CN116600830A - 缀合的tlr7和nod2激动剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了TLR7和NOD2激动剂的共价缀合物、制备此类化合物的方法以及此类化合物在药物中的用途。

Description

缀合的TLR7和NOD2激动剂
技术领域
本发明提供了TLR7和NOD2激动剂的共价缀合物(conjugate)、它们的制备方法和它们在治疗性应用中的用途。
背景技术
先天免疫系统是人体抗感染能力的基石，由APC组成，特别是树突状细胞(DC)，其中含有一系列模式识别受体(PRR)，包括Toll样受体(TLR)、核苷酸-结合寡聚化结构域(NOD)样受体(NLR)、视黄酸诱导型基因-1-样受体(RLR)、C型凝集素受体(CLR)和干扰素基因刺激物(STING)。它们被称为病原体相关分子模式(PAMP)的多种免疫刺激分子激活，这些分子通过炎性细胞因子、干扰素(IFN)和共刺激分子使DC更有效地摄取和呈递抗原，并提供确定适应性反应的类型的不可或缺的初始信号，如细胞(Th1)或体液(Th2)反应，以及它的强度和持久性(Gutjahr et al.2016)。
NOD2是NLR家族的一种细胞内PRR，在免疫细胞中广泛表达，可识别类似于胞壁酰二肽(MDP)的细菌肽聚糖片段(Jakopin 2014)。刺激NOD2可激活核因子κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路，从而导致促炎细胞因子的产生、I型IFN的分泌和共刺激分子的表达。重要的是，NOD2激动剂触发DC的成熟和激活(Asano et al.2010,Vidal etal.2001)。NOD2激动剂也被证明诱导自噬(Cooney et al.2010,Travassos et al.2010)，这是诱导有效抗原交叉呈递和促进DC中先天细胞因子产生的关键(Morris et al.2011)。因此，尽管NOD激活本身不是最有效的先天免疫诱导剂，但它对于形成适应性免疫反应是必不可少的(Kobayashi etal.2005)。值得注意的是，B细胞中的NLR表达是最佳体液反应所必需的。NOD参与多种免疫机制，使其成为疫苗佐剂的绝佳靶标；最近强调了它们在癌症疫苗中的用途(Nabergoj et al.2019)。具体地，NOD2的参与被证明对于粘膜疫苗的抗原特异性粘膜和全身反应至关重要(Bumgardner etal.2018,Jackson et al.2012)。之前的工作确定了NOD2激动剂的基本结构要求，最终发现了低纳摩尔的NOD2激动剂，可与其它分子共价偶联(Jakopin et al.2012,Gobec et al.2016,2018)。
TLR7是一种细胞内核内体受体，可检测单链RNA并且随后诱导通过IRF7和NF-κB介导的信号通路。在人类中，TLR7主要在类浆细胞DC中表达并且其激活会诱导IFNα和IL-12的产生，从而启动邻近的NK、T细胞和DC。IFN-α增强NK细胞的细胞毒性潜力，而IL-12增强NK细胞的IFN-γ分泌。TLR7还有助于DC的成熟和分化，产生具有更好共刺激能力和增强的抗原呈递能力的DC(Kobold et al.2014)。已经确定了多种小分子TLR7激动剂，包括咪唑并喹啉、嘌呤和3-脱氮杂嘌呤(Hemmi et al.2002,Lee et al.2003,Jones et al.2011)。咪喹莫特是咪唑并喹啉类的原型成员，当作为局部乳膏使用时可有效对抗生殖器疣、基底细胞癌和光化性角化病。在嘌呤类中，2-取代的8-羟基腺嘌呤被发现是有效的TLR7激动剂(Kurimoto et al.2004,2010)，并且能够与其它分子共价缀合(Akinbobuyi et al.2016)。具有嘌呤样结构的TLR7激动剂及其在药物中的用途的附加公开包括：Tran et al.2011、Nakamura et al.2013、Akinbobuyi et al.2015、WO2006/117670、WO2007/024707、WO2008/004948、WO2010/093436、WO2010/018134、WO2011/134668、WO2012/038058、WO2019/209811、WO2019/035969、WO2019/036023、WO2019/035971、WO2019/197598。
同时激活不同的PRR(交叉激活)允许信号放大，实现刺激的整合并促进微调(指导响应的极化)(Thaiss et al.2016)。多个PRR之间的串扰在数量和质量上都可以不同于每个单独途径的贡献。有效的减毒活疫苗通过多个独立的PRR的协同刺激来参与免疫系统，以实现全身反应。此外，共价连接的嵌合双重/三重PRR激动剂相对于其非缀合混合物显示出协同免疫刺激活性(Tom et al.2019)。
大量研究报道，通过酯键和酰胺键缀合多种PRR激动剂会影响它们的效力、毒性或药代动力学。TLR激动剂一直处于佐剂开发的前沿，因为它们被良好的表征并且可以引发强烈的Th1反应，这是许多疫苗所缺乏的。已报道了双TLR激动剂，包括TLR2/TLR9(Mancini etal.2014)、TLR4/9(Madan-Lala et al.2017)、TLR2/TLR7(Gutjahr et al.2017)。通过连接TLR2和TLR7激动剂构建的嵌合配体引发了有效且平衡的细胞和体液反应(Gutjahr etal.2017)。这种缀合物也被证明比等量的单个激动剂更加安全。也就是说，由未缀合的激动剂的混合物组成的佐剂可以很容易地通过免疫系统扩散。类似地，双重NOD2/TLR2激动剂增加了HIV-1亚单位疫苗的免疫原性(Pavot et al.2014)。
鉴于缀合的NLR/TLR激动剂的巨大治疗潜力，并且尽管已经完成了工作，但仍持续需要能够引起上述受体反应的新型强效化合物。因此，本说明书公开了同时用作TLR7激动剂和NOD2激动剂的新型缀合化合物、它们的制备方法和它们在药物中的用途。
发明内容
根据本发明的目的，如本文所体现和描述的，本申请公开了新型化合物，其是与合成NOD2激动剂共价缀合的合成TLR7激动剂。进一步提供了此类化合物的制备方法及此类化合物在药物中的用途。
在第一方面，本发明提供了一种式I的化合物：
或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药，其中：
·R1为H、卤素、OH、SH、CF3、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基、C5-C9杂环基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基-(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)SO2NH-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、RaRbN-或RaRbN(C＝O)-，其中烷基、烷氧基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；
·R2每次出现时独立地选自H、卤素、OH、CHF2、CF3、CH2CF2、羧基、CN、NO2、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C6-C10芳基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、(C1-C6烷基)SO2NH-、RaRbN-和RaRbN(C＝O)-，其中烷基、烷氧基、芳基和环烷基可以任选地被取代；
·Ra和Rb彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Ra和Rb可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中烷基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；优选地，Ra和Rb彼此独立地选自H、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Ra和Rb可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中烷基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；
·X1为单键、-O-、-S-、-NRc-、-C(＝O)-或-SO2-；
·Rc为H、C1-C6烷基或C3-C10环烷基；
·L为连接基团；
·n为0、1、2、3或4；并且
·R3为选自由以下组成的组的NOD2激动剂：
其中：
·X2为单键、-O-、-S-、-NRd-、-C(＝O)-或-SO2-；
·Rd为H、C1-C6烷基或C3-C10环烷基；
·X3为-(CH2)2-、-(CH＝CH)-或亚环丙基；
·R4每次出现时独立地选自H、卤素、OH、CHF2、CF3、CH2CF2、羧基、CN、NO2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C10环烷基、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C1-C6芳基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、(C1-C6烷基)SO2NH-、ReRfN-和ReRfN(C＝O)-，其中烷基、烷氧基、芳基和环烷基可以任选地被取代；
·Re和Rf彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Re和Rf可以与氮原子一起形成C5-C6杂环；
·R5为C1-C6烷基或氨基酸的特定侧链；
·R6每次出现时独立地选自OH、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-、(C5-C9杂环基)O-和RgRhN-，其中烷氧基、烯基、环烷基、芳基或杂环基可以任选地被取代；并且
·Rg和Rh彼此独立地选自H、C1-C18烷基、C2-C18烯基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Rg和Rh可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中烷基、烯基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代。
在进一步的方面，本发明提供一种用于制备式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药的方法和中间体。
在进一步的方面，本发明提供一种用于在疗法中使用的式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药。
在进一步的方面，本发明提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药，以及药学上可接受的赋形剂或载体。
在进一步的方面，本发明提供式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药在治疗TLR7和NOD2受体的激动作用有益的病症中的用途。
在进一步的方面，本发明提供式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药在制备药物中的用途。
在进一步的方面，本发明提供了一种用于治疗有此需要的受试者的方法，包括向该受试者施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药，或本发明的药物组合物。
在进一步的方面，本发明提供一种疫苗，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药。
本发明可以进一步归纳为以下项：
1.一种具有根据式I的结构的化合物，
或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药，其中：
·R1为H、卤素、OH、SH、CF3、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基、C5-C9杂环基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基-(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)SO2NH-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、RaRbN-或RaRbN(C＝O)-，其中烷基、烷氧基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；
·R2每次出现时独立地选自H、卤素、OH、CHF2、CF3、CH2CF2、羧基、CN、NO2、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C6-C10芳基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、(C1-C6烷基)SO2NH-、RaRbN-和RaRbN(C＝O)-，其中烷基、烷氧基、芳基和环烷基可以任选地被取代；
·Ra和Rb彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Ra和Rb可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中烷基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；优选地，Ra和Rb彼此独立地选自H、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Ra和Rb可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中烷基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；
·X1为单键、-O-、-S-、-NRc-、-C(＝O)-或-SO2-；
·Rc为H、C1-C6烷基或C3-C10环烷基；
·L为连接基团；
·n为0、1、2、3或4；并且
·R3为选自由以下组成的组的NOD2激动剂：
其中：
·X2为单键、-O-、-S-、-NRd-、-C(＝O)-或-SO2-；
·Rd为H、C1-C6烷基或C3-C10环烷基；
·X3为-(CH2)2-、-(CH＝CH)-或亚环丙基；
·R4每次出现时独立地选自H、卤素、OH、CHF2、CF3、CH2CF2、羧基、CN、NO2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C10环烷基、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C1-C6芳基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、(C1-C6烷基)SO2NH-、ReRfN-和ReRfN(C＝O)-，其中烷基、烷氧基、芳基和环烷基可以任选地被取代；
·Re和Rf彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Re和Rf可以与氮原子一起形成C5-C6杂环；
·R5为C1-C6烷基或氨基酸的特定侧链；
·R6每次出现时独立地选自OH、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-、(C5-C9杂环基)O-和RgRhN-，其中烷氧基、烯基、环烷基、芳基或杂环基可以任选地被取代；并且
·Rg和Rh彼此独立地选自H、C1-C18烷基、C2-C18烯基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Rg和Rh可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中烷基、烯基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代。
2.根据项1的化合物，其中n为1。
3.根据项1或2的化合物，其中R1为氢、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)NH、C1-C6烷氧基-(C1-C6烷基)NH、(C1-C6烷基)S-或CF3；优选地，R1为氢、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)S或CF3。
4.根据项1至3中任一项的化合物，其中R1为C1-C6烷氧基或C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基。
5.根据项1至3中任一项的化合物，其中R1为C1-C6烷氧基。
6.根据项1至3中任一项的化合物，其中R1为C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基。
7.根据项1至3中任一项的化合物，其中R1为n-BuO-。
8.根据项1至7中任一项的化合物，其中R2在每种情况下独立地选自氢、卤素和C1-C6烷基。
9.根据项8的化合物，其中R2在每种情况下是氢。
10.根据项1至9中任一项的化合物，其中X1为-O-、-NH-或-C(＝O)-。
11.根据项1至9中任一项的化合物，其中X1为-C(＝O)-。
12.根据项1至11中任一项的化合物，其中X1相对于(CH2)n基团处于对位。
13.根据项1至12中任一项的化合物，其中L选自由氨基酸、肽、非肽聚合物接头(non-peptidic polymeric linker)和非聚合物脂肪族接头(non-polymeric aliphaticlinker)组成的组。
14.根据项13的化合物，其中L是非肽聚合物接头或非聚合物脂肪族接头。
15.根据项14的化合物，其中L是包含2至100个重复乙二醇单元的聚乙二醇链。
16.根据项14的化合物，其中L是包含2至50个重复乙二醇单元的聚乙二醇链。
17.根据项14的化合物，其中L是包含2至20个重复乙二醇单元的聚乙二醇链。
18.根据项14的化合物，其中L是包含2、3、4、5、6、7、8、9或10个重复乙二醇单元的聚乙二醇链。
19.根据项13的化合物，其中L是非聚合物脂肪族接头。
20.根据项1至19中任一项的化合物，其中R3是
21.根据项1至20中任一项的化合物，其中X2为-O-。
22.根据项1至21中任一项的化合物，其中X2相对于X3基团处于对位。
23.根据项1至19中任一项的化合物，其中R3是
24.根据项1至19中任一项的化合物，其中R3是
25.根据项1至24中任一项的化合物，其中X3为-CH＝CH-或亚环丙基。
26.根据项1至25中任一项的化合物，其中R4在每种情况下独立地选自氢、卤素、OH、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。
27.根据项1至26中任一项的化合物，其中R4在每种情况下独立地选自氢、卤素、OH和C1-C6烷氧基。
28.根据项1至27中任一项的化合物，其中R4是相对于X3基团处于间位的C1-C6烷氧基、相对于X3基团处于对位的OH和在其它情况下是H。
29.根据项1至28中任一项的化合物，其中R4是相对于X3基团处于间位的甲氧基、相对于X3基团处于对位的OH和在其它情况下是H。
30.根据项1至27中任一项的化合物，其中R4是相对于X3基团处于间位的氟、相对于X3基团处于对位的氟和在其它情况下为H。
31.根据项1至30中任一项的化合物，其中R5为C1-C6烷基或天然氨基酸的特定侧链。
32.根据项1至31中任一项的化合物，其中R5是天然氨基酸的特定侧链。
33.根据项1至31中任一项的化合物，其中R5为C1-C6烷基或者缬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸的特定侧链。
34.根据项1至33中任一项的化合物，其中R5是缬氨酸的特定侧链。
35.根据项1至34中任一项的化合物，其中R6在每种情况下独立地选自OH、NH2、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-和C1-C18烷氧基。
36.根据项1至35中任一项的化合物，其中R6在每种情况下独立地选自OH、NH2、(C2-C10烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-和C1-C10烷氧基。
37.根据项1至36中任一项的化合物，其中R6在每种情况下独立地选自OH、NH2、(C2-C6烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-和C1-C6烷氧基。
38.根据项1至35中任一项的化合物，其中R6在每种情况下独立地选自OH、(C3-C10环烷基)O-和C1-C18烷氧基。
39.根据项1至38中任一项的化合物，其中R6在每种情况下独立地选自OH、(C3-C5环烷基)O-和C1-C6烷氧基。
40.根据项1至38中任一项的化合物，其中R6在每种情况下独立地选自OH和C1-C6烷氧基。
41.根据项1至38中任一项的化合物，其中R6在每种情况下独立地选自(C3-C5环烷基)O-和C1-C6烷氧基。
42.根据项1至38中任一项的化合物，其中R6在每种情况下独立地选自OH和(C3-C5环烷基)O-。
43.根据项1至39中任一项的化合物，其中R6在每种情况下是OH。
44.根据项1至39中任一项的化合物，其中R6在每种情况下为C1-C6烷氧基。
45.根据项1至39中任一项的化合物，其中R6在每种情况下为乙氧基。
46.根据项1至39中任一项的化合物，其中R6在每种情况下是(C3-C10环烷基)O-。
47.根据项1至39中任一项的化合物，其中R6在每种情况下是(C3-C5环烷基)O-。
48.根据项1至39中任一项的化合物，其中R6在每种情况下是(C5环烷基)O-。
49.根据项1至48中任一项的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
((E)-3-(4-((6-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)己酰基)-氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯、
N5-(2-(2-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)-N2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酰胺乙酯、
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯、
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(4-异丙基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯、
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(3,4-二氟苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯、
(15R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯、
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((S)-2-(2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯、
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((S)-2-(2-肉桂酰胺基乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯、
(13R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯、
((E)-3-(4-(1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰胺基)苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯、
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二环戊酯、
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯、
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯、和
1-苄基5-乙基((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯。
50.根据项1至48中任一项的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的组：
((E)-3-(4-((6-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)己酰基)-氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯、
