CN116492450B - 重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶及其制备方法 - Google Patents
重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116492450B CN116492450B CN202310745083.6A CN202310745083A CN116492450B CN 116492450 B CN116492450 B CN 116492450B CN 202310745083 A CN202310745083 A CN 202310745083A CN 116492450 B CN116492450 B CN 116492450B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- growth factor
- fibroblast growth
- recombinant human
- basic fibroblast
- human basic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108700005467 recombinant KCB-1 Proteins 0.000 title claims abstract description 76
- 229940041672 oral gel Drugs 0.000 title claims abstract description 70
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 229920002961 polybutylene succinate Polymers 0.000 claims abstract description 30
- 239000004631 polybutylene succinate Substances 0.000 claims abstract description 30
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims abstract description 29
- -1 polybutylene succinate Polymers 0.000 claims abstract description 28
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 22
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 8
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 8
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical group CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 claims description 8
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 claims description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 claims description 3
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 claims 1
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 abstract description 21
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 abstract description 13
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 abstract description 12
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000009194 climbing Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002138 osteoinductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 14
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 13
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 230000018678 bone mineralization Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 6
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 210000004763 bicuspid Anatomy 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010067268 Post procedural infection Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 208000008312 Tooth Loss Diseases 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003298 dental enamel Anatomy 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 108010074702 enamel matrix proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011301 standard therapy Methods 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004509 vascular smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
本发明公开了重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶及其制备方法，涉及制药技术领域。本发明的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶包括以下重量份的组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子0.01~0.5份，凝胶基质1~500份，聚丁二酸丁二醇酯1~200份，β‑磷酸三钙1~1000份，蛋白保护剂0.01~0.5份；所述聚丁二酸丁二醇酯与β‑磷酸三钙的重量比为：聚丁二酸丁二醇酯：β‑磷酸三钙=1：1~5。本发明的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶具有骨诱导作用，利用缓释载体持续释放bFGF，缓释周期长且药效持久，能够持续刺激牙周组织再生；本发明的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶具有一定支撑作用，可以为成骨细胞提供附着空间，促进成骨细胞攀附生长。
Description
技术领域
本发明涉及制药技术领域，具体涉及重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶及其制备方法。
背景技术
牙周病是口腔两大主要疾病之一，牙周病不仅危害口腔健康，导致牙齿丧失，还与全身健康有着密切的关系，目前牙周病已被列为糖尿病的第六并发症。牙周治疗的最终目标是实现牙周组织再生。然而，没有一种常规的牙周或外科治疗可以使失去的牙周组织或其功能再生。为了解决这一局限性，各种新的再生疗法已经问世，如引导组织再生（GTR）治疗和应用釉质基质衍生物（EMD），并在牙周组织再生方面取得了一些成功。此外，各种重组细胞因子也具有刺激牙周组织再生的能力，如碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、富血小板纤维蛋白（PRF）、富血小板血浆（PRP）、血小板衍生生长因子（PDGF）。其中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对骨髓间充质干细胞具有最强的促增殖作用，不仅能提高骨髓间充质干细胞的增殖速度以及寿命，并且能在增殖过程中保留骨髓间充质干细胞的多向分化潜能。bFGF属于纤维母细胞生长因子家族（FGF）的成员之一，能诱导多种细胞的增殖，包括成纤维细胞、血管内皮细胞、神经外胚层系统细胞、成骨细胞、软骨细胞、血管平滑肌细胞和上皮细胞。bFGF之所以在再生医学领域引起了关注，因为bFGF具有强大的促进血管生成的作用和促进未分化的间质细胞的细胞增殖，同时保留其多能性。
目前，使用REGROTH®（0.3%碱性成纤维细胞生长因子）的皮瓣手术（FOP）是日本牙周再生治疗的标准疗法。REGROTH®于2016年在日本上市（专利号为JP4250087B2）。然而，对于严重的牙槽骨缺损，使用REGROTH®单一疗法的牙周组织再生效果并不理想。生长因子在溶液中的活性半衰期较短，体外扩散较迅速，易因pH值、环境温度的改变、酶的作用而导致活性消失。在临床应用中发现，直接将生长因子作用于病损中易导致生长因子的流失及活性衰退。目前国内没有商品化的生长因子类产品上市，传统PRP、PRF、CGF技术制作自体血浆步骤繁琐、药物作用时间短，而人工植骨材料价格昂贵、骨生长缓慢，目前的植骨方法都是物理治疗，不能很好地促进牙周组织的再生。因此，仍然有需要开发一种口腔缓释凝胶，使得生长因子缓慢释放，持续作用于牙周组织，最大程度发挥其功效，促进牙周组织的再生。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种药物作用时间长、能够有效促进牙周组织再生的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶及其制备方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，包括以下重量份的组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子0.01~0.5份，凝胶基质1~500份，聚丁二酸丁二醇酯1~200份，β-磷酸三钙1~1000份，蛋白保护剂0.01~0.5份；所述聚丁二酸丁二醇酯与β-磷酸三钙的重量比为：聚丁二酸丁二醇酯：β-磷酸三钙=1：1~5。
聚丁二酸丁二醇酯（PBS）是一种通用高分子聚合物；β-磷酸三钙具有良好的生物降解性、生物相容性和生物无毒性。传统的重组人碱性成纤维细胞生长因子制剂种类繁多，但由于重组人碱性成纤维细胞生长因子在溶液中的活性半衰期较短、体外扩散迅速、易失活等特性，导致其牙周组织再生效果很不理想。本申请发明人经过大量的实验发现，采用聚丁二酸丁二醇酯、β-磷酸三钙和凝胶基质制备重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，聚丁二酸丁二醇酯（PBS）包裹bFGF形成油包水的微球，再装载到β-磷酸三钙疏松的孔隙中，再将β-磷酸三钙在凝胶中分散均匀，层层包裹缓释，使制备得到的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶能够持续释放bFGF，且缓释周期长。本申请发明人在实验中发现，口腔凝胶中聚丁二酸丁二醇酯、β-磷酸三钙的重量比对最终制备得到的口腔凝胶的缓释周期有很大的影响，当聚丁二酸丁二醇酯与β-磷酸三钙的重量比为1：1~5时，制备得到的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶中的活性成分重组人碱性成纤维细胞生长因子的缓释周期更长，从而能够持续作用于牙周组织，对牙周组织再生的促进作用更好。
作为本发明所述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的优选实施方式，还包括乙酸和pH调节剂。更优选地，所述乙酸的重量份数为1-1000份。
作为本发明所述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的优选实施方式，所述pH调节剂包括磷酸缓冲液。
作为本发明所述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的优选实施方式，所述凝胶基质包括壳聚糖。
作为本发明所述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的优选实施方式，所述蛋白保护剂包括肝素钠。
本发明还提供所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的制备方法，包括以下步骤：
（1）将凝胶基质溶于乙酸，并加入pH调节剂使形成透明凝胶，于121℃灭菌，冷却后备用；
（2）将重组人碱性成纤维细胞生长因子和蛋白保护剂溶于适量蒸馏水，用0.22 μm滤膜过滤除菌，得水相；
（3）将聚丁二酸丁二醇酯溶于三氯甲烷，用0.22 μm滤膜过滤除菌，得有机相；
（4）将水相加入到有机相中，超声乳化，得乳化液；
（5）将β-磷酸三钙加入到乳化液中，超声混合，得混合物；
（6）在无菌条件下将步骤（1）得到的透明凝胶和步骤（5）得到的混合物混合均匀，得所述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶。
