CN116456831A - 生物杀虫剂 - Google Patents

Abstract

地衣芽孢杆菌菌株(命名为“K‑357”)起杀虫剂的作用。出人意料的是，施用单一菌株地衣芽孢杆菌K‑357在体外减少了线虫孵化并增加了线虫死亡率，在棉花田间试验中减少了线虫数量并增加了植物活力和产量。比较了地衣芽孢杆菌K‑357处理的种子，垄沟施用涕灭威和氟吡菌酰胺，以及阿维菌素作为杀线虫剂处理的种子的杀线虫活性和棉花产量。地衣芽孢杆菌K‑357的杀线虫活性与化学处理相当，在某些情况下优于化学处理。用K‑357作为杀线虫剂处理的种子的棉花增产效果优于垄沟施用和用化学杀线虫剂处理的种子的棉花增产效果。用地衣芽孢杆菌K‑357联合化学杀虫剂和杀真菌剂处理的玉米种子在严重感染玉米根虫的玉米田间试验中减少了根节损伤。

Description

生物杀虫剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年8月6日提交的美国临时专利申请号63/061,906、2021年6月14日提交的美国临时专利申请号63/210,086和2021年6月25日提交的美国临时专利申请号63/215,239的优先权，所有这些专利申请通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明涉及微生物组合物用于控制植物病原性昆虫和提高农作物产量的用途。更具体地，本发明涉及将包含微生物菌株的组合物施用于植物、植物生长的种子或植物生长的环境。

背景技术

作物对气候变暖的反应表明，随着生长季节温度的升高，产量将会下降。Deutschet al.指出，害虫可能会加剧这种影响(C.Deutsch,et al.Dryad(2018)；https://dx.doi.org/10.5061/dryad.b7q3g2q)。昆虫已经消耗了5％到20％的主要谷物。作者的模型显示，对于三种最重要的谷物作物—小麦、水稻和玉米，气温每升高1摄氏度，昆虫造成的产量损失将增加10％至25％，这对温带地区的影响最大。这些发现提供了对全球粮食供应的进一步潜在气候影响的估计，并为未来的农作物、害虫和气候的相互作用的区域和特定领域研究提供了基准。

在美国玉米带，玉米根虫(条叶甲属(Diabrotica spp.))是威胁农民玉米产量的头号昆虫。多年来的研究估计，这些害虫每年造成的经济损失接近10亿美元。玉米根虫包括三种昆虫：西部玉米根虫、北部玉米根虫和南部玉米根虫。所有昆虫物种都具有生命周期的相似性，包括卵、幼虫、蛹和成虫四个阶段。它们各自产卵，孵化成幼虫(蠕虫)，以玉米植物的根部为食。

此外，由于马铃薯Y病毒(PVY)在世界范围内的分布和经济影响，其是茄科作物的十种最重要的植物病毒之一。控制PVY最有效的方法是避免病毒进入农田。但是一旦植物被感染，它一生都会被感染，并成为蚜虫传播PVY病毒的接种源。已经记载了大约65种蚜虫以不同程度的效率传播PVY病毒(Pelletier，Y et al.J.Econ.Entomol.105,1909-1914，doi:10.1603/ec12085(2012))。使用杀虫剂和园艺矿物油来控制蚜虫可以减少PVY在田地里的传播。尽管如此，PVY的大多数蚜虫介体并不寄居在马铃薯上，因此其不受内吸性杀虫剂的影响。商业上可获得的病毒抗性品种仅赋予对PVY的中等抗性。因此，有必要开发新的策略来控制PVY的季节性传播。

据估计，与害虫相比，植物寄生线虫每年造成的损失要大得多(Singh et al.，Procedia Environmental Sciences 29(2015)215-216)。由于这些微小的看不见的害虫，许多国家的农作物产量损失是巨大的。它们导致全球预计产量损失12.3％(1570亿美元)。种植者将害虫和其它限制因素视为生产问题，但忽略了植物寄生线虫。线虫病很难控制，因为它们具有隐蔽性，因此更容易被忽视。植物寄生线虫不仅单独造成损害，而且与其它微生物形成病害复合体，增加农作物损失。

有效保护农作物免受线虫侵害的化学标准是涕灭威(Aldicarb)，这是一种氨基甲酸酯类杀虫剂，是以前以商品名TEMIK出售的农药中的活性物质。欧洲禁止使用涕灭威，2010年，美国环境保护署(Environmental Protection Agency)禁止使用涕灭威，因为其毒性很高。一种名为AGLOGIC 15G的新涕灭威农药于2011年12月获得EPA批准，并于2015年开始进入市场。涕灭威是国际上使用最广泛的农药之一，也是对环境毒性最大的农药之一。农业径流中的涕灭威中毒导致健康的生态系统遭到破坏，肥沃的农田遭到不可逆转的毒害。

很大程度上由于希望替代合成肥料和化学农药以改善农作物健康和限制负面环境影响，近来对用于控制农业害虫的生物产品的兴趣增加了。研究表明了生物产品的经济效益和综合农作物管理系统的可靠性能。微生物产品是一类来源于天然微生物(例如细菌和真菌)的生物产品。这些产品是活的微生物菌株，可以用于播种、用于垄沟(in-furrow)或喷洒在农作物上，与植物一起生长，以防止病虫害，或提高植物的生产力和肥力。微生物产品有可能提供了可持续的、具有成本效益的解决方案，有助于增加产量，同时使用更少的投入。然而，在利用微生物防治植物害虫，尤其是防治线虫害虫方面，还有许多工作要做。

已经在综合线虫管理策略中使用的一系列细菌和真菌生物杀线虫剂(bionematicides)包括黑曲霉(Aspergillus niger)、淡紫拟青霉(Paecilomyceslilacinus)、哈茨木霉(Trichodeerma harzianum)、绿色木霉(T.viride)、厚垣普奇尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)、穿刺巴氏杆菌(Pasteuria penetrans)、荧光假单胞菌(Pseudomonas flurorescens)、坚固芽孢杆菌(Bacillus firmus)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、贝莱斯芽孢杆菌(B.velzensis)、莫海威芽孢杆菌(B.mojavensis)和枯草杆菌(B.subtilis)(Xiang et al.,Plant Disease(2017)101:774；Abd-Elgawad andAskary,Egyptian Journal of Biological Pest Control(2018)28:74)。在一个实例中，欧洲专利号EP2603086B1描述了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株DSM17231与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株DSM17236(以商品名NEMIX销售)联合用于控制植物线虫(phytonematodes)的用途。菌株的这种组合在抑制线虫运动方面显示出令人满意的效果，而对孵化的效果不显著，只有化学产品TEMIK能抑制孵化。另一个实例是用于控制土壤线虫的产品MELOCON WG(CERTIS USA)。MELOCON WG基于真菌淡紫拟青霉(Paecilomyceslilacinus)，淡紫拟青霉是普通植物感染线虫的所有发育阶段的寄生虫，尤其是卵和感染性幼体。

如上所述，许多微生物菌株已经被作为杀线虫剂进行了测试，并且几种生物杀线虫剂产品是可商购的。然而，现有的生物杀线虫剂和生物杀虫剂不足以解决植物寄生线虫和病原性昆虫对种植物的严重的世界性威胁。

因此，需要改进的微生物杀虫剂，以减少昆虫对农作物的损害，这些昆虫包括线虫、玉米根虫和蚜虫，它们是一些最棘手的昆虫，而没有化学杀虫剂的毒性作用。本公开提供了这种改进的微生物及其应用方法，以减少虫害并改善植物健康和农作物产量。

发明内容

在一个实施方案中，提供了控制植物虫害的方法，所述方法包括：将植物或植物种子种植在合适的生长环境中，所述植物或种子具有组合物的包衣或部分包衣，所述组合物包括：地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

在一个实施方案中，提供了控制植物虫害的方法，所述方法包括：向植物的种子、植物的枝叶、植物的根或植物周围的土壤或生长环境递送组合物，所述组合物包括：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

在一个实施方案中，提供了控制植物虫害的方法，所述方法包括：将植物或植物种子种植在合适的生长环境中，所述植物或种子具有组合物的包衣或部分包衣，所述组合物基本上由以下组成：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和一种或多种载体、赋形剂或营养物，其中所述组合物在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害，或两者兼有。

在一个实施方案中，提供了控制植物虫害的方法，所述方法包括：向植物的种子、植物的枝叶、植物的根、或植物周围的土壤或生长环境递送组合物，所述组合物基本上由以下组成：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物，以及一种或多种载体、赋形剂或营养物，其中所述组合物在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害，或两者兼有。

在一个实施方案中，提供了用于处理植物或植物种子的方法，包括向植物或植物种子施用组合物包衣，所述组合物包衣包含地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物，所述组合物任选地包含一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了具有组合物包衣的植物或植物种子，所述组合物包衣包含：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了用于处理植物或植物种子的方法，包括向植物或植物种子施用组合物包衣，所述组合物包衣包含地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物，所述组合物任选地包含一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了具有组合物包衣的植物或植物种子，所述组合物包衣包含：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了控制植物病原线虫的方法，所述方法包括将植物种子种植在合适的生长环境中，所述种子具有包衣，所述包衣包含：单一微生物菌株的生物纯培养物的孢子，所述单一微生物菌株是地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体；以及任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物、农作物保护剂、杀真菌剂、杀虫剂或杀线虫剂。地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原线虫存在下提高植物产量、提高植物对植物病原线虫的抗性、或减少植物病原线虫对植物的感染及其组合的量存在于种子中。

在一个实施方案中，提供了控制植物病原线虫的方法，所述方法包括向植物的种子、植物的根或植物周围的生长环境递送组合物，所述组合物包括：单一微生物菌株的生物纯培养物，所述微生物菌株是地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体；以及任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物、农作物保护剂、杀真菌剂、杀虫剂或杀线虫剂。在植物病原线虫存在的情况下，所述组合物的递送提高了植物产量，提高了植物对植物病原线虫的抗性，或减少了植物病原线虫对植物的感染，及其组合。

在一个实施方案中，提供了控制植物病原线虫的方法，所述方法包括向植物的种子、植物的根或植物周围的土壤或生长环境递送组合物，所述组合物基本上由以下组成：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；以及一种或多种载体、赋形剂或营养物。在植物病原线虫存在的情况下，所述组合物的递送提高了植物产量，提高了植物对植物病原线虫的抗性，或减少了植物病原线虫对植物的感染，及其组合。

在一个实施方案中，提供了处理种子的方法，所述方法包括向种子施用单一微生物菌株的生物纯培养物的包衣，所述微生物菌株是地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的其突变体，所述包衣任选地包括一种或多种载体、赋形剂、营养物、农作物保护剂、杀真菌剂、杀虫剂或杀线虫剂。地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原线虫存在下提高植物产量、提高植物对植物病原线虫的抗性、或减少植物病原线虫对植物的感染及其组合的量存在于经处理的种子上。

在一个实施方案中，提供了具有包衣的植物种子，所述包衣包括：单一微生物菌株的生物纯培养物，所述单一微生物菌株是地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体；以及任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物、农作物保护剂、杀真菌剂、杀虫剂或杀线虫剂。地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原线虫存在下提高植物产量、提高植物对植物病原线虫的抗性、或减少植物病原线虫对植物的感染及其组合的量存在于种子中。

在一个实施方案中，提供了用于改善植物健康和/或产量的组合物，所述组合物包括：i)地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；ii)大豆蛋白水解产物；iii)螯合的硫酸亚铁；和iv)任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

在一个实施方案中，提供了具有组合物包衣的植物或植物种子，所述组合物包衣包含：i)地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；ii)大豆蛋白水解产物；iii)螯合的硫酸亚铁；和iv)任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了处理植物或植物种子的方法，所述方法包括：向植物或植物种子施用组合物包衣，所述组合物包衣包含：i)地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；ii)大豆蛋白水解产物；iii)螯合的硫酸亚铁；和iv)任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害，或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了配制微生物农作物保护剂以改善植物健康和/或产量的方法，包括：一起加入大豆蛋白水解产物、螯合的硫酸亚铁和一种或多种微生物农作物保护剂的生物培养物，其中一种或多种微生物农作物保护剂以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害，或两者兼有的量存在于制剂中。

