CN116981476A - 具有新型活性的hhla2结合剂 - Google Patents

Abstract

本公开涉及具有新型活性的HHLA2结合剂及其用途。

Description

具有新型活性的HHLA2结合剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2021年1月28日提交的美国临时专利申请号63/142,832的优先权，该临时专利申请全文以引用方式并入本文。

背景技术

尽管已针对许多疾病和病症(包括癌症)研究了免疫疗法，但遇到了仍然需要解决的功能限制。免疫系统包括由共刺激和共抑制配体和受体的网络紧密控制。免疫检查点基于复杂的相互作用对免疫应答进展进行负调控。目前可用的免疫检查点抑制剂可调节一些患者的免疫应答，但免疫检查点表达和与天然结合配偶体的相互作用可在患者之间变化。

因此，需要开发经优化以靶向免疫检查点途径的新治疗方式。

发明内容

HERV-H LTR-关联蛋白2(HHLA2)是一种B7基因家族成员，广泛表达于多种肿瘤和抗原呈递细胞中。已知HHLA2与抑制性受体和刺激性受体相互作用以调节T细胞功能。杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)蛋白包括两个(KIR2D)或三个(KIR3D)免疫球蛋白样细胞外结构域，并且KIR3DL3是在T细胞和NK细胞上发现的抑制性HHLA2受体。HHLA2与KIR3DL3的结合已被证明能够抑制活化T细胞的免疫应答和NK细胞的细胞毒活性。

相比之下，含跨膜和免疫球蛋白结构域2(TMIGD2)是HHLA2的活化受体。在T细胞受体(TCR)信号传导的同时，天然T细胞上的TMIGD2与HHLA2相互作用并经由涉及AKT磷酸化的途径共刺激T细胞活化。随着重复的T细胞活化，刺激受体TMIGD2的表达逐渐丧失，使得抑制性受体KIR3DL3的表达变得占优势。

虽然已经研究了HHLA2结合剂作为免疫疗法，但本公开尤其涵盖具有新型活性的本文所述HHLA2结合剂的发现，所述新型活性导致：(i)抑制HHLA2与KIR3DL3的结合；和/或(ii)增强HHLA2与TMIGD2的结合。在一些实施方案中，HHLA2结合剂能够：(i)抑制HHLA2与KIR3DL3的结合；以及(ii)增强HHLA2与TMIGD2的结合。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂引起HHLA2的变构变化，从而导致HHLA2的构象变化，其增强HHLA2与TMIGD2的结合。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂直接与HHLA2上的至少一个结合位点竞争TMIGD2。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂增强早期免疫应答和/或晚期免疫应答。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂增强HHLA2与天然免疫效应细胞中的TMIGD2的结合。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂阻断HHLA2与耗竭的免疫效应细胞中的KIR3DL3结合。在一些实施方案中，耗竭的免疫效应细胞包含或表达某些细胞表面标记，诸如PD-1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、2B4/CD244/SLAMF4、CD160和/或TIGIT。

因此，本公开提供了此类HHLA2结合剂的若干示例，其特别可用于治疗多种癌症，包括实体瘤诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、肾细胞癌(RCC)、胆管癌或乳腺癌，和血液肿瘤，以及调节受试者的免疫应答。

在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂用于至少一种细胞毒性剂的肿瘤靶向。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂与细胞毒性剂一起施用或共同配制。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂用于将至少一种放射性核素递送到肿瘤(例如，本文所述的肿瘤)。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂与放射性核素一起施用或共同配制。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂与结合Fc受体(FcR)的单克隆抗体组合用于靶向肿瘤(例如，本文所述的肿瘤)，从而介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂与结合FcR的单克隆抗体一起施用或共同配制。

在一个方面，本公开提供了HHLA2结合剂，其能够：(i)抑制HHLA2与KIR3DL3的结合；并且/或者(ii)增强HHLA2与TMIGD2的结合。

在一些实施方案中，HHLA2结合剂是或包括抗体或其抗原结合片段、小分子、多肽或适体。

在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包括：(i)嵌合抗体、人抗体或人源化抗体，或其抗原结合片段；(ii)单特异性抗体或双特异性抗体，或其抗原结合片段；和/或(iii)单克隆抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段包括scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fc、纳米抗体或骆驼科动物抗体。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(i)重链恒定区，其选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，和/或(ii)轻链恒定区，其选自κ或λ的轻链恒定区。

在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(a)重链可变区(VH)，其包含一个、两个或三个VH CDR序列，所述VH CDR序列各自与表1的VH CDR具有至少约90％同一性；和/或(b)轻链可变区(VL)，其包含一个、两个或三个VL CDR序列，所述VL CDR序列各自与表1的VL CDR具有至少约90％同一性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(a)VH，该VH包含一个、两个或三个VH CDR序列，所述VH CDR序列各自与表1的VH CDR具有至少约91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性；和/或(b)VL，该VL包含一个、两个或三个VL CDR序列，所述VL CDR序列各自与表1的VL CDR具有至少约91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(a)VH，该VH包含一个、两个或三个VH CDR序列，所述VH CDR序列各自包含表1的VH CDR或由其组成；和/或(b)VL，该VL包含一个、两个或三个VL CDR序列，所述VL CDR序列各自包含表1的VL CDR或由其组成。

在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(a)VH，该VH与表1的VH具有至少约90％或更高的同一性；和/或(b)VL，该VL与表1的VL具有至少约90％或更高的同一性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(a)VH，该VH与表1的VH具有至少约95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性；和/或(b)VL，该VL与表1的VL具有至少约95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(a)VH，该VH包括表1的VH或由其组成；和/或(b)VL，该VL包括表1的VL或由其组成。

在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(a)重链，该重链与表1的重链具有至少约90％或更高的同一性；和/或(b)轻链，该轻链与表1的轻链具有至少约90％或更高的同一性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(a)重链，该重链与表1的重链具有至少约95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性；和/或(b)轻链，该轻链与表1的轻链具有至少约95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是或包含：(a)重链，该重链包括表1的重链或由其组成；和/或(b)轻链，该轻链包括表1的轻链或由其组成。

在另一方面，本公开提供了与本文所述的任何方面或实施方案的HHLA2结合剂结合和/或竞争结合HHLA2上的相同表位的剂。

在一些实施方案中，HHLA2结合剂增强HHLA2与天然免疫效应细胞中的TMIGD2的结合。在一些实施方案中，HHLA2结合剂阻断HHLA2与耗竭的免疫效应细胞中的KIR3DL3的结合。在一些实施方案中，免疫效应细胞包括或是T细胞和/或NK细胞。在一些实施方案中，T细胞包括或是CD4+T细胞和/或CD8+T细胞。

在一些实施方案中，HHLA2结合剂以约5nM或更小的KD结合HHLA2。在一些实施方案中，HHLA2结合剂以约15nM或更小的KD结合HHLA2。在一些实施方案中，HHLA2结合剂以背景的至少约50倍至约800倍的亲和力结合人HHLA2。在一些实施方案中，HHLA2结合剂以大于约2的比率增强HHLA2与TMIGD2的结合。

在另一方面，本公开提供了药物组合物，该药物组合物包含至少一种本文所述的任何方面或实施方案的HHLA2结合剂，以及药学上可接受的载剂。

在另一方面，本公开提供了治疗患有疾病、病症或疾患的受试者的方法，该方法包括：施用治疗有效量的至少一种本文所述的任何方面或实施方案的HHLA2结合剂，或本文所述的任何方面或实施方案的药物组合物。

在另一方面，本公开提供了调节受试者的免疫应答的方法，该方法包括：施用治疗有效量的至少一种本文所述的任何方面或实施方案的HHLA2结合剂，或本文所述的任何方面或实施方案的药物组合物。

在一些实施方案中，受试者患有癌症或处于发展癌症的风险中。在一些实施方案中，受试者患有实体瘤或血液癌症。在一些实施方案中，实体瘤是或包括以下中的一种或多种：肾癌、骨癌、皮肤癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、胆管癌或甲状腺癌。在一些实施方案中，血液癌症包括或是白血病或淋巴瘤。在一些实施方案中，白血病包括或是急性淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性白血病或急性白血病。在一些实施方案中，淋巴瘤包括或是霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤、淋巴细胞性淋巴瘤或弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。

在一些实施方案中，疾病、病症或疾患与异常HHLA2表达相关。

在一些实施方案中，HHLA2结合剂肠胃外施用。在一些实施方案中，肠胃外施用是或包括皮下、静脉内、肌内或胸骨内注射或输注。

在一些实施方案中，HHLA2结合剂与第二剂组合施用。

在另一方面，本公开提供了编码至少一种本文所述的任何方面或实施方案的HHLA2结合剂或其抗原结合片段的核酸。

在另一方面，本公开提供了表达载体，该表达载体包含至少一种本文所述的任何方面或实施方案的核酸。

在另一方面，本公开提供了宿主细胞，该宿主细胞包含或表达至少一种本文所述的任何方面或实施方案的HHLA2结合剂，包含至少一种本文所述方面或实施方案的核酸，或包含至少一种本文所述方面或实施方案的表达载体。

在另一方面，本公开提供了制备HHLA2结合剂的方法，该方法包括：(i)在适于表达HHLA2结合剂的条件下培养宿主细胞，该宿主细胞包含至少一种本文所述的任何方面或实施方案的核酸或至少一种本文所述的任何方面或实施方案的表达载体，以及(ii)回收HHLA2结合剂。

在另一方面，本公开提供了检测样品中HHLA2多肽的存在或水平的方法，该方法包括：使用至少一种本文所述的任何方面或实施方案的HHLA2结合剂检测样品中的HHLA2多肽。

在另一方面，本公开提供了试剂盒，该试剂盒包括至少一种本文所述的任何方面或实施方案的HHLA2结合剂，以及使用和/或施用说明书。

在一些实施方案中，HHLA2结合剂与HHLA2多肽形成复合物。在一些实施方案中，通过包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和/或蛋白质印迹的测定来检测复合物。在一些实施方案中，HHLA2结合剂被直接标记。

本发明的其他特征、目的和优点在随后的详细描述中是显而易见的。然而，应当理解，虽然详细描述和实施方案指出了本发明的具体实施方案，但是仅以举例说明而非限制的方式给出。根据详细描述，在本发明范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员将变得显而易见。

附图说明

下面描述的图(它们一起构成附图)仅用于说明目的，而非用于限制。

图1A至图1B是示出示例性抗HHLA2抗体Ab-60638和Ab-60665的重链可变结构域(图1A)和轻链可变结构域(图1A)的比对的示意图。

图2A至图2B是示出使用来自ForteBio的Octet系统的示例性抗HHLA2抗体Ab-60638(图2A)和Ab-60665(图2B)对重组HHLA2-Fc的结合亲和力的图。

图3A至图3C是流式细胞术直方图，其示出相对于同位素对照，示例性抗HHLA2抗体Ab-60638(图3A)、Ab-60665(图3B)和Ab-65885/Ab-65886/Ab-65887/Ab-65889/Ab-65890(图3C)与过表达人HHLA2的300.19细胞的结合。

图4A至图4B是流式细胞术数据的图，其示出相对于同种型对照，示例性抗HHLA2抗体Ab-60638和Ab-60665阻断人HHLA2-Fc与过表达人KIR3DL3的300.19细胞的结合(图4A)和增强人TMIGD2-Fc与过表达人HHLA2的300.19细胞的结合(图4B)的能力。

图5A至图5B是流式细胞术数据的图，其示出相对于同种型对照，示例性抗HHLA2抗体Ab-65885、Ab-65886、Ab-65887、Ab-65889和Ab-65890阻断人HHLA2-Fc与过表达人KIR3DL3的300.19细胞的结合(图5A)和增强人TMIGD2-Fc与过表达人HHLA2的300.19细胞的结合(图5B)的能力。

图6是示出使用Jurkat细胞中的荧光素酶报告基因，示例性抗HHLA2抗体Ab-65885、Ab-65886、Ab-65887、Ab-65889和Ab-65890调节表达HHLA2的CHO细胞对相邻的表达TMIGD2的Jurkat细胞的活性的柱状图；该测定显示出这五种示例性抗体不仅不阻断HHLA2介导的经由TMIGD2的信号传导，而且它们还会增强HHLA2介导的经由TMIGD2的信号传导。

定义

为了更容易理解本发明，下文首先定义了某些术语。在整个说明书中阐述了以下术语和其他术语的附加定义。本文中为了描述本发明的背景并提供关于其实践的额外细节所引用的出版物和其他参考材料特此以引用方式并入。

冠词“一个”和“一种”在本文中用于指该冠词的语法对象中的一个或多于一个(即，至少一个)。举例来说，“一种剂”意指一种剂或多于一种剂。

约：如本文所用，应用于一个或多个所关注的值的术语“约”是指类似于所陈述的参考值的值。在一些实施方案中，除非另有说明或根据上下文清楚看出(除了此类数字将超过可能值的100％的情况)，否则术语“约”是指在所陈述的参考值的任一方向(大于或小于)上落在25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小内的值范围。

亲和力成熟：如本文所用，术语“亲和力成熟”是指在其一个或多个CDR中具有一个或多个改变的抗体，与不具有所述一个或多个改变的亲本抗体相比，所述改变导致抗体对抗原的亲和力改善。在一些实施方案中，亲和力成熟的抗体对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔亲和力。亲和力成熟的抗体可通过本领域已知的多种程序中的任一种产生。通过VH和VL结构域改组实现的亲和力成熟描述于Marks等人，BioTechnology 10:779-783(1992)中。CDR和/或框架残基的随机诱变描述于以下文献中：Barbas等人，Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A91:3809-3813(1994)；Schier等人，Gene 169:147-155(1995)；Yelton等人，J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jackson等人，J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；以及Hawkins等人，J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。

剂：如本文所用，术语“剂”是指生物实体和/或化合物，包括例如抗体或其抗原结合片段、有机分子(例如，小分子)、肽(例如，融合蛋白)、适体、核酸、嵌合抗原受体、糖蛋白、糖、脂质、生长因子、酶、合成分子、碳水化合物、脂质、激素、聚合物或其衍生物、变型、复合物或它们的任何组合。在适当的情况下，如本领域技术人员从上下文将清楚的，该术语可用于指是或包括细胞或生物体或其级分、提取物或组分的实体。另选地或除此之外，如上下文将清楚的，该术语可用于指天然产物。在一些情况下，同样如将从上下文清楚的，该术语可用于指一个或多个人造实体，因为它是通过人的行动来设计、工程化和/或产生的，并且/或者未在自然界中发现。在一些实施方案中，剂可以分离形式或纯形式使用。在一些实施方案中，剂可以粗形式使用。在一些实施方案中，剂作为集合或库提供，可对这些集合或库进行筛选以鉴定或表征其中的活性剂。剂可结合任何细胞部分，诸如受体、抗原决定簇或者存在于靶标或靶细胞上的其他结合位点。各种剂可用于本文所述的组合物和方法中。

抗体：如本文所用，术语“抗体”是指包括足以赋予与特定靶抗原的特异性结合的典型免疫球蛋白序列元件的多肽。如本领域已知的，如在自然界中产生的完整抗体是大约150kD的四聚体剂，所述四聚体剂包含两个相同的重链多肽(每个约50kD)和两个相同的轻链多肽(每个约25kD)，这些多肽彼此缔合形成通常称为“Y形”的结构。每条重链包含至少四个结构域(每个结构域的长度为约110个氨基酸)—氨基末端可变(VH)结构域(位于Y结构的顶端)，然后是三个恒定结构域：CH1、CH2和羧基末端的CH3(位于Y的茎部的基部)。称为“开关”的短区域连接重链可变区和恒定区。“铰链”将CH2和CH3结构域连接到抗体的其余部分。该铰链区中的两个二硫键将完整抗体中的两个重链多肽彼此连接起来。每条轻链包含两个结构域—氨基末端可变(VL)结构域，然后是羧基末端恒定(CL)结构域，这两个结构域被另一个“开关”彼此隔开。完整抗体四聚体包含两个重链-轻链二聚体，其中重链和轻链通过单个二硫键彼此连接；两个其他二硫键将重链铰链区彼此连接，使得二聚体彼此连接并且形成四聚体。天然产生的抗体通常在CH2结构域上也被糖基化。天然抗体中的每个结构域具有以“免疫球蛋白折叠”为特征的结构，所述“免疫球蛋白折叠”由在压缩的反平行β桶中彼此堆积的两个β折叠(例如，3股、4股或5股折叠)形成。每个可变结构域含有三个称为“互补决定区”(CDR1、CDR2和CDR3)的高变环以及四个稍微不变的“框架”区(FR1、FR2、FR3和FR4)。当天然抗体折叠时，FR区形成为结构域提供结构框架的β折叠，并且来自重链和轻链的CDR环区域均在三维空间中聚集在一起，使得它们产生位于Y结构的顶端的单个高变抗原结合位点。天然存在的抗体的Fc区与补体系统的元件结合，并且还与效应细胞(包括例如介导细胞毒性的效应细胞)上的受体结合。Fc区对Fc受体的亲和力和/或其他结合属性可通过糖基化或其他修饰来调节。在一些实施方案中，根据本公开产生和/或利用的抗体包括糖基化的Fc结构域，诸如具有经修饰的或经工程化的糖基化的Fc结构域。在一些实施方案中，包含足够的如在天然抗体中发现的免疫球蛋白结构域序列的任何多肽或多肽复合物都可以被称为和/或用作“抗体”，无论这种多肽是天然产生的(例如，通过生物体对抗原的反应生成)还是通过重组工程化、化学合成或其他人工系统或方法产生的。在一些实施方案中，抗体是多克隆的。在一些实施方案中，抗体是单克隆的。在一些实施方案中，抗体具有小鼠、兔、灵长类动物或人抗体特有的恒定区序列。在一些实施方案中，抗体序列元件是人源化的、灵长类化的或嵌合的，如本领域已知的那样。此外，如本文所用的术语“抗体”在适当的实施方案中(除非另有说明或从上下文中清楚地看出)可以指针对在替代呈现中利用抗体的结构和功能特征的任何本领域已知或开发的构建体或形式。例如，在一些实施方案中，根据本发明利用的抗体呈选自但不限于完整IgA、IgG、IgE或IgM抗体的形式；双特异性或多特异性抗体(例如，等)；和/或抗体片段(优选地表现出期望的抗原结合活性的抗体片段)。本文所述的抗体可以是免疫球蛋白、重链抗体、轻链抗体、基于LRR的抗体或具有抗体样性质的其他蛋白质支架，以及本领域已知的任何其他免疫结合部分，例如Fab、Fab'、Fab'2、Fab2、Fab3、F(ab')2、Fd、Fv、Feb、scFv、SMIP、抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微型抗体、大抗体、tandab、DVD、BiTe、TandAb或它们的任何组合。不同种类抗体的亚单位结构和三维构型是本领域已知的。在一些实施方案中，抗体可以缺乏如果天然产生则将具有的共价修饰(例如，聚糖的连接)。在一些实施方案中，抗体可含有共价修饰(例如，聚糖的连接、有效负载(例如可检测部分、治疗部分、催化部分等)或其他侧基(例如，聚乙二醇等)。

抗体剂：如本文所用，术语“抗体剂”是指与特定抗原特异性结合的剂。在一些实施方案中，该术语涵盖包括足以赋予特异性结合的免疫球蛋白结构元件的任何多肽或多肽复合物。示例性抗体剂包括但不限于单克隆抗体或多克隆抗体。在一些实施方案中，抗体剂可包括具有小鼠、兔、灵长类动物或人抗体特征的一个或多个恒定区序列。在一些实施方案中，抗体剂可包括一个或多个人源化、灵长类化或嵌合的序列元件，如本领域已知。在许多实施方案中，术语“抗体剂”用于指用于在另选呈现中利用抗体结构和功能特征的本领域已知或开发的构建体或形式中的一种或多种。例如，根据本发明利用的抗体剂呈包括但不限于以下项的形式：完整IgA、IgG、IgE或IgM抗体；双特异性或多特异性抗体(例如，等)；抗体片段，诸如Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fd'片段、Fd片段和分离的CDR或它们的集合；单链Fv；多肽-Fc融合物；单结构域抗体(例如，鲨鱼单结构域抗体，诸如IgNAR或其片段)；骆驼科动物抗体；掩蔽抗体(例如，/>)；小模块免疫药物(Small ModularImmunoPharmaceuticals)(“SMIPs^TM”)；单链或串联双抗体/>VHH；微型抗体；/>锚蛋白重复蛋白或/>DART；TCR样抗体；/> 微生物蛋白质；/>或/>在一些实施方案中，抗体缺乏在天然产生时将具有的共价修饰(例如，聚糖的连接)。在一些实施方案中，抗体含有共价修饰(例如，聚糖的连接、有效负载例如可检测部分、治疗部分或催化部分)或其他侧基(例如，聚乙二醇)。在许多实施方案中，抗体剂是或包括其氨基酸序列包括本领域技术人员识别为互补决定区(CDR)的一个或多个结构元件的多肽；在一些实施方案中，抗体剂是或包括其氨基酸序列包括与在参考抗体中发现的CDR基本上相同的至少一个CDR(例如，至少一个重链CDR和/或至少一个轻链CDR)的多肽。在一些实施方案中，所包括的CDR与参考CDR基本上相同，因为与参考CDR相比，它在序列上相同或含有1-5个氨基酸取代。在一些实施方案中，所包括的CDR与参考CDR基本上相同，与参考CDR具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些实施方案中，所包括的CDR与参考CDR基本上相同，与参考CDR具有至少96％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些实施方案中，所包括的CDR与参考CDR基本上相同，因为与参考CDR相比，所包括的CDR内的至少一个氨基酸被缺失、添加或取代，但是所包括的CDR具有与参考CDR的氨基酸序列以其他方式相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所包括的CDR与参考CDR基本上相同，因为与参考CDR相比，所包括的CDR内的1-5个氨基酸被缺失、添加或取代，但是所包括的CDR具有与参考CDR在其他方面相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所包括的CDR与参考CDR基本上相同，因为与参考CDR相比，所包括的CDR内的至少一个氨基酸被取代，但是所包括的CDR具有与参考CDR的氨基酸序列在其他方面相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所包括的CDR与参考CDR基本上相同，因为与参考CDR相比，所包括的CDR内的1-5个氨基酸被缺失、添加或取代，但是所包括的CDR具有与参考CDR在其他方面相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体剂是或包括其氨基酸序列包括本领域技术人员识别为免疫球蛋白可变结构域的结构元件的多肽。在一些实施方案中，抗体剂是具有与免疫球蛋白结合结构域同源或大体同源的结合结构域的多肽蛋白。

抗体重链：如本文所用，术语“抗体重链”是指以其天然存在的构象存在于所有抗体中的两种类型多肽链中的较大者。

抗体轻链：如本文所用，术语“抗体轻链”是指以其天然存在的构象存在于所有抗体中的两种类型多肽链中的较小者。

抗原：如本文所用，术语“抗原”或“Ag”是指能够激发免疫应答的分子。该免疫应答可涉及抗体产生、特异性免疫感受态细胞的活化或这两种情况。技术人员将理解，包括几乎所有蛋白质或肽在内任何大分子都可以用作抗原。此外，抗原可以来源于重组或基因组DNA。技术人员将理解，包含编码引发免疫应答的蛋白质的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何DNA都编码如本文所用的术语“抗原”。此外，本领域技术人员将理解，抗原不需要仅由基因的全长核苷酸序列编码。显而易见的是，本发明包括但不限于使用多于一个基因的部分核苷酸序列，并且这些核苷酸序列以各种组合排列以引发期望的免疫应答。此外，技术人员将理解，抗原根本不需要由“基因”编码。显而易见的是，抗原可以合成生成或可以来源于生物样品。这样的生物样品可包括但不限于组织样品、肿瘤样品、细胞或生物流体。

抗原结合片段：如本文所用，术语“抗原结合片段”是指完整抗体的一部分，其结合完整抗体所结合的抗原。抗体的抗原结合片段包括任何天然存在的、可酶促获得的、合成的或基因工程化的特异性结合抗原以形成复合物的多肽或糖蛋白。示例性抗体片段包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv、VHH、骆驼科动物抗体，或仅VH或VL结构域)；或由抗体片段形成的多特异性抗体。在一些实施方案中，本文所述抗体的抗原结合片段是scFv。在一些实施方案中，本文所述抗体的抗原结合片段是仅VHH结构域。与全抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如，双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段可包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性结合单独的抗原或相同抗原的不同表位。抗原结合片段可通过任何方式产生。例如，在一些实施方案中，抗原结合片段通过完整抗体或抗体剂的片段化来酶促或化学产生。另选地，在一些实施方案中，抗原结合片段是重组产生的。在一些实施方案中，抗原结合片段全部或部分合成产生。在一些实施方案中，抗原结合片段具有至少约50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200个氨基酸或更大的长度。

抗体依赖性细胞毒性：如本文所用，术语“抗体依赖性细胞毒性”或“ADCC”是指其中抗体所结合的靶细胞被免疫效应细胞杀伤的现象。不希望受理论束缚，ADCC通常被理解为涉及携带Fc受体(FcR)的效应细胞识别并随后杀伤抗体包被的靶细胞(例如，在其表面上表达与抗体结合的特异性抗原的细胞)。介导ADCC的效应细胞包括免疫细胞，包括但不限于自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。

适体：如本文所用，术语“适体”是指由核酸(例如，RNA、DNA)组成的大分子，其与特定分子靶标(例如伞形拓扑聚糖)紧密结合。特定的适体可由线性核苷酸序列描述，并且长度通常为约15-60个核苷酸。不希望受任何理论束缚，设想适体中的核苷酸链形成分子内相互作用，所述分子内相互作用将分子折叠成复杂的三维形状，并且此三维形状允许适体与其靶分子的表面紧密结合。鉴于存在于所有可能的核苷酸序列范畴中的分子形状的非凡多样性，可获得用于包括蛋白质和小分子在内的广泛分子靶标阵列的适体。除高特异性之外，适体通常对其靶标具有非常高的亲和力(例如，对于蛋白质在皮摩尔至低纳摩尔范围内的亲和力)。在许多实施方案中，适体是化学稳定的，并且可以煮沸或冷冻而不丧失活性。由于其为合成分子，因此适体可进行各种修饰，这可以优化其在特定应用中的功能。例如，可对适体进行修饰以显著降低其对体内应用中使用的血液中的酶降解的敏感性。此外，可对适体进行修饰以改变其生物分布或血浆停留时间。

相关：如果一个事件或实体的存在、水平、程度、类型和/或形式与另一个事件或实体相关联，则这两个事件或实体是彼此“相关”的，如本文所用的术语。例如，如果特定实体(例如，多肽、遗传标记、代谢物或微生物)的存在、水平和/或形式与疾病、病症或疾患的发病率和/或易感性相关(例如，在相关群体中)，则该特定实体被认为与特定疾病、病症或疾患相关。在一些实施方案中，如果两个或更多个实体直接或间接相互作用，则它们彼此物理“相关”，以使得它们彼此物理靠近和/或保持彼此物理靠近。在一些实施方案中，彼此物理相关的两个或更多个实体彼此共价连接。在一些实施方案中，彼此物理相关的两个或更多个实体未彼此共价连接，而是非共价缔合，例如借助于氢键、范德华相互作用、疏水相互作用、磁性以及它们的组合来非共价缔合。

结合：如本文所用，术语“结合”是指两个或更多个实体之间或之中的非共价缔合。“直接”结合涉及各实体或部分之间的物理接触。间接结合涉及通过与一个或多个中间实体物理接触来实现的物理相互作用。两个或更多个实体之间的结合通常可以在多种情况中的任一种中评估，包括单独或在更复杂系统的环境中研究相互作用的实体或部分(例如，当与载剂实体共价缔合或以其他方式缔合时和/或在生物系统或细胞中)。

癌症：如本文所用，术语“癌症”、“恶性肿瘤”、“赘生物”、“肿瘤”和“癌”是指表现出相对异常、不受控制和/或自主生长的细胞，从而它们表现出特征在于对细胞增殖的控制显著丧失的异常生长表型。癌细胞可以局部扩散或通过血流和淋巴系统扩散到身体的其他部位。在一些实施方案中，肿瘤是或包括癌前的(例如良性的)、恶性的、转移前的、转移性的和/或非转移性的细胞。在一些实施方案中，癌症是或包括实体瘤。在一些实施方案中，癌症是或包括血液肿瘤。各种癌症的示例在本文中描述并且包括但不限于造血系统癌症，包括白血病、淋巴瘤(霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)、骨髓瘤和骨髓增生性疾病；肉瘤、黑素瘤、腺瘤、实体组织癌、口腔、咽喉、喉和肺的鳞状细胞癌、肝癌、泌尿生殖系统癌(诸如前列腺癌、宫颈癌、膀胱癌、子宫癌、子宫内膜癌和肾细胞癌)、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、皮肤或眼内黑素瘤、内分泌系统癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、头颈癌、乳腺癌、胃肠癌、神经系统癌症或良性病变如乳头状瘤，以及若干其他类型，包括本文别处描述的那些。

载剂：如本文所用，“载剂”是指与组合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂和/或媒介物。在一些示例性实施方案中，载剂包括无菌液体，诸如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。在一些实施方案中，载剂是或包含一种或多种固体组分。

CDR：如本文所用，“CDR”是指抗体可变区内的互补决定区。在重链和轻链的每个可变区中有三个CDR，对于每个可变区，它们被称为CDR1、CDR2和CDR3。“CDR的组”或“CDR组”是指在能够结合抗原的单一可变区或能够结合抗原的同源重链和轻链可变区的CDR中出现的三个或六个CDR的组。精确定义的CDR边界和长度取决于不同的分类和编号系统。本领域已经建立了用于限定CDR边界的某些系统(例如，Kabat、IMGT、Chothia或它们的组合)。因此，CDR可以由Kabat、Chothia、IMGT或本领域已知的任何其他边界定义来指代。尽管边界不同，但这些系统中的每一个在组成可变序列内的“高变区”方面具有一定程度的重叠。因此，根据这些系统的CDR定义相对于相邻框架区在长度和边界区域上可能不同(参见例如Kabat等人，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，U.S.Department ofHealth and Human Services,1992；Chothia等人(1987)J.Mol.Biol.196,901；以及MacCallum等人，J.Mol.Biol.(1996)262,732，这些文献各自全文以引用方式并入)。本领域技术人员将理解这些系统之间的差异，并且能够将CDR边界理解到理解和实践本文的权利要求和公开内容所需的程度。

化疗剂：如本文所用的术语“化疗剂”具有其本领域理解的含义，是指一种或多种促凋亡剂、细胞抑制剂和/或细胞毒性剂，例如具体地包括用于和/或推荐用于治疗一种或多种与不期望的细胞增殖相关的疾病、病症或疾患的剂。在许多实施方案中，化疗剂可用于治疗癌症。在一些实施方案中，化疗剂可以是或包括一种或多种烷基化剂、一种或多种蒽环类药物、一种或多种细胞骨架破坏剂(例如微管靶向部分，诸如紫杉烷、美登素及其类似物)、一种或多种埃博霉素、一种或多种组蛋白脱乙酰基酶抑制剂HDAC)、一种或多种拓扑异构酶抑制剂(例如，拓扑异构酶I和/或拓扑异构酶II的抑制剂)、一种或多种激酶抑制剂、一种或多种核苷酸类似物或核苷酸前体类似物、一种或多种肽抗生素、一种或多种基于铂的剂、一种或多种类维生素A、一种或多种长春花生物碱、和/或以下一者或多者的一种或多种类似物(即，共有相关的抗增殖活性)。在一些实施方案中，化疗剂可以是或包括以下一者或多者：放线菌素、全反式视黄酸、奥瑞斯他汀、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、博来霉素、硼替佐米、卡铂、卡培他滨、顺铂、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、姜黄素、阿糖胞苷、道诺霉素、多西他赛、脱氧氟尿苷、多柔比星、表柔比星、埃博霉素、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、伊马替尼、伊立替康、美登素和/或它们的类似物(例如，DM1)、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、氨甲蝶呤、米托蒽醌、美登木素、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、托泊替康、戊柔比星、长春花碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨或它们的组合。在一些实施方案中，化疗剂可用于抗体-药物缀合物的上下文中。在一些实施方案中，化疗剂是抗体-药物缀合物，其包含：hLL1-多柔比星、hRS7-SN-38、hMN-14-SN-38、hLL2-SN-38、hA20-SN-38、hPAM4-SN-38、hLL1-SN-38、hRS7-Pro-2-P-Dox、hMN-14-Pro-2-P-Dox、hLL2-Pro-2-P-Dox、hA20-Pro-2-P-Dox、hPAM4-Pro-2-P-Dox、hLL1-Pro-2-P-Dox、P4/D10-多柔比星、吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin)、本妥昔单抗维汀(brentuximab vedotin)、曲妥珠单抗美坦新(trastuzumab emtansine)、英妥珠单抗奥唑米星(inotuzumab ozogamicin)、格巴妥莫单抗维多汀(glembatumomab vedotin)、SAR3419、SAR566658、BIIB015、BT062、SGN-75、SGN-CD19A、AMG-172、AMG-595、BAY-94-9343、ASG-5ME、ASG-22ME、ASG-16M8F、MDX-1203、MLN-0264、抗PSMA ADC、RG-7450、RG-7458、RG-7593、RG-7596、RG-7598、RG-7599、RG-7600、RG-7636、ABT-414、IMGN-853、IMGN-529、伏司妥珠单抗马佛多汀(vorsetuzumab mafodotin)和罗佛珠单抗米他汀(lorvotuzumab mertansine)。

嵌合抗体：如本文所用，是指其氨基酸序列包含在第一物种中发现的VH区和VL区序列以及在不同于第一物种的第二物种中发现的恒定区序列的抗体。在许多实施方案中，嵌合抗体具有与人恒定区连接的鼠VH区和VL区。在一些实施方案中，具有与非人恒定区(例如，小鼠恒定区)连接的人VH区和VL区的抗体被称为“反向嵌合抗体”。

组合物：本领域技术人员将会理解，术语“组合物”可用于指包含一种或多种指定组分的离散物理实体。一般来讲，除非另外指明，否则组合物可以是任何形式-例如，气体、凝胶、液体或固体。

包含：本文描述为“包含”一个或多个指定要素或步骤的组合物或方法是开放式的，这意味着指定要素或步骤是必不可少的，但是可以在组合物或方法的范围内添加其他要素或步骤。为了避免繁琐，还应当理解，被描述为“包含”(或“包括”)一个或多个指定要素或步骤的任何组合物或方法还描述了相应的、更有限的“基本上由相同的指定要素或步骤组成”(或“基本上由相同的指定要素或步骤构成”)的组合物或方法，这意味着所述组合物或方法包括指定基本要素或步骤，并且还可以包括不会实质上影响所述组合物或方法的一个或多个基本和新特征的另外的要素或步骤。还应当理解，本文描述为“包含”一个或多个指定要素或步骤或“基本上由一个或多个指定要素或步骤组成”的任何组合物或方法还描述了相应的、更有限的和封闭式的“由指定要素或步骤组成”(或“由指定要素或步骤构成”)的组合物或方法，以排除任何其他未指定要素或步骤。在本文公开的任何组合物或方法中，任何指定基本要素或步骤的已知的或公开的等同物都可以替代所述要素或步骤。

保守序列修饰：如本文所用，术语“保守序列修饰”是指不会显著影响或改变含有该氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段的结合特性的氨基酸修饰。此类保守修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。可以通过本领域已知的标准技术诸如定点诱变和PCR介导的诱变来将修饰引入与各种实施方案相容的抗体中。保守氨基酸取代是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换的氨基酸取代。本领域已经定义了具有类似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有以下项的氨基酸：碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，抗体的CDR区内的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的其他氨基酸残基替换，并且可以使用本文所述的功能测定法来测试改变的抗体结合抗原的能力。

组合疗法：如本文所用，术语“组合疗法”是指其中两种或更多种不同治疗剂以重叠方案施用，使得受试者同时暴露于两种剂的那些情况。当在组合疗法中使用时，两种或更多种不同治疗剂可以同时或分开施用。这种组合施用可包括以同一剂型同时施用两种或多种治疗剂，以单独的剂型同时施用，以及分开施用。也就是说，两种或更多种治疗剂可以以同一剂型一起配制并同时施用。另选地，可同时施用两种或更多种治疗剂，其中所述剂存在于单独的制剂中。在另一个替代方案中，可以施用第一治疗剂，然后施用一种或多种附加治疗剂。在单独施用方案中，两种或更多种治疗剂可以间隔几分钟、或间隔几小时、间隔几天、或间隔几周施用。在一些实施方案中，两种或更多种治疗剂可以在间隔数小时(例如，小于约1小时、约2小时、约3小时、约4小时或约5小时)内施用。

有效量：如本文所用，“有效量”是指足以在个体中预防或治疗疾病、病症或疾患(例如，癌症)的至少一种体征和/或症状的剂量。有效用于治疗或预防用途的量将取决于例如所治疗的疾病、病症或疾患的阶段和严重程度、患者的年龄、体重和一般健康状况，以及处方医师的判断。剂量的大小也将由所选择的活性物质、施用方法、施用的时间和频率、可能伴随特定活性物质施用的任何不良副作用的存在、性质和程度，以及期望的生理作用决定。本领域技术人员将会理解，各种疾病或病症可能需要涉及多次施用的长期治疗。出于本公开的目的，所施用的治疗剂(例如，至少一种本文所述的HHLA2结合剂)的量或剂量应当足以在合理的时间范围内在受试者中实现治疗或预防反应(例如，至少一种体征或症状的严重程度或持续时间的减少或其他减轻)。例如，剂量应当足以在从施用时间起约2小时或更长时间例如约12小时至约24小时或更长时间的时间段内检测、治疗或预防癌症。在一些实施方案中，该时间段甚至更长。剂量将由一种或多种特定治疗剂的功效和受试者(例如，人)的病症以及待治疗的受试者(例如，人)的体重决定。

编码：如本文所用，术语“编码”是指多核苷酸(诸如基因、cDNA或mRNA)中的特定核苷酸序列在生物过程中用作合成其他聚合物和大分子的模板的固有特性，所述模板具有限定的核苷酸序列(例如，rRNA、tRNA或mRNA)或限定的氨基酸序列以及由此产生的生物特性。因此，如果对应于基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生蛋白质，则该基因编码该蛋白质。核苷酸序列与mRNA序列相同且通常在序列表中提供的编码链和用作基因或cDNA的转录模板的非编码链都可以被称为编码该基因或cDNA的蛋白质或其他产物。

经工程化的：如本文所用，术语“经工程化的”是指已由人工操纵的方面。例如，当不以自然界中的顺序连接在一起的两个或更多个序列通过人工操纵而在经工程化的多核苷酸中直接彼此连接时，所述多核苷酸被视为“经工程化的”。例如，在一些实施方案中，经工程化的多核苷酸包含或是在自然界中发现的与第一编码序列可操作地缔合但不与第二编码序列可操作地缔合的调控序列，所述调控序列通过人工连接而使得其与第二编码序列可操作地缔合。相比之下，如果细胞或生物体已被操纵而使得其遗传信息被改变(例如，此前不存在的新遗传物质已经被引入，例如通过转化、交配、体细胞杂交、转染、转导或其他机制，或者先前存在的遗传物质已被改变或移除，例如通过置换或缺失突变，或通过交配方案)，则所述细胞或生物体被视为“经工程化的”。在一些实施方案中，经工程化的抗体或其抗原结合片段(例如，经工程化的单克隆抗体或其抗原结合片段)包括来自在非人物种(例如，小鼠)中产生的参考抗体的VH区和/或VL区序列以及这些序列中相对于参考抗体的修饰，所述修饰旨在使它们更“类人”或更类似于人种系可变区序列。

按照惯例并且被本领域技术人员理解，工程化的多核苷酸或细胞的后代典型地仍被称为“工程化的”，尽管实际操纵是在先前实体上进行的。

表位：如本文所用，术语“表位”是指被免疫球蛋白(例如，抗体或受体)结合组分特异性识别的任何部分。在一些实施方案中，表位由抗原上的多个化学原子或基团组成。在一些实施方案中，当抗原采用相关的三维构象时，此类化学原子或基团是表面暴露的。在一些实施方案中，当抗原采用这样的构象时，此类化学原子或基团在空间上彼此物理接近。在一些实施方案中，当抗原采用另选的构象(例如，被线性化)时，至少一些此类化学原子或基团在物理上彼此分离。

表达：如本文所用，术语核酸序列的“表达”是指从核酸序列(例如，编码本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段的核酸序列)生成任何基因产物。在一些实施方案中，基因产物可以是转录物。在一些实施方案中，基因产物可以是多肽。在一些实施方案中，核酸序列的表达涉及以下项中的一种或多种：(1)从DNA序列产生RNA模板(例如，通过转录)；(2)RNA转录物的加工(例如，通过剪接、编辑、5'帽形成和/或3'端形成)；(3)将RNA翻译为多肽或蛋白质；以及/或者(4)多肽或蛋白质的翻译后修饰。

片段：如本文所用，术语“片段”是指包括整体的离散部分但缺少在整个结构中发现的一个或多个部分的结构。在一些实施方案中，片段由这样的离散部分组成。在一些实施方案中，片段由在整体中发现的特征性结构元件或部分组成或包含在整体中发现的特征性结构元件或部分。在一些实施方案中，抗原结合片段包含如在整个抗体中发现的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500个或更多个单体单元(例如，氨基酸)或者由所述单体单元组成。在一些实施方案中，抗原结合片段包含在整个抗体中发现的至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、25％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的单体单元(例如，残基)或者由所述单体单元组成。在一些实施方案中，核苷酸片段包含在整个核苷酸中发现的至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、25％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的单体单元(例如，残基)或者由所述单体单元组成。

框架区：如本文所用，术语“框架区”是指可变区减去CDR的序列。由于CDR序列可通过不同的系统来确定，因此框架序列受到相应不同解释的影响。六个CDR将重链和轻链上的框架区划分为每条链上的四个子区(FRl、FR2、FR3和FR4)，其中CDRl位于FRl与FR2之间，CDR2位于FR2与FR3之间，并且CDR3位于FR3与FR4之间。在未将特定子区指定为FR1、FR2、FR3或FR4的情况下，如其他所提及的框架区表示单一天然存在的免疫球蛋白链的可变区内的组合FR。如本文所用，FR表示四个子区中的一个子区，例如FR1表示最靠近可变区的氨基末端并且相对于CDR1处于5'的第一框架区，并且FR表示构成框架区的两个或更多个子区。

基因：如本文所用，术语“基因”是指染色体中编码产物(例如，RNA产物和/或多肽产物)的DNA序列。在一些实施方案中，基因包含编码序列(即，编码特定产物的序列)；在一些实施方案中，基因包含非编码序列。在一些实施方案中，基因可包含编码序列(例如，外显子)和非编码序列(例如，内含子)两者。在一些实施方案中，基因可包含一个或多个调控元件，其例如可以控制或影响基因表达(例如，细胞类型特异性表达和/或诱导型表达)的一个或多个方面。

同源性：如本文所用，术语“同源性”是指聚合分子之间例如核酸(例如，DNA和/或RNA)之间和/或多肽之间的总体相关性。在一些实施方案中，如果聚合物分子的序列至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％相同，则认为它们彼此“同源”。在一些实施方案中，如果聚合物分子的序列至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％相似(例如，在相应位置处含有具有相关化学特性的残基)，则认为它们彼此“同源”。如本领域技术人员将理解的，可利用多种算法来比较序列以确定它们的同源性程度，包括当考虑在不同序列中哪些残基彼此“对应”时，允许在一个序列中相对于另一个序列具有指定长度的空位。例如，两个核酸序列之间的同源性百分比的计算可以通过出于最佳比较目的而对两个序列进行比对来进行(例如，可以在第一核酸序列和第二核酸序列中的一者或二者中引入空位以实现最佳比对，并且可以出于比较目的而忽略非相应序列)。在某些实施方案中，出于比较目的而比对的序列的长度是参考序列的长度的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或基本100％。然后比较相应核苷酸位置处的核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中的相应位置相同的核苷酸占据时，则分子在该位置处是相同的；当第一序列中的位置被与第二序列中的相应位置相似的核苷酸占据时，则分子在该位置处相似。考虑到空位的数量和每个空位的长度(需要引入这些空位以对两个序列进行最佳比对)，两个序列之间的同源性百分比是这些序列共有的相同和相似位置的数量的函数。

宿主细胞：如本文所用，术语“宿主细胞”是指已将外源DNA(重组或其他方式)引入其中的细胞。本领域技术人员在阅读本公开后将理解，此类术语不仅指特定的受试细胞，而且指这种细胞的后代。因为由于突变或环境影响，某些修饰可能在后代中发生，这种后代实际上可能与亲本细胞不同，但仍包括在如本文所用的术语“宿主细胞”的范围内。在一些实施方案中，宿主细胞包括选自适于表达外源DNA(例如，重组核酸序列)的任何生命界的原核和真核细胞。示例性细胞包括原核生物和真核生物的细胞(单细胞或多细胞)、细菌细胞(例如，大肠杆菌(E.coli)、芽孢杆菌属种(Bacillus spp.)或链霉菌属种(Streptomycesspp.)的菌株)、分枝杆菌细胞、真菌细胞、酵母细胞(例如，酿酒酵母(S.cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(S.pombe)、巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)或甲醇毕赤酵(P.methanolica))、植物细胞、昆虫细胞(例如，SF-9、SF-21、杆状病毒感染的昆虫细胞或粉纹夜蛾(Trichoplusiani))、非人动物细胞、人细胞或细胞融合物(例如，杂交瘤或四重杂交瘤)。在一些实施方案中，细胞包括或是人、猴、猿、仓鼠、大鼠或小鼠细胞。在一些实施方案中，细胞是选自以下的真核细胞：CHO(例如，CHO Kl、DXB-1 1CHO、Veggie-CHO)、COS(例如，COS-7)、视网膜细胞、Vero、CV1、肾(例如，HEK293、293EBNA、MSR 293、MDCK、HaK、BHK)、HeLa、HepG2、WI38、MRC 5、Colo205、HB 8065、HL-60(例如，BHK21)、Jurkat、Daudi、A431(表皮)、CV-1、U937、3T3、L细胞、C127细胞、SP2/0、NS-0、MMT 060562、塞尔托利氏细胞、BRL 3A细胞、HT1080细胞、骨髓瘤细胞、肿瘤细胞或来源于上述细胞的细胞系。在一些实施方案中，细胞包含一个或多个病毒基因。

人抗体：如本文所用，术语“人抗体”是指具有由人免疫球蛋白序列生成(或组装)的可变区和恒定区的抗体。抗体或其抗原结合片段可被认为是“人”的，即使它们的氨基酸序列包括不是由人种系免疫球蛋白序列编码的残基或元件(例如，可通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的序列变异)，诸如在一个或多个CDR中，特别是CDR3中。

