CN117045697A - 一种治疗idh突变型胶质瘤的提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物及其制备方法和应用。涉及制药技术领域。由以下步骤制得：将大花雪胆用质量分数75％的甲醇溶液回流提取2～3h，蒸发回收甲醇获得浓缩液；在浓缩液中加水溶解，得混合液，用乙酸乙酯进行萃取，获得萃取液；萃取液通过低压硅胶柱层析，获得层析液，即得治疗IDH突变型胶质瘤的提取物。本发明通过胶质瘤原代细胞模型证明，本发明提供的提取物，能够产生比临床一线化疗药物替莫唑胺与卡莫司汀更好的抗IDH突变型胶质瘤效果。因此，在针对IDH突变型胶质瘤的临床治疗中，可能具有着潜在治疗优势，因而具有潜在的药物开发价值。
Description
技术领域
本发明涉及制药技术领域，更具体的说是涉及一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物及其制备方法和应用。
背景技术
胶质瘤是成年人最为常见的原发性颅内肿瘤，约占颅脑肿瘤的30％～50％,复发率居颅内肿瘤首位。肿瘤多呈浸润性生长，手术不易全切，目前仍无确切有效的治疗手段。
目前临床主要采取手术联合放、化疗的治疗方式，但是患者预后极差，无法有效延长患者预后生存期。临床主要使用烷化剂替莫唑胺，开展针对胶质瘤患者的化疗。但是，胶质瘤显著的异质性和原癌基因突变，造成了具有特殊分子分型的胶质瘤对化疗药物抵抗，增加了肿瘤的难治性。因此，针对特定分子分型的胶质瘤进行药物开发和研究，成为了胶质瘤治疗的一个重要方向，从而改善现有的胶质瘤药物治疗。
因此，能否提供一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物，克服上述技术缺陷是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物及其制备方法和应用。针对IDH突变型胶质瘤的可能的术后药物治疗，产生潜在治疗效果。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物的制备方法，由以下步骤制得：
(1)将大花雪胆用质量分数75％的甲醇溶液回流提取2～3h，蒸发回收甲醇获得浓缩液；
(2)在浓缩液中加水溶解，得混合液，用乙酸乙酯进行萃取，获得萃取液；
(3)萃取液通过低压硅胶柱层析，获得层析液，即得治疗IDH突变型胶质瘤的提取物。
优选的：步骤(1)大花雪胆与甲醇的质量体积比为：100～150g:1000ml。
优选的：步骤(2)浓缩液和水的体积比1：3；萃取：混合液和乙酸乙酯的体积比1:30～40，萃取3～5次。
优选的：步骤(3)低压硅胶柱层析的条件：低压为压力0.25Mpa；用体积比为25：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱，再用体积比为15：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱、最后用体积比为10：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液进行淋洗。
本发明还提供了上述任一制备方法制得的提取物。
本发明还提供了上述提取物在制备治疗IDH突变型胶质瘤药物中的应用。
优选的：药物还包括辅料。
优选的：药物的剂型包括口服剂、注射剂。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物及其制备方法和应用，取得的技术效果为通过胶质瘤原代细胞模型证明，本发明提供的提取物(命名为Nauclealise)，能够产生比临床一线化疗药物替莫唑胺与卡莫司汀更好的抗IDH突变型胶质瘤效果。因此，在针对IDH突变型胶质瘤的临床治疗中，可能具有着潜在治疗优势，因而具有潜在的药物开发价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明提供的Nauclealise对IDH突变型胶质瘤原代细胞的促凋亡作用图。
图2附图为本发明提供的Nauclealise对IDH突变型胶质瘤体内抑制效果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物及其制备方法和应用。
实施例中未提及的试剂、药品、肿瘤细胞系等均为常规市售渠道获得，也可使用实验室保存的细胞系用于验证，对其具体来源不做要求，满足实验要求即可，未提及的实验设备、操作方法均为常规实验验证方法，在此不做一一赘述。
实施例1
一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物的制备方法，由以下步骤制得：
(1)将大花雪胆用质量分数75％的甲醇溶液回流提取2h，蒸发回收甲醇获得浓缩液；
(2)在浓缩液中加水溶解，得混合液，用乙酸乙酯进行萃取，获得萃取液；
(3)萃取液通过低压硅胶柱层析，获得层析液，即得治疗IDH突变型胶质瘤的提取物。
为进一步优化技术方案：步骤(1)大花雪胆与甲醇的质量体积比为：100g:1000ml。
为进一步优化技术方案：步骤(2)浓缩液和水的体积比1：3；萃取：混合液和乙酸乙酯的体积比1:30，萃取3次。
为进一步优化技术方案：步骤(3)低压硅胶柱层析的条件：低压为压力0.25Mpa；用体积比为25：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱，再用体积比为15：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱、最后用体积比为10：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液进行淋洗。
实施例2
一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物的制备方法，由以下步骤制得：
(1)将大花雪胆用质量分数75％的甲醇溶液回流提取2.5h，蒸发回收甲醇获得浓缩液；
(2)在浓缩液中加水溶解，得混合液，用乙酸乙酯进行萃取，获得萃取液；
(3)萃取液通过低压硅胶柱层析，获得层析液，即得治疗IDH突变型胶质瘤的提取物。
为进一步优化技术方案：步骤(1)大花雪胆与甲醇的质量体积比为：130g:1000ml。
为进一步优化技术方案：步骤(2)浓缩液和水的体积比1：3；萃取：混合液和乙酸乙酯的体积比1:35，萃取4次。
为进一步优化技术方案：步骤(3)低压硅胶柱层析的条件：低压为压力0.25Mpa；用体积比为25：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱，再用积比为15：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱、最后用体积比为10：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液进行淋洗。
实施例3
一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物的制备方法，由以下步骤制得：
(1)将大花雪胆用质量分数75％的甲醇溶液回流提取3h，蒸发回收甲醇获得浓缩液；
(2)在浓缩液中加水溶解，得混合液，用乙酸乙酯进行萃取，获得萃取液；
(3)萃取液通过低压硅胶柱层析，获得层析液，即得治疗IDH突变型胶质瘤的提取物。
为进一步优化技术方案：步骤(1)大花雪胆与甲醇的质量体积比为：150g:1000ml。
为进一步优化技术方案：步骤(2)浓缩液和水的体积比1：3；萃取：混合液和乙酸乙酯的体积比1:40，萃取5次。
为进一步优化技术方案：步骤(3)低压硅胶柱层析的条件：低压为压力0.25Mpa；用体积比为25：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱，再用体积比为15：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱、最后用体积比为10：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液进行淋洗。
技术效果
1、对IDH突变型胶质瘤原代细胞促凋亡作用
实验材料和方法
IDH突变型胶质瘤原代细胞基于病患样本中筛选获得，仅用于验证。
IDH突变型胶质瘤原代细胞的培养方法采用常规培养方法(可参考例人脑胶质瘤细胞体外长期传代培养方法探讨，徐庚达，苏州医学院学报，1995)
分组：分别设置对照、4μm、8μm、16mM Nauclealise实验组、8μmNauclealise+Z-VAD-fmk(pan caspase抑制剂)实验组。
实验结果
见图1，Nauclealise对IDH突变型胶质瘤原代细胞促凋亡作用明显，且存在浓度依赖。
2、Nauclealise对IDH突变型胶质瘤体内抑制效果
常规构建鼠模型，设置对照、10mg/kg Nauclealise实验组、20mg/kg Nauclealis实验组，用于验证抑制效果。
实验结果
见图2，Nauclealise对IDH突变型胶质瘤体内抑制效果明显，此外确认Nauclealise的DMSO溶解液，具有显著的抑制IDH突变型胶质瘤效果。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (8)
1.一种治疗IDH突变型胶质瘤的提取物的制备方法，其特征在于，由以下步骤制得：
(1)将大花雪胆用质量分数75％的甲醇溶液回流提取2～3h，蒸发回收甲醇获得浓缩液；
(2)在浓缩液中加水溶解，得混合液，用乙酸乙酯进行萃取，获得萃取液；
(3)萃取液通过低压硅胶柱层析，获得层析液，即得治疗IDH突变型胶质瘤的提取物。
2.如权利要求1所述的提取物，其特征在于，步骤(1)所述大花雪胆与甲醇的质量体积比为：100～150g:1000ml。
3.如权利要求2所述的提取物，其特征在于，步骤(2)所述浓缩液和水的体积比1：3；所述萃取：混合液和乙酸乙酯的体积比1:30～40，萃取3～5次。
4.如权利要求3所述的提取物，其特征在于，步骤(3)所述低压硅胶柱层析的条件：低压为压力0.25Mpa；用体积比为25：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱，再用体积比为15：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液洗脱、最后用体积比为10：5：1的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液进行淋洗。
5.权利要求1～4任一所述制备方法制得的提取物。
6.权利要求5所述的提取物在制备治疗IDH突变型胶质瘤药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物还包括辅料。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括口服剂、注射剂。
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