CN116445592A - 一种改进的elisa测试方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种改进的ELISA测试方法。其中，该方法包括：采用酶联免疫吸附测试方法配置测试样本液；将所述测试样本液放入数字PCR设备，以通过数字PCR设备对所述测试样本液进行检测。本发明通过采用ELISA和dPCR结合的技术检测，采用ELISA配置好测试样本液，将测试样本液直接通过dPCR的液滴生成设备进行检测，降低了检测成本，提高了检测精度，解决了ELISA检测方案的重复性差和测试样本容易受到环境污染的问题。
Description
技术领域
本发明实施例涉及生物测试技术领域，尤其涉及一种改进的ELISA测试方法。
背景技术
酶联免疫吸附测定（Enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）技术，基于抗原-抗体的特异性和等比例行，是酶免疫测定技术，基本方法是将已知的抗原或抗体吸附（包被）在固相载体（聚苯乙烯微量反应板，也称酶标板）表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，加入相应的酶底物发生颜色反应，通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，通过颜色反应的深浅检测样本中相应抗体或抗原含量的检测技术。
ELISA用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量检测，也是检测抗原或抗体的最敏感技术之一。
然而，现有ELISA检测缺点如下：重复性不好；受自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性；不论仪器和手工操作，干扰因素较多。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明提供一种改进的ELISA测试方法，以提高检测精度，降低干扰因素。
本发明实施例提供了一种改进的ELISA测试方法，包括：
采用酶联免疫吸附ELISA测试方法配置测试样本液；
将所述测试样本液放入数字PCR设备，以通过数字PCR设备对所述测试样本液进行检测。
可选的，在采用酶联免疫吸附测试方法合成测试样本液之后，还包括：
将配置好的测试样本液加入数字PCR设备的测试管中，并将测试管盖上密封盖。
可选的，通过数字PCR设备对所述测试样本液进行检测，包括：
将测试样本液放入数字PCR设备中并装入测试芯片，以使测试样本液生成在数字PCR设备中生成油包水的小液滴；
通过荧光识别系统对所述小液滴中的荧光信号进行检测，以测得测试样本液中目标物数量。
本发明通过采用ELISA和dPCR结合的技术检测，采用ELISA配置好测试样本液，将测试样本液直接通过dPCR的液滴生成设备就可以进行检测，降低了检测成本，提高了检测精度，解决了ELISA检测方案的重复性差和测试样本容易受到环境污染的问题。尤其当样本液提取量少的情况下，通过数字PCR技术生成数量50倍于ELISA的微孔测试法的液滴，大大提高了检测精度；本发明中的液滴生成和检测同步完成，在短时间内可以实现对大量液滴的检测，检测速度和效率大大提高，降低了检测成本，有利于推广。此外，相较于直接采用dPCR进行检测的方案，采用ELISA配置好测试样本液的步骤也简化了传统dPCR直接进行检测的步骤。
附图说明
图1为本发明实施例提供的一种改进的ELISA测试方法的流程图；
图2为本发明实施例提供的配制测试样本液的流程图；
图3为本发明实施例提供的八连管的结构示意图；
图4为本发明实施例提供的数字PCR中测试样本液的检测示意图。
实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，附图中仅示出了与本发明相关的部分而非全部结构。
为了便于理解，先分别解释ELISA和数字PCR的工作原理。
其中，ELISA实验原理包括如下步骤：
包被：抗原或者抗体能以物理性吸附于固相载体表面，原因是蛋白质和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原抗体反应等免疫活性；
标记：抗原或者抗体可通过共价键与酶连接成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特点；
显色：酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或者抗体结合后，也被固定在固相载体上，加入酶的底物之后可出现显色反应，根据反应的颜色深浅可计算抗原或者抗体的相对含量。
数字PCR也叫Digital PCR（dPCR），是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说，数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环Ct值，不受扩增效率的影响，能够直接读出DNA的分子个数，能够对起始样本核酸分子绝对定量。数字PCR基本原理是将一个样本分成几十到几万份，然后再将其分配到不同的反应单元中，使每个微滴单元包含一个或多个拷贝的核酸分子（即DNA模板），每个单元都会对目标分子进行扩增，然后再对每个单元进行荧光信号的统计并计算。
图1为本发明实施例提供的一种改进的ELISA测试方法的流程图， 具体包括如下步骤：
S1、采用酶联免疫吸附测试方法配置测试样本液。
进一步的，在采用酶联免疫吸附测试方法合成测试样本液之后，还包括：
将配置好的测试样本液加入数字PCR设备的测试管中，并将测试管盖上密封盖。
具体的，上述测试管为数字PCR中所用的八连管。本实施例中的八管为一次同时检测的样本数，通过调整芯片通道和样本液管的数量可以调整一次同时检测的样本数，不局限于固定数量。
S2、将所述测试样本液放入数字PCR设备，以通过数字PCR设备对所述测试样本液进行检测。
具体的，通过数字PCR设备对所述测试样本液进行检测，包括：
将测试样本液放入数字PCR设备中并装入测试芯片，以使测试样本液生成在数字PCR设备中生成油包水的小液滴；
通过荧光识别系统对所述小液滴中的荧光信号进行检测，以测得测试样本液中目标物数量。
本发明通过采用ELISA和dPCR结合的技术检测，采用ELISA配置好测试样本液，由于ELISA合成的测试样本液已经有了荧光标记物，将测试样本液直接通过dPCR的液滴生成设备就可以进行检测，解决了ELISA检测方案的重复性差和测试样本容易受到环境污染的问题。而且dPCR的检测通道量一般都是8~16通道，液滴在单通道中的生成速度可以达到每秒钟5000~10000个液滴的生成量，每个通道都有对应的荧光检测，这样就可以提高检测效率，优化工艺过程并减低检测成本。
实施例
本实施例提供一种结合ELISA和dPCR两种测试方法的具体实现步骤，具体包括：
步骤1、参见图1，本实施例将测试样本液按照ELISA传统方案进行配制；
步骤2、参见图2，将配制好的测试样本液加入八连管（dPCR用），并盖上密封盖避免外界环境污染
步骤3，参见图3，将测试样本液放入数字PCR设备中，并装入测试芯片，将测设样本液生成油包水的小液滴，并通过荧光识别系统对小液滴中的荧光信号进行采集得出目标物具体数量，用于临床实验室的定量检测和分析。
本实施例结合了ELISA和数字PCR的检测方法，解决了ELISA检测方案的重复性差和测试样本容易受到环境污染的问题。尤其当样本液提取量少的情况下，可以通过数字PCR技术生成数量50倍于ELISA的微孔测试法的液滴，大大提高了检测精度。本实施例中液滴生成和检测同步完成，在1分钟可以实现对30万液滴的检测，检测速度和效率大大提高，降低了检测成本，有利于推广。
注意，上述仅为本发明的较佳实施例及所运用技术原理。本领域技术人员会理解，本发明不限于这里所述的特定实施例，对本领域技术人员来说能够进行各种明显的变化、重新调整和替代而不会脱离本发明的保护范围。因此，虽然通过以上实施例对本发明进行了较为详细的说明，但是本发明不仅仅限于以上实施例，在不脱离本发明构思的情况下，还可以包括更多其他等效实施例，而本发明的范围由所附的权利要求范围决定。
Claims (3)
1.一种改进的ELISA测试方法，其特征在于，包括：
采用酶联免疫吸附ELISA测试方法配置测试样本液；
将所述测试样本液放入数字PCR设备，以通过数字PCR设备对所述测试样本液进行检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在采用酶联免疫吸附测试方法合成测试样本液之后，还包括：
将配置好的测试样本液加入数字PCR设备的测试管中，并将测试管盖上密封盖。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过数字PCR设备对所述测试样本液进行检测，包括：
将测试样本液放入数字PCR设备中并装入测试芯片，以使测试样本液生成在数字PCR设备中生成油包水的小液滴；
通过荧光识别系统对所述小液滴中的荧光信号进行检测，以测得测试样本液中目标物数量。
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