CN117100852A - 复合佐剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药工程领域，特别涉及一种复合佐剂及其制备方法和应用，该复合佐剂包含胶体锰以及选自TLR3激动剂和TLR4激动剂中的至少一种激动剂。本发明所述复合佐剂组分的原料较易获得，制备工艺简单且成本低；本发明的复合佐剂性质稳定，具有很高的生物安全性和相容性，副作用小，可以同时激活TLR3/TLR4及STING通路，协同促进TH1型免疫应答，提升细胞免疫效果。

Description

复合佐剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药工程领域，特别涉及一种复合佐剂及其制备方法和其在免疫治疗及预防领域的应用。
背景技术
佐剂（Adjuvants）是非特异性的免疫调节剂，在疫苗中添加佐剂，可起到提高免疫反应强度、改变免疫反应类型、延长免疫反应持续时间等多种作用。特别是对免疫原性较弱的疫苗，合理应用佐剂可提高疫苗在不同免疫背景人群中接种的阳转率。
铝佐剂作为免疫佐剂已经使用了很长的时间，其安全性与免疫增强作用早已被人们所证实，但铝佐剂对某些疫苗候选抗原缺少佐剂效应或仅有较弱的佐剂效应，虽可增强体液免疫反应，但对细胞免疫没有强化作用，且在许多人用疫苗中没有明显的强化免疫反应的效果。因此，随着越来越多候选疫苗的涌现，对临床上可用的新型佐剂的需求正在快速增长。
胶体锰佐剂是一种锰纳米颗粒水性佐剂。其核心原理是Mn2+激活cGAS-STING 信号通路，高效迅速地诱导树突状细胞成熟并提呈抗原，进而诱导适应性免疫应答并产生免疫记忆。相比于铝佐剂，锰佐剂具有更高的生物安全性和相容性，以及更好的免疫活化功能。
Toll样受体(toll-like receptors；TLRs)是参与先天免疫的一类重要蛋白质分子，可以在多种细胞（如巨噬细胞和树突状细胞）中表达。TLRs是单体跨膜的非催化性受体，可以识别由微生物（细菌、病毒和寄生虫等）产生的结构保守的分子。一旦这些微生物突破如皮肤或肠道粘膜的物理屏障，就会被TLRs识别，继而激活免疫细胞应答。免疫系统之所以具有广泛识别病原微生物的能力，某种程度上是由于Toll样免疫受体的广泛存在。在哺乳动物中至少存在10种不同的TLRs。
TLR3是TLR家族的成员，能够介导1型干扰素(IFN-α/β)、促炎细胞因子(IL-6,IL-10)和趋化因子的转录诱导，从而共同建立宿主的抗病毒反应。
双链RNA类似物（例如聚肌胞苷酸(poly(I:C)), Poly ICLC和Poly I:C12U等）为TLR3的配体，能够被TLR3识别并激活TLR3。TLR3在胞内识别poly(I:C)并被其激活后，能够募集下游的衔接蛋白MyD88和TRIF，TLR3可通过MyD88依赖途径诱导炎症性细胞因子如IL-1、TNF-α、IL-6和IL-12的表达，参与非特异性抗病毒反应，同时通过MyD88非依赖途径诱导共刺激分子CD80和CD86以及IFN-β、IP-10等抗病毒性细胞因子的表达，参与诱导DC的分化成熟以及抗病毒免疫反应。在体内，以聚肌胞苷酸辅助的疫苗可以诱导强力的细胞毒性T细胞免疫应答。
TLR4是目前研究较为深入的另一种TLR，属于Ⅰ型跨膜蛋白，其配体包括革兰阴性菌脂多糖（LPS）及其衍生物单磷酰脂A（MPLA）等。TLR4激动剂或单独应用，或作为复合佐剂的主要组分，或与其他TLR激动剂联合使用，已广泛用于多种疫苗的研发，展现良好的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种复合佐剂，可以降低生产成本，并能提高疫苗的免疫效果。
为了达到上述目的，一方面，本发明提供了一种复合佐剂，包含胶体锰和选自TLR3激动剂和TLR4激动剂中的至少一种激动剂，所述TLR3激动剂选自Poly I:C、Poly ICLC和Poly I:C12U中的至少一种；所述TLR4激动剂选自单磷酰脂质A（MPL）、3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)中的至少一种。
在一些实施方式中，所述胶体锰选自MnJ(β)胶体锰和MnJ(γ)胶体锰中的至少一种。
在一些实施方式中，所述TLR3激动剂为Poly I:C。
在一些实施方式中，Poly I:C的分子量介于66,000至1200,000道尔顿之间，特别是从66,000至660,000道尔顿之间。
在一些实施方式中，所述胶体锰与Poly I:C的质量比为(0.5-2):1。
在一些实施方式中，所述TLR4激动剂为3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)。
在一些实施方式中，所述胶体锰与3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)的质量比为(5-20):1。
在一些实施方式中，所述复合佐剂的人用剂量包含胶体锰0.1-1mg和Poly I:C0.1-1mg。
在一些实施方式中，所述复合佐剂的人用剂量包含胶体锰0.1-1mg和3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL) 10-100μg。
在一些实施方式中，所述复合佐剂的人用剂量包含胶体锰0.1-1mg、Poly I:C0.1-1mg和3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL) 10-100μg。
另一方面，本发明提供了一种制备所述复合佐剂的方法，包括：将胶体锰和包含TLR3激动剂和TLR4激动剂中的至少一种激动剂的溶液分别加入到生理盐水中，混匀，得到所述复合佐剂。
又一方面，本发明还提供了所述复合佐剂在制备用于预防或治疗疾病的药物中的用途。
又一方面，本发明还提供了一种疫苗组合物，包含一种或多种抗原以及所述复合佐剂。
在一些实施方式中，所述抗原为来源于病毒、细菌、真菌、寄生虫或肿瘤的一种或多种抗原。
在一些实施方式中，所述抗原来源于人乳头瘤病毒（HPV）、引发手足口病的肠道病毒、结核杆菌、单纯疱疹病毒（HSV）、巨细胞病毒（CMV）、水痘带状疱疹病毒（VZV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、流感病毒、新型冠状病毒（SARS-CoV-2）、肝炎病毒和狂犬病毒中的至少一种。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明所述复合佐剂组分的原料较易获得，制备工艺简单且成本低；本发明的复合佐剂性质稳定，具有很高的生物安全性和相容性，副作用小，可以同时激活TLR3/TLR4及STING通路，协同促进TH1型免疫应答，提升细胞免疫效果。
附图说明
以下附图仅旨在对本发明做示意性说明和解释，并不限定本发明的范围。其中：
图1为本发明实施例3中的细胞因子检测结果。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。
在本发明的说明书中，提及“一个实施例”时均意指在该实施例中描述的具体参数、步骤等至少包含在根据本发明的一个实施例中。因而，在本发明的说明书中，若采用了诸如“根据本发明的一个实施例”、“在一个实施例中”等用语并不用于特指在同一个实施例中，若采用了诸如“在另外的实施例中”、“根据本发明的不同实施例”、“根据本发明另外的实施例”等用语，也并不用于特指提及的特征只能包含在特定的不同的实施例中。本领域的技术人员应该理解，在本发明说明书的一个或者多个实施例中公开的各具体参数、步骤等可以以任何合适的方式组合。
本发明提供一种复合佐剂，包含胶体锰和选自TLR3激动剂和TLR4激动剂中的至少一种激动剂，所述TLR3激动剂选自Poly I:C、Poly ICLC和Poly I:C12U中的至少一种；所述TLR4激动剂选自单磷酰脂质A（MPL）、3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)中的至少一种。
胶体锰
本发明中的胶体锰选自MnJ(β)胶体锰和MnJ(γ)胶体锰中的至少一种。将包含二价锰离子的水溶液加入到包含磷酸盐和氯化钠的水溶液中即可制备得到胶体锰。
TLR激动剂
本发明中的TLR3激动剂为聚肌苷酸-聚胞苷酸（Poly I:C）或其衍生物。Poly I:C是一种双链RNA类似物，由一条poly(I)链和一条poly(C)链组成，能够模拟病毒感染后所形成的dsRNA，刺激机体产生抗病毒免疫反应和炎症反应，具有良好的抗病毒作用。研究发现，将Poly I:C直接作为药物应用于临床时，会对身体产生一定的毒性。为了降低其对机体的毒性，并提高Poly I:C刺激机体产生干扰素的能力，研究人员对其进行了改造，创造出多种Poly I:C衍生物。
将poly I:C与聚左旋赖氨酸混合后溶于羧甲基纤维素形成的复合物称为Poly-ICLC。研究表明，相对于poly I:C，Poly-ICLC在小鼠体内可以将诱发的IFN最高浓度提高5-8倍。但是，Poly-ICLC同样对机体有一定的毒性。使用脂质体包被Poly-ICLC后，能够显著降低其副作用。
Poly I:C12U是一种错配的双链RNA，能够上调或下调2,5-腺苷酸合成酶/RNaseL(2,5-A synthetase/RNaseL)系统和P68蛋白激酶系统，且这种作用不依赖于干扰素。
在一些实施方式中，所述TLR3激动剂选自Poly I:C、Poly ICLC和Poly I:C12U中的一种或多种。
在一些优选的实施方式中，所述TLR3激动剂是Poly I:C，其分子量介于66,000至1200,000道尔顿之间，例如，75,000至1100,000道尔顿之间、96,000至950,000道尔顿之间、150,000至550,000道尔顿之间，特别是从66,000至660,000道尔顿之间。
本发明中的TLR4激动剂为来自革兰氏阴性细菌的脂多糖（LPS）及其衍生物。在一些实施方式中，TLR4激动剂为单磷酰脂质A(MPL)或3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)。单磷酰脂质A(MPL)是革兰氏阴性细菌例如明尼苏达沙门氏菌（Salmonella minnesota）R595的脂多糖(LPS)的无毒衍生物。它保持LPS的佐剂特性同时显示出降低的毒性(Johnson等1987Rev. Infect.Dis.9 Suppl:S512-S516)。单磷酰脂质A(MPL)经进一步的温和碱水解可获得3-O-脱酰基单磷酰脂质A（3D-MPL），它是具有4、5或6个酰化的3-O-脱酰基单磷酰脂质A的混合物。在一个优选的实施方式中，TLR4激动剂为3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)。
疫苗组合物
在一些实施方式中，所述抗原来源于人乳头瘤病毒（HPV）、引发手足口病的肠道病毒、结核杆菌、单纯疱疹病毒（HSV）、巨细胞病毒（CMV）、水痘带状疱疹病毒（VZV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、流感病毒、新型冠状病毒（SARS-CoV-2）、肝炎病毒和狂犬病毒中的至少一种。
来源于人乳头瘤病毒（HPV）的抗原为各型别HPV的L1蛋白和/或L2蛋白。在本发明的实施方式中，HPV可以为低危型HPV（例如HPV6、11、40、42、43、44、54、61、70、72、81、89），中等风险型HPV（例如HPV26、53、66、73、82），或者高危型HPV（例如HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68）。
在优选的实施方式中，来源于人乳头瘤病毒（HPV）的抗原包含由HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、45型、52型及58型中的一种或多种的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在一个优选的实施方式中，来源于人乳头瘤病毒（HPV）的抗原包含由HPV 6型和11型的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在一个优选的实施方式中，来源于人乳头瘤病毒（HPV）的抗原包含由HPV16型和18型的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在一个优选的实施方式中，来源于人乳头瘤病毒（HPV）的抗原包含由HPV 6型、11型、16型和18型的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在优选的实施方式中，来源于人乳头瘤病毒（HPV）的抗原包含由HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、45型、52型及58型的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在优选的实施方式中，来源于人乳头瘤病毒（HPV）的抗原包含由HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型及59型的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
引发手足口病的肠道病毒主要包含柯萨奇A组4型、5型、6型、7型、9型、10型、16型等，B组的2型、5型和13型，以及肠道病毒71型(EV71)等。在本发明的实施方式中，来源于这些肠道病毒的抗原可以来自上述型别中的一种或任意组合，所述抗原优选为由VP1蛋白、VP2蛋白、VP3蛋白以及VP4蛋白组成的病毒样颗粒（VLP）。VP1蛋白、VP2蛋白、VP3蛋白以及VP4蛋白由前体蛋白P1在3CD蛋白酶的作用下分解后产生。
在一些实施方式中，来源于这些肠道病毒的抗原包含EV71、柯萨奇A组6型、10型和16型病毒颗粒中的一种或多种。在优选的实施方式中，来源于这些肠道病毒的抗原包含EV71、柯萨奇A组6型、10型和16型病毒颗粒。
结核分枝杆菌免疫原性较强的蛋白家族主要包含Esx家族蛋白、PE/PPE家族蛋白和DosR家族蛋白。Esx家族蛋白优选包含ESAT-6、CFP-10、TB9.8、TB10.3、TB10.4、TB11.0、TB12.9等。PE/PPE家族蛋白优选包含PPE17、PPE18、PPE34、PPE42、PPE57、PE-PGRS33、PE35-PPE68、PE-PGRS62、PE-PGRS17、PE-PGRS11、PE25-PPE41等。DosR家族蛋白优选包含Rv2626c、Rv2029c、Rv2031c、Rv2627c、Rv3133c等。
在本发明优选的实施方式中，来源于结核杆菌的抗原包含至少一个Esx家族蛋白、至少一个PE/PPE家族蛋白和至少一个DosR家族蛋白。在一些的实施方式中，Esx家族蛋白为CFP-10，PE/PPE家族蛋白为PE35和PPE68，DosR家族蛋白选自Rv2626c、Rv2627c和Rv2031c中的一种。在一个优选的实施方式中，源于结核杆菌的抗原包含CFP-10蛋白、PE35蛋白、PPE68蛋白和Rv2627c蛋白。在一个优选的实施方式中，来源于结核杆菌的抗原包含由CFP-10蛋白、PE35蛋白、PPE68蛋白和Rv2627c蛋白形成的融合蛋白。在一个优选的实施方式中，源于结核杆菌的抗原包含CFP-10蛋白、PE35蛋白、PPE68蛋白和Rv2626c蛋白。在一个优选的实施方式中，来源于结核杆菌的抗原包含由CFP-10蛋白、PE35蛋白、PPE68蛋白和Rv2626c蛋白形成的融合蛋白。在一个优选的实施方式中，源于结核杆菌的抗原包含CFP-10蛋白、PE35蛋白、PPE68蛋白和Rv2031c蛋白。在一个优选的实施方式中，来源于结核杆菌的抗原包含由CFP-10蛋白、PE35蛋白、PPE68蛋白和Rv2031c蛋白形成的融合蛋白。
来源于单纯疱疹病毒（HSV）的抗原可以为来自HSV-1和/或HSV-2的gB、gC、gD、gH、gL、gI、ICP0、ICP4等。在本发明的实施方式中，来源于单纯疱疹病毒（HSV）的抗原包含HSVgB蛋白或其功能性片段。在一个优选的实施方式中，来源于单纯疱疹病毒（HSV）的抗原包含gB蛋白的胞外结构域或其功能片段。在一个实施方式中，gB蛋白的胞外结构域的功能片段包含gB蛋白的融合环（fusion-loop）结构域。在一个实施方式中，gB蛋白的胞外结构域包含至少一个氨基酸突变，优选的，所述氨基酸突变为脯氨酸取代。在一个实施方式中，HSV-1的gB蛋白的胞外结构域包含406位的脯氨酸取代。在一个实施方式中，HSV-2的gB蛋白的胞外结构域包含408位的脯氨酸取代。在一个实施方式中，来源于单纯疱疹病毒（HSV）的抗原包含HSV-1 gB蛋白的融合环结构域与HSV-2 gB蛋白的融合环结构域形成的融合蛋白。
来源于水痘带状疱疹病毒（VZV）的抗原包含VZV病毒的糖蛋白gB、gC、gE、gH、gI、gK、gL等。在一个优选的实施方式中，来源于水痘带状疱疹病毒（VZV）的抗原包含截短的gE蛋白，其缺少gE蛋白的羧基端疏水锚区。
来源于流感病毒的抗原包含灭活的流感病毒、流感病毒的血凝素(HA蛋白)或神经氨酸酶(NA蛋白)。在一个优选的实施方式中，来源于流感病毒的抗原包含流感病毒的血凝素(HA蛋白)。在一个优选的实施方式中，来源于流感病毒的抗原包含灭活的流感病毒。
来源于新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的抗原包含SARS-CoV-2刺突蛋白（S蛋白）、刺突蛋白的受体结合结构域（RBD）或其功能活性片段。在一些实施方式中，来源于新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的抗原为SARS-CoV-2刺突蛋白（S蛋白）的受体结合结构域（RBD）或其功能活性片段与N端结构域（NTD）或其功能活性片段形成的融合蛋白。在一个优选的实施方式中，所述融合蛋白进一步包含foldon结构域、人免疫球蛋白的Fc结构域或其功能活性片段。在一个更优选的实施方式中，来源于新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的抗原包含来自不同毒株的融合蛋白，每个融合蛋白为受体结合结构域（RBD）或其功能活性片段、N端结构域（NTD）和foldon结构域或其功能活性片段形成的融合蛋白。在一些实施方式中，来源于新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的抗原包含源自免疫优势毒株的融合蛋白和源自流行优势毒株的融合蛋白，其中，所述免疫优势毒株包含原型株和Beta株中的至少一种，所述流行优势毒株包含Delta株和Omicron株中的至少一种。
在一些实施方式中，来源于新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的抗原包含源自免疫优势毒株的S蛋白受体结合区或其功能活性片段与源自流行优势毒株的S蛋白受体结合区或其功能活性片段形成的融合蛋白，其中，所述免疫优势毒株包含原型株和Beta株中的至少一种，所述流行优势毒株包含Delta株和Omicron株中的至少一种。所述Omicron株包括BA.1、BA.2、BA.3、BA.4和BA.5变异株。
人类肝炎病毒包含甲型、乙型、丙型、丁型、戊型和庚型肝炎病毒。在一些实施方式中，来源于肝炎病毒的抗原包含源自乙肝的乙肝表面抗原（HBsAg）。
来源于狂犬病毒的抗原包括灭活的狂犬病毒或源自狂犬病毒的重组蛋白。重组蛋白源自狂犬病毒G蛋白、N蛋白、M蛋白、P蛋白及L蛋白中的至少一种。
实施例1 复合佐剂的制备
本发明中的胶体锰为MnJ(β)胶体锰佐剂或MnJ(γ)胶体锰佐剂，两种胶体锰佐剂是锰纳米颗粒水性佐剂，均购自启锰生物。其中，MnJ(β)胶体锰佐剂的锰元素含量为5 mg/mL，MnJ(γ)胶体锰佐剂的锰元素含量为2 mg/mL。
将上述胶体锰佐剂、3D-MPL水溶液和/或PolyI:C水溶液加入到生理盐水中，搅拌混匀，即得到复合佐剂。
复合佐剂的人用剂量为0.5mL，该实施例制备了不同组分的复合佐剂，其中一种复合佐剂包含胶体锰0.5mg和3D-MPL 50μg；另一种复合佐剂包含胶体锰0.5mg和PolyI:C0.5mg；另一种复合佐剂包含胶体锰0.5mg、3D-MPL 50μg和PolyI:C 0.5mg，其中的胶体锰可以分别为MnJ(β)胶体锰佐剂或MnJ(γ)胶体锰佐剂。
实施例2 疫苗组合物的制备
将来源于水痘带状疱疹病毒（VZV）的gE蛋白用注射用水溶解，并与实施例1中的复合佐剂等体积混合，得到疫苗组合物。
疫苗组合物的人用剂量为1mL，该实施例制备了不同组分的疫苗组合物，其中一种人用剂量的疫苗组合物包含gE蛋白50μg、胶体锰0.5mg和3D-MPL 50μg，另一种人用剂量的疫苗组合物包含gE蛋白50μg、胶体锰0.5mg和PolyI:C 0.5mg，另一种人用剂量的疫苗组合物包含gE蛋白50μg、胶体锰0.5mg、3D-MPL 50μg和PolyI:C 0.5mg，其中的胶体锰可以分别为MnJ(β)胶体锰佐剂或MnJ(γ)胶体锰佐剂。
实施例3 免疫实验
以6-8周龄的C57BL/6小鼠为动物模型，以水痘带状疱疹病毒gE重组蛋白为抗原进行免疫原性研究，考察不同组分的复合佐剂对免疫原性的影响，并以单独的胶体锰佐剂作为对照，免疫方案如表1。每组5只小鼠，以肌肉注射的方式，0天和21天进行重组带状疱疹疫苗免疫（1/10HD），并于第35天进行细胞内细胞因子检测评价疫苗细胞免疫效果。
表1 免疫方案
结果如表2和图1所示。可以看出，相对于单独采用胶体锰佐剂，加入3D-MPL或PolyI:C后，产生的细胞因子水平均有不同程度的提高。具体来看，在胶体锰中加入3D-MPL后，细胞因子水平可提高约20%-30%，而在胶体锰中加入PolyI:C后，细胞因子水平可提高约50%-70%，当在胶体锰MnJ（β）中同时加入3D-MPL和PolyI:C后，细胞因子水平相对于由胶体锰MnJ（β）和PolyI:C形成的复合佐剂又有进一步的提高，但与由胶体锰MnJ（γ）和PolyI:C形成的复合佐剂产生的细胞因子水平相当。
表2 含不同组分佐剂的疫苗组合物诱导产生的细胞因子水平
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (17)

1.一种复合佐剂，其特征在于，包含胶体锰和选自TLR3激动剂和TLR4激动剂中的至少一种激动剂，所述TLR3激动剂选自Poly I:C、Poly ICLC和Poly I:C12U中的至少一种；所述TLR4激动剂选自单磷酰脂质A（MPL）和3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的复合佐剂，其特征在于，所述胶体锰选自MnJ(β)胶体锰和MnJ(γ)胶体锰中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的复合佐剂，其特征在于，所述TLR3激动剂为Poly I:C。
4.根据权利要求3所述的复合佐剂，其特征在于，Poly I:C的分子量介于66,000至1200,000道尔顿之间。
5.根据权利要求4所述的复合佐剂，其特征在于，Poly I:C的分子量介于66,000至660,000道尔顿之间。
6.根据权利要求3所述的复合佐剂，其特征在于，所述胶体锰与Poly I:C的质量比为(0.5-2):1。
7.根据权利要求1所述的复合佐剂，其特征在于，所述TLR4激动剂为3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)。
8.根据权利要求7所述的复合佐剂，其特征在于，所述胶体锰与3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL)的质量比为(5-20):1。
9.根据权利要求3所述的复合佐剂，其特征在于，所述复合佐剂的人用剂量包含胶体锰0.1-1mg和Poly I:C 0.1-1mg。
10.根据权利要求7所述的复合佐剂，其特征在于，所述复合佐剂的人用剂量包含胶体锰0.1-1mg和3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL) 10-100μg。
11.根据权利要求3或7所述的复合佐剂，其特征在于，所述复合佐剂的人用剂量包含胶体锰0.1-1mg、Poly I:C 0.1-1mg和3-O-脱酰基单磷酰脂质A(3D-MPL) 10-100μg。
12.一种制备权利要求1-11任一项所述复合佐剂的方法，其特征在于，包括：将胶体锰和包含TLR3激动剂和TLR4激动剂中的至少一种激动剂的溶液分别加入到生理盐水中，混匀，得到所述复合佐剂。
13.权利要求1-11任一项所述复合佐剂在制备用于预防或治疗疾病的药物中的用途。
14.一种疫苗组合物，其特征在于，包含权利要求1-11任一项所述复合佐剂和至少一种抗原。
15.根据权利要求14所述的疫苗组合物，其特征在于，所述抗原为来源于病毒、细菌、真菌、寄生虫或肿瘤的一种或多种抗原。
16.根据权利要求15所述的疫苗组合物，其特征在于，所述抗原来源于人乳头瘤病毒（HPV）、引发手足口病的肠道病毒、结核杆菌、单纯疱疹病毒（HSV）、巨细胞病毒（CMV）、水痘带状疱疹病毒（VZV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、流感病毒、新型冠状病毒（SARS-CoV-2）、肝炎病毒和狂犬病毒中的至少一种。
17.根据权利要求16所述的疫苗组合物，其特征在于，所述抗原包含源自水痘带状疱疹病毒的gE蛋白。
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