CN116745288A - 化合物及其用途 - Google Patents

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CN116745288A
CN116745288A CN202180089830.4A CN202180089830A CN116745288A CN 116745288 A CN116745288 A CN 116745288A CN 202180089830 A CN202180089830 A CN 202180089830A CN 116745288 A CN116745288 A CN 116745288A
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K·J·威尔逊
S·内格雷蒂
S·E·R·席勒
R·G·瓦斯瓦尼
D·S·黄
J·H·福格特
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Foghorn Treatment Co
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Foghorn Treatment Co
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    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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Abstract

本公开的特征在于用于治疗BAF复合物‑相关病症的化合物。

Description

化合物及其用途
背景
本发明涉及用于调节BRG1或BRM相关因子(BAF)复合物的化合物。特别地，本发明涉及可用于治疗与BAF复合功能相关的病症的化合物。
染色质调节对于基因表达是必需的，并且ATP依赖性染色质重塑是发生这种基因表达的机制。人开关/蔗糖非发酵性(SWI/SNF)染色质重塑复合物，也称作BAF复合物，具有两种称作BRG1(Brahma相关基因-1)和BRM(Brahma)的SWI2样ATP酶。转录激活子BRG1，也称作ATP依赖性染色质重塑因子SMARCA4，由染色体19上的SMARCA4基因编码。BRG1在一些癌症肿瘤中过表达，并且是癌细胞增殖所需的。BRM，也称作可能的总体转录激活子SNF2L2和/或ATP依赖性染色质重塑因子SMARCA2，由染色体9上的SMARCA2基因编码且已显示对于特征在于BRG1功能突变丧失的细胞中的肿瘤细胞生长是必需的。BRG和/或BRM的失活导致细胞中的下游效应，包括细胞周期停滞和肿瘤抑制。
概述
本发明的特征在于可用于调节BAF复合物的化合物。在一些实施方案中，所述化合物可用于治疗与BAF复合物的改变相关的病症，例如与BRG1和BRM蛋白中的一种或两种的改变相关的病症。本发明的化合物，单独或与其他药物活性剂组合，可用于治疗这类病症。
在一个方面，本发明提供了具有如下结构的化合物:
其中
m为0、1、2或3；
n为0、1、2、3或4；
X1为-S-、-SO-、-SO2-或-S(O)(NH)-；
X2为N或CR8；
R1为氢或任选取代的C1-C6烷基；
每个R2和每个R3独立地为氢、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C1-C6杂烷基；
L1为任选取代的9-至10-元双环杂环基或任选取代的9-至10-元双环杂芳基；
L2不存在、为任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至14-元杂芳基或任选取代的4-至14-元杂环基；
R4为氢、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C3-C10环烷基；
R5为任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基或任选取代的氨基、且R6为氢、卤素、氰基、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C2-C6烯基或任选取代的C3-C10环烷基；或R5和R6与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至8-元杂环基；
每个R7独立地为任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、卤素、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C3-C10环烷基C1-C6烷基、任选取代的5-至14-元杂芳基、任选取代的4-至14-元杂环基、-N(R7A)2或-OR7A，其中每个R7A独立地为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至14-元杂环基，或两个孪位R7A基团与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基；或两个孪位R7基团与所连接的原子一起合并成羰基；
R8为氢、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C3-C10环烷基；且
R9为氢或卤素；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，式I的化合物的变量如下:
m为0、1、2或3；
n为0、1、2、3或4；
X1为S、SO、SO2或S(O)(NH)；
X2为N或CR8；
R1为氢或任选取代的C1-C6烷基；
每个R2和每个R3独立地为氢、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C1-C6杂烷基；
L1为任选取代的9-至10-元双环杂环基或任选取代的9-至10-元双环杂芳基；
L2不存在、为任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基；
R4为氢、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C3-C10环烷基；
R5为任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基或任选取代的氨基、且R6为氢、卤素、氰基、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C3-C10环烷基；或R5和R6与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至8-元杂环基；
每个R7独立地为任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、卤素、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的5-至10-元杂芳基、任选取代的4-至10-元杂环基、-N(R7A)2或-OR7A，其中每个R7A独立地为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基，或两个孪位R7A基团与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基；
R8为氢、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C3-C10环烷基；且
R9为氢；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，L2不存在、为任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基。
在一些实施方案中，每个R7独立地为任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、卤素、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的5-至10-元杂芳基、任选取代的4-至10-元杂环基、-N(R7A)2或-OR7A，其中每个R7A独立地为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基，或两个孪位R7A基团与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基。
在一些实施方案中，R5和R6与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至8-元杂环基。在一些实施方案中，R5和R6与所连接的原子一起合并成任选取代的7-元杂环基。
在一些实施方案中，R5为任选取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R5为任选取代的氨基。在一些实施方案中，R6为任选取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R6为卤素。
在一些实施方案中，X1为SO2。在一些实施方案中，X2为CR8。
在一些实施方案中，
为如下结构的基团/>其中
Z为CH2、CO或C(RX2)2；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
每个RX2独立地为H或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，为如下结构的基团/>其中
Z为CH2、CO或C(RX2)2；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
每个RX2独立地为H或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，为如下结构的基团/>其中
Z为CH2、CO或C(RX2)2；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
每个RX2独立地为氢或任选取代的C1-C6烷基；
p为0、1、2、3或4；且
q为0或1。
在一些实施方案中，为如下结构的基团/>其中
Z为CH2、CO或C(RX2)2；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
每个RX2独立地为氢或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，为如下结构的基团/>其中
为单键或双键；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
RX2为氢或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，为如下结构的基团/>其中
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
RX2为氢或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，R8为氢。
在一些实施方案中，R8为卤素。
在一些实施方案中，R8为任选取代的C3-C8环烷基。
在一些实施方案中，X2为N。
在一些实施方案中，为如下结构的基团/>其中
Z为CH2、CO或C(RX2)2；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
每个RX2为独立地为氢或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，为如下结构的基团/>其中
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基或C3-C8环烷基环，或两个邻位RX1基团与所连接的原子还一起合并成C3-C8环烷基环；
p为0、1、2、3或4；且
q为0、1或2。
在一些实施方案中，为如下结构的基团/>其中
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；且p为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，至少一个RX1为任选取代的C1-C6烷基。
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团:
一些实施方案中，至少一个RX1为卤素。
在一些实施方案中，至少两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基。
在一些实施方案中，L1为任选取代的9-至10-元双环杂芳基。
在一些实施方案中，L1为
其中
X3、X4、X5、X6、X7和X8各自独立地为N或CRL1；
每个RL1独立地为H、卤素、任选取代的C1-C6烷基；
A1键合至–(C(R2)(R3))m-；且
A2键合至L2。
在一些实施方案中，L1为
在一些实施方案中，L1为
在一些实施方案中，L1为
在一些实施方案中，L1为
在一些实施方案中，L1为
在一些实施方案中，L1为其中A1键合至–(C(R2)(R3))m-；且A2键合至L2。
在一些实施方案中，L2为任选取代的5-至10-元杂芳基。
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团:
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团:
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团:
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团：
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团：
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团：
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团：
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团：
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团：
在一些实施方案中，-L2-(R7)n为如下结构的基团：
在一些实施方案中，L2为任选取代的C6-C10芳基。
在一些实施方案中，n为1。在一些实施方案中，n为2。在一些实施方案中，n为3。
在一些实施方案中，R7为任选取代的C1-C6烷基。在一些实施方案中，R7为任选取代的C1-C6杂烷基。在一些实施方案中，R7为任选取代的4-至14-元杂环基。在一些实施方案中，R7为任选取代的氮杂环丁烷基或任选取代的吗啉基。在一些实施方案中，R7为任选取代的C3-C10环烷基。在一些实施方案中，R7为任选取代的环丙基或任选取代的环丁基。在一些实施方案中，R7为-N(R7A)2。在一些实施方案中，R7为任选取代的N-氮杂环丁烷基或任选取代的N-吗啉基。在一些实施方案中，两个孪位R7基团与所连接的原子一起合并成任选取代的4-至10-元杂环基。在一些实施方案中，至少一个R7为-OR7A。在一些实施方案中，R7A为任选取代的C1-6烷基。
在一些实施方案中，n为0。
在一些实施方案中，至少一个R7为环丙基、2,2-二氟环丙基、二氟甲氧基、2,6-二甲基吗啉-4-基、N-氮杂环丁烷基、3-氟环丁基、2-甲氧基乙基、乙氧基、甲氧基、2,2-二氟乙氧基、2,2-二氟乙基、三氟甲基、异丙基、甲基、乙酰基、氟、氯、1-甲基吡唑-3-基、二甲基氨基、N-甲基-N-(2-甲氧基乙基)-氨基、N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)-氨基、N-(2-丙基)-N-(2-甲氧基乙基)-氨基、2-甲氧基乙基氨基、3-氮杂-8-氧杂-双环[4.3.0]壬-3-基、3-氮杂-7-氧杂-双环[4.3.0]壬-3-基、1-氟环丁-1-基、3-氟吡咯烷-1-基、3-甲氧基吡咯烷-1-基、氧杂环丁烷-3-基、N-甲基二氢吲哚-4-基、2,2-二氟-3-甲基环丙-1-基、3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基、3-甲氧基哌啶-1-基、1,2-二甲基-7-氮杂吲哚-4-基、1-甲基-7-氮杂吲哚-4-基、2,3-亚甲二氧基苯基、N-甲基-N-(3-氧杂环丁烷基)氨基、3-氧杂环丁烷基氧基、1,1-二氟-5-氮杂螺[2.3]己-5-基、1-氟甲基-环丙基、N-(3-四氢呋喃基)甲基氨基、N-二氢吲哚基、N-1,4-氧杂氮杂庚环基、2-氟-2-丙基、1,1-二氟-2-丙基、2,2-二氟-1-甲基环丙-1-基、1-甲基环丙基、4,4-二氟哌啶-1-基、2-甲氧基乙氧基、3,3-二氟环丁-1-基、N-甲基-N-1-甲氧基丙-2-基氨基、1-甲氧基丙-2-基氨基、1-甲氧基乙基、4-甲基哌嗪基、3-甲基吗啉基、2,2-二氟丙氧基、3-甲氧基环丁基、甲基氨基、4-二甲基氨基-3,3-二氟哌啶基、4-甲基氨基-3,3-二氟哌啶基、3,3-二氟吡咯烷基、N-甲基-N-3-甲氧基环丁基氨基、1-甲基吡唑-5-基、6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基、环丙氧基、2,6-二甲基吡啶-4-基、2-甲基吡咯烷基、4-氧杂双环[4.1.0]庚-1-基、N-甲基-N-(2,6-二甲基四氢吡喃-4-基)氨基或N-甲基-N-3-甲基氧杂环丁烷-3-基甲基氨基。
在一些实施方案中，R1为氢。
在另一个方面，本发明提供了选自表1A中的化合物1-308的化合物及其药学上可接受的盐。
表1A.本发明的化合物
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另一方面，本发明提供化合物，选自表1B中的化合物309-856及其药学上可接受的盐。
表1B.本发明化合物(环状和非环状砜)
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在一些实施方案中，所述化合物具有至少5的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，所述化合物具有的BRG1 IC50与BRM IC50的至少7的比率。在一些实施方案中，所述化合物具有至少10的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，所述化合物具有至少15的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，所述化合物具有至少20的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。在一些实施方案中，所述化合物具有至少25的BRG1 IC50与BRMIC50的比率。在一些实施方案中，所述化合物具有至少30的BRG1IC50与BRM IC50的比率。
在另一个方面，本发明的特征在于药物组合物，其包括任一上述化合物和药学上可接受的赋形剂。
在另一个方面，本发明的特征在于降低细胞中BAF复合物活性的方法，该方法包括使所述细胞接触有效量的任一上述化合物或其药物组合物。
在一些实施方案中，所述细胞为癌细胞。
在另一个方面，本发明的特征在于治疗有需要的受试者中BAF复合物-相关病症的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的任一上述化合物或其药物组合物。
在一些实施方案中，BAF复合物-相关病症为癌症。
在另一个方面，本发明的特征在于抑制BRM的方法，该方法包括使细胞接触有效量的任一上述化合物或其药物组合物。在一些实施方案中，所述细胞为癌细胞。
在另一个方面，本发明的特征在于抑制BRG1的方法，该方法包括使所述细胞接触有效量的任一上述化合物或其药物组合物。在一些实施方案中，所述细胞为癌细胞。
在另一个方面，本发明的特征在于抑制BRM和BRG1的方法，该方法包括使细胞接触有效量的任一上述化合物或其药物组合物。在一些实施方案中，所述细胞为癌细胞。
在另一个方面，本发明的特征在于治疗有需要的受试者中与BRG1功能缺失突变相关的病症的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的任一上述化合物或其药物组合物。
在一些实施方案中，与BRG1功能缺失突变相关的病症为癌症。在其他实施方案中，确定所述受试者具有BRG1功能缺失病症，例如确定其具有BRG1功能缺失癌症(例如，已经确定所述癌症包括具有BRG1功能缺失的癌细胞)。
在另一个方面，本发明的特征在于诱导细胞中细胞凋亡的方法，该方法包括使所述细胞接触有效量的任一上述化合物或其药物组合物。在一些实施方案中，所述细胞为癌细胞。
在另一个方面，在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的任一上述化合物或其药物组合物。
在任一上述方法的一些实施方案中，所述癌症为非小细胞肺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、原发性不明原因癌、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌、食管胃癌、胰腺癌、肝胆管癌、软组织肉瘤、卵巢癌、头颈癌、肾细胞癌、骨癌、非霍金奇淋巴瘤、小细胞肺癌、前列腺癌、胚胎肿瘤、胚细胞瘤、宫颈癌、甲状腺癌、涎腺癌、胃肠道神经内分泌瘤、子宫肉瘤、胃肠道间质瘤、CNS癌症、胸腺肿瘤、肾上腺皮质癌、阑尾癌、小肠癌或阴茎癌。
在任一上述方法的一些实施方案中，所述癌症为非小细胞肺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、原发性不明原因癌、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌或阴茎癌。
在任一上述方法的一些实施方案中，所述癌症为药物抗性癌症或不能对在先疗法(例如维罗非尼(vemurafenib)、达卡巴嗪、CTLA4抑制剂、PD1抑制剂、干扰素疗法、BRAF抑制剂、MEK抑制剂、放射疗法、替莫唑胺、伊立替康、CAR-T疗法、赫赛汀、佩吉塔(perjeta)、他莫昔芬、希罗达(xeloda)、多西他赛、铂药剂例如卡铂、紫杉烷例如紫杉醇和多西他赛、ALK抑制剂、MET抑制剂、力比泰(alimta)、注射用紫杉醇(abraxane)、吉西他滨、阿瓦斯汀(avastin)、甲磺酸艾力布林(halaven)、奈拉替尼(neratinib)、PARP抑制剂、ARN810、mTOR抑制剂、托泊替康、健择(gemzar)、VERT抑制剂、叶酸盐受体拮抗剂、地默珠单抗(demcizumab)、福他布林(fosbretabulin)或PDL1抑制剂)作出响应。
在任何前述方法的一些实施方案中，所述癌症已经或已经确定具有BRG1突变。在任何前述方法的一些实施方案中，所述BRG1突变是纯合的。在任何前述方法的一些实施方案中，所述癌症不具有或已经被确定为不具有表皮生长因子受体(EGFR)突变。在任何前述方法的一些实施方案中，所述癌症不具有或已经被确定为不具有间变性淋巴瘤激酶(ALK)驱动突变。在任何前述方法的一些实施方案中，所述癌症具有或已经被确定为具有KRAS突变。在任何前述方法的一些实施方案中，BRG1突变在蛋白质的ATP酶催化结构域中。在任何前述方法的一些实施方案中，BRG1突变为在BRG1的C-末端缺失。
在另一个方面，本公开提供了治疗有需要的受试者中与BAF相关的病症(例癌症或病毒感染)的方法。该方法包括使细胞与有效量的任一上述化合物或其药学上可接受的盐或任何上述药物组合物接触。在一些实施方案中，所述病症为病毒感染，所述病毒感染为逆转录病毒科的病毒感染，例如慢病毒(例如人免疫缺陷病毒(HIV)和δ逆转录病毒(例如人T细胞白血病病毒I(HTLV-I)、人T细胞白血病病毒II(HTLV-II))、嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae family)(例如乙型肝炎病毒(HBV))、黄病毒科(例如丙型肝炎病毒(HCV))、腺病毒科(例如人腺病毒)、疱疹病毒科(例如人巨细胞病毒(HCMV)、E-B病毒、单纯疱疹病毒1(HSV-1)、单纯疱疹病毒2(HSV-2)、人疱疹病毒6(HHV-6)，疱疹病毒K*、CMV、水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus))、乳头状瘤病毒科(例如人乳头瘤病毒(HPV，HPVE1))、细小病毒科(例如细小病毒B19)、多瘤病毒科(例如JC病毒和BK病毒)、副粘液病毒科(例如麻疹病毒)、披膜病毒科(例如风疹病毒(Rubella virus))。在一些实施方案中，所述病症为Coffin Siris、神经纤维瘤病(例如NF-1、NF-2或神经鞘瘤病(Schwannomatosis))或多发性脑膜瘤(Multiple Meningioma)。
在另一个方面，本公开提供了一种用于治疗有需要的受试者的病毒感染的方法。该方法包括向受试者施用有效量的任一上述化合物或其药学上可接受的盐，或任一上述药物组合物。在一些实施方案中，所述病毒感染为逆转录病毒科的病毒感染，例如慢病毒(例如人免疫缺陷病毒(HIV)和δ逆转录病毒(例如人T细胞白血病病毒I(HTLV-I)、人T细胞白血病病毒II(HTLV-II))、嗜肝DNA病毒科(例如乙型肝炎病毒(HBV))、黄病毒科(例如丙型肝炎病毒(HCV))、腺病毒科(例如人腺病毒)、疱疹病毒科(例如人巨细胞病毒(HCMV)、E-B病毒、疱疹病毒)、单纯疱疹病毒1(HSV-1)、单纯疱疹病毒2(HSV-2)、人疱疹病毒6(HHV-6)、疱疹病毒K*、CMV、水痘-带状疱疹病毒)、乳头状瘤病毒科(例如人乳头瘤病毒(HPV，HPV E1))、细小病毒科(例如细小病毒B19)、多瘤病毒科(例如JC病毒和BK病毒)、副粘液病毒科(例如麻疹病毒)或披膜病毒科(例如风疹病毒)。
在另一个方面，本发明的特征在于治疗有需要的受试者中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的任一上述化合物或其药物组合物。
在另一个方面，本发明的特征在于在有需要的受试者中减少黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症的肿瘤生长的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的任一上述化合物或其药物组合物。
在另一个方面，本发明的特征在于抑制受试者中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症的转移性进展的方法，该方法包括施用有效量的任一上述化合物或其药物组合物。
在另一个方面，本发明的特征在于抑制受试者中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症的转移性定殖的方法，该方法包括施用有效量的任一上述化合物或其药物组合物。
在另一个方面，本发明的特征在于降低黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌细胞中BRG1和/或BRM水平和/或活性的方法，该方法包括使细胞与接触有效量的任一上述化合物或其药物组合物。
在任一上述方面的一些实施方案中，黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症细胞在受试者中。
在任一上述方面的一些实施方案中，化合物的有效量将BRG1的水平和/或活性比参比物降低至少5％(例如6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)。在一些实施方案中，化合物的有效量将BRG1的水平和/或活性比参比物降低至少50％(例如55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)。在一些实施方案中，化合物的有效量将BRG1的水平和/或活性降低至少90％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)。
在一些实施方案中，化合物的有效量将BRG1的水平和/或活性比参比物降低至少5％(例如6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)，持续至少12小时(例如14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、30小时、36小时、48小时、72小时或以上)。在一些实施方案中，化合物的有效量将BRG1的水平和/或活性比参比物降低至少5％(例如6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)，持续至少4天(例如5天、6天、7天、14天、28天或以上)。
在任一上述方面的一些实施方案中，化合物的有效量将BRM的水平和/或活性比参比物降低至少5％(例如6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)。在一些实施方案中，化合物的有效量将BRM的水平和/或活性比参比物降低至少50％(例如55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)。在一些实施方案中，化合物的有效量将BRM的水平和/或活性降低至少90％(例如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)。
在一些实施方案中，化合物的有效量将BRM的水平和/或活性比参比物降低至少5％(例如6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)，持续至少12小时(例如14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、30小时、36小时、48小时、72小时或以上)。在一些实施方案中，化合物的有效量将BRM的水平和/或活性比参比物降低至少5％(例如6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％)，持续至少4天(例如5天、6天、7天、14天、28天或以上)。
在一些实施方案中，所述受试者具有癌症。在一些实施方案中，所述癌症表达BRG1和/或BRM蛋白和/或所述细胞或受试者已经被鉴定为表达BRG1和/或BRM。在一些实施方案中，所述癌症表达BRG1蛋白和/或所述细胞或受试者已经被鉴定为表达BRG1。在一些实施方案中，所述癌症表达BRM蛋白和/或所述细胞或受试者已经被鉴定为表达BRM。在一些实施方案中，所述癌症为黑素瘤(例如眼色素层黑色素瘤、粘膜黑素瘤或皮肤黑素瘤)。在一些实施方案中，所述癌症为前列腺癌。在一些实施方案中，所述癌症为血液癌症，例如多发性骨髓瘤、大细胞淋巴瘤、急性T细胞白血病、急性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征、免疫球蛋白Aλ骨髓瘤、弥漫性混合组织细胞和淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、急性成淋巴细胞性白血病(例如T细胞急性成淋巴细胞性白血病或B细胞急性成淋巴细胞性白血病)、弥漫性大细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌(例如ER阳性乳腺癌、ER阴性乳腺癌、三阳性乳腺癌或三阴性乳腺癌)。在一些实施方案中，所述癌症为骨癌(例如尤因肉瘤)。在一些实施方案中，所述癌症为肾细胞癌(例如小眼畸形转录因子(MITF)家族易位肾细胞癌(tRCC))。在一些实施方案中，所述癌症为转移性的(例如所述癌症已扩散至肝脏)。转移性癌症可以包括表现出迁移细胞的迁移和/或侵袭的细胞和/或包括表现出内皮募集和/或血管生成的细胞。在其他实施方案中，所述迁移癌症为细胞迁移癌症。在其他实施方案中，所述细胞迁移癌为非转移性细胞迁移癌。所述转移性癌症可以为通过接种腹膜、胸膜、心包或蛛网膜下腔的表面而扩散的癌症。或者，转移性癌症可以为经由淋巴系统扩散的癌症，或血液扩散的癌症。在一些实施方案中，本发明化合物的有效量为有效抑制所述癌症转移性定殖至肝脏的量。
在一些实施方案中，所述癌症荷有GNAQ中的突变。在一些实施方案中，所述癌症荷有GNA11中的突变。在一些实施方案中，所述癌症荷有PLCB4中的突变。在一些实施方案中，所述癌症荷有CYSLTR2中的突变。在一些实施方案中，所述癌症荷有BAP1中的突变。在一些实施方案中，所述癌症荷有SF3B1中的突变。在一些实施方案中，所述癌症荷有EIF1AX中的突变。在一些实施方案中，所述癌症荷有TFE3易位。在一些实施方案中，所述癌症荷有TFEB易位。在一些实施方案中，所述癌症荷有MITF易位。在一些实施方案中，所述癌症荷有EZH2突变。在一些实施方案中，所述癌症荷有SUZ12突变。在一些实施方案中，所述癌症荷有EED突变。
在任一上述方法的一些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用抗癌疗法或使细胞接触抗癌疗法，例如化疗剂或细胞毒性剂、免疫疗法、手术、放疗、热疗法或光凝固疗法或其组合。在一些实施方案中，所述抗癌疗法为化疗剂或细胞毒性剂，例如抗代谢物、抗有丝分裂药、抗肿瘤抗生素、天冬酰胺-特异性酶、双膦酸盐、抗肿瘤药、烷化剂、DNA-修复酶抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂、皮质类固醇、脱甲基化剂、免疫调节剂、janus-相关激酶抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphinositide 3-kinase)抑制剂、蛋白酶体抑制剂或酪氨酸激酶抑制剂或其组合。
在任一上述方法的一些实施方案中，本发明的化合物与用于治疗眼色素层黑色素瘤的另一种抗癌疗法如手术、MEK抑制剂和/或PKC抑制剂组合使用。例如，在一些实施方案中，该方法还包括在施用本发明化合物之前、之后或同时进行手术。在一些实施方案中，所述方法还包括在施用本发明的化合物之前、之后或同时施用MEK抑制剂和/或PKC抑制剂。
在一些实施方案中，所述抗癌疗法和本发明的化合物彼此在28天内施用，并且各自以一起有效治疗受试者的量施用。
在一些实施方案中，所述受试者或癌症具有和/或已被鉴定为具有BRG1功能缺失突变。
在一些实施方案中，所述癌症对一种或多种化疗剂或细胞毒性剂具有抗性(例如通过基因标记物，已经确定癌症对化疗剂或细胞毒剂具有抗性，或可能对化疗剂或细胞毒剂具有抗性，例如不能对化疗剂或细胞毒性剂产生响应的癌症)。在一些实施方案中，癌症对一种或多种化疗剂或细胞毒剂无应答。在一些实施方案中，所述癌症对达卡巴嗪、替莫唑胺、顺铂、曲奥舒凡(treosulfan)、福莫司汀、IMCgp100、CTLA-4抑制剂(例如时伊匹单抗(ipilimumab))、PD-1抑制剂(例如纳武单抗或派姆单抗(pembrolizumab))、PD-L1抑制剂(例如阿替珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)或度伐利尤单抗(durvalumab))、促分裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂(例如司美替尼(selumetinib)、比美替尼(binimetinib)或曲美替尼(tametinib))和/或蛋白激酶C(PKC)抑制剂(例如索曲妥林(sotrastaurin)或IDE196)具有抗性或无应答。
在一些实施方案中，所述癌症对先前施用的用于治疗眼色素层黑色素瘤的治疗剂如MEK抑制剂或PKC抑制剂具有抗性或不能应答。例如，在一些实施方案中，所述癌症对促分裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂(例如司美替尼、比美替尼或曲美替尼)和/或蛋白激酶C(PKC)抑制剂(例如索曲妥林或IDE196)有抗性或无应答。
化学术语
本文采用的术语是为了描述特定实施方案的目的，而不意欲是限制性的。
对于任何以下化学定义，原子符号后的数字表示存在于特定化学部分中的该元素的原子总数。如将理解的，根据需要，可以存在如本文所述的其他原子，例如H原子或取代基，以满足原子的化合价。例如，未取代的C2烷基具有式–CH2CH3。当与本文定义的基团一起使用时，提及碳原子数包括缩醛和缩酮基团中的二价碳，但不包括酰基、酯、碳酸酯或氨基甲酸酯基团中的羰基碳。提及杂芳基中的氧、氮或硫原子的数目仅包括形成杂环的一部分的那些原子。
如本文所用，术语“酰基”表示通过如本文所定义的羰基与母体分子基团连接的H或烷基，并且示例为甲酰基(即羧醛基)、乙酰基、三氟乙酰基、丙酰基和丁酰基。示例性未取代的酰基包括1至6个、1至11个或1至21个碳。
如本文中所用，术语“烯基”是指具有2至20个碳原子的支链或直链单价饱和脂族烃基(例如2至16个碳原子、2至10个碳原子或2至6个碳原子)。烯基可以是例如单价或多价。本领域技术人员将从上下文中认识到可利用化合价的数量。
如本文所用，术语“烷基”是指具有1-20个碳原子的支链或直链单价饱和脂族烃基(例如1-16个碳原子、1-10个碳原子和1-6个碳原子或1-3个碳原子)。烷基可以是例如单价或多价。本领域技术人员将从上下文中认识到可利用价的数量。
如本文所用，术语“氨基”表示–N(RN1)2，其中每个RN1独立地为H、OH、NO2、N(RN2)2、SO2ORN2、SO2RN2、SORN2、N-保护基、烷基、烷氧基，芳基、芳烷基，环烷基、酰基(例如乙酰基、三氟乙酰基或本文所述的其他基团)、杂芳基或杂环基，其中每个这些列举的RN1基团可以任选地被取代；或两个RN1与它们所连接的原子结合形成杂环基或杂芳基，以及其中每个RN2独立地为H、烷基或芳基。本发明的氨基可以为未取代的氨基(即–NH2)或取代的氨基(即–N(RN1)2)。
如本文所用，术语“芳基”是指具有至少一个芳环的6至12个碳原子的芳族单碳环或多碳环基团。此类基团的实例包括但不限于苯基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、1,2-二氢萘基、茚满基和1H-茚基。芳基可以为例如单价或多价。本领域技术人员将从上下文中认识到可利用价的数量。
如本文所用，术语“芳基烷基”表示被芳基取代的烷基。示例性未取代的芳基烷基基团为7至30个碳(例如7至16或7至20个碳，例如C1-C6烷基C6-C10芳基、C1-C10烷基C6-C10芳基或C1-C20烷基C6-C10芳基)，例如苄基和苯乙基。在一些实施方案中，烷基和芳基各自可以进一步被1、2、3或4个如本文对相应基团所定义的取代基取代。
如本文所用，术语“叠氮基”表示–N3基团。
如本文所用，术语“桥接多环烷基”是指包含1至3个桥的5至20个碳的桥接多环基团。
如本文所用，术语“氰基”表示–CN基团。
如本文所用，术语“碳环基”是指非芳族C3-C12单环、双环或三环结构，其中环由碳原子形成。碳环基结构包括环烷基和不饱和碳环基。
如本文所用，术语“环烷基”是指3至10个、优选3至6个碳原子的饱和、非芳族和单价单碳环或多碳环基团。该术语进一步示例为基团如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、降冰片基和金刚烷基。环烷基可以为例如单价的或多价的。本领域技术人员将从上下文中认识到可利用化合价的数量。
如本文所用，术语“卤素”是指氟(氟代)、氯(氯代)、溴(溴代)或碘(碘代)基团。
如本文所用，术语“杂烷基”是指本文中定义的烷基，其中一个或多个组成碳原子已被氮、氧或硫替代。在一些实施方案中，杂烷基可以进一步被1、2、3或4个如本文中对烷基所述的取代基取代。杂烷基的实例为“烷氧基”，如本文所用，指烷基–O–(例如甲氧基和乙氧基)。杂烷基可以为例如单价或多价。本领域技术人员将从上下文中认识到可利用的化合价的数量。
如本文所用，术语“杂芳基”是指5-14个(例如5至12个或5至10个)原子的单或多环基团，其具有至少一个芳环并且包含1、2或3个选自氮、氧和硫的环原子，其余的环原子为碳。在一些实施方案中，杂芳基为C1-C9杂芳基(例如C2-C9杂芳基)。杂芳基的一个或两个环碳原子可以被羰基取代。杂芳基的实例为吡啶基、吡唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、苯并吗啉基、苯并哌啶基和二氢吲哚基。杂芳基可以为例如单价或多价。本领域技术人员将从上下文中认识到可利用化合价的数量。
如本文所用，术语“杂芳烷基”表示被杂芳基取代的烷基。示例性的未取代的杂芳烷基为7至30个碳(例如7至16个或7至20个碳，例如C2-C9杂芳基C1-C6烷基、C2-C9杂芳基C1-C10烷基或C2-C9杂芳基C1-C20烷基)。在一些实施方案中，烷基和杂芳基各自可以进一步被1、2、3或4个如本文中对相应基团所定义的取代基取代。
本文所用，术语“杂环基”是指具有3至14个(例如4至12个)原子的单或多环基团，其具有至少一个包含1、2、3或4个选自N、O或S的环原子的环，其中没有一个环为芳族的。在一些实施方案中，杂环基为C2-C9杂环基。杂环基的实例包括但不限于吗啉基、硫吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡咯烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、1,3-二噁烷基、氮杂-氧基双环[4.3.0]壬基和氮杂-氧基双环[4.4.0]癸基。杂环基可以为例如单价或多价。本领域技术人员将从上下文中认识到可利用化合价的数量。
如本文中所用，术语“杂环基烷基”表示被杂环基取代的烷基。示例性的未取代的杂环烷基为7至30个碳(例如7至16个或7至20个碳，例如C2-C9杂环基C1-C6烷基、C2-C9杂环基C1-C10烷基或C2-C9杂环基C1-C20烷基)。在一些实施方案中，烷基和杂环基各自可以进一步被如本文中对相应基团所定义的1、2、3或4个取代基取代。
如本文所用，术语“羟基烷基”表示烷基被–OH基团取代的烷基。
如本文所用，术语“羟基”表示–OH基团。
如本文所用，术语“N-保护基”表示旨在在合成方法期间保护氨基免于不期望的反应的那些基团。常用的N-保护基团公开在Greene,“Protective Groups in OrganicSynthesis,”第3版(John Wiley&Sons,New York,1999)中。N-保护基包括但不限于酰基、芳酰基或氨基甲酰基，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻苯二甲酰基、邻硝基苯氧基乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基和手性助剂，例如受保护或未受保护的D,L或D,L-氨基酸，例如丙氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸；含磺酰基的基团，例如苯磺酰基和对甲苯磺酰基；氨基甲酸酯形成基团，例如苄氧基羰基、对-氯苄氧基羰基、对-甲氧基苄氧基羰基、对-硝基苄氧基羰基、2-硝基苄氧基羰基、对-溴苄氧基羰基、3,4-二甲氧基苄氧基羰基、3,5-二甲氧基苄氧基羰基、2,4-20二甲氧基苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、2-硝基-4,5-二甲氧基苄氧基羰基、3,4,5-三甲氧基苄氧基羰基、1-(对-联苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苄氧基羰基、二苯甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基、异丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2,2,2,-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基、环戊氧基羰基、金刚烷基氧基羰基、环己氧基羰基和苯硫基羰基(phenylthiocarbonyl)、芳基烷基如苄基、三苯基甲基和苄氧基甲基，和甲硅烷基如三甲基甲硅烷基。优选的N-保护基为alloc、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、丙氨酰基、苯磺酰基、苄基、叔丁氧基羰基(Boc)和苄氧基羰基(Cbz)。
如本文所用，术语“硝基”表示–NO2基团。
如本文所用，术语“硫氢基”表示–SH基团。
所述烷基、杂烷基、碳环基(例如环烷基)、芳基、杂芳基和杂环基可以是取代的或未取代的。当被取代时，除非另有说明，否则通常存在1至4个取代基。取代基包括例如：烷基(例如未取代的和取代的，其中取代基包括本文所述的任何基团，例如芳基、卤素、羟基)、芳基(例如取代的和未取代的苯基)、碳环基(例如取代的和未取代的环烷基)、卤素(例如氟)、羟基、杂烷基(例如取代的和未取代的甲氧基、乙氧基或硫代烷氧基)、杂芳基、杂环基、氨基(例如NH2或单烷基氨基或二烷基氨基)、叠氮基、氰基、硝基或硫氢基。芳基、碳环基(例如环烷基)、杂芳基和杂环基也可以被烷基(未取代和取代的，例如芳基烷基(例如取代和未取代的苄基))取代。
本发明的化合物可以具有一个或多个不对称碳原子，并且可以以光学纯的对映异构体、对映异构体混合物例如外消旋物、光学纯的非对映异构体、非对映异构体的混合物、非对映异构的外消旋物或非对映异构的外消旋物的混合物的形式存在。光学活性形式可以例如通过拆分外消旋体、通过不对称合成或不对称色谱法(使用手性吸附剂或洗脱剂的色谱法)获得。也就是说，某些公开的化合物可以以各种立体异构形式存在。立体异构体是仅在其空间排列上不同的化合物。对映异构体是镜像不可重叠的立体异构体对，最常见的原因是它们含有作为手性中心的不对称取代的碳原子。“对映异构体”意指彼此为镜像且不可重叠的一对分子中的一种。非对映异构体是不作为镜像相关的立体异构体，最常见的是因为它们含有两个或更多个不对称取代的碳原子并且代表围绕一个或多个手性碳原子的取代基的构型。化合物的对映异构体可以例如通过使用一种或多种众所周知的技术和方法(例如手性色谱法和基于其的分离方法)将对映异构体与外消旋体分离来制备。本领域技术人员可以容易地确定用于从外消旋混合物中分离本文所述的化合物的对映异构体的适当技术和/或方法。“外消旋体”或“外消旋混合物”是指包含两种对映异构体的化合物，其中这类混合物不显示光学活性；即它们不旋转偏振光的平面。“几何异构体”是指取代基原子相对于碳-碳双键、环烷基环或桥连双环系统的取向不同的异构体。碳-碳双键的每一侧上的原子(除H以外)可以呈E(取代基在碳-碳双键的相对侧上)或Z(取代基在同一侧上定向)构型。“R”、“S”、“S*”、“R*”、“E”、“Z”、“顺式”和“反式”表示相对于核心分子的构型。某些公开的化合物可以以阻转异构体形式存在。阻转异构体是由围绕单键的受阻旋转产生的立体异构体，其中旋转的空间应变屏障足够高以允许构象异构体的分离。本发明的化合物可以通过异构体特异性合成或从异构体混合物中拆分而制备为单独的异构体。常规拆分技术包括使用光学活性的酸形成异构体对的每种异构体的游离碱的盐(随后分级结晶和再生游离碱)、使用光学活性的胺形成异构体对的每种异构体的酸形式的盐(随后分级结晶和再生游离酸)、使用光学纯的酸、胺或醇形成异构体对的每种异构体的酯或酰胺(随后色谱分离和除去手性助剂)，或使用各种熟知的色谱方法拆分起始材料或最终产物的异构体混合物。当通过结构来命名或描述所公开的化合物的立体化学时，所命名或描述的立体异构体相对于其他立体异构体为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％重量。当通过结构来命名或描绘单一对映异构体时，所描绘或命名的对映异构体为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％重量光学纯。当通过结构来命名或描绘单一非对映异构体时，所描绘或命名的非对映异构体为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％重量纯。光学纯度百分比是对映异构体的重量与对映异构体的重量加上其光学异构体的重量的比率。按重量计的非对映异构体纯度是一种非对映异构体的重量与所有非对映异构体的重量的比率。当通过结构来命名或描述所公开化合物的立体化学时，所命名或描述的立体异构体相对于其他立体异构体为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％摩尔分数纯。当通过结构来命名或描绘单一对映异构体时，所描绘或命名的对映异构体为至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％摩尔分数纯的。当通过结构来命名或描述单一非对映异构体时，所描述或命名的非对映异构体是至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％摩尔分数纯。按摩尔分数计的纯度百分比是对映异构体的摩尔数与对映异构体的摩尔数加上其光学异构体的摩尔数的比率。类似地，摩尔分数纯度百分比是非对映异构体的摩尔数与非对映异构体的摩尔数加上其异构体的摩尔数的比率。当所公开的化合物通过结构命名或描述而没有指示立体化学且化合物具有至少一个手性中心时，应当理解，该名称或结构涵盖不含相应光学异构体的化合物的对映异构体、化合物的外消旋混合物或相对于其相应光学异构体富含一种对映异构体的混合物。当所公开的化合物通过结构命名或描述而没有指示立体化学并且具有两个或更多个手性中心时，应当理解，该名称或结构涵盖不含其他非对映异构体的非对映异构体、不含其他非对映异构体对的许多非对映异构体、非对映异构体的混合物、非对映异构体对的混合物、其中一种非对映异构体相对于其他非对映异构体富集的非对映异构体的混合物、或其中一种或多种非对映异构体相对于其他非对映异构体富集的非对映异构体的混合物。本发明包括所有这些形式。
本公开的化合物还包括中间体或最终化合物中存在的原子的所有同位素。“同位素”是指具有相同原子序数但由核中不同数量的中子产生的不同质量数的原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。
除非另有说明，否则本文描绘的结构还意在包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面不同的化合物。可以掺入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I和125I。同位素标记的化合物(例如3H和14C标记的那些)可用于化合物或底物组织分布测定。氚代(即3H)和碳-14(即14C)同位素由于其易于制备和可检测性而可以是有用的。此外，用较重的同位素取代例如氘(即2H)因较大的代谢稳定性可以提供某些治疗优势(例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求)。在一些实施方案中，一个或多个氢原子被2H或3H替代或一个或多个碳原子被13C-或14C-富集的碳替代。正电子发射同位素，例如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以检查底物受体占有率。同位素标记的化合物的制备是本领域技术人员已知的。例如，同位素标记的化合物通常可以通过遵循与本文所述的本发明化合物公开的那些类似的程序、通过用同位素标记的试剂替换非同位素标记的试剂来制备。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。本文描述了用于本公开的方法和材料；也可以使用本领域已知的其他合适的方法和材料。所述材料、方法和实施例仅是示例性的而不是限制性的。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其他参考文献通过引用整体并入。在发生冲突的情况下，将以包括定义在内的本说明书为准。
定义
在本申请中，除非上下文另有明确说明，否则(i)术语“一”可理解为意指“至少一个”；(ii)术语“或”可理解为意指“和/或”；并且(iii)术语“包括(including)”和“包括(including)”可以被理解为涵盖逐项列出的组分或步骤，无论是单独呈现还是与一个或多个另外的组分或步骤一起呈现。
如本文所用，术语“约”和“大约”是指高于或低于所述值10％以内的值。例如，术语“约5nM”表示4.5至5.5nm的范围。
如本文所用，术语“施用”是指向受试者或系统施用组合物(例如化合物或包括如本文所述化合物的制剂)。可以通过任何适当的途径向动物受试者(例如向人)施用。例如，在一些实施方案中，施用可以是支气管(包括通过支气管滴注)、口腔、肠内、皮内、动脉内、皮内、胃内、髓内、肌内、鼻内、腹膜内、鞘内、肿瘤内、静脉内、心室内、粘膜、鼻、口服、直肠、皮下、舌下、局部、气管(包括通过气管内滴注)、透皮、阴道和玻璃体。
如本文所用，术语“BAF复合物”是指人细胞中的BRG1或HRBM相关因子复合物。
如本文所用，术语“BAF复合物相关病症”是指由BAF复合物的活性水平引起或影响的病症。
如本文所用，术语“BRG1功能缺失突变”是指BRG1中导致蛋白质活性降低(例如BRG1活性降低至少1％，例如BRG1活性降低2％、5％、10％、25％、50％或100％)的突变。示例性BRG1功能丧失突变包括但不限于纯合BRG1突变和BRG1 C末端的缺失。
如本文所用，术语“BRG1功能缺失病症”是指表现出BRG1活性降低(例如BRG1活性降低至少1％，例如BRG1活性降低2％、5％、10％、25％、50％或100％)的病症。
术语“癌症”是指由恶性肿瘤细胞增殖引起的病症，例如肿瘤、赘生物、癌、肉瘤、白血病和淋巴瘤。
如本文所用，“联合疗法”或“组合施用”是指将两种(或更多种)不同的药剂或治疗作为特定疾病或病症的限定治疗方案的一部分施用于受试者。治疗方案定义了每种药剂的剂量和施用周期，使得单独药剂对受试者的作用重叠。在一些实施方案中，两种或更多种药剂的递送是同时或并行的，并且药剂可以共同配制。在一些实施方案中，两种或更多种药剂不是共同配制的，并且作为处方方案的一部分以顺序方式施用。在一些实施方案中，组合施用两种或更多种药剂或治疗使得症状或与病症相关的其他参数的减少，大于在单独递送或不存在另一种药剂或治疗的情况下将观察到的减少。两种治疗的效果可以是部分累加的、完全累加的或大于累加的(例如协同的)。每种治疗剂的顺序或基本上同时施用可以通过任何适当的途径实现，包括但不限于口服途径、静脉内途径、肌内途径和通过粘膜组织的直接吸收。治疗剂可以通过相同途径或通过不同途径施用。例如，组合的第一治疗剂可以通过静脉内注射施用，而组合的第二治疗剂可以口服施用。
所谓“测定蛋白质或RNA的水平”是指通过本领域已知的方法直接或间接检测蛋白质或RNA。“直接确定”是指执行一个过程(例如对样品进行测定或测试或如本文所定义的术语“分析样品”)以获得物理实体或值。“间接测定”是指从另一方或来源(例如直接获取物理实体或值的第三方实验室)接收物理实体或值。测量蛋白质水平的方法通常包括但不限于蛋白质印迹、免疫印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫沉淀、免疫荧光、表面等离子体共振、化学发光、荧光偏振、磷光、免疫组织化学分析、基质辅助激光解吸/电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱、液相色谱(LC)-质谱、微量细胞术、显微镜、荧光激活细胞分选(FACS)和流式细胞术，以及基于蛋白质性质的测定，包括但不限于酶活性或与其他蛋白质配偶体的相互作用。测量RNA水平的方法是本领域已知的，包括但不限于定量聚合酶链反应(qPCR)和Northern印迹分析。
所谓蛋白质或RNA的“降低水平”或“增加水平”是指蛋白质或RNA水平与参比物相比分别降低或增加(例如降低或增加约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％、约150％、约200％、约300％、约400％、约500％或以上；与参比物相比降低或增加大于约10％、约15％、约20％、约50％、约75％、约100％或约200％；降低或增加小于约0.01-倍、约0.02-倍、约0.1-倍、约0.3-倍、约0.5-倍、约0.8-倍或以下；或增加大于约1.2-倍、约1.4-倍、约1.5-倍、约1.8-倍、约2.0-倍、约3.0-倍、约3.5-倍、约4.5-倍、约5.0-倍、约10-倍、约15-倍、约20-倍、约30-倍、约40-倍、约50-倍、约100-倍、约1000-倍或以上)。蛋白质水平以质量/vol(例如g/dL,mg/mL,μg/mL,ng/mL)或相对于在样品中的总蛋白质的质量或百分比表示。
所谓“降低BAF复合物的活性”是指降低与BAF复合物相关的活性水平或相关的下游效应。降低BAF复合物活性的非限制性实例是Sox2活化。BAF复合物的活性水平可以使用本领域已知的任何方法测量，例如Kadoch等人Cell,2013,153,71-85中所述的方法，其方法通过引用并入本文。
如本文所用，术语“抑制BRM”是指阻断或降低蛋白质的ATP酶催化结合结构域或溴结构域的水平或活性。可以使用本领域已知的方法测定BRM抑制，例如BRM ATP酶测定、NanoDSF测定或BRM荧光素酶细胞测定。
如本文所用，术语“LXS196”也称作IDE196，是指具有如下结构的PKC抑制剂：
或其药学上可接受的盐。
如本文所用，术语“药物组合物”表示包含与药学上可接受的赋形剂一起配制的本文所述的化合物的组合物，并且适合于施用于哺乳动物，例如人。典型地，药物组合物在政府管理机构的批准下作为用于治疗哺乳动物疾病的治疗方案的一部分制造或销售。药物组合物可以配制成例如用于以单位剂型(例如片剂、胶囊、胶囊形片剂、凝胶帽或糖浆剂)口服施用；用于局部施用(例如作为乳膏、凝胶、洗剂或软膏)；用于静脉内施用(例如作为不含颗粒栓子的无菌溶液并且在适合于静脉内使用的溶剂系统中)；或在任何其它药学上可接受的制剂中。
如本文所用，“药学上可接受的赋形剂”是指除本文所述化合物之外(例如能够悬浮或溶解活性化合物的媒介物)且具有在患者中基本上无毒和非炎性的性质的任何成分。赋形剂可以包括例如：抗粘附剂、抗氧化剂、粘合剂、包衣衣料、压缩助剂、崩解剂、染料(着色剂)、润肤剂(emollient)、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、矫味剂、芳香剂、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、防腐剂、印刷油墨、吸附剂、悬浮剂或分散剂、甜味剂和水化水。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指化合物例如式I任何化合物的任何药学上可接受的盐。本文所述的任何化合物的药学上可接受的盐可包括在合理的医学判断范围内、适合用于与人和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应并且与合理的利益/风险比相称的那些。药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，药学上可接受的盐描述于：Berge等人,J.Pharmaceutical Sciences 66:1-19,1977和Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,(Eds.P.H.Stahl和C.G.Wermuth),Wiley-VCH,2008。盐可以在本文所述化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱基团与合适的有机酸反应单独制备。
本发明的化合物可以具有可电离基团，以便能够制备为药学上可接受的盐。这些盐可以是涉及无机酸或有机酸的酸加成盐，或者在本发明化合物的酸性形式的情况下，盐可以由无机碱或有机碱制备。通常，化合物作为药学上可接受的盐制备或使用，所述药学上可接受的盐作为药学上可接受的酸或碱的加成产物制备。合适的药学上可接受的酸和碱以及制备合适的盐的方法是本领域熟知的。盐可以由药学上可接受的无毒酸和碱制备，包括无机和有机酸和碱。
所谓“参比物”是指用于比较蛋白质或RNA水平的任何有用的参考。参考可以是用于比较目的的任何样品、标准品、标准曲线或水平。参比物可以是正常参比样品或参比物标准或水平。“参比样品”可以是例如对照，例如预定的阴性对照值，例如“正常对照”或取自同一受试者的先前样品；来自正常健康受试者的样品，例如正常细胞或正常组织；来自未患有疾病的受试者的样品(例如细胞或组织)；来自被诊断患有疾病但尚未用本发明化合物治疗的受试者的样品；来自已经用本发明化合物治疗的受试者的样品；或已知正常浓度的纯化蛋白质或RNA(例如本文所述的任何一种)的样品。所谓“参比标准或水平”是指衍生自参考样品的值或数字。“正常对照值”是指示非疾病状态的预定值，例如在健康对照受试者中预期的值。典型地，正常对照值表示为范围(“在X与Y之间”)、高阈值(“不高于X”)或低阈值(“不低于X”)。具有在特定生物标志物的正常对照值内的测量值的受试者典型地称作该生物标志物的“在正常限度内”。正常参比物标准或水平可以是值或数字，其源自未患有疾病或病症(例如癌症)的正常受试者；已经用本发明化合物治疗的受试者。在优选的实施方案中，参比样品、标准或水平通过以下标准中的至少一种与样品受试者样品匹配：年龄、体重、性别、疾病阶段和总体健康。在正常参考范围内的纯化的蛋白质或RNA(例如本文所述的任何蛋白质或RNA)的水平的标准曲线也可以用作参比物。
如本文所用，术语“受试者”是指可以施用根据本发明的组合物的任何生物体，例如用于实验、诊断、预防和/或治疗目的。典型的受试者包括任何动物(例如哺乳动物，如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物和人)。受试者可以寻求或需要治疗、要求治疗、正在接受治疗、将接受治疗，或者是处于针对特定疾病或病症受过训练的专业人员的护理之下的人或动物。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treated)”或“治疗(treating)”是指治疗性治疗或任何措施，其目的是减缓(减轻)不希望的生理状况、病症或疾病，或获得有益或期望的临床结果。有益或期望的临床结果包括但不限于缓解症状；病状、病症或疾病的程度的减小；病况、病症或疾病的稳定(即不恶化)状态；病症、障碍或疾病的发作延迟或进展减缓；病症、障碍或疾病状态的改善或缓解(无论是部分的还是全部的)；至少一个可测量的身体参数的改善，所述可测量的身体参数不一定是患者可辨别的；或病症、障碍或疾病的增强或改善。治疗包括引起临床上显著反应而没有过度水平的副作用。治疗还包括与如果不接受治疗的预期存活相比延长的存活。本发明的化合物还可用于“预防性治疗”或“预防”病症，例如，在发展病症的风险增加的受试者中。
如本文所用，术语“变体”和“衍生物”可互换使用，并且是指本文所述化合物、肽、蛋白质或其他物质的天然存在的、合成的和半合成的类似物。本文所述的化合物、肽、蛋白质或其他物质的变体或衍生物可以保留或改善原始材料的生物活性。
在下面的描述中阐述了本发明的一个或多个实施方案的细节。根据说明书和权利要求书，本发明的其他特征、目的和优点将是显而易见的。
附图简述
图1为示例BRG1/BRM抑制剂(化合物A)对几种癌症细胞系细胞增殖抑制的示意图。
图2A为示例BRG1/BRM抑制剂(化合物A)、MEK抑制剂(司美替尼)和PKC抑制剂(LXS196)抑制眼色素层黑色素瘤细胞系92-1的细胞增殖的示意图。
图2B为示例BRG1/BRM抑制剂(化合物A)、MEK抑制剂(司美替尼)和PKC抑制剂(LXS196)抑制眼色素层黑色素瘤细胞系MP41的细胞增殖的示意图。
图3为示例BRG1/BRM抑制剂(化合物B)抑制几种癌细胞系的细胞增殖的示意图。
图4为示例根据用BRG1/BRM抑制剂处理的癌症细胞系的剂量-响应曲线计算的曲线下面积(AUC)的示意图。
图5为示例BRG1/BRM抑制剂(化合物B)抑制眼色素层黑色素瘤和非小细胞肺癌细胞系的细胞增殖的示意图。
图6A为示例BRG1/BRM抑制剂(化合物B)、MEK抑制剂(司美替尼)和PKC抑制剂(LXS196)抑制眼色素层黑色素瘤细胞系92-1的细胞增殖的示意图。
图6B为示例BRG1/BRM抑制剂(化合物B)、MEK抑制剂(司美替尼)和PKC抑制剂(LXS196)抑制眼色素层黑色素瘤细胞系MP41的细胞增殖的示意图。
图7A为示例PKC抑制剂(LXS196)对亲代和PKC抑制剂难治性眼色素层黑色素瘤细胞系的细胞增殖的抑制的示意图。
图7B为示例BRG1/BRM抑制剂(化合物B)对亲代和PKC抑制剂难治性眼色素层黑色素瘤细胞系的细胞增殖的抑制的示意图。
图8A为示例BRG1/BRM抑制剂(化合物C)对移植眼色素层黑色素瘤细胞系的小鼠的肿瘤生长的抑制的示意图。
图8B为示例移植眼色素层黑色素瘤细胞系并且给予BRG1/BRM抑制剂(化合物C)的小鼠的肿瘤尺寸的示意图。
图8C为示例移植眼色素层黑色素瘤细胞系并且给予BRG1/BRM抑制剂(化合物C)的小鼠的体重改变的示意图。
详细描述
本公开的特征在于用于抑制BRG1和任选地BRG1的化合物。这些化合物可以用于调节BAF复合物活性，例如，用于治疗BAF-相关病症，例如癌症(例如BRG1-功能缺失病症)。本文所述的示例性化合物包括具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
m为0、1、2或3；
n为0、1、2、3或4；
X1为-S-、-SO-、-SO2-或-S(O)(NH)-；
X2为N或CR8；
R1为氢或任选取代的C1-C6烷基；
每个R2和每个R3独立地为氢、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C1-C6杂烷基；
L1为任选取代的9-至10-元双环杂环基或任选取代的9-至10-元双环杂芳基；
L2不存在、为任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至14-元杂芳基或任选取代的4-至14-元杂环基；
R4为氢、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C3-C10环烷基；
R5为任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基或任选取代的氨基，且R6为氢、卤素、氰基、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C2-C6烯基或任选取代的C3-C10环烷基；或R5和R6与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至8-元杂环基；
每个R7独立地为任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、卤素、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C3-C10环烷基C1-C6烷基、任选取代的5-至14-元杂芳基、任选取代的4-至14-元杂环基、-N(R7A)2或-OR7A，其中每个R7A独立地为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基，或两个孪位R7A基团与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基；或两个孪位R7基团与所连接的原子一起合并成羰基；
R8为氢、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C3-C10环烷基；且
R9为氢或卤素；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐具有表1A中化合物1-308的任意一个的结构。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐具有表1B中化合物309-856的任意一个的结构。
其他实施方案以及用于合成生产这些化合物的示例性方法如本文所述。
药物用途
本文所述的化合物可用于本发明的方法，并且虽然不受理论束缚，但据信发挥其调节BAF复合物的水平、状态和/或活性的能力，即通过抑制哺乳动物中BAF复合物内的BRG1和/或BRM蛋白的活性。BAF复合物相关病症包括但不限于BRG1功能缺失突变相关病症。
本发明的一个方面涉及在有需要的受试者中治疗与BRG1功能缺失突变相关的病症如癌症(例如非小细胞肺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、未知原发性癌症、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌或阴茎癌)的方法。在一些实施方案中，化合物以有效导致以下一种或多种(例如两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种)的量和时间施用：(a)减小的肿瘤尺寸，(b)降低的肿瘤生长速率，(c)增加的肿瘤细胞死亡，(d)减少的肿瘤进展，(e)减少的转移数量，(f)降低的转移速率，(g)减少的肿瘤复发，(h)增加的受试者存活，(i)增加的受试者无进展存活。
治疗癌症可导致肿瘤的大小或体积减小。例如，在治疗后，肿瘤尺寸相对于其治疗前的尺寸减小5％或更多(例如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多)。肿瘤的大小可以通过任何可重复的测量手段来测量。例如，肿瘤的大小可以测量为肿瘤的直径。
治疗癌症可以进一步导致肿瘤数量的减少。例如，在治疗后，肿瘤数量相对于治疗前的数量减少5％或更多(例如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多)。肿瘤的数量可以通过任何可重复的测量手段来测量，例如，肿瘤的数量可以通过计数肉眼可见或在指定放大倍数下可见的肿瘤(例如2x、3x、4x、5x、10x或50x)来测量。
治疗癌症可导致远离原发性肿瘤部位的其他组织或器官中转移性结节的数量减少。例如，在治疗后，转移性结节的数量相对于治疗前的数量减少5％或更多(例如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多)。转移性结节的数量可以通过任何可重复的测量方式来测量。例如，转移性结节的数量可以通过计数肉眼可见或在指定放大倍数(例如2x、10x或50x)下可见的转移性结节来测量。
与未治疗的受试者群体相比，治疗癌症可导致根据本发明治疗的受试者群体的平均存活时间增加。例如，平均存活时间增加超过30天(超过60天、90天或120天)。群体的平均存活时间的增加可以通过任何可重复的方式来测量。群体的平均存活时间的增加可以例如通过计算群体在用本发明化合物开始治疗后的平均存活长度来测量。群体的平均存活时间的增加也可以例如通过计算群体在用本发明药学上可接受的盐完成第一轮治疗后的平均存活长度来测量。
与未治疗的群体相比，治疗癌症还可以导致治疗的受试者群体的死亡率降低。例如，死亡率降低超过2％(例如超过5％、10％或25％)。受治疗受试者群体的死亡率的降低可以通过任何可再现的手段来测量，例如，通过计算群体在开始用本发明药学上可接受的盐治疗后每单位时间的疾病相关死亡的平均数。群体死亡率的降低也可以例如通过计算群体在用本发明药学上可接受的盐完成第一轮治疗后每单位时间的疾病相关死亡的平均数来测量。
可以通过本发明治疗的示例性癌症包括但不限于非小细胞肺癌、小细胞肺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌、食管胃癌、胰腺癌、肝胆癌(hepatobiliary cancer)、软组织肉瘤、卵巢癌、头颈癌、肾细胞癌、骨癌、非霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、胚胎肿瘤、生殖细胞肿瘤、宫颈癌、甲状腺癌、唾液腺癌、胃肠神经内分泌肿瘤、子宫肉瘤、胃肠道间质瘤、CNS癌、胸腺肿瘤、肾上腺皮质癌、阑尾癌、小肠癌和阴茎癌。
组合制剂及其用途
本发明的化合物可以与一种或多种治疗剂组合。特别地，治疗剂可以是治疗或预防性治疗本文所述任何癌症的治疗剂。
联合疗法
本发明的化合物可以单独使用或与另外的治疗剂(例如治疗癌症或与其相关的症状的其他药剂)组合使用，或与治疗癌症的其他类型的治疗组合使用。在组合治疗中，当单独施用时，一种或多种治疗化合物的剂量可以从标准剂量减少。例如，剂量可以根据药物组合和排列凭经验确定，或者可以通过等辐射分析(isobolographic analysis)推导(例如Black等人,Neurology 65:S3-S6,2005)。在这种情况下，当组合时，化合物的剂量应提供治疗效果。
在一些实施方案中，第二治疗剂是化学治疗剂(例如细胞毒性剂或可用于治疗癌症的其他化学化合物)。这些包括烷化剂、抗代谢物、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物和相关抑制剂、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配位化合物、蒽二酮取代的脲、甲基肼衍生物、肾上腺皮质激素抑制剂、肾上腺皮质激素、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素和促性腺激素释放激素类似物。还包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸(LV)、伊立替康、奥沙利铂、卡培他滨、紫杉醇和多西他赛。化疗剂的非限制性实例包括烷化剂，例如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸盐，如白消安、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥多巴(meturedopa)和乌瑞多巴(uredopa)；乙烯亚胺和甲基蜜胺(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三亚乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三亚乙基硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；acetogenins(特别是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成类似物托泊替康)；苔藓抑素(bryostatin)；华红素(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐身霉素(cryptophycins)(特别是隐身霉素1和隐身霉素8)；多拉司他汀(dolastatin)；多卡米星(duocarmycin)(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；软珊瑚醇(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；斯蓬西他汀(spongistatin)；氮芥，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、盐酸氧化氮芥(mechlorethamine oxidehydrochloride)、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝基脲，例如卡莫司汀、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1和加利车霉素ω1(参见例如Agnew,Chem.Intl.Ed Engl.33:183-186(1994))；dynemicin，包括dynemicin A；双膦酸盐，例如氯膦酸盐；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)生色团和相关的色蛋白(chromoprotein)烯二炔抗生素生色团)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素(actinomycin)、authramycin、重氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycins)、cactinomycin、辣椒素(carabicin)、卡莫霉素(caminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、更生霉素(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托霉素(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、(多柔比星，包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯啉代-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycins)如丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、波妥霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、quelamycin、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链脲霉素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，例如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷；雄激素，例如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺素药，例如氨鲁米特、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂如亚叶酸(frolinic acid)；阿西拉酮(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝曲布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地福胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鸟氨酸(elfomithine)；醋酸依利替铵(elliptinium acetate)；埃坡霉素；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达宁(lonidainine)；美登木素生物碱(maytansinoids)，例如美登素和安丝菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌；莫匹达莫(mopidanmol)；硝胺酸(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；非那美(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；/>多糖复合物(JHS NaturalProducts,Eugene,Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐呋喃(sizofuran)；螺锗(spirogermanium)；替尼膦酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢菌烯类(trichothecenes)(尤其T-2毒素、维拉库林A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)和安格列定(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托新(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷类，例如/>紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、/>不含克列莫佛(cremophor-free)、白蛋白改造的紫杉醇纳米颗粒制剂(American PharmaceuticalPartners,Schaumberg,Ill.)和/>多西他赛(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；氯苯丁胺(chloranbucil)；/>吉西他滨；6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)；巯嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤；铂配位化合物，例如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱；platinum；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；/>长春瑞滨；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(例如CPT-11)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，例如视黄酸；卡培他滨；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。两种或多种化疗剂可以在混合物中使用，以与本文所述的第一治疗剂组合施用，联合化疗的合适给药方案是本领域已知的，并且描述在例如Saltz等人(1999)Proc ASCO 18:233a和Douillard等人(2000)Lancet 355:1041-7中。
在一些实施方案中，第二治疗剂是作为用于癌症治疗的生物制剂如细胞因子(例如干扰素或白介素(例如IL-2))的治疗剂。在一些实施方案中，生物制剂是抗血管生成剂，例如抗VEGF剂，例如贝伐单抗在一些实施方案中，生物制剂是基于免疫球蛋白的生物制剂，例如单克隆抗体(例如人源化抗体、完全人抗体、Fc融合蛋白或其功能片段)，其激动靶标以刺激抗癌应答或拮抗对癌症重要的抗原。这类药剂包括Rituxan(利妥昔单抗)；Zenapax(达珠单抗/Daclizumab)；Simulect(巴利昔单抗/Basiliximab)；Synagis(帕利珠单抗/Palivizumab)；Remicade(英夫利昔单抗/Infliximab)；赫赛汀(曲妥珠单抗/Trastuzumab)；Mylotarg(吉妥珠单抗奥佐米星/Gemtuzumab ozogamicin)；Campath(阿仑单抗/Alemtuzumab)；Zevalin(替伊莫单抗/Ibritumomab tiuxetan)；HUMIRA(阿达木单抗/Adalimumab)；Xolair(奥马珠单抗/Omalizumab)；Bexxar(托西莫单抗-L-131/Tositumomab-I-131)；Raptiva(依法利珠单抗/Efalizumab)；Erbitux(西妥昔单抗/Cetuximab)；阿瓦斯汀(贝伐单抗/Bevacizumab)；Tysabri(那他珠单抗/Natalizumab)；Actemra(托珠单抗/Tocilizumab)；维克替比(帕尼单抗/Panitumumab)；Lucentis(雷珠单抗/Ranibizumab)；Soliris(依库珠单抗/Eculizumab)；Cimzia(赛妥珠单抗/Certolizumabpegol)；Simponi(戈利木单抗/Golimumab)；LLARIS(卡那单抗(canakinumab))；Stelara(优特克单抗/Ustekinumab)；Arzerra(奥法木单抗/Ofatumumab)；Prolia(地诺单抗/Denosumab)；Numax(莫维珠单抗/Motavizumab)；ABThrax(雷昔库单抗/Raxibacumab)；Benlysta(贝利木单抗/Belimumab)；Yervoy(伊匹单抗/Ipilimumab)；Adcetris(本妥昔单抗/Brentuximab Vedotin)；Perjeta(帕妥珠单抗/Pertuzumab)；Kadcyla(ado-trastuzumab emtansine)；和Gazyva(阿托珠单抗/Obinutuzumab)。还包括抗体-药物缀合物。
第二药剂可以是非药物治疗的治疗剂。例如，第二治疗剂是放射疗法、冷冻疗法、热疗和/或肿瘤组织的手术切除。
第二药剂可以是检查点抑制剂。在一个实施方案中，检查点抑制剂是抑制性抗体(例如单特异性抗体，例如单克隆抗体)。抗体可以是例如人源化的或完全人的。在一些实施方案中，检查点抑制剂是融合蛋白，例如Fc受体融合蛋白。在一些实施方案中，检查点抑制剂是与检查点蛋白相互作用的试剂，例如抗体。在一些实施方案中，检查点抑制剂是与检查点蛋白的配体相互作用的试剂，例如抗体。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是CTLA-4的抑制剂(例如抑制性抗体或小分子抑制剂)(例如抗CTLA4抗体，例如伊匹单抗/Yervoy或曲美木单抗)。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是PD-1的抑制剂(例如抑制性抗体或小分子抑制剂)(例如纳武单抗/派姆单抗//>皮地利珠单抗/CT-011)。在一些实施方案中，检查点抑制剂是PDL1的抑制剂(例如抑制性抗体或小分子抑制剂)(例如MPDL3280A/RG7446、MEDI4736、MSB0010718C、BMS 936559)。在一些实施方案中，检查点抑制剂是PDL2(例如PDL2/Ig融合蛋白如AMP)的抑制剂(例如抑制性抗体或Fc融合或小分子抑制剂)。在一些实施方案中，检查点的抑制剂是B7-H3(例如MGA271)、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、A2aR、B-7家族配体的抑制剂或其组合(例如抑制性抗体或小分子抑制剂)。
在本文所述的任何组合实施方案中，第一和第二治疗剂同时或以任一顺序依次施用。第一治疗剂可以在第二治疗剂立即施用，在其之前或之后至多1小时、至多2小时、至多3小时、至多4小时、至多5小时、至多6小时、至多7小时、至多8小时、至多9小时、至多10小时、至多11小时、至多12小时、至多13小时、14小时、至多16小时、至多17小时、至多18小时、至多19小时、至多20小时、至多21小时、至多22小时、至多23小时、至多24小时或至多1-7、1-14、1-21或1-30天施用。
药物组合物
本发明的化合物优选配制成药物组合物，用于以适于体内施用的生物相容形式施用于哺乳动物，优选人。因此，在一个方面，本发明提供了药物组合物，其包含与合适的稀释剂、载体或赋形剂混合的本发明化合物。
本发明的化合物可以以游离碱的形式、以盐、溶剂化物的形式和作为前药使用。所有形式都在本发明的范围内。根据本发明的方法，如本领域技术人员将理解的，所述化合物或其盐、溶剂化物或前药可以根据所选择的施用途径以多种形式施用于患者。本发明的化合物可以例如通过口服、肠胃外、口腔、舌下、鼻、直肠、贴剂、泵或透皮施用来施用，并相应地配制药物组合物。肠胃外施用包括静脉内、腹膜内、皮下、肌内、经上皮、鼻、肺内、鞘内、直肠和局部施用模式。肠胃外施用可以通过在选定的时间期限内连续输注来进行。
本发明的化合物可以例如与惰性稀释剂或与可同化的可食用载体一起口服施用，或者可以将其包封在硬壳或软壳明胶胶囊中，或者可以将其压制成片剂，或者可以将其直接掺入饮食的食物中。对于口服治疗给药，本发明的化合物可以与赋形剂混合并以可摄取片剂、口含片、锭剂、胶囊、酏剂、混悬液、糖浆和糯米纸囊剂的形式使用。本发明的化合物也可以肠胃外施用。本发明化合物的溶液可以在适当地与表面活性剂混合的水中制备。在通常的储存和使用条件下，这些制剂可以包含防腐剂以防止微生物生长。用于选择和制备合适制剂的常规方法和成分描述在例如Remington’s Pharmaceutical Sciences(2003,第20版)和1999出版的The United States Pharmacopeia:The National Formulary(USP24NF19)中。适于注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，形式必须是无菌的，并且必须是流体，以至于可以通过注射器容易地施用。用于经鼻施用的组合物可以方便地配制成气雾剂、滴剂、凝胶和粉末。气雾剂制剂通常包括活性物质在生理学上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或细悬浮液，并且通常以无菌形式以单剂量或多剂量存在于密封容器中，所述密封容器可以采取药筒或再填充的形式以与雾化装置一起使用。或者，密封容器可以是整体分配装置，例如单剂量鼻吸入器或装配有计量阀的气雾剂分配器，其旨在在使用后丢弃。当剂型包含气雾剂分配器时，其将含有推进剂，其可以是压缩气体，例如压缩空气或有机推进剂。气雾剂剂型也可以采用泵-雾化器的形式。适于口腔或舌下施用的组合物包括片剂、锭剂和软锭剂(pastilles)，其中活性成分与载体一起配制。用于直肠施用的组合物方便地为包含常规栓剂基质的栓剂形式。本文所述的化合物可以肿瘤内施用，例如作为肿瘤内注射。肿瘤内注射是直接注射到肿瘤脉管系统中，并且特别考虑用于离散的、实体的、可接近的肿瘤。局部、区域或全身施用也可能是合适的。本文所述的化合物可以有利地通过向肿瘤施用一次注射或多次注射(例如以约1cm的间隔间隔)来接触。在手术干预的情况下，本发明可以在手术前使用，例如使不可手术的肿瘤经受切除。在适当的情况下，也可以应用连续施用，例如通过将导管植入肿瘤或肿瘤脉管系统中。
本发明的化合物可以单独或与如本文所述的药学上可接受的载体组合施用于动物，例如人，所述药学上可接受的载体的比例由化合物的溶解度和化学性质、所选择的施用途径和标准药学实践决定。
剂量
本发明化合物和/或包含本发明化合物的组合物的剂量可以根据许多因素而变化，例如化合物的药效学性质；施用方式；接受者的年龄、健康和体重；症状的性质和程度；治疗的频率和并行治疗的类型(如果有的话)；以及化合物在待治疗动物中的清除率。本领域技术人员可以基于上述因素确定适当的剂量。本发明的化合物可以最初以合适的剂量施用，该剂量可以根据临床反应根据需要进行调整。通常，当本发明的化合物以例如0.05mg至3000mg的日剂量施用于人时，可以获得令人满意的结果。剂量范围包括例如10-1000mg。
或者，可以使用患者的体重计算剂量。例如，施用于患者的化合物或其药物组合物的剂量可以为0.1-100mg/kg。
实施例
用于下列方案和本文其他部分的定义为：
MeCN或ACN 乙腈
AIBN 偶氮双异丁腈
Boc 叔丁氧基羰基
t-BuOK 叔丁醇钾
DAST 二乙基氨基硫三氟化物
DCE 二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DCPP-2HBF4 1,3-双(二环己基膦基)丙烷双(四氟硼酸盐)
DEA N,N-二乙胺
DMP 戴斯-马丁试剂(Dess-Martin periodinane),1,1,1-三
(乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DIBAL-H 二异丙基氢化铝
DIEA or DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMA 二甲基乙酰胺
DMAP 4-(二甲基氨基)吡啶
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基酰胺
DMSO 二甲亚砜
dppf 双(二苯基膦基)二茂铁
EDCl 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐
ESI 电喷雾电离
Et3N or TEA 三乙胺
EA 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
FA 甲酸
FCC 闪蒸塔色谱法
HATU 2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-l,1,3,3-四甲基异脲盐
HCl 盐酸
HOAc 乙酸
HOBt 羟基苯并三唑
HPLC 高效液相色谱法
IPA 异丙醇
LCMS 液相色谱法/质谱法
m-CPBA 3-氯过氧苯甲酸
MeCN 乙腈
MeI 碘甲烷
MeOH 甲醇
mL 毫升
mmol 毫摩尔
mg 毫克
MHz 兆赫
MS 质谱法
MTBE 甲基叔丁基醚
m/z 质/荷比
NBS N-溴琥珀酰亚胺
NIS N-碘琥珀酰亚胺
nm 纳米
NMR 核磁共振
PE 石油醚
PhMe 甲苯
ppm 百万分率
rt 室温
RT 保留时间
SFC 超临界流体色谱法
SPhos Pd G3 (2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯基)[2-(2’-氨
基-1,1’-联苯基)]甲磺酸钯(II)
TBS 叔丁基二甲基甲硅烷基
TBSCl 叔丁基二甲基甲硅烷基氯
TBDMS 叔丁基二甲基甲硅烷基氯
TFA 三氟乙酸
TFAA 三氟乙酸酐
THF 四氢呋喃
TMSCN 三甲基甲硅烷基氰
TosMIC 甲苯磺酰基甲基异氰化物
Ziram 二甲基二硫代氨基甲酸锌
材料
除非另有说明，否则所有材料均得自商业供应商，未经进一步纯化即可使用。所有涉及空气或水分敏感试剂的反应均在氮气气氛中进行。
表1C列出了使用本文所述方法制备的本发明的化合物。
表1C.本发明的化合物
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材料
除非另有说明，否则所有材料均从商业供应商处获得，未经进一步纯化即可使用。所有涉及空气或水分敏感试剂的反应均在氮气气氛中进行。
实施例1.中间体的制备
中间体1. 2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物
步骤1:4-溴-2-巯基苯甲酸甲酯的制备
向4-溴-2-氟-苯甲酸甲酯(100g,429.12mmol)在DMF(1L)中的溶液中加入硫化钠(33.49g,429.1mmol,18.0mL)，将该混合物在30℃搅拌16h。将该混合物倾入水(6000mL)，然后用2N HCl调节pH至～3。用MTBE(3000mL x 2)萃取该混合物。用盐水(3000mL x 3)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到4-溴-2-巯基苯甲酸甲酯(103g,粗)，为黄色油状物，不经进一步纯化用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO_d6)δ＝7.91(d,J＝1.6Hz,1H),7.83-7.81(m,1H),7.43-7.40(m,1H),5.58(br s,1H),3.83(s,3H)ppm。
步骤2:(4-溴-2-巯基苯基)甲醇的制备
在0℃在N2气氛中向4-溴-2-巯基苯甲酸甲酯(103g,416.82mmol)在THF(1000mL)中的混合物中加入LiAlH4(15.82g,416.82mmol)。将该混合物在0℃搅拌1hr。将该混合物倾入1N HCl(2000mL)，用EtOAc(2000mL x 2)萃取。用盐水(2000mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到(4-溴-2-巯基苯基)甲醇(88g,粗)，为黄色油状物，不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(400MHz,DMSO_d6)δ＝7.59(s,1H),7.32(d,J＝1.2Hz,2H),5.56-5.36(m,2H),4.39(s,2H)ppm。
步骤3:(4-溴-2-(乙烯基硫)苯基)甲醇和(4-溴-2-((2-溴乙基)硫)苯基)甲醇的制备
向(4-溴-2-巯基苯基)甲醇(85g,387.95mmol)在DMF(1700mL)中的混合物中加入K2CO3(160.9g,1.16mol)和1,2-二溴乙烷(218.6g,1.16mol,87.8mL)，将该混合物在25℃搅拌1hr。然后将该混合物在70℃再搅拌24h。将该反应混合物倾入饱和NH4Cl(10L)，用EA(3000mL*2)萃取。用盐水(4000mL x 2)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发滤液至干。通过硅胶柱色谱法纯化残余物(PE/EA＝50/1-5/1)。真空浓缩级分，得到(4-溴-2-(乙烯基硫)苯基)甲醇(33.5g,136.66mmol,35％收率)和(4-溴-2-((2-溴乙基)硫)苯基)甲醇(10g,30.67mmol,8％收率)，为黄色油状物。
(4-溴-2-(乙烯基硫)苯基)甲醇：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.55(s,1H),7.45(d,J＝2Hz,1H),7.43(d,J＝2Hz,1H),6.49-6.42(m,1H),5.45(d,J＝9.6Hz,1H),5.32(d,J＝10.4Hz,1H),4.73(s,2H)ppm；
(4-溴-2-((2-溴乙基)硫)苯基)甲醇：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.46(s,1H),7.33(d,J＝2Hz,1H),7.09(d,J＝2Hz,1H),6.67(s,2H),3.41-3.38(m,2H),3.25-3.23(m,1H)ppm。
步骤4:(4-溴-2-(乙烯基磺酰基)苯基)甲醇的制备
向(4-溴-2-(乙烯基硫)苯基)甲醇(35.5g,144.82mmol)在MeOH(350mL)和H2O(350mL)中的混合物中加入(133.54g,217.23mmol)，将该混合物在25℃搅拌2h。加入水(1500mL)，用EtOAc(1500mL x 2)萃取该混合物。用盐水(1000mL x 2)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到(4-溴-2-乙烯基磺酰基-苯基)甲醇(38.5g,粗)，为黄色固体，不经进一步纯化用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO_d6)δ＝7.98-7.95(m,2H),7.77-7.75(m,1H),7.22-7.15(m,1H),6.43-6.39(m,1H),6.31(d,J＝10.0Hz,1H),5.62-5.59(m,1H),4.75(d,J＝5.2Hz,2H)ppm。
步骤5:8-溴-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1,1-二氧化物的制备
在0℃在N2气氛中向(4-溴-2-乙烯基磺酰基-苯基)甲醇(38.5g,138.9mmol)在DMF(1000mL)中的混合物中加入NaH(11.11g,277.84mmol,60％纯度)。将该混合物在0℃搅拌1hr。将该反应混合物倾入饱和NH4Cl(2L)，用EA(2000mL*2)萃取。用(2000mL)盐水洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,PE:EtOAc＝50:1-5:1)，真空浓缩，得到8-溴-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1,1-二氧化物(26.5g,95.62mmol,69％收率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO_d6)δ＝7.99(d,J＝2.0Hz,1H),7.92-7.90(m,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,1H),4.88(s,2H),4.20-4.17(m,2H),3.68-3.66(m,2H)ppm。
步骤6:2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(中间体1)的制备
向8-溴-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1,1-二氧化物(8.8g,31.75mmol)在DMSO(90mL)和H2O(9mL)中的混合物中加入1,3-双(二环己基膦基)丙烷双(四氟硼酸盐)(3.89g,6.35mmol)、K2CO3(6.58g,47.63mmol)和Pd(OAc)2(712.90mg,3.18mmol)。用CO将该混合物吹扫3次，然后在100℃在CO气氛中(15psi)搅拌4h。加入水(3000mL)，用EtOAc(500mLx 2)萃取该混合物，然后弃去有机相。用1N HCl将水层调节pH至～3。然后用EA(500mL*5)萃取该混合物。用盐水(2000mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。用MTBE(20mL*2)洗涤粗产物，然后过滤，蒸发滤饼至干，得到2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(15g,61.92mmol,65％收率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.43(s,1H),8.20-8.18(m,1H),7.72-7.70(m,1H),4.96(s,2H),4.23-4.20(m,2H),3.67-3.66(m,2H)ppm。
中间体2. 3,5-二氢-2H-[1,4]氧杂噻庚因并[6,5-b]吡啶-8-甲酸1,1-二氧化物
步骤1:5-溴-3-巯基吡啶甲酸甲酯的制备
向5-溴-3-氟-吡啶-2-甲酸甲酯(1g,4.27mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入Na2S(333.49mg,4.27mmol)。将该混合物在25℃搅拌2h。合并三个相同批次，一起纯化。用水(50mL)稀释该混合物，用1N HCl水溶液调节至pH＝5。用EA(50mL x 2)萃取该混合物。用盐水(50mL x 2)洗涤合并的有机层，用无水Na2SO4干燥，浓缩，得到5-溴-3-巯基吡啶甲酸甲酯(3.3g,粗)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝247.8/249.8。
步骤2:(5-溴-3-巯基吡啶-2-基)甲醇的制备
在0℃向5-溴-3-巯基吡啶甲酸甲酯(3.3g,13.30mmol)在THF(33mL)中的溶液中加入LiAlH4(504.8mg,13.30mmol)。将该混合物在25℃搅拌2h。用水稀释该混合物(100mL)，用1N HCl水溶液调节至pH＝6。然后用EA(100mL x2)萃取该混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，浓缩，得到(5-溴-3-巯基吡啶-2-基)甲醇(1.66g,7.54mmol)，为棕色油状物。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝219.8/221.8。
步骤3:(5-溴-3-(乙烯基硫)吡啶-2-基)甲醇的制备
向(5-溴-3-巯基吡啶-2-基)甲醇(1.66g,7.54mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入K2CO3(3.13g,22.63mmol)和1,2-二溴乙烷(7.08g,37.71mmol,2.85mL)。将该混合物在60℃搅拌12h。用水(100mL)稀释该混合物，用EA(100mL x 2)萃取。用无水Na2SO4干燥合并淀粉有机层，浓缩，得到残余物。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(20g/>硅胶快速柱,0～100％乙酸乙酯/石油醚的洗脱液)。浓缩洗脱液，得到(5-溴-3-(乙烯基硫)吡啶-2-基)甲醇(600mg,2.44mmol,32％收率)，为棕色油状物。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝245.9/247.9；
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.53(d,J＝2.0Hz,1H),7.92(d,J＝2.0Hz,1H),6.81-6.74(m,1H),5.64-5.51(m,2H),5.32-5.29(m,1H),4.54(d,J＝6.0Hz,2H)ppm。
步骤4:(5-溴-3-(乙烯基亚磺酰基)吡啶-2-基)甲醇的制备
在0℃向(5-溴-3-(乙烯基硫)吡啶-2-基)甲醇(600mg,2.44mmol)在MeOH(6mL)中的溶液中缓慢地加入在水(6mL)中的(824.27mg,1.34mmol)。将该混合物在25℃搅拌1hr。用饱和Na2SO3水溶液(30mL)使该混合物淬灭，用EA(30mL x 2)萃取。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，浓缩，得到残余物。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(/>12g硅胶快速柱,0～100％乙酸乙酯/石油醚的洗脱液)。浓缩洗脱液，得到(5-溴-3-(乙烯基亚磺酰基)吡啶-2-基)甲醇(500mg,1.91mmol,78.25％收率)，为无色油状物。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.74(d,J＝2.4Hz,1H),8.17(d,J＝2.0Hz,1H),7.18-7.12(m,1H),6.09-6.02(m,2H),5.95(d,J＝9.6Hz,1H),4.85-4.78(m,1H),4.73-4.66(m,1H)ppm。
步骤5:8-溴-3,5-二氢-2H-[1,4]氧杂噻庚因并[6,5-b]吡啶1-氧化物的制备
在0℃向(5-溴-3-(乙烯基亚磺酰基)吡啶-2-基)甲醇(500mg,1.91mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入NaH(152.59mg,3.81mmol,60％纯度)。将该混合物在0℃搅拌2h。用饱和NH4Cl水溶液(30mL)使该混合物淬灭，用EA(30mL x 2)萃取。用无Na2SO4水干燥合并的有机层，浓缩，得到残余物。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(12g/>硅胶快速柱,0～10％乙酸乙酯/石油醚的洗脱液)。浓缩洗脱液，得到8-溴-3,5-二氢-2H-[1,4]氧杂噻庚因并[6,5-b]吡啶1-氧化物(350mg,1.34mmol,70％收率)，为无色油状物。/>
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.75(d,J＝2.4Hz,1H),8.19(d,J＝2.0Hz,1H),4.91-4.74(m,2H),4.43-4.34(m,1H),4.21-4.18(m,1H),3.65-3.56(m,1H),3.49-3.44(m,1H)ppm。
步骤6:3,5-二氢-2H-[1,4]氧杂噻庚因并[6,5-b]吡啶-8-甲酸1-氧化物的制备
向8-溴-3,5-二氢-2H-[1,4]氧杂噻庚因并[6,5-b]吡啶1-氧化物(350mg,1.34mmol)在DMSO(4mL)和水(120.27mg,6.68mmol,120.27uL)中的溶液中加入1,3-双(二环己基膦基)丙烷双(四氟硼酸盐)(81.75mg,133.52μmol)、K2CO3(276.82mg,2.00mmol)和Pd(OAc)2(29.98mg,133.52μmol)。将该混合物脱气，用CO吹扫3次。将该混合物在100℃在CO气氛中(15psi)搅拌12h。过滤该混合物，用DMSO(2mL)和水(2mL)洗涤。然后用1N HCl水溶液将滤液调节至pH＝6。通过反相HPLC(0.1％ FA条件)纯化滤液。浓缩洗脱液，以除去ACN，冻干，得到3,5-二氢-2H-[1,4]氧杂噻庚因并[6,5-b]吡啶-8-甲酸1-氧化物(70mg,0.262mmol,20％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝227.9；
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.03(d,J＝2.0Hz,1H),8.51(d,J＝2.0Hz,1H),5.01-4.88(m,2H),4.43-4.41(m,1H),4.18-4.15(m,1H),3.63-3.62(m,2H),3.52-3.48(m,2H)ppm。
步骤7:3,5-二氢-2H-[1,4]氧杂噻庚因并[6,5-b]吡啶-8-甲酸1,1-二氧化物(中间体2)的制备
在0℃向3,5-二氢-2H-[1,4]氧杂噻庚因并[6,5-b]吡啶-8-甲酸1-氧化物(70mg,0.309mmol)在MeOH(0.7mL)中的溶液中加入在水(0.7mL)中的(284.07mg,462.07μmol)。将该混合物在25℃搅拌1hr.过滤该混合物。用MeOH(5mL)洗涤滤饼。然后用饱Na2SO3和溶液使滤液淬灭。然后通过反相HPLC(0.1％ FA条件)纯化该溶液。浓缩洗脱液，以除去ACN，冻干，得到3,5-二氢-2H-[1,4]氧杂噻庚因并[6,5-b]吡啶-8-甲酸1,1-二氧化物(36mg,136.16μmol,44％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝243.9。
中间体3. 3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂噻庚因-7-甲酸5,5-二氧化物
步骤1:3-氯磺酰基4-羟基-苯甲酸的制备
向HSO3Cl溶液(31mL)中逐步加入4-羟基苯甲酸(5.5g,39.82mmol)。将该混合物在20℃搅拌16h。向该反应混合物中缓慢地滴加冰水(300mL)。用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取该混合物。用盐水(50mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，真空浓缩，得到残余物。将粗产物与PE(30mL)一起在20℃研磨30min，得到3-氯磺酰基4-羟基-苯甲酸(4.5g,13.72mmol,74％收率)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.09-8.06(m,1H),7.82-7.75(m,1H),6.89-6.81(m,1H)ppm。
步骤2:4-羟基-3-巯基苯甲酸的制备
向3-氯磺酰基-4-羟基-苯甲酸(1g,4.23mmol)在甲苯(20mL)中的溶液中分部分加入PPh3(3.88g,14.79mmol)。将该混合物在90℃搅拌2h。通过添加10％ NaOH溶液(20mL)使反应停止。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取该混合物。用1N HCl将水相调节至pH 2。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取该混合物。用Na2SO4干燥合并的有机层，真空浓缩，得到4-羟基-3-巯基苯甲酸(0.62g,3.64mmol,86.21％收率)，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.34(s,1H),7.89-7.83(m,1H),7.61-7.52(m,1H),6.90-6.83(m,1H),5.01(s,1H)ppm。
