CN117241840A - 放射性医药组合物的中间体的保存方法、放射性医药组合物的制备或保存方法、放射性医药组合物的中间体组合物、及医药制剂 - Google Patents

放射性医药组合物的中间体的保存方法、放射性医药组合物的制备或保存方法、放射性医药组合物的中间体组合物、及医药制剂 Download PDF

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Abstract

本发明的保存方法包括将放射性医药组合物的中间体保存在乙酸缓冲液中。中间体是3,6,9,15‑四氮杂双环[9.3.1]十五碳‑1(15),11,13‑三烯‑3,6,9‑三乙酸(PCTA)与抗上皮成长因子受体抗体(抗EGFR抗体)的复合体。保存时间为24小时以上。

Description

放射性医药组合物的中间体的保存方法、放射性医药组合物 的制备或保存方法、放射性医药组合物的中间体组合物、及医 药制剂
技术领域
本发明涉及放射性医药组合物的中间体的保存方法、放射性医药组合物的制备或保存方法、放射性医药组合物的中间体组合物、及医药制剂。
背景技术
采用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)等双官能性螯合剂并通过放射性核素标记来得到的放射性抗体医药品的研究开发不断推进。例如，非专利文献1～5中记载了使用了放射性抗体医药品的放射免疫疗法及诊断法。
(现有技术文献)
(非专利文献)
非专利文献1：Yoshii et al.,Sci Rep 2020；10:4143
非特許文献2：Yoshii et al.,J Nucl Med.2019；60:1437-1443
非特許文献3：Yoshii et al.,Oncotarget.2018.9:28935-28950
非特許文献4：Song IH et al.,Oncotarget.2017；8:92090-92105
非特許文献5：Song IH et al.,J Nucl Med.2016；57:1105-11
发明内容
(发明要解决的问题)
但是，上述现有技术无法确保放射性抗体医药品的中间体即抗体配体复合体(用抗体与螯合剂所构成的复合体)的长期保存性，因此必须进行即时制备。另外，若进行即时制备，则由于需要进行无菌操作及熟练操作，并且有可能被辐射等，因此难以稳定地供给放射性抗体医药品。另外，若进行放射性抗体医药品的即时制备，则由于一次能够制造的放射性抗体医药品有限，因此放射性抗体医药品的制造成本有可能增加。所以，期望开发以低成本来稳定地制造放射性抗体医药品的技术。
本发明的一个方面的目的在于实现无需进行即时制备也能制造放射性抗体医药品的技术。
(用以解决问题的技术手段)
本发明人等进行了潜心研究，结果发现通过使用特定组分的保存液，能够长期保存放射性抗体医药品的中间体。另外发现，采用在该保存液中保存了一定期间的放射性抗体医药品的中间体来制备的放射性抗体医药品的物性与通过即时制备而得到的放射性抗体医药品的物性同等，从而完成了本发明。
本发明的一个方面的保存方法包括将放射性医药组合物的中间体保存在乙酸缓冲液中，所述中间体是用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)与抗上皮成长因子受体抗体(抗EGFR抗体)所构成的复合体，保存时间为24小时以上。
另外，本发明的一个方面的保存方法包括将放射性医药组合物保存在乙酸缓冲液中，所述放射性医药组合物是用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)与抗上皮成长因子受体抗体(抗EGFR抗体)所构成且经放射性核素标记后的复合体，其中该放射性核素与PCTA配位。
另外，本发明的一个方面的中间体组合物是用于制备放射性医药组合物的中间体组合物，其包含放射性医药组合物的中间体及保存液，所述中间体是用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)与抗体所构成的复合体，所述保存液包含至少一种中性氨基酸、至少一种聚山梨醇酯及乙酸缓冲液，所述中间体在所述保存液中保存了24小时以上。
