CN117120090A - Hpk1拮抗剂和其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了化合物、其组合物和使用其抑制HPK1并治疗HPK1介导的病症的方法。

Description

HPK1拮抗剂和其用途
相关申请交叉引用
本申请要求于2021年2月12日提交的美国临时申请第63/148,857号的权益，所述美国临时申请的内容特此通过引用并入。
技术领域
本发明涉及可用于拮抗造血祖细胞激酶1(HPK1)的化合物和方法。本发明还提供了包括本发明的化合物的药学上可接受的组合物和使用所述组合物治疗各种病症的方法。
背景技术
造血祖细胞激酶1(HPK1)，也称为丝裂原激活的蛋白激酶激酶激酶1(MAP4K1)，是Ste20丝氨酸/苏氨酸激酶超家族的造血细胞限制性成员。MAP4K家族包含MAP4Kl/HPK1、MAP4K2/GCK、MAP4K3/GLK、MAP4K4/HGK、MAP4K5/KHS和MAP4K6/MINK。HPK1是MEKK/JNK/SAPK信号传导通路的组织特异性上游激活剂。
HPKl特别受关注，这是因为其主要在造血细胞，如T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞中表达(Hu,M.C.等人,《基因与发育(Genes Dev)》,1996.10(18):第2251-64页；Kiefer,F.等人,《欧洲分子生物学杂志(EMBO J)》,1996.15(24):第7013-25页)。HPKl激酶活性已被证明在以下激活时被诱导：T细胞受体(TCR)(Liou,J.等人,《免疫(Immunity)》,2000.12(4):第399-408页)、B细胞受体(BCR)(Liou,J.等人,《免疫》,2000.12(4):第399-408页)、转化生长因子受体(TGF-PR)(Wang,W.等人,《生物化学杂志(JBiol Chem)》,1997.272(36):第22771-5页；Zhou,G.等人,《生物化学杂志》,1999.274(19):第13133-8页)或Gs-偶联的PGE2受体(EP2和EP4)(Ikegami,R.等人,《免疫学杂志(JImmunol)》,2001.166(7):第4689-96页)。如此，HPKl调控各种免疫细胞的不同功能。HPK1还是树突状细胞激活以及T和B细胞应答的负调控因子的实例，其可以被靶向以增强抗肿瘤免疫。HPK1主要由造血细胞表达，包含早期祖细胞。在T细胞中，据信HPK1通过使Ser376处的SLP76(Di Bartolo等人,(2007)《实验医学杂志(JEM)》204:681-691)和Thr254处的Gads进行磷酸化从而降低信号传导微簇的持久性来对T细胞激活进行负调控，这募集了与磷酸化的SLP76和Gads结合的14-3-3蛋白，从而从含LAT的微簇中释放SLP76-Gads-14-3-3复合物(Lasserre等人,(2011)《细胞生物学杂志(J Cell Biol)》195(5):839-853)。HPK1还可以响应于通常由肿瘤分泌的前列腺素E2而被激活，从而有助于肿瘤细胞从免疫系统逃逸。
HPKl在调控各种免疫细胞的功能方面很重要，并且其与自身免疫性疾病和抗肿瘤免疫有关(Shui,J.W.等人,《自然免疫学(Nat Immunol)》,2007.8(1):第84-91页；Wang,X.等人,《生物化学杂志》,2012.287(14):第11037-48页)。
发明内容
现已发现，本发明的化合物和其药学上可接受的组合物作为HPK1拮抗剂是有效的。在某些实施例中，本发明提供了本文所呈现的式化合物。
本发明的化合物和其药学上可接受的组合物可用于治疗与对涉及HPK1激酶的信号传导途径的调控相关的各种疾病、病症或病状。此类疾病、病症或病状包含本文所描述的疾病、病症或病状。
本发明所提供的化合物还可用于：对生物学和病理学现象中的HPK1酶的研究；对存在于身体组织中的细胞内信号转导通路的研究；以及对新的HPK1抑制剂或其它激酶、信号传导通路和细胞因子水平的调控因子的体外或体内比较评价。
具体实施方式
1.本发明的某些实施例的一般描述：
在某些方面，本发明提供了一种式I化合物：
或其药学上可接受的盐，其中X、Y、Z、A、L、R1、R2、R3、R4、m和n中的每一个单独或组合如下文所定义并如本文的实施例中所描述。
在一些实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本文所提供的化合物和药学上可接受的载体、佐剂或稀释剂。
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗HPK1介导的疾病、病症或病状的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文所提供的化合物或其药学上可接受的盐。
2.化合物和定义：
本发明的化合物包含本文总体上描述的化合物并且通过本文公开的类别、子类和种类进一步说明。除非另有指示，否则如本文所使用的，以下定义应适用。出于本发明的目的，化学元素根据元素周期表(Periodic Table of the Elements),CAS版,《化学和物理手册(Handbook of Chemistry and Physics)》,第75版进行标识的。此外，有机化学的一般原理描述于“《有机化学(Organic Chemistry)》”,Thomas Sorrell,索萨利托大学科学书籍出版社(University Science Books,Sausalito):1999以及“《玛奇高等有机化学(March'sAdvanced Organic Chemistry)》”,第5版,编辑:Smith,M.B.和March,J.,纽约的约翰·威立父子出版公司(John Wiley&Sons,New York):2001，所述文献的全部内容特此通过引用并入。
如本文所使用的，术语“脂肪族”或“脂肪族基团”意指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的直链(即，无支链)或支链、经取代或未经取代的烃链，或者完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是与分子的其余部分具有单个连接点的芳香族(在本文中也称为“碳环”、“脂环族”或“环烷基”)的单环烃或双环烃。除非另有说明，否则脂肪族基团含有1-6个脂肪族碳原子。在一些实施例中，脂肪族基团含有1-5个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基团含有1-4个脂肪族碳原子。在仍其它实施例中，脂肪族基团含有1-3个脂肪族碳原子，并且在又其它实施例中，脂肪族基团含有1-2个脂肪族碳原子。在一些实施例中，“脂环族”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是与分子的其余部分具有单个连接点的芳香族的单环C3-C6烃。合适的脂肪族基团包含但不限于直链或支链的经取代的或未经取代的烷基、烯基、炔基和其杂化物，如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
如本文所使用的，术语“桥连双环”是指具有至少一个桥的任何双环体系，即，碳环或杂环，饱和或部分不饱和的。如IUPAC所定义的，“桥”是无支链的原子链或连接两个桥头的原子或价键，其中“桥头”是环体系的与三个或三个以上骨架原子(不包含氢)结合的任何骨架原子。在一些实施例中，桥连双环基团具有7-12个环成员和0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。此类桥连双环基团在本领域中是众所周知的并且包含下文阐述的那些基团，其中每个基团在任何可取代的碳或氮原子处与分子的其余部分连接。除非另有说明，否则桥连双环基团任选地被一个或多个针对脂肪族基团列出的取代基取代。另外或可替代地，桥连双环基团的任何可取代氮都是任选地经取代的。示例性桥连双环包含：
术语“低级烷基”是指C1-4直链或支链烷基。示例性低级烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。
术语“低级卤代烷基”是指被一个或多个卤素原子取代的C1-4直链或支链烷基。
术语“杂原子”意指氧、硫、氮、磷或硅中的一个或多个(包含氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式或；杂环的可取代氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N取代的吡咯烷基中))。
如本文所使用的，术语“不饱和的”意味着某一部分具有一个或多个不饱和单元。
如本文所使用的，术语“二价C1-8(或C1-6)饱和或不饱和的直链或支链烃链”是指如本文所定义的直链或支链的二价亚烷基、亚烯基和亚炔基链。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”是聚亚甲基，即，-(CH2)n-，其中n是正整数，优选地1至6、1至4、1至3、1至2或2至3。经取代的亚烷基链是一个或多个亚甲基氢原子被取代基替代的聚亚甲基。合适的取代基包含下文针对经取代的脂肪族基团描述的取代基。
术语“亚烯基”是指二价烯基。经取代的亚烯基链是其中一个或多个氢原子被取代基替代的含有至少一个双键的聚亚甲基。合适的取代基包含下文针对经取代的脂肪族基团描述的取代基。
术语“卤素”意指F、Cl、Br或I。
单独使用或作为较大部分的一部分使用如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中使用的术语“芳基”是指具有共五到十四个环成员的单环或双环体系，其中所述体系中的至少一个环是芳香族的，并且其中所述体系中的每个环含有3至7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳基环”可互换地使用。在本发明的某些实施例中，“芳基”是指包含但不限于可以携带一个或多个取代基的苯基、联苯基、萘基、蒽基等的芳香族环体系。如其在本文中所使用的，术语“芳基”的范围内还包含芳香族环与一个或多个非芳香族环稠合的基团，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。
单独使用或作为较大部分，例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”的部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”是指这样的基团，其具有5个至10个环原子，在环阵列中共享6个、10个或14π个电子；优选地5个、6个或9个环原子；并且除碳原子外，还具有一个到五个杂原子。术语“杂原子”是指氮、氧或硫并且包含氮或硫的任何氧化形式以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基包含但不限于：噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。如本文所使用的，术语“杂芳基”和“杂芳-”还包含杂芳香族环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中除非另有说明，否则基团或连接点位于杂芳香族环上或杂芳香族环所稠合的环之一上。非限制性实例包含吲哚基、异吲哚基、苯噻嗯基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基。杂芳基可以是单环的或双环的。术语“杂芳基(heteroaryl)”可以与术语“杂芳基环”、“杂芳基(heteroaryl group)”或“杂芳香族”可互换地使用，所述术语中的任何术语包含任选地经取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基，其中烷基和杂芳基部分独立地是任选地经取代的。
如本文所使用的，术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环(heterocyclic ring)”可互换使用，并且是指饱和或部分不饱和的并且除碳原子外还具有一个或多个，优选地一到四个杂原子的稳定的5元至7元单环或7-10元双环杂环部分，如上文所定义的。当关于杂环的环原子使用时，术语“氮”包含经取代的氮。作为实例，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以为N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或+NR(如在N-取代的吡咯烷基中)。
杂环可以在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与其侧基连接，并且环原子中的任何环原子可以是任选地经取代的。这类饱和或部分不饱和杂环基的实例包含但不限于四氢呋喃基、四氢苯硫基吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二氧杂环己烷基、二氧戊环基、二氮杂卓基、氧氮杂卓基、硫杂卓基、吗啉基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基环”、“杂环基(heterocyclic group)”、“杂环部分”和“杂环基团”在本文中可互换地使用并且还包含杂环基环与一个或多个芳基环、杂芳基环或脂环族环稠合的基团，如吲哚啉基、3H-吲哚基、苯并二氢吡喃基、菲啶基或四氢喹啉基。杂环基可以是单环的或双环的。术语“杂环烷基”是指被杂环基取代的烷基，其中烷基和杂环基部分独立地是任选地经取代的。
如本文所使用的，术语“部分不饱和的”是指包含至少一个双键或三键的环部分。术语“部分不饱和的”旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但不旨在包含芳基或杂芳基部分，如本文所定义的。
如本文所描述的，本发明的化合物可以含有“任选地经取代的”部分。通常，术语“经取代的”，无论前面是否有术语“任选地”，都意味着指定部分的一个或多个氢被合适的取代基替代。除非另有说明，否则“任选地经取代的”基团可以在基团的每个可取代位置处具有适当的取代基，并且在任何给定结构中的多于一个位置可以被多于一个选自指定组的取代基取代时，在每个位置处，取代基可以相同或不同。本发明所设想的取代基的组合优选地是导致形成稳定或化学上可行的化合物的那些取代基的组合。如本文所使用的，术语“稳定的”是指这样的化合物：这些化合物在经历允许其被生产、被检测并且在某些实施例中被恢复、被纯化并且被用于本文公开的目的中的一个或多个的条件时，其基本上不会变化。
“任选地经取代的”基团的可取代碳原子上的合适的单价取代基独立地是卤素；-(CH2)0-4Ro；-(CH2)0-4ORo；-O(CH2)0-4Ro；-O-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4CH(ORo)2；-(CH2)0- 4SRo；-(CH2)0-4Ph，其可以被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph，其可以被Ro取代；-CH＝CHPh，其可以被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基，其可以被Ro取代；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(Ro)2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)C(S)Ro；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)C(S)NRo 2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)ORo；-N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；-N(Ro)C(NRo)N(Ro)2；-(CH2)0-4C(O)Ro；-C(S)Ro；-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)SRo；-(CH2)0-4C(O)OSiRo 3；-(CH2)0-4OC(O)Ro；-OC(O)(CH2)0-4SRo；-SC(S)SRo；-(CH2)0-4SC(O)Ro；-(CH2)0-4C(O)NRo 2；-C(S)NRo 2；-C(S)SRo；-SC(S)SRo；-(CH2)0-4OC(O)NRo 2；-C(O)N(ORo)Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-C(NORo)Ro；-(CH2)0-4SSRo；-(CH2)0-4S(O)2Ro；-(CH2)0-4S(O)2ORo；-(CH2)0-4OS(O)2Ro；-S(O)2NRo 2；-(CH2)0-4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2NRo 2；-N(Ro)S(O)2Ro；-N(ORo)Ro；-C(NH)NRo 2；-P(O)2Ro；-P(O)Ro 2；-OP(O)Ro 2；-OP(O)(ORo)2；-SiRo 3；-(C1-4直链或支链亚烷基)O-N(Ro)2；或-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)O-N(Ro)2，其中每个Ro可以如下文定义地被取代，并且独立地是氢；C1-6脂肪族；-CH2Ph；-O(CH2)0-1Ph；-CH2-(5-6元杂芳基环)；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和的或芳基环，或者，尽管有上述定义，两个独立出现的Ro与其中间原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和的或芳基单环或双环，其可以如下文定义地被取代。
Ro(或通过两个独立出现的Ro与其中间原子一起形成的环)上合适的单价取代基独立地是卤素、-(CH2)0-2R●、-(卤代R●)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2OR●、-(CH2)0-2CH(OR●)2、-O(卤代R●)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)R●、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)OR●、-(CH2)0-2SR●、-(CH2)0- 2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHR●、-(CH2)0-2NR● 2、-NO2、-SiR● 3、-OSiR● 3、-C(O)SR●、-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)OR●或-SSR●，其中每个R●是未经取代的或者在前面带有“卤代”的情况下仅被一个或多个卤素取代，并且独立地选自C1-4脂肪族；-CH2Ph；-O(CH2)0-1Ph；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和的或芳基环。Ro的饱和碳原子上的合适的二价取代基包含＝O和＝S。
“任选地取代的”基团的饱和碳原子上的合适的二价取代基包含以下：＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R* 2))2-3O-或-S(C(R* 2))2-3S-，其中每个独立出现的R*选自氢；C1-6脂肪族，其可以如下文所定义地被取代；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5-6元饱和、部分不饱和的或芳基环。与“任选地取代的”基团的邻位可取代碳结合的合适的二价取代基包含：-O(CR* 2)2-3O-，其中每个独立出现的R*选自氢；C1-6脂肪族，其可以如下文所定义地被取代；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5-6元饱和、部分不饱和的或芳基环。
R*的脂肪族基团上的合适的取代基包含卤素；-R●；-(卤代R●)；-OH；-OR●；-O(卤代R●)；-CN；-C(O)OH；-C(O)OR●；-NH2；-NHR●；-NR● 2或-NO2，其中每个R●未被取代或者在前面带有“卤代”的情况下仅被一个或多个卤素取代，并且独立地是C1-4脂肪族；-CH2Ph；-O(CH2)0- 1Ph；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和的或芳基环。
“任选地经取代的”基团的可取代氮上的合适的取代基包含 或/>其中每个/>独立地是氢；C1-6脂肪族，其可以如下文所定义地被取代；未经取代的-OPh；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的5-6元饱和、部分不饱和的或芳基环，或者，尽管有上述定义，两个独立出现的/>与其中间原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未经取代的3-12元饱和、部分不饱和的或芳基单环或双环。
的脂肪族基团上的合适的取代基独立地是卤素；-R●；-(卤代R●)；-OH；-OR●；-O(卤代R●)；-CN；-C(O)OH；-C(O)OR●；-NH2；-NHR●；-NR● 2或-NO2，其中每个R●未被取代或者在前面带有“卤代”的情况下仅被一个或多个卤素取代，并且独立地是C1-4脂肪族；-CH2Ph；-O(CH2)0-1Ph；或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和的或芳基环。
如本文所使用的，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适合用于与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏响应等并与合理的利益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域中是众所周知的。例如，S.M.Berge等人在通过引用并入本文的《药物科学杂志(J.Pharmaceutical Sciences)》,1977,66,1-19中详细描述了药学上可接受的盐。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包含衍生自适合的无机和有机酸和碱的盐。药学上可接受的无毒性酸加成盐的实例是氨基与无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸)或有机酸(如乙酸、草酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用本领域中所用的其它方法(如离子交换)形成的盐。其它药学上可接受的盐包含己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑、磺酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸、己酸盐、氢碘酸、2-羟基乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸钠、十一酸盐、戊酸盐等。
衍生自适当碱的盐包含碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4盐。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包含钠、锂、钾、钙、镁等。适当的情况下，另外的药学上可接受的盐包含使用如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐的抗衡离子形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。
除非另有说明，否则本文描述的结构也意味着包含结构的所有异构(例如，对映体、非对映体和几何体(或构象))形式；例如，每个不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明的化合物的单一立体化学异构体以及对映、非对映和几何(或构象)混合物处于本发明的范围内。除非另有说明，否则本发明的化合物的所有互变异构形式均在本发明的范围内。另外，除非另有说明，否则本文所描绘的结构也意在包含不同之处仅为存在一个或多个同位素富集原子的化合物。例如，具有包含用氘或氚替代氢或用13C-或14C-富集碳替代碳的本发明结构的化合物都在本发明的范围内。根据本发明，此类化合物可以用作例如分析工具、生物测定中的探针或治疗剂。在某些实施例中，所提供化合物的弹头部分R1包括一个或多个氘原子。在某些实施例中，所提供化合物的B环可以被一个或多个氘原子取代。
如本文所使用的，“HPK1拮抗剂”或“HPK1抑制剂”是一种降低、抑制或以其它方式降低HPK1的生物活性中的一种或多种生物活性(例如，丝氨酸/苏氨酸激酶活性、在TCR激活时到TCR复合物的募集、与蛋白结合配偶体，如SLP76的相互作用)的分子。使用HPK1拮抗剂的拮抗不一定指示HPK1活性的完全消除。相反，与适当的对照相比，活性可以减少统计学上显著的量，包含例如减少HPK1活性的至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、95％或100％。在一些实施例中，HPK1拮抗剂降低、抑制或以其它方式降低HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施例中的一些实施例中，HPK1拮抗剂降低、抑制或以其它方式减少HPK1介导的SLP76和/或Gads的磷酸化。本发明所公开的化合物直接与HPK1结合并抑制其激酶活性。
“特异性拮抗剂”是指一种降低、抑制或以其它方式降低所定义的靶标活性的药剂，所述靶标的活性高于不相关靶标的活性。例如，HPK1特异性拮抗剂降低HPK1的至少一种生物活性的量在统计学上大于所述拮抗剂对任何其它蛋白(例如，其它丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在一些实施例中，拮抗剂对靶标的IC50是拮抗剂对非靶标的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％、1％、0.1％、0.01％、0.001％或更低。本发明所公开的化合物可以是或者可以不是特异性HPK1拮抗剂。特异性HPK1拮抗剂降低HPK1的生物活性的量在统计学上大于所述拮抗剂对任何其它蛋白(例如，其它丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在某些实施例中，HPK1拮抗剂特异性抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施例中的一些实施例中，HPK1拮抗剂对HPK1的IC50是HPK1拮抗剂对另一丝氨酸/苏氨酸激酶或其它类型激酶(例如，酪氨酸激酶)的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、0.1％、0.01％、0.001％或更低。
可以将本发明的化合物与可检测部分拴系。应当理解，此类化合物可用作成像剂。本领域的普通技术人员将认识到，可检测部分可以通过合适的取代基与所提供化合物连接。如本文所使用的，术语“合适的取代基”是指能够与可检测部分共价连接的部分。此类部分对于本领域的普通技术人员来说是众所周知的并且包含含有例如羧酸盐部分、氨基部分、硫醇部分或羟基部分的基团，仅举几例。应当理解，此类部分可以直接或通过拴系基团如二价饱和或不饱和烃链与所提供化合物连接。在一些实施例中，此类部分可以通过点击化学连接。在一些实施例中，此类部分可以任选地在铜催化剂存在的情况下通过叠氮化物与炔烃的1,3-环加成来连接。使用点击化学的方法在本领域中是已知的并且包含Rostovtsev等人,《应用化学国际版(Angew.Chem.Int.Ed.)》2002,41,2596-99和Sun等人,《生物缀合化学(Bioconjugate Chem.)》,2006,17,52-57。
如本文所使用的，术语“可检测部分”与术语“标记”可互换地使用并且涉及能够被检测的任何部分，例如初级标记和次级标记。如放射性同位素(例如，氚、32P、33P、35S或14C)、质量标签和荧光标记等初级标记是无需进一步修饰就可以被检测到的信号产生报告基团。可检测部分还包含发光和磷光基团。
如本文所使用的，术语“次级标记”是指如生物素和各种蛋白质抗原等需要存在第二中间体以产生可检测信号的部分。对于生物素来说，次级中间体可以包含链霉亲和素-酶缀合物。对于抗原标记来说，次级中间体可以包含抗体-酶缀合物。一些荧光基团充当次级标记，因为其在非辐射荧光共振能量转移(FRET)的过程中将能量转移到另一个基团，并且第二基团产生检测到的信号。
如本文所使用的，术语“荧光标记”、“荧光染料”和“荧光团”是指吸收限定激发波长下的光能并且发射不同波长下的光能的部分。荧光标记的实例包含但不限于：AlexaFluor染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor633、Alexa Fluor 660和Alexa Fluor680)、AMCA、AMCA-S、BODIPY染料(BODIPY FL、BODIPY R6G、BODIPY TMR、BODIPY TR、BODIPY530/550、BODIPY 558/568、BODIPY 564/570、BODIPY 576/589、BODIPY 581/591、BODIPY630/650、BODIPY 650/665)、羧基罗丹明6G、羧基-X-罗丹明(ROX)、瀑布蓝(Cascade Blue)、瀑布黄(Cascade Yellow)、香豆素343、花菁染料(Cy3、Cy5、Cy3.5、Cy5.5)、丹酰、Dapoxyl、二烷基氨基香豆素、4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基-荧光素、DM-NERF、伊红、赤藓红、荧光素、FAM、羟基香豆素、IRDye(IRD40、IRD 700、IRD 800)、JOE、丽丝胺罗丹明B(Lissaminerhodamine B)、马里纳蓝(Marina Blue)、甲氧基香豆素、萘基荧光素、俄勒冈绿488(OregonGreen 488)、俄勒冈绿500、俄勒冈绿514、太平洋蓝(Pacific Blue)、PyMPO、芘、罗丹明B、罗丹明6G、罗丹明绿、罗丹明红、Rhodol绿、2',4',5',7'-四-溴砜-荧光素、四甲基-罗丹明(TMR)、羧基四甲基罗丹明(TAMRA)、德克萨斯红(Texas Red)、德克萨斯红-X。
如本文所使用的，术语“质量标签”是指能够使用质谱法(MS)检测技术借助于质量被唯一检测到的任何部分。质量标签的实例包含电泳释放标签，如N-[3-[4'-[(对甲氧基四氟苯甲基)氧基]苯基]-3-甲基甘油基]异哌啶酸、4'-[2,3,5,6-四氟-4-(五氟苯氧基)]甲基苯乙酮和其衍生物。美国专利4,650,750、4,709,016、5,360,8191、5,516,931、5,602,273、5,604,104、5,610,020和5,650,270中描述了这些质量标签的合成和用途。质量标签的其它实例包含但不限于核苷酸、双脱氧核苷酸、不同长度和碱基组成的寡核苷酸、寡肽、寡糖和不同长度和单体组成的其它合成聚合物。适当质量范围(100-2000道尔顿)的大量中性和带电的有机分子(生物分子或合成化合物)也可以用作质量标签。
如本文所使用的，术语“可测量的亲和力”和“可测量地抑制”意指包括本发明的化合物或其组合物和HPK1蛋白激酶的样品与在所述化合物或其组合物不存在的情况下包括HPK1蛋白激酶的等效样品之间的HPK1蛋白激酶活性的可测量变化。
3.示例性实施例的描述：
如上文所描述的，在某些实施例中，本发明提供了一种式I化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
X是N或CR3；
Y是N或CR2；
Z是N或CR2；
A是N或CR2；
L是共价键、-O-、-S-、-NR-、-S(O)2-、-S(O)2NR-、-S(O)-、-S(O)NR-、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)NR-、-C(O)N(R)O-、-OC(O)-、-OC(O)NR-、-N(R)C(O)O-、-N(R)C(O)-、-N(R)S(O)2-；或者L是C1-4二价饱和或不饱和的直链或支链烃链，其中所述链的一个或两个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R)2-、-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-；
R1选自H；C1-6脂肪族；苯基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；以及具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；其中的每一个被RC的q个实例取代；
每个R2独立地选自H；C1-6脂肪族；苯基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和桥连双环；以及具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和、部分不饱和或不饱和的稠合、桥连或螺双环；其中的每一个被RD的r个实例取代；或者R2是卤素、-CN,-NO2,-OR,-SR,NR2,S(O)2R,S(O)(NR)R,S(O)2NR2,S(O)R,S(O)NR2,C(O)R,C(O)OR,-C(O)NR2,C(O)N(R)OR,OC(O)R,OC(O)NR2,-N(R)C(O)R,-N(R)C(O)OR,N(R)C(O)NR2,-N(R)C(NR)NR2,N(R)S(O)2NR2,-N(R)S(O)2R或-P(O)R2；
每个R3独立地选自H；C1-6脂肪族；苯基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；以及具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者R3是卤素、-CN、-NO2、-OR、-SR、-NR2、-S(O)2R、-S(O)(NR)R、-S(O)2NR2、-S(O)R、-S(O)NR2、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)NR2、-N(R)C(NR)NR2、-N(R)S(O)2NR2、-N(R)S(O)2R或-P(O)R2；
R4是H或C1-6脂肪族；其被RF的t个实例取代；
RC、RD、RE和RF的每个实例独立地是氧代、卤素,-CN,-NO2,-OR,-SR,NR2,S(O)2R,S(O)2NR2,S(O)R,S(O)NR2,C(O)R,C(O)OR,-C(O)NR2,C(O)N(R)OR,OC(O)R,OC(O)NR2,-N(R)C(O)OR,N(R)C(O)R,N(R)C(O)NR2,N(R)C(NR)NR2,-N(R)NR2,N(R)S(O)2NR2,-N(R)S(O)2R,-N＝S(O)R2,-S(NR)(O)R,-N(R)S(O)R,-N(R)CN,-P(O)(R)NR2,-P(O)(R)OR或-P(O)R2；或RC、RD、RE和RF的每个实例独立地是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；萘基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和的桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；或具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环；其中的每一个被R的u个实例取代；
每个R独立地是氢、-CN、卤素或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；萘基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的7-12元饱和或部分不饱和的双环杂环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和的桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环；或者：
同一氮上的两个R基团与氮一起以形成除氮外还具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选地经取代的4-7元单环饱和、部分不饱和的或杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的7-12元饱和或部分不饱和的双环杂环；
m是1、2或3；
n是0、1或2；
q、r、s和t中的每一个独立地是0、1、2、3或4；并且
u是0、1、2、3或4。
在一个实施例中，X是CR3；Y是N或CR2；Z是N或CR2；并且A是N或CR2。
在某些实施例中，X是CR3；Y是CR2；Z是N；并且A是CR2。
在某些实施例中，X是CR3；Y是N；Z是CR2；并且A是CR2。
在某些实施例中，X是CR3；Y是CR2；Z是CR2；并且A是CR2。
在某些实施例中，X是CR3；Y是CR2；Z是CR2；并且A是N。
在某些实施例中，X是CR3；Y是N；Z是CR2；并且A是N。
在另一实施例中，X是N；Y是N或CR2；Z是N或CR2；并且A是N或CR2。
在某些实施例中，X是N；Y是CR2；Z是N；并且A是CR2。
在某些实施例中，X是N；Y是N；Z是CR2；并且A是CR2。
在某些实施例中，X是N；Y是CR2；Z是CR2；并且A是CR2。
在某些实施例中，X是N；Y是CR2；Z是CR2；并且A是N。
在某些实施例中，X是N；Y是N；Z是CR2；并且A是N。
在某些实施例中，L是共价键、-O-,-S-,NR-,S(O)2-,S(O)2NR-,S(O)-,S(O)NR-,C(O)-,C(O)O-,-C(O)NR-,C(O)N(R)O-,OC(O)-,OC(O)NR-,-N(R)C(O)O-,N(R)C(O)-,N(R)C(O)NR-,N(R)C(NR)NR-,-N(R)NR-,N(R)S(O)2NR-或-N(R)S(O)2-。
在一些实施例中，L是共价键。
在某些实施例中，L是-O-,-S-,NR-,S(O)2-,S(O)2NR-,S(O)-,S(O)NR-,C(O)-,C(O)O-,-C(O)NR-,C(O)N(R)O-,OC(O)-,OC(O)NR-,-N(R)C(O)O-,N(R)C(O)-,N(R)C(O)NR-,N(R)C(NR)NR-,-N(R)NR-,N(R)S(O)2NR-或-N(R)S(O)2-。
在某些实施例中，L是NR-,C(O)-,C(O)O-,-C(O)NR-,C(O)N(R)O-,OC(O)-,OC(O)NR-,-N(R)C(O)O-,N(R)C(O)-,N(R)C(O)NR-,N(R)C(NR)NR-,or-N(R)NR-。
在某些实施例中，L是-NR-。在某些实施例中，L是-NH-。
在一些实施例中，L选自下表1中所描绘的那些。
在一些实施例中，R1是H。
在一些实施例中，R1是C1-6脂肪族，其被RC的q个实例取代；苯基，其被RC的q个实例取代；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环，其被RC的q个实例取代；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环，其被RC的q个实例取代；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环，其被RC的q个实例取代。
在一些实施例中，R1是苯基或具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环，其中的每一个被RC的q个实例取代。
在某些实施例中，R1是-H、-Et、-i-Pr、s-Bu、直链或支链戊基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、茚满基、四氢萘基、吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、NH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃[2,3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋吖基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、亚吲哚基、吲哚啉基、吲哚嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、异吲哚啉基、异亚吲哚基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异吲哚啉基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基和噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、-1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、氧杂环丁烷基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基(phenoxathiinyl)、吩噁嗪基(phenoxazinyl)、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁基或呫吨基；其中的每一个被RC的q个实例取代。
在某些实施例中，R1是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、呋喃基、呋吖基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、-1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、氧杂环丁烷基、嘧啶基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁基或呫吨基；其中的每一个被RC的q个实例取代。
在某些实施例中，R1是苯基、呋喃基、呋吖基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、-1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、氧杂环丁烷基、嘧啶基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、噻唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基或1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基；其中的每一个被RC的q个实例取代。
在某些实施例中，R1是苯基、吡唑基或吡啶基，其中的每一个被RC的q个实例取代。
在某些实施例中，R1是苯基、吡唑基或吡啶基；其中的每一个被RC的q个实例取代；其中每个RC独立地是卤素、-CN、-OR、-S(O)2R、-C(O)NR2，或者RC的每个实例独立地是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元饱和或部分不饱和的桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-12元饱和或部分不饱和的螺环；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；或者两个RC基团与其各自所连接的原子一起形成桥连的、稠合的或螺环的5-6元芳基环；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；其中或RC的每个实例独立地任选地被R和RD取代。
在某些实施例中，R1是
在某些实施例中，R1是
其中RC的每个实例独立地是卤素、-CN、-OR、-S(O)2R、-S(O)NR2、-C(O)NR2、任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；或具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环；其中的每一个被R的r个实例和RD的s个实例取代。
在某些实施例中，R1是
其中RC的每个实例独立地是-Me、-Et、-CH2N(CH3)2、-CN、-CH2CN、-F、-OMe、-S(O)2Me、-CH2S(O)2Me、
/>
/>
在某些实施例中，R1是
/>
/>
/>
在一些实施例中，R1选自下表1中所描绘的那些。
在一些实施例中，每个R2独立地是H。
在一些实施例中，每个R2独立地是选自以下的R2：C1-6脂肪族；苯基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；以及具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；其中的每一个被RD的r个实例取代。
在一些实施例中，每个R2独立地选自C2-6脂肪族；苯基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；其中的每一个被RD的r个实例取代。
在一些实施例中，每个R2独立地是被RD的r个实例取代的C2-6脂肪族。
在一些实施例中，每个R2独立地是被RD的r个实例取代的苯基。
在一些实施例中，每个R2独立地是被RD的q个实例取代的3-7元饱和或部分不饱和单环碳环。
在一些实施例中，每个R2独立地是具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；其被RD的r个实例取代。
在一些实施例中，每个R2独立地是具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；其被RD的q个实例取代。
在某些实施例中，R2独立地是-H、-Et、-i-Pr、s-Bu、直链或支链戊基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、茚满基、四氢萘基、吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、NH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃[2,3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋吖基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、亚吲哚基、吲哚啉基、吲哚嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、异吲哚啉基、异亚吲哚基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异吲哚啉基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基和噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、-1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、氧杂环丁烷基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基(phenoxathiinyl)、吩噁嗪基(phenoxazinyl)、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁基或呫吨基；其中的每一个被RD的q个实例取代。
在某些实施例中，每个R2独立地是-H、-Et、-i-Pr、s-Bu、直链或直链戊基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、呋喃基、呋吖基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、-1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、氧杂环丁烷基、嘧啶基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁基或呫吨基；
其中RD的每个实例独立地是氧代、卤素、-CN,-NO2,-OR,-SR,NR2,S(O)2R,S(O)2NR2,S(O)R,S(O)NR2,C(O)R,C(O)OR,-C(O)NR2,C(O)N(R)OR,OC(O)R,OC(O)NR2,-N(R)C(O)OR,N(R)C(O)R,N(R)C(O)NR2,N(R)C(NR)NR2,-N(R)NR2,N(R)S(O)2NR2,-N(R)S(O)2R,-N＝S(O)R2,-S(NR)(O)R,-N(R)S(O)R,-N(R)CN,-P(O)(R)NR2,-P(O)(R)OR或-P(O)R2；或者RD的每个实例独立地是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；萘基；具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和的桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；以及具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；
或者两个RD基团与其各自所连接的原子一起形成桥连的、稠合的或螺环的5-6元芳基环、3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环、具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；以及具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；其中RD的每个实例独立地任选地R的u个实例取代。
在某些实施例中，每个R2独立地是-H、-Et、-i-Pr、s-Bu、直链或支链戊基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、氧杂环丁烷基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、四氢吡喃基、氮杂环丁基；其中的每一个被RD的r个实例取代。
在某些实施例中，每个R2独立地是-H、-Et、-i-Pr、s-Bu、直链或支链戊基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、氧杂环丁烷基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、四氢吡喃基、氮杂环丁基；其中的每一个被其中的每一个被RD的r个实例取代，其中RD的每个实例独立地是氧代、卤素、-CN、-OR、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-N(R)C(O)R；或者RD的每个实例独立地是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；以及具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；或者两个RD基团与其各自所连接的原子一起形成桥连、稠合或螺环的5-6元芳基环；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；以及具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；其中RD的每个实例独立地任选地被R的u个实例取代。
在一些实施例中，每个R2独立地是具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和、部分不饱和或不饱和的稠合、桥连或螺双环；其中的每一个被RD的r个实例取代。
在某些实施例中，每个R2独立地是具有1-3个氮原子的7-10元稠合双环；其中的每一个被RD的r个实例取代。
在某些实施例中，每个R2独立地是具有1-3个氮原子的9元稠合双环；其中的每一个被RD的r个实例取代，其中每个RD独立地是卤素、-CN、-OR、-C(O)NR2或-NR2；或者RD的每个实例独立地是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；以及具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的稠合、桥连或螺双环杂环；其中RD的每个实例独立地被R的u个实例取代。
在某些实施例中，每个R2独立地是H、
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在某些实施例中，每个R2独立地是
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在某些实施例中，每个R2独立地是/>
在某些实施例中，每个R2独立地是
在某些实施例中，每个R2与其RD取代基一起独立地是
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在某些实施例中，每个R2与其RD取代基一起独立地是/>
在一些实施例中，每个R2独立地选自下表1中所描绘的那些。
在某些实施例中，每个R3独立地是-H。
在某些实施例中，每个R3独立地是-C1-6脂肪族或-苯基；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者每个R3独立地是-CN、卤素、-OR、-SR、-NR2、-S(O)2R、-S(O)(NR)R、-S(O)2NR2、-S(O)R、-S(O)NR2、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)NR2、-N(R)C(NR)NR2、-N(R)S(O)2NR2或-N(R)S(O)2R。
在某些实施例中，每个R3独立地是-H；-C1-6脂肪族或-苯基；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者每个R3独立地是-CN、卤素、-OR、-SR、-NR2、-S(O)2R、-S(O)(NR)R、-S(O)2NR2、-S(O)R、-S(O)NR2、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)NR2、-N(R)C(NR)NR2、-N(R)S(O)2NR2或-N(R)S(O)2R。
在某些实施例中，每个R3独立地是-H、C1-6脂肪族或-苯基；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者每个R3独立地是-CN、卤素、-OR、-NR2、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)NR2、-N(R)C(NR)NR2、-N(R)S(O)2NR2或-N(R)S(O)2R。
在某些实施例中，每个R3独立地是-H、C1-6脂肪族或-苯基；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者每个R3独立地是-CN、卤素、-OR、-NR2、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)NR2或-N(R)C(NR)NR2。
在某些实施例中，每个R3独立地是-H、C1-6脂肪族或-苯基；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者每个R3独立地是-CN、卤素、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2或-C(O)N(R)OR。
在某些实施例中，每个R3独立地是-H、-Me、-Et或-苯基；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者每个R3独立地是-CN、卤素或-C(O)OR。
在一些实施例中，每个R3独立地是-H、-Me、-Et、-CN、-Br、
在一些实施例中，每个R3独立地选自下表1中所描绘的那些。
在一些实施例中，R4是H。
在一些实施例中，R4是C1-6脂肪族；其被RF的t个实例取代。
在一些实施例中，R4选自下表1中所描绘的那些。
在一些实施例中，RC、RD、RE和RF的每个实例独立地是氧代、卤素、-CN、-NO2、-OR、-SR、NR2、S(O)2R、S(O)2NR2、S(O)R、S(O)NR2、C(O)R、C(O)OR、-C(O)NR2、C(O)N(R)OR、OC(O)R、OC(O)NR2、-N(R)C(O)OR、N(R)C(O)R、N(R)C(O)NR2、N(R)C(NR)NR2、-N(R)NR2、N(R)S(O)2NR2、-N(R)S(O)2R、-N＝S(O)R2、-S(NR)(O)R、-N(R)S(O)R、-N(R)CN、-P(O)(R)NR2、-P(O)(R)OR或-P(O)R2；或RC、RD、RE和RF的每个实例独立地是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；萘基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和的桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；或具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环。
在一些实施例中，RC、RD、RE和RF的每个实例是氧代、卤素、-CN,-NO2,-OR,-SR,NR2,S(O)2R,S(O)2NR2,S(O)R,S(O)NR2,C(O)R,C(O)OR,-C(O)NR2,C(O)N(R)OR,OC(O)R,OC(O)NR2,-N(R)C(O)OR,N(R)C(O)R,N(R)C(O)NR2,N(R)C(NR)NR2,-N(R)NR2,N(R)S(O)2NR2,-N(R)S(O)2R,-N＝S(O)R2,-S(NR)(O)R,-N(R)S(O)R,-N(R)CN,-P(O)(R)NR2,-P(O)(R)OR或-P(O)R2。
在一些实施例中，RC、RD、RE和RF的每个实例是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；萘基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和的桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；或具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环。
在一些实施例中，RC、RD、RE和RF的每个实例选自下表1中描绘的那些。
如上文一般定义的，每个R独立地是氢或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；萘基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的7-12元饱和或部分不饱和的双环杂环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和的桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环；或者：
同一氮上的两个R基团与氮一起以形成除氮外还具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选地经取代的4-7元单环饱和、部分不饱和的或杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的7-12元饱和或部分不饱和的双环杂环。
在一些实施例中，R选自下表1中所描绘的那些。
如上文总体上所定义的，m是1、2或3。在一些实施例中，m是1。在一些实施例中，m是2。在一些实施例中，m是3。
在一些实施例中，m选自下表1中所描绘的那些。
如上文总体上所定义的，n是0、1或2。在一些实施例中，n是0。在一些实施例中，n是1。在一些实施例中，n是2。
在一些实施例中，n选自下表1中所描绘的那些。
如上文总体上所定义的，q是0、1、2、3或4。在一些实施例中，q是0。在一些实施例中，q是1、2、3或4。在一些实施例中，q是1。在一些实施例中，q是2。在一些实施例中，q是3。在一些实施例中，q是4。
在一些实施例中，q选自下表1中所描绘的那些。
如上文总体上所定义的，r是0、1、2、3或4。在一些实施例中，r是0。在一些实施例中，r是1、2、3或4。在一些实施例中，r是1。在一些实施例中，r是2。在一些实施例中，r是3。在一些实施例中，r是4。
在一些实施例中，r选自下表1中所描绘的那些。
如上文总体上所定义的，s是0、1、2、3或4。在一些实施例中，s是0。在一些实施例中，s是1、2、3或4。在一些实施例中，s是1。在一些实施例中，s是2。在一些实施例中，s是3。在一些实施例中，s是4。
在一些实施例中，s选自下表1中所描绘的那些。
如上文总体上所定义的，t是0、1、2、3或4。在一些实施例中，t是0。在一些实施例中，t是1、2、3或4。在一些实施例中，t是1。在一些实施例中，t是2。在一些实施例中，t是3。在一些实施例中，t是4。
在一些实施例中，t选自下表1中所描绘的那些。
如上文总体上所定义的，u是0、1、2、3或4。在一些实施例中，u是0。在一些实施例中，u是1、2、3或4。在一些实施例中，u是1。在一些实施例中，u是2。在一些实施例中，u是3。在一些实施例中，u是4。
在一些实施例中，u选自下表1中所描绘的那些。
在一些实施例中，本发明提供了一种式II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X或XI化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中L、R1、R2、R3、R4、m和n中的每一个单独或组合如上文所定义并如本文的实施例中所描述。
在一些实施例中，本发明提供了一种式II-a、III-a、IV-a、V-a、VI-a、VII-a、VIII-a、IX-a、X-a或XI-a化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R4、m和n中的每一个单独或组合如上文所定义并如本文的实施例中所描述。
在一些实施例中，本发明提供了一种式II-b、III-b、IV-b、V-b、VI-b、VII-b、VIII-b、IX-b、X-b或XI-b化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中L、R1、R2、R3、R4和m中的每一个单独或组合如上文所定义并如本文的实施例中所描述。
在一些实施例中，本发明提供了一种式II-c、III-c、IV-c、V-c、VI-c、VII-c、VIII-c、IX-c、X-c或XI-c化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中L、R1、R2、R3、R4和m中的每一个单独或组合如上文所定义并如本文的实施例中所描述。
下表1中列出了本发明的示例性化合物。
表1：所选化合物
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在一些实施例中，本发明提供了上表1中列出的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，本发明提供了上表1中列出的化合物。在一些实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括上表1中列出的化合物或其药学上可接受的盐连同药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
在一些实施例中，本发明提供了如上文所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐或者如上文所定义的包括式I化合物的药物组合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体、佐剂或媒剂，其用作药剂。
在一些实施例中，本发明还提供了本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物，其用于如本文所描述的用于抑制HPK1的方法、如本文所描述的用于增强有需要的受试者的免疫应答的方法和/或如本文所描述的用于治疗HPK1依赖性病症的方法。
在一些实施例中，本发明还提供本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物，其用于如本文所描述的用于抑制HPK1的方法。
在一些实施例中，本发明还提供了本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物，其用于如本文所描述的用于增强有需要的受试者的免疫应答的方法。
在一些实施例中，本发明还提供本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物，其用于如本文所描述的用于治疗HPK1依赖性病症的方法。
在一些实施例中，本发明还提供了本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物的用途，其用于制造用于抑制HPK1的药物、用于增强有需要的受试者的免疫应答的药物和/或用于治疗HPK1依赖性病症的药物。
在一些实施例中，本发明还提供本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物的用途，其用于制造用于抑制HPK1的药物。
在一些实施例中，本发明还提供了本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物的用途，其用于制造用于增强有需要的受试者的免疫应答的药物。
在一些实施例中，本发明还提供本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物的用途，其用于制造治疗HPK1依赖性病症的药物。
在一些实施例中，本发明还提供了本文所描述的式I用途化合物或本文所描述的药物组合物的用途，其用于如本文所描述的用于抑制HPK1的方法、如本文所描述的用于增强有需要的受试者的免疫应答的方法和/或如本文所描述的用于治疗HPK1依赖性病症的方法。
在一些实施例中，本发明还提供本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物的用途，其用于如本文所描述的用于抑制HPK1的方法。
在一些实施例中，本发明还提供了本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物的用途，其用于如本文所描述的用于增强有需要的受试者的免疫应答的方法。
在一些实施例中，本发明还提供本文所描述的式I化合物或本文所描述的药物组合物的用途，其用于如本文所描述的用于治疗HPK1依赖性病症的方法。
如上文总体上所定义的，与碳结合的每个氢可以任选地且独立地被氘替代。
在一些实施例中，与碳结合的氢被氘替代。
4.提供本发明化合物的一般方法
本发明的化合物通常可以通过本领域的技术人员已知的针对类似化合物的合成和/或半合成方法以及通过本文的实例中详细描述的方法来制备或分离。
5.用途、调配物和施用
药学上可接受的组合物
根据另一个实施例，本发明提供了一种组合物，所述组合物包括本发明化合物或其药学上可接受的衍生物以及药学上可接受的载体、佐剂或媒剂。本发明的组合物中的化合物的量为使得有效地在生物样品或患者中可测量地抑制HPK1或其突变体。在某些实施例中，本发明的组合物中的化合物的量为使得有效地在生物样品或患者中可测量地抑制HPK1或其突变体。在某些实施例中，本发明的组合物被调配成向需要此类组合物的患者施用。在一些实施例中，本发明的组合物被调配成用于向患者口服施用。
如本文所使用的，术语“患者”意指动物，优选地哺乳动物并且最优选地人。
术语“药学上可接受的载体、佐剂或媒剂”是指不会破坏与其一起调配的化合物的药理学活性的无毒载体、佐剂或媒剂。可以在本发明的组合物中使用的药学上可接受的载体、佐剂或媒剂包含但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(如人血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇以及羊毛脂。
“药学上可接受的衍生物”意指本发明的化合物的在向接受者施用后能够直接或间接提供本发明的化合物或其抑制活性代谢物或残留物的任何无毒盐、酯、酯盐或其它衍生物。
如本文所使用的，术语“其抑制活性代谢物或残留物”意味着其代谢物或残留物也是HPK1或其突变体的抑制剂。
本文所公开的主题包含本发明的化合物的前药、代谢物、衍生物和药学上可接受的盐。代谢物包含通过包括使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间段的方法而产生的化合物。如果本发明的化合物是碱，则期望的药学上可接受的盐可以通过本领域中可用的任何合适的方法来制备，例如，用以下酸处理游离碱：如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸磷酸等无机酸；或如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸等有机酸；如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等吡喃糖苷酸；如柠檬酸或酒石酸等α-羟基酸；如天冬氨酸或谷氨酸等氨基酸；如苯甲酸或肉桂酸等芳香族酸；如对甲苯磺酸或乙磺酸等磺酸等。如果本发明的化合物为酸，则期望的药学上可接受的盐可以通过任何合适的方法来制备，例如，用如胺(伯、仲或叔)等无机或有机碱、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等处理游离酸。合适的盐的说明性实例包含但不限于衍生自如甘氨酸和精氨酸等氨基酸；氨、伯胺、仲胺和叔胺；以及如哌啶、吗啉或哌嗪等环胺的有机盐；以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。
本发明的化合物可以呈“前药”的形式，其包含具有可以在体内代谢的部分的化合物。一般而言，前药在体内通过酯酶或通过其它机制代谢为活性药物。前药及其用途的实例在本领域中是众所周知的(例如，参见Berge等人,(1977),“药用盐(PharmaceuticalSalts)”,《药物科学杂志(J.Pharm.Sci.)》66:1-19)。前药可以在化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使经纯化的化合物以其游离酸形式或羟基与合适的酯化剂单独反应来制备。羟基可以通过用羧酸处理转化成酯。前药部分的实例包含经取代的和未经取代的、支链的或无支链的低级烷基酯部分(例如，丙酸酯)、低级烯基酯、二低级烷基-氨基低级烷基酯(例如，二甲基氨基乙基酯)、酰氨基低级烷基酯(例如，乙酰基氧基甲基酯)、酰氧基低级烷基酯(例如，新戊酰氧基甲基酯)、芳基酯(苯基酯)、芳基-低级烷基酯(例如，苄基酯)、经取代的(例如，用甲基、卤基或甲氧基取代基)芳基和芳基-低级烷基酯、酰胺、低级烷基酰胺、二低级烷基酰胺和羟基酰胺。还包含通过其它体内机制转化为活性形式的前药。在各方面中，本发明的化合物是本文任何式的前药。
本发明的组合物可以口服施用、肠胃外施用、通过吸入喷雾施用、局部施用、经直肠施用、经鼻施用、经颊施用、经阴道施用或通过植入式储药器施用。如本文所使用的，术语“肠胃外”包含皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，组合物口服、腹腔内或静脉内施用。本发明的组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性的悬浮液。这些悬浮液可以使用适当的分散剂或湿润剂以及悬浮剂根据本领域中已知的技术进行调配。无菌可注射制剂还可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中例如作为1,3-丁二醇中的溶液的无菌可注射溶液或悬浮液。可以采用的可接受的媒剂和溶剂中有水、林格氏溶液(Ringer's solution)和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。
出于此目的，可以采用任何温和的不挥发性油，包含合成的甘油单酯或甘油二酯。如油酸等脂肪酸以及其甘油酯衍生物可用于制备可注射物，天然的药学上可接受的油，如橄榄油或蓖麻油，特别是以其聚氧乙烯化形式也是如此。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或通常用于调配药学上可接受的剂型(包含乳液和悬浮液)的类似分散剂。出于调配目的，还可以使用其它常用的表面活性剂如吐温(Tween)、司盘(Span)和其它乳化剂或通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其它剂型的生物利用度增强剂。
本发明的药学上可接受的组合物可以以任何口服可接受的剂型口服施用，所述剂型包含但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于口服使用的片剂的情况下，常用的载体包含乳糖和玉米淀粉。还典型地添加了润滑剂如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服施用，有用的稀释剂包含乳糖和干玉米淀粉。当口服使用需要水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果期望的话，还可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
可替代地，对于直肠施用，本发明的药学上可接受的组合物可以以栓剂的形式施用。可以通过将药剂与合适的非刺激性赋形剂混合来制备这些栓剂，所述赋形剂在室温下呈固体但在直肠温度下呈液体并且因此将在直肠中融化以释放药物。此类材料包含可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物还可以局部施用，尤其是在治疗靶标包含易于通过局部施涂接近的区域或器官时，包含眼部、皮肤或下部肠道的疾病。用于这些区域或器官中的每个区域或器官的合适的局部调配物是易于制备的。
针对下部肠道的局部施涂可以以直肠栓剂调配品(见上文)或适当的灌肠剂调配物的形式实现。还可以使用局部透皮贴剂。
对于局部施涂，提供的药学上可接受的组合物可以在含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性组分的适当软膏中调配。用于局部施用本发明的化合物的载体包含但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。可替代地，提供的药学上可接受的组合物可以在含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的合适的洗液或乳膏中调配。合适的载体包含但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
对于眼科使用，提供的药学上可接受的组合物可以调配为等渗的、pH调节的无菌盐水中的微粒化悬浮液，或优选地等渗的、pH调节的无菌盐水中的溶液(具有或不具有如苯扎氯铵等防腐剂)。可替代地，对于眼科使用，可以将药学上可接受的组合物在如凡士林等软膏中调配。
本发明的药学上可接受的组合物还可以通过鼻用气溶胶或通过吸入施用。此类组合物根据药物调配领域中熟知的技术制备并且可以采用苯甲醇或其它合适的防腐剂、用于增强生物利用度的吸收促进剂、氟碳化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂制备成盐水中的溶液。
更优选地，本发明的药学上可接受的组合物被调配成用于口服施用。此类调配物可以与或不与食物一起施用。在一些实施例中，本发明的药学上可接受的组合物不与食物一起施用。在其它实施例中，本发明的药学上可接受的组合物与食物一起施用。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的组合物的本发明的化合物的量将根据被治疗的主体、特定的施用方式而有所不同。优选地，所提供的组合物应当配制为使得可以向接受这些组合物的患者施用0.01至100mg/kg体重/天之间的剂量的抑制剂。
还应当理解的是，用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于各种因素，包含所采用的具体化合物的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄率、药物组合和治疗医师的判断以及被治疗的特定疾病的严重程度。组合物中的本发明的化合物的量还将取决于组合物中的特定化合物。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
本文所描述的化合物和组合物通常可用于抑制一种或多种酶的激酶活性。在一些实施例中，由本发明的化合物和方法抑制的激酶是HPK1。
本发明所公开的化合物用于抑制酶HPK1的活性。HPK1是Ste20相关丝氨酸/苏氨酸激酶的生发中心激酶亚家族的成员。HPK1通过磷酸化和激活MAP3K蛋白，包含MEKK1、MLK3和TAK1充当MAP4K，从而激活MAPK-Jnk。
在一个实施例中，本文所公开的主题涉及一种抑制HPK1的方法，所述方法包括使HPK1与有效量的本发明的化合物或本文所描述的药物组合物接触。
在某些实施例中，本文所公开的主题涉及一种用于增强有需要的受试者的免疫应答的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的本发明的化合物或本文所描述的药物组合物。在此实施例的某些方面中，相对于施用化合物或药物组合物之前，受试者的T细胞具有增强的引发性、增强的激活、增强的迁移、增强的增殖、增强的存活和增强的溶细胞活性中的至少一种。在此实施例的某些方面中，相对于施用化合物或药物组合物之前，T细胞激活以γ-IFN+CD8 T细胞的升高的频率或T细胞的增强的IL-2或颗粒酶B产生水平为特征。在此实施例的某些方面中，相对于施用化合物或药物组合物之前，T细胞的数量升高。在此实施例的某些方面中，T细胞是抗原特异性CD8 T细胞。在此实施例的某些方面中，相对于施用化合物或药物组合物之前，受试者中的抗原呈递细胞的成熟和激活增强。在此实施例的某些方面中，抗原呈递细胞是树突状细胞。在此实施例的某些方面中，抗原呈递细胞的成熟以CD83+树突状细胞的增加的频率为特征。在此实施例的某些方面中，抗原呈递细胞的激活的以树突状细胞上的CD80和CD86的升高的表达为特征。
本发明所公开的化合物直接与HPK1结合并抑制其激酶活性。在一些实施例中，本发明所公开的化合物降低、抑制或以其它方式降低HPK1介导的SLP76和/或Gads的磷酸化。
本发明所公开的化合物可以是或者可以不是特异性HPK1拮抗剂。特异性HPK1拮抗剂降低HPK1的生物活性的量在统计学上大于所述拮抗剂对任何其它蛋白(例如，其它丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制作用。在某些实施例中，本发明所公开的化合物特异性地抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施例中的一些实施例中，HPK1拮抗剂对HPK1的IC50是HPK1拮抗剂对另一丝氨酸/苏氨酸激酶或其它类型激酶(例如，酪氨酸激酶)的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、0.1％、0.01％、0.001％或更低。
本发明所公开的化合物可以用于一种用于抑制HPK1的方法。此类方法包括使HPK1与有效量的本发明所公开的化合物接触。“接触”是指使化合物与分离的HPK1酶或表达HPK1的细胞(例如，T细胞、B细胞、树突状细胞)足够接近，使得化合物能够与HPK1的活性结合并抑制所述活性。化合物可以在体外或通过向受试者施用化合物在体内与HPK1接触。
本领域已知的测量HPK1激酶活性的任何方法都可以用于确定HPK1是否已被抑制，包含体外激酶测定；用对HPK1的磷酸化靶标，如SLP76和Gads具有特异性的抗体进行免疫印迹；或HPK1激酶活性的下游生物效应的测量，如将14-3-3蛋白募集到磷酸化的SLP7和Gads，将SLP76-Gads-14-3-3复合物从含LAT的微簇中释放，或T或B细胞激活。
本发明所公开的化合物可以用于治疗HPK1依赖性病症。如本文所使用的，“HPK1依赖性病症”是一种病理病状，其中HPK1活性对于病理病状的发生或维持是必要的。在一些实施例中，HPK1依赖性病症是癌症。
本发明所公开的化合物还用于增强有需要的受试者的免疫应答。此类方法包括施用有效量的本发明的化合物。
如本文所使用的，“增强免疫应答”是指对抗原的任何免疫原性应答的改进。对抗原的免疫原性应答的改进的非限制性实例包含树突状细胞的增强的成熟或迁移、T细胞(例如，CD4 T细胞、CD8 T细胞)的增强的激活、增强的T细胞(例如，CD4 T细胞、CD8 T细胞)增殖、增强的B细胞增殖、T细胞和/或B细胞的增加的存活率、抗原呈递细胞(例如，树突状细胞)的改进的抗原呈递、改进的抗原清除、T细胞的增加的细胞因子产生(例如，白细胞介素-2)、对前列腺素E2诱导的免疫抑制的抗性增加，以及增强的CD8 T细胞的引发和/或细胞溶解活性。
在一些实施例中，相对于施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者的CD8 T细胞具有增强的引发、激活、增殖和/或细胞溶解活性。在一些实施例中，CD8 T细胞引发以CD8 T细胞中升高的CD44表达和/或增强的细胞溶解活性为特征。在一些实施例中，CD8 T细胞激活以γ-IFN+CD8 T细胞的升高的频率为特征。在一些实施例中，CD8 T细胞是抗原特异性T细胞。
在一些实施例中，相对于施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者的抗原呈递细胞具有增强的成熟和激活。在一些实施例中，抗原呈递细胞是树突状细胞。在一些实施例中，抗原呈递细胞的成熟以CD83+树突状细胞的增加的频率为特征。在一些实施例中，抗原呈递细胞的激活以树突状细胞上的CD80和CD86的升高的表达为特征。
在一些实施例中，相对于施用式I或Ia的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物之前，受试者的细胞因子IL-10和/或趋化因子IL-8，鼠KC的人同源物的血清水平降低。
TCR的参与导致HPK1激活，其充当TCR诱导的AP-1应答通路的负调控因子。据信HPK1通过使Ser376处的SLP76(Di Bartolo等人,(2007)《实验医学杂志》204:681-691)和Thr254处的Gads进行磷酸化从而降低信号传导微簇的持久性来对T细胞激活进行负调控，这募集了与磷酸化的SLP76和Gads结合的14-3-3蛋白，从而从含LAT的微簇中释放SLP76-Gads-14-3-3复合物，导致T细胞功能障碍，包含无反应性和耗竭(Lasserre等人,(2011)《细胞生物学杂志》195(5):839-853)。
在一些实施例中，对受试者施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物增强了T细胞功能。
因此，本发明所公开的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物用于治疗T细胞功能障碍性病症。“T细胞功能障碍性病症”是指T细胞的特征在于对抗原刺激应答性降低的病症或病状。在特定实施例中，T细胞功能障碍性病症是与HPK1激酶活性的增加特异性相关的病症。在另一实施例中，T细胞功能障碍性病症是T细胞无反应性或分泌细胞因子、增殖或执行细胞溶解活性的能力降低的病症。在具体方面，应答性降低导致对表达免疫原的病原体或肿瘤的无效控制。以T细胞功能障碍为特征的T细胞功能障碍性病症的实例包含未解决的急性感染、慢性感染和肿瘤免疫。
因此，本发明所公开的化合物可以用于治疗期望增强免疫原性的病状，如增加用于治疗癌症的肿瘤免疫原性。
在免疫功能障碍的上下文中，术语“功能障碍”是指对抗原刺激的免疫应答性降低的状态。术语包含耗竭和/或无反应性两者的共同要素，其中可能发生抗原识别，但随后的免疫应答对控制感染或肿瘤生长无效。
如本文所使用的，术语“功能障碍”还包含对抗原识别的难治性或无应答性，具体地将抗原识别翻译成下游T细胞效应子功能，如增殖、细胞因子产生(例如，IL-2、γ-IFN)和/或靶细胞杀伤的能力受损。
术语“无反应性”是指对抗原刺激无应答性的状态，这是由于通过T细胞受体递送的信号不完整或不足(例如，在没有ras激活的情况下，细胞内+2增加)。在没有共刺激的情况下，在用抗原刺激时也可能导致T细胞无反应性，从而导致细胞即使在共刺激的背景下也难以被抗原随后激活。通过白细胞介素-2的存在通常可以改变无应答性状态。无反应T细胞不经历克隆扩增和/或获取效应子功能。
术语“耗竭”是指T细胞耗竭，这是一种T细胞功能障碍状态，由许多慢性感染和癌症期间发生的持续TCR信号传导引起。耗竭与无反应性的区别在于，耗竭不是通过不完整或有缺陷的信号传导，而是通过持续的信号传导产生的。耗竭由差的效应子功能、抑制性受体的持续表达和不同于功能性效应子或记忆T细胞的状态的转录状态定义。耗竭阻止了对感染和肿瘤的最佳控制。耗竭可以由外源性负调控通路(例如，免疫调控细胞因子)和细胞内源性负调控(共刺激)通路(PD-1、B7-H3、B7-H4等)两者引起。
“免疫原性”是指特定物质激发免疫应答的能力。肿瘤具有免疫原性，并且增强肿瘤免疫原性有助于通过免疫应答清除肿瘤细胞。
“增强T细胞功能”意指诱导、导致或刺激T细胞以具有持续或扩增的生物功能，或更新或重新激活耗竭或失活的T细胞。增强T细胞功能的实例包含：细胞因子(例如，γ-干扰素、IL-2、IL-12和TNFα)的分泌增加；增殖增加；相对于干预前的此类水平，抗原应答性(例如，病毒、病原体或肿瘤清除)增加；以及CD8 T细胞的效应子颗粒产生，如颗粒酶B增加。在一个实施例中，增强水平为至少50％，可替代地为60％、70％、80％、90％、100％、120％、150％、200％。测量这种增强的方式是本领域普通技术人员已知的。
“肿瘤免疫”是指肿瘤逃避免疫识别和清除的过程。因此，作为一种治疗概念，当这种逃避减弱时，肿瘤免疫就被“治疗”了，并且肿瘤被免疫系统识别和攻击。肿瘤识别的实例包含肿瘤结合、肿瘤缩小和肿瘤清除。
本公开提供了调节(例如，抑制)HPKl活性的方法，所述方法包括向患者施用本文所提供的化合物或其药学上可接受的盐。
在一方面，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物。
在本文所描述的方法中，将本发明的化合物或其药物组合物施用于患有癌症的受试者。
在某些实施例中，本文所公开的主题涉及一种用于治疗HPK1依赖性病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本发明的化合物或本文所描述的药物组合物。在此实施例的某些方面中，HPK1依赖性病症是癌症。在此实施例的某些方面中，癌症包括选自由以下组成的组的至少一种癌症：结直肠癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、恶性血液肿瘤和肾细胞癌。在此实施例的某些方面中，癌症具有升高的T细胞浸润水平。在此实施例的某些方面中，相对于施用化合物或组合物之前，受试者的癌症细胞选择性地具有升高的MHC I类抗原表达。
在一些实施例中，本发明提供药物组合物，所述药物组合物包括有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药以及药学上可接受的载体。
在某些方面，本发明提供了一种治疗细胞增殖性病症的方法，所述细胞增殖性病症包含癌症、良性乳头状瘤病、妊娠滋养细胞疾病和良性肿瘤性疾病，如皮肤乳头状瘤(疣)和生殖器乳头状瘤。
在一方面，本发明提供了一种治疗受试者的细胞增殖性病症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药。
在某些实施例中，细胞增殖性病症是癌症。
可使用本公开的化合物治疗的癌症的非限制性实例包含但不限于骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌(carcinoma of the endometrium)、子宫内膜癌(endometrial cancer)、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病(包含急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包含由石棉诱发的癌症)以及所述癌症的组合。
在一些实施例中，可使用本公开的化合物治疗的癌症包含但不限于实体瘤(例如，前列腺癌、结肠癌、食管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、子宫癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、肉瘤、膀胱癌等)、血液癌(例如，淋巴瘤、白血病，如急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)、DLBCL、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(包含复发或难治性NHL和复发性滤泡)、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)或多发性骨髓瘤)以及所述癌症的组合。
在某些实施例中，癌症是脑癌、白血病、皮肤癌、前列腺癌、甲状腺癌、结肠癌、肺癌或肉瘤。在另一实施例中，癌症选自由以下组成的组：神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、副神经节瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、急性髓系白血病、骨髓增生异常综合征、慢性髓系白血病、黑色素瘤、乳腺、前列腺、甲状腺、结肠、肺、中枢软骨肉瘤、中枢和骨膜软骨瘤、纤维肉瘤和胆管癌。
在某些实施例中，癌症选自脑癌和脊柱癌、头颈癌、白血病和血癌、皮肤癌、生殖系统癌、胃肠系统癌、肝癌和胆管癌、肾癌和膀胱癌、骨癌、肺癌、恶性间皮瘤、肉瘤、淋巴瘤、腺癌、甲状腺、心脏肿瘤、生殖细胞肿瘤、恶性神经内分泌(类癌)肿瘤、中线道癌以及未知原发癌(发现了转移性癌症但最初的癌症部位未知的癌症)。在特定实施例中，癌症存在于成年患者中；在另外的实施例中，癌症存在于小儿患者中。在特定实施例中，癌症是AIDS相关的。
在另外的实施例中，癌症选自脑癌和脊柱癌。在特定实施例中，癌症选自由以下组成的组：间变性星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤和感觉性神经母细胞瘤(嗅觉母细胞瘤)。在特定实施例中，脑癌选自由以下组成的组：星形细胞瘤(例如，毛细胞性星形细胞瘤、室管膜下巨细胞星形细胞瘤、弥漫性星形细胞瘤、多形性黄色星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、星形细胞瘤、巨细胞胶质母细胞瘤、胶质母细胞瘤、继发性胶质母细胞瘤、原发性成人胶质母细胞瘤和原发性小儿胶质母细胞瘤)、少突神经胶质瘤(例如，少突神经胶质瘤和间变性少突神经胶质瘤)、少突星形细胞瘤(例如，少突星形细胞瘤和间变性少突星形细胞瘤)、室管膜瘤(例如，黏液乳头状室管膜瘤和间变性室管膜瘤)、髓母细胞瘤、原始神经外胚层肿瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、非典型脑膜瘤、间变性脑膜瘤、垂体腺瘤、脑干胶质瘤、小脑星形细胞瘤、小脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤、视通路和下丘脑胶质瘤和原发性中枢神经系统淋巴瘤。在这些实施例的具体实例中，脑癌选自由以下组成的组：神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、副神经节瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤(sPNET)。
在具体实施例中，癌症选自头颈癌，包含鼻咽癌、鼻腔和副鼻窦癌、下咽癌、口腔癌(例如，鳞状细胞癌、淋巴瘤和肉瘤)、唇癌、口咽癌、唾液腺肿瘤、喉癌(例如，喉鳞状细胞癌、横纹肌肉瘤)，以及眼部癌症或眼癌。在特定实施例中，眼癌选自由眼内黑色素瘤和视网膜母细胞瘤组成的组。
在具体实施例中，癌症选自白血病和血液癌。在具体实施例中，癌症选自由以下组成的组：骨髓增殖性肿瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增殖性肿瘤、急性髓系白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性髓系白血病(CML)、骨髓增殖性肿瘤(MPN)、MPN后AML、MDS后AML、del(5q)-相关高风险MDS或AML、胚期慢性髓系白血病、血管免疫母细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞白血病、朗格汉斯细胞组织细胞增多症(Langerans cellhistiocytosis)、毛细胞白血病以及包含浆细胞瘤和多发性骨髓瘤的浆细胞肿瘤。本文所提及的白血病可以是急性的或慢性的。
在具体实施例中，癌症选自皮肤癌。在特定实施例中，皮肤癌选自由以下组成的组：黑色素瘤、鳞状细胞癌和基底细胞癌。
在具体实施例中，癌症选自生殖系统癌。在特定实施例中，癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、宫颈癌、阴道癌、卵巢癌、前列腺癌、阴茎癌和睾丸癌。在这些实施例的具体实例中，癌症是选自由导管癌和叶状肿瘤组成的组的乳腺癌。在这些实施例的具体实例中，乳腺癌可以是男性乳腺癌或女性乳腺癌。在这些实施例的具体实例中，癌症是选自由鳞状细胞癌和腺癌组成的组的宫颈癌。在这些实施例的具体实例中，癌症是选自由上皮癌组成的组的卵巢癌。
在具体实施例中，癌症选自胃肠系统癌。在特定实施例中，癌症选自由以下组成的组：食管癌、胃癌(gastric cancer)(也称为胃癌(stomach cancer))、胃肠类癌肿瘤、胰腺癌、胆囊癌、结直肠癌和肛门癌。在这些实施例的实例中，癌症选自由以下组成的组：食管鳞状细胞癌、食管腺癌、胃腺癌、胃肠类癌肿瘤、胃肠间质瘤、胃淋巴瘤、胃肠淋巴瘤、胰腺实体假乳头状瘤、胰母细胞瘤、胰岛细胞瘤、包含腺泡细胞癌和导管腺癌的胰腺癌、胆囊腺癌、结直肠腺癌和肛门鳞状细胞癌。
在具体实施例中，癌症选自肝癌和胆管癌。在特定实施例中，癌症是肝癌(肝细胞癌)。在特定实施例中，癌症是胆管癌(bileduct cancer)(胆管癌(cholangiocarcinoma))；在这些实施例的实例中，胆管癌选自由肝内胆管癌和肝外胆管癌组成的组。
在具体实施例中，癌症选自肾癌和膀胱癌。在特定实施例中，癌症是选自由以下组成的组的肾癌：肾细胞癌、威尔姆氏瘤(Wilms tumor)和移行细胞癌。在特定实施例中，癌症是选自由以下组成的组的膀胱癌：尿路上皮癌(移行细胞癌)、鳞状细胞癌和腺癌。
在具体实施例中，癌症选自骨癌。在特定实施例中，骨癌选自由以下组成的组：骨肉瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)和脊索瘤。
在具体实施例中，癌症选自肺癌。在特定实施例中，肺癌选自由以下组成的组：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、支气管肿瘤和胸膜肺母细胞瘤。
在具体实施例中，癌症选自恶性间皮瘤。在特定实施例中，癌症选自由上皮间皮瘤和肉瘤组成的组。
在具体实施例中，癌症选自肉瘤。在特定实施例中，肉瘤选自由以下组成的组：中枢软骨肉瘤、中枢和骨膜软骨瘤、纤维肉瘤、肌腱鞘透明细胞肉瘤和卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)。
在具体实施例中，癌症选自淋巴瘤。在特定实施例中，癌症选自由以下组成的组：霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)(例如，里德-斯泰伯格氏细胞(Reed-Sternbergcell))、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)(例如，弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、蕈样真菌病、塞扎里综合征(Sezary syndrome)、原发性中枢神经系统淋巴瘤)、皮肤T细胞淋巴瘤和原发性中枢神经系统淋巴瘤。
在具体实施例中，癌症选自腺癌。在特定实施例中，癌症选自由以下组成的组：肾上腺皮质癌、嗜铬细胞瘤、副神经节瘤、垂体瘤、胸腺瘤和胸腺癌。
在具体实施例中，癌症选自甲状腺癌。在特定实施例中，甲状腺癌选自由以下组成的组：甲状腺髓样癌、甲状腺乳头状癌和甲状腺滤泡状癌。
在具体实施例中，癌症选自生殖细胞肿瘤。在特定实施例中，癌症选自由以下组成的组：恶性颅外生殖细胞肿瘤和恶性性腺外生殖细胞肿瘤。在这些实施例的具体实例中，恶性性腺外生殖细胞肿瘤选自由非精原细胞瘤和精原细胞瘤组成的组。
在具体实施例中，癌症选自心脏肿瘤。在特定实施例中，心脏肿瘤选自由以下组成的组：恶性畸胎瘤、淋巴瘤、横纹肌肉瘤、血管肉瘤、软骨肉瘤、婴儿纤维肉瘤和滑膜肉瘤。
在具体实施例中，细胞增殖性病症选自良性乳头状瘤病、良性肿瘤性疾病和妊娠滋养细胞疾病。在具体实施例中，良性肿瘤性疾病选自皮肤乳头状瘤(疣)和生殖器乳头状瘤。在特定实施例中，妊娠滋养细胞疾病选自由以下组成的组：葡萄胎和妊娠滋养细胞肿瘤(例如，侵袭性葡萄胎、绒毛膜癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤和上皮样滋养细胞肿瘤)。
在一些实施例中，受试者患有黑色素瘤。黑色素瘤可以处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有结直肠癌。结直肠癌可以处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有非小细胞肺癌。非小细胞肺癌可以处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有胰腺癌。胰腺癌可以处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有血液恶性肿瘤。血液恶性肿瘤可以处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有卵巢癌。卵巢癌可以处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有乳腺癌。乳腺癌可以处于早期或晚期。在一些实施例中，受试者患有肾细胞癌。肾细胞癌可以处于早期或晚期。在一些实施例中，癌症具有升高水平的T细胞浸润。
在一些实施例中，可用本公开的化合物治疗的癌症包含黑色素瘤(例如，转移性恶性黑色素瘤)、肾癌(例如，透明细胞癌)、前列腺癌(例如，激素难治性前列腺腺癌)、乳腺癌、三阴性乳腺癌、结肠癌和肺癌(例如，非小细胞肺癌和小细胞肺癌)。另外地，本公开包含其生长可以使用本公开的化合物而得以抑制的难治性或复发性恶性肿瘤。
此在一些实施例中，可使用本公开的化合物治疗的疾病和适应症包含但不限于血液癌、肉瘤、肺癌、胃肠道癌、泌尿生殖道癌、肝癌、骨癌、神经系统癌、妇科癌和皮肤癌。
示例性血液癌包含淋巴瘤和白血病，如急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(包含复发性或难治性NHL和复发性滤泡性NHL)、霍奇金淋巴瘤、骨髓增殖性疾病(例如，原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症(PV)和原发性血小板增多症(ET))、骨髓发育不良综合征(MDS)、T细胞急性淋巴细胞性淋巴瘤(T-ALL)、多发性骨髓瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、毛细胞淋巴瘤、慢性骨髓性淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)。
示例性肉瘤包含软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、粘液瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、纤维瘤、脂肪瘤、错构瘤和畸胎瘤。
示例性肺癌包含非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、支气管癌(鳞状细胞癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、软骨瘤性错构瘤和间皮瘤。
示例性胃肠道癌包含食道癌(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃癌(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺癌(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌、舒血管肠肽瘤)、小肠癌(腺癌、淋巴瘤、类癌、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠癌(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌癌)和结直肠癌。
示例性泌尿生殖道癌包含肾癌(腺癌、威尔姆氏瘤[肾母细胞瘤])、膀胱和尿道癌(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺癌(腺癌、肉瘤)和睾丸癌(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)。
示例性肝癌包含肝癌(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤和血管瘤。
示例性骨癌包含例如骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤。
示例性神经系统癌包含头骨癌(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑脊膜癌(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质过多)、脑癌(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤(松果体瘤)、胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、少突胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)和脊髓癌(神经纤维瘤、脑膜瘤、胶质瘤、肉瘤)以及神经母细胞瘤和埃尔米特-杜多斯病(Lhermitte-Duclos disease)。
示范性妇科癌包含子宫癌(子宫内膜癌)、宫颈癌(宫颈癌、前肿瘤子宫颈非典型增生)、卵巢癌(卵巢癌(浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类的癌症)、粒膜细胞肿瘤、塞-莱二氏细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、阴门癌(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道癌(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)和输卵管(癌)。
示例性皮肤癌包含黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、梅克尔细胞皮肤癌(Merkel cell skin cancer)、痣发育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤和痣发育不良痣。在一些实施例中，可使用本公开的化合物治疗的疾病和适应症包含但不限于镰状细胞病(例如，镰状细胞贫血)、三阴性乳腺癌(TNBC)、骨髓增生异常综合征、睾丸癌、胆管癌、食管癌和尿路上皮癌。
示例性头颈癌包含胶质母细胞瘤、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、淋巴肉瘤、骨肉瘤、鳞状细胞癌、腺癌、口腔癌、喉癌、鼻咽癌、鼻癌和副鼻窦癌、甲状腺癌和甲状旁腺癌。
在一些实施例中，HPKl抑制剂可以用于治疗产生PGE2(例如，Cox-2过表达的肿瘤)和/或腺苷(CD73和CD39过表达的肿瘤)的肿瘤。Cox-2的过表达已在许多肿瘤中被检测到，如结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌和肺癌，在这些癌症中，其与不良预后相关。据报道，COX-2在血液学癌症模型，如RAJI(伯基特氏淋巴瘤)和U937(急性原发性白血病)以及患者的母细胞中过表达。CD73在各种人癌症中上调，包含结肠癌、肺癌、胰腺癌和卵巢癌。重要的是，在乳腺癌中，较高的CD73表达水平与肿瘤新生血管形成、侵入性和转移以及较短的患者存活时间相关。
在一些实施例中，本发明的化合物可用于预防本文所提及的疾病中的任何疾病或降低患上所述疾病的风险；例如，预防可能被预先诊断出疾病、病状或病症但尚未经历或显示出疾病的病理学或症状学的个体的疾病、病状或病症或降低患上所述疾病、病状或病症的风险。
本发明所公开的化合物可以以本领域已知的任何合适的方式施用。在一些实施例中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物通过静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、经皮、腹膜内、眶内、植入、吸入、鞘内、心室内、瘤内或鼻内施用。
在一些实施例中，HPK1拮抗剂是连续施用的。在其它实施例中，HPK1拮抗剂是间歇地施用的。此外，用有效量的HPK1拮抗剂治疗受试者可以包含单次治疗或者可以包含一系列治疗。
应当理解，活性化合物的适当剂量取决于在普通技术医师或兽医的知识范围内的许多因素。活性化合物的剂量将变化，例如取决于受试者的年龄、体重、总体健康、性别和饮食、施用时间、施用途径、排泄率和任何药物组合。
还应理解，用于治疗的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物或衍生物的有效剂量可在特定治疗过程内增加或减少。剂量的变化可以由诊断测定的结果产生并变得显而易见。
在一些实施例中，HPK1拮抗剂以介于约0.001μg/kg与约1000mg/kg之间的剂量施用于受试者，包含但不限于约0.001μg/kg、0.01μg/kg、0.05μg/kg、0.1μg/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、100μg/kg、250μg/kg、500μg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg。
在本文所描述的方法中，方法可以进一步包括向受试者施用化疗剂。在此实施例的某些方面中，化疗剂与化合物或组合物同时施用于受试者。在此实施例的某些方面中，化疗剂在施用化合物或组合物之前施用于受试者。在此实施例的某些方面中，化疗剂在施用化合物或组合物之后施用于受试者。
如本文所使用的，术语“治疗(treatment、treat和treating)”是指逆转、缓解、延迟如本文所描述的疾病或病症或其一种或多种症状的发作或抑制其进展。在一些实施例中，可以在产生一种或多种症状后施用治疗。在其它实施例中，可以在不存在症状的情况下施用治疗。例如，可以在症状发作之前(例如，根据症状历史和/或根据遗传或其它易感因素)向易感个体施用治疗。还可以在症状消退后继续治疗，例如以预防或延缓其复发。
术语“施用(administration)”或“施用(administering)”包含将化合物引入到受试者中以执行其预期功能的途径。可以使用的施用途径的实例包含注射(皮下、静脉内、胃肠外、腹膜内、鞘内)、局部、口服、吸入、直肠和透皮。
术语“有效量”包含以剂量计并且持续所需的时间段可有效地实现所期望的结果的量。化合物的有效量可以根据如受试者的疾病状态、年龄和体重等因素以及化合物在受试者中引发期望的应答的能力而变化。剂量方案可以调整以提供最佳的治疗应答。
如本文所使用的，短语“全身施用(systemic administration和administeredsystemically)”和“外周施用(peripheral administration和administeredperipherally)”意指施用化合物、药物或其它材料，使得其进入患者的系统，并且因此经历代谢和其它类似过程。
短语“治疗有效量”意指本发明的化合物(i)治疗或预防特定疾病、病状或病症，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病状或病症的一种或多种症状，或者(iii)预防或延迟本文描述的特定疾病、病状或病症的一种或多种症状的发作的量。在癌症的情况下，治疗有效量的药物可以减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制(即，在某种程度上减慢并且优选地停止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制(即，在某种程度上减慢并且优选地停止)肿瘤转移；在某种程度上抑制肿瘤生长；和/或在某种程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在药物可以阻止生长和/或杀死现有癌细胞的程度上，药物可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。对于癌症疗法，功效可以例如通过评估疾病进展时间(TTP)和/或确定应答率(RR)来测量。
术语“受试者”是指如哺乳动物等动物，包含但不限于灵长类动物(例如，人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在某些实施例中，受试者是人。
组合疗法
根据要治疗的特定病状或疾病，通常为了治疗所述病症而施用的另外的治疗剂可以与本发明的化合物和组合物组合施用。如本文所使用的，通常为了治疗特定疾病或病状而施用的另外治疗剂被称为“适合于所治疗的疾病或病状”。
在某些实施例中，所提供组合或其组合物与另一种治疗剂组合施用。
还可以与本发明的组合结合的药剂的实例包含但不限于：用于阿尔茨海默氏病(Alzheimer's Disease)的治疗，如和/>用于HIV的治疗，如利托那韦(ritonavir)；用于帕金森氏病(Parkinson's Disease)的治疗，如L-DOPA/卡比多巴(carbidopa)、恩他卡朋(entacapone)、罗匹尼罗(ropinrole)、普拉克索(pramipexole)、溴隐亭(bromocriptine)、培高利特(pergolide)、三己芬迪(trihexephendyl)和金刚胺；用于治疗多发性硬化(MS)的药剂，如β干扰素(例如，/>和/>)、/>和米托蒽醌(mitoxantrone)；用于哮喘的治疗，如沙丁胺醇和/>用于治疗精神分裂症的药剂，如再普乐(zyprexa)、理斯必妥(risperdal)、思乐康(seroquel)和氟哌啶醇(haloperidol)；消炎剂，如皮质类固醇、TNF阻断剂、IL-1RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺胺吡啶；免疫调节和免疫抑制剂，如环孢菌素、他克莫司(tacrolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、麦考酚酸酯(mycophenolate mofetil)、干扰素、皮质类固醇、环磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神经营养因子，如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥剂、离子通道阻断剂、利鲁唑(riluzole)和抗帕金森氏病剂；用于治疗心血管疾病的药剂，如β-阻断剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙离子通道阻断剂和他汀类药物(statins)；用于治疗肝病的药剂，如皮质类固醇、消胆胺、干扰素和抗病毒剂；用于治疗血液病症的药剂，如皮质类固醇、抗白血病剂和生长因子；延长或改善药代动力学的药剂，如细胞色素P450抑制剂(即，代谢分解的抑制剂)和CYP3A4抑制剂(例如，酮康唑(ketokenozole)和利托那韦)；以及用于治疗免疫缺陷病症的药剂，如γ球蛋白。
在某些实施例中，本发明的组合疗法或其药学上可接受的组合物与单克隆抗体或siRNA治疗剂组合施用。
这些另外的药剂可以作为多剂量方案的一部分与所提供组合疗法分开施用。可替代地，那些药剂可以是单个剂型的一部分，其与本发明的化合物一起混合在单个组合物中。如果作为多剂量方案的一部分施用，则所述两种活性剂可以同时、顺序地或在彼此相隔一段时间(通常彼此相隔五小时)内递送。
如本文所使用的，术语“组合”、“组合的”和相关术语是指根据本发明同时或顺序施用治疗剂。例如，可以将本发明的组合与另一种治疗剂以单独的单位剂型同时或者顺序地施用或者以单个单位剂型一起施用。
存在于本发明的组合物中的另外的治疗剂的量将不超过通常在包括所述治疗剂作为唯一活性剂的组合物中施用的量。优选地，本发明公开的组合物中另外的治疗剂的量将在包括所述药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中通常存在的量的约50％到100％的范围内。
在一个实施例中，本发明提供了一种包括式I化合物和一种或多种另外的治疗剂的组合物。治疗剂可以与式I化合物一起施用或可以在施用式I化合物之前或之后施用。下文进一步详细地描述了适合的治疗剂。在某些实施例中，可以在治疗剂之前至多5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时或18小时施用式I化合物。在其它实施例中，可以在治疗剂之后至多5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时或18小时施用式I化合物。
在另一个实施例中，本发明提供了一种通过向有需要的患者施用式I化合物和一种或多种另外的治疗剂来治疗炎症性疾病、病症或病状的方法。此类另外的治疗剂可以是小分子或重组生物药剂并且包含例如对乙酰氨基酚、非甾体消炎药(NSAIDS)(如阿司匹林、布洛芬、萘普生、依托度酸和塞来昔布)、秋水仙碱/>皮质类固醇(如泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、氢化可的松等)、丙磺舒、别嘌呤醇、非布索坦/>柳氮磺吡啶/>抗疟疾药(如羟基氯喹/>和氯喹/>甲氨蝶呤/>)、金盐(如硫代葡萄糖金/>硫代苹果酸金/>和金诺芬/>)、D-青霉胺(/> )、硫唑嘌呤/>环磷酰胺/>苯丁酸氮芥/>环孢菌素/>来氟米特/>和“抗TNF”药剂(如依那西普/>英夫利昔单抗/>戈利木单抗赛妥珠单抗聚乙二醇/>和阿达木单抗/>)、“抗IL-1”药剂(如阿那白滞素/>和利纳西普/>)、卡那单抗/>抗Jak抑制剂(如托法替尼)、抗体(如利妥昔单抗/>)、“抗T细胞”药剂(如阿巴西普/>)、“抗IL-6”药剂(如托珠单抗/>)、双氯芬酸、可的松、透明质酸(/>或)、单克隆抗体(如他尼珠)、抗凝剂(如肝素)(/>或/>)和华法林/>止泻药(如地芬诺酯/>和洛哌丁胺/>)、胆汁酸结合剂(如消胆胺)、阿洛司琼/>鲁比前列酮/>泻药(如镁乳剂、聚乙二醇/> 和/>)、抗胆碱能药或抗痉挛药(如双环胺 )、β-2激动剂(如沙丁胺醇(/>HFA、/>HFA)、左旋沙丁胺醇/>奥西那林/>醋酸吡布特罗/>硫酸特布他林昔萘酸沙美特罗/>和福莫特罗/>)、抗胆碱能药(如异丙托溴铵/>和噻托溴铵/>)、吸入性皮质类固醇(如二丙酸倍氯米松(和/>)、曲安奈德/>莫米松/>布地奈德/>和氟尼缩松/>色甘酸钠)、甲基黄嘌呤(如茶碱(Theo/>Slo-/> Theo-/>)和氨茶碱)、IgE抗体(如奥马珠单抗/>)、核苷逆转录酶抑制剂(如齐多夫定阿巴卡韦/>阿巴卡韦/拉米夫定/>阿巴卡韦/拉米夫定/齐多夫定/>地达诺新/>恩曲他滨/>拉米夫定/>拉米夫定/齐多夫定/>司他夫定/>和扎西他滨/>)、非核苷类逆转录酶抑制剂(如地拉夫定/>依法韦仑/>奈韦拉平/>和依曲韦林/>)、核苷酸逆转录酶抑制剂(如替诺福韦/>)、蛋白酶抑制剂(如氨普那韦/>阿扎那韦/>达鲁那韦/>膦沙那韦茚地那韦/>洛匹那韦和利托那韦/>奈非那韦利托那韦/>沙奎那韦(/>或/>)和替拉那韦)、进入抑制剂(如恩夫韦肽/>和马拉韦罗/>)、整合酶抑制剂(如雷特格韦/>阿霉素/>长春新碱/>硼替佐米/>和与来那度胺/>组合的地塞米松/>)或其任何一种或多种组合。
在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和一种或多种选自以下的另外的治疗剂：非甾体消炎药(NSAIDS)(如阿司匹林、布洛芬、萘普生、依托度酸和塞来昔布)、皮质类固醇(如泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、氢化可的松等)、柳氮磺吡啶/>抗疟疾药(如羟基氯喹/>和氯喹/>甲氨蝶呤/>)、金盐(如硫代葡萄糖金/>硫代苹果酸金/>和金诺芬/>)、D-青霉胺(或/>)、硫唑嘌呤/>环磷酰胺/>苯丁酸氮芥环孢菌素/>来氟米特/>和“抗TNF”药剂(如依那西普英夫利昔单抗/>戈利木单抗/>赛妥珠单抗聚乙二醇和阿达木单抗/>)、“抗IL-1”药剂(如阿那白滞素/>和利纳西普/>)、抗体(如利妥昔单抗/>)、“抗T细胞”药剂(如阿巴西普)以及“抗IL-6”药剂(如托珠单抗/>)。
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗骨关节炎的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和一种或多种选自以下的另外的治疗剂：对乙酰氨基酚、非甾体消炎药(NSAIDS)(如阿司匹林、布洛芬、萘普生、依托度酸和塞来昔布)、双氯芬酸、可的松、透明质酸(/>或/>)以及单克隆抗体(如他尼珠)。
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗皮肤红斑狼疮或系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和一种或多种选自以下的另外的治疗剂：对乙酰氨基酚、非甾体消炎药(NSAIDS)(如阿司匹林、布洛芬、萘普生、依托度酸和塞来昔布)、皮质类固醇(如泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、氢化可的松等)、抗疟疾药(如羟基氯喹/>和氯喹/>环磷酰胺/>甲氨蝶呤)、硫唑嘌呤/>和抗凝剂(如肝素)(/>或/>)和华法林/>
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗克罗恩氏病、溃疡性结肠炎或炎症性肠病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和一种或多种选自以下的另外的治疗剂：氨水杨酸柳氮磺吡啶/>止泻药(如地芬诺酯/>和洛哌丁胺/>)、胆汁酸结合剂(如消胆胺)、阿洛司琼/>鲁比前列酮泻药(如镁乳剂、聚乙二醇/>和/>)以及抗胆碱能药或抗痉挛药(如双环胺(/>))、抗TNF疗法、类固醇和抗生素(如甲硝哒唑或环丙沙星)。
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗哮喘的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和一种或多种选自以下的另外的治疗剂：β-2激动剂(如沙丁胺醇(/>HFA、/>HFA)、左旋沙丁胺醇/>奥西那林醋酸吡布特罗/>硫酸特布他林/>昔萘酸沙美特罗和福莫特罗/>)、抗胆碱能药(如异丙托溴铵/>和噻托溴铵/>)、吸入性皮质类固醇(如泼尼松、泼尼松龙、二丙酸倍氯米松(和/>)、曲安奈德/>莫米松/>布地奈德/>和氟尼缩松/> 和/>色甘酸钠)、甲基黄嘌呤(如茶碱(Theo-/>Slo-/>Theo-/>)和氨茶碱)以及IgE抗体(如奥马珠单抗/>)。
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗COPD的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和一种或多种选自以下的另外的治疗剂：β-2激动剂，如沙丁胺醇(HFA、/>HFA)、左旋沙丁胺醇/>奥西那林/>醋酸吡布特罗/>硫酸特布他林/>羟萘甲酸沙美特罗/>和福莫特罗/>抗胆碱剂，如异丙托溴铵/>和噻托溴铵/>甲基黄嘌呤，如茶碱(Theo-/>Slo-/>Theo-/>)和胺茶碱；吸入皮质类固醇，如强的松、泼尼松龙、二丙酸倍氯米松(/> 和/>)、曲安奈德莫米松/>布地奈德/>氟尼缩松和/>
在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗血液系统恶性肿瘤的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和一种或多种选自以下的另外的治疗剂：利妥昔单抗环磷酰胺/>阿霉素/>长春新碱泼尼松、刺猬信号传导抑制剂、BTK抑制剂、JAK/泛JAK抑制剂、PI3K抑制剂、SYK抑制剂和其组合。
在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗实体瘤的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和一种或多种选自以下的另外的治疗剂：利妥昔单抗环磷酰胺/>阿霉素/>春新碱泼尼松、刺猬信号传导抑制剂、BTK抑制剂、JAK/泛JAK抑制剂、PI3K抑制剂、SYK抑制剂和其组合。
在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗血液系统恶性肿瘤的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和刺猬(Hh)信号传导途径抑制剂。在一些实施例中，血液系统恶性肿瘤是DLBCL(Ramirez等人,“定义促进在弥漫性大B细胞淋巴瘤中激活刺猬信号传导的致病因素(Defining causative factors contributing in the activation ofhedgehog signaling in diffuse large B-cell lymphoma)”《白血病研究(Leuk.Res.)》(2012)，所述文献于7月17日在线发布并通过全文引用的方式并入本文)。
在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和选自以下的一种或多种另外的治疗剂：利妥昔单抗环磷酰胺/>多柔比星/>长春新碱/>泼尼松、刺猬信号传导抑制剂和其组合。
在另一个实施例中,本发明提供了一种治疗多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和选自以下的一种或多种另外的治疗剂与来那度胺(lenalidomide)的组合：硼替佐米(bortezomib)/>和地塞米松(dexamethasone)/>刺猬信号传导抑制剂、BTK抑制剂、JAK/泛JAK抑制剂、TYK2抑制剂、PI3K抑制剂、SYK抑制剂。
在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗疾病或减轻其严重程度的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和BTK抑制剂，其中所述疾病选自炎症性肠病、关节炎、皮肤红斑狼疮、系统性红斑狼疮(SLE)、血管炎、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、骨关节炎、史迪尔氏病(Still's disease)、幼年型关节炎、糖尿病、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、奥德氏甲状腺炎(Ord's thyroiditis)、格里夫氏病(Graves'disease)、自身免疫性甲状腺炎、舍格伦氏综合征、多发性硬化、系统性硬化、神经莱姆病、格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome)、急性播散性脑脊髓炎、爱迪生氏病(Addison's disease)、眼阵挛-肌阵挛综合征、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、再生障碍性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性胃炎、恶性贫血、乳糜泻、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture's syndrome)、特发性血小板减少性紫癜、视神经炎、硬皮病、原发性胆汁性肝硬化、瑞特氏综合征(Reiter's syndrome)、高安氏动脉炎(Takayasu's arteritis)、颞动脉炎、温自身免疫性溶血性贫血、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、银屑病、普秃、贝赛特氏病、慢性疲劳、自主神经紊乱、膜性肾小球肾病、子宫内膜异位症、间质性膀胱炎、寻常天疱疮、大疱性类天疱疮、神经性肌强直、硬皮病、外阴痛、过度增殖性疾病、移植器官或组织排斥、获得性免疫缺陷综合征(AIDS，也称为HIV)、1型糖尿病、移植物抗宿主病、移植、输血、过敏反应、过敏(例如，对植物花粉、乳胶、药物、食物、昆虫毒物、动物毛发、动物皮屑、尘螨或蟑螂萼过敏)、I型超敏反应、过敏性结膜炎、过敏性鼻炎和异位性皮炎、哮喘、阑尾炎、异位性皮肤炎、哮喘、过敏、睑缘炎、毛细支气管炎、支气管炎、粘液囊炎、宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、慢性移植物排斥、结肠炎、结膜炎、克罗恩氏病、膀胱炎、泪腺炎、皮炎、皮肌炎、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维织炎、胃炎、胃肠炎、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonleinpurpura)、肝炎、化脓性汗腺炎、免疫球蛋白A肾病、间质性肺病、喉炎、乳腺炎、脑膜炎、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、卵巢炎、睾丸炎、骨炎、耳炎、胰腺炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、静脉炎、肺炎、肺部感染、多肌炎、直肠炎、前列腺炎、肾盂肾炎、鼻炎、输卵管炎、鼻窦炎、口腔炎、滑膜炎、肌腱炎、扁桃体炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、阴道炎、血管炎或外阴炎、B细胞增殖性病症例如弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病、B细胞幼淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤(也称为浆细胞骨髓瘤)、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤/白血病或淋巴瘤样肉芽肿病、乳腺癌、前列腺癌或肥大细胞癌(例如，肥大细胞瘤、肥大细胞白血病、肥大细胞肉瘤、系统性肥大细胞增多症)、骨癌、结肠直肠癌、胰腺癌、骨和关节疾病，包含但不限于类风湿性关节炎、血清阴性脊椎关节病(包含强直性脊柱炎、银屑病关节炎和瑞特氏病)、贝赛特氏病、干燥综合征、系统性硬化、骨质疏松症、骨癌、骨转移、血栓栓塞性病症(例如，心肌梗塞、心绞痛、血管成形术后再闭塞、血管成形术后再狭窄、主动脉冠状动脉旁路术后再闭塞、主动脉冠状动脉旁路术后再狭窄、中风、短暂性缺血、外周动脉闭塞性病症、肺栓塞、深静脉血栓形成)、炎性骨盆疾病、尿道炎、皮肤晒伤、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、胃炎、肠炎、皮炎、牙龈炎、阑尾炎、胰腺炎、胆囊炎、无丙种球蛋白血症、银屑病、过敏、克罗恩氏病、肠易激综合征、溃疡性结肠炎、舍格伦氏综合征、组织移植物排斥、移植器官超急性排斥、哮喘、过敏性鼻炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、自身免疫性多腺体疾病(也称为自身免疫性多腺体综合征)、自身免疫性脱发、恶性贫血、肾小球肾炎、皮肌炎、多发性硬化、硬皮病、血管炎、自身免疫性溶血性和血小板减少症、肺出血肾炎综合征、动脉粥样硬化、爱迪生氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、糖尿病、败血性休克、皮肤红斑狼疮、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、幼年型关节炎、骨关节炎、慢性特发性血小板减少性紫癜、沃登斯通巨球蛋白血症、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、异位性皮肤炎、退行性关节疾病、白癜风、自身免疫性垂体功能减退、格林-巴利综合征、贝赛特氏病、硬皮病、蕈样肉芽肿、急性炎症反应(如急性呼吸窘迫综合征和缺血/再灌注损伤)和格里夫氏病。
在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗疾病或减轻其严重程度的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和PI3K抑制剂，其中所述疾病选自癌症、神经退行性病症、血管生成性病症、病毒性疾病、自身免疫性疾病、炎症性病症、激素相关疾病、与器官移植相关的病状、免疫缺陷性病症、破坏性骨病症、增殖性病症、感染性疾病、与细胞死亡相关的病状、凝血酶诱导的血小板聚集、慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、肝病、涉及T细胞激活的病理免疫病状、心血管病症和CNS病症。
在另一个实施例中，本发明提供了一种治疗疾病或减轻其严重程度的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和PI3K抑制剂，其中所述疾病选自脑、肾(例如，肾细胞癌(RCC))、肝、肾上腺、膀胱、乳腺、胃、胃肿瘤、卵巢、结肠、直肠、前列腺、胰腺、肺、阴道、子宫内膜、宫颈、睾丸、泌尿生殖道、食道、喉、皮肤、骨或甲状腺的良性或恶性肿瘤、癌或实体瘤、肉瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、多发性骨髓瘤或胃肠癌，尤其是结肠癌或结肠直肠腺瘤或颈部和头部肿瘤、表皮过度增殖、银屑病、前列腺增生、瘤形成、上皮性瘤形成、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、淋巴瘤(包含例如非霍奇金淋巴瘤(NHL)和霍奇金淋巴瘤(还称为霍奇金病或霍奇金病))、乳腺癌、滤泡癌、未分化癌、乳突癌、精原细胞瘤、黑色素瘤或白血病，疾病包括考登综合征(Cowden syndrome)、埃尔米特-杜多斯病(Lhermitte-Dudos disease)和版纳扬-佐纳综合征(Bannayan-Zonanasyndrome)、或PI3K/PKB途径异常激活的疾病、任何类型或起源的哮喘，包含内源性(非过敏性)哮喘和外源性(过敏性)哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、支气管炎性哮喘、运动诱发性哮喘、职业性哮喘和细菌感染后诱发的哮喘、急性肺损伤(ALI)、成人/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、慢性阻塞性肺部、气道或肺病(COPD、COAD或COLD)，包含慢性支气管炎或与其相关的呼吸困难、肺气肿以及由其它药物治疗，特别是其它药物吸入性治疗引起的气道高敏性恶化、任何类型或起源的支气管炎，包含但不限于急性、花生仁吸入性、卡他性、格鲁布性、慢性或结核性支气管炎、任何类型或起源的尘肺病(炎性(通常是职业性)肺疾病，经常伴有气道阻塞，无论是慢性的还是急性的，并且由反复吸入灰尘引起)，包含例如铝尘肺、煤肺病、石棉肺、石末肺、睫毛脱落、铁尘肺、矽肺、烟尘肺和棉尘肺、洛弗勒综合征(Loffler'ssyndrome)、嗜酸性粒细胞肺炎、寄生虫(特别是后生动物)感染(包含热带嗜酸性粒细胞增多症)、支气管肺性曲霉病、结节性多动脉炎(包含丘尔-斯特劳斯综合征(Churg-Strausssyndrome))、嗜酸性肉芽肿和由药物反应引起的影响气道的嗜酸性粒细胞相关病状、银屑病、接触性皮炎、异位性皮肤炎、斑秃、多形性红斑、疱疹样皮炎、硬皮病、白癜风、超敏性血管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、红斑狼疮、天疱疹、后天性大疱性表皮松解、结膜炎、干燥性角膜结膜炎和春季结膜炎、影响鼻部的疾病(包含过敏性鼻炎)以及涉及自身免疫反应或具有自身免疫成分或病因的炎性疾病，包含自身免疫血液系统病状(例如，溶血性贫血、再生障碍性贫血、纯红细胞再生障碍贫血和特发性血小板减少症)、皮肤红斑狼疮、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、多软骨炎、硬皮病、韦格内肉芽肿(Wegener granulamatosis)、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、史蒂文-约翰逊综合征(Steven-Johnson syndrome)、特发性脂肪泻、自身免疫性炎性肠病(例如，溃疡性结肠炎和克罗恩病)、内分泌眼科疾病、格里夫氏病、结节病、牙槽炎、慢性过敏性肺炎、多发性硬化、原发性胆汁性肝硬化、葡萄膜炎(前葡萄膜和后葡萄膜)、干燥性角膜结膜炎和春季角膜结膜炎、间质性肺纤维化、银屑病关节炎和肾小球肾炎(伴和不伴肾病综合征)，例如包含特发性肾病综合征或微小病变肾病、再狭窄、心脏肥大、动脉粥样硬化、心肌梗死、缺血性中风和充血性心力衰竭、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病(Huntington's disease)和脑缺血以及由创伤性损伤、谷氨酸盐神经毒性和缺氧引起的神经退行性疾病。
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗疾病或减轻其严重程度的方法，所述方法包括向有需要的患者施用式I化合物和Bcl-2抑制剂，其中所述疾病是炎症性病症、自身免疫性病症、增殖性病症、内分泌病症、神经系统病症或与移植相关的病症。在一些实施例中，所述病症是增殖性病症、狼疮或狼疮肾炎。在一些实施例中，所述增殖性病症是慢性淋巴细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、霍奇金氏病、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、骨髓增生异常综合征、淋巴瘤、血液系统赘瘤或实体瘤。
在一些实施例中，本发明提供了一种治疗疾病或减轻其严重程度的方法，所述方法包括向有需要的患者施用HPK1结合化合物。在一些实施例中，所述疾病是自身免疫性病症、炎症性病症、增殖性病症、内分泌病症、神经系统病症或与移植相关的病症。在一些实施例中，HPK1结合化合物是式I化合物。
根据本发明的方法，可以使用有效治疗以下或减轻其严重程度的任何量和任何施用途径来施用化合物和组合物：自身免疫性病症、炎症性病症、增殖性病症、内分泌病症、神经系统病症或与移植相关的病症。需要的精确量将因受试者根据受试者的物种、年龄和总体病状、感染的严重程度、特定药剂、其施用方式等而有所不同。本发明化合物优选地以剂量单位形式调配以便于施用和剂量均一性。如本文所使用的，表达“剂量单位形式”是指适合于待治疗患者的物理上离散的药剂单位。然而，应理解的是，本发明的化合物和组合物的总日用量将在合理的医学判断的范围内由主治医师决定。任何特定患者或生物体的具体有效剂量水平将取决于多种因素，包含所治疗的病症和病症的严重程度；所采用的特定化合物的活性；所采用的特定组合物；患者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；所采用的特定化合物的施用时间、施用途径和排泄率；治疗的持续时间；与所采用的特定化合物组合或同时使用的药物以及医学领域熟知的类似因素。如本文所使用的，术语“患者”意指动物，优选地哺乳动物并且最优选地人。
本发明的药学上可接受的组合物可以根据所治疗的感染的严重程度通过口服、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹腔内、局部(如通过粉末、软膏或滴剂)、经颊、以口腔喷雾或鼻用喷雾的形式等向人和其它动物施用。在某些实施例中，本发明的化合物可以以约0.01mg/kg到约50mg/kg并且优选地约1mg/kg到约25mg/kg受试者体重/天的剂量水平每天一次或多次口服或肠胃外施用，以获得期望的治疗效果。
用于口服施用的液体剂型包含但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物以外，液体剂型还可以含有本领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(具体地，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨醇酐的脂肪酸酯和其混合物。除了惰性稀释剂，口服组合物还可以包含佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和香剂。
可注射制剂(例如，无菌可注射水性或油性悬浮液)可以根据已知技术、使用适合的分散剂或湿润剂和悬浮剂来调配。无菌可注射制剂还可以是肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如像1,3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的媒剂和溶剂中有水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可以采用任何温和的不挥发性油，包含合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，使用脂肪酸如油酸来制备可注射物。
可注射调配物可以例如通过滤过细菌截留过滤器，或通过并入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述无菌固体组合物可以在使用前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中。
为了延长本发明的化合物的效果，通常期望减缓来自皮下或肌内注射的化合物的吸收。这可以通过使用水溶性差的晶体或非晶形材料的液体悬浮液来实现。由此，化合物的吸收速率取决于其溶解速率，所述溶解速率进而可以取决于晶体大小和晶型。可替代地，通过将化合物溶解或悬浮在油性媒剂中来实现肠胃外施用的化合物形式的延迟吸收。通过在可生物降解的聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微囊基质来制备可注射储库型(depot)形式。根据化合物与聚合物的比率以及所采用的特定聚合物的性质，可以对化合物释放速率进行控制。其它可生物降解的聚合物的实例包含聚(原酸酯)和聚(酸酐)。储库型可注射调配物还通过将化合物截留在与人体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。
用于直肠或阴道施用的组合物优选地是栓剂，其可以通过将本发明的化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体(如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)相混合来制备，所述赋形剂或载体在室温下为固体但在体温下为液体并且因此可在直肠或阴道腔中融化并释放活性化合物。
用于口服施用的固体剂型包含胶囊、片剂、丸剂、粉末和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物与以下混合：至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体，如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或增充剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇以及硅酸；b)粘结剂，例如，羧甲纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、以及阿拉伯胶；c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐以及碳酸钠；e)溶液阻滞剂，如石蜡；f)吸收促进剂，如季铵化合物；g)湿润剂，例如，鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂，如高岭土和膨润土；以及i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包括缓冲剂。
类似类型的固体组合物还可以用作软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊中的填充剂，所述明胶胶囊使用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂以及颗粒剂的固体剂型可以制备有包衣和外壳，如肠溶包衣和药物调配领域中所熟知的其它包衣。所述剂型可以任选地含有乳浊剂并且其组成还可以使得所述剂型仅或者优先在肠道的特定部分中任选地以延迟的方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包含聚合物质和蜡。类似类型的固体组合物也可以用作软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊中的填充剂，所述明胶胶囊使用如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂。
活性化合物还可以与如上所述的一种或多种赋形剂一起呈微包囊形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和外壳(如肠溶包衣、释放控制包衣和药物调配领域中所熟知的其它包衣)来制备。在此类固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂(如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。在正常的情况下，除了惰性稀释剂以外，此类剂型还可以包括另外的物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述剂型还可以包括缓冲剂。所述剂型可以任选地含有乳浊剂并且其组成还可以使得所述剂型仅或者优先在肠道的特定部分中任选地以延迟的方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包含聚合物质和蜡。
用于本发明的化合物的局部或经皮施用的剂型包含软膏、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶、粉末、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何所需要的防腐剂或可能需要的缓冲液混合。眼科调配物、滴耳剂和滴眼剂也被考虑处于本发明的范围内。另外，本发明考虑了透皮贴剂的用途，所述透皮贴剂具有使化合物以受控方式递送到身体的附加优点。此类剂型可以通过将化合物溶解或分散于适当介质中来制备。还可以使用吸收促进剂来增加所述化合物穿过皮肤的流量。速率可以通过提供速率控制膜或将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。
根据一个实施例，本发明涉及一种抑制生物样品中的蛋白激酶活性的方法，所述方法包括使所述生物样品与本发明的化合物或包括所述化合物的组合物接触的步骤。
根据另一个实施例，本发明涉及一种抑制生物样品中的HPK1或其突变体活性的方法，所述方法包括使所述生物样品与本发明的化合物或包括所述化合物的组合物接触的步骤。在某些实施例中，本发明涉及一种不可逆地抑制生物样品中的HPK1或其突变体活性的方法，所述方法包括使所述生物样品与本发明化合物或包括所述化合物的组合物接触的步骤。
在另一个实施例中，本发明提供了通过一种或多种激酶选择性地抑制HPK1的方法。
如本文所使用的，术语“生物样品”包含但不限于：细胞培养物或其萃取物；从哺乳动物或其萃取物中获得的活检材料；以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、眼泪或其它体液或其萃取物。
抑制生物样品中的HPK1(或其突变体)活性可用于本领域的技术人员已知的各种目的。此类目的的实例包含但不限于输血、器官移植、生物样本储存和生物测定。
本发明的另一个实施例涉及一种抑制患者的蛋白激酶活性的方法，所述方法包括向所述患者施用本发明的化合物或包括所述化合物的组合物的步骤。
根据另一个实施例，本发明涉及一种抑制患者的HPK1或其突变体活性的方法，所述方法包括向所述患者施用本发明的化合物或包括所述化合物的组合物的步骤。根据某些实施例，本发明涉及一种可逆地或不可逆地抑制患者的HPK1中的一种或多种或其突变体活性的方法，所述方法包括向所述患者施用本发明的化合物或包括所述化合物的组合物的步骤。在其它实施例中，本发明提供了一种用于治疗有需要的患者的由HPK1或其突变体介导的病症的方法，所述方法包括向所述患者施用本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。此类病症在本文中详细描述。
根据要治疗的特定病状或疾病，本发明的组合物中还可以存在通常为了治疗所述病状而施用的另外的治疗剂。如本文所使用的，通常为了治疗特定疾病或病状而施用的另外治疗剂被称为“适合于所治疗的疾病或病状”。
本发明的化合物还可以与其它治疗性化合物组合使用以产生优势。在一些实施例中，其它治疗性化合物是抗增殖化合物。此类抗增殖化合物包含但不限于：芳香酶抑制剂；抗雌激素；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性化合物；烷基化化合物；组蛋白脱乙酰酶抑制剂；诱导细胞分化过程的化合物；环加氧酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗肿瘤抗代谢物；铂化合物；靶向蛋白质或脂质激酶/降低其活性的化合物和另外的抗血管生成化合物；靶向蛋白质或脂质磷酸酶、降低或抑制其活性的化合物；促性腺激素释放激素激动剂；抗雄激素类；甲硫氨酸氨肽酶抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；二膦酸盐；生物应答调节剂；抗增殖抗体；乙酰肝素酶抑制剂；Ras致癌同种型的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗血液系统恶性肿瘤的化合物；靶向Flt-3、降低或抑制其活性的化合物；Hsp90抑制剂，如来自康福玛医药公司(Conforma Therapeutics)的17-AAG(17-烯丙基氨基格尔德霉素，NSC330507)、17-DMAG(17-二甲氨基乙基氨基-17-去甲氧基-格尔德霉素，NSC707545)、IPI-504、CNF1010、CNF2024、CNF1010；替莫唑胺驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂，如来自葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline)的SB715992或SB743921、或来自康拜那托雷克斯公司(CombinatoRx)的喷他脒/氯丙嗪；MEK抑制剂，如来自阿莱生物制药公司(Array BioPharma)的ARRY142886、来自阿斯利康公司(AstraZeneca)的AZD6244、来自辉瑞公司(Pfizer)的PD181461以及甲酰四氢叶酸。如本文所使用的，术语“芳香酶抑制剂”涉及抑制雌激素产生，例如分别将底物雄烯二酮和睾酮转化为雌酮和雌二醇的化合物。所述术语包含但不限于：类固醇，尤其是阿他美坦(atamestane)、依西美坦(exemestane)和福美司坦(formestane)，以及特别是非类固醇，尤其是氨鲁米特(aminoglutethimide)、洛太米特(roglethimide)、吡啶吡多米特(pyridoglutethimide)、曲洛司坦(trilostane)、睾内酯(testolactone)、酮康唑(ketokonazole)、伏氯唑(vorozole)、法倔唑(fadrozole)、阿那曲唑(anastrozole)和来曲唑(letrozole)。依西美坦以商标名AromasinTM销售。福美司坦以商标名LentaronTM销售。法倔唑以商标名AfemaTM销售。阿那曲唑以商标名ArimidexTM销售。来曲唑以商标名FemaraTM或FemarTM销售。氨鲁米特以商标名OrimetenTM销售。包括作为芳香酶抑制剂的化学治疗剂的本发明的组合物尤其可用于治疗激素受体阳性肿瘤，如乳腺肿瘤。
如本文所使用的，术语“抗雌激素”涉及拮抗雌激素受体水平的雌激素的作用的化合物。术语包含但不限于它莫西芬(tamoxifen)、氟维司群(fulvestrant)、雷洛昔芬(raloxifene)和盐酸雷洛昔芬(raloxifene hydrochloride)。它莫西芬以商标名NolvadexTM销售。盐酸雷洛昔芬以商标名EvistaTM销售。氟维司群可以以商标名FaslodexTM施用。包括作为抗雌激素的化学治疗剂的本发明的组合尤其可用于治疗雌激素受体阳性肿瘤，如乳腺肿瘤。
如本文所使用的，术语“抗雄激素”涉及能够抑制雄激素的生物学作用的任何物质并且包含但不限于比卡鲁胺(bicalutamide)(CasodexTM)。如本文所使用的，术语“促性腺激素释放激素激动剂”包含但不限于阿巴瑞克(abarelix)、戈舍瑞林(goserelin)和乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)。戈舍瑞林可以以商标名ZoladexTM施用。
如本文所使用的，术语“拓扑异构酶I抑制剂”包含但不限于：拓扑替康(topotecan)、吉马替康(gimatecan)、伊立替康(irinotecan)、喜树碱(camptothecian)和其类似物、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱共轭物PNU-166148。伊立替康可以例如按照例如以商标CamptosarTM销售的形式施用。拓扑替康以商标名HycamptinTM销售。
如本文所使用的，术语“拓扑异构酶II抑制剂”包含但不限于蒽环霉素，如阿霉素(包含脂质体调配物，如CaelyxTM)、道诺霉素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)和奈莫柔比星(nemorubicin)、蒽醌——米托蒽醌(mitoxantrone)和洛索蒽醌(losoxantrone)、以及波多菲洛毒素(podophillotoxine)——依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)。依托泊苷以商标名EtopophosTM销售。替尼泊苷以商标名VM 26-Bristol销售。阿霉素以商标名AcriblastinTM或AdriamycinTM销售。表柔比星以商标名FarmorubicinTM销售。伊达比星以商标名ZavedosTM销售。米托蒽醌以商标名Novantron销售。
术语“微管活性剂”涉及微管稳定化合物、微管去稳定化合物和微管蛋白聚合抑制剂，包含但不限于：紫杉烷(taxane)，如紫杉醇(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel)；长春花生物碱，如长春碱或硫酸长春碱、长春新碱或硫酸长春新碱和长春瑞滨(vinorelbine)；盘皮海绵内酯(discodermolide)；秋水仙碱和埃博霉素和其衍生物。紫杉醇以商标名TaxolTM销售。多西他赛以商标名TaxotereTM销售。硫酸长春碱以商标名Vinblastin R.PTM销售。硫酸长春新碱以商标名FarmistinTM销售。
如本文所使用的，术语“烷化剂”包含但不限于环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑(melphalan)或亚硝基脲(BCNU或Gliadel)。环磷酰胺以商标名CyclostinTM销售。异环磷酰胺以商标名HoloxanTM销售。
术语“组蛋白脱乙酰酶抑制剂”或“HDAC抑制剂”涉及抑制组蛋白脱乙酰酶并具有抗增殖活性的化合物。这包含但不限于辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。
术语“抗肿瘤抗代谢物”包含但不限于5-氟尿嘧啶或5-FU、卡培他滨(capecitabine)、吉西他滨(gemcitabine)、DNA去甲基化化合物，如5-氮杂胞苷和地西他滨(decitabine)、甲氨蝶呤和依达曲沙(edatrexate)和叶酸拮抗剂，如培美曲塞(pemetrexed)。卡培他滨以商标名XelodaTM销售。吉西他滨以商标名GemzarTM销售。
如本文所使用的，术语“铂化合物”包含但不限于卡铂、顺铂(cis-platin)、顺铂(cisplatinum)和奥沙利铂(oxaliplatin)。卡铂可以以例如以商标CarboplatTM销售的形式施用。奥沙利铂可以以例如以商标EloxatinTM销售的形式施用。
如本文所使用的，术语“靶向蛋白质或脂质激酶/降低其活性的化合物或另外的抗血管生成化合物”包含但不限于：蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，如a)靶向血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、降低或抑制其活性的化合物，如靶向PDGFR、降低或抑制其活性的化合物，尤其是抑制PDGF受体的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼、SU101、SU6668和GFB-111；b)靶向成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、降低或抑制其活性的化合物；c)靶向胰岛素样生长因子受体I(IGF-IR)、降低或抑制其活性的化合物，如靶向IGF-IR、降低或抑制其活性的化合物，尤其是抑制IGF-I受体的激酶活性的化合物、或靶向IGF-I受体或其生长因子的细胞外结构域的抗体；d)靶向Trk受体酪氨酸激酶家族、降低或抑制其活性的化合物或肝配蛋白B4抑制剂；e)靶向AxI受体酪氨酸激酶家族、降低或抑制其活性的化合物；f)靶向Ret受体酪氨酸激酶、降低或抑制其活性的化合物；g)靶向Kit/SCFR受体酪氨酸激酶、降低或抑制其活性的化合物，如伊马替尼；h)靶向作为PDGFR家族的一部分的C-kit受体酪氨酸激酶、降低或抑制其活性的化合物，如靶向c-Kit受体酪氨酸激酶家族、降低或抑制其活性的化合物，尤其是抑制c-Kit受体的化合物，如伊马替尼；i)靶向c-Abl家族成员、其基因融合产物(例如，BCR-Abl激酶)和突变体、降低或抑制其活性的化合物，如靶向c-Abl家族成员及其基因融合产物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物、降低或抑制其活性的化合物，如伊马替尼或尼罗替尼(AMN107)；PD180970；AG957；NSC 680410；来自帕克戴维(ParkeDavis)的PD173955；或达沙替尼(dasatinib)(BMS-354825)；j)靶向丝氨酸/苏氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)和Raf家族、降低或抑制其成员；MEK、SRC、JAK/泛JAK、FAK、PDK1、PKB/Akt、Ras/MAPK、PI3K、SYK、BTK和TEC家族的成员；和/或包含星形孢菌素衍生物的细胞周期蛋白依赖性激酶家族(CDK)的成员的活性的化合物，如米哚妥林；另外的化合物的实例包含UCN-01、沙芬戈(safingol)、BAY 43-9006、苔藓抑素(Bryostatin 1)、哌立福辛(Perifosine)；伊莫福新(Ilmofosine)；RO 318220和RO320432；GO 6976；Isis 3521；LY333531/LY379196；异喹啉化合物；FTI；PD184352或QAN697(P13K抑制剂)或AT7519(CDK抑制剂)；k)靶向蛋白酪氨酸激酶抑制剂、降低或抑制其活性的化合物，如靶向蛋白酪氨酸激酶抑制剂、降低或抑制其活性的化合物包含甲磺酸伊马替尼(GleevecTM)或酪氨酸磷酸化抑制剂，如酪氨酸磷酸化抑制剂A23/RG-50810；AG 99；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 213；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 1748；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 490；酪氨酸磷酸化抑制剂B44；酪氨酸磷酸化抑制剂B44(+)对映体；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 555；AG494；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 556、AG957和阿达弗斯汀(adaphostin)(4-{[(2,5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；NSC 680410、阿达弗斯汀)；l)靶向受体酪氨酸激酶(作为同源或异源二聚体的EGFR1、ErbB2、ErbB3、ErbB4)及其突变体的表皮生长因子家族、降低或抑制其活性的化合物，如靶向表皮生长因子受体家族、降低或抑制其活性的化合物尤其是抑制EGF受体酪氨酸激酶家族成员，如EGF受体、ErbB2、ErbB3和ErbB4或结合到EGF或EGF相关配体、CP 358774、ZD 1839、ZM 105180的化合物、蛋白质或抗体；曲妥珠单抗(trastuzumab)(HerceptinTM)、西妥昔单抗(cetuximab)(ErbituxTM)、易瑞沙(Iressa)、特罗凯(Tarceva)、OSI-774、Cl-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3；以及7H-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物；m)靶向c-Met受体、降低或抑制其活性的化合物，如靶向c-Met、降低或抑制其活性的化合物，尤其是抑制c-Met受体的激酶活性的化合物、或靶向c-Met的细胞外结构域或结合到HGF的抗体；n)靶向一种或多种JAK家族成员(JAK1/JAK2/JAK3/TYK2和/或泛JAK)的激酶、降低或抑制活性的化合物，包含但不限于PRT-062070、SB-1578、巴瑞克替尼(baricitinib)、帕克替尼(pacritinib)、莫美罗替尼(momelotinib)、VX-509、AZD-1480、TG-101348、托法替尼(tofacitinib)以及鲁索替尼；o)靶向PI3激酶(PI3K)的激酶、降低或抑制其活性的化合物，包含但不限于ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕尼西(buparlisib)、皮克特尼西(pictrelisib)、PF-4691502、BYL-719、达托尼西(dactolisib)、XL-147、XL-765和艾代拉尼西；以及q)靶向、降低或抑制刺猬蛋白(Hh)或平滑受体(SMO)途径的信号传导作用的化合物，包含但不限于环杷明、维莫德吉、伊曲康唑(itraconazole)、伊莫德吉(erismodegib)和IPI-926(萨瑞德吉(saridegib))。
如本文所使用的，术语“PI3K抑制剂”包含但不限于对磷脂酰肌醇-3-激酶家族中的一种或多种酶具有抑制活性的化合物，所述酶包含但不限于PI3Kα、PI3Kγ、PI3Kδ、PI3Kβ、PI3K-C2α、PI3K-C2β、PI3K-C2γ、Vps34、p110-α、p110-β、p110-γ、p110-δ、p85-α、p85-β、p55-γ、p150、p101和p87。可在本发明中使用的PI3K抑制剂的实例包含但不限于：ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕尼西、皮克特尼西、PF-4691502、BYL-719、达托尼西、XL-147、XL-765和艾代拉尼西。
如本文所使用的，术语“BTK抑制剂”包含但不限于对布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)具有抑制活性的化合物，包含但不限于AVL-292和依鲁替尼(ibrutinib)。
如本文所使用的，术语“SYK抑制剂”包含但不限于对脾酪氨酸激酶(SYK)具有抑制活性的化合物，包含但不限于PRT-062070、R-343、R-333、埃克塞尔(Excellair)、PRT-062607和福坦替尼(Fostamatinib)。
如本文所使用的，术语“Bcl-2抑制剂”包含但不限于对B细胞淋巴瘤2蛋白质(Bcl-2)具有抑制活性的化合物，包含但不限于ABT-199、ABT-731、ABT-737、阿朴棉子酚(apogossypol)、艾森塔(Ascenta)的pan-Bcl-2抑制剂、姜黄素(和其类似物)、双Bcl-2/Bcl-xL抑制剂(无限制药公司(Infinity Pharmaceuticals)/诺华制药公司(NovartisPharmaceuticals))、奥利默森钠(Genasense)(G3139)、HA14-1(和其类似物；参见WO2008118802)、纳威托克斯(navitoclax)(和其类似物，参见US7390799)、NH-1(沈阳药科大学(Shenayng Pharmaceutical University))、奥巴托克斯(obatoclax)(和其类似物，参见WO 2004106328)、S-001(誉衡药业(Gloria Pharmaceuticals))、TW系列化合物(密歇根大学(Univ.of Michigan))和维奈托克斯(venetoclax)。在一些实施例中，Bcl-2抑制剂是小分子治疗剂。在一些实施例中，Bcl-2抑制剂是拟肽。
BTK抑制化合物的另外的实例和可通过此类化合物与本发明的化合物组合地治疗的病状可以在WO 2008039218和WO 2011090760中找到，所述文献的全部内容通过引用并入本文。
SYK抑制化合物的另外的实例和可通过此类化合物与本发明的化合物组合地治疗的病状可以在WO 2003063794、WO 2005007623和WO 2006078846中找到，所述文献的全部内容通过引用并入本文。
PI3K抑制化合物的另外的实例和可通过此类化合物与本发明的化合物组合地治疗的病状可以在WO 2004019973、WO 2004089925、WO 2007016176、US8138347、WO2002088112、WO 2007084786、WO 2007129161、WO 2006122806、WO 2005113554和WO2007044729中找到，所述文献的全部内容通过引用并入本文。
JAK抑制化合物的另外的实例和可通过此类化合物与本发明的化合物组合地治疗的病状可以在WO 2009114512、WO 2008109943、WO 2007053452、WO 2000142246和WO2007070514中找到，所述文献的全部内容通过引用并入本文。
另外的抗血管生成化合物包含针对其活性具有另一种机制例如与蛋白质或脂质激酶抑制无关的化合物例如沙利度胺(thalidomide)(ThalomidTM)和TNP-470。
可用于与本发明的化合物组合使用的蛋白酶体抑制剂的实例包含但不限于硼替佐米(bortezomib)、双硫仑(disulfiram)、表焙儿茶素-3-没食子酸盐(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)、盐孢菌酰胺A(salinosporamide A)、卡非佐米(carfilzomib)、ONX-0912、CEP-18770和MLN9708。
靶向蛋白质或脂质磷酸酶、降低或抑制其活性的化合物是例如磷酸酶1、磷酸酶2A或CDC25的抑制剂如冈田酸或其衍生物。
诱导细胞分化过程的化合物包含但不限于视黄酸、α-γ-或δ-生育酚或α-γ-或δ-生育三烯酚。
如本文所使用的，术语环氧酶抑制剂包含但不限于Cox-2抑制剂、5-烷基取代的2-芳基氨基苯乙酸和衍生物，如塞来昔布(CelebrexTM)、罗非昔布(rofecoxib)(VioxxTM)、依托昔布(etoricoxib)、伐地昔布(valdecoxib)或5-烷基-2-芳基氨基苯乙酸，如5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯氨基)苯乙酸、罗美昔布(lumiracoxib)。
如本文所使用的，术语“二膦酸盐”包含但不限于依替膦酸(etridonic acid)、氯膦酸(clodronic acid)、替鲁膦酸(tiludronic acid)、帕米膦酸(pamidronic acid)、阿仑膦酸(alendronic acid)、伊班膦酸(ibandronic acid)、利塞膦酸(risedronic acid)和唑来膦酸(zoledronic acid)。依替膦酸以商标名DidronelTM销售。氯膦酸以商标名BonefosTM销售。替鲁膦酸以商标名SkelidTM销售。帕米膦酸以商标名ArediaTM销售。阿仑膦酸以商标名FosamaxTM销售。伊班膦酸以商标名BondranatTM销售。利塞膦酸以商标名ActonelTM销售。唑来膦酸以商标名ZometaTM销售。术语“mTOR抑制剂”涉及抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)并具有抗增殖活性的化合物，如西罗莫司(sirolimus)依维莫司(everolimus)(CerticanTM)、CCI-779和ABT578。
如本文所使用的，术语“乙酰肝素酶抑制剂”是指靶向、降低或抑制硫酸肝素降解的化合物。术语包含但不限于PI-88。如本文所使用的，术语“生物响应调节剂”是指淋巴因子或干扰素。
如本文所使用的，术语“Ras致癌同种型的抑制剂”如H-Ras、K-Ras或N-Ras是指靶向Ras、降低或抑制Ras的致癌活性的化合物；例如，“法呢基转移酶抑制剂”，如L-744832、DK8G557或R115777(ZarnestraTM)。如本文所使用的，术语“端粒酶抑制剂”是指靶向端粒酶、降低或抑制其活性的化合物。靶向端粒酶、降低或抑制其活性的化合物尤其是抑制端粒酶受体的化合物，如端粒抑素。
如本文所使用的，术语“甲硫氨酸氨肽酶抑制剂”是指靶向甲硫氨酸氨肽酶、降低或抑制其活性的化合物。靶向甲硫氨酸氨肽酶、降低或抑制其活性的化合物包含但不限于班格酰胺(bengamide)或其衍生物。
如本文所使用的，术语“蛋白酶体抑制剂”是指靶向蛋白酶体、降低或抑制其活性的化合物。靶向蛋白酶体、降低或抑制其活性的化合物包含但不限于硼替佐米(VelcadeTM)和MLN 341。
如本文所使用的，术语“基质金属蛋白酶抑制剂”或(“MMP”抑制剂)包含但不限于：胶原拟肽和非拟肽抑制剂、四环素衍生物，例如异羟肟酸拟肽抑制剂巴马司他(batimastat)和其可口服生物利用类似物马马司他(marimastat)(BB-2516)、普马司他(prinomastat)(AG3340)、马他司他(metastat)(NSC 683551)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MMI270B或AAJ996。
如本文所使用的，术语“用于治疗血液系统恶性肿瘤的化合物”包含但不限于：FMS样酪氨酸激酶抑制剂，其是靶向FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)、降低或抑制其活性的化合物；干扰素、1-β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(arabinofuransylcytosine，ara-c)和硫亚砜(bisulfan)；ALK抑制剂，其是靶向、减少或抑制间变型淋巴瘤激酶和Bcl-2抑制剂的化合物。
靶向FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)、降低或抑制其活性的化合物尤其是抑制Flt-3R受体激酶家族的成员的化合物、蛋白质或抗体，如PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。
如本文所使用的，术语“HSP90抑制剂”包含但不限于靶向、降低或抑制HSP90的固有ATP酶活性的化合物；通过泛素蛋白酶体途径降解、靶向、降低或抑制HSP90客户蛋白的化合物。靶向HSP90、降低或抑制其固有ATP酶活性的化合物尤其是抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白质或抗体，如17-烯丙基氨基、17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)、格尔德霉素衍生物；其它格尔德霉素相关化合物；根赤壳菌素和HDAC抑制剂。
如本文所使用的，术语“抗增殖抗体”包含但不限于曲妥珠单抗(HerceptinTM)、曲妥珠单抗DM1、爱必妥(erbitux)、贝伐珠单抗(bevacizumab)(AvastinTM)、利妥昔单抗PRO64553(抗CD40)和2C4抗体。抗体是指完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少2种完整抗体形成的多特异性抗体和抗体片段，只要其表现出期望的生物活性即可。
对于急性髓性白血病(AML)的治疗，本发明化合物可以与标准白血病疗法组合使用，特别是与用于治疗AML的疗法组合使用。具体地，本发明的化合物可以与例如法呢基转移酶抑制剂和/或可用于治疗AML的如道诺霉素、亚德里亚霉素、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡钼(Carboplatinum)和PKC412等其它药物组合施用。在一些实施例中，本发明提供了一种治疗与ITD和/或D835Y突变相关的AML的方法，所述方法包括将本发明的化合物与一种或多种FLT3抑制剂一起施用。在一些实施例中，FLT3抑制剂选自喹杂替尼(quizartinib)(AC220)、星形孢菌素衍生物(例如，米哚妥林或来他替尼(lestaurtinib))、索拉非尼(sorafenib)、坦度替尼(tandutinib)、LY-2401401、LS-104、EB-10、法米替尼(famitinib)、NOV-110302、NMS-P948、AST-487、G-749、SB-1317、S-209、SC-110219、AKN-028、非达替尼(fedratinib)、陶扎色替(tozasertib)和舒尼替尼(sunitinib)。在一些实施例中，FLT3抑制剂选自喹杂替尼、米哚妥林、来他替尼、索拉非尼和舒尼替尼。
其它抗白血病化合物包含例如嘧啶类似物Ara-C，其是脱氧胞苷的2'-α-羟基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物。还包含次黄嘌呤、6-巯基嘌呤(6-MP)和磷酸氟达拉滨的嘌呤类似物。靶向组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂、降低或抑制其活性的化合物如丁酸钠和辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)抑制被称为组蛋白脱乙酰酶的酶的活性。特异性HDAC抑制剂包含MS275、SAHA、FK228(原名为FR901228)、曲古抑菌素A和US 6,552,065中公开的化合物，包含但不限于N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐和N-羟基-3-[4-[(2-羟基乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐，尤其是乳酸盐。如本文所使用的，生长抑素受体拮抗剂是指靶向、治疗或抑制生长抑素受体的化合物，如奥曲肽和SOM230。肿瘤细胞损伤方法指的是如电离辐射等方法。上文和下文所提及的术语“电离辐射”意指作为电磁射线(如X射线和γ射线)或粒子(如α和β粒子)产生的电离辐射。电离辐射在辐射疗法中提供，但不限于此，并且是本领域已知的。参见Hellman,放射疗法的原则(Principles ofRadiation Therapy),《癌症：肿瘤学原理与实践(Cancer,in Principles and Practiceof Oncology)》,德维塔(Devita)等人编辑,第4版,第1卷,第248-275页(1993)。
还包含EDG粘结剂和核糖核苷酸还原酶抑制剂。如本文所使用的，术语“EDG粘结剂”是指一类调节淋巴细胞再循环的免疫抑制剂，如FTY720。术语“核糖核苷酸还原酶抑制剂”是指嘧啶或嘌呤核苷类似物，包含但不限于：氟达拉滨(fludarabine)和/或胞嘧啶阿拉伯糖苷(ara-C)、6-硫鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉屈滨、6-巯基嘌呤(特别是针对ALL与ara-C组合使用)和/或喷司他丁(pentostatin)。核糖核苷酸还原酶抑制剂特别是羟基脲或2-羟基-1H-异吲哚-1,3-二酮衍生物。
还特别地包含VEGF的那些化合物、蛋白质或单克隆抗体，如1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪琥珀酸盐；AngiostatinTM；EndostatinTM；邻氨基苯甲酸酰胺；ZD4190；ZD6474；SU5416；SU6668；贝伐珠单抗；或抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体，如rhuMAb和RHUFab、VEGF适体如玛库刚(Macugon)；FLT-4抑制剂、FLT-3抑制剂、VEGFR-2IgGI抗体、血管增生核酶(Angiozyme)(RPI 4610)和贝伐珠单抗(AvastinTM)。
如本文所使用的，光动力疗法是指使用被称为光敏化合物的某些化学物质来治疗或预防癌症的疗法。光动力疗法的实例包含用如VisudyneTM和卟吩姆钠(porfimer sodium)等化合物进行的治疗。
如本文所使用的，血管生成抑制类固醇是指阻断或抑制血管生成的化合物例如阿奈可他(anecortave)、去炎松(triamcinolone)、氢化可的松、11-α-表氢化皮质醇(11-α-epihydrocotisol)、脱氧皮甾醇(cortexolone)、17α-羟孕酮、皮质酮、去氧皮质酮、睾酮、雌酮和地塞米松。
含有皮质类固醇的植入物是指如氟轻松和地塞米松等化合物。
其它化学治疗化合物包含但不限于植物生物碱、激素化合物和拮抗剂；生物应答调节剂，优选地淋巴因子或干扰素；反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物；shRNA或siRNA；或其它化合物或具有其它或未知作用机理的化合物。
本发明的化合物还可用作共同治疗化合物，以用于与如消炎药、支气管扩张药物或抗组胺药物等其它药物组合使用，尤其用于治疗如上文所提及的阻塞性或炎症性气道疾病，例如作为此类药物的治疗活性增效剂或作为减少此类药物的所需给药或潜在副作用的方法。本发明的化合物可以与其它药物以固定药物组合物的形式混合或者其可以在其它药物之前、同时或之后单独施用。因此，本发明包含如上文描述的本发明的化合物与消炎药、支气管扩张药物、抗组胺药物或止咳药物的组合，本发明的所述化合物和所述药物在相同或不同的药物组合物中。
合适的消炎药包含类固醇，特别是糖皮质类固醇，如布地奈德、二丙酸倍氯米松、丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、环索奈德(ciclesonide)或糠酸莫米松(mometasone furoate)；非类固醇糖皮质激素受体激动剂；LTB4拮抗剂，如LY293111、CGS025019C、CP-195543、SC-53228、BIIL 284、ONO 4057、SB 209247；LTD4拮抗剂，如孟鲁司特(montelukast)和扎鲁司特(zafirlukast)；PDE4抑制剂，如西洛司特(cilomilast)(葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))、罗氟司特(Roflumilast)(百克顿公司(BykGulden))、V-11294A(纳普公司(Napp))、BAY19-8004(拜耳公司(Bayer))、SCH-351591(先灵-葆雅公司(Schering-Plough))、阿罗茶碱(Arofylline)(艾美罗医用药物公司(Almirall Prodesfarma))、PD189659/PD168787(帕克戴维公司(Parke-Davis))、AWD-12-281(爱斯达制药公司(Asta Medica))、CDC-801(新基公司(Celgene))、SeICID(TM)CC-10004(新基公司)、VM554/UM565(弗纳利斯公司(Vernalis))、T-440(塔纳贝公司(Tanabe))、KW-4490(协和发酵工业公司(Kyowa Hakko Kogyo))；A2a激动剂；A2b拮抗剂；以及β-2肾上腺素受体激动剂，如沙丁胺醇(羟甲叔丁肾上腺素)、奥西那林、特布他林、沙美特罗、非诺特罗(fenoterol)、丙卡特罗(procaterol)以及尤其福莫特罗和其药学上可接受的盐。合适的支气管扩张药物包含抗胆碱能或抗毒蕈碱化合物，特别是异丙托溴铵、氧托溴铵、噻托铵盐和CHF 4226(凯西公司(Chiesi))以及格隆溴铵(glycopyrrolate)。
合适的抗组胺药物包含盐酸西替利嗪(cetirizine hydrochloride)、对乙酰氨基酚、富马酸氯马斯汀(clemastine fumarate)、异丙嗪(promethazine)、氯雷他定(loratidine)、地氯雷他定(desloratidine)、苯海拉明(diphenhydramine)和盐酸菲索芬那定(fexofenadine)、阿伐斯汀(activastine)、阿司咪唑(astemizole)、氮拉斯汀(azelastine)、依巴司汀(ebastine)、依匹斯汀(epinastine)、咪唑司汀(mizolastine)和特非拉丁(tefenadine)。
本发明的化合物与消炎药的其它可用组合是与例如以下趋化因子受体的拮抗剂的组合：CCR-1、CCR-2、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CCR-6、CCR-7、CCR-8、CCR-9和CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5，特别是CCR-5拮抗剂，如先灵-葆雅公司(Schering-Plough)拮抗剂SC-351125、SCH-55700和SCH-D和武田公司(Takeda)拮抗剂，如N-[[4-[[[6,7-二氢-2-(4-甲基苯基)-5H-苯并-环庚烯-8-基]羰基]氨基]苯基]-甲基]四氢-N,N-二甲基-2H-吡喃-4-氯化铵(TAK-770)。
通过代号、通用名或商标名标识的活性化合物的结构可以取自标准纲要“默克索引(The Merck Index)”的实际版本或数据库，例如国际专利(Patents International)(例如，IMS世界出版物(IMS World Publications))。
本发明化合物还可以与已知的治疗方法，例如施用激素或放射物组合使用。在某些实施例中，所提供化合物用作放射增敏剂，尤其用于治疗对放射疗法表现出不良敏感性的肿瘤。
本发明的化合物可以单独施用或与一种或多种其它治疗化合物组合施用，可能的组合疗法采取固定组合的形式或本发明的化合物与一种或多种其它治疗化合物的施用交错或彼此独立给予或固定组合与一种或多种其它治疗化合物的组合施用。除此之外或另外，本发明的化合物可以与化学疗法、放射疗法、免疫疗法、光疗法、外科手术介入或这些的组合组合地施用以特别用于肿瘤疗法。长期疗法同样是可能的，如在如上所述的其它治疗策略的背景下的辅助疗法一样。其它可能的治疗是在肿瘤消退后维持患者状态的疗法，或甚至是化学预防疗法，例如在有风险的患者中。
这些另外的药剂可以作为多剂量方案的一部分与含本发明化合物的组合物分开施用。可替代地，那些药剂可以是单个剂型的一部分，其与本发明的化合物一起混合在单个组合物中。如果作为多剂量方案的一部分施用，则所述两种活性剂可以同时、顺序地或在彼此相隔一段时间(通常彼此相隔五小时)内递送。
如本文所使用的，术语“组合”、“组合的”和相关术语是指根据本发明同时或顺序施用治疗剂。例如，可以将本发明的化合物与另一种治疗剂以单独的单位剂型同时或者顺序地施用或者以单次单位剂型一起施用。因此，本发明提供了一种单次单位剂型，所述剂型包括本发明的化合物、另外的治疗剂以及药学上可接受的载体、佐剂或媒剂。
可以与载体材料组合以产生单次剂型的本发明化合物和另外的治疗剂(在包括如上所述的另外的治疗剂的那些组合物中)两者的量将根据所治疗的主体和特定施用方式而有所不同。优选地，本发明的组合物应当被配置为使得可以施用0.01至100mg/kg体重/天剂量的本发明的化合物。
在包括另外的治疗剂的那些组合物中，所述另外的治疗剂和本发明的化合物可以协同发挥作用。因此，此类组合物中另外的治疗剂的量将小于仅利用所述治疗剂的单一疗法中所需的量。在此类组合物中，可以施用剂为0.01-1,000μg/kg体重/天的另外治疗剂。
存在于本发明的组合物中的另外的治疗剂的量将不超过通常在包括所述治疗剂作为唯一活性剂的组合物中施用的量。优选地，本发明公开的组合物中另外的治疗剂的量将在包括所述药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中通常存在的量的约50％到100％的范围内。
本发明的化合物或其药物组合物还可以掺入到用于涂覆可植入医疗装置如假体、人工瓣膜、血管移植物、支架和导管的组合物中。例如，血管支架已被用于克服再狭窄(损伤后血管壁的再变窄)。然而，使用支架或其它可植入装置的患者会有凝块形成或血小板激活的风险。这些不期望的效果可以通过用包括激酶抑制剂的药学上可接受的组合物预涂覆装置来进行防止或减轻。涂覆有本发明的化合物的可植入装置是本发明的另一个实施例。
例示
如在下文的实例中描绘的，在某些示例性实施例中，根据以下一般程序制备化合物。应理解的是，尽管一般方法描绘了本发明的某些化合物的合成，但是以下一般方法和本领域普通技术人员已知的其它方法可以应用于如本文所描述的所有化合物和这些化合物中的每种化合物的子类和种类。本发明的另外的化合物通过与本文在实例中所描述的方法和本领域技术人员已知的方法基本上类似的方法制备。
中间体的制备
方法CA1-2-(6-氨基吡啶-3-基)-N-乙基-2-甲基丙酰胺(CA1)的制备
步骤1：2-甲基-2-(6-硝基吡啶-3-基)丙酸乙酯(CA1.1)
在0℃下将乙基-2-(6-硝基吡啶-3-基)乙酯(CA1.0)(980mg，4.6mmol)于DMF(20mL)中的溶液用氢化钠(60％分散于矿物油中，196mg，4.8mmol)处理。将混合物搅拌5分钟，并且然后逐滴添加碘甲烷(0.316mL，5.0mmol)。在另外2小时之后，添加另外部分的氢化钠(60％分散于矿物油中，196mg，4.8mmol)，5分钟后添加碘甲烷(0.316mL，5.0mmol)。将混合物在室温下搅拌18小时，用水(30mL)淬灭，并萃取到EtOAc(2x 30mL)中。将合并的提取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩。将残留物通过柱色谱法(0-50％EtOAc/环己烷梯度洗脱)纯化，以得到呈黄色油的标题化合物(CA1.1)(758mg，68％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.63(s,1H),8.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(d,J＝8.2Hz,1H),4.16(q,J＝7.2Hz,2H),1.67(s,6H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤2：2-甲基-2-(6-硝基吡啶-3-基)丙酸(CA1.2)
将2-甲基-2-(6-硝基吡啶-3-基)丙酸乙酯(CA1.1)(750mg，3.1mmol)于甲醇-水(14mL，1:1)中的溶液用氢氧化锂一水合物(198mg，4.7mmol)处理，并将混合物在室温下搅拌过夜。使用1M HCl水溶液将pH调节至约5，并将混合物用9:1DCM-MeOH(3x 25mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩，以得到呈灰白色固体的粗标题化合物(CA1.2)(423mg，63％)。1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.87(s,1H),8.67(d,J＝1.8Hz,1H),8.28(d,J＝8.6Hz,1H),8.19(dd,J＝2.4,8.5Hz,1H),1.59(s,6H)。
步骤3：N-乙基-2-甲基-2-(6-硝基吡啶-3-基)丙烯酰胺(CA1.3)
向2-甲基-2-(6-硝基吡啶-3-基)丙酸(CA1.2)(430mg，2.0mmol)于THF(5mL)中的悬浮液中添加1-羟基苯并三唑(359mg，2.6mmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(510mg，2.6mol)。将混合物在室温下搅拌10分钟。添加DIPEA(1.069mL，6.1mmol)和乙胺(于THF中的2M溶液，2.04mL，4.0mmol)，并将反应物在室温下搅拌过夜。将反应物用EtOAc(20mL)稀释，并将有机相用水(15mL)和盐水(15mL)洗涤。将有机相干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将残留物通过柱色谱法(0-100％ EtOAc/环己烷梯度洗脱)纯化，以得到呈浅黄色油的标题化合物(CA1.3)(375mg，77％)。1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.58(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(d,J＝7.8Hz,1H),8.10(dd,J＝2.4,8.5Hz,1H),7.60(dd,J＝6.2,6.2Hz,1H),3.11-3.03(m,2H),1.53(s,6H),0.97(dd,J＝7.2,7.2Hz,3H)。
步骤4：2-(6-氨基吡啶-3-基)-N-乙基-2-甲基丙酰胺(CA1)
向溶解于甲醇(5mL)中的N-乙基-2-甲基-2-(6-硝基吡啶-3-基)丙烯酰胺(CA1.3)(375mg，1.5mmol)中添加10％钯炭(35mg)。在氢气气氛下加氢过夜之后，将混合物通过硅藻土过滤，并在真空下去除溶剂，以得到呈浅黄色油的标题化合物(CA1)(320mg，96％)，所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。1H NMR(400MHz,DMSO):δ7.83(d,J＝2.0Hz,1H),7.26(dd,J＝2.5,8.6Hz,2H),6.38(d,J＝8.1Hz,1H),5.74(s,2H),3.05-3.01(m,2H),1.36(s,6H),0.93(t,J＝7.0Hz,3H)。
方法CA2-2-(6-氨基吡啶-3-基)-N-乙基-N,2-二甲基丙酰胺(CA2)的制备
中间体CA2按照方法CA1合成，但步骤3使用N-甲基乙胺。粗产物无需进一步纯化或表征即可使用。
方法CA3-5-(3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-2-胺(CA3)的制备
中间体CA3根据WO 2015131080中所描述的方法制备，但使用3-(2-甲氧基乙氧基)氮杂环丁烷。1H NMR(400MHz,CDCl3)d 7.40(d,J＝2.3Hz,1H),6.74(dd,J＝3.0,8.6Hz,1H),6.47-6.43(m,1H),4.50-4.42(m,1H),4.11-4.01(m,2H),3.65(t,J＝6.3Hz,2H),3.60-3.54(m,4H),3.40-3.38(m,3H)。未观察到2H可交换质子。
方法PA1-1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-醇(PA1)的制备
步骤1：5-(3,4-二氢-2H-吡喃-5-基)-2-硝基吡啶(PA1.1)
向3,4-二氢-2H-吡喃-5-基硼酸、频哪醇酯(0.217g，1.06mmol，1.0当量)于THF(4.5mL)和水(0.5mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-2-硝基吡啶(0.336g，1.60mmol，1.5当量)、S-phos(0.043g，0.106mmol，0.1当量)和磷酸钾(0.680g，3.206mmol，3.0当量)。在氩气气氛下脱气5分钟之后，添加乙酸钯(0.011g，0.053mmol，0.05当量)，并在氩气气氛中对反应雾再次脱气10分钟。在60℃下搅拌1小时之后，将反应混合物用水(50ml)淬灭，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(25ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用19％乙酸乙酯/正己烷洗脱，以得到纯PA1.1(0.140g，63.51％)。MS(ES):m/z 206.20[M+H]+。
步骤2：1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-醇(PA1)
在氮气气氛下向氢氧化钯(0.03g)于甲醇(3mL)中的悬浮液中添加5-(3,4-二氢-2H-吡喃-5-基)-2-硝基吡啶(PA1.1)(0.140g，0.678mmol，1.0当量)于甲醇(3mL)中的溶液。将氢气鼓泡到反应混合物中1小时。在反应完成之后，将反应混合物通过硅藻土过滤，用甲醇洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到纯PA1(0.095g，78.45％)。MS(ES):m/z 178.24[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.77(s,1H),7.28 -7.25(dd,J＝2Hz,8.4Hz,1H),6.37(d,J＝8.4,1H),5.72(s,2H),3.94(s,2H),3.84(d,12.4Hz,1H),3.72(d,J＝8.4Hz,1H),3.2(t,J＝11.4,1H),1.82(s,1H),1.62(s,3H)。
方法PA2-5-(2-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)吡啶-2-胺(PA2)的制备
步骤1：2-(6-氯吡啶-3-基)戊-4-烯-2-醇(PA2.1)
向1-(6-氯吡啶-3-基)乙-1-酮PA2.0(1.2g，7.71mmol，1.0当量)溶解于THF(12mL)并冷却至-78℃的搅拌溶液中添加烯丙基溴化镁(于乙醚中)(11.56mL，11.56mmol，1.5当量)。在-78℃下搅拌30分钟之后，将反应混合物用水(50ml)和氯化铵溶液(10ml)淬灭，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用15％乙酸乙酯/正己烷洗脱，以得到纯PA2.1(1.31g，85.93％)。MS(ES):m/z 197.66[M+H]+。
步骤2：5-(2-(烯丙氧基)戊-4-烯-2-基)-2-氯吡啶(PA2.2)
在0℃下向2-(6-氯吡啶-3-基)戊-4-烯-2-醇PA2.1(1.31g，6.6mmol，1.0当量)溶解于THF(5mL)中的搅拌溶液中添加氢化钠(0.792g，19.8mmol，3.0当量)。在0℃下搅拌10分钟之后，将烯丙基溴(2.0g，16.5mmol，2.5当量)缓慢添加到反应混合物中。在0℃下搅拌15分钟之后，将反应混合物加热回流6小时。在反应完成之后，将反应混合物用冷的0.5N盐酸溶液(100ml)淬灭，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用8％乙酸乙酯/正己烷洗脱，以得到纯PA2.2(1.05g，66.64％)。MS(ES):m/z237.73[M+H]+。
步骤3：2-氯-5-(2-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)吡啶(PA2.3)
向5-(2-(烯丙氧基)戊-4-烯-2-基)-2-氯吡啶PA2.2(0.5g，2.1mmol，1.0当量)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加Grubbs催化剂(0.021g，0.025mmol，0.012当量)。在室温下搅拌45分钟之后，将溶剂在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用15％乙酸乙酯/正己烷洗脱，以得到纯PA2.3(0.4g，90.70％)。MS(ES):m/z 209.67[M+H]+。
步骤4：2-氯-5-(2-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)吡啶(PA2.4)
向2-氯-5-(2-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)吡啶(0.4g，1.9mmol，1.0当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.174g，0.19mmol，0.1当量)和(2-联苯基)二环己基膦(0.134g，0.38mmol，0.2当量)于1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中添加六甲基二硅氮烷锂(5.7mL，5.7mmol，3.0当量)，所述溶液用氩气脱气30分钟。在70℃下加热3小时之后，将反应混合物倒入水中(50ml)，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用2.5％甲醇/DCM洗脱，以得到纯PA2.4(0.255g，70.26％)。MS(ES):m/z 190.25[M+H]+。
步骤5：5-(2-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)吡啶-2-胺(PA2)
向10％ Pd/C(0.050g)于甲醇(3mL)中的悬浮液中添加2-氯-5-(2-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-2-基)吡啶PA2.4(0.250g，1.3mmol，1.0当量)于甲醇(3mL)中的溶液。将H2(气体)鼓泡到反应混合物中1小时。在反应完成之后，将反应混合物通过硅藻土过滤，并用甲醇(30ml)洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到纯PA2(0.220g，54.42％)。MS(ES):m/z 192.26[M+H]+，LCMS纯度：97.40％，HPLC纯度：96.52％。
方法PA4-3-(6-氨基吡啶-3-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(PA4)的制备
步骤1：3-(6-硝基吡啶-3-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(PA4.1)
向5-溴-2-硝基吡啶(1.1g，5.42mmol，1.0当量)于1,4-二噁烷(10mL)、3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(1.18g，5.96mmol，1.1当量)和碳酸钾(2.24g，16.26mmol，3.0当量)中的溶液中添加4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(0.62g，1.08mmol，0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0.49g，0.542mmol，0.1当量)，所述溶液用氮气脱气10分钟。在120℃下搅拌5小时之后，将反应混合物用水(100ml)稀释，并萃取到乙酸乙酯(100ml x3)中。将合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物使用combi-flash二氧化硅纯化，用7％甲醇/DCM洗脱，以得到3-(6-硝基吡啶-3-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯PA4.1(1g，产率57.03％)。MS(ES):m/z 321.35[M+H]+。
步骤2：3-(6-氨基吡啶-3-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(PA4)
向10％ Pd/C(0.050g)于甲醇(3mL)中的悬浮液中添加3-(6-硝基吡啶-3-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(0.850g，2.65mmol，1.0当量)于甲醇(3mL)中的溶液。在氢气鼓泡通过溶液1小时之后，将反应混合物通过用MeOH洗涤的硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，以得到粗PA4(0.900g，55.16％)。MS(ES):m/z 291.37[M+H]+。
方法PA9-3-(6-氨基吡啶-3-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸叔丁酯(PA9)的制备
步骤1：6-氟-2-甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(PA9.1)
在0℃下向6-氟-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮PA9.0(2.5g，15.13mmol，1.0当量)于干燥THF(130mL)中的溶液中添加氢化钠(60％于矿物油中)(1.2g，30.27mol，2.0当量)。在搅拌30分钟之后，添加甲基碘(4.3g，30.27mmol，2.0当量)。在室温下搅拌1小时之后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(100ml)稀释，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到PA9.1(3.07g，定量产率)。MS(ES):m/z 180.2[M+H]+
步骤2：6-氟-2-甲基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮(PA9.2)
在室温下向6-氟-2-甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮PA9.1(2.9g，16.201mmol，1.0当量)溶解于浓硫酸(25mL)中的溶液中添加硝酸钾(1.44g，17.821mmol，1.1当量)。在室温下搅拌2小时之后，将反应混合物倒入冰水中并搅拌10分钟。将固体过滤，用水洗涤并在高真空下干燥，以得到PA9.2(3.1g，85.44％)。MS(ES):m/z 225[M+H]+
步骤3：6-氟-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(PA9.3)
向0℃下向6-氟-2-甲基-7-硝基-3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮PA9.2(3.0g，13.392mmol，1.0当量)溶解于干燥THF(80mL)中的溶液中添加硼烷-THF复合物(0.9摩尔)(22ml，20.089mmol，1.5当量)。在80℃下搅拌2小时之后，将反应混合物冷却至室温并稀释水(100ml)。将水层用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物使用combi-flash二氧化硅纯化，用5％甲醇/DCM洗脱，以得到PA9.3(0.8g，28.44％)。MS(ES):m/z 211.2[M+H]+
步骤4：6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(PA9)
向10％ Pd/C(158mg，0.2％W/Wq)于甲醇(3mL)中的悬浮液中添加6-氟-2-甲基-7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉PA9.3(0.79g，3.761mmol，1.0当量)于甲醇(30mL)中的溶液。在吹扫氢气通过溶液1小时之后，将反应混合物通过用MeOH洗涤的硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，以得到粗PA9(0.56g，82.68％)。MS(ES):m/z 181.3[M+H]+
方法PA28-3-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮(PA28)的制备
步骤1：6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(PA28.1)
在0℃下向2-(6-氯吡啶-3-基)乙腈PA28.0(8g，52.4mmol，1.0当量)于乙醇(40ml)中的溶液中逐滴添加硫酸(15ml)。在100℃下搅拌3小时之后，将反应混合物倒入冰冷的水中(300ml)，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到粗材料PA28.1，所述粗材料无需进一步纯化直接用于下一步骤(8g，76.4％)。MS(ES):m/z200.30[M+H]+。
步骤2：3-(6-氯吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮(PA28.2)
在10℃下向6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺PA28.1(1.0g，5.025mmol，1.0当量)溶解于DMSO(10ml)中的溶液中添加氢化钠(0.603g，25.12mmol，3.0当量)。在相同温度下搅拌20分钟之后，添加2-溴-N-甲基乙-1-胺(1.3g，6.030mmol，1.2当量)。在室温下搅拌1小时之后，将反应混合物倒入冰冷的水中(50ml)，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到粗材料PA28.2(0.258g,24.48％)。MS(ES):m/z 211.30[M+H]+。
步骤3：N-(5-(1-甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(PA28.3)
按照方法PA4(步骤-1)中所描述的以下代表性程序，使用3-(6-氯吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮PA28.2和环丙烷甲酰胺进行步骤-3的反应，以得到PA28.3(0.80g，产率64.99％)。MS(ES):m/z 260.61[M+H]+
步骤4：3-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮(PA28)
向N-(5-(1-甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(0.500g，1.93mmol，1.0当量)于MeOH(7mL)中的溶液中添加5N氢氧化钠(2.31ml，56.0mmol，6当量)的溶液。在60℃下搅拌16小时之后，将反应混合物倒入冰冷的水中(100ml)，并用10％氯仿/异丙醇(100ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过二乙醚溶剂研磨(20ml x 2)进一步纯化，以得到纯PA28(0.250g，67.80％)。MS(ES):m/z192.51[M+H]+
方法PA29和PA30-(S)-5-(3-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-胺(PA29)和(R)-5-(3-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-胺(PA30)的制备
步骤1和步骤2：5-(3-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-胺(PA29.2)
按照方法PA4中概述的以下代表性程序进行反应，以得到PA29.2(0.980g，45.15％)。MS(ES):m/z 221.35[M+H]。
步骤3：(S)-5-(3-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-胺(PA29)和(R)-5-(3-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-胺(PA30)
化合物29.2(980mg外消旋体)通过岛津(Shimadzu)LC-20AP中的手性SFC和UV检测器分离，其中CHIRALPAK IC(250X 21.0)mm，5微米柱，流速为20毫升/分钟，使用流动相(A)0.1％ DEA/正己烷和(B)0.1％DEA/丙烷2-醇:乙腈(70:30)，以得到纯化合物PA29(350mg)和PA30(351mg)。立体化学任意指定。
方法PA31-5-(氧杂环丁-3-基)吡啶-2-胺(PA31)的制备
步骤1：2-溴-5-(氧杂环丁-3-基)吡啶(PA32.1)
向(6-溴吡啶-3-基)硼酸(1.10g，5.44mmol，1当量)、碘化镍(51mg，0.16mmol，0.2当量)、反式-2-氨基环己醇盐酸盐(24.73mg，0.16mmol，0.1当量)于2-丙醇(5mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)氨化钠(1.0g，5.44mmol，1当量)。在氮气下搅拌10分钟之后，添加3-碘氧杂环丁烷(0.5g，2.7mmol)于2-丙醇(2mL)中的溶液。在80℃下在密封小瓶中搅拌16小时之后，将反应物通过用乙醇洗涤的硅藻土过滤。将滤液浓缩，并将残留物通过硅胶快速色谱法(10-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，以得到标题化合物PA32.1(0.28g，26％)。MS(ES)m/z 215.87[M+2+H]+
步骤2和步骤3：5-(氧杂环丁-3-基)吡啶-2-胺(PA31)
按照方法PA28(步骤-3和4)中所描述的以下代表性程序，使用2-溴-5-(氧杂环丁烷-3-基)吡啶(PA32.1)和环丙烷甲酰胺进行步骤-2和3的反应，以得到PA31(0.15g，产率76.36％)。MS(ES):m/z 151.2[M+H]+
方法PA32-3-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮(PA32)的制备
步骤1：6-氟-1'-甲基-[3,4'-二吡啶]-2'(1'H)-酮(PA32.1)
向2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(2.0g，0.0089mol，1.0当量)和4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1.3g，0.0074mol，0.8当量)于1,2-二甲氧基乙烷(10ml)和水(2ml)中的溶液中添加Na2CO3(2.8g，0.0267mol，3.0当量)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)催化剂(0.36g，0.0004mol，0.05当量)。在120℃下在微波中搅拌30分钟之后，将反应混合物用水(60ml)稀释，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物使用combi-flash二氧化硅纯化，用3％甲醇/DCM洗脱，以得到PA32.1(1.4g，76.46％)。MS(ES):m/z 205.3[M+H]+
步骤2：4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(PA32.2)
向10％ Pd/C(558mg，0.5％W/Wq)于甲醇(3mL)中的悬浮液中添加6-氟-1'-甲基-[3,4'-联吡啶]-2'(1'H)-酮PA32.1(1.0g，0.0049mol，1.0当量)于甲醇中的溶液(30mL)。在氢气鼓泡通过溶液1小时之后，将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，以得到粗PA32.2(1.0g，98.06％)。MS(ES):m/z 209.2[M+H]+
步骤3：4-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(PA32)
将4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮PA32.2(0.850g，0.00048mol，1.0当量)于氨水溶液(40mL)中的溶液在钢制反应釜(剩余40％的顶部空间)中在150℃(100psi)下加热20小时。将反应混合物倒入水中(50ml)，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物使用combi-flash二氧化硅纯化，用6.2％甲醇/DCM洗脱，以得到PA32(0.220g，26.26％)。MS(ES):m/z 206.3[M+H]+
方法PA35-5-环戊基-6-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2-胺(中间体PA35)的制备
步骤1：6-氨基-3-溴吡啶甲酸甲酯(PA35.1)：
在室温下向PA35.0(500g，3289.4mmol，1.0当量)于乙腈(12.5L)中的溶液中分批添加N-溴代琥珀酰胺(644g，3618.4mmol，1.1当量)持续30分钟。在室温下搅拌30分钟之后，将反应混合物用10％ Na2S2O3水溶液(3.0L)淬灭，并浓缩以去除乙腈。将残留物用10％Na2S2O3水溶液(20L)稀释，并用50％乙酸乙酯/己烷(10L X 5)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将粗材料用25％乙酸乙酯/己烷研磨，以得到纯PA35.1(6-氨基-3-溴吡啶甲酸甲酯)。(57.07％产率)。MS(ES):m/z 231-233[M+2]+,1H NMR(400MHz,CDCL3):δ7.66(d,1H),6.53(d,1H),4.68(S,2H),3.98(s,3H)。注意：其它区异构体(6-氨基-5-溴吡啶甲酸甲酯)也会形成，并且可以通过二氧化硅纯化进行分离。通过1H NMR和NOE分析确认所需的区异构体。
步骤2：3-溴-6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)吡啶甲酸甲酯(PA35.2)
向PA35.1(1100g，4782.6mmol，1.0当量)于THF(20L)中的溶液中添加二甲基氨基吡啶(116.7g，956.5mmol，0.2当量)和Boc酸酐(2502g，11478.2mmol，2.4当量)。在75℃下搅拌1.5小时之后，将溶剂蒸发，并将残留物用盐水溶液稀释，并用乙酸乙酯(2x 10L)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用5％乙酸乙酯/己烷洗脱。将分离的材料用己烷(4L)研磨，以得到呈白色固体的PA35.2(1700g，82.79％)。MS(ES):m/z 431-433[M+2]+。1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.32(d,1H),7.61(d,1H),3.90(s,3H),1.40(s,18H)。
步骤3：6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-3-(呋喃-3-基)吡啶甲酸甲酯(PA35.3)
向PA35.2(730g，1693.7mmol，1.0当量)和呋喃硼酸(379g，3387.4mmol，2当量)以及磷酸三钾(西格玛公司，1078.3g，5086.2mmol，3.0当量)悬浮于1-4二噁烷(5.85L)和水(1.46L)中并用氮气流脱气20分钟的溶液中添加Dikis(59.5g，84.8mmol，0.05当量)。在120℃下搅拌15分钟之后，将反应冷却至室温。将有机层收集，通过硅藻土床过滤，并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶色谱法纯化，用6.0％至10％乙酸乙酯/己烷洗脱。将分离的材料通过正戊烷研磨，以得到呈奶油色固体的PA35.3(84产率)。MS(ES):m/z 418[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.12(d,1H),8.00(d,1H),7.81(s,1H),7.61(s,1H),6.70(S,1H),3.83(S,3H),1.41(s,18H)。
步骤4：6-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-3-(呋喃-3-基)吡啶甲酸甲酯(PA35.4)
向PA35.4(191g，456.9mmol，1.0当量)于甲醇(1140mL)和THF(955mL)中的溶液中添加甲酸铵(115.1g，182.5mmol，4.0当量)、乙酸(133.7ml，0.7V)和20％ WET氢氧化钯碳(133.7g，1:0.7W/W)。在氢气气氛下在室温下搅拌24小时之后，将反应混合物与通过相同方法制备的6个相同规模的其它批次合并。然后将合并的反应混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液在减压下浓缩。将残留物用饱和NaHCO3(10L)溶液中和，并用DCM(10L x 3)萃取，以得到PA35.4(1251g,92.6％).MS(ES):m/z 423[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.01(d,1H),7.58(d,1H),3.99(t,2H),3.87(S,3H),3.71(m,2H),3.60(m,1H),2.31(m,1H)1.91(d,1H),1.4(S,18H)。
步骤5：(6-(羟基甲基)-5-(THF-3-基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(PA35.5)
向PA35.4(250g，592.4mmol，1.0当量)于乙醇(2500mL)中的溶液中分批添加硼氢化钠(135g，355.4mmol，6当量)。在60℃下搅拌2小时之后，将反应在减压下浓缩，用水(10L)稀释，并用DCM(4x 10L)萃取。将合并的有机层用盐水(10L)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残留物与通过相同方法制备的4个相同规模的其它批次合并，以得到呈无色粘性液体的PA35.5(640g，73.49％)，其在2天之后在室温下变成白色固体。MS(ES):m/z 295.0[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO):δ7.81(d,1H),7.67(d,1H),7.2(d,1H),5.22(d,1H),4.55(t,1H),3.99(s,3H),3.77(m,3H),3.55(m,2H),2.28(d,2H),1.87(d,1H),1.41(s,9H)。
步骤6和7：(6-((二甲基氨基)甲基)-5-(THF-3-基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(PA35.6)
在0℃下向PA35.5(440g，149.6mmol，1.0当量)于DCM(6.5L)中的溶液中逐滴添加二异丙基乙胺(581.4g，448.9mmol，3.0当量)。在搅拌20分钟之后，在0℃下添加甲酰氯(257.04g，2244mmol，1.5当量)。在0℃至室温下搅拌2小时之后，将反应混合物用DM水(1L)淬灭，并用DCM(3x 2L)萃取。将合并的有机层用盐水(10L)洗涤，穿过Na2SO4玻璃料，并在减压下浓缩，以得到甲磺酸化中间体。将甲磺酸化中间体与通过相同方法制备的其它1批(200g规模)合并。呈浅黄色液体的(700g-粗品，86.44％)。MS(ES):m/z 373.35[M+1]+。
在室温下向甲磺酸化中间体(350g，940.0mmol，1.0当量)于MeCN(3.5L)中的溶液中逐滴添加二异丙基乙胺(529.23g，423.0mmol，4.5当量)，然后滴加二甲胺盐酸盐(152.41g，1880.0mmol和2.0当量)。在90℃下搅拌3小时之后，将反应混合物浓缩以去除乙腈，在DM水(1500mL)中淬灭并用DCM(3x 3L)萃取。将合并的有机层用盐水(10L)洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，以得到PA35.6。将产物与通过相同方法制备的相同规模的其它1批合并。呈棕色半固体(700g，定量产率)。MS(ES):m/z 322.39[M+1]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ9.61(S,1H),7.67(S,2H),3.96-3.94(t,2H,J＝7.6),3.78-3.77(d,2H,J＝4HZ),3.57(S,1H),3.54(s,1H),2.26-2.25(t,1H),2.1(S,6H),1.86(S,1H),1.45(s,9H)。
步骤8：5-环戊基-6-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2-胺(PA35)
在0℃下向PA35.6(700g，2180.7mmol，1.0当量)于DCM(5.0L)中的溶液中添加三氟乙酸(2.1L，3v)。在70℃下搅拌2小时之后，将反应混合物浓缩，在DM水(2L)中稀释，并用庚烷洗涤。将收集的水层用10％NaOH溶液中和，并且然后通过15％ MeOH/DCM(4x 3.0L)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过20％乙酸乙酯/己烷研磨，并且然后用二乙醚研磨，以得到呈浅棕色固体的纯PA35。(330g，68.47％)。MS(ES):m/z222.30[M+1]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.33(d,J＝8.4Hz,1H),6.36(d,J＝8.5Hz,1H),5.71(s,1H),3.96-3.85(m,1H),3.72(dq,J＝31.0,7.7Hz,1H),3.46-3.34(m,1H),3.35(s,1H),3.30(d,J＝11.9Hz,0H),2.19(td,J＝7.8,4.2Hz,0H),2.14(s,3H),1.79(dq,J＝12.2,8.0Hz,1H)。
方法PA37-6-((二甲基氨基)甲基)-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺(PA37)的制备
步骤1：(5-溴-6-(羟基甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(PA37.1)
向PA35.2(50g，116.27mmol，1.0当量)于乙醇(200mL)中的溶液中分批添加硼氢化钠(26.3g，697.6mmol，6当量)。在700℃下搅拌2小时之后，将反应在减压下浓缩，用水(200mL)仔细稀释，并萃取到DCM(3x 150mL)中。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，通过疏水过滤器，并在减压下浓缩，以得到呈白色固体的PA37.1(27g，79％)。MS(ES):m/z395[M+1]+1H NMR(400MHz,DMSO):δ7.81(d,1H),7.67(d,1H),7.2(d,1H),5.22(d,1H),4.55(t,1H),3.99(s,3H),3.77(m,3H),3.55(m,2H),2.28(d,2H),1.87(d,1H),1.41(s,19H)。
步骤2、3：(5-溴-6-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(PA37.2)
在0℃下向PA37.1(22.2g，73.2mmol，1.0当量)和N-N二异丙基乙胺(33.3g，256.3mmol，3.5当量)于DCM(200mL)中的溶液中添加甲烷磺酰氯(12.5g，109.8mmol，1.5当量)。在搅拌30分钟之后，将反应用水(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3x 40mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，通过疏水过滤器，并在减压下浓缩。
向溶解于乙腈(200mL)中的甲磺酸酯中间体中添加二甲胺(15g，183.0mmol，2.5当量)和N-N二异丙基乙胺(33.3g，256.3mmol，3.5当量)。在700℃下搅拌1小时之后，将反应用水(100mL)淬灭，并萃取到乙酸乙酯(3x 40mL)中。将合并的有机层用盐水洗涤，通过疏水过滤器，并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶色谱法纯化，用50％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到PA37.2(17.0g，94.3％)。MS(ES):m/z 330[M+H]+
步骤3：(5-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-6-((二甲基氨基)甲基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(PA37.3)
向PA37.2(50g，151.5mmol，1.0当量)于1,4-二噁烷:水(400mL:100mL)与2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(47.7g，227.2mmol，1.5当量)和磷酸三钾(96.3g，454.5mol，3.0当量)中的溶液中添加X-phosPdG2(11.9g，15.1mmol，0.1当量)，将溶液用N2脱气15分钟。在140℃下搅拌4小时之后，将反应混合物冷却至室温，用水(1L)稀释，并用乙酸乙酯(2x 2L)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(1L)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用2％甲醇/DCM洗脱，以得到PA37.3(40g，79％)。MS(ES):m/z 334.2[M+H]+
步骤4：(6-((二甲基氨基)甲基)-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(PA37.4)
向氢氧化钯(130g)于甲醇(600ml)和THF(40ml)中的悬浮液中添加中间体PA37.3(130g，1.0当量)。在室温下使氢气吹扫通过反应混合物4小时。在反应完成之后，将反应混合物通过用甲醇洗涤的硅藻土床过滤。将滤液在减压下浓缩，以得到PA37.4(120g，91.75％)。MS(ES):m/z 336.2[M+H]+
步骤5：6-((二甲基氨基)甲基)-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺(PA37)
向中间体PA37.4(120g，356.9mmol，1.0当量)于DCM(1.2L)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸(360mL)。在55℃下搅拌2小时之后，将反应混合物用饱和氢氧化钠溶液中和，并用10％甲醇/DCM(4x 10L)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩，以得到PA37(66g，78.40％)。MS(ES):m/z 236.1[M+H]+
方法PA39-2-(1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-3-基)丙-2-醇(PA39)的制备
步骤-1和步骤2：1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-3-甲酸乙酯(PA39.2)。
1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-3-甲酸乙酯(PA39.2)以与方法PA4中所描述的方式类似的方式制备(1.2g，89.62％)。MS(ES):m/z 250.15[M+H]
步骤3：2-(1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-3-基)丙-2-醇(PA39)。
在0℃向1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-3-甲酸乙酯(PA39.2)(2.0g，8.03mmol，1.0当量)于THF(15mL)中的溶液中逐滴添加甲基溴化镁(3N于THF中，20mL)。在室温下搅拌1小时之后，将反应混合物用冰冷的水(100mL)淬灭，并在硅藻土床上过滤。将滤液用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，并将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法(0-80％ EtOAc/己烷梯度洗脱)纯化，以得到PA39(0.200g，10.60％)。MS(ES):m/z236.17[M+H]+
方法PA40-1-(6-氨基-2-((二甲基氨基)甲基)吡啶-3-基)哌啶-4-醇(PA40)的制备
步骤1：6-氯-3-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶甲醛(PA40.1)
向PA40.0(1.0g，6.28mmol，1.0当量)和哌啶-4-醇(1.0g，10.04mmol，1.6当量)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加碳酸钾(2.6g，18.84mmol，3.0当量)。在100℃下搅拌1小时之后，将反应混合物冷却至室温，用冰冷的水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用30％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到PA40.1(1.2g，79.54％)，MS(ES):m/z 241.07[M+H]+
步骤2：1-(6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)吡啶-3-基)哌啶-4-醇(PA40.2)
在0℃下向PA40.1(1.2g，5.00mmol，1.0当量)于1,2-二氯乙烷(20ml)中的冷却溶液中添加乙酸(2.4ml)。在分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(7.4g，35mmol，7.0当量)之前，用二甲胺气体使反应鼓泡30分钟。在室温下搅拌16小时之后，将反应混合物用冰冷的水(100mL)稀释，并用DCM(4x 40mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(90mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用3.0％甲醇/DCM梯度洗脱，以得到PA40.2(0.450g，33.46％)，MS(ES):m/z 270.2[M+H]+
步骤3和步骤4：5-(氧杂环丁-3-基)吡啶-2-胺(PA40)
按照方法PA28中所描述的以下代表性程序(步骤-3和步骤4)，使用PA40.2和环丙烷甲酰胺进行步骤-3和4的反应，以得到PA40(0.3g，64％)。MS(ES):m/z 251.35[M+H]+
下列苯胺中间体根据如上文所描述的任何中间体方法PA1-PA40制备。
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方法CB1-5-氟-2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB1)的制备
步骤1：5-氟-2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(CB1.1)
向5-氟-2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(CB1.0)(2.0g，6.45mmol)于THF(60mL)中的溶液中添加LiOH(2M，7.1mL，14.2mmol)。在室温下搅拌16小时之后，在减压下去除有机溶剂，并将残留的材料用2M HCl水溶液(20mL)中和，用盐水(10mL)稀释，并且然后萃取到乙酸乙酯(3x 50mL)中。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，通过疏水性玻璃料并在减压下浓缩，以得到呈白色固体的产物(CB1.1)(1.66g，87％)，所述产物无需进一步纯化即可使用。m/z＝297.1[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.83(brs,1H),7.85(d,J＝8.7Hz,1H),7.38(d,J＝4.0Hz,1H),4.13(s,3H),1.40(s,2H)。
步骤2：5-氟-2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB1)
向(CB1.1)(1.66g，5.61mmol)于THF(25mL)中的溶液中添加羟基苯并三唑(0.98g，7.29mmol)和盐酸EDC(1.40g，7.29mmol)。在室温下搅拌1小时之后，依次添加N,N-二异丙基乙胺(2.9mL，16.8mmol)和哌啶(0.66mL，6.73mmol)。在室温下搅拌22小时之后，将有机溶剂在减压下蒸发，用水(40mL)稀释，并用DCM(2x 40mL)萃取。使合并的有机层通过疏水性玻璃料并在减压下浓缩。将所得泡沫溶解于DCM(10mL)中，并通过添加二乙醚使产物沉淀。在减压下去除溶剂，以得到呈灰白色固体的粗品(CB1)(2.07g，定量)，所述粗品无需进一步纯化即可使用。m/z＝364.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.18(d,J＝4.2Hz,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),3.85(s,3H),3.82-3.64(m,4H),1.56-1.41(m,4H),1.36(s,12H),1.33-1.25(m,2H)。
方法CB2-N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-N-甲基环丙烷甲酰胺(CB2)的制备
步骤1：N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环丙烷甲酰胺(CB2.1)
向3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺(CB2.0)(600mg，2.53mmol)于干燥DCM(12.0mL)中的溶液中添加环丙烷碳酰氯(0.24mL，2.66mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.88mL，5.06mmol)。在室温下搅拌2小时之后，将反应用2M HCl(20mL)淬灭，并用DCM(3x10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，通过疏水性玻璃料并在减压下浓缩，以得到呈白色固体的粗产物(CB2.1)(650mg，85％)，所述粗产物无需进一步纯化即可使用。m/z＝306.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.61-7.55(m,1H),7.47(d,J＝1.6Hz,1H,)7.25(s,1H),7.18(d,J＝1.6Hz,1H),1.54-1.50(m,1H),1.38-1.30(m,12H),1.88-1.83(m,2H),0.75-0.69(m,2H)。
步骤2：N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-N-甲基环丙烷甲酰胺(CB2)
向N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环丙烷甲酰胺(CB2.1)(650mg，2.13mmol)于干燥THF(6.0mL)和甲基碘(0.65mL，3.62mmol)中的溶液中分批添加氢化钠(60％于矿物油中，145mg，3.62mol)。在室温下搅拌4小时之后，将反应用逐滴水(1.0mL)[小心！]淬灭，并用EtOAc(2x 5mL)萃取。将合并的有机层经无水MgSO4干燥并在减压下浓缩。将残留物通过硅胶色谱法(0-100％EtOAc/异己烷洗脱)纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物(CB2)(390mg，57％)。m/z＝320.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.75(s,1H),8.08(d,J＝1.6Hz,1H,)8.02(d,J＝1.6Hz,1H),3.28(s,3H),2.54(s,1H),1.68-1.60(m,12H),0.88-0.83(m,2H),0.75-0.69(m,2H)。
方法CB3-2-(2-氟-4-甲氧基-5-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(CB3)的制备
向1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-甲苯(CB3.0)(500mg，2.28mmol)、双(频哪醇)二硼(696mg，2.74mmol)和乙酸钾(560mg，5.71mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM的复合物(186mg，0.23mmol)。在用氮气脱气之后，将混合物在100℃下加热6小时。将冷却的混合物用EtOAc稀释。将有机溶液收集，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将残留物通过硅胶色谱法(梯度：0-50％EtOAc/异己烷)纯化，以得到呈浅棕色固体的标题化合物(CB3)(539mg，89％)。
方法CB4-5-氟-N,N-二甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢-1H-茚-1-胺(CB4)的制备
步骤1：6-溴-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-醇(CB4.1)
向6-溴-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(CB4.0)(300mg，1.3mmol)于甲醇(3.0mL)中的溶液中添加硼氢化钠(141mg，3.9mmol)。在室温下搅拌30分钟之后，将混合物用DCM(20mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(15mL)洗涤。使有机层通过疏水性玻璃料并在减压下蒸发，以得到呈灰白色固体的期望产物(CB4.1)(307mg，定量)，所述产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。m/z＝231.9[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.56(d,J＝6.3Hz,1H),7.02-6.97(m,1H),5.25-5.16(m,1H),3.06-2.96(m,1H),2.83-2.72(m,1H),2.58-2.47(m,1H),2.04-1.94(m,1H),1.78(d,J＝6.8Hz,1H)。
步骤2：6-溴-5-氟-N,N-二甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-胺(CB4.2)
在-15℃下向6-溴-5-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-醇(CB4.1)(307mg，3.9mmol)于THF(12mL)和三乙胺(0.94mL，5.1mmol)中的溶液中逐滴添加甲磺酰氯(200μL，2.6mmol)。在-15℃下搅拌3小时之后，添加二甲胺溶液(2M于THF中，7.8mL，15.5mmol)。在搅拌过夜并温热至室温之后，将反应混合物过滤，并在减压下蒸发溶剂。使粗产物通过SCX筒(装载有DCM，用10％ MeOH/DCM洗涤，用10％7N甲醇氨/DCM洗脱)。在减压下蒸发溶剂，以得到呈红棕色油的期望产物(CB4.2)(310mg，92％)，所述产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。m/z＝259.1[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.51(d,J＝6.7Hz,1H),6.97-6.94(m,1H),4.26(t,J＝6.8Hz,1H),2.93-2.72(m,2H),2.23(s,6H),2.12-2.03(m,2H)。
步骤3：5-氟-N,N-二甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,3-二氢-1H-茚-1-胺(CB4)
向大转盘管中装入含6-溴-5-氟-N,N-二甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-胺(CB4.2)(310mg，1.2mmol)、双(频哪醇)二硼(475mg，1.8mmol)和乙酸钾(354mg，3.6mmol)的二噁烷(10mL)，添加[1,1,-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM的复合物(44mg，0.06mmol)。将管密封并在110℃下在搅拌下加热3小时。使反应混合物冷却至室温，并且化合物(CB4)无需进一步纯化即可进行下一步骤。m/z＝306.2[M+H]+。
方法CB5-4-((3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)吡啶(CB5)
步骤1：4-((4-溴-3-氟苯氧基)甲基)吡啶(CB5.1)
向4-溴-3-氟苯酚(CB5.0)(1.00g，5.24mmol)于DMF(8mL)中的溶液中添加4-(溴甲基)吡啶(1.59g，6.28mmol)和碳酸钾(1.81g，13.1mmol)。在室温下搅拌过夜之后，将反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用水(三次)和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法纯化，用0-100％ EtOAc/DCM洗脱，以得到呈白色固体的期望产物(CB5.1)(162mg，11％)。m/z＝283.9[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.63(d,J＝6.1Hz,2H),7.45-7.38(m,1H),7.32(d,J＝5.8Hz,2H),6.73(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),6.67(dd,J＝2.3,11.0Hz,1H),5.09(s,2H)。
步骤2：4-((3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)吡啶(CB5)
将4-((4-溴-3-氟苯氧基)甲基)吡啶(CB5.1)(155mg，0.55mmol)、双(频哪醇)二硼(167mg，0.66mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM(45mg，0.05mmol)的复合物和乙酸钾(135mg，1.37mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物脱气，并用氮气吹扫。在加热至100℃持续6小时之后，然后将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-100％ EtOAc/DCM纯化，以得到呈橙棕色残留物的CB5(179mg，99％)。m/z＝330.0[M+H]+,1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.62(d,J＝6.1Hz,2H),7.70-7.65(m,1H),7.34(d,J＝5.8Hz,2H),6.74(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),6.63(dd,J＝2.3,11.0Hz,1H),5.10(s,2H),1.35-1.24(m,12H)。
方法CB6-2-(5-环丁基-2-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(CB6)
步骤1：2-溴-4-环丁基-1-氟苯(CB6.1)
将2-溴-1-氟-4-碘苯(CB6.0)(600mg，1.99mmol)、Xantphos palladacaycleGen.3(95mg，0.10mmol)和Xantphos(58mg，0.10mol)于THF(10mL)中的溶液脱气并用氮气吹扫。在添加环丁基溴化锌(0.5M，5.2mL，2.59mmol)后，将反应加热至50℃持续7小时。在室温下静置3天之后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭，并萃取到EtOAc中(两次)。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法纯化，用0-20％ EtOAc/异己烷洗脱，以得到呈无色油的CB6.1(385mg，84％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.37(dd,J＝1.8,6.6Hz,1H),7.12-7.06(m,1H),7.02(dd,J＝8.5,8.5Hz,1H),3.54-3.43(m,1H),2.39-2.30(m,2H),2.15-1.96(m,4H)。
步骤2：2-(5-环丁基-2-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(CB6)
将2-溴-4-环丁基-1-氟苯(CB6.1)(378mg，1.65mmol)、双(频哪醇)二硼(503mg，1.98mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM(135mg，0.17mmol)的复合物和乙酸钾(405mg，4.12mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物脱气，并用氮气吹扫。在加热至100℃持续6小时之后，将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-40％EtOAc/异己烷纯化，以得到呈浅黄色油的CB6(286mg，63％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.53(dd,J＝2.4,5.6Hz,1H),6.95(dd,J＝8.8,8.8Hz,1H),3.57-3.46(m,1H),2.37-2.28(m,2H),2.18-1.95(m,3H),1.89-1.83(m,1H),1.36(s,12H)。
方法CB7-2-(2-氟-5-(1-甲基环丙基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(CB7)
步骤1：2-溴-1-氟-4-(丙-1-烯-2-基)苯(CB7.1)
将甲基三苯基溴化鏻(1.73g，4.84mmol)于THF(10mL)中的悬浮液冷却至0℃，然后用叔丁醇钾(0.57g，5.07mmol)分批处理。在0℃下搅拌2小时之后，将反应用逐滴添加的1-(3-溴-4-氟苯基)乙-1-酮(CB7.0)(1.00g，4.61mmol)于THF(5mL)中的溶液来处理。在温热至室温并在室温下搅拌过夜之后，将反应混合物用1M HCl水溶液淬灭，并萃取到EtOAc中(两次)。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-20％ EtOAc/异己烷纯化，以得到呈无色油的CB7.1(352mg，36％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.63(dd,J＝2.4,6.7Hz,1H),7.38-7.34(m,1H),7.06(dd,J＝8.5,8.5Hz,1H),5.31(s,1H),5.10(s,1H),2.11(s,3H)。
步骤2：2-溴-1-氟-4-(1-甲基环丙基)苯(CB7.2)
将二乙基锌(1.0M于己烷中，1.95mL，1.95mmol)于DCM(5mL)中的溶液置于氮气气氛下，并冷却至-15℃。将溶液用逐滴添加的磷酸二丁酯(0.39mL，1.95mmol)于DCM(4mL)中的溶液来处理。在-15℃下搅拌15分钟之后，然后将反应用二碘甲烷(0.16mL，1.95mmol)处理。在-15℃下搅拌30分钟之后，添加2-溴-1-氟-4-(丙-1-烯-2-基)苯(CB7.1)(350mg，1.63mmol)于DCM(4mL)中的溶液。在加热至室温并搅拌18小时之后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭，并萃取到EtOAc中(两次)。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-30％ EtOAc/异己烷纯化，以得到呈无色油的CB7.2(311mg，67％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.36(ddd,J＝2.2,4.7,8.5Hz,1H),7.17-7.10(m,2H),2.11(s,3H),0.84-0.78(m,4H)。
步骤3：2-(2-氟-5-(1-甲基环丙基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(CB7)
将2-溴-1-氟-4-(1-甲基环丙基)苯(CB7.2)(310mg，1.35mmol)、双(频哪醇)二硼(412mg，1.62mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM(111mg，0.14mmol)的复合物和乙酸钾(332mg，3.38mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物脱气，并用氮气吹扫。在加热至100℃持续5小时之后，将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-50％EtOAc/异己烷纯化，以得到呈橙色残留物的CB7(357mg)，其无需进一步纯化即可用于随后的步骤。
方法CB8-1,1,1-三氟-2-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙-2-醇(CB8)
步骤1：2-(3-溴-4-氟苯基)-1,1,1-三氟丙-2-醇(CB8.1)
将1-(3-溴-4-氟苯基)乙-1-酮(CB8.0)(1.00g，4.61mmol)和三甲基(三氟甲基)硅烷(1.4mL，9.22mmol)于THF(15mL)中的溶液用逐滴添加的四丁基氟化铵(1.0M，6.9mL，6.91mmol)处理。在室温下搅拌过夜之后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭，并萃取到EtOAc中(两次)。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-50％ EtOAc/异己烷纯化，以得到呈浅黄色油的CB8.1(1.39g，定量)。1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.42(s,1H),8.69(s,1H),8.05(dd,J＝1.9,7.5Hz,1H),7.99(d,J＝2.8Hz,1H),7.65-7.58(m,1H),7.40(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),7.35(d,J＝7.6Hz,2H),2.43(s,6H)。
步骤2：1,1,1-三氟-2-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙-2-醇(CB8)
将2-(3-溴-4-氟苯基)-1,1,1-三氟丙-2-醇(CB8.1)(521mg，1.82mmol)、双(频哪醇)二硼(553mg，2.18mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM(148mg，0.18mmol)的复合物和乙酸钾(445mg，4.54mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物脱气，并用氮气吹扫。在加热至100℃持续5小时之后，将反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-10％ MeOH/DCM纯化，以得到呈橙色残留物的CB8(348mg)，其无需分析即可用于随后的步骤。
方法CB9-(2-异氧基-5-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB9)
步骤1：(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB9.1)
将4-溴-5-氟-2-甲氧基苯甲酸(CB9.0)(215mg，0.82mmol)于THF(5mL)中的溶液用HOBt(144mg，1.06mmol)和EDC盐酸盐(204mg，1.06mmol)处理。在室温下搅拌1小时之后，将反应混合物用DIPEA(0.43mL，2.45mmol)和哌啶(0.10mL，0.98mmol)处理。在室温下搅拌3天之后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭并用DCM稀释。将有机层分离，通过疏水性玻璃料，并在减压下浓缩，以得到CB9.1(250mg，93％)。m/z＝318.0[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.07-7.00(m,2H),3.81(s,3H),3.78-3.61(m,4H),3.21-3.14(m,2H),1.53-1.41(m,4H)。
步骤2：(4-溴-5-氟-2-羟苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB9.2)
将(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB9.1)(500mg，1.58mmol)于DCM(30mL)中的溶液冷却至-78℃，并用三溴化硼(1.0M于DCM中，4.7mL，4.74mmol)处理。在-78℃下搅拌2小时之后，将反应用水淬灭并用饱和碳酸氢钠水溶液中和。将有机层分离，通过疏水性玻璃料，并在减压下浓缩，以得到呈棕褐色固体的CB9.2(450mg，94％)。m/z＝304.0[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.37(d,J＝5.8Hz,1H),6.97(d,J＝8.1Hz,1H),3.58(dd,J＝5.2,5.2Hz,4H),3.21-3.14(m,2H),1.53-1.41(m,4H)。
步骤3：(4-溴-2-异氧基-5-氟苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB9.3)
向(4-溴-5-氟-2-羟苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB9.2)(220mg，0.73mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加碳酸钾(1.00g，7.28mmol)和溴乙烷(0.12mL，1.60mmol)。在60℃下搅拌3小时之后，将反应物冷却至室温并过滤。将滤液在减压下浓缩，以得到粗CB9.3(250mg)，其无需进一步纯化即可用于随后的步骤。m/z＝332.0[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.06-7.00(m,2H),4.08-3.96(m,2H),3.75-3.62(m,3H),3.23-3.09(m,4H),1.89(s,2H),1.45-1.35(m,4H)。
步骤4：(2-异氧基-5-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB9)
将(4-溴-2-异氧基-5-氟苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB9.3)(250mg，0.76mmol)、双(频哪醇)二硼(211mg，0.83mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM(28mg，0.04mmol)的复合物和乙酸钾(223mg，2.27mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物脱气，并用氮气吹扫。在110℃下搅拌过夜之后，将反应混合物冷却至室温，用饱和氯化铵水溶液淬灭并过滤。将滤液萃取到DCM中，并使有机层通过疏水性玻璃料并在减压下浓缩，以得到粗CB9，其无需进一步纯化即可用于随后的步骤。m/z＝378.3[M+H]+。
方法CB10-(2,3-二氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)硼酸(CB10)
将(2,3-二氟-6-甲氧基苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB10.0)(2.30g，9.01mmol)于THF(40mL)中的溶液脱气并用氮气吹扫，冷却至-78℃，并且然后用逐滴添加的正丁基锂(2.50M于己烷中，3.6mL，9.01mol)处理。在-78℃下搅拌30分钟之后，逐滴添加硼酸三甲酯(1.2mL，10.8mmol)。在搅拌16小时之后，温热至室温，将反应用1M HCl水溶液(40mL)淬灭，并萃取到EtOAc(3x 50mL)中。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，以得到呈灰白色固体的CB10(2.76g，定量)。m/z＝299.9[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.04(s,1H),5.13-5.05(m,2H),3.84(s,3H),3.82-3.76(m,1H),3.71-3.67(m,1H),3.21(q,J＝5.1Hz,2H),1.67-1.63(m,4H),1.25(s,2H)。
方法CB11-1-(2-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)吡咯烷-1-基)乙-1-酮(CB11)
步骤1：(4-(3-溴-4-氟苯基)-4-氧丁基)氨基甲酸叔丁酯(CB11.1)
将2-溴-1-氟-4-碘苯(CB11.0)(3.00g，9.97mmol)于THF(75mL)中的溶液冷却至-40℃，并用逐滴添加的异丙基氯化镁(2.0M，5.0mL，9.97mol)处理。在-40℃下搅拌1小时并且然后冷却至-78℃之后，添加2-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.85g，9.97mmol)。在90分钟内温热至室温之后，将反应用饱和氯化铵水溶液淬灭，并萃取到EtOAc中。将有机层用盐水洗涤，通过疏水性玻璃料并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-60％EtOAc/环己烷纯化，以得到呈棕褐色油的CB11.1(1.50g，42％)，其在静置时固化。m/z＝362.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.18(dd,J＝1.8,6.6Hz,1H),7.94-7.89(m,1H),7.19(dd,J＝8.3,8.3Hz,1H),4.70-4.59(m,1H),3.26-3.22(m,2H),2.98(dd,J＝7.1,7.1Hz,2H),1.99-1.88(m,2H),1.27-1.14(m,9H)。
步骤2：2-(3-溴-4-氟苯基)吡咯烷(CB11.2)
向(4-(3-溴-4-氟苯基)-4-氧丁基)氨基甲酸叔丁酯(CB11.1)(1.50g，4.16mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加三氟乙酸(15mL，196mmol)。在室温下搅拌30分钟之后，在减压下去除溶剂。将粗残留物溶于THF(30mL)中，用三甲胺(0.70mL，5.00mmol)处理，然后用三乙酰氧基硼氢化钠(2.65g，12.5mmol)处理。在2小时之后，添加氰基硼氢化钠(392mg，6.24mmol)。在搅拌30分钟之后，将反应用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，并萃取到EtOAc中。将有机层分离，通过疏水性玻璃料，并在减压下浓缩，以得到呈油的CB11.2，其无需进一步纯化即可用于随后的步骤。m/z＝246.1[m+H]+。
步骤3：1-(2-(3-溴-4-氟苯基)吡咯烷-1-基)乙-1-酮(CB11.3)
向2-(3-溴-4-氟苯基)吡咯烷(CB11.2)(510mg，2.0mmol)于THF(20mL)和三乙胺(350mL，2.5mmol)中的溶液中添加乙酰氯(220mL，3.1mmol)。在室温下搅拌4小时之后，将反应用饱和NaHCO3溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，(MgSO4)干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗残留物通过硅胶色谱法使用0-60％乙酸乙酯纯化，以得到呈无色透明油的CB11.3(310mg，52％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)7.38-7.28(1H,m),7.12-7.02(2H,m),5.14-4.86(1H,m),3.77-3.57(2H,m),2.46-2.21(1H,m),2.13(3H,s),2.01-1.85(3H,m)。
步骤4：1-(2-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)吡咯烷-1-基)乙-1-酮(CB11)
使用1-(2-(3-溴-4-氟苯基)吡咯烷-1-基)乙-1-酮(CB11.3)按照方法CB3中概述的代表性程序制备期望产物，以得到呈红棕色油的粗产物(CB11)，其无需进一步纯化即可用于随后的步骤。
方法CB12-6-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基)-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(CB12)
步骤1：6-(3-溴-4-氟苄基)-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(CB12.1)
向3-溴-4-氟苯甲醛(CB12.0)(250mg，1.23mmol)于2-丙醇(10mL)中的溶液中添加2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(244mg，2.46mmol)以及异丙醇钛(IV)(0.53mL，1.79mmol)。在室温下搅拌过夜之后，然后将反应用硼氢化钠(47mg，1.23mmol)处理。在室温下搅拌1小时之后，将反应用6M HCl水溶液淬灭，在室温下搅拌2小时，并用4M NaOH水溶液中和至pH为约10。将反应混合物萃取到二乙醚中，并将有机层用MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗材料装载到SCX筒上，并用10％(7N NH3于MeOH中)DCM洗脱，以得到呈无色油的CB12.1(234mg，66％)。m/z＝288.0[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.48-7.43(m,1H),7.16-7.11(m,1H),7.05(dd,J＝8.3,8.3Hz,1H),4.74(s,4H),3.47(s,2H),3.35(s,4H)。
步骤2：6-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基)-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(CB12)
在大转盘管中向6-(3-溴-4-氟苄基)-2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(CB12.1)(234mg，0.82mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的脱气溶液添加双(频哪醇)二硼(311mg，1.23mmol)、乙酸钾(241mg，2.45mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(30mg，0.04mmol)。将反应混合物脱气并用氮气吹扫。在115℃下将密封管搅拌3小时之后，将反应混合物冷却至室温，并且化合物(CB12)无需进一步纯化即可进行下一步骤。
方法CB13-1,1,1-三氟-2-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-N,N-二甲基丙-2-胺(CB13)
步骤1：N-(2-(3-溴-4-氟苯基)-1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(CB13.1)
将1-(3-溴-4-氟苯基)乙-1-酮(CB13.0)(1.00g，4.61mmol)于THF(15mL)中的溶液置于氮气气氛下，然后用三甲基(三氟甲基)硅烷(0.82mL，5.53mmol)和四丁基氟化铵(1M于THF中，0.23mL，0.23mmol)处理。在室温下搅拌24小时之后，然后向反应混合物中装入另外的三甲基(三氟甲基)硅烷(0.82mL，5.53mmol)。在室温下搅拌2小时之后，在减压下蒸发溶剂，并将粗残留物溶于乙腈(10mL)中。将溶液用硫酸(1.0mL，18.8mmol)处理，并加热至80℃持续24小时。将反应混合物冷却至室温，通过逐滴添加饱和碳酸氢钠水溶液进行中和，并萃取到DCM(3x 20mL)中。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，通过疏水性玻璃料并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-60％ EtOAc/环己烷纯化，以得到呈白色固体的CB13.1(275mg，18％)。m/z＝329.9[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.60(d,J＝4.8Hz,1H),7.39-7.33(m,1H),7.11(dd,J＝8.5,8.5Hz,1H),6.05(s,1H),2.05(d,J＝19.7Hz,6H)。
步骤2：N-(2-(3-溴-4-氟苯基)-1,1,1-三氟丙-2-基)-N-甲基乙酰胺(CB13.2)
向氢化钠(60wt％分散于矿物油中，34mg，0.84mmol)于DMF(3mL)中的悬浮液中添加N-(2-(3-溴-4-氟苯基)-1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(CB13.1)(250mg，0.76mmol)。在室温下搅拌2小时之后，添加碘甲烷(0.05mL，0.84mmol)。在85℃下加热16小时之后，将反应冷却至室温，并用4％氯化锂水溶液(10mL)淬灭。将混合物在DCM(3x 15mL)中萃取，并将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，通过疏水性玻璃料并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-60％ EtOAc/环己烷纯化，以得到呈无色油的CB13.2(120mg，46％)。m/z＝343.9[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.50(d,J＝5.1Hz,1H),7.08(dd,J＝8.3,8.3Hz,2H),3.16(s,3H),2.10(s,3H),1.54(s,3H)。
步骤3：2-(3-溴-4-氟苯基)-1,1,1-三氟-N-甲基丙-2-胺(CB13.3)
将N-(2-(3-溴-4-氟苯基)-1,1,1-三氟丙-2-基)-N-甲基乙酰胺(CB13.2)(115mg，0.34mmol)于乙醇(2mL)和水(0.2mL)中的溶液用盐酸水溶液(11M，0.15mL，1.68mmol)处理。在100℃下搅拌4天之后，将反应冷却至室温，并在减压下去除溶剂，以得到呈白色固体的CB13.3(89mg，88％)，其无需进一步纯化即可用于随后的步骤。m/z＝302.0[M+H]+。
步骤4：1,1,1-三氟-2-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-N-甲基丙-2-胺(CB13)
将2-(3-溴-4-氟苯基)-1,1,1-三氟-N-甲基丙-2-胺(CB13.3)(89mg，0.30mmol)、双(频哪醇)二硼(90mg，0.36mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM(12mg，0.01mmol)的复合物和乙酸钾(87mg，0.89mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的混合物脱气，并用氮气吹扫。在100℃下搅拌2.5小时之后，将反应物冷却至室温，通过垫(2.5g)过滤，并用DCM洗脱。将滤液在减压下浓缩，以得到粗CB13，其无需进一步纯化即可用于随后的步骤。
方法CB14-(2-环丙基-5-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB14)
步骤1：4-溴-5-氟-2-碘苯甲酸(CB14.1)
将高锰酸钾(5.02g，31.8mmol)添加到4-溴-5-氟-2-碘代甲苯(CB14.0)(1.00g，3.18mmol)于水(12mL)和吡啶(8mL)中的溶液中。在100℃下搅拌过夜之后，使反应达到室温，在硅藻土垫上过滤并用水(20mL)洗涤。将水层用EtOAc(2x 15mL)洗涤，然后用2N HCl酸化直至pH为约1。将浑浊悬浮液用EtOAc(2x 15mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将期望产物(CB14.1)分离为白色固体，并且无需进一步纯化即可用于下一步骤(520mg，47％)。m/z＝344.9[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.6(s,1H),8.37(d,J＝6.8Hz,1H),7.76(d,J＝9.3Hz,1H)。
步骤2：4-溴-5-氟-2-碘苯甲酸甲酯(CB14.2)
将硫酸(0.04mL，0.754mmol)添加到(CB14.1)(0.52gr，1.51mmol)于MeOH(0.8mL)中的溶液中。在65℃下搅拌过夜之后，将反应用饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭，并用EtOAc(3x 8mL)萃取。在减压下蒸发有机溶剂，以得到呈结晶固体的期望化合物(CB14.2)(420mg，78％)。m/z＝358.9[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.20(d,J＝6.6Hz,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,1H),3.90(s,3H)。
步骤3：4-溴-5-氟-2-乙烯基苯甲酸甲酯(CB14.3)
将(CB14.2)(500mg，1.39mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(220mg，1.16mmol)、碳酸铯(910mg，2.79mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(100mg，0.14mmol)于1,4-二噁烷(20mL)和水(2mL)中的脱气溶液在100℃下搅拌过夜。在冷却至室温之后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并蒸发溶剂。将粗品通过硅胶色谱法纯化，用0-60％ EtOAc/环己烷洗脱，以得到呈透明固体的标题化合物(CB14.3)(200mg，56％)。m/z＝259.1[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.76(d,J＝6.6Hz,1H),7.65(d,J＝9.1Hz,1H),7.39(d,J＝6.6Hz,1H),5.60(d,J＝17.4Hz,1H),5.38(d,J＝11.1Hz,1H),3.90(s,3H)。
步骤4：4-溴-2-环丙基-5-氟苯甲酸甲酯(CB14.4)
在0℃下将二乙基锌(1.5mL，1.54mmol)于干燥DCM(2mL)中的脱气溶液用TFA(0.12mL，1.54mmol)于干燥DCM(1mL)中的脱气溶液处理。在0℃下搅拌20分钟之后，添加含二碘甲烷(0.12mL，1.54mmol)的干燥DCM(2mL)。在0℃下搅拌20分钟之后，添加(CB14.3)(200mg，0.777mmol)于干燥DCM(1mL)中的溶液。在室温下搅拌120分钟之后，将反应用NH4Cl(5mL)淬灭。将有机相收集，浓缩并在硅胶上纯化(0-70％EtOAc/环己烷洗脱)，以得到呈透明固体的标题化合物(CB14.4)(200mg，95％)。m/z＝273.1[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.56(d,J＝8.8Hz,1H),7.20(d,J＝6.6Hz,1H),3.91(s,3H),2.65-2.53(m,1H),1.04-0.95(m,2H),0.64(q,J＝5.4Hz,2H)。
步骤5：4-溴-2-环丙基-5-氟苯甲酸(CB14.5)
向(CB14.4)(200mg，0.732mmol)于干燥THF(10mL)中的溶液中添加LiOH(2M于水中，0.81mL，1.61mmol)。在室温下搅拌过夜之后，将所得沉淀物收集并且无需进一步纯化即可用于下一步骤，m/z＝259.1[M+H]+。
步骤6：(4-溴-2-环丙基-5-氟苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB14.6)
向(CB14.5)(120mg，0.463mmol)于干燥THF(5mL)中的搅拌溶液中添加1-羟基苯并三唑(81mg，0.60mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(115mg，0.60mmol)。在室温下搅拌1小时之后，添加DIPEA(0.24mL，1.39mmol)和哌啶(0.05mL，0.55mmol)。在室温下搅拌3小时之后，在减压下去除溶剂。将粗残留物通过硅胶色谱法纯化，用0-60％ EtOAc/环己烷洗脱，以得到呈澄清油的标题化合物(CB14.6)(74mg，49％)。m/z＝326.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.06(d,J＝6.3Hz,1H),6.93(d,J＝8.1Hz,1H),3.79-3.61(m,2H),3.20(dd,J＝5.4,5.4Hz,2H),1.92-1.79(m,1H),1.67(t,J＝11.6Hz,4H),1.50(d,J＝4.3Hz,4H),1.01-0.75(m,2H)。
步骤7：(2-环丙基-5-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB14)
在N2的气氛下向(CB14.6)(74mg，0.23mmol)、双(频哪醇)二硼(69mg，0.27mmol)和乙酸钾(67mg，0.68mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的混合物中添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM的复合物(9.3mg，0.01mmol)。在100℃下搅拌3.5小时之后，将反应物冷却至室温，通过硅藻土过滤，并用DCM(2x 10mL)萃取。将合并的有机层在真空中浓缩，以得到产物(CB14)，所述产物无需进一步纯化即可用于下一步骤(81mg，95％)，m/z＝373.2[M+H]+。
下列硼酸盐中间体根据如上文所描述的任何中间体方法CB1-CB14制备。
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方法PB1-N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(PB1)的制备
步骤1：关于N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(PB1)
向3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺(CB2.0)(10g，0.0421mol，1.0当量)于DCM(60mL)和二异丙基乙胺(15ml)中的溶液中添加环己烷碳酰氯(509ml，0.08435mol，2.0当量)。在室温下搅拌16小时之后，将反应混合物用DCM(500ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠(300ml)洗涤，并且然后用水(300ml)洗涤。将合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到粗材料，将所述粗材料用二乙醚(2x30ml)通过研磨纯化，以得到标题化合物PB1(12.5g，85.35％)。MS(ES):m/z 348.2[M+H]+。
方法PB2-4-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)吗啉-3-酮(PB2)的制备
步骤1：4-(3-溴苯基)吗啉-3-酮(PB2.1)
在室温下向吗啉-3-酮(1g，9.90mmol，1.0当量)于1,4-二噁烷(100mL)中的溶液中添加1,3-二溴苯PB2.0(2.6g，11.4mmol，1.1当量)。将反应混合物在氩气气氛下脱气10分钟，然后添加碳酸铯(6.2g，19.8mmol，2.0当量)、(乙酸钯)Pd(OAc)2(0.21g，0.99mmol，0.1当量)和4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(xanthphos)(0.8g，7.5mmol，0.1当量)。在三个平行反应中，将反应混合物在100℃下加热16小时。在反应完成之后，将反应混合物冷却至室温，合并，过滤，并在减压下浓缩。将粗产物通过快速色谱法，用0-30％乙酸乙酯/己烷洗脱。在减压下蒸发溶剂，以得到期望产物(PB2.1)(3.0g，39.48％)。MS(ES):m/z 258.1[M+2H]+
步骤2：6-4-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)吗啉-3-酮(PB2)
向4-(3-溴苯基)吗啉-3-酮(PB2.1)(3.0g，11.7mmol，1.0当量)于1,4-二噁烷(30mL)中的溶液中添加双(频哪醇合)乙硼烷(3.5g，14.0mmol，1.2当量)。将反应混合物在氩气气氛下脱气10分钟，然后添加乙酸钾(3.4g，35.1mmol，3.0当量)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(Pd(dppf)Cl2)(0.85g，1.17mmol，0.1当量)。在100℃下搅拌4小时之后，将反应混合物冷却至室温，过滤，并在减压下浓缩。将粗产物通过快速色谱法产物，用10-80％乙酸乙酯/己烷洗脱。在减压下蒸发溶剂，以得到期望产物PB2(3.2g，产率：90.11％)。MS(ES):m/z 304.1[M+H]+
方法PB3-6-氨基-2-氟-N,N-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(PB3)的制备
步骤1：2-氨基-6-氟苯甲酸甲酯(PB3.1)
在氮气气氛下在0℃下向2-氨基-6-氟苯甲酸(2g，12.892mmol，1.0当量)于DCM(20mL)和甲醇(5mL)中的溶液中添加(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(0.6M)(22mL，12.9mmol，1.0当量)。在室温下搅拌3小时之后，将反应混合物用乙酸缓慢淬灭，直至停止起泡。将反应混合物用DCM(50ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液(50ml)洗涤。将合并的有机层经硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残留物通过快速柱色谱法纯化，用2％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到PB3.1(2.1g，96.29％)。MS(ES):m/z 170.1[M+H]+
步骤2：6-氨基-2-氟-3-溴苯甲酸甲酯(PB3.2)
在0℃下向2-氨基-6-氟苯甲酸甲酯PB3.1(2.1g，12.416mmol，1.0当量)于乙醇(20mL)中的溶液中逐滴添加硫酸银(2.1g，14.899mmol，1.2当量)和含溴的乙醇(2.98g，18.62mmol，1.5当量)。在室温下搅拌3小时之后，将反应混合物用硫代硫酸钠和乙酸乙酯(100ml)淬灭。将混合物通过硅藻土床过滤，并将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残留物通过快速柱色谱法纯化，用4％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到PB3.2(1.5g，48.71％)。MS(ES):m/z 249.1[M+H]+
步骤3：6-氨基-2-氟-3-溴-N,N-二甲基苯甲酰胺(PB3.3)
向6-氨基-3-溴-2-氟苯甲酸甲酯PB3.2(1.4g，5.645mmol，1.0当量)于甲苯(10mL)中的溶液中添加二甲胺(2.0M于THF中)(4.8ml，9.596mmol，1.7当量)，添加三甲基铝(2.0M于THF中)(4.8ml，9.596mmol，1.7当量)。在室温下搅拌16小时之后，将反应混合物用冷水(100ml)和乙酸乙酯(150ml)淬灭。将混合物通过硅藻土床过滤，并将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残留物通过快速柱色谱法纯化，用75％乙酸乙酯/己乙基洗脱，以得到PB3.3(0.45g，30.54％)。MS(ES):m/z 262.1[M+H]+
步骤4：6-氨基-2-氟-N,N-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(PB3)
向6-氨基-3-溴-2-氟n,n-二甲基苯甲酰胺氟代苯甲酸甲酯PB3.3(0.4g，1.532mmol，1.0当量)于1,4-二噁烷(8mL)中的溶液中添加双频哪醇合二硼(1.17g，4.597mmol，3.0当量)和乙酸钾(0.45g，4.597mol，3.0当量)。在用氩气搅拌脱气15分钟之后，在室温下添加氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(xphos-PdG2)(0.12g，0.153mmol，0.1当量)。在120℃下搅拌2.5小时之后，将反应混合物用水(50ml)淬灭。将水层用乙酸乙酯(100ml x 3)洗涤。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将残留物通过快速柱色谱法纯化，以2％甲醇/DCM洗脱，以得到PB3(0.4g，84.73％)。MS(ES):m/z 309.1[M+H]+
方法PB4-1-乙基-N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环丁烷-1-甲酰胺(PB4)的制备
步骤1：1-乙基环丁烷-1-甲酸(PB4.1)
在氩气气氛下在0℃下向环丁烷甲酸(1g，5.0mmol，1当量)于干燥THF中的搅拌溶液中添加二异丙基氨基锂(2M于THF中)(10mL，20.00mmol，2.0当量)。在0℃下搅拌2小时之后，添加碘乙烷(1.7g，11mmol，1.1当量)。在室温下搅拌16小时之后，将反应混合物倒入水中(50ml)，用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到PB4.1，其无需纯化即可用于下一步骤。(1.2g,100％).1HNMR(DMSO-d6,400MHZ):12.08(s,1H),1.82(m,4H),1.60(m,2H),1.48(q,2H),0.94(t,3H)。
步骤2：1-乙基-N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环丁烷-1-甲酰胺(PB4)
在0℃下向PB4.1(1.2g，9.375mmol，1.2当量)于THF中的搅拌溶液中添加氯氧化磷和吡啶。在0℃下搅拌20分钟之后，逐滴添加3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺(CB2.0)(2.554g，7.812mmol，1.0当量)于THF中的溶液。在室温下搅拌1小时之后，将反应混合物倒入水中(100ml)，用碳酸氢钠中和，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combi flash色谱法纯化，用9％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到纯PB4。(0.350g，10.75％)。MS(ES):m/z 348.24[M+H]+。
本发明的化合物的制备
实例1：方法A-2-(2-氟-5-甲氧基苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-42)的制备
/>
步骤1：2,4-二氯-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.1)
向4,6-二氯-2-甲基烟酸乙酯(1.0)(20g，85.4mmol)于叔丁醇(200mL)中的溶液中添加1,3,5-三嗪(13.8g，170.8mmol)和叔丁醇钾(19.1g，170.8mmol)。在90℃下搅拌1小时之后，将混合物冷却至室温并在减压下蒸发。将所得残留物用水(300mL)稀释，然后使用2MHCl水溶液将其酸化至约pH 5。将所得悬浮液在室温下搅拌1小时之后，将固体通过过滤收集并用水洗涤。将粗固体悬浮在4:1DCM:乙腈(250mL)中并搅拌20分钟。将固体通过过滤收集，并用1:1DCM:二乙醚(100mL)洗涤。通过与甲苯(200mL)的共沸蒸馏从固体中去除残留的水。获得呈棕色固体(9.43g，51％)的化合物(1.1)，所述化合物无需进一步纯化即可使用。m/z＝215.9[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ11.82(s,1H),7.75(s,1H),7.60(t,J＝5.9Hz,1H),6.59(d,J＝7.1Hz,1H)。
步骤2：2-氯-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.2)
向装有含2,4-二氯-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.1)(1.61g，7.5mmol)的正丁醇(12.0mL)和N,N-二异丙基乙胺(2.6mL，15mmol)的10-20mL微波管中添加1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-醇(WO 2015131080中描述的制剂，1.59g，8.25mmol)。在160℃下在Biotage微波炉中加热6小时之后，将沉淀物通过过滤分离，并依次用乙酸乙酯(15mL)和二乙醚(40mL)洗涤。将反应在相同规模下并行进行三次，并合并，以得到呈棕色固体的粗产物(1.2)(5.02g，60％)，所述粗产物无需进一步纯化即可使用。m/z＝372.5[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.57(s,1H),11.90(d,J＝3.8Hz,1H),8.43(s,1H),8.20-8.15(m,1H),7.53(d,J＝6.6Hz,2H),7.07-7.02(m,1H),6.53(d,J＝7.1Hz,1H),4.76-4.72(m,1H),3.70(dd,J＝3.4,4.2Hz,1H),3.61(s,2H),2.98-2.88(m,2H),1.89-1.87(m,2H),1.57-1.50(m,2H)。
步骤3-2-(2-氟-5-甲氧基苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-42)
向装有含2-氯-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.2)(100mg，0.269mmol)、2-氟-5-甲氧基苯基硼酸(69mg，0.403mmol)的二噁烷(4.0mL)、水(0.5mL)和K3PO4(228mg，1.08mmol)的2-5mL微波小瓶中添加XPhos Pd G2催化剂(21mg，0.027mmol)。将混合物脱气，用N2吹扫，并在Biotage微波炉中在150℃下加热45分钟。将混合物装载到Biotage-/>HM-N筒上，并通过硅胶色谱法纯化(以0-20％MeOH/DCM洗脱)。将分离的黄色残留物用Et2O处理，通过过滤收集，用Et2O洗涤，在40℃下在真空下干燥，以得到呈黄色固体的标题化合物(I-42)(81mg，65％)。m/z＝462[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.42(s,1H),11.68-11.62(m,1H),8.72(d,J＝1.4Hz,1H),8.07(d,J＝3.0Hz,1H),7.50-7.46(m,2H),7.42(d,J＝7.3Hz,1H),7.29(dd,J＝9.0,10.5Hz,1H),7.11-7.01(m,2H),6.60(d,J＝7.3Hz,1H),4.70(d,J＝4.3Hz,1H),3.83(s,3H),3.68-3.61(m,1H),3.57-3.49(m,2H),2.92-2.83(m,2H),1.88-1.80(m,2H),1.56-1.45(m,2H)。
实例2：方法B-2-(2,6-二氟-3-甲氧基苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-92)的制备
步骤1：4-氯-6-(2,6-二氟-3-甲氧基苯基)-2-甲基烟酸乙酯(2.1)
将2,6-二氟-3-甲氧基-溴苯(838mg，3.76mmol)于干燥THF(5mL)中的溶液在氮气气氛下在-78℃下用异丙基氯化镁氯化锂复合物溶液(1.3M THF，4.2mL，5.40mmol)逐滴处理。在-78℃下搅拌40分钟之后，逐滴添加氯化锌(2M于THF中，5.6mL，11.28mmol)。在温热至0℃持续20分钟之后，将有机锌悬浮液添加到4,6-二氯-2-甲基烟酸乙酯(1.0)(550mg，2.35mmol)和Pd(PPh3)4(272mg，0.235mmol)于THF(7mL)中的脱气和氮气吹扫的混合物中。在室温下搅拌过夜之后，将反应用饱和NH4Cl淬灭，并萃取到EtOAc中(2x)。将合并的有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱法(0-60％EtOAc/环己烷梯度洗脱)纯化，以得到呈无色油的标题化合物(2.1)(745mg，93％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.39(s,1H),7.02-6.90(m,2H),4.49(q,J＝7.2Hz,2H),3.90(s,3H),2.63(s,3H),1.44(dd,J＝7.2,7.2Hz,3H)。
步骤2：4-氯-2-(2,6-二氟-3-甲氧基苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(2.2)
按照实例1，方法A，步骤1中概述的以下代表性程序进行反应，以得到产物(2.2)1HNMR(400MHz,DMSO):δ11.67-11.67(m,1H),7.76(s,1H),7.53(d,J＝7.3Hz,1H),7.41-7.33(m,1H),7.27-7.19(m,1H),6.63(d,J＝7.3Hz,1H),3.90(s,3H)。
步骤3：2-(2,6-二氟-3-甲氧基苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-92)
按照实例1，步骤2中概述的以下代表性程序进行反应，以得到产物(I-92)。1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.45(s,1H),11.64(s,1H),8.35(s,1H),7.97(d,J＝2.8Hz,1H),7.41-7.33(m,2H),7.27-7.18(m,1H),7.10(dd,J＝9.0,9.0Hz,1H),6.92(d,J＝9.1Hz,1H),6.47(d,J＝7.3Hz,1H),4.60(d,J＝4.0Hz,1H),3.82(s,3H),3.60-3.50(m,2H),3.15-3.08(m,1H),2.82-2.73(m,2H),1.72(d,J＝9.6Hz,2H),1.46-1.34(m,2H)。
实例3：方法C-4-((1-乙基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)氨基)-2-(2-氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-228)的制备
/>
步骤1：4-氯-2-(2-氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(3.1)
在氮气气氛下向2,4-二氯-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.1)(250mg，1.16mmol)、(5-氟-2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(CB1)(422mg，1.16mmol)和四(三苯基膦)钯(134mg，10mol％)于DME(5.0mL)中的混合物中添加碳酸钾溶液(2M于H2O中，1.3mL，2.56mmol)。将反应混合物用氮气流吹扫5分钟，然后在Biotage Initiator微波炉中在100℃下加热1小时。将粗反应混合物冷却至室温，并通过垫(2.5g)过滤，用DCM冲洗。将滤液在减压下浓缩，并通过硅胶柱色谱法(0-15％MeOH/DCM梯度洗脱)纯化，以得到(3.1)(381mg，63％产率，80％纯度)，其无需进一步纯化即可进行下一步骤。m/z＝416.7[M+H]+。
步骤2：4-氯-2-(2-氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(3.2)
向4-氯-2-(2-氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(3.1)(200mg，0.48mmol)和2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(0.34mL，1.92mmol)于THF(5.0mL)中的混合物中添加1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.36mL，2.40mmol)，所述混合物用氮气流脱气5分钟。在室温下搅拌16小时之后，在减压下去除溶剂，用水(15mL)稀释，并用DCM(2x 15mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，通过疏水性玻璃料并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶色谱法使用0-20％ MeOH/DCM纯化，以得到呈黄色油的(3.2)(234mg，89％产率，84％纯度)，其中16％未反应(3.1)共洗脱。化合物无需进一步纯化即可以进行下一步骤。m/z＝546.9[M+H]+。
步骤3：4-((1-乙基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)氨基)-2-(2-氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(3.3)
在4-氨基-1-乙基嘧啶-2(1H)-酮(42mg，0.30mmol)、Xantphos(23mg，0.04mmol)和碳酸铯(92mg，0.28mmol)于1,4-二噁烷(2.5mL)中的混合物中添加4-氯-2-(2-氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(3.2)(110mg，0.20mmol)。将反应混合物在室温下搅拌，在氮气流下脱气10分钟，用乙酸钯(II)(4.5mg，0.02mmol)脱气另外5分钟，并且然后在100℃下加热16小时。将粗材料经垫(2.5g玻璃料)过滤，用5％ MeOH/DCM洗脱，然后向下通过具有0-20％MeOH/DCM的硅胶柱，以得到标题化合物(3.3)(88mg，67％产率，62％纯度)，所述标题化合物无需进一步纯化即可使用。m/z＝649.2[M+H]+。
步骤4：4-((1-乙基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)氨基)-2-(2-氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-228)
将粗4-((1-乙基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)氨基)-2-(2-氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)-6-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(3.3)(88mg，0.14mmol)于DCM(1.0mL)中的溶液用三氟乙酸(0.50mL)逐滴处理。在室温下搅拌16小时之后，在减压下去除溶剂。将粗材料用饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)中和，并萃取到DCM(3x 5mL)中。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，通过疏水性玻璃料并在减压下浓缩。将粗材料通过制备型HPLC纯化，以得到呈白色固体的4-((1-乙基-2-氧代-1,2-二氢嘧啶-4-基)氨基)-2-(2-氟-5-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-228)(23mg，33％)。m/z＝519.7[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.98(s,1H),11.94(s,1H),9.35(s,1H),8.01(d,J＝7.1Hz,1H),7.58-7.49(m,2H),7.27(d,J＝10.1Hz,1H),6.73(d,J＝7.3Hz,1H),6.13(d,J＝7.1Hz,1H),3.86(s,3H),3.81(q,J＝7.0Hz,2H),3.66-3.54(m,2H),3.19-3.13(m,2H),1.61-1.56(m,4H),1.48-1.44(m,2H),1.22(t,J＝7.1Hz,3H)。
实例4：方法D-2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-215)的制备
步骤1：4-溴-5-氟-2-甲氧基苯甲醛(4.1)
在氮气气氛下在0℃下向2-溴-1-氟-4-甲氧基苯(4.0)(2.65g，12.93mmol)于DCM(45mL)中的溶液中逐滴添加氯化钛(IV)(1M于DCM中，12.93mL，19.93mmol)。在15分钟之后，添加二氯甲基甲醚(1.4mL，15.51mmol)和另外一部分氯化钛(IV)(1M于DCM中，12.93mL，19.93mmol)。在0℃下搅拌3小时之后，将反应物倒入冰/水中淬灭，并萃取到DCM(3x)中。将合并的萃取物用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在真空中浓缩，以得到用于下一步骤的呈黄色/橙色固体的标题化合物(4.1)(3.69g)。
步骤2：2-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊环(4.2)
将4-溴-5-氟-2-甲氧基苯甲醛(4.1)(3.01g，12.93mmol)、乙二醇(1.4mL，25.86mmol)和对甲苯磺酸一水合物(250mg，1.29mmol)于甲苯(30mL)中的混合物在回流(迪安-斯塔克(Dean-Stark))下加热18小时。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将残留物通过硅胶色谱法使用0-50％ EtOAc/异己烷纯化，以得到呈浅黄色油的标题化合物(4.2)(1.91g，53％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.31(d,J＝8.6Hz,1H),7.04(d,J＝5.1Hz,1H),6.06(s,1H),4.14-3.99(m,4H),3.85(s,3H)。
步骤3：2-(4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(4.3)
按照方法CB3中所描述的以下代表性程序，使用2-(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊环(4.2)进行反应，以得到产物(4.3)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.23-7.17(m,1H),6.12(s,1H),4.14-4.01(m,4H),3.91-3.86(m,2H),1.38-1.34(m,9H),1.29-1.25(m,6H)。
步骤4：2-(4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(4.4)
按照实例1，方法A，步骤3中描述的以下代表性程序，使用2-氯-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.2)和2-(4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(4.3)进行反应，以得到产物(4.4)。1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.47(s,1H),11.73-11.68(m,1H),8.77(s,1H),8.11(d,J＝2.5Hz,1H),7.60(d,J＝6.1Hz,1H),7.52(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),7.47(d,J＝7.3Hz,1H),7.38(s,1H),7.07(d,J＝8.8Hz,1H),6.66(d,J＝7.3Hz,1H),6.08(s,1H),4.74(d,J＝4.0Hz,1H),4.14(dd,J＝6.8,6.8Hz,2H),4.03-3.91(m,4H),3.72-3.66(m,1H),3.59-3.52(m,2H),3.01-2.83(m,3H),1.88(d,J＝9.9Hz,2H),1.60-1.50(m,2H)。
步骤5：5-氟-4-(4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-2-甲氧基苯甲醛(4.5)
将2-(4-(1,3-二氧戊环-2-基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(4.4)(240mg，0.450mmol)和HCl(4N于1,4-二噁烷中，4mL，16mmol)于THF(10mL)中的混合物在50℃下加热2小时。将冷却混合物用饱和NaHCO3中和，并萃取到EtOAc(x 2)中。将合并的萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，以得到呈橙色固体的标题化合物(4.5)(194mg，88％)，所述标题化合物无需纯化即可用于下一步骤。
步骤6：2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-215)
在室温下向5-氟-4-(4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-2-甲氧基苯甲醛(4.5)(90mg，0.184mmol)、二甲胺(370μL，0.735mmol)于DCM(5mL)和MeOH(1mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠(58mg，0.276mmol)。在搅拌18小时之后，将混合物经垫过滤，并且使滤液通过SCX滤筒(用MeOH洗脱，然后用7N甲醇氨洗脱)。将粗材料通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的2-(4-((二甲基氨基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-215)(23mg，24％)。m/z＝519.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.41(s,1H),11.66(d,J＝5.5Hz,1H),8.73(d,J＝1.3Hz,1H),8.23(s,1H),8.08(d,J＝3.0Hz,1H),7.53(d,J＝6.4Hz,1H),7.48(dd,J＝3.1,9.0Hz,1H),7.44-7.40(m,1H),7.03(d,J＝8.8Hz,1H),6.61(d,J＝7.3Hz,1H),3.86(s,4H),3.68-3.60(m,2H),3.57-3.49(m,3H),2.92-2.83(m,2H),2.23(s,6H),1.88-1.80(m,2H),1.56-1.45(m,2H)。
实例5：方法E-2-(3-羟基-1-哌啶基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-50)的制备
步骤1：2-氯-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.2)
按照实例1，方法A，步骤2中概述的以下程序进行反应。
步骤2：2-(3-羟基-1-哌啶基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-50)
向装有含2-氯-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.2)(200mg，0.58mmol)、3-羟基哌啶(65mg，0.64mmol)、碳酸钾(149mg，1.0mmol)和Xantphos(62mg，0.10mmol)的二噁烷(8mL)的反应管添加双(二亚苄基丙酮)钯(0)(31mg，0.05mmol)，所述反应管用N2吹扫。在125℃下搅拌8小时之后，将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土过滤。在真空中去除溶剂，以留下粗残留物，将所述粗残留物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的2-(3-羟基-1-哌啶基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-50)(16mg，7％)。m/z＝437[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.25(s,1H),11.15(s,1H),8.04(s,1H),7.92(s,1H),7.47-7.41(m,1H),7.21(s,1H),6.92-6.87(m,1H),6.22(d,J＝6.9Hz,1H),4.30(d,J＝11.8Hz,1H),4.14-4.06(m,1H),3.62-3.50(m,4H),3.04-2.98(m,1H),2.89-2.79(m,3H),1.94-1.75(m,4H),1.55-1.41(m,4H)。
实例6：方法F-2-[2-氟-4-(吡咯烷-1-羰基)苯基]-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-115)的制备
步骤1：3-氟-4-[4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-5-氧代-6H-1,6-萘啶-2-基]苯甲酸(I-134)
向3-氟-4-[4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-5-氧代-6H-1,6-萘啶-2-基]苯甲酸甲酯(I-125)(1.43g，2.92mmol)溶解于THF(20mL)和水(5mL)中的混合物中添加氢氧化锂一水合物(200mg，4.67mmol)。在室温下搅拌过夜之后，添加含4M HCl的二噁烷(10mL)，并将混合物蒸发至干燥。将残留物用二噁烷(2x 100mL)通过共沸蒸馏干燥，以得到呈无色树胶固体的粗产物(I-134)(2.78g)。粗残留物无需进一步纯化即可用于下一步骤(假定为HCl盐加上残留的LiCl)。将45mg粗产物通过制备型HPLC进一步纯化，以得到呈白色固体的纯3-氟-4-[4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-5-氧代-6H-1,6-萘啶-2-基]苯甲酸(I-134)。m/z＝476[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ13.47-13.46(m,1H),12.50(s,1H),11.72(d,J＝5.3Hz,1H),8.80(s,1H),8.17-8.09(m,2H),7.95(dd,J＝1.3,8.1Hz,1H),7.86(s,1H),7.55-7.44(m,2H),7.08(d,J＝9.1Hz,1H),6.65(d,J＝6.6Hz,1H),4.73-4.67(m,1H),3.73-3.66(m,1H),3.61-3.53(m,2H),2.95-2.87(m,2H),1.89(dd,J＝3.5,8.8Hz,2H),1.60-1.49(m,2H)。
步骤2：2-[2-氟-4-(吡咯烷-1-羰基)苯基]-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-115)的制备
向溶解于DMF(900μL)中的粗3-氟-4-[4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-5-氧代-6H-1,6-萘啶-2-基]苯甲酸(I-134)(94mg，假定0.19mmol)中添加DIPEA(138μL，0.79mmol)、吡咯烷(50μL，0.59mmol)和HOPO(33mg，0.29mmol)和EDCl.HCl(51mg，0.26mmol)于DMF(300μL)中的溶液。在室温下搅拌过夜之后，将反应混合物用DCM(6mL)稀释，并用水(3mL)洗涤。将有机相收集，并用更多DCM洗涤水相。将合并的有机相通过疏水分离器，并在真空中去除溶剂，以留下粗残留物，所述粗残留物通过制备HPLC纯化，以得到呈黄色固体的2-[2-氟-4-(吡咯烷-1-羰基)苯基]-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-115)(12mg，12％)。m/z＝529[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.49(s,1H),11.73(s,1H),8.79(s,1H),8.13-8.04(m,2H),7.57-7.50(m,3H),7.47(d,J＝7.1Hz,1H),7.08(d,J＝8.8Hz,1H),6.64(d,J＝7.3Hz,1H),4.74(d,J＝1.3Hz,1H),3.68(d,J＝1.3Hz,1H),3.61-3.46(m,6H),2.95-2.87(m,2H),1.98-1.86(m,6H),1.60-1.49(m,2H)。
实例7：方法G-2-(6-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)-4-[(5-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑-3-基)氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-285)的制备
向6-氟-5-(5-氧代-4-((5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-基)氨基)-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(7.0)(77mg，0.13mmol)于(2mL)中的溶液中添加三氟乙酸(0.5mL)。在室温下搅拌3小时之后，将混合物在真空中浓缩，并将所得残留物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的2-(6-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)-4-[(5-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑-3-基)氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-285)(47mg，74％)。m/z＝461[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.02(s,1H),8.29(s,1H),7.82(s,1H),7.45(d,J＝7.3Hz,1H),7.39(dd,J＝5.7,8.7Hz,1H),7.29(dd,J＝8.8,8.8Hz,1H),6.59(d,J＝7.3Hz,1H),5.99(s,1H),4.32(s,2H),3.45(dd,J＝9.9,11.6Hz,2H),2.95-2.88(m,1H),2.81(dd,J＝5.7,5.7Hz,4H),1.83(dd,J＝1.8,12.9Hz,4H),1.70-1.58(m,4H)。
实例8：方法H-2-(2,6-二氟苯基)-8-(1-羟乙基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-15)和2-(2,6-二氟苯基)-8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-16)的制备
步骤1：8-溴-4-氯-2-(2,6-二氟苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(8.1)
向4-氯-2-(2,6-二氟苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(8.0，根据方法B步骤1和2由2,6-二氟溴苯和4,6-二氯-2-甲基烟酸乙酯制备)(750mg，2.5mmol)溶解于DMF(10mL)中的溶液中添加N-溴代琥珀酰亚胺(460mg，2.5mol)。在室温下搅拌1小时之后，在真空中去除溶剂，并将DCM添加到残留物中以促进产物沉淀。将固体通过过滤收集，并通过用最少的甲醇研磨进行纯化，以得到呈灰白色固体的纯产物(8.1)(450mg，47％)。1H NMR(400MHz,DMSO)12.02-12.02(1H,m),8.01-7.94(2H,m),7.75-7.66(1H,m),7.36(2H,t,J＝8.1Hz)。
步骤2：8-溴-2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-5)
按照实例1，方法A，步骤2中概述的以下程序，使用8-溴-4-氯-2-(2,6-二氟苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(8.1)和1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-醇进行反应，以得到呈黄色固体的期望产物(I-5)。m/z＝528[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.65(s,1H),12.13-12.09(m,1H),8.60(s,1H),8.11(d,J＝2.5Hz,1H),7.91(s,1H),7.69-7.60(m,1H),7.52(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),7.32(dd,J＝8.0,8.0Hz,2H),7.07(d,J＝8.8Hz,1H),4.73(d,J＝4.3Hz,1H),3.70-3.65(m,1H),3.56(d,J＝12.6Hz,2H),2.95-2.86(m,2H),1.90-1.84(m,2H),1.58-1.46(m,2H)。
步骤3：8-乙酰基-2-(2,6-二氟苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(8.2)
向8-溴-2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-5)(75mg，0.14mmol)溶解于DMF(1mL)中的并用氮气吹扫20分钟的溶液中添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(67mg，0.18mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(16mg，0.01mmol)。在80℃下搅拌48小时之后，将混合物用水(6mL)稀释，并用DCM(3x 3mL)萃取。将合并的有机相用水(4mL)洗涤，并且然后通过疏水分离器。在真空中去除溶剂，并且将粗残留物通过柱色谱法纯化，用0-20％甲醇/DCM洗脱，以得到呈灰白色固体的纯8.2(40mg，57％)。1H NMR(400MHz,DMSO)12.48(1H,s),12.26(1H,s),8.60(1H,s),8.13-8.08(1H,m),7.91(1H,s),7.68-7.59(1H,m),7.55-7.49(1H,m),7.36-7.29(2H,m),7.11-7.03(1H,m),4.73(1H,d,J＝4.0Hz),3.71-3.65(1H,m),3.63-3.53(2H,m),2.95-2.88(2H,m),2.74-2.72(3H,m),1.90-1.80(2H,m),1.57-1.47(2H,m)。
步骤4：2-(2,6-二氟苯基)-8-(1-羟乙基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-15)
向8-乙酰基-2-(2,6-二氟苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(8.2)(40mg，0.08mmol)于乙醇(0.6mL)中的溶液中添加硼氢化钠(31mg，0.81mmol)。在室温下搅拌1小时之后，将反应用饱和氯化铵水溶液(1mL)淬灭，搅拌10分钟，并用乙酸乙酯(3x 3mL)萃取。将合并的有机相干燥(MgSO4)，过滤并在真空中蒸发，以得到粗产物，所述粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的(I-15)(16mg，42％)。m/z＝494[M+H]+，1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.44(s,1H),8.09(d,J＝2.9Hz,1H),7.56-7.48(m,2H),7.38(s,1H),7.14(dd,J＝8.2,8.2Hz,2H),7.07(d,J＝8.8Hz,1H),5.23(q,J＝6.3Hz,1H),3.82-3.74(m,1H),3.62-3.54(m,2H),2.98-2.90(m,2H),2.03-1.97(m,2H),1.73-1.63(m,2H),1.56(d,J＝6.4Hz,3H)。未观察到3个可交换质子。
步骤5：2-(2,6-二氟苯基)-8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-16)
在氮气气氛下在0℃下向8-乙酰基-2-(2,6-二氟苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(8.2)(73mg，0.14mmol)溶解于THF(3mL)中的溶液中逐滴添加甲基溴化镁(297μL，3M二乙醚溶液，0.89mmol)。在搅拌25分钟之后，将反应用饱和氯化铵水溶液(2mL)淬灭，并用水(5mL)稀释。将混合物用DCM(3x 5mL)萃取，并且使合并的有机萃取物通过相分离器，并在真空中浓缩，以得到粗产物，所述粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的纯(I-16)(17mg，23％)。m/z＝508[M+H]+,1H NMR(400MHz,MeOD)δ12.51(s,1H),8.48(td,J＝1.3,11.9Hz,2H),8.11(d,J＝2.9Hz,1H),7.57-7.49(m,2H),7.36(s,1H),7.16(dd,J＝8.3,8.3Hz,2H),7.08(dd,J＝1.6,8.8Hz,1H),3.83-3.75(m,1H),3.63-3.56(m,2H),2.99-2.91(m,2H),2.03-1.98(m,2H),1.74-1.67(m,2H),1.65(s,6H)。未观察到2个可交换质子。
实例9：方法I-2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-5-氧代-6H-1,6-萘啶-8-甲腈(I-33)和2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-5-氧代-6H-1,6-萘啶-8-甲酸(I-39)的制备
步骤1：2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-5-氧代-6H-1,6-萘啶-8-甲腈(I-33)
向微波管中装入8-溴-2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-5)(200mg，0.37mmol)、氰化铜(I)(68mg，0.75mmol)和DMF(2mL)。在微波中在175℃下搅拌3小时之后，将反应混合物冷却至室温并在真空中蒸发，以得到粗产物，所述粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的纯I-33(9mg，5％)。m/z＝475[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.62-12.57(m,1H),8.54(s,1H),8.40(s,1H),8.10(d,J＝2.5Hz,1H),7.69-7.60(m,1H),7.51(dd,J＝2.7,9.0Hz,1H),7.32(dd,J＝8.0,8.0Hz,2H),7.07(d,J＝9.1Hz,1H),4.73-4.72(m,1H),3.70-3.64(m,1H),3.56(d,J＝12.1Hz,2H),2.90(dd,J＝10.0,10.0Hz,2H),1.84(d,J＝9.6Hz,2H),1.58-1.48(m,2H)。未观察到一个可交换质子
步骤2：2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-5-氧代-6H-1,6-萘啶-8-甲酸(I-39)
向装有含2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-5-氧代-6H-1,6-萘啶-8-甲腈(I-33)(70mg，0.14mmol)的水(1.5mL)和二噁烷(2mL)的反应管中添加浓硫酸(168μL，3.09mmol)。在115℃下搅拌24小时之后，使用NaHCO3(形成不溶物)将反应混合物的pH调节至pH 8。将混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土垫过滤，用甲醇和DMF洗涤。在真空中蒸发滤液，以得到粗产物，所述粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的I-39(10mg，14％)。m/z＝494[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.83-12.77(m,1H),8.65(s,1H),8.38(s,1H),8.15(d,J＝2.8Hz,1H),7.75-7.67(m,1H),7.54(dd,J＝2.8,8.8Hz,1H),7.40(dd,J＝8.3,8.3Hz,2H),7.15(d,J＝8.8Hz,1H),4.74(s,1H),4.08(s,1H),3.72-3.67(m,1H),3.60(dd,J＝4.4,8.2Hz,2H),2.98-2.91(m,2H),1.87(dd,J＝3.2,12.8Hz,2H),1.58-1.47(m,2H)。
未观察到1个可交换的质子
实例10：方法J-2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-8-甲基-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-25)的制备
步骤1：8-溴-4-氯-2-(2,6-二氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(10.0)
向8-溴-4-氯-2-(2,6-二氟苯基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(8.1)(460mg，1.24mmol)溶解于DMF(10mL)中的溶液中添加碘化钾(51mg，0.31mmol)、碳酸钾(210mg，1.55mmol)和4-甲氧基苄基氯(200μL，1.49mmol)。在室温下搅拌2小时之后，将反应混合物用水(20mL)稀释并形成沉淀物。将固体通过过滤收集并干燥，以得到呈灰白色固体的期望产物(10.0)(550mg，90％)。1H NMR(400MHz,DMSO)8.56(1H,s),7.99(1H,s),7.75-7.66(1H,m),7.45-7.33(4H,m),7.00-6.95(2H,m),5.16(2H,s),3.80-3.78(3H,m)。
步骤2：4-氯-2-(2,6-二氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-8-甲基-1,6-萘啶-5(6H)-酮(10.1)
向具有含8-溴-4-氯-2-(2,6-二氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(10.0)(150mg，0.30mmol)、甲基硼酸(21mg，0.35mmol)和碳酸铯(298mg，0.91mmol)的二噁烷(1.5mL)和水(0.15mL)的转盘管中添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与DCM的复合物(30mg，0.03mmol)，所述转盘管用氮气吹扫，在100℃下搅拌过夜之后，将反应混合物用水(10mL)和盐水(2mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x 20mL)萃取。将合并的有机相干燥(MgSO4)，过滤并在真空中去除溶剂，以得到粗产物，所述粗产物通过柱色谱法纯化，用0-20％乙酸乙酯/DCM洗脱，以得到呈黄色固体的纯(10.1)(44mg，34％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)7.59(1H,s),7.44-7.35(1H,m),7.35-7.22(3H,m),7.06-6.99(2H,m),6.91-6.85(2H,m),5.14-5.10(2H,m),3.81-3.79(3H,m),2.30-2.28(3H,m)。
步骤3：2-(2,6-二氟苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-6-(4-甲氧基苄基)-8-甲基-1,6-萘啶-5(6H)-酮(10.2)
按照实例1，方法A，步骤2中概述的以下程序，使用4-氯-2-(2,6-二氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-8-甲基-1,6-萘啶-5(6H)-酮(10.1)和1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-醇进行反应，以得到呈黄色固体的期望粗产物(10.2)，所述粗产物直接用于下一步骤。
步骤4：2-(2,6-二氟苯基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-8-甲基-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-25)
向微波管中装入2-(2,6-二氟苯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-6-(4-甲氧基苄基)-8-甲基-1,6-萘啶-5(6H)-酮(10.2)(57mg，0.09mmol)和TFA(1mL)。将管密封，并将反应在165℃下加热4小时。在真空中去除反应溶剂，以得到粗产物，将所述粗产物稀释于DCM(1mL)、甲醇(2mL)和1M甲醇氨(4mL)中[注意！]，并在室温下搅拌1小时，然后再蒸发至干燥。将残留物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的纯(I-25)(10mg，22％)。m/z＝464[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.78(s,1H),11.63(s,1H),8.55(s,1H),8.09(d,J＝2.8Hz,1H),7.67-7.58(m,1H),7.51(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),7.37(s,1H),7.31(dd,J＝8.0,8.0Hz,2H),7.04(d,J＝8.8Hz,1H),4.73(s,1H),3.70-3.65(m,1H),3.54(d,J＝12.9Hz,2H),2.94-2.85(m,2H),2.21(s,3H),1.90-1.84(m,2H),1.58-1.47(m,2H)。
实例11：方法K-2-(2,6-二氟苯基)-8-乙基-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-49)的制备
步骤1：8-溴-4-((5-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-2-(2,6-二氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(11.0)
按照实例1，方法A，步骤2中概述的以下程序，使用8-溴-4-氯-2-(2,6-二氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(10.0)和5-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-2-胺进行反应，以得到呈黄色固体的期望粗产物(11.0)，所述粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。
步骤2：4-((5-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-2-(2,6-二氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-8-乙烯基-1,6-萘啶-5(6H)-酮(11.1)
按照实例10，方法J，步骤2概述的以下程序，使用8-溴-4-((5-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-2-(2,6-二氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(11.0)和乙烯基硼酸松醇酯进行反应，以得到呈黄色固体的75％纯度的期望产物(11.1)。产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。
步骤3：4-((5-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-2-(2,6-二氟苯基)-8-乙基-6-(4-甲氧基苄基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(11.2)
使用10％ Pd/C筒(室温，大气压)，使4-((5-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-2-(2,6-二氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-8-乙烯基-1,6-萘啶-5(6H)-酮(11.1)(117mg，0.16mmol)于甲醇(20mL)中的溶液通过H-在真空中去除溶剂，以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化，用0-100％二乙醚/DCM洗脱，以得到呈黄色固体的期望产物(11.2)(53mg，45％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)12.51-12.47(1H,m),8.49(1H,s),7.98-7.95(1H,m),7.30-7.23(1H,m),7.22-7.18(2H,m),7.01-6.98(1H,m),6.91(4H,q,J＝7.7Hz),6.82(2H,d,J＝8.6Hz),5.06(2H,s),3.84-3.78(1H,m),3.75-3.71(3H,m),3.35-3.28(2H,m),2.96-2.88(2H,m),2.75-2.64(2H,m),1.84-1.76(2H,m),1.65-1.59(2H,m),0.84-0.81(12H,m),0.00(6H,s)。
步骤4：2-(2,6-二氟苯基)-8-乙基-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(I-49)
按照实例10，方法J，步骤4中概述的以下程序，使用4-((5-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-2-(2,6-二氟苯基)-8-乙基-6-(4-甲氧基苄基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(11.2)进行反应。将粗残留物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的纯(I-49)(8mg，24％)。m/z＝478[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.78(s,1H),11.71-11.65(m,1H),8.60-8.53(m,1H),8.09(d,J＝2.8Hz,1H),7.67-7.57(m,1H),7.51(dd,J＝2.8,9.1Hz,1H),7.35-7.27(m,3H),7.06-7.02(m,1H),4.72(s,1H),3.72-3.63(m,1H),3.59-3.51(m,2H),2.93-2.87(m,2H),2.71(q,J＝7.2Hz,2H),1.86(d,J＝9.6Hz,2H),1.58-1.47(m,2H),1.22(t,J＝7.5Hz,3H)。
实例12：方法L-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-异丙基-8-甲基-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-89)和4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-8-甲基-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-90)的制备
步骤1：4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-异丙基-8-甲基-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-89)和4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-8-甲基-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-90)
2-氯-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-8-甲基-1,6-萘啶-5(6H)-酮(12.0)(100mg，0.25mmol，按照实例1，方法A中概述的以下步骤制备，使用4,6-二氯-2-乙基烟酸乙酯)和乙酰丙酮铁III(18mg，0.05mmol)溶解于THF(3mL)和NMP(1mL)中。将混合物冷却至-45℃，并在15分钟内逐滴添加异丙基氯化镁(1.9mL，3.89mmol，2M于THF中)。将反应在-10℃下搅拌1小时，然后在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物冷却至-15℃并且然后用饱和氯化铵水溶液(5mL)淬灭。将混合物温热至室温，用水(5mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x25mL)萃取。使合并的有机萃取物通过Isolute相分离器，并在真空中去除溶剂，以得到粗产物，所述粗产物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的纯4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-异丙基-8-甲基-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-89)(10mg，10％)。m/z＝394[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.54(s,1H),11.39(s,1H),8.28(s,1H),8.13(d,J＝3.0Hz,1H),7.51(dd,J＝2.8,8.8Hz,1H),7.27(s,1H),7.01(d,J＝8.8Hz,1H),4.74(d,J＝4.0Hz,1H),3.72-3.66(m,1H),3.58-3.52(m,2H),3.05-2.97(m,1H),2.96-2.88(m,2H),2.25(s,3H),1.93-1.87(m,2H),1.61-1.50(m,2H),1.32(d,J＝7.1Hz,6H)；和呈黄色固体的4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-8-甲基-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-90)(17mg，19％)。m/z＝352[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.62(s,1H),11.51(d,J＝4.7Hz,1H),8.55(d,J＝5.8Hz,1H),8.32(d,J＝6.0Hz,1H),8.12(d,J＝2.8Hz,1H),7.51(dd,J＝2.8,8.8Hz,1H),7.30(d,J＝4.8Hz,1H),7.03(d,J＝8.8Hz,1H),4.77(s,1H),3.72-3.65(m,1H),3.59-3.51(m,2H),2.94-2.87(m,2H),2.24(s,3H),1.87(dd,J＝4.5,7.9Hz,2H),1.61-1.50(m,2H)。
实例13：方法M-2-乙酰基-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-47)、2-(1-羟乙基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-37)、2-(1-羟基-1-甲基-乙基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-38)和4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-(2,2,2-三氟-1-羟基-1-甲基-乙基)-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-77)的制备
步骤1：2-(1-乙氧基乙烯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(13.0)
按照实例8：方法H，步骤3所概述的以下程序，使用2-氯-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.2)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡进行反应，以得到呈黄色固体的期望产物(13.0)。1H NMR(400MHz,DMSO)12.33(1H,s),11.56-11.52(1H,m),8.58(1H,s),8.08(1H,d,J＝3.0Hz),7.50-7.46(1H,m),7.36(1H,dd,J＝5.8,7.2Hz),7.02-6.99(1H,m),6.52-6.49(1H,m),5.47(1H,d,J＝1.1Hz),4.72-4.70(1H,m),4.49(1H,s),3.95(2H,q,J＝7.0Hz),3.68-3.62(1H,m),3.57-3.49(2H,m),2.92-2.84(2H,m),1.89-1.81(2H,m),1.57-1.46(2H,m),1.42-1.37(3H,m)。
步骤2：2-乙酰基-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-47)
向2-(1-乙氧基乙烯基)-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(13.0)(191mg，0.46mmol)溶解于THF(5mL)中的溶液中添加4M HCl溶液(5mL)。在室温下搅拌过夜之后，将混合物在真空下浓缩，并将残留物在NaHCO3水溶液与乙酸乙酯之间分配。将有机相收集，并用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并在真空中去除溶剂，以得到呈橙色固体的(I-47)(158mg，88％)。m/z＝380[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.46(s,1H),11.78(s,1H),8.71(s,1H),8.15-8.10(m,1H),7.53-7.42(m,2H),7.02(d,J＝8.8Hz,1H),6.63(d,J＝7.3Hz,1H),4.71(s,1H),3.71-3.49(m,3H),2.96-2.84(m,2H),2.65(s,3H),1.85(s,2H),1.53(t,J＝9.3Hz,2H)。
步骤3：2-(1-羟乙基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-37)
按照实例8：方法H，步骤4中概述的以下程序，使用2-乙酰基-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-47)进行反应，以得到呈黄色固体的(I-37)。m/z＝382[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.32(s,1H),11.53(d,J＝5.0Hz,1H),8.29(s,1H),8.22(s,1H),8.09(d,J＝3.0Hz,1H),7.48(dd,J＝3.1,9.0Hz,1H),7.35(dd,J＝5.5,7.0Hz,1H),7.02(d,J＝8.9Hz,1H),6.48(d,J＝7.3Hz,1H),5.36(s,1H),4.65(q,J＝6.5Hz,1H),3.69-3.51(m,3H),2.93-2.84(m,2H),1.89-1.81(m,2H),1.57-1.46(m,2H),1.37(d,J＝6.7Hz,3H)。
步骤4：2-(1-羟基-1-甲基-乙基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-38)
按照实例8：方法H，步骤5中概述的以下程序，使用2-乙酰基-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-47)进行反应，以得到呈黄色固体的(I-38)。m/z＝396[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.32(s,1H),11.59-11.54(m,1H),8.44(s,1H),8.13(d,J＝2.5Hz,1H),7.51(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),7.38(d,J＝7.3Hz,1H),7.10-7.05(m,1H),6.53(d,J＝7.3Hz,1H),5.26(s,1H),4.75(d,J＝3.8Hz,1H),3.74-3.67(m,1H),3.61-3.53(m,2H),2.97-2.88(m,2H),1.93-1.87(m,2H),1.62-1.52(m,2H),1.50(s,6H)。
步骤5：4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-(2,2,2-三氟-1-羟基-1-甲基-乙基)-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-77)
按照方法CB8，步骤1中概述的以下程序，使用2-乙酰基-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-47)进行反应，以得到呈黄色固体的(I-77)。m/z＝450[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.43(s,1H),11.71(s,1H),8.64(s,1H),8.14(d,J＝2.8Hz,1H),7.53(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),7.45(d,J＝7.3Hz,1H),7.06(d,J＝8.8Hz,1H),6.75(s,1H),6.58(d,J＝7.1Hz,1H),4.74(d,J＝4.3Hz,1H),3.73-3.67(m,1H),3.63-3.55(m,2H),2.98-2.90(m,2H),1.88(d,J＝9.9Hz,2H),1.75(s,3H),1.61-1.49(m,2H)。
实例14：方法N-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-四氢吡喃-4-基-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-36)的制备
向装有含2-氯-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.2)(70mg，0.18mmol)的THF(2mL)的微波管中添加RuPhos Pd G2(15mg，0.018mmol)。将混合物用氮气吹扫5分钟，并且然后添加(四氢-2H-吡喃-4-基)溴化锌(0.6M于THF中，3mL，1.8mmol)。在120℃下搅拌1小时之后，将反应混合物干燥装载到二氧化硅上，并通过柱色谱法纯化，用0-20％7N甲醇氨/DCM洗脱，以得到粗残留物，所述粗残留物通过制备型HPLC进一步纯化，以得到呈黄色固体的纯(I-36)(19mg，24％)。m/z＝422[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.33(s,1H),11.56-11.50(m,1H),8.21(s,1H),8.10(d,J＝3.0Hz,1H),7.47(dd,J＝3.1,9.0Hz,1H),7.35(dd,J＝5.5,7.0Hz,1H),6.99(d,J＝8.9Hz,1H),6.49(d,J＝7.2Hz,1H),4.72(s,1H),4.00-3.94(m,2H),3.69-3.61(m,1H),3.57-3.42(m,4H),2.92-2.82(m,3H),1.88-1.75(m,6H),1.57-1.46(m,2H)。
实例15：方法O-2-(1-乙酰基-4-哌啶基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-63)和4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-(1-甲基-4-哌啶基)-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-75)的制备
步骤1：2-(1-乙酰基-4-哌啶基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-63)
在0℃下向4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-(4-哌啶基)-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-34)(80mg，0.19mmol)于DCM(5mL)中的溶液中添加乙酸酐(0.1mL)。在室温下搅拌过夜之后，将反应用2滴2N HCl溶液淬灭，并用水(5mL)稀释。使混合物通过Isolute疏水过滤器，并在真空中蒸发有机层，以得到粗残留物，将所述粗残留物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的纯(I-63)(7mg，8％)。m/z＝463[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.34(s,1H),11.55(d,J＝2.3Hz,1H),8.37-8.31(m,1H),8.11(d,J＝6.5Hz,1H),8.06(d,J＝3.3Hz,1H),7.46(dd,J＝3.0,9.0Hz,1H),7.34(d,J＝7.3Hz,1H),7.00(d,J＝8.8Hz,1H),6.52(d,J＝7.3Hz,1H),4.52-4.47(m,1H),3.95
-3.91(m,1H),3.68-3.61(m,1H),3.54-3.46(m,2H),3.18-3.10(m,1H),2.89
-2.80(m,3H),2.68-2.60(m,1H),2.04(s,3H),1.89-1.80(m,4H),1.71-1.44(m,4H).(1当量甲酸盐，未观察到1个可交换质子)。
步骤2：4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-(1-甲基-4-哌啶基)-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-75)
向4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-2-(4-哌啶基)-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-34)(30mg，0.07mmol)于甲醇(5mL)中的含有一滴乙酸的溶液中添加37％甲醛溶液(11μL，0.14mmol)和氰基硼氢化钠(5mg，0.07mmol)。在室温下搅拌过夜之后，在真空中蒸发混合物，以得到粗残留物，所述粗残留物通过制备型HPLC纯化，以得到呈黄色固体的纯(I-75)(17mg，54％)。m/z＝435[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.08(s,1H),12.49(s,1H),9.71-9.70(m,1H),8.32-8.28(m,1H),8.15-8.13(m,1H),7.77(s,1H),7.58-7.53(m,1H),7.26-7.20(m,1H),6.70(s,1H),3.73-3.56(m,5H),3.17-3.08(m,3H),3.02-2.94(m,2H),2.87(s,3H),2.24-2.20(m,2H),2.01-1.82(m,4H),1.55-1.45(m,2H).(1当量甲酸盐，未观察到1个可交换质子)。
实例16：方法P-2-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-235)和2-[2-(环丙烷羰基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基]-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-233)的制备
步骤1：8-(4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(16.0)
向反应管中装入含2-氯-4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.2)(250mg，0.67mmol)、2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(323mg,1.34mmol)的DMSO(6mL)。在120℃下密封搅拌过夜之后，将反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤，并在真空中蒸发溶剂，以得到粗残留物，所述粗残留物通过柱色谱法纯化，用0-100％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到约80％纯度的16.0(300mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
步骤2：2-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-235)
按照实例7，方法G中概述的以下程序，使用8-(4-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(16.0)进行反应，以得到呈黄色胶的I-235。m/z＝476[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,1H),11.21(s,1H),8.43(s,1H),8.08(d,J＝2.5Hz,1H),7.99(s,1H),7.48(dd,J＝2.5,8.8Hz,1H),7.26(d,J＝7.3Hz,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,1H),6.28(d,J＝7.3Hz,1H),4.75(s,1H),3.75-3.49(m,6H),3.23(s,1H),3.19(t,J＝7.0Hz,2H),2.97(s,2H),2.90(t,J＝11.2Hz,2H),1.90-1.77(m,4H),1.66-1.51(m,6H).(1当量甲酸盐，未观察到1个可交换质子)
步骤3：2-[2-(环丙烷羰基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基]-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-233)
按照方法CB2，步骤1中概述的以下程序，使用2-(2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)-4-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-6H-1,6-萘啶-5-酮(I-235)和环丙烷碳酰氯进行反应，以得到呈黄色固体的I-233。m/z＝544[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.26(d,J＝2.6Hz,1H),11.15(s,1H),8.04(dd,J＝2.4,2.4Hz,1H),7.97(d,J＝4.9Hz,1H),7.44(dd,J＝3.0,8.9Hz,1H),7.25-7.19(m,1H),6.90(d,J＝9.0Hz,1H),6.24(dd,J＝1.6,7.2Hz,1H),4.71-4.70(m,1H),3.78-3.41(m,10H),3.26(s,1H),2.89-2.80(m,2H),1.92-1.75(m,5H),1.63-1.46(m,6H),0.76-0.70(m,4H)。
实例17：方法Q-4-[[3-(2,6-二氟苯基)-8-氧代-7H-2,7-萘啶-1-基]氨基]-N-乙基-苯甲酰胺(I-7)的制备
标题化合物根据Tett Lett,2013 54(15)，第2014页和WO 2012097683中描述的程序，使用4-氨基-N-乙基苯甲酰胺和2-溴-1,3-二氟苯，由6,8-二氯-2,7-萘啶-1(2H)-酮(17.0)制备，以得到I-7。m/z＝421[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.25(s,1H),11.99(s,1H),8.30(dd,J＝5.5,5.5Hz,1H),7.89(d,J＝8.9Hz,2H),7.82(d,J＝8.8Hz,2H),7.64-7.56(m,1H),7.51(d,J＝6.9Hz,1H),7.31(dd,J＝8.2,8.2Hz,2H),7.19(s,1H),6.63(d,J＝7.0Hz,1H),3.32-3.23(m,2H),1.12(t,J＝7.2Hz,3H)。
实例18：方法R-7-(2,6-二氟苯基)-5-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-酮(I-11)的制备
步骤1：5,7-二氯-3-(4-甲氧基苄基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(18.1)
按照实例10，方法J，步骤1中概述的以下程序，使用5,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(18.0)(描述于WO 2012097683中)进行反应，以得到呈黄色固体的18.1。1H NMR(400MHz,DMSO)8.95-8.93(1H,m),7.91-7.89(1H,m),7.45-7.39(2H,m),6.99-6.93(2H,m),5.15-5.12(2H,m),3.79-3.77(3H,m)。
步骤2：7-氯-5-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-3-(4-甲氧基苄基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(18.2)
按照实例1，方法A，步骤2中概述的以下程序，使用5,7-二氯-3-(4-甲氧基苄基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(18.1)和1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-醇进行反应，以得到呈棕色固体的18.2。1H NMR(400MHz,DMSO)11.78-11.75(1H,m),8.83(1H,s),8.48-8.46(1H,m),8.20-8.16(1H,m),7.52(1H,q,J＝3.8Hz),7.42(2H,d,J＝8.6Hz),7.14-7.09(1H,m),7.01-6.95(2H,m),5.20-5.16(2H,m),4.77-4.73(1H,m),3.78(3H,s),3.74-3.68(1H,m),3.62-3.54(2H,m),2.97-2.91(2H,m),1.88(2H,d,J＝14.0Hz),1.57-1.48(2H,m)。
步骤3：7-(2,6-二氟苯基)-5-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-3-(4-甲氧基苄基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(18.3)
向装有7-氯-5-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-3-(4-甲氧基苄基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(18.2)(140mg，0.28mmol)、2,6-二氟苯基三丁基锡(229mg，0.56mmol)和二噁烷(2mL)的用N2吹扫的转盘管中添加碘化铜I(11mg，0.05mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(20mg，0.02mmol)。在120℃下密封搅拌过夜之后，将反应冷却并通过硅藻土过滤。在减压下去除挥发物，并将粗残留物通过用二乙醚研磨纯化，以得到呈棕色固体的18.3(120mg，74％)。1H NMR(400MHz,DMSO)11.80(1H,s),8.84-8.80(1H,m),8.54-8.52(1H,m),8.12-8.08(1H,m),7.67-7.59(1H,m),7.53-7.40(3H,m),7.31(2H,t,J＝8.0Hz),7.15-7.09(1H,m),7.02-6.95(2H,m),5.23-5.19(2H,m),4.72(1H,d,J＝4.0Hz),3.80-3.77(3H,m),3.69-3.62(1H,m),3.56(2H,d,J＝12.6Hz),2.94-2.86(2H,m),1.87-1.85(2H,m),1.55-1.47(2H,m)。
步骤4：7-(2,6-二氟苯基)-5-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-酮(I-11)
按照实例10，方法J，步骤4中概述的以下程序，使用7-(2,6-二氟苯基)-5-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-3-(4-甲氧基苄基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(18.3)进行反应，以得到呈黄色固体的I-11。m/z＝451[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.87-11.82(m,1H),8.38(s,1H),8.22(s,1H),7.98(d,J＝2.8Hz,1H),7.55-7.46(m,1H),7.39(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),7.19(dd,J＝8.0,8.0Hz,2H),6.96(d,J＝8.8Hz,1H),4.60-4.60(m,1H),3.59-3.51(m,1H),3.48-3.39(m,3H),2.83-2.74(m,2H),1.75-1.71(m,2H),1.45-1.33(m,2H)。
实例19：方法S-4-[[7-(2,6-二氟苯基)-4-氧代-3H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-基]氨基]-N-乙基-苯甲酰胺(I-12)的制备
步骤1：6-((7-氯-4-氧代-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-基)氨基)-N-乙基烟酰胺(19.1)
按照实例1，方法A，步骤2中概述的以下程序，使用5,7-二氯吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(19.0)和4-氨基-N-乙基苯甲酰胺进行反应，以得到(19.1)以得到呈棕色固体的19.1。1H NMR(400MHz,DMSO)13.01-12.99(1H,m),11.56-11.50(1H,m),8.43(1H,t,J＝5.4Hz),8.36(1H,s),7.96-7.85(4H,m),7.04-7.02(1H,m),3.36-3.30(2H,m),1.21-1.14(3H,m)。
步骤2：4-[[7-(2,6-二氟苯基)-4-氧代-3H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-基]氨基]-N-乙基-苯甲酰胺(I-12)
按照实例18：方法R，步骤3中概述的以下程序，使用6-((7-氯-4-氧代-3,4-二氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-基)氨基)-N-乙基烟酰胺(19.1)进行反应，以得到呈白色固体的I-12。m/z＝422[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.67(s,1H),8.25-8.20(m,2H),7.81(d,J＝8.3Hz,2H),7.74(d,J＝8.3Hz,2H),7.57-7.48(m,1H),7.22(dd,J＝8.1,8.1Hz,2H),7.02(s,1H),3.19(q,J＝6.7Hz,2H),1.04(dd,J＝6.8,6.8Hz,3H)。未观察到一个NH共振
实例20：方法T-N-乙基-4-[(2-异丙基-5-氧代-6H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)氨基]苯甲酰胺(I-10)的制备
标题化合物根据KR2016035411中描述的程序，使用4-氨基-N-乙基苯甲酰胺，由4-氯-2-异丙基-6-甲基嘧啶-5-甲酸乙酯(20.0)制备，以得到呈黄色固体的I-10。m/z＝352[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.13(s,1H),12.00(s,1H),8.41(dd,J＝5.4,5.4Hz,1H),7.98(d,J＝8.9Hz,2H),7.91(d,J＝8.8Hz,2H),7.62(d,J＝7.2Hz,1H),6.48(d,J＝7.2Hz,1H),3.32-3.26(m,2H),3.09-2.99(m,1H),1.33(d,J＝6.9Hz,6H),1.14(dd,J＝7.2,7.2Hz,3H)。
实例21：方法U-5-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-7-异丙基-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-酮(I-59)和5-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-7-丙基-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-酮(I-60)的制备
步骤1：5-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-7-异丙基-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-酮(I-59)和5-[[5-(4-羟基-1-哌啶基)-2-吡啶基]氨基]-7-丙基-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-酮(I-60)
向装有7-氯-5-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-3-(4-甲氧基苄基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(18.2)(100mg，0.2mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(23mg，0.02mmol)于THF(2mL)中的微波管中添加2-丙基溴化锌(0.5M THF溶液，4.1mL，2.03mmol)。在120℃下密封搅拌1小时之后，将反应与重复反应合并，并添加甲醇(1mL)淬灭，并用DCM稀释。将混合物直接吸收到二氧化硅上，并通过柱色谱法纯化，用0-10％甲醇/DCM洗脱，以得到约80％纯度的5-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-7-异丙基-3-(4-甲氧基苄基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(200mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
将粗5-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-7-异丙基-3-(4-甲氧基苄基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(200mg)溶解于TFA(5mL)中。在回流下搅拌4小时之后，在真空中去除反应溶剂，以得到粗产物，将所述粗产物稀释于DCM(1mL)、甲醇(2mL)和1M甲醇氨(4mL)中[注意！]，并在室温下搅拌1小时，然后再蒸发至干燥。将残留物通过制备型HPLC纯化，以得到呈异构体混合物的产物(I-59和I-60)。将异构体随后通过制备型SFC分离，以得到均呈黄色固体的(I-59)(4mg，3％)和(I-60)(7mg，6％)。I-59:m/z＝381[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.06-11.99(m,1H),8.26(s,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝2.8Hz,1H),7.51(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),7.05(d,J＝9.1Hz,1H),4.74(s,1H),3.72-3.66(m,1H),3.62-3.53(m,2H),3.02-2.88(m,3H),1.93-1.87(m,2H),1.61-1.50(m,2H),1.30(d,J＝7.1Hz,6H)。未观察到1个可交换质子。呈黄色固体的I-60(7mg，6％)。m/z＝381[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.55(s,1H),11.78(s,1H),8.27(s,1H),8.18-8.13(m,2H),7.51(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),7.07(d,J＝8.8Hz,1H),4.74(d,J＝3.5Hz,1H),3.71-3.67(m,1H),3.62-3.53(m,2H),2.97-2.87(m,2H),2.70(dd,J＝7.6,7.6Hz,2H),1.93-1.87(m,2H),1.76(dd,J＝7.3,14.9Hz,2H),1.61-1.49(m,2H),0.99(dd,J＝7.5,7.5Hz,3H)。
实例22：方法AP-6-(2-氟-5-异丙基苯基)-8-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)异喹啉-1(2H)-酮(I-288)的制备
步骤1：4-溴-2-碘-6-甲基苯甲酸(22.1)的制备
在室温下向4-溴-2-甲基苯甲酸(22.0)(15g，69.7mmol，1.0当量)和碘苯二乙酸酯(44.93g，139.5mol，2.0当量)于N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中的搅拌溶液中添加乙酸钯(II)(0.78g，3.48mmol，0.05当量)，然后添加碘(17.7g，69.7mmol，1.0当量)。在100℃下搅拌16小时之后，将反应混合物转移到冰冷的水中(500ml)，并用乙酸乙酯(200ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到22.1.(11.25g，47.31％)。MS(ES):m/z 341.84[M+H]+。
步骤2：4-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)-2-碘-6-甲基苯甲酰胺(22.2)
在室温下向4-溴-2-碘-6-甲基苯甲酸(22.1)(5g，14.70mmol，1.0当量)于THF(10mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(5.6g，44.10mmol，3.0当量)和溴-三-吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(12.3g，26.46mmol，1.8)。在室温下搅拌30分钟之后，添加2,4-二甲氧基苄胺(3.2g，19.11mmol，1.3当量)。在室温下搅拌16小时之后，将反应混合物转移到水(300ml)中，并用乙酸乙酯(200ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用35％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到22.2(6.5g，90.43％)。MS(ES):m/z 492.72[M+H]+。
步骤3：6-溴-2-(3,4-二甲基苄基)-8-碘喹啉-1(2H)-酮(22.3)
在-78℃下向4-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)-2-碘-6-甲基苯甲酰胺(22.2)(2.5g，5.10mmol，1.0当量)于THF(50mL)中的溶液中添加含2.5M二异丙酰胺锂的THF(7.6ml，15.306mmol，3当量)。在-78℃下搅拌30分钟之后，添加N,N二甲基甲酰胺(1.49g，20.40mmol，4当量)。在-78℃下搅拌1小时之后，将反应混合物用盐酸酸化，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，用12％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到22.3(1.5g，62.82％)。MS(ES):m/z 500.85[M+H]+。
步骤4：6-溴-2-(3,4-二甲基苄基)-8-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)异喹啉-1(2H)-酮(22.4)
向6-溴-2-(3,4-二甲基苄基)-8-碘代异喹啉-1(2H)-酮(22.3)(0.7g，1.40mmol，1.0当量)于1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中添加1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-醇(0.325g，1.68mmol，1.2当量)和碳酸铯(1.36g，4.20mmol，3.0当量)。在氩气气氛下脱气10分钟之后，添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.064g，0.07mmol，0.05当量)和4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(0.08g，0.070mmol，0.1当量)，并再次脱气5分钟。在微波中在140℃下搅拌1小时之后，将反应混合物冷却至室温，转移到水中(100ml)并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combi-flash使用75-80％乙酸乙酯/己烷纯化，以得到22.4(0.250g，31.34％)。MS(ES):m/z566.25[M+H]+。
步骤5：2-(3,4-二甲基苄基)-6-(2-氟-5-异丙基苯基)-8-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)异喹啉-1(2H)-酮(22.5)
向6-溴-2-(3,4-二甲基苄基)-8-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)异喹啉-1(2H)-酮(22.4)(0.1g，0.17mmol，1.0当量)和(2-氟-5-异丙基苯基)硼酸(0.038g，0.21mmol，1.2当量)于1,4-二噁烷(5mL)和水(1ml)中的溶液中添加磷酸钾(0.75g，0.35mmol，2当量)。在氩气下脱气10分钟之后，添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(0.07g，0.008mmol，0.05当量)。在微波中在110℃下搅拌1小时之后，将反应混合物用水(50ml)稀释，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combi-flash柱色谱法纯化，用65％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到22.5(0.1g，90.30％)。MS(ES):m/z 624.24[M+H]+
步骤6：2,2,2-三氟乙酸1-(6-((6-(2-氟-5-异丙基苯基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-8-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-4-基酯(22.6)
在室温下向2-(3,4-二甲基苄基)-6-(2-氟-5-异丙基苯基)-8-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)异喹啉-1(2H)-酮(22.5)(0.07g，0.11mmol，1.0当量)于DCM(2mL)中的溶液中添加三氟乙酸(1.4ml)。在55℃下搅拌16小时之后，在真空中蒸发反应混合物，以得到22.6(0.07g，定量)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。MS(ES):m/z 569.65[M+H]+。
步骤7：6-(2-氟-5-异丙基苯基)-8-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)异喹啉-1(2H)-酮(I-288)
在室温下向2,2,2-三氟乙酸1-(6-((6-(2-氟-5-异丙基苯基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-8-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-4-基酯(22.6)(0.07g，0.123mmol，1.0当量)于THF(3mL)中的溶液中添加氢氧化钠(0.014g，0.36mmol，3.0当量)。在室温下搅拌2小时之后，将反应在真空中浓缩。将残留物通过制备型HPLC使用以下纯化：柱：SUNFIRE C18(250*19)mm5u，流动相：含0.1％三氟乙酸的水/乙腈作为缓冲液，流速为15毫升/分钟，在25分钟内梯度0-40％。将期望的级分冷冻干燥，以得到TFA盐。将盐溶解于甲醇(3ml)中，并用与聚合物结合的四烷基碳酸铵(碱性树脂)中和，以得到22的游离碱(0.025g，42.97％)。MS(ES):473.87m/z[M+H]+，LCMS纯度：100％，HPLC纯度：95.07％1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.26(d,J＝7.0Hz,6H),1.58(s,2H),1.88(s,2H),2.95-3.03(m,2H),3.52(s,2H),3.69(s,1H),6.63(d,J＝6.9Hz,1H),7.08(s,1H),7.17-7.32(m,3H),7.35(s,1H),7.43(d,J＝7.3Hz,1H),7.67(s,1H),8.10(s,1H),8.61(s,1H),11.48(s,1H),12.47(s,1H)。
实例23：方法BP-N-(3-氟-4-(4-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(I-312)的制备
步骤1：2,4-二氯-1,6-萘啶-5(6H)-酮(23.1)的制备
向4,6-二氯-2-甲基烟酸乙酯23.0(25.0g，0.1068mol，1.0当量)于叔丁醇(200mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(23.79g，0.2136mol，2.0当量)和1,3,5三嗪(16.25g，0.216mol，2.0当量)。在90℃下搅拌1小时之后，将反应混合物在减压下浓缩。将残留物溶解于冰水中，并用1N盐酸酸化至pH 2-3。在室温下搅拌1小时之后，将反应混合物过滤并用水(300ml)洗涤。使用DCM(500ml x 3)从水层中萃取另外的产物，以得到粗材料，将所述粗材料浓缩，并且然后通过甲苯(100ml)共沸，以得到23.1(18.5g，产率：80.55％)。MS(ES):m/z 216[M+H]+。
步骤2：2,4-二氯-6-(4-甲氧基苄基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(23.2)
在2,4-二氯-1,6-萘啶-5(6H)-酮(23.1)(10.0g，0.0465mol，1.0当量)于N,N二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液中添加碳酸铯(30.23g，0.093mol，2.0当量)。在室温下搅拌30分钟之后，添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(7.25g，0.0465mol，1.0当量)。在室温下搅拌4小时之后，将反应混合物用冷水(100ml)稀释，由此从溶液中沉淀出固体。将固体过滤并用水(50ml)和己烷(50ml)洗涤。将固体在减压下干燥，以得到23.2(9.98g，产率：64.03％)。MS(ES):m/z 316.18[M+H]+。
步骤3：N-(4-(4-氯-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3-氟苯基)环己烷甲酰胺(23.3)
向2,4-二氯-6-(4-甲氧基苄基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮23.1(11.5g，0.0344mol，1.0当量)和N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(11.91g，0.0344mol，1.0当量)于1,2二甲氧基乙烷(160ml)和水(40ml)中的溶液中添加磷酸钾(21.89g，0.1032mol，3.0当量)。在用氩气脱气20分钟之后，添加四(三苯基膦)钯(0)(1.98g，0.0017mol，0.05当量)。在100℃下搅拌16小时之后，将反应混合物转移到水(500ml)中，并用乙酸乙酯(500ml x 2)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，以25％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到23.3(5.2g，产率：28.03％)。MS(ES):m/z 521.00[M+H]+。
步骤4：N-(3-氟-4-(4-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(23.4)
向N-(4-(4-氯-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3-氟苯基)环己烷甲酰胺23.3(0.30g，0.576mmol，1.0当量)于1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中添加6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-胺(PA9)(0.11g，0.634mmol，1.1当量)和碳酸钾(0.22g，1.728mmol，3.0当量)。在用氮气脱气10分钟之后，在氮气气氛下添加4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(0.10g，0.115mmol，0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0.033g，0.057mmol，0.1当量)。在120℃下搅拌16小时之后，将反应混合物用水(100ml)稀释，并萃取到乙酸乙酯(100ml x 3)中。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物使用combi-flash二氧化硅纯化，以7％甲醇/DCM洗脱，以得到23.4(0.15g，39.17％)。MS(ES):m/z664.6[M+H]+
步骤5：N-(3-氟-4-(4-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(I-312)
在室温下向N-(3-氟-4-(4-((6-氟-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)氨基)-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺23.4(0.14g，0.211mmol，1.0当量)于DCM(4mL)中的溶液中添加三氟甲磺酸(0.54g，3.625mmol，17.1当量)和三氟乙酸(0.55g，4.853mmol，23.0当量)。在室温下搅拌30分钟之后，将反应混合物在减压下浓缩。将残留物通过制备型HPLC使用以下纯化：SUNFIRE C18(150*19)mm 5μ柱，其中流动相：(A)0.1％三氟乙酸(TFA)/水和(B)乙腈，流速为13毫升/分钟，在23分钟内梯度为0-34％，以得到冷冻干燥后的I-312TFA盐。将盐溶解到甲醇(3ml)中，并用与聚合物结合的四烷基碳酸铵(碱性树脂)中和，以分离I-312的游离碱(0.042g，36.63％)。MS(ES):542.99m/z[M-H]+，LCMS纯度：98.66％，HPLC纯度：99.43％,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.15-1.28(m,4H),1.35-1.41(m,2H),1.63-1.82(m,5H),2.36(d,J＝12.9Hz,1H),2.43(s,2H),2.74(s,2H),2.88(s,2H),3.60(s,2H),6.56(d,J＝7.3Hz,1H),7.04(s,1H),7.19(d,J＝11.2Hz,1H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H),7.42(d,J＝7.7Hz,2H),7.72(d,J＝14.6Hz,1H),7.93-8.06(m,1H),10.23(s,1H),11.38(s,1H),11.62(s,1H)。
实例24：方法CP-N-(3-氟-4-(4-((5-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(I-294)的制备。
/>
步骤1：2-氯-4-((5-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮(24.1)
向2,4-二氯-1,6-萘啶-5(6H)-酮(1.2)(0.50g，2.325mmol，1.5当量)和1-(6-氨基吡啶-3-基)-4-甲基哌啶-4-醇(0.53g，2.558mmol，1.1当量)于叔丁醇(10ml)中的搅拌溶液中添加二异丙基乙胺(0.60g，4.650mmol，2.0当量)。在微波炉中在150℃下加热6小时之后，将反应混合物用水(50ml)稀释，并用乙酸乙酯(100ml x 2)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过制备型HPLC使用以下纯化：X-SELECT苯基己基(150*19)mm，5μ.柱流速为15.0毫升/分钟，其中流动相为(A)0.1％甲酸/水以及(B)100％乙腈，其中18分钟内的溶剂梯度为B 0-43％，以得到24.1(0.11g，12.26％)。MS(ES):m/z 387.2[M+H]+
步骤2：N-(3-氟-4-(4-((5-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(I-294)
在室温下向2-氯-4-((5-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-1,6-萘啶-5(6H)-酮24.1(0.10g，0.261mmol，1.0当量)和N-(3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(0.13g，0.392mmol，1.5当量)于1,4-二噁烷(6.0ml)和水(1.0ml)中的溶液中添加磷酸三钾(0.39g，1.831mmol，7.0当量)。在使用氩气脱气20分钟之后，添加X-Phos氨基联苯氯化钯预催化剂(0.020g，0.0261mmol，0.1当量)。在微波中在150℃下搅拌20分钟之后，将反应混合物转移到水中(25ml)，并用乙酸乙酯(50mlx 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(25ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过柱色谱法纯化，使用Redisep金柱，用15％甲醇/DCM洗脱，以得到I-294(0.10g，67.61％)。MS(ES):556.82m/z[M+H]+，LCMS纯度：95.09％，HPLC纯度：95.73％1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.18(s,3H),1.22-1.34(m,3H),1.37-1.51(m,2H),1.59(s,4H),1.59(d,J＝11.4Hz,1H),1.68(d,J＝10.6Hz,1H),1.79(d,J＝11.7Hz,2H),1.85(d,J＝12.7Hz,1H),2.40-2.35(m,2H),3.14(s,2H),3.08-3.19(m,1H),3.32(d,J＝11.3Hz,2H),4.35(s,1H),6.58(d,J＝7.3Hz,1H),7.03(d,J＝8.9Hz,1H),7.37-7.53(m,3H),7.72-7.81(m,1H),8.01(t,J＝8.8Hz,1H),8.09(d,J＝3.1Hz,1H),8.74(s,1H),10.25(s,1H),11.65(s,1H),12.39(s,1H)。
实例25：方法DP-N-(3-氟-4-(4-((5-(1-甲基哌啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(I-337)的制备
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步骤1：3-(6-((2-(4-(环己烷甲酰胺基)-2-氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-4-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(25.1)
向N-(4-(4-氯-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3-氟苯基)环己烷甲酰胺23.3(0.50g，0.96mmol，1.0当量)于1,4-二噁烷(5.0ml)中的溶液中添加3-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.26g，0.96mmol，1.0当量)和碳酸铯(0.93g，2.8mmol，3.0当量)。在氩气气氛下脱气10分钟之后，添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.087g，0.09mmol，0.1当量)和4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(0.111g，0.19mmol，0.2当量)，并再次脱气5分钟。在110℃下搅拌1小时之后，将反应混合物转移到水中(100ml)并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combi flash纯化，用35-40％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到25.1(0.5g，产率：68.34％)。MS(ES):m/z 761.94[M+H]+。
步骤2：N-(3-氟-4-(6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-4-((5-(哌啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(25.2)
在0℃下向3-(6-((2-(4-(环己烷甲酰胺基)-2-氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-4-基)氨基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯25.1(0.24g，0.31mmol，1.0当量)于DCM(2mL)中的溶液中添加三氟乙酸(1mL)。在室温下搅拌15分钟之后，将反应混合物倒入水中(50ml)，用饱和碳酸氢钠溶液(15ml)中和，并用DCM(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过使用二乙醚(10ml x2)研磨纯化，以得到25.2(0.14g，67.17％)。MS(ES):m/z 661.7[M+H]+。
步骤3：N-(3-氟-4-(6-(4-甲氧基苄基)-4-((5-(1-甲基哌啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(25.3)
向N-(3-氟-4-(6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-4-((5-(哌啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(25.2)(0.14g，0.21mol，1.0当量)于甲醇(2mL)中的溶液中添加对甲醛(0.019g，0.63mmol，3.0当量)、无水氯化锌(0.043g，0.31mmol，1.5当量)和三乙胺(0.85mL，0.63mol，3.0当量)。在60℃下搅拌2小时之后，将反应混合物冷却至室温，并添加氰基硼氢化钠(0.033g，0.53mmol，2.5当量)。在搅拌过夜之后，将反应混合物转移到水(100ml)中，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combi flash纯化，用2-3％甲醇/DCM洗脱，以得到25.3(0.1g，69.94％)。MS(ES):m/z 675.8[M+H]+。
步骤4：N-(3-氟-4-(4-((5-(1-甲基哌啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(I-337)
在0℃下向N-(3-氟-4-(6-(4-甲氧基苄基)-4-((5-(1-甲基哌啶-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)苯基)环己烷甲酰胺(25.3)(0.1g，0.14mmol，1.0当量)于DCM(1.0mL)中的溶液中添加三氟甲磺酸(0.6mL)。在室温下搅拌0.5小时之后，将反应混合物倒入水中(50ml)，用饱和碳酸氢盐溶液(15ml)中和，并用DCM(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过制备型HPLC使用以下纯化：X-SELECT苯基己基(150*19)mm，5μ柱流动，其中流动相(A)：为含0.1％甲酸的水/乙腈并且(B)乙腈，流速为15毫升/分钟，16分钟内的梯度为0-22％。将期望级分冷冻干燥，以得到I-337的甲酸盐。将盐溶解到甲醇(3ml)中，并用与聚合物结合的四烷基碳酸铵(碱性树脂)中和，以得到I-337的游离碱(0.025g，30.42％)。MS(ES):555.8m/z[M+H]+，LCMS纯度：100％，HPLC纯度：100％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.25-1.30(m,5H),1.39-1.51(m,3H),1.69-1.77(m,2H),1.78-1.86(m,6H),2.40(s,3H),2.87-3.01(s,3H),6.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),7.40-7.50(m,2H),7.71-7.81(m,2H),8.01-8.05(m,1H),8.32(s,1H),9.06(s,1H),10.26(s,1H),11.71(d,J＝6.0Hz,1H),12.69(s,1H)。
实例26：方法EP-N-(4-(4-((5-(氰基甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3-氟苯基)环己烷甲酰胺(I-353)的制备
步骤1：(2-(4-(环己烷甲酰胺基)-2-氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(26.1)
按照方法BP(步骤-4)中描述的以下程序，使用N-(4-(4-氨基-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3-氟苯基)环己烷甲酰胺(23.3)和氨基甲酸叔丁酯(1.0g，86.57％)进行反应，MS(ES):m/z 601.7[M+H]+。
步骤2：N-(4-(4-氨基-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3-氟苯基)环己烷甲酰胺(26.2)
在0℃下向(2-(4-(环己烷甲酰胺基)-2-氟苯基)-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(26.1)(1.0g，0.00161mol，1.0当量)于DCM(5.0ml)中的溶液中添加甲基丙磺酸(2.0ml)。在室温下搅拌30分钟之后，将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液(50ml)中，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到26.2(800mg，96％)MS(ES):m/z 501.5[M+H]+
步骤3：N-(4-(4-((5-(氰基甲基)吡啶-2-基)氨基)-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3-氟苯基)环己烷甲酰胺(26.3)
按照方法BP(步骤-4)中描述的以下程序，使用N-(4-(4-氯-6-(4-甲氧基苄基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3-氟苯基)环己烷甲酰胺(26.2)和2-(6-溴吡啶-3-基)乙腈进行反应，以得到(26.3)(0.060g，37.46％)。MS(ES):m/z617.7[M+H]+。
步骤4：N-(4-(4-((5-(氰基甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-氧代-5,6-二氢-1,6-萘啶-2-基)-3-氟苯基)环己烷甲酰胺(I-353)
按照方法DP(步骤-4)中描述的以下程序进行反应，以得到I-353(30mg，62.10％)。MS(ES):m/z597.39[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6,400MHZ):13.26(s,1H),12.41(s,1H),10.40(s,1H),8.96(s,1H),8.45(s,1H),7.89-7.85(m,3H),7.47(s,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(s,1H),6.77(d,J＝72Hz,1H),4.21(s,2H),2.42-2.36(m,1H),1.87-1.77(m,4H),1.69-1.67(m,1H),1.48-1.39(m,2H),1.34-1.25(m,4H)。
实例27：方法FP-(R)-8-((6-((二甲基氨基)甲基)-5-(THF-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(7-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)异喹啉-1(2H)-酮(I-356)和(S)-8-((6-((二甲基氨基)甲基)-5-(THF-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(7-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)异喹啉-1(2H)-酮(I-357)的制备
步骤1：5-溴异喹啉(27.1)
在0℃下向异喹啉(27.0)(20.0g，0.1550mol，1.0当量)于H2SO4(120.0ml)中的溶液中添加N-溴代琥珀酰胺(30.35g，0.465mol，3.0当量)。在室温下搅拌1.5小时之后，将反应混合物倒入水(500ml)中，用浓氢氧化铵中和，并用DCM(100ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到27.1(20.5g，99％)MS(ES):m/z 208.97[M+H]+
步骤2：5-溴-8-氯异喹啉(27.2)
在0℃下向5-溴异喹啉(27.1)(20.5g，0.0985mol，1.0当量)于H2SO4(5.0ml)中的溶液中添加N-氯琥珀酰胺(19.75g，1.5当量)。在80℃下搅拌2小时之后，将反应混合物倒入水(50ml)中，用浓氢氧化铵中和，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到27.2(18.5，96％)MS(ES):m/z 243.93[M+H]+
步骤3：5-溴-8-氯异喹啉-1(2H)-酮(27.3)
在0℃下向5-溴-8-氯异喹啉(27.2)(18.0g，0.0743mol，1.0当量)于DCM(15.0ml)中的溶液中添加m-CPBA(19.23g，0.1114，1.5当量)。在室温下搅拌3小时之后，将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液(200ml)中，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩，以得到粗(15g)材料，所述粗材料溶解于乙酸酐(200ml)中。在100℃下搅拌1小时之后，添加2N NaOH(150ml)。在110℃下搅拌1小时之后，将反应混合物倒入水(200ml)中，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过combi flash纯化，用20-30％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到27.3(7g，60.94％)。MS(ES):m/z258.9[M+H]+。
步骤4：5-溴-8-氯-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(27.4)
在0℃向5-溴-8-氯异喹啉-1(2H)-酮(27.3)(7.0g，0.026mol，1.0当量)于THF(70ml)中的溶液中添加DBU(20.4g，0.13，5当量)和2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(17.8g，0.010，4当量)。在室温下搅拌1.5小时之后，将反应混合物倒入水(100ml)中，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过combi flash纯化，用60-70％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到27.4(4.0g，96％)。MS(ES):m/z389[M+H]+。
步骤5：8-氯-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(三甲基甲锡烷基)异喹啉-1(2H)-酮(27.5)
向5-溴-8-氯-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(27.4)(4.0g，0.0102mol，1.0当量)于甲苯(5ml)中的溶液中添加六甲基二锡(5.0g，0.0153，1.5当量)。在氩气气氛下脱气10分钟之后，添加双(三苯基膦基)氯化钯(0.715g，0.00102mol，0.1当量)，并再次脱气5分钟。在110℃下搅拌4小时之后，将反应混合物转移到水中(30ml)并用乙酸乙酯(40ml x3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combiflash纯化，用2％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到27.5(3.8g，产率：68.34％)。MS(ES):m/z 473.06[M+H]+。
步骤6：8-氯-5-(7-氟咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(27.6)
向8-氯-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5-(三甲基甲锡烷基)异喹啉-1(2H)-酮(27.5)(3.5g，0.0074mol，1.0当量)于二噁烷中的溶液中添加3-溴-7-氟咪唑并[1,2-a]吡啶(1.9g，0.0088mol，1.2当量)。在氩气气氛下脱气15分钟之后，添加四(0.85g，0.00074mol，0.1当量)和CuI(0.14g，0.00074mmol，0.1当量)。在110℃下搅拌2小时之后，将反应混合物转移到水中(50ml)，并通过乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combiflash纯化，用25％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到27.6(1.9g，产率：64％)。MS(ES):m/z444.13[M+H]+。
步骤7：8-((6-((二甲基氨基)甲基)-5-(THF-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(7-氟咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)异喹啉-1(2H)-酮(27.7)
向8-氯-5-(7-氟咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(27.6)(1.9g，0.00428mol，1.0当量)于二噁烷(1.5ml)中的溶液中添加6-((二甲基氨基)甲基)-5-(THF-3-基)吡啶-2-胺(0.94g，0.00428mol，1.0当量)和K2CO3(1.7g，0.0128mol，3.0当量)。在氩气气氛下脱气15分钟之后，添加4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(xanthphos)(0.24g，0.428mmol，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3)(0.39g，0.428mmol，0.1当量)。在110℃下搅拌2小时之后，将反应混合物转移到水中(50ml)，并通过乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combiflash纯化，用4％ DCM/甲醇洗脱，以得到27.7(900mg，产率：45％)。MS(ES):m/z 499.2[M+H]+。
步骤8：(R)-8-((6-((二甲基氨基)甲基)-5-(THF-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(7-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)异喹啉-1(2H)-酮(I-356)和(S)-8-((6-((二甲基氨基)甲基)-5-(THF-3-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(7-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)异喹啉-1(2H)-酮(I-357)
将27.7(100mg外消旋体)通过岛津LC-20AP手性SFC和UV检测器分离。所使用的柱为CHIRALPAK IC(250X 21.0)mm，5微米，柱流速为20毫升/分钟。所使用的流动相为(A)0.1％ DEA/正己烷、(B)0.1％ DEA/丙烷2-醇:乙腈(70:30)，以得到I-356(25mg)和I-357(28mg)。立体化学是任意指定的。I-356：MS(ES):m/z＝500.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,1H),11.61(d,J＝6.0Hz,1H),8.89(d,J＝8.7Hz,1H),7.93(dd,J＝7.5,5.8Hz,1H),7.77-7.63(m,3H),7.55(dd,J＝10.2,2.6Hz,1H),7.15(dd,J＝7.3,5.8Hz,1H),7.01-6.88(m,2H),5.89(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),4.05-3.93(m,2H),3.81(q,J＝7.7Hz,2H),3.54(dd,J＝8.2,6.8Hz,1H),2.36-2.18(m,6H),1.90(dq,J＝12.1,7.7Hz,1H).I-357:MS(ES):m/z＝500.2[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,1H),11.63(d,J＝5.8Hz,1H),8.80(s,1H),7.93(dd,J＝7.6,5.8Hz,1H),7.77-7.63(m,3H),7.56(dd,J＝10.1,2.6Hz,1H),7.23-7.11(m,1H),7.02(d,J＝8.3Hz,1H),6.93(td,J＝7.6,2.6Hz,1H),5.97-5.81(m,1H),4.15-3.93(m,3H),3.82(q,J＝7.7Hz,2H),3.73(s,1H),3.55(t,J＝7.6Hz,1H),3.49(t,J＝5.3Hz,1H),3.42(t,J＝5.2Hz,1H),2.31(s,2H),1.96-1.86(m,1H),1.25(d,J＝8.0Hz,1H)。
实例28：方法GP-8-((5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(吡啶-4-基)异喹啉-1(2H)-酮(I-358)的制备
步骤1：8-氯-5-(吡啶-4-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(28.1)
向5-溴-8-氯-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(27.5)(1.0g，2.57mmol，1.0当量)和吡啶-4-基硼酸(0.75g，3.08mmol，1.2)于1,4-二噁烷(8ml)和水(2ml)中的溶液中添加碳酸钾(1.06g，7.771mmol，3.0当量)。在氩气气氛下脱气15分钟之后，添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)与DCM复合物(Pd(dppf)Cl2)dcm(0.205g，0.257mmol，0.1当量)。在110℃下搅拌1小时之后，将反应混合物转移到水(200ml)中，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combiflash纯化，用4％DCM/甲醇洗脱，以得到28.1(700mg，产率：60％)。MS(ES):m/z 387.12[M+H]+。
步骤2：8-((5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(吡啶-4-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(28.2)
向8-氯-5-(吡啶-4-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(28.1)(0.7g，1.813mmol，1.0当量)和5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺(0.383g，1.99mmol，1.1当量)于甲苯(7ml)中的溶液中添加K2CO3(0.750g，5.43mmol，3.0当量)。在氩气气氛下脱气15分钟之后，添加4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(xanthphos)(0.104g，0.181mmol，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3)(0.165g，0.181mmol，0.1当量)。在110℃下搅拌2小时之后，将反应混合物转移到水(200ml)中，并用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combiflash纯化，用4％ DCM/甲醇洗脱，以得到28.2(300mg，产率：30.28％)。MS(ES):m/z 543.28[M+H]+。
步骤3：8-((5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(吡啶-4-基)异喹啉-1(2H)-酮(I-358)
在0℃下向8-((5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(吡啶-4-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(28.2)(300mg，0.777mmol，1.0当量)于DCM(2ml)中的溶液中添加含4M HCl的1,4-二噁烷(8ml)。在室温下搅拌1小时之后，将反应混合物转移到水中(50ml)，用碳酸氢钠中和，并用DCM(40ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物用二乙醚/戊烷研磨纯化，以得到I-358(200mg，87％产率)。MS(ES):m/z 413.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.51(s,1H),8.70-8.54(m,3H),8.00(d,J＝3.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.7Hz,1H),7.50-7.39(m,3H),7.17(d,J＝7.4Hz,1H),6.96(d,J＝8.9Hz,1H),6.47(d,J＝7.5Hz,1H),3.13(t,J＝5.0Hz,4H),2.5(s,4H,在DMSO峰中合并),2.26(s,3H)。
实例29：方法HP-5-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-8-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)异喹啉-1(2H)-酮(I-366)的制备
步骤1：8-氯-5-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮(29.1)
按照方法GP(步骤-1)中描述的以下程序，使用5-溴-8-氯-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮27.5和1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-咪唑进行反应，以得到29.1(1.4g，51.87％产率)。MS(ES):m/z 391.2[M+H]+
步骤2和3：5-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-8-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)异喹啉-1(2H)-酮(I-366)
按照方法GP(步骤-2和3)中描述的以下程序，使用8-氯-5-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)异喹啉-1(2H)-酮29.1和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯进行步骤-2和3的反应，随后进行2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)脱保护，以得到I-366(0.8g，53.87％产率)。MS(ES):m/z 402.2[M+H]+1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),11.50(s,1H),8.60(d,J＝8.7Hz,1H),8.27(s,1H),8.01(d,J＝3.0Hz,1H),7.76(s,1H),7.51-7.43(m,2H),7.15(d,J＝5.7Hz,1H),6.93(d,J＝8.9Hz,1H),6.91(td,J＝7.5,2.7Hz,1H),6.14(d,J＝7.2Hz,1H),3.36(s,3H),3.26(s,4H),3.17(s,4H)。
实例30：方法IP-8-((6-((二甲基氨基)甲基)-5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(I-361)的制备
步骤1：2-溴-5-氯-3-甲基异烟酸(30.1)
在氮气气氛下在-78℃下向2-溴-5-氯-3-甲基吡啶(30.0)(2.5g，12.13mmol)于THF(25mL)中的溶液中逐滴添加含2M二异丙酰胺锂(LDA)的THF(2M，9.1mL，18.15mmol)。在LDA添加完成之后，将反应混合物在-78℃下用CO2气体吹扫1小时。在温热至0℃之后，将反应混合物用乙酸乙酯(25ml)稀释，并且然后用水(25ml)稀释。将水层用乙酸乙酯(2x100ml)萃取。将水层用柠檬酸中和，并且然后用乙酸乙酯(4x 150ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，以得到2-溴-5-氯-3-甲基异烟酸(30.1)(1.7g，56％)，其无需进一步纯化即可使用。MS(ES):m/z＝251.4[M+H]+。
步骤2：2-溴-5-氯-3-甲基异烟酸甲酯(30.2)
在氮气气氛下向(30.1)(3g，12mmol，1.0当量)于二甲基甲酰胺(30ml)中的溶液中添加碳酸钾(3.31g，24mmol，2.0当量)和甲基碘(2.04g，14.5mmol，1.1当量)。在室温下搅拌3小时之后，将反应混合物用水(100ml)稀释，并用乙酸乙酯(3x 150ml)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物通过combiflash硅胶纯化，用5-10％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到30.2(1.5g，47％产率)。MS(ES):m/z＝265.5[M+H]+
步骤3：5-溴-8-氯-2,6-萘啶-1(2H)-酮(30.3)
在0℃下向2-溴-5-氯-3-甲基异烟酸甲酯(30.2)(1.5g，5.68mmol，1.0当量)于NMP(15ml)中的溶液中逐滴添加1,3,5三嗪(0.92g，11.36mmol，2.0当量)。在温热至室温之后，添加叔丁醇钾(1.2g，11.36mmol，2.0当量)。在110℃下搅拌1小时之后，将反应混合物转移到水(100ml)中，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物用乙醚研磨，以得到30.3(1.0g，68％产率)。MS(ES):m/z 260.0[M+H]+。
步骤4：8-氯-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(9.4)
向5-溴-8-氯-2,6-萘啶-1(2H)-酮(30.3)(1.0g，3.84mmol，1.0当量)和1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.0g，4.2mmol，1.1当量)于二噁烷(10ml)和水(2ml)中的溶液中添加磷酸钾(2.4g，11.5mmol，3.0当量)。在氩气气氛下脱气15分钟之后，添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)与DCM复合物(Pd(dppf)Cl2).dcm(0.31g，0.384mmol，0.1当量)。在90℃下搅拌1小时之后，将反应混合物转移到水(100ml)中，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combiflash纯化，用100％乙酸乙酯洗脱，以得到30.4(0.8g，66.8％产率)。MS(ES):m/z 311.0[M+H]+。
步骤5：8-氯-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(30.5)
向8-氯-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(30.4)(0.8g，2.58mmol，1.0当量)于THF(8ml)中的溶液中添加DBU(0.16g，12.9mmol，5.0当量)。在室温下搅拌20分钟之后，在0℃下添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(1.71g，10.32mmol，4.0当量)。在室温下搅拌3小时之后，将反应混合物转移到水(100ml)中，并用乙酸乙酯(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物通过combiflash纯化，用50％乙酸乙酯/己烷洗脱，以得到30.5(1.0g，88％产率)。MS(ES):m/z 442.0[M+H]+。
步骤6：8-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(30.6)
向8-氯-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(30.5)(1.0g，2.26mmol，1.0当量)于二噁烷(10ml)中的溶液中添加1-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-4-醇(0.48g，2.48mmol，1.1当量)和碳酸铯(2.2g，6.78mmol，3.0当量)。在氩气气氛下脱气15分钟之后，添加4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(xanthphos)(0.150g，0.26mmol，0.1当量)和(2-二环己基膦基-2'4'6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]氯化钯(II)(xphos PdG2)(0.204g，0.26mol，0.1当量)。在110℃下搅拌16小时之后，将反应混合物转移到水(100ml)中，并用DCM(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残留物使用combiflash纯化，用15％甲醇/DCM洗脱,以得到30.6(0.8g，59％产率)MS(ES):m/z 598.0[M+H]+。
步骤7：8-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(I-361)
在0℃下向8-((5-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(30.6)(0.8g，1.0当量)于DCM(10ml)中的溶液中逐份添加含4M HCl的二噁烷(10ml)。在室温下搅拌2小时之后，将反应混合物用NaHCO3水溶液中和，并用10％甲醇/DCM(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将残留物使用combiflash纯化，用15％甲醇/DCM洗脱，以得到I-361(0.43g，69％产率)。MS(ES):m/z 468.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.41(s,1H),9.33(s,1H),8.32-8.07(m,2H),8.04(d,J＝3.1Hz,1H),7.97-7.77(m,2H),7.51-7.37(m,2H),7.32(t,J＝6.4Hz,1H),7.18(d,J＝7.4Hz,1H),6.92(d,J＝4.9Hz,1H),6.07(d,J＝3.5Hz,1H),4.70(s,1H),3.84(s,3H),3.71-3.58(m,1H),3.49(dd,J＝11.2,6.2Hz,2H),2.93-2.76(m,2H),1.97-1.75(m,2H),1.51(q,J＝11.1,9.7Hz,2H)。
实例31：方法JP-8-((6-((二甲基氨基)甲基)-5-吗啉代吡啶-2-基)氨基)-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮(I-369)的制备
按照方法IP(步骤-6)中描述的以下程序，使用8-氯-5-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-2,6-萘啶-1(2H)-酮30.4和6-((二甲基氨基)甲基)-5-吗啉代吡啶-2-胺进行反应，以得到I-369(0.8g，53.87％产率)。MS(ES):m/z 511.2.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(s,1H),8.24(d,J＝4.9Hz,1H),7.91-7.74(m,2H),7.45(dd,J＝8.2,4.9Hz,2H),6.97(dd,J＝16.2,6.1Hz,2H),4.51(s,1H),3.86(s,2H),3.81-3.74(m,2H),2.95(s,2H),2.85(t,J＝4.5Hz,2H)。
实例32：本发明的化合物
本发明的化合物是根据上文概述的程序用文献中已知的/可商购获得的硼酸盐和苯胺或所列出的中间体制备的。在写出试剂的情况下，所述化合物是文献中已知的/可商购获得的。
表2：
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HPLC条件
手性分析方法A1
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手性分析方法A2
手性分析方法A3
LCMS条件
方法：AcHSSC18
方法：10cm_Formic_AQ
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方法：10cm_Formic_ACE-AR_AQ
方法：BicarbBEHC18
/>
方法：10cm_Bicarb_AQ
方法：CP
方法GP
方法FP
方法HP
方法JP
制备型HPLC条件
合成后，使用Waters Fractionlynx制备型HPLC系统(2525泵，2996/2998UV/VIS检测器，2767液体处理器)或Gilson制备型HPLC系统(322泵，155UV/VIS探测器，GX-281液体处理器)使用反相HPLC纯化所有化合物。
用于化合物的制备型纯化的柱是10um 19×150mm的Waters Sunfire OBD、Phenomenex Luna苯基己基或Waters Xbridge苯基。
基于乙腈和甲醇溶剂系统在酸性或碱性条件下选择合适的聚焦梯度。所使用的标准梯度在1分钟为5％ ACN至20％，保持2.5分钟，在12.5分钟变为80％ ACN，保持7.5分钟。然后在初始条件下再平衡3分钟。使用20毫升/分钟的流速。
在纯化步骤之前对所有化合物进行分析筛选。每个样品在酸性和碱性两种条件下运行(2ul注射，5/95梯度持续2.25分钟)。然后由分析员根据期望产物洗脱的位置和实现的分离来决定使用什么pH和哪个梯度。
在酸性/碱性条件下使用的改性剂分别为甲酸(0.1％ V/V)和碳酸氢铵(10mM)，或者如果需要方法开发，则为TFA(0.1％ V/V)。
纯化由Waters FractionLynx软件通过在210-400nm处监测来控制，并在260nm处触发阈值收集值和如在ESI条件下观察到的靶分子离子的存在。所收集的级分通过LCMS(具有Waters SQD的Waters Acquity系统)进行分析。含有期望产物的级分通过Genevac裂解法干燥过夜，并使用BioPharma货架冷冻干燥机进一步干燥。
由于复杂的混合物，化合物中的一些化合物可能经过了二次纯化过程以达到期望纯度。更聚焦的梯度或等度条件可能已用于更具挑战性的分离(例如，方法开发)。
制备型SFC条件
在指示的情况下，合成后的化合物使用超临界流体色谱法(SFC)，使用WatersThar Prep100制备型SFC系统(P200 CO2泵，2545改性剂泵，2998UV/VIS检测器，具有堆叠注射模块的2767液体处理器)或Waters Thar-Investigator半制备系统(Waters流体递送模块，2998UV/VIS检测器、Waters级分收集模块)纯化。在使用Waters 2767液体处理器的情况下，所述液体处理器充当自动采样器和级分收集器两者。
除非另有说明，否则化合物使用合适的柱(YMC淀粉-C、YMC纤维素-C、YMC-纤维素SC、Phenomenex LUX纤维素-3或Phenomenex-LUX纤维素-4)纯化。
基于甲醇、乙醇或异丙醇溶剂系统，在未改性或碱性条件下选择合适的等度方法。所用的标准方法是改性剂/CO2，100毫升/分钟(或视情况而定)，120巴背压，40℃柱温，其中具体的改性剂组成如方法开发所说明的。
在纯化步骤之前对所有化合物进行分析筛选。每个样品在未改性和碱性两种条件下(2.0ul注射，5/55梯度持续2.25分钟)在乙醇、甲醇和异丙醇中运行。如有必要，还可以对如乙腈、乙酸乙酯和THF等扩展溶剂的二次筛选进行审查。然后由分析员根据期望产物洗脱的位置和实现的分离来决定使用什么pH和哪个等度条件。
在碱性条件下使用的改性剂是二乙胺(0.1％ V/V)。可以使用替代性改性剂，如甲酸(0.1％ V/V)、乙酸(0.1％ V/V)等作为酸性改性剂。
纯化通过Waters FractionLynx或Waters ChromScope软件在210-400nm处监测来控制，并在适当的波长处触发阈值收集值。所收集的级分通过SFC(具有Waters SQD的Waters/Thar SFC系统或具有Waters QDa的Waters UPCC)进行分析。含有期望产物的级分通过真空离心浓缩，并使用Biopharma货架冷冻干燥机进一步干燥。
所有样品均经非手性系统预纯化，并在SFC手性纯化前进行纯度检查。
化合物中的一些化合物可能经过了二次纯化过程以达到所需的ee％或de％纯度。
实例33：HPK1生化酶测定。
HPK1生化酶测定：HPK1酶抑制作用使用微流体迁移率转变测定进行测量。在含有1.5nM HPK1(英杰公司(Invitrogen))的384孔板中，在测定缓冲液(Carna生物科学公司；pH7.4)中进行反应。在十点曲线中滴定所测试的化合物(最高最终测定浓度3μM)，并在反应开始前通过添加稀释于补充MgCl-2的测定缓冲液中的ATP(1mM最终浓度)和底物(1μM最终浓度；Carnaa生物科学公司)与酶/底物混合物预温育30分钟(最终测定浓度为5mM)。在室温下温育60分钟后，通过添加60μl/孔终止缓冲液(Carna生物科学公司)和使用Caliper EZ读取器(珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)，UK)的信号测定来终止反应。
表3示出了本发明的所选化合物在HPK1生物化学酶测定中的活性。化合物编号对应于表1中的化合物编号。具有指定为“A”的活性的化合物提供IC50≤100nM；具有指定为“B”的活性的化合物提供IC50>100nM且≤1,000nM；具有指定为“C”的活性的化合物提供了IC50>1,000nM。
表3：
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Claims (41)

1.一种式I化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
X是N或CR3；
Y是N或CR2；
Z是N或CR2；
A是N或CR2；
L是共价键、-O-、-S-、-NR--、-S(O)2-、-S(O)2NR-、-S(O)-、-S(O)NR-、-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)NR-、-C(O)N(R)O-、-OC(O)-、-OC(O)NR-、-N(R)C(O)O-、-N(R)C(O)-、-N(R)S(O)2-；或者L是C1-4二价饱和或不饱和的直链或支链烃链，其中所述链的一个或两个亚甲基单元任选地且独立地被以下替代：-C(R)2-、-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-；
R1选自H；C1-6脂肪族；苯基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；以及具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；其中的每一个被RC的q个实例取代；
每个R2独立地选自H；C1-6脂肪族；苯基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和的桥连双环；以及具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和、部分不饱和或不饱和的稠合、桥连或螺双环；其中的每一个被RD的r个实例取代；或者R2是卤素、-CN、-NO2、-OR、-SR、-NR2、-S(O)2R、-S(O)(NR)R、-S(O)2NR2、-S(O)R、-S(O)NR2、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)NR2、-N(R)C(NR)NR2、-N(R)S(O)2NR2、-N(R)S(O)2R或-P(O)R2；
每个R3独立地选自H；C1-6脂肪族；苯基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；以及具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者R3是卤素、-CN、-NO2、-OR、-SR、-NR2、-S(O)2R、-S(O)(NR)R、-S(O)2NR2、-S(O)R、-S(O)NR2、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)NR2、-N(R)C(NR)NR2、-N(R)S(O)2NR2、-N(R)S(O)2R或-P(O)R2；
R4是H或C1-6脂肪族；其被RF的t个实例取代；
RC、RD、RE和RF的每个实例独立地是氧代、卤素、-CN、-NO2、-OR、-SR、-NR2、-S(O)2R、-S(O)2NR2、-S(O)R、-S(O)NR2、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-C(O)N(R)OR、-OC(O)R、-OC(O)NR2、-N(R)C(O)OR、-N(R)C(O)R、-N(R)C(O)NR2、-N(R)C(NR)NR2、-N(R)NR2、-N(R)S(O)2NR2、-N(R)S(O)2R、-N＝S(O)R2、-S(NR)(O)R、-N(R)S(O)R、-N(R)CN、-P(O)(R)NR2、-P(O)(R)OR或-P(O)R2；或者RC、RD、RE和RF的每个实例独立地是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；萘基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-5个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和的桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；或具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环；其中的每一个被R的u个实例取代；
每个R独立地是氢、-CN、卤素或任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；萘基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的7-12元饱和或部分不饱和的双环杂环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和的桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环；或者：
同一氮上的两个R基团与氮一起以形成除氮外还具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的任选地经取代的4-7元单环饱和、部分不饱和的或杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的7-12元饱和或部分不饱和的双环杂环；
m是1、2或3；
n是0、1或2；
q、r、s和t中的每一个独立地是0、1、2、3或4；并且
u是0、1、2、3或4。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式II：
或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式III：
或其药学上可接受的盐。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式IV：
或其药学上可接受的盐。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式V：
或其药学上可接受的盐。
6.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式VI：
或其药学上可接受的盐。
7.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式VII：
或其药学上可接受的盐。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式VIII：
或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式IX：
或其药学上可接受的盐。
10.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式X：
或其药学上可接受的盐。
11.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式XI：
或其药学上可接受的盐。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中X是-NR-。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中R1是C1-6脂肪族，其被RC的q个实例取代；苯基，其被RC的q个实例取代；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环，其被RC的q个实例取代；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环，其被RC的q个实例取代；具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环，其被RC的q个实例取代。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中R1是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、呋喃基、呋吖基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁二唑基、1，2，3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、-1,2,5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、氧杂环丁烷基、嘧啶基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻唑基、噻吩基、三嗪基、1，2，3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1，3，4-三唑基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁基或呫吨基；其中的每一个被RC的q个实例取代。
15.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中R1是苯基、呋喃基、呋吖基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、-1,2,5-噁二唑基、1，3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、氧杂环丁烷基、嘧啶基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、噻唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基或1,2,5-三唑基、1，3，4-三唑基；其中的每一个被RC的q个实例取代。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中R1是
其中RC的每个实例独立地是卤素、-CN、-OR、-S(O)2R、-S(O)NR2、-C(O)NR2、任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-8元饱和或部分不饱和桥连双环；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-10元饱和或部分不饱和的螺环；或具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的双环杂环；其中的每一个被R的r个实例和RD的s个实例取代。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其中R1是
其中RC的每个实例独立地是-Me、-Et、-CH2N(CH3)2、-CN、-CH2CN、-F、-OMe、-S(O)2Me、-CH2S(O)2Me，
18.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，其中R1是
/>
19.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，其中R2选自C1-6脂肪族；苯基；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；以及具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；其中的每一个被RD的r个实例取代。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物，其中R2是-H；-Et；-i-Pr；s-Bu；直链或支链戊基；环丙基；环丁基；环戊基；环己基；苯基；氧杂环丁烷基；哌嗪基；哌啶基；吡咯烷基；四氢吡喃基；氮杂环丁基；具有0-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和、部分不饱和或不饱和的稠合、桥连或螺双环；具有1-3个氮原子的7-10元稠合双环；具有1-3个氮原子的9元稠合双环；其中的每一个被RD的r个实例取代。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物，其中R2是
/>
22.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物，其中R2是
23.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物，其中R2是
24.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中RD的每个实例独立地是氧代、卤素、-CN、-OR、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2、-N(R)C(O)R；或者RD的每个实例独立地是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；以及具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；或者两个RD基团与其各自所连接的原子一起形成桥连、稠合或螺环的5-6元芳基环；3-7元饱和或部分不饱和的单环碳环；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；以及具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环；其中RD的每个实例独立地任选地被R的u个实例取代。
25.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中RD的每个实例独立地是卤素、-CN、-OR、-C(O)NR2或-NR2；或者RD的每个实例独立地是任选地经取代的选自以下的基团：C1-6脂肪族；苯基；具有1-2个独立地选自氮、氧、磷、硅和硫的杂原子的3-7元饱和或部分不饱和的单环杂环；以及具有1-3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的6-11元饱和或部分不饱和的稠合、桥连或螺双环杂环；其中RD的每个实例独立地被R的u个实例取代。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的化合物，其中R2是-H、
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27.根据权利要求1至26中任一项所述的化合物，其中R3是H、C1-6脂肪族或苯基；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者每个R3独立地是-CN、卤素、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)NR2或-C(O)N(R)OR。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中R3是H、-Me、-Et或苯基；其中的每一个被RE的s个实例取代；或者每个R3独立地是-CN、卤素或-C(O)OR。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的化合物，其中R4是H。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自表1中描绘的化合物或其药学上可接受的盐。
31.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体、佐剂或媒剂。
32.根据权利要求1至30中任一项所述的化合物或根据权利要求31所述的药物组合物，其用作药物。
33.一种抑制生物样品中的HPK1的方法，所述方法包括使所述样品与根据权利要求1至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求31所述的药物组合物接触。
34.一种治疗患者的HPK1介导的病症、疾病或病状的方法，所述方法包括向所述患者施用根据权利要求1至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求31所述的药物组合物。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述病症是增殖性病症。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述增殖性病症是癌症。
37.根据权利要求34所述的方法，其中所述病症与HPK1中的一个或多个激活突变相关。
38.一种根据权利要求1至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求31所述的药物组合物的用途，其用于制备用于治疗患者的HPK1介导的病症、疾病或病状的药物。
39.根据权利要求38所述的用途，其中所述病症是增殖性病症。
40.根据权利要求39所述的用途，其中所述增殖性病症是癌症。
41.根据权利要求38所述的用途，其中所述病症与HPK1中的一个或多个激活突变相关。
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