N5-(2-(2-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)-N2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酰胺乙酯、以及
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯。
51.一种制备如项1至50中任一项定义的式I的化合物(可变基团如项1至50中任一项所定义)的方法，其包括使式V的化合物与式VI的化合物反应：
或使式VII的化合物与式VIII的化合物、式IX的化合物或式X的化合物反应，
以及任选地之后进行以下程序中的一个或多个：
·去除任何保护基团，
·形成药学上可接受的盐，
·将式I的化合物转化为另一种式I的化合物。
52.根据项1至50中任一项的化合物，用于在药物中使用。
53.根据项1至50中任一项的化合物，用于在治疗其中TLR7和NOD2受体的激动作用有益的病症中使用。
54.根据项53的用于使用的化合物，其中病症选自由病毒感染、细菌感染、真菌感染、原虫感染、肿瘤、癌症和免疫性疾病组成的组。
55.一种药物组合物，其包含根据项1至50中任一项的化合物以及一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。
56.一种疫苗，包含根据项1至50中任一项的化合物。
附图说明
图1展示了本发明的化合物(SG48、SG144、RH32)激活PBMC对抗MEC-1癌细胞系的细胞毒活性的能力。测试化合物的浓度为1μM。结果表示为相对于对照(培养基)的比率。使用中间化合物SG8、SG43及其未缀合的混合物将本发明的化合物分别与NOD2激动剂、TLR7激动剂及其未缀合的混合物进行比较。
图2展示了本发明的化合物(SG48、SG144、RH32)激活PBMC对抗K562癌细胞系的细胞毒活性的能力。测试化合物的浓度为1μM。结果表示为相对于对照(培养基)的比率。使用中间化合物SG8、SG43及其未缀合的混合物将本发明的化合物分别与NOD2激动剂、TLR7激动剂及其未缀合的混合物进行比较。
图3展示了本发明的化合物(SG48、SG144、RH32)促进BMDC抗原呈递给CD4阳性T-淋巴细胞的能力。测试化合物的浓度为100nM。结果表示为具有低CFSE荧光的CD25阳性T-淋巴细胞的比率。将培养基用作阴性对照。将LPS(1μg/mL)用作阳性对照。使用中间化合物SG8、SG43及其未缀合的混合物将本发明的化合物分别与NOD2激动剂、TLR7激动剂及其未缀合的混合物进行比较。
图4展示了本发明的化合物(SG48、SG144、RH32)促进BMDC抗原呈递给CD8阳性T-淋巴细胞的能力。测试化合物的浓度为100nM。结果表示为具有低CFSE荧光的CD25阳性T-淋巴细胞的比率。将培养基用作阴性对照。将LPS(1μg/mL)用作阳性对照。使用中间化合物SG8、SG43及其未缀合的混合物将本发明的化合物分别与NOD2激动剂、TLR7激动剂及其未缀合的混合物进行比较。
图5展示了本发明化合物(SG48、SG144)促进BMDC抗原呈递给CD4阳性T-淋巴细胞的剂量依赖性能力。结果表示为具有低CFSE荧光的CD25阳性T-淋巴细胞的比率。
图6展示了本发明化合物(SG48、SG144)促进BMDC抗原呈递给CD8阳性T-淋巴细胞的剂量依赖性能力。结果表示为具有低CFSE荧光的CD25阳性T-淋巴细胞的比率。
图7A-7G展示了响应于用本发明的化合物(SG144)预处理的BMDC的卵清蛋白呈递，IL-2(图7A)、IL-4(图7B)、IL-6(图7C)、IL-10(图7D)、IL-17A(图7E)、IFN-γ(图7F)和TNF(图7G)的CD4+和CD8+T-淋巴细胞分泌。将培养基用作阴性对照。将LPS(1μg/mL)用作阳性对照。使用中间化合物SG8、SG43及其未缀合的混合物将本发明的化合物分别与NOD2激动剂、TLR7激动剂及其未缀合的混合物进行比较。
具体实施方式
定义
贯穿本说明书和所附权利要求，词语“包含(comprise)”和诸如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”等变型应解释为包含性的。也就是说，在上下文允许的情况下，这些词语旨在传达可能包含未具体列举的其它要素或整数。
“Ci-Cj烷基”是指包含i至j个碳原子的线性或支化烷基。烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、戊基和己基。
“Ci-Cj烷氧基”是指与氧原子连接的如上所定义的Ci-Cj烷基。烷氧基的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基。
“Ci-Cj烯基”是指包含i至j个碳原子且含有至少一个碳-碳双键的线性或支化烃基。不对称结构旨在包括所有位置和几何异构体。烯基的非限制性实例包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁-2-烯基和丁-3-烯基。
“Ci-Cj炔基”是指包含i至j个碳原子且含有至少一个碳-碳三键的线性或支化烃基。炔基的非限制性实例包括乙炔基、丙-2-炔基和丁-2-炔基。
“Ci-Cj芳基”是指包含i至j个碳原子的单环或双环芳香族碳基基团。芳基的非限制性实例包括苯基和萘基。
“Ci-Cj环烷基”是指完全饱和或部分不饱和的包含i至j个碳原子的单环、双环或三环非芳香族碳基基团。环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
“Ci-Cj杂环”是指包含i至j个原子的由一个或多个环组成的饱和、部分饱和或不饱和环，其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其中环硫原子可以任选地氧化成S-氧化物，环氮可以任选地氧化成N-氧化物，环氮可以任选地季铵化并且-CH2-基团可以任选地被-C(＝O)-替换。杂环的非限制性实例包括吡咯烷、吡咯、呋喃、噻吩、哌啶、吡啶、吡啶-N-氧化物、吡喃、吗啉、哌嗪、嘧啶、吡唑、咪唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、苯并咪唑、苯并噁唑、吲哚、异吲哚、二氢吲哚、苯并三唑和喹啉。
“Ci-Cj杂环基”是指包含i至j个原子的由一个或多个环组成的饱和、部分饱和或不饱和的环状基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其中环硫原子可以任选被氧化成S-氧化物，环氮可以任选被氧化成N-氧化物，环氮可任选被季铵化并且-CH2-基团可以任选被-C(＝O)-替代。杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、吡啶基、吡喃基、吗啉基、哌嗪基、嘧啶基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、苯并三唑基和喹啉基。
“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴或碘。
本文所用的术语“羧基(carboxy)”或“羧基(carboxyl)”是指-COOH基团。
“氨基酸的特定侧链”是指具有通式H2NCHRCOOH的氨基酸的R基团。这包括但不限于天然氨基酸(精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸)以及非天然氨基酸(如高丝氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸、磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、磷酸酪氨酸、异缬氨酸、异丝氨酸、别苏氨酸或羟脯氨酸)的L和D异构体。
如本文所用，术语“肽”指氨基酸聚合物，其中每个氨基酸通过酰胺键-C(＝O)NH-(也称为肽键)连接至其相邻氨基酸。
本文所用的术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适用于与人类和动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的收益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的盐，其不会消除游离碱或游离酸的生物有效性并且保留了游离碱或游离酸的特性，这些特性在生物学上或其它方面都不是不受欢迎的。当化合物具有一个或多个碱性基团时，可通过使中性形式的此类化合物与足量的所需酸(纯净的或在合适的惰性溶剂中)接触而获得酸加成盐。可以用与诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸或诸如乙酸、酒石酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苯甲酸、肉桂酸、甲磺酸、乳酸、马来酸、富马酸、琥珀酸等有机酸来形成盐。当化合物具有一个或多个酸性基团时，可通过添加有机或无机碱形成盐。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐和锌盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺、取代胺、环胺、天然存在的胺等的盐，如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、乙醇胺、赖氨酸、精氨酸、哌啶、哌嗪、胆碱、甜菜碱、咖啡因、胆碱等的盐。本发明的某些特定化合物含有碱性和酸性官能团，使化合物可以转化为碱加成盐或酸加成盐。优选的药学上可接受的盐是钠盐。
不视为是药学上可接受的其它盐可用于制备式I的化合物并且包括在本发明的范围内，如用氨和三氟乙酸形成的那些。
“药学上可接受的酯”是指式I的化合物可以在羧基或羟基基团上衍生化以提供能够在体内转化回母体化合物的衍生物。这种化合物的例子包括生理上可接受的且代谢不稳定的酯衍生物，如甲氧基甲基酯、甲硫基甲基酯和新戊酰氧基甲基酯。此外，式I的化合物的任何生理上可接受的等同物，类似于代谢不稳定的酯，其能够在体内产生式I的母体化合物，均在本发明的范围内。
本文所用的术语“任选取代的”是指可以或可以不被一个或多个基团(优选1、2、3或4个基团，更优选1或2个基团)进一步取代的基团。允许的取代基包括但不限于OR、SR、NR2、CN、NO2、卤素、氧代、羧基、CF3、CH2CF3、CHF2、OCF3、OCHF2、＝NR、＝N、＝NOR、＝N-CN、-C(＝O)NR2、-NRC(＝O)R、-C(＝O)R、-OC(＝O)R、-C(＝O)OR、-NRC(＝O)OR、-SO2R、-SO2NR2、-NRSO2R、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基，其中每个R为H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基或C5-C9杂环基并且其中每个烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基和杂环基以及含有它们的基团可以进一步任选地被取代，例如被选自OR、SR、NR2、CN、NO2、卤素、氧代、羧基、CF3、CH2CF3、CHF2、OCF3、OCHF2、＝NR、＝N、＝NOR、＝N-CN、-C(＝O)NR2、-NRC(＝O)R、-C(＝O)R、-OC(＝O)R、-C(＝O)OR、-NRC(＝O)OR、-SO2R、-SO2NR2和-NRSO2R中的一个或多个基团(优选1、2、3或4个基团，更优选1或2个基团)取代。
本文所用的术语“施用”是指向受试者肠胃外、静脉内、腹膜内、肌内、肿瘤间、病灶内、鼻内、皮下或口服施用、作为栓剂施用、局部接触、鞘内施用、或植入缓释装置，如微型渗透泵。
如本文所用，术语“受试者”是指动物或人体。
本文所用的术语“激动剂”是指受体的天然配体、其类似物或类似地“激活”受体的其它配体和/或受体的正调节剂。
NOD2激动剂是具有激活NOD2受体功能的任何化合物。
TLR7激动剂是具有激活TLR7受体功能的任何化合物。
本文所用的术语“治疗有效量”是指会在动物或人体中引发所需生物学反应的式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药的量。
本文所用的术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”包括(i)防止病理病症的发生；(ii)抑制病理病症或阻止其发展；(iii)减轻病理病症和/或减少与病理病症相关的症状。
“药物组合物”是指一种或多种活性成分和一种或多种惰性成分，以及直接或间接来自任何两种或更多种成分的组合、复合或聚集、或来自一种或多种成分的解离、或来自一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用产生的任何产物。因此，本发明的药物组合物包括通过混合本发明的化合物和药学上可接受的赋形剂(药学上可接受的载体)制备的任何组合物。
“赋形剂”是指与治疗剂一起施用的化合物，例如缓冲剂、等渗性改性剂、防腐剂、稳定剂、抗吸附剂或其它辅助剂。然而，在某些情况下，一种赋形剂可能具有双重或三重功能。
本领域技术人员将理解，本文描述的某些化合物含有一个或多个手性中心。因此，这些化合物可以以光学活性和外消旋形式存在和分离。一些化合物可能表现出多晶型。本文所指的多晶型物包括结晶和无定形形式。应当理解的是，本发明包括本发明化合物的任何外消旋、光学活性、多晶型或立体异构形式或其混合物，其具有本文所述的有用性质，本领域已知如何制备光学活性形式(例如，通过重结晶技术拆分外消旋形式、通过从光学活性原料合成、通过立体选择性合成、通过酶促拆分、通过生物转化或通过使用手性固定相的色谱分离)。
除盐形式外，本发明还提供了前药形式的化合物。本文所述化合物的前药是在生理条件下容易进行化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。例如，前药包括本发明的化合物，其中羟基、胺基或羧基与任何基团键合，当对受试者施用时，该基团裂解形成羟基、胺基或羧基。此外，前药可以在离体环境中通过化学或生化方法转化为本发明的化合物。例如，当将前药置于含有合适酶或化学试剂的透皮贴剂储库中时，前药可缓慢转化为本发明的化合物。前药可以改善母体药物的物理性质和/或它还可以改善整体药物功效，例如通过控制药物的吸收、血液水平、代谢分布和细胞摄取来降低药物的毒性和不良作用。
在本发明中，应当理解的是，式I的化合物或其盐可能表现出互变异构现象，并且本说明书中的式绘制只能代表一种可能的互变异构形式。应当理解的是，本发明包括具有本文所述有用特性的任何互变异构形式，并且不仅仅限于在式绘制中使用的任何一种互变异构形式。本说明书中的式绘制只能代表一种可能的互变异构形式，并且应理解的是，本说明书涵盖所绘制的化合物的所有可能的互变异构形式，而不仅仅是可能在本文中以图形方式显示的那些形式。
特别地，式Ia的化合物是式Ib的化合物的互变异构体。
通常，为了一致性和方便起见，互变异构结构在本文中以烯醇形式表示。
还应当理解的是，某些式I的化合物及其盐可以以溶剂化以及非溶剂化形式存在，诸如，例如水合形式。应当理解的是，本发明包括具有本文所述有用性质的所有此类溶剂化形式。
在本说明书的式绘制中，两个碳原子之间穿过芳环的键表示附接的基团可以位于芳环上的任何位置，通过去除隐含在那里的氢原子而变得可获得。举例来说，式
代表了
在另一个示例中，式
代表了
NOD2和TLR7激动剂的缀合物
本发明的第一方面是式I的缀合化合物：
或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药，其中：
·R1为H、卤素、OH、SH、CF3、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基、C5-C9杂环基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基-(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)SO2NH-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、RaRbN-或RaRbN(C＝O)-，其中烷基、烷氧基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；
·R2每次出现时独立地选自H、卤素、OH、CHF2、CF3、CH2CF2、羧基、CN、NO2、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C6-C10芳基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、(C1-C6烷基)SO2NH-、RaRbN-和RaRbN(C＝O)-，其中烷基、烷氧基、芳基和环烷基可以任选地被取代；
·Ra和Rb彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Ra和Rb可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中烷基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；优选地，Ra和Rb彼此独立地选自H、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Ra和Rb可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中烷基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；
·X1为单键、-O-、-S-、-NRc-、-C(＝O)-或-SO2-；
·Rc为H、C1-C6烷基或C3-C10环烷基；
·L为连接基团；
·n为0、1、2、3或4；并且
·R3是选自由以下组成的组的NOD2激动剂：
其中：
·X2为单键、-O-、-S-、-NRd-、-C(＝O)-或-SO2-；
·Rd为H、C1-C6烷基或C3-C10环烷基；
·X3为-(CH2)2-、-(CH＝CH)-或亚环丙基；
·R4每次出现时独立地选自H、卤素、OH、CHF2、CF3、CH2CF2、羧基、CN、NO2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C10环烷基、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C1-C6芳基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、(C1-C6烷基)SO2NH-、ReRfN-和ReRfN(C＝O)-，其中烷基、烷氧基、芳基和环烷基可以任选地被取代；
·Re和Rf彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Re和Rf可以与氮原子一起形成C5-C6杂环；
·R5为C1-C6烷基或氨基酸的特定侧链；
·R6每次出现时独立地选自OH、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-、(C5-C9杂环基)O-和RgRhN-，其中烷氧基、烯基、环烷基、芳基或杂环基可以任选地被取代；并且
·Rg和Rh彼此独立地选自H、C1-C18烷基、C2-C18烯基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基或Rg和Rh可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中烷基、烯基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代。
在一个实施方式中，本发明提供了式I的化合物的子集，式Ic的化合物：
或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药，其中R1、R2、R4、R5、R6、X1、X2、X3、L和n如之前所定义。
在另一实施方式中，本发明提供了式I化合物的子集，式Id的化合物：
或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药，其中R1、R2、R4、R5、R6、X1、X3、L和n如之前所定义。
在另一实施方式中，本发明提供式I化合物的子集，式Ie的化合物：
或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、X1、X3、L和n如之前所定义。
根据某些实施方式，n是1或2。
根据某些实施方式，n是1。
根据某些实施方式，R1为氢、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)NH、C1-C6烷氧基-(C1-C6烷基)NH、(C1-C6烷基)S-或CF3。
根据某些实施方式，R1为氢、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)S-或CF3。
根据某些实施方式，R1为C1-C6烷氧基或C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R1为C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R1为正丁氧基。
根据某些实施方式，R1为C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R1为CH2O(CH2)2O-。
根据某些实施方式，R2每次出现时独立地选自H、卤素或C1-C6烷基。
根据某些实施方式，R2在每种情况下都是H。
根据某些实施方式，X1为-O-、-NH-或-C(＝O)-。
根据某些实施方式，X1为-C(＝O)-。
根据某些实施方式，X1相对于(CH2)n基团处于对位。
根据某些实施方式，X2为-O-、-NH-或-C(＝O)-。
根据某些实施方式，X2为-O-。
根据某些实施方式，X2相对于X3基团处于对位。
根据某些实施方式，X3为-CH＝CH-或亚环丙基。
根据某些实施方式，X3为-CH＝CH-。
根据某些实施方式，X3为亚环丙基。
根据某些实施方式，R4在每种情况下独立地选自氢、卤素、OH、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R4在每种情况下独立地选自氢、OH和C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R4是相对于X3基团处于间位的C1-C6烷氧基、相对于X3基团处于对位的OH且在其它情况下是H。
根据某些实施方式，R4是相对于X3基团处于间位的甲氧基、相对于X3基团处于对位的OH且在其它情况下是H。
根据某些实施方式，R4是相对于X3基团处于对位的异丙基且在其它情况下是H。
根据某些实施方式，R4在每种情况下都是H。
根据某些实施方式，R4是相对于X3基团处于间位的氟、相对于X3基团处于对位的氟且在其它情况下是H。
根据某些实施方式，R5为C1-C6烷基或天然氨基酸的特定侧链。
根据某些实施方式，R5为C1-C6烷基或缬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸的特定侧链。
根据某些实施方式，R5为C1-C6烷基或缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸的特定侧链。
根据某些实施方式，R5为C1-C6烷基。
根据某些实施方式，R5是天然氨基酸的特定侧链。
根据某些实施方式，R5是缬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸的特定侧链。
根据某些实施方式，R5是缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸的特定侧链。
根据某些实施方式，R5是缬氨酸的特定侧链。
根据某些实施方式，R5是苯丙氨酸的特定侧链。
根据某些实施方式，R5是丙氨酸的特定侧链。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自OH、NH2、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-和C1-C18烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自OH、NH2、(C2-C10烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-和C1-C10烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自OH、NH2、(C2-C6烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-和C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自OH、(C3-C10环烷基)O-和C1-C18烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自OH、(C3-C5环烷基)O-和C1-C10烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自OH和C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自(C3-C5环烷基)O-和C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自OH和(C3-C5环烷基)O-。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自R6为OH和C1-C10烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下独立地选自R6为OH和C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下是OH。
根据某些实施方式，R6在每种情况下是C1-C6烷氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下是乙氧基。
根据某些实施方式，R6在每种情况下是(C3-C10环烷基)O-。
根据某些实施方式，R6在每种情况下是(C3-C5环烷基)O-。
根据某些实施方式，R6在每种情况下是(C5环烷基)O-。
在式I的一些优选实施方式中：
·R1为C1-C6烷氧基或C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基，优选正丁氧基或CH2O(CH2)2O-；
·R2在每种情况下是H；
·n为1；
·X1为-C(＝O)-；优选为相对于(CH2)n基团处于对位的-C(＝O)-；
·L为连接基团；
·R3如本文中所定义的。
在一些优选的实施方式中，R3是式II的NOD2激动剂，其中：
·X2为相对于X3基团处于对位的-O-、-NH-或-C(＝O)-；优选地为相对于X3基团处于对位的-O-；
·R4为相对于X3基团处于间位的甲氧基并且在其它情况下为H；
·R5为L-缬氨酸、L-丙氨酸或L-苯丙氨酸(优选L-缬氨酸)的侧链；
·R6每次出现时独立地选自OH、NH2、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-和(C5-C9杂环基)O-；优选地，R6为OH、C1-C18烷氧基或(C3-C10环烷基)O-；更优选地，R6为OH、C1-C6烷氧基或(C3-C5环烷基)O-；甚至更优选地，R6为C1-C6烷氧基或(C5环烷基)O-。
在其它优选的实施方式中，R3是式III的NOD2激动剂或其中：
·R4为相对于X3基团处于间位的甲氧基、相对于X3基团处于对位的OH且在其它情况下为H；
·R5为L-缬氨酸、L-丙氨酸或L-苯丙氨酸(优选L-缬氨酸)的侧链；
·R6为OH、NH2、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-和(C5-C9杂环基)O-；优选地，R6为OH或C1-C18烷氧基；更优选地，R6为OH或C1-C6烷氧基；甚至更优选地，R6为C1-C6烷氧基。
在其它优选的实施方式中，R3是式III的NOD2激动剂或其中：
·R4为相对于X3基团处于间位的氟、相对于X3基团处于对位的氟且在其它情况下为H；
·R5为L-缬氨酸、L-丙氨酸或L-苯丙氨酸(优选L-缬氨酸)的侧链；
·R6为OH、NH2、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-和(C5-C9杂环基)O-；优选地，R6为OH或C1-C18烷氧基；更优选地，R6为OH或C1-C6烷氧基；甚至更优选地，R6为C1-C6烷氧基。
在其它优选的实施方式中，R3是式III的NOD2激动剂或其中：
·R4为相对于X3基团处于对位的异丙基且在其它情况下为H；
·R5为L-缬氨酸、L-丙氨酸或L-苯丙氨酸(优选L-缬氨酸)的侧链；
·R6为OH、NH2、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-和(C5-C9杂环基)O-；优选地，R6为OH或C1-C18烷氧基；更优选地，R6为OH或C1-C6烷氧基；甚至更优选地，R6为C1-C6烷氧基。
在其它优选的实施方式中，R3是式III的NOD2激动剂或其中：
·R4在每种情况下为H；
·R5为L-缬氨酸、L-丙氨酸或L-苯丙氨酸(优选L-缬氨酸)的侧链；
·R6为OH、NH2、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-和(C5-C9杂环基)O-；优选地，R6为OH或C1-C18烷氧基；更优选地，R6为OH或C1-C6烷氧基；甚至更优选地，R6为C1-C6烷氧基。
在其它优选的实施方式中，R3是式IV的NOD2激动剂，其中：
·R4为相对于X3基团处于间位的甲氧基、相对于X3基团处于对位的OH且在其它情况下为H；
·R5为L-缬氨酸、L-丙氨酸或L-苯丙氨酸(优选L-缬氨酸)的侧链；
·R6为OH、NH2、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-和(C5-C9杂环基)O-；优选地，R6为OH或C1-C18烷氧基；更优选地，R6为OH或C1-C6烷氧基；甚至更优选地，R6为C1-C6烷氧基。
在其它优选的实施方式中，R3是式IV的NOD2激动剂，其中：
·R4为相对于X3基团处于间位的氟、相对于X3基团处于对位的氟且在其它情况下为H；
·R5为L-缬氨酸、L-丙氨酸或L-苯丙氨酸(优选L-缬氨酸)的侧链；
·R6为OH、NH2、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-和(C5-C9杂环基)O-；优选地，R6为OH或C1-C18烷氧基；更优选地，R6为OH或C1-C6烷氧基；甚至更优选地，R6为C1-C6烷氧基。
在其它优选的实施方式中，R3是式IV的NOD2激动剂，其中：
·R4是相对于X3基团处于对位的异丙基且在其它情况下为H；
·R5为L-缬氨酸、L-丙氨酸或L-苯丙氨酸(优选L-缬氨酸)的侧链；
·R6为OH、NH2、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-和(C5-C9杂环基)O-；优选地，R6为OH或C1-C18烷氧基；更优选地，R6为OH或C1-C6烷氧基；甚至更优选地，R6为C1-C6烷氧基。
在其它优选的实施方式中，R3是式IV的NOD2激动剂，其中：
·R4在每种情况下为H；
·R5为L-缬氨酸、L-丙氨酸或L-苯丙氨酸(优选L-缬氨酸)的侧链；
·R6为OH、NH2、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-和(C5-C9杂环基)O-；优选地，R6为OH或C1-C18烷氧基；更优选地，R6为OH或C1-C6烷氧基；甚至更优选地，R6为C1-C6烷氧基。
优选的式I的化合物选自由以下组成的组：
((E)-3-(4-((6-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)己酰基)-氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯，
N5-(2-(2-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)-N2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酰胺乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(4-异丙基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(3,4-二氟苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(15R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((S)-2-(2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((S)-2-(2-肉桂酰胺基乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(13R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
((E)-3-(4-(1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰胺基)苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯，
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二环戊酯，
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯，
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯，和
1-苄基5-乙基((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯。
连接基团
在本发明的某些实施方式中，L是连接基团，其作用是将下式的TLR7激动剂
共价连接至选自由以下组成的组的NOD2激动剂，
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、X1、X2、X3和n如之前定义。
连接基团L的具体组成并不重要，只要所得缀合物保留本文所述的有用生物学特性即可。通过使用实施例17中提供的测定，可以很容易地在缀合化合物中的其它取代基的背景下优化接头类型和长度。接头组分的选择基于文献记载的其在水性(aqueous，含水)和有机介质中的生物相容性和溶解度特性。
根据某些实施方式，接头L是非肽聚合物接头。合适的非肽聚合物接头的非限制性实例包括聚亚烷基氧化物(例如聚乙二醇、聚丙二醇等)、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮等，以及它们的衍生物和共聚物。
根据某些实施方式，接头L包括聚乙二醇(PEG)链。根据某些实施方式，聚乙二醇链包含2至100个，例如2至50个重复乙二醇单元。根据某些实施方式，聚乙二醇链包含2、3、4、5、6、7、8、9或10个重复乙二醇单元。根据某些实施方式，聚乙二醇链上的一个或两个末端羟基可被选自胺基、巯基、叠氮基、羧基、羟基、N-羟基琥珀酰亚胺基和马来酰亚胺基的基团取代。
根据某些实施方式，接头L是非聚合物脂肪族接头，包含二价的线性或支化、直链或环状、饱和或不饱和的烃链，具有2至100个碳原子，其中碳原子任选地被选自-O-、-S-、-NH-、-C(＝O)-、-OC(＝O)-、-N(C1-C6烷基)-、-NHC(＝O)-、-N(C1-C6烷基)C(＝O)-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-中的基团替换并且其中该链任选地在碳上取代有一个或多个(例如1、2、3或4)个取代基。非聚合物脂肪族接头通常衍生自具有至少两个官能团的脂肪族化合物，该两个官能团能够与TLR7和NOD2激动剂部分上的官能团反应(例如羧基、NH2、OH等)。
根据某些实施方式，接头L是由氨基酸形成的二价基团。根据某些实施方式，接头L是由天然氨基酸及其立体异构体形成的二价基团。
根据某些实施方式，接头L是由肽形成的二价基团。根据某些实施方式，肽包括天然存在的氨基酸及其立体异构体。根据某些实施方式，肽仅由天然存在的氨基酸及其立体异构体形成。根据某些实施方式，接头L是聚脯氨酸接头。根据某些实施方式，接头L是聚甘氨酸接头。
根据某些实施方式，接头L为-NH-(CH2)5-C(＝O)-。
根据某些实施方式，接头L为-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-NH-。
根据某些实施方式，接头L为-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-NH-。
根据某些实施方式，接头L为-NH-(CH2)3-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)3-NH-C(＝O)-(CH2)2-C(＝O)-。
治疗性应用
本发明的缀合化合物是TLR7和NOD2激动剂。因此，式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药可用于治疗TLR7和NOD2的激动作用有益的病症。
通过同时激活TLR7和NOD2产生的免疫反应导致促炎细胞因子的产生和激活。因此，在一方面，本发明的缀合化合物可用于治疗病毒、细菌、真菌和原虫感染、肿瘤或癌症以及免疫性疾病。
根据某些实施方式，本发明的化合物可用于治疗病毒、细菌、真菌或原虫感染。根据某些实施方式，本发明的化合物可用于治疗病毒感染。根据某些实施方式，本发明的化合物可用于治疗细菌感染。根据某些实施方式，本发明的化合物可用于治疗真菌感染。根据某些实施方式，本发明的化合物可用于治疗原虫感染。
根据某些实施方式，本发明的化合物可用于治疗癌症。
根据某些实施方式，本发明的化合物可用于治疗免疫性疾病。
在另一方面，本发明的缀合化合物可用作疫苗佐剂。因此，本说明书公开了式I的化合物或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药用于药物中，用于免疫调节以治疗疾病。
本发明的化合物可以配制为药物组合物并以适合于选择的施用途径的多种形式施用于受试者，如人类患者，即口服或肠胃外、通过静脉内、肌内、局部或皮下途径。可以使用本领域技术人员已知的技术和方法来制备包含式I的化合物的药物组合物。在Remington的The Science and Practice of Pharmacy中描述了本领域常用的一些方法。
因此，本发明的一个方面涉及包含式I的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。例如，本发明的缀合化合物可以配制用于肠胃外施用，如静脉内施用或施用到体腔或器官的内腔中。注射用制剂通常包含溶解在药学上可接受的载体中的本发明的缀合化合物的溶液。可以使用的可接受的载体和溶剂包括水和林格氏溶液。此外，无菌固定油通常可用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸也可用于制备注射剂。这些溶液是无菌的并且通常不含不良物质。这些制剂可以通过常规的众所周知的灭菌技术进行灭菌。制剂可以含有为接近生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。
这些组合物也可用作疫苗佐剂。因此，本发明的另一方面是包含本发明的缀合化合物的疫苗。
式I的化合物及其药物组合物用作疫苗佐剂，可与需要针对提高细胞免疫反应(IV型超敏反应)或在免疫受试者中产生循环或局部抗体的抗原(病毒、细菌、寄生虫抗原等)同时并通过同样的方法施用。
本发明的化合物也可以以脂质体的形式施用。如本领域已知的，脂质体通常衍生自磷脂或其它脂质物质。脂质体由分散在水性介质中的单层或多层水合液晶形成。可以使用能够形成脂质体的任何无毒的、生理上可接受的和可代谢的脂质。除了本发明的化合物之外，脂质形式的本发明组合物还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。典型的脂质是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱。形成脂质体的方法是本领域已知的并且描述于Prescott的Methods in Cell Biology中，其通过引用并入本文。
方法
本发明的另一方面是用于制备式I的化合物或其药学上可接受的盐的方法。
如果不是商业上可得的，则诸如下述程序等程序所需的起始材料可以通过从标准有机化学技术、类似于已知结构相似化合物的合成的技术或类似于实施例中描述的程序的技术中选择的程序来制得。
还应当理解的是，在本文提及的一些反应中，可能需要/希望保护化合物中的任何敏感基团。需要或希望保护的情况以及用于此类保护的合适方法是本领域技术人员已知的。
用于羟基的合适保护基团的实例是例如酰基，例如烷酰基如乙酰基、芳酰基如苯甲酰基、甲硅烷基如三甲基甲硅烷基或芳基甲基如苄基。上述保护基团的脱保护条件必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以例如通过用合适的碱(如碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂或氢氧化钠)水解来除去酰基，如烷酰基或芳酰基。替代地，可例如通过氟化物或通过酸水溶液去除甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基；或可例如通过在催化剂(如碳载钯)存在下氢化除去芳基甲基，如苄基。
用于氨基的合适保护基团是例如任何酰基，例如烷酰基如乙酰基，烷氧基羰基例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基例如苄氧基羰基，或芳酰基例如苯甲酰基。上述保护基团的脱保护条件必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以例如通过用合适的碱(如碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂或氢氧化钠)水解除去酰基如烷酰基或烷氧基羰基或芳酰基。可替代地，可以例如通过用合适的酸(如盐酸、硫酸、磷酸或三氟乙酸)处理来除去酰基如叔丁氧基羰基，并且可以例如通过在催化剂(如碳载钯)上氢化或通过用路易斯酸(例如三(三氟乙酸)硼)处理，除去芳基甲氧基羰基如苄氧基羰基。用于伯氨基的合适的替代的保护基团是例如酞酰基(phthalogenyl group)，其可以通过用烷基胺(例如二甲基氨基丙胺或2-羟乙基胺)或用肼处理而除去。
用于羧基的合适保护基团的实例是例如烷基，例如甲基、乙基或叔丁基或芳基例如苄基。上述保护基团的脱保护条件必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以例如通过用合适的碱(如碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂或氢氧化钠)水解来除去烷基，如甲基或乙基。可替代地，可以例如通过用合适的酸(如盐酸、硫酸、磷酸或三氟乙酸)处理除去烷基如叔丁基。可以例如通过在催化剂(如碳载钯)上氢化而除去芳基如苄基。
在Greene和Wuts(John Wiley和Sons,1999)编的“Protective Groups inOrganic Synthesis”第3版中可以找到本领域技术人员熟知的其它合适的保护基团，其通过引用并入本文。
保护基团可以在合成中的任何方便的阶段使用化学领域众所周知的常规技术除去，或者它们可以在后面的反应步骤或后处理过程中除去。
因此，本发明还提供了式I的化合物及其药学上可接受的盐，其可以通过如下方法制备，该方法包括使式V的化合物与式VI的化合物反应，
其中R1、R2、X1和n如之前所定义，
H-L-R3
式VI，
其中R3和L如之前所定义；
或使式VII的化合物与式VIII的化合物、式IX的化合物或式X的化合物反应，
其中R1、R2、X1、L和n如之前所定义，
其中R4、R5、R6、X2和X3如之前所定义；
和任选地之后进行以下程序中的一个或多个：
·去除任何保护基团，
·形成药学上可接受的盐，
·将式I的化合物转化为另一种式I的化合物。
通过这些方法提供的是式XI、式XII或式XIII的缀合化合物及其药学上可接受的盐：
其中R1、R2、R4、R5、R6、X1、X2、X3、L和n如之前所定义。
实施例
合成方法
通过但不限于示出式I的化合物的制备的下列实施例进一步举例说明了本发明。在说明书中任何地方使用这些和其它实施例仅是说明性的，并且决不限制本发明的范围和含义或任何示例形式。同样，本发明不限于本文描述的任何特定优选实施方式。实际上，本发明进行许多修改和变化对于在阅读本说明书后的本领域技术人员而言可以是显而易见的，并且可以在不脱离其精神和范围的情况下进行这些修改和变化。因此，本发明仅受所附权利要求的词语以及权利要求所赋予的等效物的全部范围的限制。
除非另有说明：
·通过真空旋转蒸发进行蒸发，并在过滤后去除残留固体后进行后处理程序；
·通常在环境温度(通常在18和26℃之间)下并且不排除空气(除非另有说明，或本领域技术人员以其它方式在惰性气氛下工作)进行操作；
·除非另有说明，否则使用快速柱色谱纯化化合物并在Merck Silica Gel 60上进行；
·收率仅供示例且不一定是可达到的最大值；
·通常由NMR和质谱技术确认最终产物的结构；引用了质子NMR谱，并且是使用在400MHz场强下运行的Bruker Avance III 400MHz光谱仪测定的。以低场离作为内标的四甲基硅烷的ppm为单位报告化学位移，并且因此显示了峰多重性：s，单峰；brs，宽单峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；
·使用Q TOF Premier质谱仪(Micromass,Waters,Manchester,UK)和ExactivePlus Orbitrap质谱仪(Thermo Fisher Scientific,Waltham,Massachusetts,USA)获得质谱；
·每个中间体通常都被纯化到后续阶段所需的标准，并进行足够详细的表征以确认指定的结构是正确的；通过高压液相色谱法、薄层色谱法或NMR评估了纯度，并且视情况而定，通过质谱法和NMR光谱法确定身份。
缩写
如本文所用，符号和惯例与当代科学文献中使用的那些一致。具体而言，文本中使用了以下缩写：
Boc2O用于二碳酸二叔丁酯；CDCl3用于氘代氯仿；COMU用于(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐；DCC用于N,N′-二环己基碳二亚胺；DCM用于二氯甲烷；DIPEA用于N,N-二异丙基乙胺；DMAP用于4-二甲氨基吡啶；DMF用于二甲基甲酰胺；DMSO用于二甲亚砜；DMSO-d6用于氘代二甲基亚砜；EDC用于N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐；eq用于当量；g用于克；HATU用于1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐；HCl用于盐酸；HOBt用于羟基苯并三唑；K2CO3用于碳酸钾；LPS用于脂多糖；mL用于毫升；mmol用于毫摩尔；NaHCO3用于碳酸氢钠；NaOH用于氢氧化钠；Na2SO4用于硫酸钠；Na2S2O3用于硫代硫酸钠；NH4Cl用于氯化铵；NMR用于核磁共振；PBS用于磷酸盐缓冲盐水；RPM用于每分钟转数；rt用于室温；TEA用于三乙胺；TFA用于三氟乙酸。
实施例1：化合物SG8
中间体1
(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸：将L-缬氨酸(3.515g,30mmol,1eq)溶解于水(10mL)和1M NaOH水溶液(36mL)中。Boc2O(8.512g,39mmol,1.3eq)溶解于二氧六环(30mL)中并且逐滴添加到冰冷却的(ice-chilled，冰冷淬的)L-缬氨酸搅拌溶液中。将得到的混合物在室温下搅拌20h。真空蒸发二氧六环后，使用乙醚洗涤混合物。在用1M HCl溶液酸化混合物后，将其用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。合并的有机相用Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈无色油状的主题化合物(6.518g，收率100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.46(s,1H),6.94(d,1H),3.82–3.75(m,1H),2.06–1.94(m,1H),1.39(s,9H),0.87(t,6H)。
中间体2
(叔丁氧基羰基)甘氨酸：将甘氨酸(2.252g,30mmol,1eq)溶解于水(10mL)和1MNaOH水溶液(36mL)中。将Boc2O(8.512g,39mmol,1.3eq)溶解于二氧六环(30mL)中并且逐滴添加到冰冷却的甘氨酸的搅拌溶液中。将得到的混合物在室温下搅拌20h。真空蒸发二氧六环后，使用乙醚洗涤混合物。在用1M HCl溶液酸化混合物后，将其用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。合并的有机相用Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈无色油状的主题化合物(5.255g,收率100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.46(s,1H),7.08(t,1H),3.59–3.56(m,2H),1.38(s,9H)。
中间体3
D-谷氨酸二乙酯：向冰冷却的D-谷氨酸(2.943g,20mmol,1eq)在无水乙醇(40mL)中的搅拌悬浮液中加入亚硫酰氯(3.20mL,44mmol,2.2eq)。将所得混合物在搅拌下回流20h。真空浓缩混合物后，残余物在乙醚中沉淀。真空蒸发乙醚，得到呈白色结晶粉末的主题化合物(4.794g,收率100％)，其不经任何进一步纯化即用于下一步。
中间体4
(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：向冰冷却的中间体1(1.673g,7.7mmol,1.1eq)在乙酸乙酯(50mL)中的搅拌溶液中加入HOBt(1.040g,7.7mmol,1.1eq)和DCC(1.589g,7.7mmol,1.1eq)。搅拌30分钟后，加入中间体3(1.678g,7mmol,1eq)、TEA(2.44mL,17.5mmol,2.5eq)和DMAP(催化量)，并将所得混合物在室温下搅拌22h，之后加入己烷(20mL)。将混合物过滤并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈灰白色结晶固体的主题化合物(2.457g，收率：87％)，其不经任何进一步纯化即用于下一步。
中间体5
(叔丁氧基羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：将中间体4(2.424g,6.02mmol)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,24mL)中，并使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。残余物与乙醚共蒸发三次。同时，将HOBt(0.894g,6.62mmol,1.1eq)、DCC(1.366g,6.62mmol,1.1eq)和DMAP(催化量)添加到冰冷却的中间体2(1.16g,6.62mmol,1.1eq)在乙酸乙酯(30mL)中的搅拌溶液中。30分钟后，加入脱保护的中间体4在乙酸乙酯(20mL)和TEA(4.3mL,30.1mmol,5eq)中的溶液，并将所得混合物在室温下搅拌18h。添加己烷(20mL)，之后过滤混合物并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈灰白色结晶固体的主题化合物(2.06g，收率：75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,1H),7.58(d,1H),7.03(t,1H),4.28–4.23(m,2H),4.11–4.01(m,4H),3.58(d,2H),2.36(t,2H),2.04–1.92(m,2H),1.87–1.78(m,1H),1.39(s,9H),1.20–1.16(m,6H),0.86–0.81(m,6H)。
化合物6
SG8
((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：将中间体5(0.919g,2mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,12mL)中，并使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发三次并溶解在DMF(6mL)中。在冰中冷却溶液后，加入TEA(1.4mL,10mmol,5eq)、反式阿魏酸(0.427g,2.2mmol,1.1eq)、HOBt(0.297g,2.2mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(0.422g,2.2mmol,1.1eq)，并且将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释并用1M HCl溶液(2×30mL)、饱和NaHCO3溶液(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈橙色固体的主题化合物(0.804g，收率：75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(s,1H),8.39(d,1H),8.20(t,1H),7.90(d,1H),7.33(d,1H),7.14(s,1H),7.00(d,1H),6.79(d,1H),6.56(d,1H),4.28–4.22(m,2H),4.10–3.99(m,4H),3.88(d,2H),3.81(s,3H),2.35(t,2H),2.04–1.92(m,2H),1.88–1.79(m,1H),1.19–1.13(m,6H),0.85(t,6H)。
实施例2：化合物SG43
中间体7
4-((6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲腈：将2-氯腺嘌呤(1.017g,6mmol,1.0eq)、碳酸钾(2.579g,18.66mmol,3.11eq)和4-(溴甲基)苯甲腈(1.625g,8.29mmol,1.38eq)悬浮在DMSO(22mL)中并在室温下搅拌20h。将反应混合物倒入乙酸乙酯(130mL)和水(90mL)中。充分混合后，将混合物真空浓缩。在冰中冷却浓缩的混合物，过滤形成的沉淀物，用冷水洗涤并干燥，得到主题化合物(1.737g，收率：89％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),7.85-7.83(m,4H),7.42(d,2H),5.45(s,2H)。
中间体8
/>
4-((6-氨基-2-丁氧基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酸：将中间体7(1.737g,6.10mmol,1eq)悬浮在干燥正丁醇(60mL)中。加入正丁醇钠在正丁醇中的20％溶液(33.6mL,61.01mmol,10eq)，并将所得混合物在搅拌下回流20h。暂停回流以冷却混合物。加入水(20mL)并继续回流另外的20h。用80mL水萃取反应混合物三次。用浓HCl将合并的水层酸化至pH 3并冷却过夜。将得到的白色沉淀物过滤并干燥，得到主题化合物(1.605g，收率：77％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.69(br s,1H),8.07(s,1H),7.91(d,2H),7.39(d,2H),7.25(s,2H),5.35(s,2H),4.20-4.18(m,2H),1.64-1.61(m,2H),1.39-1.35(m,2H),0.90(t,3H)。
中间体9
4-((6-氨基-8-溴-2-丁氧基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酸：将中间体8(1.605g,4.701mmol,1eq)悬浮在乙酸(60mL)中。加入乙酸钠(1.928g,23.51mmol,5eq)和溴(1.22mL,23.74mmol,5.05eq)并将所得混合物在室温下搅拌2h。将Na2S2O3水溶液添加到反应混合物中。过滤得到的沉淀，并且用冷水和乙醚洗涤，得到呈黄色粉末的主题化合物(1.976g，收率100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,2H),7.44(brs,2H),7.30(d,2H),5.33(s,2H),4.19(t,2H),1.66-1.59(m,2H),1.40-1.35(m,2H),0.91(t,3H)。
化合物10
SG43
4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酸：向在甲醇(35mL)中的中间体9(1.976g,4.701mmol)添加10M NaOH水溶液(35mL)。将混合物在搅拌下回流24h。将溶液冷却至室温并用6M HCl溶液酸化。真空浓缩混合物后，过滤得到的灰白色沉淀，用水和乙醚洗涤，得到主题化合物(1.523g，收率91％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.25(s,1H),7.89(d,2H),7.38(d,2H),6.63(brs,2H),4.93(s,2H),4.13(t,2H),1.62-1.58(m,2H),1.38-1.33(m,2H),0.89(t,3H)。
实施例3：化合物SG48
中间体11
6-乙氧基-6-氧代己烷-1-氯化铵：向在乙醇(5mL)中的6-氨基己酸(656mg,5mmol,1eq)中添加亚硫酰氯(0.55mL,7.5mmol,1.5eq)并回流搅拌3h。将反应混合物真空浓缩并与乙醚共蒸发，得到呈白色固体的主题化合物(0.976g，收率100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.00(s,3H),4.05(q,2H),2.74(t,2H),2.29(t,2H),1.59-1.49(m,4H),1.34-1.29(m,2H),1.18(t,3H)。
中间体12
6-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)己酸乙酯：将化合物10(185mg,0.518mmol,1eq)溶解于DMSO(7mL)中。将中间体11(304mg,1.553mmol,3eq)和TEA(0.576mL,4.141mmol,8eq)溶解于DCM(2mL)中并添加到化合物10在DMSO中的搅拌溶液中。在冰中冷却反应混合物后，加入COMU(554mg,1.295mmol,2.5eq)并将混合物在室温下搅拌20h。添加乙酸乙酯(60mL)和1M NaHCO3溶液(40mL)。真空浓缩混合物后，将混合物在冰中冷却一小时。过滤沉淀并用水和乙醚洗涤，得到主题化合物(119mg，收率：46％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),8.40(t,1H),7.76(d,2H),7.34(d,2H),6.48(s,2H),4.90(s,2H),4.21–4.09(m,2H),4.02(q,2H),3.22(q,2H),2.27(t,2H),1.66–1.56(m,2H),1.55–1.45(m,4H),1.41–1.21(m,4H),1.15(t,3H),0.90(t,3H)。
中间体13
6-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)己酸：向中间体12(95mg,0.191mmol)在甲醇(15mL)中的搅拌溶液中加入1M NaOH水溶液(3mL)。将混合物在室温搅拌20h。添加水(12mL)且使用1M HCl溶液酸化混合物。真空蒸发甲醇并将所得悬浮液在冰中冷却1h。将得到的沉淀过滤并用水和乙醚洗涤，得到呈灰白色固体的主题化合物(59mg，收率66％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.02(brs,1H),10.12(s,1H),8.40(t,1H),7.77(d,2H),7.34(d,2H),6.54(s,2H),4.90(s,2H),4.18-4.11(m,2H),3.22(q,2H),2.20(t,2H),1.64-1.57(m,2H),1.55-1.47(m,4H),1.41-1.23(m,4H),0.90(t,3H)。
化合物14
SG48
((E)-3-(4-((6-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)己酰基)-氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：向冰冷却的中间体13(55mg,0.117mmol,1eq)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(61μL,0.351mmol,3eq)、化合物6(63mg,0.117mmol,1eq)和COMU(55mg,0.129mmol,1.1eq)。将所得混合物在室温下搅拌4h，然后用乙酸乙酯(30mL)稀释并用1M HCl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。使用硅胶色谱法(7％ MeOH/DCM)纯化粗制化合物，得到呈橙色固体的主题化合物(14mg，收率：12％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),8.46–8.37(m,2H),8.36–8.29(m,1H),7.96(d,1H),7.79(d,2H),7.43(d,1H),7.38–7.30(m,3H),7.16(d,1H),7.10(d,1H),6.77(d,1H),6.48(s,2H),4.91(s,2H),4.31–4.23(m,2H),4.17–3.98(m,6H),3.92(d,2H),3.79(s,3H),3.30–3.22(m,2H),2.40–2.31(m,2H),2.04–1.95(m,4H),1.92–1.79(m,1H),1.69–1.50(m,6H),1.41–1.31(m,4H),1.22–1.11(m,6H),0.94–0.82(m,9H)。C49H66O13N9 m/z的HRMS计算值：988.4775(M+H)+，实测值988.4779。
实施例4：化合物SG144
中间体15
5-苄基1-乙基(叔丁氧基羰基)-D-谷氨酸酯：向冰冷却的boc-D-谷氨酸5-苄酯(1.687g,5mmol,1eq)在DCM(20mL)中的溶液中加入DMAP(182mg,1.5mmol,0.3eq)、无水乙醇(5mL)和DCC(1.547g,7.5mmol,1.5eq)。将所得混合物在室温搅拌19h。真空蒸发溶剂并用乙醚洗涤两次，得到呈粘稠无色油状的主题化合物(1.827g，收率：100％)，其不经任何进一步纯化而用于下一步。
中间体16
5-苄基1-乙基(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体15(1.827g,5mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/3,25mL)中，然后将混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。残余物与乙醚共蒸发三次。同时，将HOBt(0.743g,5.5mmol,1.1eq)、DCC(1.135g,5.5mmol,1.1eq)和DMAP(催化量)加入到冰冷却的中间体1(1.194g,5.5mmol,1.1eq)在乙酸乙酯(25mL)的搅拌溶液中。30分钟后，加入脱保护的中间体15在乙酸乙酯(15mL)和TEA(3.5mL,25mmol,5eq)中的溶液，并将所得混合物在室温下搅拌17h。添加己烷(10mL)，之后过滤混合物并用1M HCl溶液(2×40mL)、饱和NaHCO3溶液(2×40mL)和盐水(40mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到呈粘性黄色油状的主题化合物(2.1g，收率：90％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,1H),7.42–7.28(m,5H),6.61(d,1H),5.08(s,2H),4.28–4.18(m,1H),4.13–4.00(m,2H),3.79(t,1H),2.43(t,2H),2.09–1.96(m,1H),1.93–1.81(m,1H),1.79–1.63(m,1H),1.36(s,9H),1.16(t,3H),0.83(t,6H)。
中间体17
5-苄基1-乙基(叔丁氧基羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体16(2.05g,4.4mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/3,25mL)中，然后将混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。残余物与乙醚共蒸发三次。同时，将HOBt(0.653g,4.84mmol,1.1eq)、DCC(0.999g,4.84mmol,1.1eq)和DMAP(催化量)添加到冰冷却的中间体2(0.848g,4.84mmol,1.1eq)在乙酸乙酯(25mL)中的搅拌溶液中。30分钟后，加入脱保护的中间体16在乙酸乙酯(15mL)和TEA(3.3mL,24mmol,5eq)中的溶液，并将所得混合物在室温搅拌17h。添加己烷(10mL)，之后过滤混合物并用1M HCl溶液(2×40mL)、饱和NaHCO3溶液(2×40mL)和盐水(40mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色结晶固体的主题化合物(1.95g，收率：85％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(d,1H),7.60(d,1H),7.36(s,5H),7.05(t,1H),5.09(s,2H),4.31–4.22(m,2H),4.11–4.03(m,2H),3.58(d,2H),2.45(t,2H),2.09–1.90(m,1H),1.89–1.80(m,1H),1.79–1.62(m,1H),1.38(s,9H),1.17(t,3H),0.82(t,6H)。
中间体18
(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸乙酯：向冰冷却的反式阿魏酸(1.942g,10mmol,1eq)在无水乙醇(20mL)中的悬浮液中加入亚硫酰氯(0.87mL,12mmol,1.2eq)。将所得混合物在搅拌下回流20h。将溶液真空浓缩，溶于乙酸乙酯(30mL)中并用1M HCl溶液(15mL)、饱和NaHCO3溶液(15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈橙色油状的主题化合物(2.185g，收率：98％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.61(s,1H),7.54(d,1H),7.33(d,1H),7.12(dd,1H),6.79(d,1H),6.48(d,1H),4.16(q,2H),3.81(s,3H),1.25(t,3H)。
中间体19
(E)-3-(3-甲氧基-4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)丙烯酸乙酯：向中间体18(2.185g,9.8mmol,1eq)在3,4-二氢吡喃(20mL)中的溶液中加入对甲苯磺酸吡啶鎓(198mg,0.79mmol,0.08eq)。将所得混合物在搅拌下回流2h。将溶液真空浓缩，溶于乙酸乙酯(35mL)并用1M NaOH水溶液(4×7mL)和水(2×10mL)洗涤。真空蒸发溶剂，得到呈黄色油状的主题化合物(2.8g，收率：93％)，其不经任何进一步纯化即用于下一步。
中间体20
(E)-3-(3-甲氧基-4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)丙烯酸：向中间体19(2.8g,9.1mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中加入1M NaOH水溶液(10mL)。将所得混合物在室温搅拌20h。真空蒸发溶剂并将残余物溶解于水(10mL)中并用乙酸乙酯(20mL)萃取。在用1MHCl溶液酸化混合物后，将其用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。用水(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈黄色油状的主题化合物(1.75g，收率：69％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(d,1H),7.16–7.08(m,3H),6.33(d,1H),5.48(t,1H),3.97–3.86(m,4H),3.67–3.56(m,1H),2.02–1.82(m,2H),1.76–1.58(m,4H)。
中间体21
5-苄基1-乙基((E)-3-(3-甲氧基-4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体17(1.50g,2.88mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,6mL)中，并使混合物升温至室温。4h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发五次并溶解在DMF(6mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(2.5mL,14.4mmol,5eq)、中间体20(0.80g,2.88mmol,1eq)、HOBt(0.388g,2.88mmol,1eq)、DMAP(催化量)和EDC(0.551g,2.88mmol,1eq)并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释并用饱和NH4Cl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到呈灰白色固体的主题化合物(0.753g，收率：38％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,1H),8.24(t,1H),7.90(d,1H),7.42–7.27(m,6H),7.21(d,1H),7.09(d,2H),6.65(d,1H),5.45(t,1H),5.06(s,2H),4.33–4.21(m,2H),4.13–4.02(m,2H),3.89(d,2H),3.83–3.75(m,4H),3.58–3.49(m,1H),2.44(t,2H),2.07–1.76(m,6H),1.64–1.52(m,3H),1.17(t,3H),0.84(t,6H)。
中间体22
(4R)-5-乙氧基-4-((2S)-2-(2-((E)-3-(3-甲氧基-4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-氧代戊酸：向乙酸钯(II)(12mg,0.055mmol,0.05eq)在干燥DCM(7mL)中的溶液中加入TEA(297μL,2.13mmol,1.95eq)和三乙基硅烷(350μL,2.19mmol,2eq)。将所得黑色溶液搅拌15分钟，然后加入中间体21(746mg,1.09mmol,1eq)在干燥DCM(13mL)中的溶液。将所得混合物在氩气氛下搅拌18h，用DCM(30mL)稀释并用水(3×30mL)萃取。合并的水相用1M HCl溶液酸化并用DCM(2×50mL)萃取。合并的有机相用水(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(355mg，收率：55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.17(s,1H),8.49(s,1H),8.36(s,1H),7.88(d,1H),7.37(d,1H),7.22(s,1H),7.10(d,2H),6.68(d,1H),5.45(t,1H),4.30–4.19(m,2H),4.16–4.00(m,2H),3.90(d,2H),3.84–3.74(m,4H),3.58–3.49(m,1H),2.27(t,2H),2.02–1.75(m,6H),1.64–1.52(m,3H),1.18(t,3H),0.85(t,6H)。
中间体23
(2-(2-氨基乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯：将Boc2O(654mg,3mmol,1eq)在DCM(15mL)中的溶液逐滴添加到在0℃下搅拌的2-氨基乙基醚二盐酸盐(2.66g,15mmol,5eq)在DCM(15mL)中的溶液中。将所得混合物在室温搅拌18h。随后，将溶液用水(3×20mL)和盐水(20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到呈无色油状的主题化合物(490mg，收率：80％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.95(brs,1H),3.50(t,2H),3.46(t,2H),3.31(q,2H),2.85(t,2H),1.43(s,9H),1.42(brs,2H)。
中间体24
(2-(2-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯：将化合物10(200mg,0.560mmol,1eq)溶解于DMSO(7mL)中。将中间体23(380mg,1.86mmol,3.3eq)和DIPEA(0.523mL,2.99mmol,5.3eq)溶解于DCM(1mL)中并添加到化合物10在DMSO中的搅拌溶液中。在冰中冷却反应混合物后，加入COMU(640mg,1.49mmol,2.7eq)并将混合物在室温下搅拌3h。添加乙酸乙酯(40mL)和1M NaHCO3溶液(30mL)。真空浓缩混合物后，将混合物在冰中冷却一小时。过滤沉淀并用水和乙醚洗涤，得到主题化合物，其不经任何进一步纯化即用于下一步骤。
中间体25
4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)-N-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)苯甲酰胺：将中间体24(160mg,0.294mmol)添加至冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,6mL)中，并使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。残余物在乙醚中沉淀，过滤并用乙醚洗涤，得到呈棕色固体的主题化合物(156mg，收率：97％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),8.41(t,1H),7.78(d,2H),7.74(s,2H),7.36(d,2H),6.50(s,2H),4.91(s,2H),4.14(t,2H),3.63–3.52(m,4H),3.50–3.41(m,2H),3.03–2.94(m,2H),1.67–1.56(m,2H),1.42–1.30(m,2H),0.90(t,3H)。
化合物26
SG144
N5-(2-(2-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)-N2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酰胺乙酯：向冰冷却的中间体22(71mg,0.120mmol,1eq)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(84μL,0.48mmol,4eq)、中间体25(115mg,0.206mmol,1.7eq)和HATU(64mg,0.168mmol,1.4eq)。将所得混合物在室温搅拌20h。随后，加入1M HCl溶液(20mL)并将混合物在室温下搅拌15分钟，然后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,3×20mL)萃取。将合并的有机相用饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到呈橙色固体的主题化合物(48mg，收率：39％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),9.43(s,1H),8.44(t,1H),8.38(d,1H),8.19(t,1H),7.89–7.82(m,2H),7.78(d,2H),7.39–7.29(m,3H),7.15(s,1H),7.00(d,1H),6.79(d,1H),6.56(d,1H),6.46(s,2H),4.89(s,2H),4.30–4.22(m,2H),4.22–4.00(m,4H),3.89(d,2H),3.80(s,3H),3.49(t,2H),3.44–3.36(m,4H),3.21–3.15(m,2H),2.14(t,2H),2.02–1.90(m,2H),1.84–1.76(m,1H),1.65–1.55(m,2H),1.41–1.31(m,2H),1.16(t,3H),0.89(t,3H),0.84(t,6H)。C45H61O12N10m/z的HRMS计算值：933.4465(M+H)+，实测值933.4458。
实施例5：化合物RH32
中间体27
(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯：将Boc2O(4.365g,20mmol,1eq)在DCM(40mL)中的溶液逐滴添加到在0℃下1,2-双(2-氨基乙氧基)乙烷(14.821g,100mmol,5eq)在DCM(100mL)中的搅拌溶液中。将所得混合物在室温搅拌20h。随后，用水(3×100mL)和盐水(100mL)洗涤该溶液，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(4.370g，收率：88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.72(brs,1H),3.53–3.44(m,4H),3.41–3.30(m,4H),3.05(q,2H),2.64(t,2H),1.36(s,9H)。
中间体28
/>
(2-(2-(2-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯：将化合物10(500mg,1.40mmol,1eq)溶解于DMSO(20mL)中。将中间体27(1.157g,4.66mmol,3.3eq)和DIPEA(1.299mL,7.46mmol,5.3eq)溶解于DCM(1mL)中，并添加到化合物10在DMSO中的搅拌溶液中。在冰中冷却反应混合物后，加入COMU(1.593g,3.72mmol,2.7eq)并将混合物在室温下搅拌19h。添加乙酸乙酯(100mL)和1MNaHCO3溶液(75mL)。真空浓缩混合物后，将混合物在冰中冷却一小时。过滤沉淀并用水和乙醚洗涤，得到主题化合物，其不经任何进一步纯化即用于下一步骤。
中间体29
4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)-N-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)苯甲酰胺：将中间体28(491mg,0.84mmol)加入到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,12mL)中，并使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。在乙醚中沉淀残余物，过滤并且用乙醚洗涤，得到呈棕色固体的主题化合物(492mg，收率：98％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),8.48(t,1H),7.82–7.75(m,4H),7.35(d,2H),6.52(brs,2H),4.91(s,2H),4.13(t,2H),3.63–3.49(m,8H),3.46–3.33(m,2H),3.03–2.88(m,2H),1.67–1.56(m,2H),1.43–1.30(m,2H),0.90(t,3H)。
化合物30
RH32
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯：向冰冷却的中间体22(72mg,0.122mmol,1eq)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(85μL,0.49mmol,4eq)、中间体29(132mg,0.22mmol,1.8eq)和COMU(73mg,0.17mmol,1.4eq)。将所得混合物在室温搅拌20h。随后，加入1M HCl溶液(20mL)并将混合物在室温下搅拌15分钟，然后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,3×20mL)萃取。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。使用制备型薄层硅胶色谱法(10％ MeOH/DCM)纯化粗制化合物，得到呈橙色固体的主题化合物(29mg，收率：24％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),9.43(s,1H),8.47(t,1H),8.38(d,1H),8.18(t,1H),7.89–7.82(m,2H),7.78(d,2H),7.38–7.29(m,3H),7.15(s,1H),7.00(d,1H),6.79(d,1H),6.57(d,1H),6.46(s,2H),4.90(s,2H),4.30–4.01(m,6H),3.89(d,2H),3.80(s,3H),3.56–3.44(m,10H),3.19–3.13(m,2H),2.13(t,2H),2.02–1.88(m,2H),1.86–1.75(m,1H),1.65–1.57(m,2H),1.41–1.31(m,2H),1.17(t,3H),0.93–0.80(m,9H)。C47H63O13N10 m/z的HRMS计算值：975.4582(M-H)-，实测值975.4589。
实施例6：化合物SG176
中间体31
5-苄基1-乙基((E)-3-(4-异丙基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体17(0.500g,0.96mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/4,5mL)中，并且使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(5mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.84mL,4.79mmol,5eq)、(E)-3-(4-异丙基苯基)丙烯酸(0.22g,1.15mmol,1.2eq)、HOBt(0.155g,1.15mmol,1.2eq)、DMAP(催化量)和EDC(0.220g,1.15mmol,1.2eq)并且所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释并用1M HCl溶液(2×30mL)、饱和NaHCO3溶液(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈灰白色固体的主题化合物(0.392g，收率：69％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,1H),8.35(t,1H),7.94(d,1H),7.49(d,2H),7.44–7.25(m,8H),6.69(d,1H),5.06(s,2H),4.32–4.19(m,2H),4.13–4.00(m,2H),3.90(d,2H),2.90(p,1H),2.43(t,2H),2.08–1.93(m,2H),1.93–1.80(m,1H),1.23–1.14(m,9H),0.84(t,6H)。
中间体32
(R)-5-乙氧基-4-((S)-2-(2-((E)-3-(4-异丙基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-氧代戊酸：向乙酸钯(II)(7mg,0.031mmol,0.05eq)在干燥DCM(5mL)的溶液中加入TEA(167μL,1.20mmol,1.95eq)和三乙基硅烷(197μL,1.23mmol,2eq)。将所得黑色溶液搅拌15分钟，然后加入中间体31(366mg,0.616mmol,1eq)在干燥DCM(10mL)中的溶液。将所得混合物在氩气氛下搅拌18h，用DCM(25mL)稀释并用水(4×30mL)萃取。合并的水相用1M HCl溶液酸化并用DCM(2×30mL)萃取。用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(133mg，收率：43％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.18(s,1H),8.43–8.31(m,2H),7.93(d,1H),7.49(d,2H),7.40(d,1H),7.29(d,2H),6.69(d,1H),4.31–4.21(m,2H),4.14–4.01(m,2H),3.90(d,2H),2.95–2.85(m,1H),2.28(t,2H),2.03–1.91(m,2H),1.88–1.74(m,1H),1.23–1.13(m,9H),0.87–0.81(m,6H)。
化合物33
SG176
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(4-异丙基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯：向中间体32(130mg,0.26mmol,1eq)在DMF(3mL)中的冰冷却的搅拌溶液中添加DIPEA(135μL,0.774mmol,3eq)、中间体29(171mg,0.28mmol,1.1eq)和COMU(133mg,0.31mmol,1.2eq)。将所得混合物在室温搅拌20h。随后，加入1M HCl溶液(40mL)，之后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,3×30mL)萃取该混合物。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液(2×40mL)和盐水(40mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。固体残余物用乙醚洗涤，得到呈灰白色固体的主题化合物(73mg，收率：29％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),8.48(t,1H),8.41–8.30(m,2H),7.91(d,1H),7.90–7.85(m,1H),7.79(d,2H),7.49(d,2H),7.40(d,1H),7.34(d,2H),7.31–7.25(m,2H),6.70(d,1H),6.49(s,2H),4.90(s,2H),4.32–4.02(m,6H),3.92(d,2H),3.56–3.45(m,6H),3.41–3.35(m,4H),3.21–3.12(m,2H),2.93–2.85(m,1H),2.14(t,2H),2.05–1.89(m,2H),1.87–1.73(m,1H),1.66–1.56(m,2H),1.41–1.31(m,2H),1.22–1.13(m,9H),0.92–0.79(m,9H)。C49H69O11N10 m/z的HRMS计算值：973.5142(M+H)+，实测值973.5112。
实施例7：化合物SG177
中间体34
5-苄基1-乙基((E)-3-(3,4-二氟苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体17(0.500g,0.96mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/4,5mL)中，并且使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(5mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.84mL,4.79mmol,5eq)、(E)-3-(3,4-二氟苯基)丙烯酸(0.21g,1.15mmol,1.2eq)、HOBt(0.155g,1.15mmol,1.2eq)、DMAP(催化量)和EDC(0.220g,1.15mmol,1.2eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释并用1MHCl溶液(2×30mL)、饱和NaHCO3溶液(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈灰白色固体的主题化合物(0.364g，收率：65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,1H),8.35(t,1H),7.96(d,1H),7.74–7.63(m,1H),7.53–7.27(m,8H),6.74(d,1H),5.07(s,2H),4.33–4.20(m,2H),4.13–4.03(m,2H),3.91(d,2H),2.44(t,2H),2.10–1.92(m,2H),1.91–1.79(m,1H),1.17(t,3H),0.84(t,6H)。
中间体35
(R)-4-((S)-2-(2-((E)-3-(3,4-二氟苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-乙氧基-5-氧代戊酸：向乙酸钯(II)(6mg,0.027mmol,0.05eq)在干燥DCM(5mL)的溶液中加入TEA(145μL,1.04mmol,1.95eq)和三乙基硅烷(171μL,1.07mmol,2eq)。将所得黑色溶液搅拌15分钟，然后加入中间体34(314mg,0.534mmol,1eq)在干燥DCM(10mL)中的溶液。将所得混合物在氩气氛下搅拌18h，用DCM(25mL)稀释并用水(4×30mL)萃取。合并的水相用1M HCl溶液酸化并用DCM(2×30mL)萃取。用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤合并的有机相，用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(64mg，收率：24％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.18(s,1H),8.43–8.32(m,2H),7.95(d,1H),7.75–7.64(m,1H),7.52–7.38(m,2H),7.36–7.24(m,1H),6.74(d,1H),4.30–4.21(m,2H),4.13–4.02(m,2H),3.91(d,2H),2.28(t,2H),2.02–1.89(m,2H),1.85–1.73(m,1H),1.17(t,3H),0.87–0.79(m,6H)。
化合物36
SG177
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(3,4-二氟苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯：向冰冷却的中间体35(64mg,0.13mmol,1eq)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(67μL,0.39mmol,3eq)、中间体29(93mg,0.15mmol,1.2eq)和COMU(66mg,0.15mmol,1.2eq)。将所得混合物在室温搅拌20h。随后，加入1M HCl溶液(40mL)，之后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,3×15mL)萃取该混合物。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液(3×40mL)和盐水(40mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。用乙醚洗涤固体残余物，得到呈灰白色固体的主题化合物(42mg，收率：34％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),8.48(t,1H),8.42–8.31(m,2H),7.94(d,1H),7.87(t,1H),7.78(d,2H),7.73–7.62(m,1H),7.53–7.22(m,5H),6.74(d,1H),6.47(s,2H),4.90(s,2H),4.34–4.02(m,6H),3.92(d,2H),3.58–3.45(m,6H),3.42–3.35(m,4H),3.22–3.09(m,2H),2.14(t,2H),2.03–1.89(m,2H),1.87–1.73(m,1H),1.67–1.55(m,2H),1.41–1.31(m,2H),1.21–1.13(m,3H),0.94–0.76(m,9H)。C46H61O11N10F2 m/z的HRMS计算值：967.4484(M+H)+，实测值967.4455。
实施例8：化合物SG187
中间体37
5-苄基1-乙基(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体17(0.500g,0.96mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/4,4mL)中，并且使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(5mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.84mL,4.79mmol,5eq)、2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-羧酸(0.209g,1.05mmol,1.1eq)、HOBt(0.142g,1.05mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(0.202g,1.05mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释并用1M HCl溶液(2×30mL)、饱和NaHCO3溶液(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(0.478g，收率：81％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45–8.36(m,2H),7.84(dd,1H),7.42–7.27(m,6H),7.27–7.17(m,1H),7.05–6.96(m,1H),5.08(d,2H),4.31–4.20(m,2H),4.14–3.99(m,2H),3.81(d,2H),2.44(t,2H),2.31–2.22(m,1H),2.07–1.91(m,3H),1.90–1.78(m,1H),1.37–1.30(m,1H),1.29–1.20(m,1H),1.16(t,3H),0.82(t,6H)。
中间体38
(4R)-4-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-乙氧基-5-氧代戊酸：向乙酸钯(II)(34mg,0.15mmol,0.2eq)在干燥DCM(5mL)中的溶液中添加TEA(208μL,1.50mmol,2eq)以及中间体37(461mg,0.75mmol,1eq)在干燥DCM(10mL)中的溶液。搅拌5分钟后，滴加三乙基硅烷(359μL,2.25mmol,3eq)，并将所得混合物在氩气氛下搅拌18h。在通过添加水(30mL)淬灭后，将混合物过滤，用1M HCL溶液酸化并用DCM(3×30mL)萃取。合并的有机相用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈红色固体的主题化合物(214mg，收率：56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.19(s,1H),8.53–8.34(m,2H),7.83(dd,1H),7.37–7.28(m,1H),7.28–7.19(m,1H),7.07–6.95(m,1H),4.29–4.19(m,2H),4.14–4.01(m,2H),3.82(d,2H),2.31–2.24(m,3H),2.04–1.90(m,3H),1.85–1.73(m,1H),1.37–1.30(m,1H),1.29–1.23(m,1H),1.18(t,3H),0.84(t,6H)。
化合物39
SG187
(15R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯：向冰冷却的中间体38(70mg,0.14mmol,1eq)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(71μL,0.41mmol,3eq)、中间体29(82mg,0.14mmol,1eq)和COMU(64mg,0.15mmol,1.1eq)。将所得混合物在室温搅拌20h。随后，加入1M HCl溶液(40mL)，之后用DCM和异丙醇的混合物(3/1，2×40mL)萃取该混合物。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液(3×40mL)和盐水(40mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。用乙醚洗涤固体残余物，得到呈灰白色固体的主题化合物(62mg，收率：47％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),8.49(q,1H),8.40(t,2H),7.92–7.74(m,4H),7.43–7.27(m,3H),7.27–7.17(m,1H),7.05–6.95(m,1H),6.48(s,2H),4.90(s,2H),4.30–4.00(m,6H),3.81(d,2H),3.55–3.45(m,6H),3.44–3.35(m,4H),3.21–3.12(m,2H),2.31–2.22(m,1H),2.13(t,2H),2.04–1.87(m,3H),1.86–1.72(m,1H),1.66–1.55(m,2H),1.41–1.29(m,3H),1.29–1.21(m,1H),1.16(t,3H),0.89(t,3H),0.83(t,6H)。C47H63O11N10F2 m/z的HRMS计算值：981.4640(M+H)+，实测值981.4605。
实施例9：化合物SG188
中间体40
1-苄基5-乙基(叔丁氧基羰基)-D-谷氨酸酯：向boc-D-谷氨酸1-苄酯(3.374g,10mmol,1eq)在DCM(50mL)中的溶液中加入DMAP(0.122g,1mmol,0.1eq)、无水乙醇(5mL)、HOBt(2.027g,15mmol,1.5eq)和EDC(2.876g,15mmol,1.5eq)。将所得混合物在室温搅拌18h。将反应混合物用DCM(50mL)稀释并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈黄色油状的主题化合物(3.605g，收率：99％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.42–7.29(m,6H),5.12(q,2H),4.10–3.99(m,3H),2.40–2.32(m,2H),2.01–1.91(m,1H),1.88–1.74(m,1H),1.37(s,9H),1.16(t,3H)。
中间体41
1-苄基5-乙基(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体40(3.515g，9.62mmol，1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/4,25mL)中，并且使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DCM(30mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(8.38mL,48.1mmol,5eq)、中间体1(2.507g,11.54mmol,1.2eq)、HOBt(1.559g,11.54mmol,1.2eq)、DMAP(催化量)和EDC(2.212g,11.54mmol,1.2eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用DCM(30mL)稀释并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈黄色油状的主题化合物(4.370g，收率：98％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,1H),7.42–7.31(m,5H),6.64(d,1H),5.12(d,2H),4.37–4.26(m,1H),4.03(q,2H),3.86–3.77(m,1H),2.36(t,2H),2.09–1.97(m,1H),1.94–1.79(m,2H),1.38(s,9H),1.16(t,3H),0.86–0.78(m,6H)。
中间体42
1-苄基5-乙基(叔丁氧基羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体41(4.238g,9.12mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/4,25mL)中，并且使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DCM(30mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(7.94mL,45.6mmol,5eq)、中间体2(1.918g,10.95mmol,1.2eq)、HOBt(1.479g,10.95mmol,1.2eq)、DMAP(催化量)和EDC(2.099g,10.95mmol,1.2eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用DCM(30mL)稀释并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈灰白色固体的主题化合物(3.672g，收率：77％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,1H),7.62(d,1H),7.43–7.27(m,5H),7.04(t,1H),5.12(d,2H),4.40–4.21(m,2H),4.03(q,2H),3.58(d,2H),2.35(t,2H),2.08–1.97(m,1H),1.97–1.88(m,1H),1.88–1.76(m,1H),1.38(s,9H),1.15(t,3H),0.89–0.72(m,6H)。
中间体43
1-苄基5-乙基((E)-3-(3-甲氧基-4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体42(500mg,0.96mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,5mL)中，并使混合物升温至室温。2h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(5mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.835mL,4.80mmol,5eq)、中间体20(294mg,1.06mmol,1.1eq)、HOBt(143mg,1.06mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(202mg,1.06mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释并用饱和NH4Cl溶液(2×30mL)、饱和NaHCO3溶液(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。使用硅胶色谱法(4％ MeOH/DCM)纯化粗制化合物，得到呈白色固体的主题化合物(251mg，收率：38％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(d,1H),8.25(t,1H),7.94(d,1H),7.41–7.29(m,6H),7.21(s,1H),7.10(s,2H),6.66(d,1H),5.46(t,1H),5.13(d,2H),4.39–4.31(m,1H),4.30–4.23(m,1H),4.01(q,2H),3.90(d,2H),3.86–3.76(m,4H),3.59–3.49(m,1H),2.36(t,2H),2.09–1.93(m,2H),1.92–1.73(m,4H),1.67–1.48(m,3H),1.14(t,3H),0.83(t,6H)。
中间体44
(2R)-5-乙氧基-2-((2S)-2-(2-((E)-3-(3-甲氧基-4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-氧代戊酸：向乙酸钯(II)(4mg,0.016mmol,0.05eq)在干燥DCM(5mL)中的溶液中加入TEA(87μL,0.62mmol,1.95eq)和三乙基硅烷(102μL,0.64mmol,2eq)。将所得黑色溶液搅拌15分钟，然后加入中间体43(218mg,0.32mmol,1eq)在干燥DCM(7mL)中的溶液。将所得混合物在氩气氛下搅拌18h，用DCM(20mL)稀释并用水(3×30mL)萃取。合并的水相用1M HCl溶液酸化并用DCM(3×30mL)萃取。合并的有机相用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(141mg，收率：75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,1H),8.29(d,1H),8.24(t,1H),7.90(d,1H),7.37(d,1H),7.21(s,1H),7.10(s,2H),6.65(d,1H),5.46(t,1H),4.30–4.19(m,2H),4.02(q,2H),3.89(d,2H),3.82(s,3H),3.80–3.74(m,1H),3.57–3.49(m,1H),2.33(t,2H),2.06–1.93(m,2H),1.92–1.71(m,4H),1.69–1.48(m,3H),1.15(t,3H),0.84(t,6H)。
化合物45
SG188
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((S)-2-(2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯：向冰冷却的中间体44(80mg,0.14mmol,1eq)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(71μL,0.41mmol,3eq)、中间体29(82mg,0.14mmol,1eq)和COMU(64mg,0.15mmol,1.1eq)。将所得混合物在室温搅拌20h。随后，加入1M HCl溶液(40mL)并将混合物在室温下搅拌15分钟，之后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,3×30mL)萃取。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液(3×40mL)和盐水(40mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。使用硅胶色谱法(10％ MeOH/DCM)纯化粗制化合物，得到呈白色固体的主题化合物(72mg，收率：54％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),9.44(s,1H),8.48(t,1H),8.28(d,1H),8.20–8.12(m,1H),7.97(d,1H),7.91(t,1H),7.78(d,2H),7.37–7.28(m,3H),7.14(d,1H),7.00(dd,1H),6.79(d,1H),6.55(d,1H),6.47(s,2H),4.90(s,2H),4.27–4.10(m,4H),4.01(q,2H),3.88(d,2H),3.80(s,3H),3.53–3.44(m,6H),3.42–3.35(m,4H),3.27–3.08(m,2H),2.31–2.23(m,2H),2.00–1.87(m,2H),1.81–1.68(m,1H),1.65–1.55(m,2H),1.42–1.30(m,2H),1.14(t,3H),0.93–0.81(m,9H)。C47H65O13N10 m/z的HRMS计算值：977.4727(M+H)+，实测值977.4691。
实施例10：化合物SG189
中间体46
1-苄基5-乙基肉桂酰基甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体42(500mg,0.96mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,5mL)中，并将混合物升温至室温。2h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(5mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.835mL,4.80mmol,5eq)、反式肉桂酸(170mg,1.15mmol,1.2eq)、HOBt(155mg,1.15mmol,1.2eq)、DMAP(催化量)和EDC(220mg,1.15mmol,1.2eq)，并且将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释并用1M HCl溶液(2×30mL)、饱和NaHCO3溶液(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(313mg，收率：59％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(d,1H),8.38(t,1H),7.97(d,1H),7.60–7.54(m,2H),7.48–7.28(m,9H),6.76(d,1H),5.14(d,2H),4.39–4.31(m,1H),4.31–4.24(m,1H),4.01(q,2H),3.91(d,2H),2.35(t,2H),2.08–1.93(m,2H),1.92–1.78(m,1H),1.13(t,3H),0.84(t,6H)。
中间体47
(R)-2-((S)-2-(2-肉桂酰胺基乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-乙氧基-5-氧代戊酸：向乙酸钯(II)(6mg,0.028mmol,0.05eq)在干燥DCM(5mL)的溶液中加入TEA(150μL,1.08mmol,1.95eq)和三乙基硅烷(177μL,1.11mmol,2eq)。将所得黑色溶液搅拌15分钟，然后加入中间体46(306mg,0.555mmol,1eq)在干燥DCM(7mL)中的溶液。将所得混合物在氩气氛下搅拌18h，用DCM(20mL)稀释并用水(3×30mL)萃取。合并的水相用1M HCl溶液酸化并用DCM(2×30mL)萃取。合并的有机相用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(99mg，收率：39％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.67(s,1H),8.37(d,1H),8.28(t,1H),7.93(d,1H),7.57(d,2H),7.47–7.33(m,4H),6.75(d,1H),4.32–4.17(m,2H),4.08–3.97(m,2H),3.91(d,2H),2.33(t,2H),2.06–1.90(m,2H),1.88–1.74(m,1H),1.15(t,3H),0.88–0.79(m,6H)。
化合物48
SG189
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((S)-2-(2-肉桂酰胺基乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯：向冰冷却的中间体47(63mg,0.14mmol,1eq)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(71μL,0.41mmol,3eq)、中间体29(82mg,0.14mmol,1eq)和COMU(64mg,0.15mmol,1.1eq)。将所得混合物在室温搅拌20h。随后，加入1M HCl溶液(40mL)，之后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,2×20mL)萃取混合物。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液(2×40mL)和盐水(40mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。固体残余物用乙醚洗涤，得到呈灰白色固体的主题化合物(44mg，收率：32％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),8.53–8.42(m,1H),8.38–8.24(m,2H),7.96–7.86(m,2H),7.78(d,2H),7.60–7.53(m,2H),7.46–7.36(m,4H),7.34(d,2H),6.73(d,1H),6.48(s,2H),4.90(s,2H),4.28–4.19(m,1H),4.17–4.09(m,3H),4.07–3.97(m,2H),3.91(d,2H),3.54–3.44(m,6H),3.42–3.35(m,4H),3.28–3.10(m,2H),2.32–2.24(m,2H),2.01–1.87(m,2H),1.81–1.67(m,1H),1.66–1.54(m,2H),1.42–1.29(m,2H),1.15(t,3H),0.94–0.79(m,9H)。C46H63O11N10 m/z的HRMS计算值：931.4683(M+H)+，实测值931.4700。
实施例11：化合物SG190
中间体49
1-苄基5-乙基(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体42(500mg,0.96mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/4,4mL)中，并将混合物升温至室温。2h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(5mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.84mL,4.79mmol,5eq)、2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-羧酸(209mg,1.05mmol,1.1eq)、HOBt(142mg,1.05mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(202mg,1.05mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释并用1M HCl溶液(2×30mL)、饱和NaHCO3溶液(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(432mg，收率：75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48–8.43(m,1H),8.40(t,1H),7.91–7.81(m,1H),7.42–7.29(m,6H),7.27–7.18(m,1H),7.04–6.96(m,1H),5.11(d,2H),4.39–4.31(m,1H),4.30–4.22(m,1H),4.08–3.99(m,2H),3.82(d,2H),2.36(t,2H),2.31–2.25(m,1H),2.07–1.92(m,3H),1.90–1.78(m,1H),1.39–1.31(m,1H),1.30–1.22(m,1H),1.19–1.12(m,3H),0.88–0.76(m,6H)。
中间体50
(2R)-2-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-乙氧基-5-氧代戊酸：向乙酸钯(II)(30mg,0.13mmol,0.2eq)在干燥DCM(5mL)的溶液中加入TEA(186μL,1.34mmol,2eq)以及中间体49(411mg,0.67mmol,1eq)在干燥DCM(10mL)中的溶液。搅拌5分钟后，逐滴加入三乙基硅烷(320μL,2.00mmol,3eq)，并将所得混合物在氩气氛下搅拌18h。在通过添加水(30mL)淬灭后，将混合物过滤，用1M HCL溶液酸化并用DCM(3×30mL)萃取。合并的有机相用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈棕色固体的主题化合物(209mg，收率：61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49–8.38(m,1H),8.20(t,1H),7.90–7.81(m,1H),7.38–7.28(m,1H),7.28–7.18(m,1H),7.05–6.97(m,1H),4.31–4.22(m,1H),4.22–4.13(m,1H),4.09–3.97(m,2H),3.81(d,2H),2.38–2.24(m,3H),2.06–1.91(m,3H),1.88–1.72(m,1H),1.38–1.31(m,1H),1.29–1.21(m,1H),1.20–1.13(m,3H),0.83(t,6H)。
化合物51
SG190
(13R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯：向冰冷却的中间体50(70mg,0.14mmol,1eq)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(71μL,0.41mmol,3eq)、中间体29(82mg,0.14mmol,1eq)和COMU(64mg,0.15mmol,1.1eq)。将所得混合物在室温搅拌20h。随后，加入1M HCl溶液(40mL)，之后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,2×30mL)萃取混合物。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)和盐水(30mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。固体残余物用乙醚洗涤，得到呈灰白色固体的主题化合物(22mg，收率：16％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),8.49(t,1H),8.44–8.34(m,2H),7.99–7.87(m,2H),7.78(d,2H),7.38–7.28(m,3H),7.28–7.17(m,1H),7.07–6.93(m,1H),6.51(s,2H),4.90(s,2H),4.31–4.20(m,2H),4.20–4.08(m,2H),4.08–3.95(m,2H),3.81(d,2H),3.55–3.44(m,6H),3.43–3.36(m,4H),3.25–3.10(m,2H),2.32–2.21(m,3H),2.06–1.86(m,3H),1.85–1.70(m,1H),1.65–1.55(m,2H),1.41–1.30(m,3H),1.30–1.21(m,1H),1.21–1.09(m,3H),0.93–0.74(m,9H)。C47H63O11N10F2 m/z的HRMS计算值：981.4640(M+H)+，实测值981.4608。
实施例12：化合物SG196
中间体52
(E)-3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)丙烯酸：向冰冷却的4-氨基肉桂酸(998mg,5.0mmol)在水(4mL)和1M NaOH(6.5mL)中的搅拌溶液中，加入二碳酸二叔丁酯(1.419g,6.5mmol)在二氧六环(20mL)中的溶液。使混合物升温至室温并继续搅拌过夜。真空蒸发二氧六环，然后用乙醚(10mL)洗涤混合物。用1M HCl溶液将水相酸化至pH＝1并用EtOAc(3×20mL)萃取。合并的有机相用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈橙色固体的主题化合物(1.062g，81％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.17(s,1H),9.59(s,1H),7.62–7.55(m,2H),7.53–7.46(m,3H),6.38(d,1H),1.48(s,9H)。
中间体53
((E)-3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：将中间体5(276mg,0.60mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,4mL)中，并将混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发三次并溶解在DMF(3mL)中。在冰中冷却溶液后，添加DIPEA(0.52mL,3.0mmol,5eq)、中间体52(174mg,0.66mmol,1.1eq)、HOBt(89mg,0.66mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(127mg,0.66mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(40mL)稀释并用1MHCl溶液(2×20mL)、饱和NaHCO3溶液(2×20mL)和盐水(20mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈橙色固体的主题化合物(179mg，收率：49％)，其不经任何进一步纯化即用于下一步。
中间体54
((E)-3-(4-氨基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：将中间体53(179mg,0.30mmol)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,4mL)中，并且将混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物溶解在EtOAc(50mL)中并用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈橙色固体的主题化合物(135mg,91％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.46(d,1H),7.34(d,2H),6.70(d,2H),6.42(d,1H),4.48–4.42(m,1H),4.31(d,1H),4.23–4.14(m,2H),4.14–3.92(m,4H),2.43(t,2H),2.27–2.13(m,2H),2.08–1.95(m,1H),1.28(t,3H),1.22(t,3H),0.99(t,6H)。
中间体55
(3-(2-(2-(3-氨基丙氧基)乙氧基)乙氧基)丙基)氨基甲酸叔丁酯：将Boc2O(4.365g,20mmol,1eq)在DCM(40mL)中的溶液逐滴添加至在0℃下搅拌的二乙二醇双(3-氨基丙基)醚(22.021g,100mmol,5eq)在DCM(100mL)中的溶液中。将所得混合物在室温搅拌20h，然后真空蒸发溶剂。将残余物溶解在饱和NaHCO3溶液(50mL)中并用DCM(2×50mL)萃取。合并的有机相用饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到呈无色油状的主题化合物(3.870g，收率：60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.82–6.72(m,1H),3.53–3.34(m,12H),2.96(q,2H),2.57(t,2H),1.63–1.51(m,4H),1.37(s,9H)。
中间体56
4-乙氧基-4-氧代丁酸：将琥珀酸酐(5g,50mmol)悬浮于无水乙醇(15mL)中并且回流2h，之后真空浓缩混合物，得到无色油状的主题化合物(7.31g，收率：100％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.98(s,1H),4.16(q,2H),2.71–2.66(m,2H),2.64–2.60(m,2H),1.26(t,3H)。
中间体57
2,2-二甲基-4,20-二氧代-3,9,12,15-四氧杂-5,19-二氮杂二十三烷-23-酸乙酯：向冰冷却的中间体55(3.870g,12.1mmol,1eq)在DCM(40mL)中的搅拌溶液中加入中间体56(1.942g,13.3mmol,1.1eq)、DIPEA(6.31mL,36.2mmol,3eq)、HOBt(1.795g,13.3mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(2.548g,13.3mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用DCM(30mL)稀释并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到黄色油状的主题化合物(4.471g，收率：83％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.83(t,1H),6.76(t,1H),4.03(q,2H),3.54–3.49(m,4H),3.48–3.44(m,4H),3.41–3.35(m,4H),3.07(q,2H),2.96(q,2H),2.50–2.45(m,2H),2.33(t,2H),1.65–1.54(m,4H),1.37(s,9H),1.17(t,3H)。
中间体58
1-氨基-15-氧代-4,7,10-三氧杂-14-氮杂十八烷-18-酸乙酯：将中间体57(4.41g,9.83mmol)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,25mL)中，并且将混合物升温至室温。4h后，真空蒸发溶剂。残余物与乙醚共蒸发三次，得到黄色油状的主题化合物(4.55g，收率100％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.86(t,1H),7.70(s,2H),4.03(q,2H),3.55–3.43(m,10H),3.38(t,2H),3.07(q,2H),2.91–2.80(m,2H),2.55–2.45(m,2H),2.37–2.28(m,2H),1.77(p,2H),1.60(p,2H),1.17(t,3H)。
中间体59
1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酸乙酯：将化合物10(0.427g,1.20mmol,1eq)溶解于DMSO(20mL)中。将中间体58(1.658g,3.59mmol,3eq)和DIPEA(2.08mL,11.95mmol,10eq)溶解于DCM(1mL)中，并且添加到化合物10在DMSO中的搅拌溶液中。在冰中冷却反应混合物后，加入COMU(1.279g,2.99mmol,2.5eq)并将混合物在室温搅拌20h。添加乙酸乙酯(100mL)和1M NaHCO3溶液(75mL)。真空浓缩混合物后，将其在冰上冷却一小时。过滤沉淀并用水和乙醚洗涤，得到主题化合物(271mg，收率：33％)，其不经任何进一步纯化即用于下一步骤。
中间体60
1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酸：向中间体59(271mg，0.39mmol)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中加入1M NaOH水溶液(4mL)。将混合物在室温下搅拌3h。添加水(6mL)且使用1MHCl溶液酸化混合物。真空蒸发甲醇并将所得悬浮液在冰上冷却1h。过滤所得沉淀，用水和乙醚洗涤，得到呈灰白色固体的主题化合物(207mg，收率80％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.04(s,1H),9.99(s,1H),8.39(t,1H),7.84–7.71(m,3H),7.34(d,2H),6.47(s,2H),4.90(s,2H),4.13(t,2H),3.55–3.40(m,10H),3.39–3.25(m,4H),3.06(q,2H),2.40(t,2H),2.28(t,2H),1.80–1.68(m,2H),1.66–1.53(m,4H),1.43–1.28(m,2H),0.89(t,3H)。
化合物61
SG196
((E)-3-(4-(1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰胺基)苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：向冰冷却的中间体60(33mg,0.05mmol,1eq)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(26μL,0.15mmol,3eq)、中间体54(28mg,0.055mmol,1.1eq)和COMU(24mg,0.055mmol,1.1eq)。将所得混合物在室温下搅拌40h，然后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,30mL)稀释，并用1M HCl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。将固体残余物用乙醚洗涤两次，得到呈灰白色固体状的主题化合物(25mg，收率：44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),8.45–8.37(m,2H),8.33(t,1H),7.92(d,1H),7.87(t,1H),7.82–7.73(m,3H),7.63(d,2H),7.50(d,2H),7.39–7.31(m,3H),6.62(d,1H),6.48(s,2H),4.90(s,2H),4.30–4.21(m,2H),4.13(t,2H),4.10–3.98(m,4H),3.89(d,2H),3.54–3.25(m,14H),3.07(t,2H),2.43–2.29(m,6H),2.04–1.93(m,2H),1.88–1.79(m,1H),1.79–1.68(m,2H),1.66–1.55(m,4H),1.43–1.29(m,2H),1.21–1.12(m,6H),0.93–0.80(m,9H)。
实施例13：化合物SG197
中间体62
(叔丁氧基羰基)-D-谷氨酸二环戊酯：向冰冷却的N-Boc-D-谷氨酸(495mg,2.0mmol,1eq)在DCM(15ml)中的搅拌溶液中，加入环戊醇(0.727mL,8mmol,8eq)、EDC(844mg,4.4mmol,4.4eq)和DMAP(65mg,0.53mmol,0.53eq)。使混合物升温至室温，并继续搅拌过夜。真空蒸发溶剂。将残余物溶解在EtOAc(25mL)中并用1M HCl溶液(2×25mL)、饱和NaHCO3溶液(2×25mL)和盐水(25mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得呈无色油状的主题化合物(625mg，82％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ5.25–5.13(m,2H),5.09(d,1H),4.29–4.20(m,1H),2.44–2.25(m,2H),2.20–2.06(m,1H),1.95–1.82(m,5H),1.79–1.64(m,8H),1.64–1.53(m,4H),1.44(s,9H)。
中间体63
(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二环戊酯：将中间体62(591mg,1.54mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/3,5mL)中，并且使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(4mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(1.34mL,7.7mmol,5eq)、中间体1(368mg,1.70mmol,1.1eq)、HOBt(230mg,1.70mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(326mg,1.70mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释并用1M HCl溶液(2×30mL)、饱和NaHCO3溶液(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈黄色油状的主题化合物(494mg，收率：67％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.69(d,1H),5.25–5.11(m,2H),5.00(s,1H),4.58–4.49(m,1H),3.99(s,1H),2.43–2.25(m,2H),2.23–2.10(m,2H),2.02–1.89(m,1H),1.88–1.78(m,4H),1.75–1.64(m,8H),1.63–1.54(m,4H),1.45(s,9H),0.97(d,3H),0.91(d,3H)。
中间体64
(叔丁氧基羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二环戊酯：将中间体63(462mg,0.96mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/3,5mL)中，并将混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(4mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.84mL,4.8mmol,5eq)、中间体2(184mg,1.05mmol,1.1eq)、HOBt(142mg,1.05mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(201mg,1.05mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释并用1M HCl溶液(2×25mL)、饱和NaHCO3溶液(2×25mL)和盐水(25mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(330mg，收率：64％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.99(d,1H),6.61(d,1H),5.27–5.09(m,3H),4.46(td,1H),4.36(dd,1H),3.90(dd,1H),3.79(dd,1H),2.35(q 2H),2.31–2.22(m,1H),2.20–2.07(m,1H),2.06–1.92(m,1H),1.90–1.79(m,4H),1.77–1.54(m,12H),1.46(s,9H),0.97(d,3H),0.93(d,3H)。
中间体65
((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二环戊酯：将中间体64(108mg,0.20mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/3,4mL)中，并将混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(3mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.174mL,1.0mmol,5eq)、反式阿魏酸(43mg,0.22mmol,1.1eq)、HOBt(30mg,0.22mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(42mg,0.22mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释并用1MHCl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(93mg，收率：76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56(d,1H),7.24(d,1H),7.09–6.97(m,3H),6.92–6.81(m,2H),6.37(d,1H),6.00(s,1H),5.21–5.07(m,2H),4.55–4.47(m,1H),4.46–4.40(m,1H),4.23–4.06(m,2H),3.91(s,3H),2.41–2.29(m,2H),2.26–2.08(m,2H),2.06–1.93(m,1H),1.87–1.76(m,4H),1.74–1.51(m,12H),1.00–0.88(m,6H)。
化合物66
SG197
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二环戊酯：向冰冷却的中间体60(19mg,0.029mmol,1.2eq)在DMF(2mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(13μL,0.073mmol,3eq)、中间体65(15mg,0.024mmol,1eq)和COMU(13mg,0.029mmol,1.2eq)。将所得混合物在室温下搅拌18h，然后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,30mL)稀释并用1M HCl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。将固体残余物用乙醚洗涤两次，得到呈灰白色固体的主题化合物(9mg，收率：29％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),8.42–8.36(m,1H),8.31(t,1H),7.96(d,1H),7.86(t,1H),7.81–7.73(m,3H),7.51(d,1H),7.48–7.38(m,3H),7.34(d,2H),6.84(d,1H),6.47(s,2H),5.10–5.00(m,2H),4.90(s,2H),4.30–4.16(m,2H),4.13(t,2H),3.96(s,3H),3.92(d,2H),3.52–3.37(m,10H),3.32–3.22(m,4H),3.15–3.03(m,2H),2.48–2.39(m,2H),2.39–2.25(m,4H),2.01–1.88(m,2H),1.86–1.68(m,7H),1.66–1.48(m,16H),1.45–1.30(m,2H),0.93–0.82(m,9H)。
实施例14：化合物SG198
中间体67
(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：向冰冷却的Boc-L-丙氨酸(1.457g,7.7mmol,1.1eq)在乙酸乙酯(50mL)中的搅拌溶液中添加HOBt(1.040g,7.7mmol,1.1eq)和DCC(1.589g,7.7mmol,1.1eq)。搅拌30分钟后，加入中间体3(1.678g,7mmol,1eq)、DIPEA(3.05mL,17.5mmol,2.5eq)和DMAP(催化量)，并将所得混合物在室温下搅拌18h，之后加入己烷(20mL)。将混合物过滤并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈灰白色结晶固体的主题化合物(2.149g，收率：82％)，其不经任何进一步纯化即用于下一步骤。
中间体68
(叔丁氧基羰基)甘氨酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：将中间体67(1.872g,5.0mmol)加入到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,20mL)中，并将混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发三次。同时，将HOBt(0.743g,5.5mmol,1.1eq)、DCC(1.135g,5.5mmol,1.1eq)和DMAP(催化量)添加到冰冷却的中间体2(0.963g,5.5mmol,1.1eq)在乙酸乙酯(30mL)中的搅拌溶液中。30分钟后，加入脱保护的中间体67在乙酸乙酯(20mL)和DIPEA(4.35mL,25.0mmol,5eq)中的溶液，并将所得混合物在室温搅拌18h。添加己烷(20mL)，之后过滤混合物并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈灰白色结晶固体的主题化合物(1.93g，收率：90％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.16(d,1H),6.73(d,1H),5.29(s,1H),4.60–4.49(m,2H),4.21–4.10(m,4H),3.90–3.74(m,2H),2.46–2.33(m,2H),2.23–2.15(m,1H),2.06–1.96(m,1H),1.45(s,9H),1.40(d,3H),1.28–1.23(m,6H)。
中间体69
((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)-甘氨酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：将中间体68(129mg,0.3mmol,1eq)加入到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,4mL)中，并且使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发三次并溶解在DMF(3mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.261mL,1.5mmol,5eq)、反式阿魏酸(64mg,0.33mmol,1.1eq)、HOBt(45mg,0.33mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(63mg,0.33mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释并用1MHCl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(66mg，收率：43％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(d,1H),7.18(d,1H),7.06(dd,1H),7.01(d,1H),6.92-6.88(m,2H),6.61(t,1H),6.33(d,1H),5.91(s,1H),4.62-4.51(m,1H),4.22 -4.00(m,6H),3.91(s,3H),2.45-2.33(m,2H),2.25-2.17(m,1H),2.08–1.99(m,1H),1.42(d,3H),1.28-1.21(m,6H)。
化合物70
SG198
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：向冰冷却的中间体60(42mg,0.064mmol,1.2eq)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(28μL,0.16mmol,3eq)、中间体69(27mg,0.053mmol,1eq)和COMU(27mg,0.064mmol,1.2eq)。将所得混合物在室温下搅拌18h，然后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,30mL)稀释并用1M HCl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。将固体残余物用乙醚洗涤两次，得到呈灰白色固体的主题化合物(32mg，收率：52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.01(s,1H),8.46–8.31(m,2H),8.28–8.19(m,1H),7.96–7.87(m,1H),7.80–7.73(m,3H),7.47–7.39(m,2H),7.34(d,2H),7.17(dd,1H),7.09(d,1H),6.75(d,1H),6.48(s,2H),4.90(s,2H),4.39–4.29(m,1H),4.29–4.22(m,1H),4.16–3.97(m,6H),3.85(d,2H),3.81(s,3H),3.55–3.40(m,10H),3.32–3.23(m,4H),3.15–3.03(m,2H),2.48–2.41(m,2H),2.37–2.30(m,4H),2.07–1.97(m,1H),1.94–1.81(m,1H),1.77–1.69(m,2H),1.66–1.57(m,4H),1.42–1.30(m,2H),1.24(d,3H),1.21–1.11(m,6H),0.95–0.84(m,3H)。
实施例15：化合物SG199
中间体71
(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：向冰冷却的Boc-L-苯丙氨酸(2.043g,7.7mmol,1.1eq)在乙酸乙酯(50mL)中的搅拌溶液中添加HOBt(1.040g,7.7mmol,1.1eq)和DCC(1.589g,7.7mmol,1.1eq)。搅拌30分钟后，加入中间体3(1.678g,7mmol,1eq)、DIPEA(3.05mL,17.5mmol,2.5eq)和DMAP(催化量)，并将所得混合物在室温下搅拌18h，之后加入己烷(20mL)。将混合物过滤并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈灰白色结晶固体的主题化合物(2.397g，收率：76％)，其不经任何进一步纯化即用于下一步骤。
中间体72
(叔丁氧基羰基)甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：将中间体71(2.253g,5.0mmol)加入到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,20mL)中，并使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发三次。同时，将HOBt(0.743g,5.5mmol,1.1eq)、DCC(1.135g,5.5mmol,1.1eq)和DMAP(催化量)加入到冰冷却的中间体2(0.963g,5.5mmol,1.1eq)在乙酸乙酯(30mL)中的搅拌溶液中。30分钟后，加入脱保护的中间体71在乙酸乙酯(20mL)和DIPEA(4.35mL,25.0mmol,5eq)中的溶液，并将所得混合物在室温搅拌18h。加入己烷(20mL)，之后过滤混合物并用1M HCl溶液(2×50mL)、饱和NaHCO3溶液(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈白色固体的主题化合物(1.93g，收率：76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31-7.20(m,5H),6.76(d,1H),6.61(d,1H),5.14(s,1H),4.76-4.70(m,1H),4.48-4.43(m,1H),4.19-4.08(m,4H),3.85-3.73(m,2H),3.16-3.02(m,2H),2.20-2.16(m,2H),2.07–1.99(m,1H),1.91-1.82(m,1H),1.43(s,9H),1.28-1.23(m,6H)。
中间体73
((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)-甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：将中间体72(152mg,0.3mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,4mL)中，并将混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发三次并溶解在DMF(3mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.261mL,1.5mmol,5eq)、反式阿魏酸(64mg,0.33mmol,1.1eq)、HOBt(45mg,0.33mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(63mg,0.33mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释并用1MHCl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到呈灰白色固体的主题化合物(84mg，收率：48％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.66-7.46(m,3H),7.23–6.92(m,8H),6.85(d,1H),6.36(d,1H),4.92-4.86(m,1H),4.52-4.47(m,1H),4.13-4.03(m,6H),3.83(s,3H),3.14-3.02(m,2H),2.14-2.09(m,2H),2.06-1.98(m,1H),1.93-1.83(m,1H),1.22-1.18(m,6H)。
化合物74
SG199
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯：向冰冷却的中间体60(41mg,0.062mmol,1.2eq)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(27μL,0.15mmol,3eq)、中间体73(30mg,0.051mmol,1eq)和COMU(26mg,0.062mmol,1.2eq)。将所得混合物在室温下搅拌18h，然后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,30mL)稀释并用1M HCl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。将固体残余物用乙醚洗涤两次，得到呈灰白色固体的主题化合物(14mg，收率：22％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),8.51–8.36(m,2H),8.33–8.24(m,1H),7.81–7.74(m,4H),7.54–7.30(m,5H),7.29–7.07(m,6H),6.81(d,1H),6.51(s,2H),4.90(s,2H),4.30–4.01(m,8H),3.96(s,3H),3.87(d,2H),3.57–3.37(m,10H),3.33–3.19(m,4H),3.15–3.03(m,4H),2.48–2.40(m,4H),2.23(t,2H),2.00–1.89(m,1H),1.85–1.68(m,3H),1.68–1.56(m,4H),1.44–1.31(m,2H),1.23–1.15(m,6H),0.96–0.85(m,3H)。
实施例16：化合物SG200
中间体75
1-苄基5-乙基((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：将中间体42(156mg,0.3mmol,1eq)添加到冰冷却的TFA和DCM的搅拌混合物(1/5,4mL)中，并使混合物升温至室温。3h后，真空蒸发溶剂。将残余物与乙醚共蒸发四次并溶解在DMF(3mL)中。在冰中冷却溶液后，加入DIPEA(0.261mL,1.5mmol,5eq)、反式阿魏酸(64mg,0.33mmol,1.1eq)、HOBt(45mg,0.33mmol,1.1eq)、DMAP(催化量)和EDC(63mg,0.33mmol,1.1eq)，并将所得混合物在室温下搅拌18h。将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释并用饱和NH4Cl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩得到呈白色固体的主题化合物(89mg，收率：50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),8.45(d,1H),8.19(t,1H),7.91(d,1H),7.41–7.28(m,6H),7.14(d,1H),7.00(dd,1H),6.79(d,1H),6.57(d,1H),5.11(d,2H),4.39–4.31(m,1H),4.30–4.23(m,1H),4.01(q,2H),3.88(d,2H),3.81(s,3H),2.35(t,2H),2.09–1.92(m,2H),1.92–1.79(m,1H),1.14(t,3H),0.83(t,6H)。
化合物76
SG200
1-苄基5-乙基((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯：向冰冷却的中间体60(58mg,0.088mmol,1eq)在DMF(2mL)的搅拌溶液中加入DIPEA(47μL,0.27mmol,3eq)、中间体75(52mg,0.088mmol,1eq)和COMU(42mg,0.098mmol,1.1eq)。将所得混合物在室温下搅拌18h，然后用DCM和异丙醇的混合物(3/1,30mL)稀释并用1M HCl溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3溶液(2×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥并真空浓缩。将固体残余物用乙醚洗涤两次，得到呈灰白色固体的主题化合物(31mg，收率：28％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),8.46(d,1H),8.39(t,1H),8.32(t,1H),7.97(d,1H),7.91(t,1H),7.83–7.74(m,2H),7.47–7.29(m,9H),7.17(dd,1H),7.09(d,1H),6.77(d,1H),6.47(s,2H),5.13(d,2H),4.90(s,2H),4.40–4.24(m,2H),4.12(t,2H),4.01(q,2H),3.91(d,2H),3.80(s,3H),3.54–3.23(m,14H),3.15–3.03(m,2H),2.48–2.41(m,4H),2.38–2.32(m,2H),2.06–1.94(m,2H),1.93–1.81(m,1H),1.78–1.67(m,2H),1.67–1.56(m,4H),1.42–1.30(m,2H),1.14(t,3H),0.93–0.80(m,9H)。
实施例17：缀合化合物的体外评价
PBMC细胞毒性测定
测试了本发明的TLR7和NOD2缀合的化合物激活外周血单核细胞(PBMC)针对癌细胞系的细胞毒活性的能力。该测定中PBMC的主要效应部分是自然杀伤(NK)细胞，它们通过针对异常细胞(尤其是肿瘤细胞和病毒感染细胞)的直接细胞毒活性而在先天免疫系统中发挥重要作用。下文描述的基于流式细胞术的方法，通过共温育PBMC和癌细胞来测量PBMC针对靶癌细胞系的细胞毒活性，这些癌细胞由羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)预先标记，以将它们与效应细胞区分开来。所测试化合物成功激活效应细胞导致靶细胞群中更高程度的细胞死亡。
在该测定中将慢性粒细胞白血病K562和慢性B细胞白血病MEC-1细胞系用作靶细胞。在进行测定之前，将两种细胞系预培养至少10天。在即将靶细胞添加到PBMC之前，将靶细胞在37℃下在黑暗中用2μM的CFSE染色15分钟。然后用培养基洗涤细胞并以200,000个细胞/mL重新悬浮。
通过使用Ficoll-Paque密度梯度溶液离心从全血中分离PBMC。离心后，PBMC用PBS洗涤两次，并以4,000,000个细胞/mL重悬于培养基中。为进行测定，将PBMC以每孔400,000个细胞接种在96孔微量滴定板上，并在所述化合物存在下在37℃下一式两份培养20h。
所述化合物制备如下：首先，在DMSO中制备1mM浓度的缀合化合物的储备溶液。然后将培养基中缀合化合物的工作稀释液直接添加到PBMC中，以确保1μM的最终浓度。
在存在化合物的情况下温育PBMC后，将10,000个CFSE染色的靶细胞添加到每个孔中，使效应细胞与靶细胞的最终比例为40:1。共温育4h后，用SYTOXTM蓝色(SYTOXTM Blue)(Invitrogen)核酸染料对细胞进行染色，并用流式细胞术进行分析。从CFSE阳性群体中选出死的(SYTOXTM蓝色染色阳性)靶细胞，提供靶细胞群体中被杀死的细胞的比例。
图1和图2展示了缀合化合物激活PBMC针对MEC-1和K562靶细胞的细胞毒活性的能力。SG48、SG144和RH32是经测试的本发明的缀合化合物。将培养基用作对照，并且结果以与对照的比率给出。将中间化合物SG8用作已知的脱胞壁酰肽(desmuramylpeptide)类型的NOD2激动剂(Gobec et al.2018)。将中间化合物SG43用作已知的嘌呤类型的TLR7激动剂(Akinbobuyi et al.2016)。使用SG8和SG43的组合来将缀合化合物的活性与NOD2和TLR7激动剂的未缀合混合物的活性进行比较。
BMDC向CD4+和CD8+T-淋巴细胞的抗原呈递
检测了本发明的缀合化合物对小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)向T-淋巴细胞的抗原呈递的影响。使用选定的化合物和卵清蛋白预处理BMDC后，通过检测受影响的T-淋巴细胞的活化和增殖程度，用流式细胞术观察了卵清蛋白向CD4+或CD8+T-淋巴细胞的抗原呈递。
通过从小鼠后腿采集骨髓获得BMDC。然后在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)存在下，将收获的细胞培养10天，以确保分化为树突状细胞。将BMDC以每孔10,000个细胞接种在96孔微量滴定板上，并在37℃下用缀合化合物和卵清蛋白(50μg/mL)一式两份刺激20h。这段时间后，去除上清液并加入CD4+T-淋巴细胞或CD8+T-淋巴细胞。
化合物制备如下：首先，在DMSO中制备1mM浓度的缀合化合物的储备溶液。然后将培养基中缀合化合物的工作稀释液直接添加到BMDC中，以确保最终浓度范围为1nM至1μM。
CD4+和CD8+T-淋巴细胞分别从OT-II和OT-I转基因小鼠的脾脏单细胞悬浮液中获得。它们表达与CD4或CD8辅助受体配对并对卵清蛋白抗原具有特异性的T-细胞受体。收获脾脏后，分使用MACS分离技术(分别为Miltenyi Biotec CD4+T细胞分离试剂盒或CD8+T细胞分离试剂盒)富集CD4+或CD8+细胞级分(fraction)。然后用CFSE对T-淋巴细胞进行染色，并以每孔50,000个细胞的量添加到BMDC中。
在37℃下共培养BMDC和T-淋巴细胞72h后，通过流式细胞术测量CD25的表达来评估T-淋巴细胞的活化，CD25是活化的T-淋巴细胞的特征。同时，测量CFSE荧光强度以评估T-淋巴细胞增殖。图3和图4显示了具有低CFSE荧光强度的CD25阳性T-淋巴细胞的比率，表示在共培养期间分裂的活化T-淋巴细胞。SG48、SG144和RH32是测试的本发明的缀合化合物。将培养基用作阴性对照。将LPS(1μg/mL)用作阳性对照。将中间化合物SG8用作已知的脱胞壁酰肽类型的NOD2激动剂(Gobec et al.2018)。将中间化合物SG43用作已知的嘌呤类型的TLR7激动剂(Akinbobuyi et al.2016)。使用SG8和SG43的组合以比较缀合化合物的活性与NOD2和TLR7激动剂的未缀合混合物的活性。
图5和图6展示了使用化合物SG48和SG144的实验中CD25阳性和CFSE低T-淋巴细胞的剂量依赖性比率。
此外，使用Th1/Th2/Th17细胞因子细胞计数珠阵列(BD Biosciences)在细胞上清液中测量所选细胞因子的浓度。图7A-7G展示了响应于用本发明化合物(SG144)预处理的BMDC呈递的卵清蛋白，IL-2(图7A)、IL-4(图7B)、IL-6(图7C)、IL-10(图7D)、IL-17A(图7E)、IFN-γ(图7F)和TNF(图7G)的CD4+和CD8+T-淋巴细胞分泌。将培养基用作阴性对照。将LPS(1μg/mL)用作阳性对照。将中间化合物SG8用作已知的脱胞壁酰肽类型的NOD2激动剂(Gobec et al.2018)。将中间化合物SG43用作已知的嘌呤类型的TLR7激动剂(Akinbobuyiet al.2016)。将SG8和SG43的组合用于比较缀合化合物的活性与NOD2和TLR7激动剂的未缀合混合物的活性。
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Claims (28)

1.一种具有根据式I的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐、外消旋体、非对映异构体、对映异构体、酯或前药，其中：
·R1为H、卤素、OH、SH、CF3、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基、C5-C9杂环基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基-(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)SO2NH-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、RaRbN-或RaRbN(C＝O)-，其中，烷基、烷氧基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；
·R2每次出现时独立地选自H、卤素、OH、CHF2、CF3、CH2CF2、羧基、CN、NO2、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C6-C10芳基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、(C1-C6烷基)SO2NH-、RaRbN-和RaRbN(C＝O)-，其中，烷基、烷氧基、芳基和环烷基可以任选地被取代；
·Ra和Rb彼此独立地选自H、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基，或Ra和Rb可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中，烷基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代；
·X1为单键、-O-、-S-、-NRc-、-C(＝O)-或-SO2-；
·Rc为H、C1-C6烷基或C3-C10环烷基；
·L为连接基团；
·n为0、1、2、3或4；并且
·R3为选自由以下组成的组的NOD2激动剂：
其中：
·X2为单键、-O-、-S-、-NRd-、-C(＝O)-或-SO2-；
·Rd为H、C1-C6烷基或C3-C10环烷基；
·X3为-(CH2)2-、-(CH＝CH)-或亚环丙基；
·R4每次出现时独立地选自H、卤素、OH、CHF2、CF3、CH2CF2、羧基、CN、NO2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C10环烷基、(C1-C6烷基)C(＝O)-、(C1-C6芳基)C(＝O)-、(C1-C6烷基)S-、(C1-C6烷基)C(＝O)O-、(C1-C6烷基)OC(＝O)-、(C1-C6烷基)C(＝O)NH-、(C1-C6烷基)SO2NH-、ReRfN-和ReRfN(C＝O)-，其中，烷基、烷氧基、芳基和环烷基可以任选地被取代；
·Re和Rf彼此独立地选自H、C1-C6烷基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基，或Re和Rf可以与氮原子一起形成C5-C6杂环；
·R5为C1-C6烷基或氨基酸的特定侧链；
·R6每次出现时独立地选自OH、C1-C18烷氧基、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-、(C6-C10芳基)O-、(C5-C9杂环基)O-和RgRhN-，其中，烷氧基、烯基、环烷基、芳基或杂环基可以任选地被取代；并且
·Rg和Rh彼此独立地选自H、C1-C18烷基、C2-C18烯基、C3-C10环烷基、C6-C10芳基和C5-C9杂环基，或Rg和Rh可以与氮原子一起形成C5-C6杂环，其中，烷基、烯基、环烷基、芳基和杂环基可以任选地被取代。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，n为1。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，R1为氢、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)S-或CF3。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中，R1为C1-C6烷氧基或C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中，R1为n-BuO-。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中，R2在每种情况下独立地选自氢、卤素和C1-C6烷基。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中，R2在每种情况下为氢。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中，X1为-O-、-NH-或-C(＝O)-。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中，L选自由以下组成的组：氨基酸、肽、非肽聚合物接头和非聚合物脂肪族接头。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中，L为非肽聚合物接头或非聚合物脂肪族接头。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中，L为包含2至100个重复乙二醇单元的聚乙二醇链。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中，L为包含2、3、4、5、6、7、8、9或10个重复乙二醇单元的聚乙二醇链。
13.根据权利要求10所述的化合物，其中，L为非聚合物脂肪族接头。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物，其中，X2为-O-、-NH-或-C(＝O)-。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中，X3为-CH＝CH-或亚环丙基。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中，R4在每种情况下独立地选自氢、卤素、OH、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其中，R5为C1-C6烷基或天然氨基酸的特定侧链。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中，R5为C1-C6烷基，或缬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸的特定侧链。
19.根据权利要求18所述的化合物，其中，R5为缬氨酸的特定侧链。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物，其中，R6在每种情况下独立地选自OH、NH2、(C2-C18烯基)O-、(C3-C10环烷基)O-和C1-C18烷氧基。
21.根据权利要求20所述的化合物，其中，R6在每种情况下独立地选自OH、(C3-C10环烷基)O-和C1-C18烷氧基。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中，所述化合物选自由以下组成的组：
((E)-3-(4-((6-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)己酰基)-氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯，
N5-(2-(2-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯甲酰胺基)乙氧基)乙基)-N2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酰胺乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(4-异丙基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((S)-2-(2-((E)-3-(3,4-二氟苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(15R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-15-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((S)-2-(2-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((S)-2-(2-肉桂酰胺基乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
(13R)-1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-13-((2S)-2-(2-(2-(3,4-二氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-1,12-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-16-酸乙酯，
((E)-3-(4-(1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰胺基)苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二乙酯，
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸二环戊酯，
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯，
((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-D-谷氨酸二乙酯，和
1-苄基5-乙基((E)-3-(4-((1-(4-((6-氨基-2-丁氧基-8-羟基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1,17-二氧代-6,9,12-三氧杂-2,16-二氮杂二十烷-20-酰基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-D-谷氨酸酯。
23.一种用于制备权利要求1至22中任一项限定的式I的化合物(可变基团在权利要求1至22任一项中限定)的方法，所述方法包括使式V的化合物与式VI的化合物反应：
H-L-R3
式VI，
或使式VII的化合物与式VIII的化合物、式IX的化合物或式X的化合物反应：
和任选地之后进行以下程序中的一个或多个：
·去除任何保护基团，
·形成药学上可接受的盐，
·将式I的化合物转化为另一种式I的化合物。
24.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，用于在药物中使用。
25.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，用于在治疗病症中使用，在所述病症中，TLR7和NOD2受体的激动作用是有益的。
26.根据权利要求25所述的用于使用的化合物，其中，所述病症选自由以下组成的组：病毒感染、细菌感染、真菌感染、原虫感染、肿瘤、癌症和免疫性疾病。
27.一种药物组合物，包含根据权利要求1至22中任一项所述的化合物以及一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体。
28.一种疫苗，包含根据权利要求1至22中任一项所述的化合物。
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