另外，本发明的一个方面的医药制剂包含放射性医药组合物及保存液，所述放射性医药组合物是用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)与抗体所构成且经放射性核素标记后的复合体，其中该放射性核素与PCTA配位，所述保存液包含至少一种中性氨基酸、至少一种聚山梨醇酯及乙酸缓冲液，所述放射性医药组合物是使用与PCTA配位的放射性核素来对在所述保存液中保存了24小时以上的所述复合体进行标记而得到的。
(发明的效果)
根据本发明的一个方面，无需进行即时制备也能够制造放射性抗体医药品。
附图说明
图1示出保存液对于64Cu-PCTA-西妥昔单抗的标识率所起到的效果。
图2示出在将PCTA-西妥昔单抗于保存液中保存了3个月的情况下，保存液对于64Cu-PCTA-西妥昔单抗的标记后稳定性所起到的效果。
图3示出在将PCTA-西妥昔单抗于保存液中保存了12个月的情况下，PCTA-西妥昔单抗的、保存液对于64Cu-PCTA-西妥昔单抗的标记后稳定性所起到的效果。
图4示出保存液对于64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性所起到的效果。
图5是标记状态下的放射能对64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性带来的影响的研究结果图。
图6示出保存液对于225Ac-PCTA-西妥昔单抗的标记后稳定性所起到的效果。
具体实施方式
〔放射性医药组合物的中间体的保存方法〕
本实施方式的放射性医药组合物的中间体的保存方法(以下有时简记为“本实施方式的中间体保存方法”)包括将放射性医药组合物的中间体保存在保存液中。
(放射性医药组合物及其中间体)
本说明书中，放射性医药组合物指经放射性核素标记后的、用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)与抗上皮成长因子受体抗体(抗EGFR抗体)所构成的复合体。放射性医药组合物可用于疾病的诊断或治疗。另外，本说明书中，放射性医药组合物的中间体指放射性核素标记前的医药组合物(即，未经放射性核素标记的、用PCTA与抗EGFR抗体所构成的复合体)。放射性核素将在后文中说明。
(PCTA)
PCTA是双官能性螯合剂。向PCTA导入异氰酸酯基或N-羟基琥珀酰亚胺基，通过使这些基作用于抗体的赖氨酸残基的侧链氨基或N末端氨基，来将螯合位点导入抗体。然后，将放射性核素络合至螯合位点，从而能够得到经放射性核素标记了的抗体。
(抗EGFR抗体)
作为抗EGFR抗体的例子，可以举出与癌特异性结合的抗体等。作为抗EGFR抗体的具体例子，可以举出西妥昔单抗(Cetuximab)、帕尼单抗(Panitumumab)及耐昔妥珠单抗(Necitumumab)等。抗EGFR抗体可以是小鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。此外，抗EGFR抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。抗EGFR抗体可以采用市售的抗EGFR抗体，也可以采用通过公知的方法合成的抗EGFR抗体。
中间体可以采用通过公知的方法合成的中间体。例如，如实施例所示，将包含PCTA的溶液与包含抗EGFR抗体的溶液混合，并在1～60℃下孵育1小时～24小时，由此能够得到中间体。
(中间体的保存液)
本实施方式的中间体保存方法中使用的保存液(以下有时记作“中间体保存液”)是乙酸缓冲液。乙酸缓冲液的pH优选为5～8。使用乙酸缓冲液作为保存液，则蛋白质的聚集被抑制，能够将中间体保存预期的时间。
中间体在上述保存液中的浓度可以是0.1mg/mL以上，也可以是1mg/mL以上。另外，可以是50mg/mL以下，也可以是5mg/mL以下。
从使中间体保存液具有自由基捕捉活性的观点等考虑，中间体保存液优选含有中性氨基酸。从增加抗体在保存液中的稳定性的观点等考虑，中性氨基酸之中更优选溶解度高的中性氨基酸。高溶解度中性氨基酸的例子包括天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、丙氨酸或甘氨酸。上述保存液中所含的中性氨基酸可以是1种，也可以是2种以上。
从增加抗体在保存液中的稳定性等方面考虑，中间体保存液中所含的中性氨基酸的浓度优选为1μM以上，更优选为10μM以上，进一步优选为50μM以上。另外，上述保存液中所含的中性氨基酸的浓度优选为260mM以下，更优选为200mM以下，进一步优选为150mM以下。
从使中间体保存液具有自由基捕捉活性，从而实现抑制抗体(蛋白质)的聚集而稳定地保存中间体的方面考虑，中间体保存液优选含有聚山梨醇酯。聚山梨醇酯的例子包括聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65和聚山梨醇酯80等。上述保存液中所含的聚山梨醇酯可以是1种，也可以是2种以上。
从实现抑制蛋白质的聚集而稳定地保存中间体的方面考虑，中间体保存液中所含的聚山梨醇酯的浓度优选为1μM以上，更优选为10μM以上，进一步优选为50μM以上。另外，上述保存液中所含的聚山梨醇酯的浓度优选为400mM以下，更优选为200mM以下，进一步优选为100mM以下。
中间体保存液更优选包含至少一种中性氨基酸及至少一种聚山梨醇酯。若作为上述保存液的乙酸缓冲液中含有中性氨基酸及聚山梨醇酯，则能够发挥乙酸缓冲液、中性氨基酸及聚山梨醇酯的协同效果，由此进一步抑制蛋白质的聚集，从而能够稳定地保存中间体。另外，还起到如下效果：对于使用保存在该保存液中的中间体来制备的放射性医药组合物，能抑制其放射性分解。
中间体的保存时间为24小时以上。中间体的保存时间可以是48小时以上，可以是1周以上，也可以是1个月以上。另外，中间体的保存时间可以是3年以下，可以是2年以下，也可以是12个月以下。
从中间体的稳定性等方面考虑，中间体的保存温度优选为1℃以上，更优选为3℃以上。另外，中间体的保存温度优选为8℃以下，更优选为5℃以下。
本实施方式的中间体保存方法可以包括其他工序。作为其他工序的例子，可以举出将合成后的中间体的溶剂置换为上述保存液的工序等。
通过本实施方式的中间体保存方法来保存了的中间体、以及含有通过该保存方法保存后的中间体的保存液(中间体组合物)也包含在本实施方式内。另外，含有中间体组合物及用于标记中间体的放射性核素的试剂盒也包含在本实施方式内。如实施例所示，用经本实施方式的中间体保存方法保存了的中间体来制备的放射性医药组合物具有可在实际临床中使用的放射化学纯度。
在现有技术中，尚未确立长期保存中间体的方法，因此需要即时制备中间体。但是，用经本实施方式的中间体保存方法保存了12个月的中间体来制备的放射性医药组合物具有与通过即时制备而得到的放射性医药组合物同等的物性。因此，通过使用本实施方式的中间体保存方法，则无需即时制备中间体，能够削减作为中间体原料的抗EGFR抗体及PCTA的成本。另外，由于无需进行中间体的即时制备，因此能够大幅度地削减中间体的制备及品质试验所需的人工费等成本。另外，本实施方式的中间体保存方法能满足医药品GMP(Good Manufacturing Practice，良好生产规范)的要求。
(放射性医药组合物的制备方法)
本实施方式的放射性医药组合物的制备方法包括标记工序，其使用与PCTA配位的放射性核素来标记用上述保存方法保存了的上述中间体。
(标记工序)
标记工序中使用的放射性核素是与PCTA配位的放射性核素。该放射性核素的例子包括64Cu及225Ac等。
放射性核素对中间体的标记可以通过公知的方法来标记。例如，如实施例所示，将包含中间体的保存液与包含放射性核素的溶液混合，在1～60℃下孵育5分钟～12小时，由此能够将放射性核素标记给中间体。含有放射性核素的溶液优选为乙酸缓冲液，更优选为pH值与保存液相同的乙酸缓冲液。
本实施方式的放射性医药组合物的制备方法可以包括上述标记工序以外的其他工序。作为其他工序的例子，可以举出放射性医药组合物的放射化学纯度的测定工序等。
〔放射性医药组合物的保存方法〕
本实施方式的放射性医药组合物的保存方法包括：将上述放射性医药组合物保存在保存液中。
(放射性医药组合物的保存液)
本实施方式的放射性医药组合物的保存方法中使用的保存液(以下有时记作“放射性医药组合物保存液”)与中间体保存液同样地是乙酸缓冲液。使用乙酸缓冲液作为保存液，则蛋白质的聚集得到抑制，可以将放射性医药组合物保存预期的时间。
放射性医药组合物保存液的优选方案与中间体保存液的优选方案相同。特别是，若作为放射性医药组合物保存液的乙酸缓冲液中含有中性氨基酸及聚山梨醇酯，则能够进一步抑制蛋白质的凝集，从而能够稳定地保存放射性医药组合物。另外，还具有抑制放射性医药组合物的放射性分解的效果。
放射性医药组合物保存液与中间体保存液可以相同，也可以不同。从不需要溶剂置换，放射性医药组合物的制备变得简便，以及能够削减成本等方面考虑，优选放射性医药组合物保存液与中间体保存液相同。
放射性医药组合物在上述保存液中的浓度可以是5MBq/mL以上，也可以是25MBq/mL以上。另外，可以是5GBq/mL以下，也可以是500MBq/mL以下。
放射性医药组合物的保存时间可以是30分钟以上，可以是1小时以上，也可以是3小时以上。另外，放射性医药组合物的保存时间可以是24小时以下，可以是18小时以下，也可以是12小时以下。放射性医药组合物的保存温度的优选范围优选为1℃以上，更优选为15℃以上。另外，中间体的保存温度优选为30℃以下，更优选为25℃以下。
通过本实施方式的放射性医药组合物的保存方法来保存了的放射性医药组合物、以及含有通过该保存方法保存后的放射性医药组合物的保存液(医药制剂)也包含在本实施方式内。如实施例所示，通过本实施方式的放射性医药组合物的保存方法来保存的放射性医药组合物具有可在实际临床中使用的放射化学纯度。
在现有技术中，尚未确立放射性医药组合物的保存方法，因此需要即时制备放射性医药组合物。但是，通过本实施方式的放射性医药组合物的保存方法，能够使放射性医药组合物在制备后仍稳定保存24小时。因此，通过使用本实施方式的放射性医药组合物的保存方法，则无需即时制备放射性医药组合物，能够将制得的放射性医药组合物大范围地运输。另外，由于无需进行放射性医药组合物的即时制备，因此能够大幅度地削减放射性医药组合物的制备及品质试验所需的人工费等成本。本实施方式的放射性医药组合物的保存方法能够满足于医药品GMP的要求。
〔总结〕
本实施方式的放射性医药组合物的中间体的保存方法包括：将该中间体保存在乙酸缓冲液中，所述中间体是用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)与抗上皮成长因子受体抗体(抗EGFR抗体)所构成的复合体，保存时间为24小时以上。
本实施方式的保存方法中，所述乙酸缓冲液可以包含至少一种中性氨基酸及至少一种聚山梨醇酯。
本实施方式的保存方法中，所述抗EGFR抗体可以是西妥昔单抗。
本实施方式的放射性医药组合物的制备方法包括：标记工序，使用与PCTA配位的放射性核素来标记用上述保存方法保存了的所述中间体。
本实施方式的放射性医药组合物的制备方法中，所述放射性核素可以是64Cu或225Ac。
本实施方式的放射性医药组合物的保存方法包括：将该放射性医药组合物保存在乙酸缓冲液中，所述放射性医药组合物是用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)与抗上皮成长因子受体抗体(抗EGFR抗体)所构成且经放射性核素标记后的复合体，其中所述放射性核素与PCTA配位。
本实施方式的放射性医药组合物的保存方法中，可以将所述放射性医药组合物在所述乙酸缓冲液中保存30分钟以上。
本实施方式的放射性医药组合物的保存方法中，所述放射性核素可以是64Cu或225Ac。
本实施方式的放射性医药组合物的保存方法中，所述抗EGFR抗体可以是西妥昔单抗。
本实施方式的放射性医药组合物的保存方法中，所述乙酸缓冲液可以包含至少一种中性氨基酸及至少一种聚山梨醇酯。
本实施方式的中间体组合物是用于制备放射性医药组合物的中间体组合物，其包含放射性医药组合物的中间体及保存液，所述中间体是用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)与抗体所构成的复合体，所述保存液包含至少一种中性氨基酸、至少一种聚山梨醇酯及乙酸缓冲液，所述中间体在所述保存液中保存了24小时以上。
本实施方式的医药制剂包含放射性医药组合物及保存液，所述放射性医药组合物是用3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸(PCTA)与抗体所构成且经放射性核素标记后的复合体，其中所述放射性核素与PCTA配位，所述保存液包含至少一种中性氨基酸、至少一种聚山梨醇酯及乙酸缓冲液，所述放射性医药组合物是使用与PCTA配位的放射性核素来对在所述保存液中保存了24小时以上的所述复合体进行标记而得到的。
本实施方式的医药制剂中，所述放射性核素可以是64Cu或225Ac。
以下示出实施例，对本发明的实施方式进行更详细的说明。当然，本发明并不限定于以下实施例，细节可为各种形态。并且，本发明并不限定于上述实施方式，能够在说明书所示的范围内进行各种变更，适当组合分布揭载的技术手段而得到的实施方式也包含在本发明的技术范围内。另外，本说明书中记载的文献全部引用作为参考。
(实施例)
以下的实施例中，只要没有特别指明，则％表示质量％。
〔材料和方法〕
〔64Cu-PCTA-西妥昔单抗的合成方法〕
作为EGFR抗体的西妥昔单抗通过公知的方法得到。具体而言，将使用西妥昔单抗基因序列来得到的编码西妥昔单抗的DNA链转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，并且对由CHO细胞生物合成出的西妥昔单抗进行纯化。
按照Nucl Med Biol 43(11):685-691的记载，使用回旋加速器制备并纯化了64Cu。使用了3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五烷-1(15),11,13-三烯-4-S-(4-异硫氰酸根合苄基)-3,6,9-三乙酸(p-SCN-Bn-PCTA、Macrocyclics、Plano、TX、USA)，以备后续与64Cu配位以及与西妥昔单抗结合。所使用的杀菌水为医药级别，所使用的其他化学物质为化学级别。
对以下文献中记载的方法进行了若干变更来用西妥昔单抗与PCTA形成了复合体及实施了64Cu标记处理。文献：Cancer Sci 103(3):600-605；PLoS One 8(4):e61230；PLoSOne 10(4):e0123761。简言之，用Vivaspin ultrafiltration device(Sartorius,Aubagne,France)进行缓冲液置换来制备了西妥昔单抗的硼酸缓冲液(0.05M，pH8.5)(2mg/mL)。将西妥昔单抗的硼酸缓冲液与PCTA的二甲基亚砜溶液(0.42mg/mL)以5:1(PCTA:西妥昔单抗)的摩尔比混合。然后，在37℃下反应16小时，制备了PCTA-西妥昔单抗。利用超滤离心浓缩管并按照表1所示的3种保存液，对制得的PCTA-西妥昔单抗进行溶液置换而得到了2mg/mL的基于该3种保存液的PCTA-西妥昔单抗溶液。
[表1]
向按照表1中记载的保存液进行溶液置换而得到的各PCTA-西妥昔单抗溶液中，以3:1(64CuCl2:PCTA-西妥昔单抗；vol:vol)的比例添加并混合了溶解在乙酸缓冲液(0.1M、pH6.0)中的64CuCl2。然后，在40℃下反应1小时，由此制备了64Cu-PCTA-西妥昔单抗。
〔64Cu-PCTA-西妥昔单抗的放射化学纯度的分析方法〕
所制备的64Cu-PCTA-西妥昔单抗的放射化学纯度用RadioTLC(radio-thin layerchromatography)进行分析。使用硅胶(silica gel 60plate,Merck,Whitehouse Station,NJ,USA)作为载体，使用80％甲醇(甲醇:水＝80:20(vol/vol))作为流动相。为了检测不与PCTA-西妥昔单抗配位的游离64Cu，向64Cu-PCTA-西妥昔单抗分析试料5μL中添加25mM的EDTA 5μL，用RadioTLC进行了分析。作为对比，向64Cu的0.1M乙酸缓冲液(pH6.0)溶液分析试料5μL中同样地添加25mM的EDTA 5μL，以作为64Cu标准试料，并用RadioTLC进行了分析。各自将64Cu-PCTA-西妥昔单抗分析试料及64Cu标准试料以1μL的方式滴加到硅胶薄层板上，用流动相使其展开。然后，用成像分析仪(FLA7000，GE Healthcare Life Science，Marlborough，MA，USA)检测TLC板的放射化学纯度，算出64Cu-PCTA-西妥昔单抗的比例及64Cu的比例。计算了无缺失而完整的64Cu-PCTA-西妥昔单抗的放射能相对于总放射能的比例，将该比例作为了相对放射能。将95％以上的放射化学纯度作为64Cu-PCTA-西妥昔单抗的目标规格基准。
〔64Cu-PCTA-西妥昔单抗相对于西妥昔单抗表达细胞的结合性的评价方法〕
64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性评价中使用了HCT116细胞(人大肠癌细胞；CCL-247；American Type Cell Collection)。将HCT116细胞稀释在含有1％牛血清白蛋白(Sigma公司制)的磷酸缓冲液中，在冰上使HCT116细胞与64Cu-PCTA-西妥昔单抗反应1小时。洗涤细胞后，用γ计量器(1480Automatic gamma counter Wizard 3、Perkin Elmer公司制)测定了放射能，由此评价了64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性。免疫结合活性通过Lindmo等人披露的方法(J Immunol Methods.1984；72:77-89)来得出。此外，在竞争性抑制检验中，将HCT116细胞与64Cu-PCTA-西妥昔单抗及各种浓度的未标记西妥昔单抗在冰上孵育1小时。洗涤后，与上述同样地评价了64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性。基于竞争性抑制检验的结果来确定离解常数。
〔统计分析〕
细胞结合性的评价数据表示是具有相应标准偏差的平均值。使用方差分析计算P值并与多组比较。小于0.05的P值被认为是统计学显著的。
〔实验1.保存液对于64Cu-PCTA-西妥昔单抗的标识率所起到效果〕
采用按照表1中记载的3种保存液来制得的PCTA-西妥昔单抗，得到了刚制备后(0个月)的试料以及制备后在4℃下冷藏保存了3、6、8、9及12个月的试料，用这些试料来制备了64Cu-PCTA-西妥昔单抗(64Cu、37MBq、20μg的PCTA-西妥昔单抗、总量40μL)。然后，比较及研究了刚标记后的放射化学纯度(标记率)，由此评价了3种保存液对PCTA-西妥昔单抗的稳定化所起到的效果。评价结果如图1所示。
图1中的纵轴表示放射化学纯度(标记率；％)。横轴表示用保存液制得的PCTA-西妥昔单抗的、自其刚制得时起的保存时间(个月)。“*”是指结果为放射化学纯度小于95％。
如图1所示，用比较例的保存液(图1中带三角点的评价线)保存了的PCTA-西妥昔单抗由于长期保存而标记率降低，低于95％这一目标规格基准。另一方面，用实施例1的保存液(图1中带方点的评价线)及实施例2的保存液(图1中带圆点的评价线)保存了的PCTA-西妥昔单抗的标记率的降低得到了抑制。特别是用实施例2的保存液保存了的PCTA-西妥昔单抗的标记率的维持效果较高。
〔实验2.保存液对于64Cu-PCTA-西妥昔单抗的标记后稳定性所起到的效果〕
将按照上述表1中记载的3种保存液来制得的PCTA-西妥昔单抗分别在4℃下冷藏保存了3个月、12个月以作为试料，使用这些试料分别制备了64Cu-PCTA-西妥昔单抗(64Cu、37MBq、20μg的PCTA-西妥昔单抗，总量为40μL)。比较及研究了刚标记后的放射化学纯度(稳定性)、以及标记后又经0.5、1、3及24小时后的放射化学纯度(稳定性)，由此评价了3种保存液对64Cu-PCTA-西妥昔单抗的稳定化所起到的效果。评价结果如图2及图3所示。
图2是在保存液中保存了3个月的PCTA-西妥昔单抗经64Cu标记后的放射化学纯度(稳定性)的比较结果。图3是在保存液中保存了12个月的PCTA-西妥昔单抗经64Cu标记后的放射化学纯度(稳定性)的比较结果。图2及3的纵轴表示放射化学纯度(标记率；％)。横轴表示经64Cu标记后的经过时间。“*”及“#”是指结果为放射化学纯度小于95％。
如图2及图3所示，以在比较例的保存液(图2及图3中带三角点的评价线)中保存了的PCTA-西妥昔单抗来看，其在刚标记后的放射化学纯度低于95％这一目标规格基准。另一方面，以在实施例1的保存液(图2及3中带方点的评价线)及实施例2的保存液(图2及3中带圆点的评价线)中保存了的PCTA-西妥昔单抗来看，其在刚标记后的放射化学纯度超过了95％这一目标规格基准。
如图2所示，在实施例1的保存液中保存了的PCTA-西妥昔单抗经标记后又经3小时后的放射化学纯度低于了95％。另一方面，如图2及图3所示，在实施例2的保存液中保存的PCTA-西妥昔单抗即使是保存了3个月或12个月，其在经标记后的24小时以内仍能够维持放射化学纯度。
实验1和2的结果表明：例如能够对保存在实施例的保存液中的中间体进行转运，并且能在转运目的地用该中间体制备放射性医药组合物。另外可知：在制备放射性医药组合物后，通过将其保存在实施例的保存液中，能够24小时稳定保存放射性医药组合物。
〔实验3.保存液对于64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性所起到的效果〕
按照上述表1中记载的3种保存液来制得PCTA-西妥昔单抗并将其在4℃下保存了12个月，然后用该PCTA-西妥昔单抗来制备了64Cu-PCTA-西妥昔单抗(64Cu、37MBq、20μg的PCTA-西妥昔单抗、总量40μL)。将HCT116细胞(6.25×105个)稀释在含有1％牛血清白蛋白(BSA)的磷酸缓冲液1mL中。向该稀释液中加入64Cu-PCTA-西妥昔单抗并在冰上孵育1小时，比较了64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性。按照非专利文献3的记载，对用市售的西妥昔单抗(商品名爱必妥(Erbitux)，Merck公司)与PCTA所构成的复合体标记了64Cu，以此作为阳性对照。对3种保存液对PCTA-西妥昔单抗的稳定化所起到的效果进行了生物化学评价，结果如图4所示。
图4的纵轴表示将阳性对照的细胞结合性结果设为100％时的、细胞结合性的比例。图4的“NS”指：与阳性对照的细胞结合性结果相比没有显著差异。
如图4所示，无论哪种保存条件，64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性均保持在与阳性对照同等的水平。
〔实验4.标记时放射能对64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性的影响〕
使用保存在实施例2的保存液中的PCTA-西妥昔单抗，研究了标记时的放射能浓度对细胞结合性的影响。将PCTA-西妥昔单抗溶液与64Cu的0.1M乙酸缓冲液(pH6.0)以3:1(64Cu:PCTA-西妥昔单抗；v/v)混合。作为64Cu的0.1M乙酸缓冲液，用放射能浓度各为520MBq、370MBq及130MBq的3种溶液进行了验证。通过在40℃下反应1小时，制备了64Cu-PCTA-西妥昔单抗(PCTA-西妥昔单抗90μg、总量5mL)。然后，在与实验3相同的条件下评价了64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性。将实验3中评价的64Cu-PCTA-西妥昔单抗(64Cu、37MBq、20μg的PCTA-西妥昔单抗、总量40μL)作为了比较对象。比较结果如图5所示。
图5的纵轴表示将实验3中评价的64Cu-PCTA-西妥昔单抗的细胞结合性结果设为100％时的、细胞结合性的比例。
如图5所示，即使放射性浓度为520MBq(PCTA-西妥昔单抗90μg、总量5mL)，也未见对细胞结合性的影响。由该结果可知，能够以可用于实际临床诊断的量及浓度来稳定地制备64Cu-PCTA-西妥昔单抗。
〔实验5.保存液对于225Ac-PCTA-西妥昔单抗的标记后稳定性所起到的效果〕
使用在实施例2的保存液中保存了的PCTA-西妥昔单抗，研究了用225Ac进行的标记处理及标记后稳定性。向PCTA-西妥昔单抗溶液中，以3:1(225Ac:PCTA-西妥昔单抗；v/v)的比例添加并混合了225Ac的0.1M乙酸缓冲液(pH6.0)。在40℃下反应1小时来制备了225Ac-PCTA-西妥昔单抗。225A-PCTA-西妥昔单抗的评价结果如图6所示。
图6中，左侧的柱状图示出刚用225Ac标记后的放射化学纯度。右侧的柱状图示出用225Ac标记后又经24小时以后的放射化学纯度。
如图6所示，刚用225Ac标记后的放射化学纯度超过95％这一目标规格基准。另外，可知这一放射化学纯度维持到225Ac标记后24小时。由这些结果可知：本发明的保存液也适用于64Cu以外的225Ac等其他金属放射性核素。
在对西妥昔单抗标记225Ac的情况下，广泛使用DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)作为配体。为了使225Ac与DOTA配位，需要较高的pH值和高温。
另一方面，制备225Ac-PCTA-西妥昔单抗时，能够在温和的条件(40℃、pH6.0)下使225Ac高效地与PCTA配位。另外，即使在温和的条件下进行了配位，放射化学纯度也高达95％以上。
(产业上的可利用性)
本发明可以用于放射性医药组合物的中间体及放射性医药组合物的长期保存。因此，本发明能够稳定且高效地制造放射性医药组合物。

Claims (14)

1.一种保存方法，
其包括：将放射性医药组合物的中间体保存在乙酸缓冲液中，
所述中间体是用PCTA与抗EGFR抗体所构成的复合体，其中，PCTA是3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸，抗EGFR抗体是抗上皮成长因子受体抗体，
保存时间为24小时以上。
2.根据权利要求1所述的保存方法，其中，
所述乙酸缓冲液包含至少一种中性氨基酸及至少一种聚山梨醇酯。
3.根据权利要求1或2所述的保存方法，其中，
所述抗EGFR抗体是西妥昔单抗。
4.一种制备方法，其是放射性医药组合物的制备方法，其包括：
标记工序，使用与PCTA配位的放射性核素来标记用权利要求1～3中任一项所述的保存方法保存了的所述中间体。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，
所述放射性核素是64Cu或225Ac。
6.一种保存方法，
其包括：将放射性医药组合物保存在乙酸缓冲液中，
所述放射性医药组合物是用PCTA与抗EGFR抗体所构成且经放射性核素标记后的复合体，其中，PCTA是3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸，抗EGFR抗体是抗上皮成长因子受体抗体，所述放射性核素与PCTA配位。
7.根据权利要求6所述的保存方法，其中，
将所述放射性医药组合物在所述乙酸缓冲液中保存30分钟以上。
8.根据权利要求6或7所述的保存方法，其中，
所述放射性核素是64Cu或225Ac。
9.根据权利要求6～8中任一项所述的保存方法，其中，
所述抗EGFR抗体是西妥昔单抗。
10.根据权利要求6～9中任一项所述的保存方法，其中，
所述乙酸缓冲液包含至少一种中性氨基酸及至少一种聚山梨醇酯。
11.一种中间体组合物，
其是用于制备放射性医药组合物的中间体组合物，
其包含放射性医药组合物的中间体及保存液，
所述中间体是用PCTA与抗体所构成的复合体，其中，PCTA是3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸，
所述保存液包含至少一种中性氨基酸、至少一种聚山梨醇酯及乙酸缓冲液，
所述中间体在所述保存液中保存了24小时以上。
12.一种医药制剂，
其包含放射性医药组合物及保存液，
所述放射性医药组合物是用PCTA与抗体所构成且经放射性核素标记后的复合体，其中，PCTA是3,6,9,15-四氮杂双环[9.3.1]十五碳-1(15),11,13-三烯-3,6,9-三乙酸，所述放射性核素与PCTA配位，
所述保存液包含至少一种中性氨基酸、至少一种聚山梨醇酯及乙酸缓冲液，
所述放射性医药组合物是使用与PCTA配位的放射性核素来对在所述保存液中保存了24小时以上的所述复合体进行标记而得到的。
13.根据权利要求12所述的医药制剂，其中，
所述放射性核素是64Cu。
14.根据权利要求12所述的医药制剂，其中，
所述放射性核素是225Ac。
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