在一个实施方案中，提供了微生物农作物保护剂的制剂以改善植物健康和/或产量，包括：i)一种或多种微生物农作物保护剂的生物培养物；ii)大豆蛋白水解产物；iii)螯合的硫酸亚铁；和iv)任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或非微生物农作物保护剂，其中一种或多种微生物农作物保护剂以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

附图说明

图1是显示在大豆胞囊线虫(Heterodera glycines)、南方根结线虫(Meloidogyneincognita)和肾形线虫(Rotylenchulus reniformis)上体外施用不同剂量的地衣芽孢杆菌K-357孢子(0.02561L/ha-相当于50mL中含5.5×10⁶CFU；0.1428 5L/ha-相当于50mL中含2.75×10⁷CFU；0.333310L/ha-相当于50mL中含5.5×10⁷CFU)后10天的线虫孵化计数百分比的图。

图2A是未添加地衣芽孢杆菌K-357的线虫图像，显示了线虫卵、幼虫和成虫。

图2B是未添加地衣芽孢杆菌K-357的线虫图像，显示卵中未孵化的幼虫。

图2C是未添加地衣芽孢杆菌K-357的线虫的图像，显示了孵化的幼虫。

图2D是未添加地衣芽孢杆菌K-357的线虫的图像，显示了成年线虫。

图2E是未添加地衣芽孢杆菌K-357的线虫的图像，显示了成年线虫。

图2F是未添加地衣芽孢杆菌K-357的线虫的图像，显示了成年线虫的嘴。

图3是放大1000倍显示寄居有地衣芽孢杆菌K-357的成年线虫的图像。

图4是地衣芽孢杆菌K-357的放大1000倍的图像，其被染成红色，包围着固定的肾形线虫卵。

图5是放大1000倍的被染成紫色的地衣芽孢杆菌K-357包围的肾形卵的图像。幼体蠕虫在卵的中心是可见的，在显微镜下是固定的。

图6是显示在阿肯色州的田间试验中，与用K-357处理的种子相比，在用化学杀线虫剂涕灭威或氟吡菌酰胺(Fluopyram)在垄沟中处理的棉花种子出苗55天后，肾形线虫计数的百分比的图：1)用杀真菌剂(嘧菌酯(Azoxystrobin)、咯菌腈(Fludioxinol)、精甲霜灵(Mefenoxam)、氟唑环菌胺(Sedaxane))、杀虫剂(噻虫嗪(Thiamethoxam))和垄沟杀线虫剂涕灭威(15磅/英亩)处理的种子，2)用杀真菌剂(嘧菌酯、咯菌腈、精甲霜灵、氟唑环菌胺)、杀虫剂(噻虫嗪、吡虫啉(Imidacloprid))和垄沟杀线虫剂氟吡菌酰胺(16盎司/英亩)处理的种子，和3)用杀真菌剂(甲霜灵(Metalaxyl)、咯菌腈、腈菌唑(Myclobutanil))、杀虫剂(吡虫啉)和作为杀线虫剂的K-357以每100磅棉花种子2液盎司(“2.000Fl.Oz./CWT”)处理的种子。

图7是显示图6农作物收获时棉花产量百分比的图。

图8是显示在德克萨斯州进行的棉田试验中，在播种时、60天后和收获时的根结线虫幼体种群的图，比较了用阿维菌素(Abamectin)处理的种子与用作为杀线虫剂的K-357处理的种子，具体地，用以下物质处理的种子：1)杀真菌剂(嘧菌酯、咯菌腈、精甲霜灵、氟唑环菌胺)、杀虫剂(吡虫啉、噻虫嗪)和含有VIBRANCE(阿维菌素)作为杀线虫剂的AVICTA ELITEPLUS；或2)杀真菌剂(甲霜灵、咯菌腈、腈菌唑)、杀虫剂(吡虫啉)和每100磅棉花种子2液盎司(“2.000Fl.Oz./CWT”)K-357作为杀线虫剂。

图9是显示在密西西比州的田间试验中，与用杀真菌剂(甲霜灵、咯菌腈、腈菌唑)、杀虫剂(吡虫啉)和每100磅棉花种子用2(“2.000Fl.Oz./CWT”)或3(“3.000Fl.Oz./CWT”)液盎司的K-357作为杀线虫剂处理的种子相比，在种植用杀真菌剂(嘧菌酯、咯菌腈、精甲霜灵、氟唑环菌胺)、杀虫剂(吡虫啉、噻虫嗪)和作为杀线虫剂的阿维菌素处理的棉花种子25天后，线虫计数的百分比。

图10是显示图9农作物收获时的棉花产量的图。

图11是显示在图9的田间试验中种植棉花种子1-9天、12天和25天后计算的植物活力的图。

图12是显示在体外用Avicta或K-357处理的4种植物病原线虫中，每一种线虫死亡率百分比的图，其中用水作为对照。

图13是显示了与单独用化学杀虫剂/杀真菌剂处理的玉米种子相比，将用K-357和化学杀虫剂/杀真菌剂以标记比率处理的玉米种子在蒙茅斯州的伊利诺伊大学种植37天后，在严重感染CRW的田地中的玉米平均林分计数(stand count)的图表。

图14是显示了与单独用化学杀虫剂/杀真菌剂处理的玉米种子相比，将用K-357和化学杀虫剂/杀真菌剂以标记比率处理的玉米种子在蒙茅斯州的伊利诺伊大学种植64天后，在严重感染CRW的田地中，玉米根节损伤评价的平均得分图表。

图15是研究地衣芽孢杆菌K-357对绿桃蚜(GPA)传播马铃薯病毒Y(PVY)的影响的实验装置的连续步骤示意图。

具体实施方式

为了促进对本公开的原理的理解，现在将参考优选实施方案，并且将使用特定的语言来描述这些实施方案。然而，应当理解，这并不意味着限制本公开的范围，如本文所示的对本公开的这种改变和进一步修改被认为是本公开所涉及的领域的技术人员通常会想到的。

如本文所用，短语“生物纯培养物”包括微生物菌株的生物纯发酵培养物的孢子和营养细胞之一或其组合。“生物纯的”是指如本领域所理解的基本上生物纯的。此外，“生物纯培养物”包括具有其所有鉴定特征的微生物菌株的突变体。

遵循长期的专利法惯例，术语“一(a)”、“一(an)”和“所述(the)”在本申请中(包括权利要求)使用时指“一个或多个”。因此，例如，提及“植物或植物的种子”包括多个植物或种子，除非上下文明显相反，等等。

在整个说明书和权利要求书中，术语“包括(comprise)”、“包括(comprises)”和“包括(comprising)”以非排他性的意义使用，除非上下文另有要求。同样，术语“具有”和“包括(including)”以及它们的语法变体旨在是非限制性的，使得列表中项目的列举不排除可以替代或添加到所列项目的其它类似项目。

为了本说明书和权利要求的目的，当与一个或多个数字或数值范围结合使用时，术语“约”应理解为指所有这样的数字，包括范围内的所有数字，并通过延伸所述数值之上和之下的边界来修饰所述范围。用端点表述的数值范围包括所述范围内包含的所有数字，例如整数，包括其小数(例如，1至5的表述包括1、2、3、4和5，以及其小数，例如1.5、2.25、3.75、4.1等)，以及所述范围内的任何范围。此外，如本文所用，术语“约”当指一个值时，可包括偏离指定量的变化，在一些实施方案中为+/-20％，在一些实施方案中为+/-10％，在一些实施方案中为+/-5％，在一些实施方案中为+/-1％，在一些实施方案中为+/-0.5％，在一些实施方案中为+/-0.1％，这些变化在所公开的组合物和方法中是合适的。或者，特别是就生物系统或过程而言，所述术语可以表示在一个数量级内，优选在一个值的5倍内，更优选在2倍内。当在本申请和权利要求中描述特定值时，除非另有说明，否则术语“约”应被认为是指所述特定值在可接受的误差范围内。

在整个说明书和权利要求书中，短语“微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂”是指任何用于保护农作物免受植物害虫和/或植物病原体侵害的微生物试剂、生物试剂或化学试剂，包括用作杀生物剂、杀虫剂、杀真菌剂或杀线虫剂中的一种或多种的试剂。

出于本说明书和权利要求书的目的，术语“昆虫”包括线虫。

出于说明书和权利要求书的目的，短语“植物的枝叶”是指除种子和根以外的任何植物部分。

出于说明书和权利要求书的目的，术语“农药”和“杀虫剂”可互换使用。

由于希望替代或减少合成肥料和化学杀虫剂以改善农作物健康并限制负面环境影响，本文提供了活的微生物菌株、包含所述菌株的组合物以及用所述菌株包衣的种子和植物，以控制植物寄生线虫和其它病原昆虫，包括但不限于蚜虫和玉米根虫。研究已经证明了这种活的微生物产品的经济效益以及在综合农作物管理系统中的可靠性能。本文提供的活的微生物菌株可以用于种子、用于垄沟或施用于植物顶端或根部，以与植物一起生长，从而保护植物免受线虫和昆虫的侵害和/或提高植物的生产力和繁殖力。本文提供的活的微生物产品和相关方法有可能提供了可持续的递送、具有成本效益的解决方案，所述解决方案可以用较少的投入增加产量，同时避免与化学替代品相关的对使用者和环境的毒性作用。

地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株NRRL B-23318，最初分离自索诺兰沙漠，从NRRL培养物保藏中心获得。出人意料的是，本发明人发现这种地衣芽孢杆菌菌株(本文命名为“K-357”)可以作为生物杀线虫剂。更具体地，施用地衣芽孢杆菌K-357减少了体外线虫孵化，在田间试验中减少了线虫土壤计数并增加了棉花产量。地衣芽孢杆菌K-357的杀线虫活性相当于或明显优于标准化学杀线虫剂处理的杀线虫活性。地衣芽孢杆菌K-357对棉花产量的增加优于标准化学处理。本文描述了示例性的实验和数据。

实施例1描述了一个体外实验，其中检验了地衣芽孢杆菌K-357控制三种不同类型的植物线虫的效果：大豆胞囊线虫(Heterodera glycines)、南方根结线虫(Meloidogyneincognita)和肾形线虫(Rotylenchulus reniformis)。图1中显示的结果说明K-357可以以剂量依赖的方式减少或防止线虫孵化，包括肾形线虫减少87％和完全抑制南方根结线虫孵化。图2-5显示了K-357寄居在线虫和线虫卵上。K-357对肾形芽孢杆菌/南方根结线虫的孵化的显著抑制/预防作用优于枯草芽孢杆菌菌株DSM17231与地衣芽孢杆菌菌株DSM17236联合使用的体外应用所观察到的效果，其中仅观察到三种测试的根结线虫物种中的一种有较小的效果(参见EP2603086B1)。使本文所述的K-357发现更出人意料的是，本领域技术人员普遍接受的是，EP2603086B1中所述的菌株组合(即枯草芽孢杆菌菌株DSM 17231+地衣芽孢杆菌菌株DSM17236)所产生的任何生物杀线虫效果均来自枯草芽孢杆菌菌株，而不是来自地衣芽孢杆菌菌株，因为没有已知报道说明地衣芽孢杆菌菌株具有杀线虫特性(参见，例如，Xiang et al.(2017)；Abd-Elgawad and Askary(2018))。

实施例2描述了棉花的田间试验，以评价与化学杀线虫剂相比，包括涕灭威(其是有效性的标准)，地衣芽孢杆菌K-357的有效性。每种处理在播种时施入垄沟内。结果如图6和7所示。结果表明，在出苗后55天，K-357将土壤中的线虫数量减少到化学标准涕灭威的约70％，并且优于氟吡菌酰胺。图7是显示收获时棉花产量百分比的图表。出人意料的是，用地衣芽孢杆菌K-357处理的棉花产量高于用氟吡菌酰胺(高出约4.5％)和涕灭威(高出约2.5％)处理的棉花产量。

实施例3描述了棉花田间试验，以评价地衣芽孢杆菌K-357施用于种子时在减少线虫数量和增加产量方面的功效。在试验中，用两种不同比例的地衣芽孢杆菌K-357处理的种子与用阿维菌素处理的种子进行比较。结果如图8至11所示。图8显示K-357比化学杀线虫剂阿维菌素对抑制根结线虫幼年种群具有更持久的效果。具体地，虽然60天后用阿维菌素处理的线虫数量低于用K-357处理的线虫数量，但这种关系在收获时发生逆转。收获时，用K-357处理的线虫数减少到小于15，而用阿维菌素处理的线虫数约为40。此外，K-357组的线虫种群开始时高于阿维菌素组，并随着试验进行稳步下降。相比之下，阿维菌素组的线虫数量在60天后逆转并迅速增加。

