CN116546990A - Cd73抑制剂及其药学应用 - Google Patents

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Abstract

提供了CD73(也称为胞外‑5’‑核苷酸酶)抑制剂化合物，及其用于治疗和/或预防CD73相关的疾病、失调和病症(包括癌症相关和免疫相关失调)的组合物和用途。CD73抑制剂化合物包括具有如式I’：(I’)所示结构的化合物及其药学上可接受的酯或盐。

Description

CD73抑制剂及其药学应用
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年11月25日递交的中国专利申请号202011346141.0以及2020年12月23日递交的美国专利申请号17/133,348的优先权的权益，其通过引用整体并入本文。
技术领域
本发明涉及抑制CD73(胞外-5'-核苷酸酶)的化合物和组合物，及其用于治疗和/或预防CD73相关或相关联的疾病、失调和病症(包括癌症相关和免疫相关失调)的用途。
背景技术
胞外核苷酸酶是一组位于细胞表面的胞外酶。胞外核苷酸酶家族的成员包括胞外-核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(E-NPP)、胞外-核苷三磷酸二磷酸水解酶(E-NTPDase)、胞外-5'-核苷酸酶(e5NT，也称为CD73)和碱性磷酸酶(AP)。这些酶使各种细胞外核苷酸水解成包括腺苷的核苷。胞外核苷酸是重要信号分子，它们通过作用于其各自受体(例如，腺苷激活P1受体，其核苷酸(ADP、ATP)激活P2受体)来触发细胞的应答。腺苷5'-单磷酸(AMP)是CD73的主要底物，其被水解为腺苷。腺苷普遍存在于体内，是对许多生理和病理生理过程至关重要的嘌呤能细胞信号传导的重要调节因子。
大量数据表明，CD73在癌症发展和转移中具酶活性。CD73在许多癌细胞类型和肿瘤中被上调，表明CD73的表达与肿瘤新血管生成、侵入和转移有关。从细胞外ATP到腺苷的水解级联是肿瘤微环境中重要的免疫抑制性调节途径。CD73过表达损害适应性抗肿瘤免疫应答，并促进肿瘤生长和转移。细胞外腺苷还涉及对缺氧的适应性反应的调节。已经表明，用单克隆抗体，siRNA和包括AMPCP(腺苷[(α,β)-亚甲基]二磷酸酯)在内的小分子抑制剂来降低e5NT活性以使肿瘤的生长和转移减弱(参见例如，Zhou et al.,Oncol.Rep.17(2007):1341-1346；Stagg and Smyth,Oncogene,29(2010):5346-5358)。在CD73缺陷小鼠中肿瘤生长也受到损害，并且已经证实这些作用主要归因于这些小鼠中腺苷产生的减少。因此，人们已经开始积极探索CD73抑制剂对癌症的治疗方面的潜在应用(参见例如，M.al-Rashida etal.,Eur.J.Med.Chem.,115(2016):484-494以及其中所引用的文献)。
肿瘤细胞部分通过免疫抑制机制实现克服抗肿瘤应答。存在几种这样的免疫调节机制。其中，腺苷是肿瘤微环境中由癌细胞和免疫细胞产生并被用于抑制抗肿瘤反应的关键因子。三磷酸腺苷(ATP)受两种细胞表面蛋白CD73和CD39催化而生成腺苷，并且该过程在代谢应激条件(如肿瘤缺氧状态)下会增强。腺苷通过在各种免疫细胞表达的四种腺苷受体(AR，分别被称为A1、A2A、A2B和A3)来发挥其免疫调节功能。腺苷生成酶(如CD73和AR)的过表达已与多种癌症类型中的肿瘤发展相关。由于AR的信号传导使肿瘤进展增加，对该信号传导的调节也就代表了用于癌症的一种很有前景的治疗方法(M.H.Kazemi,et al.,J.Cell.Physiol.,233(2018):2032-2057以及其中所引用的文献)。
如上所述，胞外核苷酸酶是位于细胞表面的酶，用于调节嘌呤能(或嘧啶能)信号传导途径。存在着四种不同的胞外核苷酸酶家族：胞外核苷酸三磷酸二磷酸水解酶(CD39)、胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶、碱性磷酸酶和胞外-5'-核苷酸酶(e5NT，也称为CD73)。CD73是一种糖基磷脂酰肌醇锚定的二锌金属磷酸酶。CD73催化细胞外腺苷单磷酸(AMP)去磷酸化从而生成腺苷。它与CD39协作形成胞外酶级联，从而由ATP产生腺苷。由CD73催化的将AMP转化为腺苷的过程被认为是肿瘤微环境中细胞外腺苷水平升高的主要因素(Stagg,J.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.:107(2010):1547-1552)。CD73的表达由于缺氧诱导因子-1α而直接上调，这解释了在缺氧恶性肿瘤中观察到的细胞外腺苷增加。CD73还被调节性T细胞(Treg)表达并促进Treg介导的免疫抑制(Stagg J,et al.,Cancer Res.71(2011):2892-2900)。此外，CD73受转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肝细胞生长因子(HGF)、白介素-6(IL-6)、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、白介素-2(IL-2)、视黄酸、int/无翅(WNT)、上皮间质转化和p53突变的诱导。CD73在多种肿瘤类型中被过度表达，并促进肿瘤细胞的侵入、转移和粘附。CD73还与癌症中的免疫耐受性和不良预后相关。因此CD73是研发抗癌药物中有希望的靶点。此外，CD73抑制剂在治疗由腺苷及其受体介导的其它疾病中具有潜力(Y.-P.Gong,et al.,ExpertOpin.Ther.Pat.,28(2018):167-171)。
腺苷途径还被认为许多人类肿瘤的主要免疫抑制组分(综述参见Whiteside,T.L.,Expert Rev.Anticancer Ther.,17(2017):527-535)。腺苷和肌苷是癌症中关键的免疫关卡。腺苷和PGE2通路在肿瘤微环境中的合作有助于抑制抗肿瘤免疫效应细胞。因此，用药物抑制剂或抗体靶向腺苷途径是癌症中有前景的治疗策略。
在临床前体内研究中，阻断胞外核苷酸酶或腺苷受体信号传导的活性已成功抑制肿瘤生长和转移。腺苷途径阻断法单独或与其他免疫疗法(包括关卡抑制剂)的联合使用现今正处于在晚期恶性肿瘤患者中进行初始I期临床试验阶段。
CD73的小分子抑制剂已有报道。例如，Adams等人(国际PCT申请公开号WO2017/098421)记载了取代的苯并噻二嗪衍生物(为CD73抑制剂)、其药物组合物及其在治疗癌症、癌前期综合征和与CD73抑制相关的疾病中的用途。
Debien等人(国际PCT申请公开号WO2017/120508；美国专利申请公开号US2017/0267710)记载了通过胞外-5'-核苷酸酶调节AMP转化成腺苷的化合物、含该化合物的组合物、合成该化合物的方法，以及这些化合物和组合物用于治疗和/或预防由胞外-5'-核苷酸酶介导的多种疾病的用途。
Cacatian等人(国际PCT申请公开号WO2015/164573)记载了嘌呤衍生物及其药物组合物，它们是CD73的抑制剂并且可用于治疗癌症。
Chen等人(国际PCT申请公开号WO 2018/049145)公开了作为胞外核苷酸酶抑制剂的核苷酸的制备以及这些化合物在治疗或预防癌症中的用途。
发明内容
本发明涉及这样的化合物和组合物：其包含抑制胞外-5'-核苷酸酶(也称为e5NT、CD73、NT5E和5NT)活性的化合物。CD73酶活性的抑制导致细胞外腺苷水平的抑制或调节，从而调节细胞和组织的生理环境。
本发明还涉及这种化合物和组合物在治疗和/或预防全部或部分由CD73介导的疾病、失调和病症中的用途。CD73抑制剂已经应用到许多疾病的治疗中，这些疾病包括癌症、纤维化、神经和神经退行性疾病(例如抑郁症和帕金森病)、缺血性心脑血管疾病、免疫相关疾病和具有炎性成分的疾病。在具体实施方式中，本文所述的CD73抑制剂化合物和组合物可以起到抑制CD73的免疫抑制活性和/或抗炎活性的作用，并且当需要这种抑制时可用作治疗性或预防性疗法。
在第一概括性方面中，提供了式I'的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
其中：W为氧；X'为-P(＝O)(OR)-，其中，R'为氢；Y为-PO3R'2，其中，R'为氢；R1'为羟基(–OH)；R2'为氯(–Cl)；以及R3'和R4'与它们所连接的氮原子一起形成单环、双环、三环、螺环或稠环体系，其中环体系是取代或未取代的。
在第二概括性方面中，提供了式I的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
其中：R1和R2独立地选自氢、未取代或取代的芳基、未取代或取代的杂芳基、未取代或取代的4-8元环状基团，以及未取代或取代的4-8元杂环基团；或者，R1和R2与它们所连接的碳原子一起形成4-8元的碳环或杂环，其中环部分是单环、与芳环稠合的环，或者具有酮官能团的环；m和n独立地选自0至4的整数，条件是m和n之和等于或大于2；当m>1时，每个R3相同或不同，且当n>1时，每个R4相同或不同；并且每个R3和每个R4各自独立地选自氢、卤素、未取代或取代的芳基、未取代或取代的杂芳基，以及4-8元碳环或杂环；或者，当m为2、3或4时，相邻的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环，并且R4和其他R3(如果存在)独立地选自氢或卤素；或者当n为2、3或4时，相邻的两个R4与它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环，并且R3和其他R4(如果存在)独立地选自氢或卤素。
在另一概括性方面中，提供了式II的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
其中：p和q独立地为0至3的整数，条件是p和q不同时为0，并且当p或q为0时，不存在碳以及与其连接的R基团；r、s和t独立地为0至2的整数；R5和R6独立地选自H、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、取代或未取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者，R5和R6与它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环；R7、R8、R9和R10独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者R8和R9与它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的碳环，或者未取代或取代的芳环；或者R7与其所连接的碳一起形成羰基。
在另一概括性方面中，提供了式III的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
其中：R5选自氢、C1至C6的烷基、未取代或取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；p和q独立地为0至3的整数，条件是p和q不同时为0，并且当p或q为0时，不存在碳和与其连接的R基团；以及R7、R8、R9和R10独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者，R8和R9与它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的碳环或者未取代或取代的芳环；或者R7与其所连接的碳一起形成羰基。
在另一概括性方面中，提供了式IV的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
其中：X选自氢、卤素、氨基、羟基和C1至C6的烷基；p和q独立地为0至3的整数，条件是p和q不同时为0，并且当p或q为0时，不存在碳和与其连接的R基团；r为0至2的整数；并且R7、R8、R9和R10独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者，R8和R9与它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的碳环或者未取代或取代的芳环；或者R7与其所连接的碳一起形成羰基。
在另一概括性方面中，提供了式V的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
其中：r和s独立地选自0至2的整数，条件是r和s不同时为0；p和q独立地为0至3的整数，条件是p和q不同时为0，并且当p或q为0时，不存在碳和与其连接的R基团；R5和R6独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者，R5和R6以及它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环；R7和R10独立地选自H、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基；或者R7与其所连接的碳一起形成羰基；以及X选自氢、卤素、氨基、羟基和C1至C6的烷基。
在另一概括性方面中，提供了式VI的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
其中，r和s独立地为0至2的整数，条件是r和s不同时为0；R5和R6独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者，R5和R6以及它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环；R11和R12独立地选自氢、未取代或取代的芳基、未取代或取代的杂芳基，以及未取代或取代的4-8元环的碳环或杂环；或者R11和R12与其所连接的碳一起形成未取代或取代的4-8元杂环。
在另一概括性方面中，提供了式I'的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
其中：W为氧、硫、氮或亚甲基；X'为选自磷酰基(-P(＝O)(OR’)-)、磺酰基(-S(＝O)2-)和羰基(-C(＝O)-)的部分，其中，R'为氢、成酯基团或者保护基团；或者X'和W一起形成–(CR7'R8')n，其中，n为0至3的整数，并且R7'和R8'独立地选自氢、卤素、羟基和具有1至4个碳原子的低级烷基；Y选自膦酸根(-PO3R'2)、磺酸根(-SO3R')和羧酸根(-CO2R')，其中，R'为氢、成酯基团或者保护基团；R1'为羟基和氢；R2'为氯或氢；以及R3'和R4'独立地选自氢、烷基、烯基和炔基，其中，R3'和R4'中的至少一个具有1至30个碳原子，例如但不限于1至10、11至20、11至30或者21至30个碳原子，并且其中当W为O或S时，碳原子数不是1至10(即，当W是O或S时，R3'和R4'中的至少一个具有11至30个碳原子)。
在式I'的一个实施方式中，R3'和R4'以及它们所连接的氮原子形成杂环体系，该杂环体系独立地选自单环、双环、三环、螺环、稠环和桥环体系。
在式I'的一个实施方式中，R3'和R4'独立地选自氢和环体系，所述环体系为含单环、双环、三环、螺环、稠环或桥环的碳环体系(芳香性的或非芳香性的)或杂环体系，并且所述环体系是取代或未取代的，条件是R3'和R4'不同时为氢，并且条件是当W是O或S时，所述环体系不是单环。
在式I'的又一实施方式中，R3'为氢或低级烷基(例如，C1-6)，且R4'为-C(＝O)R5'、–C(＝O)NHR5'或者-C(＝O)OR5'，其中R5'为C1-30烷基、C2-30烯基或C2-30炔基，其中当W是O或S时，C1-10和C2-10基团被排除在外(即，当W是O或S时，R5'是C11-30烷基、C11-30烯基或C11-30炔基)。
在式I'的一些实施方式中，R3'为氢或低级烷基，且R4'为-C(＝O)R5'、–C(＝O)NHR5'或者-C(＝O)OR5'，其中R5'为环体系，所述环体系为含单环、双环、三环、螺环、稠环或桥环的碳环体系(芳香性的或非芳香性的)或杂环体系，并且所述碳环或杂环体系为取代或未取代的，条件是，当W是O或S时，所述R5'环体系不是单环环体系。
在式I'的一些实施方式中，R3'和R4'不是苄基。
在式I'的一些实施方式中，所述双环不是联苯环。
在式I'的一些实施方式中，R3'和R4'不是苄基，并且所述双环不是联苯环。
在一个实施方式中，提供了式II'和/或式III'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中，W、X'、Y、R1'、R3'和R4'如上所限定。
在另一实施方式中，提供了式IV'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中，X'、Y、R1'、R2'、R3'和R4'如上所限定。
在另一实施方式中，提供了式IV'a的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中，X'、Y、R1'、R2'、R3'和R4'如上所限定。
在另一实施方式中，本发明提供了式IV'b的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中，X'、Y、R1'、R2'、R3'和R4'如上所限定。
在另一实施方式中，本发明提供了式IV'c的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中，m'是0至3的整数，X’、Y、R1'、R2'、R3'和R4'如上所限定，R7'和R8'独立地选自氢、卤素、羟基和具有1至4个碳原子的低级烷基。
在又一实施方式中，提供了式V'和/或式VI'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中，X'、Y、R1'、R3'和R4'如上所限定。
在另一实施方式中，本发明提供式V'a和/或式VI'a的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中X'、Y、R1'、R2'、R3'和R4'如上所限定。
在另一实施方式中，本发明提供式VII'和/或式VIII'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中R'为氢、成酯基团或者保护基团；并且R1'、R2'、R3'和R4'如上所限定。
在另一实施方式中，本发明提供式VII'a和/或式VIII'a的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中R'为氢、成酯基团或者保护基团；并且R1'、R2'、R3'和R4'如上所限定。
在又一实施方式中，本发明提供了式IX'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中，R'为氢、成酯基团或者保护基团；以及R1'、R2'、R3'和R4'如上所限定。
在又一实施方式中，本发明提供了式IX'a的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
其中：R'为氢、成酯基团或者保护基团；以及R1'、R2'、R3'和R4'如上所限定。
在式IX'a的实施方式中，R'为氢、成酯基团或者保护基团，R1'为羟基或氢；R2'为氢或氯；以及R3'为氢或低级烷基，并且R4'为具有1至30个碳原子的烷基、烯基或炔基；或者R3'为氢或低级烷基，并且R4'为含单环、双环、三环或多环的环体系的取代基，其中，所述环体系为稠环体系、螺环体系、桥环体系或并联环体系，并且所述环体系为碳环、脂肪族环、芳香性环、杂环或它们的组合；或者R3'为氢或低级烷基，并且R4'为-C(＝O)R5'、-C(＝O)NHR5'或者-C(＝O)OR5'，其中R5'为具有1至30个碳原子的烷基、烯基或炔基；或者R3'氢或低级烷基，并且R4'为-C(＝O)R5'或-C(＝O)NHR5'，其中R5'为含碳环或杂环体系的取代基，所述碳环或杂环体系含有双环、三环、螺环、稠环或桥环，所述碳环体系为芳香性的或非芳香性的，所述杂环体系为取代的或未取代的，其中，所述环为碳环、脂肪族环、芳香性环、杂环或它们的组合；或者R3'为氢或低级烷基，并且R4'为未取代或取代的1-金刚烷基、α-萘基甲基或β-萘基甲基；或者R3'、R4'和它们所连接的氮原子一起形成独立地选自单环、双环、三环、螺环、稠环或桥环的杂环体系。
在式IX'a的一个实施方式中，R'为氢、成酯基团或者保护基团；R1'为羟基或氢；R2'为氯或氢；R3'为氢或低级烷基；并且R4'为含金刚烷基部分的基团。在一些这样的实施方式中，R4'为取代或未取代的1-金刚烷基，或者取代或未取代的2-金刚烷基。在一些这样的实施方式中，R4'为取代或未取代的1-金刚烷基甲基。在一些这样的实施例中，R4'为取代或未取代的1-金刚烷基乙基、取代或未取代的1-金刚烷基丙基，或者取代或未取代的1-金刚烷基丁基。
在式IX'a的一个实施方式中，R'为氢、成酯基团或保护基团，R1'为羟基或氢，R2'为氯或氢；R3'为氢或低级烷基；并且R4'为含有萘基部分的基团。在一些这样的实施方式中，R4'为取代或未取代的α-萘基或者取代或未取代的β-萘基。在一些这样的实施方式中，R4'为取代或未取代的α-萘基甲基，或者取代或未取代的β-萘基甲基。在一些这样的实施方案中，R4'选自取代或未取代的萘基乙基、取代或未取代的萘丙基基，和取代或未取代的萘基丁基。
在式IX'a的一些实施方式中，稠合的三环结构是取代或未取代的咔唑基部分。
在一个实施方式中，R1'为羟基(即，化合物中的碳水化物部分(carbohydratemoiety)是D-核糖基部分)。在另一实施方式中，R1'为氢(即，化合物中的碳水化物部分是2-脱氧-D-核糖基部分)。
在另一实施方式中，R2'为氢。在又一实施方式中，R2'为氢，且R1'为羟基(即，该化合物是腺苷衍生物)。在另一实施方式中，R2'为氢，R1'为氢(即，该化合物是脱氧腺苷衍生物)。在另一个实施方案中，R2'为氢，R3'和R4'都不是氢(即，该化合物是腺嘌呤部分的氨基上具有取代基的腺苷衍生物或脱氧腺苷衍生物)。在另一实施方式中，R2'为氯，且该化合物是2-氯-D-腺苷衍生物或2-氯-D-脱氧腺苷衍生物。
在一些实施方式中，R3'为氢或低级烷基(例如，C1-6)，且R4'为具有1至30个碳原子的烷基、烯基或炔基(即，C1-30烷基、C2-30烯基或C2-30炔基)，且当W为O或S时，R4'具有11至30个碳原子。在一些实施方式中，R3'为氢或低级烷基，且R4'为含有金刚烷基部分的基团。R4'为可以是例如取代或未取代的1-金刚烷基、取代或未取代的2-金刚烷基、取代或未取代的1-金刚烷基甲基、取代或未取代的1-金刚烷基乙基、取代或未取代的1-金刚烷基丙基，或者取代或未取代的1-金刚烷基丁基。在一些实施方式中，R3'为氢或低级烷基，并且R4'为含萘基部分的基团。R4'为可以是例如取代或未取代的α-萘基、取代或未取代的β-萘基、取代或未取代的α-萘基甲基、取代或未取代的β-萘基甲基、取代或未取代的萘基乙基、取代或未取代的萘基丙基，或者取代或未取代的萘基丁基。
在另一实施方式中，R3'为氢或低级烷基，R4'为含单环、双环、三环或多环体系的取代基，其中所述环体系是稠环、螺环、桥环或并联环体系，并且其中所述环体系为碳环、脂肪族环、芳香性环、杂环或它们的组合。
在进一步实施方式中，R3'为氢或低级烷基，R4'为-C(＝O)R5'、-C(＝O)NHR5'或者-C(＝O)OR5'，其中R5'为具有1至30个碳原子的烷基或烯基或炔基，其中当W是O或S时，C1至C10基团被排除在外。
在一些实施方式中，R3'为氢或低级烷基，且R4'为C(＝O)R5'、-C(＝O)NHR5'或者-C(＝O)OR5'，其中R5'为含单环、双环、三环或多环体系的取代基，其中所述环体系是稠环、螺环、桥环或并联环体系，并且其中所述环体系为碳环、脂肪族环、芳香性环、杂环或它们的组合，其中当W是O或S时，R5'不是单环体系。
在一个实施方式中，R4'为含金刚烷基部分的基团。在进一步实施方式中，R4'为取代或未取代的1-金刚烷基或2-金刚烷基。在又一实施方式中，R4'为取代或未取代的1-金刚烷基甲基。在一些实施方式中，R4'为1-金刚烷基乙基、1-金刚烷基丙基或1-金刚烷基丁基，其中金刚烷基部分可以是取代的或未取代的。
在另一个实施方式中，R4'为含有萘基部分的基团。在进一步实施方式中，R4'为取代或未取代的α-萘基或β-萘基。在其它实施方式中，R4'为α-萘基甲基或β-萘基甲基，没有或具有进一步取代。在又一实施方式中，R4'为选自萘基乙基、萘基丙基和萘基丁基，其中萘基部分可以是未取代的或取代的。
在另一实施方式中，R3'和R4'与它们所连接的氮一起形成三环稠环体系，例如但不限于取代或未取代的咔唑基部分。
在另一实施方式中，R3'和R4'与它们所连接的氮一起形成独立地选自单环、双环、三环、螺环、稠环和桥环的杂环体系。
在一些实施方式中，本发明提供了表1的化合物及其药学上可接受的盐或酯。
表1.示例性化合物的结构
在一些实施方式中，提供了表1a的化合物及其药学上可接受的盐或酯。
表1a.示例性化合物的结构
在一些实施方式中，提供了表1b的化合物及其药学上可接受的盐或酯。
表1b：示例性化合物的结构
在一些实施方式中，提供了表1c的化合物及其药学上可接受的盐或酯。
表1c：示例性化合物的结构
在一些实施方式中，提供了表1d的化合物及其药学上可接受的盐或酯。
表1d.示例性化合物的结构
在一些实施方式中，提供了如本文所述的化合物中的C、H、O和N原子各自独立地选自天然丰度的原子和同位素富集原子的化合物。同位素富集原子的实例包括但不限于：对于碳，12C、13C和14C；对于氢，1H、2H和3H；对于氧，16O、17O和18O；对于氮，14N和15N。
在另一概括性方面，还提供了药物组合物，该药物组合物包括：本文所限定的化合物或其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的载体。在一些实施方式中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括式I至式VI、式I'至式IX'、式IV'a、式IV'b、式IV'c、式V'a、式VI'a、式VII'a或式VIII'a中任一种的化合物或其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的载体。在一些实施方式中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括式I至式VI中任一种的化合物或其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的载体。在一些实施方式中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括式I'至式IX'中任一种的化合物或其药学上可接受的盐或酯，其中，在该化合物中，当W是O或S时，R3'和R4'之一不是氢或C1至C10的烷基、烯基或炔基。在一些实施方式中，提供了包括表1、1a、1b、1c、1d中所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括乳膏、乳剂、凝胶、脂质体或纳米颗粒。
在一些实施方式中，药物组合物适用于口服施用。在一些这样的实施方式中，组合物为硬壳明胶胶囊、软壳明胶胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂、粉剂、颗粒剂、弹丸剂、香锭剂(pastille)或糖衣丸的形式。在一些实施方式中，组合物为溶液、水性液体悬浮液、非水性液体悬浮液、水包油液体乳液、油包水液体乳液、酏剂或糖浆的形式。在一些实施方式中，组合物具有肠溶包衣。在一些实施方式中，组合物配制用于控制释放。
在一些实施方式中，该药物组合物是可注射的。
在一些实施方式中，药学上可接受的载体进一步包括至少一种另外的治疗剂，例如但不限于化学治疗剂、免疫和/或炎症调节剂、抗高胆固醇血症剂、抗感染剂或免疫关卡抑制剂。在实施方式中，所述至少一种另外的治疗剂是免疫关卡抑制剂。免疫关卡抑制剂的非限制性实例包括伊匹单抗、纳武单抗和派姆单抗。
在另一概括性方面，提供了在有需要的受试者中抑制CD73活性的化合物、组合物和方法，包括向受试者施用有效量的本文所述的化合物和/或药物组合物。、
在具体实施方式中，本发明所述的化合物起到抑制CD73免疫抑制活性和/或抗炎活性的作用，并且当需要这种抑制时用作治疗性或预防性疗法。除非另有说明，否则在本文描述本发明化合物的用途时，应当理解的是，这些化合物可为组合物(例如药物组合物)的形式。如本文所使用的，术语“CD73抑制剂”、“CD73阻断剂”、“腺苷的胞外-5'-核苷酸酶抑制剂”、“NT5E抑制剂”、“5NT抑制剂”和所有其他相关领域的可接受的术语可互换使用来表示在体外测试、体内模型和/或表示CD73抑制和潜在治疗或预防疗效的其他测试中能够直接或间接抑制CD73受体的化合物。该术语也指在人类受试者中呈现出至少一些治疗或预防益处的化合物。
尽管本发明的化合物被认为通过抑制CD73来发挥作用，但是本发明的实施并不需要精确理解化合物的潜在作用机理。例如，化合物也可具有至少部分通过调节(例如抑制)嘌呤能信号传导途径的其他组分(例如CD39)而产生作用。嘌呤能信号传导系统由转运蛋白，酶，以及(主要)用于ATP和其细胞外分解产物腺苷的合成、释放、作用和细胞外失活的受体组成。因为CD73的抑制减少了腺苷的产生，所以CD73抑制剂可用于治疗由腺苷介导的疾病或失调，并且其对腺苷受体(包括A1、A2A、A2B和A3)发挥作用。
在本发明中，所描述的嘌呤能信号传导过程包含以下组分。嘌呤能受体(P1、P2X和P2Y)是第一种组分，为介导作为对ATP或腺苷释放的应答的各种生理功能(例如肠道平滑肌的松弛)的膜受体；一般而言，所有细胞都具有通过调节胞吐作用将核苷酸释放到细胞外环境中的能力。第二组分为核苷转运蛋白(NT)，其是跨越细胞膜转运核苷底物(例如腺苷)的膜转运蛋白；腺苷的细胞外浓度可以由NT调节，可能是以反馈环的形式连接受体信号传导与转运蛋白功能。如前所述，胞外核苷酸酶(CD73和CD39)水解释放到细胞外环境中的核苷酸还包含另外的组分。
在一些实施方式中，本发明提供了用于治疗或预防受试者(例如人)的癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种本发明所述的CD73抑制剂化合物或组合物。在此类方法的一些实施方式中，以有效逆转、减缓或阻止CD73介导的免疫抑制进展的量向受试者施用至少一种CD73抑制剂化合物或组合物。在一些实施方式中，通过抗原呈递细胞(APC)介导CD73介导的免疫抑制。
可以使用本发明所述的化合物和组合物治疗或预防的癌症或肿瘤的类型并没有特别的限制。可以使用本发明所述的化合物和组合物治疗或预防的癌症和肿瘤的实例包括但不限于：前列腺、结肠直肠、胰腺、宫颈、胃、子宫内膜、脑、肝、膀胱、卵巢、睾丸、头、颈、皮肤(包括黑色素瘤和基底癌)、间皮膜、白细胞(包括淋巴瘤和白血病)、食道、乳腺、肌肉、结缔组织、肺(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、肾上腺、甲状腺、肾或骨的癌症，胶质细胞瘤，间皮瘤，肾细胞癌，胃癌，肉瘤，绒毛膜癌，皮肤基底细胞癌和睾丸精原细胞瘤。在本发明的一些实施方式中，癌症是黑素瘤，结肠癌，胰腺癌，乳腺癌，前列腺癌，肺癌，白血病，脑瘤，淋巴瘤，肉瘤，卵巢癌或卡波西肉瘤。
在一些实施方式中，本发明提供了治疗接受骨髓移植或外周血干细胞移植的受试者的方法，包括施用足够治疗有效量的CD73抑制剂化合物或组合物以增加对肿瘤抗原的迟发型超敏反应、延迟移植后恶性肿瘤复发的时间、增加移植后不复发存活率和/或增加移植后长期存活率。
在某些实施方式中，本发明提供了用于治疗或预防受试者(例如人类)中的感染性病症(例如病毒感染)的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的本发明所述的至少一种CD73抑制剂化合物或组合物。在一些实施方式中，感染性病症是病毒感染(例如慢性病毒感染)、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。在某些实施方式中，病毒感染是人类免疫缺陷病毒或巨细胞病毒。
在其它实施方式中，本发明提供了用至少一种本发明所提供的CD73抑制剂化合物或组合物来治疗和/或预防免疫相关的疾病、失调和病症，具有炎性成分的疾病，以及与上述相关的失调的方法。
通过抑制CD73活性可全部或部分治疗或预防的其它疾病、失调和病症，也是本发明提供的CD73抑制剂化合物和组合物的候选适应症。
在一些实施方式中，本发明进一步提供了本文所述的CD73抑制剂化合物和组合物与一种或多种另外的药剂的组合的用途。该一种或多种另外的药剂可具有一些CD73-调节活性和/或它们可通过不同的作用机制起作用。在一些实施方式中，这样的试剂包含放射(例如局部放射疗法或全身放射疗法)和/或非药理学性质的其他治疗形式。当使用组合疗法时，CD73抑制剂和一种另外的药剂可以是单一组合物或多种组合物的形式，并且治疗方式可以同时、依次或通过一些其他方案来施用。举例来说，在一些实施方式中，提供了在放疗阶段之后进行化疗阶段的治疗方案。联合疗法可以具有叠加效应或协同效应。
在一些实施方式中，本发明提供了本文所述的CD73抑制剂化合物或组合物与骨髓移植、外周血干细胞移植或其他类型的移植疗法的组合的用途。
在具体的实施方式中，本发明提供了本文所述的CD73功能抑制剂与免疫关卡抑制剂组合的用途。据表明，阻断免疫关卡(其导致抗原特异性T细胞应答的扩增)在人类癌症治疗中是有前景的方法。免疫关卡(配体和受体)的非限制性实例包括PD1(程序性细胞死亡蛋白1)、PDL1(PD1配体)、BTLA(B和T淋巴细胞衰减剂)、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4)、TIM3(T细胞膜蛋白3)、LAG3(淋巴细胞激活基因3)、A2aR(腺苷A2a受体A2aR)和杀伤剂抑制受体，这些免疫关卡中的一些在各种类型的肿瘤细胞中选择性上调，是阻断的候选者。免疫关卡抑制剂的非限制性实例包括伊匹单抗、纳武单抗和派姆单抗。
在其它实施方式中，本发明提供了治疗受试者的癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种CD73抑制剂化合物或其组合物和至少一种化疗剂，所述化疗剂包括但不限于：烷基化剂(例如氮杂环丁烷，如苯丁酸氮杂环丁烷、环磷酰胺、异氟酰胺、二氯甲基二乙胺、美法仑和尿嘧啶氮杂环丁烷；氮丙啶类，如噻替哌；甲磺酸酯类，如白消安；核苷类似物，如吉西他滨；亚硝基脲，如卡莫司汀、洛莫司汀和链脲佐菌素；拓扑异构酶1抑制剂，如伊立替康；铂络合物，如顺铂和卡铂；生物还原烷化剂，如丝裂霉素、丙卡巴肼、达卡巴嗪和六甲蜜胺)；DNA链断裂剂(例如博来霉素)；拓扑异构酶II抑制剂(如安吖啶、更生霉素、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、柔比星、依托泊苷和替尼泊苷)；DNA小沟结合剂(例如，Plicamydin)；抗代谢物(例如叶酸拮抗剂，如甲氨蝶呤和三甲曲沙；嘧啶拮抗剂，如氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、CB3717、阿扎胞苷、阿糖胞苷和氟尿苷；嘌呤拮抗剂，如巯嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、氟达拉滨、喷司他丁；天冬酰胺酶；以及核糖核苷酸还原酶抑制剂，如羟基脲)；微管蛋白相互作用剂(例如长春新碱、雌莫司汀、长春碱、多西他赛、埃坡霉素衍生物和紫杉醇)；激素类(例如雌激素；结合雌激素；乙炔雌二醇；己烯雌酚；氯地孕酮；地孕烯；孕激素，如己酸羟基孕酮、甲羟孕酮和甲地孕酮；以及雄激素，如睾酮、丙酸睾酮、氟甲睾酮和甲睾酮)；肾上腺皮质类固醇(例如泼尼松；地塞米松；甲基强的松龙和泼尼松龙)；促黄体激素释放剂或促性腺激素释放激素拮抗剂(例如醋酸亮丙瑞林和醋酸戈舍瑞林)；以及抗激素抗原(例如他莫昔芬，抗雄激素药如氟他胺；和肾上腺素药如米托坦和氨鲁米特)。本发明还提供了CD73抑制剂与本领域已知的其他药剂(例如三氧化二砷)以及将来可能开发的其他化疗剂结合的用途。
在涉及治疗癌症的方法的一些实施方式中，治疗有效量的CD73抑制剂与至少一种化学治疗剂组合施用所观察的癌症存活率高于单独施用任一种药剂所观察到的癌症存活率。在涉及治疗癌症的方法的其他实施方式中，治疗有效量的CD73抑制剂与至少一种化学治疗剂的组合施用所观察到肿瘤尺寸的减小或肿瘤生长的减慢优于单独施用任一种药剂所观察到的肿瘤尺寸的减小或肿瘤生长减慢。
在进一步实施方式中，本发明提供了用于治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种CD73抑制剂化合物或组合物，以及至少一种信号转导抑制剂(STI)。在具体的实施方式中，所述至少一种STI选自bcr/abl激酶抑制剂、表皮生长因子(EGF)受体抑制剂、her-2/neu受体抑制剂和法尼基转移酶抑制剂(FTI)所组成的组。
在其它实施方式中，本发明提供了使受试者中对肿瘤细胞的排斥增强的方法，包括联合施用CD73抑制剂化合物或组合物与至少一种化学治疗剂和/或放射疗法，其中所得到的肿瘤细胞的排斥优于通过单独施用CD73抑制剂、化学治疗剂或放射疗法所得到的排斥。
在进一步实施方式中，本发明提供了用于在受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种CD73抑制剂和至少一种不同于CD73抑制剂的免疫调节剂。应该理解的是，如本发明所用，“CD73抑制剂”是指本发明提供的化合物，例如，式I至式VI、式I'至式IX'、式IV'a、式IV'b、式IV'c、式V'a、式VI'a、式VII'a或式VIII'a中任一种的化合物或表1、1a、1b、1c和1d中任一种的化合物或其药学上可接受的盐或酯，以及涉及其药物组合物。
在一些实施方式中，本发明提供了在有需要的受试者中治疗或预防CD73相关疾病、失调或病症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种CD73抑制剂或其药物组合物，从而在受试者中治疗或预防CD73相关疾病、失调或病症。在一些实施方式中，以有效逆转、减缓或停止受试者中CD73介导的免疫抑制进程的量施用化合物。
在一些实施方式中，CD73相关疾病、失调或病症为癌症，例如但不限于前列腺、结肠、直肠、胰腺、宫颈、胃、子宫内膜、脑、肝、膀胱、卵巢、睾丸、头、颈、皮肤、间皮膜、白细胞、食道、乳腺、肌、结缔组织、肺、肾上腺、甲状腺、肾或骨的癌症。在一些实施方案中，癌症是成胶质细胞瘤、间皮瘤、肾细胞癌、胃癌、肉瘤、绒毛膜癌、皮肤基底细胞癌或睾丸精原细胞瘤。在一些实施方式中，癌症是黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、白血病、脑瘤、淋巴瘤、卵巢癌或卡波西肉瘤。
在一些实施方式中，与CD73相关的疾病、失调或病症为免疫相关疾病、失调或病症，选自类风湿性关节炎、肾衰竭、狼疮、哮喘、牛皮癣、结肠炎、胰腺炎、过敏症、纤维化、贫血纤维肌痛、阿尔茨海默氏病、充血性心力衰竭、中风、主动脉瓣狭窄、动脉硬化、骨质疏松症、帕金森病、感染、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、过敏性接触性皮炎、湿疹、系统性硬化症和多发性硬化症。
在一些实施方式中，本文提供的方法进一步包括向受试者施用至少一种另外的治疗剂。该至少一种另外的治疗剂可以与本文所述的化合物或组合物同时或依次给药。在一些实施方式中，至少一种另外的治疗剂为化学治疗剂、免疫和/或炎症调节剂、抗高胆固醇血症剂或者抗感染剂。在一实施方式中，至少一种另外的治疗剂是免疫关卡抑制剂，例如但不限于伊匹单抗、纳武单抗或派姆单抗。
在一些实施方式中，本发明提供了用于在受试者(例如，人类)中治疗或预防感染性病症(例如病毒感染)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种CD73抑制剂和治疗有效量的抗感染剂(例如一种或多种抗微生物剂)。
在另外的实施方式中，感染性疾病的治疗通过疫苗和施用治疗有效量的本发明提供的CD73抑制剂的联合施用来实现。在一些实施方式中，疫苗是抗病毒疫苗，包括例如抗HIV疫苗。在其它实施方式中，疫苗对抗结核或疟疾是有效的。在其它实施方式中，疫苗是肿瘤疫苗(例如对黑素瘤有效的疫苗)；肿瘤疫苗可以包含遗传修饰的肿瘤细胞或遗传修饰的细胞系，包括遗传修饰的肿瘤细胞或已被转染以表达粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)的遗传修饰的细胞系。在具体的实施方式中，疫苗包含一种或多种免疫原性肽和/或树突细胞。
在涉及通过施用本发明提供的CD73抑制剂和至少一种另外的治疗剂治疗感染的某些实施方式中，单独施用CD73抑制剂和另外的治疗剂任一种所观察到的相同感染症状相比，在施用两者之后观察到的感染症状有所改善。在一些实施方案中，观察到的感染症状可以是病毒载量减少、CD4+T细胞计数增加、机会性感染减少、存活时间增加、慢性感染根除或它们的组合。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗受试者癌症的方法，包括向受试者施用有效量的本文所述的化合物或组合物和免疫关卡抑制剂，从而治疗受试者的癌症。本文所述的化合物或组合物和免疫关卡抑制剂可以组合或依次施用。化合物或组合物可以在免疫关卡抑制剂之后或在免疫关卡抑制剂给药之前施用。在一些实施方式中，化合物或组合物和/或免疫关卡抑制剂在其他抗癌治疗例如但不限于放射治疗之前、同时或之后施用。在一些实施方案中，免疫关卡抑制剂选自伊匹单抗、纳武单抗和派姆单抗。
在另一概括性方面，本发明还提供了包括本文所述化合物或组合物的试剂盒。试剂盒可进一步包含缓冲剂或赋形剂，和/或使用说明。在一些实施方式中，试剂盒还包括至少一种另外的治疗剂，例如但不限于化疗剂、免疫和/或炎症调节剂、抗高胆固醇血症剂、抗感染剂或免疫关卡抑制剂。
附图说明
为了更好地理解本发明并更清楚地展示出如何实现本发明，现通过示例的方式并参考附图，阐述了根据本发明的实施方式的特征，其中：
图1为化合物9的CD73抑制率曲线(％抑制vs.Log[Conc.]/nM)；
图2为化合物22的CD73抑制率曲线；
图3为化合物d-1的CD73抑制率曲线；以及
图4为化合物a的CD73抑制率曲线。
具体实施方式
被诊断患有癌症以及死于癌症的案例持续增加。包括化学疗法和放射疗法的传统治疗方法通常使受试者难以忍受，并且随着癌(例如肿瘤)进化来规避这种治疗，从而使得这些治疗方法变得不那么有效。最近的实验证据表明CD73抑制剂可能代表着用于癌症(例如乳腺癌)的重要的新型治疗方式。
有希望的数据还表明CD73功能抑制剂具有抑制CD73的抗炎活性和/或CD73的免疫抑制活性的作用，因此CD73抑制剂可用于治疗例如免疫抑制性疾病(例如，HIV和AIDS)。抑制CD73对于患有神经性或神经性精神疾病或失调(例如抑郁症)的受试者也可能是重要治疗策略。
本发明尤其提供了具有CD73抑制活性的小分子化合物及其组合物，以及使用该化合物和组合物治疗和预防本文所述的疾病、失调和病症的方法。本发明提供的化合物可用作CD73的抑制剂，因此可用于治疗其中CD73活性起作用的疾病、失调和病症中。另外，本发明提供的化合物可用作腺苷受体(例如A2A受体)的抑制剂。因此，本发明提供的化合物可用于治疗与一种或多种腺苷受体的活性相关的疾病、失调和病症。
在一实施方式中，本发明提供了治疗患有癌症或由CD73介导的失调的受试者(例如人类)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明所提供的CD73抑制剂，例如本发明所提供的化合物或其药学可接受的组合物。
应该理解的是，药物组合物包含本发明所公开的化合物(或其药学上可接受的盐或酯)和药学上可接受的载体、添加剂或溶媒(vehicle)。在某些实施方式中，组合物中化合物的量使得其能有效地作为生物样品(例如体外测定法，体内模型等)或受试者中的CD73抑制剂。在某些实施方式中，组合物被配制用于施用于需要这种组合物的受试者。在一些实施方式中，组合物是可注射的制剂。在其它实施方式中，组合物被配制为用于口服施用至受试者。
本发明还提供了治疗患有癌症或腺苷受体(例如A2AR)介导的失调的受试者(例如人)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明所提供的CD73抑制剂，例如本发明提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在某些实施方式中，组合物中化合物的量使得其有效地用作生物样品(例如体外测定法，体内模型等)或受试者中腺苷受体(例如A2AR)的抑制剂。在某些实施方式中，组合物被配制为用于施用至需要这种组合物的受试者。在一些实施方式中，组合物是可注射的制剂。在其它实施方式中，组合物被配制为用于口服施至受试者。在一些实施方式中，组合物为硬壳明胶胶囊、软壳明胶胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂、粉剂、颗粒剂、弹丸剂、香锭剂或糖衣丸的形式。在一些实施方案中，组合物为溶液、水性液体悬浮液、非水性液体悬浮液、水包油液体乳液、油包水液体乳液、酏剂或糖浆的形式。在一些实施方式中，组合物是肠溶包衣的。在一些实施方式中，组合物被配制用于控制释放。
