CN116698894B - 一种灭活冷冻电镜样品制备系统及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及病毒样品制备领域。本发明公开了一种灭活冷冻电镜样品制备系统及制备方法，其中系统包括：环境箱；夹持结构，所述夹持结构位于所述环境箱中，所述夹持结构用于夹持样品载网；灭活结构，所述灭活结构位于所述环境箱中，所述灭活结构用于对所述样品载网上的样品灭活；制样结构，所述制样结构至少部分设置在所述环境箱中，所述制样结构用于制备冷冻电镜样品。本发明灭活后的样品不需要进行转移操作，可直接进行后续冷冻电镜样品制备，缩短了从样品灭活到样品冷冻周期。本发明保留了样品近自然状态结构特征，避免了灭活样品在转移过程中可能发生的构象变化，而造成部分结构信息丢失，提高了对其功能评价的准确性。

Description

一种灭活冷冻电镜样品制备系统及制备方法

技术领域

本发明涉及病毒样品制备领域，特别涉及一种灭活冷冻电镜样品制备系统及制备方法。

背景技术

病毒样品是一类特殊的生物大分子样品，解析其结构特征，了解其与宿主细胞在分子水平上的相互作用，对于阐明病毒致病和机体抗病机理，优化抗病毒药物设计方案具有重要的科学意义。

病毒样品具有分子量大、X射线衍射峰多、探测识别困难等特点，冷冻电镜技术是当前解析病毒结构最为有利的技术方法。因病毒高致病性、高传染性的特点，通常采用下述两种技术方法获得病毒结构信息。第一种方法为，将快速冷冻装置、冷冻电镜直接安装在具有高生物安全等级（P3及以上等级）实验室内，病毒样品冷冻完成后直接转移至冷冻电镜中观察。此方法优势在于病毒样品无需灭活，可以保留并解析纯自然状态下样品特征。但其劣势也十分明显，如仪器故障维修时实验室需要全部停机消毒，维修费时费力，成本巨大。检修人员入场维修时还需穿着防护服工作，徒增了工作难度。第二种方法为，先将病毒样品在高生物安全等级（P3及以上等级）实验室内灭活，再转移至低生物安全等级（P2及以下）实验室中快速冷冻、观察。这种方法操作简单，但是样品从灭活到冷冻周期长，样品在转移过程中可能发生构象变化，造成部分结构信息丢失，降低样品功能评价的准确性。

发明内容

鉴于此，为了缩短样品从灭活到冷冻的周期，提高样品功能评价的准确性，本发明提供了一种灭活冷冻电镜样品制备系统及制备方法。

具体而言，包括以下的技术方案：

一方面提供一种灭活冷冻电镜样品制备系统，包括：

环境箱；

夹持结构，所述夹持结构位于所述环境箱中，所述夹持结构用于夹持样品载网；

灭活结构，所述灭活结构位于所述环境箱中，所述灭活结构用于对所述样品载网上的样品灭活；

制样结构，所述制样结构至少部分设置在所述环境箱中，所述制样结构用于制备冷冻电镜样品。

优选的，所述灭活结构包括第一灭活光源和第二灭活光源；

所述第一灭活光源设置在所述环境箱的第一侧板上，所述第二灭活光源设置在所述环境箱的第二侧板上，所述环境箱的第一侧板和所述环境箱的第二侧板相对设置；

所述样品载网设置在所述环境箱的第一侧板和所述环境箱的第二侧板之间，所述样品载网的所在平面、所述环境箱的第一侧板和所述环境箱的第二侧板平行设置；

所述第一灭活光源用于照射所述样品载网的正面；

所述第二灭活光源用于照射所述样品载网的反面；

所述第一灭活光源发出光线的光路和所述第二灭活光源发出光线的光路同轴设置。优选的，所述灭活结构包括保护罩，所述保护罩上设有透光孔；

所述第一灭活光源设置在一个所述保护罩内；

所述第二灭活光源设置在一个所述保护罩内。

优选的，所述保护罩上设有盖板，所述盖板覆盖在所述透光孔上，所述盖板用于控制所述透光孔的启闭。

优选的，所述制样结构包括第一吸附管路和第二吸附管路；

所述第一吸附管路设置在所述环境箱的第三侧板上，所述第二吸附管路设置在所述环境箱的第四侧板上，所述环境箱的第三侧板和所述环境箱的第四侧板相对设置；

所述第一吸附管路的第一端口设置在所述样品载网的第一侧，所述第一吸附管路的第一端口的轴线和所述样品载网的轴线相垂直，适于从所述样品载网侧面移除所述样品载网表面的多余样品溶液；

所述第二吸附管路的第一端口设置在所述样品载网的第二侧，所述第二吸附管路的第一端口的轴线和所述样品载网的轴线相垂直，适于从所述样品载网侧面移除所述样品载网表面的多余样品溶液。

优选的，所述灭活冷冻电镜样品制备系统包括消毒箱和真空泵；

所述第一吸附管路的第二端口位于所述消毒箱中；

所述第二吸附管路的第二端口位于所述消毒箱中；

所述真空泵和所述消毒箱连接，所述真空泵用于对所述消毒箱抽真空，以对所述第一吸附管路和所述第二吸附管路抽真空。

优选的，所述消毒箱中的消毒液为双氧水溶液；

所述第一吸附管路的第二端口位于所述双氧水溶液中；

所述第二吸附管路的第二端口位于所述双氧水溶液中。

另一方面提供一种灭活冷冻电镜样品制备方法，包括：

夹取预处理好的样品载网，将所述样品载网安装于夹持结构上；

用移液枪吸取样品溶液并滴加于所述样品载网的正面或反面；

控制灭活结构启动，控制所述灭活结构对所述样品载网上的样品进行灭活处理；

控制制样结构启动，控制所述制样结构制备电镜样品。

优选的，在所述夹取预处理好的样品载网，将所述样品载网安装于夹持结构上的步骤之前，还包括：

响应于灭活冷冻电镜样品制备系统的启动指令，控制灭活冷冻电镜样品制备系统启动；

预设环境箱的目标温湿度、制样的目标真空度、吸附时间、灭活结构的输出功率和第一时长。

优选的，在所述夹取预处理好的样品载网，将所述样品载网安装于夹持结构上的步骤之前，还包括：预设第二时长；

控制所述灭活结构对所述样品载网上的样品进行灭活处理之后，控制所述制样结构在所述第二时长后启动。

本发明提供的一个技术方案的有益效果至少包括：

本发明中的样品制备系统中集成了灭活结构和制样结构，灭活结构能够对样品载网上的样品进行灭活处理。灭活后的样品不需要进行转移操作，可直接进行后续冷冻电镜样品制备，缩短了从样品灭活到样品冷冻周期。本发明保留了样品近自然状态结构特征，避免了灭活样品在转移过程中可能发生的构象变化，而造成部分结构信息丢失，提高了对其功能评价的准确性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例的灭活冷冻电镜样品制备系统立体结构示意图；

图2为本发明一个实施例的环境箱内结构示意图；

图3为本发明一个实施例的环境箱剖面结构示意图。

图中的附图标记分别表示为：

100-环境箱；110-上样孔；200-夹持结构；210-样品载网；310-第一灭活光源；320-第二灭活光源；410-第一吸附管路；420-第二吸附管路；430-冷冻箱；500-消毒箱；600-真空泵；700-壳体；710-消毒装置；800-调温调湿装置。

通过上述附图，已示出本发明一个明确的实施例，后文中将有更详细的描述。这些附图和文字描述并不是为了通过任何方式限制本发明构思的范围，而是通过参考特定实施例为本领域技术人员说明本发明的概念。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为使本发明的技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。

一种灭活冷冻电镜样品制备系统，包括：环境箱100；夹持结构200，夹持结构200位于环境箱100中，夹持结构200用于夹持样品载网210；灭活结构，灭活结构位于环境箱100中，灭活结构用于对样品载网210上的样品灭活；制样结构，制样结构至少部分设置在环境箱100中，制样结构用于制备冷冻电镜样品。

进一步，如图1所示，制样结构包括冷冻箱430，环境箱100和冷冻箱430均设置在壳体700内，环境箱100的下侧设置冷冻箱430，环境箱100的底面设有通孔，夹持结构200带动样品载网210落入冷冻箱430中，实现样品载网210的冷冻。夹持结构200为镊子，样品载网210设置在夹持结构200的下端，夹持结构200的上端连接运动轴，运动轴和驱动装置连接，驱动装置和控制器之间电性连接，运动轴用于驱动夹持结构200在环境箱100和冷冻箱430之间运动。

进一步，如图1和图2所示，环境箱100内设有灭活结构，灭活结构能够对样品载网210上的样品进行灭活处理。灭活后的样品进入冷冻箱430进行冷冻，制备冷冻电镜样品。本实施例中灭活后的样品不需要进行转移操作，可直接进行后续冷冻电镜样品制备，缩短了从样品灭活到样品冷冻周期。本实施例的系统和制备方法尽可能保留了样品近自然状态结构特征，避免了灭活样品在转移过程中可能发生的构象变化，而造成部分结构信息丢失，提高对样品功能评价的准确性。

另一方面，将病毒样品在高生物安全等级（P3及以上等级）实验室内灭活时，如果仪器故障维修时实验室需要全部停机消毒，维修费时费力，成本巨大。检修人员入场维修时还需穿着防护服工作，徒增工作难度。本实施例中灭活结构如果仪器故障，可只对灭活冷冻电镜样品制备系统进行维修，维修的工作量小，成本低。

进一步，如图1所示，壳体700内设有消毒装置710，消毒装置710设置在壳体700的顶部，可对壳体700和环境箱100之间的空间进行消毒杀菌。壳体700和消毒装置710的设置可以防止壳体700内的样品污染壳体700外的环境。优选的，消毒装置710为紫外线灯。

优选的，灭活结构包括第一灭活光源310和第二灭活光源320；第一灭活光源310设置在环境箱100的第一侧板上，第二灭活光源320设置在环境箱100的第二侧板上，环境箱100的第一侧板和环境箱100的第二侧板相对设置；样品载网210设置在环境箱100的第一侧板和环境箱100的第二侧板之间，样品载网210的所在平面、环境箱100的第一侧板和环境箱100的第二侧板平行设置；第一灭活光源310用于照射样品载网210的正面，第二灭活光源320用于照射样品载网210的反面，第一灭活光源310发出光线的光路和第二灭活光源320发出光线的光路同轴设置。

进一步，第一灭活光源310和第二灭活光源320均为紫外线发生装置。如图1所示，环境箱100的第一侧板为环境箱100的前侧板，第一灭活光源310设置在环境箱100的前侧板上，第一灭活光源310发出的紫外光的光路（呈圆柱型）如图2和图3所示，第一灭活光源310发出光线覆盖样品载网210的正面。环境箱100的第二侧板为环境箱100的后侧板，第二灭活光源320设置在环境箱100的后侧板上，第二灭活光源320发出的紫外光的光路（呈圆柱型）如图2和图3所示，第二灭活光源320发出光线覆盖样品载网210的反面。以对样品载网210上的样品从正反两面进行全方位灭活处理。

优选的，灭活结构包括保护罩，保护罩上设有透光孔；第一灭活光源310设置在一个保护罩内；第二灭活光源320设置在一个保护罩内。

进一步，环境箱100的第一侧板和环境箱100的第二侧板上分别设置一个保护罩。保护罩内分别设置一个紫外线发生装置。保护罩上设有透光孔。第一灭活光源310发出光线经透光孔照射在样品载网210的左侧面上，第二灭活光源320发出光线经透光孔照射在样品载网210的右侧面上。

优选的，保护罩上设有盖板，盖板覆盖在透光孔上，盖板用于控制透光孔的启闭。盖板和控制器之间电性连接，控制器控制盖板打开时，透光孔打开，控制器控制盖板关闭时，透光孔关闭。设置保护罩和盖板，可以避免紫外线发生装置受到环境箱100内温湿度的影响，提高紫外线发生装置的精度和使用寿命。

优选的，制样结构包括第一吸附管路410和第二吸附管路420；第一吸附管路410设置在环境箱100的第三侧板上，第二吸附管路420设置在环境箱100的第四侧板上，环境箱100的第三侧板和环境箱100的第四侧板相对设置。如图1所示，环境箱100的第三侧板为环境箱100的左侧板，第一吸附管路410穿过环境箱100的第三侧板伸入环境箱100内。环境箱100的第四侧板为环境箱100的右侧板，第二吸附管路420穿过环境箱100的第四侧板伸入环境箱100内。

第一吸附管路410的第一端口设置在样品载网210的第一侧，第一吸附管路410的第一端口的轴线和样品载网210的轴线相垂直，适于从样品载网210侧面形成吸负压气流以移除样品载网210表面的多余样品溶液。如图1所示，样品载网210的第一侧为样品载网210的左侧。

第二吸附管路420的第一端口设置在样品载网210的第二侧，第二吸附管路420的第一端口的轴线和样品载网210的轴线相垂直，适于从样品载网210侧面形成吸负压气流以移除样品载网210表面的多余样品溶液。如图1所示，样品载网210的第二侧为样品载网210的右侧。

如图1所示，灭活冷冻电镜样品制备系统包括消毒箱500和真空泵600，消毒箱500设置在壳体700内，真空泵600设置在壳体700外。第一吸附管路410的第二端口位于消毒箱500中；第二吸附管路420的第二端口位于消毒箱500中；真空泵600和消毒箱500连接，真空泵600用于对消毒箱500抽真空，以对第一吸附管路410和第二吸附管路420抽真空。第一吸附管路410和第二吸附管路420从样品载网210上吸附下来的多余样品溶液进入消毒箱500中，避免吸附下来的多余样品溶液污染其他设备或环境。

优选的，消毒箱500中的消毒液为双氧水溶液；第一吸附管路410的第二端口位于双氧水溶液中；第二吸附管路420的第二端口位于双氧水溶液中。第一吸附管路410和第二吸附管路420从样品载网210上吸附下来的多余样品溶液进入双氧水溶液中，避免吸附下来的多余样品溶液污染其他设备或环境。

进一步，第一吸附管路410的第一端口和第一吸附管路410的第二端口分别位于第一吸附管路410的两端，第二吸附管路420的第一端口和第二吸附管路420的第二端口分别位于第二吸附管路420的两端。

进一步，环境箱100中设有调温调湿装置800，一个调温调湿装置800设置在环境箱100的第一侧板上，位于环境箱100第一侧板的上部。一个调温调湿装置800设置在环境箱100的第二侧板上，位于环境箱100第二侧板的下部。调温调湿装置800和控制器之间电性连接，以控制环境箱100中的温度和湿度。

进一步，环境箱100的第一侧板上设有上样孔110，从上样孔110中对样品载网210施加样品。

一种灭活冷冻电镜样品制备方法，包括：

S100：夹取预处理好的样品载网210，将样品载网210安装于夹持结构200上；

S200：用移液枪吸取样品溶液并滴加于样品载网210的正面或反面；

S300：控制灭活结构启动，控制灭活结构对样品载网210上的样品进行灭活处理；

S400：控制制样结构启动，控制制样结构制备冷冻电镜样品。

优选的，在进行步骤S100夹取预处理好的样品载网210，将样品载网210安装于夹持结构200上之前，还包括：

S001：响应于灭活冷冻电镜样品制备系统的启动指令，控制灭活冷冻电镜样品制备系统启动；

S002：预设环境箱100的目标温湿度、制样的目标真空度、吸附时间、灭活结构的输出功率和第一时长。

优选的，在进行步骤S100夹取预处理好的样品载网210，将样品载网210安装于夹持结构200上之前，步骤S002中还包括：预设第二时长；

步骤S300控制灭活结构对样品载网上的样品进行灭活处理之后，控制步骤S400控制制样结构在第二时长后启动。

具体的，制备灭活冷冻电镜样品包括灭活阶段和制样阶段，灭活阶段中灭活结构照射样品载网210第一时长。第一时长为灭活结构照射样品载网的时间。具体的，第一灭活光源310和第二灭活光源320同时开启，同时关闭。

制样阶段包括吸附阶段和冷冻阶段，吸附阶段位于冷冻阶段之前，第二时长为灭活阶段和吸附阶段之间的间隔时间。

在一实施例中，一种灭活冷冻电镜样品制备方法，使用上述的灭活冷冻电镜样品制备系统，适用于常规冷冻单颗粒样品制备。制备流程包括：

（1）打开真空泵600开关。

（2）打开灭活冷冻电镜样品制备系统开关。

（3）设置环境箱100内的目标温湿度、制样的目标真空度、吸附时间和第二时长。

（4）在控制器的操作界面上设置冷冻箱430中的乙烷控温温度为-183.3 ℃。

向冷冻箱430中加注液氮，待乙烷温度探测器探测温度低于-88.6 ℃时开始向冷冻箱430中乙烷铜杯中加注乙烷。待乙烷温度探测器探测到的乙烷温度低于-183.3 ℃，同时环境箱100的温湿度达到设定值后，可开始冷冻制样。

（5）用夹持结构200夹取已经经过表面亲水化处理的样品载网210并安装到运动轴上。用移液枪吸取3 μL样品，加载在样品载网210正面或者反面。

（6）在控制器的操作界面上点击“开始冷冻”按钮，系统将间隔第二时长后开启第一吸附管路410和第二吸附管路420，通过负压方式吸去多余的样品使得样品载网上形成纳米级液膜层。吸附时间将根据真空度和玻璃态冰层厚度做相应调整，优选的吸附时间为100~10000 ms，但不局限于此范围。

（7）然后样品载网被快速投入到液态乙烷中，形成玻璃态冰层。

（8）将冷冻好的样品载网转移到冷冻样品盒中，并放入液氮中保存以备冷冻电镜观察。

（9）实验完成后，关闭系统开关。

用本实施方式制备的人源去铁蛋白冷冻电镜样品整体分辨率为2.71Å，证实本实施例所搭建的灭活冷冻电镜样品制备系统可以用于常规冷冻单颗粒样品制备。

在一实施例中，一种灭活冷冻电镜样品制备方法，使用上述的灭活冷冻电镜样品制备系统，适用于常规冷冻组织细胞类样品制备。制备流程包括：

（1）打开真空泵600开关。

（2）打开灭活冷冻电镜样品制备系统开关。

（3）设置环境箱100内的目标温湿度、制样的目标真空度、吸附时间和第二时长。

（4）在控制器的操作界面上设置冷冻箱430中的乙烷控温温度为-183.3 ℃。

向冷冻箱430中加注液氮，待乙烷温度探测器探测温度低于-88.6 ℃时开始向冷冻箱430中乙烷铜杯中加注乙烷。待乙烷温度探测器探测到的乙烷温度低于-183.3 ℃，同时环境箱100的温湿度达到设定值后，可开始冷冻制样。

（5）用夹持结构200夹取已经经过表面亲水化处理的样品载网210并安装到运动轴上。用移液枪吸取3 μL样品，加载在样品载网210正面或者反面。

（6）在控制器的操作界面上点击“开始冷冻”按钮，系统间隔第二时长后开启第一吸附管路410和第二吸附管路420，通过负压方式吸去多余的样品使得样品载网上形成纳米级液膜层。吸附时间将根据真空度和玻璃态冰层厚度做相应调整，优选的吸附时间为100~10000 ms，但不局限于此范围。

（7）然后样品载网被快速投入到液态乙烷中，形成玻璃态冰层。

（8）将冷冻好的样品载网转移到冷冻样品盒中，并放入液氮中保存以备冷冻电镜观察。

（9）实验完成后，关闭系统开关。

在一实施例中，一种灭活冷冻电镜样品制备方法，使用上述的灭活冷冻电镜样品制备系统，适用于灭活病毒冷冻样品制备。制备流程包括：

（1）打开灭活结构的第一灭活光源310和第二灭活光源320的开关，真空泵600开关。

（2）打开灭活冷冻电镜样品制备系统开关。

（3）设置环境箱100内的目标温湿度、制样的目标真空度、吸附时间、第一灭活光源310的输出功率和第一时长、第二灭活光源320的输出功率和第一时长、第二时长。

（4）在控制器的操作界面上设置冷冻箱430中的乙烷控温温度为-183.3 ℃。

向冷冻箱430中加注液氮，待乙烷温度探测器探测温度低于-88.6 ℃时开始向冷冻箱430中乙烷铜杯中加注乙烷。待乙烷温度探测器探测到的乙烷温度低于-183.3 ℃，同时环境箱100的温湿度达到设定值后，可开始冷冻制样。

（5）用夹持结构200夹取已经经过表面亲水化处理的样品载网210并安装到运动轴上。用移液枪吸取3 μL样品，加载在样品载网210正面或者反面。

（6）在控制器的操作界面上点击“开始冷冻”按钮，系统将首先打开两个保护罩上的盖板，以打开透光孔。第一灭活光源310和第二灭活光源320发出的光线照射在样品载网210上，照射时长为第一时长。第一灭活光源310和第二灭活光源320的照射时长将根据样品特征进行调整，优选的第一时长为1~600 s，但不局限于此范围。

（7）第一时长后，系统将关闭两个保护罩上的盖板，以关闭透光孔。间隔第二时长后开启第一吸附管路410和第二吸附管路420，通过负压方式吸去多余的样品使得样品载网上形成纳米级液膜层。吸附时间将根据真空度和玻璃态冰层厚度做相应调整，优选的吸附时间为100~10000 ms，但不局限于此范围。

（8）然后样品载网被快速投入到液态乙烷中，形成玻璃态冰层。

（9）将冷冻好的样品载网转移到冷冻样品盒中，并放入液氮中保存以备冷冻电镜观察。

（10）实验完成后，关闭系统开关。再开启外壳内的消毒装置710，对壳体700内部进行消毒。

在本发明中，术语“第一”和“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。术语“多个”指两个或两个以上，除非另有明确的限定。

本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的本发明后，将容易想到本发明的其它实施方案。本发明旨在涵盖本发明的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本发明的一般性原理并包括本发明未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的。

以上仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种灭活冷冻电镜样品制备系统，其特征在于，包括：

壳体；

环境箱；

夹持结构，所述夹持结构位于所述环境箱中，所述夹持结构用于夹持样品载网；

灭活结构，所述灭活结构位于所述环境箱中，所述灭活结构用于对所述样品载网上的样品灭活；

制样结构，所述制样结构至少部分设置在所述环境箱中，所述制样结构用于利用灭活后的样品制备冷冻电镜样品；

所述环境箱和所述制样结构均位于所述壳体内，所述壳体内设有消毒装置；

所述灭活结构包括第一灭活光源和第二灭活光源；

所述第一灭活光源设置在所述环境箱的第一侧板上，所述第二灭活光源设置在所述环境箱的第二侧板上，所述环境箱的第一侧板和所述环境箱的第二侧板相对设置；

所述样品载网设置在所述环境箱的第一侧板和所述环境箱的第二侧板之间，所述样品载网的所在平面、所述环境箱的第一侧板和所述环境箱的第二侧板平行设置；

所述第一灭活光源用于照射所述样品载网的正面；

所述第二灭活光源用于照射所述样品载网的反面；

所述第一灭活光源发出光线的光路和所述第二灭活光源发出光线的光路同轴设置；

所述制样结构包括第一吸附管路和第二吸附管路；

所述第一吸附管路设置在所述环境箱的第三侧板上，所述第二吸附管路设置在所述环境箱的第四侧板上，所述环境箱的第三侧板和所述环境箱的第四侧板相对设置；

所述第一吸附管路的第一端口设置在所述样品载网的第一侧，所述第一吸附管路的第一端口的轴线和所述样品载网的轴线相垂直，适于从所述样品载网侧面移除所述样品载网表面的多余样品溶液；

所述第二吸附管路的第一端口设置在所述样品载网的第二侧，所述第二吸附管路的第一端口的轴线和所述样品载网的轴线相垂直，适于从所述样品载网侧面移除所述样品载网表面的多余样品溶液；

所述灭活冷冻电镜样品制备系统包括消毒箱和真空泵，消毒箱设置在壳体内，真空泵设置在壳体外；

所述第一吸附管路的第二端口位于所述消毒箱中；

所述第二吸附管路的第二端口位于所述消毒箱中；

所述真空泵和所述消毒箱连接，所述真空泵用于对所述消毒箱抽真空，以对所述第一吸附管路和所述第二吸附管路抽真空。

2.根据权利要求1所述的灭活冷冻电镜样品制备系统，其特征在于，

所述灭活结构包括保护罩，所述保护罩上设有透光孔；

所述第一灭活光源设置在一个所述保护罩内；

所述第二灭活光源设置在另一个所述保护罩内。

3.根据权利要求2所述的灭活冷冻电镜样品制备系统，其特征在于，

所述保护罩上设有盖板，所述盖板覆盖在所述透光孔上，所述盖板用于控制所述透光孔的启闭。

4.根据权利要求1所述的灭活冷冻电镜样品制备系统，其特征在于，

所述消毒箱中的消毒液为双氧水溶液；

所述第一吸附管路的第二端口位于所述双氧水溶液中；

所述第二吸附管路的第二端口位于所述双氧水溶液中。

5.一种灭活冷冻电镜样品制备方法，其特征在于，采用如权利要求1-4任一项所述的灭活冷冻电镜样品制备系统，所述方法包括：

夹取预处理好的样品载网，将所述样品载网安装于夹持结构上；

用移液枪吸取样品溶液并滴加于所述样品载网的正面或反面；

控制灭活结构启动，控制所述灭活结构对所述样品载网上的样品进行灭活处理；

控制制样结构启动，控制所述制样结构制备冷冻电镜样品。

6.根据权利要求5所述的灭活冷冻电镜样品制备方法，其特征在于，

在所述夹取预处理好的样品载网，将所述样品载网安装于夹持结构上的步骤之前，还包括：

响应于灭活冷冻电镜样品制备系统的启动指令，控制灭活冷冻电镜样品制备系统启动；

预设环境箱的目标温湿度、制样的目标真空度、吸附时间、所述灭活结构的输出功率和第一时长。

7.根据权利要求6所述的灭活冷冻电镜样品制备方法，其特征在于，

在所述夹取预处理好的样品载网，将所述样品载网安装于夹持结构上的步骤之前，还包括：预设第二时长；

控制所述灭活结构对所述样品载网上的样品进行灭活处理之后，控制所述制样结构在所述第二时长后启动。