图9表明，与用阿维菌素处理的种子相比，用2-oz/cwt和3-oz/cwt的K-357处理的种子在种植25天后，对线虫数量的控制效果分别为88％和91％。图10说明了用2Fl.Oz./CWT和3.000Fl.Oz./CWT地衣芽孢杆菌K-357处理，分别导致棉花产量出人意料地显著增加54磅/英亩和102磅/英亩。此外，图11显示K-357在种植后12至25天之间提高了植物活力，而阿维菌素没有观察到活力的提高。

实施例4描述了一项体外实验，所述实验检测了与化学杀线虫剂Avicta相比，地衣芽孢杆菌K-357对四种不同类型的植物线虫的效果：大豆胞囊线虫、南方根结线虫、肾形线虫和病变线虫(Lesion nematode)。将线虫置于培养皿中，用Avicta、水或K-357孢子处理48小时。数据如图12所示，该图显示了4种线虫中的每种线虫的死亡率。出人意料的是，K-357处理在杀死线虫方面与Avicta同等或显著更有效。具体地，K-357在杀死南方根结线虫、大豆胞囊线虫和病变线虫方面同样有效，并且在杀死肾形线虫方面明显优于Avicta(分别为84.6％和35.4％)。

除了线虫之外，地衣芽孢杆菌K-357还具有抗其它植物病原性昆虫的杀虫活性。实施例5描述了单独用地衣芽孢杆菌K-357处理的以及用地衣芽孢杆菌K-35与化学杀虫剂和杀真菌剂联合处理的种子减少玉米根虫(CRW)损害和增加产量的能力的田间试验检测。这些试验是在蒙茅斯州的伊利诺伊大学进行的，试验地点位于CRW病毒大量滋生的田地里。种植37天后和64天后的林分计数和根节损伤分析的结果分别显示在图13和14中。种子处理组#1(杀虫剂/杀真菌剂)和种子处理组#2(K-357+杀虫剂/杀真菌剂)的平均林分计数都是33.8(图13)。然而，图14中的根节损伤图显示，向杀虫剂/杀真菌剂混合物中添加K-357降低了根节损伤。具体地，种子处理组#2(K-357+杀虫剂/杀真菌剂)的根节损伤分数为1.12，而种子处理组#1(杀虫剂/杀真菌剂)的根节损伤分数为1.47。

实施例6描述了具有杀虫活性的地衣芽孢杆菌K-357的另一个实施例。在该实验中，使用对本氏烟草(Nicotiana benthamiana)离体叶片的病毒传播试验，评价地衣芽孢杆菌K-357减少或防止马铃薯Y病毒(PVY)传播的能力。绿桃蚜(GPA，桃蚜(Myzus persicae))是PVY最有效的媒介，该实验旨在评估地衣芽孢杆菌K-357是否能使半翅目害虫(hemptipteran pests)(例如蚜虫)衰弱，从而完全抑制和/或减少PVY传播。

在一个实施方案中，提供了控制植物虫害的方法，所述方法包括：在合适的生长环境中种植植物或植物种子，所述植物或种子具有组合物的包衣或部分包衣，所述组合物包括：地衣芽孢杆菌K-357或具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

在一个实施方案中，提供了控制植物虫害的方法，所述方法包括：向植物的种子、植物的枝叶、植物的根或植物周围的土壤或生长环境中递送组合物，所述组合物包括：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

在一个实施方案中，提供了控制植物虫害的方法，所述方法包括：在合适的生长环境中种植植物或植物种子，所述植物或种子具有组合物的包衣或部分包衣，所述组合物基本上由以下组成：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和一种或多种载体、赋形剂或营养物，其中所述组合物在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害，或两者兼有。

在一个实施方案中，提供了控制植物虫害的方法，所述方法包括：向植物的种子、植物的枝叶、植物的根、或植物周围的土壤或生长环境递送组合物，所述组合物基本上由以下组成：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物，以及一种或多种载体、赋形剂或营养物，其中所述组合物在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害，或两者兼有。

在一个实施方案中，提供了用于处理植物或植物种子的方法，包括向植物或植物种子施用组合物包衣，所述组合物包衣包含地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物，所述组合物任选地包含一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了具有组合物包衣的植物或植物种子，所述组合物包衣包含：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了用于处理植物或植物种子的方法，包括向植物或植物种子施用组合物包衣，所述组合物包衣包含地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物，所述组合物任选地包含一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了具有组合物包衣的植物或植物种子，所述组合物包衣包含：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在本公开的一个实施方案中，提供了控制植物病原线虫的方法。所述方法包括向植物的种子、植物的根、或植物周围的土壤或生长环境递送组合物，所述组合物基本上由以下组成：地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；以及一种或多种载体、赋形剂或营养物。将组合物递送至植物种子、根或生长环境可以在植物病原线虫存在下提高植物产量和植物对植物病原线虫的抗性中的一种或两种。在一些情况下，递送所述组合物还可以减少植物病原线虫对植物的感染。

“基本上由地衣芽孢杆菌K-357的生物纯培养物组成的组合物”的意思是所述组合物仅包括单一的微生物菌株(即地衣芽孢杆菌K-357)的生物纯培养物。因此，短语“基本上由…组成”仅指微生物菌株，即组合物中包含的微生物菌株限于地衣芽孢杆菌K-357菌株。虽然所述组合物仅包含单一微生物菌株地衣芽孢杆菌K-357，但是所述组合物可以包含任何数量的其它非微生物菌株成分，包括但不限于一种或多种载体、赋形剂、营养物、农作物保护剂、杀虫剂、杀线虫剂或杀真菌剂。

在本公开的一个实施方案中，提供了控制植物病原线虫的方法，所述方法包括向植物的种子、植物的根或植物周围的生长环境递送包含单一微生物菌株的生物纯培养物的组合物，所述单一微生物菌株是地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体。将组合物递送至植物种子、根或生长环境可以在植物病原线虫存在下提高植物产量和植物对植物病原线虫的抗性中的一种或两种。在一些情况下，递送所述组合物还可以减少植物病原线虫对植物的感染。

类似于上文所述，“包含单一微生物菌株的生物纯培养物的组合物，所述单一微生物菌株是地衣芽孢杆菌K-357”旨在表示，虽然组合物可以包含无限数量的成分，但是微生物菌株成分仅限于单一菌株地衣芽孢杆菌K-357的生物纯培养物。所述组合物可以包含任何数量的其它非微生物成分，包括但不限于一种或多种载体、赋形剂、营养物、农作物保护剂、杀虫剂、杀线虫剂或杀真菌剂。

在本公开的一个实施方案中，提供了控制植物病原线虫的方法，所述方法包括在合适的生长环境中种植包衣的种子。在该实施例中，种子具有包衣，所述包衣包含：单一微生物菌株的生物纯培养物的孢子，所述单一微生物菌株是地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体；和任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物、农作物保护剂、杀真菌剂、杀虫剂或杀线虫剂。地衣芽孢杆菌K-357的以适合在植物病原线虫存在下提高植物产量、提高植物对植物病原线虫的抗性或减少植物病原线虫对植物的感染中的一种或多种的量存在。包含包衣的种子的组合物可以包括一种或多种载体、赋形剂或营养物以及一种或多种农作物保护剂、杀虫剂、杀线虫剂或杀真菌剂。

地衣芽孢杆菌K-357可以以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹CFU/g、9.0×10⁷CFU/g至2.0×10⁴CFU/g或4.0×10⁸CFU/g至1.0×10⁴CFU/g种子的量存在于种子上。

包含地衣芽孢杆菌K-357的本公开的组合物可以是液体形式。液体组合物中存在的地衣芽孢杆菌K-357的浓度范围为约1.0×10¹²至1.0×10¹CFU/ml，1.0×10¹¹CFU/ml至1.0×10²CFU/ml，或1.0×10¹⁰CFU/ml至1.0×10⁴CFU/ml。

包含地衣芽孢杆菌K-357的本公开的组合物也可以是粉末、干可湿性粉末、可涂抹颗粒或干可湿性颗粒的形式。存在于这些非液体形式的组合物中的地衣芽孢杆菌K-357的含量范围为1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹⁰CFU/g，5.0×10¹¹CFU/g至1.0×10³CFU/g，或1.25×10¹¹CFU/g至1.0×10⁸CFU/g。

在本公开的一个实施方案中，提供了用于处理种子的方法，所述方法包括对种子施用单一微生物菌株的生物纯培养物的包衣，所述单一微生物菌株是地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体。虽然包衣仅限于单一微生物菌株(地衣芽孢杆菌K-357)的生物纯培养物，但包衣可任选地包括一种或多种载体、赋形剂、营养物、农作物保护剂、杀真菌剂、杀虫剂或杀线虫剂。地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原线虫存在下提高植物产量、提高植物对植物病原线虫的抗性和/或减少植物病原线虫对植物的感染的量存在于包衣中。

本公开的实施方案还包括具有包衣的植物种子，所述包衣包含单一微生物菌株的生物纯培养物，所述单一微生物菌株是地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体。任选地，种子包衣还可以包括一种或多种农作物保护剂，包括但不限于杀虫剂、杀线虫剂、杀真菌剂或营养物，或其它载体或赋形剂。地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原线虫存在下提高植物产量、提高植物对植物病原线虫的抗性和/或减少植物病原线虫对植物的感染的量存在于种子的包衣中。

在本公开的方法和组合物中，植物可以是单子叶植物或双子叶植物，或者任何一种，但不限于棉花、水稻、大豆、番茄、谷类、块根/块茎和玉米蔬菜、芸苔属蔬菜、瓜类蔬菜、球茎蔬菜、柑橘、果实类蔬菜、草本植物/香料、叶类蔬菜、豆类/蔬菜(肉质的和干燥的豆类和豌豆)、油料作物、梨果、核果、草莓、甘蔗、甜菜、坚果、猕猴桃、香蕉、草、观赏植物或硬木插条。

在一个实施例中，具有包含地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的包衣的植物或植物种子是玉米、棉花、花生、大豆、高粱、小麦、水稻、马铃薯、向日葵或洋葱。

在本公开的方法和组合物的一个实施方案中，植物根尖或移植根可以用包含地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的组合物包衣。

在本公开内容的一个实施方案中，可以将组合物施用于植物的种子、植物的枝叶、植物的根或植物周围的生长环境。

在本公开的方法和组合物中，植物病原线虫可以包括但不限于南方根结线虫、M.paranaensis、爪哇根结线虫(M.javonica)、大豆胞囊线虫(SCN)、大豆胞囊线虫(SCN)、肾形线虫(Rotylenchuitis reniformis)或病变线虫。

在本公开的方法和组合物的一个实施方案中，病原性昆虫可以包括但不限于玉米根虫、西部玉米根虫(WCR)、北部玉米根虫(NCR)、南部玉米根虫(SCR)、蚜虫、绿桃蚜(桃蚜)或棉蚜虫(Cotton aphid)(棉蚜(Aphis gossypii))。

在一些实施方案中，地衣芽孢杆菌K-357用大豆蛋白水解产物和螯合的硫酸亚铁配制。

例如，在一个实施方案中，提供了用于改善植物健康和/或产量的组合物，包括：i)地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；ii)大豆蛋白水解产物；iii)螯合的硫酸亚铁；和iv)任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

在一个实施方案中，提供了用于改善植物健康和/或产量的组合物，包括：i)地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；ii)大豆蛋白水解产物；iii)螯合的硫酸亚铁；和iv)任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

在一个实施方案中，提供了具有组合物包衣的植物或植物种子，所述组合物包衣包含：i)地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；ii)大豆蛋白水解产物；iii)螯合的硫酸亚铁；和iv)任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了处理植物或植物种子的方法，包括：向植物或植物种子施用组合物包衣，所述组合物包衣包含：i)地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；ii)大豆蛋白水解产物；iii)螯合的硫酸亚铁；和iv)任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

在一个实施方案中，提供了配制微生物农作物保护剂以改善植物健康和/或产量的方法，包括：一起加入大豆蛋白水解产物、螯合的硫酸亚铁和一种或多种微生物农作物保护剂的生物培养物，其中一种或多种农作物保护剂以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于制剂中。

