CN117054204A - 一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，涉及医疗器械检验分析技术领域，包括分析柱以及负压泵，所述分析柱顶端设有注液口，底端设有出液口，所述出液口通过输液管连接所述负压泵，所述分析柱底部设有分离膜。本发明分离膜位于分析柱底部，染色液和洗涤液由注液口处加入，废液通过负压泵排出和收集，操作简单、细胞无丢失且损伤小，适合在流式细胞检测的样本前处理。
Description
技术领域
本发明涉及医疗器械检验分析技术领域，尤其是涉及一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置及方法。
背景技术
在流式细胞分析领域经常需要对样本细胞进行染色和洗涤，以去除非必要的细胞染色液和非特异性溶液，血液检测时，需要去除血浆获得检测目标细胞，如：检测目标是白细胞时，需要对血液中红细胞进行低渗裂解，清洗液多次重复洗涤，去除溶液中血红蛋白或红细胞膜碎片而获得纯化的白细胞，但是在红细胞裂解前后缓冲液的晶体渗透压和胶体渗透压发生变化，同时目前主要采用离心的方法获得纯化血液中白细胞，在离心时，细胞需要承受流体的剪切力和本身重力的离心力，对目标细胞来说细胞膜要承受上述破坏损伤，造成渗透脆性增加和细胞膜的损害，给后续的流式细胞学检测带来影响，专利CN211426030U公开了一种细胞洗涤染色装置，包括：收集管和洗涤管；还包括，通过管盖臂与收集管的顶部连接在一起的管盖；收集管的内部距离管口固定距离处设有用于支撑洗涤管的狭窄环；狭窄环的内径小于洗涤管的外径；洗涤管的外径等于收集管的内径；管盖为两级管盖结构，第一级管盖用于适配收集管，第二级管盖用于适配洗涤管，操作时将需要洗涤/染色的细胞加入洗涤管中，再以400g的速度离心3分钟，上述方案中，在离心时，细胞会受到流体的剪切力和本身重力的离心力，使其细胞膜承受破坏损伤，不利于后续的流式细胞学检测。
因此，亟需一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置及方法。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置及方法，在细胞洗涤和染色中不使用离心的方法进行分离，以减少细胞的损害，确保血液细胞或骨髓细胞样本稳定以满足临床检验的合格样本要求。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，包括分析柱以及负压泵，所述分析柱顶端设有注液口，底端设有出液口，所述出液口通过输液管连接所述负压泵，所述分析柱底部设有分离膜。
进一步地，所述分析柱的材质采用聚丙烯树脂。
进一步地，所述分离膜选自聚四氟乙烯膜、混合纤维素膜、聚酰胺膜和聚醚砜膜的一种。
进一步地，所述分离膜膜孔径尺寸为0.2μm～2.0μm。
进一步地，所述分离膜表面进行疏水性处理。
进一步地，所述负压泵的压力范围为-5.0KPa～-20.0KPa。
进一步地，所述负压泵远离所述出液口一端通过输液管连接有废液桶。
一种基于膜技术的细胞染色洗涤方法，具体步骤如下：
S1：取新鲜抗凝血液样本由注液口加入分析柱内；
S2：将洗涤液由注液口加入分析柱内，采用移液器吹打混匀；
S3：通过负压泵排空分析柱内的液体；
S4：将S2与S3重复操作多次；
S5：使用移液器加入磷酸盐缓冲液对分析柱内细胞重新悬浮并吹打混匀；
S6：将S5得到的悬浮细胞在流式细胞仪上检测分析。
进一步地，S3与S4之间还包括S31：将染色液由注液口加入分析柱内，采用移液器吹打混匀，并在室温条件下避光染色一段时间后，通过负压泵排空分析柱内的液体。
本发明的有益效果在于：
本发明分离膜位于分析柱底部，染色液和洗涤液由注液口处加入，废液通过负压泵排出和收集，整个过程中无离心时流体剪切力的损伤，对细胞膜损伤较小；分离膜膜孔径尺寸为0.2μm～2.0μm，在负压泵的作用下，液体类或部分细胞膜碎片可以通过，但完整细胞不能通过，减少了细胞丢失，可以极大保护稀缺样本；移除废液时采用负压泵，无压力变化，避免对细胞造成损害，且操作简单和洗涤速度快；分离膜表面进行疏水性处理，可以确保各种染色液和洗涤液在分析柱内的保存；可通过本发明装置实现细胞洗涤染色的自动化和标准化，减少人员操作引入的不确定性，并极大节约人力成本；负压泵连通废液桶，减少生物污染物的暴露，提高操作人员的安全性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为本发明一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置的结构示意图。
其中，图中：
1-分析柱，11-注液口，12-出液口，2-分离膜，3-输液管，4-负压泵，5-废液桶。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，本申请的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本申请的实施例。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
在本申请中，术语“上”、“下”、“左”、“右”、“前”、“后”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“中”、“竖直”、“水平”、“横向”、“纵向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系。这些术语主要是为了更好地描述本申请及其实施例，并非用于限定所指示的装置、元件或组成部分必须具有特定方位，或以特定方位进行构造和操作。
并且，上述部分术语除了可以用于表示方位或位置关系以外，还可能用于表示其他含义，例如术语“上”在某些情况下也可能用于表示某种依附关系或连接关系。对于本领域普通技术人员而言，可以根据具体情况理解这些术语在本申请中的具体含义。
此外，术语“安装”、“设置”、“设有”、“连接”、“相连”、“套接”应做广义理解。例如，可以是固定连接，可拆卸连接，或整体式构造；可以是机械连接，或电连接；可以是直接相连，或者是通过中间媒介间接相连，又或者是两个装置、元件或组成部分之间内部的连通。对于本领域普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本申请中的具体含义。
参阅附图1，本发明中公开了一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，包括分析柱1以及负压泵4，分析柱1顶端设有注液口11，底端设有出液口12，出液口12通过输液管3连接负压泵4，分析柱1底部设有分离膜2。分离膜2位于分析柱1底部，染色液和洗涤液由注液口11处加入，废液通过负压泵4排出和收集，整个过程中无离心时流体剪切力的损伤，对细胞膜损伤较小，移除废液时采用负压泵4，无压力变化，避免对细胞造成损害，且操作简单和洗涤速度快。
分析柱1的材质采用聚丙烯树脂。
分离膜2选自聚四氟乙烯膜、混合纤维素膜、聚酰胺膜和聚醚砜膜的一种。
分离膜2膜孔径尺寸为0.2μm～2.0μm，在负压泵的作用下，液体类或部分细胞膜碎片可以通过，但完整细胞不能通过，减少了细胞丢失，可以极大保护稀缺样本。
分离膜2表面使用醇类化学试剂(例如甲醇、乙醇或乙二醇)进行疏水性处理，可以确保各种染色液和洗涤液在分析柱内的保存。
负压泵4的压力范围为-5.0KPa～-20.0KPa。确保膜结构的完整性和不对细胞等检测目标造成损害。
负压泵4远离出液口12一端通过输液管3连接有废液桶5。减少生物污染物的暴露，提高操作人员的安全性。
实施例一
一种基于膜技术的细胞染色洗涤方法，具体步骤如下：
采用聚丙烯树脂制备分析柱，采用聚四氟乙烯膜(孔径为1.2μm)制备分离膜，将分离膜放置于分析柱底部并压圈密封；
S1：取新鲜抗凝血液样本20μL由注液口11加入分析柱1内；
S2：将洗涤液(磷酸盐缓冲液2.0mL)由注液口11加入分析柱1内，采用移液器轻轻吹打混匀；
S3：将负压泵设置为-8.0KPa压力，排空分析柱1内的液体至废液桶5。
S4：将S2与S3重复操作两次；
S5：使用移液器加入200μL磷酸盐缓冲液对分析柱1内细胞重新悬浮并吹打混匀；
S6：将S5得到的悬浮细胞在流式细胞仪上检测分析。
实施例二
一种基于膜技术的细胞染色洗涤方法，具体步骤如下：
采用聚丙烯树脂制备分析柱，采用聚四氟乙烯膜(孔径为1.2μm)制备分离膜，将分离膜放置于分析柱底部并压圈密封；
S1：取新鲜抗凝血液样本20μL由注液口11加入分析柱1内；
S2：将洗涤液(磷酸盐缓冲液2.0mL)由注液口11加入分析柱1内，采用移液器轻轻吹打混匀；
S3：将负压泵设置为-8.0KPa压力，排空分析柱1内的液体至废液桶5。
S31：将染色液(带有荧光标记的抗体20μL)由注液口11加入分析柱1内，采用移液器轻轻吹打混匀，在室温条件下避光染色30min后，将负压泵设置为-5.0KPa，排空分析柱1内的液体至废液桶5；
S4：将S2与S3重复操作两次；
S5：使用移液器加入200μL磷酸盐缓冲液对分析柱1内细胞重新悬浮并吹打混匀；
S6：将S5得到的悬浮细胞在流式细胞仪上检测分析。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，其特征在于，包括分析柱(1)以及负压泵(4)，所述分析柱(1)顶端设有注液口(11)，底端设有出液口(12)，所述出液口(12)通过输液管(3)连接所述负压泵(4)，所述分析柱(1)底部设有分离膜(2)。
2.根据权利要求1所述的一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，其特征在于，所述分析柱(1)的材质采用聚丙烯树脂。
3.根据权利要求1所述的一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，其特征在于，所述分离膜(2)选自聚四氟乙烯膜、混合纤维素膜、聚酰胺膜和聚醚砜膜的一种。
4.根据权利要求3所述的一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，其特征在于，所述分离膜(2)膜孔径尺寸为0.2μm～2.0μm。
5.根据权利要求4所述的一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，其特征在于，所述分离膜(2)表面进行疏水性处理。
6.根据权利要求1所述的一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，其特征在于，所述负压泵(4)的压力范围为-5.0KPa～-20.0KPa。
7.根据权利要求1所述的一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置，其特征在于，所述负压泵(4)远离所述出液口(12)一端通过输液管(3)连接有废液桶(5)。
8.一种基于膜技术的细胞染色洗涤方法，其特征在于，利用权利要求1-7中任意一项所述的一种基于膜技术的细胞染色洗涤装置实现，具体步骤如下：
S1：取新鲜抗凝血液样本由注液口(11)加入分析柱(1)内；
S2：将洗涤液由注液口(11)加入分析柱(1)内，采用移液器吹打混匀；
S3：通过负压泵(4)排空分析柱(1)内的液体；
S4：将S2与S3重复操作多次；
S5：使用移液器加入磷酸盐缓冲液对分析柱(1)内细胞重新悬浮并吹打混匀；
S6：将S5得到的悬浮细胞在流式细胞仪上检测分析。
9.根据权利要求8所述的一种基于膜技术的细胞染色洗涤方法，其特征在于，S3与S4之间还包括S31：将染色液由注液口(11)加入分析柱(1)内，采用移液器吹打混匀，并在室温条件下避光染色一段时间后，通过负压泵(4)排空分析柱(1)内的液体。
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