本发明还提供所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶在制备治疗牙周炎的产品中的应用。
本发明还提供所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶在制备促进牙槽骨缺损再生的药物中的应用。
本发明的有益效果：本发明提供一种重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶。本发明的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶具有骨诱导作用，利用缓释载体持续释放bFGF，缓释周期长且药效持久，能够持续刺激牙周组织再生；本发明的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶具有一定支撑作用，可以为成骨细胞提供附着空间，促进成骨细胞攀附生长。
附图说明
图1为实施例1~3的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶中rh-bFGF累计释放率。
图2为重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF）口腔凝胶体生物学活性检测结果。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
本实施例提供一种重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，包括以下重量份的组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子0.15份，壳聚糖350份，聚丁二酸丁二醇酯100份，β-磷酸三钙250份，肝素钠0.15份。
上述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的制备方法具体为：
（1）将壳聚糖溶于乙酸，并加入pH调节剂使形成透明凝胶，于121℃灭菌30min，冷却后备用；
（2）将重组人碱性成纤维细胞生长因子和肝素钠溶于适量蒸馏水，用0.22 μm滤膜过滤除菌，得水相；
（3）将聚丁二酸丁二醇酯溶于三氯甲烷，用0.22 μm滤膜过滤除菌，得有机相；
（4）将水相加入到有机相中，超声15min，得乳化液；
（5）将β-磷酸三钙加入到乳化液中，超声混合4h，通过磁力搅拌加速三氯甲烷挥发，得混合物；
（6）在无菌条件下将步骤（1）得到的透明凝胶和步骤（5）得到的混合物混合均匀，得所述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶。
实施例2
本实施例提供一种重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，包括以下重量份的组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子0.15份，壳聚糖1份，聚丁二酸丁二醇酯1份，β-磷酸三钙1份，肝素钠0.01份。实施例2的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的制备方法与实施例1相同。
实施例3
本实施例提供一种重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，包括以下重量份的组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子0.15份，壳聚糖500份，聚丁二酸丁二醇酯200份，β-磷酸三钙1000份，肝素钠0.5份。
实施例3的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的制备方法与实施例1相同。
对比例1
本实施例提供一种重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，包括以下重量份的组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子0.15份，壳聚糖350份，聚丁二酸丁二醇酯250份，β-磷酸三钙100份，肝素钠0.15份。
对比例2
本实施例提供一种重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，包括以下重量份的组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子0.15份，壳聚糖350份，聚丁二酸丁二醇酯50份，β-磷酸三钙300份，肝素钠0.15份。
实验例1
本实验例测试重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF）口腔凝胶体外释药性能，具体实验方法如下：分别取实施例1、2、3、对比例1、2制备的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，以生理盐水作为释药介质，采用双抗体夹心ELISA法测试，在37 ℃恒温水溶振荡器上，以60 rpm/min恒温恒速振荡，分别在释放开始后的6h，1d，3d，5d，10d，15d，20d，25d，30d，35d 取出全部释放介质于离心管中标号保存，及时加入同样体积和温度的释放介质，由ELISA标准曲线计算出rh-bFGF的释放量。推算各时间点的累积释药百分率，平行操作3份，描绘累计释药曲线。
结果如图1所示，实施例1的口腔凝胶体外释放速率恒定，30天时间可以完全释放药物；实施例2的口腔凝胶15天内药物已经释放了90%以上；实施例3的口腔凝胶20天内基本完全释放药物。对比例1和2的口腔凝胶15天内基本完全释放药物。由上述可知，本发明制备得到的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶能够持续释放bFGF，缓释周期更长。对比例1~2的口腔凝胶中的聚丁二酸丁二醇酯、β-磷酸三钙的重量比分别为2.5：1、1：6，其最终制备得到的口腔凝胶的rh-bFGF的缓释周期明显短于口腔凝胶中的聚丁二酸丁二醇酯、β-磷酸三钙的重量比为1：2.5的实施例1，由此说明，口腔凝胶中的聚丁二酸丁二醇酯、β-磷酸三钙的重量比对口腔凝胶的rh-bFGF的释放周期有很大的影响。
实验例2
本实验例检测实施例1~3、对比例1~2的重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF）口腔凝胶体的rh-bFGF的活性，具体实验如下：
（1）铺板：将小鼠胚胎成纤维细胞加入到96孔细胞培养板中，使得细胞培养板内的细胞数为6000-8000个/100ul/孔，置于二氧化碳培养箱中孵育18-24h；
（2）饥饿培养：弃去完全培养基，加入100ul/孔的维持培养基，饥饿5-8h；
（3）加样刺激：分别取25μl每个浓度标准品及供试品加至细胞培养板，各浓度做3次重复，孵育40-48h；
（4）吸光度的测定：取出上述细胞培养板，用MTT法检测吸光度，记录测定结果；试验数据采用四参数回归计算法进行处理，并按下式进行计算：
Pr为标准品生物学活性，IU/ml；
DS为供试品预稀释倍数；
Dr为标准品预稀释倍数；
ES为供试品相当于标准品半效量的稀释倍数；
Er为标准品半效量的稀释倍数。
数据处理：测定的吸光度结果用酶标仪自带软件计算，要求两条曲线平行，曲线R2>0.9。
标示量百分比为供试品的生物学活性与对应规格标示量的百分比。
结果如图2所示，实施例1的口腔凝胶30天内rh-bFGF的活性仍大于76%；实施例2的口腔凝胶在15天内rh-bFGF的活性大于75%，20天后低于62%；实施例3的口腔凝胶在25天内rh-bFGF的活性高于70%；对比例1的口腔凝胶在10天内rh-bFGF的活性高于75%；对比例2的口腔凝胶在15天内rh-bFGF的活性高于70%。
实验例3 rh-bFGF口腔凝胶促进牙槽骨缺损模型再生的实验研究
1、试验方法
试验动物：Beagle犬，雄性，体重10~15kg，18只，牙齿排列整齐，临床未见破坏性牙周疾病。
犬牙槽骨缺损模型：以每只犬上、下颌两侧的第2、3前磨牙为实验牙，共144颗，人工手术制备长、宽、高为5 mm的箱状骨内缺损。随机分为6组，每组24颗牙。将各组分为Emdogain®植入组（对照组），实施例1口腔凝胶植入组（实验组1），实施例2口腔凝胶植入组（实验组2），实施例3口腔凝胶植入组（实验组3），对比例1口腔凝胶植入组（实验组4），对比例2口腔凝胶植入组（实验组5），动物术后3d连续肌注青霉素（80万U，1次/d）预防术后感染。
术后8周评价以下指标：①新生牙槽骨高度、新生牙骨质高度；②骨矿化率；③骨小梁数量、骨小梁厚度。统计学处理：采用t检验分析法比较各组测量结果是否存在统计学差异。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2、试验结果如表1~表3所示。
表1两组植骨术后8周牙槽嵴高度、新生牙骨质高度比较
注：* P<0.05（与对照组比较）
表2 两组植骨术后8周骨矿化率比较
注：* P<0.05（与对照组比较）
表3 两组植骨术后8周骨小梁数量、骨小梁厚度比较
由表1、2、3可以看出，本发明组实施例1的新生牙槽骨高度、新生牙骨质高度、骨矿化率、骨小梁数量等指标均高于对照组，且有显著性差异（P<0.05）；两组骨小梁厚度比较无显著差异（P>0.05）。
本发明组实施例2的新生牙槽骨高度、新生牙骨质高度、骨矿化率、骨小梁数量、骨小梁厚度与对照组比较无显著性差异（P>0.05），略高于对照组。
本发明组实施例3的骨矿化率与对照组相比有显著性差异（P<0.05），其他指标除骨小梁厚度以外略高于对照组，无显著性差异（P>0.05）。
本发明组对比例1的新生牙槽骨高度、新生牙骨质高度均显著低于对照组（P<0.05），骨矿化率、骨小梁数量、骨小梁厚度比较无显著性差异（P>0.05），但也均低于对照组。
本发明组对比例2的新生牙槽骨高度、新生牙骨质高度均显著低于对照组（P<0.05），骨矿化率、骨小梁数量、骨小梁厚度比较无显著性差异（P>0.05），但也均低于对照组。
研究表明，缓释周期更长能够使活性成分rh-bFGF持续作用于牙周组织，促进牙周组织再生。实施例1~3、对比例1~2的口腔凝胶中的聚丁二酸丁二醇酯、β-磷酸三钙的重量比分别为1：2.5、1：1、1：5、2.5：1、1：6，由上述实验结果可知，实施例1~3制备得到的口腔凝胶对牙槽骨缺损模型再生的促进作用优于对比例1~2。由此说明，当聚丁二酸丁二醇酯与β-磷酸三钙的重量比为1：1~5时，制备得到的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶中的活性成分重组人碱性成纤维细胞生长因子的缓释周期更长，从而能够持续作用于牙周组织，对牙周组织再生的促进作用更好。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (5)
1.一种重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，其特征在于，包括以下重量份的组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子0.01~0.5份，凝胶基质1~500份，聚丁二酸丁二醇酯1~200份，β-磷酸三钙1~1000份，蛋白保护剂0.01~0.5份；所述聚丁二酸丁二醇酯与β-磷酸三钙的重量比为：聚丁二酸丁二醇酯：β-磷酸三钙=1：1~5；所述凝胶基质为壳聚糖；所述蛋白保护剂为肝素钠；所述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶还包括乙酸和pH调节剂；所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的制备方法包括以下步骤：
（1）将凝胶基质溶于乙酸，并加入pH调节剂使形成透明凝胶，于121℃灭菌，冷却后备用；
（2）将重组人碱性成纤维细胞生长因子和蛋白保护剂溶于适量蒸馏水，用0.22 μm滤膜过滤除菌，得水相；
（3）将聚丁二酸丁二醇酯溶于三氯甲烷，用0.22 μm滤膜过滤除菌，得有机相；
（4）将水相加入到有机相中，超声乳化，得乳化液；
（5）将β-磷酸三钙加入到乳化液中，超声混合，得混合物；
（6）在无菌条件下将步骤（1）得到的透明凝胶和步骤（5）得到的混合物混合均匀，得所述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶。
2.根据权利要求1所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶，其特征在于，所述pH调节剂包括磷酸缓冲液。
3.根据权利要求1~2任一项所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将凝胶基质溶于乙酸，并加入pH调节剂使形成透明凝胶，于121℃灭菌，冷却后备用；
（2）将重组人碱性成纤维细胞生长因子和蛋白保护剂溶于适量蒸馏水，用0.22 μm滤膜过滤除菌，得水相；
（3）将聚丁二酸丁二醇酯溶于三氯甲烷，用0.22 μm滤膜过滤除菌，得有机相；
（4）将水相加入到有机相中，超声乳化，得乳化液；
（5）将β-磷酸三钙加入到乳化液中，超声混合，得混合物；
（6）在无菌条件下将步骤（1）得到的透明凝胶和步骤（5）得到的混合物混合均匀，得所述重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶。
4.权利要求1~2任一项所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶在制备治疗牙周炎的产品中的应用。