在一个实施方案中，提供了微生物农作物保护剂的制剂以改善植物健康和/或产量，包括：i)一种或多种微生物农作物保护剂的生物培养物；ii)大豆蛋白水解产物；iii)螯合的硫酸亚铁；和iv)任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或非微生物农作物保护剂，其中一种或多种微生物农作物保护剂以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

在本公开的组合物中，大豆蛋白水解产物可包含约4％的水溶性氮。

在本公开的组合物中，组合物或制剂中存在的大豆蛋白水解产物的含量可以为约60重量％至约99重量％，存在的螯合的硫酸亚铁的含量可以为约0.05重量％至约1.5重量％。

在本公开的组合物中，组合物或制剂中存在的大豆蛋白水解产物的含量可以为约85重量％至约95重量％，存在的螯合的硫酸亚铁的含量可以为约0.05重量％至约0.3重量％。

本公开的组合物和制剂可以是液体形式，地衣芽孢杆菌K-357可以以1.0×10¹²至1.0×10¹CFU/ml、1.0×10¹¹CFU/ml至1.0×10²CFU/ml或1.0×10¹⁰CFU/ml至1.0×10⁴CFU/ml的浓度存在。

本公开的组合物和制剂可以是粉末、干可湿性粉末、可涂抹颗粒或干可湿性颗粒的形式，并且地衣芽孢杆菌K-357可以以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹⁰CFU/g、5.0×10¹¹CFU/g至1.0×10³CFU/g或1.25×10¹¹CFU/g至1.0×10⁸CFU/g的含量存在。

在本公开的方法中，地衣芽孢杆菌K-357可以以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹CFU/g、9.0×10⁷CFU/g至2.0×10⁴CFU/g、或4.0×10⁸CFU/g至1.0×10⁴CFU/g种子的量施用于或存在于种子上。

此外，在一个或多个实施方案中，本发明的组合物和方法的合适的杀虫剂、杀真菌剂和杀线虫剂可以包括：杀虫剂：A0)agrigata、磷化铝(al-phosphate)、钝绥螨属(ambriseius)、蚜小蜂属(apherinus)、烟蚜茧蜂属(aphidinus)、食蚜瘿蚊(aphidletes)、青蒿素、苜蓿银纹夜蛾核多面体病病毒(autographa californica NPV)、三唑锡(azocyclotin)、枯草芽孢杆菌(bacilus-subtilis)、苏云金芽孢杆菌艾扎瓦亚种((bacilus-thur.-aizawai)、苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种((bacilus-thur.-kurstalki)、苏云金芽孢杆菌(Bacilltus thuringiernsis)、白僵菌属(beauveria)、球孢白僵菌(beauveria-bassiana)、β-氟氯氰菊酯(Beta-cyfluthrin)、生物制剂(biologics)、杀虫双(bislutap)、溴氟菊酯(broflutrinate)、乙基溴硫磷(bromophos-e)、溴螨酯(bromopropylate)、转Bt基因玉米(Bt transgenic corn)、转Bt基因大豆(Bt transgenicsoybean)、辣椒素、杀螟丹、celastru s)提取物，氯虫酰胺(Chloranthraniprole)、杀螨醚(Chlorbenzuron)、乙烯利(Chlorethoxyphos)、氟啶脲(Chlorfluazuron)、毒死蜱-乙基(Chiorpyrifos-e)、蛇床素(Cinidiadin)、冰晶石(Cryolite)、杀螟腈(Cyanophos)、氰虫酰胺(Cyantraniprolol)、三氟氯氰菊酯(Cyhalothrin)、三环锡(Cihexatin)、氯氰菊酯(Cypermethrin)、离额茧蜂(Dakunusa)、DCIP、二氯丙烯(Dichloropropene)、三氯杀螨醇(Dicophor)、潜蝇姬小蜂属(Digliphas)、潜蝇姬小蜂属+离额茧蜂属(Digliphas+Dakunusa)、混灭威(Dimetacarb)、螨速克(Dithioether)、乙酸月桂酯(Dodecyl Acetate)、阿维菌素、恩蚜小蜂属(Encarsia)、EPN、浆角蚜小蜂属(Eretmocerus)、二溴乙烯(Ethylene-dibromicde)、桉油精(Eucalyptol)、脂肪酸、盐、喹螨醚(Fenazacquin)、仲丁威(fenobucarb)(BPMC)、唑螨酯(fenpyroximate)、溴氟菊酯(flubrocythrinate)、氟螨嗪(flufensin)、伐虫脒(formethanate)、安果磷(formotethione)、呋线威(furthiocarb)、γ-氟氯氰菊酯(gamma Cyhalothrin)、大蒜汁(garlic juice)、颗粒体病毒(granulosis-virus)、瓢虫(harmonia)、棉铃虫核型多角体病毒(heliothis armigera NPV)、非活性细菌(inactive bacteria)、吲哚-3-基丁酸(indol-3-ylbutyric acid)、碘代甲烷(iodomethane)、铁、水胺硫磷(isocarbofos)、异丙胺磷(isofenphos)、异丙胺磷-甲基(isofenphos-m)、异丙威(isoprocarb)、异丙磷(isothioate)、高岭土、林丹(lindane)、浏阳霉素(liuyangmycin)、苦参碱(matrine)、地胺磷(mephospholane)、聚乙醛(metaaldehyde)、金龟子绿僵菌(metalicdium-anisoprie)、甲胺磷(methamicdophos)、速灭威(metorcarb)(MTMC)、矿物油、美蕾兹(milex)、m-异硫氰酸酯(m-isothiocyanate)、杀虫单(monosultap)、疣孢漆斑菌(mirotesium velcaria)(疣孢漆斑菌(Myrotheciumverrucaria))、二溴磷(nared)、蜜蜂(芙新姬小蜂(neochrysocharis formos))、尼古丁、烟碱(nicotinoid)、油脂、油酸、氧乐果(ometoate)、小花蝽属(orius)、氧化苦参碱(oxymatrine)、拟青霉菌(pesilomyces)、石蜡油、对硫磷-乙基(parathion-e)、巴斯德氏菌属(pasteuria)、石油、外激素、磷酸盐、无色杆菌属(Photolabdas)、辛硫磷(Foxime)、智利小植绥螨(Phytoseiulus)、嘧啶磷-乙基(Pirimiphos-e)、植物油、吊丝虫GV、多角体病毒(Polyhedrosis virus)、多酚提取物、油酸钾、丙溴磷、补骨内酯(prosuler)、丙硫磷(prothiophos)、吡唑硫磷(pyracrofos)、除虫菊酯(pyrethrin)、哒嗪硫磷(pyridafenthione)、嘧螨醚(pyrimidifene)、蚊蝇醚(pyriproxyfen)、奎莱提取物(quillay extract)、灭螨猛(quinomethionate)、菜籽油(rapeseed oil)、鱼藤酮(rotenone)、皂苷(saponin)、saponozit、钠化合物(sodium compound)、氟硅酸钠(sodiumfluorosilicate)、淀粉、斯氏线虫、链霉菌、氟虫胺(sulfuramide)、硫、丁基嘧啶磷(tebupyrimphos)、七氟菊酯(tefluthrin)、双硫磷(temefos)、得脱蟎(tetradiphone)、久效威(thiophanox)、甲基乙拌磷(thiometone)、转基因(例如Cry38b1)、唑蚜威(triazamate)、木霉属(trichogranma)、赤眼蜂属(trichogranma)、杀铃脲(triflumuron)、轮枝孢病(vericilliim)、beltrin、异构杀昆虫剂(例如κ-联苯菊酯、κ-七氟菊酯)、Dichloromesothiaz、溴虫氟苯双酰胺(brofuranilide)、pyradilumide、各种杀虫剂；A1)氨基甲酸酯类，包括涕灭威、棉铃威(aranicarb)、丙硫克百威(benfturacarb)、西维因(carbaryi)、克百威(carbofuran)、丁硫克百威(carbosulfan)、灭虫威(methiocarb)、灭多威(mesomil)、杀线威(oxamyl)、抗蚜威(pirimicarb)、残杀威(propoxur)和和硫双威(thiocdicarb)；A2)乙酰甲胺磷(Acephate)、益棉磷(azine phos-ethyl)、保棉磷(azinephos-methyl)、毒虫畏(chlorfenvin phos)、毒死蜱(chiorpyrifos)、甲基毒死蜱(chlorpyrifos-methyl)、灭赐松乳剂(de Meton-S-methyl)、二嗪农(diazinon)、敌敌畏(dichloryos/DDVP)、百治磷(dicrotophos)、乐果(dimethoate)、乙拌磷(disulfotone)、乙硫磷(ethion)、杀螟硫磷(fenitrothion)、倍硫磷(fenthion)、异口恶磷(isoxathion)、马拉松(malathion)、甲胺磷(metamidaphos)、杀扑磷(methidathion)、福斯金(mevinphos)、久效磷(monocrotophos)、氧乐果(oxymethoate)、亚砜磷(oxyciemethone-methyl)、对硫磷(parathion)、有机磷酸盐，包括苯酚盐、叶酸、hosalon、亚胺硫磷(phosmet)、磷胺(phosphamidone)、嘧啶磷-甲基(pyrimiphos-methyl)、喹硫磷(quinalphos)、特丁硫磷(terbufos)、杀虫畏(tetrachlortbinphos)、三唑磷和敌百虫；A3)环戊二烯有机氯化物化合物类，例如硫丹(endosulfan)；A4)乙虫腈、氟虫腈、Fiprolols包括吡嗪氟虫腈(pyrafluprole)和哌普罗(pyriprole)；A5)啶虫脒、新烟碱类，包括噻虫胺(rotianidin)、呋虫胺、吡虫啉、烯啶虫胺、噻虫啉和噻虫嗪；A6)多杀菌素(spinosyns)，例如多杀菌素(spinosad)和乙基多杀菌素；A7)来自菌素(mectins)的氯化物，包括阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、伊维菌素、雷皮菌素(lepimectin)和弥拜菌素(milbemectin)；A8)保幼激素模拟物，例如烯虫乙酯、喹诺酮、美赐平(metoprene)、苯氧威(phenoxycarb)和蚊蝇醚；A9)选择性同源喂食阻断剂，例如吡蚜酮、氟啶虫酰胺和氟虫吡喹(pyrifluquinazone)；A10)四螨嗪、六螨酯和乙螨唑；A11)丁醚脲、苯丁锡和炔螨特线粒体ATP合酶抑制剂(propargiteMitochondrial ATP synthase inhibitors)；氧化磷酸化解偶联剂，例如溴虫腈；A12)烟碱乙酰胆碱受体通道阻断剂，例如杀虫磺(bensultap)、杀螟丹(cartap hydrochloride)、硫环胺和杀虫双(thiosultap sodium)；A13)双三氟虫脲(bistriflulone)，衍生自苯甲酰脲类的甲壳质生物合成的0型抑制剂，包括除虫脲、氟虫脲、氟铃脲、虱螨脲、nobarulone和得福隆(teflubenzuron)；A14)几丁质生物合成的1型抑制剂，例如噻嗪酮；A15)灭蝇胺；A16)蜕皮激素受体激动剂，例如甲氧虫酰肼(methoxyphenozide)、虫酰肼、氯虫酰肼和环虫酰肼；A17)章鱼胺受体，例如双甲脒；A18)线粒体复合物电子传递抑制剂哒螨灵、吡螨胺、唑虫酰胺、嘧虫胺(flufenelim)、sienopyrafen、丁氟螨酯(cyflumetofene)、氟蚁腙(hydramethylnon)、灭螨醌(acequinosyl)或嘧螨酯(fluacrylpyrim)；A19)电压依赖性钠通道阻断剂，例如茚虫威和氰氟虫腙；A20)脂质合成抑制剂，例如螺螨酯、螺甲螨酯和螺虫乙酯；A21)氟虫双酰胺(fulvendiamide)、邻苯二酰胺化合物(R)-3-氯-N1-{2-甲基-4-[1，2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-2-甲基磺酰基乙基)邻苯二酰胺和衍生自二酰胺的(S)-3-氯-N1-{2-甲基-4[1,2,2,2-四氟-1-(三氟甲基)乙基]苯基}-N2-(1-甲基-2-甲磺酰基乙基)邻苯二酰胺、氯虫苯甲酰胺和氰虫苯甲酰胺鱼尼定受体调节剂，包括：A22)具有未知或不确定作用机制的化合物，例如印楝素、酰胺弗门特(amidoflumet)、联苯肼酯(biphenazate)、联氟砜(fluenesulfone)、胡椒基丁醚、三氟甲吡醚、咯菌腈；或A23)丙烯菊酯(acrinathrin)、丙烯菊酯(allethrin)、联苯菊酯(bifenthrin)、氟氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、α-氯氰菊酯、β-氯氰菊酯、ζ-氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、醚菊酯、phen Ropatorin、氰戊菊酯、氟氰戊菊酯、氟胺氰菊酯(tau-fluvalinate)、氯菊酯、钠通道调节剂衍生的含氟硅菊酯和四溴菊酯的拟除虫菊酯。

杀真菌剂：B0)苯威吡氟(benzobindiflupyr)、抗霜霉剂(antiperonosporic)、辛唑嘧菌胺(amethoctrazine)、吲唑磺菌胺(amisulbrom)、铜盐(例如氢氧化铜、氯化铜、硫酸铜、过硫酸铜)、啶酰菌胺、噻呋酰胺(thiflumazide)、氟酰胺(Fluthianyl)、甲硝哒唑(flaxilyl)、噻苯唑(thiabendazole)、麦锈灵(benodanyl)、灭锈胺(mepronyl)、异丙噻菌胺(isofetamide)、甲呋酰胺(fenflam)、联苯吡菌胺(bixafen)、氟唑菌酰胺(fluxapiroxad)、戊苯吡菌胺(penflufen)、氟唑环菌胺(sedaxane)、succinoxyxine、烯肟菌酯(enoxastrobin)、氟菌螨酯(fluphenoxystrobin)、、唑菌酯(pyroxystrobin)、唑胺菌酯(pyrame Tostrobin)、氯啶菌酯(Triclopyricarb)、Phenamine Strobin、苯氧菌胺(Metominostrobin)、吡本卡布(Pyribencarb)、消螨多(Meptyldinocap)、三苯基乙酸锡(fentin acetate)、三苯基氯化锡(Fentin chloride)、三苯基氢氧化锡(fentinhydroxide)、土霉素(oxytate Cyclin)、乙菌利(Chlozolinate)、地茂散(chloronebu)、四氧硝基苯(technazen)、依得利(etridiazole)、依杜卡(iodocarb)、硫菌威(prothiocarb)、枯草杆菌(Bacillus subtilis synonym)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)(例如QST 713，FZB24，MBI600，D747菌株)、互叶白千层提取物、白羽扇豆提取物、BLAD多肽、啶菌噁唑(pyrisoxazole)、噁咪唑(oxpoconazole)、乙环唑(etaconazole)、胺苯吡菌酮(fenpyrazamine)、naphthifine、盐酸特比萘芬(terbinafine)、有效霉素(validamycin)、丁吡吗啉(pyrimorph)、varifenalate、苯酞(Phthalide)、烯丙苯噻唑(probenazole)、异噻菌胺(isotianil)、海带多糖、洋桔梗提取物、亚磷酸及其盐类、叶枯酞(teclofthalam)、唑菌嗪(triazoxide)、甲氧苯啶菌(pyriophenone)、有机油、碳酸氢钾(potassium bicarbonate)、百菌清、唑呋草(fluoroimide)、B1)联苯三唑醇(bittertanol)、糠菌唑(bromconazole)、环唑醇(cyproconazole)、苯醚甲环唑、烯唑醇(diniconazole)、恩康唑(enilconazole)、氟环唑(Epoxiconazole)、氟喹唑、腈苯唑、氟硅唑(Flusilazole)、粉唑醇(flutriazole)、己唑醇(hexaconazole)、酰胺唑(imibenconazole)、种菌唑(ipconazole)、叶菌唑(metconazole)、腈菌唑(microbutanyl)、平克座(penconazole)、丙环唑(propiconazole)、丙硫菌唑(prothioconazole)、硅氟唑(econazole)(益康唑)、三唑酮(triadimethone)、三唑醇(triadimenol)、戊唑醇(Tebuconazole)、氟醚唑、灭菌唑、咪鲜胺、pefazoate、imazalyl、氟菌唑(triflumizole)、氰霜唑(Cyazofamid)、benomyl Carbendazim、噻苯唑(thiabendazole)、麦穗宁(fuberidazole)、噻唑菌胺(ethaboxam)、依得利(etridiazole)、土菌消(hymexazole)、戊环唑(azaconazole)、烯唑醇(diniconazole-M)、噁咪唑(oxpoconazole)、多效唑(paclobutrazole)、烯效唑(uniconazole)、含有环庚醇和硫酸抑霉唑的1-(4-氯苯基)-2-([1,2,4]三唑-1-基)-唑；B2)嘧菌酯(azoxystrobin)、醚菌胺(dimoxystrobin)、烯肟菌酯(enestrobrin)、氟嘧菌酯(fluoxastrobin)、醚菌酯(cresoxime-methyl)、苯氧菌胺(methinostrobin)、、肟醚菌胺(orisatrobin)、啶氧菌酯(picoxystrobin)、吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)、肟菌酯(trifloxystrobin)、烯肟菌酯(enestrobrin)、(2-氯-5-[1-(3-甲基苄氧亚氨基)乙基]苄基)氨基甲酸甲酯、(2-c Ro-5-[1-(6-甲基吡啶-2-基甲氧基亚氨基)乙基]苄基)氨基甲酸甲酯、2-(邻-(2,5-二甲基苯氧亚甲基)-苯基)-3-甲氧基丙烯酸甲酯、2-(2-(6-(3-氯-2-甲基-苯氧基)-5-氟-嘧啶-4-基氧基)-苯基)-2-甲氧基亚氨基-N-甲基乙酰胺和3-甲氧基-2-(2-(N-(4-甲氧基-苯基)-环丙烷甲酰亚胺磺酰基甲基)-苯基)-丙烯酸甲酯嗜球果伞素；B3)萎锈灵(carboxin)、苯霜灵、精苯霜灵(benalaxyl-M)、环酰菌胺(phenhexamide)、氟担菌宁(flutolanil)、呋吡菌胺(furametopil)、担菌宁(mepronil)、甲霜灵(metalaxyl)、精甲霜灵(mefenoxam)、Off-race、恶唑烷酮(oxadixyl)、、氧化萎锈灵(oxycarboxyl)、吡噻菌胺(penthiopyrad)、吡唑萘菌胺(isopyrazam)、噻呋酰胺(tifluzamide)、噻嗪基(thiazinyl)、3,4-二氯-N-(2-氰基苯基)异噻唑-5-甲酰胺、烯酰吗啉(dimethomorph)、氟吗啉(flumorph)、氟酰菌胺(flumetober)、氟吡菌胺(picobenzamide)、苯酰菌胺(zoxamide)、加普胺(carpropamide)、双氯氰菌胺(diclocimet)、双炔酰菌胺(mandipropamide)、N-(2-(4-[3-(4-氯苯基)丙-2-炔氧基]-3-甲氧基苯基)乙基)-2-甲磺酰基-氨基-3-甲基丁酰胺、N-(2-(4-[3-(4-氯苯基)丙-2-炔氧基]-3-甲氧基-苯基)乙基)-2-乙磺酰氨基-3-甲基丁酰胺、3-(4-氯苯基)-3-(2-异丙氧羰基-氨基-3-甲基-丁酰氨基)丙酸甲酯、N-(4’-溴联苯-2-基)-4-二氟甲基-甲基噻唑-δ-甲酰胺、N-(4’-三氟甲基联苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基噻唑-5-甲酰胺、N-(4’-氯-3’-氟联苯-2-基)-4-二氟甲基-2-甲基-噻唑-5-甲酰胺、N-(3,4’-二氯-4-氟联苯-2-基)-3-二氟-甲基-1-甲基吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氯-5-氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑Ru-4-甲酰胺、N-(2-氰基苯基)-3,4-二氯异噻唑-5-甲酰胺、2-氨基-4-甲基-噻唑-5-羧基苯胺、2-氯-N-(1,1,3-三甲基-茚满-4-基)-烟酰胺、N-(2-(1,3-二甲基丁基)-苯基)-1,3-二甲基-5-氟-1H-吡唑-4甲酰胺、N-(4’-氯-3’,5-二氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4’-氯-3’,5-二氟联苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3,4’-二氯-5-氟-联苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,5-二氟-4’-甲基-联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,5-二氟-4’-甲基-联苯-2-基)-3-三氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(顺式-2-双环丙基-2-基-苯基)-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(反式-2-双环丙基-2-基-苯基)-3-二氟-甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、氟吡菌酰胺(fluopyram)、N-(3-乙基-3,5-5-三甲基-环己基)-3-甲酰氨基-2-羟基苯甲酰胺、土霉素、silthiophane、N-(6-甲氧基-吡啶-3-基)环丙烷甲酰胺、2-碘-N-苯基苯甲酰胺、N-(2-双环丙基-2-基-苯基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-1,3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-5-氟吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-5-氯-1,3-二甲基-吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-3-氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-3-(氯氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-5-氟-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-5-氯-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-3-(氯二氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-5-氟-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-5-氯-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基羧基N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-1,3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯基)-2-基)-1,3-二甲基-5-氟吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-5-氯-1,3-二甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-3-氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-3-(氯氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基-5-氟-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-5-氯-3-二氟甲基-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-3-(氯二氟甲基)-1-甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-5-呋喃-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(2’,4’,5’-三氟联苯-2-基)-5-氯-1-甲基-3-三氟甲基吡唑-4-基甲酰胺、N-(3,4’-二氯-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氯-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氟-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氟-3-氟联苯Ru-2-基)-1-甲基-S-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’-氯-4’-氟-3-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氯-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4甲酰胺、N-(3’,4’-二氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-S-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氯-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氟-4氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’-氯-4’-氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-S-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氯-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氯-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-S-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4-二氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’,4’-二氯-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(3’-氯-4’-氟-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-二氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4’-氟-4-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4’-氟-5-氟联联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4’-氯-5-氟邻联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4’-甲基-5-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4’-氟-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4’-甲基-5-氟联苯-2-基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-(4’-氟-6-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-π溶胶-4-甲酰胺、N-(4’-氯-6-氟联苯-2-基)-1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-[2-(1,1,2,3，3,3-六氟丙氧基)-苯基]-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、N-[4’-(三氟甲基硫代)-联苯-2-基]-3-二氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺和N-[4’-(三氟甲基硫代)-联苯-2-基]-1-甲基-3-三氟甲基甲酰胺包括1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺；B4)氟啶胺、啶斑肟(pyrifenox)、乙嘧酚磺酸酯(bupyrimeto Prodinil)、嘧菌环胺(Phenarimol)、嘧菌腙、嘧菌胺、尼瑞莫(Nuarimol)、氟苯嘧啶醇(Pyrimethanyl)、三叶豆甙(Trifolin)、拌种咯(Fenpicuronyl)、氟咯菌腈、、阿尔迪莫(Ardimorph)、环烷吗啉、丁苯吗啉、十三吗啉、苯锈啶、异菌脲、腐霉利(Procimidone)、乙烯菌核利、恶唑菌酮、辛噻酮(Fenamiden)、烯丙苯噻唑(Octopronone–Azole)、5-氯-7-(4-甲基哌啶-1-基)-6-(2,4,6-三氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶、敌菌灵、哒菌酮(dichromedin)、咯喹酮(pyroxylone)、丙氧喹啉、三环唑、2-丁氧基-6-碘-3-丙基色烯-4-酮、阿拉酸式苯-S-甲基(acibenzoral-S-methyl)、敌菌丹(captahol)、克菌丹、棉隆(dazome)、灭菌丹(Holpet)、氰菌胺(phenoxanyl)、苯氧喹啉(quinoxyphene)、N,N-二甲基-3-(3-溴-6-氟-2-甲基吲哚-1-磺酰基)-[1,2,4]三唑-1-磺酰胺、乙基-6-辛基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2,7-二胺、2,3,5,6-四氯-4-甲磺酰基-吡啶、3,4,5-三氯吡啶-2,6-二腈、N-(1-(5-溴-3-氯-吡啶-2-基)-乙基)-2,4-二氯烟酰胺、N-((5-溴-3-氯吡啶-2-基)-甲基)-2,4-二氯烟酰胺、二氟林(diflumetrim)、氯定(nitrapirine)、烯酰吗啉，氟酰亚胺杂环化合物，包括杀稻瘟菌素S、灭螨猛、咪菌威、二芬唑醌、苯敌快-甲基硫酸盐(diphenzoquat-methylsulfate)、恶喹酸(oxophosphate)和病花灵(piperalin)；B5)代森锰锌、代森锰、威百亩、甲硫威(metasulfocarb)、代森联(methylam)、福美铁(felvam)、丙森锌、福美双(tyram)、代森锌(dineb)、福美锌、乙霉威、异丙菌威(iprovaricarb)、苯噻菌胺(benchavaricarb)、霜霉威丙酰胺、霜霉威盐酸盐、4-氟苯基-N-(1-(1-(4-氰基苯基)-乙磺酰基)但2-基)氨基甲酸酯、氨基甲酸酯，包括3-(4-氯苯基)-3-(2-异丙氧羰基氨基-3-甲基-丁酰氨基)丙酸甲酯，或B6)胍、十二烷基胍单乙酸酯、多果定游离碱(dodine Free base)、双胍辛胺(iminotadine)、双胍盐、抗生素：春雷霉素、链霉素、多氧霉素、有效霉素A，硝基苯衍生物：乐杀螨、dinocup、消螨通，含硫杂环化合物：二噻农、稻瘟灵，有机金属化合物：芬丁盐，有机磷化合物：敌瘟磷、异稻瘟净(iprobenphos)、乙膦酸、三乙膦酸铝(fosetyl-aluminum)、亚磷酸及其盐类、吡菌磷、甲基立枯磷(tolcrofos-methyl)，有机氯化合物：苯氟磺胺(dichlorofluanid)、磺菌胺(fursulfamide)、六氯苯、苯酞、戊菌隆(pencyclon)、五氯硝基苯、甲基硫菌灵、对甲抑菌灵(tolylfluani)和其它：环氟菌胺、霜脲氰(Simoxanyl)、甲菌定(Dimethylylmol)、乙嘧酚(Ethymol)、呋霜灵(Flaxil)、美曲酮(Metraphenone)和螺环氧沙(Spiroxa)，双胍辛乙酸盐、双胍辛烷乙酸盐酸盐、双胍三辛烷基苯磺酸盐(iminoctadine-tris(albesylate))、春雷霉素盐酸盐一水合物、二氯芬、五氯苯酚及其盐类、N-(4-氯-2-硝基苯基)-N-乙基-4-甲基苯磺酰胺、氯硝胺、酞菌酯(nitrotar-isopropyl)、四氧硝基苯(technazen)、联苯、溴硝醇、二苯胺、米多霉素(myrdiomycin)、羟基喹啉铜、调环酸钙、N-(环丙基甲氧基亚氨基-(6-二氟甲氧基-2,3-二氟-苯基)-甲基)-2-苯乙酰胺、N’-(4-(4-氯-3-三氟甲基-苯氧基)-2,5-二甲基-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N’-(4-(4-氟-3-三氟甲基-苯氧基)-2,5-二甲基-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N’-(2-甲基-5-三氟甲基-4-(3-三甲基硅烷基-丙氧基)-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒和N’-(5-二氟甲基-2-甲基-；其他杀真菌剂，包括4-(3-三甲基硅烷基-丙氧基)-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒。

杀线虫剂或生物杀线虫剂：苯菌灵、二氧威(cloetocarb)、涕灭砜威、环线威(tilupert)、除线特、苯线磷(fenamifos)、硫线磷(kazusafos)、除线磷(diclofenthion)、灭线磷(etoprophos)、丰索磷、噻唑膦(phostiazete)、速杀硫磷、氯氨磷(isamidophos)、氯唑磷、磷虫威(phosphocarbimisiafos)、硫磷嗪(phosphocarbimisiafos Mecalphone)、乙酰虫腈、苯鲁噻唑(Benclothiaz)、氯化苦、棉隆、联氟砜(Fluenesulfone)、1,3-二氯丙烯、二甲基二硫醚、威百亩、甲基二硫代甲氨酸钾、威百亩盐(全部由MITC生产)、甲基溴、生物土壤改良(例如芥菜籽、芥子提取物)、土壤蒸汽熏蒸、异硫氰酸烯丙酯(AITC)、硫酸二甲酯、糠醛(furfual)(乙醛)。

本发明合适的植物生长调节剂包括：植物生长调节剂：D1)抗毒素，例如氯贝特酸、2,3,5-三碘苯甲酸；D2)4-CPA、2,4-D、2,4-DB、2,4-DEP、滴丙酸(di Chlorprop)、2,4,5-涕丙酸、IAA、IBA、萘乙酰胺、α-萘乙酸、1-萘酚、萘氧乙酸、环烷酸钾、环烷酸钠、生长素例如2,4,5-T；D3)2iP，苄基腺嘌呤(benzyladenine Cytokinins)，例如4-羟基苯乙醇、激动素(kinetin)和玉米素；D4)枯叶剂，例如氰氨化钙、噻节因(dimethipine)、草藻灭(endal)、乙烯利、脱叶亚磷(melphos)、甲氧隆(methoxuron)、五氯苯酚、噻苯隆(thiazulone)和脱叶磷；D5)四烯雌酮(abiglycine)和1-甲基乙烯，例如环丙烯抑制剂；D6)乙烯释放剂，例如ACC、乙烯硅(etaceracyl)、乙烯利(etephone)、乙二肟；D7)杀配子剂(gametoside)，例如杀雄嗪(fenridazone)和马来酸酰肼；D8)赤霉素，例如赤霉素和赤霉酸；D9)脱落酸、嘧啶醇(ansimidol)、地乐胺、西维因、三丁氯苄膦(chlorophonium)、氯苯胺灵(chloroprofam)、调呋酸(dikeglac)、氟节胺、氟化酰胺、草铵膦、增甘膦(glyphosdine)、异嘧醇(isopyrimole)、茉莉酸、马来酰肼、助壮素、哌壮素、茉莉酸丙酯、苯胺灵(profam)、调节胺(thiaojian)、2,3,5-生长抑制剂，例如三碘苯甲酸；D10)形态素(morphactins)，例如整形素(chlorflurane)、整形醇、二氯芴丁酯(dichloroflurenol)、芴丁酯(flulenol)；D11)chlormecote、生长阻滞剂，例如矮壮素(nozide)、呋嘧醇、氟磺酰草胺、多效唑、四环唑(tetocyclase)、烯效唑；D12)生长刺激剂，例如油菜素内酯、高油菜素内酯、DCPTA、氯吡苯脲、土菌消、补骨内酯(prosuler)、三十烷醇等试剂；D13)菊乙胺酯(Bacmedesh)、氟草黄(benzofluor)、丁环草磷(buminafos)、香芹酮、氯化胆碱、siobide、苯哒嗪钾(clofenset)、氰胺、环丙酰草胺(cyclanilide)、环己酰亚胺(cyclanilide)、环丙磺酰胺(cyprosulfamide)、爱增美(epocholeon)、吲唑酯(etizlozate)、乙烯、呋苯硫脲(fufenthiourea)、乙二醇缩糖醛(fullerane)、增产肟(Heptopargyl)、氯乙亚磺酸(holosulf)、抗倒胺(inabenfide)、caletazan、砷酸铅、磺菌威(metasulfocarb)、调环酸、比达农(pida Down)、杀雄啉(Shintofen)、抑芽唑、未分类的植物生长调节剂，例如抗倒酯(trinexapac)。

在一个实施方案中，本公开的农作物保护剂可以包含吡虫啉、联苯菊酯、甲霜灵、戊唑醇、嘧菌酯、萎锈灵、福美双(Thiram)、咯菌腈、腈菌唑、精甲霜灵、氟唑环菌胺、噻虫嗪、种菌唑(lpconazole)或阿维菌素中的一种或组合。

本公开的组合物、制剂和方法可用于控制来自一种或多种下列植物病原性昆虫的虫害，所述植物病原昆虫包括但不限于：植物病原线虫、南方根结线虫、大豆胞囊线虫(SCN)、肾形线虫、玉米根虫、西部玉米根虫(WCR)、北部玉米根虫(NCR)、南方玉米根虫(SCR)、蚜虫、绿桃蚜(桃蚜)、棉蚜虫(棉蚜)、小菜蛾(吊丝虫)、毛虫(斜纹夜蛾)、赤拟谷盗(赤拟谷盗)、草地粘虫(草地贪夜蛾)和褐飞虱(褐稻虱)、绿豆象(四纹豆象)、欧洲玉米螟(玉米螟(Ostinia nubilalis))、烟草天蛾(烟草天蛾)、三化螟虫(斑禾草螟)、稻褐飞虱(Rice brown plant hopper)(褐稻虱)、稻绿叶蝉(Rice green leaf hopper)(Nephotettix cinciteps)、马铃薯叶蝉(Potato leaf hopper)(蚕豆微叶蝉(Empoascafabae))、桃蚜(Peach potato aphid)(桃蚜(Myzus persicae))、豌豆蚜虫(豌豆蚜(Acyrthosiphon pisum))、麦秆蝇(Chlorop pumilionis)、蟋蟀、蝗虫、白蚁、蓟马、蚂蚁、螨虫(螨)、鳞翅目昆虫(甘蓝夜蛾)、麦种蝇(麦地种蝇(Delia coarctata))、麦蚜虫(麦长管蚜)和科罗拉多马铃薯甲虫(马铃薯甲虫)。

在一个实施方案中，病原性昆虫包括植物病原线虫、南方根结线虫、胞囊线虫(SCN)、肾形线虫、病变线虫、玉米根虫、西部玉米根虫(WCR)、北部玉米根虫(NCR)、南部玉米根虫(SCR)、蚜虫、绿桃蚜(桃蚜)或棉蚜虫(棉蚜)中的一种或组合。

实施例

实施例1

K-357抑制线虫体外孵化

进行体外实验以评价地衣芽孢杆菌K-357控制三种不同类型的植物线虫的效果：大豆胞囊线虫、南方根结线虫和肾形线虫。将线虫卵在孵化室中生长，并用不同剂量的K-357孢子处理10天。

该实验有四个处理：

1.对照：水

2.K-357@0.0256 1L/ha(相当于50ml中含5.5×10⁶CFU)

3.K-357@0.1428 5L/ha(相当于50ml中含2.75×10⁷CFU)

4.K-357@0.3333 10L/ha(相当于50ml含的5.5×10⁷CFU)

将冻干的K-357分散在水中以提供浓缩溶液(10⁸CFU/ml)，将浓缩液稀释成总共50毫升，得到上面所示的三种不同浓度。将每种50ml溶液施加于培养皿中存在的3种不同种类的线虫卵，并放置10天。然后对卵进行显微镜评估以获得孵化计数。

数据如图1-5所示。图1是显示在大豆胞囊线虫、南方根结线虫和肾形线虫上施用不同剂量的K-357后线虫孵化计数百分比的图，表明K-357可以以剂量依赖性方式减少线虫孵化，包括肾形线虫减少87％和完全抑制南方根结线虫孵化。

图2A-2F是没有添加地衣芽孢杆菌K-357的线虫的图像，显示：A)线虫卵、幼虫和成虫；B)卵中未孵化的幼虫；C)孵化的幼虫；D)成年线虫；E)成年线虫；和F)成年线虫的嘴。

图3是放大1000倍显示寄居有地衣芽孢杆菌K-357的成年线虫的图像。

图4是地衣芽孢杆菌K-357的放大1000倍的图像，其被染成红色，包围着固定的肾形线虫卵。

图5是放大1000倍的被染成紫色的地衣芽孢杆菌K-357包围的肾形卵的图像。幼体蠕虫在卵的中心是可见的，在显微镜下是固定的。

实施例2

K-357处理的种子在棉花产量上优于涕灭威

在美国的5个不同地点进行了棉花田试验，以评估与垄沟内施用化学杀线虫剂涕灭威(15磅/英亩)和氟吡菌酰胺(16盎司/英亩)相比，用地衣芽孢杆菌K-357作为杀线虫剂处理的种子的有效性。在播种时，垄沟内施入化学杀线虫剂涕灭威和氟吡菌酰胺。测定线虫数量和棉花产量。

田间试验处理组如下：

1.杀真菌剂(嘧菌酯、咯菌腈、精甲霜灵、氟唑环菌胺)+杀虫剂(噻虫嗪)+杀线虫剂(涕灭威15磅/英亩)

2.杀真菌剂(嘧菌酯、咯菌腈、精甲霜灵、氟唑环菌胺)+杀虫剂(噻虫嗪、吡虫啉)+杀线虫剂(氟吡菌酰胺(BAYER)16盎司/英亩)

3.杀真菌剂(甲霜灵、咯菌腈、腈菌唑)+杀虫剂(吡虫啉)+杀线虫剂K-357@2.000Fl.Oz./CWT

田间试验以随机完全区组的形式进行，每种处理重复五或六次(取决于合作者设置)。种植密度为每行ft2.5粒种子，地块大小为4行×50ft。

K-357处理种子的方法。地衣芽孢杆菌K-357处理的棉花种子如下制备。将地衣芽孢杆菌孢子分散在含有89.9重量％大豆蛋白水解产物(含4％可溶性氮)和0.15重量％螯合的硫酸亚铁的液体肥料溶液中，浓度为每毫升7.0×10⁹CFU(命名为“K-357液体”)。将K-357液体以2液体盎司/100磅棉籽的比率施用于棉籽(命名为“2.000Fl.Oz./CWT”)。

图6-7显示了田间试验数据的实施例。

图6是显示在阿肯色州的田间试验中，与用K-357处理的种子相比，用化学杀线虫剂涕灭威或氟吡菌酰胺在垄沟中处理的棉花种子出苗55天后，肾形线虫计数的百分比的图。结果显示，地衣芽孢杆菌K-357将线虫数量减少至化学标准涕灭威的约70％，并且优于氟吡菌酰胺。

图7是显示本试验收获时棉花产量百分比的图。出人意料的是，K-357处理的种子比用氟吡菌酰胺(～4.5％)和涕灭威(～2.5％)进行垄沟处理的棉花产量更高。

实施例3

K-357处理的种子在棉花产量方面优于含有VIBRANCE的AVICTA ELITE PLUS

在美国的5个不同地点进行棉田试验，以评价与用含有VIBRANCE(本文称为阿维菌素)作为杀线虫剂的AVICTA ELITE PLUS处理的种子相比，用地衣芽孢杆菌K-357作为杀线虫剂处理的种子在减少线虫数量和增加产量方面的功效。在试验中，将用两种不同比例的地衣芽孢杆菌K-357处理的种子与用以标示比例施用的阿维菌素处理的种子进行比较。

在田间试验中，处理的棉花种子组如下：

1.杀真菌剂(嘧菌酯、咯菌腈、精甲霜灵、氟唑环菌胺)+杀虫剂(吡虫啉、噻虫嗪)+杀线虫剂(阿维菌素、来自Syngenta的含有VIBRANCE的AVICTA ELITE PLUS，按标示比率施用)

2.杀真菌剂(甲霜灵、咯菌腈、腈菌唑)+杀虫剂(吡虫啉)+杀线虫剂(K-357@2.000Fl.Oz./CWT)

3.杀真菌剂(甲霜灵、咯菌腈、腈菌唑)+杀虫剂(吡虫啉)+杀线虫剂(K-357@3.000Fl.Oz./CWT)

田间试验以随机完全区组的形式进行，每种处理重复五或六次(取决于合作者设置)。种植密度为每行ft2.5粒种子，地块大小为4行×50ft。

K-357处理种子的方法。将地衣芽孢杆菌孢子分散在含有89.9重量％大豆蛋白水解产物(含4％可溶性氮)和0.15重量％螯合的硫酸亚铁的液体肥料溶液中，浓度为每毫升7.0×10⁹CFU(命名为“K-357液体”)。K-357液体以2或3液体盎司/100磅棉籽的比率施用于棉籽(分别命名为“2.000Fl.Oz./CWT”和“3.000Fl.Oz./CWT”)。

图8-11显示了田间试验结果的实施例。

图8显示了在德克萨斯州进行的棉田试验中，播种时、60天后和收获时的根结线虫幼年种群，比较了用阿维菌素处理的种子和用作为杀线虫剂的K-357处理的种子。虽然60天后用阿维菌素处理的线虫数量低于用K-357处理的线虫数量，但这种关系在收获时发生逆转。收获时，用K-357处理的的线虫数量减少到15％以下，而用阿维菌素处理的线虫数量为40％。事实上，K-357组的线虫种群开始时较高，并随着试验进行稳步下降。相比之下，阿维菌素组的线虫数量在60天后逆转并迅速增加。这些数据表明，与阿维菌素相比，K-357的抑制效果更持久。

图9是显示在密西西比州的田间试验中，在种植用阿维菌素或2Fl.Oz./CWT的K-357或3.000Fl.Oz./CWT的K-357作为杀线虫剂处理的棉花种子后25天，线虫计数百分比的图。出人意料的是，分别用2.000Fl.Oz./CWT的K-357和3.000Fl.Oz./CW的K-35T处理的种子的线虫数量比用阿维菌素处理的种子的线虫数量低约8％和约12％。

图10是显示三种不同种子处理方式收获时棉花产量的图。用2.000Fl.Oz./CWT的K-357和3.000Fl.Oz./CWT的K-357处理的结果对产量的影响甚至比对线虫计数量的影响更显著，分别使产量增加54磅/英亩和102磅/英亩。

图11是显示在图9的田间试验中种植棉花种子1-9天、12天和25天后计算的植物活力的图。数据显示K-357的两种用量在种植后12-25天之间提高了植物活力，而阿维菌素没有观察到活力的提高。

实施例4

K-357在体外杀死线虫的效果优于Avicta

进行体外实验，以评价地衣芽孢杆菌K-357对四种不同类型的植物线虫的效果：大豆胞囊线虫、南方根结线虫、肾形线虫和病变线虫，并与化学杀线虫剂Avicta进行比较。将线虫置于培养皿中，并如下所述用Avicta、水或K-357孢子处理48小时。

该实验有三个处理：

1.Avicta(Syngenta，0.031％)

2.对照：水

3.K-357@0.3333 10L/ha(相当于50ml含5.5×10⁷CFU)

将冻干的K-357分散在水中以提供浓缩溶液(10⁸CFU/ml)，将浓缩溶液稀释成总共50ml。类似地将Avicta稀释成50ml，并将上述处理(1)-(3)中的每一种施加到存在于培养皿中的4种不同种类的线虫卵，并放置48小时。通过立体显微镜评估死亡率。表现出任何移动性或以弯曲形状出现的线虫被认为是活的，如果线虫没有表现出任何移动并且它们的身体形状是直的，它们被认为是死的。

数据显示在图12中，该图显示了4种类型的线虫中每个线虫死亡率百分比。出人意料的是，K-357处理对杀死线虫的效果与Avicta相同或显著更好。具体地，K-357在杀死南方根结线虫、大豆胞囊线虫和病变线虫方面同等有效，并且在杀死肾形线虫方面明显优于Avicta(分别为84.6％和35.4％)。

实施例5

K-357和化学杀虫剂/杀真菌剂处理玉米种子的玉米田间试验

在美国进行了玉米田试验，以评价单独用地衣芽孢杆菌K-357处理的种子以及用地衣芽孢杆菌K-357与化学杀虫剂和杀真菌剂联合处理的种子减少玉米根虫(CRW)损害和增加产量的能力。这些试验是在蒙茅斯州的伊利诺伊大学进行的，试验地点位于CRW病毒大量滋生的田地里。在试验中，化学杀虫剂和杀真菌剂按标示量施用。确定了玉米株数、根损伤平均分数和产量。

在田间试验中，处理的玉米种子组如下：

1.杀真菌剂(嘧菌酯、甲霜灵、戊唑醇、萎锈灵(vitavax)(37.5％萎锈灵(Carboxin)+37.5％DS福美双))+杀虫剂(联苯菊酯@3.6FL.Oz./CWT，吡虫啉@4.8FL.Oz./CWT)

2.K-357(2.00FL.Oz./CWT)+杀真菌剂(嘧菌酯、甲霜灵、戊唑醇、萎锈灵(vitavax)(37.5％萎锈灵(Carboxin)+37.5％DS福美双))+杀虫剂(联苯菊酯@3.6FL.Oz./CWT，吡虫啉@4.8FL.Oz./CWT)

3.K-357(2.00FL.Oz./CWT)+杀真菌剂(嘧菌酯、甲霜灵、戊唑醇、萎锈灵(vitavax)(37.5％萎锈灵(Carboxin)+37.5％DS福美双))

4.K-357(2.00FL.Oz./CWT)

田间试验以随机完全区组的形式进行，每个处理重复四次。种植密度为4行×30英尺(30英寸行距)，地块之间有5英尺未种植的小径。种植后37天记录林分计数，种植后64天记录根节损伤分数。

K-357处理种子的方法。将地衣芽孢杆菌孢子分散在含有89.9重量％的大豆蛋白水解产物(含4％可溶性氮)和0.15重量％的螯合的硫酸亚铁的液体肥料中，浓度为7.0×10⁹CFU/毫升(命名为“K-357液体”)。将K-357液体以2或3液体盎司/100磅玉米种子的比率施用于玉米种子(分别命名为为“2.000Fl.Oz./CWT”和“3.000Fl.Oz./CWT”)。

在早期营养期，至少记录一次林分计数和植株高度。对地块进行早期季节害虫监测，如果发生自然虫害，则收集所有地块的数据。收集、清洗玉米根系(每块地5个)，并使用0-3节伤害等级对玉米根虫损害进行评级；这一评级的时间是基于使用度日(degreedrays)和未处理地块的初步评估(通常是7月中下旬)确定的峰值损失估计值。使用地块收获从第2行记录产量。将数据进行方差分析和事后均值分离。

种植后37天和64天的林分计数和根节损伤分析的结果分别显示在图13和14中。种子处理组#1(杀虫剂/杀真菌剂)和种子处理组#2(K-357+杀虫剂/杀真菌剂)的平均林分计数都是33.8(图13)。然而，图14中的根节损伤图显示，向杀虫剂/杀真菌剂混合物中添加K-357降低了根节损伤。具体地，种子处理组#2(K-357+杀虫剂/杀真菌剂)的根节损伤分数为1.12，而种子处理组#1(杀虫剂/杀真菌剂)的根节损伤分数为1.47。

实施例6

K-357抑制由绿桃蚜传播的马铃薯Y病毒

下面概述的实验的目的是使用本氏烟草离体叶片上的病毒传播试验来确定地衣芽孢杆菌K-357是否能减少或防止马铃薯Y病毒(PVY)的传播。绿桃蚜(GPA，桃蚜)是PVY最有效的媒介。假设地衣芽孢杆菌K-357能够使半翅目害虫(例如蚜虫)衰弱，从而完全抑制和/或减少PVY传播。

蚜虫和病毒分离物：在控制气候的室内(14h光照；20±3℃；70％相对湿度)，在萝卜和芥菜幼苗的混合物上培养和维持一群GPA。这项研究中使用的PVY菌株是重组菌株NTN，其以前是从科罗拉多州圣路易斯谷受感染的马铃薯植物中收集的。

人工饲料分析：通过在培养皿(直径60mm)上拉伸一片保鲜膜来构建饲养室。然后，加入1.2ml人工饲料(Dadd，R.&Mittler，T.Cellular and Molecular Life Sciences 22，832-833(1966))，并放置第二层拉伸保鲜膜以形成喂食袋，蚜虫可通过该喂食袋以该饲料为食。将一个O形圈放在喂食袋上，并将5只蚜虫放在喂食袋上。整个装置被60mm培养皿的盖子盖住。

实验#1：为了确定K-357是否起到杀蚜剂的作用，首先进行测定以确定饲喂K-357时GPA的死亡率。简而言之，使年龄同步的GPA喂食含有三种不同浓度(低、中、高)K-357的人工饲料。24h和48h后，将蚜虫转移到本烟(N.benthamiana)的离体叶片上。在2周的时间内监测蚜虫的生长和死亡率。将不含K-357的人工饲料作为对照。K-357的浓度用于所有将来的实验中，将导致低于15％的死亡率，并且类似于控制饲料水平。

目的1：病毒传播效率的测定：为了使人工饲料实验标准化，在每次实验开始时选择1龄若虫(年龄为0-24h)。目的1的实验在控制气候的室内进行。将使用一个完全的实验程序(参见图15)。图15说明了如下所述研究K-357对绿桃蚜传播PVY的影响的实验装置的连续步骤。

第一步:通过将1龄若虫放在萝卜和芥菜幼苗的混合物上，产生年龄同步的蚜虫。

第二步:一旦每个蚜虫达到第三龄(24-48h后)，将蚜虫转移到含有K-357浓度的饲养室中，该浓度导致低于15％的死亡率。将不含K-357的饲料作为对照。允许蚜虫进食24和48h，以确保K-357被蚜虫吸收。对于每个处理(4个处理x2喂养时间点)，使用五只年龄同步的GPA。

第三步:在适当的喂食时间(24和48h)后，将GPA小心地转移至PVY^NTN阳性或感染的本烟植物中，并允许喂食48h。喂食的这段时间是病毒获得进入期或AAP。

第四步:在48h的PVY获取期后，将单只GPA(每个健康叶片一只GPA)转移至单片健康的离体的本烟叶片上，进行30min的孵育，进入饲养期。在实验室和生长室条件下，将一片离体的本烟叶片放在有湿滤纸的培养皿中，其可以存活长达一个月而没有任何有害影响。移除、收集和储存单只GPA用于进一步分析(如果需要)。

第五步:在三周的时间内，每天监测离体的本烟叶片症状的发展。在症状发展开始时，收集一小部分枝叶，使用PVY免疫条(AGDIA，Inc.，印第安纳州)检测PVY的存在。

所有的试验重复5次，10个重复含有一只蚜虫(总数：400只GPA个体和离体的本烟叶片)。用ANOVA分析确定K-357对病毒传播的影响(每批植物中感染病毒的植物数量)。

因此，尽管已经参考具体实施方案、特征和说明性实施方案描述了方法和系统，但是应当理解的是，本主题的效用并不因此受到限制，而是延伸到并包含许多其他变化、修改和替代实施方案，如本主题领域的普通技术人员基于本文的公开内容将会想到的。

本文所述的组合物、方法和特征的各种组合和子组合是可以预期的，并且对于了解本公开内容的技术人员来说是显而易见的。除非这里有相反的指示，否则这里公开的各种特征和元件中的任何一个都可以与一个或多个其它公开的特征和元件相结合。相应地，下文要求保护的主题旨在被广泛地理解和解释为在其范围内包括所有这样的变化、修改和替代实施方案，并且包括权利要求的等同物。

Claims (43)

1.控制植物虫害的方法，所述方法包括：

将植物或植物种子种植在合适的生长环境中，所述植物或种子具有组合物的包衣或部分包衣，所述组合物包括：

地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和

任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，

其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

2.控制植物虫害的方法，所述方法包括：

向植物的种子、植物的枝叶、植物的根或植物周围的土壤或生长环境中递送组合物，所述组合物包括：

地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和

任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，

其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

3.控制植物虫害的方法，所述方法包括：

将植物或植物种子种植在合适的生长环境中，所述植物或种子具有组合物的包衣或部分包衣，所述组合物基本上由以下成分组成：

地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和

一种或多种载体、赋形剂或营养物，

其中所述组合物在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有。

4.控制植物虫害的方法，所述方法包括：

向植物的种子、植物的枝叶、植物的根、或植物周围的土壤或生长环境递送组合物，所述组合物基本上由下列成分组成：

地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物，和

一种或多种载体、赋形剂或营养物，

其中所述组合物在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有。

5.根据权利要求1或3所述的方法，其中所述地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹CFU/g、9.0×10⁷CFU/g至2.0×10⁴CFU/g或4.0×10⁸CFU/g至1.0×10⁴CFU/g种子的量存在于种子上。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述农作物保护剂包括吡虫啉、联苯菊酯、甲霜灵、戊唑醇、嘧菌酯、萎锈灵、福美双、咯菌腈、腈菌唑、精甲霜灵、氟唑环菌、噻虫嗪、种菌唑或阿维菌素中的一种或组合。

7.根据权利要求2或4所述的方法，其中所述组合物为液体形式，并且所述地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²至1.0×10¹CFU/ml、1.0×10¹¹CFU/ml至1.0×10²CFU/ml或1.0×10¹⁰CFU/ml至1.0×10⁴CFU/ml的浓度存在。

8.根据权利要求2或4所述的方法，其中所述组合物为粉末、干可湿性粉末、可涂抹颗粒或干可湿性颗粒的形式，并且所述地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹⁰CFU/g、5.0×10¹¹CFU/g至1.0×10³CFU/g或1.25×10¹¹CFU/g至1.0×10⁹CFU/g的量存在。

9.处理植物或植物种子的方法，包括对植物或植物种子施用组合物包衣，所述组合物包衣包含：

地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和

任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，

其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹CFU/g、9.0×10⁷CFU/g至2.0×10⁴CFU/g或4.0×10⁸CFU/g至1.0×10⁴CFU/g种子的量施用于种子。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述包衣被施加到植物枝叶、植物根尖或植物移植根。

12.根据权利要求9所述的方法，其中所述农作物保护剂包括吡虫啉、联苯菊酯、甲霜灵、戊唑醇、嘧菌酯、萎锈灵、福美双、咯菌腈、腈菌唑、精甲霜灵、氟唑环菌、噻虫嗪、种菌唑或阿维菌素中的一种或组合。

13.具有组合物包衣的植物或植物种子，所述组合物包衣包含：

地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；和

任选的一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，

其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

14.根据权利要求13所述的植物或种子，其中所述地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹CFU/g、9.0×10⁷CFU/g至2.0×10⁴CFU/g或4.0×10⁸CFU/g至1.0×10⁴CFU/g种子的量存在于所述种子上。

15.根据权利要求13所述的植物或种子，其中所述农作物保护剂包括吡虫啉、联苯菊酯、甲霜灵、戊唑醇、嘧菌酯、萎锈灵、福美双、咯菌腈、腈菌唑、精甲霜灵、氟唑环菌、噻虫嗪、种菌唑或阿维菌素中的一种或组合。

16.根据权利要求13所述的植物或种子，其中所述植物枝叶、植物根尖或植物移植根具有所述包衣。

17.根据权利要求1、2、3、4、9或13所述的方法或植物或植物种子，其中所述植物包含玉米蔬菜、单子叶植物、双子叶植物、棉花、水稻、大豆、番茄、谷类、块根/块茎和芸苔属蔬菜、葫芦科蔬菜、球茎蔬菜、柑橘、果实类蔬菜、草本植物/香料、叶类蔬菜、豆类/蔬菜(肉质的和干燥的豆类和豌豆)、油料作物、向日葵、梨果、核果、草莓、甘蔗、甜菜、坚果、猕猴桃、香蕉、草、观赏植物或硬木插条。

18.根据权利要求1、2、3、4、9或13所述的方法或植物或植物种子，其中所述昆虫包括植物病原线虫、南方根结线虫、大豆胞囊线虫(SCN)、肾形线虫、病变线虫、玉米根虫、西部玉米根虫(WCR)、北部玉米根虫(NCR)、南部玉米根虫(SCR)、蚜虫、绿桃蚜(桃蚜)或棉蚜虫(棉蚜)。

19.用于改善植物健康和/或产量的组合物，包含：

i.地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；

ii.大豆蛋白水解产物；

iii.螯合的硫酸亚铁；

iv.任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，

其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述大豆蛋白水解产物包含约4％的水溶性氮。

21.根据权利要求19所述的组合物，其中所述大豆蛋白水解产物以约60重量％至约99重量％存在于所述组合物中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约1.5重量％存在于所述组合物中。

22.根据权利要求19所述的组合物，其中所述大豆蛋白水解产物以约85重量％至约95重量％存在于所述组合物中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约0.3重量％存在于所述组合物中。

23.根据权利要求19所述的组合物，其中所述组合物为液体形式，并且所述地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²至1.0×10¹CFU/ml、1.0×10¹¹CFU/ml至1.0×10²CFU/ml或1.0×10¹⁰CFU/ml至1.0×10⁴CFU/ml的浓度存在。

24.根据权利要求19所述的组合物，其中所述组合物为粉末、干可湿性粉末、可涂抹颗粒或干可湿性颗粒的形式，并且所述地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹⁰CFU/g、5.0×10¹¹CFU/g至1.0×10³CFU/g或1.25×10¹¹CFU/g至1.0×10⁸CFU/g的量存在。

25.配制微生物农作物保护剂以改善植物健康和/或产量的方法，包括：

一起加入大豆蛋白水解产物、螯合的硫酸亚铁和一种或多种微生物农作物保护剂的生物培养物，其中所述一种或多种农作物保护剂以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于在制剂中。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述大豆蛋白水解产物包含约4％的水溶性氮。

27.根据权利要求25所述的方法，其中所述大豆蛋白水解产物以约60重量％至约99重量％存在于所述制剂中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约1.5重量％存在于所述制剂中。

28.根据权利要求25所述的方法，其中所述大豆蛋白水解产物以约85重量％至约95重量％存在于所述制剂中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约0.3重量％存在于所述制剂中。

29.具有组合物包衣的植物或植物种子，所述组合物包衣包含：

i.地衣芽孢杆菌K-357或具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；

ii.大豆蛋白水解产物；

iii.螯合的硫酸亚铁；

iv.任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，

其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

30.根据权利要求29所述的植物或植物种子，其中所述大豆蛋白水解产物包含约4％的水溶性氮。

31.根据权利要求29所述的植物或植物种子，其中所述大豆蛋白水解产物以约60重量％至约99重量％存在于所述组合物中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约1.5重量％存在于所述组合物中。

32.根据权利要求29所述的植物或植物种子，其中所述大豆蛋白水解产物以约85重量％至约95重量％存在于所述组合物中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约0.3重量％存在于所述组合物中。

33.根据权利要求29所述的植物或植物种子，其中所述地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹CFU/g、9.0×10⁷CFU/g至2.0×10⁴CFU/g或4.0×10⁸CFU/g至1.0×10⁴CFU/g的量存在于所述种子或植物上。

34.处理植物或植物种子的方法，包括：

对植物或植物种子施用组合物包衣，所述组合物包衣包含：

i.地衣芽孢杆菌K-357或其具有其所有鉴定特征的突变体的生物纯培养物；

ii.大豆蛋白水解产物；

iii.螯合的硫酸亚铁；

iv.任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或微生物农作物保护剂、生物农作物保护剂或化学农作物保护剂，

其中所述组合物不包括枯草芽孢杆菌，并且其中地衣芽孢杆菌K-357以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在于包衣中。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述大豆蛋白水解产物包含约4％的水溶性氮。

36.根据权利要求34所述的方法，其中所述大豆蛋白水解产物以约60重量％至约99重量％存在于所述组合物中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约1.5重量％存在于所述组合物中。

37.根据权利要求34所述的方法，其中所述大豆蛋白水解产物以约85重量％至约95重量％存在于所述组合物中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约0.3重量％存在于所述组合物中。

38.根据权利要求34所述的方法，其中所述组合物为液体形式，并且地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²至1.0×10¹CFU/ml、1.0×10¹¹CFU/ml至1.0×10²CFU/ml或1.0×10¹⁰CFU/ml至1.0×10⁴CFU/ml的浓度存在。

39.根据权利要求34所述的方法，其中所述地衣芽孢杆菌K-357以1.0×10¹²CFU/g至1.0×10¹CFU/g、9.0×10⁷CFU/g至2.0×10⁴CFU/g或4.0×10⁸CFU/g至1.0×10⁴CFU/g的量存在于种子或植物上。

40.改善植物健康和/或产量的微生物农作物保护剂制剂，包括：

i.一种或多种微生物农作物保护剂的生物培养物；

ii.大豆蛋白水解产物；

iii.螯合的硫酸亚铁；

iv.任选地，一种或多种载体、赋形剂、营养物或非微生物农作物保护剂，

其中所述一种或多种微生物农作物保护剂以适合在植物病原性昆虫存在下提高植物产量或减少植物虫害或两者兼有的量存在。

41.根据权利要求40所述的制剂，其中所述大豆蛋白水解产物包含约4％的水溶性氮。

42.根据权利要求40所述的制剂，其中所述大豆蛋白水解产物以约60重量％至约99重量％存在于所述制剂中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约1.5重量％存在于所述制剂中。

43.根据权利要求40所述的制剂，其中所述大豆蛋白水解产物以约85重量％至约95重量％存在于所述制剂中，且所述螯合的硫酸亚铁以约0.05重量％至约0.3重量％存在于所述制剂中。