CN116916948A - 用于癌症疗法的双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体 - Google Patents
用于癌症疗法的双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116916948A CN116916948A CN202180073525.6A CN202180073525A CN116916948A CN 116916948 A CN116916948 A CN 116916948A CN 202180073525 A CN202180073525 A CN 202180073525A CN 116916948 A CN116916948 A CN 116916948A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- icar
- seq
- aar
- construct
- bicistronic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 1458
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 title abstract description 17
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 title description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 49
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims description 384
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 claims description 337
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 327
- 241001474033 Acar Species 0.000 claims description 292
- 101000984190 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 Proteins 0.000 claims description 240
- 102100025584 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 Human genes 0.000 claims description 240
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 184
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 100
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 100
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 100
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 100
- 101001027081 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL1 Proteins 0.000 claims description 98
- 102100037363 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL1 Human genes 0.000 claims description 98
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 claims description 66
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 50
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 49
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 40
- 206010034016 Paronychia Diseases 0.000 claims description 39
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 37
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 37
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 claims description 34
- 102100029390 CMRF35-like molecule 1 Human genes 0.000 claims description 34
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 claims description 34
- 101000990055 Homo sapiens CMRF35-like molecule 1 Proteins 0.000 claims description 34
- 101000945371 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL2 Proteins 0.000 claims description 34
- 101000984189 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Proteins 0.000 claims description 34
- 102100033599 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL2 Human genes 0.000 claims description 34
- 102100033627 Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL1 Human genes 0.000 claims description 34
- 102100025583 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Human genes 0.000 claims description 34
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 34
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100024263 CD160 antigen Human genes 0.000 claims description 33
- 108010062802 CD66 antigens Proteins 0.000 claims description 33
- 102100024533 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100021396 Cell surface glycoprotein CD200 receptor 1 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100031511 Fc receptor-like protein 2 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100031512 Fc receptor-like protein 3 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100031513 Fc receptor-like protein 4 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100031507 Fc receptor-like protein 5 Human genes 0.000 claims description 33
- 101150032879 Fcrl5 gene Proteins 0.000 claims description 33
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 claims description 33
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000761938 Homo sapiens CD160 antigen Proteins 0.000 claims description 33
- 101000969553 Homo sapiens Cell surface glycoprotein CD200 receptor 1 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000892451 Homo sapiens Fc receptor-like B Proteins 0.000 claims description 33
- 101000846911 Homo sapiens Fc receptor-like protein 2 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000846910 Homo sapiens Fc receptor-like protein 3 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000846909 Homo sapiens Fc receptor-like protein 4 Proteins 0.000 claims description 33
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000945333 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL3 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000945331 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL4 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000945337 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL5A Proteins 0.000 claims description 33
- 101000945490 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL2 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000945493 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL3 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000984192 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 3 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000984186 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000984185 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 5 Proteins 0.000 claims description 33
- 101001138062 Homo sapiens Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Proteins 0.000 claims description 33
- 101001116302 Homo sapiens Platelet endothelial cell adhesion molecule Proteins 0.000 claims description 33
- 101000633778 Homo sapiens SLAM family member 5 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000836954 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000836877 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 11 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000836875 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 12 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000863900 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 5 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000863880 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 6 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000863882 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 7 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000863884 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 8 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000863883 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 9 Proteins 0.000 claims description 33
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 claims description 33
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 claims description 33
- 102100033634 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL3 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100033633 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL4 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100033629 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL5A Human genes 0.000 claims description 33
- 102100034840 Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL2 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100034834 Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL3 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100025582 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 3 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100025578 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100025577 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 5 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100020943 Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100029216 SLAM family member 5 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100027164 Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100027125 Sialic acid-binding Ig-like lectin 11 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100027093 Sialic acid-binding Ig-like lectin 12 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100029957 Sialic acid-binding Ig-like lectin 5 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100029947 Sialic acid-binding Ig-like lectin 6 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100029946 Sialic acid-binding Ig-like lectin 7 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100029964 Sialic acid-binding Ig-like lectin 8 Human genes 0.000 claims description 33
- 102100029965 Sialic acid-binding Ig-like lectin 9 Human genes 0.000 claims description 33
- 108010074687 Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family Member 1 Proteins 0.000 claims description 33
- 102100029215 Signaling lymphocytic activation molecule Human genes 0.000 claims description 33
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 claims description 33
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 claims description 33
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 102100031381 Fc receptor-like A Human genes 0.000 claims description 30
- 101150051800 Fcrl1 gene Proteins 0.000 claims description 30
- 101150032412 Fcrla gene Proteins 0.000 claims description 30
- 101000945351 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL1 Proteins 0.000 claims description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 29
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 24
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 23
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 23
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 20
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 19
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 14
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 claims description 13
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 claims description 13
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 claims description 13
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 13
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims description 12
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 12
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 claims description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 claims description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 9
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 claims description 9
- -1 fcgriiB Proteins 0.000 claims description 7
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 claims description 6
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 6
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 6
- 229950008001 matuzumab Drugs 0.000 claims description 6
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 claims description 6
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150036449 SIRPA gene Proteins 0.000 claims description 5
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims description 5
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims description 5
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 claims description 4
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 208000020990 adrenal cortex carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 4
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 claims description 4
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 claims description 3
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 claims description 3
- 102100028970 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Human genes 0.000 claims description 3
- 102100028966 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain F Human genes 0.000 claims description 3
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 claims description 3
- 102100029966 HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Human genes 0.000 claims description 3
- 102100036242 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Human genes 0.000 claims description 3
- 102100036117 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 2 chain Human genes 0.000 claims description 3
- 102100028640 HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 5 chain Human genes 0.000 claims description 3
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 claims description 3
- 108010086377 HLA-A3 Antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 claims description 3
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 claims description 3
- 108010093061 HLA-DPA1 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 108010086786 HLA-DQA1 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 claims description 3
- 108010016996 HLA-DRB5 Chains Proteins 0.000 claims description 3
- 108010024164 HLA-G Antigens Proteins 0.000 claims description 3
- 101000986085 Homo sapiens HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Proteins 0.000 claims description 3
- 101000986080 Homo sapiens HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain F Proteins 0.000 claims description 3
- 101000930799 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 2 chain Proteins 0.000 claims description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 claims description 3
- NTJTXGBCDNPQIV-UHFFFAOYSA-N 4-oxaldehydoylbenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C(=O)C=O)C=C1 NTJTXGBCDNPQIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010001197 Adenocarcinoma of the cervix Diseases 0.000 claims description 2
- 208000034246 Adenocarcinoma of the cervix uteri Diseases 0.000 claims description 2
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017897 Carcinoma of esophagus Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000030808 Clear cell renal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 claims description 2
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061332 Paraganglion neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 claims description 2
- 208000034254 Squamous cell carcinoma of the cervix uteri Diseases 0.000 claims description 2
- 238000004833 X-ray photoelectron spectroscopy Methods 0.000 claims description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007128 adrenocortical carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005084 bladder transitional cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001528 bladder urothelial carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000006662 cervical adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006612 cervical squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010240 chromophobe renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010073251 clear cell renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005619 esophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006585 gastric adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 claims description 2
- 208000024312 invasive carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000030173 low grade glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 claims description 2
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010198 papillary carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007312 paraganglioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002381 testicular Effects 0.000 claims description 2
- 208000025421 tumor of uterus Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims description 2
- XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L zinc stearate Chemical compound [Zn+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 6
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims 1
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 4
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 abstract description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 191
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 48
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 36
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 32
- 101000863873 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type substrate 1 Proteins 0.000 description 28
- 102100029948 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type substrate 1 Human genes 0.000 description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 28
- 101100510617 Caenorhabditis elegans sel-8 gene Proteins 0.000 description 27
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 22
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 22
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical group NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 21
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 10
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 10
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 8
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 8
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 238000012552 review Methods 0.000 description 5
- 102200091901 rs141733599 Human genes 0.000 description 5
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 4
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 4
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 4
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- UAGIDIZQJQHUEH-UHFFFAOYSA-N stenophyllolide diacetate Natural products CC(=O)OCC1=C/C2OC(=O)C(=C)C2CC(OC(=O)C)C(=CCC1)C UAGIDIZQJQHUEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 3
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 3
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 3
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 102220222416 rs749443090 Human genes 0.000 description 3
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 2
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 101150106931 IFNG gene Proteins 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000012750 in vivo screening Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229950010203 nimotuzumab Drugs 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 101000878595 Arabidopsis thaliana Squalene synthase 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011357 CAR T-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091062157 Cis-regulatory element Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 101000901669 Homo sapiens CMRF35-like molecule 8 Proteins 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010017736 Leukocyte Immunoglobulin-like Receptor B1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004569 Leukocyte Immunoglobulin-like Receptor B1 Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 241001420369 Thosea Species 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- SAZUGELZHZOXHB-UHFFFAOYSA-N acecarbromal Chemical compound CCC(Br)(CC)C(=O)NC(=O)NC(C)=O SAZUGELZHZOXHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229950001537 amatuximab Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 210000004405 cytokine-induced killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229950005646 imgatuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000513 necitumumab Drugs 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- FVRDYQYEVDDKCR-DBRKOABJSA-N tiazofurine Chemical compound NC(=O)C1=CSC([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)=N1 FVRDYQYEVDDKCR-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 230000004222 uncontrolled growth Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及通过采用双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体以在癌症治疗疗法中使用的癌症免疫疗法领域。
Description
相关申请的交叉引用
本申请根据35 U.S.C.§119要求2021年4月22日提交的美国专利申请号63/178,452和2020年9月4日提交的美国专利申请号63/074,812的优先权，这两项专利申请都通过援引以其全文明确并入本文。
技术领域
本发明涉及通过采用与激活性嵌合抗原受体(aCAR)配对的抑制性嵌合抗原受体(iCAR)以在癌症治疗疗法中使用的癌症免疫疗法领域。
背景技术
鉴定仅由肿瘤细胞而非健康组织表达的可靶向抗原无疑是当今癌症免疫疗法的主要挑战。T细胞能够根除肿瘤细胞的临床证据来自于大量评价利用T细胞治疗癌症的高度多样化方法的研究(Rosenberg和Restifo,Science[科学],348(6230):62-68(2015))。这些方法采用骨髓移植伴供体淋巴细胞输注、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的过继转移、经由CAR将T细胞基因重定向到预选抗原进行治疗(Gross和Eshhar,Annual Review of Pharmacologyand Toxicology[药理学与毒理学年评],56:59-83,(2016))或T细胞受体(TCR)、使用免疫检查点抑制剂、BiTE(双特异性T细胞接合分子)技术(Einsele,H.等人,Cancer[癌症],126(14):3192-3201(2020))或主动接种疫苗。其中，基因工程化T细胞的使用和主动免疫的不同策略需要关于有可能产生持久临床反应但副作用最小的候选抗原的预先存在的信息。然而，正如S.Rosenberg的综述的标题所述，“Finding suitable targets is the majorobstacle to cancer gene therapy[寻找合适的靶标是癌症基因疗法的主要障碍]”(Rosenberg,Cancer Gene Therapy[癌症基因疗法],21:45–47(2014))。
使用嵌合抗原受体(或CAR)以不依赖于MHC的方式针对所选择的抗原基因重定向T细胞(或免疫系统的其他杀伤细胞，诸如自然杀伤(NK)细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞)的概念是由Gross和Eshhar在20世纪80年代末首次提出的(Gross等人,PNAS[美国国家科学院院刊],86(24):10024-1002(1989))。它们是由编码细胞外单链抗体可变片段(scFv)的嵌合基因合成产生的，该可变片段通过柔性铰链和跨膜结构域与共刺激结构域和信号传导组分融合，这些信号传导组分包括能够激活T细胞的CD3-ζ或FcRγ链的基于免疫受体酪氨酸的激活基序。目前，CAR正在进行几十项临床试验的研究，并且已经在B细胞恶性肿瘤中显示出极高的功效(Dotti等人,2014；Gill和June,263(1):68-89(2015)；Gross和Eshhar,AnnualReview of Pharmacology and Toxicology[药理学与毒理学年评],56:59-83,2016)。CAR-T细胞疗法的安全性在很大程度上由其区分肿瘤和健康组织的能力来决定。靶向实体瘤的主要风险以及已经在临床和临床前研究中报告的不良自身免疫效应的直接原因是由靶抗原的肿瘤外表达引起的脱瘤(off-tumor)、在靶(on-target)毒性(在综述(Gross和Eshhar,2016b)和(Klebanoff等人,Nature Medicine[自然医学]22:26–36(2016))中详细阐述)。
尽管无疑很吸引人，但以前这些基于CAR的方法需要调整CAR scFv的亲和力以选择性地结合肿瘤中的高水平的抗原，同时最大限度地减少对健康组织中较低水平的抗原的识别。另外，需要平衡激活信号和共刺激信号两者的幅度，以实现有效的在靶、在瘤T细胞反应性。值得注意的是，在B细胞恶性肿瘤中，CAR靶向B细胞独有的抗原，不需要调整亲和力或T细胞信号传导。对于实体瘤，这种平衡是否可以在临床环境中常规实现是值得怀疑的。
当由CAR重定向的杀伤细胞靶向的肿瘤抗原与正常组织共享时，就会出现脱瘤反应性。然而，如果正常组织表达另一种不存在于肿瘤上的表面抗原，则它可以被含有抑制性信号传导部分的抑制性CAR(iCAR)靶向，该抑制性信号传导部分在接合时阻止通过激活性CAR(aCAR)进行的T细胞激活。因此，aCAR和iCAR的共表达将引导杀伤细胞靶向肿瘤，同时使正常组织得以幸免。
iCAR没有激活结构域(诸如FcRγ或CD3-ζ)，而是具有源自可以拮抗T细胞激活的抑制性受体(诸如CTLA-4、PD-1或NK抑制性受体)的信号传导结构域。
本领域仍然需要癌症疗法，特别是包含iCAR以便限制脱靶效应的疗法。本发明通过提供单顺反子aCAR和iCAR构建体或包含此类iCAR并且可用于癌症治疗的双顺反子构建体的共转导来满足该需求。
发明内容
本发明提供了用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体及其用途。
本发明提供了用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，该构建体包含：
i.iCAR部分，其中该iCAR部分包含：
a.任选地处于VH-VL或VL-VH取向的iCAR单链可变片段(scFv)组分；
b.iCAR铰链结构域组分；
c.iCAR跨膜(TM)结构域组分；
d.iCAR抑制结构域组分；以及
ii.aCAR部分，其中该iCAR部分包含：
a.任选地处于VH-VL或VL-VH取向的aCAR单链可变片段(scFv)组分；
b.aCAR铰链结构域组分；
c.aCAR共刺激结构域组分；
d.aCAR激活信号传导结构域；以及
iii.连接(i)中的该iCAR部分和(ii)中的该aCAR部分的接头。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，以任一取向连接VH-VL或VL-VH的接头包括一个或多个选自由以下项组成的组的接头：(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)、G4S(SEQ ID NO:153)、(G4S)X3(SEQ ID NO:154)和Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv组分靶向HLA抗原。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，HLA抗原选自由以下项组成的组：HLA-A2、HLA-A3、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-E、HLA-F、HLA-DPA1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DQB2、HLA-DRB1和HLA-DRB5。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv组分选自由以下项组成的组：BB7.2、3PF12、3PF12/C4、3PF12/F12、3PF12/B11、W6/32、BBM.1、SN66E3、Ha5C2.A2、MWB1、MWB1-mod、Hz.BB7.2VH1-69_A18VK、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,48)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,69)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67,69)_A18、Hz.BB7.2VH1-3_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(48)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(67)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(69)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(71)_A18、Hz.BB7.2VH1-3(73)_A18、MWB1.2、SN66E3.2和SN66E3.3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv组分是BB7.2。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自BB7.2的Vh和Vl(SEQ ID NO:37和38)或来自SEQ ID NO:37和38的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-69_A18VK的Vh和Vl(SEQ ID NO:57和58)或来自SEQ ID NO:57和58的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，其中iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-69(27,30)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:59和60)或来自SEQ ID NO:59和60的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-69(27,30,48)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:61和62)或来自SEQ ID NO:61和62的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-69(27,30,67)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:63和64)或来自SEQ ID NO:63和64的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-69(27,30,69)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:65和66)或来自SEQ ID NO:65和66的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-69(27,30,67,69)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:67和68)或来自SEQ ID NO:67和68的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-3_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:69和70)或来自SEQ ID NO:69和70的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-3(48)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:71和72)或来自SEQ ID NO:71和72的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-3(67)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:73和74)或来自SEQ ID NO:73和74的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-3(69)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:75和76)或来自SEQ ID NO:75和76的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-3(71)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:77和78)或来自SEQ ID NO:77和78的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2VH1-3(73)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:79和80)或来自SEQ ID NO:79和80的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv是SEQ ID NO:167的BB7.2。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv组分是3PF12。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自3PF12/C4的Vh和Vl(SEQ ID NO:39和40)或来自SEQ ID NO:39和40的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自3PF12/F12的Vh和Vl(SEQ ID NO:41和42)或来自SEQ ID NO:41和42的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，其中iCAR scFv包含来自3PF12/B11的Vh和Vl(SEQ ID NO:43和44)或来自SEQ IDNO:43和44的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv是SEQ ID NO:168的3PF12。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv组分是SN66E3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自SN66E3.1的Vh和Vl(SEQ ID NO:49和50)或来自SEQ ID NO:49和50的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv是SEQ ID NO:169的SN66E3.1。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自SN66E3.2的Vh和Vl(SEQ ID NO:165和166)或来自SEQ IDNO:165和166的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv是SEQ ID NO:285的SN66E3.2。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自SN66E3.3的Vh和Vl(SEQ ID NO:283和284)或来自SEQ IDNO:283和284的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv是SEQ ID NO:286的SN66E3.3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv组分是W6/32。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自W6/32的Vh和Vl(SEQ ID NO:45和46)或来自SEQ ID NO:45和46的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv组分是BBM.1。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自BBM.1的Vh和Vl(SEQ ID NO:47和48)或来自SEQ ID NO:47和48的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv组分是Ha5C2.A2。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自Ha5C2.A2的Vh和Vl(SEQ ID NO:51和52)或来自SEQ ID NO:51和52的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv组分是MWB1。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自MWB1的Vh和Vl(SEQ ID NO:53和54)或来自SEQ ID NO:53和54的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自MWB1-mod(MWB1.1)的Vh和Vl(SEQ ID NO:55和56)或来自SEQID NO:55和56的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv包含来自MWB1.2的Vh和Vl(SEQ ID NO:163和164)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv是MWB1.1scFvVH_VL(SEQ ID NO:273)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR scFv是MWB1.2scFvVH_VL(SEQ ID NO:274)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分选自PD-1铰链、CD28铰链和CD8铰链(包括CD8a铰链)、LIR1Ig3-4铰链、LIR1 Ig-4铰链、LIR1 52aa铰链、LIR1 36aa铰链、LIR1 30aa铰链、LIR1 26aa铰链、LIR1 8aa铰链、CD33铰链、KIR2DL1铰链、PD-1(47)铰链、PD-1(42)铰链、PD-1(36)铰链、PD-1(30)铰链、PD-1(26)铰链和PD-1(20)铰链。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是PD-1铰链(SEQ ID NO:86)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是CD28铰链(SEQ ID NO:85)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是CD8α铰链(SEQ ID NO:84)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是LIR1Ig3-4铰链(SEQ ID NO:87)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是LIR1Ig-4铰链(SEQ ID NO:88)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是LIR152aa铰链(SEQ ID NO:89)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是LIR136aa铰链(SEQ ID NO:90)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是LIR130aa铰链(SEQ ID NO:91)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是LIR126aa铰链(SEQ ID NO:289)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是LIR18aa铰链(SEQ ID NO:92)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是CD33铰链(SEQ ID NO:93)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是KIR2DL1铰链(SEQ ID NO:94)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是PD-1(47)铰链(SEQ ID NO:290)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是PD-1(42)铰链(SEQ ID NO:291)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是PD-1(36)铰链(SEQ ID NO:292)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是PD-1(30)铰链(SEQ ID NO:293)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是PD-1(26)铰链(SEQ ID NO:294)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR铰链结构域组分是PD-1(20)铰链(SEQ ID NO:295)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR TM结构域组分选自PD-1TM结构域、CD28 TM结构域、CD8 TM结构域(包括CD8a TM结构域)、LIR1 TM结构域、CD33 TM结构域和KIR2DL1 TM结构域。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR TM结构域组分是PD-1TM结构域(SEQ ID NO:97)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR TM结构域组分是CD28TM结构域(SEQ ID NO:96)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR TM结构域组分是CD8αTM结构域(SEQ ID NO:95)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR TM结构域组分是LIR1TM结构域(SEQ ID NO:98)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR TM结构域组分是CD33TM结构域(SEQ ID NO:99)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR TM结构域组分是KIR2DL1 TM结构域(SEQ ID NO:100)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是来自选自由以下项组成的组的蛋白质的抑制结构域：PD-1、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR2DL4、KIR2DL5A、KIR3DL1、KIR3DL2、KIR3DL3、LAIR1、CD22、CD33、SIGLEC5、SIGLEC6、SIGLEC7、SIGLEC8、SIGLEC9、SIGLEC10、SIGLEC11、SIGLEC12、PECAM1/CD31、CD200R1、FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5、SLAMF1、SLAMF5、BTLA、LAG3、2B4、CD160、CEACAM1、TIM3、VISTA、TIGIT、SIRPα、FcγRIIB、CD5、CD300a、CD300f、LIR1、LIR2、LIR3、LIR5、LIR8、Ly9、2xPD1(G4S)、2xPD1(PD1)、PVRIg和AA2AR。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR组分是KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR组分是KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR组分是KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，iCAR抑制结构域组分是AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR单链可变片段(scFv)组分靶向Her2。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自曲妥珠单抗(trastuzumab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:170和171)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv是SEQ ID NO:172。
在双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自曲妥珠单抗F9G的Vh和Vl(SEQ ID NO:307和308)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自帕妥珠单抗(pertuzumab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:173和174)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv是SEQ ID NO:175。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自FRP5的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:176和177)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自A21的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:178和179)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自XMT1517的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:180和181)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自XMT1518的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:182和183)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自XMT1519的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:184和185)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自FWP51的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:186和187)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含SEQ ID NO:188。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR单链可变片段(scFv)组分靶向EGFR。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自西妥昔单抗(cetuximab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:189和190)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv是SEQ ID NO:191。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自帕尼单抗(panitumumab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:192和193)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv是SEQ ID NO:194。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自伊马曲单抗(Imgatuzumab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:195和196)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自尼妥珠单抗(Nimotuzumab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:197和198)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自尼妥珠单抗(K5)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:310和311)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自耐昔妥珠单抗(Necitumumab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:199和200)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自ICR62的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:201和202)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自马妥珠单抗(Matuzumab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:204和205)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自C10的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:206和207)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自扎芦木单抗(Zalutumumab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:208和209)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自P1X的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:210和211)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自P2X的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:212和213)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自P3X的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:214和215)。
在双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自EGFR-la1-VHH的VH(SEQ ID NO:216)。
在双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自EGFR-VHH的VH(SEQ ID NO:312)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR单链可变片段(scFv)组分靶向间皮素。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自阿麦妥单抗(Amatuximab)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:217和218)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自P4的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:219和220)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自SS1的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:222和223)。
在双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自SD1的VHH(SEQ ID NO:225)。
在双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自SD2的VHH(SEQ ID NO:226)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自1H7的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:227和228)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，aCAR scFv包含来自3C02的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:230和231)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，铰链TM结构域组分选自由以下项组成的组：CD28铰链和CD8铰链(包括CD8a铰链结构域)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，铰链TM结构域组分是CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，铰链TM结构域组分是CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，共刺激结构域组分选自由以下项组成的组：CD137(4-1BB)共刺激结构域、CD28共刺激结构域、28BB共刺激结构域和CD3z共刺激结构域。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，共刺激结构域组分是CD137(4-1BB)共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，共刺激结构域组分是CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，共刺激结构域组分是CD3z激活信号传导结构域(SEQ ID NO:235)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，ITAM是CD3ζ结构域。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，ITAM是CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，ITAM是CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，ITAM是CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，ITAM是CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，连接iCAR部分和aCAR部分的接头包括一个或多个选自由以下项组成的组的接头：T2A(SEQ ID NO:155)、F2A(SEQ ID NO:156)、P2A(SEQ ID NO:157)、E2A(SEQ ID NO:158)和IRES序列(SEQ ID NO:159或160)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，连接iCAR部分和aCAR部分的接头是GSG T2A(SEQ ID NO:155)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR构建体包含由选自由以下项组成的组的核酸序列编码的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR构建体包含由选自由以下项组成的组的核酸序列编码的氨基酸序列：SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR构建体包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR构建体包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ IDNO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR构建体进一步包含短发夹RNA(shRNA)。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，如本文所述的构建体包含含有如表8中所示的合成PD-1或LIR1序列的iCAR，该合成PD-1或LIR1序列包括选自由以下项组成的组的一个序列：SEQ ID NO:243、SEQ ID NO:244、SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、SEQID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:296、SEQ ID NO:297、SEQ ID NO:298、SEQ ID NO:299、SEQ ID NO:300、SEQ ID NO:301、SEQID NO:302和SEQ ID NO:304。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，如本文所述的构建体包含含有选自由以下项组成的组的氨基酸序列的iCAR：SEQID NO:255、SEQ ID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:305、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:260、SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:264、SEQID NO:265、SEQ ID NO:266、SEQ ID NO:267、SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:271、SEQ ID NO:272、SEQ ID NO:327、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:329、SEQID NO:330、SEQ ID NO:331、SEQ ID NO:332、SEQ ID NO:333和SEQ ID NO:334。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，如本文所述的构建体包括如表1、表11和/或表12中所述的构建体。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，如本文所述的构建体包含如表1至22的任一个中所述的构建体或其部分。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，如本文所述的构建体包含如表15、16、17和/或21的任一个中所述的构建体。
在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，如本文所述的构建体包含如表1、2、4、9、10、11和/或12的任一个中所述的构建体。
本发明还提供了一种核酸组合物，该核酸组合物包含编码根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的核酸。
本发明还提供了一种载体，该载体包含编码根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的核酸序列。
本发明还提供了一种载体组合物，该载体组合物包含根据段落[00192]的载体。
在一些实施例中，用于共转导的iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体包含iCAR和/或aCAR部分上游的信号肽。在一些实施例中，信号肽是CD8α信号肽(SEQ IDNO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
本发明还提供了一种安全效应细胞，该安全效应细胞包含如本文所述的核酸或核酸序列组合物。
本发明还提供了一种安全效应细胞，该安全效应细胞包含如本文所述的载体或载体组合物。
本发明还提供了一种安全效应免疫细胞，该安全效应免疫细胞表达如本文所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体。
本发明还提供了一种用于治疗患有以LOH为特征的肿瘤的患者的癌症的方法，该方法包括向患者施用如本文所述的安全效应免疫细胞。
本发明还提供了一种用于治疗患有以导致靶基因或靶细胞外多态性表位基因的表达完全丧失的基因突变为特征的肿瘤的患者的癌症的方法，该方法包括向患者施用如本文所述的安全效应免疫细胞。
本发明还提供了一种用于治疗患有以杂合性丢失(LOH)或其他基因丢失或等位基因失衡表型(包括但不限于由影响一个或多个核苷酸的突变造成的功能或表达丧失)为特征的肿瘤的患者的癌症的方法，该方法包括向患者施用如本文所述的安全效应免疫细胞。
在一些实施例中，癌症选自由以下项组成的组：急性骨髓性白血病[LAML]、肾上腺皮质癌[ACC]、膀胱尿路上皮癌[BLCA]、脑低级别胶质瘤[LGG]、乳腺浸润性癌[BRCA]、宫颈鳞状细胞癌和宫颈内腺癌[CESC]、胆管癌[CHOL]、结肠腺癌[COAD]、食道癌[ESCA]、多形性成胶质细胞瘤[GBM]、头颈部鳞状细胞癌[HNSC]、肾嫌色细胞癌[KICH]、肾脏透明细胞癌[KIRC]、肾脏乳头状细胞癌[KIRP]、肝脏肝细胞癌[LIHC]、肺腺癌[LUAD]、肺鳞状细胞癌[LUSC]、淋巴样肿瘤弥漫性大B细胞淋巴瘤[DLBC]、间皮瘤[MESO]、卵巢浆液性囊腺癌[OV]、胰腺腺癌[PAAD]、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤[PCPG]、前列腺腺癌[PRAD]、直肠腺癌[READ]、肉瘤[SARC]、皮肤黑色素瘤[SKCM]、胃腺癌[STAD]、睾丸生殖细胞瘤[TGCT]、胸腺瘤[THYM]、甲状腺癌[THCA]、子宫癌肉瘤[UCS]、子宫体内膜癌[UCEC]、葡萄膜黑色素瘤[UVM]、非小细胞肺癌[NSCLC]和小细胞肺癌[SCLC]。
附图说明
图1示出了双顺反子构建体设计概览和组分表。
图2A-2H示出了双顺反子研究—构建体MC0280-MC0300、MC0428、MC0447、MC0449、HLA-A2 shRNA。
图3示出了BTLA和KIR2DL2作为新的iCAR前导物。
图4示出了具有更高HLA-A结合亲合力的完全人类scFv构建体的鉴定。
图5示出了3PF12&SN66E3 PD-1iCAR表现出更稳定的表达。
图6示出了基于荧光素酶的细胞毒性测定的示意图。
图7A-7B.A)HER2双顺反子第9天-供体466的表达。B)HER2双顺反子第9天-供体149的表达。
图8示出了LIR1和KIR2DL1双CAR的荧光素酶杀伤结果。LIR1有效地抑制aCAR，使MCF7得到高度保护。KIR2DL1抑制aCAR，使MCF7得到适度保护。
图9示出了IFNg ELISA测定显示LIR1和KIR2DL1抑制。LIR1和KIR2DL1非常有效地抑制针对MCF7的IFNg分泌。
图10示出了KIR2DL1/2和LIR1在Jurkat测定中被确认为命中。
图11A-11B示出了低双CAR慢病毒转导效率和可变表达。
图12A-12B示出了关于靶细胞杀伤和CAR-T激活与E/T比例相关的实验设置和数据。
图13示出了靶细胞杀伤和CAR-T激活与E/T比例相关。
图14示出了确定CAR细胞表面水平的量子珠测定。
图15示出了相对于HER2 aCAR的异常差异PD-1iCAR表达。
图16示出了筛选细胞系组中的靶抗原量化。
图17示出了PD-1iCAR引导HLA-A2特异性EGFR a CAR杀伤(E/T＝2)。
图18示出了HLA-A2 POS癌细胞特异性抑制双CAR T细胞。
图19示出了iCAR在广泛的HLA-A2水平范围内抑制T细胞脱粒。
图20示出了PD-1iCAR引导HLA-A2特异性HER2aCAR杀伤。
图21示出了双CAR慢病毒表达高度可变(HER2 aCAR)。
图22示出了西妥昔单抗scFv慢病毒表达相对较低。
图23示出了双顺反子构建体在第8天表达良好。
图24示出了双顺反子表达在第12天较低。
图25示出了抗HLA-A2 iCAR筛选—构建体设计。
图26A-26B示出了具有比鉴定的BB7.2更高的HLA结合的替代性scFv。
图27示出了iCAR单链选项。
图28示出了BB7.2(两种型式)、3PF12和SN66E3 PD-1iCAR表现出更稳定的表达。
图29示出了KIR2DL1 iCAR在FaDu/U87-LUC免疫细胞杀伤测定中被确定为命中。
图30A-30B示出了IMPT001(一种被设计成基于肿瘤特异性HLA-A2缺失基因表达进行杀伤的双CART系统)的示意图。
图31A-31G示出了第12天的HER2双顺反子供体149表达。
图32A-32G示出了第12天的HER2双顺反子供体466表达。
图33示出了第12天的D149荧光素酶杀伤测定结果。LIR1有效地抑制aCAR，使H1703、H1650和MDA-MB231得到高度保护。KIR2DL1和CD33抑制aCAR，使H1703、H1650和MDA-MB231得到适度保护。
图34示出了第12天的D466荧光素酶杀伤测定结果。LIR1和CD33有效地抑制aCAR，使H1703、H1650得到保护。LIR1和CD33非常有效地抑制针对H1703、H1650和MCF7的IFNγ分泌。
图35示出了来自示例性实验的第8天的HER2双顺反子表达。
图36示出了VR51(LIR1 iDomain)保护HLA-A2POS靶标。LIR1有效地抑制aCAR，使来自示例性实验的H1650细胞得到高度保护，而MDA-MB-231细胞得到适度保护。
图37提供了细胞表面上的CAR表达。注意：VR52具有非常低的aCAR表达(从分析中排除)。VR55,56没有iCAR表达(数据未示出)(从分析中排除)。MFI仅具有阳性CAR部分。说的更明白些，未转导的细胞中的aCAR+部分(3％)的MFI为766。
图38A-38C示出了转导的PBMC的细胞染色(原始数据)。
图39示出了双顺反子iCAR/aCAR构建体对A2NEG细胞系显示出功效。
图40示出了iCAR RNA表达是瞬时的。
图41A-41F示出了本文所述的双顺反子iCAR-aCAR构建体的体外分析。VR354被鉴定为一种用于防止HER2 aCAR杀伤的优越LIR双顺反子构建体。
图42示出了HLA-A2 scFv作为aCAR的筛选。所有人源化BB7.2型式都表达良好，并且对A2 POS靶标显示出结合和功效。最佳命中似乎是VR375，因为与VR370相比EC50甚至更低。
图43示出了HLA-A2富集。使用抗PE珠和美天旎公司(Miltenyi)LS柱在结合部分成功富集VR51双顺反子构建体。
图44A-44K示出了合成PD1构建体的筛选。使用荧光素酶测定在H1703同基因细胞系上筛选的富集的合成PD1构建体显示，与1-5个PD1 ITIM重复序列相比，含有1-5个PD1ITSM重复序列的合成构建体显示出优越的保护。
图45示出了1x与2x PD1构建体的筛选。使用荧光素酶测定和同基因H1703细胞系筛选的富集PD1构建体显示，2x PD1构建体比天然存在的1x PD1构建体显示出更好的保护，其中G4S接头(VR68)比PD1接头(VR69)提供了优越的保护。
图46示出了iCAR接合调节CAR-T激活。iTarget NEG细胞的单一aCAR接合诱导T细胞激活。双aCAR+iCAR接合抑制iTarget POS细胞的CAR-T激活。
图47示出了iCAR靶POS癌细胞抑制双CAR T细胞。
图48示出了iCAR靶向杀伤癌细胞系。
图49A-49B示出了SN66E3 iCAR scFv构建体的筛选。使用荧光素酶测定在H1703同基因细胞系上筛选的富集双顺反子构建体显示，含有SN66E3 iCAR scFv的构建体显示出优越的保护。
图50示出了功能性Luc结果—与具有LIR1或PD1x2iDomain的mBB7.2 scFv共转导的骆驼VHH EGFR scFv的筛选。
图51示出了体内研究设计的方案。
图52示出了体内过程的方案。
图53A-53D示出了主要构建体的代表性体内研究的肿瘤生长动力学。对于VR354和VR51均观察到保护和功效。
构建体。
图54A-54F示出了系列F体内筛选肿瘤生长动力学。该模型是其中观察到保护的H1703 WT。两个CAR-T剂量的最佳命中是VR428。
图55A-55F示出了系列F体内筛选肿瘤生长动力学。该模型是其中观察到功效的H1703 KO。两个CAR-T剂量的最佳命中是VR428。
图56示出了包含iCAR的LIR1 ITIM和PD-1ITSM基序变异的合成iDomain的体外筛选。
图57示出了对HLA-A2靶标特异的人源化和完全人类iCAR scFv的系列G体外筛选。
图58示出了包含iCAR的ITIM和ITSM基序变异的合成LIR1 iDomain的体外筛选。
图59示出了对HLA-A2靶标特异的人源化iCAR scFv的系列F体外筛选。HzBB7.2iCAR scFv的体外验证。
具体实施方式
I.简介
本发明提供了特异性靶向肿瘤细胞同时保护正常细胞的双顺反子构建体和共同施用的单顺反子构建体。本文提供的构建体提供了靶向多态性细胞表面表位的单个等位基因变体的iCAR/aCAR构建体，这些表位由于它们所在的染色体区域的杂合性丢失(LOH)而从肿瘤细胞中丢失，同时在正常组织上保持表达。由于多态性变异，iCAR/aCAR对能够区分这两个等位基因并且仅靶向由于LOH而缺失靶等位基因的肿瘤细胞。
II.选择定义
如本文所用的术语“核酸分子”是指DNA或RNA分子。
术语“编码”是指多核苷酸(诸如基因、cDNA或mRNA)中特定核苷酸序列的固有特性，可作为用于在生物过程中合成具有确定的核苷酸序列(例如，rRNA、tRNA和mRNA)或确定的氨基酸序列以及由此产生的生物学特性的其他聚合物和大分子的模板。因此，如果对应于基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生蛋白质，则该基因编码该蛋白质。编码链(其核苷酸序列与mRNA序列相同，通常在序列表中提供)和非编码链(用作基因或cDNA的转录的模板)均可以被称为编码蛋白质或该基因或cDNA的其他产物。
除非另有规定，否则“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括相互是简并型式并且编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白质和RNA的核苷酸序列可包括内含子。
术语“内源性”是指来自生物体、细胞、组织或系统或者在它们内部产生的任何物质。
术语“外源性”是指从生物体、细胞、组织或系统外部引入或者在它们外部产生的任何物质。
如本文所用的术语“表达”被定义为由其启动子驱动的特定核苷酸序列的转录和/或翻译。
“表达载体”是指包含重组多核苷酸的载体，该重组多核苷酸包含与待表达的核苷酸序列可操作地连接的表达控制序列。表达载体包含足够的顺式作用元件用于表达；用于表达的其他元件可以由宿主细胞或在体外表达系统中提供。表达载体包括本领域已知的所有那些表达载体，诸如包含重组多核苷酸的粘粒、质粒(例如，裸质粒或包含在脂质体中)和病毒(例如，慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。
如本文所用的术语“基因组变体”是指与相同基因组位置处的参考或共有序列相比，测序样品中至少一个核苷酸在基因组水平上的变化。
如本文所用的关于变体的术语“相应的参考等位基因”是指与变体相同的基因组位置处的参考或共有序列或核苷酸。
如本文所用的关于蛋白质的术语“细胞外结构域”是指蛋白质的位于细胞膜之外的区域。
如本文所用的术语“杂合性丢失”或“LOH”是指在体细胞中两条染色体的一个拷贝中染色体物质(诸如完整染色体或其部分)缺失。
如本文所用的关于变体或参考等位基因的术语“序列区域”是指从变体位置上游开始并在下游结束的序列，该序列可以被翻译成可以被抗体识别的“表位肽”。
术语“CAR”在本文中使用时是指与来自例如T细胞或NK细胞的细胞免疫功能受体或衔接分子共享结构和功能特性的嵌合多肽。CAR包括TCAR和NKR-CAR。在与同源抗原结合后，CAR可以激活或灭活它所在的细胞毒性细胞，或者调节细胞的抗肿瘤活性或以其他方式调节细胞免疫反应。
如本文所用的术语“特异性结合”在细胞外结构域(诸如与多态性细胞表面表位的单个等位基因变体特异性结合的scFv)的上下文中是指scFv与一个等位基因变体相对结合及其未能与相同多态性细胞表面表位的相应不同等位基因变体结合。由于这取决于亲合力(T细胞上的CAR拷贝数、靶细胞(或要保护的细胞)表面上的抗原分子数)和所使用的特异性CAR的亲和力，功能定义将是特异性scFv将在ELISA中针对它所特异的多态性细胞表面表位的单个等位基因变体提供显著信号，或者用展示scFv的CAR转染的细胞将在FACS测定中被明确标记为多态性细胞表面表位的单个等位基因变体，而使用同一多态性细胞表面表位的相应不同等位基因变体的相同测定不会给出任何可检测信号。
如本文所用的术语“治疗”是指获得期望的生理效果的手段。就部分或完全治愈疾病和/或归因于该疾病的症状而言，该效果可以是治疗性的。该术语是指抑制疾病，例如阻止其发展；或者改善疾病，例如引起疾病的消退。
如本文所用，术语“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”是指需要诊断、预后或疗法的任何受试者，特别是哺乳动物受试者，例如人。
短语“安全效应免疫细胞”或“安全效应细胞”包括本发明描述的表达如本文所述的至少一种双顺反子iCAR/aCAR构建体或其部分或者表现出单顺反子aCAR和iCAR构建体的共表达的那些细胞。在一些实施例中，“安全效应免疫细胞”或“安全效应细胞”能够施用于受试者。在一些实施例中，“安全效应免疫细胞”或“安全效应细胞”进一步表达至少一种双顺反子iCAR/aCAR构建体或其部分，或者表现出单顺反子aCAR和iCAR构建体的共表达，如本文所述。
根据本发明使用的药物组合物可使用一种或多种生理上可接受的载剂或赋形剂以常规方式配制。在与组合物的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上，载剂必须是“可接受的”。
短语“有效量”或“治疗有效量”在本文中可互换使用，并且是指有效实现特定生物学结果的如本文所述的化合物、制剂、材料或组合物的量。
如本文所用的术语“外周血单核细胞(PBMC)”是指任何具有圆形细胞核的血细胞，诸如淋巴细胞或单核细胞。用于从血液中分离PBMC的方法对本领域技术人员来说是显而易见的。非限制性实例是使用ficoll(一种分离血液层的亲水性多糖，其中单核细胞和淋巴细胞在血浆层下方形成血沉棕黄层)或通过白细胞去除术(制备白细胞浓缩物，将红细胞和贫白细胞血浆返回给供体)从全血中提取这些细胞。
如本文所用的术语“癌症”被定义为以异常细胞快速且不受控制地生长为特征的疾病。癌细胞可以局部扩散或通过血流和淋巴系统扩散到身体的其他部位。各种癌症的实例包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、胰腺癌、结直肠癌、肾癌、肝癌、脑癌、淋巴瘤、白血病、肺癌、胶质瘤等。
III.CAR-T系统：iCAR和aCAR
LOH是一个基因组事件，会导致特定变体从肿瘤中完全丢失，而重新获得丢失的等位基因的可能性非常小。如果LOH事件发生在肿瘤发展的非常早期，则它可以确保源自初始恶性前组织(包括转移性肿瘤)的所有肿瘤细胞具有统一的靶标特征。另外，LOH发生在几乎所有类型的癌症中，因此可以依赖这一概念作为开发与所有这些癌症类型相关的标志物的通用工具。由于LOH事件在某种程度上是随机的，因此本发明进一步提供了基于在每个单独癌症患者中发生的特定LOH事件为该患者选择个性化肿瘤标志物。执行这一概念所依赖的工具即aCAR和iCAR是众所周知的，并且可以使用本领域众所周知的方法轻松制备，如例如在WO 2015/142314和US 9,745,368(这两者均通过援引并入，如同在本文完全披露一样)中所传授的。
根据一种策略，每个给定对中的两个CAR特异性识别患者对其是杂合的同一靶基因的不同等位基因变体的产物。基本原理如下：aCAR靶向由给定肿瘤细胞表达且不受LOH影响的选定细胞表面蛋白的等位基因变体，而iCAR靶向由同一基因的由于LOH而从这些肿瘤细胞中丢失的等位基因变体编码的产物。在表达所述基因的该单独患者的其他正常组织中，两个等位基因都存在并且已知功能相同，也就是说，表达在所有组织中都是双等位基因(与可能表现出随机单等位基因表达的其他基因相反)(Chess,2012；Savova等人,2016)。在一种情况下，两个CAR靶向位于蛋白质产物上相同位置处的两个相关表位，它们相差一个或仅几个氨基酸。在另一种情况下，aCAR靶向同一蛋白质上的非多态性表位，而iCAR是等位基因特异性的。在这些实施例中，正常细胞上aCAR表位的密度通常是iCAR表位的密度的两倍。在一些实施例中，单个核酸载体编码aCAR和iCAR两者，如本文所述的双顺反子构建体所例示的。在一些实施例中，aCAR和iCAR由单独的核酸载体编码并且共表达。
必须注意确保iCAR传输的抑制信号相对于aCAR信号具有主导作用，并且iCAR和aCAR之间的交叉识别是有限的和/或可忽略的。iCAR的主导作用保证了杀伤细胞在遇到表达两个等位基因的正常细胞时的激活将被阻止。这种默认制动不会在与肿瘤细胞接合时起作用：在没有其靶抗原的情况下，iCAR不会递送抑制信号，从而释放预期的aCAR介导的细胞激活和随后的肿瘤细胞裂解。iCAR相对于其aCAR对应物的主导作用是系统发挥作用方式的重要部分。本发明提供了以这种方式发挥作用的新型双顺反子iCAR/aCAR构建体，以及用于共转导单顺反子aCAR和iCAR构建体的方法。
本发明的双顺反子构建体包含以下组分：经由接头结构域连接的iCAR和aCAR。在一些实施例中，iCAR(保护)部分包含iCAR scFv、铰链跨膜(TM)结构域和抑制结构域。在一些实施例中，aCAR(功效)部分包含aCAR scFv、铰链跨膜(TM)结构域、共刺激结构域和CD3ζ结构域。
I.双顺反子序列
在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由选自由如下表1中提供的以下项组成的组的核酸序列编码的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:1的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:3的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:5的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:7的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:9的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:11的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:13的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:15的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:17的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:19的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:21的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:23的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:25的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ IDNO:27的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQID NO:29的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:31的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:33的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:35的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:275的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:277的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:279的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:281的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:321的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:323的核酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由包含SEQ ID NO:325的核酸序列编码的氨基酸序列。
在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含选自由如下表1中提供的以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
如下。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:2。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:4。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ IDNO:6。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:8。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:10。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:12。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:14。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:16。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:18。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:20。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:22。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:24。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:26。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQID NO:28。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:30。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:36。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:276。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:278。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQID NO:280。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:282。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:322。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ IDNO:324。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含SEQ ID NO:326。
表1：双顺反子iCAR/aCAR：核酸和氨基酸序列
ii.双顺反子iCAR部分
在一些实施例中，下面描述的双顺反子iCAR部分可以作为单顺反子iCAR构建体的一部分包括在内，以用于与描述的单顺反子aCAR构建体一起在共转导方法中使用。
1.iCAR部分：scFv组分
在一些实施例中，双顺反子构建体包含含有单链可变片段(scFv)组分的iCAR部分。在一些实施例中，iCAR部分包含单链可变片段(scFv)组分。在一些实施例中，scFv靶向HLA抗原。在一些实施例中，HLA抗原选自由以下项组成的组：HLA-A2、HLA-A3、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-E、HLA-F、HLA-DPA1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DQB2、HLA-DRB1和HLA-DRB5。在一些实施例中，iCAR包含scFv。在一些实施例中，scFv选自由以下项组成的组：BB7.2、3PF12、3PF12/C4、3PF12/F12、3PF12/B11、W6/32、BBM.1、SN66E3.1、SN66E3.2、SN66E.3、Ha5C2.A2、MWB1、MWB1-mod、Hz.BB7.2VH1-69_A18VK、Hz.BB7.2VH1-69(27,30)_A18、HzBB7.2VH1-69(27,30,48)A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,69)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67,69)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3_A18、Hz.BB7.2VH1-3(48)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(67)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(69)_A18、Hz.BB7.2VH1-3(71)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(73)_A18和MWB1.2。在一些实施例中，scFv具有BB7.2的VL和VH序列(SEQ ID NO:37和38)。在一些实施例中，scFv具有3PF12/C4的VL和VH序列(SEQ ID NO:39和40)。在一些实施例中，scFv具有3PF12/F12的VL和VH序列(SEQ ID NO:41和42)。在一些实施例中，scFv具有3PF12/B11的VL和VH序列(SEQ ID NO:43和44)。在一些实施例中，scFv具有W6/32的VL和VH序列(SEQ ID NO:45和46)。在一些实施例中，scFv具有BBM.1的VL和VH序列(SEQ ID NO:47和48)。在一些实施例中，scFv具有SN66E3的VL和VH序列(SEQ ID NO:49和50)。在一些实施例中，scFv具有Ha5C2.A2的VL和VH序列(SEQ ID NO:51和52)。在一些实施例中，scFv具有MWB1的VL和VH序列(SEQ ID NO:53和54)。在一些实施例中，scFv具有MWB1-mod的VL和VH序列(SEQ ID NO:55和56)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2 VH1-69_A18VK的VL和VH序列(SEQ ID NO:57和58)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2 VH1-69(27,30)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:59和60)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2VH1-69(27,30,48)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:61和62)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2VH1-69(27,30,67)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:63和64)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,69)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:65和66)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67,69)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:67和68)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2 VH1-3_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:69和70)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2 VH1-3(48)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:71和72)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2 VH1-3(67)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:73和74)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2VH1-3(69)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:75和76)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2 VH1-3(71)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:77和78)。在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2VH1-3(73)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:79和80)。在一些实施例中，scFv具有MWB1.2的VL和VH序列(SEQ ID NO:163和164)。在一些实施例中，scFv具有SN66E3.2的VL和VH序列(SEQ ID NO:165和166)。在一些实施例中，scFv具有SN66E3.3的VL和VH序列(SEQ ID NO:283和284)。在一些实施例中，scFv是BB7.2(SEQ ID NO:167)。在一些实施例中，scFv是3PF12(SEQ ID NO:168)。在一些实施例中，scFv是SN66E3.1(SEQ IDNO:169)。在一些实施例中，scFv是SN66E3.2(SEQ ID NO:285)。在一些实施例中，scFv是SN66E3.3(SEQ ID NO:286)。在一些实施例中，scFv是Hz BB7.2.1(SEQ ID NO:287)。在一些实施例中，scFv是HzBB7.2.2(SEQ ID NO:288)。在一些实施例中，scFv是MWB1.1(SEQ IDNO:273)。在一些实施例中，scFv是MWB1.2(SEQ ID NO:274)。在一些实施例中，scFv是3PF12/C4。在一些实施例中，scFv是3PF12/F12。在一些实施例中，scFv是3PF12/B11。在一些实施例中，scFv是W6/32。在一些实施例中，scFv是BBM.1。在一些实施例中，scFv是Ha5C2.A2。在一些实施例中，scFv是MWB1。在一些实施例中，scFv是MWB1-mod。在一些实施例中，scFv是BB7.2。在一些实施例中，scFv是3PF12。在一些实施例中，scFv是SN66E3.1。在一些实施例中，scFv是SN66E3.2。在一些实施例中，scFv是SN66E3.3。在一些实施例中，scFv是Hz BB7.2.1。在一些实施例中，scFv是HzBB7.2.2。在一些实施例中，scFv是MWB1.1。在一些实施例中，scFv是MWB1.2。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 VH1-69_A18VK。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 VH1-69(27,30)_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,48)_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67)_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,69)_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67,69)_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2VH1-3_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 VH1-3(48)_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 -3(67)_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 VH1-3(69)_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2 VH1-3(71)_A18。在一些实施例中，scFv是Hz.BB7.2VH1-3(73)_A18。在一些实施例中，scFv是MWB1.2。在一些实施例中，scFv是SN66E3.2。在一些实施例中，scFv是MWB1.1。在一些实施例中，scFv是MWB1.2。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链Hz.BB7.2VH1-69。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链Hz.BB7.2VH1-69(H27Y、H30S)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链HZ.BB7.2VH1-69(H27Y、H30S、H48I)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链Hz.BB7.2VH1-69(H27Y、H30S、H67T)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链Hz.BB7.2VH1-69(H27Y、H30S、H69L)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链HZ.BB7.2VH1-69(H27Y、H30S、VH67T、H69L)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链Hz.BB7.2 VH1-3。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链Hz.BB7.2 VH1-3(H48I)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链VH1-3(H67T)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链Hz.BB7.2 VH1-3(H69L)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链Hz.BB7.2 VH1-3(H71A)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2重链Hz.BB7.2 VH1-3(H73A)。在一些实施例中，scFv包含Hz.BB7.2轻链VKA18。可变重链和可变轻链的6个CDR序列(也被称为vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)针对每个序列在表2中用粗体和下划线示出。在一些实施例中，iCAR包含如针对每个序列在表2中用粗体和下划线所示的可变重链和可变轻链的6个CDR序列，也被称为vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。在一些实施例中，iCAR包含如针对每个序列在表2中用粗体和下划线所示的可变重链和可变轻链的6个CDR序列，也被称为vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3，其中每个CDR单独任选地包含一个或多个取代。在一些实施例中，iCAR包含如针对每个序列在表2中用粗体和下划线所示的可变重链和可变轻链的6个CDR序列，也被称为vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3，其中每个CDR单独任选地包含1、2和/或3个取代。在一些实施例中，iCAR包含如针对每个序列在表2中用粗体和下划线所示的可变重链和可变轻链的6个CDR序列，也被称为vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3，其中每个CDR单独包含一个或多个取代。在一些实施例中，iCAR包含如针对每个序列在表2中用粗体和下划线所示的可变重链和可变轻链的6个CDR序列，也被称为vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3，其中每个CDR单独包含1、2和/或3个取代。
表2：iCAR vh、vl和scFv序列
在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。
在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的接头。
在一些实施例中，scFv的重链和轻链经由接头共价连接。在一些实施例中，接头是gly-ser多肽接头，即由甘氨酸和丝氨酸残基组成的肽。示例性gly-ser多肽接头包含氨基酸序列Ser(Gly4Ser)n，以及(Gly4Ser)n和/或(Gly4Ser3)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3，即Ser(Gly4Ser)3。在一些实施例中，n＝4，即Ser(Gly4Ser)4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。在一些实施例中，n＝7。在一些实施例中，n＝8。在一些实施例中，n＝9。在一些实施例中，n＝10。另一种示例性gly-ser多肽接头包含氨基酸序列Ser(Gly4Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在另一个实施例中，n＝4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly4Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly3Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在另一个实施例中，n＝5。在又一个实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly4Ser3)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly3Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在另一个实施例中，n＝5。在又一个实施例中，n＝6。
在一些实施例中，iCAR包含连接VH和VL或VL和VH以形成scFv的基于GS的接头序列。在一些实施例中，GS接头包含GGGGS(SEQ ID NO:153)。在一些实施例中，iCAR包含Whitlow接头序列，例如GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含Vh-Vl取向的Vh和Vl序列。在一些实施例中，iCAR包含Vl-Vh取向的Vh和Vl序列。在一些实施例中，iCAR包含Vh与Vl序列之间的接头。在一些实施例中，iCAR不包含Vh与Vl序列之间的接头。
表3：iCAR接头
| 序列信息 | SEQ ID NO | 氨基酸序列 |
| (G4S)X3接头 | 81 | GGGGSGGGGSGGGGS |
| Whitlow接头 | 82 | GSTSGSGKPGSGEGSTKG |
| PD1接头 | 83 | DFQWREKTPEPPVPCVPEQ |
| G4S | 153 | GGGGS |
在一些实施例中，iCAR scFv包含接头。在一些实施例中，iCAR scFv选自由以下项组成的组：BB7.2 scFv(SEQ ID NO:167)、3PF12 scFv(SEQ ID NO:168)、SN66E3.1 scFv(SEQ ID NO:169)、SN66E3.2 scFv(SEQ ID NO:285)、SN66E3.3 scFv(SEQ ID NO:286)、HzBB7.2.1scFv(SEQ ID NO:287)和Hz BB7.2.2scFv(SEQ ID NO:288)。在一些实施例中，iCARscFv是BB7.2 scFv(SEQ ID NO:167)。在一些实施例中，iCAR scFv是3PF12 scFv(SEQ IDNO:168)。在一些实施例中，iCAR scFv是SN66E3.1 scFv(SEQ ID NO:169)。在一些实施例中，iCAR scFv是SN66E3.2 scFv(SEQ ID NO:285)。在一些实施例中，iCAR scFv是SN66E3.3scFv(SEQ ID NO:286)。在一些实施例中，iCAR scFv是Hz BB7.2.1scFv(SEQ ID NO:287)。在一些实施例中，iCAR scFv是Hz BB7.2.2scFv(SEQ ID NO:288)。
表4：具有接头的iCAR scFv序列
在一些实施例中，iCAR scFv接头是gly-ser多肽接头，即由甘氨酸和丝氨酸残基组成的肽。示例性gly-ser多肽接头包含氨基酸序列Ser(Gly4Ser)n，以及(Gly4Ser)n和/或(Gly4Ser3)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3，即Ser(Gly4Ser)3。在一些实施例中，n＝4，即Ser(Gly4Ser)4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。在一些实施例中，n＝7。在一些实施例中，n＝8。在一些实施例中，n＝9。在一些实施例中，n＝10。另一种示例性gly-ser多肽接头包含氨基酸序列Ser(Gly4Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在另一个实施例中，n＝4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly4Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly3Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在另一个实施例中，n＝5。在又一个实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly4Ser3)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly3Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在另一个实施例中，n＝5。在又一个实施例中，n＝6。
2.iCAR部分：铰链结构域
在一些实施例中，双顺反子构建体包含含有铰链结构域组分的iCAR部分。在一些实施例中，铰链结构域包含选自由以下项组成的组的铰链：PD-1铰链结构域、CD28铰链结构域和CD8铰链结构域(包括CD8a铰链结构域)、LIR1 Ig3-4铰链结构域、LIR1 Ig-4铰链结构域、LIR1 52aa铰链结构域、LIR1 36aa铰链结构域、LIR1 30aa铰链结构域、LIR1 8aa铰链结构域、CD33铰链结构域和KIR2DL1铰链结构域。在一些实施例中，铰链结构域是PD-1铰链(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，铰链结构域是CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，载体包含CD8铰链结构域。在一些实施例中，载体包含CD8a铰链结构域(SEQ IDNO:84)。在一些实施例中，载体包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，载体包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，载体包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，载体包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ IDNO:90)。在一些实施例中，载体包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，载体包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，载体包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，载体包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)(SEQ ID NO:295)。
表5：iCAR铰链序列
3.iCAR部分：跨膜结构域
在一些实施例中，双顺反子构建体包含含有跨膜(TM)结构域组分的iCAR部分。在一些实施例中，TM结构域包含选自由以下项组成的组的TM结构域：PD-1TM结构域、CD28 TM结构域、CD8 TM结构域(包括CD8a TM结构域)、LIR1 TM结构域、CD33TM结构域和KIR2DL1 TM结构域。在一些实施例中，TM结构域是PD-1TM结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，TM结构域是CD28 TM结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，载体包含CD8TM结构域。在一些实施例中，载体包含CD8a TM结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，载体包含LIR1 TM结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，载体包含CD33 TM结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，载体包含KIR2DL1 TM结构域(SEQ ID NO:100)。
表6：iCAR跨膜序列
| 序列信息 | SEQ ID NO | 氨基酸序列 |
| CD8α | 95 | IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC |
| CD28 | 96 | FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV |
| PD-1 | 97 | VGVVGGLLGSLVLLVWVLAVI |
| LIR1 | 98 | VIGILVAVILLLLLLLLLFLI |
| CD33 | 99 | GAIGGAGVTALLALCLCLIFFIV |
| KIR2DL1 | 100 | ILIGTSVVIILFILLFFLL |
4.iCAR部分：抑制结构域
在一些实施例中，双顺反子构建体包含含有抑制结构域组分的iCAR部分。在一些实施例中，iCAR部分包含抑制结构域。在一些实施例中，抑制结构域选自由以下项组成的组：PD-1、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR2DL4、KIR2DL5A、KIR3DL1、KIR3DL2、KIR3DL3、LAIR1、CD22、CD33、SIGLEC5、SIGLEC6、SIGLEC7、SIGLEC8、SIGLEC9、SIGLEC10、SIGLEC11、SIGLEC12、PECAM1/CD31、CD200R1、FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5、SLAMF1、SLAMF5、BTLA、LAG3、2B4、CD160、CEACAM1、TIM3、VISTA、TIGIT、SIRPα、FcγRIIB、CD5、CD300a、CD300f、LIR1、LIR2、LIR3、LIR5、LIR8、Ly9、2xPD1(G4S)、2xPD1(PD1)、PVRIg和AA2ARKIR2DL1、LIR1和PD-1。在一些实施例中，抑制结构域是KIR2DL1(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，抑制结构域是LIR1(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，抑制结构域是PD-1(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，抑制结构域是KIR2DL2(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，抑制结构域是KIR2DL3(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，抑制结构域是KIR2DL4(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，抑制结构域是KIR2DL5A(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，抑制结构域是KIR3DL1(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，抑制结构域是KIR3DL2(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，抑制结构域是KIR3DL3(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，抑制结构域是LAIR1(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，抑制结构域是CD22(SEQ IDNO:111)。在一些实施例中，抑制结构域是CD33(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，抑制结构域是SIGLEC5(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，抑制结构域是SIGLEC6(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，抑制结构域是SIGLEC7(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，抑制结构域是SIGLEC8(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，抑制结构域是SIGLEC9(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，抑制结构域是SIGLEC10(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，抑制结构域是SIGLEC11(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，抑制结构域是SIGLEC12(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，抑制结构域是PECAM1/CD31(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，抑制结构域是CD200R1(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，抑制结构域是FCRL1(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，抑制结构域是FCRL2(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，抑制结构域是FCRL3(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，抑制结构域是FCRL4(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，抑制结构域是FCRL5(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，抑制结构域是SLAMF1(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，抑制结构域是SLAMF5(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，抑制结构域是BTLA(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，抑制结构域是LAG3(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，抑制结构域是2B4(SEQ ID NO:132)。在一些实施例中，抑制结构域是CD160(SEQ ID NO:133)。在一些实施例中，抑制结构域是CEACAM1(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，抑制结构域是TIM3(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，抑制结构域是VISTA(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，抑制结构域是TIGIT(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，抑制结构域是SIRPα(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，抑制结构域是FcγRIIB(SEQID NO:139)。在一些实施例中，抑制结构域是CD5(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，抑制结构域是CD300a(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，抑制结构域是CD300f(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，抑制结构域是LIR2(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，抑制结构域是LIR3(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，抑制结构域是LIR5(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，抑制结构域是LIR8(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，抑制结构域是Ly9(SEQ IDNO:148)。在一些实施例中，抑制结构域是2xPD1(G4S)(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，抑制结构域是2xPD1(PD1)(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，抑制结构域是PVRIg(SEQ IDNO:151)。在一些实施例中，抑制结构域是AA2AR(SEQ ID NO:152)。
表7：iCAR抑制结构域序列
5.任选的合成PD-1
在一些实施例中，iCAR构建体包含任选的合成PD-1序列。在一些实施例中，iCAR包含表8中所示的合成PD-1序列。在一些实施例中，iCAR构建体包含任选的合成LIR1序列。在一些实施例中，iCAR包含表8中所示的合成LIR1序列。
表8：合成PD-1和LIR1序列
6.示例性iCAR
在一些实施例中，iCAR包含含有BB7.2的VL和VH序列(SEQ ID NO:37和38)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)(SEQID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ IDNO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ IDNO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。在一些实施例中，iCAR包含含有3PF12/C4的VL和VH序列(SEQ ID NO:39和40)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCARscFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包括CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR18aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有3PF12/F12的VL和VH序列(SEQ ID NO:41和42)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有3PF12/B11的VL和VH序列(SEQ ID NO:43和44)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包括CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有W6/32的VL和VH序列(SEQ ID NO:45和46)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有BBM.1的VL和VH序列(SEQ ID NO:47和48)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ IDNO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有SN66E3.1的VL和VH序列(SEQ ID NO:49和50)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包括CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Ha5C2.A2的VL和VH序列(SEQ ID NO:51和52)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有MWB1的VL和VH序列(SEQ ID NO:53和54)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包括CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有MWB1-mod(MWB1.1)的VL和VH序列(SEQ ID NO:55和56)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR130aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ IDNO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2 VH1-69_A18VK的VL和VH序列(SEQ IDNO:57和58)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ IDNO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2 VH1-69(27,30)_A18的VL和VH序列(SEQID NO:59和60)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包括CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ IDNO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ IDNO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ IDNO:132)。在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ IDNO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2VH1-69(27,30,48)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:61和62)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ IDNO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ IDNO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。
在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。
在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。
在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。
在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。
在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。
在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:63和64)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包括CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ IDNO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ IDNO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ IDNO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ IDNO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ IDNO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,69)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:65和66)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ IDNO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ IDNO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ IDNO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ IDNO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ IDNO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67,69)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:67和68)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR18aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ IDNO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ IDNO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ IDNO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ IDNO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2 VH1-3_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:69和70)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR130aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ IDNO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2 VH1-3(48)_A18的VL和VH序列(SEQ IDNO:71和72)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包括CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ IDNO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ IDNO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2VH1-3(67)_A18的VL和VH序列(SEQ IDNO:73和74)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ IDNO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ IDNO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ IDNO:132)。在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ IDNO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.Bb7.2VH1-3(69)_A18的VL和VH序列(SEQ IDNO:75和76)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ IDNO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ IDNO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ IDNO:132)。在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ IDNO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，scFv具有Hz.BB7.2 VH1-3(71)_A18的VL和VH序列(SEQ ID NO:77和78)。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包括CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR包含含有Hz.BB7.2VH1-3(73)_A18的VL和VH序列(SEQ IDNO:79和80)的scFv组分。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ IDNO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ IDNO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ IDNO:132)。在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ IDNO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，scFv具有MWB1.2的VL和VH序列(SEQ ID NO:163和164)。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ IDNO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ IDNO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，scFv具有SN66E3.2的VL和VH序列(SEQ ID NO:165和166)。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包括CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ IDNO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ IDNO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，scFv具有MWB1.1的VL和VH序列(SEQ ID NO:273)。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ IDNO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ IDNO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ IDNO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ IDNO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，scFv具有MWB1.2的VL和VH序列(SEQ ID NO:274)。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ IDNO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 36aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ IDNO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ ID NO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ IDNO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ ID NO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ IDNO:98)。在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQID NO:105)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，scFv具有SN66E3.3的VL和VH序列(SEQ ID NO:283和284)。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，iCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，iCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成iCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，iCAR包含CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1铰链结构域(SEQ ID NO:86)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig3-4铰链结构域(SEQ ID NO:87)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 Ig-4铰链结构域(SEQ ID NO:88)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 52aa铰链结构域(SEQ ID NO:89)。在一些实施例中，iCAR包含LIR136aa铰链结构域(SEQ ID NO:90)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 30aa铰链结构域(SEQ ID NO:91)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 8aa铰链结构域(SEQ ID NO:92)。在一些实施例中，iCAR包含CD33铰链结构域(SEQ ID NO:93)。在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1铰链结构域(SEQ ID NO:94)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1 26aa铰链结构域(SEQ IDNO:289)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(47)铰链结构域(SEQ ID NO:290)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(42)铰链结构域(SEQ ID NO:291)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(36)铰链结构域(SEQ ID NO:292)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(30)铰链结构域(SEQ IDNO:293)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(26)铰链结构域(SEQ ID NO:294)。在一些实施例中，iCAR包含PD-1(20)铰链结构域(SEQ ID NO:295)。在一些实施例中，iCAR包含CD8α跨膜结构域(SEQ ID NO:95)。在一些实施例中，iCAR包含CD28跨膜结构域(SEQ ID NO:96)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1跨膜结构域(SEQ ID NO:97)。
在一些实施例中，iCAR包含LIR1跨膜结构域(SEQ ID NO:98)。
在一些实施例中，iCAR包含CD33跨膜结构域(SEQ ID NO:99)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1跨膜结构域(SEQ ID NO:100)。
在一些实施例中，iCAR包含PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
在一些实施例中，iCAR包含KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。在一些实施例中，iCAR包含KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。在一些实施例中，iCAR包含LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。在一些实施例中，iCAR包含CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。在一些实施例中，iCAR包含CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC8抑制结构域(SEQID NO:116)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。在一些实施例中，iCAR包含SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。在一些实施例中，iCAR包含PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。在一些实施例中，iCAR包含CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL2抑制结构域(SEQID NO:124)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。在一些实施例中，iCAR包含FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。在一些实施例中，iCAR包含SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。在一些实施例中，iCAR包含BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。在一些实施例中，iCAR包含LAG3抑制结构域(SEQ IDNO:131)。在一些实施例中，iCAR包含2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
在一些实施例中，iCAR包含CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
在一些实施例中，iCAR包含CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。在一些实施例中，iCAR包含TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。在一些实施例中，iCAR包含VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。在一些实施例中，iCAR包含TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。在一些实施例中，iCAR包含SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。在一些实施例中，iCAR包含FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。在一些实施例中，iCAR包含CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。在一些实施例中，iCAR包含CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。在一些实施例中，iCAR包含CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。在一些实施例中，iCAR包含LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。在一些实施例中，iCAR包含LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。在一些实施例中，iCAR包含LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。在一些实施例中，iCAR包含LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。在一些实施例中，iCAR包含LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。在一些实施例中，iCAR包含Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。在一些实施例中，iCAR包含2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。在一些实施例中，iCAR包含PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。在一些实施例中，iCAR包含AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。在一些实施例中，iCAR包含iCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ IDNO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，iCAR具有表9-10中所示的一组组分和/或表11-12中所示的氨基酸序列。
表9：iCAR构建体
表10：iCAR构建体
表11：iCAR构建体
表12：iCAR构建体
在一些实施例中，iCAR包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:305、SEQ ID NO:259、SEQID NO:260、SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:265、SEQ ID NO:266、SEQ ID NO:267、SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:270、SEQID NO:271、SEQ ID NO:272、SEQ ID NO:327、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:329、SEQ ID NO:330、SEQ ID NO:331、SEQ ID NO:332、SEQ ID NO:333和SEQ ID NO:334。
7.iCAR部分/aCAR部分：接头
在一些实施例中，iCAR部分经由接头与aCAR部分共价连接。在一个特定的实施例中，接头是gly-ser多肽接头，即由甘氨酸和丝氨酸残基组成的肽。示例性gly-ser多肽接头包含氨基酸序列Ser(Gly4Ser)n，以及(Gly4Ser)n和/或(Gly4Ser3)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3，即Ser(Gly4Ser)3。在一些实施例中，n＝4，即Ser(Gly4Ser)4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。在一些实施例中，n＝7。在一些实施例中，n＝8。在一些实施例中，n＝9。在一些实施例中，n＝10。另一种示例性gly-ser多肽接头包含氨基酸序列Ser(Gly4Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在另一个实施例中，n＝4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly4Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly3Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在另一个实施例中，n＝5。在又一个实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly4Ser3)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在一些实施例中，n＝5。在一些实施例中，n＝6。另一种示例性gly-ser多肽接头包含(Gly3Ser)n。在一些实施例中，n＝l。在一些实施例中，n＝2。在一些实施例中，n＝3。在一些实施例中，n＝4。在另一个实施例中，n＝5。在又一个实施例中，n＝6。
在一些实施例中，双顺反子构建体包含共价连接iCAR部分和aCAR部分的接头。在一些实施例中，双顺反子构建体在编码iCAR部分的核酸序列与编码构建体的aCAR部分的核酸序列之间包含病毒自切割2A肽。在一些实施例中，病毒自切割2A肽包括来自明脉扁刺蛾(Thosea asigna)病毒(TaV)的T2A。在一些实施例中，iCAR部分经由接头与aCAR部分共价连接。在一些实施例中，iCAR部分经由GSG与aCAR部分共价连接。在一些实施例中，iCAR部分经由GGGGS接头(SEQ ID NO:153)与aCAR部分共价连接。在一些实施例中，iCAR部分经由GGGGSGGGGSGGGGS接头(SEQ ID NO:154)与aCAR部分共价连接。在一些实施例中，iCAR经由T2A接头(SEQ ID NO:155)与aCAR部分共价连接。在一些实施例中，iCAR经由F2A接头(SEQID NO:156)与aCAR部分共价连接。在一些实施例中，iCAR经由P2A接头(SEQ ID NO:157)与aCAR部分共价连接。在一些实施例中，iCAR经由E2A接头(SEQ ID NO:158)与aCAR部分共价连接。在一些实施例中，iCAR经由IRES长接头(SEQ ID NO:159)与aCAR部分共价连接。在一些实施例中，iCAR经由IRES短接头(SEQ ID NO:160)与aCAR部分共价连接。
表13：iCAR部分/aCAR部分接头序列
8.iCAR部分/aCAR部分：信号肽
在一些实施例中，双顺反子构建体包含iCAR和aCAR部分上游的信号肽。在一些实施例中，信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)。在一些实施例中，信号肽是GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)。在一些实施例中，信号肽是mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
表14：iCAR/aCAR信号肽序列
| 序列信息 | SEQ ID NO | 氨基酸序列 |
| CD8α | 161 | MALPVTALLLPLALLLHAARP |
| GM-CSF | 162 | MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP |
| mIgK | 306 | MSVPTQVLGLLLLWLTDARC |
9.aCAR部分：aCAR scFv
在一些实施例中，双顺反子构建体包含含有单链可变片段(scFv)组分的aCAR部分。在一些实施例中，iCAR部分包含scFv组分。在一些实施例中，scFv靶向Her2、间皮素或EGFR。在一些实施例中，scFv靶向Her2。在一些实施例中，scFv靶向间皮素。在一些实施例中，scFv靶向EGFR。在一些实施例中，scFv是基于曲妥珠单抗(抗Her2抗体，也称为)、帕妥珠单抗(抗Her2抗体，也称为)、另一种商业抗Her2抗体(包括但不限于FRP5、A21、XMT1517、XMT1518、XMT1519、FWP51、它们的生物等效物或它们的生物类似物)的scFv。在一些实施例中，scFv具有曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、FRP5、A21、XMT1517、XMT1518、XMT1519、FWP51、它们的生物等效物或它们的生物类似物的VH和VL结构域。在一些实施例中，scFv是基于西妥昔单抗(抗EGFR抗体，也称为)、帕尼单抗(抗EGFR抗体，也称为)、另一种商业抗EGFR抗体(包括但不限于伊马曲单抗、尼妥珠单抗、耐昔妥珠单抗、ICR62、马妥珠单抗、C10、扎芦木单抗、P1X、P2X、P3X、EGFR-la1-VHH、它们的生物等效物或它们的生物类似物)的scFv。在一些实施例中，scFv具有西妥昔单抗、帕尼单抗、伊马曲单抗、尼妥珠单抗、耐昔妥珠单抗、ICR62、马妥珠单抗、C10、扎芦木单抗、P1X、P2X、P3X、EGFR-la1-VHH、它们的生物等效物或它们的生物类似物的VH和VL结构域。在一些实施例中，scFv是基于商业抗间皮素抗体(包括但不限于阿麦妥单抗、P4、SS1、SD1、SD2、1H7、3C02、它们的生物等效物或它们的生物类似物)的scFv。在一些实施例中，scFv具有阿麦妥单抗、P4、SS1、SD1、SD2、1H7、3C02、它们的生物等效物或它们的生物类似物的VH和VL结构域。
在一些实施例中，scFv靶向Her2。在一些实施例中，Her2scFv基于来自曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，Her2 scFv基于来自曲妥珠单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，Her2scFv基于来自帕妥珠单抗的Vh和Vl。曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的Vh链和Vl链在下表15和16中提供。在一些实施例中，Her2 scFv基于来自FRP5的Vh和Vl。在一些实施例中，Her2 scFv基于来自A21的Vh和Vl。在一些实施例中，Her2 scFv基于来自XMT1517的Vh和Vl。在一些实施例中，Her2 scFv基于来自XMT1518的Vh和Vl。在一些实施例中，Her2scFv基于来自XMT1519的Vh和Vl。在一些实施例中，Her2 scFv基于来自FWP51的Vh和Vl。在一些实施例中，Her2 scFv基于来自曲妥珠单抗F9G的Vh和Vl。
表15：抗Her2序列
在一些实施例中，scFv靶向EGFR。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自西妥昔单抗、帕尼单抗、伊马曲单抗、尼妥珠单抗、耐昔妥珠单抗、ICR62、马妥珠单抗、C10、扎芦木单抗、P1X、P2X、P3X或EGFR-la1-VHH的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自西妥昔单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自帕尼单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自伊马曲单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自尼妥珠单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自尼妥珠单抗(K5)的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自耐昔妥珠单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自ICR62的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自马妥珠单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自C10的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自扎芦木单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自P1X的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自P2X的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于来自P3X的Vh和Vl。在一些实施例中，EGFR scFv基于EGFR-la1-VHH。在一些实施例中，EGFR scFv基于EGFR-VHH。
表16：抗EGFR序列
在一些实施例中，scFv靶向间皮素。在一些实施例中，间皮素scFv基于来自阿麦妥单抗、P4、SS1、SD1、SD2、1H7或3C02的Vh和Vl。在一些实施例中，间皮素scFv基于来自阿麦妥单抗的Vh和Vl。在一些实施例中，间皮素scFv基于来自P4的Vh和Vl。在一些实施例中，间皮素scFv基于来自SS1的Vh和Vl。在一些实施例中，间皮素scFv基于SD1。在一些实施例中，间皮素scFv基于SD2。在一些实施例中，间皮素scFv基于来自1H7的Vh和Vl。在一些实施例中，间皮素scFv基于来自3C02的Vh和Vl。
表17：抗间皮素序列
在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。
在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的接头。在一些实施例中，aCAR包含连接VH和VL以形成scFv的基于GS的接头序列。在一些实施例中，GS接头包含GGGGS(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR包含Whitlow接头序列，例如GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ ID NO:82)。
10.aCAR部分：铰链和跨膜结构域
在一些实施例中，双顺反子构建体包含含有铰链跨膜(TM)结构域组分的aCAR部分。在一些实施例中，aCAR部分包含铰链TM结构域。在一些实施例中，铰链TM结构域包括选自由以下项组成的组的铰链TM结构域：CD28铰链TM结构域和CD8铰链TM结构域(包括CD8a铰链TM结构域)。在一些实施例中，铰链TM结构域是CD28铰链TM结构域。在一些实施例中，载体包含CD8铰链TM结构域。在一些实施例中，载体包含CD8a铰链TM结构域。在一些实施例中，铰链结构域包括选自由以下项组成的组的铰链结构域：CD28铰链结构域和CD8铰链结构域(包括CD8a铰链结构域)。在一些实施例中，铰链结构域是CD28铰链结构域。在一些实施例中，载体包含CD8铰链结构域。在一些实施例中，载体包含CD8a铰链结构域。在一些实施例中，TM结构域包括选自由以下项组成的组的TM结构域：CD28 TM结构域和CD8 TM结构域(包括CD8aTM结构域)。在一些实施例中，TM结构域是CD28 TM结构域。在一些实施例中，载体包含CD8TM结构域。在一些实施例中，载体包含CD8a TM结构域。在一些实施例中，铰链结构域是SEQID NO:85的CD28铰链结构域。在一些实施例中，载体包含SEQ ID NO:84的CD8a铰链结构域。在一些实施例中，TM结构域是SEQ ID NO:319的CD28 TM结构域。在一些实施例中，载体包含SEQ ID NO:320的CD8a TM结构域。
表18：aCAR铰链和TM结构域序列
11.aCAR部分：共刺激和激活信号传导结构域
在一些实施例中，双顺反子构建体包含含有共刺激结构域组分的aCAR部分。在一些实施例中，aCAR部分包含共刺激结构域。在一些实施例中，共刺激结构域选自由以下项组成的组：CD137(4-1BB)或CD28或4-1BB和CD28(28BB)两者。在一些实施例中，共刺激结构域是CD137(4-1BB)共刺激结构域。在一些实施例中，共刺激结构域是CD28共刺激结构域。在一些实施例中，激活信号传导结构域是CD3z结构域。在一些实施例中，共刺激结构域是28BB共刺激结构域。在一些实施例中，共刺激结构域是4-1BB(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，共刺激结构域是CD28(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，激活信号传导结构域是CD3z(SEQID NO:235)。
表19：aCAR共刺激和激活信号传导结构域序列
12.aCAR部分：基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)
在一些实施例中，aCAR部分包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。在一些实施例中，ITAM是CD3ζ结构域。在一些实施例中，ITAM是SEQ ID NO:236的CD3ζ结构域。在一些实施例中，ITAM是SEQ ID NO:237的CD3ζ3F结构域。在一些实施例中，ITAM是SEQ ID NO:238的CD3ζ4F结构域。在一些实施例中，ITAM是SEQ ID NO:239的CD3ζ4OF结构域。
表20：aCAR ITAM结构域序列
13.示例性aCAR
在一些实施例中，aCAR包含含有曲妥珠单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:170和171)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCARscFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z激活信号传导结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有曲妥珠单抗F9G的VL和VH序列(SEQ ID NO:307和308)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z激活信号传导结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有帕妥珠单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:173和174)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCARscFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有FRP5的VL和VH序列(SEQ ID NO:176和177)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有A21的VL和VH序列(SEQ ID NO:178和179)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有XMT1517的VL和VH序列(SEQ ID NO:180和181)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有XMT1518的VL和VH序列(SEQ ID NO:182和183)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有XMT1519的VL和VH序列(SEQ ID NO:184和185)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有FWP51的VL和VH序列(SEQ ID NO:186和187)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有抗HER2 VHH(SEQ ID NO:309)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。
在一些实施例中，aCAR包含含有西妥昔单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:189和190)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCARscFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有帕尼单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:192和193)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有伊马曲单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:195和196)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCARscFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有尼妥珠单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:197和198)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCARscFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有尼妥珠单抗(K5)的VL和VH序列(SEQ ID NO:310和311)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有耐昔妥珠单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:199和200)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有ICR62的VL和VH序列(SEQ ID NO:201和202)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有马妥珠单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:204和205)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCARscFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有C10的VL和VH序列(SEQ ID NO:206和207)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有扎芦木单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:208和209)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCARscFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有P1X的VL和VH序列(SEQ ID NO:210和211)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有P2X的VL和VH序列(SEQ ID NO:212和213)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有P3X的VL和VH序列(SEQ ID NO:214和215)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有EGFR-la1-VHH的VHH序列(SEQ ID NO:216)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有EGFR-VHH的VHH序列(SEQ ID NO:312)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有阿麦妥单抗的VL和VH序列(SEQ ID NO:217和218)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCARscFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有P4的VL和VH序列(SEQ ID NO:219和220)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有SS1的VL和VH序列(SEQ ID NO:222和223)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有SD1的VHH序列(SEQ ID NO:225)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有SD2的VHH序列(SEQ ID NO:226)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有1H7的VL和VH序列(SEQ ID NO:227和228)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR包含含有3C02的VL和VH序列(SEQ ID NO:230和231)的scFv组分。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VH-VL。在一些实施例中，aCAR VH和VL区域的取向是VL-VH。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)。在一些实施例中，aCAR scFv包含共价连接VH和VL以形成aCAR scFv的Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。在一些实施例中，aCAR包含CD8α铰链TM结构域(SEQ ID NO:84)。在一些实施例中，aCAR包含CD28铰链TM结构域(SEQ ID NO:85)。在一些实施例中，aCAR包含4-1BB共刺激结构域(SEQ ID NO:233)。在一些实施例中，aCAR包含CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。在一些实施例中，aCAR包含CD3z共刺激结构域(SEQ ID NO:235)。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含含有CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)的ITAM。在一些实施例中，aCAR包含aCAR部分上游的信号肽，其中该信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ IDNO:306)。
在一些实施例中，aCAR具有表21中所示的一组组分。
表21：aCAR构建体
14.任选的shRNA
在一些实施例中，双顺反子构建体包含任选的短发夹RNA(shRNA)。在一些实施例中，双顺反子构建体包含HLA-A2shRNA。在一些实施例中，双顺反子构建体包含具有序列SEQID NO:240的HLA-A2 shRNA。在一些实施例中，双顺反子构建体包含具有序列SEQ ID NO:241的HLA-A2 shRNA。在一些实施例中，双顺反子构建体包含HLA-β2shRNA。在一些实施例中，双顺反子构建体包含具有SEQ ID NO:242的序列的HLA-β2shRNA。在一些实施例中，双顺反子构建体包含具有两个序列SEQ ID NO:240和SEQ ID NO:242的HLA-A2 shRNA。在一些实施例中，双顺反子构建体包含具有两个序列SEQ ID NO:241和SEQ ID NO:242的HLA-A2shRNA。
表22：shRNA序列
15.单顺反子构建体
在一些实施例中，iCAR和aCAR构建体由单独的载体表达，并且iCAR/aCAR对在细胞中共表达。在同一细胞中共表达多个构建体的方法在本领域是众所周知的，并且包括例如共转染两个或多个表达载体、将构建体整合到细胞内相同或不同的基因座，任选地随后进行富集以进行共表达。
iii.CAR-T双顺反子iCAR/aCAR载体构建
在一些实施例中，双顺反子构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的共转导允许iCAR和aCAR由单个核酸载体编码。在一些实施例中，本发明提供了一种载体，该载体包含如上述实施例中任一个中所定义的本发明的核酸分子，以及至少一个与该核酸分子可操作地连接的控制元件，诸如启动子。
在一些实施例中，载体是慢病毒(LV)载体。在一些实施例中，LV载体是可商购获得的LV载体。在一些实施例中，LV载体包括但不限于pLenti、pLVX-Puro、pLVX-IRES-Puro/Neo/Hygro、pLVx-EF1a-IRES(TAKARA)和/或pcLV-EF1a(Sirion)。在一些实施例中，LV载体是pLVX-Puro。在一些实施例中，LV载体是pLVX-IRES-Puro/Neo/Hygro。在一些实施例中，LV载体是pLVx-EF1a-IRES(TAKARA)。在一些实施例中，LV载体是pcLV-EF1a(Sirion)。
在一些实施例中，载体包含EF1启动子。在一些实施例中，载体包含CMV启动子。在一些实施例中，载体包含PGK启动子。
在一些实施例中，载体的核苷酸序列包含编码aCAR的核苷酸序列与编码iCAR的核苷酸序列之间的内部核糖体进入点(IRES)。一般来讲，编码aCAR的核苷酸序列和编码iCAR的核苷酸序列可以按任何顺序排列，但在特定实施例中，编码aCAR的核苷酸序列在编码iCAR的核苷酸序列的下游。
在一些实施例中，编码aCAR和iCAR的核苷酸序列在单个载体上编码。在一些实施例中，载体在编码aCAR的核苷酸序列与编码iCAR的核苷酸序列之间包含内部核糖体进入点(IRES)。在一些实施例中，编码aCAR的核苷酸序列在编码iCAR的核苷酸序列的下游。在一些实施例中，核苷酸序列包含位于编码aCAR的核苷酸序列与编码iCAR的核苷酸序列之间的病毒自切割2A肽。在一些实施例中，载体的核苷酸序列包含编码aCAR的核苷酸序列与编码iCAR的核苷酸序列之间的病毒自切割2A肽。在一些实施例中，病毒自切割2A肽包括来自明脉扁刺蛾(Thosea asigna)病毒(TaV)的T2A。在一些实施例中，载体包含编码经由柔性接头与所述iCAR连接的组成型aCAR的核苷酸序列。
免疫细胞可以用本文所述的合适核酸分子转染，例如通过RNA转染或通过掺入适合在真核细胞或病毒载体中复制和/或转录的质粒中。在一些实施例中，载体选自逆转录病毒或慢病毒载体。
也可以使用逆转录病毒载体和适当的包装系的组合，其中衣壳蛋白将具有感染人类细胞的功能。几种产双嗜性病毒的细胞系是已知的，包括PA12(Miller等人(1985)Mol.Cell.BioI.[分子和细胞生物学]5:431-437)；PA317(Miller等人(1986)Mol.Cell.Bioi.[分子和细胞生物学]6:2895-2902)；以及CRIP(Danos等人(1988)Proc.Nati.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]85:6460-6464)。替代性地，也可以使用非双嗜性颗粒，诸如用VSVG、RD 114或GAL V包膜假型化并且在一些实施例中在PG13细胞系中产生的颗粒。可以通过与生产细胞直接共培养(例如，通过Bregni等人(1992)Blood[血液]80:1418-1422的方法)或者仅与病毒上清液或浓缩载体原液培养(例如，通过Xu等人(1994)Exp.Hemat[实验血液学].22:223-230和Hughes等人(1992)J Clin.Invest[临床研究杂志].89:1817的方法)来进一步转导细胞。
在一些实施例中，iCAR和aCAR由不同构建体编码，例如作为单独的单顺反子aCAR和iCAR构建体。在一些实施例中，iCAR和aCAR由单个构建体编码，例如在单个表达载体内作为单独的单顺反子aCAR和iCAR构建体。
在一些实施例中，iCAR和aCAR由同一表达载体编码。在一些实施例中，表达载体包含选自由以下项组成的组的编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，表达载体包含选自由以下项组成的组的双顺反子iCAR/aCAR核酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，表达载体包含编码选自由以下项组成的组的氨基酸序列的双顺反子iCAR/aCAR核酸：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出75％、80％、85％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ IDNO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少75％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少80％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少85％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少90％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少91％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少92％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少93％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少94％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少95％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少96％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少97％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少98％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出至少99％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，编码双顺反子iCAR/aCAR的核酸序列与选自由以下项组成的组的核酸序列表现出100％的序列同一性：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
如本文所用，序列同一性可以包括两个或更多个核酸序列或者两个或更多个氨基酸序列之间的同一性/相似性，以序列之间的同一性或相似性来表达。序列同一性可以用同一性百分比来衡量；百分比越高，序列就越相同。序列相似性可以用相似性百分比来衡量(考虑到保守的氨基酸取代)；百分比越高，序列就越相似。当使用标准方法比对时，核酸或氨基酸序列的同系物或直系同源物具有相对高程度的序列同一性/相似性。用于比较的序列比对方法在本领域是众所周知的。各种程序和比对算法在例如但不限于以下文献中描述：Smith&Waterman,Adv.Appl.Math.[应用数学进展]2:482,1981；Needleman&Wunsch,J.Mol.Biol[分子生物学杂志].48:443,1970；Pearson&Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]85:2444,1988；Higgins&Sharp,Gene[基因],73:237-44,1988；Higgins&Sharp,CABIOS[生物科学中的计算机应用]5:151-3,1989；Corpet等人,Nuc.AcidsRes[核酸研究].16:10881-90,1988；Huang等人,Computer Appls.in the Biosciences[生物科学中的计算机应用]8,155-65,1992；以及Pearson等人,Meth.Mol.Bio[分子生物学方法].24:307-31,1994。Altschul等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-10,1990提出了对序列比对方法和同源性计算的详细考虑。NCBI基本局部比对搜索工具(BLAST)(Altschul等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-10,1990)可从几个来源获得，包括国家生物信息中心(National Center for Biological Information)(NCBI，国家医学图书馆(National Library of Medicine)，马里兰州贝塞斯达公司38A号楼8N805室，邮编20894(Building 38A,Room 8N805,Bethesda,Md.20894))和因特网，以用于与序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx结合使用。另外的信息可以在NCBI网站找到。例如，BLASTN可以用于比较核酸序列，而BLASTP可以用于比较氨基酸序列。为了比较两个核酸序列，可以如下设置选项：--将i设置为包含要比较的第一核酸序列的文件(诸如C:\seq1.txt)；--将j设置为包含要比较的第二核酸序列的文件(诸如C:\seq2.txt)；--将p设置为blastn；--将o设置为任何期望的文件名(诸如C:\output.txt)；--将q设置为--1；--将r设置为2；并且将所有其他选项保留其默认设置。例如，以下命令可以用于生成包含两个序列之间的比较的输出文件：C:\B12seq--i c:\seq1.txt--j c:\seq2.txt--p blastn--oc:\output.txt--q--1--r 2。
iv.效应细胞的构建
在另一个方面，本发明提供一种用于制备安全效应免疫细胞的方法，该方法包括：(i)用包含编码如上文所定义的用于共转染的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的核苷酸序列的核酸分子转染针对肿瘤相关抗原的效应免疫细胞，或用载体转导细胞，或者(ii)用包含编码如上文所定义的双顺反子iCAR/aCAR构建体的核苷酸序列的核酸分子转染未使用过的效应免疫细胞，或用如上文所定义的载体转导效应免疫细胞。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR构建体在单个载体上编码。
在另一个方面，本发明提供一种用于制备安全效应免疫细胞的方法，该方法包括：(i)用包含编码如上文所定义的用于共转染的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的核苷酸序列的核酸分子转染针对肿瘤相关抗原的TCR工程化效应免疫细胞，或用载体转导细胞，或者(ii)用包含编码如上文所定义的双顺反子iCAR/aCAR构建体的核苷酸序列的核酸分子转染未使用过的效应免疫细胞，或用如上文所定义的载体转导效应免疫细胞。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR构建体在单个载体上编码。在一些实施例中，双顺反子iCAR和aCAR构建体在不同/单独的载体上编码。在一些实施例中，用于共转导的单顺反子aCAR和iCAR构建体在单个载体上编码。在一些实施例中，用于共转导的单顺反子aCAR和iCAR构建体在不同/单独的载体上编码。
在一些实施例中，在工程化中使用的免疫细胞包括但不限于T细胞、自然杀伤细胞或细胞因子诱导的杀伤细胞。在一些实施例中，在工程化中使用的免疫细胞包括但不限于Jurkat T细胞、Jurkat-NFAT T细胞和/或外周血单核细胞(PBMC)。
在一些实施例中，免疫细胞被修饰为安全效应免疫细胞。在另一个方面，本发明提供了一种通过如上所述的本发明的方法获得的安全效应免疫细胞。安全效应免疫细胞可以是表达外源性T细胞受体(TCR)以及用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的重定向T细胞，其中外源性TCR针对抗原的非多态性细胞表面表位或多态性细胞表面表位的单个等位基因变体，其中所述表位是肿瘤相关抗原或至少被相关肿瘤和正常组织的细胞共享，并且用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体如上文定义；或者安全效应免疫细胞是重定向效应免疫细胞，诸如表达如上文定义的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的自然杀伤细胞或T细胞。
在一些实施例中，安全效应免疫细胞在其表面上表达包含与抗原的非多态性细胞表面表位特异性结合的细胞外结构域的aCAR，以及包含与所述aCAR的细胞外结构域所结合的不同抗原的多态性细胞表面表位的单个等位基因变体特异性结合的细胞外结构域的iCAR。在一些实施例中，iCAR的细胞外结构域特异性结合所述aCAR的细胞外结构域所结合的同一抗原的不同多态性细胞表面表位的单个等位基因变体；或者iCAR的细胞外结构域特异性结合所述aCAR的细胞外结构域所结合的同一多态性细胞表面表位的不同单个等位基因变体。
在一些实施例中，aCAR和iCAR作为单独的蛋白质存在于细胞表面上。在一些实施例中，iCAR在细胞表面上的表达水平大于或等于aCAR的表达水平。在一些实施例中，在细胞表面上表达的iCAR的细胞外结构域针对或特异性结合至少一个细胞外多态性表位的单个等位基因变体。
在一些实施例中，在细胞表面上表达的iCAR的细胞外结构域针对或特异性结合HLA-A2的单个等位基因变体。在一些实施例中，iCAR将针对HLA-A2。在一些实施例中，aCAR将针对EGFR。在一些实施例中，aCAR将针对HER2。在一些实施例中，iCAR/aCAR组将分别是HLA-A2和EGFR。在一些实施例中，iCAR/aCAR组将分别是HLA-A2和HER2。
在一些实施例中，安全效应免疫细胞包含选自由以下项组成的组的双顺反子iCAR/aCAR核酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ IDNO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，安全效应免疫细胞包含表达载体，该表达载体包含选自由以下项组成的组的双顺反子iCAR/aCAR核酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，安全效应免疫细胞包含编码选自由以下项组成的组的氨基酸序列的双顺反子iCAR/aCAR核酸：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
在一些实施例中，安全效应免疫细胞包含表达载体，该表达载体包含编码选自由以下项组成的组的氨基酸序列的双顺反子iCAR/aCAR核酸：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
在一些实施例中，EGFR是aCAR靶标，并且HLA是iCAR靶标。在一些实施例中，HER2是aCAR靶标，并且HLA是iCAR靶标。在一些实施例中，用于治疗如定义的癌症的安全效应免疫细胞包含表达载体。在一些实施例中，iCAR和aCAR由基于双顺反子核酸的表达载体编码。在一些实施例中，表达载体包含选自由以下项组成的组的核酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:275、SEQ IDNO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。在一些实施例中，表达载体包含编码选自由以下项组成的组的氨基酸序列的核酸序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
在一些实施例中，用于治疗癌症的安全效应免疫细胞包含表达载体，该表达载体包含选自由以下项组成的组的双顺反子iCAR/aCAR核酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ IDNO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，用于治疗癌症的安全效应免疫细胞包含选自由以下项组成的组的双顺反子iCAR/aCAR核酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ IDNO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
在一些实施例中，用于治疗癌症的安全效应免疫细胞包含编码选自由以下项组成的组的氨基酸序列的双顺反子iCAR/aCAR核酸：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ IDNO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
在一些实施例中，用于治疗癌症的安全效应免疫细胞包含表达载体，该表达载体包含编码选自由以下项组成的组的氨基酸序列的双顺反子iCAR/aCAR核酸：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
A.体外测定
在一些实施例中，将使用多种测定来测试双顺反子iCAR/aCAR构建体的活性效果，包括有效性和抑制能力。在一些实施例中，将在体外和/或体内测试用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体。在一些实施例中，将在体外测试用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体。在一些实施例中，将在体内测试用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体。在一些实施例中，体外测定对细胞因子分泌和/或细胞毒性效果进行测量。在一些实施例中，体内测定将评价用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体对在靶脱瘤异种移植物的抑制和保护。在一些实施例中，体内测定将评价用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体对在靶脱瘤组织和/或病毒器官的抑制和保护。
i.荧光素酶细胞毒性测定
在一些实施例中，使用荧光素酶细胞毒性测定来评价用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体。一般来讲，对于荧光素酶细胞毒性测定，靶肿瘤细胞(其可以被称为“T”)被工程化为表达萤火虫荧光素酶。在一些实施例中，使用可商购获得的ATCC细胞系。在一些实施例中，使用H1703细胞。在一些实施例中，使用H1650细胞。在一些实施例中，使用H1792细胞。在一些实施例中，使用H292细胞。可以根据Bright-Glo荧光素酶测定(可从普洛麦格公司或BPS Biosciences或其他商业供应商商购获得)进行体外荧光素酶测定。可以将经转导的效应物(E)T细胞(已经用双顺反子iCAR/aCAR构建体或模拟/对照构建体转导)与表达iCAR或aCAR靶标的重组靶细胞一起孵育18-48小时，以按不同的效应物与靶标比例进行测试。在一些实施例中，iCAR/aCAR对包含具有如上所述的组分的aCAR和/或iCAR中的任一者。在一些实施例中，将测试上述双顺反子iCAR/aCAR构建体。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含由选自由以下项组成的组的核酸序列编码的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。可以通过用Bright-Glo荧光素酶系统估计活细胞的数量来间接量化细胞杀伤。也可以使用IncuCyte细胞毒性测定来测量细胞杀伤。
在一些实施例中，可以通过根据iCAR/aCAR表达水平分选转导的T细胞群或者通过根据重组靶细胞的靶向表达(包括例如编码至少一个细胞外多态性表位的基因产物的表达)选择它们的亚群来操纵“脱瘤”细胞毒性。在一些实施例中，aCAR和iCAR靶标是具有细胞外结构域的任何靶标。在一些实施例中，分选基于EGFR、HER2或HLA-A2表达水平。
在一些实施例中，检查用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体以确定iCAR转导的T细胞是否可以在体外区分“在瘤”细胞(例如，肿瘤细胞)和“脱瘤”细胞(例如，非肿瘤细胞)。一般来讲，这是通过检查与比例为1:1至1:10的“在瘤”细胞和“脱瘤”细胞的混合物一起孵育的转导的T细胞的杀伤效果来测试的。在一些实施例中，靶细胞与效应T细胞的比例(T:E比)为1:0.02、1:0.04、1:0.06、1:0.08、1:0.1、1:0.12、1:0.12、1:0.14、1:0.16、1:0.18、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。在一些实施例中，E:T比(效应T细胞与靶细胞的比例)为0.02:1、0.04:1、0.06:1、0.08:1、0.1:1、0.12:1、0.12:1、0.14:1、0.16:1、0.18:1、2:1、3:1、4:1、5:1:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在仅一个细胞群将被工程化为一次表达荧光素酶基因的实施例中，可以通过荧光素酶表达将在瘤重组细胞与“脱瘤”重组细胞区分开来。在共孵育24-48小时后，可以用Bright-Glo测定(普洛麦格公司)来量化杀伤。也可以使用IncCyte细胞毒性测定来量化杀伤。在一些实施例中，转导的细胞仅用于转导效率大于10％并且观察到aCAR和iCAR的表达的测定中。
在一些实施例中，与用aCAR(或其他对照)转导但未用用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体转导的T细胞相比，用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体转导的T细胞表现出少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％和/或约95％的脱瘤细胞杀伤。在一些实施例中，与用aCAR(或其他对照)转导但未用双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的T细胞相比，用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体所转导的T细胞表现出低约1倍、约2倍、约3倍、约4倍、约5倍或约10倍的脱瘤细胞杀伤。
ii.半胱天冬酶3
在一些实施例中，采用半胱天冬酶-3测定在体外确定“在瘤”细胞(例如，肿瘤细胞)和“脱瘤”细胞(例如，非肿瘤细胞)的凋亡水平。在一些实施例中，检查半胱天冬酶3对由针对激活的切割的半胱天冬酶3的抗体诱导的细胞毒性淋巴细胞(CTL)凋亡的检测。
一般来讲，CTL杀死靶细胞的途径之一是通过Fas配体诱导凋亡。CASP3蛋白是半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(半胱天冬酶)家族的成员。通常，半胱天冬酶的顺序激活在细胞凋亡的执行阶段起着重要作用，因此，半胱天冬酶原3切割成半胱天冬酶3会导致构象变化和催化活性的表达。切割的激活形式的半胱天冬酶3可以被单克隆抗体特异性识别。
在一些实施例中，可以将转导的T细胞与“在瘤”(例如，模拟肿瘤)和“脱瘤”细胞(例如，模拟非肿瘤)重组细胞孵育。在一些实施例中，已经事先用CFSE(5(6)-羧基荧光素N-羟基琥珀酰亚胺酯)或其他细胞示踪染料(例如，CellTrace Violet)标记“在瘤”(例如，肿瘤)和“脱瘤”细胞(例如，非肿瘤)重组细胞。在一些实施例中，将靶细胞与效应细胞共孵育约1小时至约6小时、约2小时至约5小时或约2小时至约4小时。在一些实施例中，通过流式细胞术来量化靶细胞凋亡。可以通过内部染色试剂盒(美天旎公司或碧迪生物科学公司(BDbioscience))来透化和固定细胞，并用激活半胱天冬酶3抗体(碧迪生物科学公司)进行染色。
在一些实施例中，与用双顺反子iCAR/aCAR构建体转导但未用iCAR(或其他适当的对照)转导的T细胞相比，双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的T细胞诱导少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％和/或约95％的脱瘤细胞凋亡。在一些实施例中，与用aCAR(或其他对照)转导但未用双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的T细胞相比，双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的T细胞诱导低约1倍、约2倍、约3倍、约4倍、约5倍或约10倍的脱瘤细胞凋亡。
iii.延时显微术
可以采用双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的延时显微术以便辨别靶标结合。在一些实施例中，将用报告基因标记(例如但不限于荧光蛋白，诸如mCherry)靶细胞。在一些实施例中，将转导的T细胞与“在瘤”或“脱瘤”细胞孵育长达5天。在一些实施例中，可以使用延时显微术来可视化杀伤。在一些实施例中，将使用活细胞数染色和CountBrightTM珠(可从赛默飞世尔公司/英杰公司(Thermofisher/Invitrogen)商购获得)进行流式细胞术分析以确定终点时间的靶细胞数。
在一些实施例中，为了确定用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体转导的T细胞是否可以在体外辨别靶标，用不同的报告蛋白(例如，GFP和mCherry)标记每个重组靶细胞(“在瘤”或“脱瘤”)。在一些实施例中，任何报告蛋白对都可以起作用，只要报告蛋白对含有两个易于区分的报告物即可。在一些实施例中，将转导的T细胞(效应细胞)与重组细胞(靶细胞)以1:1的E/T比例共孵育。在一些实施例中，效应物与靶标的比例(E/T)包括但不限于16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、6:1、4:1、2:1或1:1。在一些实施例中，然后通过显微镜成像检查细胞命运。
iv.细胞因子表达细胞内染色
可以检查细胞因子表达和/或释放以便确定T细胞激活。在一些实施例中，将双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的T细胞与重组靶细胞孵育，并且量化一种或多种细胞因子的细胞因子产生，例如根据或通过流式细胞术分析测量细胞培养上清液中的细胞因子分泌，或者通过Luminex和/或MSD。对于流式细胞术分析，可以采用高尔基体终止剂来防止细胞因子的分泌。在一些实施例中，在转导的T细胞与靶细胞孵育6小时和18小时至24小时后，将通过细胞内染色试剂盒(美天旎公司)透化和固定T细胞，并用T细胞标志物(CD3和CD8)和一种或多种细胞因子的抗体进行染色。在一些实施例中，细胞因子包括但不限于IL-2、INFγ和/或TNFα。在一些实施例中，细胞因子被分泌并且包括但不限于IL-2、INFγ和/或TNFα。在一些实施例中，细胞因子是细胞内的并且包括但不限于IL-2、INFγ和/或TNFα。
v.通过CD107a染色测量的T细胞脱粒测定
作为转导的T细胞的细胞溶解活性的替代指标，也可以检查CD107a的染色。一般来讲，可以通过CD107a(一种溶酶体相关膜蛋白(LAMP-1))的表面表达来鉴定T细胞的脱粒，并且已经表明LAMP-1的表面表达与CD8 T细胞的细胞毒性相关。此外，该分子位于溶酶体的腔侧。通常，在激活后，CD107a被转移到激活的淋巴细胞的细胞膜表面。此外，CD107a在细胞表面上瞬时表达并且经由内吞途径迅速重新内化。因此，虽然不受理论约束，但通过在细胞刺激期间进行抗体染色和通过添加莫能菌素(例如，防止酸化和随后的内吞CD107a抗体复合物的降解)来最大限度地检测CD107a。
在一些实施例中，将双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的T细胞与靶细胞孵育约6小时至约24小时，并且检查CD8 T细胞上的CD107a表达。在一些实施例中，靶细胞仅表达一种被aCAR识别的靶蛋白(如在肿瘤细胞中)，或者靶细胞表达被aCAR和iCAR识别的两种靶蛋白(如在正常细胞中)。在一些实施例中，将双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的T细胞与靶细胞在存在莫能菌素的情况下孵育约6小时至约24小时，CD8 T细胞上的CD107a表达之后使用针对T细胞表面标志物(例如，CD3和CD8)的偶联抗体和CD107a的偶联抗体进行流式细胞术。
vi.通过ELISA/Luminex量化分泌的细胞因子
在一些实施例中，在将表达iCAR或aCAR或aCAR和iCAR两者的双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的T细胞(Jurkat，或原代T细胞)与在其细胞表面上表达iCAR或aCAR或aCAR和iCAR抗原两者的修饰靶细胞共培养后，将收集条件培养基，并且将通过细胞因子ELISA或通过Luminex xMAP多重测定技术(路明克斯公司(Luminex))测量细胞因子的浓度。在一些实施例中，细胞因子选自由以下项组成的组：IL-2、INFγ和/或TNFα。在一些实施例中，细胞因子选自由以下项组成的组：IL-2。在一些实施例中，细胞因子选自由以下项组成的组：INFγ。在一些实施例中，细胞因子选自由以下项组成的组：TNFα。在一些实施例中，双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的细胞显示出减少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、或约99％。
vii.通过流式微珠阵列(CBA)测定所测量的细胞因子分泌
流式微珠阵列(CBA)用于测量各种可溶性和细胞内蛋白质，包括细胞因子、趋化因子和生长因子。在一些实施例中，用在其细胞表面表达iCAR和aCAR或aCAR或iCAR靶抗原的修饰靶细胞刺激用aCAR或aCAR和iCAR构建体(效应细胞)转导的T细胞(原代T细胞或Jurkat细胞)。在一些实施例中，效应物与靶标的比例在20:1直至1:1的范围内。在一些实施例中，效应物与靶标的比例在20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1或1:1的范围内。在一些实施例中，在共孵育数小时后，效应细胞产生并分泌指示它们的效应物状态的细胞因子。在一些实施例中，收集反应的上清液，并且通过多重CBA测定来测量和量化所分泌的IL-2、IFN-γ和/或TNFα。
在一些实施例中，与由相同效应细胞与仅表达一种靶标的靶细胞共孵育产生的IL-2、IFN-γ和/或TNFα分泌相比，与表达两种靶抗原的靶标细胞共孵育的双CAR(aCAR/iCAR)转导的细胞显示出减少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或约99％。在一些实施例中，与由相同效应细胞与仅表达一种靶标的靶细胞共孵育产生的IL-2、IFN-γ和/或TNFα分泌相比，当将双顺反子iCAR/aCAR构建体转导的细胞与表达两种靶抗原的靶标细胞共孵育时显示出IL-2、IFN-γ和/或TNFα分泌减少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或约99％。在一些实施例中，减少86％。
B.体内测定
在一些实施例中，在体内测试双顺反子iCAR/aCAR构建体的有效性。在一些实施例中，用肿瘤细胞皮下或原位接种NOD/SCID/γc-或类似小鼠。在一些实施例中，肿瘤细胞是EGFR和HER2阳性细胞系A549、A431、Fadu、SK-OV-3、U-87、MCF7、NCI-H460、NCI-H1703、NCI-H1650、NCI-H1975、NCI-H292(ATCC细胞系)细胞。在一些实施例中，为了建立和/或区分“在靶”细胞和“脱瘤”细胞，A549、A431、Fadu、SK-OV-3、U-87、MCF7、NCI-H460NCI-H1703、NCI-H1650、NCI-H1975、NCI-H292可以被工程化为缺失或表达iCAR表位，从而代表健康细胞。在一些实施例中，iCAR表位包含至少一个细胞外多态性表位。在一些实施例中，iCAR表位来自HLA(包括例如HLA-A2、HLA-A3、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-E、HLA-F、HLA-DPA1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DQB2、HLA-DRB1或HLA-DRB5)。在一些实施例中，iCAR表位来自HLA-A2。可以用于这些测定中的其他细胞包括但不限于Raji或任何其他重组细胞系。在一些实施例中，此类测定可以在PDX(患者衍生的异种移植物)模型中进行。
对于该测定，将小鼠分成以下研究组；将向一个队列注射不表达iCAR表位的A549、A431、Fadu、SK-OV-3、U-87、MCF7、NCI-H460 NCI-H1703、NCI-H1650、NCI-H1975和/或NCI-H292细胞，而将向另一个队列注射表达iCAR表位的相应A549、A431、Fadu、SK-OV-3、U-87、MCF7、NCI-H460 NCI-H1703、NCI-H1650、NCI-H1975、NCI-H292细胞。分期后，将向小鼠静脉内输注用aCAR、aCAR/iCAR转导的T细胞和未转导的T细胞或无T细胞的对照组。将通过测量皮下肿瘤体积来测量肿瘤负荷。
根据该测定的一个实施例，为了测试表达双顺反子iCAR/aCAR构建体的T细胞是否可以在同一生物体中体内区分靶细胞和脱靶细胞，向小鼠注射“在瘤”/“脱瘤”A549、A431、Fadu、SK-OV-3、U-87、MCF7、NCI-H460 NCI-H1703、NCI-H1650、NCI-H1975和/或NCI-H292细胞的1:1混合物，随后在分期后注射表达单独aCAR或aCAR和iCAR两者(包括如本文所述的双顺反子iCAR/aCAR构建体)的转导T细胞。在该实施例中，在处死小鼠后，将通过免疫组织化学染色评估“在瘤”和“脱瘤”细胞的存在。
根据该测定的一个实施例，为了测试表达双顺反子iCAR/aCAR构建体的T细胞是否可以在同一生物体中体内区分靶细胞和脱靶细胞，向小鼠注射“在瘤”/“脱瘤”NALM-6、A549、A431、Fadu、SK-OV-3、U-87、MCF7和/或NCI-H460 NCI-H1703、NCI-H1650、NCI-H1975、NCI-H292细胞的1:10混合物，随后注射表达单独aCAR或aCAR和iCAR两者的转导T细胞。在该实施例中，在处死小鼠后，将通过iCAR和aCAR标记物的流式细胞术分析脾脏和骨髓中“在瘤”和“脱瘤”细胞的存在。
i.人类异种移植物小鼠模型中的肿瘤生长动力学
在一些实施例中，肿瘤细胞表达iCAR靶标、aCAR靶标或两者。在一些实施例中，aCAR肿瘤细胞系可以是EGFR或HER2阳性细胞系A549、A431、Fadu、SK-OV-3U-87、MCF7和/或NCI-H460(ATCC细胞系)。在一些实施例中，表达aCAR和iCAR两者的肿瘤细胞(即，“脱瘤”细胞)是NALM 6、A549、A431、Fadu、SK-OV-3、U-87、MCF7、MDA-MB-231和/或NCI-H460，它们被工程化为表达iCAR表位(例如，HLA-A2)，从而代表健康细胞。在一些实施例中，NALM 6和NALM6-HLA-A2也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶、GFP、mCherry)，以便于检测。在一些实施例中，A549和A549-HLA-A2也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶)，以便于检测。在一些实施例中，A431和A431-HLA-A2也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶)，以便于检测。在一些实施例中，Fadu和Fadu-HLA-A2也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶)，以便于检测。在一些实施例中，SK-OV-3和SK-OV-3-HLA-A2也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶)，以便于检测。在一些实施例中，NCI-H460和NCI-H460-HLA-A2也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶)，以便于检测。在一些实施例中，U-87和U-87-HLA-A2也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶)，以便于检测。在一些实施例中，MCF7和MCF7-HLA-A2也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶)，以便于检测。在一些实施例中，也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶)，以便于检测。在一些实施例中，NCI-H460和NCI-H460-HLA-A2也可以被工程化为表达报告基因(例如，萤火虫荧光素酶)，以便于检测。
在一些实施例中，将通过机械手段(卡尺)并且还通过使用体内成像系统(IVIS)测量肿瘤体积来进行监测。在一些实施例中，可以量化肿瘤负荷，并且可以通过FACS分析浸润T细胞群。
C.治疗方法
本发明提供了通过采用如本文所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体来治疗癌症的方法。如本文所述的治疗癌症的方法可以借助于CAR-T疗法或通过修饰免疫系统的其他细胞来利用杂合性丢失或在人类肿瘤中发现的其他基因丢失或等位基因失衡表型，包括但不限于由影响一个或多个核苷酸(例如但不限于HLA-1基因)的突变造成的功能或表达丧失。
在又一个方面，本发明提供了一种为患有以杂合性丢失或在人类肿瘤中发现的其他基因丢失或等位基因失衡表型为特征的肿瘤的受试者选择个性化生物标志物的方法，该方法包括(i)从受试者那里获得肿瘤活体组织切片；(ii)从受试者获得正常组织(例如，PBMC)的样品；(iii)鉴定由于杂合性丢失或在人类肿瘤中发现的其他基因丢失或等位基因失衡表型而不被肿瘤细胞表达但被正常组织的细胞表达的多态性细胞表面表位的单个等位基因变体，从而为受试者鉴定个性化生物标志物，以及(iv)确定适当的如本文所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体以用于治疗。
在另一个方面，本发明提供了一种用于治疗患有以杂合性丢失或在人类肿瘤中发现的其他基因丢失或等位基因失衡表型为特征的肿瘤的患者的癌症的方法，该方法包括向患者施用如上文定义的效应免疫细胞，其中iCAR针对编码由于杂合性丢失或在人类肿瘤中发现的其他基因丢失或等位基因失衡表型而不存在于肿瘤细胞中但至少存在于患者的相关哺乳动物正常组织的所有细胞上的多态性细胞表面表位的单个等位基因变体。在一些实施例中，效应免疫细胞包含如本文所述的双顺反子iCAR/aCAR构建体。
在一些实施例中，与包括向癌症患者施用至少一种表达如本文所述的双顺反子iCAR/aCAR构建体的免疫效应细胞群的治疗相比，该治疗使得在靶、脱瘤反应性降低。
在一些实施例中，如上文定义的用于治疗癌症的安全效应免疫细胞在其表面上表达包含与肿瘤相关抗原或抗原的非多态性细胞表面表位特异性结合的细胞外结构域的aCAR，以及包含特异性结合至少在肿瘤或管家蛋白起源的组织中表达的抗原(其是与所述aCAR的细胞外结构域所结合的抗原不同的抗原)的多态性细胞表面表位的单个等位基因变体的细胞外结构域的iCAR。在一些实施例中，效应免疫细胞表达如本文所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的组分。
在一些实施例中，如上文定义的用于治疗癌症的安全效应免疫细胞在其表面上表达包含与肿瘤相关抗原或抗原的非多态性细胞表面表位特异性结合的细胞外结构域的aCAR，以及包含特异性结合至少在肿瘤或管家蛋白(诸如HLA基因(包括例如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-E、HLA-F、HLA-K、HLA-L、HLA-DM、HLA-DO、HLA-DP、HLA-DQ或HLA-DR))起源的组织中表达的抗原(其是与所述aCAR的细胞外结构域所结合的抗原不同的抗原)的多态性细胞表面表位的单个等位基因变体的细胞外结构域的iCAR。
在一些实施例中，如上文定义的用于治疗癌症的安全效应免疫细胞在其表面上表达包含与肿瘤相关抗原或抗原的非多态性细胞表面表位特异性结合的细胞外结构域的aCAR，以及包含特异性结合至少在肿瘤(诸如HLA-A)起源的组织中表达的抗原(其是与所述aCAR的细胞外结构域所结合的抗原不同的抗原)的多态性细胞表面表位的单个等位基因变体的细胞外结构域的iCAR。
在一些实施例中，用于治疗癌症的方法中的安全效应免疫细胞选自T细胞、自然杀伤细胞或细胞因子诱导的杀伤细胞。在一些实施例中，安全效应免疫细胞是自体或通用(异体)效应细胞。在一些实施例中，用于上文定义的治疗癌症的任一种方法中的iCAR针对患者的存在aCAR的靶抗原的所有组织，其中aCAR的靶抗原是抗原的非多态性细胞表面表位或存在多态性细胞表面表位的单个等位基因变体，并且所述表位是肿瘤相关抗原或至少被相关肿瘤和正常组织的细胞共享。
在一些实施例中，癌症选自由以下项组成的组：急性骨髓性白血病[LAML]、肾上腺皮质癌[ACC]、膀胱尿路上皮癌[BLCA]、脑低级别胶质瘤[LGG]、乳腺浸润性癌[BRCA]、宫颈鳞状细胞癌和宫颈内腺癌[CESC]、胆管癌[CHOL]、结肠腺癌[COAD]、食道癌[ESCA]、多形性成胶质细胞瘤[GBM]、头颈部鳞状细胞癌[HNSC]、肾嫌色细胞癌[KICH]、肾脏透明细胞癌[KIRC]、肾脏乳头状细胞癌[KIRP]、肝脏肝细胞癌[LIHC]、肺腺癌[LUAD]、肺鳞状细胞癌[LUSC]、淋巴样肿瘤弥漫性大B细胞淋巴瘤[DLBC]、间皮瘤[MESO]、卵巢浆液性囊腺癌[OV]、胰腺腺癌[PAAD]、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤[PCPG]、前列腺腺癌[PRAD]、直肠腺癌[READ]、肉瘤[SARC]、皮肤黑色素瘤[SKCM]、胃腺癌[STAD]、睾丸生殖细胞瘤[TGCT]、胸腺瘤[THYM]、甲状腺癌[THCA]、子宫癌肉瘤[UCS]、子宫体内膜癌[UCEC]、葡萄膜黑色素瘤[UVM]、非小细胞肺癌[NSCLC]和小细胞肺癌[SCLC]。