在又一实施方式中，本发明提供了用于治疗或预防受试者中癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种CD73抑制剂和至少一种信号转导抑制剂(STI)。在一具体实施方式中，所述至少一种STI选自由bcr/abl激酶抑制剂、表皮生长因子(EGF)受体抑制剂、her-2/neu受体抑制剂和法尼基转移酶抑制剂(FTI)所组成的组。本发明还提供使受试者中对肿瘤细胞的排斥增强的方法，包括联合施用CD73抑制剂与至少一种化学治疗剂和/或放射疗法，其中所得到的肿瘤细胞的排斥优于通过单独施用CD73抑制剂、化学治疗剂或放射疗法所得到的排斥。在进一步实施方式中，本发明提供了用于在受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种CD73抑制剂和至少一种不同于CD73抑制剂的免疫调节剂。
在其它实施方式中，本发明提供了用于在受试者(例如人类)中治疗或预防感染性病症(例如病毒感染)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种CD73抑制剂和治疗有效量的抗感染剂(例如一种或多种抗微生物剂)。
在另外的实施方式中，感染性疾病的治疗通过疫苗和施用治疗有效量的本文提供的CD73抑制剂的联合施用来实现。在一些实施方式中，疫苗是抗病毒疫苗，包括例如抗HIV疫苗。在其它实施方式中，疫苗对抗结核或疟疾是有效的。在又一实施方式中，疫苗是肿瘤疫苗(例如对黑素瘤有效的疫苗)；肿瘤疫苗可以包含遗传修饰的肿瘤细胞或遗传修饰的细胞系，包括遗传修饰的肿瘤细胞或已被转染以表达粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)的遗传修饰的细胞系。在具体实施方式中，疫苗包含一种或多种免疫原性肽和/或树突细胞。
在涉及通过施用CD73抑制剂和至少一种另外的治疗剂治疗感染的某些实施方式中，单独施用CD73抑制剂和另外的治疗剂任一种所观察到的相同感染症状相比，在施用两者之后观察到的感染症状有所改善。在一些实施方式中，观察到的感染症状可以是病毒载量减少、CD4+T细胞计数增加、机会性感染减少、存活时间增加、慢性感染根除，或它们的组合。
定义
为了对本发明的说明书中所使用的术语提供清楚且一致的理解，在下文中提供一些定义。此外，除了特殊说明，本发明所用的全部技术和科学术语具有同本发明所属领域中普通技术人员通常所理解的相同的含义。
当在权利要求和/或说明书中与术语“包括”结合使用时，词语“一(a或an)”的使用可以表示“一个/种”，但它也与“一个/种或多个/种”，“至少一/种个”和“一个/种或多于一个/种”的含义已知。类似地，词语“另一个/种”可以表示至少第二个/种或者很多个/种。
如在本说明书和权利要求中所使用，词语“包括(comprising)”(以及包括(comprising)的任何形式，诸如“包括(comprise)”和“包括(comprises)”)，“具有(having)”(以及具有(having)的任何形式，诸如“具有(have)”、“具有(has)”)，词语“包含(containing)”(以及包含(containing)的任何形式，诸如“包含(contain)”和“包含(contains)”)是包括性的和开放式的，并且不排除另外的未列出的要素或处理步骤。
术语“约”用于表示该值包括在确定该值中所用的仪器和方法带来的固有误差变化。
本发明所用的术语“衍生物”应理解为与该化合物结构上类似，在一些细微结构上不同的另一种化合物。
本说明书涉及了本领域技术人员所使用的许多化学术语和缩写。然而，为了清楚和一致性，提供了所选术语的定义。
本发明所用术语“烷基”是指具有1至30个碳原子的饱和烃，包括直链，支链和环状的烷基。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、异丙基、叔丁基、仲丁基、异丁基、环丙基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。术语烷基包括未取代的烷基和取代的烷基。术语“C1至Cn烷基”(其中n是2至30的整数)表示具有1至所示“n”个碳原子的烷基。烷基残基可以是取代的或未取代的。在一些实施方式中，例如，烷基可以被羟基、氨基、羧基、羧酸酯、酰胺、氨基甲酸酯或氨基烷基等基团取代。在一些具体的实施方式中，“烷基”被一系列碳原子数修饰，因此烷基的大小被具体定义。例如，C11-C30烷基表示包含至少11个碳原子且不超过30个碳原子的烷基。
本发明所用术语“无环的”是指没有环体系的有机部分。术语“脂肪族基团”包括特征为直链或支链的有机部分，通常具有1至15个碳原子。脂肪族基团包括非环状烷基、烯基和炔基。
本发明所用术语“烯基”是指具有2至30个碳原子的不饱和烃，包括直链、支链和环状非芳族的烯基，并且包含1至6个碳-碳双键。烯基的实例包括但不限于乙烯基、烯丙基、1-丙烯-2-基、1-丁烯-3-基、1-丁烯-4-基、2-丁烯-4-基、1-戊烯-5-基、1,3-戊二烯-5-基、环戊烯基、环己烯基、乙基环戊烯基、乙基环己烯基等。术语烯基包括未取代的烯基和取代的烯基。术语“C2至Cn烯基”和“C2-n烯基”(其中n是3至30的整数)可互换使用，是指具有2至所示“n”个碳原子的烯基。在一些具体的实施方式中，“烯基”被一系列碳原子数修饰，因此烯基的大小被具体定义。例如，C11-C30烯基表示包含至少11个碳原子且不超过30个碳原子的烯基。
本发明所用术语“炔基”是指具有2至30个碳原子的不饱和烃，包括直链、支链和环状非芳族的炔基，并且包含1至6个碳-碳三键。炔基的实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔-3-基、1-丁炔-4-基、2-丁炔-4-基、1-戊炔-5-基、1,3-戊二炔-5-基等。术语炔基包括未取代的炔基和取代的炔基。术语“C2-Cn炔基”和“C2-n炔基”(其中n是3至30的整数)可互换使用，是指具有2至所示“n”个碳原子的炔基。在一些具体的实施方式中，“炔基”被一系列碳原子数修饰，因此炔基的大小被具体定义。例如，C11-C30炔基表示包含至少11个碳原子且不超过30个碳原子的炔基。
除非对碳数有限定，否则本文中所使用的“低级脂肪族”、“低级烷基”、“低级烯基”和“低级炔基”中的“低级”表示该部分具有至少一个(对于烯基和炔基为至少两个)且等于或小于6个碳原子。
术语“环烷基”，“脂环族”，“碳环”和等同表述是指在单环、螺环(共享一个原子)或稠合环(共享至少一个键)的碳环体系中包含饱和或部分不饱和碳环的基团，其中碳环体系具有3至15个碳原子。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯-1-基、环戊烯-2-基、环戊烯-3-基、环己基、环己烯-1-基、环己烯-2-基、环己烯-3-基、环庚基、双环[4,3,0]壬基、降冰片基等。术语环烷基包括未取代的环烷基和取代的环烷基。术语“C3至Cn环烷基”和“C3-n环烷基”(其中n是4至15的整数)可互换使用，是指在环结构中具有3至所示“n”个碳原子的环烷基。除非对碳数另有说明，否则本发明使用的“低级环烷基”基团指在其环结构中具有至少3个且等于或小于8个碳原子。
环烃基残基可以是饱和的或在环体系内含有一个或多个双键。特别地，它们可以是饱和的或在环体系内含有一个双键。在不饱和环烃基残基中，双键可存在于任何合适的位置。单环烷基残基包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基或环十四烷基，其也可取代有C1-4烷基。取代的环烷基残基的实例是4-甲基环己基和2,3-二甲基环戊基。双环体系的母体结构的实例是降冰片烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.1]辛烷。
术语“杂环烷基”和等同表述是指在单环、螺环(共享一个原子)或稠合环(共享至少一个键)的碳环体系中包含饱和或部分不饱和碳环的基团，其具有3个至30个碳原子，包括1至6个杂原子(例如N、O、S、P)或者含杂原子(例如NH、NRx(Rx是烷基、酰基、芳基、杂芳基或环烷基)，PO2、SO、SO2等)的基团。在可能的情况下，杂环烷基可以与C连接或与杂原子连接的(例如通过氮原子)。杂环烷基的实例包括但不限于吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢二噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环戊烷基、硫杂环戊烷基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂基、1,2,3,6-四氢吡啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧六环基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫杂环戊烷基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3,1,0]己基、3-氮杂双环[4,1,0]庚基、3H-吲哚基、喹嗪基和糖等。术语杂环烷基包括未取代的杂环烷基和取代的杂环烷基。术语“C3-Cn杂环烷基”和“C3-n杂环烷基”，其中n是4至30的整数，可互换使用来表示在环结构中具有3至所示“n”个原子的杂环烷基，包括至少一个如上所定义的杂基团或原子。除非另有说明，否则本发明使用的“低杂环烷基”指在其环状结构中具有至少3个且等于或小于8个碳原子。
术语“芳基”和“芳基环”是指在共轭单环或多环体系(稠和或非稠和的)中具有“4n+2”个(π)电子，并具有6至14个环原子的芳族基团，其中n是1至7的整数。多环系统包括至少一个芳环。芳基可以直接连接或通过C1-C6烷基(也称为芳基烷基或芳烷基)连接。芳基的实例包括但不限于苯基、苄基、苯乙基、1-苯基乙基、甲苯基、萘基、联苯基、三联苯基、茚基、苯并环辛烯基、苯并环庚烯基、薁基、苊基、芴基、菲基、蒽基等。术语芳基包括未取代的芳基和取代的芳基。术语“C6-Cn芳基”或“C6-n芳基”(其中n是6至30的整数)可互换使用来表示在环结构中具有6至所示“n”个碳原子的芳基，包括至少一个如上所定义的杂环基团或原子。
术语“杂芳基”和“杂芳基环”是指在共轭单环或多环体系(稠和或非稠和的)中具有“4n+2”个(π)电子，并具有5至14个环原子的芳族基团，其中n是1至7的整数，并包括1至6个杂原子(例如N、O、S)或者包括杂原子(例如NH、NRx(Rx是烷基、酰基、芳基、杂芳基或环烷基)、SO等)的基团。多环体系包括至少一个杂芳环。杂芳基可以直接连接或通过C1-C3烷基(也称为杂芳基烷基或杂芳烷基)连接。在可能的情况下，杂芳基可以与碳连接的或者与杂原子连接的(例如，通过氮原子)。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、噻吩基；异恶唑基、噻唑基、恶唑基、异噻唑基、吡咯烷基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、色烯基、异色烯基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、异吲哚基、喋啶基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并苯硫基(benzothiophenyl)、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、喹唑啉基、喹啉基、喹啉酮基、异喹啉酮基、喹喔啉基、萘啶基、呋喃并吡啶基、咔唑基、菲啶基、吖啶基、苝基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩恶嗪基、二苯并呋喃基等。术语杂芳基包括未取代的杂芳基和取代的杂芳基。术语“C5-Cn杂芳基”和“C5-n杂芳基”，其中n是6至29的整数，可互换使用来表示在环结构中具有从5至所示“n”个原子的杂芳基，包括至少一个如上所定义的杂环基团或原子。
术语“杂环”或“杂环的”包括杂环烷基和杂芳基。杂环的实例包括但不限于吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫呋喃基、苯并噻吩基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基4αH-咔唑基、咔啉基、苯并吡喃基(chromanyol)、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋吖基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基(indolenyl)、二氢吲哚基、哚啉嗪基(indolizinyl)、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异苯并吡喃基、异吲哚基、异吲哚啉基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、恶唑烷基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡啶基、氮苯基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并恶唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、3,4-三唑基、呫吨基等。术语杂环包括未取代的杂环基和取代的杂环基。
本发明所用术语“胺”或“氨基”是指未取代或取代的-NRaRb的片段，其中Ra和Rb各自独立地为氢、烷基、芳基或杂环基，或Ra和Rb与它们所连接的氮原子一起形成杂环。术语氨基指其中氮原子与至少一个碳或杂原子共价键合的化合物或片段。因此，本发明所用术语“烷基氨基”和“二烷基氨基”分别是指具有与之附接的一个和至少两个C1-C6烷基的胺基。术语“芳基氨基”和“二芳基氨基”分别包括其中氮原子与至少一个或两个芳基结合的基团。术语“酰胺”或“氨基羰基”包括含有与羰基或硫代羰基的碳连接的氮原子结构的化合物或片段。术语“酰基氨基”是指直接与本文所限定的酰基连接的氨基。
术语“双环”或“双环的”是指共用两个环碳原子的具有两个环的环体系，这两个环碳原子可位于沿着任一环的任何位置处，该术语通常指双环烃基，双环芳族碳原子环结构基团和饱和的或部分不饱和的双环碳原子环结构基团，其中一个或多个环碳原子成员已被结构稳定性所允许的杂原子如O，S或N原子取代。双环体系可以是稠环体系，如双环[4.4.0]癸烷或萘，或桥环体系，如双环[2.2.2]辛烷。
术语“三环”或“三环的”是指共用三个环碳原子的具有三个环的环体系，这三个环碳原子位于沿着每个环的任何位置处；该术语通常指三环烃基，三环芳族碳原子环结构基团和饱和或部分不饱和的三环碳原子环结构基团，其中一个或多个环碳原子成员已被结构稳定性所允许的杂原子如O，S或N原子取代。三环体系可以为稠环排列的三个环，例如蒽或十四氢化蒽，或者为桥环，例如金刚烷或三环[3.3.1.1]癸烷中的桥环。
术语“多环(multi-cycle)”、“多环(multicycle)”、“多环的(multi-cyclic)”或“多环的(multi-cyclic)”是指共用多于三个环碳原子的具有多于3个环的环体系，该多于三个环碳原子位于沿任一环的任何位置处。该术语通常指多环烃基，多环芳族碳原子环结构基团和饱和或部分不饱和的多环碳原子环结构基团，其中一个或多个碳原子环成员已被结构稳定性所允许的杂原子，如O，S或N原子所取代。
术语“稠环”或“稠合的”是指含有稠合环的多环体系。通常，稠环体系包含2或3个环，和/或多达18个环原子。如上所述，环烷基，芳基和杂环基可以形成稠环体系。因此，稠环体系可以是芳族的，部分芳族的或非芳族的并且可以含有杂原子。根据该定义，螺环系统不是稠合多环的，但是本发明的稠合多环体系本身可以具有通过该体系的单个环原子连接到其上的螺环。稠环体系的实例包括但不限于萘基(例如2-萘基)、茚基、菲基、蒽基、芘基、苯并咪唑、苯并噻唑等。术语“稠环”或“稠合的环”在本文中可互换使用。
术语“螺环”或“螺合的”是指呈现两个或更多个环(环体系)的扭曲结构的有机化合物，其中2或3个环通过一个共同原子连接在一起。螺环化合物可以是完全碳环(全碳)，例如螺[5.5]十一烷，或者是杂环(具有一个或多个非碳原子)，包括但不限于碳环螺化合物，杂环螺化合物和多螺环化合物。
术语“桥环”或“桥合的”是指其中在两个或更多个环结构中共用两个或更多个原子的碳环或杂环部分，其中所共用的原子是C、N、S或化学上合理替代模式排列的其它杂原子。或者，“桥合的”化合物也指这样的碳环或杂环结构：在主环任何位置上的一个原子通过化学键或除键以外的原子与主环上的第二个原子键合，其确实不包含主环结构的一部分。第一和第二原子可以在主环中彼此相邻或不相邻。以下说明的是本文考虑的桥环结构的具体非限制性实例。其他碳环或杂环桥环结构也是可以预期的，包括其中桥连原子是C或化学上合理替代模式排列的杂原子的桥环，如本领域已知的。
术语“硝基”是指-NO2；术语“卤代”和“卤素”是指溴、氯、氟或碘取代基；术语“硫醇”、“硫基”或“巯基”是指SH；并且术语“羟基”或“羟基基团”是指-OH。术语“烷硫基”是指具有巯基连接其上的烷基。合适的烷硫基包括具有1至约12个碳原子，优选1至约6个碳原子的基团。本发明所用术语“烷基羧基”是指具有羧基连接其上的烷基。
本发明所用术语“烷氧基”或“低级烷氧基”是指具有氧原子连接其上的烷基。代表性的烷氧基包括具有1至约6个碳原子的基团，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氯甲氧基、二氯甲氧基、三氯甲氧基等。术语“烷氧基”包括未取代或取代的烷氧基，以及全卤代烷氧基等。
术语“羰基”或“羧基”是指含有通过双键与氧原子连接的碳的化合物和片段。含有羰基的片段的实例包括醛、酮、羧酸、酰胺、酯、酸酐等。
术语“酰基”是通过其碳原子与氢(即甲酰基)、脂族基团(C1-C29烷基，C1-C29烯基，C1-C29炔基，例如乙酰基)、环烷基(C3-C8环烷基)、杂环基(C3-C8杂环烷基和C5-C6杂芳基)和芳基(C6芳基，例如苯甲酰基)等相连的羰基。酰基可以是未取代的或取代的酰基(例如水杨酰基)。
应当理解的是术语“取代”或“被取代”包括隐含的条件，即这种取代随着取代原子化合价和取代基的变化，取代产生稳定的化合物(例如化合物不能自发进行诸如重排、环化、消除等过程)。如本发明所用术语“取代的”包括有机化合物所有允许的取代基。在广义上，允许的取代基包括有机化合物的无环和环状，支链化和非支链支化，碳环和杂环，芳香族和非芳香族取代基。所允许的取代基可以是一个或多个。术语“取代的”是指当上述基团与在一个或多个位置被取代时，取代基诸如为酰基、氨基(包括简单氨基、单烷基氨基和二烷基氨基、单芳基和二芳基氨基，和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括氨基甲酰基和脲基)、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、烷氧基羰基、羧基(carboxy)、羧酸根(carboxylate)、氨基羰基、单烷基氨基羰基和二烷基氨基羰基、氰基、叠氮基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、硫基、烷硫基、芳硫基、烷硫基羰基、硫代羧酸酯、低级烷基、低级烯基、低级炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、低级烷氧基、芳氧基、芳氧基羰氧基、苄氧基、苄基、亚磺酰基、烷基亚磺酰基、磺酰基、硫酸根、磺酸根、磺酰胺、磷酸根、膦酸根、磷酰基、氧代、胍、亚氨基、甲酰基等。如果允许，任何上述取代基可以进一步被取代，例如被烷基、芳基或其它基团取代。
术语“溶剂化物”是指化合物与一个或多个溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情况下，溶剂化物能够被分离，例如当一个或多个溶剂分子并入晶体的晶格中时。“溶剂合物”包括溶液相和可被分离的溶剂化物。示例性的溶剂化物包括但不限于水合物、乙醇化物、甲醇化物、半乙醇化物等。
化合物的“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的化合物的盐。理想的化合物的盐可以保留或改善如本发明所定义的母体化合物的游离酸和碱的生物有效性和性质，或者有利于该分子的固有的碱性、酸性或带电功能性，否则则是生物学上不需要的。药学上可接受的盐的实例可以是Berge等人在"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.66,1-19(1977)所提到的。这些盐的非限制性实例包括但不限于：
(1)通过加入无机酸或有机酸而在碱性或带正电荷的官能团上形成酸加成盐，其中可加入的无机酸诸如为盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、磷酸、碳酸盐形成剂等。可加入的有机酸诸如为乙酸、丙酸、乳酸、草酸、乙醇酸、新戊酸、叔丁基乙酸、β-羟基丁酸、戊酸、己酸、环戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、环己基氨基磺酸、苯磺酸、磺胺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、3-苯基丙酸、月桂基磺酸、月桂基硫酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、月桂酸、帕莫酸(扑酸)、扑酸(palmoic acid)、泛酸、乳糖酸、藻酸、半乳糖二酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡庚糖酸、谷氨酸、萘甲酸、羟基萘甲酸、水杨酸、抗坏血酸、硬脂酸、粘康酸等。
(2)母体化合物中存在的酸性质子被金属离子取代或者与有机碱配位形成的碱加成盐，其中所述金属离子包括碱金属离子(例如锂、钠、钾)，碱土金属离子(镁、钙、钡)或其它金属离子如铝、锌、铁等；所述有机碱诸如为氨、乙胺、二乙胺、乙二胺、N,N'-二苄基乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡萄糖胺、哌嗪、氯普鲁卡因、普鲁卡因、胆碱、赖氨酸等。
药学上可接受的盐可以由含有碱性或酸性部分的母体化合物通过常规化学方法合成。通常，这种盐通过游离酸或碱形式的化合物与等化学计量的合适的碱或酸在水中或有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备。盐可以在化合物的最终分离或纯化过程中原位制备，或者使其处于游离酸或碱形式的化合物与所期望的相应碱或酸反应，然后分离由此形成的盐而独立制备。术语“药学上可接受的盐”还包括含有共价键合至阴离子基团的阳离子基团的两性离子化合物，它们被称作“内盐”。应当理解的是，本发明的化合物包括的所有酸，盐，碱和其它离子和非离子形式均涵盖在本发明的范围内。例如，如果本发明中化合物为酸，该化合物盐的形式也涵盖在本发明的范围内。同样，如果本发明中化合物为盐，该化合物酸和/或碱的形式也也涵盖在本发明的范围内。
本发明提供的化合物可以在构成此类化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。同位素的非天然比例可以定义为从自然界中发现的量到由所讨论的原子的100％构成的量。例如，化合物可以并入放射性同位素，例如氚(3H)，碘-125(125I)或碳-14(14C)或非放射性同位素如氘(2H)或碳-13(13C)。这种同位素变化可以为本申请中其它地方描述的那些提供额外的应用。例如，本发明化合物的同位素变体可以找到额外的用途，包括但不限于作为诊断和/或成像试剂，或作为细胞毒性/放射性毒性治疗剂。另外，同位素变体可以具有改变的药代动力学和药效学特征，其可以有助于增强治疗期间的安全性，耐受性或疗效。本发明提供的化合物的所有同位素变体，无论是否是放射性的，均涵盖在本发明中。
同位素富集是通过改变给定元素的同位素的相对丰度，使一种特定同位素富集(即增加)，并且其他同位素减少或耗尽的元素形式。如本发明所用术语“同位素富集的”化合物或衍生物是指化合物中一种或多种具体同位素的一种或多种特定同位素形式被增加，即一种或多种特定的同位素元素被富集(即增加)。通常，在同位素富集的化合物或衍生物中，化合物特定位置的特定同位素元素被增加。然而应当理解，化合物可以有两种或更多种同位素元素被增加。此外，同位素富集的化合物可以是富集了超过一种同位素、富集了超过一种元素或者两者兼有的同位素富集形式的的混合物形式。如本发明所用，“同位素富集的”化合物或衍生物具有的同位素形式水平高于该形式的天然丰度。同位素富集的水平将依据于特定的同位素形式的天然丰度而变动。在一些实施方式中，化合物的同位素富集的水平或化合物中元素的同位素富集水平可以为约2至约100摩尔百分比(％)，例如约2％、约5％、约17％、约30％、约51％、约83％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、以及大于约98％、约99％或为100％。
本发明所用，术语“天然丰度的元素”或“自然丰度的原子”分别是指其在自然界中最丰富的原子质量的元素或原子。例如，天然丰度的氢为1H(protium)，天然丰度的氮为14N，天然丰度的氧为16O，天然丰度的碳为12C等。“非同位素富集的”化合物是化合物中的所有原子或元素都是天然丰度的同位素的化合物，即所有原子或元素具有自然界中最丰富的原子质量。
术语“患者”和“受试者”在本文中可互换使用来表示人类或非人类动物(例如，哺乳动物)。
当应用于例如受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，术语“施用”、“施用者”等指使例如CD73抑制剂、包括该CD73抑制剂的药物组合物或诊断剂与受试者、细胞、组织、器官或生物流体相接触。在细胞的情况下，施用包括使试剂与细胞接触(例如体外或离体)，以及试剂与流体接触，其中流体与细胞接触。
术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”等是指在已经诊断、观察到了疾病、失调或病症或者其症状之后，开始进行行动(例如施用CD73抑制剂或包含其的药物组合物)，以便暂时或永久地消除、减轻、抑制、减缓或改善折磨受试者的疾病、失调或病症的至少一种潜在原因，或者折磨受试者的疾病、失调、病症有关的症状。因此，治疗包括抑制(例如阻止疾病、失调或病症或与其相关的临床症状的发展或进一步发展)活动性疾病。
如本文所用，术语“需要治疗”是指由医生或其他护理人员做出的受试者需要或将从治疗中受益的判断。这种判断是基于医生或护理人员专业领域中的各种因素作出的。
术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”、“预防(prevention)”等是指通常在易患特定疾病、病症或病症的受试者的情况下，以某种方式(例如在疾病、失调、病症或其症状发作之前)开始进行行动(例如施用CD73抑制剂或包含其的药物组合物)，从而暂时或永久地预防、抑制、压制或降低受试者患有疾病、失调或病症等的风险(如通过例如缺乏临床症状来确定)或延迟其发作。在某些情况下，该术语还指减缓疾病、失调或病症的进展或抑制其发展成有害的或其他不希望的状态。
如本文所用的术语“需要预防”是指由医生或其他护理人员作出的受试者需要或将从预防护理中受益的判断。这种判断是基于医生或护理人员专业领域中的各种因素而作出的。
术语“治疗有效量”和“有效量”在本文中可互换使用，是指单独或作为药物组合物的一部分的药剂在施用至受试者时，以单剂量或作为一系列剂量中的一部分的方式，以能够对疾病、失调或病症的任何症状、方面或特征产生任何可检测的积极作用的量来施用至受试者。通过测量相关的生理效应可以确定治疗有效量，并且可以根据受试者病症的给药方案和诊断分析等来调整治疗有效量。举例来说，测量给药后特定时间的CD73抑制剂(或例如其代谢物)的血清水平可以指示是否已经使用了治疗有效量。在一些实施方式中，术语“治疗有效量”和“有效量”是指在以单剂量或多剂量向受试者施用后，治疗剂，例如化合物在受试者中提供所需的治疗、诊断或预后效应的量或剂量。主治医生或诊断医生通过已知技术并通过观察在类似情况下获得的结果可容易地确定有效量。在确定施用的化合物的有效量或剂量时，考虑许多因素，包括但不限于：受试者的大小、年龄和一般健康状况；涉及的具体疾病；待治疗的疾病或病症的涉及程度或严重程度；受试者个体的回应；施用的特定化合物；施用模式；所施用制剂的生物利用度特征；选择的剂量方案；使用伴随药物；和其他相关考虑。
术语“基本上纯的”在本文中用于表示组分占组合物总含量大于约50％，并且典型地大于总含量的约60％。更典型地，“基本上纯的”是指组合物中，目标组分占全部组合物的至少75％，至少85％，至少90％或更多。在一些情况下，感兴趣的组分将占组合物总含量的大于约90％，或大于约95％。
如本文所用，术语“CD73相关的疾病、失调或病症”和“由CD73介导的疾病、失调或病症”可互换使用来表示用可受益于CD73抑制剂治疗的任何疾病、失调或病症。通常，CD73相关或介导的疾病、失调和病症是CD73活性在其中起生物学、机制或病理学作用的那些疾病、失调和病症。这样的疾病、失调和病症也可能与一种或多种腺苷受体的活性有关。CD73相关的疾病、失调和病症的非限制性实例包括肿瘤相关的失调(癌症、肿瘤等)，免疫相关的失调，炎症成分病症，微生物相关病症，CNS相关病症和神经病症，和其它疾病(例如但不限于心血管疾病，胃肠疾病，代谢疾病，肝脏疾病，肺疾病，眼科疾病和肾脏疾病)。
例如，CD73抑制剂可用于预防或治疗增殖性病症，癌症或肿瘤；增加或增强免疫应答；改善免疫接种，包括提高疫苗疗效；以及增加炎症。本发明公开的CD73抑制剂可用于治疗与免疫缺陷相关的免疫缺陷疾病，免疫抑制药物治疗，急性和/或慢性感染以及衰老。CD73抑制剂也可用于刺激患有医源性诱导的免疫抑制的患者的免疫系统，包括那些接受过骨髓移植，化疗或放疗的患者的免疫系统。在其它实施方式中，CD73抑制剂可用于治疗或预防任何病毒、细菌、真菌、寄生虫或其他感染性疾病、失调或病症，包括但不限于HIV和AIDS。
在一些实施方式中，CD73抑制剂可用于预防或治疗选自以下项组成的组中的免疫相关疾病、失调或症状：类风湿性关节炎、肾衰竭、狼疮、哮喘、牛皮癣、结肠炎、胰腺炎、过敏症、纤维化、贫血纤维肌痛、阿尔茨海默氏病、充血性心力衰竭、中风、主动脉瓣狭窄、动脉硬化、骨质疏松症、帕金森病、感染、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、过敏性接触性皮炎、湿疹、系统性硬化症和多发性硬化症。
本文提供的药物组合物可以配制为与预期的施用方法或途径相兼容；示例性的施用途径在本文中阐述。此外，药物组合物可以与本文所述的其他治疗活性剂或化合物组合使用，以治疗或预防本文所讨论的CD73相关的疾病、失调和病症。
含有活性成分(例如CD73抑制剂)的药物组合物可以是适于口服使用的形式，例如片剂、胶囊、锭剂(troche)、糖锭(lozenge)、水性或油性混悬剂、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬质或软质胶囊，或糖浆、溶液、微珠或酏剂。用于口服使用的药物组合物可以根据本领域已知用于制造药物组合物的任何方法来制备，并且这样的组合物可以含有一种或多种试剂，例如甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂以提供药学上可接受的制剂。片剂、胶囊等通常含有与适用于制造片剂的无毒的药学上可接受的载体或赋形剂混合的活性成分。这些载体或赋形剂可以是例如稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉，明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。
适用于口服施用的片剂，胶囊等可以未包衣或使用已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收并由此提供持续作用。例如，可以使用延时材料，例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。它们也可以用本领域已知的技术包衣以形成用于控释的渗透治疗片剂。其他试剂包括生物可降解的或生物相容的颗粒或聚合物质如聚酯，聚胺酸，水凝胶，聚乙烯吡咯烷酮，聚酸酐，聚乙醇酸，乙烯醋酸乙烯酯，甲基纤维素，羧甲基纤维素，鱼精蛋白硫酸盐或丙交酯/乙交酯共聚物，聚丙交酯/乙交酯共聚物或乙烯醋酸乙烯酯共聚物以控制所施用的组合物的递送。例如，口服制剂可以包埋在使用羟甲基纤维素通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，或明胶微胶囊或聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊中，或者包埋在胶体药物递送系统中。胶体分散系统包括大分子复合物，纳米胶囊，微球，微珠和基于脂质的系统，包括水包油乳液，胶束，混合胶束和脂质体。制备上述制剂的方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。
用于口服使用的制剂也可以以硬质明胶胶囊形式存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙，磷酸钙，高岭土或微晶纤维素)混合；或者以软质明胶胶囊形式存在，其中活性成分与水或油性介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。水性悬浮液含有与适于其制造的赋形剂混合的活性材料。这种赋形剂可以是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，海藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散或润湿剂，例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，例如十七乙烯氧基鲸蜡醇)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯山梨糖醇单油酸酯)。水性悬浮液还可含有一种或多种防腐剂。
油性悬浮液可通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡，硬石蜡或鲸蜡醇。可加入如上所述的那些，诸如甜味剂，也可加入调味剂以提供可口的口服制剂。
适用于通过加入水来制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供了与分散剂或润湿剂，悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂在本领域中是已知的。
本发明的药物组合物也可为水包油乳液的形式。油性相可为植物油(例如，橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)，或者它们的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶和黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆，卵磷脂和衍生自脂肪酸的酯或偏酯；己糖醇酐类，例如山梨糖醇酐单油酸酯；偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯。
药物组合物通常包括治疗有效量的本发明提供的CD84抑制剂化合物和一种或多种药学和生理学上可接受的配制剂。合适的药学上可接受的或生理学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂包括但不限于抗氧化剂(例如抗坏血酸和二硫化钠)、防腐剂(例如苯甲醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙或正丙酯)，乳化剂、悬浮剂、分散剂、溶剂、填料、填充剂、清洁剂、缓冲剂、溶媒、稀释剂和/或佐剂。例如，合适的溶媒可以是生理盐水溶液或柠檬酸盐缓冲盐水，可能补充有用于肠胃外给药的药物组合物中常见的其它物质。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是进一步的示例性溶媒。本领域技术人员将容易地知晓可用于本文考虑的药物组合物和剂型中的各种缓冲剂。典型的缓冲剂包括但不限于，药学上可接受的弱酸、弱碱或其混合物。举例来说，缓冲组分可以是水溶性物质，如磷酸、酒石酸、乳酸、琥珀酸、柠檬酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、谷氨酸及其盐。可接受的缓冲剂包括例如Tris缓冲液、N-(2-羟基乙基)哌嗪-N'-(2-乙磺酸)(HEPES)、2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)、2-(N-吗啉)乙磺酸钠盐(MES)，3-(N-吗啉)丙磺酸(MOPS)和Ntris[羟基甲基]甲基-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)。在配制药物组合物后，可将其以溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体、脱水或冻干粉的形式储存在无菌小瓶中。这种制剂可以以即用形式，使用前需要重构的冻干形式，使用前需要稀释的液体形式或其他可接受的形式储存。
在一些实施方式中，药物组合物容纳在一次性使用的容器(例如，一次性使用的小瓶、安瓿、注射器或自动注射器)，而在其它实施方式中，容纳在多次使用容器(例如，多次使用的小瓶)中。
制剂还可包括载体以保护组合物免于从身体快速降解或消失，诸如控释制剂，包括脂质体、水凝胶和微囊化递送系统。例如，可以使用延时材料(例如单独的甘油单硬脂酸酯或甘油硬脂酸酯)或与蜡组合使用。任何药物递送装置都可用于递送CD73抑制剂，包括植入物(例如可植入泵)和导管系统，缓慢注射泵和装置，所有这些都是本领域技术人员所熟知的。
药物组合物也可以是无菌注射水性或油性悬浮液的形式。该悬浮液可以根据已知技术使用本文提到的那些合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂还可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的稀释剂、溶剂和分散介质包括水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)及其合适的混合物。另外，无菌的固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的固定油，包括合成的甘油一酯或甘油二酯。而且，脂肪酸(如油酸)可用于制备注射剂。可以通过包括延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝或明胶)来实现特定的可注射制剂的延长吸收。
本发明提供的CD73抑制剂化合物和组合物可以以本领域已知的任何适当方式施用于受试者。合适的给药途径包括但不限于：口服；肠胃外，例如肌内、静脉内、皮下(例如注射或植入)、腹腔内、脑池内、关节内、脑内(脑实质内和脑室内)；鼻腔；阴道；舌下；眼内；直肠；局部(例如透皮)；口腔和吸入。一般通过皮下或肌肉内给药的积存注射法也可用于在限定的时间段内释放本文公开的CD73抑制剂。在某些实施方式中，将CD73抑制剂化合物和组合物口服施用至有需要的受试者。
本发明提供的CD73抑制剂化合物和组合物可以这样的量施用至受试者：该量取决于例如施用目标(例如，期望的分辨度)；施用该制剂的受试者的年龄、体重、性别、健康和身体状况；施用途径；以及疾病、失调、病症或其症状的情况。给药方案还要考虑与所施用的药剂相关的任何不良作用的存在、性质和程度。有效剂量和剂量方案可以容易由例如安全性和剂量递增试验、体内研究(例如动物模型)和本领域技术人员已知的其他方法来确定。通常，剂量参数决定剂量小于对受试者可能具有不可逆毒性的量(最大耐受剂量，MTD)并且不小于对受试者产生可测量效果所需的量。考虑到给药途径和其他因素，这些量例如通过与ADME相关的药代动力学和药效学参数来确定。
在一些实施方式中，CD73抑制剂可以以受试者体重的0.01mg/kg至约50mg/kg，或约1mg/kg至约25mg/kg的剂量水平每天一次，或一天多次来施用(例如口服)，以获得所需的治疗效果。对于口服剂的使用，组合物可以以含有1.0毫克至1000毫克活性成分，特别是含有1毫克、3毫克、5毫克、10毫克、15毫克、20毫克、25毫克、50毫克、75毫克、100毫克、150毫克、200毫克、250毫克、300毫克、400毫克、500毫克、600毫克、750毫克、800毫克、900毫克或1000毫克活性成分的片剂或胶囊等形式来提供。
在一些实施方式中，所需CD73抑制剂的剂量包含在“单位剂型”中。短语“单位剂型”是指物理上不连续的单位，每个单位含有预定量的单独CD73抑制剂或其与一种或多种另外的药剂组合，足以产生所需的效果。应该理解的是，单位剂型的参数将取决于具体的药剂和待实现的效果。
本发明还提供了包含CD73抑制剂化合物或组合物的试剂盒。试剂盒通常为容纳各种组分的物理结构的形式，并且可用于例如实施本文提供的方法。例如，试剂盒可以包括本发明公开的一种或多种CD73抑制剂(例如提供在无菌容器中)，其可为适合施用至受试者的药物组合物的形式。CD73抑制剂可以以即用型(例如片剂或胶囊)形式或以需要例如在施用前重构或稀释(例如粉末)的形式提供。当CD73抑制剂为需要使用者被重构或稀释的形式时，该试剂盒还可包括与CD73抑制剂一起包装或者分别包装的稀释剂(例如无菌水)、缓冲液、药学上可接受的赋形剂等。当采用组合疗法时，试剂盒可独立地含有几种治疗剂，或者它们可已经在试剂盒中组合。试剂盒的每个组分可以被封装在单独的容器内，并且所有的各种容器可以在单个包装内。本发明的试剂盒可被设计用于适当地保持容纳在其中的组分所需的条件(例如，冷藏或冷冻)。
试剂盒还可以包含标签或包装插页，包含其中组分的识别信息和使用说明(例如剂量参数，活性成分的临床药理学，包括作用机制、药代动力学和药效学、不良作用、禁忌症等)。标签或插页可以包含制造商信息，如批号和到期日期。标签或包装插页可以例如整合到容纳组分的物理结构中、独立地包含在物理结构内，或者附着到试剂盒的组件(例如，安瓿、管或小瓶)。
实施例
通过参考以下实施例将更容易理解本发明，所提供的实施例用于说明本发明，而不应被解释为以任何方式限制本发明的范围。
除非另有定义或上下文另有明确规定，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。应当理解，与本文所述类似或等同的任何方法和材料可用于本发明的实践或测试。
化合物的合成
胺化合物RNH2可通过商业来源来得到，或者通过文献中记载的方法来制备。
制备三乙基碳酸氢铵缓冲液(TEAC)。通过将干冰于数小时内缓慢加入到在水中的1M三乙胺溶液中，直至溶液的pH达到约7.4-7.6(利用pH计来测量)，来制备1M的TEAC溶液。
将2-氯嘌呤核苷衍生物S-x(1.0mmol，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中。通过冰浴对溶液进行冷却。向该冷的溶液中加入双(二氯膦基)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液。在0℃下，搅拌所得混合物2-4h，并且通过薄层色谱(TLC)监测反应。滴加TEAC溶液淬灭反应，并将反应液的pH调至7到8。用二氯甲烷(DCM)萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物用C18-柱通过反相色谱进行纯化，得到为类白色固体形式的产物。
实施例1：化合物1的合成
将DIEA(二异丙基乙胺，7.5mmol，969mg，1.5eq.)滴加到2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2236mg，1.0eq.)和苄胺(5.0mmol，536mg，1.0eq.)在二氧六环(25mL)的溶液中。在室温条件下将反应混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。粗产物通过柱层析进行纯化。将中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并且粗产物通过柱层析进行纯化，得到2-氯嘌呤核苷衍生物S-1(1818mg)。
将S-1(1.0mmol，392mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，然后在冰浴条件下进行冷却。向冷的溶液中加入双(二氯膦基)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液。随后在0℃下搅拌反应混合物2-4h，并且通过TLC监测反应。通过TEAC溶液淬灭反应，并将反应液的pH调至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体形式的化合物1(369mg)。1H NMR(500MHz,CD3OD-d4)δppm 2.46(t,2H)，4.23-4.74(m,7H)，6.01(d,1H)，7.19-7.38(m,5H)，8.59(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3Cl-d3)δppm 40.12，43.84，63.92，69.87，74.64，83.71，88.50，115.22，126.92，127.47，128.13，149.27，154.08，154.96，160.55；31P NMR(200MHz,CD3Cl-d3)δppm 12.94，18.11；m/z(ESI+)550.1。
实施例2：化合物6的合成
将DIEA(7.5mmol，969mg，1.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.2g，1.0eq.)和1-萘甲基胺(5.0mmol，786mg，1.0eq.)在二氧六环(25mL)的溶液中。在室温条件下将反应混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。移除溶剂(利用旋转蒸发)，并且残余物通过柱层析进行纯化。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，残余物通过柱层析进行纯化，得到S-6(1.3g)。
将S-6(1.0mmol，442mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，然后在冰浴条件下进行冷却。向冷的溶液中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液。随后在0℃下搅拌反应混合物2-4h，并且通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将反应混合物的pH调至7到8。用DCM萃取混合物。分出水相并对其进行浓缩，残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体形式的化合物6(110mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm0.88-0.91(m,3H),1.34-1.43(m,4H),1.67-1.68(m,2H),2.15-2.26(m,2H),4.16-4.22(m,2H),4.25-4.31(m,2H),4.38-4.41(m,1H),4.53-4.57(m,1H),4.74-4.76(m,H),6.13-1.15(m,1H),8.70-8.75(m,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 13.20,21.60,27.24,27.55,63.46,67.12,70.15,74.34,84.08,84.14,87.38,120.98,142.83,150.24,152.49,153.22；31PNMR(200MHz,D2O)δ16.15,18.97；m/z(ES-)571.8。
实施例3：化合物7的合成
将DIEA(7.5mmol，969mg，1.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.2g，1.0eq.)和2-萘甲基胺(5.0mmol，786mg，1.0eq.)在二氧六环(25mL)的溶液中。在室温条件下将反应搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。粗产物通过柱层析进行纯化。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，残余物通过柱层析进行纯化，得到2-氯嘌呤核苷衍生物S-7(1.15g)。
将S-7(1.0mmol，442mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，然后在冰浴条件下进行冷却。向冷的溶液中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液。随后在0℃下搅拌反应混合物2-4h，并且通过TLC监测反应。通过TEAC溶液淬灭反应，并将反应混合物的pH调至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体形式的化合物7(105mg)。1HNMR(500MHz,D2O)δppm2.11(t,J＝19.7Hz,2H),4.10(s,2H),4.29(s,1H),4.42(s,1H),4.55(s,1H),4.88(s,2H),5.79(s,1H),7.36-7.44(m,4H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.76(d,J＝7.2Hz,1H),7.87(d,J＝7.8Hz,1H),8.13(s,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 27.57,42.23,63.39,70.05,74.16,83.59,86.92,117.78,122.74,125.48,125.88,126.05,126.26,128.24,128.43,130.48,132.19,133.08,139.02,148.62,153.86,154.44.31P NMR(202MHz,D2O)δppm 15.17,19.58；m/z(ES-)598.2。
实施例4：化合物8的合成
将2-氯嘌呤核苷衍生物S-8(1.0mmol，415mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，然后在冰浴条件下对该溶液进行冷却。向冷的溶液中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液，同时施加冰浴。随后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将反应混合物的pH调至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体形式的产物(58mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm 2.12(t,J＝19.7Hz,2H),4.08(s,2H),4.27(s,1H),4.40(s,1H),4.53(s,1H),4.65(s,2H),5.75(s,1H),7.36(s,3H),7.65(s,2H),7.69(d,J＝8.0Hz,2H),8.28(s,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 44.04,63.41,70.06,74.19,83.73,86.90,125.50,125.60,126.00,126.34,127.38,128.15,132.13,132.71,135.18,139.21,153.96,154.73；31P NMR(202MHz,D2O)δppm 15.86,19.01；m/z(ES-)598.4。
实施例5：化合物9的合成
将DIEA(12.5mmol，1.6g，2.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.2g，1.0eq.)和美金刚胺盐酸盐(5.0mmol，1.0g，1.0eq.)在25mL的二氧六环的溶液中。在室温条件下将反应混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)并进行浓缩。残余物通过柱层析进行纯化以得到中间体。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌混合物过夜。真空下蒸发溶剂，残余物通过柱层析进行纯化，得到2-氯嘌呤核苷衍生物S-9(1.1g)。
将S-9(1.0mmol，463mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，然后在冰浴条件下对该混合物进行冷却。向冷的混合物中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)中的溶液。随后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC检测反应。反应完成后，用TEAC溶液淬灭反应。将混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，并分出水相。浓缩水相溶液，残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物9(200mg)。1HNMR(500MHz,D2O)δppm 0.76(s,6H),0.98-1.12(m,2H),1.22(s,2H),1.31(d,J＝11.3Hz,2H),1.70(dd,J＝29.4,11.9Hz,4H),1.90(s,2H),2.11(t,J＝19.9Hz,3H),4.07(s,2H),4.28(s,1H),4.44(dd,J＝6.5,2.4Hz,1H),4.67-4.63(m,1H),5.91(d,J＝5.7Hz,1H),8.33(s,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 25.96,26.95,29.97,32.08,39.23,42.32,50.32,55.08,63.73,70.04,74.33,83.78,87.45,116.10,138.34,148.62,153.57,154.16；31P NMR(200MHz,D2O)δppm 18.12；m/z(ES-)620.2。
实施例6：化合物10的合成
将2-氯嘌呤核苷衍生物S-10(1.0mmol，451mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，并在冰浴条件下对该溶液进行冷却。向冷的溶液中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液。随后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将反应液的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物10(60mg)。1HNMR(500MHz,D2O)δppm 2.27(t,J＝19.4Hz,2H),4.17(s,2H),4.35(s,1H),4.46(s,1H),6.02(s,1H),7.27(s,4H),7.54(s,2H),7.97(s,2H),8.33(s,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm16.73,25.47,26.48,27.50,57.39,63.69,70.09,74.31,83.84,87.70,113.16,120.00,122.84,124.66,126.42,138.03,143.08,148.86,152.70,154.12；31P NMR(200MHz,D2O)δppm 17.43,19.35-19.97；m/z(ES-)608.0。
实施例7：化合物11的合成
将2-氯嘌呤核苷衍生物S-11(1.0mmol，564mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中。在冰浴条件下对该溶液进行冷却，并且向冷的溶液中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液。随后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，然后将反应混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体形式的化合物11(100mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm 0.77(d,J＝6.5Hz,3H),1.22(s,14H),1.55(s,2H),1.92(s,4H),2.12(t,J＝19.8Hz,2H),2.67(d,J＝38.2Hz,4H),4.03(s,2H),4.19(s,1H),4.40(s,1H),4.60(s,1H),5.20(d,J＝5.6Hz,4H),5.88(d,J＝4.4Hz,1H),8.51(s,1H)；13CNMR(125MHz,D2O)δppm 13.90,22.48,24.71,25.52,27.10,29.26,29.64,31.41,36.86,37.49,63.89,70.44,74.37,84.15,86.83,119.95,127.82,129.70,149.34,152.45,152.86,164.88,174.66；31P NMR(200MHz,D2O)δppm 16.04,18.65；m/z(ES-)720.4。
实施例8：化合物12的合成
将DIEA(7.5mmol，969mg，1.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.23g，1.0eq.)和2-萘胺(5.0mmol，715mg，1.0eq.)在25mL二氧六环的溶液中。在室温条件将反应混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。将DCM溶液浓缩至干，并且残余物通过柱层析进行纯化，得到中间体。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下将混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，残余物通过柱层析进行纯化，得到化合物S-12(670mg)。
将S-12(1.0mmol，427mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，并且在冰浴条件下对该溶液进行冷却。向冷的溶液中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液。随后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并且通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将经淬灭的反应混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物12(100mg)。1HNMR(D2O,500MHz)δppm 2.21-2.29(m,2H),4.20-4.22(m,2H),4.40-4.44(m,1H),4.56-4.60(m,1H),4.78-4.80(m,1H),6.09-6.10(m,1H),7.58-7.64(m,3H),7.71-7.73(m,1H),7.97-7.99(m,1H)8.02-8.04(m,2H),8.55(s,1H)；13C NMR(D2O,125MHz)δppm26.38,27.37,28.36,63.61,70.33,84.01,86.76,118.06,121.57,122.25,125.52,126.23,126.41,139.82,149.74,153.39,153.47；31P NMR(D2O,200MHz)δppm 16.14,18.96；m/z(ES-)583.9。
实施例9：化合物15的合成
将2-氯嘌呤核苷衍生物S-15(1.0mmol，513mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)。在冰浴条件下对混合物进行冷却，随后加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液。在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将反应混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物15(30mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm 0.70(t,J＝6.3Hz,3H),1.06(s,16H),1.27(s,2H),1.58(s,2H),2.10(t,J＝19.7Hz,2H),4.12(d,J＝32.1Hz,4H),4.27(s,1H),4.46(s,1H),4.66(s,1H),6.00(d,J＝4.7Hz,1H),8.60(s,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 13.73,22.40,25.51,27.55,28.40,29.07,29.36,31.66,63.64,66.70,70.27,74.36,83.95,87.18,120.57,142.65,150.05,152.38,153.2；31PNMR(200MHz,D2O)δppm 15.64,18.89；m/z(ES-)670.1。
实施例10：化合物16的合成
将2-氯嘌呤核苷衍生物S-16(1.0mmol，478mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，并且在冰浴条件下对该混合物进行冷却，随后加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)的溶液。在0℃下搅拌所得到的混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物16(250mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm 1.64(s,11H),1.91(s,4H),2.16(t,J＝19.8Hz,2H),2.29(s,2H),4.14(dddd,J＝6.8,5.9,4.1,1.6Hz,3H),4.30-4.37(m,1H),4.56-4.46(m,1H),6.11(d,J＝5.1Hz,1H),8.72(s,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 16.75,27.23,28.38,33.41,36.07,42.03,51.44,63.47,70.17,74.37,84.19,87.49,115.91,121.90,143.36,149.28,153.15,173.66；31P NMR(200MHz,D2O)δppm 16.37,18.85；m/z(ES-)634.1。
实施例11：化合物17的合成
将DIEA(12.5mmol，1.6g，2.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.23g，1.0eq.)和2-金刚烷胺盐酸盐(5.0mmol，0.94g，1.0eq.)在25mL的二氧六环的溶液中。在室温条件下将混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。浓缩有机层，残余物通过柱层析进行纯化以得到中间体。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌过夜。蒸发溶剂，然后残余物通过柱层析进行纯化，得到2-氯嘌呤核苷衍生物S-17(880mg)。
将化合物S-17(1.0mmol，435mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，然后在冰浴条件下对该混合物进行冷却。向冷的混合物中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)中的溶液。随后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物17(30mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm 1.60(d,J＝12.7Hz,2H),1.71(s,2H),1.82(d,J＝20.8Hz,7H),1.96(d,J＝19.6Hz,4H),2.14(t,J＝19.8Hz,2H),4.10(s,2H),4.20(s,1H),4.31(s,1H),4.47(t,J＝4.2Hz,1H),5.96(d,J＝5.6Hz,1H),8.41(s,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 16.70,26.77,30.81,31.44,36.48,36.86,57.36,63.51,70.23,74.20,83.97,86.73,139.05,154.39；31P NMR(200MHz,D2O)δppm 15.85,19.04；m/z(ES-)592.0。
实施例12：化合物18的合成
将2-氯嘌呤核苷衍生物S-18(1.0mmol，512mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中。在冰浴条件下对混合物进行冷却，然后加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)中的溶液。随后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过薄层层析监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物18(70mg)。
1H NMR(500MHz,CD3OD-d4)δppm 0.93(t,J＝6.8Hz,3H),1.52(s,18H),1.60-1.74(m,2H),2.33(t,J＝19.8Hz,2H),3.43(t,J＝6.6Hz,2H),4.27(d,J＝21.4Hz,3H),4.47-4.61(m,1H),4.71(t,J＝5.3Hz,1H),6.13(d,J＝5.4Hz,1H),8.76(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD-d4)δppm 13.01,22.30,26.62,28.98,29.28,31.63,39.56,63.95,70.57,74.91,84.44,87.86,118.78,142.32,150.79,151.78,151.97,154.17；31P NMR(200MHz,CD3OD-d4)δppm16.03,20.25；m/z(ES-):669.2。
实施例13：化合物19的合成
将DIEA(7.5mmol，,969mg，1.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.23g，1.0eq.)和二正十二烷基胺(5.0mmol，1.8g，1.0eq.)在25mL的二氧六环的溶液中。在室温条件下将反应混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。将有机层浓缩至干，残余物通过柱层析进行纯化得到中间体化合物。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌混合物过夜。真空下蒸发溶剂，残余物通过柱层析进行纯化，得到2-氯嘌呤核苷衍生物S-19(1.3g)。
将S-19(1.0mmol，637mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中。在冰浴中冷却该混合物，随后加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)中的溶液。然后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将反应液的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相18C柱色谱进行纯化，得到为类白色固体的化合物19(150mg)。1H NMR(500MHz,CD3OD-d4)δppm 0.93(t,J＝6.6Hz,6H),1.32-1.46(m,36H),1.72(s,4H),2.36(t,J＝20.0Hz,2H),3.70(s,2H),4.11-4.32(m,5H),4.47(s,1H),4.66(t,J＝5.2Hz,1H),6.04(d,J＝5.4Hz,1H),8.37(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD-d4)δppm 13.08,22.34,26.44,29.08,29.34,31.68,64.24,70.51,74.51,83.84,87.46,118.27,137.84,151.64,153.46,154.25；31P NMR(200MHz,CD3OD-d4)δppm16.20,19.99；m/z(ES-):794.6。
实施例14：化合物20的合成
将DIEA(7.5mmol，969mg，1.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.23g，1.0eq.)和2-氨基蒽(5.0mmol，1.0g，1.0eq.)在25mL的二氧六环的溶液中。在室温条件下将反应混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。将有机层浓缩至干，残余物通过柱层析进行纯化，得到中间体化合物。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，然后残余物通过柱层析进行纯化，得到2-氯嘌呤核苷衍生物S-20(770mg)。
将S-20(1.0mmol，477mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中。然后在冰浴中冷却该混合物，随后加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)中的溶液。然后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将反应混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物20(80mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm 2.25(t,J＝19.4Hz,2H),4.28(d,J＝58.1Hz,3H),4.46(s,2H),5.56(s,1H),7.19(s,3H),7.57(d,J＝73.7Hz,4H),7.85(s,2H),8.21(s,1H)；31P NMR(200MHz,D2O)δppm 18.42,19.15；m/z(ES-):633.9。
实施例15：化合物22的合成
将DIEA(7.5mmol，969mg，1.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.23g，1.0eq.)和1-金刚烷胺(5.0mmol，756mg，1.0eq.)在25mL的二氧六环的溶液中。在室温条件下将反应混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。移除溶剂后，残余物通过柱层析进行纯化，得到中间体化合物。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌混合物过夜。真空下蒸发溶剂，然后残余物通过柱层析进行纯化，得到2-氯嘌呤核苷衍生物S-22(770mg)。
将S-22(1.0mmol，435mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中。然后在冰浴中冷却该混合物，随后加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)中的溶液。然后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将反应混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物22(100mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm 1.64(s,6H),2.06(d,J＝33.5Hz,9H),2.17(d,J＝19.9Hz,2H),4.09(s,2H),4.30(d,J＝0.9Hz,1H),4.45(ddd,J＝5.9,3.0,2.0Hz,1H),4.68-4.65(m,1H),5.94(d,J＝5.2Hz,1H),8.38(s,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 26.22,27.22,29.28,35.72,40.80,53.50,63.57,70.19,74.20,83.95,86.81,138.60,148.74,153.76,154.43；31P NMR(200MHz,D2O)δppm 16.38,18.81；m/z(ES-)592.2。
实施例16：化合物23的合成
将2-氯嘌呤核苷衍生物S-23(1.0mmol，481mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，并且在冰浴中冷却该混合物。向冷的混合物中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)中的溶液。然后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC监测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将反应混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物23(141mg)。1H NMR(D2O,500MHz)δppm 0.90-0.97(m,9H),1.18-1.20(m,1H),1.36-1.40(m,1H),1.75-1.80(m,1H),1.90-1.97(m,1H),2.00-2.30(m,2H),2.40-2.45(m,1H),4.20-4.25(m,2H),4.40-4.44(m,1H),4.44-4.57(m,1H),4.72-4.73(m,1H),4.91-5.05(m,1H),6.43-6.45(m,1H),9.02(m,1H)；13C NMR(D2O,125MHz)δ12.74,18.03,18.90,35.91,44.47,47.41,48.45,63.50,70.16,74.34,83.22,84.06,84.13,87.37,120.84,142.72,150.23,152.41,153.24,153.45ppm；31P NMR(D2O,200MHz)δ16.49,18.79ppm；m/z(ES-)638.0。
实施例17：化合物31的合成
将DIEA(7.5mmol，969mg，1.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.23g，1.0eq.)和3-氮杂螺环[4.5]癸烷(5.0mmol，696mg，1.0eq.)在25mL的二氧六环的溶液中。在室温条件下将反应混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。将有机层浓缩至干，残余物通过柱层析进行纯化，得到中间体化合物。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，然后残余物通过柱层析进行纯化，得到相应的2-氯嘌呤核苷衍生物S-31(1.1g)。
将S-31(1.0mmol，423mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中，并在冰浴条中冷却该混合物。向冷的混合物中加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)中的溶液。然后在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC检测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将混合物的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，收集水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物31(140mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm1.43(t,J＝22.8Hz,10H),1.83(d,J＝52.0Hz,2H),2.15(t,J＝19.7Hz,2H),3.38(s,1H),3.58(s,1H),3.79(s,1H),40.1(s,1H),4.12(s,2H),4.32(s,1H),4.49(t,J＝4.4Hz,1H),4.67-4.70(m,1H),5.97-5.98(d,J＝5.4Hz,1H),8.36-8.37(d,J＝6.8Hz,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 7.67,8.70,9.72,22.92,27.41,34.49,45.49,47.78,69.61,73.58,74.79,86.08,87.43,118.15,139.22,150.08,153.06,153.84；31P NMR(200MHz,D2O)δppm15.71,19.11；m/z(ES-):580.0。
实施例18：化合物51的合成
将DIEA(7.5mmol，969mg，1.5eq.)滴加至2,6-二氯-9-(2',3',5'-三-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(5.0mmol，2.23g，1.0eq.)和去甲托品醇(5.0mmol，636g，1.0eq.)在25mL的二氧六环的溶液中。在室温条件下将反应混合物搅拌过夜。真空下蒸发溶剂，并将残余物溶解在DCM(100mL)中，用水洗涤(2×30mL)。残余物通过柱层析进行纯化，得到中间体化合物。将该中间体溶解在50mL NH3/CH3OH溶液中，并在35℃下搅拌混合物过夜。在移除溶剂(真空下)后，将残余物通过柱层析进行纯化，得到2-氯嘌呤核苷衍生物S-51(1.2g)。
将化合物S-51(1.0mmol，411mg，1.0eq.)溶解在磷酸三甲酯(10mL)中。在冰浴中冷却该混合物，随后加入双(二氯磷酰)甲烷(4.0eq.)在磷酸三甲酯溶液(5mL)中的溶液。然后，在0℃下搅拌所得混合物2-4h，并通过TLC检测反应。用TEAC溶液淬灭反应，并将反应液的pH调节至7到8。用DCM萃取混合物，分出水相并对其进行浓缩。残余物通过反相柱色谱(C18柱)进行纯化，得到为类白色固体的化合物51(160mg)。1H NMR(500MHz,D2O)δppm 1.78-2.42(m,11H),4.06(s,1H),4.12(s,2H),4.28-4.37(m,1H),4.45-4.55(m,1H),4.82-4.88(m,1H),5.38(dd,J＝3.4,2.4Hz,1H),5.99(d,J＝5.6Hz,1H),8.40(s,1H)；13C NMR(125MHz,D2O)δppm 26.05,27.10,27.68,37.08,38.20,53.79,54.40,64.38,70.20,74.09,83.99,86.71,117.78,138.54,151.12,154.22；31P NMR(200MHz,D2O)δppm 16.90,18.63；m/z(ES-):568.0。
实施例19：化合物a-1的合成
在1000ml圆底烧瓶中加入D-核糖(50g，333.05mmol，1eq.)、丙酮(400mL)、2,2-二甲氧基丙烷(100mL)和HClO4(25g，25.00mL，70％纯度)。混合物在室温下搅拌2.5小时，然后加入MeOH(30mL)溶液，并将混合物搅拌过夜。反应完成后，将其冷却至-30℃，然后缓慢加入30％Na2CO3溶液(75mL)，使温度不超过10℃。除去丙酮(400mL)，得到粗产物。过滤沉淀物并用乙酸乙酯(50mL)洗涤。浓缩滤液。所得液体用乙酸乙酯(300mL)稀释。有机层用盐水(300mL)洗涤，然后进行干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发至干。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，PE/EA：100∶0至70∶30)，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-甲氧基-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(43g，63.22％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 1.29(s,3H),1.44(d,J＝8.3Hz,3H),3.36-3.45(m,3H),3.52-3.72(m,2H),4.39(t,J＝2.8Hz,1H),4.56(d,J＝5.9Hz,1H),4.80(d,J＝5.9Hz,1H),4.94(s,1H).
将吡啶(17.82g，225.25mmol，18.13mL，2.3eq.)加入到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-甲氧基-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(20g，97.93mmol，1eq.)在DCM(700mL)的溶液中。将混合物冷却至约-10℃。然后在约-10℃下将三氟甲磺酸酐(58.03g，205.66mmol，34.60mL，2.1eq.)滴加到混合物中。混合物变红，形成大量固体，将其在-10℃下保持约4小时。有机层用水(400mL)洗涤，然后用盐水(300mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发至干。残余物通过硅胶柱色谱纯化(洗脱，PE/EA：100∶0至85∶15)，得到棕色油状的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-甲氧基-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲基三氟甲磺酸酯(21.6g，65.59％)。
在N2保护下，将1-[乙氧基(甲基)磷酰基]氧乙烷(9.77g，64.23mmol，1.0eq.)在THF(60mL)的溶液冷却至约-78℃。然后在约-78℃下将n-BuLi(2.5M，28.26mL，1.1eq.)滴加到混合物中。混合物在-78℃下搅拌25分钟。在约-78℃下，将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-甲氧基-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲基三氟甲磺酸酯(21.6g，64.23mmol，1eq.)在THF(20mL)中的溶液滴加到混合物中。混合物在-78℃下搅拌1小时，然后用NH4Cl水溶液(60mL)在-78℃下淬灭。将H2O(60mL)和EtOAc(60mL)加入到混合物中。分离有机层，水层用EtOAc(60mL)萃取。合并有机层并对其进行浓缩，残余物通过硅胶柱色谱纯化，其中用(PE/EA从100∶0至0∶100)洗脱，得到为黄色油状物的(3aR,4R,6R,6aR)-6-(2-二乙氧基磷酰基乙基)-4-甲氧基-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂(11g，50.62％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm:1.28-1.34(m,9H).1.47(s,3H),1.72-2.00(m,4H),3.35(t,J＝10.7Hz,3H),4.01-4.19(m,5H),4.53(d,J＝5.9Hz,1H),4.60(d,J＝5.3Hz,1H),4.94(s,1H).
在N2保护下，将2-[异丙氧基(甲基)磷酰基]氧丙烷(1.60g，8.87mmol，2eq)在THF(6mL)中的溶液冷却至约-78℃。在-78℃下，将n-BuLi(2.5M，4.43mL，2.5eq.)滴加至该混合物。将混合物在-78℃下搅拌1小时。在约-78℃下，将在THF(5mL)中的(3aR,4R,6R,6aR)-6-(2-二乙氧基磷酰基乙基)-4-甲氧基-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂(1.5g，4.43mmol，1当量)加入混合物中。将混合物在-78℃下搅拌10分钟并在室温下搅拌2小时。在室温下通过加入NH4Cl溶液淬灭混合物。分出有机层，水层用EtOAc(50mL)萃取。合并有机层并浓缩至干，残余物通过硅胶柱色谱纯化，其中用(EA/MeOH从100∶0至90∶10)洗脱，得到(3aR,6R,6aR)-6-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]-4-甲氧基-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂(1g，47.74％)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δppm 1.25-1.40(m,21H),1.80-1.82(m,2H),1.94-2.05(m,2H),2.28-2.32(m,2H),3.27-3.29(m,3H),4.05-4.09(m,3H),4.51-4.54(m,2H),4.68-4.70(m,2H),4.86-4.89(m,1H).
将(2R,3S,4R,5R)-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]-5-甲氧基-四氢呋喃-3,4-二醇(1.7g，3.93mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(7.6mL)和硫酸水溶液(1M，19mL，4.83eq.)中的溶液加热回流2.5小时。在将反应冷却至室温后，用饱和NaHCO3(38mL)将pH调节至7，并浓缩至干。残余物用干燥的THF蒸发两次，得到粗产物，其无需纯化用于下一步。
在0℃下，向(3R,4S,5R)-5-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-2,3,4-三醇在干燥吡啶(25mL)中的溶液中滴加乙酸酐(5.0mL)。反应混合物在室温下搅拌16小时后，将其蒸发至干。用HCl溶液(1M，15mL)将残余物调节至pH 2。用DCM(50mL)处理，分出有机层，用盐水(10mL)洗涤，干燥并浓缩。残余物通过硅胶柱色谱纯化，其中用(DCM/MeOH从100∶0至90∶10)洗脱，得到为黄油状物的[(2R,3R,4R)-4,5-二乙酰氧基-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(1.5g，70.28％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 1.34(dt,J＝12.6,6.4,15H),1.93-2.17(m,13H),2.51-2.83(m,2H),4.13(dd,J＝16.8,7.2,2H),4.23(d,J＝15.6,1H),4.66-4.80(m,2H),5.06-5.21(m,1H),5.30(t,J＝15.2,1H),5.95-6.45(m,1H)。
在-10C下，将DBU(768.7mg,5.05mmol，572.93μL，1.1eq.)和TMSOTf(2.25g，10.10mmol，1.83mL，2.2eq.)加入至[(2R,3R,4R)-4,5-二乙酰氧基-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(2.5g，4.59mmol，1eq.)和2,6-二氯-9H-嘌呤(911.2mg，4.64mmol，1.05eq.)在ACN(25mL)的溶液中。在50℃下搅拌混合物1小时。通过TLC(EA/MeOH＝20:1)监测反应完成。对混合物进行浓缩并通过硅胶柱色谱纯化，其中用(EA/MeOH从100∶0至95∶5)洗脱，得到[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(1.5g，63.83％)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δppm 1.21-1.31(m,15H),1.65-2.06(m,10H),2.35-2.46(m,2H),4.07-4.14(m,2H),4.72-5.16(m,3H),5.28-5.77(m,1H),6.08-6.11(m,1H),8.40-9.20(m,1H).
将DIPEA(143.94mg，1.11mmol，193.99μL，3eq.)加入至[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基](250mg，371.24μmol，1eq.)和苯甲胺(47.74mg，445.49μmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(2.5mL)的溶液。在120℃下搅拌混合物16小时。通过TLC(EtOAc:MeOH＝10:1)监测反应完成。对混合物进行浓缩并通过硅胶柱色谱纯化，其中用(EA/MeOH从100∶0至90∶10)洗脱，得到为黄色半固体的[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[6-(苄氨基)-2-氯-嘌呤-9-基]-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(140mg，50.68％)。
在室温下搅拌[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[6-(苄氨基)-2-氯-嘌呤-9-基]-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(140mg，188.14μmol，1eq.)在NH3-MeOH(7M，1.5mL，57.56eq.)的溶液2小时。对混合物进行浓缩以除去溶剂，得到粗产物(2R,3R,4S,5R)-2-[6-(苄氨基)-2-氯-嘌呤-9-基]-5-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇，为黄色半固体。其被直接用于下一步。
将溴(三甲基)硅烷(432.05mg,2.82mmol,15eq.)加入到(2R,3R,4S,5R)-2-[6-(苄氨基)-2-氯-嘌呤-9-基]-5-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇(124.18mg，188.14μmol，1eq.)在DMF(4mL)的溶液中。在50℃下搅拌混合物2小时。然后用TEAC溶液淬灭混合物，直到0℃下pH＝8。将混合物浓缩至干，加入H2O(5mL)并通过反相色谱(C18柱)(H2O/ACN从100∶0至90∶10)纯化，得到白色固体形式的a-1(20mg，19.40％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm:1.88-2.13(m,6H),4.04-4.07(m,1H),4.21-4.23(m,1H),4.61-4.63(m,1H),4.77(s,2H),5.94(d,J＝2.5Hz,1H),7.27-7.29(m,1H),7.33-7.36(m,2H),7.41-7.42(m,2H),8.30(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm:27.85,28.11,28..89,31.15,31.75,32.07,32.66,45.09,74.36,75.62,86.30,86.43,69.41,119.67,128.33,128.84,129.56,139.98,141.01,151.25,155.72,156.40；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm:14.99,36.71；m/z(ESI+):548.0(M+H).
实施例20.化合物a-9的合成
将DIPEA(380.00mg，2.94mmol，512.12μL，3eq.)加入至[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(660mg，980.08μmol，1eq.)和[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氯化铵(317.20mg，1.47mmol，1.5eq.)在1,4-二氧六环(11mL)的溶液中。在130℃下搅拌混合物16小时。通过TLC(EtOAc:MeOH＝10:1)监测反应完成。对混合物进行浓缩并通过硅胶柱色谱纯化，其中用(EA/MeOH从100∶0至92∶8)洗脱，得到为黄色半固体的[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[2-氯-6-[[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氨基]嘌呤-9-基]-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(310mg，38.75％)。1H NMR(500MHz,CD3OD):δppm:0.90(s,6H),1.13-1.50(m,20H),1.79-2.26(m,14H),2.64(dd,J＝31.9,15.0Hz,2H),4.10(qd,J＝14.4,7.1Hz,2H),4.64-4.79(m,2H),5.50-5.61(m,1H),5.83-5.94(m,1H),6.09(d,J＝4.9Hz,1H),6.99(s,1H),8.18(d,J＝6.0Hz,1H)。
在室温下搅拌[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[2-氯-6-[[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氨基]嘌呤-9-基]-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(310mg，379.78μmol，1eq.)在NH3-MeOH(7M，6mL，110.59eq.)的溶液3小时。对混合物进行浓缩以除去溶剂。将EtOA(35mL)加入到残余物中，并用盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，并进行浓缩以得到粗产物(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-[[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氨基]嘌呤-9-基]-5-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇(250mg，89.91％)，为黄色半固体。该固体被直接用于下一步。
将溴(三甲基)硅烷((993.18mg，6.49mmol，856.19μL，19eq.)加入到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-[[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氨基]嘌呤-9-基]-5-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇(250mg，341.44μmol，1eq.)在DMF(8mL)的溶液中。在50℃下搅拌混合物2小时。然后用TEAC溶液淬灭混合物，直到0℃下pH＝8。将混合物浓缩至干，加入H2O(8mL)，然后通过反相色谱(C18柱)(H2O/ACN从100∶0至90∶10)对化合物进行纯化，得到白色固体形式的a-9(101mg，41.02％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm:0.89(s,6H),1.13-1.23(m,2H),1.35(d,J＝12.3Hz,2H),1.45(d,J＝12.0Hz,2H),1.81(d,J＝11.8Hz,2H),1.85-2.01(m,5H),2.03-2.15(m,5H),2.18(d,J＝2.9Hz,1H),4.02(dd,J＝12.2,5.3Hz,1H),4.17(t,J＝5.1Hz,1H),4.57(t,J＝5.1Hz,1H),5.89(d,J＝4.8Hz,1H),8.26(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm:27.68,27.94,28.72,30.75,31.69,33.44,40.72,43.75,51.75,55.91,74.37,75.65,86.15,86.29,89.47,119.70,140.55,150.78,154.97,155.88；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm:14.98,38.21；m/z(ESI+):620.1(M+H).
实施例21.化合物a-19的合成
将DIPEA(143.94mg，1.11mmol，193.99μL，3eq.)加入至[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(250mg，371.24μmol，1eq.)和十二烷-1-胺(82.57mg，445.49μmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(2.5mL)的溶液中。在120℃下搅拌混合物16小时。通过TLC(EtOAc:MeOH＝10:1)监测反应完成。对混合物进行浓缩并通过硅胶柱色谱纯化，其中用(EA/MeOH从100∶0至90∶10)洗脱，得到为黄色半固体的[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[2-氯-6-(十二烷基氨基)嘌呤-9-基]-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(150mg，49.14％)。
在室温下搅拌[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[2-氯-6-(十二烷基氨基)嘌呤-9-基]-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(150mg，182.41μmol，1eq.)在NH3-MeOH(7M，1.5mL，57.56eq.)的溶液2小时。对混合物进行浓缩以除去溶剂，得到粗产物(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(十二烷基氨基)嘌呤-9-基]-5-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇，为黄色半固体。该固体被直接用于下一步。
将溴(三甲基)硅烷(418.90mg，2.74mmol，15eq.)加入到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(十二烷基氨基)嘌呤-9-基]-5-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇(134.66mg，182.41μmol，1eq.)在DMF(4mL)的溶液中。在50℃下搅拌混合物2小时。然后用TEAC溶液淬灭混合物，直到0℃下pH＝8。将混合物浓缩至干，加入H2O(5mL)，然后通过反相色谱(C18柱)(H2O/ACN从100∶0至70∶30)对化合物进行纯化，得到白色固体形式的a-19(20mg，17.51％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm:0.86-0.089(m,3H),1.26-1.30(m,18H),1.64-1.67(m,2H),1.92-2.17(m,6H),1.81(d,J＝11.8Hz,2H),1.85-2.01(m,5H),2.03-2.15(m,5H),3.51-3.54(m,2H),4.05-4.06(d,J＝5.0,1H),4.19(t,J＝5.0Hz,1H),4.59(t,J＝5.0Hz,1H),5.91(d,J＝5.0Hz,1H),8.25(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm:13.13,22.33,26.17,26.45,28.87,28.97,29.04,29.26,29.32,31.64,40.20,72.95,74.25,84.86,87.88,118.09,139.24,149.41,154.44,155.17；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm:15.01,39.35；m/z(ESI+):626.2(M+H).
实施例22.化合物a-31的合成
将DIPEA(1.01g，7.80mmol，1.36mL，3.0eq.)加入至[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(1.5g，2.23mmol，1eq)和2-氮杂环[4.5]十烷(465.22mg，3.34mmol，1.5eq.)在1,4-二氧六环(15mL)的溶液中。在130℃下搅拌混合物16小时。通过TLC(EtOAc:MeOH＝20:1)监测反应完成。对混合物进行浓缩并通过硅胶柱色谱纯化，其中用(EA/MeOH从100∶0至95∶5)洗脱，得到[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[6-(2-氮杂环[4.5]十烷-2-基)-2-氯-嘌呤-9-基]-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(950mg，54.95％)。1H NMR(500MHz,CD3OD):δppm 1.26-1.36(m,17H),1.51-1.53(m,2H),1.83-2.17(m,12H),2.62-2.69(m,2H),3.39-3.53(m,1H),3.71-3.73(m,1H),3.93-3.95(m,1H),4.13-4.27(m,4H),4.69-4.71(m,2H),5.58-5.59(m,1H),5.91-5.93(m,1H),6.10-6.12(m,1H),6.15-6.17(m,1H)。
制备[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[6-(2-氮杂环[4.5]十烷-2-基)-2-氯-嘌呤-9-基]-2-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3-基]乙酸酯(950mg，1.22mmol，1eq.)在NH3-MeOH(7M，10mL，57.19eq.)的溶液。在室温下搅拌该混合物16小时。对混合物进行浓缩，加入EtOA(30mL)。有机层用NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干以得到(2R,3R,4S,5R)-2-[6-(2-氮杂环[4.5]十烷-2-基)-2-氯-嘌呤-9-基]-5-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇(650mg，76.73％)。1H NMR(500MHz,CD3OD):δppm 1.27-1.36(m,15H),1.52-1.54(m,10H),1.84-1.94(m,2H),2.05-2.18(m,4H),2.61-2.68(m,2H),3.52-3.54(m,1H),3.72-3.74(m,1H),3.88-4.03(m,2H),4.12-4.14(m,3H),4.27-4.29(m,1H),4.62-4.73(m,3H),5.89(s,1H),8.14-8.15(m,1H)。
在0℃下，将溴(三甲基)硅烷(331.79mg，2.17mmol，15eq.)加入到(2R,3R,4S,5R)-2-[6-(2-氮杂环[4.5]十烷-2-基)-2-氯-嘌呤-9-基]-5-[2-[二异丙氧基磷酰基甲基(乙氧基)磷酰基]乙基]四氢呋喃-3,4-二醇(100mg，144.48μmol，1eq.)在DMF(4mL)的溶液中。在50℃下搅拌混合物2小时。然后用TEAC溶液淬灭混合物，直到0℃下pH＝8。将混合物浓缩至干，加入H2O(10mL)，然后通过反相色谱(C18柱)(H2O/ACN从100∶0至90∶10)进行纯化，得到产物a-31(20mg，20.32％)。1H NMR(CD3OD,500MHz):δppm 1.51-1.57(m,10H),1.83-2.10(m,8H),3.51-3.53(m,1H),3.71-3.73(m,1H),3.95-3.97(m,1H),4.03-4.04(m,1H),4.16-4.19(m,2H),4.57-4.59(m,1H),5.90-5.91(d,1H),8.19-8.20(m,1H)；13C NMR(CD3OD,125MHz):δppm 23.02,25.87,26.18,26.40,27.18,29.21,29.80,30.13,30.73,34.89,40.37,42.67,72.94,74.05,84.70,87.93,118.71,138.65,150.96,153.21,153.83；31P NMR(CD3OD,203MHz):δ15.12,38.73；m/z(ESI+):580.1(M+H).
实施例23.化合物c-13的合成
将1N H2SO4(1M，25mL，3.38eq)加入到(3aR,4R,6R,6aR)-6-(2-二乙氧基磷酰基乙基)-4-甲氧基-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂(2.50g，7.39mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(10mL)的混合物中，然后加热回流2.5小时。用NaHCO3水溶液(50mL)将pH调节至7，并浓缩至干。向在吡啶(21mL)中的残余物中加入Ac2O(836.84mg，8.20mmol，4.2mL)，然后在室温下搅拌16小时。将所得到的溶液蒸发至干。残余物通过硅胶柱色谱纯化，其中用(DCM/MeOH从100∶0至95∶05)洗脱，得到[(2R,3R,4R)-4,5-二乙酰氧基-2-(2-二乙氧基磷酰基乙基)四氢呋喃-3-基]乙酸酯(1.9g，62.67％)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δppm 1.36-1.54(m,6H),1.81-2.30(m,13H),1.94-2.05(m,2H),4.13-4.31(m,5H),4.90-5.23(m,2H),6.16-6.41(m,1H)。
在-10C下，将DBU(775.39mg，5.09mmol，760.18μL，1.1eq)和TMSOTf(2.26g，10.19mmol，1.84mL，2.2eq)加入至[(2R,3R,4R)-4,5-二乙酰氧基-2-(2-二乙氧基磷酰基乙基)四氢呋喃-3-基]乙酸酯(1.9g，4.63mmol，1eq)在ACN(219mL)的溶液中。在50℃下搅拌混合物1小时。对混合物进行浓缩并通过硅胶柱色谱纯化，其中用(EA/MeOH从100∶0至95∶5)洗脱，得到[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)-2-(2-二乙氧基磷酰基乙基)四氢呋喃-3-基]乙酸酯(1.3g，52.06％)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δppm 1.24-1.34(m,6H),2.01-2.14(m,10H),4.09-4.12(m,5H),5.56-5.58(m,1H),5.88-5.90(m,1H),6.24-6.25(d,1H),8.68(s,1H).
将DIPEA(934.61mg，7.23mmol，1.26mL，3eq.)加入至[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)-2-(2-二乙氧基磷酰基乙基)四氢呋喃-3-基]乙酸酯(1.3g，2.41mmol，1eq.)和[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氯化铵(624.12mg，2.89mmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(13mL)的溶液。在130℃下搅拌混合物16小时。通过TLC监测反应完成。对混合物进行浓缩并通过硅胶柱色谱纯化，其中用(EA/MeOH从100∶0至90∶10)洗脱，得到[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[2-氯-6-[[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氨基]嘌呤-9-基]-2-(2-二异丙氧基磷酰基乙基)四氢呋喃-3-基]乙酸酯(700mg，42.57％).1H NMR(500MHz,CD3OD):δppm 0.84-0.91(m,6H),1.20-1.32(m,9H),1.36-1.52(m,4H),1.82-2.01(m,6H),2.07-2.14(m,10H),4.08-4.11(m,5H),5.57-5.60(m,1H),5.87-5.89(m,1H),6.09-6.10(m,1H),8.16(m,1H)。
将NH3-MeOH(7M，7mL，47.75eq.)加入至[(2R,3R,4R,5R)-4-乙酰氧基-5-[2-氯-6-[[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氨基]嘌呤-9-基]-2-(2-二异丙氧基磷酰基乙基)四氢呋喃-3-基]乙酸酯(700mg，1.03mmol，1eq)的溶液中。在室温下搅拌该混合物16小时。对混合物进行浓缩，加入EtOA(30mL)。有机层用NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发以得到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-[[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氨基]嘌呤-9-基]-5-(2-二异丙氧基磷酰基乙基)四氢呋喃-3,4-二醇(400mg，65.18％).1H NMR(500MHz,CD3OD):δppm 0.90-0.92(m,6H),1.20-1.26(m,2H),1.29-1.32(m,6H),1.36-1.39(m,2H),1.46-1.48(m,2H),1.82-1.84(m,2H),1.91-1.93(m,3H),1.96-2.05(m,3H),2.10-2.12(m,2H),2.20-2.21(m,1H),4.03-4.11(m,5H),4.27-4.29(m,1H),4.69-4.71(m,1H),5.86-5.87(m,1H),8.15(s,1H).
在0℃下，将溴(三甲基)硅烷(383.97mg，2.51mmol，331.01μL，15eq)加入到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-[[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-金刚烷基]氨基]嘌呤-9-基]-5-(2-二异丙氧基磷酰基乙基)四氢呋喃-3,4-二醇(100mg，167.20μmol，1eq)在DMF(4mL)的溶液中。在50℃下搅拌混合物2小时。然后用TEAC溶液淬灭混合物，直到0℃下pH＝8。浓缩混合物，加入H2O(510mL)，然后通过反相色谱(C18柱)(H2O/ACN从100∶0至70∶30)对化合物进行纯化，得到c-13(40mg，37.20％).1H NMR(CD3OD,500MHz):δppm 1.19-1.26(m,2H),1.36-1.38(m,2H),1.45-1.48(m,2H),1.63-1.74(m,2H),1.82-1.84(m,2H),1.90-1.95(m,2H),1.98-2.10(m,4H),2.19-2.21(m,1H),4.02-4.03(m,1H),4.15-4.17(m,1H),4.55-4.56(m,1H),5.90-5.91(d,1H),8.22(s,1H).13C NMR(CD3OD,125MHz):δppm 25.41,26.49,29.21,30.75,31.70,33.45,40.71,43.76,51.76,55.91,74.60,75.76,85.99,86.13,89.71,119.74,140.42,150.68,154.98,155.88；31P NMR(CD3OD,203MHz):δppm 24.12；m/z(ESI-):540.2(M-H).
实施例24.化合物d-1的合成
将茚烷-1-羧酸(5g，30.83mmol，1eq.)和H2SO4(3.02g，30.83mmol，1.64mL，1eq.)在MeOH(100mL)中的混合物在65℃下加热20小时。通过TLC分析指示反应完成。蒸发所得到的溶剂，残余物用EtOAc(30mL)稀释。然后用盐水洗涤、Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干，得到产物茚烷-1-甲酸甲酯(4.7g，86.5％)。
氮气气氛，0℃下，将K2CO3(11.06g，80.02mmol，3eq.)和HCHO(7.37g，80.02mmol，37％含量，3eq.)加入茚烷-1-甲酸甲酯(4.7g，26.67mmol，1eq.)在DMSO(47mL)的溶液中。室温搅拌混合物19小时，加入H2O(50mL)淬灭所得溶液。加入EtOAc(50mL)萃取混合物。水相用2.5N盐酸调节pH至3，用EtOAc(50mL)萃取。有机层用盐水洗涤、Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干，得到产物1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(3.3g，64.4％)。
将EDCI(2.99g，15.61mmol，1.5eq.)、HOBT(2.11g，15.61mmol，1.5eq.)和DIPEA(2.02g，15.61mmol，2.72mL，1.5eq.)加入1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(2g，10.41mmol，1eq.)和(4-甲氧基苯基)甲胺(1.43g，10.41mmol，1eq.)在DMF(20mL)中的混合物中。室温下搅拌混合物18小时。通过TLC指示反应完成。加入H2O(10mL)淬灭所得溶液，并加入EtOAc(80mL)来稀释。有机层用盐水洗涤、Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干。残余物用硅胶柱分离纯化(DCM/MeOH，从100:0至95:5)，得油状物形式的1-(羟甲基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]茚烷-1-甲酰胺(2.4g，74.1％)。
氮气气氛下，将PPh3(2.78g，10.60mmol，1.5eq.)和DEAD(1.85g，10.60mmol，1.67mL依次滴加至1-(羟甲基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]茚烷-1-甲酰胺(2.2g，7.07mmol，1eq.)在THF(55mL)的溶液中，同时将温度保持在0℃。混合物在室温下搅拌2小时。TLC分析指示反应完成。加入H2O(2mL)淬灭所得溶液。然后加入EtOAc(20mL)。分出有机层，用盐水洗涤、Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干。残余物用硅胶柱分离纯化(DCM/MeOH，从100:0至98:2～98:3)，得为黄色固体的1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-螺-[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(1.7g，82.1％)。
在0℃下，将硝酸铈铵(9.16g，16.70mmol，3.5eq.)加入到1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-螺-[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(1.4g，4.77mmol，1eq.)在乙腈(36mL)和H2O(4mL)的溶液中。混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC指示反应完成。所得溶液加入EtOAc(50mL)来稀释。分出有机相，用水、盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干。残余物用硅胶柱分离纯化PE/EA(从100:0至45:55)洗脱，以得到为黄色固体形式的螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(160mg，19.4％)。
在0℃下，将LiAlH4(39.44mg，1.04mmol，1eq.)加入到螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(180.00mg，1.04mmol，1eq.)在THF(10mL)的溶液中。混合物在70℃下搅拌过夜。H2O(1mL)淬灭，随后加入EtOAc(10mL)。通过过滤去除固体材料，浓缩有机相。残余物用硅胶柱分离纯化(DCM/MeOH(100:0-80:20))，以得到为油状物形式的产物螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](80mg，48.4％)。
将螺[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](80mg，502.43μmol，1eq.)和DIPEA(162.33mg，1.26mmol，218.78μL，2.5eq.)加入至[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]甲基乙酸酯(224.70mg，502.43μmol，1eq.)在1,4-二氧六环(8mL)的溶液中。混合物在100℃下搅拌过夜。TLC表明起始原料被消耗并产生两种新的产物。浓缩混合物，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc，从100:0至60:40)，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]甲基乙酸酯(100mg，34.9％)。
将NH3-MeOH(7M，601.51μL，20eq.)加入至[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]甲基乙酸酯(120mg，210.53μmol，1eq.)在MeOH(2mL)的溶液中。混合物在室温下搅拌4小时。通过蒸发除去溶剂，并且残余物用EtOAc(30mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤、Na2SO4干燥。对有机层进行浓缩以得到为浅黄色固体形式的粗产物(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(90mg，202.76μmol，96.31％收率)，其无需进一步纯化便可使用。
将2,2-二甲氧基丙烷(187.70mg，1.80mmol，10eq.)和TsOH-H2O(35.69mg，180.23μmol，1.0eq.)加入至(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(80mg，180.23μmol，1eq.)在丙酮(20mL)中的溶液中。混合物在室温下搅拌过夜。混合物用EtOAc(30mL)稀释，通过NaHCO3(40mL)水溶液和盐水(40mL)洗涤。浓缩有机层，并且残余物用硅胶柱分离纯化(PE/EtOAc(100:0-45:55))以得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(70mg，80.2％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(70mg，144.64μmol，1eq.)在PO(MeO)3(4mL)的溶液冷却至约0℃，然后加入在PO(MeO)3(1mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(72.26mg，289.29μmol，2.0eq.)。在0℃条件下搅拌混合物6小时。加入水(3mL)，进一步在室温搅拌混合物过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱纯化(在水中的0～30％ACN)进行纯化，得化合物d-1(41mg，收率44.5％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 2.47(dt,J＝31.3,12.1Hz,4H),2.96(t,J＝7.1Hz,2H),4.24(s,1H),4.28(dd,J＝11.2,6.5Hz,1H),4.34(d,J＝3.6Hz,1H),4.42(t,J＝4.8Hz,1H),4.64(t,J＝5.0Hz,1H),6.00(d,J＝5.0Hz,1H),7.16-7.31(m,3H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),8.38(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm31.23,39.74,65.95,71.42,75.67,84.73,89.71,119.06,123.26,125.49,128.29,128.80,141.30,144.69,147.40,151.90,155.69；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.89,19.83；m/z(ESI+):602.1(M+H).
实施例25.化合物d-2的合成
将叔丁醇钾(1M，26.64mL，2.0eq.)加入至在0℃下冷却的4-氟茚-1-酮(2g，13.32mmol，1eq.)在EtOH(20mL)和THF(20mL)的溶液中，然后加入在EtOH/THF(1:1，20m)的TOSMIC(3.90g，19.98mmol，1.5eq.)。混合物在室温下搅拌过夜，冷却至0℃，然后加入盐水。用EtOAc萃取混合物，并对萃取物进行浓缩。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱：PE/EA＝100：0-83：17)，得到产物4-氟茚-1-碳腈(910mg，5.65mmol，收率42.39％)。
将4-氟茚-1-碳腈(910mg，5.65mmol，1eq.)加入到氢氧化钠(677.52mg，16.94mmol，3.0eq.)在水(15mL)中的溶液中。混合物在100℃下搅拌反应16小时。将混合物冷却至室温，用水(30mL)稀释，并用EtOAc(2x 40mL)萃取。水层调节pH至2并用EtOAc(2x50mL)萃取。合并有机层，浓缩至干，得到为棕色固体形式的4-氟茚烷-1-羧酸(905mg，5.02mmol，收率88.96％)。
在室温下，将氯化亚砜(3.30g，27.75mmol，2.02mL，5eq.)加入到4-氟茚烷-1-羧酸(1g，5.55mmol，1eq.)在甲醇(20mL)和DMF(0.1mL)的溶液中。添加完成后，将反应混合物在室温下搅拌3小时，然后浓缩，用冰水(50mL)淬灭，用EtOAc(2x 50mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，并浓缩至干，得到4-氟茚烷-1-羧酸甲酯(1.02g，5.25mmol，收率94.63％)。
氮气气氛，0℃下，将K2CO3(2.18g，15.76mmol，3eq.)和HCHO(941.54mg，10.50mmol，38％纯度，2eq.)加入至4-氟茚烷-1-羧酸甲酯(1.02g，5.25mmol，1eq.)在DMSO(25mL)中的混合物中。室温下搅拌混合物16小时。用H2O(75mL)淬灭反应。混合物用乙酸乙酯(50mL)萃取。用3N HCl将水性溶液的pH值调节至3。混合物用乙酸乙酯(3×80mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干，得到4-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(1.02g，4.85mmol，收率92.39％)。
向4-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(1.02g，4.85mmol，1eq.)和苯甲胺(519.96mg，4.85mmol，1eq.)在DMF(10mL)中的混合物中加入EDCI(1.40g，7.28mmol，1.5eq.)、HOBT(2.29g，16.91mmol，1.5eq.)和DIPEA(627.14mg，4.85mmol，845.20μL，1eq.)。室温搅拌18小时，通过蒸发除去溶剂，随后加入水(50mL)和EA(60mL)。有机层盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发至干。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0 -50：50)，得到N-苄基-4-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-甲酰胺(1.25g，4.18mmol,收率86.06％)。
在0℃、氮气气氛下，向N-苄基-4-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-甲酰胺(500mg，1.67mmol，1eq.)和四氢呋喃(10mL)的混合物中加入PPh3(657.17mg，2.51mmol，1.5eq.)，然后滴加DEAD(436.35mg，2.51mmol，394.53μL，1.5eq.)。室温条件下搅拌混合物2小时。用水(20mL)淬灭反应，然后加入乙酸乙酯(60mL)。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥、过滤、蒸发至干。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0至67:33)，得到1-苄基-4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(380mg，1.35mmol,收率80.87％)。
在0℃条件下，向在0℃下冷却的三氯化铝(360.22mg，2.70mmol，2eq.)在四氢呋喃(4mL)的溶液中加入氢化铝锂(153.78mg，4.05mmol，3eq.)。在0℃条件下搅拌混合物30分钟，然后加入在四氢呋喃(3mL)中的1-苄基-4'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(380mg，1.35mmol，1eq.)。室温搅拌混合物16小时，用EtOAc(20mL)稀释，然后在0℃下缓慢加入15％氢氧化钠水溶液来将pH调节至10。分出有机层，用MgSO4干燥。过滤除去不溶物，并将滤液浓缩至干。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0至67:33)，得到1-苄基-4'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](280mg，1.05mmol，收率77.54％)。
向1-苄基-4'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](280mg，1.05mmol，1eq.)在甲醇(15mL)的溶液中加入甲酸铵(99.07mg，1.57mmol，1.5eq.)和Pd(OH)2(64.64mg，523.69μmol，0.5eq.)。氢气环境下，在60℃搅拌混合物过夜。过滤处不溶物，用甲醇洗涤。滤液和洗液合并并浓缩至干，得到产物4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](148mg，835.13μmol,收率79.74％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(340mg，760.24μmol，1eq.)在1,4-二氧六环(10mL)的溶液中加入4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](148.20mg，836.27μmol，1.1eq.)和DIPEA(442.14mg，3.42mmol，595.88μL，4.5eq.)。混合物在100℃下搅拌3小时。
浓缩混合物，并且残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-60：40)，得产物[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(290mg，493.21μmol，收率64.88％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(290mg，493.21μmol，1eq.)在甲醇(5mL)的混合物中加入NH3-MeOH(7M，1.76mL，25eq.)。混合物在室温下搅拌2小时，并浓缩至干，得到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(227mg，491.48μmol，收率99.65％)。其可直接用于下一步。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(227mg，491.48μmol，1eq.)在丙酮(10mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(1.02g，9.83mmol，20eq.)和TsOH-H2O(97.31mg，491.48μmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌反1小时。通过蒸发除去溶剂。残余物用EtOAc(50mL)稀释，依次用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，并进行浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(170mg，338.69μmol，收率68.91％)。
向在0℃下冷却的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚二酮]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(170mg，338.69μmol，1eq.)在PO(EtO)3(2.5mL)的溶液中加入在PO(OEt)3(2.5mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(74.65mg，298.84μmol，2.5eq.)。0℃条件下搅拌混合物4小时，然后将水(2mL)引入至反应混合物。混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱分离纯化(梯度洗脱，在水中0至25％ACN)，得到化合物d-2(40.2mg，收率19.15％)1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 2.52(dt,J＝42.1,14.0Hz,4H),3.00(t,J＝7.0Hz,2H),4.21–4.50(m,4H),4.65(s,1H),6.01(d,J＝5.0Hz,1H),6.96(t,J＝8.4Hz,1H),7.26–7.38(m,2H),8.40(s,1H).m/z(ESI+):620.3(M+H).
实施例26.化合物d-3的合成
向在0℃下冷却的5-氟茚-1-酮(6.0g，39.96mmol，1eq.)在EtOH(20mL)和THF(20mL)的溶液中加入在THF(40mL)的t-BuOK(8.97g，79.92mmol，2.0eq.)，然后加入在1:1的EtOH和THF(50mL)的TOSMIC(11.70g，59.94mmol，1.5eq.)。混合物在室温下搅拌过夜，冷却至0℃，然后加入盐水。用EtOAc(2x 120mL)萃取混合物。合并有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱：PE/EA＝100：0 -80：20)，得到5-氟茚-1-碳腈(2.15g，13.34mmol，33.38％收率)。
向5-氟茚-1-碳腈(2.5g，15.51mmol，1eq.)和水(30mL)的混合物中加入氢氧化钠(1.86g，46.53mmol，3eq.)。混合物在100℃下搅拌反应16小时，然后冷却至室温，随后加入水(30mL)。混合物用EtOAc(2x 30mL)萃取。将水性层调节pH至2，并用EtOAc(2x 30mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干，得到棕色固体形式的5-氟茚烷-1-羧酸(2.7g，14.99mmol，96.61％收率)。
向在0℃下冷却的5-氟茚烷-1-羧酸(2.7g，14.99mmol，1eq.)在甲醇(40mL)中的溶液中加入1滴DMF，然后加入SOCl2(7.13g，59.94mmol，4.35mL，4eq.)。反应混合物在室温下搅拌3小时，在约40℃的浴温下通过蒸发除去溶剂。向残余物中加入水(60mL)和EtOAc(40mL)，并均匀混合。分出有机层，用NaHCO3(aq.)和NaCl(aq.)依次洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并蒸发至干，得到棕色油状物形式的5-氟茚烷-1-羧酸甲酯(2.8g，14.42mmol，96.21％收率)。
向5-氟茚烷-1-羧酸甲酯(2.8g，14.42mmol，1eq.)在DMSO(30mL)中的溶液中加入K2CO3(5.98g，43.25mmol，3eq.)和HCHO(3.98g，43.25mmol，37％纯度，3eq.)。室温下搅拌混合物16小时。用H2O(100mL)淬灭反应。混合物用乙酸乙酯(50mL)萃取。用3N HCl将水性溶液的pH值调节至3。混合物用EtOAc(2x 80mL)萃取。用6N HCl将水性层的pH调节至3，随后用EtOAc(2x 60mL)提取。合并有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干，得到5-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(3.0g，14.27mmol，98.99％收率)。
向5-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(3.0g，14.27mmol，1eq.)在DMF(40mL)中的溶液中加入苯甲胺(1.53g，14.27mmol，1.56mL，1eq.)、DIPEA(3.32g，25.69mmol，4.47mL，1.8eq.)，HOBT(2.89g，21.41mmol，1.5eq.)和EDCI(4.10g，21.41mmol，1.5eq.)。混合物在室温下搅拌5小时。用水(20mL)淬灭反应，然后加入EtOAc(100mL)。分出有机层，然后用盐水洗涤，通过蒸发除去溶剂，随后加入水(50mL)和EA(60mL)。有机层盐水洗涤，用Na2SO4干燥，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0至50：50)，得到N-苄基-5-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-甲酰胺(3.6g，12.03mmol，84.27％收率)。
在0℃、氮气气氛下，向N-苄基-5-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-甲酰胺(3.6g，12.03mmol，1eq.)和四氢呋喃(40mL)的混合物中加入PPh3(3.79g，14.43mmol，1.2eq.)，然后滴加DEAD(2.51g，14.43mmol，2.27mL，1.2eq.)。室温条件下搅拌混合物16小时。用水(20mL)淬灭反应，然后加入EtOAc(100mL)。分出有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥、过滤、蒸发至干。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0至70:30)，得到白色固体形式的1-苄基-5'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(3.0g，10.66mmol，88.67％收率)。
向在0℃下冷却的三氯化铝(473.97mg，3.55mmol，2eq.)在四氢呋喃(15mL)的溶液中加入LiAlH4(202.35mg，5.33mmol，3eq.)。在0℃下搅拌混合物20分钟，然后加入1-苄基-5'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(500mg，1.78mmol，1eq.；溶解在5mL的THF)。室温搅拌混合物5小时，用THF(10ml)稀释，然后在0℃下缓慢加入15％氢氧化钠水溶液直至将混合物的pH调节至9。分出有机层，用MgSO4干燥。过滤除去不溶物，并将滤液浓缩至干，得到1-苄基-5'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](475mg，1.78mmol，99.97％收率)。
向1-苄基-5'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](475mg，1.42mmol，1eq.)在甲醇(10mL)的溶液中加入甲酸铵(134.45mg，2.13mmol，1.5eq.)和Pd(OH)2(50mg，20％担载在碳上，ca.50％水润湿)。氢气环境下，在60℃搅拌混合物过夜。过滤出不溶物，用甲醇洗涤。滤液和洗液合并并浓缩至干，得到产物5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](250mg，99.25％)并可直接用于下一步。
向5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](86mg，97.056μmol，1eq.)在1,4-二氧六环(10mL)的溶液中加入[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(217.03mg，485.28μmol，1eq.)和DIPEA(156.79mg，1.21mmol，211.31μL，2.5eq.)。混合物在100℃下搅拌4小时。通过蒸发去除溶剂。残余物用EtOAc(50mL)稀释，用水和盐水依次洗涤。对有机层进行浓缩，并且残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到白色固体形式的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(190mg，323.14μmol，66.59％收率)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(190mg，323.14μmol，1eq.)在甲醇(2.00mL)的混合物中加入NH3-MeOH(7M，1.38mL，30eq.)。混合物在室温下搅拌过夜，通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(30mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩至干，得到白色固体形式的(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(149mg，322.60μmol，99.83％yield)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(149mg，322.60μmol，1eq.)在丙酮(10mL)的溶液中加入TsOH-H2O(61.36mg，322.60μmol，1eq.)和2,2-二甲氧基丙烷(671.96mg，6.45mmol，793.34μL，20eq.)。混合物在室温下搅拌2小时。在0℃下通过缓慢加入NaHCO3(aq.)水溶液来将混合物碱化至pH9。通过蒸发除去溶剂。残余物用EtOAc(2x 30mL)萃取。有机层用盐水洗涤，并进行浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到白色固体形式的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(138mg，274.94μmol，85.22％收率)。
向在0℃下冷却的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚二酮]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(138mg，274.94μmol，1eq.)在PO(EtO)3(1.5mL)的溶液中加入在PO(OEt)3(1.5mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(171.69mg，687.34μmol，2.5eq.)。0℃条件下搅拌混合物4小时，然后加入水(2mL)。将混合物在25℃下搅拌过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱分离纯化(梯度洗脱，在水中0至30％ACN)，得到化合物d-3(40mg，64.53μmol，23.55％收率)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 2.47–2.60(m,4H),3.00(t,J＝6.8Hz,2H),4.25–4.43(m,4H),4.43–4.52(m,2H),4.68(m,3H),6.04(d,J＝4.8Hz,1H),7.00(d,J＝9.0Hz,2H),7.53(s,1H),8.45(s,1H)；m/z(ESI+):620.0(M+H).
实施例27.化合物d-4的合成
向在0℃下冷却的6-氟茚-1-酮(2g，13.32mmol，1eq.)在EtOH(9mL)和THF(9mL)的溶液中加入在THF(25mL)的t-BuOK(2.99g，26.64mmol，2.0eq.)，然后加入在EtOH和THF(1:1，25mL)中的TOSMIC(3.90g，19.98mmol，1.5eq.)的混合物。混合物在室温下搅拌16小时，冷却至0℃，然后加入盐水。用EtOAc萃取混合物并浓缩萃取物。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱：PE/EA＝100：0 -85：15)，得到6-氟茚-1-碳腈(1.3g，60.6％)。
向6-氟茚-1-碳腈(2.6g，16.13mmol，1eq.)和水(30mL)的混合物中加入氢氧化钠(1.94g，48.39mmol，3.0eq.)。混合物在100℃下搅拌5小时，然后冷却至室温。混合物用水(10mL)稀释，并用EtOAc(2x 35mL)萃取。将水层调节pH至2，并用EtOAc(2x 20mL)萃取。合并提取物，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到黄色固体形式的6-氟茚烷-1-羧酸(2.7g，92.9％)。
向在0℃下冷却的6-氟茚烷-1-羧酸(2.8g，15.54mmol，1eq.)在甲醇(40mL)中的溶液中加入1滴DMF，然后加入SOCl2(7.40g，62.16mmol，4.51mL，4.0eq.)。反应混合物在室温下搅拌过夜。通过蒸发除去溶剂，并用水(50mL)和EtOAc(100mL)处理残余物。分出有机层，首先用NaHCO3水溶液和然后用盐水进行洗涤，干燥(硫酸钠)，蒸发，得到棕色油状物形式的6-氟茚烷-1-羧酸甲酯(3g，99.4％)。
向6-氟茚烷-1-羧酸甲酯(3g，15.45mmol，1eq.)在DMSO(30mL)中的溶液中加入K2CO3(7.05g，50.98mmol，3.3eq.)和HCHO(4.27g，46.34mmol，37％含量，3.0eq.)。室温下搅拌混合物16小时。用H2O(100mL)淬灭反应溶液，用EtOAc(2x 80mL)萃取。用6N HCl将水性溶液的pH值调节至3，并用EtOAc(2x 60mL)萃取水性溶液。合并有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发，得到浅黄色固体形式的6-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(2.37g，72.9％收率)。
向6-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(2.37g，11.27mmol，1eq.)在DMF(27mL)中的溶液中加入苯甲胺(1.21g，11.27mmol，1.23mL，1.0eq.)、DIPEA(2.62g，20.29mmol，3.53mL，1.8eq.)，EDCI(3.24g，16.91mmol，1.5eq.)和HOBT(2.29g，16.91mmol，1.5eq.)。混合物在室温下搅拌5小时。用EtOAc(100mL)和水(100mL)稀释混合物。分出有机层，然后用盐水(5x100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到N-苄基-6-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-甲酰胺(3.2g，94.8％)。
在0℃下，向N-苄基-6-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-甲酰胺(1g，3.34mmol，1eq.)和四氢呋喃(14mL)的溶液中加入PPh3(1.05g，4.01mmol，1.2eq.)，然后加入DEAD(698.14mg，4.01mmol，631.23μL，1.2eq.)。室温条件下搅拌混合物过夜，用EtOAc(40mL)稀释。分出有机层，用盐水洗涤，浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0至60:40)，得到黄色固体形式的1-苄基-6'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(680mg，72.3％)。
向在0℃下冷却的三氯化铝(644.60mg，4.83mmol，2.0eq.)在四氢呋喃(15mL)的溶液中加入LiAlH4(275.19mg，7.25mmol，3.0eq.)。在0℃下搅拌混合物15分钟，然后加入1-苄基-6'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(80mg，2.42mmol，1eq.；在THF中，8mL)。室温搅拌混合物过夜，用H2O(0.6mL)淬灭反应，然后加入15％NaOH水溶液(2.5mL)和EtOAc(20mL)。通过过滤除去固体物，浓缩滤液，得到1-苄基-6'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](600mg，92.8％)。
向1-苄基-6'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](600mg，92.8％)在甲醇(10mL)的溶液中加入Pd(OH)2(100mg)和甲酸铵(212.29mg，3.37mmol，1.5eq.)。氢气环境下，在60℃搅拌混合物5小时。过滤出不溶物，用甲醇洗涤。滤液和洗液合并并浓缩至干，得到6'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](390mg，98.1％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(20mL)的溶液中加入6'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](237.76mg，1.34mmol，1.2eq.)和DIPEA(577.96mg，4.47mmol，778.93μL，4.0eq.)。混合物在100℃下搅拌3小时。浓缩混合物，并且残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0至60：40)，得到白色固体形式的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(6'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，76.1％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(6'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，850.36μmol，1eq.)在甲醇(2mL)的溶液中加入NH3-MeOH(7M，3.64mL，30eq.)。混合物在室温下搅拌过夜，通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc稀释，洗涤(首先用水，然后水盐水)，用Na2SO4干燥，浓缩，得到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(6'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(380mg，96.7％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(6'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(380mg，822.74μmol，1eq.)在丙酮(15mL)的溶液中加入p-TsOH(141.68mg，822.74μmol，1eq.)和2,2-二甲氧基丙烷(1.29g，12.34mmol，15eq.)。混合物在室温下搅拌3小时。混合物用EtOAc(25mL)稀释，用NaHCO3(aq.)水溶液洗涤，然后用盐水洗涤，并进行浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到白色固体形式的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(6'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(200mg，48.4％)。
向在0℃下冷却的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(6'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚二酮]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(200mg，398.46μmol，1eq.)在PO(EtO)3(2mL)的溶液中加入在PO(OEt)3(2mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(248.82mg，996.14μmol，2.5eq.)。0℃条件下搅拌混合物5小时。然后0℃下将水(2mL)加入至混合物。将混合物在25℃下搅拌过夜。混合物直接注入反相C-18硅胶柱来进行纯化(梯度洗脱，在水中0至30％ACN)，得到化合物d-4(75mg，30.3％收率)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 2.41-2.57(m,4H),2.93(t,J＝7.0Hz,2H),4.21-4.39(m,3H),4.42(t,J＝4.7Hz,1H),4.64(t,J＝4.9Hz,1H),6.00(d,J＝4.9Hz,1H),6.95(t,J＝8.6Hz,1H),7.23(t,J＝9.1Hz,2H),8.39(s,1H)；m/z(ESI+):620.1(M+H).
实施例28.化合物d-5的合成
向在0℃下冷却的7-氟茚-1-酮(4g，26.64mmol，1eq.)在EtOH(15mL)和THF(15mL)的溶液中加入在THF(40mL)的t-BuOK(5.98g，53.28mmol，2.0eq.)，然后加入在EtOH和THF(1:1，50mL)的TOSMIC(7.80g，39.96mmol，1.5eq.)。混合物在室温下搅拌16h，冷却至0℃。加入盐水后，用EtOAc萃取混合物。浓缩有机层，残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱：PE/EtOAc＝100：0 -85：15)，得到棕色油状物的7-氟茚-1-碳腈(2.5g，58.2％)。
向7-氟茚-1-碳腈(2.5g，15.51mmol，1eq.)和水(25mL)的混合物中加入氢氧化钠(1.86g，46.53mmol，3.0eq.)。混合物在110℃下搅拌16小时，然后冷却至室温。混合物用水(10mL)稀释，并用EtOAc(2x 35mL)萃取。将水层的pH调节，并用EtOAc(2x20mL)萃取。合并提取物，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到7-氟茚烷-1-羧酸(2.76g，93.0％)。
向在0℃下冷却的6-氟茚烷-1-羧酸(2.7g，14.99mmol，1eq.)在甲醇(25mL)中的溶液中加入1滴DMF，然后加入SOCl2(7.13g，59.94mmol，4.35mL，4.0eq.)。混合物在25℃下搅拌4小时。通过蒸发除去溶剂。用水(50mL)稀释残余物，和用EtOAc(100mL)提取。洗涤有机层(首先用NaHCO3水溶液，以及随后用盐水)，干燥(硫酸钠)，过滤并蒸发至干，得到棕色油状物形式的7-氟茚烷-1-羧酸甲酯(2.7g，92.8％)。
向7-氟茚烷-1-羧酸甲酯(2.7g，13.90mmol，1eq.)在DMSO(27mL)中的溶液中加入K2CO3(6.34g，45.88mmol，3.3eq.)和HCHO(3.84g，41.71mmol，37％purity，3.0eq.)。室温下搅拌混合物过夜。用H2O(100mL)淬灭反应，用EtOAc(2x 80mL)萃取混合物。用6N HCl将水性溶液的pH值调节至3，并用EtOAc(2x 60mL)萃取该层。合并有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发，得到7-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(2.2g，75.3％)。
向7-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(2.2g，10.47mmol，1eq.)在DMF(25mL)中的溶液中加入苯甲胺(1.12g，10.47mmol，1.14mL，1.0eq.)、DIPEA(2.43g，18.84mmol，3.28mL，1.8eq.)，HOBT(2.12g，15.70mmol，1.5eq.)和EDCI(3.01g，15.70mmol，1.5eq.)。混合物在室温下搅拌16小时。用EtOAc(100mL)和水(100mL)稀释。分出有机层，然后用盐水(5x 100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到黄色固体形式的N-苄基-7-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-甲酰胺(2.97g，94.8％)。
在约0℃下，向N-苄基-7-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-甲酰胺(1g，3.34mmol，1eq.)和四氢呋喃(15mL)的溶液中加入PPh3(1.14g，4.34mmol，1.3eq.)和DEAD(756.32mg，4.34mmol，1.3eq.)。室温条件下搅拌混合物3小时，用EtOAc(40mL)稀释。有机层用盐水洗涤，并进行浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0至60:40)，得到浅黄色固体形式的1-苄基-7'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(880mg，93.6％)。
向在0℃下冷却的三氯化铝(853.15mg，6.40mmol，2.0eq.)在四氢呋喃(15mL)的溶液中加入LiAlH4(364.22mg，9.60mmol，3.0eq.)。在0℃下搅拌混合物15分钟，然后加入在THF中(10mL)1-苄基-7'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-2-酮(900mg，3.20mmol，1eq.)。室温搅拌混合物过夜，用H2O(0.6mL)淬灭反应，然后加入15％NaOH水溶液(3.5mL)和EtOAc(20mL)。通过过滤除去固体物，浓缩滤液至干，得到1-苄基-7'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](730mg，85.4％)。
向1-苄基-7'-氟-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](730mg，2.73mmol，1eq.)在甲醇(15mL)的溶液中加入Pd(OH)2 130mg，2.73mmol，1eq.)和甲酸铵(258.29mg，4.10mmol，1.5eq.)。氢气环境下，在60℃搅拌混合物5小时。过滤出不溶物，用甲醇洗涤。滤液和洗液合并并浓缩至干，得到7'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](480mg，99.2％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(20mL)的溶液中加入7'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷](237.76mg，1.34mmol，1.2eq.)和DIPEA(577.96mg，4.47mmol，778.93μL，4.0eq.)。混合物在100℃下搅拌3小时。浓缩混合物，并且残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0至60：40)，得到白色固体形式的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(7'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(400mg，45.6％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(7'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(300mg，510.22μmol，1eq.)在甲醇(2mL)的溶液中加入NH3-MeOH(7M，2.19mL，30eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc稀释，用水和盐水依次洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩至干，得到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(7'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(200mg，84.9％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(7'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(200mg，433.02μmol，1eq.)在丙酮(10mL)的溶液中加入p-TsOH(74.57mg，433.02μmol，1eq.)和2,2-二甲氧基丙烷(676.47mg，6.50mmol，15eq.)。混合物在室温下搅拌3小时。混合物用EtOAc(25mL)稀释，用NaHCO3(aq.)水溶液和盐水依次洗涤，并进行浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到白色固体形式的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(7'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(140mg，64.4％)。
向在0℃下冷却的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(7'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚二酮]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(140mg，278.92μmol，1eq.)在PO(EtO)3(1.5mL)的溶液中加入在PO(OEt)3(1.5mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(174.17mg，697.30μmol，2.5eq.)。0℃条件下搅拌混合物5小时。然后0℃下将水(1.5mL)加入至混合物。将混合物在25℃下搅拌过夜，并将混合物直接注入反相C-18硅胶柱来进行纯化(梯度洗脱，在水中0至25％ACN)，得到化合物d-5(60mg，34.7％收率)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 2.53(dt,J＝41.8,14.0Hz,4H),3.02(t,J＝7.2Hz,2H),4.22-4.38(m,3H),4.43(d,J＝4.4Hz,2H),4.65(s,2H),4.76(s,1H),4.97(s,1H),6.00(d,J＝4.6Hz,1H),6.92(t,J＝9.3Hz,1H),7.06(d,J＝7.4Hz,1H),7.24(dd,J＝12.9,7.7Hz,1H),8.39(s,1H)；m/z(ESI+):620.1(M+H).
实施例29.化合物d-6的合成
将四氢萘-1-羧酸(0.5g，2.84mmol，1eq.)和浓硫酸(278.30mg，2.84mmol，151.25μL，1eq.)在甲醇(10mL)中的混合物在65℃下加热20小时。TLC检测反应完全。蒸发所得到的溶液。用EtOAc(30mL)浓缩残余物，用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干，得到四氢萘-1-羧酸甲酯(470mg，87.1％)。
在-78℃、氮气气氛下，向四氢萘-1-羧酸甲酯(470mg，2.47mmol，1eq.)在四氢呋喃(6mL)的混合物中滴加LDA(2M，1.48mL，1.2eq.)，并保持在-78℃，然后加入溴乙腈(592.69mg，4.94mmol，2eq.)(-78℃)。混合物在室温下搅拌4小时。通过TLC分析指示反应的完成。所得到溶液通过1N HCl(3mL)淬灭反应，用EtOAc(30mL)稀释。有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，并蒸发至干。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱，PE/EA＝100：0-70：30)得到黄色固体形式的1-(氰甲基)四氢萘-1-羧酸甲酯(490mg，86.5％)。
在0℃，氮气氛围下，向1-(氰甲基)四氢萘-1-羧酸甲酯(200mg，872.32μmol，1eq.)在乙醇(30mL)的混合物中滴加二氯化钴(226.52mg，1.74mmol，2eq.)和NaBH4(330.00mg，8.72mmol，10eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。通过TLC指示反应完成。所得到溶液通过1NHCl(30mL)淬灭反应混合物，用EtOAc(50mL*2)提取。有机层用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱：DCM/MeOH＝100：0-90：10)得到固体形式的螺环[吡咯烷-4,1'-四氢萘]-2-酮(50mg，28.5％)。
向螺环[吡咯烷-4,1'-四氢萘]-2-酮(400mg，1.99mmol，1eq.)在四氢呋喃(30mL)的混合物中加入氢化铝锂(150.85mg，3.97mmol，2.0eq.)。混合物在70℃搅拌过夜。TLC表示形成一种新的产物。混合物用水(1mL)淬灭，然后加入乙酸乙酯(20mL)。过滤除去固体物，将有机层浓缩成残余物。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，DCM/MeOH(100:0-80:20))，得到固体形式的螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘](230mg，61.8％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)、螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘](230.32mg，1.23mmol，1.1eq.)在1,4-二氧六环(20mL)的混合物中加入DIPEA(361.23mg，2.8mmol，486.83μL，2.5eq.)。在100℃搅拌混合物过夜，用乙酸乙酯(40mL)稀释，依次用水和盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到黄色固体形式的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(600mg，89.7％)。
向入[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(600mg，1.00mmol，1eq.)在甲醇(8mL)的溶液中加入NH3-MeOH(7M，4.30mL，30eq.)。室温条件下搅拌混合物过夜。TLC表明起始原料消耗以及形成一种新的产物。通过蒸发除去溶剂；用EtOAc(50mL)稀释残余物，依次用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，Na2SO4干燥，浓缩得(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，95.1％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，953.52μmol，1eq.)在丙酮(25mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(1.49g，14.30mmol，15eq.)和TsOH-H2O(188.80mg，953.52μmol，1eq.)。室温搅拌混合物3小时。通过蒸发除去溶剂；用EtOAc(50mL)稀释残余物，用NaHCO3水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到白色固体形式的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢吡啶]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(400mg，收率81.9％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢吡啶]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(400mg，781.25μmol，1eq.)在PO(OEt)3(6mL)的溶液冷却至～0℃，然后加入在PO(OEt)3(3mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(390.29mg，1.56mmol，2.0eq)。～0℃下搅拌混合物4小时，然后加入水(4mL)，在40℃搅拌1小时，随后在室温下搅拌过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱分离纯化(在水中的5～30％ACN)纯化，得到白色固体形式的化合物d-6(321mg，64.2％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 1.87(ddd,J＝34.9,18.4,7.5Hz,4H),2.11(d,J＝47.6Hz,1H),2.32-2.60(m,3H),2.82(d,J＝5.5Hz,2H),3.86(dd,J＝60.2,34.8Hz,2H),4.11-4.46(m,6H),4.60(d,J＝19.6Hz,1H),6.00(s,1H),7.03-7.19(m,3H),7.30(s,1H),8.37(d,J＝25.3Hz,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm 21.34,26.47,27.52,28.57,31.19,35.75,39.69,41.72,44.72,46.89,48.04,62.29,63.22,65.91,71.32,75.76,84.65,89.81,118.81,127.37,130.35,138.74,140.07,141.21,152.10,154.03,155.58；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.82,19.71；m/z(ESI+):630.18(M+H).
实施例30.化合物d-7的合成
氮气保护，-78℃条件下，向吲哚啉-2-酮(2g，15.02mmol，1eq.)在四氢呋喃(30mL)的混合物中滴加LiHMDS(1M，33.05mL，2.2eq.)，然后使温度升温至-50℃，持续30分钟。然后将混合物冷却至-78℃，加入在THF(15mL)中的1,5-二溴戊烷溶液(3.45g，15.02mmol，2.05mL，1eq.)。在室温下，搅拌混合物3小时，然后回流5小时。然后在室温下搅拌混合物过夜。在减压下蒸发混合物，并残余物在饱和氯化铵和乙酸乙酯之间分配。浓缩有机层，残余物经硅胶柱纯化(洗脱：PE/EtOAc＝100：0-60：40)得为黄色固体的螺环[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(1.3g，43.0％)。
向螺环[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(500mg，2.48mmol，1eq.)在四氢呋喃(30mL)的溶液中加入氢化铝锂(188.56mg，4.97mmol，2.0eq.)。混合物在70℃搅拌过夜。用水(0.3mL)淬灭混合物，并向混合物加入乙酸乙酯(20mL)。过滤除去固体，对有机层进行浓缩，残余物经硅胶柱纯化分离(洗脱：PE/EtOAc＝100：0-80：20)得为白色固体的螺环[环己烷-1,3'-吲哚啉](401mg，86.2％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(450mg，1.01mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(25mL)的溶液中加入螺环[环己烷-1,3'-吲哚啉](207.29mg，1.11mmol，1.1eq.)和DIPEA(325.10mg，2.52mmol，438.15μL，2.5eq.)。混合物在100℃搅拌过夜。浓缩混合物，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱：PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2H-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(300mg，收率49.7％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2H-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(300mg，499.95μmol，1eq.)在甲醇(5mL)的溶液中加入MeOH-NH3(7M，2.14μL，30eq.)。室温条件下搅拌混合物5小时。大量固体形成。通过蒸发除去溶剂，然后加入乙酸乙酯(100mL)和水(70mL)。去除水性层后，形成的固体悬浮于有机层。浓缩悬浮层得产物(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2H-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(236mg，99.6％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2H-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(236mg，497.94μmol，1eq.)在丙酮(20mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(1.04g，9.96mmol，20eq.)和p-TsOH□H2O(98.59mg，497.94μmol，1.0eq.)。室温搅拌混合物过夜。通过蒸发除去溶剂，将残余物置于乙酸乙酯(50mL)中。有机溶液用NaHCO3水溶液洗涤和然后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱：PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2H-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(254mg，收率99.2％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2H-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(298.82mg，583.64μmol，1eq.)在PO(OEt)3(4mL)的溶液冷却至～0℃，然后加入在PO(OEt)3(3mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(291.57mg，1.17mmol，2.0eq.)。0℃条件下搅拌混合物5小时。然后将水(4mL)加入至反应混合物中。混合物在40℃下搅拌40分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应混合物经反相C-18硅胶柱分离纯化(在水中0至25％ACN)，得到化合物d-7(301mg，80.7％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 1.31-1.81(m,10H),2.52(t,J＝20.9Hz,2H),4.27(s,1H),4.30-4.42(m,2H),4.45(t,J＝4.8Hz,1H),4.53-4.61(m,2H),4.66(t,J＝4.9Hz,1H),6.05(d,J＝4.7Hz,1H),7.04(t,J＝7.3Hz,1H),7.12-7.26(m,2H),8.41-8.49(m,2H)；13CNMR(125MHz,CD3OD)δppm 24.12,26.53,27.51,38.39,45.84,62.14,66.16,71.48,75.72,84.56,89.72,118.98,120.30,123.56,128.51,140.84,142.88,143.18,152.54,153.35,154.56；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.61,19.95；m/z(ESI+):630.27(M+H).
实施例31.化合物d-8的合成
以与化合物d-1部分中所述相同的方式制备茚烷-1-甲酸甲酯。
氮气保护，-78℃下，向茚烷-1-甲酸甲酯(2.1g，11.92mmol，1eq.)在四氢呋喃(25mL)的混合物中滴加LDA(2M，7.15mL，1.2eq.)，并在20分钟后，在-78℃下，向反应混合物加入在THF(1mL)中的2-溴乙腈溶液(2.86g，23.84mmol，2eq)。所得混合物在室温下搅拌4小时，用1N HCl(30mL)淬灭，然后加入乙酸乙酯(60mL)。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-70：30)得为黄色油状物的1-(氰甲基)茚烷-1-羧酸甲酯(2.4g，93.5％)。
氮气保护下，向1-(氰甲基)茚烷-1-羧酸甲酯(2.4g，11.15mmol，1eq.)在乙醇(25mL)的混合物中滴加二氯化钴(2.90g，22.30mmol，2eq.)和硼氢化钠(4.22g，111.50mmol，10eq.)，同时将温度保持在0℃。室温下搅拌反应混合物过夜，用1N HCl(150mL)淬灭，EtOAc(2x 200mL)萃取。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱，DCM/MeOH＝100：0-95：5)得为黄色固体的螺环[茚烷-1,3'-吡咯烷]-2'-酮(1.05g，50.3％)。
向螺环[茚烷-1,3'-吡咯烷]-2'-酮(1g，5.34mmol，1eq.)在四氢呋喃(40mL)的溶液中加入氢化铝锂(405.37mg，10.68mmol，2.0eq.)。混合物70℃搅拌过夜，用水(1mL)淬灭，然后滴加15％氢氧化钠水溶液(1mL)，水(1mL)，和乙酸乙酯(30mL)，过滤除去固体，浓缩有机层得为固体形式的螺环[茚烷-1,3'-吡咯烷](800mg，86.5％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)和1,4-二氧六环(25mL)的溶液中加入螺环[茚烷-1,3'-吡咯烷](232.44mg，1.34mmol，1.2eq.)和DIPEA(361.23mg，2.8mmol，486.83μL，2.5eq.)。混合物在100℃搅拌2小时，然后浓缩为残余物。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得白色固体形式的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，76.6％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，856.14μmol，1eq.)在甲醇(6mL)的溶液中加入MeOH-NH3(7M，3.67mL，30eq.)。室温条件下搅拌混合物4小时。通过蒸发除去溶剂，将残余物置于乙酸乙酯(100mL)，然后加入水(70mL)。分出有机层，用盐水洗涤，Na2SO4干燥，浓缩得为白色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(390mg，99.5％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(390mg，851.70μmol，1eq.)在丙酮(20mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(1.33g，12.78mmol，15eq.)和p-TsOH(146.66mg，851.70μmol，1.0eq.)。室温搅拌混合物过夜。通过蒸发除去溶剂。残余物用EtOAc(50mL)稀释，用NaHCO3水溶液和然后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得为白色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(410mg，96.7％)。
将在0℃下冷却的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(410mg，823.34μmol，1eq.)在PO(OEt)3(4mL)的溶液中加入在PO(OEt)3(4mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(411.32mg，1.65mmol，2.0eq)。0℃条件下搅拌混合物5小时，然后加入水(6mL)。在40℃下搅拌混合物1小时，然后在室温下搅拌过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱分离纯化(梯度洗脱，在水中0至35％ACN)，得到化合物d-8(301mg，58.4％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm1.96-2.35(m,4H),2.44(dd,J＝37.0,20.5Hz,2H),2.94(d,J＝6.7Hz,2H),3.64-4.19(m,3H),4.21-4.45(m,5H),4.56(d,J＝20.9Hz,1H),5.96(s,1H),7.12-7.29(m,4H),8.38(d,J＝33.4Hz,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm 26.44,27.50,28.55,31.11,37.22,38.81,39.17,53.92,56.03,59.67,60.67,65.91,71.32,75.73,84.61,89.81,118.82,123.32,125.72,127.84,128.50,140.10,144.97,147.27,152.06,154.06,155.63；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.96,19.61；m/z(ESI+):616.32(M+H).
实施例32.化合物d-9的合成
将3-氰基苯胺-1-羧酸叔丁酯(3.0g，16.46mmol，1eq.)在THF(30mL)中的溶液冷却至-78℃，然后加入LiHMDS(1M，20.58mL，1.25eq.)。混合物搅拌20分钟，然后加入1-(溴甲基)-2-碘苯(5.13g，17.29mmol，1.05eq.)在THF(3mL)的溶液。混合物在-78℃下搅拌3小时，用饱和氯化铵溶液淬灭混合物，并用乙酸乙酯50mL萃取。有机层用盐水洗涤，浓缩。残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝＝100：0-83：17)得到为黄色油状物的3-氰基-3-(2-碘苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(6.44g，16.17mmol，收率98.22％)。
将3-氰基-3-(2-碘苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(6.44g，16.17mmol，1eq.)在60mL的THF的溶液冷却至-78℃，然后在-78℃下，滴加n-BuLi(2.5M，12.94mL，2eq.)。混合物在-78℃下搅拌2小时。TLC表明起始原料消耗完全。用饱和氯化铵溶液淬灭混合物，用乙酸乙酯(75mL*2)萃取。有机层用盐水洗涤，浓缩。残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-83：17)得到为浅黄色固体的1'-氧代螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(3.4g，12.44mmol,收率76.92％)。
向1'-氧代螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(1.0g，3.66mmol，1eq.)在CH3OH/CH3COOH(5ml+10mL)的溶液中Pd/C(100mg，10％purity)。在氢气气体条件下，室温搅拌混合物过夜。TLC表明起始原料大部分被消耗。过滤混合物，用MeOH洗涤。浓缩滤液以去除大部分的溶剂。然后用饱和NaHCO3中和混合物，并乙酸乙酯萃取(15mL*2)。用盐水洗涤有机层，并进行浓缩。残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-90：10)得到为白色固体的螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(360mg，1.39mmol,收率37.94％)。
将螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(370mg，1.43mmol，1eq.)溶于HCl-EA(5mL)中，混合物在室温下搅拌3小时。混合物浓缩并用于下一步。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(523.74mg，1.17mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(8mL)的混合物中加入[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]甲基乙酸酯(523.74mg，1.17mmol，1eq.)和[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(523.74mg，1.17mmol，1eq.)和DIPEA(529.73mg，4.10mmol，713.92μL，3.5eq.)。混合物100℃下搅拌过夜。TLC表明起始原料被消耗。通过蒸发除去溶剂。将残余物置于EtOAc(40mL)中，用水、然后用盐水洗涤溶液。浓缩有机相，残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-65：35)得到为黄色固体的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(620mg，1.09mmol，收率92.88％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(620mg，1.09mmol，1eq.)在6ml的甲醇中的混合物中加入NH3-MeOH(7M，4.66mL，30eq.)。混合物室温搅拌3小时。LC-MS表明起始原料消失。通过蒸发除去溶剂。将残余物置于EtOAc(30mL)和水(50mL)中。合并有机相，用盐水洗涤，Na2SO4干燥，浓缩，以得到为白色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(459mg，1.03mmol，收率95.07％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(459mg，1.03mmol，1eq.)在30mL的丙酮溶液中加入p-TsOH□H2O(197.76mg,1.03mmol,1eq.)和2,2-二甲基丙烷(2.15g，20.68mmol，20eq.)，混合物室温搅拌一周末。通过蒸发除去溶剂。将残余物置于EtOAc(50mL)，用NaHCO3水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0–85：15)得到为白色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(350mg，723.22mmol，收率69.94％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(348.55mg，720.22μmol，1eq.)在PO(MeO)3(4mL)的溶液冷却至0℃，然后加入在PO(MeO)3(4mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(359.80mg，1.44mmol，2eq.)。混合物0℃下搅拌5小时。LC-MS监测原料消耗完，向反应体系中滴加7mL水，然后混合物40℃下搅拌40分钟，随后室温搅拌过夜。反应混合物通过C-18反相硅胶柱纯化(在水中的0～25％ACN)得到化合物d-9(260mg，收率58.63％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 2.48(t,J＝20.9Hz,2H),3.26(s,4H),4.24(s,2H),4.26-4.38(m,3H),4.42(t,J＝4.7Hz,1H),4.55(s,1H),4.63(t,J＝4.9Hz,1H),6.00(d,J＝4.8Hz,1H),7.15(dd,J＝5.1,3.2Hz,2H),7.20-7.25(m,2H),8.39(s,1H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 16.85,19.68；13C NMR(125MHz,MeOD)δppm 26.17,43.38,44.10,61.81,63.68,64.53,70.02,74.35,83.39,88.33,116.93,124.21,126.49,139.71,141.29,150.27,154.05,154.37；m/z(ESI+):602.31(M+H).
实施例33.化合物d-10的合成
将NBS(5.66g，31.78mmol，1.5eq.)添加到4-氟-2-碘-1-甲基苯(5g，21.18mmol，1eq.)在四氯化碳(50mL)的混合物中。回流搅拌混合物5小时。溶剂通过蒸发去除，残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA ＝100：0-99：1)得到1-(溴甲基)-4-氟-2-碘代苯(2.55g，8.10mmol，收率38.22％)。
向在-78℃下冷却的3-氰基偶氮烷-1-羧酸叔丁酯(1.34g，7.35mmol，1eq.)在20mL的THF的溶液中滴加LiHMDS(1M，9.19mL，1.25eq.)。混合物在此温度下搅拌20分钟，加入1-(溴甲基)-4-氟-2-碘苯(2.55g，8.09mmol，1.1eq.，溶解在5mL的THF中)。混合物在-78℃下搅拌3小时。用饱和氯化铵溶液淬灭反应。用乙酸乙酯(2x 25mL)萃取反应混合物。有机相用盐水洗涤，然后浓缩。残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-75：25)得到3-氰基-3-[(4-氟-2-碘代苯基)甲基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.41g，5.79mmol，收率78.74％)。
向在-78℃下冷却的3-氰基-3-[(4-氟-2-碘代苯基)甲基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.41g，5.79mmol，1eq.)在25mL的THF的溶液中滴加n-BuLi(2.5M，4.63mL，2eq.)。混合物在此温度下搅拌2小时。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取反应混合物。有机相用盐水洗涤，然后浓缩。残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-70：30)得到6'-氟-1'-氧代螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-羧酸叔丁酯(1.21g，4.15mmol，收率71.74％)。
在0℃下，向6'-氟-1'-氧代螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-羧酸叔丁酯(1.21g，4.15mmol，1eq.)在甲醇(5mL)的溶液中分批加入硼氢化钠(392.82mg，10.38mmol，2.5eq.)。混合物在该温度下搅拌2小时。通过蒸发去除溶剂，残余物用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取，用盐水(100mL)洗涤，将有机层浓缩至干，得到为白色固体的6'-氟-1'-羟基螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-羧酸叔丁酯(1.21g，4.13mmol，收率99.31％)。
在-40℃下，向DCM(10mL)中的6'-氟-1'-羟基螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-羧酸叔丁酯(305mg，1.04mmol，1eq.)的混合物中添加三氟化硼乙醚(4mL)和三乙基硅烷(1.21g，10.40mmol，10eq.)。混合物在40℃下搅拌16h。然后用水(20ml)和氯化铵溶液(20mL)淬灭反应。用15％NaOH将混合物的pH调节至10。用DCM(60mL*2)萃取混合物。用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发，得到5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷](100mg，394.99μmol，收率37.99％，70％纯度)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(252mg，1eq.)在5mL的二氧六环的溶液中加入5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷](99.86mg，563.47μmol，1eq.)和DIPEA(182.06mg，1.41mmol，245.36μL，2.5eq.)。混合物在100℃下搅拌3小时。浓缩混合物，残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-58：42)得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(200mg，136.06μmol，收率24.15％，纯度40％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(200mg，136.06μmol，1eq.)在5mL的甲醇的混合物加入NH3-MeOH(7M，485.92μL，25eq.)。混合物室温下搅拌2小时。残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，DCM/MeOH＝100：0-93：7)得到(2R,3R,4R,4S,4S,5R)-2-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(60mg，129.91μmol，收率95.48％)。
向(2R,3R,4R,4S,4S,5R)-2-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(60mg，129.91μmol，1eq.)在10mL的丙酮中的溶液加入p-TsOH(22.37mg，129.91μmol，1eq.)和2,2-二甲基丙烷(270.59mg，2.60，2.60mmol，20eq.)。混合物室温搅拌1小时。通过蒸发除去溶剂。残余物用50mL的EA稀释，用NaHCO3水溶液和盐水依次洗涤，然后浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0～55：45)得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6]-(5’-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(60mg，119.54μmol，收率92.02％)。
向在0℃下冷却的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6]-(5’-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(60mg，119.54μmol，1eq.)在PO(OEt)3(2mL)的溶液中加入在PO(OEt)3(2mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(74.65mg，298.84μmol，2.5eq)。0℃条件下搅拌混合物4小时，然后加入水(3mL)。混合物室温搅拌过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱分离纯化(梯度洗脱，在水中0至35％ACN)，得到化合物d-10(7.1mg，收率9.58％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 2.47(t,J＝20.8Hz,2H),3.25(d,J＝19.8Hz,4H),4.19–4.37(m,5H),4.42(d,J＝8.2Hz,1H),4.49(d,J＝58.8Hz,2H),4.64(s,1H),6.00(d,J＝4.8Hz,1H),6.88(t,J＝8.7Hz,1H),6.97(d,J＝8.2Hz,1H),7.14–7.27(m,1H),8.40(s,1H)；m/z(ESI+):620.3(M+H).
实施例34.化合物d-11的合成
将NBS(5.66g，31.78mmol，1.5eq.)和过氧化二苯甲酰(256.57mg，1.06mmol，0.05eq.)加入至1-氟-3-碘-2-甲苯(5.0g，21.18mmol，1eq.)在四氯化碳(80mL)的混合物中。回流搅拌混合物5小时。溶剂通过蒸发去除，残余物用二氯甲烷萃取(50mL*2)。有机层盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，然后浓缩。残余物经硅胶柱纯化分离(洗脱，PE/EA＝100：0-99：1)得产物2-(溴甲基)-1-氟-3-碘苯(1.97g，6.26mmol，收率29.53％)。
向在-78℃下冷却的3-氰基苯胺-1-羧酸叔丁酯(1.1g，6.05mmol，1eq.)在四氢呋喃(10mL)的溶液中滴加LiHMDS(1M，7.56mL，1.25eq.)。混合物在-78℃下搅拌20分钟，然后加入2-(溴甲基)-1-氟-3-碘苯(2.0g，6.35mmol，1.05eq.)在10mL的THF的溶液。混合物在-78℃下搅拌3小时，用饱和氯化铵淬灭反应。利用乙酸乙酯(50mL*2)完成混合物的萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-80：20)得到为黄色油状物的3-氰基-3-(2-氟-6-碘苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.92g，4.61mmol，收率76.27％)。
向在-78℃下冷却的3-氰基-3-(2-氟-6-碘苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.92g，4.61mmol，1eq.)在30mL的THF的溶液中滴加n-BuLi(2.5M，3.69mL，2eq.)混合物在此-78℃下搅拌3小时。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(2x30 mL)萃取反应混合物。有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。将残余物溶解在THF和水(20mL)的1:1混合物中，并在室温下搅拌4天，然后用乙酸乙酯(2x30 mL)进行混合物的萃取。合并有机相，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-80：20)得到4'-氟-1'-氧-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷--3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(430mg，1.48mmol，收率32％)。
在0℃下，向4'-氟-1'-氧-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(430mg，1.48mmol，1eq.)在甲醇(10mL)的溶液中硼氢化钠(167.52mg，4.43mmol，3.0eq.)。混合物在该温度下搅拌反应2小时。通过蒸发去除溶剂，残余物用乙酸乙酯(30mL*2)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到为白色固体的4'-氟-1'-羟基-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(410mg，1.40mmol，收率94.69％)。
向4'-氟-1'-羟基-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(410mg，1.40mmol，1eq.)在醋酸(10mL)中的混合物加入三氟化硼乙醚(2mL)和三乙基硅烷(1.30g，11.18mmol，1.79mL，8eq.)。混合物60℃下搅拌16小时，然后冷却至0℃，随后通过缓慢加入15％氢氧化钠溶液将混合物溶液的PH调节至9。然后乙酸乙酯(30mL*3)萃取所得混合物。合并有机层，用NH4Cl(aq.)和盐水依次洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩至干，得到4'-氟-1'.3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚](245mg，1.38mmol，收率98.91％)。
向4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚](72mg，406.28μmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(10mL)的混合物加入[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(151.42mg，338.57μmol，1eq.)和DIPEA(109.39mg，846.42μmol，147.43μL，2.5eq.)。混合物在100℃搅拌过夜。通过蒸发除去溶剂。将残余物稀释在EtOAc(50mL)，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到为白色固体形式的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(100mg，170.07μmol，收率50.23％)。
向(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(100mg，170.17μmol，1eq.)在甲醇(2mL)的混合物中加入NH3-MeOH(7M，728.88μL，30eq.)。室温条件下搅拌混合物2小时。通过蒸发除去溶剂，残余物用乙酸乙酯(2x 20mL)萃取，合并有机相，用盐水洗涤，Na2SO4干燥，浓缩至干，以得到为白色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(78mg，168.88μmol，收率99.30％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(78mg，168.88μmol，1eq.)在10mL的丙酮溶液中加入p-TsOH□H2O(32.12mg，168.88μmol，1eq.)和2,2-二甲氧基丙烷(351.76mg，3.38mmol，20eq.)。室温搅拌混合物过夜。通过在0℃下缓慢加入NaHCO3将混合物的pH调节至9。通过蒸发去除溶剂，残余物用乙酸乙酯(2x30 mL)萃取。合并有机层，并用盐水洗涤，Na2SO4干燥，浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到为白色固体的产物((3aR,4R,6R,6aR)-6-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-4-基)甲醇(57mg，113.56μmol，收率67.24％)。
向在0℃下冷却的((3aR,4R,6R,6aR)-6-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-4-基)甲醇(57mg，113.56μmol，1eq.)在PO(MeO)3(1mL)的溶液中加入在PO(MeO)3(1mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(70.91mg，283.90μmol，2.5eq.)。混合物在0℃条件下搅拌4小时。然后在0℃下缓慢加入1.5mL的水。混合物40℃下搅拌40分钟，随后在25℃搅拌过夜。反应混合物通过C-18反相硅胶柱纯化(在水中的0～25％ACN)得到化合物d-11(10mg，收率14.25％)。1HNMR(500MHz,MeOD)δppm 2.53(t,J＝20.6Hz,2H),3.35(s,4H),4.25–4.41(m,5H),4.45(s,1H),4.60(s,2H),4.67(s,1H),6.04(d,J＝4.0Hz,1H),6.91(t,J＝8.5Hz,1H),7.09(d,J＝7.1Hz,1H),7.22(d,J＝5.4Hz,1H),8.47(s,1H)；m/z(ESI+):620.1(M+H).
实施例35.化合物d-12的合成
将四氢萘-1-羧酸(2g，11.35mmol，1eq.)和H2SO4(1.11g，11.35mmol，605.00μL，1eq.)在甲醇(20mL)中的混合物在65℃下加热20小时。浓缩所得溶液。将残余物溶解在乙酸乙酯(50mL)，并且该溶液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩至干，得到四氢萘-1-羧酸甲酯(2.1g，97.2％)。
在0℃、氮气保护下，向四氢萘-1-羧酸甲酯(2.1g，11.04mmol，1eq.)在DMSO(25mL)的混合物中加入碳酸钾(5.03g，36.43mmol，3.3eq.)和HCHO(3.05g，33.12mmol，37％含量，3eq.)。室温搅拌混合物19小时。TLC表明起始原料被消耗，用水(75mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(50mL)萃取混合物。在用3N盐酸调节水性层的pH至3，加入乙酸乙酯(80mL*3)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干，得到1-(羟甲基)四氢萘-1-羧酸(1.5g，65.9％)。
向1-(羟甲基)四氢萘-1-羧酸(1.5g，7.27mmol，1eq.)和苯甲胺(779.34mg，1eq.)、在DMF(15mL)的混合物中加入EDCI(2.09g，10.91mmol，1.5eq.)、HOBT(1.47g，10.91mmol，1.5eq.)和DIPEA(1.41g，10.91mmol，1.90mL，1.5eq.)。室温搅拌混合物18小时。通过蒸发去除溶剂，然后加入50mL水来反应，加入乙酸乙酯(60mL)。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-70：30)，得油状物形式的N-苄基-1-(羟甲基)四氢萘-1-甲酰胺(1.3g，收率60.5％)。
在0℃、氮气保护下，向N-苄基-1-(羟甲基)四氢萘-1-甲酰胺(1.3g，4.40mmol，1eq.)在四氢呋喃(20mL)的混合物中加入三苯基膦(1.73g，6.60mmol，1.5eq.)，后加入DEAD(1.15g，6.60mmol，1.04mL，1.5eq.)。混合物在室温条件下搅拌2小时。TLC检测反应完全。所得溶液用水(20mL)淬灭，随后加入乙酸乙酯(60mL)。分出有机层，洗涤(盐水)Na2SO4干燥，过滤，并蒸发至干。残余物通过硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-67：33)，得产物1-苄基螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-2-酮(1g，收率81.9％)。
将三氯化铝(961.50mg，7.21mmol，2.0eq.)在四氢呋喃(15mL)中的溶液冷却至0℃，然后加入氢化铝锂(410.48mg，10.82mmol，3.0eq.)。混合物在0℃条件下搅拌30分钟，随后加入在4mL THF中的1-苄基螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-2-酮(1g，3.61mmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。用水淬灭(1mL)反应，随后加入15％氢氧化钠水溶液(4mL)，和乙酸乙酯(20mL)。过滤除去固体，有机层浓缩得1-苄基螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘](800mg，收率84.2％)。
向1-苄基螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘](800mg，3.04mmol，1eq.)在甲醇(30mL)中的溶液加入甲酸铵(287.32mg，4.56mmol，1.5eq.)和氢氧化钯(100mg)。在氢气环境下，60℃搅拌混合物过夜。过滤混合物，残余物用甲醇洗。滤液和洗液合并并进行浓缩得到螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘](500mg，95.0％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(20mL)的溶液中加入螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘](251.81mg，1.45mmol，1.3eq.)和DIPEA(577.96mg，4.47mmol，778.93μL，4eq.)。混合物在100℃下搅拌3小时。浓缩混合物，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到白色固体形式的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，收率76.5％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，856.14μmol，1eq.)在甲醇(4mL)的溶液中加入MeOH-NH3(7M，3.67mL，30eq.)。室温条件下搅拌混合物3小时。通过蒸发除去溶剂，残余物用乙酸乙酯(100mL)稀释、有机层用水(70mL)洗涤，然后用盐水(60mL)洗涤，Na2SO4干燥，浓缩得(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(390mg，851.99.4％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(391mg，853.88μmol，1eq.)在丙酮(30mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(1.78g，17.08mmol，20eq.)和p-TsOH(147.04mg，853.88μmol，1eq.)。室温搅拌混合物3小时。通过蒸发除去溶剂。残余物用EtOAc(50mL)稀释，用NaHCO3水溶液和然后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得为白色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(350mg，收率82.3％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(350mg，702.85μmol，1eq.)在PO(OEt)3(4mL)的溶液中冷却至0℃，然后加入在PO(OEt)3(3mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(351.12mg，1.41mmol，2.0eq)。0℃条件下搅拌混合物5小时，然后在0℃下加入水(5mL)。在40℃下搅拌混合物30分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱分离纯化(梯度洗脱，在水中0至25％ACN)，得到化合物d-12(253mg，收率57.4％)。1HNMR(500MHz,CD3OD)δppm 2.04(s,2H),2.38(s,2H),2.67(t,J＝20.9Hz,2H),3.02(t,J＝6.1Hz,2H),4.45(s,1H),4.47-4.52(m,1H),4.55(dd,J＝10.4,7.0Hz,1H),4.62(t,J＝4.8Hz,1H),4.84(t,J＝5.0Hz,1H),6.21(d,J＝4.8Hz,1H),7.28(d,J＝7.5Hz,1H),7.34(t,J＝7.4Hz,1H),7.42(t,J＝7.5Hz,1H),7.81(d,J＝7.9Hz,1H),8.58(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm 21.29,26.46,27.51,28.56,30.92,37.23,40.00,65.91,71.33,75.71,84.63,89.84,118.67,127.05,127.89,130.14,138.07,140.81,141.23,151.77,155.59,155.76；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm16.86,19.80；m/z(ESI+):616.3(M+H).
实施例36.化合物d-13的合成
在-78℃下，向吲哚啉-2-酮(2g，15.02mmol，1.0eq.)在THF(30mL)的混合物滴加LiHMDS(1M，33.05mL，2.2eq.)。将反应温度升高至-50℃下，并保持-50℃30分钟。然后再次冷却至-78℃，随后加入在15mLTHF中的1,4-二溴丁烷(3.24g，15.02mmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌2小时，然后在回流下搅拌2小时后在室温下将混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，残余物在乙酸乙酯和饱和氯化铵之间分配。浓缩有机层，残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)进行分离纯化，得到为黄色固体的螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(1.29g，45.87％)
向螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(1.29g，6.89mmol，1eq.)在THF(30mL)的溶液中添加LiAlH4(522.92mg，13.78mmol，2.0eq.)。将混合物在70℃下搅拌过夜。混合物用水(1mL)淬灭，并向混合物中添加EtOAc(20mL)。通过过滤去除固体并浓缩有机层，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-80：20)，得到白色固体的螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](1.02g，85.45％)
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1.2g，2.68mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(25mL)中的溶液中添加螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](511mg，2.95mmol，1.10eq.)和DIPEA(866.94mg，6.71mmol，1.17mL，2.5eq.)。将混合物在100℃下搅拌过夜。浓缩混合物并通经硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1.49g，收率95.08％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(950mg，1.63mmol，1eq.)在甲醇(15mL)中的溶液中添加氨甲醇(7M，5.81mL，25eq.)。将混合物在室温下搅拌4小时。通过过滤获得固体，用甲醇(20mL)洗涤滤饼，得到产物(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[1,3'-吲哚啉]-1'-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(580mg，收率77.87％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(580mg，1.27mmol，1eq.)在丙酮(20mL)中的混合物中添加2,2-二甲氧基丙烷(1.98g，19.00mmol，15eq.)和对甲苯磺酸(218.11mg，1.27mmol，1eq.)。将混合物在室温下搅拌2小时。蒸发去除溶剂，用EtOAc(50mL)稀释残余物，用碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(540mg，收率85,61％)。
将[(3aR,4R,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(540mg，1.08mmol，1eq.)在磷酸三甲酯(3mL)中的溶液冷却至0℃，随后加入双(二氯磷酰)甲烷(812.60mg，3.25mmol，3.0eq.)在磷酸三甲酯(3mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌5h。然后向反应混合物中加入水(4mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物通过C-18反相硅胶(在水中0至25％ACN)纯化，得到化合物d-13(149.9mg，收率21.99％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 1.90(dd,J＝17.7,12.4Hz,8H),2.52(t,J＝20.9Hz,2H),4.28(s,1H),4.36(dtd,J＝15.0,11.2,4.7Hz,2H),4.46(t,J＝4.8Hz,1H),4.55(s,2H),4.66(t,J＝4.9Hz,1H),6.06(d,J＝4.7Hz,1H),7.07(t,J＝7.4Hz,1H),7.18-7.27(m,2H),8.40-8.53(m,2H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm16.81,19.86；13C NMR(125MHz,MeOD)δppm 24.48,26.15,27.21,40.47,51.52,64.71,64.80,70.10,74.33,83.26,88.31,117.29,119.01,121.96,123.89,126.97,139.49,140.10,142.36,151.13,152.00,153.21；m/z(ESI+):616.3(M+H).
实施例37.化合物d-14的合成
将4-氟吲哚啉-2-酮(1g，6.62mmol，1eq.)在四氢呋喃(20mL)的溶液冷却至-78℃，然后加入LiHMDS(1M，14.56mL，2.2eq.)。混合物在-50℃搅拌30分钟，然后再次冷却至-78℃。在-78℃，将1,4-二溴丁烷溶液(1.43g，6.62mmol，1eq.溶于10mL四氢呋喃)加入至混合物。将混合物在室温下搅拌2小时，然后在70℃下搅拌3小时，并在室温下搅拌过夜。完成后，用氯化铵水溶液(50mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(60mL)稀释。分出有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并经硅胶柱层析进行纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-55：45)得到为黄色固体的4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(750mg，55.23％)。
向4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(500mg，2.44mmol，1eq.)在四氢呋喃(15mL)的溶液中加入氢化铝锂(369.83mg，9.75mmol，4.0eq.)。70℃搅拌混合物2小时。通过滴加水(0.3mL)和15％氢氧化钠水溶液(0.6mL)淬灭反应，然后加入乙酸乙酯(30mL)，过滤除去固体，浓缩有机层，得到4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](440mg，收率94.4％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(800mg，1.79mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(20mL)中的溶液中添加DIPEA(693.56mg，5.37mmol，934.71μL，3.0eq.)和4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](410.52mg，2.15mmol，1.2eq.)。将混合物在100℃下搅拌过夜，然后进行浓缩。残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-60：40)，得到为浅黄色固体的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(0.9g，收率83.58％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(900mg，1.49mmol，1eq.)在甲醇(6mL)的溶液中添加氨甲醇(7M，6.41mL，30eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。通过过滤获得固体，得为白色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(700mg，98.4％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(700mg，1.47mmol，1eq.)在丙酮(20mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(2.30g，22.06mmol，2.71mL，15eq.)和对甲苯磺酸(253.29mg，1.47mmol，1eq.)。室温搅拌混合物3小时。用EtOAc(50mL)稀释混合物，并且有机层用碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用盐水洗涤，且进行浓缩。残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(600mg，79.06％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(300mg，581.44μmol，1eq.)在磷酸三乙酯(3mL)中的溶液冷却至0℃，然后加入双(二氯磷酰)甲烷(290.47mg，1.16mmol，2.0eq)在2mL磷酸三甲酯的溶液。混合物在室温下搅拌4小时，然后加入水(3mL)。混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物通过C-18反相硅胶(在水中0至30％ACN)纯化，得到化合物d-14(195mg，收率52.9％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 1.84(d,J＝20.7Hz,6H),2.08(d,J＝31.3Hz,2H),2.49(t,J＝20.3Hz,2H),4.30(s,3H),4.46(d,J＝10.2Hz,3H),4.65(s,1H),6.04(d,J＝4.6Hz,1H),6.73(t,J＝9.0Hz,1H),7.15(d,J＝5.9Hz,1H),8.19(d,J＝8.1Hz,1H),8.46(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm 25.99,27.50,40.04,51.81,65.57,67.04,71.73,75.77,88.96,112.08,114.79,120.06,130.02,140.94,145.47,152.11,152.26,153.25,154.30；31P NMR(203MHz,DMSO-d6)δppm 14.72,18.24；m/z(ESI+):634.2(M+H).
实施例38.化合物d-15的合成
在-78℃下，向5-氟吲哚啉-2-酮(500.00mg，3.31mmol，1eq.)在THF(30mL)的混合物中滴加LiHMDS(1M，7.28mL，2.2eq.)。然后将混合物的温度升高至-50℃，并在-50℃下保持30分钟。然后再次冷却至-78℃。然后加入在THF(15mL)中的1,4-二溴丁烷(714.29mg，3.31mmol，1eq.)。将混合物首先在室温下搅拌1小时，然后在回流下搅拌3小时后在室温下将混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，残余物在乙酸乙酯和饱和氯化铵之间分配。浓缩有机层，残余物用硅胶柱层析进行纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到5'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(350mg，收率51.55％)
向5'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(350.00mg，1.71mmol，1eq.)在THF(30mL)的溶液中添加LiAlH4(161.80mg，4.26mmol，2.5eq.)。将混合物在70℃下搅拌2小时。在0℃下用水(1mL)和15％氢氧化钠水溶液(1mL)淬灭反应，随后加入乙酸乙酯(40mL)。通过过滤去除固体并浓缩有机层，所得残余物用硅胶柱(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-78：22)进行分离纯化，得到白色固体的5'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚](210mg，收率64.39％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(447mg，999.49μmol，1eq.)在1,4-二氧六环(25mL)中的溶液中添加5'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚啉](210.26mg，1.10mmol，1.1eq.)和DIPEA(322.94mg，2.50mmol，435.22μL，2.5eq.)。将混合物在100℃下搅拌4小时。浓缩混合物并通经硅胶柱纯化分离层析纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-58：42)，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(490mg，813.94μmol，收率81.44％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(490.00mg，813.94μmol，1eq.)在甲醇(15mL)中的溶液中添加氨甲醇(7M，2.91mL，25eq.)。将混合物在室温下搅拌4小时。通过过滤获得固体，用甲醇(10mL)洗涤滤饼，得到产物(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(5'-氟螺环[1,3'-吲哚]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(360mg，756.46μmol，收率92.94％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(5'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(360mg，756.46μmol，1eq.)在丙酮(25mL)中的混合物中添加2,2-二甲氧基丙烷(1.18g，11.35mmol，15eq.)和对甲苯磺酸(130.26mg，756.46μmol，1eq.)。将混合物在室温下搅拌2小时。通过蒸发去除溶剂，用EA(50mL)稀释残余物，用碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。浓缩有机层，并通经硅胶柱纯化分离层析纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(5'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(310mg，600.82μmol，收率79.42％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(5'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(310mg，600.82μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(3mL)中的溶液冷却至0℃，然后将双(二氯磷酰)甲烷(450.23mg，1.80mmol，3eq.))在磷酸三甲酯(3mL)中的溶液加入到混合物中。混合物在0℃下搅拌5h。然后向反应混合物中加入水(4mL)。将混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物通过C-18反相硅胶(在水中0至25％ACN)纯化，得到化合物d-15(129.9mg，收率33.99％,99.65％纯度)。1HNMR(500MHz,MeOD)δppm 1.90(d,J＝25.6Hz,8H),2.52(t,J＝20.9Hz,2H),4.28(s,1H),4.34(dd,J＝22.5,15.9Hz,2H),4.46(d,J＝4.6Hz,1H),4.60(s,2H),4.66(s,1H),6.06(d,J＝4.8Hz,1H),6.95(d,J＝2.5Hz,1H),7.01–7.08(m,1H),8.43(s,1H),8.49(d,J＝4.1Hz,1H)；13C NMR(126MHz,MeOD)δppm 24.40,40.31,51.52,69.49,70.68,73.69,74.89,87.63,88.95,117.58,118.92,138.71,140.45,142.59,150.89,151.99,153.16；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 16.76,20.03；m/z(ESI+):634.2(M+H).
实施例39.化合物d-16的合成
在-78℃、氮气气氛下，向6-氟吲哚啉-2-酮(500mg，3.31mmol，1eq.)在四氢呋喃(5mL)的混合物中滴加LiHMDS(1M，7.28mL，2.2eq.)，然后将混合物的温度升高至-50℃下并在该温度下持续30分钟。将混合物再次冷却到-78℃，随后加入在THF(5mL)中的1,4-二溴丁烷溶液(714.30mg，3.31mmol，1.0eq.)。将混合物首先在室温搅拌1小时，然后在回流下搅拌2小时。混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取(30mL*2)。有机层用盐水洗涤，并浓缩。残余物经硅胶柱层析进行纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-70：30)得到产物6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-2'-酮(282mg，1.37mmol，收率41.54％)。
将AlCl3(493.79mg，3.70mmol，2eq.)在THF(10mL)的溶液冷却至0℃，然后加入LiAlH4(210.80mg，5.55mmol，3eq.)。混合物在0℃下搅拌30分钟。然后加入6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-2'-酮(380mg，1.85mmol，1.0eq.)在4mL THF中的溶液。混合物室温搅拌过夜。用10mL THF稀释混合物，并在0℃下通过缓慢加入15％NaOH(aq.)直至pH为9来淬灭反应。有机层用硫酸镁干燥。通过过滤去除固体。浓缩滤液，残余物经硅胶柱层析进行纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-90：10)得到产物6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](250mg，1.31mmol，收率70.60％)。
将[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(487.19mg，1.09mmol，1eq.)和DIPEA(351.97mg，2.72mmol，474.36μL，2.5eq.)加入至6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](250mg，1.31mmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(15mL)的混合物中。混合物在100℃搅拌过夜。TLC表明剩余约30％的起始原料，并且产生了新产物。混合物在120℃下搅拌3小时，然后冷却至室温。通过蒸发去除溶剂。残余物用乙酸乙酯(40mL)稀释，首先用水，随后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-60：40)，得到为浅黄色固体的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(520mg，863.77μmol，收率79.29％)。
向(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(520mg，863.77μmol，1eq.)在甲醇(5mL)的混合物中加入氨甲醇(7M，3.70mL，30eq.)。混合物在室温下搅拌4小时。LC-MS表明中间体未被消耗，然后随后室温下搅拌过夜。此时，分析表明(LC-MS)反应完全。通过蒸发除去溶剂，残余物直接用于下一步，无需进一步纯化。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9H-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(410mg，861.53μmol，1eq.)在丙酮(20mL)中的溶液中加入一水对甲苯磺酸(165.41mg，861.53μmol，1eq.)和2,2-二甲氧基丙烷(1.79g，17.23mmol，2.12mL，20eq.)。室温搅拌混合物2小时。LC-MS表明SM消耗。在0℃下通过缓慢加入15％氢氧化钠水溶液来将混合物的pH调节至9。通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(2x30mL)萃取。用盐水洗涤有机层，并进行浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到为白色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(2-氯-6-(6'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(410mg，794.63μmol，收率92.24％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(2-氯-6-(6'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(380mg，736.49μmol，1eq.)在磷酸三乙酯(3mL)的溶液冷却至0℃，然后加入双(二氯磷酰)甲烷(367.93mg，1.47mmol，2.0eq.)在3mL磷酸三甲酯中的溶液。混合物在0℃下搅拌4小时。LC-MS表明仅很少量原料剩余，在0℃下，将水(3mL)慢慢滴加入混合物。混合物先在40℃下搅拌40分钟，然后室温搅拌反应过夜。LC-MS表明中间体被消耗，并且检测到产物。反应混合物通过C-18反相硅胶(在水中0至30％ACN)纯化，得到化合物d-16(255mg，收率54.24％，其中纯度99.29％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 1.91(s,8H),2.57(s,2H),4.31(s,1H),4.34–4.46(m,2H),4.49(s,1H),4.57(s,2H),4.69(s,1H),6.08(d,J＝4.6Hz,1H),6.77(dd,J＝11.7,5.2Hz,1H),7.20(dd,J＝8.0,5.7Hz,1H),8.20(s,1H),8.46(s,1H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm16.85,20.04；13C NMR(126MHz,MeOD)δppm 24.31,25.03,26.09,27.15,40.61,50.88,64.73,65.35,70.07,74.34,83.17,88.33,104.93,109.85,118.96,122.60,135.54,139.88,143.43,150.89,152.06,153.00,161.09,162.99；m/z(ESI+):634.3(M+H).
实施例40.化合物d-17的合成
将7-氟吲哚啉-2-酮(600mg，3.97mmol，1eq.)在四氢呋喃(25mL)的溶液冷却至约。-78℃，然后加入LiHMDS(1M，8.73mL，2.2eq.)。在约-50℃下搅拌混合物30分钟后，再冷却至-78℃。在-78℃，将在THF(5mL)中的1,4-二溴丁烷溶液(857.16mg，3.97mmol，1eq)添加至冷的混合物中。混合物在室温下搅拌2小时，然后在70℃下搅拌3小时，最后在室温下搅拌过夜。通过加入氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，并乙酸乙酯(60mL)，萃洗分层。有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-75：25)得产物7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(590mg，收率72.42％)。
向7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(590mg，2.87mmol，1eq.)在四氢呋喃(20mL)的溶液中加入氢化铝锂(436.40mg，11.50mmol，4.0eq.)。将混合物在70℃下搅拌2小时。通过加入水(0.3mL)和15％氢氧化钠水溶液(0.6mL)淬灭混合物。向混合物中加入乙酸乙酯(40mL)。过滤除去固体，浓缩有机层，残余物经硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-75：25)，得到为白色固体的7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](300mg，54.57％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(350mg，782.60μmol，1eq.)在NMP(20mL)的溶液中加入7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](149.67mg，782.60μmol，1eq.)和DIPEA(202.29mg，1.57mmol，272.62μL，2.0eq.)。混合物在140℃搅拌过夜。用乙酸乙酯(30mL)稀释混合物，用水洗涤、然后用盐水(30mL*3)洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到为棕色固体的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(100mg，21.23％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(350mg，581.39μmol，1eq.)在甲醇(3mL)溶液中加入氨甲醇(7M,2.49mL,30eq.)。混合物在室温下搅拌过夜，然后浓缩。残余物用乙酸乙酯(30mL)稀释，用水和盐水依次洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到为棕色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(250mg，90.36％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(270mg，567.35μmol，1eq.)在丙酮(10mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(886.31mg，8.51mmol，1.05mL，15eq.)和对甲苯磺酸(97.70mg，567.35μmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌3小时。混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，先用NaHCO3水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(290mg，收率99.07％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(290mg，562.06μmol，1eq.)在磷酸三乙酯(3mL)的溶液冷却至0℃，然后加入在2mL磷酸三甲酯中的双(二氯磷酰)甲烷(280.79mg，1.12mmol，2.0eq.)。混合物在室温下搅拌4小时，将水(3mL)加入到混合物中。混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱分离纯化(梯度洗脱，在水中0至30％ACN)，得到化合物d-17(198mg，收率55.7％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm1.81(dd,J＝36.0,29.1Hz,8H),2.51(t,J＝20.9Hz,2H),4.27(s,1H),4.32(d,J＝6.6Hz,1H),4.37(s,1H),4.45(d,J＝9.7Hz,3H),4.68(t,J＝5.0Hz,1H),6.07(d,J＝4.8Hz,1H),7.01(t,J＝9.2Hz,1H),7.09(d,J＝6.9Hz,1H),7.15(dd,J＝7.8,4.2Hz,1H),8.51(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm 25.94,27.47,39.77,55.20,65.92,68.14,71.50,75.63,84.72,89.77,116.28,118.88,121.40,127.55,130.21,141.98,146.35,152.28,153.71,154.31,154.75；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.73,20.18；m/z(ESI+):634.1(M+H).
实施例41.化合物d-18的合成
在氮气保护，-78℃下，向吲哚啉-2-酮(1.33g，9.99mmol，1.0eq.)在THF(20mL)的混合物中滴加LiHMDS(1M，21.98mL，2.2eq.)。使温度升高至-50℃，并在该温度下保持30分钟。将混合物冷却至-78℃，然后加入在THF(15mL)中的1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(2.32g，9.99mmol，1eq.)。混合物先在室温下搅拌2小时，然后在回流下搅拌2小时后在室温下将混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，残余物在饱和氯化铵和乙酸乙酯之间分配。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离(洗脱：PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到为黄色固体的螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-2-酮(420mg，收率20.69％)
向螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-2-酮(410mg，2.02mmol，1eq)的THF(15mL)溶液中添加LiAlH4(153.12mg，4.03mmol，2.0eq.)。混合物在70℃下搅拌过夜。混合物用水(0.5mL)淬灭，并向混合物中添加EtOAc(20mL)。通过过滤去除固体并浓缩有机层，所得残余物用硅胶柱(洗脱：PE/EtOAc＝100：0-75：25)进行纯化，得到为粉色固体的螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃](310mg，收率81.20％)
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(666mg，1.49mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(15mL)中的溶液中添加螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃](310.01mg，1.1eq.)和DIPEA(481.15mg，3.72mmol，2.5eq.)。混合物在100℃下搅拌过夜，并进行浓缩。残余物通过硅胶柱(洗脱：PE/EtOAc＝100：0-10：90)进行纯化，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(550mg，收率61.55％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(550mg，916.64μmol，1eq.)在甲醇(5mL)中的溶液中添加氨甲醇(7M，3.27mL，25eq.)。混合物在室温下搅拌5小时。通过过滤获得固体，其用甲醇(15mL)洗涤，得到(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(310mg，收率71.36％)。
向(2R,3R,3R,4S,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(310mg，654.13μmol，1eq.)在丙酮(10mL)中的混合物中添加2,2-二甲氧基丙烷(1.02g，9.81mmol，15eq.)和对甲苯磺酸(112.64mg，654.13μmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌2小时。蒸发去除溶剂，用EtOAc(50mL)稀释残余物，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后用盐水洗涤。浓缩有机层，并通经硅胶柱(洗脱：PE/EtOAc＝100：0-5：95)进行纯化，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(252mg，收率74.95％)。
将[(3aR,4R,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(252mg，490.30μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(3mL)中的溶液冷却至约0℃，然后加入双(二氯磷酰)甲烷(306.17mg，1.23mmol，2.5eq.)在磷酸三甲酯(3mL)中的溶液。混合物在室温下搅拌5小时。然后向反应混合物中加入水(4mL)，随后混合物在室温下搅拌过夜。残余物反应混合物经反相C-18硅胶柱分离纯化(在水中0至25％ACN)，得到化合物d-18(39.0mg，收率12.43％)。1HNMR(500MHz,MeOD)δppm 1.61(d,J＝13.5Hz,2H),2.04(t,J＝13.1Hz,2H),2.53(t,J＝21.0Hz,2H),3.73(dd,J＝16.3,8.0Hz,2H),3.98(d,J＝10.5Hz,2H),4.29(s,1H),4.31-4.43(m,2H),4.46(t,J＝4.6Hz,1H),4.66-4.75(m,3H),6.06(d,J＝4.6Hz,1H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),7.24(t,J＝7.7Hz,1H),7.29(d,J＝7.4Hz,1H),8.45-8.54(m,2H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 16.77,20.00；13C NMR(125MHz,MeOD)δppm 26.14,37.03,42.16,60.27,64.65,70.13,74.32,83.28,88.33,117.70,118.98,122.34,123.83,127.62,139.74,142.05,151.14,152.05,153.17；m/z(ESI+):632.3(M+H).
实施例42.化合物d-19的合成
将3-氰基苯胺-1-羧酸叔丁酯(3.0g，16.46mmol，1eq.)在THF(30mL)中的溶液冷却至-78℃，然后在-78℃滴加LiHMDS(1M，20.58mL，1.25eq.)。混合物在-78℃搅拌20分钟，然后加入1-(溴甲基)-2-碘苯(5.13g，17.29mmol，1.05eq.)在THF(3mL)的溶液。混合物在-78℃下搅拌3小时，用饱和氯化铵淬灭混合物。混合物用乙酸乙酯(50mL*2)萃取。有机层用盐水洗涤，浓缩。残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝＝100：0-83：17)得到为黄色油状物的3-氰基-3-[(2-碘苯基)甲基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(6.44g，16.17mmol，收率98.22％)。
将3-氰基-3-[(2-碘苯基)甲基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(6.44g，16.17mmol，1eq.)在60mL的THF的溶液冷却至-78℃，然后在-78℃下滴加n-BuLi(2.5M，12.94mL，2eq.)。混合物在-78℃下搅拌2小时，并用饱和氯化铵淬灭反应。混合物用乙酸乙酯(75mL*2)萃取。有机层用盐水洗涤，浓缩。残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-83：17)，得到为浅黄色固体的1'-氧代螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(3.4g，12.44mmol,收率76.92％)。
将1'-氧代螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(350mg，1.28mmol，1eq.)溶于HCl-EA(4mL)中。混合物在室温下搅拌3小时，浓缩，并直接用于下一步。
将向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(408.31mg，912.99μmol，1eq.)在20mL的1,4-二氧六环的混合物中加入螺环[氮杂环丁烷-1-鎓-3,2'-茚]-1'-酮氯化物(268mg，1.28mmol，1.4eq.)和DIPEA(412.98mg，3.20mmol，556.58μL，3.5eq.)。混合物在100℃下搅拌4小时。蒸发除去溶剂，残余物用乙酸乙酯(40mL)稀释，然后先用水洗涤，然后用盐水洗涤、浓缩有机相，残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到为白色固体的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(1'-氧螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-基)嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(440mg，753.46μmol,收率82.53％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(1'-氧螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-基)嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(337mg，577.08μmol，1eq.)在5.00mL的甲醇中的混合物中加入NH3-MeOH(7M，2.47mL，30eq.)。混合物室温下搅拌3小时得到粗产物，该粗产物用乙酸乙酯萃取(50mL*2)，用50mL水洗涤。有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到1-[2-氯-9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基]嘌呤-6-基]螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1'-酮(264mg，576.59μmol，收率99.91％)。
在0℃下，向1-[2-氯-9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基]嘌呤-6-基]螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1'-酮(300mg，655.21μmol，1eq.)在30mL的丙酮中的溶液中加入2,2-二甲基丙烷(1.36g，13.10mmol，1.61mL，20eq.)和p-TsOH□H2O(125.80mg，655.21μmol，1eq.)。混合物室温下搅拌3小时，随后除去溶剂。残余物用EA(50mL)稀释，随后首先用碳酸氢钠水溶液(2x 50mL)洗涤，然后用50mL洗涤。浓缩有机层。残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-60：40)，得到为白色固体的1-[9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-4-基]-2-氯-嘌呤-6-基]-螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1'-酮(270mg，收率82.76％)。
将1-[9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基--3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-4-基]-2-氯-嘌呤-6-基]-螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1'-酮(270mg，542.25μmol，1eq.)在PO(MeO)3(4mL)的溶液冷却至0℃，然后加入在PO(MeO)3(4mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(270.89mg，1.08mmol，2eq.)。混合物0℃下搅拌5小时。LC-MS分析表明反应并没有大量进行。向混合物中加入在PO(MeO)3(2mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(135.4mg，0.54mmol，1eq.)。混合物室温搅拌过夜。LC-MS分析表明原料大约有50％剩余。混合物直接用于下一步。
在0℃下，向上述混合物中加入水(7mL)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物通过制备型HPLC纯化。H NMR分析表明粗产物中有杂质(含有PO(OMe)3)。通过C-18反相硅胶柱纯化粗产物(在水中的0～25％ACN)，得到化合物d-19(60.6mg，98.11μmol,，收率22.38％，99.71％纯度)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 2.52(t,J＝20.9Hz,2H),3.68(s,2H),4.25-4.43(m,4H),4.47(t,J＝4.7Hz,2H),4.74(d,J＝68.8Hz,3H),6.04(d,J＝4.7Hz,1H),7.49(t,J＝7.5Hz,1H),7.61(d,J＝7.7Hz,1H),7.74(t,J＝7.5Hz,1H),7.80(d,J＝7.6Hz,1H),8.44(s,1H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 16.84,19.73；13C NMR(125MHz,MeOD)δppm15.90,26.14,38.96,46.25,56.11,58.97,60.87,64.58,70.07,74.31,83.31,88.34,117.89,123.72,126.42,127.67,134.91,135.65,140.10,150.63,152.95,154.15,206.67；m/z(ESI+):616.3(M+H).
实施例43.化合物d-20的合成
在氮气气氛、-78℃下，向吲哚啉-2-酮(1g，7.51mmol，1eq.)在8mL THF中的混合物中滴加LiHMDS(1M，在THF中，16.52mL，2.2eq.)。将反应温度升高至-50℃下，并在该温度下保持30分钟。然后将混合物再次冷却到-78℃，随后滴加在8mLTHF中的1,3-二溴丙烷(1.52g，7.51mmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌1小时，然后在回流下搅拌3小时。在减压下浓缩混合物，残余物在乙酸乙酯和饱和氯化铵之间分配。浓缩有机层，残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-85：15)得到螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(345mg，1.99mmol，收率26.52％)。
向螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(345mg，1.99mmol，1eq.)在20mL THF中的溶液中加入LiAlH4(151.18mg，3.98mmol，2eq.)。混合物在70℃下搅拌4小时。在0℃下，用15％NaOH(aq.，5mL)淬灭反应，然后加入EtOAc(20mL)。有机层用硫酸镁干燥。通过过滤去除固体后，浓缩滤液，得到螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉](317mg，1.99mmol，收率99.95％)。
向[(2R,3R,4R,5R)3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(593.58mg，1.33mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(30mL)中的溶液中加入螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉](317mg，1.99mmol，1.5eq.)和DIPEA(428.83mg，3.32mmol，577.94μL，2.5eq.)。混合物100℃下搅拌5小时。通过蒸发去除溶剂。残余物加乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用水洗涤，随后用盐水洗涤。浓缩有机相，残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-65：35)，得到为浅黄色固体的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(586mg，1.03mmol，收率77.46％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(586mg，1.03mmol，1eq.)在甲醇(5mL)的溶液中添加NH3-MeOH(7M，4.41mL，30eq.)。混合物在室温搅拌3小时。LC-MS分析表明起始原料被消耗，监测到产物的分子离子，并且存在一定量的中间体。向混合物中加入NH3-MeOH(2mL)，混合物在室温下搅拌过夜。蒸发除去溶剂，残余物用乙酸乙酯(2×30mL)和水(30mL)稀释。用盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，并浓缩，得到为黄色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，1.01mmol，收率98.61％)。
在0℃下，向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9H-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，1.01mmol，1eq.)在30mL的丙酮中的溶液中加入2,2-二甲基丙烷(2.11g，20.28mmol，2.49ml，20eq.)和p-TsOH□H2O(193.92mg，1.01mmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌3小时。蒸发除去溶剂，用EA(50mL)稀释残余物，然后先用NaHCO3(aq，2x 50mL)洗涤，然后用盐水(50mL)洗涤，浓缩。残余物通过柱层析纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-60：40)，得到为浅黄色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(370mg，764.55μmol，收率75.42％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(370mg，764.55μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(4mL)中的溶液冷却至0℃，然后加入在磷酸三甲酯(4mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(381.95mg，1.53mmol，2eq.)，混合物在0℃下搅拌5h。LC-MS表明大约50％的起始原料剩余。在0℃下加入在磷酸三甲酯(2mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(191mg，0.765mmol，1eq.)，通过在室温下搅拌混合物2小时来继续反应。此时，LC-MS表明起始原料消失。在0℃下，向混合物中滴加7mL水，先在40℃下搅拌混合物40分钟，然后室温搅拌过夜。反应混合物通过C-18反相硅胶(在水中0至25％ACN)纯化，得到化合物d-20(106mg，176.12μmol，收率23.04％，98.33％纯度)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 2.10-2.22(m,2H),2.38(dd,J＝15.8,9.9Hz,2H),2.48(d,J＝8.5Hz,2H),2.56(t,J＝20.9Hz,2H),4.32(s,1H),4.34-4.39(m,1H),4.40-4.46(m,1H),4.49(t,J＝4.8Hz,1H),4.70(t,J＝4.8Hz,1H),4.84(s,2H),6.08(d,J＝4.6Hz,1H),7.14(t,J＝7.4Hz,1H),7.23(t,J＝7.8Hz,1H),7.54(d,J＝7.4Hz,1H),8.46(d,J＝8.2Hz,1H),8.48(s,1H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 16.80,19.93；13C NMR(125MHz,MeOD)δ15.43,26.15,35.69,46.27,64.66,70.07,74.33,83.21,88.34,117.15,118.93,122.13,124.01,127.29,139.54,139.80,141.79,150.91,151.93,153.18；m/z(ESI+):602.2(M+H).
实施例44.化合物d-21的合成
将4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.0g，9.51mmol，1eq.)在THF(30mL)中的溶液冷却至-78℃，随后在-78℃下滴加LiHMDS(1M，11.89mL，1.25eq.)并搅拌20分钟。然后将1-(溴甲基)-2-碘代苯(3.11g，10.46mmol，1.1eq.)在THF(5mL)中的溶液滴加到该混合物中。将混合物在-78℃下搅拌3小时。反应用饱和氯化铵淬灭，并用乙酸乙酯萃取(50mL*2)。有机层用盐水冲洗，浓缩。残余物用硅胶柱(洗脱，PE/EA＝100：0-83：17)进行纯化，得到4-氰基-4-[(2-碘苯基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.7g，收率91.25％)。
将4-氰基-4-[(2-碘苯基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.7g，8.68mmol，1eq.)在THF(30mL)中的溶液冷却至约-78℃，随后在约-78℃下滴加正丁基锂(2.5M，6.94mL，2eq.)。并在此温度下搅拌2小时，反应混合物用饱和氯化铵淬灭。用EA萃取混合物(80mL*2。有机层用盐水冲洗，浓缩。残余物用硅胶柱(洗脱，PE/EA石油醚：乙酸乙酯＝100：0-75：25)进行纯化，得到1-氧代吡咯[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.55g，5.14mmol，收率59.25％)。
在0℃下，向1-氧代吡咯[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.55g，5.14mmol，1eq.)在甲醇(20mL)中溶液分批次加入硼氢化钠(486.40mg，12.86mmol，2.5eq.)。混合物在该温度下搅拌2小时。蒸发去除溶剂，用乙酸乙酯(100mL*2)萃取残余物。有机层用盐水(100mL)洗涤，并浓缩浓缩，得到1-羟基螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.54g，5.08mmol，收率98.69％)。
向1-羟基螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(950mg，3.13mmol，1eq.)在CH3OH/CH3COOH＝1：4(40mL)中的溶液中加入Pd/C(200mg，1.65mmol)。混合物在氢气气氛下于室温搅拌过夜。过滤去除不溶物，并用甲醇洗涤。合并滤液和洗液，蒸发浓缩，用饱和碳酸氢钠溶液中和，用DCM(80mL*2)萃取。有机层用盐水洗涤，浓缩。残余物用硅胶柱(洗脱，PE/EA＝100：0-90：10)进行纯化，得到螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(190mg，收率21.11％)。
将螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(330mg，1.15mmol，1eq.)溶解于盐酸二氧六环(5mL)中。在室温下搅拌3h后，浓缩混合物，且残余物直接用于下一步。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(466.8mg，1.04mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(10mL)中的溶液中添加螺环[茚-2,4'-哌啶-1-鎓]氯化物(257mg，1.15mmol，1.10eq.)和DIPEA(472.14mg，3.65mmol，636.30μL，3.5eq.)。将混合物在100℃下搅拌4小时，通过蒸发进行浓缩。残余物通过硅胶柱(洗脱，PE/EA＝100：0-55：45)进行纯化，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(590mg，收率94.52％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(590mg，986.55μmol，1eq.)在甲醇(8.38mL)中的溶液中添加氨甲醇(7M，3.52mL，25eq.)。将混合物在室温下搅拌4小时。通过蒸发去除溶剂，残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，随后加入水(40mL)。浓缩有机层得到(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，收率96.65％)。
向(2R,3R,3R,4S,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，953.52μmol，1eq.)在丙酮(30mL)中的混合物中添加2,2-二甲氧基丙烷(1.49g，14.30mmol，15eq.)和对甲苯磺酸(164.20mg，953.52μmol，1eq.)。将混合物在室温下搅拌1小时。通过蒸发去除溶剂，用乙酸乙酯(50mL)稀释残余物，先用碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱(洗脱，PE/EA＝100：0-70：30)进行纯化，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(380mg，收率77.84％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(380mg，742.19μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(5mL)中的溶液冷却至约0℃。向该冷的溶液中加入双(二氯磷酰)甲烷(556.16mg，2.23mmol，3eq.)在磷酸三甲酯(4mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌5小时，然后加入水(4mL)。室温下持续搅拌过夜。混合物直接注入到柱(C-18反相硅胶)来进行纯化(洗脱在水中0至30％ACN)，得到化合物d-21(66.7mg，收率14.01％，98.23％纯度)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 1.72(d,J＝5.0Hz,4H),2.50(t,J＝20.9Hz,2H),2.89(s,4H),4.23-4.45(m,5H),4.60(t,J＝4.9Hz,1H),6.00(d,J＝4.8Hz,1H),7.05-7.13(m,2H),7.14-7.22(m,2H),8.29(s,1H)；31PNMR(203MHz,MeOD)δppm 16.87,20.09；13C NMR(126MHz,MeOD)δppm26.11,36.57,42.21,44.08,64.73,70.07,74.28,83.17,88.14,118.20,124.42,126.01,137.83,141.79,151.67,153.65；m/z(ESI+):630.3(M+H).
实施例45.化合物d-22的合成
在氮气保护，-78℃下，向吲哚啉-2-酮(3g，22.53mmol，1eq.)在THF(50mL)中的混合物中滴加LiHMDS(1M在THF中，49.57mL，2.2eq.)。使温度升高至-50℃，并在该温度下保持30分钟。将混合物再次冷却-78℃，然后加入在THF(20mL)中的1,6-二溴己烷(5.50g，22.53mmol，1eq.)溶液。混合物先在室温下搅拌1小时，然后在回流下搅拌5小时，再在室温下搅拌过夜。淬灭混合物并在减压下蒸发，残余物在饱和氯化铵和乙酸乙酯之间分配。浓缩有机层，残余物通过柱层析纯化(洗脱：PE/EA＝100：0-80：20)得到黄色固体形式的螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(880mg，4.09mmol，收率18.14％)。
向螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(1.06g，4.92mmol，1eq.)在20mL的THF的溶液中加入LiAlH4(373.30mg，9.85mmol，2eq.)。混合物在70℃下搅拌4小时，然后在0℃下用15％NaOH(水溶液，5mL)淬灭反应，随后加入EtOAc(10mL)。分出有机成，并用硫酸镁干燥。过滤去除不溶物，浓缩滤液。残余物通过柱层析纯化(洗脱：PE/EA＝100：0-90：10)得到螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉](210mg，1.04mmol，收率21.19％)。
向螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉](210mg，1.04mmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(20mL)中的混合物中加入[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(388.78mg，869.32mmol，1eq.)和DIPEA(280.88mg，2.17mmol，378.54μL，2.5eq.)。混合物100℃下搅拌4小时。蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(40mL)稀释，然后先用水洗涤，随后用盐水洗涤。浓缩有机相，残余物通过柱层析纯化(洗脱：PE/EA＝100：0-60：40)，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(310mg，506.48mmol，收率58.26％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(310mg，506.48mmol，1eq.)在3mL的甲醇的混合物中加入NH3-MeOH(7M，2.17mL，30eq.)。混合物室温搅拌3小时。蒸发除去溶剂，并且用乙酸乙酯萃取残余物(30mL*2)，随后加入水(30mL)。分出有机相，用盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩，得到为白色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-1'-基-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(246mg，506.21μmol，收率99.95％)。
向((2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9H-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(246mg，506.21μmol，1eq.)在20mL的丙酮中的溶液中加入P-TsOH□H2O(97.19mg，506.21μmol，1eq.)和2,2-二甲基丙烷(1.05g，10.12mmol，1.24ml，20eq.)。混合物室温搅拌3小时。蒸发除去溶剂，并且用乙酸乙酯(50mL)稀释残余物，然后先用碳酸氢钠溶液水溶液洗涤，随后用盐水洗涤，并进行浓缩。残余物通过柱层析纯化(洗脱：PE/EA＝100：0-70：30)，得到为浅绿色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(213mg，404.92μmol，收率79.99％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(213mg，404.92μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(3mL)中的溶液冷却至约0℃，然后加入双(二氯磷酰)甲烷(303.43mg，1.21mmol，3eq.)在磷酸三甲酯(3mL)中的溶液。混合物在0℃下搅拌2.5小时。LCMS监测表明混合物中主要含有起始原料。将混合物升至室温搅拌2小时。LC-MS表明约65％起始原料剩余。在0℃，补加双(二氯磷酰)甲烷(101mg，0.403mmol，1eq.)在磷酸三甲酯(1mL)中的溶液，混合物在室温下搅拌过夜。此时，LC-MS监测观察到仅非常少的起始原料。将混合物冷却至0℃，然后加入水(5mL)，随后继续在室温下搅拌过夜。混合物通过制备型HPLC纯化，得到产物的钠盐。用树脂(酸性形式)酸化钠盐混合物并冻干，得到化合物d-22(76.6mg，117.26μmol，收率29.00％，纯度98.58％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm1.73-1.96(m,12H),2.56(t,J＝20.9Hz,2H),4.30-4.39(m,2H),4.41(s,1H),4.50(t,J＝4.6Hz,1H),4.53-4.60(m,2H),4.70(t,J＝4.7Hz,1H),6.10(d,J＝4.8Hz,1H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),7.23(t,J＝7.8Hz,1H),7.33(d,J＝7.4Hz,1H),8.45(d,J＝8.1Hz,1H),8.49(s,1H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 16.84,19.95；13C NMR(125MHz,MeOD)δppm 15.90,23.47,25.10,26.16,27.21,29.19,40.18,56.14,62.76,64.68,70.11,74.36,83.27,88.21,117.44,122.19,124.02,126.92,139.53,141.39,143.27,27.21,151.31,152.09,153.25；m/z(ESI+):644.3(M+H).
实施例46.化合物d-23的合成
将环己烷腈(5.0g，45.80mmol，1eq.)在四氢呋喃(50mL)中的溶液冷却至-78℃，然后LDA(1M，50.38mL，1.1eq.)。混合物升温至室温，并在室温下搅拌1小时，然后再次冷却至-78℃。向该冷的混合物中加入在THF(20mL)中的(2-溴乙基)苯溶液(10.17g，54.96mmol，1.2eq)，混合物在室温下搅拌过夜。用饱和氯化铵淬灭反应，混合物用乙酸乙酯萃取(80mL*2)。有机层用盐水洗涤，随后进行浓缩。残余物经硅胶柱纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-95：5)，得到为黄色油状物的1-(2-苯乙基)环己烷碳腈(4.0g，18.75mmol，收率40.94％)。
向1-(2-苯乙基)环己烷碳腈(4.0g，18.75mmol，1eq.)在四氢呋喃(80mL)中的溶液加入。将混合物冷却至0℃，随后加入LiAlH4(2.13g，56.25mL，3eq.)。该混合物在70℃下搅拌过夜，并在0℃下用15％NaOH(aq.)淬灭反应，直至pH为约10。用硫酸镁干燥有机层。通过过滤去除固体物，浓缩滤液，得到[1-(2-苯乙基)环己基]甲胺(4.0g，18.40mmol，收率98.15％)。该粗产物可直接用在下一步。
在0℃下，向[1-(2-苯乙基)环己基]甲胺(2.0g，9.20mmol，1eq.)在干燥二氯甲烷(30mL)中的混合物中Et3N(1.12g，11.04mmol，1.53mL，1.2eq.)和对甲苯磺酰氯(1.93g，10.12mmol，1.92mL，1.1eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。用饱和氯化铵淬灭混合物，并用二氯甲烷萃取(30mL*2)。有机相用盐水洗涤，并进行浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-90：10)，得到产为白色固体的4-甲基-N-[[1-(苯乙基)环己基]甲基]苯磺酰胺(2.4g，6.46mmol，收率70.20％)。
将4-甲基-N-((1-苯乙基环己基)甲基)苯磺酰胺(2.2g，5.92mmol，1eq.)，间氯过氧苯甲酸(1.53g，8.88mmol，1.5eq.)和碘(225.44mg，888.21μmol，0.15eq.)溶解在CH3CN/t-BuOH(1:1，40mL)中。抽空混合物，用氮气回填，然后在35℃下搅拌过夜。TLC表明起始原料大部分残留。在50℃下继续搅拌6小时，用Na2S2O3.淬灭反应。用碳酸氢钠水溶液将pH调节至8，用EtOAc萃取混合物(30mL*2)。有机相用盐水洗涤，并进行浓缩。残余物用硅胶柱纯化分离(洗脱，PE/EA＝100：0-85：15)，得到3-苯基-2-对甲苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷(900mg，2.44mmol，收率41.13％)，其中回收起始原料(1.0g)。
将3-苯基-2-对甲苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷(1.0g，2.71mmol，1eq.)在HBr/HOAc(153mL)的混合物在40℃下搅拌20小时，然后在油泵上去除HBr/HOAc。在0℃下，向剩余的混合物中缓慢地加入15％NaOH(aq)直至混合物的pH调至10，用乙酸乙酯萃取经pH调整的混合物(20mL*2)。有机层用盐水洗涤，然后进行浓缩。残余物经硅胶柱纯化(洗脱，DCM/MeOH＝100：0-90：10)，得到3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷(250mg，1.16mmol，收率42.90％)。
向3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷(250mg，1.16mmol，1.4eq.)在1,4-二氧六环(15mL)中的混合物中加入[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(370.88mg，829.28μmol，1eq.)和DIPEA(375.12mg，2.90mmol，505.55μL，3.5eq.)。混合物在100℃搅拌4小时。通过蒸发去除溶剂。残余物用乙酸乙酯(30mL)稀释，然后先用水洗涤，再用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-60：40)，得到为白色固体的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(440mg，702.76μmol，收率84.74％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(440mg，702.76μmol，1eq.)在甲醇(4mL)的混合物中加入氨甲醇(7M，3.01mL，20eq.)。混合物在室温条件搅拌3小时。去除溶剂，并用乙酸乙酯萃取残余物(20mL*2).萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并进行浓缩，得到为白色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(350mg，700.02μmol，收率99.61％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(350mg，700.02μmol，1eq.)在丙酮(20mL)的溶液中加入一水对甲苯磺酸(134.4mg,700.02μmol,1eq.)和2,2-二甲氧基丙烷(1.46g，14.00mmol，20eq.)。混合物在0℃下搅拌2小时。TLC检测原料被消耗。通过在0℃下缓慢加入15％氢氧化钠(aq.)将混合物的pH调节至约9来淬灭反应。通过蒸发去除溶剂，并将残余物溶剂溶解在乙酸乙酯(30mL)中，随后用氯化铵水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。对有机层进行浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到为白色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(343mg，635.12μmol，收率90.73％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(343mg，635.12μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(4mL)的溶液冷却至0℃，然后加入在PO(MeO)3(4mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(317.29mg，1.27mmol，2.0eq.)。混合物在0℃下搅拌4小时，在室温下搅拌2小时，然后冷却至0℃，随后补加在2mL磷酸三甲酯中的双(二氯磷酰)甲烷(158.65mg，0.635mmol，1.0eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。在0℃下将水(7mL)缓慢加入混合物中，然后在40℃下搅拌混合物40分钟，随后在室温下搅拌过夜。混合物通过制备型HPLC纯化，得到产物的钠盐。用树脂(酸性树脂、酸性形式)酸化钠盐混合物并冻干所得到的农业，得到深色的粗产物。用C18反相硅胶柱(洗脱，在水中0至50％ACN)纯化粗产物，得到化合物d-23(88.0mg，133.17μmol，收率21.01％，99.57％纯度)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 1.47-1.83(m,12H),2.54(t,J＝21.1Hz,2H),4.36(dd,J＝55.5,27.1Hz,5H),4.63(s,1H),4.75(d,J＝10.8Hz,1H),5.37(s,1H),6.02(s,1H),7.24(d,J＝41.5Hz,5H),8.49(s,1H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 17.09,20.02；13C NMR(126MHz,MeOD)δppm 22.54,23.49,25.03,25.87,26.10,27.15,33.91,35.90,42.78,61.74,64.62,69.99,74.28,83.20,88.30,118.13,125.81,126.25,127.98,138.87,143.63,151.07,153.11,153.67；m/z(ESI+):658.3(M+H).
实施例47.化合物d-26的合成
向异色烷-1,3-二酮(1.0g，6.17mmol，1eq.)在甲苯(30mL)中的混合物中加入苯甲胺(793.03mg，7.40mmol，1.2eq.)。混合物在110℃下搅拌20小时，然后进行浓缩。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱：PE/EA＝100：0-75：25)，得到为白色固体的2-苄基-4H-异喹啉-1,3-二酮(0.9g，3.58mmol，收率58.07％)。
在氮气保护，-78℃下，向2-苄基-4H-异喹啉-1,3-二酮(780mg，3.10mmol，1eq.)在四氢呋喃(8mL)的混合物中滴加LiHMDS(1M，6.83mL，2.2eq.)。使反应的温度升高到-50℃，并在该温度下保持30分钟。将混合物再次冷却-78℃，然后加入在THF(8mL)中的1,5-二溴戊烷溶液(713.76mg，3.10mmol，1.0eq.)。滴加完毕后，混合物先在室温下搅拌1小时，然后在回流下搅拌过夜。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(40mL*2)。用盐水洗涤有机相，并进行浓缩。残余物经硅胶柱纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-90：10)，得到产物2'-苄基螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-1',3'-二酮(160mg，500.95μmol，收率16.14％)。
将AlCl3(350.68mg，2.63mmol，4eq.)在THF(10mL)中的溶液冷却至0℃，然后加入LiAlH4(149.71mg，3.94mmol，6eq.)。混合物在0℃下搅拌30分钟。然后加入在2mLTHF中的2'-苄基-1'H-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-1',3'(2'H)-二酮溶液(210mg，657.49μmol，1.0eq.)。混合物在室温下搅拌6小时，用THF10(mL)稀释，然后在0℃下缓慢加入15％氢氧化钠(aq.)将混合物的pH调节至10来淬灭。分出有机层，并用硫酸镁干燥。通过过滤去除不溶物，浓缩滤液。残余物经硅胶柱纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-90：10)，得到2-苄基螺环[1,3-二氢异喹啉-4,1'-环己烷](190mg，651.96μmol，收率99.16％)。
向2-苄基螺环[1,3-二氢异喹啉-4,1'-环己烷](190mg，651.96μmol，1eq.)在甲醇5mL的溶液中加入HCOONH4(61.67mg，977.94μmol，1.5eq.)和Pd(OH)2(20mg，134.51μmol，20％担载在碳上，具有50％水)。混合物在H2氛围下于60℃下搅拌过夜。过滤除去不溶物，并用MeOH洗涤。合并滤液和洗液，并浓缩至干，得到螺环[2,3-二氢-1H-异喹啉-4,1'-环己烷](120mg，596.11μmol，收率91.43％)，其可直接用于下一步。
向螺环[2,3-二氢-1H-异喹啉-4,1'-环己烷]在1,4-二氧六环(15mL)的混合物中加入[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(205.07mg，458.54μmol，1eq.)和DIPEA(148.16mg，1.15mmol，199.67μL，2.5eq.)。混合物在100℃下搅拌2小时。去除(蒸发)溶剂后，用EtOAc(50mL)稀释残余物，随后先用水洗涤，再用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[1,3-二氢异喹啉-4,1'-环己烷]-2-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(280mg，457.46μmol，收率99.76％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[1,3-二氢异喹啉-4,1'-环己烷]-2-基-嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(280mg，457.46μmol，1eq.)在甲醇(3mL)的混合物中加入氨甲醇(7M，1.96mL，30eq.)。混合物在室温条件搅拌2小时。蒸发除去溶剂，并且用乙酸乙酯萃取残余物(30mL*2)。萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并进行浓缩，得到为白色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[1,3-二氢异喹啉-4,1'-环己烷]-2-基-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(220mg，452.71μmol，收率98.96％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-螺环[1,3-二氢异喹啉-4,1'-环己烷]-2-基-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(220mg，452.71μmol，1eq.)在丙酮(15mL)的溶液中加入一水对甲苯磺酸(77.96mg，452.71μmol，1.0eq.)和2,2-二甲氧基丙烷(942.97mg，9.05mmol，20eq.)。混合物在室温下搅拌2小时，然后通过在0℃下缓慢加入15％NaOH(aq.)来将pH调节至9。通过蒸发去除溶剂，并且用乙酸乙酯萃取残余物(30mL*2)。萃取物用盐水洗涤，并浓缩至干。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱：PE/EA＝100：0-50：50)，得到为白色固体[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[1,3-二氢异喹啉-4,1'-环己烷]2-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(200mg，380.21μmol，收率83.99％)。
向[(3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-螺环[1,3-二氢异喹啉-4,1'-环己烷]2-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(200mg，380.21μmol，1eq.)在磷酸三乙酯(2mL)的冷溶液(0℃)中加入在磷酸三甲酯(2mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(189.94mg，760.42μmol，2.0eq.)。混合物在0℃下搅拌5小时，然后在0℃下缓慢加入水(3mL)。混合物在40℃下搅拌40分钟，然后在室温搅拌过夜。反应混合物通过C-18反相硅胶柱纯化(洗脱，在水中0至30％ACN)，得到化合物d-26(82.0mg，126.21μmol，收率33.21％，99.11％纯度)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 1.38(s,1H),1.63(s,4H),1.82(dd,J＝31.4,17.4Hz,5H),2.54(t,J＝20.2Hz,2H),4.21–4.43(m,4H),4.46(s,1H),4.66(s,1H),4.79(s,2H),5.64(s,1H),6.05(s,1H),7.17–7.27(m,3H),7.48(d,J＝7.5Hz,1H),8.38(s,1H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 17.04,19.68；13C NMR(126MHz,MeOD)δppm 21.91,25.01,25.69,26.05,34.91,35.30,38.67,64.73,70.15,74.27,83.20,88.08,125.78,126.56,132.30,138.23,143.85,151.78,153.64；m/z(ESI+):644.20(M+H).
实施例48.化合物d-29的合成
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，2.24mmol，1.0eq.)和2-苯基哌啶(432.65mg，2.68mmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(10mL)的溶液中添加DIPEA(722.45mg，5.59mmol，2.5eq.)。将混合物在100℃下搅拌16小时。转化完成后，将反应混合物置于乙酸乙酯中(30mL)。混合物用盐水洗涤，在真空下浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，0至30％EA在PE中)，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(2-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，78.19％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(2-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，1.75mmol，1.0eq.)在甲醇(5mL)中的溶液添加氨甲醇(7M，5mL，20.02eq.)。混合物在室温下搅拌16小时，并通过蒸发浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，0至5％MeOH在DCM中)，得到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(2-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(700mg，89.80％)。
将(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(2-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(700mg，1.57mmol，1.0eq.)和一水对甲苯磺酸(358.31mg，1.88mmol，1.2eq.)在丙酮(10mL)中的混合物添加2,2-二甲氧基丙烷(1.63g，15.70mmol，10eq.)。混合物在室温下搅拌16小时。浓缩混合物，将残余物置于乙酸乙酯(50mL)中，用碳酸氢钠溶液洗涤(2X20 mL)。浓缩有机层，残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-70：30)洗脱，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(2-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(650mg，85.20％)。
在0℃下，向[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(2-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(200mg，411.55μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(2mL)中的溶液加入在磷酸三甲酯(1mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(205.6mg，823.11μmol，2.1eq.)。将混合物在室温下搅拌16小时。混合物用水(5mL)淬灭。混合物通过C-18反相硅胶纯化(0至20％ACN，在水中)，得到化合物d-29(60mg，24.14％)。
1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 1.61-1.72(m,4H),2.44-2.59(m,3H),4.25-4.41(m,4H),4.58-4.62(m,1H),6.01-6.02(m,1H),7.23-7.24(m,1H),7.27-7.28(m,2H),,7.33-7.35(m.2H),8.25(s,1H)；13C NMR(125MHz,MeOD)δppm 19.31,24.95,25.56,26.05,27.38,64.78,70.10,74.26,83.10,88.10,118.29,126.36,128.38,137.87,139.23,151.95,153.80,154.68；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 16.66,20.04；m/z(ESI-):601.9(M-H).
实施例49.化合物d-30的合成
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，2.24mmol，1.0eq.)和3-苯基哌啶(432.65mg，2.68mmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(10mL)的溶液中添加DIPEA(722.45mg，5.59mmol，2.5eq.)。使混合物回流16小时。反应完成后，将混合物置于乙酸乙酯中(30mL)中，用盐水洗涤，并在真空下浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，0至30％EtOAc在Pet-ether中)，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，78.19％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，1.75mmol，1.0eq.)在甲醇(5mL)中的溶液添加氨甲醇(7M，5mL，20.02eq.)。将混合物在室温下搅拌16小时。反应完全后，浓缩混合物(蒸发)。残余物通过硅胶柱纯化(0至5％MeOH，在DCM中)，得到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(600mg，收率76.97％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(600mg，1.35mmol，1.0eq.)和一水对甲苯磺酸(307.12mg，1.61mmol，1.2eq.)在丙酮(10mL)中的混合物添加2,2-二甲氧基丙烷(1.40g，13.46mmol，10eq.)。混合物在室温下搅拌16小时，然后进行浓缩。将残余物置于乙酸乙酯(50mL)中，用碳酸氢钠溶液洗涤(20mL*2)。浓缩有机层，残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-70：30)，dedao[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(550mg，84.11％)。
0℃下，向[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(200mg，411.55μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(2mL)中的溶液加入在磷酸三甲酯(1mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(205.60mg，823.11μmol，2.1eq.)。混合物在室温下搅拌16小时。反应用水(5mL)淬灭。反应混合物通过C-18反相硅胶(0至20％ACN，在水中)纯化，得到化合物d-30(100mg，40.24％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 1.70-1.72(m,1H),1.89-1.91(m,2H),2.04-2.06(m,1H),2.45-2.54(m,2H),2.77-2.79(m,1H),4.24-4.41(m,4H),4.59-4.61(m,1H),6.00-6.02(m,1H),7.21-7.31(m,5H),8.27(s,1H)；13CNMR(125MHz,CD3OD)δppm 25.01,25.46,26.05,27.11,31.58,42.90,64.76,70.07,75.25,83.06,88.12,118.30,126.33,126.83,128.19,137.84,143.19,151.72,153.55,153.70；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.70,20.04；m/z(ESI-):602.0(M-H).
实施例50.化合物d-31的合成
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，2.24mmol，1eq.)、4-苯基哌啶(432.65mg，2.68mmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(15mL)中的混合物中加入DIPEA(722.45mg，5.59mmol，973.66μL，2.5eq.)。混合物在100℃下搅拌过夜。浓缩混合物，残余物用硅胶柱纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到为棕色固体的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1.1g，收率86.0％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1.1g，1.81mmol，1.1eq.)在甲醇(7mL)中的溶液中加入氨甲醇(7M，54.30mmol，8.24mL，30eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。蒸发除去除去溶剂，残余物用乙酸乙酯(80mL)稀释，然后先用水(50mL)洗涤，再用盐水洗涤(50mL)，用硫酸钠干燥。将溶解浓缩至干，得到为棕色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(810mg，94.4％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(810mg，1.82mmol，1eq.)和一水对甲苯磺酸(380.06mg，2.0mmol，1.1eq.)在丙酮(10mL)的混合物中加入2,2-二甲氧基丙烷(1.89g，18.17mmol，10eq.)。混合物在室温下搅拌16小时，通过蒸发浓缩。残余物用乙酸乙酯(100mL)稀释，洗涤(先用碳酸氢钠溶液(2X50 mL)，然后用盐水(50mL))，干燥(硫酸钠)，浓缩。残余物用硅胶柱纯化(洗脱：PE/EA＝100：0-50：50)，得到为棕色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(710mg，80.4％)。
将[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(300mg，617.33μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(3mL)的溶液冷却至0℃，然后加入双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(308.40mg，1mL磷酸三甲酯，1.23mmol，2.0eq.)。混合物在0℃下搅拌6小时，然后加入水(5mL)。混合物在室温下搅拌过夜，然后用反相C-18硅胶柱纯化(0至30％ACN，在水中)，得到为白色固体的化合物d-31(189mg，50.1％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 1.74(q,J＝12.1Hz,2H),1.96(d,J＝12.0Hz,2H),2.49(t,J＝21.0Hz,2H),2.91(t,J＝12.1Hz,1H),3.18(s,2H),4.24(d,J＝3.3Hz,1H),4.27-4.39(m,2H),4.42(t,J＝4.9Hz,1H),4.60(t,J＝5.0Hz,1H),6.00(d,J＝4.8Hz,1H),7.16(t,J＝7.1Hz,1H),7.24(dt,J＝8.1,7.3Hz,4H),8.29(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm26.40,27.46,28.52,34.55,43.85,66.06,71.37,75.67,84.44,89.63,119.20,127.35,127.78,129.51,139.26,146.78,152.93,154.78,155.16；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.68,20.03；m/z(ESI+):604.0(M+H).
实施例51.化合物d-32的合成
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)、4-环己基哌啶盐酸盐(250.57mg，1.23mmol，1.1eq.)在1,4-二氧六环(20mL)的混合物中加入DIPEA(505.72mg，3.91mmol，681.56μL，3.5eq.)。混合物在100℃下搅拌过夜。在冷却至室温后，用乙酸乙酯(40mL)稀释混合物，依次用水和盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到为黄色固体的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(580mg，89.7％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(580mg，1.00mmol，1eq.)在甲醇(8mL)的溶液中加入氨甲醇(7M，4.3mL，30eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。通过蒸发去除溶剂，残余物用乙酸乙酯(40mL)稀释，依次用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，硫酸钠干燥，并进行浓缩，得产物(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(420mg，92.6％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(420mg，923.31μmol，1eq.)在丙酮(25mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(1.45g，13.94mmol，15eq.)和一水对甲苯磺酸(184.00mg，929.31μmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌3小时。通过蒸发去除溶剂后，残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，依次用碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-95：5)，得到为白色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(401mg，87.7％)。
在约0℃下，向[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(400mg，812.99μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(6mL)的溶液中加入在3mL磷酸三甲酯中的双(二氯磷酰)甲烷(406.15mg，1.63mmol，2.0eq.)。混合物在0℃下搅拌5小时，然后加入水(5mL)。混合物在40℃下搅拌1小时，然后在室温下搅拌过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱分离纯化(5至30％CAN，在水中)，得到化合物d-32(243mg，48.6％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 0.98(dd,J＝21.9,11.8Hz,2H),1.07-1.34(m,6H),1.42(s,1H),1.65(d,J＝11.6Hz,1H),1.74(d,J＝10.7Hz,4H),1.81(s,2H),2.50(t,J＝21.0Hz,2H),4.23(d,J＝3.4Hz,1H),4.27-4.38(m,2H),4.41(s,1H),4.58(s,1H),5.98(d,J＝4.8Hz,1H),8.28(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm 26.45,27.50,27.68,27.77,28.56,30.71,31.19,43.01,43.92,66.06,71.41,75.68,84.46,89.59,119.27,139.14,152.92,154.71,155.15；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm16.78,19.91；m/z(ESI+):610.39(M+).
实施例52.化合物d-33的合成
氮气保护，-78℃下，向2,2-二苯乙腈(500mg，2.59mmol，1eq.)在四氢呋喃(5mL)的混合物中滴加LDA(2M，1.55mL，1.2eq.)，20分钟后，在同一温度下，加入在THF(2mL)中的2-溴乙酸乙酯溶液(518.52mg，3.10mmol，1.2eq.)。混合物在室温下搅拌5小时。通过加入1NHCl(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL)萃取混合物。有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并蒸发至干。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-75：25)，得到为黄色油状物的3-氰基-3,3-二苯基丙酸乙酯(640mg，88.5％)。
氮气气氛、0℃下，向3-氰基-3,3-二苯基丙酸乙酯(640mg，2.29mmol，1eq.)在乙醇(32mL)的混合物中滴加二氯化钴(594.97mg，4.58mmol，2eq.)和硼氢化钠(866.75mg，22.91mmol，10eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。用1N HCl(10mL)淬灭反应，混合物用乙酸乙酯萃取(25mL*2)。有机层用盐水洗涤1，硫酸钠干燥，过滤，并蒸发至干。残余物硅胶柱纯化分离(洗脱，DCM/MeOH＝100：0-95：5)，得到为黄色固体的4,4-二苯基吡咯烷-2-酮(360mg，收率66.2％)。
向4,4-二苯基吡咯烷-2-酮(320mg，1.35mmol，1eq.)在四氢呋喃(8mL)的混合物中加入氢化铝锂(102.35mg，2.70mmol，2.0eq.)。混合物在70℃下搅拌过夜。用水(1mL)淬灭反应，随后加入乙酸乙酯(20mL)。过滤除去固体，浓缩滤液。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱，DCM/MeOH＝100：0-85：15)，得到为固体的产物3,3-二苯基吡咯烷(200mg，66.4％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(380mg，849.68μmol，1eq.)在1,4-二氧六环(10mL)的混合物中加入3,3-二苯基吡咯烷(208.72mg，934.65μmol，1.1eq.)和DIPEA(274.53mg，2.12mmol，369.99μL，2.5eq.)。混合物在100℃下搅拌5小时，然后用乙酸乙酯(40mL)稀释，随后先用水然后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物通过硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(401mg，74.4％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(401mg，632.41μmol，1eq.)在甲醇(3mL)的溶液中加入氨甲醇(7M，2.71mL，30eq.)。混合物在室温下搅拌5小时。通过蒸发去除溶剂，残余物用EtOAc(50mL)稀释，随后先用水(30mL)然后用盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥过滤，并进行浓缩，得到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(315mg，98.06％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(315mg，620.12μmol，1eq.)在丙酮(15mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(968.75mg，9.30mmol，15eq.)和一水对甲苯磺酸(122.78mg，620.12μmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌4小时。通过蒸发去除溶剂。残余物用EtOAc(50mL)稀释，随后先用碳酸氢钠溶液随后用盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗涤，PE/EtOAc＝100：0-60：40)，得到为白色固体形式的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(320mg，94.16％)。
在0℃下，向[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(320mg，583.91μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(6mL)的溶液中加入双(二氯磷酰)甲烷(291.70mg，1.17mmol，2.0eq.)在磷酸三甲酯(3mL)中的溶液。混合物在0℃下搅拌反应5小时，然后加入水(6mL)。混合物在40℃搅拌1小时，并在室温下搅拌过夜。反应混合物用反相C-18硅胶柱分离纯化(5至30％CAN，在水中)，得到化合物d-33(235mg，59.9％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 2.50(td,J＝20.9,13.1Hz,2H),2.69(t,J＝6.8Hz,1H),2.77(d,J＝6.8Hz,1H),3.63(d,J＝7.1Hz,1H),4.00(d,J＝6.1Hz,1H),4.19-4.47(m,5H),4.56-4.65(m,1H),4.79(q,J＝12.2Hz,1H),6.00(dd,J＝8.4,4.7Hz,1H),7.14(s,2H),7.20-7.35(m,8H),8.40(d,J＝39.7Hz,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm 26.46,27.52,28.57,36.54,38.44,47.49,53.71,55.80,58.02,59.05,66.01,71.41,75.74,84.61,89.72,119.03,119.24,127.63,127.83,129.59,140.34,146.49,152.27,153.87,154.00,155.50,155.58；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.89,19.78；m/z(ESI+):666.25(M+H).
实施例53.化合物d-34的合成
氮气保护，-78℃下，向溴苯(6g，38.21mmol，4.02mL，1eq.)在四氢呋喃(20mL)的溶液中加入正丁基锂(2.5M，15.29mL，1eq.)。混合物搅拌10分钟，然后加入在THF(15mL)中的3-氧代氮杂丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.27g，19.11mmol，0.5eq.)。混合物升温至室温，并搅拌过夜。在0℃下，用水(25mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL)稀释混合物。分出有机层，用盐水洗涤，进行浓缩。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-70：30)，得到为浅棕色固体的3-羟基-3-苯基-氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.9g，40.9％)。
将三氯化铝(1.60g，12.03mmol，3.0eq.)悬浮在甲苯(739.16mg，8.02mmol，853.53μL，2.0eq.)，并冷却至0℃。在0℃下，向冷的悬浮液中加入3-羟基-3-苯基-氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1g，4.01mmol，1eq)在731.82μL甲苯中的溶液。混合物在0℃条件下搅拌2小时。通过加入冰水(25mL)淬灭反应。混合物搅拌0.5小时，随后依次加入饱和碳酸氢钠溶液和氨水，直至混合物的pH为11。用乙酸乙酯萃取混合物。萃取物用盐水细细地，硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物溶解在微量乙酸乙酯中，随后加入草酸(361.12mg，4.01mmol，1eq.)在1.5mL乙酸乙酯中的溶液。过滤收集由此形成的固体物，干燥，得到3-苯基-3-(对甲苯基)草酸氮杂环丁烷(1.05g，收率83.54％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(20mL)的混合物中加入3-苯基-3-(对甲苯基)草酸氮杂环丁烷(385.35mg，1.23mmol，1.1eq.)和DIPEA(577.96mg，4.47mmol，778.93μL，4eq.)。混合物在100℃下搅拌过夜，浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到为白色固体的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(401mg，收率56.6％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(401mg，632.41μmol，1eq.)在甲醇(5mL)的溶液中加入氨甲醇(7M，2.71mL，30eq.)。混合物在室温下搅拌4小时。蒸发除去溶剂，残余物用乙酸乙酯(100mL)和水(70mL)稀释。分出有机层，并用盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩至干，得到(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(320mg，99.6％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(320mg，629.96μmol，1eq.)在丙酮(25mL)中的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(1.31g，12.60mmol，20eq.)和对甲苯磺酸(108.48mg，629.96μmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌过夜。浓缩除去溶解，残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用盐水洗涤，浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(345mg，99.9％)。
在0℃下，向[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(345mg，629.53μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(4mL)的溶液中加入双(二氯磷酰)甲烷(314.49mg，1.26mmol，2.0eq.)在4mL磷酸三甲酯中的溶液。混合物在0℃下搅拌5小时，随后加入水(5mL)。混合物在40℃搅拌40分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应混合物经由C-18硅胶柱分离纯化(0至25％CAN，在水中)，得到化合物d-34(259mg，60.0％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 2.23(s,3H),2.55(t,J＝20.8Hz,2H),4.23(s,1H),4.26-4.38(m,2H),4.41(t,J＝4.6Hz,1H),4.61(t,J＝4.6Hz,1H),4.81(s,2H),5.14(s,2H),5.97(d,J＝4.5Hz,1H),7.06(d,J＝7.9Hz,2H),7.14(dd,J＝18.7,7.2Hz,3H),7.19-7.31(m,4H),8.50(s,1H)；13CNMR(125MHz,CD3OD)δppm 21.04,26.50,27.55,28.60,65.09,65.92,66.99,71.29,75.75,84.71,89.87,118.13,127.37,127.45,127.70,129.67,130.26,137.54,141.28,144.11,147.29,151.67,155.08,155.75；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 17.11,19.54；m/z(ESI+):666.45(M+H).
实施例54.化合物d-35的合成
向在-78℃下冷却的溴苯(6g，38.21mmol，4.02mL，1eq.)在四氢呋喃(20mL)的溶液中滴加正丁基锂(2.5M，15.29mL，1eq.)。混合物在-78℃下搅拌10分钟，随后加入在THF(15mL)中的3-氧代氮杂丁烷-1-羧酸叔丁酯溶液(3.27g，19.11mmol，0.5eq)。混合物升温至室温，并在室温下搅拌过夜。0℃下，用水(25mL)淬灭反应。在将乙酸乙酯(50mL)加入至混合物后，分出有机层，有机层用盐水洗涤，并进行浓缩。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-70：30)，得到为浅棕色固体的产物3-羟基-3-苯基-氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.9g，40.9％)。
将三氯化铝(802.27mg，6.02mmol，3.0eq.)悬浮在苯(313.32mg，4.01mmol，358.49μL，2.0eq.)中，并冷却至0℃。在0℃下，向冷的悬浮液中加入在苯(6mL)中的3-羟基-3-苯基-氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯溶液(500mg，2.01mmol，1eq.)。混合物在0℃下搅拌反应2小时。通过加如冰水淬灭反应并搅拌0.5小时。向混合物中依次加入碳酸氢钠溶液和氨水直至混合物的pH为11。混合物用乙酸乙酯萃取，该萃取物用盐水洗涤，硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物溶解在微量乙酸乙酯中，随后加入在乙酸乙酯(8mL)中的草酸(180.56mg，2.01mmol，1eq.)。通过过滤收集由此形成的固体，干燥，得到草酸3,3-二苯氮杂环丁胺(500mg，83.3％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(25mL)的混合物中加入草酸3,3-二苯氮杂环丁胺(401.57mg，1.34mmol，1.2eq.)和DIPEA(577.96mg，4.47mmol，778.93μL，4.0eq.)。混合物在100℃下搅拌过夜，然后浓缩。残余物用乙酸乙酯(40mL)稀释，依次用水和盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂环丁烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(300mg，43.3％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂环丁烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(300mg，483.83μmol，1eq.)在甲醇(4mL)的溶液中加入氨甲醇(7M，2.07mL，30eq.)。混合物在室温条件下搅拌3小时。蒸发除去溶剂后，用乙酸乙酯(50mL)稀释残余物，随后依次用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，硫酸钠干燥，浓缩，得到为白色固体的(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂丁-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(230mg，96.2％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂丁-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(230mg，465.64μmol，1eq.)在丙酮(25mL)中的溶液加入2,2-二甲氧基丙烷(727.43mg，6.98mmol，15eq.)和甲苯磺酸(80.18mg，465.64μmol，1eq.)。混合物在室温下搅拌2小时。在通过蒸发去除溶剂后，残余物用乙酸乙酯(30mL)稀释，依次用碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EtOAc＝100：0-50：50)，得到为白色固体的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂环丁烷-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(220mg，88.5％)
0℃下，向[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂环丁烷-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(220mg，411.98μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(4mL)的溶液中加入在磷酸三甲酯(2mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(205.81mg，823.96μmol，2.0eq.)。混合物在0℃下搅拌4小时，随后加入水(5mL)。混合物在40℃下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应混合物用反相C-18硅胶柱分离纯化(0至25％CAN，在水中)，得到化合物d-35(150.4mg，54.9％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 2.50(t,J＝20.9Hz,2H),4.24(s,1H),4.30(d,J＝6.1Hz,1H),4.33-4.38(m,1H),4.42(t,J＝3.9Hz,1H),4.62(t,J＝4.1Hz,1H),4.89(s,2H),5.22(s,2H),5.89-6.03(m,1H),7.23(dt,J＝8.1,4.0Hz,2H),7.34(dd,J＝8.7,5.3Hz,8H),8.41(s,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm26.47,27.53,28.58,65.97,71.39,75.66,84.63,89.78,119.17,127.47,127.84,129.77,141.49,147.26,152.00,155.54,155.60；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.79,19.80；m/z(ESI+):652.3(M+H).
实施例55.化合物d-36的合成
封管中加入3,4-二苯基呋喃-2,5-二酮(4.5g，17.98mmol，1eq.)，苄胺(3.85g，35.96mmol，2eq.)，苯酚(3.38g，35.96mmol，2eq.)，DIPEA(18.95g，143.86mmol，25.06mL，8eq.)和4A分子筛(500mg)。反应液100℃下搅拌6小时，然后冷却至室温。用4％HCl溶液将混合物的pH调整至5。然后pH调整后的混合物用乙酸乙酯萃取(2x 50mL)。提取为用盐水洗涤，并进行浓缩。残余物经硅胶柱纯化分离(洗脱：PE/EA＝100：0-90：10)。含产物的级分蒸发至干，并将残余物用PE/EA＝50:1(40mL)溶液打浆过夜，通过过滤收集所形成的固体材料，用少量溶剂(PE/EA＝50:1)洗涤，干燥，得产物1-苄基-3,4-二苯基-吡咯-2,5-二酮(5.85g，17.24mmol，收率95.86％)。
向1-苄基-3,4-二苯基-吡咯-2,5-二酮(3.15g，9.28mmol，1eq.)在甲醇(60mL)的溶液中加入PtO2(300mg，928.15μmol，0.1eq.)。在H2气氛、室温下搅拌混合物过夜。通过过滤除去不溶物，并用MeOH洗涤。滤液和洗液合并并进行浓缩，得到1-苄基-3,4-二苯基-吡咯烷-2,5-二酮(3.0g，8.79mmol,收率94.68％)。
将AlCl3(781.13mg，5.86mmol，4eq.)加入至在0℃下冷却的LiAlH4(333.48mg，8.79mmol，6eq.)和THF(15mL)的混合物中。在0℃下搅拌混合物30分钟，然后加入在THF(4mL)中的1-苄基-3,4-二苯基-吡咯烷-2,5-二酮溶液(500mg，1.46mmol，1.0eq.)。混合物在室温下搅拌一周末。用水(1mL)淬灭反应，然后加入NaOH水溶液(15％，4mL)和EA(20mL)。混合物用MgSO4干燥。通过过滤除去不溶物，浓缩滤液，得到1-苄基-3,4-二苯基-吡咯烷(490mg)。
向1-苄基-3,4-二苯基吡咯烷(490mg，1.56mmol，1eq.)在甲醇(15mL)的溶液中加入HCOONH4(147.87mg，2.34mmol，1.5eq.)和Pd(OH)2(44mg，312.00μmol，0.2eq.)。在H2气氛、60℃下搅拌混合物过夜。通过过滤除去不溶物，并用MeOH洗涤。滤液和洗液合并并浓缩至干，得到3,4-二苯基吡咯烷(350mg粗品)，其直接用于下一步。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(400.54mg，895.61μmol，1eq.)和1,4-二氧六环(20mL)的混合物中加入3,4-二苯基吡咯烷(350mg，1.57mmol，1.75eq.)和DIPEA(405.12mg，3.13mmol，545.98μL，3.5eq.)。100℃搅拌混合物4小时。通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(40mL)稀释，用水和盐水依次洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0 -70：30)，得白色固体形式的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-2-(乙酰氧基甲基)-5-[2-氯-6-(-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]-乙酸甲酯(490mg，772.78μmol，收率86.29％)。
将NH3-MeOH(7M，3.31mL，30eq.)加入至[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-2-(乙酰氧基甲基)-5-[2-氯-6-(-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]-乙酸甲酯(490mg，772.78μmol，1eq.)和甲醇(6mL)的混合物中。室温条件下搅拌混合物过夜。通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(40mL)稀释，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并进行浓缩，得到为白色固体形式的(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(364mg，716.58μmol，收率92.73％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(364mg，716.58μmol，1eq.)在丙酮(30mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(1.49g，14.33mmol，20eq.)和p-TsOH□H2O(137.58mg，716.58μmol，1eq)。室温搅拌混合物2小时。通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(40mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用NaHCO3水溶液(2x 20mL)和盐水(30mL)依次洗涤，然后浓缩至干。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-60：40)，得到白色固体形式的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(280mg，510.92μmol，收率71.30％)。
向在0℃下冷却的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(280mg，635.12μmol，1eq.)在PO(OEt)3(4mL)的溶液中加入在PO(OEt)3(4mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(255.24mg，1.02mmol，2.0eq)。0℃条件下搅拌混合物5小时。LC-MS监测反应进行很少。向混合物中补加在PO(OEt)3(2mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(127.62mg，0.51mmol，1.0eq)。0℃条件下继续搅拌混合物3小时并且直接用于下一步。
在0℃条件下，向上述混合物中加入水(7mL)，先在40℃下搅拌混合物40分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应混合物通过C-18反相柱纯化(洗脱，在水中0至30％ACN)，得到化合物d-36(75.0mg，112.62μmol，收率22.10％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 2.49(t,J＝20.9Hz,2H),3.77(m,3H),4.15(s,1H),4.23–4.38(m,4H),4.45(s,2H),4.65(s,1H),6.05(s,1H),7.22(m,2H),7.26–7.37(m,8H),8.40(s,1H)；31P NMR(203MHz,MeOD)δppm 14.57,18.66；13C NMR(126MHz,MeOD)δppm 27.99,48.88,50.88,55.32,56.96,65.01,70.68,74.09,83.76,119.08,127.38,127.45,128.26,129.01,139.55,139.64,139.71,151.71,153.02,153.53；m/z(ESI+):666.34(M+H).
实施例56.化合物d-38的合成
向3-苯基-1H-吲哚(200mg，1.03mmol，1eq.)在三氟乙酸(2mL)的溶液中加入三乙基硅烷(240.69mg，2.07mmol，330.62μL，2.0eq.)。混合物在50℃下搅拌反应过夜。通过加入Na2CO3水溶液将混合物的pH调节至9，然后加入乙酸乙酯(25mL)。分出有机层，用Na2SO4干燥过滤，并进行浓缩。残余物通过硅胶柱纯化分离(洗脱：PE/EtOAc＝100：0-80：20)以得3-苯基吲哚啉(110mg，54.4％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(229.04mg，512.14μmol，1eq.)和1,4-二氧六环(15mL)的混合物中加入3-苯基吲哚啉(100mg，512.14μmol，1eq.)和DIPEA(165.47mg，1.28mmol，223.01μL，2.5eq.)。混合物在100℃下搅拌4小时。冷却至室温后，用EtOAc(50mL)稀释混合物。分出有机层，用水和盐水依次洗涤，用Na2SO4干燥过滤，并进行浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-60：40)，得到为白色固体形式的[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基吲哚啉-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(150mg，收率48.3％)。
向[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基吲哚啉-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(150mg，247.51μmol，1eq.)在甲醇(3mL)的溶液中加入MeOH-NH3(7M，1.06mL，30eq.)。室温条件下搅拌混合物过夜。通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(40mL)稀释，用水和盐水依次洗涤。有机层用Na2SO4干燥，并进行浓缩，得到白色固体形式的(2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3-苯基吲哚啉-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(105mg，收率88.4％)。
向((2R,3R,4S,5R)-2-[2-氯-6-(3-苯基吲哚啉-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(105mg，218.79μmol，1eq.)在丙酮(15mL)的溶液中加入2,2-二甲氧基丙烷(227.86mg，2.19mmol，10eq.)和p-TsOH□H2O(37.68mg，218.79μmol，1eq.)。室温搅拌混合物2小时，然后用EtOAc(30mL)稀释。混合物用NaHCO3水溶液和盐水洗涤。分出有机层并进行浓缩。残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-60：40)，得到白色固体形式的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3-苯基吲哚啉-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(100mg，收率87.9％)。
向在0℃下冷却的[(3aR,4R,6R,6aR)-4-[2-氯-6-(3-苯基吲哚啉-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基]甲醇(130mg，250.01μmol，1eq.)在PO(OEt)3(4mL)的溶液中加入在PO(OEt)3(3mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(124.90mg，500.02μmol，2.0eq)。0℃条件下搅拌混合物5小时。在0℃下缓慢加入水(3mL)后，先在40℃下搅拌混合物40分钟，然后在室温下搅拌过夜。反应混合物通过反相C-18硅胶柱分离纯化(梯度洗脱，在水中0至30％ACN)，得到化合物d-38(89mg，54.1％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 2.27-2.59(m,2H),4.25(s,1H),4.30(dd,J＝21.5,15.0Hz,2H),4.43(dt,J＝9.6,4.7Hz,1H),4.56-4.70(m,3H),5.15(t,J＝10.7Hz,1H),6.03(d,J＝4.6Hz,1H),6.98(dt,J＝13.7,7.1Hz,2H),7.13-7.34(m,6H),8.36(s,1H),8.56(d,J＝8.2Hz,1H)；13C NMR(125MHz,CD3OD)δppm26.41,27.47,28.53,47.79,60.91,66.02,71.41,75.73,84.58,89.65,118.82,120.37,125.16,126.19,128.17,128.81,129.90,137.19,140.94,144.32,144.70,144.77,152.34,153.36,154.54；31P NMR(203MHz,CD3OD)δppm 16.79,19.87；m/z(ESI+):638.3(M+H).
实施例57.化合物d-39的合成
0℃下，将PhMgBr(1M，20.39mL，3eq.)加入至异吲哚啉-1,3-二酮(1g，6.80mmol，1eq.)在二氯甲烷(30mL)中的混合物中。混合物在0℃下搅拌4小时。然后用水(30mL)淬灭反应。过滤混合物。分出有机层，该有机层用盐水洗涤(30mL)，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发至干。残余物通过硅胶柱纯化分离(二氯甲烷：甲醇＝100：0-95：5)，得到固体形式的产物3-羟基-3-苯基异吲哚啉-1-酮(1.3g5.77mmol，收率84.92％)。
-40℃下，将三氟化硼乙醚溶液(3mL)和三乙基硅烷(1.52g，13.05mmol，2.08mL，3eq.)加入至3-羟基-3-苯基异吲哚啉-1-酮(980mg，4.35mmol，1eq.)和二氯甲烷(15mL)的混合物中，室温搅拌该混合物16小时。TLC表明起始原料被消耗。然后用水(20mL)、和NH4Cl(20mL)淬灭反应，再加入DCM(30mL)，形成固体，该固体通过过滤除去。用DCM(25mL*2)萃取滤液。有机层用盐水洗涤，然后浓缩。将其与固体合并，得到3-苯基异吲哚啉-1-酮(900mg，4.30mmol，收率98.86％)，为白色固体。
向3-苯基异吲哚啉-1-酮(700mg，3.35mmol，1eq.)在THF(10mL)的溶液中加入BH3-THF(1M，30.11mL，9eq.)。在70℃下搅拌该混合物过夜。用甲醇(3mL)淬灭反应，并浓缩混合物。残余物通过硅胶柱纯化(洗脱：PE/EA＝100：0-90：10)，得到产物1-苯基异吲哚啉(185mg，947.46μmol，收率28.32％)。
向1-苯基异吲哚啉(185mg，947.46μmol，1.2eq.)和1,4-二氧六环(15mL)的混合物中加入[(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(353.11mg，789.55μmol，1eq.)和DIPEA(255.10mg，1.97mmol，343.80μL，2.5eq.)。在100℃下搅拌混合物4小时，并在室温下搅拌过夜。通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(50mL)稀释，用水和盐水依次洗涤。浓缩有机层，残余物用硅胶柱分离纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到为绿色固体形式的(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(1-苯基异吲哚啉-2-基)嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(360mg，收率75.24％)。
向(2R,3R,4R,5R)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(1-苯基异吲哚啉-2-基)嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(420mg，693.04μmol，1eq.)和甲醇(4mL)的混合物中加入NH3-MeOH(7M，2.97mL，30eq.)。室温下搅拌混合物过夜。通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(40mL)稀释，用盐水(40mL)洗涤，用Na2SO4干燥。浓缩有机层至干，得到(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚啉-2-基)嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(332mg，691.79μmol，收率99.82％)。
向(2R,3R,4S,5R)-2-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚啉-2-基)嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(332mg，691.79μmol，1eq.)在丙酮(20mL)的溶液中加入p-TsOH□H2O(131.58mg，691.79μmol，1.0eq.)和2,2-二甲氧基丙烷(1.44g，13.84mmol，1.70mL，20eq.)。室温搅拌混合物2小时。然后在0℃通过缓慢加入NaHCO3水溶液来调节pH直至混合物的pH为9。通过蒸发除去溶剂，残余物用EtOAc(50mL)稀释，并且用NH4Cl水溶液和盐水依次洗涤混合物。浓缩有机层，残余物用硅胶柱纯化(洗脱，PE/EA＝100：0-50：50)，得到为紫色固体形式的((3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚啉-2-基)嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(197mg，378.86μmol，收率54.77％)。
向在0℃下冷却的((3aR,4R,6R,6aR)-4-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚啉-2-基)嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二恶茂-6-基)甲醇(197mg，378.86μmol，1eq.)在PO(OEt)3(2mL)的溶液中加入在PO(OEt)3(2mL)中的双(二氯磷酰)甲烷(208.19mg，833.50μmol，2.2eq)。0℃条件下搅拌混合物5小时，然后在0℃下缓慢加入水(3mL)。先在40℃下搅拌混合物40分钟，然后在20℃搅拌过夜。反应混合物通过C-18反相柱纯化(梯度洗脱，在水中0至30％ACN)，得到化合物d-39(14mg，21.66μmol,收率11.51％，98.69％纯度)。1H NMR(500MHz,MeOD)δppm 2.55(t,J＝20.6Hz,2H),4.20–4.51(m,4H),7.37–7.12(m,8H),4.62(t,J＝30.4Hz,1H),5.27(d,J＝16.8Hz,1H),5.63(t,J＝16.7Hz,1H),6.00(d,J＝23.5Hz,1H),6.50(s,1H),7.12–7.37(m,8H),8.32(dd,J＝138.5,15.4Hz,1H)；m/z(ESI+):638.0(M+H).
化合物a
化合物a是文献中已经报道的具有以下结构的化合物(称为AB680)：
该化合物根据国际申请公开号WO2019173682中描述的过程来制备。
化合物b
化合物b是文献中已经报道的具有以下结构的化合物：
化合物b使用中国专利申请公开号CN110885352中描述的过程来制备。
实施例58.选定化合物的CD73酶抑制测定
使用Malachite Green磷酸盐检测试剂盒(R&D，Cat#DY996)来评价所选化合物对CD73的抑制效果。简而言之，用不含磷酸盐的缓冲液(Tris-HCl，pH 7.3)将化合物溶解并稀释至所需浓度。将25μL的化合物溶液加入至等体积的CD73蛋白溶液(2×浓度，0.5μg/mL，Novoprotein，Cat#C446)中，随后在室温下孵育5分钟。向每个孔加入10μL的MalachiteGreen试剂A，充分混合并且在室温下孵育10分钟。然后，向每个孔加入10μL的MalachiteGreen试剂B，充分混合并且在室温下孵育20分钟。最后，利用酶标仪在620nm下确定每孔的光学密度。
表2中给出了所选化合物的抑制活性。此外，化合物，诸如a-1、a-9和a-31在测定中显示出抑制活性。
表2.CD73酶测定中化合物抑制活性
1“+”表示IC50>100nM；“++”表示IC50为10～100nM；“+++”表示IC50<10nM。
实施例59.选定化合物的药代动力学评估
将测试化合物(1.0mg/kg)经由静脉注射施用至禁食的ICR雄性小鼠，在施用后的0.08h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h和24h的时间点收集血液样品。通过离心(8000rpm)来分离血浆样品，并且将其储存在-80℃直至用于分析。通过HPLC-MS/MS来确定血浆中测试化合物的浓度：将血浆分配至含内标和甲醇或乙腈的适当的管中。使管剧烈震荡3分钟，以实现脱蛋白，随后以8000rmp离心5分钟。将上清液转移至自动采样瓶中，并且注射入色谱分析系统中，并在MS/MS监测其上量化。利用WinMonlin 6.3软件来计算药代动力学参数，包括AUC0-t，Cmax，tmax，t1/2，MRT，CL和Vd。表3总结了测试化合物的关键PK参数(AUC(0-t)：时间0至时间t曲线下面积；AUC(0-∞)：时间0至无限曲线下面积；t1/2：体半衰期；CL：清除率；C0：当药物分子进入循环并立即分布，血液中药物的浓度(即，时间0处)
表3.ICR小鼠体内测试化合物的PK参数。
实施例60.选定化合物的CD73酶抑制测定
测试化合物溶液配置：在DMSO中配制化合物浓度为10mM的储存液。用DMSO进行5倍梯度稀释储存液，制备一系列测试化合物的预设10个所需浓度溶液。
检测缓冲液(1x)：20mM Tris，25mM NaCl，1mM MgCl2，pH 7.5，0.005％Tween-20(新鲜配置，现配现用)。
向微孔板的每个测试孔中注入0.25μL化合物溶液或DMSO(空白对照)的等分试样。在检测缓冲液中稀释重组人5'-核苷酸酶(hCD73)至1nM，将25μL hCD73(1nM)溶液的等分试样加入孔板的相应孔中。将孔中的内容物充分混合，用密封膜覆盖该板，以1000rpm下离心30秒后，随后在室温孵育15分钟。底物AMP在分析缓冲液中稀释至60μM浓度。向每个反应孔中加入25μL的AMP溶液，充分混匀后，用密封膜覆盖该板，将孔板于离心机中以1000rmp离心30秒，然后在37℃下孵育20分钟。在SPARK酶标仪上读取波长635nm处的吸光度信号(终点)(参考PiColorLockTM Gold Phosphate Detection System(Abcam)测试试剂盒)。
将含有CD73酶、底物AMP和DMSO(无化合物)的反应孔用作阳性对照，将含有底物AMP和DMSO但不含CD73酶的反应孔用作阴性对照。基于并相对于包含在每个测定板中的高和低对照孔中的信号，计算每个浓度的化合物的抑制百分比(％)。高对照孔被认为是0％抑制，不含任何化合物而是含DMSO(终浓度＝0.5％)的低对照孔被认为是100％抑制。使用GraphPad Prism软件获得IC50值。计算的IC50值总结在表4中，化合物d-1和a的CD73抑制曲线分别显示在图3和图4中。
表4.CD73酶抑制测定中的IC50值。
化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM)
a 2.02 d-9 0.73 d-33 1.76
b 1.08 d-12 0.40 d-35 1.389
d-1 0.47 d-13 1.50 d-36 1.86
d-7 1.80 d-20 1.29 d-38 1.92
d-8 0.75 d-21 1.42
实施例61.选定化合物的CD73细胞测定
T细胞刺激测定的程序如下：第1天，包被平板：用无菌PBS将抗CD3稀释至1μg/mL；用50μL稀释的抗CD3包被96孔平底组织培养板(Corning#3599)，离心(1000rpm)1分钟；密封该板，并在4℃孵育该板过夜，用于抗体交联。
第2天，人T细胞接种：(a)用无菌PBS缓冲液(2×100μL)洗涤包被的板(来自第1天)；(b)重新悬浮T细胞并用生长培养基(X-VIVO 15+1％Pen/strep+1％谷氨酰胺)将细胞密度调节至0.5×106细胞/mL，并在96孔板中接种100μL/孔(50000细胞/孔)；(c)用生长培养基将CD28抗体稀释至8x工作浓度(8μg/mL)，得到1μg/mL的最终浓度，随后将CD28抗体(25μL)加入细胞板中；在37℃下在5％CO2下孵育平板60分钟；(d)将化合物(25L，用生长培养基稀释8x)加入细胞板，并在37℃下在5％CO2下孵育板60分钟；(e)向细胞板中加入AMP(25μL)和EHNA(25μL，用生长培养基稀释8x)；(f)在37℃下，在5％的CO2中孵育该板72小时。
第5天，收集细胞生长培养基并测试细胞增殖：(a)将细胞板离心(1000rpm)5分钟；(b)从96孔板的每个孔中收获150μL细胞培养基，然后通过ELISA测试测量IFN-r的表达；(c)取一部分细胞培养上清液用于细胞因子分析，除去剩余的上清液，然后加入新鲜生长培养基(X-VIVO 15+1％Pen/strep+1％谷氨酰胺，100μL)；(d)将Celltiter-Glo溶液(50μL)加入每个孔中，用于测量细胞增殖；(e)在振荡器上室温孵育该板10分钟；(f)将100μL溶液转移到96孔白色板中，并使用TECAN读数器读取Celltiter-Glo数据。所选测试化合物的示例性数据在表5中给出(*CTG：CellTiter-Glo，发光细胞活力测定；#IFN-γ:干扰素γ，T细胞活性的指标)。
表5.在CD73细胞测定中测试化合物的功效
本文引用的所有文献和该文献所引用的内容通过引用整体并入本文。
尽管参照本发明的实施例详细描述了本发明，但提供这些实施例是为了说明而不是限制本发明。根据本发明原理能够得到的其它实施例均属于本发明权利要求所界定的精神和范畴中。

Claims (38)

1.一种式I'的化合物，或其药学上可接受的酯或盐
其中：
W为氧；X'为-P(＝O)(OR’)-，其中，R’为氢；Y为-PO3R’2，其中，R’为氢；
R1'为羟基(-OH)；R2'为氯(-Cl)；以及
R3'和R4’与它们所连接的氮原子一起形成单环、双环、三环、螺环或稠环体系，其中环体系是取代或未取代的。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物为式I的化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中：
R1和R2独立地选自氢、未取代或取代的芳基、未取代或取代的杂芳基、未取代或取代的4-8元环状基团，以及未取代或取代的4-8元杂环基团；或者，
R1和R2与它们所连接的碳原子一起形成4-8元的碳环或杂环，其中环部分是单环、与芳环稠合的环，或者具有酮官能团的环；
m和n独立地选自0至4的整数，条件是m和n之和等于或大于2；当m>1时，每个R3相同或不同，当n>1时，每个R4相同或不同；并且每个R3和每个R4各自独立地选自氢、卤素、未取代或取代的芳基、未取代或取代的杂芳基，以及4-8元碳环或杂环；或者，
当m为2、3或4时，相邻的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环，并且R4和如果存在的剩余的R3独立地选自氢或卤素；或者
当n为2、3或4时，相邻的两个R4与它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环，并且R3和如果存在的剩余的R4独立地选自氢或卤素。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中，所述化合物为式II所示化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中：
p和q独立地选自0至3的整数，条件是p和q不同时为0，并且当p或q为0时，不存在碳以及其所连接的R基团；
r、s和t独立地选自0至2的整数；
R5和R6独立地选自H、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、取代或未取代的芳基，以及取代或未取代的芳基烷基；或者，
R5和R6与它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环；
R7、R8、R9和R10独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者R8和R9与它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的碳环，或者未取代或取代的芳环；或者R7与其所连接的碳一起形成羰基。
4.根据权利要求2所述的化合物，其中，所述化合物为式III所示化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中，
R5选自氢、C1至C6的烷基、未取代或取代的C4至C7的环烃基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；
p和q独立地选自0至3的整数，条件是p和q不同时为0，并且当p或q为0时，不存在碳和与其连接的R基团；以及
R7、R8、R9和R10独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烃基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基；或者，R8和R9与它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的碳环，或者未取代或取代的芳环；或者R7与其所连接的碳一起形成羰基。
5.根据权利要求2所述的化合物，其中，所述化合物为式IV所示化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中，
X选自氢、卤素、氨基、羟基，和C1至C6的烷基；
p和q独立地选自0至3的整数，条件是p和q不同时为0，并且当p或q为0时，不存在碳和与其连接的R基团；
r选自1至2的整数；以及
R7、R8、R9和R10独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者，R8和R9与它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的碳环，或者未取代或取代的芳环；或者R7与其所连接的碳一起形成羰基。
6.根据权利要求2所述的化合物，其中，所述化合物未式V所示化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中，
r和s独立地选自0至2的整数，条件是r和s不同时为0；
p和q独立地选自0至3的整数，条件是p和q不同时为0，并且当p或q为0时，不存在碳和与其连接的R基团；
R5和R6独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者，
R5和R6以及它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环；
R7和R10独立地选自H、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基烷基；或者R7与其所连接的碳一起形成羰基；以及
X选自氢、卤素、氨基、羟基和C1至C6的烷基。
7.根据权利要求2所述的化合物，其中，所述化合物为式VI所示化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中，
r和s独立地选自0至2的整数，条件是r和s不同时为0；
R5和R6独立地选自氢、C1至C6的烷基、取代或未取代的C4至C7的环烷基、未取代或取代的芳基，以及未取代或取代的芳基烷基；或者，
R5和R6以及它们所连接的碳原子一起形成未取代或取代的芳环；
R11和R12独立地选自氢、未取代或取代的芳基、未取代或取代的杂芳基，以及未取代或取代的4-8元环的碳环或杂环；或者
R11和R12与其所连接的碳一起形成未取代或取代的4-8元杂环。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中，所述化合物选为：
或其药学上可接受的盐或酯。
9.一种药物组合物，所述药物组合物包括权利要求1至8中任一项所述的化合物或者其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的载体。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述药学上可接受的载体包括乳膏、乳剂、凝胶、脂质体或纳米颗粒。
11.根据权利要求9或10所述的药物组合物，其中，所述组合物适用于口服施用。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物为硬壳明胶胶囊、软壳明胶胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂、粉剂、颗粒剂、弹丸剂、香锭剂或糖衣丸的形式。
13.根据权利要求9至11中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物为溶液、水性液体悬浮液、非水性液体悬浮液、水包油液体乳液、油包水液体乳液、酏剂或糖浆的形式。
14.根据权利要求9至11中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物具有肠溶包衣。
15.根据权利要求9至14中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物配制用于控制释放。
16.根据权利要求9或10所述的药物组合物，其中，所述组合物是可注射的。
17.根据权利要求9至16中任一项所述的药物组合物，还包括至少一种另外的治疗剂。
18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中，所述至少一种另外的治疗剂是化学治疗剂、免疫和/或炎症调节剂、抗高胆固醇血症剂、抗感染剂或免疫关卡抑制剂。
19.一种在有需要的受试者中治疗或预防与CD73相关的疾病、失调或病症的方法，所述方法包括：向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1至8中任一项所述的化合物或权利要求9至18中任一项所述的药物组合物，使得所述受试者中的与CD73相关的疾病、失调或病症得到治疗或预防。
20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述与CD73相关的疾病、失调或病症为癌症。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述癌症选自由前列腺、结肠、直肠、胰腺、宫颈、胃、子宫内膜、脑、肝、膀胱、卵巢、睾丸、头、颈、皮肤、间皮膜、白细胞、食道、乳腺、肌肉、结缔组织、肺、肾上腺、甲状腺、肾或骨的癌症组成的组。
22.根据权利要求20所述的方法，其中，所述癌症选自由成胶质细胞瘤、间皮瘤、肾细胞癌、胃癌、肉瘤、绒毛膜癌、皮肤基底细胞癌或睾丸精原细胞瘤组成的组。
23.根据权利要求20所述的方法，其中，所述癌症选自由黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、白血病、脑瘤、淋巴瘤、卵巢癌和卡波西肉瘤组成的组。
24.根据权利要求19所述的方法，其中，所述与CD73相关的疾病、失调或病症选自以下项组成的组的免疫相关的疾病、失调或病症：类风湿性关节炎、肾衰竭、狼疮、哮喘、牛皮癣、结肠炎、胰腺炎、过敏症、纤维化、贫血纤维肌痛、阿尔茨海默氏病、充血性心力衰竭、中风、主动脉瓣狭窄、动脉硬化、骨质疏松症、帕金森病、感染、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、过敏性接触性皮炎、湿疹、系统性硬化症和多发性硬化症。
25.根据权利要求19至24中任一项所述的方法，进一步包括：向所述受试者施用至少一种另外的治疗剂。
26.根据权利要求25所述的方法，其中，所述至少一种另外的治疗剂和所述化合物或组合物同时或依次施用。
27.根据权利要求25或26所述的方法，其中，所述至少一种另外的治疗剂是化学治疗剂、免疫和/或炎症调节剂、抗高胆固醇血症剂、抗感染剂或免疫关卡抑制剂。
28.根据权利要求25或26所述的方法，其中，所述至少一种另外的治疗剂是免疫关卡抑制剂。
29.一种试剂盒，所述试剂盒包括根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或酯或立体异构体，以及至少一种另外的治疗剂。
30.根据权利要求29所述的试剂盒，其中，所述至少一种另外的治疗剂为化学治疗剂、免疫和/或炎症调节剂、抗高胆固醇血症剂、抗感染剂或免疫关卡抑制剂。
31.根据权利要求29或30所述的试剂盒，进一步包含缓冲剂或赋形剂和/或其使用说明。
32.一种在受试者中治疗受试者癌症的方法，包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至8中任一项的化合物或权利要求9至18中任一项的药物组合物以及免疫关卡抑制剂，使得所述受试者中的癌症得到治疗。
33.根据权利要求32所述的方法，其中，所述施用在放射治疗之前、同时或之后进行。
34.根据权利要求32或33所述的方法，其中，所述化合物和所述免疫关卡抑制剂组合施用。
35.根据权利要求32或33所述的方法，其中，所述化合物和所述免疫关卡抑制剂依次施用。
36.根据权利要求35所述的方法，其中，所述化合物在所述免疫关卡抑制剂之后施用。
37.根据权利要求35所述的方法，其中，所述化合物在所述免疫关卡抑制剂之前施用。
38.根据权利要求30所述的试剂盒或根据权利要求32至37中任一项所述的方法，其中所述免疫关卡抑制剂选自由伊匹单抗、纳武单抗和派姆单抗组成的组。
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