CN116515998A - 一种用于肝癌诊断的生物标志物的组合物及其应用 - Google Patents
一种用于肝癌诊断的生物标志物的组合物及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116515998A CN116515998A CN202210082259.XA CN202210082259A CN116515998A CN 116515998 A CN116515998 A CN 116515998A CN 202210082259 A CN202210082259 A CN 202210082259A CN 116515998 A CN116515998 A CN 116515998A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mir
- genes
- composition
- col15a1
- liver cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 31
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 31
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 108091089992 miR-9-1 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 108091060187 miR-9-5 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 108091071572 miR-9-2 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 108091076838 miR-9-3 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 108091038446 miR-9-4 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 108091058972 miR-9-6 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 108091084642 miR-9-7 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 102100022640 Collagen alpha-1(XV) chain Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 101000899935 Homo sapiens Collagen alpha-1(XV) chain Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 101000738575 Homo sapiens G1/S-specific cyclin-E2 Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 101000831940 Homo sapiens Stathmin Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 15
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 claims description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 108091026815 Competing endogenous RNA (CeRNA) Proteins 0.000 abstract description 39
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 abstract description 37
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 abstract description 37
- 102100024237 Stathmin Human genes 0.000 abstract description 34
- 102100037854 G1/S-specific cyclin-E2 Human genes 0.000 abstract description 33
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 56
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 27
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 27
- 108091046869 Telomeric non-coding RNA Proteins 0.000 description 21
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 20
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 15
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 12
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 11