在一些实施例中，用于治疗癌症的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体是本文所述的任何双顺反子iCAR/aCAR构建体。在一些实施例中，用于治疗癌症(诸如上文列举的癌症类型中的任何一种)的双顺反子iCAR/aCAR构建体针对或特异性结合HLA基因(包括例如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-E、HLA-F、HLA-K、HLA-L、HLA-DM、HLA-DO、HLA-DP、HLA-DQ或HLA-DR、HLA-B基因或HLA-C基因)的单个等位基因变体或者针对单个等位基因变体。在一些实施例中，治疗方法采用施用包含用于共传导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的安全效应细胞。在一些实施例中，治疗方法采用施用表达用于共传导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的安全效应细胞。
在一些实施例中，用于治疗癌症的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR或单顺反子aCAR和iCAR构建体包含由选自由以下项组成的组的核酸序列编码的氨基酸序列：SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。在一些实施例中，用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体包含由选自由以下项组成的组的核酸序列编码的氨基酸序列：SEQ IDNO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。在一些实施例中，治疗方法采用施用包含用于共传导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的安全效应细胞。在一些实施例中，治疗方法采用施用表达用于共传导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的安全效应细胞。
在一些实施例中，用于治疗癌症的双顺反子iCAR/aCAR包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。在一些实施例中，用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体包含由选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。在一些实施例中，治疗方法采用施用包含用于共传导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的安全效应细胞。在一些实施例中，治疗方法采用施用表达用于共传导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的安全效应细胞。
可将组合物配制成用于通过注射(例如，通过弹丸注射或连续输注)进行肠胃外施用。注射用制剂可以单位剂型存在于例如安瓿或多剂量容器中，并添加药学上可接受的载剂和/或防腐剂。组合物可采取诸如在油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可含有配制剂，诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
为了清晰起见，并且决不限制传授内容的范围，除非另外指示，否则所有表示数量、百分比或比例的数字以及本文中列举的其他数值应解释为在所有情况下前面都有术语“约”。因此，本说明书中列举的数字参数是可根据期望的结果而变化的近似值。例如，每个数字参数可根据报告的有效数字的数量并通过应用普通的舍入技术来解释。
实例
实例1.双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体的开发和测试
简介：
本实例提供了与开发和测试双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体有关的结果，以便开发在安全靶向已丢失编码具有多态性蛋白质编码变化的细胞膜蛋白质的基因组区段的肿瘤中使用的癌症治疗剂。实例和图中提供的数据包括T-REP鉴定新的iCAR前导物、新的人类HLA-A2 scFv构建体和双顺反子LV转导(FaDu/MCF7-Luc免疫杀伤测定)，包括开发新型iCAR前导物。
已经开发了双顺反子iCAR/aCAR构建体并且进行了初步测试，以便准备和检查这些构建体以用作癌症治疗剂。参见图1-59以及表1-22了解如本文所述的iCAR和aCAR构建体以及它们的序列的实例的示例性设计和评价。
材料和方法
体外mRNA转录
使用SpeI或BamHI限制酶将合适的质粒线性化。使用T7mScript标准mRNA产生系统(美国麦迪逊(Madison,U.S.A.)的CELLSCRIPT公司)将线性质粒用于转录体外mRNA。通过分光光度法评估mRNA的浓度和质量。根据制造商的方案进行制备。
PBMC纯化
从舍巴医疗中心(The Sheba Medical Center)血库获得白细胞富集的样品，将其用等体积的PBS稀释并加载在Ficoll-Paque PLUS(通用医疗公司(GE Healthcare))上进行基于密度的细胞分离。根据制造商的方案进行制备。从血浆/Ficoll界面收集单核细胞，将其洗涤数次并重悬在Cryostor CS10(默克公司(Merck))中。
PBMC培养和转导
将PBMC解冻并以1×106个细胞/ml接种在补充有100U/ml IL2(德国贝吉施格拉德巴赫的美天旎生物技术公司(Miltenyi Biotech,Bergisch Gladbach,Germany))的LymphoOne培养基(日本草津的宝生物公司(Takara-Bio,Kusatsu,Japan))中。第二天，以5、10或20的MOI(根据之前的校准)添加浓缩的慢病毒。3天后，将细胞转移到含有补充有1％人血清(加利福尼亚州维斯塔的阿瑟斯生物制品公司(Access Biologicals,Vista,CA))和100U/ml IL2的LymphoOne培养基的24孔G-Rex板(明尼苏达州圣保罗的威尔逊沃尔夫公司(Wilson Wolf,Saint Paul,MN))中。在解冻后的第7天添加100U/ml IL2，并且在第8天更换培养基。通常进行功能测定。
mRNA电穿孔
在PBMC培养的第8天或第10天，将2×106个细胞用OptiMEM培养基(纽约州格兰德艾兰(Grand Island,NY)的GibcoBRL公司)洗涤两次。将细胞重悬在含有1-10ug mRNA的100ul OptiMEM中并使用NepaGene21电穿孔器(日本Nepa Gene有限公司)以200V、2.5ms、一个脉冲或者使用ECM830电穿孔器(美国BTX公司)以300V、2ms、一个脉冲在2mm比色皿中进行电穿孔。将细胞重悬在5ml生长培养基中并转移到6孔板中进一步孵育。
IncuCyte细胞毒性测定
将表达核GFP(nGFP)的靶细胞接种在底部微透明的黑色壁384孔板(奥地利克雷姆斯明斯特的格瑞纳生物公司(Greiner Bio-One,Kremsmünster,Austria))中的补充有1％人血清的LymphoOne培养基中，每孔1.5×104个细胞。第二天，将转导或电穿孔的PBMC以期望的E:T比例添加到孔中。在即将添加PBMC前添加Annexin-V Red(密歇根州安阿伯的埃森生物科学公司(Essen BioScience,Ann Arbor,MI))以检测凋亡。使用IncuCyte S3(埃森生物科学公司)仪器在37℃、5％ CO2下对平板进行3天成像。将杀伤百分比计算为nGFP+Annexin-V-Red+细胞计数除以总nGFP+细胞计数。
ELISA
将表达核GFP(nGFP)的靶细胞接种在96孔板(热电公司(Thermo)，NU-167008)中的补充有1％人血清的LymphoOne培养基中，每孔5×103个细胞。第二天，将转导或电穿孔的PBMC以5:1的E:T比例添加到孔中。将细胞在37℃、5％ CO2下共孵育15-18小时。共孵育后，收获上清液并在-20℃下转移到非结合96孔板(格瑞纳公司(Greiner)，#655901)中。将上清液稀释3倍和100倍，按照制造商的说明(人IFN-γQuantikine，R&D，#SIF50)进行ELISA，并使用Tecan酶标仪进行量化。
通过流式细胞术量化抗原表达
可以使用特定抗体的MESF/“抗体结合能力”(ABC)比例来量化每个细胞的抗原位点数量。为了确定每个抗体批次的MESF/ABC比例，将染色的SCQ珠的MFI与MESF标准物的MFI相关联。曲线的斜率构成每个抗体的MESF单位荧光染料标记的比例。使用从班斯实验室(Bangs laboratories)购买的小鼠/人类/大鼠Simple Cellular量子(Simple CellularQuantum，SCQ)珠和MESF标准物测量每个抗体批次的MESF/ABC。4个SCQ珠群中的每一个都具有已知的抗体结合能力(ABC)，通常在数千到500-800K的范围内，因此通过用接近饱和的抗体对这些珠进行染色，可以将流式细胞仪上的荧光测量结果(MFI)与结合抗体的量(ABC)相关联。MESF标准珠是由4-5个用已知量的荧光染料分子标记的不同珠群组成。通过在流式细胞仪上运行MESF珠，可以将MFI测量结果与MESF单位相关联，并且可以比较在多个不同场合、PMT电压和仪器上收集的数据。当使用HLA-A2/NYESO1-PE四聚体对无标签的iCAR构建体进行染色时，通过用可量化的抗Myc标签抗体和HLA-A2/NYESO1-PE四聚体对高水平和低水平表达标记的aCAR和iCAR的对照Jurkat细胞系进行染色来确定MESF/ABC比例。对于每次染色，通过在4℃下以300g离心5分钟将100-200K阳性细胞用100ul冷FACS缓冲液(2％ FCS的PBS x1溶液)洗涤两次。对于Flag标记的aCAR和Myc标记的iCAR的量化，用50ul用FACS缓冲液按1/25稀释的APC(130-119-584，美天旎公司)和FITC(130-116-485，美天旎公司)标记的抗体对细胞进行染色。对于未标记的曲妥珠单抗aCAR和抗HLA-A2 iCAR的量化，将第一人抗曲妥珠单抗scFv69(Ab00618-10.0，绝对抗体公司(Absolute Antibody))、HLA-A2/NYESO1-PE四聚体(TB-M105-1，MBL)和第二抗人Fc APC(BLG-409306，百进公司(biolegend))分别在FACS缓冲液中按1/25、1/5和1/10稀释。对于靶细胞系抗原的量化，将抗EGFR PE(FAB9577P-100，R&D)、抗HER2 APC(130-106-696，美天旎公司)和抗HLA-A2 APC(17-9876-42，ebioscience)分别用FACS缓冲液按1/2.5、1/10和1/5稀释。将细胞在4℃下避光孵育45-60分钟并如前所述用100ul冷FACS缓冲液洗涤三次。用150ul FACS缓冲液或含有0.5-1ug/mlDAPI(MBD0015-1，默克-西格玛公司(Merck-Sigma))的PBS X1重悬细胞。通过流式细胞术(BD FACS Celesta或MACSQuant Analyzer 10)分析细胞，从每个样品中收集10K-50K双阳性事件。接下来，在不改变仪器上的PMT电压的情况下，收集每个相关MESF标准珠群(FITC555P-5ML、APC 823-5ML、PE 827-5ML，班斯(Bangs))的5-10K事件。使用FlowJo软件进行门控并计算MFI(几何平均荧光)，并且使用制造商提供的MESF珠QuickCal文件将MFI转换为MESF单位。接下来，使用所用的特定抗体批次的MESF/ABC曲线将值转换为ABC单位。
讨论
FaDu/MCF7-Luc免疫杀伤测定
使用nucGFP标记的靶细胞端点和双顺反子LV转导鉴定新型iCAR。
该测定对于以下方面是有用的：提高iCAR抑制的效力(scFv亲合力和活性)对于降低iCAR/aCAR化学计量以实现高效的aCAR保护是必要的。与慢病毒双顺反子格式的双重差异性表达有关的继续开发和分析正在进行中。
关注于HER2(抗曲妥珠单抗scFv)作为aCAR。鉴定了靶向HLA-A2的完全人类或人源化scFv。鉴定了新型iDomain(LIR1、KIR2DL1、KIR2DL2和/或BTLA)。
慢病毒双CAR表达
转导效率低并且差异表达多变。
除了抑制结构域的变化外，iCAR构建体是相同的。
除了scFv的变化外，aCAR构建体也是相同的：EGFR为西妥昔单抗或帕尼单抗，Her2为曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。
所有构建体都是具有T2A可切割接头的iCAR/aCAR构型。
IncuCyte免疫细胞杀伤测定：一种监测靶标杀伤和增殖以及T细胞激活动力学的细胞成像平台。
量子珠测定：一种将绝对aCAR和iCAR水平、化学计量和表达动力学结合到筛选和分析中的方法。
IMPT001 GO：使用Incucyte平台和FACS T细胞分析IMPT001 go将构建体mRNA共电穿孔到效应细胞中，体外验证HLA-A2 scFv/PD-1iCAR与EGFR和HER2 scFv aCAR配对。
慢病毒技术：设计和评价单和双慢病毒aCAR和iCAR的表达以支持IMPT001并鉴定新型iCAR(64个构建)。
新的强效HLA-A2 scFv：将鼠BB7.2的完全人类HLA-A2scFv替代品表征为转导到似乎更强烈地结合HLA-A四聚体的供体PBMC中的慢病毒iCAR。
FaDU/U87-Luc免疫杀伤测定：使用荧光素酶活力端点鉴定新型iCAR。鉴定了LIR1和KIR2DL1 iCAR。
IncuCyte免疫细胞杀伤测定的验证
靶细胞杀伤和增殖对E/T比例的依赖性。
实施了同时对靶细胞杀伤和增殖以及T细胞激活的动力学进行成像的免疫细胞杀伤测定。
该技术适用于多种贴壁癌细胞系，部分地规避了与工程化同基因细胞系相关的时间和成本。
动力学和终点是将允许进行双CAR排序的定量指标，即与E/T比例以及aCAR和iCAR水平成正比。
靶癌细胞系对EGFR和HER2 aCAR杀伤的敏感性(E/T EC50)变化>5倍并且与EGFR表达水平无关。
细胞表面表达
绝对iCAR/aCAR水平和化学计量—效应细胞。绝对iCAR/aCAR抗原水平和化学计量—靶细胞。参见例如图14。
已经实施了一种高度可重复的基于FACS的方法来量化绝对CAR和靶抗原水平。
利用mRNA共电穿孔获得的aCAR和iCAR表达的水平与mRNA量线性相关。
通过共电穿孔进行的化学计量表达严重偏向iCAR(例如，Jurkat实验中的iCAR/aCAR斜率＝6.0)(参见例如图12-13)。
EGFR x HLA-A2双CAR
用mRNA共电穿孔研究进行验证。
在HLA-A2 NEG和HLA-A2 POS贴壁癌细胞系中通过mRNA共电穿孔评估西妥昔单抗aCAR与BB7.2 PD-1iCAR的配对。
在低E/T比例下获得双CAR T细胞对FaDu A2 NEG细胞的杀伤，而没有明显损失aCAR活性，U87 A2 POS(EGFR aCAR敏感)癌细胞得到充分保护。
所有测试的HLA-A2 POS癌细胞系都在低E/T下抑制T细胞激活(CD107a，IFNg)，而与HLA-A2水平(每个细胞～105至～106)和靶细胞杀伤效率无关。
尚未进行CAR量化，但HLA-A2依赖性保护与过度iCAR暴露(>10倍Cmax)相关。参见例如图12A。
在HLA-A2 NEG和HLA-A2 POS贴壁癌细胞系中通过mRNA共电穿孔评估曲妥珠单抗scFv aCAR与BB7.2 scFv PD-1iCAR的配对。
在E/T＝10时观察到双CAR T细胞对FaDu A2 NEG细胞的杀伤，而没有明显损失aCAR活性。
对MDA-MB-231A2 POS癌细胞的保护似乎取决于iCAR超过aCAR表达(Cmax)300倍。
相反，较低的iCAR水平足以抑制T细胞激活(CD107a、IFNg、TNFa)，而与靶细胞杀伤效率无关。
双CAR慢病毒转导
PBMC中的绝对和化学计量表达。
除了抑制结构域的变化外，iCAR构建体是相同的。
除了scFv的变化外，aCAR构建体是相同的：EGFR为西妥昔单抗或帕尼单抗，Her2为曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。
所有构建体都是具有T2A可切割接头的iCAR/aCAR构型。
慢病毒双顺反子CAR的PBMC转导效率(％门控双阳性)是可变的，并且对于IncuCyte共培养测定来说通常太低(<20％)。
iCAR表达(近端基因)可能超过aCAR表达(远端基因)5-10倍，但例外和失败的情况并不少见。
BB7.2 HLA-A2 scFv的人类替代品的鉴定
在PBMC中的单顺反子表达和HLA-A四聚体结合。
观察到BB7.2(++)、3PF12(+++)、SN66E3(+++)、MBW1与HLA-A2四聚体结合。序列修改(++)。没有观察到Ha5C2.A2和鼠BBM.1与HLA-A2四聚体结合。
cMYC标签报告iCAR的表面表达。
HLA-A2四聚体报告HLA-A2 scFv结合。
两个完全人类HLA-A2 scFv被鉴定为似乎以更高亲合力结合HLA-A2四聚体的BB7.2(鼠)的潜在替代品：3PF12和SN66E3。
FaDu/U87-Luc免疫杀伤测定
使用荧光素酶活力端点鉴定新型iCAR。
开发FaDu/U87-Luc测定并且验证内部对照。EGFR aCAR显示出对FaDu和U87细胞的强大特异性杀伤。HLA-A2 aCAR在U87 HLA-A2 POS细胞中显示出特异性杀伤。
实现高E/T比例而没有测定干扰(E/T＝64)。
在KIR2DL1中观察到的HLA-A2依赖性保护与T-REP(KIR2DL2)和Jurkat NFAT-LucFA实验(KIR2DL1+KIR2DL2)一致。
FaDu/MCF7-Luc免疫杀伤测定
使用荧光素酶活力端点鉴定新型iCAR。
开发FaDu/MCF7-Luc测定并且验证内部对照。HER2aCAR显示出对FaDu和MCF7细胞的强大特异性杀伤。实现高E/T比例而没有测定干扰(E/T＝20)。
在KIR2DL1中观察到的HLA-A2依赖性保护与T-REP(KIR2DL2)和Jurkat NFAT-LucFA实验(KIR2DL1+KIR2DL2)一致。
在LIR1中观察到的HLA-A2依赖性保护与Jurkat NFAT-Luc FA实验一致。
总结
本文提供的数据支持人源化BB7.2 iCAR scFv的体外验证(参见例如图59)。该数据证实，对于具有Hz BB7.2型式的所有构建体都观察到功效。该数据还证明，对于具有HzBB7.2型式的所有构建体都观察到保护。VR428和VR421被鉴定为示例性构建体。
该数据还提供了HzBB7.2 iCAR scFv的体内验证(参见例如图54和图55)。在VR428施用的低剂量和高剂量体内研究中证明了功效和保护。VR428被鉴定为示例性构建体。
该数据还提供了完全人类SN66E3.3 iCAR scFv的体外验证(参见例如图49)。该数据证实，对于具有完全人类SN66E3型式的所有构建体都观察到功效。该数据还证明，对于具有完全人类SN66E3型式的所有构建体都观察到保护。VR447和VR449被鉴定为示例性构建体。
所有标题和章节名称仅用于清晰和参考目的，而不应被视为以任何方式进行限制。例如，本领域技术人员将理解根据本文所述的本发明的精神和范围适当地组合来自不同标题和章节的各个方面的有用性。
本文引用的所有参考文献均通过援引以其全文且出于所有目的据此并入，其程度如同每个单独的出版物或专利或专利申请被具体且单独地指示为通过援引以其全文出于所有目的而并入一样。
可以在不脱离本申请的精神和范围的情况下对其进行许多修改和变化，这对本领域技术人员来说是显而易见的。本文所述的具体实施例和实例仅以举例的方式提供，并且本申请仅受所附权利要求的条款以及权利要求所赋予的等同物的全部范围的限制。
Claims (202)
1.一种用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，所述构建体包含：
iv.iCAR部分，其中所述iCAR部分包含：
a.任选地处于VH-VL或VL-VH取向的iCAR单链可变片段(scFv)组分；
b.iCAR铰链结构域组分；
c.iCAR跨膜(TM)结构域组分；
d.iCAR抑制结构域组分；以及
v.aCAR部分，其中所述iCAR部分包含：
a.任选地处于VH-VL或VL-VH取向的aCAR单链可变片段(scFv)组分；
b.aCAR铰链结构域组分；
c.aCAR共刺激结构域组分；
d.aCAR激活信号传导结构域；以及
vi.连接(i)中的所述iCAR部分和(ii)中的所述aCAR部分的接头。
2.根据权利要求1所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中以任一取向连接所述VH-VL或VL-VH的所述接头包括一个或多个选自由以下项组成的组的接头：(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)、G4S(SEQ ID NO:153)、(G4S)X3(SEQID NO:154)和Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。
3.根据权利要求1或2所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分靶向HLA抗原。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述HLA抗原选自由以下项组成的组：HLA-A2、HLA-A3、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-G、HLA-E、HLA-F、HLA-DPA1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DQB2、HLA-DRB1和HLA-DRB5。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分选自由以下项组成的组：BB7.2、3PF12、3PF12/C4、3PF12/F12、3PF12/B11、W6/32、BBM.1、SN66E3、Ha5C2.A2、MWB1、MWB1-mod、Hz.BB7.2 VH1-69_A18VK、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,48)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,69)_A18、Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67,69)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(48)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(67)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(69)_A18、Hz.BB7.2VH1-3(71)_A18、Hz.BB7.2 VH1-3(73)_A18、MWB1.2、SN66E3.2和SN66E3.3。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是BB7.2。
7.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自BB7.2的Vh和Vl(SEQ ID NO:37和38)或来自SEQID NO:37和38的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
8.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-69_A18VK的Vh和Vl(SEQ ID NO:57和58)或来自SEQ ID NO:57和58的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
9.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-69(27,30)_A18的Vh和Vl(SEQ IDNO:59和60)或来自SEQ ID NO:59和60的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
10.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,48)_A18的Vh和Vl(SEQID NO:61和62)或来自SEQ ID NO:61和62的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
11.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67)_A18的Vh和Vl(SEQID NO:63和64)或来自SEQ ID NO:63和64的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
12.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,69)_A18的Vh和Vl(SEQID NO:65和66)或来自SEQ ID NO:65和66的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
13.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-69(27,30,67,69)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:67和68)或来自SEQ ID NO:67和68的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
14.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-3_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:69和70)或来自SEQ ID NO:69和70的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
15.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-3(48)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:71和72)或来自SEQ ID NO:71和72的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
16.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-3(67)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:73和74)或来自SEQ ID NO:73和74的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
17.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-3(69)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:75和76)或来自SEQ ID NO:75和76的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
18.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-3(71)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:77和78)或来自SEQ ID NO:77和78的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
19.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1-3(73)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:79和80)或来自SEQ ID NO:79和80的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
20.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:167的BB7.2。
21.根据权利要求1至4中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是3PF12。
22.根据权利要求21所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自3PF12/C4的Vh和Vl(SEQ ID NO:39和40)或来自SEQ ID NO:39和40的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
23.根据权利要求21所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自3PF12/F12的Vh和Vl(SEQ ID NO:41和42)或来自SEQ ID NO:41和42的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
24.根据权利要求21所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自3PF12/B11的Vh和Vl(SEQ ID NO:43和44)或来自SEQ ID NO:43和44的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
25.根据权利要求21所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:168的3PF12。
26.根据权利要求1至2中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是SN66E3。
27.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自SN66E3.1的Vh和Vl(SEQ ID NO:49和50)或来自SEQ ID NO:49和50的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
28.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:169的SN66E3.1。
29.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自SN66E3.2的Vh和Vl(SEQ ID NO:165和166)或来自SEQ ID NO:165和166的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
30.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:285的SN66E3.2。
31.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自SN66E3.3的Vh和Vl(SEQ ID NO:283和284)或来自SEQ ID NO:283和284的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
32.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:286的SN66E3.3。
33.根据权利要求1至4中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是W6/32。
34.根据权利要求33所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自W6/32的Vh和Vl(SEQ ID NO:45和46)或来自SEQ ID NO:45和46的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
35.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是BBM.1。
36.根据权利要求35所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自BBM.1的Vh和Vl(SEQ ID NO:47和48)或来自SEQ ID NO:47和48的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
37.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是Ha5C2.A2。
38.根据权利要求33所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Ha5C2.A2的Vh和Vl(SEQ ID NO:51和52)或来自SEQ ID NO:51和52的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
39.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是MWB1。
40.根据权利要求39所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自MWB1的Vh和Vl(SEQ ID NO:53和54)或来自SEQID NO:53和54的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
41.根据权利要求35所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自MWB1-mod(MWB1.1)的Vh和Vl(SEQ ID NO:55和56)或来自SEQ ID NO:55和56的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
42.根据权利要求35所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自MWB1.2的Vh和Vl(SEQ ID NO:163和164)。
43.根据权利要求1至4中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是MWB1.1 scFvVH_VL(SEQ ID NO:273)。
44.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是MWB1.2 scFvVH_VL(SEQ ID NO:274)。
45.根据权利要求1至44中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分选自PD-1铰链、CD28铰链和CD8铰链(包括CD8a铰链)、LIR1 Ig3-4铰链、LIR1 Ig-4铰链、LIR1 52aa铰链、LIR1 36aa铰链、LIR1 30aa铰链、LIR1 26aa铰链、LIR1 8aa铰链、CD33铰链、KIR2DL1铰链、PD-1(47)铰链、PD-1(42)铰链、PD-1(36)铰链、PD-1(30)铰链、PD-1(26)铰链和PD-1(20)铰链。
46.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD-1铰链(SEQ ID NO:86)。
47.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是CD28铰链(SEQ ID NO:85)。
48.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是CD8α铰链(SEQ ID NO:84)。
49.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 Ig3-4铰链(SEQ ID NO:87)。
50.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 Ig-4铰链(SEQ ID NO:88)。
51.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 52aa铰链(SEQ ID NO:89)。
52.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 36aa铰链(SEQ ID NO:90)。
53.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 30aa铰链(SEQ ID NO:91)。
54.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 26aa铰链(SEQ ID NO:289)。
55.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 8aa铰链(SEQ ID NO:92)。
56.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是CD33铰链(SEQ ID NO:93)。
57.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是KIR2DL1铰链(SEQ ID NO:94)。
58.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD-1(47)铰链(SEQ ID NO:290)。
59.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD-1(42)铰链(SEQ ID NO:291)。
60.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD-1(36)铰链(SEQ ID NO:292)。
61.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD-1(30)铰链(SEQ ID NO:293)。
62.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD-1(26)铰链(SEQ ID NO:294)。
63.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD-1(20)铰链(SEQ ID NO:295)。
64.根据权利要求1至63中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分选自PD-1TM结构域、CD28 TM结构域、CD8TM结构域(包括CD8a TM结构域)、LIR1 TM结构域、CD33 TM结构域和KIR2DL1 TM结构域。
65.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是PD-1TM结构域(SEQ ID NO:97)。
66.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是CD28 TM结构域(SEQ ID NO:96)。
67.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是CD8αTM结构域(SEQ ID NO:95)。
68.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是LIR1 TM结构域(SEQ ID NO:98)。
69.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是CD33 TM结构域(SEQ ID NO:99)。
70.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是KIR2DL1 TM结构域(SEQ ID NO:100)。
71.根据权利要求1至63中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是来自选自由以下项组成的组的蛋白质的抑制结构域：PD-1、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR2DL4、KIR2DL5A、KIR3DL1、KIR3DL2、KIR3DL3、LAIR1、CD22、CD33、SIGLEC5、SIGLEC6、SIGLEC7、SIGLEC8、SIGLEC9、SIGLEC10、SIGLEC11、SIGLEC12、PECAM1/CD31、CD200R1、FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5、SLAMF1、SLAMF5、BTLA、LAG3、2B4、CD160、CEACAM1、TIM3、VISTA、TIGIT、SIRPα、FcγRIIB、CD5、CD300a、CD300f、LIR1、LIR2、LIR3、LIR5、LIR8、Ly9、2xPD1(G4S)、2xPD1(PD1)、PVRIg和AA2AR。
72.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是PD-1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。
73.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR组分是KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。
74.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR组分是KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。
75.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR组分是KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。
76.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。
77.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。
78.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。
79.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。
80.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。
81.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。
82.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。
83.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。
84.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。
85.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。
86.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。
87.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。
88.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。
89.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。
90.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。
91.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。
92.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。
93.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。
94.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。
95.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。
96.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。
97.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是FCRL4抑制结构域(SEQ ID NO:126)。
98.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是FCRL5抑制结构域(SEQ ID NO:127)。
99.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SLAMF1抑制结构域(SEQ ID NO:128)。
100.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SLAMF5抑制结构域(SEQ ID NO:129)。
101.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是BTLA抑制结构域(SEQ ID NO:130)。
102.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是LAG3抑制结构域(SEQ ID NO:131)。
103.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是2B4抑制结构域(SEQ ID NO:132)。
104.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD160抑制结构域(SEQ ID NO:133)。
105.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CEACAM1抑制结构域(SEQ ID NO:134)。
106.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是TIM3抑制结构域(SEQ ID NO:135)。
107.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是VISTA抑制结构域(SEQ ID NO:136)。
108.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是TIGIT抑制结构域(SEQ ID NO:137)。
109.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIRPα抑制结构域(SEQ ID NO:138)。
110.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是FcγRIIB抑制结构域(SEQ ID NO:139)。
111.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD5抑制结构域(SEQ ID NO:140)。
112.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD300a抑制结构域(SEQ ID NO:141)。
113.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD300f抑制结构域(SEQ ID NO:142)。
114.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是LIR1抑制结构域(SEQ ID NO:143)。
115.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是LIR2抑制结构域(SEQ ID NO:144)。
116.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是LIR3抑制结构域(SEQ ID NO:145)。
117.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是LIR5抑制结构域(SEQ ID NO:146)。
118.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是LIR8抑制结构域(SEQ ID NO:147)。
119.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是Ly9抑制结构域(SEQ ID NO:148)。
120.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是2xPD1(G4S)抑制结构域(SEQ ID NO:149)。
121.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是2xPD1(PD1)抑制结构域(SEQ ID NO:150)。
122.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是PVRIg抑制结构域(SEQ ID NO:151)。
123.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是AA2AR抑制结构域(SEQ ID NO:152)。
124.根据权利要求1至123中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR单链可变片段(scFv)组分靶向Her2。
125.根据权利要求1至124中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自曲妥珠单抗的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:170和171)。
126.根据权利要求125所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv是SEQ ID NO:172。
127.根据权利要求1至124中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自曲妥珠单抗F9G的Vh和Vl(SEQID NO:307和308)。
128.根据权利要求1至124中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自帕妥珠单抗的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:173和174)。
129.根据权利要求128所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv是SEQ ID NO:175。
130.根据权利要求1至124中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自FRP5的Vh和Vl(分别为SEQ IDNO:176和177)。
131.根据权利要求1至124中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自A21的Vh和Vl(分别为SEQ IDNO:178和179)。
132.根据权利要求1至124中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自XMT1517的Vh和Vl(分别为SEQID NO:180和181)。
133.根据权利要求1至124中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自XMT1518的Vh和Vl(分别为SEQID NO:182和183)。
134.根据权利要求1至124中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自XMT1519的Vh和Vl(分别为SEQID NO:184和185)。
135.根据权利要求1至124中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自FWP51的Vh和Vl(分别为SEQ IDNO:186和187)。
136.根据权利要求135所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含SEQ ID NO:188。
137.根据权利要求1至123中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR单链可变片段(scFv)组分靶向EGFR。
138.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自西妥昔单抗的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:189和190)。
139.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv是SEQ ID NO:191。
140.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自帕尼单抗的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:192和193)。
141.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv是SEQ ID NO:194。
142.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自伊马曲单抗的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:195和196)。
143.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自尼妥珠单抗的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:197和198)。
144.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自尼妥珠单抗(K5)的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:310和311)。
145.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自耐昔妥珠单抗的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:199和200)。
146.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自ICR62的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:201和202)。
147.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自马妥珠单抗的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:204和205)。
148.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自C10的Vh和Vl(分别为SEQID NO:206和207)。
149.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自扎芦木单抗的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:208和209)。
150.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自P1X的Vh和Vl(分别为SEQID NO:210和211)。
151.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自P2X的Vh和Vl(分别为SEQID NO:212和213)。
152.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自P3X的Vh和Vl(分别为SEQID NO:214和215)。
153.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自EGFR-la1-VHH的VH(SEQID NO:216)。
154.根据权利要求1至123或137中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自EGFR-VHH的VH(SEQ IDNO:312)。
155.根据权利要求1至123中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR单链可变片段(scFv)组分靶向间皮素。
156.根据权利要求1至123或155中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自阿麦妥单抗的Vh和Vl(分别为SEQ IDNO:217和218)。
157.根据权利要求1至123或155中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自P4的Vh和Vl(分别为SEQID NO:219和220)。
158.根据权利要求1至123或155中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自SS1的Vh和Vl(分别为SEQID NO:222和223)。
159.根据权利要求1至123或155中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自SD1的VHH(SEQ ID NO:225)。
160.根据权利要求1至123或155中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自SD2的VHH(SEQ ID NO:226)。
161.根据权利要求1至123或155中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自1H7的Vh和Vl(分别为SEQID NO:227和228)。
162.根据权利要求1至123或155中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR scFv包含来自3C02的Vh和Vl(分别为SEQ ID NO:230和231)。
163.根据权利要求1至162中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述铰链TM结构域组分选自由以下项组成的组：CD28铰链和CD8铰链(包括CD8a铰链结构域)。
164.根据权利要求163所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述铰链TM结构域组分是CD28铰链结构域(SEQ ID NO:85)。
165.根据权利要求163所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述铰链TM结构域组分是CD8α铰链结构域(SEQ ID NO:84)。
166.根据权利要求1至165中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述共刺激结构域组分选自由以下项组成的组：CD137(4-1BB)共刺激结构域、CD28共刺激结构域、28BB共刺激结构域和CD3z共刺激结构域。
167.根据权利要求166所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述共刺激结构域组分是CD137(4-1BB)共刺激结构域(SEQ IDNO:233)。
168.根据权利要求166所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述共刺激结构域组分是CD28共刺激结构域(SEQ ID NO:234)。
169.根据权利要求166所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述共刺激结构域组分是CD3z激活信号传导结构域(SEQ ID NO:235)。
170.根据权利要求1至169中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述ITAM是CD3ζ结构域。
171.根据权利要求170所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述ITAM是CD3ζ结构域(SEQ ID NO:236)。
172.根据权利要求170所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述ITAM是CD3ζ3F结构域(SEQ ID NO:237)。
173.根据权利要求1至172所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述ITAM是CD3ζ4F结构域(SEQ ID NO:238)。
174.根据权利要求170所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述ITAM是CD3ζ4OF结构域(SEQ ID NO:239)。
175.根据权利要求1至174中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中连接所述iCAR部分和所述aCAR部分的所述接头包括一个或多个选自由以下项组成的组的接头：T2A(SEQ ID NO:155)、F2A(SEQ ID NO:156)、P2A(SEQ ID NO:157)、E2A(SEQ ID NO:158)和IRES序列(SEQ ID NO:159或160)。
176.根据权利要求1至175中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中连接所述iCAR部分和所述aCAR部分的所述接头是GSGT2A(SEQ ID NO:155)。
177.根据权利要求1至176中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述双顺反子iCAR/aCAR构建体包含由选自由以下项组成的组的核酸序列编码的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
178.根据权利要求1至176中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述双顺反子iCAR/aCAR构建体包含由选自由以下项组成的组的核酸序列编码的氨基酸序列：SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
179.根据权利要求1至177中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述双顺反子iCAR/aCAR构建体包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
180.根据权利要求1至177中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述双顺反子iCAR/aCAR构建体包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
181.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述双顺反子iCAR/aCAR构建体进一步包含短发夹RNA(shRNA)。
182.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR包含如表8中所示的合成PD-1或LIR1序列，包括选自由以下项组成的组的一个序列：SEQ ID NO:243、SEQ ID NO:244、SEQ ID NO:245、SEQ IDNO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:296、SEQ ID NO:297、SEQ IDNO:298、SEQ ID NO:299、SEQ ID NO:300、SEQ ID NO:301、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:304。
183.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR/aCAR包含如表1中所述的构建体。
184.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR/aCAR包含如表1中所述的核酸序列，包括SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:275、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:279、SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:321、SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:325。
185.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR/aCAR包含如表1中所述的氨基酸序列，包括SEQID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:276、SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:280、SEQ ID NO:282、SEQ ID NO:322、SEQ ID NO:324和SEQ ID NO:326。
186.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列：SEQID NO:255、SEQ ID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:305、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:260、SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:264、SEQID NO:265、SEQ ID NO:266、SEQ ID NO:267、SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:271、SEQ ID NO:272、SEQ ID NO:327、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:329、SEQID NO:330、SEQ ID NO:331、SEQ ID NO:332、SEQ ID NO:333和SEQ ID NO:334。
187.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR/aCAR包含如表1、表11和/或表12中所述的构建体。
188.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR/aCAR包含如表1至22的任一个中所述的构建体或其部分。
189.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述aCAR包含如表15、16、17和/或21的任一个中所述的构建体。
190.根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR包含如表1、2、4、9、10、11和/或12的任一个中所述的构建体。
191.一种核酸组合物，所述核酸组合物包含编码根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的核酸。
192.一种载体，所述载体包含编码根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的核酸序列。
193.一种载体组合物，所述载体组合物包含根据权利要求192所述的载体。
194.根据权利要求191至193所述的核酸或载体，其中所述用于共转导的iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体包含所述iCAR和/或aCAR部分上游的信号肽。
195.根据权利要求194所述的核酸或载体，其中所述信号肽是CD8α信号肽(SEQ ID NO:161)、GM-CSF信号肽(SEQ ID NO:162)或mIgK信号肽(SEQ ID NO:306)。
196.一种安全效应细胞，所述安全效应细胞包含根据权利要求191所述的核酸或核酸序列组合物。
197.一种安全效应细胞，所述安全效应细胞包含根据权利要求192或193所述的载体或载体组合物。
198.一种安全效应免疫细胞，所述安全效应免疫细胞表达根据前述权利要求中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体。
199.一种用于治疗患有以LOH为特征的肿瘤的患者的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用根据权利要求196至198中任一项所述的安全效应免疫细胞。
200.一种用于治疗患有以导致靶基因或靶细胞外多态性表位基因的表达完全丧失的基因突变为特征的肿瘤的患者的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用根据权利要求196至198中任一项所述的安全效应免疫细胞。
201.一种用于治疗患有以杂合性丢失(LOH)或其他基因丢失或等位基因失衡表型为特征的肿瘤的患者的癌症的方法，所述表型包括但不限于由影响一个或多个核苷酸的突变造成的功能或表达丧失，所述方法包括向所述患者施用根据权利要求196至198中任一项所述的安全效应免疫细胞。
202.根据权利要求201所述的方法，其中所述癌症选自由以下项组成的组：急性骨髓性白血病[LAML]、肾上腺皮质癌[ACC]、膀胱尿路上皮癌[BLCA]、脑低级别胶质瘤[LGG]、乳腺浸润性癌[BRCA]、宫颈鳞状细胞癌和宫颈内腺癌[CESC]、胆管癌[CHOL]、结肠腺癌[COAD]、食道癌[ESCA]、多形性成胶质细胞瘤[GBM]、头颈部鳞状细胞癌[HNSC]、肾嫌色细胞癌[KICH]、肾脏透明细胞癌[KIRC]、肾脏乳头状细胞癌[KIRP]、肝脏肝细胞癌[LIHC]、肺腺癌[LUAD]、肺鳞状细胞癌[LUSC]、淋巴样肿瘤弥漫性大B细胞淋巴瘤[DLBC]、间皮瘤[MESO]、卵巢浆液性囊腺癌[OV]、胰腺腺癌[PAAD]、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤[PCPG]、前列腺腺癌[PRAD]、直肠腺癌[READ]、肉瘤[SARC]、皮肤黑色素瘤[SKCM]、胃腺癌[STAD]、睾丸生殖细胞瘤[TGCT]、胸腺瘤[THYM]、甲状腺癌[THCA]、子宫癌肉瘤[UCS]、子宫体内膜癌[UCEC]、葡萄膜黑色素瘤[UVM]、非小细胞肺癌[NSCLC]和小细胞肺癌[SCLC]。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US63/074,812 | 2020-09-04 | ||
| US202163178452P | 2021-04-22 | 2021-04-22 | |
| US63/178,452 | 2021-04-22 | ||
| PCT/US2021/049315 WO2022051727A2 (en) | 2020-09-04 | 2021-09-07 | BICISTRONIC INHIBITORY CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (iCAR)/ACTIVATING CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (aCAR) CONSTRUCTS FOR USE IN CANCER THERAPIES |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116916948A true CN116916948A (zh) | 2023-10-20 |
Family
ID=88368135
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202180073525.6A Pending CN116916948A (zh) | 2020-09-04 | 2021-09-07 | 用于癌症疗法的双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116916948A (zh) |
-
2021
- 2021-09-07 CN CN202180073525.6A patent/CN116916948A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11085021B2 (en) | Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins | |
| JP2021525509A (ja) | 細胞療法のための多様な抗原結合ドメイン、新規プラットフォームおよびその他の強化 | |
| JP7476298B2 (ja) | Ｍａｇｅ－ａに特異的に結合する抗原結合タンパク質 | |
| JP2023518049A (ja) | 新規な抗原結合ドメインおよびそれを組み込んだ合成抗原受容体 | |
| JP2020500530A (ja) | 合成免疫受容体およびその使用方法 | |
| US11090336B2 (en) | Tn-MUC1 chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy | |
| JP2021512635A (ja) | 腫瘍微小環境を標的とするキメラ抗原受容体 | |
| US20240016839A1 (en) | Bicistronic inhibitory chimeric antigen receptor (icar)/activating chimeric antigen receptor (acar) constructs for use in cancer therapies | |
| AU2018250336A1 (en) | Engineered cells expressing prostate-specific membrane antigen (PSMA) or a modified form thereof and related methods | |
| CN113039209A (zh) | 用于使用融合蛋白进行tcr重编程的组合物和方法 | |
| JP2024119881A (ja) | 操作されたメモリー様ｎｋ細胞を作製するための方法およびその組成物 | |
| JP2024512470A (ja) | Ｔ細胞調節ポリペプチド及びその使用方法 | |
| WO2023076912A2 (en) | Cd4+ and/or cd8+ cell populations comprising icars for use in treatment therapies | |
| KR20220143057A (ko) | Cd2 활성화를 갖는 키메라 항원 수용체 | |
| US20220064257A1 (en) | Specific t cell receptors against epitopes of mutant myd88l265p protein for adoptive t cell therapy | |
| CN116916948A (zh) | 用于癌症疗法的双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体 | |
| WO2023172991A2 (en) | Bicistronic inhibitory chimeric antigen receptor (icar)/activating chimeric antigen receptor (acar) constructs for use in cancer therapies | |
| CN115925985B (zh) | Car-t细胞及其在非小细胞肺癌治疗中的应用 | |
| US20230057987A1 (en) | Antigen binding proteins specifically binding ct45 | |
| CN117980324A (zh) | 特异性结合ct45的抗原结合蛋白 | |
| CN117202921A (zh) | 用于多种免疫细胞的单链和多链合成抗原受体 | |
| EA043737B1 (ru) | Композиции и способы репрограммирования т-клеточных рецепторов с помощью гибридных белков |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |