CN116615230A - 用于治疗IgE介导的炎性病症的包含IgE片段的免疫原性产品 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含与载体蛋白缀合的至少一种免疫球蛋白或其片段的免疫原性产品，其中至少一种免疫球蛋白是IgE，并且优选地，其中IgE片段包含IgE Cε3结构域，并且其中载体蛋白优选是CRM197。本发明还涉及所述免疫原性产品用于治疗炎性病症、尤其是变应性病症的用途。

Description

用于治疗IgE介导的炎性病症的包含IgE片段的免疫原性产品

发明领域

本发明涉及免疫原性产品及其用于治疗与异常IgE表达或活性相关的病症的用途，特别是IgE介导的变态反应(allergy)，如食物和毒液过敏和过敏反应(anaphylaxis)。

发明背景

变应性疾病的患病率在过去几年急剧增加，尤其是在工业化国家，超过30％的儿童患有变态反应。变态反应最明显的临床表现是过敏反应，这是一种急性且可能致命的全身反应。免疫球蛋白E(IgE)在介导变应性反应(allergic reaction)和过敏反应(anaphylaxis)中起着核心作用。暴露于过敏原后，此类过敏原被与组织肥大细胞和血液嗜碱性粒细胞表面上的高亲和力受体FcεRI结合的过敏原特异性IgE识别，这促进这些细胞脱颗粒，并释放预先形成的和新合成的介质，包括组胺。因此，变态反应的临床诊断大部分是基于过敏原特异性IgE的测量。

针对变态反应的大多数治疗都是对症治疗(大多数是抗组胺药和皮质类固醇)。然而，近年来，已经开发出几种重组单克隆抗体(mAb)用于治疗变态反应。奥马珠单抗(Omalizumab)是一种人源化抗IgE mAb，显示出治疗变应性哮喘和慢性自发性荨麻疹的临床益处。现有的临床数据表明，这种mAb还可以有益于治疗其他类型的变态反应，包括食物过敏。然而，奥马珠单抗(或任何其他mAb)的使用首先受到高成本和需要进行重复注射的限制，还受到出现抗药物抗体(ADA)或其他不良反应的潜在风险的限制。主要的医学限制是IgE水平高于700IU/ml的患者，如果用奥马珠单抗进行治疗则可能有过敏反应的风险。已经开发了下一代抗IgE mAb利格珠单抗(ligelizumab)对IgE的亲和力显著高于奥马珠单抗，并且可能减少不良反应，但在重度哮喘患者中并未证明其相对于奥马珠单抗具有改善的功效(NCT02075008)。奥马珠单抗和利格珠单抗的不同之处在于它们在IgE上结合的表位以及它们干扰FcεRI结合的IgE或IgE产生的能力。

因此，虽然IgE是治疗变态反应和过敏反应的有前途的治疗靶点，但显然需要改进目前阻断IgE的策略，以达到长期治疗效果。

称为kinoids的治疗性结合疫苗用于主动免疫策略，以诱导针对异常高产生的靶标的中和抗体，以将靶标水平降低回基线或更低。

已经开发了几种基于这种治疗性缀合物的方法来预防和治疗IgE相关病症，包括产生包含连接到免疫原性载体的IgE抗原肽的免疫原(WO2011/154878、WO2010/067286、WO99/67293；Peng等人，2007；Spiegelberg等人，1987)。然而，到目前为止，这些缀合物(仅包含IgE的小肽)在治疗上均未得到验证。特别是，在I期临床研究期间获得的实验结果表明，源自IgE并与载体偶联的肽不会导致大多数受试者的血清IgE显著降低。因此，仍然需要在有需要的患者中有效诱导针对IgE的中和抗体的化合物。

在本发明中，申请人生成了抗人IgE kinoid，其包含与白喉毒素CRM₁₉₇的无毒突变体偶联的人IgE的Cε3结构域。这种疫苗诱导了持久的抗人IgE中和抗体反应，对IgE和FcεRI(IgE/FcεRI人源化小鼠)人源化的小鼠没有任何不良反应。抗IgE疫苗接种降低了循环IgE水平和与血液嗜碱性粒细胞表面的高亲和力受体FcεRI结合的IgE水平，并充分保护IgE/FcεRI人源化小鼠免受IgE介导的过敏反应。

发明概述

本发明涉及包含与载体蛋白缀合的至少一种免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的免疫原性产品，其中至少一种免疫球蛋白是IgE，优选人IgE，并且其中IgE片段包含IgE Cε3结构域，并且其中载体蛋白优选是CRM₁₉₇。

在一个实施方案中，免疫球蛋白片段包含部分或全部IgE Cε3和Cε4结构域。

在一个实施方案中，免疫球蛋白片段包含部分或全部IgE Cε2、Cε3和Cε4结构域。

在一个实施方案中，IgE或其片段包含G335C突变。

在一个实施方案中，IgE片段包含SEQ ID NO：7或由SEQ ID NO：7组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含至少一个糖基化。

本发明的另一个目的是包含如上所述的免疫原性产品的组合物。

本发明的另一个目的是包含如上所述的免疫原性产品和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

本发明的另一个目的是包含如上所述的免疫原性产品和至少一种佐剂的疫苗组合物。

在一个实施方案中，如上所述的组合物、药物组合物或疫苗组合物是乳剂。

本发明进一步涉及一种用于生产如上所述的免疫原性产品的方法，该方法包括以下步骤：

a)使免疫球蛋白或其片段与含有NHS-酯的异双功能交联剂，优选N-[γ-马来酰亚胺基丁酰氧基]-琥珀酰亚胺酯(sGMBS)接触，从而获得含有NHS-酯的异双功能交联剂与免疫球蛋白或其片段之间的复合物，优选sGMBS-免疫球蛋白或其片段复合物；

b)使载体蛋白与含有NHS-酯的异双功能交联剂，优选N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代乙酸酯(SATA)接触，以生成含有NHS-酯的异双功能交联剂和载体之间的复合物，优选载体-SATA复合物；

c)使含有NHS-酯的异双功能交联剂与免疫球蛋白或其片段之间的复合物(优选步骤(a)中获得的sGMBS-免疫球蛋白或其片段复合物)与含有NHS-酯的异双功能交联剂与载体之间的复合物(优选步骤(b)中获得的载体载体-SATA复合物)接触。

本发明的另一个目的是如本文所述的免疫原性产品，其用作药物。

本发明进一步涉及如本文所述的免疫原性产品或组合物、药物组合物或疫苗组合物，其用于治疗炎性病症，优选其中炎性病症与异常的IgE表达或活性相关。

在一个实施方案中，炎性病症选自哮喘、变应性病况(例如食物过敏、毒液过敏、对动物过敏、药物过敏、高IgE综合征、变应性鼻炎、变应性结膜炎和变应性肠胃炎)、过敏反应、特应性病症(例如荨麻疹(包括慢性特发性荨麻疹和慢性自发性荨麻疹)、湿疹)、大疱性类天疱疮、呼吸系统病症(如哮喘、变应性支气管肺曲霉病(allergic bronchopulmonaryaspergilosis)、变应性支气管肺真菌病(allergic bronchopulmonary mycosis))、鼻息肉病和其他涉及气道炎症的病况(例如，嗜酸性粒细胞增多、纤维化和过量粘液产生，包括囊性纤维化、系统性硬化症(SSc))；炎性和/或自身免疫性病症或病况、胃肠病症或病况(例如炎性肠病(IBD)和嗜酸细胞性食管炎(EE)，以及嗜酸性粒细胞介导的胃肠道疾病、溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)；系统性红斑狼疮；肥大细胞增多症和肥大细胞活化综合征(MCAS)。

在一个实施方案中，所述炎性病症选自变态反应、过敏反应、变应性哮喘、变应性鼻炎、变应性结膜炎、鼻息肉病，优选地，所述炎性病症是食物或毒液过敏。

本发明进一步涉及如上所述的免疫原性产品或组合物、药物组合物或疫苗组合物，其用于诱导对特定抗原过敏的受试者脱敏，其中所述免疫原性产品或组合物和所述特定抗原将被施用于过敏受试者。

定义

在本发明中，下列术语具有如下含义：

-如本文所用，当指例如量、持续时间等的可测量值时，术语“约”意指涵盖偏离指定值的±20％的变化，或在一些情况下±10％，或在一些情况下±5％，或在一些情况下±1％，或在一些情况下±0.1％，因为这样的变化适合于实施所公开的方法。

-如本文所用，“佐剂”是增强本发明的免疫原性产品的免疫原性的物质。通常给予佐剂以增强免疫应答，并且其是技术人员公知的。

-如本文所用，术语“载体蛋白分子”是指长度为至少15、30或50个氨基酸的蛋白或肽，其在注射到受试者(例如，人、猫、狗或马)时具有免疫原性，并且当其为了形成杂络物与至少一种IgE或其片段(其中优选IgE片段包含IgE Cε3结构域)部分共价结合时，其使所述至少一种IgE或其片段的大量抗原被呈递给B淋巴细胞，并随后产生针对IgE或其片段的抗体。

-如本文所用，术语“免疫应答”是指例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞和由上述细胞或肝产生的大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的行为。

-如本文所用，术语“免疫原性产品”是指与载体蛋白偶联的至少一种IgE或其片段，其在被施用所述免疫原性产品的受试者(优选哺乳动物)中诱导免疫应答，包括体液免疫应答，即产生中和例如内源性IgE的生物学活性的性质的抗体。

-如本文所用，术语“药学上可接受的赋形剂”是指当施用给哺乳动物(优选人)时，不产生不利的、变应性的或其他不良反应的赋形剂。它包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载体或赋形剂因此可以是指任何类型的无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、封装材料或制剂助剂(formulation auxiliary)。对于人的施用，制剂应符合如FDA或EMA等监管局所要求的无菌性、热原性、一般安全性和纯度标准。

-如本文所用，术语“重组蛋白”是指使用重组DNA技术产生的蛋白(例如，IgE或其片段或载体蛋白)，例如在原核细胞(使用噬菌体或质粒表达系统)或真核细胞(例如酵母、昆虫或哺乳动物表达系统)中表达的蛋白(例如，IgE或其片段或载体蛋白)。该术语也应解释为意指通过合成编码该蛋白(例如，IgE或其片段或载体蛋白)的DNA分子而产生的蛋白(例如，IgE或其片段或载体蛋白)，并且该DNA分子表达蛋白(例如，IgE或其片段或载体蛋白)或指定蛋白(例如，IgE或其片段或载体蛋白)的氨基酸序列，其中已经使用了可用的且本领域公知的重组DNA或氨基酸序列技术来获得DNA或氨基酸序列。

-如本文所用，术语“受试者”旨在包括可在其中引起免疫应答的活生物体(例如，哺乳动物，特别是人、灵长类动物、狗、猫、马、绵羊等)。优选地，受试者是人。在一个实施方案中，受试者可以是“患者”，即温血动物，优选人，其正在等待接受或正在接受医疗护理，或曾经/正在/将要是医疗程序的客体，或在监控其目标疾病或病况例如炎性病症的发展。在一个实施方案中，受试者是成年人(例如18岁以上的受试者)。在另一个实施方案中，受试者是儿童(例如18岁以下的受试者)。在一个实施方案中，受试者是男性。在另一个实施方案中，受试者是女性。在一个实施方案中，受试者患有，优选被诊断有炎性病症。在一个实施方案中，受试者处于发展炎性病症的风险中。风险因素的示例包括但不限于炎性病症的遗传易感性或家族史。

-如本文所用，术语“治疗有效量”是指有效实现特定生物学结果的如本文所述的免疫原性产品的量。因此，术语“治疗有效量”意指所针对的免疫原性产品的水平或量，其目的在于在不对靶标造成显著的负面或不利的副作用下，(1)延迟或预防目标疾病或病况的发作；(2)减慢或停止目标疾病或病况的一种或多种症状的进展、加重或恶化；(3)引起目标疾病或病况的症状减轻；(4)降低目标疾病或病况的严重性或发生率；或(5)治愈目标疾病或病况。为了预防(prophylactic)或防止(preventive)作用，可以在目标疾病或病况发作之前施用治疗有效量。可选地或另外地，为了治疗作用，可以在目标疾病或病况开始后施用治疗有效量。

-如本文所用，术语“治疗”是指治疗性治疗和预防性(prophylactic)或防止性(preventative)措施二者；其中目的是预防或减慢(减轻)目标疾病或病况。需要治疗的那些包括已经罹患该病况的那些以及易于罹患该病况的那些或想要预防该病况的那些。如果在接受治疗量的如本文所述的免疫原性产品后，受试者表现出以下一种或多种的可观察和/或可测量的改善，则成功“治疗”了受试者的疾病或病况：致病细胞的数量减少；细胞总数中致病细胞的百分比降低；在某种程度上缓解了与特定病况相关的一种或多种症状；发病率和死亡率降低，和/或生活质量问题改善。可以通过医师熟悉的常规程序容易地测量用于评估成功治疗和改善病况的上述参数。

发明详述

本发明涉及包含与至少一种载体蛋白缀合的至少一种免疫球蛋白或免疫球蛋白片段的免疫原性产品，其中所述至少一种免疫球蛋白是IgE。

申请人证明，施用本发明的免疫原性产品在动物模型中诱导了抗IgE中和抗体，从而治疗IgE介导的炎性疾病。

不愿受任何理论的束缚，申请人认为，与本领域描述的与载体蛋白缀合的肽相比，本发明的免疫原性产品具有诱导多克隆抗IgE中和抗体(即指向IgE序列上的不同表位的抗体)的优点。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE Cε3结构域或由IgE Cε3结构域组成。

载体蛋白的实例包括但不限于CRM₁₉₇、KLH(匙孔血蓝蛋白)、卵清蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、破伤风类毒素、白喉类毒素、霍乱类毒素、外膜囊泡中的脑膜炎奈瑟球菌外膜蛋白、非可分型的流感嗜血杆菌(non-typeable Haemophilus influenza)外膜蛋白、铜绿假单胞菌毒素A和病毒样颗粒(VLP)。

在一个实施方案中，载体蛋白是CRM₁₉₇。

CRM₁₉₇是具有序列SEQ ID NO：1的白喉毒素的无毒突变体，其归因于单个碱基取代(在位置52处从甘氨酸到谷氨酸的突变)而没有毒性。

SEQ ID NO：1

GADDVVDSSKSFVMENFSSYHGTKPGYVDSIQKGIQKPKSGTQGNYDD

DWKEFYSTDNKYDAAGYSVDNENPLSGKAGGVVKVTYPGLTKVLALK

VDNAETIKKELGLSLTEPLMEQVGTEEFIKRFGDGASRVVLSLPFAEGSSS

VEYINNWEQAKALSVELEINFETRGKRGQDAMYEYMAQACAGNRVRRS

VGSSLSCINLDWDVIRDKTKTKIESLKEHGPIKNKMSESPNKTVSEEKAK

QYLEEFHQTALEHPELSELKTVTGTNPVFAGANYAAWAVNVAQVIDSETA

DNLEKTTAALSILPGIGSVMGIADGAVHHNTEEIVAQSIALSSLMVAQAIPL

VGELVDIGFAAYNFVESIINLFQVVHNSYNRPAYSPGHKTQPFLHDGYAVS

WNTVEDSIIRTGFQGESGHDIKITAENTPLPIAGVLLPTIPGKLDVNKSKTH

ISVNGRKIRMRCRAIDGDVTFCRPKSPVYVGNGVHANLHVAFHRSSSEKI

HSNEISSDSIGVLGYQKTVDHTKVNSKLSLFFEIKS

在一个实施方案中，如Hickey在2018年所述(Hickey等人，2018)，可以通过本领域已知的常规方法在自体系统(白喉杆菌(C.diphtheriae))或异源系统(大肠杆菌(E.coli)和荧光假单胞菌(P.fluorescens))中获得CRM₁₉₇。例如，可以通过培养含有包含编码CRM₁₉₇的核酸序列(例如基因)的表达载体的细胞、收获包涵体并纯化CRM₁₉₇来获得重组CRM₁₉₇。也可以从购自ATCC的细菌菌株(ATCC39255)的白喉杆菌(Corynebacterium diphtheriae)培养物中提取CRM₁₉₇。在一个实施方案中，CRM₁₉₇是可商购的，并且可以购自例如ReagentProteins(San Diego，CA，US)。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品包含CRM₁₉₇的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：1具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高的同一性。在一个实施方案中，所述CRM₁₉₇的变体在CRM₁₉₇的位置52处包含从甘氨酸到谷氨酸的突变，并因此是无毒的。

术语“同一性”或“同一的”，当用于两个或更多个核酸序列或两个或更多个多肽的序列之间的关系时，是指核酸序列或多肽之间的序列相关性程度，其分别由两个或更多个核酸或氨基酸残基的串之间的匹配数所确定。“同一性”测量由特定的数学模型或计算机程序(即“算法”)所解决的具有空位比对(如果有的话)的两个或更多个序列中的较小者之间的相同匹配的百分比。通过已知方法可以容易地计算相关核酸序列或多肽的同一性。这些方法包括但不限于描述于以下的那些：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing:Informatics and GenomeProjects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993；Computer Analysis ofSequence Data,Part 1,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.,eds.,Humana Press,New Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.和Devereux,J.,eds.,M.Stockton Press,New York,1991；和Carillo等人,SIAM J.Applied Math.48,1073(1988)。设计用于确定同一性的优选方法以在所测试的序列之间给出最大的匹配。确定同一性的方法描述在公开可得的计算机程序中。用于确定两个序列之间的同一性的优选计算机程序方法包括ClustalO(Sievers F等人2011)，GCG程序包，其包括GAP(Devereux等人,Nucl.Acid.Res.\2,387(1984)；Genetics Computer Group,University of Wisconsin,Madison,Wis.)、BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul等人,J.MoI.Biol.215,403-410(1990))。BLASTX程序可公开获得自国家生物技术信息中心(NCBI)和其他来源(BLAST Manual，Altschul等人NCB/NLM/NIHBethesda,Md.20894；Altschul等人，如上所述)。也可以使用公知的史密斯沃特曼算法(Smith Waterman algorithm)来确定同一性。

在一个实施方案中，CRM₁₉₇是全长CRM₁₉₇。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品包含CRM₁₉₇的片段，例如包含来自SEQID NO：1的至少约50个、100个、150个、200个、250个、300个、350个、400个、450个或500个氨基酸(优选连续氨基酸)的片段。

IgE是一种免疫球蛋白，包含一个可变结构域和四个恒定结构域，分别命名为Cε1、Cε2、Cε3和Cε4。IgE还包含不同结构域之间的接头。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的至少一个(例如，1、2、3或4个)恒定结构域。在一个实施方案中，IgE片段不包含IgE的可变结构域。在一个实施方案中，IgE或其片段不包含全长IgE或不是由全长IgE组成。

在一个实施方案中，IgE片段是全长IgE恒定区(即，它包含Cε1、Cε2、Cε3和Cε4结构域以及所有接头区域)。

在一个实施方案中，IgE片段是IgE恒定区的片段，例如包含其源自的IgE的至少约100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400或425个氨基酸(优选连续氨基酸)的IgE恒定区的片段。

在一个实施方案中，所述片段包含IgE恒定区的至少一个特定表位。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε3结构域或由IgE的Cε3结构域组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε3结构域的至少一部分或由IgE的Cε3结构域的至少一部分组成。在一个实施方案中，所述片段包含IgE Cε3结构域的至少一个特定表位。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2和Cε3结构域或由IgE的Cε2和Cε3结构域组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2和Cε3结构域的至少一部分或由IgE的Cε2和Cε3结构域的至少一部分组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2和Cε3结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域或由IgE的Cε2和Cε3结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2和Cε3结构域的至少一部分以及Cε2和Cε3之间的接头区域或由IgE的Cε2和Cε3结构域的至少一部分以及Cε2和Cε3之间的接头区域组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2和Cε3结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε1和Cε2之间的接头区域以及Cε3和Cε4之间的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2和Cε3结构域、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε1和Cε2之间的接头区域以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2和Cε3结构域的至少一部分以及Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε1和Cε2之间的接头区域以及Cε3和Cε4之间的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε3和Cε4结构域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε3和Cε4结构域的至少一部分或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε3和Cε4结构域以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε3和Cε4结构域的至少一部分以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε3和Cε4结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε3和Cε4结构域、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε3和Cε4结构域的至少一部分以及Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域的至少一部分或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域以及Cε2和Cε3之间以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域的至少一部分以及Cε2和Cε3之间以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域，以及Cε1和Cε2之间的接头区域、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域和Cε4之后的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域、Cε1和Cε2之间的接头区域、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域的至少一部分以及Cε1和Cε2之间的接头区域、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE或IgE片段是重组的。重组IgE或其片段可以通过本领域已知的常规方法使用编码IgE或其片段的核酸序列获得。

例如，重组IgE可以通过以下步骤获得：培养含有表达载体的细胞，所述表达载体包含编码IgE的核酸序列(例如，基因)；收获包涵体以及纯化IgE。因此，重组IgE片段可以通过以下步骤获得：培养含有表达载体的细胞，所述表达载体包含编码IgE片段的核酸序列；收获包涵体以及纯化IgE片段。

在一个实施方案中，获得重组IgE并回收所述重组IgE的片段，例如通过蛋白水解。

在本发明的一个实施方案中，IgE或其片段源自哺乳动物。

在一个实施方案中，IgE或其片段是哺乳动物IgE或其片段的变体，其中所述变体与其源自的哺乳动物IgE或其片段具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

IgE是一种包含糖基化位点的免疫球蛋白。在一个实施方案中，包含在本发明的免疫原性产品中的IgE或其片段是糖基化的。不愿受任何理论的束缚，申请人认为施用包含糖基化IgE(或其片段)的免疫原性产品可以诱导产生对应于天然免疫球蛋白的糖基化形式的IgE特异性的抗IgE抗体。

此外，IgE可以被唾液酸化。例如，hIgE的唾液酸化可以在IgE效应物功能中起作用。在一个实施方案中，包含在本发明的免疫原性产品中的IgE或其片段包含至少一个唾液酸残基。在另一个实施方案中，包含在本发明的免疫原性产品中的IgE或其片段不包含任何唾液酸残基。

在一个实施方案中，IgE是人IgE，优选重组人IgE。人IgE恒定区具有序列SEQ IDNO：2(UniProt ID：P01854)，其中位置6-103、112-210、214-318和324-423的氨基酸分别对应于结构域Cε1、Cε2、Cε3和Cε4。位置1-5、104-111、211-213、319-323和424-428位的氨基酸分别对应于Cε1之前、Cε1和Cε2之间、Cε2和Cε3之间、Cε3和Cε4之间以及Cε4之后的接头区域。

SEQ ID NO：2

ASTQSPSVFPLTRCCKNIPSNATSVTLGCLATGYFPEPVMVTWDTGSLNG

TTMTLPATTLTLSGHYATISLLTVSGAWAKQMFTCRVAHTPSSTDWVDNK

TFSVCSRDFTPPTVKILQSSCDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWLED

GQVMDVDLSTASTTQEGELASTQSELTLSQKHWLSDRTYTCQVTYQGHT

FEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVN

LTWSRASGKPVNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRV

THPHLPRALMRSTTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNFM

PEDISVQWLHNEVQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEWEQK

DEFICRAVHEAASPSQTVQRAVSVNPGK

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：2的片段，其中所述片段包含SEQ IDNO：2的至少约100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400或425个氨基酸(优选连续氨基酸)。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：2的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：2呈现出至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE恒定结构域优选人IgE Cε3结构域的至少一个特异性表位。

在一个实施方案中，IgE片段是全长人IgE恒定区。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3结构域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3结构域的至少一部分或由其组成。在一个实施方案中，所述片段包含人IgE Cε3结构域的至少一个特异性表位。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2和Cε3结构域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2和Cε3结构域的至少一部分或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2和Cε3结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2和Cε3结构域的至少一部分以及Cε2和Cε3之间的接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2和Cε3结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε1和Cε2之间的接头区域以及Cε3和Cε4之间的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2和Cε3结构域、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε1和Cε2之间的接头区域以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2和Cε3结构域的至少一部分以及Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε1和Cε2之间的接头区域以及Cε3和Cε4之间的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3和Cε4结构域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3和Cε4结构域的至少一部分或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3和Cε4结构域以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3和Cε4结构域的至少一部分以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3和Cε4结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3和Cε4结构域、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3和Cε4结构域的至少一部分、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域的至少一部分或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域以及Cε2和Cε3之间以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域的至少一部分以及Cε2和Cε3之间以及Cε3和Cε4之间的接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域；以及Cε1和Cε2之间的接头区域、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域；Cε1和Cε2之间的接头区域；Cε2和Cε3之间的接头区域；Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域或由其组成。在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε2、Cε3和Cε4结构域的至少一部分以及Cε1和Cε2之间的接头区域、Cε2和Cε3之间的接头区域、Cε3和Cε4之间的接头区域以及Cε4之后的接头区域中的至少一个接头区域或由其组成。

在一个实施方案中，IgE片段包含具有SEQ ID NO：3的序列的人IgE的Cε3恒定结构域或由其组成。

SEQ ID NO:3

PRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASGKPVN

HSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALMRS

TTKTS

在一个实施方案中，IgE片段是人IgE Cε3结构域的片段，例如，包含SEQ ID NO：3的至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸(优选连续氨基酸)的人IgE片段。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：3的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：3呈现出至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含人IgE的Cε3恒定结构域或由其组成，其包含在SEQ ID NO：3的位置3处的突变(用半胱氨酸残基替换甘氨酸残基)。该突变可以被称为突变G335C(Wurzburg等人，2012)。因此，在一个实施方案中，IgE片段包含SEQ ID NO：8或由SEQID NO：8组成。

SEQ ID NO：8

PRCVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASGKPVN

HSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALMRS

TTKTS

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：8的片段，例如包含SEQ ID NO：8的至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个氨基酸(优选连续氨基酸)的人IgE片段。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：8的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：8呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含含有Cε3和Cε4恒定结构域以及任选的Cε3和Cε4之间的接头区域的人IgE片段或由其组成。含有Cε3和Cε4恒定结构域以及Cε3和Cε4之间的接头区域的人IgE片段的实例具有SEQ ID NO：4的序列。

SEQ ID NO：4

PRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASGKPVN

HSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALMRS

TTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNFMPEDISVQWLHNE

VQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEWEQKDEFICRAVHEAA

SPSQTVQRAVS

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：4的片段，例如，包含SEQ ID NO：4的至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200或205个氨基酸(优选连续氨基酸)的人IgE片段。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：4的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：4呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含以下或由以下组成：包含Cε3和Cε4恒定结构域和任选的Cε3和Cε4之间的接头区域的人IgE片段，其进一步包含在SEQ ID NO：4的位置3处的突变(用半胱氨酸残基替换甘氨酸残基)。此类包含Cε3和Cε4恒定结构域以及Cε3和Cε4之间的接头区域的IgE片段的实例包括包含SEQ ID NO：9或由SEQ ID NO：9组成的IgE片段。

SEQ ID NO:9

PRCVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASGKPVN

HSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALMRS

TTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNFMPEDISVQWLHNE

VQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEWEQKDEFICRAVHEAA

SPSQTVQRAVS

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：9的片段，例如，包含SEQ ID NO：9的至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200或205个氨基酸(优选连续氨基酸)的人IgE片段。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：9的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：9呈现出至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含含有Cε2和Cε3恒定结构域和任选的Cε2和Cε3之间的接头区域的人IgE片段或由其组成。含有Cε2和Cε3恒定结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域的人IgE片段的一个实例具有SEQ ID NO：5的序列。

SEQ ID NO:5

PTVKILQSSCDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWLEDGQVMDVDLST

ASTTQEGELASTQSELTLSQKHWLSDRTYTCQVTYQGHTFEDSTKKCAD

SNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASGKP

VNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALM

RSTTKTS

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：5的片段，例如包含SEQ ID NO：5的至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200或205个氨基酸(优选连续氨基酸)的人IgE片段。

在一个实施方案中，免疫原性产品是SEQ ID NO：5的变体，其中所述变体与SEQ IDNO：5呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含以下或由以下组成：包含Cε2和Cε3恒定结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域的人IgE片段，该片段还包含在SEQ ID NO：5的位置105处的突变(用甘氨酸残基替换半胱氨酸残基)。此类包含Cε2和Cε3恒定结构域以及Cε2和Cε3之间的接头区域的IgE片段的实例包括包含SEQ ID NO：10或由SEQ ID NO：10组成的IgE片段。

SEQ ID NO：10

PTVKILQSSCDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWLEDGQVMDVDLST

ASTTQEGELASTQSELTLSQKHWLSDRTYTCQVTYQGHTFEDSTKKCAD

SNPRCVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASGKP

VNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALM

RSTTKTS

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：10的片段，例如，包含SEQ ID NO：10的至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200或205个氨基酸(优选连续氨基酸)的人IgE片段。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：10的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：10呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含以下片段或由以下片段组成：包含Cε2、Cε3和Cε4恒定结构域以及任选的Cε2和Cε3之间以及Cε3和Cε4之间的接头区域的人IgE片段。包含Cε2、Cε3和Cε4恒定结构域以及Cε2和Cε3之间以及Cε3和Cε4之间的接头区域的人IgE片段的实例具有SEQ ID NO：6的序列。

SEQ ID NO：6

PTVKILQSSCDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWLEDGQVMDVDLST

ASTTQEGELASTQSELTLSQKHWLSDRTYTCQVTYQGHTFEDSTKKCAD

SNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASGKP

VNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALM

RSTTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNFMPEDISVQWLH

NEVQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEWEQKDEFICRAVHE

AASPSQTVQRAVS

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：6的片段，例如包含SEQ ID NO：6的至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、250、255、260、270、275、280、285、290、295、300、305或310个氨基酸(优选连续氨基酸)。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：6的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：6呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含以下片段或由以下片段组成：包含Cε2、Cε3和Cε4恒定结构域以及Cε2和Cε3之间以及Cε3和Cε4之间的接头区域的人IgE片段，该人IgE片段还包含在SEQ ID NO：6中的位置105处的突变(用半胱氨酸残基替换甘氨酸残基)。此类包含Cε2、Cε3和Cε4恒定结构域以及Cε2和Cε3之间以及Cε3和Cε4之间的接头区域的IgE片段的实例包括包含SEQ ID NO：11或由SEQ ID NO：11组成的片段。

SEQ ID NO：11

PTVKILQSSCDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWLEDGQVMDVDLST

ASTTQEGELASTQSELTLSQKHWLSDRTYTCQVTYQGHTFEDSTKKCAD

SNPRCVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASGKP

VNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALM

RSTTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNFMPEDISVQWLH

NEVQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEWEQKDEFICRAVHE

AASPSQTVQRAVS

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：11的片段，例如，包含SEQ ID NO：11的至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、270、275、280、285、290、295、300、305或310个氨基酸(优选连续氨基酸)的人IgE片段。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：11的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：11呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含SEQ ID NO：12或由SEQ ID NO：12组成。

SEQ ID NO：12

ADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASG

KPVNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRA

LMRSTTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNFMPEDISVQW

LHNEVQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEWEQKDEFICRAV

HEAASPSQTVQRAVSVNPGK

在一个实施方案中，免疫原性产品包含SEQ ID NO：12的变体，其中所述变体与SEQID NO：12呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，IgE片段包含SEQ ID NO：7或由SEQ ID NO：7组成。

SEQ ID NO：7

ADSNPRCVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASG

KPVNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRA

LMRSTTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNFMPEDISVQW

LHNEVQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEWEQKDEFICRAV

HEAASPSQTVQRAVSVNPGK

在一个实施方案中，免疫原性产品包含SEQ ID NO：7的变体，其中所述变体与SEQID NO：7呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

人IgE是一种免疫球蛋白，包含7个糖基化位点，包括Cε1结构域中的3个糖基化位点(N140、N168和N218)、Cε2结构域中的1个糖基化位点(N265)和Cε3结构域中的3个糖基化位点(N371、N383和N394)。在本领域中，认为N394残基上的糖基化对于蛋白的折叠、对于与FcεRI的稳定IgE相互作用以及对于过敏反应的引发可能是重要的。

在一个实施方案中，7个糖基化位点在SEQ ID NO：2的hIgE恒定区序列中分别对应于残基N21、N49、N99(在Cε1结构域中)、N146(在Cε2结构域中)和N252、N264、N275(在Cε3结构域中)。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品中包含的hIgE或其片段包含至少一个糖基化。不愿受任何理论的束缚，申请人认为施用此类免疫原性产品可以诱导针对天然糖基化hIgE的抗IgE抗体。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品中包含的hIgE或其片段包含至少一个(例如，1、2、3、4、5、6或7个)糖基化。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品中包含的hIgE或其片段包含N394糖基化。在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品中包含的hIgE或其片段包含N275糖基化(当氨基酸如SEQ ID NO：2中编号时)。

此外，hIgE的唾液酸化可能在IgE效应物功能中起作用。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品中包含的hIgE或其片段包含至少一个唾液酸残基。在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品中包含的hIgE或其片段不包含任何唾液酸残基。

在本发明的一个实施方案中，IgE是马IgE，优选重组马IgE。马IgE恒定区具有序列SEQ ID NO：13，其中位置1-93、94-200、201-307和308-419的氨基酸分别对应于结构域Cε1、Cε2、Cε3和Cε4。

SEQ ID NO：13

VSKQAPLIFPLAACCKDTKTTNITLGCLVKGYFPGAWDAGPLNPSTMTFP

AVFDQTSGLYTTISRVVASGKWAKQKFTCGVVHSQETFNKTFNACIVTFT

PPTVKLFHSSCDPGGDSHTTIQLLCLISDYTPGDIDIVWLIEGQKVDEQFP

TQASMKQEGSWPPTHSELNINQGQWASENTYTCQVTYKDMIFNQARKC

TESDPPGVSVYLSPPSPLDLYVSKTPKITCLVVDLANVQGLSLNWSRESG

EPLQKHTLATSEQFNKTFSVTSTLPVDTTDWIEGETYKCTVSHPDLPREV

VRSIAKAPGKRLSPEVYVFLPPEEDQSSKDKVTLTCLIQNFFPADISVQWR

RNNVLIQTDQQATTRPQKANGPDPAFFVFSRLEVSRAEWEQKNKFACKV

VHEALSQRTLQKEVSKDPGK

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：13的片段，其中所述片段包含SEQ IDNO：13的至少约100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400或415个氨基酸(优选连续氨基酸)。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：13的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：13呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在本发明的一个实施方案中，IgE是犬IgE，优选重组犬IgE。犬IgE恒定区具有序列SEQ ID NO：14。

SEQ ID NO：14

TSQDLSVFPLASCCKDNIASTSVTLGCLVTGYLPMSTTVTWDTGSLNKN

VTTFPTTFHETYGLHSIVSQVTASGKWAKQRFTCSVAHAESTAINKTFSA

CALNFIPPTVKLFHSSCNPVGDTHTTIQLLCLISGYVPGDMEVIWLVDGQ

KATNIFPYTAPGTKEGNVTSTHSELNITQGEWVSQKTYTCQVTYQGFTFK

DEARKCSESDPRGVTSYLSPPSPLDLYVHKAPKITCLVVDLATMEGMNLT

WYRESKEPVNPGPLNKKDHFNGTITVTSTLPVNTNDWIEGETYYCRVTH

PHLPKDIVRSIAKAPGKRAPPDVYLFLPPEEEQGTKDRVTLTCLIQNFFPA

DISVQWLRNDSPIQTDQYTTTGPHKVSGSRPAFFIFSRLEVSRVDWEQKN

KFTCQVVHEALSGSRILQKWVSKTPGK

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：14的片段，其中所述片段包含SEQ IDNO：14的至少约100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400或425个氨基酸(优选连续氨基酸)。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：14的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：14呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在本发明的一个实施方案中，IgE是猫IgE，优选重组猫IgE。猫IgE恒定区具有序列SEQ ID NO：15。

SEQ ID NO:15

AYISSGGNTDYADSVKGRFSISRDNAKNTLYLQMTSLKTEDTATYYCARG

TGVIPDYWGQGALVTVSSTSIQAPLVFPLATCCKGTIATAPSVTLGCLVTG

YFPMPVTVTWDARSLNKSVVTLPATLQENSGLYTTTSHVTVSGEWAKQK

FTCSVAHAESPTINKTVSACTMNFIPPTVKLFHSSCNPLGDTGSTIQLLCLI

SGYVPGDMEVTWLVDGQKATNIFPYTAPGKQEGKVTSTHSELNITQGEW

VSQKTYTCQVTYQGFTFEDHARKCTESDPRGVSTYLSPPSPLDLYVHKSP

KITCLVVDLANTDGMILTWSRENGESVHPDPMVKKTQYNGTITVTSTLP

VDATDWVEGETYQCKVTHPDLPKDIVRSIAKAPGRRFPPEVYVFLPPEGE

PKTKDKVTLTCLIQNFFPPDISVQWLHNDSPVRTEQQATTWPHKATGPSP

AFFVFSRLEVSRADWEQRDVFTCQVVHEALPGFRTLKKSVSKNPGK

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：15的片段，其中所述片段包含SEQ IDNO：15的至少约100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475或490个氨基酸(优选连续氨基酸)。

在一个实施方案中，IgE片段是SEQ ID NO：15的变体，其中所述变体与SEQ ID NO：15呈现至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的同一性。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品包含与载体蛋白、优选与CRM₁₉₇偶联的IgE或其片段，其中IgE(或其片段):CRM₁₉₇的摩尔比为约16:1至约1:4，优选约8:1至约1:2，更优选约1:1。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品包含与载体蛋白、优选与CRM₁₉₇偶联的IgE或IgE片段，并被抗IgE抗体识别。

免疫原性产品包含与载体蛋白、优选CRM₁₉₇偶联的IgE或IgE片段并且被抗IgE抗体识别的事实可以通过本领域已知的常规方法验证。此类方法的一个实例是夹心ELISA抗IgE或其片段/载体蛋白，使用例如用生物素标记的检测抗体、链霉亲和素HRP扩增系统和邻苯二胺二盐酸盐(OPD)底物溶液。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品包含与载体蛋白、优选CRM₁₉₇偶联的IgE或其片段，并且具有免疫原性，这意味着该免疫原性产品能够在测试A的条件下在体内诱导抗IgE抗体。在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品能够在体内诱导多克隆抗IgE抗体，例如在测试A的条件下。

测试A是根据以下方法进行的：

将具体量的免疫原性产品的总蛋白(如例如通过Bradford蛋白质测定法确定的)注射到小鼠(3周龄以上)，28天内注射3次。在一个实施方案中，测试A包括施用剂量范围为约10至30μg的总蛋白。在免疫前(免疫前血清样品)和免疫后(测试血清样品)获得血清样品。如下所述进行ELISA抗IgE。

简而言之，人IgE或CRM₁₉₇在4℃下分别以5或1μg/mL在包被缓冲液(碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液pH 9.6)中进行包被并孵育过夜。每一步骤之后，板用0.005％的PBS吐温20洗涤3次。在用BSA 1％ PBS封闭后，加入血清样品，从2000dil^-1开始进行两倍连续稀释(在PBS，BSA 1％中稀释)。在37℃孵育90分钟后，用HRP缀合的山羊抗小鼠IgG(BethylLaboratories)以1/10 000检测结合的抗体，并使用OPD底物显示板。用1M H₂SO₄终止反应，随后在490nm处记录吸光度。从2000dil^-1到1024000dil^-1的稀释度开始分析样品。

在一个实施方案中，当含有测试血清样品的孔的光密度(490nm)比含有免疫前血清样品的孔的光密度高至少约2倍，优选至少约5倍时，免疫原性产品被认为具有免疫原性，这意味着它在体内诱导了抗IgE抗体。

在这个测试中，滴度可以定义为血清的稀释度，在该稀释度达到测定中相应免疫前样品的OD_max减去OD的50％。这种计算模式可能比查看众所周知的血清转化滴度更严格得多，但可以提供更可靠的分析和更少的假阳性。滴度可以表示为血清稀释因子(dil^-1)。

在一个实施方案中，在测试A中，≥1000dil^-1、优选≥2000dil^-1的滴度值表明本发明的免疫原性产品允许产生针对IgE的结合抗体。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品包含与CRM₁₉₇偶联的IgE或其片段，并且能够在下文所述的测试B的条件下中和IgE活性。根据本发明，进行测试B以评价从用免疫原性产品免疫的小鼠获得的血清的中和能力。

测试B按照以下方法进行：

通过在含有IL-3(10ng/ml)的培养基中培养来自IgE/FcεRI人源化小鼠的骨髓细胞6周获得表达hFcεRI的骨髓源性培养的肥大细胞(BMCMC)，此时细胞为>95％c-Kit⁺hFcεRIα⁺。为了评估在用本发明的免疫原性产品接种后产生的抗hIgE抗体的中和能力，将BMCMC与来自用本发明的免疫原性产品或单独用CRM₁₉₇接种的小鼠的血浆稀释液一起孵育。然后添加FITC标记的hIgE，并通过流式细胞术评估FITC-hIgE与BCMMC上的hFcεRI的结合。

结果可以表示为IgE-FITC阳性BMCMC的百分比(用作hIgE结合的读出)。可以在该测试中通过在横坐标轴上插入导致50％的IgE-FITC结合的血浆稀释度来确定NC₅₀。

在一个实施方案中，在测试B中，≥100dil^-1、优选≥200dil^-1的NC₅₀值表示本发明的免疫原性产品允许产生针对IgE的中和抗体。在一个实施方案中，通过施用本发明的免疫原性产品诱导的针对IgE的中和抗体是多克隆的。

本发明进一步涉及一种用于产生免疫原性产品的方法，所述免疫原性产品包含与载体蛋白、优选CRM₁₉₇偶联的至少一种IgE或其片段，其中优选IgE片段包含IgE Cε3结构域，其中该方法包括以下步骤：

a)使至少一种IgE或其片段与含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选N-[γ-马来酰亚胺基丁酰氧基]-琥珀酰亚胺酯(sGMBS))接触，从而获得含有NHS-酯的异双功能交联剂与免疫球蛋白或其片段之间的复合物，优选sGMBS-免疫球蛋白或其片段复合物；

b)使载体蛋白与含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代乙酸酯(SATA))接触以产生包含NHS-酯的异双功能交联剂与载体之间的复合物，优选载体-SATA复合物；

c)使含有NHS-酯的异双功能交联剂与免疫球蛋白或其片段之间的复合物(优选步骤(a)中获得的sGMBS-IgE复合物)与含有NHS-酯的异双功能交联剂与载体之间的复合物(优选在步骤(b)中获得的载体-SATA复合体)接触。

在一个实施方案中，在步骤a)中，反应缓冲液是液体溶液，优选水性溶液。

在一个实施方案中，在步骤a)中，反应缓冲液的pH在约6至约8的范围内，优选在约6.5至约7.5的范围内，更优选为约pH 7.2。

在一个实施方案中，在步骤a)中，IgE或其片段以约0.1至约10mg/mL、优选约0.5至约5mg/mL、更优选约1mg/mL的浓度存在于溶液中。

在一个实施方案中，在步骤a)中，在反应缓冲液中以1mM至100mM、优选5mM至50mM、更优选10mM的浓度制备含有NHS-酯的异双功能交联剂，优选sGMBS。

在一个实施方案中，在步骤a)中，IgE或其片段与含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选sGMBS)混合，其中IgE(或其片段)：含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选sGMBS)的摩尔比范围为约1:120至约1:1，优选约1:50至约1:10，更优选约1:40至约1:20。

在一个实施方案中，在步骤a)中，将至少一种IgE或其片段与含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选sGMBS)一起孵育约30分钟至约120分钟、优选约45至约120分钟、更优选至少60分钟的时间段。

在一个实施方案中，在步骤a)中，在范围约15℃至约35℃、优选约18℃至约27℃的温度下进行至少一种IgE或其片段与含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选sGMBS)接触的步骤。

在一个实施方案中，在步骤a)之后，将反应混合物中存在的分子量小于约10kDa、小于约5kDa或小于约3kDa的小化合物去除。这些小化合物主要包含过量的含有NHS酯的异双功能交联剂(优选sGMBS)(和NHS酯水解相关的副产物)，以及过量的尚未发生反应的分子。这种去除可以通过本领域公知的方法进行(这种方法的一个实例参见实施例部分)。

在一个实施方案中，在步骤a)结束时，通过Bradford测定法或通过本领域熟知的任何方法测定蛋白质含量。

在一个实施方案中，在步骤b)中，反应缓冲液是液体溶液，优选水性溶液。

在一个实施方案中，在步骤b)中，反应缓冲液的pH在约6至约8的范围内，优选在约6.5至约7.5的范围内，更优选为约pH 7.2。

在一个实施方案中，在步骤b)中，载体蛋白(优选CRM₁₉₇)以约0.2至约20mg/mL、优选约1至约10mg/mL、更优选约2mg/mL的浓度存在于溶液中。

在一个实施方案中，在步骤b)中，含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选SATA)以20mM至约500mM、优选约50mM至约200mM、更优选约100mM的浓度存在于溶液中，优选存在于DMSO中。

在一个实施方案中，在步骤b)中，载体蛋白(优选CRM₁₉₇)和含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选SATA)混合，其中载体：含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选SATA)的摩尔比范围为约1:320至约1:10，优选约1:160至约1:40。

在一个实施方案中，在步骤b)中，载体蛋白(优选CRM₁₉₇)与含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选SATA)一起孵育约10分钟至约60分钟、优选约15分钟至约45分钟、更优选30分钟期间的时间段。

在一个实施方案中，接触步骤b)在范围约15℃至约35℃、优选约18℃至约27℃的温度下进行。

在一个实施方案中，在步骤b)之后，将反应混合物中存在的分子量小于约10kDa、小于约5kDa或小于约3kDa的小化合物去除。这些小化合物主要包含过量的含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选SATA)(和NHS酯水解相关的副产物)、DMSO以及过量的尚未发生反应的分子。这种去除可以通过本领域公知的方法进行。

在一个实施方案中，在步骤b)之后，使载体蛋白(优选CRM₁₉₇)和含有NHS-酯的异双功能交联剂(优选SATA)之间的复合物脱保护以将保护基团(含有NHS-酯的异双功能交联剂，优选SATA)转化成官能团。在一个实施方案中，所述脱保护步骤在去除反应混合物中存在的分子量小于约10kDa、小于约5kDa或小于约3kDa的小化合物的步骤之后进行。

用于使分子脱保护的方法的实例是本领域众所周知的并且包括但不限于使用羟胺、使用甲氧基胺或使用碱(例如NaOH、KOH、K₂CO₃、MeONa、NH₃的甲醇溶液)。

在一个实施方案中，脱保护步骤包括向反应混合物中添加羟胺溶液，优选终浓度范围为约10mM至约500mM，优选约20mM至约100mM，更优选为约50mM。

在一个实施方案中，将羟胺溶液与反应混合物孵育约60分钟至约180分钟、优选约90分钟至约150分钟、更优选120分钟期间的时间段。

在一个实施方案中，在120分钟期间以50mM添加羟胺溶液。

在一个实施方案中，在约15℃至约35℃、优选约18℃至约27℃的温度下进行羟胺溶液与反应混合物的孵育。

在一个实施方案中，在脱保护步骤之后，将反应混合物中存在的分子量小于约10kDa、5kDa或3kDa的小化合物去除。这些小化合物主要包含过量的羟胺和上一步可能残留的SATA。这种去除可以通过本领域熟知的方法进行。

在一个实施方案中，在步骤b)结束时，通过Bradford测定法或通过本领域熟知的任何方法来确定蛋白质含量。

然后，在本发明方法的步骤c)中，使步骤a)的最终产物与步骤b)的最终产物接触，从而产生本发明的免疫原性产品。

在一个实施方案中，在步骤c)中，使步骤a)的包含IgE或IgE片段的最终产物和步骤b)的包含载体蛋白(优选CRM₁₉₇)的最终产物接触，其中IgE或其片段：载体蛋白(优选CRM₁₉₇)的摩尔比范围为约8:1到约1:8，优选约4:1到约1:4，更优选为约1:1。

在一个实施方案中，在步骤c)中，步骤a)的包含IgE或IgE片段的最终产物与步骤b)的包含载体蛋白(优选CRM₁₉₇)的最终产物接触，其中最终蛋白质浓度在约0.01至约5mg/mL的范围内，优选在约0.1至约1mg/mL的范围内，更优选为约0.4mg/mL。

在一个实施方案中，在步骤c)中，反应缓冲液是液体溶液，优选水性溶液。

在一个实施方案中，在步骤c)中，反应缓冲液的pH在约6至约8的范围内，优选在约6.5至约7.5的范围内，更优选为约pH 7.2。

在步骤c)的一个实施方案中，接触步骤进行的时间段为约2小时至约26小时，优选约10至18小时，更优选约12至约18小时。

在一个实施方案中，孵育步骤c)在约2℃至10℃、优选约3℃至约7℃、更优选约4℃的温度下进行。

在一个实施方案中，在步骤c)之后，将反应混合物中存在的分子量小于约100kDa、小于约50kDa、小于约25kDa、小于约10kDa、小于约5kDa或小于约3kDa的小化合物去除。这些小化合物主要包括过量的尚未发生反应的分子。这种去除可以通过本领域公知的方法进行。

在一个实施方案中，将步骤c)获得的免疫原性产品浓缩。免疫原性产品的浓缩可以由本领域技术人员通过本领域已知的任何技术进行，例如通过离心超滤法，其可以任选地与无菌过滤组合。

在一个实施方案中，将步骤c)获得的并任选浓缩的免疫原性产品冻干。

本发明还涉及易于通过本发明的方法获得的免疫原性产品。

本发明进一步涉及包含如上所述的至少一种免疫原性产品、基本上由其组成或由其组成的组合物。在一个实施方案中，所述组合物可以称为免疫原性组合物。

本发明进一步涉及药物组合物，其包含至少一种如上所述的免疫原性产品和至少一种药学上可接受的赋形剂，基本上由其组成或由其组成。

可用于本发明的药物组合物中的药学上可接受的赋形剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白例如人血清白蛋白、缓冲物质例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质(例如羧甲基纤维素钠)、聚乙二醇、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

本发明进一步涉及包含至少一种如上文所述的免疫原性产品或基本上由其组成或由其组成的药物(medicament)。

如本文所用，就组合物、药物组合物或药物而言，术语“基本上由……组成”意指本发明的至少一种免疫原性产品是所述组合物、药物组合物或药物中唯一具有生物活性的治疗剂或剂。

在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物或药物包含含有与载体蛋白(优选CRM₁₉₇)偶联的IgE或IgE片段的免疫原性产品或基本上由其组成。

在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物或药物是疫苗组合物。在本发明的一个实施方案中，本发明的疫苗组合物包含至少一种佐剂。

本发明进一步涉及本发明的组合物、药物组合物、药物或疫苗的制剂，其中该组合物、药物组合物、药物或疫苗是佐剂化的(adjuvanted)。

在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或疫苗因此包含一种或多种佐剂。

可以用于本发明的合适的佐剂包括但不限于：

(1)铝盐(明矾)，例如氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝等；

(2)水包油乳剂制剂(含有或不含其他特定的免疫刺激剂，例如，胞壁肽(定义如下)或细菌细胞壁组分)，例如，角鲨烯基乳剂(例如，角鲨烯基水包油乳剂)或角鲨烷基乳剂，例如

(a)MF59(在PCT公开号WO 90/14837中描述的角鲨烯基水包油佐剂)，含有5％角鲨烯、0.5％ Tween 80和0.5％span 85(任选含有不同量的MTP(见下文，尽管不是必需的))，使用微流化器例如Model 110Y微流化器(Microfluidics，Newton，Mass.)将其配制成亚微米颗粒，

(b)SWE01(一种基于角鲨烯的水包油佐剂)，

(c)SAF，含有10％角鲨烯、0.4％ Tween 80、5％普卢尼克嵌段聚合物L121(pluronic-blocked polymer L121)和thr-MDP(见下文)，将其微流化成亚微米乳剂或将其涡旋振荡以产生更大粒径的乳剂，

(d)Ribi^TM佐剂系统(RAS)，(Corixa，Hamilton，Mont.)，含有2％角鲨烯、0.2％Tween 80和一种或多种来自由以下组成的组的细菌细胞壁组分：在美国专利号4,912,094(Corixa)中描述的3-O-去酰基单磷脂A(MPL^TM)、海藻糖二霉菌酸酯(trehalosedimycolate，TDM)和细胞壁骨架(CWS)，优选MPL+CWS(Detox^TM)；

(e)角鲨烷基佐剂，其包含但不限于以下组成：角鲨烷3.9％，w/v，三油酸山梨坦(0.47％，w/v)和聚氧乙烯(80)去水山梨糖醇单油酸酯(0.47％，w/v)，分散于柠檬酸盐缓冲剂中；

(3)油包水乳剂制剂，例如ISA-51或角鲨烯基油包水佐剂(例如ISA-720)；适用于油包水乳剂的油佐剂可包括矿物油和/或可代谢油。矿物油可以选自和/>包括/>6VR(SEPPIC,法国)。可代谢油可以选自SP油(在下文描述)、Emulsigen(MPV Laboratories,Ralston,NZ)、Montanide 264,266,26(Seppic SA,Paris,法国)以及植物油、动物油例如鱼油角鲨烷和角鲨烯，以及生育酚及其衍生物；

(4)可以使用皂苷佐剂，例如Quil A或STIMULON^TM QS-21(Antigenics，Framingham，Mass.)(美国专利号5,057,540)，或由此产生的颗粒例如ISCOM(免疫刺激复合物)；

(5)细菌脂多糖，合成的脂质A类似物，例如氨基烷基葡糖胺磷酸酯化合物(AGP)，或其衍生物或类似物，其可获得自Corixa，并且其描述在美国专利号6,113,918中；一种这样的AGP是2-[(R)-3-十四碳酰氧基十四烷酰氨基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-Oi[(R)-3十四碳酰氧基十四烷酰氨基]-2-[(R)-3-十四烷酰氧基十四烷酰氨基]-b-D-吡喃葡萄糖苷(2-[(R)-3-Tetradecanoyloxytetradecanoylamino]ethyl 2-Deoxy-4-O-phosphono-3-Oi[(R)-3tetradecanoyloxytetradecanoyl]-2-[(R)-3–tetradecanoyloxytetradecanoylamino]-b-Dglucopyranoside)，其也称为529(以前称为RC529)，它被配制为水性形式或稳定的乳剂，合成多核苷酸例如含有CpG基序的寡核苷酸(美国专利号6,207,646)；

(6)细胞因子，例如白介素(例如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18等)、干扰素(例如，γ干扰素)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)、共刺激分子B7-1和B7-2等；

(7)细菌ADP-核糖基化毒素的去毒突变体，例如野生型或突变形式的霍乱毒素(CT)，例如根据公开的国际专利申请号WO 00/18434(也参见WO 02/098368和WO 02/098369)，其中氨基酸位置29处的谷氨酸被另一种氨基酸(优选组氨酸)替代，百日咳毒素(PT)或大肠杆菌不耐热毒素(LT)，尤其是LT-K63、LT-R72、CT-S109、PT-K9/G129(例如参见WO 93/13302和WO92/19265)；和

(8)充当免疫刺激剂以增强组合物有效性的其他物质。胞壁肽包括但不限于N-乙酰基胞壁酰基-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺(N-acetylmuramyl-L-threonyl-D-isoglutamine，thr-MDP)、N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酸-2-(1'-2'二棕榈酰基-sn-丙三基-3羟基磷酰基氧)-乙胺(N-acetylnormuramyl-L-alanine-2-(1'-2'dipalmitoyl-sn-glycero-3hydroxyphos phoryloxy)-ethylamine，MTP-PE)等。

所使用的佐剂可部分取决于受体生物体。此外，佐剂的施用量将取决于动物的类型和大小。

在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物是(或包含)进一步包含一种或多种表面活性剂，以及任选至少一种如上所述的佐剂的乳剂。在一个实施方案中，乳剂是油包水乳剂或水包油乳剂。

可用于本发明的表面活性剂的实例是本领域公知的，且包括但不限于失水甘露醇单油酸酯(mannide monoleate)，例如由Arlacel(SEPPIC，法国)销售的80、Tween 20、Tween 80、span 85、Triton X-100。

在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物、疫苗组合物包含治疗有效量的至少一种本发明的免疫原性产品。

在一个实施方案中并且出于存储目的，将本发明的免疫原性产品或组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物冻干。

因此，在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物可以冷冻干燥(冻干)形式存在。根据该实施方案，将本发明的免疫原性产品与一种或多种冻干助剂组合。各种冻干助剂是本领域技术人员公知的，且包括但不限于糖，例如乳糖和甘露醇。

在一个实施方案中，可以将本发明的组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物与稳定剂混合，例如以保护易于降解的蛋白不被降解，以延长免疫原性产品的保质期，或以提高冷冻干燥效率。有用的稳定剂包括但不限于SPGA、碳水化合物(例如山梨糖醇、甘露醇、海藻糖、淀粉、蔗糖、葡聚糖或葡萄糖)、蛋白(例如白蛋白或酪蛋白或其降解产物)、氨基酸混合物例如赖氨酸或甘氨酸，以及缓冲剂例如碱金属磷酸盐。

在一个实施方案中，可以通过注射、局部(例如通过经皮递送)、经直肠、经鼻腔或经阴道施用本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物或疫苗组合物。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物处于适于注射的形式。因此，在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物将通过肌肉内、腹膜内或皮下注射注射(或用于注射)至受试者。

适用于可注射用途的形式的实例包括但不限于无菌溶液或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。可以通过在组合物中添加防腐剂例如各种抗细菌和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等)来防止微生物污染。在一个实施方案中，引入等渗剂例如糖或氯化钠以减少注射期间的疼痛可以是优选的。在一个实施方案中，可通过在组合物中使用延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来实现可注射组合物的延长吸收。

在一个实施方案中，将本发明的冻干疫苗组合物溶解于注射用水并轻柔混合；然后添加如上文所述的免疫佐剂；将混合物轻柔混合并装入合适的注射器中。因此，本发明还涉及医疗装置，包括填充有或预填充有本发明的疫苗组合物的注射器。

在一个实施方案中，本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物是适于局部施用的形式。适于局部施用的形式的示例包括但不限于聚合物贴剂或控释贴剂等。

在另一个实施方案中，本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物是适于直肠施用的形式。适于直肠施用的形式的示例包括但不限于栓剂、微灌肠剂、灌肠剂、凝胶、直肠泡沫、乳膏、软膏等。

本发明还涉及为填充有或预填充有本发明的组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物的注射器的医疗装置。

在一个实施方案中，所述注射器是双室注射器，其中一个室包含具有本发明的免疫原性产品的溶液，并且另一个室包含佐剂。

本发明还涉及包含预填充有本发明的免疫原性产品或本发明的组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物的小瓶的医疗装置。

本发明进一步涉及本发明的免疫原性产品，其用作药物(medicament)或药(drug)。

本发明进一步涉及本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物，其用于治疗受试者中的炎性病症。

本发明进一步涉及本发明的免疫原性产品在制备用于治疗受试者的炎性病症的药物中的用途。

因此，本发明还涉及一种治疗受试者中炎性病症的方法，包括向受试者施用本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物。

本发明进一步涉及一种在受试者中诱导抗IgE的免疫应答的方法，包括向受试者施用本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物。

本发明进一步涉及一种在受试者中诱导生产抑制IgE的生物学活性或中和IgE的生物学活性的抗体的方法，包括向受试者施用本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物。在一个实施方案中，抗体是多克隆抗体。

在一个实施方案中，受试者患有，优选被诊断有炎性病症，特别是与异常的总IgE表达或活性和/或过敏原特异性IgE的表达相关的炎性病症。

在一个实施方案中，受试者是人。优选地，根据该实施方案，在本发明的免疫原性产品中包含的至少一种IgE或其片段是人的。

在一个实施方案中，受试者是非人哺乳动物(例如宠物)。优选地，根据该实施方案，本发明的免疫原性产品中包含的至少一种IgE或其片段源自所述非人哺乳动物。

在一个实施方案中，受试者是马、狗或猫。优选地，根据该实施方案，本发明的免疫原性产品中包含的至少一种IgE或其片段分别是马科动物、犬科动物或猫科动物的。

在一个实施方案中，炎性病症是与异常的IgE表达或活性相关的病症。

炎性病症的实例包括但不限于哮喘、变应性病况(例如食物过敏、毒液过敏、对猫过敏、药物过敏、高IgE综合征、变应性鼻炎、变应性结膜炎和变应性肠胃炎)、过敏反应、特应性病症(例如荨麻疹(包括慢性特发性荨麻疹和慢性自发性荨麻疹)、湿疹)、大疱性类天疱疮、呼吸系统病症(例如哮喘、变应性支气管肺曲霉病、变应性支气管肺真菌病)、鼻息肉病和其他涉及气道炎症的病况(例如，嗜酸性粒细胞增多、纤维化和过量粘液产生，包括囊性纤维化和肺纤维化、系统性硬化症(SSc))；炎性和/或自身免疫性病症或病况、胃肠病症或病况(例如炎性肠病(IBD)，以及嗜酸性粒细胞介导的胃肠道疾病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病和系统性红斑狼疮)；系统性红斑狼疮；肥大细胞增多症和肥大细胞活化综合征(MCAS)。

在一个实施方案中，炎性病症选自哮喘(例如变应性哮喘)、变应性鼻炎、变应性结膜炎、变态反应(例如食物或毒液过敏)、过敏反应和鼻息肉病。

在一个实施方案中，炎性病症选自哮喘(例如，变应性哮喘)、变态反应(例如，食物或毒液过敏)和过敏反应。

在一个实施方案中，炎性病症选自变态反应、过敏反应、变应性哮喘、变应性鼻炎、变应性结膜炎、鼻息肉病，优选地，所述炎性病症是食物或毒液过敏。

在一个实施方案中，炎性病症是变应性哮喘。

本发明进一步涉及一种诱导对特定抗原过敏的受试者脱敏的方法，其中所述方法包括向受试者施用本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物和所述过敏原。

如本文所用，术语“脱敏”，也称为过敏原免疫疗法、脱敏或低敏化(hypo-sensitization)或变态反应疫苗接种，是指针对环境性过敏例如变应性哮喘的药物治疗。这种治疗涉及使人们暴露于越来越大量的过敏原，以试图在过敏原存在下减少免疫系统的应答。

过敏原的实例包括但不限于吸入性过敏原、摄入性过敏原和接触性过敏原。

吸入性过敏原的示例包括但不限于来自无气门亚目(Astigmata)的过敏原(例如粗足粉螨(Acarus siro)(贮藏螨(Storage mite)，Aca s 13)、热带无爪螨(Blomiatropicalis)(螨虫，Blo t)、美洲尘螨(Dermatophagoides farinae)(美国房尘螨(american house dust mite)，Der f)、微角尘螨(Dermatophagoides microceras)(房尘螨(house dust mite)，Der m)、屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)(欧洲房尘螨(European house dust mite)，Der p)、梅氏嗜霉螨(Euroglyphus maynei)(房尘螨，Eurm)、家食甜螨(Glycyphagus domesticus)(贮藏螨，Gly d 2)、害鳞嗜螨(Lepidoglyphusdestructor)(贮藏螨，Lep d)、腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)(贮藏螨，Tyr p))；蜚蠊目(例如德国小蠊(Blattella germanica)(德国蜚蠊(German cockroach)，Bla g)、美洲大蠊(Periplaneta americana)(美洲蜚蠊(American cockroach)，Per a))；鞘翅目(例如异色瓢虫(Harmonia axyridis)(亚洲瓢虫，Har a))、双翅目(例如，埃及伊蚊(Aedesaegypti)(黄热蚊(Yellow fever mosquito)，Aed a)、花翅摇蚊(Chironomus kiiensis)(摇蚊(Midge)，Chi k)、Chironomus thummi thummi(摇蚊(Midge)，Chi t)、台湾蛱蠓(Formcipomyia taiwana)(蠓(Biting midge)，For t)、刺舌蝇(Glossina morsitans)(萨凡纳采采蝇(Savannah Tsetse fly)，Glo m)、半翅目(Hemidiptera)：长锥蝽(Triatomaprotracta)(加州接吻虫(California kissing bug)，Tria p))、膜翅目(例如中华蜜蜂(Apis cerana)(东方蜂(Eastern hive bee)，Api c)、大蜜蜂(Apis dorsata)(巨型蜜蜂(Giant honeybee)，Api d)、西方蜂(Apis mellifera)(蜜蜂，Api m)、Bombuspennsylvanicus(熊蜂(Bumble bee)，Bom p)、欧洲熊蜂(Bombus terrestris)(熊蜂，Bomt)、长黄胡蜂(Dolichovespula arenaria)(大黄蜂(Yellow hornet)，Dol a)、白脸长黄胡蜂(Dolichovespula maculata)(白脸大黄蜂(White face hornet)，Dol m)、杰克跳蚁(Myrmecia pilosula)(澳大利亚跳蚁(Australian jumper ant)，Myr p)、胡蜂(Polistesannularis)(黄蜂(Wasp)，Pol a)、造纸胡蜂(polistes dominulus)(地中海纸黄蜂(Mediterranean paper wasp)，Pol d)、鸣黄蜂(Polistes exclamans)(黄蜂，Pol e)、北方纸巢蜂(Polistes fuscatus)(黄蜂，Pol f)、柞蚕马蜂(Polistes gallicus)(黄蜂，Polg)、长足胡蜂(Polistes metricus)(黄蜂，Pol m)、Polybia paulista(黄蜂，Pol p)、Polybia scutellaris(黄蜂，Pol s)、热带火蚁(Solenopsis geminata)(热带火蚁(Tropical fire ant)，Sol g)、红火蚁(Solenopsis invicta)(入侵红火蚁(Red importedfire ant)，Sol i)、里氏火蚁(Solenopsis richteri)(黑火蚁(Black fire ant)，Sol r)、残暴火蚁(Solenopsis saevissima)(巴西火蚁(Brazilian fire ant)，Sol s)、黄边胡蜂(Vespa crabro)(欧洲大黄蜂(European hornet)，Vesp c)、大虎头蜂(Vespa mandarinia)(亚洲巨大黄蜂(Giant asian hornet)，Vesp m)、Vespula fiavopilosa(黄夹克(Yellowjacket)，Vesp f)、德国黄胡蜂(Vespula germanica)(黄夹克，Vesp g)、额斑黄胡蜂(Vespula maculifrons)(黄夹克，Vesp m)、西部黄胡蜂(Vespula pensylvanica)(黄夹克，Vesp p)、南方黄胡蜂(Vespula squamosa)(黄夹克，Vesp s)、黄胡蜂(Vespula vidua)(黄蜂，Vesp vi)、大胡蜂(Vespula vulgaris)(黄夹克，Vesp v))、真蜱目(Ixodida)(例如，卷边锐缘蜱(Argas reflexus)(鸽蜱(Pigeon tick)，Arg r))，鳞翅目(Lepidoptera)(例如家蚕(Bombbyx niori)(蚕蛾(Silk moth)，Bomb n)、印度谷斑螟(Plodia interpunctella)(印度谷螟(Indianmeal moth)，Plo i)、松异舟蛾(Thaumetopoea pityocampa)(松异舟蛾(Pine processionary moth)，Tha p))、缨尾目(Thysanura)(例如蠹鱼(Lepismasaccharina)(银鱼((Silverfish)，Lep s))、蚤目(Siphonaptera)(例如猫栉首蚤(Ctenocephalides felis felis)(猫蚤(Cat flea)，Cte f))、食肉目(Carnivora)(例如家犬(Canis familiaris)(狗，Can f)、家猫(Felis domesticus)(猫，Fel d))；兔形目(例如欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)(兔，Ory c)、Perissodactlyla：马(Equus caballus)(家养马，Equ c))、鲽形目(Pleuronectiformes)(例如帆鳞鲆(Lepidorhombus whiffiagonis)(帆鳞鲆(Megrim)，Whiff，Gallo，Lep w))、啮齿目(例如豚鼠(Cavia porcellus)(豚鼠，Cavp)、小家鼠(Mus musculus)(小鼠，Mus m)、褐家鼠(Rattus norvegius)(大鼠，Rat n))；松柏目(Coniferales)：台湾扁柏(Chamaecyparis obtusa)(日本扁柏(Japanese cypress)，Cha o)、绿干柏(Cupressus arizonica)(柏，Cup a)、日本柳杉(Cryptomeria japonica)(日本柳杉(Sugi)，Cry j)、地中海柏木(Cupressus sempervirens)(普通柏(Commoncypress)，Cup s)、Juniperus ashei(雪松(Mountain cedar)，Jun a)、刺柏(Juniperoxycedrus)(刺桧(Prickly juniper)，Jun o)、Juniperus sabinoides(雪松，Jun s)、北美圆柏(Juniperus virginiana)(东部红柏(Eastern red cedar)，Jun v))；龙胆目(Gentianales)(例如长春花(Catharanthus roseus)(紫长春花属(Rosy periwinkle)，Catr))；禾本目(Poales)(例如黄花茅(Anthoxanthum odoratum)(甜春草(Sweet vernalgrass)，Ant o 1)、狗牙根(Cynodon dactylon)(百慕大草(Bermuda grass)，Cyn d 1，Cynd 7，Cyn d 12，Cyn d 15，Cyn d 22w，Cyn d 23，Cyn d 24)、果园草(Dactylis glomerata)(果园草(Orchard grass)，Dae g 1，Dae g 2，Dae g 3，Dae g 4，Dae g 5)、草甸羊茅(Festuca pratensis)(牛尾草(Meadow fescue)，Fes p 4))、绒毛草(Holcus lanatus)(天鹅绒草(Velvet grass)，Hol l 1，Hol l 5)、大麦(Hordeum vulgare)(大麦(Barley)，Horv 1，Hor v 5，Hor v 12，Hor v15，Hor v 16，Hor v 17，Hor v 21)、黑麦草(Loliumperenne)(黑麦(Rye grass)，Lol p 1，Lol p 2，Lol p 3，Lol p 4，Lol p 5，Lol p 11)、水稻(Oryza sativa)(稻，Ory s 1，Ory s 12)、百喜草(Paspalum notarum)(巴哈雀稗(Bahiagrass)，Pas n 1)、球茎草芦(Phalaris aquatica)(金黄草(Canary grass)，Pha a 1，Phaa 5)、猫尾草(Phleum pratense)(梯牧草(Timothy)，Phl p 1，Phl p 2，Phl p 4，Phl p 5，Phl p 6，Phl p 7，Phl p 11，Phl p 12，Phl p 13)、草地早熟禾(Poa pratensis)(肯塔基六月禾(Kentucky blue grass)，Poa p 1，Poa p 5)、黑麦属(Secale cereale)(黑麦(Rye)，Sec c 1，Sec c 20)、石茅(Sorghum halepense)(约翰逊草(Johnson grass)，Sor h1)、普通小麦(Triticum aestivum)(小麦，Tri a 12，Tri a 14，Tri a 185，Tri a 19，Tria 25，Tri a 26，Tri a 27，Tri a 28，Tri a 29，Tri a 30)、玉米(Zea mays)(玉米(Maize)，Zea m 1，Zea m 12，Zea m 14，Zea m 25)、壳斗目(Fagales)：普通赤杨(Alnusglutinosa)(赤杨(Alder)，Aln g 1，Aln g 4)、疣皮桦(Betula verrucosa)(桦树(Birch)，Bet v 1，Bet v 2，Bet v 3，Bet v 4，Bet v 5，Bet v 6，Bet v 7)、Carpinus betuhxs(角树(Hornbeam)，Car b 1)；唇形目(Lamiales)(例如欧洲白蜡树(Fraxinus excelsior)(白蜡树(Ash)，Fra e l)、普通女贞(Livetrum vulgare)(女贞(Privet)，Lig v)、紫丁香(Syringa vulgaris)(丁香花(Lilac)，Syr v))；金虎尾目(Malpighiales)(例如巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)(帕拉胶树(para rubber tree)(乳胶)，Hev b 1，Hev b 2，Hev b3，Hev b 4，Hev b 5，Hev b 6，Hev b 7，Hev b 8，Hev b 9，Hev b 10，Hev b 11，Hev b 12，Hev b 13))；山龙眼目(Proteales)(例如二球悬铃木(Platanus acerifolia)(英国梧桐(London plane tree)，Pla a 1，Pla a 2，Pla a 3)、三球悬铃木(Platanus orientalis)(法国梧桐(Oriental plane)，Pla or 1，Pla or 2，Pla or 3))。

在一个实施方案中，吸入性过敏原选自包含以下或由其组成的组：粗足粉螨(贮藏螨，Aca s 13)、美洲尘螨(美国房尘螨，Der f)、微角尘螨(房尘螨，Der m)、屋尘螨(欧洲房尘螨，Der p)、梅氏嗜霉螨(房尘螨，Eur m)、家食甜螨(贮藏螨，Gly d 2)、胡蜂(黄蜂，Pola)、造纸胡蜂(地中海纸黄蜂，Pol d)、鸣黄蜂(黄蜂，Pol e)、北方纸巢蜂(黄蜂，Pol f)、柞蚕马蜂(黄蜂，Pol g)、长足胡蜂(黄蜂，Pol m)、Polybia paulista(黄蜂，Pol p)、Polybiascutellaris(黄蜂，Pol s)、家猫(猫，Fel d)、禾本目和疣皮桦(桦树，Bet v 1，Bet v 2，Bet v 3，Bet v 4，Bet v 5，Bet v 6，Bet v 7)。

摄入性过敏原的示例包括但不限于来自真菌子囊菌的过敏原，例如座囊菌目(Dothideales)(例如互隔交链孢霉(Alternaria alternata)(链格孢腐菌(Alternariarot fungus)，Alt a)、支孢样支孢霉(Cladosporium cladosporioides)(Cla c)、草本支孢霉(Cladosporium herbarum)(Cla h)、月牙弯孢菌(Curvularia lunata)(Cur l)、-散囊菌目(Eurotiales)：黄曲霉菌(Aspergillus flavus)(Asp fl)、烟曲霉菌(Aspergillusfumigatus)(Asp f)、黑曲霉菌(Aspergillus niger)(Asp n)、米曲霉菌(Aspergillusoryzae)(Asp o)、短密青霉菌(Penicillium brevicompactum)(Pen b)、产黄青霉菌(Penicillium chrysogenum)(Pen ch)、桔青霉菌(Penicillium citrinum)(Pen c)、草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)(Pen o))、肉座菌目(Hypocreales)(例如大刀镰刀菌(Fusarium culmorum)(Fus c))；甲爪团囊属(Onygenales)(例如红色毛癣菌(Trirphytonrubrum)(Tri r)、断发毛癣菌(Trichophyton tonsurans)(Tri t)、酵母目(Saccharomycetales)：白色念珠菌(Candida albicans)(酵母，Cand a)、博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)(酵母，Cand b))；瘤座孢目(Tuberculariales)(例如黑附球菌(Epicoccum purpurascens)(Epi p))，来自真菌担子菌(Fungi Basidiomycota)的过敏原，例如层菌纲(Hymenomycetes)(例如毛头鬼伞(Coprinus comatus)(毛头鬼伞(Shaggymane)，Cop c)、古巴光盖伞(Psilocybe cubensis)(神奇蘑菇(Magic mushroom)，Psi c)、锈菌纲(Urediniomycetes)(例如胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)(酵母，Rho m))；黑粉菌纲(Ustilaginomycetes)(例如糠秕马拉色菌(Malassezia furfur)(花斑糠疹感染(Pastriasis versicolor infect.Agent，Mala f)，合轴马拉色菌(Malasseziasympodialis)(Mala s))；抗生素(例如青霉素、头孢菌素、氨基苷(Aminoside)、喹诺酮类、大环内酯类、四环素、磺胺类(Sulfamid))；药物(例如乙酰水杨酸、疫苗、吗啡及衍生物)；维生素，例如维生素K1；以及食物过敏原(例如来自奶、蛋、花生、树坚果(核桃、腰果等)、鱼、贝类、大豆、小麦和胡萝卜、苹果、梨、鳄梨、杏、桃中的过敏原)。

在一个实施方案中，摄入性过敏原是食物过敏原。

在一个实施方案中，食物过敏原选自包含以下或由其组成的组：来自奶、蛋、花生、树坚果(核桃、腰果等)、鱼、贝类、大豆、小麦和胡萝卜、苹果、梨、鳄梨、杏、桃的过敏原。

接触性过敏原的示例包括但不限于重金属(例如镍、铬、金)、乳胶、半抗原如氟烷、肼苯哒嗪。

在一个实施方案中，过敏原选自包含以下或由其组成的组：粗足粉螨(贮藏螨，Acas 13)、美洲尘螨(美国房尘螨，Der f)、微角尘螨(房尘螨，Der m)、屋尘螨(欧洲房尘螨，Derp)、梅氏嗜霉螨(房尘螨，Eur m)、家食甜螨(贮藏螨，Gly d 2)、胡蜂(黄蜂，Pol a)、造纸胡蜂(地中海纸黄蜂，Pol d)、鸣黄蜂(黄蜂，Pol e)、北方纸巢蜂(黄蜂，Pol f)、柞蚕马蜂(黄蜂，Pol g)、长足胡蜂(黄蜂，Pol m)、Polybia paulista(黄蜂，Pol p)、Polybiascutellaris(黄蜂，Pol s)、家猫(猫，Fel d)、禾本目和疣皮桦(桦树，Bet v1，Bet v 2，Betv 3，Bet v 4，Bet v 5，Bet v 6，Bet v 7)和食物过敏原。

本发明还进一步涉及用于增加对特定过敏原过敏的受试者的脱敏的功效和/或减少其持续时间的方法，其中通过脱敏治疗所述受试者，并进一步施用本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物。

在一个实施方案中，在本发明的方法中，首先向受试者施用本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物，并且然后施用过敏原。

在一个实施方案中，在本发明的方法中，首先给受试者施用过敏原，并且然后施用本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物。

在另一个实施方案中，在本发明的方法中，受试者接受本发明的免疫原性产品、组合物、药物组合物、药物或疫苗组合物和过敏原的组合施用。

本发明进一步涉及如上文所述的组合物、药物组合物、药物或疫苗，其中所述组合物、药物组合物、药物或疫苗进一步包含至少一种过敏原。

在一个实施方案中，向或将要向受试者施用治疗有效量的至少一种本发明的免疫原性产品。在一个实施方案中，治疗有效量对应于使用本领域公知的Bradford蛋白质测定法所确定的总蛋白量。

在一个实施方案中，将要向受试者施用的免疫原性产品的量诱导免疫保护应答而无显著的不良作用。

在一个实施方案中，将要向受试者施用的免疫原性产品的量诱导过敏原脱敏而无显著的不良作用。

可以通过标准研究来确定本发明的免疫原性产品的最佳成分量，包括观察受试者中适当的免疫应答。初次接种疫苗后，受试者可接受适当间隔的一次或多次加强免疫。

在一个实施方案中，治疗由一段时间内的单个剂量或多个剂量组成。

在本发明的一个实施方案中，一个月内向待治疗的受试者施用至少两次治疗有效量的如上所述的免疫原性产品。

在本发明的另一个实施方案中，一个月内向待治疗的受试者施用两次治疗有效量的本发明的免疫原性产品。在这个实施方案中，可以在第0天向受试者施用一次，并在第7天至第28天之间施用第二次。在一个实施方案中，在第0天向受试者施用一次，并在第28天施用第二次。

在本发明的另一个实施方案中，一个月内向待治疗的受试者施用三次治疗有效量的本发明的免疫原性产品。在这个实施方案中，可以在第0天向待治疗的受试者施用一次，并在第7天至第14天之间施用第二次，并在第21天至第28天之间施用第三次。在一个实施方案中，在第0天向受试者施用一次，并在第7天施用第二次，并在第28天施用第三次。

在本发明的另一个实施方案中，可进一步每三个月向待治疗的受试者施用一次治疗有效量的本发明的免疫原性产品。

在本发明的一个实施方案中，如上所述，在一个月内向待治疗的受试者施用三次，并且然后进一步每三个月施用一次治疗有效量的本发明的免疫原性产品。

在本发明的另一个实施方案中，当获得自受试者的血清样品中检测不到抗IgE的抗体量时，可进一步向受试者施用治疗有效量的如上所述的免疫原性产品。

附图简述

图1显示了hIgE Kinoid(hIgE-K)的生成。(A)使用硫醇-马来酰亚胺缀合合成hIgE-K。(B)使用SDS-PAGE和(C)HPLC确认IgE Cε3-Cε4片段与CRM₁₉₇缀合后生成高分子量kinoid。

图2显示了hIgE-Kinoid对抗hIgE抗体的中和作用。(A)肌肉内疫苗接种方案概述。用通过佐剂水包角鲨烯乳剂(SWE)乳化的hIgE-K(或单独的CRM₁₉₇作为对照)接种hIgE^KI小鼠(其表达人IgE而不是小鼠IgE)。(B)第一次注射kinoid后5、9、21、30和39周时血清中的抗hIgE和(C)抗CRM₁₉₇抗体滴度。结果显示来自个体小鼠的值，条形图表示中位数。(D)第5周收集的血清中的抗hIgE中和能力。表达hIgE受体FcεRI的骨髓源性培养的肥大细胞(BMCMC)来源于FcεRI人源化小鼠。BMCMC与来自用hIgE-K接种的小鼠的血清(在第一次注射疫苗后39天收集的)按指定的稀释度进行预孵育。紧接着，加入荧光标记的(FITC)hIgE 30分钟。洗涤细胞并通过流式细胞术定量BMCMC上的FITC荧光水平。(E)在第5、9、21、30和39周收集的血清中的总hIgE水平。结果显示来自个体小鼠的值，条形图表示平均值±SEM。(B-E)数据来自单个实验，每组n＝8只小鼠，代表两个独立实验。***，P<0.001(Mann-Whitney U检验)。

图3显示了hIgE-K的接种预防了IgE介导的全身性过敏反应。(A)方案概述。用通过佐剂SWE乳化的hIgE-K(或单独的CRM₁₉₇作为对照)接种(肌肉内，i.m)的IgE/FcεRI人源化小鼠(其表达人IgE和人IgE受体FcεRI)。在第9周，小鼠用hIgE抗硝基苯基(NP)致敏，一天后用与BSA偶联的NP(硝基苯基)进行攻击，两者均为静脉内给药，如图所示。(B)第一次注射kinoid后5周血清中的抗体滴度。结果显示来自个体小鼠的值，其中条形图表示中位数±SEM。(C)小鼠注射IgE-K或CRM₁₉₇后第0、1和3周的体温变化(Δ°T，平均值±SEM)。数据汇集自两个独立实验，每组总共n＝7-9只小鼠。(D)静脉内注射10μg抗-NP hIgE后体温的变化(其用作小鼠过敏反应的主要读出)(Δ°T，平均值±SEM)。数据汇集自两个独立实验，每组总共n＝7-9只小鼠。(E)静脉内注射500μg NP-BSA后体温的变化(Δ°T，平均值±SEM)。数据汇集自两个独立实验，每组总共n＝7-9只小鼠。*、**或***，P<0.05、0.01或0.001(Mann-Whitney U检验)。

图4显示了在遗传易感过敏小鼠模型中，hIgE-K的接种预防了IgE介导的全身性过敏反应。(A)方案概述。用通过佐剂SWE乳化的hIgE-K(或单独的CRM₁₉₇作为对照)接种携带F709 IL4Ra突变的IgE/FcεRI人源化小鼠(该等效突变与人类特应性相关，已知该突变增加小鼠对IgE介导的过敏反应的易感性)。在第6周，给小鼠静脉内注射250μg抗hIgE。(B)静脉内注射250μg抗hIgE抗体后体温的变化(其用作过敏反应的主要读出)(Δ°T，平均值±SEM)。(C)静脉内注射250μg抗hIgE后的生存曲线。数据汇集自两个独立实验，每组总共n＝9只小鼠。**或***，P<0.01或0.001(Mann-Whitney U检验)。

实施例

通过以下实施例进一步说明本发明。

本发明涉及使用CRM₁₉₇作为载体蛋白的免疫原性产品。通过以下实施例说明本发明的免疫原性产品的性质。

CRM₁₉₇是白喉毒素的无毒形式，归因于在其毒素结构域中位置52处的甘氨酸到谷氨酸的单碱基取代而没有毒性(Uchida等人，1973J Biol Chem)。

采用硫醇-马来酰亚胺缀合来制备基于IgE的免疫原性产品。将巯基部分引入具有SATA的载体蛋白CRM₁₉₇上并随后进行羟胺脱保护，而通过含马来酰亚胺剂sGMBS将IgE或IgE片段进行衍生化。SATA和sGMBS均是含有NHS-酯的异双功能交联剂，其与伯胺(例如赖氨酸残基的ε-氨基和蛋白N-末端)反应。

实施例1：抗IgE疫苗接种在人源化小鼠中预防人IgE介导的重度变应性反应

材料和方法

小鼠

通过在小鼠12号染色体(Chr12:113,147,778)上插入人IgE序列(1080碱基对，位于人14号染色体上：106,064,224-106,068,065)获得hIgE^KI小鼠。通过使hIgE^KI和mFcεRI^-/-hFcεRI^Tg小鼠杂交产生IgE/FcεRI人源化小鼠(Dombrowicz D等人，Anaphylaxis mediatedthrough a humanized high affinity IgE receptor.Journal of immunology(Baltimore,Md:1950).1996；157(4):1645-51)。通过使IgE/FcεRI人源化小鼠与F709IL4Ra小鼠杂交产生携带F709 IL4Ra突变的IgE/FcεRI人源化小鼠(Tachdjian R等人，Invivo regulation of the allergic response by the IL-4receptor alpha chainimmunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif.J Allergy Clin Immunol.2010；125(5):1128-36.e8)。小鼠被保持在巴斯德研究所(Institut Pasteur)的无特定病原体的设施中。小鼠在巴斯德研究所饲养，并表现出正常的发育和繁殖模式。所有动物护理和实验均是按照在#170043下登记的动物伦理委员会CETEA(法国巴黎巴斯德研究所)和法国研究部(the French Ministry of Research)的指南和特别批准进行的。

IgE片段生产

合成重组hIgE Cε3-4片段(含有G335C突变，带有C末端Strep Twin标签，并具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列)并瞬时转染到指数生长的Expi-293细胞中，这些细胞在以110rpm旋转的摇床平台上的加湿5％ CO2培养箱中在37℃下以悬浮液在Expi293^TM表达培养基(Life Technologies)中培养。转染前24小时，收集细胞并重悬在Expi293^TM表达培养基中，密度为2x10⁶个细胞/ml，并在与上述相同的条件下培养过夜。24小时后，将500μg表达质粒和1350μL Expifectamine在Opti-MEM(Life Technologies)培养基中预孵育5分钟并混合在一起。孵育20分钟后，将混合物以2.9x10⁶个细胞/mL的密度添加到Expi-293细胞中。转染后20小时，分别加入25mL和2.5mL转染增强剂1和2(ThermoFisher)。转染后培养细胞5天，收获上清液，以4200rpm离心30分钟并过滤(0.2μm)。使用AKTA pure FPLC仪器(GEHealthcare)和Strep-Column(IBA Lifescience)通过亲和色谱法来纯化蛋白。

hIgE Kinoid的合成和表征

hIgE Cε3-4用N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基琥珀酰亚胺酯(sGMBS；ThermoFisher)(一种与伯胺反应的含马来酰亚胺的试剂)修饰。hIgE Cε3-4缓冲液与修饰缓冲液(70mM磷酸盐缓冲液、150mM NaCl、5mM EDTA，pH＝7.2)交换，浓度为1mg/mL。制备10mMsGMBS溶液并以1:30的比例添加到hIgE Cε3-4中，并在室温(避光)下孵育60分钟。使用Zeba脱盐旋转柱(Thermo Fisher)去除过量的sGMBS并将缓冲液与修饰缓冲液交换。CRM₁₉₇购自Pfenex(美国)。在含SATA(N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基硫代乙酸酯)的载体蛋白CRM₁₉₇上引入了巯基部分。将CRM₁₉₇稀释在修饰缓冲液中，浓度为2mg/mL，并以1:80的摩尔比添加新鲜制备的100mM SATA溶液(溶解在DMSO中)，并在室温(避光)下孵育30分钟。使用Zeba脱盐旋转柱去除过量的SATA并将缓冲液与修饰缓冲液交换。SATA修饰的CRM₁₉₇与最终浓度为50mM的羟胺溶液一起在室温下避光孵育120分钟。使用Zeba脱盐旋转柱去除过量的羟胺并将缓冲液与修饰缓冲液交换。CRM₁₉₇和hIgE Cε3-4功能化后，通过Bradford(Thermo Fisher)测定法根据制造商的说明测定每种制剂的蛋白含量。

以1:1的摩尔比和0.4mg/mL的最终浓度将功能化CRM₁₉₇添加到功能化hIgE Cε3-4中。混合物在4℃下孵育16小时，避光，随后使用Zeba脱盐旋转柱将缓冲液与修饰缓冲液交换。通过Bradford测定法确定蛋白含量。然后将产生的hIgE kinoid(hIgE-K)进行0.22μm无菌过滤并在4℃下储存。

使用不同的体外方法表征hIgE-K。为了分析获得的kinoid的概况，对hIgE Cε3-4片段(Strep-TACTIN HRP缀合物(IBA Lifescience))进行了SDS-PAGE和蛋白质印迹。还使用了尺寸排阻(SE)-HPLC，其使用Bio SEC-5柱(5μm，7.8*300mm，Agilent)和BioSEC-3柱(/>3μm，7.8*300mm，Agilent)。SE-HPLC分析以1mL/min的等度模式进行，柱温为25℃。过滤后(0.22μm截止值)，样品以100μL注入并在280nm处进行分析。总运行时间为35分钟。

人IgE抗体的生产

如前所述生产和纯化抗硝基苯基hIgE(Balbino B等人，The anti-IgE mAbomalizumab induces adverse reactions by engaging Fcgamma receptors.JClinInvest.2020)。JW8/5/13(ECACC 87080706)细胞获自Sigma-Aldrich。该细胞系产生针对半抗原4-羟基-3-硝基苯乙酰基(NP)的嵌合人IgE抗体，其是由人Fcε链和小鼠抗NP可变链组成。JW8/5/13细胞在含有2mM谷氨酰胺(Thermo Fisher Scientific)和10％胎牛血清(FBS)(Thermo Fisher Scientific)的完全Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM，Gibco)中以9x10⁵个细胞/ml培养。15天后，收获上清液，以4200rpm离心30分钟并过滤(0.2μm)。我们通过亲和色谱法纯化了IgE抗体。简言之，将CNBr活化的Sepharose 4Fast Flow Beads(GEHealthcare)与WT抗IgE偶联，使用的比例为每克珠子2.5mg蛋白。对珠子进行称重，用15体积的冷1mM HCl洗涤并以2500rpm离心5分钟。将WT抗IgE重新悬浮在偶联溶液(0.1MNaHCO3pH 8.3，含有0.5M NaCl)中，并在搅拌下于4℃下与珠子混合过夜。珠子用偶联缓冲液洗涤，未反应的基团用0.1M Tris-HCl缓冲液pH 8.0封闭。然后使用交替的低(0.1M乙酸盐缓冲液pH 3)和高(0.1M Tris-HCl pH 8)pH溶液洗涤WT抗IgE偶联珠，并在4℃下储存于硼酸盐缓冲液(100mM硼酸盐，150mM NaCl pH 8.0)中直至使用。为了纯化IgE，将WT抗IgE偶联琼脂糖珠装在XK 16/20柱(GE Healthcare)中，并使用AKTA pure FPLC仪器(GE Healthcare)进行亲和色谱法。纯化后，将IgE抗体用HiTrap脱盐柱(GE Healthcare)脱盐，并在4℃下储存直至使用。

用hIgE Kinoid接种

在第0、7和28天用在PBS中以1:1(v:v)与SWE(一种水包角鲨烯乳剂佐剂(VaccineFormulation Laboratory，University of Lausanne，瑞士))组合的hIgE-K对小鼠进行肌内免疫，两次初始剂量为30μg，随后一次加强剂量为10μg。作为对照，小鼠的组按照相同的时间表注射与SWE组合的CRM₁₉₇，两次初始剂量为15μg，然后一次加强剂量为5μg(这些剂量是根据CRM₁₉₇的重量比定义的)。

定量来自接种的小鼠血清中针对人IgE和CRM₁₉₇的IgG

通过评价在接种后不同时间点收集的血清中针对人IgE和CRM₁₉₇的抗体来评估kinoid的免疫原性。将人IgE或CRM₁₉₇在4℃下分别以5或1μg/mL在包被缓冲液(碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液pH 9.6)中进行包被并孵育过夜。每个步骤后，将板用0.005％的PBS Tween 20洗涤3次。用BSA 1％PBS封闭后，加入血清样品，从2000dil^-1开始进行两倍连续稀释(稀释于PBS，BSA 1％)。在37℃孵育90分钟后，用HRP缀合的山羊抗小鼠IgG(Bethyl Laboratories)以1/10000检测结合的抗体，并使用OPD底物显示板。用1M H₂SO₄终止反应，随后记录490nm下的吸光度。从稀释度2000dil^-1开始直到1024000dil^-1分析样品。滴度定义为ODmax的50％时血清的稀释度。滴度表示为血清稀释因子(dil^-1)。滴度量化的限值是测定中测试的最低稀释度：2000dil^-1。

评估用hIgE-K接种后产生的抗hIgE抗体的中和能力

表达hFcεRI的骨髓源性培养的肥大细胞(BMCMC)通过在含有IL-3(10ng/ml)的培养基中培养来自IgE/FcεRI人源化小鼠的骨髓细胞6周获得，此时细胞>95％c-Kit⁺hFcεRIα⁺(数据未显示)。为了评估用hIgE-K接种后产生的抗hIgE抗体的中和能力，我们将BMCMC与来自用hIgE-K或CRM₁₉₇单独(作为对照)接种的小鼠的血浆稀释液一起孵育。然后，我们添加了FITC标记的hIgE(如先前在Balbino B等人，The anti-IgE mAb omalizumab inducesadverse reactions by engaging Fcgamma receptors.J Clin Invest.2020中所述产生的)，并通过流式细胞术评估FITC-hIgE与BCMMC上的hFcεRI的结合。

嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面上的IgE定量

用肝素收集血液。对于腹膜灌洗液(PLF)，轻轻去除腹膜的外皮。然后使用27g针头将3mL冷PBS注入腹腔。轻轻按摩腹膜后，切开腹膜内层皮肤，同时用镊子托起皮肤，回收PLF。

进行红细胞裂解以去除红细胞

将来自血液的细胞用抗CD49b-BV421(克隆DX5，eBioscience)、抗CD131-PE(克隆REA193，Miltenyi)以及用抗人IgE-生物素(克隆MHE-18，Biolegend)和抗生物素-APC(克隆REA746，Miltenyi)或抗人FcεRI-APC(克隆AER-37(CRA-1)，BioLegend)染色。将来自PLF的细胞用抗cKIT-APC(克隆2B8，eBioscience)以及用抗人IgE生物素(克隆MHE-18，BioLegend)和抗生物素-APC(克隆REA746，Miltenyi)或抗人FcεRI-APC(克隆AER-37(CRA-1)，BioLegend)染色。将嗜碱性粒细胞门控为CD49b⁺CD131⁺，肥大细胞门控为cKIT⁺IgE⁺或FcεRI⁺。人FcεRI和IgE的表面表达通过平均荧光强度(MFI)进行评估和表达。

人和小鼠总IgE定量

人总IgE水平通过ELISA进行定量。将抗Cε2人IgE抗体(克隆8E/5D4，AvivaSystems Biology)在4℃下在偶联缓冲液(碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液pH＝9.6)中以5μg/mL的浓度进行包被并孵育过夜。在每个步骤之后，将板用0.005％的PBS Tween 20洗涤3次。在室温下用1％ BSA的PBS溶液封闭1小时30分钟后，以1/10的最终稀释度(在PBS，BSA 1％10％FBS中稀释)添加血清样品，并在室温下孵育90分钟。然后，在室温下在90分钟期间以1:10,000添加抗人IgE抗体(A80-108P，Bethyl Laboratories)。使用OPD底物显示板。用2M H₂SO₄终止反应，随后记录490nm下的吸光度。使用商业ELISA试剂盒(E90-115；BethylLaboratories)根据制造商的说明通过ELISA对小鼠总IgE水平进行量化。

被动全身性过敏反应

在IgE/FcεRI人源化小鼠中，以100μL PBS中10μg的剂量静脉内(i.v.)施用纯化的小鼠IgE抗NP抗体。二十四小时后，小鼠接受用在PBS中的500μg NP(21-31)-BSA(SantaCruz Biotechnology)静脉内攻毒。在即将攻毒之前(时间0)和攻毒后不同时间点直到1小时进行体温直肠测量。在IgE/FcεRI人源化；F709 IL4Ra小鼠中，以250μg的剂量i.v.施用兔抗hIgE抗体(Bethyl Laboratories)。在即将注射之前(时间0)和注射后不同时间点直到1小时进行体温直肠测量。

统计分析

使用未配对的Student t检验(未配对的Mann Whitney检验)确定统计显著性。P≤0.05被认为具有统计显著性。使用Prism 7.0软件程序(GraphPad Software)进行计算。

结果

用hIgE kinoid接种在IgE人源化小鼠中诱导有效的抗IgE中和抗体

通过使用硫醇-马来酰亚胺缀合将人IgE Cε3-4结构域与白喉“交叉反应物质₁₉₇”(CRM₁₉₇，一种在多种批准的结合疫苗中用作载体蛋白的白喉毒素的无毒突变体)偶联来产生IgE kinoid(hIgE-K)(图1A)。我们将位置335的天然甘氨酸残基用半胱氨酸残基替换进Cε3-4中。因此，形成链间二硫键，其将IgE片段锁定为“闭合”构象，该构象保持与奥马珠单抗而非与FcεRI的高亲和力结合。我们假设含有这种G335C突变的IgE结合疫苗将有利于产生“奥马珠单抗样”中和抗体，同时避免与FcεRI的可能有害的结合。SDS-PAGE和HPLC分析表明在hIgE Cε3-4G335C与CRM₁₉₇缀合后形成高分子物质，证实了hIgE-K的高效合成(图1B和1C)。

用在SWE(一种角鲨烯水包油乳剂佐剂)中的hIgE-K免疫hIgE^KI小鼠(其表达人IgE而不是小鼠IgE)诱导了高抗hIgE抗体滴度，在初次免疫后5周即可检测到，并且在超过39周后(迄今为止评估的最后时间点)仍可检测到(图2A-B)。正如预期的那样，所有暴露于单独的CRM₁₉₇或hIgE-K的小鼠都发展出抗CRM₁₉₇抗体(图2C)。重要的是，用kinoid接种后产生的抗hIgE抗体在初次免疫后5周开始在所有小鼠中都表现出强的中和能力(图2D)。我们可以在CRM₁₉₇免疫的对照小鼠的血液中检测到hIgE，但在用hIgE-K接种的hIgE^KI小鼠中检测不到，这证实了接种后产生的抗体的中和能力(图2E)。总而言之，这些数据表明在hIgE^KI小鼠中可以通过用hIgE-K接种来实现hIgE的有效长期中和。

抗hIgE疫苗在hIgE介导的过敏反应模型中的功效

我们评估了在表达人IgE和人FcεRI的小鼠(IgE/FcεRI人源化小鼠)中注射hIgE-K后的潜在不良事件。我们在每次注射IgE-K疫苗(或单独的CRM₁₉₇作为对照)后仔细监测小鼠(图3A)，并且在IgE/FcεRI人源化小鼠中没有观察到任何可检测到的不良反应：既不会检测到体温过低(图3C)，其是用于密切注意小鼠的过敏性休克的参数，也不会在IgE/FcεRI人源化小鼠中每次疫苗注射后超过1小时检测到腹泻、窘迫或缺乏活力。这种不存在不良反应表明该疫苗不会通过肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面上的IgE聚集来触发FcεRI激活。用hIgE-K接种在IgE/FcεRI人源化小鼠中诱导了高的抗hIgE抗体滴度，这在第一次注射kinoid后5周就可以检测到(图3B)，类似于它们在hIgE^KI小鼠中的表现(图2E)。

为了进一步评估hIgE疫苗的安全性和效率，按照上述相同的免疫时间表(图3A)，我们将高剂量(10μg)的抗硝基苯基(NP)hIgE注射到已用hIgE-K接种的或用作为对照的单独CRM₁₉₇接种的IgE/FcεRI人源化小鼠中。再次地，在注射抗NP-hIgE后超过1小时，我们既没有观察到体温过低，也没有观察到腹泻、窘迫或缺乏活力，这证实了即使在存在非常高的循环hIgE水平的情况下，该疫苗也不会引起可检测到的副作用(图3D)。重要的是，用hIgE-K接种的小鼠免受hIgE介导的过敏反应，而注射了抗NP hIgE并用NP抗原攻毒的CRM₁₉₇接种小鼠出现严重的体温过低，7只小鼠中有1只死亡(图3E)。

抗hIgE疫苗在遗传易感过敏小鼠模型中的功效

IgE/FcεRI人源化小鼠表现出低水平的循环hIgE，而过敏患者表现出中等至高水平的循环IgE，这使得小鼠模型在抗IgE接种后可能潜在地更容易避免IgE诱导的事件。为了解决这种差异，我们将IgE/FcεRI人源化小鼠与携带在编码白细胞介素-4(IL-4)和IL-13受体亚基IL-4Ra的基因中的功能获得性Y709F突变的小鼠杂交，以生成hIgE^KI；hFcεRI^Tg；F709IL4Ra小鼠(图4A)。Y709F突变破坏了IL4Ra的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)，从而增强响应于IL-4和IL-13的受体信号传导，放大IgE水平和IgE介导的过敏反应。我们使用hIgE^KI；hFcεRI^Tg；F709 IL4Ra小鼠来评估hIgE疫苗在过敏反应被内源性hIgE触发的模型中的效率。为此，我们用高剂量的多克隆抗hIgE抗体注射hIgE^KI；hFcεRI^Tg；F709 IL4Ra小鼠，以通过FcεRI结合的hIgE交联触发肥大细胞激活。用作对照的CRM₁₉₇免疫小鼠在注射抗hIgE后30分钟内发展出重度的体温过低(图4B)，死亡率为100％(图4C)，这证实了IgE/FcεRI人源化；F709 IL4Ra小鼠具有足够水平的与hFcεRI结合的内源性hIgE以触发hIgE介导的过敏反应。与之形成鲜明对比的是，在注射抗hIgE后，IgE-K接种的小鼠仅表现出短暂的轻度体温过低，并且没有死亡(图4B-C)。

总而言之，我们的结果表明，可以使用标准工业方法生产针对人IgE Cε3-4结构域的疫苗，并且这种疫苗可以导致hIgE的长期中和，导致循环中的IgE水平检测不到，并减少FcεRI结合的hIgE。hIgE-K疫苗接种在IgE和FcεRI人源化小鼠中不诱导任何可检测到的副作用，即使在重复注射后也是如此。IgE-K接种避免了重度的IgE介导的变态反应，即使在遗传易感过敏小鼠模型中也是如此。这些结果为临床开发针对hIgE介导的过敏性病症的长期有效疫苗铺平了道路。

序列表

<110> 尼奥瓦克斯公司（NEOVACS）

法国国家健康和医学研究院（INSERM （Institut National de la Santé etde la Recherche Médicale））

巴斯德研究院（INSTITUT PASTEUR）

L·勒贝（Reber Laurent）

P·布鲁恩斯（Bruhns Pierre）

E·康德加西亚（Conde Garcia Eva）

M·巴奇科维奇（Backovic Marija）

V·塞拉（Serra Vincent）

G·格鲁阿德-沃格尔（Géraldine GROUARD-VOGEL）

R·伯特兰（Romain BERTRAND）

<120> 用于治疗IgE介导的炎性病症的包含IgE片段的免疫原性产品

<130> IBIO-1656/PCT

<150> EP20306047.0

<151> 2020-09-17

<150> US63/079686

<151> 2020-09-17

<160> 15

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 535

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> CRM197

<400> 1

Gly Ala Asp Asp Val Val Asp Ser Ser Lys Ser Phe Val Met Glu Asn

1 5 10 15

Phe Ser Ser Tyr His Gly Thr Lys Pro Gly Tyr Val Asp Ser Ile Gln

20 25 30

Lys Gly Ile Gln Lys Pro Lys Ser Gly Thr Gln Gly Asn Tyr Asp Asp

35 40 45

Asp Trp Lys Glu Phe Tyr Ser Thr Asp Asn Lys Tyr Asp Ala Ala Gly

50 55 60

Tyr Ser Val Asp Asn Glu Asn Pro Leu Ser Gly Lys Ala Gly Gly Val

65 70 75 80

Val Lys Val Thr Tyr Pro Gly Leu Thr Lys Val Leu Ala Leu Lys Val

85 90 95

Asp Asn Ala Glu Thr Ile Lys Lys Glu Leu Gly Leu Ser Leu Thr Glu

100 105 110

Pro Leu Met Glu Gln Val Gly Thr Glu Glu Phe Ile Lys Arg Phe Gly

115 120 125

Asp Gly Ala Ser Arg Val Val Leu Ser Leu Pro Phe Ala Glu Gly Ser

130 135 140

Ser Ser Val Glu Tyr Ile Asn Asn Trp Glu Gln Ala Lys Ala Leu Ser

145 150 155 160

Val Glu Leu Glu Ile Asn Phe Glu Thr Arg Gly Lys Arg Gly Gln Asp

165 170 175

Ala Met Tyr Glu Tyr Met Ala Gln Ala Cys Ala Gly Asn Arg Val Arg

180 185 190

Arg Ser Val Gly Ser Ser Leu Ser Cys Ile Asn Leu Asp Trp Asp Val

195 200 205

Ile Arg Asp Lys Thr Lys Thr Lys Ile Glu Ser Leu Lys Glu His Gly

210 215 220

Pro Ile Lys Asn Lys Met Ser Glu Ser Pro Asn Lys Thr Val Ser Glu

225 230 235 240

Glu Lys Ala Lys Gln Tyr Leu Glu Glu Phe His Gln Thr Ala Leu Glu

245 250 255

His Pro Glu Leu Ser Glu Leu Lys Thr Val Thr Gly Thr Asn Pro Val

260 265 270

Phe Ala Gly Ala Asn Tyr Ala Ala Trp Ala Val Asn Val Ala Gln Val

275 280 285

Ile Asp Ser Glu Thr Ala Asp Asn Leu Glu Lys Thr Thr Ala Ala Leu

290 295 300

Ser Ile Leu Pro Gly Ile Gly Ser Val Met Gly Ile Ala Asp Gly Ala

305 310 315 320

Val His His Asn Thr Glu Glu Ile Val Ala Gln Ser Ile Ala Leu Ser

325 330 335

Ser Leu Met Val Ala Gln Ala Ile Pro Leu Val Gly Glu Leu Val Asp

340 345 350

Ile Gly Phe Ala Ala Tyr Asn Phe Val Glu Ser Ile Ile Asn Leu Phe

355 360 365

Gln Val Val His Asn Ser Tyr Asn Arg Pro Ala Tyr Ser Pro Gly His

370 375 380

Lys Thr Gln Pro Phe Leu His Asp Gly Tyr Ala Val Ser Trp Asn Thr

385 390 395 400

Val Glu Asp Ser Ile Ile Arg Thr Gly Phe Gln Gly Glu Ser Gly His

405 410 415

Asp Ile Lys Ile Thr Ala Glu Asn Thr Pro Leu Pro Ile Ala Gly Val

420 425 430

Leu Leu Pro Thr Ile Pro Gly Lys Leu Asp Val Asn Lys Ser Lys Thr

435 440 445

His Ile Ser Val Asn Gly Arg Lys Ile Arg Met Arg Cys Arg Ala Ile

450 455 460

Asp Gly Asp Val Thr Phe Cys Arg Pro Lys Ser Pro Val Tyr Val Gly

465 470 475 480

Asn Gly Val His Ala Asn Leu His Val Ala Phe His Arg Ser Ser Ser

485 490 495

Glu Lys Ile His Ser Asn Glu Ile Ser Ser Asp Ser Ile Gly Val Leu

500 505 510

Gly Tyr Gln Lys Thr Val Asp His Thr Lys Val Asn Ser Lys Leu Ser

515 520 525

Leu Phe Phe Glu Ile Lys Ser

530 535

<210> 2

<211> 428

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> hIgE恒定区

<400> 2

Ala Ser Thr Gln Ser Pro Ser Val Phe Pro Leu Thr Arg Cys Cys Lys

1 5 10 15

Asn Ile Pro Ser Asn Ala Thr Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Ala Thr

20 25 30

Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Met Val Thr Trp Asp Thr Gly Ser Leu

35 40 45

Asn Gly Thr Thr Met Thr Leu Pro Ala Thr Thr Leu Thr Leu Ser Gly

50 55 60

His Tyr Ala Thr Ile Ser Leu Leu Thr Val Ser Gly Ala Trp Ala Lys

65 70 75 80

Gln Met Phe Thr Cys Arg Val Ala His Thr Pro Ser Ser Thr Asp Trp

85 90 95

Val Asp Asn Lys Thr Phe Ser Val Cys Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro

100 105 110

Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe Pro

115 120 125

Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr

130 135 140

Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu

145 150 155 160

Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln Ser

165 170 175

Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr

180 185 190

Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys

195 200 205

Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro

210 215 220

Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu

225 230 235 240

Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser

245 250 255

Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys

260 265 270

Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr

275 280 285

Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro

290 295 300

His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro

305 310 315 320

Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly

325 330 335

Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro

340 345 350

Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp

355 360 365

Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe

370 375 380

Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys

385 390 395 400

Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln

405 410 415

Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys

420 425

<210> 3

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> hIgE Cε3

<400> 3

Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu

1 5 10 15

Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala

20 25 30

Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys

35 40 45

Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr

50 55 60

Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu

65 70 75 80

Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala

85 90 95

Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser

100 105

<210> 4

<211> 210

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> hIgE Cε3和Cε4

<400> 4

Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu

1 5 10 15

Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala

20 25 30

Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys

35 40 45

Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr

50 55 60

Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu

65 70 75 80

Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala

85 90 95

Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu

100 105 110

Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg

115 120 125

Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val

130 135 140

Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Ser Thr

145 150 155 160

Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg

165 170 175

Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys

180 185 190

Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala

195 200 205

Val Ser

210

<210> 5

<211> 207

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> hIgE Cε2和Cε3

<400> 5

Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe

1 5 10 15

Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly

20 25 30

Thr Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp

35 40 45

Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln

50 55 60

Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr

65 70 75 80

Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys

85 90 95

Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg

100 105 110

Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys

115 120 125

Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp

130 135 140

Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu

145 150 155 160

Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly

165 170 175

Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His

180 185 190

Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser

195 200 205

<210> 6

<211> 312

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> hIgE Cε2, Cε3和Cε4

<400> 6

Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe

1 5 10 15

Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly

20 25 30

Thr Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp

35 40 45

Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln

50 55 60

Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr

65 70 75 80

Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys

85 90 95

Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg

100 105 110

Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys

115 120 125

Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp

130 135 140

Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu

145 150 155 160

Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly

165 170 175

Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His

180 185 190

Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly

195 200 205

Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro

210 215 220

Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met

225 230 235 240

Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro

245 250 255

Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly

260 265 270

Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln

275 280 285

Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser

290 295 300

Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser

305 310

<210> 7

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 肽序列 + G335C

<400> 7

Ala Asp Ser Asn Pro Arg Cys Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser

1 5 10 15

Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val

20 25 30

Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg

35 40 45

Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln

50 55 60

Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg

65 70 75 80

Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His

85 90 95

Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg

100 105 110

Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser

115 120 125

Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro Glu

130 135 140

Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala

145 150 155 160

Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe

165 170 175

Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp

180 185 190

Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr

195 200 205

Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys

210 215

<210> 8

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> hIgE Cε3 + G335C

<400> 8

Pro Arg Cys Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu

1 5 10 15

Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala

20 25 30

Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys

35 40 45

Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr

50 55 60

Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu

65 70 75 80

Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala

85 90 95

Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser

100 105

<210> 9

<211> 210

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> hIgE Cε3和Cε4 + G335C

<400> 9

Pro Arg Cys Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu

1 5 10 15

Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala

20 25 30

Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys

35 40 45

Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr

50 55 60

Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu

65 70 75 80

Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala

85 90 95

Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu

100 105 110

Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg

115 120 125

Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val

130 135 140

Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Ser Thr

145 150 155 160

Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg

165 170 175

Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys

180 185 190

Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala

195 200 205

Val Ser

210

<210> 10

<211> 207

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> hIgE Cε2和Cε3 + G335C

<400> 10

Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe

1 5 10 15

Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly

20 25 30

Thr Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp

35 40 45

Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln

50 55 60

Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr

65 70 75 80

Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys

85 90 95

Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Cys Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg

100 105 110

Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys

115 120 125

Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp

130 135 140

Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu

145 150 155 160

Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly

165 170 175

Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His

180 185 190

Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser

195 200 205

<210> 11

<211> 312

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> hIgE Cε2, Cε3和Cε4 + G335C

<400> 11

Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe

1 5 10 15

Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly

20 25 30

Thr Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp

35 40 45

Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln

50 55 60

Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr

65 70 75 80

Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys

85 90 95

Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Cys Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg

100 105 110

Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys

115 120 125

Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp

130 135 140

Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu

145 150 155 160

Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly

165 170 175

Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His

180 185 190

Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly

195 200 205

Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro

210 215 220

Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met

225 230 235 240

Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro

245 250 255

Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly

260 265 270

Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln

275 280 285

Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser

290 295 300

Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser

305 310

<210> 12

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 肽序列

<400> 12

Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser

1 5 10 15

Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val

20 25 30

Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg

35 40 45

Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln

50 55 60

Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg

65 70 75 80

Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His

85 90 95

Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg

100 105 110

Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser

115 120 125

Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro Glu

130 135 140

Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala

145 150 155 160

Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe

165 170 175

Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp

180 185 190

Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr

195 200 205

Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys

210 215

<210> 13

<211> 419

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> EIgE恒定结构域

<400> 13

Val Ser Lys Gln Ala Pro Leu Ile Phe Pro Leu Ala Ala Cys Cys Lys

1 5 10 15

Asp Thr Lys Thr Thr Asn Ile Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr

20 25 30

Phe Pro Gly Ala Trp Asp Ala Gly Pro Leu Asn Pro Ser Thr Met Thr

35 40 45

Phe Pro Ala Val Phe Asp Gln Thr Ser Gly Leu Tyr Thr Thr Ile Ser

50 55 60

Arg Val Val Ala Ser Gly Lys Trp Ala Lys Gln Lys Phe Thr Cys Gly

65 70 75 80

Val Val His Ser Gln Glu Thr Phe Asn Lys Thr Phe Asn Ala Cys Ile

85 90 95

Val Thr Phe Thr Pro Pro Thr Val Lys Leu Phe His Ser Ser Cys Asp

100 105 110

Pro Gly Gly Asp Ser His Thr Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Ile Ser

115 120 125

Asp Tyr Thr Pro Gly Asp Ile Asp Ile Val Trp Leu Ile Glu Gly Gln

130 135 140

Lys Val Asp Glu Gln Phe Pro Thr Gln Ala Ser Met Lys Gln Glu Gly

145 150 155 160

Ser Trp Pro Pro Thr His Ser Glu Leu Asn Ile Asn Gln Gly Gln Trp

165 170 175

Ala Ser Glu Asn Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Lys Asp Met Ile

180 185 190

Phe Asn Gln Ala Arg Lys Cys Thr Glu Ser Asp Pro Pro Gly Val Ser

195 200 205

Val Tyr Leu Ser Pro Pro Ser Pro Leu Asp Leu Tyr Val Ser Lys Thr

210 215 220

Pro Lys Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Asn Val Gln Gly Leu

225 230 235 240

Ser Leu Asn Trp Ser Arg Glu Ser Gly Glu Pro Leu Gln Lys His Thr

245 250 255

Leu Ala Thr Ser Glu Gln Phe Asn Lys Thr Phe Ser Val Thr Ser Thr

260 265 270

Leu Pro Val Asp Thr Thr Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Lys Cys

275 280 285

Thr Val Ser His Pro Asp Leu Pro Arg Glu Val Val Arg Ser Ile Ala

290 295 300

Lys Ala Pro Gly Lys Arg Leu Ser Pro Glu Val Tyr Val Phe Leu Pro

305 310 315 320

Pro Glu Glu Asp Gln Ser Ser Lys Asp Lys Val Thr Leu Thr Cys Leu

325 330 335

Ile Gln Asn Phe Phe Pro Ala Asp Ile Ser Val Gln Trp Arg Arg Asn

340 345 350

Asn Val Leu Ile Gln Thr Asp Gln Gln Ala Thr Thr Arg Pro Gln Lys

355 360 365

Ala Asn Gly Pro Asp Pro Ala Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val

370 375 380

Ser Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asn Lys Phe Ala Cys Lys Val Val

385 390 395 400

His Glu Ala Leu Ser Gln Arg Thr Leu Gln Lys Glu Val Ser Lys Asp

405 410 415

Pro Gly Lys

<210> 14

<211> 426

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> cIgE恒定结构域

<400> 14

Thr Ser Gln Asp Leu Ser Val Phe Pro Leu Ala Ser Cys Cys Lys Asp

1 5 10 15

Asn Ile Ala Ser Thr Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Thr Gly Tyr

20 25 30

Leu Pro Met Ser Thr Thr Val Thr Trp Asp Thr Gly Ser Leu Asn Lys

35 40 45

Asn Val Thr Thr Phe Pro Thr Thr Phe His Glu Thr Tyr Gly Leu His

50 55 60

Ser Ile Val Ser Gln Val Thr Ala Ser Gly Lys Trp Ala Lys Gln Arg

65 70 75 80

Phe Thr Cys Ser Val Ala His Ala Glu Ser Thr Ala Ile Asn Lys Thr

85 90 95

Phe Ser Ala Cys Ala Leu Asn Phe Ile Pro Pro Thr Val Lys Leu Phe

100 105 110

His Ser Ser Cys Asn Pro Val Gly Asp Thr His Thr Thr Ile Gln Leu

115 120 125

Leu Cys Leu Ile Ser Gly Tyr Val Pro Gly Asp Met Glu Val Ile Trp

130 135 140

Leu Val Asp Gly Gln Lys Ala Thr Asn Ile Phe Pro Tyr Thr Ala Pro

145 150 155 160

Gly Thr Lys Glu Gly Asn Val Thr Ser Thr His Ser Glu Leu Asn Ile

165 170 175

Thr Gln Gly Glu Trp Val Ser Gln Lys Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr

180 185 190

Tyr Gln Gly Phe Thr Phe Lys Asp Glu Ala Arg Lys Cys Ser Glu Ser

195 200 205

Asp Pro Arg Gly Val Thr Ser Tyr Leu Ser Pro Pro Ser Pro Leu Asp

210 215 220

Leu Tyr Val His Lys Ala Pro Lys Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu

225 230 235 240

Ala Thr Met Glu Gly Met Asn Leu Thr Trp Tyr Arg Glu Ser Lys Glu

245 250 255

Pro Val Asn Pro Gly Pro Leu Asn Lys Lys Asp His Phe Asn Gly Thr

260 265 270

Ile Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Asn Thr Asn Asp Trp Ile Glu

275 280 285

Gly Glu Thr Tyr Tyr Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Lys Asp

290 295 300

Ile Val Arg Ser Ile Ala Lys Ala Pro Gly Lys Arg Ala Pro Pro Asp

305 310 315 320

Val Tyr Leu Phe Leu Pro Pro Glu Glu Glu Gln Gly Thr Lys Asp Arg

325 330 335

Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Gln Asn Phe Phe Pro Ala Asp Ile Ser

340 345 350

Val Gln Trp Leu Arg Asn Asp Ser Pro Ile Gln Thr Asp Gln Tyr Thr

355 360 365

Thr Thr Gly Pro His Lys Val Ser Gly Ser Arg Pro Ala Phe Phe Ile

370 375 380

Phe Ser Arg Leu Glu Val Ser Arg Val Asp Trp Glu Gln Lys Asn Lys

385 390 395 400

Phe Thr Cys Gln Val Val His Glu Ala Leu Ser Gly Ser Arg Ile Leu

405 410 415

Gln Lys Trp Val Ser Lys Thr Pro Gly Lys

420 425

<210> 15

<211> 496

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> fIgE恒定结构域

<400> 15

Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

20 25 30

Gln Met Thr Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala

35 40 45

Arg Gly Thr Gly Val Ile Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Leu Val

50 55 60

Thr Val Ser Ser Thr Ser Ile Gln Ala Pro Leu Val Phe Pro Leu Ala

65 70 75 80

Thr Cys Cys Lys Gly Thr Ile Ala Thr Ala Pro Ser Val Thr Leu Gly

85 90 95

Cys Leu Val Thr Gly Tyr Phe Pro Met Pro Val Thr Val Thr Trp Asp

100 105 110

Ala Arg Ser Leu Asn Lys Ser Val Val Thr Leu Pro Ala Thr Leu Gln

115 120 125

Glu Asn Ser Gly Leu Tyr Thr Thr Thr Ser His Val Thr Val Ser Gly

130 135 140

Glu Trp Ala Lys Gln Lys Phe Thr Cys Ser Val Ala His Ala Glu Ser

145 150 155 160

Pro Thr Ile Asn Lys Thr Val Ser Ala Cys Thr Met Asn Phe Ile Pro

165 170 175

Pro Thr Val Lys Leu Phe His Ser Ser Cys Asn Pro Leu Gly Asp Thr

180 185 190

Gly Ser Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Ile Ser Gly Tyr Val Pro Gly

195 200 205

Asp Met Glu Val Thr Trp Leu Val Asp Gly Gln Lys Ala Thr Asn Ile

210 215 220

Phe Pro Tyr Thr Ala Pro Gly Lys Gln Glu Gly Lys Val Thr Ser Thr

225 230 235 240

His Ser Glu Leu Asn Ile Thr Gln Gly Glu Trp Val Ser Gln Lys Thr

245 250 255

Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly Phe Thr Phe Glu Asp His Ala

260 265 270

Arg Lys Cys Thr Glu Ser Asp Pro Arg Gly Val Ser Thr Tyr Leu Ser

275 280 285

Pro Pro Ser Pro Leu Asp Leu Tyr Val His Lys Ser Pro Lys Ile Thr

290 295 300

Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Asn Thr Asp Gly Met Ile Leu Thr Trp

305 310 315 320

Ser Arg Glu Asn Gly Glu Ser Val His Pro Asp Pro Met Val Lys Lys

325 330 335

Thr Gln Tyr Asn Gly Thr Ile Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Asp

340 345 350

Ala Thr Asp Trp Val Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Lys Val Thr His

355 360 365

Pro Asp Leu Pro Lys Asp Ile Val Arg Ser Ile Ala Lys Ala Pro Gly

370 375 380

Arg Arg Phe Pro Pro Glu Val Tyr Val Phe Leu Pro Pro Glu Gly Glu

385 390 395 400

Pro Lys Thr Lys Asp Lys Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Gln Asn Phe

405 410 415

Phe Pro Pro Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Asp Ser Pro Val

420 425 430

Arg Thr Glu Gln Gln Ala Thr Thr Trp Pro His Lys Ala Thr Gly Pro

435 440 445

Ser Pro Ala Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Ser Arg Ala Asp

450 455 460

Trp Glu Gln Arg Asp Val Phe Thr Cys Gln Val Val His Glu Ala Leu

465 470 475 480

Pro Gly Phe Arg Thr Leu Lys Lys Ser Val Ser Lys Asn Pro Gly Lys

485 490 495

Claims (16)

1.一种免疫原性产品，其包含与载体蛋白缀合的至少一种免疫球蛋白或免疫球蛋白片段，其中至少一种免疫球蛋白是IgE，优选人IgE，并且其中IgE片段包含IgE Cε3结构域，并且其中载体蛋白优选是CRM₁₉₇。

2.根据权利要求1所述的免疫原性产品，其中所述免疫球蛋白片段包含部分或全部的IgE Cε3和Cε4结构域。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的免疫原性产品，其中所述免疫球蛋白片段包含部分或全部的IgE Cε2、Cε3和Cε4结构域。

4.根据权利要求1至3任一项所述的免疫原性产品，其中所述IgE或其片段包含G335C突变。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的免疫原性产品，其中所述IgE片段包含SEQ IDNO：7或由SEQ ID NO：7组成。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的免疫原性产品，其中所述IgE片段包含至少一个糖基化。

7.一种组合物，其包含根据权利要求1至6中任一项所述的免疫原性产品。

8.一种药物组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的免疫原性产品和至少一种药学上可接受的赋形剂。

9.一种疫苗组合物，其包含权利要求1至6中任一项所述的免疫原性产品和至少一种佐剂。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的组合物、药物组合物或疫苗组合物，其为乳剂。

11.一种用于生产根据权利要求1至6中任一项所述的免疫原性产品的方法，该方法包括以下步骤：

a)使免疫球蛋白或其片段与含有NHS-酯的异双功能交联剂，优选N-[γ-马来酰亚胺丁酰氧基]-琥珀酰亚胺酯(sGMBS)接触，从而获得含有NHS-酯的异双功能交联剂与免疫球蛋白或其片段之间的复合物，优选sGMBS-免疫球蛋白或其片段复合物；

b)使载体蛋白与含有NHS-酯的异双功能交联剂，优选N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基硫代乙酸酯(SATA)接触，以产生含有NHS-酯的异双功能交联剂和载体之间的复合物，优选载体-SATA复合物；

c)使含有NHS-酯的异双功能交联剂与免疫球蛋白或其片段之间的复合物，优选步骤(a)中获得的sGMBS-免疫球蛋白或其片段复合物与含有NHS-酯的异双功能交联剂与载体之间的复合物，优选在步骤(b)中获得的载体-SATA复合物接触。

12.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫原性产品，其用作药物。

13.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫原性产品或根据权利要求7至10中任一项所述的组合物、药物组合物或疫苗组合物，其用于治疗炎性病症，优选地，其中所述炎性病症与异常的IgE表达或活性相关。

14.根据权利要求13所述的免疫原性产品或组合物，其中所述炎性病症选自哮喘、变应性病况(例如食物过敏、毒液过敏、对动物过敏、药物过敏、高IgE综合征、变应性鼻炎、变应性结膜炎和变应性肠胃炎)、过敏反应、特应性病症(例如荨麻疹(包括慢性特发性荨麻疹和慢性自发性荨麻疹)、湿疹)、大疱性类天疱疮、呼吸系统病症(如哮喘、变应性支气管肺曲霉病、变应性支气管肺真菌病)、鼻息肉病和其他涉及气道炎症的病况(例如，嗜酸性粒细胞增多、纤维化和过量粘液产生，包括囊性纤维化、系统性硬化症(SSc))；炎性和/或自身免疫性病症或病况、胃肠病症或病况(例如炎性肠病(IBD)和嗜酸细胞性食管炎(EE)，以及嗜酸性粒细胞介导的胃肠道疾病、溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)；系统性红斑狼疮；肥大细胞增多症和肥大细胞活化综合征(MCAS)。

15.根据权利要求13或权利要求14所述的免疫原性产品或组合物，其中所述炎性病症选自变态反应、过敏反应、变应性哮喘、变应性鼻炎、变应性结膜炎、鼻息肉病，优选地，其中所述炎性病症是食物或毒液过敏。

16.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫原性产品或根据权利要求7至10中任一项所述的组合物、药物组合物或疫苗组合物，其用于诱导对特定抗原过敏的受试者脱敏，其中将向过敏受试者施用所述免疫原性产品或组合物和所述特定抗原。