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 11
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 102100037858 G1/S-specific cyclin-E1 Human genes 0.000 description 8
- 101100534511 Gekko japonicus STMN1 gene Proteins 0.000 description 8
- 101000738568 Homo sapiens G1/S-specific cyclin-E1 Proteins 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 5
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 4
- 238000010824 Kaplan-Meier survival analysis Methods 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 238000003491 array Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- -1 miRNA Proteins 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 2
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- NOIIUHRQUVNIDD-UHFFFAOYSA-N 3-[[oxo(pyridin-4-yl)methyl]hydrazo]-N-(phenylmethyl)propanamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1CNC(=O)CCNNC(=O)C1=CC=NC=C1 NOIIUHRQUVNIDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102100032920 Chromobox protein homolog 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100039551 Collagen triple helix repeat-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010014513 Embolism arterial Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061203 Hepatobiliary neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100038970 Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Human genes 0.000 description 1
- 101000797586 Homo sapiens Chromobox protein homolog 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000746121 Homo sapiens Collagen triple helix repeat-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000882127 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 240000004322 Lens culinaris Species 0.000 description 1
- 235000010666 Lens esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 108091030146 MiRBase Proteins 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108091036407 Polyadenylation Proteins 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 108091008109 Pseudogenes Proteins 0.000 description 1
- 102000057361 Pseudogenes Human genes 0.000 description 1
- 238000012339 Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 241000242678 Schistosoma Species 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108020004417 Untranslated RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000039634 Untranslated RNA Human genes 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 108010063628 acarboxyprothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000003766 bioinformatics method Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 108700041286 delta Proteins 0.000 description 1
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000010864 dual luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000556 factor analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000011223 gene expression profiling Methods 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010227 hepatobiliary benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010832 independent-sample T-test Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108091023796 miR-182 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091084881 miR-182-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091078636 miR-182-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000003068 pathway analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000007674 radiofrequency ablation Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000002603 single-photon emission computed tomography Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种含有生物标记物的组合物，所述生物标志物包括FOXD2‑AS1、miR‑9‑5p和STMN1基因，优选的，所述生物标志物还进一步包括COL15A1和CCNE2基因。本发明研究发现，所述生物标志物在肝细胞癌中差异性表达，且FOXD2‑AS1与miR‑9‑5p之间、miR‑9‑5p与STMN1之间具有靶向结合关系，三者构成ceRNA组合，该组合进一步联合COL15A1、CCNE2作为生物学标志物对肝癌患者的诊断价值更高，因此可作为肝癌诊断的生物标志物组合物。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于肝癌诊断的生物标志物的组合物及其用途。
背景技术
肝细胞癌(HCC)起源于肝脏实质细胞的癌变，是全球癌症发病及死亡的主要原因之一。根据2018年全球癌症数据报道得知每年约有84.1万人被确诊为肝癌，而有78.2万人死于该疾病。目前已知病毒感染(包括HBV、HCV)、饮食(包括大量饮酒、吃霉变食物)、不良生活方式(如肥胖、吸烟)、以及其他疾病(如2型糖尿病、血吸虫感染)等是引起肝癌的主要危险因素。尽管乙肝疫苗纳入国家免疫计划，但仅限于年轻人HBV感染率及其所致肝癌发病率大幅度降低，年长者所面临的形势依然很严峻。所以探究早期诊断标志物对于肝癌疾病的预防和控制很关键。
癌症转录组的特征是蛋白编码和非编码转录本的异常表达和相互调控关系。竞争性内源RNA(competing endogenous RNAs,ceRNA)网络是通过将蛋白编码与非编码RNA二者的功能结合起来构成的。近年来，越来越多的学者聚焦于探索ceRNA在癌症的功能作用。微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)、假基因、病毒转录本等均可以在人体中发挥ceRNA功能，参与生理与病理状态下ceRNA大网络调控机制。其中miRNA属于ncRNA的一类，是由22-25个核苷酸组成，主要作用于靶基因的表达。而miRNA表达格局的改变会受到基因座突变、表观遗传甲基化、转录因子调控或成熟miRNA加工过程失调等影响。lncRNA长度大于200bp，包含3′多聚(a)尾巴、5′帽子以及启动子，虽不能编码蛋白质，但其在有机体的正常发育及肿瘤发生过程中仍起着关键作用。circRNA在结构上呈共价闭环结构的单链，是由线性RNA的5′端和3′端直接连接而成的ceRNAs，主要存在于细胞质，也不能够编码蛋白，相比线性RNA稳定性更好。这些非编码RNA构成人体内ceRNA网络池，在人体发育和疾病的进程中实现相互通信和共同调节。例如lncRNA UCA1作为miR-182-5p海绵，正向调节Delta-like ligand 4(DLL4)的表达，促进肾癌细胞恶性表型。
癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)计划和GEO(Gene ExpressionOmnibus)等数据库作为生物信息学分析中不可或缺的公共数据库，研究者能够从中下载肿瘤相关的数据进行分析，来挖掘某些基因在特定肿瘤中的表达趋势，为进一步探索肿瘤发病机制奠定基础，极大地促进了对癌症生物学研究。
目前，血清AFP、肝脏超声，影像学检查包括CT、MRI、PET、SPECT等在肝癌诊断中各有优势，确诊方式依然为病理活检。新的诊断标志物有血清甲胎蛋白异质体(lensculinaris agglutinin-reactive fraction of AFP,AFP-L3)和异常凝血酶原(protein induced by vitamin Kabsence/antagonist-Ⅱ,PIVKAⅡ)等，但临床实用性差。肝癌的治疗主要包括手术切除、肝动脉栓塞、射频消融和放化疗等，但是由于难以早期明确诊断，治疗效果不尽人意，肝癌患者的预后依然很差。因此，探索肝癌有价值的分子标志物及治疗靶点，对于HCC的攻克至关重要。
发明内容
本发明提供如下技术方案：
一种含有生物标记物的组合物，所述生物标志物包括FOXD2-AS1、miR-9-5p和STMN1基因。
根据本发明的组合物，所述FOXD2-AS1是一种长非编码RNA(lncRNA)，miR-9-5p是一种小分子RNA(miRNA)，STMN1是一种信使RNA(mRNA)。
根据本发明的组合物，所述生物标志物还进一步包括COL15A1和CCNE2基因。
根据本发明的组合物，所述COL15A1和CCNE2均为一种信使RNA(mRNA)。
本发明还提供本发明上述的生物标志物的组合物用于肝细胞癌诊断和预后评估。
具体的，本发明含有生物标志物的组合物的应用方式如下所述：与对照组相比，来自于待诊断或待评估的样本的上述生物标志物的浓度发生变化，由此可诊断样本的来源是否患有肝癌。
因此，本发明还提供一种用于肝癌诊断的组合物，所述组合物包含生物标志物的检测试剂，所述生物标志物包括FOXD2-AS1、miR-9-5p和STMN1基因。优选的，进一步包括COL15A1和CCNE2基因。
根据本发明的组合物，所述检测试剂为，基于核酸水平能够定量分析出所述生物标志物的试剂。
根据本发明的组合物，所述核酸水平的检测试验为用于核酸扩增反应，聚合酶链反应，实时荧光定量聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应的试剂。
所述核酸水平的检测试剂包含所述生物标志物的核酸序列，用于特异性的识别所述核酸序列的引物。
本领域技术人员可以理解，在确定生物标志物后，所上述各种检测生物标志物的试剂和方法是本领域技术人员公知或者根据技术手段可以确定地。
本发明还提供上述组合物的用途，其用于肝癌诊断剂或诊断试剂盒的制备。
本发明所述的生物标志物是指在肝癌个体和正常个体之间的受差异调节的基因。所述的诊断是指，判定检查对象对特定疾病(例如肝癌)的感受性，是否患有该疾病，以及治疗时的状态监测。所述的预后评估包括判断在被诊断为肝癌并接受治疗之后的恢复状态。本发明所述的样本是患者的肿瘤实体组织穿刺标本。
有益效果
本发明研究发现，lncRNA FOXD2-AS1、miRNA miR-9-5p和mRNA STMN1、COL15A1、CCNE2基因在肝癌组织中的相对表达量比癌旁组织普遍要高，表明这5个基因在肝癌组织中呈上调表达。本发明还发现FOXD2-AS1与miR-9-5p之间具有靶向调控关系。miR-9-5p与STMN1之间具有靶向调控关系，而miR-9-5p与COL15A1、CCNE2之间无靶向调控关系，但是COL15A1在分化程度(p＝0.036)、病灶大小(p＝0.028)及TNM分期(p＝0.005)组间均呈现差异表达，CCNE2在TNM分期中差异表达(p＝0.005)，因此其作为分子标志物的潜力更大。本发明实验研究表明，ceRNA组合联合COL15A1、CCNE2对于HCC的联合诊断效能均比单个基因分别对HCC的诊断效能要高，能够成为HCC诊断的生物标志物。
附图说明
附图1：COX回归模型的构建及其诊断价值分析：A.十倍交叉验证图，B.16个基因的Lasso回归系数分布，C.多变量COX回归模型对应的森林图，D.ROC曲线评估诊断风险评分模型的有效性，E.HCC患者的Kaplan-Meier风险生存曲线；
附图2：ceRNA阵列的Kaplan-Meier生存分析和鉴定：A-H.HCC患者8个基因的Kaplan-Meier生存曲线，I.hsa-miR-9-5p靶向基因的韦恩图，J.筛选的ceRNA阵列；
附图3：lncRNA与mRNA PCR产物电泳图(M：DNA marker，1:β-actin，2：FOXD2-AS1，3：STMN1，4：COL15A1，5：CCNE2)；
附图4：测序峰图：A.β-actin测序代表片段，B.FOXD2-AS1测序代表片段，C.STMN1测序代表片段，D.COL15A1测序代表片段，E.CCNE2测序代表片段；
附图5：4个基因与1个内参基因的扩增曲线与标准曲线：A.β-actin，B.FOXD2-AS1，C.STMN1，D.COL15A1，E.CCNE2；
附图6：qRT-PCR结果：A.FOXD2-AS1的扩增与熔解曲线；B.has-miR-9-5p的扩增与熔解曲线；C.STMN1的扩增与熔解曲线；D.COL15A1的扩增与熔解曲线；E.CCNE2的扩增与熔解曲线；
附图7：lncRNA、miRNA和mRNA在癌与癌旁表达的散点图：A.FOXD2-AS1，B.has-miR-9-5p，C.STMN1，D.COL15A1，E.CCNE2；
附图8：结合位点示意图及双荧光素酶检测柱状图：A.has-miR-9-5p与FOXD2-AS1之间双荧光素酶报告实验结果；B.has-miR-9-5p与STMN1之间双荧光素酶报告实验结果；C.has-miR-9-5p与COL15A1之间双荧光素酶报告实验结果；D.has-miR-9-5p与CCNE2之间双荧光素酶报告实验结果。
附图9：ROC曲线：A.FOXD2-AS1,B.has-miR-9-5p,C.STMN1,D.COL15A1,E.CCNE2,F.ceRNA组合(FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1),G.ceRNA网络(FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1/COL15A1/CCNE2)
