CN117126136A - Parp7抑制剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)所示的具有PARP7抑制活性的吡啶酮或嘧啶酮衍生物，及其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型物，并描述了其制备方法及其在癌症和免疫相关疾病中的用途。

Description

PARP7抑制剂及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种PARP7的小分子抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术
PARP7也称TIPARP，该基因位于染色体3q25.31，编码蛋白聚ADP核糖聚合酶7，其编码蛋白位于细胞核中。PARP7隶属聚ADP核糖聚合酶超家族，该家族由17个成员组成，它们都包含一个约230个氨基酸的共同催化结构域。其中PARP1、2、5a和5b可催化多个ADP-核糖单位转移到底物上，这些成员被称为polyPARPs。PARP3、4、6、7、8、9、10、11、12、14、15、16可催化单个ADP-核糖单位转移到底物上，这些成员被称为monoPARP。目前，仅有PARP13催化活性尚未得到证实。PARPs参与了DNA损伤修复、细胞增殖、细胞凋亡、DNA甲基化、转录调控和WNT信号通路等多个细胞过程。PARP 1作为DNA损伤、基因突变或化疗毒性引起细胞压力有关的肿瘤相关靶点被开发，其靶向抑制剂已经有4种药物获批临床。
芳香烃受体AHR配体上调PARP7的表达，在AHR信号的背景下，PARP7作为负反馈机制调控细胞色素P4501A1和P4501B1的基因表达。TBK1在病原体相关的分子模式途径开始时被激活，调控I型干扰素反应和抗病毒免疫的激活。PARP7可以MARylate TANK结合激酶1(TBK1)，从而抑制TBK1的激活，下调下游的I型干扰素分泌。研究发现PARP7在肿瘤中过度活跃，会让癌细胞实现免疫系统逃逸，从而促进肿瘤生长。临床研究表明PARP7常在鳞状组织癌中扩增，并且PARP7所在的染色体3q25是卵巢癌的易感性位点，PARP7卵巢癌中也具有重要作用。这些临床发现和临床前的研究为PARP7靶向抑制剂的开发提供了良好的生物医学基础。
monoPARP蛋白家族在炎症性疾病、癌症和神经退行性疾病发展相关的多重应激反应中发挥重要作用(Nizi et.al.J.Med.Chem.2022,65,7532.；AlGhamdi,Aet.al.Mini.Rev.Med.Chem.2022,22,1597.)。PARP7属于monoPARP家族成员，已被证明在肿瘤中过度活跃，在癌细胞存活中发挥关键作用。抑制PARP7可有效抑制癌细胞生长，恢复干扰素信号，有效阻止癌细胞逃避免疫系统(Rodriguez,et.al.Elife2021,10,No.e60480；Curtin et.al.Nat.Rev.DrugDiscovery 2020,19,711-736；O’Sullivan,Nat.Commun.2019,10,1182)。
抑制PARP7可以激活固有免疫途径STING通路，促进肿瘤免疫细胞因子分泌IFN-β，恢复干扰素信号通路，上调磷酸化的STAT1，从而抑制T细胞介导的抗肿瘤免疫，抑制肿瘤的生长。PARP7抑制剂能阻止肿瘤免疫逃逸，诱导肿瘤特异性适应性免疫记忆，进而增强免疫系统信号，解除先天和适应性免疫抑制，最终能够长时间抑制肿瘤的生长。机制上PARP7抑制剂能够与PD1单抗联用起到协调增效作用，能更有效抑制肿瘤的生长，拓展了PARP7的临床应用。在一些癌症模型中，PARP7抑制剂表现出持续的肿瘤生长抑制，显示出有效的抗增殖作用。并恢复干扰素信号传导(Gozgit et.al,Cancer Cell.2021Sep13；39(9):1214-1226)。近年来，一些PARP7抑制剂被发现具有治疗癌症的潜力(Gu,H.et.al.J.Med.Chem.2023,66,1,473-490；Kargbo,R.ACSMed.Chem.Lett.2022,13,1688-1690)。
目前靶向抑制PARP7的研究主要围绕激活T细胞介导的抗肿瘤免疫反应，并能获得适应性免疫等方面，研究揭示可与其他机制的抗肿瘤药物(例如PD1单抗)联用，具有协同增效作用，PARP7靶向抑制剂具有较大的临床使用价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有PARP7抑制活性的新型小分子化合物及其应用。
为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：
本发明第一方面提供了式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型，
其中，
X为CH或N；
R1、R2分别独立选自取代或未取代的C1-10烷基、取代或未取代的C3-10环烷基、取代或未取代的C1-10烷氧基、取代或未取代的C2-5烯基、取代或未取代的C2-3炔基中的一种；
A为手性或非手性胺单元，并通过氮与吡啶酮或嘧啶酮相连接；
L选自以下结构中的一种：
B为包含至少一个N原子的C4-12杂环，所述杂环为单环或双环，其中双环为包含桥接、融合、螺旋或自连的桥接单元的杂环；
Y为N、C或CH；
Z为N、CH或CR3，其中R3为取代或未取代的C1-10烷基、取代或未取代的C3-10环烷基、C1-10烷氧基；
进一步地，所述R1、R2分别独立选自甲基、乙基、丙基、氟甲基、三氟甲基、氘代甲基、溴、氯、氟、氰基、C3-10环烷基中的一种；在本发明一些优选的实施例中，R1、R2可独立选自-F、-Br、-CN、-CO2Me、-CONH2、以下结构所示基团一种：
进一步地，所述A更优选为以下结构中的一种：
进一步地，所述B更优选为以下结构中的一种：
进一步地，所述式(I)所示的化合物为以下结构式I-1至式I-57所示的化合物：
本发明第二方面提供了一种药物组合物，包括第一方面所述的式(I)所示的化合物、其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型中的一种或多种。
进一步地，在所述药物组合物中，上述任一式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型物与其他药物联合使用。
本发明第三方面提供了一种第一方面所述的式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型或第二方面所述的药物组合物在制备PARP7抑制剂中的应用。
进一步地，所述PARP7抑制剂通过口服、非肠外、静脉注射或经皮给药的方式给药。
本发明第四方面提供了一种第一方面所述的式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型或第二方面所述的药物组合物在制备治疗患者的PARP7介导的病症的药物中的应用。
进一步地，所述PARP7介导的病症包括乳腺癌、卵巢癌和结直肠癌。
进一步地，所述药物通过口服、非肠外、静脉注射或经皮给药的方式给药。
进一步地，在所述药物中，上述任一式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型物与其他药物联合使用。
如本文所用，除非另有说明，以下定义和术语应适用。
“R”和“S”作为描述同分异构体的术语，是不对称取代碳原子的立体化学构型的描述符。将不对称取代的碳原子命名为“R”或“S”是通过应用Cahn-Ingold-Prelog优先规则来完成的，这是本领域技术人员所熟知的，并在国际纯化学和应用化学联合会(lUPAC)有机化学命名规则中的E节，立体化学中进行了描述。
这里使用的术语Ci-j是指该部分有i-j个碳原子。例如，“C1-10烷基”是指烷基单元具有1至10之间任意数量的碳原子。
如本文所使用的“烷基”是指完全饱和的直链、支链的烷烃基。在某些实施方案中，烷基含有1-6个碳原子。在某些实施例中，烷基含有1-4个碳原子。在某些实施例中，烷基含有1-3个碳原子。在另外一些实施例中，烷基含有2-3个碳原子，并且在另外一些实施例中烷基含有1-2个碳原子。示例性烷基的非限制性实例包括基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正庚基、正辛基等。另外，术语“环烷基”指单环或双环饱和的碳环，每个环具有3到10个碳原子。环烷基的“稠合类似物”是指与芳基或杂芳基稠合的单环，其中附着点在非芳基部分。示例属于环烷基和稠合类似物，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、四氢萘基、十氢萘基、茚基等。
术语“烷氧基”是指具有所指示数量的碳原子的直链或支链烷氧基。例如，C1-10烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等。
术语“烯基”指含有至少一个碳-碳双键的碳链，其可以是直链或支链，或其组合，上述C2-5烯基包括乙烯基、丙烯基、2-甲基-1-丙烯基等；术语“炔基”指含有至少一个碳-碳三键的碳链，其可以是直链或支链，或其组合。上述C2-3烯基实例包括炔基或炔丙基。
“Ar”或“芳基”是指具有一个或多个闭合环的芳香碳环部分。示例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲蒽基、联苯和芘基。
“杂芳基”是指具有一个或多个闭合环的环状部分，具有一个或多个杂原子(例如，氧、氮或硫)至少一个环，其中至少一个环是芳香的，并且其中的一个或多个环可以独立地熔融或桥接。示例包括但不限于吡啶基、吡咯基、吡唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、喹啉基、茚唑基、噻诺[2,3-c]吡唑基、苯并呋喃基、噻吩基吡唑基、苯并噻唑基。
除非另有说明，否则术语“卤素”或“卤元素”本身或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意指包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如“卤代C1-4烷基”指包括但不限于三氟甲基、2,2,2-三氟甲基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
光学异构体、非对映异构体、几何异构体和互变异构体：一些式(I)化合物可能含有一个或多个环系统，因此可能存在顺式和反式异构体。本发明旨在涵盖所有这些顺式和反式异构体。包含烯烃双键，除非另有规定，否则意味着包括E和Z几何异构体。
通式(I)化合物的任何对映体可通过使用光学纯起始材料或已知构型的试剂的立体定向合成获得。
此外，式(I)化合物还可包括一系列稳定同位素标记的类似物。例如，式(I)化合物中的一个或多个质子可被氘原子取代，从而提供具有改进的药理活性的氘化类似物。
“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的酸盐或碱盐，所述盐具有所需的药理学活性，且既不具有生物学上的可取性，也不具有其他方面的可取性。盐可与酸形成，酸包括但不限于醋酸、己二酸、苯甲酸酯、柠檬酸、樟脑酸、樟脑磺酸盐、二光酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴化物盐酸盐、氢碘化物、2-羟乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、草酸盐。
术语“PARP介导”的病症是指已知PARP或其突变体起作用的任何疾病或其它有害病状。
借由上述技术方案，本发明至少具有以下优点：
本发明提供一类具有PARP7抑制活性的吡啶酮或嘧啶酮衍生物，该类化合物具有较高的PARP7抑制活性以及低心脏毒性，可用于制备PARP7抑制剂以及制备用于乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌等由PARP7介导的病症的药物中，具有极高的应用价值。
具体实施方式
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
为方便本领域技术人员充分理解本发明中的技术方案，将本申请实施例所基于的分离纯化方法及测试方法、英文缩写、原料或中间体的合成方法以及目标化合物的合成方法叙述如下：
1、本申请以下实施例中，分离纯化方法及测试方法如下：
本发明以下实施例中，如无特殊说明，柱层析时，使用硅胶(100-200目)和不同的洗脱液进行。使用Buchii旋转蒸发器或Genevac离心蒸发器进行溶剂去除。在酸性流动相条件下，使用Waters自动纯化器和19×100mm XTerra5微米MSCI8柱进行LC/MS。用瓦里安400MHz谱仪记录核磁共振波谱。当术语“惰性”用于描述反应器(例如，反应容器、烧瓶、玻璃反应器等)时，意味着反应器中的空气已被基本上不含水或干燥的惰性气体(例如氮气、氩气等)代替。
2、本申请以下实施例中，英文缩写所对应的中文名称如下：TEA：三乙胺；EA：乙酸乙酯；THF：四氢呋喃；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；TFA：三氟乙酸；NMP：N-甲基吡咯烷酮；DCM：二氯甲烷；HATU：2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基尿嘧啶六氟磷酸盐；DIPEA：N,N-二异丙基乙胺。
3、本申请以下实施例中，所利用的反应原料或反应中间体的合成方法如下：
中间体2a-2k的合成按照以下反应路线1所示的合成方法进行合成：
反应路线1
例如，中间体2a的制备过程如下：
向化合物1a(5.0g，22.1mmol)的CH3CN(50mL)溶液中加入S-(+)-2-氨基-l-丙醇(2.2g，29.9mmol，1.35eq)和TEA(15mL)。反应混合物在85℃下搅拌反应6h，直到TLC显示化合物1a完全反应，反应液用EA(20mL×3)萃取，合并有机相并用水和盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥后减压蒸馏得到粗品化合物，经硅胶柱层析纯化得到中间体2a(5.6g，收率95％)。
通过替换适当的反应物，根据反应路线1所示的合成方法制备得到如下表1中所示的中间体2b-2k。
表1
/>
/>
中间体4a-4i的合成按照上述反应路线1所示的合成方法进行合成：
例如，中间体4a的制备过程如下：
向中间体2a(2.0g，7.5mmol)的CH3CN(50mL)溶液中加入丙烯酸甲酯(2.3g，26.4mmol，3.5eq)和Cs2CO3(12.6g，38.6mmol，5.12eq)。反应混合物在室温下搅拌反应12h，直到TLC显示中间体2a完全反应，反应混合物用EA(20mL×3)萃取，合并有机相并用水和盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4上干燥后减压蒸馏得到粗品化合物，经硅胶柱层析纯化得到中间体3a(1.7g，收率：65％)。
向中间体3a(250mg，0.71mmol)的THF(3mL)和H2O(3mL)的混合溶液中加入NaOH(0.6g，14.2mmol，20eq)。反应液在100℃下搅拌过夜，直到TLC显示中间体3a的完全反应，冷却至室温，用2N HCI调节pH至5，用EA(20mL×3)萃取，合并有机相并用水和盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥后减压蒸馏得到粗品中间体4a(200mg，收率：88％)，直接用于下一步反应。
通过替换适当的反应物，根据反应路线1所示的合成方法制备得到如下表2中所示的中间体4b-4i。
表2
/>
中间体8a-8h的合成按照以下反应路线2所示的合成方法进行合成：
反应路线2
例如，中间体8a的制备过程如下：
0℃、N2保护下，向化合物5(1.0g，6.2mmol)的DMF(8mL)溶液中分批次加入NaH(0.5g，12.3mmol，2.0eq 60％in oil)。在0℃下搅拌反应30min后，分批次加入6a(1.4g，7.4mmol)。加入后，在室温下搅拌反应混合物反应1h，直到TLC显示中间体6a完全反应，冰浴下，反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，用EA(10mL×3)萃取，合并有机相用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并减压浓缩得到粗品化合物，经硅胶柱层析纯化得到中间体7a(1.2g，收率60％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.40(s,1H),7.64(dd,1H),6.63(d,1H),3.65-3.62(m,4H),3.55-3.53(m,4H),1.48(s,9H).
在中间体7a(1.2g，3.6mmol)的DCM(5mL)混合物中加入TFA(0.5mL)。将反应混合物在室温下搅拌反应1h，直到TLC显示中间体7a完全反应，除去大部分溶剂，用饱和NaHCO3调节Ph至7，反应混合物用EA(10mL×3)萃取，合并有机相用水和盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥后减压蒸馏得到中间体8a(0.71g，收率85％)。
通过替换适当的反应物，根据反应路线2所示的合成方法制备得到如下表3中所示的中间体8a-8h。
表3
/>
中间体11a-11i的合成按照以下反应路线3所示的合成方法进行合成：
反应路线3
例如，中间体11a的制备过程如下：
将化合物9a(1.5g，8.2mmol)、化合物6a(1.5g，8.2mmol,1.0eq)、K2CO3(2.3g，16.5mmol，2.0eq)的NMP(20mL)混合溶液80℃下搅拌10h，直到TLC显示化合物9a完全反应。反应混合物用EA(20mL×3)萃取，合并有机相并用水和盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥减压蒸馏得到粗品化合物，经硅胶柱层析纯化得到中间体10a(2.1g，得率77％)。
向中间体10a(2.1g，6.3mmol)的DCM(10mL)溶液中加入TFA(1.2mL)。将反应混合物在室温下搅拌1h，直到TLC显示中间体10a完全反应，除去大部分溶剂，用饱和NaHCO3调节Ph至7，反应混合物用EA(15mL×3)萃取，合并有机相并用水和盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥后减压蒸馏得到中间体11a(1.4g，收率95％)。
通过替换适当的反应物，根据反应路线3所示的合成方法制备得到如下表4中所示的中间体11a-11i。
表4
/>
反应路线4：
反应路线4具体制备过程如下：
中间体4a(0.31mmol，1eq)，HATU(131mg，0.34mmol，1.1eq)，DIPEA(81mg，0.63mmol，2.0eq)和中间体8a(0.34mmol，1.1eq)的DCM(5mL)溶液在室温下搅拌2h，直到TLC显示中间体4a的完全反应。反应混合物用DCM(8mL×3)萃取，合并有机相并用水和盐水洗涤，无水Na2SO4干燥后减压蒸馏得到粗品化合物，经TLC纯化得到化合物12。
实施例1
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-1)
该化合物由中间体4a(表2)和8a(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.45(s,1H),8.39(s,1H),7.89(s,1H),7.65(dd,1H),6.62(d,1H),5.58(d,1H),4.40-4.34(m,1H),3.85-3.82(t,2H),3.86-3.82(m,2H),3.76-3.71(m,4H),3.69-3.59(m,4H),3.54-3.52(m,2H),2.68-2.65(t,2H),1.25(d,3H).
LCMS:m/z＝534.45[M+l]+。
实施例2
6-[4-(3-{[(2S)-2-[(5-溴-6-氧亚基-1H-嘧啶-4-基)氨基]丙基]氧基}丙酰基)哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(I-2)
该化合物由中间体4a(表2)和8e(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝490.11[M+l]+。
实施例3
5-溴-6-{[(2S)-1-({3-[4-(5-氟吡啶-2-基)哌嗪-1-基]-3-氧亚基丙基}氧基)丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-3)
该化合物由中间体4a(表2)和8f(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝483.11[M+l]+。
反应路线5：
反应路线5
化合物16按照反应路线5制备得到，先由化合物13通过硼氢化钠还原得到化合物14，化合物14可以通过CBr4、PPh3或者Tosyl制备得到化合物15，然后再与中间体8或中间体11反应得到化合物16。
实施例4
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-{4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-4)
该化合物由中间体13a和8a(表3)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝519.13[M+l]+。
实施例5
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-{5-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-5)
该化合物由中间体13a和8b(表3)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝531.13[M+l]+。
实施例6
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-5-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-6)
该化合物由中间体4a(表2)和8b(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.01(s,1H),8.34(s,1H),7.90(d,1H),7.58(dd,1H),6.32(d,1H),5.53(d,1H),4.38-4.24(m,1H),3.83-3.75(m,2H),3.72-3.68(m,2H),3.65-3.60(m,1H),3.56-3.54(m,2H),3.52-3.48(m,1H),3.46-3.37(m,2H),3.18-3.12(m,2H),2.04-1.90(m,2H),1.14(d,3H).
LCMS:m/z＝546.45[M+l]+。
反应路线6：
反应路线6
实施例7
5-溴-6-{[(2S)-1-[3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-7)
该化合物由中间体2a(表1)按照反应路线6先制备得到中间体20，再与8a(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝544.12[M+l]+。
实施例8
5-溴-6-{[(2S)-1-[3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁-1-基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-8)
该化合物通过实施例7制备得到的化合物I-7通过标准酰胺官能团还原条件制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝530.14[M+l]+。
实施例9
5-溴-6-{[(2S)-1-[3-({4-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-9)
该化合物由中间体20与11a(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝545.12[M+l]+。
实施例10
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-{4-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-10)
该化合物由中间体13a与11a(表4)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝520.12[M+l]+。
实施例11
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{4-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-11)
该化合物由中间体4a(表2)与11a(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.40(s,1H),8.49(s,2H),7.89(s,1H),5.57(d,1H),4.40-4.34(m,1H),3.92-3.87(m,4H),3.85-3.82(t,2H),3.72-3.69(m,2H),3.59-3.56(m,6H),3.54-3.52(m,2H),2.69-2.65(t,2H),1.25(d,3H).
LCMS:m/z＝535.40[M+l]+。
实施例12
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-{5-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-12)
该化合物由中间体4a(表2)与11b(表4)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝532.12[M+l]+。
实施例13
5-溴-6-{[(2S)-1-({3-[5-(5-氟嘧啶-2-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]丙基}氧基)丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-13)
该化合物由中间体13a与11c(表4)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝482.12[M+l]+。
实施例14
2-[2-(3-{[(2S)-2-[(5-溴-6-氧亚基-1H-嘧啶-4-基)氨基]丙基]氧基}丙基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-5-基]嘧啶-5-甲腈(I-14)
该化合物由中间体13a与11d(表4)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝489.13[M+l]+。
实施例15
5-溴-6-{[(2S)-1-({3-[2-(5-氟嘧啶-2-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-5-基]-3-氧亚基丙基}氧基)丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-15)
该化合物由中间体4a(表2)与11c(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝496.10[M+l]+。
实施例16
5-溴-6-{[(2S)-1-({3-[(3aR,6aS)-5-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]八氢吡咯并[4,3-c]吡咯-2-基]丙基}氧基)丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-16)
该化合物由中间体13a与8c(表3)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝545.14[M+l]+。
实施例17
5-溴-6-{[(2S)-1-({3-氧亚基-3-[(3aS,6aR)-5-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]八氢吡咯并[4,3-c]吡咯-2-基]丙基}氧基)丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-17)
该化合物由中间体4a(表2)与8c(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.11(s,1H),8.36(s,1H),7.90(d,1H),7.60(dd,1H),6.34(d,1H),5.60(d,1H),4.36-4.32(m,1H),3.86-3.73(m,6H),3.54-3.48(m,3H),3.45-3.40(m,3H),3.18-3.05(m,2H),2.57-2.54(t,2H),1.22(d,3H).
LCMS:m/z＝560.50[M+l]+。
实施例18
5-溴-6-{[(2S)-1-({3-氧亚基-3-[(3aS,6aR)-5-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]八氢吡咯并[4,3-c]吡咯-2-基]丙基}氧基)丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-18)
该化合物由中间体4a(表2)与11e(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝560.12[M+l]+。
实施例19
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-19)
该化合物由中间体13a与8d(表3)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝531.13[M+l]+。
实施例20
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-20)
该化合物由中间体4a(表2)与8d(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.21(s,1H),8.35(s,1H),7.91(s,1H),7.60(dd,1H),6.27(d,1H),5.59(d,1H),4.41-4.37(m,1H),4.35(s,2H),4.22-15(m,6H),3.80-3.77(m,2H),3.55-3.48(m,2H),2.38-2.65(t,2H),1.25(d,3H).
LCMS:m/z＝546.50[M+l]+。
实施例21
6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-5-甲基-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-21)
该化合物由中间体4d(表2)与8d(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝481.21[M+l]+。
实施例22
5-环丙基-6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-22)
该化合物由实施例20制备的化合物I-20与环丙醇硼酸在Suzuki反应条件下反应得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝507.23[M+l]+。
实施例23
5-氟-6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-23)
该化合物由中间体4c(表2)与8d(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝485.18[M+l]+。
实施例24
5-氯-6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-24)
该化合物由中间体4b(表2)与8d(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.15(s,1H),8.38(s,1H),7.95(s,1H),7.78(dd,1H),6.48(d,1H),6.39(d,1H),4.37-4.31(m,1H),4.30(s,2H),4.18-4.13(m,4H),4.02(s,2H),3.61-3.58(t,2H),3.51-3.44(m,1H),3.33-3.18(m,1H),2.25-2.24(t,2H),1.13(d,3H).
LCMS:m/z＝501.90[M+l]+。
反应路线7：
反应路线7
实施例25
6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{6-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-5-(三氟甲基)-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-25)
该化合物由实施例20制备的化合物I-20按照反应路线7制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝535.18[M+l]+。
实施例26
6-{[(2S)-1-[(3-{6-[3-甲基-5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基}-3-氧亚基丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-5-甲基-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-26)
该化合物由中间体4d(表2)与8g(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝495.23[M+l]+。
实施例27
6-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-5-甲基-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-27)
该化合物由中间体4d(表2)与11f(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝482.20[M+l]+。
实施例28
5-溴-6-{[(2S)-1-[(3-{2-[3-甲氧基-5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}-3-氧亚基丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-28)
该化合物由中间体4a(表2)与8h(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝575.12[M+l]+。
实施例29
5-溴-6-{[(2R)-1,1,1-三氟-3-[(3-氧亚基-3-{6-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-29)
该化合物由中间体4e(表2)与8d(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝599.08[M+l]+。
实施例30
5-溴-6-{[(2R)-1,1,1-三氟-3-[(3-氧亚基-3-{6-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-30)
该化合物由中间体4e(表2)与11f(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝600.07[M+l]+。
实施例31
5-溴-6-{[(2R)-1-[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-31)
该化合物由中间体4f(表2)与8d(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝545.10[M+l]+。
实施例32
5-溴-6-({2-甲基-1-[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]丙-2-基}氨基)-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-32)
该化合物由中间体4g(表2)与8d(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝559.12[M+l]+。
实施例33
5-溴-6-[({[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]甲基}环丙基)氨基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-33)
该化合物由中间体4h(表2)与8d(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝557.10[M+l]+。
实施例34
5-溴-6-[(2S)-2-{[(3-氧亚基-3-{4-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}丙基)氧基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-34)
该化合物由中间体4i(表2)与11a(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.25(s,1H),8.50(s,2H),7.84(s,1H),4.73-4.71(m,1H),4.03-3.97(m,1H),3.94-3.88(m,4H),3.82-3.76(m,2H),3.74-3.65(m,4H),3.59-3.56(m,2H),3.41-3.36(m,1H),2.65-2.61(t,2H),2.00-1.95(m,2H),1.49-1.42(m,2H).
LCMS:m/z＝561.30[M+l]+。
实施例35
5-溴-6-[(2S)-2-{[(3-氧亚基-3-{4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}丙基)氧基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-35)
该化合物由中间体4i(表2)与8a(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39(s,1H),7.83(s,1H),7.66(dd,1H),6.65(d,1H),4.71-4.69(m,1H),4.00-3.95(m,1H),3.83-3.75(m,4H),3.74-3.72(m,2H),3.70-3.66(m,2H),3.64-3.61(m,4H),3.40-3.36(m,1H),2.64-2.61(t,2H),1.99-1.94(m,2H),1.46-1.43(m,2H).
LCMS:m/z＝560.30[M+l]+。
实施例36
5-溴-6-[(2S)-2-{[(3-{4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}丙基)氧基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-36)
该化合物由Ca(BH4)2还原实施例35制备的化合物I-35的酰胺基团制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝545.14[M+l]+。
实施例37
6-[(2S)-2-[({3-[(3aR,6aS)-5-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]八氢吡咯并[4,3-c]吡咯-2-基]丙基}氧基)甲基]四氢-1H-吡咯-1-基]-5-溴-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-37)
该化合物由中间体4i(表2)与8c(表3)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝571.16[M+l]+。
实施例38
5-溴-6-[(2S)-2-[({3-氧亚基-3-[(3aS,6aR)-5-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]八氢吡咯并[4,3-c]吡咯-2-基]丙基}氧基)甲基]四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-38)
该化合物由中间体4i(表2)与8c(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝585.14[M+l]+。
实施例39
5-溴-6-[(2S)-2-[({3-氧亚基-3-[(3aS,6aR)-5-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]八氢吡咯并[4,3-c]吡咯-2-基]丙基}氧基)甲基]四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-39)
该化合物由中间体4i(表2)与11e(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝586.13[M+l]+。
实施例40
5-溴-6-[(2S)-2-{[(3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-40)
该化合物由中间体13i与8d(表3)按照反应路线5制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝557.14[M+l]+。
实施例41
5-溴-6-[(2S)-2-{[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-41)
该化合物由中间体4i(表2)与8d(表3)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝571.12[M+l]+。
实施例42
5-溴-6-[(2S)-2-{[(3-氧亚基-3-{2-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基}丙基)氧基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-42)
该化合物由中间体4i(表2)与11f(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝572.12[M+l]+。
实施例43
5-溴-6-[(2S)-2-{[3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-43)
该化合物由中间体2i(表1)与8a(表3)按照反应路线6和反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝570.14[M+l]+。
实施例44
5-溴-6-[(2S)-2-{[3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁-1-基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-44)
该化合物由实施例43制备的化合物I-43按照反应路线7制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝556.16[M+l]+。
实施例45
5-溴-6-[(2S)-2-{[3-({4-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-45)
该化合物由中间体2i(表1)与11a(表4)按照反应路线6和反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝571.13[M+l]+。
实施例46
5-甲基-6-[(2S)-2-{[3-({4-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-46)
该化合物由中间体2j(表1)与11a(表4)按照反应路线6和反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝507.24[M+l]+。
实施例47
5-(三氟甲基)-6-[(2S)-2-{[3-({4-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-47)
该化合物由实施例45制备的化合物I-45按照反应路线7制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝561.21[M+l]+。
实施例48
5-甲基-6-[(2S)-2-{[3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-48)
该化合物由中间体2j(表1)与8a(表3)按照反应路线6和反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝506.24[M+l]+。
实施例49
5-环丙基-6-[(2S)-2-{[3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-49)
该化合物由实施例43制备的化合物I-43与环丙醇硼酸在Suzuki反应条件下反应得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝532.26[M+l]+。
实施例50
5-(三氟甲基)-6-[(2S)-2-{[3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]甲基}四氢-1H-吡咯-1-基]-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-50)
该化合物由实施例43制备的化合物I-43按照反应路线7制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝560.21[M+l]+。
实施例51
6-{4-[(1-{[(2S)-1-(5-甲基-6-氧亚基-1H-嘧啶-4-基)四氢-1H-吡咯-2-基]甲基}氮杂环丁-3-基)羰基]哌嗪-1-基}吡啶-3-甲腈(I-51)
该化合物由中间体2j(表1)与8e(表3)按照反应路线6和反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝463.25[M+l]+。
反应路线8：
反应路线8
实施例52
6-{[(2S)-1-[3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]-1,2,3,6-四氢吡啶-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]丙-2-基]氨基}-5-(三氟甲基)-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-52)
该化合物由反应路线8制备得到的中间体26，然后与中间体20缩合得到的产物，再按照反应路线7制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝531.19[M+l]+。
实施例53
6-{[(2S)-1-[3-({4-[5-(三氟甲基)吡啶-2-基]六氢吡啶-1-基}羰基)氮杂环丁-1-基]丙-2-基]氨基}-5-(三氟甲基)-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-53)
该化合物由反应路线8制备得到的中间体27，然后与中间体20缩合得到的产物，再按照反应路线7制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝533.20[M+l]+。
实施例54
6-{[(2S)-1-({3-氧亚基-3-[4-(5-乙烯基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基]丙基}氧基)丙-2-基]氨基}-5-(三氟甲基)-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-54)
该化合物由中间体4a(表1)与11j(表4)按照反应路线4和反应路线7制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝482.20[M+l]+。
实施例55
6-{[(2S)-1-({3-[4-(5-乙炔基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基]-3-氧亚基丙基}氧基)丙-2-基]氨基}-5-(三氟甲基)-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-55)
该化合物由中间体4a(表1)与11h(表4)按照反应路线4和反应路线7制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝480.19[M+l]+。
实施例56
6-{[(2S)-1-({3-[4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基]-3-氧亚基丙基}氧基)丙-2-基]氨基}-5-(三氟甲基)-3,4-二氢嘧啶-4-酮(I-56)
该化合物由中间体4a(表1)与11i(表4)按照反应路线4和反应路线7制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝496.22[M+l]+。
反应路线9：
反应路线9
实施例57
4-{[(2S)-1-[(3-氧亚基-3-{4-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪-1-基}丙基)氧基]丙-2-基]氨基}-3-甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮(I-57)
该化合物由反应路线9制备得到的中间体31，然后与中间体11a(表4)按照反应路线4制备得到，对产物进行表征，表征结果如下：
LCMS:m/z＝469.48[M+l]+。
生物活性研究
1、体外抑制活性研究
对上述实施例1-57中所合成的部分目标化合物进行生物活性测试，以市售药物RBN-2397、Olaparib作为对照样，测试其对PARP7的体外抑制活性，具体操作如下：
(1)向384微孔板中，每孔加入25μL的组蛋白(Active Motif)溶液，4℃孵育过夜。
(2)制备PBST缓冲液，封闭缓冲液和分析缓冲液。
(3)用PBST缓冲液清洗组蛋白包被的384孔板3次，再用50μL封闭缓冲液是室温下封闭1h，最后用PBST缓冲液清洗3次。
(4)制备2000×(20mM)化合物。用19.95uL缓冲液将50nL化合物从源板转移到96孔板。摇匀，离心1000rpm，1min。向384微孔板中每孔转移5μL DMSO/化合物。
(5)除最小对照外孔外，其他孔加入10μL酶混合液，与化合物在室温下孵育10min，最小对照中加入10μL检测缓冲液。然后每孔加入10μL 2.5×Biotin-NAD+(R&D)，25℃孵育60min。最后用PBST缓冲液清洗3次。
(6)加入25μL Strep-HRP(Thermo Pierce)，在室温下孵育1h后，用PBS缓冲液洗涤3次。再加入25μL的QuantaRed增强剂混合液。孵育10分钟。最后加入2.5uL QuantaRed(Thermo Pierce)终止液，摇板10-30秒，停止过氧化物酶活性。
(7)在Paradigm(Ex550/Em620)上立即进行读数。
(8)首先进行数据拟合：方程式(1)：inh％＝(最大信号-复合信号)/(最大信号-最小信号)×100。再根据计算方程式(2):Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC50/X)×HillSlope)计算IC50，式中Y是抑制率，X是化合物浓度，Top和Bottom分别为曲线上观察到的最小值和最大值，HillSlope指的是曲线最大斜率的绝对值，即曲线中点。
表5不同化合物对PARP7的体外抑制试验IC50测试结果
化合物 IC50(nM)
RBN-2397 4.80±1.87
Olaparib 134.35
I-1 34.45±0.37
I-6 28.93±4.86
I-20 10.88±0.23
I-34 4.05±1.20
I-35 4.23±2.06
I-57 8.35±0.24
根据上述PARP7体外抑制试验IC50测试结果可知，本发明实施例所提供的一种新的化合物，对于PARP7具有较高的抑制活性，均优于Olaparib的抑制活性，且化合物I-34与化合物I-35对PARP7的体外抑制活性高于RBN-2397。
2、体外hERG研究
以化合物I-35为例，本发明测试该化合物的hERG IC50值，测试结果显示化合物I-35的hERG IC50值为7.14±1.63μm。由此可知，该化合物具有较低的hERG钾通道的抑制活性，但用量较少时，对心血管毒性少，满足药用需求。
3、药代动力学试验
以化合物I-35为例，雄性SD大鼠为受试动物，单次给药后测定化合物血药浓度并评估其药代动力学行为，具体操作如下：
选择健康成年雄性SD大鼠3只为静脉注射组，静脉注射组溶媒为10％DMSO+90％(30％HP-β-CD)。称取适量化合物，加入对应体积的10％DMSO溶解后，再先后加入对应体积的90％(30％HP-β-CD)混合均匀，涡旋震荡溶解，制备得到0.1mg/mL澄清溶液。大鼠1mg/kg静脉注射给药后，收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS法检测血浆中原形药物浓度，并用WinNonlin软件计算相关药动学参数，试验结果见下表6所示：
表6大鼠静脉注射给予1mg/kg的药动学参数
选择健康成年雄性SD大鼠3只为口服组，口服组溶媒为10％DMSO+90％(30％HP-β-CD)。称取适量化合物，加入对应体积的10％DMSO溶解后，再先后加入对应体积的90％(30％HP-β-CD)混合均匀，涡旋震荡溶解，制备得到1mg/ml澄清溶液。大鼠10mg/kg口服给药后，收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS法检测血浆中原形药物浓度，并用WinNonlin软件计算相关药动学参数，试验结果见下表7所示：
表7大鼠灌胃的药动学参数(n＝3，雄性)
综上可知，本发明提供的一类新型化合物对PARP7具有较高的抑制活性，且对hERG钾通道的抑制活性低以及成药性好，在制备预防和/或治疗体内PARP7升高有关的疾病的药物中具有极高的应用价值。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (10)

1.式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型，
其中，
X为CH或N；
R1、R2分别独立选自取代或未取代的C1-10烷基、取代或未取代的C3-10环烷基、取代或未取代的C1-10烷氧基、取代或未取代的C2-5烯基、取代或未取代的C2-3炔基中的一种；
A为手性或非手性胺单元，并通过A中的氮与吡啶酮或嘧啶酮相连接；
L选自以下结构中的一种：
B为包含至少一个N原子的C4-12杂环，所述杂环为单环或双环，其中双环为包含桥接、融合、螺旋或自连的桥接单元的杂环；
Y为N、C或CH；
Z为N、CH或CR3，其中R3为取代或未取代的C1-10烷基、取代或未取代的C3-10环烷基、C1-10烷氧基中的一种。
2.根据权利要求1所述的式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型，其特征在于，所述R1、R2分别独立选自甲基、乙基、丙基、氟甲基、三氟甲基、氘代甲基、溴、氯、氟、氰基、C3-10环烷基中的一种。
3.根据权利要求1所述的式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型，其特征在于，所述A选自以下结构中的一种：
所述B选自以下结构中的一种：
4.根据权利要求1所述的式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型，其特征在于，所述式(I)所示的化合物为以下结构式I-1至式I-57所示的化合物：
5.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-4任一项所述的式(I)所示的化合物、其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型中的一种或多种。
6.一种权利要求1-4任一项所述的式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药、多晶型、权利要求5所述的药物组合物在制备PARP7抑制剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述PARP7抑制剂通过口服、非肠外、静脉注射或经皮给药的方式给药。
8.一种权利要求1-4任一项所述的式(I)所示的化合物或其同位素形式、立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、水合物、前药及多晶型、权利要求5所述的药物组合物在制备治疗患者的PARP7介导的病症的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述PARP7介导的病症包括乳腺癌、卵巢癌和结直肠癌。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物通过口服、非肠外、静脉注射或经皮给药的方式给药。
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