CN116514799A - 一种Wee1抑制剂及其组合物和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种Wee1抑制剂及其组合物和用途，其中，Wee1抑制剂包括式A所示的Wee1抑制剂、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其药学上可接受的盐。本发明提供的化合物对Wee1具有强抑制活性，可以用于治疗和/或预防多种Wee1相关肿瘤。

Description

一种Wee1抑制剂及其组合物和用途
技术领域
本发明涉及Wee1抑制剂领域，具体而言，涉及一种Wee1抑制剂及其组合物和用途。
背景技术
细胞周期由一系列依赖于细胞周期蛋白调控的序贯的、复杂的细胞进程组成。在细胞周期的不同时期，细胞周期蛋白与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependentkinases,CDKs)相互作用，驱动着细胞周期的运转。除了激酶之外，其对应的磷酸酶也参与了细胞周期。在细胞周期进程中，激酶和磷酸酶通过交替调节对应靶点，以确保该进程顺利结束并动态地响应相关细胞事件。细胞周期的主要事件发生在DNA复制的S期和最终导致细胞分裂成两个子细胞的M期。这两个时期之间通过“间隙”时期(分别为G1和G2)来连接，在此期间，细胞可通过修改其转录活性来准备合成后续事件所需的分子。这种有序的进展中，细胞周期检查点(Checkpoint)协助使得DNA能够正确复制、染色体能够正确分配。细胞周期检查点是一种负反馈调节，一般认为这些检查点是细胞周期进程中很有利的质量控制措施。当细胞受到辐射或药物伤害、DNA损伤或DNA复制受阻时，细胞周期检查点的激活能够延迟细胞周期向下一阶段的进程，为DNA损伤修复提供必要的时间以应对细胞内外的应激。作为细胞周期监测系统的一部分，DNA损伤和纺锤体检查点保护细胞不受基因组不稳定性的影响。
肿瘤的发生是由于基因突变继而引发细胞复制紊乱所引起的。而基因突变是DNA复制或损伤修复失误的结果。由于细胞稳态的存在，大多数稳定获得的体细胞突变是无害的；然而，小部分的基因突变却可以赋予细胞选择性优势，从而使得突变细胞优先生长或存活。DNA损伤反应通路可修复受损序列或诱导不可修复的受损细胞发生凋亡或衰老。然而，DNA损伤反应机制的缺陷也可以为癌症治疗提供机会，因对DNA损伤反应的抑制可以破坏肿瘤细胞的DNA复制应激反应。尽管这会造成未修复的DNA损伤不断积累并维持在较高水平，但这也进一步增强了细胞的复制压力并促进细胞周期进展，从而引发有丝分裂灾难和细胞凋亡。最近，越来越多针对关键DNA损伤反应节点的候选药物已成为开发管线。
酪氨酸激酶Wee1是DNA损伤反应通路上的关键激酶，在细胞周期进程和基因组稳定中发挥着重要作用。它能抑制CDK1的激活从而抑制细胞进入有丝分裂期，被称为“Wee”家族。Wee1表达及功能的变化促使细胞周期停滞于G2期而发生凋亡，或直接越过G2-M期，使得损伤的DNA没有时间完成修复，细胞却继续分裂成子细胞，它们携带有不正确的DNA信息最终发生死亡或癌变。Wee家族包括几种蛋白激酶：Wee1、Wee2和Myt1，它们通过抑制CDC25正向调控的CDK1-Cyclin复合物而发挥细胞周期负调控作用。这两个系统的平衡控制着有丝分裂进入的时间。Wee1激酶对CDK1的抑制通过控制复制起始和核苷酸消耗来保护基因组的完整性。
由于各种肿瘤抑制基因的突变，正常细胞癌变后，多数的癌细胞有细胞周期G1检查点的缺陷，这是其中就包括参与调控G1检查点的成网细胞瘤蛋白(RB)和肿瘤抑制蛋白P53。所有肿瘤细胞相关的分子的异常中，最常见的就是肿瘤抑制蛋白P53的缺失，在所有噁性肿瘤细胞中约占50％。一般来说，细胞周期阻滞在DNA损伤3周后开始进入G1、S以及G2期。正常细胞往往依赖于G1检查点进行DNA损伤修复。肿瘤细胞中突变的P53主要负责控制G1检查点阻滞，因此，DNA损伤时P53缺失的肿瘤细胞G1检查点缺失而广泛依赖于G2检查点。对于那些G1检查点被P53突变所导致G1检查点直接通过的肿瘤，DNA修复系统可能只依赖于G2检查点。研究发现Wee1激酶在多种噁性肿瘤特别是在P53突变型的肿瘤中表达上调，如乳腺癌、结肠癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、卵巢癌、骨肉瘤、精原细胞瘤和外阴癌。在黑色素瘤中，Wee1激酶的表达和其血管生成、肿瘤转移及预后相关。也有研究表明Wee1在一些其他类型的肿瘤中下调，在非小细胞肺癌中发现Wee1的表达水平与预后不良之间存在一定程度的负相关。尽管Wee1激酶在各种癌症类型中的作用仍然存在很多争议，但是学者们普遍认为Wee1表达异常增高时，通过Wee1激酶的抑制来控制肿瘤进展被认为是一种潜在的有效的肿瘤治疗策略。与大多数旨在细胞周期停滞的激酶抑制剂的治疗策略不同，Wee1抑制剂治疗肿瘤的机制是促进有丝分裂，并通过迫使细胞通过连续的复制周期，最终导致灾难性的有丝分裂而导致细胞凋亡。因此，抑制Wee1激酶是增强现有的传统的DNA损伤放化疗疗效的有效治疗手段。该方法可在维持临床疗效的同时减少细胞毒性化疗的剂量，从而提高安全性，提高传统放化疗治疗后预后仍较差肿瘤的的敏感性。
但在现有的通过抑制Wee1激酶发挥作用的药物中并未有获批准药物，领先进入临床2期的药物AZD1775因临床不良反应如胃肠道毒性、血液毒性终止研究；现有化合物不能满足市场需求，需要提供新化合物。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种Wee1抑制剂及其组合物和用途，以解决现有技术中缺少通过抑制Wee1激酶发挥作用的药物的问题。
为了实现上述目的，根据本发明的第一个方面，提供了一种式A所示的Wee1抑制剂或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其药学上可接受的盐，
其中，R1选自H、氰基、环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基或稠合环；环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基或稠合环为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、羧基、氨基、氰基、硝基、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氨羰基、烷氧羰基、甲酰基、羟烷基、烷氧烷基、烯基、炔基、磺酰基、环烷基或环杂烷基；R2选自环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基或稠合环；环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基或稠合环为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、羧基、氨基、氰基、硝基、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氨羰基、烷氧羰基、甲酰基、羟烷基、烷氧烷基、烯基、炔基、磺酰基、氧代、环烷基、取代环烷基、环杂烷基、取代环杂烷基、芳基、取代芳基、杂芳基或取代杂芳基；取代环烷基、取代环杂烷基、取代芳基或取代杂芳基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氨基、氰基、卤素、烷氨基、烷氨羰基、烷氨烷基、烷氧羰基、烷氧烷基、羟烷基、烷基羰基或甲酰基；R3选自环烷基或环杂烷基；环烷基或环杂烷基为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、羧基、氨基、氰基、硝基、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氨羰基、烷氧羰基、甲酰基、羟烷基、烷氧烷基、烯基、炔基、磺酰基、氧代、环烷基、环杂烷基、芳基或杂芳基；(R4)n表示苯环上的氢被n个R4取代，n为0、1、2、3或4，每个R4相同或不同，各自独立地选自羟基、羧基、氨基、氰基、硝基、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氨羰基、烷氧羰基、甲酰基、羟烷基、烷氧烷基、烯基、炔基、磺酰基、环烷基、环杂烷基、芳基或杂芳基。
进一步地，R1选自H、氰基、C4-C6环杂烷基、C5-C10杂芳基或C5-C10稠合环；优选地，C4-C6环杂烷基、C5-C10杂芳基或C5-C10稠合环为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、烷氨烷基或氰基；优选地，C4-C6环杂烷基、C5-C10杂芳基或C5-C10稠合环为未取代或任选地被一个或多个C1-C3烷基取代；优选地，C4-C6环杂烷基、C5-C10杂芳基或C5-C10稠合环为未取代；优选地，C4-C6环杂烷基选自氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪或吗啉；优选地，C4-C6环杂烷基选自氧杂环丁烷；优选地，C5-C10杂芳基选自噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、吡唑、吡啶或三氮唑；优选地，C5-C10杂芳基选自噁唑、噻唑、咪唑或三氮唑；优选地，C5-C10稠合环选自苯并呋喃、苯并噻唑、呋喃并环烷基或噻吩并环烷基；R2选自C4-C6环杂烷基、苯、C5-C10杂芳基或C5-C14稠合环；优选地，C4-C6环杂烷基选自哌嗪、吗啉、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶；优选地，C4-C6环杂烷基选自哌嗪或吗啉；优选地，C5-C10杂芳基选自噻唑、吡啶、异噻唑、三氮唑、呋喃、吡咯、咪唑或吡唑；优选地，C5-C14稠合环选自苯并呋喃、噻唑并环己烷或呋喃并环己烷；优选地，C4-C6环杂烷基、苯、C5-C10杂芳基或C5-C14稠合环为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、羟基、羟烷基、磺酰基、氨基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氧羰基、氧代、环烷基、取代环烷基、环杂烷基、取代环杂烷基、杂芳基或取代杂芳基；优选地，取代环烷基、取代环杂烷基或取代杂芳基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C3烷氨基、C1-C3烷氨羰基、C1-C3烷氨C1-C3烷基、C1-C3烷氧羰基、C1-C3烷氧C1-C3烷基、羟C1-C3烷基、C1-C3烷基羰基或甲酰基；优选地，环杂烷基或取代环杂烷基中的环杂烷基选自氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶；杂芳基或取代杂芳基中的杂芳基选自咪唑或吡唑；R3选自哌啶基或哌嗪基；优选地，哌啶基或哌嗪基被H、C1-C3烷基或氨基取代；R4选自H、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基或烷氨基；优选地，n＝1；优选地，R4为H或C1-C3烷氧基；优选地，R4为H或甲氧基。
进一步地，Wee1抑制剂的结构如式B所示：
其中，X为CRaRb或NRa，其中，Ra为H或C1-C3烷基；优选地，Ra为H或甲基；优选地，Rb为H、氨基或C1-C3烷氨基；优选地，Rb为氨基；R4选自H或甲氧基；X1至X7各自独立地选自O、S、C、N、CRc、CRcCRc或NRc；Rc选自H、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代C1-C4烷基、卤素、卤代C1-C4烷氧基、羟基或羟C1-C4烷基；优选地，Rc为H或甲基；优选地，Rc为H；R5为H、环杂烷基、取代环杂烷基、C1-C4烷基、羟基、羟C1-C4烷基、C1-C4烷氧羰基、环烷基、取代环烷基、杂芳基、取代杂芳基、氨酰基、C1-C4烷氨C1-C4烷基；其中取代环烷基、取代环杂烷基或取代杂芳基任选地被选自一个或多个如下的取代基取代：卤素、羟基、C1-C4烷基羰基、氰基、氨基、甲酰基、C1-C4烷基氨基羰基、羟C1-C4烷基或C1-C4烷氧羰基；优选地，环杂烷基选自氮杂环丁烷、哌嗪或吡咯烷；杂芳基选自吡唑或咪唑。
进一步地，其中，X1为N；X2为O、S或NRc；X3为O、S、CRc、N、NRc；X4为N、O、CRc、S、CRcCRc；X5为CRc、O、S、N或NRc；X6为C或N；X7为CRc；优选地，X1为N；X2为O或S；X3为O、S；X4为N或CRc；X5为CRc；X6为C；X7为CRc；优选地，Rc为H或C1-C3烷基；优选地，Rc为H；优选地，R5为吡咯烷、C1-C4烷基、羟C1-C4烷基、C1-C4烷氧羰基、哌嗪、氮杂环丁烷、环烷基、咪唑、氨酰基或吡唑基；优选地，吡咯烷、环烷基、咪唑、哌嗪、氮杂环丁烷或吡唑被选自一个或多个如下的取代基取代：羟基、氰基、卤素、氨基、羟C1-C4烷基、C1-C4烷氧羰基或甲酰基。
进一步地，X为NCH3；X1为N；X2为O或S；X3为O或S；X4为N；X5为CRc；X6为C；X7为CRc；R5为吡咯烷；优选地，Rc为H；优选地，吡咯烷被一个或多个选自如下的取代基取代：羟基或卤素。
进一步地，Wee1抑制剂的结构如式C所示，
其中，X为CRaRb或NRa，其中，Ra为H或C1-C3烷基；优选地，Ra为H或甲基；优选地，Rb为H、氨基或烷氨基；优选地，Rb为氨基；R4选自H或甲氧基；X1为N；X2为O或S；X8为O或S；X9为CH或N；R6为H、氧代、羟基或氨基。
进一步地，Wee1抑制剂的结构如式D所示，
其中，X为CRaRb或NRa，其中，Ra为H或C1-C3烷基；优选地，Ra为H或甲基；优选地，Rb为H、氨基或烷氨基；优选地，Rb为氨基；R4选自H或甲氧基；X8为O或S；X9为CRd或N；Rd为H或C1-C3烷基；R1为H、噁唑、氰基、噻唑、甲基噻唑、咪唑、三氮唑、氧杂环丁烷；R7为H、羟C1-C4烷基、氨基、C1-C4烷基或C1-C4烷氨基。
进一步地，Wee1抑制剂的结构选自如下化合物：
/>
/>
/>
/>
为了实现上述目的，根据本发明的第二个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效剂量的上述Wee1抑制剂。
为了实现上述目的，根据本发明的第三个方面，提供了一种上述Wee1抑制剂、或药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的应用；优选地，肿瘤包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、宫颈癌或结肠癌。
本发明还提供一种制备上述药物组合物的方法，其包括将式A所示的Wee1抑制剂或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或赋形剂相混合。
本发明还提供一种预防和/或治疗肿瘤的方法，其包括向需要其的患者施用治疗有效剂量的式A所示的Wee1抑制剂或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其药学上可接受的盐，或包含其的药物组合物。
可将作为活性成分的式A所示的Wee1抑制剂或其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其药学上可接受的盐制成适合于通过任何适当途径给药的形式，其中，活性成分优选是以单位剂量的方式，或者是以患者可以以单剂自我给药的方式。本发明活性成分或组合物的单位剂量的表达方式可以是片剂、胶囊、颗粒剂、膏剂、锭剂、栓剂或液体制剂等。
本发明治疗方法中所用的化合物或组合物的剂量通常将随患者的体重、疾病的病症程度、化合物的相对功效而改变。本发明通用的化合物单位剂量为0.1-1000mg。
本发明的药物组合物除活性成分外，可含有一种或多种载体或赋形剂，所述载体或赋形剂选自以下成分：填充剂、崩解剂、粘合剂、润湿剂或润滑剂等。根据给药方法的不同，药物组合物可含有0.1-99重量％的活性成分。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、混悬液或糖浆剂等。可按照本领域任何已知方法制备口服组合物。其中，口服组合物中的片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂包括活性成分和用于混合的适宜制备上述口服组合物的可药用的赋形剂，这些赋形剂可以是填充剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂；口服组合物还可含有以下载体：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以改善口感提高稳定性。
混悬液含有活性物质和用于适宜制成混悬液的赋形剂。此类赋形剂包括混悬剂、分散剂和湿润剂。混悬液还可以包括防腐剂、着色剂或矫味剂等。
本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。赋形剂可包括水、甘油、氯化钠等溶剂、防腐剂、增溶剂等。
本发明的药物组合物可用于直肠给药的栓剂形式给予。栓剂所包括的赋形剂包括基质、增稠剂、抗氧化剂、硬化剂等。
发明的详细说明
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环，芳基的非限制性实施例包括：苯基等。
术语“杂芳基”是指包含1-4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族单环体系，其中杂原子选自O、S和N。杂芳基的非限制性实施例包括：咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基、哒嗪基、三唑基、异噁唑基或异噻唑基等。
术语“稠合环”是指包含5至14元环原子的稠合体系，稠合环的定义包含稠合芳基、稠合杂芳基，芳基或杂芳基并环烷基或环杂烷基，稠合环非限制性实施例包括：萘基，苯并呋喃，苯并噻唑、呋喃并环己烷或噻唑并环己烷等；C5-C10稠合环指包含5至10元环原子的稠合体系。
术语“环烷基”是指饱和或部分饱和的环状烃基，组成环烷基的碳原子数可为3-15个，环烷基的非限制性实施例包括：环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。
术语“环杂烷基”是指具有碳、氢及碳、氢之外的其他原子(如氧、氮、硫等)组成的非芳香性环状结构的基团，环杂烷基的非限制实施例包括：哌啶基或哌嗪基；C4-C6环杂烷基指由碳原子和上述其他原子(如氧、氮、硫等)组成的4到6元非芳香性环状结构的基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氰基”指-CN。
术语“氨基”是指-NH2。
术语“羟基”是指-OH。
术语“羧基”是指-COOH。
术语“硝基”是指-NO2。
术语“甲酰基”是指-CHO。
术语“氧代”是指＝O。
术语“烯基”是指含有碳碳双键的取代基，烯基的非限制实施例包括：-CH＝CH2、-CH2-CH＝CH2。
术语“炔基”是指含有碳碳三键的取代基，炔基的非限制实施例包括：-C≡CH、-CH2-C≡CH、-C≡C-CH3。
术语“烷基”是指直链或支链饱和烃基，烷基的非限制性实施例包括：甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基；C1-C3烷基指由1-3个C原子组成的烷基。
术语“羟烷基”被羟基取代的烷基，羟烷基的非限制实施例包括：羟甲基或羟乙基；羟C1-C3烷基指被羟基取代的、由1-3个C原子组成的烷基。
术语“卤代烷基”是指烷基结构中的一个或多个氢原子被卤素(如氯、溴、碘等)取代的基团，卤代烷基的非限制实施例包括：-CH2-Cl。
术语“卤代烷氧基”是指烷氧基结构中的一个或多个氢原子被卤素取代的基团，卤代烷氧基的非限制实施例包括：-O-CH2-Br。
术语“烷氧基”是指具有“W-O-”结构的基团，其中W为烷基，烷氧基的非限制性实施例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基或叔丁氧基等。
术语“烷氨基”是指具有“W-NH-”或“W2-N-”结构的基团，其中W为烷基，烷氨基的非限制实施例包括：-NH-CH3、-N-(CH3)2；C1-C3烷氨基中的W为由1-3个C原子组成的烷基。
术语“烷氨烷基”是指直链或支链烷氨基基团通过烷基(-C-)与结构相连，烷氨烷基的非限制实施例包括：-CH2-NH-CH3；C1-C3烷氨C1-C3烷基指-NH-两端的烷基各种独立选自1-3个C原子组成的烷基。
术语“烷氨羰基”是指直链或支链烷氨基基团通过羰基(-CO-)与结构相连，烷氨羰基的非限制实施例包括：乙氨羰基、1-甲基丙氨羰基；C1-C3烷氨羰基指烷氨羰基中的烷基由1-3个C原子组成。
术语“烷氧羰基”是指直链或支链烷氧基基团通过羰基(-CO-)与结构相连，烷氧羰基的非限制实施例包括：甲氧羰基、2-甲基丙氧羰基；C1-C3烷氧羰基指烷氧羰基中的烷基由1-3个C原子组成。
术语“烷氧烷基”是指直链或支链烷氧基基团通过烷基(-C-)与结构相连，烷氧烷基的非限制实施例包括：-CH2-O-CH3。
术语“氨酰基”是指具有-C(＝O)-NR2结构的基团，其中R为氢或取代基，氨酰基的非限制实施例包括：-C(＝O)-NH2、-C(＝O)-N-(CH3)2。
术语“磺酰基”是指具有-SO2-R结构的基团，其中R为氢或取代基，取代基包括但不限于烷基、烷氨基，芳基，杂芳基，稠合环。磺酰基的非限制实施例包括：-SO2H、甲基磺酰基、苯基磺酰基、二甲氨基磺酰基。
术语“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。
术语“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
术语“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
应用本发明的技术方案，上述Wee1抑制剂，或上述制备方法制备获得的Wee1抑制剂，具有较好的Wee1酶的抑制活性，较好的PLK1选择性(骨髓抑制风险可能较低)，较好的体内吸收，以及较低的hERG通道阻断风险，在细胞实验中对于典型的癌细胞系具有较好的细胞抑制活性，能够用于制备用于治疗或预防肿瘤的药物组合物，具有很好的应用前景和价值。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
生物学测试评价
1.化合物抑制Wee1酶活性测定
本发明中，采用ADP-GloTM Kinase Assay试剂盒(Promega-V9101)进行Wee1酶学催化试验。因反应产生的发光信号与产生的ADP浓度成正比，并与激酶活性相关，故通过量化对激酶催化反应产生的ADP量来测定激酶的活性。试验中阳性化合物浓度范围0.03nM-500nM,待测化合物浓度范围0.06nM-1000nM。
将化合物用100％ DMSO溶解并梯度稀释成中间浓度，再用配制的缓冲液(Hepesbuffer 50mM，MgCl2 10mM，EDTA 1mM，Brij-35(聚氧乙烯月桂醚)0.01％，DTT(二硫苏糖醇)2mM)进行稀释，使得DMSO的浓度为1％。
取1μL化合溶液，2μL Wee1激酶(终浓度2nM)和Poly-Lys,Tyr(聚(赖氨酸，酪氨酸))4:1底物(终浓度0.1mg/mL)混合液，2μL ATP(终浓度15μM)加入到5μL的反应体系中充分混合，在30℃孵育60分钟。酶促反应后加入等体积的ADP-GloTM试剂，在室温反应40分钟，此过程终止反应，并将剩余的ATP消耗掉。再加入两倍体积的激酶检测试剂，在室温下反应30分钟，此过程同时将ADP转化为ATP，并用荧光素酶/荧光素反应测量新合成的ATP。最后使用酶标仪测量发光信号(Relative light units,RLU)，与DMSO溶剂对照组相比，利用下述方法计算化合物对Wee1激酶活性的IC50。
本申请中选用AZD1775作为阳性对照。
用GraphPad Prism软件对数据进行分析，将未加Wee1激酶的RLU作为100％抑制对照(100％I)，将加Wee1激酶未加化合物的RLU作为0％抑制对照(0％ I)，不同浓度抑制百分比(％I)计算：
％I＝(0％抑制RLU-不同浓度RLU)/(0％抑制RLU-100％抑制RLU)
运用非线性回归分析绘制％I与对应不同浓度曲线，方程式为:
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)×HillSlope))，Y＝抑制百分比，Top＝最小抑制百分比，Bottom＝最大抑制百分比，X＝化合物浓度，HillSlope＝斜率因子，IC50＝半数最大抑制百分比化合物浓度。
结果如表1所示。本发明化合物表现出优异的Wee1抑制活性，其中，A表示IC50≤10nM，B表示10nM<IC50≤100nM，C表示100nM<IC50≤1000nM，D表示IC50>1000nM。
表1化合物对Wee1活性抑制数据
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2.细胞学增殖检测
本试验使用的来源为ATCC，包括人非小细胞肺癌细胞系A427细胞、小细胞肺癌细胞NCIH446、卵巢癌细胞系OVCAR3细胞、宫颈癌细胞系C33A细胞和结肠癌细胞系WiDr细胞开展，用于评估Wee1抑制剂的细胞学活性。
将指数生长期的细胞计数、铺到384孔培养板中，在37℃、5％ CO2的条件下培养过夜。次日，使用梯度稀释的化合物处理细胞，待测化合物浓度范围1.5nM-10000nM，继续培养。待化合物处理72小时后，使用Cell Titer-Glo试剂(Promega,G7572)检测细胞活性。利用下述方法计算化合物对细胞的IC50。
用GraphPad Prism软件对数据进行分析，将20μM Staurosporine(十字孢碱，Selleck,AM-2282)处理的作为100％抑制对照，将DMSO处理作为0％抑制对照(0％ I)，不同浓度抑制百分比(％I)计算：
％I＝(0％抑制RLU-不同浓度RLU)/(0％抑制RLU-100％抑制RLU)
运用非线性回归分析绘制％I与对应不同浓度曲线，方程式为:
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)×HillSlope))，Y＝抑制百分比，Top＝最小抑制百分比，Bottom＝最大抑制百分比，X＝化合物浓度，HillSlope＝斜率因子，IC50＝半数最大抑制百分比化合物浓度。
本发明实施例化合物对不同细胞系均显示良好的抑制活性，其中A表示IC50≤100nM，B表示100nM<IC50≤500nM，C表示500nM＜IC50≤1000nM。对不同细胞系的抑制活性参见表2。
表2化合物对不同细胞系抑制活性
3.化合物抑制PLK1酶活性测定
本发明中，采用ADP-GloTM Kinase Assay试剂盒(Promega-V9101)进行PLK1酶学催化试验。因反应产生的发光信号与产生的ADP浓度成正比，并与激酶活性相关，故通过量化对激酶催化反应产生的ADP量来测定激酶的活性。试验中阳性化合物浓度范围0.03nM-500nM,待测化合物浓度范围0.06nM-1000nM。
将化合物用100％ DMSO溶解并梯度稀释成中间浓度，再用配制的缓冲液(50mMHEPES,10mM MgCl2,1mM EDTA,0.01％ Brij-35,1mM DTT)进行稀释，使得DMSO的浓度为1％。
取1μL化合溶液，2μL PLK1激酶(终浓度10nM)和Casein底物(终浓度0.2mg/mL)混合液，2μL ATP(终浓度36μM)加入到5μL的反应体系中充分混合，在25℃孵育60分钟。酶促反应后加入等体积的ADP-GloTM试剂，在室温反应40分钟，此过程终止反应，并将剩余的ATP消耗掉。再加入两倍体积的激酶检测试剂，在室温下反应30分钟，此过程同时将ADP转化为ATP，并用荧光素酶/荧光素反应测量新合成的ATP。最后使用酶标仪测量发光信号(Relative light units,RLU)，与DMSO溶剂对照组相比，计算化合物对PLK1激酶活性的IC50。利用下述方法计算化合物对PLK1激酶活性的IC50。并计算PLK1的IC50和Wee1的IC50的比值。
用GraphPad Prism软件对数据进行分析，将未加PLK1激酶的RLU作为100％抑制对照(100％I)，将加PLK1激酶未加化合物的RLU作为0％抑制对照(0％ I)，不同浓度抑制百分比(％I)计算：
％I＝(0％抑制RLU-不同浓度RLU)/(0％抑制RLU-100％抑制RLU)
运用非线性回归分析绘制％I与对应不同浓度曲线，方程式为:
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)×HillSlope))，Y＝抑制百分比，Top＝最小抑制百分比，Bottom＝最大抑制百分比，X＝化合物浓度，HillSlope＝斜率因子，IC50＝半数最大抑制百分比化合物浓度。
结果如表3所示。本发明化合物和AZD1775相比对PLK1具有较好的选择性。其中，A表示IC50≤10nM，B表示10nM<IC50≤100nM，C表示100nM<IC50≤1000nM，D表示IC50>1000nM。
表3化合物对Wee1、PLK1的酶抑制活性及活性比值
4.化合物对hERG钾离子通道的抑制作用
1)测试化合物溶液准备
测试化合物的最终浓度均在当天配制，再溶于细胞外液。细胞外溶液(以mM为单位)：NaCl：132、KCl：4、CaCl2：3、MgCl2：0.5、葡萄糖：11.1和HEPES(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸)：10(用NaOH调节pH至7.35)。
2)细胞培养
将hERG稳定表达的HEK 293细胞系(Cat#K1236，购自Invitrogen)在85％ DMEM培养基、10％透析型胎牛血清、0.1mM NEAA(MEM非必需氨基酸溶液，Non-Essential AminoAcids)、25mM HEPES、100U/mL青霉素-链霉素、5μg/mL杀稻瘟菌素和400μg/mL新霉素中培养。在测定之前，用1μg/mL的多西环素诱导48小时。
3)实验步骤
试验用稳定表达hERG通道的人胚肾细胞(HEK293-hERG)。以Multi Clamp 700B手动膜片钳系统钳制HEK293细胞形成全细胞电压钳模式，并以相应的电压诱发hERG电流。首先通过灌流系统给予细胞溶媒对照溶液，hERG电流稳定后灌流5个浓度供试品溶液(0.37、1.11、3.33、10和30μmol/L)和150nmol/L的阳性对照品多非利特溶液，记录hERG电流约5min至电流稳定，计算供试品不同浓度的抑制百分比，并用GraphPad Prism进行曲线拟合及IC50计算。
IC50值如表4所示。
表4化合物对hERG钾离子通道的抑制作用
化合物 IC50(μM)
多非利特 0.016
AZD1775 16.120
T70 >30
T71 >30
T74 23.094
从表4中可以看出，本发明提供的化合物和AZD1775相比具有较低的hERG钾离子通道阻断风险。
5.小鼠药代动力学测试
雄性ICR小鼠(体重20-30g)，经口灌胃给与10mg/kg化合物T71、AZD1775，每组3只动物。给药溶剂为20％ HP-β-CD(羟丙基-β-环糊精)的水溶液。于给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、24小时采血。置于EDTA-K2抗凝的EP管中冰浴。将血液样品在4℃下以4000g离心5分钟分离血浆。然后将样品立即储存在-75±15℃冷冻保存。使用液相色谱串联质谱方法(LC-MS/MS)对血浆中化合物浓度进行定量分析，WinNonlin(PhoenixTM,version 8.3)的非房室模型计算小鼠给药后的药代动力学参数。药代动力学参数如表5所示
表5小鼠口服(10mg/kg)药代动力学参数
从表5中可以看出，本发明提供的化合物T71，小鼠经口灌胃给药后，和AZD1775相比具有较好的暴露量。
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：上述Wee1抑制剂具有较好的Wee1酶的抑制效果，且此种抑制效果同样地在多种癌细胞细胞系增殖实验中得到证实，能够在较小的浓度下抑制癌细胞增殖，具有较好的活性和应用前景。且上述Wee1抑制剂对于PLK1酶活性和hERG钾离子通道的抑制能力较低，具有较好的安全性和成药能力。在小鼠的药代动力学实验中，经口服给药后在血液中具有较高的暴露量，说明此种Wee1抑制剂具有良好的成药能力和应用前景。
上述化合物的合成包括但不限于以下实施例所示。
实施例1：5-(2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基噻唑-2-基)氮杂环丁烷-3-醇(T01)的合成
步骤1：3-(叔丁基二甲基硅基)氧)氮杂环丁烷(化合物1-2)的合成
将化合物氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(化合物1-1，4.0g，36.50mmol)溶于四氢呋喃溶液中，在0℃温度下加入咪唑(7.4g，109.50mmol)并搅拌约10分钟左右。之后，在冰浴条件下分批加入TBSCl，之后将反应液温度升至室温并搅拌16小时。反应结束后用乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干得化合物3-(叔丁基二甲基硅基)氧)氮杂环丁烷(3.5g)，浅黄色油状物，产率为40.8％。LCMS(ESI,m/z)：188.1[M+H]-。
步骤2：5-溴-2-(3-(叔丁基二甲基硅氧基)氮杂环丁烷-1-基)噻唑(化合物1-4)的合成
将化合物2,5-二溴噻唑(化合物1-3，4.0g，16.50mmol)，化合物3-(叔丁基二甲基硅基)氧)氮杂环丁烷(6.2g，33.00mmol)溶于1,4-二氧六环溶液中。然后加入DIEA(4.3g，33.00mmol)，在80℃的温度下搅拌16小时。反应结束后用水淬灭，乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干得化合物5-溴-2-(3-(叔丁基二甲基硅氧基)氮杂环丁烷-1-基)噻唑(2.3g)，棕色固体，产率为32％。LCMS(ESI,m/z)：349.03[M+H]+。
步骤3：2-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧基)氮杂酮-1-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)噻唑(化合物1-5)的合成
将化合物5-溴-2-(3-(叔丁基二甲基硅氧基)氮杂环丁烷-1-基)噻唑(1.0g，2.90mmol)和2-异丙氧基-4,4,5-三甲基-1,3,2-二氧硼烷(1.5g，8.7mmol)溶于四氢呋喃溶液中，之后用N2保护，-78℃温度下搅拌约10分钟，加入n-BuLi(3.43mL，8.7mmol)，搅拌1小时后将得到的混合物加热到室温，再搅拌1.5小时。反应结束后用NH4Cl淬灭，乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干得化合物2-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧基)氮杂酮-1-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼兰-2-基)噻唑(0.53g)，黄色固体，产率为58.1％。LCMS(ESI,m/z)：270.1[M+H]-。
步骤4：5-(4-(2-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧)氮唑-1-基噻唑-5-基)-2-氯嘧啶-5-基)噁唑(化合物1-6)的合成
将化合物2-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧基)氮杂酮-1-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)噻唑(268mg，0.94mmol)、2,4-二氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶(170mg，0.78mmol)和Na2CO3(166mg，1.57mmol)溶于1,4-二氧六环/H2O的混合溶液中，在50℃氮气下搅拌加入Pd(pph3)4(90mg，0.07mmol)。反应混合物在此条件下搅拌16小时。反应完成后用乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化，旋干得化合物5-(4-(2-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧)氮唑-1-基噻唑-5-基)-2-氯嘧啶-5-基)噁唑(93mg)，黄色固体，产率为32％。LCMS(ESI,m/z)：450.1[M+H]-。
步骤5：叔丁基(1-(4-(4-(2-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧基)氮杂丁-1-基)噻唑-5-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(化合物1-7)的合成
将化合物5-(4-(2-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧)氮唑-1-基噻唑-5-基)-2-氯嘧啶-5-基)噁唑(73mg，0.16mmol)、INT B(44mg，0.14mmol)和K2CO3(44mg，0.32mmol)溶于1,4-二氧六烷溶液中并于100℃氮气中搅拌加入X-PHOS(30mg，0.06mmol)Pd2(dba)3(29mg，0.03mmol)，并在此条件下搅拌16个小时。INT B的结构为
反应完成后用乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化，旋干得化合物叔丁基(1-(4-(4-(2-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧基)氮杂丁-1-基)噻唑-5-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(18mg)，黄色固体，产率为13.1％。LCMS(ESI,m/z)：719.3[M+H]-。
步骤6：1-(5-(2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基噻唑-2-基)氮杂环丁烷-3-醇(化合物T01)的合成
将化合物叔丁基(1-(4-(4-(2-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧基)氮杂丁-1-基)噻唑-5-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(18mg，0.0056mmol)溶于1,4-二氧六环溶液中，加入盐酸/1,4-二氧六环1mL，在室温空气下搅拌。将反应混合物搅拌1小时。反应结束后加入甲基叔丁基醚搅拌约0.5小时过滤得到粗产品，进一步用制备型HPLC法(Gemini 5u C18 150x 21.2mm,ACN/H2O,20mL/min)纯化得到化合物T01(4.36mg，黄色固体，产率：32.2％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.43(s,1H),8.25(s,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,2H),7.34(s,1H),7.08(d,J＝8.8Hz,2H),6.91(s,1H),4.78(t,J＝5.6Hz,1H),4.42–4.34(m,2H),3.96(dd,J＝9.2,4.4Hz,2H),3.52(d,J＝13.2Hz,2H),3.13(t,J＝10.0Hz,2H),2.00(m,4H),1.48(s,3H)。
实施例2：2-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)苯并呋喃-6-基)甲醇(T02)的合成
步骤1：2-(2-氯嘧啶-4-基)-1-苯并呋喃-6-羧酸甲酯(化合物2-2)的合成
向TPGS-750M H2O溶液(2w％)中加入甲基2-(6-甲基-4,8-二氧代-1,3,6,2-二氧杂硼烷-2-基)-1-苯并呋喃-6-羧酸盐(50mg，0.151mmol)、2,4-二氯嘧啶(化合物1-1，22.5mg，0.151mmol)、Pd(dtbpf)Cl2(7.87mg，0.012mmol)以及TEA(45.84mg，0.453mmol)，然后将反应混合物在45℃氮气下搅拌16小时。反应完毕用10mL EA萃取混合物3次，用5mL用饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥。最后除去溶剂，并使用硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝9/1)得到淡黄色固体化合物2-2(23mg，产率:50.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.94(d,J＝5.17Hz,1H),8.28(s,1H),8.09(s,1H),8.08(s,1H),7.98-7.93(m,2H),3.91(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：289.1[M+H]+。
步骤2：2-(2-{[4-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基哌啶-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)-1-苯并呋喃-6-羧酸甲酯(化合物2-3)的合成
将2-(2-氯嘧啶-4-基)-1-苯并呋喃-6-羧酸甲酯(44mg，0.1524mmol)、第三丁基N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸酯(55.85mg，0.1828mmol)Pd(dba)3(13.96mg，0.0152mmol)、X-PHOS(14.53mg，0.0304mmol)和K2CO3(44.23mg，0.32mmol)溶于5mL二噁烷中的溶液中，在100℃下搅拌16小时。将混合物冷却至室温并除去溶剂。最后，通过快速柱层析纯化粗产物，得到深橙色固体化合物2-3(31mg，产率:34.6％)。LCMS(ESI,m/z)：558.3[M+H]+。
步骤3：N-{1-[4-({4-[6-(羟甲基)-1-苯并呋喃-2-基]嘧啶-2-基}氨基)苯基]-4-甲基哌啶-4-基}氨甲酸叔丁酯(化合物2-4)的合成
将2-(2-{[4-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基哌啶-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)-1-苯并呋喃-6-羧酸甲酯(25mg，0.0448mmol)在氮气下搅拌的1.5mL干燥THF的溶液中逐滴添加LiAlH4的THF溶液(0.98mg，0.0488mmol)。将反应混合物在-10℃下搅拌30分钟，然后用Na2SO4×10H2O淬灭。过滤混合物并收集滤液。最后去除溶剂，得到橙色固体化合物2-4(12mg，收率：48％)。LCMS(ESI,m/z)：530.2[M+H]+。
步骤4：化合物T02合成
将4mL盐酸-二氧六环溶液添加到N-{1-[4-({4-[6-(羟甲基)-1-苯并呋喃-2-基]嘧啶-2-基}氨基)苯基]-4-甲基哌啶-4-基}氨甲酸叔丁酯(12mg，0.0227mmol)中。将反应混合物在室温下搅拌45分钟。然后过滤并收集固体，用5mL二氧六环洗涤两次，得到橙色固体化合物T02(12mg，收率：34.8％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.49(d,J＝5.1Hz,1H),7.71–7.63(m,5H),7.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.30(dd,J＝23.1,6.6Hz,2H),7.27(d,J＝5.1Hz,1H),7.07(d,J＝8.9Hz,2H),7.07(d,J＝8.9Hz,2H),4.78(s,2H),3.50(m,2H),3.13-3.07(m,2H),2.05-1.91(m,4H),1.48(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：430.3[M+H]+。
实施例3：N-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-4-(7-氨基苯并呋喃-2-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T03)的合成
步骤1：化合物03-2的合成
将2-碘-6-硝基苯酚(化合物03-1，500mg，1.88mmol)、2-乙炔基-6-甲基-1,3,3,6,2-二氧杂硼烷-4,8-二酮(445mg，2.45mmol)，碘化亚铜(I)(36mg，0.18mmol)，三苯基膦二氯化钯(66mg，0.09mmol)，三苯基膦(50mg，0.18mmol)加入到DMF中，然后将1,1,3,3-四甲基胍(260mg，2.26mmol)加入到反应液中，混合物在50℃下在N2下搅拌22小时。然后用H2O(10mL)稀释混合物，并用EA(10mL)萃取两次，然后用饱和食盐水(10mL)洗涤，蒸发有机相，并通过闪式柱层析(DCM/MeOH＝10:1)纯化残余物，得到化合物03-2(320mg，收率：32.0％)棕色固体。LCMS(ESI,m/z)：319.0[M+H]+。
步骤2：化合物03-3的合成
把2,4-二氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶(280mg，1.30mmol)、化合物03-2(320mg，1.00mmol)，Pd(dtbpf)Cl2(33mg，0.05mmol)和三乙胺(305mg，3.01mmol)加入到THF/H2O＝5:1(10mL)的溶液中，在45℃氮气下搅拌16小时。然后用H2O(10mL)稀释混合物，并用EA(10mL)萃取两次，然后用饱和食盐水(10mL)洗涤，蒸发有机相，通过闪式柱层析(DCM/MeOH＝10：1)纯化残留物，得到化合物03-3(320mg，收率：32.0％)，棕色固体。LCMS(ESI,m/z)：343.0[M+H]+。
步骤3：化合物03-4的合成
将化合物03-3(100mg，0.29mmol)、N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(98mg，0.32mmol)，Xantphos Palladacycle Gen.3(28mg，0.029mmol)和碳酸铯(190mg，0.58mmol)加入到二氧六环(5mL)中，混合物在90°下搅拌16h。然后用H2O(10mL)稀释混合物并用EA(10mL)萃取两次，然后用饱和食盐水(10mL)洗涤，蒸发有机相，并用Prep-TLC(DCM/MeOH＝10:1)纯化残留物，得到化合物03-4(37mg，收率：20.7％)，黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：612.1[M+H]+。
步骤4：化合物03-5的合成
将化合物03-4(35mg，0.057mmol),铁粉(32mg，0.57mmol)和氯化铵(16mg，0.28mmol)加入到MeOH(1mL)中，混合物在65℃搅拌2小时。然后用H2O(10mL)稀释混合物，用EA(10mL)萃取两次，再用饱和食盐水(10mL)洗涤，蒸发有机相，残余物经Prep-TLC(DCM/MeOH＝10：1)纯化，得到化合物03-5(18mg，收率：47.0％)，黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：582.3[M+H]+。
步骤5：化合物T03的合成
将化合物03-5(15mg，0.02mmol)加入到1,4-二氧六环中，混合物中加入二氧六环中的盐酸溶液(1mL)，混合物在25℃下搅拌3小时。然后用H2O(10mL)稀释混合物，用EA(10mL)萃取两次，再用饱和食盐水(10mL)洗涤，蒸发有机相，残余物经HPLC(Gemini 5u C18150x 21.2mm,ACN/H2O,20mL/min)纯化，得到化合物T03(8mg，白色固体，收率：61.6％)。1HNMR(400MHz,DMSO)：δ9.88(s,1H),8.59(s,1H),8.53(s,1H),8.39(s,1H),7.67(d,J＝8.2Hz,2H),7.39(s,1H),7.31(s,1H),7.05–6.90(m,4H),6.66(d,J＝7.6Hz,1H),4.87(s,2H),3.16–2.94(m,4H),1.65(s,4H),1.21(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：482.1[M+H]+。
实施例4：(S)-N-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-4-(3-(3-氨基吡咯烷-1-基)异噻唑-5-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T04)的合成
步骤1：化合物04-2的合成
在圆底烧瓶中加入化合物04-1(3.6g，21.9mmol)，(S)-3-叔丁氧羰基氨基吡咯烷(4.90g，26.3mmol)的中加入甲苯(100mL)。将混合物在100℃下搅拌过夜。将混合物直接真空浓缩并通过快速柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化，得到化合物04-2(1.5g，黄色固体，产率：25.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.26(d,J＝6.1Hz,1H),7.12(d,J＝3.6Hz,1H),6.70(d,J＝3.6Hz,1H),4.23–4.07(m,1H),3.56(dd,J＝10.0,6.4Hz,1H),3.52–3.43(m,1H),3.41–3.34(m,1H),3.20(dd,J＝10.2,4.7Hz,1H),2.26–2.08(m,1H),1.91(dt,J＝12.8,6.5Hz,1H),1.38(d,J＝12.2Hz,9H)。
步骤2：化合物04-3的合成
在圆底烧瓶中加入化合物04-2(1.5g，5.55mmol)、二异丙胺(1.4g，13.9mmol)、I2(1.7g，6.7mmol)、四氢呋喃(15mL)，在-78℃下缓慢加入正丁基锂(885mg，13.9mmol)，然后将所得混合物在-78℃搅拌2小时。将所得混合物升温至室温并用水淬灭并用乙酸乙酯(5mL)萃取3次，有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，粗品经快速色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)，得到化合物04-3(1.3g，黄色固体，收率：55.20％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ7.26(d,J＝5.8Hz,1H),7.19(s,1H),4.12(d,J＝4.9Hz,1H),3.61–3.40(m,2H),3.39–3.34(m,1H),3.18(dd,J＝10.2,4.4Hz,1H),2.15(dd,J＝12.9,6.6Hz,1H),1.89(td,J＝12.6,6.0Hz,1H),1.39(s,9H)。
步骤3：化合物04-4的合成
在圆底烧瓶中加入化合物04-3(137mg，0.348mmol)、INT A(100mg，0.29mmol)、四三苯基膦钯(34mg，0.03mmol)、碘化亚铜(I)(17mg，0.09mmol)以及N,N-二甲基甲酰胺(2mL)。将混合物在90℃搅拌16小时。INT A的结构为
将混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，浓缩有机相，将残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝30/1)纯化，得到化合物04-4(80mg，黄色固体，收率：55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.68(s,1H),8.59(s,1H),7.59(s,1H),7.31(s,1H),7.06(s,1H),4.16(s,1H),3.65(s,2H),3.48(s,2H),2.06–1.86(m,2H),1.39(s,9H)。
步骤4：化合物04-5的合成
向化合物04-4(70mg，0.16mmol)的二氧六环(1.0mL)溶液中加入INT B(57mg，0.19mmol)、Xantphos Pd G3(15mg，0.016mmol)和碳酸铯(98mg，0.31mmol)，然后将混合物在90℃搅拌16小时。将所得混合物冷却至室温并用水淬灭并用乙酸乙酯(2mL)萃取3次，将有机层真空浓缩，粗品通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到化合物04-5(50mg，黄色固体，产率：37.15％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.60(s,1H),8.56(s,1H),8.26(s,1H),7.59(d,J＝8.9Hz,2H),7.40(s,1H),7.30(d,J＝6.9Hz,2H),6.91(d,J＝9.5Hz,2H),6.81(s,1H),4.15(s,1H),3.70–3.59(m,1H),3.50(s,2H),3.45(dd,J＝16.4,8.1Hz,2H),3.19(d,J＝18.6Hz,1H),2.90(s,2H),2.24–2.14(m,2H),2.04–1.90(m,2H),1.62–1.51(m,2H),1.38(s,21H)。
步骤5：(S)-N-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-4-(3-(3-氨基吡咯烷-1-基)异噻唑-5-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T04)的合成
向化合物04-5(40mg，0.06mmol)的二氧六环(1mL)溶液中加入4M HCl/二氧六环，将混合物在25℃搅拌2小时。真空浓缩溶剂得到粗品，将其通过制备型HPLC进一步纯化(Gemini 5um C18 150×21.2mm，ACN/H2O，20mL/min)，得到化合物T04(6mg，黄色固体，产率：20.47％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.42(s,1H),8.27(s,1H),7.75(d,J＝8.8Hz,2H),7.34(s,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(s,1H),4.11(s,1H),3.90(dd,J＝12.0,6.0Hz,1H),3.72(dd,J＝18.4,8.8Hz,1H),3.66(d,J＝14.0Hz,4H),3.43–3.33(m,2H),2.57(td,J＝14.6,8.0Hz,1H),2.32–2.23(m,1H),2.16(t,J＝10.0Hz,2H),2.04(d,J＝13.6Hz,2H),1.53(s,3H)。19F NMR(377MHz,MeOD)：δ-77.17(s,3F)。(HPLC制备样品时，流动相里含有TFA，与目标化合物T04形成TFA盐，故F谱出峰。)LCMS(ESI,m/z)：518.2[M+H]+。
实施例5：4-(4-(1氢-吡唑-3-基)吡啶-2-基)-氮-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)吡啶-2-胺(T05)的合成
步骤1：化合物2-溴-4-吡唑-3-吡啶(化合物05-2)的合成
将化合物2-溴-4-碘吡啶(化合物05-1，1g，0.0035mol)溶于甲苯/乙醇/水(25mL)的混合溶液中并加入化合物(1氢-吡唑-3-基)硼酸(0.47g，0.0042mol)，K2CO3(0.89g，0.00647mol)和Pd(pph3)4(0.4g，0.00035mol)。混合物在92℃的温度下搅拌16小时。反应完成后浓缩，并用乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化，旋干得化合物2-溴-4-吡唑-3-吡啶(化合物05-2，0.226g)，无色油状物，产率为36％。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.40(d,J＝5.2Hz,1H),7.92(s,1H),7.76–7.62(m,2H),7.26(s,1H),6.74(d,J＝2.4Hz,1H)。
步骤2：化合物2-溴-4-(1-(四氢-2氢-吡唑-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶(化合物05-3)的合成
将化合物2-溴-4-吡唑-3-吡啶(1.61g，7.22mmol)加入到DHP(4mL)溶液中并加入TFA(82.3mg，0.722mmol)。混合物在82.5℃搅拌16小时。反应完成后浓缩，并用乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化，旋干得化合物2-溴-4-(1-(四氢-2氢-吡唑-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶(化合物05-3，1.8g)，白色固体，产率为74％。LCMS(ESI,m/z)：308.3[M+H]+。
步骤3：化合物2-碘-4-(1-(四氢-2氢-吡唑-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶(化合物05-4)的合成
将化合物2-溴-4-(1-(四氢-2氢-吡唑-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶(300mg，0.9735mmol)，化合物(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(55mg，0.38mmol)，碘化钠(584mg，3.894mmol)和碘化酮(37mg，0.1947mmol)溶于1,4-二氧六环溶液中在110℃氮气下搅拌。将反应混合物搅拌2小时。反应完成后用乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化，旋干得化合物(1r,3r)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯基)环丁基4-硝基苯甲酸酯(化合物05-4，310mg)，白色固体，产率为80％。LCMS(ESI,m/z)：355.8[M+H]+。
步骤4：化合物5-(2-氯-4-(4-(1-(四氢-2氢-吡喃-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶-2-基)嘧啶-5-基)噁唑(化合物05-5)的合成
将化合物(1r,3r)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯基)环丁基4-硝基苯甲酸酯(200mg，0.56mmol)，化合物INT A(192mg，0.56mmol)，碘化亚铜(I)(32mg，0.16mmol)和Pd(ph3)4(65mg，0.056mmol)溶于1,4-二氧六环溶液中，在80℃氮气下搅拌。将反应混合物搅拌2小时。反应完成后用乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化，旋干得化合物5-(2-氯-4-(4-(1-(四氢-2氢-吡喃-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶-2-基)嘧啶-5-基)噁唑(化合物05-5，140mg)，白色固体，产率为54％。LCMS(ESI,m/z)：409.11[M+H]+。
步骤5：化合物叔丁基(4-甲基-1-(4-(5-(噁唑-5-基)-4-(4-(1-(四氢-2氢-吡喃-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-基氨基苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(化合物05-6)的合成
将化合物5-(2-氯-4-(4-(1-(四氢-2氢-吡喃-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶-2-基)嘧啶-5-基)噁唑(100mg，0.24mmol)，化合物INT B(90mg，0.29mmol)，Cs2CO3(159mg，0.49mmol)和Xantphos pd G3(23mg，0.024mmol)溶于1,4-二氧六环溶液中在100℃氮气下搅拌。将反应混合物搅拌16小时。反应完成后用乙酸乙酯萃取三次，混合有机相用饱和食盐水洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，将反应液减压旋干，粗产物通过制备薄层色谱纯化，旋干得化合物叔丁基(4-甲基-1-(4-(5-(噁唑-5-基)-4-(4-(1-(四氢-2氢-吡喃-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-基氨基苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(化合物05-6，16mg)，黄色固体，产率为8.6％。LCMS(ESI,m/z)：678.34[M+H]+。
步骤6：4-(4-(1氢-吡唑-3-基)吡啶-2-基)-氮-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)吡啶-2-胺(T05)的合成
将化合物叔丁基(4-甲基-1-(4-(5-(噁唑-5-基)-4-(4-(1-(四氢-2氢-吡喃-2-基)-1氢-吡唑-3-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-基氨基苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(38mg，0.056mmol)溶于1,4-二氧六环溶液中，在室温下搅拌，加入盐酸/1,4-二氧六环溶液1mL。将反应混合物搅拌1小时。反应完成后加入甲基叔丁基醚搅拌约0.5小时过滤得到残渣，进一步用制备型HPLC法(Gemini 5u C18 150×21.2mm,ACN/H2O,20mL/min)纯化得到化合物T05(12.44mg，黄色固体，产率:45.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.97(s,1H),8.76(s,1H),8.56(d,J＝5.2Hz,1H),8.27(d,J＝11.6Hz,2H),7.90(d,J＝5.2Hz,5H),7.66(d,J＝8.8Hz,2H),6.99–6.97(m,4H),3.45(s,2H),3.01(t,J＝10.0Hz,2H),1.84(t,J＝9.6Hz,2H),1.74(d,J＝12.8Hz,2H),1.34(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：494.2[M+H]+。
实施例6：2-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)苯并呋喃-6-基)甲醇(T06)的合成
步骤1：4-甲基吗啉-2,6-二酮(化合物06-2)的合成
圆底烧瓶内放置100mL Ac2O溶解的[(羧甲基)(甲基)氨基]乙酸(化合物06-1，20g，0.1359mol)和吡啶(0.21g，2.7mmol)的混合物。然后将混合物置于70℃的油浴中3小时。用Et2O溶解混合物，过滤固体并蒸发Et2O。最后，将产物结晶得到橙色固体化合物06-2(12.18g，产率：67.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ3.49(s,4H),2.44(s,3H)。
步骤2：2-乙炔基-6-甲基-1,3,6,2-二氧杂硼烷-4,8-二酮(化合物06-3)的合成
圆底烧瓶中将含有4-甲基吗啉-2,6-二酮(8.13g，0.063mol)和乙炔基硼烷二醇(2.20g，0.0315mol)的混合物的溶解在80mL二氧六环中，在70℃下油浴16小时。将混合物冷却至室温并除去溶剂。用水稀释混合物并用EA(30mL)萃取3次。收集有机层并用硫酸钠干燥。最后除去溶剂和硫酸钠，得到橙色固体化合物06-3(2.57g，收率：45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ4.25(d,J＝17.18Hz,2H),4.07(d,J＝17.23Hz,2H),3.27(s,1H),2.99(s,3H)。
其中，乙炔基硼烷二醇的合成包括：
将溴(乙炔基)镁(6.46g，0.05mol)溶于100mL THF中，逐滴添加到在-78℃氮气下搅拌的含有硼酸三甲酯(5.71g，0.055mol)的THF(20mL)溶液中，在-78℃氮气下搅拌1小时。加入溴(乙炔基)镁后，将反应混合物在23℃搅拌15小时。然后用100mL 1M HCl淬灭混合物，并用100mL Et2O稀释。分离有机层并用50mL Et2O萃取水相两次。用30mL饱和食盐水清洗结合的有机层，并用硫酸钠干燥。最后，蒸发溶剂并得到深棕色固体化合物乙炔基硼烷二醇(2.17g，收率：59.0％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ2.49(s,1H)。
步骤3：甲基2-(6-甲基-4,8-二氧-1,3,6-二氧杂硼砂-2-基)-1-苯并呋喃-6-羧酸盐(化合物06-4)的合成
将3-羟基-4-碘苯甲酸甲酯(125mg，0.4496mmol)、2-乙炔基-6-甲基-1,3,6,2-二氧杂硼烷-4,8-二酮(100mg，0.5844mmol)，PPh3(23.59mg，0.0899mmol)和PdCl2(PPh3)2(31.56mg，0.0449mmol。将反应混合物在50℃下搅拌15小时。用50mL EA稀释混合物，并用100mL水、10mL饱和食盐水洗涤两次，用硫酸钠干燥。最后除去硫酸钠和溶剂，通过快速色谱法(甲醇/二氯甲烷＝1/25)进行纯化，得到呈灰白色固体的化合物06-4(99mg，收率：53％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.44(s,1H),10.44(s,1H),7.48–7.46(m,2H),7.36(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),4.32(d,J＝17.2Hz,2H),4.13(d,J＝17.1Hz,2H),3.83(s,3H),3.08(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：332.1[M+H]+。
步骤4：化合物06-5的合成
将2,4-二氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶(63mg，0.2916mmol)、甲基2-(6-甲基-4,8-二氧-1,3,6-二氧杂硼砂-2-基)-1-苯并呋喃-6-羧酸盐(96.54mg，0.2916mmol)和Pd(dtbpf)Cl2(15.2mg，0.0233mmol)溶于THF中，在45℃氮气条件下搅拌添加三乙胺(88.52mg，0.8748mmol)。反应混合物在该条件下搅拌16小时。然后用10mL EA萃取混合物3次，并用5mL饱和食盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥。最后，蒸发溶剂并通过快速色谱法纯化粗产物(石油醚/乙酸乙酯＝9/1)，得到淡黄色固体化合物06-5(27mg，收率：22.12％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝9.06(s,1H),8.71(s,1H),8.03(d,J＝1.6,1H),7.96(dd,J＝8.0,1.6,1H),7.84(s,1H),7.82(d,J＝8.0,1H),4.55(s,1H),3.89(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：356.0[M+H]+。
步骤5：化合物06-6的合成
将甲基2-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)苯并呋喃-6-羧酸甲酯(250mg，0.703mmol)、2,4-二氯嘧啶(216.8mg，0.703mmol)和TsOH(26mg，0.141mmol)溶于25mL 2-戊醇中，溶液在80℃氮气下搅拌16小时。蒸发溶剂并通过快速色谱法(甲醇/二氯甲烷＝3:100)纯化粗产物，得到淡黄色固体化合物06-6(121mg，产率：27.6％)。LCMS(ESI,m/z)：625.3[M+H]+。
步骤7：化合物06-7的合成
将NaBH4(29.29mg，0.7748mmol)依次添加到0℃EtOH(12mL)中的甲基2-(2-{[4-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基哌啶-1-基)苯基]氨基}-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-1-苯并呋喃-6-羧酸盐(化合物06-6，121mg，0.1937mmol)和CaCl2(42.99mg，0.3874mmol)的溶液中。1.5小时后将反应混合物加热至室温，并搅拌14小时。反应后过滤固体并去除溶剂。最后，通过快速色谱法(DCM/MeOH＝3:100)纯化粗产物，得到淡黄色固体化合物06-7(58mg，收率：48.7％)。LCMS(ESI,m/z)：597.3[M+H]+。
步骤8：化合物T06的合成
将N-{1-[4-({4-[6-(羟甲基)-1-苯并呋喃-2-基]-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基}氨基)苯基]-4-甲基哌啶-4-基}氨甲酸叔丁酯(化合物06-7，58mg，0.0972mmol)溶于5mL盐酸-二氧六环并在25℃搅拌45min。然后过滤并收集固体，用5mL Et2O洗涤两次，得到淡黄色固体化合物T06的盐酸盐(51mg，产率：81.2％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ＝8.68(s,1H),8.54(s,1H),8.27(s,1H),7.61(d,J＝8.0,1H),7.47(s,1H),7.35(d,J＝7.6,1H),7.30(s,1H),7.25-7.23(m,2H),6.77(d,J＝8.0,2H),4.67(s,2H),3.38-3.33(m,2H),3.00(m,2H),1.93-1.82(m,4H),1.40(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：497.2[M+H]+。
实施例7：2-(3-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(苯并呋喃-2-基)嘧啶-4-基)苯基)丙-2-醇(T07)的合成
步骤1：化合物5-(苯并呋喃-2-基)-2,4-二甲氧基嘧啶(化合物07-2)的合成
将(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(化合物07-1，2.00g，10.87mmol)和2-溴苯并呋喃(2.36g，11.95mmol)加入250mL单口烧瓶中，并加入二氧六环(40mL)将其溶解，在向体系中依次加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(1.59g，2.174mmol)，碳酸钠(3.45g，32.61mmol)和水(4mL)，置换氮气三次后，将体系置于80℃油浴中搅拌5小时。用水和乙酸乙酯(100mL)萃取3次，有机相合并，用饱和食盐水(100mL)洗涤两次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，将液体减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝10/1)，旋干得化合物5-(苯并呋喃-2-基)-2,4-二甲氧基嘧啶(1.74g)，浅黄色固体(化合物)，产率为62.4％。LCMS(ESI,m/z)：257.1[M+H]+。
步骤2：5-(苯并呋喃-2-基)嘧啶-2,4-二醇(化合物07-3)的合成
常温下将5-(苯并呋喃-2-基)-2,4-二甲氧基嘧啶(1.60g，6.24mmol)溶于盐酸-1,4-二氧六环(4mol/L，40mL)溶液，反应液升温到60℃搅拌回流12小时。将水(100mL)在0℃滴加到反应液中，然后用乙酸乙酯(100mL)萃取两次，有机相合并，用饱和食盐水(100mL)洗涤两次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，将液体减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝5/1)，旋干得化合物5-(苯并呋喃-2-基)嘧啶-2,4-二醇(1.53g)，浅黄色固体，产率为98.95％。TLC(石油醚/乙酸乙酯,5:1v/v):Rf＝0.13。
步骤3：5-(苯并呋喃-2-基)-2,4-二氯嘧啶(化合物07-4)的合成
将5-(1-苯并呋喃-2-基)嘧啶-2,4-二醇(500mg，2.2mmol)溶于TEA-POCl3(15mL)溶液。将反应混合物在100℃搅拌12小时。将反应液减压旋干，然后将水(50mL)在0℃滴加到反应液中，然后用乙酸乙酯(50mL)萃取两次，有机相合并，用饱和食盐水(100mL)洗涤两次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，将液体减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝10/1)，旋干得化合物5-(苯并呋喃-2-基)-2,4-二氯嘧啶(580mg)，浅黄色固体，产率为98.95％。TLC(石油醚/乙酸乙酯,10:1v/v):Rf＝0.52。
步骤4：2-(3-(5-(苯并呋喃-2-基)-2-氯嘧啶-4-基)苯基)丙-2-醇(化合物07-5)的合成
将5-(苯并呋喃-2-基)-2,4-二氯嘧啶(100mg，0.38mmol)和(3-(2-羟基丙-2-基)苯基)硼酸(68.2mg，0.38mmol)溶于二氧六环(2.7mL)溶液中，在室温加入碳酸钠(100mg，0.947mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(27.72mg，0.0378mmol)和水(0.3mL)反应液升温到50℃搅拌3小时。用水和乙酸乙酯(50mL)萃取3次，有机相合并，用饱和食盐水(50mL)洗涤两次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，将液体减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝5/1)，旋干得化合物2-(3-(5-(苯并呋喃-2-基)-2-氯嘧啶-4-基)苯基)丙-2-醇(113mg)，浅黄色固体，产率为79％。LCMS(ESI,m/z)：365.1[M+H]+。
步骤5：苄基(1-(4-((5-(苯并呋喃-2-基)-4-(3-(2-羟基丙-2-基)苯基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(化合物07-6):
将2-(3-(5-(苯并呋喃-2-基)-2-氯嘧啶-4-基)苯基)丙-2-醇(100mg，0.26mmol)，N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸苄酯(102mg，0.30mmol)，2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(12mg，0.026mmol)和醋酸钯(6mg，0.026mmol)溶于二氧六环(10mL)溶液中，反应液升温到100℃搅拌4小时。用水和乙酸乙酯(50mL)萃取3次，有机相合并，用饱和食盐水(50mL)洗涤两次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，将液体减压旋干，粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝10/1)，旋干得化合物4-基)氨基甲酸酯(40mg)，浅黄色固体，产率为44％。LCMS(ESI,m/z)：668.4[M+H]+。
步骤6：化合物2-(3-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(苯并呋喃-2-基)嘧啶-4-基)苯基)丙-2-醇(化合物T07)
将旋干得化合物苄基(1-(4-((5-(苯并呋喃-2-基)-4-(3-(2-羟基丙-2-基)苯基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(10mg，0.015mmol)溶于甲醇(2mL)溶液中，然后加入钯-碳(10mg)，置换氢气三次，在氢气下，常温搅拌3小时。将反应液通过硅藻土过滤，收集滤液并在真空下浓缩，得到化合物T07(6mg，黄色固体)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.80(s,1H),8.78(s,1H),7.63(d,J＝8.9Hz,2H),7.60–7.54(m,3H),7.44–7.36(m,3H),7.25–7.18(m,2H),6.90(d,J＝9.1Hz,2H),6.65(s,1H),5.00(s,1H),2.00(dd,J＝14.2,6.8Hz,2H),1.50(ddd,J＝18.1,13.3,8.0Hz,6H),1.26(s,6H),1.07(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：534.2[M+H]+。
实施例8：2-(3-(2-苯基)4-氨基(4-氨基-4-甲基哌啶基苯基)氨基)-5-苯并呋喃-6-基嘧啶-4-苯基)-2-丙醇(T08)的合成
步骤1：5-(苯并呋喃-6-基)-2,4-二甲氧基嘧啶(化合物08-2)的合成
将6-溴-1-苯并呋喃(2.58g，0.0130mol)溶于1,4-二氧六环/水＝8:1(27mL)溶液中，加入Pd(dppf)Cl2(1.60g，0.0021mol)，碳酸钠(3.47g，0.0327mol)和(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(化合物08-1，2g，0.0109mol)。将反应液升温到80℃，在氮气下搅拌16小时。将反应液减压旋干，粗产物通过flash纯化，旋干得化合物5-(苯并呋喃-6-基)-2,4-二甲氧基嘧啶(2.1g)，白色固体，产率为67.89％。LCMS(ESI,m/z)：257[M+H]+。
步骤2：5-(苯并呋喃-6-基)嘧啶-2,4-二醇(化合物08-3)的合成
将5-(1-苯并呋喃-6-基)-2,4-二甲氧基嘧啶(2.1g，0.0082mol)溶于1,4-二氧六环(5mL)溶液中，加入4M盐酸-1,4-二氧六环(20mL)。反应液升温到90℃搅拌16小时。将反应液减压旋干，得到化合物5-(苯并呋喃-6-基)嘧啶-2,4-二醇(1.9g)，黄色固体，产率为91.46％。LCMS(ESI,m/z)：229[M+H]+。
步骤3：5-(苯并呋喃-6-基)-2,4-二氯嘧啶(化合物08-4)的合成
将5-(1-苯并呋喃-6-基)嘧啶-2,4-二醇(900mg，3.9438mmol)溶于三氯氧磷(10mL)溶液中加入三乙胺(796.65mg，7.8876mmol)。反应液升温到100℃搅拌16小时。将反应液减压旋干，粗产物通过flash纯化，旋干得化合物5-(苯并呋喃-6-基)-2,4-二氯嘧啶(850mg)，白色固体，产率为73.17％。LCMS(ESI,m/z)：265[M+H]+。
步骤4：2-(3-(5-(苯并呋喃-6-基)-2-氯嘧啶-4-基)苯基)丙醇(化合物08-5)的合成
将5-(苯并呋喃-6-基)-2,4-二氯嘧啶(500mg，1.8861mmol)溶于1,4-二氧六环/水＝8:1(9mL)溶液中，加入[3-(2-羟丙基-2-基)苯基]硼二醇(339.51mg，1.8861mmol)，Pd(dppf)Cl2(138.01mg，0.1886mmol)和碳酸钠(599.78mg，5.6583mmol)。反应液升温到50℃，在氮气下搅拌3小时。将反应液减压旋干，粗产物通过flash纯化，旋干得化合物2-(3-(5-(苯并呋喃-6-基)-2-氯嘧啶-4-基)苯基)丙醇(250mg)，白色固体，产率为32.70％。LCMS(ESI,m/z)：365[M+H]+。
步骤5：化合物苄基(1-(4-(5-(苯并呋喃-6-基)-4-(3-(2-羟丙基-2-基)苯基嘧啶-2-基)氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(化合物08-6)的合成
将2-(3-(5-(苯并呋喃-6-基)-2-氯嘧啶-4-基)苯基)丙醇(100mg，0.2741mmol)溶于1,4-二氧六环(3mL)溶液中，加入N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸苄酯(111.65mg，0.3289mmol)、醋酸钯(6.15mg，0.0274mmol)、X-PHOS(13.07mg，0.0274mmol)和碳酸铯(178.61mg，0.5482mmol)。反应液升温到100℃，在氮气下搅拌16小时。将反应液减压旋干，粗产物通过flash纯化，旋干得化合物苄基(1-(4-(5-(苯并呋喃-6-基)-4-(3-(2-羟丙基-2-基)苯基嘧啶-2-基)氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(55mg)，黄色固体，产率为27.03％。LCMS(ESI,m/z)：668[M+H]+。
步骤6：2-(3-(2-苯基)4-氨基(4-氨基-4-甲基哌啶基苯基)氨基)-5-苯并呋喃-6-基嘧啶-4-苯基)-2-丙醇(化合物T08)的合成
将苄(1-(4-(5-(苯并呋喃-6-基)-4-(3-(2-羟丙基-2-基)苯基嘧啶-2-基)氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(10mg，0.0150mmol)溶于甲醇(2mL)溶液中，加入Pd/C(7.98mg，0.075mmol)。反应液在氢气下室温搅拌3小时。反应液减压浓缩，粗产物通过flash纯化，得到产物T08(7mg，白色固体，收率：78.67％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.42(s,1H),7.73(d,J＝2.0Hz,1H),7.66(d,J＝8.8Hz,2H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.49(d,J＝7.8Hz,1H),7.44(s,1H),7.41(d,J＝7.8Hz,1H),7.30(s,1H),7.26(t,J＝7.8Hz,1H),7.03(t,J＝8.2Hz,3H),6.82(s,1H),3.28–3.23(m,2H),3.13–3.07(m,2H),1.75(s,4H),1.24(d,J＝5.2Hz,9H)。LCMS(ESI,m/z)：534.25[M+H]+。
实施例9：N-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-4-(6-(2-(甲基氨基)丙-2-基)吡啶-2-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T09)的合成
步骤1：化合物09-2的合成
在0℃下，向异丁腈(583.4mg，8.4426mmol)的甲苯(50mL)溶液中加入LIHMDS(1059mg，6.3319mmol)1小时。然后加入化合物09-1(1000mg，4.2213mmol)和Pd2(dba)3(386.55mg，0.4221mmol)。在室温搅拌16小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(30mL)萃取3次。减压浓缩。将残余物通过柱色谱纯化，用己烷中的0-30％ EA洗脱，得到化合物09-2(540mg，51.15％收率，黄色油状物)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.65–7.54(m,2H),7.45–7.39(m,1H),1.75(s,6H)。
步骤2：化合物09-3的合成
向化合物09-2(1500mg，6.6641mmol)的溶液中溶解EtOH(15mL)和K2CO3/H2O(15mL)，然后冷却至0℃，加入30％ H2O2(45mL)，加入后，回到25℃，反应4小时，TLC显示反应完全，LCMS分析反应完全处理后，加水(20mL)，加入EA(10mL)萃取3次，再加入饱和氯化钠水溶液(15mL)至洗涤有机相3次，合并有机相，用Na2SO4干燥，浓缩得到1200mg白色固体产物。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ7.71(t,J＝7.8Hz,1H),7.49(d,J＝7.8Hz,1H),7.40(d,J＝7.7Hz,1H),7.00(d,J＝4.1Hz,2H),1.44(s,6H)。
步骤3：化合物09-4的合成
将化合物09-3(960mg，3.949mmol)用几滴吡啶溶解在无水t-BuOH(15mL/mmol)中并用氩气冲洗。添加四乙酸铅(3.848g，8.687mmol)，并将反应混合物加热回流2小时。将混合物冷却至室温，减压浓缩，残余物用饱和溶液稀释。NaHCO3(15mL)和EA(30mL)。过滤双相混合物。将滤液转移至分液漏斗。分离有机相，并用EA(15mL)萃取水相两次。合并的有机萃取物用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，EA-己烷5:1)纯化，得到化合物09-4(900mg，产率68.4％)，为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：315.1[M+H]+。
步骤4：化合物09-5的合成
在N2保护下，将化合物09-4(917mg，2.8999mmol)的DMF(20mL)溶液冷却至0℃，加入60％ NaH(162.4mg，4.0598mmol)。加完后，反应在0℃搅拌0.5小时，加入CH3I(535.1mg，3.7698mmol)。将反应升温至25℃并搅拌2小时。LCMS显示反应完成。向反应中加入水(50mL)，混合物用EA(20mL)萃取3次。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤浓缩后得到1.1g粗品。粗产物通过快速色谱法(PE/EA＝10/1)纯化，得到800mg化合物09-5，为白色固体。产率：75.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.44(t,J＝7.6Hz,1H),7.29(s,1H),7.24(d,J＝8.0Hz,1H),1.60(s,6H),1.14(s,9H)。
步骤5：化合物09-6的合成
向化合物09-5(450mg，1.3626mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入化合物INT A(563.11mg，1.6365mmol)、碘化亚铜(I)(25.95mg，0.1362mmol)和Pd(pph3)2Cl2(95.64mg，0.1362mmol)。反应用N2吹扫3次，升温至80℃搅拌3小时，TLC分析反应完全。向反应中加入水(20mL)并用EtOAc(10mL)萃取3次，合并的有机层用饱和食盐水(3mL)洗涤。干燥过滤后，除去溶剂，得到550mg粗品。粗产物通过快速色谱法(DCM/MeOH＝30/1)纯化，得到300mg化合物09-6，为黄色油状物。产率：45.99％。LCMS(ESI,m/z)：430[M+H]+。
步骤6：氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-4-(6-(2-(甲基氨基)丙-2-基)吡啶-2-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T09)的合成
将化合物09-6(100mg，0.2321mmol)、INT B(71.12mg，0.2321mmol)和TsOH(44.15mg，0.2321mmol)在25mL 2-戊醇中的溶液在氮气下在80℃下搅拌40小时。最后，蒸发溶剂。将粗产物送至pre-HPLC(TFA)纯化，得到化合物T09(5.8mg，淡黄色固体，产率：3.19％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.94(s,1H),8.85(d,J＝4.9Hz,2H),8.78(s,1H),8.25(s,1H),8.17(t,J＝8.0Hz,1H),7.93(s,2H),7.84(d,J＝7.6Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(d,J＝8.9Hz,2H),6.99–6.87(m,2H),3.44(d,J＝13.2Hz,2H),2.96(s,2H),2.20(t,J＝5.2Hz,3H),1.83(s,2H),1.75(s,2H),1.51(s,6H),1.33(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：499.3[M+H]+。
实施例10：N-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-4-(1-((1s,4s)-4-氨基环己基)-1H-1,2,4-三唑-3-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T10)的合成
步骤1：化合物10-2的合成
用DCM(50mL)溶解化合物10-1(5.0g，0.0231mol)、TEA(4.67g，0.0462mol)和DMAP(0.28g，0.0023mol)，在冰水浴中冷却至0℃，溶解TsCl(5.28g，0.0277mol)与DCM(25mL)缓慢滴加到(4-羟基环己基)氨基甲酸叔丁酯体系中，滴完后恢复至25℃。搅拌4小时，TLC检测剩余20％的原料。加水(100mL)洗涤有机相，水相用DCM(50mL)萃取3次，Na2SO4干燥，浓缩，柱层析(EA/PE:0/100-30/70)白色固体产物化合物10-2，2.46g(25％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.79(d,J＝8.2Hz,2H),7.33(d,J＝8.1Hz,2H),3.41(s,1H),2.45(s,3H),2.05–1.88(m,4H),1.57-1.56(m,3H),1.42(s,9H)。
步骤2：化合物10-3的合成
将化合物10-2(4.2g，0.0113mmol)、3-碘-1H-1,2,4-噻唑(2.0g 0.0103mmol)和碳酸铯(6.71g 0.0206mmol)用DMF(60mL)溶解，滴加后回到85℃。搅拌16小时，TLC检测无残留化合物10-2。加水(100mL)洗涤有机相，水相用EA(60mL)萃取3次，Na2SO4干燥，浓缩，柱层析(EA/PE:0/100-30/70)白色固体产物化合物10-3，2.1g(27％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(s,1H),4.76(s,1H),4.32–4.18(m,1H),3.82(s,1H),2.18–2.06(m,2H),2.04–1.96(m,2H),1.91–1.80(m,2H),1.75-1.71(m,2H),1.45(s,9H)。LCMS(ESI,m/z)：393.2[M+H]+。
步骤3：化合物10-4的合成
向化合物10-3(100mg，0.2543mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入INT A(113.85mg，0.3305mmol)、碘化亚铜(I)(4.84mg，0.0254mmol)和Pd(pph3)2Cl2(17.85mg，0.0254mmol)。反应用N2吹扫3次，升温至100℃搅拌3小时，TLC分析反应完全。向反应中加入水(10mL)并用EtOAc(10mL)萃取3次，合并的有机层用饱和食盐水(3mL)洗涤。干燥过滤后，除去溶剂，得到140mg粗品。粗产物通过快速色谱纯化(DCM/MeOH＝30/1)，得到31mg化合物10-4，为黄色油状物，24％收率。LCMS(ESI,m/z)：446.1[M+H]+。
步骤4：N-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-4-(1-((1s,4s)-4-氨基环己基)-1H-1,2,4-三唑-3-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T10)的合成
将化合物10-4(100mg，0.2238mmol)、INT B(65.44mg，0.2238mmol)和TsOH(42.57mg，0.2238mmol)在25mL 2-戊醇(3mL)中的溶液在氮气下在80℃下搅拌40小时。最后，蒸去溶剂，粗品经纯化。粗品送制备(TFA)纯化，得到5.0mg产物，得到化合物T10(5mg，淡黄色固体，收率：4％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.72(s,1H),8.65(s,1H),8.23(s,1H),7.67(d,J＝8.8Hz,2H),7.12(s,1H),7.06(d,J＝8.9Hz,2H),4.62–4.52(m,1H),3.51-3.46(m,2H),3.41–3.33(m,1H),3.14-3.08(m,2H),2.36-2.31(m,2H),2.13–2.02(m,2H),1.99-1.93(m,6H),1.77–1.62(m,2H),1.46(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：515.25[M+H]+。
实施例11：N-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-4-(7-氨基苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-胺(T11)的合成
步骤1：2-碘-6-硝基苯酚(化合物11-2)的合成
向在10℃下搅拌的80mL AcOH中的2-碘苯酚(化合物11-1，5g，0.0227mol)溶液中逐滴添加硝酸(1.86g，0.0295mol)。将混合物保持在25℃下并搅拌2小时。用200mL EA稀释混合物，并用100mL饱和碳酸钠溶液洗涤3次、30mL饱和食盐水洗涤一次。然后用硫酸钠干燥有机层并蒸发溶剂。最后，用快速柱层析(2％乙酸乙酯，乙酸乙酯/石油醚)纯化产物，得到黄色固体化合物11-2(1.31g，收率21.15％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.15-8.13(m,2H),6.84(t,J＝7.80Hz,1H)。
步骤2：6-甲基-2-(7-硝基-1-苯并呋喃-2-基)-1,3,6,2-二氧杂硼烷-4,8-二酮(化合物11-3)的合成
一个圆底烧瓶放有2-碘-6-硝基苯酚(122mg，0.4604mmol)、2-乙炔基-6-甲基-1,3,6,2-二氧杂硼烷-4,8-二酮(99.97mg，0.5524mmol，将4mL DMF中的PPh3(24.15mg，0.092mmol)和1,1,3,3-四甲基胍(63.63mg，0.5524mmol)置于在氮气下50℃油浴15小时。用30mL EA稀释混合物，并用50mL水、用饱和食盐水(10mL)洗涤2次，用硫酸钠干燥。最后去除硫酸钠和溶剂，通过快速色谱法(甲醇/二氯甲烷＝1/25)纯化，得到黄色固体化合物11-3(38mg，产率24.65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.19–8.10(m,2H),7.47(t,J＝7.9,1H),7.33(s,1H),4.47(d,J＝17.2,2H),4.19(d,J＝17.2,2H),2.75(s,3H)。
步骤3：2-氯-4-(7-硝基-1-苯并呋喃-2-基)嘧啶(化合物11-4)的合成
将2,4-二氯嘧啶(16.39mg，0.11mmol)、6-甲基-2-(7-硝基-1-苯并呋喃-2-基)-1,3,6,2-二氧杂硼烷-4,8-二酮(35mg，0.11mmol)、三乙胺(33.39mg，0.33mmol)和Pd(dtbpf)Cl2(7.87mg，0.012mmol)在45℃氮气搅拌下于TPGS-750M H2O溶液(2w％)中的溶液加热2小时。用水稀释混合物并用EA(10mL)三次。收集有机层并用硫酸钠干燥。最后去除溶剂和硫酸钠。通过快速色谱纯化产物(乙酸乙酯/石油醚＝23/100)，得到淡黄色固体化合物11-4(20mg，收率：63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(d,J＝5.2,1H),8.35(d,J＝8.0,1H),8.29(d,J＝7.6,1H),8.20(s,1H),8.07(d,J＝5.0,1H),7.62(t,J＝8.0,1H)。
步骤4：第三丁基N-[4-甲基-1-(4-{[4-(7-硝基-1-苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)哌啶-4-基]氨基甲酸酯(化合物11-5)的合成
一个圆底烧瓶，其中含有2-氯-4-(7-硝基-1-苯并呋喃-2-基)嘧啶(20mg，0.0726mmol)、N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(22.17mg，0.0736mmol)和TsOH的混合物。H2O(13.79mg，0.0726mmol)溶于4mL 2-戊醇中。将混合物置于85℃加热的油浴中15h。在真空下除去溶剂，通过快速色谱法(PE/EA＝1/1)纯化，得到淡黄色固体(化合物11-5，7mg，收率：17％)的产物。LCMS(ESI,m/z)：545.3[M+H]+。
步骤5：N-[1-(4-{[4-(7-氨基-1-苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物11-6)的合成
一个圆底烧瓶，其中含有溶于3mL MeOH/H2O(v/v＝5/1)中的第三丁基N-[4-甲基-1-(4-{[4-(7-硝基-1-苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)哌啶-4-基]氨基甲酸酯(7mg，0.0129mmol)、Fe(3.6mg，0.0645mmol)和氯化铵(3.45mg，0.064mmol)的混合物。将混合物置于65℃油浴中加热并回流2小时，然后过滤固体并蒸发滤液溶剂。最后，通过快速色谱法纯化粗产物(DCM/MeOH＝15/1)，得到绿色固体化合物11-6(6mg，收率：81％)。LCMS(ESI,m/z)：515.2[M+H]+。
步骤6：化合物T11的合成
将3mL盐酸的二氧六环溶液逐滴添加到N-[1-(4-{[4-(7-氨基-1-苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(6mg，0.0117mmol)中。将反应混合物在25℃搅拌45min。然后过滤并收集固体，用5mL Et2O洗涤两次，得到呈棕色固体的化合物T11的盐酸盐(5mg，收率：73.5％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ＝8.65(d,J＝5.3,1H),8.04(d,J＝8.7,2H),7.93–7.88(m,4H),7.54–7.45(m,3H),3.92-3.80(m,4H),2.52(s,2H),2.33-2.30(m,2H),1.66(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：415.2[M+H]+。
实施例12：2-(5-(2-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-基)丙醇(T12)的合成
步骤1：5-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸甲酯(化合物12-2)的合成
将5-(2-氯-4-(三甲基锡基)嘧啶-5-基)噁唑(化合物12-1，500mg，1.4519mmol)溶于DMF(5mL)溶液中，加入5-溴呋喃-2-羧酸甲酯(357.18mg，1.7422mmol)，Pd(PPh3)4(167.78mg，0.1451mmol)和碘化亚铜(I)(82.95mg，0.4355mmol)。将反应液升温到90℃，在氮气下搅拌1小时。向反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯(20mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗，将有机相减压旋干，粗产物通过flash纯化，旋干得化合物5-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸甲酯(化合物12-2，310mg)，黄色固体，产率为62.86％。LCMS(ESI,m/z)：306[M+H]+。
步骤2：甲基5-(2-(4-(4-(苄氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸酯(化合物12-3)的合成
将5-氯-5-(噁唑-5-)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸甲酯(120mg，0.3926mmol)溶于1,4-二氧六环(3mL)中。加入苄N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸酯(159.91mg，0.4711mmol)，醋酸钯(17.63mg，0.0785mmol)，X-PHOS(37.43mg，0.0785mmol)和碳酸铯(255.83mg，0.7852mmol)。反应液升温到100℃搅拌16小时。将反应液减压旋干，粗产物通过flash纯化得到化合物甲基5-(2-(4-(4-(苄氧基羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸酯(化合物12-3，100mg)，黄色固体，产率为37.67％。LCMS(ESI,m/z)：609[M+H]+。
步骤3：苄基(1-(4-(4-(5-(2-羟丙氨酸-2-基)呋喃-2-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(化合物12-4)的合成
将甲基5-(2-(4-(4-((苄氧基)羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸酯(80mg，0.1314mmol)溶于四氢呋喃(5mL)溶液中，加入甲基锂(28.88mg，1.314mmol)。反应液在-78℃，氮气下搅拌1小时。向反应液中加入水淬灭，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗，将有机相减压旋干，粗产物通过flash纯化，旋干得化合物苄基(1-(4-(4-(5-(2-羟丙氨酸-2-基)呋喃-2-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(化合物12-4，15mg)，白色固体，产率为16.89％。LCMS(ESI,m/z)：609[M+H]+。
步骤4：2-(5-(2-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-基)丙醇(化合物T12):
将苄(1-(4-(4-(4-(5-(2-(2-2-羟丙基)呋喃-2-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(15mg，0.0246mmol)溶于甲醇(2mL)溶液中，加入Pd/C(13.09mg，0.123mmol)。反应液在氢气下室温搅拌3小时。反应液过滤减压浓缩，粗产物通过flash纯化，得到化合物T12(7mg，白色固体，收率：54.07％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.34(d,J＝7.0Hz,2H),7.63(d,J＝8.8Hz,2H),7.25(s,1H),7.07(d,J＝3.4Hz,1H),7.03(d,J＝8.8Hz,2H),6.41(d,J＝3.6Hz,1H),3.27(d,J＝6.0Hz,2H),3.12(d,J＝5.2Hz,2H),1.75(d,J＝3.6Hz,4H),1.40(s,6H),1.24(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：475.25[M+H]+。
实施例13：2-(5-2-(4-氨基-4-甲基哌啶基苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-2-吡咯-2-醇(T13)的合成
步骤1：5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(化合物13-2)的合成-
将醋酸钾(1.923g，19.6mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.1717g，0.98mmol)加入到化合物5-溴吡咯-2-羧酸甲酯(化合物13-1，2g，9.80mmol)和4，4，4，5，5，5，5-八甲基-2，2-二氧杂硼烷(3.7g，14.7mmol)的1,4-二氧六环溶液中。然后，反应液在氮气中110℃下搅拌4小时。将反应液用水淬灭，乙酸乙酯(50mL)萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥干燥有机相，减压旋蒸除去有机溶剂，粗产物通过柱层析纯化(EtOAc/PE＝10/1)，得化合物5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(化合物13-2，2.2g)，白色固体，产率为87％。LCMS(ESI,m/z)：252.1[M+H]+。
步骤2：5-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(化合物13-3)的合成
将Pd(dppf)Cl2 DCM(81.25mg，0.0995mmol)和碳酸钾(824.4mg，0.0995mmol)加入到5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(500mg，1.9913mmol)和2，4-二氯-5-(1，3-噁唑-5-基)嘧啶(516.2mg，2.3895mmol)的1,4-二氧六环/H2O(体积比5/1，11mL)溶液中。然后，反应液在氮气中50℃下搅拌4小时。反应液用乙酸乙酯(50mL)萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸除去有机溶剂，粗产物通过柱层析纯化(EtOAc/PE从20/80到35/64)，得化合物5-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(300mg)，白色固体，产率为43.5％。LCMS(ESI,m/z)：305.0[M+H]+。
步骤3：5-(2-(4-(4-(苄氧基羰基氨基)-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(化合物13-4)的合成
将碳酸钠(139.16mg，1.3128mmol)、Pd2(dba)3(60.11mg，0.0656mmol)和Xphos(62.58mg，0.1312mmol)加入到5-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(200mg，0.6564mmol)和N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸苄酯(222.8mg，0.6564mmol)的1,4-二氧六环溶液中。然后，反应液在氮气中100℃下搅拌16小时。将反应液用水淬灭，二氯甲烷(50mL)萃取两次，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥干燥，减压旋蒸除去有机溶剂，粗产物通过柱层析纯化(EtOAc/PE＝1/1)，得化合物5-(2-(4-(4-(苄氧基羰基氨基)-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(170mg)，黄色固体，产率为42.6％。LCMS(ESI,m/z)：608.2[M+H]+。
步骤4：1-(4-(4-(4-(5-羟基丙2-基)-1H-吡咯-2-基)-5-噁唑-5-氨基嘧啶基苯基)苯基苄基-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(化合物13-5)的合成
将5-(2-(4-(4-(苄氧基羰基氨基)-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(120mg，0.1975mmol)溶于干燥的DCM中。反应液在氮气中用冰水浴冷却至0℃，在此温度下，向反应液中逐滴滴加MeMgBr溶液(3.0M in Et2O)(1.32mL，3.9496mmol)。加毕后，反应液保持在该温度下继续搅拌21小时。反应液用饱和氯化铵的水溶液(5mL)淬灭，再用二氯甲烷(10mL)萃取3次，合并有机相，有机相再用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸除去有机溶剂，粗产品使用柱层析纯化，得产物1-(4-(4-(4-(5-羟基丙2-基)-1H-吡咯-2-基)-5-噁唑-5-氨基嘧啶基苯基)苯基苄基-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(15mg)，黄色固体，产率为12.5％。LCMS(ESI,m/z)：608.3[M+H]+。
步骤5：2-(5-2-(4-氨基-4-甲基哌啶基苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-2-吡咯-2-醇(化合物T13)的合成
将1-(4-(4-(4-(5-羟基丙2-基)-1H-吡咯-2-基)-5-噁唑-5-氨基嘧啶基苯基)苯基苄基-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(10.0mg，0.0165mmol)和Pd/C(7.0mg，0.066mmol)溶于MeOH/NH3 .H2O(v/v＝20:1,1mL)中。反应混合物在氢气中室温下搅拌5小时。将反应液用滤膜过滤，除去固体杂质，滤液直接冻干，得到化合物T13(8.0mg，黄色固体，收率：88.5％)。1HNMR(400MHz,d6-DMSO)：δ10.21(brs,1H),9.59(s,1H),8.53(s,1H),8.25(s,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,2H),7.32(s,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),5.94(s,1H),5.57(s,1H),5.39(s,1H),3.16-3.06(m,4H),1.56-1.47(m,4H),1.44(s,6H),1.09(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：474.3[M+H]+。
实施例14：4-(4-氨基-4-甲基哌啶基苯基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-(1，3-噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T14)的合成
步骤1：2-氯-4-甲基哌嗪-5-噁唑-5-嘧啶(化合物14-2)的合成
将化合物14-1(100mg，0.46mmol)溶于EtOH(2mL)中，在0℃下加入1-甲基哌嗪(46mg，0.46mmol)和DIEA(119mg，0.92mmol)。反应液升温到25℃搅拌2小时。将H2O(10mL)在0℃滴加到反应液中，然后用乙酸乙酯(200mL)萃取3次，有机相合并，用饱和食盐水(100mL)洗涤两次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后用柱层析纯化(0-5％ MeOH/DCM)得到化合物14-2(120mg)，黄色固体，产率为83.41％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.55(s,1H),8.26(s,1H),7.45(s,1H),3.35(t,J＝4.8Hz,4H),2.33(t,J＝4.8Hz,4H),2.17(s,3H)。
步骤2：5N-[4-甲基-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-(1，3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基苯基)哌啶-4-基氨基甲酸吡啶(化合物14-3)的合成
将化合物14-2(100mg，0.35mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中，依次加入N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸苄酯(121mg，0.35mmol),Pd(OAc)2(8mg，0.035mmol),X-PHOS(34mg，0.071mmol)和Cs2CO3(232mg，0.71mmol)。反应液升温到100℃搅拌2小时将H2O(1mL)在0℃滴加到反应液中，然后用乙酸乙酯(200mL)萃取3次，有机相合并，用饱和食盐水(100mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后用柱层析纯化(0-3％ MeOH/DCM)得到化合物14-3(40mg)，黄色固体，产率为17.2％。LCMS(ESI,m/z)：583.3[M+H]+。
步骤3：4-(4-氨基-4-甲基哌啶基苯基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-(1，3-噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T14)的合成
将化合物14-3(30mg，0.052mmol)溶于MeOH(2.0mL)中，在25℃加入Pd/C(0.55mg，0.05mmol)。反应液在25℃搅拌12小时。随后，反应液过滤除去Pd/C。滤液减压浓缩得到粗品经制备型HPLC(H2O(0.1％FA)-ACN(0.1％ FA)纯化得到化合物T14(10.72mg，白色固体，收率：40.78％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.16(s,1H),7.95(s,1H),7.38(d,J＝8.8Hz,2H),7.09(s,1H),6.88(d,J＝8.8Hz,2H),3.31-3.29(m,4H),3.21(s,2H),3.14-3.10(m,2H),3.02-2.96(m,2H),2.37(t,J＝4.4Hz,4H),2.19(s,3H),1.61(dd,J＝10.8,6.4Hz,4H),1.10(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：449.20[M+H]+。
实施例15：2-(6-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基吡啶-2-基-2-醇(T15)的合成
步骤1：2-(6-(2-氯-5-噁唑-5-基)嘧啶-4-基吡啶-2-基-2-丙醇(化合物15-2)的合成
将化合物2-(6-(三丁基锡烷基)吡啶-2-基)丙烷-2-醇(化合物15-1,600mg，1.4077mmol)和5-(2，4-二氯嘧啶-5-基)噁唑(312mg，1.4077mmol)溶于甲苯溶液(6.0mL)中，室温加入四三苯基磷钯(166.8mg，0.14077mmol。然后，反应液升温到150℃搅拌2小时。用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(PE/EA＝1/1)，旋干得化合物2-(6-(2-氯-5-噁唑-5-基)嘧啶-4-基吡啶-2-基-2-丙醇(300mg)，固体，产率为40.37％。LCMS(ESI,m/z)：316.9[M+H]-。
步骤2：1-(4-(4-(4-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-5-噁唑-5-基氨基嘧啶)苯基)苄基-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(化合物15-3)的合成
将化合物2-(6-(2-氯-5-噁唑-5-基)嘧啶-4-基吡啶-2-基-2-丙醇(300mg，0.9471mmol)和1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸苄酯(642.95mg，1.8942mmol)溶于2-戊醇(9.4mL)中，室温加入三氟乙酸(1079.88mg，9.471mmol)。然后，反应液升温到100℃搅拌4小时。用2M NaHCO3将pH调节至6-7，然后用乙酸乙酯(3mL)萃取两次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤两次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产品用半制备液相色谱纯化，得到1-(4-(4-(4-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-5-噁唑-5-基氨基嘧啶)苯基)苄基-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(22.0mg)，固体，产率为3.56％。LCMS(ESI,m/z)：620.4[M+H]-。
步骤3：2-(6-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基吡啶-2-基-2-醇(化合物T15)的合成
将1-(4-(4-(4-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-5-噁唑-5-基氨基嘧啶)苯基)苄基-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(22mg，0.0355mmol)溶于甲醇/水＝20：1(5.0mL)溶液中加入钯碳(3.78mg),在25℃氢气下搅拌4小时。反应液过滤，滤液减压浓缩得到化合物T15(18mg，固体，收率：103.38％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.81(s,1H),8.62(s,1H),8.22(s,1H),7.97(t,J＝7.8Hz,1H),7.80(d,J＝7.4Hz,1H),7.75–7.70(m,1H),7.60(d,J＝9.0Hz,2H),7.05(s,1H),6.91(d,J＝9.2Hz,2H),3.17(s,1H),3.13(dd,J＝6.8,3.8Hz,4H),1.57–1.51(m,2H),1.48–1.43(m,2H),1.18(s,6H),1.06(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：486.2[M+H]+。
实施例16：N-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-苯基)-4-苯并呋喃-2-基-5-噁唑-5-氨基嘧啶(T16)的合成
步骤1：5-(4-苯并呋喃-2-基)-2-氯嘧啶-5-基噁唑(化合物16-2)的合成
将化合物5-(2，4-二氯嘧啶-5-基)噁唑(化合物16-1,200mg，0.9258mmol)和苯并呋喃-2-硼酸(179.92mg，1.1110mmol)溶于1，4-二氧六环溶液/水＝5：1溶液(24.0mL)中，室温加入Pd(dppf)Cl2(67.74mg，0.09258mmol)和三乙胺(187.36mg，1.8516mmol)。然后，反应液升温到50℃搅拌6小时。然后用乙酸乙酯(20mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(10mL)洗涤两次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝20/1)，旋干得化合物5-(4-苯并呋喃-2-基)-2-氯嘧啶-5-基噁唑(222.3mg)，白色固体，产率为76.63％。LCMS(ESI,m/z)：298.0[M+H]-。
步骤2：1-(4-(4-(4-(2-苯并呋喃基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯基)-4-甲基哌啶-4-氨基甲酸酯(化合物16-3)的合成
将化合物5-(4-苯并呋喃-2-基)-2-氯嘧啶-5-基噁唑(70mg，0.2351mmol)和1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(71.8mg，0.2351mmol)溶于1，4-二氧六环溶液(2.0mL)中，室温加入X-Phos(22.42mg，0.04702mmol)，醋酸钯(5.28mg，0.02351mmol)和碳酸铯(153.2mg，0.4702mmol)。然后，反应液升温到100℃搅拌7小时。然后用乙酸乙酯(2mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(1mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝20/1)，旋干得化合物1-(4-(4-(4-(2-苯并呋喃基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯基)-4-甲基哌啶-4-氨基甲酸酯(35.0mg)，固体，产率为22.33％。LCMS(ESI,m/z)：567.3[M+H]-。
步骤3：N-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-苯基)-4-苯并呋喃-2-基-5-噁唑-5-氨基嘧啶(化合物T16)的合成
将1-(4-(4-(4-(2-苯并呋喃基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯基)-4-甲基哌啶-4-氨基甲酸酯(10mg，0.0176mmol)溶于1M的盐酸1，4-二氧六环溶液(2.0mL)中加入钯碳(10mg)，在25℃搅拌2小时。反应液减压浓缩，粗产品用半制备液相色谱纯化，得到产物T16(3.0mg，固体，收率：35.23％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.50(s,1H),8.34(s,1H),7.68(t,J＝7.2Hz,3H),7.45(s,1H),7.37(q,J＝7.8Hz,2H),7.31–7.25(m,2H),7.06(d,J＝8.8Hz,2H),3.49–3.41(m,2H),3.15–3.05(m,2H),1.97–1.86(m,4H),1.41(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：467.2[M+H]+。
实施例17：N-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基苯基)-4-吗啉基-5-噁唑-5-基嘧啶-2-胺(T17)的合成
步骤1：4-(2-氯-5-噁唑-5-基)嘧啶-4-吗啉(化合物17-2)的合成
将化合物17-1(100mg，0.46mmol)溶于EtOH(2mL)中，在0℃下加入吗啉(40mg，0.46mmol)和DIEA(119mg，0.92mmol)。反应液升温到25℃搅拌2小时。将H2O(10mL)在0℃滴加到反应液中，然后用乙酸乙酯(200mL)萃取3次，有机相合并，用饱和食盐水(100mL)洗涤两次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后用柱层析纯化(0-5％ MeOH/DCM)得到化合物17-2(80mg)，黄色固体，产率为58.33％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.55(s,1H),8.29(s,1H),7.46(s,1H),3.65–3.57(m,4H),3.39–3.33(m,4H)。
步骤2：4-甲基-1-(4-(4-吗啉基-5-噁唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯基哌啶-4-氨基吡啶苄酯)(化合物17-3)的合成
将化合物17-2(50mg，0.18mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中，依次加入N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸苄酯(63mg，0.18mmol)，Pd(OAc)2(4mg，0.018mmol)，Brettphos-Pd-G3(34mg，0.037mmol)和Cs2CO3(112mg，0.37mmol)。反应液升温到100℃搅拌2小时。将H2O(1mL)在0℃滴加到反应液中，然后用乙酸乙酯(200mL)萃取3次，有机相合并，用饱和食盐水(100mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后用柱层析纯化(0-5％ MeOH/DCM)得到化合物17-3(30mg)，黄色固体，产率为25.2％。LCMS(ESI,m/z)：570.3[M+H]+。
步骤3：N-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基苯基)-4-吗啉基-5-噁唑-5-基嘧啶-2-胺(T17)的合成
将化合物17-3(30mg，0.052mmol)溶于MeOH(2.0mL)中，在25℃加入Pd/C(0.56mg，0.052mmol)。反应液过滤除去Pd/C。滤液减压浓缩得到粗品经制备型HPLC(H2O(0.1％FA)-ACN(0.1％ FA))纯化得到T17(4.82mg，白色固体，产率：20.8％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.17(s,1H),7.97(s,1H),7.40(d,J＝9.0Hz,2H),7.11(s,1H),6.90(d,J＝9.0Hz,2H),3.64–3.56(m,4H),3.34(dt,J＝12.7,4.5Hz,2H),3.31–3.26(m,4H),2.99-2.92(m,2H),1.89-1.76(m,4H),1.33(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：436.15[M+H]+。
实施例18：1-(4-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-碳腈(T18)的合成
步骤1：2-(4-溴噻唑-2-基)乙腈(化合物18-2)的合成
将化合物2,4-二溴-1,3-噻唑(化合物18-1，10g，0.041mol)、2-氰基乙酸叔丁酯(9.31g，0.065mol)和碳酸钾(17.08g，0.123mol)溶于NMP(100mL)中，80℃搅拌16小时，然后冷却至室温，用盐酸调节pH到2并过滤得到粗产品。加入4M盐酸水溶液(120mL)和乙酸(120mL)，在80℃搅拌30分钟。将反应液减压旋干得到化合物2-(4-溴噻唑-2-基)乙腈(5g)，棕色固体，产率为53.88％。LCMS(ESI,m/z)：203[M+H]+。
步骤2：1-(4-溴噻唑-2-基)环丙烷-1-碳腈(化合物18-3)的合成
将氢氧化钠(5.91g，0.147mol)的水溶液(80mL)滴加到含2-(4-溴噻唑-2-基)乙腈(4g，0.0197mol),1,2-二溴乙烷(11.10g，0.0591mol)和TEBAC(0.22g，0.00098mol)的圆底烧瓶中，在25℃搅拌2小时。将反应液用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥减压旋干，粗产品通过硅胶柱纯化(PE/EA＝9/1)，得到化合物1-(4-溴噻唑-2-基)环丙烷-1-碳腈(2.5g)，白色固体，产率为49.75％。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ7.82(s,1H),2.03(d,J＝3.5Hz,2H),1.78(d,J＝3.5Hz,2H)。
步骤3：1-(4-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-碳腈(化合物18-4)的合成
将1-(4-溴-1,3-噻唑-2-基)环丙烷-1-碳腈(100mg，0.43mmol)、2-(4-溴噻唑-2-基)乙腈2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)-4-(三甲基锡基)嘧啶(150mg，0.43mmol)、Pd2(dba)3(10mg，0.011mmol)和三苯基砷(13mg，0.043mmol)溶于甲苯(2mL)，在氮气下升温到120℃搅拌2小时。将反应液过滤旋干，粗产品通过硅胶柱纯化(PE/EA＝2/1)，得到化合物1-(4-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-碳腈(30mg)，白色固体，产率为18.76％。LCMS(ESI,m/z)：330[M+H]+。
步骤4：叔丁基N-{1-[4-({4-[2-(1-氰基环丙基)-1,3-噻唑-4-基]-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基}氨基)苯基]-4-甲基哌啶(化合物18-5)的合成
将Xphos(4mg，0.0091mmol)、碳酸铯(59mg，0.18mmol)、醋酸钯(2mg，0.0091mmol)、1-(4-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-碳腈(30mg，0.091mmol)和N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(33mg，0.11mmol)溶于1，4-二氧六环(2mL)，在氮气下升温到100℃搅拌2小时。将反应液过滤旋干，粗产品通过硅胶柱纯化(PE/EA＝2/1)，得到化合物叔丁基N-{1-[4-({4-[2-(1-氰基环丙基)-1,3-噻唑-4-基]-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基}氨基)苯基]-4-甲基哌啶(10mg)，白色固体，产率为16.48％。LCMS(ESI,m/z)：599[M+H]+。
步骤5：1-(4-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-碳腈(化合物T18)的合成
将叔丁基N-{1-[4-({4-[2-(1-氰基环丙基)-1,3-噻唑-4-基]-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基}氨基)苯基]-4-甲基哌啶(10mg，0.016mmol)溶于盐酸的1，4-二氧六环溶液中(1mL)，在25℃搅拌1小时。将反应液旋干得到化合物T18(1.76mg，白色固体，收率：20.36％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.85(s,1H),8.57(s,1H),8.39(s,1H),8.27(s,1H),8.17(s,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,2H),7.16(s,1H),6.97(d,J＝8.7Hz,2H),3.46(d,J＝12.2Hz,2H),2.99(t,J＝10.7Hz,2H),1.94(d,J＝3.3Hz,2H),1.85(s,2H),1.76(s,2H),1.48(d,J＝2.8Hz,2H),1.34(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：499[M+H]+。
实施例19：5-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-甲酰胺(T19)的合成
步骤1：5-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸甲酯(化合物19-2)的合成
将5-溴呋喃-2-羧酸甲酯(357mg，1.74mmol)、碘化亚铜(I)(83mg，0.43mmol)、Pd(pph3)4(167mg，0.14mmol)和2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)-4-(三甲基锡基)嘧啶(化合物19-1,500mg，1.45mmol)溶于DMF(10mL),在氮气下升温到90℃搅拌1小时。将H2O(20mL)加入到反应液中，然后用乙酸乙酯(25mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后用硅胶柱纯化(PA/EA＝2/1)得到化合物3.5-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸甲酯(220mg，白色固体，收率：44.62％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.80(s,1H),7.79–7.62(m,1H),7.46(d,J＝3.7Hz,1H),7.35(t,J＝8.0Hz,1H),7.29(d,J＝3.7Hz,1H),3.93(s,3H)。
步骤2：5-(2-((4-((((苄氧基)羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸甲酯(化合物19-3)的合成
将苄基N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸酯(133mg，0.39mmol)、醋酸钯(14mg，0.065mmol)、Xphos(31mg，0.065mmol)、碳酸铯(213mg，0.65mmol)和3.5-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸甲酯(100mg，0.32mmol)溶于二氧六环(5mL),在氮气下升温到100℃搅拌5小时。将反应液过滤，减压浓缩后用硅胶柱纯化(PA/EA＝1/1)得到化合物5-(2-((4-((((苄氧基)羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸甲酯(40mg)，白色固体，产率为18.07％。LCMS(ESI,m/z)：609[M+H]+。
步骤3：5-(2-((4-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸(化合物19-4)的合成
将5-(2-((4-((((苄氧基)羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸甲酯(40mg，0.065mmol)和氢氧化锂(27mg，0.65mmol)溶于四氢呋喃和水的1:1混合液(2mL),在25℃搅拌16小时。用1mol/L盐酸将反应液pH调节到6，过滤得到化合物5-(2-((4-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸(40mg)，白色固体，产率为69.10％。LCMS(ESI,m/z)：595[M+H]+。
步骤4：苄基(1-(4-((4-(5-氨甲酰呋喃-2-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(化合物19-5)的合成
将5-(2-((4-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-羧酸(30mg，0.050mmol)、EDCI(19mg，0.10mmol)和HOBT.NH3(15mg，0.10mmol)溶于DMF(1mL),在氮气下升温到100℃搅拌5小时。将反应液用水(5mL)稀释，DCM(5mL)萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩后用硅胶柱纯化(EA)得到化合物苄基(1-(4-((4-(5-氨甲酰呋喃-2-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(25mg)，白色固体，产率为75.05％。LCMS(ESI,m/z)：594[M+H]+。
步骤5：5-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-甲酰胺(化合物T19)的合成
将苄基(1-(4-((4-(5-氨甲酰呋喃-2-基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)苯基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(5mg，0.0084mmol)和Pd/C(0.09mg，0.00084mmol)溶于甲醇(1mL),在氢气下25℃搅拌2小时。将反应液过滤，减压浓缩得到化合物T19(1.48mg，白色固体，收率：34.52％)。LCMS(ESI,m/z)：460[M+H]+。
实施例20：N-(4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-4-(7-氨基苯并呋喃-2-基)-5-(氧杂-3-基)嘧啶-2-胺(T20)的合成
步骤1：化合物20-2的合成
将化合物20-1(500mg，2.19mmol)、3-碘氧杂环丁烷(1.61mg，8.77mmol)，三(三甲硅基)硅烷(818mg，3.29mmol)，[4,4′-双(1,1-二甲基乙基)-2,2′-联吡啶N1,N1']双[3,5-二氟-2-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基N]苯基-C]六氟磷酸铱(III)(49.1mg，0.04mmol)，4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶(11.7mg，0.04mmol)，Na2CO3(930mg，8.77mmol)以及NiCl·DME(8.69mg，0.04mmol)溶于DME(10mL)中，在35℃、40W蓝灯下搅拌反应。LCMS检测反应完成后，过滤，浓缩并通过硅胶柱纯化(PE/EA＝0至30％)，得到无色油状化合物20-2(220mg，纯度85％，收率41.56％)。LCMS(ESI,m/z)：205.0[M+H]+。
步骤2：化合物20-3的合成
将化合物20-2(200mg，0.97mmol)、6-甲基-2-(7-硝基苯并呋喃-2-基)-1,3,6,2-二氧氮杂硼烷-4,8-二酮(310mg，0.97mmol)，Pd(dtbpf)Cl2(50.8mg，0.07mmol。用EA(15mL)提取混合物2次，并在真空下合并和浓缩有机层。通过闪蒸(PE/EA＝0至40％)纯化粗产物，得到浅棕色固体化合物20-3(130mg，88％，36.16％产率)。LCMS(ESI,m/z)：332.0[M+H]+。
步骤3：化合物20-4的合成
将化合物20-3(120mg，0.36mmol)、N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸苄酯(122mg，0.36mmol)、Xantphos Palladacycle Gen.3(34mg，0.03mmol)和Cs2CO3(235mg，0.72mmol)存于二氧六环(5mL)中的溶液在氮气下加热至100℃16小时。产物通过LCMS检测。混合物在真空下浓缩。通过TLC纯化粗产物(DCM/MeOH＝15/1)，得到淡黄色固体形式的化合物20-4(40mg，纯度90％，收率15.67％)。
步骤4：化合物T20的合成
苄基(4-甲基-1-(4-((4-(7-硝基苯并呋喃-2-基)-5-(氧杂环丁烷-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(30mg，0.0473mmol)和Pd/C(2.52mg，0.0236mmol)溶于2mL甲醇中，常温常压氢化催化反应4小时。然后过滤固体并用甲醇洗涤固体。真空除去过液中的溶剂，使用Genal Prep HPLC纯化产物(ACN-H2O(0.1％FA))作为流动相)，得到化合物T20甲酸盐(7mg，淡黄色固体，收率：31.1％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ＝8.54(s,1H),7.63(d,J＝9.0,2H),7.54(s,1H),7.08–7.03(m,4H),6.78(dd,J＝6.8,1.8,1H),5.20(dd,J＝8.2,5.9,2H),5.05(m,1H),4.85–4.81(m,4H),3.09(m,2H),1.92–1.82(m,4H),1.37(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：471.2[M+H]+。
实施例21：甲基1-甲基-2-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸酯(T21)的合成
步骤1：化合物21-2的合成
将NIS(104.35mg，0.4638mmol)加入化合物21-1(50mg，0.3568mmol)的DMF溶液中，60℃搅拌过夜。然后将溶剂蒸发，用硅胶色谱法(MeOH在DCM中为0-10％)纯化，得到化合物21-2(85mg)为灰白色固体，收率为80.6％。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.07(s,1H),3.73(s,3H),3.60(s,3H)。
步骤2：化合物21-3的合成
向化合物21-2(80mg，0.3007mmol)、INT A(113.91mg，0.3307mmol)、碘化亚铜(I)(11.45mg，0.0601mmol)的二氧六环溶液中加入Pd(pph3)4(34.75mg，0.03mmol)在氮气条件下搅拌回流4小时。用饱和水(30mL)淬火。用乙酸乙酯(30mL)萃取3次，浓缩有机相，用制备型HPLC(ACN-H2O(0.1％ FA))纯化，得到化合物3(25mg)为白色固体，收率26％。
步骤3：化合物T21的合成
向化合物21-3(20mg，0.0626mmol)，4-(4-甲基哌嗪)苯胺(17.96mg，0.0939mmol)和一水对甲苯磺酸(16.65mg，0.0876mmol)的混合物中加入2-戊醇，在100℃下搅拌过夜。溶剂在真空下浓缩得到粗产物，用制备型HPLC法(ACN-H2O(0.1％ FA))纯化得到化合物T21(8mg，棕色固体，收率25.5％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.92(s,1H),8.21(s,1H),8.10(s,1H),7.64(d,J＝9.2Hz,2H),7.08(s,1H),7.05(d,J＝9.2Hz,2H),3.91(s,3H),3.81(d,J＝10.0Hz,5H),3.63(d,J＝12.4Hz,2H),3.28(s,2H),3.04(d,J＝11.6Hz,2H),3.00(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：475.2[M+H]+。
实施例22：1-(4-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)环丙烷-1-甲腈(T22)的合成
步骤1：2-(4-碘吡唑-1-基)乙腈(化合物22-2)的合成
在0℃下，向化合物4-碘-1H-吡唑(化合物22-1,2g，0.0103mol)的无水THF(20mL)溶液中加入NaH(0.27g，0.0113mol)并搅拌10分钟。加入化合物2-溴乙腈(1.24g，0.0103mol)，反应在25℃搅拌14小时。完成后，反应用水淬灭。混合物用EtOAc(20mL)萃取3次，有机层用饱和食盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩。将粗品通过FCC(溶剂梯度：PE中的EA 0％～30％)纯化，得到化合物2-(4-碘吡唑-1-基)乙腈(2.171g，90.29％)，为白色固体。LCMS(ESI,m/z)：234.00[M+H]+。
步骤2：1-(4-碘吡唑-1-基)环丙烷-1-甲腈(化合物22-3)的合成
将DMSO(5.25mL)冷却至10℃并在氮气下搅拌10分钟，分批加入NaH(216.3mg，9.0123mmol)。化合物2-(4-碘吡唑-1-基)乙腈(500mg，2.1458mmol)和化合物1,2-二溴乙烷(1209.34mg，6.4374mmol)DMSO(5.25mL)的混合溶液在30分钟内逐滴添加。添加过程中，保持内部温度在10～20℃之间。将反应在20℃以下搅拌6小时，在25℃搅拌10小时。完成后，将反应用饱和氯化铵水溶液在5℃缓慢淬灭。混合物用EtOAc(15mL)萃取3次，有机层用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液。将粗品通过FCC纯化(溶剂梯度：EA在PE中0％～15％)，得到化合物1-(4-碘吡唑-1-基)环丙烷-1-甲腈(176.4mg，31.74％)，为无色油状液体。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.25(d,J＝0.4Hz,1H),7.70(d,J＝0.4Hz,1H),1.84(ttd,J＝8.0,7.2,2.4Hz,4H)。
步骤3：1-{4-[2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基]吡唑-1-基}环丙烷-1-甲腈(化合物22-4)的合成
向1-(4-碘吡唑-1-基)环丙烷-1-甲腈)(130mg，0.5018mmol)的甲苯(4mL)溶液加入化合物2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)-4-(三甲基甲锡烷基)嘧啶(172.81mg，0.5018mmol)、Pd2(dba)3(45.95mg，0.0501mmol)和AsPh3(15.37mg，0.0501mmol)。将反应在120℃搅拌2小时。完成后，反应混合物用水淬灭。混合物用EtOAc(10mL)萃取3次，有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液。通过制备型TLC(PE:EA＝1:1)纯化粗品，得到化合物1-{4-[2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基)]吡唑-1-基}环丙烷-1-甲腈(49mg，31.23％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.87(s,1H),8.65(s,1H),8.50(s,1H),7.63(s,1H),7.50(s,1H),1.95–1.85(m,4H)。
步骤4：叔丁基N-{1-[4-({4-[1-(1-氰基环丙基)吡唑-4-基]-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基}氨基)苯基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸酯)(化合物22-5)的合成
将化合物1-{4-[2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基]吡唑-1-基}环丙烷-1-甲腈、化合物N-[1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(46.88mg，0.1534mmol)、Pd(AcO)2(5.74mg，0.0255mmol)、Xphos(12.19mg，0.0255mmol)和Cs2CO3(83.34mg，0.2558mmol)溶于1,4-二氧六环溶液(2mL)中。将反应在100℃搅拌2小时。完成后，反应混合物用水淬灭。混合物用EtOAc(10mL)萃取3次，有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液。将粗品通过半制备型HPLC(ACN(0.1％ FA)在5％至50％的水中)纯化以提供化合物叔丁基N-{1-[4-({4-[1-(1-氰基环丙基)吡唑-4-基]-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基}氨基)苯基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸酯(20mg，26.90％)，为棕色固体。LCMS(ESI,m/z)：582.50[M+H]+。
步骤5：1-(4-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)环丙烷-1-甲腈(化合物T22)的合成
化合物叔丁基N-{1-[4-({4-[1-(1-氰基环丙基)吡唑-4-基]-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-))基}氨基)苯基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸酯(10mg，0.0172mmol)在DCM:TFA＝6:1(1.4mL)中的溶液在25℃下搅拌0.5小时。完成后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液缓慢淬灭。混合物用EtOAc(15mL)萃取3次，有机层用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液。通过制备型TLC(DCM:MeOH＝9:1)纯化粗产品，得到化合物T22(4.85mg，黄色固体，收率：56.98％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.69(s,1H),8.51(s,1H),8.46(s,1H),8.06(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.56(s,1H),7.36(s,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),3.14(ddd,J＝18.0,10.4,5.6Hz,4H),1.93(dd,J＝8.4,6.0Hz,2H),1.83(dd,J＝8.4,6.0Hz,2H),1.60–1.47(m,4H),1.10(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：482.20[M+H]+。
实施例23：4-异丙基吡唑-4-氨基-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-噁唑-5-氨基嘧啶(T23)的合成
步骤1：5-氯-4-异丙基吡唑-4-基嘧啶-5-基噁唑(化合物23-2)的合成
将化合物4-异丙基-4-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-吡唑(化合物23-1,400mg，1.700mmol)和5-(2，4-二氯嘧啶-5-基)噁唑(366mg，1.700mmol)溶于1,4二氧六环/水＝8：1溶液(5.0mL)中，室温加入Pd(dppf)Cl2(124.8mg，0.1700mmol)和碳酸钠(450.5mg，4.25mmol)。然后，反应液升温到80℃搅拌18小时。用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(PE/EA＝1/1)，旋干得化合物5-氯-4-异丙基吡唑-4-基嘧啶-5-基噁唑(120mg)，固体，产率为30.0％。LCMS(ESI,m/z)：290.1[M+H]-。
步骤2：4-异丙基吡唑-4-氨基-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-噁唑-5-氨基嘧啶(化合物T23)的合成
将化合物5-氯-4-异丙基吡唑-4-基嘧啶-5-基噁唑(60mg，0.2071mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(39.61mg，0.2071mmol)溶于2-戊醇(4.0mL)中，室温加入PTSA(78.78mg，0.4142mmol)。然后，反应液升温到80℃搅拌24小时。用2M NaHCO3将pH调节至6-7，然后用乙酸乙酯(2mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产品用半制备液相色谱纯化，得到化合物T23(10.39mg，固体，收率：11.25％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.24(s,1H),7.95(s,1H),7.51(s,1H),7.49–7.42(m,3H),7.10(s,1H),7.05(s,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),4.40(dt,J＝13.2,6.6Hz,1H),3.24–3.15(m,4H),2.66(s,4H),2.39(s,3H),1.43(d,J＝6.8Hz,6H)。LCMS(ESI,m/z)：445.1[M+H]+。
实施例24：2-(3-甲基-5-苯基)氨基-5-(3-甲基-5-基)嘧啶-4-呋喃-2-基呋喃-2-醇(T24)的合成
步骤1：5-(2-氯-5-噁唑-5-基)嘧啶-4-基-3-甲基呋喃-2-羧酸甲酯(化合物24-2)的合成
将2，4-二氯-5-(1，3-噁唑-5-基)嘧啶(化合物24-1，500.0mg，2.3146mmol)、3-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)呋喃-2-羧酸甲酯(739.09mg，2.7775mmol)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(169.36mg，0.2314mmol)和碳酸钾(958.24mg，6.9437mmol)加入到1，4-二氧六环/水＝4:1(10mL)的溶液中，在90℃氮气保护下搅拌反应5个小时。将反应混合物用水淬灭并用乙酸乙酯(100mL)萃取2次。将有机相合并用无水硫酸钠干燥，过滤并用旋转蒸发仪浓缩干燥。将所得固体用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/l)，得到的化合物24-2(490mg，纯度：90％，收率：59.60％)为白色固体。LCMS(ESI,m/z)：320.05[M+H]+。
步骤2：3-甲基-5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-呋喃-2-羧酸甲酯(化合物24-3)的合成
将5-[2-氯-5-(1，3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基]-3-甲基呋喃-2-羧酸甲酯(50.0mg，0.1564mmol)，4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(35.90mg，0.1876mmol),醋酸钯(3.51mg，0.0156mmol)，碳酸铯(101.92mg，0.3128mmol)和2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(7.46mg，0.00156mmol)溶于1，4-二氧六环(1mL)中,在100℃氮气保护下搅拌4小时。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。将反应混合物浓缩旋干。将粗产物吸附到硅胶上形成干燥样品，用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3：1)，得到化合物24-3(30.0mg，纯度：95％，收率：38.40％)，黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：475.15[M+H]+。
步骤3：2-(3-甲基-5-苯基)氨基-5-(3-甲基-5-基)嘧啶-4-呋喃-2-基呋喃-2-醇(化合物T24)的合成
将3-甲基-5-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基-5-(1，3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(100.0mg，0.2107mmol)溶于四氢呋喃(8mL)溶液中，降温至-78℃并使用氮气保护。然后向其中加入甲基锂的正己烷溶液(69.47mg，3.1605mmol)，在-78℃下搅拌反应4个小时。同液质联用监测反应原料全部消耗完后，通过加入饱和的氯化铵水溶液淬灭反应，然后用乙酸乙酯萃取。将有机相合并并浓缩旋干。将粗产物吸附在硅胶粉末上形成干燥样品，通过制备(乙腈-水(0.1％三氟乙酸)纯化，得到T24(11.9mg，黄色固体，收率：39.66％)。1HNMR(400MHz,DMSO)：δ9.69(s,1H),8.47(s,1H),8.38(s,1H),7.66(d,J＝8.6Hz,2H),7.30(s,1H),6.92(d,J＝9.1Hz,2H),6.87(s,1H),5.19(s,1H),3.10–3.05(m,4H),2.45(d,J＝5.0Hz,4H),2.22(s,3H),2.15(s,3H),1.26(s,6H)。LCMS(ESI,m/z)：475.20[M+H]+。
实施例25：4-苯并呋喃-2-基-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-5-甲腈(T25)的合成
步骤1：4-苯并呋喃-2-基-2-氯嘧啶-5-甲腈(化合物25-2)的合成
在氮气保护下,将2,4-二氯嘧啶-5-甲腈(化合物25-1,200mg，1.15mmol)，1-苯并呋喃-2-基硼酸(186mg，1.15mmol)，Pd(dppf)Cl2(84mg，0.115mmol)及Na2CO3(304.7mg，2.87mmol)溶于10mL二氧六环/水溶液中(v/v＝4：1)，在80℃下反应1小时。TLC检测反应完全后，加入水溶液(5mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(20mL)萃取3次，合并的有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)分离纯化得到化合物4-苯并呋喃-2-基-2-氯嘧啶-5-甲腈(80mg)，白色固体，收率27％。
步骤2：4-苯并呋喃-2-基-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-5-甲腈(化合物T25)的合成
在氮气保护下,将4-苯并呋喃-2-基-2-氯嘧啶-5-甲腈(30mg，0.117mmol)，4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(25mg，0.128mmol)和TFA(106.7mg，0.936mmol)溶于2mL 2-戊醇中，在100℃下反应12小时。降至室温并加入碳酸氢钠饱和水溶液(5mL)淬灭反应。用二氯甲烷(5mL)萃取3次，合并的有机相用饱和食盐水(5mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。经HPLC分离纯化得到化合物T25(4.6mg，白色固体，收率：8.5％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.75(s,1H),7.92(s,1H),7.82–7.62(m,4H),7.53–7.48(m,1H),7.37(t,J＝7.5Hz,1H),7.09(d,J＝7.9Hz,2H),3.85(d,J＝11.1Hz,2H),3.63(d,J＝11.1Hz,2H),3.32(s,2H),3.05(s,2H),2.99(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：411.18[M+H]+。
实施例26：2-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-6,7-二氢苯并[d]噻唑-4(5H)-酮(T26)的合成
步骤1：3-溴环己烷-1,2-二酮(化合物26-2)的合成
在5℃搅拌的环己烷-1,2-二酮(化合物26-1,4g，0.0357mol)二甲基亚砜溶液中，按比例添加NBS(6.99g，0.0392mol)。反应混合物温度升至25℃并搅拌15小时。用50mL EA稀释混合物并用50mL水、30mL饱和用饱和食盐水洗涤。然后用硫酸钠干燥有机层并蒸发溶剂。最后，用快速柱层析纯化产物(石油醚/乙酸乙酯＝9/1)，得到黄色固体3-溴环己烷-1,2-二酮(化合物25-2,2.08g，收率27.54％)。LCMS(ESI,m/z)：191.00and 193.00[M+H]+。
步骤2：2-氨基-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(化合物26-3)的合成
将含有3-溴环己烷-1,2-二酮(1g，5.2mmol)和硫脲(0.4g，5.2mmol)的混合物的圆底烧瓶置于加热至78℃的油浴中并回流15小时。将在真空下除去混合物的溶剂后将30mLACN添加到混合物中进行沉淀。接下来，过滤悬浮液，并用15mL ACN清洗滤饼。最后，在真空下干燥固体，得到红色固体化合物26-3(650mg)，无需进一步纯化，产率：56％。LCMS(ESI,m/z)：168.9[M+H]+。
步骤3：2-碘-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(化合物26-4)的合成
向在0℃氮气搅拌的2-氨基-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(500mg，2.9724mmol)和碘化亚铜(I)(905.75mg，mmol)的ACN溶液中逐滴添加亚硝酸叔丁酯(459.77mg，4.4586mmol)。添加后将反应混合物加热至25℃并搅拌15小时。过滤混合物并用10mL ACN洗涤滤饼两次。最后除去滤液中的溶剂，用快速色谱法纯化产物，得到棕色固体化合物26-4(50mg)，收率5.73％。LCMS(ESI,m/z)：279.9[M+H]+。
步骤4：2-[2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基]-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(化合物26-5)的合成
将2-碘-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(250mg，0.8957mmol)、2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)-4-(三甲基锡基)嘧啶(339.31mg，0.9852mmol)，AsPh3(54.86mg，0.1791mmol)和Pd(AcO)2(40.22mg，0.179mmol)溶于二噁烷中的溶液在110℃下在氮气下搅拌15小时。过滤混合物，并用DCM洗涤滤饼两次。最后除去滤液中的溶剂，并通过快速色谱法纯化产物(PE/EA＝1/1)，得到棕色固体产物(92mg，收率27.8％)。LCMS(ESI,m/z)：333.0[M+H]+。
步骤5：2-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-6,7-二氢苯并[d]噻唑-4(5H)-酮(化合物T26)的合成
将4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(31.39mg，0.1641mmol)，2-[2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基]-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(52mg，0.1563mmol)和P-TsOH(14.85mg，0.0781mmol)存于2-戊醇中的溶液在氮气下油浴加热100℃搅拌16小时。然后在真空下除去混合物的溶剂。通过制备色谱板(DCM/MeOH＝10/1)纯化粗产物，得到黄色固体化合物T26(32mg，收率39.9％)。使用制备型HPLC进一步纯化。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ＝10.01(s,1H),8.86(s,1H),8.45(s,1H),8.02(s,1H),7.63(d,J＝9.0,2H),6.96(d,J＝9.0,2H),3.22(t,J＝5.9,2H),3.11(t,J＝4.8,4H),2.61(t,J＝6.4,2H),2.46(t,J＝4.8,4H),2.23(s,3H),2.17(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：488.15[M+H]+。
实施例27：2-(2-((4-(4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)吡啶-4-基)-5,6-二氢苯基[d]噻唑7(4H)-酮(T27)的合成
步骤1：化合物27-2的合成
向亚硝酸盐叔丁脂(4.59g，0.0445mol)的乙腈溶液中加入化合物27-1(5g，0.0297mol)和碘化亚铜(I)(9.05g，0.0475mol)，在N2条件下搅拌20℃过夜。经硅胶层析纯化，得到化合物27-2(0.72g)为黄色固体，收率为8.75％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ2.99(t,J＝6.0Hz,2H),2.59–2.52(m,2H),2.13–2.02(m,2H)。
步骤2：化合物27-3的合成
在化合物27-2(780mg，2.7947mmol)和INT A(1154.94mg，3.3536mmol)的1,4-二氧六环溶液中加入四三苯基膦钯(62.74mg，0.2794mmol)和三苯基砷(85.58mg，0.2794mmol)，在N2条件下，20℃，100℃搅拌6小时。用饱和水(30mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(50mL)萃取3次，浓缩有机相，用硅胶柱层析(0～50％ EA in PE)纯化，得到化合物27-3(300mg)为黄色固体，收率:30.65％。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.22(s,1H),8.62(s,1H),7.90(s,1H),2.98(t,J＝6.0Hz,2H),2.70–2.61(m,2H),2.21–2.11(m,2H)。
步骤3：化合物T27的合成
化合物27-3(40mg，0.1202mmol)，4-(4-甲基哌嗪)苯胺(27.59mg，0.1442mmol)和TsOH(2.07mg，0.0120mmol)的混合物在2-戊醇中在100℃N2下搅拌过夜。溶剂在真空中浓缩得到渣油，用制备薄层色谱(10％MeOH在DCM中)进一步纯化得到化合物T27(5mg，红色固体，收率：7.8％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ8.58(s,1H),8.19(s,1H),7.54(d,J＝8.8Hz,2H),7.43(s,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),3.10(d,J＝5.2Hz,4H),2.87(t,J＝6.0Hz,2H),2.56(t,J＝6.4Hz,6H),2.27(s,3H),2.12(dd,J＝12.8,6.4Hz,2H)。LCMS(ESI,m/z)：488.2[M+H]+。
实施例28：4-苯并呋喃-2-基-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-噻唑-5-基2-氨基嘧啶(T28)的合成
步骤1：4-苯并呋喃-2-基-2,5-二氯嘧啶(化合物28-2)的合成
在氮气保护下,将2,4,5-三氯嘧啶(化合物28-1g，5.44mmol)，1-苯并呋喃-2-基硼酸(0.88g，5.44mmol)，Pd(dppf)Cl2(0.39g，0.554mmol)及Na2CO3(1.44g，13.62mmol)溶于50mL二氧六环/水溶液中(v/v＝4：1)，在80℃下反应1小时。TLC检测反应完全后，加入水溶液(50mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(50mL)萃取3次，合并的有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10:1)分离纯化得到化合物4-苯并呋喃-2-基-2,5-二氯嘧啶(1.06g)，白色固体，收率74％。
步骤2：4-苯并呋喃-5-氯-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(化合物28-3)的合成
在氮气保护下,将4-苯并呋喃-2-基-2,5-二氯嘧啶(500mg，1.85mmol)，4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(532mg，2.03mmol)和TFA(2.08g，18.4mmol)溶于20mL2-戊醇中，在100℃下反应12小时。降至室温并加入碳酸氢钠饱和水溶液(5mL)淬灭反应。用二氯甲烷(5mL)萃取3次，合并的有机相用饱和食盐水(5mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10:1)分离纯化得到化合物4-苯并呋喃-5-氯-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(0.6g)，白色固体，收率77％。LCMS(ESI,m/z)：420.1[M+H]+。
步骤3：4-苯并呋喃-2-基-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-噻唑-5-基2-氨基嘧啶(化合物T28)的合成
在氮气保护下,将4-苯并呋喃-5-氯-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(100mg，0.238mmol)，5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1,3-噻唑(55.26mg，0.261mmol)，Xphos(11.35mg，0.0238mmol),Xphos-Pd-G3(20.15mg，0.0238mmol)及Na2CO3(63.06mg，0.595mmol)溶于10mL二氧六环/水溶液中(v/v＝4：1)，在80℃下反应2小时。TLC检测反应完全后，加入水溶液(10mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(10mL)萃取3次，合并的有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。经HPLC分离纯化得到化合物T28(15.88mg，白色固体，收率：14.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.89(s,1H),9.23(d,J＝0.7Hz,1H),8.54(s,1H),8.00(d,J＝0.7Hz,1H),7.73(d,J＝7.7Hz,1H),7.69(d,J＝8.5Hz,2H),7.50(d,J＝8.2Hz,1H),7.42–7.38(m,1H),7.30(t,J＝7.5Hz,1H),7.12(s,1H),6.95(d,J＝9.1Hz,2H),3.11–3.07(m,4H),2.46(d,J＝5.0Hz,4H),2.22(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：469.1[M+H]+。
实施例29：4-(5-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基呋喃-N-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-噁唑-5-基嘧啶-2-胺(T29)的合成
步骤1：5-溴呋喃-2-亚甲基-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物29-2)的合成
将化合物5-溴呋喃-2-甲醛(化合物29-1，1.0g，0.0057mol)，2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.69g，0.0057mol)和四乙氧基钛(2.6g，0.0114mol)溶于乙腈溶液(10mL)中。然后，反应液在室温下搅拌16个小时。向反应液中加入20mL二氯甲烷进行稀释，然后加入十水合硫酸钠继续搅拌30分钟。最后，用硅藻土进行过滤，用旋转蒸发器旋干得化合物5-溴呋喃-2-亚甲基-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.4g)直接用于下一步反应，产物为白色固体，产率为84.21％。LCMS(ESI,m/z)：277.98[M+H]+。
步骤2：5-溴呋喃-2-基咪唑(化合物29-3)的合成
将5-溴呋喃-2-基亚甲基-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(100.0mg，0.3595mmol)，对甲基苯磺酰甲基异腈(77.21mg，0.3954mmol)和碳酸钾(124.22mg，0.8987mmol)溶于甲醇(3mL),在室温下搅拌30分钟。然后将溶剂在真空下浓缩得到粗产物，用硅胶层析柱(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化，得到白色固体化合物29-3(52mg)，收率为61.11％。LCMS(ESI,m/z)：213.00[M+H]+。
步骤3：5-(4-(5-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基-2-氯嘧啶-5-基)噁唑(化合物29-4)的合成
将5-溴呋喃-2-基-1H-咪唑(10.0mg，0.0469mmol),2-氯-5-(1，3-噁唑-5-基)-4-三甲基锡烷基嘧啶(19.38mg，0.0562mmol),碘化亚铜(I)(0.89mg，0.0046mmol)和四(三苯基)钯(5.42mg，0.0046mmol)溶解在N，N二甲基甲酰胺(1mL)中,反应液在100℃下搅拌4个小时。反应液用水和乙酸乙酯(20mL)萃取3次，将有机相合并后用无水硫酸铵干燥，然后减压浓缩得到化合物29-4(10mg)，为白色固体，产率为61.19％。LCMS(ESI,m/z)：314.04[M+H]+。
步骤4：4-(5-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基呋喃-N-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-噁唑-5-基嘧啶-2-胺(化合物T29)的合成
将2-氯-4-[5-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基]-5-(1，3-噁唑-5-基)嘧啶(90.0mg，0.2869mL)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(65.85mg，0.3442mmol)溶于1摩尔/升的三氟乙酸-二戊醇(1mL)溶液中，反应液升温到110℃搅拌16个小时。反应液用旋转蒸发器减压浓缩，粗产品用硅胶层析柱(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到化合物T29(5.0mg)，黄色粉末，产率为3.42％。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.86(s,1H),9.68(s,1H),8.56(s,1H),8.50(s,1H),8.21(s,1H),7.72(d,J＝8.7Hz,2H),7.42(s,1H),7.20(d,J＝3.0Hz,1H),7.03(d,J＝8.8Hz,3H),6.86(d,J＝3.5Hz,1H),3.78(d,J＝12.6Hz,4H),3.19(s,2H),2.93(s,2H),2.88(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：373.06[M+H]+。
实施例30：4-苯并呋喃-2-基-5-咪唑-4-甲基哌嗪-1-基-苯基-2-氨基嘧啶(T30)的合成
步骤1：4-碘-1H-咪唑-1-甲酸叔丁酯(化合物30-2)的合成
将4-碘咪唑(化合物30-1,500mg，1.85mmol)，Boc2O(844mg，3.86mmol)和二甲基吡啶(32mg，0.257mmol)溶于5mL二氯甲烷中，在25℃下反应1小时。加入饱和氯化铵水溶液(5mL)淬灭反应。用乙酸乙酯(5mL)萃取3次，合并的有机相用饱和食盐水(5mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10:1)分离纯化得到化合物4-碘-1H-咪唑-1-甲酸叔丁酯(750mg)，浅黄色油状液体，收率99％。LCMS(ESI,m/z)：295.1[M+H]+。
步骤2：4-苯并呋喃-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶5-基硼酸(化合物30-4)的合成
在氮气保护下,将4-苯并呋喃-5-氯-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(化合物30-3，500mg，1.19mmol)，5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基-5,5-二甲基-1,3,2-二氧硼杂烷(403mg，1.78mmol)，Pd(PCy3)2(88mg，0.11mmol)及AcOK(350mg，3.57mmol)溶于5mL二氧六环中,在90℃下反应2小时。TLC检测反应完全后，加入水溶液(5mL)淬灭反应。用二氯甲烷(5mL)萃取3次，合并的有机相用饱和食盐水(5mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10:1)分离纯化得到化合物4-苯并呋喃-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶5-基硼酸(325mg)，白色固体，收率58％。LCMS(ESI,m/z)：430.1[M+H]+。
步骤3：叔丁基4-(4-苯呋喃-2-基)-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)嘧啶-5-基)-1H-咪唑-1-羧酸酯(化合物30-5)的合成
在氮气保护下,将4-苯并呋喃-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶5-基硼酸(化合物30-4，100mg，0.238mmol)，4-碘-1H-咪唑-1-甲酸叔丁酯(化合物30-2，84.28mg，0.285mmol)，Pd(dppf)Cl2(17.41mg，0.023mmol)及Na2CO3(63.06mg，0.595mmol)溶于5mL二氧六环/水溶液中(v/v＝4：1)，在80℃下反应2小时。TLC检测反应完全后，加入水溶液(5mL)淬灭反应。用二氯甲烷(5mL)萃取3次，合并的有机相用饱和食盐水(5mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝10:1)分离纯化得到化合物叔丁基4-(4-苯呋喃-2-基)-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)嘧啶-5-基)-1H-咪唑-1-羧酸酯(20mg)，白色固体，收率16％。LCMS(ESI,m/z)：552.1[M+H]+。
步骤4：4-苯并呋喃-2-基-5-咪唑-4-甲基哌嗪-1-基-苯基-2-氨基嘧啶(化合物T30)的合成
在氮气保护下,将叔丁基4-(4-苯呋喃-2-基)-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)嘧啶-5-基)-1H-咪唑-1-羧酸酯(20mg，0.044mmol)溶于2mL HCl/1,4-二氧六环(4N)中，在25℃下反应2小时。减压浓缩得到粗品。经HPLC分离纯化得到化合物T30(1.7mg，白色固体，收率：6.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ12.26(s,1H),9.67(s,1H),8.53(s,1H),8.23(s,1H),7.81(s,1H),7.70(d,J＝7.9,3H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.40(t,J＝7.4Hz,1H),7.28(t,J＝7.5Hz,1H),7.16(s,1H),6.93(d,J＝9.0Hz,2H),3.10–3.06(m,4H),2.46(d,J＝5.0Hz,4H),2.22(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：451.1[M+H]+。
实施例31：1-(5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基)环戊烷-1-醇(T31)的合成
步骤1：5-溴呋喃-2-基环戊烷-1-醇(化合物31-2)的合成
将2，5-二溴呋喃(化合物31-1，1.4g，6.25mmol)溶于THF(14.0mL),在-78℃加入n-BuLi(2.5M in hexane,2.5mL，6.25mmol)搅拌0.5h，加入环戊酮(0.551g，6.56mol),反应液升温到-40℃搅拌2小时。将饱和氯化铵水溶液(7mL)在0℃滴加到反应液中，然后用乙酸乙酯(7mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水洗涤(20mL)2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后用硅胶柱纯化(PA/EA＝4/1)得到化合物5-溴呋喃-2-基环戊烷-1-醇(960mg)，固体，产率为30.0％。LCMS(ESI,m/z)：213.0[M+H]+。
步骤2：5-(2-氯-5-噁唑-5-基)嘧啶-4-呋喃-2-基环戊烷(化合物31-3)的合成
将化合物5-溴呋喃-2-基环戊烷-1-醇(200mg，0.8655mmol)和5-(2-氯-4-三甲基锡烷基)嘧啶-5-基噁唑(312.97mg，0.908775mmol)溶于甲苯溶液(5.0mL)中，室温加入Pd2(dba)3(19.81mg，0.0216375mmol)和三苯基砷(26.5mg，0.08655mmol)。然后，反应液升温到120℃微波搅拌18小时。用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(PE/EA＝1/1)，旋干得化合物5-(2-氯-5-噁唑-5-基)嘧啶-4-呋喃-2-基环戊烷(30mg)，固体，产率为8.35％。LCMS(ESI,m/z)：314.0[M+H]-。
步骤3：1-(5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基)环戊烷-1-醇(化合物T31)的合成
将化合物5-(2-氯-5-噁唑-5-基)嘧啶-4-呋喃-2-基环戊烷(30mg，0.0904mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(25.94mg，0.1356mmol)溶于1，4二氧六环溶液(3.0mL)中，室温加入醋酸钯(2.03mg，0.00904mmol)，X-Phos(8.62mg，0.018mmol)，和碳酸铯(58.91mg，0.1808mmol)。然后，反应液升温到100℃搅拌12小时。
用乙酸乙酯(2mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水洗涤(2mL)2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后粗产品用半制备液相色谱纯化，得到化合物T31(7.0mg，固体，收率：9.07％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.81(s,1H),9.65(s,1H),8.48(s,1H),8.44(s,1H),7.71(s,2H),7.32(s,1H),7.23(s,1H),7.10(s,1H),7.06–6.94(m,4H),6.45(d,J＝3.4Hz,1H),3.76(d,J＝13.0Hz,1H),3.75–3.72(m,2H),3.53(d,J＝7.2Hz,2H),3.19(s,2H),2.93(d,J＝13.6Hz,2H),2.87(s,3H),1.70(s,8H)。LCMS(ESI,m/z)：487[M+H]+。
实施例32：2-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-4,5,6,7-四氢苯并噻唑-4-醇(T32)的合成
步骤1：3-溴环己烷-1,2-二酮(化合物32-2)的合成
在5℃搅拌的环己烷-1,2-二酮(化合物32-1，4g，0.0357mol)二甲基亚砜溶液中，按比例添加NBS(6.99g，0.0392mol)。反应混合物温度升至25℃并搅拌15小时。用50mL EA稀释混合物并用50mL水、30mL饱和用饱和食盐水洗涤。然后用硫酸钠干燥有机层并蒸发溶剂。最后，用快速柱层析纯化产物(PE/EA＝9/1)，得到黄色固体化合物32-2(2.08g，收率27.54％)。LCMS(ESI,m/z)：191.00and 193.00[M+H]+。
步骤2：2-氨基-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(化合物32-3)的合成
将含有3-溴环己烷-1,2-二酮(1g，5.2mmol)和硫脲(0.4g，5.2mmol)的混合物的圆底烧瓶置于加热至78℃的油浴中并回流15h。将在真空下除去的混合物溶剂和30mL ACN添加到混合物中进行沉淀。接下来，过滤悬浮液，并用15mL ACN清洗滤饼。最后，在真空下干燥固体，得到红色固体化合物32-3(650mg)，无需进一步纯化，产率：56％。LCMS(ESI,m/z)：168.9[M+H]+。
步骤3：2-碘-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(化合物32-4)的合成
向在0℃氮气搅拌的2-氨基-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(500mg，2.9724mmol)和碘化亚铜(I)(905.75mg，mmol)的乙腈溶液中逐滴添加亚硝酸叔丁酯(459.77mg，4.4586mmol)。添加后将反应混合物加热至25℃并搅拌15h。过滤混合物并用10mL ACN洗涤滤饼两次。最后除去滤液中的溶剂，用快速色谱法纯化产物，得到棕色固体化合物32-4(50mg)，收率5.73％。LCMS(ESI,m/z)：279.9[M+H]+。
步骤4：2-[2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基]-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(化合物32-5)的合成
将2-碘-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(250mg，0.8957mmol)、2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)-4-(三甲基锡基)嘧啶(339.31mg，0.9852mmol)，AsPh3(54.86mg，0.1791mmol)和Pd(AcO)2(40.22mg，0.179mmol)溶于二噁烷中的溶液在110℃下在氮气下搅拌15小时。过滤混合物，并用DCM洗涤滤饼两次。最后除去滤液中的溶剂，并通过快速色谱法纯化产物(PE/EA＝1/1)，得到棕色固体化合物32-5(92mg，收率27.8％)。LCMS(ESI,m/z)：333.0[M+H]+。
步骤5：2-(2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(化合物32-6)的合成
将4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(31.39mg，0.1641mmol)，2-[2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基]-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(52mg，0.1563mmol)和P-TsOH(14.85mg，0.0781mmol)存于2-戊醇中的溶液在100℃氮气下搅拌16小时。然后在真空下除去混合物的溶剂。通过制备TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化粗产物，得到黄色固体化合物32-6(32mg，收率：39.9％)。使用制备HPLC进一步纯化。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ＝10.01(s,1H),8.86(s,1H),8.45(s,1H),8.02(s,1H),7.63(d,J＝9.0,2H),6.96(d,J＝9.0,2H),3.22(t,J＝5.9,2H),3.11(t,J＝4.8,4H),2.61(t,J＝6.4,2H),2.46(t,J＝4.8,4H),2.23(s,3H),2.17(m,2H)。
步骤6：化合物T32的合成
向在0℃搅拌的2-(2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-6,7-二氢-5H-1,3-苯并噻唑-4-酮(20mg，0.0415mmol)存于MeOH中的溶液中按比例添加NaBH4(4.65mg，0.123mmol)。添加后，将反应混合物在40℃下搅拌2小时。然后在真空下除去混合物中的溶剂。通过制备TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化粗产物，得到黄色固体化合物T32(10mg，收率44.9％)。使用制备HPLC进一步纯化(ACN-H2O(0.1％NH3)5～42％ ACN)。1HNMR(400MHz,DMSO)：δ＝9.92(s,1H),8.77(s,1H),8.40(s,1H),7.86(s,1H),7.65(d,J＝8.6,2H),7.65(d,J＝8.6,2H),6.95(d,J＝9.0,2H),5.16(s,1H),4.62(t,J＝3.4,1H),3.10(t,J＝4.8,4H),2.98–2.91(m,1H),2.81–2.73(m,1H),2.46(t,J＝4.9,4H),2.22(s,3H),1.98-1.92(m,1H),1.86-1.76(m,3H)。LCMS(ESI,m/z)：490.15[M+H]+。
实施例33：4-苯并呋喃-2-氨基-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-甲基噻唑-5-氨基嘧啶(T33)的合成
步骤1：4-苯并呋喃-2-基-5-氯-N-(4-甲基哌嗪-1-基苯基)嘧啶-2-胺(化合物33-2)的合成
将4-(1-苯并呋喃-2-基)-2，5-二氯嘧啶(化合物33-1，200.0mg，0.7544mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(183.64mg，0.8298mmol)加入到1摩尔/升的三氟乙酸-二戊醇溶液中，在110℃氮气保护下搅拌反应16个小时。将反应混合物用旋转蒸发仪器减压浓缩，将粗产品用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20/l)，得到的化合物33-2(150mg，收率：47.35％)为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：420.80[M+H]+。
步骤2：4-苯并呋喃-2-氨基-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-甲基噻唑-5-氨基嘧啶(化合物T33)的合成
将4-(1-苯并呋喃-2-基)-5-氯-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺(100.0mg，0.2381mmol)，4-甲基-5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基噻唑(64.32mg，0.2857mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(20.13mg，0.0238mmol)和碳酸钠(50.47mg，0.4762mmol)溶于1，4-二氧六环/水(2mL)中,在90℃氮气保护下搅拌1小时。反应混合物用水和乙酸乙酯(20mL)萃取3次,将有机相合并浓缩旋干。将粗产品用半制备液相色谱(ACN-H2O(0.1％TFA))纯化，得到化合物T33(59.74mg，为黄色固体，收率：51.98％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ9.12(s,1H),8.39(s,1H),7.76(d,J＝9.0Hz,2H),7.68(dd,J＝13.1,6.2Hz,1H),7.64(t,J＝6.9Hz,2H),7.34(s,1H),7.31(s,1H),7.28(d,J＝4.3Hz,1H),7.26(s,1H),7.21(s,1H),7.08(d,J＝8.9Hz,3H),3.81(d,J＝12.6Hz,3H),3.63(d,J＝11.3Hz,3H),3.30–3.24(m,2H),3.07(d,J＝11.9Hz,2H),2.99(s,5H),2.21(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：483.15[M+H]+。
实施例34：4-苯并呋喃-2-基-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-1，2，4-三氮唑-2-氨基嘧啶(T34)的合成
步骤1：4-苯并呋喃-2-基-2-氯嘧啶-5-胺(化合物34-2)的合成
将化合物2，4-二氯嘧啶-5-胺(化合物34-1，7.2g，0.0439mol)和苯并呋喃-2-硼酸(7.11g，0.0439mol)溶于1，4-二氧六环溶液/水＝10：1溶液(72.0mL)中，室温加入Pd(dppf)Cl2(3.21g，0.00439mol)和碳酸钠(11.63g，0.10975mol)。然后，反应液升温到80℃搅拌2小时。然后用乙酸乙酯(10mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(5mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(PE/EA＝3/1)，旋干得化合物4-苯并呋喃-2-基-2-氯嘧啶-5-胺(化合物34-2，5.6g)，固体，产率为38.95％。LCMS(ESI,m/z)：246.1[M+H]-。
步骤2：4-苯并呋喃-2-基-5-溴-2-氯嘧啶(化合物34-3)的合成
将化合物4-苯并呋喃-2-基-2-氯嘧啶-5-胺(2.0g，0.0081mol)和溴化铜(1.74g，0.01215mol)溶于乙腈溶液(20mL)中，室温加入亚硝酸钠(0.84g，0.01215mol)。然后，反应液升温到50℃搅拌18小时。然后用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(PE/EA＝5/1)，旋干得化合物4-苯并呋喃-2-基-5-溴-2-氯嘧啶(700.0mg)，固体，产率为25.12％。LCMS(ESI,m/z)：311.0[M+H]-。
步骤3：4-苯并呋喃-2-基-5-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(化合物34-4)的合成
将化合物4-苯并呋喃-2-基-5-溴-2-氯嘧啶(700mg，2.2614mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(648.82mg，3.3921mmol)溶于2-戊醇溶液(5.0mL)中，室温加入三氟乙酸(2578.45mg，22.614mmol)。然后，反应液升温到100℃搅拌48小时。用2M NaHCO3将pH调节至6-7，然后用乙酸乙酯(5mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝10/1)，旋干得化合物4-苯并呋喃-2-基-5-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(650mg)，固体，产率为55.71％。LCMS(ESI,m/z)：464.1[M+H]-。
步骤4：4-苯并呋喃-2-基-5-碘-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(化合物34-5)的合成
将化合物4-苯并呋喃-2-基-5-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(500mg，1.0768mmol)和N1，N2-二甲基乙烷-1，2-二胺(189.84mg，2.1536mmol)溶于1，4-二氧六环溶液(5.0mL)中，室温加入碘化亚铜(I)(205.08mg，1.0768mmol)和碘化钠(323.04mg，2.1536mmol)。然后，反应液升温到110℃搅拌18小时。用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝10/1)，旋干得化合物4-苯并呋喃-2-基-5-碘-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(150mg)，固体，产率为30.0％。LCMS(ESI,m/z)：511.8[M+H]-。
步骤5：4-苯并呋喃-2-基-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-1，2，4-三氮唑-2-氨基嘧啶(化合物T34)的合成
将化合物4-苯并呋喃-2-基-5-碘-N-(4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(110mg，0.2151mmol)和N1，N2-二甲基乙烷-1，2-二胺(1.9mg，0.02151mmol)溶于DMA溶液(3.0mL)中，室温加入碘化亚铜(I)(4.1mg，0.02151mmol)和磷酸钾(91.32mg，0.4302mmol)。然后，反应液升温到120℃搅拌4小时。用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过半制备液相色谱纯化得化合物T34(3.7mg，固体，产率为3.44％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.35(s,1H),8.23(s,1H),8.20(s,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,3H),7.30(d,J＝7.0Hz,3H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),3.24(s,4H),2.68(s,4H),2.40(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：453[M+H]+。
实施例35：2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-6，7-二氢苯并呋喃-4(T35)的合成
步骤1：2-碘-6，7-二氢苯并呋喃-4-酮(化合物35-2)的合成
将6，7-二氢苯并呋喃-4-5H-酮(化合物35-1，500mg，3.7mmol)溶于ACN(20.0mL)中，室温加入碘(1.21g，4.8mmol)和AgOMs(969mg，4.8mmol)。然后，反应液在25℃搅拌2小时。用乙酸乙酯(15mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(25mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化旋干得化合物2-碘-6，7-二氢苯并呋喃-4-酮(650mg)，黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ6.82(s,1H),2.91(t,J＝6.4Hz,2H),2.49(dd,J＝7.2Hz,5.6Hz,2H),2.17(dd,J＝12.8Hz,6.4Hz,2H)。
步骤2：2-氯-5-噁唑-4-嘧啶-6，7-二氢苯并呋喃-4-酮(化合物35-3)的合成
将化合物2-碘-6，7-二氢苯并呋喃-4-酮(300mg，1.145mmol)和5-(2-氯-4-三甲基锡烷基)嘧啶-5-基噁唑(414.7mg，1.202mmol)溶于DMF溶液(3.0mL)中，室温加入四三苯基磷钯(132.3mg，0.1145mol)和碘化亚铜(I)(21.8mg，0.1145mol)。然后，反应液升温到80℃搅拌1小时。用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(PE/EA＝1/1)，旋干得化合物2-氯-5-噁唑-4-嘧啶-6，7-二氢苯并呋喃-4-酮(295mg)，固体，产率为52.29％。LCMS(ESI,m/z)：316.0[M+H]-。
步骤3：2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-6，7-二氢苯并呋喃-4(化合物T35)的合成
将化合物2-氯-5-噁唑-4-嘧啶-6，7-二氢苯并呋喃-4-酮(295mg，0.9344mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(357.45mg，1.8688mmol)溶于2-戊醇溶液(5.0mL)中，室温加入三氟乙酸(1065.4mg，9.344mmol)。然后，反应液升温到110℃搅拌12小时。用乙酸乙酯(2mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后粗产品用硅胶柱(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-6，7-二氢苯并呋喃-4(20.0mg，固体，收率：6.78％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.41(s,1H),8.00(s,1H),7.53(d,J＝9.0Hz,2H),7.22(s,1H),7.17(s,1H),7.11(s,1H),6.98(t,J＝6.2Hz,2H),3.27(d,J＝5.2Hz,4H),2.87(t,J＝6.4Hz,2H),2.68(d,J＝30.0Hz,4H),2.57–2.51(m,2H),2.42(d,J＝17.8Hz,3H),2.24–2.15(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：471.2[M+H]+。
实施例36：2-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-4,5,6,7-四氢苯并噻唑-7-醇(T36)的合成
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步骤1：第三丁基N-[4-甲基-1-(4-{[5-(1,3-噁唑-5-基)-4-(7-oxo-5,6-二氢-4H-1,3-苯并噻唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)哌啶-4-基]氨基甲酸酯(化合物36-2)的合成
将2-[2-氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-4-基]-5,6-二氢-4H-1,3-苯并噻唑-7-酮(化合物36-1，230mg，0.6912mmol)、N-第三丁基-1-(4-氨基苯基)-4-甲基哌啶-4-基氨基甲酸酯(232.21mg，0.7603mmol)，Xantphos Palladacycle Gen.3(65.55mg，0.0691mmol)和Cs2CO3(450.41mg，1.3824mmol)在二噁烷和水中油浴90℃下搅拌15小时。过滤混合物，并在真空下浓缩滤液。最后，使用快速柱层析(2％MeOH，DCM&MeOH)纯化产物，得到棕色固体化合物36-2(216mg，收率：46.7％)。LCMS(ESI,m/z)：602.20[M+H]+。
步骤2：三丁基N-[1-(4-{[4-(7-羟基-4,5,6,7-四氢-1,3-苯并噻唑-2-基)-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸酯(化合物36-3)的合成
向在0℃搅拌的第三丁基N-[4-甲基-1-(4-{[5-(1,3-噁唑-5-基)-4-(7-oxo-5,6-二氢-4H-1,3-苯并噻唑-2-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)哌啶-4-基]氨基甲酸酯(化合物36-2，75mg，0.1246mmol)存于MeOH中的溶液中分段添加NaBH4(14.13mg，0.3738mmol)。添加后，将反应混合物在25℃下搅拌2小时。反应后，用0.5mL水淬灭NaBH4。然后在真空下除去混合物的溶剂，并通过制备TLC(DCM/MeOH＝20:1)纯化，得到呈橙色固体的化合物36-3(65mg，收率：77.8％)。LCMS(ESI,m/z)：604.25[M+H]+。
步骤3：化合物T36的合成
将盐酸-二氧六环加入三丁基N-[1-(4-{[4-(7-羟基-4,5,6,7-四氢-1,3-苯并噻唑-2-基)-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸酯(化合物36-3，30mg，0.0497mmol中在25℃搅拌45min。然后在真空下除去混合物的溶剂。通过制备型HPLC得到化合物T36甲酸盐(11mg，黄色固体，收率：36.6％)。1HNMR(400MHz,DMSO)：δ＝9.91(s,1H),8.66(s,1H),8.40(s,1H),7.64(d,J＝8.5,2H),7.52(s,1H),6.96(d,J＝9.1,2H),5.68(s,1H),4.85(t,J＝5.3,1H),3.07(m,2H),2.58(m,1H),2.02-1.93(m,2H),1.64-1.75(m,6H),1.20(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：504.15[M+H]+。
实施例37：4-苯并呋喃-2-基-N-(4-甲基哌嗪-1-基苯基)-5-氧杂环丁-3-基嘧啶-2-胺(T37)的合成
步骤1：2，4-二氯-5-氧杂环丁烷-3-嘧啶(化合物37-2)的合成
N2保护下，将NiCl2 .DME(10mg，0.044mmol)和dtbpy(12mg，0.044mmol)加入到DME(2mL)中，室温搅拌0.5h，制成溶液A。向另一个反应瓶中加入5-溴-2,4-二氯嘧啶(化合物37-1，500mg，2.2mmol),3-碘氧杂环丁烷(1.6g，8.8mmol),TTMSS(818mg，3.3mmol),Na2CO3(930mg，8.8mmol)和Ir(dF(CF3)ppy)2(dtbbpy)PF6(49mg，0.044mmol)，N2保护下加入DME(8mL)，再将溶液A加进去。将反应液放入40W蓝光灯中，35℃搅拌16h。向反应液中加入20mL水，用EtOAc每次10mL萃取3次。有机层干燥浓缩，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝3/1)，旋干得化合物37-2，4-二氯-5-氧杂环丁烷-3-嘧啶(250mg)，无色油状物，产率为55.57％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ8.89(d,J＝0.8Hz,1H),4.88(dd,J＝8.8Hz,6.4Hz,2H),4.80–4.73(m,2H),4.50–4.41(m,1H)。
步骤2：4-苯并呋喃-2-氯-5-氧杂环丁烷-3-嘧啶(化合物37-3)的合成
将2，4-二氯-5-氧杂环丁烷-3-嘧啶(50mg，0.24mmol)溶到二氧六环/H2O＝4:1(2.5mL)中，再加入苯并呋喃-2-硼酸(40mg，0.24mmol),Pd(dppf)Cl2 DCM(20mg，0.024mmol)和Na2CO3(52mg，0.49mmol)。将反应液置换N2三次，80℃反应1h。向反应液中加入10mL水，用EtOAc每次5mL萃取3次。有机层干燥浓缩，得到的粗产物通过制备板纯化(PE/EA＝2/1)，旋干得化合物4-苯并呋喃-2-氯-5-氧杂环丁烷-3-嘧啶(20mg)，黄色固体，产率为28.61％。LCMS(ESI,m/z)：286.9[M+H]+。
步骤3：4-苯并呋喃-2-基-N-(4-甲基哌嗪-1-基苯基)-5-氧杂环丁-3-基嘧啶-2-胺(化合物T37)的合成
将4-苯并呋喃-2-氯-5-氧杂环丁烷-3-嘧啶(20mg，0.07mmol)溶于二氧六环(5mL)，再加入4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(20mg，0.105mmol),xphos pd G3(5.9mg，0.007mmol)和Cs2CO3(45.5mg，0.14mmol).N2置换三次后100℃反应4h。向反应液中加入10mL水，用EtOAc每次5mL萃取3次。有机层干燥浓缩，得到的粗产物通过TLC纯化(PE/EA＝2/1)。得到的产品再次用制备液相色谱纯化，得化合物T37(4.4mg，黄色固体，收率：14.28％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.53(s,1H),8.66(s,1H),7.79(dd,J＝18.8Hz,8.0Hz,2H),7.70–7.60(m,3H),7.45(d,J＝7.6Hz,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),6.94(d,J＝9.2Hz,2H),5.03(dd,J＝7.6Hz,6.0Hz,2H),4.86–4.80(m,1H),4.79–4.71(m,2H),3.13–3.04(m,4H),2.48–2.45(m,4H),2.23(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：442.1[M+H]+。
实施例38：4-苯并呋喃-2-基-N-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-氧杂环丁-3-基嘧啶-2-胺(T38)的合成
步骤1：4-苯并呋喃-2-基-N-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-氧杂环丁-3-基嘧啶-2-胺(化合物T38)的合成
将4-苯并呋喃-2-氯-5-氧杂环丁烷-3-嘧啶(化合物38-1，30mg，0.105mmol)溶于1,4-二氧六环(8mL)，再加入3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(35mg，0.16mmol),xphospd G3(8.9mg，0.0105mmol)和Cs2CO3(68mg，0.21mmol).N2置换三次后100℃反应4h。向反应液中加入20mL水，用EtOAc每次10mL萃取3次。有机层干燥浓缩，得到的粗产物通过TLC纯化(PE/EA＝2/1)。得到的产品再次用制备液相色谱纯化，得化合物T38(4.0mg，黄色固体，收率：8.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.61(s,1H),8.70(s,1H),8.19(s,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.65–7.63(m,2H),7.46(t,J＝8.0Hz,1H),7.38–7.30(m,2H),6.87(d,J＝8.8Hz,1H),5.03(dd,J＝8.0Hz,5.6Hz,2H),4.84(t,J＝7.2Hz,1H),4.79–4.73(m,2H),3.83(s,3H),3.30–3.23(m,4H),2.93(s,4H),2.24(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：472.15[M+H]+。
实施例39：4-苯并呋喃-2-基-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-噻唑-5-氨基嘧啶(T39)的合成
步骤1：4-苯并呋喃-2-基-5-氯-N-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)嘧啶-2-胺(化合物39-2)的合成
将4-(1-苯并呋喃-2-基)-2，5-二氯嘧啶(化合物39-1，200.0mg，0.7544mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(183.64mg，0.8298mmol)溶解在1mol/L的三氟乙酸-二戊醇(4mL)溶液中，在110℃氮气保护下搅拌反应16个小时。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。将反应混合物浓缩旋干。将粗产物吸附到硅胶上形成干燥样品，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，得到化合物39-2(160.0mg，收率：47.13％)，为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：450.80[M+H]+。
步骤2：4-苯并呋喃-2-基-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-噻唑-5-氨基嘧啶(化合物T39)的合成
将4-(1-苯并呋喃-2-基)-5-氯-N-[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺(70.0mg，0.1556mmol)，4-甲基-5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基噻唑(42.03mg，0.1867mmol)，XPhos Pd G3(13.15mg，0.0155mmol)和碳酸钠(32.99mg，0.3112mmol)溶于1，4-二氧六环/水＝5：1(2mL)中,在90℃氮气保护下搅拌3h。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。向反应混合物中加入水和乙酸乙酯(50mL)萃取3次，然后合并有机相并用无水硫酸钠干燥，然后通过旋蒸真空干燥。将粗产物吸附在硅胶粉末上形成干燥样品，通过制备(乙腈-水(0.1％三氟乙酸))纯化，得到化合物T39(8.47mg，黄色固体，收率：10.92％)。1HNMR(400MHz,MeOD)：δ9.13(s,1H),8.43(s,1H),7.92(s,1H),7.68(d,J＝3.4Hz,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.37(dd,J＝7.0,1.1Hz,1H),7.34(s,1H),7.32(d,J＝2.1Hz,1H),7.27(s,1H),7.04(s,1H),7.02(s,1H),4.01(s,3H),3.57(s,6H),3.05(s,3H),2.98(s,5H),2.22(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：453[M+H]+。
实施例40：2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-4，5，6，7-四氢苯并呋喃-4-醇(T40)的合成
步骤1：2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-4，5，6，7-四氢苯并呋喃-4-醇(化合物T40)的合成
将2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-6，7-二氢苯并呋喃-4(化合物T35，40mg，0.085mmol)溶于甲醇(3.0mL),在0℃加入硼氢化钠(96.92mg，0.85mmol)搅拌，反应液升温到25℃搅拌8h。用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝10/1)，旋干得化合物T40(14mg，固体，收率：34.82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.36(s,1H),7.99(s,1H),7.54(d,J＝8.8Hz,2H),7.17(s,1H),6.97(d,J＝9.0Hz,2H),6.88(s,1H),4.73(s,1H),3.29(s,4H),2.86–2.64(m,4H),2.58(dd,J＝26.2,6.6Hz,2H),2.47(s,3H),2.05–1.89(m,3H),1.83(d,J＝10.2Hz,3H)。LCMS(ESI,m/z)：473.2[M+H]+。
实施例41：4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-噁唑-4-(4，5，6，7-四氢苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-胺(T41)的合成
步骤1：4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)-5-噁唑-4-(4，5，6，7-四氢苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-胺(化合物T41)的合成路线
将2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噁唑-5-基嘧啶-4-基)-4，5，6，7-四氢苯并呋喃-4-醇(化合物T40，10mg，0.0283mmol)溶于三氟乙酸(5.0mL),在0℃加入Et3SiH(370.9mg，1.063mmol)搅拌，反应液升温到60℃搅拌4h。用2M NaHCO3将pH调节至6-7，然后用乙酸乙酯(2mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝15/1)，旋干得化合物T41(1.1mg，固体，收率：11.1％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.34(s,1H),8.00(s,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,2H),7.18(s,1H),6.96(d,J＝8.8Hz,2H),6.60(s,1H),3.51(s,4H),2.78(s,3H),2.59(t,J＝6.2Hz,2H),2.42(d,J＝5.8Hz,2H),2.25–2.19(m,2H),2.05–1.98(m,4H),1.83(d,J＝6.0Hz,2H),1.78–1.70(m,4H)。LCMS(ESI,m/z)：456.9[M+H]+。
实施例42：(S)-1-(5-(2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(T42)的合成
步骤1：(S)-1-(5-溴噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物42-2)的合成
将2,5-二溴-1,3-噻唑(化合物42-1，10g，0.0412mol)溶于1,4-二噁烷(200mL)溶液中，加入(3S)-吡咯烷-3-醇(4.31g，0.0494mol)和DIEA(6.92g，0.0535mol)。反应液升温至80℃下搅拌16h。将反应液减压旋干，粗产物通过flash纯化得到化合物(S)-1-(5-溴噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(5.2g)，黄色固体，产率为45.63％。LCMS(ESI,m/z)：249[M+H]+。
步骤2：(S)-1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物42-3)的合成
将(3S)-1-(5-溴-1,3-噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(2g，0.008mol)溶于DMF(23mL)中。2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶(2.74g，0.0088mol)，Pd(PPh3)4(0.92g，0.0008mol)和碘化亚铜(I)(0.3g，0.0016mol)。反应液升温到90℃，在氮气下搅拌16h。加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤减压旋干，粗产物通过flash纯化得到化合物(S)-1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(0.9g)，黄色固体，产率为32.50％。LCMS(ESI,m/z)：317[M+H]+。
步骤3：(S)-1-(5-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物42-4)的合成
将(S)-1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(1g，0.0032mol)溶于1N TFA的2-戊醇(40mL)溶液中，加入4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.73g，0.0038mol)。反应液升温至110℃搅拌16h。反应液过滤减压浓缩，粗产物通过flash纯化，得到产物(S)-1-(5-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(1g)，黄色固体，产率为59.38％。LCMS(ESI,m/z)：472[M+H]+。
步骤4：(S)-1-(5-(2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物T42)的合成
将(S)-1-(5-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(300mg，0.6356mmol)溶于1,4-二氧六环/水＝5:1(7.2mL)溶液中，加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼酸-2-基)-1,3-噻唑(161mg，0.7627mmol)，XPhos-Pd-G3(107.6mg，0.1271mmol)和碳酸钠(202.12mg，1.9068mmol)。反应液升温至90℃在氮气下搅拌1h。反应液过滤减压浓缩，粗产物通过flash纯化，得到产物T42(20mg，黄色固体，收率：5.62％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.53(s,1H),9.29(s,1H),8.21(s,1H),7.95(s,1H),7.62(d,J＝9.0Hz,2H),6.92(d,J＝9.0Hz,2H),6.80(s,1H),5.12(d,J＝3.6Hz,1H),4.40(s,1H),3.55–3.45(m,3H),3.28(s,1H),3.10–3.06(m,4H),2.47–2.44(m,4H),2.22(s,3H),2.11–2.04(m,1H),1.96–1.90(m,1H)。LCMS(ESI,m/z)：521.10[M+H]+。
实施例43：(S)-1-(5-(2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(T43)的合成
步骤1：(S)-1-(5-溴噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物43-2)的合成
将2,5-二溴-1,3-噻唑(化合物43-1，10g，0.0412mol)溶于1,4-二噁烷(200mL)溶液中，加入(3S)-吡咯烷-3-醇(4.31g，0.0494mol)和DIEA(6.92g，0.0535mol)。反应液升温至80℃下搅拌16h。将反应液减压旋干，粗产物通过flash纯化得到化合物(S)-1-(5-溴噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(5.2g)，黄色固体，产率为45.63％。LCMS(ESI,m/z)：249[M+H]+。
步骤2：(S)-1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物43-3)的合成
将(3S)-1-(5-溴-1,3-噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(2g，0.008mol)溶于DMF(23mL)中。2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶(2.74g，0.0088mol)，Pd(PPh3)4(0.92g，0.0008mol)和碘化亚铜(I)(0.3g，0.0016mol)。反应液升温到90℃，在氮气下搅拌16h。加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤减压旋干，粗产物通过flash纯化得到化合物(S)-1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(0.9g)，黄色固体，产率为32.50％。LCMS(ESI,m/z)：317[M+H]+。
步骤3：(S)-1-(5-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物43-4)的合成
将(S)-1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(1g，0.0032mol)溶于1N TFA的2-戊醇(40mL)溶液中，加入4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.73g，0.0038mol)。反应液升温至110℃搅拌16h。反应液过滤减压浓缩，粗产物通过flash纯化，得到产物(S)-1-(5-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(1g)，黄色固体，产率为59.38％。LCMS(ESI,m/z)：472[M+H]+。
步骤4：(S)-1-(5-(2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物T43)的合成
将(S)-1-(5-(5-氯-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(300mg，0.6356mmol)溶于1,4-二氧六环/水＝5:1(7.2mL)溶液中，加入4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼醇-2-基)-1,3-噻唑(171.7mg，0.7627mmol)，XPhos-Pd-G3(107.6mg，0.1271mmol)和碳酸钠(202.12mg，1.9068mmol)。反应液升温至90℃在氮气下搅拌1h。反应液过滤减压浓缩，粗产物通过flash纯化，得到化合物T43(97mg，黄色固体，收率：25.69％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.52(s,1H),9.20(s,1H),8.20(s,1H),7.62(d,J＝9.0Hz,2H),6.92(d,J＝9.0Hz,2H),6.74(s,1H),5.11(d,J＝3.6Hz,1H),4.40(s,1H),3.54–3.44(m,3H),3.27(s,1H),3.10–3.06(m,4H),2.47–2.44(m,4H),2.22(s,3H),2.18(s,3H),2.11–2.04(m,1H),1.94(s,1H)。LCMS(ESI,m/z)：535.10[M+H]+。
实施例44：2-(5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-4-基呋喃-2-基丙烷-2-醇(T44)的合成
步骤1：5-氯-2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-4-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯的合成(化合物44-2)
将5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-甲酸甲酯(化合物44-1，200.0mg，0.7324mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(194.50mg，0.8788mmol)溶解在1mol/L的三氟乙酸-二戊醇(6mL)溶液中，在110℃氮气保护下搅拌反应16个小时。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。将反应混合物浓缩旋干。将粗产物吸附到硅胶上形成干燥样品，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，得到化合物44-2(250.0mg，收率：74.54％)，为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：457.85[M+H]+。
步骤2：5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯的合成(化合物44-3)
将5-(5-氯-2-[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(200.0mg，0.4368mmol)，4-甲基-5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基噻唑(118.0mg，0.5241mmol),XPhos Pd G3(184.62mg，0.2184mmol)和碳酸钠(92.60mg，0.8736mmol)溶于1，4-二氧六环/水＝4：1(5mL)中,在90℃氮气保护下搅拌3h。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。向反应混合物中加入水和乙酸乙酯(50mL)萃取3次，然后合并有机相并用无水硫酸钠干燥，然后通过旋蒸真空干燥。将粗产物吸附在硅胶粉末上形成干燥样品，通过硅胶柱层析(DCM/MeOH＝20:1)纯化，得到化合物44-3(100.0mg，收率：43.98％)，为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：521.10[M+H]+。
步骤3：2-(5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-4-基呋喃-2-基丙烷-2-醇的合成(化合物T44)
将5-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-基苯基)氨基-5-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(50.0mg，0.096mmol)溶解在超干四氢呋喃(3.0mL)中，并且进行氮气保护。然后在零度下加入甲基碘化镁溶液(3M in diethyl ether,0.32mL，0.96mmol)，搅拌反应一小时。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。向反应混合物中加入水和乙酸乙酯(50mL)萃取3次，然后合并有机相并用无水硫酸钠干燥，然后通过旋蒸真空干燥。将粗产物吸附在硅胶粉末上形成干燥样品，通过(乙腈-水(0.1％三氟乙酸))纯化，得到化合物T44(11.80mg，黄色固体，收率：23.60％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.97(s,1H),9.65(d,J＝13.6Hz,2H),9.19(s,1H),8.57(d,J＝5.1Hz,0H),8.49(s,1H),7.83–7.68(m,5H),7.54–7.27(m,5H),7.03(t,J＝7.7Hz,3H),6.87(s,1H),3.79(d,J＝12.7Hz,6H),3.54(d,J＝11.9Hz,3H),3.19(dd,J＝21.5,9.7Hz,3H),2.91(dd,J＝22.8,8.0Hz,7H),2.18(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：521.15[M+H]+。
实施例45：2-(5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-呋喃-2-基-2-醇(T45)的合成
步骤1：5-氯-2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-4-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(化合物45-2)的合成将化合物5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-甲酸甲酯(化合物45-1，200.0mg，0.7324mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(194.50mg，0.8788mmol)溶于1mol/L的三氟乙酸-二戊醇溶液(6mL)中，反应液升温到110℃搅拌16h。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。将反应混合物浓缩旋干。将粗产物吸附到硅胶上形成干燥样品，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，得到化合物45-2(250.0mg，收率：74.54％)，为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：457.85[M+H]+。
步骤2：5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-基苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-呋喃-2-羧酸甲酯(化合物45-3)的合成
将5-(5-氯-2-[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(200.0mg，0.4368mmol)，5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1，3-噻唑(110.64mg，0.5241mmol)，XPhos Pd G3(184.62mg，0.2184mmol)和磷酸钾(185.44mg，0.8736mmol)溶于1，4-二氧六环/水＝5：1(5mL),反应液升温到90℃搅拌2小时。用LCMS监控原料全部消耗完后，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(20mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后用TLC纯化(DCM/MeOH＝20/1)得到化合物5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-基苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-呋喃-2-羧酸甲酯(100.0mg)，黄色固体，产率为45.20％。LCMS(ESI,m/z)：507.10[M+H]+。
步骤3：2-(5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-呋喃-2-基-2-醇(化合物T45)的合成
5-(2-[3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}-5-(1，3-噻唑-5-基)嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(50.0mg，0.0987mmol)溶解在四氢呋喃溶液(3mL)中，然后在0℃下加入3M甲基碘化镁的乙醚溶液(0.66mL，1.974mmol)。混合物氮气保护，搅拌反应一个小时。用LCMS检测原料消耗完毕，用水淬灭反应体系。用乙酸乙酯(30mL)萃取3次，然后将有机相合并，用无水Na2SO4干燥，并在真空下浓缩干燥。粗品通过制备型HPLC法纯化(ACN-H2O(0.1％FA))，得到化合物T45(5.20mg，黄色固体，产率：10.40％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.73(s,1H),9.20(s,1H),8.41(s,1H),7.90(s,1H),7.50(s,1H),7.39(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),6.92(d,J＝3.4Hz,1H),6.87(s,1H),6.37(d,J＝3.4Hz,1H),5.22(s,1H),3.80(s,3H),2.96(s,4H),2.55(d,J＝28.2Hz,4H),2.32(s,3H),1.21(s,6H)。LCMS(ESI,m/z)：507.10[M+H]+。
实施例46：2-(2-((4-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)-4,5,6,7-四氢苯并噻唑-7-胺(T46)的合成
步骤1：N-[1-(4-{[4-(7-叠氮-4,5,6,7-四氢-1,3-苯并噻唑-2-基)-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸酯(化合物46-2)的合成
三丁基N-[1-(4-{[4-(7-羟基-4,5,6,7-四氢-1,3-苯并噻唑-2-基)-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸酯(化合物46-1，23mg，0.0381mmol)、DBU(8.7mg，0.0571mmol)和DPPA(15.73mg，0.05 71mmol)的甲苯溶液在110℃氮气下搅拌4h。在真空下浓缩混合物并用制备TLC纯化(DCM/MeOH＝20:1)，得到呈橙色固体的化合物46-2(20mg，收率：76.9％)。LCMS(ESI,m/z)：629.20[M+H]+。
步骤2：N-[1-(4-{[4-(7-氨基-4,5,6,7-四氢-1,3-苯并噻唑-2-基)-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物46-3)的合成
将含有THF/H2O(10:1，2mL)中N-[1-(4-{[4-(7-叠氮-4,5,6,7-四氢-1,3-苯并噻唑-2-基)-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸酯(23mg，mmol)和PPh3(19.2mg，0.0732mmol)混合物的圆底烧瓶置于加热至65℃的油浴中并回流8h。然后在真空下除去混合物的溶剂，并通过制备TLC(DCM/MeOH＝20:1)纯化，得到橙色固体化合物46-3(20mg，收率：81.7％)。LCMS(ESI,m/z)：603.25[M+H]+。
步骤3：化合物T46的合成
一个圆底烧瓶，内装N-[1-(4-{[4-(7-氨基-4,5,6,7-四氢-1,3-苯并噻唑-2-基)-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯与HCl二氧六环的混合物，在25℃搅拌45分钟。然后过滤悬浮液，并用5mL叔丁基甲醚洗涤滤饼两次。最后，干燥固体，得到化合物T46盐酸盐(14mg，橙色固体，收率：66.9％)。1H NMR(400MHz,MeOD)：δ＝8.77(s,1H),8.30(s,1H),8.07(d,J＝9.2,2H),7.91(d,J＝9.1,2H),7.62(s,1H),4.77(t,J＝5.3,1H),3.88-3.77(m,4H),2.85-2.73(m,2H),2.50(m,2H),2.29-2.22(m,3H),2.07-1.94(m,3H),1.64(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：503.15[M+H]+。
实施例47：(S)-1-(5-(2-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(T47)的合成
步骤1：(S)-1-(5-溴噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物47-2)的合成
将2,5-二溴-1,3-噻唑(化合物47-1，10g，0.0412mol)溶于1,4-二噁烷(200mL)溶液中，加入(3S)-吡咯烷-3-醇(4.31g，0.0494mol)和DIEA(6.92g，0.0535mol)。反应液升温至80℃下搅拌16h。将反应液减压旋干，粗产物通过flash纯化得到化合物(S)-1-(5-溴噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(5.2g)，黄色固体，产率为45.63％。LCMS(ESI,m/z)：249[M+H]+。
步骤2：(S)-1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物47-3)的合成
将(3S)-1-(5-溴-1,3-噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(2g，0.008mol)溶于DMF(23mL)中。2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶(2.74g，0.0088mol)，Pd(PPh3)4(0.92g，0.0008mol)和碘化亚铜(I)(0.3g，0.0016mol)。反应液升温到90℃，在氮气下搅拌16h。加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤减压旋干，粗产物通过flash纯化得到化合物(S)-1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(0.9g)，黄色固体，产率为32.50％。LCMS(ESI,m/z)：317[M+H]+。
步骤3：(S)-1-(5-氯-2-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基嘧啶-4-基噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物47-4)的合成
将(S)-1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(600mg，1.8916mmol)溶于1N TFA的2-戊醇(24mL)溶液中，加入3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(837.22mg，3.7832mmol)。反应液升温至110℃搅拌16h。反应液过滤减压浓缩，粗产物通过flash纯化，得到产物(S)-1-(5-氯-2-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基嘧啶-4-基噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(700mg)，黄色固体，产率为66.34％。LCMS(ESI,m/z)：502[M+H]+。
步骤4：(S)-1-(5-(2-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物T47)的合成
将(3S)-1-[5-(5-氯-2-{[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]吡咯烷-3-醇(150mg，0.2988mmol)溶于1,4-二氧六环/水＝5:1(3.6mL)溶液中，加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼醇-2-基)-1,3-噻唑(75.69mg，0.3585mmol)，XPhos-Pd-G3(50.58mg，0.0597mmol)和碳酸钠(95.02mg，0.8964mmol)。反应液升温至90℃在氮气下搅拌1h。反应液过滤减压浓缩，粗产物通过flash纯化，得到化合物T47(16mg，黄色固体，收率：8.73％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.62(s,1H),9.30(s,1H),8.24(s,1H),7.96(s,1H),7.57(s,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.6Hz,1H),6.76(s,1H),5.13(s,1H),4.41(s,1H),3.86(s,3H),3.54–3.44(m,3H),3.26(s,1H),2.93(s,4H),2.45(s,4H),2.21(s,3H),2.10–2.05(m,1H),1.96–1.91(m,1H)。LCMS(ESI,m/z)：551.10[M+H]+。
实施例48：2-(5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基-2-丙醇(T48)的合成
步骤1：5-氯-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(化合物48-2)的合成
将化合物5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-1(化合物48-1，400mg 1.46mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(560.35mg，1.46mmol)溶于2-戊醇溶液(5.0mL)中，室温加入三氟乙酸(1670.2mg，14.65mmol)。然后，反应液升温到110℃搅拌12h。用2M NaHCO3将pH调节至6-7，然后用乙酸乙酯(2mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝10/1)，得到5-氯-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(250mg)，固体，产率为31.91％。LCMS(ESI,m/z)：428.14[M+H]-。
步骤2：5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(化合物48-3)的合成将化合物5-氯-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(200mg，0.4674mmol)和5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁杂硼烷-2-基)噻唑(157.83mg，0.7011mmol)溶于1,4二氧六环/水＝4:1溶液(3.0mL)中，室温加入X-phos-Pd-G3(247.29mg，0.292mmol)和磷酸钾(248.05mg，1.169mmol)。然后，反应液升温到90℃搅拌1小时。用乙酸乙酯(3mL)萃取两次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝10/1)，旋干得化合物5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(130mg)，固体，产率为37.34％。LCMS(ESI,m/z)：478.16[M+H]-。
步骤3：2-(5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基-2-丙醇(化合物T48)的合成
将5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(130mg，0.273mmol)溶于THF(4.0mL),在0℃加入甲基碘化镁3.0M in hexane,1.82mL，5.46mmol)搅拌,反应液升温到25℃搅拌2h。在0℃滴加水(2.0mL)到反应液中，然后用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后粗产品用半制备液相色谱纯化，得到化合物T48(6.44mg，固体，收率：4.95％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.74(s,1H),9.62(s,1H),9.21(s,1H),8.39(s,1H),7.89(s,1H),7.74(d,J＝8.8Hz,2H),7.00(d,J＝9.0Hz,2H),6.86(d,J＝3.4Hz,1H),6.36(d,J＝3.4Hz,1H),3.76(d,J＝13.0Hz,3H),3.25–3.09(m,4H),2.92(d,J＝12.2Hz,2H),2.87(d,J＝3.6Hz,3H),1.22(s,6H)。LCMS(ESI,m/z)：477.0[M+H]+。
实施例49：4-(3-甲基苯并呋喃-2-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(T49)的合成
步骤1：6-((2-乙氧基-2-氧乙基)氨基)吡啶甲酸甲酯(化合物49-2)的合成
向化合物2,4,5-三氯嘧啶(化合物49-1，52.11mg，0.2841mmol)在1,4-二噁烷/H2O＝5/1(4mL)溶液加入化合物(3-甲基-1-苯并呋喃-2-基)硼烷二醇(50mg，0.2841mmol)、Pd(dppf)Cl2(20.79mg，0.0284mmol)和Na2CO3(75.29mg，0.7102mmol)。将反应在N2下在80℃搅拌1小时。有机相用纯水、用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂，粗产物通过快速色谱法纯化(EtOAc/PE＝10/1)，得到产物化合物49-2(甲基6-((2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)吡啶甲酸酯)(60mg，76％产率)为白色固体。LCMS(ESI,m/z)：278.8[M+H]+。
步骤2：5-氯-4-(3-甲基-1-苯并呋喃-2-基)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺(化合物49-3)的合成化合物6-((2-乙氧基-2-氧乙基)氨基)吡啶甲酸甲酯(60mg，0.215mmol)和化合物4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(102.81mg，0.5375mmol)的1N TFA的2-戊醇(5mL)溶液在110℃下搅拌48h。完成后，浓缩反应混合物。将粗产品通过FCC(溶剂梯度：MeOH/DCM 7％)纯化，得到化合物5-氯-4-(3-甲基-1-苯并呋喃-2-基)-N-[4-(4-甲基哌嗪)-1-基)苯基]嘧啶-2-胺(60mg，64.33％产率)为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：434.2[M+H]+。
步骤3：6-((2-乙氧基-2-氧乙基)(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)吡啶甲酸甲酯(化合物T49)的合成
化合物5-氯-4-(3-甲基-1-苯并呋喃-2-基)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺、化合物5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1,3-噻唑)(31.61mg，0.1497mmol)、Xphos(5.49mg，0.0115mmol)、碳酸钠(26.86mg，0.2534mmol)和Xphos-Pd-G3(9.75mg，0.0115mmol)溶于1，4-二氧六环/水＝4/1(3mL)。将反应混合物在氮气下在80℃搅拌1小时。有机相用水、用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。将残余物通过FCC纯化(溶剂梯度：ACN/水(0.1％ NH3)0％～80％)，得到化合物T49(9.96mg，黄色固体，收率：17.19％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.78(s,1H),8.51(s,1H),7.80(s,1H),7.55(dd,J＝15.2,8.4Hz,3H),7.35–7.27(m,3H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),3.34–3.21(m,4H),2.73(s,4H),2.43(d,J＝15.2Hz,6H)。LCMS(ESI,m/z)：483.2[M+H]+。
实施例50：2-(5-(2-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-4-基噻唑-2-基-2-醇(T50)的合成
步骤1：5-氯-2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-4-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-羧酸甲酯(化合物50-2)的合成将化合物5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-甲酸甲酯(化合物50-1，200.0mg，0.7324mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(194.50mg，0.8788mmol)溶于1mol/L的三氟乙酸-二戊醇溶液(6mL)中，反应液升温到110℃搅拌16h。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。将反应混合物浓缩旋干。将粗产物吸附到硅胶上形成干燥样品，用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝20：1)，得到化合物50-2(250.0mg，收率：74.54％)，为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：457.85[M+H]+。
步骤2：5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-羧酸甲酯(化合物50-3)的合成
将5-(5-氯-2-[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基嘧啶-4-基)-1，3-噻唑-2-羧酸甲酯(480.0mg，1.0106mmol)，4-甲基-5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基噻唑(273.0mg，1.2127mmol),XPhos Pd G3(427.14mg，0.5053mmol)和碳酸钠(214.25mg，2.0212mmol)溶于1，4-二氧六环/水＝4：1(10mL)中,在90℃氮气保护下搅拌2个小时。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。向反应混合物中加入水和乙酸乙酯(50mL)萃取3次，然后合并有机相并用无水硫酸钠干燥，然后通过旋蒸真空干燥。将粗产物吸附在硅胶粉末上形成干燥样品，通过硅胶柱层析(DCM/MeOH＝20:1)纯化，得到化合物50-3(20.0mg，收率：3.64％)，为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：537.95[M+H]+。
步骤3：2-(5-(2-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)嘧啶-4-基噻唑-2-基-2-醇(化合物T50)的合成
将5-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-基苯基)氨基-5-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)嘧啶-4-基嘧啶-1，3-噻唑-2-羧酸甲酯(20.0mg，0.0372mmol)溶解在超干四氢呋喃(3.0mL)中，并且进行氮气保护。然后在零度下加入甲基碘化镁的二乙醚溶液(3M,154.6mg，0.93mmol)，搅拌半小时后恢复到室温反应1.5小时。反应结束20分钟后，用LCMS监控原料全部反应完。向反应混合物中加入水和乙酸乙酯(50mL)萃取3次，然后合并有机相并用无水硫酸钠干燥，然后通过旋蒸真空干燥。将粗产物吸附在硅胶粉末上形成干燥样品，通过(乙腈-水(0.1％三氟乙酸))纯化，得到化合物T50(5.0mg，黄色固体，收率：25.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.90(s,1H),9.03(s,1H),8.48(s,1H),7.63(d,J＝12.6Hz,2H),7.23(d,J＝8.0Hz,1H),6.86(d,J＝8.6Hz,1H),5.75(s,1H),3.85(s,3H),2.94(s,4H),2.46(s,4H),2.22(s,3H),2.12(s,3H),1.52(s,6H)。LCMS(ESI,m/z)：537.90[M+H]+。
实施例51：1-(5-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环丁烷-3-醇(T51)的合成
步骤1：1-(5-溴噻唑-2-基)氮杂环-3-醇(化合物51-2)的合成
将化合物51-1(2,5-二溴噻唑)(1g，4.1mmol)溶于20mL1,4-二氧六环中，加入N,N-二异丙基乙胺(1.06g，8.2mmol)和化合物2(氮杂环丁烷-3-醇)(360mg，4.9mmol)。100℃下搅拌20小时，LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后使用快速柱色谱法(35％ EA/PE)得到目标产物化合物51-2(1-(5-溴噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(340mg)，白色固体，收率35.0％。LCMS(ESI,m/z)：234.9[M+H]+,236.9[M+3]+。
步骤2：1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇(化合物51-3)的合成
化合物51-3(1-(5-溴噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(290mg，1.234mmol)溶于5mLN,N-二甲基甲酰胺溶液，加入化合物4(2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶)(885mg，2.837mmol)，四(三苯基膦)钯(143mg，0.123mmol)和碘化亚铜(I)(24mg，0.123mmol)。氮气下90℃搅拌1小时。LCMS和TLC检测到反应完全。饱和食盐水(40mL)洗涤5次，乙酸乙酯(20mL)萃取，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用快速柱色谱法(60％EA/PE)得到目标产物化合物51-3(1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(250mg)，黄色固体，收率66.8％。LCMS(ESI,m/z)：302.9[M+H]+,304.9[M+3]+。
步骤3：1-(5-(5-氯-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇(化合物51-4)的合成
将化合物51-3(1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(230mg，0.759mmol)溶于8mL1 M三氟乙酸的2-戊醇溶液，加入4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(218mg，1.138mmol)。110℃搅拌12小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后通过制备薄层层析法得到目标产物化合物51-4(1-(5-(5-氯-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(60mg)，黄色固体，收率17.2％。LCMS(ESI,m/z)：458.1[M+H]+。
步骤4：1-(5-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环丁烷-3-醇(化合物T51)的合成
将化合物51-4(1-(5-(5-氯-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(60mg，0.131mmol)，5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)噻唑(42mg，0.197mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(11.1mg，0.013mmol)和碳酸钠(28mg，0.262mmol)溶于7.5mL1，4-二氧六环/水(4：1)的混合溶液中。氮气下90℃搅拌1小时。LCMS和TLC检测到反应完全。加水(30mL)洗涤，乙酸乙酯(30mL)萃取3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用制备薄层层析法得到较纯产物，而后使用制备型HPLC(Gemini 5u C18 150x 21.2mm,ACN/H2O(0.1％ FA),20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到目标产物化合物T51(9.2mg，黄色固体，收率13.28％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.55(s,1H),9.29(s,1H),8.24(s,1H),7.95(s,1H),7.59(d,J＝9.0Hz,2H),6.92(d,J＝9.1Hz,2H),6.77(s,1H),5.88(s,1H),4.64(s,1H),4.33–4.19(m,2H),3.81(dd,J＝9.3,4.5Hz,2H),3.10–3.04(m,4H),2.47–2.44(m,4H),2.22(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：507.2[M+H]+。
实施例52：4-(5-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(T52)的合成
步骤1：N-[(1E)-(5-溴呋喃-2-基)亚甲基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物52-2)的合成
将Ti(OEt)4(7.8g，0.0342mol)添加到25℃氮气搅拌的DCM中2-甲基丙烷-2-硫酰胺(2.07g，0.0171mol)和5-溴呋喃-2-甲醛(化合物52-1，3g，0.0171mol)的溶液中。将反应混合物在25℃搅拌15h。用10g Na2SO4×10H2O对混合物进行淬灭并过滤，用DCM洗涤固体。滤液在真空下浓缩。最后，通过快速柱层析(12％EA，EA&PE)纯化产物，得到淡黄色固体化合物52-2(4.4g，收率87.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ＝8.24(s,1H),7.41(d,J＝3.6,1H),6.91(d,J＝3.6,1H),1.16(s,9H)。
步骤2：4-(5-溴呋喃-2-基)-1H咪唑(化合物52-3)的合成
将装有N-[(1E)-(5-溴呋喃-2-基)亚甲基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物52-2，4.4g，0.0158mol)、TosMIC(3.39g，0.0173mol)和K2CO3(5.46g，0.0395mol)混合物的圆底烧瓶在MeOH中加热至25℃30min。过滤混合物，并用MeOH洗涤固体。然后在真空下除去滤液溶剂，并通过快速柱层析(30％EA，EA&PE)纯化，得到灰白色固体化合物52-3(3.14g，收率：86.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.30(s,1H),7.71(d,J＝0.8,1H),7.42(s,1H),6.59(d,J＝3.0,1H),6.54(s,1H)。
步骤3：2,5-二氯-4-[5-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基]嘧啶(化合物52-4)的合成
将4-(5-溴呋喃-2-基)-1H咪唑(化合物52-3，1g，0.0047mol)，2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶(1.76g，0.0056mol)、碘化亚铜(I)(0.09g，0.004mol)和Pd(pph3)4(0.54g，0.004mol)在DMF中的溶液在90℃氮气下搅拌15小时。用50mL EA稀释混合物，并用100mL水和10mL饱和用饱和食盐水洗涤。接下来，用Na2SO4干燥有机层，并在真空下除去溶剂。最后，通过快速柱层析(46％EA，EA&PE)纯化产物，得到黄色固体化合物52-4(0.669g，收率：40.4％)。LCMS(ESI,m/z)：280.95[M+H]+。
步骤4：5-氯-4-[5-(1H-(1-咪唑-4-基)呋喃-2-基]-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺(化合物52-5)的合成
将含有1N TFA/2-戊醇溶液中2,5-二氯-4-[5-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基]嘧啶(化合物52-4，300mg，1.0672mmol)，4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(408.25mg，2.1344mmol)混合物的圆底烧瓶置于加热至110℃的油浴中15h。反应后在真空下除去溶剂。最后，通过制备TLC(MeOH/DCM＝15:1)纯化产物，得到黄色固体化合物52-5(292mg，收率：50.2％)。LCMS(ESI,m/z)：436.05[M+H]+。
步骤5：5-氯-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-4-{5-[1-(三苯基甲基)咪唑-4-基]呋喃-2-基}嘧啶-2-胺(化合物52-6)的合成
圆底烧瓶中含有的5-氯-4-[5-(1H-(1-咪唑-4-基)呋喃-2-基]-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺(化合物52-5，262mg，0.6010mmol)、TrtCl(251.32mg，0.9015mmol)和TEA(121.63mg，1.202mmol)的二氯甲烷溶液，加热至25℃保持3h。反应后在真空下除去溶剂。最后，通过制备TLC(MeOH/DCM＝15:1)纯化产物，得到黄色固体化合物52-6(200mg，收率：44.2％)。LCMS(ESI,m/z)：678.20[M+H]+。
步骤6：N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-5-(1,3-噻唑-5-基)-4-{5-[1-(三苯基甲基)咪唑-4-基]呋喃-2-基}嘧啶-2-胺(化合物52-7)的合成
向5-氯-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-4-{5-[1-(三苯基甲基)咪唑-4-基]呋喃-2-基}嘧啶-2-胺(化合物52-6，180mg，0.2654mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1,3-噻唑(112.05mg，0.5308mmol)，X-phos Pd G3(104.27mg，0.1327mmol)和K2CO3(73.36mg，0.5304mmol)存于二氧六环/H2O中的溶液搅拌15小时。反应后在真空下除去溶剂。最后，通过制备TLC(MeOH/DCM＝15:1)纯化产物，得到黄色固体化合物52-7(90mg，收率：23.3％)。LCMS(ESI,m/z)：485.10[M+H]+。
步骤7：4-(5-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T52)的合成
将含有N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-5-(1,3-噻唑-5-基)-4-{5-[1-(三苯基甲基)咪唑-4-基]呋喃-2-基}嘧啶-2-胺(化合物52-7，90mg，0.1238mmol)溶于HCl二氧六环溶液在25℃下搅拌1h。然后过滤混合物并收集固体用乙醚洗涤滤饼两次并干燥。通过预处理纯化粗产品。HPLC以黄色固体形式提供化合物T52(18mg，0.29甲酸盐，收率：28.9％)。1HNMR(400MHz,DMSO)：δ＝12.34(s,1H),9.66(s,1H),9.26(s,1H),8.39(s,1H),7.97(s,1H),7.74(s,1H),7.68(d,J＝8.7,2H),7.01(d,J＝2.8,1H),6.94(d,J＝9.0,2H),6.81(s,1H),6.66(d,J＝3.1,1H),3.09(t,J＝4.8,4H),2.48(t,J＝4.9,4H),2.23(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：485.15[M+H]+。
实施例53：1-(5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基环丙烷-1-甲腈(T53)的合成
步骤1：[1，2，3]三唑-1-基4-甲基苯磺酸酯(化合物53-2)的合成
将化合物53-1(20g，148mmol)溶于DCM(400mL)，加入三乙胺(15g，148mmol)。N2保护下降温至0℃，慢慢加入TsCl(28.2g，148mmol)，加完继续反应0.5h。向反应液用水(200mL)洗一次，再用食用饱和食盐水(200mL)洗一次，干燥浓缩，得到[1，2，3]三唑-1-基4-甲基苯磺酸酯(42g，黄色固体，收率：98.09％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.78(d,J＝8.4Hz,2H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.62-7.56(m,1H),7.46-7.39(m,3H),2.50(s,3H)。
步骤2：1-呋喃-2-基甲氧基苯并三氮(化合物53-3)的合成
将[1，2，3]三唑-1-基4-甲基苯磺酸酯(42g，145mmol)溶到THF(500mL)中，再加入DBU(26.5g，174mmol)和呋喃-2-甲醇(21.4g，218mmol)，25℃反应16h。向反应液中加入500mL水，用EtOAc每次200mL萃取3次。有机层干燥浓缩，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝5/1)，旋干得化合物1-呋喃-2-基甲氧基苯并三氮(18.7g)，黄色固体，产率为59.86％。1HNMR(400MHz,CDCl3)：δ7.96(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(dd,J＝1.6Hz,0.8Hz,1H),7.40-7.30(m,2H),7.19(dd,J＝8.4Hz,0.8Hz,1H),6.30-6.21(m,2H),5.48(s,2H)。
步骤3：2-呋喃-2-基乙腈(化合物53-4)的合成
将1-呋喃-2-基甲氧基苯并三氮(18.5g，86mmol)溶于DMSO(185mL)，再加入NaCN(8.4g，172mmol)，100℃反应3h。向反应液中加入300mL水，用EtOAc每次100mL萃取3次。有机层干燥浓缩，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝10/1)。得化合物2-呋喃-2-基乙腈(4.1g)，黄色液体，产率为44.09％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40(d,J＝1.6Hz,1H),6.37-6.36(m,1H),6.34-6.33(m,1H),3.77(s,2H)。
步骤4：1-(呋喃-2-基)环丙烷-1-甲腈(化合物53-5)的合成
N2保护下，将2-呋喃-2-基乙腈(4.1g，38.3mmol)溶于DMSO(80mL)，再加入60％NaH(3.8g，95.7mmol)，25℃反应0.5h。再加入1,2-二溴乙烷(14.4g，76.6mmol)，25℃反应3h。向反应液中加入200mL水，用EtOAc每次50mL萃取3次。有机层干燥浓缩，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝10/1)。得化合物1-(呋喃-2-基)环丙烷-1-甲腈(2.8g)，黄色液体，产率为54.94％。1H NMR(400MHz,CDCl3)；δ7.32-7.28(m,1H),6.34-6.31(m,2H),1.64(dd,J＝8.0Hz,4.8Hz,2H),1.51(dd,J＝8.0Hz,4.8Hz,2H)。
步骤5：1-(5-溴呋喃-2-基)环丙烷-1-甲腈(化合物53-6)的合成
将1-(呋喃-2-基)环丙烷-1-甲腈(2.8g，0.021mol)溶于DMF(50mL)中，加入NBS(4.1g，0.0231mol)，25℃反应2h。向反应液中加入100mL水，用EtOAc每次50mL萃取3次。有机层用食用饱和食盐水(50mL)洗一次，干燥浓缩，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝10/1)。得化合物1-(5-溴呋喃-2-基)环丙烷-1-甲腈(3g)，黄色液体，产率为67.28％。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ6.32(d,J＝3.2Hz,1H),6.26(d,J＝3.2Hz,1H),1.68-1.64(m,2H),1.54-1.50(m,2H)。
步骤6：1-(5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基环丙烷-1-甲腈(化合物53-7)的合成
将1-(5-溴呋喃-2-基)环丙烷-1-甲腈(2g，9.4mmol)溶于DMF(40mL)，再加入2，5-二氯-4-三甲基锡烷基嘧啶(3.2g，10.3mmol)，Pd(pph3)4(1.09g，0.9mmol)和CuI(0.18g，0.9mmol)。N2置换三次，90℃反应2h。向反应液中加入100mL水，用EtOAc每次30mL萃取3次。有机层用食用饱和食盐水(50mL)洗一次，干燥浓缩，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝2/1)。得化合物1-(5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基环丙烷-1-甲腈(1.1g)，黄色固体，产率为41.64％。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.55(s,1H),7.59(d,J＝3.6Hz,1H),6.66(d,J＝3.6Hz,1H),1.82-1.80(m,4H)。
步骤7：5-氯-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-环丙烷-1-甲腈(化合物53-8)的合成
将1-(5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基环丙烷-1-甲腈(500mg，1.8mmol)中加入2-戊醇(25mL)，再加入4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(512mg，2.68mmol)和TFA(2.85g，25mmol)。将反应110℃反应16h。将反应液浓缩干，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝2/1)。得化合物5-氯-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-环丙烷-1-甲腈(460mg)，黄色固体，产率为59.25％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.77(s,1H),8.53(s,1H),7.75(d,J＝8.4Hz,2H),7.52(d,J＝3.6Hz,1H),6.99(d,J＝9.2Hz,2H),6.73(d,J＝3.6Hz,1H),3.70(s,2H),3.50(s,2H),3.17(s,3H),2.86(s,4H),1.92-1.88(m,2H),1.71-1.67(m,2H)。
步骤8：1-(5-(2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基环丙烷-1-甲腈(T53)的合成
将5-氯-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-环丙烷-1-甲腈(100mg，0.23mmol)溶于1,4-二氧六环(4mL)和H2O(1mL)中，再加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁杂硼烷-2-基)噻唑(97mg，0.46mmol)，X-phosPdG3(39mg，0.046mmol)和K3PO4(98mg，0.46mmol)。N2置换三次，90℃反应4h。向反应液中加入10mL水，用EtOAc每次5mL萃取3次。有机层用食用饱和食盐水(10mL)洗一次，干燥浓缩，得到的粗产物通过TLC纯化(PE/EA＝2/1)。得70mg产物。到的产物再次通过半制备液相色谱纯化化合物T53(40mg，黄色固体，收率：36.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.81(s,1H),9.60(s,1H),9.23(s,1H),8.42(s,1H),7.90(s,1H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),7.01(d,J＝9.2Hz,2H),6.80(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),3.75(d,J＝13.6Hz,2H),3.53(d,J＝12.4Hz,2H),3.22-3.14(m,2H),2.94-2.91(m,2H),2.87(d,J＝4.4Hz,3H),1.76-1.72(m,2H),1.27-1.24(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：483.9[M+H]+。
实施例54：1-(5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基)环丙烷-1-甲腈(T54)的合成
步骤1：5-(5-氯-2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)嘧啶-4-基呋喃-2-环丙烷-1-甲腈(化合物54-2)的合成
将1-(5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基环丙烷-1-甲腈(化合物54-1，500mg，1.8mmol)中加入2-戊醇(25mL)，再加入3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(593mg，2.68mmol)和TFA(2.85g，25mmol)。将反应110℃反应16h。将反应液浓缩干，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝2/1)。得化合物5-(5-氯-2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)嘧啶-4-基呋喃-2-环丙烷-1-甲腈(650mg)，黄色固体，产率为78.32％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H),9.73(s,1H),8.57(d,J＝5.9Hz,1H),7.58(s,1H),7.55(d,J＝3.6Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),6.75(d,J＝3.6Hz,1H),3.85(s,3H),3.54-3.43(m,4H),3.17(s,3H),2.90(s,4H),1.89-1.86(m,2H),1.69-1.66(m,2H)。
步骤2：1-(5-(2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基)环丙烷-1-甲腈(化合物T54)的合成
将5-(5-氯-2-(3-甲氧基-4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)嘧啶-4-基呋喃-2-环丙烷-1-甲腈(100mg，0.22mmol)溶于二氧六环(4mL)和H2O(1mL)中，再加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁杂硼烷-2-基)噻唑(91mg，0.43mmol)，X-phosPdG3(36mg，0.043mmol)和K3PO4(91mg，0.43mmol)。N2置换三次，90℃反应4h。向反应液中加入10mL水，用EtOAc每次10mL萃取3次。有机层用食用饱和食盐水(20mL)洗一次，干燥浓缩，得到的粗产物通过TLC纯化(PE/EA＝2/1)。得60mg产物。到的产物再次通过半制备液相色谱纯化，得到化合物T54(35mg，黄色固体，收率：31.68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.87(s,1H),9.54(s,1H),9.24(d,J＝0.8Hz,1H),8.46(s,1H),7.92(d,J＝0.8Hz,1H),7.60(s,1H),7.45-7.38(m,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),6.79(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝3.6Hz,1H),3.83(s,3H),3.47(s,4H),3.21(d,J＝12.0Hz,2H),2.90-2.86(m,5H),1.75-1.72(m,2H),1.28-1.24(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：514.0[M+H]+。
实施例55：(S)-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(T55)的合成
步骤1(S)-5-溴-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑(化合物55-2)的合成
将化合物2,5-二溴噻唑(1g，4.1mmol)溶于15mL1,4-二氧六环中，加入N,N-二异丙基乙胺(1.6g，12.3mmol)和(S)-3-氟吡咯烷(440mg，4.9mmol)。100℃下搅拌36小时，LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后使用快速柱色谱法(16％ EA/PE)得到目标产物化合物3((S)-5-溴-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑)(630mg)，无色油状液体，收率60.7％。LCMS(ESI,m/z)：251[M+H]+,253[M+3]+。
步骤2：(S)-5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑(化合物55-3)的合成
化合物(S)-5-溴-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑(570mg，2.270mmol)溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺溶液，加入化合物4(2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶)(1.56g，4.994mmol)，四(三苯基膦)钯(262mg，0.227mmol)和碘化亚铜(I)(44mg，0.227mmol)。氮气下90℃搅拌1小时。LCMS和TLC检测到反应完全。饱和食盐水(40mL)洗涤5次，乙酸乙酯(30mL)萃取，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用快速柱色谱法(25％EA/PE)得到目标产物化合物55-3((S)-5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑)(320mg)，黄色固体，收率44.1％。LCMS(ESI,m/z)：319[M+H]+,321[M+3]+。
步骤3：(S)-5-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-胺(化合物55-4)的合成
将化合物55-3((S)-5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑)(280mg，0.877mmol)溶于5mL1M三氟乙酸的2-戊醇溶液，加入4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(250mg，1.316mmol)。110℃搅拌12小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后通过快速柱色谱法得到目标产物化合物55-4((S)-5-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-胺)(430mg)，黄色固体，收率93.1％。LCMS(ESI,m/z)：474.1[M+H]+。
步骤4：(S)-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T55)的合成
将化合物55-4((S)-5-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-胺)(200mg，0.422mmol)，5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)噻唑(134mg，0.633mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(178mg，0.211mmol)和碳酸钠(90mg，0.844mmol)溶于50mL1，4-二氧六环/水(4：1)的混合溶液中。氮气下90℃搅拌2小时。LCMS和TLC检测到反应完全。加水(30mL)洗涤，乙酸乙酯(50mL)萃取3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用制备薄层层析法得到较纯产物，后使用制备型HPLC(Gemini 5u C18 150x 21.2mm,ACN/H2O(0.1％ FA),20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到目标产物化合物T55(13.4mg，黄色固体，收率：5.21％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.56(s,1H),9.29(s,1H),8.23(s,1H),7.96(s,1H),7.62(d,J＝9.2Hz,2H),6.92(d,J＝9.2Hz,2H),6.80(s,1H),5.45(d,J＝53.3Hz,1H),3.73–3.64(m,2H),3.61–3.45(m,2H),3.10–3.05(m,4H),2.47–2.44(m,4H),2.36–2.26(m,2H),2.22(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：523.2[M+H]+。
实施例56：(S)-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(T56)的合成
步骤1：(S)-5-溴-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑(化合物56-2)的合成
将化合物56-1(2,5-二溴噻唑)(6.5g，26.8mmol)溶于50mL1,4-二氧六环中，加入N,N-二异丙基乙胺(10.4g，80.4mmol)和(S)-3-氟吡咯烷(2.87g，32.1mmol)。100℃下搅拌36小时，LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后使用快速柱色谱法(16％ EA/PE)得到目标产物化合物56-2((S)-5-溴-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑)(4.5g)，无色油状液体，收率63.4％。LCMS(ESI,m/z)：251[M+H]+,253[M+3]+。
步骤2：(S)-5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑(化合物56-3)的合成
化合物56-2((S)-5-溴-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑)(1.2g，4.8mmol)溶于25mLN,N-二甲基甲酰胺溶液，加入2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶(1.80g，5.76mmol)，四(三苯基膦)钯(550mg，0.48mmol)和碘化亚铜(I)(90mg，0.48mmol)。氮气下90℃搅拌1小时。LCMS和TLC检测到反应完全。饱和食盐水(60mL)洗涤5次，乙酸乙酯(40mL)萃取，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用快速柱色谱法(35％EA/PE)得到目标产物化合物56-3((S)-5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑)(820mg)，黄色固体，收率43.75％。LCMS(ESI,m/z)：319[M+H]+,321[M+3]+。
步骤3：(S)-5-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-胺(化合物56-4)的合成
将化合物56-3((S)-5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑)(500mg，1.57mmol)溶于10mL1M三氟乙酸的2-戊醇溶液，加入3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(520mg，2.35mmol)。110℃下搅拌12小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后通过快速柱色谱法得到目标产物化合物56-4((S)-5-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-胺)(800mg)，黄色固体，收率81.06％。LCMS(ESI,m/z)：504[M+H]+,506[M+3]+。
步骤4：(S)-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T56)的合成
将化合物56-4(S)-5-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-胺(400mg，0.794mmol),5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)噻唑(251mg，1.190mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(336mg，0.397mmol)和碳酸钠(168mg，1.587mmol)溶于50mL1，4-二氧六环/水(4：1)的混合溶液中。氮气下90℃搅拌2小时。LCMS和TLC检测到反应完全。加水(30mL)洗涤，乙酸乙酯(50mL)萃取3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到较纯产物，后使用制备型HPLC(Gemini 5uC18 150x 21.2mm,ACN/H2O(0.1％ FA),20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到目标产物化合物T56(20mg，黄色固体，收率：4.15％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.63(s,1H),9.30(s,1H),8.26(s,1H),7.97(s,1H),7.55(s,1H),7.19(d,J＝6.9Hz,1H),6.85(d,J＝8.6Hz,1H),6.77(s,1H),5.45(d,J＝54.0Hz,1H),3.86(s,3H),3.72–3.46(m,4H),2.92(s,4H),2.45(s,4H),2.35–2.25(m,2H),2.22(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：553.2[M+H]+。
实施例57：1-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇(T57)的合成
步骤1：1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇(化合物57-2)的合成
化合物57-1(1-(5-溴噻唑-2-基)氮杂环丁醇)(740mg，3.148mmol)溶于4mLN,N-二甲基甲酰胺溶液，加入2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶(1.47g，4.721mmol)，四(三苯基膦)钯(363mg，0.315mmol)和碘化亚铜(I)(60mg，0.315mmol)。氮气下90℃搅拌1小时。LCMS和TLC检测到反应完全。饱和食盐水(40mL)洗涤5次，乙酸乙酯(20mL)萃取，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用快速柱色谱法(60％EA/PE)得到目标产物化合物57-2(1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(560mg)，黄色固体，收率49.88％。LCMS(ESI,m/z)：303[M+H]+,305[M+3]+。
步骤2：1-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇(化合物57-3)的合成
将化合物57-2(1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(500mg，1.649mmol)溶于12mL1 M三氟乙酸的2-戊醇溶液，加入3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(548mg，2.474mmol)。110℃下搅拌12小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后通过制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到目标产物化合物57-3(1-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(200mg)，黄色固体，收率19.88％。LCMS(ESI,m/z)：488.2[M+H]+。
步骤3：1-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇(化合物T57)的合成
将化合物57-3(1-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氮杂环-3-醇)(200mg，0.410mmol),5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)噻唑(130mg，0.615mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(35mg，0.041mmol)和碳酸钠(87mg，0.820mmol)溶于25mL1，4-二氧六环/水(4：1)的混合溶液中。氮气下90℃搅拌16小时。LCMS和TLC检测到反应完全。加水(30mL)洗涤，乙酸乙酯(30mL)萃取3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到较纯产物，后使用制备型HPLC(Gemini5u C18 150x 21.2mm,ACN/H2O(0.1％ FA),20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到目标产物化合物T57(23.16mg，黄色固体，收率：10.42％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.64(s,1H),9.30(d,J＝0.6Hz,1H),8.27(s,1H),7.96(d,J＝0.6Hz,1H),7.52(s,1H),7.18(d,J＝6.9Hz,1H),6.85(d,J＝8.6Hz,1H),6.74(s,1H),5.89(d,J＝6.8Hz,1H),4.63(dd,J＝11.1,4.5Hz,1H),4.27–4.22(m,2H),3.84(s,3H),3.80(dd,J＝9.3,4.4Hz,2H),2.92(s,4H),2.45(s,4H),2.22(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：537.2[M+H]+。
实施例58：4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(T58)的合成
步骤1：5-溴-2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑(化合物58-2)的合成
将化合物58-1(2,5-二溴噻唑)(5.5g，22.6mmol)溶于35mL1,4-二氧六环中，加入N,N-二异丙基乙胺(7.30g，56.5mmol)和3,3-二氟吡咯烷(2.90g，27.1mmol)。100℃下搅拌24小时，LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后使用快速柱色谱法(20％ EA/PE)得到目标产物化合物58-2(5-溴-2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑)(3.96g)，无色晶状固体，收率63.72％。LCMS(ESI,m/z)：269[M+H]+,271[M+3]+。
步骤2：5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑(化合物58-3)的合成
化合物58-2(5-溴-2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑)(2.5g，9.3mmol)溶于40mLN,N-二甲基甲酰胺溶液，加入2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶(3.48g，11.1mmol)，四(三苯基膦)钯(1.07g，0.93mmol)和碘化亚铜(I)(180mg，0.93mmol)。氮气下90℃搅拌2小时。LCMS和TLC检测到反应完全。饱和食盐水(60mL)洗涤5次，乙酸乙酯(40mL)萃取，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用快速柱色谱法(40％EA/PE)得到目标产物化合物58-3(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑)(1.23g)，黄色固体，收率35.48％。LCMS(ESI,m/z)：337[M+H]+,339[M+3]+。
步骤3：5-氯-4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基]苯基)嘧啶-2-胺(化合物58-4)的合成
将化合物58-3(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑)(400mg，1.186mmol)溶于10mL1M三氟乙酸的2-戊醇溶液，加入3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(394mg，1.779mmol)。110℃下搅拌16小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后通过制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到目标产物化合物58-4(5-氯-4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基]苯基)嘧啶-2-胺)(460mg)，黄色固体，收率70.56％。LCMS(ESI,m/z)：522.1[M+H]+。
步骤4：4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T58)的合成
将化合物58-4(5-氯-4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基]苯基)嘧啶-2-胺)(460mg，0.881mmol),5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)噻唑(280mg，1.322mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(224mg，0.264mmol)和碳酸钠(187mg，1.762mmol)溶于50mL1，4-二氧六环/水(4：1)的混合溶液中。氮气下90℃搅拌15小时。LCMS和TLC检测到反应完全。加水(100mL)洗涤，乙酸乙酯(60mL)萃取3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到较纯产物，后使用制备型HPLC(Gemini5u C18 150x 21.2mm,ACN/H2O(0.1％ FA),20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到目标产物化合物T58(72.76mg，黄色固体，收率：13.86％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.67(s,1H),9.30(s,1H),8.29(s,1H),8.14(s,0.15H),7.98(s,1H),7.52(s,1H),7.21(d,J＝6.8Hz,1H),6.86(d,J＝8.6Hz,1H),6.77(s,1H),3.90(d,J＝12.7Hz,2H),3.85(s,3H),3.64(t,J＝7.3Hz,2H),2.94(s,4H),2.65–2.57(m,2H),2.49–2.47(m,4H),2.25(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：571.1[M+H]+。
实施例59：4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(T59)的合成
步骤1：5-氯-4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-胺(化合物59-2)的合成
将化合物59-1(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑)(400mg，1.186mmol)溶于10mL1M三氟乙酸的2-戊醇溶液，加入4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(340mg，1.779mmol)。110℃下搅拌16小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后通过制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到目标产物化合物59-2(5-氯-4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-胺)(280mg)，黄色固体，收率45.58％。LCMS(ESI,m/z)：492.1[M+H]+。
步骤2：4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T59)的合成
将化合物59-2(5-氯-4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2-胺)(280mg，0.569mmol),5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)噻唑(180mg，0.854mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(145mg，0.171mmol)和碳酸钠(121mg，1.138mmol)溶于40mL1，4-二氧六环/水(4：1)的混合溶液中。氮气下90℃搅拌15小时。LCMS和TLC检测到反应完全。加水(100mL)洗涤，乙酸乙酯(60mL)萃取3次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到较纯产物，后使用制备型HPLC(Gemini 5u C18 150x21.2mm,ACN/H2O(0.1％FA),20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到目标产物化合物T59(28.51mg，黄色固体，收率：9.23％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.60(s,1H),9.29(d,J＝0.6Hz,1H),8.26(s,1H),7.96(d,J＝0.6Hz,1H),7.61(d,J＝9.0Hz,2H),6.93(d,J＝9.1Hz,2H),6.79(s,1H),3.89(t,J＝12.6Hz,2H),3.66(t,J＝7.3Hz,2H),3.11–3.05(m,4H),2.67–2.56(m,2H),2.47–2.44(m,4H),2.22(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：541.1[M+H]+。
实施例60：4-(5-(1h-咪唑-4-基)呋喃-2-基)-n-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-2-胺(T60)的合成
步骤1：2,5-二氯-4-[5-(1h-咪唑-4-基)呋喃-2-基]嘧啶(化合物60-2)的合成
在4-(5-溴呋喃-2-基)-1h咪唑(化合物60-1，1000mg，4.6942mmol)和2,5-二氯-4-(三甲基锡基)嘧啶(2049.01mg，6.5718mmol)的DMF 10mL溶液中加入碘化亚铜(I)(89.40mg，0.4694mmol)和四(三苯基膦)钯(542.44mg，0.4694mmol)。反应混合物在90℃的氮气下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物过滤。过滤用水(10mL)冲洗2次，乙酸乙酯(10mL)提取3次，用饱和食盐水(10mL)冲洗，Na2SO4干燥。最后，过滤Na2SO4，蒸发溶剂得到粗产物，用闪式柱层析(PE/EtOAc＝1/2)进行纯化，得到化合物60-2(1000mg，产率68.21％)为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：281[M+H]+。
步骤2：5-氯-4-[5-(1h-咪唑-4-基)呋喃-2-基]-n-[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺(化合物60-3)的合成
在2,5-二氯-4-[5-(1h-咪唑-4-基)呋喃-2-基]嘧啶(800mg，2.846mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(755.78mg，3.4152mmol)的2-戊醇(10mL)溶液中加入TFA(1.24mL)。反应混合物在110℃的氮气下搅拌12h。反应结束后，用Na2CO3调整反应液pH为12，用清水(10mL)冲洗2次，用乙酸乙酯(10mL)提取3次，用饱和食盐水(10mL)冲洗，用Na2SO4干燥。最后，Na2SO4过滤，蒸发溶剂得到粗产物，用闪式柱层析(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到化合物60-3(400mg，产率28.66％)为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：466[M+H]+。
步骤3：5-氯-n-[3-甲氧基-4-(4-三苯甲基)咪唑-4-基]呋喃-2-基}嘧啶-2-胺(化合物60-4)的合成
在0℃下，向5-氯-4-[5-(1h-咪唑-4-基)呋喃-2-基]-n-[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺(650mg，1.3950mmol)和三乙胺(282.32mg，2.79mmol)的DCM(10mL)溶液中加入TrtCl(466.68mg，1.674mmol)，反应混合物在室温下搅拌10min。反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，用水(10mL)洗涤反应液2次，用乙酸乙酯(10mL)提取3次，用饱和食盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥。最后，Na2SO4过滤，蒸发溶剂得到粗品，用闪式柱层析(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到化合物60-4(600mg，产率54.65％)为黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO)：δ9.65(s,1H),8.49(s,1H),7.64(d,J＝3.7Hz,1H),7.58(d,J＝1.2Hz,1H),7.49–7.35(m,11H),7.31–7.11(m,9H),6.91(d,J＝3.6Hz,1H),6.62(d,J＝7.6Hz,1H),3.67(s,3H),2.79(s,4H),2.29(s,4H),0.85(t,J＝6.8Hz,2H)。
步骤4：N-[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-5-(1,3-噻唑-5-基)-4-{5-[1-(三苯基甲基)咪唑-4-基]呋喃-2-基}嘧啶-2-胺(化合物60-5)的合成
将K2CO3(128.78mg，0.9318mmol)和XPhos-Pd-G3(118.31mg，0.1397mmol)加入到5-氯-n-[3-甲氧基-4-(4-三苯甲基)咪唑-4-基]呋喃-2-基}嘧啶-2-胺(330mg，0.4659mmol)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1,3-噻唑(196.69mg，0.9318mmol)在1,4-二噁烷/水＝5/1(36mL)溶液中。反应混合物在100℃的氮气下搅拌12h。反应完成后，将反应混合物过滤。过滤用水(5mL)冲洗2次，乙酸乙酯(5mL)提取3次，用饱和食盐水(5mL)冲洗，Na2SO4干燥。最后，Na2SO4过滤，蒸发溶剂得到粗产物，采用闪式柱层析(DCM/MeOH＝10/1)进行纯化，得到化合物60-5(380mg，产率53.87％)为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：757[M+H]+。
步骤5：化合物T60的合成
在0℃下，在1,4-二噁烷(3mL)中加入4mol/L的HCl，制备N-[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-5-(1,3-噻唑-5-基)-4-{5-[1-(三苯基甲基)咪唑-4-基]呋喃-2-基}嘧啶-2-胺(300mg，0.396mmol)溶液。反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，用genal-pre-hplc(ACN和0.1％TFA中的水)纯化反应混合物，得到化合物T60(50mg，黄色固体，收率：23.77％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.84(d,J＝36.0Hz,2H),9.27(s,1H),8.69(s,1H),8.51(s,1H),8.00(s,1H),7.60(s,1H),7.41(d,J＝8.5Hz,1H),7.22–7.03(m,2H),7.03–6.84(m,2H),3.81(s,3H),3.54–3.41(m,4H),3.22(s,2H),2.90(d,J＝18.4Hz,5H)。LCMS(ESI,m/z)：515[M+H]+。
实施例61：(S)-1-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)-N-甲基吡咯烷-3-甲酰胺(T61)的合成
步骤1：(3S)-1-[5-(5-氯-2-{[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]-N-甲基吡咯烷-3-甲酰胺(化合物61-2)的合成
圆底烧瓶中将(3S)-1-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]-N-甲基吡咯烷-3-甲酰胺(化合物61-1，200mg，0.5583mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(247.1mg，1.1166mmol)溶于1N TFA/2-戊醇置于油浴中，在氮气下加热至110℃反应15h。反应后在真空下除去溶剂。最后，通过制备TLC(MeOH/DCM＝10:1)纯化产物，得到黄色固体化合物61-2(203mg，收率：60.3％)。LCMS(ESI,m/z)：543.10[M+H]+。
步骤2：化合物T61的合成
将(3S)-1-[5-(5-氯-2-{[3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]-N-甲基吡咯烷-3-甲酰胺(218mg，0.4014mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-13-噻唑(169.46mg，0.8028mmol)，X-phos Pd G3(169.88mg，0.2007mmol)和K2CO3(110.95mg，0.802mmol)溶于二氧六环/水并在90℃氮气下搅拌15小时。反应后在真空下除去溶剂。最后，通过制备HPLC纯化产物，得到黄色固体化合物T61(11mg，0.33FA盐，收率：4.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ＝9.62(s,1H),9.30(s,1H),8.25(s,1H),8.01(q,J＝4.4,1H),7.96(s,1H),7.56(s,1H),7.19(dd,J＝8.8,1.9,1H),6.85(d,J＝8.6,1H),6.77(s,1H),3.85(s,3H),3.61-3.56(m,2H),3.49-3.45(m,3H),3.10(m,2H),2.92(s,4H),2.60(d,J＝4.6,3H),2.46(s,4H),2.22(s,3H),2.19-2.07(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：592.15[M+H]+。
实施例62：(1r,4r)-4-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己-1-醇(T62)的合成
步骤1：2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-7-烯-8-基)噻唑(化合物62-2)的合成
向化合物62-1(2-溴-1,3-噻唑)(6.2g，0.0378mol)在1,4-二氧六环/H2O＝4/1(150mL)中的溶液中添加2-{1,4-二噁螺[4.5]癸-7-烯-8-基}-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(10.06g，0.0370mol)，Pd(pph3)4(2.18g，0.0018mol)和Na2CO3(8.01g，0.0756mol)。将反应混合物在90℃氮气下搅拌16小时。完成后，浓缩反应混合物。粗产品通过FCC纯化(溶剂梯度：EA在PE中5％)，得到化合物2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-7-烯-8-基)噻唑(7.15g，84.13％收率)为无色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ7.77(d,J＝3.2Hz,1H),7.60(d,J＝3.2Hz,1H),6.53–6.46(m,1H),3.92(s,4H),2.66(d,J＝1.8Hz,2H),2.45–2.36(m,2H),1.81(t,J＝6.4Hz,2H)。
步骤2：2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(化合物62-3)的合成
用圆底烧瓶将化合物2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-7-烯-8-基)噻唑(7.15g，0.032mol)和Pd/C(1.7g，将0.016mol)的EtOH(80mL)反应液置于加热至65℃的油浴中并在H2下搅拌30小时。完成后，将反应混合物过滤并浓缩。通过FCC纯化粗产品(溶剂梯度：EA在PE中33％)，得到化合物2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(6.8g，94.38％产率)，为无色油。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ7.70(d,J＝3.2Hz,1H),7.58(d,J＝3.2Hz,1H),3.88(s,4H),3.08(tt,J＝10.8,4.0Hz,1H),2.08–1.98(m,2H),1.81–1.68(m,4H),1.63(ddd,J＝13.6,10.0,3.6Hz,2H)。
步骤3：5-溴-2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(化合物62-4)的合成
向化合物2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(6.8g，0.0302mol)在DMF(100mL)中的溶液中加入NBS(6.45g，0.0362mol)，温度为0℃。将反应混合物在氮气下于25℃搅拌5小时。有机相用纯水、用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。通过FCC纯化粗产品(溶剂梯度：EA在PE中22％)，得到化合物5-溴-2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(8.72克，95.03％)产率)为无色油状物。LCMS(ESI,m/z)：303.6[M+H]+。
步骤4：4-(5-溴噻唑-2-基)环己烷-1-酮(化合物62-5)的合成
化合物5-溴-2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(8.72g，0.0287mol)和对甲苯磺酸吡啶鎓(14.42g，0.0574mol)在丙酮中的溶液/H2O＝1:1(140mL)置于加热至55℃的油浴中搅拌16h。完成后，真空除去丙酮，水层用EA萃取。有机相用纯水、用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。粗产品通过FCC纯化(溶剂梯度：在PE中的EA 28％)，得到化合物4-(5-溴噻唑-2-基)环己-1-酮(6.62g，88.50％产率)，为浅橙色固体。LCMS(ESI,m/z)：259.5[M+H]+。
步骤5：(1r，4r)-4-(5-溴噻唑-2-基)环己烷-1-醇(化合物62-6)的合成
0℃下向化合物4-(5-溴噻唑-2-基)环己-1-酮(2g，0.0077mol)MeOH(30mL)中的溶液中加入NaBH4(1.46g，0.0385mol)。将反应混合物在氮气下于25℃搅拌1小时。完成后，真空除去MeOH。混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，水层用EA萃取。有机相用纯水、用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。将粗产品通过FCC纯化(溶剂梯度：EA在PE 30％中)，得到化合物(1r，4r)-4-(5-溴噻唑-2-基)环己烷-1-醇(1.521g，75.32％产率)为无色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ7.73(s,1H),4.64(d,J＝4.4Hz,1H),3.50–3.37(m,1H),2.89(tt,J＝11.6,3.6Hz,1H),2.09–1.83(m,4H),1.58–1.22(m,4H)。
步骤6：(1r，4r)-4-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-醇(化合物62-7)的合成
将化合物2,5-二氯-4-(三甲基甲锡基)嘧啶(2.67g，0.0085mol)、Pd(pph3)4(0.66g，0.0005mol)和碘化亚铜(I)(0.22g，0.0011mol)。将反应混合物在氮气下在90℃搅拌3小时。反应完成后，混合物用水淬灭，用EA萃取。合并的有机层用水和用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液。将粗产品通过FCC纯化(溶剂梯度：EA在PE 50％中)，得到化合物(1r,4r)-4-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-醇(70mg，35.09％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.90(s,1H),8.72(s,1H),4.61(s,1H),3.50–3.35(m,1H),3.04–2.89(m,1H),2.11–1.99(m,2H),1.96–1.83(m,2H),1.62–1.42(m,2H),1.36–1.21(m,2H)。
步骤7：4-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-醇(化合物62-8)的合成
将4-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]环己烷-1-醇(500mg，1.5141mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(670.14mg，3.0282mmol)在1N TFA中的2-戊醇(10mL)中的反应液搅拌16h。完成后，用饱和碳酸氢钠溶液淬火反应混合物并用EA萃取，用水冲洗有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液。通过制备TLC(DCM:MeOH＝20:1)纯化残余物，得到作为黄色固体的化合物62-8(4-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-醇)(500mg，64.11％产率)。LCMS(ESI,m/z)：515.0[M+H]+。
步骤8：(1r,4r)-4-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己-1-醇(化合物T62)的合成
向化合物62-8(4-(5-(5-(5-chloro-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-噻唑-2--环己烷-2-环己烷-l-醇(200mg，0.388mmol)的1,4-二氧六环/H2O＝4/1(6mL)溶液中添加化合物12(5-(4,4,4,1,5,5-四甲基-1,3,2-二氧基)-1,3-噻唑(122.9mg，0.582mmol)，Xphos(18.5mg，0.038mmol)，碳酸钠(102.8mg，0.97mmol)和Xphos-Pd-G3(32.8mg，0.038mmol)。将反应在80℃，氮气保护下搅拌1小时。反应完成后，用水淬火混合物，用EA萃取。用水和用饱和食盐水冲洗结合的有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液。通过制备型HPLC法(ACN(0.1％TFA)在水中)纯化粗产品，以提供作为黄色固体的化合物T62(48.65mg)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.90(s,1H),9.67(d,J＝30.8Hz,1H),9.31(d,J＝0.4Hz,1H),8.48(s,1H),8.00(d,J＝0.8Hz,1H),7.58(s,1H),7.41(s,1H),7.29(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),3.85(s,3H),3.47(dd,J＝24.8,11.6Hz,5H),3.21(dd,J＝20.4,10.0Hz,2H),2.98–2.78(m,6H),2.11–1.84(m,4H),1.46(tt,J＝12.8,6.4Hz,2H),1.28(ddd,J＝16.0,9.6,2.8Hz,2H)。LCMS(ESI,m/z)：564.2[M+H]+。
实施例63：(1s,4s)-4-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己-1-醇(T63)的合成
步骤1：2-(1,4-二噁螺[4.5]dec-7-en-8-yl)噻唑(化合物63-2)的合成
向化合物63-1(2-溴-1,3-噻唑)(6.2g，0.0378mol)在1,4-二氧六环/H2O＝4/1(150mL)中的溶液中添加2-{1,4-二噁螺[4.5]癸-7-烯-8-基}-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(10.06g，0.0370mol)，Pd(pph3)4(2.18g，0.0018mol)和Na2CO3(8.01g，0.0756mol)。将反应混合物在90℃氮气下搅拌16小时。完成后，浓缩反应混合物。残余物通过FCC纯化(溶剂梯度：EA在PE中25％)，得到化合物2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-7-烯-8-基)噻唑(化合物63-2，7.15g，84.13％收率)为无色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ7.77(d,J＝3.2Hz,1H),7.60(d,J＝3.2Hz,1H),6.53–6.46(m,1H),3.92(s,4H),2.66(d,J＝1.8Hz,2H),2.45–2.36(m,2H),1.81(t,J＝6.4Hz,2H)。
步骤2：2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(化合物63-3)的合成
圆底烧瓶，含有化合物2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-7-烯-8-基)噻唑(7.15g，0.032mol)和Pd/C(1.7g，将0.016mol)的EtOH(80mL)置于加热至65℃的油浴中并在H2下搅拌30小时。完成后，将反应混合物过滤并浓缩。通过FCC纯化残余物(溶剂梯度：EA在PE中33％)，得到化合物2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(化合物63-3，6.8g，94.38％产率)，为无色油。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.70(d,J＝3.2Hz,1H),7.58(d,J＝3.2Hz,1H),3.88(s,4H),3.08(tt,J＝10.8,4.0Hz,1H),2.08–1.98(m,2H),1.81–1.68(m,4H),1.63(ddd,J＝13.6,10.0,3.6Hz,2H)。
步骤3：5-溴-2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(化合物63-4)的合成
向化合物2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(6.8g，0.0302mol)在DMF(100mL)中的溶液中加入NBS(6.45g，0.0362mol)，温度为0℃。将反应混合物在氮气下于25℃搅拌5小时。有机相用纯水、用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。通过FCC纯化残余物(溶剂梯度：EA在PE中22％)，得到化合物5-溴-2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(化合物63-4，8.72克，95.03％)产率)为无色油状物。LCMS(ESI,m/z)：303.6[M+H]+。
步骤4：4-(5-溴噻唑-2-基)环己烷-1-酮(化合物63-5)的合成
化合物5-溴-2-(1,4-二噁螺[4.5]癸-8-基)噻唑(8.72g，0.0287mol)和对甲苯磺酸吡啶鎓(14.42g，0.0574mol)在丙酮中的溶液/H2O＝1:1(140mL)置于加热至55℃的油浴中搅拌16h。完成后，真空除去丙酮，水层用EA萃取。有机相用H2O、用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。将残余物通过FCC纯化(溶剂梯度：在PE中的EA28％)，得到化合物4-(5-溴噻唑-2-基)环己-1-酮(化合物63-5，6.62g，88.50％产率)，为浅橙色固体。LCMS(ESI,m/z)：259.5[M+H]+。
步骤5：(1r，4r)-4-(5-溴噻唑-2-基)环己烷-1-醇(化合物63-6)的合成
向化合物4-(5-溴噻唑-2-基)环己-1-酮(2g，0.0077mol)在MeOH(30mL)中的溶液中加入NaBH4(1.46g，0.0385mol)，温度为0℃。将反应混合物在氮气下于25℃搅拌1小时。完成后，真空除去MeOH。混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，水层用EA萃取。有机相用纯水、用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。将残余物通过FCC纯化(溶剂梯度：EA在PE 30％中)，得到化合物(1r，4r)-4-(5-溴噻唑-2-基)环己烷-1-醇(化合物63-6，1.521g，75.32％产率)为无色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.73(s,1H),4.64(d,J＝4.4Hz,1H),3.50–3.37(m,1H),2.89(tt,J＝11.6,3.6Hz,1H),2.09–1.83(m,4H),1.58–1.22(m,4H)。
步骤6：(1r，4r)-4-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-醇(化合物63-7)的合成
将化合物2,5-二氯-4-(三甲基甲锡基)嘧啶(2.67g，0.0085mol)、Pd(pph3)4(0.66g，0.0005mol)和碘化亚铜(I)(0.22g，0.0011mol)。将反应混合物在氮气下在90℃搅拌3小时。反应完成后，混合物用水淬灭，用EA萃取。合并的有机层用水和用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液。将残余物通过FCC纯化(溶剂梯度：EA在PE 50％中)，得到化合物(1r,4r)-4-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-醇(化合物63-7，70mg，35.09％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.90(s,1H),8.72(s,1H),4.61(s,1H),3.50–3.35(m,1H),3.04–2.89(m,1H),2.11–1.99(m,2H),1.96–1.83(m,2H),1.62–1.42(m,2H),1.36–1.21(m,2H)。
步骤7：4-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-醇(化合物63-8)的合成
将4-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1,3-噻唑-2-基]环己烷-1-醇(500mg，1.5141mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(670.14mg，3.0282mmol)在1N TFA中的2-戊醇(10mL)中的混合物搅拌16h。完成后，用饱和碳酸氢钠溶液淬火反应混合物并用EA萃取，用水冲洗有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液。通过制备TLC(DCM:MeOH＝20:1)纯化残余物，得到作为黄色固体的化合物63-8(4-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-醇)(化合物63-8，500mg，64.11％产率)。LCMS(ESI,m/z)：515.0[M+H]+。
步骤8：(1s,4s)-4-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己-1-醇(化合物T63)的合成
向化合物63-8(4-(5-(5-(5-chloro-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环己烷-1-噻唑-2--环己烷-2-环己烷-l-醇在(200mg，0.388mmol)存于1,4-二氧六环/H2O＝4/1(6mL)中的溶液中添加化合物12(5-(4,4,4,1,5,5-四甲基-1,3,2-二氧基)-1,3-噻唑(122.9mg，0.582mmol)，Xphos(18.5mg，0.038mmol)，碳酸钠(102.8mg，0.97mmol)和Xphos-Pd-G3(32.8mg，0.038mmol)。将反应混合物在80℃，氮气保护下搅拌1小时。反应完成后，用水淬火混合物，用EA萃取。用水和用饱和食盐水冲洗结合的有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液。通过制备型HPLC法(ACN(0.1％TFA)在水中)纯化残余物，以提供作为黄色固体的化合物T63(24.17mg)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.91(s,1H),9.62(s,1H),9.31(d,J＝0.4Hz,1H),8.49(s,1H),8.01(s,1H),7.62(s,1H),7.42(s,1H),7.27(d,J＝8.4Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),4.43(s,1H),3.87(s,3H),3.81(s,1H),3.48(t,J＝11.6Hz,4H),3.21(s,2H),3.00(ddd,J＝13.6,10.0,3.6Hz,1H),2.87(s,5H),1.87(td,J＝14.0,3.6Hz,2H),1.78–1.69(m,2H),1.69–1.51(m,4H)。LCMS(ESI,m/z)：564.1[M+H]+。
实施例64：1-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-甲腈(T64)的合成
步骤1：1-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-甲腈(化合物64-2)的合成
将化合物1-(5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-甲腈(330mg，1.1105mmol)、化合物3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(294mg，1.3326mmol)溶于TFA(1M)的2-戊醇溶液中在氮气下于110℃搅拌。将反应混合物搅拌6小时。反应完成后将反应液浓缩，得到粗产物，将其通过Pre-TLC纯化，得到化合物1-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-甲腈(126mg)，黄色固体，产率21.19％。LCMS(ESI,m/z)：481.1[M+H]-。
步骤2：1-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-甲腈(T64)的合成
将化合物1-(5-(5-氯-2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-甲腈(136mg，0.2822mmol)、化合物5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)噻唑(119mg，0.5644mmol)和K2CO3(78mg，0.5644mmol)溶于1,4-二氧六环和水的混合溶液中加入XPhos-Pd-G3(24mg，0.02822mmol)。将反应混合物在90℃温度下搅拌3小时。反应结束后将反应混合物真空浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC(Gemini 5u C18150x 21.2mm，ACN/H2O，20mL/min)进一步纯化，得到化合物1-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)环丙烷-1-甲腈(22mg，棕色固体，收率：14.39％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.98(s,1H),9.32(s,1H),8.52(s,1H),8.02(s,1H),7.62(s,1H),7.28(s,1H),7.24(d,J＝7.7Hz,1H),6.94(d,J＝8.6Hz,1H),3.88(s,3H),3.44(s,4H),3.22(dd,J＝20.0,9.3Hz,2H),2.98–2.80(m,5H),2.04(dd,J＝8.2,4.7Hz,2H),1.78(dd,J＝8.3,4.8Hz,2H)。LCMS(ESI,m/z)：531.10[M+H]+。
实施例65：1-(5-(2-((3-甲基-4-(4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)环丁基-1-乙腈(T65)的合成
步骤1化合物65-2的合成
在2-(5-溴-1,3-噻唑-2-基)乙腈(化合物65-1，5g，0.0246mol)和1,3-二溴丙烷(5.46g，0.02701mol)四氢呋喃溶液中加入氢化钠(2.16g，0.0541mol)，0℃，N2,20℃搅拌16小时。最后的混合物用水淬火，用乙酸乙酯提取。合成的有机相用水和用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱纯化，得到化合物65-2(500mg，收率8.13％)为黄色油状化合物。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ7.98(s,1H),2.90–2.80(m,2H),2.79–2.69(m,2H),2.24(ddq,J＝11.6,9.2,7.6Hz,1H),2.11(ddq,J＝17.2,9.2,6.0Hz,1H)。
步骤2：化合物65-3的合成
将化合物65-2(600mg，2.4679mmol)、2,5-二氯-4-(三甲基甲锡烷基)嘧啶(1923.63mg，6.1697mmol)和碘化亚铜(I)(141mg，0.7403mmol)的DMF溶液在20℃氮气搅拌下一次性加入四(三苯基膦)钯(285.18mg，0.2467mmol)。将烧瓶抽空并用氮气清洗三次。反应混合物在80℃搅拌2小时。得到的混合物用水稀释，并用乙酸乙酯提取。结合有机相用饱和食盐水洗涤，在硫酸钠上干燥，浓缩，并用硅胶柱层析纯化，得到化合物65-3(400mg，49.5％收率)为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.04(s,1H),8.94(s,1H),2.97–2.89(m,2H),2.83(dt,J＝12.4,8.4Hz,2H),2.31(ddt,J＝16.4,11.6,8.4Hz,1H),2.24–2.10(m,1H)。
步骤3：化合物65-4的合成
将3-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯胺(53.34mg，0.2410mmol)加入到化合物65-3(50mg，0.1607mmol)在2-戊醇中的1N TFA溶液中，回流6小时。冷却至室温后，混合物进行过滤。在MeOH中加入7N NH3，将滤液的pH值调整到9-10，用预备薄层色谱(prep-tlc)纯化，得到化合物65-4(40mg，45.2％收率)为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.84(s,1H),8.84(s,1H),8.65(s,1H),7.47(s,1H),7.16(d,J＝6.4Hz,1H),6.87(d,J＝8.4Hz,1H),3.84(s,3H),3.06–2.69(m,10H),2.41–2.12(m,7H)。
步骤4：化合物T65的合成
将化合物65-4(40mg，0.0858mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噻唑(36.22mg，0.1716mmol)和碳酸钾(35.58mg，0.2574mmol)在1,4-二氧六烷/水＝4:1的溶液中，在20℃氮气搅拌下一次充注加入XPhos Pd G3(36.26mg，0.0429mmol)。将烧瓶抽空并用氮气清洗三次。反应混合物在90℃搅拌1小时得到的混合物用水稀释，并用乙酸乙酯提取。结合有机相用饱和食盐水洗涤，在硫酸钠上干燥，浓缩，用预备薄层色谱(prep-tlc)纯化，得到黄色固体化合物T65(18mg，收率38.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.91(s,1H),9.32(s,1H),8.52(s,1H),8.03(s,1H),7.54(s,1H),7.45(s,1H),7.21(d,J＝8.4Hz,1H),6.87(d,J＝8.4Hz,1H),3.84(s,3H),3.30(s,3H),3.01–2.88(m,4H),2.88–2.80(m,2H),2.78–2.68(m,2H),2.31–2.07(m,6H)。LCMS(ESI,m/z)：545.1[M+H]+。
实施例66：4-(5-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基呋喃-2-甲酸甲酯(T66)的合成
步骤1：4-(5-溴呋喃-2-基)-1-(2-三甲基硅基乙氧基甲基)-1H-咪唑(化合物66-2)的合成
将5-溴呋喃-2-基咪唑(化合物66-1，2.0g，9.4mmol)中加入DMF(20mL)，降温至0℃，再分批加入NaH(0.27g，11.2mmol)。该反应在0℃反应0.5h，加入SEMCl(1.88g，11.2mmol)，0℃继续反应2h。向反应液中加入50mL水，用EtOAc每次30mL萃取3次。有机层用食用饱和食盐水(50mL)洗一次，干燥浓缩，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝2/1)。得4-(5-溴呋喃-2-基)-1-(2-三甲基硅基乙氧基甲基)-1H-咪唑(2g)，棕色固体，产率为62.05％。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.89(s,1H),7.30(s,1H),6.80(d,J＝3.2Hz,1H),6.38(d,J＝3.2Hz,1H),5.34(s,2H),3.53(t,J＝8.0Hz,2H),0.93(t,J＝8.0Hz,2H),0.00(s,9H)。
步骤2：4-溴呋喃-2-基-1-(2-三甲基乙氧基硅基甲基)甲基-1H-咪唑-2-甲酸甲酯(化合物66-3)的合成
N2保护下，将4-(5-溴呋喃-2-基)-1-(2-三甲基硅基乙氧基甲基)-1H-咪唑(2.2g，6.4mmol)溶于THF(44mL)，降温至-65℃.慢慢滴加LDA(3.8mL，2M)。加完后-65℃反应1h，再加入氯甲酸甲酯(1.8g，19.2mmol)，-65℃继续反应1h。向反应液中加入100mL水，用EtOAc每次30mL萃取3次。有机层用食用饱和食盐水(50mL)洗一次，干燥浓缩，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝2/1)。得4-溴呋喃-2-基-1-(2-三甲基乙氧基硅基甲基)甲基-1H-咪唑-2-甲酸甲酯(0.69g)，黄色油状物，产率为26.82％。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.53(s,1H),6.96(d,J＝3.6Hz,1H),6.39(d,J＝3.6Hz,1H),5.83(s,2H),4.01(s,3H),3.61(t,J＝8.0Hz,2H),0.96(t,J＝8.0Hz,2H),0.00(s,9H)。
步骤3：4-(5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基-1-(2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-羧酸甲酯(化合物66-4)的合成
将4-溴呋喃-2-基-1-(2-三甲基乙氧基硅基甲基)甲基-1H-咪唑-2-甲酸甲酯(690mg，1.72mmol)溶于DMF(15mL)，加入Pd(pph3)4(199mg，0.172mmol)，CuI(33mg，0.172mmol)和2，5-二氯-4-三甲基锡烷基嘧啶(643mg，2.06mmol)。N2置换3次后，90℃反应1h。向反应液中加入30mL水，用EtOAc每次15mL萃取3次。有机层用食用饱和食盐水(20mL)洗一次，干燥浓缩，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝3/1)。得4-(5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基-1-(2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-羧酸甲酯(410mg)，黄色固体，产率为50.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.56(s,1H),7.88-7.73(m,2H),7.20(d,J＝3.6Hz,1H),5.87(s,2H),4.02(s,3H),3.69-3.60(m,2H),1.03-0.95(m,2H),0.01(s,9H)。
步骤4：4-(5-氯-2-)4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-基呋喃甲酯(化合物66-5)的合成
将4-(5-(2，5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基-1-(2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-1H-咪唑-2-羧酸甲酯(410mg，1.72mmol)溶于2-戊醇(20mL)，再加入TFA(2.28g，20mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(251mg，1.31mmol)。100℃反应16h。将反应液直接浓缩干，得到的粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EA＝3/1)。得4-(5-氯-2-)4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-基呋喃甲酯(180mg)，黄色固体，产率为41.72％。LCMS(ESI,m/z)：494.1[M+H]+。
步骤5：4-(5-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基呋喃-2-甲酸甲酯(化合物T66)的合成
将4-(5-氯-2-)4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基呋喃-2-基呋喃甲酯(100mg，0.2mmol)溶于二氧六环/H2O＝20/1(5mL)，再加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁杂硼烷-2-基)噻唑(85mg，0.41mmol)，X-phos pd G3(34mg，0.041mmol)和K3PO4(86mg，0.41mmol)。N2置换3次，90℃反应2h。向反应液中加入20mL水，用EtOAc每次10mL萃取3次。有机层用食用饱和食盐水(10mL)洗一次，干燥浓缩，得到的粗产物通过TLC纯化(PE/EA＝2/1)，得50mg产品。将产品再次通过半制备液相色谱纯化，得到化合物T66(35mg，黄色固体，收率：31.86％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ13.73(s,1H),9.73(s,1H),9.26(s,1H),8.41(s,1H),7.99(s,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,2H),7.02(s,1H),6.94(d,J＝9.2Hz,3H),6.82(s,1H),3.87(s,3H),3.11-3.07(m,4H),2.48-2.45(m,4H),2.23(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：543.2[M+H]+。
实施例67：4-(5-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-呋喃-2-基)-1H-咪唑-2-甲醇(T67)的合成
步骤1：4-(5-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-呋喃-2-基)-1H-咪唑-2-甲醇(T67)的合成
N2保护下，将4-(5-2-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基)-5-噻唑-5-基嘧啶-4-基呋喃-2-基呋喃-2-甲酸甲酯(化合物T66，15mg，0.028mmol)溶于THF(3mL)，降温至-65℃。慢慢加入DIBAL-H(0.166mL，1M))，-65℃反应1h。向反应液中加入0.1mL水，过滤，再将滤液浓缩。得到的粗产物通过TLC纯化(PE/EA＝2/1)，得到化合物T67(13.3mg)，黄色固体，产率为93.49％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.24(s,1H),9.66(s,1H),9.25(s,1H),8.38(s,1H),7.97(s,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,2H),6.96-6.93(m,3H),6.75(s,1H),6.61(d,J＝3.6Hz,1H),5.46(t,J＝5.6Hz,1H),4.46(d,J＝5.2Hz,2H),3.12-3.06(m,4H),2.48-2.45(m,4H),2.23(s,3H)。LCMS(ESI,m/z)：514.9[M+H]+。
实施例68：3-甲氧基-4-甲基哌嗪-3-苯基氨基-5-噁唑-5-嘧啶-4-甲基噻唑-2-基吡咯烷-3-醇(T68)的合成
步骤1：5-溴-4-甲基噻唑-2-吡咯烷-3-醇(化合物68-2)的合成
将化合物2，5-二溴-4-甲基噻唑(化合物68-1，5.0g，0.0195mol)和3-吡咯烷醇(1.7g，0.0195mol)溶于DMA溶液(10.0mL)中，室温加入DIEA(5.04g，0.039mol)。然后，反应液升温到80℃搅拌1小时。用乙酸乙酯(10mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(5mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(PE/EA＝1/1)，旋干得化合物5-溴-4-甲基噻唑-2-吡咯烷-3-醇(3.0g)，固体，产率为49.74％。LCMS(ESI,m/z)：264.6[M+H]-。
步骤2：4-甲基噻唑-2-吡咯烷-3-醇(化合物68-3)的合成
将5-溴-4-甲基噻唑-2-吡咯烷-3-醇(3g，0.0114mol)溶于甲醇(4mL)溶液中加入钯碳(0.97g，0.0091mmol),在25℃和氢气环境下搅拌3h。反应液过滤，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(40mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝10/1)，旋干得化合物4-甲基噻唑-2-吡咯烷-3-醇(1.85g)，白色固体，产率为87.72％。LCMS(ESI,m/z)：185.1[M+H]-。
步骤3：5-碘-4-甲基噻唑-2-吡咯烷-3-醇(化合物68-4)的合成
将化合物4-甲基噻唑-2-吡咯烷-3-醇(1.8g，0.0098mol)溶于DMF溶液(5.0mL)中，室温加入NIS(3.31g 0.0147mol)。然后，反应液搅拌2小时。用乙酸乙酯(10mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(10mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后用硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝20/1)得到化合物5-碘-4-甲基噻唑-2-吡咯烷-3-醇(2.0g)，固体，产率为53.06％。LCMS(ESI,m/z)：310.8[M+H]+。
步骤4：5-氯-5-噁唑-4-基嘧啶-4-甲基噻唑-2-基吡咯烷-3-醇(化合物68-5)的合成
将化合物5-碘-4-甲基噻唑-2-吡咯烷-3-醇(400.0mg，1.29mmol)和5-(2-氯-4-三甲基锡烷基)嘧啶-5-基噁唑(533.0mg，1.550mmol)溶于DMF溶液(4.0mL)中，室温加入碘化亚铜(I)(24.56mg，0.13mmol)和四三苯基磷钯(149.0mg，0.13mmol)。然后，反应液升温到90℃搅拌1小时。用乙酸乙酯(10mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(5mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝20/1)，旋干得化合物5-氯-5-噁唑-4-基嘧啶-4-甲基噻唑-2-基吡咯烷-3-醇(200.0mg)，固体，产率为29.84％。LCMS(ESI,m/z)：364.0[M+H]-。
步骤5：3-甲氧基-4-甲基哌嗪-3-苯基氨基-5-噁唑-5-嘧啶-4-甲基噻唑-2-基吡咯烷-3-醇(化合物T68)的合成将化合物5-氯-5-噁唑-4-基嘧啶-4-甲基噻唑-2-基吡咯烷-3-醇(65mg，0.18mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(79.1mg，0.3574mmol)溶于1M TFA in 2-pentanol(3.0mL)中。然后，反应液升温到110℃搅拌12h。用2M NaHCO3将pH调节至6-7，然后用乙酸乙酯(3mL)萃取2次，有机相合并，用饱和食盐水(2mL)洗涤2次；有机相无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后通过半制备液相色谱纯化得化合物T68(6.06mg，黄色固体，收率：5.15％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.71(s,1H),8.54(d,J＝4.2Hz,1H),8.42(d,J＝4.2Hz,1H),7.51(s,1H),7.25(dd,J＝11.6,6.1Hz,2H),6.83(dd,J＝8.6,4.0Hz,1H),5.12(s,1H),4.40(s,1H),3.80(d,J＝3.8Hz,3H),3.49(d,J＝10.8Hz,2H),3.27(dd,J＝13.4,6.3Hz,2H),2.91(s,4H),2.44(s,4H),2.21(d,J＝3.8Hz,3H),2.07(dd,J＝8.6,4.3Hz,1H),1.92(s,4H)。LCMS(ESI,m/z)：549.0[M+H]+。
实施例69：1-(4-(5-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮(T69)的合成
步骤1：2,5-二氯-4-[5-(哌啶-4-基)呋喃-2-基]嘧啶(化合物69-2)的合成
在0℃下，向4-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物69-1，900mg，2.260mmol)溶液中加入4mol/L的HCl的二氧六环溶液(10mL)。反应混合物在氮气下搅拌2小时。反应完成后，反应混合物在溶剂中蒸发，得到粗产物化合物69-2(700mg，收率83.1％)，未进行任何纯化。LCMS(ESI,m/z)：298[M+H]+。
步骤2：1-{4-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基]哌啶-1-基}乙烯酮(化合物69-3)的合成
向2,5-二氯-4-[5-(哌啶-4-基)呋喃-2-基]嘧啶(化合物69-2，700mg，13.1988mmol)的DCM(10mL)溶液中加入TEA(948.47mg，9.3908mmol)，0℃。反应搅拌10min后加入乙酰氯(276.44mg，3.52155mmol)。反应混合物在氮气下rt反应2h。反应完成后，用水(10mL)洗涤反应液2次，用乙酸乙酯(10mL)提取3次，用饱和食盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥。最后，过滤Na2SO4，蒸发溶剂得到粗产物，用闪式柱层析(PE/EtOAc＝1/1)进行纯化，得到化合物69-3(550mg，收率61.89％)为黄色油状物。LCMS(ESI,m/z)：340[M+H]+.
步骤3：1-{5-(5-氯-2-{3-甲氧基-4-4-(4-甲氧基-4-基)呋喃-2-哌啶-1-基]乙烯酮(化合物69-4)的合成
在1-{4-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基]哌啶-1-基}乙烯酮(化合物69-3，250mg，0.7349mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(195.16mg，0.88188mmol)的2-戊醇(5mL)溶液中加入TFA(0.12mL)。反应混合物在110℃的氮气下搅拌12h。反应完成后，用水(10mL)洗涤反应液2次，用乙酸乙酯(10mL)提取3次，用饱和食盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥。最后，Na2SO4过滤，蒸发溶剂得到粗产物，用闪式柱层析(DCM/MeOH＝10/1)进行纯化，得到化合物69-4(150mg，产率34.98％)为黄色固体。LCMS(ESI,m/z)：525[M+H]+。
步骤4：化合物T69的合成
在1,4-二噁烷/H2O＝10:1(20mL)溶液中加入K2CO3(81.60mg，0.5904mmol)和XPhos-Pd-G3(124.94mg，0.1476mmol)和1-{5-(5-氯-2-{3-甲氧基-4-4-(4-甲氧基-4-基)呋喃-2-哌啶-1-基]乙烯酮(化合物69-4，155mg，0.2952mmol)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1,3-噻唑(93.47mg，0.4428mmol)。反应混合物在氮气下90℃反应2h。反应完成后，将反应混合物过滤。过滤用水(5mL)冲洗2次，乙酸乙酯(5mL)提取3次，用饱和食盐水(5mL)冲洗，Na2SO4干燥。最后，过滤Na2SO4，蒸发溶剂得到粗产物，用genal-pre-hplc(ACN和0.1％TFA中的水)纯化，得到化合物T69(18mg，黄色固体，收率：10.09％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.84(d,J＝36.0Hz,2H),9.27(s,1H),8.69(s,1H),8.51(s,1H),8.00(s,1H),7.60(s,1H),7.41(d,J＝8.5Hz,1H),7.22–7.03(m,2H),7.03–6.84(m,2H),3.81(s,3H),3.54–3.41(m,4H),3.22(s,2H),2.90(d,J＝18.5Hz,5H)。LCMS(ESI,m/z)：574[M+H]+。
实施例70：(S)-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T70)的合成
步骤1：(S)-5-(2-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)嘧啶-5-基)噁唑)(化合物70-2)的合成
将化合物70-1((S)-5-溴-2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑)(400mg，1.593mmol)溶于15mLN,N-二甲基甲酰胺溶液，加入5-(2-氯-4-(三甲基锡基)嘧啶-5-基)噁唑(660mg，1.911mmol)，四(三苯基膦)钯(184mg，0.159mmol)和碘化亚铜(I)(30mg，0.159mmol)。氮气下90℃搅拌2小时。LCMS和TLC检测到反应完全。饱和食盐水(40mL)洗涤5次，乙酸乙酯(40mL)萃取，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后使用快速柱色谱法(100％EA)得到目标产物化合物70-2((S)-5-(2-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)嘧啶-5-基)噁唑))(175mg)，黄色固体，收率26.54％。LCMS(ESI,m/z)：352.0[M+H]+。
步骤2：(S)-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T70)的合成
将化合物70-2((S)-5-(2-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)嘧啶-5-基)噁唑)(70mg，0.199mmol)溶于4.5mL1 M三氟乙酸的2-戊醇溶液，加入4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(57mg，0.299mmol)。110℃下搅拌16小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后使用制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到较纯产物，后使用制备型HPLC(Gemini 5u C18 150x21.2mm,ACN/H2O(0.1％ TFA),20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到化合物T70(17.18mg，1.0TFA盐，黄色固体，收率：16.43％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.72(s,1H),9.58(s,1H),8.58(s,1H),8.30(s,1H),7.67(d,J＝9.0Hz,2H),7.41(s,1H),7.01(d,J＝9.1Hz,2H),6.84(s,1H),5.47(d,J＝52.8Hz,1H),3.77(dd,J＝13.4Hz,4H),3.66(dd,J＝15.0Hz,4H),3.18(dd,J＝11.6Hz,2H),2.92(d,J＝11.9Hz,2H),2.87(d,J＝4.3Hz,3H),2.34–2.20(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：507.2[M+H]+。
实施例71：(S)-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T71)的合成
步骤1：(S)-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺)(化合物T71)的合成
将化合物71-1((S)-5-(2-氯-4-(2-(3-氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)嘧啶-5-基)噁唑)(80mg，0.227mmol)溶于6mL1 M三氟乙酸的2-戊醇溶液，加入化合物2(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺)(76mg，0.341mmol)。110℃下搅拌16小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后使用制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到较纯产物，后使用制备型HPLC(Gemini 5u C18 150x 21.2mm,ACN/H2O(0.1％ TFA),20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到目标产物化合物T71(10.55mg，1.0TFA盐，黄色固体，收率8.44％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.80(s,1H),9.58(s,1H),8.59(s,1H),8.34(s,1H),7.60(s,1H),7.43(s,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),6.93(d,J＝8.6Hz,1H),6.81(s,1H),5.48(d,J＝53.6Hz,1H),3.75(d,J＝2.7Hz,3H),3.64(d,J＝17.4Hz,4H),3.48(s,4H),3.21(dd,J＝20.9,9.7Hz,2H),2.92–2.85(m,5H),2.34–2.22(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：537.2[M+H]+。
实施例72：(S)-1-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(T72)的合成
步骤1(S)-1-(5-(2-((3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇(化合物T72)的合成
将化合物86-1((S)-1-(5-(2-氯-5-(噁唑-5-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-3-醇)(45mg，0.214mmol)溶于5mL1 M三氟乙酸的2-戊醇溶液，加入化合物2(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺)(55mg，0.257mmol)。110℃搅拌16小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后通过制备薄层层析法(11％ MeOH/DCM)得到较纯产物，后使用制备型HPLC(Gemini 5u C18 150x 21.2mm,0.1％ TFA H2O/ACN,20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到化合物T72(18.82mg，1.0TFA盐，黄色固体，收率：15.86％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.77(s,1H),9.54(s,1H),8.58(s,1H),8.31(s,1H),7.61(s,1H),7.42(s,1H),7.23(d,J＝9.0Hz,1H),6.93(d,J＝8.6Hz,1H),6.80(s,1H),5.17(s,1H),4.42(s,1H),3.88(s,3H),3.54(dd,J＝11.3,4.5Hz,2H),3.48(s,4H),3.24(dt,J＝20.5,9.8Hz,4H),2.90–2.84(m,5H),2.13–1.93(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：535.5[M+H]+。
实施例73：4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T73)的合成
步骤1：5-(2-氯-4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)嘧啶-5-基(噁唑)(化合物73-2)的合成
向化合物73-1(5-溴-2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑)(300mg，1.1148mmol)的DMF(10mL)溶液添加5-(2-氯-4-(三甲基锡酰基)嘧啶-5-基)噁唑(767.84mg，2.2296mmol)，Pd(pph3)4(128.82mg，0.1114mmol)和碘化酮(42.46mg，0.2229mmol)。将反应混合物在90℃氮气下搅拌3小时。反应完成后，用水淬火混合物，用EA萃取。用水和用饱和食盐水冲洗结合的有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液。通过FCC(溶剂梯度：EA in PE 60％)纯化粗产品，得到黄色固体化合物73-2(5-(2-氯-4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)嘧啶-5-基(噁唑))(100mg，24.26％产率)。1H NMR：(400MHz,DMSO)δ8.67(d,J＝12.0Hz,2H),7.62(s,1H),7.08(s,1H),3.96(t,J＝12.8Hz,2H),3.71(t,J＝7.2Hz,2H),2.62(tt,J＝14.4,7.2Hz,2H)。
步骤2：4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(化合物T73)的合成
将化合物73-2(5-(2-氯-4-(2-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)噻唑-5-基)嘧啶-5-基(噁唑))(50mg，0.1352mmol)和3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(59.84mg，0.2704mmol)的1N TFA2-戊醇(3mL)溶液在110℃搅拌16h。完成后，浓缩反应混合物。通过制备TLC(DCM:MeOH＝10:1)和半制备HPLC(ACN(0.1％TFA)在5％到37％的水中)纯化粗产品，得到化合物T73(3.74mg，黄色固体，收率：4.83％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.83(s,1H),9.67(s,1H),8.58(s,1H),8.36(s,1H),7.57(s,1H),7.44(s,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),6.82(s,1H),3.87(s,5H),3.67(t,J＝7.2Hz,2H),3.45(s,4H),3.21(s,2H),2.86(s,5H),2.68–2.56(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：555.2[M+H]+。
实施例74：4-(5-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)呋喃-2-基)哌啶-1-甲醛(T74)的合成
步骤1：2,5-二氯-4-[5-(哌啶-4-基)呋喃-2-基]嘧啶(化合物74-2)的合成
将装有叔丁基{4-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基]哌啶-1-基}甲酸酯(化合物74-1，1g，0.0025mol)溶于10mL盐酸-二氧六环，在25℃下反应45分钟。过滤并收集固体，用乙醚5mL洗涤两次，得到呈棕色固体的化合物74-2(684mg，收率：76.0％)。LCMS(ESI,m/z)：297.85[M+H]+。
步骤2：4-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基]哌啶-1-甲醛(化合物74-3)的合成
向25℃搅拌的2,5-二氯-4-[5-(哌啶-4-基)呋喃-2-基]嘧啶(化合物74-2，500mg，1.677mmol)和TEA(509.06mg，5.0307mmol)存于DCM中的溶液中逐滴添加甲酸乙酰酯(295.34mg，3.3538mmol)。将反应混合物在25℃搅拌1小时。用水4mL淬灭反应并用30mL DCM稀释，用水10mL洗涤并用Na2SO4干燥。最后，通过快速柱层析(DCM/MeOH＝3％MeOH)纯化产物，得到化合物74-3(399mg，收率62.0％)为黄色油状化合物。LCMS(ESI,m/z)：326.00[M+H]+。
步骤3：4-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基]哌啶-1-甲醛(化合物74-4)的合成
将4-[5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)呋喃-2-基]哌啶-1-甲醛(化合物74-3，200mg，0.6132mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(234.58mg，1.2264mmol)溶于1-N TFA/2-戊醇加热至110℃的油浴中15h。用NH3-MeOH溶液淬灭反应并浓缩。最后，通过制备TLC(DCM/MeOH＝15:1)纯化产物，得到黄色油状化合物74-4(100mg，纯度50％，收率17.0％)。LCMS(ESI,m/z)：481.05[M+H]+。
步骤4：化合物T74的合成
将4-[5-(5-氯-2-{[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)呋喃-2-基]哌啶-1-甲醛(化合物74-4，40mg，0.0832mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼酸-2-基)-1,3-噻唑(35.13mg，0.1664mmol)，X-phos Pd G3(35.21mg，0.0416mmol)和K2CO3(23mg，0.166mmol)溶于二氧六环/水中在90℃氮气下搅拌3小时。反应后在真空下除去溶剂。最后，通过制备TLC和制备HPLC对产物进行纯化，得到黄色固体化合物T74(3mg，0.33FA盐，纯度98％，收率6.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ＝9.66(s,1H),9.18(s,1H),8.37(s,1H),8.00(s,1H),7.89(s,1H),7.68(d,J＝8.7,2H),6.91(d,J＝9.1,2H),6.78(d,J＝3.4,1H),6.33(d,J＝3.4,1H),4.08(d,J＝13.0,1H),3.65(d,J＝13.4,1H),3.14–3.06(m,6H),2.87(t,J＝11.2,1H),2.74(td,J＝12.9,3.1,1H),2.46(t,J＝4.85,4H),2.22(s,3H),1.78(t,J＝14.7,2H),1.41–1.14(m,2H)。LCMS(ESI,m/z)：530.20[M+H]+。
实施例75：4-(5-(1-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺)(T75)的合成
步骤1：4-(5-(1-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基)-N-(3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-(噁唑-5-基)嘧啶-2-胺(T75)的合成
将化合物75-1(5-(4-(5-(1-(1H-咪唑-4-基)呋喃-2-基)-2-氯嘧啶-5-基)噁唑)(75mg,0.239mmol)溶于1mL三氟乙酸的2-戊醇溶液(51mol/L)，加入3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(65mg,0.287mmol)。110℃搅拌16小时。LCMS和TLC检测到反应完全。真空浓缩后通过制备薄层层析法(10％ MeOH/DCM)得到较纯产物，后使用制备型HPLC(Gemini 5uC18 150x 21.2mm,0.1％ TFA H2O/ACN,20mL/min)进一步纯化出产物，真空冷冻干燥后得到化合物T75(9.48mg，1.0TFA盐，黄色固体，收率：7.86％)。1H NMR(400MHz,DMSO)：δ9.91(s,1H),9.57(s,1H),8.56(s,1H),8.54(s,1H),8.21(s,1H),7.57(s,1H),7.44(s,1H),7.40(dd,J＝8.6,2.1Hz,1H),7.20(d,J＝3.5Hz,1H),7.04(s,1H),6.96(d,J＝8.6Hz,1H),6.86(d,J＝3.4Hz,1H),3.82(s,3H),3.48(s,4H),3.22(d,J＝10.5Hz,2H),2.89(t,J＝7.8Hz,5H)。LCMS(ESI,m/z)：498.9[M+H]+。
实施例76：INT A的合成
步骤1
向干燥的圆底烧瓶中加入化合物1a(35g，0.189mol)、一水合乙醛酸(50w/w)(18.2g，196mmol)、1,2,3,4-四氢喹啉(7.6g，1.6mmol)，乙腈(400mL)，在室温下，将所得混合物在空气中搅拌72小时。然后将所得混合物真空浓缩，粗品经快速色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到化合物1(13g，黄色固体，收率：40.90％)。1H NMR：(400MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),8.77(s,1H),4.04(s,3H),4.00(s,3H)。
步骤2
向干燥的圆底烧瓶中加入化合物1(12g，71.4mmol)、甲苯磺酰基甲基异氰化物(16.8g，84mmol)、碳酸钾(25g，180mmol)、甲醇(150mL)，然后将所得混合物在80℃中搅拌30分钟。然后将所得混合物用水淬灭并用乙酸乙酯(15mL)萃取3次。有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，粗品经快速色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到化合物2(12.5g，为黄色固体，收率84.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.49(s,1H),7.48(s,1H),4.07(s,3H),3.96(s,3H)。
步骤3
在500mL的圆底烧瓶中加入化合物2(12.5g，60.4mol)、4M氯化氢/二氧六环(130mL)，然后将所得混合物在80℃搅拌4小时。将得到的混合物冷却至室温并真空浓缩，得到粗品化合物3(11.3g，为黄色固体，收率：94.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.51(s,1H),11.46(d,J＝5.6Hz,1H),8.35(s,1H),7.79(d,J＝6.0Hz,1H),7.39(s,1H)。
步骤4
在500mL圆底烧瓶中加入化合物3(11.2g，62.6mmol)，三乙胺(12.6g，125.2mmol)、三氯氧磷(120mL)，然后将所得混合物在110℃搅拌16小时。将所得混合物冷却至室温，真空浓缩，然后用乙酸乙酯稀释。将所得混合物滴加到饱和碳酸氢钠水溶液中，将pH调节至7-8，用乙酸乙酯(120mL)萃取3次，有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，粗品经快速色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)，得到化合物4(2,4-二氯-5-(1,3-噁唑-5-基)嘧啶，7.0g，为黄色固体，产率：51.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.16(s,1H),8.75(s,1H),8.02(s,1H).
步骤5
在圆底烧瓶中加入化合物4(1g，4.6mmol)、1,1,1,2,2,2-六甲基二锡烷(1.5g，4.6mmol),醋酸钯(5mg，4.6mmol),4-双(二苯基膦基)丁烷(200mg，0.46mmol)、二氧六环(10mL)，然后将所得混合物在110℃下搅拌16小时。将所得混合物冷却至室温，用水淬灭，并用乙酸乙酯(10mL)萃取3次。有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，粗品经快速色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)，得到化合物INT A(550mg，黄色固体，收率：41.0％)。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种式A所示的Wee1抑制剂、其互变异构体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，
R1选自H、氰基、环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基或稠合环；所述环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基或稠合环为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、羧基、氨基、氰基、硝基、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氨羰基、烷氧羰基、甲酰基、羟烷基、烷氧烷基、烯基、炔基、磺酰基、环烷基或环杂烷基；
R2选自环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基或稠合环；所述环烷基、环杂烷基、芳基、杂芳基或稠合环为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、羧基、氨基、氰基、硝基、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氨羰基、烷氧羰基、甲酰基、羟烷基、烷氧烷基、烯基、炔基、磺酰基、氧代、环烷基、取代环烷基、环杂烷基、取代环杂烷基、芳基、取代芳基、杂芳基或取代杂芳基；所述取代环烷基、取代环杂烷基、取代芳基或取代杂芳基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氨基、氰基、卤素、烷氨基、烷氨羰基、烷氨烷基、烷氧羰基、烷氧烷基、羟烷基、烷基羰基或甲酰基；
R3选自环烷基或环杂烷基；所述环烷基或环杂烷基为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、羧基、氨基、氰基、硝基、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氨羰基、烷氧羰基、甲酰基、羟烷基、烷氧烷基、烯基、炔基、磺酰基、氧代、环烷基、环杂烷基、芳基或杂芳基；
(R4)n表示苯环上的氢被n个R4取代，n为0、1、2、3或4，每个R4相同或不同，各自独立地选自羟基、羧基、氨基、氰基、硝基、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氨羰基、烷氧羰基、甲酰基、羟烷基、烷氧烷基、烯基、炔基、磺酰基、环烷基、环杂烷基、芳基或杂芳基。
2.根据权利要求1所述的Wee1抑制剂，其特征在于，
R1选自H、氰基、C4-C6环杂烷基、C5-C10杂芳基或C5-C10稠合环；优选地，所述C4-C6环杂烷基、C5-C10杂芳基或C5-C10稠合环为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、烷氨烷基或氰基；优选地，所述C4-C6环杂烷基、C5-C10杂芳基或C5-C10稠合环为未取代或任选地被一个或多个C1-C3烷基取代；优选地，所述C4-C6环杂烷基、C5-C10杂芳基或C5-C10稠合环为未取代；优选地，所述C4-C6环杂烷基选自氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪或吗啉；优选地，所述C4-C6环杂烷基选自氧杂环丁烷；优选地，所述C5-C10杂芳基选自噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、吡唑、吡啶或三氮唑；优选地，所述C5-C10杂芳基选自噁唑、噻唑、咪唑或三氮唑；优选地，所述C5-C10稠合环选自苯并呋喃、苯并噻唑、呋喃并环烷基或噻吩并环烷基；
R2选自C4-C6环杂烷基、苯、C5-C10杂芳基或C5-C14稠合环；优选地，所述C4-C6环杂烷基选自哌嗪、吗啉、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶；优选地，所述C4-C6环杂烷基选自哌嗪或吗啉；优选地，所述C5-C10杂芳基选自噻唑、吡啶、异噻唑、三氮唑、呋喃、吡咯、咪唑或吡唑；优选地，所述C5-C14稠合环选自苯并呋喃、噻唑并环己烷或呋喃并环己烷；优选地，所述C4-C6环杂烷基、苯、C5-C10杂芳基或C5-C14稠合环为未取代或任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：烷基、羟基、羟烷基、磺酰基、氨基、烷氨基、烷氨烷基、氨酰基、烷氧羰基、氧代、环烷基、取代环烷基、环杂烷基、取代环杂烷基、杂芳基或取代杂芳基；优选地，所述取代环烷基、取代环杂烷基或取代杂芳基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C3烷氨基、C1-C3烷氨羰基、C1-C3烷氨C1-C3烷基、C1-C3烷氧羰基、C1-C3烷氧C1-C3烷基、羟C1-C3烷基、C1-C3烷基羰基或甲酰基；优选地，所述环杂烷基或取代环杂烷基中的环杂烷基选自氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶；所述杂芳基或取代杂芳基中的杂芳基选自咪唑或吡唑；
R3选自哌啶基或哌嗪基；优选地，所述哌啶基或哌嗪基被H、C1-C3烷基或氨基取代；
R4选自H、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基或烷氨基；优选地，n＝1；优选地，R4为H或C1-C3烷氧基；优选地，R4为H或甲氧基。
3.根据权利要求1或2所述的Wee1抑制剂，其特征在于，Wee1抑制剂的结构如式B所示：
其中，
X为CRaRb或NRa，其中，Ra为H或C1-C3烷基；优选地，Ra为H或甲基；优选地，Rb为H、氨基或C1-C3烷氨基；优选地，Rb为氨基；
R4选自H或甲氧基；
X1至X7各自独立地选自O、S、C、N、CRc、CRcCRc或NRc；
Rc选自H、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代C1-C4烷基、卤素、卤代C1-C4烷氧基、羟基或羟C1-C4烷基；优选地，Rc为H或甲基；优选地，Rc为H；
R5为H、环杂烷基、取代环杂烷基、C1-C4烷基、羟基、羟C1-C4烷基、C1-C4烷氧羰基、环烷基、取代环烷基、杂芳基、取代杂芳基、氨酰基、C1-C4烷氨C1-C4烷基；其中取代环烷基、取代环杂烷基或取代杂芳基任选地被选自一个或多个如下的取代基取代：卤素、羟基、C1-C4烷基羰基、氰基、氨基、甲酰基、C1-C4烷基氨基羰基、羟C1-C4烷基或C1-C4烷氧羰基；优选地，所述环杂烷基选自氮杂环丁烷、哌嗪或吡咯烷；所述杂芳基选自吡唑或咪唑。
4.根据权利要求3所述的Wee1抑制剂，其特征在于，
X1为N；
X2为O、S或NRc；
X3为O、S、CRc、N、NRc；
X4为N、O、CRc、S、CRcCRc；
X5为CRc、O、S、N或NRc；
X6为C或N；
X7为CRc；
优选地，
X1为N；
X2为O或S；
X3为O、S；
X4为N或CRc；
X5为CRc；
X6为C；
X7为CRc；
优选地，Rc为H或C1-C3烷基；优选地，Rc为H；
优选地，R5为吡咯烷、C1-C4烷基、羟C1-C4烷基、C1-C4烷氧羰基、哌嗪、氮杂环丁烷、环烷基、咪唑、氨酰基或吡唑基；
优选地，吡咯烷、环烷基、咪唑、哌嗪、氮杂环丁烷或吡唑被选自一个或多个如下的取代基取代：羟基、氰基、卤素、氨基、羟C1-C4烷基、C1-C4烷氧羰基或甲酰基。
5.根据权利要求3所述的Wee1抑制剂，其特征在于，
X为NCH3；
X1为N；
X2为O或S；
X3为O或S；
X4为N；
X5为CRc；
X6为C；
X7为CRc；
R5为吡咯烷；
优选地，Rc为H；
优选地，所述吡咯烷被一个或多个选自如下的取代基取代：羟基或卤素。
6.根据权利要求1或2所述的Wee1抑制剂，其特征在于，Wee1抑制剂的结构如式C所示，
其中，
X为CRaRb或NRa，其中，Ra为H或C1-C3烷基；优选地，Ra为H或甲基；优选地，Rb为H、氨基或烷氨基；优选地，Rb为氨基；
R4选自H或甲氧基；
X1为N；
X2为O或S；
X8为O或S；
X9为CH或N；
R6为H、氧代、羟基或氨基。
7.根据权利要求1或2所述的Wee1抑制剂，其特征在于，Wee1抑制剂的结构如式D所示，
其中，
X为CRaRb或NRa，其中，Ra为H或C1-C3烷基；优选地，Ra为H或甲基；优选地，Rb为H、氨基或烷氨基；优选地，Rb为氨基；
R4选自H或甲氧基；
X8为O或S；
X9为CRd或N；Rd为H或C1-C3烷基；
R1为H、噁唑、氰基、噻唑、甲基噻唑、咪唑、三氮唑、氧杂环丁烷；
R7为H、羟C1-C4烷基、氨基、C1-C4烷基或C1-C4烷氨基。
8.根据权利要求1所述的Wee1抑制剂，其特征在于，Wee1抑制剂的结构选自如下化合物：
/>
/>
/>
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9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有治疗有效剂量的权利要求1-8中任一项所述的Wee1抑制剂。
10.权利要求1-8中任一项所述的Wee1抑制剂、或权利要求9所述的药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的应用；优选地，所述肿瘤包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、宫颈癌或结肠癌。
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