CN116981688A

CN116981688A - 包含结合存在于靶细胞的细胞表面上的人prdx4的抗体的组合物

Info

Publication number: CN116981688A
Application number: CN202180083222.2A
Authority: CN
Inventors: R·蔡徳勒
Original assignee: Aximian Biotechnology Co ltd; Helmholtz Munich Center German Center For Health And Environmental Research Ltd
Current assignee: Aximian Biotechnology Co ltd; Helmholtz Munich Center German Center For Health And Environmental Research Ltd
Priority date: 2020-12-10
Filing date: 2021-12-10
Publication date: 2023-10-31

Abstract

本发明提供一种药物组合物，其包含结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体和任选的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明还提供所述药物组合物以用于治疗人受试者的癌症的方法中。还提供一种用于确定人受试者是否可能患有癌症的方法，所述方法包括在从所述人受试者获得的样品中确定所述样品包含的细胞的细胞表面上是否存在PRDX4。另外，提供结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体。

Description

包含结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体的组合物

技术领域

本发明提供一种药物组合物，其包含结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体和任选的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明还提供所述药物组合物以用于治疗人受试者的癌症的方法中。还提供一种用于确定人受试者是否可能患有癌症的方法，所述方法包括在从所述人受试者获得的样品中确定所述样品包含的癌细胞的细胞表面上是否存在PRDX4。另外，提供结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体。

背景技术

长期以来，人们知道肿瘤细胞在其表面携带蛋白质，这些蛋白质仅在非肿瘤细胞内部发现和/或分泌。在正常细胞中，这些蛋白质通常位于高尔基体或内质网(ER)的膜中。还不知道肿瘤细胞为何和为了什么目的在其表面携带它们(Weidle等人,2011)。对肿瘤细胞表面上这些蛋白质的功能知之甚少。另一方面，这些蛋白质作为某些应用的靶结构可能是感兴趣的，因为它们可代表可以用各种方法控制的肿瘤相关或肿瘤特异性抗原。这些包括例如抗体，诸如可以用于检测或治疗(肿瘤)疾病。

过氧化氧化还原蛋白(peroxiredoxin)(PRDX4；UniProt Q13162)是由六个成员组成的PRDX家族的成员。发现PRDX4在大多数(如果不是全部)细胞中的浓度相对较高。其功能是将H₂O₂转化成水，并由此降低细胞中的氧化应激。PRDX4位于细胞内，主要在ER腔中。PRDX4的分泌形式也已有描述(Okado-Matsumoto等人,2000,#88382)。

PRDX4在许多肿瘤类型中过表达，并且通常是不良临床预后的标志物(Hwang等人,2015；Jeong等人,2020；Mizutani等人,2019；Schulte等人,2011；Schulte,2011；Wang等人,2019)。然而迄今为止，它还没有被描述为在肿瘤细胞的表面上。事实上，Hwang等人，2015在免疫组织化学染色中使用针对PRDX4的多克隆抗体，该免疫组织化学染色需要待检查的组织的细胞被透化，因为PRDX4是已知的细胞内蛋白质。因此，Hwang等人，2015通过将组织切片与乙二胺一起孵育以便使细胞内表位可用于被抗体结合，从而将热表位修复应用于福尔马林固定的石蜡包埋的组织切片。然而，Hwang等人，2015不能检测癌细胞的细胞表面上的PRDX4。结果，Hwang等人，2015未能教导结合癌细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体以用作药物，例如用于治疗癌症。

EP-A1 2546269提供了针对PRDX4的抗体，其用作诊断标志物或用于治疗性治疗坏死病灶。制备针对PRDX4的氨基酸序列WETEERPRT(SEQ ID NO:82)的抗体，发现其存在于坏死的HeLa细胞的细胞提取物中。上述氨基酸序列对应于SEQ ID NO:81的氨基酸位置38-46。在EP-A1 2546268中观察到，这种抗体不识别活的HeLa细胞(参见实施例8.2)，即，抗体不结合完整的HeLa细胞并且结论是这是因为PRDX4是细胞内蛋白。然而在免疫组织化学测定中，这些抗体将由小鼠模型中的HeLa细胞引起的肿瘤组织切片中的坏死区染色。已知在坏死中，细胞内蛋白质被释放并且可被抗体接近。EP-A1 2546268未能在癌细胞的细胞表面上检测到PRDX4。因此，EP-A1 2546268没有教导与存在于癌细胞的细胞表面上的人PRDX4结合的抗体以用作药物，例如用于治疗癌症。

从与Helmholtz Center Munich(HMGU)的“单克隆抗体”核心工厂(corefacility'Monoclonal Antibodies'at the Helmholtz Center Munich(HMGU))合作进行的免疫接种中产生了针对人PRDX4的单克隆抗体(AK)。本发明人在本发明的各种实验中证明了这些AK的特异性。发现这些抗体与各种人肿瘤细胞系的表面结合。

因此，本发明首次描述了PRDX4携带在肿瘤细胞的表面上。所述抗体特异性识别肿瘤细胞的表面上的PRDX4，并为癌症治疗提供了新的肿瘤特异性靶分子。

发明内容

本发明提供一种药物组合物，其包含：抗体，优选单克隆抗体，其结合存在于癌细胞的细胞表面上的人PRDX4，更优选地，所述抗体识别示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中的氨基酸81至271的区域；和任选的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

在本发明的药物组合物的一个实施方案中，所述抗体具有细胞毒活性。

在本发明的药物组合物的另一个实施方案中，所述抗体具有ADCC或CDC。

在本发明的药物组合物的一个实施方案中，所述抗体与细胞毒性物质缀合。

在本发明的药物组合物的另一个实施方案中，所述抗体是嵌合抗原受体(CAR)的一部分。对于所述实施方案，优选所述CAR被T细胞、NK细胞、NK-T细胞或巨噬细胞包含。

在本发明的药物组合物的一个实施方案中，所述抗体与PRDX4相关蛋白的交叉反应性小于20％。

在本发明的药物组合物的另一个实施方案中，所述抗体识别示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中的氨基酸1至79、优选氨基酸37到79、更优选氨基酸81至271的区域。

另外，在本发明的药物组合物的一个实施方案中，所述抗体是

(a)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:1的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:2的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(b)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:3的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:4的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(c)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:5的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:6的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(d)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:7的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:8的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(e)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:9的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:10的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(f)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:11的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(g)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:13的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(h)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:15的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(i)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:17的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(j)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:19的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；或

(k)一种抗体，其结合与抗体(a)至(j)中的任一个所结合的人PRDX4蛋白中表位相同的表位。

在本发明的药物组合物的一个实施方案中，所述抗体是

(a)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链CDR3；

(b)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:28的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链CDR3；

(c)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:37的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR3；

(d)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:39的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链CDR3；

(e)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:45的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:46的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:47的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:49的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链CDR3；

(f)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链CDR3；

(g)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:57的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:62的氨基酸序列的轻链CDR3；

(h)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:66的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:68的氨基酸序列的轻链CDR3；

(i)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:69的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:71的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:72的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:74的氨基酸序列的轻链CDR3；

(j)一种抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:77的氨基酸序列的重链CDR3，以及

轻链可变区，所述轻链可变区包含具有如示于SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链CDR1、具有如示于SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链CDR2和具有如示于SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链CDR3；或

在另一方面，本发明提供根据本发明的药物组合物，其用于治疗人受试者的癌症的方法中。对于所述实施方案，优选所述癌症的特征在于细胞，其中所述细胞的细胞表面上存在人PRDX4。对于所述实施方案，还优选所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结直肠癌、卵巢癌、口腔鳞癌、血液恶性肿瘤或神经胶质瘤。

在另一方面，本发明提供一种用于确定人受试者是否可能患有癌症的方法，所述方法包括在从所述人受试者获得的样品中确定所述样品包含的癌细胞的细胞表面上是否存在PRDX4。

在另一方面，本发明提供一种结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体，其中所述抗体是

在另一个实施方案中，本发明提供一种结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体，其包含

附图说明

图1示出PRDX4是人癌细胞的表面上低氧诱导的蛋白质。图1a)示出在标准细胞培养基中在常氧(大约18％ O₂)或低氧(1％ O₂)条件下培养的A549肺癌细胞和ES-2卵巢癌细胞。使用抗体11F2作为一抗和Alexa647标记的山羊抗大鼠IgG作为二抗，通过流式细胞术测量表面PRDX4的表达。图1b)示出来自图1a)的测量的平均荧光强度。给出来自三个独立实验的平均值和标准偏差。在原代PBMC、肝细胞和心脏成纤维细胞上没有观察到表达(数据未示出)。

图2在图2a)中示出PRDX4在不同来源的各种人癌细胞系上和在从来自卵巢癌患者的原发性腹水分离的癌细胞上表达。第1行示出卵巢癌细胞系。第2行示出来自卵巢癌的原发性腹水。第3行示出结肠癌、宫颈癌和肺癌、间皮瘤。第4行示出HEK293细胞。第5行示出源自T细胞白血病、头颈癌的阴性细胞系和来自健康供体的原代外周血单核细胞(PBMC)。图2b)示出PRDX4特异性抗体11F2使PRDX4从表达或不表达表面PRDX4的细胞系的裂解物沉淀。将溴化氰珠子与11F2偶联，然后与0.5mg裂解物在RIPA缓冲液中在4℃下一起孵育过夜，然后以3.000rpm离心5分钟。将沉淀的珠子与Laemmli缓冲液一起孵育，煮沸5分钟，通过SDS-PAGE分离洗脱液(泳道“IP”)。细胞裂解物用作对照(L)。凝胶被印迹，印迹与商业PRDX4抗体(Thermo Scientific)一起孵育，然后与HRP标记的山羊-抗大鼠抗体一起孵育，用ECL显影。图2c)示出PRDX4被生物素化，因此存在于癌细胞的表面。将活的ES-2肿瘤细胞与不能渗透膜的EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin(Thermo Scientific)一起孵育，以仅使表面蛋白生物素化。然后，裂解细胞，裂解物与如上所述的11F2偶联珠子一起孵育。与其它抗体偶联的珠子用作对照。通过SDS-PAGE分离沉淀珠子的洗脱液。用链霉抗生物素蛋白-HRP缀合物进行免疫印迹以检测生物素化的蛋白质(上部)和用商业PRDX4抗体进行免疫印迹(下部)。用ECL使印迹显影。来自非生物素化细胞的裂解物(-)用作对照。前2个泳道是IP前的细胞裂解物。

图3示出11F2结合活的ES-2细胞。ES-2细胞在显微镜载玻片上生长，在PBS中洗涤并与PRDX4抗体11F2一起孵育。然后，用4％多聚甲醛固定细胞，并与Alexa488偶联的合适二抗一起孵育。细胞核用DAPI复染。

图4示出抗体11F2使PRDX4沉淀。将偶联11F2的溴化氰珠子与ES-2细胞的裂解物一起孵育过夜。在珠子沉淀并在Laemmli缓冲液中孵育后，通过SDS-PAGE分离洗脱液并印迹。用商业PRDX4抗体(Thermo Scientific)和合适二抗的免疫印迹显示PRDX4被11F2特异性沉淀。与FLAG特异性抗体偶联的珠子用作对照。L＝免疫沉淀前的细胞裂解物。

图5示出PRDX4是膜相关的。裂解ES-2细胞，并通过分别以7,000×g和16,500×g离心获得膜级分MF1和MF2。通过以100,000×g离心获得胞质级分MF3。

图6示出表面PRDX4阳性的SKOV3细胞激活PRDX4特异性CAR-T细胞。用编码CAR构建体的逆转录病毒载体转导来自两个供体(FI和JE)的原代T细胞，所述CAR构建体具有源自抗体11F2的单链构建体。CAR的表达通过用山羊抗大鼠IgG抗体(未示出)的流式细胞术进行测试。将SKOV3细胞与转导的T细胞(印迹的第4-6列)或未转导的对照T细胞(印迹的第1-3列)以X-轴上所示的比率一起孵育24小时。然后，用商业ELISA测定定量上清液中的干扰素-γ，其为T细胞活化的标志物。作为特异性的另一证据，将一些共培养物(第3和6列)与11F2抗体一起预孵育以便阻断T细胞对靶细胞的识别。这种预孵育导致上清液中干扰素浓度降低。

图7示出11F2是PRDX4特异性的。将与溴化氰珠子偶联的11F2与10ng重组PRDX4或作为对照的相同量的重组CCDC47蛋白一起孵育。沉淀后，将珠子在Laemmli缓冲液中孵育，并通过SDS-PAGE分离上清液。用商业PRDX4抗体(Thermo Scientific)和合适二抗进行的免疫印迹显示11F2的特异性。重组PRDX4蛋白是二聚体，因此大小为约50kD。

图8示出11F2是PRDX4特异性的：用PRDX4特异性siRNA或对照siRNA转染ES-2细胞。3天后，如图1所述通过流式细胞术测量11F2的结合。示出的是与对照siRNA转染的ES-2w细胞(平均值＝1908)相比，siRNA转染的群4BC_KO仅显示大约50％的11F2结合(平均值＝874)。包括同种型抗体作为对照(平均值＝159)。

图9示出PRDX4特异性抗体存在于来自卵巢癌患者的腹水中。用编码大小大约55kD的PRDX4-GFP融合蛋白的表达质粒转染HEK293细胞。通过SDS-PAGE分离转染子和亲代HEK293细胞的相似量的裂解物并印迹。然后将该印迹与腹水一起孵育，接着与山羊抗人IgG抗体一起孵育，并用ECL显影。

图10示出抗体2C1(分别为SEQ ID NO:1和2)、5H5(分别为SEQ ID NO:3和4)、13B2(分别为SEQ ID NO:9和10)、15F11(分别为SEQ ID NO:11和12)、11F2(分别为SEQ ID NO:7和8)、17A10(分别为SEQ ID NO:13和14)各自的序列，包括具有各自CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链和重链。

图11示出11F2结合包含PRDX4的外显子2-7的区域。用PRDX4-外显子2-7GFP融合蛋白(泳道“1”)或PRDX4-全长GFP融合蛋白(泳道“2”)瞬时转染HEK293细胞。两天后，将溴化氰珠子与11F2偶联，然后与0.5mg裂解物在RIPA缓冲液中在4℃一起孵育过夜，然后以3.000rpm离心5分钟。将沉淀的珠子与Laemmli缓冲液一起孵育，煮沸5分钟，通过SDS-PAGE分离洗脱液。凝胶被印迹，印迹与商业PRDX4抗体(Thermo Scientific)或GFP特异性抗体一起孵育。然后将印迹与合适的HRP标记的二抗一起孵育，用ECL显影。PRDX4印迹中的箭头指向内源性PRDX4。外显子2-7对应于示于SEQ ID NO:81的人PRDX4的氨基酸81-271。

具体实施方式

本发明在第一方面提供一种药物组合物，其包含抗体，优选单克隆抗体，其结合存在于癌细胞的细胞表面上的人PRDX4，更优选地，所述抗体识别示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中氨基酸81-271的区域；和任选的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

因此，本发明包括PRDX4存在于(癌)细胞的细胞表面上的发现。因此，新的治疗概念是可能的。现有技术将PRDX4表征为ER蛋白或有时表征为胞质或甚至分泌的蛋白，但不用于治疗目的。

PRDX4的氨基酸序列是本领域已知的(UniProt Q13162)。例如，人PRDX4的氨基酸序列如示于SEQ ID NO:81。

本发明中使用的PRDX4蛋白可以是具有上述序列的PRDX4蛋白，或可以是具有通过修饰一个或多个氨基酸而源自上述序列的氨基酸序列的修饰蛋白质。具有通过修饰一个或多个氨基酸而源自上述序列的序列的修饰蛋白质的实例可以包括与所述氨基酸序列具有70％或更多、优选80％或更多、更优选90％或更多、甚至更优选95％或更多同源性的多肽。或者，可使用这些PRDX4蛋白的部分肽。

同源性比较可以用眼睛进行，或更通常地，借助于可容易获得的序列比较程序进行。这些商业上可获得的计算机程序可以计算两个或更多个序列之间的同源性％。

同源性％可以在连续序列上计算，即，将一个序列与另一个序列比对，并且将一个序列中的每个氨基酸与另一个序列中的对应氨基酸直接比较，一次一个残基。这被称为“无缺口”比对。通常，这种无缺口比对仅在相对少量的残基(例如，少于50个连续氨基酸)上进行。

用于本发明的PRDX4蛋白不受其来源的限制，并且优选是人PRDX4蛋白。

PRDX4具有N端信号序列。PRDX4穿过内质网(ER)，伴随所述信号序列的切割，但然后保留在ER中而不被分泌。

如本文和本发明的上下文中使用的术语“抗体”可以包括嵌合抗体、人源化抗体、单价抗体、多价抗体、低分子抗体、双抗体或scFv。

嵌合抗体是指包含彼此连接的不同来源的可变区和恒定区的抗体。例如，小鼠-人异源嵌合抗体是包含小鼠抗体的重链和轻链可变区以及人抗体的重链和轻链恒定区的抗体。将编码小鼠抗体可变区的DNA与编码人抗体恒定区的DNA连接，并可以将连接产物整合到表达载体中，以制备表达嵌合抗体的重组载体。可以培养用这些载体转化的细胞(重组细胞)以表达DNA插入片段，从而获得在培养过程中产生的嵌合抗体。

通常，嵌合抗体包含非人动物来源的抗体可变区和人抗体来源的恒定区。相比之下，人源化抗体包含非人动物来源的抗体互补决定区(CDR)、人抗体来源的框架区(FR)和人抗体来源的恒定区。人源化抗体也称为重构(reshaped)人抗体。具体而言，例如，包含移植在人抗体中的非人动物(例如小鼠)抗体CDR的人源化抗体是本领域已知的。由于人源化抗体在人体中的抗原性降低，因此它们可用作本发明治疗剂的活性成分。

每个抗体可变区通常包含3个CDR，侧翼为4个FR。CDR区基本上决定了抗体的结合特异性。CDR具有不同的氨基酸序列。另一方面，构成FR的氨基酸序列在具有不同结合特异性的抗体间常常表现出高度同源性。因此，通常，据说通过CDR移植，可以将某种抗体的结合特异性移植到其它抗体上。

本发明的药物组合物中存在的抗体可以涵盖以IgG(IgG1、IgG2、IgG4等)为代表的二价抗体，以及以IgM为代表的单价抗体或多价抗体，只要这些抗体结合PRDX4蛋白即可。可以存在于本发明的药物组合物中的多价抗体可以涵盖具有抗原结合位点的多价抗体，所有的多价抗体彼此相同或一些或所有的多价抗体彼此不同。

本发明的药物组合物中存在的抗体也可以是低分子抗体，其涵盖缺少完整抗体(例如完整IgG)的一部分的抗体片段。只要所得抗体片段能够结合PRDX4，就接受抗体分子的这种部分缺少。优选在根据本发明的药物组合物中使用的抗体片段应含有重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)之一或两者。还优选在根据本发明的药物组合物中使用的抗体片段应含有CDR。在本发明的药物组合物中使用的抗体片段中所含的CDR的数目没有特别限制，优选至少6个CDR：重链CDR1、CDR2和CDR3，和轻链CDR1、CDR2和CDR3。

VH或VL的氨基酸序列可以含有一个或多个取代、缺失、添加和/或插入。此外，可在本发明的药物组合物中使用的抗体或抗体片段可缺少VH和VL之一或两者的一部分，只要所得抗体片段能够结合人PRDX4即可。此外，其可变区可以是嵌合的或人源化的。抗体片段的具体实例可以包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv。此外，低分子抗体的具体实例可以包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv(单链Fv)、双抗体、sc(Fv)2(单链(Fv)2)和scFv-Fc。在本发明中，低分子抗体优选地是双抗体或sc(Fv)2，这些抗体多聚体(例如，二聚体、三聚体、四聚体和聚合物)也被可在本发明的药物组合物中使用的低分子抗体所涵盖。

如本文和本发明的上下文中使用的术语“双抗体”可以是指通过基因融合构建的二价抗体片段。双抗体是包含两条多肽链的二聚体。通常，构成二聚体的每条多肽链包含经由同一链上的接头连接的重链和轻链可变区。双抗体中的接头通常太短以至于不允许同一链上的重链和轻链可变区之间配对。具体地，构成接头的氨基酸残基的数目是例如大约5个残基。因此，在同一多肽链上编码的重链和轻链可变区不能一起形成单链可变区片段。相反，它们通过与另一个单链可变区片段配对形成二聚体。结果，双抗体具有两个抗原结合位点。

如本发明上下文中使用的scFv可以通过连接抗体的重链和轻链可变区而获得。在scFv中，重链和轻链可变区经由接头、优选肽接头连接。scFv中的重链和轻链可变区可以源自本说明书中描述的任何抗体。连接可变区的肽接头没有特别限制。例如，可以使用大约3至25个残基的任意单链肽作为接头。

如在所述药物组合物中使用的抗体和根据本发明的抗体也可以涵盖结合实体，诸如脂质运载蛋白、适体或anticalin。

在本发明中使用的结合人PRDX4的抗体可具有多种形式。然而，它需要结合PRDX4蛋白，并且不受其来源、类型、形状等特别限制，但可具有细胞毒活性。具体地，可以使用抗体，诸如如上文所述的非人动物来源的抗体(例如，小鼠、大鼠或骆驼抗体)、人来源的抗体、嵌合抗体或人源化抗体。在一个实施方案中，在本发明中使用的结合人PRDX4的抗体可以是多克隆或单克隆抗体，优选是单克隆抗体。

在本发明中使用的结合人PRDX4的抗体可使用本领域已知的手段以多克隆或单克隆抗体获得。在本发明中使用的抗体特别优选地是哺乳动物来源的单克隆抗体。哺乳动物来源的单克隆抗体涵盖例如由杂交瘤产生的那些和由通过基因工程方法用含有抗体基因的表达载体转化的宿主产生的那些。

结合人PRDX4的抗体可以用各种分子诸如聚乙二醇(PEG)修饰。此外，结合人PRDX4的抗体也可用具有细胞毒活性的化学治疗剂、放射性化学品等修饰。

在本发明中使用的识别存在于靶细胞的细胞表面上的PRDX4并与其结合的抗体的具体实例可包括本文给出和描述的抗体。

如上文所述，本发明的或如在本发明的药物组合物中使用的包括一个或多个氨基酸的取代、缺失、添加和/或插入的抗体也包括在本发明的范围内，并且可以是制备的或天然存在的。用于在多肽中引入突变的方法的实例包括定点诱变(Hashimoto-Gotoh,T等人,1995)(Zoller,MJ和Smith,M.,1983)(Kramer,W等人,1984)(Kramer W和Fritz HJ,1987)(Kunkel,TA,1985)(Kunkel,1988)。这是本领域技术人员熟知的用于制备功能上等同于某一多肽的多肽的方法之一。本领域技术人员可以使用这样的方法适当地在本发明的抗体或如在本发明的组合物中使用的抗体中引入突变，从而制备功能上等同于这样的抗体的抗体。此外，自然界中可能发生氨基酸突变。这种具有源自本发明抗体或如在本发明组合物中使用的抗体的氨基酸序列的包含一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列的抗体在功能上等同于所述抗体或是所述抗体的变体，并且也被本发明的抗体或如在本发明的药物组合物中使用的抗体所涵盖。

在这样的变体中突变的氨基酸数目通常在50个氨基酸内，优选在30个氨基酸内，更优选在10个氨基酸内(例如在5个氨基酸内)。

对于待突变的氨基酸残基，优选该突变应当在具有相同侧链性质的氨基酸之间保守地进行。例如，已经建立了基于氨基酸侧链性质的以下分类：疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y和V)、亲水性氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S和T)、具有脂族侧链的氨基酸(G、A、V、L、I和P)、具有含羟基侧链的氨基酸(S、T和Y)、具有含硫原子侧链的氨基酸(C和M)、具有含羧酸和酰胺侧链的氨基酸(D、N、E和Q)、具有含碱基侧链的氨基酸(R、K和H)和具有含芳族基团侧链的氨基酸(H、F、Y和W)(括号内的所有符号表示氨基酸的单字母代码)。

已知具有通过缺失和/或添加一个或多个氨基酸残基和/或用其它氨基酸取代而从某一氨基酸序列修饰的氨基酸序列的多肽保持原始多肽的生物学活性(Mark,D.F.等人,1984)(Wang,A.等人,1982)。具体地，当构成某个多肽的氨基酸序列中的氨基酸被分类在与其相同的组中的氨基酸取代时，通常认为该多肽可能保持其活性。在本发明中，上文所述的相同氨基酸组内的氨基酸之间的取代被称为保守取代。

如本文使用的术语“表面”或具体地“细胞表面”表示细胞膜。细胞膜也可以被称为质膜，其是围绕每个活细胞的薄膜，将细胞与其周围的环境划出界限。该细胞膜包围的是细胞组成成分，通常是大的、水溶性的、高度带电的分子，诸如蛋白质、核酸、碳水化合物和参与细胞代谢的物质。因此，细胞膜具有两种功能：首先是屏障，保持细胞的组成成分在内而不需要的物质在外，其次是门，允许必需营养物转运到细胞内而从细胞除去废物。ER衍生的囊泡也可参与细胞膜的构建或形成。

如本发明上下文中使用的术语“靶细胞”优选地是癌细胞。如本文使用的术语“癌症”可以包括以下中的任何一种或多种：急性淋巴细胞白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，肾上腺皮质癌，肛门癌，膀胱癌，血癌，骨癌，脑瘤，乳腺癌，女性生殖系统癌，男性生殖系统癌，中枢神经系统淋巴瘤，宫颈癌，儿童横纹肌肉瘤，儿童肉瘤，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性髓性白血病(CML)，结肠和直肠癌，结肠癌，子宫内膜癌，子宫内膜肉瘤，食管癌，眼癌，胆囊癌，胃癌，胃肠道癌，毛细胞白血病，头颈癌，肝细胞癌，霍奇金病，咽下癌，卡波西肉瘤，肾癌，喉癌，白血病，肝癌，肺癌，恶性纤维组织细胞瘤，恶性胸腺瘤，黑色素瘤，间皮瘤，多发性骨髓瘤，骨髓瘤，鼻腔和鼻窦癌，鼻咽癌，神经系统癌，胚细胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤，卵巢癌，胰腺癌，甲状旁腺癌，阴茎癌，咽喉癌，垂体瘤，浆细胞瘤，原发性CNS淋巴瘤，前列腺癌，直肠癌，呼吸系统，视网膜母细胞瘤，唾液腺癌，皮肤癌，小肠癌，软组织肉瘤，胃癌，睾丸癌，甲状腺癌，泌尿系统癌，子宫肉瘤，阴道癌，血管系统，Waldenstrom’s巨球蛋白血症和Wilms’s肿瘤。

如本发明上下文中使用的术语“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”可以包含本领域技术人员已知的用于药物组合物的任何药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。应当理解，如本文所述的这些抗体或药物组合物可以与载体或稀释剂混合，这不会干扰本发明的预期目的。例如，如本发明中使用的这种载体可以是载体蛋白，诸如牛血清白蛋白(BSA)或匙孔血蓝蛋白(KLH)。

