CN116829570A

CN116829570A - Wee1降解化合物

Info

Publication number: CN116829570A
Application number: CN202380009470.1A
Authority: CN
Inventors: 刁剑雄; 陈明辰; 赖玮婷; 何龙; 刑唯强; 陈航; 刘帆
Original assignee: Beijing Xingqiyuan Biotechnology Co ltd
Current assignee: Beijing Xingqiyuan Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-04-08
Filing date: 2023-04-07
Publication date: 2023-09-29

Abstract

本文提供了靶向WEE1激酶蛋白以进行泛素化和蛋白酶体降解的化合物。本文还提供了使用所述化合物治疗疾病的方法。

Description

WEE1降解化合物

交叉引用

本申请要求2022年4月8日提交的国际申请PCT/CN2022/085833的权益，该申请通过引用整体并入本文。

背景技术

WEE1是属于Ser/Thr蛋白激酶家族的激酶，并且是细胞周期进程的关键调节剂。细胞周期中的药物干预是用于治疗癌症和其它增殖性疾病的策略。本公开提供了通过泛素化和蛋白酶体降解经由靶向细胞中的WEE1蛋白来减少或者消除WEE1活性的化合物、组合物和方法。

发明内容

本文提供了靶向WEE1蛋白以进行泛素化和蛋白酶体降解的化合物。本文还提供了使用所述化合物治疗疾病的方法。

一个实施方案提供了一种化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，具有式(I)的结构：

其中

R¹、R²、R³和R⁴各自独立地选自氢、任选取代的直链或者支链C_1-6烷基、任选取代的C_1-3烷氧基、卤素、氨基、羟基和氰基；或者

R¹和R²、R²和R³或者R³和R⁴与它们连接的中间原子一起形成任选取代的5-6元环烷基或者任选取代的杂环烷基环；

L是-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*；

Ak¹选自-(CR⁵R⁶)_k-；

Ak²选自-(CR⁵R⁶)_m-；

Ak³选自-(CR⁵R⁶)_n-；

k、m和n各自选自0至10

R⁵和R⁶各自独立地选自氢、卤素、氨基、羟基、氰基、C_1-3烷基和C₃环烷基；

Z¹和Z²各自独立地选自键、-O-、-NR⁷-、-S-、亚杂环基和亚环烷基；

R⁷是氢、任选取代的烷基、或者任选取代的烷基，其中1个或者多个-CH₂-单元被O替代，前提是两个相邻的-CH₂-单元不被同时替代；

其中Z¹和Z²中的至少一个不是键；或者

L是含有聚乙二醇的部分；

与VHL配体的键合点通过星号表示；并且

U是VHL配体。

一个实施方案提供了一种药物组合物，包含式(I)化合物或者其药学上可接受的溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。

一个实施方案提供了式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体用于治疗人或者动物的方法。

一个实施方案提供了式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体用于治疗癌症或者肿瘤疾病的方法。

一个实施方案提供了式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体用于制造用于治疗癌症或者肿瘤疾病的药物的用途。

一个实施方案提供了一种在有需要的患者中治疗疾病或者病症的方法，包括向患者施用式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体。另一个实施方案提供了方法，其中疾病或者病症为癌症。

一个实施方案提供了一种在有需要的患者中治疗癌症的方法，包括向患者施用药物组合物，该药物组合物包含式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，以及药学上可接受的赋形剂。

援引并入

本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，用于本文所确定的特定目的。

具体实施方式

如本文和所附权利要求中使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代物，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“一个试剂”包括多个此类药剂，而对“该细胞”的提及包括对一个或者更多细胞(或者多个细胞)的提及以及本领域技术人员已知的其等价物等等。当范围在本文中用于物理性质，如分子量，或者化学性质，如化学式时，范围的所有组合和子组合以及其中的具体实施方案旨在包括在内。当提到数字或者数值范围时，术语“约”意为所指的数字或者数值范围是实验变化性(或者统计实验误差)内的近似值，并且因此在某些情况下，数字或者数值范围将在数字或者数值范围的1％至15％之间变化。术语“包括”(以及相关术语如“包含”或者“具有”或者“含有”)并不旨在排除在其它某些实施方案中，例如，本文所描述的任何物质的组合物、组合物、方法或者过程等等的实施方案“由”或者“基本上由”所描述的特征组成。

定义

如在说明书和所附权利要求中所用的，除非另有相反的规定，否则以下术语具有如下表示的含义。

“氨基”是指-NH₂基团。

“氰基”是指-CN基团。

“硝基”是指-NO₂基团。

“氧杂”是指-O-基团。

“氧代”是指＝O基团。

“硫代”是指＝S基团。

“亚氨基”是指＝N-H基团。

“肟基”是指＝N-OH基团。

“肼基”是指＝N-NH₂基团。

“烷基”是指仅由碳原子和氢原子组成、不含不饱和度、具有1-15个碳原子(例如，C₁-C₁₅烷基)的直链或支链的烃链基团。在某些实施方案中，烷基包含1至13个碳原子(例如，C₁-C₁₃烷基)。在某些实施方案中，烷基包含1至8个碳原子(例如，C₁-C₈烷基)。在其它实施方案中，烷基包含1至5个碳原子(例如，C₁-C₅烷基)。在其它实施方案中，烷基包含1至4个碳原子(例如，C₁-C₄烷基)。在其它实施方案中，烷基包含1至3个碳原子(例如，C₁-C₃烷基)。在其它实施方案中，烷基包含1至2个碳原子(例如，C₁-C₂烷基)。在其它实施方案中，烷基包含一个碳原子(例如，C₁烷基)。在其它实施方案中，烷基包含5至15个碳原子(例如，C₅-C₁₅烷基)。在其它实施方案中，烷基包含5至8个碳原子(例如，C₅-C₈烷基)。在其它实施方案中，烷基包含2至5个碳原子(例如，C₂-C₅烷基)。在其它实施方案中，烷基包含3至5个碳原子(例如，C₃-C₅烷基)。在其它实施方案中，该烷基选自甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、1-甲基乙基(异丙基)、1-丁基(正丁基)、1,1-甲基丙基(仲丁基)、2-甲基丙基(异丁基)、1,1-二甲基乙基(叔丁基)和1-戊基(正戊基)。该烷基通过单键与该分子的其余部分连接。除非在说明书中另有明确规定，否则烷基任选地被一个或多个下列取代基取代：卤代、氰基、硝基、氧代、硫代、亚氨基、肟基、三甲基甲硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)-N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t为1或2)、-S(O)_tOR^a(其中t为1或2)、-S(O)_tR^a(其中t为1或2)和-S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)，其中每个R^a独立地为氢、烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、碳环基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳环基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)。

“烷氧基”是指式-O-烷基的通过氧原子键合的基团，其中烷基为如上定义的烷基链。

“烯基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链自由基，含有至少一个碳-碳双键，并具有二至十二个碳原子。在某些实施方案中，烯基包含二至八个碳原子。在其它实施方案中，烯基包含二至四个碳原子。烯基通过单键附接至分子的其余部分，例如乙烯基(即，乙烯基)、丙-1-烯基(即，烯丙基)、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。除非说明书中另有具体说明，否则烯基基团任选被以下取代基中的一个或多个取代：卤代、氰基、硝基、氧代、硫代、亚氨基、肟基、三甲基硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)-N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tOR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tR^a(其中t是1或2)和-S(O)_tN(R^a)₂(其中t是1或2)，其中各R^a独立地是氢、烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、碳环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳环烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)。

“炔基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链自由基，含有至少一个碳-碳三键，具有二至十二个碳原子。在某些实施方案中，炔基包含二至八个碳原子。在其它实施方案中，炔基包含二至六个碳原子。在其它实施方案中，炔基包含二至四个碳原子。炔基通过单键附接至分子的其余部分，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。除非说明书中另有具体说明，否则炔基基团任选被以下取代基中的一个或多个取代：卤代、氰基、硝基、氧代、硫代、亚氨基、肟基、三甲基硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)-N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tOR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tR^a(其中t是1或2)和-S(O)_tN(R^a)₂(其中t是1或2)，其中各R^a独立地是氢、烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、碳环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳环烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)。

“亚烷基”或“亚烷基链”是指将分子的其余部分连接到仅由碳和氢组成的自由团上的直链或支链二价烃链，不含不饱和度，且具有一至十二个碳原子，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、异-丁烯等。亚烷基链通过单键附接至分子的其余部分，并通过单键附接至自由基。亚烷基链与分子其余部分和自由基的附接点是通过亚烷基链中的一个碳或通过该链中的任意两个碳进行。在某些实施方案中，亚烷基包含一至八个碳原子(例如，C₁-C₈亚烷基)。在其它实施方案中，亚烷基包含一至五个碳原子(例如，C₁-C₅亚烷基)。在其它实施方案中，亚烷基包含一至四个碳原子(例如，C₁-C₄亚烷基)。在其它实施方案中，亚烷基包含一至三个碳原子(例如，C₁-C₃亚烷基)。在其它实施方案中，亚烷基包含一至两个碳原子(例如，C₁-C₂亚烷基)。在其它实施方案中，亚烷基包含一个碳原子(例如，C₁亚烷基)。在其它实施方案中，亚烷基包含五至八个碳原子(例如，C₅-C₈亚烷基)。在其它实施方案中，亚烷基包含二至五个碳原子(例如，C₂-C₅亚烷基)。在其它实施方案中，亚烷基包含三至五个碳原子(例如，C₃-C₅亚烷基)。除非说明书中另有具体说明，否则亚烷基链任选被以下取代基中的一个或多个取代：卤代、氰基、硝基、氧代、硫代、亚氨基、肟基、三甲基硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)-N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tOR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tR^a(其中t是1或2)和-S(O)_tN(R^a)₂(其中t是1或2)，其中各R^a独立地是氢、烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基烷基、碳环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳环烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)。

“亚烯基”或“亚烯基链”是指将分子的其余部分连接到仅由碳和氢组成的自由团上的直链或支链二价烃链，含有至少一个碳碳双键，且具有二至十二个碳原子。亚烯基链通过单键附接至分子的其余部分，并通过单键附接至自由基。在某些实施方案中，亚烯基包含二至八个碳原子(例如，C₂-C₈亚烯基)。在其它实施方案中，亚烯基包含二至五个碳原子(例如，C₂-C₅亚烯基)。在其它实施方案中，亚烯基包含二至四个碳原子(例如，C₂-C₄亚烯基)。在其它实施方案中，亚烯基包含二至三个碳原子(例如，C₂-C₃亚烯基)。在其它实施方案中，亚烯基包含二个碳原子(例如，C₂亚烯基)。在其它实施方案中，亚烯基包含五至八个碳原子(例如，C₅-C₈亚烯基)。在其它实施方案中，亚烯基包含三至五个碳原子(例如，C₃-C₅亚烯基)。除非说明书中另有具体说明，否则亚烯基链任选被以下取代基中的一个或多个取代：卤代、氰基、硝基、氧代、硫代、亚氨基、肟基、三甲基硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)-N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tOR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tR^a(其中t是1或2)和-S(O)_tN(R^a)₂(其中t是1或2)，其中各R^a独立地是氢、烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基烷基、碳环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳环烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)。

“亚炔基”或“亚炔基链”是指将分子的其余部分连接到仅由碳和氢组成的自由团上的直链或支链二价烃链，含有至少一个碳碳三键，且具有二至十二个碳原子。亚炔基链通过单键附接至分子的其余部分，并通过单键附接至自由基。在某些实施方案中，亚炔基包含二至八个碳原子(例如，C₂-C₈亚炔基)。在其它实施方案中，亚炔基包含二至五个碳原子(例如，C₂-C₅亚炔基)。在其它实施方案中，亚炔基包含二至四个碳原子(例如，C₂-C₄亚炔基)。在其它实施方案中，亚炔基包含二至三个碳原子(例如，C₂-C₃亚炔基)。在其它实施方案中，亚炔基包含二个碳原子(例如，C₂亚炔基)。在其它实施方案中，亚炔基包含五至八个碳原子(例如，C₅-C₈亚炔基)。在其它实施方案中，亚炔基包含三至五个碳原子(例如，C₃-C₅亚炔基)。除非说明书中另有具体说明，否则亚炔基链任选被以下取代基中的一个或多个取代：卤代、氰基、硝基、氧代、硫代、亚氨基、肟基、三甲基硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)-N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tOR^a(其中t是1或2)、-S(O)_tR^a(其中t是1或2)和-S(O)_tN(R^a)₂(其中t是1或2)，其中各R^a独立地是氢、烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基烷基、碳环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳环烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地经卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)。

“芳基”是指通过从环碳原子上去除氢原子而由芳族单环或多环烃环体系衍生的基团。芳族单环或多环烃环体系仅包含氢和来自5-18个碳原子的碳，其中该环系中的至少一个环是完全不饱和的，即，其根据休克尔(Hückel)理论包含环状、离域的(4n+2)π-电子体系。衍生出芳基的环系包括但不限于诸如苯、芴、茚满、茚、四氢化萘和萘等基团。除非在说明书中另有明确说明，否则术语“芳基”或前缀“芳”(如在“芳烷基”中)意在包括任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基所取代的芳基基团：烷基、烯基、炔基、卤代、氟烷基、氰基、硝基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的芳烯基、任选取代的芳炔基、任选取代的碳环基、任选取代的碳环基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t为1或2)、-R^b-S(O)_tR^a(其中t为1或2)、-R^b-S(O)_tOR^a(其中t为1或2)和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)(其中t为1或2)，其中每个R^a独立地为氢、烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、环烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、环烷基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)，每个R^b独立地为直接键或直链或支链亚烷基或亚烯基链，且R^c为直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且除非另有说明，其中上述取代基中的每一个为未取代的。

“芳烷基”是指式-R^c-芳基的基团，其中R^c为如上文所定义的亚烷基链，例如，亚甲基、亚乙基等。芳烷基基团的亚烷基链部分如上文针对亚烷基链所述任选地被取代。芳烷基基团的芳基部分如上文针对芳基所述任选地被取代。

“芳烯基”是指式-R^d-芳基的基团，其中R^d是如上所定义的亚烯基链。芳烯基基团的芳基部分如上针对芳基基团所述地任选取代。芳烯基基团的亚烯基链部分如上针对亚烯基基团所述地任选取代。

“芳炔基”是指式-R^e-芳基的基团，其中R^e是如上所定义的亚炔基链。芳炔基基团的芳基部分如上针对芳基基团所述地任选取代。芳炔基基团的亚炔基链部分如上针对亚炔基链所述地任选取代。

“芳烷氧基”是指通过式-O-R^c的氧原子键合的基团，其中R^c是如上所定义的亚烷基链，例如，亚甲基、亚乙基等等。芳烷基基团的亚烷基链部分如上针对亚烷基链所述地任选取代。芳烷基基团的芳基部分如上针对芳基基团所述地任选取代。

“碳环基”是指仅由碳和氢原子组成的稳定的非芳族单环或多环烃基团，其包括稠环、桥环或螺环体系，具有3至15个碳原子。在某些实施方案中，碳环基包含3至10个碳原子。在其它实施方案中，碳环基包含5至7个碳原子。该碳环基通过单键与分子的其余部分连接。碳环基是饱和的(即仅包含单一C-C键)或不饱和的(即含有一个或多个双键或三键)。完全饱和的碳环基基团还被称为“环烷基”。单环环烷基的实例包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。不饱和的碳环基还被称为“环烯基”。单环环烯基的实例包括，例如，环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。多环碳环基基团包括，例如，金刚烷基、降冰片基(即，双环[2.2.1]庚烷基)、降冰片烯基、十氢萘基、7,7-二甲基-双环[2.2.1]庚烷基等。螺环碳环基或者环烷基基团包括，例如，螺[2.2]戊烷、螺[2.3]己烷、螺[2.4]庚烷、螺[2.5]辛烷、螺[2.6]壬烷、螺[3.3]庚烷、螺[3.4]辛烷、螺[3.5]壬烷、螺[3.6]癸烷、螺[4.4]壬烷、螺[4.5]癸烷、螺[4.6]十一烷、螺[5.5]十一烷、螺[5.6]十二烷、螺[6.6]十三烷等等。除非在说明书中另有明确说明，否则术语“碳环基”意在包括任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基所取代的碳环基基团：烷基、烯基、炔基、卤代、氟烷基、氧代、硫代、氰基、硝基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的芳烯基、任选取代的芳炔基、任选取代的碳环基、任选取代的碳环基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t为1或2)、-R^b-S(O)_tR^a(其中t为1或2)、-R^b-S(O)_tOR^a(其中t为1或2)和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)(其中t为1或2)，其中每个R^a独立地为氢、烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、环烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、环烷基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)，每个R^b独立地为直接键或直链或支链亚烷基或亚烯基链，且R^c为直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且除非另有说明，其中上述取代基中的每一个为未取代的。

“亚环烷基”是指将分子的其余部分连接到基团的二价碳环基或者环烷基。

“碳环基烷基”是指式-R^c-碳环基的基团，其中R^c为如上文所定义的亚烷基链。亚烷基链和碳环基基团如上文所述任选地被取代。

“碳环基炔基”是指式-R^c-碳环基的基团，其中R^c为如上文所定义的亚炔基链。亚炔基链和碳环基基团如上文所述任选地被取代。

“碳环基烷氧基”是指式-O-R^c-碳环基的通过氧原子键合的基团，其中R^c为如上所定义的亚烷基链。亚烷基链和碳环基基团如上文所述任选地被取代。

如本文所用的，“羧酸生物电子等排体”是指表现出与羧酸部分类似的物理、生物和/或化学性质的官能团或部分。羧酸生物电子等排体的实例包括但不限于：

等等。

“卤代”或“卤素”是指溴代、氯代、氟代或碘代取代基。

“氟烷基”是指被一个或多个如上定义的氟代基团取代的如上定义的烷基基团，例如，三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基等。在一些实施方案中，氟烷基的烷基部分如以上针对烷基所述任选地被取代。

“杂环基”是指稳定的3至18元非芳族环基团，其包含2至12个碳原子和1至6个选自氮、氧和硫的杂原子。除非在说明书中另有明确说明，否则杂环基基团是单环、双环、三环、四环或螺环的环系，其任选地包括稠环或桥环体系。杂环基基团中的杂原子任选地被氧化。如果存在一个或多个氮原子，则其任选地被季铵化。杂环基是部分或完全饱和的。杂环基通过环中的任何原子连接至分子的其余部分。这类杂环基基团的实例包括但不限于二氧戊环基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、奎宁环基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、硫杂吗啉基、1-氧代-硫代吗啉基和1,1-二氧代-硫代吗啉基、1-氮杂螺[2.2]戊烷、1-氮杂螺[2.3]己烷、1-氮杂螺[2.4]庚烷、1-氮杂螺[2.5]辛烷、1-氮杂螺[2.6]壬烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、2-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氮杂螺[3.5]壬烷、2-氮杂螺[3.6]癸烷、2-氮杂螺[4.4]壬烷、2-氮杂螺[4.5]癸烷、2-氮杂螺[4.6]十一烷、3-氮杂螺[5.5]十一烷、3-氮杂螺[5.6]十二烷、3-氮杂螺[6.6]十三烷、5-氮杂螺[2.3]己烷、5-氮杂螺[2.4]庚烷、6-氮杂螺[2.5]辛烷、6-氮杂螺[2.6]壬烷、6-氮杂螺[3.4]辛烷、7-氮杂螺[3.5]壬烷、7-氮杂螺[3.6]癸烷、8-氮杂螺[4.5]癸烷、8-氮杂螺[4.6]十一烷、9-氮杂螺[5.6]十二烷、1,4-二氮杂螺[2.2]戊烷、1,5-二氮杂螺[2.3]己烷、1,5-二氮杂螺[2.4]庚烷、1,6-二氮杂螺[2.5]辛烷、1,6-二氮杂螺[2.6]壬烷、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷、2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷、2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷、2,7-二氮杂螺[3.6]癸烷、2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷、2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷、2,8-二氮杂螺[4.6]十一烷、3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷、3,9-二氮杂螺[5.6]十二烷和3,10-二氮杂螺[6.6]十三烷。除非在说明书中另有明确说明，否则术语“杂环基”意在包括任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代的如上定义的杂环基基团：烷基、烯基、炔基、卤代、氟烷基、氧代、硫代、氰基、硝基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的芳烯基、任选取代的芳炔基、任选取代的碳环基、任选取代的碳环基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t为1或2)、-R^b-S(O)_tR^a(其中t为1或2)、-R^b-S(O)_tOR^a(其中t为1或2)和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)(其中t为1或2)，其中每个R^a独立地为氢、烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、环烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、环烷基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)，每个R^b独立地为直接键或直链或支链亚烷基或亚烯基链，且R^c为直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且除非另有说明，其中上述取代基中的每一个为未取代的。

“亚杂环基”是指将分子的其余部分连接到基团的二价杂环基。

“N-杂环基”或“N-连接的杂环基”是指含有至少一个氮的如上定义的杂环基基团，并且其中该杂环基基团与该分子的其余部分的连接点是通过该杂环基基团中的氮原子。N-杂环基基团如上文针对杂环基基团所述任选地被取代。这样的N-杂环基基团的实例包括但不限于1-吗啉基、1-哌啶基、1-哌嗪基、1-吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑啉基和咪唑烷基。

“C-杂环基”或“C-连接的杂环基”是指含有至少一个杂原子的如上定义的杂环基基团，并且其中该杂环基基团与该分子的其余部分的连接点是通过该杂环基基团中的碳原子。C-杂环基基团如上文针对杂环基基团所述任选地被取代。这样的C-杂环基基团的实例包括但不限于2-吗啉基、2-或3-或4-哌啶基、2-哌嗪基、2-或3-吡咯烷基等。

“杂环基烷基”是指式-R^c-杂环基的基团，其中R^c为如上所定义的亚烷基链。如果杂环基为含氮的杂环基，则该杂环基任选地在该氮原子处连接至烷基基团。杂环基烷基基团的亚烷基链如上文针对亚烷基链所述任选地被取代。杂环基烷基基团的杂环基部分如上文针对杂环基所述任选地被取代。

“杂环基烷氧基”是指式-O-R^c-杂环基的通过氧原子键合的基团，其中R^c为如上所定义的亚烷基链。如果杂环基为含氮的杂环基，则该杂环基任选地在该氮原子处连接至烷基基团。杂环基烷氧基基团的亚烷基链如上文针对亚烷基链所述任选地被取代。杂环基烷氧基基团的杂环基部分如上文针对杂环基所述任选地被取代。

“杂芳基”是指由包含2至17个碳原子以及1至6个选自氮、氧和硫的杂原子的3至18元芳环基团衍生的基团。如本文所用的，杂芳基基团是单环、双环、三环或四环环系，其中该环系中的至少一个环是完全不饱和的，即，其根据休克尔(Hückel)理论包含环状、离域的(4n+2)π–电子体系。杂芳基包括稠合或桥连的环系。杂芳基基团中的杂原子任选地被氧化。如果存在一个或多个氮原子，则其任选地被季铵化。杂芳基通过环中的任何原子与分子的其余部分连接。杂芳基的实例包括但不限于氮杂基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、1,3-苯并二氧戊环基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并[d]噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二氧杂/>基、苯并[b][1,4]噁嗪基、1,4-苯并二噁烷基、苯并萘并呋喃基(benzonaphthofuranyl)、苯并噁唑基、苯并二氧戊环基、苯并二噁英基(benzodioxinyl)、苯并吡喃基、苯并吡喃酮基(benzopyranonyl)、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基(benzofuranonyl)、苯并噻吩基(benzothienyl)(benzothiophenyl)、苯并噻吩并[3,2-d]嘧啶基、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、环戊并[d]嘧啶基、6,7-二氢-5H-环戊并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6-二氢苯并[h]喹唑啉基、5,6-二氢苯并[h]噌啉基、6,7-二氢-5H-苯并[6,7]环庚并[1,2-c]哒嗪基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋喃酮基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、5,6,7,8,9,10-六氢环辛并[d]嘧啶基、5,6,7,8,9,10-六氢环辛并[d]哒嗪基、5,6,7,8,9,10-六氢环辛并[d]吡啶基、异噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、异喹啉基、吲嗪基、异噁唑基、5,8-甲桥-5,6,7,8-四氢喹唑啉基、萘啶基、1,6-萘啶酮基(1,6-naphthyridinonyl)、噁二唑基、2-氧代氮杂/>基、噁唑基、环氧乙烷基、5,6,6a,7,8,9,10,10a-八氢苯并[h]喹唑啉基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡唑并[3,4-d]嘧啶基、吡啶基、吡啶并[3,2-d]嘧啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡咯基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、5,6,7,8-四氢喹唑啉基、5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、6,7,8,9-四氢-5H-环庚并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6,7,8-四氢吡啶并[4,5-c]哒嗪基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、噻吩并[3,2-d]嘧啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基和噻吩基(thiophenyl)(即噻吩基(thienyl))。除非在说明书中另有明确说明，否则术语“杂芳基”意在包括任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代的如上所定义的杂芳基基团：烷基、烯基、炔基、卤代、氟烷基、卤代烯基、卤代炔基、氧代、硫代、氰基、硝基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的芳烯基、任选取代的芳炔基、任选取代的碳环基、任选取代的碳环基烷基、任选取代的杂环基、任选取代的杂环基烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a(其中t为1或2)、-R^b-S(O)_tR^a(其中t为1或2)、-R^b-S(O)_tOR^a(其中t为1或2)和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂(其中t为1或2)(其中t为1或2)，其中每个R^a独立地为氢、烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、环烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、环烷基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂环基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)、杂芳基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)或杂芳基烷基(任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代)，每个R^b独立地为直接键或直链或支链亚烷基或亚烯基链，且R^c为直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且除非另有说明，其中上述取代基中的每一个为未取代的。

“N-杂芳基”是指含有至少一个氮的如上定义的杂芳基基团，并且其中该杂芳基基团与该分子的其余部分的连接点是通过该杂芳基基团中的氮原子。N-杂芳基基团如上文针对杂芳基基团所述任选地被取代。

“C-杂芳基”是指如上所定义的杂芳基，其中该杂芳基基团与该分子的其余部分的连接点是通过该杂芳基基团中的碳原子。C-杂芳基基团如上文针对杂芳基基团所述任选地被取代。

“杂芳基烷基”是指式–R^c-杂芳基的基团，其中R^c为如上所定义的亚烷基链。如果杂芳基为含氮的杂芳基，则该杂芳基任选地在该氮原子处与烷基基团连接。杂芳基烷基基团的亚烷基链如上文针对亚烷基链所述任选地被取代。杂芳基烷基基团的杂芳基部分如上文针对杂芳基所述任选地被取代。

“杂芳基烷氧基”是指式–O-R^c-杂芳基的通过氧原子键合的基团，其中R^c为如上所定义的亚烷基链。如果杂芳基为含氮的杂芳基，则该杂芳基任选地在该氮原子处与烷基基团连接。杂芳基烷氧基基团的亚烷基链如上文针对亚烷基链所述任选地被取代。杂芳基烷氧基基团的杂芳基部分如上文针对杂芳基所述任选地被取代。

在一些实施方案中，本文公开的化合物含有一个或多个不对称中心，因此产生了对映异构体、非对映异构体以及根据绝对立体化学被定义为(R)-或(S)-的其它立体异构形式。除非另有说明，否则本公开意在涉及本文公开的化合物的所有立体异构形式。当本文所述的化合物含有烯烃双键时，除非另有说明，否则本发明意在同时包括E和Z几何异构体(例如，顺式(cis)或反式(trans))。同样，还意在包括所有可能的异构体，以及其外消旋形式和光学纯形式，和所有互变异构形式。术语“几何异构体”是指烯烃双键的E或Z几何异构体(例如顺式或反式)。术语“位置异构体”是指围绕中心环的结构异构体，如围绕苯环的邻位、间位和对位异构体。

“互变异构体”是指一种分子，其中质子从分子的一个原子转移到同一分子的另一个原子是可能的。在某些实施方案中，本文所述的化合物以互变异构体的形式存在。在可能发生互变异构的情况下，将存在互变异构体的化学平衡。互变异构体的确切比例取决于几个因素，包括物理状态、温度、溶剂和pH。互变异构平衡的一些实例包括：

在一些实施方案中，本文公开的化合物以不同的富集同位素形式使用，例如，富集²H、³H、¹¹C、¹³C和/或¹⁴C的含量。在一个特定的实施方案中，该化合物在至少一个位置被氘化。此种氘化形式可以通过美国专利第5,846,514和6,334,997号中描述的方法制备。如美国专利第5,846,514和6,334,997号中所述，氘化可以改善代谢稳定性和/或功效，从而增加药物的作用持续时间。

除非另有说明，否则本文所描绘的结构旨在包括仅在一个或多个同位素富集的原子存在下不同的化合物。例如，除了氢被氘或氚置换，或者碳被富含¹³C或¹⁴C的碳置换之外，具有本发明结构的化合物在本公开的范围内。

本公开的化合物任选地在构成此种化合物的一个或多个原子处包含非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以用同位素标记，诸如例如，氘(²H)、氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)或碳-14(¹⁴C)。经以下进行I同位素取代均被设想到：²H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵C、¹²N、¹³N、¹⁵N、¹⁶N、¹⁶O、¹⁷O、¹⁴F、¹⁵F、¹⁶F、¹⁷F、¹⁸F、³³S、³⁴S、³⁵S、³⁶S、³⁵Cl、³⁷Cl、⁷⁹Br、⁸¹Br、¹²⁵I。在一些实施方案中，考虑用¹⁸F进行同位素取代。本发明化合物的所有同位素变型，无论是否是放射性的，都囊括在本发明的范围内。

在某些实施方案中，本文公开的化合物所具有的一些或全部¹H原子被²H原子置换。含氘化合物的合成方法是本领域已知的，且仅作为非限制性实例，包括以下合成方法。

使用各种方法合成氘取代的化合物，如描述于：Dean,Dennis C.；Editor.RecentAdvances in the Synthesis and Applications of Radiolabeled Compounds for DrugDiscovery and Development[Curr.,Pharm.Des.,2000；6(10)]2000,110pp；George W.；Varma,Rajender S.The Synthesis of Radiolabeled Compounds via OrganometallicIntermediates,Tetrahedron,1989,45(21),6601-21；和Evans,E.Anthony.Synthesis ofradiolabeled compounds,J.Radioanal.Chem.,1981,64(1-2),9-32。

氘化起始物料容易获得，并经过本文所述的合成方法以提供含氘化合物的合成。大量的含氘试剂和结构单元可从化学品供应商处，如Aldrich Chemical公司购得。

适于用于亲核取代反应的氘转移试剂，如碘甲烷-d₃(CD₃I)，是易于获得的，并且可用于在亲核取代反应条件下将氘取代的碳原子转移到反应底物。仅举例而言，CD₃I的使用在反应方案中示出。

氘转移试剂，如氘化铝锂(LiAlD₄)，用于在还原条件下将氘转移到反应底物。仅举例而言，LiAlD₄的使用仅在以下反应方案中示出。

氘气和钯催化剂用于还原不饱和碳-碳键并且进行芳基碳-卤键的还原取代，如仅举例而言在以下反应方案中示出。

在一个实施方案中，本文所公开的化合物含有一个氘原子。在另一个实施方案中，本文所公开的化合物含有两个氘原子。在另一个实施方案中，本文所公开的化合物含有三个氘原子。在另一个实施方案中，本文所公开的化合物含有四个氘原子。在另一个实施方案中，本文所公开的化合物含有五个氘原子。在另一个实施方案中，本文所公开的化合物含有六个氘原子。在另一个实施方案中，本文所公开的化合物含有超过六个的氘原子。在另一个实施方案中，本文所公开的化合物被氘原子完全取代，并且不含有不可交换的¹H氢原子。在一个实施方案中，氘掺入的水平通过合成方法确定，其中使用氘化合成构建单元作为起始材料。

“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐。任一种本文所述杂芳族WEE1抑制化合物的药学上可接受的盐意在包括任何和所有药学上合适的盐形式。本文所述化合物的优选的药学上可接受的盐是药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。

“药学上可接受的酸加成盐”是指保留了游离碱的生物有效性和性质的那些盐，其在生物学上或其它方面不是不合需要的，并且其是用诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢碘酸、氢氟酸、亚磷酸等无机酸形成的。还包括用如下有机酸形成的盐：诸如脂肪族单羧酸和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、链烷二酸、芳族酸、脂肪族和芳香族磺酸等，并且包括例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。因此，示例性的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、异丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐等。还涉及氨基酸的盐如精氨酸盐、葡糖酸盐和半乳糖醛酸盐(参见，例如，Berge S.M等人,"Pharmaceutical Salts,"Journal of Pharmaceutical Science,66:1-19(1997))。在一些实施方案中，碱性化合物的酸加成盐通过按照熟练技术人员熟悉的方法和技术使其游离碱形式与足量的所需酸接触以产生盐而制备。

“药学上可接受的碱加成盐”是指保留了游离酸的生物有效性和性质的那些盐，其在生物学上或其它方面不是不合需要的。这些盐是通过向游离酸中加入无机碱或有机碱而制备的。在一些实施方案中，药学上可接受的碱加成盐用金属或胺如碱金属和碱土金属或有机胺形成。衍生自有机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。衍生自有机碱的盐包括但不限于下列有机碱的盐：伯胺、仲胺和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代胺)，环胺和碱性离子交换树脂，例如，异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、N,N-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、亚乙基二苯胺、N-甲基葡糖胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱(theobromine)、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。参见Berge等人，同上。

“药学上可接受的溶剂化物”是指作为溶剂加成形式的物质的组合物。在一些实施方案中，溶剂化物含有化学计量的或者非化学计量的溶剂，并且在用药学上可接受的溶剂如水、乙醇等制备过程中形成。当溶剂为水时形成水合物，或者当溶剂为醇时形成醇合物。本文所描述的化合物的溶剂化物可方便地在本文所描述的过程中制备或者形成。本文所提供的化合物任选地以未溶剂化形式和溶剂化形式存在。术语“对象”或者“患者”包括哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于，哺乳动物纲的任何成员：人类、黑猩猩等非人类灵长类动物以及其它猿类和猴物种；农场动物，如牛、马、绵羊、山羊、猪；家畜，如兔、狗和猫；实验动物，包括啮齿动物，如大鼠、小鼠和豚鼠等等。在一方面，哺乳动物是人类。

“前药”是指在表现出其药理作用之前经历生物转化的化合物。因此，前药可以被视为含有特殊保护基团的药物，该保护基团以短暂的方式用于改变母体分子中的药理学性质。

如本文所用的，“治疗”或者“减轻”或者“改善”可互换使用。这些术语是指获得有益或者期望结果的方法，包括但不限于治疗益处和/或者预防益处。“治疗益处”是指根除或者改善正在治疗的潜在疾病。此外，通过根除或者改善与潜在疾病相关的一种或者多种生理症状使得在患者中观察到改善，从而获得治疗益处，即使患者仍然患有潜在疾病。在一些实施方案中，为了预防益处，将组合物施用于有发生特定疾病的风险的患者，或者施用于报告一种或者多种疾病的生理症状的患者，即使尚未做出该疾病的诊断。

WEE1激酶

WEE1是属于Ser/Thr蛋白激酶家族的激酶，并且是细胞周期进程的关键调节剂。WEE1激酶通过WEE1基因编码。WEE1是G2/M细胞周期检查点的重要调节剂。WEE1通过调节细胞周期蛋白依赖性激酶1(Cdk1)的磷酸化来介导细胞周期停滞。WEE1通过在两个不同的位点Tyr15和Thr14上磷酸化来抑制Cdk1。磷酸化的Cdk1减少了激酶的活性，并且因此防止进入有丝分裂。随着细胞在细胞周期中的进展，WEE1被灭活和降解，并且允许细胞进入有丝分裂。例如，由基因组不稳定、DNA合成错误或者DNA损伤剂引起的DNA损伤会激活p53并且减少WEE1降解，从而停滞细胞周期并且阻止进展到有丝分裂。癌细胞通常缺乏p53信号传导，表现出基因组不稳定性，并且依靠WEE1和G2/M细胞周期检查点来避免由于DNA损伤引起的有丝分裂灾难。WEE1的抑制或者降解使癌症对DNA损伤疗法敏感。其它信息可见于a)LLParker和H Piwnica-Worms.Inactivation of the p34cdc2-cyclin B complex by thehuman WEE1 tyrosine kinase.Science.1992Sep 25；257(5078):1955-1957，b)NWatanabe,M Broome和THunter.Regulation of the human WEE1Hu CDK tyrosine 15-kinase during the cell cycle.EMBO J.1995May 1；14(9):1878-1891，c)CH McGowan和PRussell.Cell cycle regulation of human WEE1.EMBO J.1995May15；14(10):2166-2175以及d)Philip C De Witt Hamer,Shahryar E Mir,David Noske,Cornelis J F VanNoorden,Tom Wurdinger.WEE1 kinase targeting combined with DNA-damaging cancertherapy catalyzes mitotic catastrophe.Clin Cancer Res.1022Jul 1；17(13),4200–4207，它们均通过引用并入本文。

选择性蛋白质降解

细胞内蛋白质的水平由蛋白质合成率和蛋白质降解率二者决定。在真核细胞中，存在两种选择性蛋白质降解途径，泛素-蛋白酶体途径和溶酶体蛋白水解途径。一般来讲，选择性蛋白质降解是由促进降解蛋白(如蛋白酶体降解蛋白)或者与泛素-蛋白酶体途径相关的蛋白质的结合的募集基序的存在来介导的。募集基序包括E3连接酶识别剂和蛋白酶体识别剂。募集基序与WEE1激酶的高亲和力配体的缀合提供了能够选择性地将蛋白质降解途径引导至WEE1激酶蛋白本身的化合物。这样的结果将降低WEE1激酶活性的水平。

杂芳族WEE1降解化合物

在一方面，本文提供了杂芳族WEE1降解化合物，其具有以下提供的通式：

其中WEE1激酶亲和力基序是独立于连接基序和/或者募集基序而对WEE1激酶蛋白具有高亲和力的分子构建体，连接基序是提供与WEE1激酶亲和力基序和募集基序两者的共价键的分子构建体，而募集基序是具有选择性靶向和募集蛋白质降解的能力的分子构建体。

募集基序

募集基序包括E3连接酶识别剂和蛋白酶体识别剂。在一些实施方案中，募集基序来源于VHL配体、nutlin、苯丁抑制素、HIF-1α-VHL结合肽、羟基脯氨酸-HIF-1α-VHL结合肽、SCFb-TRCP靶向肽或者凋亡蛋白配体抑制剂。

在一些实施方案中，募集基序选自与VHL配体相关的分子构建体，如下所示：

在一些实施方案中，募集基序选自与VHL配体相关的分子构建体，如下所示：/>

其中与连接基序的键合点由波浪键表示。在一些实施方案中，募集基序是或者/>在一些实施方案中，募集基序是在一些实施方案中，募集基序是/>

术语“VHL配体”、“VHL结合剂”和“VHL E3泛素连接酶结合剂”在本文中可互换使用，以指代与Von Hippel-Lindau肿瘤抑制因子(VHL)结合的化合物或者基序。

连接基序

连接基序是提供与WEE1激酶亲和力基序和募集基序二者的共价键的分子构建体。在一些实施方案中，连接基序包括环状部分。在一些实施方案中，连接基序包括非环状部分。在一些实施方案中，连接基序包括不饱和部分。在一些实施方案中，连接基序包括线性序列中的4至50个非氢原子。在一些实施方案中，连接基序包括线性序列中的4和20个非氢原子。在一些实施方案中，连接基序包括线性序列中的4和25个非氢原子。在一些实施方案中，连接基序包括线性序列中的4至30个非氢原子。在一些实施方案中，连接基序包含6至18个原子。在一些实施方案中，连接基序包括线性序列中的5至10个非氢原子。在一些实施方案中，连接基序包括线性序列中的4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或者20个非氢原子。

在一些实施方案中，连接基序由下式表示：

-Ak¹-Z^1-Ak²-Z²-Ak³-*

其中

Ak¹选自-(CR⁵R⁶)_k-；

Ak²选自-(CR⁵R⁶)_m-；

Ak³选自-(CR⁵R⁶)_n-；

k、m和n各自选自0至10；

R⁷是氢、任选取代的烷基、或者任选取代的烷基，其中1个或者多个-CH₂-单元被O替代，前提是两个相邻的-CH₂-单元不被同时替代；并且其中Z¹和Z²中的至少一个不是键，并且与VHL配体的键合点通过星号表示。

在一些实施方案中，连接基序是含有聚乙二醇的部分。

在一些实施方案中，-Ak¹-Z^1-Ak²-Z²-Ak³-*选自-(CR⁵R⁶)_n-O-(CR⁵R⁶)_m-*，其中n选自1至10，并且m选自1至10；并且与VHL配体的键合点通过星号表示。在一些进一步的实施方案中，所述n选自1至5(例如，1、2、3、4或者5)，并且所述m选自1至5(例如，1、2、3或者4)。

在一些实施方案中，连接基序-Ak¹-Z^1-Ak²-Z²-Ak³-*选自-(CR⁵R⁶)_n-NR⁷-(CR⁵R⁶)_m-*，其中n选自0至10，m选自0至10，R⁷是氢、任选取代的烷基、或者任选取代的烷基，其中1个或者多个-CH₂-单元被O替代，前提是两个相邻的-CH₂-单元不被同时替代；并且与VHL配体的键合点通过星号表示。在一些实施方案中，n选自1至10，m选自1至10。在一些进一步的实施方案中，所述n选自1至5(例如，1、2、3、4或者5)，而所述m选自1至5(例如，1、2、3、4或者5)。在一些实施方案中，所述n选自1至7，而所述m选自0至3。在一些实施方案中，R⁷是氢或者甲基。

在一些实施方案中，连接基序-Ak¹-Z^1-Ak²-Z²-Ak³-*选自-(CR⁵R⁶)_k-O-(CR⁵R⁶)_n-O-(CR⁵R⁶)_m-*，其中k选自1-10，n选自1-10，而m选自1-10；并且与VHL配体的键合点通过星号表示。在一些进一步的实施方案中，所述k选自1至5，所述n选自1至5(例如，1、2、3、4或者5)，且所述m选自1至5(例如，1、2，3、4或者5)。

在一些实施方案中，连接基序-Ak¹-Z^1-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中X、X1和X2在每种情况下为独立地CH或者N，并且其中与VHL配体的键合点通过星号表示。

其中与VHL配体的键合点通过星号表示。

或者/>其中R⁷各自独立地为氢、任选取代的烷基、或者任选取代的烷基，其中1个或者多个-CH₂-单元被O替代，前提是两个相邻的-CH₂-单位不被同时替代，其中与VHL配体的键合点通过星号表示。在一些实施方案中，R⁷是氢或者甲基。在一些实施方案中，k是1、2、3、4、5、6或者7，并且m是0、1、2、3、4或者5。在一些实施方案中，k是1、2、3、4、5、6或者7，并且m是0。在一些实施方案中，k是1、2、3、4或者5，并且m是1、2、3、4或5。在一些实施方案中，/>是或者/>

在一些实施方案中，连接基序是选自-(O-CH₂-CH₂)_n-O-和-(O-CH₂-CH₂)_n-N(R²³)-*的聚乙二醇，其中n选自1至20，并且R²³是任选取代的烷基或者任选取代的烷基，其中1个或者多个-CH₂-单元被O替代，前提是两个相邻的-CH₂-单位不被同时替代；并且其中与VHL配体的键合点通过星号表示。在一些实施方案中，n是1、2、3、4或者5。

WEE1激酶亲和力基序

Adavosertib(MK-1775，AZD1775)是一种强效且选择性的Wee1抑制剂，在无细胞测定中IC₅₀为5.2nM，所述无细胞测定如Hirai等人,“Small-molecule inhibition of Wee1kinase by MK-1775selectively sensitizes p53-deficient tumor cells to DNA-damaging agents”Mol.Can.Therap.2009.DOI:10.1158/1535-7163.MCT-09-0463中所述，其通过引用并入本文。

adavosertib

ZN-c3也是一种强效且选择性的Wee1抑制剂，在无细胞测定中IC₅₀为3.8nM，所述无细胞测定如Huang等人,“Discovery of ZN-c3,a Highly Potent and Selective Wee1inhibitor Undergoing Evaluation in Clinical Trials for the Treatment ofCancer”J.Med.Chem.2021.DOI:10.1021/acs.jmedchem.1c01121中所述，其通过引用并入本文。

ZN-c3

杂芳WEE1降解化合物

在一些实施方案中，本文提供了具有式(I)结构的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体：

其中，

R¹和R²、R²和R³或者R³和R⁴与它们连接的中间原子一起形成任选取代的5-6元环烷基或者任选取代的杂环基环；

L是-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*；

Ak¹选自-(CR⁵R⁶)_k-；

Ak²选自-(CR⁵R⁶)_m-；

Ak³选自-(CR⁵R⁶)_n-；

k、m和n各自选自0至10

其中Z¹和Z²中的至少一个不是键；或者

L是含有聚乙二醇的部分；并且

其中与VHL配体的键合点通过星号表示；并且

U是VHL配体。

在一些实施方案中，本文提供了式(I)化合物或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物。

在式(I)的一些实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴各自独立地选自氢、任选取代的直链或者支链C_1-6烷基、任选取代的C_1-3烷氧基、卤素、氨基、羟基和氰基，其中烷基被羟基任选取代。在一些实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴各自独立地选自氢、任选取代的直链或者支链C_1-6烷基、任选取代的C_1-3烷氧基和卤素，其中烷基被羟基任选取代。在一些实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴各自独立地选自氢和任选取代的直链或者支链C_1-6烷基，其中烷基被羟基任选取代。在一些实施方案中，R¹为任选取代的支链C_1-6烷基，其中烷基被羟基任选取代。在一些实施方案中，R¹是任选取代的支链C_1-6烷基，其中烷基被羟基任选取代，并且R²、R³和R⁴均是氢。在一些实施方案中，R¹是

在式(I)的一些实施方案中，R¹和R²、R²和R³或者R³和R⁴与它们连接的中间原子一起形成任选取代的5-6元环烷基或者任选取代的杂环基环，其中环烷基和杂环基被一个或者多个选自C_1-6烷基和羟基的取代基任选取代。在一些实施方案中，R¹和R²与它们连接的中间原子一起形成任选取代的5-6元环烷基或者任选取代的杂环基环，其中环烷基和杂环基被一个或者多个选自C_1-6烷基和羟基的取代基任选取代，并且R³和R⁴是氢。在一些实施方案中，R¹和R²与它们连接的中间原子一起形成任选取代的5-6元环烷基。在一些实施方案中，R¹和R²与它们连接的中间原子一起形成任选取代的5-6元环烷基，其中环烷基被一个或者多个选自C_1-6烷基和羟基的取代基任选取代。在一些实施方案中，R¹和R²与它们连接的中间原子一起形成取代的5-6元环烷基，其中环烷基被C_1-6烷基和羟基取代。在一些实施方案中，R¹和R²与它们连接的中间原子一起形成或者/>

在一些实施方案中，本文提供了具有式(I-a)结构的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体：

其中

L是-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*；

Ak¹选自-(CR⁵R⁶)_k-；

Ak²选自-(CR⁵R⁶)_m-；

Ak³选自-(CR⁵R⁶)_n-；

k、m和n各自选自0至10

R⁵和R⁶各自独立地选自氢、卤素、氨基、羟基、氰基、C_1-3烷

基和C₃环烷基；

Z¹和Z²各自独立地选自键、-O-、-NR⁷-、-S-、亚杂环基和亚环

烷基；

其中Z¹和Z²中的至少一个不是键；或者

L是含有聚乙二醇的部分；并且

其中与VHL配体的键合点通过星号表示；并且

U是VHL配体。

在一些实施方案中，本文提供了式(I-a)化合物或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物。

在一些实施方案中，本文提供了具有式(I-b)结构的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体：

其中

L是-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*；

Ak¹选自-(CR⁵R⁶)_k-；

Ak²选自-(CR⁵R⁶)_m-；

Ak³选自-(CR⁵R⁶)_n-；

k、m和n各自选自0至10

其中Z¹和Z²中的至少一个不是键；或者

L是含有聚乙二醇的部分；并且

其中与VHL配体的键合点通过星号表示；并且

U是VHL配体。

在一些实施方案中，本文提供了式(I-b)化合物或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物。

在式(I)、式(I-a)和式(I-b)的一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1、2、3、4、5或6并且m是1、2、3、4或5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是-(CR⁵R⁶)_n-NR⁷–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1、2、3、4、5或6并且m是1、2、3、4或5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1、2、3或4，n是1、2或3并且m是1或2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>并且每个R⁷独立地是氢或C_1-3烷基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>并且每个R⁷独立地是氢或C_1-3烷基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>其中k是1-7，m是0-5并且R⁷是氢或C_1-3烷基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>其中k是1-6，m是0-3并且R⁷是氢或C_1-3烷基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是其中k是1-6，m是0并且R⁷是氢或甲基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是

其中X、X1和X2各自独立地是CH或N并且其中每个k独立地是0、1或2，并且每个m独立地是0、1或2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是其中X1和X2各自独立地是CH或N并且其中每个k独立地是0、1或2，并且每个m独立地是0、1或2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是

其中X1、X2、X3和X4各自独立地是CH或N并且其中每个k独立地是0、1或2，每个m独立地是0、1或2，并且每个n独立地是0、1或2。在一些实施方案中，R⁵和R⁶独立地选自氢、卤素、氨基、羟基、氰基、C_1-3烷基和C₃环烷基。在一些实施方案中，R⁵和R⁶独立地选自氢、卤素、羟基、C_1-3烷基和C_1-3环烷基。在一些实施方案中，R⁵和R⁶独立地选自氢、卤素、C_1-3烷基和C₃环烷基。在一些实施方案中，R⁵和R⁶独立地选自氢、氟和甲基。在一些实施方案中，R⁵和R⁶都是氢。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是

其中X1和X2各自独立地是CH或N并且其中每个k独立地是0、1或2，并且每个m独立地是0、1或2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是

在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/> 在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>

在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>/>

在一些实施方案中，本文提供了具有式(I-a)结构的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体

其中

U是或者/>并且L是-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1、2、3、4、5或6并且m是1、2、3、4或5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是2并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是3并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是4并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是5并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是3。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是4。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是6并且m是5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是-(CR⁵R⁶)_n-NR⁷–(CR⁵R⁶)_m-*，其中n是1、2、3、4、5或6并且m是1、2、3、4或5。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1、2、3或4，n是1、2或3并且m是1或2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是1并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是2并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是3并且m是1。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是1并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是2并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是1，n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是2，n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是3，n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是–(CR⁵R⁶)_k-O––(CR⁵R⁶)_n-O–(CR⁵R⁶)_m-*，其中k是4，n是3并且m是2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/> 在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>并且每个R⁷独立地是氢或C_1-3烷基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>并且每个R⁷独立地是氢或C_1-3烷基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>其中k是1-7，m是0-5并且R⁷是氢或C_1-3烷基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>其中k是1-6，m是0-3并且R⁷是氢或C_1-3烷基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是其中k是1-6，m是0并且R⁷是氢或甲基。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>

其中X、X1和X2各自独立地是CH或N并且其中每个k独立地是0、1或2，并且每个m独立地是0、1或2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是其中X1和X2各自独立地是CH或N并且其中每个k独立地是0、1或2，并且每个m独立地是0、1或2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>

其中X1和X2各自独立地是CH或N并且其中每个k独立地是0、1或2，并且每个m独立地是0、1或2。在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/> 在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/> 在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>在一些实施方案中，-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是/>/>

在一些实施方案中，本文提供了具有式(I-b)结构的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体

其中

在一些实施方案中，本文所描述的化合物具有表1、表2或者表3中提供的结构。在一些实施方案中，本文所描述的化合物具有表1中提供的结构。

表1

/>

在一些实施方案中，本文所描述的化合物具有表2中提供的结构。

表2

/>

在一些实施方案中，如本文所描述的化合物具有表3中提供的结构。

表3

/>

化合物的制备

本文所描述反应中使用的化合物是根据本领域技术人员已知的有机合成技术，从市售化学品和/或者化学文献中描述的化合物开始制成的。“市售化学品”来自标准商业来源，包括Acros Organics(Pittsburgh,PA)、Aldrich Chemical(Milwaukee,WI,includingSigma Chemical and Fluka)、Apin Chemicals Ltd.(Milton Park,UK)、AvocadoResearch(Lancashire,U.K.)、BDH Inc.(Toronto,Canada)、Bionet(Cornwall,U.K.)、Chemservice Inc.(West Chester,PA)、Crescent Chemical Co.(Hauppauge,NY)、EastmanOrganic Chemicals,Eastman Kodak Company(Rochester,NY)、Fisher Scientific Co.(Pittsburgh,PA)、Fisons Chemicals(Leicestershire,UK)、Frontier Scientific(Logan,UT)、ICN Biomedicals,Inc.(Costa Mesa,CA)、Key Organics(Cornwall,U.K.)、Lancaster Synthesis(Windham,NH)、Maybridge Chemical Co.Ltd.(Cornwall,U.K.)、Parish Chemical Co.(Orem,UT)、Pfaltz&Bauer,Inc.(Waterbury,CN)、Polyorganix(Houston,TX)、Pierce Chemical Co.(Rockford,IL)、Riedel de Haen AG(Hanover,Germany)、Spectrum Quality Product,Inc.(New Brunswick,NJ)、TCI America(Portland,OR)、Trans World Chemicals,Inc.(Rockville,MD)和Wako Chemicals USA,Inc.(Richmond,VA)。

详细介绍用于制备本文所述化合物的反应物的合成或者提供对描述该制备的文章的参考的合适参考书和论文例如包括："Synthetic Organic Chemistry",John Wiley&Sons,Inc.,New York；S.R.Sandler等人,"Organic Functional Group Preparations,"第二版,Academic Press,New York,1983；H.O.House,"Modern Synthetic Reactions",第二版,W.A.Benjamin,Inc.Menlo Park,Calif.1972；T.L.Gilchrist,"HeterocyclicChemistry",第二版,John Wiley&Sons,New York,1992；J.March,"Advanced OrganicChemistry:Reactions,Mechanisms and Structure",第四版,Wiley-Interscience,NewYork,1992。其它详细介绍用于制备本文所述化合物的反应物的合成或者提供对描述该制备的文章的参考的合适参考书和论文例如包括：Fuhrhop,J.和Penzlin G."OrganicSynthesis:Concepts,Methods,Starting Materials",第二修订和扩大版(1994)JohnWiley&Sons ISBN:3-527-29074-5；Hoffman,R.V."Organic Chemistry,An IntermediateText"(1996)Oxford University Press,ISBN 0-19-509618-5；Larock,R.C."Comprehensive Organic Transformations:A Guide to Functional GroupPreparations"第二版(1999)Wiley-VCH,ISBN:0-471-19031-4；March,J."AdvancedOrganic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure"4th Edition(1992)JohnWiley&Sons,ISBN:0-471-60180-2；Otera,J.(editor)"Modern Carbonyl Chemistry"(2000)Wiley-VCH,ISBN:3-527-29871-1；Patai,S."Patai's 1992Guide to theChemistry of Functional Groups"(1992)Interscience ISBN:0-471-93022-9；Solomons,T.W.G."Organic Chemistry"第七版(2000)John Wiley&Sons,ISBN:0-471-19095-0；Stowell,J.C.,"Intermediate Organic Chemistry"第二版(1993)Wiley-Interscience,ISBN:0-471-57456-2；"Industrial Organic Chemicals:StartingMaterials and Intermediates:An Ullmann'sEncyclopedia"(1999)John Wiley&Sons,ISBN:3-527-29645-X,8卷；"Organic Reactions"(1942-2000)John Wiley&Sons,超过55卷；以及"Chemistry of Functional Groups"John Wiley&Sons,73卷。

特异性和类似反应物任选地通过由美国化学学会化学文摘服务编制的已知化学品的索引来识别，其可在大多数公共和大学图书馆以及通过在线数据库获得(请联系华盛顿特区的美国化学学会以获取更多详细信息)。目录中已知但未商业化的化学品可选择由定制化学合成公司制备，其中许多标准化学品供应公司(例如，上文列出的那些)提供定制合成服务。用于制备和选择本文所描述化合物的药用盐的参考文献是P.H.Stahl&C.G.Wermuth"Handbook of Pharmaceutical Salts",Verlag Helvetica Chimica Acta,Zurich,2002。

药物组合物

在某些实施方案中，本文所描述的杂芳族WEE1降解化合物(例如，式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物)作为纯化学品施用。在其它实施方案中，本文所描述的杂芳族WEE1降解化合物与基于所选择的给药途径和所描述的标准药物实践而选择的药学上合适或者可接受的载体(本文也称为药学上合适的(或者可接受的)赋形剂、生理上合适的(或者可接受的)赋形剂或者生理上合适的(或者可接受的)载体)组合，例如，在Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy(Gennaro,第二十一版Mack Pub.Co.,Easton,PA(2005))中描述。

本文所提供的药物组合物包含至少一种如本文所描述的杂芳族WEE1降解化合物(例如，式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物)或者其立体异构体、药学上可接受的盐、水合物或者溶剂化物，以及一种或者多种药学上可接受的载体。如果载体与组合物的其它成分相容并且对组合物的接受者(即，对象或者患者)无害，载体(或者赋形剂)是可接受的或者合适的。

一个实施方案提供了一种药物组合物，包含药学上可接受的赋形剂和式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物，或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物。

一个实施方案提供了一种制备药物组合物的方法，该方法包括混合式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物，或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物，以及药学上可接受的载体。

在某些实施方案中，如式(I)、式(I-a)或者式(I-b)所描述的杂芳族WEE1降解化合物或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物基本上是纯净的，因为它含有小于约5％、或者小于约1％或者小于约0.1％的其它有机小分子，如未反应的中间体或者例如在合成方法的一个或者多个步骤中产生的合成副产物。

合适的口服剂型包括，例如，片剂、丸剂、小袋、硬明胶或者软明胶胶囊、甲基纤维素或者易溶解于消化道中的其它合适材料。在一些实施方案中，使用合适的无毒固体载体，其包括，例如，药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。(例如，参见Remington:The Science and Practice of Pharmac(Gennaro,第二十一版Mack Pub.Co.,Easton,PA(2005))。

在一些实施方案中，如式(I)、式(I-a)或者式(I-b)所描述的杂芳族WEE1降解化合物，或者其药学上可接受的盐或者溶剂合物，被配制成通过注射施用。在一些情况下，注射制剂是水性制剂。在一些情况下，注射制剂是非水性制剂。在一些情况下，注射制剂是油基制剂，如芝麻油等等。

包含本文所描述的至少一种杂芳族WEE1降解化合物(例如，式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物)的组合物的剂量根据对象或者患者(例如，人类)的情况而不同。在一些实施方案中，此类因素包括一般健康状态、年龄和其它因素。

药物组合物以适合于治疗(或者预防)疾病的方式施用。适当的剂量和合适的施用持续时间和频率将由诸如患者的情况、患者疾病的类型和严重程度、活性成分的特定形式以及施用方法等因素决定。一般而言，适当的剂量和治疗方案提供的组合物的量足以提供治疗和/或者预防益处(例如，改善临床效果，如更频繁的完全或者部分缓解，或者更长的无病生存和/或者总生存期，或者减轻症状严重程度)。最佳剂量一般使用实验模型和/或者临床试验确定。最佳剂量取决于患者的身体质量、体重或者血容量。

治疗方法

一个实施方案提供了式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物，或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物用于治疗人或者动物体的方法。

一个实施方案提供了式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物，或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物用于治疗癌症或者肿瘤疾病的方法。

一个实施方案提供了式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物用于制造用于治疗癌症或者肿瘤疾病的药物的用途。

在一些实施方案中，本文描述了一种治疗有需要的患者的癌症的方法，包括向患者施用式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物，或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物。在一些实施方案中，本文描述了一种治疗有需要的患者的癌症的方法，包括向患者施用包括式(I)、式(I-a)或者式(I-b)化合物的药物组合物，或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物，以及药学上可接受的赋形剂。

本文提供了方法，其中药物组合物是口服施用的。本文提供了方法，其中药物组合物通过注射施用。

根据本公开，其它实施方案和用途对于本领域技术人员来说是显而易见的。以下实施例仅作为各种实施方案的说明而提供，不应被解释为以任何方式限制本发明。

实施例

I.化学合成

在一些实施方案中，本文所公开的化合物根据以下实施例合成。如下所示，以及在整个本发明描述中，除非另有说明，否则以下缩写应理解为具有以下含义：

℃ 摄氏度

δ_H 相对于四甲基硅烷的百万分之一低磁场化学位移

DCM 二氯甲烷(CH₂Cl₂)

DMF 二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

EA 乙酸乙酯

ESI 电喷雾电离

Et 乙基

g 克

h 小时

HPLC 高效液相色谱

Hz 赫兹

J 耦合常数(在核磁共振波谱中)

LCMS 液相色谱质谱

μ 微

m 多重(光谱)；米；毫

M 摩尔

M⁺ 母体分子离子

Me 甲基

MHz 兆赫兹

min 分钟

mol 摩尔；分子(以mol wt为单位)

mL 毫升

MS 质谱

nm 纳米

NMR 核磁共振

pH 氢电势；对水溶液酸度或者碱度的衡量

PE 石油醚

RT 室温

s 单峰(光谱)

t 三重峰(光谱)

T 温度

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

DIEA 二异丙基乙胺

HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟磷酸盐

化合物1

步骤1. 4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁酸甲酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5mL)溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)和4-溴丁酸甲酯(119.05mg，0.658mmol，1.6当量)。在50℃下将所得混合物搅拌3h。冷却至室温后，用H₂O(10mL)淬灭反应物，然后用DCM(3*10mL)萃取，用盐水(4*30mL)洗涤。合并和浓缩有机层。所得残留物通过TLC(1/14MeOH/DCM)纯化，得到4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁酸甲酯。

LC/MS:587.50[M+H]⁺。

步骤2. 4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁酸向4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁酸甲酯(116mg，0.198mmol，1.00当量)的THF(3mL)溶液中加入LiOH.H₂O(41.48mg，0.990mmol，5当量)和H₂O(3mL)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。使用2NHCl溶液将所得混合物的pH值调节至6。过滤所得混合物，得到4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁酸。

LC/MS:573.35[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物1)

向4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁酸(98mg，0.171mmol，1.00当量)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(155.85mg，1.539mmol，9当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(88.42mg，0.205mmol，1.2当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(88.42mg，0.205mmol，1.2当量)、HATU(84.59mg，0.222mmol，1.3当量)。在25℃下将混合物搅拌3h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3*15mL)萃取。合并有机层，用盐水(4*15mL)洗涤。获得的残留物通过TLC(1:8MeOH/DCM)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：含10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O的水，流动相B：CH₃CN(11min内20％至47％，0.1min内47％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至20％，1min内20％至20％；检测器：UV254 nm以提供化合物1(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(brs,1H),8.98(s,1H),8.83(s,1H),8.57(t,J＝6.0Hz,1H),8.02-8.07(m,1H),7.85-7.91(m,1H),7.72-7.78(m,1H),7.55-7.59(m,3H),7.35-7.47(m,4H),6.92(d,J＝9.2Hz,2H),5.60-5.74(m,1H),5.33(s,1H),5.11-5.17(m,1H),4.96-5.03(m,1H),4.78-4.88(m,1H),4.66-4.72(m,2H),4.53-4.60(m,1H),4.39-4.49(m,2H),4.30-4.40(m,1H),4.17-4.30(m,1H),3.62-3.73(m,2H),3.08-3.14(m,4H),2.47(s,4H),2.45(s,3H),2.24-2.33(m,3H),2.13-2.24(m,1H),2.00-2.09(m,1H),1.86-1.97(m,1H),1.64-1.76(m,2H),1.47(s,6H),0.95(s,9H)。

LC/MS:985.50[M+H]⁺。

化合物2

步骤1. 6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(280mg，0.575mmol)的DMF(5mL)溶液中加入6-溴己酸叔丁酯(158.98mg，0.633mmol)。在50℃下将所得混合物搅拌6h。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(4x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-5％MeOH/DCM)纯化，得到6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己酸叔丁酯。

LCMS:657.4[M+H]⁺。

步骤2. 6-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}己酸向6-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}己酸叔丁酯(260mg，0.396mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(1.5mL)。在25℃下将所得混合物搅拌1.5h。将反应物浓缩得到6-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}己酸。

步骤3.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物2)

向6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己酸(240mg，0.400mmol)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(121.28mg，1.200mmol)、HATU(197.48mg，0.520mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(189.22mg，0.440mmol)。在室温下将所得混合物搅拌4h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。获得的残留物通过TLC(DCM:MeOH/10:1)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，SunFirePrepC18，19*150mm5umHPrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/LNH₄HCO₃的水；B相：CH₃CN(28％CH₃CN在7min内达到58％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到58％CH₃CN，在0.9min内保持28％)；检测器，UV220&254nm，以提供58.0mg化合物2(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(brs,1H),8.99(s,1H),8.80(s,1H),8.51-8.57(m,1H),8.03-8.18(m,1H),7.84(d,J＝9.2Hz,1H),7.76-7.77(m,1H),7.53-7.63(m,3H),7.39-7.44(m,4H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),5.60-5.73(m,1H),5.31(s,1H),5.11-5.12(m,1H),5.00(d,J＝1.2Hz,1H),4.85(d,J＝1.2Hz,1H),4.64-4.73(m,2H),4.55(d,J＝9.6Hz,1H),4.40-4.48(m,2H),4.34-4.38(m,1H),4.20-4.26(m,1H),3.62-3.71(m,2H),3.30(s,2H),3.10(s,4H),2.50(s,2H),2.47(s,3H),2.22-2.32(m,3H),2.10-2.20(m,1H),2.02-2.04(m,1H),1.89-1.96(m,1H),1.39-1.61(m,10H),1.23-1.33(m,2H),0.93(s,9H)。

LCMS:1013.5,[M+H]⁺。

化合物3

步骤1.7-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]庚酸叔丁酯向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(280mg，0.575mmol)的DMF(5mL)溶液中加入6-溴己酸叔丁酯(167.86mg，0.633mmol)。在50℃下将所得混合物搅拌6h。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(4x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-6％MeOH/DCM)纯化，得到6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己酸叔丁酯。

LCMS:671.4[M+H]⁺。

步骤2.7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}庚酸

向7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}庚酸叔丁酯(280mg，0.418mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(1.5mL)。在25℃下将所得混合物搅拌1.5h。将反应物浓缩得到7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}庚酸。

步骤3.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(7-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物3)

向7-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]庚酸(240mg，0.39mmol)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(118.51mg，1.170mmol)、HATU(192.98mg，0.507mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(184.90mg，0.429mmol)，在室温下将所得混合物搅拌4h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。获得的残留物通过TLC(DCM:MeOH/10:1)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，Sun Fire PrepC18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/L NH₄HCO₃的水；B相：CH₃CN(31％CH₃CN在9min内达到57％，1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到57％CH₃CN，在0.9min内保持31％)；检测器，UV220&254nm，以提供66.9mg化合物3(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(7-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(brs,1H),8.99(s,1H),8.80(s,1H),8.51-8.57(m,1H),8.03-8.18(m,1H),7.84(d,J＝9.2Hz,1H),7.76-7.77(m,1H),7.53-7.63(m,3H),7.39-7.44(m,4H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),5.60-5.73(m,1H),5.31(s,1H),5.11-5.12(m,1H),5.00(d,J＝1.2Hz,1H),4.85(d,J＝1.2Hz,1H),4.64-4.73(m,2H),4.55(d,J＝9.6Hz,1H),4.40-4.48(m,2H),4.34-4.38(m,1H),4.20-4.26(m,1H),3.62-3.71(m,2H),3.30(s,2H),3.10(s,4H),2.50(s,2H),2.47(s,3H),2.22-2.32(m,3H),2.10-2.20(m,1H),2.02-2.04(m,1H),1.89-1.96(m,1H),1.39-1.61(m,10H),1.23-1.33(m,4H),0.93(s,9H)。

LCMS:1027.5[M+H]⁺。

化合物4

步骤1. 4-(2-烯丙基-2-(叔丁氧基羰基)肼基)-2-(甲基硫代)嘧啶-5-甲酸乙酯

向4-氯-2-(甲基硫代)嘧啶-5-甲酸乙酯(12.5g，53.722mmol)、1-烯丙基肼-1-甲酸叔丁酯(9.25g，53.722mmol)和DIEA(23.39mL，134.305mmol)的THF(120mL)溶液中加入。在70℃下将所得混合物搅拌18h。冷却至室温后。反应物通过硅胶色谱法(0-10％EtOAc/石油醚)浓缩纯化，得到4-(2-烯丙基-2-(叔丁氧基羰基)肼基)-2-(甲基硫代)嘧啶-5-甲酸乙酯。

LC/MS:369.2[M+H]⁺。

步骤2. 4-(2-烯丙基肼基)-2-(甲基硫代)嘧啶-5-甲酸乙酯

向4-(2-烯丙基-2-(叔丁氧基羰基)肼基)-2-(甲基硫代)嘧啶-5-甲酸乙酯(8.51g，23.097mmol)的DCM(20mL)溶液中加入TFA(13mL，175.019mmol)。在℃下将所得混合物搅拌1h。将反应物浓缩得到4-(2-烯丙基肼基)-2-(甲基硫代)嘧啶-5-甲酸乙酯。

LC/MS:269.1[M+H]⁺。

步骤3. 2-烯丙基-6-(甲基硫代)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

向4-(2-烯丙基肼基)-2-(甲基硫代)嘧啶-5-甲酸乙酯(6.123g，22.818mmol)的EtOH(60mL)溶液中，在0℃下搅拌混合物，然后加入6M NaOH(120mL)。在25℃下将所得混合物搅拌30min。将所得混合物的pH值用浓盐酸调节至1。通过浓缩和过滤除去乙醇后，得到的固体用乙醚洗涤，得到2-烯丙基-6-(甲基硫代)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:223.1[M+H]⁺。

步骤4. 1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-(甲基硫烷基)-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

向6-(甲基硫烷基)-2-(丙-2-烯-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(4.20g，18.896mmol)的1,4-二噁烷(50mL)溶液中加入2-(6-溴吡啶-2-基)丙-2-醇(5.31g，24.565mmol)，然后加入K₂CO₃(3.66g，26.454mmol)和CuI(3.60g，18.903mmol)，最后加入甲基[2-(甲基氨基)乙基]胺(3.33g，37.775mmol)。在100℃下将所得混合物在N₂保护下搅拌过夜。冷却至室温后，用H₂O(100mL)淬灭反应，然后过滤。所得混合物用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x100mL)洗涤，然后减压浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(35-45％EtOAc/石油醚)纯化，得到1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-(甲基硫烷基)-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:358.1[M+H]⁺。

步骤5. 1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-甲烷亚磺酰基-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

在0℃下向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-(甲基硫烷基)-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(4.48g，12.534mmol)的DCM(100mL)溶液中加入mCPBA(2.16g，12.517mmol)。在室温下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(50mL)淬灭反应。所得混合物用DCM(3x100mL)萃取，浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-5％MeOH/DCM)纯化，得到1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-甲烷亚磺酰基-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:374.1[M+H]⁺。

步骤6. 4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-甲烷亚磺酰基-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(4.5g，12.050mmol)的甲苯(80mL)溶液中加入DIEA(4.67g，36.151mmol)、4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.34g，12.050mmol)。在80℃下将所得混合物搅拌4h。降温至室温后，将反应物浓缩，溶解于DCM中，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-5％MeOH/DCM)纯化，得到4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:587.30[M+H]⁺。

步骤7. 4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯

向4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.80g，8.181mmol)的DCM(8mL)溶液中加入TFA(6mL)。在室温下将所得混合物搅拌1.5h。将所得混合物浓缩，溶解于DMF(6mL)中。残留物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱：C18硅胶；流动相：MeCN在水中，30min内梯度为0％至50％；检测器：UV254，220nm以得到1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:487.25[M+H]⁺。

步骤8. 8-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]辛酸乙酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(450mg，0.925mmol)的DMF(5mL)溶液中加入8-溴辛酸乙酯(255.51mg，1.018mmol)。在室温下将所得混合物搅拌过夜。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x100mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-5％MeOH/DCM)纯化，得到8-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]辛酸乙酯。

LC/MS:657.38[M+H]⁺。

步骤9. 8-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]辛酸向8-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]辛酸乙酯(250mg，0.381mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(1.5mL)。在室温下将所得混合物搅拌1.5h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取。用盐水(5x30mL)洗涤有机层，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(10-20％MeOH/DCM)纯化，得到8-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]辛酸。

LC/MS:629.4[M+H]⁺。

步骤10.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(8-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]辛酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物4)

向8-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]辛酸(250mg，0.398mmol)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(120.70mg，1.193mmol)、HATU(196.53mg，0.517mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(171.19mg，0.398mmol)，在室温下将所得混合物搅拌4h。用H₂O(10mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(5-15％MeOH/)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，SunFirePrepC18，19*150mm5umHPrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃H₂O的水；B相：CH₃CN(42％CH₃CN在7min内达到62％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到62％CH₃CN，在0.9min内保持42％)；检测器，UV220和254nm，以提供110.3mg

化合物4(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(8-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]辛酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.15(brs,1H),8.98(s,1H),8.83(s,1H),8.53-8.61(m,1H),7.93-8.16(m,1H),7.85(d,J＝6.9Hz,1H),7.71-7.81(m,1H),7.53-7.68(m,3H),7.31-7.48(m,4H),6.92(d,J＝6.6Hz,2H),5.59-5.84(m,1H),5.33(s,1H),5.13(s,1H),5.00(d,J＝6.0Hz,1H),4.82(d,J＝7.2Hz,1H),4.68(s,2H),4.55(d,J＝6.0Hz,1H),4.39-4.49(m,2H),4.35(brs,1H),4.17-4.28(m,1H),3.61-3.74(m,2H),3.30(s,2H),3.08(brs,4H),2.41-2.49(m,5H),2.22-2.36(m,3H),1.99-2.17(m,2H),1.84-1.96(m,1H),1.46(s,10H),1.27(s,6H),0.93(s,9H)。

LC/MS:1041.55[M+H]⁺。

化合物5

步骤1. 9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)壬酸乙酯

向2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(450mg，0.925mmol)的DMF(10mL)溶液中加入K₂CO₃(638mg，4.629mmol)和9-溴壬酸乙酯(268mg，1.017mmol)。在50℃下将所得混合物搅拌6h。反应通过LCMS监测。完成后，反应用H₂O(15ml)淬灭，用EA(15ml*3)萃取并且用盐水(4*20)洗涤。然后将有机层真空浓缩，残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，0～10％)纯化，得到9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)壬酸乙酯。

LCMS:671.6[M+H]⁺。

步骤2. 9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)壬酸

向9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)壬酸乙酯(300mg，0.447mmol)在THF(3mL)和H₂O(3mL)中的溶液中加入LiOH(54mg，2.238mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌16h。反应通过LCMS监测。完成后，用2N HCl调节反应至pH为6，用EA(15mL*3)萃取并且用Na₂SO₄干燥。然后将有机层真空浓缩得到9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)壬酸。

LCMS:643.6[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-1-((S)-2-(9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)壬酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物5)

将9-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]壬酸(250mg，0.389mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(167.46mg，0.389mmol，1.0当量)、HATU(192.24mg，0.506mmol，1.3当量)和TEA(196.77mg，1.945mmol，5.0当量)溶解于DMF(10ml)中。在室温下将混合物搅拌过夜。加入30mL水。溶液用EA(100ml*3)萃取，用(80ml*3)洗涤并且浓缩。粗产物用DCM/MeOH(10/1)通过TLC纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃H₂O的水；B相：CH₃CN(50％CH₃CN在7min内达到66％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到66％CH₃CN，在0.9min内保持50％)；检测器，UV220和254nm。这产生124.9mg化合物5(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(9-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]壬酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(brs,1H),8.98(s,1H),8.83(s,1H),8.53-8.61(m,1H),7.93-8.16(m,1H),7.85(d,J＝6.9Hz,1H),7.71-7.81(m,1H),7.53-7.68(m,3H),7.31-7.48(m,4H),6.92(d,J＝6.6Hz,2H),5.59-5.84(m,1H),5.33(s,1H),5.13(s,1H),5.00(d,J＝6.0Hz,1H),4.82(d,J＝7.2Hz,1H),4.68(s,2H),4.55(d,J＝6.0Hz,1H),4.39-4.49(m,2H),4.35(brs,1H),4.17-4.28(m,1H),3.61-3.74(m,2H),3.31(s,2H),3.09(brs,4H),2.41-2.49(m,5H),2.21-2.37(m,3H),1.99-2.17(m,2H),1.84-1.96(m,1H),1.46(s,10H),1.27(s,8H),0.94(s,9H)。

LCMS:1055.6[M+H]⁺。

化合物6

步骤1. 10-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)癸酸叔丁酯

向2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(450mg，0.925mmol)的DMF(10mL)溶液中加入K₂CO₃(638mg，4.629mmol)和10-溴癸酸叔丁酯(283mg，1.017mmol)。在50℃下将所得混合物搅拌6h。反应通过LCMS监测。完成后，反应用H₂O(15ml)淬灭，用EA(15mL*3)萃取并用盐水(4*20)洗涤。然后将有机层真空浓缩，残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，0～10％)纯化，得到10-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)癸酸叔丁酯。

LCMS:713.6[M+H]⁺。

步骤2. 10-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)癸酸向10-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)癸酸叔丁酯(300mg，0.421mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(1.5mL)。在25℃下将所得混合物搅拌2h。反应通过LCMS监测。完成后，将反应真空浓缩得到10-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)癸酸。

LCMS:657.6[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-1-((S)-2-(10-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)癸酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物6)

10-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]癸酸(250mg，0.381mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(163.88mg，0.381mmol，1.0当量)、HATU(188.14mg，0.495mmol，1.3当量)和TEA(192.57mg，1.905mmol，5.0当量)溶解于DMF(10ml)中。在室温下将混合物搅拌过夜。加入30mL水。溶液用EA(100ml*3)萃取，用(80ml*3)洗涤并且浓缩。粗产物用DCM/MeOH(10/1)通过TLC纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃H₂O的水；B相：CH₃CN(50％CH₃CN在7min内达到66％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到66％CH₃CN，在0.9min内保持50％)；检测器，UV220和254nm。这产生144.3mg化合物6(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(10-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]癸酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(brs,1H),8.98(s,1H),8.83(s,1H),8.53-8.61(m,1H),7.93-8.16(m,1H),7.85(d,J＝6.9Hz,1H),7.71-7.81(m,1H),7.53-7.68(m,3H),7.31-7.48(m,4H),6.92(d,J＝6.6Hz,2H),5.59-5.84(m,1H),5.33(s,1H),5.13(s,1H),5.00(d,J＝6.0Hz,1H),4.82(d,J＝7.2Hz,1H),4.68(s,2H),4.55(d,J＝6.0Hz,1H),4.39-4.49(m,2H),4.35(brs,1H),4.17-4.28(m,1H),3.61-3.76(m,2H),3.33(s,2H),3.09(brs,4H),2.41-2.47(m,5H),2.21-2.37(m,3H),1.99-2.17(m,2H),1.84-1.96(m,1H),1.46(s,10H),1.26(s,10H),0.94(s,9H)。

LCMS:1069.6[M+H]⁺。

化合物7

步骤1. 11-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)十一酸甲酯

向2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(450mg，0.925mmol)的DMF(10mL)溶液中加入K₂CO₃(638mg，4.629mmol)和11-溴十一酸甲酯(282mg，1.017mmol)。在50℃下将所得混合物搅拌6h。反应通过LCMS监测。完成后，用H₂O(15ml)淬灭反应，用EA(15ml*3)萃取并且用盐水(4*20)洗涤。然后将有机层真空浓缩，残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，0～10％)纯化，得到11-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)十一酸甲酯。

LCMS:685.6[M+H]⁺。

步骤2. 11-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)十一烷酸

向9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)壬酸乙酯(300mg，0.438mmol)在THF(3mL)和H₂O(3ml)中的溶液中加入LiOH(52.63mg，2.19mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌16h。反应通过LCMS监测。完成后，用2N HCl调节反应pH至6，用EA(15ml*3)萃取并且用Na₂SO₄干燥。然后将有机层真空浓缩得到11-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)十一烷酸。

LCMS:671.6[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-1-((S)-2-(11-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)十一烷酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物7)

11-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]十一烷酸(250mg，0.373mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(160.45mg，0.373mmol，1.0当量)、HATU(184.2mg，0.485mmol，1.3当量)和TEA(188.55mg，1.865mmol，5.0当量)溶解于DMF(10ml)中。在室温下将混合物搅拌过夜。加入30mL水。溶液用EA(100ml*3)萃取，用(80ml*3)洗涤并且浓缩。粗产物用DCM/MeOH(10/1)通过TLC纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃H₂O的水；B相：CH₃CN(54％CH₃CN在7min内达到74％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到74％CH₃CN，在0.9min内保持54％)；检测器，UV220和254nm。这产生127.9mg化合物7(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(11-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]十一烷酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(brs,1H),8.98(s,1H),8.82(s,1H),8.46-8.63(m,1H),7.95-8.18(m,1H),7.85(d,J＝6.9Hz,1H),7.71-7.81(m,1H),7.53-7.68(m,3H),7.31-7.48(m,4H),6.92(d,J＝6.6Hz,2H),5.59-5.84(m,1H),5.33(s,1H),5.13(s,1H),5.00(d,J＝6.0Hz,1H),4.82(d,J＝7.2Hz,1H),4.68(s,2H),4.55(d,J＝6.0Hz,1H),4.39-4.49(m,2H),4.35(brs,1H),4.17-4.28(m,1H),3.61-3.76(m,2H),3.32(s,2H),3.09(brs,4H),2.41-2.48(m,5H),2.21-2.38(m,3H),1.99-2.17(m,2H),1.87-1.96(m,1H),1.46(s,10H),1.26(s,12H),0.94(s,9H)。

LCMS:1083.6[M+H]⁺。

化合物8

步骤1.(E)-4-(2-(苄氧基)乙氧基)丁-2-烯酸甲酯

在-78℃下，在N₂气体中，向DMSO(800mg，10.2mmol)的DCM(15mL)溶液中缓慢加入草酰氯(970mg，7.65mmol)。将所得混合物在此温度下搅拌0.5h。然后加入2-(2-(苄氧基)乙氧基)乙-1-醇(1g，5.1mmol)并且在此温度下搅拌1h。随后，加入TEA(2.58g，25.5mmol)。然后使反应缓慢升温至室温并且搅拌1h。反应通过TLC监测。完成后，加入2-(三苯基-l5-亚磷烷基)乙酸甲酯(2.05g，6.12mmol)，并且在室温下搅拌反应2h。反应通过LCMS监测。用H₂O(20mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取，并将有机层真空浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-15％EtOAc/石油醚)纯化，得到(E)-4-(2-(苄氧基)乙氧基)丁-2-烯酸甲酯。

LCMS:251.1[M+H]⁺。

步骤2. 4-(2-羟基乙氧基)丁酸甲酯

向(E)-4-(2-(苄氧基)乙氧基)丁-2-烯酸甲酯(900mg，3.6mmol)的MeOH(15mL)溶液中加入10％Pd/C(800mg)。在10atm的H₂气氛下，在室温下将所得混合物搅拌16h。反应通过LCMS监测。完成后，将混合物过滤并且真空浓缩。得到550mg的4-(2-羟基乙氧基)丁酸甲酯。

LCMS:163.1[M+H]⁺。

步骤3. 4-(2-碘乙氧基)丁酸甲酯

向4-(2-羟基乙氧基)丁酸甲酯(300mg，1.850mmol)的DCM(5mL)溶液中加入咪唑(151.11mg，2.220mmol)、I₂(516.43mg，2.035mmol)、PPh₃(533.68mg，2.035mmol)，在室温下将所得混合物搅拌过夜，用Na₂S₂O₃(20mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取，用盐水(2x30mL)洗涤。合并然后浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(10-20％EtOAc/石油醚)纯化，得到4-(2-碘乙氧基)丁酸甲酯。

步骤4. 4-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)丁酸甲酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(300mg，0.617mmol)的DMF(5mL)溶液中加入K₂CO₃(426.05mg，3.085mmol)、4-(2-羟基乙氧基)丁酸甲酯(138.53mg，0.678mmol)，在室温下将所得混合物搅拌过夜。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-6％MeOH/DCM)纯化，得到200mg的4-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丁酸甲酯。

LC/MS:631.3[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-1-((S)-2-(十二-11-炔酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺向4-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丁酸甲酯(200mg，0.317mmol)在TFA(3mL)、H₂O(3mL)中的溶液中加入LiOH(37.97mg，1.585mmol)。在室温下将所得混合物搅拌过夜。用2N HCl将反应物酸化至pH 2-4。将所得混合物过滤并且浓缩以得到4-(2-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]乙氧基)丁酸。

LC/MS:617.3[M+H]⁺。

步骤6.(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物8)

向4-(2-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]乙氧基)丁酸(240mg，0.389mmol)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(118.14mg，1.167mmol)、HATU(192.36mg，0.506mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(184.31mg，0.428mmol)，在室温下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。获得的残留物通过TLC(DCM:MeOH/6:1)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，SunFire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含50mmol/L NH₄HCO₃的水；B相：CH₃CN(21％CH₃CN在9min内达到51％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到51％CH₃CN，在0.9min内保持21％)；检测器，UV220和254nm以提供128.3mg化合物8(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[4-(2-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]乙氧基)丁酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(brs,1H),8.99(s,1H),8.80(s,1H),8.51-8.57(m,1H),8.03-8.18(m,1H),7.88(d,J＝9.6Hz,1H),7.76-7.77(m,1H),7.53-7.63(m,3H),7.39-7.44(m,4H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),5.60-5.73(m,1H),5.31(s,1H),5.11-5.12(m,1H),5.00(d,J＝1.2Hz,1H),4.85(d,J＝1.2Hz,1H),4.64-4.73(m,2H),4.54(d,J＝2.4Hz,1H),4.40-4.48(m,2H),4.34-4.38(m,1H),4.20-4.26(m,1H),3.62-3.71(m,2H),3.45-3.56(m,2H),3.35-3.40(m,2H),3.10(s,4H),2.51 -2.60(m,6H),2.39(s,3H)2.23-2.30(m,1H),2.16-2.23(m,1H),2.10-2.20(m,1H),2.02-2.04(m,1H),1.63-1.78(m,2H),1.45(s,6H),0.81-1.00(m,9H)。

LC/MS:1029.5[M+H]⁺。

化合物9

步骤1. 3-(4-羟基丁氧基)丙酸叔丁酯

在0℃下向1,4-丁二醇(500mg，5.548mmol)的DMF(5mL)溶液中加入NaH(199.71mg，8.322mmol)。在室温下将所得混合物搅拌0.5h。然后加入3-溴丙酸叔丁酯，在室温下搅拌反应1h。用H₂O(15mL)淬灭反应。然后用EtOAc(3x20mL)萃取所得混合物。合并的有机层用盐水(4x30mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-30％EtOAc/石油醚)纯化，得到3-(4-羟基丁氧基)丙酸叔丁酯，为无色油状。

步骤2. 3-(4-碘丁氧基)丙酸叔丁酯

向3-(4-羟基丁氧基)丙酸叔丁酯(450mg，2.061mmol)的DCM(5mL)溶液中加入咪唑(168.41mg，2.474mmol)、I₂(575.54mg，2.268mmol)和PPh₃(594.76mg，2.268mmol)。在室温下将所得混合物搅拌过夜，用Na₂S₂O₃(20mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取，用盐水(2x30mL)洗涤，合并然后浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(10-20％EtOAc/石油醚)纯化，得到3-(4-碘丁氧基)丙酸叔丁酯。

步骤3. 3-(4-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丁氧基)丙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(250mg，0.514mmol)的DCM(5mL)溶液中加入K₂CO₃(355.04mg，2.569mmol)、3-(4-碘丁氧基)丙酸叔丁酯(185.48mg，0.565mmol)，在室温下将所得混合物搅拌过夜。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x50mL)洗涤，然后浓缩。通过硅胶色谱法(0-5％MeOH/DCM)纯化所得残留物，得到240mg的3-(4-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丁氧基)丙酸叔丁酯。

LCMS:687.4[M+H]⁺。

步骤4. 3-(4-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丁氧基)

向3-(4-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丁氧基)丙酸叔丁酯(280mg，0.408mmol)、DCM(5mL)、TFA(2mL)的溶液，在室温下将所得混合物搅拌1h并且浓缩，得到3-(4-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丁氧基)丙酸。

LC/MS:631.3[M+H]⁺

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丁氧基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物9)

向3-(4-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丁氧基)丙酸(270mg，0.428mmol)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(129.95mg，1.284mmol)、HATU(211.59mg，0.556mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(202.74mg，0.471mmol)，在室温下将所得混合物搅拌4h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。获得的残留物通过TLC(DCM:MeOH/10:1)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱SunFire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含50mmol/L NH₄HCO₃的水；B相：CH₃CN(36％CH₃CN在9min内达到56％，1min内达到100％CH₃CN，1min内保持100％，在0.1min内下降到56％CH₃CN，在0.9min内保持36％)；检测器，UV220和254nm以提供182.2mg化合物9(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丁氧基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),8.99(s,1H),8.80(s,1H),8.51–8.57(m,1H),8.03–8.18(m,1H),7.84(d,J＝9.2Hz,1H),7.76–7.77(m,1H),7.53–7.63(m,3H),7.39–7.44(m,4H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),5.60–5.73(m,1H),5.31(s,1H),5.11–5.12(m,1H),5.00(d,J＝1.2Hz,1H),4.85(d,J＝1.2Hz,1H),4.64–4.73(m,2H),4.57(d,J＝9.6Hz,1H),4.36–4.59(m,3H),4.19–4.28(m,1H),3.52–3.71(m,5H),3.30–3.41(m,2H),3.04–3.12(m,4H),2.48–2.60(m,3H),2.45(s,3H),2.29–2.38(m,3H),2.00–2.10(m,1H),1.90–1.98(m,1H),1.49–1.53(m,4H),1.48(s,7H),0.94(s,9H)。

LCMS:1043.5[M+H]⁺。

化合物10

步骤1. 4-(3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)丁酸甲酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(250.00mg，0.514mmol)的DMF(4mL)溶液中加入4-(3-碘丙氧基)丁酸甲酯(161.70mg，0.565mmol)和K₂CO₃(355.04mg，2.569mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌5h。用水(5mL)淬灭反应物。所得混合物用乙酸乙酯(3*15mL)萃取。合并有机层，用盐水(4*15mL)洗涤并且浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％DCM/MeOH)纯化，得到4-(3-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丙氧基)丁酸甲酯。

LC/MS:645.3[M+H]⁺。

步骤2.4-(3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)丁酸

向4-(3-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丙氧基)丁酸甲酯(146.00mg，0.226mmol)的THF(2mL)和H₂O(2mL)的溶液中加入LiOH.H₂O(47.51mg，1.132mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌16h。用水(5mL)淬灭反应。使用HCl溶液(2M)将水相的pH值调节至5，然后过滤并且浓缩得到4-(3-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丙氧基)丁酸。

LC/MS:631.25[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物10)

添加(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(82.60mg，0.192mmol)、HATU(86.20mg，0.227mmol)和DIEA(67.62mg，0.523mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌3h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并有机层，用盐水(4x15mL)洗涤并且浓缩。所得残留物通过TLC(1/10MeOH/DCM)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，Xselect CSHOBD柱30*150mm 5um；流动相A：含10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃H₂O的水；B相：CH₃CN(25％CH₃CN在9min内达到55％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到25％CH₃CN，在0.9min内保持25％)；检测器，UV220和254nm。这产生77.2mg化合物10(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[4-(3-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丙氧基)丁酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(brs,1H),9.00(s,1H),8.82(s,1H),8.55(t,J＝4Hz,1H),7.99-8.18(m,1H),7.87(d,J＝12Hz,1H),7.68-7.82(m,1H),7.51-7.67(m,3H),7.37-7.50(m,4H),6.82-6.92(m,2H),5.55-5.75(m,1H),5.31(s,1H),5.10-5.13(m,1H),4.97-5.05(m,1H),4.80-4.90(m,1H),4.61-4.75(m,2H),4.51-4.62(m,1H),4.40-4.50(m,2H),4.35-4.39(m,1H),4.12-4.30(m,1H),3.66-3.80(m,2H),3.37-3.42(m,2H),3.32(s,2H),3.02-3.20(m,4H),2.44(s,6H),2.28-2.40(m,4H),2.18-2.22(m,1H),1.99-2.11(m,1H),1.81-1.95(m,1H),1.60-1.80(m,4H),1.46(s,6H),0.94(s,9H)。LC/MS:1043.65[M+H]⁺。

化合物11

步骤1. 2-((6-羟基己基)氧基)乙酸叔丁酯

在0℃下向己-1,6-二醇(1.00g，8.462mmol)的DMF(20mL)溶液中加入NaH(0.51g，12.693mmol)。在室温下将所得混合物搅拌0.5h。然后加入2-溴乙酸丁酯(1.65mL，8.462mmol)，在室温下将所得混合物搅拌1h。用H₂O(20mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(4x100mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％EtOAc/石油醚)纯化，得到2-((6-羟基己基)氧基)乙酸叔丁酯。

LC/MS:233.2[M+H]⁺。

步骤2. 2-((6-碘己基)氧基)乙酸叔丁酯

向2-[(6-羟基己基)氧基]乙酸叔丁酯(500mg，2.152mmol)的DCM(5mL)溶液中加入咪唑(175.82mg，2.583mmol)、I₂(600.87，2.367mmol)和PPh₃(620.94mg，2.367mmol)。在室温下将所得混合物搅拌过夜。用Na₂S₂O₃(20mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取，用盐水(2x30mL)洗涤。合并然后浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(10-20％EtOAc/石油醚)纯化，得到2-[(6-碘己基)氧基]乙酸叔丁酯。

步骤3. 2-((6-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)己基)氧基)乙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(280mg，0.575mmol)的溶液中加入K₂CO₃(397.65mg，2.877mmol)、4-(2-羟基乙氧基)丁酸甲酯(216.62mg，0.633mmol)，在室温下将所得混合物搅拌过夜。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-6％MeOH/DCM)纯化，得到2-[(6-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}己基)氧基]乙酸叔丁酯。

LC/MS:702.4[M+H]⁺。

步骤4. 2-((6-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)己基)氧基)乙酸

向2-[(6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己基)氧基]乙酸叔丁酯(220mg，0.314mmol)、DCM(5mL)、TFA(2mL)的溶液，在室温下将所得混合物搅拌1.5h并且浓缩，得到[(6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己基)氧基]乙酸，为黄色固体。

LCMS:645.3[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((6-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)己基)氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物11)

向[(6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己基)氧基]乙酸(200mg，0.310mmol)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(94.16mg，0.930mmol)、HATU(153.32mg，0.403mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(146.91mg，0.341mmol)。在室温下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。获得的残留物通过TLC(DCM:MeOH/10:1)纯化，然后在以下条件下通过Prep-HPLC纯化：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)4；流动相，A相：含50mmol/L NH₄HCO₃的水；B相：CH₃CN(38％CH₃CN在9min内达到68％，1min内达到100％CH₃CN，1min内保持100％，在0.1min内下降到68％CH₃CN，在0.9min内保持38％)；检测器，UV220和254nm，以提供136.4mg化合物11(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-[(6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己基)氧基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(brs,1H),8.99(s,1H),8.80(s,1H),8.50-8.70(m,1H),7.90-8.10(m,1H),7.71-7.80(m,1H),7.52-7.63(m,3H),7.31-7.43(m,5H),6.81-6.97(m,2H),5.51-5.79(m,1H),5.29(s,1H),5.15(s,1H),4.98(d,J＝1.2Hz,1H),4.85(d,J＝1.2Hz,1H),4.63-4.72(m,2H),4.55(d,J＝1.2Hz,1H),4.32-4.50(m,3H),4.22-4.30(m,1H),3.87-3.98(m,2H),3.60-3.70(m,2H),3.47-3.52(m,2H),3.00-3.12(m,4H),2.40-2.50(m,6H),2.13-2.40(m,3H),2.00-2.10(m,1H),1.89-1.96(m,1H),1.52-1.62(m,2H),1.46(s,8H),1.30-1.40(m,4H),0.95(s,9H)。

LC/MS:1057.33[M+H]⁺。

化合物12

步骤1. 2-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丁氧基)乙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5.00mL)溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)、2-(4-碘丁氧基)乙酸叔丁酯(154.96mg，0.493mmol，1.2当量)。在50℃下将所得混合物搅拌5h。反应用H₂O(10mL)淬灭并且用EA(3x20mL)萃取，用盐水(3x20mL)洗涤，合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱，得到2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)乙酸叔丁酯(240mg，79.32％)。

LC/MS:673.3[M+H]⁺。

步骤2. 2-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丁氧基)乙酸

向2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)乙酸叔丁酯(240mg，0.357mmol，1.00当量)的DCM(5mL，78.650mmol，220.49当量)溶液中加入TFA(3mL，40.389mmol，113.23当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。反应物通过反相柱纯化得到(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)乙酸。

LC/MS:617.3[M+H]⁺。

步骤3. 2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丁氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物12)

向(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)乙酸(220mg，0.357mmol，1.00当量)的DMF(5.00mL)溶液中加入TEA(180.48mg，1.785mmol，5当量)、HATU(176.33mg，0.464mmol，1.3当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(168.95mg，0.393mmol，1.1当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。反应用H₂O(10mL)淬灭并且用EA(3x40mL)萃取，用盐水(3x20mL)洗涤，合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱得到粗产物，粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：11min内35％B至45％B，1min内45％至100％，1min内保持100％，1min降至35％，1min内保持35％；波长：254nm以得到化合物12(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.12(brs,1H),9.00(s,1H),8.82(s,1H),8.58-8.68(m,1H),8.00-8.10(m,1H),7.75(s,1H),7.56-7.60(m,3H),7.35-7.41(m,5H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),5.65-5.67(m,1H),5.32(s,1H),5.18(s,1H),4.96-5.00(m,1H),4.75-4.90(m,1H),4.60-4.72(m,2H),4.57(d,J＝9.6Hz,1H),4.42-4.52(m,1H),4.30-4.41(m,2H),4.20-4.29(m,1H),3.90-4.03(m,2H),3.58-3.72(m,2H),3.44-3.55(m,2H),3.00-3.15(m,4H),2.50(s,3H),2.28-2.45(m,6H),2.00-2.12(m,1H),1.85-1.95(m,1H),1.58-1.60(m,4H),1.46(s,6H),0.96(s,9H)。

LCMS:1029.5[M+H]⁺。

化合物13

步骤1. 3-[3-(苄氧基)丙氧基]丙酸叔丁酯

向3-(苄氧基)丙-1-醇(1.5g，9.024mmol，1.00当量)的DCM(10mL，157.300mmol，17.43当量)溶液中加入3-溴丙酸叔丁酯(2.83g，13.536mmol，1.5当量)、NaOH(10mL，250.018mmol，27.71当量)和四丁基氯化铵(2.51g，9.024mmol，1当量)。将混合物在25℃搅拌过夜。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用DCM(3x15mL)萃取。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶柱色谱纯化，用(50％PE/EA)洗脱，得到3-[3-(苄氧基)丙氧基]丙酸叔丁酯。

步骤2. 3-(3-碘丙氧基)丙酸叔丁酯

向3-[3-(苄氧基)丙氧基]丙酸叔丁酯(810mg，2.751mmol，1.00当量)的MeOH(10mL，246.989mmol，89.77当量)溶液中加入Pd/C(600mg，5.638mmol，2.05当量)。将混合物在氢气气氛中保存并且在25℃下搅拌过夜，过滤并且浓缩，得到3-(3-碘丙氧基)丙酸叔丁酯(549mg，63.51％)，为无色油状。

步骤3. 3-(3-碘丙氧基)丙酸叔丁酯

向3-(3-羟基丙氧基)丙酸叔丁酯(549mg，2.688mmol，1.00当量)的DCM(5mL，78.650mmol，29.26当量)溶液中加入PPh₃(775.43mg，2.957mmol，1.1当量)、咪唑(219.56mg，3.226mmol，1.2当量)、I₂(750.37mg，2.957mmol，1.1当量)。在25℃下将所得混合物搅拌4h。用Na₂S₂O₃(50mL)淬灭反应。所得混合物用DCM(3x50mL)萃取。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到3-(3-碘丙氧基)丙酸叔丁酯。

步骤4. 3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)丙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，157.19当量)的溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)、1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)。将所得混合物在50℃下搅拌3h。冷却至室温后，用水(10mL)淬灭反应。所得混合物用EA(3x10mL)萃取，用盐水(6*10mL)洗涤。合并和浓缩有机层。残留物通过Prep-TLC(DCM/MeOH 14/1)纯化，得到3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)丙酸叔丁酯。

LC/MS:673.40[M+H]⁺。

步骤5. 3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)丙酸向3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)丙酸叔丁酯(145mg，0.216mmol，1.00当量)的DCM(5mL，78.650mmol，364.95当量)溶液中加入TFA(2mL，26.926mmol，124.94当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。将反应浓缩得到3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)丙酸。

LC/MS:617.30M+H]⁺。

步骤6.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物13)

向3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)丙酸(130mg，0.211mmol，1.00当量)的DMF(4mL)溶液中加入TEA(106.65mg，1.055mmol，5当量)、HATU(104.19mg，0.274mmol，1.3当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(108.91mg，0.253mmol，1.2当量)。将混合物在25℃下搅拌3h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并有机层，然后用盐水(4x15mL)洗涤。获得的残留物通过TLC(1:8MeOH/DCM)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，XBridge Prep C18 OBD柱，30*100mm，5μm；流动相A：含10mmol/LNH₄HCO₃的水，流动相B：CH₃CN(10min内21％至41％，0.1min内41％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至21％，1min内21％至21％；检测器，UV254 nm以提供16.7mg化合物13(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.10(brs,1H),8.95(s,1H),8.81(s,1H),8.54-8.60(m,1H),7.99-8.10(m,1H),7.71-7.98(m,1H),7.70-7.80(m,1H),7.50-7.68(m,3H),7.30-7.41(m,4H),6.89(d,J＝9.3Hz,2H),5.49-5.80(m,1H),5.29(s,1H),5.10-5.19(m,1H),4.90-5.00(m,1H),4.75-4.89(m,1H),4.61-4.70(m,2H),4.53-4.57(m,1H),4.30-4.50(m,3H),4.19-4.29(m,1H),3.48-3.79(m,4H),3.35-3.42(m,2H),3.06(brs,4H),2.45-2.47(m,5H),2.42(s,3H),2.30-2.39(m,3H),1.99-2.10(m,1H),1.82-1.98(m,1H),1.60-1.73(m,2H),1.44(s,6H),0.93(s,9H)。LCMS:1029.70[M+H]⁺。

化合物14

步骤1. 2-((2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)甲氧基)乙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(50mg，0.103mmol，1.00当量)的DMF(5.00mL)溶液中加入K₂CO₃(71.01mg，0.515mmol，5当量)、2-[(2-碘乙氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯(35.73mg，0.113mmol，1.1当量)。将所得混合物在50℃下搅拌5h。反应用H₂O(10mL)淬灭并且用EA(3x20mL)萃取，用盐水(3x20mL)洗涤，合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱得到2-[(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯。

LC/MS:675.3[M+H]⁺。

步骤2. 2-((2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)甲氧基)乙酸

向2-[(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯(45mg，0.067mmol，1.00当量)的DCM(3mL)溶液中加入TFA(1mL)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。反应物通过反相柱纯化得到[(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)甲氧基]乙酸。

LC/MS:619.3[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)甲氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物14)

向[(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)甲氧基]乙酸(135mg，0.218mmol，1.00当量)的DMF(5.00mL)溶液中加入TEA(110.40mg，1.090mmol，5当量)、HATU(107.86mg，0.283mmol，1.3当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(112.74mg，0.262mmol，1.2当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。反应用H₂O(10mL)淬灭，用EA(3x40mL)萃取，用盐水(3x20mL)洗涤。合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱得到粗产物，粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH₄HCO₃)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：9min内53％B至60％B，然后在1min内60％至100％，1min内保持100％，1min内降至53％，1min内保持53％；波长：254nm以得到化合物14(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)甲氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.18(brs,1H),9.00(s,1H),8.83(s,1H),8.61-8.63(m,1H),8.00-8.10(m,1H),7.74-7.76(m,1H),7.48-7.62(m,4H),7.40(s,4H),6.91(d,J＝9.2Hz,2H),5.66-5.67(m,1H),5.33(s,1H),5.18(s,1H),4.92-5.02(m,1H),4.60-4.85(m,6H),4.69(d,J＝5.2Hz,1H),4.30-4.52(m,3H),4.18-4.29(m,1H),3.95-4.15(m,2H),3.55-3.72(m,4H),3.08-3.10(m,4H),2.51-2.58(m,5H),2.44(s,3H),2.00-2.15(m,1H),1.82-1.92(m,1H),1.46(s,6H),0.96(s,9H)。

LC/MS:1031.5[M+H]⁺。

化合物15

步骤1. 2-[(5-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}戊基)氧基]乙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，157.19当量)的溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)、2-[(5-碘戊基)氧基]乙酸叔丁酯(148.39mg，0.452mmol，1.1当量)。将所得混合物在50℃下搅拌3h。冷却至室温后，用水(10mL)淬灭反应。所得混合物用EA(3x10mL)萃取，用盐水(6*10mL)洗涤。合并和浓缩有机层。残留物通过Prep-TLC(DCM/MeOH 14/1)纯化，得到2-[(5-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}戊基)氧基]乙酸叔丁酯。

LC/MS:687.35[M+H]⁺。

步骤2.[(5-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}戊基)氧基]乙酸

向2-[(5-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}戊基)氧基]乙酸叔丁酯(152mg，0.221mmol，1.00当量)的DCM(5mL，78.650mmol，355.40当量)溶液中加入TFA(2mL，26.926mmol，121.67当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。将反应物浓缩得到[(5-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}戊基)氧基]乙酸。

LC/MS:631.25M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[(5-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}戊基)氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物15)

向[(5-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}戊基)氧基]乙酸(140mg，0.222mmol，1.00当量)的DMF(4mL，51.687mmol，232.87当量)溶液中加入TEA(202.14mg，1.998mmol，9当量)、HATU(109.71mg，0.289mmol，1.3当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(114.68mg，0.266mmol，1.2当量)。将混合物在25℃下搅拌3h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并有机层，用盐水(4x15mL)洗涤。获得的残留物通过TLC(1:8MeOH/DCM)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，XBridge Prep C18OBD柱，30*100mm，5μm；流动相A：含10mmol/L NH₄HCO₃的水，流动相B：CH₃CN(10min内30％至42％，0.1min内42％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至30％，1min内30％至30％；检测器，UV254nm以提供74.8mg化合物15(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[(5-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}戊基)氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.10(brs,1H),8.95(s,1H),8.81(s,1H),8.59(t,J＝6.0Hz,1H),7.98-8.02(m,1H),7.71-7.74(m,1H),7.50-7.60(m,3H),7.30-7.42(m,5H),6.90(d,J＝9.0Hz,2H),5.56-5.72(m,1H),5.29(s,1H),5.13-5.14(m,1H),4.97(d,J＝12Hz,1H),4.77-4.90(m,1H),4.60-4.72(m,2H),4.50-4.59(m,1H),4.13-4.49(m,4H),3.90(s,2H),3.64-3.88(m,2H),3.48(t,J＝6.3Hz,2H),3.04(brs,4H),2.42-2.49(m,7H),2.20-2.32(m,2H),1.99-2.10(m,1H),1.82-1.98(m,1H),1.51-1.61(m,2H),1.30-1.50(m,11H),0.91(s,9H)。

LC/MS:1044.10[M+H]⁺。

化合物16

步骤1. 5-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)戊酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF溶液中加入5-(2-碘乙氧基)戊酸叔丁酯(148.39mg，0.452mmol，1.1当量)，将所得混合物在50℃下搅拌4h。用H₂O(mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取。合并的有机层用盐水(4x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过制备TLC(MeOH:DCM＝1:8)纯化，得到5-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)戊酸叔丁酯。

LC/MS:687.39[M+H]⁺。

步骤2. 5-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙基-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)戊酸向5-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)戊酸叔丁酯(175mg，0.255mmol，1.00当量)的DCM(5mL)溶液加入TFA(1.5mL)，在室温下将所得混合物搅拌1.5h并且浓缩，得到5-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)戊酸。

LC/MS:631.3[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[5-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)戊酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物16)

向5-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)戊酸(150mg，0.238mmol)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(120.32mg，1.19mmol)、HATU(117.55mg，0.309mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(102.39mg，0.238mmol)，在室温下将所得混合物搅拌4h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。获得的残留物通过TLC(DCM:MeOH/8:1)纯化，然后通过Prep-HPLC进一步纯化，条件如下：色谱柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/L NH₄HCO₃+0.1NH₃.H₂O的水；B相：CH₃CN(35％CH₃CN在7min内达到55％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到55％CH₃CN，在0.9min内保持35％)；检测器，UV220和254nm以提供90.5mg化合物16(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[5-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)戊酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(brs,1H),9.00(s,1H),8.83(s,1H),8.50-8.60(m,1H),8.00-8.16(m,1H),7.89(d,J＝12.00Hz,1H),7.69-7.82(m,1H),7.50-7.64(m,3H),7.32-7.48(m,4H),6.92(d,J＝8.0Hz,2H),5.59-5.74(m,1H),5.42(s,1H),5.09-5.16(m,1H),4.97(d,J＝8.0Hz,1H),4.83(d,J＝12Hz,1H),4.60-4.73(m,2H),4.56(d,J＝8.0Hz,1H),4.40-4.50(m,2H),4.30-4.38(m,1H),4.17-4.28(m,1H),3.59-3.86(m,2H),3.48-3.52(m,2H),3.36-3.44(m,2H),3.02-3.16(m,4H),2.53-2.61(m,6H),2.43(s,3H),2.26-2.35(m,1H),2.09-2.19(m,1H),1.98-2.07(m,1H),1.89-1.96(m,1H),1.41-1.57(m,10H),0.95(s,9H)。

LC/MS:1043.52[M+H]⁺。

化合物17

步骤1. 2-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)、2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯(128.03mg，0.452mmol，1.1当量)。将所得混合物在50℃下搅拌8h。冷却至室温后，用水(10mL)淬灭反应物。所得混合物用EA(3*10mL)萃取，用盐水(6*10mL)洗涤。合并和浓缩有机层。通过Prep-TLC(DCM/MeOH 14/1)纯化残留物，以得到2-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯。

LC/MS:689.55[M+H]⁺。

步骤2.十二-11-炔酸甲酯[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]乙酸

向2-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯(110mg，0.160mmol，1.00当量)的DCM(4mL，62.920mmol，394.01当量)溶液中加入TFA(2mL，26.926mmol，168.61当量)。在25℃下将所得混合物d搅拌1h。将反应物浓缩得到[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]乙酸。

LC/MS:633.20[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物17)

向[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]乙酸(100mg，0.158mmol，1.00当量)的DMF(4mL，51.687mmol，327.04当量)溶液中加入TEA(143.94mg，1.422mmol，9当量)、HATU(78.12mg，0.205mmol，1.3当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(81.66mg，0.190mmol，1.2当量)。将混合物在25℃下搅拌5h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并有机层，用盐水(4x15mL)洗涤。获得的残留物通过TLC(1:8MeOH/DCM)纯化，然后通过Prep-HPLC进一步纯化，条件如下：柱，XBridge Shield RP18OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：含10mmol/L NH₄HCO₃的水，流动相B：CH₃CN(10min内36％至43％，0.1min内43％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至43％，1min内43％至43％；检测器，UV254 nm以提供70.6mg化合物17(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(brs,1H),8.96(s,1H),8.82(s,1H),8.59(t,J＝6.0Hz,1H),8.03(t,J＝7.6Hz,1H),7.74-7.75(m,1H),7.50-7.61(m,3H),7.41-7.59(m,5H),6.88-6.91(m,2H),5.60-5.75(m,1H),5.32(s,1H),5.16(d,J＝2.8Hz,1H),4.97-5.05(m,1H),4.80-4.84(m,1H),4.65-4.72(m,2H),4.51-4.62(m,1H),4.31-4.49(m,3H),4.20-4.30(m,1H),3.99(s,2H),3.55-3.70(m,8H),3.06(brs,4H),2.50-2.56(m,6H),2.43(s,3H),2.04-2.11(m,1H),1.85-1.93(m,1H),1.46(s,6H),0.94(s,9H)。

LC/MS:1045.65[M+H]⁺。

化合物18

步骤1. 2-((3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)甲氧基)乙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5.00mL)溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)。在50℃下将所得混合物搅拌5h。反应用H₂O(10mL)淬灭并且用EA(3x20mL)萃取，用盐水(3x20mL)洗涤，合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化得到2-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯。

LC/MS:689.3[M+H]⁺。

步骤2. 2-((3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)甲氧基)乙酸

向2-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯(200mg，0.290mmol，1.00当量)的DCM(5mL，78.650mmol，270.88当量)溶液中加入TFA(3mL，40.389mmol，139.11当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。通过反相柱色谱纯化反应得到[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)甲氧基]乙酸。

LC/MS:633.3[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)甲氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物18)

向[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)甲氧基]乙酸(180mg，0.284mmol，1.00当量)的DMF(5.00mL)溶液中加入TEA(143.94mg，1.420mmol，5当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(146.99mg，0.341mmol，1.2当量)、HATU(140.62mg，0.369mmol，1.3当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。反应用H₂O(10mL)淬灭并且用EA(3x20mL)萃取，用盐水(3x20mL)洗涤，合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱得到粗产物，粗产物用Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：15min内34％至40％，然后在1min内40％至100％，1min内保持100％，1min内降至34％，1min内保持34％；波长：254nm以提供化合物18(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)甲氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.10(brs,1H),9.00(s,1H),8.85(s,1H),8.58-8.60(m,1H),8.00-8.10(m,1H),7.60(d,J＝7.6Hz,1H),7.59-7.64(m,3H),7.45-7.47(m,1H),7.40(s,4H),6.90(d,J＝9.2Hz,2H),5.56-5.78(m,1H),5.30(s,1H),5.15(d,J＝3.2Hz,1H),4.97-5.02(m,1H),4.79-4.87(m,1H),4.72(s,2H),4.62-4.71(m,2H),4.58(d,J＝9.6Hz,1H),4.35-4.52(m,3H),4.20-4.32(m,1H),3.90-4.15(m,2H),3.50-3.75(m,4H),3.06-3.10(m,4H),2.51-2.52(m,4H),2.49(s,3H),2.30-2.49(m,2H),2.00-2.12(m,1H),1.85-1.96(m,1H),1.65-1.76(m,2H),1.46(s,6H),0.95(s,9H)。LC/MS:1045.5[M+H]⁺。

化合物19

步骤1. 3-((5-(苄氧基)戊基)氧基)丙酸叔丁酯

向5-(苄氧基)戊-1-醇(1g，5.15mmol)的DCM(10mL)溶液中加入3-溴丙酸叔丁酯(1.6g，7.73mmol)、35％NaOH(10mL)和Bu₄NCl(1.4g，5.15mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌16h。反应通过LCMS监测。完成后，用H₂O淬灭反应并且用DCM(20mL*3)萃取。然后将有机层真空浓缩，所得粗产物通过硅胶柱(0-15％PE/EA)纯化，得到3-((5-(苄氧基)戊基)氧基)丙酸叔丁酯。

LC/MS:267[M+H-tBu]⁺。

步骤2. 3-((5-羟基戊基)氧基)丙酸叔丁酯

向3-((5-(苄氧基)戊基)氧基)丙酸叔丁酯(520mg，1.61mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入10％Pd/C(300mg)。在25℃下将所得混合物在H₂气体中搅拌16h。反应通过LCMS监测。完成后，过滤反应混合物，并且真空浓缩有机相以得到3-((5-羟基戊基)氧基)丙酸叔丁酯。

LC/MS:177[M+H-tBu]⁺。

步骤3. 3-((5-碘戊基)氧基)丙酸叔丁酯

向3-((5-羟基戊基)氧基)丙酸叔丁酯(310mg，1.33mmol)的DCM(10mL)溶液中加入PPh₃(383mg，1.46mmol)、1H-咪唑(108mg，1.596mmol)和I₂(369mg，1.46mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌4h。反应由TLC监测。完成后，用Na₂S₂O₃水溶液淬灭反应，用DCM(15mL*3)萃取。所得溶液真空浓缩，残留物通过硅胶柱纯化，得到3-((5-碘戊基)氧基)丙酸叔丁酯。

步骤4. 3-((5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氧基)丙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)和3-[(5-碘戊基)氧基]丙酸叔丁酯(182.86mg，0.534mmol，1.3当量)的DCM的搅拌溶液中加入K₂CO₃(170.42mg，1.233mmol，3当量)。在50℃下将所得混合物搅拌过夜。反应溶液用水(20mL)淬灭。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(4x100mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％DCM/MeOH)纯化，得到3-((5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氧基)丙酸叔丁酯。

LC/MS:701.40[M+H]⁺。

步骤5. 3-((5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氧基)丙酸

向3-((5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氧基)丙酸叔丁酯(190mg，0.271mmol，1.00当量)的DCM的搅拌溶液中滴加TFA(1.5mL，20.195mmol，74.50当量)。在室温下将混合物搅拌1.5h。然后将溶液溶解于DCM(30*2mL)中并且减压浓缩得到3-((5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氧基)丙酸。

LC/MS:645.35[M+H]⁺。

步骤6.(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(5-(4-(4-(2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊氧基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物19)

向3-((5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氧基)丙酸(180mg，0.279mmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(120mg，0.279mmol)的DMF(5mL)溶液加入HATU(138mg，0.363mmol)和TEA(0.5mL)。在室温下将混合物搅拌过夜。反应溶液用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并有机层用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，除去固体，减压浓缩滤液。残留物通过快速色谱纯化，得到100mg黄色固体P1。通过Prep-HPLC在以下条件下纯化残留物：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：11min内39％B至50％B，50％B；波长：254nm；RT1(min)：9.2；运行次数：0。这产生了化合物19(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(5-(4-(4-(2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊氧基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),8.98(s,1H),8.83(s,1H),8.59-8.68(m,1H),8.01-8.13(m,1H),7.87-7.99(m,1H),7.72-7.85(m,1H),7.50-7.71(m,3H),7.38-7.49(m,4H),6.87-7.02(m,2H),5.57-5.82(m,1H),5.31(s,1H),5.10-5.19(m,1H),4.91-5.02(m,1H),4.73-4.85(m,1H),4.62-4.73(m,2H),4.51-4.61(m,1H),4.38-4.49(m,2H),4.32-4.49(m,1H),4.18-4.31(m,1H),3.50-3.78(m,4H),3.18-3.49(m,2H),3.10(s,4H),2.55-2.65(m,5H),2.41-2.43(m,3H),2.22-2.37(m,3H),2.00-2.11(m,1H),1.82-1.99(m,1H),1.39-1.58(m,10H),1.25-1.38(m,2H),0.93-0.95(m,9H)。

LC/MS:1057.70[M+H]⁺。

化合物20

步骤1. 4-(4-碘丁氧基)丁酸叔丁酯

向4-(4-羟基丁氧基)丁酸叔丁酯(590mg，2.540mmol，1.00当量)的DCM(5mL)溶液中加入咪唑(207.47mg，3.048mmol，1.2当量)、I₂(709.03mg，2.794mmol，1.1当量)和PPh₃(732.71mg，2.794mmol，1.1当量)。在室温下将所得混合物搅拌过夜，然后用Na₂S₂O₃(20mL)淬灭。所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取，用盐水(2x30mL)洗涤。将有机层合并然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(10-20％EtOAc/石油醚)纯化，得到4-(4-碘丁氧基)丁酸叔丁酯。

LC/MS:343.07[M+H]⁺。

步骤2.4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)丁酸叔丁酯向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，157.19当量)溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)、4-(4-碘丁氧基)丁酸叔丁酯(154.73mg，0.452mmol，1.1当量)。在50℃下将所得混合物搅拌4h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机层用盐水(4x50mL)洗涤，然后浓缩。残留物通过Prep-TLC[MeOH/DCM][1:8]纯化，得到4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)丁酸叔丁酯。

LC/MS:701.41[M+H]⁺。

步骤3.4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)丁酸向4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)丁酸叔丁酯(194mg，0.277mmol，1.00当量)的DCM(5mL，78.650mmol，284.15当量)溶液中加入TFA(1.5mL，20.195mmol，72.96当量)，在室温下将所得混合物搅拌1h。将反应浓缩得到4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)丁酸。

LC/MS:645.35[M+H]⁺。

步骤4.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)丁酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物20)

向4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)丁酸(160mg，0.248mmol，1.00当量)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(125.55mg，1.241mmol)、HATU(122.66mg，0.323mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(106.85mg，0.248mmol)，在室温下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。获得的残留物通过TLC(DCM:MeOH/8:1)纯化，然后通过Prep-HPLC进一步纯化，条件如下：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/L NH₄HCO₃+0.1NH₃.H₂O的水；B相：CH₃CN(40％CH₃CN在7min内达到70％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到70％CH₃CN，在0.9min内保持40％)；检测器，UV220和254nm提供105.3mg化合物20(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)丁酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(brs,1H),8.99(s,1H),8.83(s,1H),8.51-8.57(m,1H),7.95-8.18(m,1H),7.84(d,J＝9.2Hz,1H),7.74 -7.78(m,1H),7.57-7.60(m,3H),7.37-7.44(m,4H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),5.60-5.73(m,1H),5.33(s,1H),5.13-5.14(m,1H),5.01(d,J＝1.2Hz,1H),4.85(d,J＝1.2Hz,1H),4.64-4.73(m,2H),4.55(d,J＝9.6Hz,1H),4.40-4.48(m,2H),4.31-4.42(m,1H),4.18-4.30(m,1H),3.62-3.71(m,2H),3.38-3.42(m,3H),3.31-3.34(m,1H),3.09-3.14(m,4H),2.49-2.50(m,4H),2.45(s,3H),2.29-2.33(m,3H),2.18-2.20(m,1H),1.98-2.10(m,1H),1.89-1.96(m,1H),1.71-1.72(m,2H),1.45-1.52(m,10H),0.95(s,9H)。

LC/MS:1057.54[M+H]⁺。

化合物21

步骤1. 2-((4-羟基丁氧基)甲氧基)乙酸叔丁酯

向2-{[4-(苄氧基)丁氧基]甲氧基}乙酸叔丁酯(700mg，2.158mmol，1.00当量)的MeOH(15mL，370.484mmol，171.70当量)溶液中加入Pd/C(550mg，2.819mmol，1.31当量)。在25℃下将所得混合物在H₂下搅拌16h。过滤并且浓缩反应，得到2-[(4-羟基丁氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯。

步骤2. 2-((4-碘丁氧基)甲氧基)乙酸叔丁酯

向2-[(4-羟基丁氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯(435mg，1.857mmol，1.00当量)在DCM溶液中加入PPh₃(535.67mg，2.043mmol，1.1当量)、咪唑(151.68mg，2.228mmol，1.2当量)和I₂(518.36mg，2.043mmol，1.1当量)。在25℃下将所得混合物搅拌16h。反应用饱和硫代硫酸钠溶液(30mL)淬灭并且用DCM(3x20mL)萃取，用盐水(3x20mL)洗涤，合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，得到2-[(4-碘丁氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯。

步骤3. 2-((3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)甲氧基)乙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5.00mL)溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)、2-[(3-碘丙氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯(162.85mg，0.493mmol，1.2当量)。将所得混合物在50℃下搅拌5h。反应用H₂O(10mL)淬灭并且用EA(3x20mL)萃取，用盐水(3x20mL)洗涤，合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱得到2-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯。

LC/MS:689.3[M+H]⁺。

步骤4. 2-((3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)甲氧基)乙酸

向2-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)甲氧基]乙酸叔丁酯(124mg，0.180mmol，1.00当量)的THF(3mL，37.029mmol，205.70当量)、H₂O(3mL，166.525mmol，925.06当量)和MeOH(3mL，74.097mmol，411.61当量)溶液中加入LiOH(75mg，3.132mmol，17.40当量)。在室温下将所得混合物搅拌1h。所得混合物通过反相柱浓缩纯化，得到[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)甲氧基]乙酸。

LC/MS:633.3[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)甲氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物21)

向[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)甲氧基]乙酸(110mg，0.170mmol，1.00当量)的DMF(5.00mL)溶液中加入TEA(86.05mg，0.850mmol，5当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(87.88mg，0.204mmol，1.2当量)、HATU(77.60mg，0.204mmol，1.2当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。反应用H₂O(10mL)淬灭并且用EA(3x20mL)萃取，用盐水(3x20mL)洗涤，合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱得到粗产物，粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：Kinetex EVO C18柱，30*150，5um；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：9min内39％至46％，1min内46％至100％，1min内保持100％，1min内降至39％，1min内保持39％；波长：254nm以提供化合物21(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)甲氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.15(brs,1H),9.00(s,1H),8.85(s,1H),8.58-8.68(m,1H),8.00-8.10(m,1H),7.70-7.80(m,1H),7.45-7.64(m,4H),7.40(s,4H),6.91(d,J＝9.0Hz,2H),5.56-5.78(m,1H),5.32(s,1H),5.15(brs,1H),4.92-5.02(m,1H),4.76-4.87(m,1H),4.50-4.75(m,5H),4.18-4.48(m,4H),3.90-4.10(m,2H),3.50-3.72(m,4H),3.10(brs,4H),2.40(s,6H),2.20-2.39(m,3H),1.80-2.15(m,2H),1.40-1.65(m,10H),0.95(s,9H)。

LC/MS:1045.5[M+H]⁺。

化合物22

步骤1.[(3-{[5-(叔丁氧基)戊基]氧基}丙氧基)甲基]苯向3-(苄氧基)丙-1-醇(1g，6.016mmol，1.00当量)和5-溴戊酸叔丁酯(2.14g，9.024mmol，1.5当量)的NaOH(12mL，300.022mmol，49.87当量)的搅拌溶液中加入四丁基氯化铵(1.67g，6.016mmol，1当量)过夜。用H₂O(50mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用水(2x100mL)和盐水(2x100mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc/PE)纯化，得到[(3-{[5-(叔丁氧基)戊基]氧基}丙氧基)甲基]苯。

LC/MS:229.18[M+H]⁺。

步骤2.3-{[5-(叔丁氧基)戊基]氧基}丙-1-醇

向[(3-{[5-(叔丁氧基)戊基]氧基}丙氧基)甲基]苯(780mg，2.529mmol，1.00当量)和Pd/C(500mg，4.698mmol，1.86当量)的MeOH(5mL，123.495mmol，48.84当量)的搅拌溶液在室温下在H₂气体中搅拌过夜，然后浓缩得到3-{[5-(叔丁氧基)戊基]氧基}丙-1-醇。

LC/MS:219.19[M+H]⁺。

步骤3.5-(3-碘丙氧基)戊酸叔丁酯

向5-(3-羟基丙氧基)戊酸叔丁酯(550mg，2.367mmol，1.00当量)的DCM(5mL)溶液中加入咪唑(193.40mg，2.840mmol，1.2当量)、I₂(660.96mg，2.604mmol，1.1当量)和PPh₃(683.04mg，2.604mmol，1.1当量)。在室温下将所得混合物搅拌过夜，用Na₂S₂O₃(20mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x20mL)萃取，用盐水(2x30mL)洗涤，将有机层合并然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(10-20％EtOAc/石油醚)纯化，得到5-(3-碘丙氧基)戊酸叔丁酯。

LC/MS:343.07,[M+H]⁺。

步骤4.5-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)戊酸叔丁酯向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(30mg，0.062mmol，1.00当量)的DMF(5mL)溶液加入K₂CO₃(42.61mg，0.310mmol，5当量)甲烷；5-(3-碘丙氧基)戊酸叔丁酯(24.30mg，0.068mmol，1.1当量)。在室温下将所得混合物搅拌4h。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x50mL)洗涤，然后浓缩。通过Prep-TLC(MeOH/DCM1:8)纯化残留物，得到20mg的5-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)戊酸叔丁酯。

LC/MS:701.41[M+H]⁺。

步骤5.5-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)戊酸

向5-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)戊酸叔丁酯(180mg，1当量)的DCM(5mL)溶液加入TFA(1.5mL)。在室温下将所得混合物搅拌1.5h。浓缩反应，得到5-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)戊酸。

LC/MS:645.35[M+H]⁺。

步骤6.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[5-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)戊酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物22)

向5-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)戊酸(160mg，0.248mmol)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(125.55mg，1.240mmol)、HATU(122.66mg，0.322mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(106.85mg，0.248mmol)，在室温下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。获得的残留物通过TLC(DCM:MeOH/8:1)纯化，然后通过Prep-HPLC进一步纯化，条件如下：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/L NH₄HCO₃+0.1NH₃.H₂O的水；B相：CH₃CN(40％CH₃CN在8min内达到60％，1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内降至60％CH₃CN，在0.9min内保持40％)；检测器，UV220和254nm可提供73.9mg化合物22(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[5-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)戊酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(brs,1H),8.99(s,1H),8.82(s,1H),8.51-8.57(m,1H),8.00-8.18(m,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.74-7.76(m,1H),7.57-7.62(m,3H),7.38-7.40(m,4H),6.92(d,J＝8.8Hz,2H),5.60-5.73(m,1H),5.33(s,1H),5.11-5.12(m,1H),5.00(d,J＝1.2Hz,1H),4.85(d,J＝1.2Hz,1H),4.64-4.73(m,2H),4.55(d,J＝9.6Hz,1H),4.40-4.48(m,2H),4.21-4.32(m,1H),4.20-4.26(m,1H),3.62-3.71(m,2H),3.38-3.42(m,4H),3.09-3.21(m,4H),2.45-2.50(m,7H),2.33-2.39(m,3H),2.20-2.27(m,1H),2.01-2.16(m,1H),1.89-1.96(m,1H),1.64-1.70(m,2H),1.52-1.54(m,10H),0.95(s,9H)。

LC/MS:1057.54[M+H]⁺。

化合物23

步骤1. 10,10,11,11-四甲基-1-苯基-2,6,9-三氧杂-10-硅杂十二烷

向2-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]乙醇(2.0g，11.342mmol，1.00当量)的DMF(30mL，387.653mmol，34.18当量)的溶液中加入60％NaH(0.33g，13.610mmol，1.2当量)，在0℃下将混合物搅拌1h，然后加入[(3-溴丙氧基)甲基]苯(2.86g，12.476mmol，1.1当量)。在25℃下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(50mL)淬灭反应。所得混合物用EA(3*50mL)萃取。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用(0-30％PE/EA)洗脱得到10,10,11,11-四甲基-1-苯基-2,6,9-三氧杂-10-硅杂十二烷(1.89g，51.34％)10,10,11,11-四甲基-1-苯基-2,6,9-三氧杂-10-硅杂十二烷。

步骤2. 2-[3-(苄氧基)丙氧基]乙醇

向10,10,11,11-四甲基-1-苯基-2,6,9-三氧杂-10-硅杂十二烷(1.6g，4.930mmol，1.00当量)的1,4-二噁烷(10mL，113.501mmol，23.02当量)溶液中加入HCl的1,4-二噁烷(10mL，329.119mmol，66.76当量)溶液。在25℃下将所得混合物搅拌1h。用水(15mL)淬灭反应。所得混合物用EA(3*15mL)萃取，用盐水(4*15mL)洗涤。所得残留物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到2-[3-(苄氧基)丙氧基]乙醇。

步骤3. 2-{2-[3-(苄氧基)丙氧基]乙氧基}乙酸叔丁酯

向2-[3-(苄氧基)丙氧基]乙醇(466mg，2.216mmol，1.00当量)的DCM(6mL，94.380mmol，42.59当量)溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯(648.41mg，3.324mmol，1.5当量)、35％NaOH(6mL，150.011mmol，67.69当量)和四丁基氯化铵(615.91mg，2.216mmol，1当量)。在25℃下将混合物搅拌过夜。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用DCM(3x15mL)萃取。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶柱色谱法(0-20％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到2-{2-[3-(苄氧基)丙氧基]乙氧基}乙酸叔丁酯。

步骤4. 2-[2-(3-羟基丙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯

向2-{2-[3-(苄氧基)丙氧基]乙氧基}乙酸叔丁酯(353.0mg，1.088mmol，1.00当量)的MeOH(5mL，123.495mmol，113.49当量)溶液中加入Pd/C(300mg，2.819mmol，2.59当量)。将所得混合物保持在氢气下并且在40℃下搅拌过夜。过滤并且浓缩反应，得到2-[2-(3-羟基丙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯。

步骤5. 2-[2-(3-碘丙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯

向2-[2-(3-羟基丙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯(227.0mg，0.969mmol，1.00当量)的DCM(4mL，62.920mmol，64.94当量)溶液中加入Ph₃P(279.53mg，1.066mmol，1.1当量)、咪唑(79.15mg，1.163mmol，1.2当量)和I₂(270.50mg，1.066mmol，1.1当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。用Na₂S₂O₃(15mL)淬灭反应。所得混合物用DCM(3*15mL)萃取。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(0-30％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到2-[2-(3-碘丙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯。

步骤6. 2-[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200.00mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，157.19当量)的溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)、2-[2-(3-碘丙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯(155.62mg，0.452mmol，1.1当量)。将所得混合物在50℃下搅拌3h。冷却至室温后，用水(15mL)淬灭反应。所得混合物用EA(3*15mL)萃取，用盐水(6*15mL)洗涤。合并和浓缩有机层。通过Prep-TLC(DCM/MeOH 14/1)纯化残留物，得到2-[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯。

LC/MS:703.45[M+H]⁺。

步骤7.[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)乙氧基]乙酸

向2-[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)乙氧基]乙酸叔丁酯(166.00mg，0.236mmol，1.00当量)的DCM(5mL，78.650mmol，333.01当量)溶液中加入TFA(3mL，40.389mmol，171.01当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。将反应物浓缩得到[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)乙氧基]乙酸。

LC/MS:647.25[M+H]⁺。

步骤8.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)乙氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物23)

向[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1yl)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)乙氧基]乙酸(150mg，0.232mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，278.57当量)溶液中加入TEA(211.22mg，2.088mmol，9当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(119.83mg，0.278mmol，1.2当量)和HATU(114.64mg，0.302mmol，1.3当量)。将混合物在25℃下搅拌3h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。将有机层合并，用盐水(4x15mL)洗涤。获得的残留物通过TLC(1:8MeOH/DCM)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O的水，流动相B：CH₃CN(11min内38％至45％，0.1min内45％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至38％，1min内38％至38％；检测器，紫外254nm得到化合物23(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)乙氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(brs,1H),8.97(s,1H),8.82(s,1H),8.60(t,J＝7.6Hz,1H),8.05(t,J＝7.6Hz,1H),7.71-7.80(m,1H),7.55-7.62(m,3H),7.40-7.43(m,5H),6.90(d,J＝9.6Hz,2H),5.60-5.72(m,1H),5.32(s,1H),5.16(d,J＝3.6Hz,1H),4.97-5.01(m,1H),4.79-4.89(m,1H),4.61-4.71(m,2H),4.51-4.60(m,1H),4.32-4.50(m,3H),4.19-4.31(m,1H),4.00(s,2H),3.60-3.70(m,4H),3.51-3.59(m,2H),3.40-3.50(m,2H),3.00 -3.11(m,4H),2.48-2.50(m,4H),2.45(s,3H),2.31-2.39(m,2H),2.01-2.11(m,1H),1.89-1.98(m,1H),1.71-1.73(m,2H),1.46(s,6H),0.96(s,9H)。

LC/MS:1059.70[M+H]⁺。

化合物24

步骤1. 6-[2-(苄氧基)乙氧基]己酸甲酯

向苄二醇(2g，13.141mmol，1.00当量)的DMF(15mL，193.826mmol，14.75当量)溶液中加入60％NaH(0.38g，15.769mmol，1.2当量)，在0℃下将混合物搅拌1h，然后加入[(3-溴丙氧基)甲基]苯(2.86g，12.476mmol，1.1当量)。在25℃下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(50mL)淬灭反应。所得混合物用EA(3*50mL)萃取。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用(0-30％PE/EA)洗脱得到6-[2-(苄氧基)乙氧基]己酸甲酯。

步骤2. 6-(2-羟基乙氧基)己酸甲酯

向6-[2-(苄氧基)乙氧基]己酸甲酯(660mg，2.354mmol，1.00当量)的MeOH(6mL，148.193mmol，62.95当量)溶液中加入Pd/C(550mg，5.168mmol，2.20当量)。将所得混合物保持在氢气下并且在40℃下搅拌过夜。过滤反应物并且浓缩得到6-(2-羟基乙氧基)己酸甲酯。

步骤3. 6-(2-碘乙氧基)己酸甲酯

向6-(2-羟基乙氧基)己酸甲酯(398mg，2.092mmol，1.00当量)的DCM(5mL，78.650mmol，37.59当量)溶液中加入PPh₃(603.60mg，2.301mmol，1.1当量)、咪唑(170.91mg，2.510mmol，1.2当量)和I₂(584.09mg，2.301mmol，1.1当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。用Na₂S₂O₃(15mL)淬灭反应。所得混合物用DCM(3*15mL)萃取。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(0-30％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到6-(2-碘乙氧基)己酸甲酯。

步骤4. 6-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)己酸甲酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，157.19当量)的溶液中加入K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)、6-(2-碘乙氧基)己酸甲酯(135.70mg，0.452mmol，1.1当量)。在50℃下将所得混合物搅拌3h。冷却至室温后，用水(15mL)淬灭反应。所得混合物用EA(3*15mL)萃取，用盐水(6*15mL)洗涤。合并和浓缩有机层。残留物通过Prep-TLC(DCM/MeOH 14/1)纯化，得到6-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)己酸甲酯。

LC/MS:659.45[M+H]⁺。

步骤5.6-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)己酸向6-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)己酸甲酯(139.0mg，0.211mmol，1.00当量)的THF(3mL，37.029mmol，175.50当量)和H₂O(3mL，166.525mmol，789.26当量)溶液中加入LiOH.H₂O(44.27mg，1.055mmol，5当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。使用2N HCl溶液将所得混合物的pH值调节至6。然后用EA(3*15mL)萃取，用盐水(4*15mL)洗涤。将有机层合并，用Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到6-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)己酸。

LC/MS:645.30[M+H]⁺。

步骤6.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[6-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)己酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物24)

向6-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)己酸(100mg，0.155mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，416.58当量)溶液中加入TEA(141.24mg，1.395mmol，9当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(80.13mg，0.186mmol，1.2当量)和HATU(76.66mg，0.202mmol，1.3当量)。在25℃下将混合物搅拌3h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。将有机层合并，用盐水(4x15mL)洗涤。获得的残留物通过TLC(1:8MeOH/DCM)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，YMC-Actus Triart C18ExRS，30*150mm 5μm；流动相A：含10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O的水，流动相B：CH₃CN(8min内36％至60％，0.1min内60％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至36％，1min内36％至36％；检测器，UV254nm得到化合物24(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[6-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)己酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(brs,1H),8.98(s,1H),8.82(s,1H),8.55(t,J＝6.7Hz,1H),8.00-8.10(m,1H),7.70-7.89(m,2H),7.52-7.67(m,3H),7.37-7.47(m,4H),6.89-6.99(m,2H),5.57-5.71(m,1H),5.30(s,1H),5.12(d,J＝3.2Hz,1H),4.98-5.01(m,1H),4.80-4.90(m,1H),4.65-4.71(m,2H),4.51-4.60(m,1H),4.40-4.50(m,2H),4.29-4.39(m,1H),4.20-4.25(m,1H),3.61-3.70(m,2H),3.51(t,J＝6.0Hz,2H),3.32(s,2H),3.10(brs,4H),2.59-2.61(m,3H),2.51(s,3H),2.44(s,3H),2.21-2.31(m,1H),2.10-2.20(m,1H),2.00-2.09(m,1H),1.89-1.99(m,1H),1.46-1.52(m,10H),1.21-1.31(m,2H),0.94(s,9H)。

LC/MS:1057.70[M+H]⁺。

化合物25

步骤1. 3-[2-(苄氧基)乙氧基]丙-1-醇

向3-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]丙-1-醇(2.0g，10.507mmol，1.00当量)的DMF(30mL，387.653mmol，36.90当量)溶液中加入60％NaH(0.55g，13.659mmol，1.3当量)，在0℃下将混合物搅拌1h，然后加入[(2-溴乙氧基)甲基]苯(2.71g，12.608mmol，1.2当量)。在25℃下将所得混合物搅拌4h。用H₂O(50mL)淬灭反应。所得混合物用EA(3*50mL)萃取。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用(0-30％PE/EA)洗脱得到3-[2-(苄氧基)乙氧基]丙-1-醇。

步骤2. 2-{3-[2-(苄氧基)乙氧基]丙氧基}乙酸叔丁酯

向3-[2-(苄氧基)乙氧基]丙-1-醇(537.00mg，2.554mmol，1.00当量)的DCM(7mL，110.110mmol，43.12当量)溶液中加入2-溴乙酸叔丁酯(747.21mg，3.831mmol，1.5当量)、35％NaOH(7mL，175.013mmol，68.53当量)和四丁基氯化铵(709.75mg，2.554mmol，1当量)。在25℃下将混合物搅拌过夜。用H₂O(50mL)淬灭反应。所得混合物用DCM(3*50mL)萃取。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶柱色谱法(0-30％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到2-{3-[2-(苄氧基)乙氧基]丙氧基}乙酸叔丁酯。

步骤3. 2-[3-(2-羟基乙氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯

向2-{3-[2-(苄氧基)乙氧基]丙氧基}乙酸叔丁酯(331.00mg，1.020mmol，1.00当量)的MeOH(5mL，123.495mmol，121.04当量)溶液中加入Pd/C(300.00mg，2.819mmol，2.76当量)。将所得混合物保持在氢气下并且在40℃下搅拌过夜。过滤并且浓缩反应，得到2-[3-(2-羟基乙氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯。

步骤4. 2-[3-(2-碘乙氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯

向2-[3-(2-羟基乙氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯(236.00mg，1.007mmol，1.00当量)的DCM(5mL，78.650mmol，78.08当量)溶液中加入Ph₃P(290.62mg，1.108mmol，1.1当量)、咪唑(82.29mg，1.208mmol，1.2当量)、I₂(281.23mg，1.108mmol，1.1当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。用Na₂S₂O₃(15mL)淬灭反应。所得混合物用DCM(3*15mL)萃取。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(0-30％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到2-[3-(2-碘乙氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯。

步骤5. 2-[3-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，157.19当量)的溶液中加入2-[3-(2-碘乙氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯(155.62mg，0.452mmol，1.1当量)、K₂CO₃(284.03mg，2.055mmol，5当量)。在50℃下将所得混合物搅拌4h。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x100mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物经TLC(MeOH:DCM＝1:8)纯化，得到2-[3-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯。

LC/MS:703.39[M+H]⁺。

步骤6.[3-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丙氧基]乙酸}

向2-[3-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丙氧基]乙酸叔丁酯(190mg)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(1.5mL)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。在真空下将所得混合物浓缩，得到[3-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丙氧基]乙酸)。

LC/MS:647.33[M+H]⁺.

步骤7.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[3-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丙氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物25)

向[3-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丙氧基]乙酸的溶液(160mg，0.247mmol，1.00当量)的DMF(5mL)中加入TEA(125.17mg，1.235mmol，5当量)、HATU(122.29mg，0.321mmol，1.3当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(106.52mg，0.247mmol，1当量)，在室温下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x15mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x20mL)洗涤，然后浓缩。获得的残留物通过TLC(DCM:MeOH/8:1)纯化，然后通过Prep-HPLC进一步纯化，条件如下：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm 5umHPrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/LNH₄HCO₃+0.1NH₃.H₂O的水；B相：CH₃CN(30％CH₃CN在7min内达到52％，1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到52％CH₃CN，在0.9min内保持30％)；检测器，UV220和254nm提供84.7mg化合物25(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[3-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丙氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.18(brs,1H),9.00(s,1H),8.82(s,1H),8.51-8.68(m,1H),7.92-8.17(m,1H),7.70-7.81(m,1H),7.53 -7.64(m,3H),7.48-7.52(m,5H),6.77-7.01(m,2H),5.56-5.73(m,1H),5.35(s,1H),5.15(s,1H),4.99(d,J＝8.0Hz,1H),4.81(d,J＝8Hz,1H),4.60-4.76(m,2H),4.58(d,J＝12.0Hz,1H),4.32-4.50(m,3H),4.18-4.31(m,1H),3.88-4.02(m,2H),3.46-3.74(m,9H),3.02-3.10(m,4H),2.53-2.60(m,4H),2.43(s,3H),2.00-2.17(m,1H),1.87-1.99(m,1H),1.74-1.84(m,2H),1.46(s,7H),0.96(s,9H)。

LC/MS:1059.52[M+H]⁺。

化合物26

步骤1. 3-(2-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯

在室温下向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol)和3-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]丙酸叔丁酯(134.37mg，0.452mmol)的DMF(8mL)溶液中加入K₂CO₃(170.42mg，1.233mmol)。在50℃下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(20mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(4x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％DCM/MeOH)纯化，得到3-(2-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯。

LC/MS:703.40[M+H]⁺。

步骤2. 3-(2-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸

向3-(2-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(190mg，0.270mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(1.5mL，20.195mmol)。在室温下将所得混合物搅拌1.5h。然后将溶液溶解于DCM(30*2mL)中并且减压浓缩得到3-(2-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸。

LC/MS:647.30[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(2-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物26)

向3-(2-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)丙酸(190mg，0.294mmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基吡咯烷-2-甲酰胺(126mg，0.294mmol)的DMF(5mL)溶液中加入HATU(145mg，0.382mmol)和TEA(0.5mL)。在室温下将混合物搅拌过夜。反应溶液用水淬灭并且用乙酸乙酯萃取，合并有机层用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，除去固体，减压浓缩滤液。残留物通过快速色谱纯化，得到100mg黄色固体产物。通过Prep-HPLC在以下条件下纯化残留物：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内35％B至45％B，45％B；波长：254nm。这产生50.2mg化合物26(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{3-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]丙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.18(brs,1H),8.98(s,1H),8.82(s,1H),8.50-8.70(m,1H),8.00-8.16(m,1H),7.90-7.99(m,1H),7.69-7.82(m,1H),7.51-7.68(m,3H),7.31-7.50(m,4H),6.86-7.02(m,2H),5.55-5.78(m,1H),5.33(s,1H),5.13(s,1H),4.92-5.02(m,1H),4.77-4.91(m,1H),4.68(s,2H),4.54-4.62(m,1H),4.40-4.51(m,2H),4.35(s,1H),4.10-4.32(m,1H),3.40-3.80(m,11H),3.00-3.19(m,4H),2.55-2.65(m,5H),2.30-2.46(m,5H),2.01-2.11(m,1H),1.86-1.98(m,1H),1.45(s,6H),0.93(s,9H)。

LC/MS:[M+H]⁺。

化合物27

步骤1. 4-(三氟甲烷磺酰基氧基)环己-3-烯-1-甲酸甲酯

在0℃下，在N₂下，向4-氧代环己烷-1-甲酸甲酯(1.0g，6.403mmol)和2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(1.97g，9.604mmol)的DCM(20.0mL)溶液中加入Tf₂O(1.99g，7.043mmol)。在室温下将所得混合物在N₂下搅拌过夜。所得混合物用DCM(3x20mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x10mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用PE/EA(3:1)洗脱，得到4-(三氟甲烷磺酰基氧基)环己-3-烯-1-甲酸甲酯。

步骤2. 4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}环己-3-烯-1-甲酸甲酯

在室温下，向4-(三氟甲烷磺酰基氧基)环己-3-烯-1-甲酸甲酯(1.22g，4.233mmol)和2-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(1.35g，5.080mmol)在1,4-二噁烷(25.0mL)和H₂O(5mL)中的溶液中加入K₃PO₄(1.80g，8.466mmol)和Pd(PPh₃)₄(0.4g，0.339mmol)。在100℃下将所得混合物在N₂下搅拌过夜。通过LCMS可以检测到所需的产物。所得混合物用EA(3x30mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x10mL)洗涤，用无水NaSO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用PE/EA(3:1)洗脱为4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}环己-3-烯-1-甲酸甲酯。

LC/MS:279.15[M+H]⁺。

步骤3. 4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己烷-1-甲酸甲酯

向4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}环己-3-烯-1-甲酸甲酯(870mg3.126mmol)的MeOH(15mL)溶液中加入Pd/C(0.3g，10％)。在室温下将所得混合物在H₂下搅拌1.5h。所得混合物用硅藻土过滤并且用MeOH洗涤。在真空下除去溶剂，得到4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己烷-1-甲酸甲酯。

LC/MS:283.20[M+H]⁺。

步骤4. 4'-氧代-[1,1'-联(环己烷)]-4-甲酸甲酯

在60℃下，在空气气氛中，将4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己烷-1-甲酸甲酯(830mg，2.939mmol)的TFA(15mL)溶液搅拌过夜。减压浓缩反应混合物。然后用正相色谱法纯化残留物(流动相：EA/PE，0～30％)，得到4'-氧代-[1,1'-联(环己烷)]-4-甲酸甲酯。

LC/MS:239.20[M+H]⁺。

步骤5.4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-甲酸甲酯向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(250mg，0.514mmol，1.0当量)和4'-氧代-[1,1'-联(环己烷)]-4-甲酸甲酯(183.68mg，0.771mmol，1.5当量)的MeOH(10mL)溶液中加入AcOH(20.0mg)。在60℃下将所得混合物在空气气氛中搅拌1h。在室温下向上述混合物中加入NaBH₃CN(51.66mg，0.822mmol，1.6当量)。在室温下将所得混合物进一步搅拌5h。通过LCMS可以检测到所需的产物。在室温下将反应用饱和NaHCO₃(水溶液)淬灭。所得混合物用EA(3x10mL)萃取。将合并的有机层用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液，得到4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-甲酸甲酯。

LC/MS:709.70[M+H]⁺。

步骤6.4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-甲酸

在室温下，在空气气氛中，向4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-甲酸甲酯(240mg，0.339mmol，1.0当量)的THF(4.5mL)和MeOH(2.5mL)溶液中加入LiOH(2.48mL，3mol/L，7.458mmol，22.0当量)。在室温空气气氛中将所得混合物搅拌过夜。通过LCMS可以检测到所需的产物。减压浓缩反应物，通过C18柱用ACN/H₂O(0.5％TFA)纯化得到4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-甲酸。

LC/MS:695.70[M+H]⁺。

步骤7.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[(4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)甲酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物27)在室温下，在空气气氛中，向4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-甲酸(190mg，0.273mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(129.5mg，0.300mmol，1.1当量)和HATU(155.95mg，0.410mmol，1.5当量的DMF(4mL)溶液中加入DIEA(141.35mg，1.094mmol，4.0当量)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌过夜。通过LCMS可以检测到所需的产物。反应混合物进一步通过Prep-HPLC纯化(柱：Xselect CSH C18 OBD柱30*150mm 5μm，n；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：9min内44％B至64％B，64％B；波长：254nm；RT1(min)：9；运行次数：0)以得到100.8mg化合物27(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[(4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)甲酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),8.99(d,J＝1.8Hz,1H),8.82(d,J＝1.0Hz,1H),8.56(t,J＝6.1Hz,1H),8.03(d,J＝8.7Hz,1H),7.75(d,J＝8.1Hz,2H),7.68(m,3H),7.35-7.48(m,4H),6.91(dd,J＝8.4,3.5Hz,2H),5.66(m,1H),5.32(s,1H),5.13(dt,J＝3.4,1.6Hz,1H),4.99(m,1H),4.82(m,1H),4.68(d,J＝6.1Hz,2H),4.35-4.52(m,4H),4.22(m,1H),3.60-3.72(m,2H),3.08(s,4H),2.57-2.63(m,4H),2.45(d,J＝1.5Hz,3H),2.27(s,1H),2.18(s,1H),1.67-1.90(m,8H),1.46(s,9H),1.27-1.41(m,3H),1.21(m,1H),1.14(s,2H),0.83-0.99(m,12H)。

LC/MS:1107.65[M+H]⁺。

化合物28

步骤1. 4-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)环己烷-1-甲酸甲酯

向4-氧代环己烷-1-甲酸甲酯(600mg，3.842mmol，1.00当量)的DCE(10mL，126.315mmol，32.88当量)溶液中加入1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(550.08mg，3.842mmol，1当量)和一滴CH₃COOH。在室温下将混合物搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(1628.43mg，7.684mmol，2当量)。在室温下将混合物搅拌3h。完成后，用水(30mL)淬灭反应。用NaHCO₃调节溶液的pH值至8～9，用EA(3x50mL)萃取混合物，有机层用Na₂SO₄干燥并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％PE:EtOAc)纯化。减压浓缩有机层，得到4-{1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己烷-1-甲酸甲酯。

LC/MS:284[M+H]⁺。

步骤2. 4-(4-氧代哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯在60℃下将4-{1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己烷-1-甲酸甲酯(470mg，1.660mmol，1.00当量)与三氟乙醛(5mL)的混合物搅拌16h。完成后，浓缩有机层。用NaHCO₃调节溶液的pH值至8～9。用DCM/MeOH(10:1,3x20mL)萃取混合物，并且在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(MeOH/DCM，0～10％)纯化。减压浓缩有机层，得到4-(4-氧代哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯。

LC/MS:240[M+H]⁺。

步骤3. 4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的溶液中加入4-(4-氧代哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯(98.37mg，0.411mmol，1当量)和CH₃COOH(0.01mL，0.175mmol，0.13当量)。在室温下将混合物搅拌1h。之后，加入NaBH₃CN(51.66mg，0.822mmol，2当量)。完成后，用水(10mL)淬灭反应。用DCM(3x20mL)萃取混合物，并且在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％DCM:EtOH)纯化。减压浓缩有机层得到4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯。

LC/MS:710[M+H]⁺。

步骤4. 4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸

向4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯(104mg，0.147mmol，1.00当量)的THF(2mL，24.686mmol，168.50当量)和H₂O(2mL，111.017mmol，757.79当量)溶液中加入LiOH(17.54mg，0.735mmol，5当量)。在室温下将混合物搅拌2h。完成后。用HCl调节溶液的pH值至4～5。粗产物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，货号：SO230120-2，C18，120g，20～45μm，批号：BP0002P2503；流动相，在40min内CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝20％增加到CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，在10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，在2min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％，在10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％；检测器，UV220 nm和254nm。减压浓缩有机层得到4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸。

LC/MS:696[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)环己烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物28)

向4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸(77mg，0.111mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，583.89当量)溶液中加入TEA(33.59mg，0.333mmol，3当量)、HATU(54.70mg，0.144mmol，1.3当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(47.64mg，0.111mmol，1当量)。在室温下将混合物搅拌1h。完成后，粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：CHIRALCEL OJ-3,4.6*50mm 3um；流动相B：MEOH(0.1％DEA)；流速：2mL/min；梯度：等度10％B；波长：220nm柱：Xselect CSH C18 OBD。冻干后，得到化合物28(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]甲酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.13(s,1H),8.98(s,1H),8.82(s,1H),8.56(t,J＝6.1Hz,1H),8.05(s,1H),7.75(d,J＝8.1Hz,1H),7.64-7.56(m,3H),7.50-7.35(m,4H),6.91(d,J＝8.9Hz,2H),5.66(ddt,J＝16.5,10.2,6.0Hz,1H),5.32(s,1H),5.13(s,1H),4.99(dt,J＝10.3,1.4Hz,1H),4.82(dd,J＝17.2,1.6Hz,1H),4.68(d,J＝5.9Hz,2H),4.54(d,J＝9.3Hz,1H),4.48-4.33(m,2H),4.22(dd,J＝15.8,5.5Hz,2H),3.72–3.60(m,2H),3.07(d,J＝6.1Hz,4H),2.96(d,J＝9.8Hz,2H),2.62(t,J＝4.8Hz,3H),2.45(s,5H),2.16(s,2H),1.78-2.03(m,10H),1.31-1.46(m,12H),0.94(s,9H)。

LC/MS:1108.65[M+H]⁺

化合物29

步骤1. 4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(400mg，0.822mmol，1当量)在DCE(10mL)、MeOH(10mL)中的溶液中加入AcOH(74.05mg，1.233mmol，1.5当量)，2h后，加入NaBH₃CN(0.08mL，1.233mmol，1.5当量)。在25℃下将所得混合物搅拌3h。用H₂O(10mL)淬灭反应。将混合物用NaHCO₃水溶液碱化至pH约9，用EA(3x50mL)萃取，用盐水(3x70mL)洗涤，合并有机层并且真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱，得到4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:670.4[M+H]⁺.

步骤2.2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮向4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(660mg，0.985mmol，1当量)的二噁烷(10mL)溶液中加入HCl的1,4-二噁烷(10mL，329.119mmol，334.02当量)溶液。在25℃下将所得混合物搅拌1h。将反应物真空浓缩得到1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-({4-[4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:570.3[M+H]⁺。

步骤3.4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-({4-[4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(135mg，0.237mmol，1当量)在MeOH(2mL)、DCE(2mL)中的溶液中加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(70.82mg，0.355mmol，1.5当量)、AcOH(21.34mg，0.355mmol，1.5当量)，2h后，加入NaBH₃CN(22.34mg，0.355mmol，1.5当量)。在25℃下将所得混合物搅拌3h。用H₂O(10mL)淬灭反应物，将混合物用NaHCO₃水溶液碱化至pH约9，用DCM/MeOH(10:1，30mL*3)萃取，用盐水(3x50mL)洗涤，将有机层合并以及真空浓缩，得到4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯。

LC/MS:753.4[M+H]⁺.

步骤4.6-((4-(4-([1,4’-联哌啶]-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮向4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(285mg，0.379mmol，1当量)的二噁烷(5mL)溶液中加入HCl(气体)的1,4-二噁烷溶液(10mL，329.119mmol，869.53当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。反应真空浓缩，得到6-{[4-(4-{[1,4’-联哌啶]-4-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮的粗产物。

LC/MS:653.4[M+H]⁺.

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-2-异氰酸基-3,3-二甲基丁酰基)-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺向(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(30mg，0.070mmol，1当量)的DCM(10mL)溶液中加入TEA(14.10mg，0.140mmol，2当量)、三光气(41.35mg，0.140mmol，2当量)。在25℃下将所得混合物搅拌2h。真空浓缩反应物。将EA加入残留物，过滤，并且浓缩以得到(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-异氰酸基-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

LC/MS:457.2[M+H]⁺.

步骤6. 4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-N-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酰胺(化合物29)

向6-{[4-(4-{[1,4’-联哌啶]-4-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(220mg，0.337mmol，1当量)的DCM(5mL，78.650mmol，233.39当量)溶液中加入三乙胺(102.30mg，1.011mmol，3当量)、(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-异氰酸基-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(200.01mg，0.438mmol，1.3当量)。在25℃下将所得混合物搅拌16h。真空浓缩反应物。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱得到粗产物，粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10min内10％至64％，然后在1min内64％至100％，1min内保持100％，1min内降至10％，1min内保持10％；波长：254nm以提供化合物29N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.12(brs,1H),9.02(s,1H),8.82(s,1H),8.50-8.60(m,1H),7.95-8.12(m,1H),7.70-7.85(m,1H),7.50-7.68(m,3H),7.40(s,4H),6.91(d,J＝8.7Hz,2H),5.84(d,J＝9.0Hz,1H),5.55-5.80(m,1H),5.30(s,1H),5.11(d,J＝3.6Hz,1H),4.99(d,J＝9.6Hz,1H),4.70-4.86(m,1H),4.66(s,2H),4.15-4.50(m,5H),3.90-4.10(m,2H),3.55-3.75(m,2H),3.10(brs,4H),2.78-2.93(m,2H),2.51-2.60(m,4H),2.45(s,3H),2.00-2.30(m,5H),1.55-1.95(m,4H),1.45(s,7H),1.15-1.40(m,5H),0.91(s,9H)。

LC/MS:1109.85[M+H]⁺.

化合物30

/>

步骤1. 1-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌啶-4-甲酸乙酯

向哌啶-4-甲酸乙酯(600mg，3.816mmol，1.00当量)和1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(596.06mg，3.816mmol，1当量)的DCE(10mL)溶液中加入CH₃COOH(11.46mg，0.191mmol，0.05当量)。1h后，加入NaBH(OAc)₃(1617.74mg，7.632mmol，2当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。用H₂O(30mL)淬灭反应。使用NaHCO₃溶液将所得混合物的pH值调节至7。然后用DCM(3*30mL)萃取，用盐水(4*30mL)洗涤。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，0～10％)纯化，得到1-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌啶-4-甲酸乙酯。LC/MS:298.35[M+H]⁺。

步骤2.1-(4-氧代环己基)哌啶-4-甲酸乙酯

向1-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌啶-4-甲酸乙酯(580mg，1.950mmol，1.00当量)的TFA(5mL)溶液。在60℃下将所得混合物搅拌2h。冷却至室温后。将反应浓缩。使用NaHCO₃溶液将所得混合物的pH值调节至8。然后用DCM/MeOH(10:1,3*30mL)萃取，用盐水(2*50mL)洗涤。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，0～10％)纯化，得到1-(4-氧代环己基)哌啶-4-甲酸乙酯。步骤3.1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酸乙酯向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1当量)的MeOH(10mL)溶液中加入CH₃COOH(0.25mg，0.004mmol，0.01当量)。1h后，加入NaBH₃CN(51.66mg，0.822mmol，2当量)。将所得混合物在60℃下搅拌过夜。反应用H₂O(50mL)淬灭，然后用EA(3*50mL)萃取。合并和浓缩有机层。所得残留物通过TLC(DCM/MeOH＝5/1)纯化，得到1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酸乙酯。

LC/MS:724.40[M+H]⁺。

步骤4.1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酸

向1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酸乙酯(150mg，0.207mmol，1当量)的THF(5mL)溶液中加入LiOH.H₂O(86.95mg，2.070mmol，10当量)、H₂O(5mL)。在25℃下将所得混合物搅拌过夜。反应物浓缩后通过反相柱(A：TFA/H₂O，B：CH₃CN)纯化，得到1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酸。

LC/MS:696.40[M+H]⁺。

步骤5.N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酰胺(化合物30)

向1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酸(140mg，0.201mmol，1.00当量)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(101.79mg，1.005mmol，5当量)、HATU(99.45mg，0.261mmol，1.3当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(86.63mg，0.201mmol，1当量)。在25℃下将混合物搅拌1h。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3*15mL)萃取。合并和浓缩有机层。通过Prep-HPLC纯化获得的残留物，条件如下：柱，XSelect CSHPrepC18OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含10mmol/L NH₄HCO₃的水，流动相B：CH₃CN(12min内33％至44％，0.1min内44％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至33％，1min内33％至33％；检测器，UV254 nm得到化合物30N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酰胺(顺式)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40-98.90(m,3H),8.02-8.06(m,1H),7.70-7.77(m,2H),7.54-7.64(m,3H),7.35-7.45(m,4H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),5.59-5.73(m,1H),5.30-5.34(m,1H),5.11-5.16(m,1H),4.99(d,J＝10.4Hz,1H),4.78-4.87(m,1H),4.66-4.71(m,2H),4.48-4.55(m,1H),4.30-4.48(m,3H),4.00-4.30(m,1H),3.58-3.68(m,2H),3.04-3.09(m,4H),2.79-2.86(m,2H),2.61-2.67(m,4H),2.46(s,3H),2.19-2.24(m,2H),2.11-2.17(m,2H),1.98-2.08(m,1H),1.60-1.98(m,7H),1.50-1.60(m,3H),1.46(s,6H),1.19-1.25(m,4H),0.91(s,9H)。

LC/MS:1108.65[M+H]⁺。

以及化合物30N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酰胺(反式)。

1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65-9.00(m,2H),8.56(t,J＝6.2Hz,1H),7.98-8.15(m,1H),7.65-7.90(m,2H),7.50-7.64(m,3H),7.45-7.35(m,4H),6.91(d,J＝8.6Hz,2H),5.73-5.59(m,1H),5.34-5.30(m,1H),5.15-5.11(m,1H),5.03-4.96(m,1H),4.87-4.78(m,1H),4.71-4.65(m,2H),4.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.48-4.38(m,2H),4.37-4.33(m,1H),4.26-4.17(m,1H),3.68-3.58(m,2H),3.12-3.07(m,4H),2.99-2.92(m,2H),2.60-2.56(m,4H),2.44(s,3H),2.21-2.16(m,2H),1.65-2.08(m,10H),1.50-1.60(m,3H),1.46(s,6H),1.30-1.40(m,4H),0.93(s,9H)。

LC/MS:1108.65[M+H]⁺。

化合物31

步骤1. 4-(三氟甲烷磺酰基氧基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯将4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(5g，25.094mmol)、搅拌棒、THF(40mL)加入250mL三颈圆底烧瓶中并且搅拌至均匀，然后在氮气气氛中用LiHMDS(30mL)在-78℃下处理。在室温下将反应混合物搅拌1h。在0℃下向上述混合物中加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-三氟甲磺酰甲磺酰胺(9.9g，27.712mmol)。在室温下将所得混合物搅拌过夜。将上述混合物用饱和NH₄Cl水溶液(100mL)淬灭，并且用EA(100mLx3)萃取。将合并的萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。残留物采用硅胶色谱法(PE/EA)以得到4-(三氟甲烷磺酰基氧基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:332.20[M+H]⁺。

步骤2. 4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯

将4-(三氟甲烷磺酰基氧基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(4g，12.073mmol)和2-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(3.37g，12.677mmol，)、搅拌棒、1,4-二噁烷(50mL)和H₂O(10mL)加入250mL圆底烧瓶中搅拌至均匀，然后用K₃PO₄(5.13g，24.146mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(1.40g，1.207mmol)处理。在100℃下将所得混合物在氮气气氛中搅拌过夜，然后冷却至室温，用水(100mL)稀释，并且用EA(100mLx3)萃取。将合并的萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，得到近黄色粘稠的油。油采用硅胶色谱法(0-70％EtOAc/石油醚)以得到4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:322.20[M+H]⁺。

步骤3. 4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌啶-1-甲酸乙酸叔丁酯

将4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.49g，4.636mmol)、搅拌棒和MeOH(25mL)加入100ml圆底烧瓶中搅拌至均匀，然后用10％Pd/C(4g，3.755mmol)处理。在室温下将所得混合物在氢气气氛中搅拌过夜。将所得混合物过滤，滤饼用MeOH洗涤。减压浓缩滤液得到4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌啶-1-甲酸乙酸叔丁酯。

LC/MS:326.25[M+H]⁺。

步骤4.4-(哌啶-4-基)环己-1-酮

将4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.33g，4.087mmol)、搅拌棒和TFA(30mL)加入100ml圆底烧瓶中并且搅拌至均匀。在60℃下将所得混合物在氮气气氛中搅拌过夜。减压浓缩反应混合物，得到4-(哌啶-4-基)环己-1-酮，直接用于下一步。

LC/MS:182.15[M+H]⁺。

步骤5.4-(4-氧代环己基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将4-(哌啶-4-基)环己-1-酮(3g，16.549mmol)和二碳酸二叔丁酯(2.98g，13.342mmol)、搅拌棒和THF(20mL)加入250mL圆底烧瓶中并且搅拌至均匀，然后用TEA(2.23g，22.038mmol)和DMAP(0.21g，1.719mmol)处理。在室温下将所得混合物搅拌4h。所得混合物用H₂O(100mL)稀释，并且用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的萃取物用盐水(3x100mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并且减压浓缩至干。所得残留物通过硅胶色谱法(0-60％EtOAc/石油醚)纯化，得到4-(4-氧代环己基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:282.25[M+H]⁺。

步骤6.4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯

将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(864mg，1.776mmol)和4-(4-氧代环己基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(749mg，2.652mmol)、搅拌棒和MeOH(25mL)加入100mL圆底烧瓶中，搅拌至均匀，然后用AcOH(10mg)处理。将所得混合物搅拌1h。在室温下向上述混合物中加入NaBH₃CN(167.93mg，2.672mmol)。将所得混合物搅拌4h，然后用饱和NaHCO₃水溶液(50mL)淬灭，并且用EtOAc(100mLx3)萃取。将合并的萃取物用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。残留物采用硅胶色谱法(0-15％MeOH/DCM)以得到4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:753.90[M+H]⁺。

步骤7. 1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[(4-{4-[4-(哌啶-4-基)环己基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮将4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(716mg，0.952mmole)、搅拌棒、TFA(4mL)和DCM(20mL)加入100mL圆底烧瓶中。在室温下将所得混合物搅拌2h。减压浓缩所得混合物，通过CH₃CN/5mM NH₄HCO₃水(5％-70％)C18柱纯化，得到1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[(4-{4-[4-(哌啶-4-基)环己基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS(:652.65[M+H]⁺。

步骤8.N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-1-甲酰胺(化合物31)

将(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(660mg，1.533mmol)和Et₃N(400mg，4.605mmol)、搅拌棒、DCM(20mL)加入250mL圆底烧瓶中搅拌至均匀，然后在0℃下，在氮气气氛中用三光气(273.14mg，0.921mmol)处理。在室温下将所得混合物在氮气气氛中搅拌1h。真空浓缩反应混合物，然后溶解于EA(40mL)中并且过滤。将滤液浓缩至干，然后溶解于DCM(5mL)中，加入1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[(4-{4-[4-(哌啶-4-基)环己基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮和Et₃N(65.70mg)的DCM(5mL)溶液中。将混合物减压浓缩，得到通过Prep-HPLC纯化的粗产物[柱：XBridge Prep OBD C18柱，19*250mm，5μm；流动相A：含(10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％B至75％B，75％B；波长：220nm；RT1(min)：5.35 6.3；运行次数：0]以得到化合物31N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-1-甲酰胺。

1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.16(s,1H),8.99(d,J＝3.4Hz,1H),8.83(d,J＝1.1Hz,1H),8.57(s,1H),8.05(s,1H),7.76(d,J＝8.3Hz,1H),7.41-7.61(m,3H),7.40(d,J＝2.1Hz,5H),6.92(d,J＝8.8Hz,2H),5.62-5.77(m,2H),5.34(s,1H),5.12(d,J＝3.6Hz,1H),5.00(d,J＝10.0Hz,1H),4.83(d,J＝17.3Hz,1H),4.69(s,2H),4.39-4.43(m,5H),4.00(s,2H),3.68(d,J＝11.6Hz,2H),3.08(s,4H),2.52-2.60(m,4H),2.42-2.51(m,3H),2.19(s,1H),1.97-2.05(m,1H),1.90(s,2H),1.71-1.82(m,3H),1.36-1.47(m,8H)，1.24-1.36(m,6H),0.85-0.94(m,12H)。

LC/MS:1108.65[M+H]⁺。

化合物32

步骤1. 4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯

向1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-酮(1g，6.403mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.19g，6.403mmol)和乙酸(0.02g，0.320mmol)。在60℃下将所得混合物保持1h。冷却至室温后，加入NaBH₃CN(0.80g，12.806mmol)。在室温下将所得混合物保持1h。加入NaHCO₃溶液，所得混合物用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-15％MeOH/DCM)纯化，得到4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:327.40[M+H]⁺。

步骤2.4-(哌嗪-1-基)环己-1-酮

在60℃下将4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.5g，4.595mmol)与TFA(10mL)的混合物搅拌过夜。在真空下除去溶剂，并且用MeOH/DCM(0％-40％)通过硅胶柱纯化残留物，得到4-(哌嗪-1-基)环己-1-酮(0.8g，95.4％)。LC/MS:183.15[M+H]⁺。

步骤3.4-(4-氧代环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯

在0℃下向4-(哌嗪-1-基)环己-1-酮(600mg，3.292mmol)、TEA(999.31mg，9.876mmol)的DCM(10mL)溶液中加入(Boc)₂O(862.13mg，3.950mmol)。在室温下将混合物搅拌过夜。在真空下除去溶剂，并且用MeOH/DCM(0％-40％)的硅胶柱纯化残留物，得到4-(4-氧代环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:283.20[M+H]⁺。

步骤4.4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(150mg，0.308mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入4-(4-氧代环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(174.10mg，0.616mmol)和乙酸(0.1mL)。将所得混合物在60℃下保持1h。冷却至室温后，加入NaBH₃CN(23.25mg，0.370mmol)。在室温下将所得混合物保持1h。加入NaHCO₃溶液，所得混合物用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-15％MeOH/DCM)纯化，得到4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:753.60[M+H]⁺。

步骤5.1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[(4-{4-[4-(哌嗪-1-基)环己基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮向4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.239mmol)的DCM(3mL)溶液中加入TFA(3mL)。在60℃下将所得混合物保持1h。在真空下除去溶剂，残留物用CH₃CN/NH₄HCO₃水(0.5％)(5％-100％)的C18柱纯化，得到1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[(4-{4-[4-(哌嗪-1-基)环己基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:653.60[M+H]⁺。

步骤6.4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)-N-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)哌嗪-1-甲酰胺(化合物32)向(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(369mg，0.86mmol)和三乙胺(326mg，3.21mmol)的DCM(10mL)溶液中加入三光气(45mg，0.15mmol)。将所得混合物保持在氮气下并且在室温下搅拌1h。在真空下将混合物浓缩，并且将残留物溶解于EA(10mL)中。通过倾析除去少量未溶解的物质。有机层减压浓缩以得到粗产物。然后向2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(4-(4-(哌嗪-1-基)环己基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(140mg，0.21mmol)和三乙胺(43mg，0.43mmol)的DCM(10mL)溶液缓慢加入粗产物。在室温下将混合物搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到粗产物，通过Prep-HPLC纯化[柱：XBridge Prep OBD C18柱，30*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内30％B至60％B，60％B；波长：254nm；RT1(min)：6；运行次数：0]以提供化合物32 4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)-N-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)哌嗪-1-甲酰胺。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.15(s,1H),8.99(s,1H),8.83(s,1H),8.57(t,J＝6.1Hz,1H),8.05(t,J＝8.1Hz,1H),7.76(d,J＝8.1Hz,1H),7.51-7.66(m,3H),7.30-7.49(m,5H),6.92(d,J＝8.7Hz,2H),5.84(d,J＝9.0Hz,1H),5.53-5.74(m,1H),5.34(s,1H),5.13(d,J＝3.6Hz,1H),5.00(dd,J＝10.3,1.5Hz,1H),4.83(dd,J＝17.2,1.6Hz,1H),4.69(d,J＝6.0Hz,2H),4.32-4.54(m,4H),4.15-4.22(m,1H),3.60-3.75(m,2H),3.10(s,4H),2.58-2.71(m,4H),2.43-2.47(m,3H),2.34-2.43(m,4H),2.19(s,2H),1.92-2.08(m,1H),1.68-1.89(m,4H),1.32-1.58(m,11H),0.95(s,10H)。LC/MS:1109.65[M+H]⁺。

化合物33

步骤1. 2-[4-(三氟甲烷磺酰基氧基)环己-3-烯-1-基]乙酸甲酯

在N₂和0℃下，将2-(4-氧代环己基)乙酸甲酯(2.0g 10.856mmol)、2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(3.3g 16.284mmol)和DCM(50mL)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中。将混合物冷却至0℃后加入Tf₂O(4.3g，15.198mmol)并且在室温下搅拌18h。在真空下除去溶剂，残留物用0～50％EA/PE硅胶柱纯化，得到2-[4-(三氟甲烷磺酰基氧基)环己-3-烯-1-基]乙酸甲酯。

步骤2. 2-(4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}环己-3-烯-1-基)乙酸乙酯

将2-[4-(三氟甲烷磺酰基氧基)环己-3-烯-1-基]乙酸甲酯(1g，3.162mmol)、2-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(840mg3.162mmol)、Pd(PPh₃)₄(365mg，0.316mmol)、K₃PO₄(1g，4.743mmol)、二噁烷(50mL)和H₂O(10mL)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中。将烧瓶抽真空并且用氮气冲洗三次，并且在100℃下将混合物搅拌5.0h。将EA加入混合物中，然后用水洗涤，分离有机层并且用无水硫酸钠干燥。在真空下除去溶剂，残留物用EA/PE(0～50％)硅胶柱纯化，得到2-(4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基}环己-3-烯-1-基)乙酸乙酯。

LC/MS:307.40[M+H]⁺。

步骤3. 2-(4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己基)乙酸乙酯

向带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中，加入2-(4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己基)乙酸乙酯(700mg，2.28mmol)、MeOH(15mL)和Pd/C(10％)。将烧瓶抽真空并且用氢气冲洗三次，并且在室温下将混合物搅拌16.0h。然后用硅藻土过滤，用MeOH洗涤。在真空下除去溶剂，得到2-(4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己基)乙酸乙酯。

LC/MS:311.30[M+H]⁺。

步骤4. 2-{4'-氧代-[1,1'-联(环己烷)]-4-基}乙酸乙酯

将2-(4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己基)乙酸甲酯(600mg，1.933mmol)和三氟乙醛(6mL)加入带有搅拌棒的圆底烧瓶中，然后在60℃下反应1h。在真空下除去溶剂，残留物用0～20％DCM/MeOH硅胶柱纯化，得到2-{4'-氧代-[1,1'-联(环己烷)]-4-基}乙酸乙酯。

LC/MS:267.80[M+H]⁺。

步骤5. 2-(4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)乙酸乙酯

将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(250mg，0.514mmol，1当量)、2-{4'-氧代-[1,1'-联(环己烷)]-4-基}乙酸乙酯(410.59mg，1.542mmol，3当量)、MeOH(10mL)和AcOH(3.09mg)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中。然后在60℃下搅拌1h。然后在混合物冷却至室温后加入NaBH₃CN(64.58mg，1.028mmol，2当量)，然后在室温下搅拌16h。残留物用0～20％DCM/MeOH硅胶柱纯化得到2-(4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)乙酸乙酯。

LC/MS:737.25[M+H]⁺。

步骤6.(4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)乙酸

将2-(4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)乙酸乙酯(250mg，0.339mmol，1当量)、锂醇(1.13mL，3M在H₂O中)、MeOH(2mL)和四氢呋喃(6mL)加入圆底烧瓶中。然后在室温下搅拌2h。混合物通过C18柱用H₂O(0.05％TFA)/5～100％ACN纯化。在真空下除去溶剂，以得到(4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)乙酸(230mg，95.64％)。

LC/MS:709.50[M+H]⁺。

步骤7.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4'-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物33)

(4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)乙酸(135mg，0.190mmol)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(82mg，0.190mmol)、HATU(109mg，0.285mmol)、DIEA(74mg，0.570mmol)和DMF(5mL)加入带有搅拌棒的圆底烧瓶中。然后在室温下搅拌18h。通过Prep-HPLC纯化获得的残留物，在以下条件下：柱，XBridge Prep OBDC18柱，30*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN(7min内40％至70％，0.1min内70％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至40％，1min内40％至40％；检测器，UV 254nm以得到化合物33(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4'-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,1'-双(环己烷)]-4-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.15(s,1H),8.99(d,J＝1.5Hz,1H),8.83(s,1H),8.53-8.62(m,1H),8.05(t,J＝8.0Hz,1H),7.75-7.89(m,2H),7.51-7.66(m,3H),7.35-7.46(m,4H),6.92(d,J＝8.7Hz,2H),5.55-5.81(m,1H),5.34(s,1H),5.12(d,J＝3.4Hz,1H),5.00(dd,J＝10.2,1.6Hz,1H),4.75-4.89(m,1H),4.69(d,J＝6.0Hz,2H),4.30-4.60(m,4H),4.13-4.29(m,1H),3.66(s,2H),3.08(s,4H),2.53-2.68(m,4H),2.45(d,J＝1.5Hz,3H),2.10-2.21(m,2H),1.94-2.09(m,2H),1.81-1.93(m,2H),1.62-1.80(s,4H),1.29-1.55(m,13H),1.24(s,2H),1.15(s,2H),0.80-1.00(m,12H)。

LC/MS:1121.65[M+H]⁺。

化合物34

步骤1. 2-(4-{1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己基)乙酸乙酯向2-(4-氧代环己基)乙酸乙酯(600mg，3.257mmol，1当量)的DCE(5mL)溶液中加入1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(466.32mg，3.257mmol，1当量)、CH₃COOH(1.96mg，0.033mmol，0.01当量)。在室温下将所得混合物搅拌0.5h，然后加入NaBH(OAc)₃(1380.46mg，6.514mmol，2当量)，在室温下搅拌过夜。用H₂O(mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x100mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，0～10％)纯化，得到2-(4-{1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己基)乙酸乙酯。

LC/MS:312.21[M+H]⁺。

步骤2.2-[4-(4-氧代哌啶-1-基)环己基]乙酸乙酯向2-(4-{1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基}环己基)乙酸乙酯(600mg，1.927mmol，1当量)的TFA(5mL)溶液中，在60℃下将所得混合物搅拌16h。用NaHCO₃水溶液将反应物浓缩并且碱化至pH7。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x100mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，10～20％)纯化，得到2-[4-(4-氧代哌啶-1-基)环己基]乙酸乙酯。

LC/MS:268.19[M+H]⁺。

步骤3.2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]乙酸乙酯向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的MeOH(5mL)溶液中加入2-[4-(4-氧代哌啶-1-基)环己基]乙酸乙酯(142.87mg，0.534mmol，1.3当量)、CH₃COOH(0.25mg，0.004mmol，0.01当量)。在60℃下将所得混合物搅拌1.5h，然后加入NaBH₃CN(38.75mg，0.616mmol，1.5当量)，在60℃下将所得混合物搅拌4h，然后在室温下搅拌过夜。用H₂O(mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，0～10％)纯化，得到2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]乙酸乙酯。

LC/MS:738.44[M+H]⁺。

步骤4.[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]乙酸

向2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]乙酸乙酯(108mg，0.146mmol，1当量)的THF(3mL)溶液中加入LiOH.H₂O(61.41mg，1.460mmol，10当量)、H₂O(3mL)。在室温下将所得混合物搅拌2h。将混合物/残留物用2N HCl溶液中和至pH7。将所得混合物过滤，用H₂O(5mL)洗涤滤饼。将滤饼减压浓缩，得到[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]乙酸。

LC/MS:710.41[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物34)

向[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]乙酸(90mg，0.127mmol，1.00当量)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(64.14mg，0.635mmol，5当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(60.05mg，0.140mmol，1.1当量)、HATU(62.67mg，0.165mmol，1.3当量)。在室温下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶柱([DCM:MeOH][8:1])纯化。然后通过Prep-HPLC在以下条件下纯化：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃H₂O的水；B相：CH₃CN(50％CH₃CN在7min内达到70％，在1min内达到100％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到70％CH₃CN，在0.9min内保持50％)；检测器，UV220和254nm得到化合物34(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.01(brs,1H),8.99(s,1H),8.82-8.84(m,1H),8.52-8.61(m,1H),8.24(s,1H),8.00-8.11(m,1H),7.90-7.98(m,1H),7.70-7.78(m,1H),7.50 -7.61(m,3H),7.34-7.46(m,4H),6.90(d,J＝8.0Hz,2H),5.60-5.71(m,1H),5.00(d,J＝8.0Hz,1H),4.81(d,J＝8.0Hz,1H),4.64-4.70(m,2H),4.50-4.59(m,1H),4.40-4.44(m,2H),4.34-4.40(m,1H),4.19-4.27(m,1H),3.68(s,2H),3.08-3.13(m,4H),2.97-3.02(m,2H),2.60-2.64(m,4H),2.36-2.47(m,6H),2.16-2.24(m,3H),1.98-2.12(m,5H),1.90-1.93(m,1H),1.72-1.80(m,2H),1.33-1.50(m,14H),0.97(s,9H)。

LC/MS:1122.60[M+H]⁺。

化合物35

步骤1. 2-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-基)乙酸叔丁酯

向6-{[4-(4-{[1,4’-联哌啶]-4-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(150mg，0.230mmol，1当量)的DMF(5mL)溶液中加入DIEA(207.87mg，1.610mmol，7当量)、2-溴乙酸叔丁酯(89.63mg，0.460mmol，2当量)。在60℃下将所得混合物搅拌12h。反应用H₂O(10mL)淬灭，用EA(3x20mL)萃取，用盐水(3x40mL)洗涤，将有机层合并以及真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱，得到2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-基)乙酸叔丁酯。

LC/MS:767.5[M+H]⁺。

步骤2.2-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-基)乙酸向2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-基)乙酸叔丁酯(90mg，0.117mmol，1当量)的二噁烷(2mL)溶液中加入HCl的1,4-二噁烷(6mL，197.471mmol，1682.88当量)溶液。在25℃下将所得混合物搅拌1h。反应真空浓缩，得到(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-基)乙酸的粗产物。

LC/MS:711.4[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物35)

向(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-基)乙酸(80mg，0.113mmol，1当量)的DMF(3mL)溶液中加入DIEA(43.63mg，0.339mmol，3当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(48.45mg，0.113mmol，1当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(48.45mg，0.113mmol，1当量)。在室温下将反应物搅拌1h。反应用H₂O(10mL)淬灭并且用EA(3x30mL)萃取，用盐水(3x40mL)洗涤，将有机层合并以及真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH/DCM洗脱得到粗产物，用Prep-HPLC纯化粗产物，条件如下：柱：XBridge Shield RP18OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10min内38％至53％，1min内53％至100％，1min内保持100％，1min内降至38％，1min内保持38％；波长：254nm以提供化合物35(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.12(brs,1H),9.02(s,1H),8.82(s,1H),8.60-8.70(m,1H),7.95-8.12(m,1H),7.70-7.85(m,2H),7.50-7.68(m,3H),7.35-7.49(m,4H),6.92(d,J＝8.7Hz,2H),5.55-5.80(m,1H),5.30(brs,1H),5.17(brs,1H),5.00(d,J＝10.2Hz,1H),4.67-4.86(m,1H),4.66(s,2H),4.20-4.55(m,5H),3.50-3.75(m,2H),3.08-3.10(m,5H),2.78-2.98(m,5H),2.58(s,4H),2.42(s,4H),2.00-2.30(m,7H),1.83-1.99(m,1H),1.68-1.82(m,4H),1.45(s,8H),0.91(s,9H)。

LC/MS:1123.55[M+H]⁺.

化合物36

步骤1. 2-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯

向2-(哌啶-4-基)乙酸乙酯(600mg，3.509mmol，1.00当量)的DCE(10mL)溶液中加入1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-酮(547.4mg，3.509mmol，1当量)和一滴CH₃COOH。在室温下将混合物搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(1487.7mg，7.017mmol，2当量)。在室温下将混合物搅拌3h。完成后，用水(30mL)淬灭反应。用NaHCO₃调节溶液的pH值至8～9，用EA(3x50mL)萃取混合物，有机层用Na₂SO₄干燥并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％PE:EtOAc)纯化。减压浓缩有机层，得到2-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯。

LC/MS:312.2[M+H]⁺。

步骤2. 2-(1-(4-氧代环己基)哌啶-4-基)乙酸乙酯

在60℃下将2-(1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯(700mg，2.250mmol，1.00当量)与三氟乙醛(5mL)的混合物搅拌16h。完成后，浓缩有机层。用饱和NaHCO₃水溶液将溶液的pH值调节至8～9。用DCM:MeOH＝10:1(3x20mL)萃取混合物，以及在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-10％DCM:MeOH)纯化。减压浓缩有机层，得到2-(1-(4-氧代环己基)哌啶-4-基)乙酸乙酯。

LC/MS:268.2[M+H]⁺。

步骤3. 2-(1-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌啶-4-基)乙酸乙酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(400mg，0.823mmol，1.00当量)的MeOH(8mL)溶液中加入2-(1-(4-氧代环己基)哌啶-4-基)乙酸乙酯(220mg，0.823mmol，1当量)和CH₃COOH(0.03mL)。在室温下将混合物搅拌1h。之后，加入NaBH₃CN(104mg，1.645mmol，2当量)。在室温下将混合物搅拌3h。完成后，用水(10mL)淬灭反应。用DCM(3x20mL)萃取混合物，以及在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％DCM:EtOH)纯化。减压浓缩有机层得到2-(1-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌啶-4-基)乙酸乙酯。

LC/MS:738.4[M+H]⁺。

步骤4.2-(1-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌啶-4-基)乙酸向2-(1-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌啶-4-基)乙酸乙酯(300mg，0.407mmol，1.00当量)的THF(5mL)和H₂O(5mL)溶液中加入LiOH(84mg，2.035mmol，5当量)。在室温下将混合物搅拌2h。完成后。用HCl调节溶液的pH值至4～5。粗产物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，货号：SO230120-2，C18，120g，20～45μm，批号：BP0002P2503；流动相，CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝20％在40min内增加到CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，在10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，在2min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％，在10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％；检测器，UV220 nm和254nm。减压浓缩有机层得到2-(1-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌啶-4-基)乙酸。

LC/MS:710.4[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物36)

向[1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-基]乙酸(250mg，0.352mmol，1.00当量)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(178.18mg，1.760mmol，5当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(151.63mg，0.352mmol，1当量)、HATU(174.07mg，0.458mmol，1.3当量)。在室温下将所得混合物搅拌2h。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机层用盐水(5x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm 5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃H₂O的水；B相：CH₃CN(34％CH₃CN在9min内达到44％，1min内达到100％CH₃CN，1min内保持100％，在0.1min内下降到44％CH₃CN，在0.9min内保持34％)；检测器，UV220和254nm得到化合物36(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.01(brs,1H),8.99(s,1H),8.80(s,1H),8.40–8.69(m,1H),7.90–8.19(m,1H),7.71–7.90(m,2H),7.47–7.68(m,3H),7.19–7.34(m,4H),6.77 -7.08(m,2H),5.52–5.81(m,1H),5.32(s,1H),4.90–5.19(m,2H),4.83(d,J＝12.0Hz,1H),4.61–4.71(m,2H),4.55(d,J＝8.0Hz,1H),4.30–4.50(m,3H),4.03–4.25(m,1H),3.59–3.92(m,2H),2.99–3.17(m,4H),2.71–2.97(m,2H),2.54–2.70(m,4H),2.43(s,3H),2.12–2.28(m,3H),1.99–2.11(m,3H),1.69–1.93(m,6H),1.52–1.67(m,3H),1.30–1.51(m,8H),1.20–1.30(m,2H),1.07–1.17(m,2H),0.82–1.00(m,9H)。

LC/MS:1122.60[M+H]⁺

化合物37

步骤1. 2-(4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌啶-1-基)乙酸

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[(4-{4-[4-(哌啶-4-基)环己基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(140mg，0.215mmol，1.0当量)的MeOH(8mL)溶液中加入乙醛酸(15.90mg，0.215mmol，1当量)。在室温下将所得混合物搅拌1h。向上述混合物中加入NaBH₃CN(13.50mg，0.215mmol，1当量)。在室温下将所得混合物搅拌5分钟。反应混合物通过C18柱用ACN/H₂O(0.05％TFA)纯化，得到[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-1-基]乙酸。

LC/MS:710.70[M+H]⁺。

步骤2.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物37)

向[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-1-基]乙酸(150mg，0.211mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(100.08mg，0.232mmol，1.1当量)和HATU(120.51mg，0.317mmol，1.5当量)的DMF(1mL)溶液中加入DIEA(109.24mg，0.844mmol，4.0当量)。在室温下将所得混合物搅拌2h。反应物通过C18柱用ACN/H₂O(0.05％TFA)纯化。反应混合物通过Prep-HPLC进一步纯化(柱：XBridge Prep OBD C18柱，19*250mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7.5min内40％B至75％B，75％B；波长：220纳米；RT1(min)：5.87.；运行次数：0)以得到化合物37(生成(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-1-基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.16(s,1H),8.90-9.10(m,1H),8.83(s,1H),8.50-8.64(m,1H),8.05(s,1H),7.75-7.83(m,2H),7.61-7.70(m,3H),7.36-7.48(m,4H),6.91-7.00(m,2H),5.67-5.75(m,1H),5.34(s,1H),5.12-5.20(m,1H),4.95-5.10(m,1H),4.83(d,J＝17.3Hz,1H),4.68(s,2H),4.53-4.34(m,3H),4.15-4.26(m,1H),3.50-3.80(m,2H),3.07(s,4H),2.85(s,3H),2.55-2.60(m,4H),2.50-2.43(m,3H),1.70-2.17(m,11H),1.47-1.60(m,8H),1.15-1.30(m,7H),0.94-1.05(m,10H)。

LC/MS:1122.50[M+H]⁺。

化合物38

步骤1. 4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯

向1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-酮(1g，6.403mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.19g，6.403mmol)和乙酸(0.02g，0.320mmol)。在60℃下将所得混合物保持1h。冷却至室温后，加入NaBH₃CN(0.80g，12.806mmol)。在室温下将所得混合物保持1h。所得混合物用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-15％MeOH/DCM)纯化，得到4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:327.40[M+H]⁺。

步骤2. 4-(哌嗪-1-基)环己-1-酮

在60℃下将4-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.5g，4.595mmol)与三氟乙醛(10mL)的混合物搅拌过夜。在真空下除去溶剂，残留物用MeOH/DCM(0％～40％)通过硅胶柱纯化，得到4-(哌嗪-1-基)环己-1-酮。

LC/MS:183.15[M+H]⁺。

步骤3. 4-(4-氧代环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯

在0℃下向4-(哌嗪-1-基)环己-1-酮(600mg，3.292mmol)、4-(哌嗪-1-基)环己-1-酮(600mg，3.292mmol)、TEA(999.31mg，9.876mmol)的DCM(10mL)溶液中加入(Boc)₂O(862.13mg，3.950mmol)。在室温下将混合物搅拌过夜。在真空下除去溶剂，并且用MeOH/DCM(0％-40％)的硅胶柱纯化残留物，得到4-(4-氧代环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:283.20[M+H]⁺。

步骤4. 4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(150mg，0.308mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入4-(4-氧代环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(174.10mg，0.616mmol)和乙酸(0.1mL)。在60℃下将所得混合物保持1h。冷却至室温后，加入NaBH₃CN(23.25mg，0.370mmol)。在室温下将所得混合物保持1h。所得混合物用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-40％MeOH/DCM)纯化，得到4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:753.60[M+H]⁺。

步骤5.1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[(4-{4-[4-(哌嗪-1-基)环己基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮向4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg，0.239mmol)的DCM(3mL)溶液中加入三氟乙醛(3mL)。在60℃下将所得混合物保持1h。在真空下除去溶剂，残留物通过CH₃CN/NH₄HCO₃水(5％-100％)的C18柱纯化，得到1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[(4-{4-[4-(哌嗪-1-基)环己基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:653.60[M+H]⁺。

步骤6.[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-基]乙酸将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-[(4-{4-[4-(哌嗪-1-基)环己基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(280mg，0.429mmol，1.0当量)、乙醛酸(32mg，0.348mmol，0.81当量)、MeOH(10mL)加入带有搅拌棒的10mL的schlenk管中，在室温下搅拌1h。混合物通过冰水浴冷却。加入NaBH₃CN(27mg，0.0430mmol，1.00当量)，在室温下搅拌2h。直接用甲醇稀释，减压过滤并浓缩。反应混合物用ACN/酸性水通过硅胶柱纯化，得到直接用于下一步的产物。LC/MS:711.65[M+H]⁺。

步骤7.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌嗪-1-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物38)

将[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌嗪-1-基]乙酸(280mg，0.394mmol，1当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(169.59mg，0.014mmol，1当量)和二甲基甲酰胺(3mL)溶解于100mL圆底烧瓶中，然后将HATU(224.65mg，0.591mmol)和DIEA(168mg，1.300mmol)加入反应溶液中。在室温下将反应混合物搅拌2h。LCMS显示反应完成，反应混合物通过Prep-HPLC进一步纯化(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内46％B至66％B，66％B；波长：254nm；RT1(min)：4.78；运行次数：0)以得到化合物38(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌嗪-1-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺。

LC/MS:1123.65[M+H]⁺。

化合物39

步骤1. 4-((1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)甲基)环己烷-1-甲酸甲酯

向4-甲酰基环己烷-1-甲酸甲酯(950mg，5.588mmol，1.00当量)的DCE(10mL)溶液中加入1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(799mg，5.588mmol，1当量)和一滴CH₃COOH。在室温下将混合物搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(2.37g，11.176mmol，2当量)。在室温下将混合物搅拌3h。完成后，用水(30mL)淬灭反应。用饱和NaHCO₃水溶液调节pH值至8～9。用EA(3x50mL)萃取混合物，以及在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％PE:EtOAc)纯化。减压浓缩有机层得到4-((1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)甲基)环己烷-1-甲酸甲酯。

LC/MS:298.2[M+H]⁺。

步骤2.4-((4-氧代哌啶-1-基)甲基)环己烷-1-甲酸甲酯在60℃下将4-((1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)甲基)环己烷-1-甲酸甲酯(1.1g，3.699mmol，1当量)与三氟乙醛(20mL，204.032mmol，55.16当量)的混合物搅拌12h。将混合物减压浓缩以除去TFA。用NaHCO₃调节溶液的pH值至8～9。用EA(300mLx2)萃取混合物，用Na₂SO₄干燥并且过滤。在真空下除去溶剂，得到4-[(4-氧代哌啶-1-基)甲基]环己烷-1-甲酸甲酯。

LC/MS:254[M+H]⁺。

步骤3.4-((4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)环己烷-1-甲酸甲酯向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(350mg，0.719mmol，1当量)的DCE(10mL，126.315mmol，175.61当量)溶液中加入4-[(4-氧代哌啶-1-基)甲基]环己烷-1-甲酸(258.21mg，1.079mmol，1.5当量)和AcOH(0.01mL，0.175mmol，0.24当量)。在室温下将混合物搅拌1h。之后，加入NaBH₃CN(90.41mg，1.438mmol，2当量)。在室温下将混合物搅拌3h。完成后，用水(20mL)淬灭反应。用DCM(3x20mL)萃取混合物，以及在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％DCM:EtOH)纯化。减压浓缩有机层得到4-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)甲基]环己烷-1-甲酸甲酯。

LC/MS:724[M+H]⁺。

步骤4. 4-((4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)环己烷-1-甲酸

向4-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)甲基]环己烷-1-甲酸甲酯(270mg，0.373mmol，1当量)的THF(2mL)和H₂O(2mL)中的溶液中加入LiOH(89.32mg，3.730mmol，10当量)。在室温下将混合物搅拌3h。完成后，粗产物在以下条件下通过反相快速色谱法纯化：柱，货号：SO230120-2，C18，120g，20～45μm，批号：BP0002P2503；流动相，CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝20％在40min内增加到CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，在10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，在2min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％，在10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％；检测器，UV220 nm和254nm。减压浓缩有机层得到4-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)甲基]环己烷-1-甲酸。

LCMS:710[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-1-((S)-2-(4-((4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)环己烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物39)

向4-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)甲基]环己烷-1-甲酸(250mg，0.352mmol，1当量)的DMF(5mL，64.609mmol，183.46当量)溶液中加入TEA(106.91mg，1.056mmol，3当量)、HATU(174.07mg，0.458mmol，1.3当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(151.63mg，0.352mmol，1当量)。在室温下将混合物搅拌1h。完成后。粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：CHIRALPAK AS-3,3.0*50mm，3μm；流动相B：MEOH(0.1％DEA)；流速：2mL/min；梯度：等度10％B；波长：220nm。冻干后得到化合物39(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-({4-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)甲基]环己基}甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.15(s,1H),8.99(s,1H),8.82(s,1H),8.57(t,J＝6.0Hz,1H),8.05(s,1H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.50-7.73(m,3H),7.46-7.35(m,4H),6.91(d,J＝8.7Hz,2H),5.66(ddt,J＝16.4,10.2,6.0Hz,1H),5.33(s,1H),5.14(dd,J＝3.5,1.5Hz,1H),4.99(dd,J＝10.3,1.4Hz,1H),4.87-4.78(m,1H),4.68(d,J＝5.9Hz,2H),4.52(dd,J＝9.3,4.2Hz,1H),4.48-4.38(m,2H),4.35(s,1H),4.22(dd,J＝15.9,5.4Hz,1H),3.65(q,J＝11.1,10.0Hz,2H),3.08(s,4H),2.85(s,2H),2.61(d,J＝5.1Hz,4H),2.45(s,3H),2.26 -2.41(m,1H),2.20-2.11(m,2H),2.04(d,J＝6.3Hz,2H),1.53-1.97(m,9H),1.24-1.52(m,12H),0.73-1.00(m,9H)。

LC/MS:1122.55[M+H]⁺。

化合物40

步骤1. 1-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基甲基}哌啶-4-甲酸甲酯

将1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲醛(500mg，2.938mmol，1.0当量)，哌啶-4-甲酸甲酯(420.62mg，2.938mmol，1.0当量)、AcOH(60.21mg)和MeOH(10mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在60℃下搅拌1h。将混合物用冰水冷却，加入NaBH₃CN(369.21mg，5.8763mmol，2.0当量)，并且在室温下搅拌过夜。混合物冷却至室温后加入EA并且用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩。反应混合物通过DCM/MeOH硅胶柱纯化，得到产物。LC/MS:298.20[M+H]⁺

步骤2. 1-[(4-氧代环己基)甲基]哌啶-4-甲酸甲酯

将1-{1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基甲基}哌啶-4-甲酸甲酯(442mg)和TFA(6mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌过夜。将反应混合物减压浓缩，以得到直接用于下一步的产物。

LC/MS:254.30[M+H]⁺。

步骤3. 1-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)甲基]哌啶-4-甲酸甲酯

将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.0当量)、1-[(4-氧代环己基)甲基]哌啶-4-甲酸甲酯(624.79mg，2.466mmol，6.0当量)、MeOH和K₂CO₃加入带有搅拌棒的10mL的schlenk管中，在室温下搅拌2分钟，然后过滤混合物。将滤液AcOH(20.7mg)和MeOH(15mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在60℃下搅拌1.5h。将混合物通过冰水浴冷却，加入NaBH₃CN(2.58mg，0.042mmol，2.0当量)，并且在60℃搅拌1h。在将混合物冷却至室温并且用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)洗涤后加入EA。然后用无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩。反应混合物通过DCM/MeOH硅胶柱纯化，得到产物。

LC/MS:724.65[M+H]⁺。

步骤4. 1-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)甲基]哌啶-4-甲酸

将1-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)甲基]哌啶-4-甲酸甲酯(130mg，0.180mmol，1.0当量、THF(6mL)、MeOH(2mL)和LiOH(0.72mL，3mol/L，2.160mmol，12.0当量)加入带有搅拌棒的10mL的schlenk管中，并且在室温下搅拌过夜。将混合物减压浓缩，并且通过C18柱用CH₃CN/H₂O(0.05％TFA)纯化得到产物。

LC/MS:710.70[M+H]⁺。

步骤5.N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)甲基]哌啶-4-甲酰胺(化合物40)

1-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)甲基]哌啶-4-甲酸(42mg，0.059mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(25.47mg，0.059mmol，1.0当量)、HATU(33.74mg，0.088mmol，1.5当量)、DIEA(30.59mg，0.236mmol，4.0当量)和DMF(3mL)加入带有搅拌棒的25mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌1h。LCMS显示反应完成，反应混合物通过Prep-HPLC进一步纯化(柱：XBridge Prep OBD C18柱，30*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：11min内30％B至50％B，50％B；波长：254nm；RT1(min)：10.6；运行次数：0)以得到化合物40。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.16(s,1H),9.00(s,1H),8.83(s,1H),8.59(t,J＝6.1Hz,1H),8.05(t,J＝7.9Hz,1H),7.77(t,J＝9.6Hz,2H),7.57-7.61(m,3H),7.34-7.47(m,4H),6.92(d,J＝8.8Hz,2H),5.55-5.81(m,1H),5.34(s,1H),5.15(d,J＝3.4Hz,1H),4.95-5.05(m,1H),4.76-4.88(m,1H),4.69(d,J＝6.0Hz,2H),4.53(d,J＝9.3Hz,1H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H),4.35(s,1H),4.10-4.28(m,1H),3.65(s,2H),3.09(s,4H),2.80-2.99(m,2H),2.59(s,3H),2.45(s,3H),2.28-2.41(m,1H),2.10-2.23(m,3H),2.04(t,J＝9.5Hz,1H),1.75-1.96(m,3H),1.52-1.72(m,6H),1.53(s,11H),1.24(s,3H),0.94(s,9H)。

LC/MS:1122.55[M+H]⁺。

化合物41

步骤1. 4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)哌啶

向哌啶-4-甲醇(1g，8.682mmol，1.00当量)的DCM(10mL)溶液中加入咪唑(0.71g，10.418mmol，1.2当量)和TBSCl(1.44g，9.550mmol，1.1当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。将反应浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-20％MeOH/DCM)纯化，得到4-{[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]甲基}哌啶。

LC/MS:230.15[M+H]⁺。

步骤2. 4-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯

向4-{[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]甲基}哌啶(2.0g，8.717mmol，1.00当量)和4-氧代环己烷-1-甲酸甲酯(1.36g，8.717mmol，1当量)的DCE(20mL)溶液中加入CH₃COOH(0.03g，0.500mmol，0.06当量)。1h后，加入NaBH(OAc)₃(3.69g，17.434mmol，2当量)。在25℃下将所得混合物搅拌过夜。用H₂O(30mL)淬灭反应。用NaHCO₃溶液将所得混合物的pH值调节至7。然后用DCM(3*30mL)萃取。合并和浓缩有机层。所得残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，0～10％)纯化，得到4-(4-{[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]甲基}哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯。

步骤3. 4-(4-(羟基甲基)哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯

向4-(4-{[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]甲基}哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯(2.7g，7.305mmol，1.00当量)的1,4-二噁烷(15mL)溶液中加入HCl的1,4-二噁烷(20mL，658.238mmol，90.11当量)溶液。在25℃下将所得混合物搅拌3h。将反应浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(MeOH/DCM，0～10％)纯化，得到4-[4-(羟基甲基)哌啶-1-基]环己烷-1-甲酸甲酯。

步骤4. 4-(4-甲酰基哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯

向DMSO(305.97mg，3.916mmol，2当量)和DCM(10mL)的助溶剂(COCl)₂(372.79mg，2.937mmol，1.5当量)加入。在-78℃下将混合物在氮气气氛中搅拌。30分钟后，加入4-[4-(羟基甲基)哌啶-1-基]环己烷-1-甲酸甲酯(500mg，1.958mmol，1.00当量)的DCM溶液。1h后，加入TEA(990.67mg，9.790mmol，5当量)。在25℃下将所得混合物搅拌1h。将反应浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到4-(4-甲酰基哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯。

步骤5. 4-(4-((4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(400mg，0.823mmol，1.00当量)的MeOH(10mL)溶液中加入4-(4-甲酰基哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸甲酯(208mg，0.823mmol，1当量)和CH₃COOH(0.02mL)。在室温下将混合物搅拌1h。之后，加入NaBH₃CN(104mg，1.644mmol，2当量)。在室温下将混合物搅拌3h。完成后，用水(10mL)淬灭反应。用DCM(3x20mL)萃取混合物，并且在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％DCM:EtOH)纯化。减压浓缩有机层得到4-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)哌啶-1-基]环己烷-1-甲酸甲酯。

LC/MS:724.4[M+H]⁺

步骤6. 4-(4-((4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)环己烷-1-甲酸

向4-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)哌啶-1-基]环己烷-1-甲酸甲酯(300mg，0.414mmol，1当量)在THF(2mL)和H₂O(2mL)中的溶液中加入LiOH(99.24mg，4.140mmol，10当量)。在室温下将混合物搅拌3h。完成后，粗产物在以下条件下通过反相快速色谱法纯化：柱，货号：SO230120-2，C18，120g，20～45μm，批号：BP0002P2503；流动相，CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝20％在40min内增加到CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，2min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％，10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％；检测器，UV 220nm和254nm。减压浓缩有机层得到4-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)哌啶-1-基]环己烷-1-甲酸。

LC/MS:710[M+H]⁺。

步骤7.(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-((4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)环己烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物41)

向4-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)哌啶-1-基]环己烷-1-甲酸(180mg，0.254mmol，1.00当量)的DMF(5mL，64.609mmol，254.81当量)溶液中加入TEA(76.97mg，0.762mmol，3当量)、HATU(125.33mg，0.330mmol，1.3当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(109.17mg，0.254mmol，1当量)。在室温下将混合物搅拌1h。完成后，粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：KinetexEVO C18，21.2*250mm，5μm；流动相A：含(10mmol/LNH₄HCO₃)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％B至60％B，60％B；波长：254nm；RT1(min)：5.6。冻干后得到化合物41(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-({4-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)哌啶-1-基]环己基}甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.13(s,1H),8.98(s,1H),8.82(s,1H),8.55(t,J＝6.1Hz,1H),8.04(t,J＝7.9Hz,1H),7.72(dd,J＝19.4,8.7Hz,1H),7.48-7.66(m,4H),7.48-7.35(m,4H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),5.66(ddt,J＝16.4,10.2,6.0Hz,1H),5.31(s,1H),5.12(t,J＝3.2Hz,1H),4.99(dd,J＝10.2,1.5Hz,1H),4.88-4.78(m,1H),4.68(d,J＝6.0Hz,2H),4.52(t,J＝10.3Hz,1H),4.43(dq,J＝10.1,6.0,4.9Hz,2H),4.35(s,1H),4.22(dd,J＝16.0,5.4Hz,1H),3.66(q,J＝10.9Hz,2H),3.09(s,4H),2.75-3.00(m,2H),2.40-2.46(m,3H),2.10-2.26(m,3H),1.95-2.10(m,3H),1.76-1.95(m,5H),1.62-1.76(m,3H),1.27-1.57(m,13H),1.01-1.18(m,3H),0.86-0.98(m,9H)。LC/MS:1122[M+H]⁺。

化合物42

步骤1. 4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)环己烷-1-酮向4-(羟基甲基)环己-1-酮(500mg，3.901mmol，1.00当量)的DCM(5mL)溶液中加入TBSCl(705.57mg，4.681mmol，1.2当量)和咪唑(371.81mg，5.461mmol，1.4当量)。在室温下将混合物搅拌4h。完成后，用水(10mL)淬灭反应。用EA(3x20mL)萃取混合物，并且在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％PE:EtOAc)纯化。减压浓缩有机层得到4-{[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]甲基}环己烷-1-酮。

LC/MS:243[M+H]⁺。

步骤2. 1-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)环己基)哌啶-4-甲酸乙酯

向4-{[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]甲基}环己烷-1-酮(716mg，2.953mmol，1.00当量)在DCE(10mL)和CH₃COOH(0.01mL，0.175mmol，0.06当量)中的溶液。在室温下将混合物搅拌1h。之后，加入NaBH₃CN(371.19mg，5.906mmol，2当量)并且在室温下搅拌3h。完成后，用水(10mL)淬灭反应。用DCM(3x20mL)萃取混合物，并且在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％DCM:EtOH)纯化。减压浓缩有机层，得到1-(4-{[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]甲基}环己基)哌啶-4-甲酸乙酯。

LC/MS:384[M+H]⁺。

步骤3. 1-(4-(羟基甲基)环己基)哌啶-4-甲酸乙酯

向1-(4-{[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]甲基}环己基)哌啶-4-甲酸乙酯(662mg，1.726mmol，1.00当量)、1-(4-{[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]甲基}环己基)哌啶-4-甲酸乙酯(662mg，1.726mmol，1.00当量)的溶液中加入HCl的二噁烷(4M)溶液。在室温下将混合物搅拌2h。将混合物减压浓缩以除去二噁烷。在真空下除去溶剂，得到1-[4-(羟基甲基)环己基]哌啶-4-甲酸乙酯(220mg，47.33％)，为白色油状。LC/MS:270[M+H]⁺。

步骤4. 1-(4-甲酰基环己基)哌啶-4-甲酸乙酯

在N₂气体下向DMSO溶液(116.02mg，1.484mmol，2当量)的DCM(10mL，157.300mmol，211.87当量)溶液中加入(COCl)₂(141.35mg，1.113mmol，1.5当量)。在-78℃下将混合物搅拌30min，将1-[4-(羟基甲基)环己基]哌啶-4-甲酸乙酯(200mg，0.742mmol，1.00当量)加入混合物中。在-78℃下将混合物搅拌1h，将TEA(375.63mg，3.710mmol，5当量)加入混合物中，在室温下将混合物搅拌1h。完成后，用水(50mL)淬灭反应。用EA(3x50 m)萃取混合物，并且在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％PE:EtOAc)纯化。将合并的有机层减压浓缩，得到1-(4-甲酰基环己基)哌啶-4-甲酸乙酯。

LC/MS:268[M+H]⁺。

步骤5. 1-(4-((4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)哌啶-4-甲酸乙酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(223mg，0.458mmol，1当量)的MeOH(10mL)溶液中加入1-(4-甲酰基环己基)哌啶-4-甲酸乙酯(122.54mg，0.458mmol，1当量)和AcOH(0.01mL，0.175mmol，0.38当量)。在室温下将混合物搅拌1h。之后，加入NaBH₃CN(57.60mg，0.916mmol，2当量)并且在室温下搅拌3h。完成后，用水(10mL)淬灭反应。用DCM(3x20mL)萃取混合物，以及在Na₂SO₄上干燥有机层并且过滤。浓缩有机层。粗产物用硅胶柱(0-50％DCM:EtOH)纯化。减压浓缩有机层得到1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]哌啶-4-甲酸乙酯。

LC/MS:738[M+H]⁺。

步骤6. 1-(4-((4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)哌啶-4-甲酸

向1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]哌啶-4-甲酸乙酯(228mg，0.309mmol，1当量)在THF(3mL，37.029mmol，119.85当量)和H₂O(3mL，166.525mmol，538.98当量)中的溶液中加入LiOH(73.99mg，3.090mmol，10当量)。在室温下将混合物搅拌3h。完成后，用浓HCl调节溶液的pH值至4～5。粗产物通过反相快速色谱法纯化，条件如下：柱，货号：SO230120-2，C18，120g，20～45μm，批号：BP0002P2503；流动相，CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝20％在40min内增加到CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，在10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝70％，在2min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％，在10min内保持CH₃CN:H₂O(0.05％TFA)＝95％；检测器，UV220 nm和254nm。减压浓缩有机层得到1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]哌啶-4-甲酸。

LC/MS:710[M+H]⁺。

步骤7.N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]哌啶-4-甲酰胺(化合物42)

向1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]哌啶-4-甲酸(150mg，0.211mmol，1.00当量)的DMF(5mL)溶液中加入TEA(64.14mg，0.633mmol，3当量)、HATU(104.44mg，0.274mmol，1.3当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(90.98mg，0.211mmol，1当量)。在室温下将混合物搅拌1h。完成后，粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内45％B至55％B，55％B；波长：254nm；RT1(min)：9。冻干后得到化合物42N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]哌啶-4-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.14(s,1H),8.99(s,1H),8.82(s,1H),8.56(t,J＝6.0Hz,1H),8.04(s,1H),7.78-7.68(m,2H),7.50-7.64(m,3H),7.45-7.35(m,4H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),5.66(ddt,J＝16.5,11.1,6.1Hz,1H),5.32(s,1H),5.13(s,1H),4.99(d,J＝10.8Hz,1H),4.82(d,J＝17.2Hz,1H),4.68(d,J＝5.9Hz,2H),4.51(d,J＝9.2Hz,1H),4.48-4.38(m,2H),4.35(s,1H),4.22(dd,J＝16.0,5.5Hz,1H),3.57-3.71(m,2H),3.08(s,4H),2.81(d,J＝10.3Hz,2H),2.41-2.47(m,6H),2.06-2.37(m,5H),1.61-2.06(m,6H),1.34-1.60(m,13H),1.11-1.29(m,2H),0.76-1.04(m,9H)。LC/MS:1122.6[M+H]⁺。

化合物43

步骤1. 2-(4-氧代哌啶-1-基)乙酸甲酯

在室温下向4-哌啶酮(600mg，6.052mmol，1.00当量)和K₂CO₃(2.51g，18.156mmol，3当量)在ACN(20mL)中的搅拌混合物中滴加2-溴乙酸甲酯(1.39g，9.078mmol，1.5当量)。在80℃下将所得混合物搅拌16h。过滤所得混合物，滤饼用ACN(4x10mL)洗涤。减压浓缩滤液。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(10:1)洗脱，得到2-(4-氧代哌啶-1-基)乙酸甲酯。

LC/MS:172.15[M+H]⁺。

步骤2. 2-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)乙酸甲酯

在60℃下将2-(4-氧代哌啶-1-基)乙酸甲酯(140.73mg，0.822mmol，2当量)与1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.411mmol，1.00当量)的混合物和加入的甲醇(5mL)中的CH₃COOH(0.1当量)搅拌过夜。将混合物冷却至室温。在室温下，在5分钟内，向上述混合物中分批加入NaBH₃CN(51.66mg，0.822mmol，2当量)。在60℃下将所得混合物再搅拌2h。所得混合物用DCM(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(1x50mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(10:1)洗脱，得到2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)乙酸甲酯。LC/MS:642.55[M+H]⁺。

步骤3. 2-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)乙酸

在室温下向2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)乙酸甲酯(206mg，0.321mmol，1.00当量)在THF(3mL)中的搅拌混合物中滴加LiOH(3mL，4M)。在室温下将所得混合物搅拌3h。将混合物用HCl(2M)酸化至pH 5。通过过滤收集沉淀的固体并且用水(1x3mL)洗涤。将滤饼减压浓缩得到(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)乙酸。

LC/MS:628.40[M+H]⁺。

步骤4.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物43)

在室温下向(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)乙酸(133mg，0.212mmol，1.00当量)和HATU(104.73mg，0.276mmol，1.3当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中分批加入TEA(64.32mg，0.636mmol，3当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(91.22mg，0.212mmol，1.0当量)。在室温下将所得混合物搅拌1h。所得混合物用EA(3x50mL)萃取。将合并的有机层用水(1x50mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。残留物在以下条件下通过反相快速色谱纯化：柱：KinetexEVO C18柱，30*150，5um；流动相A：含(10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：9min内30％B至50％B，50％B；波长：254nm。在真空下将产物浓缩得到化合物43(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),8.94(s,1H),8.83(s,1H),8.62(t,J＝6.1Hz,1H),8.04(d,J＝8.1Hz,1H),7.72-7.86(m,2H),7.51-7.65(m,3H),7.37-7.49(m,4H),6.89(d,J＝8.8Hz,2H),5.60-5.74(m,1H),5.33(s,1H),5.15(d,J＝3.4Hz,1H),4.96-5.04(m,1H),4.78-4.88(m,1H),4.69(d,J＝5.8Hz,2H),4.35-4.54(m,4H),4.23-4.33(m,1H),3.57-3.73(m,2H),2.98-3.16(m,5H),2.84-2.96(m,2H),2.57-2.71(m,4H),2.45(s,3H),2.01-2.29(m,4H),1.75-1.98(m,3H),1.39-1.54(m,9H),0.96(s,9H)。

LC/MS:1040.55[M+H]⁺.

化合物44

步骤1. 3-(1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)丙酸甲酯

将1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷(1g，6.984mmol)、K₂CO₃(1.46g，10.488mmol)和3-溴丙酸甲酯(1.52g，9.102mmol)溶解于50mL烧瓶中的20mL丙酮中，并且在70℃下搅拌1h。通过LCMS找到了所需的产物。在真空下除去溶剂，残留物用MeOH/DCM(0～15％)通过硅胶柱纯化，得到产物。

步骤2. 3-(4-氧代哌啶-1-基)丙酸甲酯

在60℃下将3-{1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基}丙酸甲酯(1.6g，6.978mmol，1当量)在三氟乙醛(10mL)中的溶液加热过夜。允许混合物冷却至室温。所得混合物减压浓缩，以得到粗产物3-(4-氧代哌啶-1-基)丙酸甲酯，其用于下一步而不进行纯化。

步骤3. 3-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)丙酸甲酯

将3-(4-氧代哌啶-1-基)丙酸甲酯(456.80mg，2.468mmol，4当量)1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(300mg，0.617mmol，1.00当量)和乙酸(3.70mg，0.062mmol，0.1当量)溶解于40mL小瓶中的6mL MeOH中，并且在70℃下搅拌1h。在此之后，将混合物冷却至室温。加入NaBH₃CN(77.49mg，1.234mmol，2当量)并且在室温下搅拌1h。LCMS显示反应成功，混合物用100mL的EA稀释并且用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。将有机层合并并且用Na₂SO₄干燥，然后浓缩。残留物用0～15％的MeOH/DCM通过硅胶柱纯化得到3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)丙酸甲酯。

步骤4. 3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)丙酸

将3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)丙酸甲酯(370mg，0.564mmol，1.0当量)、THF(12mL)、MeOH(4mL)和LiOH(2.26mL，3mol/L，6.768mmol，12.0当量)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌过夜。将混合物减压浓缩，并且用MeOH/H₂O(0.05％TFA)通过C18柱纯化以得到产物。

LC/MS:642.60[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物44)

将3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)丙酸(120mg，0.167mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(80.51mg，0.167mmol，1.0当量)、HATU(106.64mg，0.280mmol，1.5当量)、DIEA(96.66mg，0.748mmol，4.0当量)和DMF(4mL)加入带有搅拌棒的25mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌1h。LCMS显示反应完成，反应混合物通过Prep-HPLC纯化(柱：CHIRALPAK IB N-3,4.6*100mm，3um；流动相B：MeOH(0.1％DEA)；流速：2mL/min；梯度：等度50％B；波长：220nm)以得到化合物44(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.16(s,1H),8.93(s,1H),8.83(s,2H),8.64(t,J＝6.1Hz,1H),8.04(t,J＝7.9Hz,1H),7.75(d,J＝8.1Hz,1H),7.52-7.68(m,3H),7.25-7.49(m,4H),6.84(d,J＝8.7Hz,2H),5.57-5.76(m,1H),5.34(s,1H),5.16(d,J＝3.4Hz,1H),4.95-5.08(m,1H),4.78-4.95(m,1H),4.69(d,J＝6.0Hz,2H),4.52-4.62(m,1H),4.40-4.52(m,2H),4.37(s,1H),4.16-4.28(m,1H),3.58-3.74(m,2H),2.97(s,6H),2.60(s,4H),2.42(s,5H),2.12-2.28(m,3H),1.86-1.99(m,6H),1.52-1.74(m,2H),1.46(s,6H),0.97(s,9H)。

LC/MS:1054.50[M+H]⁺。

化合物45

步骤1. 9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯

将9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(4.4g，16.442mol)和1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(4g，8.221mmol)、搅拌棒和DCE(80mL)加入250mL圆底烧瓶中，搅拌至均匀，然后用AcOH(60mg，0.999mmol)处理。在室温下将所得混合物搅拌1h。向上述混合物中加入NaBH₃CN(5.23g，24.663mmol)。在60℃下将所得混合物在氮气气氛中搅拌过夜。将所得混合物冷却至室温并且用饱和NaHCO₃水溶液(40mL)淬灭，然后用CH₂Cl₂(3x20mL)萃取。将合并的萃取物用盐水(2x20mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。所得残留物通过硅胶柱色谱(0-15％MeOH/DCM)纯化，得到9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯。

LC/MS:738.75[M+H]⁺。

步骤2. 6-{[4-(4-{3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

将9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(5.8g，7.860mmol)、搅拌棒、DCM(50mL)加入250mL圆底烧瓶中搅拌至均匀，然后在室温下用HCl的1,4-二噁烷(70mL)溶液处理。在室温下将所得混合物搅拌2h，然后减压浓缩，残留物用DCM/MeOH(10/1)(1L)稀释。用NaHCO₃饱和溶液调节溶液的pH值至9。然后用DCM/MeOH(10/1，1Lx3)萃取所得混合物。合并的萃取物用H₂O(500ml)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并且真空浓缩，得到6-{[4-(4-{3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。粗产物直接用于下一步，无需进一步纯化。

LC/MS:638.65[M+H]⁺。

步骤3.(9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸

将6-{[4-(4-{3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(1.3g，2.038mmol)、乙醛酸一水合物(0.21g，2.242mmol)、搅拌棒和MeOH(13mL)加入100mL圆底烧瓶中。在室温下将所得混合物搅拌1h。在室温下向上述混合物中加入NaBH₃CN(0.13g，2.038mmol)。将所得混合物搅拌5分钟。反应物通过C18柱用CH₃CN/5mM NH₄HCO₃水(5％-60％)纯化得到(9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸。

LC/MS:696.30[M+H]⁺

步骤4.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物45)

将(9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸(1.6g，2.299mmol)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(0.99g，2.299mmol)、搅拌棒、DMF(28mL)加入250mL圆底烧瓶中，搅拌至均匀，然后用DIEA(0.89g，6.897mmol)和HATU(0.96g，2.529mmol)处理。在室温下将所得混合物搅拌2h。反应用ACN/H₂O(6.5mM NH₄HCO₃+氢氧化氨(pH＝10))通过C18柱纯化得到化合物45(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.11(s,1H),8.98(d,J＝2.4Hz,1H),8.82(d,J＝2.4Hz,1H),8.60(s,1H),8.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.78-7.84(m,2H),7.56-7.75(m,3H),7.40-7.42(m,4H),6.90(d,J＝7.5Hz,2H),5.56-5.82(m,1H),5.33(s,1H),5.16-5.15(m,1H),5.00(d,J＝10.2Hz,1H),4.84(d,J＝16.8Hz,1H),4.69(d,J＝5.7Hz,2H),4.40-4.50(m,4H),4.26-4.35(m,1H),3.42-3.60(m,2H),2.87-3.10(m,6H),2.58-2.71(m,4H),2.45-2.50(m,6H),2.10-2.18(m,1H),2.05(d,J＝7.5Hz,1H),1.91(s,1H),1.46-1.72(m,13H),1.35-1.33(m,5H),1.34-1.47(m,3H),0.94-1.06(m,7H)。

LC/MS:1108.65[M+H]⁺。

化合物46

步骤1. 7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯

在室温下，在空气气氛中，向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(500mg，1.028mmol，1.00当量)和7-氧代-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(491.83mg，2.056mmol，2当量)的DCE搅拌溶液中加入AcOH(0.62mg，0.010mmol，0.01当量)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌1h。在室温下向上述混合物中加入的NaBH(OAc)₃(653.36mg，3.084mmol，3当量)。在60℃下将所得混合物再搅拌12h。在室温下将反应用饱和NaHCO₃(水溶液)淬灭。所得混合物用DCM(3x10mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x10mL)洗涤，用无水MgSO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用DCM/MeOH(10:1)洗脱，得到7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯。

LC/MS:710[M+H]⁺。

步骤2. 6-{[4-(4-{2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

在室温下向7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯(690mg，0.972mmol，1.00当量)的DCM溶液中加入HCl的1,4-二噁烷(5mL，164.559mmol，169.30当量)溶液。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌2h。在真空下将所得混合物浓缩，得到6-{[4-(4-{2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮作为粗产物，直接用于下一步，无需进一步纯化。

LC/MS:610[M+H]⁺。

步骤3.2-(9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基乙酸叔丁酯在室温下，在空气气氛中，向6-{[4-(4-(4-{3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(580mg，0.909mmol，1.00当量)与2-溴乙酸叔丁酯(371.06mg，1.902mmol，2当量)的搅拌溶液加入DMF。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌过夜。在室温下用水淬灭反应。用EtOAc(3x10mL)萃取所得混合物。合并的有机层用盐水(2x10mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(10:1)洗脱，得到2-(9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸叔丁酯。

LC/MS:724[M+H]⁺。

步骤4.(7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酸在室温下，在空气气氛中，向2-(7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酸叔丁酯(178mg，0.246mmol，1.00当量)与DCM搅拌溶液中分批加入HCl(气体)的1,4-二噁烷(2mL，65.824mmol，267.70当量)溶液。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌4h。在真空下将所得混合物浓缩得到(7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酸，其直接用于下一步，无需进一步纯化。LC/MS:668[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物46)

在室温下，在空气气氛中，向(7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酸(160mg，0.240mmol，1.00当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(113.48mg，0.264mmol，1.1当量)的DMF搅拌溶液中加入HATU(182.20mg，0.480mmol，2当量)和DIEA(139.34mg，1.080mmol，4.5当量)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌2h。在室温下用水淬灭反应。用EtOAc(3x10mL)萃取所得混合物。合并的有机层用盐水(2x8mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液，得到粗产物。粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Prep OBD C18柱，30*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：15min内27％B至37％B，37％B；波长：254nm；RT1(min)：14.350以得到化合物46：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.11(s,1H),8.97(s,1H),8.82(s,1H),8.59(t,J＝6.0Hz,1H),8.04(t,J＝7.8Hz,1H),7.75(d,J＝8.1Hz,1H),7.55-7.67(m,4H),7.38-7.45(m,4H),6.89(d,J＝9Hz,2H),5.65(ddd,J＝16.4,10.5,5.7Hz,1H),5.31(s,1H),5.14(s,1H),4.98(dd,J＝10.2,1.5Hz,1H),4.86(dd,J＝17.1,1.8Hz,1H),4.68(d,J＝4.8Hz,2H),4.47(d,J＝10.2Hz,1H),4.38-4.44(m,1H),4.34-4.37(m,1H),4.27-4.29(m,1H),3.61(q,J＝10.5,9.6Hz,2H),3.00-3.18(m,9H),2.60(s,4H),2.45(s,3H),2.00-2.28(m,3H),1.81-1.95(m,3H),1.62-1.75(m,2H),1.46(s,6H),1.37(d,J＝12.9Hz,2H),1.24(d,J＝12.3Hz,3H),0.94(s,9H)。

LC/MS:1080.60[M+H]⁺。

化合物47

步骤1. 2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯

在室温下，在空气气氛中，向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(550mg，1.130mmol，1.00当量)和2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(541.01mg，2.260mmol，2当量)在DCE(10mL，126.315mmol，111.75当量)中的搅拌溶液中加入AcOH(0.68mg，0.011mmol，0.01当量)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌1h。在室温下向上述混合物中加入NaBH(OAc)₃(479.13mg，2.260mmol，2当量)。在室温下将所得混合物再搅拌2h。在室温下将反应用饱和NaHCO₃(水溶液)淬灭。所得混合物用CH₂Cl₂(3x20mL)萃取。合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，用无水MgSO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(10:1)洗脱，得到2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯。

LC/MS:710[M+H]⁺。

步骤2. 6-{[4-(4-{7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

在室温下，向2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(709mg，0.999mmol，1.00当量)的DCM搅拌溶液中分批加入TFA(10mL，134.630mmol，134.80当量)。在室温下将所得混合物搅拌2h。所得混合物减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(10:1)洗脱得到6-{[4-(4-{7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:610[M+H]⁺。

步骤3. 2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸叔丁酯

在室温下，在空气气氛中，向6-{[4-(4-{7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(400mg，0.656mmol，1.00当量)和2-溴乙酸叔丁酯(255.90mg，1.312mmol，2当量)的DMF搅拌溶液中加入DIEA(211.95mg，1.640mmol，2.5当量)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌2h。在室温下用水淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x8mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x8mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(10:1)洗脱，得到2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸叔丁酯。

LC/MS:724[M+H]⁺。

步骤4.(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸

在室温下，在空气气氛中，向2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸叔丁酯(120mg，0.166mmol，1.00当量)的DCM搅拌溶液中分批加入TFA(2mL，26.926mmol，162.44当量)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌过夜。通过LCMS可以检测到所需的产物。在真空下将所得混合物浓缩得到(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸。粗产物直接用于下一步，无需进一步纯化。

LC/MS:668[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物47)

在室温下，在空气气氛中，向(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸(110mg，0.165mmol，1.00当量)和(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(78.01mg，0.182mmol，1.1当量)的DMF搅拌溶液中加入HATU(81.42mg，0.215mmol，1.3当量)和DIEA(85.15mg，0.660mmol，4当量)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌2h。通过LCMS可以检测到所需的产物。在室温下用水淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x6mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x8mL)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液，得到粗产物。粗产物通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内45％B至75％B，75％B；波长：254nm；RT1(min)：6.5以提供化合物47：(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.12(s,1H),8.99(s,1H),8.82(s,1H),8.59(t,J＝6.0Hz,1H),8.04(t,J＝9.0Hz,1H),7.74-7.84(m,2H),7.55-7.65(m,3H),7.38-7.52(m,4H),6.90(d,J＝9.3Hz,2H),5.54-5.82(m,1H),5.08-5.44(m,2H),4.99(dd,J＝10.2,1.5Hz,1H),4.77-4.89(m,1H),4.68(d,J＝4.8Hz,2H),4.32-4.56(m,4H),4.14-4.31(m,1H),3.42-3.78(m,3H),3.09(s,4H),2.79-3.04(m,2H),2.61-2.77(m,1H),2.45(s,4H),2.37(s,6H),2.00-2.15(m,1H),1.83 -1.95(m,3H),1.52-1.68(m,6H),1.46(s,6H),0.94(s,9H)。

LC/MS:1081.05[M+H]⁺。

化合物48

步骤1. 3-(4-(异丙氧羰基)环己-1-烯-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在26℃下，向3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(3.03g，10.703mmol，1.00当量)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯(3.30g，11.773mmol，1.1当量)在异丙醇(20mL)中的搅拌溶液中先后加入碘化镍(II)(334.46mg，1.070mmol，0.1当量)和(1R,2R)反式-2-氨基环己醇盐酸盐(0.16g，1.070mmol，0.1当量)。将反应混合物用氮气脱气15min，并且在26℃下搅拌10min，然后在26℃下加入NaHMDS(21.41mL，21.406mmol，2当量)。将反应混合物加热至80℃并且在相同温度下搅拌16h。反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，并且用EtOAc(3x100mL)萃取。将有机层在Na₂SO₄(无水)上干燥，过滤并且减压浓缩。通过使用石油醚/EtOAc的线性梯度硅胶柱纯化粗产物，得到3-(4-(异丙氧基羰基)环己-1-烯-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。

步骤2. 3-[4-(异丙氧基羰基)环己基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-[4-(异丙氧基羰基)环己-1-烯-1-基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.65g，5.102mmol)的MeOH(15mL)溶液中加入Pd/C(0.53g，10％)。在室温下将所得混合物在H₂下搅拌1.5h。所得混合物用硅藻土过滤并且用MeOH洗涤。在真空下除去溶剂，得到3-[4-(异丙氧基羰基)环己基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:326.25[M+H]⁺

步骤3. 3-[4-(羟基甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃，在N₂下，向3-[4-(异丙氧基羰基)环己基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.44g，4.425mmol，1.0当量)的THF(15mL)溶液中滴加LiBH₄(6.64mL，13.275mmol，3.0当量，2mol/L)。在50℃下将所得混合物搅拌3.5h。在室温下将反应用饱和NH₄Cl(水溶液)淬灭。所得混合物用EA(3x20mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x10mL)洗涤，用无水NaSO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液，得到3-[4-(羟基甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:270.15[M+H]⁺。

步骤4. 3-(4-甲酰基环己基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向双(一氧化碳)(2.36g，18.56mmol，5.0当量)的溶液中加入DCM(40mL)。在-78℃下将所得混合物搅拌20min。在-78℃下向上述混合物中加入DMSO(2.03g，25.98mmol，7当量)。在-78℃下将所得混合物再搅拌20min。在-78℃下向上述混合物中加入3-[4-(羟基甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g，3.71mmol，1.0当量)和DCM(10mL)。在-78℃下将所得混合物再搅拌30min。在-78℃下向上述混合物中加入TEA(3.76g，37.12mmol，10.0当量)。在室温下将所得混合物再搅拌30min。在室温下将反应用H₂O淬灭。所得混合物用EA(3x60mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x20mL)和HCl(0.5mol/L，2x20mL)洗涤，用无水NaSO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液，得到3-(4-甲酰基环己基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:268.15[M+H]⁺。

步骤5.3-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯在室温下，在空气气氛中，向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(400mg，0.822mmol，1.0当量)和3-(4-甲酰基环己基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(439.59mg，1.644mmol，2当量)的MeOH(15mL)溶液中加入AcOH(20.0mg)。在60℃下将所得混合物在空气气氛中搅拌1h。在室温下向上述混合物中加入NaBH₃CN(82.66mg，1.315mmol，1.6当量)。在室温下将所得混合物搅拌4h。通过LCMS可以检测到所需的产物。在室温下反应用饱和NaHCO₃(水溶液)淬灭。所得混合物用EA(3x20mL)萃取。将合并的有机层用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液。残留物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(10:1)洗脱，得到3-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。LC/MS:738.40[M+H]⁺。

步骤6. 6-{[4-(4-{[4-(氮杂环丁烷-3-基)环己基]甲基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

向3-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(390mg，0.528mmol，1.0当量)的DCM(20mL)溶液中加入TFA(4mL)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌1h。减压浓缩反应物。残留物用ACN/H₂O(0.05％NH₄HCO₃)通过C18柱纯化，得到6-{[4-(4-{[4-(氮杂环丁烷-3-基)环己基]甲基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:638.65[M+H]⁺。

步骤7.{3-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-基}乙酸

在室温下，在空气气氛中，向6-{[4-(4-{[4-(氮杂环丁烷-3-基)环己基]甲基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(220mg，0.345mmol，1.0当量)的MeOH(8mL)溶液中加入乙醛酸(25.54mg，0.345mmol，1当量)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌1h。在室温下向上述混合物中加入NaBH₃CN(21.68mg，0.345mmol，1当量)。在室温下将所得混合物再搅拌5min。该反应物用ACN/H₂O(0.5％TFA)通过C18柱纯化得到{3-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-基}乙酸。

LC/MS:696.70[M+H]⁺。

步骤8.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(2-{3-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-基}乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物48)

在室温下，在空气气氛中，向{3-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-基}乙酸(150mg，0.216mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(102.09mg，0.238mmol，1.1当量)和HATU(122.94mg，0.324mmol，1.5当量)的DMF(4mL)溶液中加入DIEA(111.44mg，0.864mmol，4.0当量)。在室温下将所得混合物在空气气氛中搅拌2h。通过LCMS可以检测到所需的产物。反应混合物通过Prep-HPLC进一步纯化(柱：XBridgeShield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：11min内42％B至62％B，62％B；波长：254nm；RT1(min)：10.67；运行次数：0)以得到化合物48。(生成(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(2-{3-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-基}乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.15(s,1H),9.00(s,1H),8.83(s,1H),8.62(t,J＝6.0Hz,1H),8.05(s,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.58–7.61(m,4H),7.42(s,4H),6.92(d,J＝8.7Hz,2H),5.74-5.60(m,1H),5.33(s,1H),5.16(d,J＝3.4Hz,1H),5.00(m,1H),4.83(d,J＝17.2Hz,1H),4.51-4.69(m,2H),4.26-4.41(m,6H),3.50-3.66(m,3H),2.92-3.08(m,8H),2.46(s,7H),2.08(m,3H),1.64-1.90(m,4H),1.47(s,8H),1.35(s,1H),0.94(s,10H),0.82(s,4H)。

LC/MS:1108.60[M+H]⁺。

化合物49

步骤1. 2-(1-(4-(羟基甲基)环己基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯

将4-(羟基甲基)环己-1-酮(992.3mg，7.742mmol)、2-(氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(1g，7.742mmol)和AcOH(46mg，0.774mmol)溶解于40mL小瓶中的15mL MeOH中，并且在70℃下搅拌1h。然后将混合物冷却至室温。加入NaBH₃CN(973mg，15.485mmol)并且在室温下搅拌1h。LCMS显示反应成功，混合物用100mL EA稀释并且用NaHCO₃(水溶液)洗涤，有机层合并并且用Na₂SO₄干燥，浓缩。残留物用MeOH/DCM(0～15％)硅胶柱纯化以得到产物。

步骤2. 2-(1-(4-甲酰基环己基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯

2-[1-(4-甲酰基环己基)氮杂环丁-3-基]乙酸甲酯(600mg，93.09％)在-78℃下，在N₂气体中，向草酰氯(854.61mg，6.732mmol，2.5当量)的DCM(10mL)搅拌溶液/混合物中滴加/分批加入DMSO(1052.22mg，13.465mmol，5当量)。在-78℃下所得混合物搅拌20min。之后，在-78℃下加入在2mL DCM中的2-{1-[4-(羟基甲基)环己基]氮杂环丁烷-3-基}乙酸甲酯(650mg，2.693mmol，1.00当量)并且搅拌30min。在-78℃下反应用TEA(1907.81mg，18.851mmol，7当量)淬灭，并且在室温下搅拌30min。所得混合物用DCM(3×30mL)萃取并且用水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，减压浓缩滤液，得到2-[1-(4-甲酰基环己基)氮杂环丁-3-基]乙酸甲酯，用于下一步而不进行纯化。

步骤3. 2-(1-(4-((4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯

将2-[1-(4-甲酰基环己基)氮杂环丁烷-3-基]乙酸甲酯(860.70mg，3.598mmol，7当量)、1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(250mg，0.514mmol，1当量)和乙酸(3.70mg，0.062mmol，0.1当量)溶解于40mL小瓶中的甲醇(10mL)中，并且在70℃下搅拌1h。然后将混合物冷却至室温。加入NaBH₃CN(64.58mg，1.028mmol，2当量)并且在室温下搅拌1h。LCMS显示反应成功，混合物用100mL EA稀释并且用NaHCO₃(水溶液)洗涤，有机层合并并且用Na₂SO₄干燥并且浓缩。残留物用MeOH/DCM(0～15％)通过硅胶柱纯化得到2-{1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-3-基}乙酸甲酯。

LC/MS:710.15[M+H]⁺。

步骤4.{1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-3-基}乙酸

将2-{1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-3-基}乙酸甲酯(170mg，0.239mmol，1.0当量)、THF(6mL)、MeOH(2mL)和LiOH(0.96mL，3mol/L，2.868mmol，12.0当量)加入带有搅拌棒的25mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌过夜。将混合物减压浓缩，并且通过MeOH/H₂O(0.05％TFA)C18柱纯化以得到产物。

LC/MS:696.70[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(1-(4-((4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物49)

将{1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-3-基}乙酸(100mg，0.144mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(61.88mg，0.144mmol，1.0当量)、HATU(81.96mg，将0.216mmol，1.5当量)、DIEA(74.29mg，0.576mmol，4.0当量)和DMF(4mL)加入带有搅拌棒的25mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌2h。LCMS显示反应完成，反应混合物通过Prep-HPLC纯化(柱：XBridge Prep Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH₄HCO₃)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内65％B至85％B，85％B；波长：254nm；RT1(min)：3.9；以得到化合物49(2S,4R)-1-(S)-2-(2-(4-(4-(2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.02(s,1H),9.02(S,1H),8.87(s,1H),8.70(s,1H),8.45(t,J＝6.0Hz,1H),7.92(t,J＝7.7Hz,1H),7.76-7.8(m,1H),7.41-7.63(m,3H),7.22-7.35(m,4H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),5.58-5.82(m,1H),5.45-5.64(m,1H),5.20(s,1H),5.01(d,J＝3.5Hz,1H),4.78-4.95(m,1H),4.62-4.76(m,2H),4.56(d,J＝5.9Hz,1H),4.20-4.44(m,3H),4.15-4.22(m,1H),3.56-3.72(m,2H),3.15-3.28(m,2H),3.13(s,4H),2.54(s,2H),2.33(d,J＝4.0Hz,6H),2.00(d,J＝8.1Hz,4H),1.85-1.96(m,2H),1.53-1.82(m,3H),1.42-1.50(m,6H),1.20-1.38(m,5H),0.81(s,9H),0.71(s,4H)。

LC/MS:1108.65[M+H]⁺。

化合物51

步骤1. 4-[3-(羟基甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己烷-1-甲酸乙酯

向氮杂环丁烷-3-基甲醇(800mg，9.183mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入4-氧代环己烷-1-甲酸乙酯(2.3g，13.774mmol)和乙酸(0.01mL)。在60℃下将所得混合物保持1h。冷却至室温后，加入NaBH₃CN(692.4mg，11.020mmol)。在室温下将所得混合物保持1h。所得混合物用乙酸乙酯(2x30mL)萃取并且用NaHCO₃(水溶液)洗涤。将有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-40％MeOH/DCM)纯化，得到4-[3-(羟基甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己烷-1-甲酸乙酯。

LC/MS:228.10[M+H]⁺。

步骤2. 4-{3-[(甲烷磺酰基氧基)甲基]氮杂环丁烷-1-基}环己烷-1-甲酸乙酯

在0℃下向4-[3-(羟基甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己烷-1-甲酸乙酯(400mg，1.657mmol)和TEA(335.4mg，3.314mmol)的DCM(10mL)溶液中加入甲烷磺酰氯(208.8mg，1.823mmol)。在室温下将混合物搅拌1h。将所得混合物用水稀释并且用DCM(2x20mL)萃取。将有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-20％MeOH/DCM)纯化，得到4-{3-[(甲烷磺酰基氧基)甲基]氮杂环丁烷-1-基}环己烷-1-甲酸乙酯。

LC/MS:306.30[M+H]⁺。

步骤3. 4-[3-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己烷-1-甲酸甲酯

向1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(300mg，0.617mmol)的溶液中加入4-{3-[(甲烷磺酰基氧基)甲基]氮杂环丁烷-1-基}环己烷-1-甲酸甲酯(188.29mg，0.617mmol)和Cs₂CO₃(302.26mg，0.925mmol)。在70℃下将混合物搅拌过夜。残留物通过CH₃CN/NH₄HCO₃水(5％-100％)C18柱纯化，得到4-[3-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己烷-1-甲酸甲酯。

LC/MS:696.65[M+H]⁺。

步骤4. 4-[3-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己烷-1-甲酸

向4-[3-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己烷-1-甲酸甲酯(300mg，0.431mmol)在THF(10mL)和MeOH(2.5mL)中的溶液中加入氢氧化锂(2.16mL，6.465mmol，3M在H₂O中)。在室温下将混合物搅拌过夜。残留物通过CH₃CN/NH₄HCO₃水(5％-100％)C18柱纯化，得到4-[3-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己烷-1-甲酸。

LC/MS:682.40[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-({4-[3-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物51)

向4-[3-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己烷-1-甲酸(140mg，0.205mmol)的DMF(5mL)溶液中加入(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(88.41mg，0.205mmol)、TEA(62.33mg，0.615mmol)和BOP(136.22mg，0.307mmol)。在室温下将所得混合物保持过夜。混合物通过Prep-HPLC纯化[柱：XBridge Prep OBD C18柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内18％B至46％B，46％B；波长：254nm；RT1(min)：6.1；运行次数：0]以提供化合物51(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-({4-[3-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)氮杂环丁烷-1-基]环己基}甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.94-9.05(m,1H),8.58(s,1H),7.33-7.46(m,4H),7.07-7.29(m,5H),6.83-7.05(m,2H),5.50(s,1H),5.04-5.30(m,3H),4.69-4.92(m,2H),4.10-4.63(m,7H),2.93-3.30(m,12H),2.58-2.92(m,5H),2.20-2.41(m,4H),1.55-2.10(m,8H),1.17-1.49(m,9H),0.72-1.09(m,11H)。

LC/MS:1094.55[M+H]⁺。

化合物52

步骤1. 3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)环丁-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环丁烯-1-甲酸甲酯

将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)环丁-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(250mg，0.514mmol，1当量)、3-(4-氧代哌啶-1-基)环丁烯-1-甲酸甲酯(759.81mg，3.598mmol，7当量)、乙酸(3.09mg，0.051mmol，0.1当量)和甲醇(10mL)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中，并且在60℃下搅拌1h。然后在将混合物冷却至室温后加入NaBH₃CN(64.58mg，1.028mmol，2当量)。并且将反应物在室温下搅拌6h。将EA加入混合物中，并且用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，分离有机层，然后用无水硫酸钠干燥。在真空下除去溶剂，残留物用DCM/MeOH(0～20％)通过硅胶柱纯化，得到3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)环丁-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环丁烯-1-甲酸甲酯。

LC/MS:682.60[M+H]⁺。

步骤2. 3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环丁烷-1-甲酸

将3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环丁烷-1-甲酸甲酯(170mg，0.249mmol，1当量)、四氢呋喃(6.00mL，83.101mmol，333.74当量)、甲醇(2.00mL)和LiOH(0.83mL，3M在H₂O中)加入100mL圆底烧瓶中。并且在室温下将反应物搅拌2h。残留物用H₂O(0.5％TFA)/5～100％ACN通过C18柱纯化。在真空下除去溶剂，得到3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环丁烷-1-甲酸。

LC/MS:668.60[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环丁基]甲酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物52)

将3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环丁烷-1-甲酸(110mg，0.165mmol，1当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(70.9mg，0.165mmol，1当量)、HATU(59.5mg，0.247mmol，1.5当量)、二甲基甲酰胺(4mL)和DIEA(63.8mg，0.495mmol，3当量)加入带有搅拌棒的圆底烧瓶中。然后在室温下搅拌18h。通过Prep-HPLC在以下条件下纯化获得的残留物：柱，XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/LNH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN(11min内30％至55％，0.1min内55％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至30％，1min内30％至30％；检测器，UV 254nm以得到化合物52(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环丁基]甲酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.15(s,1H),8.99(s,1H),8.83(s,1H),8.58(t,J＝6.0Hz,1H),8.05(t,J＝7.9Hz,1H),7.70-7.87(m,2H),7.53-7.65(m,3H),7.34-7.50(m,4H),6.92(d,J＝8.8Hz,2H),5.57-5.76(m,1H),5.34(s,1H),5.15(d,J＝3.5Hz,1H),4.95-5.05(m,1H),4.78-4.87(m,1H),4.69(d,J＝6.1Hz,2H),4.55(d,J＝9.3Hz,1H),4.51-4.33(m,3H),4.17-4.28(m,1H),3.67(s,2H),3.08(s,4H),2.83(s,3H),2.63(s,4H),2.45(s,3H),2.16(m,2H),1.98-2.09(m,2H),1.83-1.98(m,3H),1.61-1.80(m,4H),1.47(s,8H),1.24(s,1H),0.94(d,J＝2.9Hz,9H)。

LC/MS:1080.55[M+H]⁺

化合物53

步骤1. 4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯

将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(500mg，1.028mmol)、4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(614mg，3.084mmol)、AcOH(6.17mg，0.103mmol)和MeOH(25mL)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中，并且在60℃下搅拌1h。然后在将混合物冷却至室温后加入NaBH₃CN(130mg，2.056mmol)，然后在室温下搅拌3h。将EA加入混合物中，然后用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，分离有机层，然后用无水硫酸钠干燥。在真空下除去溶剂，残留物用0～20％DCM/MeOH的硅胶柱纯化，得到4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:670.55[M+H]⁺。

步骤2. 1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-({4-[4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

向4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.746mmol，1当量)、TFA(1mL)和DCM(10mL)加入圆底烧瓶中。然后将反应在室温下搅拌2h。残留物用H₂O(0.5％NH₄HCO₃)/5～100％ACN通过C18柱纯化，得到1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-({4-[4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。LC/MS:570.55[M+H]⁺。

步骤3. 3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-({4-[4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(350mg，0.614mmol，1当量)、3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(631.04mg，3.684mmol，6当量)、乙酸(3.69mg，0.061mmol，0.1当量)和甲醇(10mL)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中。然后将反应物在60℃下搅拌1h。然后在将混合物冷却至室温后加入NaBH₃CN(77.21mg，1.228mmol，2当量)，然后在室温下搅拌反应16h。将EA加入混合物中，然后用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，分离有机层，然后用无水硫酸钠干燥。在真空下除去溶剂，残留物用DCM/MeOH(0～20％)通过硅胶柱纯化，得到3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。

LC/MS:725.45[M+H]⁺。

步骤4. 6-[(4-{4-[1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

将3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(268mg，0.370mmol，1当量)、TFA(1mL)和DCM(10mL)加入带有搅拌棒的圆底烧瓶中。然后在室温下搅拌2h。残留物通过H₂O(0.05％NH₄HCO₃)/5～100％ACN的C18柱纯化，然后用100％ACN纯化，再用100％MeOH纯化，得到6-[(4-{4-[1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮。

LC/MS:625.40[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羰基氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物53)

在0℃下，在N₂下，将(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(379.03mg，0.880mmol，5当量)、TEA(302.86mg，2.992mmol，17当量)和DCM(10mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中。将混合物冷却至0℃后加入三光气(182.86mg，0.616mmol，3.5当量)，然后在室温下搅拌1.5h。在真空下除去溶剂。加入EA并且过滤固体。将得到的固体加入6-[(4-{4-[1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(110mg，0.176mmol，1当量)和TEA(302.86mg，2.992mmol，17当量)的DCM(1.5mL)溶液中，在室温下搅拌反应20h。所得残留物通过Prep-HPLC纯化(XBridge Prep Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃)的水，流动相B：ACN(7min内38％至58％，0.1min内58％至100％，2min内100％至100％，0.1min内100％至38％，1min内38％至38％；检测器，UV254 nm)以提供化合物53(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羰基氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.15(s,1H),8.99(s,1H),8.82(s,1H),8.49-8.65(m,1H),8.05(s,1H),7.75(d,J＝8.2Hz,1H),7.55-7.65(m,3H),7.57(s,4H),6.85-6.99(m,2H),5.77-5.82(m,1H),5.58-5.71(m,1H),5.32(s,1H),5.13(d,J＝3.6Hz,1H),4.99(m,1H),4.82(m,1H),4.68(d,J＝6.0Hz,2H),4.31-4.47(m,2H),4.23(m,2H),3.90(t,J＝7.6Hz,1H),3.75-3.85(m,2H),3.66(s,4H),3.30(s,1H),3.08(s,4H),2.99(s,1H),2.72-2.84(m,2H),2.56-2.69(m,3H),2.42-2.58(m,3H),2.17-2.29(m,1H),2.04(t,J＝10.4Hz,1H),1.96-1.86(m,1H),1.68-1.72(m,4H),1.46(s,8H),0.93(s,9H)。

LC/MS:1081.60[M+H]⁺。

化合物54

步骤1. 3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(3.0g，6.165mmol，1.0当量)、3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(3.17g，18.495mmol，3.0当量)、AcOH(20.7mg)和MeOH(40mL)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中，并且在60℃下搅拌2h。将混合物用冰水冷却，加入NaBH₃CN(0.77g，12.330mmol，2.0当量)，并且在室温下搅拌2h。加入EA混合物后冷却至室温并且用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩。反应混合物用DCM/MeOH通过硅胶柱纯化，得到产物。

LC/MS:642.15[M+H]⁺。

步骤2.6-({4-[4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮将3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.0g)、TFA(4mL)和DCM(20mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌2h。减压浓缩反应混合物，用MeCN/H₂O(0.05％NH₄HCO₃)通过C18柱纯化得到产物。

LC/MS:542.30[M+H]⁺。

步骤3.3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-甲酸叔丁酯将6-({4-[4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(1.0g，1.846mmol，1.0当量)、3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.9g，11.076mmol，6.0当量)、AcOH(20.7mg)和MeOH(10mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在60℃下搅拌2h。将混合物用冰水冷却，加入NaBH₃CN(0.23g，3.692mmol，2.0当量)，并且在室温下搅拌1h。加入EA混合物后冷却至室温并且用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩。反应混合物用DCM/MeOH通过硅胶柱纯化，得到产物。

LC/MS:697.40[M+H]⁺。

步骤4.6-{[4-(4-{[1,3'-联氮杂环丁烷]-3-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

将3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-甲酸叔丁酯(700mg)、TFA(2.0mL)和DCM(10.0mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌1h。将混合物减压浓缩，并且通过MeCN/H₂O(0.05％NH₄HCO₃)通过C18柱纯化以得到产物。

LC/MS:597.55[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺

将6-{[4-(4-{[1,3'-联氮杂环丁烷]-3-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(150mg，0.251mmol，1.0当量)、乙醛酸(18.61mg，0.251mmol，1.0当量)和MeOH(10mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，在室温下搅拌1h。将混合物用冰水冷却，加入NaBH₃CN(15.80mg，0.251mmol，1.0当量)，并且在室温下搅拌2min。减压浓缩反应混合物，并且通过MeOH/H₂O(0.5％TFA)通过C18柱纯化得到产物。

LC/MS:655.60[M+H]⁺。

步骤6.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物54)

将(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)乙酸(180mg，0.275mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(59.18mg，0.138mmol，0.5当量)、BOP(182.38mg，0.413mmol，1.5当量)、TEA(111.27mg，1.100mmol，4.0当量)和DMF(3mL)加入带有搅拌棒的10mL的schlenk管中，并且在室温下搅拌1h。混合物通过Prep-HPLC进一步纯化(柱：Xselect CSH C18 OBD柱30*150mm 5μm，n；流动相A：水(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：11min内25％B至40％B，40％B；波长：254nm；RT1(min)：10.72；运行次数：0)以得到化合物54(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.02(s,1H),8.95-9.08(m,1H),8.86(s,1H),8.70(s,1H),8.18-8.52(m,1H),7.96-8.13(m,1H),7.91(d,J＝8.1Hz,1H),7.40-7.62(m,4H),7.28(s,4H),6.82-6.95(m,2H),5.55-5.77(m,1H),5.21(s,1H),5.04(d,J＝3.4Hz,1H),4.82-4.92(m,1H),4.56(d,J＝6.1Hz,2H),4.13-4.60(m,5H),3.50-3.78(m,3H),3.02-3.15(m,8H),2.97(d,J＝4.4Hz,4H),2.42-2.45(m,3H),2.25(s,4H),1.34(s,8H),1.10-1.13(m,3H),0.82(s,9H)。

LC/MS:1067.60[M+H]⁺。

化合物55

/>

将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(3.0g，6.165mmol，1.0当量)、3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(3.17g，18.495mmol，3.0当量)、AcOH(20.7mg)和MeOH(40mL)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中，并且在60℃下搅拌2h。将混合物在冰水浴中冷却。然后加入NaBH₃CN(0.77g，12.330mmol，2.0当量)，在室温下搅拌2h。将混合物冷却至室温后加入EA并且用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩。反应混合物用DCM/MeOH通过硅胶柱纯化，得到产物。

LC/MS:642.15[M+H]⁺。

步骤2. 6-({4-[4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

将3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.0g)、TFA(4mL)和DCM(20mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌2h。减压浓缩反应混合物，用MeCN/H₂O(0.05％NH₄HCO₃)通过C18柱纯化得到产物。

LC/MS:542.30[M+H]⁺。

步骤3. 3-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

将6-({4-[4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(400mg，0.738mmol，1.0当量)、3-甲酰氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(273.56mg，1.476mmol，2.0当量)、AcOH(20.7mg)和MeOH(8mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在60℃下搅拌2h。将混合物在冰水浴中冷却。然后加入NaBH₃CN(92.81mg，1.476mmol，2.0当量)，在室温下搅拌反应1.5h。将混合物冷却至室温后加入EA并且用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩。反应混合物用DCM/MeOH硅胶柱纯化，得到产物。

LC/MS:711.65[M+H]⁺。

步骤4. 6-[(4-{4-[1-(氮杂环丁烷-3-基甲基)氮杂环丁烷-3-基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

将3-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(360mg)和HCl-1,4-二噁烷(20mL)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌1h。反应混合物用H₂O(NH₄HCO₃，0.05％)/THF/MeOH通过C18凝胶柱纯化，得到产物。

LC/MS:611.55[M+H]⁺。

步骤5.{3-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]氮杂环丁烷-1-基}乙酸

将6-[(4-{4-[1-(氮杂环丁烷-3-基甲基)氮杂环丁烷-3-基]哌嗪-1-基}苯基)氨基]-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.327mmol，1.0当量)、乙醛酸(24.24mg，0.327mmol，1.0当量)和MeOH(10mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，在室温下搅拌2h。加入NaBH₃CN(20.58mg，0.327mmol，1.0当量)，并且在室温下搅拌2min。反应混合物用MeCN/H₂O(0.05％TFA)通过C18凝胶柱纯化至产物。

LC/MS:669.60[M+H]⁺。

步骤6.(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(2-{3-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]氮杂环丁烷-1-基}乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物55)

将{3-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]氮杂环丁烷-1-基}乙酸(70mg，0.105mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(36.05mg，0.105mmol，1.0当量)、HATU(54.11mg，将0.420mmol，1.5当量)、DIEA(3.86mg，0.028mmol，4.0当量)和DMF(3mL)加入带有搅拌棒的10mL的schlenk管中，并且在室温下搅拌1h。混合物通过Prep-HPLC进一步纯化(柱：Xselect CSH C18 OBD柱30*150mm 5μm，n；流动相A：水(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：9min内36％B至56％B，56％B；波长：254nm；RT1(min)：8.35；运行次数：0)以得到化合物55(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(2-{3-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]氮杂环丁烷-1-基}乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.14(s,1H),8.97(s,1H),8.81(s,1H),8.58-8.70(m,1H),7.96-8.11(m,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,1H),7.55(s,4H),7.39(s,4H),6.86-6.96(m,2H),5.55-5.74(m,1H),5.32(s,1H),5.14(d,J＝3.4Hz,1H),4.88-5.15(m,1H),4.74-4.86(m,1H),4.66(d,J＝6.0Hz,2H),4.31-4.53(m,4H),4.20-4.28(m,1H),3.69-3.60(m,1H),3.56-3.75(m,2H),3.10-3.52(m,2H),3.05(d,J＝8.9Hz,5H),2.76-2.99(m,5H),2.76(t,J＝6.4Hz,2H),2.43(s,4H),2.33(s,5H),1.87-2.10(m,2H),1.44(s,6H),1.22(s,1H),0.91(s,9H)。

LC/MS:1081.50[M+H]⁺。

化合物56

将1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(3.0g，6.165mmol，1.0当量)、3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(3.17g，18.495mmol，3.0当量)、AcOH(20.7mg)和MeOH(40mL)加入带有搅拌棒的100mL圆底烧瓶中，并且在60℃下搅拌2h。将混合物在冰水浴中冷却。然后加入NaBH₃CN(0.77g，12.330mmol，2.0当量)，在室温下搅拌反应2h。在将混合物冷却至室温后加入EA。有机层用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩。残留物用DCM/MeOH通过硅胶柱纯化，得到产物。

LC/MS:642.15[M+H]⁺。

步骤2.6-({4-[4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮将3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.0g)、TFA(4mL)和DCM(20mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌2h。减压浓缩反应混合物，并用MeCN/H₂O(0.05％NH₄HCO₃)通过C18柱纯化得到产物。

LC/MS:542.30[M+H]⁺。

步骤3.3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-甲酸叔丁酯将6-({4-[4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基]苯基}氨基)-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(1.0g，1.846mmol，1.0当量)、3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.9mg，11.076mmol，6.0当量)、AcOH(20.7mg)和MeOH(10mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中。在60℃下将反应物搅拌2h。将混合物在冰水批次中冷却。加入NaBH₃CN(0.23g，3.692mmol，2.0当量)，在室温下搅拌1h。在将混合物冷却至室温并且用饱和NaHCO₃水溶液(10mL)洗涤后加入EA。然后用无水硫酸钠干燥，过滤并且减压浓缩。反应混合物用DCM/MeOH通过硅胶柱纯化，得到产物。

LC/MS:697.40[M+H]⁺。

步骤4. 6-{[4-(4-{[1,3'-联氮杂环丁烷]-3-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮

将3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-甲酸叔丁酯(700mg)、TFA(2.0mL)和DCM(10.0mL)加入带有搅拌棒的50mL圆底烧瓶中，在室温下搅拌1h。将混合物减压浓缩，残留物用MeCN/H₂O(0.05％NH₄HCO₃)通过C18柱纯化，得到产物。

LC/MS:597.55[M+H]⁺。

步骤5. 3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)丙酸甲酯

将6-{[4-(4-{[1,3'-联氮杂环丁烷]-3-基}哌嗪-1-基)苯基]氨基}-1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(280mg，0.469mmol，1.0当量)、丙烯酸甲酯(40.39mg，0.469mmol，1.0当量)和MeOH(10mL)加入带有搅拌棒的圆底烧瓶中。将反应物在60℃下搅拌1h。反应混合物用DCM/MeOH通过硅胶柱纯化，得到产物。

LC/MS:683.65[M+H]⁺。

步骤6. 3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)丙酸

将2-{1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-3-基}乙酸甲酯(107mg，0.157mmol，1.0当量)、THF(6mL)、MeOH(2mL)和LiOH(0.63mL，3mol/L，1.884mmol，12.0当量)加入带有搅拌棒的25mL圆底烧瓶中，在室温下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物。残留物用MeOH/H₂O(0.05％TFA)通过C18柱纯化，得到产物。

LC/MS:669.65[M+H]⁺。

步骤7.(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物56)

将3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)丙酸(80mg，0.120mmol，1.0当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(41.20mg，0.096mmol，0.8当量)、BOP(79.36mg，0.180mmol，1.5当量)、TEA(48.42mg，0.480mmol，4.0当量)和DMF(3mL)加入带有搅拌棒的25mL圆底烧瓶中，并且在室温下搅拌1h。通过Prep-HPLC进一步纯化混合物(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10min内40％B至52％B，52％B；波长：254nm；RT1(min)：6.38；运行次数：0)以得到化合物56(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.00(s,1H),9.01(s,1H),8.86(s,1H),8.70(s,1H),8.44(t,J＝5.9Hz,1H),8.21(d,J＝9.3Hz,1H),7.92(t,J＝7.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.1Hz,1H),7.44(s,3H),7.22-7.35(m,4H),6.85-3.96(m,2H),5.54-5.75(m,1H),5.20-5.42(m,1H),5.19(s,1H),5.01(s,1H),4.72-4.87(m,1H),4.58-4.70(m,2H),4.56(d,J＝6.1Hz,4H),4.24(s,1H),3.63(s,2H),3.41(s,2H),3.11(s,3H),2.97(s,5H),2.78(d,J＝7.8Hz,3H),2.32(s,3H),2.26(s,1H),2.07-2.25(m,2H),1.88(s,3H),1.34(s,6H),1.12(s,5H),0.83(s,8H)。

LC/MS:1081.60[M+H]⁺.

化合物57

步骤1. 3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-酮

向9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(3g，11.220mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(4mL)，在室温下将所得混合物搅拌1h。反应通过LCMS监测。将反应浓缩得到3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-酮。

LC/MS:168.13[M+H]⁺。

步骤2. 2-{9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基}乙酸乙酯

向3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-酮(1.5g，8.969mmol，1当量)的DMF(5mL)溶液中加入K₂CO₃(6.20g，44.845mmol，5当量)、溴乙酸乙酯(1.20g，7.175mmol，0.8当量)。在室温下将所得混合物搅拌16h。反应通过LCMS监测。用H₂O(25mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化，得到2-{9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基}乙酸乙酯。

LC/MS:254.17[M+H]⁺。

步骤3.2-(9-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸乙酯向1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(200mg，0.390mmol，1当量)的MeOH(10mL)溶液中加入2-{9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基}乙酸乙酯(197.68mg，0.780mmol，2当量)、AcOH(40mg)。在60℃下将所得混合物搅拌1.5h，然后加入NaBH₃CN(36.78mg，0.585mmol，1.5当量)。在60℃下将所得混合物搅拌4h。反应通过LCMS监测。完成后。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x30mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化，得到2-(9-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸乙酯。

LC/MS:750.44[M+H]⁺。

步骤4.(9-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸

向2-(9-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸乙酯(500mg，0.667mmol，1当量)在H₂O(5mL)和THF(5mL)中的的溶液中加入LiOH.H₂O(139.87mg，3.335mmol，5当量)。在室温下将所得混合物搅拌16h。反应通过LCMS监测。完成后，通过反相快速色谱纯化残留物，条件如下：柱C18硅胶；流动相，MeCN水溶液，30min中的0％至50％梯度，检测器，UV254，220nm。这产生了(9-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸。

LC/MS:722.41[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-(9-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物57)

向(9-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酸(160mg，0.222mmol，1当量)的DMF(5mL，64.608mmol，291.50当量)的溶液中加入NMI(109.19mg，1.332mmol，6当量)、TCFH(186.56mg，0.666mmol，3当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(95.43mg，0.222mmol，1当量)，在室温下将所得混合物搅拌1h，通过LCMS监测反应。完成后。反应用H₂O(25mL)淬灭。所得混合物用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水(3x100mL)洗涤，然后浓缩，所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化，然后用Prep-HPLC纯化，条件如下：柱，Sun Fire Prep C18，19*150mm5umH PrepC-001(T)；流动相，A相：含(10mmol/L NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)的水；B相：CH₃CN(40％CH₃CN在7min内达到70％，在1min内达到70％CH₃CN，在1min内保持100％，在0.1min内下降到40％CH₃CN，在0.9min内保持40％)；检测器，UV220和254nm提供(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-(9-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.11(brs,1H),9.00(s,1H),8.82(s,1H),8.63(t,J＝61Hz,1H),7.93(brs,1H),7.82(d,J＝10Hz,1H),7.69(d,J＝8.2Hz,1H),7.52-7.61(m,2H),7.43(q,J＝8.3Hz,4H),6.90(d,J＝8.4Hz,2H),5.58-5.78(m,1H),5.16(d,J＝3.2Hz,1H),5.06(s,1H),5.01(d,J＝10Hz,1H),4.85(d,J＝17.1Hz,1H),4.70-4.82(m,1H),4.50-4.65(m,2H),4.32-4.47(m,3H),4.10-4.30(m,1H),3.52-3.70(m,2H),3.06(s,4H),2.90-3.03(m,3H),2.73-2.85(m,1H),2.62(s,4H),2.40-2.44(m,7H),2.13-2.22(m,2H),1.99-2.10(m,2H),1.86-1.98(m,2H),1.61-1.75(m,3H),1.42-1.60(m,4H),1.28-1.40(m,4H),1.01-1.12(m,2H),0.94(s,9H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。

LC/MS:1134.55[M+H]⁺。

化合物58

步骤1. 7-氮杂螺[3.5]壬-2-酮

向2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(3g，12.536mmol，1当量)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(4mL)，在室温下将所得混合物搅拌1h。反应通过LCMS监测。将反应浓缩得到7-氮杂螺[3.5]壬-2-酮。

LC/MS:140.10[M+H]⁺。

步骤2. 2-{2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基}乙酸乙酯

向7-氮杂螺[3.5]壬-2-酮(1.6g，11.494mmol，1当量)的DMF(5mL)溶液中加入K₂CO₃(7.94g，57.470mmol，5当量)、溴乙酸乙酯(1.54g，9.195mmol，0.8当量)。在室温下将所得混合物搅拌1h。用H₂O(15mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x40mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x50mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化，得到2-{2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基}乙酸乙酯。

LC/MS:226.14[M+H]⁺。

步骤3.2-(2-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸乙酯向1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-6-{[4-(哌嗪-1-基)苯基]氨基}-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(400mg，0.780mmol，1当量)的MeOH(10mL)溶液中加入2-{2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基}乙酸乙酯(404.33mg，1.794mmol，2.3当量)、AcOH(40mg，0.666mmol，0.85当量)。在60℃下将所得混合物搅拌1.5h，然后加入NaBH₃CN(73.55mg，1.170mmol，1.5当量)。在60℃下将所得混合物搅拌4h。反应通过LCMS监测。用H₂O(5mL)淬灭反应。所得混合物用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x30mL)洗涤，然后浓缩。所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化，得到2-(2-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸乙酯。

LC/MS:722.41[M+H]⁺。

步骤4.(2-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸向2-(2-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸乙酯(500mg，0.693mmol，1当量)在H₂O(3mL)和THF(3mL)中的溶液中加入LiOH.H₂O(145.31mg，3.465mmol，5当量)。在室温下将所得混合物搅拌16h。反应通过LCMS监测。完成后，通过反相快速色谱纯化残留物，条件如下：柱C18硅胶；流动相，MeCN水溶液，30min中的0％至50％梯度，检测器，UV254，220nm。这产生了(2-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸。

LC/MS:694.38[M+H]⁺。

步骤5.(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-(2-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物58)

向(2-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酸(200mg，0.288mmol，1当量)的DMF(5mL)溶液中加入NMI(142.00mg，1.728mmol，6当量)、TCFH(242.63mg，0.864mmol，3当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺(124.11mg，0.288mmol，1当量)，在室温下将所得混合物搅拌1h，通过LCMS监测反应。完成后。反应用H₂O(10mL)淬灭。所得混合物用EtOAc(3x30mL)萃取。合并的有机层用盐水(3x50mL)洗涤然后浓缩，所得残留物通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化，然后通过Prep-HPLC纯化，条件如下：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：含(10mmol/L NH₄HCO₃)的水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内42％B至62％B，62％B；波长：254nm；RT1(min)：5.18；运行次数：0以得到化合物58(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-(2-{4-[4-({1-[(7R)-7-乙基-7-羟基-5H,6H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(brs,1H),9.00(s,1H),8.82(s,1H),8.63(t,J＝6.1Hz,1H),7.93(brs,1H),7.84(d,J＝9.6Hz,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,1H),7.59(brs,2H),7.42(q,J＝8.4Hz,4H),6.92(d,J＝9.6Hz,2H),5.65-5.75(m,1H),5.16(d,J＝3.2Hz,1H),5.07(s,1H),4.99(d,J＝10.8Hz,1H),4.85(d,J＝17.2Hz,1H),4.70-4.76(m,1H),4.56-4.63(m,1H),4.38-4.52(m,4H),4.27-4.36(m,1H),3.61-3.65(m,2H),3.08(m,4H),2.92-3.01(m,2H),2.72-2.90(m,2H),2.62-2.70(m,1H),2.46(s,3H),2.41-2.44(m,2H),2.29-2.38(m,6H),2.14-2.22(m,1H),2.00-2.10(m,2H),1.82-1.96(m,4H),1.59-1.76(m,1H),1.58-1.62(m,2H),1.48-1.56(m,4H),0.94(s,9H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。

LC/MS:1106.50[M+H]⁺。

化合物59

/>

步骤1. 8-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯向8-氧代-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(78.10mg，308.28μmol)的DCM(5mL)溶液中依次加入2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(50mg，102.76μmol)和Et₃N(71.51μL，513.80μmol)。在25℃下将混合物搅拌2h。然后加入NaBH(OAc)₃(108.90mg，513.80μmol)，并且将所得混合物再搅拌14h。完成后，用H₂O(10mL)淬灭反应。有机层用DCM(10mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩。残留物通过硅胶柱纯化，用DCM/MeOH(9/1)洗脱，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 724.5[M+H]⁺。

步骤2. 6-((4-(4-(2-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐

向8-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酸叔丁酯(29.2mg，40.34μmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中加入HCl/1,4-二噁烷(4M，15mL)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，真空浓缩混合物，真空干燥残留物，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 624.3[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-N-((S)-3-(8-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物59)

向6-((4-(4-(2-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐(25mg，37.92μmol)的DMAC(2mL)溶液中依次加入((S)-3-((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酸(27.64mg，48.09μmol)、DIPEA(20.94μL，120.23μmol)、HOAt(6.55mg，48.09μmol)、HATU(18.29mg，48.09μmol)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，反应混合物直接用反相HPLC纯化(柱：Boston Green ODS 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：22％-52％，12min)以得到化合物59。

LCMS:MS(ESI)m/z 590.8[M/2+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.27(br,1H),9.01(s,1H),8.85(s,1H),8.60-8.54(m,1H),8.08-7.97(m,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.63-7.61(m,3H),7.50-7.35(m,4H),7.26-7.24(m,1H),7.02(d,J＝8.8Hz,2H),5.74-5.60(m,1H),5.30-5.21(m,1H),5.01(d,J＝9.2Hz 1H),4.83(dd,J＝1.2,17.2Hz 1H),4.69(d,J＝4.4Hz,2H),4.58(d,J＝9.2Hz,1H),4.51-4.42(m,1H),4.29(br,1H),3.82(d,J＝12.0Hz,3H),3.43-3.10(m,10H),3.08-2.87(m,3H),2.86-2.67(m,2H),2.47(m,3H),2.12-1.91(m,3H),1.83-1.53(m,5H),1.52-1.47(m,8H),1.42-1.29(m,4H),1.28-1.18(m,3H),0.98(s,9H)。

化合物60

步骤1. 2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯

向2-氧代-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(31.24mg，123.31μmol)的DCM(5mL)溶液中依次加入2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(50mg，102.76μmol)和Et₃N(42.91μL，308.28μmol)。在25℃下将混合物搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(43.56mg，205.52μmol)，并且将所得混合物再搅拌1h。完成后，用H₂O(10mL)淬灭反应。有机层用DCM(10mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩。残留物通过硅胶柱纯化，用DCM/MeOH(9/1)洗脱，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 724.9[M+H]⁺。

步骤2. 6-((4-(4-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-2-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐

向2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯(67.1mg，92.69μmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中加入HCl/1,4-二噁烷(4M，15mL)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，真空浓缩混合物，真空干燥残留物，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 624.5[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-N-((1S)-3-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物60)

向6-((4-(4-(8-氮杂螺[4.5]癸烷-2-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐(57.82mg，92.69μmol)的DMF(2mL)溶液中依次加入(S)-3-((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酸(63.92mg，111.23μmol)、DIPEA(48.44μL，278.07μmol)、HOAt(15.14mg，111.23μmol)、HATU(42.29mg，111.23μmol)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，反应混合物直接用反相HPLC纯化(柱：Boston Green ODS 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：22％-42％，10min)以得到化合物60。

LCMS:MS(ESI)m/z591.1[M/2+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.20(br s,1H),9.56(br s,1H),9.06-8.96(m,1H),8.85(s,1H),8.52(d,J＝5.2Hz,1H),8.02(t,J＝7.6Hz,1H),7.75(m,1H),7.68-7.60(m,3H),7.47-7.38(m,4H),7.25(d,J＝8.8Hz,1H),7.01(m,2H),5.74-5.59(m,1H),5.23-5.17(m,1H),4.99(d,J＝10.8Hz,1H),4.82(d,J＝18.0Hz,1H),4.68(m,2H),4.58(m,1H),4.48-4.43(m,1H),4.28(m,1H),3.63-3.23(m,13H),3.13(m,2H),2.99-2.74(m,4H),2.47(m,3H),2.20-1.71(m,5H),1.53(m,2H),1.46(s,6H),1.43-1.26(m,5H),1.26 -1.17(m,3H),1.16-1.04(m,1H),1.01-0.93(m,9H)。

化合物61

步骤1. 9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯

向9-氧代-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(82.97mg，310.33μmol)的DCM(5mL)溶液中依次加入2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(50mg，102.76μmol)和Et₃N(31.19mg，308.28μmol)。将混合物在25℃下搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(103.56mg，488.63μmol)，并且将所得混合物再搅拌1h。完成后，用H₂O(10mL)淬灭反应。有机层用DCM(10mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶柱纯化，用DCM/MeOH(9/1)洗脱，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 738.9[M+H]⁺。

步骤2. 6-((4-(4-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐

向9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(32.4mg，43.91μmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中加入HCl/1,4-二噁烷(4M，15mL)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，真空浓缩混合物，真空干燥残留物，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 638.4[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-N-((S)-3-(9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物61)

向6-((4-(4-(3-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐(28mg，43.90μmol)的DMAC(2mL)溶液中依次加入(S)-3-((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酸(25.23mg，43.90μmol)、DIPEA(22.94μL，131.70μmol)、HOAt(7.17mg，52.68μmol)、HATU(20.03mg，52.68μmol)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，反应混合物直接用反相HPLC纯化(柱：Boston Green ODS 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：17％-47％，12min)得到化合物61。

LCMS:MS(ESI)m/z 598.1[M/2+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.14(br s,1H),8.99(s,1H),8.82(s,1H),8.53(t,J＝8.8Hz,1H),8.11-8.00(m,1H),7.74(d,J＝7.6Hz,1H),7.64-7.53(m,3H),7.47-7.37(m,4H),7.26(d,J＝7.2Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),5.73-5.59(m,1H),5.33(s,1H),5.25-5.12(m,2H),4.99(d,J＝10.6Hz,1H),4.82(d,J＝18.4Hz,1H),4.68(d,J＝4.4Hz,2H),4.58(d,J＝9.2Hz,1H),4.48-4.38(m,1H),4.32-4.24(m,1H),3.62-3.52(m,2H),3.49-3.44(m,2H),3.07(m,4H),2.88-2.77(m,2H),2.61(m,4H),2.48–2.43(m,3H),2.25-2.14(m,1H),2.09-1.98(m,1H),1.81-1.67(m,2H),1.66-1.49(m,3H),1.46(s,6H),1.42-1.26(m,5H),1.27-1.09(m,5H),1.09-0.98(m,4H),0.95(s,9H)。

化合物62

步骤1. 2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯

向2-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(77.78mg，345.25μmol)的DCM(5mL)溶液中依次加入2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(50mg，102.76μmol)和Et₃N(42.91μL，308.28μmol)。在25℃下将混合物搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(93.56mg，441.44μmol)，并且将所得混合物再搅拌1h。通过LCMS(ES23824-13-P1c)显示检测到67.0％的目标产物。完成后，用H₂O(10mL)淬灭反应。有机层用DCM(10mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩。残留物通过硅胶柱纯化，用DCM/MeOH(9/1)洗脱，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 696.4[M+H]⁺。

步骤2. 6-((4-(4-(6-氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐

向2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(62.5mg，89.82μmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中加入HCl/1,4-二噁烷(4M，15mL)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，真空浓缩混合物，真空干燥残留物，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 596.4[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-N-((S)-3-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物62)

向6-((4-(4-(6-氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐(53.51mg，89.82μmol)的DMF(2mL)溶液中依次加入(S)-3-((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酸(61.94mg，107.79μmol)、DIPEA(46.94μL，269.46μmol)、HOAt(14.67mg，107.79μmol)、HATU(40.98mg，107.79μmol)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，反应混合物直接用反相HPLC纯化(柱：Boston Green ODS 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：22％-42％，10min)得到化合物62。

LCMS:MS(ESI)m/z 577.0[M/2+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.21(br s,1H),9.99-9.69(m,1H),9.01(s,1H),8.85(s,1H),8.61–8.51(m,1H),8.02(t,J＝8.0Hz,1H),7.75(m,1H),7.67–7.59(m,3H),7.47-7.35(m,4H),7.24(d,J＝9.2Hz,1H),7.01(d,J＝8.4Hz,2H),5.75–5.60(m,1H),5.27–5.14(m,1H),4.99(d,J＝10.0Hz,1H),4.82(m,1H),4.68(m,2H),4.58(m,1H),4.52–4.41(m,1H),4.28(m,1H),3.92-3.73(m,2H),3.50-3.32(m,8H),3.30-3.15(m,3H),3.06-2.84(m,4H),2.83-2.65(m,2H),2.47(s,3H),2.29-2.00(m,5H),1.98-1.69(m,3H),1.46(s,6H),1.43–1.28(m,2H),1.27–1.19(m,2H),1.00-0.94(s,9H)。

化合物63

步骤1. 2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯

向2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(79.51mg，332.25μmol)的DCM(2mL)溶液中依次加入2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(50mg，102.76μmol)和Et₃N(42.91μL，308.28μmol)。将混合物在25℃下搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(103.56mg，488.63μmol)，并且将所得混合物再搅拌1h。完成后，用H₂O(10mL)淬灭反应。有机层用DCM(10mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩。残留物通过硅胶柱纯化，用DCM/MeOH(9/1)洗脱，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 710.5[M+H]⁺。

步骤2. 6-((4-(4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐

向2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(52mg，72.67μmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中加入HCl/1,4-二噁烷(4M，15mL)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，真空浓缩混合物，真空干燥残留物，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 610.5[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-N-((S)-3-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物63)

向6-((4-(4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐(47mg，72.73μmol)的DMF(2mL)溶液中依次加入(S)-3-((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酸(50.15mg，87.28μmol)、DIPEA(38.00μL，218.19μmol)、HATU(33.19mg，87.28μmol)、HOAt(11.88mg，87.28μmol)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，反应混合物直接用反相HPLC纯化(柱：Boston Green ODS 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：20％-40％，12min)以得到化合物63。

LCMS:MS(ESI)m/z 584.1[M/2+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,MeOD)δ8.89(s,1H),8.80(s,1H),8.42(s,1H),7.96(t,J＝8.0Hz,1H),7.76(d,J＝8.4Hz,1H),7.64(d,J＝7.6Hz,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,2H),7.53-7.48(m,1H),7.47(d,J＝1.6Hz,3H),7.46-7.42(m,1H),6.98(d,J＝9.2Hz,2H),5.77-5.65(m,1H),5.40-5.33(m,1H),5.03(d,J＝10.4Hz,1H),4.81(d,J＝6.8Hz,3H),4.75(d,J＝6.8Hz,2H),4.59-4.55(m,2H),4.46(s,1H),3.87-3.81(m,1H),3.80-3.74(m,1H),3.51-3.38(m,3H),3.26(m,4H),3.17-2.93(m,3H),2.79(m,4H),2.49(s,3H),2.26-2.05(m,3H),2.03-1.93(m,1H),1.85-1.71(m,2H),1.57(s,6H),1.56-1.41(m,3H),1.41-1.26(m,4H),1.11(s,9H)。

化合物64

步骤1.甲基(6-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯

在-78℃下，向无水DCM(8mL)和DMSO(405.31μL，5.19mmol)的溶液中滴加(COCl)₂(189.20μL，2.16mmol)。在-78℃下将混合物搅拌30min，然后在DCM(2mL)中滴加(6-羟基己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，432.28μmol)溶液。将溶液再搅拌30min，然后加入Et₃N(601.68μL，4.32mmol)。将悬浮液加热至25℃并且搅拌2h。完成后，用H₂O(10mL)淬灭反应。有机层用HCl水溶液(5％，10mL)、水性饱和NaHCO₃(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并且真空浓缩，得到标题化合物。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝9.66(s,1H),3.32(s,3H),2.74(br,4H),1.38(br,15H)。

步骤2.(6-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

向甲基(6-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯(70.69mg，308.28μmol)的DCM(5mL)溶液中依次加入2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(50mg，102.76μmol)和Et₃N(42.91μL，308.28μmol)。在25℃下将混合物搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(43.56mg，205.52μmol)，并且将所得混合物再搅拌1h。完成后，用H₂O(10mL)淬灭反应。有机层用DCM(10mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶柱纯化，用DCM/MeOH(9/1)洗脱，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 700.5[M+H]⁺。

步骤3. 2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(4-(6-(甲基氨基)己基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐

向(6-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(71mg，101.45μmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中加入HCl/1,4-二噁烷(4M，15mL)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，真空浓缩混合物，并且真空干燥残留物，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 600.4[M+H]⁺。

步骤4.(2S,4R)-N-((S)-3-((6-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)己基)(甲基)氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物64)

向2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(4-(6-(甲基氨基)己基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐(60mg，94.30μmol)的DMF(2mL)溶液中依次加入(S)-3-((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酸(68.99mg，120.05μmol)、DIPEA(52.27μL，300.12μmol)、HOBt(16.22mg，120.05μmol)、EDCI(23.01mg，120.05μmol)。完成后，反应混合物直接用反相HPLC纯化(柱：Welch Xtimate C18150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：19％-49％，7min)以得到化合物64。

LCMS:MS(ESI)m/z 578.5[M/2+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.16(br,1H),8.98(s,1H),8.82(s,1H),8.51(t,J＝8.4Hz,1H),8.04(br,1H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.64-7.50(m,3H),7.46-7.35(m,4H),7.30-7.23(m,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),5.71-5.61(m,1H),5.34(br,1H),5.25-5.16(m,1H),4.99(dd,J＝1.2,10.4Hz,1H),4.84-4.80(m,1H),4.69-4.67(m,2H),4.57(d,J＝9.2Hz,1H),4.44(t,J＝8.0Hz,1H),4.28(br,1H),3.66-3.49(m,3H),3.29-3.22(m,1H),3.21-3.12(m,1H),3.06(m,4H),2.97-2.78(m,4H),2.75(s,1H),2.45(m,7H),2.30-2.22(m,2H),2.09-2.00(m,1H),1.80-1.74(m,1H),1.46(m,6H),1.43-1.31(m,6H),1.28-1.08(m,6H),0.97(s,9H)。

化合物65

步骤1.(5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

向甲基(5-氧代戊基)氨基甲酸叔丁酯(26.55mg，123.31μmol)的DCM(5mL)溶液中依次加入2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(50mg，102.76μmol)和Et₃N(42.91μL，308.28μmol)。在25℃下将混合物搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(43.56mg，205.52μmol)，并且将所得混合物再搅拌1h。完成后，用H₂O(10mL)淬灭反应。有机层用DCM(10mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩。残留物通过硅胶柱纯化，用DCM/MeOH(9/1)洗脱，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 686.4[M+H]⁺。

步骤2. 2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(4-(5-(甲基氨基)戊基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐

向(5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(50.4mg，73.48μmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中加入HCl/1,4-二噁烷(4M，15mL)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，真空浓缩混合物，并且真空干燥残留物，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 586.4[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-N-((S)-3-((5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)(甲基)氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物65)

向2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(4-(5-(甲基氨基)戊基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐(45mg，73.48μmol)的DMF(2mL)溶液中依次加入(S)-3-((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酸(49.87mg，86.79μmol)、DIPEA(37.79μL，216.97μmol)、HOBt(11.73mg，86.79μmol)、EDCI(16.64mg，86.79μmol)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，反应混合物直接用反相HPLC纯化(柱：Welch Xtimate C18 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：19％-49％，7min)以得到化合物65。

LCMS:MS(ESI)m/z 572.1[M/2+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.15(br,1H),8.97(br,1H),8.82(s,1H),8.51(dd,J＝8.4,11.2Hz,1H),8.03(t,J＝6.4Hz,1H),7.76-7.74(m,1H),7.64-7.52(m,3H),7.46-7.34(m,4H),7.29-7.22(m,1H),6.90(d,J＝8.0Hz,2H),5.71-5.61(m,1H),5.40(br,1H),5.27-5.15(m,1H),4.99(d,J＝10.4Hz,1H),4.87-4.78(m,1H),4.69-4.67(m,2H),4.58(d,J＝9.2Hz,1H),4.45(t,J＝7.2Hz,1H),4.28(br,1H),3.61-3.53(m,3H),3.29-3.24(m,1H),3.19-3.14(m,1H),3.06(m,4H),2.93-2.80(m,4H),2.75(s,1H),2.45(m,7H),2.30-2.20(m,2H),2.09-1.99(m,1H),1.80-1.74(m,1H),1.46(s,6H),1.43-1.30(m,6H),1.25-1.08(m,4H),0.97(s,9H)。

化合物66

/>

步骤1.(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丁基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

向甲基(4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(24.82mg，123.31μmol)的DCM(5mL)溶液中依次加入2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮(50mg，102.76μmol)和Et₃N(42.91μL，308.28μmol)。在25℃下将混合物搅拌1h。然后加入NaBH(OAc)₃(43.56mg，205.52μmol)，并且将所得混合物再搅拌1h。完成后，用H₂O(10mL)淬灭反应。有机层用DCM(10mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩。残留物通过硅胶柱纯化，用DCM/MeOH(9/1)洗脱，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 672.4[M+H]+。

步骤2. 2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(4-(4-(甲基氨基)丁基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐

向(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丁基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(52.7mg，78.44μmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中加入HCl/1,4-二噁烷(4M，15mL)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，真空浓缩混合物，真空干燥残留物，得到标题化合物。

LCMS:MS(ESI)m/z 572.2[M+H]⁺。

步骤3.(2S,4R)-N-((S)-3-((4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丁基)(甲基)氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物66)

向2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-((4-(4-(4-(甲基氨基)丁基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1,2-二氢-3H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮盐酸盐(47mg，78.44μmol)的DMF(2mL)溶液中依次加入(S)-3-((2S,4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)丙酸(53.07mg，92.35μmol)、DIPEA(40.22μL，230.88μmol)、HOBt(12.48mg，92.35μmol)、EDCI(17.70mg，92.35μmol)。在25℃下将混合物搅拌2h。完成后，反应混合物直接用反相HPLC纯化(柱：Welch Xtimate C18 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：19％-49％，7min)以得到化合物66。

LCMS:MS(ESI)m/z 565.2[M/2+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.14(br,1H),8.96(br,1H),8.82(s,1H),8.50(dd,J＝4.0,8.0Hz,1H),8.05-8.03(m,1H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.64-7.50(m,3H),7.41-7.40(m,4H),7.31-7.21(m,1H),6.89(d,J＝8.4Hz,2H),5.71-5.61(m,1H),5.33(br,1H),5.26-5.16(m,1H),4.99(d,J＝10.0Hz,1H),4.87-4.78(m,1H),4.69-4.68(m,2H),4.58(d,J＝9.2Hz,1H),4.49-4.39(m,1H),4.28(br,1H),3.64-3.53(m,3H),3.29-3.27(m,1H),3.22-3.16(m,1H),3.05(m,4H),2.97-2.80(m,4H),2.76(s,1H),2.45-2.44(m,7H),2.30-2.22(m,2H),2.09-1.99(m,1H),1.81-1.74(m,1H),1.46(s,6H),1.42-1.27(m,6H),1.25-1.17(m,2H),0.97(s,9H)。

II.生物学评价

ZNL-02-096(结构如下)如Li等人,“Development and Characterization of aWee1 Kinase Degrader”Cell Chemical Biology,2020,27(1)57-65中所公开的，被选作为参考化合物。

实施例B1：WEE1降解测定

细胞培养

在补充10％FBS(Gibco，10099-141)的RPMI 1640(Gibco，11875119)培养基中培养人T淋巴母细胞MOLT-4(ATCC，CRL1582)。所有细胞系均在37℃、5％CO₂气氛中保持。

蛋白质提取和Western印迹以及DC₅₀测定

使用补充有蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂和PMSF溶液的细胞裂解缓冲液(CST，9803)制备全细胞裂解物。使用Pierce二辛可宁酸(BCA)蛋白质浓度试剂盒(Solarbio，PC0020)定量蛋白质浓度。将等量的蛋白质上样至PAGE并且使用Bio-Rad反式印迹将样品转移到PVDF膜上。将印迹物与第一抗体(抗-WEE1和抗-α-微管蛋白)温育，然后将HRP偶联到适当的第二抗体。化合物29、31、32、40、42、49、51和56的DC₅₀>1.0μM至≤10μM，D_max％<50％。

细胞活性测定和生长抑制测定

根据制造商的方案，使用CellTiter-Glo测定试剂盒(Promega，G7573)测量细胞活性。将MOLT-4接种到384孔板中，并且用各种增加剂量的化合物处理72h。从温育箱中取出细胞板，并且平衡细胞板和CellTiter-使用发光检测器在Envision 2104多板读数仪进行读取。

来自示例性化合物的代表性降解活性和细胞活性如表4所示。

注意：指定DC₅₀数据在以下范围内：

A：≤0.010μM C：>0.10μM至≤1.0μM

B：>0.010μM至≤0.10μM D：>1.0μM至≤10μM

注意：指定D_max数据在以下范围内：

A：≥80％B：≥50％；<80％C：<50％

注意：指定GI₅₀数据在以下范围内：

A：≤0.10μM B：>0.10μM至≤1.0μM C：>1.0μM至≤10μM

注意：“-”表示未确定。

表4

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实施例B2：化合物溶解度

溶解度测定

将每个样品的30μL储备溶液(10mM)依次放入它们的适当的96孔架中。将970μL的FaSSGF、FaSSIF或者FeSSIF加入无盖溶解度样品板的每个小瓶中。测定一式两份进行。每个小瓶中加入一个磁力搅拌棒，并且使用模制的PTFE/硅酮塞来密封。然后将溶解度样品板转移到Eppendorf Thermomixer Comfort板摇床中，并且在37℃下以1100RPM摇动2h。2h完成后，取下塞子并且使用磁体取出磁力搅拌棒，将来自溶解度样品板的样品转移到过滤板中。使用真空歧管，过滤所有样品。从滤液中取出5μL等分试样，然后加入5μL的DMSO和490μL含有内标物(IS、100nM阿普唑仑、500nM拉贝洛尔和2μM酮洛芬)和0.1％甲酸的乙腈。稀释因子根据溶解度值和LC-MS信号应答而改变。将板放入孔板自动进样器中。通过LC-MS/MS分析对样品进行评估。使用SCIEX分析软件分析LC-MS/MS数据。所有计算使用Microsoft Excel进行。

本文公开的式(I)化合物与参考ZNL-02-096相比显示出显著改善的FaSSGF、FassiF、FessiF溶解度。

示例性化合物的代表性溶解度如表5所示。

表5

实施例B3：代谢稳定性测定

肝微粒体稳定性

两个独立的实验如下进行：a)带有辅因子(NADPH和UDPGA)和b)没有辅因子(NADPH和UDPGA)。人和小鼠微粒体的最终浓度为0.5mg/mL。加入4μL的100μM测试化合物溶液或者对照化合物溶液，终浓度为1μM，并且在37℃下进行反应开始。在0、15、30、45和60min时从反应溶液中取出50μL的等分试样。通过加入4个体积的冷乙腈与IS(3％甲酸，100nM阿普唑仑，200nM拉贝洛尔，200nM咖啡因和2μM酮洛芬)停止反应。以3220g离心样品40min。将100μL上清液等分试样与100μL超纯H₂O混合，然后用于LC-MS/MS分析。LC-MS/MS数据使用SCIEX分析软件进行分析。通过提取的离子色谱图确定峰面积。所有计算均使用Microsoft Excel进行。斜率值k通过母体药物剩余百分比与温育时间曲线的自然对数的线性回归来确定。

示例性化合物的代表性肝微粒体稳定性如表6所示。

表6

肝细胞代谢稳定性

在DMSO中制备10mM的测试化合物和阳性对照的储备溶液。将温育培养基和肝细胞解冻培养基置于37℃水浴中，并且在使用前允许其温热至少15min。从储存中取出一小瓶冷冻保存的肝细胞。解冻后，将小瓶喷洒70％乙醇并转移到生物安全柜中。将肝细胞转移到含有解冻培养基的50mL锥形管中，并且置于离心机中并且以100g离心10min。旋转完成后，吸出解冻培养基，并且重悬肝细胞。计数细胞并且使用AOPI染色溶液测定活细胞密度。LC-MS/MS数据使用SCIEX分析软件进行分析。通过提取的离子色谱图测定峰面积。所有计算均使用Microsoft Excel进行。经由母体消失百分比与时间曲线的回归分析来确定母体化合物的体外半衰期(t_1/2)。

用于示例性化合物的代表性肝细胞稳定性如表7所示。

表7.人和小鼠肝细胞情况下的化合物稳定性

实施例B4：体内药代动力学测定

小鼠中的化合物药代动力学

该研究是在6-8周龄的雄性CD-1小鼠中进行的。动物接受2.0mg/kg剂量的单次静脉注射。在小鼠中测试的5％DMSO/45％PEG400/50％水中将2.0mg/kg的剂量制备为0.4mg/ml溶液。

在以下时间点中的每一个处从三只不同的小鼠取得血液样品：5min、15min、30min、1h、2h、4h、8h、24h。从小鼠提取血液样品(30μL)并且转移到EDTA管。将血液在4℃离心机中以4000g离心5min以获得血浆。分析前，所有血浆样品均储存在-75±15℃的冰箱中。

通过将分析物的储备溶液用50％乙腈水溶液稀释，达到所需的连续工作溶液浓度。制备了针对血浆的4个质控样品，分别为1ng/mL、2ng/mL、50ng/mL和800ng/mL，与用于校准曲线的那些样品无关。这些QC样品在分析当天以与校准标准品相同的方式制备。将33μL标准品、33μL QC样品和33μL未知样品(带有3μL空白溶液的30μL血浆)分别加入200μL含乙腈的IS混合物中以沉淀蛋白质。然后将样品涡旋30s。用水以1:2的速率稀释上清液，将10μL稀释的上清液注入LC/MS/MS系统进行定量分析。

使用WinNonlin(PhoenixTM，版本8.3)软件进行药代动力学计算，并且根据血浆浓度与时间数据的关系计算以下药代动力学参数：T_1/2、AUC_∞、Cl和V_Dss。

本文公开的式(I)化合物与参考ZNL-02-096相比显示出显著改善的半衰期和AUC。

示例性化合物的代表性药代动力学参数如表8所示。

表8.化合物体内药代动力学性质

实施例B5：通过细胞活性测定评估TOV21G细胞系中化合物的抗增殖作用

细胞培养

在含有5％CO₂的空气气氛中将TOV-21G细胞系在37℃的培养条件下保持。肿瘤细胞常规传代培养。收获在指数生长期生长的细胞并且计数用于铺板。

细胞铺板

(1).在台盼蓝染色下通过血细胞计数器计数细胞。

(2).将细胞浓度调节至适当的细胞密度(4000个/每96孔)。

(3).根据板图将90μL细胞悬液板铺板入测定板中。将90μL测定培养基加入空白孔中。

(4).将板在37℃、5％CO₂、95％空气和100％相对湿度下温育过夜。

化合物储备板制备

化合物储备板(1000X储备板)的制备：在DMSO中将储备溶液从最高浓度(10μM)连续稀释至最低浓度(1.52μM)。

化合物板(10X)制备和化合物处理

(1).10X浓缩化合物板制备：向V底板的每个孔中加入198μL测定培养基；然后从储备板转移2μL每个浓度的储备化合物溶液。将2μL的DMSO加入空白孔和对照孔中。上下移液以充分混合。该V板被指定为10X浓缩化合物板。

(2).对于第0天的板，将10μL的DMSO培养基加入对照孔中。最终DMSO浓度为0.1％。然后直接进行细胞活性测定。

(3).化合物处理：根据板图，将来自10X浓缩化合物板的每个孔的10μL化合物-培养基加入到96孔测定板中的细胞中。对于媒介物和空白组，向孔中加入10μL的DMSO-培养基。最终DMSO浓度为0.1％。

(4).将测定板放回温育箱中并温育3天。

CellTiter-Glo发光细胞活性测定

该程序是根据Promega CellTiter-Gl发光细胞活性测定试剂盒手册(Promega-G7573)进行的。

(1).解冻CellTiter-Glo缓冲液并且在使用前平衡至室温。

(2).使用前将冻干的CellTiter-Glo底物平衡至室温。

(3).将CellTiter-Glo缓冲液的全部液体体积转移到含有CellTiter-Glo底物的琥珀色瓶中，以重构冻干的酶/底物混合物。这形成了CellTiter-Glo试剂。

(4).通过轻轻涡旋来混合，得到均匀的溶液。

(5).将板及其内容物平衡至室温大约30分钟。

(6).在每个孔中加入50μL(相当于每个孔中存在的培养基的一半体积)CellTiter-Glo试剂。用铝箔盖板以遮光保护。

(7).在轨道摇床上混合内容物2分钟，以诱导细胞裂解。

(8).将板在室温下温育10分钟以稳定发光信号。

(9).在2104EnVision读取器上记录发光。

数据分析

测试化合物的抑制率(IR)由以下公式确定：IR(％)＝(1-(RLU化合物-RLU空白)/(RLU对照-RLU空白))*100％。在Excel文件中计算不同剂量化合物的抑制，然后用于绘制抑制曲线并且评估相关参数，如底部(％)、顶部(％)和相对IC₅₀。数据由GraphPad Prism说明。

来自示例性化合物的代表性细胞活性如表9所示：

表9：TOV21G细胞系中化合物的抗增殖作用

化合物编号	IC₅₀(nM)	化合物编号	IC₅₀(nM)
				059	355.10	060	59.82
061	87.48	062	186.40
				063	60.18	064	78.83
065	116.40	066	185.90

III.药物剂型的制备

实施例C1：口服胶囊

活性成分是式(I)、式(I-a)或者式(I-b)的化合物，或者其药学上可接受的盐或者溶剂化物。通过将1-1000mg活性成分与淀粉或者其它合适的粉末共混物混合来制备用于口服施用的胶囊。混合物掺入口服剂量单位如硬明胶胶囊中，其适合口服施用。

实施例C2：注射液

活性成分是表(I)、表(2)、表(3)、式(I)、式(I-a)或者式(I-b)的化合物，或者其药学上可接受的盐，并且配制成浓度为50mg-eq/mL的芝麻油溶液。

本文所描述的实施例和实施方案仅用于说明目的，并且本领域技术人员想到的各种修改或者变化均应包括于本申请的精神和范围以及所附权利要求的范围之内。

Claims

1.一种化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，具有式(I)的结构：

其中

R¹、R²、R³和R⁴各自独立地选自氢、任选取代的直链或者支链C_1-6烷基、任选取代的C_1-3烷氧基、卤素、氨基、羟基和氰基；或者R¹和R²、R²和R³或者R³和R⁴与它们连接的中间原子一起形成任选取代的5-6元环烷基或者任选取代的杂环烷基环；

L是-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*；

Ak¹选自-(CR⁵R⁶)_k-；

Ak²选自-(CR⁵R⁶)_m-；

Ak³选自-(CR⁵R⁶)_n-；

k、m和n各自选自0至10

Z¹和Z²各自独立地选自键、-O-、-NR⁷-、-S-、亚杂环基和亚环烷基；R⁷是氢、任选取代的烷基、或者任选取代的烷基，其中1个或者多个-CH₂-单元被O替代，前提是两个相邻的-CH₂-单元不被同时替代；其中Z¹和Z²中的至少一个不是键；或者

L是含有聚乙二醇的部分；并且

其中与VHL配体的键合点通过星号表示；并且

U是VHL配体。

2.根据权利要求1所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中R¹是任选取代的支链C_1-6烷基，其中所述烷基被羟基任选取代；并且

R²、R³和R⁴是氢。

3.根据权利要求1或者权利要求2所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中R¹是

4.根据权利要求1所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中R¹和R²与它们所连接的中间原子一起形成任选取代的5-6元环烷基或者任选取代的5-6元杂环基环，其中所述环烷基和杂环基被选自C_1-6烷基和羟基的一个或者多个取代基任选取代。

5.根据权利要求1或者权利要求4所述的化合物，其中R¹和R²与它们所连接的中间原子一起形成

6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中所述-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是-(CR⁵R⁶)_n-O-(CR⁵R⁶)_m-*，其中n选自1至10，并且m选自1至10；并且与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中所述-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是-(CH₂)_n-O-(CH₂)_m-*，其中n选自1至10，并且m选自1至10；并且与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中所述-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是-(CR⁵R⁶)_n-NR⁷-(CR⁵R⁶)_m-*，其中n选自1至10，m选自1至10；并且与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

9.根据权利要求1-5或者8中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中所述-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是-(CH₂)_n-NR⁷-(CH₂)_m-*，其中n选自1至10，m选自1至10；并且与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

10.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中所述-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是-(CR⁵R⁶)_k-O-(CR⁵R⁶)_n-O-(CR⁵R⁶)_m-*，其中k选自1至10，n选自1至10，并且m选自1至10；并且与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

11.根据权利要求1-5或者10中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中所述-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*是-(CH₂)_k-O-(CH₂)_n-O-(CH₂)_m-*，其中k选自1至10，n选自1至10，并且m选自1至10；并且与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

12.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中每个情况下的X1和X2独立地是CH或者N；并且

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

13.根据权利要求1-5或者12中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

14.根据权利要求1-5、12或者13中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

15.根据权利要求1-5、12或者14中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

16.根据权利要求1-5或者12-14中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

17.根据权利要求1-5、12或者16中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

18.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

19.根据权利要求1-5或者18中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

20.根据权利要求1-5、18或者19中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

21.根据权利要求1-5、18或者20中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

22.根据权利要求1-5或者18-20中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

23.根据权利要求1-5、18-20或者22中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

24.根据权利要求1-5或者18-23中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

25.根据权利要求1-5、18或者24中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

26.根据权利要求1-5、18-20、22或者24中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

27.根据权利要求1-5、18或者26中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

28.根据权利要求1-5、18-22、24、26或者27中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

29.根据权利要求1-5、18或者28中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

30.根据权利要求1-5、18-20、22-24或者26-28中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

31.根据权利要求1-5、18或者30中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

32.根据权利要求1-5或者12-31中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

或者/>

33.根据权利要求1-5、12-14、16、17或者32中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：/>或者/>

34.根据权利要求1-5或者12中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

35.根据权利要求1-5、12或者34中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

其中与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

36.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中-Ak¹-Z¹-Ak²-Z²-Ak³-*选自如下所示的分子片段：

或者/>

其中R⁷各自独立地为氢、任选取代的烷基、或者任选取代的烷基，

其中1个或者多个-CH₂-单元被O替代，前提是两个相邻的-CH₂-单元不被同时替代，与所述VHL配体的键合点通过星号表示。

37.根据权利要求36所述的化合物，其中是或者/>

38.根据权利要求36或者37所述的化合物，其中R⁷是氢或者甲基。

39.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中L是选自以下的含有聚乙二醇的部分：

-(O-CH₂-CH₂)_n-O-和-(O-CH₂-CH₂)_n-N(R²³)-*，其中n选自1至20，

并且R²³是任选取代的烷基或者任选取代的烷基，其中1个或者多个-CH₂-单元被O替代，前提是两个相邻的-CH₂-单元不被同时替代；并且与募集基序的键合点通过星号表示。

40.根据权利要求1-39中任一项所述的化合物或者其药学盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中U选自：

41.根据权利要求1-40中任一项所述的化合物或者其药学盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其中U选自：

42.根据权利要求1所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，选自：

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[4-(2-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]乙氧基)丁酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]丁氧基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-[(6-[4-[4-([1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基)苯基]哌嗪-1-基]己基)氧基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-((2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)甲氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[(5-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}戊基)氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[5-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)戊酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)甲氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(5-(4-(4-(2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊氧基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)丁酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丁氧基)甲氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[5-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)戊酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}丙氧基)乙氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[6-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)己酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[3-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)丙氧基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{3-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}乙氧基)乙氧基]丙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[(4'-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,1'-联(环己烷)]-4-基)甲酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]甲酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酰胺；

N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-甲酰胺；

N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-1-甲酰胺；

4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)-N-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)哌嗪-1-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4'-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,1'-联(环己烷)]-4-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环己基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,4'-联哌啶]-1'-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[1-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-4-基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{2-[4-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)哌啶-1-基]乙酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环己基)哌嗪-1-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-({4-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)甲基]环己基}甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1-[(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}环己基)甲基]哌啶-4-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-({4-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)哌啶-1-基]环己基}甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

N-[(2S)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-({[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}氨甲酰基)吡咯烷-1-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]哌啶-4-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)丙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(9-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(7-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(2-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(2-{3-[4-({4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}甲基)环己基]氮杂环丁烷-1-基}乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(1-(4-((4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

1-(3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)环丁基)-N-((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)哌啶-4-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(3-((4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)环己烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-{[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)环丁基]甲酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[3-(4-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羰基氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-[2-(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-4-羟基-1-[(2S)-2-(2-{3-[(3-{4-[4-({1-[6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基]-3-氧代-2-(丙-2-烯-1-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)苯基]哌嗪-1-基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]氮杂环丁烷-1-基}乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-{[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基}吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(3-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁烷]-1'-基)丙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(9-(4-(4-((2-烯丙基-1-((R)-7-乙基-7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-((R)-7-乙基-7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[b]吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-N-((S)-3-(8-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-N-((1S)-3-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-N-((S)-3-(9-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-N-((S)-3-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-N-((S)-3-(2-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-N-((S)-3-((6-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)己基)(甲基)氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺；

(2S,4R)-N-((S)-3-((5-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)(甲基)氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺；以及

(2S,4R)-N-((S)-3-((4-(4-(4-((2-烯丙基-1-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)

丁基)(甲基)氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-3-氧代丙基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺。

43.一种包含如权利要求1-42中任一项所描述的式(I)化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体的药物组合物。

44.根据权利要求1-42中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其用于治疗人或者动物体的方法。

45.根据权利要求1-42中任一项所述的化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，其用于治疗癌症或者肿瘤疾病的方法。

46.根据权利要求1-42中任一项所述的化合物或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体用于制造用于治疗癌症或者肿瘤疾病的药物的用途。

47.一种在有需要的患者中治疗癌症的方法，包括向所述患者施用如权利要求1-42中任一项所描述的式(I)化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体。

48.一种在有需要的患者中治疗癌症的方法，包括向所述患者施用药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-42中任一项所描述的式(I)化合物，或者其药学上可接受的盐、溶剂化物、前药、立体异构体或者互变异构体，以及药学上可接受的赋形剂。