CN117295513A

CN117295513A - 基于环节动物血红蛋白的凝胶

Info

Publication number: CN117295513A
Application number: CN202280021485.5A
Authority: CN
Inventors: F·察尔; 伊丽莎白·雷泽-察尔
Original assignee: Hemarina SA
Current assignee: Hemarina SA
Priority date: 2021-03-15
Filing date: 2022-03-14
Publication date: 2023-12-26
Also published as: WO2022194735A1; FR3120521A1; FR3120521B1; CA3210393A1; EP4308147A1; US20240156918A1; BR112023018037A2

Abstract

本发明涉及一种组合物，在生理上可接受的介质中包括：选自环节动物珠蛋白、环节动物珠蛋白原聚体和环节动物细胞外血红蛋白中的至少一种分子；选自含至少一个甘露糖单元的天然来源的聚合物的至少一种亲水增稠聚合物，任选地被改性；和透明质酸或其盐。

Description

基于环节动物血红蛋白的凝胶

技术领域

本发明涉及一种组合物，包括选自环节动物珠蛋白、环节动物珠蛋白原聚体和环节动物细胞外血红蛋白中的至少一种分子，选自含至少一个甘露糖单元天然来源的聚合物的至少一种亲水增稠聚合物，以及透明质酸或其盐。

背景技术

牙周病是感染源(细菌)的疾病，其影响和破坏形成牙周组织的牙齿支持组织。牙周组织由四种组织组成：牙龈组织、牙槽骨、牙周韧带和牙骨质。当牙周病仅限于牙龈时，使用的术语是牙龈炎。当整个牙周组织受到影响时，使用的术语是牙周炎。

牙周炎是一种上皮-结缔(conjonctif)附着系统病。其特征是附着丧失，即连接上皮和牙龈结缔纤维从牙齿表面脱离。这种脱离可以是与牙周袋形成相对应的病理性脱离，也可以是与牙周伤口相对应的手术性脱离。因此，牙周愈合包括在牙齿表面重新附着软组织，可以说是《闭合》牙周伤口。

从最广泛的意义上来说，愈合是伤口的修补，即涉及身体所有组织并倾向于恢复其解剖结构和功能的动态过程。牙周愈合具有涉及生物学上独特的、有不同类型和一致性的组织的特殊方面，不像皮肤愈合的模型需要连接和/或填充组织学上相同的软组织。

皮肤伤口的特征是：

-两种组织：表皮和真皮；

-血块，其体积随伤口的程度而变化；

-伤口边缘或多或少的分离，并承受应力。

传统上，在由伤口边缘的完美接合导致的主要意图的愈合和由表皮细胞的迁移以填充远离的伤口边缘导致的次要意图的愈合是有区别的。

牙周愈合似乎比皮肤愈合更复杂。发现了相同的特征：组织区室(上皮和结缔组织)、伤口边缘距离、应力、血凝块体积。

然而，该模型的不同之处在于(1)与骨和牙周韧带细胞的参与相关的更大的细胞多样性，(2)有不同类型和一致性的伤口边缘，以及(3)特定的细菌环境。牙菌斑(即食物残渣和细菌的积累)和牙垢(即该牙菌斑的钙化)附着在牙龈线下的牙齿表面，并被致病菌定植。这些细菌在牙菌斑的滞留是牙龈和骨骼炎症反应的原因，逐渐导致其破坏。

因此，伤口的愈合，无论是皮肤的还是牙周的，对于恢复皮肤屏障的完整性是主要感兴趣的。

目前牙周炎的治疗包括牙根平整(如有必要，在局部麻醉下)以去除牙龈下的牙菌斑和牙垢。这种治疗的目的是使先前暴露的牙龈与牙根表面重新附着。牙周手术也可以设想。然而，这些选择仍然相对具有侵入性。

关于皮肤伤口，这些伤口或多或少都很严重，大小也不同。

因此，需要一种简单有效并促进愈合的伤口治疗，特别是皮肤或牙周伤口。

此外，这些治疗必须是无菌的，以防止皮肤和/或牙周组织的进一步污染，但也必须是稳定的。最后，它们必须具有足够的粘度：不要太液态，因此能够在作用部位停留足够长的时间(例如在牙周袋中或皮肤伤口上)，并且不要太固态，以便它们能够相对容易地被再吸收。

发明内容

利用本发明，有可能满足这些期望。

令人惊讶的是，申请人已经发现，在含天然来源的亲水增稠聚合物和透明质酸或其盐的凝胶中配制选自环节动物珠蛋白、环节动物珠蛋白原聚体和环节动物细胞外血红蛋白的至少一种分子，使获得稳定有效的组合物，特别是用于愈合，且特别是对皮肤或牙周伤口的愈合，其中，天然来源的亲水增稠聚合物具有至少一个甘露糖单元。此外，所述组合物使所述分子能够原位可靠给药，并且具有令人满意的作用时间长度(即至少几个小时，优选地至少5个小时，优选地至少10个小时，优选地至少12个小时)。最后，所述组合物通常是无菌的，并且具有所需的粘度。最后，所述组合物是生物相容的、可生物降解的和可再吸收的。

本发明的主题是一种组合物(《本发明的组合物》)，在生理上可接受的水性介质中包括：

-选自环节动物珠蛋白、环节动物珠蛋白原聚体和环节动物细胞外血红蛋白中的至少一种分子；

-选自含至少一个甘露糖单元的天然来源的聚合物的至少一种亲水增稠聚合物，任选地被改性；和

-透明质酸或其盐。

本发明还涉及本发明的组合物，用作医药产品。

优选地，本发明涉及本发明的组合物预防和/或治疗牙周病，和/或治疗至少一个牙周袋，和/或促进皮肤和/或牙周组织的愈合，和/或治疗(即促进和/或增加)骨愈合的用途。

优选地，本发明涉及本发明组合物在预防和/或治疗皮肤病，优选地痤疮中的用途。

优选地，本发明的组合物具有流变流化性能。

这些性能可以通过以下方案进行评价：使用具有平行板几何形状(直径40mm，间隙1mm)的流变仪(Thermo Scientific Haake Mars，模块化高级流变仪系统)。将适量的样品加载到配有温度控制系统的帕尔贴板上，以实现高效、精确的温度调节(±0.001℃)。粘度流速曲线采用恒速扫描法(0.1Pa·s至10000Pa·s)测量。样品的线性粘弹性范围(LVER)通过动态振幅扫描和频率扫描测试，并用粘弹性模量(G'储能模量和G”损耗模量)来确定。在这些测试中，在LVER范围内对样品施加连续激励，以避免破坏样品。两个测试的振幅扫描测试范围在0.01％和100％之间，角频率为0.1Hz，温度为20℃。在流变仪中，在20℃下，在0.1Hz至100Hz的角频率范围内，在1％的恒定应力下，对样品进行频率扫描分析。

本发明的组合物具有弹性性能。此外，即使在低频下，G'仍高于G”。

本发明的组合物包括选自环节动物珠蛋白、环节动物珠蛋白原聚体和环节动物细胞外血红蛋白中的至少一种分子。

该分子是氧载体。《氧载体》是指能够可逆地将氧从环境运输到细胞、组织或靶器官的分子。

环节动物细胞外血红蛋白包含在三个纲环节动物中：多毛纲(Polychaeta)、寡毛纲(Oligochaeta)和蛭纲(Hirudinea)。使用术语细胞外血红蛋白是因为它天然不包含在细胞中，因此它能够在血液系统中自由循环，而无需对其化学修饰以稳定或功能化。

环节动物细胞外血红蛋白是一种分子量在2000kDa到4000kDa之间的巨大生物聚合物，由大约200条4到12种不同类型的多肽链组成，通常分为两类。

第一类包括144至192个元件，将所谓的“有功能的”多肽链集合在一起。这些“有功能的”多肽链携带血红素型活性位点，并且能够可逆地与氧结合。它们是珠蛋白型的链(Arenicola marina血红蛋白共有八种类型：a1、a2、b1、b2、b3、c、d1和d2)，分子量在15kDa至18kDa之间。它们与脊椎动物的α型和β型链非常相似。

