CN116492285B - 一种用于口腔的复合益生菌组合物及其应用和产品 - Google Patents
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Abstract
本发明属于口腔护理技术领域，其公开了一种用于口腔的复合益生菌组合物及其应用和产品，所述复合益生菌组合物，包括复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物，所述复合益生菌粉包括罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC 7469和长双歧杆菌CICC 6068。本发明科学合理的将复合益生菌粉与植物活性成分进行配合使用，在抑制口腔致病菌牙龈卟啉单胞菌生长方面产生了协同增效作用，抑菌抗炎效果显著，能够调节口腔菌群平衡，预防口腔疾病，利于口腔健康。
Description
技术领域
本发明属于口腔护理技术领域，涉及一种用于口腔的复合益生菌组合物及其应用和产品。
背景技术
口腔疾病是最常见的非传染性疾病，可分为口腔黏膜病、牙体牙髓疾病、牙周疾病。具体而言，口腔黏膜疾病是指在口腔内，上唇、下唇、舌黏膜、颊黏膜发生的疾病，常见的有复发性口腔溃疡；目前的治疗手段主要是消炎、止痛、促进溃疡愈合，常用抗生素类、激素类药物及维生素，如四环素、地塞米松、倍他米松、维生素C、复合维生素B、西瓜霜等；牙体牙髓疾病是指牙齿本身，包括牙冠和牙根上发生的疾病，常见的有龋病、牙髓病和根尖周病；牙周疾病是指牙齿周围的牙龈、牙周膜、牙槽骨、牙骨质发生的疾病，常见的有牙龈炎和牙周病。牙周病的治疗药物，主要包括抗生素类药物和抗炎类药物，如硝基咪唑类、四环素类、青霉素类、大环内酯类药物、非甾体类抗炎药物等。
然而，上述口腔疾病治疗的药物，或是治疗效果不明显，或是存在一定的副作用，因此开发新型的用于防治口腔疾病的药物具有十分重要的意义。
益生菌是对宿主健康有益的一类活性微生物。口腔菌群有300多种微生物组成，总个数达到100亿以上。健康人的口腔中有益菌占优，它们不仅维持了口腔健康，还会分布到肠道和全身，甚至传递给下一代，产生更多有利于健康长寿的作用。
然而，长期高压的生活学习工作环境、不健康的生活饮食习惯、疾病等等因素均有可能导致体内菌群失调，进而导致口腔疾病，科学实验已经证明，口臭、龋齿、口腔炎症、口腔溃疡、口腔癌、咽喉炎等口腔疾病都与口腔菌群失调有关。所谓菌群失调，亦即有益菌减少，有害菌或致病菌增加，以下是口腔疾病常见的病原微生物：牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis）、具核梭杆菌（Fusobacteriumnucleatum）、幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori）、白色念珠菌（Monilia albican）等等。如果是有害菌、致病菌占优，它们不仅危害口腔，同样会进入肠道、生殖系统等部位，产生有害难闻的气体（口臭、异味）、其它有毒有害物质、致病、致肿瘤等作用。可见，及时补充益生菌对于预防口腔菌群失调，保持口腔保健具有重要意义，对于全身健康也有实际意义。
随着科学技术的发展和人民生活水平的提高，人们越来越注重自身营养结构和健康需求，具有特殊保健功能的食品或膳食补充剂已经成为食品科学技术的重要发展方向，集营养和保健功能于一体的益生菌食品越来越受到消费者青睐。
虽然市面上已有益生菌、益生元的产品，但是现有的益生菌制剂普遍存在以下问题或不足：（1）市面上大多数益生菌产品只是简单组合，缺乏有利于益生菌生长的益生元的科学配比，或者益生菌种类不够丰富，导致应用效果不佳，功能单一，对口腔菌群微生态改善作用较弱；（2）目前市面上现有的益生菌产品多为固体制剂（含片、咀嚼片、胶囊剂、颗粒剂），对于儿童、老人和有口腔或胃肠道疾病的人群而言，服用较困难，消化、吸收难度高，甚至限制了肠胃虚弱或伴有其他疾病的人群的使用。
综上所述，现有技术中普遍存在益生菌配比单一、功能和剂型简单，导致适用人群较窄、应用效果不明显等问题。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于口腔的复合益生菌组合物及其应用和产品。本发明通过科学合理的将复合益生菌菌粉与植物活性成分进行配合使用，抑菌抗炎效果显著，能够调节口腔菌群平衡，预防口腔疾病，利于口腔健康，且适宜人群广泛。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种用于口腔的复合益生菌组合物，包括复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物，所述复合益生菌粉包括罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC 7469和长双歧杆菌CICC 6068。
本发明通过罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC 7469和长双歧杆菌CICC 6068组成的复合益生菌粉与植物活性成分柿子单宁、香菇提取物的配合使用，在抑制口腔致病菌牙龈卟啉单胞菌生长方面产生了协同增效作用，抑菌抗炎效果显著，能够调节口腔菌群平衡，预防口腔疾病，利于口腔健康。
本发明的复合益生菌粉精选罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC 7469和长双歧杆菌CICC 6068三种口腔益生菌组成，其中，罗伊氏乳杆菌可以减少牙斑菌、健康牙龈，鼠李糖乳杆菌对口腔病原体有明显的抑制作用，同时，可以减少口腔中的蛀牙诱发菌-变形链球菌的数量，长双歧杆菌作为一种生理性有益菌，对人体健康具有生物屏障、营养作用、抗肿瘤作用、免疫增强作用、改善胃肠道功能、抗衰老等多种重要的生理功能，且在本发明中，长双歧杆菌可以促进罗伊氏乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的生长，抑制有害菌。
本发明中与所述复合益生菌粉配合发挥协同增效抑制牙龈卟啉单胞菌生长的植物活性成分为柿子单宁和香菇提取物，其中，柿子单宁是从柿子中提取的由许多酚类氢氧基构成的大分子。柿子单宁与口腔内的蛋白质和生物碱结合之后，会瞬间吸附有害物质（如：重金属）、分解臭味、强效抗菌，可以有效消灭因为肠胃问题而导致的口臭现象，也可以去除吃重口味食物、宿醉导致的口腔异味。另外，柿子单宁还能保护胃黏膜、防止毛细血管老化、预防高血压。香菇提取物含有丰富的香菇多糖，硬脂酸，香菇嘌呤，腺苷，麦角甾醇等多种营养成分，能够抑制口腔内致病菌黏附生长，阻止牙菌斑的形成，防止龋齿的发生，蘑菇中的腺苷亦能抑制生物膜的形成。
在本发明的一些实施例中，所述复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物的质量比为3-6:1:2-4，优选为4.5:1:3。
在本发明的一些实施例中，所述复合益生菌粉中罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC 7469和长双歧杆菌CICC 6068的质量比为1:1:1。
上述复合益生菌组合物的制备方法为：将配方量的柿子单宁和香菇提取物混合，再加入配方量的复合益生菌粉混合，即得所述复合益生菌组合物。
本发明的复合益生菌组合物，还可以根据实现需要添加对上述技术效果无影响的其他功效组分，如添加具有抑菌抗炎，清新口气的薄荷提取物、绿茶粉等、添加具有预防口腔溃疡的营养酵母粉，添加甜味剂，如乳糖醇和低聚果糖等，还可以添加其他本领域中常见的原料，如亚麻籽油等。
在一些实施例中，本发明还提供了一种口腔爆珠，由芯材和包裹在芯材外表面的壁材组成，所述芯材包含上述复合益生菌组合物。
在一些优选的实施例中，本发明中所述复合益生菌组合物占芯材重量的6-11%，优选为8.5%。所述芯材还包括乳糖醇，低聚果糖，营养酵母粉、薄荷提取物、绿茶粉和亚麻籽油中的至少一种。
本发明采用的壁材原料为本领域常规组分，本领域的技术人员可以根据实际需要选择对复合益生菌组合物无影响的任何适用的原料作为壁材，例如，所述对复合益生菌组合物的功效无影响的壁材原料可以包括甘油、明胶和水等。
在一些优选的实施例中，本发明中所述壁材的重量占口腔爆珠总重量的8-12%，优选为10%。
本发明还提供了上述口腔爆珠的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备壁材：将壁材原料混合，搅拌均匀，得到壁材凝胶；
（2）制备芯材：将含上述复合益生菌组合物的芯料按配方量混合，作为芯材；
（3）将步骤（1）得到的壁材凝胶和步骤（2）得到的芯材同时滴入亚麻籽油中，制成滴丸，清洗，得到湿丸；
（4）将步骤（3）得到的湿丸干燥，清洗，风干，得到所述口腔爆珠。
本发明的有益效果为：
（1）本发明科学合理的将复合益生菌粉与植物活性成分进行配合使用，在抑制口腔致病菌牙龈卟啉单胞菌生长方面产生了协同增效作用，抑菌抗炎效果显著，能够调节口腔菌群平衡，预防口腔疾病，利于口腔健康。
（2）本发明提供的口腔爆珠不添加任何化学添加剂，并且还能有效隔绝空气、氧气、水，保护益生菌活性，耐酸耐胆碱性能较好，同时产品使用、携带便捷，色味俱佳，使用体验良好，适宜人群广泛。
（3）本发明提供的口腔爆珠，其制备方法可有效降低其他产品制剂在制备过程中益生菌和植物提取成分的活性损失，操作简单，条件可控，利于实现大规模工业化生产。
具体实施方式
除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
以下实施例如无特殊说明，则不含有除不可避免的杂质以外的其它未明确指出的组分。各实施例中所用的原料均为市售产品。其中，柿子单宁，购自广州柿宝生物科技有限公司；香菇提取物，购自陕西海赛生物科技有限公司；薄荷提取物，购自西安瑞尔丽生物工程有限公司；乳糖醇，购自西安大丰收生物科技有限公司；低聚果糖，购自河南明瑞集团有限公司；营养酵母粉，购自河北吉捷生物科技有限公司；绿茶粉，购自兰州沃特莱斯生物科技有限公司；亚麻籽油，购自西安首禾生物科技有限公司。
实施例1
一种用于口腔的复合益生菌组合物，包括质量比为4.5:1:3的复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物，其中，复合益生菌粉中罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC7469和长双歧杆菌CICC 6068的质量比为1:1:1。
实施例2
一种用于口腔的复合益生菌组合物，包括质量比为3:1:2的复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物，其中，复合益生菌粉中罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC7469和长双歧杆菌CICC 6068的质量比为1:1:1。
实施例3
一种用于口腔的复合益生菌组合物，包括质量比为6:1:4的复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物，其中，复合益生菌粉中罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC7469和长双歧杆菌CICC 6068的质量比为1:1:1。
对比例1
本对比例与实施例1的区别在于，复合益生菌组合物的组成不同。
具体地，所述复合益生菌组合物仅为质量比为1:1:1的罗伊氏乳杆菌GDMCC1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC 7469和长双歧杆菌CICC 6068。
对比例2
本对比例与实施例1的区别在于，复合益生菌组合物的组成不同。
具体地，所述复合益生菌组合物仅为香菇提取物。
对比例3
本对比例与实施例1的区别在于，复合益生菌组合物的组成不同。
具体地，所述复合益生菌组合物仅为柿子单宁。
对比例4
本对比例与实施例1的区别在于，复合益生菌组合物中各组分的质量比不同；
具体地，所述复合益生菌组合物中复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物的质量比为4.5:3:1。
为了进一步验证本发明上述实施例和对比例提供的复合益生菌组合物的功效，将实施例1-3和对比例1-4的复合益生菌组合物，按照以下配方和制备方法，制备成用于预防或缓解口腔疾病的口腔爆珠，分别标记为S1、S2、S3、D1、D2、D3和D4，并对其进行功效试验。
所述口腔爆珠，由包含上述复合益生菌组合物的芯材和包裹在所述芯材外表面的壁材组成，其中，所述壁材为质量比4:2:0.5的纯净水、明胶和甘油，壁材重量占口腔爆珠总重量的10%，
所述口腔爆珠的芯材配方如表1所示，其中，芯材中益生菌的活菌数为1.0×109CFU/g。
表1 含不同复合益生菌组合物的口腔爆珠的芯材配方
所述口腔爆珠的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备壁材：称取甘油和明胶，放入30-45℃制备釜中，按一定比例倒入纯净水中，搅拌均匀，得到有效粘度为1000-1550 cp的壁材凝胶，静置待用；
（2）制备芯材：按照重量比称取乳糖醇、低聚果糖、营养酵母粉、薄荷提取物、绿茶粉、柿子单宁、香菇提取物，混合均匀，再加入配方量的益生菌组合物（GDMCC 1.614罗伊氏乳杆菌、ATCC 7469鼠李糖乳杆菌、CICC 6068长双歧杆菌），得到芯材；
（3）将制备好的壁材凝胶和芯材分别通入滴丸机中，控制温度为30-45℃，壁材和芯材同时滴入亚麻籽油中，经同心圆多层滴头在表面张力作用下收缩制成滴丸，将滴丸冷却并用净化水清洗，制得湿丸；
（4）将湿丸干燥，得到干燥爆珠，用食用乙醇清洗去除表面附着的植物油和破损爆珠，风干，制得制得水分含量为8-12％的包裹有益生菌的口腔爆珠，每粒0.25g。
功效试验
试验一：通过感官评价的方法，将制备的含复合益生菌组合物的口腔爆珠S1-S3和D1-D4用于类似于人饮食结构的培养基中，研究产生恶臭挥发性化合物的情况。
具体来说，将1粒口腔爆珠溶解于含有0.5wt％葡萄糖、0.5wt％果糖、1wt％酵母提取物、1wt％肉浸膏、真核细胞（HOEC人口腔上皮细胞系）（200个细胞/mL）的培养基中，在37℃、5％ CO2培养箱中培养48 h，研究产生恶臭挥发性化合物的情况。
评价标准：通过3名专业人员（经过专业培训的，对气味敏感的人员）进行评价，评分后取均值。恶臭值评价分数为1-5之间，其中，1-5的分值代表气味为较好到较差的气味。
结果：不同复合益生菌组合物对不良气体的产生情况如表2所示。
表2 不同复合益生菌组合物对不良气体的产生情况
由表2可知，本发明提供的含复合益生菌组合物的口腔爆珠在类似于人饮食的培养基中生长时，未产生不良气味。
试验二：采用牛津杯法，研究含复合益生菌组合物的口腔爆珠S1-S3和D1-D4对口腔致病菌牙龈卟啉单胞菌（GIM 1.851）生长的抑制作用。
具体来说，采用双层培养基，将1.5％（W/V）的琼脂培养基倒入平皿中，凝固后将无菌的牛津杯固定在适宜的位置，然后将0.7％（W/V）的BHI培养基与牙龈卟啉单胞菌的混合物（107CFU/mL）倾倒在下层培养基上。待凝固后取出牛津杯，在每个孔中加入10 μL待测的口腔爆珠溶液（1粒口腔爆珠溶解于10 mL水制成口腔爆珠溶液）。将上述平板在37 ℃（5％CO2）的环境中培养过夜，根据抑菌圈的情况分析含不同复合益生菌组合物的口腔爆珠对牙龈卟啉单胞菌生长的抑制作用。测定时，通过将琼脂平板放在直尺上来测定抑菌圈。
结果：含不同复合益生菌组合物的口腔爆珠对口腔致病菌牙龈卟啉单胞菌生长的抑制情况如表3所示，其中抑菌直径为一式三份试验的平均值。
表3 不同复合益生菌组合物对牙龈卟啉单胞菌生长的抑制情况
由表3可知，本发明含实施例1-3复合益生菌组合物的口腔爆珠S1-S3对于口腔致病菌牙龈卟啉单胞菌的抑菌圈直径为4.1-4.5mm，表明，本发明的复合益生菌组合物对牙龈卟啉单胞菌具有较好的抑制作用。
通过口腔爆珠S1与口腔爆珠D1、D2和D3的抑菌结果可知，当口腔爆珠的芯材中仅含有复合物益生菌粉、香菇提取物或柿子单宁任一种，其得到的口腔爆珠对口腔致病菌牙龈卟啉单胞菌的抑菌圈直径仅为3.2mm、2.8mm和2.9mm，同时，根据D4可知，当改变复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物的质量比不在本发明要求的范围内时，其制备的口腔爆珠对抑制口腔致病菌牙龈卟啉单胞菌产生了拮抗作用，而本发明实施例1-3制备的口腔爆珠S1-S3在抑制口腔致病菌牙龈卟啉单胞菌方面产生了协同增效作用，取得了预料不到的技术效果。
试验三：采用动物模型，研究含复合益生菌组合物的口腔爆珠S1-S3和D1-D4对牙龈指数的影响记录包括牙龈指数和牙周袋深度的指标。
1、试验动物分组：选用SD雄性大鼠，体重180g-220g。实验动物随机分为9组：正常对照组、模型组、给药组S1-S3以及D1-D4,每组各5只。
2、动物模型建立：用5％水合氯醛（0.3 mL/100g，腹腔注射）麻醉，采用直径为0.2mm的正畸结扎丝结扎大鼠双侧上颌第一磨牙。结扎丝在大鼠上颌双侧第一磨牙远中侧进入，环上颌第一恒磨牙，用针持在腭侧结扎固定，置于龈下，并保证结扎丝不脱落。
3、给含复合益生菌组合物的口腔爆珠S1-S3和D1-D4：将0.5g口腔爆珠溶于2 mL无菌蒸馏水中，用无菌针管吸取后对大鼠左上颌牙结扎部位进行缓慢冲洗，并禁食禁水半小时。每两天一次，持续8周。
4、检测：8周后，对大鼠进行5％水合氯醛（0.3 mL/100g，腹腔注射）麻醉，使用牙周袋探测针对大鼠第一磨牙的牙龈指数和牙周袋深度。
牙龈指数（GI）参考Loe和Silness的检查方法。将牙龈健康程度分为四个等级：0＝牙龈健康；1＝牙龈轻度炎症：牙龈的色有轻度改变并轻度水肿，探诊不出血；2＝牙龈中等炎症：牙龈色红，水肿光亮，探诊出血；3＝牙龈严重炎症：牙龈明显红肿或有溃疡，并有自动出血倾向。
牙周袋深度测量方法为：使用牙周袋探诊针测量大鼠牙龈缘至牙周袋底的深度。分别检查大鼠左上颌第一磨牙的腭侧近中，腭侧正中，腭侧远中三点，结果取三点平均值。
表4 不同复合益生菌组合物对牙龈指数（平均值±标准差）的影响
| 牙龈指数 | 牙周袋深度/mm | |
| 正常对照组 | 0.4±0.5 | 0.503±0.091 |
| 模型组 | 2.8±0.4## | 1.458±0.075## |
| S1组 | 1.8±0.7* | 0.950±0.103* |
| S2组 | 1.6±0.5* | 0.921±.0.121* |
| S3组 | 1.4±0.5* | 0.894±.0.041* |
| D1组 | 2.2±0.4* | 1.337±0.108 |
| D2组 | 2.4±0.5 | 1.356±0.047 |
| D3组 | 2.6±0.5 | 1.396±0.132 |
| D4组 | 2.0±0.6* | 1.327±0.118 |
注：相比正常对照组，##P＜0.01，相比模型组，*P＜0.05。
本发明给药组S1-S3组大鼠均愈合良好，而给药组D1-D4组大鼠牙龈偶见有红肿现象，上颌第一磨牙龈呈粉红色，有冠周炎症反应。由表4可知，相比模型组，给药组S1-S3组各项指标均呈显著性差异（P＜0.05，n＝5），而D1-D4无显著性差异，即给药组S1-S3组的各项指标显著优于D1-D4组。表明，本发明的复合益生菌组合物治疗口腔疾病的效果较好。
以上是结合具体实施例对本发明进一步的描述，但这些实施例仅仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (6)
1.一种用于口腔的复合益生菌组合物，其特征在于，由复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物组成，所述复合益生菌粉、柿子单宁和香菇提取物的质量比为4.5:1:3；
所述复合益生菌粉，由罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC 7469和长双歧杆菌CICC 6068组成，所述罗伊氏乳杆菌GDMCC 1.614、鼠李糖乳杆菌ATCC 7469和长双歧杆菌CICC 6068的质量比为1:1:1。
2.一种口腔爆珠，由芯材和包裹在芯材外表面的壁材组成，其特征在于，所述芯材包含权利要求1所述的复合益生菌组合物。
3.根据权利要求2所述的口腔爆珠，其特征在于，所述复合益生菌组合物占芯材重量的7-10%。
4.根据权利要求3所述的口腔爆珠，其特征在于，所述芯材包括乳糖醇、低聚果糖、营养酵母粉、薄荷提取物、绿茶粉和亚麻籽油中的至少一种。
5.根据权利要求2所述的口腔爆珠，其特征在于，所述壁材的重量占口腔爆珠总重量的8-12%。
6.权利要求2-5任一项所述口腔爆珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）制备壁材：将原料混合，搅拌均匀，得到壁材凝胶；
（2）制备芯材：将含上述复合益生菌组合物的芯料按配方量混合，作为芯材；
（3）将步骤（1）得到的壁材凝胶和步骤（2）得到的芯材同时滴入亚麻籽油中，制成滴丸，清洗，得到湿丸；
（4）将步骤（3）得到的湿丸干燥，清洗，风干，得到所述口腔爆珠。
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