具体实施方式
下文将结合具体实施例对本发明的生物标志组合物和应用做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
实施例1 FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1/COL15A1/CCNE2标志物的筛选
1.1数据的下载及处理
从TCGA(https://portal.gdc.cancer.gov/)数据库总共下载377例HCC样本和50例对照组样本，排除临床资料不全，基因表达谱缺失、非原发性肝细胞患者以及伴有其他肝胆肿瘤或其他组织脏器肿瘤者，最终将366例HCC样本纳入后续分析，其中有239例患者到随访截止日期处于生存状态，138例患者已死亡。
TCGA数据库下载的肝细胞癌lncRNA,miRNA和mRNA转录本文件，使用R4.0.2软件中的DESeq2包，对下载的所有基因进行差异表达分析((false discovery rate,FDR)<0.05,|log(fold change)|＞1)，得到差异表达的lncRNA、miRNA、mRNA。分别从数据库miRcode[10]和starBase[11]中查找DElncRNAs-DEmiRNAs、DEmiRNAs-DEmRNAs相互作用关系对(超几何分布检验p＜0.05，相关性检验p＜0.05)。再用Cytoscape3.7.2软件构建ceRNA网络。在DAVID数据库中对ceRNA网络中的mRNA进行GO注释分析和KEGG通路分析以阐释mRNA在ceRNA网络中的作用，p＜0.01具有统计学意义。对ceRNA网络进行单因素COX回归、lasso回归分析以防止发生过度拟合。在此基础上进行多因素COX回归分析，构建风险评分模型，并采用Kaplan-Meier生存曲线和ROC曲线评估该模型的诊断价值。对ceRNA网络中每个基因进行批量Kaplan-Meier生存分析以评估每个基因的风险性。将关键miRNA在starBase数据库匹配的DEmRNA与TargetScan、miRDB、PicTar 3个数据库匹配的靶基因进行取交集。
1.2 ceRNA阵列的筛选
以单因素COX回归、lasso回归分析筛选出9个基因(图1A,B)，进一步多因素COX回归分析后，发现CCNE1、EZH2、CTHRC1、CBX2、COL15A1、miR-9-5p 6个基因用于构建风险评分模型最佳(图1C)。生存曲线表明高风险患者的生存时间明显降低(图1E)。ROC曲线对应1、3、5年生存期的曲线下面积(Area under curve,AUC)分别为0.77、0.73、0.764，表明该模型对HCC患者生存预测准确性较高(图1D)。
对网络中的所有基因批量进行Kaplan-Meier生存分析，筛选出1个miRNA miR-9-5p和1个lncRNA FOXD2-AS1与HCC预后相关(图2A,B)。为使与miR-9-5p靶向的mRNA更准确，对预测的StarBase(7个靶基因)、TargetScan(1292个靶基因)、miRDB(1236个靶基因)和PicTar(642个靶基因)取交集，显示COL15A1、CCNE2、STMN1在4个数据库均与miR-9-5p具有靶向结合关系(图2I)。对ceRNA相关基因构建ceRNA网络图(图2J)。综上，从TCGA数据库中确立FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1/COL15A1/CCNE2轴为HCC诊断及预后相关的ceRNA阵列。
1.3 ceRNA阵列与HCC临床特征的关系
采用卡方检验分别分析了FOXD2-AS1、miR-9-5p、STMN1、COL15A1、CCNE2的表达量与TCGA数据库下载的临床资料中的年龄、性别、Grade分级、TNM分期、Stage分期的关系。结果表明miR-9-5p与TNM-T分期(p＝0.040)、Stage分期(p＝0.024)，STMN1与Grade分级(p＝0.001)，COL15A1与TNM-T分期(p＝0.000)、Stage分期(p＝0.003)，CCNE2与年龄(p＝0.009)、Grade分级(p＝0.000)组间具有差异，且均以p＜0.05作为有统计价值，而各个基因与其他临床信息不具备相关性(p＞0.05)，具体结果详见下表：
表1.FOXD2-AS1、Has-miR-9-5p、STMN1、COL15A1、CCNE2与肝癌患者临床特征的关系
表2
1.4结论
本发明基于TCGA数据库在HCC中构建了ceRNA网络，最终发现1个lncRNA(FOXD2-AS1)，1个miRNA(miR-9-5P)，3个mRNA(STMN1、COL15A1、CCNE2)有成为HCC诊断及预后标志物的潜能。这种基于ceRNA分布的网络基因为研究对象，不仅缩小了目标ncRNA的范围，而且为评估HCC的预后提供了特定的候选分子生物标志物，这将有助于扩大我们对参与HCC早期开发的ceRNA机制的了解。但这5个基因在HCC临床组织中的表达趋势及相互之间的调控关系尚需进一步验证。
实施例2 5个关键基因在肝癌组织中的诊断价值
2.1实验对象组织芯片：
HCC lncRNA、miRNA和mRNA组织cDNA芯片阵列，均购于上海芯超生物科技有限公司。芯片批号为：cDNA-HLivH30PG02和cDNA-HLivH087Su02。两组组织芯片中共包含癌症样本96例(实验组)，癌旁样本51例(对照组)。
2.2实验试剂与仪器
表3.实验试剂
表4.实验仪器
2.3 ceRNA网络中关键基因的引物纯度
从blast软件中设计FOXD2-AS1、STMN1、COL15A1、CCNE2共4个基因及β-actin内参基因的引物，以此对HCC组织中提取的cDNA分别进行普通PCR扩增，将这4个基因及1个内参基因的PCR产物进行水平核酸电泳，以120V等压进行电泳，以RNase-free ddH2O作为阴性对照。同时将这4个基因与1个内参基因的PCR产物送上海生工Sangon Biotech公司进行测序，将测序结果与从blast软件中设计的引物序列进行比对。比对一致者才能用于实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测。采用加尾法对miRNA进行逆转录，引物为通用，故不需要验证miR-9-5p的引物特异性。
结论：得到β-actin(132bp)、FOXD2-AS1(234bp)、STMN1(109bp)、COL15A1(124bp)、CCNE2(159bp)的电泳目的条带，如图3所示。结果表明用上述基因扩增出来的产物所对应的电泳条带单一且清晰，说明验证的引物纯度较高，可用于后续qRT-PCR实验。
对普通PCR扩增产物进行测序，对测序结果与从blast软件中设计的每个基因对应的引物序列进行比对后，发现β-actin、FOXD2-AS1、STMN1、COL15A1、CCNE2对应引物的比对结果均为一致，说明引物扩增特异性较高，可用于后续实验。图4为上述4个关键基因与β-actin的测序结果。
表5. 4个关键基因及1个内参的PCR引物
表6.普通PCR反应体系
表7.普通PCR反应程序
2.4关键基因引物扩增效率检测
将普通PCR扩增产物进行1万倍稀释后作为qRT-PCR的原液，以此进行10倍浓度梯度稀释后再作为qRT-PCR的cDNA，对FOXD2-AS1、STMN1、COL15A1、CCNE2及β-actin基因的qRT-PCR反应结果进行标准曲线绘制，分析其对应引物的扩增效率(qRT-PCR按PerfectStartTM Green qPCR SuperMix试剂盒说明书进行操作)。
结论：如图5所示，扩增曲线均呈S型，β-actin、FOXD2-AS、STMN1、COL15A1、CCNE2的标准曲线所对应的E值依次为123.5％、122.9％、95.7％、123.7％、96.0％，R2值依次为0.868、0.957、0.994、0.937、0.991，结果表明E值均在100.0％附近，R2值均接近1.000，提示扩增效率较好。
2.5 qRT-PCR检测
严格按照PerfectStartTM Green qPCR SuperMix试剂盒说明书在HCC组织cDNA芯片中对FOXD2-AS1、STMN1、COL15A1、CCNE2进行qRT-PCR操作，以β-actin作为内参进行均一化处理。按照miRcute Plus miRNA qPCR Detection Kit(SYBR Green)说明书对miR-9-5p进行qRT-PCR操作，以U6作为内参进行均一化处理。均以RNase-free ddH2O作为阴性对照，在qRT-PCR仪上设置为无模板参照(NTC)。
Real time PCR结果显示，FOXD2-AS1、miR-9-5p、STMN1、COL15A1、CCNE2基因的扩增曲线呈S型，且阴性对照孔未扩增，溶解曲线的Tm值均呈单峰，见图6。因此扩增曲线与阈值线交点所得到的Ct值可用于后续统计分析。
对5个关键基因在癌症组与癌旁组进行qRT-PCR所得到的Ct值采用2-△△Ct算法来计算两组间的相对表达水平。FOXD2-AS1在癌症组与癌旁组Ct值分别为27.65±1.92和29.55±1.78，STMN1在癌症组与癌旁组Ct值分别为26.93±1.91和29.96±1.18，COL15A1在癌症组与癌旁组Ct值分别为26.01±2.19和29.99±1.45，CCNE2在癌症组与癌旁组Ct值分别为26.61±2.15和29.85±1.68，lncRNA和mRNA以β-actin作为内参实现均一化；miR-9-5p在癌症组与癌旁组Ct值分别为23.25±1.84和24.19±1.30，miRNA以U6作为内参实现均一化，且NTC未扩增或所有Ct值均远远小于NTC的Ct值，表明目的基因的Ct值可以用于分析。采用独立样本t检验对基因在两组间的表达差异性进行比较，发现FOXD2-AS1(p＝0.016)、miR-9-5p(p＝0.042)、STMN1(p＝0.000)、COL15A1(p＝0.000)、CCNE2(p＝0.000)在96例癌症组与51例癌旁组中表达量均有差异，且对应p值均小于0.05，有统计学意义，两组间相对表达量比较的具体结果见下表。
表8.ceRNA网络中关键基因在HCC组织中的相对表达量
通过绘制癌症组与癌旁组相对表达量的的散点图(图7)，以便于更直观的展示各个基因在两组间表达水平的差异程度，发现STMN1、COL15A1、CCNE2在肝癌组的表达量均明显要高于癌旁组，FOXD2-AS1、miR-9-5p在肝癌组的表达量稍高于癌旁组，但统计仍具有差异性。
对FOXD2-AS1、miR-9-5p、STMN1、COL15A1、CCNE2在HCC组织中的表达量与HCC患者的性别、年龄、分化程度、病灶大小以及TNM分期进行单因素方差分析，来比较基因在不同临床特征中表达量是否具有组间差异。如下表所示，结果发现FOXD2-AS1在不同分化程度中差异表达(p＝0.021)，在另外4组临床特征中组间表达无差异；COL15A1在分化程度(p＝0.036)、病灶大小(p＝0.028)及TNM分期(p＝0.005)组间均呈现差异表达；CCNE2在TNM分期中差异表达(p＝0.005)，与其他临床因素无相关。而miR-9-5p和STMN1的表达与临床特征之间无相关性。
表9.HCC组织中5个关键基因的相对表达量和临床病理参数的关系
双荧光素酶报告实验检测ceRNA靶向关系
利用miRBase、TargetScan、miRanda、PicTar和MicroT在线数据库对作用于miR-9-5p种子区域的FOXD2-AS1及STMN1、COL15A1、CCNE2的microRNA反应元件(microRNAresponse element,MRE)的结合序列片段进行预测。将1个lncRNA和3个靶基因的3′-UTR以及3′-UTR与miR-9-5p结合位点突变体分别克隆在pMiR Report载体的Luciferase片段的下游，再对构建好的载体进行测序，用以确认目的序列已经克隆到载体上的目的位置。然后将载体与化学合成的miR-9-5p片段(以NC minics作为对照组)共转染到293T细胞中，由此把细胞分为4个组，即NC minics+lncRNA/靶基因-wt组、miR-9-5p+lncRNA/靶基因-wt组、NCminics+lncRNA/靶基因-mu组、miR-9-5p+lncRNA/靶基因-mu组。按双荧光素酶报告基因检测试剂盒操作说明书完成实验。FOXD2-AS1与miR-9-5p的结合位点具有2个，因此将这两处结合位点的碱基片段进行串联构建FOXD2-AS1基因3′-UTR以及3′-UTR突变体，再克隆到pMiR Report载体中，以进行分析。
双荧光素酶报告基因结果(图8)显示FOXD2-AS1与miR-9-5p之间、miR-9-5p与STMN1之间具有靶向结合关系，而miR-9-5p与COL15A1之间，miR-9-5p与CCNE2之间无结合关系。故在HCC组织中既能差异表达，相互之间又具有靶向调节关系的ceRNA组合为FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1。COL15A1和CCNE2参与以miR-9-5p为核心的ceRNA网络，但无直接靶向关系。
分析HCC组织中ceRNA组合诊断效能
最终根据上一步实验结果来确定与HCC患者生存及预后相关且相互之间具有靶向调控关系的ceRNA组合。基于基因在HCC组织中的相对表达量，对上述所有筛选的关键基因分别绘制ROC曲线，观察每个基因在HCC组织中的诊断准确度。采用二元logistic回归分别计算ceRNA组合(FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1)及ceRNA网络(FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1/COL15A1/CCNE2)的联合预测因子，并分别绘制ROC曲线，根据AUC值评估单个基因与ceRNA组合以及ceRNA网络联合的诊断效能的差异。
通过绘制ROC曲线来探讨FOXD2-AS1、miR-9-5p、STMN1、COL15A1、CCNE2作为可能的生物标志物在HCC诊断及预后中的价值，并分别对ceRNA组合(FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1)及ceRNA网络(FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1/COL15A1/CCNE2)的诊断能力进行了分析。如图9所示，FOXD2-AS1对应ROC曲线的曲线下面积(AUC值)为0.687(95％CI：0.589-0.785，p＝0.002)，miR-9-5p的AUC值为0.633(95％CI：0.527-0.739，p＝0.025)，STMN1的AUC值为0.741(95％CI：0.642-0.839，p＝0.000)，COL15A1的AUC值为0.824(95％CI：0.744-0.903，p＝0.000)，CCNE2的AUC值为0.835(95％CI：0.744-0.926，p＝0.000)以上分析均具有统计学意义。采用二元Logistic回归分析分别求出ceRNA组合及其联合两个基因的联合预测因子，并用于绘制ROC曲线，其AUC值分别为0.818(95％CI：0.732-0.905，p＝0.000)、0.926(95％CI：0.867-0.985，p＝0.000)。以上分析表明ceRNA组合(FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1)的ROC曲线的AUC值比各组成部分要大，其诊断效能也要高；ceRNA组合联合两个基因的ROC曲线的AUC值也比每个基因单独对应的AUC值要大，其诊断效能也要更高。
应用约登指数计算FOXD2-AS1、miR-9-5p、STMN1、COL15A1、CCNE2、c ceRNA组合(FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1)及ceRNA网络(FOXD2-AS1/miR-9-5p/STMN1/COL15A1/CCNE2)的ROC曲线所对应的灵敏度和特异度。如下表所示，FOXD2-AS1、miR-9-5p、STMN1、COL15A1、CCNE2、ceRNA组合及其联合两个基因的cutoff值依次为10.237、9.616、9.442、8.931、9.336、0.751、0.768，对应敏感度依次为62.1％、62.0％、65.5％、65.5％、75.9％、70.1％、84.4％，特异度依次为66.2％、64.7％、70.5％、83.1％、83.1％、79.3％、93.1％。综合以上结果来看，将ceRNA组合联合COL15A1、CCNE2作为生物学标志物对HCC患者的诊断价值更高，HCC患者被确诊的可能性就更大。
表10.ceRNA阵列在肝癌组织中的诊断价值分析
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种含有生物标记物的组合物，所述生物标志物包括FOXD2-AS1、miR-9-5p和STMN1基因。
2.根据权利要求1的组合物，所述生物标志物还进一步包括COL15A1和CCNE2基因。
3.一种用于肝癌诊断的组合物，所述组合物包含生物标志物的检测试剂，所述生物标志物包括FOXD2-AS1、miR-9-5p和STMN1基因。优选的，进一步包括COL15A1和CCNE2基因。
4.根据权利要求3所述的组合物，所述检测试剂为，基于核酸水平能够定量分析出所述生物标志物的试剂。
5.根据权利要求4所述的组合物，所述核酸水平的检测试验为用于核酸扩增反应，聚合酶链反应，逆转录聚合酶链反应，荧光定量聚合酶链反应的试剂。
6.根据权利要求4所述的组合物，所述核酸水平的检测试剂包含所述生物标志物的核酸序列，用于特异性的识别所述核酸序列片段的引物。
7.权利要求1-2任一项所述的组合物在制备肝癌诊断剂或肝癌诊断试剂盒中的应用。
8.权利要求3-6任一项所述的组合物在制备肝癌诊断剂或肝癌诊断试剂盒中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210082259.XA CN116515998A (zh) | 2022-01-24 | 2022-01-24 | 一种用于肝癌诊断的生物标志物的组合物及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210082259.XA CN116515998A (zh) | 2022-01-24 | 2022-01-24 | 一种用于肝癌诊断的生物标志物的组合物及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116515998A true CN116515998A (zh) | 2023-08-01 |
Family
ID=87406905
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210082259.XA Pending CN116515998A (zh) | 2022-01-24 | 2022-01-24 | 一种用于肝癌诊断的生物标志物的组合物及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116515998A (zh) |
-
2022
- 2022-01-24 CN CN202210082259.XA patent/CN116515998A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2017261442B2 (en) | Detection of chromosome interaction relevant to breast cancer | |
| US20230366034A1 (en) | Compositions and methods for diagnosing lung cancers using gene expression profiles | |
| JP2018524972A (ja) | 肺癌の診断または検出のための方法及び組成物 | |
| CN108949992B (zh) | 一种与食管鳞癌及其分级相关的生物标志物 | |
| CN111826444A (zh) | 一种与胰腺癌相关的血清/血浆tsRNA标志物、探针及其应用 | |
| CN111187840B (zh) | 一种用于早期乳腺癌诊断的生物标志物 | |
| CN110229899B (zh) | 用于结直肠癌早期诊断或预后预测的血浆标记物组合 | |
| CN114592065A (zh) | 一组预测肝癌预后联合标志物及其应用 | |
| US20220084632A1 (en) | Clinical classfiers and genomic classifiers and uses thereof | |
| CN111424085B (zh) | tRNA来源片段在制备乳腺癌诊断试剂中的应用 | |
| TWI829042B (zh) | 泛癌症早篩預測方法 | |
| CN110699457A (zh) | 检测肺癌的引物组和试剂盒 | |
| CN110241211A (zh) | 诊断结直肠癌的分子组合标志物及检测试剂盒 | |
| CN106755330B (zh) | 癌症相关基因表达差异检测试剂盒及其应用 | |
| WO2023105295A2 (zh) | 肾癌诊断用尿液miRNA标志物、诊断试剂及试剂盒 | |
| CN115820860A (zh) | 基于增强子甲基化差异的非小细胞肺癌标志物筛选方法及其标志物和应用 | |
| CN116515998A (zh) | 一种用于肝癌诊断的生物标志物的组合物及其应用 | |
| WO2019245587A1 (en) | Methods and compositions for the analysis of cancer biomarkers | |
| EP3936614A1 (en) | Kit, device, and method for detecting uterine leiomyosarcoma | |
| CN109609649B (zh) | 一种用于直肠腺癌诊疗的lncRNA | |
| EP3835434A1 (en) | Kit, device and method for detecting prostate cancer | |
| SG185254A1 (en) | 3.4 kb mitochondrial dna deletion for use in the detection of cancer | |
| CN112813168B (zh) | 一种与口腔鳞癌相关的生物标志物 | |
| CN113774123B (zh) | 预测HIV感染者免疫应答水平的microRNA分子标志物组合及其用途 | |
| CN113862369A (zh) | 与肺腺癌对含铂双药化疗敏感性相关的标志物及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |