CN116888128A - 嘧啶并芳香环类化合物 - Google Patents

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CN116888128A CN202280013706.4A CN202280013706A CN116888128A CN 116888128 A CN116888128 A CN 116888128A CN 202280013706 A CN202280013706 A CN 202280013706A CN 116888128 A CN116888128 A CN 116888128A
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伍文韬
耿开骏
徐洋洋
李志祥
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Abstract

提供了一类嘧啶并芳香环类化合物，具体提供了式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐。

Description

嘧啶并芳香环类化合物
本发明主张如下优先权：
CN202110182357.6，申请日：2021年02月09日；
CN202110251656.0，申请日：2021年03月08日；
CN202110379326.X，申请日：2021年04月08日；
CN202110485837.X，申请日：2021年04月30日；
CN202110825879.3，申请日：2021年07月21日；
CN202110975205.1，申请日：2021年08月24日；
CN202111136266.5，申请日：2021年09月27日；
CN202111283561.3，申请日：2021年11月01日；
CN202210072243.0，申请日：2022年01月21日；
CN202210113080.6，申请日：2022年01月29日。
技术领域
本发明涉及一类嘧啶并芳香环类化合物，具体涉及式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐。
背景技术
RAS癌基因突变是人类癌症中最常见的激活突变，约30％的人类肿瘤中存在RAS突变。RAS基因家族包括三个亚型(KRAS、HRAS和NRAS)，其中85％的RAS驱动的癌症是由KRAS亚型突变引起的。
KRAS是一种鼠类肉瘤病毒癌基因，是RAS蛋白中的重要一员。KRAS好像分子开关，一旦它打开，就会活化多种分裂、增殖因子，如c-RAF、PI3K等。正常情况下，KRAS与GTP结合，把GTP最末端一个磷酸基切掉，变成GDP，在把GTP变成GDP后，KRAS就关闭了。正常情况下，KRAS能够调控细胞生长的路径；KRAS基因突变后，KRAS蛋白持续保持活化状态，可以不依赖于上游生长因子受体信号，独立向下游通路传输生长和增殖信号，造成不受控制的细胞生长和肿瘤进展。
KRAS突变常见于实体肿瘤中，如：肺腺癌、胰腺导管癌和结直肠癌等。在KRAS突变肿瘤中，80％的致癌突变发生在密码子12上，最常见的突变包括：p.G12D(41％)、p.G12V(28％)和p.G12C(14％)。同时KRAS基因是否有突变，也是肿瘤预后的一个重要指标。
目前，直接靶向KRAS突变的小分子主要集中在KRAS G12C领域，包括Amgen公司的AMG510和Mirati Therapeutics的MRTX849，临床结果显示这两个化合物对KRAS G12C突变的肿瘤患者均展现出了良好的治疗效果。但至今还没有KRAS G12D小分子进入临床研究阶段，临床上对KRAS G12D突变的抑制剂存在巨大的未满足需求。
发明内容
本发明提供了式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐
其中，
E 1选自S或-CR 3＝CH-；
L 1选自-CH 2-和键；
环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代；
T 1选自CH 2、NH和O；
T 2选自CH和N；
T 3和T 4分别独立地选自CH 2和NH；
m、n、p和x分别独立地选自0、1或2；
r、v和w分别独立地选自1或2；
q、s和u分别独立地选自1、2或3；
R 1选自C 6-10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-10芳基和5-10元杂芳基任选被1、2、3、4或5个R b取代；
R 2选自H、F、Cl、CN、NH 2、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个卤素取代；
R 3选自H、F、Cl、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基任选被1、2或3个卤素取代；
R 4选自4-8元杂环烷基和 所述4-8元杂环烷基和 任选被1、2或3个R e取代；结构单元 选自5-6元杂环烯基；
各R a分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述 C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个卤素取代；
各R e分别独立地选自H、F、Cl、Br、OH、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-C 1-3烷基-O-CO-C 1-3烷氨基。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH，所述CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH任选被1、2或3个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各R b分别独立地选自F、Cl、OH、NH 2、CN、CH 3、CF 3、CH 2CH 3和-C≡CH，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自苯基、吡啶基、萘基、喹啉基、苯并噻唑基和苯并噻吩基，所述苯基、吡啶基、萘基、喹啉基、苯并噻唑基和苯并噻吩基任选被1、2、3、4或5个R b取代，其他变量如本发明所定义
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 2选自H、F、Cl、CH 3和OCH 3，所述CH 3和OCH 3任选被1、2或3个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 2选自H、F、Cl、OCH 3和OCHF 2，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 3选自H、F、Cl、CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基，所述CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基任选被1、2或3个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 3选自H、F、Cl、OCHF 2、-CH＝CH 2和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各R e分别独立地选自H、F、Cl、Br、OH、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3和 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 4选自四氢吡咯基和六氢-1H-吡咯里嗪基，所述四氢吡咯基和六氢-1H-吡咯里嗪基被1、2或3个R e取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 4选自 其他变量如本发明所定义。
本发明提供了式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐
其中，
E 1选自S或-CR 3＝CH-；
L 1选自-CH 2-和键；
环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代；
T 1选自CH 2、NH和O；
T 2选自CH和N；
T 3和T 4分别独立地选自CH 2和NH；
m、n、p和x分别独立地选自0、1或2；
r、v和w分别独立地选自1或2；
q、s和u分别独立地选自1、2或3；
R 1选自C 6-10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-10芳基和5-10元杂芳基任选被1、2、3、4或5个R b取代；
R 2选自H、F、Cl、CN、NH 2、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个卤素取代；
R 3选自H、F、Cl、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基任选被1、2或3个卤素取代；
R 4选自4-8元杂环烷基和 所述4-8元杂环烷基和 任选被1、2或3个R e取代；结构单元 选自5-6元杂环烯基；
各R a分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个卤素取代；
各R e分别独立地选自H、F、Cl、Br、OH、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-C 1-3烷基-O-CO-C 1-3烷氨基。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH，所述CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH任选被1、2或3个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各R b分别独立地选自F、OH、NH 2、CN、CH 3、CF 3、CH 2CH 3和-C≡CH，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自苯基、萘基、苯并噻唑基和苯并噻吩基，所述苯基、萘基、苯并噻唑基和苯并噻吩基任选被1、2、3、4或5个R b取代，其他变量如本发明所定义
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 2选自H、F、Cl、CH 3和OCH 3，所述CH 3和OCH 3任选被1、2或3个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 2选自H、F、Cl、OCH 3和OCHF 2，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 3选自H、F、Cl、CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基，所述CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基任选被1、2或3个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 3选自H、Cl、OCHF 2、-CH＝CH 2和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各R e分别独立地选自H、F、Cl、Br、OH、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3和 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 4选自四氢吡咯基和六氢-1H-吡咯里嗪基，所述四氢吡咯基和六氢-1H-吡咯里嗪基被1、2或3个R e取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 4选自 其他变量如本发明所定义。
本发明提供了式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐
其中，
E 1选自S或-CR 3＝CH-；
L 1选自-CH 2-和键；
环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代；
T 1选自CH 2、NH和O；
T 2选自CH和N；
T 3和T 4分别独立地选自CH 2和NH；
m、n、p和x分别独立地选自0、1或2；
r、v和w分别独立地选自1或2；
q、s和u分别独立地选自1、2或3；
R 1选自C 6-10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-10芳基和5-10元杂芳基任选被1、2、3、4或5个R b取代；
R 2选自H、F、Cl、CN、NH 2、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个R c取代；
R 3选自H、F、Cl、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基任选被1、2或3个R d取代；
R 4选自4-8元杂环烷基和 所述4-8元杂环烷基和 任选被1、2或3个R e取代；结构单元 选自5-6元杂环烯基；
各R a分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个R取代；
各R c分别独立地选自F、Cl、Br和I；
各R d分别独立地选自F、Cl、Br和I；
各R e分别独立地选自H、F、Cl、Br、OH、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-C 1-3烷基-O-CO-C 1-3烷氨基；
各R分别独立地选自F、Cl、Br、I。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH，所述CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH任选被1、2或3个R取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各R b分别独立地选自F、OH、NH 2、CH 3、CF 3、CH 2CH 3和-C≡CH，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 2选自H、F、CH 3和OCH 3，所述CH 3和OCH 3任选被1、2或3个R c取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 2选自H、F、OCH 3和OCHF 2，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 3选自H、F、Cl、CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基，所述CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基任选被1、2或3个R d取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 3选自H、Cl、OCHF 2、-CH＝CH 2和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各R e分别独立地选自H、F、Cl、Br、OH、CN、CH 3、CH 2CH 3、CH 2CF 3、OCH 3、OCF 3和 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各R e分别独立地选自H、F、Cl、Br、OH、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3和 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 4选自四氢吡咯基和六氢-1H-吡咯里嗪基，所述四氢吡咯基和六氢-1H-吡咯里嗪基被1、2或3个R e取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 4选自 其他变量如本发明所定义。
本发明提供了式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐
其中，
E 1选自S或-CR 3＝CH-；
环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代；
T 1、T 2、T 3和T 4分别独立地选自CH和N；
m、n、p和x分别独立地选自0、1或2；
r、v和w分别独立地选自1或2；
q、s和u分别独立地选自1、2或3；
R 1选自苯基和萘基，所述苯基和萘基任选被1、2、3、4或5个R b取代；
R 2选自H、F、Cl、CN、NH 2、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个R c取代；
R 3选自H、F、Cl、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基任选被1、2或3个R d取代；
各R a分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CF 3和OCH 3；
各R c分别独立地选自F、Cl、Br和I；
各R d分别独立地选自F、Cl、Br和I。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 1选自 其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 2选自H、F、CH 3和OCH 3，所述CH 3和OCH 3任选被1、2或3个R c取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 2选自H、F、OCH 3和OCHF 2，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 3选自H、F、Cl、CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基，所述CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基任选被1、2或3个R d取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述R 3选自H、Cl、OCHF 2、-CH＝CH 2和环丙基，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
其中，
环A、R 1、R 2和R 3如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
其中，
T 6选自CH和N；
R 1、R 2、R 3和R e如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
其中，T 6、R 1、R 2和R 3如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
其中，
T 5和T 6分别独立地选自CH和N；
y选自0、1、2、3、4和5；
R b如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
其中，
T 6选自CH和N；
R 1、R 2和R 3如发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
其中，
T 6选自CH和N；
R 2和R 3如发明所定义。
各R b1、R b2、R b3、R b4、R b5、R b6、R b7、R b8、R b9、R b10和R b11分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个卤素取代。
在本发明的一些方案中，所述各R b1、R b2、R b3、R b4、R b5、R b6、R b7、R b8、R b9、R b10和R b11分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH，所述CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH任选被1、2或3个卤素取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，所述各R b1、R b2、R b3、R b4、R b5、R b6、R b7、R b8、R b9、R b10和R b11分别独立地选自F、Cl、OH、NH 2、CN、CH 3、CF 3、CH 2CH 3和-C≡CH，其他变量如本发明所定义。
本发明还有一些方案是由上述变量任意组合而来。
本发明还提供了下式化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
在本发明的一些方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
本发明还提供了所述的化合物或其药学上可接受的盐，其在制备治疗KRAS G12D突变相关肿瘤药物中的应用。
在本发明的一些方案中，所述肿瘤指结直肠癌和胰腺癌。
本发明还提供了下列合成方法：
方法1：
其中，R 2和R 3如本发明所定义。
方法2：
其中，R 2和R 3如本发明所定义。
方法3：
其中，R 2如本发明所定义。
方法4：
其中，R 2如本发明所定义。
测试方法2.化合物在肿瘤细胞系AsPC-1和GP2D中的抗细胞增殖作用
研究目的
本实验通过检测化合物在肿瘤细胞系AsPC-1和GP2D中对体外细胞活性的影响而研究化合物抑制细胞增殖的作用。
实验材料
表1.实验材料
细胞系 肿瘤类型 生长特点 培养方法
AsPC-1 胰腺癌 贴壁生长 RPMI 1640+10％FBS
GP2D 结肠癌 贴壁生长 DMEM+10％FBS+2mM L-glutamine
Ultra Low Cluster-96孔板(Corning-7007)
Greiner CELLSTAR 96-孔板(#655090)
Promega CellTiter-Glo 3D发光法细胞活性检测试剂盒(Promega-G9683)
2104-10 EnVision读板器，PerkinElmer
RPMI 1640，DMEM，PBS(磷酸盐缓冲溶液)，FBS(胎牛血清)，Antibiotic-antimycotic(抗生素-抗真菌药)，L-glutamine(L-谷氨酰胺)，DMSO(二甲基亚砜)
实验方法及步骤
细胞培养
将肿瘤细胞系按培养方法所示的培养条件在37℃，5％CO2的培养箱中进行培养。定期传代，取处于对数生长期的细胞用于铺板。
细胞铺板
用台盼兰进行细胞染色并计数活细胞。
将细胞浓度调整至合适浓度。
表2.细胞密度
细胞系 密度(每孔)
AsPC-1 7000个细胞
GP2D 8000个细胞
在ULA培养板中每孔加入135μL细胞悬液，在空白对照空中加入同样体积且不含细胞的培养液。
铺板后，立刻在室温条件下将ULA培养板离心10分钟，离心条件1000rpm。注意：在离心后，务必小心处理后续操作，不要造成不必要的震荡。
将培养板在37℃,5％CO 2,及100％相对湿度的培养箱中培养过夜。
10X化合物工作液的配制及化合物处理细胞(第一天)
配制好10X化合物工作液(DMSO 10X工作液)后，分别向ULA培养板内加入15μL的10X化合物工作液，在溶媒对照和空白对照中加入15μL DMSO-细胞培养液混合液。
将96孔细胞板放回培养箱中培养120小时。
每天观察细胞成球情况直至实验终点。
CellTiter-Glo发光法细胞活性检测(第五天)
以下步骤按照Promega CellTiter-Glo 3D发光法细胞活性检测试剂盒(Promega#G9683)的说明书来进行。
在每孔中加入150μL(等于每孔中细胞培养液体积)的CellTiter-Glo 3D试剂。用铝箔纸包裹细胞板以避光。
将培养板在轨道摇床上振摇5分钟。
小心的用移液管上下吹打10次，混匀空内混合物。在继续下一步之前需确保细胞球体充分被分离。
然后将ULA培养板内的溶液转移至黑底培养板(#655090)中，在室温放置25分钟以稳定发光信号。在2104EnVision读板器上检测发光信号。
数据分析
用下列公式来计算检测化合物的抑制率(Inhibition rate，IR)：IR(％)＝(1–(RLU化合物–RLU空白对照)/(RLU溶媒对照–RLU空白对照))*100％。在Excel中计算不同浓度化合物的抑制率，然后用GraphPad Prism软件作抑制曲线图和计算相关参数，包括最小抑制率，最大抑制率及IC 50。
技术效果
本发明化合物对KRAS G12D蛋白有较好的结合作用、抑制作用，可有效抑制下游信号p-ERK，对KRAS G12D突变的细胞具有良好的细胞增殖抑制活性，对肿瘤具有显著的抑制效果。此外，本发明化合物药代动力学性质佳。
相关定义
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明 的范围之内。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚( 3H)，碘-125( 125I)或C-14( 14C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，取代基可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR) 0-，表示该连接基团为单键。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，按平面所示从左往右的顺序读取，例如， 中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成 所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，当某一基团具有一个或多个可连接位点时，该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。当该化学键的连接方式是不定位的，且可连接位点存在H原子时，则连接化学键时，该位点的H原子的个数会随所连接化学键的个数而对应减少变成相应价数的基团。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形实线键 直形虚线键 或波浪线 表示。例如-OCH 3中的直形实线键表示通过该基团中的氧原子与其他基团相连； 中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子的两端与其他基团相连； 中的波浪线表示通过该苯基基团中的1和2位碳原子与其他基团相连； 表示该哌啶基上的任意可连接位点可以通过1个化学键与其他基团相连，至少包括 这4种连接方式，即使-N-上画出了H原子，但是 仍包括 这种连接方式的基团，只是在连接1个化学键时，该位点的H会对应减少1个变成相应的一价哌啶基。 表示该萘[2,3-d]异噁唑基上的任意可连接位点可以通过1个化学键与其他基团相连，至少包括 这7种连接方式。
除非另有说明，用楔形实线键 和楔形虚线键 表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键 和直形虚线键 表示立体中心的相对构型，用波浪线 表示楔形实线键 或楔形虚线键 或用波浪线 表示直形实线键 或直形虚线键
除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)原子。
除非另有规定，术语“C 1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C 1-3烷基包括C 1-2和C 2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C 1- 3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。
除非另有规定，术语“C 1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C 1-3烷氧基包括C 1-2、C 2-3、C 3和C 2烷氧基等。C 1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。
除非另有规定，术语“C 1-3烷氨基”表示通过氨基连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C 1-3烷氨基包括C 1-2、C 3和C 2烷氨基等。C 1-3烷氨基的实例包括但不限于-NHCH 3、-N(CH 3) 2、-NHCH 2CH 3、-N(CH 3)CH 2CH 3、-NHCH 2CH 2CH 3、-NHCH 2(CH 3) 2等。
除非另有规定，“C 2-4烯基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳双键的由2至4个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳双键可以位于该基团的任何位置上。所述C 2-4烯基包括C 2-3、C 4、C 3和C 2烯基等；所述C 2-4烯基可以是一价、二价或者多价。C 2-4烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、丁间二烯基 等。
除非另有规定，“C 2-3烯基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳双键的由2至3个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳双键可以位于该基团的任何位置上。所述C 2-3烯基包括C 3和C 2烯基；所述C 2-3烯基可以是一价、二价或者多价。C 2-3烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基等。
除非另有规定，“C 2-4炔基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳三键的由2至4个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳三键可以位于该基团的任何位置上。所述C 2-4炔基包括C 2-3、C 4、C 3和C 2炔基等。其可以是一价、二价或者多价。C 2-4炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基等。
除非另有规定，“C 2-3炔基”用于表示直链或支链的包含至少一个碳-碳三键的由2至3个碳原子组成的碳氢基团，碳-碳三键可以位于该基团的任何位置上。其可以是一价、二价或者多价。所述C 2-3炔基包括C 3和C 2炔基。C 2-3炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基等。
除非另有规定，本发明术语“C 6-10芳环”和“C 6-10芳基”可以互换使用，术语“C 6-10芳环”或“C 6-10芳基”表示由6至10个碳原子组成的具有共轭π电子体系的环状碳氢基团，它可以是单环、稠合双环或稠合三环体系，其中各个环均为芳香性的。其可以是一价、二价或者多价，C 6-10芳基包括C 6-9、C 9、C 10和C 6芳基等。C 6-10芳基的实例包括但不限于苯基、萘基(包括1-萘基和2-萘基等)。
除非另有规定，本发明术语“5-10元杂芳环”和“5-10元杂芳基”可以互换使用，术语“5-10元杂芳基”是表示由5至10个环原子组成的具有共轭π电子体系的环状基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子。其可以是单环、稠合双环或稠合三环体系，其中各个环均为芳香性的。其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O) p，p是1或2)。5-10元杂芳基可通过杂原子或碳原子连接到分子的其余部分。所述5-10元杂芳基包括5-8元、5-7元、5-6元、5元和6元杂芳基等。所述5-10元杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡嗪基、嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)、苯并噻唑基(包括5-苯并噻唑基等)、嘌呤基、苯并咪唑基(包括2-苯并咪唑基等)、苯并噁唑基、吲哚基(包括5-吲哚基等)、异喹啉基(包括1-异喹啉基和5-异喹啉基等)、喹喔啉基(包括2-喹喔啉基和5-喹喔啉基等)或喹啉基(包括3-喹啉基和6-喹啉基等)。
除非另有规定，术语“4-8元杂环烷基”本身或者与其他术语联合分别表示由4至8个环原子组成的饱和环状基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子，其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O) p，p是1或2)。其包括单环和双环体系，其中双 环体系包括螺环、并环和桥环。此外，就该“4-8元杂环烷基”而言，杂原子可以占据杂环烷基与分子其余部分的连接位置。所述4-8元杂环烷基包括4-6元、5-6元、4元、5元和6元杂环烷基等。4-8元杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢噻吩基(包括四氢噻吩-2-基和四氢噻吩-3-基等)、四氢呋喃基(包括四氢呋喃-2-基等)、四氢吡喃基、哌啶基(包括1-哌啶基、2-哌啶基和3-哌啶基等)、哌嗪基(包括1-哌嗪基和2-哌嗪基等)、吗啉基(包括3-吗啉基和4-吗啉基等)、二噁烷基、二噻烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、1,2-噁嗪基、1,2-噻嗪基、六氢哒嗪基、高哌嗪基、高哌啶基或二氧杂环庚烷基等。
除非另有规定，术语“5-6元杂环烯基”本身或者与其他术语联合分别表示包含至少一个碳-碳双键的由5至6个环原子组成的部分不饱和的环状基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子，其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O) p，p是1或2)。其包括单环和双环体系，其中双环体系包括螺环、并环和桥环，此体系的任意环都是非芳香性的。此外，就该“5-6元杂环烯基”而言，杂原子可以占据杂环烯基与分子其余部分的连接位置。所述5-6元杂环烯基包括5元和6元杂环烯基等。5-6元杂环烯基的实例包括但不限于
除非另有规定，C n-n+m或C n-C n+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C 1-12包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6、C 7、C 8、C 9、C 10、C 11、和C 12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C 1-12包括C 1- 3、C 1-6、C 1-9、C 3-6、C 3-9、C 3-12、C 6-9、C 6-12、和C 9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式： 扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
化合物依据本领域常规命名原则或者使用 软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
附图说明
图1.化合物A与和KRAS G12D蛋白的结合模式图；
图2.化合物B与和KRAS G12D蛋白的结合模式图；
图3.化合物C与和KRAS G12D蛋白的结合模式图；
图4.化合物D与和KRAS G12D蛋白的结合模式图；
图5.化合物E与和KRAS G12D蛋白的结合模式图；
图6.化合物F与和KRAS G12D蛋白的结合模式图；
图7.化合物G与和KRAS G12D蛋白的结合模式图；
图8.化合物H与和KRAS G12D蛋白的结合模式图。
图9.化合物I与和KRAS G12D蛋白的结合模式图。
图10.化合物J与和KRAS G12D蛋白的结合模式图。
图11.化合物K与和KRAS G12D蛋白的结合模式图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
计算例1
分子对接过程是通过使用Maestro( 版本2017-2)中的Glide SP [1]和默认选项进行的。选取PDB数据库中KRAS_G12C的晶体结构PDB:6UT0，将Cys12模拟突变为Asp12，经过能量优化后，作为对接模板。为了准备蛋白质，使用Maestro [2]的蛋白质准备向导模块添加氢原子，并使用OPLS3力场。对于配体的准备，使用LigPrep生成了分子的三维结构，并进行了能量最小化 [3]，使用confgen模块对小分子构象进行采样。以6UT0的配体作为质心生成了边长为 的正方体对接网格。在分子对接过程中放置参考化合物。分析蛋白质受体与配体的相互作用类型，分析蛋白质受体与配体的相互作用类型，然后根据计算得到的docking scrore以及结合模式选择并保存了合理对接构象，如图1至图11所示。
[1]Glide, LLC,New York,NY,2017.
[2]Maestro, LLC,New York,NY,2017.
[3]LigPrep, LLC,New York,NY,2017.
结论：本发明化合物与KRAS G12D有较好的结合。
实施例1
合成路线：
步骤1：化合物001-2的合成
将化合物001-1(3.95g,11.96mmol,1eq)和化合物001-1A(2.54g,11.96mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)，再加入二异丙基乙胺(3.87g,29.91mmol,5.21mL,2.5eq)，20℃反应16小时。加200mL水，用乙酸乙酯萃取3次，每次100mL，合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到粗产品。粗产品经硅胶柱分离(石油醚:乙酸乙酯＝20:1-10:1-5:1)得到化合物001-2。LCMS:(ESI)m/z:506.8[M+H] +。
步骤2：化合物001-3的合成
将化合物001-2(1.5g,2.96mmol,1eq)溶于四氢呋喃(6mL)和N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，氮气保护下依次加入001-2A(707.64mg,4.44mmol,1.5eq)，碳酸铯(2.90g,8.89mmol,3eq)和三乙烯二胺(33.24mg,296.33μmol,32.59μL,0.1eq)，加完后20℃反应16小时。在反应液中加入水，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取，用水洗涤，有机相浓缩旋干得到粗产品。粗产品经柱层析纯化(PE:EA＝10：1)得到化合物001-3。LCMS:(ESI)m/z:628.1[M+H] +。
步骤3：化合物001-4的合成
将化合物001-3(0.05g,79.50μmol,1eq)，化合物001-3A(25.77mg,95.40μmol,1.2eq)，碳酸钠(25.28mg,238.50μmol,3eq)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，氮气保护下加入Pd(dppf)Cl 2.DCM(5.82mg,7.95μmol,0.1eq)，加完后100℃反应16小时。将反应液浓缩，得到粗产品。粗产品经柱层析纯化(PE:EA＝10:1)得到化合物001-4。LCMS:(ESI)m/z:692.2[M+H] +。
步骤4：化合物001甲酸盐的合成
将化合物001-4(0.05g,72.23μmol,1eq)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(2.57g,22.51mmol,1.67mL,311.63eq)，加完后20℃反应1小时。反应液浓缩旋干，得到粗产品。粗产品经机分(色谱柱: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈％:0％-30％,7min)纯化得到化合物001的甲酸盐。LCMS:(ESI)m/z:592.2[M+H] +。 1H NMR(CD 3OD,400MHz):δ＝8.50(s,1H),8.02(s,1H),7.78(d,J＝8.3Hz,1H),7.41-7.46(m,1H),7.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.19-7.25(m,2H),7.05(d,J＝1.5Hz,1H),5.38-5.58(m,1H),4.69(br d,J＝13.6Hz,2H),4.49-4.60(m,2H),4.08(br s,2H),3.86(br d,J＝13.3Hz,2H),3.59-3.81(m,3H),3.25-3.33(m,3H),2.44-2.65(m,2H),2.29-2.38(m,1H),2.20-2.28(m,2H),2.07-2.13ppm(m,3H).
实施例4
合成路线：
步骤1：化合物004-1合成
将化合物001-3(500mg,794.99μmol,1eq)和004-1A(297.76mg,953.99μmol,1.2eq)和碳酸铯(518.05mg,1.59mmol,2eq)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)中，氮气置换，然后在氮气保护下加入四三苯基膦钯(91.87mg,79.50μmol,0.1eq)，100℃油浴中搅拌反应15小时，反应结束后旋干反应液，硅胶柱纯化(乙酸乙酯/石油醚＝0～100％)，得到化合物004-1。LCMS:(ESI)m/z:816.5[M+H] +。
步骤2：化合物004合成
将化合物004-1(530mg,649.25μmol,1eq)加入到三氟乙酸(5mL)中，室温20℃搅拌反应30分钟。反应完后将反应液直接浓缩，送制备分离纯化柱子:Phenomenex C18 80*40mm*3μm；流动相:[水(氨水)-乙腈]；乙腈％:44％-74％,8min，得到化合物004。LCMS:(ESI)m/z:616.2[M+H] +。
实施例5
合成路线：
步骤1：化合物005-2合成
将化合物005-1(4g,17.09mmol,1eq)和尿素(10.27g,170.92mmol,9.17mL,10eq)加入到烧瓶中，200℃反应1.5小时，反应完后，降温至室温，反应固体利用30mL乙酸乙酯打浆1小时过滤后，将滤饼浓缩旋干，然后用30mL的水打浆1小时，过滤，将滤饼旋干得到化合物005-2。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝11.45-11.06(m,2H),7.67-7.56(m,1H),7.45-7.35(m,1H)。
步骤2：化合物005-3合成
将化合物005-2(2.5g,9.65mmol,1eq)加入到三氯氧磷(20mL)中，加入二异丙基乙二胺(3.74g,28.95mmol,5.04mL,3eq)，100℃反应3小时，反应完后，将反应液直接浓缩，浓缩后的产品缓慢加入到20mL的冰水中，利用10mL*2的乙酸乙酯萃取，合并有机相，20mL的饱和氯化铵和饱和食盐水分别洗涤后，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩得到化合物005-3。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.81-8.59(m,2H)；LCMS:(ESI)m/z:296.8[M+H] +。
步骤3：化合物005-4合成
将化合物005-3(1.5g,5.07mmol,1eq)加入到无水二氯甲烷(20mL)中，加入三乙胺(1.54g,15.21mmol,2.12mL,3eq)和化合物001-1A(1.29g,6.08mmol,1.2eq)，20℃反应2小时，反应完后，粗品利用过 柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:0-1:1)，得到化合物005-4。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝7.83(d,J＝0.8Hz,1H),7.71-7.63(m,1H),4.42-4.30(m,2H),4.23(s,2H),3.58(d,J＝1.2Hz,2H),1.84-1.74(m,2H),1.68-1.59(m,2H),1.45(s,9H)；LCMS:(ESI)m/z:473.0[M+H] +。
步骤4：化合物005-5合成
将化合物005-4(0.7g,1.48mmol,1eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(7mL)和无水四氢呋喃(7mL)中，加入化合物001-2A(354.34mg,2.23mmol,1.5eq)，碳酸铯(1.45g,4.45mmol,3eq)，三乙烯二胺(16.64mg,148.38μmol,16.32μL,0.1eq)，20℃反应20小时，反应完后，向反应液中加入20mL的水，利用10mL*2的乙酸乙酯萃取，合并有机相，利用20mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品利用过柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝100：0-10:1)，得到化合物005-5。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.45-7.39(m,1H),7.32-7.28(m,1H),5.40-5.13(m,1H),4.45-4.28(m,4H),4.26-4.21(m,1H),4.18-4.05(m,1H),3.69-3.42(m,2H),3.33-3.10(m,3H),3.05-2.92(m,1H),2.30-2.07(m,3H),2.00-1.84(m,5H),1.81-1.70(m,2H),1.52(s,9H)；LCMS:(ESI)m/z:594.1[M+H] +。
步骤5：化合物005-6合成
将化合物005-5(0.1g,168.21μmol,1eq)和化合物001-3A(68.16mg,252.32μmol,1.5eq)和碳酸钠(35.66mg,336.42μmol,2eq)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.4mL)中，氮气置换三次，加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(13.74mg,16.82μmol,0.1eq)，100℃反应1小时，将反应液利用3mL的乙酸乙酯稀释，利用2mL的水和5mL的饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩得到化合物005-6。LCMS:(ESI)m/z:658.2[M+H] +。
步骤6：化合物005盐酸盐的合成
将化合物005-6(70.00mg,106.42μmol,1eq)加入到无水二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(0.4mL)，20℃反应2小时，将反应液直接浓缩旋干，粗品进行制备分离纯化(柱子:Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相:[水(HCl)-乙腈]；乙腈％:14％-34％,7min)，得到化合物005的盐酸盐。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝11.50(s,1H),10.05(d,J＝0.8Hz,1H),9.87-9.63(m,1H),7.97(d,J＝0.8Hz,1H),7.81(m,J＝0.8Hz,1H),7.54-7.34(m,3H),7.31-7.21(m,2H),7.15(m,J＝0.8Hz,1H),5.67-5.62(m,1H),4.69-4.59(m,2H),4.52(t,J＝1.6Hz,2H),4.17(s,2H),3.95(t,J＝1.2Hz,2H),3.87-3.71(m,3H),3.38-3.18(m,2H),2.69-2.58(m,1H),2.57-2.53(m,1H),2.38-2.28(m,1H),2.24-2.12(m,2H),2.10-2.04(m,1H),1.95-2.02(m,3H)；LCMS:(ESI)m/z:558.2[M+H] +。
实施例6
合成路线：
步骤1：化合物006-1合成
将化合物005-5(0.06g,100.93μmol,1eq)和化合物006-1A(43.63mg,121.11μmol,1.2eq)和碳酸钠(32.09mg,302.78μmol,3eq)加入到1,4-二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(14.77mg,20.19μmol,0.2eq)，100℃反应2小时，反应完后，向反应液中加入3mL的水，利用3mL*2的乙酸乙酯萃取，合并有机相，利用5mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，得到化合物006-1。LCMS:(ESI)m/z:748.4[M+H] +。
步骤2：化合物006盐酸盐的合成
将化合物006-1加入到乙腈(4mL)中，加入盐酸/二氧六环(4M,802.31μL,30eq)，20℃反应5小时，反应结束后。将反应液浓缩，粗品进行制备分离纯化，柱子:Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相:[水(HCl)-乙腈]；乙腈％:17％-44％,7min，得到化合物006的盐酸盐。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.11((d,J＝0.8Hz,1H),7.76-7.59(m,2H),7.35-7.20(m,2H),6.97(s,1H),5.73-5.50(m,1H),5.15-4.94(m,5H),4.44-4.29(m,2H),4.27-4.10(m,2H),4.06-3.81(m,3H),3.50-3.42(m,1H),2.97-2.58(m,3H),2.57-2.31(m,6H),2.30-2.08(m,5H)；LCMS:(ESI)m/z:604.2[M+H] +。
实施例7
步骤1：化合物007-2合成
化合物007-1(2.5g,10.68mmol,1eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中，加入N-氯代丁二酰亚胺(1.57g,11.75mmol,1.1eq)，50℃反应2小时，反应结束后向反应液中加入20mL水，析出固体，将固体过滤，旋干，向粗品中加入30mL的二氯甲烷，打浆搅拌1小时后，过滤，将滤饼利用二氯甲烷10mL*2淋洗后旋干，得到化合物007-2。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝7.69-7.57(d,J＝0.8Hz,1H)；LCMS:(ESI)m/z:267.9[M+H] +。
步骤2：化合物007-3合成
将化合物007-2(3.5g,13.04mmol,1eq)和尿素(7.83g,130.37mmol,6.99mL,10eq)加入到烧瓶中，200℃反应1小时，反应结束后，将反应固体利用30mL的乙酸乙酯打浆1小时后，将滤饼过滤后旋干，然后利用30mL的水打浆1小时后，过滤，将滤饼旋干，得到化合物007-3。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝11.38-10.97(m,2H),7.79-7.68(d,J＝0.8Hz,1H)。
步骤3：化合物007-4合成
将化合物007-3(2g,6.81mmol,1eq)加入到三氯氧磷(20mL)中，加入二异丙基乙二胺(2.64g,20.44mmol,3.56mL,3eq)，100℃反应3小时，反应结束后，将反应液直接浓缩，浓缩的产物缓慢加入到20mL冰水中，利用10mL*2的乙酸乙酯萃取，合并有机相，利用10mL*2的饱和氯化铵洗涤，20mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，得到化合物007-4。LCMS:(ESI)m/z:328.8[M+H] +。
步骤4：化合物007-5合成
将化合物007-4(1.7g,5.15mmol,1eq)加入到无水二氯甲烷(20mL)中，加入三乙胺(1.56g,15.44mmol,2.15mL,3eq)和化合物001-1A(1.31g,6.17mmol,1.2eq)，20℃反应2小时，反应液直接旋干，粗品利用过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:0-1:1，石油醚：乙酸乙酯＝3:1)，得到化合物007-5。LCMS:(ESI)m/z:505.0[M+H] +。
步骤5：化合物007-6合成
将化合物007-5(1.2g,2.37mmol,1eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(12mL)和无水四氢呋喃(12mL)中，加入化合物001-2A(566.11mg,3.56mmol,1.5eq)和碳酸铯(2.32g,7.11mmol,3eq)和三乙烯二胺(26.59mg,237.06μmol,26.07μL,0.1eq)，20℃反应20小时，反应结束后，向反应液中加入20mL的水，利用10mL*2的乙酸乙酯萃取，合并有机相，利用20mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品利用过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3:1-0:1,二氯甲烷：甲醇＝100:0-10:1,二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到化合物007-6。LCMS:(ESI)m/z:628.2[M+H] +。
步骤6：化合物007-7合成
将化合物007-6(0.1g,159.00μmol,1eq)和化合物004-1A(59.55mg,190.80μmol,1.2eq)和碳酸钠(50.56mg,477.00μmol,3eq)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.6mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(23.27mg,31.80μmol,0.2eq)，100℃反应2小时。向反应液中加入3mL的水，利用3mL*2的乙酸乙酯萃取，合并有机相，利用5mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品利用过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-0:1，二氯甲烷：甲醇＝100:0-10:1，二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到化合物007-7。LCMS:(ESI)m/z:816.3[M+H] +。
步骤7：化合物007盐酸盐的合成
将化合物007-7(90mg,112.73μmol,1eq)加入到三氟乙酸(0.5mL)和无水二氯甲烷(3mL)中，20℃反应3.5小时，将反应液直接浓缩，进行制备分离纯化(柱子:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(HCl)-乙腈]；乙腈％:5％-35％,8min)，得到化合物007的盐酸盐。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝7.83-7.77(m,1H),7.32-7.20(m,1H),7.12-6.96(m,1H),5.67-5.46(m,1H),4.81-4.60(m,4H),4.30-4.20(m,2H),3.99-3.85(m,4H),3.55-3.42(m,2H),2.79-2.57(m,2H),2.52-2.44(m,1H),2.41-2.29(m,2H),2.22-2.02(m,5H)；LCMS:(ESI)m/z:616.2[M+H] +。
实施例8
步骤1：化合物008-1合成
将化合物007-6(0.1g,159.00μmol,1eq)和化合物001-3A(64.43mg,238.50μmol,1.5eq)和碳酸钠(33.70mg,318.00μmol,2eq)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.4mL)中，氮气置换三次，加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(12.98mg,15.90μmol,0.1eq)，100℃反应1小时，将反应液利用3mL的乙酸乙酯稀释，利用2mL的水和5mL的饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，得到黑色液体状的化合物008-1。LCMS:(ESI)m/z:692.2[M+H] +。
步骤2：化合物008盐酸盐合成
将化合物008-1(70.00mg,101.13μmol,1eq)加入到无水二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(0.2mL)，20℃反应2小时。将反应液直接浓缩，pre-HPLC分离纯化(柱子:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(HCl)-乙腈]；乙腈％:5％-35％,8min)，得到化合物008的盐酸盐。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝11.48-11.32(m,1H),9.94(d,J＝0.8Hz,1H),9.76-9.60(m,1H),7.92(d,J＝0.8Hz,1H),7.81d,J＝0.8Hz,1H),7.44(t,J＝0.8Hz,1H),7.30(d,J＝0.4Hz,1H),7.25-7.14(m,2H),7.09(d,J＝0.4Hz,1H),5.68-5.43(m,1H),4.71-4.57(m,2H),4.48(d,J＝1.2Hz,2H),4.15(s,2H),3.98-3.75(m,6H),3.35-3.22(m,1H),2.70-2.57(m,1H),2.38-2.29(m,1H),2.25-2.11(m,2H),2.08-1.97(m,5H)；LCMS:(ESI)m/z:592.2[M+H] +。
实施例9
步骤1：化合物009-1合成
将化合物005-5(0.05g,84.11μmol,1eq)和化合物004-1A(31.50mg,100.93μmol,1.2eq)和碳酸钠(26.74mg,252.32μmol,3eq)加入到1,4-二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(12.31mg,16.82μmol,0.2eq)，100℃反应2小时，向反应液中加入3mL的水，利用3mL*2的乙酸乙酯萃取，合并有机相，利用5mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，得到化合物009-1。LCMS:(ESI)m/z:782.3[M+H] +。
步骤2：化合物009盐酸盐的合成
将化合物009-1(60mg,76.74μmol,1eq)加入到无水二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(0.6mL)，20℃反应2.5小时，反应完后将反应液直接浓缩，送制备分离纯化柱子:Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相:[水(HCl)-乙腈]；乙腈％:12％-28％,7min，得到化合物009的盐酸盐。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.13(d,J＝1.2Hz,1H),7.73(t,J＝0.8Hz,1H),7.66-7.57(m,1H),7.28(t,J＝1.2Hz,1H),5.76-5.50(m,1H),5.13-4.97(m,4H),4.40-4.27(m,2H),4.25-4.14(m,2H),4.13-3.83(m,3H),3.55-3.43(m,1H),2.89-2.60(m,2H),2.59-2.45(m,1H),2.44-2.25(m,3H),2.23-2.05(m,4H)；LCMS:(ESI)m/z:582.2[M+H] +。
实施例10
步骤1：化合物010-1合成
将化合物005-5(0.2g,336.42umol,1eq)和化合物010-1A(206.91mg,403.71μmol,1.2eq)和碳酸钠(106.97mg,1.01mmol,3eq)加入到1,4-二氧六环(1.5mL)和水(0.3mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(49.23mg,67.28μmol,0.2eq)，100℃反应2小时。反应完后将反应液中加入5mL的乙酸乙酯，利用5mL的水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品利用过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-0:1，二氯甲烷：甲醇＝100:0-10:1)得到化合物010-1。LCMS:(ESI)m/z:900.4[M+H] +。
步骤2：化合物010-2合成
将化合物010-1(0.25g,277.73μmol,1eq)加入到无水四氢呋喃(5mL)中，加入四甲基氟化铵四水合物(129.34mg,1.39mmol,5eq)，50℃反应19小时，反应结束后向反应液中加入5mL的乙酸乙酯，利用5mL的水和5mL的饱和食盐水分别洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品进行制备分离纯化(柱子:Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10μm；流动相:[水(氨水)-乙腈]；乙腈％:70％-90％,8min)，得到化合物010-2。LCMS:(ESI)m/z:744.3[M+H] +。
步骤3：化合物010的盐酸盐合成
将化合物010-2(0.03g,40.33μmol,1eq)加入到乙腈(2mL)中，加入盐酸/二氧六环(4M,201.66μL,20eq)，25℃反应1小时。反应完后，将反应液在氮气的保护下过滤，滤饼用乙腈(2mL*2)淋洗后，旋干，得到化合物010的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z:600.3[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝7.92-7.70(m,2H),7.38-7.20(m,3H),7.08(d,J＝2.4Hz,1H),5.41-5.3(m,1H),4.65-4.44(m,4H),4.38-4.19(m,2H),3.75-3.56(m,5H),3.24-3.15(m,1H),3.11-2.97(m,1H),2.46-2.10(m,3H),2.08-1.98(m,2H),1.96-1.76(m,5H)。
步骤4：化合物010的合成