第二类有36至42个元件，将所述《结构》多肽链或《接头》集合在一起。所述《结构》多肽链或《接头》没有或几乎没有活性位点，但允许组装称为十二聚体或原聚体的亚单位。有两种类型的接头，L1和L2。

每个血红蛋白分子由两个叠加的六边形组成，称为六边形双层，每个六边形本身由水滴形状的六个亚单位(十二聚体或原聚体体)组装而成。该天然分子由十二个亚单位(十二聚体或原聚体)组成。每个亚单位的分子量约为250kDa，形成该天然分子的有功能的单位。

优选地，环节动物细胞外血红蛋白选自多毛纲环节动物的细胞外血红蛋白和寡毛纲环节动物的细胞外血红蛋白。优选地，环节动物细胞外血红蛋白选自正蚓科(Lumbricidae Family)的细胞外血红蛋白、沙蠋(Arenicolidae)科的血红蛋白和沙蚕(Nereididae)科的细胞外血红蛋白。更优选地，环节动物细胞外血红蛋白选自Lumbricusterrestris的细胞外血红蛋白、Arenicola sp的细胞外血红蛋白、Nereis sp的细胞外血红蛋白。根据本发明的进一步优选地，Arenicola marina或Nereis virens的细胞外血红蛋白，再进一步优选地，为Arenicola marina的细胞外血红蛋白。该Arenicola marina的海蚯蚓或沙虫是一种多毛纲环节动物蠕虫，主要生活在沙子中。

如上所述，在本发明中，环节动物细胞外血红蛋白的珠蛋白原聚体形成天然血红蛋白的有功能的单位。

最后，环节动物细胞外血红蛋白的珠蛋白链可以特别选自环节动物细胞外血红蛋白的Ax型和/或Bx型珠蛋白链。

与哺乳动物尤其是人类血红蛋白相反，环节动物细胞外血红蛋白、其珠蛋白原聚体和/或珠蛋白不需要辅因子就能发挥作用。最后，由于环节动物细胞外血红蛋白、其珠蛋白原聚体和/或珠蛋白没有任何血型，它们避免了任何免疫或过敏反应的问题。环节动物细胞外血红蛋白、其珠蛋白原聚体和/或珠蛋白具有固有的超氧化物歧化酶(SOD)作用。因此，这种固有的抗氧化作用不需要任何抗氧化剂就能发挥作用，这与哺乳动物血红蛋白的使用不同，哺乳动物血红蛋白的抗氧化分子包含在红细胞内，不与血红蛋白结合。

环节动物细胞外血红蛋白、其珠蛋白原聚体和/或珠蛋白可以是天然的或重组的。

优选地，细胞外血红蛋白是Arenicola marina的或Nereis virens，更优选地是Arenicola marina的细胞外血红蛋白。

优选地，相对于所述组合物的总重量，分子以0.01重量％至10重量％被包含在本发明组合物中，优选地为0.05重量％至5重量％，优选地为0.06重量％至2重量％，优选地为0.07重量％至1重量％，优选地为0.08重量％至0.5重量％，优选地为0.09重量％至0.3重量％。

优选地，在缓冲溶液中配制选自本发明的环节动物珠蛋白、环节动物珠蛋白原聚体和环节动物细胞外血红蛋白的分子。获得的溶液(即含该分子的缓冲溶液)可以冻干以获得粉末。优选地，获得的溶液(即含该分子的缓冲溶液)以非冻干形式的原样(液体形式)使用。

通常，将含冻干或非冻干分子(在这种情况下是液体分子)的缓冲溶液加入到含亲水增稠聚合物和透明质酸的混合物中，以获得本发明的组合物。

缓冲溶液为血红蛋白、其原聚体及珠蛋白创造了合适的盐水环境，从而使得能够维持该分子的四级结构进而其功能。优选地，缓冲溶液是包括盐的水性溶液。优选地，盐是钠、钙、镁、钾氯离子，水性溶液pH值在5和9之间，优选地在5.5和8.5之间，优选地在6.5和7.6之间。缓冲溶液的配制类似于生理可注射液体的配制。优选地，缓冲溶液还包括抗氧化剂，如抗坏血酸。在这些条件下，环节动物细胞外血红蛋白、其珠蛋白原聚体及珠蛋白保持是有功能的。

