CN117187375A - Kdelr3生物标志物在诊断高度近视中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了KDELR3生物标志物在诊断高度近视中的应用，本发明涉及高度近视，提供了一种辅助诊断高度近视是否存在或患病风险的应用、产品已经方法，在帮助受试者辅助诊断高度近视方面提供了有益的帮助。另外地，本发明还提供了一种制备眼轴异常、屈光度下降动物模型的方法及应用。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及KDELR3生物标志物在诊断高度近视中的应用。
背景技术
高度近视在全球，尤其在亚洲国家的患病率较高，是致盲的重要原因之一。高度近视通常定义为屈光度小于–6.00D或眼轴长度大于26.0mm，其发病机制尚不清楚。我国是近视高发国家，其中，青少年近视比例随年龄增长不断上升。高度近视除影响正常视觉功能外，还会大幅增加视网膜脱落、青光眼、黄斑变性等致盲性眼病的发生风险。许多研究表明遗传因素在近视中发挥着至关重要的作用，其中，在高度近视中更为明显。
多年来，人们已经认识到近视具有高度的遗传性，但直到最近，在剖析高度近视遗传背景方面才取得了重大进展。双胞胎和家族研究表明，高度近视的遗传率很高，估计约为90％。由于眼球的复杂结构，解释高度近视的遗传机制也比较困难。高度近视存在许多可叠加、影响较小的遗传变异，在眼球所有组织及细胞都有表达，通常与已知的神经传递或细胞外基质功能有关。这些基因在视网膜到巩膜的信号级联和其他可能的通路中发挥作用的确切机制仍有待阐明。在全基因组关联研究(GWAS，genome-wide association study)的时代到来之前，一些早期的近视关联研究和候选基因研究已经确定了多达50个基因位点和基因，但研究结果在大多没有得到重复队列验证。以近视或以屈光不正为疾病性状进行全基因组关联研究，已经在多个位点中发现了一些重要的变异，如11q24.1，5p15，4q25，13q12，21q22，15q14，15q25。目前，各个国家开启了自己的测序计划，如英格兰基因组学10万基因组计划和加拿大基因组计划，以帮助科研人员补充疾病和致病变异的关联证据。高度近视作为一种受多种遗传和环境因素影响的复杂性状，其遗传效应对个体差异的重要性可以从家族基因检测和分析中估算。尽管对高度近视家系和双胞胎的研究以及对高度近视的分子遗传学研究表明，高度近视具有强大的遗传性(在大型家系研究中具有55％的遗传性，在双胞胎研究中的遗传性超过80％，近视的阳性率超过50％)，但确定与潜在的高度近视相关的位点仍然是一个挑战。
发明内容
本发明的目的在于提供用于高度近视诊断的生物标志物及其应用和方法，以寻找到更可靠、准确的标志物以进一步提高高度近视的诊出效率。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明提供了检测样本中KDELR3生物标志物的试剂在制备诊断高度近视的产品中的应用。
进一步，所述生物标志物KDELR3的试剂包括特异性检测KDELR3基因表达水平的试剂，或特异性结合KDELR3基因编码的蛋白的试剂。
术语“生物标志物”是指基因或基因产物，其是用于调节一种或多种目标表型(例如髓系细胞中的目标表型)的靶标。在这种情形下，术语“生物标志物”与“靶标”同义。然而，在一些实施方案中，所述术语还涵盖已被确定为指示目标输出例如一种或多种诊断、预后和/或治疗输出(例如，用于调节炎性表型、癌症状态等)的靶标的可测量实体。在其他实施方案中，所述术语还涵盖调节基因或基因产物的组合物，包括抗基因产物抗体及其抗原结合片段。因此，生物标志物可包括但不限于核酸(例如，基因组核酸和/或转录的核酸)、蛋白质和抗体(以及其抗原结合片段)。
进一步，所述产品包括检测样本中生物标志物KDELR3基因、功能片段、蛋白的存在/不存在或量的试剂。
进一步，所述试剂包括通过PCR反应、RT-PCR衍生反应、3SR扩增、LCR、SDA、NASBA、TMA、SYBR Green、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、复合探针、ISH、微阵列、Southern印迹、Northern印迹、多分析物谱测试、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法、免疫荧光测定法、酶免疫测定法、免疫沉淀测定法、化学发光测定法、免疫组织化学测定法、斑点印迹测定法或狭线印迹测定法检测样本中KDELR3基因、功能片段、蛋白的存在、不存在和/或量的试剂。
进一步，所述样本包括血液、唾液、尿液、粪便、脑脊液、精液、阴道分泌物、痰液、汗液、母乳、滑液、粘液、泪液、胆汁、胃液、组织间液、组织的活检或上皮细胞、口腔拭子、鼻腔拭子、房水、羊水、胸膜液或受试者的呼气。
进一步，所述样本包括口腔拭子。
本发明提供了一种诊断受试者是否患有高度近视或患高度近视的风险的产品，所述产品包括检测前面所述的KDELR3生物标志物的基因或蛋白表达水平的试剂。
术语“高度近视”是指具有至少一只眼睛的SE值大于-6.0D的人。根据上下文，“高度近视”也可以指SE值大于-6.0D的眼睛的状况或眼轴长度大于26mm。
术语“近视”又叫做屈光不正，意思为眼睛不能正确弯曲光线导致模糊图像的病症。屈光不正的主要类型包括近视(近视眼)、远视(远视眼)、老视(近视力随年龄丧失)和散光。近视与眼轴伸长有关，眼轴伸长导致眼球伸长和/或角膜变得太弯曲。随着眼轴伸长的进行，眼球可能变得太长或者角膜(眼睛的透明前盖)太弯曲，结果，进入眼睛的光线未正确聚焦，并且远处物体看起来模糊。近视还依赖于角膜曲率和透镜光学能力。虽然近视可以在任何年龄发展，但通常近视的发作发生在小学年龄期间并且进展直到眼睛的生长完成。
眼科诊所中通常使用等效球镜值(SE)评估近视。等效球镜值是屈光度中的单个数，并且可以定义为球镜度，其焦点与球体柱面镜片的最小混淆圆重合。SE基于眼睛的球体和圆柱体的值来确定，并且通常表示为球体值与圆柱体值的一半之和。因此，等效球镜值是表示来自若干关于屈光力的来源的数据的便利临床方法。随着近视的进展，屈光力变为负值-屈光不正发展-，眼轴长度增加，并且SE的绝对值增加(SE变为更负的值)。近视由于正视化的正常过程失败而发生，其对于眼睛来说基本上是内源性的。眼睛的焦距和眼轴长度之间存在不匹配，后者对于晶状体和角膜的屈光力来说太长。因此，随着近视的进展，屈光力从远视转向近视。在动物研究中，通常通过测量屈光度中的屈光力(即屈光不正)并测量眼轴长度伸长来评估近视。屈光度是屈光力的单位，其等于给定晶状体的焦距(以米为单位)的倒数。屈光不正变化以用于动物研究的屈光度记录，与眼科门诊中的等效球镜值一样。
进一步，所述产品包括引物、探针、芯片、试剂盒、试纸、膜条。
进一步，所述试剂包括通过PCR反应、RT-PCR衍生反应、3SR扩增、LCR、SDA、NASBA、TMA、SYBR Green、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、复合探针、ISH、微阵列、Southern印迹、Northern印迹、多分析物谱测试、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法、免疫荧光测定法、酶免疫测定法、免疫沉淀测定法、化学发光测定法、免疫组织化学测定法、斑点印迹测定法或狭线印迹测定法检测样本中KDELR3基因、功能片段、蛋白的存在、不存在和/或量的试剂。
