CN116490187A

CN116490187A - 用于癌症治疗的激酶抑制剂组合

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Publication number: CN116490187A
Application number: CN202180076918.2A
Authority: CN
Inventors: A·克拉克; A·麦克尔; B·哈克; E·威尔克; R·卡莱塔
Original assignee: Merck Patent GmbH
Current assignee: Merck Patent GmbH
Priority date: 2020-11-16
Filing date: 2021-11-15
Publication date: 2023-07-25

Abstract

本发明涉及4‑[(S)‑2‑氮杂环丁‑1‑基‑1‑(4‑氯‑3‑三氟甲基‑苯基)‑乙基氨基]‑喹唑啉‑8‑羧酸酰胺和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物，和MEK激酶的抑制剂，以及作为任选的第三抑制剂，与EGFR的抑制剂的组合，以及此类组合用于治疗癌症的用途，以及涉及4‑[(S)‑2‑氮杂环丁‑1‑基‑1‑(4‑氯‑3‑三氟甲基‑苯基)‑乙基氨基]‑喹唑啉‑8‑羧酸酰胺和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物与EGFR的抑制剂的组合。

Description

用于癌症治疗的激酶抑制剂组合

本发明涉及4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺(在下文中被称作M2698)和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物，和MEK激酶的抑制剂，以及作为任选的第三抑制剂，与受体酪氨酸蛋白激酶ERBB-1(也被称作EGFR(表皮生长因子受体))的抑制剂的组合，以及此类组合用于治疗癌症的用途。本发明还涉及M2698与EGFR抑制剂在没有MEK激酶抑制剂的情况下的组合。

背景技术

M2698、其制备方法和其用于治疗癌症的用途在WO 2012/069146中公开(被称作化合物A)。该化合物为p70S6K和Akt的选择性的、高度有效的双重抑制剂，如在各种基于细胞的测定中证实的。显示了M2698展现出针对一组广泛的癌症细胞系的有效的抗肿瘤活性。已发现乳腺癌细胞、多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞、子宫内膜癌细胞和卵巢癌细胞对M2698特别敏感。M2698在体内穿过血脑屏障。

蛋白激酶构成了一大类结构上相关的酶，所述酶负责控制细胞内各式各样的信号转导过程(Hardie,G.和Hanks,S.(1995)The Protein Kinase Facts Book.I and II,Academic Press,San Diego,CA)。激酶可根据它们磷酸化的底物(例如蛋白-酪氨酸、蛋白-丝氨酸/苏氨酸、脂质等等)而被分类成家族。已经鉴定了通常对应于这些激酶家族的每一个的序列基序(例如Hanks,S.K.,Hunter,T.,FASEB J.,9:576-596(1995)；Knighton等人，Science,253:407-414(1991)；Hiles等人，Cell,70:419-429(1992)；Kunz等人，Cell,73:585-596(1993)；Garcia-Bustos等人，EMBO J.,13:2352-2361(1994))。蛋白激酶可通过其调节机制进行表征。这些机制包括例如自磷酸化、通过其他激酶的转磷酸化、蛋白-蛋白相互作用、蛋白-脂质相互作用以及蛋白-多核苷酸相互作用。单个蛋白激酶可通过多于一种机制进行调节。激酶通过向靶蛋白添加磷酸基团来调节许多不同的细胞过程，包括但不限于增殖、分化、凋亡、运动、转录、翻译和其他信号传导过程。这些磷酸化事件充当可调控或调节靶蛋白的生物学功能的分子开启/关闭开关。靶蛋白的磷酸化响应于各种细胞外信号(激素、神经递质、生长和分化因子等等)、细胞周期事件、环境或营养压力等等而发生。适当的蛋白激酶在信号传导通路中起作用，以(直接或间接地)激活或灭活例如代谢酶、调节蛋白、受体、细胞骨架蛋白、离子通道或泵或者转录因子。由于蛋白磷酸化控制缺陷的不受控信号传导已牵涉许多疾病，包括例如炎症、癌症、过敏/哮喘、免疫系统疾病和病况、中枢神经系统疾病和病况以及血管生成。

P70S6K抑制

蛋白激酶70S6K，70kDa的核糖体蛋白激酶p70S6K(也被称为SK6、p70/p85 S6激酶、p70/p85核糖体S6激酶和pp70S6K)为AGC蛋白激酶亚家族的成员。p70S6K为丝氨酸-苏氨酸激酶，其为磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/AKT通路的组分。p70S6K为PI3K的下游，并且激活响应于众多促细胞分裂原、激素和生长因子，通过许多位点处的磷酸化而发生。p70S6K活性还受含mTOR复合物(TORC1)的控制，因为雷帕霉素发挥作用以抑制p70S6K活性。p70S6K由PI3K下游靶标Akt和PKC调节。Akt直接磷酸化和灭活TSC2，从而激活mTOR。另外，对被渥曼青霉素(Wortmannin)而不被雷帕霉素抑制的p70S6K突变体等位基因的研究表明，Pl3K通路可对p70S6K展现出独立于mTOR活性调节的效应。酶p70S6K通过S6核糖体蛋白磷酸化来调控蛋白合成。S6磷酸化与编码翻译装置的组分的mRNA的翻译增加相关，所述组分包括核糖体蛋白和翻译延伸因子，其表达增加对细胞生长和增殖至关重要。这些mRNA在其5'转录起始处含有寡嘧啶片段(被称为5'TOP)，这已显示在翻译水平上对其调节至关重要。

除了其在翻译中的参与，p70S6K激活还已牵涉细胞周期控制，神经元细胞分化，细胞运动调节以及在肿瘤转移、免疫应答和组织修复中重要的细胞应答。对p70S6K的抗体消除了促有丝分裂应答驱动的大鼠成纤维细胞向S期的进入，指示了p70S6K功能对细胞周期中从G1向S期的进展至关重要。此外，雷帕霉素在细胞周期的G1至S期抑制细胞周期增殖已被鉴定为抑制p70S6K的过度磷酸化、激活形式产生的结果。

p70S6K在肿瘤细胞增殖和保护细胞免于凋亡中的作用基于其参与肿瘤组织中的生长因子受体信号转导、过表达和激活而得到支持。例如，RNA印记和蛋白质印记分析分别揭示了PS6K基因扩增伴随mRNA和蛋白表达的相应增加(Cancer Res.(1999)59:1408-11-Localization of PS6K to Chromosomal Region 17q23 and Determination of ItsAmplification in Breast Cancer)。

在用上游激酶mTOR的抑制剂CCI-779(雷帕霉素酯)治疗的肾癌患者中观察到p70S6K激活的临床抑制。报道了疾病进展和p70S6K活性抑制之间显著的线性关联。

响应于能量应激，肿瘤遏制物LKB1激活AMPK，其使TSC1/2复合物磷酸化并使其能够灭活mTOR/p70S6K通路。LKB1中的突变引起黑斑息肉综合征(Peutz-Jeghers syndrome,PJS)，其中患有PJS的患者发展癌症的可能性是一般人群的15倍。另外，1/3的肺腺癌带有失活的LKB1突变。

被描述为适合于p70S6K抑制的化合物在WO 03/064397、WO 04/092154、WO 05/054237、WO 05/056014、WO 05/033086、WO 05/117909、WO 05/039506、WO 06/120573、WO06/136821、WO 06/071819、WO 06/131835、WO 08/140947、WO 10/093419、WO 12/013282和WO 12/069146中公开。

已显示，不止抑制p70S6K还抑制激酶Akt的同工型1和3(PI3K通路中p70S6K的上游)的M2698提供更有效的PI3K通路关停(Choo AY,Yoon SO,Kim SG,Roux PP,BlenisJ.Proc.Natl Acad Sci U S A.2008Nov 11；105(45):17414-9.)，并允许捕获任何Akt反馈循环激活(Tamburini等人，Blood 2008；111:379–82)。

PI3K/Akt/mTOR通路(PAM)的抑制因Akt反馈循环随后的上调而受阻(O'Reilly KE等人，Cancer Res.2006；66(3):1500-1508)。p70S6K和Akt1/3的选择性双重抑制剂M2698阻断Akt反馈循环下游的信号传导；因此，与诸如mTOR抑制剂等PAM通路单节点抑制剂相比较，M2698可改善临床功效。M2698在人类GBM的正位移植模型中减少肿瘤生长并延长生存期(Machl A等人，Am J Cancer Res.2016；6(4):806-818)。

本发明具有找到进一步增进M2698的药学实用性的方式的目的。在此背景下，在体内研究了作为双重组合的M2698与MEK激酶的抑制剂的组合，和作为三重组合的另外与EGFR的抑制剂的组合，以及作为双重组合的M2698与EGFR的抑制剂组合。

MEK抑制

促细胞分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路在多种细胞活动的调节中起关键作用，包括细胞增殖、生存、分化和运动(Karin L.C.M.Nature.2001；410:37–40)。MAPK通路的失调发生在所有恶性肿瘤中的多于三分之一中。经典MAPK通路由Ras(在所有动物细胞谱系和器官中表达的相关蛋白家族)、Raf(逆转录病毒致癌基因相关的三种丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶的家族)、MEK(促细胞分裂原激活的蛋白激酶激酶)和ERK(细胞外信号调节的激酶)组成，它们通过胞质信号传导序贯地将在细胞表面受体处产生的增殖信号转送至核内。MEK抑制剂靶向Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路，抑制细胞增殖并诱导凋亡。因此，其在临床使用方面具有潜力用于癌症治疗，特别是用于那些由RAS/RAF功能障碍诱导的癌症(Leonard J.T.等人，J.Hematol.Oncol.2016；9:31.doi:10.1186/s13045-016-0258-1)。

由于该通路在众多赘生物中的广泛激活，MEK抑制剂已在各种临床情况下作为一类单一疗法或与其他靶向药物及细胞毒性药物的组合疗法处于开发和研究的过程中。最近，与免疫检查点抑制剂的使用的组合已成为用于一些癌症的有效治疗，扩大了该类药剂的功效(Thompson N.等人，Curr.Opin.Pharmacol.2005；5:350–356)。

处于临床开发下和/或由监管当局批准的MEK抑制剂的实例包括曲美替尼、考比替尼、司美替尼、瑞法替尼和pimasertib。Pimasertib为N-(2,3-二羟基-丙基-3-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)-异烟酰胺，并已在WO2006045514(实施例115)中描述。

令人惊讶地，本专利申请的发明人已发现M2698在与MEK抑制剂组合时以协同作用方式起作用。

EGFR抑制

表皮生长因子受体为ErbB受体家族的成员，四种密切相关的受体酪氨酸激酶的亚家族：EGFR(ErbB-1)、HER2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)和Her 4(ErbB-4)。在许多癌症类型中，影响EGFR表达或活性的突变可导致癌症(Zhang H等人，The Journal of ClinicalInvestigation.117(8):2051–8)。表皮生长因子和其受体是由范德堡大学(VanderbiltUniversity)的Stanley Cohen发现的。Cohen与Rita Levi-Montalcini因他们发现生长因子而共享了1986年诺贝尔医学奖。人体中EGFR和其他受体酪氨酸激酶的信号传导缺陷与诸如阿尔茨海默等疾病相关，而过表达则与多种多样的肿瘤的发展相关。通过阻断在受体的细胞外结构域上的EGFR结合位点或通过抑制细胞内酪氨酸激酶活性来中断EGFR信号传导，可预防表达EGFR的肿瘤的生长并改善患者的病况。

处于临床开发下和/或由监管当局批准的EGFR抑制剂的实例包括吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、布加替尼、埃克替尼、奥希替尼和西妥昔单抗(嵌合(小鼠/人类)单克隆抗体，被用于治疗转移性结直肠癌和头颈癌)。

令人惊讶地，本专利申请的发明人已发现M2698在与MEK抑制剂和任选地另外的EGFR抑制剂组合时，或在与EGFR抑制剂单独组合时，以协同作用方式起作用。

附图说明

图1：在GSC系中的体外分析。(A)蛋白表达的蛋白印迹分析；(B)M2698的IC50；(C)pimasertib的IC50；和(D)用M2698、pimasertib或M2698+pimasertib组合治疗后凋亡的GSC11、GSC7-2和GSC17细胞。单一药剂在其IC50下测试；使用每种化合物IC50的一半用于组合。

图2：在用媒介物、M2698、pimasertib或M2698+pimasertib组合治疗后，正位GSC异种移植模型中的(A)肿瘤体积和(B)中位生存期。

图3：在用媒介物对照、M2698、pimasertib或M2698+pimasertib组合治疗后，GSC17和GSC7-2异种移植模型中的(A)pS6表达、(B)pERK表达和(C)Ki-67表达。

图4：NSCLC脑转移PDX模型

图5：Her2+/HR-乳腺癌PDX模型

图6：12个胆管癌PDX模型中的M2698和Pimasertib组合

图7：在CRC的75个PDX模型中的M2698、Pimasertib和西妥昔单抗(单一药剂组)

图8：在CRC的75个PDX模型中的M2698、Pimasertib和西妥昔单抗(双重组合)

图9：在CRC的75个PDX模型中的M2698、Pimasertib和西妥昔单抗(三重组合)

图10：在SCCHN的38个PDX模型中的M2698和西妥昔单抗(双重组合)

具体实施方式

本发明涉及用于预防和/或治疗癌症的方法，其包含向受试者施用M2698和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物、MEK抑制剂和任选地EGFR抑制剂。

M2698和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物和(一种或多种)其他活性成分可同时或序贯施用。当同时施用时，M2698和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物和MEK抑制剂可作为化合物混合物在一种药物组合物中施用或作为分开的药物组合物施用。

在优选的实施方案中，根据本发明的方法包含使用M2698和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物、MEK抑制剂和任选地EGFR抑制剂，序贯施用。

本发明特别涉及用于预防和/或治疗选自结直肠癌、乳腺癌(特别是Her2+/HR-型)、胆管癌、GBM、SCCHN和NSCLC(特别是NSCLC的脑转移)的肿瘤的方法。

此外，本发明涉及药物组合物，其包含活性药物成分(API)M2698及其生理学上可接受的盐和溶剂合物，以及MEK抑制剂及生理学上可接受的盐和溶剂合物的化合物混合物。

适合的酸加成盐为所有生理学或药学上可接受的酸的无机或有机盐，例如卤化物特别是盐酸盐或氢溴酸盐、乳酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、草酸盐、乙酸盐、磷酸盐、甲基磺酸盐、苯甲酸盐或对甲苯磺酸盐。

M2698和MEK抑制剂的溶剂合物被认为是指惰性溶剂分子到M2698上的加合物，其由于它们相互的吸引力而形成。溶剂合物为例如水合物，诸如一水合物或二水合物，或者醇化物，即与醇类(例如与甲醇或乙醇)的加成化合物。

M2698的优选的盐形式为其游离碱。还优选的是其盐酸盐、二盐酸盐、甲磺酸盐、琥珀酸盐或丙二酸盐。

表达“有效量”表示在组织、系统、动物或人类中引起生物学或医学应答的药品或药物活性成分的量，所述应答为例如由研究者或医师所寻求或期望的。

另外，表达“治疗有效量”表示与未接受该量的相应受试者相比具有以下结果的量：改善疾病、综合征、病况、不适、病症的治疗、治愈、预防或消除，或者预防副作用，或者还有减少疾病、病况或病症的进展。术语“治疗有效量”还涵盖对提高正常生理功能有效的量。

根据本发明的药物组合物包含两种API的混合物，例如呈1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:10、1:100或1:1000的比率。

药物组合物进一步包含至少一种固体、液体和/或半液体赋形剂或辅助剂。因此，本发明还涉及包含所述根据本发明的API混合物和所述赋形剂和/或辅助剂的药物组合物。

此外，本发明涉及所述药物组合物用于制备用于治疗癌症的药品的用途。

本发明还涉及由分别包装的以下组成的套装(试剂盒)：

(a)包含有效量的M2698的药物组合物，

(b)包含有效量的MEK抑制剂的药物组合物，以及任选地，

(c)包含有效量的EGFR抑制剂的药物组合物。

本发明还涉及由分别包装的以下组成的套装(试剂盒)：

(a)包含有效量的M2698的药物组合物，和

(b)包含有效量的EGFR抑制剂的药物组合物。

套装包含适合的容器，诸如盒、单独的瓶、袋或安瓿。套装可例如包含分开的安瓿，每个安瓿含有呈溶解或冻干形式的包含有效量的M2698和/或其药学上可用的盐的药物组合物、包含有效量的MEK抑制剂和/或其药学上可用的盐的药物组合物以及任选的包含有效量的EGFR抑制剂的药物组合物。

与M2698结合的特别优选的脑穿透性MEK抑制剂为pimasertib。与M2698结合(伴随或不伴随MEK抑制剂)的特别优选的EGFR抑制剂为西妥昔单抗。特别优选的三重组合为M2698+pimasertib+西妥昔单抗。

根据本发明的化合物和化合物混合物可适应于经由任何合乎期望的适合的方法施用，例如通过口服(包括口颊或舌下)、直肠、鼻腔、局部(包括口颊、舌下或透皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)方法。此类药品可使用药学领域已知的所有方法通过例如将活性成分与(一种或多种)赋形剂或(一种或多种)辅助剂结合来制备。

适应于口服施用的化合物和化合物混合物可作为分开的单位施用，所述单位例如胶囊或片剂；粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；可食用泡沫或泡沫食品；或者水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。

因此，例如在以片剂或胶囊形式口服施用的情况下，化合物或化合物混合物可与诸如乙醇、甘油、水等等口服无毒且药学上可接受的惰性赋形剂组合。粉末通过以下来制备：将化合物粉碎成适合的精细大小并将其与以类似方式粉碎的药学赋形剂混合，所述赋形剂例如可食用碳水化合物，例如淀粉或甘露醇。同样地，可存在风味剂、防腐剂、分散剂和染料。

胶囊通过制备如上所述的粉末混合物并用其填充成型明胶壳来产生。在填充操作前可向粉末混合物添加助流剂和润滑剂，例如高度分散的硅酸、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或呈固体形式的聚乙二醇。同样地，可添加崩解剂或增溶剂，例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以便改善化合物或化合物混合物在胶囊被服用后的可用性。

另外，如果期望或必要，同样地可将适合的粘合剂、润滑剂和崩解剂以及染料掺入混合物中。适合的粘合剂包括淀粉；明胶；天然糖类，例如葡萄糖或β-乳糖；由玉米制成的甜味剂；天然和合成橡胶，例如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠；羧甲基纤维素；聚乙二醇；蜡等等。用于该剂型的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等等，但不限于此。片剂通过例如以下来配制：制备粉末混合物，将混合物造粒或干压，添加润滑剂和崩解剂以及压制整个混合物以得到片剂。粉末混合物通过以下来制备：如上所述，将以适合的方式粉碎的化合物与以下混合：与稀释剂或碱，以及任选地与粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮；溶解延迟剂，例如石蜡；吸收加速剂，例如季盐；和/或吸收剂，例如膨润土、高岭土或磷酸二钙。粉末混合物可通过以下来造粒：用粘合剂例如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶浆(acadia mucilage)或者纤维素或聚合物材料的溶液将其润湿，并将其挤压通过筛。作为造粒的替代方式，可将粉末混合物运行通过压片机，得到形状不一的块状物，其被破碎以形成颗粒。可通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来润滑颗粒，以便防止粘在片剂铸模上。然后压制经润滑的混合物以得到片剂。根据本发明的化合物和化合物混合物还可与自由流动的惰性赋形剂结合，并然后直接进行压制以得到片剂，而无需进行造粒或干压步骤。可存在由虫胶密封层、糖或聚合物材料层和蜡的光泽层组成的透明或不透明的保护层。可将染料添加至这些包衣，以便使得能够在不同剂量单位之间进行区分。

口服液体，例如溶液、糖浆剂和酏剂，可以剂量单位形式制备，从而使得给定数量包含预先指定的量的化合物。糖浆剂可通过将化合物和化合物混合物溶解于具有适合风味的水性溶液中来制备，而酏剂是使用无毒醇类媒介物制备的。悬浮液可通过化合物分散在无毒媒介物中来配制。可类似地添加增溶剂和乳化剂，例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚；防腐剂；风味添加剂，例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其他人工甜味剂等等。

如果期望，可将用于口服施用的剂量单位制剂封装在微胶囊中。制剂还可以这样的方式制备，使得释放被延长或延迟，例如通过将颗粒材料包衣或包埋在聚合物、蜡等等中。

根据本发明的化合物和化合物混合物及其盐和溶剂合物也可以脂质体递送系统形式施用，例如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡。脂质体可形成自各种磷脂质，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。

根据本发明的化合物和化合物混合物也可使用单克隆抗体作为化合物分子与之偶联的单独的载剂来进行递送。化合物和化合物混合物还可偶联至作为靶向的药品载剂的可溶性聚合物。此类聚合物可涵盖聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰-氨基苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚或聚氧化乙烯聚赖氨酸，由棕榈酰自由基取代。此外，化合物可偶联至一类适合于实现药品受控释放的可生物降解的聚合物，例如聚乳酸、聚-ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二羟基吡喃、聚氰基丙烯酸酯以及水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。

适应于透皮施用的化合物和化合物混合物可作为独立的贴膏剂施用，用于与接受者表皮的长时间紧密接触。因此，例如，活性成分可通过离子电渗法从贴膏剂中递送，如在Pharmaceutical Research,3(6):318,1986的一般款项中所述。

适应于局部施用的化合物和化合物混合物可被配制为油膏剂、乳膏剂、悬浮液、洗剂、粉末、溶液、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。

为了治疗眼或其他外部组织，例如嘴和皮肤，制剂优选作为局部油膏剂或乳膏剂应用。在进行配制以得到油膏剂的情况下，化合物或化合物混合物可与石蜡族或水混溶性乳膏剂基质一起被采用。或者，可配制化合物或化合物混合物以得到具有水包油乳膏剂基质或油包水基质的乳膏剂。

适应于局部应用至眼部的化合物和化合物混合物包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮于适合的载剂，特别是水性溶剂。

适应于局部应用至嘴部的化合物和化合物混合物涵盖锭剂、含片剂和漱口剂。

适应于直肠施用的化合物和化合物混合物可以栓剂或灌肠剂形式施用。

其中载剂物质为固体的适应于鼻腔施用的化合物和化合物混合物包含具有例如在20-500微米范围内的粒径的粗粉末，其以其中吸入鼻烟的方式施用，即通过从放在靠近鼻子处的含有粉末的容器中经由鼻道快速吸入。具有液体作为载剂物质的用于作为喷鼻剂或滴鼻剂施用的适合的制剂涵盖在水或油中的活性成分溶液。

适应于通过吸入施用的化合物和化合物混合物涵盖细颗粒粉或雾，其可通过各种类型的具有气雾剂、雾化器或吹药器的加压分配器产生。

适应于阴道施用的化合物和化合物混合物可作为阴道栓剂、卫生棉、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾制剂施用。

适应于肠胃外施用的化合物和化合物混合物包括水性和非水性无菌注射溶液，其包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，通过这些使得制剂与待治疗的接受者的血液等渗；以及水性和非水性无菌悬浮液，其可包含悬浮液介质和增稠剂。制剂在单剂或多剂容器例如密封的安瓿和小瓶中施用，并以冷冻干燥(冻干)状态储存，因此只需在使用前立即添加无菌载剂液体，例如注射用水。根据配方配制的注射溶液和悬浮液可制备自无菌粉末、颗粒和片剂。

不言而喻，除了以上特别提到的组成要素之外，根据本发明的药品还可包含本领域中对于特定类型的药物制剂常见的其他药剂；因此，例如，适合于口服施用的化合物或化合物混合物可包含风味剂。

本发明的化合物或化合物混合物的治疗有效量取决于许多因素，包括例如接受者的年龄和体重、需要治疗的确切病况及其严重程度、制剂的性质以及施用方法，并且最终由治疗的医生或兽医确定。然而，根据本发明用于治疗疾病的API的有效量通常在0.1-100mg/kg接受者(哺乳动物)体重/天的范围内，并且特别是一般在1-10mg/kg体重/天的范围内。因此，对于重量为70kg的成年哺乳动物，每天的实际量经常介于70-700mg之间，其中该量可作为每天的单独剂量施用，或更经常地以每天的一系列部分剂量(例如二个、三个、四个、五个或六个)施用，以使得每日总剂量相同。盐或溶剂合物有效量或者其生理功能性衍生物的有效量可被确定为根据本发明的化合物和化合物混合物本身的有效量的分数。

可采用根据本发明的药物制剂作为人类和兽医的药品。适合的赋形剂为适合于肠胃内(例如口服)、肠胃外或局部施用且不与新型化合物反应的有机或无机物质，例如水、植物油、苯甲醇、聚乙二醇、明胶、碳水化合物诸如乳糖或淀粉、硬脂酸镁、滑石或凡士林。适合于肠胃内施用的特别是片剂、包衣片剂、胶囊、糖浆剂、果汁、滴剂或栓剂，适合于肠胃外施用的为溶液，优选为油基或水性溶液，此外还有悬浮液、乳剂或植入物，并且适合于局部应用的为油膏剂、乳膏剂或粉末。化合物和化合物混合物还可为冻干的，并且所得冻干剂用于例如注射制剂的制备。

所述制剂可被灭菌和/或包含辅助剂，诸如润滑剂、防腐剂、稳定剂和/或润湿剂、乳化剂、用于改变渗透压的盐、缓冲物质、染料、风味剂和/或芳香物质。如果期望，它们还可包含一种或多种进一步的活性成分，例如一种或多种维生素。

本发明还涉及用于预防和/或治疗癌症尤其是头颈鳞状细胞癌(SCCHN)的方法，其包含向受试者施用M2698和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物，和EGFR抑制剂尤其是西妥昔单抗，以及相应的化合物混合物、药物组合物、制剂和施用方式，如本文在上面所述。

在某些实施方案中，本发明涉及：

1.化合物混合物，其包含4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐，以及MEK的抑制剂或其生理学上可接受的盐。

2.如上文在本实施方案详述中所述的化合物混合物，其中所述MEK抑制剂为pimasertib。

3.如上文在本实施方案详述中所述的化合物混合物，其进一步包含EGFR抑制剂

4.药物组合物，其包含如上文在本详述中所述的化合物混合物，以及任选地，赋形剂和/或辅助剂。

5.套装(试剂盒)，其包含分别包装的(a)有效量的4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐和(b)有效量的MEK抑制剂或其生理学上可接受的盐。

6.如上文在本实施方案详述中所述的套装(试剂盒)，其进一步包含分别包装的(c)有效量的EGFR抑制剂或其生理学上可接受的盐。

7.如上文在本实施方案详述中所述的套装(试剂盒)，其中EGFR抑制剂为西妥昔单抗。

8.用于预防或治疗癌症的方法，其包含向受试者施用4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐，以及MEK抑制剂或其生理学上可接受的盐。

9.如上文在本实施方案详述中所述的方法，其中MEK抑制剂为pimasertib。

10.如上文在本实施方案详述中所述的方法，其进一步包含向受试者施用EGFR抑制剂或其生理学上可接受的盐。

11.如上文在本实施方案详述中所述的方法，其中EGFR抑制剂为西妥昔单抗。

12.如上文在本实施方案详述中所述的方法，其中4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺、MEK抑制剂和任选的EGFR抑制剂同时施用。

13.如上文在本实施方案详述中所述的方法，其中4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺、MEK抑制剂和任选的EGFR抑制剂序贯施用。

14.化合物混合物，其包含4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐以及EGFR的抑制剂，优选为西妥昔单抗。

15.套装(试剂盒)，其包含分别包装的(a)有效量的4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐以及(b)有效量的EGFR抑制剂，优选为西妥昔单抗。

16.用于预防或治疗癌症的方法，其包含向受试者施用4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐，以及EGFR抑制剂，优选为西妥昔单抗，其中两种药剂同时或序贯施用。

17.在优选的实施方案中，癌症为结直肠癌、乳腺癌、胆管癌、多形性胶质母细胞瘤、头颈鳞状细胞癌和非小肺癌。

实施例

实施例1：患者来源的胶质母细胞瘤(GBM)的异种移植模型(PDX)中M2698和Pimasertib的组合

GSC系：体外对M2698和Pimasertib的敏感性

尽管M2698在一些GBM模型中的作用为显著的，但应答为相对温和的。由于PAM和MAPK通路均参与GBM，因此体内和体外将M2698与脑穿透性MEK抑制剂pimasertib19 GSC(胶质母细胞瘤干细胞)细胞/模型结合。

使用体外IC50数据选择用于体内研究的GSC系；IC50值<2μM被认为是敏感的而>2μM被认为是抗性的。所有GSC系均表达Akt。与GSC272和GSC267相比较，在GSC17、GSC7-2、GSC231、GSC11、GSC20、GSC6-27和GSC8-11系中pAkt表达相对较高(图1A)。除了GSC20，具有相对更高的pAkt表达的细胞系对M2698敏感，表明组成型Akt激活使细胞对M2698敏感(图1B)。较少细胞系(GSC17、GSC11和GSC231)对pimasertib敏感(IC50<2μM)，而GSC20、GSC272、GSC6-27和GSC7-2为抗性的(图1C)。

在对M2698敏感的五个GSC系中的三个中测量了由M2698、pimasertib和组合对凋亡的诱导。当然，GSC11为对pimasertib最敏感的，GSC17中度敏感，而GSC7-2对pimasertib不敏感。在GSC11、GSC17和GSC7-2系中作为单一疗法施用的M2698和pimasertib两者均诱导凋亡，尽管对于各化合物，在IC50下(分别为56％、11％、13％)相对于在2×IC50下(分别为62％、12％、17％)在凋亡百分比方面没有明显差异。与单独的单个药剂相比较，M2698+pimasertib在凋亡的诱导方面具有相加性(GSC11和GSC7-2系)或明显的协同作用(GSC17系)(图1D)。

M2698和Pimasertib在正位GSC异种移植模型中的体内功效和PD作用

在正位移植至小鼠体内后，在GSC模型中评价单独的及组合的M2698和pimasertib的体内作用。移植后治疗持续期间和安乐死时间为5–10周。终点为表达PD标志物pS6和pERK、增殖标志物Ki67、如通过TUNEL所测量的凋亡、肿瘤体积以及生存期。

七个GSC模型中，除了一个(GSC20)之外，其他所有均对M2698单一疗法敏感，如通过肿瘤体积测量的；M2698还显著抑制肿瘤生长(GSC17、GSC6-27、GSC7-2、GSC272、GSC231；所有P<0.05；图2A)或是具有这样的趋势(GSC11，P＝0.10)。在六个对M2698敏感的模型中，五个响应于pimasertib单一疗法，或是伴随显著的肿瘤生长抑制(GSC6-27、GSC7-2、GSC272；P<0.05)或是伴随朝向显著应答的趋势(GSC231 P＝0.10)。GSC17的肿瘤生长不受单独的pimasertib的影响(与媒介物相比较P＝0.34)。与媒介物相比较，M2698+pimasertib在所有GSC模型均显著抑制肿瘤生长，即使是在GSC20中也如此(所有P<0.05；图2A)，所述GSC20的肿瘤生长并未响应于单一疗法治疗(P>0.05)。

GSC模型的中位生存期并不完全反映肿瘤体积数据。(图1B)。与媒介物相比较，M2698(GSC272和GSC231)和组合(GSC17和GSC7-2)在仅两个模型中各自延长生存期(P<0.05)，而Pimasertib相对于对照在任何模型中均对生存期没有显著作用(P>0.05)。在GSC6-27中，出于未知的原因，媒介物治疗的小鼠比来自治疗组的小鼠具有显著更长的中位生存期(P<0.05)。相比之下，两种单一疗法均在一些模型中显著抑制肿瘤生长，而组合在每个模型中均抑制肿瘤生长。

对肿瘤体积的显著作用指示了该化合物进入脑并影响正位生长的肿瘤。BBB穿透的另外证据包括对肿瘤细胞中靶向的信号传导通路的PD标志物的作用。M2698显著减少除了GSC20之外所有GSC模型的正位肿瘤中的pS6(P<0.05；图3A)。类似地，pimasertib治疗对pERK蛋白的显著作用未见于GSC20肿瘤中(P＝0.18)，然而pimasertib显著减少其他GSC肿瘤中的pERK(P<0.05；图3B)，包括在pimasertib治疗后并未经历肿瘤体积减少的GSC17。M2698+pimasertib组合在除了GSC20之外的所有模型中减少pS6和pERK(所有P<0.05)。在GSC20模型的媒介物治疗的小鼠中，肿瘤生长、pS6和pERK中相对较高的变化可能掩盖了这些终点的生物学相关治疗作用的统计学显著性。相反地，显著应答的缺乏由GSC20在体外对两种化合物的不敏感性来预测(图1B和图1C).

除了在正位脑模型中pimasertib对pERK的作用和M2698对pS6的作用之外，各个M2698也能够影响相反的PD标志物。pimasertib在GSC272和GSC231模型中显著减少pS6。M2698在除了GSC20的所有GSC模型中减少pERK(P<0.05；图3B)。

在多于一个时间点对三个GSC肿瘤的PD标志物进行了分析。尽管未进行跨时间的对应答的统计学分析，但评估了在不同终点中的趋势。pS6-阳性细胞的百分比在GSC7-2和GSC272肿瘤而非GSC231肿瘤中随时间推移增加，而pERK仅在GSC7-2肿瘤中随时间推移增加(图3)。在GSC272和GSC231模型中，通过pimasertib的pS6的交叉通路减少从7.5–10周起减少，并且在GSC231模型中，化合物对pERK表达(单独的或组合的)活性从7.5–10周起减少。这些趋势是否涉及抗性的发展将需要另外的研究，但它们反映了模型的异质性。

在来自GSC17和GSC7-2的肿瘤切片中(在这两个模型中M2698+pimasertib组合显著延长生存期)，通过免疫组化测量了Ki67(图3C)。在GSC17模型中，与媒介物相比较，所有三种治疗均显著减少增殖，在GSC7-2模型中，M2698单一疗法和其与pimasertib的组合也是如此(所有P<0.05)。

在7.5周时，M2698、pimasertib或组合治疗在GSC7-2异种移植中相对于对照均未显著影响凋亡。然而10周后，类似于体外数据，与对照(8.50±1.80；P＝0.002)、单独的M2698(52.17±25.20；P＝0.01)和单独的pimasertib(65.00±60.80；P＝0.02)相比较，M2698+pimasertib组合显著增加凋亡细胞数目/视野(172.33±60.80)。

实施例2：在患者来源的非小肺癌(NSCLC)脑转移的异种移植模型(PDX)中M2698和Pimasertib的组合

如图4中可见，M2698与pimasertib的组合出乎意料地显示出26％的肿瘤控制率(TCR)，而单一药剂显示出5％(M2698)和16％

(pimasertib)。

实施例3：在患者来源的Her2+/HR-乳腺癌的异种移植模型(PDX)中M2698和Pimasertib的组合

如图5中可见，M2698与pimasertib的组合出乎意料地在试验持续期间将肿瘤体积减小至几乎为零，而单一药剂仅实现了肿瘤体积的停滞。

实施例4：在患者来源的胆管癌的异种移植模型(PDX)中M2698和Pimasertib的组合

本实验的目的为在免疫缺陷的小鼠中评估单独的M2698和与Pimasertib的组合在一组13个患者来源的异种移植模型中的抗肿瘤活性，所述模型代表源自中国患者的人类胆管癌。模型的Her2状态经由免疫组化(IHC)获得，并展示于图6中。

研究设计

媒介物：在Milli-Q水中的0.5％甲基纤维素(Methocel)/0.25％吐温20。当达到介于300-500mm³之间的肿瘤体积时，收集来自三只未治疗小鼠的肿瘤作为附属样本。

如从图6可知的，令人惊讶地，用M2698和pimasertib在12个肿瘤样本中的10个(83％)中实现了肿瘤停滞，而单一药剂显示17％(2/12，M2698)和8％(1/12，pimasertib)。在本实验的任一治疗中均未观察到肿瘤生长应答或甚至消退。

实施例5：在75个患者来源的结直肠癌的异种移植模型(PDX)中M2698、Pimasertib和西妥昔单抗的组合

研究设计

在75个模型中，25个为野生型、25个为KRas突变体且25个为BRaf突变体。

结果

如图7显示，对于单一药剂，肿瘤控制率(TCR)对M2698为15％(11/74)，对Pimasertib为32％(24/74)以及对西妥昔单抗为21％(15/73)。

如图8显示，对于双重组合，TCR对Pimasertib+西妥昔单抗为59％(44/74)，以及对M2698+西妥昔单抗为35％(26/74)，并且出乎意料地，对M2698+Pimasertib为63％(45/72)。

如图9显示，对于三重组合，令人惊讶地，TCR为78％(58/74)，其再次显著高于双重组合的TCR。

实施例6：38个患者来源的SCCHN的异种移植模型(PDX)中M2698和西妥昔单抗的组合

46个SCCHN PDX模型以1+1方案(一只小鼠/治疗组)运行。取消了8个模型，因为该模型未能生长。伴随对取消的调整，完成了38个模型。在“1+1”筛选(即一只小鼠/治疗/模型)中，在所有单一疗法和组合中M2698与标准护理(SoC)药剂顺铂和西妥昔单抗一起施用。植入后，当对于每个模型平均肿瘤体积达到～200mm³时，治疗开始。对每个模型测量肿瘤体积，直至对照肿瘤达到～1200mm³，此时该模型的所有动物均被安乐死。

研究设计

结果

如上表和图10显示，对于组合，TCR为58％(22/38)，这是在这种难以治疗的癌症类型中单一药剂的TCR的出乎意料的改善。

Claims

2.根据权利要求1的化合物混合物，其中所述MEK抑制剂为pimasertib。

3.根据权利要求1或2的化合物混合物，其进一步包含EGFR抑制剂。

4.药物组合物，其包含根据权利要求1-2中任一项的化合物混合物以及任选的赋形剂和/或辅助剂。

5.套装(试剂盒)，其包含分别包装的

(a)有效量的4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐和

(b)有效量的MEK抑制剂或其生理学上可接受的盐。

6.根据权利要求5的套装(试剂盒)，其进一步包含分别包装的(c)有效量的EGFR抑制剂或其生理学上可接受的盐。

7.根据权利要求6的套装(试剂盒)，其中所述EGFR抑制剂为西妥昔单抗。

8.用于预防或治疗癌症的方法，其包含向受试者施用4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐以及MEK抑制剂或其生理学上可接受的盐。

9.根据权利要求8的方法，其中所述MEK抑制剂为pimasertib。

10.根据权利要求8或9的方法，其进一步包含向受试者施用EGFR抑制剂或其生理学上可接受的盐。

11.根据权利要求9的方法，其中所述EGFR抑制剂为西妥昔单抗。

12.根据权利要求8-11中任一项的方法，其中4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺、所述MEK抑制剂和任选的所述EGFR抑制剂同时施用。

13.根据权利要求8-11中任一项的方法，其中4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺、所述MEK抑制剂和任选的所述EGFR抑制剂序贯施用。

14.化合物混合物，其包含4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐以及EGFR的抑制剂。

15.根据权利要求14的化合物混合物，其中所述EGFR抑制剂为西妥昔单抗。

16.套装(试剂盒)，其包含分别包装的

(b)有效量的EGFR抑制剂。

17.根据权利要求16的套装(试剂盒)，其中所述EGFR抑制剂为西妥昔单抗。

18.用于预防或治疗癌症的方法，其包含向受试者施用4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺或其生理学上可接受的盐，以及EGFR抑制剂。

19.根据权利要求18的方法，其中所述EGFR抑制剂为西妥昔单抗。

20.根据权利要求18或19中任一项的方法，其中4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺和所述EGFR抑制剂同时施用。

21.根据权利要求18或19中任一项的方法，其中4-[(S)-2-氮杂环丁-1-基-1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-乙基氨基]-喹唑啉-8-羧酸酰胺和所述EGFR抑制剂序贯施用。

22.根据权利要求8-13或18-21中任一项的方法，其中所述癌症为结直肠癌、乳腺癌、胆管癌、多形性胶质母细胞瘤、头颈鳞状细胞癌和非小肺癌。