CN117298032A - 一种改变皮肤微生态的后生元面膜及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及面膜领域，具体的说，涉及一种改变皮肤微生态的后生元面膜及其制备方法，其组成成分的质量百分比为:酵美因:98.5‑99.5％；1,2‑己二醇:0.3‑0.8％；对羟基苯乙酮:0.3‑0.8％。本发明提供的面膜能够减少面部皮肤物种数量。在门水平上，该面膜能够使放线菌门、变形菌门和厚壁菌门相对丰度的总和增加，降低人们面部皮肤发生银屑病与其它皮肤炎症性疾病的几率。

Description

一种改变皮肤微生态的后生元面膜及其制备方法

技术领域

本发明涉及面膜领域，具体的说，涉及一种改变皮肤微生态的后生元面膜及其制备方法。

背景技术

后生元面膜是一种护肤产品，它利用了后生元的皮肤微生态制剂技术。后生元是经过灭活处理的益生菌，但仍保有高度生理活性，它耐热、耐酸、耐储存、耐加工，活性稳定，增强免疫的功能优于原活菌。在护肤领域，后生元可以促进皮肤表层有益菌的增长，抑制有害菌的繁殖，从而达到调节皮肤菌群平衡的目的，激活肌肤免疫力，增强皮肤屏障功能。虽然后生元面膜具有一定抑菌能力，但是如何在保证皮肤保持修复的前提下降低人们面部皮肤发生银屑病与其它皮肤炎症性疾病的几率是亟待解决的。鉴于此，我们提出一种改变皮肤微生态的后生元面膜及其制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种改变皮肤微生态的后生元面膜及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，一方面，本发明提供一种改变皮肤微生态的后生元面膜，其组成成分的质量百分比为:

酵美因: 98.5-99.5％；

1,2-己二醇: 0.3-0.8％；

对羟基苯乙酮: 0.3-0.8％。

另一方面，本发明提供一种后生元面膜的制备方法，所述的改变皮肤微生态的后生元面膜的制备方法为:

S1:制备酵美因；

S2:将酵美因投入乳化锅中，搅拌升温，保温，降温，加入提前溶解好1,2-己二醇、对羟基苯乙酮，搅拌，得到面膜液。

作为优选，所述酵美因的制备方法为：

S1.1:配种子培养基，灭菌，接入乳酸菌；

S1.2:恒温振荡培养一段时间；

S1.3:配发酵培养基，灭菌，将培养好的种子液接入发酵罐中，发酵过程控制pH和根据溶氧变化调节转速，恒温培养48h；

S1.4：发酵结束将发酵液进行过滤除杂，灭菌，制得酵美因。

作为优选,所述乳酸菌为干酪乳杆菌SM003，分类命名为：干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏编号：CGMCC NO.26537，2023年2月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

作为优选,所述S1.2中恒温振荡培养温度为35-39℃。

作为优选,所述S1.2中恒温振荡培养时间为16-20h。

作为优选,所述S2中搅拌升温至80-85℃。

作为优选,所述S2中保温时间为18-22min。

作为优选,所述S2中降温至53-56℃。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明提供的面膜能够减少面部皮肤物种数量。在门水平上，该面膜能够使放线菌门、变形菌门和厚壁菌门相对丰度的总和增加，降低人们面部皮肤发生银屑病与其它皮肤炎症性疾病的几率。在属水平上，该面膜能够降低链球菌属的相对丰度，间接保护皮肤不受到病原体的侵害。在种水平，该面膜能够增强表面葡萄球菌相对丰度，从而增强皮肤免疫能力，维持皮肤状态稳定。除此之外，该面膜还能够降低奥斯陆莫拉菌的相对丰度，使皮肤减少水分流失，保持水润状态。综上，从使用面膜的人面部皮肤菌群分析可以看出，该面膜是一款能够降低炎症性皮肤病发生几率，增强皮肤免疫力，改善干性皮肤状态，对皮肤具有保湿修复等功能的产品。

附图说明

图1为实施例1面部皮肤菌群OTU数目图；

图2为实施例1面部皮肤菌群多样性图(A)Chao 1指数(B)Shannon指数；

图3为实施例1门水平面部皮肤菌群丰度图；

图4为实施例1属水平面部皮肤菌群链球属丰度图；

图5为实施例1种水平面部皮肤菌群表面葡萄球菌丰度图；

图6为实施例1种水平面部皮肤菌群奥斯陆莫拉菌丰度图；

图7为实施例1弹性蛋白酶抑制率直方图；

图8为实施例1透明质酸酶抑制率直方图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。在本发明中，若非特指，所有设备和原料均可从市场购得或是本行业常用，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域常规方法。

实施例1

后生元面膜制备

面膜制备工艺：

(1)后生元酵美因的制备：配种子培养基，灭菌，接入乳酸菌(干酪乳杆菌SM003，分类命名为：干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏编号：CGMCC NO.26537，2023年2月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心)，37℃的恒温振荡培养16～20h。配发酵培养基，灭菌，将培养好的种子液接入发酵罐中，发酵过程pH控制在4.0～5.0，溶氧控制在20～30％，搅拌转速控制在200～400rpm，37℃恒温培养48h。发酵结束将发酵液进行过滤除杂，灭菌，制得酵美因。

(2)将酵美因投入乳化锅中，搅拌升温至80-85℃，保温20min，降温，温度降至55℃，加入提前溶解好1,2-己二醇、对羟基苯乙酮，搅拌，得到面膜液。

(3)面膜的配料及含量

表1面膜配原料及含量

原料名称	W/W％
		酵美因	99
1,2-己二醇	0.5
		对羟基苯乙酮	0.5

紧致功效测试：

测试原理：紧致功效生物化学法主要通过评估功效物质对弹性蛋白酶的抑制率来表征其紧致的功效。弹性蛋白酶是基质金属蛋白酶家族中最重要的酶，主要由成纤维细胞合成分泌，能够降解皮肤中的弹性蛋白导致皮肤老化。

设备：分析天平、全波长多功能酶标仪

试剂耗材：三羟甲基氨基甲烷(AR)；浓盐酸(GR)；弹性蛋白酶(30U/mg)；EGCG(没食子儿茶素)

样品：样品稀释成5％水溶液；阴性对照：纯水；阳性对照：EGCG溶液。

检测方法：

分别设置ABCD四组，每组设置3个平行。在96孔板中依次加入缓冲溶液、样品溶液、酶溶液以及底物，将96孔板放入一定温度的低温震荡水槽中，并开启震荡模式，待里面的溶液反应完全后，在410nm波长下测定各组的吸光度值。

式中：A-为含有样品和酶的反应溶液的吸光度；

B-为含有样品和不含酶的反应溶液的吸光度；

C-为含酶不含样品的反应溶液的吸光度；

D-为不含样品和酶的反应溶液的吸光度。

结果：在保证试验反应体系有效的前提下(阳性对照品弹性蛋白酶抑制率>50％),受试样品弹性蛋白酶抑制率高于阴性对照品弹性蛋白酶抑制率，且两者相比具有显著性差异(P<0.05)，结果见表2。即表明受试样品具有一定的紧致作用。

表2面膜液对弹性蛋白酶的抑制效果

舒缓功效测试：

测试原理：透明质酸酶是I型过敏反应的参与者，其与炎症、过敏具有强相关性。参考Elson-Morgan透明质酸酶抑制实验，样品中舒缓或抗过敏成分，在37℃，在氯化钙和透明质酸钾等存在的情况下与透明质酸酶进行反应，所得反应物再用显色剂P-DAB显色，通过紫外可见分光光度计在530nm处测定其吸光度，再通过计算转换成透明质酸酶抑制率。

设备：BSA224S-CW分析天平；ANT-UV-6100紫外可见分光光度计；DKZ-2C低温震荡水槽。

耗材：氢氧化钠(AR)；浓盐酸(GR)；冰醋酸(AR)；对二甲氨基苯甲醛(AR)；无水碳酸钠(AR)；无水醋酸钠(AR)；无水氯化钙(AR)；乙酰丙酮(AR)；透明质酸钾(BR)；透明质酸酶(BR)；甘草酸二钾，纯度≥98％。

样品：样品稀释成5％水溶液；阴性对照：纯水；阳性对照：甘草酸二钾溶液。

检测方法：

分别设置ABCD四组，每组设置3个平行。在试管中先后加入氯化钙、缓冲溶液、样品溶液、氢氧化钠、乙酸丙酮等溶液混匀后先后置于沸水、冰水、室温三种环境反应后向四管加入P-DAB显色剂。

待里面的溶液反应完全后，在530nm波长下测定各组的吸光度值。

式中：A-为含有样品和酶的反应溶液的吸光度；

B-为含有样品和不含酶的反应溶液的吸光度；

C-为含酶不含样品的反应溶液的吸光度；

D-为不含样品和酶的反应溶液的吸光度。

结果：

在保证试验系统有效的前提下(阳性对照品透明质酸酶抑制率>50％),受试样品透明质酸酶抑制率高于阴性对照品透明质酸酶抑制率，且两者相比具有显著性差异(P<0.05)，结果见表3。即可判定受试样品具有舒缓作用。

表3面膜液对透明质酸酶的抑制效果

面膜的人体功效测试：

仪器设备

MPA580皮肤测试仪、皮肤水分含量测试探头Corneometer CM825、经皮水分流失和蒸发热损失测试探头Tewameter TM Hex、皮肤弹性测试探头Cutomerter、皮肤颜色测试探头Skin-Colorimrtre CL 400，均是德国Courage+khazaka electronic GmbH(CK)公司；美国Canfield面部图像分析仪VISIA。

实验方法

选择符合要求的志愿者(女性志愿者7名，男性志愿者3名，年龄35±15)10名，志愿者皮肤微生物采样后，统一用温水、标准洁面乳清洗面部，静坐在测试环境(温度为20℃±1.0℃，相对湿度为50％±5％)中30min后进行数据采集，等待时间结束后进行基础值测定，用Corneometer CM825皮肤水分含量测试探头测定角质层含水量(MMV)，用经皮水分流失和蒸发热损失测试探头Tewameter TM Hex测试皮肤水分散失量(TEWL)；用Cutomerter皮肤弹性测试探头测定皮肤弹性和紧致度(R2、F4)；用皮肤颜色测试探头Skin-Colorimrtre CL400测定皮肤亮度L*值和色度ITA°值；用VISIA检测志愿者的红区分值等。

初始采样后志愿者每周使用面膜3次(隔一天用一次)，使用4、6周后分别按照要求进行功效检测。

结果和分析

总结结果见表4。

表4面膜功效检测结果

结果分析：使用面膜4周后，与初始数据相比20组数据中，有17组数据增加，使用6周后，与初始数据相比，有18组数据增加。使用面膜后，皮肤水分含量有明显的提高，且使用的时间越长，皮肤水分含量增加的越多。经皮水分流失量TEWL在使用面膜4周和6周后，与初始数据相比，20组数据中都只有一组数据增加，经皮水分流失量TEWL在4周和6周时减少率随着使用时间的增加而增加，说明面膜有很好的保湿效果。

使用面膜4周后，与初始数据相比，皮肤亮度L*20组数据中，有11组是增加的，ITA°有15组增加的；使用面膜6周后，与初始数据相比，皮肤亮度L*20组数据中，有10组是增加的，ITA°有14组增加的。皮肤亮度L*整体提高率的几乎没有变化，而ITA°在4周和6周时有明显变化，说明面膜有一定的美白效果。

皮肤弹性R2数值越大越好，使用面膜4周后，与初始数据相比，20组数据中，18组都是增加的，使用面膜6周后，与初始相比，17组数据都是增加的。皮肤紧致度F4的数值是越小紧致效果越明显，使用面膜4周后，与初始数据相比，20组数据中，有18组数据都是减小的，而使用面膜6周后，与初始数据相比，20组数据都是减少的。随着使用面膜时间越久，皮肤弹性R2提高率越高，皮肤紧致度F4的减少率也越来越高，说明面膜有很好的紧致功效。

使用VISIA检测志愿者的红区，使用面膜4周后，与初始数据相比，红区分值20组数据中，有12组是减少的，使用面膜6周后，与初始数据相比，红区分值有11组是减少的，且随着使用时间的延长，红区分值减少率越来越明显，说明面膜有一定的舒缓功效。

结合以上结果，我们得出本实施例的面膜有明显的保湿、紧致、舒缓、美白的功效。

为了解本发明中制备的面膜能改善皮肤微生态，对其进行人体试服实验和微生物多样性分析，具体实验过程如下：

研究对象

受试者例数n＝10，受试者皮肤健康，且无皮肤过敏史，选择受试者面部作为测试区域，试验品涂敷于受试者面部。

面膜使用说明

(1)受试者洁面后，将面膜涂敷于面部，放松精神；

(2)静待15-20分钟后轻轻按摩面部，令其充分吸收营养；

(3)用清水将其洗净，面膜每两天使用一次，连续使用4周。

微生物菌群取样

受试者均被要求取样前8h不能进行面部清洁和涂抹任何化妆品，取两支无菌棉拭子蘸取润湿液，分别在受试者面颊皮肤左右对称部位区域擦拭，期间注意转动棉拭子，然后将棉拭子放入收集管内，注意拭子头不要碰到管壁。

微生物多样性分析

提取人面部皮肤中的总DNA，测定其浓度，构建高通量测序数据库，使用在线平台BMKCloud进行数据分析。将得到的结果进行OUT分析、Chao 1和Shannon分析以及门、属、种水平面部皮肤菌群变化分析，并绘制柱状图。

皮肤微生态实验结果

OTU数目变化

将收集到的皮肤取样样品，进行16S rDNA基因高通量测序，通过对测序结果进行分析，将超过97％相似的序列划分为一个分类操作单元(operational taxonomic unit，OTU)，每个OTU对应一个物种。每个样本的OTU数量通过对样本进行聚类得到，如图1所示。0周(对照组)测得的20个样本OTU总数为5019，实验组测得的20个样本OTU总数为4673，与对照组相比，实验组有15个样本OTU总数有所降低，占样本总数的75％；结果表明，根据对照组和实验组相比较，使用面膜能够改变人面部皮肤菌群的OTU数目，减少面部皮肤的物种数量。

菌群α多样性

结果如图2所示。与对照组(0周)相比，实验组中15个样本的物种丰度和9个样本的多样性有所下降。根据对照组和实验组所得结果相比，本产品能够改变面部皮肤菌群的物种丰富度，减少物种数量。

门水平面部皮肤菌群分析

基于门水平，分析对照组(0周)和实验组人皮肤菌群的物种丰度及差异。发现对照组(0周)和实验组中各有17个样本的主导菌门为放线菌门(Actinobacteriota)、变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Frimicutes)，实验组2(6周)中有20个样本的主导菌门为放线菌门(Actinobacteriota)、变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Frimicutes)。此外还发现实验组的主要菌门与对照组相同，由图3可知，对照组中17个样本放线菌门、变形菌门和厚壁菌门相对丰度的总和大于70％，3个样本(A1、D1、H2)相对丰度的和小于70％。实验组中上述17个样本相对丰度总和依然保持基本稳定，3个样本放线菌门、变形菌门和厚壁菌门相对丰度的总和有所增长。结果表明，在使用面膜后，本产品能够增加或维持放线菌门、变形菌门和厚壁菌门的相对丰度，使人面部皮肤微生态体系得到缓解或维持良好状态。

属水平面部皮肤菌群分析

针对门水平上的差异，进一步在属水平上对对照组(0周)和实验组的菌属进行分析。如图4所示，与对照组(0周)相比，实验组中11个样本面部皮肤的链球菌属丰度降低。结果表明，面膜可以降低面部皮肤链球菌属的丰度，间接保护人体皮肤不受到病原体侵害，维持皮肤健康，减少皮肤病的发生。

种水平面部皮肤菌群分析

本实施例基于种水平分析对照组(0周)和实验组皮肤微生物物种丰度和多样性。如图5可以看到，与对照组(0周)相比，实验组1中11个样本面部皮肤的表面葡萄球菌相对丰度增加。维持S.epidermidis的相对丰度和多样性可能是皮肤健康的一个关键因素。结果表明，面膜能够改变皮肤表面葡萄球菌的丰度使其丰度增加，有利于增强皮肤免疫能力，维持面部皮肤状态的稳定，使面部皮肤保持良好状态。

从图6可以看到，结果发现与对照组(0周)相比，实验组1(4周)中E1和E2两个样本含有奥斯陆莫拉菌丰度显著减少了，而余下的18个样本使用面膜后，使该菌依然保持着较低的丰度。结果表明，该面膜对奥斯陆莫拉菌具有抑制作用，能够减少皮肤水分流失，使皮肤保持水润状态，对皮肤具有保湿作用。

在使用面膜后发现：该面膜能够减少面部皮肤物种数量。在门水平上，该面膜能够使放线菌门、变形菌门和厚壁菌门相对丰度的总和增加，降低人们面部皮肤发生银屑病与其它皮肤炎症性疾病的几率。在属水平上，该面膜能够降低链球菌属的相对丰度，间接保护皮肤不受到病原体的侵害。在种水平，该面膜能够增强表面葡萄球菌相对丰度，从而增强皮肤免疫能力，维持皮肤状态稳定。除此之外，该面膜还能够降低奥斯陆莫拉菌的相对丰度，使皮肤减少水分流失，保持水润状态。综上，从使用面膜的人面部皮肤菌群分析可以看出，该面膜是一款能够降低炎症性皮肤病发生几率，增强皮肤免疫力，改善干性皮肤状态，对皮肤具有保湿修复等功能的产品。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例，并不用来限制本发明，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (9)

1.一种改变皮肤微生态的后生元面膜，其特征在于：其组成成分的质量百分比为：

酵美因:98.5-99.5％；

1,2-己二醇:0.3-0.8％；

对羟基苯乙酮:0.3-0.8％。

2.一种后生元面膜的制备方法，其特征在于：所述的改变皮肤微生态的后生元面膜的制备方法为:

S1：制备酵美因；

S2：将酵美因投入乳化锅中，搅拌升温，保温，降温，加入提前溶解好1,2-己二醇、对羟基苯乙酮，搅拌，得到面膜液。

3.根据权利要求2所述的改变皮肤微生态的后生元面膜的制备方法，其特征在于：所述酵美因的制备方法为：

S1.1：配种子培养基，灭菌，接入乳酸菌；

S1.2：恒温振荡培养一段时间；

S1.3：配发酵培养基，灭菌，将培养好的种子液接入发酵罐中，发酵过程控制pH和根据溶氧变化调节转速，恒温培养48h；

S1.4：发酵结束将发酵液进行过滤除杂，灭菌，制得酵美因。

4.根据权利要求2所述的改变皮肤微生态的后生元面膜的制备方法，其特征在于：所述乳酸菌为干酪乳杆菌SM003，分类命名为：干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏编号：CGMCC NO.26537，2023年2月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

5.根据权利要求2所述的改变皮肤微生态的后生元面膜的制备方法，其特征在于：所述S1.2中恒温振荡培养温度为35-39℃。

6.根据权利要求2所述的改变皮肤微生态的后生元面膜的制备方法，其特征在于：所述S1.2中恒温振荡培养时间为16-20h。

7.根据权利要求2所述的改变皮肤微生态的后生元面膜的制备方法，其特征在于：所述S2中搅拌升温至80-85℃。

8.根据权利要求2所述的改变皮肤微生态的后生元面膜的制备方法，其特征在于：所述S2中保温时间为18-22min。

9.根据权利要求2所述的改变皮肤微生态的后生元面膜的制备方法，其特征在于：所述S2中降温至53-56℃。