在本发明的上下文中，短语“细胞毒活性”是指具有PRDX4结合活性，并且还可包括具有等同于本发明抗体的活性的活性。在本发明中，等同活性不一定必须是相同的活性，例如，与如本文所述的抗体(a)至(k)中的任一个的活性相比，可以是50％或更多、优选70％或更多、更优选90％或更多的活性。活性的上限的实例可以包括、但不限于，1000％或更少、500％或更少、300％或更少、150％或更少、和100％或更少。

因此，根据本发明的细胞毒活性的实例可以包括ADCC和CDC活性。在本发明的上下文中，ADCC活性表示通过携带Fcγ受体的细胞(免疫细胞等)经由该Fcγ受体与特异性附着于靶细胞的细胞表面抗原的抗体的Fc结构域结合而破坏靶细胞的活性。另一方面，CDC活性表示由补体系统介导的细胞毒活性。抗体是否具有ADCC活性或具有CDC活性可通过本领域已知的方法测定。

因此，在本发明的药物组合物中使用的抗体可以具有诸如ADCC活性的活性，并且因此可以用作药物，优选抗癌剂，其中所述癌症是例如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结直肠癌、卵巢癌、口腔鳞癌、血液恶性肿瘤或神经胶质瘤。

在药物组合物的一个优选实施方案中，抗体可以与细胞毒性物质诸如化学治疗剂、毒性肽或放射性化学品缀合。这样的修饰抗体(以下称为抗体偶联物)可以通过对获得的抗体进行化学修饰而得到。用于抗体修饰的方法在本领域中已经建立。

其细胞毒活性通过与结合PRDX4的抗体缀合起作用的化学治疗剂的实例可包括以下化学治疗剂：阿扎立平，阿那曲唑，氮胞苷，博来霉素，硼替佐米，苔藓抑素-1，白消安，喜树碱，10-羟基喜树碱，卡莫司汀，塞来昔布，苯丁酸氮芥，顺铂，伊立替康，卡铂，克拉屈滨，环磷酰胺，阿糖胞苷，达卡巴嗪，多西他赛，放线菌素，柔红霉素葡糖苷酸，柔红霉素，地塞米松，己烯雌酚，多柔比星，多柔比葡糖苷酸，表柔比星，炔雌醇，雌莫司汀，依托泊苷，依托泊苷葡糖苷酸，氟尿苷，氟达拉滨，氟他胺，氟尿嘧啶，氟甲睾酮，吉西他滨，己酸羟孕酮，羟基脲，伊达比星，异环磷酰胺，甲酰四氢叶酸，环己亚硝脲，氮芥，醋酸甲羟孕酮，醋酸甲地孕酮，美曲松，巯基嘌呤，氨甲蝶呤，米托恩醌，光神霉素，丝裂霉素，米托坦，丁酸苯酯，泼尼松龙，丙卡巴肼，紫杉醇，喷司他丁，司莫司汀，链脲菌素，它莫西芬，紫杉烷类、他克唑(taxol)、丙酸睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、噻替派、替尼泊苷、拓扑替康、乌拉莫司汀、长春碱、长春瑞滨、长春新碱。

化学治疗剂优选低分子化学治疗剂。低分子化学治疗剂不太可能干扰抗体，即使在其与抗体缀合后。低分子化学治疗剂通常具有100至2000、优选200至1000的分子量。上文例示的所有化学治疗剂都是低分子化学治疗剂。这些化学治疗剂涵盖在体内转化为活性化学治疗剂的前药。前药的活化可以是酶转化或非酶转化。

嵌合抗原受体(CAR，也称为嵌合免疫受体、嵌合T细胞受体或人工T细胞受体)是已经工程化以赋予T细胞靶向特定蛋白的能力的受体蛋白。

在本发明的药物组合物的一个实施方案中，所述抗体与PRDX4相关蛋白的交叉反应性小于20％。这意味着优选地所述抗体与其它过氧化氧化还原蛋白诸如PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5或PRDX6的交叉反应性小于20％。更优选地，所述抗体与PRDX4相关蛋白例如PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5或PRDX6的交叉反应性小于15％。甚至更优选地，所述抗体与PRDX4相关蛋白例如PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5或PRDX6的交叉反应性小于10％。甚至更优选地，所述抗体与PRDX4相关蛋白例如PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5或PRDX6的交叉反应性小于5％。甚至更优选地，所述抗体与PRDX4相关蛋白例如PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5或PRDX6的交叉反应性小于3％。甚至更优选地，所述抗体与PRDX4相关蛋白例如PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5或PRDX6的交叉反应性小于2％。甚至更优选地，所述抗体与PRDX4相关蛋白例如PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5或PRDX6的交叉反应性小于1％。

在本发明的药物组合物的另一个实施方案中，所述抗体识别示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中的氨基酸1至79、优选氨基酸37至79、更优选氨基酸81至271的区域(也参见图11和其图例)。如从图2A显而易见地，本发明的识别示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中的更优选氨基酸81至271的区域的抗体结合完整的HeLa细胞。相比之下，EP-A1 2546269中公开的结合人PRDX4(示于SEQ ID NO:81)的氨基酸38至46内的区域(示于SEQ ID NO:82)的抗体如EP-A1 2546269的实施例8.2中所报道的那样不能结合完整的HeLa细胞。因此，看起来当PRDX4存在于癌细胞的细胞表面上时，示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中的更优选氨基酸81至271的区域提供抗体与其结合。不受理论束缚，看起来本发明提供了PRDX4内的区域，即，示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中的氨基酸81至271的区域，当PRDX4存在于癌细胞的细胞表面上时，所述区域对于与其结合的抗体是可接近的。因此，看起来本发明不仅首次提供PRDX4作为癌细胞的细胞表面上的新细胞表面蛋白，从而允许例如治疗癌症，而且提供PRDX4中当存在于癌细胞的细胞表面上时的区域，即示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中的氨基酸81至271的区域，其辨别能够检测存在于癌细胞的细胞表面上时的PRDX4的抗体。这是因为，结合例如氨基酸1至46内的区域的抗体无法检测存在于癌细胞的细胞表面上时的PRDX4(参见EP-A1 2546269，实施例8.2)。

在这样的区域内，例如示于SEQ ID NO:81的氨基酸1至79、37至79或81至271的区域，如本文所述的抗体结合表位。因此，当本文提及“示于SEQ ID NO:81的氨基酸1至79的区域”或“示于SEQ ID NO:81的氨基酸37至79的区域”或“示于SEQ ID NO:81的氨基酸81至271的区域”时，优选地表示如本文所述的抗体结合示于SEQ ID NO:81的氨基酸1至79或37至79或81至271的区域内的表位。

优选示于SEQ ID NO:81的氨基酸1至79的区域内的表位，更优选示于SEQ ID NO:81的氨基酸37至79的区域内的表位，甚至更优选示于SEQ ID NO:81的氨基酸81至271的区域内的表位。

在本发明的药物组合物的一个实施方案中，所述抗体是

在本发明的药物组合物的一个优选实施方案中，所述抗体是

(a)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；

(b)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:3的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:4的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；

(c)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:5的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:6的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；

(d)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:7的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:8的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；

(e)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:9的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:10的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；

(f)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:11的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；

(g)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:13的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；

(h)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:15的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；

(i)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:17的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；

(j)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:19的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列；或

在本发明的药物组合物的一个更优选实施方案中，所述抗体是

(a)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:1的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:2的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(b)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:3的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:4的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(c)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:5的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:6的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(d)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:7的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:8的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(e)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:9的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:10的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(f)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:11的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(g)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:13的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(h)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:15的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(i)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:17的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；

(j)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:19的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列；或

在本发明的药物组合物的一个甚至更优选实施方案中，所述抗体是

(a)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:1的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:2的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；

(b)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:3的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:4的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；

(c)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:5的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:6的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；

(d)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:7的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:8的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；

(e)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:9的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:10的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；

(f)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:11的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；

(g)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:13的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；

(h)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:15的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；

(i)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:17的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；

(j)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQID NO:19的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少99％同一性的氨基酸序列；或

在本发明的药物组合物的一个实施方案中，所述抗体是

如在本发明的药物组合物中使用的和如本文所述的抗体(a)至(k)可以含有恒定区。所用的恒定区没有特别限制，并且可以使用任何恒定区。在本发明中使用的恒定区的优选实例可以包括人来源的恒定区。例如，可以使用人IgG1来源的、人IgG2来源的、人IgG3来源的、或人IgG4来源的恒定区作为重链恒定区。另外，例如，人κ链来源的或人λ链来源的恒定区可以用作轻链恒定区。在本发明中使用的恒定区可以是具有天然序列的恒定区，或者可以是具有通过修饰一个或多个氨基酸而源自天然序列的修饰的恒定区。

如在本发明的药物组合物中使用的和如本文所述的抗体(a)至(k)还可以含有FR。所用的FR没有特别限制，并且可以使用任何FR，只要所得抗体保持其对存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的结合活性即可。在本发明中使用的FR的优选实例可以包括人抗体来源的FR。由于使抗体的抗原结合活性维持的FR替换技术是本领域已知的，本领域技术人员可以适当地选择FR。在本发明中使用的FR可以是具有天然序列的FR，或者可以是具有通过修饰一个或多个氨基酸而源自天然序列的序列的FR。

具体而言，本发明也可以使用识别与这些抗体中的任一个所识别的表位相同的表位的抗体(参见上文所述的实施方案中的项目(k))。

抗体是否与某个抗体共有表位可以基于它们对相同表位的竞争来确认。抗体之间的竞争通过交叉阻断测定等检测。交叉阻断测定优选例如竞争ELISA测定。

假设与在不存在候选抗体的情况下进行的对照测试中获得的结合活性相比，候选抗体可以至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、甚至更优选至少95％结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4，则该候选抗体被确定为结合与本发明抗体结合的表位或与在药物组合物中使用的抗体结合的表位基本上相同的表位的抗体。

根据本发明的药物组合物可以通过标准途径给药。这些包括、但不限于：口服、直肠、眼(包括玻璃体内或前房内)、鼻、局部(包括颊和舌下)、子宫内、阴道或非肠道(包括皮下、腹膜内、肌内、静脉内、皮内、颅内、气管内和硬膜外)经皮、腹膜内、颅内、脑室内、大脑内、阴道内、子宫内或肠胃外(例如静脉内、脊柱内、皮下或肌内)途径。

本发明还包括治疗癌症的方法，其中所述方法包括向人受试者施用治疗有效量的根据本发明的药物组合物。对于所述实施方案，优选所述癌症的特征在于细胞，其中所述细胞的细胞表面上存在人PRDX4。对于所述实施方案，还优选所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结直肠癌、卵巢癌、口腔鳞癌、血液恶性肿瘤或神经胶质瘤。

此外，本发明包括治疗癌症的方法，其中所述方法包括向人受试者施用治疗有效量的在根据本发明的药物组合物中使用的抗体。对于所述实施方案，优选所述癌症的特征在于细胞，其中所述细胞的细胞表面上存在人PRDX4。对于所述实施方案，还优选所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结直肠癌、卵巢癌、口腔鳞癌、血液恶性肿瘤或神经胶质瘤。

本发明还提供治疗癌症的方法，其中所述方法包括向人受试者施用治疗有效量的如本文所述的根据本发明的抗体。对于所述实施方案，优选所述癌症的特征在于细胞，其中所述细胞的细胞表面上存在人PRDX4。对于所述实施方案，还优选所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结直肠癌、卵巢癌、口腔鳞癌、血液恶性肿瘤或神经胶质瘤。

术语“治疗有效量”是指在人受试者中有效“治疗”癌症的根据本发明的抗体或药物组合物或药物的量。具体地，在癌症的情况下，治疗有效量的抗体/药物组合物/药物可以减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制或停止癌细胞浸润到外周器官；抑制和停止肿瘤转移；抑制和停止肿瘤生长；在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状，或对癌细胞的这些作用的组合。在抗体/药物组合物/药物阻止现存癌细胞生长和/或杀死现存癌细胞的程度上，其可被称为细胞抑制性和/或细胞毒性的。

本发明还覆盖根据本发明的药物组合物用于制备用于治疗癌症的药物的用途。

在一个实施方案中，本发明还覆盖根据本发明的和如本文所述的药物组合物的抗体用于制备用于治疗癌症的药物的用途。

在另一个实施方案中，本发明还覆盖根据本发明的和如本文所述的抗体用于制备用于治疗癌症的药物的用途。

术语诸如“治疗”或“处理”是指1)治愈、减缓、减轻诊断的病理状况或病症的症状和/或停止诊断的病理状况或病症的进展的治疗措施，和2)预防或减缓靶向的病理状况或病症的发展的预防或防止措施。因此，需要治疗的那些包括已经患有病症的那些；倾向于患有病症的那些；以及需要预防疾病的那些。如果患者表现出以下一种或多种情况，则根据本发明的方法或用根据本发明的药物组合物或抗体成功地“治疗”了受试者：癌细胞的数量减少或完全不存在；肿瘤大小的减小；癌细胞浸润到外周器官(包括癌扩散到软组织和骨)的抑制或不存在；肿瘤转移的抑制或不存在；肿瘤生长的抑制或不存在；与特定癌症相关的一种或多种症状的缓解；发病率和死亡率降低；生活质量的提高。

待施用于人的抗体也可转化为已人工改造的遗传重组抗体，该人工改造例如为了降低在人中的异种抗原性。基因重组抗体行例如如本文定义的嵌合抗体和人源化抗体。这些工程抗体可以使用本领域已知的方法产生。

所述用于确定人受试者是否可能患有癌症的方法可以包括以下步骤：

-提供从所述人受试者获得的样品，

-在从所述人受试者获得的所述样品中确定所述样品包含的癌细胞的细胞表面上是否存在PRDX4，

-将在所述样品包含的癌细胞的细胞表面上PRDX4的存在与确定所述人受试者是否可能患有癌症相关联。

在本发明的上下文中，“受试者”或“人受试者”是人类。例如，受试者可以是怀疑患有与癌症相关的疾病或临床病症或被诊断为患有这样的疾病或临床病症的患者。

从所述人受试者获得的所述“样品”优选地选自血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊液样品、唾液样品、溶解的组织样品和尿样品或任何上述样品的提取物。优选地，所述样品是血清样品或血浆样品。最优选地，所述样品是用于确定人受试者是否可能患有癌症的血清样品。

PRX4可以单体或多聚体形式存在。因此，在根据本发明的方法的一个具体实施方案中，PRDX4可被确定为同多聚体，特别是同十聚体或同五聚体。在另一个具体实施方案中，可以确定所述样品包含的细胞的细胞表面上PRDX4的异多聚体的存在或不存在。多聚体(无论是同多聚体或异多聚体)优选地具有在约158kDa至约660kDa、优选330kDa+/-50kDa范围内的表观分子量，如通过使用凝胶过滤柱在非变性条件下的尺寸排阻层析所测定的。

“在从所述人受试者获得的所述样品中确定所述样品包含的癌细胞的细胞表面上是否存在PRDX4”的步骤可包括通过使所述样品与至少一种PRDX4结合物接触来确定PRDX4或其片段的存在。所述至少一种结合物可以是例如根据本发明的抗体。优选至少一种结合物与其它蛋白质、特别是其它过氧化氧化还原蛋白诸如PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5和PRDX6的交叉反应性小于20％，更优选小于15％，更优选小于10％，更优选小于5％，甚至更优选小于3％，甚至更优选小于2％，甚至更优选小于1％。在一个具体的实施方案中，所述至少一种结合物结合包含在根据SEQ ID NO:81的PRDX4的位置1-79中的表位。在另一个具体的实施方案中，所述至少一种结合物结合包含在根据SEQ ID NO:81的PRDX4的位置37-79中的表位。在一个更具体的实施方案中，所述至少一种结合物结合包含在根据SEQ ID NO:81的PRDX4的位置81-271中的表位。

本发明还提供一种抗体，其识别示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中氨基酸1至79、优选氨基酸37至79、更优选氨基酸81至271的区域。所述抗体可另外由如本文定义的重链可变区和轻链可变区中的任一个限定。或者，这样的抗体可以另外由重链可变区和轻链可变区限定，所述重链可变区包含如本文定义的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的任一个，所述轻链可变区包含如本文定义的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的任一个。

本发明还提供结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体，其中所述抗体是

在结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体的一个优选实施方案中，所述抗体是

在结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体的一个更优选实施方案中，所述抗体是

在结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体的一个甚至更优选实施方案中，所述抗体是

在另一个实施方案中，本发明提供结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体，所述抗体包含

任何上述抗体可优选地结合示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中的氨基酸81至271的区域。

本发明还提供本发明的抗体在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

本发明另外提供本发明的抗体，其用于治疗癌症的方法中。

在一些实施方案中，本发明的抗体可以含有经修饰以增强效应子功能(例如抗原依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC))的人Fc区。这可以通过在抗体的Fc区中引入一个或多个氨基酸取代来实现。例如，可在Fc区中引入半胱氨酸残基，以允许在该区域中形成链间二硫键，从而改善补体介导的细胞杀伤和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。具有增强的抗肿瘤活性的同二聚体抗体也可以使用如本领域技术人员已知的异双功能交联剂来制备。或者，可以改造具有双Fc区的抗体。

可以基于它们对相同表位的竞争来确认待测试的抗体是否识别与如上文所述(k)中的某个抗体所识别的表位相同的表位，即，这些抗体是否共有该表位。抗体之间的竞争通过交叉阻断测定等检测。例如，竞争ELISA测定是优选使用的交叉阻断测定。具体地，在交叉阻断测定中，包被在微量滴定板的孔上的PRDX4蛋白可在候选竞争抗体的存在或不存在下预孵育，然后将本发明的抗体加入到孔中。与孔中PRDX4蛋白结合的本发明抗体的量与与其竞争结合相同表位的候选竞争抗体(待测试抗体)的结合能力间接相关。具体地，待测试抗体对相同表位具有的亲和力越大，本发明抗体与PRDX4蛋白包被的孔结合的量越小，而待测试抗体与PRDX4蛋白包被的孔结合的量越大。

通过预先标记抗体，可以容易地测量与孔结合的抗体的量。例如，生物素标记的抗体可以通过使用抗生物素蛋白-过氧化物酶缀合物和合适的底物来测量。使用酶(例如过氧化物酶)标记的交叉阻断测定特别称为竞争ELISA测定。抗体可以用其它可检测或可测量的标记物质标记。具体地，放射性标记或荧光标记等是本领域已知的。

此外，如上文所述抗体(a)至(j)在其CDR序列中可以具有一个或多个氨基酸的取代、缺失、添加和/或插入，只要所得抗体在功能上等同于抗体(a)至(j)即可。术语“功能上等同”是指在对PRDX4的亲合力和细胞毒性方面相当。术语“等同”是指与抗体(a)至(j)相比，具有至少50％、优选具有至少60％、更优选具有至少70％、更优选具有至少80％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％、甚至更优选至少99％的活性。活性的上限没有特别限制，可以高于抗体(a)至(j)的上限。亲合力或细胞毒性可以通过本领域技术人员通常已知的方法测定。

根据本发明的抗体可能够细胞外地结合PRDX4多肽。换句话说，如本文所述的抗体在其位于细胞外时能够结合PRDX4，其也包括特异性位于细胞的表面上的PRDX4。

示于序列表中和如在本发明上下文中使用的序列的描述如下：

SEQ ID NO:1示出抗体2C1的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:2示出抗体2C1的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:3示出抗体5H5的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:4示出抗体5H5的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:5示出抗体10G7的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:6示出抗体10G7的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:7示出抗体11-F2的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:8示出抗体11-F2的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:9示出抗体13B2的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:10示出抗体13B2的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:11示出抗体15-F11的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:12示出抗体15-F11的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:13示出抗体17A10的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:14示出抗体17A10的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:15示出抗体18G8的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:16示出抗体18G8的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:17示出抗体19H9的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:18示出抗体19H9的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:19示出抗体24B7的VH区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:20示出抗体24B7的VL区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:21示出抗体2C1的VH-CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:22示出抗体2C1的VH-CDR2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:23示出抗体2C1的VH-CDR3的氨基酸序列。

SEQ ID NO:24示出抗体2C1的VL-CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:25示出抗体2C1的VL-CDR2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:26示出抗体2C1的VL-CDR3的氨基酸序列。

SEQ ID NO:27示出抗体5H5的VH-CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:28示出抗体5H5的VH-CDR2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:29示出抗体5H5的VH-CDR3的氨基酸序列。

SEQ ID NO:30示出抗体5H5的VL-CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:31示出抗体5H5的VL-CDR2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:32示出抗体5H5的VH-CDR3的氨基酸序列。

SEQ ID NO:33示出抗体10G7的VH-CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:34示出抗体10G7的VH-CDR2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:35示出抗体10G7的VH-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:36示出抗体10G7的VL-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:37示出抗体10G7的VL-CDR2的氨基酸序列。SEQID NO:38示出抗体10G7的VL-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:39示出抗体11-F2的VH-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:40示出抗体11-F2的VH-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:41示出抗体11-F2的VH-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:42示出抗体11-F2的VL-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:43示出抗体11-F2的VL-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:44示出抗体11-F2的VL-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:45示出抗体13B2的VH-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:46示出抗体13B2的VH-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:47示出抗体13B2的VH-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:48示出抗体13B2的VL-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:49示出抗体13B2的VL-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:50示出抗体13B2的VL-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:51示出抗体15-F11的VH-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:52示出抗体15-F11的VH-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:53示出抗体15-F11的VH-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:54示出抗体15-F11的VL-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:55示出抗体15-F11的VL-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:56示出抗体15-F11的VL-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:57示出抗体17A10的VH-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:58示出抗体17A10的VH-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:59示出抗体17A10的VH-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:60示出抗体17A10的VL-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:61示出抗体17A10的VL-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:62示出抗体17A10的VL-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:63示出抗体18G8的VH-CDR1的氨基酸序列。SEQID NO:64示出抗体18G8的VH-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:65示出抗体18G8的VH-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:66示出抗体18G8的VL-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:67示出抗体18G8的VL-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:68示出抗体18G8的VL-CDR3的氨基酸序列。SEQID NO:69示出抗体19G9的VH-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:70示出抗体19G9的VH-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:71示出抗体19G9的VH-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:72示出抗体19G9的VL-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:73示出抗体19G9的VL-CDR2的氨基酸序列。SEQID NO:74示出抗体19G9的VL-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:75示出抗体24B7的VH-CDR1的氨基酸序列。SEQ ID NO:76示出抗体24B7的VH-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:77示出抗体24B7的VH-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:78示出抗体24B7的VL-CDR1的氨基酸序列。SEQID NO:79示出抗体24B7的VL-CDR2的氨基酸序列。SEQ ID NO:80示出抗体24B7的VL-CDR3的氨基酸序列。SEQ ID NO:81示出人PRDX4的氨基酸序列。

SEQ ID NO:82示出SEQ ID NO:81中位置38至46的氨基酸序列。

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注意如本文所用，单数形式“一种”、“一个”和“该/所述”包括复数指代，除非上下文另有明确指示。因此，例如，提及“一种试剂”包括一种或多种这样的不同试剂，并且提及“该方法”包括提及本领域普通技术人员已知的等同步骤和方法，其可以被修改或替代本文所述的方法。

除非另有说明，在一系列元件之前的术语“至少”应理解为是指该系列中的每个元件。本领域技术人员将认识到或能够使用不超过常规实验确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等同方案。这些等同方案也意在被本发明涵盖。

无论在何处使用，术语“和/或”包括“和”、“或”和“由所述术语连接的元件的全部或任何其它组合”的含义。

术语“小于”或反之“大于”不包括具体的数字。

例如，“小于20”表示小于所指示的数目。类似地，“大于”或“大于”表示多于或大于所指定的数量，例如“大于80％”表示多于或大于所指定的80％的数量。

在整个说明书和随后的权利要求书中，除非上下文另有要求，词语“包括”及其变体如“包含”和“含有”应理解为表示包括所述的整体或步骤或整体或步骤的组，但不排除任何其它整体或步骤或整体或步骤的组。当在本文使用时，术语“包含”可以用术语“含有”或“包括”代替，或者有时，当在本文使用时，用术语“具有”代替。当在本文中使用时，“由…组成”排除未指定的任何要素、步骤或成分。

术语“包括”表示“包括但不限于”。“包括”和“包括但不限于”可互换使用。

应当理解本发明不限于本文所述的特定方法、方案、材料、试剂和物质等，因此可以变化。本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不意在限制本发明的范围，本发明的范围仅由权利要求书限定。

本说明书全文中引用的所有出版物(包括所有专利、专利申请、科学出版物、说明书等)，无论在上文或下文中，均以其全文以引用方式并入。本文中没有任何内容被解释为承认本发明无权凭借在先发明而早于这些公开。在通过引用并入的材料与本说明书矛盾或不一致的程度上，本说明书将替代任何这样的材料。

本文引用的所有文献和专利文献的内容以其全文以引用方式并入。

从以下实施例将更好地理解本发明及其优点，提供这些实施例仅用于说明性目的。这些实施例不意在以任何方式限制本发明的范围。

实施例

材料和方法：

细胞和培养条件：

细胞在补充了8％v/v胎牛血清、1％v/v L-谷氨酰胺和1％v/v青霉素-链霉素的DMEM/F12培养基(Gibco BRL,Karlsruhe,Germany)中培养。所有细胞在加湿CO₂培养箱中在37℃、18.3％ O₂和5％ CO₂下孵育。低氧细胞在1％ O₂下孵育。

293细胞的转染：

根据制造商的说明书，使用Lipofectamine^TM 2000转染试剂(ThermoFisherScientific,Menzel,Germany)用表达质粒转染293细胞，所述质粒编码人PRDX或其突变体。使用Lipofectamine转染PRDX4特异性siRNA。如果合适，用80μg/ml潮霉素C筛选细胞以获得阳性转染的细胞，并在补充了80μg/ml潮霉素C的正常生长培养基中进一步培养。

原代外周血单核细胞(PBMC)从新鲜血液的分离：

用PBS稀释来自健康供体的30ml新鲜肝素化的血液，并小心地将其装载在10ml人Pancoll(Pan Biotech,Aidenbach,Germany)的层的顶部。将试管在800×g下离心25分钟。然后从Pancoll和血浆之间的中间层小心收集PBMC，并在PBS中洗涤三次。细胞新鲜用于实验或立即冷冻并储存在-80℃用于以后的实验。

流式细胞术：

对于PRDX4表达的流式细胞术分析，在FACS缓冲液(PBS+2％ FSC)中用11F2或任何其它PRDX4特异性抗体或用同种型对照抗体将细胞染色20分钟，然后用抗大鼠-Alexa647二抗(Jackson Immuno Research)染色。所有染色均在冰上进行。

Western印迹分析：

为了通过western印迹分析PRDX4表达，制备全细胞裂解物。用PBS洗涤贴壁的细胞，用胰蛋白酶分离并沉淀。细胞沉淀在PBS中洗涤。之后，将细胞重悬于含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液(Roche Diagnostics)中，并在冰上孵育20分钟。细胞片段在4℃以最大速度离心20分钟。将上清液转移到新的试管中，通过Bradford测定(Bio-Rad)来测定蛋白质含量。20μg细胞裂解物用于SDS-PAGE。将凝胶电印迹在硝酸纤维素膜上，并用5％牛奶的TBST溶液封闭。使用以下一抗进行Western印迹：抗PRDX4(Thermo Scientific)，抗GFP(Helmholtz Center Munich的“单克隆抗体”核心工厂友情赠送)。所有的一抗在4℃孵育过夜。洗涤膜，并在室温下与HRP缀合的二抗一起孵育2小时。使用以下二抗：抗大鼠IgG-HRP(Cell Signaling)，抗小鼠IgG-HRP(Cell Signaling Technology,Frankfurt a.Main,Germany)和抗兔IgG-HRP(Cell Signaling)。用ECL系统(GE Healthcare,Freiburg,Germany)进行蛋白质的检测。

免疫沉淀：

使用CNBr珠子(CNBr-活化的Sepharose 4 Fast Flow,GE Healthcare)进行免疫沉淀。将1g珠子溶解在10ml 1mM HCl中，并在室温下孵育20分钟。然后将珠子以3000×g离心1分钟，洗涤15次。然后将亚类特异性小鼠抗大鼠IgG2a抗体与珠子在室温下偶联(偶联缓冲液0.3M NaHCO₃、1.5M NaCl，pH 8.3中的2mg抗体)1小时。之后，在偶联缓冲液中洗涤珠子，所有剩余的结合位点用1M乙醇胺(1M)在室温下封闭2小时。在洗涤缓冲液(0,1M Tris/HCl,0.5M NaCl,pH 4)和NaOAc缓冲液(0.1M NaOAc,0.5M NaCl)中洗涤后，将偶联的珠子重悬于PBS中，用于与22E6偶联。因此，将500μl 22E6杂交瘤上清液与60μl抗亚类特异性珠子在4℃下一起孵育过夜。

然后将珠子在PBS中洗涤，并与2mg细胞裂解物或0,75μg sCD73(人CD73/NT5E蛋白，his标记的，Sino Biologicals)在4℃下一起孵育过夜。之后，在含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液、PBS+(PBS,0.5％ N-月桂酰肌氨酸,0.1％ SDS)和PBS中洗涤珠子。弃去上清液，将珠子重悬于3×Laemmli缓冲液中，并在室温下孵育3分钟。在1,000×g离心5分钟后，将上清液用于western印迹分析。

实施例：

实施例1：PRDX4是人癌细胞的表面上低氧诱导的蛋白质

在标准细胞培养基中在常氧(大约18％ O₂)或低氧(1％ O₂)条件下培养A549肺癌细胞和ES-2卵巢癌细胞。使用抗体11F2作为一抗和Alexa647标记的山羊抗大鼠IgG作为二抗，通过流式细胞术测量表面PRDX4的表达。测量来自图1a)的平均荧光强度(参见图2b))。给出来自三个独立实验的平均值和标准偏差。在原代PBMC、肝细胞和心脏成纤维细胞上没有观察到表达(数据未示出)。

实施例2：

PRDX4在不同来源的各种人癌细胞系上和在从来自卵巢癌患者的原发性腹水分离的癌细胞上表达(参见图2a)。第1行示出卵巢癌细胞系，第2行示出来自卵巢癌的原发性腹水，第3行示出结肠癌、宫颈癌和肺癌、间皮瘤，第4行示出HEK293细胞，第5行示出源自T细胞白血病、头颈癌的阴性细胞系和来自健康供体的原代外周血单核细胞(PBMC)。

示出PRDX4特异性抗体11F2使PRDX4从表达或不表达表面PRDX4的细胞系的裂解物沉淀。将溴化氰珠子与11F2偶联，然后与0.5mg裂解物在RIPA缓冲液中在4℃下一起孵育过夜，然后以3.000rpm离心5分钟。将沉淀的珠子与Laemmli缓冲液一起孵育，煮沸5分钟，通过SDS-PAGE分离洗脱液(泳道“IP”)。细胞裂解物用作对照(L)。凝胶被印迹，印迹与商业PRDX4抗体(Thermo Scientific)一起孵育，然后与HRP标记的山羊-抗大鼠抗体一起孵育，用ECL显影。

PRDX4被生物素化，因此存在于癌细胞的表面(参见图2c)。将活的ES-2肿瘤细胞与不能渗透膜的EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin(Thermo Scientific)一起孵育，以仅使表面蛋白生物素化。然后，裂解细胞，裂解物与如上所述的11F2偶联珠子一起孵育。与其它抗体偶联的珠子用作对照。通过SDS-PAGE分离沉淀珠子的洗脱液。用链霉抗生物素蛋白-HRP缀合物进行免疫印迹以检测生物素化的蛋白质(上部)和用商业PRDX4抗体进行免疫印迹(下部)。用ECL使印迹显影。来自非生物素化细胞的裂解物(-)用作对照。前2个泳道是IP前的细胞裂解物。

实施例3：11F2与活的ES-2细胞的结合

ES-2细胞在显微镜载玻片上生长，在PBS中洗涤并与PRDX4抗体11F2一起孵育。然后，用4％多聚甲醛固定细胞，并与Alexa488偶联的合适二抗一起孵育。细胞核用DAPI复染。

实施例4：抗体11F2使PRDX4沉淀并结合在PRDX4的外显子1内

本实施例示出抗体11F2使PRDX4沉淀(参见图4a))。将偶联11F2的溴化氰珠子与ES-2细胞的裂解物一起孵育过夜。在珠子沉淀并在Laemmli缓冲液中孵育后，通过SDS-PAGE分离洗脱液并印迹。用商业PRDX4抗体(Thermo Scientific)和合适二抗的免疫印迹显示PRDX4被11F2特异性沉淀。与FLAG特异性抗体偶联的珠子用作对照。L＝免疫沉淀前的细胞裂解物。

该实施例进一步示出11F2结合在PRDX4的外显子1内(参见图4b))。用编码与GFP融合的PRDX4外显子1(AS 1-80)的表达质粒转染HEK293细胞。将与溴化氰珠子偶联的11F2与转染子或亲代HEK293细胞的裂解物一起孵育。沉淀后，将珠子在Laemmli缓冲液中孵育，并通过SDS-PAGE分离上清液。用GFP特异性抗体(Helmholtz Centre Munich的核心工厂)和合适二抗进行的免疫印迹显示了11F2的特异性。

实施例5：PRDX4是膜相关的

该实施例示出PRDX4是膜相关的(也参见图5)。裂解ES-2细胞，并通过分别以7,000×g和16,500×g离心获得膜级分MF1和MF2。通过以100,000×g离心获得胞质级分MF3。

实施例6：表面PRDX4阳性SKOV3细胞激活PRDX4特异性CAR-T细胞

本实施例示出表面PRDX4阳性的SKOV3细胞激活PRDX4特异性CAR-T细胞(也参见图6)。用编码CAR构建体的逆转录病毒载体转导来自两个供体(FI和JE)的原代T细胞，所述CAR构建体具有源自抗体11F2的单链构建体。CAR的表达通过用山羊抗大鼠IgG抗体(未示出)的流式细胞术进行测试。将SKOV3细胞与转导的T细胞(印迹的第4-6列)或未转导的对照T细胞(印迹的第1-3列)以X-轴上所示的比率一起孵育24小时。然后，用商业ELISA测定定量上清液中的干扰素-γ，其为T细胞活化的标志物。作为特异性的另一证据，将一些共培养物(第3和6列)与11F2抗体一起预孵育以便阻断T细胞对靶细胞的识别。这种预孵育导致上清液中干扰素浓度降低。

实施例7：11F2是PRDX4特异性的

该实施例示出11F2是PRDX4特异性的(也参见图7)。将与溴化氰珠子偶联的11F2与10ng重组PRDX4或作为对照的相同量的重组CCDC47蛋白一起孵育。沉淀后，将珠子在Laemmli缓冲液中孵育，并通过SDS-PAGE分离上清液。用商业PRDX4抗体(ThermoScientific)和合适二抗进行的免疫印迹显示11F2的特异性。重组PRDX4蛋白是二聚体，因此大小为约50kD。

实施例8：图8还证明11F2是PRDX4特异性的：用PRDX4特异性siRNA或对照siRNA转染ES-2细胞。3天后，如图1所述通过流式细胞术测量11F2的结合。示出的是与对照siRNA转染的ES-2w细胞(平均值＝1908)相比，siRNA转染的群4BC_KO仅显示大约50％的11F2结合(平均值＝874)。包括同种型抗体作为对照(平均值＝159)。

实施例9：存在于来自卵巢癌患者的腹水中的PRDX4特异性抗体

PRDX4特异性抗体存在于来自卵巢癌患者的腹水中(参见图9)。用编码大小大约55kD的PRDX4-GFP融合蛋白的表达质粒转染HEK293细胞。通过SDS-PAGE分离转染子和亲代HEK293细胞的相似量的裂解物并印迹。然后将该印迹与腹水一起孵育，接着与山羊抗人IgG抗体一起孵育，并用ECL显影。

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EP-A1 2546269。

序列表

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艾克西米恩生物技术股份有限公司

<120> 包含结合存在于靶细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体的组合物

<130> LC23310010P

<150> LU 102276

<151> 2020-12-10

<150> EP 21155773.1

<151> 2021-02-08

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<170> PatentIn version 3.5

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<220>

<223> 5H5 VH-CDR2

<400> 28

Ile Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser Arg Phe Asn Val Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 29

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 5H5 VH-CDR3

<400> 29

Gly Asn Pro Ala Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 30

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 5H5 VL-CDR1

<400> 30

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Lys Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 31

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 5H5 VL-CDR2

<400> 31

Asn Thr Asn Thr Leu Glu Thr Gly

1 5

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 5H5 VL-CDR3

<400> 32

Leu Gln His Ser Asn Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 33

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 10G7 VH-CDR1

<400> 33

Thr Ser Asn His Met Asn

1 5

<210> 34

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 10G7 VH-CDR2

<400> 34

Ile Ile Asn Pro Val Asn Gly Gly Thr Arg Tyr Asn Val Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 35

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 10G7 VH-CDR3

<400> 35

Gly Asn Pro Ala Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 36

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 10G7 VL-CDR1

<400> 36

Lys Ala Ser Gln Asn Ile His Lys Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 37

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 10G7 VL-CDR2

<400> 37

Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr

1 5

<210> 38

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 10G7 VL-CDR3

<400> 38

Leu Gln His Ser Ser Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 39

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 11F2 VH-CDR1

<400> 39

Ser Thr His His Met His

1 5

<210> 40

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 11F2 VH-CDR2

<400> 40

Ile Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Val Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 41

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 11F2 VH-CDR3

<400> 41

Gly Asn Pro Ala Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 42

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 11F2 VL-CDR1

<400> 42

Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 43

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 11F2 VL-CDR2

<400> 43

Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Glu Thr Asp

1 5

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 11F2 VL-CDR3

<400> 44

Leu Gln His Ser Asn Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 45

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 13B2 VH-CDR1

<400> 45

Thr Ser Asn His Met Asn

1 5

<210> 46

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 13B2 VH-CDR2

<400> 46

Ile Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser Arg Phe Asn Val Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 47

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 13B2 VH-CDR3

<400> 47

Gly Asn Pro Ala Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 48

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 13B2 VL-CDR1

<400> 48

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Lys Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 49

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 13B2 VL-CDR2

<400> 49

Tyr Asn Thr Asn Thr Leu Glu Thr Gly

1 5

<210> 50

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 13B2 VL-CDR3

<400> 50

Leu Gln His Ser Asn Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 51

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 15F11 VH-CDR1

<400> 51

Thr Ser Asn His Met His

1 5

<210> 52

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 15F11 VH-CDR2

<400> 52

Ile Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser Arg Phe Asn Val Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 53

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 15F11 VH-CDR3

<400> 53

Gly Asn Pro Ala Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 54

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 15F11 VL-CDR1

<400> 54

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 55

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 15F11 VL-CDR2

<400> 55

Ser Asn Thr Asn Thr Leu Glu Thr Gly

1 5

<210> 56

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 15F11 VL-CDR3

<400> 56

Leu Gln His Ser Asn Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 57

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 17A10 VH-CDR1

<400> 57

Thr Ser Asn His Met His

1 5

<210> 58

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 17A10 VH-CDR2

<400> 58

Ile Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser Arg Phe Asn Val Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 59

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 17A10 VH-CDR3

<400> 59

Gly Asn Pro Ala Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 60

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 17A10 VL-CDR1

<400> 60

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 61

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 17A10 VL-CDR2

<400> 61

Tyr Asn Thr Asn Thr Leu Glu Thr Gly

1 5

<210> 62

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 17A10 VL-CDR3

<400> 62

Leu Gln His Ser Asn Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 63

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 18G8 VH-CDR1

<400> 63

Thr Asn Asn His Ile His

1 5

<210> 64

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 18G8 VH-CDR2

<400> 64

Ile Ile Asn Ser Gly Asn Gly Gly Thr Lys Tyr Asp Val Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 65

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 18G8 VH-CDR3

<400> 65

Gly Asn Pro Ala Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 66

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 18G8 VL-CDR1

<400> 66

Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 67

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 18G8 VL-CDR2

<400> 67

Asp Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly

1 5

<210> 68

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 18G8 VL-CDR3

<400> 68

Leu Gln His Ser Asn Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 69

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 19H9 VH-CDR1

<400> 69

Thr Ser Asn His Met His

1 5

<210> 70

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 19H9 VH-CDR2

<400> 70

Ile Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser Arg Phe Asn Val Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 71

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 19H9 VH-CDR3

<400> 71

Gly Asn Pro Ala Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 72

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 19H9 VL-CDR1

<400> 72

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 73

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 19H9 VL-CDR2

<400> 73

Asn Thr Asn Thr Leu Glu Thr Gly

1 5

<210> 74

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 19H9 VL-CDR3

<400> 74

Leu Gln His Ser Asn Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 75

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 24B7 VH-CDR1

<400> 75

Thr Ser Asn His Met His

1 5

<210> 76

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 24B7 VH-CDR2

<400> 76

Ile Ile Asn Pro Gly Asn Gly Gly Ser Arg Phe Asn Val Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 77

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 24B7 VH-CDR3

<400> 77

Gly Asn Pro Ala Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 78

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 24B7 VL-CDR1

<400> 78

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 79

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 24B7 VL-CDR2

<400> 79

Asn Thr Asn Thr Leu Glu Thr Gly

1 5

<210> 80

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 24B7 VL-CDR3

<400> 80

Leu Gln His Ser Asn Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 81

<211> 271

<212> PRT

<213> 人

<400> 81

Met Glu Ala Leu Pro Leu Leu Ala Ala Thr Thr Pro Asp His Gly Arg

1 5 10 15

His Arg Arg Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Phe Leu Leu Pro Ala

20 25 30

Gly Ala Val Gln Gly Trp Glu Thr Glu Glu Arg Pro Arg Thr Arg Glu

35 40 45

Glu Glu Cys His Phe Tyr Ala Gly Gly Gln Val Tyr Pro Gly Glu Ala

50 55 60

Ser Arg Val Ser Val Ala Asp His Ser Leu His Leu Ser Lys Ala Lys

65 70 75 80

Ile Ser Lys Pro Ala Pro Tyr Trp Glu Gly Thr Ala Val Ile Asp Gly

85 90 95

Glu Phe Lys Glu Leu Lys Leu Thr Asp Tyr Arg Gly Lys Tyr Leu Val

100 105 110

Phe Phe Phe Tyr Pro Leu Asp Phe Thr Phe Val Cys Pro Thr Glu Ile

115 120 125

Ile Ala Phe Gly Asp Arg Leu Glu Glu Phe Arg Ser Ile Asn Thr Glu

130 135 140

Val Val Ala Cys Ser Val Asp Ser Gln Phe Thr His Leu Ala Trp Ile

145 150 155 160

Asn Thr Pro Arg Arg Gln Gly Gly Leu Gly Pro Ile Arg Ile Pro Leu

165 170 175

Leu Ser Asp Leu Thr His Gln Ile Ser Lys Asp Tyr Gly Val Tyr Leu

180 185 190

Glu Asp Ser Gly His Thr Leu Arg Gly Leu Phe Ile Ile Asp Asp Lys

195 200 205

Gly Ile Leu Arg Gln Ile Thr Leu Asn Asp Leu Pro Val Gly Arg Ser

210 215 220

Val Asp Glu Thr Leu Arg Leu Val Gln Ala Phe Gln Tyr Thr Asp Lys

225 230 235 240

His Gly Glu Val Cys Pro Ala Gly Trp Lys Pro Gly Ser Glu Thr Ile

245 250 255

Ile Pro Asp Pro Ala Gly Lys Leu Lys Tyr Phe Asp Lys Leu Asn

260 265 270

<210> 82

<211> 9

<212> PRT

<213> 人

<400> 82

Trp Glu Thr Glu Glu Arg Pro Arg Thr

1 5

Claims

1.药物组合物，其包含结合存在于癌细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体和任选的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，其中所述抗体识别示于SEQ ID NO:81的人PRDX4中的氨基酸81至271的区域。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗体具有细胞毒活性。

3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体具有ADCC或CDC。

4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体与细胞毒性物质缀合。

5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体是嵌合抗原受体(CAR)的一部分。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述CAR被T细胞、NK细胞、NK-T细胞或巨噬细胞包含。

7.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体与PRDX4相关蛋白的交叉反应性小于20％。

8.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体是

(a)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:1的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ IDNO:2的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(b)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:3的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ IDNO:4的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(c)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:5的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ IDNO:6的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(d)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:7的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ IDNO:8的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(e)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:9的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQ IDNO:10的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(f)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:11的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:12的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(g)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:13的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:14的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(h)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:15的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:16的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(i)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:17的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:18的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；

(j)一种抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与示于SEQ IDNO:19的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与示于SEQID NO:20的氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列；或

9.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体是

10.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其用于治疗人受试者的癌症的方法中。

11.根据权利要求10所述使用的药物组合物，其中所述癌症的特征在于细胞，其中所述细胞的细胞表面上存在人PRDX4。

12.根据权利要求10或11所述使用的药物组合物，其中所述癌症是乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结直肠癌、卵巢癌、口腔鳞癌、血液恶性肿瘤或神经胶质瘤。

13.一种用于确定人受试者是否可能患有癌症的方法，所述方法包括在从所述人受试者获得的样品中确定所述样品包含的癌细胞的细胞表面上是否存在PRDX4。

14.一种结合存在于癌细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体，其中所述抗体是

15.一种结合存在于癌细胞的细胞表面上的人PRDX4的抗体，其包含