进一步，所述芯片包括基因芯片和蛋白芯片，所述基因芯片包括用于检测KDELR3基因转录水平的针对KDELR3基因的寡核苷酸探针，所述蛋白芯片包括KDELR3蛋白的特异性抗体或配体；所述试剂盒包括基因检测试剂盒、蛋白检测试剂盒，所述基因检测试剂盒包括用于检测KDELR3基因转录水平的试剂或芯片，所述蛋白检测试剂盒包括用于检测KDELR3蛋白表达水平的试剂或芯片；所述试纸包括基因检测试纸，蛋白检测试纸。
进一步，所述膜条包括基底和固定于所述基底上的特异性识别KDELR3的探针；所述基底可以是任何适于固定寡核苷酸探针的基底，如尼龙膜、硝酸纤维素膜、聚丙烯膜、玻璃片、硅胶晶片、微缩磁珠等。
进一步，所述探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。
进一步，所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。
进一步，所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
在某些具体的实施方案中，本发明提供的是一种用于检测KDELR3生物标志物的基因或蛋白表达水平的试剂盒。在某些实施方案中，所述试剂盒包括检测KDELR3生物标志物的基因或蛋白表达水平的试剂、引物或探针。
进一步，所述产品通过测定样本中的KDELR3的表达水平来确定受试者是否患有高度近视或患高度近视的风险。
在某些具体的实施方案中，本发明可用于评估不怀疑或倾向于怀疑患有高度近视的受试者的状况。所选的受试对象可以是以下任意一种：未曾被诊断为患有高度近视的受试者，本发明所述评估为未被诊断为患有高度近视的受试者，未曾或近期(如一年内)没有进行眼部检测的受试者，未曾诊断出青光眼、飞蚊症、中心浆液性视网膜病变、干眼症、交感性眼炎、夜盲症、失明、弱视、散光、沙眼、白内障、糖尿病视网膜病变、结膜炎、老花眼、色盲、虹膜异色症、视网膜色素变性、视网膜中央动脉阻塞、视网膜脱落、近视、远视、针眼、雪盲症、霰粒肿的受试者。
本发明提供了一种利用生物标志物KDELR3诊断高度近视的系统，所述系统包括：
核酸样本分离单元，用于从检测对象中分离核酸样本；
测序单元，用于对分离的样本进行测序，以获得测序结果；
数据处理单元，用于根据测序结果，对所述生物标志物的基因或蛋白表达水平进行检测，将所得到的检测值进行分析，得出上述生物标志物的诊断值；
结果判定单元，用于将数据处理单元得到的生物标志物的诊断值与设定界限值进行比较。
本发明所述的KDELR3生物标志物可以选择性的从样本中提取并测量。在一些具体的实施方案中，所述生物标志物的诊断值由生物标志物的基因或蛋白表达水平的检测值经过/不经过本领域常规数据处理技术处理得到。在一些具体的实施方案中，所述设定界限值为能够经由KDELR3表达水平判断受试者是否患有高度近视或患高度近视的风险的临界值，在高于该临界值时受试者患有高度近视或患高度近视的风险低，在低于该临界值时受试者患有高度近视或患高度近视的风险高。
在本发明的具体实施方案中，会出现以下情况，样本制备过程有时会在测量前导致生物标志物的大量损失。用于疾病预测的样本制备和分离、测量使用相同的仪器(例如:相同的LC-MS)可提高测量的准确度和精确度，用于疾病预测的样本制备和分离、测量使用不同的仪器(例如:不同的实验室)会导致不可预测的生物标志物检测信号的变化。因此，在本发明中可优选的使用内标，以在样本制备和测量时校正相应生物标志物的损失和/或信号水平变化。
进一步，所述受试者包括人或非人哺乳动物。
进一步，所述受试者为人。
在一些实施方案中，可以使用本领域技术人员常规知晓的且容易获得的技术进行生物标志物的检测表达水平。在使用常规的本领域技术时不需要进行精确的描述。
生物标志物的水平(例如：检测的结果)或评分(例如：模型计算的结果)和可比较的水平或可比较的评分去做对应的比较，使用诸如参考范围、区分范围、诊断、分类的阈值或截断值、非正常值等来判断受试对象是否存在高度近视或患有高度近视的风险度。KDELR3生物标志物的可比较的水平可以是某眼球状态未知的受试对象的生物标志物水平或评分。
术语“基因产物”(在本文中也称为“基因表达产物”或“表达产物”)涵盖由基因表达产生的产物，例如从基因转录的核酸(例如mRNA)和源自所述mRNA的翻译的多肽或蛋白质。应了解，某些基因产物可例如在细胞中经受处理或修饰。
本发明提供了一种分析受试者是否眼轴异常增长，屈光度下降的计算机模型，所述计算机模型包括执行检测或分析前面所述的KDELR3生物标志物的基因或蛋白表达水平的计算机程序。
术语“基因”涵盖编码具有一定功能的分子(例如RNA、蛋白质等)的核苷酸(例如DNA)序列。基因通常包含两条互补核苷酸链(即dsDNA)，即编码链和非编码链。在提及DNA转录时，编码链是碱基序列对应于所产生RNA转录物的碱基序列(但胸腺嘧啶由尿嘧啶代替)的DNA链。编码链含有密码子，而非编码链含有反密码子。在转录期间，RNA Pol II结合非编码链，读取反密码子，并且转录其序列以合成具有互补碱基的RNA转录物。在一些实施方案中，所列出的基因序列(即DNA序列)是编码链的序列。
本发明提供了KDELR3的抑制剂在制备用于眼轴异常增长、屈光度下降动物模型的处理产品中的应用。
本发明提供了一种非治疗或非诊断目的制备眼轴异常增长，屈光度下降的动物模型的方法，所述方法包括使用有效量的KDELR3的抑制剂的步骤。
生物标志物的“过表达”或“显著较高表达水平”是指测试样品中的表达水平大于用于评价表达的测定的标准误差，并且优选地高于对照样品(例如来自未患有生物标志物相关疾病的健康受试者的样品)中生物标志物的表达活性或水平并且优选地若干对照样品中的平均生物标志物表达水平至少10％并且更优选地1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20倍或更多倍。生物标志物的“显著较低表达水平”是指测试样品中的表达水平低于对照样品(例如来自未患有生物标志物相关疾病的健康受试者的样品)中生物标志物的表达水平并且优选地若干对照样品中的平均生物标志物表达水平至少10％并且更优选地1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20倍或更多倍。
术语“对照”是指任何适于提供与测试样品中的表达产物进行比较的参考标准物。在一个实施方案中，对照包括获得检测表达产物水平的“对照样品”并且与来自测试样品的表达产物水平进行比较。这种对照样品可包含任何合适样品，包括但不限于来自受试者的样本，从受试者分离的正常组织或细胞，从受试者分离的经培养原代细胞/组织，或从保藏机构获得的原代细胞/组织。
本发明提供了KDELR3生物标志物在构建诊断高度近视的计算模型中的应用。
本发明提供了KDELR3在制备预测、治疗高度近视的药物组合物中的应用。
术语“药物组合物”是指化合物、超分子复合物、材料和/或它们的组合或混合物。化合物(例如分子)可由化学式、化学结构或序列代表。药物组合物的代表性非限制性实例包括例如抗体、小分子、多肽、多核苷酸(例如RNAi剂、siRNA、miRNA、piRNA、mRNA、反义多核苷酸、适体等)、脂质和多糖。一般来说，药物组合物可使用本领域已知的任何合适方法获得。药物组合物还包括药学上可接受的赋形剂。
药学上可接受的赋形剂包括碳水化合物或蛋白质填充剂，包括但不限于：糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；来自玉米，小麦、水稻、马铃薯或其他植物的淀粉；纤维素如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠；和树胶，包括阿拉伯树胶和黄蓍胶；以及如明胶和胶原蛋白等蛋白质。如果需要，可以加入崩解剂或增溶剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。
在一些实施方案中，术语“约”涵盖在所测量值的1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％(包括所述值)或任何中间范围(例如±2％-6％)内的值。在一些实施方案中，术语“约”是指方法、测定或测量值的固有误差变化，例如存在于实验中的变化。
本发明的优点和有益效果：
本发明对这些患者的功能丧失变异及有害错义突变进行病例-对照研究，确定这两种类型的变异对高度近视的风险。通过单基因负荷分析，我们确定了拥有数个变异且具有统计学意义的致病基因KDELR3，并确认了其在眼球的不同组织中的单细胞表达，揭示了KDELR3在眼部成纤维细胞中对高度近视的贡献及致病原因。
附图说明
图1是全外显子组负荷测试图；
图2是单个基因的罕见变异体关联分析图；
图3是眼部组织单细胞分析图，其中，FB代表成纤维细胞，CM代表黑色素细胞，CEC代表脉络膜上皮细胞，ACT代表单核细胞；
图4是斑马鱼基因敲除KDELR3基因后的眼轴与屈光度统计图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
下述实施例中所涉及的试剂、方法等，若无特别说明，均为现有技术中的常规试剂、方法。本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。
实施例
1、实验材料
万例高度近视人群和万例对照人群。对2万例人进行口腔拭子采样，从中筛选出449例高度近视病例及449例正视对照。
2、实验方法
1)对口腔拭子样本进行遗传物质DNA提取。
2)对21227个DNA样本进行全外显子组测序。采用Twist人类核心外显子试剂盒，并使用Illumina NovaSeq 6000测序仪进行全外显子组测序。测序得到的序列片段使用Burrows–Wheeler Aligner(BWA 0.7.12)比对至37号人类基因组序列(GRCh37)上。随后，采用Sambamba 0.6.6对测序片段进行染色体坐标的排序和重复序列的标记。最后，采用一系列基因组分析工具组合包(GATK 4.0.11.0)区分单核苷酸变异(SNVs)和插入或删除变异(indels)。
3)质量控制。本实验首先保留了通过了GATK VQSR(变异质量分数重校准)的度量标准，以及位于低复杂区域以外的读段。基因型深度(DP)<10、基因型质量(GQ)<20的基因型以及等位基因平衡率>0.8或<0.2的杂合基因型被设置为缺失。本实验还排除了缺失率>1，病例-对照缺失率<0.995的变异位点，以及在基于合并病例对照队列的Hardy-Weinberg均衡(HWE)检验中，P值<10-6的那些变异位点。此外，如果样本的平均召回率低(<0.9)、平均测序深度低(<10)或平均基因型质量低(<65)，则排除样本。最后，排除每个队列中转换/颠换比、杂合/纯合子比或插入/缺失率的异常值(距离平均值>4SD)。
X染色体近亲繁殖系数>0.8的样本被归类为雄性，X染色体近亲繁殖系数<0.4的样本被归类为雌性。从数据集中排除<0.8到>0.4之间的样本，这些样本被归类为显示不明确的性别状态。
为了缓解因召回率差异造成的混淆，我们使用了一种基于位点的过滤策略。如果病例百分比与对照组相比的绝对差异超过0.007，则显示有外显子序列位点靶向的个体被排除在分析之外。基于位点的过滤导致2.42％的目标外显子序列碱基被排除在各自的分析之外，以缓解与差异召回率相关的问题。此外，我们去除了2.36％的目标外显子序列碱基，这些碱基在召回率关联测试中达到了全基因组显著性阈值(P<1×10-6)(Fisher精确测试中的双侧P值)。
4)变异位点的注释。实验采用Ensembl的变异效应预测软件(VEP v.99)对人类基因组GRCh37进行变异的注释。我们将蛋白质编码变体分为以下四类：(1)同义突变(2)良性的错义突变；(3)破坏性的错义突变；(4)蛋白质截短变异体(PTV)。
5)筛选样本：筛选449名双眼高度近视的患者作为研究对象，并从9606名对照组中随机抽取449名作为高度近视队列的第二个对照组，以此进行重复分析。
6)全外显子组范围负荷测试：为了确定高度近视病例与对照组中是否存在某类变异的富集，我们应用了多个Firth逻辑回归(Firth-logistic regression)模型。(1)模型1仅从变异计数预测高度近视病例－对照状态(2)模型2纳入了多个协变量(样本性别和PCA结果中前10个PC的样本人口结构)(3)模型3纳入了第二个模型中使用的所有协变量以及样本总外显子组计数，即测试的特定频率类中的变异的全外显子计数。(4)模型4在模型2基础上，增加了良性变异(同义变异加良性错义突变)的计数作为协变量。(5)模型5与模型3、4相似，但将增加的协变量改为功能丧失变异、有害错义突变和同义变异。五个Firth逻辑回归模型被用来从全外显子组的同义变异、良性错义突变、有害错义突变和功能丧失变异的计数中预测病例－对照的致病状态。我们使用Firth逻辑回归模型对高度近视病例中与近视相关的基因进行了富集分析。模型根据优势比(odds ratio，OR)及P值判断变异的富集状态。若优势比大于1，被认为高度近视拥有更多的特定类型变异，并是高度近视致病的危险因素。P值小于0.05被认为具有显著性。模型4被认为是代表高度近视数据集效果最为优秀的模型，被作为我们分析的首选模型。
7)单基因负荷检验：为了确定在高度近视病例中单个基因是否富集或耗尽了罕见的蛋白质编码变异，我们进行了三种基因水平的关联测试，包括Fisher'sexact test、SKAT和SKAT-O，以及先前定义的协变量(样本性别，PC1-PC10)。我们对高度近视病例和对照组进行了以下两种测试：一种是罕见的PTVs测试，另一种是罕见的损伤性错义变异测试。
8)单细胞分析：KDELR3在眼部不同组织的单细胞转录表达分析的所有数据在R3.6平台中，使用Seurat单细胞分析软件包(4.3.0)进行处理分析。
3、实验结果
1)对测序数据进行质控、比对和变异检测。
2)分为449：449及449：9606两个队列。
3)进行全外显子组负荷测试，通过五个逻辑模型，在两个队列中(449：9606，449：449)评估了所有罕见的功能丧失变异、损伤性错义变异、良性错义变异或同义变异的负荷与高度近视的关联，结果如图1所示，相对于对照组，高度近视病例中罕见的功能丧失变异(OR＝1.08，P＝7.14×10-6)和损伤性错义变异(OR＝1.02，P＝0.0149)明显富集。以上结果说明，在遗传学上，高度近视的成因主要是由功能丧失变异及损伤性错义变异驱动的。
4)进一步，我们进行了基于单个基因的罕见变异体关联分析，因为通过聚合一个基因中多个高度近视罕见因果变异的影响，可以提高挖掘单个基因导致高度近视的能力。结果如图2所示，我们发现，通过Fisher精确检验，有两个基因P值达到了外显子意义上的显著阈值(表1)，其基因上的变异更有可能与高度近视相关。
表1
5)进一步为了证明KDELR3在成纤维细胞中是否具有差异表达，对眼部组织单细胞进行了分析，其结果如图3所示，结果显示，在眼部组织单细胞中，KDELR3在成纤维细胞(FB)中都具有最高的表达。
6)为了进一步证明KDELR3的诊断能力，对斑马鱼的KDELR3基因进行了敲除，检测其眼部异常变化，统计结果如图4所示，结果表明，在KDELR3敲除的斑马鱼中，其眼部的眼轴增长，屈光度下降。
综合以上结果可知，高度近视的成因主要是由功能丧失变异及损伤性错义变异驱动的。在高度近视候选基因及camera-type眼球中的角膜发生发展相关基因集中，其优势比得到进一步提升。这一结果说明，由功能丧失变异或损伤性错义变异介导的高度近视，更有可能是在这些特定的基因集中发生的，为高度近视的致病基因提供了新的证据。我们在本发明中新发现了KDELR3基因作为高度近视的候选基因，经过fisher’s精确分析，我们发现了其与高度近视的相关性。
Claims (10)
1.检测样本中KDELR3生物标志物的试剂在制备诊断高度近视的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标志物KDELR3的试剂包括特异性检测KDELR3基因表达水平的试剂，或特异性结合KDELR3基因编码的蛋白的试剂；
优选地，所述产品包括检测样本中生物标志物KDELR3基因、功能片段、蛋白的存在/不存在或量的试剂；
优选地，所述试剂包括通过PCR反应、RT-PCR衍生反应、3SR扩增、LCR、SDA、NASBA、TMA、SYBR Green、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、复合探针、ISH、微阵列、Southern印迹、Northern印迹、多分析物谱测试、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法、免疫荧光测定法、酶免疫测定法、免疫沉淀测定法、化学发光测定法、免疫组织化学测定法、斑点印迹测定法或狭线印迹测定法检测样本中KDELR3基因、功能片段、蛋白的存在、不存在和/或量的试剂。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样本包括血液、唾液、尿液、粪便、脑脊液、精液、阴道分泌物、痰液、汗液、母乳、滑液、粘液、泪液、胆汁、胃液、组织间液、组织的活检或上皮细胞、口腔拭子、鼻腔拭子、房水、羊水、胸膜液或受试者的呼气。
4.一种诊断受试者是否患有高度近视或患高度近视的风险的产品，其特征在于，所述产品包括检测权利要求1中所述的KDELR3生物标志物的基因或蛋白表达水平的试剂；
优选地，所述产品包括引物、探针、芯片、试剂盒、试纸、膜条；
优选地，所述芯片包括基因芯片和蛋白芯片，所述基因芯片包括用于检测KDELR3基因转录水平的针对KDELR3基因的寡核苷酸探针，所述蛋白芯片包括KDELR3蛋白的特异性抗体或配体；
优选地，所述试剂盒包括基因检测试剂盒、蛋白检测试剂盒，所述基因检测试剂盒包括用于检测KDELR3基因转录水平的试剂或芯片，所述蛋白检测试剂盒包括用于检测KDELR3蛋白表达水平的试剂或芯片；
优选地，所述试纸包括基因检测试纸，蛋白检测试纸。
5.一种利用生物标志物KDELR3诊断高度近视的系统，其特征在于，所述系统包括：
数据处理单元，用于根据测序结果，对所述生物标志物的基因或蛋白表达水平进行检测，将所得到的检测值进行分析，得出上述生物标志物的诊断值；
优选地，所述系统包括结果判定单元，用于将数据处理单元得到的生物标志物的诊断值与设定界限值进行比较；
优选地，所述系统包括核酸样本分离单元，用于从检测对象中分离核酸样本；
优选地，所述系统包括测序单元，用于对分离的样本进行测序，以获得测序结果。
6.一种分析受试者是否眼轴异常增长，屈光度下降的计算机模型，其特征在于，所述计算机模型包括执行检测或分析权利要求1中所述的KDELR3生物标志物的基因或蛋白表达水平的计算机程序；
优选地，所述受试者包括人或非人哺乳动物；
优选地，所述受试者为人。
7.KDELR3的抑制剂在制备用于眼轴异常增长、屈光度下降动物模型的处理产品中的应用。
8.一种非治疗或非诊断目的制备眼轴异常增长，屈光度下降的动物模型的方法，其特征在于，所述方法包括使用有效量的KDELR3的抑制剂的步骤。
9.KDELR3生物标志物在构建诊断高度近视的计算模型中的应用。
10.KDELR3在制备预测、治疗高度近视的药物组合物中的应用。
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