CN116509901A - 一种铅黄肠球菌shamu-qh-02在制备抗炎抗氧化产品中的应用 - Google Patents
一种铅黄肠球菌shamu-qh-02在制备抗炎抗氧化产品中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116509901A CN116509901A CN202310692335.3A CN202310692335A CN116509901A CN 116509901 A CN116509901 A CN 116509901A CN 202310692335 A CN202310692335 A CN 202310692335A CN 116509901 A CN116509901 A CN 116509901A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- shamu
- inflammatory
- enterococcus casseliflavus
- antioxidant
- product
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241001522957 Enterococcus casseliflavus Species 0.000 title claims abstract description 57
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 title claims abstract description 27
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 23
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 21
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 claims description 16
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 claims description 11
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 6
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 6
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 abstract description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 10
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- -1 ABTS radical Chemical class 0.000 description 4
- 241001167795 Escherichia coli OP50 Species 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 4
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 3
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 3
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 2
- 208000028804 PERCHING syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 2
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- HQFLTUZKIRYQSP-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C2N(CC)CSC2=C1 HQFLTUZKIRYQSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010061695 Biliary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 1
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 208000003167 cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000021045 dietary change Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000015096 spirit Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q1/00—Make-up preparations; Body powders; Preparations for removing make-up
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种铅黄肠球菌SHAMU‑QH‑02在制备抗炎抗氧化产品中的应用，属于微生物应用技术领域。该铅黄肠球菌SHAMU‑QH‑02的保藏编号为CCTCC No：M2023277。本发明提供的铅黄肠球菌SHAMU‑QH‑02及其发酵上清液、溶胞物具有良好的抗氧化效果，无细胞毒性。有益效果：本发明菌株在抗氧化、抗衰老、缓解炎症制剂和微生态调控品开发方面具有良好的应用前景，填补了铅黄肠球菌在抗氧化、抗炎功效筛选中的空白。
Description
技术领域
本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及一种铅黄肠球菌SHAMU-QH-02在制备抗炎抗氧化产品中的应用。
背景技术
在人体的体表以及与外界相通的腔道粘膜表面存在着大量的正常微生物群，这些正常菌群在相应部位寄居，形成相对稳定的群落，并与人体相互影响，成为具有共生关系的统一体，即微生态系统，主要分为：皮肤、口腔、呼吸道、肠道和生殖道五大微生态系统。
五大微生态系统由各自的栖息微生物、表层组织细胞及其分泌物、微环境等共同组成，维持各系统的健康，保护机体免受外来微生物的侵害，具有重要的生理作用。在日常生活中，频繁使用化妆品和药品、手术、外伤、紫外线暴露、饮食改变、营养水平变化、不良生活方式、过度清洁、精神压力以及环境污染等因素会引发微生态失衡，削弱或破坏各系统的微生物屏障，损害正常生理机能，甚至引发炎症、感染、促进组织细胞老化。调控微生态是治疗各系统非恶性疾病的新兴手段。
自身代谢或有害因素暴露会使机体不断产生“自由基”，而过量的自由基会导致各种疾病以及组织细胞衰老。研究表明，细菌脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)暴露，会使机体组织细胞合成的活性氧(Reactive oxygen species，ROS)自由基显著增多，导致炎症因子水平升高、细胞活力下降甚至细胞衰亡。此外，紫外线辐照会使皮肤细胞内的ROS增多，诱发基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPs)水平增高，引发皮肤胶原蛋白和弹性蛋白的降解，致使皮肤变得粗糙、松弛和起皱。
随着高通量测序、宏基因组学、代谢组学和生物信息学等分析技术的发展，我们对五大微生态系统微生物的组成、结构和功能有了更深入的认知。栖息微生物作为五大微生态系统的重要组份，在维护各系统健康中发挥着十分重要的作用。当前，如何利用益生菌来改善和治疗各系统非恶性疾病，在本领域内仍亟待解决。
目前，国内外尚无铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)抗氧化、抗炎的相关报道。
公布号为CN114107109A的中国专利申请文献，公开了一种铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)及其在微生物发酵生产己酸中的应用，属于微生物发酵技术领域，该菌株筛选于浓香型大曲酒优质老窖泥，命名为Enterococcus casseliflavusBF-1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2021年7月13日，保藏编号为CCTCCNO:M2021871。该专利中的菌株对生长性能、免疫和具有潜在的益生影响，优化了发酵培养基，提高了己酸的产量，在现有单一变量优化的基础上，己酸产量可达3.01g/L；该己酸菌可进一步用于己酸生产，增强接种剂应用浓香型白酒生产过程。但该专利的并没有公开该铅黄肠球菌具有抗炎、抗氧化活性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于如何提供了一株具有良好抗氧化和抗炎效果的铅黄肠球菌及其应用。
本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：
本发明的第一方面提出一种铅黄肠球菌SHAMU-QH-02在制备抗炎抗氧化产品中的应用，所述铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的保藏编号为CCTCC No：M 2023277。
有益效果：本发明提供的铅黄肠球菌，具有良好的抗氧化和抗炎活性，无细胞毒性。对ABTS自由基具有良好的清除活性，能够降低巨噬细胞ROS自由基含量，并且可以减少LPS刺激巨噬细胞产生的IL-1β水平，因此可以为抗氧化、抗衰老、抗炎益生菌制剂和微生态调控品的开发奠定基础。
说明：该铅黄肠球菌已于2023年3月9日在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，武汉大学，邮编430072)保藏，保藏名称为铅黄肠球菌Enterococcus casseliflavus SHAMU-QH-02，保藏编号为CCTCC No：M2023277。铅黄肠球菌。抗氧化为清除ABTS自由基和/或降低巨噬细胞ROS自由基的含量。抗炎活性为降低炎症因子IL-1β的表达水平。无细胞毒性为不影响巨噬细胞的细胞增殖率。
优选的，所述产品为食品、药品、保健品、化妆品中的一种或多种。
优选的，所述抗氧化为清除ABTS自由基和/或降低巨噬细胞ROS自由基的含量。
优选的，所述抗炎为降低炎症因子IL-1β的表达水平。
本发明的第二方面提出一种抗炎抗氧化产品，其特征在于，其原料包括上述铅黄肠球菌SHAMU-QH-02。
优选的，其原料包括上述铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的发酵上清液、溶胞物中的一种或多种。
优选的，所述发酵上清液是将铅黄肠球菌SHAMU-QH-02培养基中培养一段时间后，离心去除菌体后获得的发酵上清液。
优选的，所述溶胞物是将铅黄肠球菌SHAMU-QH-02培养基中培养一段时间后，超声破碎，离心去除菌体后获得的溶胞物。
优选的，所述发酵上清液的浓度为125-500μg/mL。
优选的，所述溶胞物的浓度为125-500μg/mL。
有益效果：
本发明的第五方面提出采用上述的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02、菌株SHAMU-QH-02的发酵上清液或菌株SHAMU-QH-02的溶胞物在制备具有抗炎和/或抗氧化作用的药物、食品、保健品或化妆品中的应用。
本发明的优点在于：
1、本发明提供的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02及其发酵上清液、溶胞物具有良好的抗氧化效果，无细胞毒性。对ABTS自由基具有良好的清除活性，能够降低巨噬细胞ROS自由基含量，并且可以减少LPS刺激巨噬细胞产生的IL-1β水平，因此可以为抗氧化、抗衰老、抗炎益生菌制剂和微生态调控品的开发奠定基础
2、本发明提供的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02具有良好的抗炎效果。
3、本发明提供的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02无细胞毒性，使用安全。
4、本发明菌株在抗氧化、抗衰老、缓解炎症制剂和微生态调控品开发方面具有良好的应用前景，填补了铅黄肠球菌在抗氧化、抗炎功效筛选中的空白。
附图说明
图1为本发明实施例1中铅黄肠球菌SHAMU-QH-02在血琼脂平板上的菌落形态图；
图2为本发明实施例1中铅黄肠球菌SHAMU-QH-02经革兰氏染色后，在显微镜下(1000×)的菌体形态图；
图3为本发明实施例1中铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的MALDI-TOF MS鉴定图谱；
图4为本发明实施例1中铅黄肠球菌SHAMU-QH-02基于16S rRNA基因构建的系统发育树；
图5为本发明实施例4中铅黄肠球菌SHAMU-QH-02不同剂量溶胞物和发酵上清液对ATBS自由基的清除效果图；
图6为本发明实施例5中铅黄肠球菌SHAMU-QH-02对RAW264.7巨噬细胞ROS的清除效果图；
图7为本发明实施例6中铅黄肠球菌SHAMU-QH-02对LPS引起的RAW264.7巨噬细胞表达IL-1β的影响图；
图8为本发明实施例7中铅黄肠球菌SHAMU-QH-02对RAW264.7巨噬细胞的细胞毒性评估(CCK8法)结果图；
图9为本发明实施例8中铅黄肠球菌SHAMU-QH-02对RAW264.7巨噬细胞的细胞毒性评估(MTT法)结果图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
(1)铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的分离与鉴定：
2022年10月5日，发明人在对安徽医科大学第二附属医院肝胆胰外科普通患者(非胆道感染)的胆汁标本进行研究时，通过系统性筛选，发现了一株能够抑制金黄色葡萄球菌生长的菌株；使用布鲁克公司的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS)和MALDI Biotyper 3.1软件初步鉴定该菌株为铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)，评分为2.439(详见图3)；利用细菌通用引物(27F/1492R)进行16S rRNA基因扩增，PCR产物送测后获得的基因序列(GenBank Accession：OQ918013)在NCBI中进行比对分析，并使用MEGA 11.0软件构建SHAMU-QH-02的系统发育树，明确该菌株的分类地位(详见图4)。
(2)铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的菌落形态和菌体结构：
血琼脂平板上，该菌株的菌落为浅黄色、不透明、表面光滑、湿润、直径0.5～3mm大小、圆形凸起，周围有α溶血环(如图1所示)。经革兰氏染色后，光学显微镜下观察，该菌株的菌体呈球形或卵球形，单个、成对或短链状排列，无荚膜，无芽胞，无鞭毛，革兰氏染色为阳性(如图2所示)。
该铅黄肠球菌SHAMU-QH-02已于2023年3月9日保藏在中国典型培养物保藏中心(武汉大学)，保藏名称为铅黄肠球菌Enterococcus casseliflavus SHAMU-QH-02，保藏编号为CCTCC No：M 2023277。
实施例2：
铅黄肠球菌SHAMU-QH-02发酵上清液的制备的制备方法，包括以下步骤：将SHAMU-QH-02划线接种于绵羊血琼脂平板，37℃恒温培养16～20小时，活化2次。将活化好的SHAMU-QH-02接种到LB液体培养基中，37℃摇床振荡培养16～20小时，调整菌体OD600在1.0左右，作为种子菌液。
以1％的接种量将种子菌液接种到250mL三角瓶中，置于37℃恒温震荡培养箱中，以200r/min的速度培养12小时，得到发酵液。
将上述发酵液以10000r/min离心5min，留取上清液。将上述离心上清液，用0.22μm滤器过滤除菌，获得的无菌上清液即为铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的发酵上清。
实施例3：
铅黄肠球菌SHAMU-QH-02溶胞物的制备方法，包括以下步骤：
将SHAMU-QH-02划线于绵羊血琼脂平板，37℃恒温培养16～20小时，活化2次。将活化好的SHAMU-QH-02接种到LB液体培养基中，37℃摇床振荡培养16～20小时，调整菌体OD600在1.0左右，作为种子菌液。
以1％的接种量将种子菌液接种到250mL三角瓶中，置于37℃恒温震荡培养箱中，以200r/min的速度培养12小时，得到发酵液。
将上述发酵液以10000r/min离心5min，弃上清，留取沉淀物。将上述离心沉淀物，用适量ddH2O悬浮；再以10000r/min离心5min，弃上清，留取沉淀物；重复3次。最后一次离心后，尽量除尽上清，用适量ddH2O悬浮后超声破碎。
将上述超声破碎物以10000r/min离心5min，留取上清液。将上述离心上清液，用0.22μm滤器过滤，获得的无菌体碎片上清液即为铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的溶胞物。
实施例4：
ABTS自由基检测：
将2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)[2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS]和0.1mol/L的PBS(pH 7.4)按体积比1:1混合，加入适量的H2O2，置于室温下30分钟，直至其OD734稳定在0.7～0.8，制备成ABTS溶液。
将125μg/mL和500μg/mL两种浓度的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02溶胞物和发酵上清液，加入ABTS溶液中，混匀，放置于室温下10分钟。常规设置空白对照。每组设置3个平行样。使用酶标仪在734nm处测量吸光度值，与空白对照对比，根据吸光度的变化计算出样品的ABTS清除率。
ABTS清除率(％)＝((空白对照OD734－实验组OD734)/空白对照OD734)×100％
结果如图5所示，500μg/mL溶胞物的ABTS自由基清除率为19.0％和500μg/mL发酵上清液的ABTS自由基清除率为19.6％。
实施例5：
ROS检测：
用培养基将处于最佳生长状态的RAW264.7巨噬细胞悬液密度调整到105个/mL，以每孔1mL细胞悬液加入24孔Transwell板。
将OD600＝0.6的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02和大肠埃希菌OP50菌体分别以25μL、50μL、100μL接种上述24孔Transwell板，与RAW264.7巨噬细胞，37℃、5％ CO2，共孵育24小时。常规设置培养基空白对照和RAW264.7巨噬细胞对照。每组设置5个平行孔。离心后弃去培养基，加入1:1000稀释的DCFH-DA探针，37℃避光孵育30分钟。用PBS洗涤三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。使用酶标仪测定荧光值，λ激发光＝488nm，λ发射光＝525nm。
结果如图6所示，100μL OD600＝0.6的菌体对RAW264.7巨噬细胞的ROS自由基清除效果显著优于相同剂量的大肠埃希菌OP50(P＝0.039)。
实施例6：
炎症因子IL-1β表达水平检测：
用培养基将处于最佳生长状态的RAW264.7巨噬细胞悬液密度调整到105个/mL，以每孔1mL细胞悬液加入24孔Transwell板。除细胞对照孔之外，每孔加入100ngLPS。
将OD600＝0.6的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02和大肠埃希菌OP50菌体分别以25μL、50μL接种上述24孔Transwell板，与RAW264.7巨噬细胞，37℃、5％ CO2，共孵育24小时。常规设置RAW264.7巨噬细胞对照和LPS对照。每组设置5个平行孔。处理完成后，离心留取上清。用ELISA试剂盒进行炎症因子IL-1β检测。使用酶标仪在450nm处测量吸光度值，计算各孔上清液中的IL-1β浓度。
结果如图7所示，25μL OD600＝0.6的菌体使100ng/mL LPS引起的RAW264.7巨噬细胞IL-1β表达量从13.71pg/mL降至8.43pg/mL(下降38.5％)，优于相同剂量的大肠埃希菌OP50(P＝0.049)。50μL OD600＝0.6的菌体使100ng/mL LPS引起的RAW264.7巨噬细胞IL-1β表达量从21.87pg/mL降至14.90pg/mL(下降31.9％)，显著优于相同剂量的大肠埃希菌OP50(P＝0.037)。
实施例7：
CCK8检测细胞活力：
用培养基将处于最佳生长状态的RAW264.7巨噬细胞悬液密度调整到105个/mL，以每孔1mL细胞悬液加入24孔Transwell板。
将OD600＝0.6的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02和大肠埃希菌OP50菌体分别以25μL、50μL、100μL接种上述24孔Transwell板，与RAW264.7巨噬细胞，37℃、5％ CO2，共孵育24小时。常规设置培养基空白对照和RAW264.7巨噬细胞对照。每组设置5个平行孔。处理完成后，离心弃去培养基，每孔各加入100μL新鲜培养基，其中含10μLCCK8溶液，37℃孵育1小时。使用酶标仪在450nm处测量吸光度值，计算相对细胞增殖率。
相对细胞增殖率(％)＝((实验组OD450－培养基空白对照OD450)/(RAW264.7巨噬细胞对照OD450-培养基空白对照OD450))×100％
结果如图8所示，与空白对照相比，25μL、50μL以及100μL OD600＝0.6的菌体对RAW264.7巨噬细胞细胞增殖率均无统计学影响(P>0.05)。
实施例8：
MTT检测细胞活力：
用培养基将处于最佳生长状态的RAW264.7巨噬细胞悬液密度调整到105个/mL，以每孔1mL细胞悬液加入24孔Transwell板。
将OD600＝0.6的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02和大肠埃希菌OP50菌体分别以25μL、50μL、100μL接种上述24孔Transwell板，与RAW264.7巨噬细胞，37℃、5％ CO2，共孵育24小时。常规设置培养基空白对照和RAW264.7巨噬细胞对照。每组设置5个平行孔。处理完成后，离心弃去培养基，每孔各加100μL MTT溶液(5mg/mL)。37℃培养箱中避光孵育4小时后，每孔加入100μL DMSO萃取，培养箱中放置30分钟。使用经过预热的酶标仪在490nm处测量吸光度值，计算相对细胞增殖率。
相对细胞增殖率(％)＝((实验组OD490－培养基空白对照OD490)/(RAW264.7巨噬细胞对照OD490-培养基空白对照OD490))×100％
结果如图8所示，与空白对照相比，25μL、50μL以及100μL OD600＝0.6的菌体对RAW264.7巨噬细胞细胞增殖率均无统计学影响(P>0.05)。
实施例9：
本实施例与实施例4的区别在于：将铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的溶胞物、发酵上清液的浓度改为“450μg/mL”，其它步骤同实施例4。
本实施例450μg/mL的溶胞物、发酵上清液的ABTS自由基清除率比实施例4中500μg/mL的略低。
综上所述，本发明的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02具有良好的清除ABTS自由基、降低巨噬细胞ROS自由基含量的能力，本发明菌株在对抗自由基对组织细胞的损伤，以及抗氧化、抗衰老制剂开发方面具有良好的应用前景。
本发明的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02具有良好的抑制LPS引起的巨噬细胞IL-1β表达的能力，本发明菌株在缓解炎症制剂和微生态调控品开发方面具有良好的应用前景。
本发明的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02无细胞毒性，使用安全。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种铅黄肠球菌SHAMU-QH-02在制备抗炎抗氧化产品中的应用，其特征在于，所述铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的保藏编号为CCTCC No：M 2023277。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为食品、药品、保健品、化妆品中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗氧化为清除ABTS自由基和/或降低巨噬细胞ROS自由基的含量。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗炎为降低炎症因子IL-1β的表达水平。
5.一种抗炎抗氧化产品，其特征在于，其原料包括权利要求1所述的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02。
6.根据权利要求5所述的抗炎抗氧化产品，其特征在于，其原料包括权利要求1所述的铅黄肠球菌SHAMU-QH-02的发酵上清液、溶胞物中的一种或多种。
7.根据权利要求5所述的抗炎抗氧化产品，其特征在于，所述发酵上清液是将铅黄肠球菌SHAMU-QH-02培养基中培养一段时间后，离心去除菌体后获得的发酵上清液。
8.根据权利要求5所述的抗炎抗氧化产品，其特征在于，所述溶胞物是将铅黄肠球菌SHAMU-QH-02培养基中培养一段时间后，超声破碎，离心去除菌体后获得的溶胞物。
9.根据权利要求7所述的抗炎抗氧化产品，其特征在于，所述发酵上清液的浓度为125-500μg/mL。
10.权利要求8所述的抗炎抗氧化产品，其特征在于，所述溶胞物的浓度为125-500μg/mL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310692335.3A CN116509901A (zh) | 2023-06-09 | 2023-06-09 | 一种铅黄肠球菌shamu-qh-02在制备抗炎抗氧化产品中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310692335.3A CN116509901A (zh) | 2023-06-09 | 2023-06-09 | 一种铅黄肠球菌shamu-qh-02在制备抗炎抗氧化产品中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116509901A true CN116509901A (zh) | 2023-08-01 |
Family
ID=87403134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310692335.3A Pending CN116509901A (zh) | 2023-06-09 | 2023-06-09 | 一种铅黄肠球菌shamu-qh-02在制备抗炎抗氧化产品中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116509901A (zh) |
-
2023
- 2023-06-09 CN CN202310692335.3A patent/CN116509901A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pirnazar et al. | Bacteriostatic effects of hyaluronic acid | |
| CN114081901B (zh) | 一种益生菌组合物、制备方法及其应用 | |
| CN115637235B (zh) | 具有良好抗氧化抗炎效果的表皮葡萄球菌及其应用 | |
| CN114504599A (zh) | 副干酪乳杆菌et-22在抗衰老、提高先天免疫方面的新应用 | |
| US8349316B2 (en) | Lactobacillus fermentum SG-A95 for improving oral bacterial groups and health care compositions thereof | |
| CN116751705B (zh) | 一种具有改善阴道炎症的罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
| CN117264839A (zh) | 唾液联合乳杆菌mb1在制备美白和缓解痛风食品药品中的应用 | |
| CN114504106A (zh) | 乳双歧杆菌bl-99在抗衰老、提高先天免疫方面的新应用 | |
| CN114836349B (zh) | 拮抗幽门螺旋杆菌的嗜酸乳杆菌la16及其应用 | |
| CN116509901A (zh) | 一种铅黄肠球菌shamu-qh-02在制备抗炎抗氧化产品中的应用 | |
| CN113956993B (zh) | 一株具有缓解人角质形成细胞氧化损伤作用的副干酪乳杆菌 | |
| CN115491334A (zh) | 一株鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
| CN116650536A (zh) | 一株格氏乳球菌shamu-lg6在制备抗炎抗氧化产品中的应用 | |
| CN116869909A (zh) | 一株巨大芽孢杆菌菌株si-jd-01在制备抗炎抗氧化产品中的应用及制备的护肤品 | |
| CN116875487A (zh) | 一株表皮葡萄球菌菌株si-bp-02在制备抗炎和抗氧化产品中的应用 | |
| CN115386523B (zh) | 一株乳酸乳球菌及其在抗幽门螺杆菌感染的应用 | |
| CN116790402B (zh) | 一株具有抗炎特性的单形拟杆菌菌株、培养方法及应用 | |
| CN117384788B (zh) | 一株唾液联合乳杆菌sm4及其在制备美白和降胆固醇食品药品中的应用 | |
| CN114717131B (zh) | 一株对皮肤损伤具有保护作用的鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
| CN118028182B (zh) | 一种改善口腔健康的约翰逊氏乳杆菌及其用途 | |
| CN115040551B (zh) | 一株调控宿主褪黑素水平的罗伊氏乳酸杆菌ln0214的应用 | |
| CN117838736B (zh) | 凝结芽孢杆菌ja845在制备预防和/或治疗抗动脉粥样硬化药物中的应用 | |
| CN117384789A (zh) | 一株戊糖片球菌ks5及其在制备抗氧化和抗衰老食品药品中的应用 | |
| CN116716202A (zh) | 一株副干酪乳酪杆菌及其在防治咽炎中的应用 | |
| CN117981871A (zh) | 一种调节肠道中动物双歧杆菌/条件致病菌比值的组合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |