小时。无需附加处理，将粗反应混合物通过反相快速C18色谱法纯化，洗脱梯度为0％至46％ACN的H2O溶液，得到中间体11(14mg，4.94％)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝860.
步骤11：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-[3-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并 [2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4- (4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物34)和(2S,4R)-4-羟基-1- [(2S)-2-[3-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁 基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙 基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物114)的制备
中间体11(14mg)通过手性制备型HPLC纯化：柱，CHIRALPAK ID，2*25cm，5μm；流动相A：MtBE(10mM NH3-MeOH)，流动相B：MeOH；流速：20mL/分钟；梯度：在20分钟内从5％B到15％B；检测器，UV 254/220nm；RT1(分钟)：10.3；RT2(分钟)：15.4。这产生：
化合物34(2.1mg，15.00％)(第二个峰)，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.89(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(s,1H),8.08(d,J＝8.2Hz,1H),7.52–7.38(m,5H),7.09–6.99(m,2H),6.42(d,J＝11.8Hz,1H),5.07(d,J＝7.0Hz,1H),4.55(t,J＝8.2Hz,1H),4.47(s,1H),3.94–3.77(m,2H),3.66(d,J＝2.1Hz,3H),3.63–3.51(m,1H),3.13(d,J＝12.8Hz,2H),3.03–2.92(m,1H),2.61(d,J＝9.0Hz,2H),2.50(s,6H),2.47–2.29(m,1H),2.26–2.03(m,8H),2.01–1.78(m,4H),1.67–1.47(m,5H),1.10(d,J＝6.6Hz,4H),0.90(d,J＝6.7Hz,8H)。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝860.30.
化合物114(2.1mg，15.00％)(第一个峰)，为黄色固体。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.88(d,J＝12.2Hz,1H),8.55(d,J＝1.9Hz,1H),8.07(d,J＝7.5Hz,1H),7.53–7.32(m,5H),7.09–6.98(m,2H),6.43(d,J＝9.7Hz,1H),5.09–4.95(m,1H),4.61(t,J＝8.1Hz,1H),4.46(s,1H),3.92(d,J＝9.1Hz,1H),3.80–3.63(m,4H),3.23(s,1H),3.12(d,J＝12.3Hz,2H),3.04–2.92(m,1H),2.67–2.49(m,3H),2.48–2.40(m,6H),2.30–2.04(m,8H),2.00–1.82(m,3H),1.66–1.45(m,5H),1.10(d,J＝6.6Hz,3H),1.04–0.82(m,6H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝860.30.
使用与上述用于化合物34的制备的那些程序类似的程序，使用合适的胺和酮来制备表8中的化合物。
表8.
(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[(1S,2S)-2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩 并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁氧基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)- 1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物36)、(2S,4R)-4-羟 基-1-[(2S)-2-{3-[(1S,2S)-2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌 啶-1-基}环丁氧基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑- 5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物115)和(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[(1R, 2S)-2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁氧基]-1, 2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯 烷-2-甲酰胺(化合物35)的制备
步骤1：3-甲基-2-[3-(2-氧代环丁氧基)-1,2-噁唑-5-基]丁酸甲酯(中间体2)的 制备
将2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(400mg，2.008mmol，1当量)、2-溴代环丁-1-酮(448.74mg，3.012mmol，1.5当量)和Cs2CO3(13.1g，4.016mmol，2当量)在丙酮(3mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将所得混合物过滤并将滤饼用乙腈(3×2mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到中间体2(860mg，粗品)，为红棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝268.
步骤2：2-[3-(2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1- 基}环丁氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(中间体3)的制备
将中间体2(400mg，1.497mmol，1当量)和化合物I-10(200mg，0.615mmol，0.41当量)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟。在室温下，向上述混合物中加入NaBH3CN(282.13mg，4.491mmol，3当量)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。将混合物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(10mmol/LNH4HCO3)，梯度在30分钟内从0％到100％；检测器，UV 254nm。这产生中间体3(91mg，10.54％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝577.
步骤3：2-[3-(2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1- 基}环丁氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(中间体4)的制备
将中间体3(91mg，0.158mmol，1当量)和LiOH.H2O(33.10mg，0.790mmol，5当量)在MeOH(2mL)和H2O(2mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用浓HCl酸化至pH 6。将所得混合物减压浓缩，得到中间体4(96mg，粗品)，为黄绿色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝563.
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-1-{2-[3-(2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3- c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基}-N-[(1S)-1-[4-(4- 甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(中间体5)的制备
将中间体4(90mg，0.160mmol，1当量)、(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(53.01mg，0.160mmol，1当量)、PyBOP(124.85mg，0.240mmol，1.5当量)和DIEA(103.36mg，0.800mmol，5当量)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将混合物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(10mmol/L NH4HCO3)，梯度在30分钟内从0％到100％；检测器，UV 254nm。这产生中间体5(80mg，57.09％)，为浅黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝876.
步骤5：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{3-[(1S,2S)-2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲 基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁氧基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-N- [(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物115)和(2S, 4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-[3-(2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌 啶-1-基}环丁氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑- 5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(中间体6)的制备
将中间体5通过SFC纯化，条件如下：柱，CHIRAL ART Amylose-SA，3*25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH/DCM 1:1；流速：60mL/分钟；梯度：等度50％B；柱温(℃)：35；背压(bar)：100；检测器：206nm；RT1(分钟)：5.77；RT2(分钟)：10.18。这产生：
化合物115(35.6mg，38.53％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),9.01–8.95(m,1H),8.70–8.65(m,1H),8.28–8.24(m,1H),8.16(d,J＝7.8Hz,1H),7.51–7.27(m,5H),7.06–6.97(m,2H),6.18–6.08(m,1H),5.12–4.84(m,2H),4.69–4.64(m,1H),4.42(t,J＝7.8Hz,1H),4.27(s,1H),3.77(d,J＝8.3Hz,1H),3.57–3.44(m,2H),3.10–2.86(m,3H),2.49–2.40(m,7H),2.28–2.23(m,2H),2.20–2.00(m,3H),2.00–1.54(m,7H),1.49–1.39(m,1H),1.38–1.31(m,3H),1.00–0.74(m,6H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝876.30.
中间体6(20.0mg，21.64％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝876.30.
步骤6：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[(1S,2S)-2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲 基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁氧基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-N- [(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物36)和(2S, 4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[(1R,2S)-2-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒 嗪-6-基]哌啶-1-基}环丁氧基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲 基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物35)的制备
/>
将中间体6通过手性HPLC纯化，条件如下：柱，CHIRALPAK ID，2*25cm，5μm；流动相A：MtBE(10mM NH3-MeOH)，流动相B：MeOH；流速：20mL/分钟；梯度：在11.5分钟内从20％B到50％B；检测器：208/268nm；RT1(分钟)：4.555；RT2(分钟)：7.69。这产生：
化合物36(10.7mg，53.07％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),8.98(s,1H),8.68(d,J＝1.9Hz,1H),8.40(d,J＝7.7Hz,1H),8.19–8.13(m,1H),7.49–7.41(m,2H),7.41–7.33(m,3H),7.06–6.97(m,2H),6.10(s,1H),5.12–5.07(m,1H),4.92(q,J＝7.3Hz,1H),4.74–4.64(m,1H),4.37(t,J＝7.9Hz,1H),4.29(s,1H),3.74–3.62(m,2H),3.60–3.43(m,1H),3.26–3.18(m,1H),3.07–2.92(m,3H),2.48–2.41(m,6H),2.36–2.23(m,2H),2.21–2.00(m,3H),1.99–1.92(m,3H),1.84–1.74(m,1H),1.74–1.55(m,3H),1.52–1.35(m,4H),1.01–0.93(m,3H),0.87–0.77(m,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝876.40.
化合物35(3.2mg，15.68％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.86(s,1H),8.52(s,1H),8.08–7.98(m,1H),7.48–7.24(m,5H),7.05–6.97(m,2H),6.00(s,1H),5.08–4.93(m,1H),4.79(s,1H),4.55–4.35(m,2H),3.88–3.80(m,1H),3.76–3.58(m,3H),3.56–3.44(m,1H),3.17(d,J＝11.7Hz,1H),3.13–3.03(m,2H),2.49–2.45(m,4H),2.43–2.10(m,7H),2.09–2.00(m,3H),1.99–1.89(m,1H),1.89–1.78(m,2H),1.77–1.67(m,1H),1.62–1.54(m,1H),1.51(d,J＝7.0Hz,3H),1.08–1.02(m,3H),0.94–0.86(m,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝876.40.
使用与上述用于化合物化合物115的制备的那些程序类似的程序，使用合适的胺和酮来制备表9中的化合物。
表9.
3-甲基-2-[3-(吗啉-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酸(中间体A)的制备
步骤1：3-甲基-2-[3-(吗啉-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酸甲酯(中间体2)的制备
向中间体1(3.5g，7.276mmol，1当量)和DIEA(1184.27mg，21.829mmol，3当量)在DMF(40mL)中的溶液中加入吗啉(1.33g，36.382mmol，5当量)。将溶液在120℃下搅拌2小时。将混合物冷却至室温并通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液，梯度在20分钟内从0％到100％；检测器，UV 254nm。这产生中间体2(1.06g，54.10％)，为无色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝269.
步骤2：3-甲基-2-[3-(吗啉-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酸(中间体A)的制备
向中间体2(1g，3.727mmol，1当量)在THF(5mL)和H2O(5mL)中的溶液中加入氢氧化锂(0.13g，5.590mmol，1.5当量)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用浓HCl酸化至pH6。将水层用EtOAc(3×30mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。这产生中间体A(852mg，89.90％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝255.
(2S,4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((R)-3-甲基-2-(3- 吗啉异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体B)的制备
步骤1：(2S,4R)-4-羟基-2-({[2-羟基-4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨 基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(中间体2)的制备。
在0℃下，向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(2.97g，12.853mmol，1当量)和DIEA(8.31g，64.265mmol，5当量)在DCM(100mL)中的溶液中加入T3P(6.13g，19.279mmol，1.5当量)。30分钟后，加入2-(氨基甲基)-5-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯酚盐酸盐(3.3g，12.853mmol，1当量)。将溶液在室温下搅拌16小时。将所得混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EA(1:1)洗脱，得到中间体2(2.85g，51.15％)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝434.
步骤2：(2S,4R)-4-羟基-N-{[2-羟基-4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡 咯烷-2-甲酰胺(中间体3)的制备
向中间体2(2.75g，6.343mmol，1当量)在DCM(3mL)中的溶液中分批加入HCl在1,4-二噁烷中的溶液(15mL)。将溶液在室温下搅拌2小时。将所得混合物减压浓缩。这产生中间体3(2.4g，粗品)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝334.
步骤3：(2S,4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-(3-甲基-2- (3-吗啉异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体4)的制备
在0℃下，向中间体A(0.92g，3.599mmol，1当量)和DIEA(2.33g，17.995mmol，5当量)在DCM(20mL)中的溶液中逐滴加入T3P(1.72g，5.399mmol，1.5当量)。30分钟后，加入中间体3(1.2g，3.599mmol，1.00当量)。将溶液在室温下搅拌3小时。将所得混合物减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在30分钟内从10％到100％；检测器，UV 254nm。这产生中间体4(800mg，39.02％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝570.
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((R)-3-甲 基-2-(3-吗啉异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(中间体B)的制备
将中间体4(800mg)通过手性分离来分离，得到中间体B(第二个峰)(302.9mg，37.37％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝570.10.
(2S,4R)-4-羟基-N-{[2-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6- 基]哌啶-1-基}丙氧基)-4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}-1-[(2S)-3-甲基-2-[3- (吗啉-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物55)和(2S,4R)-4-羟基-N- {[2-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}丙氧基)-4- (4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(吗啉-4-基)-1,2-噁唑-5- 基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物56)的制备。
步骤1：(2S,4R)-N-({2-[2-(1,3-二氧戊环-2-基)乙氧基]-4-(4-甲基-1,3-噻唑- 5-基)苯基}甲基)-4-羟基-1-{3-甲基-2-[3-(吗啉-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基}吡咯 烷-2-甲酰胺(中间体2)的制备。
向中间体B(150.0mg，0.263mmol，1.00当量)和2-(2-溴乙基)-1,3-二氧戊环(47.7mg，0.263mmol，1.00当量)在DMF(3.0mL)中的溶液中加入K2CO3(109.2mg，0.789mmol，3.00当量)。在80℃下搅拌2小时后，将混合物冷却至室温并用EA(3×3mL)萃取。将合并的有机层用水(5mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体2(200.0mg，粗品)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝670.
步骤2：(2S,4R)-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)-2-(3-氧代丙氧基)苯 基]甲基}-1-{3-甲基-2-[3-(吗啉-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基}吡咯烷-2-甲酰胺(中间 体3)的制备。
向中间体2(200mg，粗品)在H2O(3mL)中的溶液中加入HCl(4M)(3mL)。在室温下搅拌1小时后，将混合物用EA(3×5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液减压浓缩。这产生中间体3(147.0mg，粗品)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝626.
步骤3：(2S,4R)-4-羟基-N-{[2-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c] 哒嗪-6-基]哌啶-1-基}丙氧基)-4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}-1-{3-甲基-2- [3-(吗啉-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基}吡咯烷-2-甲酰胺(中间体4)的制备。
向中间体3(147.0mg，0.235mmol，1.00当量)和化合物I-10(91.8mg，0.282mmol，1.20当量)在MeOH(2.0mL)和DCM(2.0mL)中的溶液中加入AcOH(0.05mL，0.873mmol，3.71当量)。在室温下搅拌20分钟后，加入NaBH3CN(44.3mg，0.705mmol，3.00当量)。在室温下搅拌2小时后，将反应混合物减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.05％FA)，梯度在30分钟内从0％到100％；检测器，UV 254nm)。这产生中间体4(75.5mg，34.37％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝935.
步骤4：(2S,4R)-4-羟基-N-{[2-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c] 哒嗪-6-基]哌啶-1-基}丙氧基)-4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}-1-[(2S)-3-甲 基-2-[3-(吗啉-4-基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物55)和(2S,4R)- 4-羟基-N-{[2-(3-{4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}丙 氧基)-4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(吗啉-4-基)-1,2- 噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物56)的制备。
将中间体4(75.5mg)通过手性HPLC纯化，条件如下：柱，CHIRALPAK ID，2*25cm，5μm；流动相A：MtBE(10mM NH3-MeOH)，流动相B：EtOH；流速：18mL/分钟；梯度：在23分钟内从20％B到50％B；检测器：210/268nm；RT1(分钟)：8.815；RT2(分钟)：16.57。这产生：
化合物55(第二个峰)(18.7mg，24.7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,1H),9.00(s,1H),8.69(s,1H),8.31(t,J＝6.0Hz,1H),8.20–8.12(m,1H),7.43–7.34(m,1H),7.34–7.26(m,1H),7.10–6.94(m,4H),6.15(s,1H),5.15(d,J＝3.7Hz,1H),4.61–4.45(m,1H),4.40–4.32(m,1H),4.33–4.19(m,2H),4.20–4.05(m,2H),3.72(d,J＝8.9Hz,1H),3.66(t,J＝4.8Hz,1H),3.63–3.49(m,5H),3.22–3.10(m,3H),3.10–2.96(m,5H),2.47–2.42(m,6H),2.36–1.82(m,10H),1.82–1.58(m,2H),0.97(d,J＝6.6Hz,3H),0.83(d,J＝6.7Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝935.15.
化合物56(第一个峰)(5.5mg，7.3％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),9.00(s,1H),8.69(s,1H),8.39(t,J＝5.9Hz,1H),8.20–8.12(m,1H),7.43–7.29(m,2H),7.14–6.95(m,4H),6.18(s,1H),5.14(d,J＝3.7Hz,1H),4.47–4.20(m,4H),4.14(t,J＝6.0Hz,2H),3.83–3.73(m,1H),3.73–3.56(m,5H),3.51(s,1H),3.49–3.39(m,2H),3.17–3.11(m,4H),3.12–3.04(m,2H),2.72–2.63(m,1H),2.47–2.42(m,6H),2.38–2.12(m,3H),2.10–1.86(m,6H),1.82–1.62(m,2H),0.94(d,J＝9.3,6.6Hz,3H),0.80(d,J＝7.8Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝935.15.
使用与上述用于化合物55的制备的那些程序类似的程序，使用合适的胺和醛来制备表10中的化合物。
表10.
/>
(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[3-({4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩并[2,3- c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}甲基)双环[1.1.1]戊-1-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]- N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物72)的制备。
步骤1：3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(中间体2)的制备。
在0℃和氮气气氛下，向3-(甲氧基羰基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸(10g，58.767mmol，1.00当量)在THF(50mL)中的搅拌溶液中逐滴加入BH3-THF(147mL，293.835mmol，5.0当量)。将所得混合物在室温和氮气气氛下搅拌16小时。在0℃下，将反应物用水猝灭。将所得混合物用EA(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。这产生中间体2(8.4g，91.52％)，为无色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝157.
步骤2：3-甲酰基双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(中间体3)的制备。
在-78℃和氩气氛下，向(COCl)2(11.39g，89.74mmol，2.00当量)在CH2Cl2(100mL)中的搅拌溶液中加入DMSO(10.5g，134.62mmol，3当量)。将所得混合物在-78℃和氮气气氛下搅拌30分钟。在-78℃和氮气气氛下，向上述混合物中加入中间体2(7.0g，44.820mmol，1.00当量)。将所得混合物在-78℃和氮气气氛下再搅拌30分钟。在-78℃下，向上述混合物中逐滴加入TEA(31mL，223.026mmol，4.98当量)。在氮气气氛下，将所得混合物从-78℃至室温再搅拌1小时。在室温下，将反应物用水猝灭并用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。这产生中间体3(7g，粗品)，为无色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝155.
步骤3：3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(中间体4)的制备。
在室温下，向中间体3(3.90g，25.298mmol，1当量)和乙二醇(3.14g，50.596mmol，2.0当量)在甲苯(50mL)中的搅拌混合物中加入TsOH(435.63mg，2.530mmol，0.1当量)。将所得混合物在110℃下搅拌5小时。将所得混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EA(5:1)洗脱，得到中间体4(1.8g，34.46％)，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝199.
步骤4：(3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊烷-1-基)甲醇(中间体5)的制备。
在0℃下，向中间体4(1.6g，8.072mmol，1当量)在THF(20mL)中的搅拌溶液中逐滴加入LiAlH4(612.72mg，16.144mmol，2.0当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物用EtOAc(20mL)稀释。将所得混合物过滤并将滤饼用EtOAc(3×30mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EA(3:1)洗脱，得到中间体5(1.1g，76.86％)，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝171.
步骤5：3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊烷-1-甲醛(中间体6)的制备。
在-60℃和氮气气氛下，向(COCl)2(1.36g，10.693mmol，1.3当量)在DCM(50mL)中的搅拌溶液中逐滴加入DMSO(1.67g，21.385mmol，2.6当量)。将所得混合物在-60℃和氮气气氛下搅拌40分钟。然后在-60℃和氮气气氛下加入中间体5(1.4g，8.225mmol，1当量)，并在-60℃和氮气气氛下搅拌混合物40分钟。在-60℃下，在4分钟内向上述混合物中逐滴加入TEA(4.99g，49.350mmol，6.0当量)。将所得混合物在-50℃下再搅拌30分钟。将所得混合物用水(100mL)稀释。将所得混合物用CH2Cl2(2×300mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体6(1.2g，74.60％)，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝169.
步骤6：(Z)-3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊烷-1-甲醛肟(中间体7)的制 备。
在室温下，向中间体6(970mg，5.767mmol，1当量)和羟胺(228.59mg，6.920mmol，1.2当量)在MeOH(5mL)和H2O(5mL)中的搅拌溶液中加入Na2CO3(305.63mg，2.884mmol，0.5当量)。将所得混合物在室温下搅拌4小时。将所得混合物用水(100mL)稀释。将所得混合物用EtOAc(2×300mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体7(960mg，82.68％)，为浅黄色油状物。将粗产物无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝184.
步骤7：(Z)-3-(1,3-二氧戊环-2-基)-N-羟基双环[1.1.1]戊烷-1-碳酰亚胺基氯 (中间体8)的制备。
在室温下，向中间体7(950.00mg，5.185mmol，1当量)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中加入NCS(761.66mg，5.704mmol，1.1当量)。将所得混合物在室温下搅拌4小时。将所得混合物用水(100mL)稀释。将所得混合物用EtOAc(2×300mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体8(1.1g，88.69％)，为浅黄色油状物。将粗产物无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝218.
步骤8：2-{3-[3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊-1-基]-1,2-噁唑-5-基}乙 酸甲酯(中间体9)的制备
将中间体8(980.00mg，4.503mmol，1当量)和NaHCO3(567.38mg，6.755mmol，1.5当量)在EtOAc(10mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。在0℃下，向上述混合物中加入3-丁炔酸甲酯(441.71mg，4.503mmol，1.0当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，ACN的水溶液，梯度在30分钟内从0％到100％；检测器，UV 220nm。这产生中间体9(270mg，20.61％)，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝280.
步骤9：2-(3-(3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲 基丁酸甲酯(中间体10)的制备
在0℃下，向中间体9(200.00mg，0.716mmol，1当量)和2-碘丙烷(182.60mg，1.074mmol，1.5当量)在THF(5mL)中的搅拌混合物中加入t-BuOK(241.07mg，2.148mmol，3.0当量)和Na2SO4(200.00mg，1.408mmol，1.97当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩。将残余物溶解于DMF(3mL)中并通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液，梯度在30分钟内从0％到100％；检测器，UV 254nm。这产生中间体10(40mg，17.39％)，为浅黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝322.
步骤10：2-(3-(3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊-1-基)异噁唑-5-基)-3- 甲基丁酸(中间体11)的制备
将中间体10(600mg，1.87mmol，1.00当量)和LiOH(224mg，9.34mmol，5当量)在MeOH(2mL)和H2O(6mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用浓HCl酸化至pH 5，然后用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将粗中间体11(516mg)无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝308.
步骤11：(2S,4R)-1-(2-{3-[3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊-1-基]-1,2- 噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基] 吡咯烷-2-甲酰胺(中间体12)的制备。
将中间体11(400mg，1.301mmol，1当量)和HATU(742.29mg，1.951mmol，1.5当量)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟。在室温下，向上述混合物中加入(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(517.61mg，1.561mmol，1.2当量)和DIEA(672.84mg，5.204mmol，4当量)。将所得混合物在室温下再搅拌2小时。将混合物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液，梯度在30分钟内从0％到100％；检测器，UV 254nm。这产生中间体12(560mg，69.31％)，为浅棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝621.
步骤12：(2S,4R)-1-((R)-2-(3-(3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊-1-基) 异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯 烷-2-甲酰胺(中间体13)的制备。
将中间体12通过制备型SFC纯化，条件如下：柱，CHIRAL ART Amylose-SA，3*25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：IPA；流速：50mL/分钟；梯度：等度30％B；柱温(℃)：35；背压(bar)：100；检测器：211nm；RT1(分钟)：6.2；RT2(分钟)：7.24。这产生中间体13(第一个峰)(300mg，53.57％)，为浅黄色油状物，以及(2S,4R)-1-[(2S)-2-{3-[3-(1,3-二氧戊环-2-基)双环[1.1.1]戊-1-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(第二个峰)(260mg，46.43％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝621.
步骤13：(2S,4R)-1-[(2R)-2-(3-{3-甲酰基双环[1.1.1]戊-1-基}-1,2-噁唑-5- 基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷- 2-甲酰胺(中间体14)的制备
将中间体13(13mg，0.021mmol，1当量)在H2SO4(1mol/L)(1mL)和THF(1mL)中的混合物在60℃下搅拌1小时。将混合物用饱和NaHCO3(水溶液)碱化至pH 8。将所得混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×5mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体14(10mg，82.80％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝577.
步骤14：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-2-{3-[3-({4-[3-(2-羟基苯基)-5-甲基噻吩 并[2,3-c]哒嗪-6-基]哌啶-1-基}甲基)双环[1.1.1]戊-1-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁 酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物72) 的制备
将中间体14(10mg，0.017mmol，1当量)、化合物I-10(5.64mg，0.017mmol，1当量)、AcOH(3.12mg，0.051mmol，3当量)和NaOAc(4.27mg，0.051mmol，3当量)在DCM(1mL)和MeOH(1mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟。在室温下，向上述混合物中加入NaBH3CN(3.27mg，0.051mmol，3当量)。将所得混合物在室温下再搅拌2小时。将混合物通过制备型HPLC纯化，条件如下：柱，XBridge Shield RP18OBD，19*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在7分钟内从47％B到73％B，然后73％B；检测器：254/220nm；RT(分钟)：6.47。这产生化合物72(1.6mg，10.12％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.87(s,1H),8.53(s,1H),8.09–8.02(m,1H),7.48–7.31(m,5H),7.06–6.97(m,2H),6.29–6.21(m,1H),5.08–4.98(m,1H),4.55–4.37(m,2H),3.89–3.75(m,2H),3.65–3.57(m,1H),3.28–3.26(m,1H),3.21–3.13(m,2H),2.63(s,2H),2.50–2.46(m,6H),2.45–2.24(m,3H),2.21–2.12(m,7H),2.07–1.87(m,5H),1.56(dd,J＝30.6,7.0Hz,3H),1.06(d,J＝6.6Hz,3H),0.91–0.83(m,3H)。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝886.2.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-((1R,4R)-5-((S)-3-(2-羟基苯基)-5,6,7,8-四 氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羰基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)异噁唑-5- 基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合 物41)的制备
步骤1：1-(叔丁基)3-甲基2-(丁-3-炔-1-基)丙二酸酯(中间体2)的制备
在0℃下，向1-叔丁基3-甲基丙二酸酯(80.00g，459.253mmol，1.00当量)在DMF(300mL)中的溶液中加入NaH(22.0g，918.506mmol，2.00当量)。在该温度下搅拌一小时后，加入4-溴丁-1-炔(61.08g，459.253mmol，1.00当量)。将所得混合物在80℃下搅拌过夜。将所得混合物用水(800mL)稀释。将所得混合物用EtOAc(3×500mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×300mL)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用EtOAc的PE溶液从0％至30％洗脱，得到中间体2(75.00g，64.9％)，为黄色油状物。在LCMS中未观察到质谱信号，通过GCMS检测到产物。
步骤2：1-(叔丁基)3-甲基2-(4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)丁-3-炔-1-基)丙二酸酯 (中间体3)的制备
向4-溴-3,6-二氯哒嗪(75.53g，331.459mmol，1.00当量)、Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(27.00g，33.146mmol，0.10当量)和CuI(12.63g，66.292mmol，0.2当量)在甲苯(400mL)中的溶液中加入TEA(100.62g，994.377mmol，3.00当量)和中间体2(75.00g，331.459mmol，1.00当量)。在室温和氮气气氛下搅拌过夜后，将所得混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用EtOAc的PE溶液从0％至30％洗脱，得到中间体3(40.00g，29.1％)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝373.
步骤3：1-(叔丁基)3-甲基2-(2-(3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)乙基)丙二酸酯 (中间体4)的制备
向中间体3(40.00g，107.173mmol，1.00当量)在NMP(600mL)中的溶液中加入NaHS(7.81g，139.325mmol，1.30当量)。在100℃下搅拌25分钟后，将所得混合物用水(800mL)稀释。将所得混合物用EtOAc(3×500mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×300mL)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用EtOAc的PE溶液从0％至50％洗脱，得到中间体4(27.00g，61.1％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝371.
步骤4：4-(3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)-2-(甲氧基羰基)丁酸(中间体5)的制 备
向中间体4(27.00g，72.806mmol，1.00当量)在DCM(150mL)中的溶液中加入TFA(50mL，673.154mmol，9.25当量)。在室温下搅拌一小时后，将所得混合物减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，ACN的水溶液，梯度在10分钟内从10％到50％；检测器，UV 254nm。这产生中间体5(19g，74.62％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝315.
步骤5：3-氯-5-氧代-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羧酸甲酯 (中间体6)的制备
向中间体5(19.00g，60.367mmol，1.00当量)在甲磺酸(60mL)中的溶液中加入P2O5(17.14g，120.753mmol，2.00当量)。在80℃下搅拌1.5小时后，在0℃下将反应物通过加入水(200mL)猝灭。将混合物用饱和碳酸钠溶液中和至pH 7。将所得混合物用EtOAc(3×500mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×200mL)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体6(7.00g，35.1％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝297.
步骤6：3-氯-6-(羟甲基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-5-醇(中 间体7)的制备
在0℃下，向中间体6(7.00g，23.590mmol，1.00当量)和CaCl2(5.24g，47.180mmol，2.00当量)在EtOH(150mL)中的混合物中加入NaBH4(2.68g，70.770mmol，3.00当量)。在室温下搅拌6小时后，在0℃下将反应物用1N HCl猝灭。将所得混合物用DCM/MeOH(10:1)(3×500mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，ACN的水溶液，梯度在10分钟内从10％到50％；检测器，UV 254nm。这产生中间体7(4.20g，59.1％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝271.
步骤7：(3-氯-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)甲醇(中间体8) 的制备
向中间体7(4.20g，15.514mmol，1.00当量)在TFA(50mL)中的溶液中加入Et3SiH(25mL，154.800mmol，9.98当量)。在90℃下搅拌2.5小时后，将所得混合物减压浓缩。将残余物溶解于EtOAc(500mL)中，用饱和碳酸氢钠洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到中间体8(2.50g，56.9％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝255.
步骤8：3-氯-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羧酸(中间体9)的制 备
在0℃下，向中间体8(2.50g，9.814mmol，1.00当量)在丙酮(50mL)中的溶液中加入琼斯试剂(3.89g，19.628mmol，2.00当量)。在室温下搅拌一小时后，将反应物通过加入NaHSO3溶液猝灭并用水(50mL)稀释。将所得混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体9(1.5g，51.19％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝269.
步骤9：3-(2-羟基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羧酸(中 间体10)的制备
向中间体9(1.50g，5.582mmol，1.00当量)和2-羟基苯基硼酸(1.15g，8.373mmol，1.50当量)在二噁烷(35mL)和水(7mL)中的溶液中加入Cs2CO3(5.46g，16.746mmol，3.00当量)和XPhos Pd G3(0.47g，0.558mmol，0.10当量)。在100℃和氮气气氛下搅拌一小时后，将所得混合物减压浓缩。将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，ACN的水溶液，梯度在10分钟内从10％到50％；检测器，UV 254nm。这产生中间体10(910.0mg，44.9％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝327.
步骤10：(S)-3-(2-羟基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羧 酸(中间体11)的制备
将中间体10(500mg)通过手性HPLC分离，条件如下：柱：CHIRALPAK IG-3，4.6*50mm，3μm；流动相A：己烷(0.1％TFA)，流动相B：EtOH；流速：1mL/分钟；梯度：从0％B到70％B。这产生中间体11(169.0mg，33.8％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝327.
步骤11：(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-((1R,4R)-5-((S)-3-(2-羟基苯基)-5,6, 7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羰基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)异噁 唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺 (化合物41)的制备
将中间体11(15mg，0.046mmol，1当量)、DIEA(17.82mg，0.138mmol，3当量)、PyBOP(96mg，0.184mmol，4当量)和(2S,4R)-1-[(2R)-2-{3-[(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(26.60mg，0.046mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液在25℃下搅拌2小时。将混合物通过制备型HPLC纯化，条件如下：柱：X Bridge Prep OBD C18，30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在7分钟内从40％B到60％B，然后60％B；检测器：254/220nm；RT(分钟)：5.8。这产生化合物41(12.4mg，30.41％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.89(s,1H),8.46(dd,J＝13.6,11.7Hz,1H),8.10–7.98(m,1H),7.51–7.45(m,4H),7.41–7.23(m,2H),7.08–6.96(m,2H),6.10(d,J＝7.9Hz,1H),5.10–4.99(m,2H),4.57–4.49(m,3H),3.94–3.86(m,2H),3.76–3.56(m,2H),3.50–3.36(m,1H),3.28(d,J＝10.2Hz,2H),3.18(td,J＝6.6,3.7Hz,2H),3.01–2.89(m,1H),2.64–2.46(m,4H),2.32–2.22(m,1H),2.20–2.15(m,1H),2.01–1.96(m,3H),1.89–1.82(m,2H),1.65–1.49(m,3H),1.09(dd,J＝6.6,1.7Hz,3H),1.02–0.89(m,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝887.30.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-((1R,4R)-5-((R)-3-(2-羟基苯基)-5,6,7,8-四 氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羰基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)异噁唑-5- 基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合 物42)的制备
步骤1：(R)-3-(2-羟基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羧 酸(中间体12)的制备
将中间体10(500mg)通过手性HPLC分离，条件如下：柱：CHIRALPAK IG-3，4.6*50mm，3μm；流动相A：己烷(0.1％TFA)，流动相B：EtOH；流速：1mL/分钟；梯度：从0％B到70％B。这产生中间体12(180.1mg，36.0％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝327.
步骤2：(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-((1R,4R)-5-((R)-3-(2-羟基苯基)-5,6, 7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羰基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)异噁 唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺 (化合物42)的制备
将中间体12(15mg，0.046mmol，1当量)、DIEA(17.82mg，0.138mmol，3当量)、PyBOP(96mg，0.184mmol，4当量)和(2S,4R)-1-[(2R)-2-{3-[(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-1,2-噁唑-5-基}-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(26.60mg，0.046mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液在25℃下搅拌2小时。将混合物通过制备型HPLC纯化，条件如下：柱：X Bridge Prep OBD C18，30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在7分钟内从40％B到60％B，然后60％B；检测器：254/220nm；RT(分钟)：6.4。这产生化合物42(10.8mg，26.47％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),8.98(d,J＝1.6Hz,1H),8.63(d,J＝12.7Hz,1H),8.39(dd,J＝16.5,7.7Hz,1H),8.16(ddd,J＝8.1,3.2,1.6Hz,1H),7.44–7.32(m,5H),7.06–6.99(m,2H),6.09(d,J＝7.7Hz,1H),5.20–4.84(m,3H),4.48(s,1H),4.43–4.23(m,2H),3.87–3.73(m,2H),3.70–3.65(m,1H),3.58–3.41(m,2H),3.40–3.38(m,1H),3.36–3.25(m,1H),3.18–3.08(m,4H),2.84(d,J＝14.4Hz,2H),2.45(d,J＝3.7Hz,3H),2.42–2.15(m,1H),2.08(d,J＝7.5Hz,1H),2.04–1.98(m,1H),1.95–1.90(m,2H),1.87–1.77(m,1H),1.49–1.33(m,3H),0.97(t,J＝6.1Hz,3H),0.93–0.84(m,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝887.30.
使用与上述用于化合物41的制备的那些程序类似的程序，使用合适的胺和羧酸来制备表11中的化合物。
表11.
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(R)-2-(6-氨基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基)苯酚(中间体 A)和(S)-2-(6-氨基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基)苯酚(中间体B)的 制备
步骤1：(3-氯-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)氨基甲酸叔丁 酯(中间体2)的制备
向3-氯-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羧酸(1.30g，4.838mmol，1.00当量)和DIEA(1.88g，14.514mmol，3.00当量)在t-BuOH(15mL，157.846mmol，32.63当量)中的溶液中加入DPPA(2.00g，7.257mmol，1.5当量)。在80℃下搅拌过夜后，将所得混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用EtOAc的PE溶液从0％至100％洗脱，得到中间体2(1.20g，65.6％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝340.
步骤2：(3-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒 嗪-6-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)的制备。
向中间体2(1.20g，3.531mmol，1.00当量)和2-(甲氧基甲氧基)苯基硼酸(0.96g，5.296mmol，1.50当量)在二噁烷(30mL)和水(6mL)中的溶液中加入Cs2CO3(3.45g，10.593mmol，3.00当量)和XPhos Pd G3(0.30g，0.353mmol，0.10当量)。在100℃和氮气气氛下搅拌一小时后，将所得混合物减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用EtOAc的PE溶液从0％至50％洗脱，得到中间体3(1.20g，69.2％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝442.
步骤3：(R)-(3-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3- c]哒嗪-6-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体4)和(S)-(3-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四 氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体5)的制备
将中间体3(1.20g)通过手性HPLC分离，条件如下：柱：CHIRALPAK IC-3，4.6*50mm，3μm；流动相A：己烷(0.1％DEA)，流动相B：EtOH；流速：1mL/分钟；梯度：从0％B到70％B。这产生中间体4(475.0mg，39.5％)和中间体5(490.0mg，40.8％)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝442.
步骤4和5：(R)-2-(6-氨基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基)苯 酚(中间体A)和(S)-2-(6-氨基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基)苯酚 (中间体B)的制备。
将中间体4(10.0mg，0.023mmol，1.00当量)溶解于DCM(1mL)中并加入TFA(0.5mL，6.732mmol，297.23当量)。将混合物在室温下搅拌一小时。将所得混合物减压浓缩。将残余物用制备型HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18 OBD，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在7分钟内从11％B到26％B，然后26％B；检测器：254/220nm。这产生中间体A(2.2mg，32.4％)，为浅黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝298.05.
将中间体5(10.0mg，0.023mmol，1.00当量)溶解于DCM(1mL)中并加入TFA(0.5mL，6.732mmol，297.23当量)。将混合物在室温下搅拌一小时。将所得混合物减压浓缩。将残余物用制备型HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18 OBD，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在7分钟内从11％B到26％B，然后26％B；检测器：254/220nm。这产生中间体B(2.1mg，30.8％)，为浅黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝298.10.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(2-(((R)-3-(2-羟基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并 [4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)氨基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1- (4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物40)的制备
在室温下，向中间体A(25mg，0.046mmol，1当量)和中间体I-3(27.50mg，0.092mmol，2当量)在DCM(1.5mL)中的搅拌混合物中逐滴加入AcOH(0.1mL)和MeOH(0.5mL)。在室温下，向上述混合物中分批加入NaBH3CN(8.72mg，0.138mmol，3当量)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物通过制备型HPLC纯化，条件如下：柱，XBridge ShieldRP18 OBD，19*150mm，5μm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在7分钟内从21％达到38％)；检测器，UV 254nm。这产生化合物40(12.6mg，18.23％)，为浅黄色固体)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.87(d,J＝4.9Hz,1H),8.55–8.37(m,2H),8.03(d,J＝7.9Hz,1H),7.48–7.31(m,5H),7.06–6.98(m,2H),6.08(s,1H),5.03(d,J＝7.0Hz,1H),4.54–4.33(m,4H),3.83(dd,J＝11.1,4.2Hz,1H),3.73–3.59(m,2H),3.46–3.36(m,4H),3.18–3.09(m,2H),2.75(s,1H),2.46(d,J＝13.4Hz,3H),2.39(s,2H),2.23–2.13(m,1H),2.05–1.90(m,2H),1.51(d,J＝7.0Hz,3H),1.05(d,J＝6.5Hz,3H),0.94–0.85(m,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝822.25.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(2-(((S)-3-(2-羟基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并 [4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)氨基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1- (4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物39)的制备
在室温下，向中间体B(25mg，0.046mmol，1当量)和中间体I-3(27.50mg，0.092mmol，2当量)在DCM(1.5mL)中的搅拌溶液中逐滴加入AcOH(0.1mL)和MeOH(0.5mL)。在室温下，向上述混合物中分批加入NaBH3CN(8.72mg，0.138mmol，3当量)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物通过制备型HPLC纯化，条件如下：柱，XBridge Shield RP18OBD，19*150mm，5μm；流动相，水(0.1％FA)和ACN(ACN在7分钟内从21％达到38％)；检测器，UV 254nm。这产生化合物39(11.8mg，17.08％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.87(d,J＝4.6Hz,1H),8.52–8.43(m,2H),8.00(dd,J＝17.6,7.9Hz,1H),7.48–7.30(m,5H),7.01(dd,J＝8.1,4.9Hz,2H),6.07(s,1H),5.03(t,J＝7.0Hz,1H),4.54–4.38(m,4H),3.83(dd,J＝10.8,4.1Hz,1H),3.77–3.58(m,2H),3.36(s,4H),3.14(d,J＝10.1Hz,2H),2.72(s,1H),2.46(d,J＝13.1Hz,3H),2.37(s,2H),2.23–2.13(m,1H),2.02–1.89(m,2H),1.61–1.48(m,3H),1.05(d,J＝6.5Hz,3H),0.90(dd,J＝9.8,6.7Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝822.25.
2-(5,6,7,8-四氢吡啶并[3',4':4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基)苯酚(中间体C) 的制备
步骤1：(4-(3,6-二氯哒嗪-4-基)丁-3-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体2)的制 备。
将4-溴-3,6-二氯哒嗪(10.00g，43.885mmol，1.00当量)、N-(丁-3-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(11.14g，65.828mmol，1.50当量)、Pd(dppf)Cl2(6.42g，8.777mmol，0.20当量)、CuI(2.51g，13.165mmol，0.30当量)和Et3N(13.32g，131.655mmol，3.00当量)在甲苯(100mL)中的混合物在60℃和氮气气氛下搅拌4小时。冷却至室温后，将所得混合物过滤，并将滤饼用EtOAc(3×100mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EA(1:1)洗脱，得到中间体2(11g，粗品)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝316.
步骤2：(2-(3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(中间体3)的制 备。
将中间体2(11.00g，34.790mmol，1.00当量)和硫氢化钠(2.26g，27.832mmol，0.8当量)在NMP(50mL)中的混合物在100℃下搅拌过夜。减压浓缩后，将残余物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在20分钟内从20％到80％；检测器，UV 254nm和220nm。这产生中间体3(9.3g，85.19％)，为浅黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝314.
步骤3：2-(3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)乙-1-胺TFA盐(中间体4)的制备。
将中间体3(9.20g，29.318mmol，1.00当量)和TFA(3mL)在DCM(9mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将所得混合物减压浓缩。将残余物用水(5mL)稀释。将所得固体滤出并通过冻干干燥，得到中间体4(3.2g，粗品)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝214.
步骤4：(2-(3-氯噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-基)乙基)氨基甲酸苄酯(中间体5)的制 备。
将中间体4(3.00g，14.040mmol，1.00当量)、CbzCl(4.79g，28.080mmol，2.00当量)和K2CO3(5.82g，42.120mmol，3.00当量)在THF(15mL)和H2O(15mL)中的混合物在室温和氮气气氛下搅拌2小时。将所得混合物用水(300mL)稀释。将所得混合物用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层用水(300mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物溶解于DMF(10mL)中并通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在20分钟内从30％到80％；检测器，UV 254nm和220nm。这产生中间体5(497mg，10.18％)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝348.
步骤5：3-氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3',4':4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪(中间体6)的 制备。
将中间体5(497.0mg，1.429mmol，1.00当量)和HCHO(128.1mg，4.287mmol，3.00当量)在TFA(4mL)中的混合物在60℃下搅拌2小时。将所得混合物减压浓缩。将残余物溶解于DMF(2mL)中并通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％NH3.H2O)，梯度在20分钟内从0％到50％；检测器，UV 254nm和220nm。这产生中间体6(196mg，60.78％)，为浅棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝226.
步骤6：3-氯-7,8-二氢吡啶并[3',4':4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6(5H)-羧酸叔丁 酯(中间体7)的制备。
将中间体6(186.0mg，0.824mmol，1.00当量)、(Boc)2O(359.7mg，1.648mmol，2.00当量)、DMAP(20.1mg，0.165mmol，0.20当量)和DIEA(319.6mg，2.472mmol，3.00当量)在DCM(3mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将所得混合物减压浓缩。将残余物用水(50mL)稀释。将所得混合物用EtOAc(3×25mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到中间体7(247mg，粗品)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝326.
步骤7：3-(2-羟基苯基)-7,8-二氢噻吩并[2,3-b:4,5-c’]二吡啶-6(5H)-羧酸叔 丁酯(中间体8)的制备。
将中间体7(237.0mg，0.727mmol，1.00当量)、2-羟基苯基硼酸(150.5mg，1.091mmol，1.50当量)、XPhos Pd G3(123.2mg，0.145mmol，0.20当量)和Cs2CO3(711.0mg，2.181mmol，3.00当量)在1,4-二噁烷(3mL)和H2O(0.6mL)中的混合物在80℃和氮气气氛下搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩。将残余物溶解于DMF(5mL)中并通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，C18硅胶；流动相，MeCN的水溶液(0.1％FA)，梯度在20分钟内从0％到80％；检测器，UV 254nm和220nm。这产生中间体8(61mg，21.87％)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝383.
步骤8：2-(5,6,7,8-四氢吡啶并[3',4':4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-3-基)苯酚(中 间体C)的制备。
将中间体8(56.0mg，0.146mmol，1.00当量)和TFA(0.5mL)在DCM(1.5mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将所得混合物减压浓缩。将残余物用水(5mL)稀释。将所得固体滤出并通过冻干干燥，得到中间体C(76mg，粗品)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝284.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(4-(3-(2-羟基苯基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3', 4':4,5]噻吩并[2,3-c]哒嗪-6-羰基)哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)- 1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物11)的制备
在室温下，向I-6(15mg，0.025mmol，1.00当量)和中间体C(8.36mg，0.030mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入PyBOP(19.20mg，0.038mmol，1.5当量)和DIEA(9.54mg，0.075mmol，3当量)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。将混合物通过制备型HPLC纯化，条件如下：柱，XBridge Prep Phenyl OBD，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.05％NH3-H2O)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在7分钟内从50％B到63％B；检测器：254/220nm。这产生化合物11(4.0mg，18.26％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),8.99(s,1H),8.84(d,J＝11.0Hz,1H),8.41(d,J＝7.5Hz,1H),8.21(d,J＝8.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,2H),7.37(d,J＝8.2Hz,3H),7.03(q,J＝7.9,7.3Hz,2H),6.16(s,1H),5.11(s,1H),5.00–4.77(m,3H),4.37(s,1H),4.29(s,1H),4.00(s,1H),3.93(s,1H),3.69(d,J＝13.7Hz,3H),3.58(d,J＝10.1Hz,1H),3.48(s,1H),3.18(s,1H),3.04(s,2H),2.93(d,J＝12.6Hz,2H),2.46(s,3H),2.23(s,1H),2.02(s,1H),1.70(d,J＝27.2Hz,5H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),0.95(d,J＝6.6Hz,3H),0.81(d,J＝6.3Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝875.60.
使用与上述用于化合物11的制备的程序类似的程序，使用合适的胺和羧酸来制备表12中的化合物。
表12.
(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(2-(3-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[3,2-c]哒嗪-6- 基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑- 5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
步骤1：4-溴-6-氯-3-碘哒嗪(中间体2)的制备。
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(2.00g，9.595mmol，1.00当量)和t-BuONO(1.09g，10.555mmol，1.10当量)在THF(20mL)中的搅拌溶液中加入CuI(1.83g，9.595mmol，1.00当量)和二碘甲烷(2.57g，9.595mmol，1.00当量)。将所得混合物在60℃下搅拌过夜。将所得混合物用EtOAc(300mL)稀释，用饱和NH4Cl(水溶液)(100mL×3)洗涤，并将有机层经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EtOAc(4:1)洗脱，得到中间体2(1.1g，35.90％)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝319.
步骤2：3-[2-(4-溴-6-氯哒嗪-3-基)乙炔基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(中间体 3)的制备。
向中间体2(1.10g，3.445mmol，1.00当量)和3-乙炔基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(624.3mg，3.445mmol，1.00当量)在THF(15mL)中的搅拌溶液中加入Pd(PPh3)4(796.1mg，0.689mmol，0.20当量)、CuI(196.8mg，1.033mmol，0.30当量)和TEA(1.05g，10.335mmol，3.00当量)。将所得混合物在60℃和氮气气氛下搅拌2小时。将反应混合物通过短硅藻土垫过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EtOAc(1:1)洗脱，得到中间体3(702mg，54.69％)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝372.
步骤3：3-{3-氯噻吩并[3,2-c]哒嗪-6-基}氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(中间体4) 的制备。
/>
向中间体3(702.0mg，1.884mmol，1.00当量)在NMP(10mL)中的搅拌溶液中加入NaSH(116.0mg，2.072mmol，1.10当量)。将所得混合物在100℃下搅拌1小时。将混合物直接通过反相快速色谱法纯化，洗脱梯度为从0％到70％的MeCN的水溶液(含有0.1％甲酸)，得到中间体4(450mg，73.32％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝326.
步骤4：3-[3-(2-羟基苯基)噻吩并[3,2-c]哒嗪-6-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯 (中间体5)的制备。
向中间体4(450.0mg，1.381mmol，1.00当量)和2-羟基苯基硼酸(571.5mg，4.143mmol，3.00当量)在二噁烷(10mL)和H2O(2mL)中的搅拌溶液中加入XPhos Pd G3(233.8mg，0.276mmol，0.20当量)和K2CO3(572.6mg，4.143mmol，3.00当量)。将所得混合物在100℃和氮气气氛下搅拌2小时。将所得混合物过滤并将滤饼用EtOAc(30mL×3)洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EtOAc(1:1)洗脱，得到中间体5(435mg，82.13％)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝384.
步骤5：2-[6-(氮杂环丁烷-3-基)噻吩并[3,2-c]哒嗪-3-基]苯酚(I-11)的制备。
向中间体5(435.0mg，1.134mmol，1.00当量)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中加入TFA(5mL)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。将所得混合物真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化，条件如下(柱：XBridge Prep C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在8分钟内从18％B到31％B，保持31％B；波长：254/220nm；RT1(分钟)：6.80)得到I-11(233.1mg，72.49％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.94(s,1H),9.16(s,1H),8.03(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.78(s,1H),7.51–7.21(m,1H),7.12–6.76(m,2H),4.36(d,J＝8.3Hz,1H),4.30–4.26(p,J＝6.9Hz,1H),3.95(t,J＝7.7Hz,2H),3.68(t,J＝7.0Hz,2H)。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝284.10.
步骤6：(2S,4R)-4-羟基-1-((R)-2-(3-(2-(3-(3-(2-羟基苯基)噻吩并[3,2-c]哒 嗪-6-基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基 噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物9)的制备
将化合物I-11(42.0mg，0.148mmol，1.00当量)、(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(80.1mg，0.148mmol，1.00当量)和AcOH(8.9mg，0.148mmol，1.00当量)在MeOH(3mL)和DCM(3mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟。在室温下，向上述混合物中加入NaBH3CN(46.5mg，0.740mmol，5.00当量)。将所得混合物在室温下再搅拌3小时，然后真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化，条件如下(柱：XBridge Prep C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：25mL/分钟；梯度：在8分钟内从40％B到57％B，保持57％B，得到化合物9(67.4mg，55.71％)，为灰白色固体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.96(s,1H),9.14(s,1H),8.99(s,1H),8.42(d,J＝7.6Hz,1H),8.07–7.97(m,1H),7.77(s,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,2H),7.39–7.33(m,3H),7.07–6.97(m,2H),6.11(s,1H),5.06(dd,J＝26.0,3.2Hz,1H),4.98–4.84(m,1H),4.38(t,J＝7.9Hz,1H),4.29(s,1H),4.18(t,J＝5.3Hz,2H),4.09(t,J＝6.6Hz,1H),3.82–3.71(m,2H),3.70–3.63(m,2H),3.50–3.42(m,1H),3.41–3.39(m,2H),2.85(t,J＝5.4Hz,2H),2.45(d,J＝3.5Hz,3H),2.33–2.13(m,1H),2.12–1.96(m,1H),1.85–1.73(m,1H),1.38(d,J＝7.0Hz,3H),0.97–0.94(m,3H),0.80(d,J＝6.6Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝808.30.
使用与上述用于化合物9的制备的那些程序类似的程序，使用合适的胺和醛(或酮)来制备表13中的化合物。
表13.
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实施例2.本发明化合物对BRM和BRG1的降解
本实施例证明了本公开的化合物在基于细胞的降解测定中降解HiBit-BRM或HiBit-BRG1融合蛋白的能力。
程序：建立了表达HiBiT-BRM的稳定HeLa细胞系。在第0天，将40μL培养基中的5000个细胞接种到384孔细胞培养板的每个孔中。在第1天，用120nL的DMSO或120nL的3倍连续DMSO稀释的化合物处理细胞(一式两份10个点，30μM作为最终最高剂量)。随后将板在标准组织培养箱中孵育24小时，并在室温下平衡15分钟。新鲜制备Nano-Glo HiBiT裂解检测系统(Promega N3050)试剂并取20μl加入到每个孔中。加入这种含LgBit的试剂后，HiBiT和LgBiT蛋白缔合形成发光NanoBiT荧光素酶。将板在室温下振摇10分钟，并使用EnVision读板器(PerkinElmer)读取生物发光。
为了测量BRG1的降解，建立了表达HiBit-BRG1和LgBit的稳定HeLa细胞系。随后进行与上述相同的方案。
使用下式计算降解％：降解％＝100％-100％×(Lum样品-LumLC)/(LumHC-LumLC)。经DMSO处理的细胞用作高对照(HC)，并且2μM已知的BRM/BRG1降解物标准处理的细胞用作低对照(LC)。将数据拟合为四参数非线性曲线拟合以计算IC50(μM)值，如表14所示。
结果：如下表14所示，本发明的化合物降解BRM和BRG1。
表14.
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“+”表示≥1000nM的抑制效果；“++”表示≥100nM的抑制作用；
“+++”表示≥10nM的抑制效果；“++++”表示<10nM的抑制作用；
“NT”表示未测试；“A”表示最大降解≥75％；“B”表示最大降解≥50％；“C”表示最大降解<50％。
其他实施方案
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请以引用方式整体并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地且单独地指出以引用方式整体并入一样。当返现本申请中的术语在以引用方式并入本文的文献中被不同地定义时，本文提供的定义用作该术语的定义。
虽然本发明已经结合其具体实施方式进行了描述，但应当理解的是，本发明能够进行进一步的修改，并且本申请旨在涵盖本发明的任何变化、使用或改编，这些变化、使用或改编通常遵循本发明的原则并且包括来自本公开的此类偏离：这些偏离在本发明所属领域内的已知或惯例实践内并且可应用于上文阐述的基本特征，并且遵循权利要求书的范围。
其他实施方案在权利要求书中。

Claims (142)

1.一种具有式I或II的结构的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
环系A为5元至9元杂环基或杂芳基；
m为0、1、2或3；
k为0、1或2；
每个R1独立地为卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C8环烷基或任选取代的C2-C9杂环基；
每个X独立地为卤素；
L为接头；并且
B为降解部分。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式I-A或II-A的结构：
其中虚线键表示单键或双键。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式I-B的结构：
4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式I-C的结构：
其中每个R1独立地为任选取代的C1-C6烷基。
5.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式I-D的结构：
其中每个R1独立地为任选取代的C1-C6烷基。
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式I-E的结构：
7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式I-F的结构：
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中m为0。
9.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式I-G或II-G的结构：
10.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式I-H或II-H的结构：
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分B具有式A-1的结构：
其中
Y1为
RA5为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RA6为H或任选取代的C1-C6烷基；并且RA7为H或任选取代的C1-C6烷基；或者RA6和RA7与各自键合的碳原子一起结合形成任选取代的C3-C6碳环基或任选取代的C2-C5杂环基；或者RA6和RA7与各自键合的碳原子一起结合形成任选取代的C3-C6碳环基或任选取代的C2-C5杂环基；
RA8为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RA1、RA2、RA3和RA4中的每一者独立地为H、A2、卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C2-C9杂环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C2-C9杂芳基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、任选取代的-O-C3-C6碳环基、羟基、硫醇或任选取代的氨基；或者RA1和RA2、RA2和RA3、和/或RA3和RA4与各自所连接的碳原子一起组合形成并且/>为任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C2-C9杂芳基或C2-C9杂环基，它们中的任一者任选地被A2取代，
其中RA1、RA2、RA3和RA4中的一者为A2，或者被A2取代；并且
A2为所述降解部分和所述接头之间的键。
12.根据权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA5为H或甲基。
13.根据权利要求12所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA5为H。
14.根据权利要求11至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA1、RA2、RA3和RA4中的每一者独立地为H或A2。
15.根据权利要求11至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA1为A2，并且RA2、RA3和RA4中的每一者为H。
16.根据权利要求11至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA2为A2，并且RA1、RA3和RA4中的每一者为H。
17.根据权利要求11至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA3为A2，并且RA1、RA2和RA4中的每一者为H。
18.根据权利要求11至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA4为A2，并且RA1、RA2和RA3中的每一者为H。
19.根据权利要求11至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y1为
20.根据权利要求19所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA6为H。
21.根据权利要求19或20所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA7为H。
22.根据权利要求11至21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y1为
23.根据权利要求22所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA8为H或任选取代的C1-C6烷基。
24.根据权利要求23所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA8为H或甲基。
25.根据权利要求23所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RA8为甲基。
26.根据权利要求11至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分包括式A2的结构：
27.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分为
28.根据权利要求11至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分包括式A4的结构：
29.根据权利要求28所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分是
30.根据权利要求11至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分包括式A5的结构：
31.根据权利要求11至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分包括式A6的结构：
32.根据权利要求11至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分包括式A8的结构：
33.根据权利要求11至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分包括式A10的结构：
34.根据权利要求11至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分包括以下结构：
35.根据权利要求11至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分包括以下结构：
36.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分具有式C’的结构或其药学上可接受的盐：
其中
L4为-N(RB1)(RB2)、
RB1为H、A2、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；RB2为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C2-C9杂环基或任选取代的C1-C6杂烷基；
RB3为A2、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C1-C6烷基C3-C10碳环基、或任选取代的C1-C6烷基C6-C10芳基；
RB4为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C1-C6烷基C3-C10碳环基、或任选取代的C1-C6烷基C6-C10芳基；
RB5为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
v2为0、1、2、3或4；
每个RB6独立地为A2、卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C2-C9杂环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C2-C9杂芳基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、羟基、硫醇或任选取代的氨基；
RB7和RB8中的每一者独立地为H、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C6-C10芳基；
RB9为H或任选取代的C1-C6烷基；并且
A2为所述降解部分和所述接头之间的键；
其中RB1、RB3和RB6中的一者且仅一者为A2。
37.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分具有式C的结构或其药学上可接受的盐：
其中
L4为-N(RB1)(RB2)、
RB1为H、A2、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RB2为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
RB3为A2、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C1-C6烷基C3-C10碳环基、或任选取代的C1-C6烷基C6-C10芳基；
RB4为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C1-C6烷基C3-C10碳环基、或任选取代的C1-C6烷基C6-C10芳基；
RB5为H、任选取代的C1-C6烷基、或任选取代的C1-C6杂烷基；
v2为0、1、2、3或4；
每个RB6独立地为A2、卤素、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10碳环基、任选取代的C2-C9杂环基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C2-C9杂芳基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、羟基、硫醇或任选取代的氨基；
RB7和RB8中的每一者独立地为H、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C6-C10芳基；
RB9为H或任选取代的C1-C6烷基；并且
A2为所述降解部分和所述接头之间的键；
其中RB1、RB3和RB6中的一者且仅一者为A2。
38.根据权利要求36或37所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分具有式C1的结构：
39.根据权利要求36或37所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分为
40.根据权利要求36或37所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分为
41.根据权利要求36或37所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分为
42.根据权利要求36或37所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分具有式C2的结构：
43.根据权利要求36、37、38或42所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RB9为任选取代的C1-C6烷基。
44.根据权利要求43所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RB9为甲基。
45.根据权利要求36、37、38和42至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中RB9与(S)-立体异构中心键合。
46.根据权利要求36或37所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述降解部分为
47.根据权利要求1至45中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述接头具有式III的结构或其药学上可接受的盐：
A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-(D)-(B3)i-(C2)j-(B4)k–A2，
式III，
其中
A1为所述接头和环系A之间的键；
A2为所述降解部分和所述接头之间的键；
B1、B2、B3和B4中的每一者独立地为任选取代的C1-C4烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C6-C10芳基C1-4烷基、任选取代的C1-C4杂烷基、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C2-C6杂环基、任选取代的C2-C9杂芳基、O、S、S(O)2或NRN；
每个RN独立地为H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C2-4烯基、任选取代的C2-4炔基、任选取代的C2-6杂环基、任选取代的C6-12芳基或任选取代的C1-7杂烷基；
C1和C2中的每一者独立地为羰基、硫代羰基、磺酰基或磷酰基；
f、g、h、i、j和k中的每一者独立地为0或1；并且
D为任选取代的C1-10烷基、任选取代的C2-10烯基、任选取代的C2-10炔基、任选取代的C2-6杂环基、任选取代的C6-12芳基、任选取代的C2-C10聚乙二醇或任选取代的C1-10杂烷基或将A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-连接到-(B3)i-(C2)j-(B4)k–A2的化学键。
48.根据权利要求1至45中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述接头具有式III的结构或其药学上可接受的盐：
A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-(D)-(B3)i-(C2)j-(B4)k–A2，
式III，
其中
A1为所述接头和环系A之间的键；
A2为所述降解部分和所述接头之间的键；
B1、B2、B3和B4中的每一者独立地为任选取代的C1-C4烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的C6-C10芳基C1-4烷基、任选取代的C1-C4杂烷基、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C2-C6杂环基、O、S、S(O)2或NRN；
每个RN独立地为H、任选取代的C1-4烷基、任选取代的C2-4烯基、任选取代的C2-4炔基、任选取代的C2-6杂环基、任选取代的C6-12芳基或任选取代的C1-7杂烷基；
C1和C2中的每一者独立地为羰基、硫代羰基、磺酰基或磷酰基；
f、g、h、i、j和k中的每一者独立地为0或1；并且
D为任选取代的C1-10烷基、任选取代的C2-10烯基、任选取代的C2-10炔基、任选取代的C2-6杂环基、任选取代的C6-12芳基、任选取代的C2-C10聚乙二醇或任选取代的C1-10杂烷基或将A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-连接到-(B3)i-(C2)j-(B4)k–A2的化学键。
49.根据权利要求47或48所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B1、B2、B3和B4中的每一者独立地为任选取代的C1-C2烷基、任选取代的C1-C3杂烷基、任选取代的C2-C6杂环基或NRN。
50.根据权利要求47、48或49所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个RN独立地为H或任选取代的C1-C4烷基。
51.根据权利要求47至50中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个RN独立地为H或CH3。
52.根据权利要求47至51中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B1和B4中的每一者独立地为
53.根据权利要求47至52中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B1和B4中的每一者独立地为
54.根据权利要求52所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B1为
55.根据权利要求53所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B1为
56.根据权利要求52至55中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B4为O、
/>
57.根据权利要求52至56中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B4为
58.根据权利要求47至57中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中C1和C2中每一者为
59.根据权利要求58所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中C1为
60.根据权利要求58所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中C2为
61.根据权利要求47至60中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B2为任选取代的C1-C4烷基。
62.根据权利要求47至60中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B2为任选取代的C2-C6杂环基。
63.根据权利要求62所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B2为
64.根据权利要求47至60中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B2为任选取代的C2-C9杂芳基。
65.根据权利要求64所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B2为
66.根据权利要求47至65中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B3为任选取代的C3-C10环烷基。
67.根据权利要求66所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B3为
68.根据权利要求47至67中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中D为任选取代的C1-C10烷基。
69.根据权利要求47至68中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中f为1。
70.根据权利要求47至69中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中g为0。
71.根据权利要求47至69中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中g为1。
72.根据权利要求47至71中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中h为0。
73.根据权利要求47至71中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中h为1。
74.根据权利要求47至73中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中i为0。
75.根据权利要求47至73中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中i为1。
76.根据权利要求47至75中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中j为0。
77.根据权利要求47至75中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中j为1。
78.根据权利要求47至77中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中k为0。
79.根据权利要求47至77中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中k为1。
80.根据权利要求47至79中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述接头具有以下结构：
/>
/>
/>
81.根据权利要求47至80中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述接头具有以下结构：
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82.根据权利要求47至81中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中连接所述接头的两个化合价的最短原子链为2至10个原子长。
83.根据权利要求47至81中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中连接所述接头的两个化合价的最短原子链为6个原子长。
84.根据权利要求82所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述接头具有以下结构：
85.一种化合物，所述化合物选自表1中的化合物1至33及其药学上可接受的盐。
86.一种化合物，所述化合物选自表1中的化合物1至115及其药学上可接受的盐。
87.根据权利要求1至86中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有至少5的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
88.根据权利要求1至86中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有至少7的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
89.根据权利要求1至86中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有至少10的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
90.根据权利要求1至86中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有至少15的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
91.根据权利要求1至86中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有至少20的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
92.根据权利要求1至86中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有至少25的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
93.根据权利要求1至86中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有至少30的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
94.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至93中任一项所述的化合物及其药学上可接受的赋形剂。
95.一种降低细胞中BAF复合物活性的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物接触。
96.根据权利要求95所述的方法，其中所述BAF复合物是癌细胞。
97.一种治疗有需要的受试者的BAF复合体相关病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物。
98.根据权利要求97所述的方法，其中所述BAF复合物相关病症是癌症或病毒感染。
99.一种抑制BRM的方法，所述方法包括使细胞与有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物接触。
100.根据权利要求99所述的方法，其中所述细胞为癌细胞。
101.一种治疗有需要的受试者的与BRG1功能缺失突变相关的病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至93中任一项的所述化合物或根据权利要求94所述的药物组合物。
102.根据权利要求101所述的方法，其中与BRG1功能缺失突变相关的所述病症是癌症。
103.一种诱导细胞凋亡的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物接触。
104.根据权利要求103所述的方法，其中所述细胞为癌细胞。
105.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物。
106.根据权利要求96、98、100、102、104和105中任一项所述的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌、结直肠癌、膀胱癌、原发灶不明的癌症、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌、食管胃癌、胰腺癌、肝胆管癌、软组织肉瘤、卵巢癌、头颈癌、肾细胞癌、骨癌、非霍奇金淋巴瘤、小细胞肺癌、前列腺癌、胚胎肿瘤、生殖细胞瘤、宫颈癌、甲状腺癌、唾液腺癌、胃肠道神经内分泌肿瘤、子宫肉瘤、胃肠道间质瘤、CNS癌、胸腺肿瘤、肾上腺皮质癌、阑尾癌、小肠癌或阴茎癌。
107.根据权利要求96、98、100、102、104和105中任一项所述的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌、结直肠癌、膀胱癌、原发灶不明的癌症、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌或阴茎癌。
108.根据权利要求96、98、100、102、104和105中任一项所述的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌。
109.根据权利要求96、98、100、102、104和105中任一项所述的方法，其中所述癌症为软组织肉瘤。
110.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述癌症选自黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌和血液学癌症，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物。
111.一种在有需要的受试者中减少癌症的肿瘤生长的方法，所述癌症选自黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌和血液学癌症，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物。
112.一种抑制受试者中癌症的转移性进展的方法，所述癌症选自黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌和血液学癌症，所述方法包括施用有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物。
113.一种抑制受试者的癌症转移性定殖的方法，所述癌症选自黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌和血液学癌症，所述方法包括施用有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物。
114.一种降低癌症中BRG1和/或BRM的水平和/或活性的方法，所述癌症选自黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌和血液学癌症细胞，所述方法包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物接触。
115.根据权利要求114所述的方法，其中所述细胞存在于受试者。
116.根据权利要求110至115中任一项所述的方法，其中所述癌症是转移性的。
117.根据权利要求110至115中任一项所述的方法，其中所述方法还包括向所述受试者施用抗癌疗法或使所述细胞与所述抗癌疗法接触。
118.根据权利要求117所述的方法，其中所述抗癌疗法是化疗剂或细胞毒性剂、免疫疗法、手术、放射疗法、温热疗法或光凝固。
119.根据权利要求118所述的方法，其中所述抗癌疗法是手术。
120.根据权利要求118所述的方法，其中所述抗癌疗法是化疗剂或细胞毒性剂。
121.根据权利要求120所述的方法，其中所述化疗剂或细胞毒性剂是抗代谢药、抗有丝分裂剂、抗肿瘤抗生素、天冬酰胺特异性酶、双膦酸盐、抗肿瘤剂、烷化剂、DNA修复酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、皮质类固醇、去甲基化剂、免疫调节剂、janus-相关激酶抑制剂、磷酸肌醇3-激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂或酪氨酸激酶抑制剂。
122.根据权利要求120或121所述的方法，其中所述一种或多种化疗剂或细胞毒性剂是达卡巴嗪、替莫唑胺、顺铂、曲奥舒凡、福莫司汀、IMCgp100、CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂和/或蛋白激酶C抑制剂。
123.根据权利要求118至122中任一项所述的方法，其中所述抗癌疗法和根据权利要求1至83中任一项所述的化合物或根据权利要求84所述的药物组合物彼此在28天内并且各自以一起有效治疗所述受试者的量施用。
124.根据权利要求118至123中任一项所述的方法，其中所述受试者或癌症具有和/或已被鉴定为具有BRG1功能缺失突变。
125.根据权利要求118至124中任一项所述的方法，其中所述癌症在施用一种或多种化疗剂或细胞毒性剂后没有反应或进展。
126.根据权利要求118至125中任一项所述的方法，其中所述癌症对一种或多种化疗剂有抗性，或预测对一种或多种化疗剂具有抗性。
127.根据权利要求118或126所述的方法，其中所述一种或多种化疗剂或细胞毒性剂是达卡巴嗪、替莫唑胺、顺铂、曲奥舒凡、福莫司汀、IMCgp100、CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂和/或蛋白激酶C抑制剂。
128.根据权利要求118至127中任一项所述的方法，其中所述癌症是黑素瘤。
129.根据权利要求128所述的方法，其中所述黑素瘤是葡萄膜黑素瘤。
130.根据权利要求128所述的方法，其中所述黑素瘤是粘膜黑素瘤。
131.根据权利要求128所述的方法，其中所述黑素瘤是皮肤黑素瘤。
132.根据权利要求118至131中任一项所述的方法，其中所述癌症是血液学癌症。
133.根据权利要求132所述的方法，其中所述血液学癌症是多发性骨髓瘤、大细胞淋巴瘤、急性T细胞白血病、急性髓样白血病、骨髓增生异常综合征、免疫球蛋白Aλ骨髓瘤、弥漫性混合组织细胞性和淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病、弥漫性大细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。
134.根据权利要求110至127中任一项所述的方法，其中所述癌症是前列腺癌。
135.根据权利要求110至127中任一项所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
136.根据权利要求135所述的方法，其中所述乳腺癌是ER阳性乳腺癌、ER阴性乳腺癌、三阳性乳腺癌或三阴性乳腺癌。
137.根据权利要求110至127中任一项所述的方法，其中所述癌症是骨癌。
138.根据权利要求137所述的方法，其中所述骨癌是尤因肉瘤。
139.根据权利要求110至127中任一项所述的方法，其中所述癌症是肾细胞癌。
140.根据权利要求139所述的方法，其中所述肾细胞癌是小眼畸形转录因子(MITF)家族易位肾细胞癌。
141.一种治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至93中任一项所述的化合物或根据权利要求94所述的药物组合物。
142.根据权利要求141所述的方法，其中所述病毒感染是逆转录病毒科、嗜肝病毒科、黄病毒科、腺病毒科、疱疹病毒科、乳头瘤病毒科、细小病毒科、多瘤病毒科、副粘病毒科或披盖病毒科的病毒感染。
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