CN116813788A - 一种结合依托咪酯的抗体及其应用 - Google Patents
一种结合依托咪酯的抗体及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116813788A CN116813788A CN202310847458.XA CN202310847458A CN116813788A CN 116813788 A CN116813788 A CN 116813788A CN 202310847458 A CN202310847458 A CN 202310847458A CN 116813788 A CN116813788 A CN 116813788A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- seq
- etomidate
- binding fragment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229960001690 etomidate Drugs 0.000 title claims abstract description 82
- NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N etomidate Chemical compound CCOC(=O)C1=CN=CN1[C@H](C)C1=CC=CC=C1 NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N 0.000 title claims abstract description 77
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 75
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 75
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 75
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 64
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 63
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 44
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 61
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 28
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 28
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 22
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 21
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 4
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 21
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 19
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 11
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 10
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 10
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 7
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- -1 haptens Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000000891 luminescent agent Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036967 uncompetitive effect Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 10043-66-0 Chemical compound [131I][131I] PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101100524585 Arabidopsis thaliana RH14 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-OIOBTWANSA-N Bromine-77 Chemical compound [77Br] WKBOTKDWSSQWDR-OIOBTWANSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010013654 Drug abuse Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N Iodine-123 Chemical compound [123I] ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005082 bioluminescent agent Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000005081 chemiluminescent agent Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012637 gene transfection Methods 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 229960001269 glycine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000000147 hypnotic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940079865 intestinal antiinfectives imidazole derivative Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-BJUDXGSMSA-N iodane Chemical compound [126IH] XMBWDFGMSWQBCA-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-LZFNBGRKSA-N iodane Chemical compound [133IH] XMBWDFGMSWQBCA-LZFNBGRKSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N iodine-125 Chemical compound [125I] ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000005080 phosphorescent agent Substances 0.000 description 1
- 238000012123 point-of-care testing Methods 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 238000012418 validation experiment Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本说明书实施例提供了一种结合依托咪酯的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段包括:重链可变区,其包括氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的CDRH1、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的CDRH2和氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的CDRH3;轻链可变区,其包括氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的CDRL1、氨基酸序列为LTS的CDRL2和氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的CDRL3。
Description
技术领域
本说明书涉及生物医药技术领域,特别涉及一种结合依托咪酯的抗体及其应用。
背景技术
依托咪酯(etomidate)是一种催眠性静脉全麻药,属于咪唑类衍生物,安全性好,是麻醉诱导常用的药物之一。依托咪酯应用于门诊、手术室外麻醉具有较好的安全性和可控性,应用前景广泛。目前,对依托咪酯的检测主要依靠高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(G C)、薄层色谱法(TLC)、质谱法(MS)等,但仪器昂贵,检测费时,并且需要专业技术人员进行操作。
因此,需要提供一种快速、灵敏、准确的检测依托咪酯的技术。
发明内容
根据本说明书的第一方面,提供一种结合依托咪酯的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或抗原结合片段包括:重链可变区,其包括氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的C DRH1、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的CDRH2和氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的CDRH3;轻链可变区,其包括氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的CDRL1、氨基酸序列为LTS的CDRL2和氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的CDRL3。
在一些实施例中,所述抗体为鼠源抗体、兔源抗体或人源化抗体。
在一些实施例中,所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
在一些实施例中,所述抗体为单克隆抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。
在一些实施例中,所述抗原结合片段选自下组:Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、Fv、scFv、dAb。
根据本说明书的第二方面,提供一种核酸分子,其包含编码如前文所述的抗体或抗原结合片段的核苷酸序列。
在一些实施例中,所述核酸分子包括:编码重链可变区的核苷酸序列,其包括如SEQ ID NO:9所示的CDRH1的编码序列、如SEQ ID NO:10所示的CDRH2的编码序列和如SEQID NO:11所示的CDRH3的编码序列;编码轻链可变区的核苷酸序列,其包括如SEQ ID NO:13所示的CDRL1的编码序列、序列为CTCACATCC的CDRL2的编码序列和如S EQ ID NO:14所示的CDRL3的编码序列。
在一些实施例中,所述编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示;所述编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。
根据本说明书的第三方面,提供一种重组载体,其包括如前文所述的核酸分子。
根据本说明书的第四方面,提供一种宿主细胞,其包括如前文所述的核酸分子或者如权利要求8所述的重组载体。
根据本说明书的第五方面,提供一种制备结合依托咪酯的抗体或抗原结合片段的方法,所述方法包括:培养如前文所述的宿主细胞;从所述宿主细胞的细胞培养物中分离所述抗体或抗原结合片段。
根据本说明书的第六方面,提供一种检测样品中依托咪酯的方法,所述方法包括:使所述样品和能够与依托咪酯结合形成抗原抗体复合物的抗体或抗原结合片段接触,所述抗体或抗原结合片段是如前文所述的抗体或抗原结合片段;检测所述抗原抗体复合物,以定性检测或定量检测所述样品中的依托咪酯。
在一些实施例中,所述抗体或抗原结合片段是带有可检测标记的,通过可检测标记产生的信号来检测所述抗原抗体复合物;或者所述抗体或抗原结合片段是未标记的,使所述抗原抗体复合物中作为捕获抗体的所述抗体或抗原结合片段与带有可检测标记的检测抗体结合,通过可检测标记产生的信号来检测所述抗原抗体复合物。
在一些实施例中,所述定量检测包括:对比获自所述样品的第一检测信号和获自对照品或校准品的第二检测信号,其中,所述第一检测信号由所述样品与所述抗体或抗原结合片段接触形成的抗原抗体复合物产生,所述第二检测信号由所述对照品或校准品与所述抗体或抗原结合片段接触形成的抗原抗体复合物产生,所述对照品或校准品中含有预定浓度的依托咪酯;基于对比结果和所述预定浓度,确定所述样品的依托咪酯浓度。
在一些实施例中,所述样品包括外周血、尿液、唾液和毛发中的一种或多种。
根据本说明书的第七方面,提供一种检测依托咪酯的试剂盒,其包含如前文所述的抗体或抗原结合片段。
在一些实施例中,所述试剂盒选自下组:胶体金检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、酶联免疫检测试剂盒、化学发光试剂盒、免疫比浊检测试剂盒。
根据本说明书的第八方面,提供如前文所述的抗体或抗原结合片段、核酸分子、重组载体或者宿主细胞在检测依托咪酯或制备检测依托咪酯的试剂盒中的应用。
具体实施方式
应当理解,尽管术语“第一”、“第二”、“第三”等可以在本文中用于描述各种元素,但这些元素不应受这些术语的限制。这些术语仅用于将一个元素与另一个元素区分开来。例如,第一检测信号可以被称为第二检测信号,并且类似地,在不脱离本说明书的示例性实施例的范围的情况下,第二检测信号可以被称为第一检测信号。