在本说明书中，除非另有说明，pH值应理解为在环境温度(25℃)下的。优选地，缓冲溶液是包括氯化钠、氯化钙、氯化镁、氯化钾连同葡萄糖酸钠和乙酸钠的水性溶液，并且pH在6.5和7.6之间，优选地为7.1±0.5，优选地为约7.35。更优选地，缓冲溶液是包括90mMNaCl、23mM葡萄糖酸钠、2.5mM CaCl₂、27mM醋酸钠、1.5mM MgCl₂和5mM KCl的水性溶液，并且pH值为7.1±0.5。

本发明的组合物还包括选自具有至少一个甘露糖单元的天然来源的聚合物中的至少一种亲水增稠聚合物。这些天然来源的聚合物可以，例如，通过添加一个或多个羟丙基、添加甲基羧酸盐(如甲基羧酸钠)的基团或添加三甲基铵基团来改性。

优选地，亲水增稠聚合物是一种包括至少一个甘露糖单位的、非改性天然来源的聚合物。

优选地，亲水增稠聚合物选自：

-黄原胶及黄原胶衍生物；

-葡甘露聚糖及其衍生物，如魔芋胶；

-半乳甘露聚糖及其衍生物，如刺槐豆胶、葫芦巴胶、塔拉胶、瓜尔胶或瓜尔胶的衍生物，如羟丙基瓜尔胶、由甲基羧酸钠修饰的羟丙基瓜尔胶(如Rhodia以商品名JaguarXC97-1出售的产品)或瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵；

-及它们的混合物。

优选地，亲水增稠聚合物选自：

-黄原胶；

-魔芋胶；

-刺槐豆胶、胡芦巴胶、塔拉胶、瓜尔胶；

-及它们的混合物。

优选地，亲水增稠聚合物是黄原胶。

黄原胶是一种高分子量的(约10⁶)阴离子多糖，其通过Xanthomonas campestris由碳水化合物发酵产生。它由β(1->4)糖苷键连接的D-葡萄糖单元形成的主链组成；每隔一个脱水葡萄糖单元携带一个三糖侧链，该侧链由两个甘露糖单元之间的葡萄糖醛酸残基组成。大多数末端单元含有丙酮酸基团，主链附近的甘露糖单元可以乙酰化为C6。

例如，黄原胶可以由嘉吉公司以商品名Satiaxane UCX 930或Satiaxane UCX 911销售。

优选地，相对于组合物的总重量，亲水增稠聚合物以0.5重量％至5重量％的量被包含，优选地为0.8重量％至4重量％，优选地为1重量％至3重量％，优选地为1.5重量％至2.5重量％。

本发明的组合物还包括透明质酸或其盐。

透明质酸是二糖聚合物，特别是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基葡萄糖形成的糖胺聚糖。

它天然存在于许多组织中，主要存在于皮肤中，特别是表皮中，以及结缔组织中，是细胞外基质的主要成分之一。分子的长度根据组织、物种和组织状况而变化。

透明质酸可以通过从动物组织中组织提取或通过细菌发酵获得，特别是用马链球菌(Streptococcus equi)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

优选地，本发明的透明质酸是通过细菌发酵获得的，特别是用马链球菌或枯草芽孢杆菌，特别是用马链球菌。

优选地，本发明的组合物包括透明质酸盐，称为透明质酸盐(hyaluronate)。优选地，本发明的组合物包括钠盐(透明质酸钠)。优选地，透明质酸或其盐是非硫酸化的。

优选地，相对于组合物的总重量，本发明的组合物包含含量为至少0.1重量％，优选至少0.2重量％，优选至少0.3重量％，优选至少0.4重量％，优选至少0.5重量％的透明质酸或其盐。

优选地，相对于组合物的总重量，透明质酸或其盐以0.3重量％至5重量％，优选0.5重量％至3重量％，优选0.8重量％至2重量％的量被包含。

透明质酸或其盐可以是低分子量的透明质酸或透明质酸盐、高分子量的透明质酸或透明质酸盐，或两者的混合物。

高分子量的透明质酸或透明质酸盐可以具有5kDa至5000kDa的分子量，特别是6kDa至4800kDa，更特别是8kDa至4500kDa(4.5MDa)。优选地，高分子量的透明质酸或透明质酸盐的分子量范围为1400kDa至4000kDa，优选地为1500kDa至3500kDa，优选地为1500kDa至3400kDa。

低分子量的透明质酸或透明质酸盐可以具有10kDa至1000kDa的分子量，特别是10kDa至600kDa。

分子量可以用HPLC洗脱/排阻的常规方法测量。

在一个特定的实施方式中，作为透明质酸或其盐的组合物仅包括高分子量的透明质酸或透明质酸盐。这特别意味着低分子量的透明质酸(或透明质酸盐)相对于高分子量的透明质酸(或透明质酸盐)的重量比小于或等于0.1％，特别是小于0.01％，甚至为0。

特别地，相对于该组合物的总重量，该组合物具有0.3重量％至5重量％的高分子量透明质酸(或透明质酸盐)的含量，优选地0.5重量％至3重量％，优选地0.8重量％至2重量％。

优选地，透明质酸或其盐在25℃下具有1m³/kg至4m³/kg的固有粘度，优选地1.4m³/kg至3.8m³/kg，优选地从1.7m³/kg到3.4m³/kg，优选地从2m³/kg到3.4m³/kg，优选地2.5m³/kg至3.4m³/kg。固有的粘度的计算是本领域技术人员熟知的参数，并且可以按照欧洲药典(欧洲药典9.0，专论S，钠(透明质酸盐)，3834-3835页)中的指示进行。

优选地，本发明组合物，在生理上可接受的水性介质中包括：

-Arenicola marina的细胞外血红蛋白或Nereis virens的细胞外血红蛋白，优选地，相对于所述组合物的总重量，量为0.05重量％至0.5％重量％，优选地为0.08重量％至0.4％重量％，优选地为0.09重量％至0.3％重量％；

-黄原胶，优选地，相对于所述组合物的总重量，量为0.5重量％至5重量％，优选为1重量％至3％重量，优选地为1.5重量％至2.5重量％；和

-透明质酸钠，优选地是高的分子量的，优选地，相对于所述组合物的总重量，量为0.4重量％至5重量％，优选地为0.5重量％至4重量％，优选地为0.8重量％和2重量％。

-Arenicola marina的细胞外血红蛋白，量为0.09重量％至0.3重量％；

-黄原胶，量为1.5重量％至2.5重量％；和

-透明质酸钠，量为0.8重量％和2重量％，优选地，在25℃下的固有粘度为1m³/kg至4m³/kg，优选地1.4m³/kg至3.8m³/kg，优选地从1.7m³/kg到3.4m³/kg，优选地从2m³/kg到3.4m³/kg，优选地2.5m³/kg至3.4m³/kg。

本发明的组合物还包括了生理上可接受的水性介质。《生理上可接受的》是指该介质与应用于皮肤和/或牙周袋相容。优选地，所述介质是无菌的。

所述介质通常包括水。优选地，相对于组合物的总重量，水的量至少是80重量％，优选地至少是90重量％，优选地至少是95重量％。

优选地，本发明的组合物是凝胶。

优选地，本发明的组合物通过注射或通过原位滴入给药至待治疗区域。优选地，特别是对于牙周病变，本发明的组合物通过局部途径给药，通过注射或原位滴入牙周袋的中空部分或伤口。优选地，本发明的组合物通过直接到滴入待治疗的区域上给药，通常滴入牙周袋的中空部分或待治疗的伤口上。它也可以在牙周组织的骨头上给药，直接给药到骨头上或其附近。

优选地，本发明的组合物用于疗法中、优选地，用于预防和/或治疗牙周病，和/或治疗至少一个牙周袋，和/或促进皮肤和/或牙周组织的愈合的疗法中。优选地，本发明的组合物通过促进牙龈和牙根表面之间的重新附着，以及通过促进骨组织的愈合，用于预防和/或治疗牙周病。

优选地，本发明的组合物用于治疗(即促进和/或增加)骨愈合。

优选地，本发明的组合物用作抗炎剂，特别用于治疗由缺氧引起的炎症，和/或抑制由牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)引起的组织降解。

如实施例中所解释的，本发明组合物的抗炎作用允许预防和/或治疗牙周病或牙周袋：通过抑制这种类型病理中由缺氧引起的炎症，本发明组合物可以减缓牙周炎的进展。

此外，本发明的组合物抑制由牙龈卟啉单胞菌引起的组织降解，从而促进其愈合。

优选地，本发明的组合物用于预防和/或治疗皮肤病、优选地炎症性皮肤病、优选地痤疮。《炎症性皮肤病》是指任何伴有炎症成分的皮肤疾病。该术语尤其包括酒渣鼻、痤疮、湿疹、手部湿疹、荨麻疹、面部红斑、erythema pudicitiae、瘙痒、特应性皮炎和所有形式的银屑病(例如皮肤的、粘膜的或指甲的银屑病)、或银屑病关节炎。

本发明的组合物能够抑制由涉及这些病理的细菌引起的炎症、皮肤病(如涉及细菌和炎症成分的痤疮)。作为常驻人体微生物群的成员，革兰氏阳性厌氧菌，痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)，或P.acnes，现称为Cutibacterium acnes主要存在于皮肤的皮脂腺中。P.acnes估计皮肤密度为10²cm^-2到10^5-6cm^-2；它是一种众所周知的机会性致病菌。有时，这种通常生活在皮肤表面的细菌会导致毛囊发炎(但不是感染)。如果炎症靠近皮肤表面发展，就会形成红色丘疹或黄色丘疹(脓疱)。如果感染靠近发根，会形成更深的发炎病变(结节和囊肿)。在非常严重的痤疮中，囊肿可以聚集在一起形成更大更深的发炎病变(聚合性痤疮)，但这是罕见的。P.acnes病灶也可继发感染金黄色葡萄球菌(Staphyloccocusaureus)。

优选地，痤疮选自寻常痤疮、粉刺性痤疮、多形性痤疮、酒渣鼻引起的痤疮、结节性囊肿性痤疮、聚合性痤疮和老年痤疮。

本发明还涉及一种设备包括：

-注射器；和

-本发明的组合物。

注射器含有本发明的组合物。

在本发明的设备中，注射器可以连接到中空针头上，优选地中空针头上设有侧孔。典型地，当将本发明的组合物给药到牙周袋的中空部分时，针头可以存在也可以不存在；如果不存在，在这种情况下，组合物直接从注射器输送。优选地，本发明的组合物用中空针头应用于牙周袋或任何洞缺损，优选地用具有侧孔的中空针头，优选地用圆形尖端。优选地，本发明的组合物直接从注射器应用于皮肤(皮肤应用)。

具体实施方式

通过以下实施例说明本发明。

实施例1：本发明组合物的制备

在无菌条件下，制备下列组合物：

[表1]

将所有成分混合在缓冲液中，直到获得凝胶。该组合物是凝胶的形式。

一旦制备好，将组合物包装在1mL注射器中。将注射器冷冻。

评估了其稳定性。

发现该组合物在4℃下稳定至少3个月，并且该组合物的血红蛋白也是稳定和有功能的。

实施例2：本发明组合物对愈合的影响

1、研究目的

本研究的目的是评估包括本发明的凝胶的愈合产品在用于小型猪伤口愈合时的有效性和安全性。

研究持续了22天，在大部分伤口愈合后停止。

该研究包括来自Ellegaard的3头迷你猪：M1、M2和M3(M1和M2是雄性，M3是雌性)。

按照标准程序安置动物。

2、研究设计

2.1、治疗产品

下表解释了该设计。

[表2]

2.2、治疗方案

在伤口形成当天(D1)和每次更换敷料时给予治疗，即：D1、D3、D5、D8、D10、D12、D15、D17和D19。

在应用该产品之前，清洗伤口：

-Hydrocellular敷料：将敷料直接应用在伤口上，以取代敷料(6cm×7cm)；

-0.9％NaCl：在应用敷料之前，用0.9％NaCl浸泡敷料的吸收部分；

-凝胶K-Y润滑剂：在应用敷料之前，将该产品直接应用在伤口上；

-本发明的凝胶：在应用敷料之前，将该产品直接应用在伤口上；

2.3、伤口形成

制作了两种类型的全厚度伤口：圆形的使用活检穿孔器，正方形的使用手术刀。每只动物造成八(8)个伤口(4个圆形/20mm的直径和4个正方形/20mm的边)，允许4次治疗，每次治疗代表每种类型的伤口。

2.3、伤口宏观评价

使用以下参数对伤口进行宏观评价：

对每次更换治疗/敷料的变化进行宏观评价(通过照片和分数等级记录)。

3、结果

3.1、一般观察

结果是肯定的：本发明的凝胶包装在注射器中，易于使用和应用，产品在治疗期间在伤口中保持良好。

3.2、伤口宏观评价

宏观观察结果与此类研究的预期一致。

对于K-Y凝胶、本发明的凝胶和hydrocellular敷料，上皮化的第一个迹象发生在D5当天和之后，对于NaCl，上皮化的第一个迹象发生在D8当天和之后。

伤口周围的局部反应(红斑、水肿和硬结)有限，主要涉及研究的最初几天；它们可以由产品的过度应用(K-Y凝胶或本发明的凝胶的红斑)来解释。用NaCl的伤口周围无局部反应。

关于伤口的整体愈合，可以注意到，在完成研究(D22)时，用本发明的凝胶治疗的所有伤口都完全愈合，而用K-Y凝胶和NaCl治疗的一个伤口尚未愈合，并且用hydrocellular敷料治疗的所有伤口尚未完全愈合。

还报道了用本发明的凝胶治疗引起的结痂比用其它治疗少得多。

因此，本发明的凝胶表现出非常好的愈合性能。

实施例3：本发明组合物对牙周病的影响

目标：牙周炎的特征在于与菌群失调和缺氧微环境相关的深牙周袋，这加剧了组织的炎症和降解。

Arenicola marina细胞外血红蛋白具有极好的携氧能力和抗氧化能力，最近显示出抗炎症性和抗菌性能。

本研究的目的是评价这种血红蛋白在体外和体内减少缺氧和氧化应激的作用。

方法：采用牙龈卟啉单胞菌感染二维和三维培养的口腔上皮细胞(MOI＝100)或将该口腔上皮细胞暴露于氯化钴诱以导缺氧和氧化应激，并用血红蛋白(1g/L)治疗24h。

通过荧光显微镜评价缺氧，通过RT-qPCR和Elisa评价缺氧关键标志物(缺氧诱导因子α亚单位(HIF-1α)、葡萄糖-1转运蛋白(Glut-1)和葡萄糖-3转运蛋白(Glut-3))的表达的定量分析。

在体内，通过放置用牙龈卟啉单胞菌浸泡3周的结扎线来诱导实验性牙周炎，并通过应用本发明的凝胶治疗损伤。

2周后通过骨形态计量学分析和TRAP染色评价愈合情况。

结果：在培养中，用本发明的凝胶处理降低了由牙龈卟啉单胞菌和氯化钴诱导的缺氧和氧化应激。处理24h后，牙龈卟啉单胞菌诱导的缺氧关键标志物(HIF-1α、Glut-1、Glut-3)相关基因的表达分别降低85％、42％和83％。

在体内，骨形态计量学分析显示，与对照相比，用本发明凝胶治疗的小鼠的炎症评分降低，临床附着改善(p<0.05)，以及破骨细胞活性降低。免疫组织化学分析还显示，在用本发明凝胶治疗的组中，软组织中HIF-1α的表达降低。

结论：Arenicola marina细胞外血红蛋白是一种非常有前景的分子，能够改善缺氧诱导的炎症和牙龈卟啉单胞菌诱导的组织降解。

因此，它显示出牙周炎治疗的主要治疗潜力。

实施例4：对比测试

所有百分比都是相对于组合物总重量的重量百分比。

1/通过混合成分制备下列对比组合物：

将它们与实施例1中的本发明的配方进行比较。

[表3]

/>

-在37℃+/-2℃下，T0和T+12h时，评价组合物HA粘度的稳定性。

在37℃+/-2℃的牛顿平台，以0.01s^-1的剪切速率记录粘度测量。该测量是在T0时测量的。在T0测量后，将凝胶放置在37℃+/-2℃的热水浴上12小时。然后在37℃+/-2℃的牛顿平台，以0.01s^-1的剪切速率记录粘度测量。该测量是在T+12h时测量的。

组合物HA，在37℃+/-2℃下，在使用所需的最短时间内没有表现出稳定的粘度。

-对于组合物XG，测量由不同组成的介质(即O₂饱和的几乎没有矿化的水，相对于O₂去饱和的几乎没有矿化的水)分隔的两个隔室之间的分子氧转移速率。结果表明，该组合物XG表现出比实施例1中的组合物更低的传输速率(数据未示出)。

-本发明实施例1中的组合物表现出足够的粘度和高于组合物XG的分子氧转移速率。

这些结果表明，仅本发明的组合物允许获得稳定的组合物，具有足够的粘度并允许分子氧的良好扩散。

Claims

1.一种组合物，在生理上可接受的水性介质中包括：

-透明质酸或其盐。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述分子选自正蚓(Lumbricidae)科的细胞外血红蛋白、沙蠋(Arenicolidae)科的细胞外血红蛋白和沙蚕(Nereididae)科的细胞外血红蛋白，优选地选自Lumbricus terrestris的细胞外血红蛋白、Arenicola sp的细胞外血红蛋白和Nereis sp的细胞外血红蛋白，更优选地选自Arenicola marina和Nereisvirens的细胞外血红蛋白，更优选地选自Arenicola marina的细胞外血红蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述亲水增稠聚合物选自黄原胶和黄原胶衍生物，葡甘露聚糖及其衍生物，半乳甘露聚糖及其衍生物，及它们的混合物；优选地，所述亲水增稠聚合物选自黄原胶、黄原胶的衍生物、魔芋胶、刺槐豆胶、葫芦巴胶、塔拉胶、瓜尔胶、羟丙基瓜尔胶、由甲基羧酸钠基团改性的羟丙基瓜尔胶、瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵，它们的混合物。

4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述亲水增稠聚合物选自黄原胶和黄原胶衍生物。

5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述透明质酸或其盐是通过细菌发酵获得的，特别是用马链球菌(Streptococcus equi)或枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，更特别是用马链球菌。

6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述透明质酸或其盐是透明质酸钠。

7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述透明质酸或其盐的分子量为1400kDa至4000kDa，优选地为1500kDa至3500kDa，优选地为1500kDa至3400kDa。

8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述透明质酸或其盐在25℃下固有粘度为1m³/kg至4m³/kg，优选地1.4m³/kg至3.8m³/kg，优选地从1.7m³/kg到3.4m³/kg，优选地从2m³/kg到3.4m³/kg，优选地2.5m³/kg至3.4m³/kg。

9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，相对于所述组合物的总重量，所述分子以0.01重量％至10重量％的量，优选地为0.05重量％至5重量％，优选地为0.06重量％至2重量％，优选地为0.07重量％至1重量％，优选地为0.08重量％至0.5重量％，优选地为0.09重量％至0.3重量％被包含。

10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，相对于所述组合物的总重量，所述亲水增稠聚合物以0.5重量％至5％重量％的量，优选地为0.8重量％至4％重量％，优选地为1重量％至3％重量％被包含；和/或，相对于所述组合物的总重量，所述透明质酸或其盐以0.3重量％至5％重量％的量，优选地为0.5重量％至3％重量％，优选地为0.8重量％至2％重量％被包含。

11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，包括：

-黄原胶，优选地，相对于所述组合物的总重量，量为0.5重量％至5重量％，优选地为1重量％至3％重量，优选地为1.5重量％至2.5重量％；和

12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，包括：

-黄原胶，量为1.5重量％至2.5重量％；和

-透明质酸钠，量为0.8重量％至2重量％。

13.一种设备，包括：

-注射器；和

-根据前述权利要求中任一项所述的组合物。

14.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，所述组合物用作医药产品。

15.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，所述组合物用于预防和/或治疗牙周病，和/或治疗至少一个牙周袋，和/或促进皮肤和/或牙周组织的愈合，和/或治疗骨愈合，和/或预防和/或治疗皮肤病，优选地痤疮。