步骤3:4-羟基-3-巯基苯甲酸甲酯的制备
向4-羟基-3-巯基苯甲酸(0.6g,3.53mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中滴加H2SO4(352.84mg,3.53mmol,191.76uL,98％纯度)。将该混合物在70℃搅拌40h。通过添加水(20mL)使反应停止。用乙酸乙酯(20mL*3)萃取该混合物。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，真空浓缩，得到4-羟基-3-巯基苯甲酸甲酯(0.6g,粗)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.30(s,1H),8.07-8.01(m,1H),7.77-7.71(m,1H),6.99-6.95(m,1H),3.80-3.78(m,3H)ppm。
步骤4:3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂噻庚因-7-甲酸甲酯的制备
向4-羟基-3-巯基苯甲酸甲酯(0.1g,542.85μmol,1eq)在DMF(5mL)中的溶液中加入Cs2CO3(884.36mg,2.71mmol)，滴加1,3-二溴丙烷(109.6mg,0.543mmol,55uL)。将该混合物在20℃搅拌2h。通过添加水(20mL)使反应停止。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取该混合物。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，真空浓缩，得到残余物。通过制备型-TLC纯化残余物(SiO2,石油醚:乙酸乙酯＝1:1)，真空浓缩洗脱液，得到3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂噻庚因-7-甲酸甲酯(65mg,0.274mmol,51％收率)，为黄色油状物。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝225.1；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.09-8.02(m,1H),7.83-7.74(m,1H),7.03-6.94(m,1H),4.45-4.34(m,2H),3.93-3.84(m,3H),3.10-2.98(m,2H),2.34-2.22(m,2H)ppm。
步骤5:3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂噻庚因-7-甲酸甲酯5,5-二氧化物的制备
向3,4-二氢-2H-1,5-苯并氧杂噻庚因-7-甲酸甲酯(60mg,267.53μmol)在MeOH(5mL)和H2O(5mL)中的混合物中加入(493.40mg,802.58μmol)，然后将该混合物在20℃搅拌16h。通过添加饱和Na2SO3(30mL)使反应淬灭。用DCM(30mL x 5)萃取该混合物。用Na2SO4干燥合并的有机层，真空浓缩，得到3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂噻庚因-7-甲酸甲酯5,5-二氧化物(66mg,0.257mmol,96％收率)，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.73-8.60(m,1H),8.32-8.16(m,1H),7.26-7.23(m,1H),4.43-4.30(m,2H),3.97-3.91(m,3H),3.48-3.36(m,2H),2.53-2.41(m,2H)ppm。
步骤6:3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂噻庚因-7-甲酸5,5-二氧化物(中间体3)的制备
向3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂噻庚因-7-甲酸甲酯5,5-二氧化物(65mg,0.254mmol)在MeOH(3mL)和H2O(3mL)中的混合物中逐步加入NaOH(30.44mg,0.761mmol)，然后将该混合物在20℃搅拌2h。真空浓缩该反应体系，得到残余物。用EA(10mL)和1N NaOH溶液(10mL)分配残余物。用1N HCl溶液将水层调节至pH 1，用EA(10mL x 3)萃取。真空浓缩合并的有机相，得到3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]氧杂噻庚因-7-甲酸5,5-二氧化物(60mg,0.248mmol,98％收率)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+Na]+＝265.2；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.42-8.30(m,1H),8.21-8.10(m,1H),7.41-7.29(m,1H),4.34-4.22(m,2H),2.31 -2.22(m,2H),1.81-1.71(m,2H)ppm。
中间体4. 6-氯-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物
步骤1:4-溴-2-氯-6-氟苯甲酸甲酯的制备
向4-溴-2-氯-6-氟苯甲酸(10g,39.46mmol)在MeOH(90mL)中的溶液中缓慢地加入浓H2SO4(18.4g,187.60mmol,10mL)，然后将该混合物在70℃搅拌8h。真空浓缩该混合物以除去部分MeOH，然后倾入饱和NaHCO3(200mL)，然后用EA(200mL x 2)萃取。用盐水洗涤合并的有机层(100mL x 2)，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到4-溴-2-氯-6-氟苯甲酸甲酯(9.2g,粗)，为无色油状物，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.87-7.76(m,2H),3.91(s,3H)ppm。
步骤2:4-溴-2-氯-6-巯基苯甲酸甲酯的制备
向4-溴-2-氯-6-氟苯甲酸甲酯(7.2g,26.92mmol)在DMF(72mL)中的溶液中加入Na2S(2.10g,26.92mmol)，然后将该混合物在25℃搅拌2h。用水稀释该混合物(300mL)，然后用1N HCl溶液将得到的混合物酸化至pH 3，用EA(200mL x 2)萃取。用盐水(250mL x 2)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到4-溴-2-氯-6-巯基苯甲酸甲酯(7g,粗)，为黄色油状物，将粗产物直接用于下一步。
步骤3:(4-溴-2-氯-6-巯基苯基)甲醇的制备
在0℃向4-溴-2-氯-6-巯基苯甲酸甲酯(9g,31.97mmol)在THF(90mL)中的混合物中加入LiAlH4(1.33g,35.16mmol)，然后将该混合物在0℃搅拌1hr。将该混合物倾入HCl(1N,200mL)，然后用EA(250mL x 2)萃取。用盐水(200mL x 2)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到(4-溴-2-氯-6-巯基苯基)甲醇(5.8g,粗)，为无色油状物。
步骤4:(4-溴-2-氯-6-(乙烯基硫)苯基)甲醇的制备
向(4-溴-2-氯-6-巯基苯基)甲醇(5.7g,22.48mmol)在DMF(110mL)中的混合物中加入K2CO3(9.32g,67.44mmol)和1,2-二溴乙烷(21.12g,112.41mmol,8.5mL)，然后将该混合物在25℃搅拌12h。将该混合物倾入水(200mL)，用EA(100mL)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(PE/EA＝10/1-1:1,SiO2)，蒸发洗脱液，得到(4-溴-2-氯-6-(乙烯基硫)苯基)甲醇(2.7g,9.66mmol,43％收率)，为无色油状物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.65(d,J＝2.0Hz,1H),7.42(d,J＝2.0Hz,1H),6.78-6.71(m,1H),5.61 -5.52(m,2H),5.25-5.23(m,1H),4.62(d,J＝5.2Hz,2H)ppm。
步骤5:3-氯-4-(羟基甲基)-5-(乙烯基硫)苯甲酸甲酯的制备
向(4-溴-2-氯-6-(乙烯基硫)苯基)甲醇(1000mg,3.58mmol)在MeOH(20mL)和TEA(10mL)中的混合物中加入Pd(OAc)2(80.30mg,357.68μmol)和XPhos(341mg,0.715mmol)，然后给该混合物脱气，用CO(15psi)吹扫3次，然后将该混合物在70℃在CO气氛中(15psi)搅拌8h。用水(20mL)稀释该混合物，用EA(15mL x 3)萃取，用盐水(30mL)洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到粗产物。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)。真空浓缩级分，得到3-氯-4-(羟基甲基)-5-(乙烯基硫)苯甲酸甲酯(650mg,2.36mmol,66％收率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.83(d,J＝1.6Hz,1H),7.80(d,J＝1.6Hz,1H),6.74-6.67(m,1H),5.62-5.51(m,2H),5.36-5.33(m,1H),4.70(d,J＝5.2Hz,2H),3.87(s,3H)ppm。
步骤6:3-氯-4-(羟基甲基)-5-(乙烯基磺酰基)苯甲酸甲酯的制备
向3-氯-4-(羟基甲基)-5-(乙烯基硫)苯甲酸甲酯(500mg,1.93mmol)在H2O(5mL)和MeOH(5mL)中的混合物中加入(3.56g,5.80mmol)，将该混合物在25℃搅拌1hr。用水(200mL)稀释该混合物，然后用EA(250mL x 2)萃取，用饱和Na2SO3(150mL x 2)和盐水(100mL)洗涤合并的有机溶液，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到3-氯-4-(羟基甲基)-5-乙烯基磺酰基-苯甲酸甲酯(560mg,粗)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝273.0；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.42(d,J＝1.6Hz,1H),8.27(d,J＝1.6Hz,1H),7.34-7.27(m,1H),6.47-6.31(m,2H),5.52-5.49(m,2H),4.98(d,J＝5.2Hz,2H),3.91(s,3H)ppm。
步骤7:6-氯-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(中间体4)的制备
在0℃向3-氯-4-(羟基甲基)-5-乙烯基磺酰基-苯甲酸甲酯(560mg,1.93mmol)在THF(18mL)中的混合物中加入NaH(154.09mg,3.85mmol,60％纯度)，将该混合物在0℃搅拌1hr。用水(10mL)和MeOH(5mL)稀释该混合物，然后在25℃搅拌15min，用水(100mL)稀释得到的混合物，用HCl(1N)酸化至pH 2，用EA(150mL x 2)萃取得到的溶液。用盐水(200mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到6-氯-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(300mg,粗)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.91-13.84(m,1H),8.38(d,J＝1.6Hz,1H),8.22(d,J＝1.6Hz,1H),5.19(s,2H),4.23-4.21(m,2H),3.79-3.77-3.74(m,2H)ppm。
中间体5:6-氟-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物
步骤1:4-溴-2-氟-6-((4-甲氧基苄基)硫)苯甲酸甲酯的制备
向4-溴-2,6-二氟-苯甲酸甲酯(5g,19.92mmol)和(4-甲氧基苯基)甲硫醇(3.07g,19.92mmol,2.77mL)在DMF(50mL)中的混合物中加入Cs2CO3(12.98g,39.84mmol)，然后将该混合物在60℃搅拌2h。用水(400mL)稀释该混合物，用EA(200mL x 3)萃取，用盐水(200mL x2)洗涤合并的有机层，然后用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到4-溴-2-氟-6-((4-甲氧基苄基)硫)苯甲酸甲酯(9g,粗)，为黄色油状物，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.54-7.51(m,2H),7.29-7.26(m,2H),6.90-6.87(m,2H),4.29(s,2H),3.83(s,3H),3.73-3.72(m,3H)ppm。
步骤2:4-溴-2-氟-6-巯基苯甲酸甲酯的制备
将4-溴-2-氟-6-((4-甲氧基苄基)硫)苯甲酸甲酯(9g,23.36mmol)在TFA(138.60g,1.22mol,90mL)中的混合物在60℃搅拌2h。蒸发该混合物，然后用饱和NaHCO3中和至pH 7。然后用EA(200mL)萃取该混合物。分离有机层，用无水Na2SO4干燥。真空浓缩有机相，得到4-溴-2-氟-6-巯基苯甲酸甲酯(6g,粗)，为黄色油状物，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.77-7.61(m,2H),3.93(s,3H)ppm。
步骤3:(4-溴-2-氟-6-巯基苯基)甲醇的制备
向4-溴-2-氟-6-巯基苯甲酸甲酯(3.4g,12.83mmol)在THF(34mL)中的混合物中加入LiAlH4(535.5mg,14.11mmol)，然后将该混合物在0℃搅拌1hr。用1N HCl(100mL)使该混合物淬灭，用EA(50mL)萃取。分离有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到(4-溴-2-氟-6-巯基苯基)甲醇(3g,粗)，为黄色油状物，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.51(s,1H),7.32-7.24(m,1H),4.45(d,J＝1.2Hz,2H)。
步骤4:(4-溴-2-氟-6-(乙烯基硫)苯基)甲醇的制备
向(4-溴-2-氟-6-巯基苯基)甲醇(3g,12.65mmol)、K2CO3(5.25g,37.96mmol)在DMF(60mL)中的混合物中加入1,2-二溴乙烷(11.89g,63.27mmol)，然后将该混合物25℃搅拌15h。将该混合物倾入水(200mL)，用EA(100mL)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(PE/EA＝10/1,SiO2)，蒸发洗脱液，得到(4-溴-2-氟-6-(乙烯基硫)苯基)甲醇(1.6g,6.08mmol,48％收率)，为无色油状物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.47-7.44(m,1H),7.30-7.29(m,1H),6.77-6.70(m,1H),5.59-5.52(m,2H),5.22-5.20(m,1H),4.51-4.46(m,2H)ppm。
步骤5:(4-溴-2-氟-6-(乙烯基亚磺酰基)苯基)甲醇的制备
在0℃向(4-溴-2-氟-6-(乙烯基硫)苯基)甲醇(800mg,3.04mmol)在DCM(12mL)中的混合物中加入m-CPBA(678.98mg,3.34mmol,85％纯度)，然后将该混合物在25℃搅拌1hr。在0℃通过添加饱和Na2SO3水溶液(20mL)使该反应混合物淬灭，然后用H2O(20mL)稀释，用EA(100mL x 3)萃取。用盐水100mL洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝20/1-1/1)。真空浓缩级分，得到(4-溴-2-氟-6-(乙烯基亚磺酰基)苯基)甲醇(690mg,2.47mmol,81％收率)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[79BrM+H]+＝278.9；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.74-7.71(m,1H),7.61-7.60(m,1H),7.12-7.06(m,1H),6.05-5.92(m,2H),5.85-5.82(m,1H),4.75-4.71(m,1H),4.63-4.58(m,1H)ppm。
步骤6:8-溴-6-氟-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1-氧化物的制备
在0℃向(4-溴-2-氟-6-(乙烯基亚磺酰基)苯基)甲醇(650mg,2.33mmol)在DMF(40mL)中的混合物中加入NaH(186.3mg,4.66mmol,60％纯度)，然后将该混合物在0℃搅拌1hr。用50mL饱和NH4Cl水溶液使反应溶液淬灭，用EA(50mL x 3)萃取。用盐水(60mL x 3)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝10/1-1/1)，减压浓缩洗脱液，得到8-溴-6-氟-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1-氧化物(350mg,1.25mmol,54％收率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.79(m,1H),7.38-7.35(m,1H),5.13(d,J＝14.4Hz,1H),4.49-4.34(m,3H),3.47-3.41(m,1H),3.26-3.21(m,1H)ppm。
步骤7:6-氟-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1-氧化物的制备
向8-溴-6-氟-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1-氧化物(320mg,1.15mmol)、Pd(OAc)2(12.87mg,57.32μmol)和二环己基(3-二环己基磷鎓基丙基)鏻；双四氟硼酸盐(70.19mg,114.64μmol)在DMSO(4mL)和H2O(0.2mL)中的混合物中加入K2CO3(475.33mg,3.44mmol)，然后将该混合物在100℃在CO气氛中(15psi)搅拌4h。用水(50mL)稀释该混合物，用EA(30mL x 3)萃取。用HCl溶液(2M)将水层酸化至pH＝3，用EA(100mL x 2)萃取。用盐水洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到6-氟-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1-氧化物(210mg,粗)，为白色固体，直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝244.9。
步骤8:6-氟-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(中间体5)的制备
向6-氟-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1-氧化物(210.00mg,859.81μmol)在MeOH(4mL)和H2O(4mL)中的混合物中加入(634.30mg,1.03mmol)，然后将该混合物在25℃搅拌2h。用水(50mL)稀释该混合物，然后用EA(30mLx3)萃取，用盐水(40mL x 2)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到6-氟-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(220mg,粗)，为白色固体，直接用于下一步。
中间体6和7.(R)-2-甲基-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物和(S)-2-甲基-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物
步骤1:8-溴-2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1,1-二氧化物的制备
在0℃向8-溴-2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1,1-二氧化物(380mg,1.37mmol,641.03uL)in DMF(5mL)中的溶液中加入NaH(65.82mg,1.65mmol,60％纯度)。将该混合物在0℃搅拌0.5h。然后在0℃缓慢地加入MeI(233.55mg,1.65mmol,102.43uL)。将该混合物在25℃搅拌1.5h。用饱和NH4Cl溶液(30mL)稀释该混合物，用EtOAc(30mL x 2)萃取。用无水Na2SO4干燥合并淀粉有机层，浓缩，得到残余物。通过反相HPLC(0.1％ FA条件)纯化残余物。浓缩洗脱液，以除去MeCN，冻干，得到8-溴-2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1,1-二氧化物(100mg,309.11μmol,23％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝291.0/292.9；
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.99(d,J＝2.0Hz,1H),7.95-7.92(m,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,1H),4.87(s,2H),4.27 -4.23(m,1H),4.00-3.95(m,1H),3.71-3.62(m,1H),1.14(d,J＝7.2Hz,3H)ppm。
步骤2:2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物的制备
向8-溴-2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因1,1-二氧化物(100mg,343.45μmol)在DMSO(1mL)和H2O(30.95mg,1.72mmol,31μL)中的溶液中加入1,3-双(二环己基膦基)丙烷双(四氟硼酸盐)(21.03mg,34.35μmol)、K2CO3(71.20mg,515.18μmol)和Pd(OAc)2(7.71mg,34.35μmol)。将烧瓶脱气，用CO吹扫3次。将该混合物在100℃在CO气氛中(15psi)搅拌4h。过滤该混合物，用EA(2mL)和水(2mL)洗涤。然后用水(5mL)稀释该混合物，用EA(5mL x 2)萃取。弃去合并的有机层。用1N HCl水溶液将水相调节至pH＝6。然后用EA(5mL x 2)萃取水相。用盐水(5mLx2)洗涤合并的有机层，用无水Na2SO4干燥，浓缩，得到2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(80mg,0.290mol,85％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝256.9；
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.44(d,J＝1.6Hz,1H),8.22-8.19(m,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),4.95(s,2H),4.29 -4.25(m,1H),4.03-3.98(m,1H),3.72-3.60(m,1H),1.14(d,J＝6.8Hz,3H)ppm。
步骤3:(R)-2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(中间体6)和(S)-2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(中间体7)的制备
通过SFC(柱:Daicel ChiralPak IG(250x30mm,10um)；流动相:[0.1％NH3H2OMEOH]；B％:30％-30％,3.0；85min)分离外消旋2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物。浓缩洗脱液，以除去大部分溶剂，用FA调节至pH＝6。然后用DCM(20mLx2)萃取该混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，浓缩，得到(R)-2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(35mg,0.136mmol,44％收率)，为白色固体；和(S)-2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(40mg,0.156mmol,50.00％收率)，为白色固体。任意分配立体化学。
(R)-2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(中间体6):LCMS(ESI)m/z:[M+Na]+＝279.1；
手性SFC:IG-3_5CM_MEOH(DEA)_5_40_3ML_T35.M；Rt＝1.729min；
(S)-2-甲基-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(中间体7):LCMS(ESI)m/z:[M+Na]+＝279.1；
手性SFC:IG-3_5CM_MEOH(DEA)_5_40_3ML_T35.M；Rt＝1.897min。
中间体8.6,7,8,9-四氢噻吩并[3,2-b]吡啶-3-甲酸5,5-二氧化物
步骤1:2-溴-5-氯-吡啶-3-硫醇的制备
在25℃在N2气氛中向2-溴-5-氯-3-氟-吡啶(1.3g,6.18mmol,1eq)在DMF(20mL)中的混合物中一次性加入Na2S(482.14mg,6.18mmol,259.22μL)。将该混合物在25℃搅拌12h。将该混合物倾入(100mL)。向该混合物中加入HCl水溶液(2M)以调节pH＝3。用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取水相。用盐水(50mL x 1)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到2-溴-5-氯-吡啶-3-硫醇(1.2g,5.35mmol,86.52％收率)，为黄色固体。
LCMS(ESI)m/z:[79BrM+H]+＝225.8。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.33-8.23(m,1H),8.17-8.08(m,1H)ppm。
步骤2:2-溴-3-(丁-3-烯-1-基硫)-5-氯吡啶的制备
向2-溴-5-氯-吡啶-3-硫醇(1.2g,5.35mmol)和丁-3-烯-1-醇(385.41mg,5.35mmol,459.91μL)在THF(10mL)中的混合物中加入PPh3(2.10g,8.02mmol)，随后在0℃在N2气氛中滴加DEAD(1.40g,8.02mmol,1.46mL)。将该混合物在25℃搅拌12h。将该混合物倾入水(50mL)，用乙酸乙酯(30mL x 2)萃取。用盐水(30mL x 1)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到残余物。通过硅胶色谱法纯化残余物(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)。浓缩洗脱液，得到2-溴-3-(丁-3-烯-1-基硫)-5-氯吡啶(1.2g,4.31mmol,81％收率)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[79BrM+H]+＝277.9。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.05-7.99(m,1H),7.34-7.28(m,1H),5.88-5.73(m,1H),5.16-5.01(m,2H),2.99-2.86(m,2H),2.48-2.35(m,2H)ppm。
步骤3:3-(丁-3-烯-1-基硫)-5-氯-2-乙烯基吡啶的制备
将2-溴-3-(丁-3-烯-1-基硫)-5-氯吡啶(860mg,3.09mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(1.24g,9.26mmol)、Pd(dtbpf)Cl2(201.19mg,308.69μmol)和K3PO4(1.97g,9.26mmol)在二噁烷(12mL)和H2O(3mL)中的混合物在80℃在N2气氛中搅拌1hr。将该混合物倾入H2O(100mL)，用EA(30mL x 3)萃取。用盐水(20mL x2)洗涤合并的有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过硅胶色谱法纯化残余物(PE–PE/EA＝20/1)。减压浓缩洗脱液，得到3-(丁-3-烯-1-基硫)-5-氯-2-乙烯基吡啶(510mg,2.26mmol,73.％收率)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝226.0。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.36(d,J＝2.4Hz,1H),7.60(d,J＝2.4Hz,1H),7.26-7.19(m,1H),6.41-6.36(m,1H),5.89-5.81(m,1H),5.57-5.53(m,1H),5.20-5.07(m,2H),2.97-2.93(m,2H),2.44-2.36(m,2H)ppm。
步骤4:3-氯-6,7-二氢噻吩并[3,2-b]吡啶的制备
将3-(丁-3-烯-1-基硫)-5-氯-2-乙烯基吡啶(250mg,1.11mmol)和亚苄基-[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-亚基]-二氯-钌；三环己基膦(Grubbs II)(94.0mg,0.111mol)在DCM(12mL)中的混合物在25℃在N2气氛搅拌16h中。真空浓缩该溶液。通过硅胶色谱法纯化残余物(PE–PE/EA＝20/1)。减压浓缩洗脱液，得到3-氯-6,7-二氢噻吩并[3,2-b]吡啶(110mg,556.44μmol,50％收率)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝198.0。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.40(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(d,J＝1.6Hz,1H),6.81-6.71(m,1H),6.32-6.26(m,1H),3.10-3.05(m,2H),2.88-2.81(m,2H)。
步骤5:6,7-二氢噻吩并[3,2-b]吡啶-3-甲酸的制备
将3-氯-6,7-二氢噻吩并[3,2-b]吡啶(50mg,0.253mol)、K2CO3(52.44mg,0.379mol)、Pd(OAc)2(2.84mg,12.65μmol)、1,3-双(二环己基膦基)丙烷双(四氟硼酸盐)(15.49mg,25.29μmol)和H2O(100μL)在DMSO(1mL)中的混合物在100℃在CO气氛中(15psi)搅拌4h。将该混合物倾入H2O(10mL)，用EA(10mL x 2)萃取。弃去有机相。用HCl(1M)将水相酸化至pH＝3，用EA(10mL x3)萃取。用盐水(10mL x 2)洗涤合并的有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到6,7-二氢噻吩并[3,2-b]吡啶-3-甲酸(28mg,135.10μmol,53.4％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝207.9。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.36(d,J＝2.4Hz,1H),7.60(d,J＝2.4Hz,1H),7.26-7.19(m,1H),6.41-6.36(m,1H),5.89-5.81(m,1H),5.57-5.53(m,1H),5.20-5.07(m,2H),2.97-2.93(m,2H),2.44-2.36(m,2H)ppm。
步骤6:6,7,8,9-四氢噻吩并[3,2-b]吡啶-3-甲酸的制备
在25℃向6,7-二氢噻吩并[3,2-b]吡啶-3-甲酸(28mg,135.10μmol)在MeOH(5mL)中的混合物中加入Pd/C(湿,50mg,10％纯度)。用H2吹扫该混合物3次，在25℃在H2气氛中(15psi)搅拌30min。过滤该混合物，减压浓缩滤液，得到6,7,8,9-四氢噻吩并[3,2-b]吡啶-3-甲酸(23mg,109.91μmol,81.2％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝210.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.81(d,J＝2.0Hz,1H),8.20(d,J＝2.0Hz,1H),3.23-3.17(m,2H),2.88-2.78(m,2H),2.11-1.96(m,2H),1.76-1.62(m,2H)ppm。
步骤7:5,5-二氧代-6,7,8,9-四氢噻吩并[3,2-b]吡啶-3-甲酸(中间体8)的制备
在25℃向6,7,8,9-四氢噻吩并[3,2-b]吡啶-3-甲酸(23mg,109.91μmol)在MeOH(1mL)和H2O(1mL)中的混合物中加入(67.57mg,109.9μmol)。将该混合物在25℃搅拌4h。用饱和Na2SO3(20mL)使该混合物淬灭，用HCl(1M)酸化至pH＝2，用EA(20mL x 2)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到5,5-二氧代-6,7,8,9-四氢噻吩并[3,2-b]吡啶-3-甲酸(18mg,74.61μmol,68％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝241.9；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.14(d,J＝2.0Hz,1H),8.55(d,J＝2.1Hz,1H),3.53-3.51(m,2H),3.17(br d,J＝5.2Hz,2H),2.19-2.13(m,2H),1.82(br d,J＝3.2Hz,2H)ppm。
中间体9:4,5-二氢-2H-苯并[d][1,3]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物
步骤1:(6-溴苯并[b]噻吩-2-基)硼酸的制备
在-70℃在N2气氛中向6-溴苯并[b]噻吩(8g,37.54mmol)在THF(80mL)中的混合物中滴加LDA(2M,22.53mL)。将该混合物在-70℃搅拌1hr。然后在-70℃向该混合物中加入硼酸三异丙酯(8.47g,45.05mmol,10.36mL)，将该混合物搅拌1hr。在-70℃向该混合物中加入H2SO4(7.36g,75.08mmol,4.00mL)，将该混合物在25℃搅拌1hr。将该混合物倾入水(300mL)，用乙酸乙酯(200mLx2)萃取。用盐水(200mLx1)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。用PE/MTBE＝10/1(50mL)研磨残余物。过滤该混悬液。在泵中干燥滤饼，得到(6-溴苯并[b]噻吩-2-基)硼酸(7.3g,28.41mmol,76％收率)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.58-8.53(m,2H),8.28-8.24(m,1H),7.96-7.93(m,1H),7.88-7.84(m,1H),7.54-7.46(m,1H)ppm。
步骤2:6-溴苯并[b]噻吩-2(3H)-酮的制备
在25℃在N2气氛中向(6-溴苯并[b]噻吩-2-基)硼酸(6.5g,25.30mmol)在EtOH(78mL)中的混合物中滴加H2O2(38.35g,338.24mmol,32.50mL)。将该混合物在25℃搅拌1hr。过滤该混合物。用H2O(50mL)洗涤滤饼，真空干燥，得到6-溴苯并[b]噻吩-2(3H)-酮(4.2g,18.33mmol,72％收率)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝214.8,216.9。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.53-7.47(m,1H),7.38-7.32(m,1H),7.16(d,J＝8.0Hz,1H),4.06-3.84(m,2H)ppm。
步骤3:2-(4-溴-2-巯基苯基)乙-1-醇的制备
在25℃在N2气氛中向6-溴苯并[b]噻吩-2(3H)-酮(4.2g,18.33mmol)在EtOH(67mL)中的混合物中分部分加入NaBH4(3.47g,91.67mmol)。将该混合物在80℃搅拌30min。将该混合物冷却至25℃。向该混合物中缓慢地加入HCl水溶液(1M)以便调节pH＝2。将该混合物倾入水(200mL)，用乙酸乙酯(100mLx2)萃取。用盐水(100mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)。浓缩洗脱液，得到2-(4-溴-2-巯基苯基)乙-1-醇(3.6g,15.44mmol,84％收率)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.61(d,J＝2.0Hz,1H),7.24-7.22(m,1H),7.13(d,J＝8.2Hz,1H),5.58(s,1H),4.97-4.49(m,1H),3.59-3.57(m,2H),2.71-2.69(m,2H)。
步骤4:制备8-溴-4,5-二氢苯并[d][1,3]氧杂噻庚因
在0℃在N2气氛中向2-(4-溴-2-巯基苯基)乙-1-醇(500mg,2.14mmol)在DMF(50mL)中的混合物中分部分加入NaH(257.37mg,6.43mmol)。将该混合物在25℃搅拌30min。然后在0℃在N2气氛中向该混合物中滴加在DMF(1mL)中的氯(碘)甲烷(416.13mg,2.36mmol,171μL)。将该混合物在25℃搅拌1.5h。将该混合物倾入饱和NH4Cl(10mL)，用乙酸乙酯(10mLx2)萃取。用盐水(10mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)。浓缩洗脱液，得到8-溴-4,5-二氢苯并[d][1,3]氧杂噻庚因(50mg,0.189mmol,9％收率)，为黄色油状物。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝246.2,248.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.67-7.60(m,1H),7.47-7.38(m,1H),7.31-7.22(m,1H),5.00-4.86(m,2H),3.81 -3.67(m,2H),3.12-3.09(m,2H)ppm。
步骤5:4,5-二氢苯并[d][1,3]氧杂噻庚因-8-甲酸的制备
给8-溴-4,5-二氢苯并[d][1,3]氧杂噻庚因(50mg,203.97μmol)、Pd(OAc)2(4.58mg,20.40μmol)、1,3-双(二环己基膦基)丙烷双(四氟硼酸盐)(24.98mg,40.79μmol)和K2CO3(56.38mg,0.408mmol)在DMSO(2mL)和H2O(0.2mL)中的溶液真空脱气，用CO吹扫几次。将该混合物在100℃在CO气氛中(15psi)搅拌2h。将该混合物倾入水(20mL)，用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。弃去有机层。向水相中加入HCl水溶液(1M)以调节pH＝3。用乙酸乙酯(10mL x 2)萃取该混合物。用盐水(10mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到4,5-二氢苯并[d][1,3]氧杂噻庚因-8-甲酸(40mg,190.25μmol,93％收率)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝211.1。
步骤6:4,5-二氢-2H-苯并[d][1,3]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(中间体9)的制备
在25℃在N2气氛中向4,5-二氢苯并[d][1,3]氧杂噻庚因-8-甲酸(20mg,95.13μmol)在DCM(1mL)中的混合物中分部分加入mCPBA(48.28mg,237.81μmol,85％纯度)。将该混合物在25℃搅拌12h。过滤该混合物，浓缩滤液。通过反相柱(FA)直接纯化残余物。浓缩洗脱液，以除去MeCN。冻干水相，得到4,5-二氢苯并[d][1,3]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(20mg,82.56μmol,86.79％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H2O]+＝260.0；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.38(d,J＝1.6Hz,1H),8.16-8.14(m,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,1H),4.99(s,2H),4.01-4.00(m,2H),3.42(s,2H)ppm。
中间体10:4,5-二氢-2H-苯并[d][1,3]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物
步骤1:4-溴-2-[(4-甲氧基苯基)甲基硫烷基]苄腈的制备
向4-溴-2-氟-苄腈(10g,50.00mmol)和(4-甲氧基苯基)甲硫醇(7.71g,50.00mmol)在DMF(100mL)中的溶液中加入Cs2CO3(16.29g,50.00mmol)，将该混合物在60℃搅拌2h。将该反应混合物倾入水(1000mL)，用EA(1000mL x 3)萃取该溶液，用盐水(500mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到4-溴-2-[(4-甲氧基苯基)甲基硫烷基]苄腈(13g,粗)，为白色固体。
步骤2:[4-溴-2-[(4-甲氧基苯基)甲基硫烷基]苯基]甲胺的制备
在0℃在N2气氛中向4-溴-2-[(4-甲氧基苯基)甲基硫烷基]苄腈(13g,38.90mmol)在THF(150mL)中的溶液中加入LiAlH4(1.62g,42.78mmol)，将该混合物在0℃搅拌1hr。向该混合物中倾入水(1.62g)和15％ NaOH溶液(2.5mL)，将该溶液倾入EA(500mL)，过滤该溶液，浓缩滤液，得到[4-溴-2-[(4-甲氧基苯基)甲基硫烷基]苯基]甲胺(13g,粗)，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.48-7.47(m,1H),7.21-7.20(m,1H),7.19-7.18(m,3H),6.85-6.82(m,2H),4.08(s,2H),3.80-3.79(m,5H)ppm。
步骤3:[2-[[2-(氨基甲基)-5-溴-苯基]二硫烷基]-4-溴-苯基]甲胺的制备
将[4-溴-2-[(4-甲氧基苯基)甲基硫烷基]苯基]甲胺(13g,38.43mmol)在TFA(130mL)中的混合物在60℃搅拌16h。浓缩该反应混合物，得到残余物。通过反相HPLC(0.1％FA条件)纯化残余物。冻干该溶液，得到氨基甲基)-5-溴-苯基]二硫烷基]-4-溴-苯基]甲胺(3.5g,7.20mmol,19％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[79BrM+H]+＝434.8。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.35(br s,3H),7.55(s,2H),7.50-7.37(m,1H),4.05(s,2H)ppm。
步骤4:8-溴-4,5-二氢-1,4-苯并硫杂吖庚因(benzothiazepin)-3-酮的制备
向氨基甲基)-5-溴-苯基]二硫烷基]-4-溴-苯基]甲胺(1g,2.30mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入NaBH4(261.37mg,6.91mmol)，将该混合物在30℃搅拌2h。然后向该溶液中加入TEA(11.52mmol,1.60mL)、2-氯乙酰氯(312.13mg,2.76mmol)，将该混合物在30℃搅拌3h。将该反应混合物倾入水(100mL)，用EA(100mL x 3)萃取。用盐水(200mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝10:1-0:1)，浓缩该溶液，得到8-溴-4,5-二氢-1,4-苯并硫杂吖庚因-3-酮(300mg,871.29μmol,38％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[79BrM+H]+＝260.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.37(d,J＝2.0Hz,1H),7.24–7.22(m,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),4.45(s,2H),3.89(s,2H)ppm。
步骤5:3-氧代-4,5-二氢-1,4-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(中间体10)的制备
向8-溴-4,5-二氢-1,4-苯并硫杂吖庚因-3-酮(280mg,1.08mmol)在DMSO(5mL)中的溶液中加入二环己基(3-二环己基磷鎓基丙基)鏻；双四氟硼酸盐(66.41mg,108.47μmol)、K2CO3(224.88mg,1.63mmol)、Pd(OAc)2(24.35mg,108.47μmol)和H2O(3.91mg,216.94μmol)，将该混合物在CO气氛中(15psi)在100℃搅拌2h。过滤该反应混合物，用MTBE(10mL)萃取该溶液，弃去有机层。然后用1N HCl将水相调节至pH＝2，用EA(50mLx5)萃取该溶液，用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到3-氧代-4,5-二氢-1,4-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(120mg,0.487mmol,45％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝224.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.09–13.06(m,1H),8.18(t,J＝6.4Hz,1H),7.64(d,J＝1.6Hz,1H),7.60-7.57(m,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H),4.45(d,J＝6.4Hz,2H),3.91(s,2H)ppm。
步骤6:1,1,3-三氧代-4,5-二氢-1λ6,4-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸的制备
向3-氧代-4,5-二氢-1,4-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(50mg,223.97μmol)在MeOH(0.5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中加入Oxone(275.37mg,447.93μmol)，将该混合物在30℃搅拌2h。将该反应混合物倾入MeOH(5mL)，过滤该溶液，浓缩滤液，得到1,1,3-三氧代-4,5-二氢-1λ6,4-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(57mg,223.31μmol,99.71％收率)，为白色固体。
中间体11.4-(2-甲氧基乙基)-3-甲基磺酰基-苯甲酸
步骤1:2-(4-氯-2-甲基硫烷基-苯基)乙酸的制备
将2-(2-溴-4-氯苯基)乙酸(1g,4.01mmol)、CuI(763.36mg,4.01mmol)和DABCO(899.20mg,8.02mmol,881.57uL)在DMSO(10mL)中的混合物在145℃在N2气氛中搅拌12h。用1N HCl(300mL)稀释该反应混合物，过滤。用DCM(300mLx2)萃取滤液。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(石油醚/乙酸乙酯＝1/0-0/1)。浓缩洗脱液，得到2-(4-氯-2-甲基硫烷基-苯基)乙酸(1.5g,粗)，为黄色固体，直接用于下一步。
步骤2:2-(4-氯-2-甲基磺酰基-苯基)乙酸的制备
在0℃向2-(4-氯-2-甲基硫烷基-苯基)乙酸(500mg,2.31mmol)在MeOH(3mL)和H2O(3mL)中的溶液中加入在H2O(3mL)中的Oxone(4.26g,6.92mmol)。将该混合物在25℃搅拌12h。用饱和Na2SO3(100mL)稀释该反应混合物，搅拌10min，然后用DCM(100mL x 3)萃取。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩，得到残余物。通过反相(0.1％ FA)纯化残余物。浓缩洗脱液，得到2-(4-氯-2-甲基磺酰基-苯基)乙酸(200mg,0.804mol,35％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝248.9。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.62-12.54(m,1H),7.91(d,J＝2.0Hz,1H),7.78-7.76(m,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,1H),4.05(s,2H),3.26(s,3H)ppm。
步骤3:2-(4-氯-2-甲基磺酰基-苯基)乙醇的制备.
在0℃向2-(4-氯-2-甲基磺酰基-苯基)乙酸(200mg,804.24μmol)在THF(4mL)中的溶液中加入BH3-Me2S混合物(10M,402.12uL)。将该混合物在25℃搅拌2h。用1N HCl(10mL)稀释该反应混合物，用DCM(10mL)萃取。用无Na2SO4水干燥有机层，过滤，浓缩，得到残余物。通过反相(0.1％ FA)纯化残余物。浓缩洗脱液，得到2-(4-氯-2-甲基磺酰基-苯基)乙醇(180mg,766.94μmol,96％收率)，为无色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝235.0。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J＝2.4Hz,1H),7.58-7.55(m,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),3.97-3.94(m,2H),3.28-3.25(m,2H),3.15(s,3H)ppm。
步骤4:4-氯-1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基磺酰基-苯的制备
向2-(4-氯-2-甲基磺酰基-苯基)乙醇(80mg,0.341mmol)在DCM(1mL)中的溶液中加入Ag2O(236.97mg,1.02mmol)和MeI(241.91mg,1.70mmol,106uL)。将该混合物在30℃搅拌12h。用H2O(10mL)稀释该反应混合物，用DCM(10mL x 2)萃取。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，浓缩，得到残余物，通过反相(0.1％ FA)纯化。浓缩洗脱液，得到4-氯-1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基磺酰基-苯(60mg,0.241mmol,71％收率)，为黄色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝248.9。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.06(d,J＝2.4Hz,1H),7.55-7.52(m,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,1H),3.70-3.67(m,2H),3.33-3.29(m,5H),3.15(s,3H)ppm。
步骤5:4-(2-甲氧基乙基)-3-甲基磺酰基-苯甲酸((中间体11)的制备
将4-氯-1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基磺酰基-苯(60mg,0.241mmol)、K2CO3(50.0mg,0.362mmol)、二环己基(3-二环己基磷鎓基丙基)鏻；双四氟硼酸盐(14.77mg,24.12μmol)和Pd(OAc)2(2.71mg,12.06μmol)在DMSO(1mL)和H2O(0.2mL)中的混合物脱气，用CO吹扫3次。将该混合物在100℃在CO气氛中(15psi)搅拌3h。用MeOH(10mL)稀释该反应混合物，过滤，浓缩滤液，得到残余物。通过反相(0.1％ FA)纯化残余物。浓缩洗脱液，以除去ACN，冻干，得到4-(2-甲氧基乙基)-3-甲基磺酰基-苯甲酸(50mg,0.194mmol,80％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝259.0。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.78(d,J＝1.6Hz,1H),8.28-8.26(m,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),3.77-3.74(m,2H),3.45-3.42(m,2H),3.33(s,3H),3.19(s,3H)ppm。
中间体12.4-(2-甲氧基乙基)-3-甲基磺酰基-苯甲酸
步骤1:3-[烯丙基(叔丁氧基羰基)氨磺酰基]-4-乙烯基-苯甲酸甲酯的制备
在0℃向3-(烯丙基氨磺酰基)-4-乙烯基-苯甲酸甲酯(1.2g,4.27mmol)(根据FG-A4366中的方法制备)和DMAP(52.11mg,426.55μmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入TEA(863.24mg,8.53mmol,1.19mL)和Boc2O(1.86g,8.53mmol,1.96mL)。将该混合物在20℃搅拌2h。将其倾入水(60mL)，用DCM(40mLx3)萃取。用盐水(40mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(40g/>硅胶快速柱,0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度的洗脱液@50mL/min)。真空浓缩级分，得到3-[烯丙基(叔丁氧基羰基)氨磺酰基]-4-乙烯基-苯甲酸甲酯(1.5g,3.93mmol,92％收率)，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.50(d,J＝2.0Hz,1H),8.34-8.15(m,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.23-7.00(m,1H),6.01-5.86(m,2H),5.75-5.61(m,1H),5.39-5.14(m,2H),4.38(d,J＝4.8Hz,2H),3.91(s,3H),1.13(s,9H)ppm。
步骤2:苯并[f][1,2]硫杂吖庚因-2,8(3H)-二甲酸2-(叔丁基)酯8-甲基酯1,1-二氧化物的制备
将3-[烯丙基(叔丁氧基羰基)氨磺酰基]-4-乙烯基-苯甲酸甲酯(1.5g,3.93mmol)和亚苄基-[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-亚基]-二氯-钌；三环己基膦(333.85mg,393.24μmol)在DCM(80mL)中的混合物脱气，用N2吹扫3次。将该混合物在25℃在N2气氛中搅拌2h。浓缩以除去DCM。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(40g/>硅胶快速柱,0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度的洗脱液@50mL/min)。真空浓缩级分，得到苯并[f][1,2]硫杂吖庚因-2,8(3H)-二甲酸2-(叔丁基)酯8-甲基酯1,1-二氧化物(1.1g,2.77mmol,70％收率)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[Br79M+H]+＝298.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.43(d,J＝1.6Hz,1H),8.32-8.17(m,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),6.75(d,J＝12.8Hz,1H),6.39-6.18(m,1H),4.95-4.57(m,2H),3.92(s,3H),1.11(s,9H)ppm。
步骤3:4,5-二氢苯并[f][1,2]硫杂吖庚因-2,8(3H)-二甲酸2-(叔丁基)酯8-甲基酯1,1-二氧化物的制备
将苯并[f][1,2]噻庚因-2,8(3H)-二甲酸2-(叔丁基)酯8-甲基酯1,1-二氧化物(500mg,1.41mmol)、Pd/C(50mg,10％纯度)在MeOH(10mL)中的混合物脱气，用H2吹扫3次。将该混合物在20℃在H2气氛中搅拌16h。过滤，浓缩，得到4,5-二氢苯并[f][1,2]噻庚因-2,8(3H)-二甲酸2-(叔丁基)酯8-甲基酯1,1-二氧化物(4.1g,12.27mmol,96％收率)，为黄色油状物。
LCMS(ESI)m/z:[Br79M+H]+＝300.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.37(d,J＝2.0Hz,1H),8.23-8.11(m,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),4.17-4.06(m,2H),3.90(s,3H),3.32-3.14(m,2H),1.90-1.53(m,2H),1.22(s,9H)ppm。
步骤4:2-叔丁氧基羰基-1,1-二氧代-4,5-二氢-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸的制备
向4,5-二氢苯并[f][1,2]噻庚因-2,8(3H)-二甲酸2-(叔丁基)酯8-甲基酯1,1-二氧化物(250mg,0.703mmol)在THF(2.5mL)和H2O(2.5mL)中的溶液中加入LiOH.H2O(118.06mg,2.81mmol)。将该混合物在25℃搅拌2h。用HCl水溶液(1M)调节至pH＝5，用EA(40mLx3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到2-叔丁氧基羰基-1,1-二氧代-4,5-二氢-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(190mg,0.473mmol,67％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝285.9。
步骤5:1,1-二氧代-2,3,4,5-四氢-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(中间体12)的制备
将2-叔丁氧基羰基-1,1-二氧代-4,5-二氢-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(180mg,0.527mmol)在HCl/二噁烷(4M,3mL)中的混合物在25℃搅拌2h。浓缩，以除去二噁烷，得到1,1-二氧代-2,3,4,5-四氢-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(130mg,0.468mmol,89％收率,HCl)，为黄色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.31(d,J＝1.6Hz,1H),8.05-8.00(m,1H),7.57-7.52(m,2H),3.66(br s,2H),3.22(br d,J＝3.2Hz,2H),1.91-1.77(m,1H),1.70(br s,2H)ppm。
中间体13.2-甲基-1,1-二氧代-4,5-二氢-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸
步骤1:4-溴-3-氯磺酰基苯甲酸的制备
将4-溴苯甲酸(10g,49.75mmol)在HSO3Cl(86.95g,0.746mol,49.7mL)中的混合物在100℃搅拌16h。将该反应体系在120℃再搅拌16h。将其倾入冰水(400mL)。形成沉淀，过滤该混合物。真空干燥滤饼，得到4-溴-3-氯磺酰基苯甲酸(11g,36.72mmol,73％收率)，为灰色固体。
LCMS(ESI)m/z:[Br79M+H]+＝300.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.96(br s,1H),8.46(d,J＝1.6Hz,1H),7.79-7.60(m,2H)ppm。
步骤2:4-溴-3-氯磺酰基苯甲酸甲酯的制备
将4-溴-3-氯磺酰基苯甲酸(11g,36.72mmol)在SOCl2(43.69g,367.25mmol,26.64mL)中的混合物中在80℃搅拌2h。然后浓缩该混合物以除去SOCl2。加入MeOH(11mL)。将该混合物在20℃搅拌0.5hr。将其倾入水(600mL)，用EA(300mL x 3)萃取。用盐水(200mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到4-溴-3-氯磺酰基苯甲酸甲酯(10g,粗)，为黄色固体。
LCMS(ESI)m/z:[Br79M+H]+＝314.8。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.31(br s,2H),8.71-8.31(m,1H),7.89-7.62(m,2H),3.86(s,3H)。
步骤3:3-(烯丙基氨磺酰基)-4-溴-苯甲酸甲酯的制备
在0℃向4-溴-3-氯磺酰基苯甲酸甲酯(4g,12.76mmol)和丙-2-烯-1-胺(1.31g,14.03mmol,1.73mL,HCl)在DCM(40mL)中的溶液中加入DIEA(6.60g,51.03mmol,8.89mL)。然后将该混合物在25℃搅拌2h。将其倾入水(100mL)，用DCM(60mLx3)萃取。用盐水(60mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(80g硅胶快速柱,0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度的洗脱液@100mL/min)。真空浓缩级分，得到3-(烯丙基氨磺酰基)-4-溴-苯甲酸甲酯(4.1g,12.27mmol,96％收率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.51-8.42(m,1H),8.29(br s,1H),8.01(d,J＝0.8Hz,2H),5.77-5.52(m,1H),5.17-5.06(m,1H),5.03-4.93(m,1H),3.89(s,3H),3.57(brd,J＝4.8Hz,2H)ppm。
步骤4:3-(烯丙基氨磺酰基)-4-乙烯基-苯甲酸甲酯的制备
将3-(烯丙基氨磺酰基)-4-溴-苯甲酸甲酯(3.1g,9.28mmol)、三氟(乙烯基)硼化钾(6.21g,46.38mmol)、二叔丁基(环戊基)膦；二氯钯；铁(604.6mg,0.928mmol)和K3PO4(5.91g,27.8mmol)在二噁烷(30mL)和H2O(6mL)中的混合物脱气，用N2吹扫3次。将该混合物在60℃在N2气氛中搅拌16h。将其倾入水(100mL)，用EA(60mL x 3)萃取。用盐水(60mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(40g硅胶快速柱,0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度的洗脱液@80mL/min)。真空浓缩级分，得到3-(烯丙基氨磺酰基)-4-乙烯基-苯甲酸甲酯(1.5g,5.33mmol,57％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝282.1。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.62(d,J＝1.6Hz,1H),8.29-8.11(m,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.62-7.47(m,1H),5.92-5.77(m,1H),5.73-5.53(m,2H),5.22-4.97(m,2H),4.84-4.57(m,1H),3.69-3.41(m,2H)ppm。
步骤5:3-[烯丙基(甲基)氨磺酰基]-4-乙烯基-苯甲酸甲酯的制备
向3-(烯丙基氨磺酰基)-4-乙烯基-苯甲酸甲酯(200mg,0.711mmol)和K2CO3(196.5mg,1.42mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入MeI(201.81mg,1.42mmol,88.5μL)。将该混合物在20℃搅拌3h。将其倾入水(60mL)，用EA(30mL x 3)萃取。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，然后用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(12g硅胶快速柱,0～50％乙酸乙酯/石油醚梯度的洗脱液@50mL/min)。真空浓缩级分，得到3-[烯丙基(甲基)氨磺酰基]-4-乙烯基-苯甲酸甲酯(190mg,0.643mmol,90％收率)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝296.0
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.56(d,J＝1.6Hz,1H),8.26-8.09(m,1H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),7.67-7.53(m,1H),5.88-5.77(m,1H),5.76-5.64(m,1H),5.59-5.50(m,1H),5.27-5.16(m,2H),3.96(s,3H),3.75(d,J＝6.4Hz,2H),2.75(s,3H)ppm。
步骤6:2-甲基-1,1-二氧代-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸甲酯的制备
给3-[烯丙基(甲基)氨磺酰基]-4-乙烯基-苯甲酸甲酯(190mg,0.643mmol)和亚苄基-[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-亚基]-二氯-钌；三环己基膦(benzylidene-[1,3-bis(2,4,6-trimethylphenyl)imidazolidin-2-ylidene]-dichloro-ruthenium；tricyclohexylphosphane)(54.61mg,64.33μmol)在DCM 10mL)中的混合物脱气，用N2吹扫3x。将该混合物在25℃在N2气氛中搅拌2h。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(12g硅胶快速柱,～50％乙酸乙酯/石油醚梯度的洗脱液@30mL/min)。真空浓缩级分，得到2-甲基-1,1-二氧代-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸甲酯(130mg,0.486mmol,76％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝268.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.38(d,J＝2.0Hz,1H),8.26-8.10(m,1H),7.78(d,J＝8.4Hz,1H),6.72(br d,J＝13.2z,1H),6.31-5.96(m,1H),4.45-4.17(m,2H),3.90(s,3H),2.55(s,3H)ppm。
步骤7:2-甲基-1,1-二氧代-4,5-二氢-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸甲酯的制备
将2-甲基-1,1-二氧代-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸甲酯(130mg,0.486mmol)、Pd/C(13mg,10％纯度)在MeOH(4mL)中的混合物脱气，用H2吹扫3次。然后将该混合物在20℃在H2气氛中搅拌2h。过滤，浓缩，得到2-甲基-1,1-二氧代-4,5-二氢-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸甲酯(110mg,0.408mmol,84％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝270.0。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.56(d,J＝2.0Hz,1H),8.17-8.03(m,1H),7.38(d,J＝7.6Hz,1H),3.95(s,3H),3.92-3.59(m,2H),3.45-3.23(m,2H),2.65(s,3H),1.91-1.80(m,3H)ppm。
步骤8:2-甲基-1,1-二氧代-4,5-二氢-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(中间体13)的制备
向2-甲基-1,1-二氧代-4,5-二氢-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸甲酯(110mg,0.408mmol)在THF(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中加入LiOH.H2O(68.56mg,1.63mmol)。将该混合物在25℃搅拌2h。用HCl水溶液(1M)调节至H＝5，用EA(20mLx3)萃取。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，然后用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到2-甲基-1,1-二氧代-4,5-二氢-3H-1λ6,2-苯并硫杂吖庚因-8-甲酸(80mg,0.313mmol,77％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝519.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.27(d,J＝1.6Hz,1H),8.14-8.01(m,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),3.75-3.55(m,2H),3.23(br s,3H),2.55(s,3H),1.83-1.71(m,2H)ppm。
中间体14.4-(二氟甲基)-3-(甲基磺酰基)苯甲酸
步骤1:3-溴-4-(二氟甲基)苯甲酸甲酯的制备
向3-溴-4-甲酰基苯甲酸甲酯(300mg,1.23mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入DAST(596.87mg,3.70mmol,489.24uL)。将该混合物在25℃搅拌1hr。用饱和NaHCO3(20mL)稀释该反应混合物，用DCM(20mL)萃取。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(石油醚/乙酸乙酯＝1/0-3/1)。浓缩洗脱液，得到3-溴-4-(二氟甲基)苯甲酸甲酯(190mg,716.84μmol,58％收率)，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.28(s,1H),8.09(d,J＝8.0Hz,1H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.06-6.79(m,1H),3.96(s,3H)ppm。
步骤2:3-溴-4-(二氟甲基)苯甲酸的制备
向3-溴-4-(二氟甲基)苯甲酸甲酯(90mg,339.56μmol)在THF/MeOH/H2O＝2/1/1(1mL)中的溶液中加入NaOH(27.16mg,679.11μmol)。将该混合物在30℃搅拌2h。用1N HCl(10mL)稀释该反应混合物，用DCM(10mL x 2)萃取。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，浓缩，得到3-溴-4-(二氟甲基)苯甲酸(70mg,278.86μmol,82％收率)，为黄色油状物，直接用于下一步。
步骤3:4-(二氟甲基)-3-甲基硫烷基-苯甲酸的制备
将3-溴-4-(二氟甲基)苯甲酸(50mg,0.199mmol)、DABCO(44.68mg,0.398mmol,44uL)和CuI(37.93mg,0.199mmol)在DMSO(0.5mL)中的混合物在145℃搅拌12h。向该混合物中加入1N HCl以调节pH＝5。过滤该混合物。浓缩滤液，得到残余物。通过反相(0.1％FA)纯化残余物。浓缩洗脱液，得到4-(二氟甲基)-3-甲基硫烷基-苯甲酸(30mg,0.137mmol,69％收率)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝218.9。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.10(s,1H),8.02(d,J＝8.4Hz,1H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.15-6.87(m,1H),2.58(s,3H)ppm。
步骤4:4-(二氟甲基)-3-甲基磺酰基-苯甲酸(中间体14)的制备
在0℃向4-(二氟甲基)-3-甲基硫烷基-苯甲酸(30mg,137.48μmol)在MeOH(0.5mL)中的溶液中加入Oxone(169.03mg,274.95μmol)在H2O(0.5mL)中的混合物。将该混合物在25℃搅拌12h。用H2O(10mL)稀释该反应混合物，用DCM(10mL)萃取。用无水Na2SO4干燥有机层，过滤，浓缩，得到残余物。通过反相(0.1％ FA)纯化残余物。浓缩洗脱液，得到4-(二氟甲基)-3-(甲基磺酰基)苯甲酸(20mg,79.9μmol,58％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝250.9。
中间体15.6-甲基-5-(甲基磺酰基)烟酸
步骤1:6-甲基-5-(甲硫基)烟酸的制备
向5-氟-6-甲基-吡啶-3-甲酸甲酯(300mg,1.77mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入硫代甲醇钠(320.30mg,1.95mmol)。将该混合物在100℃搅拌16h。用HCl(1M)(40mL)使该反应混合物淬灭，用EA/MeOH＝15/1(40mLx5)萃取。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过HPLC(0.1％ FA条件)反相纯化残余物。减压浓缩该溶液以除去MeCN，然后冻干，得到6-甲基-5-(甲硫基)烟酸(200mg,1.09mmol,62％收率)，为黄色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝183.9。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝14.14-12.40(m,1H),8.69(d,J＝1.6Hz,1H),7.94(d,J＝2.0Hz,1H),2.55(s,3H),2.50(s,3H)ppm。
步骤2:6-甲基-5-(甲基磺酰基)烟酸(中间体15)的制备
向6-甲基-5-(甲硫基)烟酸(30mg,163.73μmol)在MeOH(1mL)中的溶液中加入(150.98mg,0.246mmol)和H2O(1mL)。将该混合物在25℃搅拌16h。用DMSO(5mL)溶解该反应混合物，然后过滤，得到滤液。通过反相HPLC(0.1％ FA条件)纯化滤液。减压浓缩该溶液，以除去MeCN，然后冻干，得到6-甲基-5-(甲基磺酰基)烟酸(15mg,67.8μmol,41％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝216.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝15.43-11.63(m,1H),9.17(d,J＝2.0Hz,1H),8.61(d,J＝2.0Hz,1H),3.36(s,3H),2.90(s,3H)ppm。
中间体16.3-氯-4-甲基-5-甲基磺酰基-苯甲酸
步骤1:3-氯-5-氯磺酰基4-甲基苯甲酸的制备
将3-氯-4-甲基苯甲酸(1g,5.86mmol)在氯磺酸(10.25g,87.93mmol,5.85mL)中的混合物在120℃搅拌12h。在0℃将该反应混合物加入到H2O(20mL)中。白色固体从该混合物中沉淀出来。通过过滤采集固体，减压干燥，得到3-氯-5-氯磺酰基4-甲基苯甲酸(1.2g,4.46mmol,76％收率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(d,J＝2.0Hz,1H),2.63(s,3H)ppm。
步骤2:3-氯-4-甲基-5-甲基磺酰基-苯甲酸(中间体16)的制备
在80℃向Na2SO3(140.51mg,1.11mmol)和NaHCO3(280.97mg,3.34mmol,130.08uL)在H2O(1.2mL)中的溶液中加入3-氯-5-氯磺酰基-4-甲基苯甲酸(300mg,1.11mmol)。将该混合物在80℃搅拌1hr。然后加入2-溴乙酸(309.8mg,2.23mmol,161μL)和NaOH(89.19mg,2.23mmol)，将该混合物在110℃搅拌12h。用H2O(10mL)稀释该反应混合物，然后加入1N HCl以调节pH＝3。白色固体从该混合物中沉淀出来。通过过滤采集固体，减压干燥，得到3-氯-4-甲基-5-甲基磺酰基-苯甲酸(120mg,0.483mmol,43％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝248.9
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.41(d,J＝1.6Hz,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),3.32(s,3H),2.74(s,3H)ppm。
中间体17.4-氯-3-氟-5-甲基磺酰基-苯甲酸
步骤1:4-氯-3-氟-5-甲基硫烷基-苯甲酸的制备
将3-溴-4-氯-5-氟-苯甲酸甲酯(200mg,747.72μmol)、CuI(142.40mg,747.72μmol)和DABCO(167.8mg,1.50mmol,164μL)在DMSO(2mL)中的混合物在145℃在N2气氛中搅拌12h。过滤该反应混合物。通过反相HPLC(0.1％FA条件)纯化滤液。冻干期望的级分，得到4-氯-3-氟-5-甲基硫烷基-苯甲酸(90mg,0.371mmol,50％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝220.9.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.66-7.56(m,2H),2.59(s,3H)ppm。
步骤2:4-氯-3-氟-5-甲基磺酰基-苯甲酸(中间体17)的制备
向4-氯-3-氟-5-甲基硫烷基-苯甲酸(90mg,0.408mmol)在H2O(1mL)和MeOH(2mL)中的溶液中加入(501.5mg,0.816mmol)。将该反应体系在20℃在N2气氛中搅拌12h。向该混合物中加入饱和Na2SO3水溶液(5mL)。用EA(5mL x 3)萃取该混合物。用盐水(10mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到4-氯-3-氟-5-甲基磺酰基-苯甲酸(40mg,0.158mmol,39％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝252.9.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.35(s,1H),8.21-8.19(m,1H),3.45(s,3H)ppm。
中间体18.((2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
步骤1.2-溴-5-碘-吡啶-4-胺的制备
在80℃将NIS(93.6g,416mmol)加入到2-溴吡啶-4-胺(60g,347mmol)在MeCN(1.5L)中的溶液中。将该反应混合物在80℃搅拌36h。减压浓缩该反应混合物，得到残余物。用饱和Na2SO3(1.5L)稀释残余物，用EA(1.5L x 2)萃取。用盐水(1L)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,PE/EA＝20:3)，减压浓缩，得到2-溴-5-碘-吡啶-4-胺(65g,217mmol)，为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.31(s,1H),6.79(s,1H),4.75(br s,2H)ppm。
步骤2.3-(4-氨基-6-溴-3-吡啶基)丙-2-烯酸乙基酯的制备
将丙-2-烯酸乙酯(45.1mL,415mmol)、Et3N(43.3mL,311mmol)、Pd(OAc)2(2.3g,10.4mmol)和三-邻-甲苯基膦(tris-o-tolylphosphane)(6.3g,20.7mmol)加入到2-溴-5-碘-吡啶-4-胺(62g,207mmol)在DMF(620mL)中的溶液中。将该混合物在100℃搅拌3h。用水(4L)稀释该反应混合物，用EA(2L x2)萃取。用盐水(2L)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,PE/EA＝20:3)，减压浓缩，得到3-(4-氨基-6-溴-3-吡啶基)丙-2-烯酸乙基酯(50g,170mmol)，为淡黄色固体。
LCMS(ESI)m/z:[79BrM+H]+＝271.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.23(s,1H),7.73(d,J＝16.0Hz,1H),6.90-6.67(m,3H),6.52(d,J＝16.0Hz,1H),4.18(d,J＝7.2Hz,2H),1.25(d,J＝7.2Hz,3H)ppm。
步骤3.7-溴-1,6-萘啶-2(1H)-酮的制备
将硫代甲醇钠(24.2mL,380mmol)加入到3-(4-氨基-6-溴-3-吡啶基)丙-2-烯酸乙基酯(40g,148mmol)在EtOH(200mL)中的溶液中。将该反应混合物在60℃搅拌2h。用水(400mL)稀释该反应混合物，然后用1N HCl中和至pH＝7.0。过滤固体，用水(50mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤饼，得到7-溴-1,6-萘啶-2(1H)-酮(22g,96.8mmol)，为黄白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[79BrM+H]+＝224.9.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.08(br s,1H),8.65(s,1H),7.99(d,J＝9.6Hz,1H),7.36(s,1H),6.62(d,J＝9.6Hz,1H)ppm。
步骤4.2-氧代-1,2-二氢-1,6-萘啶-7-甲腈的制备
将锌粉(406.80mg,6.22mmol)加入到7-溴-1,6-萘啶-2(1H)-酮(7g,31.1mmol)、Zn(CN)2(3.95mL,62.2mmol)和Pd(dppf)Cl2 .CH2Cl2(5.08g,6.22mmol)在DMA(140mL)中的溶液中。给该反应混合物脱气，用N2吹扫3次，然后将该混合物在120℃搅拌2h。用水(200mL)稀释该反应混合物，用DCM/异丙醇(v/v＝3:1)(150mL x 2)萃取。过滤合并的有机层，用盐水(200mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,PE/EA＝1:1)，减压浓缩，得到2-氧代-1,2-二氢-1,6-萘啶-7-甲腈(3g,17.5mmol)，为黄白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.37(br s,1H),8.97(s,1H),8.09(d,J＝9.6Hz,1H),7.67(s,1H),6.77(d,J＝9.6Hz,1H)ppm。
步骤5.制备2-氯-1,6-萘啶-7-甲腈
将2-氧代-1,2-二氢-1,6-萘啶-7-甲腈(3.0g,17.5mmol)和POCl3(30mL,323mmol)的混合物在80℃搅拌2h。将该反应混合物倾入H2O(2L)，用NaHCO3调节至pH＝7。用EA(1.5L x2)萃取该溶液，用盐水(2L)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到2-氯-1,6-萘啶-7-甲腈(1.1g,5.76mmol)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝190.1.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.58(d,J＝0.8Hz,1H),8.79(d,J＝0.8Hz,1H),8.69(s,1H),8.00(d,J＝8.8Hz,1H)ppm。
步骤6.(2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲胺的制备
在-70℃在N2气氛中向2-氯-1,6-萘啶-7-甲腈(25g,131.86mmol)在DCM(1000mL)中的溶液中滴加DIBAL-H(1M,329.64mL,2.5eq)。将该反应混合物在-70℃搅拌2h。用水(500mL)和饱和酒石酸钾钠(1500mL)使该反应混合物淬灭，再搅拌30min。用DCM:MeOH＝10:1(6000mL x 3)萃取该混合物。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到(2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲胺(51g,粗)，为棕色固体，直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z:[35ClM+H]+＝194.2.
步骤7:((2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体18)的制备
向(2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲胺(51g,263.4mmol)在DCM(1500mL)中的溶液中加入(Boc)2O(172.45g,790.16mmol)和DIEA(102.12g,790.16mmol)。将该混合物在25℃搅拌16h。用水(1500mL)稀释该反应混合物，然后过滤。用DCM(1000mL x 3)萃取滤液。用盐水(1500mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝10/1-2/1-1/3)，减压浓缩洗脱，得到((2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(21g,64.34mmol,24％收率)，为淡黄色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝293.9.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.37(s,1H),8.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.71(d,J＝8.4Hz,1H),7.58-7.53(m,2H),4.39(d,J＝6.4Hz,2H),4.20–4.25(m,2H),1.41(s,9H)ppm。
中间体19:[2-[6-(2,2-二氟环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲胺
步骤1:2-溴-6-(2,2-二氟环丙基)吡啶的制备
在70℃在N2气氛中向2-溴-6-乙烯基吡啶(500mg,2.72mmol)和NaI(81.45mg,0.543mmol)在THF(4mL)中的混合物中加入TMSCF3(1.55g,10.87mmol)在THF(1mL)中的溶液，历时1h。将该混合物在70℃在N2气氛中搅拌1h。通过硅胶色谱法纯化残余物(PE–PE/EA＝50/1)。减压浓缩洗脱液，得到2-溴-6-(2,2-二氟环丙基)吡啶(570mg,2.44mmol,90％收率)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝233.9.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.52-7.48(m,1H),7.39-7.37(m,1H),7.19(d,J＝7.6Hz,1H),2.95-2.84(m,1H),2.21-2.12(m,1H),1.89-1.83(m,1H)ppm。
步骤2:[6-(2,2-二氟环丙基)-2-吡啶基]-三甲基锡烷的制备
将2-溴-6-(2,2-二氟环丙基)吡啶(100mg,427.28μmol)、六甲基二锡(279.97mg,854.55μmol,177.20uL)和Pd(PPh3)4(49.37mg,42.73μmol)在二噁烷(2mL)中的混合物在100℃在N2气氛中搅拌2h。过滤该混合物，减压浓缩，得到[6-(2,2-二氟环丙基)-2-吡啶基]-三甲基锡烷(170mg,粗)，为棕色油状物。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝320.1。
步骤3:N-[[2-[6-(2,2-二氟环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯的制备
将((2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg,170.21μmol)、[6-(2,2-二氟环丙基)-2-吡啶基]-三甲基锡烷(163mg,0.511mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(11.95mg,17.02μmol)在二噁烷(1mL)中的混合物在100℃在N2气氛中搅拌16h。将该混合物倾入饱和KF(10mL)，在20℃搅拌30min。用EA(10mL x3)萃取该混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过硅胶色谱法纯化残余物(PE/EA＝10/1-EA)。减压浓缩洗脱液，得到N-[[2-[6-(2,2-二氟环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(30mg,72.74μmol,43％收率)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝413.3。
步骤4:[2-[6-(2,2-二氟环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲胺(中间体19)的制备
在0℃向N-[[2-[6-(2,2-二氟环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(30mg,72.74μmol)在DCM(1mL)中的混合物中加入TFA(462mg,4.05mmol,0.3mL)。将该混合物在30℃搅拌1hr。减压浓缩该混合物，得到[2-[6-(2,2-二氟环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲胺(31mg,72.71μmol,100％收率,TFA盐)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝313.2。
中间体20.(2-(2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-4-基)-1,6-萘啶-7-基)甲胺酸酯(methanaminemate)
步骤1:2,2-二氟环丙烷甲亚胺酰胺(carboximidamide)的制备
在0℃向NH4Cl(6.88g,128.59mmol)在甲苯(50mL)中的混合物中加入Al(CH3)3的溶液(2M,64.29mL)。然后将该混合物在25℃搅拌1hr。在0℃向该溶液中加入2,2-二氟环丙烷羧酸甲酯(3.5g,25.72mmol)，然后将该溶液在80℃搅拌12h。大量白色沉淀形成。将该反应混合物冷却至0℃。加入MeOH(50mL)，然后搅拌10min。过滤该混合物。真空浓缩滤液，得到2,2-二氟环丙烷甲亚胺酰胺(3g,粗)，为白色固体，直接使用。
步骤2:2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-4-醇的制备
在25℃在N2气氛中向2,2-二氟环丙烷甲亚胺酰胺(3.00g,24.97mmol)在EtOH(40mL)中的混合物中一次性加入K2CO3(6.90g,49.94mmol)。将该混合物在25℃搅拌10min，然后在25℃加入(E)-3-乙氧基丙烯酸乙酯(1.2g,8.32mmol,1.20mL)。将该混合物在75℃搅拌6h。过滤该反应混合物，真空浓缩滤液。通过硅胶色谱法纯化该混合物(DCM/MeOH＝20/1)。浓缩洗脱液，得到2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-4-醇(500mg,2.90mmol,35％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝173.2.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.04-7.95(m,1H),6.43-6.35(m,1H),2.84-2.69(m,1H),2.51-2.39(m,1H),2.00-1.88(m,1H)ppm。
步骤3:4-氯-2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶的制备
在0℃在N2气氛中向2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-4-醇(350mg,2.03mmol)和DMF(14.9mg,0.203mmol,15.6uL)在DCM(6mL)中的混合物中一次性加入草酰氯(516mg,4.07mmol,356μL)。将该混合物在25℃搅拌20min。将该混合物加入到饱和NaHCO3(50mL)中。用DCM(50mL x 2)萃取水相。用盐水(50mLx1)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物(PE/EA＝10/1)。浓缩洗脱液，得到4-氯-2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶(150mg,0.787mmol,39％收率)，为淡黄色油状物。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝190.9,192.9。
步骤4:2-(2,2-二氟环丙基)-4-(三丁基甲锡烷基)嘧啶的制备
在25℃在N2气氛中向4-氯-2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶(100mg,0.525mmol)和三甲基(三甲基甲锡烷基)锡烷(343.8mg,1.05mmol,218μL)在二噁烷(2mL)中的混合物中一次性加入Pd(PPh3)4(60.63mg,52.47μmol)。将该混合物在100℃搅拌2h。将该混合物倾入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mLx2)萃取。用盐水(10mL x 1)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到2-(2,2-二氟环丙基)-4-(三丁基甲锡烷基)嘧啶(150mg,粗)，为黄色油状物。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝320.9。
步骤5:制备((2-(2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-4-基)-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
在25℃在N2气氛中向2-(2,2-二氟环丙基)-4-(三丁基甲锡烷基)嘧啶(147mg,0.460mmol)和((2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg,0.306mmol)在二噁烷(2mL)中的混合物中一次性加入Pd(PPh3)2Cl2(21.51mg,30.64μmol)。将该混合物在100℃搅拌12h。将该混合物倾入水(30mL)，用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取。用盐水(20mL x 1)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化残余物(PE/EA＝3/1)。浓缩洗脱液，得到((2-(2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-4-基)-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg,0.218mmol,71％收率)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝414.0.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.50-9.43(m,1H),9.08-9.01(m,1H),8.84-8.78(m,1H),8.73-8.67(m,1H),8.50-8.44(m,1H),7.86-7.80(m,1H),7.72-7.60(m,1H),4.51-4.42(m,2H),2.30-2.13(m,1H),1.52-1.41(m,9H),1.41-1.21(m,2H)ppm。
步骤6:(2-(2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-4-基)-1,6-萘啶-7-基)甲酸酯的制备
在25℃在N2气氛中向((2-(2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-4-基)-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg,0.218mmol)在DCM(1mL)中的混合物中一次性加入TFA(770.0mg,6.75mmol,500μL)。将该混合物在25℃搅拌30min。将该混合物倾入冰-水(20mL)，用乙酸乙酯(20mL x 1)萃取。弃去有机相。向水相中加入饱和NaHCO3以调节pH＝8。然后用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取水相。用盐水(10mL*1)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到(2-(2-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-4-基)-1,6-萘啶-7-基)甲酸酯(70mg,粗)，为淡黄色固体，不经纯化直接使用。
中间体21.[2-[6-(2,2-二氟-1-甲基-环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲胺
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步骤1:2-溴-6-(2,2-二氟-1-甲基-环丙基)吡啶的制备
在70℃在N2气氛中向2-溴-6-异丙烯基-吡啶(100mg,504.90μmol)和NaI(15.14mg,100.98μmol)在THF(0.8mL)中的混合物中滴加TMSCF3(287.19mg,2.02mmol)，历时30min。将该混合物在70℃在N2气氛中搅拌30min。减压浓缩该混合物，得到残余物。通过硅胶色谱法纯化残余物(PE–PE/EA＝20/1)。减压浓缩洗脱液，得到2-溴-6-(2,2-二氟-1-甲基-环丙基)吡啶(125mg,0.504mmol,100％收率)，为黄色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝247.9.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.56-7.50(m,1H),7.40-7.37(m,1H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),2.28-2.21(m,1H),1.63-1.59(m,3H),1.48-1.41(m,1H)ppm。
步骤2:[6-(2,2-二氟-1-甲基环丙基)-2-吡啶基]-三甲基-锡烷的制备
将2-溴-6-(2,2-二氟-1-甲基-环丙基)吡啶(100mg,403.12μmol)、六甲基二锡(264.15mg,0.806mmol,167μL)和Pd(PPh3)4(46.58mg,40.31μmol)在二噁烷(2mL)中的混合物在100℃在N2气氛中搅拌2h。过滤该混合物，减压浓缩滤液，得到[6-(2,2-二氟-1-甲基环丙基)-2-吡啶基]-三甲基-锡烷(210mg,粗)，为黑棕色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝334.0。
步骤3:N-[[2-[6-(2,2-二氟-1-甲基-环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯的制备
将((2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(60mg,0.204mmol)、[6-(2,2-二氟-1-甲基环丙基)-2-吡啶基]-三甲基-锡烷(203.4mg,0.613mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(14.34mg,20.43μmol)在二噁烷(1mL)中的混合物在100℃在N2气氛中搅拌16h。将该混合物倾入饱和KF(10mL)，在20℃搅拌30min。用EA(10mL x 3)萃取该混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过硅胶色谱法纯化残余物(PE/EA＝10/1-EA)。减压浓缩洗脱液，得到N-[[2-[6-(2,2-二氟-1-甲基-环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(42mg,98.49μmol,48％收率)，为黄色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝427.0。
步骤4:[2-[6-(2,2-二氟-1-甲基-环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲胺(中间体21)的制备
在0℃向N-[[2-[6-(2,2-二氟-1-甲基-环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(42mg,98.49μmol)在DCM(1mL)中的溶液中加入TFA(462.0mg,4.05mmol,0.3mL)。将该混合物在25℃搅拌1hr。减压浓缩该混合物，得到[2-[6-(2,2-二氟-1-甲基-环丙基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲胺(43mg,97.65μmol,99％收率,TFA盐)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝327.0。
中间体22.1-亚氨基-1-氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酸
步骤1:N-(8-溴-1-氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-1-亚基)-2,2,2-三氟-乙酰胺的制备
将8-溴-3,5-二氢-2H-4,1λ4-苯并氧杂噻庚因1-氧化物(50mg,191.47μmol),2,2,2-三氟乙酰胺(64.93mg,574.42μmol,)、乙酸[乙酰氧基(苯基)-λ3-碘]酯([acetoxy(phenyl)-λ3-iodanyl]acetate)(129.51mg,402.09μmol)和MgO(46.30mg,1.15mmol)在DCM(3mL)中的混合物在25℃搅拌5min。然后向该混合物中加入二乙酰氧基铑(8.46mg,19.15μmol)，将该混合物在25℃在气氛中N2搅拌16h。用MeOH(3mL)稀释该反应混合物，得到N-(8-溴-1-氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-1-亚基)-2,2,2-三氟-乙酰胺(71mg,190.78μmol,100％收率)，为黄色液体，直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z＝[M+H]+＝373.2。
步骤2:8-溴-1-亚氨基-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因1-氧化物的制备
向N-(8-溴-1-氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-1-亚基)-2,2,2-三氟-乙酰胺(70mg,188.09μmol)在MeOH(3mL)中的混合物中加入K2CO3(181.97mg,1.32mmol)，将该混合物在25℃搅拌4h。用水(10mL)稀释该混合物，过滤，以除去沉淀。分离滤液，用DCM(10mL)萃取水层。用盐水(10mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物(SiO2,PE:EtOAc＝20:1-1:1)，得到8-溴-1-亚氨基-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因1-氧化物(40mg,137.65μmol,73％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z＝[M+H]+＝277.2.
1H NMR(400MHz,DMSO_d6)δ＝8.07(d,J＝2.0Hz,1H),7.81-7.79(m,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),4.99-4.81(m,3H),4.21-4.13(m,2H),3.42-3.39(m,2H)ppm。
步骤3:1-亚氨基-1-氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酸的制备
向8-溴-1-亚氨基-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因1-氧化物(40mg,144.85μmol)和二乙酰氧基钯(3.25mg,14.48μmol)在DMSO(3mL)和H2O(0.3mL)中的混合物中加入K2CO3(30.03mg,217.27μmol)和二环己基(3-二环己基磷鎓基丙基)鏻；双四氟硼酸盐(17.74mg,28.97μmol)。将该混合物脱气，用CO吹扫3次，然后在100℃在CO气氛中(15psi)搅拌4h。将该混合物倾入水(50mL)，用EA(20.0mL x 2)萃取，弃去合并的有机层。用HCl(1M)将水层调节pH至5，然后用DCM(20.0mL*3)萃取。用盐水(50.0mL*2)洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发滤液至干，得到1-亚氨基-1-氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酸(34mg,粗)，为黄色固体。
实施例2.N-[[2-[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]-1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酰胺
步骤1.[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-三甲基-锡烷的制备
向2-(氮杂环丁烷-1-基)-6-溴-吡啶(150mg,703.98μmol)在二噁烷(3mL)中的溶液中加入六甲基二锡(461.28mg,1.41mmol)和Pd(PPh3)4(81.35mg,70.40μmol)。用N2吹扫该混合物3x，然后在100℃在N2气氛中搅拌2h。用H2O(200mL)稀释该反应混合物，用EA(150mL x3)萃取。用盐水(200mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-三甲基-锡烷(209mg,粗)，为棕色油状物，不经进一步纯化用于下一步。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝299.3。
步骤2.N-[[2-[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯的制备
向N-[(2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(100mg,340.43μmol)在二噁烷(2mL)中的溶液中加入[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-三甲基-锡烷(202.2mg,680.7μmolμmol)和Pd(PPh3)2Cl2(23.9mg,34.04μmol)。用N2吹扫该混合物3次，然后在100℃在N2气氛中搅拌12h。用H2O(20mL)稀释该反应混合物，用EA(30mL x 3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到残余物，通过柱色谱法纯化(SiO2,石油醚/乙酸乙酯＝10:1–1:1)，得到N-((2-(6-(氮杂环丁烷-1-基)吡啶-2-基)-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(70mg,173.45μmol,51％收率)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝392.4；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝9.22(s,1H),8.68(d,J＝8.8Hz,1H),8.33(d,J＝8.4Hz,1H),7.98(d,J＝7.2Hz,1H),7.93(s,1H),7.72-7.61(m,1H),6.43(d,J＝8.4Hz,1H),4.68(d,J＝4.8Hz,2H),4.18-4.14(m,4H),2.18(s,2H),1.50(s,9H)ppm。
步骤3.[2-[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲胺的制备
在0℃向N-((2-(6-(氮杂环丁烷-1-基)吡啶-2-基)-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(70mg,178.82μmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。将该混合物在25℃搅拌2h。将该反应混合物倾入饱和NaHCO3水溶液(30mL)，用EA(30mL x 3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到[2-[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲胺(60mg,粗)，为黄色固体，不经进一步纯化用于下一步。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝292.4。
步骤4.N-[[2-[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]-1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,16-苯并氧杂噻庚因-8-甲酰胺(1)的制备
向1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酸(24.94mg,102.97μmol)在DCM(1mL)中的溶液中加入EDCI(21.38mg,111.55μmol)、HOBt(15.07mg,111.55μmol)和DIEA(33.27mg,257.42μmol)。然后加入[2-[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲胺(25mg,85.81μmol)。将该混合物在25℃搅拌2h。用H2O(20mL)稀释该反应混合物，用EA(30mL*3)萃取。用盐(30mL)水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到残余物，通过制备型-TLC(SiO2,DCM:MeOH＝15:1)纯化，得到粗产物。然后通过制备型-HPLC(0.1％ FA添加剂)进一步纯化粗产物。减压浓缩洗脱液以除去MeCN，冻干残余物，得到N-[[2-[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]-1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,16-苯并氧杂噻庚因-8-甲酰胺(10.21mg,19.21μmol,22％收率)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z＝[M+H]+＝261.9.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ＝9.33(s,1H),8.69-8.63(m,2H),8.62-8.57(m,1H),8.39(s,1H),8.24(d,J＝2.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.87(d,J＝7.2Hz,1H),7.73-7.65(m,2H),6.54(d,J＝7.6Hz,1H),5.07(s,2H),4.95(s,2H),4.39-4.34(m,2H),4.17-4.15(m,4H),3.58-3.53(m,2H),2.53-2.40(m,2H)ppm。
使用与用于制备实施例2的那些类似的标准化学操作和方法制备表2中的下列化合物。
表2.本发明的化合物
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实施例3.N-[[2-[6-(氮杂环丁烷-1-基)-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]-1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酰胺
步骤1.(6-氟-2-吡啶基)-三甲基-锡烷的制备
向2-溴-6-氟-吡啶(500mg,2.84mmol)在二噁烷(5mL)中的混合物中加入三甲基(三甲基甲锡烷基)锡烷(2.79g,8.52mmol)和Pd(PPh3)4(328.31mg,284.11μmol)。用N2吹扫该混合物1min，然后在100℃搅拌2h。加入水(20mL)，用EtOAc(20mL x 2)萃取该混合物。用盐水(30mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩滤液，得到(6-氟-2-吡啶基)-三甲基-锡烷(730mg,粗)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z＝[M+H]+＝261.9。
步骤2.N-[[2-(6-氟-2-吡啶基)-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯的制备
向N-[(2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(300mg,1.02mmol)和6-氟-2-吡啶基)-三甲基-锡烷(530.85mg,2.04mmol)在二噁烷(6mL)中的混合物中加入Pd(PPh3)2Cl2(71.68mg,102.13μmol)，用N2吹扫该混合物1min。将得到的混合物在110℃搅拌16h。然后将该反应混合物倾入饱和KF(30mL)，搅拌30min，用EtOAc(30mL x 2)萃取该混合物。用盐水(40mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩滤液。通过柱色谱法纯化该反应混合物(SiO2,PE:EtOAc＝20:1-1:1)，得到N-[[2-(6-氟-2-吡啶基)-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(230mg,649.03μmol,64％收率)，为黄色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝355.1.
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝9.26(s,1H),8.63-8.58(m,2H),8.41-8.39(m,1H),8.04-7.98(m,1H),7.94(s,1H),7.09-7.06(m,1H),5.49(br s,1H),4.69(br d,J＝5.2Hz,2H),1.50(s,9H)ppm。
步骤3.[2-(6-氟-2-吡啶基)-1,6-萘啶-7-基]甲胺的制备
将N-[[2-(6-氟-2-吡啶基)-1,6-萘啶-7-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(220mg,620.81μmol)在HCl/二噁烷(2mL)中的混合物在25℃搅拌1hr。蒸发该混合物至干，将残余物与MTBE(20mL x 2)一起研磨。过滤该混合物，蒸发滤饼至干，得到[2-(6-氟-2-吡啶基)-1,6-萘啶-7-基]甲胺(180mg,粗,HCl)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝255.1。
步骤4.N-[[2-(6-氟-2-吡啶基)-1,6-萘啶-7-基]甲基]-1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酰胺的制备
向[2-(6-氟-2-吡啶基)-1,6-萘啶-7-基]甲胺(180mg,619.15μmol)和1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酸(180mg,0.743mmol)在DCM(2mL)中的混合物中加入DIEA(320.08mg,2.48mmol)、EDCI(178mg,0.928mmol)和HOBt(125.49mg,928.72μmol)。将该混合物在25℃搅拌1hr。将该混合物倾入水(20mL)，用EA(10.0mL x 3)萃取。用盐水(20.0mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发滤液至干。通过制备型-HPLC(0.1％ FA条件)纯化残余物，真空浓缩洗脱液以除去MeCN。冻干残余物，得到N-[[2-(6-氟-2-吡啶基)-1,6-萘啶-7-基]甲基]-1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酰胺(253mg,0.528mmol,85％收率)，为白色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝479.0.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.66-9.61(m,1H),9.45(d,J＝0.8Hz,1H),8.75-8.72(m,1H),8.54-8.49(m,3H),8.26-8.26(m,1H),8.25-8.17(m,1H),7.84(s,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.39-7.36(m,1H),4.97(s,2H),4.83(d,J＝5.6Hz,2H),4.23-4.21(m,2H),3.68-3.66(m,2H)ppm。
步骤5.N-[[2-[6-[(2R)-2-甲基吗啉-4-基]-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]-1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酰胺(37)的制备
向N-[[2-(6-氟-2-吡啶基)-1,6-萘啶-7-基]甲基]-1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酰胺(20mg,0.0418mmol)和(2R)-2-甲基吗啉；盐酸盐(17.26mg,125.39μmol)在DMSO(1mL)中的混合物中加入DIEA(27.0mg,0.209mmol)。将该混合物在120℃搅拌16h。然后将该混合物倾入饱和NaHCO3(20mL)，用EA(10.0mL x 3)萃取。用盐水(20.0mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发滤液至干。通过制备型-HPLC(柱:Shim-pack C18 150*25*10um；流动相:[水(0.225％FA)-ACN]；B％:38％-58％,10min)纯化残余物，真空浓缩洗脱液以除去MeCN。冻干残余物，得到N-[[2-[6-[(2R)-2-甲基吗啉-4-基]-2-吡啶基]-1,6-萘啶-7-基]甲基]-1,1-二氧代-3,5-二氢-2H-4,1λ6-苯并氧杂噻庚因-8-甲酰胺(15.89mg,26.24μmol,63％收率,FA)，为黄色固体。
LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝560.3.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.65-9.62(m,1H),9.40(s,1H),8.68-8.61(m,2H),8.54(d,J＝2.0Hz,1H),8.46(s,1H),8.28-8.25(m,1H),7.92(d,J＝7.2Hz,1H),7.81(s,1H),7.77-7.73(m,2H),7.03(d,J＝8.4Hz,1H),4.98(s,2H),4.82(d,J＝5.6Hz,2H),4.30-4.22(m,4H),3.99-3.96(m,1H),3.70-3.58(m,4H),2.94-2.87(m,1H),2.62-2.56(m,1H),1.22(d,J＝6.0Hz,3H)ppm。
使用与用于制备实施例3的那些类似的标准化学操作和方法制备表3中的下列实施例。
表3.本发明的化合物
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实施例4.N-((2-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-1,6-萘啶-7-基)甲基)-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酰胺1,1-二氧化物
步骤1:4-甲基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪的制备
将Pd(dppf)Cl2(32.1mg,0.0448mmol)和AcOK(129mg,1.32mmol)加入到4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(134mg,0.526mmol)和8-溴-4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪(100mg,0.438mmol)在二噁烷(2mL)中的溶液中。将该反应混合物在80℃搅拌2h。用H2O(20mL)稀释该反应混合物，用EA(20mL x 3)萃取。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到标题化合物(125mg,粗)，为棕色油状物。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝276.1。
步骤2:((2-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将N-[(2-氯-1,6-萘啶-7-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.340mmol)、4-甲基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪(122mg,0.443mmol)、K3PO4(217mg,1.02mmol)、[1,1′-双(二-叔丁基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(22.2mg,0.340mmol)在二噁烷(1mL)和H2O(0.3mL)中的混合物脱气，用N2吹扫3次。将该混合物在80℃搅拌2h。用H2O(10mL)稀释该反应混合物，用EA(10mL x 3)萃取。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到残余物。通过反相HPLC(0.1％ FA添加剂)纯化残余物。减压浓缩级分，以除去MeCN，然后用EA(50mL x 3)除去。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩，得到标题化合物(100mg,0.205mmol)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝407.3.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.30(s,1H),8.48(d,J＝8.8Hz,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(s,1H),7.63-7.58(m,1H),7.04-7.02(m,1H),6.94-6.90(m,1H),6.87-6.81(m,1H),4.43(d,J＝5.6Hz,2H),4.35-4.27(m,2H),3.34-3.33(m,2H),2.91(s,3H),1.43(s,9H)ppm。
步骤3:(2-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-1,6-萘啶-7-基)甲胺盐酸盐的制备
将HCl/二噁烷(4N,750uL)加入到((2-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-1,6-萘啶-7-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg,0.221mmol)在二噁烷(1mL)中的溶液中。将该反应混合物在25℃搅拌1hr。减压浓缩该反应混合物。用MTBE(5mL x 2)洗涤得到的残余物，过滤，真空干燥，得到标题化合物(70mg,0.204mmol)，为棕色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝307.2。
步骤4:N-((2-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-1,6-萘啶-7-基)甲基)-3,5-二氢-2H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酰胺1,1-二氧化物(58)的制备
将EDCI(25.2mg,0.131mol)、HOBt(17.7mg,0.131mmol)、DIEA(76.2uL,0.438mmol)和(2-(4-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-1,6-萘啶-7-基)甲胺盐酸盐(30mg,0.0875mmol)加入到2,3-二氢-5H-苯并[e][1,4]氧杂噻庚因-8-甲酸1,1-二氧化物(25.4mg,0.105mmol)在DCM(0.5mL)中的溶液中。将该反应混合物在25℃搅拌2h。用H2O(5mL)稀释该反应混合物，用DCM(5mL x 3)萃取。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，减压浓缩。通过反相HPLC(0.1％ FA条件)纯化得到的残余物。减压浓缩该溶液，以除去MeCN，冻干，得到标题化合物(14.2mg,0.0257mmol)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝531.2.1H NMR(400MHz,CD3OD)δ＝9.30(s,1H),8.64-8.59(m,1H),8.48(d,J＝8.8Hz,1H),8.22-8.20(m,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,1H),7.93(s,1H),7.63(d,J＝7.6Hz,1H),7.01-6.92(m,2H),6.88-6.83(m,1H),5.04(s,2H),4.92(s,2H),4.35-4.31(m,4H),3.53-3.50(m,2H),3.34(d,J＝4.4Hz,2H),2.97-2.92(m,3H)ppm。
使用与用于制备实施例4那些类似的标准化学操作和方法制备表4A中的下列实施例。
表4A.本发明的化合物
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使用类似于上述使用标准化学操作和方法制备表4B中的下列实施例。
表4B.本发明的化合物
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实施例5.BRM和BRG-1的ATP酶催化活性的测定
通过使用ADP-GloTM(Promega,V9102)的体外生化测定来测量BRM或BRG-1的ATP酶催化活性。一旦反应完成，则分两步进行ADP-GloTM激酶测定。第一个步骤是耗尽反应体系中任何未消耗的ATP。第二个步骤是将反应产物ADP转化为ATP，其将被荧光素酶利用以产生发光并被发光读出器如Envision检测到。
测定反应混合物(10μL)包含30nM BRM或BRG-1、20nM鲑精DNA(来自Invitrogen,UltraPureTMSalmon Sperm DNA Solution,目录号15632011)以及400μM ATP于ATP酶测定缓冲液中，所述缓冲液包含20mM Tris,pH 8、20mM MgCl2、50mM NaCl、0.1％ Tween-20和1mM新鲜DTT(PierceTMDTT(二硫苏糖醇),目录号20290)。反应通过将2.5μL ATP酶溶液加入到低体积白色Proxiplate-384+平板(PerkinElmer,目录号6008280)上的2.5μL ATP/DNA溶液中引发，并在室温下孵育1小时。然后，在加入试剂盒中提供的5μL ADP-GloTM试剂后，将该反应体系在室温下孵育40分钟。然后，将试剂盒中提供的10μL激酶检测试剂加入以将ADP转化为ATP，并且将该反应体系在室温下孵育60分钟。最终，使用例如Envision这样的平板读数光度计收集发光测量值。
BRM和BRG-1由具有纯度大于90％的high five昆虫细胞系合成。来自本文所述的ATP酶催化活性测定的IC50数据如下表5A和5B中所示。
表5A.本发明化合物的BRM和BRG-1抑制数据
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*比率为BRG1 IC50(μM)除以BRM IC50(μM)产生的数值。
表5B.本发明化合物的BRM和BRG-1抑制数据
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实施例6.化合物A的合成
BRG1/BRM抑制剂化合物A具有如下结构:
如下方案1中所示合成化合物A。
方案1.化合物A的合成
通过使用上述ADP-GloTM(Promega,V9102)的体外生化测定法测定在化合物A存在下BRM或BRG-1的ATP酶催化活性。发现化合物A在该测定中对BRM具有10.4nM的IC50，对BRG1具有19.3nM的IC50。
实施例7.BRG1/BRM ATP酶抑制对眼色素层黑色素瘤和血液癌症细胞系生长的作用
方法：将眼色素层黑色素瘤细胞系(92-1,MP41,MP38,MP46)、前列腺癌细胞系(LNCAP)、肺癌细胞系(NCI-H1299)和无限增殖化胚肾细胞系(HEK293T)在含有生长培养基的96孔板中铺板(参见表6)。将BRG1/BRM ATP酶抑制剂化合物A溶于DMSO，并且在铺板时以0至10微摩尔的浓度梯度加入到细胞中。将细胞在37摄氏度下孵育3天。处理3天后，从细胞中除去培养基，并且向细胞中加入30微升的TrypLE(Gibco)，持续10分钟。使细胞与板分离并且通过添加170微升的生长培养基重新悬浮。对来自两个DMSO处理的对照孔的细胞进行计数，并在37摄氏度下将实验开始时铺板的初始细胞数重新在包含新鲜化合物的板中再铺板4天。在第7天，如上所述收获细胞。在第3天和第7天，通过添加Cell-titer glo(Promega)测量相对细胞生长，并在Envision平板读出器(Perkin Elmer)上测量发光。使用GraphpadPrism计算每个细胞系的生长被抑制50％的浓度(GI50)，并且如下绘图。对于多发性骨髓瘤细胞系(OPM2,MM1S,LP1)、ALL细胞系(TALL1,JURKAT,RS411)、DLBCL细胞系(SUDHL6,SUDHL4,DB,WSUDLCL2,PFEIFFER)、AML细胞系(OCIAML5)、MDS细胞系(SKM1)、卵巢癌细胞系(OV7,TYKNU)、食管癌细胞系(KYSE150)、横纹肌样肿瘤系(RD,G402,G401,HS729,A204)、肝癌细胞系(HLF,HLE,PLCRPF5)和肺癌细胞系(SW1573,NCIH2444)，可以使用如下修改实施上述方法：将细胞在96孔板中铺板，第二天，将BRG1/BRM ATP酶抑制剂化合物A溶于DMSO，并以0至10微摩尔的浓度梯度添加到细胞中。在第3天和第7天的细胞分裂时，使细胞分裂入新的96孔板，并在重新铺板后4小时加入新鲜化合物。
表6列出了测试的细胞系和所用的生长培养基。
表6.细胞系和生长培养基
细胞系 来源 生长介质
92-1 SIGMA RPMI1640+20％FBS
A204 ATCC McCoy's5A+10％FBS
DB ATCC RPMI1640+10％FBS
G401 ATCC McCoy's5A+10％FBS
G402 ATCC McCoy's5A+10％FBS
HEK293T ATCC DMEM+10％FBS
HLE JCRB DMEM+10％FBS
HLF JCRB DMEM+10％FBS
HS729 ATCC DMEM+10％FBS
JURKAT ATCC RPMI1640+10％FBS
KYSE150 DSMZ RPMI1640/Ham'sF12+10％FBS
LNCAP ATCC RPMI1640+10％FBS
LP1 DSMZ IMDM+20％FBS
MM1S ATCC RPMI1640+10％FBS
MP38 ATCC RPMI1640+20％FBS
MP41 ATCC RPMI1640+20％FBS
MP46 ATCC RPMI1640+20％FBS
NCIH1299 ATCC RPMI1640+10％FBS
NCIH2444 ATCC RPMI1640+20％FBS
OCIAML5 DSMZ alpha-MEM+20％FBS+10ng/mlGM-CSF
OPM2 DSMZ RPMI1640+10％FBS
OV7 ECACC DMEM/Ham's F12(1:1)+2mM谷氨酰胺+10％FBS+0.5ug/ml氢化可的松+10ug/ml胰岛素
PFEIFFER ATCC RPMI1640+10％FBS
PLCPRF5 ATCC EMEM+10％FBS
RD ATCC DMEM+10％FBS
RS411 ATCC RPMI1640+10％FBS
SKM1 JCRB RPMI1640+10％FBS
SUDHL4 DSMZ RPMI1640+10％FBS
SUDHL6 ATCC RPMI1640+20％FBS
SW1573 ATCC DMEM+10％FBS
TALL1 JCRB RPMI1640+10％FBS
TYKNU JCRB EMEM+20％FBS
WSUDLCL2 DSMZ RPMI1640+10％FBS
结果：如图1中所示，眼色素层黑色素瘤和血液癌症细胞系对BRG1/BRM抑制比其他测试细胞系更敏感。对眼色素层黑色素瘤和血液癌症细胞系的抑制维持至第7天。
实施例8.BRG1/BRM抑制剂与临床PKC和MEK抑制剂在眼色素层黑色素瘤细胞系中的比较
方法：在生长培养基的存在下，将眼色素层黑色素瘤细胞系92-1或MP41在96孔板中铺板(参见表5)。将BAFATP酶抑制剂(化合物A)、PKC抑制剂(LXS196；MedChemExpress)或MEK抑制剂(司美替尼；Selleck Chemicals)溶于DMSO，并在铺板时以0至10微摩尔的浓度梯度添加到细胞中。将细胞在37摄氏度下孵育3天。处理3天后，用细胞滴度发光法(Promega)测量细胞生长，并在Envision平板读出器(Perkin Elmer)上读取发光。
结果：如图2A和图2B中所示，化合物A显示与临床PKC和MEK抑制剂对眼色素层黑色素瘤细胞相当的生长抑制。此外，发现化合物A比临床PKC和MEK抑制剂产生更快起效的抑制作用。
实施例9.化合物B的合成
BRG1/BRM抑制剂化合物B具有如下结构:
如下方案2张所示合成化合物B。
方案2：化合物B的合成
(S)-1-(甲基磺酰基)-N-(4-(甲硫基)-1-氧代-1-((4-(3-(吡啶-4-基)苯基)噻唑-2-基)氨基)丁-2-基)-1H-吡咯-3-甲酸酯(化合物B)的制备
向(2S)-2-氨基-4-甲基硫烷基-N-[4-[3-(4-吡啶基)苯基]噻唑-2-基]丁酰胺(2g,4.75mmol,HCl盐)和1-甲基磺酰基吡咯-3-甲酸(898.81mg,4.75mmol)在DMF(20mL)中的混合物中加入EDCI(1.37g,7.13mmol)、HOBt(962.92mg,7.13mmol)和DIEA(2.46g,19.00mmol,3.31mL)，将该混合物在25℃搅拌3小时。将该混合物倾入H2O(100mL)，通过过滤采集沉淀。将固体在MeOH(20mL)中研磨，通过过滤采集沉淀。将固体溶于DMSO(10mL)，然后将该混合物倾入MeOH(50mL)，过滤采集形成的沉淀，冻干，得到化合物B(2.05g,3.66mmol,77.01％收率)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z[M+H]+＝555.9.1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.49(s,1H),8.68-8.66(m,2H),8.46(d,J＝7.2Hz,1H),8.31-8.30(m,1H),8.02-8.00(m,1H),7.94-7.96(m,1H),7.83(s,1H),7.73-7.74(m,3H),7.61-7.57(m,1H),7.31-7.29(m,1H),6.79-6.77(m,1H),4.74-4.69(m,1H),3.57(s,3H),2.67-2.53(m,2H),2.13-2.01(m,5H).SFC:AS-3-MeOH(DEA)-40-3mL-35T.lcm,t＝0.932min,ee％＝100％.
实施例10.BRG1/BRM ATP酶抑制对眼色素层黑色素瘤、血液癌症、前列腺癌、乳腺癌和尤因肉瘤细胞系生长的影响
方法：也如上文中所述用化合物B测试上述实施例7中所述的所有细胞系。此外，还对以下细胞系进行了如下测试。简言之，对于尤因肉瘤细胞系(CADOES1,RDES,SKES1)、视网膜母细胞瘤细胞系(WERIRB1)、ALL细胞系(REH)、AML细胞系(KASUMI1)、前列腺癌症细胞系(PC3,DU145,22RV1)、黑素瘤细胞系(SH4,SKMEL28,WM115,COLO829,SKMEL3,A375)、乳腺癌细胞系(MDAMB415,CAMA1,MCF7,BT474,HCC1419,DU4475,BT549)、B-ALL细胞系(SUPB15)、CML细胞系(K562,MEG01、Burkitt淋巴瘤细胞系(RAMOS2G64C10,DAUDI)、套膜细胞淋巴瘤细胞系(JEKO1,REC1)、膀胱癌细胞系(HT1197)和肺癌细胞系(SBC5)，上述方法进行了以下修改：将细胞在96-孔板中铺板，第二天，将BRG1/BRM ATP酶抑制剂化合物B溶于DMSO，并以0至10微摩尔的浓度梯度添加到细胞中。在第3天和第7天的细胞分裂时，使细胞分裂成入新的96孔板，并在重新铺板后4小时加入新鲜化合物。
表7列出了测试细胞系和所用的生长培养基。
表7.细胞系和生长培养基
细胞系 来源 生长介质
22RV1 ATCC RPMI1640+10％FBS
A375 ATCC DMEM+10％FBS
BT474 ATCC Hybricare medium+1.5g/L碳酸氢钠+10％FBS
BT549 ATCC RPMI1640+0.023IU/ml胰岛素+10％FBS
CADOES1 DSMZ RPMI1640+10％FBS
CAMA1 ATCC EMEM+10％FBS
COLO829 ATCC RPMI1640+10％FBS
DAUDI ATCC RPMI1640+10％FBS
DU145 ATCC EMEM+10％FBS
DU4475 ATCC RPMI1640+10％FBS
HCC1419 ATCC RPMI1640+10％FBS
HT1197 ATCC EMEM+10％FBS
JEKO1 ATCC RPMI1640+20％FBS
K562 ATCC IMDM+10％FBS
KASUMI1 ATCC RPMI1640+10％FBS
MCF7 ATCC EMEM+0.01mg/ml牛胰岛素+10％FBS
MDAMB415 ATCC Leibovitz's L-15+2mM L-谷氨酰胺+10mcg/ml胰岛素+10mcg/ml谷胱甘肽+15％FBS
MEG01 ATCC RPMI1640+10％FBS
PC3 ATCC F-12K+10％FBS
RAMOS2G64C10 ATCC RPMI1640+10％FBS
RDES ATCC RPMI1640+15％FBS
REC1 ATCC RPMI1640+10％FBS
REH ATCC RPMI1640+10％FBS
SBC5 JCRB EMEM+10％FBS
SH4 ATCC DMEM+10％FBS
SKES1 ATCC McCoy's 5A+15％FBS
SKMEL28 ATCC EMEM+10％FBS
SKMEL3 ATCC McCoy's 5A+15％FBS
SUPB15 ATCC IMDM+4mM L-谷氨酰胺+1.5g/L碳酸氢钠+0.05mM 2-巯基乙醇+20％FBS
WERIRB1 ATCC RPMI1640+10％FBS
WM115 ATCC EMEM+10％FBS
结果：如图3中所示，眼色素层黑色素瘤、血液癌症、前列腺癌、乳腺癌和尤因肉瘤细胞系对BRG1/BRM抑制比其他受试细胞系更敏感。对眼色素层黑色素瘤、血液癌症、前列腺癌、乳腺癌和尤因肉瘤细胞系的抑制作用持续到第7天。
实施例11.BRG1/BRM ATP酶抑制对癌细胞系生长的作用
方法：如前所述(“High-throughput identification of genotype-specificcancervulnerabilities in mixtures of barcoded tumor cell lines”,Yu等人,NatureBiotechnology 34,419-423,2016)，使用以下修改进行汇集的细胞活力测定。细胞系得自Cancer Cell Line Encyclopedia(CCLE)藏品，并适应无酚红的RPMI-1640培养基，其中补充了10％热灭活胎牛血清(FBS)，以便使独特的感染和汇集方案适用于如此庞大的一系列细胞系。执行慢病毒旋转感染方案以在每个细胞系中导入24个核苷酸的条形码，使用杀稻瘟菌素(blasticidin)作为选择标记，对于所有细胞系的估计感染倍数(MOI)为1。然后，将超过750个稳定打条形码的PRISM癌症细胞系按照倍增时间汇集在一起，每池25个。对于筛选执行，不使用如前所述(Yu等人)在每个孔中铺板25个细胞系汇总，而是分别使用T25烧瓶(100000个细胞/烧瓶)或6孔板(50000个细胞/孔)将所有粘附细胞或所有悬浮细胞系汇总一起铺板。用DMSO或化合物从10μM的最高浓度开始，以一式三份的8点3倍剂量响应处理细胞。作为测定稳定性的对照，用两种先前验证的化合物即泛-Raf抑制剂AZ-628和蛋白酶体抑制剂硼替佐米平行处理细胞，最高浓度分别为2.5μM和0.039μM。
用化合物处理3天后，裂解细胞，提取基因组DNA，通过PCR扩增条形码，并通过Next-Generation Sequencing进行检测。通过将处理样品中的细胞系特异性条形码的计数与DMSO对照和第0天对照中的细胞系特异性条形码计数进行比较来确定细胞活力。拟合每个细胞系的剂量-响应曲线并且计算相应的曲线下面积(AUC)，并将其与所有细胞系的中值AUC进行比较(图4)。AUC小于中值的细胞系被视为最敏感的。
实施例12.BRG1/BRM ATP酶抑制剂对眼色素层黑色素瘤细胞系的作用。
方法：将眼色素层黑色素瘤细胞系(92-1,MP41,MP38,MP46)和非小细胞肺癌细胞(NCIH1299)在含有生长培养基的96孔板中铺板(参见表6)。将BRG1/BRM ATP酶抑制剂化合物67溶于DMSO中并在铺板时以0至10微摩尔的浓度梯度添加到细胞中。将细胞在37℃下孵育3天。处理3天后，用细胞滴度发光法(Promega)测量细胞生长，并在Envision平板读出器(Perkin Elmer)上读取发光。
结果：如图5中所示，化合物B在眼色素层黑色素瘤细胞系中导致有效的生长抑制。
实施例13.BRG1/BRM抑制剂与临床PKC和MEK抑制剂在眼色素层黑色素瘤细胞中的比较
方法：在生长培养基的存在下，将眼色素层黑色素瘤细胞系92-1或MP41在96孔板中铺板(参见表6)。将BAF ATP酶抑制剂(化合物B)、PKC抑制剂(LXS196；MedChemExpress)和MEK抑制剂(司美替尼；Selleck Chemicals)溶于DMSO，并在铺板时以0至10微摩尔的浓度梯度添加到细胞中。将细胞在37℃下孵育3天。处理3天后，用细胞滴度发光法(Promega)测量细胞生长，并在Envision平板读出器(Perkin Elmer)上读取发光。
结果：如图6A和图6B中所示，化合物B与临床PKC和MEK抑制剂相比对眼色素层黑色素瘤细胞的生长抑制显示出更有效的作用。此外，发现化合物B比临床PKC和MEK抑制剂更快地启动生长抑制。
实施例14.BRG1/BRM ATP酶抑制剂有效地抑制PKC抑制剂抗性细胞的生长
方法：MP41眼色素层黑色素瘤细胞通过在包含递增浓度的至多1微摩尔的化合物的生长培养基中长期培养而对PKC抑制剂(LXS196；MedChemExpress)产生抗性(参见表6)。3个月后，在如上述实施例9中所述的7天生长抑制测定中测试亲代MP41细胞和PKC抑制剂(PKCi)-抗性细胞对PKC抑制剂(LXS196)或BRG1/BRM ATP酶抑制剂(化合物B)的敏感性。
结果：尽管PKCi抗性细胞可以在更高浓度的LXS196下比亲代MP41细胞系耐受生长(图7A)，但是BRG1/BRM ATP酶抑制剂(化合物B)仍然导致PKCi抗性和亲代细胞系的强烈生长抑制(图7B)。PKCi抗性细胞对化合物B比亲代MP41细胞更敏感(图7B)。
实施例15.化合物C的合成
步骤1.6-氟吡啶-2-羰基氯(中间体B)的制备
向冷却的(0℃)6-氟吡啶-2-甲酸(50.00g,354.36mmol)在二氯甲烷(500mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.26mL,3.54mmol)中的溶液中加入草酰氯(155.10mL,1.77mol)。草酰氯添加完成后，将该反应混合物温热至室温，再搅拌0.5h。真空浓缩该混合物，得到中间体B(56.50g)，为白色固体，不经进一步纯化用于下一步。
步骤2.2-氯-1-(6-氟-2-吡啶基)乙酮(中间体C)的制备
向冷却的(0℃)中间体B(56.00g,351.00mmol)在1,4-二噁烷(800mL)中的混合物中以滴加方式加入2M三甲基甲硅烷基重氮甲烷的己烷溶液(351mL)。将得到的反应混合物在25℃搅拌10h。随后用4M HCl的1,4-二噁烷溶液(500mL)使该反应混合物淬灭。搅拌2h后，真空浓缩反应溶液，得到油状物。用饱和NaHCO3水溶液(500mL)稀释残余物，用乙酸乙酯(200mL x 3)萃取。用盐水(300mL x 2)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到中间体C(35.50g)，为白色固体，直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝173.8.
步骤3.4-(6-氟-2-吡啶基)噻唑-2-胺(中间体E)的制备
在室温向中间体C(35.50g,204.53mmol)和硫脲(14.01g,184.07mmol)在MeOH(250mL)和H2O(250mL)的混合物中的溶液中加入NaF(3.56g,84.82mmol)。搅拌0.5h后，真空下部分浓缩该反应混合物以除去MeOH，用2M HCl水溶液将得到的溶液酸化至pH～3。15min后，用乙酸乙酯(200mL x 3)萃取该溶液，弃去有机层，用NaHCO3(500mL)碱化水相，搅拌30min，然后用乙酸乙酯(325mL*3)萃取，用盐水洗涤合并的有机层(225mL*3)，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。将残余物与石油醚(300mL)一起研磨，在25℃搅拌10min，过滤。真空干燥得到的固体，得到中间体E(28.00g,143.43mmol,70.13％收率,100％纯度)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝195.8.；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.00-7.96(m,1H),7.72(d,J＝7.2Hz,1H),7.24(s,1H),7.16(s,2H),7.02(d,J＝8.0Hz,1H)。
步骤4.N-[2-[[4-(6-氟-2-吡啶基)噻唑-2-基]氨基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(中间体G)的制备
向N-Boc-甘氨酸(5.92g,33.81mmol)、HATU(12.86g,33.81mmol)和DIEA(15.89g,122.94mmol,21.41mL)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入中间体E(6.00g,30.74mmol)。搅拌2h后，浓缩该反应混合物，随后用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(60mL x 4)萃取。用盐水(100mL x 2)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到残余物。将残余物与1:1石油醚和MeOH的混合物(40mL)一起研磨。在25℃搅拌20min后，过滤该混悬液，用MTBE(20mL)洗涤滤饼，真空干燥，得到中间体G(7.7g,21.63mmol,70.4％收率,99.0％纯度)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝353.1.
步骤5.氯化2-((4-(6-氟吡啶-2-基)噻唑-2-基)氨基)-2-氧代乙-1-铵(中间体H)的制备
将中间体G(5.40g,15.32mmol)在4M HCl的1,4-二噁烷溶液(35mL)中的溶液在25℃搅拌1.5h。真空浓缩该混合物，得到中间体H(4.42g)，为白色固体，不经进一步纯化用于直接用于下一步。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝252.9。
步骤6. 1-叔丁基-N-[2-[[4-(6-氟-2-吡啶基)噻唑-2-基]氨基]-2-氧代-乙基]吡咯-3-甲酰胺(中间体J)的制备
向中间体H(3.00g,10.39mmol)、1-叔丁基吡咯-3-甲酸(1.74g,10.39mmol)和DIEA(6.71g,51.95mmol,9.05mL)在二氯甲烷(40mL)中的溶液中依次加入HOBt(1.68g,12.47mmol)和EDCI(2.39g,12.47mmol)。搅拌4h后，真空浓缩该混合物。用水(250mL)稀释残余物，用乙酸乙酯(200mL x 3)萃取。用盐水(300mL x 3)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。将得到的固体与1:1的MTBE/乙酸乙酯混合物(400mL)一起研磨，30min后，过滤该混悬液。用MTBE(85mL x 3)洗涤固体，然后真空干燥，得到中间体J(3.10g,7.64mmol,73.6％收率,99.0％纯度)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝402.3.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.40(s,1H),8.18-8.15(m,1H),8.09-8.08(m,1H),7.87-7.83(m,2H),7.52(s,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,1H),6.97(m,1H),6.47(s,1H),4.10(d,J＝5.6Hz,2H),1.49(s,9H).
步骤7. 1-(叔丁基)-N-(2-((4-(6-(cis-2,6-二甲基吗啉代)吡啶-2-基)噻唑-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡咯-3-甲酸酯(化合物C)的制备
向中间体J(0.100g,0.249mmol)在DMSO(1mL)中的溶液中加入DIEA(0.130mL,0.747mmol)和顺式-2,6-二甲基吗啉(0.057g,0.498mmol)，将该混合物在120℃搅拌。12h后，将该溶液冷却至室温，用MeOH(3mL)稀释反应混合物。通过制备型-HPLC(0.1％ TFA；柱:Luna C18 150*25 5u；流动相:[水(0.075％ TFA)-ACN]；B％:30％-60％，2min)纯化残余物。采集合适的级分，冻干，得到化合物C(0.079g,0.129mmol,51.94％收率,100％纯度)，为白色固体。LCMS(ESI)m/z:[M+H]+＝497.5；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.27(s,1H),8.17-8.14(m,1H),7.75(s,1H),7.63-7.59(m,1H),7.51(s,1H),7.25(d,J＝7.2Hz,1H),6.96(s,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,1H),6.47(s,1H),4.24(d,J＝12.4Hz,2H),4.08(d,J＝5.6Hz,2H),3.64-3.61(m,2H),2.44-2.38(m,2H),1.49(s,9H),1.18(d,J＝5.6Hz,6H)。
实施例16.BRG1/BRM ATPase抑制剂导致体内眼色素层黑色素瘤生长抑制
方法：给裸小鼠(Envigo)腋窝区域皮下植入5x106 92-1眼色素层黑色素瘤细胞。使肿瘤生长至～200mm3平均值，此时将小鼠分组并开始给药。给小鼠通过口腔管饲每天一次给予媒介物(20％2-羟丙基-β-环糊精)或递增剂量的化合物C。在3周的过程中测量肿瘤体积和体重，并根据体重调整剂量，以达到以mg/kg计的适当剂量。此时，处死动物，解剖肿瘤并成像。
结果：用化合物C以剂量依赖的方式导致肿瘤生长抑制，在最高(50mg/kg)剂量下观察到肿瘤消退。(图8A和图8B)。所有治疗均耐受良好，未观察到体重减轻(图8C)。
其他实施方案
尽管已经结合本发明的具体实施方案描述了本发明，但是应当理解本发明能够进一步修改，且本申请旨在涵盖本发明的任何变化、用途或通常遵循本发明的原理的改变并包括这类在本发明所属领域的已知或习惯实践范围内的对本公开的偏离，这些偏离可以适用于上文所述的基本特征，并在权利要求的范围内。
其他实施方案在权利要求中。

Claims (117)

1.具有如下结构的化合物：
其中
m为0、1、2或3；
n为0、1、2、3或4；
X1为-S-、-SO-、-SO2-或-S(O)(NH)-；
X2为N或CR8；
R1为氢或任选取代的C1-C6烷基；
每个R2和每个R3独立地为氢、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C1-C6杂烷基；
L1为任选取代的9-或10-元双环杂环基或任选取代的9-或10-元双环杂芳基；
L2不存在、为任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至14-元杂芳基或任选取代的4-至14-元杂环基；
R4为氢、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C3-C10环烷基；
R5为任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基或任选取代的氨基，且R6为氢、卤素、氰基、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C2-C6烯基或任选取代的C3-C10环烷基；或R5和R6与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至8-元杂环基；
每个R7独立地为任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、卤素、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C3-C10环烷基C1-C6烷基、任选取代的5-至14-元杂芳基、任选取代的4-至14-元杂环基、-N(R7A)2或-OR7A，其中每个R7A独立地为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C3-C10环烷基、任选取代的C6-C10芳基、任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基，或两个孪位R7A基团与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至10-元杂芳基或任选取代的4-至10-元杂环基；或两个孪位R7基团与所连接的原子一起合并成羰基；
R8为氢、卤素、任选取代的C1-C6烷基或任选取代的C3-C10环烷基；且
R9为氢或卤素；
或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5和R6与所连接的原子一起合并成任选取代的5-至8-元杂环基。
3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5和R6与所连接的原子一起合并成任选取代的7-元杂环基。
4.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为任选取代的C1-C6烷基。
5.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为任选取代的氨基。
6.权利要求1、4或5的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6为任选取代的C1-C6烷基。
7.权利要求1、4或5的化合物或其药学上可接受的盐，其中R6为卤素。
8.权利要求1-7任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中X1为SO2。
9.权利要求1-8任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中X2为CR8。
10.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中为如下结构的基团/>其中
Z为CH2、CO或C(RX2)2；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
每个RX2独立地为H或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
11.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中为如下结构的基团/>其中
Z为CH2、CO或C(RX2)2；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
每个RX2独立地为H或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
12.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中为如下结构的基团/>其中
Z为CH2、CO或C(RX2)2；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
每个RX2为独立地为氢或任选取代的C1-C6烷基；
p为0、1、2、3或4；且
q为0或1。
13.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中为如下结构的基团/>其中
为单键或双键；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
RX2为氢或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
14.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中为如下结构的基团/>其中
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
RX2为氢或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
15.权利要求1-14任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8为氢。
16.权利要求1-14任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8为卤素。
17.权利要求1-8任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中X2为N。
18.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中为如下结构的基团/>其中
Z为CH2、CO或C(RX2)2；
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；
每个RX2为独立地为氢或任选取代的C1-C6烷基；且
p为0、1、2、3或4。
19.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中为如下结构的基团/>其中
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基或C3-C8环烷基环，或两个邻位RX1基团与所连接的原子一起合并成C3-C8环烷基环；
p为0、1、2、3或4；且
q为0、1或2。
20.权利要求19的化合物或其药学上可接受的盐，其中为如下结构的基团/>其中
每个RX1独立地为任选取代的C1-C6烷基或卤素，或两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基；且
p为0、1、2、3或4。
21.权利要求10-14和18-20任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中至少一个RX1为任选取代的C1-C6烷基，或至少一个RX1为卤素。
22.权利要求10-14和18-21任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中至少两个孪位RX1基团与所连接的原子一起合并成羰基。
23.权利要求1-22任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为任选取代的9-或10-元双环杂芳基。
24.权利要求23的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为
其中
X3、X4、X5、X6、X7和X8各自独立地为N或CRL1；
每个RL1独立地为H、卤素、任选取代的C1-C6烷基；
A1是键合至–(C(R2)(R3))m-的键；且
A2是键合至L2的键。
25.权利要求24的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为
26.权利要求24的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为
27.权利要求24的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为
28.权利要求24的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为
29.权利要求24的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为
30.权利要求23的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为其中A1是键合至–(C(R2)(R3))m-的键；且A2是键合至L2的键。
31.权利要求1-30任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中L2为任选取代的5-至14-元杂芳基。
32.权利要求1-30任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
33.权利要求1-30任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
34.权利要求33的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
35.权利要求32的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
36.权利要求32的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
37.权利要求32的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
38.权利要求32的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
39.权利要求32的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
40.权利要求32的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
41.权利要求32的化合物或其药学上可接受的盐，其中-L2-(R7)n为如下结构的基团:
42.权利要求1-30任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中L2为任选取代的C6-C10芳基。
43.权利要求1-42任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1。
44.权利要求1-42任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为2。
45.权利要求1-42任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为3。
46.权利要求1-45任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为任选取代的C1-C6烷基。
47.权利要求1-46任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为任选取代的C1-C6杂烷基。
48.权利要求1-47任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为任选取代的4-至10-元杂环基。
49.权利要求48的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为任选取代的氮杂环丁烷基或任选取代的吗啉基。
50.权利要求1-49任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为任选取代的C3-C10环烷基。
51.权利要求50的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为任选取代的环丙基或任选取代的环丁基。
52.权利要求1-51任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为-N(R7A)2。
53.权利要求52的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7为任选取代的N-氮杂环丁烷基或任选取代的N-吗啉基。
54.权利要求1-53任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中两个孪位R7基团与所连接的原子一起合并成任选取代的4-至10-元杂环基。
55.权利要求1-54任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中至少一个R7为-OR7A。
56.权利要求52的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7A为任选取代的C1-6烷基。
57.权利要求1-42任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为0。
58.权利要求1-56任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中至少一个R7为环丙基、2,2-二氟环丙基、二氟甲氧基、2,6-二甲基吗啉-4-基、N-氮杂环丁烷基、3-氟环丁基、2-甲氧基乙基、乙氧基、甲氧基、2,2-二氟乙氧基、2,2-二氟乙基、三氟甲基、异丙基、甲基、乙酰基、氟、氯、1-甲基吡唑-3-基、二甲基氨基、N-甲基-N-(2-甲氧基乙基)-氨基、N-乙基-N-(2-甲氧基乙基)-氨基、N-(2-丙基)-N-(2-甲氧基乙基)-氨基、2-甲氧基乙基氨基、3-氮杂-8-氧杂-双环[4.3.0]壬-3-基、3-氮杂-7-氧杂-双环[4.3.0]壬-3-基、1-氟环丁-1-基、3-氟吡咯烷-1-基、3-甲氧基吡咯烷-1-基、氧杂环丁烷-3-基、N-甲基二氢吲哚-4-基、2,2-二氟-3-甲基环丙-1-基、3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基、3-甲氧基哌啶-1-基、1,2-二甲基-7-氮杂吲哚-4-基、1-甲基-7-氮杂吲哚-4-基、2,3-亚甲二氧基苯基、N-甲基-N-(3-氧杂环丁烷基)氨基、3-氧杂环丁烷氧基、1,1-二氟-5-氮杂螺[2.3]己-5-基、1-氟甲基-环丙基、N-(3-四氢呋喃基)甲基氨基、N-二氢吲哚基、N-1,4-氧杂氮杂庚环基、2-氟-2-丙基、1,1-二氟-2-丙基、2,2-二氟-1-甲基环丙-1-基、1-甲基环丙基、4,4-二氟哌啶-1-基、2-甲氧基乙氧基、3,3-二氟环丁-1-基、N-甲基-N-1-甲氧基丙-2-基氨基、1-甲氧基丙-2-基氨基、1-甲氧基乙基、4-甲基哌嗪基、3-甲基吗啉基、2,2-二氟丙氧基、3-甲氧基环丁基、甲基氨基、4-二甲基氨基-3,3-二氟哌啶基、4-甲基氨基-3,3-二氟哌啶基、3,3-二氟吡咯烷基、N-甲基-N-3-甲氧基环丁基氨基、1-甲基吡唑-5-基、6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基、环丙氧基、2,6-二甲基吡啶-4-基、2-甲基吡咯烷基、4-氧杂双环[4.1.0]庚-1-基、N-甲基-N-(2,6-二甲基四氢吡喃-4-基)氨基或N-甲基-N-3-甲基氧杂环丁烷-3-基甲基氨基。
59.权利要求1-58任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为氢。
60.化合物，选自化合物1-308及其药学上可接受的盐。
61.化合物，选自化合物309-856及其药学上可接受的盐。
62.权利要求1-61任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有至少5的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
63.权利要求1-61任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有至少7的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
64.权利要求1-61任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有至少10的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
65.权利要求1-61任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有至少15的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
66.权利要求1-61任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有至少20的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
67.权利要求1-61任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有至少25的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
68.权利要求1-61任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有至少30的BRG1 IC50与BRM IC50的比率。
69.药物组合物，包含权利要求1-68任一项的化合物和药学上可接受的赋形剂。
70.降低细胞中BAF复合物活性的方法，该方法包括使所述细胞接触有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
71.权利要求70的方法，其中BAF复合物在癌细胞中。
72.治疗有需要的受试者中BAF复合物相关病症的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
73.权利要求72的方法，其中BAF复合物相关病症为癌症或病毒感染。
74.抑制BRM的方法，该方法包括使细胞接触有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
75.权利要求73的方法，其中所述细胞为癌细胞。
76.治疗有需要的受试者中涉及BRG1功能缺失突变的病症的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
77.权利要求76的方法，其中涉及BRG1功能缺失突变的病症为癌症。
78.诱导细胞中细胞凋亡的方法，该方法包括使所述细胞接触有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
79.权利要求78的方法，其中所述细胞为癌细胞。
80.治疗有需要的受试者中癌症的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
81.权利要求71-80任一项的方法，其中所述癌症为非小细胞肺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、原发性不明原因癌、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌、食管胃癌、胰腺癌、肝胆癌、软组织肉瘤、卵巢癌、头颈癌、肾细胞癌、骨癌、非霍金奇淋巴瘤、小细胞肺癌、前列腺癌、胚胎癌、生殖细胞瘤、宫颈癌、甲状腺癌、唾液腺癌、胃肠道神经内分泌瘤、子宫肉瘤、胃肠道间质瘤、CNS癌症、胸腺瘤、肾上腺皮质癌、阑尾癌、小肠癌或阴茎癌。
82.权利要求81的方法，其中所述癌症为非小细胞肺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、原发性不明原因癌、神经胶质瘤、乳腺癌、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、子宫内膜癌或阴茎癌。
83.权利要求82的方法，其中所述癌症为非小细胞肺癌。
84.权利要求82的方法，其中所述癌症为软组织肉瘤。
85.治疗有需要的受试者中病毒感染的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
86.权利要求85的方法，其中所述病毒感染为逆转录病毒科、嗜肝DNA病毒科、黄病毒科、腺病毒科、疱疹病毒科、乳头状瘤病毒科、细小病毒科、微小病毒科、多瘤病毒科、副粘液病毒科或披膜病毒科的病毒感染。
87.治疗有需要的受试者中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
88.减少有需要的受试者中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症的肿瘤生长的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
89.抑制受试者中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症的转移进展的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
90.抑制受试者中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症的转移定殖的方法，该方法包括施用有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
91.降低黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症细胞中BRG1和/或BRM水平和/或活性的方法，该方法包括使所述细胞接触有效量的权利要求1-68任一项的化合物或权利要求69的药物组合物。
92.权利要求91的方法，其中所述细胞在受试者中。
93.权利要求87-92任一项的方法，其中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症为转移性的。
94.权利要求87-92任一项的方法，其中该方法还包括向所述受试者施用抗癌疗法或使所述细胞接触抗癌疗法。
95.权利要求94的方法，其中所述抗癌疗法为化疗剂或细胞毒性剂、免疫疗法、手术、放疗、热疗法或光凝固法或其组合。
96.权利要求95的方法，其中所述抗癌疗法为手术。
97.权利要求95的方法，其中所述抗癌疗法为化疗剂或细胞毒性剂。
98.权利要求97的方法，其中所述化疗剂或细胞毒性剂为抗代谢物、抗有丝分裂药、抗肿瘤抗生素、天冬酰胺-特异性酶、双膦酸盐、抗肿瘤药、烷化剂、DNA-修复酶抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂、皮质类固醇、脱甲基化剂、免疫调节剂、janus-相关激酶抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂或酪氨酸激酶抑制剂或其组合。
99.权利要求97或98的方法，其中一种或多种化疗剂或细胞毒性剂为达卡巴嗪、替莫唑胺、顺铂、曲奥舒凡、福莫司汀、IMCgp100、CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、促分裂原活化蛋白激酶抑制剂和/或蛋白激酶C抑制剂。
100.权利要求94-99任一项的方法，其中所述抗癌疗法和权利要求1-38任一项的化合物或权利要求39的药物组合物彼此在28天内施用，并且各自以一起有效治疗所述受试者的量施用。
101.权利要求87-100任一项的方法，其中所述受试者或癌症具有和/或已被鉴定为具有BRG1功能缺失突变。
102.权利要求87-101任一项的方法，其中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症对施用一种或多种化疗剂或细胞毒性剂未能响应或施用后进展。
103.权利要求87-102任一项的方法，其中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症为对一种或多种化疗剂具有抗性或预期对一种或多种化疗剂具有抗性。
104.权利要求102或103的方法，其中一种或多种化疗剂或细胞毒性剂为达卡巴嗪、替莫唑胺、顺铂、曲奥舒凡、福莫司汀、IMCgp100、CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、促分裂原活化蛋白激酶抑制剂和/或蛋白激酶C抑制剂。
105.权利要求87-104任一项的方法，其中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症为黑素瘤。
106.权利要求105的方法，其中所述黑素瘤为眼色素层黑色素瘤。
107.权利要求105的方法，其中所述黑素瘤为粘膜黑素瘤。
108.权利要求105的方法，其中所述黑素瘤为皮肤黑素瘤。
109.权利要求87-104任一项的方法，其中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症为血液癌症。
110.权利要求109的方法，其中所述血液癌症为多发性骨髓瘤、大细胞淋巴瘤、急性T细胞白血病、急性髓性白血病、骨髓增生异常综合征、免疫球蛋白Aλ骨髓瘤、弥漫性混合组织细胞和淋巴细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、急性成淋巴细胞白血病、弥漫性大细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。
111.权利要求87-104任一项的方法，其中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症为前列腺癌。
112.权利要求87-104任一项的方法，其中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症为乳腺癌。
113.权利要求112的方法，其中所述乳腺癌为ER阳性乳腺癌、ER阴性乳腺癌、三阳性乳腺癌或三阴性乳腺癌。
114.权利要求87-104任一项的方法，其中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症为骨癌。
115.权利要求114的方法，其中所述骨癌为尤因肉瘤。
116.权利要求87-104任一项的方法，其中黑素瘤、前列腺癌、乳腺癌、骨癌、肾细胞癌或血液癌症为肾细胞癌。
117.权利要求116的方法，其中所述肾细胞癌为小眼畸形转录因子(MITF)家族易位肾细胞癌。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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US9050345B2 (en) * 2013-03-11 2015-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolotriazines as potassium ion channel inhibitors
US9663502B2 (en) * 2013-12-20 2017-05-30 Lycera Corporation 2-Acylamidomethyl and sulfonylamidomethyl benzoxazine carbamates for inhibition of RORgamma activity and the treatment of disease
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