CN116897053A - 含抗tslp抗体的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

提供含抗TSLP抗体的药物组合物及其用途。具体而言，提供了一种药物组合物，其包含：(a)抗TSLP抗体，(b)缓冲剂，(c)表面活性剂，以及一种或多种(d)稳定剂，以及所述药物组合物在制备用于治疗和预防TSLP相关疾病的药物中的用途。

Description

含抗TSLP抗体的药物组合物
本申请引用或参考的所有文献(包括但不限于文献、专利、专利申请)和本申请引用的文献中引用或参考的所有文献，以及本申请或通过引用并入本申请的任何文献提及的任何产品的任何制造商的说明、描述、产品规格和产品页，均通过引用的方式并入，并可以用于本发明的实践。更具体地，本申请引用的所有参考文献都以相同程度通过引用的方式并入，就如同各文献被具体地和单独地指出通过引用的方式并入本申请一样。而且，在任何国家，在本申请中对这些出版物的任何引用并不构成该出版物成为本领域公知常识的认可。
技术领域
本公开属于药物制剂领域，具体而言，本公开涉及含有抗TSLP抗体的稳定的药物组合物。或者，本公开涉及含有高浓度的抗TSLP抗体的稳定的药物组合物。
背景技术
胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是一种由上皮细胞产生的细胞因子。它与IL-7密切相关，并与TSLPR(IL-7受体α链和TSLP受体链的异二聚体)结合。TSLP在免疫反应的诱导阶段诱导DC细胞极化，促使辅助性T细胞(Th)2的分化和Th2细胞因子的产生，此外TSLP还能直接促进T细胞扩增并提高Th2细胞因子的分泌。因此，TSLP被认为是Th2驱动的炎症的主要调节剂，且TSLP的上调与Th2型细胞相关疾病如特应性皮炎和哮喘的发病机理有关(Rui He et al.,(2010)同上；Ito T et al.,(2005)The Journal of Experimental Medicine 202(9):1213-1223；He R et al.,(2008)Proc Natl Acad Sci USA 105(33):11875-11880)。另一方面，TSLP介导肠道和胸腺中的几种免疫稳态。例如，在细菌的刺激下，TSLP在肠道上皮细胞系中以应变依赖性方式上调，与转化生长因子β协同作用以促进Treg细胞分化。TSLP还可由人类原代肠上皮细胞产生，用于调节CD103 +DC细胞成为致耐受性表型(Katerina Tsilingiri et al.,(2017)Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology 3(2):174-182；Zeuthen LH et al.,(2008)Immunology 123:197–208；Iliev ID et al.,(2009)Gut 58:1481–1489)。
TSLP对免疫系统的双重作用导致其两个亚型的发现，即长型和短型，其中短型由长型TSLP末端63个氨基酸残基组成。这两种亚型由不同的启动子控制，并依赖于环境、组织和刺激而表达(Harada M et al.,(2011)Amrican Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology 44:787–793)。高免疫原性微生物菌株感染后，人肠上皮细胞中长型TSLP的表达上调，短型TSLP的表达下调；而共生性大肠杆菌感染后，则观察到相反的表达模式。在一些TSLP相关的疾病中对TSLP亚型的表达模式也进行了研究，例如，在哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和牛皮癣中观察到长型TSLP的过表达，而在麦胶性肠病中发现长型TSLP的表达降低。在克罗恩病、麦胶性肠病和特应性皮炎中短型TSLP的表达下调(Katerina Tsilingiri et al.,(2017)同上；Fornasa G et al.,(2015)J Allergy Clin Immunol 136:413–422)。
TSLP与多种疾病具有相关性，已成为重要的临床靶标，将会有越来越多的抗TSLP抗体被开发和应用。因此，本领域需要开发包含抗TSLP抗体的药物组合物，使抗TSLP抗体适于生产和施用于患者，并且在储存和随后使用过程中能保持生物学活性和稳定性。
发明内容
本公开提供了包含抗TSLP抗体的药物组合物，所述药物组合物能够实现稳定的效果，适合在受试者中施用。
具体而言，本公开提供了含有抗TSLP抗体的药物组合物，例如：(i)能够抑制高分子杂质生成的药物组合物；(ii)能够抑制电荷变体生成的药物组合物；(iii)能够维持抗体生物学活性的药物组合物；和/或(iv)能够降低抗体浓度较高时增加的粘度的药物组合物。
本公开提供的药物组合物，其包含：(a)抗TSLP抗体，(b)缓冲剂，(c)表面活性剂，以及一种或多种(d)稳定剂。
在一些实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体的浓度为30mg/mL至300mg/mL，优选为50mg/mL至250mg/mL，优选为70mg/mL至200mg/mL，更优选为90mg/mL至150mg/mL。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体的浓度为约120mg/mL。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体的浓度为约130mg/mL。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体的浓度为约140mg/mL。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体的浓度为约150mg/mL。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体的浓度包括但不限于：约90mg/mL，约100mg/mL，约110mg/mL，约115mg/mL，约120mg/mL，约125mg/mL，约130mg/mL，约135mg/mL，约140mg/mL，约145mg/mL，或约150mg/mL。
在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂包含磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂、醋酸盐缓冲剂、或枸橼酸盐缓冲剂等。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂包含磷酸盐缓冲剂。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂包含醋酸盐缓冲剂。优选地，前述药物组合物中所述缓冲剂包含组氨酸缓冲剂。
在一些具体实施方案中，所述磷酸盐缓冲剂包括磷酸钠缓冲剂或磷酸钾缓冲剂，所述醋酸盐缓冲剂包括醋酸钠缓冲剂、醋酸钾缓冲剂或醋酸铵缓冲剂，所述枸橼酸盐缓冲剂包括枸橼酸钠缓冲剂、枸橼酸钾缓冲剂或枸橼酸钙缓冲剂。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂包含磷酸钠缓冲剂，例如由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠组成的磷酸钠缓冲剂。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂包含醋酸钠缓冲剂，例如由醋酸钠和醋酸组成的醋酸钠缓冲剂。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂包含枸橼酸钠缓冲剂，例如由枸橼酸和枸橼酸钠组成的枸橼酸钠缓冲剂。
在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的浓度为1mM至100mM，优选为2mM至80mM，优选为5mM至60mM，更优选为10mM至40mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的浓度为约10mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的浓度为约18mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的浓度为约20mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的浓度为约22mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的浓度包括但不限于：约10mM，约11mM，约12mM，约13mM，约14mM，约15mM，约16mM，约17mM，约18mM，约19mM，约20mM，约21mM，约22mM，约23mM，约24mM，约25mM，约26mM，约27mM，约28mM，约30mM，约32mM，约34mM，约36mM，约38mM，或约40mM。
在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的pH为约5.6。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的pH为约5.8。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的pH为约6。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述缓冲剂的pH包括但不限于：约5，约5.1，约5.2，约5.3，约5.4，约5.5，约5.6，约5.7，约5.8，约5.9，约6，约6.1，约6.2，约6.3，约6.4，或约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物中所述表面活性剂选自聚山梨酯(如聚山梨 酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80、聚山梨酯81、聚山梨酯85)，泊洛沙姆(如泊洛沙姆181、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407)，聚乙二醇或聚羟体等。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述表面活性剂是聚山梨酯80。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述表面活性剂是聚山梨酯20。
在一些实施方案中，前述药物组合物中所述表面活性剂的浓度为0.001％至0.1％(w/v)，优选为0.004％至0.08％(w/v)，优选为0.006％至0.06％(w/v)，更优选为0.008％至0.04％(w/v)。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述表面活性剂的浓度为约0.01％(w/v)。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述表面活性剂的浓度为约0.02％(w/v)。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述表面活性剂的浓度为约0.04％(w/v)。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述表面活性剂的浓度包括但不限于：约0.008％(w/v)，约0.009％(w/v)，约0.01％(w/v)，约0.02％(w/v)，约0.03％(w/v)，约0.04％(w/v)，约0.05％(w/v)，或约0.06％(w/v)。
在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂包含海藻糖、甘露醇、蔗糖、精氨酸或其药学上可接受的盐、甘氨酸或脯氨酸。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂包含甘露醇。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂包含精氨酸。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂包含脯氨酸。在一些实施方案中，前述药物组合物中包含两种稳定剂，例如蔗糖和脯氨酸。所述精氨酸或其药学上可接受的盐包括精氨酸、盐酸精氨酸或醋酸精氨酸等。
在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂的浓度为100mM至1000mM，为120mM至800mM，优选为150mM至700mM，更优选为150mM至600mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂的浓度为约200mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂的浓度为约250mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂的浓度为约400mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂的浓度为约500mM。在一些实施方案中，前述药物组合物中所述稳定剂的浓度包括但不限于：约120mM，约150mM，约200mM，约210mM，约230mM，约250mM，约270mM，约290mM，约300mM，约310mM，约330mM，约350mM，约370mM，约380mM，约390mM，约400mM，约410mM，约420mM，约430mM，约450mM，约470mM，约490mM，约500mM，约510mM，约530mM，约550mM，约570mM，或约600mM。
在一些实施方案中，前述药物组合物的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。在一些实施方案中，前述药物组合物的pH为约5.6。在一些实施方案中，前述药物组合物的pH为约5.8。在一些实施方案中，前述药物组合物的pH为约6。在一些实施方案中，前述药物组合物的pH包括但不限于：约5，约5.1，约5.2，约5.3，约5.4，约5.5，约5.6，约5.7，约5.8，约5.9，约6，约6.1，约6.2，约6.3，约6.4，或约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约30mg/mL至约300mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约1mM至约100mM的缓冲剂，(c)约0.001％至约0.1％(w/v)的表面活性剂，和一种或多种(d)约100mM至约1000mM的稳定剂；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约50mg/mL至约250mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约2mM至约80mM的缓冲剂，(c)约0.004％至约0.08％(w/v)的表面活性剂，和一种或多种(d)约120mM至约800mM的稳定剂；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约70mg/mL至约200mg/mL的抗 TSLP抗体，(b)约5mM至约60mM的缓冲剂，(c)约0.006％至约0.06％(w/v)的表面活性剂，和一种或多种(d)约150mM至约700mM的稳定剂；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约90mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约10mM至约40mM的缓冲剂，(c)约0.008％至约0.04％(w/v)的表面活性剂，和一种或多种(d)约150mM至约600mM的稳定剂；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约10mM至约40mM的缓冲剂，(c)约0.008％至约0.04％(w/v)的表面活性剂，和一种或多种(d)约150mM至约600mM的稳定剂；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约30mg/mL至约300mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约1mM至约100mM的磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸盐缓冲剂，(c)约0.001％至约0.1％(w/v)的聚山梨酯20或聚山梨酯80，和(d)约100mM至约1000mM的海藻糖、甘露醇或蔗糖，和/或约100mM至约1000mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、甘氨酸或脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约50mg/mL至约250mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约2mM至约80mM的磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸盐缓冲剂，(c)约0.004％至约0.08％(w/v)的聚山梨酯20或聚山梨酯80，和(d)约120mM至约800mM的海藻糖、甘露醇或蔗糖，和/或约120mM至约800mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、甘氨酸或脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约70mg/mL至约200mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约5mM至约60mM的磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸盐缓冲剂，(c)约0.006％至约0.06％(w/v)的聚山梨酯20或聚山梨酯80，和(d)约150mM至约700mM的海藻糖、甘露醇或蔗糖，和/或约150mM至约700mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、甘氨酸或脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约90mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约10mM至约40mM的磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸盐缓冲剂，(c)约0.008％至约0.04％(w/v)的聚山梨酯20或聚山梨酯80，和(d)约150mM至约600mM的海藻糖、甘露醇或蔗糖，和/或约150mM至约600mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、甘氨酸或脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约10mM至约40mM的磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸盐缓冲剂，(c)约0.008％至约0.04％(w/v)的聚山梨酯20或聚山梨酯80，和(d)约150mM至约600mM的海藻糖、甘露醇或蔗糖，和/或约150mM至约600mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、甘氨酸或脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约30mg/mL至约300mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约1mM至约100mM的磷酸钠缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸钠缓冲剂，(c)约0.001％至约0.1％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约100mM至约1000mM的甘露醇， 和/或约100mM至约1000mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、或脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约50mg/mL至约250mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约2mM至约80mM的磷酸钠缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸钠缓冲剂，(c)约0.004％至约0.08％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约120mM至约800mM的甘露醇；和/或约120mM至约800mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、或脯氨酸，其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约70mg/mL至约200mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约5mM至约60mM的磷酸钠缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸钠缓冲剂，(c)约0.006％至约0.06％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约150mM至约700mM的甘露醇，和/或约150mM至约700mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、或脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约90mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约10mM至约40mM的磷酸钠缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸钠缓冲剂，(c)约0.008％至约0.04％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约150mM至约600mM的甘露醇，和/或约150mM至约600mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、或脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约10mM至约40mM的磷酸钠缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸钠缓冲剂，(c)约0.008％至约0.04％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约150mM至约600mM的甘露醇，和/或约150mM至约600mM的精氨酸或其药学上可接受的盐、或脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，优选为约5.5至约7，更优选为约5.5至约6.5。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约10mM至约40mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.01％(w/v)至约0.04％(w/v)的聚山梨酯80或聚山梨酯20，和(d)约150mM至约600mM的脯氨酸、甘露醇或精氨酸，其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6，例如，约5.5，约5.6，约5.7，约5.8，约5.9，或约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约200mM的甘露醇；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约150mM的精氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约400mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约18mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约400mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约22mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约400mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约18mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约 500mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约22mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约500mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约500mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约18mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约450mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约22mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约450mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约450mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约18mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约350mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约22mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约350mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约350mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约18mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约250mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约22mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约250mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约250mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH为约5.5至约6.5，优选为约5.5至约6。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的组氨酸缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)的聚山梨酯80，和(d)约400mM的脯氨酸；其中所述药物组合物的pH约为5.8。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约10mM至约40mM的磷酸盐或醋酸盐缓冲剂，(c)约0.01％(w/v)至约0.04％(w/v)的聚山梨酯80或聚山梨酯20，和(d)约200mM至约600mM的脯氨酸、精氨酸或甘露醇；其中所述药物组合物的pH为约5至约7，例如，约5，约5.1，约5.2，约5.3，约5.4，约5.5，约5.6，约5.7，约5.8，约5.9，约6，约6.5，或约7。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的磷酸盐或醋酸盐缓冲剂，(c)约0.01％(w/v)至约0.04％(w/v) 的聚山梨酯80或聚山梨酯20，和(d)约200mM的的甘露醇；其中所述药物组合物的pH为约5至约7。
在一些实施方案中，前述药物组合物包含：(a)约120mg/mL至约150mg/mL的抗TSLP抗体，(b)约20mM的磷酸钠或醋酸钠缓冲剂，(c)约0.02％(w/v)至约0.04％(w/v)的聚山梨酯80或聚山梨酯20，和(d)约200mM的的甘露醇；其中所述药物组合物的pH为约5至约7。
前述药物组合物中，可以根据期望适当添加等渗剂或防腐剂，所述等渗剂或防腐剂可以在能够实现期望效果的量的范围内适当适量地使用。其中，等渗剂包括氯化钠、氯化钾、氯化钙等；防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚、苯甲醇等。
在任选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含VH-CDR1区、VH-CDR2区和VH-CDR3区，其中VH-CDR1区、VH-CDR2区和VH-CDR3区分别包含：如SEQ ID NOs：1、2和3所示的氨基酸序列。
在任选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NOs：7、8或9(X1＝R，X2＝V，X3＝R；X1＝R，X2＝V，X3＝V；X1＝R，X2＝A，X3＝R；X1＝K，X2＝A，X3＝R；或X1＝K，X2＝A，X3＝V)所示的氨基酸序列。其中，SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列可以由SEQ ID NOs：17或18所示的核苷酸序列编码，SEQ ID NO：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)所示的氨基酸序列可以由SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列编码。
在任选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区，其中VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区可分别包含：如SEQ ID NOs：4、5和6所示的氨基酸序列。
在任选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NOs：10或11(X1＝S，X2＝V；X1＝A，X2＝I；或X1＝S，X2＝I)所示的氨基酸序列。其中，SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列可以由SEQ ID NOs：20或21所示的核苷酸序列编码，SEQ ID NO：11(X1＝A，X2＝I)所示的氨基酸序列可以由SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列编码。
在任选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含VH-CDR1区、VH-CDR2区和VH-CDR3区，所述轻链可变区包含VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区，其中VH-CDR1区、VH-CDR2区、VH-CDR3区、VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区分别包含：如SEQ ID NOs：1、2、3、4、5和6所示的氨基酸序列。
在任选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区可包含选自下述的氨基酸序列：(1)分别如SEQ ID NOs：7和10所示；(2)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝S，X2＝V)所示；(3)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(4)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(5)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(6)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(7)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(8)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝A，X2＝I)所示；(9)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(10)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(11)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(12)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I) 所示；(13)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(14)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝S，X2＝I)所示；(15)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示；(16)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝I)所示；(17)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示；(18)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示；或(19)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝I)所示。
在可选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体包含重链和轻链，所述重链包含重链可变区和重链恒定区，所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区；所述重链恒定区可包含具有SEQ ID NOs：12或37所示氨基酸序列的人IgG1重链恒定区，或具有SEQ ID NO：13所示氨基酸序列的人IgG4重链恒定区，或这些重链恒定区的片段；所述轻链恒定区可包含具有SEQ ID NO：14所示氨基酸序列的人κ轻链恒定区或其片段；所述重链恒定区也可以是具有SEQ ID NO：15所示氨基酸序列的小鼠IgG1重链恒定区，且所述轻链恒定区可以是具有SEQ ID NO：16所示氨基酸序列的小鼠κ轻链恒定区。其中，SEQ ID NOs：12-16和37所示的氨基酸序列可以分别由SEQ ID NOs：23-27和38所示的核苷酸序列编码。
在可选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体可以是全长抗体，例如IgG1、IgG2或IgG4同种型的全长抗体。在其他实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体可以是单链可变区(scFv)抗体，或抗体片段，例如Fab或F(ab’)2片段。
在任选的实施方案中，前述药物组合物中所述抗TSLP抗体为PCT/CN2020/113289中的抗TSLP抗体。
本公开还提供一种制备前述药物组合物的方法，其包括使上述抗TSLP抗体与缓冲剂接触的步骤，例如将抗TSLP抗体置换到缓冲剂中，优选地，所述缓冲剂为磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂或醋酸盐缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为1mM至100mM，为2mM至80mM，优选为5mM至60mM，更优选为10mM至40mM，所述缓冲剂的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。所述制备前述药物组合物的方法，进一步地还包括加入一种或多种稳定剂，以及表面活性剂，不区分先后顺序，其中所述稳定剂包含海藻糖、甘露醇、蔗糖、精氨酸或其药学上可接受的盐、甘氨酸或脯氨酸等，所述表面活性剂包括聚山梨酯20或聚山梨酯80等。
本公开还提供一种制备包含抗TSLP抗体的冻干制剂的方法，其包括将前述药物组合物经冷冻干燥的步骤。在一些实施方案中，所述冷冻干燥按照本领域公知的方法进行，包括但不限于包括预冻、一次干燥和二次干燥的步骤。技术人员理解，任何将水从本公开的药物组合物中移除的方法均适用于本公开。
本公开还提供一种包含抗TSLP抗体的冻干制剂，其是经前述制备冻干制剂的方法制备所得。
本公开还提供一种包含抗TSLP抗体的冻干制剂，所述冻干制剂经复溶后可形成前述药物组合物。
本公开还提供一种制品，其包括容器，该容器中装有前述药物组合物或前述冻干制剂。
本公开的药物组合物或冻干制剂可根据已知的方法施用，例如以合适的方式在一段时间内注射或输注，例如，通过皮下的、静脉的、腹膜内的、肌肉内的、动脉内的、病灶内的或关节内的途径，局部施用，吸入或通过持续释放或延时释放。
只要是对需治疗的特定症状有必要的，本公开的药物组合物也可以包含一个或多个其他活性化合物，优选地，包含那些不会相互带来不利影响的且具有互补活性的活性化合物。此外或可选择地，所述药物组合物可包括抗TSLP抗体和另一种疾病特异性 蛋白，例如TSLPR、IgE、IL-13或IL-5，这样的分子以对预定目标有效的数量适当地存在于药物组合物中。
本公开还提供了本公开的药物组合物、冻干制剂或制品在制备用于治疗和预防TSLP相关疾病的药物中的用途。在一些实施方案中，所述TSLP相关疾病包括哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和牛皮癣。
本公开还提供一种治疗和预防TSLP相关疾病的方法，其包括向受试者施用本公开的药物组合物、冻干制剂或制品。在一些实施方案中，所述TSLP相关疾病包括哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和牛皮癣。
概括而言，本公开涉及下述各项：
1、一种药物组合物，其包含：(a)抗TSLP抗体，(b)缓冲剂，(c)表面活性剂，以及一种或多种(d)稳定剂。
2、项1所述的药物组合物，其中，所述抗TSLP抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含VH-CDR1区、VH-CDR2区和VH-CDR3区，所述轻链可变区包含VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区，其中VH-CDR1区、VH-CDR2区、VH-CDR3区、VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区分别包含：如SEQ ID NOs：1、2、3、4、5和6所示的氨基酸序列。
3、项1或2所述的药物组合物，其中，所述抗TSLP抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区可包含选自下述的氨基酸序列：(1)分别如SEQ ID NOs：7和10所示；(2)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝S，X2＝V)所示；(3)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(4)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(5)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(6)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(7)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(8)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝A，X2＝I)所示；(9)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(10)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(11)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(12)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(13)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(14)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝S，X2＝I)所示；(15)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示；(16)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝I)所示；(17)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示；(18)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示；或(19)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝I)所示。
4、项1-3中任一项所述的药物组合物，其中，所述抗TSLP抗体的浓度为30mg/ml至300mg/ml，优选为50mg/ml至250mg/ml，优选为70mg/ml至200mg/ml，更优选为90mg/ml至150mg/ml，最优先为120mg/ml至150mg/ml。
5、项1-4中任一项所述的药物组合物，其中，所述缓冲剂包括磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂、醋酸盐缓冲剂或枸橼酸盐缓冲剂。
6、项5所述的药物组合物，其中，所述磷酸盐缓冲剂是磷酸钠缓冲剂，所述醋酸盐缓冲剂是醋酸钠缓冲剂，所述枸橼酸盐缓冲剂是枸橼酸钠缓冲剂。
7、项1-6中任一项所述的药物组合物，其中所述缓冲剂的浓度为1mM至100mM，优选为2mM至80mM，更优选为5mM至60mM，最优选为10mM至40mM。
8、项1-7中任一项所述的药物组合物，其中所述表面活性剂包括聚山梨酯80或聚山梨酯20。
9、项1-8中任一项所述的药物组合物，其中所述表面活性剂的浓度为0.001％至0.1％(w/v)，优选为0.004％至0.08％(w/v)，更优选为0.006％至0.06％(w/v)，最优选为0.008％至0.04％(w/v)。
10、项1-9中任一项所述的药物组合物，其中所述稳定剂包含海藻糖、甘露醇、蔗糖、精氨酸或其药学上可接受的盐、甘氨酸或脯氨酸。
11、项1-10中任一项所述的药物组合物，其中所述稳定剂的浓度为100mM至1000mM，优选为120mM至800mM，更优选为150mM至700mM，最优选为150mM至600mM。
12、项1-11中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。
13、项1-12中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含：
(a)30mg/ml至300mg/ml的抗TSLP抗体，
(b)1mM至100mM的缓冲剂，
(c)0.001％至0.1％(w/v)的表面活性剂，和
一种或多种(d)100mM至1000mM的稳定剂；
其中所述药物组合物的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。
14、项1-13中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含：
(a)50mg/ml至250mg/ml的抗TSLP抗体，
(b)2mM至80mM的缓冲剂，
(c)0.004％至0.08％(w/v)的表面活性剂，和
一种或多种(d)120mM至800mM的稳定剂；
其中所述药物组合物的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。
15、项1-14中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含：
(a)70mg/ml至200mg/ml的抗TSLP抗体，
(b)5mM至60mM的缓冲剂，
(c)0.006％至0.06％(w/v)的表面活性剂，和
一种或多种(d)150mM至700mM的稳定剂；
其中所述药物组合物的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。
16、项1-15中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含：
(a)90mg/ml至150mg/ml的抗TSLP抗体，
(b)10mM至40mM的缓冲剂，
(c)0.008％至0.04％(w/v)的表面活性剂，和
一种或多种(d)150mM至600mM的稳定剂；
其中所述药物组合物的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。
17、项1-16中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含：
(a)120mg/ml至150mg/ml的抗TSLP抗体，
(b)10mM至40mM的缓冲剂，
(c)0.008％至0.04％(w/v)的表面活性剂，和
一种或多种(d)150mM至600mM的稳定剂；
其中所述药物组合物的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。
18、一种含有抗TSLP抗体的冻干制剂，所述冻干制剂通过将项1-17中任一项所述的药物组合物经冷冻干燥获得。
19、一种含有抗TSLP抗体的冻干制剂，所述冻干制剂经复溶后可形成项1-17中任一项所述的药物组合物。
20、一种制品，其包括容器，该容器中装有项1-17中任一项所述的药物组合物，或项18-19中任一项所述的冻干制剂。
21、一种治疗和预防TSLP相关疾病的方法，包括给予所需患者治疗有效量的项1-17中任一项所述的药物组合物或项18-19中任一项所述的冻干制剂或项20所述的制品。
22、项21所述的方法，其中所述TSLP相关疾病包括哮喘、溃疡性结肠炎、特应性皮炎和牛皮癣。
附图说明
图1：示出捕获ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14与人TSLP的结合能力。
图2：示出间接ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14与食蟹猴TSLP的结合能力。
图3：示出竞争ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14对人TSLP与TSLPR/IL7R结合的阻断能力。
图4：示出竞争ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14阻断参照品Tezepelumab与人TSLP结合的能力。
图5：示出在基于细胞的配体阻断FACS测定中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14对人TSLP与表达人TSLPR和IL7R的工程化BAF3细胞结合的阻断能力。
图6A-6B：示出在基于细胞的功能测定中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8(A)和hu1C5F12E9-V14(B)对BAF3细胞存活和增殖的抑制作用。
图7：示出捕获ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)与人TSLP的结合能力。
图8：示出竞争ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)对人TSLP与TSLPR/IL7R结合的阻断能力。
图9：示出竞争ELISA中人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)阻断参照品与人TSLP结合的能力。
图10：示出在基于细胞的配体阻断FACS测定中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)对人TSLP与表达人TSLPR和IL7R的工程化BAF3细胞结合的阻断能力。
图11A-11B：示出在基于细胞的功能测定中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)(A)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)(B)对BAF3细胞存活和增殖的抑制作用。
图12A-12B：示出在基于细胞的报告基因检测中，人源化抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)(A)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)(B)对人TSLP与工程化HEK293T细胞相互作用的阻断能力。
图13：示出hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)抗体的蛋白热位移测定结果。
具体实施方式
本公开的以下描述只为说明本公开的多种实施方式。
为了更容易理解本公开，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本公开所属领域的一般技术人员通常理解的含义。
“磷酸盐缓冲剂”是包含磷酸根离子的缓冲剂。磷酸盐缓冲剂的示例包括磷酸钠缓冲剂、磷酸钾缓冲剂等，优选的磷酸盐缓冲剂是磷酸钠缓冲剂。
“醋酸盐缓冲剂”是包括醋酸根离子的缓冲剂。醋酸盐缓冲剂的示例包括醋酸钾缓冲剂、醋酸铵缓冲剂、醋酸钠缓冲剂等，优选的醋酸盐缓冲剂是醋酸钠缓冲剂。
“枸橼酸盐缓冲剂”是包括枸橼酸根离子的缓冲剂。枸橼酸盐缓冲剂的示例包括枸橼酸钠缓冲剂、枸橼酸钾缓冲剂、枸橼酸钙缓冲剂等，优选的枸橼酸盐缓冲剂是枸橼酸钠缓冲剂。
“组氨酸缓冲剂”是包括组氨酸根离子的缓冲剂。组氨酸缓冲剂的实例包括组氨酸-醋酸缓冲剂、组氨酸-盐酸缓冲剂、组氨酸-盐酸组氨酸缓冲剂，优选地，组氨酸缓冲剂是通过组氨酸(L-Histidine)来制备，并用醋酸或盐酸对pH进一步调节。
“缓冲剂”是指在药学上可接受的、能够维持药物组合物的pH至期望的pH范围。适用于本公开使用的缓冲剂包括磷酸盐缓冲剂、醋酸盐缓冲剂、枸橼酸盐缓冲剂或组氨酸缓冲剂。在优选的实施方案中，适用于本公开使用的缓冲剂是组氨酸缓冲剂，通过组氨酸(L-Histidine)来制备，并用醋酸或盐酸对pH进一步调节。
“稳定剂”是指在药学上可接受的、用于维持药物组合物中活性成分的稳定性。在本公开中，稳定剂还具有抗粘剂和/或等渗剂的功能。
“药物组合物”意在涵盖以任选地特定的量包含特定活性成分(例如抗体)的产物，以及任何通过以任选地特定的量组合特定活性成分直接或间接产生的任何产物。药物组合物的目的是使抗体适于生产和施用于患者，并且在储存和随后的使用过程中保持生物学活性和/或稳定性。在一些方案中，所述药物组合物为水溶性注射液，所述水溶性注射液包括但不限于未经冻干的水溶性制剂或冻干粉重构的水溶性制剂。在另一些方案中，所述药物组合物为冻干制剂。在本公开中，“药物组合物”和“制剂”不相互排斥。
“稳定的”或“稳定化的”药物组合物是指活性成分(例如抗体)保存在其中时基本保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物学活性的药物组合物。本领域已有多种用于测量活性成分稳定性的分析技术，例如在Peptide and Protein Drug Delivery,247-301,Vincent Lee Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs.(1991)Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10:29-90(1993)中进行了综述。稳定性可以在所选温度和其他保存条件下在所选时间段进行测量。举例来说，如果在目检颜色和/或澄清度后，或者通过UV光散射、分子排阻色谱法(SEC)和差示扫描量热法(DSC)测得，活性成分没有显示出显著的聚集增加、沉淀和/或变性，那么所述活性成分在药物组合物中“保留它的物理稳定性”。优选地，当使用本公开的药物组合物时，如通过SEC-UPLC或任何其他合适的用于测量聚集形成的方法时，5％或更少，4％或更少，优选地3％或更少的活性成分形成聚集物(也称为高分子杂质)。如果活性成分(例如抗体)没有显示出显著的化学改变，那么所述活性成分在药物组合物中“保留它的化学稳定性”。通过检测和定量化学上改变的形式的抗体，可以评估化学稳定性。经常改变蛋白化学结构的过程包括水解或截短(通过诸如分子排阻色谱法和SDS-PAGE等方法来评价)、氧化(通 过诸如与质谱法或MALDI/TOF/MS结合的肽谱法等方法来评价)、脱酰胺作用(通过诸如离子交换色谱法、毛细管等电聚焦电泳、肽谱法、异天冬氨酸测量等方法来评价)和异构化(通过测量异天冬氨酸含量、肽谱法等来评价)。如果活性成分(例如抗体)在给定时间内的生物学活性在制备药物组合物时所表现出的生物活性的预定范围内，则活性成分在药物组合物中于给定时间内“保持其生物学活性”，例如通过抗原结合测定来确定。在下面的实施例中还描述用于评估药物组合物稳定性的其他方法，例如使用HVROC-S粘度计检测粘度，优选地，当本公开的药物组合物表现出约20mpa·s、约19mpa·s、约18mpa·s、约15mpa·s或更低的粘度，则认为其具有低粘度。
“高分子杂质”或“聚集物”是指分子量大于目标活性成分(例如抗体)的杂质的总称。
“电荷变体”是指抗体经过糖基化、脱酰胺作用、氧化和/或异构化等直接或间接地引起抗体分子所带电荷发生改变的变体，这些电荷变体可以通过毛细管等电聚焦电泳(CIEF)和阳离子交换色谱(CEX-HPLC)等进行检测。
冠词“一种”、“一个”和“所述”在此用于指代该冠词的语法对象的一个/种或多于一个/种(即至少一个/种)。举例来说，“一种/个药物组合物”指一种/个药物组合物或多于一种/个药物组合物。
“约”或“大约”是指数值在本领域一般技术人员所测定的具体值的可接受误差范围内，所述数值部分取决于怎样测量或测定(即测量体系的限度)。例如，在本领域中“约”或“大约”可意味着在1内或超过1的标准差。或者“约”或“大约”表示所述值加上或减去15％、10％、5％或1％的范围。此外，特别对于生物学系统或过程而言，该术语可意味着至多一个数量级或数值的至多5倍。本公开中除另外说明，否则“约XX”或“大约XX”或“基本上包含“XX”的含义是该具体值“XX”的可接受误差范围内的数值(包括数值“XX”本身，以及本领域一般技术人员测定该数值的可接受误差范围内的数值)。
如本文中所述，任何百分比范围、比率范围或整数范围应当理解为包括在列举的范围内的任意整数的值，且适当时包括其分数(诸如整数的十分之一和百分之一)，除非另外指出。
在本公开全文中，除非上下文另有规定，词语“包含”、“包括”和“含有”将被理解为表示包括所述的步骤或要素或一组步骤或要素，但不排除任何其他步骤或要素或一组步骤或要素。“由……组成”所表示的是包括并且限于短语“由……组成”之后的内容。因此，短语“由……组成”表示所列出的要素是需要的或必需的，并且没有其他要素可存在。“基本由……组成”所表示的是包括列于此短语之后的任意要素，并且限于不妨碍或有助于所列的要素的如在本公开中详述的活性或作用的其他要素。因此，短语“基本由……组成”表示所列出的要素是需要的或必需的，但其他要素是可选的并可取决于其是否影响所列出的要素的活性或作用而存在或不存在。
术语“TSLP”是指胸腺基质淋巴细胞生成素。术语“TSLP”包括变体、亚型、同系物、直系同源物和旁系同源物。例如，在某些情况下，对人TSLP蛋白具有特异性的抗体可与人以外的物种(如猴)的TSLP蛋白发生交叉反应。在其他实施方案中，对人TSLP蛋白具有特异性的抗体可以对人TSLP蛋白完全特异，并且不与其他物种或其他类型的蛋白交叉反应，或者可以与来源于某些其他物种但并非所有其他物种的TSLP发生交叉反应。
术语“人TSLP”是指具有人氨基酸序列的TSLP蛋白，例如Genbank登录号为NP_149024.1的人TSLP的氨基酸序列。术语“猴或恒河猴TSLP”和“小鼠TSLP”分别指猴和小鼠TSLP序列，例如，分别具有Genbank登录号为NP_001100503.1和NP_067342.1的氨基酸序列。
“抗体”意在包括全长抗体及其任何抗原结合片段(即，抗原结合部分)或单链。常规的全长抗体是包含两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，重链和轻链由二硫键连接。每条重链由重链可变区(简称V H)和重链恒定区构成，重链恒定区由三个结构域构成，即C H1、 C H2和C H3。每条轻链由轻链可变区(简称V L)和轻链恒定区构成，轻链恒定区由一个结构域C L构成。V H和V L区还可以划分为称作互补决定区(CDR)的高变区，其由较为保守的骨架区(FR)区分隔开。每个V H和V L由三个CDR以及四个FR构成，从氨基端到羧基端以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排布。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括多种免疫系统细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。
抗体的“抗原结合部分”(或简称为“抗体部分”)，是指抗体中保持特异性结合抗原(例如，TSLP蛋白)能力的一个或多个片段。已证实，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实施。涵盖在抗体的“抗原结合部分”中的结合片段的例子包括：(i)Fab片段，由V L、V H、C L和C H1构成的单价片段；(ii)F(ab') 2片段，包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由V H和C H1构成的Fd片段；(iv)由抗体单臂V L和V H构成的Fv片段；(v)由V H构成的dAb片段(Ward et al.,(1989)Nature 341:544-546)；(vi)分离的互补决定区(CDR)；以及(vii)纳米抗体，即一种包含单可变结构域和两个恒定结构域的重链可变区。此外，尽管Fv片段的两个结构域V L和V H由不同的基因编码，它们可以通过重组的方法，使两者经合成接头连接成为蛋白单链，其中V L和V H区配对形成单价分子(称为单链Fc(scFv)；参见例如Bird et al.,(1988)Science 242:423-426；and Huston et al.,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。这些单链抗体也涵盖在术语抗体的“抗原结合部分”中。这些抗体片段可以通过本领域技术人员已知的常用技术获得，且可以通过与全长抗体相同的方式进行功能筛选。
“分离的抗体”是指基本不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与TSLP蛋白特异性结合的分离抗体基本不含特异性结合TSLP蛋白之外抗原的抗体)。但是，特异性结合人TSLP蛋白的分离抗体可能对其他抗原例如其他物种的TSLP蛋白具有交叉结合性。此外，分离的抗体基本不含其他细胞材料和/或化学物质。
“小鼠抗体”是指包括这样的抗体，其可变区中骨架区和CDR区均来自小鼠种系免疫球蛋白序列的抗体。此外，如果抗体包含恒定区，则恒定区也来自小鼠种系免疫球蛋白序列。本公开的小鼠抗体可以包含不由小鼠种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机突变或点突变、或通过体内体细胞突变而引入的突变)。然而，本文所用的术语“小鼠抗体”不包括在小鼠骨架区序列中插入来自其他哺乳动物物种的CDR序列的抗体。
“嵌合抗体”是指通过组合非人来源的遗传物质与人来源的遗传物质而得来的抗体。或者更笼统地说，嵌合抗体是指组合一个物种的遗传物质与另一物种遗传物质的抗体。
“人源化抗体”是指来源于非人物种但其蛋白序列已经被修改以增加其与人天然生成抗体的相似度的抗体。
“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类(例如IgM或IgG1)。
“识别抗原的抗体”以及“对抗原特异的抗体/对抗原具有特异性的抗体”在本文中与术语“特异性结合抗原的抗体”交替使用。
“特异性结合人TSLP”的抗体是指与人TSLP蛋白(还可能是一个或多个非人物种的TSLP蛋白)结合但是基本不与非TSLP蛋白结合的抗体。优选地，抗体以“高亲和力”结合人TSLP蛋白，即K D值为5.0×10 -8M或更小，优选为1.0×10 -8M或更小，更优选为7.0×10 -9M或更小。
“基本不结合”蛋白或细胞是指，不与蛋白或细胞结合，或者不以高亲和力与其结合，即结合蛋白或细胞的K D值为1.0×10 -6M或更大，优选为1.0×10 -5M或更大，更优选为1.0×10 -4M或更大，更优选为1.0×10 -3M或更大，更优选为1.0×10 -2M或更大。
“高亲和力”对于IgG抗体而言，是指对于抗原的K D值为1.0×10 -6M或更小，优选为 5.0×10 -8M或更小，更优选为1.0×10 -8M或更小，更优选为7.0×10 -9M或更小，更优选为1.0×10 -9M或更小。但是对于其他抗体同种型，“高亲和力”结合可能有所不同。例如，IgM同种型的“高亲和力”结合是指K D值为10 -6M或更小，优选为10 -7M或更小，更优选为10 -8M或更小。
术语“K assoc”或“K a”是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，术语“K dis”或“K d”是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。术语“K D”是指解离常数，其得自K d与K a之比(即K d/K a)并用摩尔浓度(M)表示。抗体的K D值可以使用本领域熟知的方法测定，测定抗体K D值的优选方法是使用表面等离子体共振，优选使用生物传感器系统，例如Biacore TM系统进行测定。
术语“EC 50”，又叫半数最大效应浓度，是指在特定暴露时间后，诱导反应达到基线和最大值之间的一半的抗体浓度。
术语“IC50”，又叫半数最大抑制浓度，是指相对于不存在抗体时，将特异性生物学或生化功能抑制50％的抗体浓度。
“受试者”包括任何人或非人动物。“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳类和非哺乳类，例如非人灵长类、羊、狗、猫、牛、马、鸡、两栖类和爬行类；尽管优选为哺乳动物，例如非人灵长类、羊、狗、猫、牛和马。
术语“治疗有效量”是指足以防止或改善与疾病或病症(例如TSLP相关疾病)相关的症状，和/或减轻疾病或病症的严重性的量。应当理解，治疗有效量与被治疗的疾病相关，其中本领域技术人员可以方便地判别出实际的有效量。
本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体
本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体或其抗原结合部分可以是结构和化学特性如下文和实施例中所述的抗体。抗体的重/轻链可变区的氨基酸SEQ ID NOs总结在下表1中，一些抗体具有相同的VH或VL。抗体的重链恒定区可以是具有SEQ ID NOs：12或37所示氨基酸序列的人IgG1重链恒定区、或具有SEQ ID NO：13所示氨基酸序列的人IgG4重链恒定区，且抗体的轻链恒定区可以是具有SEQ ID NO：14所示氨基酸序列的人κ轻链恒定区。这些抗体也可以包含小鼠IgG1或IgG2重链恒定区，和/或小鼠κ轻链恒定区。该抗体可以由通过二硫键连接的两条重链和两条轻链组成，重链可变区的C-末端连接至重链恒定区的N-末端，轻链可变区的C-末端连接至轻链恒定区的N-末端。
表1中的重链可变区CDRs和轻链可变区CDRs已由Kabat编号系统定义。然而，如本领域所熟知的，CDR区也可以基于重/轻链可变区序列由其他编号系统例如Chothia、IMGT、AbM或Contact编号系统/方法确定。
与人TSLP结合的其他抗TSLP抗体的VH和VL序列(或CDR序列)可以与本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体的VH和VL序列(或CDR序列)“混合并配对”。优选地，当VH和VL链(或这些链中的CDR)混合并配对时，来自特定VH/VL对中的VH序列被结构相似的VH序列取代。同样地，优选将来自特定VH/VL对中的VL序列替换为结构相似的VL序列。
因此，在一个实施方案中，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体或其抗原结合部分包括：
(a)重链可变区，其包含列于表1中氨基酸序列；和
(b)轻链可变区，其包含列于表1中氨基酸序列，或另一种抗TSLP抗体的VL，其中所述抗体特异性结合人TSLP。
在另一个实施方案中，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体或其抗原结合部分包含：
(a)列于表1中的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；和
(b)列于表1中的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3，或另一种抗TSLP抗体的CDRs，其中所述抗体特异性结合人TSLP。
在另一个实施方案中，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体或其抗原结合部分包括抗TSLP抗体的重链可变区CDR2以及其他结合人TSLP的抗体的CDRs，例如来自另一抗TSLP抗体的重链可变区的CDR1和/或CDR3，和/或轻链可变区的CDR1、CDR2和/或CDR3。
本领域所熟知的是，不依赖于CDR1和/或CDR2结构域，CDR3结构域可以单独确定抗体对同源抗原的结合特异性，并且基于共同的CDR3序列可以预测性地产生具有相同结合特异性的多种抗体。
在另一个实施方案中，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体包含抗TSLP抗体的重链可变区的CDR2以及至少抗TSLP抗体的重链可变区和/或轻链可变区的CDR3，或另一抗TSLP抗体的重链可变区和/或轻链可变区的CDR3，其中该抗体能特异性结合人TSLP。这些抗体优选地与本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体(a)竞争结合TSLP；(b)保留功能特性；(c)结合相同表位；和/或(d)具有相似的结合亲和力。在另一个实施方案中，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体还可以包含抗TSLP抗体的轻链可变区CDR2，或者另一抗TSLP抗体的轻链可变区CDR2，其中该抗体特异性结合人TSLP。在另一个实施方案中，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体还可以包括抗TSLP抗体的重链可变区和/或轻链可变区CDR1，或另一抗TSLP抗体的重链可变区和/或轻链可变区CDR1，其中该抗体特异性结合人TSLP。
保守修饰
在另一个实施方案中，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体包含不同于本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体的重链可变区和/或轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述不同是源于一个或多个保守修饰。本领域中应理解，一些保守的序列修饰不会使抗原结合性消失。参见，例如Brummell et al.,(1993)Biochem 32:1180-8；de Wildt et al.,(1997)Prot.Eng.10:835-41；Komissarov et al.,(1997)J.Biol.Chem.272:26864-26870；Hall et al.,(1992)J.Immunol.149:1605-12；Kelley and O'Connell(1993)Biochem.32:6862-35；Adib-Conquy et al.,(1998)Int.Immunol.10:341-6and Beers et al.,(2000)Clin.Can.Res.6:2835-43.
因此，在一个实施方案中，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含CDR1、CDR2和CDR3，其中：
(a)重链可变区CDR1包含表1列出的序列，和/或其保守修饰；和/或
(b)重链可变区CDR2包含表1列出的序列，和/或其保守修饰；和/或
(c)重链可变区CDR3包含表1列出的序列，和/或其保守修饰；和/或
(d)轻链可变区CDR1、和/或CDR2、和/或CDR3包含表1列出的序列，和/或其保守修饰；和
(e)该抗体特异性结合人TSLP。
本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体具有一种或多种下述功能特性，例如对人TSLP的高亲和力。
在多个实施方案中，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体可以是例如，小鼠、人、嵌合或人源化抗体。
本文所用的术语“保守序列修饰”是指不会显著影响或改变抗体结合特性的氨基酸修饰。这样的保守修饰包括氨基酸替换、添加和删除。可以通过本领域已知的标准技术将修饰引入本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体中，例如点突变和PCR介导的突变。保守氨基酸替换是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。具有相似侧链的氨基酸残基组在本 领域中已知。因此，本公开的药物组合物中的抗TSLP抗体的CDR区中的一个或多个氨基酸残基可以用来自相同侧链组的其他氨基酸残基进行替换，且得到的抗体可以使用本文所述的功能检测对其进行功能测试。
本公开中抗TSLP抗体的制备、纯化方法已在申请号为PCT/CN2020/113289的专利文件中记载，前述申请文件的全部内容均引入本公开。
为清楚起见，进一步用实施例来阐述本公开，但是实施例并非限制本公开的范围。实施例中的抗TSLP抗体1C5F12E9为PCT/CN2020/113289中的抗体1C5F12E9，其中，小鼠抗TSLP抗体1C5F12E9是按照PCT/CN2020/113289中所述方法，通过杂交瘤技术产生，经体外功能筛选后获得。
实施例1抗TSLP小鼠单克隆抗体的人源化
对小鼠抗TSLP抗体1C5F12E9进行人源化。小鼠抗体的人源化是使用已建立的CDR移植方法进行的，如下所述。为了选择用于小鼠抗体1C5F12E9人源化的受体骨架，将抗体轻链可变区和重链可变区的序列与人免疫球蛋白基因数据库进行BLAST。选择与小鼠抗体具有最高同源性的人种系抗体作为人源化的受体骨架。将小鼠抗体重/轻链可变区CDRs插入到选出的骨架中，并进一步突变骨架中的残基以获得更多候选的重/轻链可变区。总共获得18个示例性人源化1C5F12E9抗体，即hu1C5F12E9-V1至hu1C5F12E9-V18，其重/轻链可变区序列如表1中所示。
构建包含编码人源化1C5F12E9重链可变区和人IgG4重链恒定区(SEQ ID NO：13)的载体以及包含人源化1C5F12E9轻链可变区和人κ轻链恒定区(SEQ ID NO：14)的载体，按60％：40％的轻链构建体：重链构建体的比例，用1mg/mL的PEI瞬时转染到50mL 293F悬浮细胞中。在摇瓶中培养六天后，收集含有人源化抗体的细胞上清液，通过离心沉淀上清液中的细胞，然后从细胞上清液中纯化出上述18种抗体。
实施例2示例性人源化抗TSLP单克隆抗体的表征
通过Biacore T200系统(GE Healthcare，Pittsburgh，PA，USA)评估了纯化的示例性人源化1C5F12E9抗体与人TSLP的结合亲和力和结合动力学。
简而言之，内部合成的重组人TSLP-his(SEQ ID NO：28)或者食蟹猴TSLP-his蛋白(SEQ ID NO：29)溶于CH3COONa缓冲液(由Biocore提供)，终浓度为10μg/mL，然后使用Biacore(GE Healthcare，Pittsburgh,PA,USA)提供的标准胺偶联试剂盒，通过伯胺基团将其共价连接至CM5芯片(羧甲基化葡聚糖涂层芯片，GE Healthcare#BR100530)上。用乙醇胺封闭生物传感器表面上未反应的部分。然后，分别将梯度稀释的纯化的人源化1C5F12E9抗体(以100nM为起始浓度在HBS-EP+缓冲液中2倍梯度稀释)和参照品Tezepelumab(也称为TSLP-BM，使用SEQ ID NO：35和36所示的重链和轻链内部制备，以100nM为起始浓度在HBS-EP+缓冲液中2倍梯度稀释)以50μL/min的流速流过芯片。追踪抗原-抗体结合动力学4分钟，并追踪解离动力学13分钟。使用BIAcore evaluation软件将结合和解离曲线拟合至1:1Langmuir结合模型，并测定KD、Ka和Kd值，结果如下表2中所示。
表2.人源化1C5F12E9单克隆抗体的结合亲和力
Biacore测量的Kd值下限是1.00E-05，并且可以从相应的传感图中粗略计算出低于1.00E-05的Kd值。结果表明，所有人源化1C5F12E9抗体与人TSLP的结合亲和力均高于Tezepelumab。
实施例3人源化抗TSLP抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14的表征
选择人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14进行进一步表征。具体而言，按照实施例2和下述中的方法，通过Biacore、捕获ELISA、间接ELISA、竞争ELISA、基于细胞的配体阻断FACS和基于细胞的功能测定，测定它们对人和食蟹猴TSLP的结合亲和力/能力以及其他功能，结果如下表3、和图1-5和6A-6B所示。
对于捕获ELISA，溶于PBS的2μg/mL亲和纯化的山羊抗人IgG抗体(Jackson Immuno Research，109-005-098)包被在96孔板中，100μL/孔，于4℃孵育过夜。用洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween-20，PBST)洗涤板4次，然后每孔加入200μL的封闭缓冲液(含5％w/v脱脂牛奶的PBST)，于37℃封闭2h。再次洗涤板，加入100μL/孔梯度稀释(以66.7nM为起始浓度，在含2.5％脱脂牛奶的PBST中5倍梯度稀释)的本公开的人源化抗TSLP抗体、Tezepelumab或hIgG(Hualan Biological Engineering Inc.)，于37℃共孵育40min，然后再次洗涤板4次。在捕获抗体的96孔板中加入100μL/孔生物素标记的人TSLP-his蛋白(SEQ ID NO：28，内部制备，溶于含2.5％脱脂牛奶的PBST中，终浓度为0.23nM)，于37℃共孵育40min，洗涤板4次，然后每孔加入100μL的HRP标记链霉亲和素(在PBST中以1:10000稀释，Jackson Immuno Research，016-030-084)，于37℃孵育40min。最后一次洗涤后，板中加入100μL/孔的TMB(Innoreagents)进行孵育。15min后，室温下加入50μL/孔的1M H 2SO 4终止反应，并在酶标仪上使用双波长模式(TMB检测波长450nm，参比波长630nm)读取每个孔的吸光度。以OD(450-630)值和对应的抗体浓度作图。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到EC50值。一些抗体的结果如图1所示。
对于间接ELISA，溶于碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液(pH 9.6)的2μg/mL食蟹猴TSLP-his蛋白(SEQ ID NO：29，内部制备)包被在96孔板中，100μL/孔，于4℃孵育过夜。用洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween-20，PBST)洗涤板4次，然后每孔加入200μL的封闭缓冲液(含5％w/v脱脂牛奶的PBST)，于37℃封闭2h。再次洗涤板，并加入100μL/孔梯度稀释(以66.7nM为起始浓度，在含2.5％脱脂牛奶的PBST中5倍梯度稀释)的本公开的人源化抗TSLP抗体、Tezepelumab或hIgG，于37℃孵育40min。再次洗涤板4次，并加入100μL/孔的过氧化物酶标记的亲和纯化F(ab')2片段化山羊抗人IgG抗体(Jackson Immunoresearch，109-036-098)，于37℃孵育40min。最后一次洗涤后，加入100μL/孔的TMB(Innoreagents)进行孵育。15min后，室温下加入50μL/孔的1M H 2SO 4终止反应，并在酶标仪上使用双波长模式(TMB检测波长450nm，参比波长630nm)读取每个孔的吸光 度。以OD(450-630)值和对应的抗体浓度作图。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到EC50值。一些抗体的结果如图2所示。
使用竞争ELISA法测定人源化抗TSLP抗体阻断TSLP与TSLPR/IL7R结合的能力。简而言之，将TSLPR-Fc蛋白(SEQ ID NO：30，内部制备)溶于PBS，终浓度为1μg/mL，将IL7Ra-Fc蛋白(SEQ ID NO：31，内部制备)溶于PBS，终浓度为1μg/mL，将上述两种溶液(各取100μL)包被于96孔板中，于4℃孵育过夜。第二天，用洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween-20，PBST)洗涤板，并加入含5％w/v脱脂牛奶的PBST，在37℃中封闭2h。然后，用洗涤缓冲液洗涤板。用生物素标记的人TSLP-Fc(SEQ ID NO：32，内部制备，溶于含有2.5％脱脂牛奶的PBST，终浓度为0.29nM)稀释人源化抗TSLP抗体或对照品，以66.7nM为起始浓度，3倍梯度稀释，于室温孵育40min。然后将100μL/孔的抗体/TSLP-Fc混合物添加到包被有TSLPR/IL7R的板中。于37℃孵育40min后，用洗涤缓冲液洗涤板4次。然后加入HRP标记链霉亲和素，于37℃孵育40min，以检测与TSLPR/IL7R结合的生物素标记的人TSLP-Fc。再次用洗涤缓冲液洗涤板。最后，加入TMB，并用1M H 2SO 4终止反应。在酶标仪上使用双波长模式(TMB检测波长450nm，参比波长630nm)读取每个孔的吸光度，然后以OD(450-630)值和对应的抗体浓度作图。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到IC50值。一些抗体的结果如图3所示。
使用竞争ELISA法测定人源化抗TSLP抗体阻断参照品(Tezepelumab)与人TSLP结合的能力。简而言之，溶于PBS的2μg/mL的Tezepelumab以100μL/孔包被于96孔板中，于4℃孵育过夜。第二天，用洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween-20，PBST)洗涤板，并加入含5％w/v脱脂牛奶的PBST，于37℃封闭2h。同时，用生物素标记的人TSLP-Fc(SEQ ID NO：32，溶于含有2.5％脱脂牛奶的PBST，终浓度为0.047nM)稀释抗TSLP抗体或对照品，以40nM为起始浓度4倍梯度稀释，于室温孵育40min。然后，将100μL/孔的抗体/TSLP-Fc-生物素混合物加到包被有参照品的96孔板中。于37℃孵育40min后，用洗涤缓冲液洗涤板4次。然后加入HRP标记链霉亲和素，于37℃孵育40min，以检测与参照品结合的生物素标记的人TSLP-Fc。最后用洗涤缓冲液洗涤板。加入TMB，并使用1M H 2SO 4终止反应。在酶标仪上使用双波长模式(TMB检测波长450nm，参比波长630nm)读取每个孔的吸光度，然后以OD(450-630)值和对应的抗体浓度作图。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到IC50值。一些抗体的结果如图4所示。
基于细胞的配体阻断FACS，使用细胞表面表达人TSLPR(uniprot No.Q9HC73.1的第1-371位氨基酸残基，SEQ ID NO：33)和人IL7R(uniprot No.P16871.1的第1-459位氨基酸残基，SEQ ID NO：34)的细胞系BAF3-3E6，利用流式细胞术(FACS)评估人源化抗TSLP抗体阻断TSLP-Fc蛋白与细胞表面TSLPR/IL7R结合的活性。按照lipofectamine 3000转染试剂(Thermo Fisher)的说明，用重组质粒pCMV-T-P(在EcoRI和Xbal位点间插入TSLPR编码序列)和重组质粒pCMV3-SP(在HindIII和Xbal之间插入IL7R编码序列)转染BAF3细胞(iCell Bioscience Inc.，MIMCL-021)，制备BAF3-3E6细胞系。简而言之，用人TSLP-Fc溶液(SEQ ID NO：32，内部制备，溶于FACS缓冲液中，终浓度为0.38nM)稀释本公开的抗TSLP抗体、参照品或阴性对照hIgG(用于静脉注射的人免疫球蛋白(pH 4)(Hualan Biological Engineering Inc.)，以30nM为起始浓度2倍梯度稀释，于室温孵育40min。从细胞培养瓶中收获BAF3-3E6细胞，洗涤两次，然后重悬于含有2％v/v胎牛血清的磷酸盐缓冲液(PBS)中(FACS缓冲液)。在含有1×10 5个细胞/孔的96孔板中加入100μL/孔的抗体/TSLP-Fc-生物素混合物，于4℃孵育40min。用FACS缓冲液洗涤细胞两次，然后加入100μL/孔的R-藻红蛋白标记链霉亲和素(在FACS缓冲液中以1:1000稀释，Jackson Immunoresearch，016-110-084)，于4℃避光孵育40min。洗涤细胞两次，并重悬于FACS缓冲液中。使用Becton Dickinson FACS Canto II-HTS测定荧光值。使用Graphpad Prism软 件分析数据，并得到IC 50值。一些抗体的结果如图5所示。
BAF3细胞的增殖和存活通常依赖于IL-3。但是，当这些细胞经过工程化改造表达人TSLPR和人IL7R，并且细胞培养基中添加了TSLP时，它们可以在没有IL-3的情况下存活。基于细胞的功能测定的方法，进一步检测人源化抗TSLP抗体对表达TSLPR(SEQ ID NO：33)/IL7R(SEQ ID NO：34)的BAF3-3E6细胞增殖的抑制活性。简而言之，将100μL含有8×l0 3个对数生长期的BAF3-3E6细胞的RPMI1640培养基(Gibco，A10491-01)接种到96孔板上，其中RPMI1640培养基含10％FBS(Gibco，A10099-141)。然后，将50μL人TSLP-his蛋白(SEQ ID NO：28，内部制备，溶于RPMI-1640中，终浓度为6.4ng/mL)与50μL人源化抗TSLP抗体或对照品(以40μg/mL为起始浓度于培养基中5倍梯度稀释)混合，并将混合物在室温中孵育30min。然后，将100μL/孔的抗体/TSLP-his混合物添加到含BAF3-3E6细胞的96孔板中，于37℃、含CO 2的培养箱中培养72h。此后，将含细胞的96孔板与Cell 发光细胞活力测定试剂盒(Promega，G7572，50μL/孔)于37℃孵育10min。使用Tecan 200Pro测定化学发光值。使用Graphpad Prism软件分析数据，并得到IC 50值。一些抗体的结果如图6A-6B所示。
数据表明，hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14显示出与亲本小鼠和嵌合抗体相当的体外活性。
如表3、图1和图2所示，与参照品相比，人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14与人TSLP的结合亲和力/活性更高，与食蟹猴TSLP的结合亲和力/能力相当。
图3和5显示人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14能够阻断人TSLP与人TSLPR/IL7R的结合。
图6A-6B显示人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14能够阻断TSLP与TSLPR/IL7R的相互作用，从而在低抗体浓度下导致TSLP通路的阻断和BAF3-3E6细胞的死亡，而参照品则需要在高抗体水平下才能发挥这样的效力。
表3.单克隆抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14的结合亲和力
之后，按照实施例2-3中所述的方法和下述方法，通过Biacore、捕获ELISA、竞争ELISA、基于细胞的配体阻断FACS、基于细胞的功能测定、基于细胞的报告基因测定和蛋白热位移测定法，将具有人IgG1重链恒定区(SEQ ID NO：12)和人κ轻链恒定区(SEQ ID NO：14)的人源化抗体hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14，与具有人IgG4重链恒定区(SEQ ID NO：13)和人κ轻链恒定区(SEQ ID NO：14)的hu1C5F12E9-V8和hu1C5F12E9-V14，对人和食蟹猴TSLP的结合亲和力/能力以及其他功能进行比较。结果如图7-10、11A-11B、12A-12B和13所示。
为了测定四种抗TSLP人源化抗体的热稳定性，使用GloMelt TM热位移蛋白稳定性试剂盒(Biotium，33022-T)，通过蛋白热位移测定法测定Tm(熔解温度)。简而言之，GloMelt TM染料解冻至室温。将含有染料的小瓶涡旋并离心。然后，将5μL 200×染料添加到95μL PBS中制备10×染料。反应体系中加入2μL 10×染料和10μg人源化抗体，并加入PBS至总反 应体积为20μL。将含有染料和抗体的离心管短暂离心，并置于实时PCR热循环仪(Roche，LightCycler 480II)中，该热循环仪中Melt Curve程序的参数如表4所示。
表4.Melt Curve程序的参数
步骤 温度 升温速率 持续时间
Initial hold 25℃ NA 30s
Melt curve 25-99℃ 0.1℃/s NA
在基于细胞的报告基因测定中，使用细胞表面表达人TSLPR(SEQ ID NO：33)和人IL7R(SEQ ID NO：34)的报告基因细胞系HEK293T-TSLPR/IL7R/STAT5-Luc。按照lipofectamine 3000转染试剂(Thermo Fisher)的说明，用重组质粒pCMV-T-P(在EcoRI和Xbal位点间插入TSLPR编码序列)、重组质粒pCMV3-SP(在HindIII和Xbal之间插入IL7R编码序列)和pGL4.52[luc2P/STAT5RE/Hygro](Promega)，转染HEK293T细胞( CRL-11268)，在内部制备HEK293T-TSLPR/IL7R/STAT5-Luc细胞。简而言之，从细胞培养瓶中收获HEK293T-TSLPR/IL7R/STAT5-Luc细胞。然后，将100μL含5×l0 4个细胞的DMEM培养基(Gibco，10566-016)接种到96孔细胞培养板上(Corning，30218026)，其中DMEM培养基含10％FBS(Gibco，10099-141)。同时，将50μL人TSLP-his(SEQ ID NO：28，溶于含10％FBS的DMEM培养基中，终浓度为160ng/mL)分别与50μL梯度稀释的抗TSLP抗体hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)、hu1C5F12E9-V14(IgG4)和Tezepelumab(以200μg/mL为起始浓度于含10％FBS的DMEM培养基中5倍梯度稀释)混合，于室温孵育30min。然后，将100μL/孔的抗TSLP抗体/TSLP-his的混合物加入到96孔细胞培养板中，于37℃、含CO2的培养箱中培养16-18h。每孔弃去100μL上清液，然后加入50μL/孔的荧光素酶检测试剂(Promega，E6120)。10min后，用Tecan Infinite 200Pro读板仪对板进行分析。使用Graphpad prism软件分析发光信号的数据并得到IC50值。
如图7、8、10、11A-11B和12A-12B所示，与Tezepelumab相比，hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)在体外具有相当的或更好的体外活性。特别地，如图11A-11B和12A-12B所示，人源化抗体能够以比参照品浓度低得多的抗体浓度阻断TSLP与TSLPR/IL7R相互作用，从而导致TSLP通路的阻断和BAF3-3E6细胞的死亡。
如图13所示，hu1C5F12E9-V8(IgG1)、hu1C5F12E9-V8(IgG4)、hu1C5F12E9-V14(IgG1)和hu1C5F12E9-V14(IgG4)的熔解温度(T1，T2)分别为(69.5℃，80℃)、(66.5℃，76℃)、(69.5℃，80℃)和(66.5℃，76℃)。
实施例4药物组合物的筛选
分子排阻色谱法(SEC-UPLC)：用于测定样品中抗体的纯度，采用Thermo Vanquish F高效液相色谱，Waters ACQUITY UPLC Protein BEH SEC Column 凝胶色谱柱，Waters ACQUITY UPLC Protein BEH SEC Guard Column 为预柱，以50mmol/L磷酸盐缓冲液-200mmol/L氯化钠溶液(pH 7.0)为流动相进行洗脱，检测波长为280nm。按面积归一化法计算高分子杂质和免疫球蛋白单体的百分含量。
差示扫描量热法(DSC)：采用MicroCal VP-Capillary DSC(Malvern)分析样品的解折叠温度(Tm)，将样品稀释至浓度为1mg/mL，程序如下：扫描开始温度为20℃，扫描结束温度为110℃，升温速率为60℃/h。
使用Dynaproplate ReaderⅢ(Wyatt)检测样品的聚集温度(Tagg)，将样品加入到384孔样品盘中，封板膜封板，再将384孔样品盘离心去除气泡，然后进行检测，程序如下：升温程序从35℃到85℃，扫描时间为5秒。
采用HVROC-S粘度计(Rheosense)分析样品的粘度，选择Auto模式，记录检测结果。
毛细管等电聚焦电泳(CIEF)：用于测定样品的电荷变体，采用Proteinsimple iCE3成像毛细管等电聚焦电泳仪、Maurice快速全自动蛋白质表征分析系统，ProteinSimple涂层石英毛细管，紫外检测器，在紫外检测波长280nm下进行检测。设置进样时间60秒、1500V预聚焦1分钟、3000V聚焦5分钟。按峰面积归一化法计算电荷变体的峰面积百分比。
CE-SDS还原电泳：采用Beckman Coulter Pa 800Plus生物制药分析系统，内径50μm、总长31cm、有效长度21cm的非涂层-熔融石英毛细管，PDA检测器，在检测波长220nm下进行检测。按面积归一化法计算轻链、重链和非糖基化重链的校正峰面积百分比。CE-SDS非还原电泳：采用Beckman Coulter Pa 800Plus生物制药分析系统，内径50μm、总长31cm、有效长度21cm的非涂层-熔融石英毛细管，PDA检测器，在检测波长220nm下进行检测。按面积归一化法计算主峰的校正峰面积百分比。
采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测生物学活性，2μg/mL的TSLP蛋白(Sinobiological，16135-H08H)包被于96孔板中，100μL/孔，于228℃孵育过夜。洗涤96孔板后，每孔加入250μL的封闭液(含3％BSA的PBS溶液)，于25℃孵育2小时。洗涤96孔板后，分别加入梯度稀释的参比品和供试品(初始浓度为4000ng/mL，4倍梯度稀释，共7个稀释度)，25℃孵育2小时，其中参比品是具有工艺代表性的药物组合物样品，供试品是待测试的药物组合物样品，制备方法参见下文。洗涤96孔板后，以100μL/孔加入HRP标记的羊抗人抗体(PekinElmer，NEF802001EA，按说明书进行稀释)，25℃孵育1小时。洗涤96孔板后，每孔加入100μL TMB，25℃避光孵育5分钟。最后加入1M H 2SO 4终止显色，室温放置5分钟后用酶标仪进行检测，以650nm为参比波长，在450nm波长处测定吸光度，记录测定结果。供试品生物学活性(％)＝(参比品EC50值/供试品EC50值)×100％
缓冲剂的配制：磷酸钠缓冲剂由一水磷酸二氢钠(NaH 2PO 4·H 2O)和十二水合磷酸氢二钠(Na 2HPO 4·12H 2O)配制而成，例如20mM磷酸钠缓冲剂(pH6.0)由约2.54g/L NaH 2PO 4·H 2O和约0.573g/L Na 2HPO 4·12H 2O配制而成；醋酸钠缓冲剂由无水醋酸钠和醋酸配制而成，例如20mM醋酸钠缓冲剂(pH6.0)由约1.58g/L无水醋酸钠和约0.116g/L醋酸配制而成；组氨酸缓冲剂由组氨酸(L-Histidine)配制，并用醋酸调节至目标pH，例如20mM组氨酸缓冲剂(pH6.0)由约3.1g/L组氨酸配制而成，并用醋酸调节pH至6。
通过超滤离心的方式，将抗TSLP抗体(hu1C5F12E9-V8(IgG1)’，具有SEQ ID NO：37所示的人IgG1重链恒定区和SEQ ID NO：14所示的人κ轻链恒定区)置换到表5中筛选的缓冲剂中，置换完成后进行浓缩，按照表5中筛选的药物组合物分别添加辅料。混合均匀后，经0.22μm滤膜过滤除菌。不同药物组合物的Tm值、Tagg值和SEC-UPLC的检测结果如表5所示。
表5.筛选的药物组合物的Tm、Tagg、SEC-UPLC检测结果
示例性地，选择组氨酸缓冲剂作为缓冲剂进一步地筛选，通过超滤离心的方式，将抗TSLP抗体(hu1C5F12E9-V8(IgG1)’，具有SEQ ID NO：37所示的人IgG1重链恒定区和SEQ ID NO：14所示的人κ轻链恒定区)置换到表6中筛选的组氨酸缓冲剂中，置换完成后进行浓缩，按照表6中的筛选的药物组合物分别添加辅料。混合均匀后，经0.22μm滤膜过滤除菌。不同药物组合物的Tm值、Tagg值、粘度和SEC-UPLC的检测结果如表6所示。
表6.筛选的药物组合物的Tm、Tagg、粘度和SEC-UPLC检测结果
示例性地，选择组氨酸缓冲剂作为缓冲剂进一步地筛选，通过超滤离心的方式，将抗TSLP抗体(hu1C5F12E9-V8(IgG1)’，具有SEQ ID NO：37所示的人IgG1重链恒定区和SEQ ID NO：14所示的人κ轻链恒定区)置换到表7中筛选的组氨酸缓冲剂中，置换完成后进行浓缩，按照表7中筛选的药物组合物分别添加辅料。混合均匀后，经0.22μm滤膜过滤除菌。不同药物组合物的外观、可见异物、生物学活性、粘度和SEC-UPLC的检测结果如表7所示；不同药物组合物在228℃的稳定性研究结果如表8所示。
表7.筛选的药物组合物的外观、可见异物、生物学活性、粘度和SEC-UPLC检测结果
表8筛选的药物组合物在228℃的稳定性研究结果
示例性地，选择组氨酸缓冲剂作为缓冲剂，和脯氨酸作为稳定剂进一步地筛选，通过超滤离心的方式，将抗TSLP抗体(hu1C5F12E9-V8(IgG1)’，具有SEQ ID NO：37所示的人IgG1重链恒定区和SEQ ID NO：14所示的人κ轻链恒定区)置换到表9中筛选的组氨酸缓冲剂(醋酸调节pH至5.8)中，置换完成后进行浓缩，按照表9中筛选的药物组合物分别添加辅料。混合均匀后，经0.22μm滤膜过滤除菌。不同药物组合物的粘度、SEC-UPLC、CIEF和CE-SDS检测结果如表10所示。
表9.筛选的药物组合物
成分 F1 F2
抗TSLP抗体 150mg/mL(150g/L) 120mg/mL(120g/L)
组氨酸 20mmol/L(3.1g/L) 20mmol/L(3.1g/L)
脯氨酸 500mmol/L(57.56g/L) 400mmol/L(46.05g/L)
聚山梨酯80 0.02％w/v(0.2g/L) 0.02％w/v(0.2g/L)
pH 5.8 5.8
表10.筛选的药物组合物的粘度、SEC-UPLC、CIEF和CE-SDS检测结果
示例性地，选择表9中药物组合物F2进行228℃的稳定性考察，药物组合物F2在228℃的稳定性研究结果如表11所示。
表11.筛选的药物组合物在228℃的稳定性研究结果
本领域技术人员应该进一步理解，本发明可以在不背离其精神和核心属性的前提下以其他具体形式实施。在前述说明书中，本发明仅公开了示例性的实施方案，应该理解其他的变化也被包括在本发明的范围之内。因此，本发明不限于本文详细描述的具体实施方案。相反，关于本发明的范围和内容，应该参考后附的权利要求。

Claims (15)

  1. 一种药物组合物，其包含：(a)抗TSLP抗体，(b)缓冲剂，(c)表面活性剂，以及一种或多种(d)稳定剂，其中，所述抗TSLP抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含VH-CDR1区、VH-CDR2区和VH-CDR3区，所述轻链可变区包含VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区，其中VH-CDR1区、VH-CDR2区、VH-CDR3区、VL-CDR1区、VL-CDR2区和VL-CDR3区分别包含：如SEQ ID NOs：1、2、3、4、5和6所示的氨基酸序列。
  2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述抗TSLP抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区可包含选自下述的氨基酸序列：(1)分别如SEQ ID NOs：7和10所示；(2)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝S，X2＝V)所示；(3)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(4)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(5)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(6)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(7)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝V)所示；(8)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝A，X2＝I)所示；(9)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(10)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(11)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(12)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(13)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝A，X2＝I)所示；(14)分别如SEQ ID NOs：8和11(X1＝S，X2＝I)所示；(15)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示；(16)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝V，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝I)所示；(17)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝R，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示；(18)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝R)和11(X1＝S，X2＝I)所示；或(19)分别如SEQ ID NOs：9(X1＝K，X2＝A，X3＝V)和11(X1＝S，X2＝I)所示。
  3. 根据权利要求1-2中任一项所述的药物组合物，其中，所述抗TSLP抗体的浓度为30mg/ml至300mg/ml，优选为50mg/ml至250mg/ml，优选为70mg/ml至200mg/ml，更优选为90mg/ml至150mg/ml，最优选为120mg/ml至150mg/ml。
  4. 根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中，所述缓冲剂包括磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂、醋酸盐缓冲剂或枸橼酸盐缓冲剂。
  5. 根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述磷酸盐缓冲剂是磷酸钠缓冲剂，所述醋酸盐缓冲剂是醋酸钠缓冲剂，所述枸橼酸盐缓冲剂是枸橼酸钠缓冲剂。
  6. 根据权利要求1-5中任一项所述的药物组合物，其中所述缓冲剂的浓度为1mM至100mM，优选为2mM至80mM，更优选为5mM至60mM，最优选为10mM至40mM。
  7. 根据权利要求1-6中任一项所述的药物组合物，其中所述表面活性剂包括聚山梨酯80或聚山梨酯20。
  8. 根据权利要求1-7中任一项所述的药物组合物，其中所述表面活性剂的浓度为0.001％至0.1％(w/v)，优选为0.004％至0.08％(w/v)，更优选为0.006％至0.06％(w/v)，最优选为0.008％至0.04％(w/v)。
  9. 根据权利要求1-8中任一项所述的药物组合物，其中所述稳定剂包含海藻糖、甘露醇、蔗糖、精氨酸或其药学上可接受的盐、甘氨酸或脯氨酸。
  10. 根据权利要求1-9中任一项所述的药物组合物，其中所述稳定剂的浓度为100mM至1000mM，优选为120mM至800mM，更优选为150mM至700mM，最优选为150mM至600mM。
  11. 根据权利要求1-10中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的pH为5至7，优选为5.5至7，更优选为5.5至6.5。
  12. 一种含有抗TSLP抗体的冻干制剂，所述冻干制剂通过将权利要求1-11中任一项所述的药物组合物经冷冻干燥获得。
  13. 一种含有抗TSLP抗体的冻干制剂，所述冻干制剂经复溶后可形成权利要求1-11中任一项所述的药物组合物。
  14. 一种制品，其包括容器，该容器中装有权利要求1-11中任一项所述的药物组合物，或权利要求12-13中任一项所述的冻干制剂。
  15. 一种治疗和预防TSLP相关疾病的方法，包括给予所需患者治疗有效量的权利要求1-11中任一项所述的药物组合物或权利要求12-13中任一项所述的冻干制剂或权利要求14所述的制品。
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