5.权利要求1~2任一项所述的重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶在制备促进牙槽骨缺损再生的药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310745083.6A CN116492450B (zh) | 2023-06-25 | 2023-06-25 | 重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310745083.6A CN116492450B (zh) | 2023-06-25 | 2023-06-25 | 重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116492450A CN116492450A (zh) | 2023-07-28 |
| CN116492450B true CN116492450B (zh) | 2023-10-10 |
Family
ID=87316843
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310745083.6A Active CN116492450B (zh) | 2023-06-25 | 2023-06-25 | 重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116492450B (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1090928A1 (en) * | 1999-09-30 | 2001-04-11 | IsoTis N.V. | Polymers loaded with bioactive agents |
| CA2439813A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-09-12 | Stryker Corporation | Porous beta-tricalcium phosphate granules and methods for producing same |
| KR20030006787A (ko) * | 2001-07-16 | 2003-01-23 | 이승진 | 트리칼슘포스페이트를 함유한 골대체제용 키토산 비드 |
| KR101306748B1 (ko) * | 2012-03-29 | 2013-09-10 | 주식회사 바이오알파 | 성장인자 전달속도 조절이 가능한 히알루론산-인산칼슘 복합체 및 그 제조방법 |
| CN104984326A (zh) * | 2015-07-14 | 2015-10-21 | 珠海亿胜生物制药有限公司 | 不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法 |
| WO2019217765A1 (en) * | 2018-05-09 | 2019-11-14 | The Johns Hopkins University | Nanofiber-hydrogel composites for cell and tissue delivery |
| CN110559479A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-13 | 苏州高哲斯环境新材料有限公司 | 一种用于牙齿修复的引导组织再生膜的制备方法 |
| CN113633826A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-11-12 | 重庆医科大学附属第三医院(捷尔医院） | 一种含有高活性促骨生长因子的骨修复生物材料及用途 |
-
2023
- 2023-06-25 CN CN202310745083.6A patent/CN116492450B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1090928A1 (en) * | 1999-09-30 | 2001-04-11 | IsoTis N.V. | Polymers loaded with bioactive agents |
| CA2439813A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-09-12 | Stryker Corporation | Porous beta-tricalcium phosphate granules and methods for producing same |
| KR20030006787A (ko) * | 2001-07-16 | 2003-01-23 | 이승진 | 트리칼슘포스페이트를 함유한 골대체제용 키토산 비드 |
| KR101306748B1 (ko) * | 2012-03-29 | 2013-09-10 | 주식회사 바이오알파 | 성장인자 전달속도 조절이 가능한 히알루론산-인산칼슘 복합체 및 그 제조방법 |
| CN104984326A (zh) * | 2015-07-14 | 2015-10-21 | 珠海亿胜生物制药有限公司 | 不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法 |
| WO2019217765A1 (en) * | 2018-05-09 | 2019-11-14 | The Johns Hopkins University | Nanofiber-hydrogel composites for cell and tissue delivery |
| CN110559479A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-13 | 苏州高哲斯环境新材料有限公司 | 一种用于牙齿修复的引导组织再生膜的制备方法 |
| CN113633826A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-11-12 | 重庆医科大学附属第三医院(捷尔医院） | 一种含有高活性促骨生长因子的骨修复生物材料及用途 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 聚丁二酸丁二醇酯作为生物材料的应用及研究进展;周卫东;张维;王小威;季君晖;;化工新型材料(07);第145-147页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116492450A (zh) | 2023-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Miron et al. | Autologous liquid platelet rich fibrin: A novel drug delivery system | |
| Li et al. | Accelerated bony defect healing based on chitosan thermosensitive hydrogel scaffolds embedded with chitosan nanoparticles for the delivery of BMP2 plasmid DNA | |
| Yang et al. | Fibrin glue mixed with platelet‐rich fibrin as a scaffold seeded with dental bud cells for tooth regeneration | |
| Dabra et al. | Tissue engineering in periodontal regeneration: A brief review | |
| EP2979710B1 (en) | Cell tissue gel containing collagen and hyaluronan | |
| Beigi et al. | Activated platelet‐rich plasma improves cartilage regeneration using adipose stem cells encapsulated in a 3D alginate scaffold | |
| JP2008517660A (ja) | 生物剤を送達する中空かつ多孔質の整形外科用または歯科用のインプラント | |
| Sordi et al. | Three-dimensional bioactive hydrogel-based scaffolds for bone regeneration in implant dentistry | |
| Seo et al. | Osteoinductivity of gelatin/β-tricalcium phosphate sponges loaded with different concentrations of mesenchymal stem cells and bone morphogenetic protein-2 in an equine bone defect model | |
| US9925140B2 (en) | Cell tissue gel containing collagen and hyaluronan | |
| Tong et al. | Synthesis of and in vitro and in vivo evaluation of a novel TGF-β1-SF-CS three-dimensional scaffold for bone tissue engineering | |
| Tavakolinejad et al. | A glance at methods for cleft palate repair | |
| Bansal et al. | Regenerative endodontics: a road less travelled | |
| Li et al. | Injectable thermosensitive chitosan/gelatin-based hydrogel carried erythropoietin to effectively enhance maxillary sinus floor augmentation in vivo | |
| Ma et al. | Locally injection of cell sheet fragments enhances new bone formation in mandibular distraction osteogenesis: a rabbit model | |
| Li et al. | Use of a biological reactor and platelet-rich plasma for the construction of tissue-engineered bone to repair articular cartilage defects | |
| Findikcioglu et al. | Effect of platelet-rich plasma and fibrin glue on healing of critical-size calvarial bone defects | |
| JP2016514030A (ja) | 感熱性骨成長組成物 | |
| Zhao et al. | Periodontal ligament stem cell-based bioactive constructs for bone tissue engineering | |
| KR102147272B1 (ko) | 연부조직 질환 치료용 약물이 탑재된 나노입자가 함유된 줄기세포의 3차원 세포 집합체 및 이의 제조방법 | |
| CN116492450B (zh) | 重组人碱性成纤维细胞生长因子口腔凝胶及其制备方法 | |
| WO2023179544A1 (zh) | 一种负载间充质干细胞外基质的3d打印骨缺损修复支架及其制备方法 | |
| CN107519528A (zh) | 一种生物可吸收的骨蜡及其制备方法 | |
| Dilogo et al. | Role of mesenchymal stem cell-conditioned medium (MSC-CM) in the bone regeneration: a systematic review from 2007-2018 | |
| Zhang et al. | Super activated platelet lysate, a novel autologous platelet lysate, regulates the expression of inflammasome and cytokine in the experimental periodontitis in rats |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Recombinant human basic fibroblast growth factor oral gel and its preparation method Granted publication date: 20231010 Pledgee: Agricultural Bank of China Limited Foshan Zumiao Sub-branch Pledgor: Long peptide biopharmaceutical Co.,Ltd. Registration number: Y2024980000968 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |