CN117143184A - 多肽lssw-1及其在制备猫口炎治疗药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多肽LSSW‑1及其在制备猫口炎治疗药物中的应用。该多肽LSSW‑1的氨基酸序列为：Ac‑TXYXRTG{β‑Ala}RLYR‑NH2；其中，X为C或S。本发明首次发现，上述多肽LSSW‑1不仅能够有效消除猫宠口腔内出现的猫口炎症状，而且多肽本身具有水溶性好、生物相容性好等优点，使用时不会出现任何副作用，且无细胞毒性。表明该多肽LSSW‑1能够用于治疗猫口炎，为猫口炎的治疗提供了新的有效途径。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种多肽LSSW-1及其在制备猫口炎治疗药物中的应用。
背景技术
由牙齿、免疫或者病毒等因素引起而导致猫宠出现广泛性的牙周炎、牙龈炎，这些症状被统称为猫口炎。
猫口炎的治疗手段可分为常规治疗和手术治疗两种，其中，常规治疗即使用药物进行止痛、消炎，这些药物包括激素、环孢素、干扰素以及抗生素等等；然而，抗生素易产生耐药性，激素类药物可能在抑制炎症的同时产生严重的副作用。手术治疗包括半口拔牙或全口拔牙，这种治疗手段对猫宠的伤害较大，而且拔牙也无法根治。
因此亟需开发既能够避免拔牙又不会产生副作用的猫口炎治疗药物。
比如公告号为CN110613726B的中国发明专利公开了一种核苷化合物的应用、药物及其制备方法，该核苷化合物的结构式如下式所示：
其中，R1为氢或/>,R2为选自碳原子为1～8个的链烷烃基或环烷烃基。
该核苷化合物虽然能够用于治疗猫口炎，但水溶性较差，使其应用受到限制，即使使用也需要较大的用量。
发明内容
本发明的发明目的是提供一种多肽LSSW-1及其在制备猫口炎治疗药物中的应用，该多肽LSSW-1水溶性好，且用于治疗猫口炎时不会产生副作用。
为实现上述发明目的，本发明的技术方案为：
一种多肽LSSW-1，该多肽LSSW-1具有如下氨基酸序列：
Ac-TXYXRTG{β-Ala}RLYR-NH2；
其中，X为C或S。
本发明首次发现，上述多肽LSSW-1不仅能够有效消除猫宠口腔内出现的猫口炎症状，而且多肽本身具有水溶性好、生物相容性好等优点，使用时不会出现任何副作用，且无细胞毒性。表明该多肽LSSW-1能够用于治疗猫口炎，为猫口炎的治疗提供了新的有效途径。
作为优选，该多肽LSSW-1的结构式如式(Ⅰ)：
基于此，本发明还提供了上述多肽LSSW-1在制备猫口炎治疗药物中的应用。
本发明还提供了一种猫口炎治疗药物，该猫口炎治疗药物包含有效成分和药学上能接受的辅料，其中，该有效成分至少包括上述的多肽LSSW-1。
所述的猫口炎治疗药物可用的剂型包括喷剂、注射剂、片剂和粉剂中的至少一种；更优选为喷剂，能够实现快速施药，药物也能直接、均匀地覆盖患处。
因此，本发明还特别提供了一种用于治疗猫口炎的口腔喷剂，该口腔喷剂的有效成分至少包括上述的多肽LSSW-1；且所述的多肽的浓度不低于50μg/ml。
本发明还提供了上述多肽LSSW-1的制备方法，即采用基于9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)的固相合成法合成；具体地，包括以下步骤：
(1)将酰胺树脂投料于固相合成反应管中，加入二氯甲烷充分溶胀树脂，旋干溶剂后加入第一个Fmoc保护的氨基酸，再加入DMF溶解并加入缩合试剂DIEA，振荡反应后加入哌啶脱保护；
(2)按与步骤(1)同样的方法将第二个氨基酸在缩合试剂DIEA/HATU存在的条件下缩合至树脂上的前一个氨基酸上，按多肽碳端至氮端的顺序将多肽链组装完毕，最后进行乙酰化修饰；
(3)反应完成后，加入由95％TFA、1％水、2％乙二硫醇和2％三异丙基硅烷组成的切割剂，获得目标粗品；而后用反相高效液相色谱法纯化，获得所述的多肽LSSW-1。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
本发明首次发现，上述多肽LSSW-1不仅能够有效消除猫宠口腔内出现的猫口炎症状，而且多肽本身具有水溶性好、生物相容性好等优点，使用时不会出现任何副作用，且无细胞毒性。表明该多肽LSSW-1能够用于治疗猫口炎，为猫口炎的治疗提供了新的有效途径。
附图说明
图1为本发明多肽LSSW-1的电喷雾质谱检测图；
其中，m/z表示质荷比；
图2为本发明多肽LSSW-1的高效液相色谱检测图；
其中，min为(保留时间)分钟；
图3为本发明多肽LSSW-1对人脐静脉内皮细胞系HUVEC的体外毒性实验结果；
其中，Concentration(μM)表示多肽浓度(微摩尔每升)，Percent survival(％)表示生存率(百分比)；
图4为本发明多肽LSSW-1对猫口炎的治疗效果图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细说明。
实施例1多肽LSSW-1的制备和性能分析
1、多肽LSSW-1的制备
本实施例一种多肽LSSW-1，其结构式如式(Ⅰ)：
该多肽LSSW-1采用基于9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)的固相合成法合成。具体地，包括以下步骤：
(1)将酰胺树脂投料于固相合成反应管中，加入二氯甲烷充分溶胀树脂，旋干溶剂后加入第一个Fmoc保护的氨基酸，再加入DMF溶解并加入缩合试剂DIEA，振荡反应后加入哌啶脱保护；
(2)按与步骤(1)同样的方法将第二个氨基酸在缩合试剂DIEA/HATU存在的条件下缩合至树脂上的前一个氨基酸上，按多肽碳端至氮端的顺序将多肽链组装完毕，最后进行乙酰化修饰；
(3)反应完成后，加入由95％TFA、1％水、2％乙二硫醇和2％三异丙基硅烷组成的切割剂，获得目标粗品；而后用反相高效液相色谱法纯化，获得本实施例的多肽LSSW-1。
该多肽LSSW-1的氨基酸序列为：
Ac-TXYXRTG{β-Ala}RLYR-NH2(SEQ ID No.1)；其中，X可为C或S，本实施例为C。
对多肽LSSW-1进行电喷雾质谱检测和高效液相色谱检测，以验证其结构，检测结果见图1和图2。
由图1和图2可见，图1和图2所示的分析结果与本实施例所列的结构式相一致，表明本实施例成功制备了多肽LSSW-1。
2、水溶性测试
称取20mg多肽粉末于试管中，并加入1mL去离子水或磷酸缓冲溶液，发现无论是去离子水还是磷酸缓冲溶液均可完全溶解这20mg多肽，表明室温下多肽LSSW-1在去离子水和磷酸缓冲溶液中的溶解度均大于20mg/mL，表明其良好的水溶性。
3、细胞毒性测试
将人脐静脉内皮细胞系HUVEC以合适的细胞密度(2×104cells/well)接种于96孔板中，并置于37℃恒温箱中过夜培养使之贴壁；次日将培养基换成新鲜培养基后加入多肽LSSW-1，使药物浓度为1.56μM～50μM，恒温培养24h后加入MTT试剂再恒温培育4h，弃去细胞培养基，每孔加入150μL的DMSO，充分混匀后置于酶标仪中，于490nm波长下检测OD值，计算每孔的细胞存活率，测试结果见图3。
由图3可见，多肽LSSW-1对人脐静脉内皮细胞系HUVEC无细胞毒性，生物安全性良好。
4、猫口炎治疗效果测试
将多肽LSSW-1溶于去离子水中，制成喷雾。使用时，将喷雾器对准猫口腔炎症的部位，按压喷雾器使药物喷洒在口腔黏膜处。一天二次，每次约1mL(200μg/mL)，连用7天(可视炎症情况酌情增减次数)，观察猫宠口腔炎症情况，观察结果见图4。
由图4可见，用药前，受试猫宠的口部有较为严重的炎症，而用药7天后，猫宠口部的炎症已全部消失，且痊愈60天后均未复发。
Claims (10)
1.一种多肽LSSW-1，其特征在于，具有如下氨基酸序列：
Ac-TXYXRTG{β-Ala}RLYR-NH2；
其中，X为C或S。
2.如权利要求1所述多肽LSSW-1，其特征在于，结构式如式(Ⅰ)：
3.如权利要求1所述多肽LSSW-1的制备方法，其特征在于，采用基于9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)的固相合成法合成。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将酰胺树脂投料于固相合成反应管中，加入二氯甲烷充分溶胀树脂，旋干溶剂后加入第一个Fmoc保护的氨基酸，再加入DMF溶解并加入缩合试剂DIEA，振荡反应后加入哌啶脱保护；
(2)按与步骤(1)同样的方法将第二个氨基酸在缩合试剂DIEA/HATU存在的条件下缩合至树脂上的前一个氨基酸上，按多肽碳端至氮端的顺序将多肽链组装完毕，最后进行乙酰化修饰；
(3)反应完成后，加入由95％TFA、1％水、2％乙二硫醇和2％三异丙基硅烷组成的切割剂，获得目标粗品；而后用反相高效液相色谱法纯化，获得所述的多肽LSSW-1。
5.如权利要求1所述的多肽LSSW-1在制备猫口炎治疗药物中的应用。
6.一种猫口炎治疗药物，其特征在于，有效成分至少包括如权利要求1所述的多肽LSSW-1。
7.如权利要求6所述的猫口炎治疗药物，其特征在于，剂型包括喷剂、注射剂、片剂和粉剂中的至少一种。
8.如权利要求6所述的猫口炎治疗药物，其特征在于，剂型为喷剂。
9.一种用于治疗猫口炎的口腔喷剂，其特征在于，有效成分至少包括如权利要求1或2所述的多肽LSSW-1。
10.如权利要求9所述的用于治疗猫口炎的口腔喷剂，其特征在于，所述的多肽LSSW-1的浓度不低于50μg/ml。
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| CN202311110442.7A CN117143184A (zh) | 2023-08-30 | 2023-08-30 | 多肽lssw-1及其在制备猫口炎治疗药物中的应用 |
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2023
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