将010的盐酸盐加入到20mL的饱和碳酸氢钠溶液中，pH为8，用乙酸乙酯(10mL*2)萃取，合并有机相，20mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，得到化合物010。
实施例11
步骤1：化合物011-1合成
将化合物005-5(0.1g,168.21μmol,1eq)和化合物011-1A(70.68mg,201.85μmol,1.2eq)和碳酸钠(53.49mg,504.63μmol,3eq)加入到1,4-二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(12.31mg,16.82μmol,0.1eq)，100℃反应1.5小时。反应完后将反应液中加入5mL的乙酸乙酯，利用10mL的水洗涤，10mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，得到化合物011-1。LCMS:(ESI)m/z:738.2[M+H] +。
步骤2：化合物011的盐酸盐合成
将化合物011-1(0.15g,203.31μmol,1eq)加入到乙腈(5mL)中，加入盐酸/二氧六环(4M,508.28μL,10eq)，25℃反应3小时，析出固体。将反应液在氮气保护下过滤，将滤饼利用3mL*2的乙腈淋洗，粗品进行制备分离纯化(柱子:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(盐酸)-乙腈]；乙腈％:10％-30％,8min)，得到化合物011的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z:594.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.12(d,J＝8.8Hz,1H),7.70-7.58(m,2H),7.46-7.33(m,2H),7.15(s,1H),5.66-5.54(m,1H),5.19-4.89(m,5H),4.36-4.02(m,5H),4.00-3.84(m,2H),3.53-3.32(m,1H),2.76-2.58(m,1H),2.55-2.47(m,1H),2.42-2.30(m,2H),2.29-2.26(m,1H),2.25-2.12(m,4H)。
实施例12
步骤1：化合物012-1合成
将化合物001-3(100mg,159.00μmol,1eq)和化合物012-1A(79.81mg,190.80μmol,1.2eq)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.6mL)中，然后加入4-(二叔丁基膦)-N,N-二甲基苯胺(8.44mg,31.80μmol,0.2eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(14.56mg,15.90μmol,0.1eq)和碳酸钾(65.93mg,477.00μmol,3eq)，氮气置换三次，置于95℃油浴中搅拌反应15小时。反应完后粗品制备分离：柱子:Welch Xtimate C18 100*40mm*3μm；流动相:[水(三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:50％-70％,5.5min。得到化合物012-1。LCMS:(ESI)m/z:840.5[M+H] +。
步骤2：化合物012的甲酸盐合成
将化合物012-1(20mg,23.80μmol,1eq)溶解于三氟乙酸(3mL)中，25℃搅拌反应1小时，反应完后旋干，粗品制备分离：柱子:Phenomenex C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；乙腈％:6％-36％,10min。得到化合物012的甲酸盐。LCMS:(ESI)m/z:640.5[M+H] +。
实施例13
步骤1：化合物013-1合成
将化合物011的盐酸盐(0.4g,600.12μmol,1eq)加入到无水二氯甲烷(4mL)中，加入二异丙基乙二胺(387.80mg,3.00mmol,522.64μL,5eq)，二碳酸二叔丁酯(157.17mg,720.14μmol,165.44μL,1.2eq)，25℃反应1小时。反应完后，加入10mL水和20mL二氯甲烷，然后加入1M盐酸调水相pH约2，水相用20mL二氯甲烷萃取一次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物013-1。LCMS:(ESI)m/z:694.6[M+H] +。
步骤2：化合物013-2合成
将化合物013-1(0.4g,547.80μmol,1eq))加入到无水二氯甲烷(20mL)中，加入二异丙基乙二胺(24.80mg,3.29mmol,572.50μL,6eq)，0℃加入三氟甲磺酸酐(463.67mg,1.64mmol,271.15μL,3eq)，0℃反应1小时。反应完后将反应液加入10mL水，搅拌10min，然后静置分液，水相用20mL二氯甲烷萃取一次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品利用过柱纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-60％)，得到化合物013-2。LCMS:(ESI)m/z:826.4[M+H] +。
步骤3：化合物013-3合成
将化合物013-2(0.2g,231.95μmol,1eq))加入到无水甲苯(6mL)中，加入二苯甲酮亚胺(84.07mg,463.90μmol,77.85μL,2eq)，碳酸铯(226.72mg,695.85μmol,3eq)，4,5-双(二苯基磷)-9,9-二甲基氧杂蒽(26.84mg,46.39μmol,0.2eq)，氮气置换三次后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(21.24mg,23.20μmol,0.1eq)氮气置换三次后100℃搅拌12hr。反应完后，加入20mL水和20mL乙酸乙酯，搅拌5min，然后静置分 液，水相用10mL乙酸乙酯萃取一次，合并有机相，饱和食盐水(20mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品利用过柱纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-80％)，得到化合物013-3。LCMS:(ESI)m/z:857.6[M+H] +。
步骤4：化合物013盐酸盐合成
将化合物013-3(0.14g,163.37μmol,1eq)加入到乙腈(3mL)中，加入盐酸/二氧六环(4M,408.43μL,10eq)，25℃反应2小时，析出固体。反应完后将反应液过滤，将滤饼利用5mL的乙腈淋洗，粗品进行制备分离纯化(柱子:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(盐酸)-乙腈]；乙腈％:10％-40％,8min)，得到化合物013盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z:593.2[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δppm 8.19-8.11(m,2H),8.00(dd,J＝8.57,4.20Hz,1H),7.76-7.66(m,2H),7.59(t,J＝2.00Hz,1H),5.68-5.55(m,1H),5.17-5.00(m,2H),5.00-4.91(m,2H),4.34(s,2H),4.28-4.10(m,2H),4.09-3.84(m,3H),3.58-3.39(m,1H),2.59-2.86(m,2H),2.56-2.47(m,1H),2.43-2.33(m,2H),2.33-2.12(m,5H)。
实施例14
步骤1：化合物014-1盐酸盐合成
将化合物010-1(250mg,277.73μmol,1eq)加入到乙腈(8mL)中，加入盐酸/二氧六环(4M,2.08mL,30eq)，25℃反应1小时，析出固体。反应完后，将反应液过滤，将滤饼利用5mL的乙腈淋洗,然后10mL甲醇溶解滤饼，减压浓缩，得到化合物014-1的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z:756.7[M+H] +。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 11.22(br d,J＝13.64Hz,1H),9.93(br d,J＝9.12Hz,1H),9.56(br s,1H),7.98(dd,J＝9.00,6.00Hz,1H),7.87(br d,J＝8.64Hz,1H),7.53-7.35(m,2H),7.10-7.04(m,1H),5.68-5.46(m,1H),4.74-4.44(m,3H),4.22-4.11(m,3H),4.01-3.84(m,2H),3.80-3.79(m,1H),3.74-3.62(m,1H),3.31(br s,1H),3.16(s,3H),2.46-1.88(m,8H),0.80(dd,J＝16.64,7.38Hz,18H),0.51-0.45(m,3H)。
步骤2：化合物014-2合成
将化合物014-1(200mg,264.56μmol,1eq)盐酸盐加入到无水二氯甲烷(5mL)中，加入二异丙基乙二胺(170.96mg,1.32mmol,230.40μL,5eq)，二碳酸二叔丁酯(57.74mg,264.56μmol,60.78μL,1eq)，25℃反应1小时。反应完后加入5mL水和10mL二氯甲烷，然后加入1M盐酸调水相pH约为2，水相用5mL二氯甲烷萃取一次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物014-2。LCMS:(ESI)m/z:856.4[M+H] +。
步骤3：化合物014-3合成
将化合物014-2(220mg,256.98μmol,1eq))加入到无水二氯甲烷(10mL)中，加入二异丙基乙二胺(199.28mg,1.54mmol,268.57μL,6eq)，0℃加入三氟甲磺酸酐(217.51mg,770.94μmol,127.20μL,3eq)，0℃反应1小时。反应完后加入10mL水，搅拌10min，然后静置分液，水相用10mL二氯甲烷萃取一次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品利用过柱纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-60％)，得到化合物014-3。LCMS:(ESI)m/z:988.3[M+H] +。
步骤4：化合物014-4合成
将化合物014-3(140mg,141.68μmol,1eq)加入到无水甲苯(2.8mL)中，加入二苯甲酮亚胺(51.35mg,283.35μmol,47.55μL,2eq)，碳酸铯(138.48mg,425.03μmol,3eq)，4,5-双(二苯基磷)-9,9-二甲基氧杂蒽(16.40mg,28.34μmol,0.2eq)，氮气置换三次后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(12.97mg,14.17μmol,0.1eq)氮气置换三次后100℃搅拌12hr。反应完后加入10mL水和10mL乙酸乙酯，搅拌5min，然后静置分液， 水相用10mL乙酸乙酯萃取一次，合并有机相，饱和食盐水(20mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品利用过柱纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-60％)，得到化合物014-4。LCMS:(ESI)m/z:1019.5[M+H] +。
步骤5：化合物014-5盐酸盐合成
将化合物014-4(100mg,98.10μmol,1eq)加入到乙腈(2.5mL)中，加入盐酸/二氧六环(8M,245.26μL,20eq)，25℃反应2小时，反应完后将反应液过滤，将滤饼利用3mL的乙腈淋洗，然后5mL甲醇溶解滤饼后减压浓缩，得到化合物014-5的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z:755.4[M+H] +。
步骤6：化合物014合成
将化合物014-5(65mg,78.51μmol,1eq)的盐酸盐加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入无水碳酸钾(70mg,506.49μmol,6.45eq)，氟化铯(40mg,263.33μmol,3.35eq)，60℃反应3小时，反应完后将反应液加入10mL乙酸乙酯稀释，过滤，母液用饱和食盐水(10mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品。粗品进行制备分离纯化(柱子:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(盐酸)-乙腈]；乙腈％:1％-40％,8min)，馏分经石油醚(10mL*3)萃取，水相滴加氨水调pH至约9，乙酸乙酯(10mL*2)萃取，收集有机相，减压浓缩，得到化合物014。LCMS:(ESI)m/z:599.3[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δppm 7.79-7.66(m,2H),7.26-7.17(m,2H),7.14(d,J＝2.38Hz,1H),7.02(d,J＝2.26Hz,1H),5.38-5.23(m,1H),4.50(br t,J＝11.56Hz,2H),4.33-4.16(m,2H),3.68-3.55(m,4H),3.27-3.17(m,3H),3.14(d,J＝9.00Hz,1H),3.07-2.97(m,1H),2.41-2.12(m,3H),2.05-1.94(m,2H),1.86(br s,5H)。
实施例15
步骤1：化合物015-2合成
反应瓶中加入化合物015-1(30g,133.17mmol,1eq)，乙二醇二甲醚(900mL)和乙醇(19.5mL)。氮气保护下降温至0℃，加入叔丁醇钾(60.00g,534.71mmol,4.02eq)和对甲苯磺酰基异腈(51.99g,266.29mmol,2.00eq)。加热至60℃，搅拌12小时。反应完后加入饱和食盐水(500mL)，加入乙酸乙酯(500mL*3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(400mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-50％)。得到化合物015-2。LCMS:(ESI)m/z:137.0[M+H-Boc] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝4.28-4.26(m,2H),3.01-2.94(m,1H),2.05-2.02(m,4H),1.88-1.86(m,2H),1.62-1.59(m,2H),1.48-1.46(m,9H)。
步骤2：化合物015-3合成
反应瓶中加入化合物015-2(16g,67.71mmol,1eq)，乙醇(240mL)，水(240mL)。加入氢氧化钾(22.79g,406.25mmol,6eq)，加热至80℃，搅拌12小时。反应完后将反应液冷却至0℃，用盐酸(1N)调pH至约3，反应用乙酸乙酯(500mL*3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。得到化合物015-3。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝8.90-8.12(m,1H),4.30-4.22(m,2H), 2.86-2.82(m,1H),2.00-1.98(m,2H),1.78-1.77(m,2H),1.75-1.74(m,2H),1.66-1.64(m,2H),1.46(s,9H)。
步骤3：化合物015-4合成
反应瓶中加入化合物015-3(17g,66.59mmol,1eq)，三乙胺(13.48g,133.17mmol,18.54mL,2eq)和二氯甲烷(170mL)。加入羰基二咪唑(12.96g,79.90mmol,1.2eq)和N-甲基-N-甲氧基胺盐酸盐(9.74g,99.88mmol,1.5eq,HCl)。20℃搅拌1小时。反应完后加入水(200mL)，分层后用DCM(200mL*2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-50％)。得到化合物015-4。LCMS:(ESI)m/z:321.0[M+Na] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝4.31-4.21(m,2H),3.74-3.71(m,3H),3.26-3.21(m,1H),3.16(s,3H),2.01-1.96(m,4H),1.93-1.84(m,2H),1.68-1.66(m,2H),1.46(s,9H)。
步骤4：化合物015-5合成
反应瓶中加化合物015-4A(12.08g,62.60mmol,7.02mL,1.33eq)和四氢呋喃(420mL)。氮气保护下降温至-70℃，加入二异丙基胺基锂(2M,31.20mL,1.33eq)。加完-70℃搅拌1小时。-60～-70℃加入化合物015-4(14g,46.92mmol,1eq)的四氢呋喃(14mL)溶液。继续搅拌0.5小时。反应完后将反应液倒入饱和氯化铵水溶液(400mL)中淬灭，用乙酸乙酯(400mL*2)萃取，合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-15％)。得到化合物015-5。LCMS:(ESI)m/z:451.9[M+Na] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.45-7.39(m,2H),4.37-4.27(m,2H),3.62-3.56(m,1H),2.07-2.04(m,2H),1.88-1.85(m,2H),1.77-1.75(m,4H),1.48-1.47(m,9H)。
步骤5：化合物015-6合成
反应瓶中加入化合物015-5(4g,9.30mmol,1eq)，盐酸胍(1.78g,18.59mmol,3.26μL,2eq,HCl)，碳酸铯(6.06g,18.59mmol,2eq)和N-甲基吡咯烷酮(40mL)。120℃搅拌12小时。反应完后将反应降温至室温，加入水(100mL)，有黄色固体没有溶解，用乙酸乙酯(20mL)搅拌，过滤。滤饼减压浓缩，得到黄色固体2.5g；滤液用EA(50mL*2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(50mL x 2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-15％)。产物与滤饼合并。得到化合物015-6。LCMS:(ESI)m/z:451.0[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.58-7.56(m,1H),7.36-7.32(m,1H),5.47(s,2H),4.43-4.33(m,2H),3.96-3.89(m,1H),2.29-2.13(m,4H),1.91-1.87(m,2H),1.71.-1.67(m,2H),1.51(s,9H)。
步骤6：化合物015-7合成
将化合物016-6(1.2g,2.66mmol,1eq)，化合物010-1A(1.50g,2.92mmol,1.1eq)，无水磷酸钾(1.13g,5.32mmol,2eq)溶于1,4-二氧六环(12mL)，水(2.5mL)中，氮气置换三次，加入氯化(2-二环己基膦-2′,6′-二甲氧基-1,1′-联苯基)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯基)]钯(II)(191.60mg,265.88μmol,0.1eq)，氮气置换三次，在100℃下反应3hr。反应完后倒入水中(10mL)，加入乙酸乙酯(10mL*3)萃取三次，饱和食盐水(10 mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗品。粗品柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1～0/1)得到产品。产品再用石油醚/甲基叔丁基醚＝5/1(15mL)打浆30min，过滤，收集固体得到化合物015-7。LCMS:(ESI)m/z:757.4[M+H] +。
步骤7：化合物015-8合成
反应瓶中加入化合物015-7(600mg,792.61μmol,1eq)和四氢呋喃(12mL)。氮气置换3次。加入碘化亚铜(150.95mg,792.61μmol,1eq)，亚硝酸异戊酯(278.56mg,2.38mmol,320.19μL,3eq)，二碘甲烷(1.06g,3.96mmol,319.71μL,5eq)。反应加热至80℃搅拌3小时。反应完后将反应液浓缩。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-30％)，得到化合物015-8。LCMS:(ESI)m/z:868.2[M+H] +。
步骤8：化合物015-9合成
反应瓶中加入化合物015-8(377mg,434.39μmol,1eq)，化合物001-2A(207.47mg,1.30mmol,3eq)，4A分子筛(300mg,434.39μmol,1eq)和二氧六环(8mL)。加入碳酸铯(424.60mg,1.30mmol,3eq)和氯化(2-二环己基膦-2’,6’-二甲氧基-1,1’-联苯基)[2-(2’-氨基-1,1’-联苯基)]钯(II)(31.30mg,43.44μmol,0.1eq)。氮气置换3次。反应加热至90℃搅拌4小时。反应完后减压浓缩。粗品经柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0-100％)。得到化合物015-9。LCMS:(ESI)m/z:899.4[M+H] +。
步骤9：化合物015-10合成
反应瓶中加入化合物015-9(247mg,274.70μmol,1eq)和乙腈(2.5mL)。加入盐酸/二氧六环(4M,2.06mL,30eq)。20℃搅拌1小时。反应完后用氨水调pH约为10，用二氯甲烷(10mL*3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(5mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。得到粗品化合物015-10。LCMS:(ESI)m/z:755.4[M+H] +。
步骤10：化合物015盐酸盐合成
反应瓶中加入化合物015-10(50mg,66.23μmol,1eq)，N,N-二甲基甲酰胺(1mL)。加入碳酸钾(91.53mg,662.26μmol,10eq)和氟化铯(50.30mg,331.13μmol,12.21μL,5eq)。65℃加热3小时。反应完后将反应冷却至室温，加入水(5mL)，用乙酸乙酯(5mL*3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(5mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品经高效液相色谱纯化(柱子:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(盐酸)-乙腈]；乙腈％:10％-35％,8min)。得到化合物015的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z:599.3[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.14-8.11(m,1H),7.87-7.84(m,1H),7.49-7.48(m,1H),7.34-7.29(m,2H),7.09-7.08(m,1H),5.38-5.24(d,J＝54Hz,1H),4.38-4.29(m,3H),4.13(s,2H),3.25-3.20(m,2H),3.14-3.13(m,1H),3.06-3.00(m,1H),2.51-2.43(m,1H),2.40-2.31(m,3H),2.30-2.22(m,3H),2.18-2.14(m,1H),2.12-2.05(m,2H),2.03-1.97(m,2H),1.92(s,2H)。
实施例16
步骤1：化合物016-1B的合成
向预先干燥的反应瓶中加入化合物016-1A(2g,5.58mmol,1eq)，二氯甲烷(40mL)，N,N-二异丙基乙胺(4.33g,33.47mmol,5.83mL,6eq)，0℃加入三氟甲磺酸酐(6.30g,22.31mmol,3.68mL,4eq)，0℃搅拌1hr，反应完后加水(5mL)，用二氯甲烷(5mL x 4)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(5mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析分离纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到化合物016-1B。
步骤2：化合物016-1C的合成
反应瓶中加入化合物016-1B(3.2g,5.14mmol,1eq)，二苯亚胺(1.86g,10.28mmol,1.72mL,2eq)，无水甲苯(64mL)，再加入碳酸铯(5.02g,15.42mmol,3eq)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(594.75mg,1.03mmol,0.2eq)，氮气保护，加入三二亚苄基丙酮二钯(470.62mg,513.94umol,0.1q)，100℃搅拌2hr，反应结束后将反应液冷却至室温，减压浓缩，粗品经柱层析纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到 化合物016-1C。LCMS:(ESI)m/z＝654.2[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.83～7.78(m,5H),7.60～7.49(m,9H),1.20～1.16(m,21H).
步骤3：化合物016-1的合成
将化合物016-1C(2.4g,3.67mmol,1eq)，双联频哪醇硼酸酯(1.86g,7.34mmol,2eq)，乙酸钾(1.08g,11.01mmol,3eq)溶于无水甲苯(48mL)，再加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(537.20mg,734.17umol,0.2eq)，氮气保护，130℃搅拌12小时，反应完后，减压浓缩，粗品经柱层析纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到化合物016-1。LCMS:(ESI)m/z＝632.3[M+H] +。 1H NMR(400MHz,DMSO)δppm 7.80-7.87(m,1H),7.68-7.74(m,2H),7.55-7.62(m,1H),7.47-7.53(m,2H),7.39-7.47(m,1H),7.27-7.35(m,4H),7.18-7.23(m,2H),7.10-7.15(m,1H),1.26(s,12H),1.07-1.15(m,21H)。
步骤4：化合物016-2的合成
将化合物001-3(0.15g,238.50μmol,1eq)和化合物016-1(225.99mg,357.75μmol,1.5eq)和磷酸钾(151.88mg,715.50μmol,3eq)加入到甲苯(4mL)和水(1mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加入[(二(1-金刚烷基)-N-丁基膦)-2-(2-氨基联苯)氯化钯(II)(15.95mg,23.85μmol,0.1eq)，氮气置换三次100℃反应1.5小时，反应结束后降至室温并向反应液中加入20mL的乙酸乙酯和10mL水，静置分液，水相用10mL乙酸乙酯萃取一次，合并有机相，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，硅胶柱层析分离纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:0～60:40，乙酸乙酯加入千分之五的三乙胺)得到化合物016-2。LCMS:(ESI)m/z＝1053.6[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δppm 7.83(dd,J＝9.2,5.6Hz,1H),7.77-7.71(m,3H),7.55-7.48(m,1H),7.47-7.40(m,2H),7.38-7.24(m,5H),7.17-7.12(m,2H),6.81(d,J＝2.0Hz,1H),5.30-5.23(m,1H),4.73(br t,J＝14.0Hz,1H),4.44-4.33(m,2H),4.30-4.22(m,1H),4.19-4.04(m,3H),3.76(s,1H),3.37-3.16(m,4H),3.06-2.97(m,1H),2.34-1.82(m,9H),1.52(s,9H),0.95-0.81(m,18H),0.61-0.43(m,3H).
步骤5：化合物016-3的合成
将化合物016-2(0.15g,142.35μmol,1eq)，加入氯化氢/甲醇(4M,4mL,112.40eq)，15℃反应2小时，反应结束后，将反应液减压浓缩至干，然后残渣中加入4mL乙酸乙酯打浆纯化过夜，过滤，收集滤饼，真空干燥，得到化合物016-3。LCMS:(ESI)m/z＝789.5[M+H] +.
步骤6：化合物016的合成
将化合物016-3(0.1g,115.96μmol,1eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入碳酸钾(256.42mg,1.86mmol,16eq)和氟化铯(2.84mg,347.88μmol,,3eq)，65℃搅拌3小时，反应结束后降至室温，然后过滤，10mL乙酸乙酯淋洗滤饼，然后母液用饱和食盐水(20mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经高效液相制备色谱分离、纯化，高效液相制备方法:色谱柱:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(盐酸)-乙腈]；乙腈％:1％-40％,8min，得到馏分滴加氨水调pH～8，减压浓缩除去乙腈，然后用20mL乙酸乙酯萃取两次后，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产品016。然后SFC分离色谱柱:DAICEL CHIRALPAK IC(250mm*30mm,10μm)；流动相:[0.1％氨水-异丙醇]；异丙醇％:60％-60％,16min，减压浓缩除去溶剂，得到化合物016A和化合物016B。
化合物016A的分析和表征如下：
SFC分析方法:
柱子：Chiralpak IC-3，3μm，50×4.6mm I.D；流动相：A(CO 2)和B(IPA，含0.1％异丙胺)；梯度：B％＝5～50％，5min；流速:4.0mL/min；波长:220nm；压力:124.14bar，Rt＝1.13min，手性异构体过量100％。
LCMS:(ESI)m/z＝633.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δppm 7.81(s,1H),7.73(dd,J＝8.8,5.6Hz,1H),7.23(t,J＝8.8Hz,1H),7.17(d,J＝2.2Hz,1H),6.97(d,J＝2.2Hz,1H),5.24-5.42(m,1H),4.54(d,J＝12.8Hz,1H),4.43(d,J＝12.8Hz,1H),4.33(d,J＝10.4Hz,1H),4.23(d,J＝10.8Hz,1H),3.73-3.66(m,3H),3.60(d,J＝12.4Hz,1H),3.35-3.23(m,3H),3.21-3.19(m,1H),3.10-3.02(m,1H),2.44-2.13(m,3H),2.06-1.98(m,2H),1.94-1.81(m,5H).
化合物016B的分析和表征如下：
SFC分析方法:
柱子：Chiralpak IC-3，3μm，50×4.6mm I.D；流动相：A(CO 2)和B(IPA，含0.1％异丙胺)；梯度：B％＝5～50％，5min；流速:4.0mL/min；波长:220nm；压力:124.14bar，Rt＝2.20min，手性异构体过量97.76％。
LCMS:(ESI)m/z＝633.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δppm 7.80(s,1H),7.73(dd,J＝8.8,6.0Hz,1H),7.23(t,J＝9.0Hz,1H),7.17(d,J＝2.2Hz,1H),6.97(d,J＝2.4Hz,1H),5.39-5.25(m,1H),4.54-4.40(m,2H),4.26(dd,J＝23.2Hz,10.4Hz,2H),3.70-3.59(m,4H),3.29-3.19(m,4H),3.08-3.01(m,1H),2.40-2.13(m,3H),2.06-1.96(m,2H),1.92-1.82(m,5H).
实施例17
步骤1：化合物017-2合成
向化合物017-1(0.27g,1.22mmol,1eq)中加入THF(10mL)溶解，缓慢加入二碳酸二叔丁酯(318.41mg,1.46mmol,335.16μL,1.2eq)，80℃反应12hr，反应完后直接旋干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝10:1-5:1)得到化合物017-2。
步骤2：化合物017-3合成
将化合物017-2(0.35g,1.09mmol,1eq)，联硼酸频那醇酯(413.78mg,1.63mmol,1.5eq)，1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(79.48mg,108.63μmol,0.1eq)，乙酸钾(159.92mg,1.63mmol,1.5eq)溶于1,4-二氧六环(10mL)，氮气保护，80℃反应16小时，反应完后直接旋干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝50:1-20:1)得到化合物017-3。
步骤3：化合物017-4合成
将化合物017-3(100mg,270.81μmol,1eq)，1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(19.82mg,27.08μmol,0.1eq)，碳酸钾(74.86mg,541.62μmol,2eq)，化合物005-5(160.99mg,270.81μmol,1eq)溶于1,4-二氧六环(2.5mL)和水(0.5mL)，氮气保护，95℃反应16hr，反应完后直接旋干，粗品进行硅胶柱纯化，(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝50:1-20:1)得到化合物017-4。
步骤4：化合物017合成
将化合物017-4(49.93mg,65.97μmol,1eq)溶于1,4-二氧六环(2mL)，加入盐酸(48.11mg,1.32mmol,47.17μL,20eq)，25℃反应4hr，反应完后直接旋干，得到化合物017的盐酸盐，LCMS:(ESI)m/z＝557.3[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.11(br d,J＝7.3Hz,1H),8.05-8.00(m,1H),7.68-7.49(m,5H),5.58–5.46(m,1H),4.43-3.71(m,7H),3.62-3.56(m,2H),3.44-3.32(m,1H),2.78-2.50(m,2H),2.48-2.38(m,1H),2.34-1.96(m,7H)。
实施例18
步骤1：化合物018-2合成
氮气保护下，将化合物018-1(5g,11.70mmol,1eq)，六正丁基锡(20.36g,35.10mmol,17.55mL,3eq)，三(二亚苄基茚丙酮)二钯(1.07g,1.17mmol,0.1eq，三环己基膦(656.23mg,2.34mmol,758.64μL,0.2eq)，氯化锂(2.48g,58.50mmol,1.20mL,5eq)，1,4-二氧六环(50mL)，在110℃下搅拌2小时，反应结束后旋干，粗品进行硅胶柱纯化，(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:1)得到化合物018-2。LCMS:(ESI)m/z＝639.3[M+H] +。
步骤2：化合物018-3合成
将化合物001-2(2.5g,4.94mmol,1eq)溶于N,N-二甲基乙酰胺(30mL)，再加入氟化钾(5.74g,98.78mmol,2.31mL,20eq)，120℃反应18小时，反应完后加水，100mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，粗品进行硅胶柱纯化，(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-10:1)得到化合物018-3。LCMS:(ESI)m/z＝489.1[M+H] +。
步骤3：化合物018-4合成
将化合物018-3(384.12mg,784.34μmol,1eq)，化合物018-2(0.5g,784.34μmol,1eq)，四(三苯基膦)钯(90.63mg,78.43μmol,0.1eq)，碘化亚铜(22.41mg,117.65μmol,0.15eq)和氯化锂(39.90mg,941.20μmol,19.28μL,1.2eq)溶于1,4-二氧六环(10mL)，120℃反应18小时，反应结束后直接旋干，粗品进行硅胶柱纯化，(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-2:1)得到化合物018-4，LCMS:(ESI)m/z＝757.3[M+H] +。
步骤4：化合物018-5合成
将化合物018-4(0.1g,132.05μmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，再加入N-碘代丁二酰亚胺(44.57mg,198.08μmol,1.5eq)，25℃反应1小时，反应完后加水，100mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-5:1)得到化合物018-5。LCMS:(ESI)m/z＝883.2[M+H] +。
步骤5：化合物018-6合成
将化合物018-5(0.1g,113.23μmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，再加入碘化亚铜(64.69mg,339.69μmol,3eq)，六甲磷酰三胺(202.91mg,1.13mmol,198.93μL,10eq)，氮气保护，再加入氟磺酰基二氟乙酸甲酯(217.53mg,1.13mmol,144.06μL,10eq)，90℃反应2小时，反应完后加水，100mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，粗品进行硅胶柱纯化，(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-5:1)得到化合物018-6。
步骤6：化合物018-7合成
将001-2A(28.94mg,181.76μmol,3eq)溶于THF(2mL)，在0℃下加入氢化钠(14.54mg,363.52μmol,60％含量,6eq)，加完后升温至25℃，搅拌1小时，再加入018-6(0.05g,60.59μmol,1eq)搅拌1小时，反应完后加入甲醇(0.5mL)淬灭反应，溶剂浓缩干，粗品进行硅胶柱纯化，(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝50:1-20:1)得到化合物018-7。
步骤7：化合物018-8的合成
将化合物018-7(0.05g,51.84μmol,1eq)溶于三氟乙酸(2mL)，50℃下搅拌5小时，旋干，制备HPLC分离色谱柱:Welch Xtimate C18 100*40mm*3μm；流动性:[水(三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:7％-37％,8min，得到化合物018的三氟乙酸盐，LCMS:(ESI)m/z＝624.3[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δppm 2.01-2.27(m,5H)2.30-2.41(m,2H)2.45(br d,J＝8.78Hz,1H)2.52(br s,3H)2.55-2.85(m,2H)3.41-3.58(m,1H)3.80-4.12(m,5H)4.26(br s,2H)4.60-4.80(m,4H)5.53(br s,1H)5.67(br d,J＝3.51Hz,1H)6.64-6.89(m,1H)6.80(s,1H)7.97(s,1H)。
实施例19
步骤1：化合物019-1合成
将化合物005-4(2g,4.24mmol,1eq)溶于N,N-二甲基乙酰胺(30mL)，再加入氟化钾(1.23g,21.20mmol,496.58μL,5eq)，120℃反应24小时，反应完后加水，100mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-10:1)得到化合物019-1，LCMS:(ESI)m/z＝455.0[M+H] +。
步骤2：化合物019-2合成
将化合物019-1(220mg,483.20μmol,1eq)，化合物018-2(308.03mg,483.20μmol,1eq)，四(三苯基膦)钯(55.84mg,48.32μmol,0.1eq)，碘化亚铜(13.80mg,72.48μmol,0.15eq)和氯化锂(20.48mg,483.20μmol,9.90μL,1eq)溶于1,4-二氧六环(10mL)，120℃反应18小时，反应结束后直接旋干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-2:1)得到化合物019-2，LCMS:(ESI)m/z＝723.3[M+H] +。
步骤3：化合物019-3合成
将化合物019-2(200mg,276.69μmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，再加入N-碘代丁二酰亚胺(186.75mg,830.08μmol,3eq)，25℃反应5小时，反应完后加水，100mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-5:1)得到化合物019-3。LCMS:(ESI)m/z＝849.2[M+H] +。
步骤4：化合物019-4合成
将化合物019-3(120mg,141.39μmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，再加入碘化亚铜(53.86mg,282.78μmol,2eq)，六甲磷酰三胺(126.69mg,706.95μmol,124.20μL,5eq)，氮气保护，再加入氟磺酰基二氟乙酸甲酯(135.81mg,706.95μmol,89.94μL,5eq)，80℃反应18小时，反应完后加水，100mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化，(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-5:1)得到化合物019-4。LCMS:(ESI)m/z＝791.3[M+H] +。
步骤5：化合物019-5合成
将化合物019-4(200mg,252.90μmol,1eq)溶于四氢呋喃(2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，再加入碳酸铯(164.80mg,505.80μmol,2eq)和三乙烯二胺(14.18mg,126.45μmol,13.91μL,0.5eq)，最后加入001-2A(80.52mg,505.80μmol,2eq)，25℃反应28hr，反应完后加水，100mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝50:1-20:1)得到化合物019-5。LCMS:(ESI)m/z＝930.7[M+H] +。
步骤6：化合物019合成
将化合物019-5(100mg,107.53μmol,1eq)溶于三氟乙酸(1.54g,13.51mmol,1mL,125.61eq)中，加毕55℃反应4hr，制备HPLC分离(色谱柱:Phenomenex C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(盐酸)-乙腈]；乙腈％:5％-35％,10min)，得到化合物019的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝590.5[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.09(d,J＝8.8Hz,1H),7.57(t,J＝7.5Hz,1H),7.05(s,1H),5.69-5.56(m,1H),4.86-4.75(m,4H),4.31(br s,2H),4.16-3.84(m,5H),3.55-3.44(m,1H),2.86-2.56(m,5H),2.51(br s,1H),2.43-2.32(m,2H),2.31-2.13(m,5H)。
实施例20
步骤1：化合物020-2的合成
将化合物020-1(30g,144.23mmol,1eq)和硫酸银(44.97g,144.23mmol,24.44mL,1eq)溶于乙醇(300mL)中，再加入碘(40.27g,158.65mmol,31.96mL,1.1eq)，25℃搅拌2小时.，反应完后将反应液过滤，滤液蒸干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:1-20:1)得到化合物020-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:5.08(d,J＝7.8Hz,1H),4.30-4.24(m,1H),1.63-1.53(m,2H),1.32(s,9H),0.70-0.58(m,1H),0.42-0.32(m,2H),0.05--0.05(m,2H)。
步骤2：化合物020-3的合成
在一氧化碳环境，压力为50Psi，温度是30℃下，将化合物020-2(22g,65.89mmol,1eq)和1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(5.38g,6.59mmol,0.1eq)溶于甲醇(100mL)中，搅拌5分钟，然后加入三乙胺(46.67g,461.22mmol,64.20mL,7eq)，继续搅拌24小时，反应结束后，过滤，将滤液蒸干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-5:1)得到化合物020-3。LCMS:(ESI)m/z＝265.8[M+H] +。
步骤3：化合物020-4的合成
将化合物020-3(15g,56.38mmol,1eq)溶解于甲醇(50mL)，加入氢氧化钠(9.02g,225.53mmol,4eq)的水(50mL)溶液，25℃搅拌2小时，反应结束后将反应液浓缩，使用2mol/L的盐酸调节pH＝5，有白色固体析出，抽滤得到化合物020-4。LCMS:(ESI)m/z＝251.8[M+H] +。
步骤4：化合物020-5的合成
将化合物020-4(12g,47.62mmol,1eq)和尿素(85.79g,1.43mol,76.60mL,30eq)加入反应瓶中，200℃反应4小时，将反应液冷却至室温，使用200mL的水打浆，抽滤得到化合物020-5。LCMS:(ESI)m/z＝276.9[M+H] +。
步骤5：化合物020-6的合成
在0℃下将N,N-二异丙基乙胺(11.66g,90.25mmol,15.72mL,5eq)滴加到三氯氧磷(82.50g,538.05mmol,50mL,29.81eq)，然后分批加入化合物020-5(5g,18.05mmol,1eq)，加完后在80℃回流20小时,将三氯氧磷蒸出，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-10:1)得到化合物020-6。LCMS:(ESI)m/z＝312.9[M+H] +。
步骤6：化合物020-7的合成
将化合物001-1A(1.2g,3.82mmol,1eq)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入化合物020-6(811.51mg,3.82mmol,1eq)和N,N-二异丙基乙胺(1.48g,11.47mmol,2.00mL,3eq)，25℃搅拌反应2小时，将反应液倒入50mL的水中，析出固体，用水(3*20mL)洗涤固体，得到化合物020-7。LCMS:(ESI)m/z＝489.0[M+H] +。
步骤7：化合物020-8的合成
将化合物020-7(1.6g,3.27mmol,1eq)溶解N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和THF(10mL)中，然后加入碳酸铯(3.19g,9.80mmol,3eq)，化合物001-2A(780.17mg,4.90mmol,1.5eq)，三乙烯二胺(36.65mg,326.70μmol,35.93μL,0.1eq)，25℃搅拌反应18小时，反应完后用40mL乙酸乙酯萃取，水洗，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-10:1)得到化合物020-8。LCMS:(ESI)m/z＝612.2[M+H] +。
步骤8：化合物020-9的合成
将化合物020-8(0.2g,408.38μmol,1eq)和化合物004-1A(127.47mg,408.38μmol,1eq)溶解于1,4-二氧六环(2mL)和水(2mL)中，加入1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯合钯(26.62mg,40.84μmol,0.1eq)，磷酸钾(130.03mg,612.57μmol,1.5eq)，在氮气保护下，90℃反应18小时，反应结束后将反应液旋干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-10:1)得到化合物020-9。LCMS:(ESI)m/z＝800.3[M+H] +。
步骤9：化合物020的合成
将化合物020-9(25mg,31.25μmol,1eq)溶于乙腈(1mL)和盐酸/1,4-二氧六环(1mL)，25℃反应12小时，反应结束后旋干溶剂，制备分离：色谱柱:Phenomenex C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；乙腈％:1％-30％,10min，得到化合物020的甲酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝600.1[M+H] +。
实施例21
步骤1：化合物021-2的合成
将化合物021-1(15g,59.89mmol,1eq)加入反应瓶中，然后加入尿素(60g,999.08mmol,53.57mL,16.68eq)，加热至200℃回流4小时，冷却至室温，用热水打浆，得到化合物021-2。LCMS:(ESI)m/z＝274.9[M+H] +。
步骤2：化合物021-3的合成
0℃下将N,N-二异丙基乙胺(11.73g,90.75mmol,15.81mL,5eq)加入到三氯氧磷(82.50g,538.05mmol,50mL,29.64eq)中，加完后分批加入021-2(5g,18.15mmol,1eq)，然后100℃反应，反应结束后将反应液蒸干，除去三氯化磷，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝20:1-10:1)分离得到化合物021-3。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 8.50(s,1H)8.58(s,1H)。
步骤3：化合物021-4的合成
将021-3(3g,9.60mmol,1eq)和001-1A(2.04g,9.60mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(3.72g,28.81mmol,5.02mL,3eq)，25℃搅拌4小时，将反应液倒入200mL的水中，过滤得到固体，将固体使用20mL的水洗涤3次，得到化合物021-4。LCMS:(ESI)m/z＝487.0[M+H] +。
步骤4：化合物021-5合成
将021-4(1.5g,3.07mmol,1eq)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和THF(10mL)中，然后加入碳酸铯(3.00g,9.22mmol,3eq)，001-2A(733.71mg,4.61mmol,1.5eq)，三乙烯二胺(34.46mg,307.25μmol,33.79 μL,0.1eq)，25℃搅拌反应18小时，反应完后用50mL的乙酸乙酯萃取，水洗三次，饱和食盐水洗涤，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:1-20:1)得到化合物021-5。LCMS:(ESI)m/z＝610.2[M+H] +。
步骤5：化合物021-6的合成
将021-5(0.4g,654.72μmol,1eq)和004-1A(204.36mg,654.72μmol,1eq)溶解于1,4-二氧六环(6mL)和水(6mL)中，加入1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(42.67mg,65.47μmol,0.1eq)，磷酸钾(208.47mg,982.09μmol,1.5eq)，在氮气保护下，90℃反应18小时，反应结束后将反应液旋干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：二氯甲烷:甲醇＝100:1-20:1)得到化合物021-6。LCMS:(ESI)m/z＝798.3[M+H] +。
步骤6：化合物021的合成
将021-6(0.1g,125.26μmol,1eq)溶解在乙腈(2mL)中，加入氯化氢/1,4-二氧六环(2mL)，25℃反应15小时，反应结束后将反应液蒸干，制备HPLC分离：色谱柱:Phenomenex C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；乙腈％:7％-37％,10min得到化合物021的甲酸盐。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 1.67-1.95(m,8H)1.96-2.06(m,2H)2.10-2.19(m,1H)2.79-2.87(m,1H)2.99-3.15(m,3H)3.63(br d,J＝13.30Hz,1H)3.87(br s,2H)3.96-4.12(m,2H)4.32(br d,J＝12.80Hz,2H)5.17-5.38(m,1H)7.03(t,J＝8.78Hz,1H)7.22(dd,J＝8.28,5.77Hz,1H)7.54(s,1H)7.87(s,2H)7.98(s,1H)8.22(s,1H)。
实施例22
步骤1：化合物022-1的合成
将018-3(1.8g,3.68mmol,1eq)，022-1A(1.50g,3.68mmol,1eq)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(2mL)中，加入1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(479.09mg,735.08μmol,0.2eq)和磷酸钾(1.17g,5.51mmol,1.5eq)，氮气保护，90℃反应18小时，反应完后使用30mL的乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：二氯甲烷:甲醇＝100:1-20:1)得到化合物022-1。LCMS:(ESI)m/z＝774.3[M+H] +。
步骤2：化合物022-2的合成
将022-1(1.3g,1.68mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N-碘代丁二酰亚胺(1.13g,5.04mmol,3eq)，25℃反应2小时，反应完后30mL的乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:1-10:1)得到化合物022-2。LCMS:(ESI)m/z＝900.2[M+H] +。
步骤3：化合物022-3的合成
将022-2(100mg,111.09μmol,1eq)溶于N-甲基吡咯烷酮(2mL)中，再加入氟磺酰基二氟乙酸甲酯(3.02g,15.72mmol,2mL,141.50eq)，碘化亚铜(105.79mg,555.45μmol,5eq)，氮气保护下，加入六甲磷酰三胺(99.54mg,555.45μmol,97.59μL,5eq)，80℃回流18小时，反应结束后用20mL的乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:1-10:1)得到化合022-3。LCMS:(ESI)m/z＝842.3[M+H] +。
步骤4：化合物022-4的合成
将022-3(70mg,83.11μmol,1eq)溶于四氢呋喃(1mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后加入碳酸铯(27.08mg,83.11μmol,1eq)，001-2A(15.88mg,99.73μmol,1.2eq)，三乙烯二胺(932.23μg,8.31μmol, 9.14e-1μL,0.1eq)，25℃反应18小时，反应完后加水，100mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：二氯甲烷:甲醇＝100:1-20:1)得到化合物022-4。LCMS:(ESI)m/z＝981.4[M+H] +。
步骤5：化合物022的合成
将022-4(50mg,50.94μmol,1eq)溶于三氟乙酸(5.81mg,50.94μmol,3.77μL,1eq)中，25℃搅拌2小时，反应完后旋然溶剂，制备分离：色谱柱:Phenomenex C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；乙腈％:5％-35％,10min，得到化合物022的甲酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝641.2[M+H] +。
实施例23
步骤1：化合物023-1的合成
将019-1(1.1g,2.42mmol,1eq)，022-1A(988.77mg,2.42mmol,1eq)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(2mL)中，加入1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(314.93mg,483.20μmol,0.2eq)和磷酸钾(769.27mg,3.62mmol,1.5eq)，氮气保护，90℃反应18小时，反应完后使用30mL的乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚/乙酸乙酯＝10:1-5:1)得到化 合物023-1。LCMS:(ESI)m/z＝740.3[M+H] +
步骤2：化合物023-2的合成
将023-1(1.1g,1.49mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N-碘代丁二酰亚胺(501.77mg,2.23mmol,1.5eq)，25℃反应2小时，反应完后30mL的乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝10:1-5:1)得到化合物023-2。LCMS:(ESI)m/z＝866.2[M+H] +。
步骤3：化合物023-3合成
将023-2(1.1g,1.27mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入氟磺酰基二氟乙酸甲酯(1.22g,6.35mmol,808.29μL,5eq)，六甲磷酰三胺(1.14g,6.35mmol,1.12mL,5eq)，碘化亚铜(483.98mg,2.54mmol,2eq)，氮气保护，80℃回流18小时，反应结束后用20mL的乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝10:1-5:1)得到化合物023-3。LCMS:(ESI)m/z＝866.2[M+H] +。
步骤4：化合物023-4的合成
将023-3(118.24mg,742.74μmol,1eq)溶于四氢呋喃(2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入碳酸铯(242.00mg,742.74μmol,1eq)，三乙烯二胺(8.33mg,74.27μmol,8.17μL,0.1eq)，001-2A(0.6g,742.74μmol,1eq)，25℃反应18小时，反应完后加水，100mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：二氯甲烷:甲醇＝100:1-20:1)得到化合物023-4。LCMS:(ESI)m/z＝947.4[M+H] +。
步骤5：化合物023的合成
将023-4(60mg,63.36μmol,1eq)溶于三氟乙酸(7.22mg,63.36μmol,4.69μL,1eq)中，25℃搅拌1小时，反应完后旋干溶剂，制备分离：色谱柱:Phenomenex C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；乙腈％:5％-35％,10min得到化合物023的甲酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝607.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 1.68-1.80(m,6H)2.00-2.17(m,3H)2.36(br s,3H)2.83(br d,J＝5.25Hz,2H)2.95-3.14(m,3H)3.66(br s,2H)3.98-4.12(m,2H)4.27(br d,J＝11.76Hz,2H)5.18-5.39(m,1H)6.00(br s,2H)6.80(br d,J＝8.75Hz,1H)7.10(br t,J＝7.63Hz,1H)7.80(br d,J＝8.76Hz,1H)8.24(s,1H)。
实施例24
步骤1：化合物024-2的合成
将024-1(4.8g,19.16mmol,1eq)和尿素(69.06g,1.15mol,61.66mL,60eq)加入到反应瓶中，200℃搅拌反应2小时，反应完后降至室温，加入200mL的水，抽滤得到化合物024-2。LCMS:(ESI)m/z＝274.9[M+H] +。
步骤2：化合物024-3的合成
在0℃下将N,N-二异丙基乙胺(11.13g,86.12mmol,15.00mL,11.86eq)滴加到三氯氧磷(50mL)，分批加入024-2(2g,7.26mmol,1eq)，80℃回流20小时，反应结束后将反应液蒸干，除去三氯化磷，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝10:1-3:1)分离得到化合物024-3。LCMS:(ESI)m/z＝310.8[M+H] +。
步骤3：化合物024-4的合成
将024-3(1g,3.20mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入001-1A(679.59mg,3.20mmol,1eq)和N,N-二异丙基乙胺(1.24g,9.60mmol,1.67mL,3eq)，25℃搅拌反应2小时，反应结束后将反应液倒入200mL的水中，析出固体，使用60mL的水洗涤固体得到化合物024-4。LCMS:(ESI)m/z＝487.0[M+H] +。
步骤4：化合物024-5合成
将024-4(1.3g,2.66mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)和四氢呋喃(10mL)中，然后加入碳 酸铯(867.60mg,2.66mmol,1eq)，001-2A(635.88mg,3.99mmol,1.5eq)，三乙烯二胺(29.87mg,266.28μmol,29.28μL,0.1eq)，25℃搅拌反应18小时，反应完后用50mL的乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:1-20:1)得到化合物024-5。LCMS:(ESI)m/z＝610.2[M+H] +。
步骤5：化合物024-6的合成
将024-5(0.2g,327.36μmol,1eq)和化合物006-1A(91.03mg,327.36μmol,1eq)溶于1,4-二氧六环(1mL)和水(0.2mL)中，加[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(21.34mg,32.74μmol,0.1eq)，磷酸钾(104.23mg,491.04μmol,1.5eq)，氮气保护，90℃反应18小时，反应完后，将反应液蒸干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:1-20:1)得到化合物024-6。LCMS:(ESI)m/z＝764.3[M+H] +。
步骤6：化合物024的合成
将024-6(100mg,130.84μmol,1eq)溶于盐酸/1,4-二氧六环(2mL)中，加入乙腈(2mL)，25℃搅拌反应15小时，将反应液旋干，制备HPLC分离：色谱柱:Phenomenex C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；乙腈％:1％-30％,10min，得到化合物024的甲酸盐。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 0.71(br s,3H)1.69-1.91(m,8H)2.04(br d,J＝18.89Hz,2H)2.23(br s,1H)2.83(br s,2H)3.01(br s,2H)3.09(br s,3H)3.92-4.20(m,4H)4.23-4.35(m,2H)5.20-5.38(m,1H)6.83(br s,1H)7.25-7.39(m,3H)7.74(br s,1H)7.95(br d,J＝7.25Hz,1H)8.28(br s,1H)。
实施例25
步骤1：化合物025-1B的合成
将025-1A(0.9g,4.03mmol,1eq)溶解在N-甲基吡咯烷酮(5mL)中，加入碳酸钾(1.39g,10.09mmol,2.5eq)，碘化钾(669.76mg,4.03mmol,1eq)和对甲氧基苯甲基氯(1.58g,10.09mmol,1.37mL,2.5eq)，25℃反应15小时，反应完后使用20mL的乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:1-10:1)得到化合物025-1B。LCMS:(ESI)m/z＝463.1[M+H] +。
步骤2：化合物025-1的合成
将005-5(0.6g,1.01mmol,1eq)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，加入双(频哪醇合)二硼(384.44mg,1.51mmol,1.5eq)，双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(73.85mg,100.93μmol,0.1eq)，醋酸钾(148.58mg,1.51mmol,1.5eq)，105℃回流15小时，反应完后将反应液旋干，制备HPLC分离：色谱柱:Phenomenex C18 150*40mm*5μm；流动相:[水(甲酸)-乙腈]；乙腈％:10％-40％,10min得到化合物025-1(110mg,171.46μmol,16.99％yield)。LCMS:(ESI)m/z＝560.3[M-82+H] +。
步骤3：化合物025-2的合成
将025-1(82.83mg,178.76μmol,1eq)，025-1B(100mg,178.76μmol,1eq)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(0.4mL)中，加入磷酸钾(56.92mg,268.14μmol,1.5eq)，1,1-二(叔丁基磷)二茂铁氯化钯(11.65mg,17.88μmol,0.1eq)，氮气保护下80℃反应15小时，反应结束后将反应液直接蒸干，粗品进行硅胶柱纯化(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:1-30:1)得到化合物025-2。LCMS:(ESI)m/z＝898.4[M+H] +。
步骤4：化合物025合成
将025-2(100mg,111.35μmol,1eq)溶于三氟乙酸(2mL)中，25℃搅拌2小时，反应结束后旋干溶剂，制备HPLC分离：色谱柱:Phenomenex C18 150*40mm*5μm；流动性:[水(甲酸)-乙腈]；乙腈％:55％-85％,10min得到化合物025的甲酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝558.3[M+H] +。
实施例26
步骤1：化合物026-1合成
将化合物001-3(0.30g,477.00μmol,1eq)和化合物026-1A(180.67mg,953.99μmol,2eq)和无水磷酸钾(506.25mg,2.38mmol,5eq)加入到1,4-二氧六环(15mL)，氮气置换三次，氮气保护下加入氯(2-二环己基膦基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯基)[2-(2-氨基-1,1-联苯)]钯(II)(37.53mg,47.70μmol,0.1eq)，氮气置换三次，100℃反应16小时，反应完后将反应液降温至室温，向反应液中加入20mL水和20mL乙酸乙酯，搅拌5min，然后静置分液，水相用20mL乙酸乙酯萃取一次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗涤3次，然后无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到粗品，粗品利用过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:0-0:100)，得到化合物026-1。LCMS:(ESI)m/z＝693.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.7(s,1H)7.30-7.23(m,1H),6.67-6.48(m,1H),5.37-5.24(m,1H),4.43-4.21(m,6H),3.79-3.48(m,3H),3.39(s,2H),3.33-3.15(m,2H),3.11-2.93(m,1H),2.43-2.16(m,3H),2.01-1.94(m,5H),1.85-1.76(m,2H),1.53(s,9H).
步骤2：化合物026-2合成
将化合物026-1(110mg,158.60μmol,1eq))加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N-氯代丁二酰亚胺(23.30mg,174.46μmol,1.1eq)，70℃反应3小时，反应完后向反应液中加入10mL乙酸乙酯和5mL水，搅拌5min，然后静置分液，水相用10mL乙酸乙酯萃取一次，合并有机相，20mL饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，粗品经过硅胶柱纯化(二氯甲烷：甲醇(滴加千分之一的氨水)＝20:1)得到化合物026-2。LCMS:(ESI)m/z＝727.1[M+H] +. 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.77(s,1H),7.42(d,J＝7.25Hz,1H),5.34-5.20(m,1H),4.40-4.27(m,5H),3.7-3.5(s,3H),3.32-3.21(m,2H),3.15-3.19(m,1H)2.93-3.04(m,2H),2.32-2.10(m,4H),2.00-1.76(m,7H),1.52(s,9H).
步骤3：化合物026的合成
将化合物026-2(40mg,54.94μmol,1eq)加入到无水二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(308.00mg,2.70mmol,200.00μL,49.16eq)，25℃反应2小时，析出固体，反应结束后将反应液减压浓缩至干，粗品进行制备分离纯化(色谱柱:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(盐酸)-乙腈]；乙腈％:15％-35％,7min)，得到化合物026的盐酸盐。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)THANOL-d MHz,a 80*30mm*3.00J＝7.25Hz,1H),5.34-5.20(m,1H),4.40-4.27(m,5H),3.7-3.5(s,3H),3.32-3.21(m,2H),3.15-3.19m,2H),3.84-4.04(m,3H),3.42-3.59(m,1H),2.56-2.82(m,2H),2.44-2.54(m,1H),2.31-2.42(m,2H),2.29-2.14(m,5H)。
实施例27
步骤1：化合物027-1合成
20℃下，将化合物001-1(400mg,1.21mmol,1eq)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(391.21mg,3.03mmol,527.24μL,2.5eq)和027-1A(257.03mg,1.21mmol,1eq)，搅拌0.5小时，反应完后，用乙酸乙酯(150mL)稀释，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，分离干燥有机相，减压除去有机溶剂，得到粗品027-1。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.79(d,J＝2.0Hz,1H),4.93(br d,J＝12.8Hz,1H),5.00-4.87(m,1H),4.15-3.90(m,2H),3.42-3.20(m,2H),2.06-1.85(m,4H),1.50(s,9H)。
步骤2：化合物027-2合成
将化合物027-1(600mg,1.19mmol,1eq)溶于四氢呋喃(3mL)和N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，氮气保护下依次加入加入001-2A(284.17mg,1.78mmol,1.5eq)，碳酸铯(1.16g,3.57mmol,3eq)和三乙烯二胺(13.35mg,119.00μmol,13.09μL,0.1eq)，反应液在20℃继续搅拌16小时，反应完后向反应液中加入100mL乙酸乙酯，用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，干燥，减压除去有机溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯：石油醚＝0～80％)分离纯化得到化合物027-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.73(d,J＝2.0Hz,1H),5.38-5.20(m,1H),4.89-4.75(m,2H),4.29-4.21(m,1H),4.19-4.13(m,1H),4.04(br d,J＝12.0Hz,1H),3.91(br d,J＝12.0Hz,1H),3.43-3.16(m,5H),3.03-2.97(m,1H),2.34-2.11(m,3H),2.01-1.76(m,8H),1.65(br s,1H),1.50(s,9H)。
步骤3：化合物027-3合成
氮气保护下，将027-2(50mg,79.50μmol,1eq)，001-3A(25.77mg,95.40μmol,1.2eq)和碳酸钠(25.28mg,238.50μmol,3eq)溶于1,4-二氧六环(2mL)和水(1mL)中，加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(6.49mg,7.95μmol,0.1eq)，加完后100℃反应3小时，反应完后冷却，减压除去有机溶剂，所得粗产物经制备硅胶板(展开剂：二氯甲烷：甲醇＝10:1)分离纯化得到化合物027-3。LCMS:(ESI)m/z ＝692.2[M+H] +。
步骤4：化合物027合成
20℃下，将化合物027-3(40mg,57.79μmol,1eq)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(770.00mg,6.75mmol,0.5mL,116.86eq)，反应液搅拌1小时，反应完后将反应液旋干，所得粗产物经制备分离纯化(色谱柱:Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-乙腈]；乙腈％:20％-50％,9min)得到化合物027的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝592.1[M+H] +。
实施例029
步骤1：化合物029-1的合成
20℃下，化合物001-3(500mg,794.99μmol,1eq)溶于四氢呋喃(5mL)中，加入甲醇钠(85.90mg,1.59mmol,2eq)，反应液升温至70℃搅拌48小时，反应结束后旋干溶剂，所得粗产物经制备硅胶板(展开剂：乙酸乙酯/石油醚＝0～100％)分离纯化得到化合物029-1。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.65(s,1H),5.37(br s,1H),5.24(br s,1H),4.28(br d,J＝7.3Hz,6H),4.15-4.12(m,3H),3.54(br s,2H),3.37-3.17(m,3H),3.01(br s,1H),2.34-2.10(m,3H),2.01-1.88(m,5H),1.81(br d,J＝8.0Hz,2H),1.52(s,9H)。
步骤2：化合物029-2的合成
氮气保护下，将化合物029-1(50mg,78.01μmol,1eq)，001-3A(25.29mg,93.61μmol,1.2eq)和碳酸铯(76.25mg,234.02μmol,3eq)溶于1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)中，加入Pd(PPh 3) 4(9.01mg,7.80μmol,0.1eq)，加完后100℃反应16小时，反应完后旋干溶剂，所得粗产物经制备硅胶板(展开剂：二氯甲烷：甲醇＝10:1)分离纯化得到化合物029-2，LCMS:(ESI)m/z＝704.3[M+H] +。
步骤3：化合物029的合成
20℃下，将化合物029-2(20.00mg,28.40μmol,1eq)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(1.54g,13.51mmol,1mL,475.58eq)，反应液继续搅拌16小时，反应完后旋干溶剂，制备分离(色谱柱:Welch Xtimate C18 100*40mm*3μm；流动相:[水(三氟乙酸)-乙腈]；乙腈％:15％-45％,8min)分离纯化得到化合物029的三氟乙酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝604.5[M+H] +。
实施例30
步骤1：化合物030-1合成
将化合物030-1A(0.22g,981.91μmol,1eq)和咪唑(147.07mg,2.16mmol,2.2eq)溶于无水二氯甲烷(4mL)中，温度降低到0℃后，滴加叔丁基二甲基氯硅烷(162.79mg,1.08mmol,132.35μL,1.1eq)，置换氮 气缓慢升温至20℃后，搅拌3小时。反应完后向反应体系加入5毫升二氯甲烷和10毫升水稀释，分液后收集有机相，水相用30mL二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到产品粗品，粗品通过柱层析分离(梯度淋洗：石油醚:乙酸乙酯＝10:0-1:10)纯化得到化合物030-1。LCMS:(ESI)m/z＝338.0[M+H] +
步骤2：化合物030-2合成
将化合物025-1(0.2g)，化合物030-1(43.54mg,128.71μmol,1.2eq)和碳酸钠(34.10mg,321.77μmol,3eq)加入到1,4-二氧六环(4mL)和水(0.8mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(7.85mg,10.73μmol,0.1eq)，100℃反应2小时，反应完后向反应液中加入5mL的乙酸乙酯，利用10mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩。粗品经高效液相制备色谱分离纯化(色谱柱:Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相A：水(HCl)，流动相B：乙腈；运行梯度：乙腈％:40％-70％，运行时间：7min)，得到化合物030-2。LCMS:(ESI)m/z＝773.3[M+H] +。
步骤3：化合物030合成
将化合物030-2(0.035g,45.28μmol,1eq)加入到乙腈(2mL)中，加入盐酸/1,4-二氧六环(4M,226.39μL,20eq)，25℃反应2小时，反应完后将反应液加入到5mL水中，利用3mL的乙酸乙酯萃取2次，将水相浓缩得到化合物030。LCMS:(ESI)m/z＝559.3[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.47-8.43(m,1H),8.15-8.10(m,1H),7.81(d,J＝8.8Hz,1H),7.43-7.27(m,3H),7.14(d,J＝2.4Hz,1H),5.40-5.22(m,1H),4.57-4.50(m,2H),4.33-4.17(m,2H),3.66-3.57(m,4H),3.26-3.13(m,3H),3.03-2.95(m,1H),2.42-2.27(m,1H),2.41-2.09(m,2H),1.94(s,2H),1.89(s,2H),1.84(s,3H)。
实施例31
步骤1：化合物031-2合成
将硫氰酸铵(2.38g,31.25mmol,2.38mL,1.3eq)加入到丙酮(50mL)中，加入苯甲酰氯(3.38g,24.04mmol,2.79mL,1eq)，70℃反应0.5小时，降温至50℃，分批加入化合物031-1(5g,24.04mmol,1eq)的丙酮(7mL)溶液，70℃反应0.5小时，加入氢氧化钠(2M,42.07mL,3.5eq)，继续回流0.5小时，反应完后将反应液冷却置室温，加入盐酸至pH为5，利用氨水调pH为8，搅拌0.5小时，用30mL的乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩粗品，用30mL的二氯甲烷打浆搅拌1小时，过滤，得到化合物031-2。LCMS:(ESI)m/z＝266.9[M+H] +。
步骤2：化合物031-3合成
将化合物031-2(2g,7.49mmol,1eq)加入到二氯乙烷(20mL)中，加入溴素(2.39g,14.98mmol,772.04μL,2eq)的二氯乙烷溶液(2mL)，95℃反应2小时，反应完后将反应液过滤，将滤饼利用20mL的1,2-二氯乙烷淋洗，得到化合物031-3。LCMS:(ESI)m/z＝264.8[M+H] +。
步骤3：化合物031-4合成
将化合物031-3(1.0g,3.77mmol,1eq)加入到无水四氢呋喃(15mL)中，加入N,N-二乙基异丙胺(1.22g,9.43mmol,1.64mL,2.5eq)和4-二甲氨基吡啶(46.09mg,377.25μmol,0.1eq)，氮气保护下加入二碳酸二叔丁酯(988.01mg,4.53mmol,1.04mL,1.2eq)，20℃反应19小时，反应完后向反应液中加入20mL水，利用10mL的乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，20mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩。粗品利用10mL的二氯甲烷打浆1小时后，过滤，得到化合物031-4。LCMS:(ESI)m/z＝308.8[M-55] +。
步骤4：化合物031-5合成
将化合物025-1(0.2g)，化合物031-4(47.00mg,128.71μmol,1.2eq)和碳酸钠(34.10mg,321.77μmol,3eq)加入到1,4-二氧六环(4mL)和水(0.8mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁] 二氯化钯(7.85mg,10.73μmol,0.1eq)，100℃反应2小时，反应完后向反应液中加入5mL的乙酸乙酯，利用8mL的水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩。粗品经高效液相制备色谱分离纯化(色谱柱:Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相A：水(盐酸)，流动相B：乙腈；运行梯度：乙腈％:40％-70％，运行时间：7min)，得到化合物031-5。LCMS:(ESI)m/z＝800.3[M+H] +。
步骤5：化合物031合成
将化合物031-5(0.025g,31.25μmol,1eq)加入到乙腈(1mL)中，加入盐酸/1,4-二氧六环(4M,156.27μL,20eq)，25℃反应7小时，反应完后将反应液加入到5mL水中，利用3mL的乙酸乙酯萃取2次，粗品经高效液相制备色谱分离纯化(色谱柱:Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相A：水(盐酸)，流动相B：乙腈；运行梯度：乙腈％:10％-35％，运行时间：7min)，得到化合物031的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝600.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.09-7.97(m,1H),7.73-7.62(m,1H),7.04-6.93(m,1H),5.70-5.52(m,1H),4.34-4.27(m,2H),4.17-4.03(m,3H),4.00-3.85(m,3H),3.52-3.43(m,3H),2.91-2.57(m,3H),2.54-2.45(m,1H),2.42-2.32(m,2H),2.28-2.21(m,1H),2.19-2.09(m,4H).
实施例32
步骤1：化合物032-2合成
将化合物032-1(5g,21.27mmol,1eq)，N-氯代丁二酰亚胺(4.26g,31.90mmol,1.5eq)，4-硝基-2-(三氟甲基)苯酚(1.32g,6.38mmol,0.3eq)和4-三氟甲基苯胺(342.71mg,2.13mmol,263.62μL,0.1eq)溶于二氯乙烷(20mL)中，在氮气保护下加入三氟乙酸(24.25g,212.70mmol,15.75mL,10eq)和醋酸钯(77.53mg,2.13mmol,0.1eq)，80℃反应16小时，反应完后降至室温，向反应液加入20mL水，用20mL二氯甲烷萃取2次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥后浓缩得到粗品，粗产品利用过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)，得到化合物032-2。LCMS:(ESI)m/z＝268.9[M+H] +。
步骤2：化合物032-3合成
将化合物032-2(3g,11.13mmol,1eq)加入二甲基亚砜(10mL)中，再加入盐酸氢胺(1.55g,22.26mmol,2eq)，95℃反应6小时，反应完后向反应液加入30mL水，利用30mL甲基叔丁醚萃取3次，合并有机相，用20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩得到合物032-3。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝8.31-8.26(m,1H),7.97-7.91(m,1H),7.83-7.81(m,1H),7.78-7.50(m,2H)。
步骤3：化合物032-4合成
将对甲氧基苄胺(617.64mg,4.50mmol,582.68μL,1.2eq)和化合物032-3(1g,3.75mmol,1eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，再加入碳酸钾(1.04g,7.50mmol,2eq)，80℃反应16小时，反应完后向反应液中加入30mL水，用20mL的甲基叔丁醚萃取2次，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗涤，后用无水硫酸钠干燥浓缩，粗产品利用硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：0-1:1)，得到化合物032-4。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ＝7.78-7.73(m,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.58-7.50(m,1H),7.40(d,J＝7.2Hz,1H),7.30-7.24(m,3H),6.85-6.78(m,1H).
步骤4：化合物032-5合成
将化合物032-4(70.90mg,193.06μmol,1.2eq)和碳酸氢钠(27.03mg,321.77μmol,12.51μL,2eq)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(3mL)中，氮气置换三次，在氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(11.77mg,16.09μmol,0.1eq)，升温至100℃，加入化合物025-1(0.09g,160.88μmol,1eq)，氮气置换三次，氮气保护下100℃反应1小时，反应结束后将反应液倒入30mL水中，用20mL乙酸乙酯进行萃取3次，合并有机相，加入20mL饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥后浓缩。粗品利用高效液相制备色谱分离纯化(色谱柱:Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相A:水(盐酸)，流动相B：乙腈；运行梯度：乙腈％:34％-54％，运行时间：7min)，得到化合物032-5。LCMS:(ESI)m/z＝802.2[M+H] +。
步骤5：化合物032合成
将化合物032-5(0.002g,2.49μmol,1eq)加入到无水二氯甲烷(0.25mL)和三氟乙酸(0.05mL)中，25℃反应5小时，反应完后旋干溶剂，粗品经高效液相制备色谱分离纯化(色谱柱:Phenomenex luna C18 80*40mm*3μm；流动相A:水(0.04％盐酸)，流动相B：乙腈；运行梯度：乙腈％:10％-30％，运行时间：8min)，得到化合物032的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝582.3[M+H] +。
实施例33
步骤1：化合物033-1B的合成
将化合物033-1A(120g,709mmol,1.00eq)溶于叔丁醇(1200mL)和水(1200mL)，再加入锇酸钾(10.4g,28.3mmol,0.04eq)和N-甲基吗啉氧化物(249g,2.13mol,224mL,3.00eq)，45℃下搅拌16小时，反应完后将反应液减压浓缩，并用乙酸乙酯和亚硫酸钠水溶液(1000mL)萃取，有机相再用500mL的饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，粗品经柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)，得到化合物033-1B。 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝4.23(t,J＝3.6Hz,2H),3.55-3.58(m,2H),3.33(d,J＝10.4Hz,2H),2.85(s,2H),1.45(s,9H).
步骤2：化合物033-1C的合成
将化合物033-1B(107g,526mmol,1.00eq)溶于二氯甲烷，在0℃再加入碘苯二乙酸(254g,789mmol,1.50eq)，25℃下搅拌3小时，反应完后向反应液中加入500mL碳酸氢钠水溶液和100mL二氯甲烷，搅拌0.5小时，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物033-1C. 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝9.73(d,J＝6.8Hz,2H),4.28(s,2H),4.06(s,2H),1.29(s,9H).
步骤3：化合物033-1D的合成
将化合物033-1C(200g)溶于四氢呋喃(600mL)，在-78℃下滴加乙烯基溴化镁(1M,1.79L,6.00eq)，25℃下搅拌16小时，反应完后在10℃下用1000mL饱和氯化铵淬灭，500mL乙酸乙酯萃取，有机相再用饱和食盐水萃取(500mL*3)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)得到化合物033-1D。 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝5.82-5.89(m,2H),5.32(t,J＝11.6Hz,2H),5.16-5.19(m,2H),4.45(s,2H),3.60-3.70(m,1H),3.37(s,2H),3.25(s,1H),2.95(d,J＝8.8Hz,1H),1.48(s,9H).
步骤4：化合物033-1E的合成
将化合物033-1D(80.0g,310mmol,1.00eq)溶于二氯甲烷(1000mL)，在0℃下加入二氮杂二环(23.6g,155mmol,23.4mL,0.50eq)和三氯乙腈(269g,1.87mol,187mL,6.00eq)，25℃下搅拌16，反应完后过滤浓缩，粗品经柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到化合物033-1E。 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝8.37(s,2H),5.81-5.87(m,2H),5.45(s,2H),5.39-5.43(m,2H),5.25-5.30(m,2H),3.61-3.81(m,4H),1.48(s,9H)。
步骤5：化合物033-1F的合成
将化合物α,α-二甲基苄胺(32.1g,238mmol,1.30eq)溶于，再加入1,5-环辛二烯氯化铱二聚体(12.3g,18.3mmol,0.10eq)，将化合物033-1E溶于1,2-二氯乙烷(1.00L)后于在0℃下滴加到反应液中，25℃下搅拌16小时，反应完后过滤浓缩，粗品经柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10：1)得到化合物033-1F。 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝7.52-7.55(m,2H),7.30(t,J＝7.2Hz,2H),7.22(t,J＝7.2Hz,1H),5.94-6.03(m,2H),5.10(t,J＝19.2Hz,2H),4.99(d,J＝10.4Hz,2H),3.51-3.61(m,4H),3.33(t,J＝13.6Hz,2H),1.48(s,15H).步骤6：化合物033-1G的合成
将化合物033-1F(36.0g,50.4mmol,1.00eq)溶于甲苯(900mL)，再加入1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)-2-(咪唑烷亚基)(二氯苯亚甲基)(三环己基膦)钌(2.14g,2.52mmol,0.05eq)，125℃下搅拌16小时，反应完后过滤浓缩，粗品经柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10：1)得到化合物033-1G。LCMS:(ESI)m/z＝329.2[M+H] +。 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝7.60(t,J＝1.2Hz,2H),7.31(t,J＝7.2Hz,2H),7.22(s,1H),5.96(t,J＝9.2Hz,2H),3.60-3.65(m,2H),3.46-3.53(m,2H),3.09-3.14(m,2H),1.42(s,9H),1.25(d,J＝6.0Hz,6H).步骤7：化合物033-1H的合成
将化合物033-1G(26.8g,81.6mmol,1.00eq)溶于甲醇(201mL)，再加入盐酸/甲醇(4M,67.3mL,3.30eq).35℃反应16小时，反应完后调pH为12，用30mL乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物033-1H。LCMS:(ESI)m/z＝229.2[M+H] +； 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝7.62(t,J＝7.2Hz,2H),7.31(t,J＝7.6Hz,2H),7.21(s,1H),6.01(s,2H),3.42(s,2H),2.89-2.93(m,2H),2.30-2.34(m,2H),1.23(s,6H).
步骤8：化合物033-1的合成
将化合物001-1(138.23mg,605.38μmol,1eq)，033-1H(0.2g,605.38μmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(234.72mg,1.82mmol,316.34μL,3eq)，25℃搅拌反应2小时，反应完后向反应液中，加入10mL水析出固体，过滤得到化合物033-1。LCMS:(ESI)m/z＝521.02[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 1.23(s,6H)3.58-3.74(m,4H)4.22(br d,J＝11.04Hz,2H)5.91(s,2H)7.16-7.23(m,2H)7.26-7.34(m,2H)7.54(s,1H)7.69(d,J＝2.01Hz,1H).
步骤9：化合物033-2三氟乙酸盐的合成
将化合物033-1(300mg,574.45μmol,1eq)溶与三氟乙酸(2mL)，75℃搅拌反应1小时，反应完后浓缩得到化合物033-2的三氟乙酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝402.92[M+H] +。
步骤10：化合物033-3的合成
将化合物033-2(220mg,544.47μmol,1eq)三氟乙酸盐溶于四氢呋喃(2mL)中，再加入二碳酸二叔丁酯(142.60mg,653.36μmol,150.10μL,1.2eq)，三乙胺(165.28mg,1.63mmol,227.35μL,3eq)，25℃反应2小时，反应完后直接浓缩，粗品经柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10:1-3:1)得到化合物033-3。LCMS:(ESI)m/z＝502.92[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝1.55(s,9H)3.62-3.90(m,2H)4.27-4.52(m,2H)4.60-4.82(m,2H)6.19(s,2H)7.75(d,J＝2.01Hz,1H)。
步骤11：化合物033-4的合成
将化合物033-3(250mg,495.86μmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)和四氢呋喃THF(5mL)，然后加入三乙烯二胺(5.56mg,49.59μmol,5.45μL,0.1eq)，001-2A(94.73mg,595.03μmol,1.2eq)，碳酸铯(242.34mg,743.78μmol,1.5eq)，25℃搅拌反应2小时，反应完后浓缩，粗品经柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10:1-5:1)得到化合物033-4。LCMS:(ESI)m/z＝626.12[M+H] +； 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δppm 1.47(s,9H)1.77-1.92(m,2H)1.96-2.16(m,3H)2.74(s,1H)2.79-2.90(m,2H)3.04-3.19(m,2H)3.66(br d,J＝10.54Hz,2H)3.90-4.11(m,2H)4.30(br s,2H)4.60(br s,2H)5.15-5.38(m,1H)6.06-6.22(m,1H)6.16(br s,1H)7.92-8.05(m,1H)。
步骤12：化合物033-5合成
将化合物033-4(0.25,398.78μmol,1eq)，化合物016-1(327.48mg,518.41μmol,1.3eq)和磷酸钾(253.94mg,1.20mmol,3eq)加入到1,4-二氧六环和水(0.4mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加入[(二(1-金刚烷基)- N-丁基膦)-2-(2-氨基联苯)氯化钯(II)(26.66mg,39.88μmol,0.1eq)，80℃反应12小时。反应完后向反应液中加入3mL的水，用乙酸乙酯(2mL*2)萃取，合并有机相，5mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩。粗品经柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:0-1:2，二氯甲烷：甲醇＝10:1)得到化合物033-5。LCMS:(ESI)m/z＝1051.4[M+H] +。
步骤13：化合物033-6的盐酸盐合成
将化合物033-5(0.13g,123.60μmol,1eq)加入到盐酸/甲醇(2mL)中，18℃反应2小时，反应完后将反应液浓缩，粗品经5mL的乙酸乙酯打浆1小时后，过滤，将滤饼利用2mL的乙酸乙酯淋洗后，旋干得到化合物033-6的盐酸盐。LCMS:(ESI)m/z＝787.3[M+H] +。
步骤14：化合物033的合成
将化合物033-6(0.02g,24.28μmol,1eq,HCl)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入碳酸钾(33.55mg,242.75μmol,10eq)和氟化铯(7.37mg,48.55μmol,1.79μL,2eq)，60℃反应15小时，LCMS监测表明原料消失，转化为产物。向反应液中加入5mL的水，用乙酸乙酯(3mL*2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩得到粗品化合物033。LCMS:(ESI)m/z＝631.1[M+H] +。
实施例34
步骤1：化合物034-1合成
将化合物020-6(0.5g,1.59mmol,1eq)加入到无水二氯甲烷(10mL)中，加入化合物033-1H(400.05mg,1.75mmol,1.1eq)和三乙胺(322.35mg,3.19mmol,443.40μL,2eq)，18℃反应1小时，反应结束后用10mL的饱和氯化铵洗涤2次，10mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品利用石油醚：甲基叔丁基醚＝3:1的溶剂10mL打浆搅拌1小时后，过滤，滤饼用该比例的溶剂10mL淋洗后，得到化合物034-1。LCMS:(ESI)m/z＝505.1[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.63(d,J＝7.6Hz,2H),7.44-7.34(m,3H),7.30-7.25(m,1H),5.99(s,2H),4.29(d,J＝11.2Hz,2H),3.78(s,2H),3.70(d,J＝11.6Hz,2H),1.31(s,6H)。
步骤2：化合物034-2合成
将化合物034-1(0.35g,691.99μmol,1eq)加入到无水四氢呋喃(2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入碳酸铯(676.40mg,2.08mmol,3eq)，化合物001-2A(132.20mg,830.39μmol,1.2eq)和三乙烯二胺(23.29mg,207.60μmol,22.83μL,0.3eq)，25℃反应17小时，反应完后将反应液加入到10mL的甲基叔丁基醚，利用10mL的饱和氯化铵洗涤2次后，10mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，得到化合物034-2。LCMS:(ESI)m/z＝628.0[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.65-7.60(m,2H),7.40-7.32(m,3H),7.30-7.28(m,1H),5.97-5.93(m,2H),5.40-5.15(m,1H),4.34-4.22(m,2H),4.16(d,J＝10.0Hz,1H),4.02(d,J＝10.4Hz,1H),3.75-3.71(m,2H),3.69-3.60(m,2H),3.30-3.17(m,2H),3.15-3.08(m,1H),3.01-2.92(m,1H),2.33-2.06(m,3H),1.98-1.80(m,3H),1.30(s,6H)。
步骤3：化合物034-3合成
将化合物034-2(0.3g,477.31μmol,1eq)，化合物016-1(452.27mg,715.96μmol,1.5eq)和磷酸钾(303.95 mg,1.43mmol,3eq)加入到甲苯(3mL)和水(0.6mL)中，氮气置换三次，氮气保护下加入[(二(1-金刚烷基)-N-丁基膦)-2-(2-氨基联苯)氯化钯(II)(31.91mg,47.73μmol,0.1eq)，80℃反应4.5小时，LCMS监测表明原料少量剩余，有产物信号出现，向反应液中加入20mL的水，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，合并有机相，30mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品经过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:0-0:1，二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到化合物034-3。LCMS:(ESI)m/z＝1053.5[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.81-7.76(m,2H),7.67-7.62(m,3H),7.52-7.47(m,1H),7.46-7.31(m,5H),7.30-7.28(m,1H),7.26-7.22(m,3H),7.21-7.17(m,2H),7.15-7.10(m,2H),6.96-6.90(m,1H),6.12-6.06(m,1H),5.98-5.94(m,1H),5.36-5.18(m,1H),4.65-4.58(m,1H),4.22-4.08(m,1H),4.06-3.97(m,1H),3.94-3.87(m,1H),3.85-3.77(m,2H),3.70-3.68(m,1H),3.50-3.43(m,1H),3.30-3.13(m,3H),3.02-2.92(m,1H),2.33-2.13(m,3H),1.94-1.85(m,3H),1.25(s,6H),0.93-0.81(m,18H),0.59-0.51(m,3H)。
步骤4：化合物034-4合成
将化合物034-3(0.23g,218.35μmol,1eq)加入到三氟乙酸(2mL)中，升温至70℃反应0.5小时，反应结束后将反应液浓缩后，用5mL的乙酸乙酯稀释，用5mL的水洗涤2次，10mL的饱和碳酸氢钠溶液洗涤，10mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩得到化合物034-4。LCMS:(ESI)m/z＝771.3[M+H] +。
步骤5：化合物034合成
将化合物034-4(0.27g,350.21μmol,1eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入碳酸钾(242.01mg,1.75mmol,5eq)和氟化铯(106.39mg,700.41μmol,25.82μL,2eq)，60℃反应5小时，反应完后，将反应液用10mL的乙酸乙酯稀释，用10mL的水洗涤，水相继续利用5mL的乙酸乙酯萃取，合并有机相，10mL的饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品经混合溶剂(正庚烷：乙酸乙酯＝5:1)打浆搅拌1hr，过滤，滤饼利用相同比例的混合溶剂3mL淋洗3次，旋干后经高效液相制备色谱分离纯化(色谱柱:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相A:水(0.04％盐酸)，流动相B:乙腈；运行梯度:乙腈％:10％-35％，运行8min)。将分离馏分用10mL的饱和碳酸氢钠溶液调pH为8，用乙酸乙酯(20mL*2)萃取，合并有机相，用20mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩得到化合物034。LCMS:(ESI)m/z＝615.2[M+H] +。
实施例35
步骤1：化合物035-1A的合成
将化合物033-1H(18.6g)溶于四氢呋喃(190mL)，再加入氯甲酸-9-芴基甲酯(20.5g,79.4mmol,1.00eq)，碳酸钠(25.2g,238.2mmol,3.00eq)，在0℃下搅拌1小时，反应完后向反应液中加入100mL的乙酸乙酯和200mL的水萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物035-1A。LCMS:(ESI)m/z＝451.3[M+H] +； 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝7.76(d,J＝13.6Hz,2H),7.54-7.61(m,4H),7.24-7.40(m,7H),5.93-6.01(m,2H),4.34-4.40(m,2H),4.21(s,1H),3.70(t,J＝2Hz,2H),3.55-3.59(m,2H),3.15-3.23(m,2H),1.27(d,J＝2.4Hz,6H)。
步骤2：化合物035-1B的合成
将化合物035-1A(9.52g,21.1mmol,1.00eq)溶于三氟乙酸(192mL)，75℃下搅拌16小时，反应完后向反应液中加入20mL水，调pH到9，再用20mL二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩， 粗品用6mL的正庚烷在25℃下打浆2小时，过滤得到化合物035-1B。LCMS:(ESI)m/z＝333.3[M+H] +； 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝7.77(d,J＝7.6Hz,2H),7.56(d,J＝7.2Hz,2H),7.41(t,J＝7.6Hz,2H),7.33(t,J＝6Hz,2H),6.18-6.27(m,2H),4.38-4.42(m,2H),4.23(s,1H),3.88(d,J＝2.0Hz,2H),3.82(d,J＝2.4Hz,1H),3.72(d,J＝2.0Hz,1H),3.21-3.60(m,2H)。
步骤3：化合物035-1C的合成
将化合物035-1B(1.00g)溶于四氢呋喃(10.0mL)，再加入二碳酸二叔丁酯(764mg,3.50mmol,804μL,1.20eq)，三乙胺(885mg,8.75mmol,1.22mL,3.00eq)，25℃下搅拌1小时，反应完后用10mL乙酸乙酯和10mL水萃取，再用15mL的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经过柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得到化合物035-1C。LCMS:(ESI)m/z＝433.2[M+H] +。
步骤4：化合物035-1D的合成
将化合物035-1C(5.69g)溶于乙醇(60.0mL)，再加入二甲胺(34.4g,251.8mmol,33％含量)，25℃下搅拌3小时，反应完后用40mL乙酸乙酯和40mL柠檬酸萃取，水相调pH到9，过滤，用40mL乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物035-1D。LCMS:(ESI)m/z＝211.2[M+H] +； 1H NMR:(400MHz,CDCl 3)δ＝6.22(d,J＝10Hz,2H),4.40(d,J＝38.8Hz,2H),2.89-3.01(m,2H),2.40(d,J＝13.2Hz,2H),1.49(s,9H)。
步骤5：化合物035-1的合成
将化合物005-3(0.5g,1.69mmol,1eq)溶于无水二氯甲烷(5mL)，再加入三乙胺(512.92mg,5.07mmol,705.53μL,3eq)，035-1D(426.34mg,2.03mmol,1.2eq)，在15℃搅拌1小时，反应完后浓缩，然后用20mL二氯甲烷溶解残渣，10mL水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物035-1。LCMS:(ESI)m/z＝468.9[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.55-7.39(m,2H),6.17(s,2H),4.80-4.60(m,2H),4.51-4.25(m,2H),3.88-3.58(m,2H),1.57-1.51(m,9H).
步骤6：化合物035-2的合成
将化合物035-1(0.9g,1.92mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(9mL)和无水四氢呋喃(9mL)，再加入化合物001-2A(366.03mg,2.30mmol,1.2eq)，碳酸铯(1.87g,5.75mmol,3eq)，三乙烯二胺(64.47mg,574.79μmol,63.21μL,0.3eq)，30℃搅拌12小时，反应完后向反应液加入10mL水和15mL乙酸乙酯，搅拌5min，然后静置分液，水相用15mL乙酸乙酯萃取一次，合并有机相，饱和食盐水(20mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，然后经硅胶柱层析(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:0～50:50，乙酸乙酯中加入千分之五的三乙胺)纯化得到化合物035-2。LCMS:(ESI)m/z＝592.1[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.37(d,J＝9.2Hz,1H),7.29-7.23(m,1H),6.13(s,2H),5.38-5.17(m,1H),4.76-4.56(m,2H),4.45-4.25(m,2H),4.24-4.04(m,2H),3.81-3.53(m,2H),3.30-3.11(m,3H),3.02-2.92(m,1H),2.32-2.09(m,3H),2.00-1.81(m,3H),1.56-1.48(m,9H)。
步骤7：化合物035-3合成
向预先干燥的反应瓶中加入化合物035-2(0.8g,1.35mmol,1eq)，无水四氢呋喃(8mL)，无水磷酸钾(859.87mg,4.05mmol,3eq)，水(4mL)，氮气置换三次后加入氯[(正丁基二(1-金刚烷基)膦)-2-(2-氨基联苯)]钯(III)(98.34mg,135.03μmol,0.1eq)，氮气置换三次升温至60℃加入化合物016-1(1.19g,1.89mmol,1.4eq)的无水四氢呋喃(8mL)溶液，然后60℃反应3小时。反应完后将反应液降温至室温，减压浓缩除去四氢呋喃，加入20mL乙酸乙酯，饱和食盐水洗涤(20mL*3)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品。粗品经硅胶柱层析(梯度洗脱：石油醚:乙酸乙酯＝100:0～50:50乙酸乙酯中加入千分之五的三乙胺)纯化得到化合物035-3。LCMS:(ESI)m/z＝1017.5[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.83-7.71(m,2H),7.65(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),7.53-7.40(m,4H),7.36-7.10(m,8H),6.93(t,J＝7.0Hz,1H),6.89-6.86(m,1H),6.25(br s,1H),6.18-6.12(m,1H),5.39-5.12(m,1H),4.85-4.49(m,3H),4.26-4.00(m,2H),3.96-3.68(m,1H),3.66-3.38(m,1H),3.32-3.11(m,3H),3.05-2.90(m,1H),2.36-2.14(m,3H),2.00-1.80(m,3H),1.59(s,9H),0.90-0.76(m,18H),0.59-0.43(m,3H)。
步骤8：化合物035-4合成
向化合物035-3(0.8g,786.39μmol,1eq)中加入盐酸/甲醇(4M,8.00mL,40.69eq)，15℃搅拌1小时，反应完后将反应液减压浓缩至干，然后加入混合溶液(乙酸乙酯:二氯甲烷＝5:1，20mL)打浆搅拌0.5小时，然后过滤，真空干燥滤饼，得到化合物035-4。LCMS:(ESI)m/z＝753.3[M+H] +。
步骤9：化合物035合成
将化合物035-4(0.7g,847.56μmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(7mL)，加入无水碳酸钾(2.34g,16.95mmol,20eq)和氟化铯(643.73mg,4.24mmol,5eq)，65℃搅拌4小时，反应完后降温至室温，然后反应液过滤，20mL乙酸乙酯淋洗滤饼，然后母液用饱和食盐水(20mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品。粗品经高效液相制备色谱分离、纯化，高效液相制备方法:色谱柱:Phenomenex Luna 80*30mm*3μm；流动相:[水(0.04％盐酸)-乙腈]；乙腈％:5％-25％,8min，得到馏分滴加氨水调pH为9，减压浓缩除去乙腈，乙酸乙酯(50mL*2)萃取，减压浓缩，得到化合物035。LCMS:(ESI)m/z＝597.2[M+H] +； 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.65(dd,J＝9.0,5.8Hz,1H),7.52(d,J＝9.2Hz,1H),7.21(t,J＝8.8Hz,1H),7.12-7.01(m,2H),6.95(d,J＝2.4Hz,1H),6.29-6.22(m,2H),5.38-5.18(m,1H),4.48-4.38(m,2H),4.29-4.18(m,1H),4.00-3.93(m,2H),3.90(s,1H),3.79-3.72(m,2H),3.31-3.22(m,2H),3.17(s,1H),3.01-2.94(m,1H),2.72(d,J＝2.0Hz,1H),2.34-2.15(m,3H),2.03-1.84(m,3H).
生物测试：
实验例1.KRAS G12D抑制活性测试
1.目的
通过TR-FRET的方法，筛选出能有效抑制KRAS与GTP结合的化合物。
2.耗材和仪器
表3.耗材和仪器
3.试剂准备
a.储存试剂：
1)KRAS核苷酸交换缓冲液
取20mL 1000mM HEPES，20mL 500mM EDTA，10mL 5M氯化钠，100％0.1mL吐温20，949.9mL水，配制成1L溶液，用过滤法消毒，4℃条件下储存。
2)KRAS实验缓冲液
取20mL 1000mM HEPES，10mL 1000mM氯化镁，30mL 5M氯化钠，100％0.05mL吐温20，939.95mL水，配制成1L溶液，用过滤法消毒，4℃条件下储存。
3)KRAS/Bodipy GDP/Tb-SA混合液
取9.5μL 95μM KRAS G12D蛋白，440.5μL KRAS核苷酸交换缓冲液混合，室温下孵育1小时后，与8.4μL 17.9μM Tb-SA，1.8μL 5mM Bodipy GDP，9539.8μL KRAS实验缓冲液，配制成1L溶液，混合后室温下 静置6小时，储存至-80℃条件下。
b.实验试剂：
1)KRAS酶溶液
取73.3μL KRAS/Bodipy GDP/Tb-SA混合液，2126.7μL KRAS实验缓冲液，配制成2200μL溶液。
2)SOS/GTP混合液
取1.59μL 166μM SOS蛋白，198μL 100mM GTP，2000.41μL KRAS实验缓冲液，配制成2200μL溶液。
4.实验流程
1)对照化合物母液浓度为1mM，待测化合物母液浓度为10mM。转移9μL对照化合物和待测化合物至384-LDV板内；
2)使用Bravo将LDV板上的化合物进行10点3倍稀释；
3)使用ECHO将LDV板上的化合物转移9nL至实验板；
4)使用Dragonfly自动加样仪依次向实验板每孔中加入3μL 3nM Kras/0.5nM TB-SA/30nM BodipyGDP混合液和3μL Ras buffer，以1000rpm/min，将实验板离心1分钟；
5)实验板在室温中孵育1小时；
6)使用Dragonfly自动加样仪在实验板每孔加入3μL 120nM SOS/9mM GTP混合液，以1000rpm/min，将实验板离心1分钟；
7)实验板在室温中孵育1小时；
8)使用Envision读板并记录数据；
9)使用Excel和Xlfit进行数据分析，计算待测化合物IC 50。
5实验结果
结果见表4。
表4化合物对KRAS G12D酶抑制的IC 50值
化合物编号 KRAS G12D IC 50(nM)
化合物001的甲酸盐 9.2
化合物004 0.5
化合物005的盐酸盐 0.1
化合物007的盐酸盐 0.4
化合物008的盐酸盐 1.3
化合物020的甲酸盐 6.6
化合物027的盐酸盐 38.6
实验结论：本发明化合物具有显著的KRAS G12D酶抑制作用。
实验例2.AGS细胞p-ERK抑制测试
1.目的
通过HTRF的方法，筛选出能有效抑制AGS细胞p-ERK的化合物。
2.实验流程
1).AGS细胞种于透明96孔细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，每孔包含10000个细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
2).结束孵育后，弃掉细胞上清，加入80μL每孔的培养基，培养基含0.02％血清，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育：
3).取2μL化合物加入78μL细胞培养基，混匀后，取20μL化合物溶液加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育3小时；
4).结束孵育后，弃掉细胞上清加入50μL 1X细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；
5).使用detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍；
6).取16μL细胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀释液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释液，常温孵育至少4小时；
7).孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation:320nm,emission:615nm，665nm；
8).计算待测化合物IC 50。
3.实验结果
结果见表5。
表5化合物对AGS细胞p-ERK抑制的IC 50值
化合物编号 AGS p-ERK IC 50(nM)
化合物001的甲酸盐 291.8
化合物004 31.4
化合物005的盐酸盐 147.3
化合物006的盐酸盐 67.1
实验结论：本发明化合物具有显著的AGS细胞p-ERK抑制作用。
实验例3.GP2D细胞p-ERK抑制测试
1.目的
通过HTRF的方法，筛选出能有效抑制GP2D细胞p-ERK的化合物。
2.实验流程
1).GP2D细胞种于透明96孔细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，每孔包含8000个细胞，细胞板放入二氧化碳培养箱，37度过夜孵育；
2).取2μL化合物加入78μL细胞培养基，混匀后，取20μL化合物溶液加入到对应细胞板孔中，细胞板放回二氧化碳培养箱继续孵育1小时；
3).结束孵育后，弃掉细胞上清加入50μL 1X细胞裂解液每孔，室温摇晃孵育30分钟；
4).使用detection buffer将Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody和Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释20倍；
5).取16μL细胞裂解物上清每孔到新的384白色微孔板中，再加入2μL Phospho-ERK1/2 Eu Cryptate antibody稀释液和2μL Phospho-ERK1/2 d2 antibody稀释液，常温孵育至少4小时；
6).孵育结束后使用多标记分析仪读取HTRF excitation:320nm,emission:615nm，665nm；
7).计算待测化合物IC 50。
3.实验结果
结果见表6。
表6化合物对GP2D细胞p-ERK抑制的IC 50值
化合物编号 GP2D p-ERK IC 50(nM)
化合物010的盐酸盐 0.055
化合物011的盐酸盐 0.016
化合物012的甲酸盐 0.71
化合物013的盐酸盐 0.88
化合物014 0.43
化合物016B 0.67
化合物018的三氟乙酸盐 1.6
化合物019的盐酸盐 21.4
化合物022的甲酸盐 11.6
化合物024的甲酸盐 4.4
实验结论：本发明化合物具有显著的GP2D细胞p-ERK抑制作用。
实验例4.GP2D细胞增殖抑制测试
1.实验目的：
本实验旨在验证本发明化合物对KRAS G12D突变的GP2D人胰腺癌细胞的增殖抑制效果。
2.实验材料：
细胞株GP2D、DMEM培养基，盘尼西林/链霉素抗生素购自维森特，胎牛血清购自Biosera。CellTiter- 3D Cell Viability Assay(3D细胞活率化学发光检测试剂)试剂购自Promega。
3.实验方法：
将GP2D细胞种于96孔U底细胞培养板中，80μL细胞悬液每孔，其中包含2000个GP2D细胞。细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。将待测化合物用排枪进5倍稀释至第8个浓度，即从200μM稀释至2.56nM，设置双复孔实验。向中间板中加入78μL培养基，再按照对应位置，转移2μL每孔的梯度稀释化合物至中间板，混匀后转移20μL每孔到细胞板中。转移到细胞板中的化合物浓度范围是1μM至0.0128nM。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养5天。加入化合物的细胞板结束孵育后，向细胞板中加入每孔100μL的细胞活率化学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。
4.数据分析：
利用方程式(Sample-Min)/(Max-Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中"log(inhibitor)vs.response--Variable slope"模式得出)。
5.实验结果
结果见表7。
表7.化合物对GP2D细胞增殖抑制的IC 50值
化合物编号 GP2D IC 50(nM)
化合物006的盐酸盐 2.04
化合物010的盐酸盐 3.6
化合物011的盐酸盐 6.2
化合物012的甲酸盐 0.94
化合物024的甲酸盐 16
实验结论：本发明化合物具有显著的GP2D细胞增殖抑制作用。
实验例5：SOS1介导的KRAS G12D与效应蛋白c-Raf的结合能力测试
1.目的
通过TR-FRET的方法，筛选出能有效抑制KRAS G12D与MAPK通路下游效应蛋白c-Raf结合的化合物。
2.实验步骤
2.1制备1x酶反应缓冲液:
表8.反应缓冲液
2.2 KRAS G12D酶配制(2×)：
表9 KRAS G12D酶
2.3底物及抗体混合物配制(2×)：
表10底物及抗体混合物
3.化合物筛选:
1)在稀释板中用DMSO对化合物进行5倍梯度稀释，化合物最终起始浓度为10μM。
2)将化合物用Echo转移到384反应板上，每孔100μL。
3)向反应板中每孔加入5μL KRAS G12D酶。
4)用封板膜封住板子1000g离心30秒，室温孵育15分钟。
5)用1X的酶反应缓冲液配制2x cRaf/SOS1/GTP/MAb Anti 6HIS-d2/MAb Anti GST-Eu混合液，向反应板中加入5μL的混合液。
6)1000g离心30秒，室温反应2小时。
7)用BMG酶标仪读615nm(Cryptate)和665nm(XL665)的荧光信号。
8)用Graphpad 7.0软件进行数据分析，得到IC 50。
4.实验结果
结果见表11：
表11.化合物对KRAS G12D活性的IC 50值
化合物编号 IC 50(nM)
化合物014 11.97
化合物016B 6.23
化合物034 22.49
实验结论：本发明化合物能够显著抑制KRAS G12D活性。
实验例6：血浆蛋白结合实验(PPB)实验
实验操作：取各种属的空白血浆995μL，加入5μL受试化合物工作溶液(400μM)或华法林工作溶液(400μM)，使血浆样品中受试化合物与华法林终浓度均为2μM。将样品充分混合。有机相DMSO的终浓度为0.5％；移取50μL受试化合物和华法林血浆样品到样品接收板中(三个平行)，立即加入相应体积的对应空白血浆或缓冲液，使得每个样品孔的终体积为100μL，血浆：透析缓冲液的体积比为1:1，然后向这些样品中加入500μL终止液，此样品将作为T 0样品用于回收率及稳定性测定。将T 0样品存储于2-8℃，等待与其它透析完的样品一起进行后续处理；将150μL受试化合物和华法林血浆样品加入到每个透析孔的给药端，在透析孔对应的接收端中加入150μL空白透析缓冲液。然后将透析板置于湿润的、5％CO 2的培养箱中，在37℃下、约100rpm振荡孵育4-hr。透析结束后，移取50μL透析后的缓冲液样品和透析后的血浆样品到新的样品接收板。在样品中加入相应体积的对应空白血浆或缓冲液，使得每个样品孔的终体积为100μL，血浆：透析缓冲液的体积比为1:1。所有样品经过蛋白沉淀后进行LC/MS/MS分析，并通过公式：％Unbound＝100*F/T,％Bound＝100-％Unbound,％Recovery＝100*(F+T)/T 0计算蛋白结合率以及回收率(其中F是透析4h后透析液中化合物的峰面积比值；T是透析4h后血浆中化合物的峰面积比值；T 0是零时刻血浆样品中化合物的峰面积比值)。实验结果如表12所示：
表12 PPB测试结果
化合物编号 Unbound PPB H/D/C/R/M
010 2.9％/2.2％/1.9％/1.3％/2.0％
014 18.5％/3.0％/2.8％/2.0％/4.5％
结论：本发明化合物与血浆蛋白结合比较强。
实验例7：化合物在小鼠中药代动力学评价
实验目的：测试化合物在CD-1小鼠体内药代动力学数据。
将化合物与溶媒5％DMSO/95％(10％HP-β-CD水溶液)混合，涡旋并超声，制备得到0.2mg/mL-0.3mg/mL澄清溶液。选取7至10周龄的CD-1雄性小鼠，静脉注射给予候选化合物溶液，收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNonlin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数，结果如表13所示。
表13静脉(IV)PK数据
供试品 010 014
给药剂量(mg/kg) 1.03 1.28
C 0(nM) 712 953
T 1/2(h) 8.1 5.7
Vd(L/kg) 25.0 25.6
Cl(mL/Kg/min) 61.4 77.0
AUC 0-inf(nM.h) 457 565
化合物与溶媒5％DMSO/95％(10％HP-β-CD水溶液)混合，涡旋并超声，制备得到1.6mg/mL-4.0mg/mL澄清溶液。选取7至10周龄的CD-1雄性小鼠，口服给予候选化合物溶液，收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNonlin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数，结果如表14所示。
表14口服(PO)PK数据
供试品 010盐酸盐 014
给药剂量(mg/kg) 5.54 16.0
C max(nM) 54 524
T max 1.5 2.5
T 1/2(h) 1.6 6.0
AUC 0-inf(nM.h) 125 1491
AUC u(nM.h) 2.5 67.1
F％ 5.1 20.5
注：AUC u＝AUC 0-inf*Unbound PPB(Mouse)
结论：本发明化合物在小鼠中具有良好PK性质。
实验例8：化合物在大鼠中药代动力学评价
实验目的：测试化合物在SD大鼠体内药代动力学数据。
化合物与溶媒5％DMSO/95％(10％HP-β-CD水溶液)混合，涡旋并超声，制备得到0.3mg/mL澄清溶液。静脉注射给予候选化合物溶液。收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓 度，并计算药代参数，结果如表15所示。
表15静脉(IV)PK数据
供试品 014
给药剂量(mg/kg) 1.56
C 0(nM) 971
T 1/2(h) 0.56
Vd(L/kg) 5.89
Cl(mL/Kg/min) 271
AUC 0-inf(nM.h) 150
化合物与溶媒5％DMSO/95％(10％HP-β-CD水溶液)混合，涡旋并超声，制备得到7mg/mL的溶液。口服给予候选化合物溶液。收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并计算药代参数，结果如表16所示。
表16口服(PO)PK数据
供试品 014
给药剂量(mg/kg) 31.7
C max(nM) 182
T max 2.0
T 1/2(h) 6.8
AUC 0-inf(nM.h) 427
F％ 12.5
结论：本发明化合物在大鼠中具有良好PK性质。
实验例9：化合物在犬中药代动力学评价
实验目的：测试化合物在比格犬体内药代动力学数据。
化合物014与溶媒20％DMSO/60％PEG400/20％(10％HP-β-CD水溶液)混合，涡旋并超声，制备得到4mg/mL澄清溶液。静脉注射给予候选化合物溶液。收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并计算药代参数，结果如表17所示。
表17静脉(IV)PK数据
供试品 014
给药剂量(mg/kg) 1.56
C 0(nM) 971
T 1/2(h) 0.56
Vd(L/kg) 5.89
Cl(mL/Kg/min) 271
AUC 0-inf(nM.h) 150
化合物014与溶媒15mg/mL in 20％DMSO/60％PEG400/20％(10％HP-β-CD水溶液)混合，涡旋并超声，制备得到6mg/mL-15mg/mL的溶液。口服给予候选化合物溶液。收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC-MS/MS方法分析药物浓度，并计算药代参数，结果如表18所示。
表18口服(PO)PK数据
供试品 014
给药剂量(mg/kg) 32.1
C max(nM) 439
T max 1.0
T 1/2(h) 10.8
AUC 0-inf(nM.h) 969
F％ 16.9
结论：本发明化合物在犬中具有良好PK性质。
实验例10：体内药效研究
GP2D Balb/c nude小鼠异种移植瘤模型：
实验方法：建立人结肠癌GP2D细胞皮下异种移植肿瘤Balb/c nude小鼠模型，将0.2mL(2×10 6个)GP2D细胞(加基质胶，体积比为1:1)皮下接种于每只小鼠的右后背，当肿瘤平均体积达到149mm 3时开始分组给药，每组6只。实验当天动物按组别给予相对应的药物。第一组G1设阴性对照组，单独灌胃给予5％DMSO+95％(10％HP-β-CD)，第二组G2-第五组G5给予给化合物014，给药剂量和方案如表19所示。
表19.受试物对人弥漫大B淋巴瘤TMD8小鼠移植瘤的药效研究
注：PO表示口服，QD表示每日一次，BID表示每日一次。
实验期间每周测定2次动物的体重和肿瘤的大小，同时每天观察并记录动物的临床症状，每次给药均参考最近一次称量的动物体重。
肿瘤的测量用数显游标卡尺来测定长(a)和宽(b)，肿瘤体积(Tumor volume，TV)的计算公式为：TV＝a×b 2/2。
实验结果：
化合物014对人结肠癌GP2D小鼠异种移植瘤有显著的抑制作用，给药22天后，第二组G2(25mg/kg, PO,BID)在第14天时，肿瘤体积抑制率TGI(％)为84.2％；第三组G3(50mg/kg,PO,BID)和第四组G4(150mg/kg,PO,BID)在第14天时，肿瘤体积抑制率TGI(％)分别为89.4％和97.3％；此外，在第五组G5(150mg/kg,PO,QD)计量下，肿瘤体积抑制率TGI(％)分别为91.4％，详细结果如表20所示。
表20.受试物在人结肠癌GP2D小鼠异种移植瘤模型中对动物肿瘤大小的影响
注：N/A表示未检测。
实验结论：在体内药效方面，本发明化合物对肿瘤具有显著的抑制效果。

Claims (20)

  1. 式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐
    其中，
    E 1选自S或-CR 3＝CH-；
    L 1选自-CH 2-和键；
    环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代；
    T 1选自CH 2、NH和O；
    T 2选自CH和N；
    T 3和T 4分别独立地选自CH 2和NH；
    m、n、p和x分别独立地选自0、1或2；
    r、v和w分别独立地选自1或2；
    q、s和u分别独立地选自1、2或3；
    R 1选自C 6-10芳基和5-10元杂芳基，所述C 6-10芳基和5-10元杂芳基任选被1、2、3、4或5个R b取代；
    R 2选自H、F、Cl、CN、NH 2、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基，所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基任选被1、2或3个卤素取代；
    R 3选自H、F、Cl、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和环丙基任选被1、2或3个卤素取代；
    R 4选自4-8元杂环烷基和 所述4-8元杂环烷基和 任选被1、2或3个R e取代；结构单元 选自5-6元杂环烯基；
    各R a分别独立地选自F、Cl、Br、I和CH 3；
    各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基，所述C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、C 2-4烯基和C 2-4炔基任选被1、2或3个卤素取代；
    各R e分别独立地选自H、F、Cl、Br、OH、CN、C 1-3烷基、C 1-3烷氧基和-C 1-3烷基-O-C(＝O)-C 1-3烷氨基。
  2. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自 所述 任选被1、2或3个R a取代。
  3. 根据权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自
  4. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中各R b分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH，所述CH 3、CH 2CH 3、OCH 3、OCH 2CH 3、-CH＝CH 2、-CH 2-CH＝CH 2和-C≡CH任选被1、2或3个卤素取代。
  5. 根据权利要求4所述化合物或其药学上可接受的盐，其中各R b分别独立地选自F、Cl、OH、NH 2、CN、CH 3、CF 3、CH 2CH 3和-C≡CH。
  6. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1选自苯基、吡啶基、萘基、喹啉基、苯并噻唑基和苯并噻吩基，所述苯基、吡啶基、萘基、喹啉基、苯并噻唑基和苯并噻吩基任选被1、2、3、4或5个R b取代。
  7. 根据权利要求1、4、5或6任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1选自
  8. 根据权利要求7所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1选自
  9. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 2选自H、F、Cl、CH 3和OCH 3，所述CH 3和OCH 3任选被1、2或3个卤素取代。
  10. 根据权利要求1或9所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 2选自H、F、Cl、OCH 3和OCHF 2。
  11. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 3选自H、F、Cl、CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基，所述CH 3、OCH 3、-CH＝CH 2和环丙基任选被1、2或3个卤素取代。
  12. 根据权利要求1或11所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 3选自H、F、Cl、OCHF 2、-CH＝CH 2和环丙基。
  13. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，各R e分别独立地选自H、F、Cl、Br、OH、CN、CH 3、CH 2CH 3、OCH 3和
  14. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 4选自四氢吡咯基和六氢-1H-吡咯里嗪基，所述四氢吡咯基和六氢-1H-吡咯里嗪基被1、2或3个R e取代。
  15. 根据权利要求1、13或14任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 4选自
  16. 下式化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
  17. 根据权利要求16所述的化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
  18. 根据权利要求16所述的化合物或其药学上可接受的盐，其化合物选自
  19. 根据权利要求1～18任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其在制备治疗KRAS G12D突变相关肿瘤药物中的应用。
  20. 根据权利要求19所述的应用，肿瘤指结直肠癌和胰腺癌。
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