CN117157093A - 细胞外囊泡-nlrp3拮抗剂 - Google Patents

细胞外囊泡-nlrp3拮抗剂 Download PDF

Info

Publication number
CN117157093A
CN117157093A CN202280028912.2A CN202280028912A CN117157093A CN 117157093 A CN117157093 A CN 117157093A CN 202280028912 A CN202280028912 A CN 202280028912A CN 117157093 A CN117157093 A CN 117157093A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aspects
seq
aso
nlrp3
nucleotides
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280028912.2A
Other languages
English (en)
Inventor
A·维尔马
K·伊科诺米迪斯
K·柯温
J·林
S·C·张
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lonza Sales AG
Original Assignee
Lonza Sales AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lonza Sales AG filed Critical Lonza Sales AG
Publication of CN117157093A publication Critical patent/CN117157093A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2006—IL-1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/145—Amines having sulfur, e.g. thiurams (>N—C(S)—S—C(S)—N< and >N—C(S)—S—S—C(S)—N<), Sulfinylamines (—N=SO), Sulfonylamines (—N=SO2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/164—Amides, e.g. hydroxamic acids of a carboxylic acid with an aminoalcohol, e.g. ceramides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/341—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide not condensed with another ring, e.g. ranitidine, furosemide, bufetolol, muscarine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本公开涉及包含NLRP3拮抗剂的细胞外囊泡，例如外泌体。在一些方面中，NLRP3拮抗剂包含反义寡核苷酸(ASO)。本文还提供了产生外泌体的方法和使用外泌体治疗和/或预防疾病或病症(例如周围神经病)的方法。

Description

细胞外囊泡-NLRP3拮抗剂
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年2月17日提交的美国临时申请No.63/150,453的优先权，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。
通过EFS-WEB电子提交的序列表的引用
本申请中提交的电子提交的序列表(名称：4000_124PC01_SEQLISTING_ST25.txt；大小：302,477字节；创建日期：2022年2月17日)的内容通过引用整体并入本文。
技术领域
本公开涉及通过向受试者施用包含NLRP3拮抗剂的细胞外囊泡(EV)(例如，外泌体)来治疗有需要的受试者的周围神经病的方法。在一些方面中，NLRP3拮抗剂包含反义寡核苷酸(ASO)。在本公开的某些方面中，细胞外囊泡还包含支架蛋白。
背景技术
外泌体是每个真核细胞自然产生的小细胞外囊泡。外泌体包含包围内部空间(即内腔)的膜。作为药物递送载体，EV(例如外泌体)作为许多治疗领域的新治疗方式，比传统药物递送方法具有许多优势。特别是，外泌体本质上具有较低的免疫原性，即使施用于不同的物种也是如此。
反义寡核苷酸已成为调节体外或体内靶基因表达的有力手段。然而，仍然需要提高ASO的体内稳定性和靶向性。
因此，需要新的、更有效的工程化EV(例如外泌体)，特别是那些可用于递送可减少与疾病(例如癌症)相关的基因表达的治疗剂的EV，以更好地实现治疗用途以及基于EV技术的其他应用。
发明内容
本公开的一些方面涉及治疗有需要的受试者中的周围神经病的方法，包括向受试者施用包含外源性NLRP3拮抗剂的细胞外囊泡。
本公开的一些方面涉及在有需要的受试者中减轻、改善或治疗周围神经病的一种或多种症状的方法，包括向受试者施用包含外源性NLRP3拮抗剂的细胞外囊泡。
在一些方面中，外源性NLRP3拮抗剂是化学化合物、siRNA、shRNA、反义寡核苷酸、蛋白质或其任何组合。
在一些方面中，细胞外囊泡靶向选自由巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞(MDSC)、单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及其任何组合组成的组的细胞。
在一些方面中，包含ASO的细胞外囊泡或ASO诱导受试者中的M2巨噬细胞极化。在一些方面中，包含ASO的细胞外囊泡或ASO减少神经中的骨髓炎症、脑膜骨髓炎症、神经鞘炎症或其任何组合。在一些方面中，包含ASO的细胞外囊泡减少鞘中的骨髓炎症。在一些方面中，包含ASO的细胞外囊泡减少根、神经和/或肌肉中的一者或多者中的巨噬细胞流入。在一些方面中，包含ASO的细胞外囊泡减少根、神经和/或肌肉中的一者或多者中的巨噬细胞吞噬作用。
在一些方面中，外源性NLRP3拮抗剂是小分子。在一些方面中，小分子选自由MCC950、Tanilast、冬凌草甲素、CY-09、Bay 11-7082、小白菊内酯、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNB)、β-羟基丁酸(BHB)、二甲基亚砜(DMSO)、I型干扰素及其任意组合组成的组。在一些方面中，外源性NLRP3拮抗剂包含式(I)：
在一些方面中，外源性NLRP3拮抗剂包含MCC950。
在一些方面中，外源性NLRP3拮抗剂包含反义寡核苷酸(ASO)。在一些方面中，ASO包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，其与NLRP3转录物内的核酸序列互补。在一些方面中，连续核苷酸序列与NLRP3转录物内的核酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％互补。
在一些方面中，ASO能够降低人细胞(例如，免疫细胞)中的NLRP3蛋白表达，其中人细胞表达NLRP3蛋白。在一些方面中，与未暴露于ASO的人细胞中NLRP3蛋白表达相比，NLRP3蛋白表达降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、或约100％。在一些方面中，ASO能够降低人细胞(例如，免疫细胞)中NLRP3 mRNA的水平，其中人细胞表达NLRP3 mRNA。在一些方面中，与未暴露于ASO的人细胞中NLRP3 mRNA的水平相比，NLRP3 mRNA的水平降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。
在一些方面中，所述ASO是间隙聚体(gapmer)、混合聚体(mixmer)或全聚体(totalmer)。在一些方面中，所述ASO包含一种或多种核苷类似物。在一些方面中，所述核苷类似物中的一者或多者包括2'-O-烷基-RNA；2'-O-甲基RNA(2'-OMe)；2'-烷氧基-RNA；2'-O-甲氧基乙基-RNA(2'-MOE)；2'-氨基-DNA；2'-氟-RNA；2'-氟-DNA；阿拉伯核酸(ANA)；2'-氟-ANA；或双环核苷类似物。在一些方面中，所述核苷类似物中的一者或多者是糖修饰的核苷。在一些方面中，所述糖修饰的核苷是增强亲和力的2'糖修饰的核苷。在一些方面中，所述核苷类似物中的一者或多者包括包含双环糖的核苷。在一些方面中，所述核苷类似物中的一者或多者包括LNA。在一些方面中，所述核苷酸类似物中的一者或多者选自由以下组成的组：限制性乙基核苷(cEt)、2',4'-限制性2'-O-甲氧基乙基(cMOE)、α-L-LNA、β-D-LNA、2'-O,4'-C-亚乙基-桥联核酸(ENA)、氨基-LNA、氧基-LNA、硫代-LNA以及它们的任何组合。在一些方面中，所述ASO包含一个或多个5'-甲基-胞嘧啶核碱基。
在一些方面中，所述连续核苷酸序列与所述NLRP3转录物的(i)5'非翻译区(UTR)；(ii)编码区；或(iii)3'UTR内的核酸序列互补。在一些方面中，所述连续核苷酸序列与包含(i)SEQ ID NO:3的核苷酸1–534；(ii)SEQ ID NO:3的核苷酸448–2193；(iii)SEQ ID NO:3的核苷酸2125–3036；(iv)SEQ ID NO:3的核苷酸2987–3990；(v)SEQ ID NO:3的3996–4456；(vi)SEQ ID NO:3的核苷酸106–334；(vii)SEQ ID NO:3的核苷酸648–2113；(viii)SEQ IDNO:3的核苷酸2225–2956；(ix)SEQ ID NO:3的核苷酸2987–3810；(x)SEQ ID NO:3的3996–4376；(xi)SEQ ID NO:3的核苷酸156–284；(xii)SEQ ID NO:3的核苷酸698–2063；(xiii)SEQ ID NO:3的核苷酸2275–2906；(xiv)SEQ ID NO:3的核苷酸3037–3760；(xv)SEQ ID NO:3的4046–4326；(xvi)SEQ ID NO:3的核苷酸196–244；(xvii)SEQ ID NO:3的核苷酸738–2003；(xviii)SEQ ID NO:3的核苷酸2315–2866；(xix)SEQ ID NO:3的核苷酸3077–3720；或(xx)SEQ ID NO:3的4086–4286的核酸序列互补。
在一些方面中，所述连续核苷酸序列与(i)SEQ ID NO:3的核苷酸206–234；(ii)SEQ ID NO:3的核苷酸748-2013；(iii)SEQ ID NO:3的核苷酸2325–2856；(iv)SEQ ID NO:3的核苷酸3087–3710；或(v)SEQ ID NO:3的4096–4276内的核酸序列互补。
在一些方面中，所述连续核苷酸序列包含与选自图1A和图1B中序列的序列互补的核苷酸序列。在一些方面中，所述连续核苷酸序列与所述NLRP3转录物内的核苷酸序列完全互补。在一些方面中，所述ASO包含选自SEQ ID NO:101-200的核苷酸序列，具有一个或两个错配。在一些方面中，所述ASO包含选自SEQ ID NO:101-200的核苷酸序列。在一些方面中，所述ASO的长度是14至20个核苷酸。
在一些方面中，所述连续核苷酸序列包含一个或多个经修饰的核苷间键联。在一些方面中，所述一个或多个经修饰的核苷间键联是硫代磷酸酯键联。在一些方面中，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的核苷间键联经修饰。在一些方面中，所述ASO中的核苷间键联中的每一者是硫代磷酸酯键联。
在一些方面中，所述细胞外囊泡包含锚定部分。在一些方面中，所述外源性NLRP3拮抗剂连接至所述锚定部分。
在某些方面中，所述细胞外囊泡包含外源靶向部分。在一些方面中，所述外源靶向部分包含肽、抗体或其抗原结合片段、化学化合物、RNA适体或它们的任何组合。在一些方面中，所述外源靶向部分包含肽。
在一些方面中，所述外源靶向部分包含微蛋白、设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、抗运载蛋白、adnectin、适体、肽模拟物分子、受体的天然配体、骆驼科动物纳米抗体或它们的任何组合。在一些方面中，所述外源靶向部分包含全长抗体、单结构域抗体、仅重链抗体(VHH)、单链抗体、仅鲨鱼重链抗体(VNAR)、scFv、Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或它们的任何组合。在一些方面中，所述抗体是单链抗体。
在一些方面中，所述外源靶向部分使外泌体靶向肝脏、心脏、肺、脑、肾脏、中枢神经系统、周围神经系统、肌肉、骨、关节、皮肤、肠、膀胱、胰腺、淋巴结、脾脏、血液、骨髓或它们的任何组合。
在一些方面中，EV包含将所述外源靶向部分连接至EV的支架部分。在一些方面中，所述锚定部分和/或所述支架部分是支架X或支架Y。在一些方面中，所述外源性NLRP3拮抗剂与所述EV的外表面上的锚定部分和/或支架部分连接。在一些方面中，所述外源性NLRP3拮抗剂与所述EV的腔表面上的锚定部分和/或支架部分连接。在一些方面中，所述锚定部分包含固醇、GM1、脂质、维生素、小分子、肽或它们的组合。在一些方面中，所述锚定部分包含胆固醇。在一些方面中，所述锚定部分包含磷脂、溶血磷脂、脂肪酸、维生素(例如，维生素D和/或维生素E)或它们的任何组合。
在一些方面中，所述外源性NLRP3拮抗剂通过接头与所述锚定部分和/或所述支架部分连接。在一些方面中，所述外源性NLRP3拮抗剂通过接头与所述EV连接。在一些方面中，所述接头是多肽。在一些方面中，所述接头是非多肽部分。在一些方面中，所述接头包含乙二醇。在一些方面中，所述接头包含HEG、TEG、PEG或它们的任何组合。在一些方面中，所述接头包含丙烯酸亚磷酰胺(例如，ACRYDITETM)、腺苷酸化、叠氮化物(NHS酯)、地高辛(NHS酯)、胆固醇-TEG、I-LINKERTM、氨基修饰剂(例如，氨基修饰剂C6、氨基修饰剂C12、氨基修饰剂C6dT或Uni-LinkTM氨基修饰剂)、炔烃、5'己炔基、5-辛二炔基dU、生物素化(例如，生物素、生物素(叠氮化物)、生物素dT、生物素-TEG、双重生物素、PC生物素或脱硫生物素)、硫醇修饰(硫醇修饰剂C3 S-S、二硫醇或硫醇修饰剂C6S-S)或它们的任何组合。
在一些方面中，所述接头是可裂解接头。在一些方面中，所述接头包含缬氨酸-丙氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯或缬氨酸-瓜氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯。在一些方面中，所述接头包含(i)马来酰亚胺部分和(ii)缬氨酸-丙氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯或缬氨酸-瓜氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯。
在一些方面中，所述EV是外泌体。
在一些方面中，周围神经病与糖尿病、创伤、自身免疫性疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、甲状腺功能减退、血管疾病、维生素水平异常、饮酒或其任何组合相关。在一些方面中，周围神经病包括化疗诱导的周围神经病(CIPN)。
在一些方面中，受试者之前接受过化疗。在一些方面中，化疗包括顺铂衍生物、长春花生物碱、硼替佐米、紫杉烷或其任何组合。在一些方面中，化疗包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、多西他赛、长春新碱、紫杉醇、吉西他滨或其任何组合。
在一些方面中，细胞外囊泡降低受试者中选自刺痛、疼痛、烧灼感、麻木、热敏感、冷敏感、精细运动技能困难及其任何组合中的一种或多种症状的严重性或发生。
附图说明
图1是列出了靶向NLPR3转录物的各种ASO序列的表。该表包含以下信息(从左到右)：(i)描述，(ii)没有任何特定设计或化学结构的ASO序列，(iii)仅指定用于ASO序列的SEQ ID号，(iv)以核苷酸数(NT)表示的ASO长度，(ii)NLPR3转录物序列(SEQ ID NO：3)上的目标起始和终止位置。ASO为从5'到3'。化学结构中的符号如下：Nb表示LNA；dN表示DNA；5MdC表示5-甲基-dC；Nm表示MOE；s表示硫代磷酸酯。
图2是鞘内注射外泌体的小鼠的图像，显示了外泌体在整个CNS中的分布，如所标记。
图3A-3B是说明施用了阴性对照(假；无顺铂)；顺铂和PBS；顺铂和MCC950(第15-20天)；顺铂和对照外泌体(无ASO；第15天)；顺铂和ASONLRP3(游离ASO；第15天)；顺铂和exoASONLRP3(第5天)；顺铂和exoASONLRP3(第15天)；或顺铂和加巴喷丁(egabapentin)(第8和21天)的小鼠中使用Von Frey测试测量的疼痛的图示。图3A显示了随着时间的推移测量的疼痛水平，并且图3B显示了每组在第21天的疼痛水平。
具体实施方式
本公开的一些方面涉及治疗有需要的受试者中的周围神经病的方法，包括向受试者施用包含NLRP3拮抗剂的细胞外囊泡(EV)，例如外泌体。本公开的一些方面涉及在有需要的受试者中减轻、改善或治疗周围神经病的一种或多种症状的方法，包括向受试者施用包含外源性NLRP3拮抗剂的细胞外囊泡。在一些方面中，NLRP3拮抗剂包含反义寡核苷酸(ASO)。在一些方面中，ASO包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，其与NLRP3转录物内的核酸序列互补。
I.定义
为了能够更容易地理解本说明书，首先定义某些术语。另外的定义在整个详细描述中阐述。
应注意，术语“一个/种(a或an)”实体是指一个/种或多个/种所述实体；例如，“一个核苷酸序列(a nucleotide sequence)”应理解为表示一个或多个核苷酸序列。因此，术语“一个/种(a或an)”、“一个/种或多个/种”和“至少一个/种”在本文中可互换地使用。
此外，本文使用的“和/或”应被视为具体地公开两个指定特征或组分中的每个与或不与另一个一起存在。因此，如在诸如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独的)和“B”(单独的)。同样，如在诸如“A、B和/或C”的短语中使用术语“和/或”旨在包括以下方面的每一方面：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独的)；B(单独的)；和C(单独的)。
应当理解，本文无论在何处用措辞“包含/包括(comprising)”来描述方面，都还提供了以“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的其它类似方面。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开相关的领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。例如，the Concise Dictionary ofBiomedicineand Molecular Biology,Juo,Pei-Show，第2版，2002,CRC Press；TheDictionary of Cell and Molecular Biology，第3版，1999,Academic Press；和theOxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology,Revised,2000,OxfordUniversity Press为技术人员提供了本公开中使用的许多术语的通用词典。
单位、前缀和符号以它们的国际单位制(Système International de Unites)(SI)认可的形式表示。数值范围包括定义范围的数值。除非另有说明，否则核苷酸序列从左至右以5’至3’方向书写。氨基酸序列从左至右以氨基至羧基方向书写。本文提供的标题不限制本公开的各种方面，所述方面可通过参考整个说明书得出。因此，通过整体参考说明书，更充分地定义了紧接着在下文中定义的术语。
术语“约”在本文中用于意指近似、大致、约或在……左右。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过使边界延伸高于和低于所述数值来修饰所述范围。一般来说，术语“约”可通过向上或向下(升高或降低)例如10％的变化修饰高于或低于所述值的数值。例如，如果陈述“在施用ASO后，ASO使细胞中NLRP3蛋白的表达降低至少约60％”，则意味着NLRP3水平降低50％至70％的范围。
本文所用的术语“周围神经病”是指以神经损伤、炎症、损害或疾病为特征的疾病或病症，所述神经携带信息往返于大脑和脊髓以及身体的其余部分。在某些方面中，周围神经病包括周围神经或周围神经周围的炎症。在一些方面中，周围神经病与糖尿病、创伤、自身免疫性疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、甲状腺功能减退、血管疾病、维生素水平异常、饮酒或其任何组合相关。在一些方面中，周围神经病是化疗诱导的周围神经病(CIPN)。
本文所用的术语“化疗诱导的周围神经病”或“CIPN”是指在施用一种或多种化疗的受试者中出现的神经病。CIPN是抗肿瘤药物引起的最常见副作用之一，在接受化疗的患者中发生率为19％至85％以上。CIPN患病率最高的是服用铂类药物(70％至100％)、紫杉烷类药物(11％至87％)、沙利度胺及其类似物(20％至60％)和伊沙匹隆(60％至65％)的患者。CIPN的强度和持续时间各不相同，症状范围从急性、短暂的热感觉到周围神经的永久性变化，并伴有慢性疼痛和不可逆的神经损伤。CIPN是一种主要是感觉神经病，可能伴有运动和自主神经变化。停止化疗后，疼痛和感觉异常可能持续数月甚至数年，导致一些未患癌症的患者遭受先前癌症治疗引起的衰弱性神经病变。症状通常首先出现在脚和手中，通常表现为典型的“手套和袜子”神经病，四肢的最远端部分表现出最大的缺陷。CIPN的症状包括但不限于麻木、刺痛、触觉改变、振动受损、感觉异常、触摸和温暖或凉爽的温度引起的感觉迟钝、疼痛的感觉(包括自发烧灼感、射击或电击样疼痛)、机械或热异常性疼痛或痛觉过敏，以及感觉丧失(严重情况下)。参见，例如Zajaczkowska et al.,Int.J.Mol.Sci.20(6):1451(March 2019)，其全部内容通过引用并入。
术语“反义寡核苷酸”(ASO)是指通过核苷酸间键联彼此共价连接的核苷(如天然存在的核苷或其修饰形式)的寡聚物或聚合物。可用于本公开的ASO包含至少一种非天然存在的核苷。ASO与靶核酸至少部分互补，使得ASO与靶核酸序列杂交。
术语“核酸”或“核苷酸”意图涵盖多种核酸。在一些方面中，术语“核酸”或“核苷酸”是指靶序列，例如体内或体外的前体mRNA、mRNA或DNA。当所述术语是指靶序列中的核酸或核苷酸时，核酸或核苷酸可以是细胞内天然存在的序列。在其它方面中，“核酸”或“核苷酸”是指本公开的ASO中的序列。当所述术语是指ASO中的序列时，核酸或核苷酸可以是非天然存在的，即化学合成的、酶促产生的、重组产生的或它们的任何组合。在一些方面中，ASO中的核酸或核苷酸是合成或重组产生的，但不是天然存在的序列或其片段。在一些方面中，ASO中的核酸或核苷酸不是天然存在的，因为它们含有至少一种在自然界中非天然存在的核苷类似物。
如本文所用的术语“核苷酸”是指包含糖部分、碱基部分和共价连接基团(键联基团)如磷酸酯或硫代磷酸酯核苷酸间键联基团的糖苷，并且涵盖两种天然存在的核苷酸如DNA或RNA，以及包含经修饰的糖和/或碱基部分的非天然存在的核苷酸，它们在本文中也称为“核苷酸类似物”。本文中，单个核苷酸可被称为单体或单元。在某些方面中，术语“核苷酸类似物”是指具有经修饰的糖部分的核苷酸。具有经修饰的糖部分的核苷酸(例如，LNA)的非限制性实例在本文别处公开。在其它方面中，术语“核苷酸类似物”是指具有经修饰的核碱基部分的核苷酸。具有经修饰的核碱基部分的核苷酸包括但不限于5-甲基-胞嘧啶、异胞嘧啶、假异胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶、6-氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、肌苷、二氨基嘌呤和2-氯-6-氨基嘌呤。在一些方面中，术语“核苷酸”、“单元”和“单体”可互换使用。将认识到，当提及核苷酸或单体的序列时，所指的是诸如A、T、G、C或U以及其类似物的碱基的序列。
如本文所用的术语“核苷”用于指包含糖部分和碱基部分的糖苷，并且因此可用于在提及通过ASO的核苷酸之间的核苷酸间键联共价连接的核苷酸单元时使用。在生物技术领域，术语“核苷酸”通常用于指核酸单体或单元。在ASO的上下文中，术语“核苷酸”可指单独的碱基，即包含胞嘧啶(DNA和RNA)、鸟嘌呤(DNA和RNA)、腺嘌呤(DNA和RNA)、胸腺嘧啶(DNA)和尿嘧啶(RNA)的核碱基序列，其中糖主链和核苷酸间键联的存在是隐含的。同样，特别是在一个或多个核苷酸间键联基团经修饰的寡核苷酸的情况下，术语“核苷酸”可指“核苷”。例如，可使用术语“核苷酸”，即使在指定核苷之间的键联的存在或性质时也是如此。
如本文所用的术语“核苷酸长度”是指给定序列中核苷酸(单体)的总数。例如，ASO-NLRP3-206(SEQ ID NO:101)的序列具有20个核苷酸；因此所述序列的核苷酸长度是20。因此，术语“核苷酸长度”在本文中可与“核苷酸数量”互换使用。
如本领域普通技术人员将认识到的，寡核苷酸的5'末端核苷酸不包含5'核苷酸间键联基团，尽管它可包含5'末端基团。
本文所述的化合物可包含若干不对称中心并且可以光学纯的对映异构体、对映异构体的混合物例如外消旋体、非对映异构体的混合物、非对映异构外消旋体或非对映异构外消旋体的混合物形式存在。在一些方面中，不对称中心可以是不对称碳原子。术语“不对称碳原子”是指具有四个不同取代基的碳原子。根据Cahn-Ingold-Prelog公约，不对称碳原子可具有“R”或“S”构型。
如本文所用，术语“双环糖”是指包含4至7元环的经修饰的糖部分，所述糖部分包含连接4至7元环的两个原子以形成第二个环、从而产生双环结构的桥联。在一些方面中，所述桥联连接核苷的核糖环的C2'和C4'(即，2'-4'桥联)，如在LNA核苷中观察到的。
如本文所用，“编码区”或“编码序列”是多核苷酸中由可翻译成氨基酸的密码子组成的一部分。虽然“终止密码子”(TAG、TGA或TAA)通常未被翻译成氨基酸，它可被认为是编码区的一部分，但是任何侧翼序列(例如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子、非翻译区(“UTR”)等)并非编码区的一部分。编码区的边界通常通过位于5’末端处编码所得多肽的氨基末端的起始密码子和位于3’末端处编码所得多肽的羧基末端的翻译终止密码子决定。
如本文所用的术语“非编码区”是指不是编码区的核苷酸序列。非编码区的实例包括但不限于启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子、非翻译区(“UTR”)、非编码外显子等。一些外显子可以是每种转录物的5'非翻译区(5'UTR)或3'非翻译区(3'UTR)的全部或部分。非翻译区对于转录物的有效翻译以及控制转录物的翻译速率和半衰期是重要的。
当用于核苷酸序列的上下文中时，术语“区域”是指所述序列的一部分。例如，短语“核苷酸序列内的区域”或“核苷酸序列的互补序列内的区域”是指比核苷酸序列短、但比分别位于特定核苷酸序列或所述核苷酸序列的互补序列内的至少10个核苷酸长的序列。术语“子序列(sub-sequence)”或“子序列(subsequence)”也可指核苷酸序列的区域。
当提及核苷酸序列时，术语“下游”是指核酸或核苷酸序列位于参考核苷酸序列的3'。在某些方面中，下游核苷酸序列涉及转录起始点之后的序列。例如，基因的翻译起始密码子位于转录起始位点的下游。
术语“下游”是指位于参考核苷酸序列5'的核苷酸序列。
如本文所用，术语“调控区”是指位于编码区上游(5'非编码序列)、编码区内或编码区下游(3'非编码序列)的核苷酸序列，并且其影响相关编码区的转录、RNA加工、稳定性或翻译。调控区可包括启动子、翻译前导序列、内含子、聚腺苷酸化识别序列、RNA加工位点、效应子结合位点、UTR和茎环结构。如果编码区意图在真核细胞中表达，则聚腺苷酸化信号和转录终止序列通常将位于编码序列的3'。
如本文所用的术语“转录物”可指通过DNA的转录合成并在加工后成为信使RNA(mRNA)(即前体信使RNA(pre-mRNA)和加工的mRNA本身)的初级转录物。术语“转录物”可与“前体mRNA”和“mRNA”互换使用。在DNA链转录成初级转录物后，新合成的初级转录物以多种方式进行修饰，以转化为它们的成熟功能形式，从而产生不同的蛋白质和RNA，如mRNA、tRNA、rRNA、lncRNA、miRNA等。因此，术语“转录物”可包括外显子、内含子、5'UTR和3'UTR。
如本文所用的术语“表达”是指多核苷酸产生基因产物，例如RNA或多肽的过程。它包括但不限于将多核苷酸转录成信使RNA(mRNA)和将mRNA翻译成多肽。表达产生“基因产物”。如本文所用，基因产物可以是核酸，例如由基因转录产生的信使RNA，或从转录物翻译的多肽。本文所述的基因产物还包括具有转录后修饰的核酸，所述修饰例如为聚腺苷酸化或剪接；或具有翻译后修饰的多肽，所述修饰例如为甲基化、糖基化、添加脂质、与其它蛋白质亚基缔合或蛋白水解裂解。
在两种或更多种核酸的背景下的术语“同一的”或“同一性”百分比是指当针对最大对应进行比较和比对时(如果必要，引入空位)，两个或更多个序列是相同的或具有指定百分比的相同的核苷酸或氨基酸残基，而不考虑任何保守性氨基酸取代作为序列同一性的一部分。可使用序列比较软件或算法或通过目视检查来测量同一性百分比。可用于获得氨基酸或核苷酸序列的比对的不同算法和软件是本领域已知的。
序列比对算法的一个这样的非限制性实例是在Karlin等人,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.,87:2264-2268中进行描述的，在Karlin等人,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.,90:5873-5877中进行修改的并且并入至NBLAST和XBLAST程序(Altschul等人,1991,Nucleic Acids Res.,25:3389-3402)中的算法。在某些方面中，可如Altschul等人,1997,Nucleic Acids Res.25:3389-3402中所述而使用空位BLAST。BLAST-2、WU-BLAST-2(Altschul等人,1996,Methods in Enzymology,266:460-480)、ALIGN、ALIGN-2(Genentech，南圣弗朗西斯科，加利福尼亚)或Megalign(DNASTAR)是可用于比对序列的另外可公开获得的软件程序。在某些方面中，两个核苷酸序列之间的同一性百分比使用GCG软件包中的GAP程序来确定(例如，使用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或90的空位权重以及1、2、3、4、5或6的长度权重)。在某些替代方面中，并入Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970))的算法的GCG软件包中的GAP程序可用于确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比(例如，使用BLOSUM 62矩阵抑或PAM250矩阵和16、14、12、10、8、6或4的空位权重以及1、2、3、4、5的长度权重)。或者，在某些方面中，使用Myers和Miller的算法(CABIOS,4:11-17(1989))来确定核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比。例如，可使用ALIGN程序(2.0版)和使用具有残基表、空位长度罚分12和空位罚分4的PAM120来确定同一性百分比。本领域技术人员可通过特定比对软件确定用于达到最大比对的适当参数。在某些方面中，使用比对软件的默认参数。
在某些方面中，第一氨基酸序列与第二氨基酸序列的同一性百分比“X”计算为100x(Y/Z)，其中Y是在第一序列和第二序列的比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数(如通过目视检查或特定序列比对程序所比对)，并且Z是第二序列中的残基总数。如果第一序列的长度长于第二序列，则第一序列与第二序列的同一性百分比将高于第二序列与第一序列的同一性百分比。
与多核苷酸参考序列比对的单个多核苷酸靶序列内的不同区域可各自具有其自己的序列同一性百分比。应注意，序列同一性百分比值四舍五入至最接近的十分位。例如，80.11、80.12、80.13和80.14向下舍入到80.1，而80.15、80.16、80.17、80.18和80.19向上舍入到80.2。还应注意，长度值将始终是整数。
如本文所用，术语“同源的”和“同源性”可与术语“同一性”和“同一的”互换。
术语“其天然存在的变体”是指NLRP3多肽序列或NLRP3核酸序列(例如，转录物)的变体，所述变体天然存在于所定义的分类群中，如哺乳动物，如小鼠、猴和人中。通常，当提及多核苷酸的“天然存在的变体”时，所述术语还可涵盖通过染色体易位或复制在染色体位置1q44的247,416,156-247,449,108(即，GenBank登录号NC_000001.11的核苷酸247,416,156-247,449,108)处发现的编码NLRP3的基因组DNA以及源自其的RNA如mRNA的任何等位基因变体。“天然存在的变体”还可包括源自NLRP3 mRNA的选择性剪接的变体。当提及特定多肽序列时，例如，所述术语还包括蛋白质的天然存在的形式，其因此可通过例如共翻译或翻译后修饰(如信号肽裂解、蛋白水解裂解、糖基化等)进行加工。
在确定本公开的ASO(或其区域)与编码哺乳动物NLRP3(例如，NLRP3基因)的核酸的靶区域(如本文公开的那些)之间的“互补性”程度时，“互补性”(也称为“同源性”或“同一性”)的程度表示为ASO(或其区域)的序列和与其最佳比对的靶区域的序列(或靶区域的反向互补序列)之间的同一性百分比(或同源性百分比)。所述百分比是通过计数两个序列之间同一的比对碱基数、除以ASO中连续单体的总数、并且乘以100而计算的。在这样的比较中，如果存在空位，则优选地，此类空位仅仅是错配，而不是在本公开的ASO与靶区域之间空位内的单体数量不同的区域。
如本文所用的术语“互补”表示与参考序列互补的序列。众所周知，互补性是DNA复制和转录的基本原理，因为它是两个DNA或RNA序列之间共有的性质，因此当它们彼此反平行比对时，序列中每个位置的核苷酸碱基将是互补的，就像照镜子和看到事物的反面一样。因此，例如，5'"ATGC"3'序列的互补序列可书写为3'"TACG"5'或5'"GCAT"3'。如本文所用的术语“反向互补的”、“反向互补”和“反向互补性”可与术语“互补的”、“互补”和“互补性”互换。在一些方面中，术语“互补性”是指与NLRP3转录物内的连续核酸序列100％匹配或互补性(即，完全互补)。在一些方面中，术语“互补”是指与NLRP3转录物内的连续核酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％匹配或互补性。
当提及两个单独的核酸或核苷酸序列时，术语“对应于(corresponding to)”和“对应于(corresponds to)”可用于阐明基于同源性和/或功能性彼此对应或相似的序列区域，尽管具体序列的核苷酸可不同地编号。例如，基因转录物的不同同种型可具有核苷酸序列的相似或保守部分，其编号可基于选择性剪接和/或其它修饰在相应同种型中不同。此外，应认识到，在表征核酸或核苷酸序列(例如，基因转录物以及是否从翻译起始密码子开始对序列进行编号或是否包括5'UTR)时，可采用不同的编号系统。此外，应认识到，基因或基因转录物的不同变体的核酸或核苷酸序列可变化。然而，如本文所用，共享核酸或核苷酸序列同源性和/或功能性的变体区域被视为彼此“对应”。例如，对应于SEQ ID NO:1(“参考序列”)的核苷酸X至Y的NLRP3转录物的核苷酸序列是指与SEQ ID NO:1的核苷酸X至Y具有同一序列或相似序列的NLRP3转录物序列(例如，NLRP3前体mRNA或mRNA)，其中X是起始位点，并且Y是终止位点(如图1所示)。本领域普通技术人员可通过将NLRP3转录物序列与SEQID NO:1进行比对来鉴定NLRP3转录物序列中的对应X和Y残基。
术语“对应的核苷酸类似物”和“对应的核苷酸”旨在表示核苷酸类似物和天然存在的核苷酸中的核碱基具有相同的配对或杂交能力。例如，当核苷酸的2-脱氧核糖单元与腺嘌呤连接时，“对应的核苷酸类似物”含有与腺嘌呤连接的戊糖单元(不同于2-脱氧核糖)。
ASO化学的注释如下：β-D-氧基LNA核苷酸由氧基B指定，其中B表示核苷酸碱基，如胸腺嘧啶(T)、尿苷(U)、胞嘧啶(C)、5-甲基胞嘧啶(MC)、腺嘌呤(A)或鸟嘌呤(G)，并且因此包括氧基A、氧基T、氧基MC、氧基C和氧基G。DNA核苷酸由DNAb指定，其中小写b表示核苷酸碱基，如胸腺嘧啶(T)、尿苷(U)、胞嘧啶(C)、5-甲基胞嘧啶(Mc)、腺嘌呤(A)或鸟嘌呤(G)，并且因此包括DNAa、DNAt、DNA和DNAg。C或c前的字母M表示5-甲基胞嘧啶。字母“s”表示硫代磷酸酯核苷酸间键联。
如本文所用的术语“ASO编号(ASO Number)”或“ASO编号(ASO No.)”是指针对具有组分的详细化学结构的核苷酸序列给予的独特编号，所述组分例如核苷(例如，DNA)、核苷类似物(例如，β-D-氧基-LNA)、核碱基(例如，A、T、G、C、U或MC)和主链结构(例如，硫代磷酸酯或磷酸二酯)。例如，ASO-NLRP3-206可指NLRP3-206(SEQ ID NO:101)。
除非另有说明，否则“效力”通常表示为以μM、nM或pM计的IC50或EC50值。效力也可用抑制百分比来表示。IC50是治疗性分子的中值抑制浓度。EC50是治疗性分子相对于媒介物或对照(例如，盐水)的中值有效浓度。在功能测定中，IC50是治疗性分子的浓度，所述浓度可使生物反应(例如，mRNA转录或蛋白质表达)降低由治疗性分子实现的生物反应的50％。在功能测定中，EC50是产生50％的生物反应(例如，mRNA转录或蛋白质表达)的治疗性分子的浓度。可通过本领域中已知的任何数量的方式来计算IC50或EC50。
如本文所用，术语“抑制”例如NLRP3基因转录物和/或NLRP3蛋白的表达是指ASO降低细胞或组织中的NLRP3基因转录物和/或NLRP3蛋白的表达。在一些方面中，术语“抑制”是指对NLRP3基因转录物或NLRP3蛋白的完全抑制(100％抑制或不可检测水平)。在其它方面中，术语“抑制”是指对细胞或组织中的NLRP3基因转录物和/或NLRP3蛋白表达的至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％抑制。
如本文所用，术语“细胞外囊泡”或“EV”是指包含包封内部空间的膜的细胞来源的囊泡。细胞外囊泡包括直径小于其所源自的细胞的直径的所有膜结合的囊泡(例如，外泌体、纳米囊泡)。在一些方面中，细胞外囊泡的直径在20nm至1000nm的范围内，并且可包含在内部空间(即，腔)内、展示在细胞外囊泡的外表面上和/或跨膜的各种大分子有效载荷。在一些方面中，有效载荷可包括核酸、蛋白质、碳水化合物、脂质、小分子和/或它们的组合。在某些方面中，细胞外囊泡包含支架部分。举例而言并且非限制性地，细胞外囊泡包括凋亡小体、细胞片段、通过直接或间接操纵(例如，通过连续挤出或用碱性溶液进行的处理)而来源于细胞的囊泡、含有小囊的胞器和由活细胞产生(例如，通过直接质膜出芽(plasmamembrane budding)或晚期内体与质膜的融合)的囊泡。细胞外囊泡可源自活的或死的生物体、外植组织或器官、原核或真核细胞、和/或培养的细胞。在一些方面中，细胞外囊泡由表达一种或多种转基因产物的细胞产生。
如本文所用，术语“外泌体”是指直径介于20-300nm之间(例如，介于40-200nm之间)的细胞外囊泡。外泌体包含封闭内部空间(即，腔)的膜，并且在一些方面中，可通过直接质膜出芽或通过晚期内体与质膜的融合而从细胞(例如，生产细胞)生产。在某些方面中，外泌体包含支架部分。如下文所描述，外泌体可来源于生产细胞，并且基于其大小、密度、生物化学参数或它们的组合从生产细胞中分离。在一些方面中，本公开的EV(例如，外泌体)由表达一种或多种转基因产物的细胞产生。
如本文所用，术语“纳米囊泡”是指直径介于20-250nm之间(例如，介于30-150nm之间)的细胞外囊泡，并且通过直接或间接操纵由细胞(例如，生产细胞)产生，以使得在无操纵的情况下所述细胞将不产生纳米囊泡。为了产生纳米囊泡而对细胞进行的适当操纵包括但不限于连续挤出、用碱性溶液进行的处理、超声处理或它们的组合。在一些方面中，纳米囊泡的产生可导致生产细胞的破坏。在一些方面中，本文所述的纳米囊泡群体基本上不含通过从质膜直接出芽或晚期内体与质膜融合的方式而来源于细胞的囊泡。在某些方面中，纳米囊泡包含支架部分。纳米囊泡，一旦来源于生产细胞，就可基于其大小、密度、生物化学参数或它们的组合从生产细胞中分离。
如本文所用，术语“表面工程化EV，例如外泌体”(例如，支架X工程化EV，例如外泌体)是指以下EV(例如，外泌体)：EV(例如，外泌体)的膜或表面在其组成方面进行了修饰，以使得工程化EV(例如，外泌体)的表面不同于修饰前EV(例如，外泌体)的表面或天然存在的EV(例如，外泌体)的表面。工程化可在EV(例如，外泌体)的表面上或在EV(例如，外泌体)的膜中进行，以使得EV(例如，外泌体)的表面被改变。例如，膜在其蛋白质、脂质、小分子、碳水化合物等的组成方面进行修饰。可通过化学、物理或生物学方法或通过由先前或同时通过化学、物理或生物学方法进行修饰的细胞产生来改变组成。具体地，可通过遗传工程化或通过由先前通过遗传工程化进行修饰的细胞产生来改变组成。在一些方面中，表面工程化EV(例如，外泌体)包含外源性蛋白质(即，EV(例如，外泌体)不天然表达的蛋白质)或其片段或变体，所述外源性蛋白质或其片段或变体可暴露于EV(例如，外泌体)的表面，或者可以是暴露于EV(例如，外泌体)的表面上的部分的锚定点(连接)。在其它方面中，表面工程化EV(例如，外泌体)包含天然外泌体蛋白(例如，支架X)或其片段或变体的更高表达(例如，更高数量)，所述蛋白质或其片段或变体可暴露于EV(例如，外泌体)的表面，或者可以是暴露于EV(例如，外泌体)的表面上的部分的锚定点(连接)。
如本文所用，术语“腔工程化外泌体”(例如，支架Y工程化外泌体)是指以下EV(例如，外泌体)：EV(例如，外泌体)的膜或腔在其组成方面进行了修饰，以使得工程化EV(例如，外泌体)的腔不同于修饰前EV(例如，外泌体)的腔或天然存在的EV(例如，外泌体)的腔。工程化可在EV(例如，外泌体)的腔中或在EV(例如，外泌体)的膜中直接进行，以使得EV(例如，外泌体)的腔被改变。例如，将膜在其蛋白质、脂质、小分子、碳水化合物等的组成方面进行修饰，以使得EV(例如，外泌体)的腔得到修饰。可通过化学、物理或生物学方法或通过由先前通过化学、物理或生物学方法进行修饰的细胞产生来改变组成。具体地，可通过遗传工程化或通过由先前通过遗传工程化进行修饰的细胞产生来改变组成。在一些方面中，腔工程化外泌体包含外源性蛋白质(即，EV(例如，外泌体)不天然表达的蛋白质)或其片段或变体，所述外源性蛋白质或其片段或变体可暴露于EV(例如，外泌体)的腔中，或者可以是暴露于EV(例如，外泌体)的内层上的部分的锚定点(连接)。在其它方面中，腔工程化EV(例如，外泌体)包含天然外泌体蛋白(例如，支架X或支架Y)或其片段或变体的更高表达，所述蛋白质或其片段或变体可暴露于外泌体的腔，或者可以是暴露于外泌体的腔中的部分的锚定点(连接)。
术语“经修饰的”当在本文所述的EV(例如，外泌体)的背景中使用时，是指EV(例如外泌体和/或其生产细胞)的改变或工程化，以使得经修饰的EV(例如，外泌体)不同于天然存在的EV(例如，外泌体)。在一些方面中，本文所述的经修饰的EV(例如，外泌体)包含与天然存在的EV(例如，外泌体)的膜相比在蛋白质、脂质、小分子、碳水化合物等的组成方面不同的膜(例如，膜包含更高密度或数量的天然外泌体蛋白和/或膜包含在外泌体中非天然存在的蛋白质(例如，ASO))。在某些方面中，对膜的此类修饰改变EV(例如，外泌体)(例如，本文所述的表面工程化EV，例如外泌体)的外表面。在某些方面中，对膜的此类修饰改变EV(例如，外泌体)(例如，本文所述的腔工程化EV，例如外泌体)的腔。
如本文所用，术语“支架部分”是指可用于将目标载荷或任何其它感兴趣的化合物(例如，ASO)在EV(例如，外泌体)的腔表面上或外表面上锚定至EV(例如，外泌体)的分子。在某些方面中，支架部分包含合成分子。在一些方面中，支架部分包含非多肽部分。在其它方面中，支架部分包含天然存在于EV(例如，外泌体)中的脂质、碳水化合物或蛋白质。在一些方面中，支架部分包含不天然存在于EV(例如，外泌体)中的脂质、碳水化合物或蛋白质。在某些方面中，支架部分是支架X。在一些方面中，支架部分是支架Y。在另外的方面中，支架部分包括支架X和支架Y两者。可用于本公开的其它支架部分的非限制性实例包括：氨基肽酶N(CD13)；脑啡肽酶，AKA膜金属内肽酶(MME)；外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成员1(ENPP1)；神经纤毛蛋白-1(NRP1)；CD9、CD63、CD81、PDGFR、GPI锚蛋白、乳凝集素(MFGE8)、LAMP2和LAMP2B。
如本文所用，术语“支架X”是指最近在外泌体的表面上鉴定的外泌体蛋白。参见例如，美国专利号10,195,290，其以引用的方式整体并入本文。支架X蛋白的非限制性实例包括：前列腺素F2受体负调控因子(“PTGFRN蛋白”)；basigin(“BSG蛋白”)；免疫球蛋白超家族成员2(“IGSF2蛋白”)；免疫球蛋白超家族成员3(“IGSF3蛋白”)；免疫球蛋白超家族成员8(“IGSF8蛋白”)；整联蛋白β-1(“ITGB1蛋白”)；整联蛋白α-4(“ITGA4蛋白”)；4F2细胞表面抗原重链(“SLC3A2蛋白”)；一类ATP转运蛋白(“ATP1A1蛋白”、“ATP1A2蛋白”、“ATP1A3蛋白”、“ATP1A4蛋白”、“ATP1B3蛋白”、“ATP2B1蛋白”、“ATP2B2蛋白”、“ATP2B3蛋白”、“ATP2B蛋白”)；以及它们的功能片段。在一些方面中，支架X蛋白可以是完整蛋白质或其片段(例如，功能片段，例如，能够将另一部分锚定在EV(例如，外泌体)的外表面上或腔表面上的最小片段)。在一些方面中，支架X可将部分(例如，ASO)锚定至外泌体的外表面或腔表面。
如本文所用，术语“支架Y”是指在外泌体的腔内新鉴定的外泌体蛋白。参见例如，国际公布号WO/2019/099942，其以引用的方式整体并入本文。支架Y蛋白的非限制性实例包括：富含肉豆蔻酰化丙氨酸的蛋白激酶C底物(“MARCKS蛋白”)；富含肉豆蔻酰化丙氨酸的蛋白激酶C底物样1(“MARCKSL1蛋白”)；和脑酸溶性蛋白1(“BASP1”)。在一些方面中，支架Y蛋白可以是完整蛋白质或其片段(例如，功能片段，例如，能够将部分锚定至外泌体的腔表面的最小片段)。在一些方面中，支架Y可将部分(例如，ASO)锚定至EV(例如，外泌体)的腔表面。在一些方面中，支架Y可将部分(例如，ASO)锚定至EV(例如，外泌体)的外表面。
如本文所用，术语蛋白质(例如，治疗性蛋白质、支架X或支架Y)的“片段”是指蛋白质的氨基酸序列，所述氨基酸序列比天然存在的序列短，与天然存在的蛋白质相比，蛋白质的N和/或C末端缺失或任何部分缺失。如本文所用，术语“功能片段”是指保留蛋白质功能的蛋白质片段。因此，在一些方面中，支架X蛋白的功能片段保留将部分锚定在EV(例如，外泌体)的腔表面上或外表面上的能力。类似地，在某些方面中，支架Y蛋白的功能片段保留将部分锚定在EV(例如，外泌体)的腔表面或外表面上的能力。片段是否是功能片段可通过任何本领域已知的测定EV(例如，外泌体)的蛋白质含量的方法来评估，所述方法包括蛋白质印迹、FACS分析和片段与自发荧光蛋白(如例如GFP)的融合。在某些方面中，支架X蛋白的功能片段保留天然存在的支架X蛋白的至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约100％的能力，例如锚定部分的能力。在一些方面中，支架Y蛋白的功能片段保留天然存在的支架Y蛋白的至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约100％的能力，例如锚定另一分子的能力。
如本文所用，术语分子(例如，功能性分子、抗原、支架X和/或支架Y)的“变体”是指通过本领域已知的方法进行比较后与另一分子共有某些结构和功能属性的分子。例如，蛋白质的变体可包括另一蛋白质中的取代、插入、缺失、移码或重排。
在一些方面中，支架X的变体包括与全长、成熟PTGFRN、BSG、IGSF2、IGSF3、IGSF8、ITGB1、ITGA4、SLC3A2或ATP转运蛋白或PTGFRN、BSG、IGSF2、IGSF3、IGSF8、ITGB1、ITGA4、SLC3A2或ATP转运蛋白的片段(例如，功能片段)具有至少约70％同一性的变体。在一些方面中，PTGFRN的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:301的PTGFRN或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，BSG的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:303的BSG或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，IGSF2的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:308的IGSF2或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，IGSF3的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:309的IGSF3或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，IGSF8的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:304的IGSF8或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ITGB1的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:305的ITGB1或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ITGA4的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:306的ITGA4或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，SLC3A2的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:307的SLC3A2或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ATP1A1的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:310的ATP1A1或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ATP1A2的变体或片段的变体与根据SEQ IDNO:311的ATP1A2或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ATP1A3的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:312的ATP1A3或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ATP1A4的变体或片段的变体与根据SEQ IDNO:313的ATP1A4或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ATP1B3的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:314的ATP1B3或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ATP2B1的变体或片段的变体与根据SEQ IDNO:315的ATP2B1或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ATP2B2的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:316的ATP2B2或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ATP2B3的变体或片段的变体与根据SEQ IDNO:317的ATP2B3或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，ATP2B4的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:318的ATP2B4或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，本文公开的支架X蛋白的变体或片段的变体保留特异性地靶向EV(例如，外泌体)的能力。在一些方面中，支架X包含一个或多个突变，例如保守氨基酸取代。
在一些方面中，支架Y的变体包括与MARCKS、MARCKSL1、BASP1或MARCKS、MARCKSL1或BASP1的片段具有至少70％同一性的变体。在一些方面中，MARCKS的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:401的MARCKS或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，MARCKSL1的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:402的MARCKSL1或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，BASP1的变体或片段的变体与根据SEQ ID NO:403的BASP1或其功能片段共有至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性。在一些方面中，支架Y蛋白的变体或片段的变体保留特异性地靶向EV(例如，外泌体)的腔表面的能力。在一些方面中，支架Y包含一个或多个突变，例如保守氨基酸取代。
“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替代的一种氨基酸取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，如果多肽中的氨基酸被来自同一侧链家族的另一种氨基酸替代，则所述取代被认为是保守的。在另一个方面中，氨基酸串可被在侧链家族成员的顺序和/或组成上不同的结构相似的串保守地替代。
术语两个多核苷酸或多肽序列之间的“序列同一性百分比”或“同一性百分比”是指在考虑到了为了两个序列的最佳比对而必须引入的添加或缺失(即，空位)的情况下，比较窗口内序列所共有的相同匹配位置的数量。匹配位置是其中在靶序列和参考序列两者中呈现相同核苷酸或氨基酸的任何位置。呈现在靶序列中的空位未计数，因为空位并非核苷酸或氨基酸。同样地，呈现在参考序列中的空位未计数，因为对靶序列核苷酸或氨基酸进行计数，而不对来自参考序列的核苷酸或氨基酸进行计数。
序列同一性百分比通过以下方式计算：确定两个序列中出现相同氨基酸残基或核酸碱基的位置数以得到匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗中的位置总数，并将结果乘以100以得到序列同一性百分比。序列的比较和两个序列之间的序列同一性百分比的确定可使用供在线使用和供下载的易于获得的软件完成。合适的软件程序可从各种来源获得，并且用于蛋白质和核苷酸序列的比对。用于确定序列同一性百分比的一种合适的程序是bl2seq，其为可从美国政府国家生物技术信息中心BLAST网址(blast.ncbi.nlm.nih.gov)获得的BLAST程序套件的一部分。Bl2seq使用BLASTN或BLASTP算法进行两个序列之间的比较。BLASTN用于比较核酸序列，而BLASTP用于比较氨基酸序列。其它合适的程序是例如Needle、Stretcher、Water或Matcher，其为生物信息学程序的EMBOSS套件的一部分，并且也可从欧洲生物信息学研究所(EBI)在www.ebi.ac.uk/Tools/psa获得。
与多核苷酸或多肽参考序列比对的单个多核苷酸或多肽靶序列内的不同区域可各自具有其自己的序列同一性百分比。应注意，序列同一性百分比值四舍五入至最接近的十分位。例如，80.11、80.12、80.13和80.14向下舍入到80.1，而80.15、80.16、80.17、80.18和80.19向上舍入到80.2。还应注意，长度值将始终是整数。
本领域技术人员将理解，用于计算序列同一性百分比的序列比对的生成不限于仅由一级序列数据驱动的二进制序列-序列比较。序列比对可来源于多重序列比对。产生多重序列比对的一种合适的程序是可从www.clustal.org获得的ClustalW2。另一种合适的程序是可从www.drive5.com/muscle/获得的MUSCLE。ClustalW2和MUSCLE可替代地例如从EBI获得。
还应理解，序列比对可通过将序列数据与来自异构源的数据如结构数据(例如，晶体学蛋白质结构)、功能数据(例如，突变的位置)或系统发育数据整合而产生。整合异构数据以生成多重序列比对的合适程序是可在www.tcoffee.org获得且可替代地可例如从EBI获得的T-Coffee。还应理解，用于计算百分比序列同一性的最终比对可自动地或人工地加以验证。
多核苷酸变体可在编码区、非编码区或两者中含有改变。在一个方面中，多核苷酸变体含有产生沉默取代、添加或缺失，但不改变所编码多肽的性质或活性的改变。在另一个方面中，由于遗传密码的简并性，通过沉默取代产生核苷酸变体。在其它方面中，其中以任何组合取代、缺失或添加5-10个、1-5个或1-2个氨基酸的变体。可出于多种原因产生多核苷酸变体，例如，为了优化用于特定宿主的密码子表达(将人mRNA中的密码子改变为其它密码子，例如，细菌宿主诸如大肠杆菌)。
天然存在的变体被称为“等位基因变体”，并且是指占据生物体的染色体上的给定基因座的基因的若干替代形式之一(Genes II,Lewin,B.,ed.,John Wiley&Sons,New York(1985))。这些等位基因变体可在多核苷酸和/或多肽水平上变化，并且包括在本公开中。或者，非天然存在的变体可通过诱变技术或直接合成产生。
使用蛋白质工程化和重组DNA技术的已知方法，可产生变体以改进或改变多肽的特征。例如，可从分泌蛋白质的N末端或C末端缺失一个或多个氨基酸，而基本上不损失生物功能。Ron等人，J.Biol.Chem.268:2984-2988(1993)(以引用的方式整体并入本文)报告了即使在缺失3个、8个或27个氨基末端氨基酸残基之后仍具有肝素结合活性的变体KGF蛋白。类似地，干扰素γ在从这种蛋白质的羧基末端缺失8-10个氨基酸残基后表现出高达10倍的活性。(Dobeli等人，J.Biotechnology 7:199-216(1988)，以引用的方式整体并入本文)。
此外，大量的证据表明，变体通常保留与天然存在的蛋白质相似的生物活性。例如，Gayle和同事(J.Biol.Chem 268:22105-22111(1993)，以引用的方式整体并入本文)对人细胞因子IL-1a进行了广泛的突变分析。他们利用随机诱变生成了3,500多种单独的IL-1a突变体，在分子的整个长度上每种变体具有平均2.5个氨基酸变化。在每个可能的氨基酸位置都检查到多重突变。研究人员发现，“[大多数]分子可被改变，而对[结合或生物活性]几乎没有影响。”(参见摘要)。事实上，在所检查的3,500多个核苷酸序列中，只有23个独特的氨基酸序列产生了与野生型活性显著不同的蛋白质。
如上所述，多肽变体包括例如经修饰的多肽。修饰包括，例如，乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价连接、血红素部分的共价连接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价连接、脂质或脂质衍生物的共价连接、磷脂酰肌醇的共价连接、交联、环化、二硫键形成、去甲基化、共价交联的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸盐的形成、甲酰化、γ-羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、肉豆蔻酰化、氧化、聚乙二醇化(Mei等人,Blood 116:270-79(2010)，其以引用的方式整体并入本文)、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、硒酰化、硫酸化、转运RNA介导的向蛋白质中添加氨基酸，诸如精氨酰化和遍在蛋白化。在一些方面中，可在任何方便的位置修饰支架X和/或支架Y。
如本文所用，术语“与……连接”或“与……缀合”可互换使用，并且是指第一部分与第二部分(例如，分别为胆固醇和ASO或支架X和ASO，例如，在细胞外囊泡中或细胞外囊泡上表达的支架部分和ASO，例如，分别在细胞外囊泡的腔表面中或外表面上表达的支架X(例如，PTGFRN蛋白))之间形成的共价键或非共价键。
术语“包封的”，或所述术语的语法上不同的形式(例如，包封(encapsulation)或包封(encapsulating))是指在第二部分(例如，EV，例如外泌体)内具有第一部分(例如，ASO)而两个部分没有化学或物理地连接的状态或过程。在一些方面中，术语“包封的”可与“在……的腔中”互换使用。在本文别处公开了将第一部分(例如，ASO)包封到第二部分(例如，EV，例如外泌体)中的非限制性实例。
如本文所用，术语“生产细胞”是指用于产生EV(例如，外泌体)的细胞。生产细胞可以是体外培养的细胞，或者是体内细胞。生产细胞包括但不限于已知可有效产生EV(例如，外泌体)的细胞，例如，HEK293细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、间充质干细胞(MSC)、BJ人包皮成纤维细胞、fHDF成纤维细胞、神经元前体细胞、/>羊水细胞、脂肪间充质干细胞、RPTEC/TERT1细胞。在某些方面中，生产细胞不是抗原呈递细胞。在一些方面中，生产细胞不是树突细胞、B细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、Kupffer-Browicz细胞、源自这些细胞中的任一者的细胞或它们的任何组合。在一些方面中，可用于本公开中的EV(例如，外泌体)不在暴露于EV(例如，外泌体)的表面上的MHC I类或II类分子上携带抗原，而是可通过连接至支架X和/或支架Y而在EV(例如，外泌体)的腔中或在EV(例如，外泌体)的表面上携带抗原。
如本文所用，术语“分离(isolate)”、“分离的(isolated)”和“分离(isolating)”或“纯化(purify)”、“纯化的(purified)”和“纯化(purifying)”以及“提取的(extracted)”和“提取(extracting)”可互换使用，并且是指已进行一个或多个纯化过程(例如，所需EV制剂的选择或富集)的所需EV的制剂状态(例如，多个已知或未知的量和/或浓度)。在一些方面中，如本文所用的分离或纯化是从含有生产细胞的样品中除去、部分除去(例如，一部分)EV的过程。在一些方面中，分离的EV组合物没有可检测的不希望的活性，或者可替代地，不希望的活性的水平或量处于或低于可接受的水平或量。在其它方面中，分离的EV组合物的所需EV的量和/或浓度处于或高于可接受的量和/或浓度。在其它方面中，与从其中获得组合物的起始材料(例如，生产细胞制剂)相比，分离的EV组合物得到富集。与起始材料相比，这种富集大10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％、99.99％、99.999％、99.9999％或大99.9999％。在一些方面中，分离的EV制剂基本上不含残留生物产物。在一些方面中，分离的EV制剂100％不含、99％不含、98％不含、97％不含、96％不含、95％不含、94％不含、93％不含、92％不含、91％不含或90％不含任何污染性生物物质。残留生物产物可包括非生物物质(包括化学物质)或不想要的核酸、蛋白质、脂质或代谢物。基本上不含残留生物产物也可意味着EV组合物不含可检测的生产细胞，并且仅EV是可检测的。
如本文所用，术语“有效载荷”是指作用于与EV接触的靶标(例如，靶细胞)的剂。可包含在EV(例如，外泌体)上的有效载荷的非限制性实例是ASO。可引入到EV(例如，外泌体)和/或生产细胞中的有效载荷包括治疗剂，诸如核苷酸(例如，包含可检测部分或毒素或破坏转录的核苷酸)、核酸(例如，编码诸如酶的多肽的DNA或mRNA分子，或具有调控功能的RNA分子诸如miRNA、dsDNA、lncRNA和siRNA)、氨基酸(例如，包含可检测部分或毒素或破坏翻译的氨基酸)、多肽(例如，酶)、脂质、碳水化合物和小分子(例如，小分子药物和毒素)。在某些方面中，有效载荷包含ASO。如本文所用，术语“抗体”涵盖免疫球蛋白(无论是天然产生的还是部分或完全合成产生的)及其片段。所述术语还覆盖具有与免疫球蛋白结合结构域同源的结合结构域的任何蛋白质。“抗体”还包括多肽，所述多肽包含来自免疫球蛋白基因或其片段的特异性结合和识别抗原的框架区。如本文所用，术语“抗原”是指当引入受试者时引发针对自身的免疫反应(细胞或体液)的任何剂。术语抗体的使用意在包括完全抗体、多克隆抗体、单克隆抗体和重组抗体、它们的片段，并且还包括单链抗体、人源化抗体、鼠抗体、嵌合单克隆抗体、小鼠-人单克隆抗体、小鼠-灵长类动物单克隆抗体、灵长类动物-人单克隆抗体、抗独特型抗体、抗体片段(诸如，例如scFv、(scFv)2、Fab、Fab'和F(ab')2、F(abl)2、Fv、dAb和Fd片段)、双功能抗体和抗体相关多肽。抗体包括双特异性抗体和多特异性抗体，只要它们表现出所需的生物活性或功能即可。
术语“个体”、“受试者”、“宿主”和“患者”在本文中可互换使用并且是指需要诊断、治疗或疗法的任何哺乳动物受试者，特别是人。本文描述的组合物和方法适用于人的疗法和兽医应用。在一些方面中，受试者是哺乳动物，并且在其它方面中，受试者是人。如本文所用，“哺乳动物受试者”包括所有哺乳动物，包括但不限于人、家畜(例如，狗、猫等)、农场动物(例如，牛、绵羊、猪、马等)和实验室动物(例如，猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠等)。
术语“药物组合物”是指处于允许活性成分的生物活性有效的形式并且不含对将向其施用所述组合的受试者具有不可接受的毒性的另外组分的制剂。这种组合物可以是无菌的。
如本文所用，术语“基本上不含”意指包含EV(例如，外泌体)的样品包含按质量/体积(m/v)百分比浓度计少于10％的大分子。一些级分可含有少于0.001％、少于0.01％、少于0.05％、少于0.1％、少于0.2％、少于0.3％、少于0.4％、少于0.5％、少于0.6％、少于0.7％、少于0.8％、少于0.9％、少于1％、少于2％、少于3％、少于4％、少于5％、少于6％、少于7％、少于8％、少于9％或少于10％(m/v)的大分子。
如本文所用，术语“大分子”意指核酸、污染物蛋白质、脂质、碳水化合物、代谢物或它们的组合。
如本文所用，术语“常规外泌体蛋白”意指先前已知富集于外泌体中的蛋白质，所述蛋白质包括但不限于CD9、CD63、CD81、PDGFR、GPI锚蛋白、乳凝集素(MFGE8)、LAMP2和LAMP2B、它们的片段、或与它们结合的肽。
如本文所用的“施用”意指通过药学上可接受的途径向受试者给予本文公开的包含EV(例如，外泌体)的组合物。施用途径可以是静脉内途径，例如静脉内注射和静脉内输注。另外的施用途径包括例如皮下、肌内、经口、经鼻和经肺施用。EV(例如，外泌体)可作为包含至少一种赋形剂的药物组合物的一部分施用。
如本文所公开的例如ASO或细胞外囊泡的“有效量”是足以执行明确说明的目的的量。关于所阐述的目的，可根据经验并且以常规方式确定“有效量”。
如本文所用，“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指例如疾病或疾患的严重程度的降低；病程持续时间的缩短；与疾病或疾患相关的一种或多种症状的改善或消除；向患有疾病或疾患的受试者提供有益作用，但不一定治愈所述疾病或疾患。所述术语还包括疾病或疾患或其症状的防治或预防。在一个方面中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括在有需要的受试者中诱导造血。在一些方面中，疾病或疾患与造血或其缺陷相关。在某些方面中，疾病或疾患是癌症。在一些方面中，治疗增强患有癌症的受试者的造血，其中增强的造血包括受试者中一种或多种免疫细胞的增殖和/或分化增加。
如本文所用，术语“预防(prevent)”或“预防(preventing)”是指减少或降低特定结果的发生或严重程度。在一些方面中，通过防治性治疗来实现预防结果。在一些方面中，将本文所述的包含ASO的EV(例如，外泌体)防治性地施用于受试者。在一些方面中，受试者处于发展癌症的风险中。在一些方面中，受试者处于发展造血系统病症的风险中。
II.本公开的方法
本公开的一些方面涉及在有需要的受试者中预防和/或治疗周围神经病的方法，包括施用本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV。如本文所述，NLRP3拮抗剂是ASO。用于本公开的ASO可以与NLRP3转录物的一个或多个区域(例如，前体mRNA或mRNA)特异性杂交，导致细胞中NLRP3蛋白表达的减少和/或抑制。因此，包含此类ASO的EV可用于预防和/或治疗与NLRP3蛋白表达增加相关的周围神经病。
在一些方面中，可用本方法治疗的周围神经病的特征在于炎症增加。在一些方面中，周围神经病与糖尿病、创伤、自身免疫性疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、甲状腺功能减退、血管疾病、维生素水平异常、饮酒或其任何组合相关。在某些方面中，周围神经病包括一种或多种周围神经的炎症。
在一些方面中，所述周围神经病包括化疗引起的周围神经病(CIPN)。在一些方面中，受试者之前接受过化疗。在一些方面中，在施用本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV之前，对受试者施用化疗至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约6周、至少约8周、至少约10周、至少约12周、至少约16周、至少约20周、至少约24周或至少约28周。在一些方面中，在并行化疗期间向受试者施用本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV。在一些方面中，本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV与化疗在同一天施用。在一些方面中，本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV和化疗不在同一天施用。在一些方面中，化疗包含铂衍生物、长春花生物碱、硼替佐米、紫杉烷或其任何组合。在一些方面中，化疗包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、多西他赛、长春新碱、紫杉醇、吉西他滨或其任何组合。在某些方面中，化疗包含顺铂。
在一些方面中，本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV降低受试者中周围神经病例如CIPN的一种或多种症状的严重性和/或发生。在一些方面中，本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV外细胞囊泡或ASO诱导受试者中的M2巨噬细胞极化。在一些方面中，本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV减少神经中的骨髓炎症、脑膜骨髓炎症、神经鞘炎症或其任何组合。在一些方面中，本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV减少鞘中的骨髓炎症。在一些方面中，本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV减少根、神经和/或肌肉中的一者或多者中的巨噬细胞流入。在一些方面中，本文公开的包含NLRP3拮抗剂的EV减少根、神经和/或肌肉中的一者或多者中的巨噬细胞吞噬作用。在一些方面中，细胞外囊泡降低受试者中选自刺痛、疼痛、烧灼感、麻木、热敏感、冷敏感、精细运动技能困难及其任何组合中的一种或多种症状的严重性或发生。在一些方面中，细胞外囊泡降低疼痛的严重程度或发生。
在一些方面中，将EV静脉内施用于受试者的循环系统。在一些方面中，将EV输注在合适的液体中并且施用至受试者的静脉中。在一些方面中，将EV动脉内施用于受试者的循环系统。在一些方面中，将EV输注在合适的液体中并且施用至受试者的动脉中。
在一些方面中，通过鞘内施用将EV施用于受试者。在一些方面中，通过鞘内施用来施用EV，然后向躯干施加机械对流力。参见例如，Verma等人,Alzheimer'sDement.12:e12030(2020)；其以引用的方式整体并入本文)。因此，本公开的某些方面涉及向有需要的受试者施用EV(例如，外泌体)的方法，所述方法包括通过鞘内注射向所述受试者施用EV(例如，外泌体)，然后向所述受试者的躯干施加机械对流力。在一些方面中，使用高频胸壁或腰椎-胸廓振荡呼吸清除装置(例如，Smart Vest或Smart Wrap,ELECTROMED INCH，新布拉格，明尼苏达州，美国)实现机械对流力。在一些方面中，机械对流力(例如振荡背心)有助于鞘内给药的EV(例如，外泌体)进一步向下传播至神经，从而允许至神经的更佳EV(例如，外泌体)递送。
I在一些方面中，可通过在区室递送外泌体后作用于受试者的外源性体外力来操纵外泌体的区室内和跨区室生物分布。这包括施加机械对流，例如通过对身体区室或整个身体施加敲击、振动、摇动或按摩的方式。例如，在鞘内给药后，通过包括振荡机械夹套在内的多种方式施加胸壁振动可使外泌体的生物分布沿着神经轴或沿着颅神经和脊神经扩散，这可有助于通过携带药物的外泌体治疗神经病症。
在一些方面中，通过振荡夹套或其它类似的方式施加外部机械对流力可用于从鞘内空间的脑脊液中除去外泌体和其它物质并进入外周循环。这方面可有助于将内源性有毒外泌体和其它有害大分子如β-淀粉样蛋白、tau、α-突触核蛋白、TDP43、神经丝和过多的脑脊液从鞘内空间除去至外周以消除。
在一些方面中，通过同时合并腰椎穿刺并允许脑室-腰椎灌注，可使通过脑室内途径递送的外泌体在整个神经轴中易位，其中在外泌体给药后将额外的流体输注至脑室中，同时允许CSF的现有神经轴柱退出是腰椎穿刺。脑室-腰椎灌注可使ICV给药的外泌体沿整个神经轴扩散并完全覆盖蛛网膜下腔，以治疗软脑膜炎症和其它疾病。
在一些方面中，施加外部体外聚焦超声、热能(热)或冷可用于操纵被工程化为对这些现象敏感的外泌体的区室药代动力学和药物释放特性。
在一些方面中，经工程化以含有顺磁性材料的外泌体的区室内行为和生物分布可通过磁体或磁场的外部施加来操纵。
在一些方面中，将EV经由注射剂施用至椎管中，或施用至蛛网膜下腔中以使其到达脑脊液(CSF)。在一些方面中，将EV瘤内施用至受试者的一个或多个肿瘤中。在一些方面中，通过鼻内施用将EV施用于受试者。在一些方面中，可以局部施用或全身性施用的形式经由鼻吹入EV。在某些方面中，EV作为鼻喷雾剂施用。在一些方面中，通过腹膜内施用将EV施用于受试者。在一些方面中，将EV输注在合适的液体中并且注射至受试者的腹膜中。在一些方面中，腹膜内施用使得EV分布至淋巴管。在一些方面中，腹膜内施用使得EV分布至胸腺、脾脏和/或骨髓。在一些方面中，腹膜内施用使得EV分布至一个或多个淋巴结。在一些方面中，腹膜内施用使得EV分布至颈部淋巴结、腹股淋巴结、纵隔淋巴结或胸骨淋巴结中的一者或多者。在一些方面中，腹膜内施用使得EV分布至胰腺。在一些方面中，通过眼周施用将EV(例如，外泌体)施用于受试者。在一些方面中，将注射至眼周组织中。眼周药物施用包括结膜下、前房眼球筋膜囊下、后房眼球筋膜囊下和眼球后施用途径。
II.A.NLRP3拮抗剂
本公开的某些方面涉及向受试者施用包含外源性NLRP3拮抗剂的EV的方法。如本文所用，“NLRP3拮抗剂”是抑制或阻断NLRP3途径的物质。NLRP3拮抗剂可以直接影响NLRP3的活性和/或表达。或者，NLRP3拮抗剂可以间接影响NLRP3的活性和/或表达，包括影响NLRP3途径中的另一因子的活性和/或表达。在一些方面中，NLRP3拮抗剂选自化学化合物、siRNA、shRNA、反义寡核苷酸、肽(例如蛋白质)及其任何组合。在某些方面中，NLRP3拮抗剂是ASO，例如本文公开的任何ASO。
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂是反义寡核苷酸、二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物(PMO)或肽缀合的二氨基磷酸酯吗啉代寡聚物(PPMO)。
II.A.1.反义寡核苷酸(ASO)
在一些方面中，本公开通过采用反义寡核苷酸(ASO)调节编码哺乳动物NLRP3的核酸分子(如NLRP3核酸，例如NLRP3转录物，包括NLRP3前体mRNA和NLRP3 mRNA)或编码哺乳动物NLRP3的此类核酸分子的天然变体的功能，治疗有需要的受试者中的周围神经病。在本公开的上下文中，术语“ASO”是指由两个或更多个核苷酸的共价键联形成的分子(即，寡核苷酸)。
ASO包含长度为约10至约30，如10-20、14-20、16-20或15-25个核苷酸的连续核苷酸序列。在某些方面中，ASO的长度是20个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是18个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是19个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是17个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是16个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是15个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是14个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是13个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是12个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是11个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是10个核苷酸。
在一些方面中，ASO包含长度为约10至约50个核苷酸，例如约10至约45、约10至约40、约10或约35、或约10至约30个核苷酸的连续核苷酸序列。在某些方面中，ASO的长度是21个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是22个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是23个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是24个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是25个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是26个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是27个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是28个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是29个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是30个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是31个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是32个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是33个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是34个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是35个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是36个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是37个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是38个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是39个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是40个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是41个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是42个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是43个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是44个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是45个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是46个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是47个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是48个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是49个核苷酸。在某些方面中，ASO的长度是50个核苷酸。
如本文所用，术语“反义ASO”、“反义寡核苷酸”和“寡聚物”可与术语“ASO”互换。
对SEQ ID编号的引用包括特定核碱基序列，但不包括任何设计或完整的化学结构。此外，本文图中公开的ASO示出代表性设计，但不限于图中所示的具体设计，除非另有说明。例如，当权利要求书(或本说明书)提及SEQ ID NO:101时，它仅包含SEQ ID NO:101的核苷酸序列。本文公开的任何ASO的设计可书写为SEQ ID NO:XX，其中从5'端起的第一核苷酸、第二核苷酸、第三核苷酸、第一核苷酸、第二核苷酸和第N核苷酸中的每一者都是经修饰的核苷酸，例如LNA，并且其它核苷酸中的每一者是未修饰的核苷酸(例如，DNA)。
在各个方面中，本公开的ASO不包含RNA(单元)。在一些方面中，ASO包含一个或多个DNA单元。在一个方面中，根据本公开的ASO是线性分子或被合成为线性分子。在一些方面中，ASO是单链分子，并且不包含例如至少3、4或5个连续核苷酸的短区域，所述短区域与同一ASO内的等效区域(即双链体)互补-在此方面，ASO(基本上)不是双链的。在一些方面中，ASO基本上不是双链的。在一些方面中，ASO不是siRNA。在各个方面中，本公开的ASO可完全由连续核苷酸区域组成。因此，在一些方面中，ASO基本上不是自身互补的。
在其它方面中，本公开包括ASO的片段。例如，本公开包括本文公开的ASO的至少一个核苷酸、至少两个连续核苷酸、至少三个连续核苷酸、至少四个连续核苷酸、至少五个连续核苷酸、至少六个连续核苷酸、至少七个连续核苷酸、至少八个连续核苷酸或至少九个连续核苷酸。本文公开的任何序列的片段被考虑为本公开的一部分。
II.A.1.a.靶标
合适地，本公开的ASO能够下调(例如，降低或除去)NLRP3 mRNA或NLRP3蛋白的表达。在这方面，本公开的ASO可通过降低通常哺乳动物细胞，如人细胞，如免疫细胞(例如，巨噬细胞、树突细胞、B细胞和/或T细胞)中的NLRP3mRNA水平来阻断NLRP3炎症小体的形成并因此阻断其活性。特别地，本公开涉及靶向NLRP3前体mRNA的一个或多个区域(例如，内含子区域、外显子区域和/或外显子-内含子接合点区域)的ASO。除非另有说明，否则如本文所用的术语“NLRP3”可指来自一种或多种物种(例如，人、非人灵长类动物、狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、牛和熊)的NLRP3。
NLRP3(NLRP3)也称为含NLR家族热蛋白结构域3。NLRP3/NLRP3的同义词是已知的，并且包括NLRP3；C1orf7；CIAS1；NALP3；PYPAF1；含核苷酸结合寡聚化结构域、富含亮氨酸的重复序列和热蛋白结构域3；冷诱导的自身炎症性综合征1蛋白；cryopyin；含NACHT、LRR和PYD结构域的蛋白3；血管紧张素/加压素受体AII/AVP样；毛虫蛋白(caterpiller protein)1.1；CLR1.1；冷诱导的自身炎症性综合征1蛋白；和含PYRIN的APAF1样蛋白1。人NLRP3基因的序列可在可公开获得的GenBank登录号NC_000001.11:247416156-247449108下找到。人NLRP3基因位于染色体位置1q44的247,416,156-247,449,108。
人NLRP3前体mRNA转录物的序列(SEQ ID NO:1)对应于染色体1q44的残基247,416,156-247,449,108的反向互补序列。NLRP3 mRNA序列(GenBank登录号NM_001079821.2)提供于SEQ ID NO:3(表1)中，除了SEQ ID NO:3中的核苷酸“t”在mRNA中显示为“u”。人NLRP3蛋白的序列可在可公开获得的登录号：Q96P20(规范序列，SEQ ID NO:1；表1)、Q96P20-2(SEQ ID NO:4)、Q96P20-3(SEQ ID NO:5)、Q96P20-4(SEQ ID NO:6)、Q96P20-5(SEQ ID NO:7)和Q96P20-6(SEQ ID NO:8)下找到，其各自以引用的方式整体并入本文。
表1.NLRP3 mRNA和蛋白质序列
/>
/>
ASO的靶核酸序列的一个实例是NLRP3前体mRNA。SEQ ID NO:1表示人NLRP3基因组序列(即，染色体1q44的核苷酸247,416,156-247,449,108的反向互补序列)。SEQ ID NO:1与NLRP3前体mRNA序列同一，除了SEQ ID NO:1中的核苷酸“t”在前体mRNA中显示为“u”。在某些方面中，“靶核酸”包含编码NLRP3蛋白的核酸或其天然存在的变体以及源自其的RNA核酸(例如，前体mRNA)的内含子。在其它方面中，靶核酸包含编码NLRP3蛋白的核酸或其天然存在的变体以及源自其的RNA核酸(例如，前体mRNA)的外显子区域。在其它方面中，靶核酸包含编码NLRP3蛋白的核酸或其天然存在的变体以及源自其的RNA核酸(例如，前体mRNA)的外显子-内含子接合点。在一些方面中，例如当用于研究或诊断时，“靶核酸”可以是源自上述DNA或RNA核酸靶标的cDNA或合成寡核苷酸。由NLRP3前体mRNA编码的人NLRP3蛋白序列显示为SEQ ID NO:3。在其它方面中，靶核酸包含编码NLRP3蛋白的核酸或其天然存在的变体的非翻译区，例如5'UTR、3'UTR或两者。
在一些方面中，本公开的ASO与NLRP3转录物(例如，SEQ ID NO:1)的内含子内的区域杂交。在某些方面中，本公开的ASO与NLRP3转录物(例如，SEQ ID NO:1)的外显子内的区域杂交。在其它方面中，本公开的ASO与NLRP3转录物(例如，SEQ ID NO:1)的外显子-内含子接合点内的区域杂交。在一些方面中，本公开的ASO与NLRP3转录物(例如，内含子、外显子或外显子-内含子接合点)，例如SEQ ID NO:1内的区域杂交，其中ASO具有根据下式的设计：如本文别处所述的5'A-B-C 3'。
在一些方面中，ASO靶向编码NLRP3蛋白的特定同种型(例如，同种型1)的mRNA。在一些方面中，ASO靶向NLRP3蛋白的所有同种型。在其它方面中，ASO靶向NLRP3蛋白的两种同种型(例如，同种型1和同种型2、同种型3和同种型4、以及同种型5和同种型6)。
在一些方面中，ASO包含与NLRP3转录物内的核酸序列(例如对应于SEQ ID NO:1的区域)互补的连续核苷酸序列(例如，长度为10至30个核苷酸，例如，长度为20个核苷酸)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸206-225(例如，ASO-NLRP3-206；SEQID NO:101)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸208-227(例如，ASO-NLRP3-208；SEQ ID NO:102)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸214-233(例如，ASO-NLRP3-214；SEQ ID NO:103)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸748-767(例如，ASO-NLRP3-748；SEQ ID NO:104)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸825-844(例如，ASO-NLRP3-825；SEQ ID NO:105)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸892-911(例如，ASO-NLRP3-892；SEQ ID NO:106)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸898-917(例如，ASO-NLRP3-898；SEQ ID NO:107)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸899-918(例如，ASO-NLRP3-899；SEQ ID NO:108)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸900-919(例如，ASO-NLRP3-900；SEQ ID NO:109)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸902-921(例如，ASO-NLRP3-902；SEQ ID NO:110)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸903-922(例如，ASO-NLRP3-903；SEQ ID NO:111)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸954-973(例如，ASO-NLRP3-954；SEQID NO:112)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸960-979(例如，ASO-NLRP3-960；SEQ ID NO:113)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸964-983(例如，ASO-NLRP3-964；SEQ ID NO:114)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸966-985(例如，ASO-NLRP3-966；SEQ ID NO:115)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸969-988(例如，ASO-NLRP3-969；SEQ ID NO:116)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸970-989(例如，ASO-NLRP3-970；SEQ ID NO:117)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸971-990(例如，ASO-NLRP3-971；SEQ ID NO:118)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1016-1035(例如，ASO-NLRP3-1016；SEQ ID NO:119)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1021-1040(例如，ASO-NLRP3-1021；SEQ ID NO:120)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1028-1047(例如，ASO-NLRP3-1028；SEQ ID NO:121)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1103-1122(例如，ASO-NLRP3-1103；SEQID NO:122)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1108-1127(例如，ASO-NLRP3-1108；SEQ ID NO:123)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1113-1132(例如，ASO-NLRP3-1113；SEQ ID NO:124)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1159-1178(例如，ASO-NLRP3-1159；SEQ ID NO:125)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1173-1192(例如，ASO-NLRP3-1173；SEQ ID NO:126)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1197-1216(例如，ASO-NLRP3-1197；SEQ ID NO:127)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1204-1223(例如，ASO-NLRP3-1204；SEQ ID NO:128)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQID NO:3的核苷酸1227-1246(例如，ASO-NLRP3-1227；SEQ ID NO:129)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1232-1251(例如，ASO-NLRP3-1232；SEQ ID NO:130)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1239-1258(例如，ASO-NLRP3-1239；SEQ ID NO:131)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1240-1259(例如，ASO-NLRP3-1240；SEQ ID NO:132)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1241-1260(例如，ASO-NLRP3-1241；SEQ ID NO:133)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1242-1261(例如，ASO-NLRP3-1242；SEQ ID NO:134)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1313-1332(例如，ASO-NLRP3-1313；SEQID NO:135)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1314-1333(例如，ASO-NLRP3-1314；SEQ ID NO:136)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1341-1360(例如，ASO-NLRP3-1341；SEQ ID NO:137)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1343-1362(例如，ASO-NLRP3-1343；SEQ ID NO:138)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1346-1365(例如，ASO-NLRP3-1346；SEQ ID NO:139)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1491-1510(例如，ASO-NLRP3-1491；SEQ ID NO:140)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1561-1580(例如，ASO-NLRP3-1561；SEQ ID NO:141)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQID NO:3的核苷酸1568-1587(例如，ASO-NLRP3-1568；SEQ ID NO:142)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1664-1683(例如，ASO-NLRP3-1664；SEQ ID NO:143)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1670-1689(例如，ASO-NLRP3-1670；SEQ ID NO:144)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1676-1695(例如，ASO-NLRP3-1676；SEQ ID NO:145)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1678-1697(例如，ASO-NLRP3-1678；SEQ ID NO:146)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1680-1699(例如，ASO-NLRP3-1680；SEQ ID NO:147)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1681-1700(例如，ASO-NLRP3-1681；SEQID NO:148)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1682-1701(例如，ASO-NLRP3-1682；SEQ ID NO:149)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1688-1707(例如，ASO-NLRP3-1688；SEQ ID NO:150)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1693-1712(例如，ASO-NLRP3-1693；SEQ ID NO:151)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1704-1723(例如，ASO-NLRP3-1704；SEQ ID NO:152)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1718-1737(例如，ASO-NLRP3-1718；SEQ ID NO:153)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1720-1739(例如，ASO-NLRP3-1720；SEQ ID NO:154)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQID NO:3的核苷酸1723-1742(例如，ASO-NLRP3-1723；SEQ ID NO:155)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1837-1856(例如，ASO-NLRP3-1837；SEQ ID NO:156)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1932-1951(例如，ASO-NLRP3-1932；SEQ ID NO:157)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸1993-2012(例如，ASO-NLRP3-1993；SEQ ID NO:158)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2325-2344(例如，ASO-NLRP3-2325；SEQ ID NO:159)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2432-2451(例如，ASO-NLRP3-2432；SEQ ID NO:160)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2472-2491(例如，ASO-NLRP3-2472；SEQID NO:161)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2543-2562(例如，ASO-NLRP3-2543；SEQ ID NO:162)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2638-2657(例如，ASO-NLRP3-2638；SEQ ID NO:163)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2639-2658(例如，ASO-NLRP3-2639；SEQ ID NO:164)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2667-2686(例如，ASO-NLRP3-2667；SEQ ID NO:165)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2672-2691(例如，ASO-NLRP3-2672；SEQ ID NO:166)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2699-2718(例如，ASO-NLRP3-2699；SEQ ID NO:167)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQID NO:3的核苷酸2750-2769(例如，ASO-NLRP3-2750；SEQ ID NO:168)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2755-2774(例如，ASO-NLRP3-2755；SEQ ID NO:169)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2760-2779(例如，ASO-NLRP3-2760；SEQ ID NO:170)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2830-2849(例如，ASO-NLRP3-2830；SEQ ID NO:171)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸2836-2855(例如，ASO-NLRP3-2836；SEQ ID NO:172)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3087-3106(例如，ASO-NLRP3-3087；SEQ ID NO:173)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3094-3113(例如，ASO-NLRP3-3094；SEQID NO:174)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3109-3128(例如，ASO-NLRP3-3109；SEQ ID NO:175)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3120-3139(例如，ASO-NLRP3-3120；SEQ ID NO:176)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3212-3231(例如，ASO-NLRP3-3212；SEQ ID NO:177)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3476-3495(例如，ASO-NLRP3-3476；SEQ ID NO:178)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3481-3500(例如，ASO-NLRP3-3481；SEQ ID NO:179)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3488-3507(例如，ASO-NLRP3-3488；SEQ ID NO:180)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQID NO:3的核苷酸3489-3508(例如，ASO-NLRP3-3489；SEQ ID NO:181)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3493-3512(例如，ASO-NLRP3-3493；SEQ ID NO:182)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3498-3517(例如，ASO-NLRP3-3498；SEQ ID NO:183)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3500-3519(例如，ASO-NLRP3-3500；SEQ ID NO:184)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3502-3521(例如，ASO-NLRP3-3502；SEQ ID NO:185)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3503-3522(例如，ASO-NLRP3-3503；SEQ ID NO:186)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3504-3523(例如，ASO-NLRP3-3504；SEQID NO:187)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3508-3527(例如，ASO-NLRP3-3508；SEQ ID NO:188)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3514-3533(例如，ASO-NLRP3-3514；SEQ ID NO:189)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3561-3580(例如，ASO-NLRP3-3561；SEQ ID NO:190)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3580-3599(例如，ASO-NLRP3-3580；SEQ ID NO:191)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3585-3604(例如，ASO-NLRP3-3585；SEQ ID NO:192)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3593-3612(例如，ASO-NLRP3-3593；SEQ ID NO:193)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQID NO:3的核苷酸3598-3617(例如，ASO-NLRP3-3598；SEQ ID NO:194)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3652-3671(例如，ASO-NLRP3-3652；SEQ ID NO:195)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3676-3695(例如，ASO-NLRP3-3676；SEQ ID NO:196)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸3690-3709(例如，ASO-NLRP3-3690；SEQ ID NO:197)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸4096-4115(例如，ASO-NLRP3-4096；SEQ ID NO:198)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸4105-4124(例如，ASO-NLRP3-4105；SEQ ID NO:199)。在一些方面中，所述靶区域对应于SEQ ID NO:3的核苷酸4256-4275(例如，ASO-NLRP3-4256；SEQID NO:200)。
在一些方面中，本公开的ASO与NLRP3转录物(例如，基因组序列，SEQ ID NO:1)内的多个靶区域杂交。在一些方面中，ASO与NLRP3转录物内的两个不同靶区域杂交。在一些方面中，ASO与NLRP3转录物内的三个不同靶区域杂交。与多个靶区域杂交的示例性ASO的序列以及不同靶区域的起始/终止位点提供于图1中。在一些方面中，相较于与NLRP3转录物(例如，基因组序列，SEQ ID NO:1)内的单个区域杂交的ASO，与NLRP3转录物(例如，基因组序列，SEQ ID NO:1)内的多个区域杂交的ASO在降低NLRP3表达方面更有效(例如，具有更低EC50)。
II.A.1.b.ASO序列
本公开的ASO包含连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列对应于NLRP3转录物(例如，对应于SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的核苷酸序列)的区域的互补序列。
在某些方面中，本公开提供了长度为10-30，如10-15个核苷酸、10-20个核苷酸、10-25个核苷酸或长度为约20个核苷酸的ASO，其中所述连续核苷酸序列与NLRP3转录物(如，SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3或其天然存在的变体)的互补序列内的区域具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性。因此，例如，所述ASO与具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3或其一部分的序列的单链核酸分子杂交。
ASO可包含与编码哺乳动物NLPR3蛋白的核酸(例如，SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3)的等效区域完全互补(fully complementary)(绝对互补(perfectly complementary))的连续核苷酸序列。ASO可包含与对应于SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的核苷酸X-Y的核酸序列或所述序列内的区域完全互补(绝对互补)的连续核苷酸序列，其中X和Y分别是起始位点和终止位点，如图1所示。
ASO可包含与编码哺乳动物NLPR3蛋白的mRNA(例如，SEQ ID NO:3)的等效区域完全互补(绝对互补)的连续核苷酸序列。ASO可包含与对应于SEQ IDNO:3的核苷酸X-Y的mRNA序列或所述序列内的区域完全互补(绝对互补)的连续核苷酸序列，其中X和Y分别是起始位点和终止位点。
在一些方面中，本公开的ASO的核苷酸序列或连续核苷酸序列与选自SEQ ID NO:101至200的序列(即，图1中的序列)具有至少约80％序列同一性，如至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％序列同一性、至少约97％序列同一性、至少约98％序列同一性、至少约99％序列同一性，如约100％序列同一性(同源)。在一些方面中，ASO具有本文别处描述的设计或本文别处所示的化学结构(例如，图1)。
在一些方面中，ASO(或其连续核苷酸部分)选自或包含选自由以下组成的组的序列中的一个：SEQ ID NO:101至200或其至少10个连续核苷酸的区域，其中当与相应的NLRP3转录物相比时，ASO(或其连续核苷酸部分)可任选地包含1个、2个、3个或4个错配。
在一些方面中，ASO包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQID NO:119、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、SEQID NO:130、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140、SEQID NO:141、SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:151、SEQID NO:152、SEQ ID NO:153、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:156、SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:162、SEQID NO:163、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173、SEQID NO:174、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:176、SEQ ID NO:177、SEQ ID NO:178、SEQ ID NO:179、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:181、SEQ ID NO:182、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:184、SEQID NO:185、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:189、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:192、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:194、SEQ ID NO:195、SEQID NO:196、SEQ ID NO:197、SEQ ID NO:198、SEQ ID NO:199或SEQ ID NO:200。
在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:101中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:102中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:103中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:104中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:105中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:106中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:107中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:108中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:109中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:110中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:111中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:112中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:113中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:114中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:115中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:116中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:117中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:118中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:119中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:120中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:121中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:122中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:123中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:124中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:125中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:126中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:127中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:128中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:129中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:130中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:131中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:132中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:133中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:134中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:135中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:136中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:137中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:138中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:139中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:140中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:141中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:142中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:143中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:144中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:145中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:146中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:147中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:148中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:149中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:150中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:151中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:152中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:153中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:154中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:155中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:156中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:157中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:158中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:159中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:160中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:161中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:162中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:163中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:164中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:165中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:166中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:167中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:168中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:169中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:170中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:171中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:172中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:173中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:174中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:175中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:176中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:177中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:178中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:179中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:180中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:181中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:182中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:183中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:184中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:185中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:186中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:187中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:188中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:189中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:190中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:191中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:192中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ IDNO:193中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:194中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:195中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:196中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:197中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:198中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:199中列出的序列。在一些方面中，ASO包含如SEQ ID NO:200中列出的序列。
在一些方面中，本公开的ASO结合至靶核酸序列(例如，NLRP3转录物)，并且能够使NLRP3转录物的表达与细胞中的正常(即对照)表达水平相比抑制或降低至少10％或20％，例如与正常表达水平(例如，尚未暴露于ASO的细胞中的表达水平)相比抑制或降低至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％。
在一些方面中，与未与ASO接触(例如，与盐水接触)的细胞相比，当使细胞与ASO接触时，本公开的ASO能够在体外使靶细胞中NLRP3 mRNA的表达降低至少20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％。
在一些方面中，当与靶序列杂交时，ASO可容许1个、2个、3个或4个(或更多个)错配，并且仍然与靶标充分结合以显示所需作用，即靶mRNA和/或蛋白质的下调。错配可例如通过增加ASO核苷酸序列的长度和/或增加数量的核苷酸类似物来补偿，这在本文别处进行了公开。
在一些方面中，当与靶序列杂交时，本公开的ASO包含不超过三个错配。在其它方面中，当与靶序列杂交时，连续核苷酸序列包含不超过两个错配。在其它方面中，当与靶序列杂交时，连续核苷酸序列包含不超过一个错配。
II.A.1.c.ASO长度
ASO可包含长度为总共10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸的连续核苷酸序列。应当理解，当给出ASO或连续核苷酸序列长度的范围时，所述范围包括在所述范围内提供的下限和上限长度，例如10-30(或介于10-30之间)，包括10和30。
在一些方面中，ASO包含长度为总共约14-20、14、15、16、17、18、19或20个连续核苷酸的连续核苷酸序列。在某些方面中，ASO包含长度为总共约20个连续核苷酸的连续核苷酸序列。在某些方面中，本公开的ASO的长度是14个核苷酸。在某些方面中，本公开的ASO的长度是15个核苷酸。在某些方面中，本公开的ASO的长度是16个核苷酸。在某些方面中，本公开的ASO的长度是17个核苷酸。在某些方面中，本公开的ASO的长度是18个核苷酸。在某些方面中，本公开的ASO的长度是19个核苷酸。
II.A.1.d.核苷和核苷类似物
在本公开的一个方面中，ASO包含一种或多种非天然存在的核苷类似物。如本文所用，“核苷类似物”是天然核苷(如DNA或RNA核苷)通过糖和/或碱基部分的修饰所得的变体。原则上，在寡核苷酸的情况下，类似物可能仅与天然核苷“沉默”或“等效”，即对寡核苷酸起作用以抑制靶基因表达的方式没有功能性影响。然而，如果此类“等效”类似物例如更容易或更便宜地制造，或者对储存或制造条件更稳定，或者代表标签或标记，则它们仍然可以是有用的。然而，在一些方面中，类似物将对ASO起作用以抑制表达的方式具有功能性影响；例如通过产生增加的对靶标的结合亲和力和/或增加的对细胞内核酸酶的抗性和/或增加的转运进入细胞的容易性。核苷类似物的具体实例由例如Freier和Altmann；Nucl.AcidRes.,1997,25,4429-4443和Uhlmann；Curr.Opinion in Drug Development,2000,3(2),293-213以及在方案1中描述。本公开的ASO可含有多于1个、多于2个、多于3个、多于4个、多于5个、多于6个、多于7个、多于8个、多于9个、多于10个、多于11个、多于12个、多于13个、多于14个、多于15个、多于16个、多于18个、多于19个或多于20个核苷类似物。在一些方面中，ASO中的核苷类似物是相同的。在其它方面中，ASO中的核苷类似物是不同的。ASO中的核苷酸类似物可以是以下核苷类似物中的任一者或其组合。
在一些方面中，核苷类似物包括2'-O-烷基-RNA；2'-O-甲基RNA(2'-OMe)；2'-烷氧基-RNA；2'-O-甲氧基乙基-RNA(2'-MOE)；2'-氨基-DNA；2'-氟-RNA；2'-氟-DNA；阿拉伯核酸(ANA)；2'-氟-ANA；双环核苷类似物；或它们的任何组合。在一些方面中，核苷类似物包括糖修饰的核苷。在一些方面中，核苷类似物包括包含双环糖的核苷。在一些方面中，核苷类似物包括LNA。
在一些方面中，核苷类似物选自由以下组成的组：限制性乙基核苷(cEt)、2',4'-限制性2'-O-甲氧基乙基(cMOE)、α-L-LNA、β-D-LNA、2'-O,4'-C-亚乙基-桥联核酸(ENA)、氨基-LNA、氧基-LNA、硫代-LNA以及它们的任何组合。在一些方面中，ASO包含一个或多个5'-甲基-胞嘧啶核碱基。
术语核碱基包括存在于在核酸杂交中形成氢键的核苷和核苷酸中的嘌呤(例如，腺嘌呤和鸟嘌呤)和嘧啶(例如，尿嘧啶、胸腺嘧啶和胞嘧啶)部分。在本公开的上下文中，术语核碱基还涵盖经修饰的核碱基，其可能不同于天然存在的核碱基，但在核酸杂交期间是有功能的。在一些方面中，通过修饰或替代核碱基来修饰核碱基部分。在此上下文中，“核碱基”是指天然存在的核碱基，如腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸苷、尿嘧啶、黄嘌呤和次黄嘌呤，以及非天然存在的变体。此类变体例如在Hirao等人,(2012)Accounts of ChemicalResearch第45卷第2055页和Bergstrom(2009)Current Protocols in NucleicAcidChemistry增刊37 1.4.1中进行了描述。
在一些方面中，核碱基部分通过将嘌呤或嘧啶改变为经修饰的嘌呤或嘧啶，如取代的嘌呤或取代的嘧啶来进行修饰，如选自异胞嘧啶、假异胞嘧啶、5-甲基-胞嘧啶、5-噻唑并-胞嘧啶、5-丙炔基-胞嘧啶、5-丙炔基-尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-噻唑并-尿嘧啶、2-硫代-尿嘧啶、2'硫代-胸腺嘧啶、肌苷、二氨基嘌呤、6-氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、2,6-二氨基嘌呤和2-氯-6-氨基嘌呤的核碱基。
核碱基部分可由每个相应核碱基的字母代码表示，例如A、T、G、C或U，其中每个字母可任选地包括具有等效功能的经修饰的核碱基。例如，在示例性寡核苷酸中，核碱基部分选自A、T、G、C和5-甲基-胞嘧啶。任选地，对于LNA间隙聚体，可使用5-甲基-胞嘧啶LNA核苷。
本公开的ASO可包含具有经修饰的糖部分(即当与DNA和RNA中发现的核糖部分相比时，对糖部分的修饰)的一个或多个核苷。已经制备了具有核糖部分的修饰的许多核苷，主要目的是改善寡核苷酸的某些性质，如亲和力和/或核酸酶抗性。
此类修饰包括其中核糖环结构例如通过用己糖环(HNA)或通常在核糖环上的C2'与C4'碳之间具有双基桥的双环(LNA)或通常在C2'与C3'碳之间缺乏键的未连接核糖环(例如，UNA)替代而进行修饰的那些修饰。其它糖修饰的核苷包括例如双环己糖核酸(WO2011/017521)或三环核酸(WO2013/154798)。经修饰的核苷还包括其中糖部分被非糖部分替代的核苷，例如在肽核酸(PNA)或吗啉代核酸的情况下。
糖修饰还包括通过将核糖环上的取代基改变为除氢以外的基团或改变RNA核苷中天然存在的2'-OH基团进行的修饰。可例如在2'、3'、4'或5'位置引入取代基。具有经修饰的糖部分的核苷还包括2'修饰的核苷，如2'取代的核苷。实际上，已经将很多重点放在开发2'取代的核苷上，并且已经发现许多2'取代的核苷在掺入寡核苷酸时具有有益性质，如增强的核苷抗性和增强的亲和力。
2'糖修饰的核苷是在2'位置具有除H或–OH以外的取代基(2'取代的核苷)或包含2'连接的双基的核苷，并且包括2'取代的核苷和LNA(2'-4'双基桥联)核苷。例如，2'修饰的糖可提供增强的结合亲和力(例如，亲和力增强2'糖修饰的核苷)和/或对寡核苷酸的增加的核酸酶抗性。2'取代的经修饰核苷的实例是2'-O-烷基-RNA、2'-O-甲基-RNA、2'-烷氧基-RNA、2'-O-甲氧基乙基-RNA(MOE)、2'-氨基-DNA、2'-氟-RNA、2'-氟-DNA、阿拉伯核酸(ANA)和2'-氟-ANA核苷。关于其它实例，请参见例如，Freier和Altmann；Nucl.Acid Res.,1997,25,4429-4443；Uhlmann,Curr.Opinion in Drug Development,2000,3(2),293-213；以及Deleavey和Damha,Chemistry and Biology 2012,19,937。下文是一些2'取代的经修饰核苷的说明。
LNA核苷是经修饰的核苷，其在核苷的核糖环的C2'与C4'之间包含接头基团(称为双基或桥)(即2'-4'桥)，它限制或锁定核糖环的构象。这些核苷在文献中也称为桥联核酸或双环核酸(BNA)。当将LNA掺入互补RNA或DNA分子的寡核苷酸中时，核糖构象的锁定与增强的杂交亲和力(双链体稳定化)相关。这可通过测量寡核苷酸/补体双链体的解链温度来常规地确定。
非限制性示例性LNA核苷在WO 99/014226、WO 00/66604、WO 98/039352、WO 2004/046160、WO 00/047599、WO 2007/134181、WO 2010/077578、WO 2010/036698、WO 2007/090071、WO 2009/006478、WO 2011/156202、WO2008/154401、WO 2009/067647、WO 2008/150729；Morita等人,Bioorganic&Med.Chem.Lett.12,73-76；Seth等人,J.Org.Chem.2010,第75(5)卷第1569-81页；以及Mitsuoka等人,Nucleic Acids Research 2009,37(4),1225-1238中有所公开。
在一些方面中，本公开的ASO的经修饰的核苷或LNA核苷具有式I或II的通式结构：
其中
W选自–O–、–S–、–N(Ra)–、–C(RaRb)–，特别是–O–；
B是核碱基或经修饰的核碱基部分；
Z是与相邻核苷或5'-末端基团的核苷间键联；
Z*是与相邻核苷或3'-末端基团的核苷间键联；
R1、R2、R3、R5和R5*独立地选自氢、卤素、烷基、烯基、炔基、羟基、烷氧基、烷氧基烷基、烯氧基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、甲酰基、叠氮化物、杂环和芳基；并且
X、Y、Ra和Rb如本文所定义。
在–X-Y-的一些方面中，Ra是氢或烷基，特别是氢或甲基。在–X-Y-的一些方面中，Rb是氢或烷基，特别是氢或甲基。在–X-Y-的其它方面中，Ra和Rb中的一者或两者是氢。在–X-Y-的其它方面中，Ra和Rb中仅一者是氢。在-X-Y-的一些方面中，Ra和Rb中的一者是甲基并且另一者是氢。在–X-Y-的某些方面中，Ra和Rb同时均是甲基。
在–X-的一些方面中，Ra是氢或烷基，特别是氢或甲基。在–X-的一些方面中，Rb是氢或烷基，特别是氢或甲基。在–X-的其它方面中，Ra和Rb中的一者或两者是氢。在–X-的某些方面中，Ra和Rb中仅一者是氢。在–X-的某些方面中，Ra和Rb中的一者是甲基并且另一者是氢。在–X-的某些方面中，Ra和Rb同时均是甲基。
在–Y-的一些方面中，Ra是氢或烷基，特别是氢或甲基。在–Y-的某些方面中，Rb是氢或烷基，特别是氢或甲基。在–Y-的其它方面中，Ra和Rb中的一者或两者是氢。在–Y-的一些方面中，Ra和Rb中仅一者是氢。在–Y-的其它方面中，Ra和Rb中的一者是甲基并且另一者是氢。在–Y-的一些方面中，Ra和Rb同时均是甲基。
在一些方面中，R1、R2、R3、R5和R5*独立地选自氢和烷基，特别是氢和甲基。
在一些方面中，R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。
在一些方面中，R1、R2、R3同时都是氢，R5和R5*中的一者是氢并且另一者如上文所定义，特别是烷基，更特别是甲基。
在一些方面中，R1、R2、R3同时都是氢，R5和R5*中的一者是氢并且另一者是叠氮化物。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CH2-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。此类LNA核苷公开于WO 99/014226、WO 00/66604、WO 98/039352和WO 2004/046160中，其全部特此以引用的方式并入，并且包括本领域公知的β-D-氧基LNA和α-L-氧基LNA核苷。
在一些方面中，-X-Y-是-S-CH2-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。此类硫代LNA核苷公开于WO 99/014226和WO 2004/046160中，其特此以引用的方式并入。
在一些方面中，-X-Y-是-NH-CH2-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。此类氨基LNA核苷公开于WO 99/014226和WO 2004/046160中，其特此以引用的方式并入。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CH2CH2-或-OCH2CH2CH2-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。此类LNA核苷公开于WO 00/047599和Morita等人,Bioorganic&Med.Chem.Lett.12,73-76中，其特此以引用的方式并入，并且包括本领域公知的2'-O-4'C-亚乙基桥联核酸(ENA)。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CH2-，W是氧，R1、R2、R3同时都是氢，R5和R5*中的一者是氢并且另一者不是氢，如烷基，例如甲基。此类5'取代的LNA核苷公开于WO 2007/134181中，其特此以引用的方式并入。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CRaRb-，其中Ra和Rb中的一者或两者不是氢，特别是烷基，如甲基，W是氧，R1、R2、R3同时都是氢，R5和R5*中的一者是氢并且另一者不是氢，特别是烷基，例如甲基。此类双修饰的LNA核苷公开于WO 2010/077578中，其特此以引用的方式并入。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CH(CH2-O-CH3)-("2'O-甲氧基乙基双环核酸"，Seth等人,J.Org.Chem.2010,第75(5)卷第1569-81页)。
I在一些方面中，-X-Y-是-O-CHRa-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。此类6'-取代的LNA核苷公开于WO2010/036698和WO 2007/090071中，两者均特此以引用的方式并入。在此类6'-取代的LNA核苷中，Ra特别是C1-C6烷基，如甲基。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CH(CH2-O-CH3)-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。此类LNA核苷在本领域中也称为环状MOE(cMOE)并且公开于WO 2007/090071中。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CH(CH3)-。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CH2-O-CH2-(Seth等人,J.Org.Chem 2010op.cit.)。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CH(CH3)-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。此类6'-甲基LNA核苷在本领域中也称为cET核苷，并且可以是(S)-cET或(R)-cET非对映异构体，如WO 2007/090071(β-D)和WO 2010/036698(α-L)中所公开，两者均特此以引用的方式并入。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CRaRb-，其中Ra和Rb都不是氢，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。在某些方面中，Ra和Rb同时均是烷基，特别是同时均是甲基。此类6'-二取代的LNA核苷公开于WO 2009/006478中，其特此以引用的方式并入。
在一些方面中，-X-Y-是-S-CHRa-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。此类6'-取代的硫代LNA核苷公开于WO 2011/156202中，其特此以引用的方式并入。在此类6'-取代的硫代LNA的某些方面中，Ra是烷基，特别是甲基。
在一些方面中，-X-Y-是-C(＝CH2)C(RaRb)-，如W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。此类乙烯基碳LNA核苷公开于WO 2008/154401和WO 2009/067647中，两者均特此以引用的方式并入。
在一些方面中，-X-Y-是-N(ORa)-CH2-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。在一些方面中，Ra是烷基，如甲基。此类LNA核苷也称为N取代的LNA，并且公开于WO 2008/150729中，其特此以引用的方式并入。
在一些方面中，-X-Y-是-O-NCH3-(Seth等人,J.Org.Chem 2010op.cit.)。
在一些方面中，-X-Y-是ON(Ra)-–N(Ra)-O-、-NRa-CRaRb-CRaRb-或–NRa-CRaRb-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。在某些方面中，Ra是烷基，如甲基。(Seth等人,J.Org.Chem 2010op.cit.)。
在一些方面中，R5和R5*同时均是氢。在其它方面中，R5和R5*中的一者是氢并且另一者是烷基，如甲基。在此类方面中，R1、R2和R3可特别是氢并且-X-Y-可特别是-O-CH2-或-O-CHC(Ra)3-，如-O-CH(CH3)-。
在一些方面中，-X-Y-是-CRaRb-O-CRaRb-，如-CH2-O-CH2-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。在此类方面中，Ra可特别是烷基，如甲基。此类LNA核苷也称为构象限制性核苷酸(CRN)，并且公开于WO 2013/036868中，其特此以引用的方式并入。
在一些方面中，-X-Y-是-O-CRaRb-O-CRaRb-，如-O-CH2-O-CH2-，W是氧，并且R1、R2、R3、R5和R5*同时都是氢。在某些方面中，Ra可特别是烷基，如甲基。此类LNA核苷也称为COC核苷酸，并且公开于Mitsuoka等人,Nucleic Acids Research2009,37(4),1225-1238中，其特此以引用的方式并入。
除非另有说明，否则将认识到LNA核苷可呈β-D或α-L立体同工型。
方案1中呈现了LNA核苷酸的某些实例。
方案1
如别处所示，在本公开的一些方面中，寡核苷酸中的LNA核苷是β-D-氧基-LNA核苷。
II.A.1.e.核酸酶介导的降解
核酸酶介导的降解是指在与互补核苷酸序列形成双链体时能够介导这种序列的降解的寡核苷酸。
在一些方面中，寡核苷酸可通过核酸酶介导的靶核酸降解起作用，其中本公开的寡核苷酸能够募集核酸酶，特别是核酸内切酶，优选核糖核酸内切酶(RNA酶)，如RNA酶H。通过核酸酶介导的机制起作用的寡核苷酸设计的实例是通常包含至少5或6个DNA核苷的区域并且在一侧或两侧侧接增强亲和力的核苷(例如间隙聚体)的寡核苷酸。
II.A.1.f.RNA酶H活性和募集
反义寡核苷酸的RNA酶H活性是指其在与互补RNA分子形成双链体时募集RNA酶H和诱导互补RNA分子降解的能力。WO01/23613提供了用于确定RNA酶H活性的体外方法，所述方法可用于确定募集RNA酶H的能力。通常，如果在提供互补靶核酸序列时寡核苷酸具有如以pmol/l/min测量的至少5％，如至少10％的初始速率或超过20％的初始速率，则认为所述寡核苷酸能够募集RNA酶H，所述初始速率是在使用与所测试的经修饰寡核苷酸具有相同碱基序列但仅含有DNA单体、在寡核苷酸中的所有单体之间具有硫代磷酸酯键联的寡核苷酸并使用由WO01/23613的实施例91-95提供的方法确定的。
在一些方面中，如果在提供互补靶核酸时RNA酶H初始速率(如以pmol/l/min测量)是初始速率的小于20％，如小于10％，如小于5％，则认为寡核苷酸基本上不能募集RNA酶H，所述初始速率是在使用与所测试的寡核苷酸具有相同碱基序列但仅含有DNA单体、无2'取代、在寡核苷酸中的所有单体之间具有硫代磷酸酯键联的寡核苷酸并使用由WO01/23613的实施例91-95提供的方法确定的。
II.A.1.g.ASO设计
本公开的ASO可包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含核苷和核苷类似物两者，并且可呈间隙聚体的形式。可与本公开的ASO一起使用的间隙聚体的构型的实例描述于美国专利申请公布号2012/0322851中。
如本文所用的术语“间隙聚体”是指包含RNA酶H募集寡核苷酸的区域(间隙)的反义寡核苷酸，所述区域在5'和3'侧接一个或多个增强亲和力的经修饰核苷(侧翼)。术语“LNA间隙聚体”是间隙聚体寡核苷酸，其中所述增强亲和力的经修饰核苷中的至少一者是LNA核苷。术语“混合翼间隙聚体”是指LNA间隙聚体，其中侧翼区包含至少一种LNA核苷和至少一种DNA核苷或非LNA修饰的核苷，如至少一种2'取代的经修饰核苷，诸如，例如，2'-O-烷基-RNA、2'-O-甲基-RNA、2'-烷氧基-RNA、2'-O-甲氧基乙基-RNA(MOE)、2'-氨基-DNA、2'-氟-RNA、2'-氟-DNA、阿拉伯核酸(ANA)和2'-氟-ANA核苷。
在一些方面中，本公开的ASO可呈混合聚体的形式。在一些方面中，本公开的ASO可呈全聚体的形式。在一些方面中，除了增强ASO对靶区域的亲和力外，一些核苷类似物还介导RNA酶(例如，RNA酶H)结合和裂解。由于α-L-LNA单体在一定程度上募集RNA酶H活性，所以在一些方面中，含有α-L-LNA单体的ASO的间隙区(例如，如本文所提及的区域B)由较少的可被RNA酶H识别和裂解的单体组成，并在混合聚体构型中引入了更多灵活性。
在一些方面中，本公开的ASO是间隙聚体并且包含能够募集RNA酶(例如RNA酶H)的连续核苷酸段(例如，一个或多个DNA)，在本文中称为区域B(B)，其中区域B在5'和3'侧接核苷类似物的区域，所述核苷类似物的区域位于区域B的连续核苷酸段的5'和3'——这些区域分别称为区域A(A)和C(C)。在一些方面中，核苷类似物是糖修饰的核苷(例如，高亲和力糖修饰的核苷)。在某些方面中，区域A和区域C的糖修饰核苷增强ASO对靶核酸的亲和力(即增强亲和力的2'糖修饰核苷)。在一些方面中，糖修饰的核苷是2'糖修饰的核苷，如高亲和力2'糖修饰，如LNA和/或2'-MOE。
在间隙聚体中，区域B的最5'和最3'核苷是DNA核苷，并且分别位于区域A和区域C的核苷类似物(例如，高亲和力糖修饰的核苷)附近。在一些方面中，区域A和区域C可通过在距离B区最远的端(即在区域A的5'端和区域C的3'端)具有核苷类似物来进一步限定。
在一些方面中，本公开的ASO包含式(5'至3')A-B-C的核苷酸序列，其中：(A)(5'区或第一翼序列)包含至少一个核苷类似物(例如，3-5个LNA单元)；(B)包含至少四个连续核苷(例如，4-24个DNA单位)，它们能够募集RNA酶(当与互补RNA分子如前体mRNA或mRNA靶标形成双链体时)；以及(C)(3'区或第二翼序列)包含至少一个核苷类似物(例如，3-5个LNA单元)。
在一些方面中，区域A包含3-5个核苷类似物如LNA，区域B由6-24(例如，6、7、8、9、10、11、12、13或14)个DNA单元组成，并且区域C由3或4个核苷类似物如LNA组成。此类设计包括(A-B-C)3-14-3、3-11-3、3-12-3、3-13-3、4-9-4、4-10-4、4-11-4、4-12-4和5-10-5。在一些方面中，ASO具有LLLDnLLL、LLLLDnLLLL或LLLLLDnLLLLL的设计，其中L是核苷类似物，D是DNA，并且n可以是介于4与24之间的任何整数。在一些方面中，n可以是介于6与14之间的任何整数。在一些方面中，n可以是介于8与12之间的任何整数。在一些方面中，ASO具有LLLMMDnMMLLL、LLLMDnMLLL、LLLLMMDnMMLLLL、LLLLMDnMLLLL、LLLLLLMMDnMMLLLLL或LLLLLLMDnMLLLLL的设计，其中D是DNA，n可以是介于3与15之间的任何整数，L是LNA，并且M是2'MOE。
另外的间隙聚体设计公开于WO2004/046160、WO 2007/146511和WO2008/113832中，其各自特此以引用的方式整体并入。
II.A.1.H.核苷酸间键联
本文所述的ASO的单体通过键联基团偶联在一起。合适地，每个单体通过键联基团与3'相邻单体连接。
本领域普通技术人员将理解，在本公开的上下文中，ASO末端的5'单体不包含5'键联基团，尽管它可以或可以不包含5'末端基团。
在一些方面中，连续核苷酸序列包含一个或多个经修饰的核苷间键联。术语“键联基团”或“核苷间键联”旨在表示能够将两个核苷共价偶联在一起的基团。非限制性实例包括磷酸基团和硫代磷酸酯基团。
本公开的ASO的核苷或其连续核苷序列通过键联基团偶联在一起。合适地，每个核苷通过键联基团与3'相邻核苷连接。
在一些方面中，核苷间键联从其正常磷酸二酯修饰为对核酸酶攻击具有更强抗性的一种，如可被RNA酶H裂解、还允许反义抑制途径降低靶基因的表达的硫代磷酸酯。在一些方面中，至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的核苷间键联经修饰。
II.A.2.小分子NLRP3抑制剂
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂是小分子。在一些方面中，所述NLRP3选自MCC950、曲尼司特(Tanilast)、冬凌草甲素、CY-09、Bay 11-7082、小白菊内酯、3,4-亚甲基二氧基-β-硝基苯乙烯(MNB)、β-羟基丁酸酯(BHB)、二甲基亚砜(DMSO)、I型干扰素以及它们的任何组合(参见例如，Cell Death and Disease10:128(2019))。在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含式：
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含MCC950(参见例如，Nat.Med.21,248(2015))。
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含式：
/>
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含曲尼司特(参见例如，EMBO Mol.Med.10,e8689(2018))。
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含式：
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含冬凌草甲素(参见例如，Nat.Commun.9,2550(2018))。
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含式：
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含CY-09(参见例如，J.Exp.Med.214,3219–3238(2017))。
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含式：
在一些方面中，所述NLRP3途径拮抗剂包含Bay 11-7082(参见例如，J.Biol.Chem.285,9792–9802(2010))。
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含式：
在一些方面中，所述NLRP3途径拮抗剂包含小白菊内酯(参见例如，J BiolChem.285:9792–9802(2010))。
在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂包含式：
在一些方面中，所述NLRP3途径拮抗剂包含3,4-亚甲基二氧基-β-硝基苯乙烯(MNB)(参见例如，J Biol Chem.289:1142–1150(2014))。
III.细胞外囊泡，例如外泌体
本公开的一些方面涉及治疗有需要的受试者中的周围神经病的方法，包括向受试者施用本文公开的包含外源性NLRP3拮抗剂的EV。因此，本公开的一些方面涉及包含NLP3拮抗剂的EV，例如，外泌体。在一些方面中，所述NLRP3拮抗剂是化学化合物、siRNA、shRNA、ASO、蛋白质或它们的任何组合。ASO可以是本文所述的任何ASO或其功能片段。在某些方面中，ASO降低靶细胞中的NLRP3 mRNA或NLRP3蛋白的水平。在一些方面中，施用本文所述的EV(例如，外泌体)减少、阻断或抑制靶细胞中NLRP3炎症小体的形成。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含至少一个ASO。在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含至少两个ASO，例如，包含第一核苷酸序列的第一ASO和包含第二核苷酸序列的第二ASO。在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含至少三个ASO、至少四个ASO、至少五个ASO、至少六个ASO或多于六个ASO。在一些方面中，第一ASO、第二ASO、第三ASO、第四ASO、第五ASO、第六ASO和/或第N个ASO中的每一者都是不同的。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含第一ASO和第二ASO，其中所述第一ASO包含与第一转录物中的第一靶序列互补的第一核苷酸序列，并且其中所述第二ASO包含与所述第一转录物中的第二靶序列互补的第二核苷酸序列。在一些方面中，第一靶序列不与第二靶序列重叠。在一些方面中，第一靶序列包含位于转录物的5'UTR内的至少一个核苷酸，并且第二靶序列不包含位于5'UTR内的核苷酸。在一些方面中，第一靶序列包含位于转录物的3'UTR内的至少一个核苷酸，并且第二靶序列不包含位于3'UTR内的核苷酸。在一些方面中，第一靶序列包含位于转录物的5'UTR内的至少一个核苷酸，并且第二靶序列包含位于3'UTR内的至少一个核苷酸。
在一些方面中，第一ASO靶向外显子-内含子接合点内的序列，并且第二ASO靶向外显子-内含子接合点内的序列。在一些方面中，第一ASO靶向外显子-内含子接合点内的序列，并且第二ASO靶向外显子内的序列。在一些方面中，第一ASO靶向外显子-内含子接合点内的序列，并且第二ASO靶向内含子内的序列。在一些方面中，第一ASO靶向外显子内的序列，并且第二ASO靶向外显子内的序列。在一些方面中，第一ASO靶向内含子内的序列，并且第二ASO靶向外显子内的序列。在一些方面中，第一ASO靶向内含子内的序列，并且第二ASO靶向内含子内的序列。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含第一ASO和第二ASO，其中所述第一ASO包含与第一转录物中的第一靶序列互补的第一核苷酸序列，并且其中所述第二ASO包含与第二转录物中的第二靶序列互补的第二核苷酸序列，其中所述第一转录物与所述第二转录物不是同一基因的产物。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)靶向免疫细胞。在一些方面中，免疫细胞选自巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、B细胞、T细胞以及它们的任何组合。在某些方面中，EV(例如，外泌体)靶向髓系细胞(例如，嗜中性粒细胞、骨髓源性抑制细胞(MDSC，例如单核细胞性MDSC或粒细胞性MDSC)、单核细胞、巨噬细胞、造血干细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞或嗜酸性粒细胞)或它们的任何组合。在某些方面中，EV(例如，外泌体)靶向巨噬细胞。在某些方面中，EV(例如，外泌体)靶向树突细胞。在某些方面中，EV(例如，外泌体)靶向B细胞。在某些方面中，EV(例如，外泌体)靶向T细胞。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)降低由NLRP3炎症小体上调的一种或多种基因的表达。在一些方面中，EV(例如，外泌体)降低血清中的IL-1β表达。在一些方面中，EV(例如，外泌体)减轻受试者的炎症。在一些方面中，EV(例如，外泌体)治疗有需要的受试者的慢性炎症。在一些方面中，EV(例如，外泌体)治疗有需要的受试者的自身炎症。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)治疗有需要的受试者的神经炎症性疾病。在一些方面中，EV(例如，外泌体)治疗有需要的受试者的炎症性神经病变。在一些方面中，EV(例如，外泌体)减轻神经中的髓样炎症。在一些方面中，EV(例如，外泌体)减轻鞘中的髓样炎症。在一些方面中，EV(例如，外泌体)减少根、神经和/或肌肉中的一者或多者中的巨噬细胞流入。在一些方面中，EV(例如，外泌体)减少根、神经和/或肌肉中的一者或多者中的巨噬细胞吞噬。在一些方面中，EV(例如，外泌体)治疗有需要的受试者的化疗诱导的周围神经病(CIPN)。
如上文所述，本文所述的EV(例如，外泌体)是直径介于约20-300nm之间的细胞外囊泡。本文所述的EV(例如，外泌体)的大小可根据下文描述的方法测量。
在一些方面中，本公开的EV(例如，外泌体)包含双脂质膜(“EV(例如，外泌体)膜”)，所述膜包含内(腔)表面和外表面。在某些方面中，内(腔)表面面向EV(例如，外泌体)的内核(即，腔)。在某些方面中，外表面可与内体、多囊泡体或生产细胞或靶细胞的膜/细胞质接触。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)膜包含脂质和脂肪酸。在一些方面中，EV(例如，外泌体)膜包含磷脂、糖脂、脂肪酸、鞘脂、磷酸甘油酯、固醇、胆固醇和磷脂酰丝氨酸。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)膜包含内小叶和外小叶。内小叶和外小叶的组成可通过本领域中已知的跨双层分布测定来确定，参见例如，Kuypers等人,Biohim BiophysActa 1985 819:170。在一些方面中，外小叶的组成是介于约70％-90％之间的胆碱磷脂、介于约0％-15％之间的酸性磷脂和介于约5％-30％之间的磷脂酰乙醇胺。在一些方面中，内小叶的组成是介于约15％-40％之间的胆碱磷脂、介于约10％-50％之间的酸性磷脂和介于约30％-60％之间的磷脂酰乙醇胺。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)膜包含一种或多种多糖，诸如聚糖。
在一些方面中，本公开的EV(例如，外泌体)包含ASO，其中所述ASO通过支架部分与EV连接，在EV的外表面上或在EV的腔表面上。
在一些方面中，包含ASO的EV(例如，外泌体)在所述ASO与外泌体膜之间包含锚定部分，所述锚定部分任选地包含接头。接头的非限制性实例在本文别处公开。
III.A.锚定部分(AM)
一种或多种锚定部分(AM)可用于将ASO锚定至本公开的EV。在一些方面中，ASO直接与锚定部分连接或通过接头连接。在一些方面中，ASO可通过“反应性基团”(RG；例如胺、硫醇、羟基、羧酸或叠氮化物)与“反应性部分”(RM；例如马来酰亚胺、琥珀酸酯，NHS)之间的反应连接至锚定部分或接头组合。设想了几种潜在合成途径，例如：
[AM]-/反应性部分/+/反应性基团/-[ASO]
[AM]-[接头]n-/反应性部分/+/反应性基团/-[ASO]
[AM]-/反应性部分/+/反应性基团/-[接头]n-[ASO]
[AM]-[接头]n-/反应性部分/+/反应性基团/-[接头]n-[ASO]。
锚定部分可插入EV(例如，外泌体)的脂质双层中，从而允许外泌体负载ASO。目前，外泌体作为极性ASO的递送媒介物的商业化的主要障碍是非常低效的负载。这一障碍可通过在将极性ASO负载至外泌体中之前对其进行修饰来克服。因此，如本文所述，ASO的修饰有助于将它们负载至外泌体中。
与先前报告的通过例如电穿孔或阳离子脂质转染将未修饰的ASO引入外泌体中的负载效率相比，本文阐述的使外泌体负载经修饰的极性ASO的方法显著提高负载效率。
在一些方面中，相对于天然(未修饰的)ASO，修饰使ASO的疏水性增加至少约1、至少约2、至少约3、至少约4、至少约5、至少约6、至少约7、至少约8、至少约9或至少约10倍。在一些方面中，相对于天然(未修饰的)ASO，修饰使ASO的疏水性增加至少约1、至少约2、至少约3、至少约4、至少约5、至少约6、至少约7、至少约8、至少约9或至少约10个数量级。
在一些方面中，相对于天然(未修饰的)ASO(例如相应的未修饰的ASO)，修饰使ASO的疏水性增加至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约100％、至少约125％、至少约150％、至少约175％、至少约200％、至少约250％、至少约300％、至少约350％、至少约400％、至少约450％、至少约500％、至少约600％、至少约700％、至少约800％、至少约900％或至少约1000％。可使用任何合适的方法评估疏水性的增加。例如，可通过与在水性溶剂如水中的溶解度相比，测量在有机溶剂如辛醇中的溶解度百分来确定疏水性。
在一些方面中，锚定部分可化学缀合至ASO以增强其疏水特性。在示例性方面中，锚定部分是固醇(例如，胆固醇)、GM1、脂质、维生素、小分子、肽或它们的组合。在一些方面中，所述部分是脂质。在一些方面中，锚定部分是固醇，例如胆固醇。另外的疏水性部分包括例如磷脂、溶血磷脂、脂肪酸或维生素(例如，维生素D或维生素E)。
在一些方面中，锚定部分直接或通过一个或多个接头在ASO的末端缀合(即“末端修饰”)。在其它方面中，锚定部分缀合至ASO的其它部分。
在一些方面中，ASO可包含可检测标记。示例性标记包括荧光标记和/或放射性标记。在一些方面中，其中ASO进行荧光标记，可检测标记可以是例如Cy3。向ASO添加可检测标记可用作标记外泌体并跟踪其生物分布的一种方式。在其它方面中，可检测标记可直接地，例如通过标记外泌体脂质和/或外泌体肽而连接至外泌体。
ASO的不同组分(即，锚定部分、接头和接头组合，以及ASO)可通过酰胺、酯、醚、硫醚、二硫化物、氨基磷酸酯、磷酸三酯、二硫代磷酸酯、膦酸甲酯、磷酸二酯或硫代磷酸酯键联或可替代地任何或其它键联连接。
在一些方面中，ASO的不同组分可以是使用双功能接头(即，含有两个官能团的接头)的接头，如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯、N-4-马来酰亚胺丁酸、S-(2-吡啶基二硫代)半胱胺、碘乙酰氧基琥珀酰亚胺、N-(4-马来酰亚胺丁氧基)琥珀酰亚胺、N-[5-(3'-马来酰亚胺丙基酰胺)-1-羧基戊基]亚氨基二乙酸、N-(5-氨基戊基)-亚氨基二乙酸等。
III.A.1.锚定部分
如下文详细描述的，能够将ASO锚定至EV(例如，外泌体)的表面的合适锚定部分包含例如固醇(例如，胆固醇)、脂质、溶血磷脂、脂肪酸或脂溶性维生素。
在一些方面中，锚定部分可以是脂质。脂质锚定部分可以是本领域已知的任何脂质，例如棕榈酸或糖基磷脂酰肌醇。在一些方面中，脂质是脂肪酸、磷脂(phosphatide)、磷脂质(phospholipid)(例如，磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸或磷脂酰乙醇胺)或其类似物(例如，磷脂酰胆碱、卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、脑磷脂或磷脂酰丝氨酸或其类似物或部分，如其部分水解的部分)。
通常，锚定部分是化学连接的。然而，锚定部分可酶促连接至ASO。在一些方面中，有可能通过改变细胞培养条件来将锚定部分连接至ASO。例如，通过使用限制肉豆蔻酸的培养基，一些其它脂肪酸(包括短链和不饱和脂肪酸)可连接至N末端甘氨酸。例如，据报告，在BK通道中，肉豆蔻酸通过羟基酯键联在翻译后连接至内部丝氨酸/苏氨酸或酪氨酸残基。
锚定部分可在任何化学上可行的位置，例如在ASO的5'和/或3'端，直接地或通过接头组合间接地缀合至ASO。在一个方面中，锚定部分仅缀合至ASO的3'端。在一个方面中，锚定部分仅缀合至ASO的5'端。在一个方面中，锚定部分缀合在不是ASO的3'端或5'端的位置。
可用于实践本公开的方法的一些类型的膜锚呈现于下表中：
在一些方面中，本公开的锚定部分可包含本文公开的两种或更多种类型的锚定部分。例如，在一些方面中，锚定部分可包含两种脂质(例如磷脂和脂肪酸)、或两种磷脂、或两种脂肪酸、或脂质和维生素、或胆固醇和维生素等，合在一起具有6-80个碳原子(即，6-80的等价碳数(ECN))。
在一些方面中，锚定部分的组合，例如脂质(例如，脂肪酸)的组合具有6-80、8-80、10-80、12-80、14-80、16-80、18-80、20-80、22-80、24-80、26-80、28-80、30-80、4-76、6-76、8-76、10-76、12-76、14-76、16-76、18-76、20-76、22-76、24-76、26-76、28-76、30-76、6-72、8-72、10-72、12-72、14-72、16-72、18-72、20-72、22-72、24-72、26-72、28-72、30-72、6-68、8-68、10-68、12-68、14-68、16-68、18-68、20-68、22-68、24-68、26-68、28-68、30-68、6-64、8-64、10-64、12-64、14-64、16-64、18-64、20-64、22-64、24-64、26-64、28-64、30-64、6-60、8-60、10-60、12-56、14-56、16-56、18-56、20-56、22-56、24-56、26-56、28-56、30-56、6-52、8-52、10-52、12-52、14-52、16-52、18-52、20-52、22-52、24-52、26-52、28-52、30-52、6-48、8-48、10-48、12-48、14-48、16-48、18-48、20-48、22-48、24-48、26-48、28-48、30-48、6-44、8-44、10-44、12-44、14-44、16-44、18-44、20-44、22-44、24-44、26-44、28-44、30-44、6-40、8-40、10-40、12-40、14-40、16-40、18-40、20-40、22-40、24-40、26-40、28-40、30-40、6-36、8-36、10-36、12-36、14-36、16-36、18-36、20-36、22-36、24-36、26-36、28-36、30-36、6-32、8-32、10-32、12-32、14-32、16-32、18-32、20-32、22-32、24-32、26-32、28-32、或30-32的ECN。
III.A.1.a.胆固醇和其它固醇
在一些方面中，锚定部分包含固醇、类固醇、藿烷类、羟基类固醇、开环类固醇、或它们的具有亲脂性质的类似物。在一些方面中，锚定部分包含固醇，如植物固醇、真菌固醇(mycosterol)或动物固醇。示例性动物固醇包括胆固醇和24S-羟基胆固醇；示例性植物固醇包括麦角固醇(真菌固醇)、菜油固醇、谷固醇和豆固醇。在一些方面中，固醇选自麦角固醇、7-脱氢胆固醇、胆固醇、24S-羟基胆固醇、羊毛固醇、环阿屯醇、岩藻固醇、大褐马尾藻固醇(saringosterol)、菜油固醇、β-谷固醇、谷甾烷醇、粪固醇、燕麦固醇或豆固醇。固醇可以游离固醇、酰化(固醇酯)、烷基化(固醇烷基醚)、硫酸化(硫酸固醇)形式存在，或与糖苷部分连接(固醇糖苷)，其本身可被酰化(酰化固醇糖苷)。
在一些方面中，锚定部分包含类固醇。在一些方面中，类固醇选自二氢睾酮、熊果醇、龙舌蓝皂苷配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、黄体酮或皮质醇。
例如，固醇可直接或通过接头组合在固醇的可用—OH基团处与ASO缀合。示例性固醇具有如下所示的通用骨架：
作为另一实例，麦角固醇具有以下结构：
胆固醇具有以下结构：
因此，在一些实施方案中，固醇或类固醇的游离—OH基团用于将ASO直接或通过接头组合缀合至固醇(例如胆固醇)或类固醇。
在一些方面，ASO通过以下结构缀合至EV：
III.A.1.b.脂肪酸
在一些方面中，锚定部分是脂肪酸。在一些方面中，脂肪酸是短链、中链或长链脂肪酸。在一些方面中，脂肪酸是饱和脂肪酸。在一些方面中，脂肪酸是不饱和脂肪酸。在一些方面中，脂肪酸是单不饱和脂肪酸。在一些方面中，脂肪酸是多不饱和脂肪酸，如ω-3(ω-3)或ω-6(ω-6)脂肪酸。
在一些方面中，脂质(例如脂肪酸)具有C2-C60链。在一些实施方案中，脂质(例如脂肪酸)具有C2-C28链。在一些方面中，脂肪酸具有C2-C40链。在一些方面中，脂肪酸具有C2-C12或C4-C12链。在一些方面中，脂肪酸具有C4-C40链。在一些方面中，脂肪酸具有C4-C40、C2-C38、C2-C36、C2-C34、C2-C32、C2-C30、C4-C30、C2-C28、C4-C28、C2-C26、C4-C26、C2-C24、C4-C24、C6-C24、C8-C24、C10-C24、C2-C22、C4-C22、C6-C22、C8-C22、C10-C22、C2-C20、C4-C20、C6-C20、C8-C20、C10-C20、C2-C18、C4-C18、C6-C18、C8-C18、C10-C18、C12-C18、C14-C18、C16-C18、C2-C16、C4-C16、C6-C16、C8-C16、C10-C16、C12-C16、C14-C16、C2-C15、C4-C15、C6-C15、C8-C15、C9-C15、C10-C15、C11-C15、C12-C15、C13-C15、C2-C14、C4-C14、C6-C14、C8-C14、C9-C14、C10-C14、C11-C14、C12-C14、C2-C13、C4-C13、C6-C13、C7-C13、C8-C13、C9-C13、C10-C13、C10-C13、C11-C13、C2-C12、C4-C12、C6-C12、C7-C12、C8-C12、C9-C12、C10-C12、C2-C11、C4-C11、C6-C11、C7-C11、C8-C11、C9-C11、C2-C10、C4-C10、C2-C9、C4-C9、C2-C8、C2-C7、C4-C7、C2-C6或C4-C6链。在一些方面中，脂肪酸具有C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31、C32、C33、C34、C35、C36、C37、C38、C39、C40、C41、C42、C43、C44、C45、C46、C47、C48、C49、C50、C51、C52、C53、C54、C55、C56、C57、C58、C59或C60链。
在一些方面中，锚定部分包含两种脂肪酸，所述脂肪酸各自独立地选自具有链的脂肪酸，所述链具有前述碳原子范围或碳原子数中的任一者。在一些方面中，其中一种脂肪酸独立地是具有C6-C21链的脂肪酸，并且一种脂肪酸独立地是具有C12-C36链的脂肪酸。在一些实施方案中，每种脂肪酸独立地具有11、12、13、14、15、16或17个碳原子的链。
合适的脂肪酸包括饱和直链脂肪酸、饱和支链脂肪酸、不饱和脂肪酸、羟基脂肪酸和多元羧酸。在一些方面中，此类脂肪酸具有多达32个碳原子。
有用的饱和直链脂肪酸的实例包括具有偶数个碳原子的那些，丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、二十四烷酸、二十六烷酸、二十八烷酸、三十烷酸和正三十二烷酸，以及具有奇数个碳原子的那些，如丙酸、正戊酸、庚酸、壬酸、十一烷酸、十三烷酸、十五烷酸、十七烷酸、十九烷酸、二十一烷酸、二十三烷酸、二十五烷酸和二十七烷酸。
合适的饱和支链脂肪酸的实例包括异丁酸、异己酸、异辛酸、异癸酸、异月桂酸、11-甲基十二烷酸、异肉豆蔻酸、13-甲基-十四烷酸、异棕榈酸、15-甲基-十六烷酸、异硬脂酸、17-甲基十八烷酸、异花生酸、19-甲基-二十烷酸、α-乙基-己酸、α-己基癸酸、α-庚基十一烷酸、2-癸基十四烷酸、2-十一烷基十四烷酸、2-癸基十五烷酸、2-十一烷基十五烷酸和Fine oxocol 1800酸(Nissan Chemical Industries,Ltd.的产品)。合适的饱和奇数碳支链脂肪酸包括以异丁基封端的反异脂肪酸，如6-甲基-辛酸、8-甲基-癸酸、10-甲基-十二烷酸、12-甲基-十四烷酸、14-甲基-十六烷酸、16-甲基-十八烷酸、18-甲基-二十烷酸、20-甲基-二十二烷酸、22-甲基-二十四烷酸、24-甲基-二十六烷酸和26-甲基二十八烷酸。
合适的不饱和脂肪酸的实例包括4-癸烯酸、癸烯酸、4-十二碳烯酸、5-十二碳烯酸、月桂烯酸、4-十四碳烯酸、5-十四碳烯酸、9-十四碳烯酸、棕榈油酸、6-十八碳烯酸、油酸、9-十八碳烯酸、11-十八碳烯酸、9-二十碳烯酸、顺式-11-二十碳烯酸、鲸蜡油酸、13-二十二碳烯酸、15-二十四碳烯酸、17-二十六碳烯酸、6,9,12,15-十六碳四烯酸、亚油酸、亚麻酸、α-桐酸、β-桐酸、石榴酸、6,9,12,15-十八碳四烯酸、杷荏酸、5,8,11,14-二十碳四烯酸、5,8,11,14,17-二十碳五烯酸、7,10,13,16,19-二十二碳五烯酸、4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸等。
合适的羟基脂肪酸的实例包括α-羟基月桂酸、α-羟基肉豆蔻酸、α-羟基棕榈酸、α-羟基硬脂酸、ω-羟基月桂酸、α-羟基花生酸、9-羟基-12-十八碳烯酸、蓖麻油酸、α-羟基山嵛酸、9-羟基-反式-10,12-十八碳二烯酸、粗糠柴酸、番红醇酸、9,10-二羟基硬脂酸、12-羟基硬脂酸等。
合适的多元羧酸的实例包括草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、D,L-苹果酸等。
在一些方面中，每种脂肪酸独立地选自丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一酸、月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五酸、棕榈酸、十七酸、硬脂酸、十九酸、花生酸、二十一酸、山嵛酸、二十三酸、木蜡酸、二十五酸、蜡酸、二十七酸、褐煤酸、二十九酸、蜂花酸、三十一酸、紫胶蜡酸、叶虱酸、格地酸、三十六酸(ceroplastic acid)、三十六烷酸(hexatriacontylic acid)、三十七烷酸或三十八烷酸。
在一些方面中，每种脂肪酸独立地选自α-亚麻酸、十八碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、亚油酸、γ-亚油酸、二高-γ-亚油酸、花生四烯酸、二十二碳四烯酸、棕榈油酸、异油酸、二十烯酸(paullinic acid)、油酸、反油酸、巨头鲸鱼酸(gondoic acid)、芥酸、神经酸、二十碳三烯酸(mead acid)、肾上腺酸、bosseopentaenoic酸、ozubondo酸、沙丁鱼酸(sardine acid)、鲱鱼酸(herring acid)、二十二碳六烯酸或二十四碳五烯酸，或另一种单不饱和或多不饱和脂肪酸。
在一些方面中，脂肪酸中的一者或两者是必需脂肪酸。鉴于某些必需脂肪酸的有益健康作用，可通过在治疗剂中包含此类脂肪酸来增加所公开的负载治疗剂的外泌体的治疗益处。在一些方面中，必需脂肪酸是选自由以下组成的组的n-6或n-3必需脂肪酸：亚麻酸、γ-亚麻酸、二高-γ-亚麻酸、花生四烯酸、肾上腺酸、二十二碳五烯n-6酸、α-亚麻酸、十八碳四烯酸、20:4n-3酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯n-3酸或二十二碳六烯酸。
在一些方面中，每种脂肪酸独立地选自全顺式-7,10,13-十六碳三烯酸、α-亚麻酸、十八碳四烯酸、二十碳三烯酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸(DHA)、二十四碳五烯酸、二十四碳六烯酸或硫辛酸。在其它方面中，脂肪酸选自二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或硫辛酸。脂肪酸的其它实例包括全顺式-7,10,13-十六碳三烯酸、α-亚麻酸(ALA或全顺式-9,12,15-十八碳三烯酸)、十八碳四烯酸(STD或全顺式-6,9,12,15-十八碳四烯酸)、二十碳三烯酸(ETE或全顺式-11,14,17-二十碳三烯酸)、二十碳四烯酸(ETA或全顺式-8,11,14,17-二十碳四烯酸)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA，鰶鱼酸或全顺式-7,10,13,16,19-二十二碳五烯酸)、二十二碳六烯酸(DHA或全顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸)、二十四碳五烯酸(全顺式-9,12,15,18,21-二十二碳六烯酸)或二十四碳六烯酸(尼生酸(nisinic acid)或全顺式-6,9,12,15,18,21-二十四碳烯酸)。在一些方面中，脂肪酸是中链脂肪酸，如硫辛酸。
脂肪酸链在其链长度方面差异很大，并且可根据链长进行分类，例如短至极长。短链脂肪酸(SCFA)是具有约五个或更少碳的链的脂肪酸(例如丁酸)。在一些方面中，脂肪酸是SCFA。中链脂肪酸(MCFA)包括具有约6-12个碳的链的脂肪酸，其可形成中链甘油三酯。在一些方面中，脂肪酸是MCFA。长链脂肪酸(LCFA)包括具有13-21个碳的链的脂肪酸。在一些方面中，脂肪酸是LCFA。在一些方面中，脂肪酸是LCFA。极长链脂肪酸(VLCFA)包括具有22个或更多个碳，如22-60、22-50或22-40个碳的链的脂肪酸。在一些方面中，脂肪酸是VLCFA。
III.A.1.c.磷脂
在一些方面中，所述锚定部分包含磷脂。磷脂是一类为所有细胞膜的主要组分的脂质。由于它们的两亲特性，它们可形成脂质双层。磷脂分子的结构通常由两个疏水性脂肪酸“尾部”和由磷酸酯基团组成的亲水性“头部”组成。例如，磷脂可以是根据下式的脂质：
其中Rp代表磷脂部分，并且R1和R2代表可相同或不同的具有或不具有不饱和度的脂肪酸部分。
磷脂部分可选自例如由以下组成的非限制性组：磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、2溶血磷脂酰胆碱和鞘磷脂。
特定的磷脂可促进与脂质双层，例如外泌体膜的脂质双层的融合。例如，阳离子磷脂可与膜的一种或多种带负电荷的磷脂相互作用。磷脂与膜的融合可允许含脂质组合物的一种或多种要素与所述膜结合或穿过所述膜。
脂肪酸部分可选自例如由以下组成的非限制性组：月桂酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻脑酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸、芥酸、植烷酸、花生酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、山嵛酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸。
在本公开中用作锚定部分的磷脂可以是天然或非天然磷脂。还考虑了非天然磷脂物质，包括具有修饰和取代(包括支化、氧化、环化和炔烃)的天然物质。例如，磷脂可用一种或多种炔烃官能化或与一种或多种炔烃(例如，其中一个或多个双键被三键替代的烯基)交联。在适当反应条件下，炔烃基团可在暴露于叠氮化物时经历铜催化的环加成反应。
III.A.2.接头组合
在一些方面中，ASO通过接头组合与本文公开的疏水性膜锚定部分连接，所述接头组合可包含可裂解接头和/或不可裂解接头的任何组合。接头组合的主要功能是提供一个或多个锚定部分与BAM靶标之间的最佳间距。例如，在ASO的情况下，接头组合应减少空间位阻并定位ASO，以便它可与靶核酸(例如mRNA或miRNA)相互作用。
接头可易于裂解(“可裂解接头”)，从而促进生物活性分子的释放。因此，在一些方面中，本文公开的接头组合可包含可裂解接头。在生物活性分子保持活性的条件下，此类可裂解接头可能例如易感于酸诱导的裂解、光诱导的裂解、肽酶诱导的裂解、酯酶诱导的裂解和二硫键裂解。或者，接头可基本上抵抗裂解(“不可裂解接头”)。在一些方面中，可裂解接头包含间隔子。在一些方面中，间隔子是PEG。
在一些方面中，接头组合包含至少2、至少3、至少4、至少5或至少6个或更多个本文公开的不同接头。在一些方面中，接头组合中的接头可通过酯键联(例如，磷酸二酯或硫代磷酸酯)连接。
在一些方面中，接头是锚定部分与BAM(例如ASO)之间的直接键。
III.A.2.a.不可裂解接头
在一些方面中，接头组合包含“不可裂解接头”。不可裂解接头是能够以稳定的共价方式连接本公开的经修饰的生物活性分子的两种或更多种组分(例如，生物活性分子和锚定部分；生物活性分子和可裂解接头；锚定部分和可裂解接头)并且不属于上文针对可裂解接头列出的类别的任何化学部分。因此，不可裂解接头基本上耐受酸诱导的裂解、光诱导的裂解、肽酶诱导的裂解、酯酶诱导的裂解和二硫键诱导的裂解。
此外，不可裂解是指接头中或与接头相邻的化学键在环状二核苷酸和/或抗体不会失去其活性的条件下经受由酸、光不稳定裂解剂、肽酶、酯酶或裂解二硫键的化学或生理化合物诱导的裂解的能力。在一些方面中，生物活性分子通过另一个接头(例如自分解性接头)连接至接头。
在一些方面中，接头组合包含不可裂解接头，所述不可裂解接头包含例如四甘醇(TEG)、六甘醇(HEG)、聚乙二醇(PEG)、琥珀酰亚胺或它们的任何组合。在一些方面中，不可裂解接头包含间隔子单元以将生物活性分子连接至不可裂解接头。
在一些方面中，一个或多个不可裂解接头包含连接在一起的较小单元(例如，HEG、TEG、甘油、C2至C12烷基等)。在一个方面中，键联是酯键联(例如，磷酸二酯或硫代磷酸酯)或其它键联。
III.A.2.b.乙二醇(HEG,TEG,PEG)
在一些方面中，接头组合包含不可裂解接头，其中所述不可裂解接头包含特征在于式R3-(O-CH2-CH2)n-或R3-(0-CH2-CH2)n-O-的聚乙二醇(PEG)，其中R3是氢、甲基或乙基，并且n具有2至200的值。在一些方面中，接头包含间隔子，其中所述间隔子是PEG。
在一些方面中，PEG接头是低聚乙二醇，例如二甘醇、三甘醇、四甘醇(TEG)、五甘醇或六甘醇(HEG)接头。
在一些方面中，n具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、189、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199或200的值。
在一些方面中，n介于2与10之间、介于10与20之间、介于20与30之间、介于30与40之间、介于40与50之间、介于50与60之间、介于60与70之间、介于70与80之间、介于80与90之间、介于90与100之间、介于100与110之间、介于110与120之间、介于120与130之间、介于130与140之间、介于140与150之间、介于150与160之间、介于160与170之间、介于170与180之间、介于180与190之间或介于190与200之间。
在一些具体方面中，n具有3至200、3至20、10至30或9至45的值。
在一些方面中，PEG是支链PEG。支链PEG具有3至10条源自中心核心基团的PEG链。
在某些方面中，PEG部分是单分散聚乙二醇。在本公开的上下文中，单分散聚乙二醇(mdPEG)是具有单一的、限定链长和分子量的PEG。mdPEG通常通过色谱法从聚合混合物中分离而产生。在某些式中，单分散PEG部分被指定为缩写mdPEG。
在一些方面中，PEG是星形PEG。星形PEG具有10至100条源自中心核心基团的PEG链。
在一些方面中，PEG是梳形PEG。梳形PEG具有通常接枝到聚合物主链上的多条PEG链。
在某些方面中，PEG具有介于100g/mol与3000g/mol之间，特别是介于100g/mol与2500g/mol之间、更特别地大约100g/mol至2000g/mol的摩尔质量。在某些方面中，PEG具有介于200g/mol与3000g/mol之间，特别是介于300g/mol与2500g/mol之间、更特别地大约400g/mol至2000g/mol的摩尔质量。
在一些方面中，PEG是PEG100、PEG200、PEG300、PEG400、PEG500、PEG600、PEG700、PEG800、PEG900、PEG1000、PEG1100、PEG1200、PEG1300、PEG1400、PEG1500、PEG1600、PEG1700、PEG1800、PEG1900、PEG2000、PEG2100、PEG2200、PEG2300、PEG2400、PEG2500、PEG1600、PEG1700、PEG1800、PEG1900、PEG2000、PEG2100、PEG2200、PEG2300、PEG2400、PEG2500、PEG2600、PEG2700、PEG2800、PEG2900或PEG3000。在一个特定方面中，PEG是PEG400。在另一个特定方面中，PEG是PEG2000。
在一些方面中，本公开的接头组合可包含若干PEG接头，例如侧接PEG、HEG或TEG接头的可裂解接头。
在一些方面中，接头组合包含(HEG)n和/或(TEG)n，其中n是介于1与50之间的整数，并且每个单元例如通过磷酸酯接头、硫代磷酸酯键联或它们的组合连接。
III.A.2.c.甘油和聚甘油(PG)
在一些方面中，接头组合包含不可裂解接头，所述不可裂解接头包含由式((R3—O—(CH2—CHOH—CH2O)n—)描述的甘油单元或聚甘油(PG)，其中R3是氢、甲基或乙基，并且n具有3至200的值。在一些方面中，n具有3至20的值。在一些方面中，n具有10至30的值。
在一些方面中，PG接头是二甘油、三甘油、四甘油(TG)、五甘油或六甘油(HG)接头。
在一些方面中，n具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、189、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199或200的值。
在一些方面中，n介于2与10之间、介于10与20之间、介于20与30之间、介于30与40之间、介于40与50之间、介于50与60之间、介于60与70之间、介于70与80之间、介于80与90之间、介于90与100之间、介于100与110之间、介于110与120之间、介于120与130之间、介于130与140之间、介于140与150之间、介于150与160之间、介于160与170之间、介于170与180之间、介于180与190之间或介于190与200之间。
在这些实施方案的一些替代方案中，n具有9至45的值。在一些方面中，异源部分是由式(R3—O—(CH2—CHOR5—CH2—O)n—)描述的支链聚甘油，其中R5是氢；或由式(R3—O—(CH2—CHOH—CH2—O)n—)描述的直链甘油链，并且R3是氢、甲基或乙基。在一些方面中，异源部分是由式(R3—O—(CH2—CHOR5—CH2—O)n—)描述的超支化聚甘油，其中R5是氢；或由式(R3—O—(CH2—CHOR6—CH2—O)n—)描述的甘油链，其中R6是氢；或由式(R3—O—(CH2—CHOR7—CH2—O)n—)描述的甘油链，其中R7是氢；或由式(R3—O—(CH2—CHOH—CH2—O)n—)描述的直链甘油链，并且R3是氢、甲基或乙基。超支化甘油及其合成方法描述于Oudshorn等人(2006)Biomaterials 27:5471-5479；Wilms等人(20100Acc.Chem.Res.43,129-41以及其中引用的参考文献中。
在某些方面中，PG具有介于100g/mol与3000g/mol之间，特别是介于100g/mol与2500g/mol之间、更特别地大约100g/mol至2000g/mol的摩尔质量。在某些方面中，PG具有介于200g/mol与3000g/mol之间，特别是介于300g/mol与2500g/mol之间、更特别地大约400g/mol至2000g/mol的摩尔质量。
在一些方面中，PG是PG100、PG200、PG300、PG400、PG500、PG600、PG700、PG800、PG900、PG1000、PG1100、PG1200、PG1300、PG1400、PG1500、PG1600、PG1700、PG1800、PG1900、PG2000、PG2100、PG2200、PG2300、PG2400、PG2500、PG1600、PG1700、PG1800、PG1900、PG2000、PG2100、PG2200、PG2300、PG2400、PG2500、PG2600、PG2700、PG2800、PG2900、或PG3000。在一个特定方面中，PG是PG400。在另一个特定方面中，PG是PG2000。
在一些方面中，接头组合包含(甘油)n、和/或(HG)n和/或(TG)n，其中n是介于1与50之间的整数，并且每个单元例如通过磷酸酯接头、硫代磷酸酯键联或它们的组合连接。
III.A.2.d.脂肪族(烷基)接头
在一些方面中，接头组合包含至少一个脂肪族(烷基)接头，例如丙基、丁基、己基或C2-C12烷基，如C2-C10烷基或C2-C6烷基。
III.A.3.可裂解接头
在一些方面中，本文公开的ASO的不同组分可以通过可裂解接头连接。术语可裂解接头是指包含至少一个可断裂或裂解的键联或化学键的接头。如本文所用，术语裂解是指以产生两个或更多个相对较小分子的方式使相对大的分子中的一个或多个化学键断裂。裂解可例如由例如核酸酶、肽酶、蛋白酶、磷酸酶、氧化酶或还原酶介导，或者由特定物理化学条件，例如氧化还原环境、pH、活性氧类的存在或特定波长的光介导。
在一些方面中，如本文所用的术语“可裂解”是指例如可快速降解的接头，诸如例如磷酸二酯和二硫化物，而术语“不可裂解”是指例如更稳定的键联，诸如例如，耐核酸酶的硫代磷酸酯。
在一些方面中，可裂解接头是二核苷酸或三核苷酸接头、二硫化物、亚胺、硫缩酮、val-cit二肽或它们的任何组合。
在一些方面中，可裂解接头包含缬氨酸-丙氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯或缬氨酸-瓜氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯。
III.A.4.具体实例和拓扑结构
在本公开的具体方面中，接头组合由下式的接头组成：
[烷基接头]m-[PEG1]n-[PEG2]o
其中m、n和o是0或1，并且m、n或o中的至少一者不为零。根据这样的式的示例性接头组合是C6-TEG-HEG、C6-HEG、C6-TEG、C6、TEG-HEG、TEG、C8-TEG-HEG、C8-HEG、C8-TEG和C8。
在一些方面中，接头组合包含与一种或多种可裂解接头(例如酶可裂解接头和自分解性接头)组合的不可裂解接头(例如，TEG或HEG)。
在一个具体方面中，接头组合包括接头组合TEG(不可裂解接头)-Val-Cit(可裂解接头)-pAB(自分解性接头)，如下所示：
锚定部分和接头组合的具体组合在下表中说明。
表2.
表3.
下文举例说明本公开的具体寡核苷酸，如ASO[胆固醇]-[TEG]-[HEG]-[ASO]
[胆固醇]-[SMal]-[Val-Cit]-[pAB]-[ASO]
[胆固醇]-[TEG]-[Val-Cit]-[C6]-[ASO]
[胆固醇]-[TEG]-[SS]-[C6]-[ASO]
其中[胆固醇]是胆固醇锚定部分，[TEG]是TEG不可裂解接头，[HEG]是HEG不可裂解接头，[SS]是二硫化物氧化还原可裂解接头，[C6]是烷基不可裂解接头，[SMal]是S-马来酰亚胺，[Val-Cit]是缬氨酸-瓜氨酸可裂解接头，[pAB]是pAB自分解性接头。在一些方面中，本公开的ASO具有根据上文提供的示例性结构的结构，其中一种或多种组分已被与实例中描绘的那些相同类别的组分替代。例如，[胆固醇]锚定部分可被本文公开的另一种锚定部分取代，[TEG]可被本文公开的另一种聚合不可裂解接头(例如，HEG、PEG、PG)取代，[Val-Cit]可被另一种肽酶可裂解的接头替代，或者[pAB]可被另一种自分解性接头取代。
III.B.支架部分
一个或多个支架部分可在EV中表达。在一些方面中，一个或多个支架部分用于将ASO锚定至本公开的EV。在其它方面中，一个或多个支架部分还用于将除ASO以外的蛋白质或分子锚定至EV。因此，本公开的EV包含连接ASO的锚定部分和连接蛋白质或分子的支架部分，例如靶向部分。在一些方面中，ASO与支架部分连接。在一些方面中，EV包含多于一个支架部分。在一些方面中，第一ASO与第一支架部分连接，并且第二ASO与第二支架部分连接。在一些方面中，第一支架部分和第二支架部分是相同类型的支架部分，例如，第一和第二支架部分两者均是支架X蛋白。在一些方面中，第一支架部分和第二支架部分是不同类型的支架部分，例如，第一支架部分是支架Y蛋白，并且第二支架部分是支架X蛋白。在一些方面中，第一支架部分是本文公开的支架Y。在一些方面中，第一支架部分是本文公开的支架X。在一些方面中，第二支架部分是本文公开的支架Y。在一些方面中，第二支架部分是本文公开的支架X。
在一些方面中，EV包含一个或多个支架部分，所述支架部分能够将ASO锚定至EV，例如外泌体(例如，在腔表面上或在外表面上)。在某些方面中，支架部分是多肽(“支架蛋白”)。在某些方面中，支架蛋白包含外泌体蛋白或其片段。在其它方面中，支架部分是非多肽部分。在一些方面中，支架蛋白包括各种膜蛋白，如跨膜蛋白、整合蛋白和外周蛋白，它们在外泌体膜上富集。它们可包括各种CD蛋白、转运蛋白、整联蛋白、凝集素和钙粘蛋白。在某些方面中，支架部分(例如，支架蛋白)包含支架X。在其它方面中，支架部分(例如，外泌体蛋白)包含支架Y。在另外的方面中，支架部分(例如，外泌体蛋白)包含支架X和支架Y两者。
在一些方面中，本公开的EV(例如，外泌体)包含其组成被改变的膜。例如，可通过改变膜的蛋白质、脂质或聚糖含量来改变它们的膜组成。
在一些方面中，通过化学和/或物理方法，诸如PEG诱导的融合和/或超声融合来产生表面工程化EV(例如，外泌体)。在其它方面中，表面工程化EV(例如，外泌体)通过遗传工程化产生。从遗传修饰的生产细胞或遗传修饰的细胞的后代产生的EV(例如，外泌体)可含有改变的膜组成。在一些方面中，表面工程化EV(例如，外泌体)具有较高或较低密度(例如，较高数目)的支架部分(例如，外泌体蛋白，例如，支架X)，或者包括支架部分的变体或片段。
例如，表面(例如，支架X)工程化EV可从用编码支架部分(例如，外泌体蛋白，例如，支架X)或其变体或片段的外源序列转化的细胞(例如，HEK293细胞)产生。包含由外源序列表达的支架部分的EV可包括改变的膜组成。
支架部分的各种修饰或片段可用于本公开的方面。例如，经修饰而对结合剂具有增强的亲和力的支架部分可用于产生可使用结合剂纯化的表面工程化EV。可使用经修饰以更有效地靶向EV和/或膜的支架部分。还可使用经修饰以包含特异性且有效地靶向外泌体膜所需的最小片段的支架部分。
支架部分可被工程化以表达为融合分子，例如支架X与ASO的融合分子。例如，融合分子可包含连接至ASO的本文公开的支架部分(例如，支架X，例如PTGFRN、BSG、IGSF2、IGSF3、IGSF8、ITGB1、ITGA4、SLC3A2、ATP转运蛋白或它们的片段或变体)。
在一些方面中，支架X包含前列腺素F2受体负调控因子(PTGFRN多肽)。PTGFRN蛋白也可称为CD9配偶体1(CD9P-1)、含Glu-Trp-Ile EWI基序的蛋白F(EWI-F)、前列腺素F2-α受体调控蛋白、前列腺素F2-α受体相关蛋白或CD315。人PTGFRN蛋白(Uniprot登录号Q9P2B2)的全长氨基酸序列在表3中显示为SEQ ID NO:301。PTGFRN多肽含有信号肽(SEQ ID NO:301的氨基酸1至25)、细胞外结构域(SEQ ID NO:301的氨基酸26至832)、跨膜结构域(SEQ IDNO:301的氨基酸833至853)和细胞质结构域(SEQ ID NO:301的氨基酸854至879)。成熟PTGFRN多肽由不含信号肽的SEQ ID NO:301组成，即SEQ ID NO:301的氨基酸26至879。
表3.示例性支架X蛋白序列
III.C.靶向部分
I在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含靶向部分，例如外源靶向部分。在一些方面中，所述外源靶向部分包含肽、抗体或其抗原结合片段、化学化合物或它们的任何组合。在一些方面中，靶向部分包含微蛋白、设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、抗运载蛋白(anticalin)、adnectin、适体、肽模拟物分子、受体的天然配体、骆驼科动物纳米抗体或它们的任何组合。在一些方面中，所述外源靶向部分包含全长抗体、单结构域抗体、仅重链抗体(VHH)、单链抗体、仅鲨鱼重链抗体(VNAR)、scFv、Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或它们的任何组合。在一些方面中，所述抗体是单链抗体。
在一些方面中，本公开的向性部分靶向转铁蛋白受体(TfR)。转铁蛋白受体(例如TfR1或TfR2)是转铁蛋白的载体蛋白。转铁蛋白受体通过受体介导的内吞作用将转铁蛋白-离子复合物内化来输入铁。
TfR1(参见例如，UniProt P02786 TFR1_人)或转铁蛋白受体1(也称为分化簇71或CD71)在血脑屏障(BBB)的内皮细胞上表达。在一些方面中，本公开的向性部分可包含能够靶向TfR(例如靶向TfR1)的配体，如转铁蛋白，或能够特异性地结合至TfR的抗体或其它结合分子。在一些方面中，靶向转铁蛋白受体的抗体是低亲和力抗转铁蛋白受体抗体(参见例如US20190202936A1，其以引用的方式整体并入本文)。
在一些方面中，向性部分包含转铁蛋白受体的配体的全部或一部分(例如，结合部分)，例如在GenBank中作为登录号NM001063、XM002793、XM039847、NM002343或NM013900等可获得的人转铁蛋白或其变体、片段或衍生物。
在一些方面中，向性部分包含转铁蛋白受体靶向部分，即，针对转铁蛋白受体的靶向部分。合适的转铁蛋白受体靶向部分包括转铁蛋白或转铁蛋白变体，如但不限于血清转铁蛋白、乳转铁蛋白(乳铁蛋白)、卵转铁蛋白或黑素转铁蛋白。转铁蛋白是在脊椎动物中发现的非血红素铁结合蛋白家族，包括血清转铁蛋白、乳转铁蛋白(乳铁蛋白)、卵转铁蛋白和黑素转铁蛋白。血清转铁蛋白是分子量为约80kDa的糖蛋白，包含单个多肽链和两个N连接的多糖链，所述两个N连接的多糖链分支并终止于多个触角中，每个触角具有末端唾液酸残基。存在两个主要结构域，约330个氨基酸的N结构域和约340个氨基酸的C结构域，所述结构域各自分为两个亚结构域N1和N2，以及C1和C2。转铁蛋白的受体结合通过C结构域发生，与糖基化无关。
在一些方面中，向性部分是血清转铁蛋白或转铁蛋白变体，如但不限于六唾液酸转铁蛋白、五唾液酸转铁蛋白、四唾液酸转铁蛋白、三唾液酸转铁蛋白、二唾液酸转铁蛋白、单唾液酸转铁蛋白或去唾液酸转铁蛋白，或糖缺失性转铁蛋白(CDT)如去唾液酸、单唾液酸或二唾液酸转铁蛋白，或不含糖的转铁蛋白(CFT)，如去唾液酸转铁蛋白。在一些方面中，向性部分是具有转铁蛋白的N末端结构域、转铁蛋白的C末端结构域、天然转铁蛋白的糖基化、与天然(野生型)转铁蛋白相比糖基化降低、无糖基化、转铁蛋白的至少两个N末端叶、转铁蛋白的至少两个C末端叶、N结构域中的至少一个突变、C结构域中的至少一个突变、其中突变体对转铁蛋白受体的结合亲合力比天然转铁蛋白弱的突变和/或其中突变体对转铁蛋白受体的结合亲合力比天然转铁蛋白强的突变或前述的任何组合的转铁蛋白变体。
在一些方面中，靶向转铁蛋白受体的向性部分包含抗转铁蛋白受体可变新抗原受体(vNAR)，例如，具有一般基序结构(FW1-CDR1-FW2-3-CDR3-FW4)的结合结构域。参见例如，美国2017-0348416，其以引用的方式整体并入本文。vNAR是鲨鱼的适应性免疫系统的关键组分。这些单结构域结构只有11kDa，是动物界中最小的IgG样蛋白，并且为分子工程化和生物制剂药物发现提供优异的平台。vNAR属性包括对靶标的高亲和力、易于表达、稳定性、溶解性、多特异性和增加的实体组织穿透潜力。参见Ubah等人Biochem.Soc.Trans.(2018)46(6):1559-1565。
在一些方面中，向性部分包含能够特异性地结合至TfR1的vNAR结构域，其中所述vNAR结构域包含具有US2017-0348416的表1中的任一种CDR1肽与US 2017-0348416的表1中的任一种CDR3肽的组合的vNAR支架或基本上由其组成。
在一些方面中，靶向部分通过支架蛋白连接至EV，例如外泌体。在一些方面中，支架蛋白是本文公开的任何支架蛋白。在一些方面中，支架蛋白是支架X。在一些方面中，支架蛋白是支架Y。
III.D.接头
如上文所述，本公开的细胞外囊泡(EV)(例如，外泌体和纳米囊泡)可包含将目标分子(例如，ASO)连接至EV(例如，连接至外表面或腔表面上)的一个或多个接头。在一些方面中，ASO直接或通过支架部分(例如，支架X或支架Y)连接至EV。在某些方面中，ASO通过接头连接至支架部分。在某些方面中，ASO通过接头连接至第二支架部分。
在某些方面中，ASO通过支架X连接至外泌体的外表面。在另外的方面中，ASO通过支架X或支架Y连接至外泌体的腔表面。接头可以是本领域已知的任何化学部分。
如本文所用，术语“接头”是指肽或多肽序列(例如，合成肽或多肽序列)或非多肽，例如烷基链。在一些方面中，可将两个或更多个接头串联连接。当存在多个接头时，每个接头可相同或不同。一般来说，接头提供了灵活性或防止/改善了空间位阻。接头通常不被裂解；然而，在某些方面中，这种裂解可以是合乎需要的。因此，在一些方面中，接头可包含一个或多个蛋白酶可裂解位点，其可位于接头序列内或在接头序列的任一端侧接所述接头。
在一些方面中，接头是肽接头。在一些方面中，肽接头可包含至少约2、至少约3、至少约4、至少约5、至少约10、至少约15、至少约20、至少约25、至少约30、至少约35、至少约40、至少约45、至少约50、至少约55、至少约60、至少约65、至少约70、至少约75、至少约80、至少约85、至少约90、至少约95或至少约100个氨基酸。
在一些方面中，肽接头是合成的，即非天然存在的。在一个方面中，肽接头包含肽(或多肽)(例如，天然或非天然存在的肽)，所述肽包含将第一线性氨基酸序列与第二线性氨基酸序列连接或遗传融合，所述第一线性氨基酸序列在自然界中与所述第二线性氨基酸序列不是天然连接或遗传融合的。例如，在一个方面中，肽接头可包含非天然存在的多肽，所述多肽是天然存在的多肽的经修饰形式(例如，包含突变诸如添加、取代或缺失)。
接头可易于裂解(“可裂解接头”)，从而促进生物活性分子(例如，ASO)的释放。
在一些方面中，接头是“还原敏感型接头”。在一些方面中，还原敏感型接头含有二硫键。在一些方面中，接头是“酸不稳定型接头”。在一些方面中，酸不稳定型接头含有腙。合适的酸不稳定型接头还包括，例如，顺式乌头酸接头、酰肼接头、硫代氨甲酰基接头或它们的任何组合。
在一些方面中，接头包括不可裂解接头。
在一些方面中，所述接头包含丙烯酸亚磷酰胺(例如，ACRYDITETM)、腺苷酸化、叠氮化物(NHS酯)、地高辛(NHS酯)、胆固醇-TEG、I-LINKERTM、氨基修饰剂(例如，氨基修饰剂C6、氨基修饰剂C12、氨基修饰剂C6 dT或Uni-LinkTM氨基修饰剂)、炔烃、5'己炔基、5-辛二炔基dU、生物素化(例如，生物素、生物素(叠氮化物)、生物素dT、生物素-TEG、双重生物素、PC生物素或脱硫生物素)、硫醇修饰(硫醇修饰剂C3 S-S、二硫醇或硫醇修饰剂C6 S-S)或它们的任何组合。
在一些方面中，接头包含萜烯，如橙花叔醇、法尼醇、柠檬烯、芳樟醇、香叶醇、香芹酮、小茴香酮或薄荷醇；脂质，如棕榈酸或肉豆蔻酸；胆固醇；油烯基；视黄基；胆固醇基残基；胆酸；金刚烷乙酸；1-芘丁酸；二氢睾酮；1,3-双-O(十六烷基)甘油；香叶基氧基己基；十六烷基甘油；冰片；1,3-丙二醇；十七烷基；O3-(油酰基)石胆酸；O3-(油酰基)胆烯酸；二甲氧基三苯甲基；吩噁嗪，马来酰亚胺部分，glucorinidase型，CL2A-SN38型，叶酸；碳水化合物；维生素A；维生素E；维生素K；或它们的任何组合。
III.E.包含向性部分的经修饰EV
在一些方面中，本文公开的EV(例如，外泌体)可进行表面工程化以调节其性质(例如生物分布)，例如通过掺入免疫亲和配体或同源受体配体。例如，本文公开的EV(例如，外泌体)可进行表面工程化以将它们引导至特定细胞类型，例如雪旺氏细胞、感觉神经元、运动神经元、脑膜巨噬细胞或肿瘤细胞，或者可进行表面工程化以增强它们迁移至特定区室，例如迁移至CNS(以提高鞘内区室保留)或迁移至肿瘤微环境。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含(i)本文公开的ASO和(ii)生物分布调节剂或靶向部分。在一些方面中，生物分布调节剂或靶向部分包含单结构域抗原结合部分，例如VHH和/或vNAR。如本文所用，术语“生物分布调节剂”和“靶向部分”可互换使用，并且是指可在体内或体外(例如，在不同品种细胞的混合培养物中)调节细胞外囊泡(例如，外泌体、纳米囊泡)的分布的剂。在一些方面中，靶向部分改变EV(例如，外泌体)的向性，即靶向部分是“向性部分”。如本文所用，术语“向性部分”是指当在EV(例如，外泌体)上表达时改变和/或增强EV的自然运动的靶向部分。例如，在一些方面中，向性部分可促进EV(例如，外泌体)被特定细胞、组织或器官吸收。
EV(例如，外泌体)在离散细胞类型和组织中表现出优先摄取，并且可通过向其表面添加与靶细胞表面上的受体相互作用的蛋白质来引导它们的向性。向性部分可包含生物分子，如蛋白质、肽、脂质或碳水化合物，或合成分子。例如，在一些方面中，向性部分可包含亲和配体，例如抗体(如抗CD19纳米抗体、抗CD22纳米抗体、抗CLEC9A纳米抗体或抗CD3纳米抗体)、VHH结构域、噬菌体展示肽、纤连蛋白结构域、骆驼科动物纳米抗体和/或vNAR。在一些方面中，向性部分可包含例如合成聚合物(例如，PEG)、天然配体/分子(例如，CD40L、白蛋白、CD47、CD24、CD55、CD59)和/或重组蛋白(例如，XTEN)。
在一些方面中，向性部分可增加细胞对EV(例如，外泌体)的摄取。
在一些方面中，当对中枢神经系统的向性为所需时，本公开的EV(例如，外泌体)可包含增加EV(例如，外泌体)对特定中枢神经系统组织或细胞的向性的组织或细胞特异性靶配体。在一些方面中，细胞是神经胶质细胞。在一些方面中，神经胶质细胞是少突胶质细胞、星形胶质细胞、室管膜细胞、小神经胶质细胞、雪旺氏细胞、卫星神经胶质细胞、嗅鞘细胞或它们的组合。在一些方面中，细胞是神经干细胞。在一些方面中，增加EV(例如，外泌体)对雪旺氏细胞的向性的细胞特异性靶配体结合至雪旺氏细胞表面标志物，诸如髓鞘碱性蛋白(MBP)、髓鞘蛋白零(P0)、P75NTR、NCAM、PMP22或它们的任何组合。在一些方面中，细胞特异性向性部分包含抗体或其抗原结合部分、适体或在雪旺氏细胞表面上表达的受体的激动剂或拮抗剂。
原则上，包含可将EV(例如，外泌体)引导至特定靶细胞或组织(例如，CNS中的细胞或外周神经中的雪旺氏细胞)的至少一个向性部分的本公开的EV(例如，外泌体)可使用本领域已知的任何合适的施用方法(例如，静脉内注射或输注)施用，因为向性部分的存在(单独或与抗吞噬信号如CD47的存在和特定施用途径的使用组合)将诱导EV(例如，外泌体)朝向所需的靶细胞或组织的向性。
还可通过选择合适的施用途径(例如，鞘内施用或眼内施用，以改善对中枢神经系统的向性)来实现药代动力学、生物分布，并且特别是向性和在所需的组织或解剖位置中的保留。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含至少两个不同的向性部分。在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含三个不同的向性部分。在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含四个不同的向性部分。在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含五个或更多个不同的向性部分。在一些方面中，一个或多个向性部分增加细胞对EV(例如，外泌体)的摄取。在一些方面中，每个向性部分连接至支架部分，例如支架X蛋白或其片段。在一些方面中，多个向性部分可连接至同一支架部分，例如支架X蛋白或其片段。在一些方面中，若干向性部分可串联连接至支架部分，例如支架X蛋白或其片段。在一些方面中，本文公开的向性部分或其组合通过接头或间隔子连接至支架部分，例如支架X蛋白或其片段。在一些方面中，接头或间隔子或它们的组合插入在本文公开的两个向性部分之间。
下文公开了能够将本公开的EV(例如，外泌体)引导至不同神经系统细胞类型的向性部分的非限制性实例。
III.E.1.靶向雪旺氏细胞的向性部分
在一些方面中，向性部分可靶向雪旺氏细胞。在一些方面中，向性部分将本文公开的EV(例如，外泌体)引导至雪旺氏细胞靶标，例如转铁蛋白受体(TfR)、载脂蛋白D(ApoD)、半乳糖凝集素1(LGALS1)、髓磷脂蛋白脂质蛋白(PLP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖1或多配体聚糖3。在一些方面中，将本公开的EV(例如，外泌体)引导至雪旺氏细胞的向性部分是转铁蛋白或其片段、变体或衍生物。
在一些方面中，本公开的向性部分靶向转铁蛋白受体(TfR)。转铁蛋白受体(例如TfR1或TfR2)是转铁蛋白的载体蛋白。转铁蛋白受体通过受体介导的内吞作用将转铁蛋白-离子复合物内化来输入铁。
TfR1(参见例如，UniProt P02786 TFR1_人)或转铁蛋白受体1(也称为分化簇71或CD71)在血脑屏障(BBB)的内皮细胞上表达。已知TfR1在诸如红细胞、单核细胞、肝细胞、肠细胞和红系细胞的多种细胞中表达，并在诸如肿瘤细胞(非小细胞肺癌、结肠癌和白血病)的快速分裂细胞中以及受诸如急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的病症影响的组织中上调。TfR2主要在肝脏和红系细胞中表达，在肺、脾脏和肌肉中发现的程度较低，并且与TfR1具有45％同一性和66％相似性。TfR1是具有二硫键且分子量为90kDa的形成760个残基的同二聚体的跨膜受体。对转铁蛋白的亲和力在两种受体类型之间不同，对TfR1的亲和力比对TfR2的亲和力高至少25-30倍。
与TfR1的结合允许大分子(例如抗体)转运至脑中。一些TfR1靶向抗体已被证明可穿过血脑屏障，而不会干扰铁的吸收。其中包括小鼠抗大鼠-TfR抗体OX26和大鼠抗小鼠-TfR抗体8D3。抗体-TfR相互作用的亲和力对于确定经BBB的内皮细胞转胞吞转运的成功而言是重要的。由于细胞内分选途径改变，单价TfR相互作用有利于BBB转运。二价相互作用的亲合力效应将转运重定向至溶酶体。此外，降低TfR结合亲和力直接促进与TfR的解离，这增加了TfR结合抗体的脑实质暴露。参见例如，美国专利号8,821,943，其以引用的方式整体并入本文。因此，在一些方面中，本公开的向性部分可包含能够靶向TfR(例如靶向TfR1)的配体，如转铁蛋白，或能够特异性地结合至TfR的抗体或其它结合分子。在一些方面中，靶向转铁蛋白受体的抗体是低亲和力抗转铁蛋白受体抗体(参见例如US20190202936A1，其以引用的方式整体并入本文)。
在一些方面中，向性部分包含转铁蛋白受体的配体的全部或一部分(例如，结合部分)，例如在GenBank中作为登录号NM001063、XM002793、XM039847、NM002343或NM013900等可获得的人转铁蛋白或其变体、片段或衍生物。
在一些方面中，向性部分包含转铁蛋白受体靶向部分，即，针对转铁蛋白受体的靶向部分。合适的转铁蛋白受体靶向部分包括转铁蛋白或转铁蛋白变体，如但不限于血清转铁蛋白、乳转铁蛋白(乳铁蛋白)、卵转铁蛋白或黑素转铁蛋白。转铁蛋白是在脊椎动物中发现的非血红素铁结合蛋白家族，包括血清转铁蛋白、乳转铁蛋白(乳铁蛋白)、卵转铁蛋白和黑素转铁蛋白。血清转铁蛋白是分子量为约80kDa的糖蛋白，包含单条多肽链和两条N连接的多糖链，所述两条N连接的多糖链分支并终止于多个触角中，每个触角具有末端唾液酸残基。存在两个主要结构域，约330个氨基酸的N结构域和约340个氨基酸的C结构域，所述结构域各自分为两个亚结构域N1和N2，以及C1和C2。转铁蛋白的受体结合通过C结构域发生，与糖基化无关。
在一些方面中，向性部分是血清转铁蛋白或转铁蛋白变体，如但不限于六唾液酸转铁蛋白、五唾液酸转铁蛋白、四唾液酸转铁蛋白、三唾液酸转铁蛋白、二唾液酸转铁蛋白、单唾液酸转铁蛋白或去唾液酸转铁蛋白，或糖缺失性转铁蛋白(CDT)如去唾液酸、单唾液酸或二唾液酸转铁蛋白，或不含糖的转铁蛋白(CFT)，如去唾液酸转铁蛋白。在一些方面中，向性部分是具有转铁蛋白的N末端结构域、转铁蛋白的C末端结构域、天然转铁蛋白的糖基化、与天然(野生型)转铁蛋白相比糖基化降低、无糖基化、转铁蛋白的至少两个N末端叶、转铁蛋白的至少两个C末端叶、N结构域中的至少一个突变、C结构域中的至少一个突变、其中突变体对转铁蛋白受体的结合亲合力比天然转铁蛋白弱的突变和/或其中突变体对转铁蛋白受体的结合亲合力比天然转铁蛋白强的突变或前述的任何组合的转铁蛋白变体。
在一些方面中，靶向转铁蛋白受体的向性部分包含抗转铁蛋白受体可变新抗原受体(vNAR)，例如，具有一般基序结构(FW1-CDR1-FW2-3-CDR3-FW4)的结合结构域。参见例如，美国2017-0348416，其以引用的方式整体并入本文。vNAR是鲨鱼的适应性免疫系统的关键组分。这些单结构域结构只有11kDa，是动物界中最小的IgG样蛋白，并且为分子工程化和生物制剂药物发现提供优异的平台。vNAR属性包括对靶标的高亲和力、易于表达、稳定性、溶解性、多特异性和增加的实体组织穿透潜力。参见Ubah等人Biochem.Soc.Trans.(2018)46(6):1559-1565。
在一些方面中，向性部分包含能够特异性地结合至TfR1的vNAR结构域，其中所述vNAR结构域包含具有US2017-0348416的表1中的任一种CDR1肽与US 2017-0348416的表1中的任一种CDR3肽的组合的vNAR支架或基本上由其组成。
在一些方面中，本公开的向性部分靶向ApoD。与主要在肝脏中产生的其它脂蛋白不同，载脂蛋白D主要在大脑、小脑和周围神经中产生。ApoD是169个氨基酸长，包含20个氨基酸的分泌肽信号。它含有两个糖基化位点(天冬酰胺45和78)，并且成熟蛋白的分子量从20至32kDa变化。ApoD以相对强的亲和力结合类固醇激素如黄体酮和孕烯醇酮，并且以较弱的亲和力结合至雌激素。花生四烯酸(AA)是亲和力比黄体酮或孕烯醇酮好得多的ApoD配体。其它ApoD配体包括E-3-甲基-2-己烯酸、视黄酸、鞘磷脂和鞘脂。因此，在一些方面中，本公开的向性部分包含能够靶向ApoD的配体，例如能够特异性地结合至ApoD的抗体或其它结合分子。
在一些方面中，本公开的向性部分靶向半乳糖凝集素1。半乳糖凝集素-1蛋白的长度是135个氨基酸。因此，在一些方面中，本公开的向性部分包含能够靶向半乳糖凝集素1的配体，例如能够特异性地结合半乳糖凝集素1的抗体或其它结合分子。
在一些方面中，本公开的向性部分靶向PLP。PLP是来自CNS的主要髓鞘蛋白。它在髓磷脂的多层结构的形成或维持中起重要作用。髓鞘是神经系统独有的作为绝缘子可大大提高轴突脉冲传导的效率的多层膜。PLP是276至280个氨基酸的高度保守的疏水性蛋白质，其含有四个跨膜区段、两个二硫键并共价结合脂质(哺乳动物中的至少六个棕榈酸酯基团)。因此，在一些方面中，本公开的向性部分包含能够靶向PLP的配体，例如能够特异性地结合PLP的抗体或其它结合分子。
在一些方面中，本公开的向性部分靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖1。因此，在一些方面中，本公开的向性部分包含能够靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖1的配体，例如能够特异性地结合至磷脂酰肌醇蛋白聚糖1的抗体或其它结合分子。在一些方面中，本公开的向性部分靶向多配体聚糖3。因此，在一些方面中，本公开的向性部分包含能够靶向多配体聚糖3的配体，例如能够特异性地结合至多配体聚糖3的抗体或其它结合分子。
III.E.2.靶向感觉神经元的向性部分
在一些方面中，本文公开的向性部分可将本文公开的EV(例如，外泌体)引导至感觉神经元。在一些方面中，将本文公开的EV(例如，外泌体)引导至感觉神经元的向性部分靶向Trk受体，例如TrkA、TrkB、TrkC或它们的组合。
Trk(原肌球蛋白受体激酶)受体是酪氨酸激酶家族，其可调控哺乳动物神经系统中的突触强度和可塑性。Trk受体的常见配体是神经营养蛋白，其是对神经系统的功能至关重要的生长因子家族。这些分子的结合是高度特异性的。每种类型的神经营养蛋白对其相应的Trk受体具有不同的结合亲和力。因此，在一些方面中，将本文公开的EV(例如，外泌体)引导至感觉神经元的向性部分包含神经营养蛋白。
神经营养蛋白结合至呈同二聚体形式的Trk受体。因此，在一些方面中，向性部分包含例如串联的至少两种本文公开的神经营养蛋白。在一些方面中，向性部分包含例如串联的至少两种本文公开的神经营养蛋白，所述神经营养蛋白通过接头连接至支架蛋白，例如蛋白X。在一些方面中，将支架蛋白(例如蛋白X)连接至神经营养蛋白(例如，神经营养蛋白同二聚体)的接头具有至少10个氨基酸的长度。在一些方面中，将支架蛋白(例如蛋白X)连接至神经营养蛋白(例如神经营养蛋白同二聚体)的接头具有至少约25个氨基酸、约30个氨基酸、约35个氨基酸、约40个氨基酸、约45个氨基酸或约50个氨基酸的长度。
在一些方面中，神经营养蛋白是神经营养蛋白前体，即神经营养蛋白前体蛋白(proneurotrophin)，其随后被裂解以产生成熟蛋白质。
神经生长因子(NGF)是神经营养蛋白家族中首个鉴定并且可能最佳表征的成员。它对周围神经系统的感觉和交感神经元的发育具有显著作用。脑源性神经营养因子(BDNF)具有类似于NGF的神经营养活性，并且主要在CNS中表达，并已在心脏、肺、骨骼肌和周围的坐骨神经中检测到(Leibrock,J.等人,Nature,341:149-152(1989))。神经营养蛋白-3(NT-3)是NGF家族的第三成员，并且主要在海马锥体和颗粒神经元的亚群中表达，并且已在小脑、大脑皮层和外周组织(如肝脏和骨骼肌)中检测到(Ernfors,P.等人,Neuron 1:983-996(1990))。神经营养蛋白-4(也称为NT-415)是神经营养蛋白家族中最可变的成员。神经营养蛋白-6(NT-5)在真骨鱼中发现并且结合至p75受体。
在一些方面中，靶向TrkB的神经营养蛋白包括例如NT-4或BDNF，或它们的片段、变体或衍生物。在一些方面中，靶向TrkA的神经营养蛋白包括例如NGF或其片段、变体或衍生物。在一些方面中，靶向TrkC的神经营养蛋白包括例如NT-3或其片段、变体或衍生物。
在一些方面中，向性部分包含脑源性神经营养因子(BDNF)。在一些方面中，BDNF是天然BDNF的变体，如两种氨基酸羧基截短的变体。在一些方面中，向性部分包含BDNF的全长119个氨基酸的序列(HSDPARRGELSVCDSISEWVTAADKKTAVDMSGGTVTVLEKVPVSKGQLKQYF YETKCNPMGYTKEGCRGIDKRHWNSQCRTTQSYVRALTMDSKKRIGWRFIRIDTS CVCTLTIKRGR；SEQ ID NO:161)。在一些方面中，使用了BDNF的一个氨基酸羧基截短的变体(SEQ ID NO:161的氨基酸1-118)。
在一些方面中，向性部分包含天然BDNF的羧基截短的变体，例如，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或多于10个氨基酸从BDNF的羧基末端缺失的变体。BDNF变体包括完整的119个氨基酸的BDNF、具有截短的羧基末端的117或118个氨基酸的变体、具有截短的氨基末端的变体、或氨基酸组成变化高达约20％、约30％或约40％的变体，只要蛋白质变体仍然以高亲和力结合至TrkB受体。
在一些方面中，向性部分包含BDNF的两个氨基酸羧基截短的变体(SEQ ID NO:161的氨基酸1-117)。在一些方面中，向性部分包含BDNF的三个氨基酸羧基截短的变体(SEQ IDNO:161的氨基酸1-116)。在一些方面中，向性部分包含BDNF的四个氨基酸羧基截短变体(SEQ ID NO:161的氨基酸1-115)。在一些方面中，向性部分包含BDNF的五个氨基酸羧基截短变体(SEQ ID NO:161的氨基酸1-114)。在一些方面中，向性部分包含与SEQ ID NO:161的序列或其截短型式(例如具有一个或两个氨基酸截短的羧基末端的117或118个氨基酸的变体或具有截短的氨基末端的变体)至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或约100％同一的BDNF。参见例如，美国专利号8,053,569B2，其以引用的方式整体并入本文。
在一些方面中，向性部分包含神经生长因子(NGF)。在一些方面中，NGF是天然NGF的变体，如截短变体。在一些方面中，向性部分包含蛋白质的26-kDaβ亚基，它是7S NGF复合物的唯一具有生物活性的组分。在一些方面中，向性部分包含βNGF的全长120个氨基酸的序列(SSSHPIFHRGEFSVCDSVSVWVGDKTTATDIKGKEVMVLGEVNINNSVFKQYFF ETKCRDPNPVDSGCRGIDSKHWNSYCTTTHTFVKALTMDGKQAAWRFIRIDTACV CVLSRKAVRRA；SEQ ID NO:162)。在一些方面中，向性部分包含天然NGF的羧基截短的变体，例如，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或多于10个氨基酸从NGF的羧基末端缺失的变体。NGF变体包括完整的120个氨基酸的NGF、具有截短的羧基末端的较短氨基酸变体、具有截短的氨基末端的变体、或氨基酸组成变化高达约20％、约30％或约40％的变体，只要向性部分仍然以高亲和力结合至TrkB受体。在一些方面中，向性部分包含与SEQ ID NO:162的序列或其截短型式至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或约100％同一的NGF。
在一些方面中，向性部分包含神经营养蛋白-3(NT-3)。在一些方面中，NT-3是天然NT-3的变体，如截短变体。在一些方面中，向性部分包含NT-3的全长119个氨基酸的序列(YAEHKSHRGEYSVCDSESLWVTDKSSAIDIRGHQVTVLGEIKTGNSPVKQYFYETRCKEARPVKNGCRGIDDKHWNSQCKTSQTYVRALTSENNKLVGWRWIRIDTSCVCALSRKIGRT；SEQ ID NO:163)。在一些方面中，向性部分包含天然NT-3的羧基截短的变体，例如，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或多于10个氨基酸从NT-3的羧基末端缺失的变体。NT-3变体包括完整的119个氨基酸的NT-3、具有截短的羧基末端的较短氨基酸变体、具有截短的氨基末端的变体、或氨基酸组成变化高达约20％、约30％或约40％的变体，只要向性部分仍然以高亲和力结合至TrkC受体。在一些方面中，向性部分包含与SEQ ID NO:163的序列或其截短型式至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或约100％同一的NT-3。
在一些方面中，向性部分包含神经营养蛋白-4(NT-4)。在一些方面中，NT-4是天然NT-4的变体，如截短变体。在一些方面中，向性部分包含NT-4的全长130个氨基酸的序列(GVSETAPASRRGELAVCDAVSGWVTDRRTAVDLRGREVEVLGEVPAAGGSPLRQYFFETRCKADNAEEGGPGAGGGGCRGVDRRHWVSECKAKQSYVRALTADAQGRVGWRWIRIDTACVCTLLSRTGRA；SEQ ID NO:164)。在一些方面中，向性部分包含天然NT-4的羧基截短的变体，例如，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或多于10个氨基酸从NT-4的羧基末端缺失的变体。NT-4变体包括完整的130个氨基酸的NT-4、具有截短的羧基末端的较短氨基酸变体、具有截短的氨基末端的变体、或氨基酸组成变化高达约20％、约30％或约40％的变体，只要向性部分仍然以高亲和力结合至TrkB受体。在一些方面中，向性部分包含与SEQ ID NO:164的序列或其截短型式至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或约100％同一的NT-4。
NGF和NGF相关重组分子的结构/功能关系研究表明，NGF区域25-36以及其它β-发夹环和非环区域中的突变显著影响NGF/NGF受体相互作用(Ibanez等人,EMBO J.,10,2105-2110,(1991))。已证明源自此区域的小肽模拟NGF与Mock受体结合并影响生物反应(LeSauteur等人J.Biol.Chem.270,6564-6569,1995)。发现对应于NGF的β环区域的环化肽的二聚体充当部分NGF激动剂，因为它们同时具有促进存活和抑制NGF的活性，而单体和线性肽则无活性(Longo等人,J.Neurosci.Res.,48,1-17,1997)。因此，在一些方面中，本公开的向性部分包含此类肽。
还设计并合成了环肽以模拟NGF、BDNF、NT3和NT-4/5的β环区域。这些环肽的某些单体、二聚体或聚合物可具有三维结构，所述三维结构在生理条件下与神经营养蛋白受体结合。与神经细胞表面受体结合并被内化的神经营养蛋白的所有这些结构类似物都可充当根据本公开的化合物的结合剂B，以将缀合的治疗性部分TM递送至神经系统。因此，在一些方面中，本公开的向性部分包含此类环肽或其组合。
在一些方面中，能够与受体结合并被内化的针对神经细胞表面受体的抗体也可充当与Trk受体结合的向性部分。例如，单克隆抗体(MAb)5C3对人p140 TrkA受体的NGF对接位点具有特异性，与人TrkB受体没有交叉反应性。MAb 5C3及其Fab在体外模拟NGF的作用，并在体内对人Trk-A阳性肿瘤进行成像(Kramer等人,Eur.J.Cancer,33,2090-2091,(1997))。Mab 5C3可变区的分子克隆、重组、诱变和建模研究表明，其三个或更少的互补决定区(CDR)对于与TrkA的结合是相关的。对重组CDR和CDR样合成多肽的测定表明，它们具有与完整Mab5C3相似的激动生物活性。针对p75受体的单克隆抗体MC192也已被证明具有神经营养性作用。因此，这些抗体和它们的功能等效片段也可充当本公开的向性部分。
在一些方面中，通过掺入非天然氨基酸或其它有机分子而合成的肽模拟物也可充当本公开的向性部分。
其它神经营养因子是本领域已知的。因此，在一些方面中，靶部分包含选自由以下组成的组的神经营养因子：成纤维细胞生长因子(FGF)-2和其它FGF、促红细胞生成素(EPO)、肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)-a、TGF-(3、血管内皮生长因子(VEGF)、白介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)、睫状神经营养因子(CNTF)、神经胶质源性神经营养因子(GDNF)、neurturin、血小板源性生长因子(PDGF)、调蛋白、神经调节蛋白、artemin、persephin、白细胞介素、粒细胞集落刺激因子(CSF)、粒细胞-巨噬细胞-CSF、netrin、心肌营养蛋白-1、刺猬(hedgehog)、白血病抑制因子(LIF)、中期因子(midkine)、多效生长因子、骨形态发生蛋白(BMP)、netrin、鞘脂酶激活蛋白(saposin)、信号素(semaphorin)和干细胞因子(SCF)。
在一些方面中，将本文公开的EV(例如，外泌体)引导至感觉神经元的向性部分包含水痘带状疱疹病毒(VZV)肽。
III.E.3.靶向运动神经元的向性部分
在一些方面中，本文公开的向性部分可将本文公开的EV(例如，外泌体)引导至运动神经元。在一些方面中，将本文公开的EV(例如，外泌体)引导至运动神经元的向性部分包含狂犬病病毒糖蛋白(RVG)肽、靶向轴突输入(TAxI)肽、P75R肽或Tet-C肽。
在一些方面中，向性部分包含狂犬病病毒糖蛋白(RVG)肽。参见例如，美国专利申请公布2014-00294727，其以引用的方式整体并入本文。在一些方面中，RVG肽包含RVG(YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG；SEQ ID NO:601)的氨基酸残基173-202或其变体、片段或衍生物。在一些方面中，向性部分是SEQ ID NO:601的片段。SEQ ID NO:601的这种片段可具有例如从SEQ ID NO:601的N末端和/或C末端缺失的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸。源自SEQ ID NO:601的功能性片段可通过从SEQ ID NO:601顺序缺失N和/或C末端氨基酸并评估所得肽片段的功能，如肽片段结合乙酰胆碱受体的功能和/或通过血脑屏障传递的能力来鉴定。在一些方面中，向性部分包含SEQ ID NO:601的长度为28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16或15个氨基酸的片段。在一些方面中，向性部分包含SEQ ID NO:601的长度小于15个肽的片段。
RVG肽(例如SEQ ID NO:601)的“变体”意指在结构和功能上基本相似的分子，即，其中功能是穿过BBB或通过BBB传递至整个分子或其片段的能力而实现。RVG肽的变体可含有不同于SEQ ID NO:601中的参考氨基酸的突变或修饰。在一些方面中，SEQ ID NO:601的变体是如本文公开的SEQ ID NO:601的片段。在一些方面中，RVG变体可以是SEQ ID NO:601的不同同种型，或者可包含不同的异构体氨基酸。变体可以是使用本领域熟知的方法分离或产生的天然存在的、合成的、重组的或化学修饰的多核苷酸或多肽。RVG变体可包含保守或非保守的氨基酸变化。参见例如，美国专利号9,757,470，其以引用的方式整体并入本文。
在一些方面中，向性部分包含靶向轴突输入(TAxI)肽。在一些方面中，TAxI肽是序列SACQSQSQMRCGGG(SEQ ID NO:602)的环化TAxI肽。参见例如，Sellers等人(2016)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 113:2514-2519和美国专利号9,056,892，其以引用的方式整体并入本文。如本文所述的TAxI转运肽可具有任何长度。通常，转运肽的长度将介于6与50个氨基酸之间，更通常长度介于10与20个氨基酸之间。在一些方面中，TAxI转运肽包含氨基酸序列QSQSQMR(SEQ ID NO:603)、ASGAQAR(SEQ ID NO:604)、PF或TSTAPHLRLRLTSR(SEQ IDNO:605)。任选地，TAxI转运肽还包含侧接序列以促进掺入递送构建体或载体，例如接头中。在一个方面中，肽侧接半胱氨酸。在一些方面中，TAxI转运肽还包含经选择以促进递送至细胞核中的另外序列。例如，促进核递送的肽是核定位信号(NLS)。通常，此信号由一些带正电荷的赖氨酸或精氨酸的短序列组成，如PPKKRKV(SEQ ID NO:606)。在一个方面中，NLS具有氨基酸序列PKKRKV(SEQ ID NO:607)。
在一些方面中，本公开的向性部分包含具有选自SEQ ID NO:608-627和它们的任何组合的序列的肽BBB穿梭(shuttle)。参见例如，Oller-Salvia等人(2016)Chem.Soc.Rev.45,4690-4707和Jafari等人(2019)Expert Opinion on Drug Delivery16:583-605，所述文献以引用的方式整体并入本文。
环肽(&)的命名法适用于Spengler等人Pept.Res.,2005,65,550–555描述的3字母氨基酸代码。[Dap]代表二氨基丙酸。
III.F.抗吞噬信号
身体的免疫系统清除所施用的EV(例如，外泌体)可降低施用的EV(例如，外泌体)疗法的功效。在一些方面中，EV(例如，外泌体)的表面经修饰以限制或阻断免疫系统的细胞(例如，巨噬细胞)对EV(例如，外泌体)的摄取。在一些方面中，EV(例如，外泌体)的表面经修饰以表达一种或多种抑制巨噬细胞摄取EV(例如，外泌体)的表面抗原。在一些方面中，表面抗原与EV(例如，外泌体)的外表面缔合。
可用于本公开中的表面抗原包括但不限于将细胞标记为“自身”细胞的抗原。在一些方面中，表面抗原包含抗吞噬信号。在一些方面中，抗吞噬信号选自CD47、CD24、它们的片段以及它们的任何组合。在某些方面中，抗吞噬信号包含CD24，例如人CD24。在一些方面中，抗吞噬信号包含CD24(例如人CD24)的片段。在某些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以在EV(例如，外泌体)的外表面上表达CD47或其片段。
如本文所用，CD47，也称为白细胞表面抗原CD47和整联蛋白相关蛋白(IAP)，是在体内的许多细胞上发现的跨膜蛋白。CD47通常被称为“别吃我”信号，因为它向免疫细胞、特别是骨髓细胞发出信号，表明表达CD47的特定细胞不是外来细胞。CD47是SIRPA的受体，与其结合可防止未成熟树突细胞成熟并抑制成熟树突细胞产生细胞因子。CD47与SIRPG的相互作用介导细胞-细胞粘附，增强超抗原依赖性T细胞介导的增殖并共同刺激T细胞活化。还已知CD47通过充当血小板上的THBS1的粘附受体而在细胞粘附中起作用，并且在整联蛋白的调节中起作用。CD47在海马的记忆形成和突触可塑性中也起着重要作用(由于相似性)。此外，CD47可在膜转运和/或整联蛋白依赖性信号转导中发挥作用，防止红细胞过早清除，并参与病毒感染后诱导的膜通透性变化。
在一些方面中，本文公开的EV(例如，外泌体)经修饰以在EV(例如，外泌体)的表面上表达人CD47。人CD47的规范氨基酸序列和各种已知同种型(UniProtKB-Q08722)在本文中提供为SEQ ID NO:629-632。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达包含SEQ IDNO:629中列出的氨基酸序列或其片段的多肽。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达包含SEQ ID NO:630中列出的氨基酸序列或其片段的多肽。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达包含SEQ ID NO:631中列出的氨基酸序列或其片段的多肽。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达包含SEQ ID NO:632中列出的氨基酸序列或其片段的多肽。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以在EV(例如，外泌体)的表面上表达全长CD47。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以在EV(例如，外泌体)的表面上表达CD47的片段，其中所述片段包含CD47(例如，人CD47)的细胞外结构域。保留阻断和/或抑制巨噬细胞的吞噬作用的能力的任何CD47片段都可用于本文公开的EV(例如，外泌体)中。在一些方面中，所述片段包含规范人CD47序列的氨基酸19至约141(例如，SEQ ID NO 629的氨基酸19-141)。在一些方面中，所述片段包含规范人CD47序列的氨基酸19至约135(例如，SEQ IDNO 629的氨基酸19-135)。在一些方面中，所述片段包含规范人CD47序列的氨基酸19至约130(例如，SEQ ID NO 629的氨基酸19-130)。在一些方面中，所述片段包含规范人CD47序列的氨基酸19至约125(例如，SEQ ID NO 629的氨基酸19-125)。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达与规范人CD47序列的氨基酸19至约141(例如，SEQ ID NO 629的氨基酸19-141)具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的多肽。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达与规范人CD47序列的氨基酸19至约135(例如，SEQ ID NO 629的氨基酸19-135)具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的多肽。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达与规范人CD47序列的氨基酸19至约130(例如，SEQ ID NO 629的氨基酸19-130)具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的多肽。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达与规范人CD47序列的氨基酸19至约125(例如，SEQ ID NO 629的氨基酸19-125)具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性的多肽。
在一些方面中，CD47或其片段经修饰以增加CD47及其配体SIRPα的亲和力。在一些方面中，CD47的片段包含Velcro-CD47(参见例如，Ho等人,JBC 290:12650-63(2015)，其以引用的方式整体并入本文)。在一些方面中，Velcro-CD47包含相对于野生型人CD47序列(SEQ ID NO:629)的C15S取代。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)包含在EV(例如，外泌体)的表面上以高于未修饰的EV(例如，外泌体)的水平表达的CD47或其片段。在一些方面中，CD47或其片段与支架蛋白融合。本文公开的任何支架蛋白均可用于在EV(例如，外泌体)的表面上表达CD47或其片段。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达与支架X蛋白的N末端融合的CD47片段。在一些方面中，EV(例如，外泌体)经修饰以表达与PTGFRN的N末端融合的CD47片段。
在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约20个分子、至少约30个分子、至少约40、至少约50、至少约75、至少约100、至少约125、至少约150、至少约200、至少约250、至少约300、至少约350、至少约400、至少约450、至少约500、至少约750或至少约1000个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约20个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约30个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约40个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约50个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约100个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约200个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约300个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约400个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约500个分子。在一些方面中，EV(例如，外泌体)在所述EV(例如，外泌体)的表面上包含CD47的至少约1000个分子。
在一些方面中，与不表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)相比，在EV(例如，外泌体)的表面上表达CD47或其片段使得骨髓细胞对所述EV(例如，外泌体)的摄取减少。在一些方面中，相对于骨髓细胞对不表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)的摄取，骨髓细胞对表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)的摄取减少至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约95％。
在一些方面中，与不表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)相比，在EV(例如，外泌体)的表面上表达CD47或其片段使得EV(例如，外泌体)至肝脏的定位降低。在一些方面中，相对于不表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)至肝脏的定位，表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)至肝脏的定位降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约95％。
在一些方面中，表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)的体内半衰期相对于不表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)的体内半衰期增加。在一些方面中，表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)的体内半衰期相对于不表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)的体内半衰期增加至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约4.5倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍或至少约10倍。
在一些方面中，相对于不表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)在循环(例如血浆)中的保留，表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)在循环(例如血浆)中具有增加的保留。在一些方面中，相对于不表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)在循环(例如血浆)中的保留，表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)在循环(例如血浆)中的保留增加至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约4.5倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍或至少约10倍。
在一些方面中，与不表达CD47或其片段的外泌体相比，表达CD47或其片段的EV(例如，外泌体)具有改变的生物分布。在一些方面中，改变的生物分布导致内皮细胞、T细胞中的摄取增加，或各种组织中的累积增加，所述组织包括但不限于骨骼肌、心肌、膈肌、肾脏、骨髓、中枢神经系统、肺、脑脊液(CSF)或它们的任何组合。
IV.药物组合物
本公开的一些方面涉及在有需要的受试者中治疗周围神经病例如CIPN的方法，包括向受试者施用包含EV的药物组合物，所述EV包含外源性NLRP3拮抗剂，如本文公开的。因此，本文提供了呈适合施用于受试者的形式的药物组合物，所述药物组合物包含具有所需纯度的本公开的EV(例如，外泌体)和药学上可接受的载体或赋形剂。药学上可接受的赋形剂或载体可部分地由所施用的特定组合物以及由用于施用组合物的特定方法决定。因此，存在多种多样的包含多个细胞外囊泡的药物组合物的合适制剂。(参见例如，Remington'sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.第21版(2005))。药物组合物通常被配制为无菌并且完全遵循美国食品与药品管理局的所有良好生产规范(GMP)条例。
在一些方面中，药物组合物包含一种或多种治疗剂和本文所述的外泌体。在某些方面中，EV(例如，外泌体)与一种或多种另外的治疗剂在药学上可接受的载体中共同施用。在一些方面中，用于本公开的ASO和一种或多种另外的治疗剂可在同一EV中施用。在其它方面中，用于本公开的ASO和一种或多种另外的治疗剂在不同的EV中施用。例如，本公开包括药物组合物，所述药物组合物包含含有ASO的EV和含有另外治疗剂的EV。在一些方面中，包含EV(例如，外泌体)的药物组合物在施用另外的治疗剂之前施用。在其它方面中，包含EV(例如，外泌体)的药物组合物在施用另外的治疗剂之后施用。在另外的方面中，包含EV(例如，外泌体)的药物组合物与另外的治疗剂同时施用。
可接受的载体、赋形剂或稳定剂在采用的剂量和浓度下对接受者(例如，动物或人)是无毒的，并且包括缓冲液如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物(包括葡萄糖、甘露糖或糊精)；螯合剂如EDTA；糖类如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
载体或稀释剂的实例包括但不限于水、盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和5％人血清白蛋白。此类介质和化合物用于药物活性物质的用途在本领域中众所周知。除非任何常规介质或化合物与本文所述的细胞外囊泡不相容，否则考虑其在组合物中的使用。还可将补充治疗剂掺入组合物中。通常，将药物组合物配制成可与其预期施用途径相容。EV(例如，外泌体)可通过胃肠外、局部、静脉内、经口、皮下、动脉内、皮内、经皮、经直肠、颅内、腹膜内、鼻内、瘤内、肌内途径施用或以吸入剂形式施用。在某些方面中，静脉内施用(例如，通过注射)包含外泌体的药物组合物。EV(例如，外泌体)可任选地与在预期所述EV(例如，外泌体)所要治疗的疾病、病症或疾患方面至少部分有效的其它治疗剂组合施用。
溶液或悬浮液可包含以下组分：诸如水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂的无菌稀释剂；诸如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯的抗菌化合物；诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠的抗氧化剂；诸如乙二胺四乙酸(EDTA)的螯合化合物；诸如乙酸酯、柠檬酸酯或磷酸酯的缓冲剂；以及诸如氯化钠或右旋糖的用于调整张力的化合物。可用诸如盐酸或氢氧化钠的酸或碱来调节pH。制剂可封闭在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。
适用于可注射用途的药物组合物包括无菌水溶液(如果是水溶性)或分散液和无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。组合物通常是无菌的并且具有达到容易注射的程度的流动性。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)以及它们的合适混合物的溶剂或分散介质。可例如通过使用诸如卵磷脂的包衣、通过在分散液的情况下维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。微生物作用的预防可通过各种抗细菌和抗真菌化合物(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等)来实现。如果需要，可向组合物中添加等渗化合物，例如，糖、多元醇如甘露醇、山梨糖醇和氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中包含延迟吸收的化合物(例如，单硬脂酸铝和明胶)来实现。
根据需要，可通过将有效量的EV(例如，外泌体)在合适的溶剂中与本文列举或本领域已知的一种或多种成分混合来制备无菌注射溶液。一般来说，通过将EV(例如，外泌体)掺入含有基础分散介质和任何所需其它成分的无菌媒介物中来制备分散体。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，此举产生活性成分加来自其前述无菌过滤溶液的任何另外所需成分的粉末。可将EV(例如，外泌体)以贮库注射或植入制剂的形式施用，所述制剂可以允许EV(例如，外泌体)的持续或脉冲释放的方式配制。
包含外泌体的组合物的全身性施用还可通过经粘膜方式来进行。对于经粘膜施用，在制剂中使用适合于渗透障壁的渗透剂。此类渗透剂在本领域中通常是已知的，并且对于经粘膜施用，包括例如清洁剂、胆汁盐和梭链孢酸衍生物。经粘膜施用可通过使用例如鼻喷剂来实现。
在某些方面中，将包含EV(例如，外泌体)的药物组合物静脉内施用于将从药物组合物受益的受试者中。在某些其它方面中，例如通过淋巴管内注射或通过结节内注射(参见例如，Senti等人,PNAS105(46):17908(2008))或通过肌内注射、通过皮下施用、通过瘤内注射、通过直接注射至胸腺中或至肝脏中来将组合物施用至淋巴系统。
在某些方面中，包含外泌体的药物组合物以液体悬浮液的形式施用。在某些方面中，药物组合物以能够在施用后形成贮库的制剂的形式施用。在某些优选的方面中，贮库将EV(例如，外泌体)缓慢地释放至循环中，或保持呈贮库形式。
通常，药学上可接受的组合物被高度纯化为不含污染物，具有生物相容性并且不具有毒性，并且适合于向受试者施用。如果水是载体的成分，则水经高度纯化并且被加工为不含例如内毒素的污染物。
药学上可接受的载体可以是乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯啶酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、苯甲酸甲基羟酯、苯甲酸丙基羟酯、滑石、硬脂酸镁和/或矿物油，但不限于此。药物组合物还可包含润滑剂、润湿剂、甜味剂、香味增强剂、乳化剂、悬浮剂和/或防腐剂。
在一些方面中，本文所述的药物组合物包含药学上可接受的盐。在一些方面中，药学上可接受的盐包括钠盐、钾盐、铵盐或它们的任何组合。
本文所述的药物组合物包含本文所述的EV(例如，外泌体)和任选地另外的药物活性剂或治疗剂。另外的治疗剂可以是生物剂、小分子剂或核酸剂。在一些方面中，另外的治疗剂是另外的NLRP3拮抗剂。在一些方面中，NLRP3拮抗剂是本文公开的任何NLRP3拮抗剂。在一些方面中，另外的NLRP3拮抗剂是抗NLRP3抗体。在一些方面中，另外的NLRP3拮抗剂是小分子。在一些方面中，另外的NLRP3拮抗剂是本文公开的小分子。在一些方面中，另外的NLRP3拮抗剂选自MCC950、曲尼司特、冬凌草甲素、CY-09、Bay 11-7082、小白菊内酯、3,4-亚甲基二氧基-β-硝基苯乙烯(MNB)、β-羟基丁酸酯(BHB)、二甲基亚砜(DMSO)、I型干扰素以及它们的任何组合。在一些方面中，另外的NLRP3拮抗剂包含下式：
在一些方面中，另外的NLRP3拮抗剂包含MCC950。
在一些方面中，另外的NLRP3拮抗剂包含ASO。在一些方面中，另外的NLRP3拮抗剂包含本文所述的任何ASO。
提供了包含药物组合物的剂型，所述药物组合物包含本文所述的EV(例如，外泌体)。在一些方面中，剂型被配制为液体悬浮液以用于静脉内注射。在一些方面中，剂型被配制为液体悬浮液以用于瘤内注射。
在某些方面中，使外泌体制剂经受例如X射线、γ射线、β粒子、α粒子、中子、质子、元素核、UV射线的放射以便损坏残余具有复制能力的核酸。
在某些方面中，使用超过1、5、10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100或超过100kGy的照射剂量使外泌体制剂经受γ照射。
在某些方面中，使用超过0.1、0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000或超过10000mSv的照射剂量使外泌体制剂经受X射线照射。
V.药盒
本文还提供了试剂盒，其包含本文所述的一种或多种外泌体以及根据本文公开的方法将一种或多种外泌体施用于受试者(例如，患有周围神经病，例如CIPN)的说明书。在一些方面中，本文提供了药物包或药盒，所述药物包或药盒包括填充有本文所述的药物组合物的一种或多种成分(如本文提供的一种或多种外泌体)的一个或多个容器，以及使用根据本文所公开的任何方法(例如，用于患有周围神经病(如CIPN)的受试者)的说明书。在一些方面中，药盒含有本文所述的药物组合物和任何预防剂或治疗剂，如本文所述的那些。在一些方面中，药盒用于治疗与周围神经病相关的疾病或疾患。在一些方面中，药盒用于治疗CIPN。在一些方面中，药盒是诊断试剂盒。
除非另外指出，否则本公开的实践将采用细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA以及免疫学的常规技术，所述技术处于本领域的技能之内。此类技术在文献中进行了充分解释。参见例如，Sambrook et al.,ed.(1989)MolecularCloning A Laboratory Manual(2nd ed.；Cold Spring Harbor Laboratory Press)；Sambrook et al.,ed.(1992)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,(Cold SpringsHarbor Laboratory,NY)；D.N.Glover ed.,(1985)DNA Cloning,Volumes I and II；Gait,ed.(1984)Oligonucleotide Synthesis；Mullis et al.U.S.Pat.No.4,683,195；Hamesand Higgins,eds.(1984)Nucleic Acid Hybridization；Hames and Higgins,eds.(1984)Transcription And Translation；Freshney(1987)Culture Of Animal Cells(AlanR.Liss,Inc.)；Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press)(1986)；Perbal(1984)APractical Guide To Molecular Cloning；the treatise,Methods In Enzymology(Academic Press,Inc.,N.Y.)；Miller and Calos eds.(1987)Gene Transfer VectorsFor Mammalian Cells,(Cold Spring Harbor Laboratory)；Wu et al.,eds.,Methods InEnzymology,Vols.154and 155；Mayer and Walker,eds.(1987)Immunochemical MethodsIn Cell And Molecular Biology(Academic Press,London)；Weir and Blackwell,eds.,(1986)Handbook Of Experimental Immunology,Volumes I-IV；Manipulating the MouseEmbryo,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,(1986)；)；Crooke,Antisense drug Technology:Principles,Strategies and Applications,2ndEd.CRC Press(2007)and in Ausubel et al.(1989)Current Protocols in MolecularBiology(John Wiley and Sons,Baltimore,Md.)。
以上引用的所有参考文献，以及本文引用的所有参考文献以引用的方式整体并入本文。
通过说明而不是通过限制的方式提供以下实例。
实例
实例1：CIPN小鼠模型中exoASONLRP3的体内分析
使用化疗诱导的周围神经病(CIPN)的小鼠模型来测试exoASONLRP3的体内功效。通过鞘内注射施用包含exoASONLRP3的外泌体(图2)。通过在第0-5和10-15天向小鼠施用顺铂来模拟CIPN，如图3A所示。给小鼠施用阴性对照(假；无顺铂)；顺铂和PBS；顺铂和MCC950(第15-20天)；顺铂和对照外泌体(无ASO；第15天)；顺铂和ASONLRP3(游离ASO；第15天)；顺铂和exoASONLRP3(第5天)；顺铂和exoASONLRP3(第15天)；或顺铂和加巴喷丁(第8天和第21天)；如所示(图3A-3B)。使用Von Frey测试来测量处理小鼠的疼痛。用顺铂随后用NLRP3抑制剂处理的小鼠表现出疼痛减轻，施用exoASONLRP3的小鼠表现出与未使用顺铂的小鼠相当的疼痛水平。
这些结果表明通过施用exoASONLRP3抑制NLRP3能够减轻与CIPN相关的疼痛。
以引用的方式并入
在本申请中引用的所有出版物、专利、专利申请和其它文件出于所有目的特此以引用的方式整体并入，其并入程度如同每个单独出版物、专利或专利申请或其它文件被单独地指示出于所有目的以引用的方式并入一般。
等效方案
虽然已经示出和描述了各个具体方面，但上述说明书不是限制性的。
应当理解，在不脱离一项或多项发明的精神和范围的情况下，可进行各种改变。通过阅读本说明书，许多变化对于本领域技术人员来说将变得显而易见。
序列表
<110> 隆萨销售股份有限公司
<120> 细胞外囊泡-NLRP3拮抗剂
<130> 4000.124PC01
<150> US 63/150,453
<151> 2021-02-17
<160> 636
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 32729
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NLRP3基因组序列
<400> 1
ttttttaaaa ttaagaaaag gaatcaattt aattaaatac caaaaagttt tacatattcc 60
tgaattttca accagctaca aaaagcatgg atttttctta ttagaaaaca aaactgttac 120
aaaaaattta aataaataaa tagctgccat aaaatttcaa cataatatat agtcaactag 180
ttctgtgtta tggtcagtta atagaaagat agcgggaatg atgatatgag caaaagtaaa 240
cagaacaaag aagaaaaaag ataggaaaaa gaaagttaga cagagaagag aaaaataaag 300
aaagtgcttt attgaatgag ctaattacat gaggtcacca agaggaacat cctctaactg 360
aggcgctgtg atgacaacaa cacccgatgc tgtcattgtc ctggtgtctt cctcaccctg 420
gcgtaaagga gatgcccaag ctctgcacag gaaggcatcg tcggcaagct ctcttctccg 480
acactccacc ggaaggatca cagagctgtg gtcttggcct ggatggatcg cagctctctc 540
cacctgaggg cccccagctg gagggaccgg agaacactgg cgtctggcag ccccgtttcc 600
actcctacca agaaggctca aagacgacgg tcagctcagg cttttcttct tgaagtgttt 660
ctaacgcact ttttgtctca taattgaaat acatttcaga caacctgtaa aagcaaatag 720
aaagcctggg ttgcactctt cagataactc tgtcagagtc gttaacctta aaagtctcat 780
ctcttcattt ccctaaactc cacacacttc taaaatgtaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 840
gagggaccac aactcccaga gtgctccgcg tcctcgccgc cgtcgccgcc gccgagacca 900
agatggccgc gagactccgc accttcttca agaatgcctg ggccaaggag ccggtgctcg 960
tcgtgtcctt cgtcactggg agcctcagac ccccaggacc ccagcctgga gtggctgaag 1020
aaactgtgag cacctccaat gacagaggag gcccctccca cggctcccaa taaaaatgtg 1080
gggaaaaaaa aaaaaaagct ctaagtgccc aatgtggttc ctgttatatt tttaactatc 1140
tagttgggaa aatgttaagc atacataaaa gtatagaaaa tagtataatg aaccccctgt 1200
gtccattacc caagttcgac aattaaacag gtcatgtcaa cttgtttctt ctattgccca 1260
cccactcctc ccacccatgg attattttaa atactgcatt taatgcatct atcaataatt 1320
cactttgtga cactaaaata taattacaat gtcactatca caccaaaatc gtttaacaat 1380
aatttcttag tatcactgta tgtccagtca gcatttacgc ttcctcaact gtcttgtaaa 1440
tttttttacc ttatgttcat ttagtcacta acctgatcaa ttctacacat tgcatttgcc 1500
caggatgcct ctcacatctt cgatgtaagt tcttcctcct ctttaataaa gtttcccttg 1560
caacttaact aataaatcca cccatttgtc ctgcaccatt tataaccatc tcaatttggt 1620
ggtgttatat actgaatgtt tgtcttcctt aacaattccc atgatgaagc ccgaacccct 1680
aatgtacggt acttaaaggt gaggcccttg ggaagtagtt agagttagat gaagttgtga 1740
gggtggggcc ctcagtatgg ggtgagtgcc cttacaggag agatatcaga gagtttgttc 1800
tttctcccct gtcttctctc ccttgcctcc cctccctcca tgcaatcaca taacaagaag 1860
gtagccatct gcaaatcagg aagaggactc tcgccagcaa ccaaattcat cagagacttg 1920
attttggact ttctagcctc cagtattgtg agataataaa tctgtgtttg agtcacacag 1980
tctaaagcag cttgttatcg cagcctgaga aaacgggttg attgcattca tggattcttc 2040
aatctatttt gagcctgtcc ctcagcctgg gtccagaatg tccctcaggg ctaggtcagt 2100
gatgctacat gtagcagtgt ccccagcttt gacctgacca atcctttgtt tgttccccca 2160
tctctcttag ctctgggaat attggcttgt cctgcagcaa atgtgctcca ttatgttggc 2220
acaaggatgc aaggctgatt caaacttgta tttattcaaa cctgcattcc aacaagttct 2280
cagccttgag atcattaata tggacagaag tccctggact aatggaattt atattttggg 2340
agcagagata gataataaat aaacaagaaa atgacatagc acataagatg tgctacactg 2400
cagaggagaa tgagaagaga agaaaaagtg cttctatttt cagtagaata gtcaaagaca 2460
gcctcgcaga gaagaccttt aagcagagaa tttaggaagg tacagggaat aatgcaggtg 2520
gatactgaag gggagagagt tctaggccag aagaaaagca agtgcaaaaa tccagagatg 2580
acagtgttct tgcaaaacag caaggagatc actgtactgg ggcagaataa gcaagggttg 2640
ggagaagcgg aatcttcgga agcaggagag gctggattat gtggggcatg gaagccacca 2700
tgagtttgtt gctctgatta tgaaagtgat aagaagacga tgttgacaag agtgatatga 2760
tgcgagttac gttttagctg aatcccttgt ctgctaaaat cagaataaca gatgcagggt 2820
gacctgtcag aatgccacca tgacaatcca gacaccaggt gatggtggct tgagccaagg 2880
aagaagccgt gaagctggcc tgaagtggtc agggagtggc caagctggga aggcagagct 2940
cacaggatgt gctgacacat tggacatgat tataaggaaa aagagacagt gacgacagaa 3000
ccagaaatgt tttggcccga gcaacttgga ggaagtgacc atcgactgaa atggggaaga 3060
atcaggtttc gggtagaaga gagtagcaag ggtgtggatc tagatgtgac gtttgagagg 3120
tttattaaac cttcaagaag aaagatcagc caagcacgga gacacagaat ttatggacat 3180
ataatctgga ggccacagca cacatatcat gaagccagaa gaccagataa tttaaatgag 3240
ggagaaagtg tagggaagaa aaattagccc agcgactaag ctctgaggat tcaacacata 3300
agggtcagga tgatgaagaa gaggccagaa aggagactga gtagaaggat ctgatgaaat 3360
aggagaaaac ccaggagagc atgttggcct taaagccaag cagtgaaaac gtcttcaggg 3420
aaaagtgcaa tcatcacggc tgacagaacc gtgggactcg ccaggaagct cttgctagag 3480
aggagacgac tacctcagta gtatcacaga ggtgggctgg caatatcctg acacactgtc 3540
gaatttcgtg taatttccca tcttgctatt cctggagcac tcttttccca tttagaaatc 3600
ctcagaaacc gccaggcacg gaggctcaca cctgtaatcc cagcacttgg ggaggccgag 3660
gcaggcagat cacgaggtca ggagatggag accatcctgg ctaacacagt gaaaccccaa 3720
ctctactaaa aatacaaaaa attagccggg tgtggtggca ggcgcctgtg gtcccagcta 3780
cttgggaggc cgaggcagga gaatggcgtg aacccgggag gcggagcttg cagtgagccg 3840
agatcatgcc actgcactcc agcctgggcg acagagcaag actctgtctc aaggaaaaaa 3900
aaaataaatc ctcagaaaca aaacaacaag atccccacta tgtaaagacc cttccaattt 3960
ggatgaccca tagacgagtt ctacgaagtt cggttccttg tgtagaacag aatcctcctt 4020
ggccatgatc gcatgagggc ttgtgtttct ttggggaatg tgggtgaaat ccagcttagc 4080
cttggtgatt ctaaccatct cagtgaagtg gaatgtgtag tttaacccca tattctctat 4140
tttaaaatat ccaccacaac tgacccaggc ccaacctaat cttgagtggc tgcaaatgaa 4200
gcgagagcca tcctggattt tgataacagt caacgtttcc tgagaactca gagtcccacc 4260
acgggcatct ctgcagagca cactcacccc aggttctgca ggaggcagct ctgctgtttc 4320
agcacttcac agaacatcat gacccccagg tcgcccaggt cattgttgcc caggctcagc 4380
tttcgcaggc tctggctgga ggtcagaagt gtggaaagat cccagcagca gtgtgacgtg 4440
aggttgcagt tgtctaatct gcaaaaaggg ggtgatttaa agaaaatgtc cccttaacca 4500
tccccctagc tccccaagat tttagcatct tagcctgtct tgtttcaggt ggaaaaaaaa 4560
aaagcacagg agcacaggac taactagctt caagcagcct tgtatgctgg taattattct 4620
tctctctctt tttcaaatcc actgcattgc acagatcaaa ttagtaacag tggtttgttc 4680
attgatttac caaattctgt gcctttccct acatttccat aaaatgtaag tgtcatactg 4740
ccctccttgt tttgtggtac agaaaactgt gatggtaagg actcaagttc ctacatctat 4800
atcatctgga aggactcctc ccagtcccat gatcctgtaa caaggcaaac actaagaaga 4860
cacctcactt ctaagataca gattatcttg tggccactct gcctaaacgt ccctccaccc 4920
ttggccacca tgtgttctca ttgctgtaat aaaccaaagg acttactcca acacctgaag 4980
cttgcagtcg gggtgcaaga gtccctcaca gagtagtttg atccccttgt ctccgagagt 5040
gttgcctcgc aggtaaaggt gcgtgagatt ctgattagtg ctgagtaccg aggacaaagc 5100
tgaacaacag actgacgtaa ggccagaatt caccaacctg tagaaggaca gggagaagag 5160
tcctcagtac ccagctgttc cccaacattg tgcagctgct ttgactcagt gcctcgtcct 5220
ctctcagcag ctgcagcctt cagctcagag agcaggagcc agcatctcag atatgatctg 5280
gggagagcaa gacctgctgt ctctggctgt cacaggagac acaaatgatg tctcagcaga 5340
tgctttgctg tatgagtccg acagaaagag ccaaggcaaa ctgagccagt taccccatac 5400
tcctcctcct cctcacacag ctttcctccg gccaggagtg ctcctcagca ccacttcttc 5460
cagaaacaca tcccagtggt tatcctcaac taataatccc cgtaacactg cagacaccca 5520
cactgcaggg gccttttttt ttttttttaa gagagacagg aaaaaaaaat cctcctcatg 5580
ggaagtcggt gctgatttaa acatcaaaga caacaggtga acgtccattg tgaccttcta 5640
agctgtagct agggctgtga caggaacacg gcggggccct tagcaattgc cacctcccgc 5700
cttcctgcgc ccccaaatgc ccctttcaca tctttctcgc tgcagccctc aaccacgttg 5760
gagaggtggg aggatcgctt gagtccagga agtcgaggct gcagtgagcc atgattgcgc 5820
tgccacactc tagcctgggt gacagagtga gaccctgcct aaataaataa ataaataagg 5880
ccaggtgcag tggcttatgc ctgtaatccc agcactttgg gaggtccagc actttgggag 5940
ggtggatcac gaggtcagga gttcaaaacc agcctggcca acatggtgaa agcccatctc 6000
tactaaaaat ataaaaatta gttagggtgg tggtgggcac ctgtaatccc agctacttgg 6060
gaggctgagg caggagaatt gcttgaacct gggaggcaga ggttgcagtg agccgagatt 6120
gccactgcac ttcaacctgg gcaacaaagt gagactctgt ctcaaaaata aataaataaa 6180
tagaaaaagc caggctcttg ctcagtcacc caggccaagt gcacagctca ctgcagtctt 6240
aaactcctgg gctcagacaa tccacccacc ttggcctccc aaagtgctgg gattacaggc 6300
atgagccact gtgcctgacc cagagaccag tcttatttga ttattatatc aacctggcaa 6360
ggaaggagtg cagctaaaac tattacatac attttacata ttagaaatct aaggcttata 6420
aaaattacat gtttctctca aggccacaga gcaggtgtgt ggtggggagg gatccagacc 6480
tggactttcc accttttagt ctcatcttct ccccactgcc ctttctgtcc acctctctct 6540
tccttctgca cagcaaaagg ccttttagag cataaaaccc caaaaatgca tcaatctcga 6600
tggaattaag agttttgatg tactattctt gagtcaaatt aagcccattc tatcacccag 6660
gaagagcata agagctctaa aatcactggt ggcgtaattc ctaggagcac agatgcttct 6720
attccatgaa gccaggaata gcgcaggtga ttgcctcctt cctgccagag tccttggcaa 6780
tggcatgttt tttaagctct ttggtgtcta cgaggcagga aaaatagaaa tacagaaaaa 6840
gtgtattcag acagtaaagc atgaacagat gaccagcagg aaaaagtgat tatccatcca 6900
ctggtttcta tcttcccaat taaggaagag tcaaactgaa aagacacagt aagtaagact 6960
aataggcaaa tgaagcccaa gagagacaga caaaaacaaa gcaagttttg agtggcttct 7020
actaagctct catccccggt aagaattcta tcagagggtt gttgttaatt aacatgcaga 7080
agggattagt agcattcctg gcaaaggcca gggacattct agtagaatgg ggatggtctt 7140
caaagaggaa aagagaaaat attttttaaa ttatgtaatt aaagttatgc aggctttacc 7200
actatttcca aaaaggagta gaatggatta ttcaacagat gtttggggag cactacacag 7260
tagtagtaga aattgcaaca gacggtgcag ttttgttaag aaaacgtcat atccaaattg 7320
tgaaaatgct ggtaactatt aagcaacggt tacactgaac acataataaa atgtttaaag 7380
aatcaaacaa ccatgtccca ccaaccaatc cttggattag aggaatgtga ttgacatctc 7440
gatttcaacc aatccaccta actgagctct acatttacca agcacggata tcttgccatg 7500
tactgtatta agttaattgg ttggggattt ttatttatta actacctgcc tatgtcacaa 7560
aactgtctca taatgaaaac tgaatcccag tgctttggga ggccaaggtg ggaggaccac 7620
ttgaggccag gagtttgaga ccagcctggg caacatagca agaccctgtc tctacataaa 7680
aaattttaaa cattttaaac attacccagg catggtagta cacacctgta gtcctagcta 7740
gtcagaaggc tgaggcagga agattgcttg agcccaggag agttcaaggc tacagtgagc 7800
tatgatccta ccactgcact ccagtctgag ccacagagca aaaccctgtc ttaaaaaaag 7860
aaaagaaaag aaaggaaaat aaggaaagga aaggggaaag ggaaaggggg gggggagggg 7920
aagggaaggg agaaagagaa agaaagaaag agagagagag agaaagaaag aaagaaagag 7980
aaaaagaaaa agagagaaag aaaggaggag gaggaagaag gaaggaagga aggaaggaat 8040
ctgaagaaga agatcaaaca ttttttgagt atttattgtg tgcttgacat ggatgacgac 8100
tttaaacagg gttatctcat tgaatgatca caacctcaag atgggaatgt tagttttatc 8160
cctgctttta aatggacaaa atgaggatca cagtaattaa aaaataagta ggagcttctt 8220
agatggatag tagaaagtgg gaaagtgggg gtaaccttcc aggcaaaagg aaaagagtag 8280
caagaataag gaagattaaa agaaccacca agatgtttca aaactaattc atagctgggc 8340
acagtgatgt ccacctatag tcccagctac ttgggcggct gagacgggag gattgcttga 8400
gcccaggagt gcagatgaga tcaggcactc tgggtggtat ggctgtagat gaacccagga 8460
attcaaattc agcctgagca tcatagcaag tccccatctc taaaacagca aaacaaaact 8520
catccaatat gactcaaaat ggagtgcaag gtatggcagg agagagggca gtatcaggga 8580
cagccttgtg tgccaagcta agatgtcact ctgactgcag agaagaactt ttgaagattt 8640
ttgaacaaag ggtcaatatt ttcaaatttg catcttaaaa agttccctct ggtgtagtga 8700
tgagtggtag agggaaccga aagcagagca tttaggaccg tcccccgttt actcactcag 8760
cagcctcctg gaaagcccca ctattcaatg aggcaggagg aagagggcag gagcaggtca 8820
gagaacgggg gtggaaggtg gggtatgata attaaaccaa tgttgcaaat gctcagcatg 8880
tgtgaccctt gagcagtatt gagacaggca gtacacaata tgcagccaga gatgaggacc 8940
caaagttcga gagaaaaaaa tgtagctata cctaacacat aggctatacc taacacatag 9000
gctataccta acacgtaggc tatacctaac ccataggcta tacctaacac acaggctatg 9060
cctaacccat aggctatacc taacacacag ccacatgtat ggctgtacct aacacataaa 9120
atgcataaaa gtctcgactg attaatgcca cttatagata cctatctcaa agcaaataca 9180
catgcataaa actatatata caaatgtgct ttttgcagag ttgtttgtaa tagtggaaaa 9240
gaacagttat cccaaaatgc atgatttgat taaataaatt atggtaaagc acactatggg 9300
atattatgcc ccaatcgata gatctacaca aatcagcatg gaaatttatc catgataaat 9360
gaaaaaagga tatcacagaa aaatatttat attatggttc tagtttcaat agatagggtg 9420
ttatggattg aattgtttcc tctaagactt tatatgtgga agtcctaggc cccagtactt 9480
cagattgtga ccttatttgg tgatacggtt actgaaaatg taattagtta agatcaggtc 9540
gttacaaatc taacatgact tgtgttcttt cacagggaaa cttgggacat ggagaaagac 9600
acacacagac acagggaaga caccacgtag agataaaggc aatggtgtgg cagaggcatc 9660
tacaggtcaa ggaatggcaa aatgtgtcag caagatgaca ttccaccaga agccaaagag 9720
aagcatgaac agattcccca cagccctcag aaggacccag cctgctagca tcttaatctc 9780
acacttctgg cctccagaac tgagggacaa taaatttctg ttgtttaagc tgctctgttt 9840
gtgatacttt attacagtag ctctaacaga ctaggcattt aaaatactac ataacaatgt 9900
attacaaatg caacatgaaa atcacatagg tcttcattca cattactgat ataaatacca 9960
cccagatcag catatacagg aaatccattt gtccataatt agcaaccaat atatgttcac 10020
aaagctctga tactcccttg gatggattga tggatggatg gatggatgga tggatggatg 10080
gatggatgga ttgacggatg gaaaatagag ggatggatga tggatggatg gatggatgga 10140
cagatgaatg gattatataa caatctattg tattaaaaaa agtctggatg gttgttcatc 10200
agactattgt aaatggctct ctcagaagag ggctgagaag gagctttcac tttccacttt 10260
gtctgtacta tgatatgttt acaccaagca tgtgttactt ttctaataaa aagtttgtga 10320
atgatatctg ggtttgagac ctactgttgt tgaaattgag aggtatatga gaattctcag 10380
ggagtttaga aatatttagt aacaacaaca acaaaaaagg taaaccaggc gggtgtgtgg 10440
ctcacgcctg taatcccaac actttgggag gccaaggcag gcagatcacc tgaggtcaga 10500
aattcgagac cagcctggca aacatggtga aaccccgtat ctactaaaaa tacaaaaatt 10560
agccaggcat ggcagtgcac acctgtagtc cctgctactc agaaggctga ggcagaagaa 10620
ttgttggaac ccgggaggca gaggttgcag tgagccaaga ttgcgccact gcattttagc 10680
ctgggtgaca gagtaagact ccaactcaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa cacaactaaa 10740
ccagtcgtga aatccccaga ccacaggaag agaagccaat gcaggatcca gggaggggga 10800
agctataaca ttagcaggaa agactaagta gtgacctaaa aataagagcg aagaaggctt 10860
ccaaagagga agagtgaaat gaattaaagg cagcagatgt caactaaagt aaggactggg 10920
aaggacctgt acgacctata aggacccagc ctgctgatgc ctcagtctca gactttggcc 10980
tcctgaactg agaggcaata aactcttgtt gtttaggccg ctctgtttgt gatactttat 11040
tacagcagct ctaccaggtt aggtattgac aatagtaact acatagagca tattacagat 11100
gcatcaggca catttgtaat tggcttgttt gtcatgtgga atttggaacc aggatcactg 11160
agagtcacct gagtgcctac gcctgggcct cttcggttcc atctgctttg cctggagggc 11220
tcttccggct ccttcacagc ccatcccacg cttcactgag cacctgctcc aatgtcaccc 11280
gctcggagag gcactcgcca aacgtgagca gagaagcacc cctcgccgtc actccagttt 11340
ttcttatagc tcttatacac agggtatatt gtttagcatg tctattatct gttatcactt 11400
ccctaaaaga acggttgtga aaacaggatt ttggtctgtt ttactcactg ctgctgtcag 11460
tgcccaccac agagccccca gagggcctgc aaaatgaagg gacaaaatca tgtctgttga 11520
acaaacttag agaagcagaa gtcaaattgc caaggaagag taatattcta aggcgatttg 11580
ctaaggaagg gtaataccct aaggcgagga aatgaaggca ctgcaggaag acttcataga 11640
aagagatatg gtcacatctg aggattggct gatgggagag gtccaaggaa gtatcagagc 11700
tttgtgaaca gaggttggtt gttaattatg gattagtgga ttactcctct gggaagacct 11760
ttcctgccaa attttgtctt gaatgctgat ctggctggta tatatattaa taatgtgaat 11820
gaatgaagac ctatccaatt tgcttattgt atttgtagat attattgtca gaatgaagat 11880
tcaaaactgc ctagtcaatg ggtcaaaaga caggtaagat gaggtttagc aaagctaaat 11940
tggaggtccc acccttaagc tgagagccag atgaagaagc cctgtagaga gcccattagc 12000
aacatctcct aaggcaatgc actgggaatt aaggcagtgg cttgggaggt cacagacgtt 12060
tgtctacact gagttccact accttctctc tgagtgtcct tggacaaagt tatgaggctc 12120
cctgaatttt attttctcct ctttaaattg gagacacaga taccctaccc tatagcatct 12180
ttctgaagcc aactgagaaa atccatgtaa gaacatgaaa gagcaggtga tacagggaaa 12240
gtgatacagg aaagtggtac agggaaagtg catgattatt agtgggtatt ccctactact 12300
gtttactgca gaattccaac atgaatcaaa aggcttatgt aactgccaaa aaaaacaagg 12360
aaatcagaga ttccaccagt gaaaccatag ttctctgcaa caggaggtaa aacatccacc 12420
atgcatcatc aggtctgggc accacatttc aaagacagac actaacaaac cagcctgtgt 12480
acctgggaga gcatggctac ataggtgaag gtgctgagcc atgacactgt tgaggatata 12540
gaggctgcag tgtaagagtc ctctcctagt gtagaggctg cagggtgaga gctctttcct 12600
agtgtagagg ctgcatgcac tatgcgataa cttgcatgct tgcaagcatg cacacataaa 12660
atgggtgact attcatgtga gtgtcttgga agcaagtttt tccctcaaca ggcaattggg 12720
ctgcaccatc tctaaggttt cttccaacac taagaaactc tagttctata atcataaatt 12780
agcataaatt atcttattag cagcagtata cattatatgc ctccagtcct tcaaagcatt 12840
tctgatgttt ttacctcctt actctacctt cagctctgcc tgaccaaagt aacccccatc 12900
cacattttcc aaataattca cctctgaaaa gaagttactt ttctggtaag acacccatga 12960
agacttaccc cagtttctgc aggttacact gtggattctt ggctttttca cataaaattg 13020
cgactcctga gtctcccaag gcattctccc ccacatagag tctggtcagg gaatggctgg 13080
tgctcaatac tgatgcaaga tcctgacaac atgctgatgt gaggcagcag ctgaccaacc 13140
ttccatagag atggcagaat gtcagtcatg tctctcaccc acgctccacc atggacaagg 13200
aagcacccgt acctgccact gcctctactc cagtttacac atggaaaggg agtggacaca 13260
agctctatgt acacttctga tttccttttc catttggtgg aataacaagt aagcattctc 13320
caagctccca ccaatactac atcttcccag ctccctacat tcagctttat tgtggtaaaa 13380
tacgtgtaaa ataaaattta ccattttaac catttttaag tgcacaatta atggccttaa 13440
gcacttcaca ttgttgtgca accatcacca ccaccatctc cagaactcct ttcatcttgc 13500
agaactgaaa ctccataacc attaaacaat gtcttcccac tctccgccct cccattgcct 13560
gcaaccacgt ttcttcctgt ctctatgaat ctgtctgttc tagacacctc ctataaggac 13620
aatcagagta tttgcccttt cgagtctagc ttatcttact tagcataatg tccccgaggc 13680
tcatccatgt tgtagtgtgt actagaattc tttttaaagc tgaatgtaca tatatagcac 13740
ttttcaacac ccttcatccg ttgaaggacg tttggttatt tccacctttt ggctatttct 13800
aatagtgttg ctatggacat agatgtacaa ataacatgtt tgagttcctg ccttctgttt 13860
tttttaatgc ttcctctgtc acccaggcgg gagtacagtg acgggatctt gactcactgc 13920
aacccccgcc tcccaggttc aaaagattct cttgcctcca ccccgagtaa ctgggattac 13980
aggcatgcac caccatgcct ggctaatttt tgtattttta gtagagacaa ggttttacta 14040
tgatggccag gctagtctcg aactcccgac ctccagtgat ccacctgcct cagcctccca 14100
aaatgctggg attacaggtg tgagccaccg ctcctggctg agttcctgct ttgaactctt 14160
ttgcagatat acccagcagt ggaaatgctg gctccagtag taattctgta tttatttttt 14220
aggaattgct gtgctgtttt ccatagtggc tgcatcattt acattcccac cagcaacaca 14280
caatggcttc catttctccg cacccacacc aatacttgtt gttttctagt tttcttgctt 14340
ttgtttgata atagccatcc taatgggtga gaaatggccc ttccattttt aagtggtttt 14400
ttctctcctt caaaatgcaa gtctcccaga agcactcagg gaagggctgc atacaacatc 14460
gagggtctgc attgctttag caccattttt cttatacaat atgaggaccc agggcttgtc 14520
atgaagttct aaaactcctc taaagcaatg cattacactg attttttctt tttgtcagct 14580
aggcagtagg caccctaaag gcagacatct tctttttgtt attatttatg ctccttgtca 14640
gggttgagtg tgtggctttc cccacgacaa acactcactg accgcaatgc tagacacccc 14700
aagacaagca cacgcagtca cccgagccgc caaggccatt ctcactcaaa ccccagccca 14760
ccgggcctca ctgaagccag agtgcgcagc acgcctcgct ggcagaactt ccttagggga 14820
acgggctcga ctcaccagag cttcttcaga ttgcacaaca ggtgcttcag tcccacacac 14880
agaagtctga ttccgaagtc accgagggcg ttgtcactca ggtccagctc caccagcttc 14940
tggttgctgc tgaggaccaa ggagatgtcg aagcagcact catgcgagag gccacagcgc 15000
cccaaccttc atgccaagaa cagaggcaga aagcatcaga acacacctga ccagagagct 15060
ccagaacaga ggaagcatca ggacacacct gatcaggaag ctccggaata gagaaagcat 15120
cagaacacat ctgatcagag agctccggaa tacagaaagc atcagaacac acctgaccag 15180
agagctccgg aatagagaaa gcatcagaac acatctgacc agagagctcc agaatagaga 15240
aagcatcagg acacacctga caagagagct ctggaataga gaaagcatca ggacacacct 15300
gaccagagag ctctggaata gagaatgcat caggacacac ctgaccagag agctccggaa 15360
tagagaaagc atcaggacac acctgaccag agagctccgg aatagagaaa gcatcaggac 15420
acacctgacc agagagctct ggaatagaga aagcatcagg acacacctga ccagagagct 15480
ctggaataga gaaagcatca gaatacacct gaccagagag ctccggaata cagcacaagg 15540
cacattggga ggtcagcccc cagtctcccc agtcacagca gagggatcac ctgtcagtga 15600
actcccggcc gtaaacagtg ccgggtgcat tgagatcacc ccccagacat gtgaatggtg 15660
cgctcctggt ttgtaagtga agcgggcggt gtgggcctgt gcacccacct ccttccctcg 15720
tgttcctaac cattgacgtg cccgcagtcg gcactgccct cgccagtgct gcactcagct 15780
atttcttgtc ttcaccaaca ttgtcacccc attgtgtttg acgatttcat cccagccctc 15840
catctatatt gaaaggaaaa gcagctctga ttctttttct tttcttttct tttctttttt 15900
taaagacagg gtctcacttt gttgcacagg ctggagtgca ctggcgagat catagctcac 15960
tgccacctcg aactcctggg ctcaagggat ccacctgcct cagcctccca agtggctgca 16020
aatacaggca tgtgctacca tgcttagcca ttttatttta tttatatttt atttttatta 16080
ttattattat cttctaaaga caaggtctca ccagcttgct caggctggtt ttgaactcct 16140
gggctcaggt gatctgccca cctcagcctc tcaaagtgct gggattccac atcccgctgc 16200
agctctgatt cttgattagt ttccccgtca cacacatgca cacaaacaca cacgcacatc 16260
actaccaccg tcaccaccac caccagcaac aaaaactata ctttatccct gtcatggggg 16320
caagaacaac attctagctt ctttccaggg caatagttca taggtcctgg agcctgttag 16380
accaccttcc tttctgtccc tatccttaca ccaacttcaa gcaaatggac aaatggatct 16440
ctacttctct gcgaagcatc tcactgtccc ctacccttcc ctgtttgtgt ctgcctctcc 16500
agaatcatac aggggcaatg gcagtgggga gagaatttgg gcatgaagtt ggagaaataa 16560
ggttaaatgt cccaaacaac cagtctccat ggcactacga tttgaaattt accaaaagag 16620
caaagatgaa gagtgtgatc tatatacata atggaatact gctcagccat agaaaagaat 16680
gaagtcacat ctttgaagcc acacagatgg aactggaggc cattacctta agtgaaacaa 16740
ctcagaaaca gagtcaaata ccacacgttc tcacttacaa gtgggagcta aacaaagggt 16800
aacatccata gagcatggaa tgatagacac tagagcctca gaagggtggg agggtgggag 16860
ccaggtgagg gctggaaaat tatttattgg gtacaatgtt cactatttgg gtaagagtta 16920
cactaaggcc gggcacggtg gctcacgcct gtaatcccag cactttggga ggccgaggcg 16980
ggtggatcac gaggtcagga gtttgagacc agcctagcca atacggtgaa accttgtccc 17040
tactaaaaat acaaaaatca gctgggcgtg gtggcccatg cctgtaatcc caactactcg 17100
aagaattgct tgaacccagg aggtggatgt tgcagtgagc cgagatcact ccactgtact 17160
ccagcctggg caacacggcg agagtccatc tcaaaaaaaa aggggtagtt acagtaaaag 17220
cccagacact accactgtgc agtaacatat ccatgaaaca aagctgctct tgcgccccct 17280
acatctacaa aaataaatac ataaagtaaa aaataaagag cagagcagac agaaagcatt 17340
taagccaccg aacagcacaa tcgaatcaga attttctaaa ggaccatctt acttttgtgc 17400
agagaatggt cgggtgaggg aaaaaggcag acacagggag accaaagagc caacattcat 17460
tcagtgcgtg cttttgacca ctgatgggta ctaagatgtc tgtccaggcg tggcaaagat 17520
gacagcaaga caaacaaacg caaaccccat ccccggggag ctgatggtct aggaggtcac 17580
tgcgtgtcca ggcaagtggt gacagttgct ggacctgggc tggtggggtg aggacgagga 17640
aaagtggaaa acagctcggg taggaggaaa aattgataag actggtgaca aggtgagtgt 17700
gttgagccgg agagggaggt agcaaaatgt cctagagtgg cggactttaa cacttgctgt 17760
gcagctcctc aaaaatgcag acgcctgcat gcgtccacag agcagggaat gaaacagagc 17820
tagtgaggcg gcccaggcac cagcgcggtg gggcgtgtga atctgattca tggtgtggga 17880
gaaagcaagc acatttttta ttattattat tattattatt attttgaaat ggaatctcgc 17940
tctgtcaccc aggctggagt gcaatggcac gatctcggct cactgccatc tccgcctccc 18000
gggtacacac agttctcctg cctcagcctc ccgagtagct gggactacag gtgtgagcaa 18060
gcacattatt aataaagtca caggagattc cctgtgacat ttcaacccat acaaagcatt 18120
ctgaccaggc tgggcaacgt gatgagacca catctctaca aaaaaaatac aaaaattagc 18180
cagcatggtg gtgcatgcct gtagtcccag ctactcgggg gagctgaggt gggaggattg 18240
cttgagcctg ggaggtcgag gctgcagtaa gctgtgatca cacactccag cctgggtgac 18300
agagagaggt cctgtctcaa agaaaaaaaa aaaaagtatt ttcatagttt ttaggtgagg 18360
ttgccattgt tgtaaatggc aaattctcca actctcatct atgaacatgg cccatgagga 18420
aatggaatat atcgagcatc atggttgttt caagaaatga cttttttttt agttcctcat 18480
tcattcttcc ccacacaaaa cttccccagc tggcctccaa cccattctac cttctcactt 18540
gttctgggct gaactgtgcc cccccaaaaa tttacatgtt gaagccctaa tcctcaagac 18600
ctcataatgt ggctgttttg ggaaatgggg tctttaaagg agtgactaga ttaacattag 18660
gtcttgtgta gtcatgcctg actgtgccta atccatcagg actgctgtcc ctgtaagaag 18720
aggagactag gccactcttc cccccaaggc aagatggcat cagtacacag ggagaagggg 18780
gcatctacaa accaaggagg gcggcctcag aagaaaccaa ccctgctgac accttgatct 18840
tagactttcg gcctcagaac tgcaagaaaa tgaatttttg ttgttgaagc cattcagtct 18900
gtggcacttt gttacagcag aaaccacacc accggccggg tgcggtggct catgcctgta 18960
atcccagcat tttgggaggc cgaggcgggc ggatcacctg aggtcaggac ttcgagacta 19020
gcctggacaa catgatgaaa ccccatctct actaaaaata caaaaaatta gctgggtatg 19080
gtggtgggtg cctgtaatcc cagctactca ggaggctgag gcaggagaat cacttgaacc 19140
caggaggcag agattgcagt gagccgaggt cacggcattg cactccagcc tgggcaataa 19200
gagcaaaact ctgcctcaaa aaaagaaaaa aagaaaaaga aaagaaagaa accacaccag 19260
caacctggtc ctgaagatct ttctccagtc tgtttctctc tctctctctc atatgaactt 19320
gcactcacac agatcacatg cacggggact caccacaatc tccgaatgtt acagccagga 19380
tgctggagcg tttcacacaa cactctcatc cctgggtccc ccagagaatt gtcactgagg 19440
tccaattcag ttagactctg gctggtgctc agaactgaaa agaggccccg gcaaaaactg 19500
gaagtgaggt ggctgttcac caatctagga attagaagga agacagacag aaaagaaatc 19560
agcctcgaat aataactaac tggagctggg ggccggggtg cctggcacca gttcagagaa 19620
atgccttccg gggattaaga aatgggtcac gaaaccaaaa attgttccca gagaaatgaa 19680
gagggctgga tgagccttgg taaaagcagt tctgcctcct ctcggacgga gagcatgagc 19740
ctgtgactgt ggcggactgt ggcaccctac agcctgctcc ccagtgtcct cctctcgccc 19800
ttaccagtcc actgtcccaa catggccctg aacgttctgt gctgggtgat cagagggcag 19860
tcctcactcc tggctacaca acagcatcag gagtgctcac aaaaatcctc aggccaggct 19920
gggcatggtg gctcacacct gtaatcccag cactttggga ggccgaggcg ggcagatcac 19980
ctgaggtcag gagttcaaga tcagcctggc caacatggtg aaaccctctc tctactaaaa 20040
atacaaaaat taattgggtg tggtggcacg agcctgtcat cccagctatt agggaggctg 20100
aggcaggaga atcacttgaa cctgggaggt ggaagttgca gtgagccaag atcatgccac 20160
agcactccag cctgggcaac agagcaagac ttcatctcaa aaaaaaaaaa aagaaaaaga 20220
aaatcgcaag cccaggccac atccatggaa ataaaatcag aagctctgag gtggaactag 20280
atgaattttt taaatttttt ttcagatgaa acccaagctg gaatgcagtg ccatgatcat 20340
agctcactgc agcctcaaac tcctgggctc aagcaatcct cttgcctcag cctcccgagt 20400
agctgaggtt acaggcacga gtcactgtgt ccagctatat ggatcttttt tatttaaaaa 20460
aagccaggtg gctccaacat gcagtcacat ttttgctttt gtttttctgt agagaggtgc 20520
tctcactttg ctgctcaggt aggacttgaa ttcctggctt caagcaatcc ccccatcttg 20580
gcctcccaaa acctaggatt acaggcaaga gccactgcac ccacacatgc agtcaccttt 20640
gaatcacctg tagctctcat tcaaatgcaa agtctagctc tctaggtcta agattgggtc 20700
cacaatcctg catttctaat agatgctcag gcttctggtt ctcagaaggg actggaacat 20760
acaaagcaag ctcctgccct cagagtaagg cagctgccat ctagaaagat gggtgctgag 20820
ccccctacca gggctccagt cagagtctgt cctcagagta aggcaggtgc catctagagg 20880
gatgggtgct gagcccccta ccagggctcc cgtcagagtc tgtcctcaga gtaaggcagg 20940
tgccatctag agggatgggt gctgagcccc ctaccagggt tccagtcaga gtctgtcctg 21000
aggaaggaag gtgctatcta gagaaatggg tgctgagcct cctaccgggg cttcagtgag 21060
agtctgtcct cagaggaagg aaggtgctat ctagagaaat gggtgctgag ccccctgcca 21120
gggctccaat cagagtctgt cctcagagga aggaaggtgc tatctagaga aatggttgct 21180
gagcctccta ccggggcttc agtgagagtc tgtcctcaga gtaaggcagg tgccatctag 21240
agggatgggt gctgagcccc ctgccagggc tccaatcaga gtctgtcctc agaggaagga 21300
aggtgctatc tagagaaatg ggtgctgagc ctcctaccgg ggcttcagtg agagtctgtc 21360
ctcagaggaa ggaaggtgct atctagagaa atgggtgctg agccccctgc cagggctcca 21420
atcagagtct gtcctcagag gaaggaaggt gctatctaga gaaatgggtg ctgagcctcc 21480
taccggggct tcagtgagag tctgtcctca gagtaaggca ggtgccatct agagggatgg 21540
gtgctgagcc ccctaccagg gctccagtca gaatctgtcc tcagaggaag gaaggtgcta 21600
tctagagaaa tgggtgctga gcctcctacc ggggcttcag tgagagtgtg caaaccttcc 21660
tcacagatgt gtgatcttca taaggtctcc ctgccctctc caccttccac ctcactctta 21720
atgagtagtt ctgcctactt ttctctctgt cttactcttc ttctcccatt tctatggtct 21780
gaatgtttgt gtgccccaaa atccatacgc tgaaatccta accctcaaca tgacgtatca 21840
ggcgatgggg cctttgaggt gtggttaagt tatgagggtg gagccctcag gagtgggatt 21900
gctgtcctta ggaaagggac cccagagagc tgccttgcct cttcaccatg taaggacaca 21960
gtgagaaggc accatcgacc agggaacagg ccctcaccaa acaccagatc tgccagagcc 22020
tggatcatgg acttcccagc ctccagaacc gtaaggtgaa ccttcctttt gcttataagc 22080
caaccagcct gcagtgtttt gttatggcaa cctgatgaat gaagacaact gtcttttttc 22140
cagtcactcg gaactgtttg ctgccgtaga aaccgtaccc tgctttccca cacctgccct 22200
ctctctcaac accgtaagcc cccagcctgg ctgccccttt ccttctctca ctctctcact 22260
gcccatcctc cggaagctgg ctgagcgggg acacccaccc gtgccccgct ggtgaacagg 22320
ttcgtcccct tgtgctttgg atactctgca agtttccttg tcagagccca tgaccccctc 22380
cccgacatct gcacttgttt ccggactgtc ccacagccag acctcaagtc cctgtgacca 22440
ggacctgggt cttcaccacc actgcggccc tgtgggcagt cagtccttca tggccaaacc 22500
atgactagga aggtggtcct ggtcatggta atgtcaacgg atcaagaaag ctgaaactca 22560
ttgttgcctg tggaagggcc aagcctcctg tttcccttaa ttttgcccca cgtcaagtgt 22620
cttctatcca ggctaaactc acacatcaca gggtggccac cttcctacaa ccactgtggg 22680
tggtccttct gcaggaggca ctgaacgata aacccaaaag ggactcagaa gtcaggtgac 22740
tcaaccactt cattgcacag acttggccac tagcttccaa ccacccagca agtgtgtgaa 22800
cagacccgaa aacggggttt tggcaatgcc cagtgcagag caacatgggg gcctagaaag 22860
agggtctcca catttctgct ctatttccct tgatttacct tcatcatgtt tttttccaag 22920
gaaactgtgt ctctctccac tgtcacctgc acacactttt tctcagactg cattcatgat 22980
ttggctcata ccagtcttca gtgcagaatt cctttaattt cttctctatg cgcccaggtc 23040
ccaccattcc ttaaaggagg cttagattgc acatttctaa gaaacatccc cccagcctcc 23100
agctctgagg ccctctgtcc cctcgctcct gggacacaga ctctctggca ttgttctgcc 23160
ccacagacat tgactgactc ttaggcacta gtgctccaag tagcttacaa gaaatttcag 23220
ttgacaaata tttgtaggca atcctacatc ctacttaata ccttgtgcta aactggcatt 23280
ccccaaacat ttgttccttg ttttattttt tttttcctca tcccatttat ccacctacca 23340
tacatcaatc tttgctcatg aaggagtctc aaacagacag tggtggcatt atgatgtagc 23400
tgtggcaaca gtatttggaa gatagttgaa aagagatgag aggaggcaag cgccaagaag 23460
aagctggcga ggaagcagga ggaagcacct ggaagccgag tttccttacc catgagaaca 23520
ggcagcatga gaggagcttg ggaggacaca ctgcaccata tcaaggtgtc ggccttcctt 23580
ttcctcctcc tcttcctcct tgggcatgtt atggagaaac cccagggaca gtgactccac 23640
ccgatgacag ttctcaatgc aaaaggaaga aaccatgtgg tccattctgg tggagagatt 23700
gatctcaatc ttggggaaat agtccatggc cctttgcacg aagtcctcct cctgcatctc 23760
gtacaaacag tagaacaatt ccagctggct gggctggatc tgcagctttt tagctttggc 23820
tttcacttca atccatttca gcagctccag cctgatttgc tgagagatct tgcaacttaa 23880
tttcttctcc aagtaggagg tcctctcctg gtttaccagg ccaaagagga aacgtacaac 23940
aaaaatcaaa tacccctttt cgaatttgcc atagttttcc agaaggactg tcacgtctcg 24000
gctgggaagc ttcaaacgac tccctggaac gttcgtcctt ccttcctttt cctcttccag 24060
caggtagtac atggcggcaa agaactcctg gaaagtcatg tggatgaagc tgtagaactt 24120
ctcgcagtcc acttcctttt ggaacaggtt catcctcagg aaagcagaca catccgcctt 24180
ctgcagtcca tgattcctga ggtcggactc ctcaaacagg attttctggt tccagattcc 24240
atctgcagcc aaagagcaga gcccccagag gtgggcgcag aggccgtgct cctggctccc 24300
tccccggggc tgcagcaaac tggaaaggaa gaagacgtac accgcggtgg tggtcttgga 24360
tgtctgggca aggctcttgc cactctccat ctgctgtttc agtccagtgc acacgatcca 24420
gcagaccagg gggatgaagc acatggtgaa gaggacctcg ttctcctgaa tcagactgaa 24480
ggctgccctg gcttgggcct catcagagaa gtacttgaag aagtactctt tccttttggc 24540
ctcggagaaa cccaggatct ccacatgccg aggatggtcc agcaagtgct gcagtttctc 24600
cagggccaca ggtctcgtgg tgatgagcag agaggcctcg ggaagcagct tctttctgat 24660
gaggctgctc aggagaatgt ctccccgctc ggccttctgc cagtcagtgc agagcggtcc 24720
tatgtgctcg tcaaaggcac cttgcagctc atcgaagccg tccatgagga agaggattct 24780
ggagggtttt ctcacgatct tgtggatggg tgggtttggg tcggggcagc agctcatgat 24840
caggtccccc aggctcctct gtgtcacaag gctcacctct cgacagtgga tatagaacag 24900
atagtcaaac ctgtcttggt agagtgtccc cgacgcccag tccaacatca tcttcctggc 24960
caggattgtt ttcccaatcc ctgccgcccc ctggaacacc acggtgtgca caggctcaga 25020
atgctcatca tcggggtcaa acagcaactc catcttaatg ggactcacgg ggctctcaca 25080
cgtcttggtc ttgccgatgg ccagaagctc ctgctccctc tcctgctggc tccggtgctc 25140
cttgatgaga cgcagtcgtg tgtagcgttt gttgaggctc acactctcac ccagacgggc 25200
attcctgtct tcaatgcact ggaatctgct tctcacgtac tttctgtact tcttacggta 25260
atctacggca aagacaggaa gttaggggga aagtatacac acatccacct gagatgcgct 25320
ctcagctggg gcctgtcatc ggaagcgagt ggtaaccgga atggagaaat ggaaggtgca 25380
gctcctcccc actgggtagg aaaggtgccg agaatctctg gtgtcaagtt tttaagatac 25440
acagctgagc agaaggccca tctctatgtg tagctaccag cccaaagatc atttgaatca 25500
atcttattcc tttaagtaat ctgcatccta tgccttatca aacttgaaac gcttaatcac 25560
cgccgctggc tctgggactg caagagccac acaaacatga atttgtttct tcaactgaca 25620
atggatttcc tgagacaggc ctttgcattc caaagagcag gaacctatag tatggccaag 25680
ttacccagct gctcagcttc ccagagcctc ctgaaccagg tcttaaaact caactagaag 25740
caccacccca gtcgcttacc tttcttcatt ttacaaatag agattctcga aaggtactcc 25800
agtaaaccca tccactcctc ttcaatgctg tcttcctggc atatcacagt gggattcgaa 25860
acacgtgcat tatctgaacc taaaagggaa aaaaaaggtg tcaaaaccca gaactattat 25920
cacagaggat gcaattgaaa cctggcctaa tatttggcat gagagaggag accccaaaca 25980
tcccccaaat caaaacatgg ctctgagttg cagaggacag gtatccagtc aaaagtctgg 26040
ttgggagcat ttctgcactc ctagtttcaa aacaacttct gctgtccacc tgccaagcat 26100
gtgttcccac tgtccccagt ctcagaatct cttcctcagg cctggaaatc aatcagcaaa 26160
catgcgaagc aggctaagtt tcttttaccc tcgtttgctt ttgcctgccc ctggcagcct 26220
gattgtgagg gcatctccaa gctctcctat atccccaaca cggctgtggg ctaagaaagg 26280
tcacccttcc ctgaccgcag ttccctgcaa tccattttac acacgtcttc tattgtcaag 26340
tctagatgtc tggttcttca agagtgagaa cgaccagtct atttcgtgcc taatctagtg 26400
gttgggaatc ctggctgact ttagaatcac ccaggaagct ttaaaaatat ggacttcagg 26460
actgcacgcc cagaggttct ttttcagtcc ctctgaggtg aggcccagga accatcacat 26520
actaaaagct cccaggtgat tccaacatgc atctgtgttg agaatcacaa atccaaacag 26580
tcactagata gcatatctta agaaggcatt ctataggaga aattcaggtt aggtaaaaca 26640
agagttagtc actaggggaa atatataaga cagataactt caggtgggca ggaatctaca 26700
agtaacataa atgatttttt tttttttttt gagacagggc ctcactctat tgcccaggct 26760
ggagtgcaat gacacaatca tggctccctg cagcctcaac ctcctgggct caagtgatcc 26820
tcccacctca gcctccagaa cagctgggac tattgacacg tgccaccaca cctaactaat 26880
gtttgcattt tttgtagaga caggttctca ctatgttgcc caggctggtc tcaaactcct 26940
gggctcaagc aatcctccca tcttggcctc ctgaagtgct gggattacag gcataagcca 27000
ctgcgcccag cccataaaag acctctgaca gctgtctact tggtaaccat atcacaaaat 27060
aaaatccaaa aaatctaagc caaaaccaaa atcttattct ttttttttaa gagacagagt 27120
cttgctttgt ttccaaagct ggagggcagt ggcatggtca tagctcactc cagcctggaa 27180
ctcctgagct caagtgatgc acccacttca gccacctgag taactgggac tcaggtagga 27240
gccatgacag taaattagcc aaagtctatt acctaaaacc taaccccacc ccaggaaaca 27300
aacaaacaaa cttctaaccc tagttataac ttttctgcct caaaatccag atatggaagc 27360
aaagacggtg tagtggttaa gagccaggct ttgatcagag acatgccctg ctttttaccc 27420
cagctctggt tatggctaga aataaaccat gggccagtta ggatctcttc caggctcacc 27480
tcattcactt gcaggaggga taataccaga agctgtttca tgggtttctt gaatgtgcca 27540
taaaatccat aaaaactgct tagcaaagta cttctacagt tgtgattatg acactttcat 27600
ttgggtatgt gagtatataa gtactgacac aatgataatt gctttattta cttagagatg 27660
aggtctccct atgttgctca ggctggtttt gagctcctgg gctcaagcga tcctcctgcc 27720
ttagcctcct gagtagctgg gactacaggt gagagccatt gcagcaactg gtttctgacc 27780
tcccccggct gcacactgct gtctgtttcc ccagtgtcat tacacccaca ctgctgccct 27840
gccttaacat gtgtctccct atccactgac tcatttgtac tcctccttcc catcaccacc 27900
agctctacat catcatcctg caataccctg cccttctctg agccctacct ttgcctagaa 27960
cacaagacaa aagaaagaac cttatcccca atgtgtacat ggggattaag agaatttctt 28020
ttacattcca attcccaaag tggtggtgaa aggaaaggct tctgccccaa actccacggt 28080
tcttcaagga gagaggctgc cctctgggcc ataggaagca gaggcccaag cctgctgacc 28140
acacagcaga tactggacaa aacatgtggt ctgagaagct ggatggagaa ttggaggcag 28200
gtctaggcac tgctgagatt cagataaaga gggactaatc atggcaggtg cccagggggt 28260
aggtacagtc tgcatcagct ttttaaagga gttagagaaa gcaaacagtt tgcctccacc 28320
ttctcatagc actaccgtga gaggggaaaa gagaaaaaac caagacaata caagaaaaaa 28380
aaattttttt ttgaaacagg gtcttgctct ttagcccagg ctggagtgcc gtggtgcaat 28440
ctcagctcac tgcaacctcc actccccatg ttcaagcaat tctcctacct cagcctcctg 28500
agtagctggg attacaggtg cccaccacca cacccggcta attttttttg tatttttagt 28560
agagatgggg ttttgccatg ttggccaggc tggtgttgaa ctcctgacct caggtgatcc 28620
acccacctca gcctcacaaa gtgctggaat tacaggcatg agccaccatg cccggccatg 28680
atttaaaaaa aaaaaaatca tactaacttc tgtgcatcaa aggacacagt taaccaaatg 28740
aaaagacaac ccacagaata ggagaaaata tttgtaaatc atatatctga tatggggtta 28800
atatctagaa tacataaaga actcctacaa ggcaacaaca aaagccaaac ctggtctgaa 28860
aatgagaaaa gaacttgaac agaactttct ctgaagaagc tctataaatg gccaacaagc 28920
agtgaaaatg tgctcagcat cacttatcat tagggaaacg gaaatcaaaa ctacagtgag 28980
ataccacctc acactcatta gaatggctac tataaaaaag aaaaaataaa taaaaataac 29040
gtgttcttag gatatggaga aattggaacc cttgtgtgct gttggtggga aatggtgcag 29100
atggtatcta aaacagtaga gcagttcttc aaaatattta acagaattac cgtatgattc 29160
agaaatttca cttctgagta tataccccag agaattcaaa gcagggtctt gaagagatat 29220
ttgtgcacca acactcataa cagcattaac aataacaaaa aggtagaagt aatccaggtg 29280
ttcatcaaca gataactaaa caaaatttgg tatatggtac catggagtat ttatacagtc 29340
ttttttaaag gaagggaatt ccgacacatg ctacaacata gttgaacccg gaggacatta 29400
tgctgagtga aataaactac tcataaagga aaaaatgctg tatgtttcca cttatatgag 29460
gtacccagag tagtaagatt cacagagatg gcaaatagaa tggtggttac cagggctggg 29520
agaatgaggc aatgaggagt tatcattcaa tgggtgagga gtttcagttt tgcaagatga 29580
aaacagttct ggagactggt tgcacaatgt gagtgtacct aacactactg aactgtacat 29640
ttaaaaatta ttacggccgg gcgcggtggc tcacacctgt aattccagca ctttgcgagg 29700
ccgaggcggg tggatcacct gaggtcggga gtttgagacc aacctgacca acatggagaa 29760
accccatctc tactaaaaat acaaaattag ccgggcgtgg aggtgcaatg cctgtaatcc 29820
cagctacttg ggaggctgag gcaggaaaat cgcttgaacc cgggaggtgg aggttgcagt 29880
gagccaagat ctcaccattg cactccagcc tgggcaacaa gagcaactcc gtctcaaaaa 29940
aaaatatata tatatatata tataaagatg gaaaattgta cactatgtgc acttggccac 30000
aatttttttt aaaagtcttc cttccactca ccccacttcg gctcatctct ttttgctttc 30060
tcataaaggt ctctcctgtt gatcgcagcg aagatccaca cggccatggc ccacgccttc 30120
tcctccccat tgaagtcgat cattagcgtg gctagatcca catggtctgc cttctctgtc 30180
tgacccctcg ggagggggat gcagcccttc tggggaggat agtcctctaa gtgcatctta 30240
aatttcttca agtccacatc ctccaggtcc tccaggtacc tggccagctt gcagcgggtg 30300
cttgccatct tcatctgcag ctgttttcag ggtccttagg cttcggtcca cactaagata 30360
ccaggcagtg aacacggcac acggatgagt cttttttaaa gtctccactt tgagagatat 30420
aaattatcaa aaactcagca aacagaaaga aaaaaatgtc acatgactgt aacaagtcaa 30480
aatctttaat tttgaaaagt tagccaaggc cgggcacagt ggctcacgcc tgtaatccca 30540
gcactttgag aggccaaggc aggcagatca cctgagctga ggaattcaag accagcctgg 30600
ccaacatggc aaaactgtgt ctctactaaa agtacaaaaa tgagccgggt gtggtggcgg 30660
gcgcctgtaa tcccagctac tcaggaagtt gaggtaggag aattgattga acccgggaag 30720
tggaggctgc agtgagccaa gatcacgcca ctgcactcca gcctaggcga cacagcaaga 30780
ctccatctca aaaaaaaaaa agttagccaa atgcttacca gaaagttctc ctgttggctc 30840
gatccaggag tgtgtcctga gccatggaag aaaggtttcc ctatggaggg aaaaatatgc 30900
aaacaaatcc ataaacagga ttgtattaca gtttacggtg aacaaccact tcacgatgcc 30960
atcttgaccc atcagcaaga aaatttttgt cccgttgatt acggggctat gacattggac 31020
aaactcttca ctattcctca acttcagttt cctcatctac aaaatgagaa agcagaagag 31080
aatgttttca gttcctccaa actgaaggct ctggctcttt gcttctgttt ttgtgaggga 31140
agagggatga gagacaatag aaggagaagg ccaggaggtg agtaagtgtg ttgataacag 31200
aacaggacgt ggctagggag agaggagaga gaacataaaa gcttgcagag gaggggacag 31260
tctttgactg cacttctatc aaccagtgga ttgaagtgag atgaagctgg gagtgcataa 31320
tggagaataa taaaaacata catccctgta atcccagcac tttgggaggc cgaggtgggc 31380
ggatcacctg aggtcaggag ttggagacca ggctcaccaa acaacaggga gaaatcccgt 31440
ctctactaaa aatacaaaaa ttaaccgggc atggtaccag gcacctgtaa tcccagctac 31500
tcgggaggct gaggcaggag aatcgcttga acccaggagg cggaggttgc gatgagccaa 31560
gatcacacca ctgcactcca gcctgggcaa taagagcaaa actccatctc aaaaaataaa 31620
atagaataaa ataaaataaa taaaaacata catcctttaa tgtctccttg caaaattcgc 31680
aattgttatc attataattc acattaattt agagctttcc acaggctagg cactcactga 31740
tgtttttccc catctaacct gcacagagct ctatgaggtg cacctattcc tagccccatt 31800
ttatagatgc ataaactgag tcttaggggg actaggaagc ctgccgaggg gtttagaacc 31860
aggaaggaac agagccagga ttttgaccag agatatgaga ccatgtcttc catcacttgt 31920
ttcagtcaga caaagacaaa gacaacaaaa tagatgacta aaagacacac ttccccagca 31980
tttatcacag gtgtatcact gcagcattca ccaacatagt cttcccaact agactgtgag 32040
ttccacaaaa actagcaatc acctgctgta tctttagatc ttccatatct cctagagtcc 32100
ggatggatga acaagttggc tttgtttgga attgttccct ccttgatccc ttgattatac 32160
tctatttggc aaagcacctc aacctaaagc cataaataac actcaaggga ggcagagagc 32220
ctggaaaacg gtggagctct ccaaattgga atttctgtga ctgcagttca atgtcaagat 32280
gcctcagact cactcatctc tcccgtccca tctccattcc tgcctatcta ctcctcgcct 32340
cctgagccct gcaaacccag ccctgtgcat cctgaggtga ctgctctcca gacagcccta 32400
ttagctccgc ataccctccc agctcctgcc catcctgagg tgactgctct ccagacagcc 32460
ctattagctc cgcataccct cccagctcct gccccatcag tccttccatc tgcatcagga 32520
ttctgccttt cttctgtgct ccttccaccc taacaccagc acaaaaatct gctgcccttt 32580
ggtctttaag gaggtttgtt tccttctgta tatcccatcc atcttctccc ctgggaggga 32640
tactgggcaa atctgctgaa gtcgtgggtg taaactatgg ttgctgccgc tgtcctcccc 32700
gcttcccccc gccacataca cacacacga 32729
<210> 2
<211> 1036
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NLRP3规范
<400> 2
Met Lys Met Ala Ser Thr Arg Cys Lys Leu Ala Arg Tyr Leu Glu Asp
1 5 10 15
Leu Glu Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Lys Met His Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Pro Pro Gln Lys Gly Cys Ile Pro Leu Pro Arg Gly Gln Thr Glu Lys
35 40 45
Ala Asp His Val Asp Leu Ala Thr Leu Met Ile Asp Phe Asn Gly Glu
50 55 60
Glu Lys Ala Trp Ala Met Ala Val Trp Ile Phe Ala Ala Ile Asn Arg
65 70 75 80
Arg Asp Leu Tyr Glu Lys Ala Lys Arg Asp Glu Pro Lys Trp Gly Ser
85 90 95
Asp Asn Ala Arg Val Ser Asn Pro Thr Val Ile Cys Gln Glu Asp Ser
100 105 110
Ile Glu Glu Glu Trp Met Gly Leu Leu Glu Tyr Leu Ser Arg Ile Ser
115 120 125
Ile Cys Lys Met Lys Lys Asp Tyr Arg Lys Lys Tyr Arg Lys Tyr Val
130 135 140
Arg Ser Arg Phe Gln Cys Ile Glu Asp Arg Asn Ala Arg Leu Gly Glu
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Asn Lys Arg Tyr Thr Arg Leu Arg Leu Ile Lys Glu
165 170 175
His Arg Ser Gln Gln Glu Arg Glu Gln Glu Leu Leu Ala Ile Gly Lys
180 185 190
Thr Lys Thr Cys Glu Ser Pro Val Ser Pro Ile Lys Met Glu Leu Leu
195 200 205
Phe Asp Pro Asp Asp Glu His Ser Glu Pro Val His Thr Val Val Phe
210 215 220
Gln Gly Ala Ala Gly Ile Gly Lys Thr Ile Leu Ala Arg Lys Met Met
225 230 235 240
Leu Asp Trp Ala Ser Gly Thr Leu Tyr Gln Asp Arg Phe Asp Tyr Leu
245 250 255
Phe Tyr Ile His Cys Arg Glu Val Ser Leu Val Thr Gln Arg Ser Leu
260 265 270
Gly Asp Leu Ile Met Ser Cys Cys Pro Asp Pro Asn Pro Pro Ile His
275 280 285
Lys Ile Val Arg Lys Pro Ser Arg Ile Leu Phe Leu Met Asp Gly Phe
290 295 300
Asp Glu Leu Gln Gly Ala Phe Asp Glu His Ile Gly Pro Leu Cys Thr
305 310 315 320
Asp Trp Gln Lys Ala Glu Arg Gly Asp Ile Leu Leu Ser Ser Leu Ile
325 330 335
Arg Lys Lys Leu Leu Pro Glu Ala Ser Leu Leu Ile Thr Thr Arg Pro
340 345 350
Val Ala Leu Glu Lys Leu Gln His Leu Leu Asp His Pro Arg His Val
355 360 365
Glu Ile Leu Gly Phe Ser Glu Ala Lys Arg Lys Glu Tyr Phe Phe Lys
370 375 380
Tyr Phe Ser Asp Glu Ala Gln Ala Arg Ala Ala Phe Ser Leu Ile Gln
385 390 395 400
Glu Asn Glu Val Leu Phe Thr Met Cys Phe Ile Pro Leu Val Cys Trp
405 410 415
Ile Val Cys Thr Gly Leu Lys Gln Gln Met Glu Ser Gly Lys Ser Leu
420 425 430
Ala Gln Thr Ser Lys Thr Thr Thr Ala Val Tyr Val Phe Phe Leu Ser
435 440 445
Ser Leu Leu Gln Pro Arg Gly Gly Ser Gln Glu His Gly Leu Cys Ala
450 455 460
His Leu Trp Gly Leu Cys Ser Leu Ala Ala Asp Gly Ile Trp Asn Gln
465 470 475 480
Lys Ile Leu Phe Glu Glu Ser Asp Leu Arg Asn His Gly Leu Gln Lys
485 490 495
Ala Asp Val Ser Ala Phe Leu Arg Met Asn Leu Phe Gln Lys Glu Val
500 505 510
Asp Cys Glu Lys Phe Tyr Ser Phe Ile His Met Thr Phe Gln Glu Phe
515 520 525
Phe Ala Ala Met Tyr Tyr Leu Leu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg Thr
530 535 540
Asn Val Pro Gly Ser Arg Leu Lys Leu Pro Ser Arg Asp Val Thr Val
545 550 555 560
Leu Leu Glu Asn Tyr Gly Lys Phe Glu Lys Gly Tyr Leu Ile Phe Val
565 570 575
Val Arg Phe Leu Phe Gly Leu Val Asn Gln Glu Arg Thr Ser Tyr Leu
580 585 590
Glu Lys Lys Leu Ser Cys Lys Ile Ser Gln Gln Ile Arg Leu Glu Leu
595 600 605
Leu Lys Trp Ile Glu Val Lys Ala Lys Ala Lys Lys Leu Gln Ile Gln
610 615 620
Pro Ser Gln Leu Glu Leu Phe Tyr Cys Leu Tyr Glu Met Gln Glu Glu
625 630 635 640
Asp Phe Val Gln Arg Ala Met Asp Tyr Phe Pro Lys Ile Glu Ile Asn
645 650 655
Leu Ser Thr Arg Met Asp His Met Val Ser Ser Phe Cys Ile Glu Asn
660 665 670
Cys His Arg Val Glu Ser Leu Ser Leu Gly Phe Leu His Asn Met Pro
675 680 685
Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg His Leu Asp Met Val
690 695 700
Gln Cys Val Leu Pro Ser Ser Ser His Ala Ala Cys Ser His Gly Leu
705 710 715 720
Val Asn Ser His Leu Thr Ser Ser Phe Cys Arg Gly Leu Phe Ser Val
725 730 735
Leu Ser Thr Ser Gln Ser Leu Thr Glu Leu Asp Leu Ser Asp Asn Ser
740 745 750
Leu Gly Asp Pro Gly Met Arg Val Leu Cys Glu Thr Leu Gln His Pro
755 760 765
Gly Cys Asn Ile Arg Arg Leu Trp Leu Gly Arg Cys Gly Leu Ser His
770 775 780
Glu Cys Cys Phe Asp Ile Ser Leu Val Leu Ser Ser Asn Gln Lys Leu
785 790 795 800
Val Glu Leu Asp Leu Ser Asp Asn Ala Leu Gly Asp Phe Gly Ile Arg
805 810 815
Leu Leu Cys Val Gly Leu Lys His Leu Leu Cys Asn Leu Lys Lys Leu
820 825 830
Trp Leu Val Ser Cys Cys Leu Thr Ser Ala Cys Cys Gln Asp Leu Ala
835 840 845
Ser Val Leu Ser Thr Ser His Ser Leu Thr Arg Leu Tyr Val Gly Glu
850 855 860
Asn Ala Leu Gly Asp Ser Gly Val Ala Ile Leu Cys Glu Lys Ala Lys
865 870 875 880
Asn Pro Gln Cys Asn Leu Gln Lys Leu Gly Leu Val Asn Ser Gly Leu
885 890 895
Thr Ser Val Cys Cys Ser Ala Leu Ser Ser Val Leu Ser Thr Asn Gln
900 905 910
Asn Leu Thr His Leu Tyr Leu Arg Gly Asn Thr Leu Gly Asp Lys Gly
915 920 925
Ile Lys Leu Leu Cys Glu Gly Leu Leu His Pro Asp Cys Lys Leu Gln
930 935 940
Val Leu Glu Leu Asp Asn Cys Asn Leu Thr Ser His Cys Cys Trp Asp
945 950 955 960
Leu Ser Thr Leu Leu Thr Ser Ser Gln Ser Leu Arg Lys Leu Ser Leu
965 970 975
Gly Asn Asn Asp Leu Gly Asp Leu Gly Val Met Met Phe Cys Glu Val
980 985 990
Leu Lys Gln Gln Ser Cys Leu Leu Gln Asn Leu Gly Leu Ser Glu Met
995 1000 1005
Tyr Phe Asn Tyr Glu Thr Lys Ser Ala Leu Glu Thr Leu Gln Glu
1010 1015 1020
Glu Lys Pro Glu Leu Thr Val Val Phe Glu Pro Ser Trp
1025 1030 1035
<210> 3
<211> 4470
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NLRP3 mRNA
<400> 3
gtagatgagg aaactgaagt tgaggaatag tgaagagttt gtccaatgtc atagccccgt 60
aatcaacggg acaaaaattt tcttgctgat gggtcaagat ggcatcgtga agtggttgtt 120
caccgtaaac tgtaatacaa tcctgtttat ggatttgttt gcatattttt ccctccatag 180
ggaaaccttt cttccatggc tcaggacaca ctcctggatc gagccaacag gagaactttc 240
tggtaagcat ttggctaact tttttttttt tgagatggag tcttgctgtg tcgcctaggc 300
tggagtgcag tggcgtgatc ttggctcact gcagcctcca cttcccgggt tcaatcaatt 360
ctcctacctc aacttcctga gtagctggga ttacaggcgc ccgccaccac acccggctca 420
tttttgtact tttagtagag acacagtttt gccatgttgg ccaggctggt cttgaattcc 480
tcagctcagg tgatctgcct gccttggcct ctcaaagtgc tgggattaca ggcgtgagcc 540
actgtgcccg gccttggcta acttttcaaa attaaagatt ttgacttgtt acagtcatgt 600
gacatttttt tctttctgtt tgctgagttt ttgataattt atatctctca aagtggagac 660
tttaaaaaag actcatccgt gtgccgtgtt cactgcctgg tatcttagtg tggaccgaag 720
cctaaggacc ctgaaaacag ctgcagatga agatggcaag cacccgctgc aagctggcca 780
ggtacctgga ggacctggag gatgtggact tgaagaaatt taagatgcac ttagaggact 840
atcctcccca gaagggctgc atccccctcc cgaggggtca gacagagaag gcagaccatg 900
tggatctagc cacgctaatg atcgacttca atggggagga gaaggcgtgg gccatggccg 960
tgtggatctt cgctgcgatc aacaggagag acctttatga gaaagcaaaa agagatgagc 1020
cgaagtgggg ttcagataat gcacgtgttt cgaatcccac tgtgatatgc caggaagaca 1080
gcattgaaga ggagtggatg ggtttactgg agtacctttc gagaatctct atttgtaaaa 1140
tgaagaaaga ttaccgtaag aagtacagaa agtacgtgag aagcagattc cagtgcattg 1200
aagacaggaa tgcccgtctg ggtgagagtg tgagcctcaa caaacgctac acacgactgc 1260
gtctcatcaa ggagcaccgg agccagcagg agagggagca ggagcttctg gccatcggca 1320
agaccaagac gtgtgagagc cccgtgagtc ccattaagat ggagttgctg tttgaccccg 1380
atgatgagca ttctgagcct gtgcacaccg tggtgttcca gggggcggca gggattggga 1440
aaacaatcct ggccaggaag atgatgttgg actgggcgtc ggggacactc taccaagaca 1500
ggtttgacta tctgttctat atccactgtc gggaggtgag ccttgtgaca cagaggagcc 1560
tgggggacct gatcatgagc tgctgccccg acccaaaccc acccatccac aagatcgtga 1620
gaaaaccctc cagaatcctc ttcctcatgg acggcttcga tgagctgcaa ggtgcctttg 1680
acgagcacat aggaccgctc tgcactgact ggcagaaggc cgagcgggga gacattctcc 1740
tgagcagcct catcagaaag aagctgcttc ccgaggcctc tctgctcatc accacgagac 1800
ctgtggccct ggagaaactg cagcacttgc tggaccatcc tcggcatgtg gagatcctgg 1860
gtttctccga ggccaaaagg aaagagtact tcttcaagta cttctctgat gaggcccaag 1920
ccagggcagc cttcagtctg attcaggaga acgaggtcct cttcaccatg tgcttcatcc 1980
ccctggtctg ctggatcgtg tgcactggac tgaaacagca gatggagagt ggcaagagcc 2040
ttgcccagac atccaagacc accaccgcgg tgtacgtctt cttcctttcc agtttgctgc 2100
agccccgggg agggagccag gagcacggcc tctgcgccca cctctggggg ctctgctctt 2160
tggctgcaga tggaatctgg aaccagaaaa tcctgtttga ggagtccgac ctcaggaatc 2220
atggactgca gaaggcggat gtgtctgctt tcctgaggat gaacctgttc caaaaggaag 2280
tggactgcga gaagttctac agcttcatcc acatgacttt ccaggagttc tttgccgcca 2340
tgtactacct gctggaagag gaaaaggaag gaaggacgaa cgttccaggg agtcgtttga 2400
agcttcccag ccgagacgtg acagtccttc tggaaaacta tggcaaattc gaaaaggggt 2460
atttgatttt tgttgtacgt ttcctctttg gcctggtaaa ccaggagagg acctcctact 2520
tggagaagaa attaagttgc aagatctctc agcaaatcag gctggagctg ctgaaatgga 2580
ttgaagtgaa agccaaagct aaaaagctgc agatccagcc cagccagctg gaattgttct 2640
actgtttgta cgagatgcag gaggaggact tcgtgcaaag ggccatggac tatttcccca 2700
agattgagat caatctctcc accagaatgg accacatggt ttcttccttt tgcattgaga 2760
actgtcatcg ggtggagtca ctgtccctgg ggtttctcca taacatgccc aaggaggaag 2820
aggaggagga aaaggaaggc cgacaccttg atatggtgca gtgtgtcctc ccaagctcct 2880
ctcatgctgc ctgttctcat ggattggtga acagccacct cacttccagt ttttgccggg 2940
gcctcttttc agttctgagc accagccaga gtctaactga attggacctc agtgacaatt 3000
ctctggggga cccagggatg agagtgttgt gtgaaacgct ccagcatcct ggctgtaaca 3060
ttcggagatt gtggttgggg cgctgtggcc tctcgcatga gtgctgcttc gacatctcct 3120
tggtcctcag cagcaaccag aagctggtgg agctggacct gagtgacaac gccctcggtg 3180
acttcggaat cagacttctg tgtgtgggac tgaagcacct gttgtgcaat ctgaagaagc 3240
tctggttggt cagctgctgc ctcacatcag catgttgtca ggatcttgca tcagtattga 3300
gcaccagcca ttccctgacc agactctatg tgggggagaa tgccttggga gactcaggag 3360
tcgcaatttt atgtgaaaaa gccaagaatc cacagtgtaa cctgcagaaa ctggggttgg 3420
tgaattctgg ccttacgtca gtctgttgtt cagctttgtc ctcggtactc agcactaatc 3480
agaatctcac gcacctttac ctgcgaggca acactctcgg agacaagggg atcaaactac 3540
tctgtgaggg actcttgcac cccgactgca agcttcaggt gttggaatta gacaactgca 3600
acctcacgtc acactgctgc tgggatcttt ccacacttct gacctccagc cagagcctgc 3660
gaaagctgag cctgggcaac aatgacctgg gcgacctggg ggtcatgatg ttctgtgaag 3720
tgctgaaaca gcagagctgc ctcctgcaga acctggggtt gtctgaaatg tatttcaatt 3780
atgagacaaa aagtgcgtta gaaacacttc aagaagaaaa gcctgagctg accgtcgtct 3840
ttgagccttc ttggtaggag tggaaacggg gctgccagac gccagtgttc tccggtccct 3900
ccagctgggg gccctcaggt ggagagagct gcgatccatc caggccaaga ccacagctct 3960
gtgatccttc cggtggagtg tcggagaaga gagcttgccg acgatgcctt cctgtgcaga 4020
gcttgggcat ctcctttacg ccagggtgag gaagacacca ggacaatgac agcatcgggt 4080
gttgttgtca tcacagcgcc tcagttagag gatgttcctc ttggtgacct catgtaatta 4140
gctcattcaa taaagcactt tctttatttt tctcttctct gtctaacttt ctttttccta 4200
tcttttttct tctttgttct gtttactttt gctcatatca tcattcccgc tatctttcta 4260
ttaactgacc ataacacaga actagttgac tatatattat gttgaaattt tatggcagct 4320
atttatttat ttaaattttt tgtaacagtt ttgttttcta ataagaaaaa tccatgcttt 4380
ttgtagctgg ttgaaaattc aggaatatgt aaaacttttt ggtatttaat taaattgatt 4440
ccttttctta attttaaaaa aaaaaaaaaa 4470
<210> 4
<211> 922
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NLRP3-2
<400> 4
Met Lys Met Ala Ser Thr Arg Cys Lys Leu Ala Arg Tyr Leu Glu Asp
1 5 10 15
Leu Glu Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Lys Met His Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Pro Pro Gln Lys Gly Cys Ile Pro Leu Pro Arg Gly Gln Thr Glu Lys
35 40 45
Ala Asp His Val Asp Leu Ala Thr Leu Met Ile Asp Phe Asn Gly Glu
50 55 60
Glu Lys Ala Trp Ala Met Ala Val Trp Ile Phe Ala Ala Ile Asn Arg
65 70 75 80
Arg Asp Leu Tyr Glu Lys Ala Lys Arg Asp Glu Pro Lys Trp Gly Ser
85 90 95
Asp Asn Ala Arg Val Ser Asn Pro Thr Val Ile Cys Gln Glu Asp Ser
100 105 110
Ile Glu Glu Glu Trp Met Gly Leu Leu Glu Tyr Leu Ser Arg Ile Ser
115 120 125
Ile Cys Lys Met Lys Lys Asp Tyr Arg Lys Lys Tyr Arg Lys Tyr Val
130 135 140
Arg Ser Arg Phe Gln Cys Ile Glu Asp Arg Asn Ala Arg Leu Gly Glu
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Asn Lys Arg Tyr Thr Arg Leu Arg Leu Ile Lys Glu
165 170 175
His Arg Ser Gln Gln Glu Arg Glu Gln Glu Leu Leu Ala Ile Gly Lys
180 185 190
Thr Lys Thr Cys Glu Ser Pro Val Ser Pro Ile Lys Met Glu Leu Leu
195 200 205
Phe Asp Pro Asp Asp Glu His Ser Glu Pro Val His Thr Val Val Phe
210 215 220
Gln Gly Ala Ala Gly Ile Gly Lys Thr Ile Leu Ala Arg Lys Met Met
225 230 235 240
Leu Asp Trp Ala Ser Gly Thr Leu Tyr Gln Asp Arg Phe Asp Tyr Leu
245 250 255
Phe Tyr Ile His Cys Arg Glu Val Ser Leu Val Thr Gln Arg Ser Leu
260 265 270
Gly Asp Leu Ile Met Ser Cys Cys Pro Asp Pro Asn Pro Pro Ile His
275 280 285
Lys Ile Val Arg Lys Pro Ser Arg Ile Leu Phe Leu Met Asp Gly Phe
290 295 300
Asp Glu Leu Gln Gly Ala Phe Asp Glu His Ile Gly Pro Leu Cys Thr
305 310 315 320
Asp Trp Gln Lys Ala Glu Arg Gly Asp Ile Leu Leu Ser Ser Leu Ile
325 330 335
Arg Lys Lys Leu Leu Pro Glu Ala Ser Leu Leu Ile Thr Thr Arg Pro
340 345 350
Val Ala Leu Glu Lys Leu Gln His Leu Leu Asp His Pro Arg His Val
355 360 365
Glu Ile Leu Gly Phe Ser Glu Ala Lys Arg Lys Glu Tyr Phe Phe Lys
370 375 380
Tyr Phe Ser Asp Glu Ala Gln Ala Arg Ala Ala Phe Ser Leu Ile Gln
385 390 395 400
Glu Asn Glu Val Leu Phe Thr Met Cys Phe Ile Pro Leu Val Cys Trp
405 410 415
Ile Val Cys Thr Gly Leu Lys Gln Gln Met Glu Ser Gly Lys Ser Leu
420 425 430
Ala Gln Thr Ser Lys Thr Thr Thr Ala Val Tyr Val Phe Phe Leu Ser
435 440 445
Ser Leu Leu Gln Pro Arg Gly Gly Ser Gln Glu His Gly Leu Cys Ala
450 455 460
His Leu Trp Gly Leu Cys Ser Leu Ala Ala Asp Gly Ile Trp Asn Gln
465 470 475 480
Lys Ile Leu Phe Glu Glu Ser Asp Leu Arg Asn His Gly Leu Gln Lys
485 490 495
Ala Asp Val Ser Ala Phe Leu Arg Met Asn Leu Phe Gln Lys Glu Val
500 505 510
Asp Cys Glu Lys Phe Tyr Ser Phe Ile His Met Thr Phe Gln Glu Phe
515 520 525
Phe Ala Ala Met Tyr Tyr Leu Leu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg Thr
530 535 540
Asn Val Pro Gly Ser Arg Leu Lys Leu Pro Ser Arg Asp Val Thr Val
545 550 555 560
Leu Leu Glu Asn Tyr Gly Lys Phe Glu Lys Gly Tyr Leu Ile Phe Val
565 570 575
Val Arg Phe Leu Phe Gly Leu Val Asn Gln Glu Arg Thr Ser Tyr Leu
580 585 590
Glu Lys Lys Leu Ser Cys Lys Ile Ser Gln Gln Ile Arg Leu Glu Leu
595 600 605
Leu Lys Trp Ile Glu Val Lys Ala Lys Ala Lys Lys Leu Gln Ile Gln
610 615 620
Pro Ser Gln Leu Glu Leu Phe Tyr Cys Leu Tyr Glu Met Gln Glu Glu
625 630 635 640
Asp Phe Val Gln Arg Ala Met Asp Tyr Phe Pro Lys Ile Glu Ile Asn
645 650 655
Leu Ser Thr Arg Met Asp His Met Val Ser Ser Phe Cys Ile Glu Asn
660 665 670
Cys His Arg Val Glu Ser Leu Ser Leu Gly Phe Leu His Asn Met Pro
675 680 685
Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg His Leu Asp Met Val
690 695 700
Gln Cys Val Leu Pro Ser Ser Ser His Ala Ala Cys Ser His Gly Leu
705 710 715 720
Gly Arg Cys Gly Leu Ser His Glu Cys Cys Phe Asp Ile Ser Leu Val
725 730 735
Leu Ser Ser Asn Gln Lys Leu Val Glu Leu Asp Leu Ser Asp Asn Ala
740 745 750
Leu Gly Asp Phe Gly Ile Arg Leu Leu Cys Val Gly Leu Lys His Leu
755 760 765
Leu Cys Asn Leu Lys Lys Leu Trp Leu Val Asn Ser Gly Leu Thr Ser
770 775 780
Val Cys Cys Ser Ala Leu Ser Ser Val Leu Ser Thr Asn Gln Asn Leu
785 790 795 800
Thr His Leu Tyr Leu Arg Gly Asn Thr Leu Gly Asp Lys Gly Ile Lys
805 810 815
Leu Leu Cys Glu Gly Leu Leu His Pro Asp Cys Lys Leu Gln Val Leu
820 825 830
Glu Leu Asp Asn Cys Asn Leu Thr Ser His Cys Cys Trp Asp Leu Ser
835 840 845
Thr Leu Leu Thr Ser Ser Gln Ser Leu Arg Lys Leu Ser Leu Gly Asn
850 855 860
Asn Asp Leu Gly Asp Leu Gly Val Met Met Phe Cys Glu Val Leu Lys
865 870 875 880
Gln Gln Ser Cys Leu Leu Gln Asn Leu Gly Leu Ser Glu Met Tyr Phe
885 890 895
Asn Tyr Glu Thr Lys Ser Ala Leu Glu Thr Leu Gln Glu Glu Lys Pro
900 905 910
Glu Leu Thr Val Val Phe Glu Pro Ser Trp
915 920
<210> 5
<211> 719
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NLRP3-3
<400> 5
Met Lys Met Ala Ser Thr Arg Cys Lys Leu Ala Arg Tyr Leu Glu Asp
1 5 10 15
Leu Glu Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Lys Met His Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Pro Pro Gln Lys Gly Cys Ile Pro Leu Pro Arg Gly Gln Thr Glu Lys
35 40 45
Ala Asp His Val Asp Leu Ala Thr Leu Met Ile Asp Phe Asn Gly Glu
50 55 60
Glu Lys Ala Trp Ala Met Ala Val Trp Ile Phe Ala Ala Ile Asn Arg
65 70 75 80
Arg Asp Leu Tyr Glu Lys Ala Lys Arg Asp Glu Pro Lys Trp Gly Ser
85 90 95
Asp Asn Ala Arg Val Ser Asn Pro Thr Val Ile Cys Gln Glu Asp Ser
100 105 110
Ile Glu Glu Glu Trp Met Gly Leu Leu Glu Tyr Leu Ser Arg Ile Ser
115 120 125
Ile Cys Lys Met Lys Lys Asp Tyr Arg Lys Lys Tyr Arg Lys Tyr Val
130 135 140
Arg Ser Arg Phe Gln Cys Ile Glu Asp Arg Asn Ala Arg Leu Gly Glu
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Asn Lys Arg Tyr Thr Arg Leu Arg Leu Ile Lys Glu
165 170 175
His Arg Ser Gln Gln Glu Arg Glu Gln Glu Leu Leu Ala Ile Gly Lys
180 185 190
Thr Lys Thr Cys Glu Ser Pro Val Ser Pro Ile Lys Met Glu Leu Leu
195 200 205
Phe Asp Pro Asp Asp Glu His Ser Glu Pro Val His Thr Val Val Phe
210 215 220
Gln Gly Ala Ala Gly Ile Gly Lys Thr Ile Leu Ala Arg Lys Met Met
225 230 235 240
Leu Asp Trp Ala Ser Gly Thr Leu Tyr Gln Asp Arg Phe Asp Tyr Leu
245 250 255
Phe Tyr Ile His Cys Arg Glu Val Ser Leu Val Thr Gln Arg Ser Leu
260 265 270
Gly Asp Leu Ile Met Ser Cys Cys Pro Asp Pro Asn Pro Pro Ile His
275 280 285
Lys Ile Val Arg Lys Pro Ser Arg Ile Leu Phe Leu Met Asp Gly Phe
290 295 300
Asp Glu Leu Gln Gly Ala Phe Asp Glu His Ile Gly Pro Leu Cys Thr
305 310 315 320
Asp Trp Gln Lys Ala Glu Arg Gly Asp Ile Leu Leu Ser Ser Leu Ile
325 330 335
Arg Lys Lys Leu Leu Pro Glu Ala Ser Leu Leu Ile Thr Thr Arg Pro
340 345 350
Val Ala Leu Glu Lys Leu Gln His Leu Leu Asp His Pro Arg His Val
355 360 365
Glu Ile Leu Gly Phe Ser Glu Ala Lys Arg Lys Glu Tyr Phe Phe Lys
370 375 380
Tyr Phe Ser Asp Glu Ala Gln Ala Arg Ala Ala Phe Ser Leu Ile Gln
385 390 395 400
Glu Asn Glu Val Leu Phe Thr Met Cys Phe Ile Pro Leu Val Cys Trp
405 410 415
Ile Val Cys Thr Gly Leu Lys Gln Gln Met Glu Ser Gly Lys Ser Leu
420 425 430
Ala Gln Thr Ser Lys Thr Thr Thr Ala Val Tyr Val Phe Phe Leu Ser
435 440 445
Ser Leu Leu Gln Pro Arg Gly Gly Ser Gln Glu His Gly Leu Cys Ala
450 455 460
His Leu Trp Gly Leu Cys Ser Leu Ala Ala Asp Gly Ile Trp Asn Gln
465 470 475 480
Lys Ile Leu Phe Glu Glu Ser Asp Leu Arg Asn His Gly Leu Gln Lys
485 490 495
Ala Asp Val Ser Ala Phe Leu Arg Met Asn Leu Phe Gln Lys Glu Val
500 505 510
Asp Cys Glu Lys Phe Tyr Ser Phe Ile His Met Thr Phe Gln Glu Phe
515 520 525
Phe Ala Ala Met Tyr Tyr Leu Leu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg Thr
530 535 540
Asn Val Pro Gly Ser Arg Leu Lys Leu Pro Ser Arg Asp Val Thr Val
545 550 555 560
Leu Leu Glu Asn Tyr Gly Lys Phe Glu Lys Gly Tyr Leu Ile Phe Val
565 570 575
Val Arg Phe Leu Phe Gly Leu Val Asn Gln Glu Arg Thr Ser Tyr Leu
580 585 590
Glu Lys Lys Leu Ser Cys Lys Ile Ser Gln Gln Ile Arg Leu Glu Leu
595 600 605
Leu Lys Trp Ile Glu Val Lys Ala Lys Ala Lys Lys Leu Gln Ile Gln
610 615 620
Pro Ser Gln Leu Glu Leu Phe Tyr Cys Leu Tyr Glu Met Gln Glu Glu
625 630 635 640
Asp Phe Val Gln Arg Ala Met Asp Tyr Phe Pro Lys Ile Glu Ile Asn
645 650 655
Leu Ser Thr Arg Met Asp His Met Val Ser Ser Phe Cys Ile Glu Asn
660 665 670
Cys His Arg Val Glu Ser Leu Ser Leu Gly Phe Leu His Asn Met Pro
675 680 685
Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg His Leu Asp Met Val
690 695 700
Gln Cys Val Leu Pro Ser Ser Ser His Ala Ala Cys Ser His Gly
705 710 715
<210> 6
<211> 979
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NLRP3-4
<400> 6
Met Lys Met Ala Ser Thr Arg Cys Lys Leu Ala Arg Tyr Leu Glu Asp
1 5 10 15
Leu Glu Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Lys Met His Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Pro Pro Gln Lys Gly Cys Ile Pro Leu Pro Arg Gly Gln Thr Glu Lys
35 40 45
Ala Asp His Val Asp Leu Ala Thr Leu Met Ile Asp Phe Asn Gly Glu
50 55 60
Glu Lys Ala Trp Ala Met Ala Val Trp Ile Phe Ala Ala Ile Asn Arg
65 70 75 80
Arg Asp Leu Tyr Glu Lys Ala Lys Arg Asp Glu Pro Lys Trp Gly Ser
85 90 95
Asp Asn Ala Arg Val Ser Asn Pro Thr Val Ile Cys Gln Glu Asp Ser
100 105 110
Ile Glu Glu Glu Trp Met Gly Leu Leu Glu Tyr Leu Ser Arg Ile Ser
115 120 125
Ile Cys Lys Met Lys Lys Asp Tyr Arg Lys Lys Tyr Arg Lys Tyr Val
130 135 140
Arg Ser Arg Phe Gln Cys Ile Glu Asp Arg Asn Ala Arg Leu Gly Glu
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Asn Lys Arg Tyr Thr Arg Leu Arg Leu Ile Lys Glu
165 170 175
His Arg Ser Gln Gln Glu Arg Glu Gln Glu Leu Leu Ala Ile Gly Lys
180 185 190
Thr Lys Thr Cys Glu Ser Pro Val Ser Pro Ile Lys Met Glu Leu Leu
195 200 205
Phe Asp Pro Asp Asp Glu His Ser Glu Pro Val His Thr Val Val Phe
210 215 220
Gln Gly Ala Ala Gly Ile Gly Lys Thr Ile Leu Ala Arg Lys Met Met
225 230 235 240
Leu Asp Trp Ala Ser Gly Thr Leu Tyr Gln Asp Arg Phe Asp Tyr Leu
245 250 255
Phe Tyr Ile His Cys Arg Glu Val Ser Leu Val Thr Gln Arg Ser Leu
260 265 270
Gly Asp Leu Ile Met Ser Cys Cys Pro Asp Pro Asn Pro Pro Ile His
275 280 285
Lys Ile Val Arg Lys Pro Ser Arg Ile Leu Phe Leu Met Asp Gly Phe
290 295 300
Asp Glu Leu Gln Gly Ala Phe Asp Glu His Ile Gly Pro Leu Cys Thr
305 310 315 320
Asp Trp Gln Lys Ala Glu Arg Gly Asp Ile Leu Leu Ser Ser Leu Ile
325 330 335
Arg Lys Lys Leu Leu Pro Glu Ala Ser Leu Leu Ile Thr Thr Arg Pro
340 345 350
Val Ala Leu Glu Lys Leu Gln His Leu Leu Asp His Pro Arg His Val
355 360 365
Glu Ile Leu Gly Phe Ser Glu Ala Lys Arg Lys Glu Tyr Phe Phe Lys
370 375 380
Tyr Phe Ser Asp Glu Ala Gln Ala Arg Ala Ala Phe Ser Leu Ile Gln
385 390 395 400
Glu Asn Glu Val Leu Phe Thr Met Cys Phe Ile Pro Leu Val Cys Trp
405 410 415
Ile Val Cys Thr Gly Leu Lys Gln Gln Met Glu Ser Gly Lys Ser Leu
420 425 430
Ala Gln Thr Ser Lys Thr Thr Thr Ala Val Tyr Val Phe Phe Leu Ser
435 440 445
Ser Leu Leu Gln Pro Arg Gly Gly Ser Gln Glu His Gly Leu Cys Ala
450 455 460
His Leu Trp Gly Leu Cys Ser Leu Ala Ala Asp Gly Ile Trp Asn Gln
465 470 475 480
Lys Ile Leu Phe Glu Glu Ser Asp Leu Arg Asn His Gly Leu Gln Lys
485 490 495
Ala Asp Val Ser Ala Phe Leu Arg Met Asn Leu Phe Gln Lys Glu Val
500 505 510
Asp Cys Glu Lys Phe Tyr Ser Phe Ile His Met Thr Phe Gln Glu Phe
515 520 525
Phe Ala Ala Met Tyr Tyr Leu Leu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg Thr
530 535 540
Asn Val Pro Gly Ser Arg Leu Lys Leu Pro Ser Arg Asp Val Thr Val
545 550 555 560
Leu Leu Glu Asn Tyr Gly Lys Phe Glu Lys Gly Tyr Leu Ile Phe Val
565 570 575
Val Arg Phe Leu Phe Gly Leu Val Asn Gln Glu Arg Thr Ser Tyr Leu
580 585 590
Glu Lys Lys Leu Ser Cys Lys Ile Ser Gln Gln Ile Arg Leu Glu Leu
595 600 605
Leu Lys Trp Ile Glu Val Lys Ala Lys Ala Lys Lys Leu Gln Ile Gln
610 615 620
Pro Ser Gln Leu Glu Leu Phe Tyr Cys Leu Tyr Glu Met Gln Glu Glu
625 630 635 640
Asp Phe Val Gln Arg Ala Met Asp Tyr Phe Pro Lys Ile Glu Ile Asn
645 650 655
Leu Ser Thr Arg Met Asp His Met Val Ser Ser Phe Cys Ile Glu Asn
660 665 670
Cys His Arg Val Glu Ser Leu Ser Leu Gly Phe Leu His Asn Met Pro
675 680 685
Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg His Leu Asp Met Val
690 695 700
Gln Cys Val Leu Pro Ser Ser Ser His Ala Ala Cys Ser His Gly Leu
705 710 715 720
Gly Arg Cys Gly Leu Ser His Glu Cys Cys Phe Asp Ile Ser Leu Val
725 730 735
Leu Ser Ser Asn Gln Lys Leu Val Glu Leu Asp Leu Ser Asp Asn Ala
740 745 750
Leu Gly Asp Phe Gly Ile Arg Leu Leu Cys Val Gly Leu Lys His Leu
755 760 765
Leu Cys Asn Leu Lys Lys Leu Trp Leu Val Ser Cys Cys Leu Thr Ser
770 775 780
Ala Cys Cys Gln Asp Leu Ala Ser Val Leu Ser Thr Ser His Ser Leu
785 790 795 800
Thr Arg Leu Tyr Val Gly Glu Asn Ala Leu Gly Asp Ser Gly Val Ala
805 810 815
Ile Leu Cys Glu Lys Ala Lys Asn Pro Gln Cys Asn Leu Gln Lys Leu
820 825 830
Gly Leu Val Asn Ser Gly Leu Thr Ser Val Cys Cys Ser Ala Leu Ser
835 840 845
Ser Val Leu Ser Thr Asn Gln Asn Leu Thr His Leu Tyr Leu Arg Gly
850 855 860
Asn Thr Leu Gly Asp Lys Gly Ile Lys Leu Leu Cys Glu Gly Leu Leu
865 870 875 880
His Pro Asp Cys Lys Leu Gln Val Leu Glu Leu Asp Asn Cys Asn Leu
885 890 895
Thr Ser His Cys Cys Trp Asp Leu Ser Thr Leu Leu Thr Ser Ser Gln
900 905 910
Ser Leu Arg Lys Leu Ser Leu Gly Asn Asn Asp Leu Gly Asp Leu Gly
915 920 925
Val Met Met Phe Cys Glu Val Leu Lys Gln Gln Ser Cys Leu Leu Gln
930 935 940
Asn Leu Gly Leu Ser Glu Met Tyr Phe Asn Tyr Glu Thr Lys Ser Ala
945 950 955 960
Leu Glu Thr Leu Gln Glu Glu Lys Pro Glu Leu Thr Val Val Phe Glu
965 970 975
Pro Ser Trp
<210> 7
<211> 979
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NLRP3-5
<400> 7
Met Lys Met Ala Ser Thr Arg Cys Lys Leu Ala Arg Tyr Leu Glu Asp
1 5 10 15
Leu Glu Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Lys Met His Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Pro Pro Gln Lys Gly Cys Ile Pro Leu Pro Arg Gly Gln Thr Glu Lys
35 40 45
Ala Asp His Val Asp Leu Ala Thr Leu Met Ile Asp Phe Asn Gly Glu
50 55 60
Glu Lys Ala Trp Ala Met Ala Val Trp Ile Phe Ala Ala Ile Asn Arg
65 70 75 80
Arg Asp Leu Tyr Glu Lys Ala Lys Arg Asp Glu Pro Lys Trp Gly Ser
85 90 95
Asp Asn Ala Arg Val Ser Asn Pro Thr Val Ile Cys Gln Glu Asp Ser
100 105 110
Ile Glu Glu Glu Trp Met Gly Leu Leu Glu Tyr Leu Ser Arg Ile Ser
115 120 125
Ile Cys Lys Met Lys Lys Asp Tyr Arg Lys Lys Tyr Arg Lys Tyr Val
130 135 140
Arg Ser Arg Phe Gln Cys Ile Glu Asp Arg Asn Ala Arg Leu Gly Glu
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Asn Lys Arg Tyr Thr Arg Leu Arg Leu Ile Lys Glu
165 170 175
His Arg Ser Gln Gln Glu Arg Glu Gln Glu Leu Leu Ala Ile Gly Lys
180 185 190
Thr Lys Thr Cys Glu Ser Pro Val Ser Pro Ile Lys Met Glu Leu Leu
195 200 205
Phe Asp Pro Asp Asp Glu His Ser Glu Pro Val His Thr Val Val Phe
210 215 220
Gln Gly Ala Ala Gly Ile Gly Lys Thr Ile Leu Ala Arg Lys Met Met
225 230 235 240
Leu Asp Trp Ala Ser Gly Thr Leu Tyr Gln Asp Arg Phe Asp Tyr Leu
245 250 255
Phe Tyr Ile His Cys Arg Glu Val Ser Leu Val Thr Gln Arg Ser Leu
260 265 270
Gly Asp Leu Ile Met Ser Cys Cys Pro Asp Pro Asn Pro Pro Ile His
275 280 285
Lys Ile Val Arg Lys Pro Ser Arg Ile Leu Phe Leu Met Asp Gly Phe
290 295 300
Asp Glu Leu Gln Gly Ala Phe Asp Glu His Ile Gly Pro Leu Cys Thr
305 310 315 320
Asp Trp Gln Lys Ala Glu Arg Gly Asp Ile Leu Leu Ser Ser Leu Ile
325 330 335
Arg Lys Lys Leu Leu Pro Glu Ala Ser Leu Leu Ile Thr Thr Arg Pro
340 345 350
Val Ala Leu Glu Lys Leu Gln His Leu Leu Asp His Pro Arg His Val
355 360 365
Glu Ile Leu Gly Phe Ser Glu Ala Lys Arg Lys Glu Tyr Phe Phe Lys
370 375 380
Tyr Phe Ser Asp Glu Ala Gln Ala Arg Ala Ala Phe Ser Leu Ile Gln
385 390 395 400
Glu Asn Glu Val Leu Phe Thr Met Cys Phe Ile Pro Leu Val Cys Trp
405 410 415
Ile Val Cys Thr Gly Leu Lys Gln Gln Met Glu Ser Gly Lys Ser Leu
420 425 430
Ala Gln Thr Ser Lys Thr Thr Thr Ala Val Tyr Val Phe Phe Leu Ser
435 440 445
Ser Leu Leu Gln Pro Arg Gly Gly Ser Gln Glu His Gly Leu Cys Ala
450 455 460
His Leu Trp Gly Leu Cys Ser Leu Ala Ala Asp Gly Ile Trp Asn Gln
465 470 475 480
Lys Ile Leu Phe Glu Glu Ser Asp Leu Arg Asn His Gly Leu Gln Lys
485 490 495
Ala Asp Val Ser Ala Phe Leu Arg Met Asn Leu Phe Gln Lys Glu Val
500 505 510
Asp Cys Glu Lys Phe Tyr Ser Phe Ile His Met Thr Phe Gln Glu Phe
515 520 525
Phe Ala Ala Met Tyr Tyr Leu Leu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg Thr
530 535 540
Asn Val Pro Gly Ser Arg Leu Lys Leu Pro Ser Arg Asp Val Thr Val
545 550 555 560
Leu Leu Glu Asn Tyr Gly Lys Phe Glu Lys Gly Tyr Leu Ile Phe Val
565 570 575
Val Arg Phe Leu Phe Gly Leu Val Asn Gln Glu Arg Thr Ser Tyr Leu
580 585 590
Glu Lys Lys Leu Ser Cys Lys Ile Ser Gln Gln Ile Arg Leu Glu Leu
595 600 605
Leu Lys Trp Ile Glu Val Lys Ala Lys Ala Lys Lys Leu Gln Ile Gln
610 615 620
Pro Ser Gln Leu Glu Leu Phe Tyr Cys Leu Tyr Glu Met Gln Glu Glu
625 630 635 640
Asp Phe Val Gln Arg Ala Met Asp Tyr Phe Pro Lys Ile Glu Ile Asn
645 650 655
Leu Ser Thr Arg Met Asp His Met Val Ser Ser Phe Cys Ile Glu Asn
660 665 670
Cys His Arg Val Glu Ser Leu Ser Leu Gly Phe Leu His Asn Met Pro
675 680 685
Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg His Leu Asp Met Val
690 695 700
Gln Cys Val Leu Pro Ser Ser Ser His Ala Ala Cys Ser His Gly Leu
705 710 715 720
Val Asn Ser His Leu Thr Ser Ser Phe Cys Arg Gly Leu Phe Ser Val
725 730 735
Leu Ser Thr Ser Gln Ser Leu Thr Glu Leu Asp Leu Ser Asp Asn Ser
740 745 750
Leu Gly Asp Pro Gly Met Arg Val Leu Cys Glu Thr Leu Gln His Pro
755 760 765
Gly Cys Asn Ile Arg Arg Leu Trp Leu Gly Arg Cys Gly Leu Ser His
770 775 780
Glu Cys Cys Phe Asp Ile Ser Leu Val Leu Ser Ser Asn Gln Lys Leu
785 790 795 800
Val Glu Leu Asp Leu Ser Asp Asn Ala Leu Gly Asp Phe Gly Ile Arg
805 810 815
Leu Leu Cys Val Gly Leu Lys His Leu Leu Cys Asn Leu Lys Lys Leu
820 825 830
Trp Leu Val Asn Ser Gly Leu Thr Ser Val Cys Cys Ser Ala Leu Ser
835 840 845
Ser Val Leu Ser Thr Asn Gln Asn Leu Thr His Leu Tyr Leu Arg Gly
850 855 860
Asn Thr Leu Gly Asp Lys Gly Ile Lys Leu Leu Cys Glu Gly Leu Leu
865 870 875 880
His Pro Asp Cys Lys Leu Gln Val Leu Glu Leu Asp Asn Cys Asn Leu
885 890 895
Thr Ser His Cys Cys Trp Asp Leu Ser Thr Leu Leu Thr Ser Ser Gln
900 905 910
Ser Leu Arg Lys Leu Ser Leu Gly Asn Asn Asp Leu Gly Asp Leu Gly
915 920 925
Val Met Met Phe Cys Glu Val Leu Lys Gln Gln Ser Cys Leu Leu Gln
930 935 940
Asn Leu Gly Leu Ser Glu Met Tyr Phe Asn Tyr Glu Thr Lys Ser Ala
945 950 955 960
Leu Glu Thr Leu Gln Glu Glu Lys Pro Glu Leu Thr Val Val Phe Glu
965 970 975
Pro Ser Trp
<210> 8
<211> 1016
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NLRP3-6
<400> 8
Met Lys Met Ala Ser Thr Arg Cys Lys Leu Ala Arg Tyr Leu Glu Asp
1 5 10 15
Leu Glu Asp Val Asp Leu Lys Lys Phe Lys Met His Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Pro Pro Gln Lys Gly Cys Ile Pro Leu Pro Arg Gly Gln Thr Glu Lys
35 40 45
Ala Asp His Val Asp Leu Ala Thr Leu Met Ile Asp Phe Asn Gly Glu
50 55 60
Glu Lys Ala Trp Ala Met Ala Val Trp Ile Phe Ala Ala Ile Asn Arg
65 70 75 80
Arg Asp Leu Tyr Glu Lys Ala Lys Arg Asp Glu Pro Lys Trp Gly Ser
85 90 95
Asp Asn Ala Arg Val Ser Asn Pro Thr Val Ile Cys Gln Glu Asp Ser
100 105 110
Ile Glu Glu Glu Trp Met Gly Leu Leu Glu Tyr Leu Ser Arg Ile Ser
115 120 125
Ile Cys Lys Met Lys Lys Asp Tyr Arg Lys Lys Tyr Arg Lys Tyr Val
130 135 140
Arg Ser Arg Phe Gln Cys Ile Glu Asp Arg Asn Ala Arg Leu Gly Glu
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Asn Lys Arg Tyr Thr Arg Leu Arg Leu Ile Lys Glu
165 170 175
His Arg Ser Gln Gln Glu Arg Glu Gln Glu Leu Leu Ala Ile Gly Lys
180 185 190
Thr Lys Thr Cys Glu Ser Pro Val Ser Pro Ile Lys Met Glu Leu Leu
195 200 205
Phe Asp Pro Asp Asp Glu His Ser Glu Pro Val His Thr Val Val Phe
210 215 220
Gln Gly Ala Ala Gly Ile Gly Lys Thr Ile Leu Ala Arg Lys Met Met
225 230 235 240
Leu Asp Trp Ala Ser Gly Thr Leu Tyr Gln Asp Arg Phe Asp Tyr Leu
245 250 255
Phe Tyr Ile His Cys Arg Glu Val Ser Leu Val Thr Gln Arg Ser Leu
260 265 270
Gly Asp Leu Ile Met Ser Cys Cys Pro Asp Pro Asn Pro Pro Ile His
275 280 285
Lys Ile Val Arg Lys Pro Ser Arg Ile Leu Phe Leu Met Asp Gly Phe
290 295 300
Asp Glu Leu Gln Gly Ala Phe Asp Glu His Ile Gly Pro Leu Cys Thr
305 310 315 320
Asp Trp Gln Lys Ala Glu Arg Gly Asp Ile Leu Leu Ser Ser Leu Ile
325 330 335
Arg Lys Lys Leu Leu Pro Glu Ala Ser Leu Leu Ile Thr Thr Arg Pro
340 345 350
Val Ala Leu Glu Lys Leu Gln His Leu Leu Asp His Pro Arg His Val
355 360 365
Glu Ile Leu Gly Phe Ser Glu Ala Lys Arg Lys Glu Tyr Phe Phe Lys
370 375 380
Tyr Phe Ser Asp Glu Ala Gln Ala Arg Ala Ala Phe Ser Leu Ile Gln
385 390 395 400
Glu Asn Glu Val Leu Phe Thr Met Cys Phe Ile Pro Leu Val Cys Trp
405 410 415
Ile Val Cys Thr Gly Leu Lys Gln Gln Met Glu Ser Gly Lys Ser Leu
420 425 430
Ala Gln Thr Ser Lys Thr Thr Thr Ala Val Tyr Val Phe Phe Leu Ser
435 440 445
Ser Leu Leu Gln Pro Arg Gly Gly Ser Gln Glu His Gly Leu Cys Ala
450 455 460
His Leu Trp Gly Leu Cys Ser Leu Ala Ala Asp Gly Ile Trp Asn Gln
465 470 475 480
Lys Ile Leu Phe Glu Glu Ser Asp Leu Arg Asn His Gly Leu Gln Lys
485 490 495
Ala Asp Val Ser Ala Phe Leu Arg Met Asn Leu Phe Gln Lys Glu Val
500 505 510
Asp Cys Glu Lys Phe Tyr Ser Phe Ile His Met Thr Phe Gln Glu Phe
515 520 525
Phe Ala Ala Met Tyr Tyr Leu Leu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg Thr
530 535 540
Asn Val Pro Gly Ser Arg Leu Lys Leu Pro Ser Arg Asp Val Thr Val
545 550 555 560
Leu Leu Glu Asn Tyr Gly Lys Phe Glu Lys Gly Tyr Leu Ile Phe Val
565 570 575
Val Arg Phe Leu Phe Gly Leu Val Asn Gln Glu Arg Thr Ser Tyr Leu
580 585 590
Glu Lys Lys Leu Ser Cys Lys Ile Ser Gln Gln Ile Arg Leu Glu Leu
595 600 605
Leu Lys Trp Ile Glu Val Lys Ala Lys Ala Lys Lys Leu Gln Ile Gln
610 615 620
Pro Ser Gln Leu Glu Leu Phe Tyr Cys Leu Tyr Glu Met Gln Glu Glu
625 630 635 640
Asp Phe Val Gln Arg Ala Met Asp Tyr Phe Pro Lys Ile Glu Ile Asn
645 650 655
Leu Ser Thr Arg Met Asp His Met Val Ser Ser Phe Cys Ile Glu Asn
660 665 670
Cys His Arg Val Glu Ser Leu Ser Leu Gly Phe Leu His Asn Met Pro
675 680 685
Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg His Leu Asp Met Val
690 695 700
Gln Cys Val Leu Pro Ser Ser Ser His Ala Ala Cys Ser His Gly Leu
705 710 715 720
Val Asn Ser His Leu Thr Ser Ser Phe Cys Arg Gly Leu Phe Ser Val
725 730 735
Leu Ser Thr Ser Gln Ser Leu Thr Glu Leu Asp Leu Ser Asp Asn Ser
740 745 750
Leu Gly Asp Pro Gly Met Arg Val Leu Cys Glu Thr Leu Gln His Pro
755 760 765
Gly Cys Asn Ile Arg Arg Leu Cys Asn Gln Lys Leu Val Glu Leu Asp
770 775 780
Leu Ser Asp Asn Ala Leu Gly Asp Phe Gly Ile Arg Leu Leu Cys Val
785 790 795 800
Gly Leu Lys His Leu Leu Cys Asn Leu Lys Lys Leu Trp Leu Val Ser
805 810 815
Cys Cys Leu Thr Ser Ala Cys Cys Gln Asp Leu Ala Ser Val Leu Ser
820 825 830
Thr Ser His Ser Leu Thr Arg Leu Tyr Val Gly Glu Asn Ala Leu Gly
835 840 845
Asp Ser Gly Val Ala Ile Leu Cys Glu Lys Ala Lys Asn Pro Gln Cys
850 855 860
Asn Leu Gln Lys Leu Gly Leu Val Asn Ser Gly Leu Thr Ser Val Cys
865 870 875 880
Cys Ser Ala Leu Ser Ser Val Leu Ser Thr Asn Gln Asn Leu Thr His
885 890 895
Leu Tyr Leu Arg Gly Asn Thr Leu Gly Asp Lys Gly Ile Lys Leu Leu
900 905 910
Cys Glu Gly Leu Leu His Pro Asp Cys Lys Leu Gln Val Leu Glu Leu
915 920 925
Asp Asn Cys Asn Leu Thr Ser His Cys Cys Trp Asp Leu Ser Thr Leu
930 935 940
Leu Thr Ser Ser Gln Ser Leu Arg Lys Leu Ser Leu Gly Asn Asn Asp
945 950 955 960
Leu Gly Asp Leu Gly Val Met Met Phe Cys Glu Val Leu Lys Gln Gln
965 970 975
Ser Cys Leu Leu Gln Asn Leu Gly Leu Ser Glu Met Tyr Phe Asn Tyr
980 985 990
Glu Thr Lys Ser Ala Leu Glu Thr Leu Gln Glu Glu Lys Pro Glu Leu
995 1000 1005
Thr Val Val Phe Glu Pro Ser Trp
1010 1015
<210> 9
<400> 9
000
<210> 10
<400> 10
000
<210> 11
<400> 11
000
<210> 12
<400> 12
000
<210> 13
<400> 13
000
<210> 14
<400> 14
000
<210> 15
<400> 15
000
<210> 16
<400> 16
000
<210> 17
<400> 17
000
<210> 18
<400> 18
000
<210> 19
<400> 19
000
<210> 20
<400> 20
000
<210> 21
<400> 21
000
<210> 22
<400> 22
000
<210> 23
<400> 23
000
<210> 24
<400> 24
000
<210> 25
<400> 25
000
<210> 26
<400> 26
000
<210> 27
<400> 27
000
<210> 28
<400> 28
000
<210> 29
<400> 29
000
<210> 30
<400> 30
000
<210> 31
<400> 31
000
<210> 32
<400> 32
000
<210> 33
<400> 33
000
<210> 34
<400> 34
000
<210> 35
<400> 35
000
<210> 36
<400> 36
000
<210> 37
<400> 37
000
<210> 38
<400> 38
000
<210> 39
<400> 39
000
<210> 40
<400> 40
000
<210> 41
<400> 41
000
<210> 42
<400> 42
000
<210> 43
<400> 43
000
<210> 44
<400> 44
000
<210> 45
<400> 45
000
<210> 46
<400> 46
000
<210> 47
<400> 47
000
<210> 48
<400> 48
000
<210> 49
<400> 49
000
<210> 50
<400> 50
000
<210> 51
<400> 51
000
<210> 52
<400> 52
000
<210> 53
<400> 53
000
<210> 54
<400> 54
000
<210> 55
<400> 55
000
<210> 56
<400> 56
000
<210> 57
<400> 57
000
<210> 58
<400> 58
000
<210> 59
<400> 59
000
<210> 60
<400> 60
000
<210> 61
<400> 61
000
<210> 62
<400> 62
000
<210> 63
<400> 63
000
<210> 64
<400> 64
000
<210> 65
<400> 65
000
<210> 66
<400> 66
000
<210> 67
<400> 67
000
<210> 68
<400> 68
000
<210> 69
<400> 69
000
<210> 70
<400> 70
000
<210> 71
<400> 71
000
<210> 72
<400> 72
000
<210> 73
<400> 73
000
<210> 74
<400> 74
000
<210> 75
<400> 75
000
<210> 76
<400> 76
000
<210> 77
<400> 77
000
<210> 78
<400> 78
000
<210> 79
<400> 79
000
<210> 80
<400> 80
000
<210> 81
<400> 81
000
<210> 82
<400> 82
000
<210> 83
<400> 83
000
<210> 84
<400> 84
000
<210> 85
<400> 85
000
<210> 86
<400> 86
000
<210> 87
<400> 87
000
<210> 88
<400> 88
000
<210> 89
<400> 89
000
<210> 90
<400> 90
000
<210> 91
<400> 91
000
<210> 92
<400> 92
000
<210> 93
<400> 93
000
<210> 94
<400> 94
000
<210> 95
<400> 95
000
<210> 96
<400> 96
000
<210> 97
<400> 97
000
<210> 98
<400> 98
000
<210> 99
<400> 99
000
<210> 100
<400> 100
000
<210> 101
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 101
ggctcgatcc aggagtgtgt 20
<210> 102
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 102
ttggctcgat ccaggagtgt 20
<210> 103
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 103
ctcctgttgg ctcgatccag 20
<210> 104
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 104
gcgggtgctt gccatcttca 20
<210> 105
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 105
ggatagtcct ctaagtgcat 20
<210> 106
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 106
ggctagatcc acatggtctg 20
<210> 107
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 107
tagcgtggct agatccacat 20
<210> 108
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 108
ttagcgtggc tagatccaca 20
<210> 109
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 109
attagcgtgg ctagatccac 20
<210> 110
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 110
tcattagcgt ggctagatcc 20
<210> 111
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 111
atcattagcg tggctagatc 20
<210> 112
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 112
gcgaagatcc acacggccat 20
<210> 113
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 113
atcgcagcga agatccacac 20
<210> 114
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 114
gttgatcgca gcgaagatcc 20
<210> 115
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 115
ctgttgatcg cagcgaagat 20
<210> 116
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 116
ctcctgttga tcgcagcgaa 20
<210> 117
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 117
tctcctgttg atcgcagcga 20
<210> 118
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 118
ctctcctgtt gatcgcagcg 20
<210> 119
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 119
ctgaacccca cttcggctca 20
<210> 120
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 120
attatctgaa ccccacttcg 20
<210> 121
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 121
cacgtgcatt atctgaaccc 20
<210> 122
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 122
tcgaaaggta ctccagtaaa 20
<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 123
gattctcgaa aggtactcca 20
<210> 124
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 124
atagagattc tcgaaaggta 20
<210> 125
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 125
cacgtacttt ctgtacttct 20
<210> 126
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 126
tggaatctgc ttctcacgta 20
<210> 127
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 127
cgggcattcc tgtcttcaat 20
<210> 128
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 128
acccagacgg gcattcctgt 20
<210> 129
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 129
cgtttgttga ggctcacact 20
<210> 130
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 130
tgtagcgttt gttgaggctc 20
<210> 131
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 131
agtcgtgtgt agcgtttgtt 20
<210> 132
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 132
cagtcgtgtg tagcgtttgt 20
<210> 133
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 133
gcagtcgtgt gtagcgtttg 20
<210> 134
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 134
cgcagtcgtg tgtagcgttt 20
<210> 135
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 135
acgtcttggt cttgccgatg 20
<210> 136
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 136
cacgtcttgg tcttgccgat 20
<210> 137
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 137
atcttaatgg gactcacggg 20
<210> 138
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 138
ccatcttaat gggactcacg 20
<210> 139
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 139
actccatctt aatgggactc 20
<210> 140
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 140
tagtcaaacc tgtcttggta 20
<210> 141
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 141
gctcatgatc aggtccccca 20
<210> 142
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 142
ggcagcagct catgatcagg 20
<210> 143
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 143
cgtcaaaggc accttgcagc 20
<210> 144
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 144
tgtgctcgtc aaaggcacct 20
<210> 145
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 145
gtcctatgtg ctcgtcaaag 20
<210> 146
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 146
cggtcctatg tgctcgtcaa 20
<210> 147
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 147
agcggtccta tgtgctcgtc 20
<210> 148
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 148
gagcggtcct atgtgctcgt 20
<210> 149
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 149
agagcggtcc tatgtgctcg 20
<210> 150
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 150
cagtgcagag cggtcctatg 20
<210> 151
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 151
ccagtcagtg cagagcggtc 20
<210> 152
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 152
tcggccttct gccagtcagt 20
<210> 153
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 153
gaatgtctcc ccgctcggcc 20
<210> 154
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 154
gagaatgtct ccccgctcgg 20
<210> 155
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 155
caggagaatg tctccccgct 20
<210> 156
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 156
gatctccaca tgccgaggat 20
<210> 157
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 157
ttctcctgaa tcagactgaa 20
<210> 158
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 158
cagtccagtg cacacgatcc 20
<210> 159
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 159
tacatggcgg caaagaactc 20
<210> 160
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 160
cgaatttgcc atagttttcc 20
<210> 161
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 161
ccaaagagga aacgtacaac 20
<210> 162
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 162
gcctgatttg ctgagagatc 20
<210> 163
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 163
catctcgtac aaacagtaga 20
<210> 164
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 164
gcatctcgta caaacagtag 20
<210> 165
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 165
atggcccttt gcacgaagtc 20
<210> 166
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 166
agtccatggc cctttgcacg 20
<210> 167
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 167
agagattgat ctcaatcttg 20
<210> 168
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 168
gatgacagtt ctcaatgcaa 20
<210> 169
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 169
cacccgatga cagttctcaa 20
<210> 170
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 170
gactccaccc gatgacagtt 20
<210> 171
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 171
aaggtgtcgg ccttcctttt 20
<210> 172
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 172
catatcaagg tgtcggcctt 20
<210> 173
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 173
cagcactcat gcgagaggcc 20
<210> 174
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 174
gtcgaagcag cactcatgcg 20
<210> 175
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 175
gaggaccaag gagatgtcga 20
<210> 176
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 176
tggttgctgc tgaggaccaa 20
<210> 177
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 177
gattgcacaa caggtgcttc 20
<210> 178
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 178
ggtgcgtgag attctgatta 20
<210> 179
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 179
gtaaaggtgc gtgagattct 20
<210> 180
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 180
ctcgcaggta aaggtgcgtg 20
<210> 181
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 181
cctcgcaggt aaaggtgcgt 20
<210> 182
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 182
gttgcctcgc aggtaaaggt 20
<210> 183
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 183
agagtgttgc ctcgcaggta 20
<210> 184
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 184
cgagagtgtt gcctcgcagg 20
<210> 185
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 185
tccgagagtg ttgcctcgca 20
<210> 186
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 186
ctccgagagt gttgcctcgc 20
<210> 187
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 187
tctccgagag tgttgcctcg 20
<210> 188
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 188
cttgtctccg agagtgttgc 20
<210> 189
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 189
gatccccttg tctccgagag 20
<210> 190
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 190
acctgaagct tgcagtcggg 20
<210> 191
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 191
gcagttgtct aattccaaca 20
<210> 192
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 192
aggttgcagt tgtctaattc 20
<210> 193
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 193
gtgacgtgag gttgcagttg 20
<210> 194
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 194
gcagtgtgac gtgaggttgc 20
<210> 195
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 195
gctcagcttt cgcaggctct 20
<210> 196
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 196
gtcgcccagg tcattgttgc 20
<210> 197
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 197
atcatgaccc ccaggtcgcc 20
<210> 198
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 198
acatcctcta actgaggcgc 20
<210> 199
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 199
ccaagaggaa catcctctaa 20
<210> 200
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 200
gttatggtca gttaatagaa 20
<210> 201
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 201
gcttgcaacg gacactcgtc 20
<210> 202
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 202
gatacagcct ttctcgggcg 20
<210> 203
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 203
cgttttgacc ctatgacagt 20
<210> 204
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 204
cgggatggtc agttaacagg 20
<210> 205
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 205
cgtcaaaggc cccttgtagc 20
<210> 206
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 206
gcttcgtaga tagaggtgtg 20
<210> 207
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 207
tcgccattga agtcaatcat 20
<210> 208
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 208
ctctcggcag tggataaaga 20
<210> 209
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 209
tccaaggcta ccggcctcgt 20
<210> 210
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反义寡核苷酸
<400> 210
ctcgcagtcc acttccttct 20
<210> 211
<400> 211
000
<210> 212
<400> 212
000
<210> 213
<400> 213
000
<210> 214
<400> 214
000
<210> 215
<400> 215
000
<210> 216
<400> 216
000
<210> 217
<400> 217
000
<210> 218
<400> 218
000
<210> 219
<400> 219
000
<210> 220
<400> 220
000
<210> 221
<400> 221
000
<210> 222
<400> 222
000
<210> 223
<400> 223
000
<210> 224
<400> 224
000
<210> 225
<400> 225
000
<210> 226
<400> 226
000
<210> 227
<400> 227
000
<210> 228
<400> 228
000
<210> 229
<400> 229
000
<210> 230
<400> 230
000
<210> 231
<400> 231
000
<210> 232
<400> 232
000
<210> 233
<400> 233
000
<210> 234
<400> 234
000
<210> 235
<400> 235
000
<210> 236
<400> 236
000
<210> 237
<400> 237
000
<210> 238
<400> 238
000
<210> 239
<400> 239
000
<210> 240
<400> 240
000
<210> 241
<400> 241
000
<210> 242
<400> 242
000
<210> 243
<400> 243
000
<210> 244
<400> 244
000
<210> 245
<400> 245
000
<210> 246
<400> 246
000
<210> 247
<400> 247
000
<210> 248
<400> 248
000
<210> 249
<400> 249
000
<210> 250
<400> 250
000
<210> 251
<400> 251
000
<210> 252
<400> 252
000
<210> 253
<400> 253
000
<210> 254
<400> 254
000
<210> 255
<400> 255
000
<210> 256
<400> 256
000
<210> 257
<400> 257
000
<210> 258
<400> 258
000
<210> 259
<400> 259
000
<210> 260
<400> 260
000
<210> 261
<400> 261
000
<210> 262
<400> 262
000
<210> 263
<400> 263
000
<210> 264
<400> 264
000
<210> 265
<400> 265
000
<210> 266
<400> 266
000
<210> 267
<400> 267
000
<210> 268
<400> 268
000
<210> 269
<400> 269
000
<210> 270
<400> 270
000
<210> 271
<400> 271
000
<210> 272
<400> 272
000
<210> 273
<400> 273
000
<210> 274
<400> 274
000
<210> 275
<400> 275
000
<210> 276
<400> 276
000
<210> 277
<400> 277
000
<210> 278
<400> 278
000
<210> 279
<400> 279
000
<210> 280
<400> 280
000
<210> 281
<400> 281
000
<210> 282
<400> 282
000
<210> 283
<400> 283
000
<210> 284
<400> 284
000
<210> 285
<400> 285
000
<210> 286
<400> 286
000
<210> 287
<400> 287
000
<210> 288
<400> 288
000
<210> 289
<400> 289
000
<210> 290
<400> 290
000
<210> 291
<400> 291
000
<210> 292
<400> 292
000
<210> 293
<400> 293
000
<210> 294
<400> 294
000
<210> 295
<400> 295
000
<210> 296
<400> 296
000
<210> 297
<400> 297
000
<210> 298
<400> 298
000
<210> 299
<400> 299
000
<210> 300
<400> 300
000
<210> 301
<211> 879
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PTGFRN
<400> 301
Met Gly Arg Leu Ala Ser Arg Pro Leu Leu Leu Ala Leu Leu Ser Leu
1 5 10 15
Ala Leu Cys Arg Gly Arg Val Val Arg Val Pro Thr Ala Thr Leu Val
20 25 30
Arg Val Val Gly Thr Glu Leu Val Ile Pro Cys Asn Val Ser Asp Tyr
35 40 45
Asp Gly Pro Ser Glu Gln Asn Phe Asp Trp Ser Phe Ser Ser Leu Gly
50 55 60
Ser Ser Phe Val Glu Leu Ala Ser Thr Trp Glu Val Gly Phe Pro Ala
65 70 75 80
Gln Leu Tyr Gln Glu Arg Leu Gln Arg Gly Glu Ile Leu Leu Arg Arg
85 90 95
Thr Ala Asn Asp Ala Val Glu Leu His Ile Lys Asn Val Gln Pro Ser
100 105 110
Asp Gln Gly His Tyr Lys Cys Ser Thr Pro Ser Thr Asp Ala Thr Val
115 120 125
Gln Gly Asn Tyr Glu Asp Thr Val Gln Val Lys Val Leu Ala Asp Ser
130 135 140
Leu His Val Gly Pro Ser Ala Arg Pro Pro Pro Ser Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Glu Gly Glu Pro Phe Glu Leu Arg Cys Thr Ala Ala Ser Ala Ser Pro
165 170 175
Leu His Thr His Leu Ala Leu Leu Trp Glu Val His Arg Gly Pro Ala
180 185 190
Arg Arg Ser Val Leu Ala Leu Thr His Glu Gly Arg Phe His Pro Gly
195 200 205
Leu Gly Tyr Glu Gln Arg Tyr His Ser Gly Asp Val Arg Leu Asp Thr
210 215 220
Val Gly Ser Asp Ala Tyr Arg Leu Ser Val Ser Arg Ala Leu Ser Ala
225 230 235 240
Asp Gln Gly Ser Tyr Arg Cys Ile Val Ser Glu Trp Ile Ala Glu Gln
245 250 255
Gly Asn Trp Gln Glu Ile Gln Glu Lys Ala Val Glu Val Ala Thr Val
260 265 270
Val Ile Gln Pro Ser Val Leu Arg Ala Ala Val Pro Lys Asn Val Ser
275 280 285
Val Ala Glu Gly Lys Glu Leu Asp Leu Thr Cys Asn Ile Thr Thr Asp
290 295 300
Arg Ala Asp Asp Val Arg Pro Glu Val Thr Trp Ser Phe Ser Arg Met
305 310 315 320
Pro Asp Ser Thr Leu Pro Gly Ser Arg Val Leu Ala Arg Leu Asp Arg
325 330 335
Asp Ser Leu Val His Ser Ser Pro His Val Ala Leu Ser His Val Asp
340 345 350
Ala Arg Ser Tyr His Leu Leu Val Arg Asp Val Ser Lys Glu Asn Ser
355 360 365
Gly Tyr Tyr Tyr Cys His Val Ser Leu Trp Ala Pro Gly His Asn Arg
370 375 380
Ser Trp His Lys Val Ala Glu Ala Val Ser Ser Pro Ala Gly Val Gly
385 390 395 400
Val Thr Trp Leu Glu Pro Asp Tyr Gln Val Tyr Leu Asn Ala Ser Lys
405 410 415
Val Pro Gly Phe Ala Asp Asp Pro Thr Glu Leu Ala Cys Arg Val Val
420 425 430
Asp Thr Lys Ser Gly Glu Ala Asn Val Arg Phe Thr Val Ser Trp Tyr
435 440 445
Tyr Arg Met Asn Arg Arg Ser Asp Asn Val Val Thr Ser Glu Leu Leu
450 455 460
Ala Val Met Asp Gly Asp Trp Thr Leu Lys Tyr Gly Glu Arg Ser Lys
465 470 475 480
Gln Arg Ala Gln Asp Gly Asp Phe Ile Phe Ser Lys Glu His Thr Asp
485 490 495
Thr Phe Asn Phe Arg Ile Gln Arg Thr Thr Glu Glu Asp Arg Gly Asn
500 505 510
Tyr Tyr Cys Val Val Ser Ala Trp Thr Lys Gln Arg Asn Asn Ser Trp
515 520 525
Val Lys Ser Lys Asp Val Phe Ser Lys Pro Val Asn Ile Phe Trp Ala
530 535 540
Leu Glu Asp Ser Val Leu Val Val Lys Ala Arg Gln Pro Lys Pro Phe
545 550 555 560
Phe Ala Ala Gly Asn Thr Phe Glu Met Thr Cys Lys Val Ser Ser Lys
565 570 575
Asn Ile Lys Ser Pro Arg Tyr Ser Val Leu Ile Met Ala Glu Lys Pro
580 585 590
Val Gly Asp Leu Ser Ser Pro Asn Glu Thr Lys Tyr Ile Ile Ser Leu
595 600 605
Asp Gln Asp Ser Val Val Lys Leu Glu Asn Trp Thr Asp Ala Ser Arg
610 615 620
Val Asp Gly Val Val Leu Glu Lys Val Gln Glu Asp Glu Phe Arg Tyr
625 630 635 640
Arg Met Tyr Gln Thr Gln Val Ser Asp Ala Gly Leu Tyr Arg Cys Met
645 650 655
Val Thr Ala Trp Ser Pro Val Arg Gly Ser Leu Trp Arg Glu Ala Ala
660 665 670
Thr Ser Leu Ser Asn Pro Ile Glu Ile Asp Phe Gln Thr Ser Gly Pro
675 680 685
Ile Phe Asn Ala Ser Val His Ser Asp Thr Pro Ser Val Ile Arg Gly
690 695 700
Asp Leu Ile Lys Leu Phe Cys Ile Ile Thr Val Glu Gly Ala Ala Leu
705 710 715 720
Asp Pro Asp Asp Met Ala Phe Asp Val Ser Trp Phe Ala Val His Ser
725 730 735
Phe Gly Leu Asp Lys Ala Pro Val Leu Leu Ser Ser Leu Asp Arg Lys
740 745 750
Gly Ile Val Thr Thr Ser Arg Arg Asp Trp Lys Ser Asp Leu Ser Leu
755 760 765
Glu Arg Val Ser Val Leu Glu Phe Leu Leu Gln Val His Gly Ser Glu
770 775 780
Asp Gln Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Ser Val Thr Pro Trp Val Lys
785 790 795 800
Ser Pro Thr Gly Ser Trp Gln Lys Glu Ala Glu Ile His Ser Lys Pro
805 810 815
Val Phe Ile Thr Val Lys Met Asp Val Leu Asn Ala Phe Lys Tyr Pro
820 825 830
Leu Leu Ile Gly Val Gly Leu Ser Thr Val Ile Gly Leu Leu Ser Cys
835 840 845
Leu Ile Gly Tyr Cys Ser Ser His Trp Cys Cys Lys Lys Glu Val Gln
850 855 860
Glu Thr Arg Arg Glu Arg Arg Arg Leu Met Ser Met Glu Met Asp
865 870 875
<210> 302
<211> 192
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PTGFRN片段
<400> 302
Gly Pro Ile Phe Asn Ala Ser Val His Ser Asp Thr Pro Ser Val Ile
1 5 10 15
Arg Gly Asp Leu Ile Lys Leu Phe Cys Ile Ile Thr Val Glu Gly Ala
20 25 30
Ala Leu Asp Pro Asp Asp Met Ala Phe Asp Val Ser Trp Phe Ala Val
35 40 45
His Ser Phe Gly Leu Asp Lys Ala Pro Val Leu Leu Ser Ser Leu Asp
50 55 60
Arg Lys Gly Ile Val Thr Thr Ser Arg Arg Asp Trp Lys Ser Asp Leu
65 70 75 80
Ser Leu Glu Arg Val Ser Val Leu Glu Phe Leu Leu Gln Val His Gly
85 90 95
Ser Glu Asp Gln Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Ser Val Thr Pro Trp
100 105 110
Val Lys Ser Pro Thr Gly Ser Trp Gln Lys Glu Ala Glu Ile His Ser
115 120 125
Lys Pro Val Phe Ile Thr Val Lys Met Asp Val Leu Asn Ala Phe Lys
130 135 140
Tyr Pro Leu Leu Ile Gly Val Gly Leu Ser Thr Val Ile Gly Leu Leu
145 150 155 160
Ser Cys Leu Ile Gly Tyr Cys Ser Ser His Trp Cys Cys Lys Lys Glu
165 170 175
Val Gln Glu Thr Arg Arg Glu Arg Arg Arg Leu Met Ser Met Glu Met
180 185 190
<210> 303
<211> 385
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BSG蛋白
<400> 303
Met Ala Ala Ala Leu Phe Val Leu Leu Gly Phe Ala Leu Leu Gly Thr
1 5 10 15
His Gly Ala Ser Gly Ala Ala Gly Phe Val Gln Ala Pro Leu Ser Gln
20 25 30
Gln Arg Trp Val Gly Gly Ser Val Glu Leu His Cys Glu Ala Val Gly
35 40 45
Ser Pro Val Pro Glu Ile Gln Trp Trp Phe Glu Gly Gln Gly Pro Asn
50 55 60
Asp Thr Cys Ser Gln Leu Trp Asp Gly Ala Arg Leu Asp Arg Val His
65 70 75 80
Ile His Ala Thr Tyr His Gln His Ala Ala Ser Thr Ile Ser Ile Asp
85 90 95
Thr Leu Val Glu Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Glu Cys Arg Ala Ser Asn
100 105 110
Asp Pro Asp Arg Asn His Leu Thr Arg Ala Pro Arg Val Lys Trp Val
115 120 125
Arg Ala Gln Ala Val Val Leu Val Leu Glu Pro Gly Thr Val Phe Thr
130 135 140
Thr Val Glu Asp Leu Gly Ser Lys Ile Leu Leu Thr Cys Ser Leu Asn
145 150 155 160
Asp Ser Ala Thr Glu Val Thr Gly His Arg Trp Leu Lys Gly Gly Val
165 170 175
Val Leu Lys Glu Asp Ala Leu Pro Gly Gln Lys Thr Glu Phe Lys Val
180 185 190
Asp Ser Asp Asp Gln Trp Gly Glu Tyr Ser Cys Val Phe Leu Pro Glu
195 200 205
Pro Met Gly Thr Ala Asn Ile Gln Leu His Gly Pro Pro Arg Val Lys
210 215 220
Ala Val Lys Ser Ser Glu His Ile Asn Glu Gly Glu Thr Ala Met Leu
225 230 235 240
Val Cys Lys Ser Glu Ser Val Pro Pro Val Thr Asp Trp Ala Trp Tyr
245 250 255
Lys Ile Thr Asp Ser Glu Asp Lys Ala Leu Met Asn Gly Ser Glu Ser
260 265 270
Arg Phe Phe Val Ser Ser Ser Gln Gly Arg Ser Glu Leu His Ile Glu
275 280 285
Asn Leu Asn Met Glu Ala Asp Pro Gly Gln Tyr Arg Cys Asn Gly Thr
290 295 300
Ser Ser Lys Gly Ser Asp Gln Ala Ile Ile Thr Leu Arg Val Arg Ser
305 310 315 320
His Leu Ala Ala Leu Trp Pro Phe Leu Gly Ile Val Ala Glu Val Leu
325 330 335
Val Leu Val Thr Ile Ile Phe Ile Tyr Glu Lys Arg Arg Lys Pro Glu
340 345 350
Asp Val Leu Asp Asp Asp Asp Ala Gly Ser Ala Pro Leu Lys Ser Ser
355 360 365
Gly Gln His Gln Asn Asp Lys Gly Lys Asn Val Arg Gln Arg Asn Ser
370 375 380
Ser
385
<210> 304
<211> 613
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGSF8蛋白
<400> 304
Met Gly Ala Leu Arg Pro Thr Leu Leu Pro Pro Ser Leu Pro Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Met Leu Gly Met Gly Cys Trp Ala Arg Glu Val Leu Val
20 25 30
Pro Glu Gly Pro Leu Tyr Arg Val Ala Gly Thr Ala Val Ser Ile Ser
35 40 45
Cys Asn Val Thr Gly Tyr Glu Gly Pro Ala Gln Gln Asn Phe Glu Trp
50 55 60
Phe Leu Tyr Arg Pro Glu Ala Pro Asp Thr Ala Leu Gly Ile Val Ser
65 70 75 80
Thr Lys Asp Thr Gln Phe Ser Tyr Ala Val Phe Lys Ser Arg Val Val
85 90 95
Ala Gly Glu Val Gln Val Gln Arg Leu Gln Gly Asp Ala Val Val Leu
100 105 110
Lys Ile Ala Arg Leu Gln Ala Gln Asp Ala Gly Ile Tyr Glu Cys His
115 120 125
Thr Pro Ser Thr Asp Thr Arg Tyr Leu Gly Ser Tyr Ser Gly Lys Val
130 135 140
Glu Leu Arg Val Leu Pro Asp Val Leu Gln Val Ser Ala Ala Pro Pro
145 150 155 160
Gly Pro Arg Gly Arg Gln Ala Pro Thr Ser Pro Pro Arg Met Thr Val
165 170 175
His Glu Gly Gln Glu Leu Ala Leu Gly Cys Leu Ala Arg Thr Ser Thr
180 185 190
Gln Lys His Thr His Leu Ala Val Ser Phe Gly Arg Ser Val Pro Glu
195 200 205
Ala Pro Val Gly Arg Ser Thr Leu Gln Glu Val Val Gly Ile Arg Ser
210 215 220
Asp Leu Ala Val Glu Ala Gly Ala Pro Tyr Ala Glu Arg Leu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Glu Leu Arg Leu Gly Lys Glu Gly Thr Asp Arg Tyr Arg Met Val
245 250 255
Val Gly Gly Ala Gln Ala Gly Asp Ala Gly Thr Tyr His Cys Thr Ala
260 265 270
Ala Glu Trp Ile Gln Asp Pro Asp Gly Ser Trp Ala Gln Ile Ala Glu
275 280 285
Lys Arg Ala Val Leu Ala His Val Asp Val Gln Thr Leu Ser Ser Gln
290 295 300
Leu Ala Val Thr Val Gly Pro Gly Glu Arg Arg Ile Gly Pro Gly Glu
305 310 315 320
Pro Leu Glu Leu Leu Cys Asn Val Ser Gly Ala Leu Pro Pro Ala Gly
325 330 335
Arg His Ala Ala Tyr Ser Val Gly Trp Glu Met Ala Pro Ala Gly Ala
340 345 350
Pro Gly Pro Gly Arg Leu Val Ala Gln Leu Asp Thr Glu Gly Val Gly
355 360 365
Ser Leu Gly Pro Gly Tyr Glu Gly Arg His Ile Ala Met Glu Lys Val
370 375 380
Ala Ser Arg Thr Tyr Arg Leu Arg Leu Glu Ala Ala Arg Pro Gly Asp
385 390 395 400
Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Leu Ala Lys Ala Tyr Val Arg Gly Ser Gly
405 410 415
Thr Arg Leu Arg Glu Ala Ala Ser Ala Arg Ser Arg Pro Leu Pro Val
420 425 430
His Val Arg Glu Glu Gly Val Val Leu Glu Ala Val Ala Trp Leu Ala
435 440 445
Gly Gly Thr Val Tyr Arg Gly Glu Thr Ala Ser Leu Leu Cys Asn Ile
450 455 460
Ser Val Arg Gly Gly Pro Pro Gly Leu Arg Leu Ala Ala Ser Trp Trp
465 470 475 480
Val Glu Arg Pro Glu Asp Gly Glu Leu Ser Ser Val Pro Ala Gln Leu
485 490 495
Val Gly Gly Val Gly Gln Asp Gly Val Ala Glu Leu Gly Val Arg Pro
500 505 510
Gly Gly Gly Pro Val Ser Val Glu Leu Val Gly Pro Arg Ser His Arg
515 520 525
Leu Arg Leu His Ser Leu Gly Pro Glu Asp Glu Gly Val Tyr His Cys
530 535 540
Ala Pro Ser Ala Trp Val Gln His Ala Asp Tyr Ser Trp Tyr Gln Ala
545 550 555 560
Gly Ser Ala Arg Ser Gly Pro Val Thr Val Tyr Pro Tyr Met His Ala
565 570 575
Leu Asp Thr Leu Phe Val Pro Leu Leu Val Gly Thr Gly Val Ala Leu
580 585 590
Val Thr Gly Ala Thr Val Leu Gly Thr Ile Thr Cys Cys Phe Met Lys
595 600 605
Arg Leu Arg Lys Arg
610
<210> 305
<211> 748
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ITGB1蛋白
<400> 305
Met Asn Leu Gln Pro Ile Phe Trp Ile Gly Leu Ile Ser Ser Val Cys
1 5 10 15
Cys Val Phe Ala Gln Thr Asp Glu Asn Arg Cys Leu Lys Ala Asn Ala
20 25 30
Lys Ser Cys Gly Glu Cys Ile Gln Ala Gly Pro Asn Cys Gly Trp Cys
35 40 45
Thr Asn Ser Thr Phe Leu Gln Glu Gly Met Pro Thr Ser Ala Arg Cys
50 55 60
Asp Asp Leu Glu Ala Leu Lys Lys Lys Gly Cys Pro Pro Asp Asp Ile
65 70 75 80
Glu Asn Pro Arg Gly Ser Lys Asp Ile Lys Lys Asn Lys Asn Val Thr
85 90 95
Asn Arg Ser Lys Gly Thr Ala Glu Lys Leu Lys Pro Glu Asp Ile Thr
100 105 110
Gln Ile Gln Pro Gln Gln Leu Val Leu Arg Leu Arg Ser Gly Glu Pro
115 120 125
Gln Thr Phe Thr Leu Lys Phe Lys Arg Ala Glu Asp Tyr Pro Ile Asp
130 135 140
Leu Tyr Tyr Leu Met Asp Leu Ser Tyr Ser Met Lys Asp Asp Leu Glu
145 150 155 160
Asn Val Lys Ser Leu Gly Thr Asp Leu Met Asn Glu Met Arg Arg Ile
165 170 175
Thr Ser Asp Phe Arg Ile Gly Phe Gly Ser Phe Val Glu Lys Thr Val
180 185 190
Met Pro Tyr Ile Ser Thr Thr Pro Ala Lys Leu Arg Asn Pro Cys Thr
195 200 205
Ser Glu Gln Asn Cys Thr Ser Pro Phe Ser Tyr Lys Asn Val Leu Ser
210 215 220
Leu Thr Asn Lys Gly Glu Val Phe Asn Glu Leu Val Gly Lys Gln Arg
225 230 235 240
Ile Ser Gly Asn Leu Asp Ser Pro Glu Gly Gly Phe Asp Ala Ile Met
245 250 255
Gln Val Ala Val Cys Gly Ser Leu Ile Gly Trp Arg Asn Val Thr Arg
260 265 270
Leu Leu Val Phe Ser Thr Asp Ala Gly Phe His Phe Ala Gly Asp Gly
275 280 285
Lys Leu Gly Gly Ile Val Leu Pro Asn Asp Gly Gln Cys His Leu Glu
290 295 300
Asn Asn Met Tyr Thr Met Ser His Tyr Tyr Asp Tyr Pro Ser Ile Ala
305 310 315 320
His Leu Val Gln Lys Leu Ser Glu Asn Asn Ile Gln Thr Ile Phe Ala
325 330 335
Val Thr Glu Glu Phe Gln Pro Val Tyr Lys Glu Leu Lys Asn Leu Ile
340 345 350
Pro Lys Ser Ala Val Gly Thr Leu Ser Ala Asn Ser Ser Asn Val Ile
355 360 365
Gln Leu Ile Ile Asp Ala Tyr Asn Ser Leu Ser Ser Glu Val Ile Leu
370 375 380
Glu Asn Gly Lys Leu Ser Glu Gly Val Thr Ile Ser Tyr Lys Ser Tyr
385 390 395 400
Cys Lys Asn Gly Val Asn Gly Thr Gly Glu Asn Gly Arg Lys Cys Ser
405 410 415
Asn Ile Ser Ile Gly Asp Glu Val Gln Phe Glu Ile Ser Ile Thr Ser
420 425 430
Asn Lys Cys Pro Lys Lys Asp Ser Asp Ser Phe Lys Ile Arg Pro Leu
435 440 445
Gly Phe Thr Glu Glu Val Glu Val Ile Leu Gln Tyr Ile Cys Glu Cys
450 455 460
Glu Cys Gln Ser Glu Gly Ile Pro Glu Ser Pro Lys Cys His Glu Gly
465 470 475 480
Asn Gly Thr Phe Glu Cys Gly Ala Cys Arg Cys Asn Glu Gly Arg Val
485 490 495
Gly Arg His Cys Glu Cys Ser Thr Asp Glu Val Asn Ser Glu Asp Met
500 505 510
Asp Ala Tyr Cys Arg Lys Glu Asn Ser Ser Glu Ile Cys Ser Asn Asn
515 520 525
Gly Glu Cys Val Cys Gly Gln Cys Val Cys Arg Lys Arg Asp Asn Thr
530 535 540
Asn Glu Ile Tyr Ser Gly Ala Ser Asn Gly Gln Ile Cys Asn Gly Arg
545 550 555 560
Gly Ile Cys Glu Cys Gly Val Cys Lys Cys Thr Asp Pro Lys Phe Gln
565 570 575
Gly Gln Thr Cys Glu Met Cys Gln Thr Cys Leu Gly Val Cys Ala Glu
580 585 590
His Lys Glu Cys Val Gln Cys Arg Ala Phe Asn Lys Gly Glu Lys Lys
595 600 605
Asp Thr Cys Thr Gln Glu Cys Ser Tyr Phe Asn Ile Thr Lys Val Glu
610 615 620
Ser Arg Asp Lys Leu Pro Gln Pro Val Gln Pro Asp Pro Val Ser His
625 630 635 640
Cys Lys Glu Lys Asp Val Asp Asp Cys Trp Phe Tyr Phe Thr Tyr Ser
645 650 655
Val Asn Gly Asn Asn Glu Val Met Val His Val Val Glu Asn Pro Glu
660 665 670
Cys Pro Thr Gly Pro Asp Ile Ile Pro Ile Val Ala Gly Val Val Ala
675 680 685
Gly Ile Val Leu Ile Gly Leu Ala Leu Leu Leu Ile Trp Lys Leu Leu
690 695 700
Met Ile Ile His Asp Arg Arg Glu Phe Ala Lys Phe Glu Lys Glu Lys
705 710 715 720
Met Asn Ala Lys Trp Asp Thr Gly Glu Asn Pro Ile Tyr Lys Ser Ala
725 730 735
Val Thr Thr Val Val Asn Pro Lys Tyr Glu Gly Lys
740 745
<210> 306
<211> 1032
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ITGA4蛋白
<400> 306
Met Ala Trp Glu Ala Arg Arg Glu Pro Gly Pro Arg Arg Ala Ala Val
1 5 10 15
Arg Glu Thr Val Met Leu Leu Leu Cys Leu Gly Val Pro Thr Gly Arg
20 25 30
Pro Tyr Asn Val Asp Thr Glu Ser Ala Leu Leu Tyr Gln Gly Pro His
35 40 45
Asn Thr Leu Phe Gly Tyr Ser Val Val Leu His Ser His Gly Ala Asn
50 55 60
Arg Trp Leu Leu Val Gly Ala Pro Thr Ala Asn Trp Leu Ala Asn Ala
65 70 75 80
Ser Val Ile Asn Pro Gly Ala Ile Tyr Arg Cys Arg Ile Gly Lys Asn
85 90 95
Pro Gly Gln Thr Cys Glu Gln Leu Gln Leu Gly Ser Pro Asn Gly Glu
100 105 110
Pro Cys Gly Lys Thr Cys Leu Glu Glu Arg Asp Asn Gln Trp Leu Gly
115 120 125
Val Thr Leu Ser Arg Gln Pro Gly Glu Asn Gly Ser Ile Val Thr Cys
130 135 140
Gly His Arg Trp Lys Asn Ile Phe Tyr Ile Lys Asn Glu Asn Lys Leu
145 150 155 160
Pro Thr Gly Gly Cys Tyr Gly Val Pro Pro Asp Leu Arg Thr Glu Leu
165 170 175
Ser Lys Arg Ile Ala Pro Cys Tyr Gln Asp Tyr Val Lys Lys Phe Gly
180 185 190
Glu Asn Phe Ala Ser Cys Gln Ala Gly Ile Ser Ser Phe Tyr Thr Lys
195 200 205
Asp Leu Ile Val Met Gly Ala Pro Gly Ser Ser Tyr Trp Thr Gly Ser
210 215 220
Leu Phe Val Tyr Asn Ile Thr Thr Asn Lys Tyr Lys Ala Phe Leu Asp
225 230 235 240
Lys Gln Asn Gln Val Lys Phe Gly Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Val Gly
245 250 255
Ala Gly His Phe Arg Ser Gln His Thr Thr Glu Val Val Gly Gly Ala
260 265 270
Pro Gln His Glu Gln Ile Gly Lys Ala Tyr Ile Phe Ser Ile Asp Glu
275 280 285
Lys Glu Leu Asn Ile Leu His Glu Met Lys Gly Lys Lys Leu Gly Ser
290 295 300
Tyr Phe Gly Ala Ser Val Cys Ala Val Asp Leu Asn Ala Asp Gly Phe
305 310 315 320
Ser Asp Leu Leu Val Gly Ala Pro Met Gln Ser Thr Ile Arg Glu Glu
325 330 335
Gly Arg Val Phe Val Tyr Ile Asn Ser Gly Ser Gly Ala Val Met Asn
340 345 350
Ala Met Glu Thr Asn Leu Val Gly Ser Asp Lys Tyr Ala Ala Arg Phe
355 360 365
Gly Glu Ser Ile Val Asn Leu Gly Asp Ile Asp Asn Asp Gly Phe Glu
370 375 380
Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gln Glu Asp Asp Leu Gln Gly Ala Ile
385 390 395 400
Tyr Ile Tyr Asn Gly Arg Ala Asp Gly Ile Ser Ser Thr Phe Ser Gln
405 410 415
Arg Ile Glu Gly Leu Gln Ile Ser Lys Ser Leu Ser Met Phe Gly Gln
420 425 430
Ser Ile Ser Gly Gln Ile Asp Ala Asp Asn Asn Gly Tyr Val Asp Val
435 440 445
Ala Val Gly Ala Phe Arg Ser Asp Ser Ala Val Leu Leu Arg Thr Arg
450 455 460
Pro Val Val Ile Val Asp Ala Ser Leu Ser His Pro Glu Ser Val Asn
465 470 475 480
Arg Thr Lys Phe Asp Cys Val Glu Asn Gly Trp Pro Ser Val Cys Ile
485 490 495
Asp Leu Thr Leu Cys Phe Ser Tyr Lys Gly Lys Glu Val Pro Gly Tyr
500 505 510
Ile Val Leu Phe Tyr Asn Met Ser Leu Asp Val Asn Arg Lys Ala Glu
515 520 525
Ser Pro Pro Arg Phe Tyr Phe Ser Ser Asn Gly Thr Ser Asp Val Ile
530 535 540
Thr Gly Ser Ile Gln Val Ser Ser Arg Glu Ala Asn Cys Arg Thr His
545 550 555 560
Gln Ala Phe Met Arg Lys Asp Val Arg Asp Ile Leu Thr Pro Ile Gln
565 570 575
Ile Glu Ala Ala Tyr His Leu Gly Pro His Val Ile Ser Lys Arg Ser
580 585 590
Thr Glu Glu Phe Pro Pro Leu Gln Pro Ile Leu Gln Gln Lys Lys Glu
595 600 605
Lys Asp Ile Met Lys Lys Thr Ile Asn Phe Ala Arg Phe Cys Ala His
610 615 620
Glu Asn Cys Ser Ala Asp Leu Gln Val Ser Ala Lys Ile Gly Phe Leu
625 630 635 640
Lys Pro His Glu Asn Lys Thr Tyr Leu Ala Val Gly Ser Met Lys Thr
645 650 655
Leu Met Leu Asn Val Ser Leu Phe Asn Ala Gly Asp Asp Ala Tyr Glu
660 665 670
Thr Thr Leu His Val Lys Leu Pro Val Gly Leu Tyr Phe Ile Lys Ile
675 680 685
Leu Glu Leu Glu Glu Lys Gln Ile Asn Cys Glu Val Thr Asp Asn Ser
690 695 700
Gly Val Val Gln Leu Asp Cys Ser Ile Gly Tyr Ile Tyr Val Asp His
705 710 715 720
Leu Ser Arg Ile Asp Ile Ser Phe Leu Leu Asp Val Ser Ser Leu Ser
725 730 735
Arg Ala Glu Glu Asp Leu Ser Ile Thr Val His Ala Thr Cys Glu Asn
740 745 750
Glu Glu Glu Met Asp Asn Leu Lys His Ser Arg Val Thr Val Ala Ile
755 760 765
Pro Leu Lys Tyr Glu Val Lys Leu Thr Val His Gly Phe Val Asn Pro
770 775 780
Thr Ser Phe Val Tyr Gly Ser Asn Asp Glu Asn Glu Pro Glu Thr Cys
785 790 795 800
Met Val Glu Lys Met Asn Leu Thr Phe His Val Ile Asn Thr Gly Asn
805 810 815
Ser Met Ala Pro Asn Val Ser Val Glu Ile Met Val Pro Asn Ser Phe
820 825 830
Ser Pro Gln Thr Asp Lys Leu Phe Asn Ile Leu Asp Val Gln Thr Thr
835 840 845
Thr Gly Glu Cys His Phe Glu Asn Tyr Gln Arg Val Cys Ala Leu Glu
850 855 860
Gln Gln Lys Ser Ala Met Gln Thr Leu Lys Gly Ile Val Arg Phe Leu
865 870 875 880
Ser Lys Thr Asp Lys Arg Leu Leu Tyr Cys Ile Lys Ala Asp Pro His
885 890 895
Cys Leu Asn Phe Leu Cys Asn Phe Gly Lys Met Glu Ser Gly Lys Glu
900 905 910
Ala Ser Val His Ile Gln Leu Glu Gly Arg Pro Ser Ile Leu Glu Met
915 920 925
Asp Glu Thr Ser Ala Leu Lys Phe Glu Ile Arg Ala Thr Gly Phe Pro
930 935 940
Glu Pro Asn Pro Arg Val Ile Glu Leu Asn Lys Asp Glu Asn Val Ala
945 950 955 960
His Val Leu Leu Glu Gly Leu His His Gln Arg Pro Lys Arg Tyr Phe
965 970 975
Thr Ile Val Ile Ile Ser Ser Ser Leu Leu Leu Gly Leu Ile Val Leu
980 985 990
Leu Leu Ile Ser Tyr Val Met Trp Lys Ala Gly Phe Phe Lys Arg Gln
995 1000 1005
Tyr Lys Ser Ile Leu Gln Glu Glu Asn Arg Arg Asp Ser Trp Ser
1010 1015 1020
Tyr Ile Asn Ser Lys Ser Asn Asp Asp
1025 1030
<210> 307
<211> 630
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SLC3A2蛋白
<400> 307
Met Glu Leu Gln Pro Pro Glu Ala Ser Ile Ala Val Val Ser Ile Pro
1 5 10 15
Arg Gln Leu Pro Gly Ser His Ser Glu Ala Gly Val Gln Gly Leu Ser
20 25 30
Ala Gly Asp Asp Ser Glu Leu Gly Ser His Cys Val Ala Gln Thr Gly
35 40 45
Leu Glu Leu Leu Ala Ser Gly Asp Pro Leu Pro Ser Ala Ser Gln Asn
50 55 60
Ala Glu Met Ile Glu Thr Gly Ser Asp Cys Val Thr Gln Ala Gly Leu
65 70 75 80
Gln Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Ala Leu Ala Ser Lys Asn Ala
85 90 95
Glu Val Thr Gly Thr Met Ser Gln Asp Thr Glu Val Asp Met Lys Glu
100 105 110
Val Glu Leu Asn Glu Leu Glu Pro Glu Lys Gln Pro Met Asn Ala Ala
115 120 125
Ser Gly Ala Ala Met Ser Leu Ala Gly Ala Glu Lys Asn Gly Leu Val
130 135 140
Lys Ile Lys Val Ala Glu Asp Glu Ala Glu Ala Ala Ala Ala Ala Lys
145 150 155 160
Phe Thr Gly Leu Ser Lys Glu Glu Leu Leu Lys Val Ala Gly Ser Pro
165 170 175
Gly Trp Val Arg Thr Arg Trp Ala Leu Leu Leu Leu Phe Trp Leu Gly
180 185 190
Trp Leu Gly Met Leu Ala Gly Ala Val Val Ile Ile Val Arg Ala Pro
195 200 205
Arg Cys Arg Glu Leu Pro Ala Gln Lys Trp Trp His Thr Gly Ala Leu
210 215 220
Tyr Arg Ile Gly Asp Leu Gln Ala Phe Gln Gly His Gly Ala Gly Asn
225 230 235 240
Leu Ala Gly Leu Lys Gly Arg Leu Asp Tyr Leu Ser Ser Leu Lys Val
245 250 255
Lys Gly Leu Val Leu Gly Pro Ile His Lys Asn Gln Lys Asp Asp Val
260 265 270
Ala Gln Thr Asp Leu Leu Gln Ile Asp Pro Asn Phe Gly Ser Lys Glu
275 280 285
Asp Phe Asp Ser Leu Leu Gln Ser Ala Lys Lys Lys Ser Ile Arg Val
290 295 300
Ile Leu Asp Leu Thr Pro Asn Tyr Arg Gly Glu Asn Ser Trp Phe Ser
305 310 315 320
Thr Gln Val Asp Thr Val Ala Thr Lys Val Lys Asp Ala Leu Glu Phe
325 330 335
Trp Leu Gln Ala Gly Val Asp Gly Phe Gln Val Arg Asp Ile Glu Asn
340 345 350
Leu Lys Asp Ala Ser Ser Phe Leu Ala Glu Trp Gln Asn Ile Thr Lys
355 360 365
Gly Phe Ser Glu Asp Arg Leu Leu Ile Ala Gly Thr Asn Ser Ser Asp
370 375 380
Leu Gln Gln Ile Leu Ser Leu Leu Glu Ser Asn Lys Asp Leu Leu Leu
385 390 395 400
Thr Ser Ser Tyr Leu Ser Asp Ser Gly Ser Thr Gly Glu His Thr Lys
405 410 415
Ser Leu Val Thr Gln Tyr Leu Asn Ala Thr Gly Asn Arg Trp Cys Ser
420 425 430
Trp Ser Leu Ser Gln Ala Arg Leu Leu Thr Ser Phe Leu Pro Ala Gln
435 440 445
Leu Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Met Leu Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro
450 455 460
Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu Ile Gly Leu Asp Ala Ala Ala Leu Pro
465 470 475 480
Gly Gln Pro Met Glu Ala Pro Val Met Leu Trp Asp Glu Ser Ser Phe
485 490 495
Pro Asp Ile Pro Gly Ala Val Ser Ala Asn Met Thr Val Lys Gly Gln
500 505 510
Ser Glu Asp Pro Gly Ser Leu Leu Ser Leu Phe Arg Arg Leu Ser Asp
515 520 525
Gln Arg Ser Lys Glu Arg Ser Leu Leu His Gly Asp Phe His Ala Phe
530 535 540
Ser Ala Gly Pro Gly Leu Phe Ser Tyr Ile Arg His Trp Asp Gln Asn
545 550 555 560
Glu Arg Phe Leu Val Val Leu Asn Phe Gly Asp Val Gly Leu Ser Ala
565 570 575
Gly Leu Gln Ala Ser Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser Leu Pro Ala Lys
580 585 590
Ala Asp Leu Leu Leu Ser Thr Gln Pro Gly Arg Glu Glu Gly Ser Pro
595 600 605
Leu Glu Leu Glu Arg Leu Lys Leu Glu Pro His Glu Gly Leu Leu Leu
610 615 620
Arg Phe Pro Tyr Ala Ala
625 630
<210> 308
<211> 1021
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGSF2
<400> 308
Met Ala Gly Ile Ser Tyr Val Ala Ser Phe Phe Leu Leu Leu Thr Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ile Gly Gln Arg Glu Val Thr Val Gln Lys Gly Pro Leu Phe
20 25 30
Arg Ala Glu Gly Tyr Pro Val Ser Ile Gly Cys Asn Val Thr Gly His
35 40 45
Gln Gly Pro Ser Glu Gln His Phe Gln Trp Ser Val Tyr Leu Pro Thr
50 55 60
Asn Pro Thr Gln Glu Val Gln Ile Ile Ser Thr Lys Asp Ala Ala Phe
65 70 75 80
Ser Tyr Ala Val Tyr Thr Gln Arg Val Arg Ser Gly Asp Val Tyr Val
85 90 95
Glu Arg Val Gln Gly Asn Ser Val Leu Leu His Ile Ser Lys Leu Gln
100 105 110
Met Lys Asp Ala Gly Glu Tyr Glu Cys His Thr Pro Asn Thr Asp Glu
115 120 125
Lys Tyr Tyr Gly Ser Tyr Ser Ala Lys Thr Asn Leu Ile Val Ile Pro
130 135 140
Asp Thr Leu Ser Ala Thr Met Ser Ser Gln Thr Leu Gly Lys Glu Glu
145 150 155 160
Gly Glu Pro Leu Ala Leu Thr Cys Glu Ala Ser Lys Ala Thr Ala Gln
165 170 175
His Thr His Leu Ser Val Thr Trp Tyr Leu Thr Gln Asp Gly Gly Gly
180 185 190
Ser Gln Ala Thr Glu Ile Ile Ser Leu Ser Lys Asp Phe Ile Leu Val
195 200 205
Pro Gly Pro Leu Tyr Thr Glu Arg Phe Ala Ala Ser Asp Val Gln Leu
210 215 220
Asn Lys Leu Gly Pro Thr Thr Phe Arg Leu Ser Ile Glu Arg Leu Gln
225 230 235 240
Ser Ser Asp Gln Gly Gln Leu Phe Cys Glu Ala Thr Glu Trp Ile Gln
245 250 255
Asp Pro Asp Glu Thr Trp Met Phe Ile Thr Lys Lys Gln Thr Asp Gln
260 265 270
Thr Thr Leu Arg Ile Gln Pro Ala Val Lys Asp Phe Gln Val Asn Ile
275 280 285
Thr Ala Asp Ser Leu Phe Ala Glu Gly Lys Pro Leu Glu Leu Val Cys
290 295 300
Leu Val Val Ser Ser Gly Arg Asp Pro Gln Leu Gln Gly Ile Trp Phe
305 310 315 320
Phe Asn Gly Thr Glu Ile Ala His Ile Asp Ala Gly Gly Val Leu Gly
325 330 335
Leu Lys Asn Asp Tyr Lys Glu Arg Ala Ser Gln Gly Glu Leu Gln Val
340 345 350
Ser Lys Leu Gly Pro Lys Ala Phe Ser Leu Lys Ile Phe Ser Leu Gly
355 360 365
Pro Glu Asp Glu Gly Ala Tyr Arg Cys Val Val Ala Glu Val Met Lys
370 375 380
Thr Arg Thr Gly Ser Trp Gln Val Leu Gln Arg Lys Gln Ser Pro Asp
385 390 395 400
Ser His Val His Leu Arg Lys Pro Ala Ala Arg Ser Val Val Met Ser
405 410 415
Thr Lys Asn Lys Gln Gln Val Val Trp Glu Gly Glu Thr Leu Ala Phe
420 425 430
Leu Cys Lys Ala Gly Gly Ala Glu Ser Pro Leu Ser Val Ser Trp Trp
435 440 445
His Ile Pro Arg Asp Gln Thr Gln Pro Glu Phe Val Ala Gly Met Gly
450 455 460
Gln Asp Gly Ile Val Gln Leu Gly Ala Ser Tyr Gly Val Pro Ser Tyr
465 470 475 480
His Gly Asn Thr Arg Leu Glu Lys Met Asp Trp Ala Thr Phe Gln Leu
485 490 495
Glu Ile Thr Phe Thr Ala Ile Thr Asp Ser Gly Thr Tyr Glu Cys Arg
500 505 510
Val Ser Glu Lys Ser Arg Asn Gln Ala Arg Asp Leu Ser Trp Thr Gln
515 520 525
Lys Ile Ser Val Thr Val Lys Ser Leu Glu Ser Ser Leu Gln Val Ser
530 535 540
Leu Met Ser Arg Gln Pro Gln Val Met Leu Thr Asn Thr Phe Asp Leu
545 550 555 560
Ser Cys Val Val Arg Ala Gly Tyr Ser Asp Leu Lys Val Pro Leu Thr
565 570 575
Val Thr Trp Gln Phe Gln Pro Ala Ser Ser His Ile Phe His Gln Leu
580 585 590
Ile Arg Ile Thr His Asn Gly Thr Ile Glu Trp Gly Asn Phe Leu Ser
595 600 605
Arg Phe Gln Lys Lys Thr Lys Val Ser Gln Ser Leu Phe Arg Ser Gln
610 615 620
Leu Leu Val His Asp Ala Thr Glu Glu Glu Thr Gly Val Tyr Gln Cys
625 630 635 640
Glu Val Glu Val Tyr Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Asn Asn Arg Pro Pro
645 650 655
Arg Ala Ser Ala Ile Ser His Pro Leu Arg Ile Ala Val Thr Leu Pro
660 665 670
Glu Ser Lys Leu Lys Val Asn Ser Arg Ser Gln Val Gln Glu Leu Ser
675 680 685
Ile Asn Ser Asn Thr Asp Ile Glu Cys Ser Ile Leu Ser Arg Ser Asn
690 695 700
Gly Asn Leu Gln Leu Ala Ile Ile Trp Tyr Phe Ser Pro Val Ser Thr
705 710 715 720
Asn Ala Ser Trp Leu Lys Ile Leu Glu Met Asp Gln Thr Asn Val Ile
725 730 735
Lys Thr Gly Asp Glu Phe His Thr Pro Gln Arg Lys Gln Lys Phe His
740 745 750
Thr Glu Lys Val Ser Gln Asp Leu Phe Gln Leu His Ile Leu Asn Val
755 760 765
Glu Asp Ser Asp Arg Gly Lys Tyr His Cys Ala Val Glu Glu Trp Leu
770 775 780
Leu Ser Thr Asn Gly Thr Trp His Lys Leu Gly Glu Lys Lys Ser Gly
785 790 795 800
Leu Thr Glu Leu Lys Leu Lys Pro Thr Gly Ser Lys Val Arg Val Ser
805 810 815
Lys Val Tyr Trp Thr Glu Asn Val Thr Glu His Arg Glu Val Ala Ile
820 825 830
Arg Cys Ser Leu Glu Ser Val Gly Ser Ser Ala Thr Leu Tyr Ser Val
835 840 845
Met Trp Tyr Trp Asn Arg Glu Asn Ser Gly Ser Lys Leu Leu Val His
850 855 860
Leu Gln His Asp Gly Leu Leu Glu Tyr Gly Glu Glu Gly Leu Arg Arg
865 870 875 880
His Leu His Cys Tyr Arg Ser Ser Ser Thr Asp Phe Val Leu Lys Leu
885 890 895
His Gln Val Glu Met Glu Asp Ala Gly Met Tyr Trp Cys Arg Val Ala
900 905 910
Glu Trp Gln Leu His Gly His Pro Ser Lys Trp Ile Asn Gln Ala Ser
915 920 925
Asp Glu Ser Gln Arg Met Val Leu Thr Val Leu Pro Ser Glu Pro Thr
930 935 940
Leu Pro Ser Arg Ile Cys Ser Ser Ala Pro Leu Leu Tyr Phe Leu Phe
945 950 955 960
Ile Cys Pro Phe Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ile Ser Leu Leu Cys
965 970 975
Leu Tyr Trp Lys Ala Arg Lys Leu Ser Thr Leu Arg Ser Asn Thr Arg
980 985 990
Lys Glu Lys Ala Leu Trp Val Asp Leu Lys Glu Ala Gly Gly Val Thr
995 1000 1005
Thr Asn Arg Arg Glu Asp Glu Glu Glu Asp Glu Gly Asn
1010 1015 1020
<210> 309
<211> 1195
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGSF3
<400> 309
Met Lys Cys Phe Phe Pro Val Leu Ser Cys Leu Ala Val Leu Gly Val
1 5 10 15
Val Ser Ala Gln Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Gly Pro Leu Tyr Arg
20 25 30
Thr Glu Gly Ser His Ile Thr Ile Trp Cys Asn Val Ser Gly Tyr Gln
35 40 45
Gly Pro Ser Glu Gln Asn Phe Gln Trp Ser Ile Tyr Leu Pro Ser Ser
50 55 60
Pro Glu Arg Glu Val Gln Ile Val Ser Thr Met Asp Ser Ser Phe Pro
65 70 75 80
Tyr Ala Ile Tyr Thr Gln Arg Val Arg Gly Gly Lys Ile Phe Ile Glu
85 90 95
Arg Val Gln Gly Asn Ser Thr Leu Leu His Ile Thr Asp Leu Gln Ala
100 105 110
Arg Asp Ala Gly Glu Tyr Glu Cys His Thr Pro Ser Thr Asp Lys Gln
115 120 125
Tyr Phe Gly Ser Tyr Ser Ala Lys Met Asn Leu Val Val Ile Pro Asp
130 135 140
Ser Leu Gln Thr Thr Ala Met Pro Gln Thr Leu His Arg Val Glu Gln
145 150 155 160
Asp Pro Leu Glu Leu Thr Cys Glu Val Ala Ser Glu Thr Ile Gln His
165 170 175
Ser His Leu Ser Val Ala Trp Leu Arg Gln Lys Val Gly Glu Lys Pro
180 185 190
Val Glu Val Ile Ser Leu Ser Arg Asp Phe Met Leu His Ser Ser Ser
195 200 205
Glu Tyr Ala Gln Arg Gln Ser Leu Gly Glu Val Arg Leu Asp Lys Leu
210 215 220
Gly Arg Thr Thr Phe Arg Leu Thr Ile Phe His Leu Gln Pro Ser Asp
225 230 235 240
Gln Gly Glu Phe Tyr Cys Glu Ala Ala Glu Trp Ile Gln Asp Pro Asp
245 250 255
Gly Ser Trp Tyr Ala Met Thr Arg Lys Arg Ser Glu Gly Ala Val Val
260 265 270
Asn Val Gln Pro Thr Asp Lys Glu Phe Thr Val Arg Leu Glu Thr Glu
275 280 285
Lys Arg Leu His Thr Val Gly Glu Pro Val Glu Phe Arg Cys Ile Leu
290 295 300
Glu Ala Gln Asn Val Pro Asp Arg Tyr Phe Ala Val Ser Trp Ala Phe
305 310 315 320
Asn Ser Ser Leu Ile Ala Thr Met Gly Pro Asn Ala Val Pro Val Leu
325 330 335
Asn Ser Glu Phe Ala His Arg Glu Ala Arg Gly Gln Leu Lys Val Ala
340 345 350
Lys Glu Ser Asp Ser Val Phe Val Leu Lys Ile Tyr His Leu Arg Gln
355 360 365
Glu Asp Ser Gly Lys Tyr Asn Cys Arg Val Thr Glu Arg Glu Lys Thr
370 375 380
Val Thr Gly Glu Phe Ile Asp Lys Glu Ser Lys Arg Pro Lys Asn Ile
385 390 395 400
Pro Ile Ile Val Leu Pro Leu Lys Ser Ser Ile Ser Val Glu Val Ala
405 410 415
Ser Asn Ala Ser Val Ile Leu Glu Gly Glu Asp Leu Arg Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Arg Thr Ala Gly Arg Pro Gln Gly Arg Phe Ser Val Ile Trp
435 440 445
Gln Leu Val Asp Arg Gln Asn Arg Arg Ser Asn Ile Met Trp Leu Asp
450 455 460
Arg Asp Gly Thr Val Gln Pro Gly Ser Ser Tyr Trp Glu Arg Ser Ser
465 470 475 480
Phe Gly Gly Val Gln Met Glu Gln Val Gln Pro Asn Ser Phe Ser Leu
485 490 495
Gly Ile Phe Asn Ser Arg Lys Glu Asp Glu Gly Gln Tyr Glu Cys His
500 505 510
Val Thr Glu Trp Val Arg Ala Val Asp Gly Glu Trp Gln Ile Val Gly
515 520 525
Glu Arg Arg Ala Ser Thr Pro Ile Ser Ile Thr Ala Leu Glu Met Gly
530 535 540
Phe Ala Val Thr Ala Ile Ser Arg Thr Pro Gly Val Thr Tyr Ser Asp
545 550 555 560
Ser Phe Asp Leu Gln Cys Ile Ile Lys Pro His Tyr Pro Ala Trp Val
565 570 575
Pro Val Ser Val Thr Trp Arg Phe Gln Pro Val Gly Thr Val Glu Phe
580 585 590
His Asp Leu Val Thr Phe Thr Arg Asp Gly Gly Val Gln Trp Gly Asp
595 600 605
Arg Ser Ser Ser Phe Arg Thr Arg Thr Ala Ile Glu Lys Ala Glu Ser
610 615 620
Ser Asn Asn Val Arg Leu Ser Ile Ser Arg Ala Ser Asp Thr Glu Ala
625 630 635 640
Gly Lys Tyr Gln Cys Val Ala Glu Leu Trp Arg Lys Asn Tyr Asn Asn
645 650 655
Thr Trp Thr Arg Leu Ala Glu Arg Thr Ser Asn Leu Leu Glu Ile Arg
660 665 670
Val Leu Gln Pro Val Thr Lys Leu Gln Val Ser Lys Ser Lys Arg Thr
675 680 685
Leu Thr Leu Val Glu Asn Lys Pro Ile Gln Leu Asn Cys Ser Val Lys
690 695 700
Ser Gln Thr Ser Gln Asn Ser His Phe Ala Val Leu Trp Tyr Val His
705 710 715 720
Lys Pro Ser Asp Ala Asp Gly Lys Leu Ile Leu Lys Thr Thr His Asn
725 730 735
Ser Ala Phe Glu Tyr Gly Thr Tyr Ala Glu Glu Glu Gly Leu Arg Ala
740 745 750
Arg Leu Gln Phe Glu Arg His Val Ser Gly Gly Leu Phe Ser Leu Thr
755 760 765
Val Gln Arg Ala Glu Val Ser Asp Ser Gly Ser Tyr Tyr Cys His Val
770 775 780
Glu Glu Trp Leu Leu Ser Pro Asn Tyr Ala Trp Tyr Lys Leu Ala Glu
785 790 795 800
Glu Val Ser Gly Arg Thr Glu Val Thr Val Lys Gln Pro Asp Ser Arg
805 810 815
Leu Arg Leu Ser Gln Ala Gln Gly Asn Leu Ser Val Leu Glu Thr Arg
820 825 830
Gln Val Gln Leu Glu Cys Val Val Leu Asn Arg Thr Ser Ile Thr Ser
835 840 845
Gln Leu Met Val Glu Trp Phe Val Trp Lys Pro Asn His Pro Glu Arg
850 855 860
Glu Thr Val Ala Arg Leu Ser Arg Asp Ala Thr Phe His Tyr Gly Glu
865 870 875 880
Gln Ala Ala Lys Asn Asn Leu Lys Gly Arg Leu His Leu Glu Ser Pro
885 890 895
Ser Pro Gly Val Tyr Arg Leu Phe Ile Gln Asn Val Ala Val Gln Asp
900 905 910
Ser Gly Thr Tyr Ser Cys His Val Glu Glu Trp Leu Pro Ser Pro Ser
915 920 925
Gly Met Trp Tyr Lys Arg Ala Glu Asp Thr Ala Gly Gln Thr Ala Leu
930 935 940
Thr Val Met Arg Pro Asp Ala Ser Leu Gln Val Asp Thr Val Val Pro
945 950 955 960
Asn Ala Thr Val Ser Glu Lys Ala Ala Phe Gln Leu Asp Cys Ser Ile
965 970 975
Val Ser Arg Ser Ser Gln Asp Ser Arg Phe Ala Val Ala Trp Tyr Ser
980 985 990
Leu Arg Thr Lys Ala Gly Gly Lys Arg Ser Ser Pro Gly Leu Glu Glu
995 1000 1005
Gln Glu Glu Glu Arg Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp
1010 1015 1020
Asp Asp Asp Asp Pro Thr Glu Arg Thr Ala Leu Leu Ser Val Gly
1025 1030 1035
Pro Asp Ala Val Phe Gly Pro Glu Gly Ser Pro Trp Glu Gly Arg
1040 1045 1050
Leu Arg Phe Gln Arg Leu Ser Pro Val Leu Tyr Arg Leu Thr Val
1055 1060 1065
Leu Gln Ala Ser Pro Gln Asp Thr Gly Asn Tyr Ser Cys His Val
1070 1075 1080
Glu Glu Trp Leu Pro Ser Pro Gln Lys Glu Trp Tyr Arg Leu Thr
1085 1090 1095
Glu Glu Glu Ser Ala Pro Ile Gly Ile Arg Val Leu Asp Thr Ser
1100 1105 1110
Pro Thr Leu Gln Ser Ile Ile Cys Ser Asn Asp Ala Leu Phe Tyr
1115 1120 1125
Phe Val Phe Phe Tyr Pro Phe Pro Ile Phe Gly Ile Leu Ile Ile
1130 1135 1140
Thr Ile Leu Leu Val Arg Phe Lys Ser Arg Asn Ser Ser Lys Asn
1145 1150 1155
Ser Asp Gly Lys Asn Gly Val Pro Leu Leu Trp Ile Lys Glu Pro
1160 1165 1170
His Leu Asn Tyr Ser Pro Thr Cys Leu Glu Pro Pro Val Leu Ser
1175 1180 1185
Ile His Pro Gly Ala Ile Asp
1190 1195
<210> 310
<211> 1023
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ATP1A1
<400> 310
Met Gly Lys Gly Val Gly Arg Asp Lys Tyr Glu Pro Ala Ala Val Ser
1 5 10 15
Glu Gln Gly Asp Lys Lys Gly Lys Lys Gly Lys Lys Asp Arg Asp Met
20 25 30
Asp Glu Leu Lys Lys Glu Val Ser Met Asp Asp His Lys Leu Ser Leu
35 40 45
Asp Glu Leu His Arg Lys Tyr Gly Thr Asp Leu Ser Arg Gly Leu Thr
50 55 60
Ser Ala Arg Ala Ala Glu Ile Leu Ala Arg Asp Gly Pro Asn Ala Leu
65 70 75 80
Thr Pro Pro Pro Thr Thr Pro Glu Trp Ile Lys Phe Cys Arg Gln Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Phe Ser Met Leu Leu Trp Ile Gly Ala Ile Leu Cys Phe
100 105 110
Leu Ala Tyr Ser Ile Gln Ala Ala Thr Glu Glu Glu Pro Gln Asn Asp
115 120 125
Asn Leu Tyr Leu Gly Val Val Leu Ser Ala Val Val Ile Ile Thr Gly
130 135 140
Cys Phe Ser Tyr Tyr Gln Glu Ala Lys Ser Ser Lys Ile Met Glu Ser
145 150 155 160
Phe Lys Asn Met Val Pro Gln Gln Ala Leu Val Ile Arg Asn Gly Glu
165 170 175
Lys Met Ser Ile Asn Ala Glu Glu Val Val Val Gly Asp Leu Val Glu
180 185 190
Val Lys Gly Gly Asp Arg Ile Pro Ala Asp Leu Arg Ile Ile Ser Ala
195 200 205
Asn Gly Cys Lys Val Asp Asn Ser Ser Leu Thr Gly Glu Ser Glu Pro
210 215 220
Gln Thr Arg Ser Pro Asp Phe Thr Asn Glu Asn Pro Leu Glu Thr Arg
225 230 235 240
Asn Ile Ala Phe Phe Ser Thr Asn Cys Val Glu Gly Thr Ala Arg Gly
245 250 255
Ile Val Val Tyr Thr Gly Asp Arg Thr Val Met Gly Arg Ile Ala Thr
260 265 270
Leu Ala Ser Gly Leu Glu Gly Gly Gln Thr Pro Ile Ala Ala Glu Ile
275 280 285
Glu His Phe Ile His Ile Ile Thr Gly Val Ala Val Phe Leu Gly Val
290 295 300
Ser Phe Phe Ile Leu Ser Leu Ile Leu Glu Tyr Thr Trp Leu Glu Ala
305 310 315 320
Val Ile Phe Leu Ile Gly Ile Ile Val Ala Asn Val Pro Glu Gly Leu
325 330 335
Leu Ala Thr Val Thr Val Cys Leu Thr Leu Thr Ala Lys Arg Met Ala
340 345 350
Arg Lys Asn Cys Leu Val Lys Asn Leu Glu Ala Val Glu Thr Leu Gly
355 360 365
Ser Thr Ser Thr Ile Cys Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu Thr Gln Asn
370 375 380
Arg Met Thr Val Ala His Met Trp Phe Asp Asn Gln Ile His Glu Ala
385 390 395 400
Asp Thr Thr Glu Asn Gln Ser Gly Val Ser Phe Asp Lys Thr Ser Ala
405 410 415
Thr Trp Leu Ala Leu Ser Arg Ile Ala Gly Leu Cys Asn Arg Ala Val
420 425 430
Phe Gln Ala Asn Gln Glu Asn Leu Pro Ile Leu Lys Arg Ala Val Ala
435 440 445
Gly Asp Ala Ser Glu Ser Ala Leu Leu Lys Cys Ile Glu Leu Cys Cys
450 455 460
Gly Ser Val Lys Glu Met Arg Glu Arg Tyr Ala Lys Ile Val Glu Ile
465 470 475 480
Pro Phe Asn Ser Thr Asn Lys Tyr Gln Leu Ser Ile His Lys Asn Pro
485 490 495
Asn Thr Ser Glu Pro Gln His Leu Leu Val Met Lys Gly Ala Pro Glu
500 505 510
Arg Ile Leu Asp Arg Cys Ser Ser Ile Leu Leu His Gly Lys Glu Gln
515 520 525
Pro Leu Asp Glu Glu Leu Lys Asp Ala Phe Gln Asn Ala Tyr Leu Glu
530 535 540
Leu Gly Gly Leu Gly Glu Arg Val Leu Gly Phe Cys His Leu Phe Leu
545 550 555 560
Pro Asp Glu Gln Phe Pro Glu Gly Phe Gln Phe Asp Thr Asp Asp Val
565 570 575
Asn Phe Pro Ile Asp Asn Leu Cys Phe Val Gly Leu Ile Ser Met Ile
580 585 590
Asp Pro Pro Arg Ala Ala Val Pro Asp Ala Val Gly Lys Cys Arg Ser
595 600 605
Ala Gly Ile Lys Val Ile Met Val Thr Gly Asp His Pro Ile Thr Ala
610 615 620
Lys Ala Ile Ala Lys Gly Val Gly Ile Ile Ser Glu Gly Asn Glu Thr
625 630 635 640
Val Glu Asp Ile Ala Ala Arg Leu Asn Ile Pro Val Ser Gln Val Asn
645 650 655
Pro Arg Asp Ala Lys Ala Cys Val Val His Gly Ser Asp Leu Lys Asp
660 665 670
Met Thr Ser Glu Gln Leu Asp Asp Ile Leu Lys Tyr His Thr Glu Ile
675 680 685
Val Phe Ala Arg Thr Ser Pro Gln Gln Lys Leu Ile Ile Val Glu Gly
690 695 700
Cys Gln Arg Gln Gly Ala Ile Val Ala Val Thr Gly Asp Gly Val Asn
705 710 715 720
Asp Ser Pro Ala Leu Lys Lys Ala Asp Ile Gly Val Ala Met Gly Ile
725 730 735
Ala Gly Ser Asp Val Ser Lys Gln Ala Ala Asp Met Ile Leu Leu Asp
740 745 750
Asp Asn Phe Ala Ser Ile Val Thr Gly Val Glu Glu Gly Arg Leu Ile
755 760 765
Phe Asp Asn Leu Lys Lys Ser Ile Ala Tyr Thr Leu Thr Ser Asn Ile
770 775 780
Pro Glu Ile Thr Pro Phe Leu Ile Phe Ile Ile Ala Asn Ile Pro Leu
785 790 795 800
Pro Leu Gly Thr Val Thr Ile Leu Cys Ile Asp Leu Gly Thr Asp Met
805 810 815
Val Pro Ala Ile Ser Leu Ala Tyr Glu Gln Ala Glu Ser Asp Ile Met
820 825 830
Lys Arg Gln Pro Arg Asn Pro Lys Thr Asp Lys Leu Val Asn Glu Arg
835 840 845
Leu Ile Ser Met Ala Tyr Gly Gln Ile Gly Met Ile Gln Ala Leu Gly
850 855 860
Gly Phe Phe Thr Tyr Phe Val Ile Leu Ala Glu Asn Gly Phe Leu Pro
865 870 875 880
Ile His Leu Leu Gly Leu Arg Val Asp Trp Asp Asp Arg Trp Ile Asn
885 890 895
Asp Val Glu Asp Ser Tyr Gly Gln Gln Trp Thr Tyr Glu Gln Arg Lys
900 905 910
Ile Val Glu Phe Thr Cys His Thr Ala Phe Phe Val Ser Ile Val Val
915 920 925
Val Gln Trp Ala Asp Leu Val Ile Cys Lys Thr Arg Arg Asn Ser Val
930 935 940
Phe Gln Gln Gly Met Lys Asn Lys Ile Leu Ile Phe Gly Leu Phe Glu
945 950 955 960
Glu Thr Ala Leu Ala Ala Phe Leu Ser Tyr Cys Pro Gly Met Gly Val
965 970 975
Ala Leu Arg Met Tyr Pro Leu Lys Pro Thr Trp Trp Phe Cys Ala Phe
980 985 990
Pro Tyr Ser Leu Leu Ile Phe Val Tyr Asp Glu Val Arg Lys Leu Ile
995 1000 1005
Ile Arg Arg Arg Pro Gly Gly Trp Val Glu Lys Glu Thr Tyr Tyr
1010 1015 1020
<210> 311
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ATP1A2
<400> 311
Met Gly Arg Gly Ala Gly Arg Glu Tyr Ser Pro Ala Ala Thr Thr Ala
1 5 10 15
Glu Asn Gly Gly Gly Lys Lys Lys Gln Lys Glu Lys Glu Leu Asp Glu
20 25 30
Leu Lys Lys Glu Val Ala Met Asp Asp His Lys Leu Ser Leu Asp Glu
35 40 45
Leu Gly Arg Lys Tyr Gln Val Asp Leu Ser Lys Gly Leu Thr Asn Gln
50 55 60
Arg Ala Gln Asp Val Leu Ala Arg Asp Gly Pro Asn Ala Leu Thr Pro
65 70 75 80
Pro Pro Thr Thr Pro Glu Trp Val Lys Phe Cys Arg Gln Leu Phe Gly
85 90 95
Gly Phe Ser Ile Leu Leu Trp Ile Gly Ala Ile Leu Cys Phe Leu Ala
100 105 110
Tyr Gly Ile Gln Ala Ala Met Glu Asp Glu Pro Ser Asn Asp Asn Leu
115 120 125
Tyr Leu Gly Val Val Leu Ala Ala Val Val Ile Val Thr Gly Cys Phe
130 135 140
Ser Tyr Tyr Gln Glu Ala Lys Ser Ser Lys Ile Met Asp Ser Phe Lys
145 150 155 160
Asn Met Val Pro Gln Gln Ala Leu Val Ile Arg Glu Gly Glu Lys Met
165 170 175
Gln Ile Asn Ala Glu Glu Val Val Val Gly Asp Leu Val Glu Val Lys
180 185 190
Gly Gly Asp Arg Val Pro Ala Asp Leu Arg Ile Ile Ser Ser His Gly
195 200 205
Cys Lys Val Asp Asn Ser Ser Leu Thr Gly Glu Ser Glu Pro Gln Thr
210 215 220
Arg Ser Pro Glu Phe Thr His Glu Asn Pro Leu Glu Thr Arg Asn Ile
225 230 235 240
<210> 312
<211> 780
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ATP1A3
<400> 312
Cys Phe Phe Ser Thr Asn Cys Val Glu Gly Thr Ala Arg Gly Ile Val
1 5 10 15
Ile Ala Thr Gly Asp Arg Thr Val Met Gly Arg Ile Ala Thr Leu Ala
20 25 30
Ser Gly Leu Glu Val Gly Arg Thr Pro Ile Ala Met Glu Ile Glu His
35 40 45
Phe Ile Gln Leu Ile Thr Gly Val Ala Val Phe Leu Gly Val Ser Phe
50 55 60
Phe Val Leu Ser Leu Ile Leu Gly Tyr Ser Trp Leu Glu Ala Val Ile
65 70 75 80
Phe Leu Ile Gly Ile Ile Val Ala Asn Val Pro Glu Gly Leu Leu Ala
85 90 95
Thr Val Thr Val Cys Leu Thr Leu Thr Ala Lys Arg Met Ala Arg Lys
100 105 110
Asn Cys Leu Val Lys Asn Leu Glu Ala Val Glu Thr Leu Gly Ser Thr
115 120 125
Ser Thr Ile Cys Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu Thr Gln Asn Arg Met
130 135 140
Thr Val Ala His Met Trp Phe Asp Asn Gln Ile His Glu Ala Asp Thr
145 150 155 160
Thr Glu Asp Gln Ser Gly Ala Thr Phe Asp Lys Arg Ser Pro Thr Trp
165 170 175
Thr Ala Leu Ser Arg Ile Ala Gly Leu Cys Asn Arg Ala Val Phe Lys
180 185 190
Ala Gly Gln Glu Asn Ile Ser Val Ser Lys Arg Asp Thr Ala Gly Asp
195 200 205
Ala Ser Glu Ser Ala Leu Leu Lys Cys Ile Glu Leu Ser Cys Gly Ser
210 215 220
Val Arg Lys Met Arg Asp Arg Asn Pro Lys Val Ala Glu Ile Pro Phe
225 230 235 240
Asn Ser Thr Asn Lys Tyr Gln Leu Ser Ile His Glu Arg Glu Asp Ser
245 250 255
Pro Gln Ser His Val Leu Val Met Lys Gly Ala Pro Glu Arg Ile Leu
260 265 270
Asp Arg Cys Ser Thr Ile Leu Val Gln Gly Lys Glu Ile Pro Leu Asp
275 280 285
Lys Glu Met Gln Asp Ala Phe Gln Asn Ala Tyr Met Glu Leu Gly Gly
290 295 300
Leu Gly Glu Arg Val Leu Gly Phe Cys Gln Leu Asn Leu Pro Ser Gly
305 310 315 320
Lys Phe Pro Arg Gly Phe Lys Phe Asp Thr Asp Glu Leu Asn Phe Pro
325 330 335
Thr Glu Lys Leu Cys Phe Val Gly Leu Met Ser Met Ile Asp Pro Pro
340 345 350
Arg Ala Ala Val Pro Asp Ala Val Gly Lys Cys Arg Ser Ala Gly Ile
355 360 365
Lys Val Ile Met Val Thr Gly Asp His Pro Ile Thr Ala Lys Ala Ile
370 375 380
Ala Lys Gly Val Gly Ile Ile Ser Glu Gly Asn Glu Thr Val Glu Asp
385 390 395 400
Ile Ala Ala Arg Leu Asn Ile Pro Met Ser Gln Val Asn Pro Arg Glu
405 410 415
Ala Lys Ala Cys Val Val His Gly Ser Asp Leu Lys Asp Met Thr Ser
420 425 430
Glu Gln Leu Asp Glu Ile Leu Lys Asn His Thr Glu Ile Val Phe Ala
435 440 445
Arg Thr Ser Pro Gln Gln Lys Leu Ile Ile Val Glu Gly Cys Gln Arg
450 455 460
Gln Gly Ala Ile Val Ala Val Thr Gly Asp Gly Val Asn Asp Ser Pro
465 470 475 480
Ala Leu Lys Lys Ala Asp Ile Gly Ile Ala Met Gly Ile Ser Gly Ser
485 490 495
Asp Val Ser Lys Gln Ala Ala Asp Met Ile Leu Leu Asp Asp Asn Phe
500 505 510
Ala Ser Ile Val Thr Gly Val Glu Glu Gly Arg Leu Ile Phe Asp Asn
515 520 525
Leu Lys Lys Ser Ile Ala Tyr Thr Leu Thr Ser Asn Ile Pro Glu Ile
530 535 540
Thr Pro Phe Leu Leu Phe Ile Ile Ala Asn Ile Pro Leu Pro Leu Gly
545 550 555 560
Thr Val Thr Ile Leu Cys Ile Asp Leu Gly Thr Asp Met Val Pro Ala
565 570 575
Ile Ser Leu Ala Tyr Glu Ala Ala Glu Ser Asp Ile Met Lys Arg Gln
580 585 590
Pro Arg Asn Ser Gln Thr Asp Lys Leu Val Asn Glu Arg Leu Ile Ser
595 600 605
Met Ala Tyr Gly Gln Ile Gly Met Ile Gln Ala Leu Gly Gly Phe Phe
610 615 620
Thr Tyr Phe Val Ile Leu Ala Glu Asn Gly Phe Leu Pro Ser Arg Leu
625 630 635 640
Leu Gly Ile Arg Leu Asp Trp Asp Asp Arg Thr Met Asn Asp Leu Glu
645 650 655
Asp Ser Tyr Gly Gln Glu Trp Thr Tyr Glu Gln Arg Lys Val Val Glu
660 665 670
Phe Thr Cys His Thr Ala Phe Phe Ala Ser Ile Val Val Val Gln Trp
675 680 685
Ala Asp Leu Ile Ile Cys Lys Thr Arg Arg Asn Ser Val Phe Gln Gln
690 695 700
Gly Met Lys Asn Lys Ile Leu Ile Phe Gly Leu Leu Glu Glu Thr Ala
705 710 715 720
Leu Ala Ala Phe Leu Ser Tyr Cys Pro Gly Met Gly Val Ala Leu Arg
725 730 735
Met Tyr Pro Leu Lys Val Thr Trp Trp Phe Cys Ala Phe Pro Tyr Ser
740 745 750
Leu Leu Ile Phe Ile Tyr Asp Glu Val Arg Lys Leu Ile Leu Arg Arg
755 760 765
Tyr Pro Gly Gly Trp Val Glu Lys Glu Thr Tyr Tyr
770 775 780
<210> 313
<211> 1026
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ATP1A4
<400> 313
Met Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ser Tyr Arg Ile Ala Thr Ser Gln Asp
1 5 10 15
Lys Lys Asp Asp Lys Asp Ser Pro Lys Lys Asn Lys Gly Lys Glu Arg
20 25 30
Arg Asp Leu Asp Asp Leu Lys Lys Glu Val Ala Met Thr Glu His Lys
35 40 45
Met Ser Val Glu Glu Val Cys Arg Lys Tyr Asn Thr Asp Cys Val Gln
50 55 60
Gly Leu Thr His Ser Lys Ala Gln Glu Ile Leu Ala Arg Asp Gly Pro
65 70 75 80
Asn Ala Leu Thr Pro Pro Pro Thr Thr Pro Glu Trp Val Lys Phe Cys
85 90 95
Arg Gln Leu Phe Gly Gly Phe Ser Ile Leu Leu Trp Ile Gly Ala Ile
100 105 110
Leu Cys Phe Leu Ala Tyr Gly Ile Gln Ala Gly Thr Glu Asp Asp Pro
115 120 125
Ser Gly Asp Asn Leu Tyr Leu Gly Ile Val Leu Ala Ala Val Val Ile
130 135 140
Ile Thr Gly Cys Phe Ser Tyr Tyr Gln Glu Ala Lys Ser Ser Lys Ile
145 150 155 160
Met Glu Ser Phe Lys Asn Met Val Pro Gln Gln Ala Leu Val Ile Arg
165 170 175
Glu Gly Glu Lys Met Gln Val Asn Ala Glu Glu Val Val Val Gly Asp
180 185 190
Leu Val Glu Ile Lys Gly Gly Asp Arg Val Pro Ala Asp Leu Arg Ile
195 200 205
Ile Ser Ala His Gly Cys Lys Val Asp Asn Ser Ser Leu Thr Gly Glu
210 215 220
Ser Glu Pro Gln Thr Arg Ser Pro Asp Cys Thr His Asp Asn Pro Leu
225 230 235 240
Glu Thr Arg Asn Ile Thr Phe Phe Ser Thr Asn Cys Val Glu Gly Thr
245 250 255
Ala Arg Gly Val Val Val Ala Thr Gly Asp Arg Thr Val Met Gly Arg
260 265 270
Ile Ala Thr Leu Ala Ser Gly Leu Glu Val Gly Lys Thr Pro Ile Ala
275 280 285
Ile Glu Ile Glu His Phe Ile Gln Leu Ile Thr Gly Val Ala Val Phe
290 295 300
Leu Gly Val Ser Phe Phe Ile Leu Ser Leu Ile Leu Gly Tyr Thr Trp
305 310 315 320
Leu Glu Ala Val Ile Phe Leu Ile Gly Ile Ile Val Ala Asn Val Pro
325 330 335
Glu Gly Leu Leu Ala Thr Val Thr Val Cys Leu Thr Leu Thr Ala Lys
340 345 350
Arg Met Ala Arg Lys Asn Cys Leu Val Lys Asn Leu Glu Ala Val Glu
355 360 365
Thr Leu Gly Ser Thr Ser Thr Ile Cys Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu
370 375 380
Thr Gln Asn Arg Met Thr Val Ala His Met Trp Phe Asp Asn Gln Ile
385 390 395 400
His Glu Ala Asp Thr Thr Glu Asp Gln Ser Gly Thr Ser Phe Asp Lys
405 410 415
Ser Ser His Thr Trp Val Ala Leu Ser His Ile Ala Gly Leu Cys Asn
420 425 430
Arg Ala Val Phe Lys Gly Gly Gln Asp Asn Ile Pro Val Leu Lys Arg
435 440 445
Asp Val Ala Gly Asp Ala Ser Glu Ser Ala Leu Leu Lys Cys Ile Glu
450 455 460
Leu Ser Ser Gly Ser Val Lys Leu Met Arg Glu Arg Asn Lys Lys Val
465 470 475 480
Ala Glu Ile Pro Phe Asn Ser Thr Asn Lys Tyr Gln Leu Ser Ile His
485 490 495
Glu Thr Glu Asp Pro Asn Asp Asn Arg Tyr Leu Leu Val Met Lys Gly
500 505 510
Ala Pro Glu Arg Ile Leu Asp Arg Cys Ser Thr Ile Leu Leu Gln Gly
515 520 525
Lys Glu Gln Pro Leu Asp Glu Glu Met Lys Glu Ala Phe Gln Asn Ala
530 535 540
Tyr Leu Glu Leu Gly Gly Leu Gly Glu Arg Val Leu Gly Phe Cys His
545 550 555 560
Tyr Tyr Leu Pro Glu Glu Gln Phe Pro Lys Gly Phe Ala Phe Asp Cys
565 570 575
Asp Asp Val Asn Phe Thr Thr Asp Asn Leu Cys Phe Val Gly Leu Met
580 585 590
Ser Met Ile Asp Pro Pro Arg Ala Ala Val Pro Asp Ala Val Gly Lys
595 600 605
Cys Arg Ser Ala Gly Ile Lys Val Ile Met Val Thr Gly Asp His Pro
610 615 620
Ile Thr Ala Lys Ala Ile Ala Lys Gly Val Gly Ile Ile Ser Glu Gly
625 630 635 640
Asn Glu Thr Val Glu Asp Ile Ala Ala Arg Leu Asn Ile Pro Val Ser
645 650 655
Gln Val Asn Pro Arg Asp Ala Lys Ala Cys Val Ile His Gly Thr Asp
660 665 670
Leu Lys Asp Phe Thr Ser Glu Gln Ile Asp Glu Ile Leu Gln Asn His
675 680 685
Thr Glu Ile Val Phe Ala Arg Thr Ser Pro Gln Gln Lys Leu Ile Ile
690 695 700
Val Glu Gly Cys Gln Arg Gln Gly Ala Ile Val Ala Val Thr Gly Asp
705 710 715 720
Gly Val Asn Asp Ser Pro Ala Leu Lys Lys Ala Asp Ile Gly Val Ala
725 730 735
Met Gly Ile Ala Gly Ser Asp Val Ser Lys Gln Ala Ala Asp Met Ile
740 745 750
Leu Leu Asp Asp Asn Phe Ala Ser Ile Val Thr Gly Val Glu Glu Gly
755 760 765
Arg Leu Ile Phe Asp Asn Leu Lys Lys Ser Ile Ala Tyr Thr Leu Thr
770 775 780
Ser Asn Ile Pro Glu Ile Thr Pro Phe Leu Leu Phe Ile Met Ala Asn
785 790 795 800
Ile Pro Leu Pro Leu Gly Thr Ile Thr Ile Leu Cys Ile Asp Leu Gly
805 810 815
Thr Asp Met Val Pro Ala Ile Ser Leu Ala Tyr Glu Ala Ala Glu Ser
820 825 830
Asp Ile Met Lys Arg Gln Pro Arg Asn Pro Arg Thr Asp Lys Leu Val
835 840 845
Asn Glu Arg Leu Ile Ser Met Ala Tyr Gly Gln Ile Gly Met Ile Gln
850 855 860
Ala Leu Gly Gly Phe Phe Ser Tyr Phe Val Ile Leu Ala Glu Asn Gly
865 870 875 880
Phe Leu Pro Gly Asn Leu Val Gly Ile Arg Leu Asn Trp Asp Asp Arg
885 890 895
Thr Val Asn Asp Leu Glu Asp Ser Tyr Gly Gln Gln Trp Thr Tyr Glu
900 905 910
Gln Arg Lys Val Val Glu Phe Thr Cys His Thr Ala Phe Phe Val Ser
915 920 925
Ile Val Val Val Gln Trp Ala Asp Leu Ile Ile Cys Lys Thr Arg Arg
930 935 940
Asn Ser Val Phe Gln Gln Gly Met Lys Asn Lys Ile Leu Ile Phe Gly
945 950 955 960
Leu Phe Glu Glu Thr Ala Leu Ala Ala Phe Leu Ser Tyr Cys Pro Gly
965 970 975
Met Asp Val Ala Leu Arg Met Tyr Pro Leu Lys Pro Ser Trp Trp Phe
980 985 990
Cys Ala Phe Pro Tyr Ser Phe Leu Ile Phe Val Tyr Asp Glu Ile Arg
995 1000 1005
Lys Leu Ile Leu Arg Arg Asn Pro Gly Gly Trp Val Glu Lys Glu
1010 1015 1020
Thr Tyr Tyr
1025
<210> 314
<211> 1029
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ATP1B3
<400> 314
Met Gly Leu Trp Gly Lys Lys Gly Thr Val Ala Pro His Asp Gln Ser
1 5 10 15
Pro Arg Arg Arg Pro Lys Lys Gly Leu Ile Lys Lys Lys Met Val Lys
20 25 30
Arg Glu Lys Gln Lys Arg Asn Met Glu Glu Leu Lys Lys Glu Val Val
35 40 45
Met Asp Asp His Lys Leu Thr Leu Glu Glu Leu Ser Thr Lys Tyr Ser
50 55 60
Val Asp Leu Thr Lys Gly His Ser His Gln Arg Ala Lys Glu Ile Leu
65 70 75 80
Thr Arg Gly Gly Pro Asn Thr Val Thr Pro Pro Pro Thr Thr Pro Glu
85 90 95
Trp Val Lys Phe Cys Lys Gln Leu Phe Gly Gly Phe Ser Leu Leu Leu
100 105 110
Trp Thr Gly Ala Ile Leu Cys Phe Val Ala Tyr Ser Ile Gln Ile Tyr
115 120 125
Phe Asn Glu Glu Pro Thr Lys Asp Asn Leu Tyr Leu Ser Ile Val Leu
130 135 140
Ser Val Val Val Ile Val Thr Gly Cys Phe Ser Tyr Tyr Gln Glu Ala
145 150 155 160
Lys Ser Ser Lys Ile Met Glu Ser Phe Lys Asn Met Val Pro Gln Gln
165 170 175
Ala Leu Val Ile Arg Gly Gly Glu Lys Met Gln Ile Asn Val Gln Glu
180 185 190
Val Val Leu Gly Asp Leu Val Glu Ile Lys Gly Gly Asp Arg Val Pro
195 200 205
Ala Asp Leu Arg Leu Ile Ser Ala Gln Gly Cys Lys Val Asp Asn Ser
210 215 220
Ser Leu Thr Gly Glu Ser Glu Pro Gln Ser Arg Ser Pro Asp Phe Thr
225 230 235 240
His Glu Asn Pro Leu Glu Thr Arg Asn Ile Cys Phe Phe Ser Thr Asn
245 250 255
Cys Val Glu Gly Thr Ala Arg Gly Ile Val Ile Ala Thr Gly Asp Ser
260 265 270
Thr Val Met Gly Arg Ile Ala Ser Leu Thr Ser Gly Leu Ala Val Gly
275 280 285
Gln Thr Pro Ile Ala Ala Glu Ile Glu His Phe Ile His Leu Ile Thr
290 295 300
Val Val Ala Val Phe Leu Gly Val Thr Phe Phe Ala Leu Ser Leu Leu
305 310 315 320
Leu Gly Tyr Gly Trp Leu Glu Ala Ile Ile Phe Leu Ile Gly Ile Ile
325 330 335
Val Ala Asn Val Pro Glu Gly Leu Leu Ala Thr Val Thr Val Cys Leu
340 345 350
Thr Leu Thr Ala Lys Arg Met Ala Arg Lys Asn Cys Leu Val Lys Asn
355 360 365
Leu Glu Ala Val Glu Thr Leu Gly Ser Thr Ser Thr Ile Cys Ser Asp
370 375 380
Lys Thr Gly Thr Leu Thr Gln Asn Arg Met Thr Val Ala His Met Trp
385 390 395 400
Phe Asp Met Thr Val Tyr Glu Ala Asp Thr Thr Glu Glu Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Thr Phe Thr Lys Ser Ser Asp Thr Trp Phe Met Leu Ala Arg Ile
420 425 430
Ala Gly Leu Cys Asn Arg Ala Asp Phe Lys Ala Asn Gln Glu Ile Leu
435 440 445
Pro Ile Ala Lys Arg Ala Thr Thr Gly Asp Ala Ser Glu Ser Ala Leu
450 455 460
Leu Lys Phe Ile Glu Gln Ser Tyr Ser Ser Val Ala Glu Met Arg Glu
465 470 475 480
Lys Asn Pro Lys Val Ala Glu Ile Pro Phe Asn Ser Thr Asn Lys Tyr
485 490 495
Gln Met Ser Ile His Leu Arg Glu Asp Ser Ser Gln Thr His Val Leu
500 505 510
Met Met Lys Gly Ala Pro Glu Arg Ile Leu Glu Phe Cys Ser Thr Phe
515 520 525
Leu Leu Asn Gly Gln Glu Tyr Ser Met Asn Asp Glu Met Lys Glu Ala
530 535 540
Phe Gln Asn Ala Tyr Leu Glu Leu Gly Gly Leu Gly Glu Arg Val Leu
545 550 555 560
Gly Phe Cys Phe Leu Asn Leu Pro Ser Ser Phe Ser Lys Gly Phe Pro
565 570 575
Phe Asn Thr Asp Glu Ile Asn Phe Pro Met Asp Asn Leu Cys Phe Val
580 585 590
Gly Leu Ile Ser Met Ile Asp Pro Pro Arg Ala Ala Val Pro Asp Ala
595 600 605
Val Ser Lys Cys Arg Ser Ala Gly Ile Lys Val Ile Met Val Thr Gly
610 615 620
Asp His Pro Ile Thr Ala Lys Ala Ile Ala Lys Gly Val Gly Ile Ile
625 630 635 640
Ser Glu Gly Thr Glu Thr Ala Glu Glu Val Ala Ala Arg Leu Lys Ile
645 650 655
Pro Ile Ser Lys Val Asp Ala Ser Ala Ala Lys Ala Ile Val Val His
660 665 670
Gly Ala Glu Leu Lys Asp Ile Gln Ser Lys Gln Leu Asp Gln Ile Leu
675 680 685
Gln Asn His Pro Glu Ile Val Phe Ala Arg Thr Ser Pro Gln Gln Lys
690 695 700
Leu Ile Ile Val Glu Gly Cys Gln Arg Leu Gly Ala Val Val Ala Val
705 710 715 720
Thr Gly Asp Gly Val Asn Asp Ser Pro Ala Leu Lys Lys Ala Asp Ile
725 730 735
Gly Ile Ala Met Gly Ile Ser Gly Ser Asp Val Ser Lys Gln Ala Ala
740 745 750
Asp Met Ile Leu Leu Asp Asp Asn Phe Ala Ser Ile Val Thr Gly Val
755 760 765
Glu Glu Gly Arg Leu Ile Phe Asp Asn Leu Lys Lys Ser Ile Met Tyr
770 775 780
Thr Leu Thr Ser Asn Ile Pro Glu Ile Thr Pro Phe Leu Met Phe Ile
785 790 795 800
Ile Leu Gly Ile Pro Leu Pro Leu Gly Thr Ile Thr Ile Leu Cys Ile
805 810 815
Asp Leu Gly Thr Asp Met Val Pro Ala Ile Ser Leu Ala Tyr Glu Ser
820 825 830
Ala Glu Ser Asp Ile Met Lys Arg Leu Pro Arg Asn Pro Lys Thr Asp
835 840 845
Asn Leu Val Asn His Arg Leu Ile Gly Met Ala Tyr Gly Gln Ile Gly
850 855 860
Met Ile Gln Ala Leu Ala Gly Phe Phe Thr Tyr Phe Val Ile Leu Ala
865 870 875 880
Glu Asn Gly Phe Arg Pro Val Asp Leu Leu Gly Ile Arg Leu His Trp
885 890 895
Glu Asp Lys Tyr Leu Asn Asp Leu Glu Asp Ser Tyr Gly Gln Gln Trp
900 905 910
Thr Tyr Glu Gln Arg Lys Val Val Glu Phe Thr Cys Gln Thr Ala Phe
915 920 925
Phe Val Thr Ile Val Val Val Gln Trp Ala Asp Leu Ile Ile Ser Lys
930 935 940
Thr Arg Arg Asn Ser Leu Phe Gln Gln Gly Met Arg Asn Lys Val Leu
945 950 955 960
Ile Phe Gly Ile Leu Glu Glu Thr Leu Leu Ala Ala Phe Leu Ser Tyr
965 970 975
Thr Pro Gly Met Asp Val Ala Leu Arg Met Tyr Pro Leu Lys Ile Thr
980 985 990
Trp Trp Leu Cys Ala Ile Pro Tyr Ser Ile Leu Ile Phe Val Tyr Asp
995 1000 1005
Glu Ile Arg Lys Leu Leu Ile Arg Gln His Pro Asp Gly Trp Val
1010 1015 1020
Glu Arg Glu Thr Tyr Tyr
1025
<210> 315
<211> 279
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ATP2B1
<400> 315
Met Thr Lys Asn Glu Lys Lys Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ala Glu Trp
1 5 10 15
Lys Leu Phe Ile Tyr Asn Pro Thr Thr Gly Glu Phe Leu Gly Arg Thr
20 25 30
Ala Lys Ser Trp Gly Leu Ile Leu Leu Phe Tyr Leu Val Phe Tyr Gly
35 40 45
Phe Leu Ala Ala Leu Phe Ser Phe Thr Met Trp Val Met Leu Gln Thr
50 55 60
Leu Asn Asp Glu Val Pro Lys Tyr Arg Asp Gln Ile Pro Ser Pro Gly
65 70 75 80
Leu Met Val Phe Pro Lys Pro Val Thr Ala Leu Glu Tyr Thr Phe Ser
85 90 95
Arg Ser Asp Pro Thr Ser Tyr Ala Gly Tyr Ile Glu Asp Leu Lys Lys
100 105 110
Phe Leu Lys Pro Tyr Thr Leu Glu Glu Gln Lys Asn Leu Thr Val Cys
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Phe Glu Gln Lys Gly Pro Val Tyr Val Ala Cys
130 135 140
Gln Phe Pro Ile Ser Leu Leu Gln Ala Cys Ser Gly Met Asn Asp Pro
145 150 155 160
Asp Phe Gly Tyr Ser Gln Gly Asn Pro Cys Ile Leu Val Lys Met Asn
165 170 175
Arg Ile Ile Gly Leu Lys Pro Glu Gly Val Pro Arg Ile Asp Cys Val
180 185 190
Ser Lys Asn Glu Asp Ile Pro Asn Val Ala Val Tyr Pro His Asn Gly
195 200 205
Met Ile Asp Leu Lys Tyr Phe Pro Tyr Tyr Gly Lys Lys Leu His Val
210 215 220
Gly Tyr Leu Gln Pro Leu Val Ala Val Gln Val Ser Phe Ala Pro Asn
225 230 235 240
Asn Thr Gly Lys Glu Val Thr Val Glu Cys Lys Ile Asp Gly Ser Ala
245 250 255
Asn Leu Lys Ser Gln Asp Asp Arg Asp Lys Phe Leu Gly Arg Val Met
260 265 270
Phe Lys Ile Thr Ala Arg Ala
275
<210> 316
<211> 1258
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ATP2B2
<400> 316
Met Gly Asp Met Ala Asn Asn Ser Val Ala Tyr Ser Gly Val Lys Asn
1 5 10 15
Ser Leu Lys Glu Ala Asn His Asp Gly Asp Phe Gly Ile Thr Leu Ala
20 25 30
Glu Leu Arg Ala Leu Met Glu Leu Arg Ser Thr Asp Ala Leu Arg Lys
35 40 45
Ile Gln Glu Ser Tyr Gly Asp Val Tyr Gly Ile Cys Thr Lys Leu Lys
50 55 60
Thr Ser Pro Asn Glu Gly Leu Ser Gly Asn Pro Ala Asp Leu Glu Arg
65 70 75 80
Arg Glu Ala Val Phe Gly Lys Asn Phe Ile Pro Pro Lys Lys Pro Lys
85 90 95
Thr Phe Leu Gln Leu Val Trp Glu Ala Leu Gln Asp Val Thr Leu Ile
100 105 110
Ile Leu Glu Ile Ala Ala Ile Val Ser Leu Gly Leu Ser Phe Tyr Gln
115 120 125
Pro Pro Glu Gly Asp Asn Ala Leu Cys Gly Glu Val Ser Val Gly Glu
130 135 140
Glu Glu Gly Glu Gly Glu Thr Gly Trp Ile Glu Gly Ala Ala Ile Leu
145 150 155 160
Leu Ser Val Val Cys Val Val Leu Val Thr Ala Phe Asn Asp Trp Ser
165 170 175
Lys Glu Lys Gln Phe Arg Gly Leu Gln Ser Arg Ile Glu Gln Glu Gln
180 185 190
Lys Phe Thr Val Ile Arg Gly Gly Gln Val Ile Gln Ile Pro Val Ala
195 200 205
Asp Ile Thr Val Gly Asp Ile Ala Gln Val Lys Tyr Gly Asp Leu Leu
210 215 220
Pro Ala Asp Gly Ile Leu Ile Gln Gly Asn Asp Leu Lys Ile Asp Glu
225 230 235 240
Ser Ser Leu Thr Gly Glu Ser Asp His Val Lys Lys Ser Leu Asp Lys
245 250 255
Asp Pro Leu Leu Leu Ser Gly Thr His Val Met Glu Gly Ser Gly Arg
260 265 270
Met Val Val Thr Ala Val Gly Val Asn Ser Gln Thr Gly Ile Ile Phe
275 280 285
Thr Leu Leu Gly Ala Gly Gly Glu Glu Glu Glu Lys Lys Asp Glu Lys
290 295 300
Lys Lys Glu Lys Lys Asn Lys Lys Gln Asp Gly Ala Ile Glu Asn Arg
305 310 315 320
Asn Lys Ala Lys Ala Gln Asp Gly Ala Ala Met Glu Met Gln Pro Leu
325 330 335
Lys Ser Glu Glu Gly Gly Asp Gly Asp Glu Lys Asp Lys Lys Lys Ala
340 345 350
Asn Leu Pro Lys Lys Glu Lys Ser Val Leu Gln Gly Lys Leu Thr Lys
355 360 365
Leu Ala Val Gln Ile Gly Lys Ala Gly Leu Leu Met Ser Ala Ile Thr
370 375 380
Val Ile Ile Leu Val Leu Tyr Phe Val Ile Asp Thr Phe Trp Val Gln
385 390 395 400
Lys Arg Pro Trp Leu Ala Glu Cys Thr Pro Ile Tyr Ile Gln Tyr Phe
405 410 415
Val Lys Phe Phe Ile Ile Gly Val Thr Val Leu Val Val Ala Val Pro
420 425 430
Glu Gly Leu Pro Leu Ala Val Thr Ile Ser Leu Ala Tyr Ser Val Lys
435 440 445
Lys Met Met Lys Asp Asn Asn Leu Val Arg His Leu Asp Ala Cys Glu
450 455 460
Thr Met Gly Asn Ala Thr Ala Ile Cys Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu
465 470 475 480
Thr Met Asn Arg Met Thr Val Val Gln Ala Tyr Ile Asn Glu Lys His
485 490 495
Tyr Lys Lys Val Pro Glu Pro Glu Ala Ile Pro Pro Asn Ile Leu Ser
500 505 510
Tyr Leu Val Thr Gly Ile Ser Val Asn Cys Ala Tyr Thr Ser Lys Ile
515 520 525
Leu Pro Pro Glu Lys Glu Gly Gly Leu Pro Arg His Val Gly Asn Lys
530 535 540
Thr Glu Cys Ala Leu Leu Gly Leu Leu Leu Asp Leu Lys Arg Asp Tyr
545 550 555 560
Gln Asp Val Arg Asn Glu Ile Pro Glu Glu Ala Leu Tyr Lys Val Tyr
565 570 575
Thr Phe Asn Ser Val Arg Lys Ser Met Ser Thr Val Leu Lys Asn Ser
580 585 590
Asp Gly Ser Tyr Arg Ile Phe Ser Lys Gly Ala Ser Glu Ile Ile Leu
595 600 605
Lys Lys Cys Phe Lys Ile Leu Ser Ala Asn Gly Glu Ala Lys Val Phe
610 615 620
Arg Pro Arg Asp Arg Asp Asp Ile Val Lys Thr Val Ile Glu Pro Met
625 630 635 640
Ala Ser Glu Gly Leu Arg Thr Ile Cys Leu Ala Phe Arg Asp Phe Pro
645 650 655
Ala Gly Glu Pro Glu Pro Glu Trp Asp Asn Glu Asn Asp Ile Val Thr
660 665 670
Gly Leu Thr Cys Ile Ala Val Val Gly Ile Glu Asp Pro Val Arg Pro
675 680 685
Glu Val Pro Asp Ala Ile Lys Lys Cys Gln Arg Ala Gly Ile Thr Val
690 695 700
Arg Met Val Thr Gly Asp Asn Ile Asn Thr Ala Arg Ala Ile Ala Thr
705 710 715 720
Lys Cys Gly Ile Leu His Pro Gly Glu Asp Phe Leu Cys Leu Glu Gly
725 730 735
Lys Asp Phe Asn Arg Arg Ile Arg Asn Glu Lys Gly Glu Ile Glu Gln
740 745 750
Glu Arg Ile Asp Lys Ile Trp Pro Lys Leu Arg Val Leu Ala Arg Ser
755 760 765
Ser Pro Thr Asp Lys His Thr Leu Val Lys Gly Ile Ile Asp Ser Thr
770 775 780
Val Ser Asp Gln Arg Gln Val Val Ala Val Thr Gly Asp Gly Thr Asn
785 790 795 800
Asp Gly Pro Ala Leu Lys Lys Ala Asp Val Gly Phe Ala Met Gly Ile
805 810 815
Ala Gly Thr Asp Val Ala Lys Glu Ala Ser Asp Ile Ile Leu Thr Asp
820 825 830
Asp Asn Phe Thr Ser Ile Val Lys Ala Val Met Trp Gly Arg Asn Val
835 840 845
Tyr Asp Ser Ile Ser Lys Phe Leu Gln Phe Gln Leu Thr Val Asn Val
850 855 860
Val Ala Val Ile Val Ala Phe Thr Gly Ala Cys Ile Thr Gln Asp Ser
865 870 875 880
Pro Leu Lys Ala Val Gln Met Leu Trp Val Asn Leu Ile Met Asp Thr
885 890 895
Leu Ala Ser Leu Ala Leu Ala Thr Glu Pro Pro Thr Glu Ser Leu Leu
900 905 910
Leu Arg Lys Pro Tyr Gly Arg Asn Lys Pro Leu Ile Ser Arg Thr Met
915 920 925
Met Lys Asn Ile Leu Gly His Ala Phe Tyr Gln Leu Val Val Val Phe
930 935 940
Thr Leu Leu Phe Ala Gly Glu Lys Phe Phe Asp Ile Asp Ser Gly Arg
945 950 955 960
Asn Ala Pro Leu His Ala Pro Pro Ser Glu His Tyr Thr Ile Val Phe
965 970 975
Asn Thr Phe Val Leu Met Gln Leu Phe Asn Glu Ile Asn Ala Arg Lys
980 985 990
Ile His Gly Glu Arg Asn Val Phe Glu Gly Ile Phe Asn Asn Ala Ile
995 1000 1005
Phe Cys Thr Ile Val Leu Gly Thr Phe Val Val Gln Ile Ile Ile
1010 1015 1020
Val Gln Phe Gly Gly Lys Pro Phe Ser Cys Ser Glu Leu Ser Ile
1025 1030 1035
Glu Gln Trp Leu Trp Ser Ile Phe Leu Gly Met Gly Thr Leu Leu
1040 1045 1050
Trp Gly Gln Leu Ile Ser Thr Ile Pro Thr Ser Arg Leu Lys Phe
1055 1060 1065
Leu Lys Glu Ala Gly His Gly Thr Gln Lys Glu Glu Ile Pro Glu
1070 1075 1080
Glu Glu Leu Ala Glu Asp Val Glu Glu Ile Asp His Ala Glu Arg
1085 1090 1095
Glu Leu Arg Arg Gly Gln Ile Leu Trp Phe Arg Gly Leu Asn Arg
1100 1105 1110
Ile Gln Thr Gln Met Asp Val Val Asn Ala Phe Gln Ser Gly Ser
1115 1120 1125
Ser Ile Gln Gly Ala Leu Arg Arg Gln Pro Ser Ile Ala Ser Gln
1130 1135 1140
His His Asp Val Thr Asn Ile Ser Thr Pro Thr His Ile Arg Val
1145 1150 1155
Val Asn Ala Phe Arg Ser Ser Leu Tyr Glu Gly Leu Glu Lys Pro
1160 1165 1170
Glu Ser Arg Ser Ser Ile His Asn Phe Met Thr His Pro Glu Phe
1175 1180 1185
Arg Ile Glu Asp Ser Glu Pro His Ile Pro Leu Ile Asp Asp Thr
1190 1195 1200
Asp Ala Glu Asp Asp Ala Pro Thr Lys Arg Asn Ser Ser Pro Pro
1205 1210 1215
Pro Ser Pro Asn Lys Asn Asn Asn Ala Val Asp Ser Gly Ile His
1220 1225 1230
Leu Thr Ile Glu Met Asn Lys Ser Ala Thr Ser Ser Ser Pro Gly
1235 1240 1245
Ser Pro Leu His Ser Leu Glu Thr Ser Leu
1250 1255
<210> 317
<211> 1272
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ATP2B3
<400> 317
Met Gly Asp Met Thr Asn Ser Asp Phe Tyr Ser Lys Asn Gln Arg Asn
1 5 10 15
Glu Ser Ser His Gly Gly Glu Phe Gly Cys Thr Met Glu Glu Leu Arg
20 25 30
Ser Leu Met Glu Leu Arg Gly Thr Glu Ala Val Val Lys Ile Lys Glu
35 40 45
Thr Tyr Gly Asp Thr Glu Ala Ile Cys Arg Arg Leu Lys Thr Ser Pro
50 55 60
Val Glu Gly Leu Pro Gly Thr Ala Pro Asp Leu Glu Lys Arg Lys Gln
65 70 75 80
Ile Phe Gly Gln Asn Phe Ile Pro Pro Lys Lys Pro Lys Thr Phe Leu
85 90 95
Gln Leu Val Trp Glu Ala Leu Gln Asp Val Thr Leu Ile Ile Leu Glu
100 105 110
Ile Ala Ala Ile Ile Ser Leu Gly Leu Ser Phe Tyr His Pro Pro Gly
115 120 125
Glu Gly Asn Glu Gly Cys Ala Thr Ala Gln Gly Gly Ala Glu Asp Glu
130 135 140
Gly Glu Ala Glu Ala Gly Trp Ile Glu Gly Ala Ala Ile Leu Leu Ser
145 150 155 160
Val Ile Cys Val Val Leu Val Thr Ala Phe Asn Asp Trp Ser Lys Glu
165 170 175
Lys Gln Phe Arg Gly Leu Gln Ser Arg Ile Glu Gln Glu Gln Lys Phe
180 185 190
Thr Val Val Arg Ala Gly Gln Val Val Gln Ile Pro Val Ala Glu Ile
195 200 205
Val Val Gly Asp Ile Ala Gln Val Lys Tyr Gly Asp Leu Leu Pro Ala
210 215 220
Asp Gly Leu Phe Ile Gln Gly Asn Asp Leu Lys Ile Asp Glu Ser Ser
225 230 235 240
Leu Thr Gly Glu Ser Asp Gln Val Arg Lys Ser Val Asp Lys Asp Pro
245 250 255
Met Leu Leu Ser Gly Thr His Val Met Glu Gly Ser Gly Arg Met Leu
260 265 270
Val Thr Ala Val Gly Val Asn Ser Gln Thr Gly Ile Ile Phe Thr Leu
275 280 285
Leu Gly Ala Gly Gly Glu Glu Glu Glu Lys Lys Asp Lys Lys Gly Val
290 295 300
Lys Lys Gly Asp Gly Leu Gln Leu Pro Ala Ala Asp Gly Ala Ala Ala
305 310 315 320
Ser Asn Ala Ala Asp Ser Ala Asn Ala Ser Leu Val Asn Gly Lys Met
325 330 335
Gln Asp Gly Asn Val Asp Ala Ser Gln Ser Lys Ala Lys Gln Gln Asp
340 345 350
Gly Ala Ala Ala Met Glu Met Gln Pro Leu Lys Ser Ala Glu Gly Gly
355 360 365
Asp Ala Asp Asp Arg Lys Lys Ala Ser Met His Lys Lys Glu Lys Ser
370 375 380
Val Leu Gln Gly Lys Leu Thr Lys Leu Ala Val Gln Ile Gly Lys Ala
385 390 395 400
Gly Leu Val Met Ser Ala Ile Thr Val Ile Ile Leu Val Leu Tyr Phe
405 410 415
Thr Val Asp Thr Phe Val Val Asn Lys Lys Pro Trp Leu Pro Glu Cys
420 425 430
Thr Pro Val Tyr Val Gln Tyr Phe Val Lys Phe Phe Ile Ile Gly Val
435 440 445
Thr Val Leu Val Val Ala Val Pro Glu Gly Leu Pro Leu Ala Val Thr
450 455 460
Ile Ser Leu Ala Tyr Ser Val Lys Lys Met Met Lys Asp Asn Asn Leu
465 470 475 480
Val Arg His Leu Asp Ala Cys Glu Thr Met Gly Asn Ala Thr Ala Ile
485 490 495
Cys Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu Thr Thr Asn Arg Met Thr Val Val
500 505 510
Gln Ala Tyr Val Gly Asp Val His Tyr Lys Glu Ile Pro Asp Pro Ser
515 520 525
Ser Ile Asn Thr Lys Thr Met Glu Leu Leu Ile Asn Ala Ile Ala Ile
530 535 540
Asn Ser Ala Tyr Thr Thr Lys Ile Leu Pro Pro Glu Lys Glu Gly Ala
545 550 555 560
Leu Pro Arg Gln Val Gly Asn Lys Thr Glu Cys Gly Leu Leu Gly Phe
565 570 575
Val Leu Asp Leu Lys Gln Asp Tyr Glu Pro Val Arg Ser Gln Met Pro
580 585 590
Glu Glu Lys Leu Tyr Lys Val Tyr Thr Phe Asn Ser Val Arg Lys Ser
595 600 605
Met Ser Thr Val Ile Lys Leu Pro Asp Glu Ser Phe Arg Met Tyr Ser
610 615 620
Lys Gly Ala Ser Glu Ile Val Leu Lys Lys Cys Cys Lys Ile Leu Asn
625 630 635 640
Gly Ala Gly Glu Pro Arg Val Phe Arg Pro Arg Asp Arg Asp Glu Met
645 650 655
Val Lys Lys Val Ile Glu Pro Met Ala Cys Asp Gly Leu Arg Thr Ile
660 665 670
Cys Val Ala Tyr Arg Asp Phe Pro Ser Ser Pro Glu Pro Asp Trp Asp
675 680 685
Asn Glu Asn Asp Ile Leu Asn Glu Leu Thr Cys Ile Cys Val Val Gly
690 695 700
Ile Glu Asp Pro Val Arg Pro Glu Val Pro Glu Ala Ile Arg Lys Cys
705 710 715 720
Gln Arg Ala Gly Ile Thr Val Arg Met Val Thr Gly Asp Asn Ile Asn
725 730 735
Thr Ala Arg Ala Ile Ala Ile Lys Cys Gly Ile Ile His Pro Gly Glu
740 745 750
Asp Phe Leu Cys Leu Glu Gly Lys Glu Phe Asn Arg Arg Ile Arg Asn
755 760 765
Glu Lys Gly Glu Ile Glu Gln Glu Arg Ile Asp Lys Ile Trp Pro Lys
770 775 780
Leu Arg Val Leu Ala Arg Ser Ser Pro Thr Asp Lys His Thr Leu Val
785 790 795 800
Lys Gly Ile Ile Asp Ser Thr His Thr Glu Gln Arg Gln Val Val Ala
805 810 815
Val Thr Gly Asp Gly Thr Asn Asp Gly Pro Ala Leu Lys Lys Ala Asp
820 825 830
Val Gly Phe Ala Met Gly Ile Ala Gly Thr Asp Val Ala Lys Glu Ala
835 840 845
Ser Asp Ile Ile Leu Thr Asp Asp Asn Phe Ser Ser Ile Val Lys Ala
850 855 860
Val Met Trp Gly Arg Asn Val Tyr Asp Ser Ile Ser Lys Phe Leu Gln
865 870 875 880
Phe Gln Leu Thr Val Asn Val Val Ala Val Ile Val Ala Phe Thr Gly
885 890 895
Ala Cys Ile Thr Gln Asp Ser Pro Leu Lys Ala Val Gln Met Leu Trp
900 905 910
Val Asn Leu Ile Met Asp Thr Phe Ala Ser Leu Ala Leu Ala Thr Glu
915 920 925
Pro Pro Thr Glu Thr Leu Leu Leu Arg Lys Pro Tyr Gly Arg Asn Lys
930 935 940
Pro Leu Ile Ser Arg Thr Met Met Lys Asn Ile Leu Gly His Ala Val
945 950 955 960
Tyr Gln Leu Ala Leu Ile Phe Thr Leu Leu Phe Val Gly Glu Lys Met
965 970 975
Phe Gln Ile Asp Ser Gly Arg Asn Ala Pro Leu His Ser Pro Pro Ser
980 985 990
Glu His Tyr Thr Ile Ile Phe Asn Thr Phe Val Met Met Gln Leu Phe
995 1000 1005
Asn Glu Ile Asn Ala Arg Lys Ile His Gly Glu Arg Asn Val Phe
1010 1015 1020
Asp Gly Ile Phe Arg Asn Pro Ile Phe Cys Thr Ile Val Leu Gly
1025 1030 1035
Thr Phe Ala Ile Gln Ile Val Ile Val Gln Phe Gly Gly Lys Pro
1040 1045 1050
Phe Ser Cys Ser Pro Leu Gln Leu Asp Gln Trp Met Trp Cys Ile
1055 1060 1065
Phe Ile Gly Leu Gly Glu Leu Val Trp Gly Gln Val Ile Ala Thr
1070 1075 1080
Ile Pro Thr Ser Arg Leu Lys Phe Leu Lys Glu Ala Gly Arg Leu
1085 1090 1095
Thr Gln Lys Glu Glu Ile Pro Glu Glu Glu Leu Asn Glu Asp Val
1100 1105 1110
Glu Glu Ile Asp His Ala Glu Arg Glu Leu Arg Arg Gly Gln Ile
1115 1120 1125
Leu Trp Phe Arg Gly Leu Asn Arg Ile Gln Thr Gln Ile Glu Val
1130 1135 1140
Val Asn Thr Phe Lys Ser Gly Ala Ser Phe Gln Gly Ala Leu Arg
1145 1150 1155
Arg Gln Ser Ser Val Thr Ser Gln Ser Gln Asp Ile Arg Val Val
1160 1165 1170
Lys Ala Phe Arg Ser Ser Leu Tyr Glu Gly Leu Glu Lys Pro Glu
1175 1180 1185
Ser Arg Thr Ser Ile His Asn Phe Met Ala His Pro Glu Phe Arg
1190 1195 1200
Ile Glu Asp Ser Gln Pro His Ile Pro Leu Ile Asp Asp Thr Asp
1205 1210 1215
Leu Glu Glu Asp Ala Ala Leu Lys Gln Asn Ser Ser Pro Pro Ser
1220 1225 1230
Ser Leu Asn Lys Asn Asn Ser Ala Ile Asp Ser Gly Ile Asn Leu
1235 1240 1245
Thr Thr Asp Thr Ser Lys Ser Ala Thr Ser Ser Ser Pro Gly Ser
1250 1255 1260
Pro Ile His Ser Leu Glu Thr Ser Leu
1265 1270
<210> 318
<211> 874
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ATP2B4
<400> 318
Met Gly Asp Met Ala Asn Ser Ser Ile Glu Phe His Pro Lys Pro Gln
1 5 10 15
Gln Gln Arg Asp Val Pro Gln Ala Gly Gly Phe Gly Cys Thr Leu Ala
20 25 30
Glu Leu Arg Thr Leu Met Glu Leu Arg Gly Ala Glu Ala Leu Gln Lys
35 40 45
Ile Glu Glu Ala Tyr Gly Asp Val Ser Gly Leu Cys Arg Arg Leu Lys
50 55 60
Thr Ser Pro Thr Glu Gly Leu Ala Asp Asn Thr Asn Asp Leu Glu Lys
65 70 75 80
Arg Arg Gln Ile Tyr Gly Gln Asn Phe Ile Pro Pro Lys Gln Pro Lys
85 90 95
Thr Phe Leu Gln Leu Val Trp Glu Ala Leu Gln Asp Val Thr Leu Ile
100 105 110
Ile Leu Glu Val Ala Ala Ile Val Ser Leu Gly Leu Ser Phe Tyr Ala
115 120 125
Pro Pro Gly Glu Glu Ser Glu Ala Cys Gly Asn Val Ser Gly Gly Ala
130 135 140
Glu Asp Glu Gly Glu Ala Glu Ala Gly Trp Ile Glu Gly Ala Ala Ile
145 150 155 160
Leu Leu Ser Val Ile Cys Val Val Leu Val Thr Ala Phe Asn Asp Trp
165 170 175
Ser Lys Glu Lys Gln Phe Arg Gly Leu Gln Ser Arg Ile Glu Gln Glu
180 185 190
Gln Lys Phe Thr Val Ile Arg Asn Gly Gln Leu Leu Gln Val Pro Val
195 200 205
Ala Ala Leu Val Val Gly Asp Ile Ala Gln Val Lys Tyr Gly Asp Leu
210 215 220
Leu Pro Ala Asp Gly Val Leu Ile Gln Ala Asn Asp Leu Lys Ile Asp
225 230 235 240
Glu Ser Ser Leu Thr Gly Glu Ser Asp His Val Arg Lys Ser Ala Asp
245 250 255
Lys Asp Pro Met Leu Leu Ser Gly Thr His Val Met Glu Gly Ser Gly
260 265 270
Arg Met Val Val Thr Ala Val Gly Val Asn Ser Gln Thr Gly Ile Ile
275 280 285
Phe Thr Leu Leu Gly Ala Gly Gly Glu Glu Glu Glu Lys Lys Asp Lys
290 295 300
Lys Gly Lys Gln Gln Asp Gly Ala Met Glu Ser Ser Gln Thr Lys Ala
305 310 315 320
Lys Lys Gln Asp Gly Ala Val Ala Met Glu Met Gln Pro Leu Lys Ser
325 330 335
Ala Glu Gly Gly Glu Met Glu Glu Arg Glu Lys Lys Lys Ala Asn Ala
340 345 350
Pro Lys Lys Glu Lys Ser Val Leu Gln Gly Lys Leu Thr Lys Leu Ala
355 360 365
Val Gln Ile Gly Lys Ala Gly Leu Val Met Ser Ala Ile Thr Val Ile
370 375 380
Ile Leu Val Leu Tyr Phe Val Ile Glu Thr Phe Val Val Glu Gly Arg
385 390 395 400
Thr Trp Leu Ala Glu Cys Thr Pro Val Tyr Val Gln Tyr Phe Val Lys
405 410 415
Phe Phe Ile Ile Gly Val Thr Val Leu Val Val Ala Val Pro Glu Gly
420 425 430
Leu Pro Leu Ala Val Thr Ile Ser Leu Ala Tyr Ser Val Lys Lys Met
435 440 445
Met Lys Asp Asn Asn Leu Val Arg His Leu Asp Ala Cys Glu Thr Met
450 455 460
Gly Asn Ala Thr Ala Ile Cys Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu Thr Thr
465 470 475 480
Asn Arg Met Thr Val Val Gln Ser Tyr Leu Gly Asp Thr His Tyr Lys
485 490 495
Glu Ile Pro Ala Pro Ser Ala Leu Thr Pro Lys Ile Leu Asp Leu Leu
500 505 510
Val His Ala Ile Ser Ile Asn Ser Ala Tyr Thr Thr Lys Ile Leu Pro
515 520 525
Pro Glu Lys Glu Gly Ala Leu Pro Arg Gln Val Gly Asn Lys Thr Glu
530 535 540
Cys Ala Leu Leu Gly Phe Val Leu Asp Leu Lys Arg Asp Phe Gln Pro
545 550 555 560
Val Arg Glu Gln Ile Pro Glu Asp Lys Leu Tyr Lys Val Tyr Thr Phe
565 570 575
Asn Ser Val Arg Lys Ser Met Ser Thr Val Ile Arg Met Pro Asp Gly
580 585 590
Gly Phe Arg Leu Phe Ser Lys Gly Ala Ser Glu Ile Leu Leu Lys Lys
595 600 605
Cys Thr Asn Ile Leu Asn Ser Asn Gly Glu Leu Arg Gly Phe Arg Pro
610 615 620
Arg Asp Arg Asp Asp Met Val Arg Lys Ile Ile Glu Pro Met Ala Cys
625 630 635 640
Asp Gly Leu Arg Thr Ile Cys Ile Ala Tyr Arg Asp Phe Ser Ala Gly
645 650 655
Gln Glu Pro Asp Trp Asp Asn Glu Asn Glu Val Val Gly Asp Leu Thr
660 665 670
Cys Ile Ala Val Val Gly Ile Glu Asp Pro Val Arg Pro Glu Val Pro
675 680 685
Glu Ala Ile Arg Lys Cys Gln Arg Ala Gly Ile Thr Val Arg Met Val
690 695 700
Thr Gly Asp Asn Ile Asn Thr Ala Arg Ala Ile Ala Ala Lys Cys Gly
705 710 715 720
Ile Ile Gln Pro Gly Glu Asp Phe Leu Cys Leu Glu Gly Lys Glu Phe
725 730 735
Asn Arg Arg Ile Arg Asn Glu Lys Gly Glu Ile Glu Gln Glu Arg Leu
740 745 750
Asp Lys Val Trp Pro Lys Leu Arg Val Leu Ala Arg Ser Ser Pro Thr
755 760 765
Asp Lys His Thr Leu Val Lys Gly Ile Ile Asp Ser Thr Thr Gly Glu
770 775 780
Gln Arg Gln Val Val Ala Val Thr Gly Asp Gly Thr Asn Asp Gly Pro
785 790 795 800
Ala Leu Lys Lys Ala Asp Val Gly Phe Ala Met Gly Ile Ala Gly Thr
805 810 815
Asp Val Ala Lys Glu Ala Ser Asp Ile Ile Leu Thr Asp Asp Asn Phe
820 825 830
Thr Ser Ile Val Lys Ala Val Met Trp Gly Arg Asn Val Tyr Asp Ser
835 840 845
Ile Ser Lys Phe Leu Gln Phe Gln Leu Thr Val Asn Val Val Ala Val
850 855 860
Ile Val Ala Phe Thr Gly Ala Cys Ile Thr
865 870
<210> 319
<400> 319
000
<210> 320
<400> 320
000
<210> 321
<400> 321
000
<210> 322
<400> 322
000
<210> 323
<400> 323
000
<210> 324
<400> 324
000
<210> 325
<400> 325
000
<210> 326
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BSG蛋白片段
<400> 326
Pro Gly Thr Val Phe Thr Thr Val Glu Asp Leu Gly Ser Lys Ile Leu
1 5 10 15
Leu Thr Cys Ser Leu Asn Asp Ser Ala Thr Glu Val Thr Gly His Arg
20 25 30
Trp Leu Lys Gly Gly Val Val Leu Lys Glu Asp Ala Leu Pro Gly Gln
35 40 45
Lys Thr Glu Phe Lys Val Asp Ser Asp Asp Gln Trp Gly Glu Tyr Ser
50 55 60
Cys Val Phe Leu Pro Glu Pro Met Gly Thr Ala Asn Ile Gln Leu His
65 70 75 80
Gly Pro Pro Arg Val Lys Ala Val Lys Ser Ser Glu His Ile Asn Glu
85 90 95
Gly Glu Thr Ala Met Leu Val Cys Lys Ser Glu Ser Val Pro Pro Val
100 105 110
Thr Asp Trp Ala Trp Tyr Lys Ile Thr Asp Ser Glu Asp Lys Ala Leu
115 120 125
Met Asn Gly Ser Glu Ser Arg Phe Phe Val Ser Ser Ser Gln Gly Arg
130 135 140
Ser Glu Leu His Ile Glu Asn Leu Asn Met Glu Ala Asp Pro Gly Gln
145 150 155 160
Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Ser Ser Lys Gly Ser Asp Gln Ala Ile Ile
165 170 175
Thr Leu Arg Val Arg Ser His Leu Ala Ala Leu Trp Pro Phe Leu Gly
180 185 190
Ile Val Ala Glu Val Leu Val Leu Val Thr Ile Ile Phe Ile Tyr Glu
195 200 205
Lys Arg Arg Lys Pro Glu Asp Val Leu Asp Asp Asp Asp Ala Gly Ser
210 215 220
Ala Pro Leu Lys Ser Ser Gly Gln His Gln Asn Asp Lys Gly Lys Asn
225 230 235 240
Val Arg Gln Arg Asn Ser Ser
245
<210> 327
<211> 168
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BSG蛋白片段
<400> 327
His Gly Pro Pro Arg Val Lys Ala Val Lys Ser Ser Glu His Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gly Glu Thr Ala Met Leu Val Cys Lys Ser Glu Ser Val Pro Pro
20 25 30
Val Thr Asp Trp Ala Trp Tyr Lys Ile Thr Asp Ser Glu Asp Lys Ala
35 40 45
Leu Met Asn Gly Ser Glu Ser Arg Phe Phe Val Ser Ser Ser Gln Gly
50 55 60
Arg Ser Glu Leu His Ile Glu Asn Leu Asn Met Glu Ala Asp Pro Gly
65 70 75 80
Gln Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Ser Ser Lys Gly Ser Asp Gln Ala Ile
85 90 95
Ile Thr Leu Arg Val Arg Ser His Leu Ala Ala Leu Trp Pro Phe Leu
100 105 110
Gly Ile Val Ala Glu Val Leu Val Leu Val Thr Ile Ile Phe Ile Tyr
115 120 125
Glu Lys Arg Arg Lys Pro Glu Asp Val Leu Asp Asp Asp Asp Ala Gly
130 135 140
Ser Ala Pro Leu Lys Ser Ser Gly Gln His Gln Asn Asp Lys Gly Lys
145 150 155 160
Asn Val Arg Gln Arg Asn Ser Ser
165
<210> 328
<211> 66
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BSG蛋白片段
<400> 328
Ser His Leu Ala Ala Leu Trp Pro Phe Leu Gly Ile Val Ala Glu Val
1 5 10 15
Leu Val Leu Val Thr Ile Ile Phe Ile Tyr Glu Lys Arg Arg Lys Pro
20 25 30
Glu Asp Val Leu Asp Asp Asp Asp Ala Gly Ser Ala Pro Leu Lys Ser
35 40 45
Ser Gly Gln His Gln Asn Asp Lys Gly Lys Asn Val Arg Gln Arg Asn
50 55 60
Ser Ser
65
<210> 329
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BSG蛋白 – 信号肽
<400> 329
Met Ala Ala Ala Leu Phe Val Leu Leu Gly Phe Ala Leu Leu Gly Thr
1 5 10 15
His Gly
<210> 330
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGSF8蛋白片段
<400> 330
Ala Pro Pro Gly Pro Arg Gly Arg Gln Ala Pro Thr Ser Pro Pro Arg
1 5 10 15
Met Thr Val His Glu Gly Gln Glu Leu Ala Leu Gly Cys Leu Ala Arg
20 25 30
Thr Ser Thr Gln Lys His Thr His Leu Ala Val Ser Phe Gly Arg Ser
35 40 45
Val Pro Glu Ala Pro Val Gly Arg Ser Thr Leu Gln Glu Val Val Gly
50 55 60
Ile Arg Ser Asp Leu Ala Val Glu Ala Gly Ala Pro Tyr Ala Glu Arg
65 70 75 80
Leu Ala Ala Gly Glu Leu Arg Leu Gly Lys Glu Gly Thr Asp Arg Tyr
85 90 95
Arg Met Val Val Gly Gly Ala Gln Ala Gly Asp Ala Gly Thr Tyr His
100 105 110
Cys Thr Ala Ala Glu Trp Ile Gln Asp Pro Asp Gly Ser Trp Ala Gln
115 120 125
Ile Ala Glu Lys Arg Ala Val Leu Ala His Val Asp Val Gln Thr Leu
130 135 140
Ser Ser Gln Leu Ala Val Thr Val Gly Pro Gly Glu Arg Arg Ile Gly
145 150 155 160
Pro Gly Glu Pro Leu Glu Leu Leu Cys Asn Val Ser Gly Ala Leu Pro
165 170 175
Pro Ala Gly Arg His Ala Ala Tyr Ser Val Gly Trp Glu Met Ala Pro
180 185 190
Ala Gly Ala Pro Gly Pro Gly Arg Leu Val Ala Gln Leu Asp Thr Glu
195 200 205
Gly Val Gly Ser Leu Gly Pro Gly Tyr Glu Gly Arg His Ile Ala Met
210 215 220
Glu Lys Val Ala Ser Arg Thr Tyr Arg Leu Arg Leu Glu Ala Ala Arg
225 230 235 240
Pro Gly Asp Ala Gly Thr Tyr Arg Cys Leu Ala Lys Ala Tyr Val Arg
245 250 255
Gly Ser Gly Thr Arg Leu Arg Glu Ala Ala Ser Ala Arg Ser Arg Pro
260 265 270
Leu Pro Val His Val Arg Glu Glu Gly Val Val Leu Glu Ala Val Ala
275 280 285
Trp Leu Ala Gly Gly Thr Val Tyr Arg Gly Glu Thr Ala Ser Leu Leu
290 295 300
Cys Asn Ile Ser Val Arg Gly Gly Pro Pro Gly Leu Arg Leu Ala Ala
305 310 315 320
Ser Trp Trp Val Glu Arg Pro Glu Asp Gly Glu Leu Ser Ser Val Pro
325 330 335
Ala Gln Leu Val Gly Gly Val Gly Gln Asp Gly Val Ala Glu Leu Gly
340 345 350
Val Arg Pro Gly Gly Gly Pro Val Ser Val Glu Leu Val Gly Pro Arg
355 360 365
Ser His Arg Leu Arg Leu His Ser Leu Gly Pro Glu Asp Glu Gly Val
370 375 380
Tyr His Cys Ala Pro Ser Ala Trp Val Gln His Ala Asp Tyr Ser Trp
385 390 395 400
Tyr Gln Ala Gly Ser Ala Arg Ser Gly Pro Val Thr Val Tyr Pro Tyr
405 410 415
Met His Ala Leu Asp Thr Leu Phe Val Pro Leu Leu Val Gly Thr Gly
420 425 430
Val Ala Leu Val Thr Gly Ala Thr Val Leu Gly Thr Ile Thr Cys Cys
435 440 445
Phe Met Lys Arg Leu Arg Lys Arg
450 455
<210> 331
<211> 320
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGSF8蛋白片段
<400> 331
Ala His Val Asp Val Gln Thr Leu Ser Ser Gln Leu Ala Val Thr Val
1 5 10 15
Gly Pro Gly Glu Arg Arg Ile Gly Pro Gly Glu Pro Leu Glu Leu Leu
20 25 30
Cys Asn Val Ser Gly Ala Leu Pro Pro Ala Gly Arg His Ala Ala Tyr
35 40 45
Ser Val Gly Trp Glu Met Ala Pro Ala Gly Ala Pro Gly Pro Gly Arg
50 55 60
Leu Val Ala Gln Leu Asp Thr Glu Gly Val Gly Ser Leu Gly Pro Gly
65 70 75 80
Tyr Glu Gly Arg His Ile Ala Met Glu Lys Val Ala Ser Arg Thr Tyr
85 90 95
Arg Leu Arg Leu Glu Ala Ala Arg Pro Gly Asp Ala Gly Thr Tyr Arg
100 105 110
Cys Leu Ala Lys Ala Tyr Val Arg Gly Ser Gly Thr Arg Leu Arg Glu
115 120 125
Ala Ala Ser Ala Arg Ser Arg Pro Leu Pro Val His Val Arg Glu Glu
130 135 140
Gly Val Val Leu Glu Ala Val Ala Trp Leu Ala Gly Gly Thr Val Tyr
145 150 155 160
Arg Gly Glu Thr Ala Ser Leu Leu Cys Asn Ile Ser Val Arg Gly Gly
165 170 175
Pro Pro Gly Leu Arg Leu Ala Ala Ser Trp Trp Val Glu Arg Pro Glu
180 185 190
Asp Gly Glu Leu Ser Ser Val Pro Ala Gln Leu Val Gly Gly Val Gly
195 200 205
Gln Asp Gly Val Ala Glu Leu Gly Val Arg Pro Gly Gly Gly Pro Val
210 215 220
Ser Val Glu Leu Val Gly Pro Arg Ser His Arg Leu Arg Leu His Ser
225 230 235 240
Leu Gly Pro Glu Asp Glu Gly Val Tyr His Cys Ala Pro Ser Ala Trp
245 250 255
Val Gln His Ala Asp Tyr Ser Trp Tyr Gln Ala Gly Ser Ala Arg Ser
260 265 270
Gly Pro Val Thr Val Tyr Pro Tyr Met His Ala Leu Asp Thr Leu Phe
275 280 285
Val Pro Leu Leu Val Gly Thr Gly Val Ala Leu Val Thr Gly Ala Thr
290 295 300
Val Leu Gly Thr Ile Thr Cys Cys Phe Met Lys Arg Leu Arg Lys Arg
305 310 315 320
<210> 332
<211> 179
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGSF8蛋白片段
<400> 332
Arg Glu Glu Gly Val Val Leu Glu Ala Val Ala Trp Leu Ala Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Tyr Arg Gly Glu Thr Ala Ser Leu Leu Cys Asn Ile Ser Val
20 25 30
Arg Gly Gly Pro Pro Gly Leu Arg Leu Ala Ala Ser Trp Trp Val Glu
35 40 45
Arg Pro Glu Asp Gly Glu Leu Ser Ser Val Pro Ala Gln Leu Val Gly
50 55 60
Gly Val Gly Gln Asp Gly Val Ala Glu Leu Gly Val Arg Pro Gly Gly
65 70 75 80
Gly Pro Val Ser Val Glu Leu Val Gly Pro Arg Ser His Arg Leu Arg
85 90 95
Leu His Ser Leu Gly Pro Glu Asp Glu Gly Val Tyr His Cys Ala Pro
100 105 110
Ser Ala Trp Val Gln His Ala Asp Tyr Ser Trp Tyr Gln Ala Gly Ser
115 120 125
Ala Arg Ser Gly Pro Val Thr Val Tyr Pro Tyr Met His Ala Leu Asp
130 135 140
Thr Leu Phe Val Pro Leu Leu Val Gly Thr Gly Val Ala Leu Val Thr
145 150 155 160
Gly Ala Thr Val Leu Gly Thr Ile Thr Cys Cys Phe Met Lys Arg Leu
165 170 175
Arg Lys Arg
<210> 333
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGSF8蛋白片段
<400> 333
Val Ala Leu Val Thr Gly Ala Thr Val Leu Gly Thr Ile Thr Cys Cys
1 5 10 15
Phe Met Lys Arg Leu Arg Lys Arg
20
<210> 334
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGSF8蛋白 - 信号肽
<400> 334
Met Gly Ala Leu Arg Pro Thr Leu Leu Pro Pro Ser Leu Pro Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Met Leu Gly Met Gly Cys Trp Ala
20 25
<210> 335
<400> 335
000
<210> 336
<400> 336
000
<210> 337
<400> 337
000
<210> 338
<400> 338
000
<210> 339
<400> 339
000
<210> 340
<400> 340
000
<210> 341
<400> 341
000
<210> 342
<400> 342
000
<210> 343
<400> 343
000
<210> 344
<400> 344
000
<210> 345
<400> 345
000
<210> 346
<400> 346
000
<210> 347
<400> 347
000
<210> 348
<400> 348
000
<210> 349
<400> 349
000
<210> 350
<400> 350
000
<210> 351
<400> 351
000
<210> 352
<400> 352
000
<210> 353
<400> 353
000
<210> 354
<400> 354
000
<210> 355
<400> 355
000
<210> 356
<400> 356
000
<210> 357
<400> 357
000
<210> 358
<400> 358
000
<210> 359
<400> 359
000
<210> 360
<400> 360
000
<210> 361
<400> 361
000
<210> 362
<400> 362
000
<210> 363
<400> 363
000
<210> 364
<400> 364
000
<210> 365
<400> 365
000
<210> 366
<400> 366
000
<210> 367
<400> 367
000
<210> 368
<400> 368
000
<210> 369
<400> 369
000
<210> 370
<400> 370
000
<210> 371
<400> 371
000
<210> 372
<400> 372
000
<210> 373
<400> 373
000
<210> 374
<400> 374
000
<210> 375
<400> 375
000
<210> 376
<400> 376
000
<210> 377
<400> 377
000
<210> 378
<400> 378
000
<210> 379
<400> 379
000
<210> 380
<400> 380
000
<210> 381
<400> 381
000
<210> 382
<400> 382
000
<210> 383
<400> 383
000
<210> 384
<400> 384
000
<210> 385
<400> 385
000
<210> 386
<400> 386
000
<210> 387
<400> 387
000
<210> 388
<400> 388
000
<210> 389
<400> 389
000
<210> 390
<400> 390
000
<210> 391
<400> 391
000
<210> 392
<400> 392
000
<210> 393
<400> 393
000
<210> 394
<400> 394
000
<210> 395
<400> 395
000
<210> 396
<400> 396
000
<210> 397
<400> 397
000
<210> 398
<400> 398
000
<210> 399
<400> 399
000
<210> 400
<400> 400
000
<210> 401
<211> 332
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MARCKS蛋白
<400> 401
Met Gly Ala Gln Phe Ser Lys Thr Ala Ala Lys Gly Glu Ala Ala Ala
1 5 10 15
Glu Arg Pro Gly Glu Ala Ala Val Ala Ser Ser Pro Ser Lys Ala Asn
20 25 30
Gly Gln Glu Asn Gly His Val Lys Val Asn Gly Asp Ala Ser Pro Ala
35 40 45
Ala Ala Glu Ser Gly Ala Lys Glu Glu Leu Gln Ala Asn Gly Ser Ala
50 55 60
Pro Ala Ala Asp Lys Glu Glu Pro Ala Ala Ala Gly Ser Gly Ala Ala
65 70 75 80
Ser Pro Ser Ala Ala Glu Lys Gly Glu Pro Ala Ala Ala Ala Ala Pro
85 90 95
Glu Ala Gly Ala Ser Pro Val Glu Lys Glu Ala Pro Ala Glu Gly Glu
100 105 110
Ala Ala Glu Pro Gly Ser Pro Thr Ala Ala Glu Gly Glu Ala Ala Ser
115 120 125
Ala Ala Ser Ser Thr Ser Ser Pro Lys Ala Glu Asp Gly Ala Thr Pro
130 135 140
Ser Pro Ser Asn Glu Thr Pro Lys Lys Lys Lys Lys Arg Phe Ser Phe
145 150 155 160
Lys Lys Ser Phe Lys Leu Ser Gly Phe Ser Phe Lys Lys Asn Lys Lys
165 170 175
Glu Ala Gly Glu Gly Gly Glu Ala Glu Ala Pro Ala Ala Glu Gly Gly
180 185 190
Lys Asp Glu Ala Ala Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Glu Ala Gly
195 200 205
Ala Ala Ser Gly Glu Gln Ala Ala Ala Pro Gly Glu Glu Ala Ala Ala
210 215 220
Gly Glu Glu Gly Ala Ala Gly Gly Asp Pro Gln Glu Ala Lys Pro Gln
225 230 235 240
Glu Ala Ala Val Ala Pro Glu Lys Pro Pro Ala Ser Asp Glu Thr Lys
245 250 255
Ala Ala Glu Glu Pro Ser Lys Val Glu Glu Lys Lys Ala Glu Glu Ala
260 265 270
Gly Ala Ser Ala Ala Ala Cys Glu Ala Pro Ser Ala Ala Gly Pro Gly
275 280 285
Ala Pro Pro Glu Gln Glu Ala Ala Pro Ala Glu Glu Pro Ala Ala Ala
290 295 300
Ala Ala Ser Ser Ala Cys Ala Ala Pro Ser Gln Glu Ala Gln Pro Glu
305 310 315 320
Cys Ser Pro Glu Ala Pro Pro Ala Glu Ala Ala Glu
325 330
<210> 402
<211> 195
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MARCKSL1蛋白
<400> 402
Met Gly Ser Gln Ser Ser Lys Ala Pro Arg Gly Asp Val Thr Ala Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Gly Ala Ser Pro Ala Lys Ala Asn Gly Gln Glu Asn Gly
20 25 30
His Val Lys Ser Asn Gly Asp Leu Ser Pro Lys Gly Glu Gly Glu Ser
35 40 45
Pro Pro Val Asn Gly Thr Asp Glu Ala Ala Gly Ala Thr Gly Asp Ala
50 55 60
Ile Glu Pro Ala Pro Pro Ser Gln Gly Ala Glu Ala Lys Gly Glu Val
65 70 75 80
Pro Pro Lys Glu Thr Pro Lys Lys Lys Lys Lys Phe Ser Phe Lys Lys
85 90 95
Pro Phe Lys Leu Ser Gly Leu Ser Phe Lys Arg Asn Arg Lys Glu Gly
100 105 110
Gly Gly Asp Ser Ser Ala Ser Ser Pro Thr Glu Glu Glu Gln Glu Gln
115 120 125
Gly Glu Ile Gly Ala Cys Ser Asp Glu Gly Thr Ala Gln Glu Gly Lys
130 135 140
Ala Ala Ala Thr Pro Glu Ser Gln Glu Pro Gln Ala Lys Gly Ala Glu
145 150 155 160
Ala Ser Ala Ala Ser Glu Glu Glu Ala Gly Pro Gln Ala Thr Glu Pro
165 170 175
Ser Thr Pro Ser Gly Pro Glu Ser Gly Pro Thr Pro Ala Ser Ala Glu
180 185 190
Gln Asn Glu
195
<210> 403
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BASP1蛋白
<400> 403
Met Gly Gly Lys Leu Ser Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Asn Val Asn Asp
1 5 10 15
Glu Lys Ala Lys Glu Lys Asp Lys Lys Ala Glu Gly Ala Ala Thr Glu
20 25 30
Glu Glu Gly Thr Pro Lys Glu Ser Glu Pro Gln Ala Ala Ala Glu Pro
35 40 45
Ala Glu Ala Lys Glu Gly Lys Glu Lys Pro Asp Gln Asp Ala Glu Gly
50 55 60
Lys Ala Glu Glu Lys Glu Gly Glu Lys Asp Ala Ala Ala Ala Lys Glu
65 70 75 80
Glu Ala Pro Lys Ala Glu Pro Glu Lys Thr Glu Gly Ala Ala Glu Ala
85 90 95
Lys Ala Glu Pro Pro Lys Ala Pro Glu Gln Glu Gln Ala Ala Pro Gly
100 105 110
Pro Ala Ala Gly Gly Glu Ala Pro Lys Ala Ala Glu Ala Ala Ala Ala
115 120 125
Pro Ala Glu Ser Ala Ala Pro Ala Ala Gly Glu Glu Pro Ser Lys Glu
130 135 140
Glu Gly Glu Pro Lys Lys Thr Glu Ala Pro Ala Ala Pro Ala Ala Gln
145 150 155 160
Glu Thr Lys Ser Asp Gly Ala Pro Ala Ser Asp Ser Lys Pro Gly Ser
165 170 175
Ser Glu Ala Ala Pro Ser Ser Lys Glu Thr Pro Ala Ala Thr Glu Ala
180 185 190
Pro Ser Ser Thr Pro Lys Ala Gln Gly Pro Ala Ala Ser Ala Glu Glu
195 200 205
Pro Lys Pro Val Glu Ala Pro Ala Ala Asn Ser Asp Gln Thr Val Thr
210 215 220
Val Lys Glu
225
<210> 404
<400> 404
000
<210> 405
<400> 405
000
<210> 406
<400> 406
000
<210> 407
<400> 407
000
<210> 408
<400> 408
000
<210> 409
<400> 409
000
<210> 410
<400> 410
000
<210> 411
<400> 411
000
<210> 412
<400> 412
000
<210> 413
<400> 413
000
<210> 414
<400> 414
000
<210> 415
<400> 415
000
<210> 416
<400> 416
000
<210> 417
<400> 417
000
<210> 418
<400> 418
000
<210> 419
<400> 419
000
<210> 420
<400> 420
000
<210> 421
<400> 421
000
<210> 422
<400> 422
000
<210> 423
<400> 423
000
<210> 424
<400> 424
000
<210> 425
<400> 425
000
<210> 426
<400> 426
000
<210> 427
<400> 427
000
<210> 428
<400> 428
000
<210> 429
<400> 429
000
<210> 430
<400> 430
000
<210> 431
<400> 431
000
<210> 432
<400> 432
000
<210> 433
<400> 433
000
<210> 434
<400> 434
000
<210> 435
<400> 435
000
<210> 436
<400> 436
000
<210> 437
<400> 437
000
<210> 438
<400> 438
000
<210> 439
<400> 439
000
<210> 440
<400> 440
000
<210> 441
<400> 441
000
<210> 442
<400> 442
000
<210> 443
<400> 443
000
<210> 444
<400> 444
000
<210> 445
<400> 445
000
<210> 446
<400> 446
000
<210> 447
<400> 447
000
<210> 448
<400> 448
000
<210> 449
<400> 449
000
<210> 450
<400> 450
000
<210> 451
<400> 451
000
<210> 452
<400> 452
000
<210> 453
<400> 453
000
<210> 454
<400> 454
000
<210> 455
<400> 455
000
<210> 456
<400> 456
000
<210> 457
<400> 457
000
<210> 458
<400> 458
000
<210> 459
<400> 459
000
<210> 460
<400> 460
000
<210> 461
<400> 461
000
<210> 462
<400> 462
000
<210> 463
<400> 463
000
<210> 464
<400> 464
000
<210> 465
<400> 465
000
<210> 466
<400> 466
000
<210> 467
<400> 467
000
<210> 468
<400> 468
000
<210> 469
<400> 469
000
<210> 470
<400> 470
000
<210> 471
<400> 471
000
<210> 472
<400> 472
000
<210> 473
<400> 473
000
<210> 474
<400> 474
000
<210> 475
<400> 475
000
<210> 476
<400> 476
000
<210> 477
<400> 477
000
<210> 478
<400> 478
000
<210> 479
<400> 479
000
<210> 480
<400> 480
000
<210> 481
<400> 481
000
<210> 482
<400> 482
000
<210> 483
<400> 483
000
<210> 484
<400> 484
000
<210> 485
<400> 485
000
<210> 486
<400> 486
000
<210> 487
<400> 487
000
<210> 488
<400> 488
000
<210> 489
<400> 489
000
<210> 490
<400> 490
000
<210> 491
<400> 491
000
<210> 492
<400> 492
000
<210> 493
<400> 493
000
<210> 494
<400> 494
000
<210> 495
<400> 495
000
<210> 496
<400> 496
000
<210> 497
<400> 497
000
<210> 498
<400> 498
000
<210> 499
<400> 499
000
<210> 500
<400> 500
000
<210> 501
<400> 501
000
<210> 502
<400> 502
000
<210> 503
<400> 503
000
<210> 504
<400> 504
000
<210> 505
<400> 505
000
<210> 506
<400> 506
000
<210> 507
<400> 507
000
<210> 508
<400> 508
000
<210> 509
<400> 509
000
<210> 510
<400> 510
000
<210> 511
<400> 511
000
<210> 512
<400> 512
000
<210> 513
<400> 513
000
<210> 514
<400> 514
000
<210> 515
<400> 515
000
<210> 516
<400> 516
000
<210> 517
<400> 517
000
<210> 518
<400> 518
000
<210> 519
<400> 519
000
<210> 520
<400> 520
000
<210> 521
<400> 521
000
<210> 522
<400> 522
000
<210> 523
<400> 523
000
<210> 524
<400> 524
000
<210> 525
<400> 525
000
<210> 526
<400> 526
000
<210> 527
<400> 527
000
<210> 528
<400> 528
000
<210> 529
<400> 529
000
<210> 530
<400> 530
000
<210> 531
<400> 531
000
<210> 532
<400> 532
000
<210> 533
<400> 533
000
<210> 534
<400> 534
000
<210> 535
<400> 535
000
<210> 536
<400> 536
000
<210> 537
<400> 537
000
<210> 538
<400> 538
000
<210> 539
<400> 539
000
<210> 540
<400> 540
000
<210> 541
<400> 541
000
<210> 542
<400> 542
000
<210> 543
<400> 543
000
<210> 544
<400> 544
000
<210> 545
<400> 545
000
<210> 546
<400> 546
000
<210> 547
<400> 547
000
<210> 548
<400> 548
000
<210> 549
<400> 549
000
<210> 550
<400> 550
000
<210> 551
<400> 551
000
<210> 552
<400> 552
000
<210> 553
<400> 553
000
<210> 554
<400> 554
000
<210> 555
<400> 555
000
<210> 556
<400> 556
000
<210> 557
<400> 557
000
<210> 558
<400> 558
000
<210> 559
<400> 559
000
<210> 560
<400> 560
000
<210> 561
<400> 561
000
<210> 562
<400> 562
000
<210> 563
<400> 563
000
<210> 564
<400> 564
000
<210> 565
<400> 565
000
<210> 566
<400> 566
000
<210> 567
<400> 567
000
<210> 568
<400> 568
000
<210> 569
<400> 569
000
<210> 570
<400> 570
000
<210> 571
<400> 571
000
<210> 572
<400> 572
000
<210> 573
<400> 573
000
<210> 574
<400> 574
000
<210> 575
<400> 575
000
<210> 576
<400> 576
000
<210> 577
<400> 577
000
<210> 578
<400> 578
000
<210> 579
<400> 579
000
<210> 580
<400> 580
000
<210> 581
<400> 581
000
<210> 582
<400> 582
000
<210> 583
<400> 583
000
<210> 584
<400> 584
000
<210> 585
<400> 585
000
<210> 586
<400> 586
000
<210> 587
<400> 587
000
<210> 588
<400> 588
000
<210> 589
<400> 589
000
<210> 590
<400> 590
000
<210> 591
<400> 591
000
<210> 592
<400> 592
000
<210> 593
<400> 593
000
<210> 594
<400> 594
000
<210> 595
<400> 595
000
<210> 596
<400> 596
000
<210> 597
<400> 597
000
<210> 598
<400> 598
000
<210> 599
<400> 599
000
<210> 600
<400> 600
000
<210> 601
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RVG肽
<400> 601
Tyr Thr Ile Trp Met Pro Glu Asn Pro Arg Pro Gly Thr Pro Cys Asp
1 5 10 15
Ile Phe Thr Asn Ser Arg Gly Lys Arg Ala Ser Asn Gly
20 25
<210> 602
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TAxI肽
<400> 602
Ser Ala Cys Gln Ser Gln Ser Gln Met Arg Cys Gly Gly Gly
1 5 10
<210> 603
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TAxI肽
<400> 603
Gln Ser Gln Ser Gln Met Arg
1 5
<210> 604
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TAxI肽
<400> 604
Ala Ser Gly Ala Gln Ala Arg
1 5
<210> 605
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TAxI肽
<400> 605
Thr Ser Thr Ala Pro His Leu Arg Leu Arg Leu Thr Ser Arg
1 5 10
<210> 606
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 核定位信号
<400> 606
Pro Pro Lys Lys Arg Lys Val
1 5
<210> 607
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 核定位信号
<400> 607
Pro Lys Lys Arg Lys Val
1 5
<210> 608
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Angiopep-2
<400> 608
Thr Phe Phe Tyr Gly Gly Ser Arg Gly Lys Arg Asn Asn Phe Lys Thr
1 5 10 15
Glu Glu Tyr
<210> 609
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ApoB
<400> 609
Ser Ser Val Ile Asp Ala Leu Gln Tyr Lys Leu Glu Gly Thr Thr Arg
1 5 10 15
Leu Thr Arg Lys Arg Gly Leu Lys Leu Ala Thr Ala Leu Ser Leu Ser
20 25 30
Asn Lys Phe Val Glu Gly Ser
35
<210> 610
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ApoE
<400> 610
Leu Arg Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu Leu Arg Lys Leu Arg Lys Arg
1 5 10 15
Leu Leu
<210> 611
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽-22
<400> 611
Cys Met Pro Arg Leu Arg Gly Cys
1 5
<210> 612
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> THR
<400> 612
Thr His Arg Pro Pro Met Trp Ser Pro Val Trp Pro
1 5 10
<210> 613
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> THR逆向-对映
<400> 613
Pro Trp Val Pro Ser Trp Met Pro Pro Arg His Thr
1 5 10
<210> 614
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CRT
<400> 614
Cys Arg Thr Ile Gly Pro Ser Val Cys
1 5
<210> 615
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 瘦蛋白30
<400> 615
Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile
1 5 10 15
Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu
20 25 30
<210> 616
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RVG29
<400> 616
Tyr Thr Ile Trp Met Pro Glu Asn Pro Arg Pro Gly Thr Pro Cys Asp
1 5 10 15
Ile Phe Thr Asn Ser Arg Gly Lys Arg Ala Ser Asn Gly
20 25
<210> 617
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> DCDX
<400> 617
Gly Arg Glu Ile Arg Thr Gly Arg Ala Glu Arg Trp Ser Glu Lys Phe
1 5 10 15
<210> 618
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 蜂毒明肽
<400> 618
Cys Asn Cys Lys Ala Pro Glu Thr Ala Leu Cys Ala Arg Arg Cys Gln
1 5 10 15
Gln His
<210> 619
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MiniAp-4
<400> 619
Lys Ala Pro Glu Thr Ala Leu Asp
1 5
<210> 620
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GSH
<400> 620
Cys Gly
1
<210> 621
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> G23
<400> 621
His Leu Asn Ile Leu Ser Thr Leu Trp Lys Tyr Arg Cys
1 5 10
<210> 622
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> g7
<400> 622
Gly Phe Thr Gly Phe Leu Ser
1 5
<210> 623
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TGN
<400> 623
Thr Gly Asn Tyr Lys Ala Leu His Pro His Asn Gly
1 5 10
<210> 624
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TAT (4757)
<400> 624
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg
1 5 10
<210> 625
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SynB1
<400> 625
Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr
1 5 10 15
Gly Arg
<210> 626
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 二酮哌嗪
<400> 626
Met Phe Met Phe
1
<210> 627
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 苯基脯氨酸
<400> 627
Pro Pro Pro Pro
1
<210> 628
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> "自身"肽
<400> 628
Gly Asn Tyr Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr
1 5 10 15
Ile Ile Glu Leu Lys
20
<210> 629
<211> 323
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 规范CD47
<400> 629
Met Trp Pro Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Ala Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe
20 25 30
Cys Asn Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala
35 40 45
Gln Asn Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp
50 55 60
Ile Tyr Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Val Pro Thr Asp
65 70 75 80
Phe Ser Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu
115 120 125
Leu Lys Tyr Arg Val Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu Asn Ile Leu
130 135 140
Ile Val Ile Phe Pro Ile Phe Ala Ile Leu Leu Phe Trp Gly Gln Phe
145 150 155 160
Gly Ile Lys Thr Leu Lys Tyr Arg Ser Gly Gly Met Asp Glu Lys Thr
165 170 175
Ile Ala Leu Leu Val Ala Gly Leu Val Ile Thr Val Ile Val Ile Val
180 185 190
Gly Ala Ile Leu Phe Val Pro Gly Glu Tyr Ser Leu Lys Asn Ala Thr
195 200 205
Gly Leu Gly Leu Ile Val Thr Ser Thr Gly Ile Leu Ile Leu Leu His
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Ser Thr Ala Ile Gly Leu Thr Ser Phe Val Ile Ala
225 230 235 240
Ile Leu Val Ile Gln Val Ile Ala Tyr Ile Leu Ala Val Val Gly Leu
245 250 255
Ser Leu Cys Ile Ala Ala Cys Ile Pro Met His Gly Pro Leu Leu Ile
260 265 270
Ser Gly Leu Ser Ile Leu Ala Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Val Tyr
275 280 285
Met Lys Phe Val Ala Ser Asn Gln Lys Thr Ile Gln Pro Pro Arg Lys
290 295 300
Ala Val Glu Glu Pro Leu Asn Ala Phe Lys Glu Ser Lys Gly Met Met
305 310 315 320
Asn Asp Glu
<210> 630
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD47人同种型OA3-293
<400> 630
Met Trp Pro Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Ala Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe
20 25 30
Cys Asn Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala
35 40 45
Gln Asn Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp
50 55 60
Ile Tyr Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Val Pro Thr Asp
65 70 75 80
Phe Ser Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu
115 120 125
Leu Lys Tyr Arg Val Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu Asn Ile Leu
130 135 140
Ile Val Ile Phe Pro Ile Phe Ala Ile Leu Leu Phe Trp Gly Gln Phe
145 150 155 160
Gly Ile Lys Thr Leu Lys Tyr Arg Ser Gly Gly Met Asp Glu Lys Thr
165 170 175
Ile Ala Leu Leu Val Ala Gly Leu Val Ile Thr Val Ile Val Ile Val
180 185 190
Gly Ala Ile Leu Phe Val Pro Gly Glu Tyr Ser Leu Lys Asn Ala Thr
195 200 205
Gly Leu Gly Leu Ile Val Thr Ser Thr Gly Ile Leu Ile Leu Leu His
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Ser Thr Ala Ile Gly Leu Thr Ser Phe Val Ile Ala
225 230 235 240
Ile Leu Val Ile Gln Val Ile Ala Tyr Ile Leu Ala Val Val Gly Leu
245 250 255
Ser Leu Cys Ile Ala Ala Cys Ile Pro Met His Gly Pro Leu Leu Ile
260 265 270
Ser Gly Leu Ser Ile Leu Ala Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Val Tyr
275 280 285
Met Lys Phe Val
290
<210> 631
<211> 305
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD47人同种型OA3-305
<400> 631
Met Trp Pro Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Ala Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe
20 25 30
Cys Asn Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala
35 40 45
Gln Asn Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp
50 55 60
Ile Tyr Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Val Pro Thr Asp
65 70 75 80
Phe Ser Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu
115 120 125
Leu Lys Tyr Arg Val Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu Asn Ile Leu
130 135 140
Ile Val Ile Phe Pro Ile Phe Ala Ile Leu Leu Phe Trp Gly Gln Phe
145 150 155 160
Gly Ile Lys Thr Leu Lys Tyr Arg Ser Gly Gly Met Asp Glu Lys Thr
165 170 175
Ile Ala Leu Leu Val Ala Gly Leu Val Ile Thr Val Ile Val Ile Val
180 185 190
Gly Ala Ile Leu Phe Val Pro Gly Glu Tyr Ser Leu Lys Asn Ala Thr
195 200 205
Gly Leu Gly Leu Ile Val Thr Ser Thr Gly Ile Leu Ile Leu Leu His
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Ser Thr Ala Ile Gly Leu Thr Ser Phe Val Ile Ala
225 230 235 240
Ile Leu Val Ile Gln Val Ile Ala Tyr Ile Leu Ala Val Val Gly Leu
245 250 255
Ser Leu Cys Ile Ala Ala Cys Ile Pro Met His Gly Pro Leu Leu Ile
260 265 270
Ser Gly Leu Ser Ile Leu Ala Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Val Tyr
275 280 285
Met Lys Phe Val Ala Ser Asn Gln Lys Thr Ile Gln Pro Pro Arg Asn
290 295 300
Asn
305
<210> 632
<211> 311
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD47人同种型OA3-312
<400> 632
Met Trp Pro Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Ala Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe
20 25 30
Cys Asn Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala
35 40 45
Gln Asn Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp
50 55 60
Ile Tyr Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Val Pro Thr Asp
65 70 75 80
Phe Ser Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu
115 120 125
Leu Lys Tyr Arg Val Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu Asn Ile Leu
130 135 140
Ile Val Ile Phe Pro Ile Phe Ala Ile Leu Leu Phe Trp Gly Gln Phe
145 150 155 160
Gly Ile Lys Thr Leu Lys Tyr Arg Ser Gly Gly Met Asp Glu Lys Thr
165 170 175
Ile Ala Leu Leu Val Ala Gly Leu Val Ile Thr Val Ile Val Ile Val
180 185 190
Gly Ala Ile Leu Phe Val Pro Gly Glu Tyr Ser Leu Lys Asn Ala Thr
195 200 205
Gly Leu Gly Leu Ile Val Thr Ser Thr Gly Ile Leu Ile Leu Leu His
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Ser Thr Ala Ile Gly Leu Thr Ser Phe Val Ile Ala
225 230 235 240
Ile Leu Val Ile Gln Val Ile Ala Tyr Ile Leu Ala Val Val Gly Leu
245 250 255
Ser Leu Cys Ile Ala Ala Cys Ile Pro Met His Gly Pro Leu Leu Ile
260 265 270
Ser Gly Leu Ser Ile Leu Ala Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Val Tyr
275 280 285
Met Lys Phe Val Ala Ser Asn Gln Lys Thr Ile Gln Pro Pro Arg Lys
290 295 300
Ala Val Glu Glu Pro Leu Asn
305 310
<210> 633
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 脑源性神经营养因子(BDNF)
<400> 633
His Ser Asp Pro Ala Arg Arg Gly Glu Leu Ser Val Cys Asp Ser Ile
1 5 10 15
Ser Glu Trp Val Thr Ala Ala Asp Lys Lys Thr Ala Val Asp Met Ser
20 25 30
Gly Gly Thr Val Thr Val Leu Glu Lys Val Pro Val Ser Lys Gly Gln
35 40 45
Leu Lys Gln Tyr Phe Tyr Glu Thr Lys Cys Asn Pro Met Gly Tyr Thr
50 55 60
Lys Glu Gly Cys Arg Gly Ile Asp Lys Arg His Trp Asn Ser Gln Cys
65 70 75 80
Arg Thr Thr Gln Ser Tyr Val Arg Ala Leu Thr Met Asp Ser Lys Lys
85 90 95
Arg Ile Gly Trp Arg Phe Ile Arg Ile Asp Thr Ser Cys Val Cys Thr
100 105 110
Leu Thr Ile Lys Arg Gly Arg
115
<210> 634
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> β NGF
<400> 634
Ser Ser Ser His Pro Ile Phe His Arg Gly Glu Phe Ser Val Cys Asp
1 5 10 15
Ser Val Ser Val Trp Val Gly Asp Lys Thr Thr Ala Thr Asp Ile Lys
20 25 30
Gly Lys Glu Val Met Val Leu Gly Glu Val Asn Ile Asn Asn Ser Val
35 40 45
Phe Lys Gln Tyr Phe Phe Glu Thr Lys Cys Arg Asp Pro Asn Pro Val
50 55 60
Asp Ser Gly Cys Arg Gly Ile Asp Ser Lys His Trp Asn Ser Tyr Cys
65 70 75 80
Thr Thr Thr His Thr Phe Val Lys Ala Leu Thr Met Asp Gly Lys Gln
85 90 95
Ala Ala Trp Arg Phe Ile Arg Ile Asp Thr Ala Cys Val Cys Val Leu
100 105 110
Ser Arg Lys Ala Val Arg Arg Ala
115 120
<210> 635
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 神经营养蛋白
<400> 635
Tyr Ala Glu His Lys Ser His Arg Gly Glu Tyr Ser Val Cys Asp Ser
1 5 10 15
Glu Ser Leu Trp Val Thr Asp Lys Ser Ser Ala Ile Asp Ile Arg Gly
20 25 30
His Gln Val Thr Val Leu Gly Glu Ile Lys Thr Gly Asn Ser Pro Val
35 40 45
Lys Gln Tyr Phe Tyr Glu Thr Arg Cys Lys Glu Ala Arg Pro Val Lys
50 55 60
Asn Gly Cys Arg Gly Ile Asp Asp Lys His Trp Asn Ser Gln Cys Lys
65 70 75 80
Thr Ser Gln Thr Tyr Val Arg Ala Leu Thr Ser Glu Asn Asn Lys Leu
85 90 95
Val Gly Trp Arg Trp Ile Arg Ile Asp Thr Ser Cys Val Cys Ala Leu
100 105 110
Ser Arg Lys Ile Gly Arg Thr
115
<210> 636
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 神经营养蛋白
<400> 636
Gly Val Ser Glu Thr Ala Pro Ala Ser Arg Arg Gly Glu Leu Ala Val
1 5 10 15
Cys Asp Ala Val Ser Gly Trp Val Thr Asp Arg Arg Thr Ala Val Asp
20 25 30
Leu Arg Gly Arg Glu Val Glu Val Leu Gly Glu Val Pro Ala Ala Gly
35 40 45
Gly Ser Pro Leu Arg Gln Tyr Phe Phe Glu Thr Arg Cys Lys Ala Asp
50 55 60
Asn Ala Glu Glu Gly Gly Pro Gly Ala Gly Gly Gly Gly Cys Arg Gly
65 70 75 80
Val Asp Arg Arg His Trp Val Ser Glu Cys Lys Ala Lys Gln Ser Tyr
85 90 95
Val Arg Ala Leu Thr Ala Asp Ala Gln Gly Arg Val Gly Trp Arg Trp
100 105 110
Ile Arg Ile Asp Thr Ala Cys Val Cys Thr Leu Leu Ser Arg Thr Gly
115 120 125
Arg Ala
130

Claims (73)

1.一种治疗有需要的受试者的周围神经病的方法，包括通过向受试者施用包含外源性NLRP3拮抗剂的细胞外囊泡。
2.一种在有需要的受试者中减轻、改善或治疗周围神经病的一种或多种症状的方法，包括向受试者施用包含外源性NLRP3拮抗剂的细胞外囊泡。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述外源性NLRP3拮抗剂是化学化合物、siRNA、shRNA、反义寡核苷酸、蛋白质或其任何组合。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡靶向选自由以下组成的组的细胞：巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞(MDSC)、单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及其任何组合。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中包含ASO的细胞外囊泡或ASO诱导受试者中的M2巨噬细胞极化。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中包含ASO的细胞外囊泡或ASO减少神经中的骨髓炎症、脑膜骨髓炎症、神经鞘炎症或其任何组合。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中包含ASO的细胞外囊泡减少鞘中的骨髓炎症。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中包含ASO的细胞外囊泡减少根、神经和/或肌肉中的一者或多者中的巨噬细胞流入。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中包含ASO的细胞外囊泡减少根、神经和/或肌肉中的一者或多者中的巨噬细胞吞噬作用。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中外源性NLRP3拮抗剂是小分子。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述小分子选自由MCC950、Tanilast、冬凌草甲素、CY-09、Bay 11-7082、小白菊内酯、3,4-亚甲二氧基-β-硝基苯乙烯(MNB)、β-羟基丁酸(BHB)、二甲基亚砜(DMSO)、I型干扰素及其任意组合组成的组。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中外源性NLRP3拮抗剂包含式(I)：
13.根据权利要求10至10中任一项所述的方法，其中外源性NLRP3拮抗剂包含MCC950。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中外源性NLRP3拮抗剂包含反义寡核苷酸(ASO)。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，ASO包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，其与NLRP3转录物内的核酸序列互补。
16.根据权利要求15所述的方法，其中连续核苷酸序列与NLRP3转录物内的核酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％互补。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的方法，其中ASO能够降低人细胞(例如，免疫细胞)中的NLRP3蛋白表达，其中人细胞表达NLRP3蛋白。
18.根据权利要求17所述的方法，其中与未暴露于ASO的人细胞中NLRP3蛋白表达相比，NLRP3蛋白表达降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、或约100％。
19.根据权利要求14至18中任一项所述的方法，其中ASO能够降低人细胞(例如，免疫细胞)中NLRP3 mRNA的水平，其中人细胞表达NLRP3 mRNA。
20.根据权利要求19所述的方法，其中与未暴露于ASO的人细胞中NLRP3 mRNA的水平相比，NLRP3 mRNA的水平降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。
21.根据权利要求14至20中任一项所述的方法，其中ASO是间隙聚体、混合聚体或全聚体。
22.根据权利要求14至21中任一项所述的方法，其中ASO包含一种或多种核苷类似物。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括2'-O-烷基-RNA；2'-O-甲基RNA(2'-OMe)；2'-烷氧基-RNA；2'-O-甲氧基乙基-RNA(2'-MOE)；2'-氨基-DNA；2'-氟-RNA；2'-氟-DNA；阿拉伯核酸(ANA)；2'-氟-ANA；或双环核苷类似物。
24.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述核苷类似物中的一者或多者是糖修饰的核苷。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述糖修饰的核苷是增强亲和力的2'糖修饰的核苷。
26.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括包含双环糖的核苷。
27.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括LNA。
28.根据权利要求22至27中任一项所述的方法，其中所述核苷酸类似物中的一者或多者选自由以下组成的组：限制性乙基核苷(cEt)、2',4'-限制性2'-O-甲氧基乙基(cMOE)、α-L-LNA、β-D-LNA、2'-O,4'-C-亚乙基-桥联核酸(ENA)、氨基-LNA、氧基-LNA、硫代-LNA以及其任何组合。
29.根据权利要求14至28中任一项所述的方法，其中所述ASO包含一个或多个5'-甲基-胞嘧啶核碱基。
30.根据权利要求15至29中任一项所述的方法，其中所述连续核苷酸序列与所述NLRP3转录物的(i)5'非翻译区(UTR)；(ii)编码区；或(iii)3'UTR内的核酸序列互补。
31.根据权利要求15至30中任一项所述的方法，其中所述连续核苷酸序列与包含(i)SEQ ID NO:3的核苷酸1–534；(ii)SEQ ID NO:3的核苷酸448–2193；(iii)SEQ ID NO:3的核苷酸2125–3036；(iv)SEQ ID NO:3的核苷酸2987–3990；(v)SEQ ID NO:3的3996–4456；(vi)SEQ ID NO:3的核苷酸106–334；(vii)SEQ ID NO:3的核苷酸648–2113；(viii)SEQ ID NO:3的核苷酸2225–2956；(ix)SEQ ID NO:3的核苷酸2987–3810；(x)SEQ ID NO:3的3996–4376；(xi)SEQ ID NO:3的核苷酸156–284；(xii)SEQ ID NO:3的核苷酸698–2063；(xiii)SEQ IDNO:3的核苷酸2275–2906；(xiv)SEQ ID NO:3的核苷酸3037–3760；(xv)SEQ ID NO:3的4046–4326；(xvi)SEQ ID NO:3的核苷酸196–244；(xvii)SEQ ID NO:3的核苷酸738–2003；(xviii)SEQ ID NO:3的核苷酸2315–2866；(xix)SEQ ID NO:3的核苷酸3077–3720；或(xx)SEQ ID NO:3的4086–4286的核酸序列互补。
32.根据权利要求15至31中任一项所述的方法，其中所述连续核苷酸序列与(i)SEQ IDNO:3的核苷酸206–234；(ii)SEQ ID NO:3的核苷酸748-2013；(iii)SEQ ID NO:3的核苷酸2325–2856；(iv)SEQ ID NO:3的核苷酸3087–3710；或(v)SEQ ID NO:3的4096–4276内的核酸序列互补。
33.根据权利要求15至32中任一项所述的方法，其中所述连续核苷酸序列包含与选自图1A和图1B中序列的序列互补的核苷酸序列。
34.根据权利要求15至33中任一项所述的方法，其中所述连续核苷酸序列与所述NLRP3转录物内的核苷酸序列完全互补。
35.根据权利要求14至34中任一项所述的方法，其中所述ASO包含选自SEQ ID NO:101-200的核苷酸序列，具有一个或两个错配。
36.根据权利要求14至35中任一项所述的方法，其中所述ASO包含选自SEQ ID NO:101-200的核苷酸序列。
37.根据权利要求14至36中任一项所述的方法，其中所述ASO的长度是14至20个核苷酸。
38.根据权利要求15至37中任一项所述的方法，其中所述连续核苷酸序列包含一个或多个经修饰的核苷间键联。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述一个或多个经修饰的核苷间键联是硫代磷酸酯键联。
40.根据权利要求38或39所述的方法，其中至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的核苷间键联经修饰。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述ASO中的核苷间键联中的每一者是硫代磷酸酯键联。
42.根据权利要求1至41中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡包含锚定部分。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述NLRP3拮抗剂与所述锚定部分连接。
44.根据权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡包含外源靶向部分。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述外源靶向部分包含肽、抗体或其抗原结合片段、化学化合物、RNA适体或其任何组合。
46.根据权利要求44或45所述的方法，其中所述外源靶向部分包含肽。
47.根据权利要求44至46中任一项所述的方法，其中所述外源靶向部分包含微蛋白、设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、抗运载蛋白、adnectin、适体、肽模拟物分子、受体的天然配体、骆驼科动物纳米抗体或其任何组合。
48.根据权利要求44至47中任一项所述的方法，其中所述外源靶向部分包含全长抗体、单结构域抗体、仅重链抗体(VHH)、单链抗体、仅鲨鱼重链抗体(VNAR)、scFv、Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或其任何组合。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗体是单链抗体。
50.根据权利要求44至49中任一项所述的方法，其中EV包含将所述外源靶向部分连接至EV的支架部分。
51.根据权利要求42至50中任一项所述的方法，其中所述锚定部分和/或所述支架部分是支架X或支架Y。
52.根据权利要求42至51中任一项所述的方法，其中所述外源性NLRP3拮抗剂与EV的外表面上的锚定部分和/或支架部分连接。
53.根据权利要求42至52中任一项所述的方法，其中所述外源性NLRP3拮抗剂与EV的腔表面上的锚定部分和/或支架部分连接。
54.根据权利要求42至53中任一项所述的方法，其中所述锚定部分包含固醇、GM1、脂质、维生素、小分子、肽或其组合。
55.根据权利要求42至53中任一项所述的方法，其中所述锚定部分包含胆固醇。
56.根据权利要求42至53中任一项所述的方法，其中所述锚定部分包含磷脂、溶血磷脂、脂肪酸、维生素(例如，维生素D和/或维生素E)或其任何组合。
57.根据权利要求42至56中任一项所述的方法，其中所述外源性NLRP3拮抗剂通过接头与所述锚定部分和/或所述支架部分连接。
58.根据权利要求1至57中任一项所述的方法，其中所述外源性NLRP3拮抗剂通过接头与EV连接。
59.根据权利要求57或58所述的方法，其中所述接头是多肽。
60.根据权利要求57或58所述的方法，其中所述接头是非多肽部分。
61.根据权利要求57或58所述的方法，其中所述接头包含乙二醇。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述接头包含HEG、TEG、PEG或其任何组合。
63.根据权利要求57或58所述的方法，其中所述接头包含丙烯酸亚磷酰胺(例如，ACRYDITETM)、腺苷酸化、叠氮化物(NHS酯)、地高辛(NHS酯)、胆固醇-TEG、I-LINKERTM、氨基修饰剂(例如，氨基修饰剂C6、氨基修饰剂C12、氨基修饰剂C6 dT或Uni-LinkTM氨基修饰剂)、炔烃、5'己炔基、5-辛二炔基dU、生物素化(例如，生物素、生物素(叠氮化物)、生物素dT、生物素-TEG、双重生物素、PC生物素或脱硫生物素)、硫醇修饰(硫醇修饰剂C3 S-S、二硫醇或硫醇修饰剂C6 S-S)或其任何组合。
64.根据权利要求57至63中任一项所述的方法，其中所述接头是可裂解的接头。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述接头包含缬氨酸-丙氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯或缬氨酸-瓜氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯。
66.根据权利要求57至65中任一项所述的方法，其中所述接头包含(i)马来酰亚胺部分和(ii)缬氨酸-丙氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯或缬氨酸-瓜氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯。
67.根据权利要求1至66中任一项所述的方法，其中EV是外泌体。
68.根据权利要求1至67中任一项所述的方法，其中所述周围神经病与糖尿病、创伤、自身免疫性疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、甲状腺功能减退、血管疾病、维生素水平异常、饮酒或其任何组合相关。
69.根据权利要求1至68中任一项所述的方法，其中所述周围神经病包括化疗诱导的周围神经病(CIPN)。
70.根据权利要求1至69中任一项所述的方法，其中所述受试者之前接受过化疗。
71.根据权利要求70所述的方法，其中化疗包括顺铂衍生物、长春花生物碱、硼替佐米、紫杉烷或其任何组合。
72.根据权利要求70或71所述的方法，其中化疗包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、多西他赛、长春新碱、紫杉醇、吉西他滨或其任何组合。
73.根据权利要求1至72中任一项所述的方法，其中细胞外囊泡降低受试者中选自刺痛、疼痛、烧灼感、麻木、热敏感、冷敏感、精细运动技能困难及其任何组合中的一种或多种症状的严重性或发生。
CN202280028912.2A 2021-02-17 2022-02-17 细胞外囊泡-nlrp3拮抗剂 Pending CN117157093A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163150453P 2021-02-17 2021-02-17
US63/150,453 2021-02-17
PCT/US2022/016828 WO2022178149A2 (en) 2021-02-17 2022-02-17 Extracellular vesicle-nlrp3 antagonist

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117157093A true CN117157093A (zh) 2023-12-01

Family

ID=80682892

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280028912.2A Pending CN117157093A (zh) 2021-02-17 2022-02-17 细胞外囊泡-nlrp3拮抗剂

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20240167036A1 (zh)
EP (1) EP4294421A2 (zh)
JP (1) JP2024512236A (zh)
KR (1) KR20230147125A (zh)
CN (1) CN117157093A (zh)
CA (1) CA3207944A1 (zh)
IL (1) IL305171A (zh)
WO (1) WO2022178149A2 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114671900A (zh) * 2022-04-26 2022-06-28 广州医科大学 硼酸类化合物及其应用

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
JP4236812B2 (ja) 1997-09-12 2009-03-11 エクシコン エ／エス オリゴヌクレオチド類似体
CZ296576B6 (cs) 1999-02-12 2006-04-12 Sankyo Company Limited Nukleosidový analog a oligonukleotidový analog a farmaceutický prostredek, sonda a primer s jeho obsahem
AU776362B2 (en) 1999-05-04 2004-09-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S L-ribo-LNA analogues
US6617442B1 (en) 1999-09-30 2003-09-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Human Rnase H1 and oligonucleotide compositions thereof
EP2141233B1 (en) 2002-11-18 2016-10-19 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense design
US8142781B2 (en) 2005-10-07 2012-03-27 Armagen Technologies, Inc. Fusion proteins for blood-brain barrier delivery
CA2640171C (en) 2006-01-27 2014-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
AU2007258117B2 (en) 2006-05-05 2013-05-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating gene expression
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
DK2066684T3 (da) 2006-05-11 2012-10-22 Isis Pharmaceuticals Inc 5´-Modificerede bicycliske nukleinsyreanaloge
US8748567B2 (en) 2006-05-22 2014-06-10 Children's Medical Center Corporation Method for delivery across the blood brain barrier
WO2008033924A2 (en) 2006-09-12 2008-03-20 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Methods and compositions for targeted delivery of therapeutic agents
WO2008113832A2 (en) 2007-03-22 2008-09-25 Santaris Pharma A/S SHORT RNA ANTAGONIST COMPOUNDS FOR THE MODULATION OF TARGET mRNA
EP2170917B1 (en) 2007-05-30 2012-06-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
CA2692579C (en) 2007-07-05 2016-05-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
US8501805B2 (en) 2008-09-24 2013-08-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-L-bicyclic nucleosides
WO2011017521A2 (en) 2009-08-06 2011-02-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
WO2011156202A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted 2 '-amino and 2 '-thio-bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
US20120171120A1 (en) 2010-11-30 2012-07-05 Genentech, Inc. Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor
CA2863253A1 (en) 2011-09-07 2013-03-14 Marina Biotech, Inc. Synthesis and uses of nucleic acid compounds with conformationally restricted monomers
WO2013036889A1 (en) 2011-09-09 2013-03-14 University Of Washington Retrograde transport peptide and use of same for delivery to central nervous system
US9221864B2 (en) 2012-04-09 2015-12-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Tricyclic nucleic acid analogs
CA2967830A1 (en) 2014-11-14 2016-05-19 Ossianix, Inc. Tfr selective binding compounds and related methods
RU2018136151A (ru) * 2016-03-15 2020-04-15 Кодиак Байосайнсиз, Инк. Терапевтические мембранные везикулы
US11458097B2 (en) * 2016-03-30 2022-10-04 The University Of North Carolina At Chapel Hill Biological agent-exosome compositions and uses thereof
KR102052204B1 (ko) * 2016-07-15 2019-12-04 주식회사 탠덤 신규 재조합 엑소좀 및 그의 용도
AU2017368050A1 (en) * 2016-11-29 2019-06-20 Puretech Lyt, Inc. Exosomes for delivery of therapeutic agents
CN111212632B (zh) 2017-08-25 2024-04-16 隆萨销售股份公司 使用膜蛋白制备治疗性外来体
US20200347112A1 (en) 2017-11-17 2020-11-05 Codiak Biosciences, Inc. Compositions of engineered exosomes and methods of loading luminal exosomes pay-loads
AU2019378591A1 (en) * 2018-11-16 2021-06-17 Lonza Sales Ag Engineered extracellular vesicles and uses thereof

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114671900A (zh) * 2022-04-26 2022-06-28 广州医科大学 硼酸类化合物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230147125A (ko) 2023-10-20
WO2022178149A3 (en) 2022-09-29
EP4294421A2 (en) 2023-12-27
US20240167036A1 (en) 2024-05-23
CA3207944A1 (en) 2022-08-25
WO2022178149A2 (en) 2022-08-25
IL305171A (en) 2023-10-01
JP2024512236A (ja) 2024-03-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102366078B1 (ko) Pkk 발현을 조절하는 조성물 및 방법
KR102286223B1 (ko) 타우 발현을 감소시키기 위한 화합물 및 방법
AU2020267282B2 (en) Compositions and methods for decreasing tau expression
KR20220078565A (ko) 분자에 연결된 세포외 소포 및 이의 용도
CN114641570A (zh) 具有靶向kras的反义寡核苷酸的细胞外囊泡
KR20220070433A (ko) Stat6을 표적으로 하는 세포외 소포-aso 작제물
KR20170012207A (ko) Sod-1 발현을 조절하기 위한 조성물
KR20140084232A (ko) Gccr 발현의 안티센스 조절
CA3171143A1 (en) Targeted delivery of extracellular vesicles
CN107267517A (zh) 用于治疗、延缓和/或预防人类遗传性疾病如强直性肌营养不良症1型的新化合物
CN114829586A (zh) 细胞外囊泡-nlrp3拮抗剂
US20230002764A1 (en) Extracellular vesicle-aso constructs targeting cebp/beta
WO2021184020A1 (en) Methods of treating neuroinflammation
CN117157093A (zh) 细胞外囊泡-nlrp3拮抗剂
WO2021184021A1 (en) Extracellular vesicle-aso constructs targeting pmp22
US20230220068A1 (en) Anti-transferrin extracellular vesicles
KR20220035137A (ko) Ppm1a 억제제 및 그의 사용 방법
US20230241089A1 (en) Sting agonist comprising exosomes for treating neuroimmunological disorders
RU2777570C2 (ru) Композиции и способы для снижения экспрессии tau
KR20240019755A (ko) 치료제의 안구 전달

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40102638

Country of ref document: HK