如本说明书和权利要求书中所示,除非上下文明确提示例外情形,“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数,也可包括复数。一般说来,术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素,而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列,方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。
除另有定义外,本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。
依托咪酯在全麻诱导时血液动力学稳定性好,术后恢复快,目前广泛运用于老年人以及并发心血管疾病和危重症患者的麻醉诱导。本说明书提出一种结合依托咪酯的抗体及其应用。在一些实施例中,依托咪酯的药物治疗效果需要受到监测,本说明书提供的一种结合依托咪酯的抗体及其应用可运用于依托咪酯的治疗监测,例如用于检测患者生物样本中依托咪酯的浓度,可辅助医疗人员调整/优化治疗方案。在一些实施例中,依托咪酯存在药物滥用风险,本说明书提供的一种结合依托咪酯的抗体及其应用可运用于依托咪酯的药品管理,例如用于检测受试者生物样本中是否存在依托咪酯。具体地,本说明书一些实施例使用化学合成的依托咪酯半抗原免疫Balb/c小鼠,选取免疫成功的小鼠脾脏淋巴细胞,通过细胞融合技术将淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经过二轮亚克隆筛选后获得稳定分泌抗依托咪酯的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过培养和再免疫获得大量小鼠腹水,再通过分离及纯化获得高特异性的抗依托咪酯的单克隆抗体。本说明书提供的抗体或抗原结合片段可以为基于免疫学原理的检测依托咪酯胶体金免疫层析技术等方法提供稳定可靠的原料来源,降低产品成本,同时提高依托咪酯快速诊断商品如金标试纸条、ELISA试剂盒等的检出率及灵敏度,降低假阳率。
本说明书一些实施例提供了一种结合依托咪酯的抗体或抗原结合片段,所述抗体或抗原结合片段能够结合依托咪酯抗原。所述抗体或抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区。其中,重链可变区包括三个互补决定区(CDR),即CDRH1、CDRH2和CDRH3;轻链可变区包括三个互补决定区,即CDRL1、CDRL2和CDRL3。
如本文所用,术语“抗体”或“Ab”是指包含至少一条免疫球蛋白重链(HC)和至少一条免疫球蛋白轻链(LC)的分子。每个重链可包括重链可变区(VH)和重链恒定区(CH),重链可变区具有3个互补决定区(CDR)和4个框架区(FR)。每个轻链可包括轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL),轻链可变区具有3个互补决定区和4个框架区。根据VH抗原性的不同,抗体可分为IgM、IgG、IgA、IgD和IgE。在一些实施例中,抗体包括但不限于单克隆抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、二聚抗体、三聚抗体和多聚抗体等。
术语“抗原结合片段”是指包含全长抗体的片段的多肽,其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力,和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合。抗原结合片段的非限制性实例包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、CDR片段、单链抗体(例如,scFv或dsFv)、双抗体片段(dAb)、单域抗体(sdAb)和纳米抗体(Nb)等。在一些实施例中,抗原结合片段选自下组:Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、Fv、scFv、dAb。
术语“CDR”或称“互补决定区”是指抗体特异性识别抗原的区域。
在一些实施例中,所述抗体或抗原结合片段包括:重链可变区,其包括氨基酸序列如S EQ ID NO:2所示的CDRH1、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的CDRH2和氨基酸序列如SEQID NO:4所示的CDRH3;轻链可变区,其包括氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的CDRL1、氨基酸序列为LTS的CDRL2和氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的CDRL3。
在一些实施例中,所述抗体或抗原结合片段包括以下序列的组中的一种或多种:与前述CDRH1具有不多于2个或者不多于1个氨基酸变化的变体;与前述CDRH2具有不多于2个或者不多于1个氨基酸变化的变体;与前述CDRH3具有不多于2个或者不多于1个氨基酸变化的变体;与前述CDRL1具有不多于2个或者不多于1个氨基酸变化的变体;与前述CD RL2具有不多于2个或者不多于1个氨基酸变化的变体;与前述CDRL3具有不多于2个或者不多于1个氨基酸变化的变体。
如本文所用,术语“变体”是指经过一个或多个氨基酸的修饰。与参考的蛋白或多肽相比,蛋白或多肽的变体基本上保留修饰前蛋白或多肽的生物学特征。例如,包含重链CDR变体和/或轻链CDR变体的抗原结合蛋白(例如,抗体或抗原结合片段)保留修饰前抗原结合蛋白的85%、90%、95%或100%的生物学特征,与修饰前抗原结合蛋白具有相同或相似的功能。在一些实施例中,氨基酸的修饰为氨基酸的取代、缺失或添加。在一些较优的实施例中,氨基酸的修饰为氨基酸的取代。
术语“氨基酸的取代”是指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白质/多肽的基本性质的氨基酸取代。例如,氨基酸的取代可以通过本领域已知的标准技术(例如定点诱变和PCR介导的诱变)引入。氨基酸的取代包括其中氨基酸残基被具有相似侧链的另一氨基酸残基取代的取代,例如物理或功能相似的残基(例如,具有相似的大小,形状,电荷,化学性质包括形成共价键或氢键的能力等)至相应的氨基酸残基的取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如,赖氨酸、精氨酸和组氨酸),具有酸性侧链的氨基酸(例如,天冬氨酸和谷氨酸),具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如,甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸和色氨酸),具有非极性侧链的氨基酸(例如,丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸),具有β-分支侧链的氨基酸(例如,苏氨酸、缬氨酸和异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如,酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和组氨酸)。因此,相应的氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基取代。
在一些实施例中,所述抗体或抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列为PWTRELLS LLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYGGSYNYNPSLKNRISITRDTSKN QFFLNLNSVTTEDTATYYCATFYDGYYRAWGLWTLVTVS(SEQ ID NO:1)。在一些实施例中,所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列为QIVLTQSPALMSASPGEK VTMTCSASSSVSYMYWYQQKPRSSPKTWIYLTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEA EDAATYYCQEWSGNPPITFGAGTKLE(SEQ ID NO:5)。
在一些实施例中,所述重链可变区的氨基酸序列与如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。在一些实施例中,所述轻链可变区的氨基酸序列与如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。如本文所用,术语“同一性”是指通过比对和比较序列确定的两个或更多个多肽分子或两个或更多个核酸分子的序列之间的关系。“百分比同一性”是指比较分子中氨基酸或核苷酸之间相同残基的百分比,并基于被比较的最小分子的大小计算。
在一些实施例中,与如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列相比,上述具有百分比同一性的重链可变区的氨基酸序列可以在CDR区和/或非CDR区(例如,FR区)具有一个或多个氨基酸的变化(例如,氨基酸的取代、缺失或添加)。在一些实施例中,与如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列相比,上述具有百分比同一性的轻链可变区的氨基酸序列可以在CDR区和/或非CDR区(例如,FR区)具有一个或多个氨基酸的变化。在一些较优的实施例中,氨基酸的变化发生在非CDR区。
本说明书实施例提供的抗体可以来源于同一物种。在一些实施例中,所述抗体为鼠源抗体或者兔源抗体。
本说明书实施例提供的抗体可以来自不同物种。在一些实施例中,所述抗体为嵌合抗体或人源化抗体。
如本文所用,“嵌合抗体”是指由某一物种抗体的可变区与另一物种抗体的恒定区融合而成的抗体。嵌合抗体具有降低异源抗体免疫原性的特点。在一些实施例中,嵌合抗体的可变区可为兔源或鼠源,嵌合抗体的恒定区可为人源。术语“人源化抗体”是指经基因工程改造的包含人源抗体序列和非人源抗体序列的抗体形式。在一些实施例中,人源化抗体的全部或部分CDR区来自于非人源(例如,鼠源或兔源)抗体,人源化抗体的全部或部分的非CD R区(例如,恒定区和可变区框架)来自于人源抗体。
在一些实施例中,所述抗体可以是单克隆抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。本领域技术人员可根据应用需要来确定抗体可识别的抗原表位的数量和类别。
制备抗体的方法对于本领域技术人员而言应该是已知的。例如,杂交瘤技术,或者以编码抗体的基因作为起始材料,利用重组DNA技术在体外生产抗体。制备抗原结合片段的方法对于本领域技术人员而言应该是已知的。例如,可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。
本说明书一些实施例还提供了一种分离的核酸分子。所述核酸分子包含编码如前文所述的任意抗体或抗原结合片段的核苷酸序列。
在一些实施例中,所述核酸分子中的编码重链可变区的核苷酸序列包括:序列为GGC TACTCCATCACCAGTGGTTATTAC(SEQ ID NO:9)的CDRH1的编码序列;序列为ATAAGCTACGGCGGTTCCTAT(SEQ ID NO:10)的CDRH2的编码序列;序列为GCAACGTTCTATGATGGTTACTACAGGGCC(SEQ ID NO:11)的CDRH3的编码序列。在一些实施例中,所述核酸分子中的编码轻链可变区的核苷酸序列包括:序列为TCAAGTGTAAGTT AC(SEQ ID NO:13)的CDRL1的编码序列、序列为CTCACATCC的CDRL2的编码序列和序列为CAGGAGTGGAGTGGTAACCCACCCATCACG(SEQ ID NO:14)的CDRL3的编码序列。
在一些实施例中,所述编码重链可变区的核苷酸序列可以包括与上述任意CDRH编码序列具有密码子简并性的核苷酸序列,该具有密码子简并性的核苷酸序列与对应的上述CDR H编码序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。
如本文所用,术语“密码子简并性”是指编码蛋白或多肽的多核苷酸包括由于遗传密码而简并的序列。一个氨基酸可以由一个以上的三联体密码编码,从而使得具有密码子简并性的不同核苷酸序列可以编码相同的蛋白或多肽。
在一些实施例中,所述编码轻链可变区的核苷酸序列可以包括与上述任意CDRL编码序列具有密码子简并性的核苷酸序列,该具有密码子简并性的核苷酸序列与对应的上述CDR L编码序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。
在一些实施例中,所述编码重链可变区的核苷酸序列为CCGTGGACTCGTGAGCTTCTCAGTCTCTTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCACCAGTGGTTATTACTGGAACTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAAACTGGAATGGATGGGCTACATAAGCTACGGCGGTTCCTATAACTACAACCCCTCTCTCAAAAATCGAATCTCCATCACTCGAGACACATCCAAGAACCAGTTTTTCCTGAACTTGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCTACATATTACTGTGCAACGTTCTATGATGGTTACTACAGGGCCTGGGGCCTCTGGACTCTGGTCACTGTCTCT(SEQ ID NO:8)。
在一些实施例中,所述编码轻链可变区的核苷酸序列为CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCACTCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAAGATCCTCCCCCAAAACCTGGATTTATCTCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTATTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGGAGTGGAGTGGTAACCCACCCATCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAG(SEQ IDNO:12)。
在一些实施例中,所述编码重链可变区的核苷酸序列是与如SEQ ID NO:8所示的序列具有密码子简并性的核苷酸序列,该具有密码子简并性的核苷酸序列与如SEQ ID NO:8所示的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。
在一些实施例中,所述编码轻链可变区的核苷酸序列是与如SEQ ID NO:12所示的序列具有密码子简并性的核苷酸序列,该具有密码子简并性的核苷酸序列与如SEQ ID NO:12所示的序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。
本说明书一些实施例还提供了一种重组载体,其包括如前文所述的任意核酸分子。制备重组载体的方法对于本领域技术人员来说应该是已知的,例如,可以使用重组DNA技术和基因转染方法,将前述核酸分子插入一个或多个表达载体中,使得核酸分子可操作地连接于转录和翻译调节序列。
本说明书一些实施例还提供一种宿主细胞,其包括如前文所述的任意核酸分子或者重组载体。
如本文所用,术语“宿主细胞”是指能够引入外源基因并使其稳定维持的细胞。
在一些实施例中,宿主细胞可以为真核细胞或原核细胞。在一些实施例中,可作为宿主细胞的真核细胞包括但不限于啮齿类动物细胞、灵长类动物细胞、植物细胞、昆虫细胞和酵母细胞等。在一些实施例中,可作为宿主细胞的原核细胞包括但不限于大肠杆菌、芽孢杆菌和沙门氏菌等。
本说明书一些实施例还提供一种制备结合依托咪酯的抗体或抗原结合片段的方法,该方法使用如前文所述的任意宿主细胞。该方法包括:培养宿主细胞;从宿主细胞的细胞培养物中分离抗体或抗原结合片段。
本说明书一些实施例还提供一种检测样品中依托咪酯的方法。该方法包括:使样品和能够与依托咪酯结合形成抗原抗体复合物的抗体或抗原结合片段接触,抗体或抗原结合片段是如前文所述的抗体或抗原结合片段;检测抗原抗体复合物,以定性检测或定量检测样品中的依托咪酯。
在一些实施例中,样品可以是生物样品,例如外周血、尿液、唾液、毛发、组织液、粪便等。在一些实施例中,样品可以是非生物样品,例如取样自物品(例如,容器)或物品表面。在一些较优的实施例中,样本包括外周血、尿液、唾液和毛发中的一种或多种。
在一些实施例中,抗体或抗原结合片段是带有可检测标记的,通过可检测标记产生的信号来检测所述抗原抗体复合物。
在一些实施例中,抗体或抗原结合片段是未标记的,使抗原抗体复合物中作为捕获抗体的抗体或抗原结合片段与带有可检测标记的检测抗体结合,通过可检测标记产生的信号来检测所述抗体复合物。
在一些实施例中,所述可检测标记可以是放射性同位素标记或非放射性同位素标记。在一些实施例中,放射性同位素标记包括但不限于碘123、碘125、碘126、碘131、碘133、溴77等。在一些实施例中,非放射性同位素标记可以选自下组:染料、半抗原、发光剂(例如,放射性发光剂、化学发光剂、生物发光剂、荧光剂(例如,荧光素、GFP、Cy3或Cy5等)或磷光剂等)、酶(例如,荧光素酶、过氧化物酶或碱性磷酸酶等)、抗体、受体和配体(例如,生物素、亲和素等)。
在一些实施例中,所述定量检测包括:对比获自样品的第一检测信号和获自对照品或校准品的第二检测信号,其中,第一检测信号由样品与抗体或抗原结合片段接触形成的抗原抗体复合物产生,第二检测信号由对照品或校准品与所体或抗原结合片段接触形成的抗原抗体复合物产生,所述对照品或校准品中含有预定浓度的依托咪酯;基于对比结果和预定浓度,确定样品的依托咪酯浓度。
本说明书一些实施例还提供了一种检测依托咪酯的试剂盒,其包含如前文所述的任意抗体或抗原结合片段。
在一些实施例中,所述试剂盒选自下组:胶体金检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、酶联免疫检测试剂盒、化学发光试剂盒、免疫比浊检测试剂盒。
本说明书一些实施例还提供了如前文所述的任意抗体或抗原结合片段、核酸分子、重组载体或宿主细胞在检测依托咪酯或制备检测依托咪酯的试剂盒中的应用。
以下实施例是对与上述一些实施例相关的实施例的一些更具体的说明。这些实施例中的部分内容也可以与其他实施例中的相应内容替换或组合,从而形成新的实施例。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂公司购买得到的。以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。应当理解,以下实施例是为了更好地解释本发明,并不旨在限制本发明。
实施例
方法
制备依托咪酯-KLH偶联物的方法
制备依托咪酯-KLH偶联物步骤如下:
1、取依托咪酯240mg溶于甲醇中,将1N氢氧化钠溶液加入该甲醇溶液中,室温下搅拌过夜。
2、反应结束,将溶剂旋干,加入少量水和1N盐酸溶液调节pH至中性或弱酸性。
3、加入20mL二氯甲烷萃取3次,收集有机相,加入无水硫酸钠干燥,过滤并旋干有机相,得到浅黄色粘稠液,即依托咪酯酸。不进行下一步纯化,可直接投入下一步反应。
4、取上一步反应产物依托咪酯酸与甘氨酸盐酸盐、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)按照1:(1.2~1.5):(1.5~2)的混合于吡啶中,在室温下搅拌过夜。
5、反应结束后,旋干溶剂,进行薄层色谱法(TLC),层析液为石油醚:乙酸乙酯=1:1,产物Rf=0.3。分离后得产物170mg。
6、将上一步产物溶于甲醇中,取2~2.5eq氢氧化钠配置成1mol/L的溶液加入到甲醇溶液中,室温下搅拌过夜。
7、反应结束,将溶液旋干,加入少量水和1N盐酸溶液调节pH至中性或弱酸性。
8、加入20mL二氯甲烷萃取3次,收集有机相,加入无水硫酸钠干燥,过滤并旋干有机相,得到依托咪酯半抗原。
9、取依托咪酯半抗原20mg与10.1mg的N-羟基丁二酰亚胺(NHS)、16.8mg的E DC溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,放置在转盘上室温反应过夜,得到依托咪酯半抗原溶液。
10、称取40mg血蓝蛋白(KLH)溶于4mL的PBS缓冲液中,搅拌均匀,得到浓度为10mg/mL的KLH溶液。
11、冰浴下,将得到的KLH缓慢滴加到步骤9中制备的依托咪酯半抗原溶液中,得到的混合液在室温下放置在转盘上8h,得到人工抗原混合液。
12、将人工抗原混合液移入透析袋中,用PBS缓冲液透析7次,透析结束后以10000r/min的速度离心10min,弃沉淀,取上清液即得到人工抗原依托咪酯-KLH偶联物(以下简称依托咪酯-KLH)。
动物免疫的方法
动物免疫使用的抗原是前述制备方法制备的依托咪酯-KLH。动物免疫方法具体包括以下步骤:
1、将体重、周龄均值一致的Balb/c小鼠随机分为2组,加铝佐剂(氢氧化铝佐剂)组和不加铝佐剂组。
2、实验开始前,小鼠各收集免疫前血清(第五天收集免疫前血清,通过眼球取血,适量取血,保证小鼠正常状态),收集好的血清存于-80℃。
3、加铝佐剂(氢氧化铝佐剂)组配制方式:免疫前,抗原在75μL的PBS中分别稀释至所需的对应剂量(75μg/只小鼠),得到免疫原稀释液,并与铝佐剂(1mg/只小鼠)混合,按照体积免疫原稀释液:佐剂=3:1(即75μL免疫原稀释液中加入25μL佐剂)混合。其中,铝佐剂在使用前摇匀,将铝佐剂(25μL)缓慢滴加至免疫原稀释液中;铝佐剂与免疫原稀释液充分混合30min,使佐剂有效吸附抗原。后续根据免疫动物实验操作进行。
4、不加铝佐剂组配制方式:抗原在100μL的PBS中稀释至所需的对应剂量(75μg/只小鼠),得到100μL的免疫原稀释液。后续根据免疫动物实验操作进行。
5、以2周的间隔皮下注射:实验设计为3次免疫方式,但分别在每一次免疫注射7天后眼球取血,离心法获得部分小鼠上清,先进行血清滴度检测,最后一次免疫结束7天后,心脏取血取最大血量,离心获得上清,存于-80℃。
抗体的抗原结合能力检测的方法
1、间接ELISA检测
间接ELISA检测即采用IgG抗体滴度检测方式检测依托咪酯的结合活性。
(1)底板包被:使用包被稀释液将包被抗原依托咪酯-KLH稀释到1μg/mL,酶标板每孔各加入配好的包被抗原50μL,置4℃冰箱,放置24h。
(2)24h后,从冰箱取出后置于37℃平衡30min,之后弃去孔中液体;用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min。
(3)封闭酶标反应孔:每孔加入200μL封闭液(例如,5%脱脂奶粉溶液)后置37℃封闭90min,封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min。
(4)加入待检测样品:将待检测样品按照需要的比例进行稀释,将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每孔50μL,置于37℃中反应30min;用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min。
(5)加入酶标抗体:按照说明书加入适宜浓度的二抗(例如,羊抗鼠IgG-HRP),每孔加50μL,37℃反应30min;洗涤同前。
(6)加入底物液:底物加入量每孔100μL,置37℃避光放置15~30min。
(7)终止反应:每孔加入终止液(例如,2mol/L H2SO4)50μL终止反应,在20min内用酶标仪读取A450值,测定抗体效价。
2、间接竞争ELISA检测
间接竞争ELISA检测的过程与间接ELISA检测不同之处在于:间接竞争ELISA检测步骤(4)的反应孔中需要先加入稀释的小分子依托咪酯(或称原型依托咪酯)标准液50μL作为竞争半抗原,再加入待检测样品。间接竞争ELISA检测方法的其余步骤与间接ELISA检测方法相同。
抗依托咪酯单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
细胞融合备用小鼠的准备
选用6-8周龄Balb/c健康雌性小鼠,按照上述动物免疫方法进行动物免疫后,按照上述抗体效价检测方法检测动物体内的血清效价。
免疫了3只小鼠,小鼠编号依次为A0,A1,A2。其中,A0和A1为加铝佐剂组,A2是不加铝佐剂组。3次免疫结束后,分别采用上述间接ELISA法和间接竞争ELISA法检测免疫小鼠的血清效价。检测数据如表1所示。
表1-血清效价检测数据(A450值)
由表1可以看出:通过分析间接ELISA检测数据,3只小鼠的三免后眼眶血效价均>62500;通过对比间接ELISA检测数据和间接竞争ELISA检测数据,3只小鼠的三免后眼眶血稀释浓度在1:12500时均能达到竞争率50%以上。其中,竞争率=(A450未加竞争半抗原-A450加竞争半抗原)/A450未加竞争半抗原*100。综上,3只小鼠的血清中均检出高效价的抗体,可以进行后续细胞融合。
细胞融合与杂交瘤细胞株的筛选
选取编号依次为A0,A1,A2的三只小鼠免疫脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0进行细胞融合及融合细胞的筛选与克隆。具体地:
A0小鼠融合筛选共挑出18个阳性孔,进行亚克隆,经融合筛选,共挑选出48个OD450值>2.2以上的阳性孔,将上述阳性孔进行倍比稀释检测效价,再进行第二次亚克隆筛选。得到3个杂交瘤细胞株,分别命名为A0-1、A0-2、A0-3。
A1小鼠融合筛选共挑出16个阳性孔,进行亚克隆,经融合筛选,共挑选出15个OD450值>2.1以上的阳性孔,将上述阳性孔进行倍比稀释检测效价,再进行第二次和第三次亚克隆筛选,最终得到3个杂交瘤细胞株,分别命名为A1-1、A1-2、A1-3。
A2小鼠融合筛选共挑出28个阳性孔,进行亚克隆,再进行第二次和第三次亚克隆筛选,最终得到4个杂交瘤细胞株,分别命名为A2-1、A2-1、A2-3、A2-4。
单克隆抗体的免疫学特性鉴定
(1)单抗隆抗体腹水效价检测:将每个杂交瘤细胞株分别注入F1代小鼠腹腔,共制备了10份腹水,按照间接ELISA法和间接竞争ELISA法分别测试腹水抗体效价。所有腹水检测效价数据如表2所示。
表2-腹水抗体效价检测数据(A450值)
(2)纯化后的抗体效价检测:以上腹水经3.3%正辛酸-硫胺沉淀法纯化,共得到10个杂交瘤细胞株对应分泌的候选单克隆抗体,所有候选单克隆抗体的效价检测数据见表3。
表3-候选单克隆抗体效价检测数据(A450值)
表2和表3的数据显示10个候选单克隆抗体对依托咪酯半抗原均具有良好的特异性结合能力。且候选单克隆抗体对原型依托咪酯具有良好的竞争效果,例如候选单克隆抗体A0-3和A1-2号。上述结果表明,本实施例的候选单克隆抗体可应用于依托咪酯的免疫检测,例如作为依托咪酯胶体金检测产品的检测抗体。
以上候选单克隆抗体经Protein A/G抗体纯化柱纯化,纯化后的抗体ELISA效价>1:128,000,纯度>90%。
抗依托咪酯单克隆抗体在依托咪酯抗原检测中的验证
本实施例以免疫胶体金检测法为例,通过免疫胶体金平台对抗依托咪酯抗体A0-3和A1-2号抗体进行验证。
具体实验设置如下:
实验组:杭州安旭生物科技有限公司的依托咪酯标准品Etomidate。
阴性对照组:尿液样本。
使用上述实验得到的抗依托咪酯抗体A0-3和A1-2号作为金标抗体,依托咪酯-KLH作为包被抗原,制备依托咪酯竞争法免疫胶体金抗原检测试剂盒。将上述实验组和阴性对照组的试剂分别加样至试剂盒,之后使用杭州安旭生物科技有限公司的POCT检测仪器ACG1000(ID-A003)对结果进行检测,实验数据结果见表4。
表4-检测结果
注:G4-G8表示试纸条的条带颜色深浅的级别,数值越高,表示颜色越深,+/-表示比该级别的颜
色稍深或稍浅。加入依托咪酯标准品数值变低说明小分子有竞争作用,抗体可以和依托咪酯标准
品结合。
通过表4可以看出,A0-3和A1-2号抗体梯度较好,可用于例如依托咪酯检测产品中,cut-off值可以做到500ng/mL。
采用上述验证实验对不同批次的A1-2号抗体进行稳定性评估,制备3个批次的抗体小样,分别编号为A1-2-(1),A1-2-(2),A1-2-(3),评估结果如表5所示。
表5-稳定性评估结果表
表5的评估结果显示A1-2号抗体的稳定性良好。将A1-2号抗体命名为anti-Etomidate-mab1,该抗体可以例如用于制备依托咪酯抗原检测试剂盒。
单克隆抗体anti-Etomidate-mab1的测序分析
对单克隆抗体anti-HP-urease-mab1进行测序分析,具体步骤如下:
1、设计扩增重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因的引物。
扩增VH及VL基因的引物如下:
VH正向引物(VH-FOR):GCTCAGGGAAATAGCCCTTGAC(SEQ ID NO:15);
VH反向引物(VH-BACK):GGGAATTCGAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGG(SEQ I D NO:16);
VL正向引物(VL-FOR):GATGGTGGGAAGATGGATACAGTT(SEQ ID NO:17);
VL反向引物(VL-BACK):ATTWTCAGCTTCCTGCTAATC(SEQ ID NO:18)。
2、取anti-Etomidate-mab1对数生长期的杂交瘤细胞株(约107个细胞),按照Trizol RNA提取试剂盒的说明书抽提细胞的总RNA,以总RNA为模板反转录合成cDNA第一链,以上述扩增产物为模板PCR扩增抗体的VH/VL基因。
3、回收取anti-Etomidate-mab1的VH片段(约360bp)、VL片段(约300bp),进行测序。所得序列如下:
VH编码序列(anti-Etomidate-mab1-VH):324bp
CCGTGGACTCGTGAGCTTCTCAGTCTCTTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTAC
TCCATCACCAGTGGTTATTACTGGAACTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAAACTGG
AATGGATGGGCTACATAAGCTACGGCGGTTCCTATAACTACAACCCCTCTCTCAAAAA
TCGAATCTCCATCACTCGAGACACATCCAAGAACCAGTTTTTCCTGAACTTGAATTCTG
TGACTACTGAGGACACAGCTACATATTACTGTGCAACGTTCTATGATGGTTACTACAGG
GCCTGGGGCCTCTGGACTCTGGTCACTGTCTCT。
VH氨基酸序列(anti-Etomidate-mab1 protein):108aa
PWTRELLSLLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYGGSYNYNPSLK NRISITRDTSKNQFFLNLNSVTTEDTATYYCATFYDGYYRAWGLWTLVTVS。
VL编码序列(anti-Etomidate-mab1 LVκ):315bp
CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCACTCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAAGATCCTCCCCCAAAACCTGGATTTATCTCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTATTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGGAGTGGAGTGGTAACCCACCCATCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAG。
VL氨基酸序列(anti-Etomidate-mab1 LVκprotein):105aa
QIVLTQSPALMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPRSSPKTWIYLTSNLASGVP ARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQEWSGNPPITFGAGTKLE。
本说明书实施例所披露的一种结合依托咪酯的抗体或抗原结合片段及其相关应用,带来的有益效果包括但不限于:(1)本说明书实施例提供的结合依托咪酯的单克隆抗体具有良好的特异性和灵敏度;(2)本发明所提供的结合依托咪酯的单克隆抗体可用于免疫印迹、免疫荧光等免疫学检测,例如可用于通过胶体金检测平台,检测样本中是否存在依托咪酯。需要说明的是,不同实施例可能产生的有益效果不同,在不同的实施例里,可能产生的有益效果可以是以上任意一种或几种的组合,也可以是其他任何可能获得的有益效果。
本领域的技术人员应当理解,以上实施例仅为说明本发明,而不对本发明构成限制。凡在本发明的精神和原则内所作的任何修改、等同替换和变动等,均应包含在本发明的保护范围之内。
同时,本说明书使用了特定词语来描述本说明书的实施例。如“一个实施例”、“一实施例”、和/或“一些实施例”意指与本说明书至少一个实施例相关的某一特征、结构或特点。因此,应强调并注意的是,本说明书中在不同位置两次或多次提及的“一实施例”或“一个实施例”或“一个替代性实施例”并不一定是指同一实施例。此外,本说明书的一个或多个实施例中的某些特征、结构或特点可以进行适当的组合。
一些实施例中使用了描述成分、属性数量的数字,应当理解的是,此类用于实施例描述的数字,在一些示例中使用了修饰词“大约”、“近似”或“大体上”来修饰。除非另外说明,“大约”、“近似”或“大体上”表明所述数字允许有±20%的变化。相应地,在一些实施例中,说明书和权利要求中使用的数值参数均为近似值,该近似值根据个别实施例所需特点可以发生改变。在一些实施例中,数值参数应考虑规定的有效数位并采用一般位数保留的方法。尽管本说明书一些实施例中用于确认其范围广度的数值域和参数为近似值,在具体实施例中,此类数值的设定在可行范围内尽可能精确。
针对本说明书引用的每个专利、专利申请、专利申请公开物和其他材料,如文章、书籍、说明书、出版物、文档等,特此将其全部内容并入本说明书作为参考。与本说明书内容不一致或产生冲突的申请历史文件除外,对本说明书权利要求最广范围有限制的文件(当前或之后附加于本说明书中的)也除外。需要说明的是,如果本说明书附属材料中的描述、定义、和/或术语的使用与本说明书所述内容有不一致或冲突的地方,以本说明书的描述、定义和/或术语的使用为准。
最后,应当理解的是,本说明书中所述实施例仅用以说明本说明书实施例的原则。其他的变形也可能属于本说明书的范围。因此,作为示例而非限制,本说明书实施例的替代配置可视为与本说明书的教导一致。相应地,本说明书的实施例不仅限于本说明书明确介绍和描述的实施例。
Claims (14)
1.一种结合依托咪酯的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或抗原结合片段包括:
重链可变区,其包括氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的CDRH1、氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示的CDRH2和氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的CDRH3;
轻链可变区,其包括氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的CDRL1、氨基酸序列为LTS的CDRL2和氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的CDRL3。
2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
3.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗体为单克隆抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。
4.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段,其特征在于,所述抗原结合片段选自下组:Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、Fv、scFv、dAb。
5.一种核酸分子,其包含编码如权利要求1-3中任一项所述的抗体或抗原结合片段的核苷酸序列。
6.如权利要求5所述的核酸分子,其特征在于,所述核酸分子包括:
编码重链可变区的核苷酸序列,其包括如SEQ ID NO:9所示的CDRH1的编码序列、如SEQID NO:10所示的CDRH2的编码序列和如SEQ ID NO:11所示的CDRH3的编码序列;
编码轻链可变区的核苷酸序列,其包括如SEQ ID NO:13所示的CDRL1的编码序列、序列为CTCACATCC的CDRL2的编码序列和如SEQ ID NO:14所示的CDRL3的编码序列。
7.如权利要求5所述的核酸分子,其特征在于,所述编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示;所述编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。
8.一种重组载体,其包括如权利要求5-7中任一项所述的核酸分子。
9.一种宿主细胞,其包括如权利要求5-7中任一项所述的核酸分子或者如权利要求8所述的重组载体。
10.一种制备结合依托咪酯的抗体或抗原结合片段的方法,其特征在于,所述方法包括:
培养如权利要求9所述的宿主细胞;
从所述宿主细胞的细胞培养物中分离所述抗体或抗原结合片段。
11.一种检测样品中依托咪酯的方法,其特征在于,所述方法包括:
使所述样品和能够与依托咪酯结合形成抗原抗体复合物的抗体或抗原结合片段接触,所述抗体或抗原结合片段是如权利要求1-4中任一项所述的抗体或抗原结合片段;
检测所述抗原抗体复合物,以定性检测或定量检测所述样品中的依托咪酯。
12.如权利要求11所述的方法,其特征在于,所述样品包括外周血、尿液、唾液和毛发中的一种或多种。
13.一种检测依托咪酯的试剂盒,其包含如权利要求1-4中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
14.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或抗原结合片段在检测依托咪酯或制备检测依托咪酯的试剂盒中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310847458.XA CN116813788A (zh) | 2023-07-11 | 2023-07-11 | 一种结合依托咪酯的抗体及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310847458.XA CN116813788A (zh) | 2023-07-11 | 2023-07-11 | 一种结合依托咪酯的抗体及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116813788A true CN116813788A (zh) | 2023-09-29 |
Family
ID=88140813
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310847458.XA Pending CN116813788A (zh) | 2023-07-11 | 2023-07-11 | 一种结合依托咪酯的抗体及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116813788A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN118150823A (zh) * | 2024-05-11 | 2024-06-07 | 北京市禁毒科技中心 | 一种依托咪酯免疫荧光层析快检试纸及检测方法 |
-
2023
- 2023-07-11 CN CN202310847458.XA patent/CN116813788A/zh active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN118150823A (zh) * | 2024-05-11 | 2024-06-07 | 北京市禁毒科技中心 | 一种依托咪酯免疫荧光层析快检试纸及检测方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110616192B (zh) | 一种抗人神经丝轻链(nefl)的单克隆抗体及其应用 | |
CN116375856A (zh) | 一种抗Tau蛋白的单克隆抗体1A5-47H7和基于其的产品以及应用 | |
EP3239176A1 (en) | Anti-active gip antibody | |
CN116355091A (zh) | 一种抗人神经丝轻链的单克隆抗体21d2-30d3及其产品和应用 | |
CN108659131B (zh) | 一种抗ceacam-5的单域抗体及其应用 | |
CN116813788A (zh) | 一种结合依托咪酯的抗体及其应用 | |
CN109627338B (zh) | 一种新型抗人pd-l1抗体及其应用 | |
CN111363037B (zh) | 一种包含特异性结合afp蛋白的抗体的疾病检测试剂盒 | |
CN110105449B (zh) | 一种特异性结合vegf的抗体及用途 | |
US10295534B2 (en) | Method for measuring anti-drug antibody | |
CN115746131A (zh) | 抗天然类风湿因子rf的单克隆抗体及其应用 | |
JPWO2009044561A1 (ja) | 抗proNT/NMNモノクローナル抗体 | |
CN110133278B (zh) | 一种用于检测人vegf蛋白表达水平的体外试剂盒 | |
CN110927387B (zh) | 一种brca2蛋白酶联免疫双抗夹心试剂盒及其应用 | |
CN110031616B (zh) | 一种辅助诊断疾病的检测试剂盒 | |
CN110579610A (zh) | 用于检测t细胞活化的v域免疫抑制因子的试剂盒 | |
CN110596369A (zh) | 一种用于检测人tim-3表达水平的试剂盒 | |
EP2484694B1 (en) | Monoclonal antibody against human hig-1 polypeptide | |
CN112557662B (zh) | 一种结直肠癌检测试剂盒 | |
CN110156891B (zh) | 一种高效、快速结合vegf的抗体及其用途 | |
CN112876565B (zh) | 结直肠癌检测试剂盒 | |
CN116836291B (zh) | 抗cd47-cldn18.2双特异性抗体的抗独特型抗体及其制备方法和应用 | |
KR102542593B1 (ko) | 소나무재선충 분비 항원 pwn-sa571 특이적 항체 및 이의 용도 | |
CN114456265B (zh) | 一种抗hfabp单克隆抗体及其应用 | |
JP6586648B2 (ja) | 抗プログルカゴン抗体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |