CN117224689A

CN117224689A - 联合抗her2抗体和化疗剂治疗胃癌的用途

Info

Publication number: CN117224689A
Application number: CN202311527171.5A
Authority: CN
Inventors: 王清宇; 杨復唐; 程建成; 邱文婷
Original assignee: Shanghai Fuhong Hanlin Biomedical Co ltd; Shanghai Fuhong Hanlin Biopharmacy Co ltd; Shanghai Henlius Biotech Inc
Current assignee: Shanghai Fuhong Hanlin Biomedical Co ltd; Shanghai Fuhong Hanlin Biopharmacy Co ltd; Shanghai Henlius Biotech Inc
Priority date: 2023-11-16
Filing date: 2023-11-16
Publication date: 2023-12-15
Anticipated expiration: 2043-11-16
Also published as: CN117224689B

Abstract

本发明涉及抗HER2抗体组合和化疗剂联用用于治疗胃癌的方法和用途。述方法和用途是将曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和化疗剂联合治疗HER2阳性的晚期胃癌，与现有的HER2阳性晚期胃癌的一线治疗方案相比，曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和化疗剂（XELOX）联合治疗方法，延长了患者的无进展生存期（PFS）和/或总生存期（OS）。

Description

联合抗HER2抗体和化疗剂治疗胃癌的用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及药物联合治疗癌症的用途，尤其是涉及一种抗HER2抗体、曲妥珠单抗和化疗剂联合治疗HER2阳性的胃癌或胃食管结合部腺癌的用途。

背景技术

胃癌是常见恶性肿瘤，根据 WHO 统计，2015年胃癌以 75.4万例死亡位居全球恶性肿瘤死亡的第四位。在世界范围内属于高发地区。胃癌可分为腺癌、腺鳞癌、鳞癌、类癌等，绝大多数是胃腺癌。胃癌临床早期表现隐匿，虽然消化道内镜的快速发展使胃癌的早期诊断率有了很大的提高，但总体来说胃癌的预后仍不理想，尤其是局部进展和转移性胃癌的整体预后不佳。手术切除虽能为胃癌患者提供最大的治疗机会，但术后复发和转移也是此类胃癌患者死亡的重要原因。

HER2（人表皮生长因子受体 2）基因是致癌基因，位于人类第 17 号染色体长臂（17q21-q22），编码跨膜糖蛋白受体。HER2 是结合在细胞膜表面的受体酪氨酸激酶，参与导致细胞生长和分化的信号传导途径，由原癌基因 HER2/neu 编码。学界通常认为 HER2 是一个孤受体，表皮生长因子家族的配体都无法激活 HER2，但配体结合ErbB受体时可形成二聚体，且 HER2 可与ErbB（酪氨酸激酶受体）家族的其他成员结合成异二聚体。

HER2 阳性胃癌是一类独特的疾病亚型，需要采取不同于 HER2 阴性胃癌的诊疗策略和方法。全球报道的胃癌 HER2 过表达阳性率为 7.3% ～ 20.2%，中国胃癌患者 HER2阳性率为12% ～ 13%。目前由于不同研究使用的评价标准各不相同，HER2 在胃癌预后判断中的价值尚无一致结论。

HER2 阳性晚期胃癌患者可从曲妥珠单抗治疗中获益。此前基于已有的非临床结果和曲妥珠单抗联合化疗用于 HER2 阳性转移性乳腺癌和乳腺癌辅助治疗的确证性临床获益，开展了一项随机 III 期研究（ToGA），评价在氟尿嘧啶类药物（卡培他滨或 5-FU）+顺铂（FP）基础上联合曲妥珠单抗治疗 HER2-阳性晚期胃癌的有效性和安全性。该研究在 24个国家入组了 594 例患者。患者按照 1:1的比例随机，接受 FP 方案或 FP+曲妥珠单抗(TFP)治疗。主要终点为OS。结果表明 TFP 治疗优于 FP 单独治疗，在意向治疗(ITT)人群中 TFP 组患者的中位总生存期为 13.8个月，与之相比 FP 治疗组为 11.1个月（风险比=0.74；95% CI：0.60，0.91）。TFP 组患者的中位无进展生存期为6.7个月，FP 治疗组为 5.5个月（风险比= 0.71；95% CI：0.59，0.85）。

对于晚期胃癌患者的化疗药物选择，在中国通常推荐氟尿嘧啶类和铂类药物的两药联合方案。基于患者更好的耐受性和中国实际临床应用的情况，CSCO 胃癌指南在铂类药物中更多推荐奥沙利铂。卡培他滨+奥沙利铂（XELOX）方案的疗效也得到了相关临床试验的证实，得到了中国CSCO 胃癌指南的Ⅰ级推荐。同时目前欧洲ESMO指南及美国NCCN指南也将曲妥珠联合化疗（氟尿嘧啶类及铂类药物）作为HER2阳性晚期胃癌一线治疗的首选推荐。免疫治疗已成为HER2阳性晚期胃癌联合治疗重要的探索方向。

发明内容

本发明的一个目的是提供曲妥珠单抗与第二抗体和化疗剂联合在制备治疗HER2阳性的胃癌的药物中的用途。

本发明的第二个目的是提供一种用于治疗HER2阳性的胃癌或胃食管结合部腺癌的药剂盒。

本发明也提供治疗HER2阳性的胃癌或胃食管结合部腺癌的方法。

根据本发明的一方面，曲妥珠单抗与第二抗体和化疗剂联合治疗癌症，特别是HER2阳性的胃癌，其中所述第二抗体为抗HER2抗体（也称为第二抗HER2抗体）或其抗原结合片段，且第二抗体与曲妥珠单抗有不同的结合表位，优选的第二抗体包含：

重链可变区，其包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:2所示的HCDR2和如SEQ ID NO:3所示的HCDR3；和

轻链可变区，其包含如SEQ ID NO:6所示的LCDR1、如SEQ ID NO:7所示的LCDR2和如SEQ ID NO:8所示的LCDR3。

在本发明的一个较佳实施方式中，其中所述第二抗体的重链可变区包含如SEQ IDNO:4所示的氨基酸序列或由其组成，和所述第二抗体的轻链可变区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或由其组成。

在本发明的一个较佳实施方式中，其中所述第二抗体的重链包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或由其组成，和所述第二抗体的轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由其组成。

作为与二种抗体联合使用的化疗剂，可以选择目前临床上应用的或指南推荐使用的各种化疗剂，优选的化疗剂是氟尿嘧啶类药物和铂类药物单用或联合使用。优选的氟尿嘧啶类药物选自5-氟尿嘧啶和卡培他滨，铂类药物选自顺铂和奥沙利铂。更优选的是，化疗剂为卡培他滨和奥沙利铂，在最优选的治疗方案上，将曲妥珠单抗与第二抗体和卡培他滨+奥沙利铂的化疗方案（XELOX）联合使用。

本发明所述的用途主要用于治疗HER2阳性的胃癌，特别是HER2阳性的晚期胃癌，更推荐的是治疗晚期不可切除或转移性HER2阳性的胃癌，也包括胃食管结合部腺癌，其与胃癌有大致相同或类似的诊断标准和临床表现。在本发明的一个优选实施方案中，将本发明的方法和用途用于未接受过治疗并且诊断有晚期不可切除或转移性胃癌，即用于所述癌症的一线治疗。

在用药方式和药物用量上，其中所述曲妥珠单抗、第二抗体或其结合片段的用量为：每3周静脉内施用，所述曲妥珠单抗以8mg/kg初始负荷剂量施用，随后每3周6mg/kg施用，所述第二抗体以25mg/kg或15mg/kg剂量施用；其中所述化疗剂为卡培他滨联合奥沙利铂（XELOX方案），用量为奥沙利铂以130mg/m²剂量、静脉内输注，每三周给药一次；卡培他滨以1000mg/m²剂量、口服施用，每日两次，每三周为一个给药周期。

在上述联合用药的基础上，根据需要，还可以施用免疫检查点抑制剂，例如抗PD-1/PD-L1抗体，优选抗PD-1抗体。

根据本发明的另一方面，本发明的联合治疗方案可以将各药物按照上述方案分别施用于患者，也可以制备成药包或药剂盒的形式以方便用药。因此，本发明也提供一种药剂盒，用于治疗HER2阳性的胃癌或胃食管结合部腺癌，包含下述组成物：

曲妥珠单抗；

第二抗体，所述第二抗体为与所述曲妥珠单抗具有不同结合位点的第二种抗HER2的抗体或其抗原结合片段，包含：

轻链可变区，其包含如SEQ ID NO:6所示的LCDR1、如SEQ ID NO:7所示的LCDR2和如SEQ ID NO:8所示的LCDR3；和

化疗剂。

在本发明的一个优选实施方式中，其中所述化疗剂为卡培他滨和奥沙利铂。

本发明所述的药剂盒，还可以进一步包含抗PD-1/PD-L 1抗体。

有益效果：

本发明提供了抗HER2抗体组合和化疗剂联用用于治疗HER2阳性的胃癌患者的方法和用途。特别地，所述方法和用途是将曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和化疗剂联合治疗HER2阳性的晚期胃癌，基于针对晚期不可切除或转移性HER2阳性的胃癌患者中曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和化疗剂（XELOX）联合治疗的随机、双盲、多中心、II期临床研究数据表明，与HER2阳性晚期胃癌的一线治疗方案相比，曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和化疗剂（XELOX）联合治疗方法，延长了患者的无进展生存期（PFS）和/或总生存期（OS）。

附图说明

图1为本发明所涉及的第二抗HER2抗体、曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的HER2表位结合竞争分析结果；

其中a为依次注射HER2-Fc蛋白、曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的表位结合竞争分析结果；

b为依次注射HER2-Fc蛋白、帕妥珠单抗和曲妥珠单抗的表位结合竞争分析结果；

图中HER2代表HER2-Fc蛋白。

图2为本发明所涉及的第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗联合处理胃癌细胞NCI-N87和SNU216的HER2介导的内吞作用研究。

图3为本发明所涉及的第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗联合处理胃癌细胞NCI细胞引起的EGFR细胞表达水平研究；

其中图3中a为细胞的HER2的表达水平；

图3中b为细胞的EGFR表达水平。

图4a为本发明所涉及的第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗联合处理胃癌细胞NCI-N87的细胞存活率的研究；

图4b为本发明所涉及的第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗联合处理胃癌细胞NCI-N87的细胞凋亡研究；

图4c为本发明所涉及的第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗联合处理异种人胃癌NCI-N87模型的肿瘤体积结果；

图4d和图4e为本发明所涉及的第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗联合处理人胃癌PDX模型的肿瘤体积结果。

图5为本发明所涉及的临床研究的受试者无进展生存期Kaplan-Meier曲线（RECIST1.1）。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明进行进一步的详细说明，不应理解为对本发明的限制。

I. 定义

“HER受体”是术语HER受体家族的受体蛋白酪氨酸激酶，包括EGFR、HER2、HER3和HER4受体。HER受体通常会包含：a.胞外域，可结合HER配体和/或与另一个HER受体分子二聚化；b.亲脂性跨膜域；c.保守的胞内酪氨酸激酶域；和d.含有几个可被磷酸化的酪氨酸残基的羧基末端信号传导域。HER受体可以是“天然序列”HER受体或其“氨基酸序列变体”。优选的是，HER受体是天然序列人HER受体。

“HER二聚体”在本文中指包含至少两个HER受体的非共价联合二聚体。当表达两种或更多种HER受体的细胞暴露于HER配体时可能形成此类复合物，且可通过免疫沉淀进行分离以及通过SDS-PAGE进行分析，如例如Sliwkowski等,J .Biol .Chem .269(20):14661~14665(1994)中所述。其它蛋白质，如细胞因子受体亚基可与所述二聚体联合。优选地，所述HER二聚体包含HER2。

“HER异二聚体”在本文中指包含至少两个不同HER受体的非共价联合异二聚体，如EGFR-HER2、HER2-HER3或HER2-HER4异二聚体。

“HER抗体”是指结合HER受体的抗体。任选地，HER抗体进一步干扰HER活化或功能。优选地，HER抗体结合HER2受体。本文所涉及的HER2抗体为曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体，其包括CDRs。

“HER活化”指任一种或多种HER受体的活化或磷酸化。一般而言，HER活化导致信号转导（例如由HER受体胞内激酶域引起的，磷酸化HER受体或底物多肽中的酪氨酸残基）。HER活化可由结合包含HER受体的HER二聚体的HER配体介导。结合HER二聚体的HER配体可活化二聚体中的一种或多种HER受体的激酶域，并由此导致一种或多种HER受体中酪氨酸残基的磷酸化和/或其他底物多肽如Akt或MAPK胞内激酶中酪氨酸残基的磷酸化。

“磷酸化”指一个或多个磷酸基向蛋白质如HER受体或其底物的添加。

“抑制HER二聚化”的抗体，是指抑制或干扰HER二聚体形成的抗体。优选地，这类抗体结合HER2与其异二聚体结合位点处。本文中最优选的二聚化抑制性抗体是曲妥珠单抗或第二抗HER2抗体。抑制HER二聚化的抗体的其他例子包含结合EGFR并抑制其与一种或多种其他HER受体二聚化的抗体；结合HER3并抑制其与一种或多种其他HER受体二聚化的抗体；和结合HER4并抑制其与一种或多种其他HER受体二聚化的抗体。

“HER2二聚化抑制剂”是抑制包含HER2的二聚体或异二聚体形成的药剂。

HER2上的“异二聚体结合位点”指HER2胞外域中在与EGFR、HER3或HER4形成二聚体时，接触EGFR、HER3或HER4胞外域中某区域或与EGFR、HER3或HER4胞外域中某区域形成介面的区域。已发现所述区域在HER2的域II中。

就如本文所使用的，“曲妥珠单抗”指包含SEQ ID NO:11的重链和SEQ ID NO:12的轻链及其所包含的CDRs的抗体；可以理解的是，术语“曲妥珠单抗”在本文中覆盖“rhuMb4D5”（例如美国专利No.5,821,337中公开的抗体）以及曲妥珠单抗药物的生物类似药。

“帕妥珠单抗”指包含SEQ ID NO:13的重链和SEQ ID NO:14的轻链及其所包含的CDRs的抗体；可以理解的是，术语“帕妥珠单抗”在本文中覆盖“RhuMAb 2C4”（例如WO01/00245、WO2006/007398和美国专利US2006/0034842中所公开）以及帕妥珠单抗药物的生物类似药。

术语“抗体”在本文中以最广义使用，具体覆盖单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体以及抗体片段。

“完整抗体”在本文中是指包含两个抗原结合区和Fc区的抗体。

“抗原结合片段”在本文中是指是指任何能够与抗原结合的抗体片段，包括Fab、F(ab ')、F(ab ')2、Fv等。Fab具有一个抗原结合位点，其由抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域、轻链恒定结构域和重链第一恒定结构域(CH1)构成。Fab '不同于Fab在于在重链CH1结构域的C末端具有包含一个或更多个半胱氨酸残基的铰链区。通过在Fab′铰链区的半胱氨酸残基之间形成二硫键来产生F(ab’)2抗体。Fv是由重链可变区和轻链可变区构成的最小抗体片段，并且制备Fv片段的重组技术公开于PCT WO 88/10649、WO 88/106630、WO88/07085、WO 88/07086和WO 88/09344中。在双链中，重链和轻链的可变区通过非共价键连接，而在单链Fv中，重链和轻链的可变区通常经由肽接头通过共价键连接，或者在C末端彼此直接连接形成二聚体(例如双链Fv)。可使用蛋白水解酶获得这样的抗体片段(例如，用木瓜蛋白酶消化全抗体以产生Fab片段，而胃蛋白酶处理导致产生F(ab’)₂片段)，并且可以通过遗传重组技术来制备这样的抗体片段。

本文使用的术语“重链”是指全长重链及其一部分二者，其包含含有用于特异性结合抗原之可变区序列的氨基酸序列的可变结构域(VH)和三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)。本文使用的术语“轻链”是指全长轻链及其一部分二者，其包含含有用于特异性结合抗原之可变区序列的氨基酸序列的可变结构域(VL)和恒定结构域(CL)。

本文使用的术语“CDR(互补决定区，complementarity determining region)”是指免疫球蛋白的重链超变区和轻链超变区的氨基酸序列(K a ba t等，S e q u e n c e so fProteins of Immunological Interest，第4版，U .S .Department of Health andHumanServices，National Institutes of Health(1987))。每个重链和轻链包含三个CDR(重链(HCDR1、HCDR2和HCDR3)以及轻链(LCDR1、LCDR2和LCDR3))。CDR提供了在抗体与抗原或表位结合中具有重要作用的接触残基。

“表位”或“结合表位”，又名抗原决定簇，是指抗原分子上能够与抗体结合位点发生特异性结合作用并且决定抗原特异性的部位。

如本发明所用，“免疫检查点（immunecheckpoint）”是一类免疫抑制性分子，主要在免疫细胞上表达、能调节免疫激活程度，防止自身免疫；例如包括PD1、CTLA4、LMTK3、LAG3、TIM3、TIGIT等。“免疫检查点抑制剂”是指能够降低、阻断、抑制、消除或干扰免疫检查点分子与其配体相互作用。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂包括抗PD-1抗体、抗CTLA4抗体、抗LMTK3抗体、抗LAG3抗体、抗TIM3抗体和抗TIGIT抗体。在本发明某些具体实施例中，免疫检查点抑制剂优选为抗PD-1抗体。

“PD-1”，为程序性死亡受体1，是指结合CD28家族的免疫抑制受体。PD-1主要表达于体内活化T细胞表面，并且能够结合两个配体，PD-L1和PD-L2。术语“PD-1”通常包括人PD-1、其变体、同型或具有至少一个通用表位的类似物。如本文所用的，抗PD-1抗体能够降低、阻断、抑制、消除或干扰PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用的信号转导。

如本文所用，“ADCC或抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用”，是指在IgG抗体通过Fab片段与靶细胞（例如肿瘤细胞或感染的细胞）的表面抗原决定簇特异性结合后，其抗体Fc片段与具有FcγR的效应细胞结合，例如NK细胞、单核-巨噬细胞、中性粒细胞等细胞，触发效应细胞的杀伤活性，直接杀伤靶细胞的作用，其中，NK细胞为介导ADCC的主要细胞。

“细胞系来源的异体移植肿瘤模型或CDX”，是指将体外培养的异源（例如人源）的肿瘤细胞系移植到免疫缺陷的小鼠体内而构建的肿瘤模型，目前作为抗肿瘤药物临床前药效学评价最常见的体内模型之一。

“PDX模型或病人来源肿瘤异种移植模型”，是指将来源于肿瘤患者的肿瘤组织移植至重症免疫缺陷型小鼠体内，并使肿瘤组织在小鼠体内生长形成移植瘤；该模型能够保留亲代肿瘤的生长微环境，并且有利于更好的表现亲代肿瘤性状，并且维持肿瘤的异质性。

如本文所用的，“癌症”或“癌病”是指哺乳动物中特征为不受控制的细胞过度增殖的生理病患。

如本文所用的，“晚期胃癌”是指存在局部侵入或转移而扩散至最初部位或器官之外的癌症，通常地，根据AJCC/UICC 胃癌TNM分期规则确定晚期胃癌，例如肿瘤侵犯组织（例如脏层腹膜或邻近结构）、区域淋巴结转移和/或远处转移或CT分期征象等。

“不可切除”癌症是不能通过手术切除的；主要是因为肿瘤原因不可切除，例如原发肿瘤外侵严重，与周围正常组织无法分类或包饶大血管；区域淋巴结转移固定、融合成团，或转移淋巴结不在手术可清扫范围内；肿瘤远处转移或肿瘤的腹腔种植等。

“转移性”癌症是指身体的一个部位（通常为原发位）扩散至身体另一部位的癌症。

“HER2阳性”癌症是指包含具有高于正常水平的HER2的癌细胞。通常地，HER2阳性癌症具有2+或3+的免疫组织化学（IHC）评分和/或≥2.0的原位杂交（ISH）扩增比。

“治疗”是治疗性处理和防护性或预防性措施，用于获得有益的或所希望的结果（包括临床结果）。获得有益的或所希望的结果包括单不限于以下一种或多种：缓解由疾病引起的一种或多种症状、减少疾病的程度、稳定疾病（例如，预防或延缓疾病的恶化）、延迟或减缓疾病的进展、改善疾病状态、增加或改善生活质量、增加体重和/或延长存活期等。

“施用”代表使用本领域技术人员已知的多种方法和递送方式或系统中的一种，向主体（例如受试者）引入治疗性药物。抗体的施用途径包括静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内等其他胃肠外途径。在一些实施例中，通过静脉内使用，例如通过注射或输注。化疗剂的使用途径包括静脉内、肌肉内、皮下等其他胃肠外给药途径或者口服施用。

如本文所用，“有效剂量或有效量”是指在每次施用时能够在个体产生治疗效果的用量。此剂量会因为多种因素而变化，例如治疗目的、治疗频率、个体的体重和耐受、症状的严重程度、副作用的危险性和给药途径等。

“化疗剂”是指可用于治疗癌症的化学化合物。举例来说，用于化疗的化疗剂包括烷化剂类（alkyating agents）、乙撑亚胺类（ehtylenimines）和甲基密胺类（methylamelamines）、番荔枝内酯类（aceogenin）、秋水仙素类（colchicines）、喜树碱类（camptothecin）、抗生素类、叶酸类似物、嘌呤类似物、嘧啶类似物、铂类似物或基于铂的类似物等。本发明所用的化疗剂涉及氟尿嘧啶类化合物和铂类化疗剂，具体包括5-氟尿嘧啶（5-FU）、卡培他滨和顺铂、奥沙利铂。另外，本发明所用的“XELOX”是指包含药物卡培他滨（Xeloda）和奥沙利铂（Oxaliplatin）的联合化疗剂，其通常用于消化道癌症的化疗，例如晚期胃癌、晚期结肠癌等。

如本文所用的，“化疗”用于指任何用于治疗癌症的化疗方法，包括本发明涉及的氟尿嘧啶类化合物的化疗和铂类化疗剂的化疗的标准方案。在本发明的具体实施方案中，化疗剂包含5-氟尿嘧啶、卡培他滨+顺铂或奥沙利铂，优选为卡培他滨+奥沙利铂。

“免疫治疗或免疫疗法”表示通过一定方法治疗患有疾病或处于感染或遭受疾病复发的风险主体，包括诱导、增强、抑制或以其他方式改变免疫应答。

如本文所用的，“固定的（fixed）”或“不变的（flat）”剂量指不考虑患者的体重和体表面积而适用于患者的剂量。

“加载或负荷（loading）”剂量一般包括施用于患者治疗剂（包括曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体、化疗剂等）的初始剂量，后续其一个或多个维持剂量。一般而言，施加单个加载剂量；而本发明其他实施例中，施加多个加载剂量。通常地，所施用的加载剂量的量超过所施用的维持剂量的量，和/或记载剂量的施用比维持剂量更频繁，从而比使用维持剂量更早达到治疗剂的期望稳态浓度。

“维持”剂量在本文中是指在治疗期间施用于患者的一个或多个剂量的治疗剂。通常，维持剂量以一定的治疗间隔施用，例如大约每周一次、大约每两周一次、大约每三周一次或大约每四周一次，优选为每三周一次。

“静脉内（IV）”施用是指将药物（例如曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体或化疗剂）施用入患者的静脉，例如通过输注。

“皮下”施用是指将药物（包括曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体或化疗剂）施用于患者的皮肤下。

如本文中使用，“总体存活”或“OS”指患者自我诊断或治疗时间起保持限定时段存活，诸如1年、5年等。根据实施例中描述的临床实验的目的而言，总体存活（OS）定义为患者群体随机化的日期起到因任何原因而死亡的日期的时间。

“无进展存活”或“PFS”指患者保持存活且癌症没有进展或恶化。无进展存活（PFS）定义为从研究群体随机化到首次记载的进展型疾病或难管理的毒性或因任何原因死亡（以先发生者为准）的时间。疾病进展可通过任何临床接受的方法记载。

“无疾病存活”或“DFS”指患者自治疗启动或自初始诊断起保持一段时间段活着且癌症没有复发，诸如约1年、约2年、约3年、约4年、约5年、约10年等。在构成本发明的基础的研究中，DFS依照治疗意图原则来分析，即在其指派疗法的基础上评估患者。DFS分析中使用的事件典型地包括局部、区域性和远端癌症复发，继发性癌症发生以及在没有在先时间（胃癌复发或第二原发性癌症）的患者中死于任何原因。

“无侵入性疾病存活”或“iDFS”是在辅助治疗之后患者活着且在任何部位侵入性癌症没有复发或死于任何原因的时间。换言之，iDFS定义为患者自治疗启动或自初始诊断起在辅助治疗之后保持一段时间段活着（存活）且侵入性疾病没有复发，诸如约1年、约2年、约3年、约4年、约5年、约10年等。在一个实施方案中，iDFS是自治疗启动起约1年或约3年。

“延长存活”意味着使依照本发明治疗的患者中总体或无进展存活相对于未治疗的患者和/或相对于用一种或多种已获批批准的抗肿瘤药剂治疗但未接受依照本发明治疗的患者延长。在一个具体的例子中，“延长存活”意味着使接受本发明的组合疗法的癌症患者的无进展存活（PFS）和/或总体存活相对于仅用曲妥珠单抗和化疗治疗的患者延长。在另一个具体例子中，“延长存活”意味着使本发明的组合疗法的癌症患者的无进展存活（PFS）和/或总体存活（OS）相对于仅用抗体和/或化疗剂治疗的患者延长。

“客观响应”指可测量的响应，包括完全响应（CR）或部分响应（PR）。

“完全响应”或“CR”意指癌症的所有症候响应治疗而消失。这并不总是意味着癌症得到治愈。

“部分响应”或“PR”指一处或多处肿瘤或损伤的大小或癌症在身体中范围响应治疗而缩小。

如本文所用的，“不良事件（AE）”是与医学治疗的应用有关的任何不利的和通常非故意的不希望的迹象（包括异常的实验室发现）、征状或疾病。例如，不良事件可与响应于治疗的免疫系统的激活或免疫系统细胞的扩增相关。

如本文所用的，“安全性数据”涉及在受控的临床试验中获得数据，其显示不良事件的流行性和严重度以在药物安全性方便指导使用者，包括如何监测和预防对药物的不良反应的指导。

“功效数据”是在受控的临床实验中的获得数据，其显示药物的有效治疗疾病，例如胃癌。

如本文所用的，“同时”使用，是指在同一治疗周期期间，在于所述一种或多种其他药物治疗的同一天，且任选地，在与所述一种或多种其他药物的同一时间施用的。

如本文所用的，“联用”或“联合使用”，是指两种及以上的活性物质以混合物形式一起地、作为单一制剂同时地或作为单一制剂以任何顺序依次地适用于患者或受试者。

术语“协同作用”或“协同效应”，是指两种或多种活性分子所产生的效果大于成分单独给药的效果的简单加成。

II.概述

本发明提供了一种利用抗HER2抗体组合和化疗剂联合用于制备治疗胃癌药物的用途，其具体为曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体或其抗原结合片段和化疗剂联合用于制备治疗HER2阳性的胃癌，特别是HER2阳性的晚期胃癌，更推荐的是治疗诊断有晚期不可切除或转移性HER2阳性胃癌或胃食管结合部腺癌患者药物的用途。

本发明还提供治疗上述疾病，特别是治疗诊断有晚期不可切除或转移性HER2阳性胃癌或胃食管结合部腺癌患者的方法，此方法包括向患者施用治疗有效量的曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体或其结合片段和化疗剂（例如氟尿嘧啶化疗剂和铂类化合物）。

在本发明的一些实施例中，此治疗延长了患者的无进展生存期（PFS）和/或总生存期（OS），并且根据客观缓解率值（ORR），患者病情得到明显改善。

III. 抗HER2抗体和化疗剂

本发明所涉及的抗HER2抗体包括曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体，其作用机制是抑制PI3K/AKT信号通路、诱导细胞周期阻滞、介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）、抑制DNA损伤修复、抑制血管生成以及诱导免疫应答等。

曲妥珠单抗

曲妥珠单抗包括赫赛汀（Trastuzumab）及其生物类似药，其中，所述单抗其重链包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成，轻链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由其组成。

曲妥珠单抗用于治疗HER2阳性的转移性乳腺癌、阳性早期乳腺癌和转移性胃癌（美国食品药品监督管理局批准的药品说明书，中国国家药品监督管理局批注的药品说明书）。在适用的HER2阳性转移性乳腺癌给药方案，曲妥珠单抗作为单一药物治疗已接受过1个或多个化疗方案的转移性乳腺癌，并且与紫杉醇或者多西他赛联合，用于未接受化疗的转移性乳腺癌患者，其初始负荷剂量为4mg/kg，静脉输注（IV）90分钟以上，并且维持剂量为2mg/kg；在适用的本发明所涉及的转移性胃癌的给药方案，曲妥珠单抗为每三周一次施用，初始负荷剂量为8mg/kg，随后6mg/kg三周给药一次，其中，转移性胃癌患者施用曲妥珠单抗治疗直至疾病进展或不可耐受的毒性。

第二抗体（也称为第二抗HER2抗体）

本发明涉及的第二抗体或称为第二抗HER2抗体，为不同于曲妥珠单抗的、HER2位点结合的单克隆抗体。在一些实施例中，第二抗HER2抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中：

（a）重链可变区包含SEQ ID NO:1的HCDR1、SEQ ID NO:2的HCDR2和SEQ ID NO:3的HCDR3；

（b）轻链可变区包含SEQ ID NO:6的LCDR1、SEQ ID NO:7的LCDR2和SEQ ID NO:8的LCDR3。

在一些实施例中，第二抗HER2抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中：

（a）重链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成；

（b）轻链可变区包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO:9的氨基酸序列组成。

在一些实施例中，第二抗HER2抗体包括重链和轻链，其中：

（a）重链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO:5的氨基酸组成；

（b）轻链包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：10的氨基酸组成。

在本发明的其他实施例中，涉及使用第二抗HER2的抗原结合片段，其包含上述定义的氨基酸序列，尤其是结合抗原的结构区，例如HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3，其例子包括Fab、Fab’、F(ab’)₂和Fv片段、双抗体、线性抗体、单链抗体分子以及由其他抗体片段形成的多特异性抗体。

本发明所使用的第二抗HER2抗体，为一种人源化IgG1的单克隆抗体，与曲妥珠单抗具有相同的HER2靶向结构域，即HER2的结构域IV，但曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体作用于不同的表位，并且第二抗HER2抗体不与曲妥珠单抗竞争性结合HER2的结构域IV，参见图1所示的第二抗HER2抗体、帕妥珠单抗和曲妥珠单抗的HER2抗原表位结合分析。内吞作用作为抗体作为肿瘤治疗药物的机制之一，抗体-受体相互作用或复合物能够促进受体分子在细胞中高效率内吞，使得细胞表面受体下降和降解，抑制受体依赖的信号传导，影响肿瘤细胞的生长。结合到本发明所用的第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗，申请人发现第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗单独作用于HER2阳性的胃癌细胞时，引起的胃癌细胞表面的HER2内吞作用较弱，从而引起细胞凋亡和肿瘤细胞生长抑制的作用也较弱，参见图2所示，第二抗HER2抗体、曲妥珠单抗以及帕妥珠单抗单独引起胃癌细胞（NCI-N87、SNU216）的内吞作用较弱，然而第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗联合作用引起的胃癌细胞内吞作用会显著增强，但是曲妥珠单抗和帕妥珠单抗联合作用并未引起胃癌细胞内吞作用的增强。参照图3所示，第二抗HER2抗体、曲妥珠单抗联合作用引起的胃癌细胞内吞作用引起了胃癌细胞HER2表达水平和EGFR表达水平的下降，而曲妥珠单抗和帕妥珠单抗联合作用引起了胃癌细胞HER2表达水平下降，但EGFR水平下降较小。因此能够合理推测的是，虽然曲妥珠单抗和帕妥珠单抗联合可用于HER2阳性乳腺癌的辅助治疗（例如CN110337450记载，罗氏），但是由于不同肿瘤细胞特征和抗体机制的限制，曲妥珠单抗和帕妥珠单抗联合可能难以用于HER2阳性胃癌的治疗或辅助治疗，而相对应地，根据本发明实施例的研究，曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体联合可以用于HER2阳性胃癌的新型治疗方案。

在一些实施例中，本发明涉及了包含曲妥珠抗体和第二抗HER2抗体或其结合片段以及药学上可接受的载体的组合物；其中第二抗HER2抗体如上所定义。

氟尿嘧啶类化合物和铂类化疗剂

氟尿嘧啶类化合物

氟尿嘧啶类化合物，为临床上最广泛应用的抗肿瘤药物之一，其通过防止嘧啶类核苷酸的形成而干扰DNA的合成来杀伤癌细胞，包括5-FU（5-氟尿嘧啶）以及可口服的前药卡培他滨和替加氟等药物，临床上主要用于治疗乳腺癌、消化道癌、卵巢癌和原发性支气管肺腺癌等。

本发明的一些实施例涉及使用5-FU或卡培他滨（capecitabine）。而在较优选的实施例中，将卡培他滨用于本发明所涉及的用途和方法。

铂类化疗剂

铂类化疗剂，也是广泛使用的抗肿瘤药物，其能引起DNA交联为单加合物、链间交联物、链内交联物或DNA蛋白交联物，其通过作用于鸟嘌呤的相邻N-7位置，形成1,2链内交联（P o k l a r 等人( 1 9 9 6 ).P r o c .N a t l .A c a d .S c i .U .S .A .9 3(1 5 ) : 7 6 0 6 - 1 1 ；R u d d等人(1 9 9 5 ) .C a n c e rChemother.Pharmacol .35(4):323-6）；所产生的交联会抑制癌细胞中的DNA修复和/或DNA合成。铂类化疗剂，包括顺铂（cisplatin）、卡铂（Carboplatin）、奥沙利铂（oxaliplatin）和沙铂（Staraplatin）。

本发明的一些实施例涉及使用顺铂或奥沙利铂。而在较优选的实施例中，将奥沙利铂用于本发明所涉及的用途和方法。

IV.治疗方法和用途

本发明涉及了曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体或其结合片段和化疗剂联合用于制备治疗HER2阳性的胃癌，特别是治疗诊断有晚期不可切除或转移性HER2阳性胃癌或胃食管结合部腺癌患者药物的用途。

另一方面地，本发明还涉及治疗HER2阳性的胃癌，特别是治疗诊断有晚期不可切除或转移性HER2阳性胃癌或胃食管结合部腺癌患者的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体或其结合片段和化疗剂。在一些实施例中，本发明的治疗延长了患者的无进展生存期（PFS）和/或总生存期（OS），并且根据客观缓解率值（ORR），患者病情得到明显改善。

本发明具体涉及针对晚期胃癌，特别是晚期不可切除或转移性HER2阳性胃癌或胃食管结合部腺癌的治疗方案。其中，本发明涉及的晚期胃癌可根据AJCC/UICC TNM规则确定，例如根据肿瘤侵犯周围组织的进展、区域淋巴结转移情况或远处转移情况以及CT分期征象等。HER2检测应用于本发明所治疗的晚期胃癌患者，例如HER2阳性在KEYNOT811研究中定义，即基于免疫组织化学（IHC）3+或者免疫组织化学（IHC）2+阳性且原位杂交（ISH）阳性；而本发明的一些实施例中，HER2阳性癌症是基于免疫组织化学（IHC）3+或2+且ISH阳性的HER2表达水平。其中，HER2的免疫组织化学（IHC）和原位杂交（ISH）检测全程按照胃癌HER2检测指南的操作规范执行，相关检测IHC、ISH可以选用FDA或中国药品监督管理局（NMPA）批准的商业检测方法。

在本发明的一些实施例中，所述用途或方法包括曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体或其结合片段和化疗剂的联用。在一些实施例中，第二抗HER2抗体或其结合片段如上所定义。所述化疗剂为氟尿嘧啶类化合物和铂类化疗剂的联合。在一些具体实施例中，氟尿嘧啶类化合物为5-氟尿嘧啶或卡培他滨。在一些具体实施例中，铂类化合物为顺铂或奥沙利铂。在一些较优选的实施例中，所述化疗剂为5-氟尿嘧啶和奥沙利铂的联合。

本发明的一些实施例中，所述患者是未经治疗的，包括例如未经过任何针对晚期不可切除或转移性HER2阳性胃癌或胃食管结合部腺癌的系统性抗肿瘤治疗，或者虽然既往接受过辅助治疗，末次治疗结束距离本发明治疗方案首次给药≥6个月，或者既然接受过抗肿瘤中药或中成药治疗，末次治疗结束在本发明所涉及研究随机分组之前。

本发明的一些实施例中，所述曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体或其结合片段每3周静脉内使用。

在一些实施例中，第二抗HER2抗体以25mg/kg剂量施用。

在一些实施例中，第二抗HER2抗体以15mg/kg剂量施用。

在一些实施例中，曲妥珠单抗以8mg/kg初始负荷剂量施用，随后每3周6mg/kg施用。

在本发明的一些实施例中，所述化疗剂为卡培他滨和奥沙利铂的联合。

在一些实施例中，奥沙利铂以130mg/m²剂量、静脉内输注，每三周给药一次；通常地，静脉输注2-6小时，并且每周期第一天给药；而且在某些情况下，例如体表面积超过2.0m²时，研究者可以根据临床实际计算药剂量。

在一些实施例中，卡培他滨以1000mg/m²剂量、口服施用，每日两次，每三周为一个给药周期；通常地，每周期第一天至第十四天给药；而且在某些情况下，研究者根据临床实际计算药剂量，例如计算理论剂量超过1500mg时，选择卡培他滨的剂量为1500mg。

免疫检查点抑制剂，也作为在治疗晚期胃癌的治疗方案重要部分，例如III期研究KEYNOTE-811在治疗HER2阳性胃癌的研究中，相对于曲妥珠单抗+化疗剂联合，进一步联合帕博利珠单抗的缓解率显著提高，并且FDA批准了帕博利珠单抗联合曲妥珠单抗和氟尿嘧啶和铂类化疗剂一线治疗晚期不可切除或转移性HER2阳性胃癌或胃食管结合部腺癌患者的治疗方案。也可以将本发明所涉及的曲妥珠单抗+第二抗HER2抗体+化疗剂的联用治疗方案，联合免疫检查点抑制剂以提高缓解率。本发明一些实施例中，本发明涉及的用途或治疗方案中，可以同时或隔段时间施用免疫检查点抑制，优选为抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体，优选为抗PD-1抗体，例如纳武单抗、派姆单抗（帕博利珠）、信迪利单抗、替雷利珠单抗、卡瑞利珠单抗、特瑞普利单抗、斯鲁利单抗等。

V.药物组合/药物组合物

本发明提供了一种药物组合，其涉及曲妥珠单抗和上述的第二抗HER2抗体的联用，其具体包含曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体或其结合片段。

本发明还提供了药物组合物，例如，用于治疗胃癌的药物组合物，其包含曲妥珠单抗和上述的第二抗HER2抗体以及药学上可接受的载体。

在一些实施例中，本发明所述的药物组合物，以液体制剂或冻干粉的形式，通常地，以液体制剂的形式。该制剂包含抗体（曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体）、表面活性剂（例如聚山梨醇酯20、80）、缓冲液（组氨酸缓冲液、乙酸缓冲液、枸橼酸缓冲液或者两种缓冲液混合）、稳定剂（例如糖类、醇类、盐类、氨基酸类等）以及合适的pH值。

VI. 药剂盒

本发明还涉及一种用于上述胃癌治疗的药剂盒，其通常包括抗体、化疗剂和/或预期用途的标签和使用说明书等。具体地，本发明涉及的试剂盒，其用于治疗胃癌治疗，尤其是用于晚期不可切除或转移性HER2阳性胃癌的治疗，包含至少一个周期剂量的曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和化疗剂。在一些示例性实施例中，曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和/或化疗剂包装在单位剂型中。其中，所述的第二抗HER2抗体如上所定义。在本发明优选的实施方案中，药剂盒包含的化疗剂为氟尿嘧啶类化合物和铂类药物，例如氟尿嘧啶类化合物为5-氟尿嘧啶或卡培他滨，并且铂类药物为顺铂或奥沙利铂。在较优选的实施方案中，药剂盒包含曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和卡培他滨、奥沙利铂。

本发明中涉及的序列信息总结在表1中。

表1.序列表

本发明所涉及使用的缩写总结在表2中。

表2.缩略语表

药物来源：曲妥珠单抗（或生物类似药）：来自复宏汉霖，其商品名为汉曲优。

第二抗HER2抗体：按照中国专利申请No. 201480024152 .3的方法制备，其中编号为hz1E11-133的抗体为参考抗体；

帕妥珠单抗：按照WO01/00245和WO2006/007398所述方法制备，也可以使用通过商业途径购买的药品，或者是经批准用于临床研究的生物类似药；

化疗剂：

卡培他滨和奥沙利铂，齐鲁制药；

用于实验的细胞：胃癌细胞系NCI-N87购自美国国家癌症研究所（NationalCancer Institute，NCI）；SNU216购自科佰生物（CoBioer）。

实施例1所用的HER2-Fc蛋白来自Sino Biological （PA，USA），产品号10004-H02H，LC10JA1203。

通过如下非限制性实施例说明本发明。

实施例1.曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体的HER2表位研究

分析曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和帕妥珠单抗的表位结合竞争。第二抗HER2抗体固定在BiacoreCM5传感器芯片，使用约1000RU的胺偶联，然后依次添加（a）HER2-Fc蛋白、曲妥珠单抗和帕妥珠单抗，和（b）HER2-Fc蛋白、帕妥珠单抗和曲妥珠单抗。

参照图1所示的HER2表位亲和力研究，第二抗HER2抗体与曲妥珠单抗、帕妥珠单抗均无竞争性结合，并且第二抗HER2抗体与曲妥珠单抗具有不同的结合位点，第二抗HER2抗体虽然也与HER2亚结构域IV结合但是不与曲妥珠单抗存在竞争。

实施例2.曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体联合处理胃癌细胞NCI-N87和SNU216的HER2介导的内吞能力和EGFR细胞表面表达水平研究

内吞能力研究

通过PHrodo Green染色法观察在曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和帕妥珠单抗以及它们联合处理的胃癌细胞株NCI-N87和SNU216中HER2抗体内吞的时间梯度变化。使用pHrodoiFL Green STP酯胺活性染料(P35369, Invitrogen)进行HER2内化试验检测。将NCI-N87、SNU216 (1.5×10⁵cells/孔)胃癌细胞接种于96孔板(CLS3799、康宁)，然后与曲妥珠单抗、抗HER2抗体、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗+帕妥珠单抗或曲妥珠单抗+抗HER2抗体(10 μg/mL)在冰上孵育1 h。用洗涤缓冲液短暂洗涤去除未结合的抗体后，将其中一组细胞置于冰上冷冻以终止内化，其余细胞置于37℃培养箱继续培养。抗体孵育后，用固定缓冲液(420801,biolgend)固定细胞30分钟。最后，用染色缓冲液洗涤所有染色细胞，并用CytoFLEX LX流式细胞仪(Beckman Coulter, USA)进行分析。

参照图2所示，曲妥珠单抗+帕妥珠单抗在胃癌细胞系NCI-N87、SNU216中显示出有限HER2内化，而曲妥珠单抗+抗HER2抗体在NCI-N87和SNU216胃癌细胞系中诱导更强的HER2内化。抗HER2抗体和曲妥珠单抗联合同时结合到HER2亚结构域IV，而曲妥珠单抗和帕妥珠单抗联合结合HER2亚结构域IV和亚结构域II，因此抗体结合在不同的亚结构域，将产生受体不同的内化率，这体现出抗HER2抗体与曲妥珠单抗联用独特的协同作用。

EGFR细胞表达水平研究

采用BV421抗人EGF受体(749755,BD)和AF647抗人CD340 (erbB2/HER-2)(324412, biolgend)检测EGFR和HER2蛋白表达水平。所有染色细胞用CytoFLEX LX流式细胞仪(Beckman Coulter, USA)进行分析。使用FlowJo软件进行分析数据。

参照图3中a，b所示，在NCI-N87胃癌细胞中，抗HER2抗体和曲妥珠单抗联合处理不仅降低了HER2的表达（图3中a），还降低了细胞表面EGFR的表达（图3中b），表明EGFR以HER2/EGFR异源二聚体的形式与HER2一起内化，而帕妥珠单抗和曲妥珠单抗联合处理可以降低HER2的表达，但细胞表面EGFR的表达降低程度有限。

实施例3.曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体联合治疗HER2 阳性胃癌的协同作用研究

通过胃癌细胞NCI-N87细胞存活率和HER2阳性胃癌的PDX模型研究曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体的协同抗肿瘤作用。

曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗/第二抗HER2抗体联合或曲妥珠单抗/帕妥珠单抗联合作用72小时后，检测胃癌细胞NCI-N87 的细胞存活率；使用Caspase-Glo®3/7 Assay系统，通过测量caspases 3/7在胃癌细胞NCI-N87细胞中的活性来评估细胞凋亡。在给定剂量下使用抗体处理的异种人胃癌NCI-N87模型，以及在给定剂量下使用抗体处理的人胃癌PDX模型。

体外增殖实验研究

使用CellTiter-Glo发光细胞活力试剂盒(G7571, Promega)检测细胞增殖。1.5×10⁴细胞于96孔板(CLS3799，康宁)中，37℃孵育过夜。分别用IgG1、曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体、帕妥珠单抗或曲妥珠单抗/第二抗HER2抗体、曲妥珠单抗/帕妥珠单抗处理。同时，测量T=0小时板的发光值。孵育72小时后，使用Spark (Tecan，瑞士)测量T=72小时板中的发光值。计算细胞存活率: 细胞存活率= (T72 - T0)/(T72(c) - T0) *× 100%， T:处理，c:对照。

细胞凋亡检测

使用Caspase-Glo®3/7 Assay (G8093, Promega)系统，通过测量caspases 3/7在NCI-N87细胞中的活性来评估细胞凋亡。将大约1.5×10⁴细胞接种于96孔实验板(CLS3799，康宁)中，培养过夜。用100µL含药物的培养液替换原培养基，处理24 h。在室温下孵育30分钟后，加入100µL Caspase-Glo 3/7试剂。避光孵育30分钟，轻微震荡后，使用Spark (Tecan，瑞士)检测。

动物肿瘤模型研究

在异种人胃癌NCI-N87模型中，BALB/c n裸雌性小鼠皮下植入5×10⁶NCI-N87细胞。当小鼠的平均肿瘤体积达到约120-150 mm³时，将小鼠随机分组，然后给予如下所述的治疗。第二抗HER2抗体或对照试剂每周2次腹腔注射10mg/kg，每组8只，连续28天。在PDX模型中，从患者胃癌组织中生成肿瘤异种移植物，并将其皮下移植到每只NCG小鼠的右背部。曲妥珠单抗、曲妥珠单抗/第二抗HER2抗体和曲妥珠单抗/帕妥珠单抗在PDX模型中以不同的给药剂量处理，每组n = 5只小鼠，每周2次给药，连续52 ~ 60天。每周2次测量肿瘤体积和体重。

参照图4a所示，第二抗HER2抗体或曲妥珠单抗单独使用和联合使用抑制NCI-N87胃癌细胞系的体外生长研究中，曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体的联合使用，可以显著增强单独使用的抗增殖活性，并且细胞增殖效果优于曲妥珠单抗与帕妥珠单抗联合使用。参照图4b所示，根据caspases 3/7活性检测，第二抗HER2抗体与曲妥珠单抗联合处理胃癌细胞NCI-N87，能够诱导NCI-N87细胞凋亡，而曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体、帕妥珠单抗分别单独处理和曲妥珠单抗和帕妥珠单抗联合处理NCI-N87胃癌细胞未显著诱导NCI-N87的细胞凋亡。参照图4c所示的处理异种人胃癌NCI-N87模型研究中，曲妥珠单抗与第二抗HER2抗体联合使用能够显著抑制模型内NCI-N87肿瘤大小。参照图4d和4e所示的处理PDX模型研究中，曲妥珠单抗与第二抗HER2抗体联用能够抑制肿瘤大小。其中图4a-4e的所有数据均以平均值±SEM表示。图4d和4e中，**代表p<0.01，*代表p<0.05，p值采用Student's t检验计算。

在上述的人胃癌细胞系、异种人胃癌NCI-N87模型和PDX模型研究中，曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体联合使用具有较强的抗肿瘤作用（胃癌细胞），抑制肿瘤生长并且能够促进肿瘤消退，并且表现出第二抗HER2抗体与曲妥珠单抗联用后增强的抗肿瘤作用，体现了曲妥珠单抗和第二抗HER2抗体联用的独特协同作用，这一部分是因为抗HER2抗体与曲妥珠单抗能够诱导胃癌细胞的凋亡，但是此作用在曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体、帕妥珠单抗单独处理和曲妥珠单抗和帕妥珠单抗联合处理胃癌细胞研究中未出现。

实施例4.曲妥珠单抗、第二抗HER2抗体和化疗剂联合治疗诊断有晚期不可切除或转移性HER2阳性胃癌或胃食管结合部腺癌患者的临床研究

此项研究是随机、双盲、多中心、II临床研究，旨在评价，相对于安慰剂和曲妥珠单抗+化疗剂一线治疗方案，曲妥珠单抗+第二抗HER2抗体+化疗剂在治疗晚期不可切除或转移性胃癌患者的临床功效和安全性。

研究设计

本次研究为随机双盲研究；大约53例诊断有晚期不可切除或转移性胃癌患者（未经治疗）按照约1:1:1比例随机分为三组以及相对应的治疗方案：

A组（试验组）：第二抗HER2抗体（25mg/kg）+曲妥珠单抗+化疗剂（XELOX）；

B组（试验组）：第二抗HER2抗体（15mg/kg）+曲妥珠单抗+化疗剂（XELOX）；

C组（标准治疗组）：安慰剂（已揭盲及开放标签部分受试者不使用安慰剂）+曲妥珠单抗+化疗剂（XELOX）。

随机分组程序采用中央随机系统暨交互式网络响应系统（IWRS），根据免疫组织化学 (IHC/FISH) 法确认的HER2表达水平（3+ 或 2+）进行随机分层，并且按照1:1:1的比例的比例产生随机编码。

给药方法如下：

第二抗HER2抗体：25 mg/kg或15 mg/kg静脉输注（IV），每三周给药一次，每周期第一天给药。

安慰剂：参照第二抗HER2抗体给药方法（使用剂量根据阶段而不同）。

曲妥珠单抗：初始负荷剂量为8 mg/kg，随后 6 mg/kg 每三周给药一次，每周期第一天给药；第一次输注时间应在90分钟以上（含90分钟），重复 6 mg/kg。

奥沙利铂：130 mg/m²，静脉输注2-6小时（在曲妥珠单抗输注结束后之后使用），每三周给药一次，每周期第一天给药，最多给药至8周期；如体表面积超过2.0 m²，研究者可以根据临床实际按照2.0 m²计算给药剂量。

卡培他滨：1000 mg/m²，口服，每日两次，每三周为一个给药周期，每周期第一天至第十四天给药；如计算的理论剂量超过1500 mg，研究者可以根据临床实际选择卡培他滨剂量为1500 mg，口服，每日两次。

对患者肿瘤的评估，直到研究者根据RECIST v1.1标准评价进展后终止、治疗方案持续直到失去临床获益、发生不可耐受的毒性、患者或研究决定终止治疗（治疗方案非正常终止）、接受试验治疗的受试者死亡、受试者撤销知情同意、受试者妊娠、对方案或程序要求不依从，或管理方面的原因（以先发生者为准）。

患者

患者未接受过治疗并且诊断有晚期不可切除或转移性胃癌，并且符合参加此项研究的标准。

入选标准

1）自愿参加临床研究；完全了解、知情本研究并签署知情同意书（ICF）；愿意遵循并有能力完成所有试验程序；

2）性别不限，签署ICF时年龄≥ 18岁且≤80 岁；

3）经组织病理学检查确诊的、不能经手术治疗治愈的HER2阳性的局部晚期/转移性胃癌或胃食管交界处腺癌且组织学检查证实主要为腺癌；

4）既往未接受过针对局部晚期/转移性胃癌或胃食管交界处腺癌的系统性抗肿瘤治疗；

5）既往接受过新辅助/辅助治疗的受试者，末次治疗结束距本研究首次用药必须≥ 6个月；

6）既往接受过抗肿瘤中药或中成药治疗的受试者，末次治疗结束应在随机前；

7）既往治疗相关AE恢复至NCI-CTCAE ≤ 1级（脱发除外）；

8）根据实体瘤疗效评价标准（RECIST v1.1），经中心影像评估至少具有一个可测量病灶，可测量病灶应未接受过放疗等局部治疗（位于既往放疗区域内的病灶，如果证实发生进展，也可选做靶病灶），靶病灶不能仅为骨转移灶；

9）患者必须提供肿瘤组织，进行HER2表达水平检测，并且确认为 HER2 阳性肿瘤，即：

a. 经免疫组织化学法（IHC）明确至少为 HER2 阳性 3+ (+++) 或

b. 经免疫组织化学法（IHC）明确至少为 HER2 阳性 2+ (++) 且荧光原位杂交法(FISH) 检测呈阳性；

10）随机前7天内ECOG：0～1；

11）预期生存期≥6个月；

12）乙肝表面抗原（HBsAg）（-）并且乙肝核心抗体（HBcAb）（-）。如果HBsAg（+）或者HBcAb（+），则乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）必须<2500拷贝/mL或500 IU/mL或在本中心正常值范围内。

13）HCV抗体（-）；若HCV抗体（+）则必须HCV-RNA检查呈阴性方可入组。存在乙肝及丙肝共同感染的受试者需排除（HBsAg或HBcAb检查呈阳性，且HCV抗体检查呈阳性）。

14）主要器官功能正常，即符合表3所示标准（在本研究首次用药前14天内，未接受过输血、白蛋白、重组人促血小板生成素或集落刺激因子（CSF）治疗）：

表3.主要器官功能标准

15）具有生育能力的女性受试者，随机前7天内的血妊娠试验必须为阴性。具有生育能力的女性受试者，以及伴侣为育龄期女性的男性受试者，需要在研究治疗期间、以及在最后一次使用第二抗HER2抗体/曲妥珠单抗/安慰剂和化疗后至少6个月至少采用一种经医学认可的避孕措施（如宫内节育器、避孕药或避孕套）。

排除标准

符合下列任一项排除标注的患者，将不得进入本项研究：

1）研究药物首次用药前2年内患有其它恶性肿瘤。已治愈的局限性肿瘤，例如皮肤基底细胞癌、皮肤鳞癌、表浅膀胱癌、前列腺原位癌、宫颈原位癌、乳腺原位癌、甲状腺癌等可以入组；

2）曾因胃腺癌或胃食管交界处腺癌完成新辅助或辅助化疗（或两者皆有）或放疗之后的6个月内出现疾病进展；

3）曾接受过任意HER2靶向治疗或针对免疫检查点（例如PD-1、PD-L1、CTLA-4）的治疗；

4）既往使用多柔比星体内浓度>360 mg/m²（或当量）；注意：等效药物包括表柔比星>720 mg/m²、米托蒽醌>120 mg/m²、伊达比星>90 mg/m²、超过360 mg/m²多柔比星当量的阿霉素脂质体或其他蒽环类抗生素。如果使用了一种以上蒽环类抗生素，则累积剂量不得超过360 mg/m²多柔比星当量；

5）通过适当干预后无法控制的胸腔积液、心包积液或需经常引流的腹水；

6）需要输血治疗或者有创干预治疗的胃肠道活动性出血；

7）存在中枢神经系统（CNS）或软脑膜转移；

8）距首次用药前半年内发生过脑血管意外、心肌梗塞、不稳定心绞痛、控制不良的心律失常（包括QTc间期男性≥ 450 ms、女性≥ 470 ms）（QTc间期以Fridericia公式计算）；

9）按照美国纽约心脏病学会（NYHA）标准Ⅲ级或Ⅳ级心功能不全，或心脏彩超检查：LVEF（左室射血分数）<55%；

10）患有活动性肺结核病；

11）既往和目前有间质性肺炎、尘肺、放射性肺炎、药物相关肺炎、肺功能严重受损等可能会干扰可疑的药物相关肺毒性的检测和处理的患者；

12）随机前28天内接受过减毒活疫苗的治疗；用于季节性流感或新型冠状感染灭活病毒疫苗除外；

13）基线胸部影像学检查提示存在活动性肺部炎症且伴有临床相关症状或体征；

14）随机前 14 天内或研究期间需要接受全身用皮质类固醇（>10 mg/天泼尼松疗效剂量）或其他免疫抑制药物治疗的患者。但以下情况允许入组：在没有活动性自身免疫疾病的情况下，允许患者使用局部外用或吸入型类固醇、或剂量≤ 10mg/天泼尼松疗效剂量的肾上腺激素替代治疗；

15）研究药物首次用药前28天内，接受过重大手术，本研究重大手术定义：术后至少需要3周恢复时间，才能够接受本研究治疗的手术；

16）在开始研究治疗之前3个月内接受过根治性放疗；允许骨病症及浅表病灶的姑息性放疗，且在首次用药前14天已经结束；不允许首次给药前28天内接受覆盖30%以上骨髓区域的放疗；

17）正在参加其他临床研究，或计划开始本研究治疗距离前一项临床研究治疗结束时间不足14天；

18）已知对任何单克隆抗体或研究药物辅料有严重过敏史；

19）有证据表明存在无法通过穿刺或近期外科手术解释说明的腹内积气；

20）已知有精神类药物滥用或吸毒史；

21）妊娠期或哺乳期妇女；

22）经研究者判断，受试者有其他可能导致其被迫中途终止研究的因素，如患有其他严重疾病（含精神疾病）需要合并治疗，实验室检查值严重异常，家庭或社会因素，可能影响到受试者安全或试验资料收集的情况。

结果

本项研究的主要疗效终点为无进展生存期（PFS）以及客观缓解率（ORR）；其中，无进展生存期（PFS）定义为根据RECIST v1.1（IRRC）标准评估的受试者从随机开始，至首次确认记录疾病进展或死亡（以先发生者为准）的时间（以月为单位）。对于分析时尚未发生疾病进展或死亡的受试者，以其最后一次客观肿瘤评估的日期为PFS的删失日期；客观缓解率（ORR）定义为采用RECIST v1.1（研究者和IRRC）标准评估的达到最佳缓解为CR和PR的受试者比例。描述性分析各组的客观缓解率，给出相应的95%置信区间。采用Kaplan Meier法估算中位无进展生存期，并绘制Kaplan-Meier曲线。通过分层COX比例风险模型估计PFS的HR及其95%置信区间。采用分层log-rank检验比较组间PFS。组间 ORR差异采用分层Cochran-Mantel-Haenszel（CMH）方法检验，估计比值比（odds ratio）及其95%置信区间。

本项研究的次要疗效终点为总生存期，由研究者根据RECIST v1.1标准评估的无进展生存期及客观缓解率的统计方法与主要疗效终点相同。缓解持续时间指从首次达到CR或PR（以先记录到的状态为准）日期开始至首次记录疾病进展或死亡日期的时间（以先发生者为准）。分别对研究者与IRRC评判为客观缓解的受试者进行DOR评估。采用Kaplan Meier法估算中位数，并绘制Kaplan-Meier曲线。

疗效

本项研究共有53例患者随机入组并且纳入分析，其中A组18例，B组17例，C组18例。53例受试者经影像评估的中位无进展生存期如下：A组患者的PFS为 15.1个月（95%置信区间 6.8个月-无法评估），B组患者尚未达到（95%置信区间 9.9个月-无法评估），C组患者的PFS为 8.2个月（95%置信区间 9.9个月-无法评估）。在此次分析时共有12例（28.3%）受试者死亡，总生存期数据尚未成熟，各组均未达到中位总生存时间。受试者无进展生存期的K-M曲线请见图5，患者疗效数据总结请见表4。

表4.疗效数据总结

参照表4所示，A组的中位无进展生存期为15.11个月以及其中位持续缓解时间为12.4个月，B组的中位无进展生存期和中位持续缓解时间未达到，C组的中位无进展生存期为8.21个月以及其中位持续缓解时间为6.8个月，即曲妥珠单抗+第二抗HER2抗体+化疗剂的联用（A组、B组）相对于曲妥珠单抗+化疗剂的联用，能够显著延长患者的中位无进展生存期和中位持续缓解时间。A组的中位无进展生存期风险比0.5（95%CI，0.17-1.27，P=0.1272），B组中位无进展生存期风险比0.1（95%CI，0.04-0.52，P=0.0007），同时，A组的中位持续缓解时间风险比0.6（95%CI，0.20-1.62，P=0.2848），B组的中位持续缓解时间风险比0.1（95%CI，0.02-0.50，P=0.0006），有利于曲妥珠单抗+第二抗HER2抗体+化疗剂联用组。

两个试验组（A组、B组）的客观缓解率均较对照组（C组）明显提高，其中A组和B组的36周客观缓解率分别为44.4%和64.7%，并且A组和B组的48周客观缓解率分别为38.9%和58.8%。

在本次研究针对的HER2阳性晚期胃癌患者治疗中，第二抗HER2抗体联合标准治疗（曲妥珠单抗+XELOX）的疗法，体现出明显且持久的缓解，使这些患者获得了显著延长的无进展生存期。

安全性

在针对第二抗HER2抗体的一期临床试验中，截止2022年4月22日，共有 11 例受试者入组并接受至少一次抗HER2抗体，11 例受试者被纳入安全性分析集。试验结果显示第二抗HER2抗体各剂量组耐受性良好。未观察到剂量相关性毒性反应，未发生导致研究药物输注中断、导致研究药物剂量降低或导致研究药物输注速率降低的治疗期不良事件。试验期间发生的不良事件包括淋巴细胞计数降低，白细胞计数降低，低钾血症。

在此项研究试验中，截止2023年7月30日，共有53例受试者入组并接受至少一次曲妥珠单抗+第二抗HER2抗体+化疗剂治疗，53例受试者被纳入安全性分析集。其中最常见的试验期间发生的不良事件（TEAE）为血小板计数降低(A组 vs B 组vs C组, 55.6% vs76.5% vs 83.3%), 贫血 (66.7% vs 58.8% vs 72.2%)，中性粒细胞计数降低 (72.2% vs64.7% vs 55.6%)，及白细胞计数降低 (72.2% vs 52.9% vs 61.1%)。试验期间发生的3级以上的不良事件发生情况为，A组13例 (72.2%)，B组7例 (41.2%)以及C组8例 (44.4%)，其中最常见的不良事件为血小板计数降低及中性粒细胞计数降低。受试者疗效数据总结见表5。

表5.安全性数据总结

在本次研究试验组中，试验组（A组及B组）尤其是B组与标准治疗组（C组，曲妥珠单抗+XELOX）安全性数据基本一致，试验组无受试者出现第二抗HER2抗体相关的死亡不良事件，体现出良好的安全性及耐受性。

总结

针对HER2阳性晚期胃癌的一线标准疗法曲妥珠单抗联合化疗剂的中位总生存期为13.8个月，中位无进展生存期为6.7个月。在本项研究中，第二抗HER2抗体联合标准治疗（曲妥珠单抗+化疗剂）的疗法较目前的标准治疗体现出明显疗效优势，高剂量组（A组）中位无进展生存期已达15.1个月，并且已超过中位总生存期的登记历史数据，而低剂量组（B组）中位无进展生存期仍未达到，预计将超过A组，其与标准治疗组（C组）相比，风险比为0.71（95%置信区间：0.04，0.52），p值为0.0007。因此，本发明涉及的第二抗HER2抗体+曲妥珠单抗+化疗剂联合疗法，体现出明显高于标准治疗的疗效优势，同时也表现出良好的安全性及耐受性。

应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.曲妥珠单抗与第二抗体和化疗剂联合在制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述第二抗体为与所述曲妥珠单抗具有不同结合表位的第二种抗HER2的抗体或其抗原结合片段，包含：

重链可变区，其包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:2所示的HCDR2和如SEQID NO:3所示的HCDR3；和

轻链可变区，其包含如SEQ ID NO:6所示的LCDR1、如SEQ ID NO:7所示的LCDR2和如SEQID NO:8所示的LCDR3；

所述癌症为HER2阳性的胃癌或胃食管结合部腺癌。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述化疗剂为氟尿嘧啶类药物和铂类药物的联合。

3.根据权利要求2所述的用途，其中所述的氟尿嘧啶类药物选自5-氟尿嘧啶和卡培他滨，所述的铂类药物选自顺铂和奥沙利铂。

4.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其中所述的化疗剂为卡培他滨和奥沙利铂。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述的癌症为HER2阳性的晚期胃癌。

6.根据权利要求1所述的用途，其中所述的癌症为不可切除或转移性的HER2阳性的胃癌或胃食管结合部腺癌。

7.根据权利要求1所述的用途，其中所述第二抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或由其组成，和所述第二抗体的轻链可变区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或由其组成。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述第二抗体的重链包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或由其组成，和所述第二抗体的轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由其组成。

9.根据权利要求1所述的用途，其中所述曲妥珠单抗、第二抗体的用量为：每3周静脉内施用，所述曲妥珠单抗以8mg/kg初始负荷剂量施用，随后每3周6mg/kg施用，所述第二抗体以25mg/kg或15mg/kg剂量施用。

10.根据权利要求9所述的用途，其中所述化疗剂为卡培他滨联合奥沙利铂，用量为奥沙利铂以130mg/m²剂量、静脉内输注，每三周给药一次；卡培他滨以1000mg/m²剂量、口服施用，每日两次，每三周为一个给药周期。

11.根据权利要求1所述的用途，其中进一步包括施用免疫检查点抑制剂。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。

13.根据权利要求12所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体。

14.一种药剂盒，用于治疗HER2阳性的胃癌或胃食管结合部腺癌，包含下述组成物：

曲妥珠单抗；

轻链可变区，其包含如SEQ ID NO:6所示的LCDR1、如SEQ ID NO:7所示的LCDR2和如SEQID NO:8所示的LCDR3；和

化疗剂。

15.根据权利要求14所述的药剂盒，其中所述第二抗体的重链可变区包含如SEQ IDNO:4所示的氨基酸序列或由其组成，和所述第二抗体的轻链可变区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或由其组成。

16.根据权利要求14所述的药剂盒，其中所述化疗剂为卡培他滨和奥沙利铂。

17.根据权利要求14-16任一项所述的药剂盒，其进一步包含抗PD-1/PD-L1抗体。