CN116806151A

CN116806151A - 通过施用阿米洛利衍生物治疗皮肤病的方法

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Publication number: CN116806151A
Application number: CN202280011526.2A
Authority: CN
Inventors: 丽贝卡·沙弗兰; 马滕·温格; 伊利亚·巴特里扬
Original assignee: Famrinalden Ltd
Current assignee: Famrinalden Ltd
Priority date: 2021-01-25
Filing date: 2022-01-25
Publication date: 2023-09-26

Abstract

本发明涉及一种通过向人施用有效剂量的由式(I)表示的化合物来治疗有此需要的受试者的皮肤病的方法

Description

通过施用阿米洛利衍生物治疗皮肤病的方法

技术领域：

本发明涉及药物治疗领域，并且特别是用能够抑制离子通道交换剂ENaC、NHE和NCX的化合物对皮肤的疾病的治疗。

背景技术：

皮肤为半渗透性屏障，它对于用于维持体内平衡以及防止过度水分流失、微生物攻击、体温调节和感觉是重要的。为了维持这些功能，皮肤需要密切调节其功能，其功能涉及增殖、分化和表皮免疫相互作用。离子通道流量对于调节这些功能是重要的，并且阳离子(比如钠和钙)在细胞外和细胞内都受到离子通道交换剂的严格调节。细胞内Na和膜电势的变化可以调节基底外侧Na/H和Na/Ca交换剂的活性，这将影像这种串扰(Harvey等人，1995)。这意味着，这些通道中一个通道的改变导致其它通道中的补偿机制。这方面的一个示例为，不需要在自我平衡意义上的正确方向上发生所有个体电导的调节，前提是适当地调节剩余电导的足够子集(O’Leary等人，2013)。

这些通道的调整是复杂的，然而被广泛接受的是，对于很多不同的电可兴奋细胞，电压门控钙通道提供对膜电压变化的间接测量，并且随后的钙离子的流入可以触发离子通道表达的变化。这一现象的药理学证明为，用钠通道阻断剂美西律进行的治疗导致钠通道转录和表达的上调，并且用钙通道阻断剂维拉帕米进行的治疗产生类似于用钠通道阻断所见的作用，表明对钠通道阻断的应答是由钙离子通量的变化所介导的(Rosati等人，2004)。

另一示例为，钠过载如何可促进NCX过度活动，而钠耗尽也可促进NCX1介导的应答以及来自免疫细胞的促炎细胞因子释放的产生(Harvey等人，1995)。

WO 9009792提出阿米洛利及其一些衍生物用于治疗炎症性皮肤病和眼病。

WO 2015168574提出上皮离子通道(ENaC)阻断剂(比如苄基氨氯吡咪(benzamil))用于治疗牛皮癣的用途。

WO 2020150606提出一种用于治疗受试者的免疫失调的疾病的方法，所述方法包括向该受试者施用治疗有效量的例如苄基氨氯吡咪。免疫失调的疾病可以是炎症性疾病，而炎症性疾病又可以是皮肤病。

发明内容

本发明描述特异性阿米洛利衍生物的用途，该衍生物具有组合的脱靶特征，该组合的脱靶特征具有模拟苄基氨氯吡咪的方向性，该衍生物对于所有三种离子通道ENaC、NHE1和NCX1都具有活性。与对于NHE和NCX具有降低的活性或无活性的特异性ENaC抑制剂相比，此类阿米洛利衍生物在其对皮肤炎症的作用上是不同的并且有差异的。

本发明利用阿米洛利衍生的药物对多种离子通道(ENaC、NHE和NCX)的组合抑制，以使得能够恢复皮肤炎症中所涉及的细胞因子的异常信号传导，其中这些通道中的几种通道的表达或活性失调，使得这些药物能够治疗多种皮肤的疾病。可用于本发明的阿米洛利衍生物为式(I)的那些及其药学上可接受的盐，

其中R选自

-C(CH₃)CH₂C(CH₃)₃；

以及

根据第一方面，提供一种通过向人施用有效剂量的由式(I)表示的化合物及其药学上可接受的盐来治疗有此需要的受试者的皮肤病的方法，

其中R选自

-C(CH₃)CH₂C(CH₃)₃；

以及

前提是当该化合物为氨氯吡嗪脒或苄基氨氯吡咪时，则该皮肤病不是牛皮癣。

该皮肤的疾病可以选自下述的组，其中CXCL1、TNFα和/或IL1α是失调的，例如，其中异常水平的CXCL1、TNFα和/或IL1α存在并且与发病机制有关，并且/或由以下组成：痤疮、特应性皮炎、脂溢性皮炎、钱币状皮炎、口周皮炎、红斑痤疮、白癜风、化脓性汗腺炎、狼疮、硬斑病、硬皮病、皮肤溃疡、炎性脂溢性角化病、痣、纤维状丘疹、毛发红糠疹、包括寻常型天疱疮和增殖型天疱疮在内的天疱疮、大疱性类天疱疮、IgA天疱疮、毛囊角化病、片层状鱼鳞癣、表皮松解性鱼鳞癣、内瑟顿氏综合征、先天性鱼鳞癣样红皮病、皮肤血管炎、白塞病、皮肤性移植物抗宿主病、SAPHO(滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎)综合征、结节病、脂膜炎、史蒂文斯-约翰逊综合征、中毒性表皮坏死松解症、嗜中性皮肤病、坏疽性脓皮病、斯威特综合征、角层下脓疱性皮病、急性泛发性发疹性脓疱病(AGEP)、疱疹样皮炎、皮肌炎、隐热蛋白相关周期性综合征、家族性地中海热、着色性干皮病、瘙痒、疼痛、UV-诱导的皮肤损伤、刺激性接触性皮炎、斯提耳氏病、扁平苔癣、湿疹、伤口、病变、溃疡、脱发，以及伴有炎症的皮肤肿瘤，包括光化性角化病、原位鳞状细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、乳腺外佩吉特病、隆凸性皮肤纤维瘤、非典型纤维黄色瘤、皮脂腺癌；和梅克尔细胞癌。

可以局部地或全身性地施用由式(I)表示的该化合物。

可以注射或口服给予该化合物。

被治疗的受试者可以是哺乳动物受试者，比如人或动物。

当该化合物为药学上可接受的盐的形式时，该盐可以选自乳酸盐、乙酸盐和磷酸盐。

在一些实施方案中，以在该受试者中有效实现5-50ng/mL的血清浓度的量施用该化合物。

根据第二方面，提供一种由式(I)表示的化合物，

其中R选自

-C(CH₃)CH₂C(CH₃)₃；

以及

及其药学上可接受的盐，其用于上述治疗的方法中。

根据第三方面，提供一种由式(I)表示的化合物，

其中R选自

-C(CH₃)CH₂C(CH₃)₃；

以及

及其药学上可接受的盐在药物组合物的制造中的用途，用于上述治疗的方法中。

附图说明

在图1a中显示，与不患有痤疮的对照人相比，在患有痤疮的患者中，ENaC和NCX1上调并且NHE下调。

在图1b中显示，在患有痤疮的患者中，CXCL1和IL1α上调。

在图2a中显示，与不患有特应性皮炎的对照人相比，在患有特应性皮炎的患者中，NCX1上调并且ENAC下调。

在图2b中显示，在患有湿疹的患者中，CXCL1和TNFα上调。

在图3中显示，苄基氨氯吡咪降低CXCL1在受刺激的角质形成细胞中的表达。

在图4中显示，苄基氨氯吡咪降低IL1α在受刺激的角质形成细胞中的表达。

在图5中显示，苄基氨氯吡咪降低TNFα在受刺激的角质形成细胞中的表达。

在图6中显示，在低水平发炎的角质形成细胞条件下，苄基氨氯吡咪不降低增殖。

具体实施方式

已经提出，阿米洛利衍生物苄基氨氯吡咪用于治疗牛皮癣(WO 2015168574,A1)和囊性纤维化(Hirsh等人，2004)。尽管苄基氨氯吡咪在体外为比阿米洛利更有效的ENaC抑制剂，但先前已经显示，苄基氨氯吡咪和氨氯吡嗪脒特异性地对ENaC的体内功效等同于阿米洛利(Hirsh等人，2004)。因此将会预期，如果ENaC为造成对角质形成细胞增殖的作用的特异性靶，则更高剂量的阿米洛利将产生部分的或类似的作用。

ENaC、NCX1或NHE的单独损失不会将细胞内离子通道信号传导改变到当多个通道被抑制时的程度(Rosati等人，2004)。已经证明，NCX1(Staiano等人，2009)、NHE1和ENaC的表达的差异与活化相关，并且它们可能彼此补偿。

本发明已经发现，当与阿米洛利或特异性钠通道抑制剂相比时，苄基氨氯吡咪的脱靶特征是不同的，这使得苄基氨氯吡咪能够具有治疗性作用，并且通过组合的ENaC、NCX1和NHE抑制来抑制在炎症性皮肤疾病中造成炎症的皮肤细胞中的促炎细胞因子产生。

因此，本发明涉及使用与苄基氨氯吡咪具有共有的组合的ENaC、NCX1和NHE抑制性质的化合物的治疗方法，用于治疗由皮肤细胞中的促炎细胞因子产生引起或并发的病症，前提是当该化合物为氨氯吡嗪脒或苄基氨氯吡咪时，则该皮肤病不是牛皮癣。在一些实施方案中，当该化合物为苄基氨氯吡咪时，该皮肤病不是特应性皮炎、斑秃、大疱性天疱疮、慢性湿疹、皮肌炎、结节性红斑、大疱性表皮松解症、化脓性汗腺炎、扁平苔癣、寻常型天疱疮、坏疽性脓皮病、硬皮病或白癜风。

本文所披露的实验结果表明，具有组合的所有三种离子通道ENaC、NCX1和NHE的组合抑制作用的化合物，例如苄基氨氯吡咪，对于预防通过炎症性细胞因子CXCL1、TNFα和IL1α的促炎信号传导而言是足够的和必要的。

对所有三种离子通道ENaC、NCX1和NHE的组合具有组合抑制作用的大量阿米洛利衍生物为本领域已知的，并且包括由式(I)表示的化合物

其中R选自

-C(CH₃)CH₂C(CH₃)₃；

以及

(Kleyman等人，1988)。

上文披露的特异性阿米洛利衍生物(本文中也称为“本发明的化合物”)具有靶向所有三种离子通道ENaC、NHE和NCX1的类似特征，并且因此在治疗具有组合的炎症和异常角质形成细胞增殖的皮肤的疾病中具有治疗潜能，如本文所述。

已经证实，炎症性细胞因子CXCL1、TNFα和/或IL1a为皮肤病发病机制的基础，其中异常上皮信号传导导致炎症性免疫应答。这些病症包括痤疮(Li,X.,等人，2019)、特应性皮炎(Farley,S.M.,等人，2006)(He,H.,等人，2021)、脂溢性皮炎(Molinero,L.L.,等人，ClinImmunol[临床免疫学])、钱币状皮炎(Farley,S.M.,等人，2006)、口周皮炎(Farley,S.M.,等人，2006)、红斑痤疮(Li,N.,等人，2014)、白癜风(Jimbo,H.,等人，2020)、化脓性汗腺炎(Gupta和Skinner,2004)、狼疮(Norman,R.,等人，2006)、硬斑病(Fett,N.,2013)、硬皮病、皮肤溃疡、炎性脂溢性角化病、痣、纤维状丘疹、毛发红糠疹(Muller,H.,等人，2008)、包括寻常型天疱疮和增殖型天疱疮在内的天疱疮(Tavakolpour,S.,等人，2020)、大疱性类天疱疮(Tabatabaei-Panah,P.S.,等人，2019)、IgA天疱疮(Howell,S.M.,等人，2005)、毛囊角化病(Mayuzumi,N.,等人，2005)、片层状鱼鳞癣(Malik,K.,等人，2019)、表皮松解性鱼鳞癣(Malik,K.,等人，2019)、内瑟顿氏综合征(Malik,K.,等人，2019)、先天性鱼鳞癣样红皮病(Malik,K.,等人，2019)、皮肤血管炎(Carbone,F.和F.Montecucco,2015)、白塞病(van derHouwen和van Laar,2020)、皮肤性移植物抗宿主病(Gupta和Skinner,2004)、SAPHO(滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎)综合征(Gupta和Skinner,2004)、结节病(Gupta和Skinner,2004)、脂膜炎(Gupta和Skinner,2004)、史蒂文斯-约翰逊综合征(Wang,C.W.,等人，2018)、中毒性表皮坏死松解症(Gupta和Skinner,2004)、嗜中性皮肤病(Ahn,C.等人，2018)、坏疽性脓皮病(Ahn,C.等人，2018)、斯威特综合征(Gupta和Skinner,2004)、角层下脓疱性皮病(Gupta和Skinner,2004)、急性泛发性发疹性脓疱病(AGEP)(Feldmeyer,L.,等人，2016)、疱疹样皮炎(Amerio,P.,等人，2000)、皮肌炎(Alexis和Strober,2005)、隐热蛋白相关周期性综合征(Luo,X.Y.,等人，2020)、家族性地中海热(Samuels和Ozen,2006)、着色性干皮病(Kunisada,M.,等人，2017)、瘙痒(Deftu,A.F.,等人，2018)、疼痛(Deftu,A.F.,等人，2018)、UV-诱导的皮肤损伤(Fukunaga,A.,等人，2021)、刺激性接触性皮炎(Funch,A.B.,等人，2021)、斯提耳氏病(Kadavath,S.和P.Efthimiou,2015)、扁平苔癣(Wu,T.,等人，2013)、湿疹(Farley,S.M.,等人，2006)、伤口(Zheng,R.,等人，2019)、病变、溃疡、脱发(Loh,S.H.,等人，2018)，以及伴有炎症的皮肤肿瘤，包括光化性角化病(Maru,G.B.,等人，2014)、原位鳞状细胞癌(Maru,G.B.,等人，2014)、鳞状细胞癌、基底细胞癌(Maru,G.B.,等人，2014)、乳腺外佩吉特病、隆凸性皮肤纤维瘤、非典型纤维黄色瘤、皮脂腺癌；和梅克尔细胞癌。

本发明的阿米洛利衍生物激活和/或改变免疫应答，而免疫应答又影响上文列出的癌。

其中CXCL1失调的皮肤病包括痤疮、着色性干皮病、瘙痒、疼痛、刺激性接触性皮炎、扁平苔癣、特应性皮炎。

其中TNFα失调的皮肤病包括毛发红糠疹、包括寻常型天疱疮和增殖型天疱疮在内的天疱疮、大疱性类天疱疮、IgA天疱疮、毛囊角化病、片层状鱼鳞癣、表皮松解性鱼鳞癣、内瑟顿氏综合征、先天性鱼鳞癣样红皮病、皮肤血管炎、白塞病、皮肤性移植物抗宿主病、SAPHO(滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎)综合征、结节病、脂膜炎、史蒂文斯-约翰逊综合征、中毒性表皮坏死松解症、嗜中性皮肤病、坏疽性脓皮病、斯威特综合征、角层下脓疱性皮病、AGEP、疱疹样皮炎、硬皮病、硬斑病、皮肌炎、隐热蛋白相关周期性综合征、家族性地中海热、UV-诱导的皮肤损伤、斯提耳氏病、化脓性汗腺炎、脱发、白癜风、基底细胞癌、光化性角化病和鳞状细胞癌(包括原位鳞状细胞癌(鲍温病))。

其中IL1α失调的皮肤病包括大疱性类天疱疮、毛囊角化病、皮肤血管炎、隐热蛋白相关周期性综合征、家族性地中海热、UV-诱导的皮肤损伤、斯提耳氏病、扁平苔癣、伤口、脂溢性皮炎和脱发。

可以向罹患上述列出的病症中任一者的个体提供组合物，该组合物包含有效量的苄基氨氯吡咪和对于ENaC、NCX1和NHE全部具有类似的组合抑制效应的化合物或盐，任选地与附加治疗剂组合。施用可较佳地按口服或局部等进行。在一些实施方案中，较佳的是局部施用。选择施用的剂量和周期以提供治疗性功效。

因此，本发明涉及并且利用药学上可接受的组合物，该组合物包含治疗有效量的至少一种根据本发明的化合物，该化合物任选地为药学上可接受的盐的形式，任选地与一种或多种用于治疗相关皮肤病的附加剂组合，与一种或多种药学上可接受的赋形剂配制在一起。可根据本领域已知的方法将活性成分和一种或多种赋形剂配制成组合物和剂型。本发明的药物组合物可配制为用于以固体、液体或半固体形式施用，包括适于以下的那些形式：口服施用，例如，片剂、胶囊剂、粉末剂、颗粒剂、用于施加至舌头的糊剂、水或非水溶液或悬浮液、灌药剂或糖浆剂；或局部施加，例如，作为施加至皮肤的洗剂、乳霜剂、油膏剂、喷雾剂、贴剂、微针阵列等。根据本发明的药品、药物组合物或治疗性组合可以是适用于施加至人和/或动物(较佳地，包括婴儿、儿童和成人在内的人)并且可通过本领域技术人员已知的标准程序产生的任何形式。该药品、(药物)组合物或治疗性组合可通过本领域技术人员已知的标准程序产生，该标准程序例如来自“Pharmaceutics:The Science of DosageForms”[药剂学：剂型科学],第二版，Aulton,M.E.(编)Churchill Livingstone[丘吉尔利文斯顿出版社],爱丁堡(2002)；“Encyclopedia of Pharmaceutical Technology”[制药技术百科全书],第二版，Swarbrick,J.和Boylan J.C.(编)，Marcel Dekker,Inc.New York[纽约的马赛尔德克尔公司](2002)；“Modern Pharmaceutics”[现代药剂学],第四版，Banker G.S.和Rhodes C.T.(编)Marcel Dekker,Inc.New York[纽约的马赛尔德克尔公司]2002,“The Theory and Practice of Industrial Pharmacy”[工业制药的理论与实践],Lachman L.,Lieberman H.和Kanig J.(编),Lea&Febiger[莱亚与菲比格出版社],费城(1986)。

苄基氨氯吡咪和对ENaC、NCX1和NHE两者均具有类似的组合抑制作用的化合物或盐的有效剂量可包括“治疗有效剂量或量”或“预防有效剂量或量”。“治疗有效剂量/量”是指在必要的剂量和时间段下有效实现所期望治疗结果的量。治疗有效量可以根据多种因素(比如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及在个体中引起期望应答的能力)而变化。治疗有效剂量也是治疗有益作用超过任何毒性或有害作用的量。“预防有效剂量/量”是指在必要的剂量和时间段下有效实现所期望预防结果的量。典型地，由于在疾病发生之前或疾病早期阶段对受试者使用预防剂量，因此预防有效量小于治疗有效量。

本发明研究人员已经在动物研究中发现，约20纳克/毫升(62.5nM)的血清浓度是治疗有效的。因此，在一个实施方案中，以足以实现约20ng/mL(比如5-50ng/mL)的血清浓度的剂量向受试者提供本发明的化合物。目前评定，本发明的化合物的5-50ng/mL的血清浓度对应于要向人受试者施用的约0.1-20mg的剂量。作为比较，对于在成年人中的20.6ng/mL的血清浓度，需要10mg的钠通道抑制剂阿米洛利的人口服给药(Jones等人，1997)。要施用的剂量取决于施用的途径、受试者的年龄和体重以及要施用的活性成分的生物可利用性，这又可受到所使用的剂型的影响，如本领域已知的(Adajare,2020)。用于评定局部药物生物可利用性的方法为本领域已知的，例如(Herkenne等人，2008)。

可调节剂量方案以提供最优的所期望应答(例如，治疗性或预防性应答)。例如，可以进行单一剂量施用，可以在一段时间内进行多次分剂量施用，或者可以根据治疗情况紧急性的指示按比例减少或增加剂量。该剂量可以在出现皮肤疾病症状时或症状发作前向受试者施用。

需注意，剂量值可随着要缓解的病症的类型和严重程度而变化。应进一步理解，对于任何特定的受试者，应根据个体需要以及施用组合物或监督组合物施用的人员的专业判断，随时间调节具体剂量方案，并且本文列出的剂量范围仅是示例性的，并且不旨在限制要求保护的组合物的范围或实践。

如本文所用，术语“剂量量”是指向受试者施用的物质的数量，例如，毫克(mg)。在一个实施方案中，剂量量是固定剂量，例如，不取决于要向其施用物质的受试者的体重。在另一实施方案中，剂量量不是固定剂量，例如，取决于要向其施用物质的受试者的体重，或对于局部疗法，剂量可与被治疗的表面积相关，例如，剂量/m²的皮肤。

示例性剂量量(例如，用于治疗成年人的固定剂量量)包括，约0.01mg、约0.05mg、约0.1mg、约0.5mg、约1mg、约5mg、约10mg、约20mg、约50mg、约100mg、约500mg或更多。

示例性剂量量(例如，用于通过本发明的方法局部治疗成年人的剂量量)包括，约0.01mg/m²表面积、约0.05mg/m²表面积、约0.1mg/m²表面积、约0.5mg/m²表面积、约1mg/m²表面积、约5mg/m²表面积、约10mg/m²表面积、约20mg/m²表面积、约50mg/m²表面积、约100mg/m²表面积、约500mg/m²表面积或更多。

也预期了处于上述范围中间的范围。例如，具有这些值中的任一者作为上限或下限的范围也旨在为本发明的部分，例如，约0.01mg至约100mg、约1mg至约10mg等。

组合物的施用可包括重复向受试者施用组合物的周期。施用该化合物的周期可以是约一周一次、每两周一次、约每三周一次、约每4周一次、约每5周一次、约每6周一次、约每7周一次、约每8周一次、约每9周一次、约每10周一次、约每11周一次、约每12周一次、约每13周一次、约每14周一次、约每15周一次、约每16周一次、约每17周一次、约每18周一次、约每19周一次、约每20周一次、约每21周一次、约每22周一次、约每23周一次、约每24周一次、约每5-10天一次、约每10-20天一次、约每10-50天一次、约每10-100天一次、约每10-200天一次、约每25-35天一次、约每20-50天一次、约每20-100天一次、约每20-200天一次、约每30-50天一次、约每30-90天一次、约每30-100天一次、约每30-200天一次、约每50-150天一次、约每50-200天一次、约每60-180天一次或约每80-100天一次。本发明也预期了处于上述时间中间的周期。本发明也预期了处于上述范围中间的范围。例如，具有这些值中的任一者作为上限或下限的范围也旨在为本发明的部分，例如，约110天至约170天、约160天至约220天等。

“周期的持续时间”是指发生重复施用周期所历经的时间。例如，施用物质的周期的持续时间可以长达约4周、长达约8周、长达约12周、长达约16周或更久、长达约20周、长达约24周、长达约28周、长达约32周或更久，在此期间，施用的周期为约每周一次。例如，周期的持续时间可以是约6周，在此期间，施用的周期为约每4周一次，例如，在第零周并且在第四周施用物质。

本发明的化合物可以药学上可接受的盐的形式提供。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所披露的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸或碱盐来修饰。药学上可接受的盐的示例包括，但不限于，碱性残基(比如胺)的无机或有机酸盐；酸性残基(比如羧酸)的碱或有机盐；和类似的盐。药学上可接受的盐包括，例如，由非毒性无机或有机酸形成的母体化合物的传统非毒性盐或季铵盐。例如，此类传统非毒性盐包括从无机酸(比如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸和类似的酸)衍生的那些盐；以及从有机酸(比如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、亚甲基双羟萘酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、草酸、羟基乙磺酸和类似的酸)制备的盐。目前优选的药学上可接受的盐是从乳酸、乙酸和磷酸制备的，已经发现它们至少在改善的稳定性、增加的水溶性和/或降低的多态性方面具有改善的性质(如共同未决专利申请EP 21199548.5中所描述)。本发明的化合物的药学上可接受的盐可通过传统化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，此类盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备；通常，非水性介质(如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈)是优选的。合适的盐的列表见于Remington:TheScience And Practice Of Pharmacy[雷明顿：药剂学科学与实践](Adajare,2020)中。

本文引用的所有参考文献通过引用整体并入本文。包括下述实施例以示例性说明本发明，并且不应将这些实施例视为限制本发明的范围，本发明的范围如所附权利要求所限定。

实验

通过计算机模拟实验，我们已经发现，在具有皮肤炎症的病症中，离子通道ENaC、NCX1和NHE中的几种离子通道而不是单个离子通道失调(上调或下调)，如在具有异常细胞因子信号传导的皮肤病中所例示的。在图1a中显示，与不患有痤疮的对照人相比，在患有痤疮的人中，ENaC和NCX1上调并且NHE下调。在图1b中显示，与不患有痤疮的对照人相比，在患有痤疮的患者中，细胞因子CXCL1和IL1α上调。

在图2a中显示，与不患有特应性皮炎的对照人相比，在患有特应性皮炎的患者中，NCX1上调并且ENAC下调。在图2b中显示，在患有特应性皮炎的患者中，细胞因子CXCL1和TNFα上调。

将原代角质形成细胞用TNFα(5ng/ml)刺激24小时，并且用苄基氨氯吡咪作为抑制剂来分析炎症性皮肤疾病中所涉及的促炎细胞因子的表达并且与以下具有不同亲和力的抑制剂进行比较：对ENaC/NCX1/NHE1具有亲和力(阿米洛利)、对ENaC具有亲和力但对NCX1和NHE1不具亲和力(甲磺酸卡莫司他)、对NCX1具有亲和力但对ENaC和NHE1不具亲和力(KB-R7943)或对NHE具有亲和力但对ENaC或NCX1不具亲和力(唑泊来德(zoniporide))。

根据制造商的使用说明将原代人角质形成细胞融解，在生长培养基(GM)中洗涤，并且经由台盼蓝评定活力。将细胞在37℃用5％ CO₂温育。汇合后，在GM中制备1.5x 10⁵个细胞/毫升的储备细胞溶液。将200μL的细胞悬浮液添加至相应96孔板的每个孔中，总计3x10⁴个细胞/孔。将细胞在37℃用5％ CO₂温育过夜以进行粘附。在过夜温育后，从每个孔去除细胞培养基，并将100μL的新鲜GM添加至每个孔。在总体积为3ml的GM中制备适当浓度的抑制剂化合物、媒介物和TNFα。将非苄基氨氯吡咪抑制剂的浓度选择为针对每个原代靶的IC50的0.1倍、1倍和10倍。对于阿米洛利，0.1、1和10um(针对ENaC的IC50为100nM)；对于甲磺酸卡莫司他，5nm、50nm和500nM(针对ENaC的IC50为50nM)；对于KB-R7943，0.01uM、0.1uM和1uM(针对NCX的IC50为5-10uM)；唑泊来德，1nM、10nM和100nM(针对NHE的IC50为14nM)。选择TNFα的浓度以概括低水平的促炎细胞因子刺激。

将100μl的每种处理添加至适当的孔中。将样品温育24小时。在TNFα刺激后20小时，为每个孔添加20μL的阿尔玛蓝。将细胞在37℃温育4小时。在TNFα刺激后24小时，在544/590nm读取每个孔的荧光以确定细胞活力。收集上清液并储存在-80℃以用于细胞因子分析。通过Luiminex分析细胞培养上清液中的炎症性细胞因子TNFα、CXCL1和IL1a。将数据导出到Excel中并使用Graphpad Prism 9.1进行处理。

结果

与阿米洛利、甲磺酸卡莫司他(具有不同脱靶特征的细胞外ENaC抑制剂)、KB-R7943(NCX1抑制剂)或唑泊来德(NHE抑制剂)不同，苄基氨氯吡咪以剂量依赖性方式降低CXCL1(图3)、IL1a(图4)和TNFα(图5)的表达。发现高于1μM的浓度(其中预测要靶向ENaC、NCX1和NHE1)是有效的，并且ENaC的完全抑制但NCX1或NHE1的低抑制或无抑制是不够的。

在这些情况下，苄基氨氯吡咪不降低增殖(图6)，这指示降低的促炎细胞因子的表达并非由于毒性作用。这些结果表明，由苄基氨氯吡咪所表现出的对ENaC、NCX1和NHE的所有三者(不是一个或另一个)的组合抑制作用对于预防促炎信号传导而言是足够的和必要的。已经证实，CXCL1、TNFα和IL1α对于皮肤炎症的发病机制而言是重要的(参见例如图1和图2)。

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Claims

1.一种通过向有需要的受试者施用有效剂量的由式(I)表示的化合物及其药学上可接受的盐来治疗该受试者的皮肤病的方法，

其中R选自

-C(CH₃)CH₂C(CH₃)₃；

以及

2.根据权利要求1所述的方法，其中该皮肤病选自以下组：其中CXCL1、TNFα和/或IL1α失调。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中该皮肤病选自由以下组成的组：痤疮、特应性皮炎、脂溢性皮炎、钱币状皮炎、口周皮炎、红斑痤疮、白癜风、化脓性汗腺炎、狼疮、硬斑病、硬皮病、皮肤溃疡、炎性脂溢性角化病、痣、纤维状丘疹、毛发红糠疹、包括寻常型天疱疮和增殖型天疱疮在内的天疱疮、大疱性类天疱疮、IgA天疱疮、毛囊角化病、片层状鱼鳞癣、表皮松解性鱼鳞癣、内瑟顿氏综合征、先天性鱼鳞癣样红皮病、皮肤血管炎、白塞病、皮肤性移植物抗宿主病、SAPHO(滑膜炎、痤疮、脓疱病、骨肥厚和骨炎)综合征、结节病、脂膜炎、史蒂文斯-约翰逊综合征、中毒性表皮坏死松解症、嗜中性皮肤病、坏疽性脓皮病、斯威特综合征、角层下脓疱性皮病、急性泛发性发疹性脓疱病(AGEP)、疱疹样皮炎、皮肌炎、隐热蛋白相关周期性综合征、家族性地中海热、着色性干皮病、瘙痒、疼痛、UV-诱导的皮肤损伤、刺激性接触性皮炎、斯提耳氏病、扁平苔癣、湿疹、伤口、病变、溃疡、脱发，以及伴有炎症的皮肤肿瘤，包括光化性角化病、原位鳞状细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、乳腺外佩吉特病、隆凸性皮肤纤维瘤、非典型纤维黄色瘤、皮脂腺癌；和梅克尔细胞癌。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中局部地或全身性地施用由式(I)表示的该化合物。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中该受试者为哺乳动物受试者，比如人或动物。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中局部地或全身性地向该受试者施用该化合物。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中向该受试者施用该化合物的药学上可接受的盐。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中以在该受试者中有效实现5-50ng/mL的血清浓度的量施用该化合物。

9.一种由式(I)表示的化合物，

其中R选自

-C(CH₃)CH₂C(CH₃)₃；

以及

及其药学上可接受的盐，用于根据权利要求1至7中任一项所述的治疗的方法中。

10.一种由式(I)表示的化合物，

其中R选自

-C(CH₃)CH₂C(CH₃)₃；

以及

及其药学上可接受的盐在药物组合物的制造中的用途，用于根据权利要求1至7中任一项所述的治疗的方法中。