人源化：如本文所用，术语“人源化”是指抗体或其抗原结合片段，其氨基酸序列包含来自在非人物种(例如，小鼠)中产生的参考抗体的VH区和/或VL区序列，但还包含这些序列中相对于参考抗体的修饰，所述修饰旨在使它们更“类人”或更类似于人种系可变区序列。在一些实施方案中，人源化抗体或其抗原结合片段是免疫特异性结合所关注的抗原的抗体，并且具有基本上具有人抗体的氨基酸序列的FR区和基本上具有非人抗体的氨基酸序列的CDR。人源化抗体包含基本上所有的至少一个且通常两个可变结构域(Fab、Fab'、F(ab')₂、FabC、Fv)，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白(例如，供体免疫球蛋白)，并且所有或基本上所有的框架区对应于人免疫球蛋白共有序列。在一些实施方案中，人源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，人源化抗体包含轻链以及至少重链的可变结构域。抗体还可包含重链恒定区的CH1、铰链、CH2、CH3和任选的CH4区。在一些实施方案中，人源化抗体仅包含人源化VL区。在一些实施方案中，人源化抗体仅包含人源化VH区。在一些实施方案中，人源化抗体包含人源化VH区和VL区。

同一性：如本文所用，术语“同一性”是指两个聚合物分子之间、特别是两个氨基酸分子之间诸如两个多肽分子之间的亚基序列同一性。当两个氨基酸序列在相同位置处具有相同残基时；例如，如果两个多肽分子的每一个中的位置被精氨酸占据，则它们在该位置处是相同的。两个氨基酸序列在比对中在相同位置处具有相同残基的同一性或程度通常表示为百分比。两个氨基酸序列之间的同一性是匹配或相同位置的数量的直接函数；例如，如果两个序列中的一半位置(例如，长度为10个氨基酸的聚合物中的五个位置)是相同的，则两个序列具有50％同一性；如果90％的位置(例如，长度为10个氨基酸的聚合物中的九个位置)是相同的，则两个氨基酸序列具有90％序列同一性。

免疫细胞：如本文所用，术语“免疫细胞”是指参与免疫应答(例如，促进免疫应答)的细胞。免疫细胞的示例包括但不限于T细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、血小板、大颗粒淋巴细胞、朗格汉斯细胞或B淋巴细胞。

免疫检查点：如本文所用，术语“免疫检查点”是指CD4+和/或CD8+T细胞以及NK细胞的细胞表面上的一组分子，其通过下调或抑制抗肿瘤免疫应答来微调免疫应答。免疫检查点蛋白是本领域熟知的，并且包括但不限于HHLA2、KIR家族受体、CTLA-4、PD-l、VISTA、B7-H2、B7-H3、PD-L1、B7-H4、B7-H6、ICOS、HVEM、PD-L2、CD160、gp49B、PIR-B、TIM-l、TIM-3、TIM-4、LAG-3、GITR、4-IBB、OX-40、BTLA、SIRPα、CD47、CD48、2B4(CD244)、B7.1、B7.2、ILT-2、ILT-4、TIGIT、CD226、CD155，CD112、嗜乳脂蛋白和A2aR。在一些实施方案中，NK细胞包含TIGIT、CD226和/或CD96。该术语还涵盖生物活性蛋白片段，以及编码全长免疫检查点蛋白及其生物活性蛋白片段的核酸。在一些实施方案中，该术语还涵盖根据本文提供的同源性描述的任何片段。

免疫应答：如本文所用，术语“免疫应答”是指当淋巴细胞将抗原分子鉴定为外来物并且诱导抗体的形成和/或活化淋巴细胞以除去抗原时发生的对抗原的细胞和/或系统应答。在一些实施方案中，免疫细胞应答可包括免疫效应细胞(例如，T细胞)的增殖、免疫效应细胞(例如，T细胞)的细胞因子产生和/或免疫效应细胞(例如，T细胞)包含穿孔素和/或颗粒酶的细胞毒性颗粒的释放。

免疫球蛋白：如本文所用，术语“免疫球蛋白”或“Ig”是指一类起抗体作用的蛋白质。B细胞表达的抗体有时被称为BCR(B细胞受体)或抗原受体。这类蛋白质中包括的五个成员是IgA、IgG、IgM、IgD和IgE。IgA是存在于身体分泌物(诸如唾液、泪液、母乳、胃肠道分泌物以及呼吸道和泌尿生殖道的粘液分泌物)中的一抗。IgG是最常见的循环抗体。IgM是在大多数受试者的初次免疫应答中产生的主要免疫球蛋白。它是凝集、补体结合和其他抗体应答中最有效的免疫球蛋白，并且对防御细菌和病毒很重要。IgD是不具有已知抗体功能但可用作抗原受体的免疫球蛋白。IgE是通过在暴露于过敏原时引起介质从肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放来介导速发型超敏反应的免疫球蛋白。

“改善”、“增加”、“抑制”或“减少”：如本文所用，术语“改善”、“增加”、“抑制”、“减少”或其语法等同物表示相对于基线或其他参考测量的值。在一些实施方案中，适当的参考测量是或包括在特定系统中(例如，在单个个体中)在不存在(例如，之前和/或之后)特定剂或治疗或在存在适当的可比较参考剂的其他可比较条件下的测量。在一些实施方案中，适当的参考测量是或包括在已知或预期在相关剂或治疗的存在下以特定方式响应的可比较系统中的测量。

分离：如本文所用，术语“分离”是指从自然状态改变或取出的物质。例如，天然存在于活动物中的核酸或肽不是“分离的”，但与其自然状态的共存物质部分或完全分离的相同核酸或肽是“分离的”。分离的核酸或蛋白质可以基本纯化的形式存在，或者可以存在于非天然环境诸如宿主细胞中。

K_D：如本文所用，术语“K_D”是指结合剂(例如，抗体或其抗原结合片段)从与其配偶体(例如，抗体或其抗原结合片段所结合的表位)的复合物的解离常数。本文所用的术语“K_D”等于K_off除以K_on。

K_off:：如本文所用，术语“K_off”是指结合剂(例如，抗体或其抗原结合片段)从与其配偶体(例如，抗体或其抗原结合片段所结合的表位)的复合物解离的解离率常数。

K_on：如本文所用，术语“K_on”是指结合剂(例如，抗体或其抗原结合片段)与其配偶体(例如，抗体或其抗原结合片段所结合的表位)缔合的缔合率常数。

调节：如本文所用，术语“调节”是指与未治疗的受试者或未经治疗的受试者中的应答水平和/或性质相比，介导受试者中的应答水平和/或应答性质变化的可检测的增加或减少。该术语涵盖扰乱和/或影响天然信号或响应，从而在受试者、优选人中介导有益的治疗响应。

单克隆抗体：“单克隆抗体”或“mAb”是指从基本上同源的抗体群体获得的抗体，使得该群体的各个抗体是相同的并且/或者结合相同的表位，除了可能的变体抗体(例如，含有天然存在的突变或在单克隆的产生过程中产生)，此类变体通常以少量存在。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，单克隆抗体制剂中的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。

核酸：如本文所用，术语“核酸”是指至少三个核苷酸的聚合物。在一些实施方案中，核酸包括DNA。在一些实施方案中，核酸包括RNA。在一些实施方案中，核酸是单链的。在一些实施方案中，核酸是双链的。在一些实施方案中，核酸包含单链和双链部分两者。在一些实施方案中，核酸包含含有一个或多个磷酸二酯键的主链。在一些实施方案中，核酸包含含有磷酸二酯键和非磷酸二酯键的主链。例如，核酸可包含含有一个或多个硫代磷酸酯或5'-N-亚磷酰胺键和/或一个或多个肽键的主链，例如，如在肽核酸中。在一些实施方案中，核酸包含一个或多个或所有天然残基(例如，腺嘌呤、胞嘧啶、脱氧腺苷、脱氧胞苷、脱氧鸟苷、脱氧胸苷、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和/或尿嘧啶)。在一些实施方案中，核酸包含一个或多个或所有非天然残基。在一些实施方案中，非天然残基包括核苷类似物(例如，2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基胞苷、C-5丙炔基尿苷、2-氨基腺苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-丙炔基尿苷、C5-丙炔基胞苷、C5-甲基胞苷、2-氨基腺苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、0(6)-甲基鸟嘌呤、2-硫代胞苷、甲基化碱基、插入型碱基或它们的组合)。在一些实施方案中，与天然残基中的糖相比，非天然残基包含一种或多种修饰的糖(例如，2'-氟核糖、核糖、2'-脱氧核糖、阿拉伯糖和/或己糖)。在一些实施方案中，核酸具有编码功能性基因产物诸如RNA或多肽的核苷酸序列。在一些实施方案中，核酸具有包含一个或多个内含子的核苷酸序列。在一些实施方案中，核酸可通过从天然来源分离、酶促合成(例如，通过基于互补模板的聚合，例如在体内或体外)、在重组细胞或系统中复制或者化学合成来制备。在一些实施方案中，核酸的长度为至少3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、20、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000个或更多个残基。

可操作地连接：如本文所用，术语“可操作地连接”是指例如调节序列与异源核酸序列之间的使得后者表达的功能性连接。例如，当第一核酸序列与第二核酸序列处于功能关系中时，第一核酸序列与第二核酸序列可操作地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则启动子可操作地连接到编码序列。通常，可操作地连接的DNA序列是连续的，并且在需要连接两个蛋白质编码区时，处于同一阅读框中。

药学上可接受的：如本文所用，术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内适用于与人类和动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

药学上可接受的载剂：如本文所用，术语“药学上可接受的载剂”意指涉及将主题化合物从一个器官或身体的一部分携带或运输到另一个器官或身体的另一部分的药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂或溶剂包封材料。在与制剂的其他成分相容和对受试者无害的意义上，每种载剂必须是“可接受的”。可用作药学上可接受的载剂的材料的一些示例包括糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；黄芪胶粉；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；pH缓冲溶液；聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；以及药物制剂中采用的其他无毒相容性物质。

多核苷酸：如本文所用，术语“多核苷酸”是指核苷酸链。此外，核酸是核苷酸的聚合物。因此，如本文所用的核酸和多核苷酸是可互换的。本领域技术人员具有如下一般知识：核酸是可以水解成单体“核苷酸”的多核苷酸。单体核苷酸可以水解成核苷。如本文所用，多核苷酸包括但不限于通过本领域中可用的任何手段获得的所有核酸序列，包括但不限于重组手段(即使用普通克隆技术和PCR^TM等从重组文库或细胞基因组克隆核酸序列)以及通过合成手段。

多肽：如本文所用，如本文可互换使用的术语“多肽”或“蛋白质”是指通常通过肽键连接的残基(例如，氨基酸)的任何聚合链。在一些实施方案中，多肽具有天然存在的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽具有非天然存在的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽具有被工程化的氨基酸序列，因为它是通过人工的动作设计和/或产生的。多肽可包含天然氨基酸、非天然氨基酸或两者或者由天然氨基酸、非天然氨基酸或两者组成。多肽可包含仅天然氨基酸或仅非天然氨基酸或者由仅天然氨基酸或仅非天然氨基酸组成。多肽可包含D-氨基酸、L-氨基酸或两者。多肽可包括一个或多个侧基或其他修饰，例如在N-末端、C-末端或两者修饰或连接到一个或多个氨基酸侧链。在一些实施方案中，此类侧基或修饰选自乙酰化、酰胺化、脂化、甲基化或聚乙二醇化，包括它们的组合。多肽可以是环状的并且/或者可包含环状部分。在一些实施方案中，多肽不是环状的并且/或者不包含任何环状部分。在一些实施方案中，多肽是线性的。多肽可以是或包括钉合多肽。术语“多肽”可以附加到参考多肽、活性或结构的名称；在这种情况下，它在本文中用于指如下多肽，所述多肽共享相关活性或结构，因此可被认为是多肽的同一类别或家族的成员。对于每个这样的类别，本说明书提供和/或本领域技术人员将知晓所述类别内的示例性多肽，其氨基酸序列和/或功能是已知的；在一些实施方案中，此类示例性多肽是针对多肽类别或家族的参考多肽。在一些实施方案中，多肽类别或家族的成员显示出与所述类别的参考多肽的显著的序列同源性或同一性，与所述类别的参考多肽共有共同的序列基序(例如，特征序列元件)，并且/或者与所述类别的参考多肽共有共同的活性(在一些实施方案中，处于相当的水平或在指定范围内)。例如，成员多肽可以与参考多肽具有总体程度的序列同源性或同一性，即至少约30％-40％，并且通常为约50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多，并且/或者包括至少一个显示出非常高的序列同一性，通常大于90％或甚至95％、96％、97％、98％或99％的区域(例如，可以是或包含特征性序列元件的保守区域)。这样的保守区通常涵盖至少3-4个并且通常至多20个或更多个氨基酸；在一些实施方案中，保守区涵盖至少一段至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个或更多个连续氨基酸。有用的多肽可包含亲本多肽的片段或由亲本多肽的片段组成。有用的多肽可包含多个片段或由多个片段组成，每个片段在同一亲本多肽中以与在所关注的多肽中的发现不同的相对于彼此的空间排列发现(例如，在亲本中直接连接的片段可在所关注的多肽中被空间分离，反之亦然，并且/或者片段可在所关注的多肽中以与在亲本中不同的顺序存在)，使得所关注的多肽是其亲本多肽的衍生物。

单链抗体：如本文所用，术语“单链抗体”是指通过重组DNA技术形成的抗体，其中免疫球蛋白重链和轻链片段经由工程化的氨基酸跨度连接到Fv区。生成单链抗体的各种方法是已知的，包括以下文献中所述的那些方法：美国专利号4,694,778；Bird(1988)Science242:423-442；Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；Ward等人(1989)Nature 334:54454；Skerra等人(1988)Science 242:1038-1041。

重组体：如本文所用，旨在指通过重组手段设计、工程化、制备、表达、产生、制造和/或分离的多肽，诸如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的多肽；从重组组合人多肽文库分离的多肽(参见例如Hoogenboom,TIB Tech 15:62,1997；AzzazyClin.Biochem.35:425,2002；Gavilondo BioTechniques 29:128,2002；HoogenboomImmunology Today 21:371,2000)；从动物(例如，小鼠)分离的抗体，所述动物对于人免疫球蛋白基因是转基因的(参见例如Taylor Nuc.Acids Res.20:6287,1992；LittleImmunology Today 12:364,2000；Kellermann Curr.Opin.Biotechnol 13:593,2002；Murphy Proc.Natl Acad Sci USA111:5153,2104)；或通过任何其他方式制备、表达、产生或分离的多肽，所述方式涉及彼此剪接所选的序列元件。在一些实施方案中，此类所选的序列元件中的一个或多个在自然界中发现。在一些实施方案中，此类所选的序列元件中的一个或多个是在计算机上设计的。在一些实施方案中，一种或多种此类所选的序列元件由例如来自天然或合成来源的已知序列元件的诱变(例如，体内或体外)产生。例如，在一些实施方案中，重组抗体多肽由在所关注的来源生物体(例如，人、小鼠等)的种系中发现的序列组成。在一些实施方案中，重组抗体具有由诱变(例如，体外或体内，例如在转基因动物中)产生的氨基酸序列，使得重组抗体的VH区和VL区的氨基酸序列是这样的序列，其虽然源自种系VH和VL序列并与其相关，但在体内并非天然存在于种系抗体库中。

小分子：如本文所用，术语“小分子”是指低分子量有机和/或无机化合物。一般来讲，“小分子”是大小小于约5千道尔顿(kD)的分子。在一些实施方案中，小分子小于约4kD、3kD、约2kD或约1kD。在一些实施方案中，小分子小于约800道尔顿(D)、约600D、约500D、约400D、约300D、约200D或约100D。在一些实施方案中，小分子小于约2000g/mol、小于约1500g/mol、小于约1000g/mol、小于约800g/mol或小于约500g/mol。在一些实施方案中，小分子不是聚合物。在一些实施方案中，小分子不包含聚合部分。在一些实施方案中，小分子不是和/或不包含蛋白质或多肽(例如，不是寡肽或肽)。在一些实施方案中，小分子不是和/或不包含多核苷酸(例如，不是寡核苷酸)。在一些实施方案中，小分子不是和/或不包含多糖；例如，在一些实施方案中，小分子不是糖蛋白、蛋白聚糖或糖脂。在一些实施方案中，小分子不是脂质。在一些实施方案中，小分子是调节剂(例如，抑制剂或活化剂)。在一些实施方案中，小分子具有生物活性。在一些实施方案中，小分子是可检测的(例如，包含至少一个可检测部分)。在一些实施方案中，小分子是治疗剂。本领域普通技术人员在阅读本公开内容后将理解，某些小分子化合物可以多种形式中的任一种提供和/或利用，所述形式诸如晶体形式、盐形式、受保护形式、前药形式、酯形式、异构体形式(例如，光学和/或结构异构体)或同位素形式。本领域技术人员将理解，某些小分子化合物具有可以一种或多种立体异构形式存在的结构。在一些实施方案中，这样的小分子可以根据本公开以单独的对映异构体、非对映异构体或几何异构体的形式利用，或者可以为立体异构体的混合物的形式；在一些实施方案中，这样的小分子可根据本公开以外消旋混合物形式利用。本领域技术人员将理解，某些小分子化合物具有可以一种或多种互变异构形式存在的结构。在一些实施方案中，这样的小分子可根据本公开以单独互变异构体的形式或以在互变异构体形式之间相互转化的形式利用。本领域技术人员将理解，某些小分子化合物具有允许同位素取代的结构(例如，²H或³H取代H；¹¹C、¹³C或¹⁴C取代12C；¹³N或¹⁵N取代14N；¹⁷O或¹⁸O取代16O；³⁶Cl取代XXC；¹⁸F取代XXF；131I取代XXXI；等)。在一些实施方案中，这样的小分子可根据本公开以一种或多种同位素修饰形式或它们的混合物使用。在一些实施方案中，对特定小分子化合物的提及可涉及所述化合物的具体形式。在一些实施方案中，特定小分子化合物可以以盐形式(例如，酸加成盐或碱加成盐形式，视化合物而定)提供和/或使用；在一些此类实施方案中，盐形式可以是药学上可接受的盐形式。在一些实施方案中，当小分子化合物是在自然界中存在或发现的化合物时，所述化合物可以根据本公开以不同于其在自然界中存在或发现的形式提供和/或使用。本领域普通技术人员将理解，在一些实施方案中，含有绝对量或相对量的化合物或其特定形式的特定小分子化合物的制剂不同于在其存在于参考制剂或来源中时的化合物，所述绝对量或相对量不同于所关注的参考制剂中(例如，在来自所关注的来源诸如生物或环境来源的原始样品中)存在的化合物或形式的绝对或相对(相对于制剂的另一组分，包括例如化合物的另一种形式)量。因此，在一些实施方案中，例如，小分子化合物的单一立体异构体的制备被认为是与化合物的外消旋混合物不同的化合物形式；小分子化合物的特定盐被认为是与该化合物的另一种盐形式不同的形式；仅含有一种形式的含有双键的一种构象异构体((Z)或(E))的化合物的制剂被认为是与含有双键的另一种构象异构体((E)或(Z))的化合物不同的形式；或者其中一个或多个原子是与存在于参考制剂中的同位素不同的同位素的制剂被认为是不同的形式。

受试者：如本文所用，术语“受试者”是指生物体，例如哺乳动物(例如，人、非人类哺乳动物、非人灵长类动物、灵长类动物、实验动物、小鼠、大鼠、仓鼠、沙鼠、猫或狗)。在一些实施方案中，人受试者是成人、青少年或儿科受试者。在一些实施方案中，受试者患有疾病、病症或疾患，例如可以如本文提供那样治疗的疾病、病症或疾患，例如本文列出的癌症或肿瘤。在一些实施方案中，受试者易患疾病、病症或疾患。在一些实施方案中，易感受试者倾向于和/或表现出增加的发展疾病、病症或疾患的风险(与在参考受试者或群体中观察到的平均风险相比)。在一些实施方案中，受试者表现出疾病、病症或疾患的一种或多种症状。在一些实施方案中，受试者不表现出疾病、病症或疾患的特定症状(例如，疾病的临床表现)或特征。在一些实施方案中，受试者不表现出疾病、病症或疾患的任何症状或特征。在一些实施方案中，受试者是患者。在一些实施方案中，受试者是施用和/或已经施用诊断和/或疗法的个体。

基本同一性：如本文所用，术语“基本同一性”是指氨基酸或核酸序列之间的比较。如本领域普通技术人员将理解的，如果两个序列在相应的位置中含有相同的残基，则通常认为它们是“基本相同的”。如本领域所熟知的，可使用多种算法(包括可在商业计算机程序中获得的那些算法，诸如用于核苷酸序列的BLASTN以及用于氨基酸序列的BLASTP、缺口BLAST和PSI-BLAST)中的任一种来比较氨基酸或核酸序列。在一些实施方案中，如果两个序列的相应残基的至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多在相关残基段上是相同的，则认为它们是基本相同的。在一些实施方案中，相关段是完整序列。在一些实施方案中，相关段是至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500个或更多个残基。在CDR的上下文中，提及“基本同一性”通常是指具有与参考CDR的氨基酸序列具有至少80％、优选至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的CDR。

基本上：如本文所用，术语“基本上”是指表现出所关注的特征或特性的总体或接近总体程度或度的定性条件。生物学领域的普通技术人员应当理解的是生物学以及化学现象很少(如果有的话)会达到完成，和/或进行到完成或者实现或避免绝对的结果。因此，术语“基本上”在本文中用于捕获在许多生物和化学现象中固有的完整性的潜在缺乏。

患有：“患有”疾病、病症和/或疾患的个体已被诊断患有疾病、病症和/或疾患并且/或者表现出疾病、病症和/或疾患的一种或多种症状。

靶标：如本文所用，术语“靶标”是指作为所提供的方法、系统和/或组合物的受试者的体内的细胞、组织、器官或部位，例如体内需要治疗或优先被例如本文所述的HHLA2结合剂结合的细胞、组织、器官或部位。

治疗性：如本文所用，术语“治疗性”是指治疗和/或预防。治疗效果例如通过抑制、缓解或根除疾病状态获得。

治疗剂：如本文所用，短语“治疗剂”是指当向受试者施用时具有治疗效果并且/或者引起期望的生物学和/或药理学作用的任何剂。在一些实施方案中，治疗剂可以是当施用于受试者时可预防不期望的副作用的剂。在一些实施方案中，治疗剂是可用于减轻、改善、缓解、抑制、预防疾病、病症和/或疾患的一种或多种症状或特征、延迟其发作、降低其严重程度并且/或者降低其发病率的任何物质。治疗剂包括但不限于至少一种如本文所述的HHLA2结合剂。

治疗有效量：如本文所用，术语“治疗有效量”意指当作为治疗方案的一部分施用时引起期望的生物反应的物质(例如，治疗剂、组合物和/或制剂)的量。在一些实施方案中，物质的治疗有效量是当施用于患有或易患疾病、病症和/或疾患的受试者时足以治疗、诊断、预防疾病、病症和/或疾患并且/或者延迟疾病、病症和/或疾患发作的量。如本领域普通技术人员将理解的那样，物质的有效量可根据诸如期望的生物学终点、待递送的物质和/或靶细胞或组织等因素而变化。例如，用于治疗疾病、病症和/或疾患的制剂中的化合物的有效量是减轻、改善、缓解、抑制、预防疾病、病症和/或疾患的一种或多种症状或特征、延迟其发作、降低其严重程度并且/或者降低其发病率的量。在一些实施方案中，治疗有效量以单剂量施用。在一些实施方案中，需要多个单位剂量来递送治疗有效量。

治疗：如本文所用，术语“治疗”是指疾病、病症和/或疾患的一种或多种症状或特征的部分或完全缓和、改善、发作延迟、抑制、预防、缓解以及/或者发生率和/或严重度的降低。在一些实施方案中，治疗被施用于未表现出疾病、病症和/或疾患的体征或特征的受试者(例如，可以是预防性的)。在一些实施方案中，治疗被施用于仅表现出疾病、病症和/或疾患的早期或轻度体征或特征的受试者，例如出于降低发展与疾病、病症和/或疾患相关的病理学的风险的目的。在一些实施方案中，治疗被施用于表现出疾病、病症或疾患的确定、严重和/或晚期体征的受试者。在一些实施方案中，治疗包括向受试者施用至少一种本文所述的HHLA2结合剂。

肿瘤：如本文所用，术语“肿瘤”是指细胞或组织的异常生长。肿瘤可包含癌前的(例如，良性的)、恶性的、转移前的、转移性的和/或非转移性的细胞。在一些实施方案中，肿瘤与癌症相关或是癌症的表现。在一些实施方案中，肿瘤是弥散性肿瘤或液体性肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是实体瘤。

在本公开全文中，本发明的各个方面可以以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，而不应被解释为对本发明的范围进行僵化限制。因此，范围的描述应被认为具有具体公开的所有可能子范围以及该范围内的单个数值。例如，范围诸如1至6的描述应被认为具有具体公开的子范围(诸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等)以及该范围内的单个数值(例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6)。这不管范围的宽度如何都适用。

具体实施方式

本公开尤其提供了HHLA2结合剂，其导致：(i)抑制HHLA2与KIR3DL3的结合；和/或(ii)增强HHLA2与TMIGD2的结合。在一些实施方案中，HHLA2结合剂能够：(i)抑制HHLA2与KIR3DL3的结合；以及(ii)增强HHLA2与TMIGD2的结合。HHLA2是调节NK细胞和T细胞功能的B7家族成员。HHLA2在多种肿瘤和抗原呈递细胞中广泛表达，并且已被认为是NK细胞和T细胞的活化和抑制配体。HHLA2是TMIGD2的特异性配体，并且HHLA2和TMIGD2的相互作用选择性地刺激T细胞增殖和细胞因子产生。HHLA2还结合T细胞和NK细胞上的受体KIR3DL3，导致T细胞和NK细胞活化的抑制。本公开提供了HHLA2结合剂，其用于治疗包括实体瘤和血液肿瘤在内的多种癌症，并且/或者调节受试者的免疫应答。

HHLA2结合剂

本发明尤其提供了HHLA2结合剂。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂表现出以下能力：(i)抑制HHLA2与一种或多种抑制免疫应答的受体(例如TMIGD2)的结合，和/或(ii)增强HHLA2与一种或多种促进免疫应答的受体(例如TMIGD2)的结合。因此，本文所述的HHLA2结合剂特别可用于治疗包括实体瘤和血液肿瘤在内的多种癌症，以及调节受试者的免疫应答。

术语“HHLA2”或“人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2”是指B7家族的成员。HHLA2也称为HERV-H LTR-关联蛋白2、B7y、B7H7或B7-H7。HHLA2蛋白在正常人组织中的表达有限，但在人癌症中广泛表达。HHLA2是具有三个Ig样结构域(IgV-IgC-IgV)的膜蛋白，而B7家族的其他成员通常仅具有两个Ig结构域(IgV-IgC)。正常人组织中的HHLA2在肾、肠、胆囊和乳腺的上皮以及胎盘滋养层细胞中表达。在免疫系统中，HHLA2在人单核细胞和巨噬细胞上组成型表达。HHLA2调节人T细胞功能，包括例如T细胞增殖和细胞因子产生。HHLA2在来自结直肠癌、肾癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌和前列腺癌的多种人癌症中以较高水平表达。HHLA2还在人甲状腺癌、黑素瘤、肝癌、膀胱癌、结肠癌、肾癌、乳腺癌和食道癌中表达。

术语“HHLA2”包括其片段、变体(例如，等位基因变体)和衍生物。代表性人HHLA2cDNA和人HHLA2蛋白序列可从美国国家生物技术信息中心(NCBI)公开获得。人HHLA2变体包括变体1(NM_007072.3和NP_009003.1，其表示最长的转录物并且编码最长的同种型a)、变体2(NM_001282556.1和NP_001269485.1，其表示交替启动子的使用并且与变体1相比在5'UTR方面不同)、变体3(NM_001282557.1和NP_001269486.1，其表示交替启动子的使用并且与变体1相比在5'UTR方面不同)、变体4(NM_001282558.1和NP_001269487.1，其编码同种型b，表示交替启动子的使用，与变体1相比在5'UTR方面不同并且在3'编码区中缺少交替的框内外显子，得到比同种型a更短的同种型)和变体5(NM_001282559.1和NP_001269488.1，其编码同种型c，表示交替启动子的使用，并且与变体2相比具有多个差异，得到不同的5'UTR并且导致与变体1相比在交替起始密码子处的翻译起始，得到不同的N末端和比同种型a更短的同种型)。

在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂与HHLA2的结合使用诸如生物层干涉测量法(BLI)、免疫组织化学(IHC)、蛋白质印迹、细胞间流动、ELISA、表面等离子体共振(SPR)、等温滴定量热法(ITC)或本领域任何其他已知方法的测定来评估。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂以约20nM至约0.1nM，例如约10nM至约0.1nM，例如约5nM至约0.5nM的K_D结合HHLA2。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂以约20nM或更小、约15nM或更小、约10nM或更小、约9nM或更小、约8nM或更小、约7nM或更小、约6nM或更小、约5nM或更小、约4nM或更小、约3nM或更小、约2nM或更小、约1nM或更小、约0.5nM或更小、或约0.1nM或更小的K_D结合HHLA2。

在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂抑制HHLA2与KIR3DL3的结合。如本文所用的术语“KIR3DL3”或“杀伤细胞免疫球蛋白样受体3DL3”是指由NK细胞和T细胞表达的杀伤细胞免疫球蛋白样受体跨膜糖蛋白家族的成员。KIR3DL3也称为KIRC1、CD158Z、KIR3DL7和KIR44。杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因是在1Mb白细胞受体复合物(LRC)中的染色体19q13.4上发现的成簇的多态性和高度同源的基因。KIR基因簇的基因内容在单倍型之间变化，但在所有单倍型(KIR3DL3、KIR3DL1、KIR3DL4和KIR3DL2)中发现若干“框架”基因。KIR蛋白根据细胞外免疫球蛋白结构域(2D或3D)的数量和它们是否具有长(L)或短(S)胞质结构域来分类。具有长胞质结构域的KIR蛋白在配体结合后经由基于免疫酪氨酸的抑制性基序(ITIM)转导抑制性信号，而具有短胞质结构域的KIR蛋白缺少ITIM基序，而是与TYRO蛋白酪氨酸激酶结合蛋白缔合以转导活化信号。若干种KIR蛋白的配体是HLA I类分子的子集；因此，KIR蛋白被认为在免疫应答的调控中起重要作用。KIR3DL3蛋白质具有N-末端信号序列、3个Ig结构域、缺少带正电荷残基的跨膜区和含有ITIM的长胞质尾。KIR3DL3缺少在其他KIR中发现的茎区。

术语“KIR3DL3”包括其片段、变体(例如，等位基因变体)和衍生物。代表性人KIR3DL3 cDNA和人KIR3DL3多肽序列可从NCBI公开获得。例如，至少一种人KIR3DL3同种型是已知的：由转录物(NP_703144.3)编码的人KIR3DL3(NM_153443.4)。除人类以外的生物体中的KIR3DL3直系同源物的核酸和多肽序列也是已知的，包括但不限于黑猩猩KIR3DL3(XM_003316679.3和XP_003316727.3)、恒河猴KIR3DL3(NM_001104552.2和NP_001098022.1)、小鼠KIR3DL3(NM_001310690.1和NP_001297619.1、NM_177749.4和NP_808417.2、NM_177748.2和NP_808416.1)和大鼠KIR3DL3(NM_181479.2和NP_852144.1)。

在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂对HHLA2与KIR3DL3结合的抑制使用诸如细胞结合竞争测定(例如，可溶性HHLA2与表达KIR3DL3的细胞(例如，表达KIR3DL3的300.19小鼠前B白血病细胞)的结合的测定)、表面等离子体共振(SPR)的测定或本领域任何其他已知方法来评估。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂以例如相对于同位素对照的约0.8至约0.0的比率抑制HHLA2与KIR3DL3的结合。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂以例如相对于同位素对照的约0.8、约0.7、约0.6、约0.5、约0.4、约0.3、约0.2、约0.1或约0.0的比率抑制HHLA2与KIR3DL3的结合。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂消除HHLA2与KIR3DL3的结合。

在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂增强HHLA2与TMIGD2的结合。如本文所用的术语“TMIGD2”或“含跨膜和免疫球蛋白结构域2(TMIGD2)”是指具有细胞外IgV样结构域、跨膜区和具有两个酪氨酸信号传导基序的富含脯氨酸的胞质结构域的膜蛋白。TMIGD2在天然T细胞和自然杀伤(NK)细胞上组成型表达，但在T调节细胞或B细胞上不表达。TMIGD2表达随着T细胞的重复刺激而缓慢丧失。与此一致，TMIGD2仅在大约一半的记忆T细胞上表达，而TMIGD2阴性T细胞具有终末分化的衰老表型。TMIGD2还在内皮细胞和上皮细胞中表达，并且在血管生成期间起到减少细胞迁移并促进毛细管形成的作用。

术语“TMIGD2”旨在包括其片段、变体(例如，等位基因变体)和衍生物。代表性人TMIGD2 cDNA和人TMIGD2蛋白序列可从NCB I公开获得。人TMIGD2同种型包括同种型1(NM_144615.2和NP_653216.2)、同种型2(NM_001169126.1和NP_001162597.1；其与变体1相比在3'编码区中使用交替的框内剪接位点，得到与同种型1相比更短的同种型)和同种型3(NM_001308232.1和NP_001295161.1，其与变体1相比在5'编码区中缺乏交替的框内外显子，得到与同种型1相比更短的同种型)。还已知除人以外的生物体中的TMIGD2直系同源物的核酸和多肽序列，包括例如黑猩猩TMIGD2(XM_009434393.2和XP_009432668.2，以及XM_OOl138228.4和XP_001138228.3)和牛TMIGD2(XM_005208980.3和XP 005209037.1、XM_005208979.3和XP_005209036.1、以及XM_002688933.5和XP_002688979.1)。

在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂对HHLA2与TMIGD2结合的增强使用诸如细胞结合竞争测定(例如，可溶性TMIGD2与表达HHLA2的细胞(例如，表达HHLA2的300.19小鼠前B白血病细胞)的结合的测定)的测定或本领域任何其他已知方法来评估。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂以例如相对于同位素对照的约2.0至约8.0的比率增强HHLA2与TMIGD2的结合。在一些实施方案中，本文所述的HHLA2结合剂以例如相对于同位素对照的约2.0、约2.5、约3.0、约3.5、约4.0、约4.5、约5.0、约5.5、约6.0、约6.5、约7.0、约7.5、约8.0或更大的比率增强HHLA2与TMIGD2的结合。

在一些实施方案中，HHLA2结合剂是或包括抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，HHLA2结合剂是或包括有机分子(例如，小分子)。在一些实施方案中，HHLA2结合剂是或包括多肽(例如，融合多肽)。在一些实施方案中，HHLA2结合剂是或包括适体。在一些实施方案中，HHLA2结合剂是或包括核酸。在一些实施方案中，HHLA2结合剂是或包括嵌合抗原受体(例如，包含本文所述的抗HHLA2抗原结合片段诸如scFv的CAR)。

抗HHLA2抗体及其片段

本公开尤其提供了抗HHLA2抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段特异性结合HHLA2上的表位。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段可以是或包含免疫球蛋白、重链抗体、轻链抗体或具有抗体样特性的其他蛋白质支架，以及本领域已知的其他免疫结合部分，包括Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、二硫键结合的Fv片段、scFv片段、双抗体、三抗体、四抗体、微型抗体、大型抗体、tandab、BiTe或它们的任何组合。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段抑制HHLA2与KIR3DL3的结合。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段增强HHLA2与TIMGD2的结合。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含或是单克隆抗体。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含或是全长抗体，该全长抗体例如包含免疫球蛋白Fc区。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含或是多特异性抗体，该多特异性抗体例如包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中所述多个免疫球蛋白可变结构域序列中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性，并且所述多个免疫球蛋白可变结构域序列中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含或是双特异性抗体分子。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段是或已经是亲和力成熟的。

抗HHLA2抗体或其抗原结合片段可包含重链可变结构域序列(VH)和轻链可变结构域序列(VL)。在一些实施方案中，抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含四条多肽链的免疫球蛋白分子，例如两条重链和两条轻链。重链可包含VH和重链恒定结构域。重链恒定结构域可包含CH1、铰链、CH2、CH3和任选的CH4区。轻链可包含VL和轻链恒定结构域。轻链恒定结构域可包含CL结构域。

VH和/或VL可进一步细分为变异性区，称为互补决定区(CDR)，其中散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。此类VH和/或VL结构域可各自包含三个CDR和四个框架区，按以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4，其中一者或多者可如本文所述工程化。一般来讲，在每个VH中有三个CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，并且在每个VL中有三个CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。框架区和CDR的范围可使用多种众所周知的方案来定义(参见例如Kabat,E.A.等人，(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH出版号91-3242；Chothia,C.等人，(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；以及Oxford Molecular’s AbM抗体建模软件所使用的AbM定义，其各自全文据此以引用方式并入)。

本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段可来自任何类别的抗体，包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE，以及来自任何亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的抗体。本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段可以是或包含人的、人源化的、CDR移植的或体外生成的抗体。本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段可具有或包含选自例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。抗HHLA2抗体或片段可具有或包含选自例如κ或λ的轻链。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段是或包括单克隆抗体。通常，单克隆抗体是从基本上同源的抗体群体中获得的，使得构成该群体的各个抗体是基本上相同的，除了可能以少量存在的可能的天然发生的突变。因此，如本文所用的修饰语“单克隆”表示抗体的特征不是离散抗体的混合物。在一些实施方案中，针对特定表位的单克隆抗体来源于单一细胞系(例如，B细胞系)。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段是或包括多克隆抗体。与单克隆抗体不同，多克隆抗体通常从异质抗体群体中获得，使得特定群体中的抗体包括结构变异，例如对特定靶标(例如，HHLA2)上的不同表位的亲和力。产生多克隆抗体的若干种方法是本领域已知的，包括将相关抗原多次皮下和/或腹膜内注射到动物中，任选地包括共同施用一种或多种佐剂。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含一个、两个或三个VH CDR序列，所述VH CDR序列各自与表1中的VH CDR具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性；和/或(b)VL，该VL包含一个、两个或三个VL CDR序列，所述VL CDR序列各自与表1中的VL CDR具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH与表1中的VH具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性；和/或(a)VL，该VL与表1中的VL具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链，该重链与表1中的重链具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性；和/或(a)轻链，该轻链与表1中的轻链具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:1的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:2的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:14的VL CDR1氨基酸序列、SEQ IDNO:15的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:16的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:4的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:5的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:6的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含各自公开于表1中的SEQ ID NO:17的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:18的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:19的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:7的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:8的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:9的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含各自公开于表1中的SEQ ID NO:20的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:21的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:22的VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VH，该VH包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或与SEQ ID NO:10具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VL，该VL包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列或与SEQ ID NO:23具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：VH，该VH包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；以及VL，该VL包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含重链，该重链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或与SEQ ID NO:12具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：重链，该重链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；以及轻链，该轻链包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:27的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:28的VH CDR2氨基酸序列和SEQ IDNO:29的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:40的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:41的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:42的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:30的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:31的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:43的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:44的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:45的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:33的VH CDR1氨基酸序列、SEQ IDNO:34的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:35的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:46的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:47的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:48的VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VH，该VH包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列或与SEQ ID NO:36具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VL，该VL包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列或与SEQ ID NO:49具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：VH，该VH包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；以及VL，该VL包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含重链，该重链包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列或与SEQ ID NO:38具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列或与SEQ ID NO:51具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：重链，该重链包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；以及轻链，该轻链包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:53的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:54的VH CDR2氨基酸序列和SEQ IDNO:55的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:66的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:67的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:68的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:56的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:57的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:58的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:69的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:70的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:71的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:59的VH CDR1氨基酸序列、SEQ IDNO:60的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:61的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:72的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:73的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:74的VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VH，该VH包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列或与SEQ ID NO:62具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VL，该VL包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列或与SEQ ID NO:75具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：VH，该VH包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；以及VL，该VL包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含重链，该重链包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列或与SEQ ID NO:64具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列或与SEQ ID NO:77具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：重链，该重链包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；以及轻链，该轻链包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:79的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:80的VH CDR2氨基酸序列和SEQ IDNO:81的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:92的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:93的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:94的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:82的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:83的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:84的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:95的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:96的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:97的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:85的VH CDR1氨基酸序列、SEQ IDNO:86的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:87的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:98的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:99的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:100的VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VH，该VH包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列或与SEQ ID NO:88具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VL，该VL包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列或与SEQ ID NO:101具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：VH，该VH包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列；以及VL，该VL包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含重链，该重链包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列或与SEQ ID NO:90具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列或与SEQ ID NO:103具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：重链，该重链包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列；以及轻链，该轻链包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:105的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:106的VH CDR2氨基酸序列和SEQ IDNO:107的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:118的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:119的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:120的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:108的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:109的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:110的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:121的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:122的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:123的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:111的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:112的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:113的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:124的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:125的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:126的VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VH，该VH包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列或与SEQ ID NO:114具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VL，该VL包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列或与SEQ ID NO:127具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：VH，该VH包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列；以及VL，该VL包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含重链，该重链包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列或与SEQ ID NO:116具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列或与SEQ ID NO:129具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：重链，该重链包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列；以及轻链，该轻链包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:131的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:132的VH CDR2氨基酸序列和SEQ IDNO:133的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:144的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:145的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:146的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:134的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:135的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:136的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:147的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:148的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:149的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:137的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:138的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:139的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:150的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:151的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:152的VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VH，该VH包含SEQ ID NO:140的氨基酸序列或与SEQ ID NO:140具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VL，该VL包含SEQ ID NO:153的氨基酸序列或与SEQ ID NO:153具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：VH，该VH包含SEQ ID NO:140的氨基酸序列；以及VL，该VL包含SEQ ID NO:153的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含重链，该重链包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列或与SEQ ID NO:142具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列或与SEQ ID NO:155具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：重链，该重链包含SEQ ID NO:142的氨基酸序列；以及轻链，该轻链包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:157的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:158的VH CDR2氨基酸序列和SEQ IDNO:159的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:170的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:171的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:172的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:160的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:161的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:162的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:173的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:174的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:175的VL CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：(a)VH，该VH包含SEQ ID NO:163的VH CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:164的VH CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:165的VH CDR3氨基酸序列；以及(b)VL，该VL包含SEQ ID NO:176的VL CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:177的VL CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:178的VL CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VH，该VH包含SEQ ID NO:166的氨基酸序列或与SEQ ID NO:166具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含VL，该VL包含SEQ ID NO:179的氨基酸序列或与SEQ ID NO:179具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：VH，该VH包含SEQ ID NO:166的氨基酸序列；以及VL，该VL包含SEQ ID NO:179的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含重链，该重链包含SEQ ID NO:168的氨基酸序列或与SEQ ID NO:168具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列或与SEQ ID NO:181具有至少85％、90％、95％或99％或更高同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包含：重链，该重链包含SEQ ID NO:168的氨基酸序列；以及轻链，该轻链包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列。

表1.示例性抗HHLA2抗体的氨基酸和核苷酸序列。

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抗原结合片段

本公开尤其提供了抗HHLA2抗原结合片段。如本文所用，“抗HHLA2抗原结合片段”包含或是包含免疫球蛋白分子的至少一部分的任何含蛋白质或肽的分子，所述免疫球蛋白分子含有来源于本文所述任何抗体的VH或VL或HHLA2结合部分的至少一个互补决定区(CDR)。可使用本领域技术人员已知的常规技术获得抗体片段，并且以与完整抗体相同的方式针对效用筛选片段。此类功能性抗体片段可保留与HHLA2选择性结合的能力。

本文所述的抗HHLA2抗原结合片段的示例可包括：(i)Fab片段，其是包含VL、VH、CL和CH1结构域的单价片段；(ii)F(ab')2片段，其是包含通过铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其包含VH和CH1结构域；(iv)Fv片段，其包含抗体单臂的VL和VH结构域，(v)双抗体(dAb)片段，其包含VH结构域；(vi)骆驼科动物抗体或骆驼科动物可变结构域；(vii)scFv，VH和VL区的融合蛋白；或(viii)单结构域抗体。在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗原结合片段包含或是重链和轻链(例如，半抗体)。

制备方法

本公开尤其提供了制备本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段的方法。在一些实施方案中，使用展示技术诸如酵母展示、噬菌体展示或核糖体展示来鉴定本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，如本文所述HHLA2抗体或其抗原结合片段使用杂交瘤文库(例如，哺乳动物杂交瘤文库，例如小鼠杂交瘤文库)，然后进行上清液筛选来鉴定。

用于生成抗体的组合方法是本领域已知的(如描述于例如Ladner等人，美国专利号5,223,409；Kang等人，国际公布号WO 92/18619；Dower等人，国际公布号WO 91/17271；Winter等人，国际公布WO 92/20791；Markland等人，国际公布号WO 92/15679；Breitling等人，国际公布WO 93/01288；McCafferty等人，国际公布号WO 92/01047；Garrard等人，国际公布号WO 92/09690；Ladner等人，国际公布号WO 90/02809；Fuchs等人，(1991)Bio/Technology 9:1370-1372；Hay等人，(1992)Hum Antibody Hybridomas 3:81-85；Huse等人，(1989)Science 246:1275-1281；Griffths等人，(1993)EMBO J 12:725-734；Hawkins等人，(1992)J Mol Biol 226:889-896；Clackson等人，(1991)Nature 352:624-628；Gram等人，(1992)PNAS 89:3576-3580；Garrad等人，(1991)Bio/Technology 9:1373-1377；Hoogenboom等人，(1991)Nuc Acid Res 19:4133-4137；以及Barbas等人，(1991)PNAS 88:7978-7982中，所述文献各自全文据此以引用方式并入)。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段可来源于其他物种。人源化抗体是通过重组DNA技术产生的抗体，其中不需要用于抗原结合的人免疫球蛋白轻链或重链的一些或全部氨基酸(例如，可变结构域的恒定区和/或框架区)用于取代来自同源非人抗体的轻链或重链的相应氨基酸。举例来说，针对给定抗原的鼠抗体的人源化形式在重链和轻链上具有：(1)人抗体的恒定区；(2)来自人抗体可变结构域的FR；以及(3)来自鼠抗体的CDR。人FR可基于其与小鼠FR序列的最高序列同源性进行选择。必要时，可将人FR中的一个或多个残基改变为鼠抗体中相应位置的残基，以便保持人源化抗体对靶标的结合亲和力。这种改变有时称为“回复突变”。类似地，出于期望的原因，例如稳定性或对靶标的亲和性，可进行正向突变以回复成鼠序列。人源化抗体与嵌合人抗体相比通常更不可能在人中引发免疫应答，因为前者含有相当少的非人组分。

用于人源化非人抗体的方法是本领域众所周知的。用于制备根据本公开的人源化抗体的合适方法描述于例如Winter EP 0 239 400；Jones等人，Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人，Nature332:323-327(1988)；Verhoeyen等人，Science 239:1534-1536(1988)；Queen等人，Proc.Nat.Acad.ScL USA 86:10029(1989)；美国专利6,180,370；以及Orlandi等人，Proc.Natl.Acad.Sd.USA 86:3833(1989)；所述文献各自的公开内容全文以引用方式并入本文。通常，将非人(例如，鼠)CDR移植到人抗体上如下实现。编码VH和VL的cDNA从杂交瘤中分离，并且编码包含CDR的VH和VL的核酸序列通过测序确定。将编码CDR的核酸序列插入人抗体VH或VL编码序列的相应区域中，并连接到期望的同种型的人恒定区基因区段(例如，对于CH为γl，对于CL为κ)。人源化重链和轻链基因在哺乳动物宿主细胞(例如，CHO或NSO细胞)中共表达以产生可溶性人源化抗体。为了促进抗体的大规模产生，通常期望使用例如生产品系中的DHFR基因或GS基因来选择高表达子。

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包括或是人抗体。全人抗体对于人受试者的治疗性治疗可能是特别期望的。人抗体可通过本领域已知的多种方法制备，所述方法包括使用来源于人免疫球蛋白序列的抗体文库的上述噬菌体展示方法(参见例如美国专利号4,444,887和4,716,111；以及PCT公布WO 98/46645、WO 98/60433、WO98/24893、WO 98/16664、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741；所述文献各自全文以引用方式并入本文)。在例如Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Riss,(1985)和Boerner等人，J.Immunol.,147(1):86-95,(1991)中的技术可用于制备人单克隆抗体，所述文献各自全文以引用方式并入本文。

核酸

本公开尤其提供了编码本文所述HHLA2结合剂(例如，抗HHLA2抗体或其抗原结合片段)的核酸。本公开包括编码本文所公开的一种或多种重链、VH结构域、重链FR、重链CDR、重链恒定结构域、轻链、VL结构域、轻链FR、轻链CDR、轻链恒定结构域或其他免疫球蛋白样序列、抗体或其抗原结合片段的核酸。此类核酸可存在于载体中。这样的核酸可存在于细胞的基因组中，例如需要治疗的受试者的细胞或用于产生抗体的细胞，例如用于产生本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段的哺乳动物细胞。

编码本文所述HHLA2结合剂(例如，抗HHLA2抗体或其抗原结合片段)的核酸可经修饰以包含经优化以在特定细胞类型或生物体中表达的密码子。经密码子优化的序列是合成序列，并且优选地编码由经非密码子优化的亲本多核苷酸编码的相同多肽(或与全长多肽具有基本上相同的活性的全长多肽的生物活性片段)。在一些实施方案中，编码本文所述HHLA2结合剂的核酸的编码区整体地或部分地可包含改变的序列以优化特定细胞类型(例如，真核或原核细胞)的密码子使用。例如，如本文所述的人源化重链(或轻链)可变区的编码序列可被优化用于在细菌细胞中表达。另选地，可以优化编码序列以在哺乳动物细胞(例如，CHO细胞)中表达。这样的序列可被描述为经密码子优化的序列。

本公开的核酸构建体可通过本领域已知的方法插入表达载体或病毒载体中，并且核酸可以可操作地连接到表达控制序列。本公开进一步提供了包含本文所述的任何核酸或其片段的载体。可将本文所述的任何核酸或其片段克隆到任何合适的载体中，并且可用于转化或转染任何合适的宿主。载体的选择和构建它们的方法是本领域普通技术人员众所周知的(参见例如“Recombinant DNA Part D,”Methods in Enzymology，第153卷，Wu和Grossman编，Academic Press(1987))。

包括例如电泳、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染或脂质转染的常规使用的技术可用于将外源核酸(例如，DNA或RNA)引入原核或真核宿主细胞中。有利地，视情况而定并考虑载体是DNA还是RNA，载体可包含调控序列，诸如转录和/或翻译起始和/或终止密码子，其对于载体待引入的宿主类型(例如，细菌、真菌、植物或动物)是特异性的。在一些实施方案中，载体包含对于宿主细胞属具有特异性的调控序列。在一些实施方案中，载体包含对于宿主物种具有特异性的调控序列。

除了复制系统和插入的核酸，核酸构建体可包含一个或多个标记基因，其允许选择转化或转染的宿主。示例性标记基因包括例如杀生物剂抗性(例如，对抗生素或重金属的抗性)或营养缺陷型宿主中的互补以提供原养型。

表达载体可包含可操作地连接到上述分离或纯化的核酸的天然或非天然启动子。启动子例如强启动子、弱启动子、诱导型启动子、组织特异性启动子和/或发育特异性启动子的选择在本领域技术人员的技术范围内。类似地，将如上所述的核酸与启动子组合也在本领域技术人员的技术范围内。

合适的载体包括被设计用于增殖和扩增和/或表达的那些载体。例如，克隆载体可选自pUC系列、pBluescript系列(Stratagene,LaJolla,Calif.)、pET系列(Novagen,Madison,Wis.)、pGEX系列(Pharmacia Biotech,Uppsala,Sweden)或pEX系列(Clontech,Palo Alto,Calif.)。可以使用噬菌体载体，诸如λGT10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。可使用的植物表达载体的示例包括pBI110、pBI101.2、pBI101.3、pBI121或pBIN19(Clontech)。可使用的动物表达载体的示例包括pEUK-C1、pMAM或pMAMneo(Clontech)。TOPO克隆系统(Invitrogen,Carlsbad,Calif.)也可根据制造商的建议使用。

可将另外的序列添加到此类克隆和/或表达序列中，以优化它们在克隆和/或表达中的功能，以帮助分离编码本文所述HHLA2结合剂的核酸，或改善核酸向细胞中的引入。克隆载体、表达载体、适体和接头的使用是本领域众所周知的(参见例如Sambrook等人，Molecular Cloning,a Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Press,ColdSpring Harbor,N.Y.(1989)；以及Ausubel等人，Current Protocols in MolecularBiology,Greene Publishing Associates and John Wiley&Sons,New York,N.Y.(1994)，所述文献各自全文据此以引用方式并入)。

在一些实施方案中，本公开的核酸和载体是分离的和/或纯化的。本公开还提供了包含分离的或纯化的核酸的组合物，任选地以载体的形式。分离的核酸和载体可使用本领域已知的标准技术制备，包括例如碱/SDS处理、CsCl结合、柱色谱法、琼脂糖凝胶电泳和/或本领域众所周知的其他技术。所述组合物可包含如本文进一步描述的其他组分。

可使用本领域技术人员已知的用于将核酸插入载体中的任何方法构建表达载体，所述表达载体在转录和/或翻译控制信号的控制下编码本文所述的抗人HHLA2抗体或其抗原结合片段。这些方法可包括体外重组DNA和合成技术以及体内重组(参见例如Ausubel，同上；或Sambrook，同上)。

结合相同表位的抗体

在一些实施方案中，本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段包括与表1所示的HHLA2结合抗体结合相同表位的抗体和抗体片段。因此，其他抗体和抗体片段可基于它们在HHLA2结合测定中与本文所述的其他抗体交叉竞争(例如，以统计学显著的方式竞争性抑制其结合)的能力来进行鉴定。测试抗体抑制本文所述的抗体和抗体片段与HHLA2蛋白(例如，人HHLA2)结合的能力证明测试抗体可与该抗体或抗体片段竞争结合HHLA2；根据非限制性理论，这样的抗体可以结合HHLA2蛋白上与其竞争的抗体或抗体片段相同或相关(例如，结构上相似或空间上接近)的表位。在一些实施方案中，与本文所述的抗HHLA2抗体或其抗原结合片段结合HHLA2上相同表位的抗体是人或人源化单克隆抗体。此类人或人源化单克隆抗体可以如本文所述制备和分离。

治疗方法

本公开尤其提供了治疗受试者的疾病、病症或疾患(例如，本文所述的疾病、病症或疾患)的方法，该方法包括施用包含至少一种本文所述的HHLA2结合剂的药物组合物。在一些实施方案中，向患有疾病、病症或疾患的受试者施用治疗有效量的至少一种本文所述的药物组合物。

包含本文所述的至少一种HHLA2结合剂的药物组合物可用于制造用于治疗受试者的疾病、病症或疾患或刺激受试者的免疫应答的药物。包含至少一种本文所述HHLA2结合剂的药物组合物可根据本文所述的给药方案单独或与一种或多种治疗剂、程序或形式组合施用于受试者。

待用本文所述的方法治疗的受试者可以是哺乳动物，例如灵长类动物，例如人(例如，患有本文所述的疾病、病症或疾患或处于患有本文所述的疾病、病症或疾患的风险中的患者)。提供了用包含至少一种本文所述HHLA2结合剂的药物组合物治疗受试者的癌症或肿瘤(例如，减少、抑制或延迟其进展中的一种或多种)的方法。受试者可以患有成人或儿童形式的癌症。癌症可处于早期、中期或晚期，或者可以是转移性癌症。

提供了用包含至少一种本文所述HHLA2结合剂的药物组合物治疗受试者的癌症的体征或症状(例如，减少、抑制或延迟其进展中的一种或多种)的方法。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物可用于延迟癌症的发作、减缓癌症的进展或改善癌症的一种或多种体征或症状。在一些实施方案中，癌症的生理体征或症状包括或是肿瘤体积的增加、癌细胞的数目的增加、转移的数目的增加、预期寿命的减少、癌细胞增殖的增加和/或癌细胞存活的增加。在一些实施方案中，癌症的身体体征或症状包括或是皮肤损伤(例如，肿块或痣)、体重减轻、消化问题、不适、疲劳、疼痛、吞咽困难、咳嗽、不寻常的出血和/或分泌物、排便和/或排尿习惯的变化和/或精神错乱。

癌症可以包括但不限于实体瘤、血液癌症(例如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤)或转移性病变。实体瘤的示例包括恶性肿瘤，例如肉瘤和癌，例如各种器官系统的腺癌，诸如影响肺、乳腺、卵巢、淋巴、胃肠(例如结肠)、肛门、生殖器和泌尿生殖道(例如肾、尿路上皮、膀胱细胞、前列腺)、咽、CNS(例如，脑、神经或神经胶质细胞)、头和颈、皮肤(例如黑素瘤，例如皮肤黑素瘤)、胰腺和骨(例如脊索瘤)的那些。

在一些实施方案中，癌症选自肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC)(例如具有鳞状和/或非鳞状组织学的非小细胞肺癌(NSCLC)或NSCLC腺癌)或小细胞肺癌(SCLC))、皮肤癌(例如，Merkel细胞癌或黑素瘤(例如晚期黑素瘤))、卵巢癌、间皮瘤、膀胱癌、软组织肉瘤(例如血管外皮细胞瘤(HPC))、骨癌(骨肉瘤)、肾脏癌(例如肾癌(例如肾细胞癌))、肝癌(例如肝细胞癌)、胆管癌、肉瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、前列腺癌、乳腺癌(例如不表达雌激素受体、孕酮受体或Her2/neu中的一种、两种或全部的乳腺癌，例如三阴性乳腺癌)、结肠直肠癌(例如复发性结肠直肠癌或转移性结肠直肠癌，例如微卫星不稳定结肠直肠癌、微卫星稳定结肠直肠癌、错配修复熟练结肠直肠癌或错配修复缺陷结肠直肠癌)、鼻咽癌、十二指肠癌、子宫内膜癌、胰腺癌、头颈癌(例如头颈鳞状细胞癌(HNSCC))、肛门癌、胃食管癌、甲状腺癌(例如未分化型甲状腺癌)、宫颈癌(例如宫颈鳞状细胞癌)、神经内分泌肿瘤(NET)(例如非典型肺类癌瘤)、淋巴组织增生性疾病(例如移植后淋巴组织增生性疾病)、淋巴瘤(例如T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)或白血病(例如，骨髓性白血病或淋巴性白血病)。在一些实施方案中，受试者患有肾细胞癌。

在一些实施方案中，癌症是脑肿瘤，例如成胶质细胞瘤、胶质肉瘤或复发性脑肿瘤。在一些实施方案中，癌症是胰腺癌，例如晚期胰腺癌。在一些实施方案中，癌症是皮肤癌，例如黑素瘤(例如II-IV期黑素瘤、HLA-A2阳性黑素瘤、不可切除的黑素瘤或转移性黑素瘤)或Merkel细胞癌。在一些实施方案中，癌症是肾癌，例如肾细胞癌(RCC)(例如转移性肾细胞癌)。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌，例如转移性乳腺癌或IV期乳腺癌，例如三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方案中，癌症是病毒相关癌症。在一些实施方案中，癌症是肛管癌(例如肛管鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌症是宫颈癌(例如宫颈鳞状细胞癌)。在一些实施方案中，癌症是胃癌(例如EB病毒(EBV)阳性胃癌或者胃或胃食管连接癌)。在一些实施方案中，癌症是头颈癌(例如HPV阳性和阴性头颈鳞状细胞癌(SCCHN))。在一些实施方案中，癌症是鼻咽癌(NPC)。在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌，例如复发性结肠直肠癌、转移性结肠直肠癌，例如微卫星不稳定结肠直肠癌、微卫星稳定结肠直肠癌、错配修复熟练结肠直肠癌或错配修复缺陷结肠直肠癌。

在一些实施方案中，癌症是血液癌症。在一些实施方案中，癌症是白血病，例如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性白血病或急性白血病。在一些实施方案中，癌症是淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤、淋巴细胞性淋巴瘤或弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(例如复发性或难治性HL或DLBCL)。在一些实施方案中，癌症是骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤。

包含至少一种本文所述HHLA2结合剂的药物组合物的施用可以任何方便的方式(例如，注射、摄取、输液、吸入、植入或移植)进行。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物通过注射或输注施用。本文所述的药物组合物可经动脉、皮下、静脉内、皮内、肿瘤内、节内、髓内、肌内或腹膜内施用于患者。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物胃肠外(例如，静脉内、皮下、腹膜内或肌内)施用。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物通过皮下、静脉内、肌内或胸骨内输注或注射施用。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物通过肌内或皮下注射施用。本文所述的药物组合物可直接注射到受试者的炎症部位、局部疾病部位、淋巴结、器官、肿瘤或感染部位。

在一些实施方案中，至少一种本文所述的HHLA2结合剂与一种或多种其他治疗剂或形式组合使用。在一些实施方案中，所述一种或多种其他治疗剂或形式也是抗癌剂或形式。在一些实施方案中，所述组合在治疗癌症方面显示出协同效应。在治疗癌症方面显示出治疗功效的已知化合物或治疗可包括例如一种或多种化疗剂、烷基化剂、抗代谢物、抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒性抗生素、血管生成抑制剂、免疫调节剂、疫苗、基于细胞的疗法(例如同种异体或自体干细胞移植)、器官移植、放射疗法和/或外科手术。

药物组合物

本公开尤其提供了包含至少一种HHLA2结合剂与一种或多种药学上或生理学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂的组合的药物组合物。

当指示“治疗有效量”、“免疫有效量”、“抗免疫应答有效量”或“免疫应答抑制有效量”时，包含至少一种本文所述的HHLA2结合剂的药物组合物的精确量可由医师考虑患者(受试者)的年龄、体重、免疫应答和状况的个体差异来确定。

本文所述的药物组合物可包含缓冲液，包括中性缓冲盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)；碳水化合物，诸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖、葡聚糖或甘露醇；蛋白质、多肽或氨基酸(例如，甘氨酸)；抗氧化剂；螯合剂，诸如EDTA或谷胱甘肽；佐剂(例如，氢氧化铝)；以及防腐剂。在一些实施方案中，药物组合物基本上不含污染物，例如不存在可检测水平的污染物(例如，内毒素)。

本文所述的药物组合物可以适合于待治疗或预防的疾病、病症或疾患的方式施用。施用的量和频率将由诸如患者的病症以及患者的疾病、病症或疾患的类型和严重程度的因素来确定，但是合适的剂量可由临床试验确定。

本文所述的药物组合物可以呈多种形式。这些形式包括例如液体、半固体和固体剂型，诸如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)、分散体或悬浮液、脂质体和栓剂。优选的组合物可以是可注射或可输注溶液。本文所述的药物组合物可以被配制用于静脉内、皮下、皮内、肿瘤内、结内、髓内、肌内、经动脉或腹膜内施用。

在一些实施方案中，本文所述的药物组合物被配制用于肠胃外(例如，静脉内、皮下、腹膜内或肌内)施用。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物被配制用于皮下、静脉内、肌内或胸骨内注射或输注。在优选的实施方案中，本文所述的药物组合物被配制用于皮下或静脉内注射或输注。本文所述的药物组合物可以被配制用于通过使用免疫疗法中通常已知的输注技术施用(参见例如，Rosenberg等人，New Eng.J.of Med.319:1676,1988，该文献全文据此以引用方式并入)。

如本文所用，术语“肠胃外施用(parenteral administration)”和“肠胃外施用(administered parenterally)”是指除肠内和局部施用之外通常通过注射或输注进行的施用模式，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外、瘤内和胸骨内注射和输注。

在一些实施方案中，本文所述的药物组合物与骨髓移植或使用化疗剂(例如，氟达拉滨、外束放射疗法(XRT)、环磷酰胺或利妥昔单抗(Rituxan))的淋巴细胞消融疗法组合(例如，在其之前、与其同时或在其之后)施用。在某些实施方案中，受试者经历高剂量化疗的标准治疗，随后进行外周血干细胞移植。在某些实施方案中，在移植后，受试者接受本文所述的一种或多种药物组合物。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物可在手术之前或之后施用。

待施用于受试者的任何前述疗法的剂量将随着所治疗的疾病、病症或疾患并且基于特定受试者而变化。可以根据本领域接受的实践来进行针对人施用的剂量缩放。

试剂盒

本公开尤其提供了试剂盒，该试剂盒包括至少一种本文所述的HHLA2结合剂，以及使用和/或施用说明书。在一些实施方案中，试剂盒包括至少一种本文所述的HHLA2结合剂和药学上可接受的载剂，以及使用和/或施用说明书。

在一些实施方案中，试剂盒包括用于本文所述的任何方法的说明书。说明书可包括向受试者施用第一和第二药物组合物以在受试者中实现预期活性的描述。该试剂盒还可包括基于鉴定受试者是否需要治疗来选择适于治疗的受试者的说明书。在一些实施方案中，说明书包括向需要治疗的受试者施用第一和第二药物组合物的描述。

涉及本文所述的第一和第二药物组合物的说明书通常包括关于预期治疗的剂量、给药方案和施用途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。本公开的试剂盒中提供的说明书通常是标签或包装插页上的书面说明书。标签或包装插页指示药物组合物用于治疗受试者的疾病、病症或疾患、延迟所述疾病、病症或疾患的发作和/或减轻所述疾病、病症或疾患。

本文提供的试剂盒在合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶、罐、软包装等。还设想了与特定装置诸如输注装置组合使用的包装。试剂盒可具有无菌入口(例如，容器可以是具有塞子的静脉输液袋或小瓶，该塞子可被皮下注射针刺穿)。容器还可具有无菌入口。

试剂盒任选地可提供另外的组分，诸如缓冲液和解释信息。通常，试剂盒包括容器和在容器上或与容器相关联的标签或包装说明书。在一些实施方案中，本公开提供了包含上述试剂盒的内容物的制品。

以引用的方式并入

本文中提及的所有公布、专利申请、专利和其他参考文献(包括GenBank登录号)以引用方式整体并入。此外，所述材料、方法和示例仅是说明性的而非意图具有限制性。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。尽管可以在本发明的实践或测试中使用与本文所述的方法和材料类似或等同的方法和材料，但是本文描述了合适的方法和材料。

通过下列实施例进一步说明本公开。提供实施例仅用于说明目的。不应将其解释为以任何方式限制本公开的范围或内容。

实施例

提供以下实施例以便向技术人员描述如何制备和使用本文所述的方法和组合物，并且不旨在限制本公开的范围。

实施例1：某些HHLA2结合剂的表征

本实施例展示了表征HHLA2结合剂，尤其是本文所述的抗HHLA2抗体和/或其抗原结合片段的方法。本实施例进一步提供了测定和/或表征本文所述HHLA2结合剂的相关功能活性的各种方法。本文所述的示例性抗HHLA2抗体Ab-60638和Ab-60665的重链可变结构域和轻链可变结构域的比对示于图1A至图1B中。

研究了抗HHLA2抗体对重组HHLA2-Fc的avid亲和力。使用得自ForteBio的Octet系统测量抗HHLA2抗体对重组HHLA2-Fc的avid亲和力。通过在AHC传感器上捕获每种抗体，然后转移到含有100nM HHLA2-Fc抗原的溶液的孔中来测定avid亲和力。示例性抗HHLA2抗体Ab-60638和Ab-60665的avid亲和力显示出对重组HHLA2的单位数纳摩尔或更好的avid亲和力(表2和图2A至图2B)。

表2.示例性抗HHLA2抗体Ab-60638和Ab-60665的Avid亲和力测量。

使用来自Cytiva的Biacore系统测量示例性抗HHLA2抗体Ab-65885、Ab-65886、Ab-65887、Ab-65889和Ab-65890对重组HHLA2-His的单价亲和力。通过在CM5芯片上捕获每种抗体，然后添加不同浓度的HHLA2-His分析物来测定单价亲和力。示例性抗HHLA2抗体Ab-65885、Ab-65886、Ab-65887、Ab-65889和Ab-65890对重组HHLA2的单价亲和力为约750pM至约15nM(表3)。

表3.示例性抗HHLA2抗体Ab-65885、Ab-65886、Ab-65887、Ab-65889和Ab-65890的单价亲和力测量。

研究了抗HHLA2抗体结合过度表达人HHLA2的300.19小鼠前B白血病细胞的能力。将300.19-人HHLA2细胞与15μg/ml的每种抗体在冰上孵育30分钟，然后添加PE缀合的抗人第二抗体的1:10稀释液。流式细胞术直方图展示了示例性抗HHLA2抗体Ab-60638和Ab-60665与过度表达人HHLA2的300.19细胞结合的能力(表4和图3A至图3B)。数据显示为中值荧光强度(MFI)和相对于背景的倍数(FOB)。

表4.示例性抗HHLA2抗体Ab-60638和Ab-60665的流式细胞术直方图的结果。

研究了抗HHLA2抗体阻断HHLA2与KIR3DL3的结合并增强HHLA2与TMIGD2的结合的能力。将总共10μg/mL的IgG与4μg/mL生物素化人HHLA2-Fc或TMIGD2-Fc在冰上孵育30分钟，然后分别添加到表达KIR3DL3或HHLA2的300.19小鼠前B白血病细胞中，并继续在冰上孵育30分钟。添加Alexa Fluor 633缀合的链霉抗生物素蛋白作为第二检测试剂。流式细胞术数据展示了示例性抗HHLA2抗体完全阻断HHLA2与KIR3DL3的结合，同时增加HHLA2与TMIGD2的结合的能力(表5以及图4A至图4B和图5A至图5B)。这些数据表明，本文所述的抗HHLA2抗体能够：(i)抑制HHLA2与KIR3DL3的结合；以及(ii)增强HHLA2与TMIGD2的结合。

表5.阻断HHLA2-Fc与过度表达KIR3DL3的300.19细胞的结合并增强TMIGD2-Fc与过度表达HHLA2的300.19细胞的结合的示例性抗HHLA2抗体Ab-60638和Ab-60665的流式细胞术结果。

等效案

本领域技术人员应理解，本领域技术人员将容易想到对本公开的各种改变、修改和改进。此类改变、修改和改进旨在成为本公开的一部分，并且旨在落入本发明的精神和范围内。因此，前述描述和附图仅是示例性的，并且本公开中描述的任何发明均由所附权利要求书进一步详细描述。

本领域技术人员应理解可归因于本文所述的测定或其他方法中获得的值的典型的标准偏差或误差。本文中为了描述本发明的背景并提供关于其实践的额外细节所引用的出版物、网址和其他参考材料由此以引用的方式整体并入。

Claims (44)

1.一种HHLA2结合剂，其能够：

(i)抑制HHLA2与KIR3DL3的结合；以及

(ii)增强HHLA2与TMIGD2的结合。

2.如权利要求1所述的HHLA2结合剂，其中所述HHLA2结合剂是或包括抗体或其抗原结合片段、小分子、多肽或适体。

3.如权利要求2所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包括：

(i)嵌合抗体、人抗体或人源化抗体，或其抗原结合片段；

(ii)单特异性抗体或双特异性抗体，或其抗原结合片段；和/或

(iii)单克隆抗体或其抗原结合片段。

4.如权利要求2或3所述的HHLA2结合剂，其中所述抗原结合片段包括scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fc、纳米抗体或骆驼科动物抗体。

5.如权利要求2至4中任一项所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(i)重链恒定区，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，和/或

(ii)轻链恒定区，所述轻链恒定区选自κ或λ的轻链恒定区。

6.如权利要求2至5中任一项所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(a)重链可变区(VH)，所述VH包含一个、两个或三个VH CDR序列，所述VH CDR序列各自与表1的VH CDR具有至少约90％的同一性；和/或

(b)轻链可变区(VL)，所述VL包含一个、两个或三个VL CDR序列，所述VL CDR序列各自与表1的VL CDR具有至少约90％的同一性。

7.如权利要求6所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(a)VH，所述VH包含一个、两个或三个VH CDR序列，所述VH CDR序列各自与表1的VH CDR具有至少约91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性；和/或

(b)VL，所述VL包含一个、两个或三个VL CDR序列，所述VL CDR序列各自与表1的VL CDR具有至少约91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性。

8.如权利要求7所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(a)VH，所述VH包含一个、两个或三个VH CDR序列，所述VH CDR序列各自包含表1的VHCDR或由其组成；和/或

(b)VL，所述VL包含一个、两个或三个VL CDR序列，所述VL CDR序列各自包含表1的VLCDR或由其组成。

9.如权利要求2至7中任一项所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(a)VH，所述VH与表1的VH具有至少约90％或更高的同一性；和/或

(b)VL，所述VL与表1的VL具有至少约90％或更高的同一性。

10.如权利要求9所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(a)VH，所述VH与表1的VH具有至少约95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性；和/或

(b)VL，所述VL与表1的VL具有至少约95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性。

11.如权利要求10所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(a)VH，所述VH包含表1的VH或由其组成；和/或

(b)VL，所述VL包含表1的VL或由其组成。

12.如权利要求2至11中任一项所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(a)重链，所述重链与表1的重链具有至少约90％或更高的同一性；和/或

(b)轻链，所述轻链与表1的轻链具有至少约90％或更高的同一性。

13.如权利要求12所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(a)重链，所述重链与表1的重链具有至少约95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性；和/或

(b)轻链，所述轻链与表1的轻链具有至少约95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高的同一性。

14.如权利要求13所述的HHLA2结合剂，其中所述抗体或其抗原结合片段是或包含：

(a)重链，所述重链包含表1的重链或由其组成；和/或

(b)轻链，所述轻链包含表1的轻链或由其组成。

15.一种剂，所述剂与上述权利要求中任一项所述的HHLA2结合剂结合和/或竞争结合HHLA2上的相同表位。

16.如上述权利要求中任一项所述的HHLA2结合剂，其增强HHLA2与天然免疫效应细胞中的TMIGD2的结合。

17.如上述权利要求中任一项所述的HHLA2结合剂，其阻断HHLA2与耗竭的免疫效应细胞中的KIR3DL3的结合。

18.如权利要求16或17所述的HHLA2结合剂，其中所述免疫效应细胞包括或是T细胞和/或NK细胞。

19.如权利要求18所述的HHLA2结合剂，其中所述T细胞包括或是CD4+T细胞和/或CD8+T细胞。

20.如上述权利要求中任一项所述的HHLA2结合剂，其以约15nM或更小的K_D结合HHLA2。

21.如上述权利要求中任一项所述的HHLA2结合剂，其以背景的至少约50倍至约800倍的亲和力结合人HHLA2。

22.如上述权利要求中任一项所述的HHLA2结合剂，其以大于约2的比率增强HHLA2与TMIGD2的结合。

23.一种药物组合物，其包含至少一种上述权利要求中任一项所述的HHLA2结合剂以及药学上可接受的载剂。

24.一种治疗患有疾病、病症或疾患的受试者的方法，其包括：施用治疗有效量的至少一种权利要求1至22中任一项所述的HHLA2结合剂或权利要求23所述的药物组合物。

25.一种调节受试者的免疫应答的方法，其包括：施用治疗有效量的至少一种权利要求1至22中任一项所述的HHLA2结合剂或权利要求23所述的药物组合物。

26.如权利要求24或25所述的方法，其中所述受试者患有癌症或处于发展癌症的风险中。

27.如权利要求26所述的方法，其中所述受试者患有实体瘤或血液癌症。

28.如权利要求27所述的方法，其中所述实体瘤是或包括以下中的一种或多种：肾癌、骨癌、皮肤癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肺癌、卵巢癌、肝癌、胆管癌或甲状腺癌。

29.如权利要求27所述的方法，其中所述血液癌症包括或是白血病或淋巴瘤。

30.如权利要求29所述的方法，其中所述白血病包括或是急性淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性白血病或急性白血病。

31.如权利要求29所述的方法，其中所述淋巴瘤包括或是霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤、淋巴细胞性淋巴瘤或弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。

32.如权利要求24至31中任一项所述的方法，其中所述疾病、病症或疾患与异常HHLA2表达相关。

33.如权利要求24至32中任一项所述的方法，其中所述HHLA2结合剂肠胃外施用。

34.如权利要求33所述的方法，其中所述肠胃外施用是或包括皮下、静脉内、肌内或胸骨内注射或输注。

35.如权利要求24至32中任一项所述的方法，其中所述HHLA2结合剂与第二剂组合施用。

36.一种核酸，其编码至少一种权利要求1至22任一项所述的HHLA2结合剂或其抗原结合片段。

37.一种表达载体，其包含至少一种权利要求36所述的核酸。

38.一种宿主细胞，其包含或表达至少一种权利要求1至22中任一项所述的HHLA2结合剂，包含至少一种权利要求36所述的核酸，或包含至少一种权利要求37所述的表达载体。

39.一种制备HHLA2结合剂的方法，其包括：

(i)在适于表达所述HHLA2结合剂的条件下培养包含至少一种权利要求36所述的核酸或至少一种权利要求37所述的表达载体的宿主细胞，以及

(ii)回收所述HHLA2结合剂。

40.一种检测样品中HHLA2多肽的存在或水平的方法，其包括：使用至少一种权利要求1至22中任一项所述的HHLA2结合剂检测所述样品中的所述HHLA2多肽。

41.一种试剂盒，其包括至少一种权利要求1至22中任一项所述的HHLA2结合剂和使用和/或施用说明书。

42.如权利要求41所述的试剂盒，其中所述HHLA2结合剂与HHLA2多肽形成复合物。

43.如权利要求42所述的试剂盒，其中所述复合物通过包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和/或蛋白质印迹的测定进行检测。

44.如权利要求41至43中任一项所述的试剂盒，其中所述HHLA2结合剂被直接标记。