CN116437913A - 用于治疗补体介导的病症的药物化合物 - Google Patents

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文卡特·拉奥·加达钱德
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Abstract

本公开提供了用于治疗医学病症的药物化合物，所述医学病症为诸如补体介导的病症，包括补体C1介导的病症。

Description

用于治疗补体介导的病症的药物化合物
发明领域
本文提供了用于治疗医学病症诸如补体介导的病症(包括补体C1介导的病症)的药物化合物。
发明背景
补体系统是先天免疫系统的一部分，其不适应宿主生命过程中的变化，但被适应性免疫系统募集和使用。例如，它有助于或补充抗体和吞噬细胞清除病原体的能力。这种复杂的调控性途径允许对病原生物体快速反应，同时保护宿主细胞免受破坏。超过三十种蛋白质和蛋白质片段构成了补体系统。这些蛋白质通过调理作用(增强抗原的吞噬作用)、趋化作用(吸引巨噬细胞和中性粒细胞)、细胞裂解(破裂外源细胞膜)和凝集反应(使病原体聚集和结合在一起)起作用。
补体系统具有三种途径：经典途径、旁路途径和凝集素途径。经典途径是由具有抗体同种型IgG和IgM的抗体-抗原复合物来触发。抗体-抗原复合物与C1结合，并且这启动C4和C2的切割以生成C3转换酶，然后该转换酶使C3分裂为C3a和C3b。C3a与其C3a受体相互作用以募集白细胞，而C3b与C3转换酶结合以形成C5转换酶。C5转换酶将C5切割成C5a和C5b。与C3a类似，C5a与其C5a受体相互作用以募集白细胞，但C5b与C6、C7、C8相互作用，并且C8和这些蛋白质一起形成圆柱状膜攻击复合物(MAC)，该圆柱状膜攻击复合物导致细胞膨胀和破裂。这些免疫响应可通过防止C1能够结合抗体-抗原复合物而被抑制。
考虑到补体系统功能异常介导的严重疾病的范围，医学上显然需要提供用于抑制有需要的患者中的补体系统的药学上可接受的化合物、方法、组合物以及制造方法。
因此，本公开提供了用于治疗由补体系统的功能异常引起或因补体系统的功能异常而加重的病症的化合物及它们的用途和组合物。本公开还提供了抑制C1s(补体1酯酶)并且从而能够治疗由C1s介导的病症的化合物、用途、组合物、组合和制造工艺。
发明内容
本公开包括任选地呈药学上可接受的组合物形式的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体。在一个实施方案中，如本文所述的化合物或其盐或组合物被用于治疗医学病症，所述医学病症是炎性或免疫疾患、由补体级联(包括级联功能异常(dysfunctional cascade))介导的病症、对细胞参与或响应于正常补体活性(包括例如，经典补体途径)的能力有不良影响的细胞的病症或异常，或者不期望的补体介导的对医学治疗(诸如手术或其他医学程序或制药药物或生物制药药物施用、血液输注或其他同种异体组织或流体施用)的响应。
这些化合物可被用于治疗有需要的宿主(通常为人)中的医学疾患。所述活性化合物可通过抑制补体C1s而充当补体经典途径的抑制剂。在一个实施方案中，提供了用于治疗由补体活性介导的病症的方法，其包括施用有效量的任选地呈药学上可接受的组合物形式的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体，如以下更详细地所描述。
在一个实施方案中，该病症与补体经典途径相关，并且该化合物抑制经典途径。在又一实施方案中，该病症与替代补体级联途径相关。在进一步的实施方案中，该病症与补体卵磷脂途径相关。替代地，该活性化合物或其盐或前药可通过与补体级联不同的作用基质起作用以治疗本文所述的病症。在另一个实施方案中，该活性化合物和/或其盐或前药抑制这些途径的组合。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有由补体系统介导的病症的宿主(通常为人)的方法，其包括施用预防性抗生素或疫苗以减小使用本文所述的化合物中的一种化合物治疗期间细菌感染的可能性。在某些实施方案中，该宿主(通常为人)是在用本文所述的化合物中的一种化合物治疗之前、期间或之后被给予预防性疫苗。在某些实施方案中，该宿主(通常为人)是在用本文所述的化合物中的一种化合物治疗之前、期间或之后被给予预防性抗生素。在一些实施方案中，该感染是脑膜炎球菌感染(例如，败血病和/或脑膜炎)、曲霉菌属感染，或由封装的生物体(例如，肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)或b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza)(Hib))(特别是在儿童中)引起的感染。在其他实施方案中，疫苗或抗生素是在患者因补体系统抑制或伴随补体系统抑制而发生感染后被施用给该患者。
在本公开的一个方面，提供了式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII或IX的化合物：
Figure BDA0004238079180000031
Figure BDA0004238079180000041
Figure BDA0004238079180000051
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
每个n均独立地为0、1、2或3；
每个m均独立地为0、1、2或3；
Figure BDA0004238079180000052
是单键或双键；
Z是CH2、C(CH2)或C(O)；
X1选自S、O和N(R30)；
X2选自键、N(R30)和-O-N(R30)-；
X3选自N和C(R17)；
X4选自N和C(R18)；
其中X3和X4中只有一者可以为N；
X5是C、Si或S；
X6选自
Figure BDA0004238079180000061
Figure BDA0004238079180000062
X7选自O、S、N(R30)和CR5R6；
R1和R2独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R1和R2基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R3和R4独立地选自氢、C(O)R31、-SR30和-OR30；
或者R3和R4独立地选自氢、CN、C(O)R31、-SR30和-OR30；
或者R3和R4取而代之地组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或者任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基取代的二氢咪唑；例如
Figure BDA0004238079180000063
可以是/>
Figure BDA0004238079180000064
每个R5和R6均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2，其中当在彼此相邻的碳上时，R5和R6基团可任选地被例如碳-碳双键替代，
Figure BDA0004238079180000071
任选地包括/>
Figure BDA0004238079180000072
或者，当n是1时，R5和R6与它们所附接的碳一起被例如-SO2-替代；
或者R5和R6与它们所附接的碳原子一起组合形成环丙基；
R7、R8、R9、R10、R11和R12独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、-S(O)(NR31)(R31)、碳环、杂环、芳基和杂芳基，除氢和卤素以外的所述R7、R8、R9、R10、R11和R12基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代；
或者R7和R8可以与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R7和R8可与它们所附接的碳一起形成
Figure BDA0004238079180000073
或羰基；
或者R9和R10可以与它们所附接的原子一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R9和R10可与它们所附接的原子一起形成
Figure BDA0004238079180000081
或羰基；
或者R11和R12可以与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R11和R12可与它们所附接的碳一起形成
Figure BDA0004238079180000082
或羰基；
或者R7和R9与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R9和R11与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥，例如
Figure BDA0004238079180000083
可以任选地为/>
Figure BDA0004238079180000084
每个R13均独立地选自氢、C1-C6烷基和OH；
或者R13与其所附接的氮原子一起被-O-替代；
每个R13′和R13″独立地选自氢和C1-C6烷基；
或者R13′和R14与它们所附接的原子一起组合形成含有一个N的5或6元杂环；
R14、R15和R16独立地选自氢、卤素、SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷基芳基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、碳环、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基，除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R14、R15和R16基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、碳环、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
或者R14、R15和R16独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷基芳基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、碳环、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基，除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R14、R15和R16基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、碳环、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；R17和R18独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
或者R17和R18与它们所附接的碳一起形成双键；
R19和R20独立地选自氢、C1-C6烷基、C5-C10双环碳环、C4-C6杂环、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-N(R30)2、-(CH2)n-R33和
Figure BDA0004238079180000091
R21选自C1-C6烷基和-O-C1-C6烷基；
R21选自C1-C6卤代烷基、-O-C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基、-O-C1-C6烷基、-S(O)(NR31)R31、碳环、芳基、-O-芳基、杂芳基、-O-碳环或-O-杂芳基，所述R21基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代；
每个R30均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、碳环、芳基、杂芳基、杂环和C(O)R31，除C(O)R31以外的每个R30均任选地被1、2、3或4个选自C1-C6烷基、卤素、SF5、-C(O)R31、-N(R30)2、芳基、-OR32和-S(O)(NR31)R31的取代基取代；
每个R31均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR32、-SR32、-N(R32)2、杂环、芳基和杂芳基；
每个R32均独立地选自氢、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；
每个R33均独立地选自氢、胍、杂芳基、芳基、-C6H5-OR30；-OR30、-SR30、-SeR30、-N(R30)2和-C(O)R31。
在一些实施方案中，R5和/或R6还可以是C1-C6羟基烷基或C(O)R31。
在一些实施方案中，R30还可以任选地被碳环(例如，环烷基)取代。
在一些实施方案中，对于式I和式II的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180000111
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180000112
或羰基；
i.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180000113
或羰基；
j.R7和R9与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10或R12不是氢；
k.R9和R11与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R8或R10不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.X6选自
Figure BDA0004238079180000114
n.R3和R4中的至少一者是CN、-SR30或C(O)R31；或者
o.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑。
在一个实施方案中，式IX的化合物是：
Figure BDA0004238079180000121
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，式IX的化合物是：
Figure BDA0004238079180000122
或其药学上可接受的盐。
在替代实施方案中，式IX的化合物是
Figure BDA0004238079180000131
或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本公开的化合物具有式X、XI或XII：
Figure BDA0004238079180000132
Figure BDA0004238079180000141
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
R22选自-C1-C6烷基-R23、-C2-C6烯基-R23、-C2-C6炔基-R23、-杂芳基-R23、-碳环-R23和双环环烷基-R23，所述R22中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R23选自氢、糖、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31和-S(O)2R31；并且
所有其他变量均如本文所定义；
在一些实施方案中，对于式X和式XI的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180000151
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180000152
或羰基；
i.R9和R11与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
j.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180000153
或羰基；
k.R7和R9与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.R22被至少三个OR30基团取代；
n.R23是糖；
o.R3和R4中的至少一者是CN、-SR30或C(O)R31；或者
p.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的噁二唑。
在一个实施方案中，R23选自氢、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31和-S(O)2R31。
在一个实施方案中，式X的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000161
在一个实施方案中，R23选自-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31和-S(O)2R31。
在另一个方面，式X、XI或XII的化合物选自
Figure BDA0004238079180000171
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
在替代实施方案中，式XII的化合物是
Figure BDA0004238079180000181
/>
或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本公开的化合物具有式XIII：
Figure BDA0004238079180000182
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
X7选自O、S、N(R30)和CR5R6；
o是0、1或2；
每个R25均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R25、基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；或者
每个R25均独立地选自氢、SF5、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R25基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R26选自
Figure BDA0004238079180000191
/>
Figure BDA0004238079180000192
Figure BDA0004238079180000201
或者R26选自
Figure BDA0004238079180000202
Figure BDA0004238079180000203
或者R26是，和
Figure BDA0004238079180000204
R27选自
Figure BDA0004238079180000205
/>
Figure BDA0004238079180000206
或者R27是
Figure BDA0004238079180000207
或者R27是
Figure BDA0004238079180000208
R34选自
Figure BDA0004238079180000209
Figure BDA0004238079180000211
X11选自N和CR1；
X12选自N和CR2；
其中每个其他变量如本文所定义；
或者
Figure BDA0004238079180000212
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
或者R13和R26与它们所附接的原子一起形成任选地被R27取代的杂环。
在另一个方面，本公开的化合物具有式XIV化合物：
Figure BDA0004238079180000221
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中所述变量如本文所定义，并且对于式XIV的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X1是O或N(R30)；
b.R14不是氢；
c.R1不是氢；
d.R2不是氢；
e.R3不是氢；或者
f.R4不是氢。
在另一个方面，式XIII或XIV的化合物选自
Figure BDA0004238079180000231
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
在另一个方面，本公开的化合物是具有式XV：
Figure BDA0004238079180000232
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
每个X8和X9均独立地选自O、S、NR30、CR9R10、CR5R6和CH2；其中X8和X9两者不能为相同基团；并且所有其他变量均如本文所定义。
在替代实施方案中，
Figure BDA0004238079180000241
替代，例如在本实施方案中，式/>
Figure BDA0004238079180000242
的化合物可以被/>
Figure BDA0004238079180000251
替代。
在另一个方面，本公开的化合物具有式XVI、XVII或XVIII：
Figure BDA0004238079180000252
Figure BDA0004238079180000261
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
X10选自
Figure BDA0004238079180000262
R35选自C3-C10烷基或C3-C10卤代烷基；并且
所有其他变量均如本文所定义。
在另一个方面，本公开的化合物具有式XIX或式XX：
Figure BDA0004238079180000271
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
R29选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基和杂芳基，除氢和卤素以外的所述R29基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；并且
所有其他变量均如本文所定义。
在替代实施方案中，R29是氢。
还公开了药物组合物，其包含式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物或盐连同药学上可接受的载体。
因此，本公开包括至少以下特征：
a.任选地呈药学上可接受的组合物形式的本公开的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体；
b.任选地呈药学上可接受的组合物形式的本公开的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体，其用于治疗或预防包括但不限于以下的病症：脂肪肝和源于脂肪肝的疾患的发展，诸如非酒精性脂肪肝(NASH)、肝脏炎症、肝硬化、肝衰竭；皮肌炎；肌萎缩侧索硬化；响应于生物治疗药物(例如CAR T细胞疗法)的细胞因子或炎性反应；遗传性血管性水肿(HAE)、慢性免疫性血小板减少症(ITP)、冷凝集素疾病、冷凝集素综合征、热性自身免疫性溶血性贫血、冷球蛋白血症、大疱性类天疱疮、常见可变免疫缺陷、内毒素血症、脓毒症、多器官功能障碍综合征、溶血性尿毒症综合征(HUS)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、急性肾损伤、肾移植、移植体排斥、抗体介导的排斥、移植体功能延迟、终末期肾病、重症肌无力、系统性红斑狼疮(SLE)、阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)、类风湿性关节炎、多发性硬化、年龄相关性黄斑变性(AMD)、视网膜变性、其他眼科疾病(例如，地图样萎缩(geographic atrophy))、吸系统疾病或心血管疾病；中枢神经系统或外周神经系统的疾病、缺血性再灌注损伤或中风、创伤性脑损伤(TBI)和脊髓损伤(SCI)、阿尔茨海默氏病(AD)、多发性硬化、视神经脊髓炎(NMO)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、帕金森病(PD)、亨廷顿病(HD)、脱髓鞘髓鞘碎裂性疾病、脱髓鞘白质营养不良疾病和神经性炎症性病症；
c.本公开的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体在药学上可接受的载体中的药学上可接受的组合物；
d.任选地呈药学上可接受的组合物形式的本公开的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体，其用于治疗或预防由补体途径以及例如经典补体途径介导的病症；
e.任选地呈药学上可接受的组合物形式的如本文所述的本公开的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体在制造药物方面的用途，所述药物用于治疗或预防包括但不限于以下的病症：脂肪肝和源于脂肪肝的疾患的发展，诸如非酒精性脂肪肝(NASH)、肝脏炎症、肝硬化、肝衰竭；皮肌炎；肌萎缩侧索硬化；响应于生物治疗药物(例如CAR T细胞疗法)的细胞因子或炎性反应；遗传性血管性水肿(HAE)、慢性免疫性血小板减少症(ITP)、冷凝集素疾病、冷凝集素综合征、热性自身免疫性溶血性贫血、冷球蛋白血症、大疱性类天疱疮、常见可变免疫缺陷、内毒素血症、脓毒症、多器官功能障碍综合征、溶血性尿毒症综合征(HUS)、非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)、急性肾损伤、肾移植、移植体排斥、抗体介导的排斥、移植体功能延迟、终末期肾病、重症肌无力、系统性红斑狼疮(SLE)、阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)、类风湿性关节炎、多发性硬化、年龄相关性黄斑变性(AMD)、视网膜变性、其他眼科疾病(例如，地图样萎缩)、吸系统疾病或心血管疾病；中枢神经系统或外周神经系统的疾病、缺血性再灌注损伤或中风、创伤性脑损伤(TBI)和脊髓损伤(SCI)、阿尔茨海默氏病(AD)、多发性硬化、视神经脊髓炎(NMO)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、帕金森病(PD)、亨廷顿病(HD)、脱髓鞘髓鞘碎裂性疾病(demyelinating myelinoclasticdisease)、脱髓鞘白质营养不良疾病(demyelinating leukostrophic disease)和神经性炎症性病症；
f.一种用于制造预期用于在治疗或预防病症方面，或者一般在治疗或预防由经典补体途径介导的病症方面的治疗用途的药物的工艺，其特征在于在制造中使用本公开的化合物或活性化合物的实施方案；
g.处于基本上纯(例如，至少90％或95％)的形式的如本文所描述的本公开的化合物或其盐；
h.任选地在载体中形成药学上可接受的组合物的如本文所述的本公开的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体，其用于治疗医学病症，所述医学病症是炎性或免疫疾患、由补体级联(包括级联功能异常)介导的病症、对细胞参与或响应于正常补体活性的能力有不良影响的细胞的病症或异常，或者不期望的补体介导的对医学治疗(诸如手术或其他医学程序或制药药物或生物制药药物施用、血液输注或者其他同种异体组织或流体施用)的响应。
i.对于以上(a)至(h)中的每一项以及本文中其他内容，部分的每个集合体以及由其制备的每种活性化合物或其用途被考虑并且被视为具体单独公开，因为此种描绘只是为了篇幅上的方便，而不旨在仅描述用于此种指示的属或甚至亚属。
具体实施方式
术语
化合物是使用标准命名法描述的。除非另外定义，否则本文所用的所有技术性和科学性术语具有与所要求保护的发明所属领域的技术人员通常所理解的相同的含义。
本文所述的式中的任何式的化合物都包括对映异构体、对映异构体的混合物、非对映异构体、互变异构体、消旋体和其他异构体(诸如旋转异构体)，如同每一者均被具体地描述，除非另外指示或以其他方式被上下文排除。
术语“一个/种(a)”和“一个/种(an)”并不表示数量限制，而是表示存在所提及的物品中的至少一种物品。术语“或”意指“和/或”。除非本文另外指明，否则值的范围的列举仅仅意图用作单独地提及落在所述范围内的每个单独值的速记方法，并且每个单独值均被并入到本专利说明书中，犹如它在本文被单独地列举。所有范围的终点均包括在所述范围内并且可被独立地组合。除非本文另外指示或以其他方式与上下文明显矛盾，否则本文中所描述的所有方法都可以按任何合适的顺序进行。实例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅意图作为例证，并且不会对由权利要求限定的本发明的范围施加限制。
本公开的化合物可与溶剂(包括水)形成溶剂化物。因此，在一个实施方案中，本公开包括活性化合物的溶剂化形式。术语“溶剂化物”是指本公开的化合物(包括其盐)与一个或多个溶剂分子的分子复合物。溶剂的非限制性实例是水、乙醇、二甲基亚砜、丙酮和其他普通的有机溶剂。术语“水合物”是指包含本公开的化合物和水的分子复合物。根据本公开的药学上可接受的溶剂化物包括这样的溶剂化物，其中结晶溶剂可被同位素取代，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。溶剂化物可以处于液体或固体形式。
不在两个字母或符号之间的破折号(“-”)被用于指示取代基的附接点。例如，-(C＝O)NH2是通过酮基(C＝O)基团的碳附接的。
如本文所用的术语“取代(的)”意指指定原子或基团上的任何一个或多个氢被选自指示基团的部分替代，条件是指定原子的正常价未被超过，并且所得到的化合物是稳定的。例如，当取代基是氧代基(即，＝O)时，则该原子上的两个氢被替代。例如，被氧代基取代的吡啶基团是吡啶酮。取代基和/或变量的组合仅在此类组合产生稳定化合物或有用的合成中间体时才是可允许的。
稳定的活性化合物是指可被分离并且可被配制成具有至少一个月的保存期限的剂型的化合物。如果活性化合物的稳定的制造中间体或前体在反应或其他用途所需的时段内未降解，则该制造中间体或前体是稳定的。稳定的部分或取代基基团是在使用所必需的时段内不降解、不反应或不分解的部分或取代基基团。不稳定的部分的非限制性实例是如本领域技术人员通常已知和可识别的那样以不稳定的排列组合杂原子的部分。
任何合适的基团都可能存在于形成稳定分子并符合本公开的期望目的的“经取代的”或“任选地经取代的”位置上，并且包括但不限于例如卤素(其可以独立地为F、Cl、Br或I)；氰基；羟基；硝基；叠氮基；烷酰基(诸如C2-C6烷酰基基团)；羧酰胺；烷基、碳环(例如，环烷基或环烯基)、烯基、炔基、烷氧基、芳基氧基诸如苯氧基；硫代烷基，包括具有一个或多个硫醚连键的硫代烷基；烷基亚磺酰基；烷基磺酰基基团，包括具有一个或多个磺酰基连键的烷基磺酰基基团；芳基(例如，苯基、联苯基、萘基等，每个环均被取代或未被取代)；具有例如1至3个分开的或稠合的环以及从6个至约14个或18个环碳原子的芳基烷基，其中苄基是示例性芳基烷基基团；芳基烷氧基，例如，具有1至3个分开的或稠合的环的芳基烷氧基，其中苄基氧基是示例性芳基烷氧基基团；或具有1至3个含有一个或多个N、O或S原子的分开的或稠合的环的饱和或部分不饱和的杂环，或具有1至3个含有一个或多个N、O或S原子的分开的或稠合的环的杂芳基，例如，香豆素、喹啉、异喹啉、喹唑啉、吡啶、吡唑、噁二唑、三唑、吡嗪、嘧啶、呋喃、吡咯、噻吩基、噻唑、三嗪、噁唑、异噁唑、咪唑、吲哚、苯并呋喃、苯并噻唑、四氢呋喃、四氢吡喃、哌啶、吗啉、哌嗪和吡咯烷。此类基团可进一步被例如羟基、烷基、烷氧基、卤素和氨基取代。在某些实施方案中，“任选地经取代的”包括一个或多个独立地选自卤素、羟基、氨基、氰基、-CHO、-COOH、-CONH2烷基(包括C1-C6烷基)、烯基(包括C2-C6烯基)、炔基(包括C2-C6炔基)、-C1-C6烷氧基、烷酰基(包括C2-C6烷酰基)、(单-和二-C1-C6烷基氨基)C0-C2烷基、卤代烷基(包括C1-C6卤代烷基)、羟基C1-C6烷基、酯、氨基甲酸酯(根)、尿素、磺酰胺、-C1-C6烷基(杂环)、C1-C6烷基(杂芳基)、-C1-C6烷基(C3-C7环烷基)、O-C1-C6烷基(C3-C7环烷基)、B(OH)2、磷酸酯(根)、膦酸酯(根)和卤代烷氧基(包括C1-C6卤代烷氧基)的取代基。
“烷基”是支链或直链的饱和烃基团。在一个实施方案中，烷基含有从1个至约12个碳原子，更一般地从1至约6个碳原子或从1至约4个碳原子。在一个实施方案中，烷基含有从1至约8个碳原子。在某些实施方案中，烷基是C1-C2、C1-C3、C1-C4、C1-C5或C1-C6。如本文所用的具体指定的范围表示具有该范围中描述为独立物质的每个成员的烷基基团。例如，如本文所用的术语C1-C6烷基表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链烷基，并且旨在意指这些中的每一个均被描述为独立物质。例如，如本文所用的术语C1-C4烷基表示具有1、2、3或4个碳原子的直链或支链烷基，并且旨在意指这些中的每一个均被描述为独立物质。当C0-Cn烷基在本文中与另一个基团结合使用时(例如(C3-C7环烷基)C0-C4烷基或–C0-C4烷基(C3-C7环烷基))，所指示的基团(在这种情况下为环烷基)通过单个共价键(C0烷基)直接结合或通过烷基链(在这种情况下为1、2、3或4个碳原子)附接。烷基基团还可以经由其他基团，诸如杂原子附接，如在–O-C0-C4烷基(C3-C7环烷基)中。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、叔戊基、新戊基、正己基、2-甲基戊烷、3-甲基戊烷、2,2-二甲基丁烷、2,3-二甲基丁烷和己基。烷基基团可以任选地被一个或多个本文所述的取代基独立地取代。
当使用包含“烷/烯/炔(alk)”的术语时，应当理解“环烷基”或“碳环”可被视为定义的一部分，除非上下文明确排除。例如但不限于，术语烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷酰基、烯氧基(alkenloxy)、卤代烷基等全都可以视为包括烷基的环形式，除非上下文明确排除。
“烯基”是具有一个或多个碳-碳双键的支链或直链的脂肪族烃基团，该碳-碳双键可出现在沿该链的稳定点处。非限制性实例是C2-C8烯基、C2-C7烯基、C2-C6烯基、C2-C5烯基和C2-C4烯基。如本文所用的具体指定的范围表示具有该范围中描述为独立物质的每个成员的烯基基团，如上文针对烷基部分所描述的。烯基的实例包括但不限于乙烯基和丙烯基。烯基基团可以任选地被一个或多个本文所述的取代基独立地取代。
“炔基”是具有一个或多个碳-碳三键的支链或直链的脂肪族烃基团，该碳-碳三键可出现在沿该链的稳定点处，例如，C2-C8炔基或C2-C6炔基。如本文所用的具体指定的范围表示具有该范围中描述为独立物质的每个成员的炔基基团，如上文针对烷基部分所描述的。炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。炔基基团可以任选地被一个或多个本文所述的取代基独立地取代。
“卤代烷基”表示被1个或多个(最高可达卤素原子的最大可允许数目)卤素原子取代的支链和直链的烷基基团。卤代烷基的实例包括但不限于三氟甲基、一氟甲基、二氟甲基、2-氟乙基和五氟乙基。卤代烷基基团可以任选地被一个或多个本文所述的取代基独立地取代。
“卤代基”或“卤素”独立地表示氟、氯、溴或碘中的任一者。
“芳基”表示一个或多个芳族环中仅含碳的芳族基团。在一个实施方案中，芳基基团含有1至3个分开的或稠合的环，并且具有6至14或18个环原子，不含杂原子作为环成员。当被指明时，此类芳基基团可进一步被碳或非碳原子或基团取代。此种取代可包括与任选地含有1、2或3个独立地选自N、O、B、P、Si和S的杂原子的4至7元或5至7元饱和或部分不饱和的环基团稠合，以形成例如3,4-亚甲基二氧基苯基基团。芳族基团包括例如苯基和萘基，包括1-萘基和2-萘基。在一个实施方案中，芳基基团是侧挂的(pendant)。侧挂环的实例是被苯基基团取代的苯基基团。芳基基团可以任选地被一个或多个本文所述的取代基独立地取代。
“杂环”是指饱和的和部分饱和的含杂原子的环基，其中杂原子可选自N、S和O。术语“杂环”包括单环的3-12元环，以及双环的5-16元环体系(其可以包括稠合的、桥接的或螺旋(spiro)的双环环体系)，并且不包括含-O-O-、-O-S-或-S-S-部分的环。饱和杂环基团的实例包括含有1至4个氮原子的饱和的4至7元单环基团[例如，吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、吡咯啉基、氮杂环丁基、哌嗪基和吡唑烷基]；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的饱和的4至6元单环基团[例如，吗啉基]；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的3至6元杂单环基团[例如，噻唑烷基]。部分饱和的杂环基的实例包括但不限于二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基和二氢噻唑基。部分饱和的和饱和的杂环基团的实例包括但不限于吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、吡咯啉基、吡唑烷基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡喃基、噻唑烷基、二氢噻吩基、2,3-二氢-苯并[l,4]二氧杂环己基、吲哚啉基、异吲哚啉基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、异色满基、色满基、1,2-二氢喹啉基、1,2,3,4-四氢-异喹啉基、1,2,3,4-四氢-喹啉基、2,3,4,4a,9,9a-六氢-lH-3-氮杂-芴基、5,6,7-三氢-l,2,4-三唑并[3,4-a]异喹啉基、3,4-二氢-2H-苯并[1,4]噁嗪基、苯并[1,4]二噁烷基、2,3-二氢-lH-lλ’-苯并[d]异噻唑-6-基、二氢吡喃基、二氢呋喃基和二氢噻唑基。“双环杂环”包括这样的基团，其中杂环基与芳基稠合，其中附连点是杂环。“双环杂环”还包括与碳环基稠合的杂环基。例如，含有1至5个氮原子的部分不饱和的缩合杂环基团(例如，吲哚啉、异吲哚啉)、含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的部分不饱和的缩合杂环基团、含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的部分不饱和的缩合杂环基团以及含有1至2个氧或硫原子的饱和的缩合杂环基团全部涵盖在内。杂环基团可以任选地被一个或多个本文所述的取代基独立地取代。
双环杂环的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000351
除非另外从上下文得出或显而易见，否则术语“双环杂环”包括顺式和反式非对映异构体。手性双环杂环的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000352
Figure BDA0004238079180000361
“碳环”是指非芳族单环或多环(例如，双环或三环)，其中所有环原子都为碳原子。碳环基团包括饱和基团(即，环烷基)和不饱和基团(例如，包含一个或多个双键并且不包含三键的环烯基和包含至少一个三键的环炔基)。在一些实施方案中，“碳环”是环烷基。在一些实施方案中，“碳环”是环烯基(例如，环戊烯基、环己烯基、环庚烯基或环辛烯基)。在一些实施方案中，“碳环”包含3至13个碳原子。在一些实施方案中，“碳环”是三环环烯基基团(例如，芴基)。在一些实施方案中，“碳环”(例如，环烷基或环烯基)任选地被一个或多个本文所述的取代基取代。
“杂芳基”是指含有从1至3个或者在一些实施方案中1、2或3个选自N、O、S、B和P(并且通常选自N、O和S)的杂原子且其余环原子为碳的稳定的单环、双环或多环芳族环，或含有至少一个含有从1至3个或者在一些实施方案中从1至2个选自N、O、S、B或P的杂原子且其余环原子为碳的5、6或7元芳族环的稳定的双环或三环体系。在一个实施方案中，唯一的杂原子是氮。在一个实施方案中，唯一的杂原子是氧。在一个实施方案中，唯一的杂原子是硫。单环杂芳基基团通常具有从5或6个环原子。在一些实施方案中，双环杂芳基基团是8至10元杂芳基基团，即含有8或10个环原子的基团，其中一个5、6或7元芳族环与第二个芳族或非芳族环稠合，其中附连点是芳族环。当杂芳基基团中的S和O原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。在一个实施方案中，杂芳基基团中S和O原子的总数不超过2个。在另一个实施方案中，芳族杂环中S和O原子的总数不超过1个。杂芳基基团的实例包括不限于吡啶基(包括，例如，2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基(indolizinyl)、酞嗪基(phthalazinyl)、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基(pteridinyl)、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋吖基(furazanyl)、苯并呋吖基、苯并噻吩基(benzothiophenyl)、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、四氢呋喃基以及呋喃并吡啶基。杂芳基基团可以任选地被一个或多个本文所述的取代基取代。
“剂型”意指活性剂的施用单位。剂型的实例包括片剂、胶囊、注射剂、悬浮剂、液体、乳剂、植入物(implant)、颗粒剂、球剂(spheres)、霜剂、膏剂、栓剂、可吸入形式、透皮形式、颊用剂(buccal)、舌下剂(sublingual)、外用剂(topical)、凝胶剂、粘膜剂(mucosal)等。“剂型”还可以包括植入物(implant)，例如光学植入物(optical implant)。
“药物组合物”是包含至少一种活性剂和至少一种其他物质(诸如药学上可接受的载体)的组合物。“药物组合”是至少两种活性剂的组合，该至少两种活性剂可能被组合成单一剂型，或者以单独的剂型一起提供并随附有该活性剂将一起用于治疗本文所述的任何病症的说明书。
“药学上可接受的盐”是所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物是通过制备它的无机和有机的药学上可接受的酸或碱加成盐来修饰的。本发明化合物的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物来合成。一般来说，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适当的碱(诸如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应或通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量量的适当的酸反应来制备。此类反应通常在水中或在有机溶剂中，或在两者的混合物中进行。一般来说，非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈在可行的情况下是典型的。本发明化合物的盐进一步包括化合物的溶剂化物和化合物的盐的溶剂化物。
药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基(诸如胺)的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基(诸如羧酸)的碱盐或有机盐；等等。药学上可接受的盐包括对于人食用可接受的盐以及例如由无机酸或有机酸形成的母体化合物的季铵盐。此类盐的实例包括衍生自无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等)的盐；以及由有机酸(诸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸、HOOC-(CH2)1-4-COOH等)或使用产生相同反离子的不同的酸制备的盐。另外的合适的盐的列表可在例如Remington’sPharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,第1418页(1985)中找到。
应用于根据本公开的药物组合物/组合的术语“载体”是指与活性化合物一起提供的稀释剂、赋形剂或媒介物。
“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的载体”可互换使用，并且意指这样的赋形剂，该赋形剂可用于制备药物组合物/组合，一般是安全的、对于人食用是可接受的，并且在生物学上和其他方面都适合于施用给宿主(通常是人)。在一个实施方案中，使用对于兽类使用(veterinary use)可接受的赋形剂。在一个实施方案中，使用对于哺乳动物(特别是人类)使用可接受的赋形剂。
“患者”或“宿主”或“受试者”是需要治疗或预防如本文具体描述的病症中的任一种病症(包括但不限于通过调节经典补体途径)或者患有可用本文所述的化合物中的一种化合物治疗的疾患的人或非人动物。通常，宿主是人。“患者”或“宿主”或“受试者”还指例如哺乳动物、灵长类动物(例如，人)、母牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鸟等。
“前药”是指当体内施用给宿主时被转化为母体药物的化合物。术语“母体药物”意指本文中本发明描述的化学化合物中的任一种。前药可被用于实现任何所需效果，包括用于提高母体药物的特性或用于改善母体药物的药物或药代动力学特性，包括用于增加该药物的体内半衰期。前药策略在调节母体药物的体内生成条件方面提供了选择。前药策略的非限制性实例包括共价附接可移除的基团、或基团的可移除部分，例如但不限于乙酰化、磷酸化、膦酸化、氨基磷酸酯衍生物、酰胺化、还原、氧化、酯化、烷基化、其他羧基衍生物、硫氧基(sulfoxy)或砜衍生物、羰基化或酸酐等。
“将化合物与至少一种另外的活性剂一起提供”，例如，在一个实施方案中可以意指该化合物和该一种或多种另外的活性剂以单一剂型同时提供、以分开的剂型伴随地提供，或以分开的剂型提供以用于施用。在一个实施方案中，化合物施用被隔开一定量的时间，该时间在该化合物和该至少一种另外的活性剂都在患者血流中的时间内。在某些实施方案中，该化合物和该另外的活性剂不必是由同一医疗护理工作者为患者开具的。在某些实施方案中，该一种或多种另外的活性剂不需要处方。施用该化合物或该至少一种另外的活性剂可以经由任何适当的途径(例如，经口片剂、经口胶囊、经口液体、吸入、注射、栓剂、肠胃外、舌下、经颊、静脉内、主动脉内、经皮、多聚体控制递送、非多聚体控制递送、纳米颗粒或微颗粒、脂质体和/或外用接触)进行。在一个实施方案中，药物标签中提供了以组合疗法形式施用的说明书。
本公开的药物组合物/组合的“治疗有效量”意指当被施用给宿主时有效提供治疗益处(诸如症状的改善或者疾病本身的减轻或缩减(dimunition))的量。在一个实施方案中，治疗有效量是足以防止患者血液、血清或组织中可检测的溶血水平显著增加，或者将显著降低患者血液、血清或组织中可检测的溶血水平的量。
N-氧化物
在某些实施方案中，所述活性化合物中的任一种活性化合物均可以以其N-氧化物形式提供给有需要的患者。在一个实施方案中，在制造方案中使用活性化合物的N-氧化物或活性化合物的前体。在又一实施方案中，该N-氧化物是本文中的活性化合物中的一种活性化合物的施用代谢物，并且可能具有独立的活性。可以通过用氧化剂例如合适的过氧酸或过氧化物处理感兴趣的化合物以生成N-氧化物化合物来形成N-氧化物。例如，可以在基于铼的催化剂存在下在温和的反应条件下用氧化剂诸如过碳酸钠来处理杂芳基基团(例如吡啶基基团)以生成N-氧化物化合物。本领域技术人员将理解，适当的保护基团可能是执行该化学反应所必需的。参见Jain,S.L.等人,“Rhenium-Catalyzed Highly EfficientOxidations of Tertiary Nitrogen Compounds to N-Oxides Using SodiumPercarbonate as Oxygen Source,Synlett,2261-2663,2006。
在本公开的其他方面，含有硫的活性化合物中的任一种都可以以其亚砜或砜的形式提供给有需要的患者。在不同的实施方案中，在制造方案中使用活性化合物之一或活性化合物前体的亚砜或砜。可使用已知方法将如本文所述的选定化合物中的硫原子氧化从而形成亚砜
Figure BDA0004238079180000401
或砜/>
Figure BDA0004238079180000402
例如，化合物1,3,5-三唑-2,4,6-三膦-2,2,4,4,6,6-四氯化物(TAPC)是硫化物氧化成亚砜的有效促进剂。参见,Bahrami,M.等人,“TAPC-PromotedOxidation of sulfides and Deoxygenation of Sulfoxides”,J.Org.Chem.,75,6208-6213(2010)。碳化钽催化30％过氧化氢氧化硫化物可提供高收率的亚砜，参见Kirihara,A.,等人,“Tantalum Carbide or Niobium Carbide Catalyzed Oxidation of Sulfideswith Hydrogen Peroxide:Highly Efficient and Chemoselective Syntheses ofSulfoxides and Sulfones”,Synlett,1557-1561(2010)。可使用例如碳化铌作为催化剂将硫化物氧化成砜，参见)Kirihara,A.,等人,“Tantalum Cardide or Niobium CarbideCatalyzed Oxidation of Sulfides with Hydrogen Peroxide:Highly Efficient andChemoselective Syntheses of Sulfoxides and Sulfones”,Synlett,1557-1561(2010)。尿素-过氧化氢加合物是用于将硫化物氧化成砜的稳定的廉价且容易操作的试剂，参见Varma,R.S.和Naicker,K.P.,“The Urea-Hydrogen Peroxide Complex:Solid-StateOxidative Protocols for Hydroxylated Aldehydes and Ketones(Dakin Reaction),Nitriles,Sulfides,and Nitrogen Heterocycles”,Org.Lett.,1,189-191(1999)。本领域的技术人员将理解，在进行硫原子氧化以产生所需化合物时，可能需要对其他杂原子诸如氮进行保护，并然后进行去保护。
“烷基”的实施方案
在某些实施方案中，“烷基”是C1-C10烷基、C1-C9烷基、C1-C8烷基、C1-C7烷基、C1-C6烷基、C1-C5烷基、C1-C4烷基、C1-C3烷基或C1-C2烷基。
在某些实施方案中，“烷基”具有一个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有两个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有三个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有四个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有五个碳。
在某些实施方案中，“烷基”具有六个碳。
“烷基”的非限制性实例包括：甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。
“烷基”的另外的非限制性实例包括：异丙基、异丁基、异戊基和异己基。
“烷基”的另外的非限制性实例包括：仲丁基、仲戊基和仲己基。
“烷基”的另外的非限制性实例包括：叔丁基、叔戊基和叔己基。
“烷基”的另外的非限制性实例包括：新戊基、3-戊基和活性戊基。
“卤代烷基”的实施方案
在某些实施方案中，“卤代烷基”是C1-C10卤代烷基、C1-C9卤代烷基、C1-C8卤代烷基、C1-C7卤代烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C5卤代烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C3卤代烷基和C1-C2卤代烷基。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳和一个卤素。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳和两个卤素。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有一个碳和三个卤素。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有两个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有三个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有四个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有五个碳。
在某些实施方案中，“卤代烷基”具有六个碳。
“卤代烷基”的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000421
“卤代烷基”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000422
Figure BDA0004238079180000423
“卤代烷基”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000424
“卤代烷基”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000425
“芳基”的实施方案
在某些实施方案中，“芳基”是6个碳的芳族基团(苯基)
在某些实施方案中，“芳基”是10个碳的芳族基团(萘基)
在某些实施方案中，“芳基”是“取代的芳基”。
“杂芳基”的实施方案
在某些实施方案中，“杂芳基”是含有1、2或3个氮原子的5元芳族基团。
5元“杂芳基”基团的非限制性实例包括吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、咪唑、三唑、异噁唑、噁唑、噁二唑、噁三唑、异噻唑、噻唑、噻二唑和噻三唑。
5元“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000431
在某些实施方案中，“杂芳基”是含有1、2或3个氮原子的6元芳族基团(即吡啶基、哒嗪基、三嗪基、嘧啶基和吡嗪基)。
具有1个或2个氮原子的6元“杂芳基”基团的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000441
在某些实施方案中，“杂芳基”是含有1个或2个选自氮、氧和硫的原子的9元双环芳族基团。
双环的“杂芳基”基团的非限制性实例包括吲哚、苯并呋喃、异吲哚、吲唑、苯并咪唑、氮杂吲哚、氮杂吲唑、嘌呤、异苯并呋喃、苯并噻吩、苯并异噁唑、苯并异噻唑、苯并噁唑和苯并噻唑。
双环的“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000442
双环的“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000443
双环的“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000444
在一个实施方案中，“杂芳基”是含有1个或2个选自氮、氧和硫的原子的10元双环芳族基团。
双环的“杂芳基”基团的非限制性实例包括喹啉、异喹啉、喹喔啉、酞嗪、喹唑啉、噌啉和萘啶。
双环的“杂芳基”基团的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000451
在替代实施方案中，杂芳基是四唑。
“碳环”的实施方案
在某些实施方案中，“碳环”是仅含碳原子作为环原子的饱和或不饱和的非芳族环基团，例如C3-C8碳环、C3-C7碳环、C3-C6碳环、C3-C5碳环、C3-C4碳环、C4-C8碳环、C5-C8碳环或C6-C8碳环。
在某些实施方案中，“碳环”具有三个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有四个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有五个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有六个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有七个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有八个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有九个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有十个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有十一个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有十二个碳。
在某些实施方案中，“碳环”具有十三个碳。
在某些实施方案中，“碳环”是饱和的环基团，即“环烷基”基团。
在某些实施方案中，“碳环”是不饱和的非芳族环基团，即“环烯基”基团。
“环烷基”的实施方案
在某些实施方案中，“环烷基”是C3-C8环烷基、C3-C7环烷基、C3-C6环烷基、C3-C5环烷基、C3-C4环烷基、C4-C8环烷基、C5-C8环烷基或C6-C8环烷基。
在某些实施方案中，“环烷基”具有三个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有四个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有五个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有六个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有七个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有八个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有九个碳。
在某些实施方案中，“环烷基”具有十个碳。
“环烷基”的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基和环癸基。
“环烯基”的实施方案
在某些实施方案中，“环烷基”是C4-C8环烯基、C4-C7环烯基、C4-C6环烯基、C4-C5环烯基、C4-C9环烯基、C4-C10环烯基、C4-C11环烯基、C4-C12环烯基、C4-C13环烯基、C5-C8环烯基或C6-C8环烯基。
在某些实施方案中，“环烯基”具有四个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”具有五个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”具有六个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”具有七个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”具有八个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”具有九个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”具有十个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”具有十一个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”具有十二个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”具有十三个碳。
在某些实施方案中，“环烯基”包括一个双键。
在某些实施方案中，“环烯基”包括两个或更多个双键。
在某些实施方案中，“环烯基”是双环基团。
在某些实施方案中，“环烯基”是三环基团。
“环烯基”的非限制性实例包括环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基和环癸烯基。
三环“烯基”的非限制性实例是芴基。
“杂环”的实施方案
在一个实施方案中，“杂环”是指含有一个氮和3、4、5、6、7或8个碳原子的饱和的或不饱和的非芳族环的环。
在一个实施方案中，“杂环”是指含有一个氮和一个氧和3、4、5、6、7或8个碳原子的饱和的或不饱和的非芳族环的环。
在一个实施方案中，“杂环”是指含有两个氮和3、4、5、6、7或8个碳原子的饱和的或不饱和的非芳族环的环。
在一个实施方案中，“杂环”是指含有一个氧和3、4、5、6、7或8个碳原子的饱和的或不饱和的非芳族环的环。
在一个实施方案中，“杂环”是指含有一个硫和3、4、5、6、7或8个碳原子的饱和的或不饱和的非芳族环的环。
“杂环”的非限制性实例包括氮丙啶、环氧乙烷、硫杂环丙烷、氮杂环丁烷、1,3-二氮杂环丁烷、氧杂环丁烷和硫化环丙烷(thietane)。
“杂环”的另外的非限制性实例包括吡咯烷、3-吡咯啉、2-吡咯啉、吡唑烷和咪唑烷。
“杂环”的另外的非限制性实例包括四氢呋喃、1,3-二氧戊环、四氢噻吩、1,2-氧杂硫杂环戊烷(oxathiolane)和1,3-氧杂硫杂环戊烷。
“杂环”的另外的非限制性实例包括哌啶、哌嗪、四氢吡喃、1,4-二噁烷、硫化环戊烷(thiane)、1,3-二硫化环戊烷、1,4-二硫化环戊烷、吗啉和硫代吗啉。
“杂环”的另外的非限制性实例包括二氢噁二唑和二氢嘧啶。
“杂环”的非限制性实例还包括：
Figure BDA0004238079180000491
“杂环”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000492
“杂环”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000493
“杂环”的非限制性实例还包括：
Figure BDA0004238079180000494
“杂环”的非限制性实例还包括：
Figure BDA0004238079180000495
/>
“杂环”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000501
“杂环”的另外的非限制性实例包括：
Figure BDA0004238079180000502
“糖”的实施方案
在一些实施方案中，“糖”是指式C3H5O3、C4H7O4、C5H9O5、C6H11O6、C7H13O7或C8H15O8的化合物。
糖的非限制性实例包括
Figure BDA0004238079180000503
Figure BDA0004238079180000504
本公开的另外的实施方案：
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000507
选自：/>
Figure BDA0004238079180000505
Figure BDA0004238079180000506
/>
Figure BDA0004238079180000511
/>
Figure BDA0004238079180000521
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000522
选自：
Figure BDA0004238079180000523
/>
Figure BDA0004238079180000531
在一些实施方案中，R22选自
Figure BDA0004238079180000532
Figure BDA0004238079180000533
/>
Figure BDA0004238079180000541
在一些实施方案中，R22选自
Figure BDA0004238079180000542
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000543
选自/>
Figure BDA0004238079180000544
Figure BDA0004238079180000545
/>
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000551
选自/>
Figure BDA0004238079180000552
Figure BDA0004238079180000553
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000554
选自/>
Figure BDA0004238079180000555
Figure BDA0004238079180000556
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000557
选自/>
Figure BDA0004238079180000558
Figure BDA00042380791800005510
/>
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000561
选自/>
Figure BDA0004238079180000562
Figure BDA0004238079180000563
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000564
Figure BDA0004238079180000565
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000566
Figure BDA0004238079180000567
在一些实施方案中，R26选自
Figure BDA0004238079180000568
Figure BDA0004238079180000569
在一些实施方案中，R27选自
Figure BDA00042380791800005610
/>
Figure BDA0004238079180000571
在一些实施方案中，
Figure BDA0004238079180000572
选自/>
Figure BDA0004238079180000573
Figure BDA0004238079180000574
在一些实施方案中，R21选自：
Figure BDA0004238079180000575
Figure BDA0004238079180000576
在一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000581
/>
Figure BDA0004238079180000591
在一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000592
/>
Figure BDA0004238079180000601
在一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000611
/>
Figure BDA0004238079180000621
在一个方面，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000631
/>
Figure BDA0004238079180000641
在一个方面，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000651
/>
Figure BDA0004238079180000661
在一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000662
/>
Figure BDA0004238079180000671
/>
Figure BDA0004238079180000681
在一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000682
/>
Figure BDA0004238079180000691
/>
Figure BDA0004238079180000701
在一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000702
/>
Figure BDA0004238079180000711
在一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000721
/>
Figure BDA0004238079180000731
在一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000732
/>
Figure BDA0004238079180000741
/>
Figure BDA0004238079180000751
在一个方面，式IV的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000752
/>
Figure BDA0004238079180000761
在一个方面，式V的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000771
/>
Figure BDA0004238079180000781
在另一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000791
/>
Figure BDA0004238079180000801
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；其中所有变量均如本文所定义。
在另一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000811
/>
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；其中所有变量均如本文所定义。
在另一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000812
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
R200选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)；并且所有其他变量均如本文所定义。
在另一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000821
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
Figure BDA0004238079180000822
选自3至6元碳环和含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环；例如/>
Figure BDA0004238079180000831
可以选自
在替代实施方案中，
Figure BDA0004238079180000833
任选地被1、2、3或4个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2的取代基取代；
所有其他变量均如本文所定义。
在另一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000841
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
Figure BDA0004238079180000842
是3至8元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；例如，在一个实施方案中，/>
Figure BDA0004238079180000843
可以选自/>
Figure BDA0004238079180000844
/>
Figure BDA0004238079180000851
其中在这个方面，R8和R10中至少一者不为氢；并且
所有其他变量均如本文所定义。
在另一个方面，式I的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000852
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
Figure BDA0004238079180000853
是3至8元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；例如，在一个实施方案中；
其中在这个方面，R10和R12中至少一者不为氢；并且
所有其他变量均如本文所定义。
在替代实施方案中，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000861
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
Figure BDA0004238079180000862
是3至8元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环，其中/>
Figure BDA0004238079180000863
被1、2、3或4个选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2的取代基取代；并且
所有其他变量均如本文所定义。
在另一个方面，式X的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000871
/>
Figure BDA0004238079180000881
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；其中所有变量均如本文所定义。
在另一个方面，式X的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000882
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；其中所有变量均如本文所定义。
在另一个方面，式X的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000891
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
R200选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)并且所有其他变量均如本文所定义。
在另一个方面，式X的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000892
Figure BDA0004238079180000901
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
Figure BDA0004238079180000902
选自3至6元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环；
在替代实施方案中，
Figure BDA0004238079180000903
任选地被1、2、3或4个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2的取代基取代；
所有其他变量均如本文所定义。
在另一个方面，式X的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000904
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
Figure BDA0004238079180000911
是3至8元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
其中在这个方面，R8和R10中至少一者不为氢；并且
所有其他变量均如本文所定义。
在另一个方面，式X的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000912
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
Figure BDA0004238079180000913
是3至8元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；例如，在一个实施方案中
其中在这个方面，R10和R12中至少一者不为氢；并且
所有其他变量均如本文所定义。
在替代实施方案中，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000921
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
Figure BDA0004238079180000922
是3至8元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环，其中/>
Figure BDA0004238079180000923
被1、2、3或4个选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2的取代基取代；并且
所有其他变量均如本文所定义。
在一个实施方案中，3至8元碳环是4至8元碳环。在另一个实施方案中，3至8元碳环是4至8元碳环。
在一个实施方案中，R7和R9与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
在一个实施方案中，R9和R11与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
在一个实施方案中，
Figure BDA0004238079180000931
是4至8元碳环或含有1个或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
在另一个方面，式XIV的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000932
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；其中所有变量均如本文所定义。
在另一个方面，式XIV的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000941
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体，它们任选地处于药学上可接受的载体中；
其中：
R201选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基和杂芳基，除卤素以外的所述R201基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、CC6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；并且
所有其他变量均如本文所定义。
在本公开的某些方面，R9和R11与它们所附接的原子一起形成环丙烷。
在一个实施方案中，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000951
/>
Figure BDA0004238079180000961
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000971
/>
Figure BDA0004238079180000981
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180000991
/>
Figure BDA0004238079180001001
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180001002
/>
Figure BDA0004238079180001011
/>
Figure BDA0004238079180001021
或其药学上可接受的盐；
其中每个R40均独立地选自：SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基。
在某些实施方案中，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180001022
或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本公开的化合物是：
Figure BDA0004238079180001031
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180001032
或其药学上可接受的盐。
编号的实施方案
1.一种化合物，其选自：
Figure BDA0004238079180001041
/>
Figure BDA0004238079180001051
/>
Figure BDA0004238079180001061
/>
Figure BDA0004238079180001071
/>
Figure BDA0004238079180001081
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体；
其中：
每个n均独立地为0、1、2或3；
每个m均独立地为0、1、2或3；
o是0、1或2；
Figure BDA0004238079180001082
是单键或双键；
Z是CH2、C(CH2)或C(O)；
X1选自S、O和N(R30)；
X2选自键、N(R30)和-O-N(R30)-；
X3选自N和C(R17)；
X4选自N和C(R18)；
其中X3和X4中只有一者可以为N；
X5是C、Si或S；
X6选自
Figure BDA0004238079180001091
Figure BDA0004238079180001092
X7选自O、S、N(R30)和CR5R6；
每个X8和X9均独立地选自O、S、NR30、CR9R10、CR5R6和CH2；其中X8和X9两者不能为相同基团；
X10选自
Figure BDA0004238079180001093
X11选自N和CR1；
X12选自N和CR2；
R1和R2独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R1和R2基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R3和R4独立地选自氢、硝基、-S(O)2R31、CN、C(O)R31、-SR30和-OR30；
或者R3和R4取而代之地组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；
R5和R6各自独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、-OR30、-N(R30)2和C(O)R31，其中当位于彼此相邻的碳上时，R5和R6基团可任选地被碳碳双键替代；
或者，当n是1时，R5和R6与它们所附接的碳一起被-SO2-替代；
或者R5和R6与它们所附接的碳原子一起组合形成环丙基；
R7、R8、R9、R10、R11和R12独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、-S(O)(NR31)(R31)、碳环、杂环、芳基和杂芳基，除氢和卤素以外的所述R7、R8、R9、R10、R11和R12基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代；
或者R7和R8可与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R7和R8可与它们所附接的碳一起形成
Figure BDA0004238079180001101
或羰基；
或者R9和R10可与它们所附接的原子一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R9和R10可与它们所附接的原子一起形成
Figure BDA0004238079180001111
或羰基；
或者R11和R12可与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R11和R12可与它们所附接的碳一起形成
Figure BDA0004238079180001112
或羰基；
或者R7和R9与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R9和R11与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
或者，当X5是S时，R9和R10不存在；每个R13均独立地选自氢、C1-C6烷基和OH；
或者R13和R26与它们所附接的原子一起形成任选地被R27取代的杂环；
或者R13与其所附接的氮原子一起被-O-替代；
每个R13′和R13″均独立地选自氢和C1-C6烷基；
或者R13′和R14与它们所附接的原子一起组合形成含有一个N的5或6元杂环；
R14、R15和R16独立地选自氢、卤素、SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷基芳基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基，除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R14、R15和R16基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R17和R18独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
或者R17和R18与它们所附接的碳一起形成双键；
R19和R20独立地选自氢、C1-C6烷基、C5-C10双环碳环、C4-C6杂环、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-N(R30)2、-(CH2)n-R33和
Figure BDA0004238079180001121
R21选自C1-C6卤代烷基、-O-C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基、-O-C1-C6烷基、-S(O)(NR31)R31、碳环、芳基、-O-芳基、杂芳基、-O-碳环或-O-杂芳基，所述R21基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代；
R22选自-C1-C6烷基-R23、-C2-C6烯基-R23、-C2-C6炔基-R23、-杂芳基-R23、-碳环-R23和双环环烷基-R23，所述R22中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R23选自氢、糖、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31和-S(O)R31、-S(O)2R31；
每个R25均独立地选自氢、SF5、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、-S(O)(NR31)R31、-P(O)(OR31)R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R25基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R26选自
Figure BDA0004238079180001131
Figure BDA0004238079180001132
Figure BDA0004238079180001141
R27选自-OR30、S-甲基氨亚基替磺酰基(S-methylsulfonimidoyl)、
Figure BDA0004238079180001142
R29选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基和杂芳基，除氢和卤素以外的所述R29基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
每个R30均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、碳环、芳基、杂芳基、杂环和C(O)R31，除C(O)R31以外的每个R30均任选地被1、2、3或4个选自C1-C6烷基、卤素、SF5、-C(O)R31、-N(R30)2、芳基、杂芳基、-OR32、-S(O)(NR31)R31和碳环的取代基取代；
或者
Figure BDA0004238079180001143
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
每个R31均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR32、-SR32、-N(R32)2、杂环、芳基和杂芳基；
每个R32均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；
每个R33均独立地选自氢、胍、杂芳基、芳基、-C6H5-OR30；-OR30、-SR30、-SeR30、-N(R30)2和-C(O)R31；
R34选自
Figure BDA0004238079180001151
Figure BDA0004238079180001152
Figure BDA0004238079180001153
并且
R35选自C3-C10烷基或C3-C10卤代烷基。
2.如实施方案1所述的化合物，其中对于式I和式II的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，并且R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001161
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001162
或羰基；
i.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001163
或羰基；
j.R7和R9与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R8或R10不是氢；
k.R9和R11与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10或R12不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.X6选自
Figure BDA0004238079180001164
n.R3和R4中至少一者是CN、硝基、-S(O)2R31、-SR30或C(O)R31；
o.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；或
p.R27是
Figure BDA0004238079180001171
并且/>
Figure BDA0004238079180001172
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
其中对于X和式XI的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，并且R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001173
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001174
或羰基；
i.R9和R11与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
j.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001181
或羰基；
k.R7和R9与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.R22被至少三个OR30基团取代；
n.R23是糖；
o.R3和R4中至少一者是CN、硝基、-S(O)2R31、-SR30或C(O)R31；
p.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；或
q.R27是
Figure BDA0004238079180001182
并且/>
Figure BDA0004238079180001183
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
其中对于式XIV的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X1是O或N(R30)；
b.R14不是氢；
c.R1不是氢；
d.R2不是氢；
e.R3不是氢；或者
f.R4不是氢。
3.如实施方案1或2所述的化合物，其中所述化合物选自：
Figure BDA0004238079180001191
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体。
4.如实施方案1或2所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001201
/>
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体。
5.如实施方案1或2所述的化合物，其具有式：
Figure BDA0004238079180001202
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体。
6.如实施方案1或2所述的化合物，其选自：
Figure BDA0004238079180001211
/>
Figure BDA0004238079180001221
/>
Figure BDA0004238079180001231
/>
Figure BDA0004238079180001241
其中
R21选自C1-C6烷基和-O-C1-C6烷基；
每个R25均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R1和R2基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R14、R15和R16独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷基芳基、-OR30,-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基，除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R14、R15和R16基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代。
7.在另一个实施方案中，本公开的化合物选自：
Figure BDA0004238079180001251
/>
Figure BDA0004238079180001261
/>
Figure BDA0004238079180001271
/>
Figure BDA0004238079180001281
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体；其中：
每个n均独立地为0、1、2或3；
每个m均独立地为0、1、2或3；
o是0、1或2；
Figure BDA0004238079180001282
是单键或双键；
Z是CH2、C(CH2)或C(O)；
X1选自S、O和N(R30)；
X2选自键、N(R30)和-O-N(R30)-；
X3选自N和C(R17)；
X4选自N和C(R18)；
其中X3和X4中只有一者可以为N；
X5是C、Si或S；
X6选自
Figure BDA0004238079180001291
Figure BDA0004238079180001292
X7选自O、S、N(R30)和CR5′R6′；
每个X8和X9均独立地选自O、S、NR30、CR9R10、CR5R6和CH2；其中X8和X9两者不能为相同基团；
X11选自N和CR1；
X12选自N和CR2；
R1和R2独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R1和R2基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R3和R4独立地选自氢、硝基、-S(O)2R31、C(O)R31、-SR30和-OR30；
或者R3和R4取而代之地组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；
R5、R5′、R6和R6′各自独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、-OR30、-N(R30)2和C(O)R31，其中当位于彼此相邻的碳上时，R5和R6基团可任选地被碳碳双键替代；
或者，当n是1时，R5和R6与它们所附接的碳一起被-SO2-替代；
或者R5和R6与它们所附接的碳原子一起组合形成环丙基；
R7、R8、R9、R10、R11和R12独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、-S(O)(NR31)R31、碳环、杂环、芳基和杂芳基，除氢和卤素以外的所述R7、R8、R9、R10、R11和R12基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代；
或者R7和R8可与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R7和R8可与它们所附接的碳一起形成
Figure BDA0004238079180001311
或羰基；
或者R9和R10可与它们所附接的原子一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R9和R10可与它们所附接的原子一起形成
Figure BDA0004238079180001312
或羰基；
或者R11和R12可与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R11和R12可与它们所附接的碳一起形成
Figure BDA0004238079180001313
或羰基；
或者R7和R9与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R9和R11与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
或者，当X5是S时，R9和R10不存在；
每个R13独立地选自氢、C1-C6烷基和OH；
或者R13和R26与它们所附接的原子一起形成任选地被R27取代的杂环；
或者R13与其所附接的氮原子一起被-O-替代；
每个R13′和R13″均独立地选自氢和C1-C6烷基；
或者R13′和R14与它们所附接的原子一起组合形成含有一个N的5或6元杂环；
R14、R15和R16独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷基芳基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基，除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R14、R15和R16基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R17和R18独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
或者R17和R18与它们所附接的碳一起形成双键；
R19和R20独立地选自氢、C1-C6烷基、C5-C10双环碳环、C4-C6杂环、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-N(R30)2、-(CH2)n-R33和
Figure BDA0004238079180001321
R21选自C1-C6烷基和-O-C1-C6烷基；
R22选自-C1-C6烷基-R23、-C2-C6烯基-R23、-C2-C6炔基-R23、-杂芳基-R23、-芴基-R23和双环环烷基-R23，所述R22中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R23选自氢、糖、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31和-S(O)2R31；
每个R25均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、-S(O)(NR31)R31、-P(O)(OR31)R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R1和R2基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R26选自
Figure BDA0004238079180001331
Figure BDA0004238079180001332
R27选自
Figure BDA0004238079180001341
/>
Figure BDA0004238079180001342
每个R30均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、碳环、芳基、杂芳基、杂环和C(O)R31，除C(O)R31以外的每个R30均任选地被1、2、3或4个选自C1-C6烷基、卤素、SF5、-C(O)R31、-N(R30)2、芳基、-OR32、-S(O)(NR31)R31和碳环的取代基取代；
或者中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
每个R31均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR32、-SR32、-N(R32)2、杂环、芳基和杂芳基；
每个R32均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；以及
每个R33均独立地选自氢、胍、杂芳基、芳基、-C6H5-OR30；-OR30、-SR30、-SeR30、-N(R30)2、-C(O)R31。
8.如实施方案7所述的化合物，其中对于式I和式II的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，并且R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001351
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001352
或羰基；
i.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001353
或羰基；
j.R7和R9与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10或R12不是氢；
k.R9和R11与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R8或R10不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.X6选自
Figure BDA0004238079180001361
n.R3和R4中的至少一者是CN、-SR30硝基、-S(O)2R31或C(O)R31；
o.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；
p.R27是
Figure BDA0004238079180001362
并且/>
Figure BDA0004238079180001363
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
其中对于X和式XI的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，并且R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001371
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001372
或羰基；
i.R9和R11与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
j.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure BDA0004238079180001373
或羰基；/>
k.R7和R9与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.R22被至少三个OR30基团取代；
n.R23是糖；
o.R3和R4中的至少一者是-SR30或C(O)R31；
p.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；或
q.R27是
Figure BDA0004238079180001381
并且/>
Figure BDA0004238079180001382
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
其中对于式XIV的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X1是O或N(R30)；
b.R14不是氢；
c.R1不是氢；
d.R2不是氢；
e.R3不是氢；或者
f.R4不是氢。
9.如实施方案1-8中任一项所述的化合物，其中n是0。
10.如实施方案1-8中任一项所述的化合物，其中n是1。
11.如实施方案1-8中任一项所述的化合物，其中n是2。
12.如实施方案1-11中任一项所述的化合物，其中R5和R6与它们所附接的碳一起是
Figure BDA0004238079180001383
13.如实施方案1-12中任一项所述的化合物，其中R5是甲基并且R6是H。
14.如实施方案1-13中任一项所述的化合物，其中每个m均独立地为0或1。
15.如实施方案1-14中任一项所述的化合物，其中Z是C(O)。
16.如实施方案1-15中任一项所述的化合物，其中X1是S。
17.如实施方案1-16中任一项所述的化合物，其中X2是键。
18.如实施方案1-17中任一项所述的化合物，其中X3是C(R17)。
19.如实施方案1-18中任一项所述的化合物，其中X4是N。
20.如实施方案1-19中任一项所述的化合物，其中X5是C。
21.如实施方案1-19中任一项所述的化合物，其中X5是Si。
22.如实施方案1-19中任一项所述的化合物，其中X5是S，并且R9和R10不存在。
23.如实施方案1-22中任一项所述的化合物，其中X6是
Figure BDA0004238079180001391
24.如实施方案1-23中任一项所述的化合物，其中X7是O。
25.如实施方案1-23中任一项所述的化合物，其中X7是CR5′R6′。
26.如实施方案1-23中任一项所述的化合物，其中X7是S。
27.如实施方案1-23中任一项所述的化合物，其中X7是N(R30)。
28.如实施方案1-27中任一项所述的化合物，其中X8是CH。
29.如实施方案1-27中任一项所述的化合物，其中X8是CH并且X9是N。
30.如实施方案1-29中任一项所述的化合物，其中X11和X12两者都为CH。
31.如实施方案1-29中任一项所述的化合物，其中X11和X12中的一者是CH，并且另一者是N。
32.如实施方案1-31中任一项所述的化合物，其中R1和R2独立地选自氢、卤素、-OR30、-SR30、-N(R30)2和C1-C6烷基。
33.如实施方案1-31中任一项所述的化合物，其中R1和R2独立地选自氢、卤素和C1-C6烷基。
34.如实施方案1-31中任一项所述的化合物，其中R1和R2两者都为氢。
35.如实施方案1-34中任一项所述的化合物，其中R3和R4两者都为氢。
36.如实施方案1-34中任一项所述的化合物，其中R3是氢并且R4是羟基。
37.如实施方案1-34中任一项所述的化合物，其中R3是氢并且R4是硝基。
38.如实施方案1-34中任一项所述的化合物，其中R3是氢并且R4是S(O)2CH3。
39.如实施方案1-34中任一项所述的化合物，其中R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑。
40.如实施方案1-34中任一项所述的化合物，其中R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑。
41.如实施方案1-34中任一项所述的化合物，其中R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑。
42.如实施方案1-34中任一项所述的化合物，其中R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑。
43.如实施方案1-42中任一项所述的化合物，其中R5和R6两者都为氢。
44.如实施方案1-42中任一项所述的化合物，其中n是1，并且R5和R6与它们所附接的碳原子一起被-SO2-替代。
45.如实施方案1-42中任一项所述的化合物，其中R5和R6与它们所附接的碳原子一起组合形成环丙基；
46.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R7是氢。
47.如实施方案1-46中任一项所述的化合物，其中R9是氢。
48.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R7和R11组合形成1-碳桥。
49.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R7和R11组合形成2-碳桥。
50.如实施方案1-46中任一项所述的化合物，其中R11是氢。
51.如实施方案1-46中任一项所述的化合物，其中R9和R11组合形成4-8元碳环。
52.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R11组合形成环丙基环。
53.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R11与它们所附接的原子一起组合形成
Figure BDA0004238079180001421
54.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R10与它们所附接的碳一起形成
Figure BDA0004238079180001422
其中R32是氟。
55.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10是氢。
56.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31和-S(O)2R31，除氢和卤素以外的每个R10均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代。
57.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10选自碳环、芳基和杂芳基，所述碳环、芳基和杂芳基中的每一者均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代。
58.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10是甲基。
59.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10是叠氮基甲基。
60.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10是-OR30。
61.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10是-OCHF2。
62.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10是S-甲基氨亚基替磺酰基。
63.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10是环烷基。
64.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10是环戊基。
65.如实施方案1-53中任一项所述的化合物，其中R10是环己基。
66.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R10与它们所附接的碳原子一起是
Figure BDA0004238079180001431
67.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R10组合形成螺环。
68.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R10组合形成5元杂环螺环。
69.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R10组合形成5元碳环螺环。
70.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R10与它们所附接的碳一起形成任选地被一个或多个卤素取代的环丙基。
71.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R10与它们所附接的碳一起形成
Figure BDA0004238079180001432
72.如实施方案1-45中任一项所述的化合物，其中R9和R10与它们所附接的碳一起形成
Figure BDA0004238079180001441
73.如实施方案1-72中任一项所述的化合物，其中R12是氢。
74.如实施方案1-73中任一项所述的化合物，其中R8是氢。
75.如实施方案1-74中任一项所述的化合物，其中R13是氢。
76.如实施方案1-74中任一项所述的化合物，其中R13是C1-C6烷基。
77.如实施方案1-74中任一项所述的化合物，其中R13是OH。
78.如实施方案1-74中任一项所述的化合物，其中R13和R26与它们所附接的原子一起形成任选地被R27取代的杂环。
79.如实施方案1-74中任一项所述的化合物，R13和R26与它们所附接的原子一起形成
Figure BDA0004238079180001442
80.如实施方案1-74中任一项所述的化合物，其中R13与其所附接的氮原子一起被-O-替代。
81.如实施方案1-80中任一项所述的化合物，其中R13′是氢。
82.如实施方案1-80中任一项所述的化合物，其中R13′是C1-C6烷基。
83.如实施方案1-80中任一项所述的化合物，其中R13′和R14与它们所附接的原子一起组合形成含有一个N的5或6元杂环。
84.如实施方案1-83中任一项所述的化合物，其中R13″是氢。
85.如实施方案1-83中任一项所述的化合物，其中R13″是C1-C6烷基。
86.如实施方案1-85中任一项所述的化合物，其中R14是C1-C6烷基。
87.如实施方案1-85中任一项所述的化合物，其中R14是氢。
88.如实施方案1-85中任一项所述的化合物，其中R14是卤素。
89.如实施方案1-85中任一项所述的化合物，其中R14是卤代烷基。
90.如实施方案1-85中任一项所述的化合物，其中R14是-OR30。
91.如实施方案1-85中任一项所述的化合物，其中R14是-O-苯基。
92.如实施方案1-91中任一项所述的化合物，其中R15是C1-C6烷基。
93.如实施方案1-91中任一项所述的化合物，其中R15是氢。
94.如实施方案1-91中任一项所述的化合物，其中R15是卤素。
95.如实施方案1-91中任一项所述的化合物，其中R15是卤代烷基。
96.如实施方案1-91中任一项所述的化合物，其中R15是-OR30。
97.如实施方案1-91中任一项所述的化合物，其中R15是-O-苯基。
98.如实施方案1-97中任一项所述的化合物，其中R16是C1-C6烷基。
99.如实施方案1-97中任一项所述的化合物，其中R16是氢。
100.如实施方案1-97中任一项所述的化合物，其中R16是卤素。
101.如实施方案1-97中任一项所述的化合物，其中R16是卤代烷基。
102.如实施方案1-97中任一项所述的化合物，其中R16是-OR30。
103.如实施方案1-97中任一项所述的化合物，其中R16是-O-苯基。
104.如实施方案1-103中任一项所述的化合物，其中R17是氢。
105.如实施方案1-104中任一项所述的化合物，其中R18是氢。
106.如实施方案1-105中任一项所述的化合物，其中R19是氢。
107.如实施方案1-105中任一项所述的化合物，其中R19选自C1-C6烷基、C5-C10双环碳环、C4-C6杂环、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-N(R30)2、-(CH2)n-R33和
Figure BDA0004238079180001461
108.如实施方案1-107中任一项所述的化合物，其中R20是氢。
109.如实施方案1-107中任一项所述的化合物，其中R20选自C1-C6烷基、C5-C10双环碳环、C4-C6杂环、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-N(R30)2、-(CH2)n-R33和
Figure BDA0004238079180001462
110.如实施方案1-107中任一项所述的化合物，其中R20是-(CH2)n-R33。
111.如实施方案1-110中任一项所述的化合物，其中R21是C1-C6卤代烷基。
112.如实施方案1-110中任一项所述的化合物，其中R21是-O-C1-C6卤代烷基。
113.如实施方案1-110中任一项所述的化合物，其中R21是任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代的苯基。
114.如实施方案1-110中任一项所述的化合物，其中R21是任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代的杂芳基。
115.如实施方案113或114所述的化合物，其中R21未被取代。
116.如实施方案113或114所述的化合物，其中R21被至少1个卤素基团取代。
117.如实施方案113或114所述的化合物，其中R21被至少1个C1-C6烷基基团取代。
118.如实施方案113或114所述的化合物，其中R21被1个氟代基团取代。
119.如实施方案113或114所述的化合物，其中R21被至少1个甲基基团取代。
120.如实施方案111-119中任一项所述的化合物，其中R21与其所附接的碳一起是
Figure BDA0004238079180001471
121.如实施方案1-120中任一项所述的化合物，其中R22是任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代的-C1-C6烷基-R23。
122.如实施方案1-120中任一项所述的化合物，其中R22是任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代的–C3-C6烷基-R23。
123.如实施方案1-120中任一项所述的化合物，其中R22是任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代的双环环烷基-R23。
124.如实施方案1-120中任一项所述的化合物，其中R22是任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代的-杂芳基-R23。
125.如实施方案1-120中任一项所述的化合物，其中R22是
Figure BDA0004238079180001481
126.如实施方案1-120中任一项所述的化合物，其中R22是
Figure BDA0004238079180001482
127.如实施方案1-120中任一项所述的化合物，其中R22是任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代的-碳环-R23。
128.如实施方案1-120中任一项所述的化合物，其中R22是
Figure BDA0004238079180001491
129.如实施方案1-124和127中任一项所述的化合物，其中R22是未经取代的。
130.如实施方案1-129中任一项所述的化合物，其中R23是氢。
131.如实施方案1-129中任一项所述的化合物，其中R23是糖。
132.如实施方案1-129中任一项所述的化合物，其中R23是-OR30。
133.如实施方案1-129中任一项所述的化合物，其中R23是SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31或-S(O)2R31。
134.如实施方案1-133中任一项所述的化合物，其中R25是C1-C6烷基。
135.如实施方案1-133中任一项所述的化合物，其中R25是氢。
136.如实施方案1-133中任一项所述的化合物，其中R25是卤素。
137.如实施方案1-133中任一项所述的化合物，其中R25是卤代烷基。
138.如实施方案1-133中任一项所述的化合物，其中R25是-OR30。
139.如实施方案1-133中任一项所述的化合物，其中R25是-O-苯基。
140.如实施方案1-133中任一项所述的化合物，其中R25是-SF5。
141.如实施方案1-133中任一项所述的化合物，其中R25是S-甲基氨亚基替磺酰基。
142.如实施方案1-133中任一项所述的化合物，其中R25是甲基次膦酰基(methylphosphinyl)。
143.如实施方案1-142中任一项所述的化合物，其中R26是
Figure BDA0004238079180001501
144.如实施方案1-142中任一项所述的化合物，其中R26选自：
Figure BDA0004238079180001502
145.如实施方案1-142中任一项所述的化合物，其中R26是
Figure BDA0004238079180001503
146.如实施方案1-142中任一项所述的化合物，其中R26是
Figure BDA0004238079180001504
147.如实施方案1-142中任一项所述的化合物，其中R26是
Figure BDA0004238079180001505
148.如实施方案1-142中任一项所述的化合物，其中R26选自：
Figure BDA0004238079180001511
149.如实施方案1-142中任一项所述的化合物，其中R26是
Figure BDA0004238079180001512
150.如实施方案1-149中任一项所述的化合物，其中R27是
Figure BDA0004238079180001513
151.如实施方案1-149中任一项所述的化合物，其中R27是
Figure BDA0004238079180001514
152.如实施方案1-149中任一项所述的化合物，其中R27是
Figure BDA0004238079180001515
153.如实施方案1-149中任一项所述的化合物，其中R27是
Figure BDA0004238079180001521
154.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是氢。
155.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是C1-C6烷基。
156.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是甲基。
157.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是被碳环取代的C1-C6烷基。
158.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是被环烷基取代的甲基。
159.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是被环己基取代的甲基。
160.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是被环丙基取代的甲基。
161.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是C1-C6卤代烷基。
162.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是CF3。
163.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是C(O)R31。
164.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是环烷基。
165.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是环丙基。
166.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是环己基。
167.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是芳基。
168.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是被C(O)R31取代的芳基。
169.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是4-氟苯基。
170.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是4-氟苯基。
171.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是4-羧基苯基。
172.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是4-乙氧羰基苯基。
173.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)苯基。
174.如实施方案1-153中任一项所述的化合物，其中R30是对甲苯基。
175.如权利要求1-153中任一项所述的化合物，其中R30是4-(五氟-λ6-硫烷基)苯基。
176.如实施方案1-175中任一项所述的化合物，其中R31是氢。
177.如实施方案1-175中任一项所述的化合物，其中R31是C1-C6烷基。
178.如实施方案1-175中任一项所述的化合物，其中R31是甲基。
179.如实施方案1-175中任一项所述的化合物，其中R31是C1-C6卤代烷基。
180.如实施方案1-175中任一项所述的化合物，其中R31是CF3。
181.如实施方案1-175中任一项所述的化合物，其中R31是-OR32。
182.如实施方案1-175中任一项所述的化合物，其中R31是-N(R32)2。
183.如实施方案1-182中任一项所述的化合物，其中R32是氢。
184.如实施方案1-182中任一项所述的化合物，其中R32是C1-C6烷基。
185.如实施方案1-182中任一项所述的化合物，其中R32是卤素。
186.如实施方案1-182中任一项所述的化合物，其中R32是氟。
187.如实施方案1-186中任一项所述的化合物，其中R33是氢。
188.如实施方案1-186中任一项所述的化合物，其中R33独立地选自杂芳基、芳基、-C6H5-OR30；-OR30、-SR30、-SeR30、-N(R30)2和-C(O)R31。
189.如实施方案1-186中任一项所述的化合物，其中R33是胍。
190.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001551
或其药学上可接受的盐。
191.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001552
或其药学上可接受的盐。
192.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001561
或其药学上可接受的盐。
193.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001562
或其药学上可接受的盐。
194.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001571
或其药学上可接受的盐。
195.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001572
或其药学上可接受的盐。
196.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001581
或其药学上可接受的盐。
197.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001582
或其药学上可接受的盐。
198.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001591
或其药学上可接受的盐。
199.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001592
或其药学上可接受的盐。
200.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001601
/>
或其药学上可接受的盐。
201.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001602
或其药学上可接受的盐。
202.如实施方案201所述的化合物，其中
Figure BDA0004238079180001603
是单键。
203.如实施方案201所述的化合物，其中
Figure BDA0004238079180001604
是双键。
204.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001611
或其药学上可接受的盐。
205.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001612
或其药学上可接受的盐。
206.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001621
或其药学上可接受的盐。
207.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001622
或其药学上可接受的盐。
208.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001631
或其药学上可接受的盐。
209.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001632
或其药学上可接受的盐。
210.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001641
或其药学上可接受的盐。
211.如实施方案1-189中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure BDA0004238079180001642
或其药学上可接受的盐。
212.一种选自表1中任一种化合物的化合物，
或其药学上可接受的盐。
213.一种药物组合物，其包含实施方案要求1-212中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
214.一种治疗补体介导的病症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的实施方案1-212所述的化合物或其药学上可接受的盐。
215.如实施方案214所述的方法，其中所述受试者是人。
216.如实施方案214或215所述的方法，其中所述病症是由C1s介导的。
217.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是C3肾小球病。
218.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是眼科病症。
219.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是年龄相关性黄斑变性(AMD)。
220.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)。
221.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是C3肾小球肾炎。
222.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是致密物沉积病。
223.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是血管性水肿。
224.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是遗传性血管性水肿。
225.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是自身免疫性溶血性贫血。
226.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症是冷凝集素疾病。
227.如实施方案214-2167中任一项所述的方法，其中所述病症是移植体排斥。
228.如实施方案214-216中任一项所述的方法，其中所述病症选自遗传性血管性水肿1型、遗传性血管性水肿2型、创伤、炎症、脓毒症、多器官功能不全综合征、内毒素血症、终末期肾脏疾病、肾衰竭、移植体功能延迟、缺血再灌注损伤、视神经脊髓炎、普通可变型免疫缺陷、抗体介导的排斥、移植体排斥、哮喘、过敏性哮喘、血管神经性水肿、急性ACE诱导性血管性水肿、肾移植和急性肾损伤。
229.如权利要求1-212中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求213所述的药物组合物，其用于治疗补体介导的病症。
230.如实施方案231使用的化合物或组合物，其中所述受试者是人。
231.如实施方案229或230使用的化合物或组合物，其中所述病症是由C1s介导的。
232.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是C3肾小球病。
233.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是眼科病症。
234.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是年龄相关性黄斑变性(AMD)。
235.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)。
236.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是C3肾小球肾炎。
237.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是致密物沉积病。
238.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是血管性水肿。
239.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是遗传性血管性水肿。
240.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是自身免疫性溶血性贫血。
241.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是冷凝集素疾病。
242.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症是移植体排斥。
243.如实施方案229-231中任一项使用的化合物或组合物，其中所述病症选自遗传性血管性水肿1型、遗传性血管性水肿2型、创伤、炎症、脓毒症、多器官功能不全综合征、内毒素血症、终末期肾脏疾病、肾衰竭、移植体功能延迟、缺血再灌注损伤、视神经脊髓炎、普通可变型免疫缺陷、抗体介导的排斥、移植体排斥、哮喘、过敏性哮喘、血管神经性水肿、急性ACE诱导性血管性水肿、肾移植和急性肾损伤。
244.如权利要求1-213中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗补体介导的病症的药物中的用途。
245.如实施方案244所述的用途，其中所述受试者是人。
246.如实施方案244或245所述的用途，其中所述病症是由C1s介导的。
247.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是C3肾小球病。
248.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是眼科病症。
249.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是年龄相关性黄斑变性(AMD)。
250.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)。
251.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是C3肾小球肾炎。
252.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是致密物沉积病。
253.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是血管性水肿。
254.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是遗传性血管性水肿。
255.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是自身免疫性溶血性贫血。
256.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是冷凝集素疾病。
257.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症是移植体排斥。
258.如实施方案244-246中任一项所述的用途，其中所述病症选自遗传性血管性水肿1型、遗传性血管性水肿2型、创伤、炎症、脓毒症、多器官功能不全综合征、内毒素血症、终末期肾脏疾病、肾衰竭、移植体功能延迟、缺血再灌注损伤、视神经脊髓炎、普通可变型免疫缺陷、抗体介导的排斥、移植体排斥、哮喘、过敏性哮喘、血管神经性水肿、急性ACE诱导性血管性水肿、肾移植和急性肾损伤。
药物制备物
本文所述的活性化合物可作为纯化学品施用给有需要的宿主，但更通常是作为药物组合物施用，该药物组合物包含对于需要此种治疗的宿主(通常是人)是有效的量的如本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体。因此，在一个实施方案中，本公开提供了药物组合物，所述药物组合物包含有效量的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体连同至少一种药学上可接受的载体，所述药物组合物用于本文所述的用途中的任一用途。药物组合物可含有化合物或盐作为唯一的活性剂，或者在替代实施方案中，含有所述化合物和至少一种另外的活性剂。
有效量的如本文所述的活性化合物，或与另一种活性剂组合或交替或在另一种活性剂之后、与另一种活性剂伴随或先于另一种活性剂的本文所述的活性化合物可以以足以实现以下的量使用：(a)抑制包括炎性的、免疫性的(包括自身免疫性的)病症或补体相关病症在内的由补体途径介导的病症的进展；(b)引起炎性的、免疫性的(包括自身免疫性的)病症或补体相关病症的进展；(c)引起炎性的、免疫性的(包括自身免疫性的)病症或补体相关病症的治愈；或者抑制或预防炎性的、免疫性的(包括自身免疫性的)病症或补体相关病症的发展。因此，有效量的本文所述的活性化合物或其盐或组合物在被施用给患者以提供临床益处时将提供足量的活性剂。
待递送给有需要的宿主(通常是人)的本文所述的活性化合物或药物组合物的精确量将由健康护理提供者确定以实现期望的临床益处。
在某些实施方案中，药物组合物呈在单位剂型中含有从约0.1mg至约2000mg、从约10mg至约1000mg、从约100mg至约800mg或从约200mg至约600mg的活性化合物以及任选的从约0.1mg至约2000mg、从约10mg至约1000mg、从约100mg至约800mg或从约200mg至约600mg的另外的活性剂的剂型的形式。实例是具有至少约0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、900、1000、1100、1200、1250、1300、1400、1500或1600mg活性化合物或其盐、N-氧化物或前药的剂型。在一个实施方案中，该剂型具有至少约1mg、5mg、10mg、25mg、50mg、75mg、100mg、200mg、400mg、500mg、600mg、1000mg、1200mg或1600mg活性化合物、N-氧化物、前药或其盐。该剂型中活性化合物的量是在不参考盐的情况下计算的。该剂型可例如按每天一次(q.d.)、每天两次(b.i.d.)、每天三次(t.i.d.)、每天四次(q.i.d.)、隔天一次(Q2d)、每三天一次(Q3d)、根据需要，或提供对本文所述的病症的治疗的任何剂量时间表施用。
本文所公开的或如本文所述使用的化合物可以以含有常规药学上可接受的载体的剂量单位制剂经口、外用、肠胃外、通过吸入或喷雾、舌下、经由植入物(包括眼部植入物)、经皮、经由颊施用、经直肠、作为眼科溶液、注射剂(包括眼部注射剂)、静脉内、主动脉内、颅内、真皮下、腹膜内、皮下、经鼻、舌下、鞘内或直肠或通过其他方式施用。对于眼部递送，所述化合物可按所需施用，例如作为溶液、悬浮液或其他制剂经由玻璃体内、基质内、前房内、筋膜下、视网膜下、眼球后、眼球周、脉络膜上、脉络膜下、脉络膜、结膜、结膜下、巩膜上、眼周、经巩膜、眼球后、后部近巩膜、角膜周，或泪管注射，或经过粘液、粘蛋白或粘膜屏障，以立即释放或受控释放方式或经由眼部装置、注射或外用施用制剂，例如，作为滴眼液提供的溶液或悬浮液施用。
药物组合物可被配制为任何药学上可使用的形式，例如，被配制为气溶胶、霜剂、凝胶、凝胶帽、丸剂、微颗粒、纳米颗粒、注射液或输注液、胶囊、片剂、糖浆、经皮贴剂、皮下贴剂、干燥粉末、吸入制剂、在医疗装置中、栓剂、颊用剂，或舌下制剂、肠胃外制剂，或眼科溶液或悬浮液。一些剂型(诸如片剂和胶囊)被再分成含有适当量的活性成分(如有效量)的适当大小的单位剂量以实现所需目的。
适合于如本文所考虑的那样施用的药物组合物和制造此类组合物的方法是本领域已知的。已知技术的实例包括例如美国专利号4,983,593；5,013,557；5,456,923；5,576,025；5,723,269；5,858,411；6,254,889；6,303,148；6,395,302；6,497,903；7,060,296；7,078,057；7,404,828；8,202,912；8,257,741；8,263,128；8,337,899；8,431,159；9,028,870；9,060,938；9,211,261；9,265,731；9,358,478；和9,387,252；这些专利均通过引用方式并入本文。
这里所考虑的药物组合物可以任选地包含载体。载体必须具有足够高的纯度和足够低的毒性，以使它们适合于施用给被治疗的患者。载体可以是惰性的，或者它可具有其自身的药物益处。与化合物结合使用的载体的量足以为每单位剂量的化合物的施用提供可行量的材料。载体的类别包括但不限于粘合剂、缓冲剂、着色剂、稀释剂、崩解剂、乳化剂、填充剂、调味剂、助流剂、润滑剂、pH调节剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、增溶剂、压片剂和润湿剂。一些载体可被列于多于一个类别中，例如植物油可在一些制剂中用作润滑剂，而在另一些制剂中用作稀释剂。示例性的药学上可接受的载体包括糖、淀粉、纤维素、黄蓍胶粉、麦芽、明胶；滑石粉和植物油。
其他基质材料、填充剂或稀释剂的实例包括乳糖、甘露醇、木糖醇、微晶纤维素、磷酸氢钙和淀粉。表面活性剂的实例包括月桂基硫酸钠和聚山梨酯80。
药物络合剂或增溶剂的实例包括聚乙二醇、咖啡因、呫吨、龙胆酸和环糊精。
崩解剂的实例包括羟基乙酸淀粉钠、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、胶态二氧化硅和交联羧甲基纤维素钠。
粘合剂的实例包括甲基纤维素、微晶纤维素、淀粉和树胶(诸如瓜尔胶和黄蓍胶)。
润滑剂的实例包括硬脂酸镁和硬脂酸钙。
pH调节剂的实例包括酸，诸如柠檬酸、乙酸、抗坏血酸、乳酸、天门冬氨酸、琥珀酸、磷酸等；碱，诸如乙酸钠、乙酸钾、氧化钙、氧化镁、磷酸三钠、氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化铝等，以及缓冲剂，一般包括酸和所述酸的盐的混合物。药物组合物中可包含基本上不干扰本公开的化合物的活性的任选的其他活性剂。
在某些实施方案中，用于施用的药物组合物进一步包含式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物或盐，并且任选地包含以下中的一者或多者：磷酸甘油酯；磷脂酰胆碱；二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)；二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)；二油氧基丙基三乙基铵(DOTMA)；二油酰基磷脂酰胆碱；胆固醇；胆固醇酯；二酰基甘油；二酰基甘油琥珀酸酯；二磷脂酰甘油(DPPG)；十六醇；脂肪醇诸如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂基醚；表面活性脂肪酸，诸如棕榈酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸单甘油酯；脂肪酸二甘油酯；脂肪酸酰胺；脱水山梨糖醇三油酸酯
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甘胆酸盐；脱水山梨糖醇单月桂酸酯/>
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聚山梨酯20/>
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聚山梨酯60/>
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聚山梨酯65/>
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聚山梨酯80/>
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聚山梨酯85/>
Figure BDA0004238079180001737
聚氧乙烯单硬脂酸酯；表面活性素；泊洛沙姆；脱水山梨糖醇脂肪酸酯，如脱水山梨糖醇三油酸酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)；心磷脂；磷脂酸；脑苷脂；磷酸二鲸蜡酯；二棕榈酰基磷脂酰甘油；硬脂胺；十二烷基胺；十六烷基-胺；乙酰棕榈酸酯；蓖麻油酸甘油酯；硬脂酸十六烷基酯；肉豆蔻酸异丙酯；泰洛沙泊；聚(乙二醇)5000-磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400-单硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性剂特性的合成和/或天然洗涤剂；脱氧胆酸盐；环糊精；离液盐；离子配对剂；葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺和神经氨酸；普鲁兰多糖、纤维素、微晶纤维素、羟基丙基甲基纤维素(HPMC)、羟基纤维素(HC)、甲基纤维素(MC)、葡聚糖、环葡聚糖、糖原、羟乙基淀粉、鹿角菜胶、糖基(glycon)、淀粉糖、壳聚糖、N,O-羧甲基壳聚糖、藻胶和藻酸、淀粉、几丁质、菊粉、魔芋、葡甘露聚糖、石耳素、肝素、透明质酸、凝胶多糖和黄原胶、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇和乳糖醇、普朗尼克聚合物、聚乙烯、聚碳酸酯(例如，聚(1,3-二噁烷-2酮))、聚酐(例如，聚(癸二酸酐))、聚富马酸丙酯、聚酰胺(例如，聚己内酰胺)、聚缩醛、聚醚、聚酯(例如，聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-共-乙交酯、聚己内酯、聚羟基酸(例如，聚((β-羟基烷酸酯)))、聚(原酸酯)、聚氰基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯和聚胺、聚赖氨酸、聚赖氨酸-PEG共聚物和聚(乙烯亚胺)、聚(乙烯亚胺)-PEG共聚物、甘油单癸酰基癸酸酯、丙二醇维生素E TPGS(也称为d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、明胶、二氧化钛、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟基丙基甲基纤维素(HPMC)、羟基丙基纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物(PEO/PPO)、聚乙二醇(PEG)、羧甲基纤维素钠(NaCMC)和乙酸琥珀酸羟基丙基甲基纤维素(HPMCAS)。
在一些实施方案中，药物制备物可包含用于所述化合物的受控递送的聚酯，包括但不限于普朗尼克聚合物、聚酯(例如，聚乳酸、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、聚己酸内酯、聚戊内酯、聚(1,3-二噁烷-2酮))；聚酸酐(例如，聚(癸二酸酐))；聚醚(例如，聚乙二醇)；聚氨酯；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；和聚氰基丙烯酸酯。
在一些实施方案中，聚合物可用聚乙二醇(PEG)、用碳水化合物和/或用由多糖衍生的无环聚缩醛修饰。参见，例如，Papisov,2001,ACS Symposium Series,786:301，其通过引用方式并入本文。
本公开的化合物可被配制为颗粒。在一个实施方案中，颗粒是微颗粒或包括微颗粒。在替代实施方案中，颗粒是纳米颗粒或包括纳米颗粒。
在另外的替代实施方案中，用于制备颗粒的普通技术包括但不限于溶剂蒸发、溶剂去除、喷雾干燥、倒相、凝聚和低温铸造。本文中简要描述了合适的颗粒配制方法。在颗粒形成过程中可以任选地将包括pH调节剂、崩解剂、防腐剂和抗氧化剂在内的药学上可接受的赋形剂掺入到颗粒中。
在一个实施方案中，该颗粒来源于溶剂蒸发法。在这个方法中，将本文所述的化合物(或聚合物基质和一种或多种本文所述的化合物)溶解于挥发性有机溶剂诸如二氯甲烷。然后，将含有本文所述的化合物的有机溶液被悬浮于含有表面活性剂诸如聚(乙烯醇)的水性溶液中。搅拌所得乳液直至大部分有机溶剂蒸发，留下固体纳米颗粒或微颗粒。将所得纳米颗粒或微颗粒用水洗涤，并且在冻干机中干燥过夜(在真空下，加热或不加热)。通过此方法可以获得具有不同尺寸和形态的纳米颗粒。
含有不稳定聚合物(诸如某些聚酸酐)的药物组合物在制造过程期间可能因水的存在而降解。对于这些聚合物，在完全或基本上无水的有机溶剂中进行的方法可被用于制备颗粒。
溶剂去除也可被用于由水解不稳定的化合物制备颗粒。在这个方法中，将化合物(或聚合物基质和一种或多种化合物)分散或溶解于挥发性有机溶剂诸如二氯甲烷中。然后，通过搅拌将该混合物悬浮在有机油(诸如硅油)中以形成乳液。固体颗粒从乳液形成，随后可以将该固体颗粒从上清液中分离。由该技术生产的球体的外部形态高度依赖于药物的特性(identity)。
在一个实施方案中，如本文所述的活性化合物作为通过溶剂去除形成的颗粒被施用给有需要的患者。在另一个实施方案中，本公开提供了通过溶剂去除形成的颗粒，所述颗粒包含本公开的化合物和一种或多种如本文定义的药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，通过溶剂去除形成的颗粒包含本公开的化合物和另外的治疗剂。在进一步的实施方案中，通过溶剂去除形成的颗粒包含本公开的化合物、另外的治疗剂和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，通过溶剂去除形成的所描述的颗粒中的任一种颗粒可被配制成片剂，并且然后可被包衣从而形成经包衣的片剂。在替代实施方案中，通过溶剂去除形成的颗粒被配制成片剂，但该片剂是未被包衣。
在一个实施方案中，颗粒是通过喷雾干燥得到的。在这个方法中，将化合物(或聚合物基质和一种或多种化合物)溶解于有机溶剂诸如二氯甲烷中。通过由压缩空气的流动驱动的微粉化喷嘴泵送该溶液，并且将所得气溶胶悬浮在经加热的空气旋风中，使溶剂从微液滴中蒸发，从而形成颗粒。可使用该方法获得微颗粒和纳米颗粒。
在一个实施方案中，如本文所述的活性化合物可作为经喷雾干燥的分散体(SDD)被施用给有需要的患者。在另一个实施方案中，本公开提供了经喷雾干燥的分散体(SDD)，所述经喷雾干燥的分散体包含本公开的化合物和一种或多种如本文定义的药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，所述SDD包含本公开的化合物和另外的治疗剂。在进一步的实施方案中，所述SDD包含本公开的化合物、另外的治疗剂和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，所描述的经喷雾干燥的分散体中的任一种分散体可被包衣从而形成经包衣的片剂。在替代实施方案中，经喷雾干燥的分散体被配制成片剂，但该片剂是未被包衣。
可使用倒相(phase inversion)方法由如本文所述的活性化合物形成颗粒。在这种方法中，将化合物(或聚合物基质或一种或多种活性化合物)溶解于合适的溶剂中，并且将该溶液倾倒到该化合物的强非溶剂中，以在有利的条件下自发产生微颗粒或纳米颗粒。该方法可被用于生产包括例如从纳米颗粒到微颗粒的广泛尺寸的纳米颗粒，其通常具有窄粒度分布。
在一个实施方案中，如本文所述的活性化合物作为通过倒相形成的颗粒被施用给有需要的患者。在另一个实施方案中，本公开提供了通过倒相形成的颗粒，所述颗粒包含本公开的化合物和一种或多种如本文定义的药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，通过倒相形成的颗粒包含本公开的化合物和另外的治疗剂。在进一步的实施方案中，通过倒相形成的颗粒包含本公开的化合物、另外的治疗剂和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，通过倒相形成的所描述的颗粒中的任一种颗粒可被配制成片剂，并且然后可被包衣从而形成经包衣的片剂。在替代实施方案中，通过倒相形成的颗粒被配制成片剂，但该片剂未被包衣。
使用凝聚的颗粒形成技术是本领域已知的，例如，如GB-B-929406、GB-B-929 40 1以及美国专利号3,266,987、4,794,000和4,460,563中所述。凝聚涉及将化合物(或聚合物基质和一种或多种化合物)溶液分离成两个不混溶的液相。一个相是致密的凝聚层相，其含有高浓度的化合物，而第二相含有低浓度的化合物。在致密的凝聚层相中，化合物形成纳米级或微米级液滴，该液滴硬化成颗粒。凝聚可通过温度变化、添加非溶剂或添加微盐(单凝聚)或通过添加另一种聚合物从而形成互聚物复合物(复合凝聚)来诱导。
在一个实施方案中，如本文所述的活性化合物作为通过凝聚形成的颗粒被施用给有需要的患者。在另一个实施方案中，本公开提供了通过凝聚形成的颗粒，所述颗粒包含本公开的化合物和一种或多种如本文定义的药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，通过凝聚形成的颗粒包含本公开的化合物和另外的治疗剂。在进一步的实施方案中，通过凝聚形成的颗粒包含本公开的化合物、另外的治疗剂和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，通过凝聚形成的所描述的颗粒中的任一种颗粒可被配制成片剂，并且然后可被包衣从而形成经包衣的片剂。在替代实施方案中，通过凝聚形成的颗粒被配制成片剂，但该片剂未被包衣。
颁给Gombotz等人的美国专利号5,019,400描述了在非常低的温度下铸造受控释放微球的方法。在这个方法中，将化合物溶解于溶剂中。然后将混合物在低于使化合物液滴冻结的药物溶液冻结点的温度下雾化到含有液体非溶剂的容器中。随着化合物的液滴和非溶剂温热，液滴中的溶剂融化，并被萃取到非溶剂中，从而使微球体硬化。
在一个实施方案中，本公开的化合物作为通过低温铸造形成的颗粒被施用给有需要的患者。在另一个实施方案中，本公开提供了通过低温铸造形成的颗粒，所述颗粒包含本公开的化合物和一种或多种如本文定义的药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，通过低温铸造形成的颗粒包含本公开的化合物和另外的治疗剂。在进一步的实施方案中，通过低温铸造形成的颗粒包含本公开的化合物、另外的治疗剂和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，通过低温铸造形成的所描述的颗粒中的任一种颗粒可被配制成片剂，并且然后可被包衣从而形成经包衣的片剂。在替代实施方案中，通过低温铸造形成的颗粒被配制成片剂，但该片剂未被包衣。
在本公开的一个方面，有效量的如本文所述的活性化合物被掺入到纳米颗粒中，例如，以便方便递送和/或延长释放的递送。纳米级材料的使用提供了改变基本物理特性诸如溶解度、扩散性、血液循环半衰期、药物释放特征和/或免疫原性的能力。许多基于纳米颗粒的治疗剂和诊断剂已被开发用于治疗癌症、糖尿病、疼痛、哮喘、过敏病和感染。这些纳米级剂可提供更有效和/或更方便的施用途径、更低的治疗毒性、延长产品生命周期，并且最终降低健康护理费用。作为治疗递送系统，纳米颗粒可允许靶向递送和受控释放。
此外，基于纳米颗粒的化合物递送可被用于以持续的速率释放化合物，并因此降低施用频率，以靶向方式递送药物以使全身性副作用最小化，或者同时递送用于组合疗法的两种或更多种药物以产生协同效果并且阻抑耐药性。许多基于纳米技术的治疗产品已被批准用于临床使用。在这些产品中，脂质体药物和基于聚合物的缀合物占所述产品的很大的比例。参见Zhang,L.等人,Nanoparticles in Medicine:Therapeutic Applicationsand Developments,Clin.Pharm.and Ther.,83(5):761-769,2008。
用于生产纳米颗粒的方法是本领域已知的。例如，参见Muller,R.H.等人,Solidlipid nanoparticles(SLN)for controlled drug delivery–a review of the state ofthe art,Eur.H.Pharm.Biopharm.,50:161-177,2000；美国8,691,750至Consien等人；WO2012/145801至Kanwar；美国8,580,311至Armes,S.等人；Petros,R.A.和DeSimone,J.M.,Strategies in the design of nanoparticles for therapeutic applications,NatureReviews/Drug Discovery,第9卷:615-627,2010；美国8,465,775；美国8,444,899；美国8,420,124；美国8,263,129；美国8,158,728；8,268,446；Pellegrino等人,2005,Small,1:48；Murray等人,2000,Ann.Rev.Mat.Sci.,30:545；以及Trindade等人,2001,Chem.Mat.,13:3843；全部通过引用方式并入本文。另外的方法已描述于文献(参见，例如，Doubrow,编著,“Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy,”CRC Press,BocaRaton,1992；Mathiowitz等人,1987,J.Control.Release,5:13；Mathiowitz等人,1987,Reactive Polymers,6:275；以及Mathiowitz等人,1988,J.Appl.Polymer Sci.,35:755；美国专利号5,578,325和6,007,845号；P.Paolicelli等人,“Surface-modified PLGA-basedNanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-likeParticles”Nanomedicine.5(6):843-853(2010)颁给Gref等人的美国专利号5,543,158，或Von Andrian等人的WO公布WO2009/051837；Zauner等人,1998,Adv.Drug Del.Rev.,30:97；以及Kabanov等人,1995,Bioconjugate Chem.,6:7；(PEI；Boussif等人,1995,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,1995,92:7297)，和poly(amidoamine)dendrimers(Kukowska-Latallo等人,1996,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,93:4897；Tang等人,1996,BioconjugateChem.,7:703；以及Haensler等人,1993,Bioconjugate Chem.,4:372；Putnam等人,1999,Macromolecules,32:3658；Barrera等人,1993,J.Am.Chem.Soc.,115:11010；Kwon等人,1989,Macromolecules,22:3250；Lim等人,1999,J.Am.Chem.Soc.,121:5633；以及Zhou等人,1990,Macromolecules,23:3399)。这些聚酯的实例包括聚(L-丙交酯-L-赖氨酸)共聚物(Barrera等人,1993,J.Am.Chem.Soc.,115:11010聚(丝氨酸酯)(Zhou等人,1990,Macromolecules,23:3399聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)(Putnam等人,1999,Macromolecules,32:3658；以及Lim等人,1999,J.Am.Chem.Soc.,121:5633)和聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)(Putnam等人,1999,Macromolecules,32:3658；以及Lim等人,1999,J.Am.Chem.Soc.,121:5633；美国专利号6,123,727；美国专利号5,804,178；美国专利号5,770,417；美国专利号5,736,372；美国专利号5,716,404；美国专利号6,095,148；美国专利号5,837,752；美国专利号5,902,599；美国专利号5,696,175；美国专利号5,514,378；美国专利号5,512,600；美国专利号5,399,665；美国专利号5,019,379；美国专利号5,010,167；美国专利号4,806,621；美国专利号4,638,045；以及美国专利号4,946,929；Wang等人,2001,J.Am.Chem.Soc.,123:9480；Lim等人,2001,J.Am.Chem.Soc.,123:2460；Langer,2000,Acc.Chem.Res.,33:94；Langer,1999,J.Control.Release,62:7；以及Uhrich等人,1999,Chem.Rev.,99:3181；Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Amines and AmmoniumSalts,Goethals编著,Pergamon Press,1980；Principles of Polymerization,Odian,John Wiley&Sons,第4版,2004；Contemporary Polymer Chemistry,Allcock等人,Prentice-Hall,1981；Deming等人,1997,Nature,390:386；以及美国专利号6,506,577、6,632,922、6,686,446和6,818,732；C.Astete等人,“Synthesis and characterization ofPLGA nanoparticles”J.Biomater.Sci.Polymer Edn,第17卷，第3期，第247-289页(2006)；K.Avgoustakis“Pegylated Poly(Lactide)and Poly(Lactide-Co-Glycolide)Nanoparticles:Preparation,Properties and Possible Applications in DrugDelivery”Current Drug Delivery 1:321-333(2004)；C.Reis等人,“NanoencapsulationI.Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles”Nanomedicine2:8-21(2006)；P.Paolicelli等人,“Surface-modified PLGA-based Nanoparticles thatcan Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles”Nanomedicine.5(6):843-853(2010)；以及颁给Unger的美国专利号6,632,671,2003年10月14日，全部通过引用方式并入本文。
在一个实施方案中，聚合物颗粒为在约0.1nm至约10000nm之间、在约1nm至约1000nm之间、在约10nm和1000nm之间、在约1nm和100nm之间、在约1nm和10nm之间、在约1nm和50nm之间、在约100nm和800nm之间、在约400nm和600nm之间或约500nm。在一个实施方案中，微颗粒为不超过约0.1nm、0.5nm、1.0nm、5.0nm、10nm、25nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm、250nm、300nm、400nm、450nm、500nm、550nm、600nm、650nm、700nm、750nm、800nm、850nm、900nm、950nm、1000nm、1250nm、1500nm、1750nm或2000nm。在一些实施方案中，本文所述化合物可共价偶联至纳米颗粒(例如聚苯乙烯颗粒、PLGA颗粒、PLA颗粒或其他纳米颗粒)中使用的聚合物。
根据本公开的药物组合物可以被配制用于经口施用。这些组合物可含有实现所需结果的任何量的活性化合物，例如，介于0.1重量％和99重量％(wt.％)的化合物，并且通常至少约5重量％的所述化合物。一些实施方案含有至少约10％、15％、20％、25重量％至约50重量％或从约5重量％至约75重量％的所述化合物。
适合于直肠施用的药物组合物通常呈现为单位剂量栓剂。这些栓剂可通过将活性化合物与一种或多种常规固体载体(例如可可脂)混合，并然后使所得混合物成形来制备。
适合于局部施加于皮肤的药物组合物优选采用膏剂、霜剂、洗剂、糊剂、凝胶、喷雾、气溶胶或油的形式。可被使用的载体包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇、经皮增强剂以及它们中的两种或更多种的组合。
适合于经皮施用的药物组合物可呈现为适于与接受者的表皮保持延长的时间段的密切接触的离散贴剂。适合于经皮施用的药物组合物也可通过离子电渗疗法(iontophoresis)来递送(参见，例如，Pharmaceutical Research 3(6):318(1986))，并且通常采取活性化合物的任选经缓冲的水性溶液的形式。在一个实施方案中，提供了用于将药物递送穿过或者进入生物组织(特别是皮肤)的微针贴剂或装置。该微针贴剂或装置允许以临床相关的速率递送药物穿过或进入皮肤或其他组织屏障，而对组织具有最小的或没有损害、疼痛或刺激。
适合于施用到肺部的药物组合物可由广泛的被动呼吸驱动或主动动力驱动的单剂量/多剂量干粉吸入器(DPI)递送。最常用于呼吸递送的装置包括雾化器、计量剂量吸入器和干粉吸入器。若干类型的雾化器可以获得，包括喷射雾化器、超声雾化器和振动网孔雾化器。合适的肺部递送装置的选择取决于参数，诸如药物的性质及它的制剂、作用位点和肺部的病理生理学。
吸入药物递送装置和方法的另外的非限制性实例包括例如发明名称为“Inhalation Device”的US 7,383,837(SmithKline Beecham Corporation)；发明名称为“Powder Inhaler”的WO/2006/033584(Glaxo SmithKline Pharmaceuticals SA)；发明名称为“Inhalable Pharmaceutical Formulations Employing Desiccating Agents andMethods of Administering the Same”的WO/2005/044186(Glaxo Group Ltd和SmithKline Beecham Corporation)；发明名称为“Inhalation Device and Method ofDispensing Medicament”的US9,095,670，发明名称为“Dry Powder Inhaler”的US 8,205,611(Astrazeneca AB)；发明名称为“Inhaler”的WO/2013/038170(Astrazeneca AB和Astrazeneca UK Ltd.)；发明名称为“Inhalation Device with Feedback System”的US/2014/0352690，发明名称为“Inhalation Device for Use in Aerosol Therapy”的US 8,910,625和US/2015/0165137(Vectura GmbH)；发明名称为“Inhalers”的US 6,948,496，发明名称为“Powders Comprising Anti-adherent Materials for Use in Dry PowderInhalers”的US/2005/0152849，发明名称为“Carrier Particles for Use in Dry PowderInhalers”的US 6,582,678、US 8,137,657、US/2003/0202944和US/2010/0330188，发明名称为“Method of Producing Particles for Use in Dry Powder Inhalers”的US 6,221,338，发明名称为“Powders”的US 6,989,155，发明名称为“Pharmaceutical Compositionsfor Treating Premature Ejaculation by Pulmonary Inhalation”的US/2007/0043030，发明名称为“Inhaler”的US 7,845,349，发明名称为“Formulations for Use in InhalerDevices”的US/2012/0114709和US 8,101,160，发明名称为“Compositions and Uses”的US/2013/0287854，发明名称为“Particles for Use in aPharmaceutical Composition”的US/2014/0037737和US 8,580,306，发明名称为“Mixing Channel for an InhalationDevice”的US/2015/0174343，发明名称为“Method of Making Particles for Use inaPharmaceutical Composition”的US 7,744,855和US/2010/0285142，发明名称为“Pharmaceutical Formulations for Dry Powder Inhalers”的US 7,541,022、US/2009/0269412和US/2015/0050350(Vectura Limited)。
用于将药物递送到眼睛的许多方法和装置是本领域已知的。非限制性实例描述于以下专利和专利申请中(其通过引用方式全部并入)：发明名称为“Ocular trocarassembly”的US 8,192,408(Psivida Us,Inc.)；发明名称为“Transcleral delivery”的US7,585,517(Macusight,Inc.)；发明名称为“Ophthalmic composition”的US 5,710,182和US 5,795,913(Santen OY)；发明名称为“Formulations for treating ocular diseasesand conditions”的US 8,663,639，发明名称为“Formulations and methods forvascular permeability-related diseases or conditions”的US 8,486,960，发明名称为“Liquid formulations for treatment of diseases or conditions”的US 8,367,097和US 8,927,005，发明名称为“Delivering substance and drug delivery system usingthe same”的US 7,455,855(Santen Pharmaceutical Co.,Ltd.)；发明名称为“Conformable Therapeutic Shield For Vision and Pain”的WO/2011/050365和发明名称为“Therapeutic Device for Pain Management and Vision”的WO/2009/145842(Forsight Labs,LLC)；发明名称为“Implantable therapeutic device”的US 9,066,779和US 8,623,395，发明名称为“Ophthalmic Implant for Delivering TherapeuticSubstances”的WO/2014/160884，发明名称为“Posterior segment drug delivery”的US8,399,006、US 8,277,830、US 8,795,712、US 8,808,727、US 8,298,578和WO/2010/088548，发明名称为“Systems for Sustained Intraocular Delivery of LowSolubility Compounds from a Port Delivery System Implant”的WO/2014/152959和US20140276482，发明名称为“Injector apparatus and method for drug delivery”的US8,905,963和US 9,033,911，发明名称为“Formulations and Methods for Increasing orReducing Mucus”的WO/2015/057554，发明名称为“Ocular insert apparatus andmethods”的US 8,715,712和US 8,939,948，发明名称为“Insertion and Removal Methodsand Apparatus for Therapeutic Devices”的WO/2013/116061，发明名称为“OphthalmicSystem for Sustained Release of Drug to the Eye”的WO/2014/066775，发明名称为“Implantable Therapeutic Device”的WO/2015/085234和WO/2012/019176，发明名称为“Methods and Apparatus to determine Porous Structures for Drug Delivery”的WO/2012/065006，发明名称为“Anterior Segment Drug Delivery”的WO/2010/141729，发明名称为“Corneal Denervation for Treatment of Ocular Pain”的WO/2011/050327，发明名称为“Small Molecule Delivery with Implantable Therapeutic Device”的WO/2013/022801，发明名称为“Subconjunctival Implant for Posterior Segment DrugDelivery”的WO/2012/019047，发明名称为“Therapeutic Agent Formulations forImplanted Devices”的WO/2012/068549，发明名称为“Combined Delivery Methods andApparatus”的WO/2012/019139，发明名称为“Ocular Insert Apparatus and Methods”的WO/2013/040426，发明名称为“Injector Apparatus and Method for Drug Delivery”的WO/2012/019136和发明名称为“Fluid Exchange Apparatus and Methods”的WO/2013/040247(ForSight Vision4,Inc.)。
如何递送活性化合物的另外的非限制性实例提供于发明名称为“IntracameralImplant for Treatment of an Ocular Condition”的WO/2015/085251(EnvisiaTherapeutics,Inc.)；发明名称为“Engineered Aerosol Particles,and AssociatedMethods”的WO/2011/008737，发明名称为“Geometrically Engineered Particles andMethods for Modulating Macrophage or Immune Responses”的WO/2013/082111，发明名称为“Degradable compounds and methods of use thereof,particularly withparticle replication in non-wetting templates”的WO/2009/132265，发明名称为“Interventional drug delivery system and associated methods”的WO/2010/099321，发明名称为“Polymer particle composite having high fidelity order,size,andshape particles”的WO/2008/100304，发明名称为“Nanoparticle fabrication methods,systems,and materials”的WO/2007/024323(Liquidia Technologies,Inc.和theUniversity of North Carolina at Chapel Hill)；发明名称为“IontophoreticDelivery of aControlled-Release Formulation in the Eye”的WO/2010/009087(Liquidia Technologies,Inc.和Eyegate Pharmaceuticals,Inc.)和发明名称为“Compositions and Methods for Intracellular Delivery and Release of Cargo”的WO/2009/132206，发明名称为“Nano-particles for cosmetic applications”的WO/2007/133808，发明名称为“Medical device,materials,and methods”的WO/2007/056561，发明名称为“Method for producing patterned materials”的WO/2010/065748，以及发明名称为“Nanostructured surfaces for biomedical/biomaterial applications andprocesses thereof”的WO/2007/081876(Liquidia Technologies,Inc.)。
用于将药物递送到眼睛的方法和装置的另外的非限制性实例包括例如发明名称为“Sustained delivery of therapeutic agents to an eye compartment”的WO2011/106702和US 8,889,193，发明名称为“Controlled release formulations for thedelivery of HIF-1inhibitors”的WO2013/138343和US 8,962,577，发明名称为“Non-Linear Multiblock Copolymer-Drug Conjugates for the Delivery of ActiveAgents”的WO/2013/138346和US2013/0272994，发明名称为“Drug and Gene CarrierParticles that Rapidly Move Through Mucus Barriers”的WO2005/072710和US 8,957,034，发明名称为“Compositions and Methods for Enhancing Transport ThroughMucous”的WO2008/030557、US2010/0215580、US2013/0164343，发明名称为“Compositionsand Methods Relating to Reduced Mucoadhesion”的WO2012/061703、US2012/0121718和US2013/0236556，发明名称为“Rapid Diffusion of Large Polymeric Nanoparticles inthe Mammalian Brain”的WO2012/039979和US2013/0183244，发明名称为“MucusPenetrating Gene Carriers”的WO2012/109363和US2013/0323313，发明名称为“Nanoparticles with enhanced mucosal penetration or decreased inflammation”的WO 2013/090804和US2014/0329913，发明名称为“Nanoparticle formulations withenhanced mucosal penetration”的WO2013/110028，发明名称为“Lipid-based drugcarriers for rapid penetration through mucus linings”的WO2013/166498和US2015/0086484(The Johns Hopkins University)；发明名称为“Pharmaceutical NanoparticlesShowing Improved Mucosal Transport”的WO2013/166385，发明名称为“Nanocrystals,Compositions,And Methods that Aid Particle Transport in Mucus”的US2013/0323179(The Johns Hopkins University and Kala Pharmaceuticals,Inc.)；发明名称为“Compositions and methods for ophthalmic and/or other applications”的WO/2015/066444，发明名称为“Pharmaceutical nanoparticles showing improved mucosaltransport”的WO/2014/020210和WO/2013/166408(Kala Pharmaceuticals,Inc.)；发明名称为“Ophthalmic injection device including dosage control device”的US 9,022,970，发明名称为“Ophthalmic compositions comprising pbo-peo-pbo blockcopolymers”的WO/2011/153349，发明名称为“Stabilized ophthalmic galactomannanformulations”的WO/2011/140203，发明名称为“Ophthalmic emulsion”的WO/2011/068955，发明名称为“Injectable aqueous ophthalmic composition and method of usetherefor”的WO/2011/037908，发明名称为“Pharmaceutical Formulation for Deliveryof Receptor Tyrosine Kinase Inhibiting(RTKi)Compounds to the Eye”的US2007/0149593，以及发明名称为“Water insoluble polymer matrix for drug delivery”的US8,632,809(Alcon,Inc.)。
药物递送装置和方法的另外的非限制性实例包括例如发明名称为“Pharmaceutical Dosage Form For Oral Administration Of Tyrosine KinaseInhibitor”的US 2009/0203709(Abbott Laboratories)；发明名称为“Delivery of anactive drug to the posterior part of the eye via subconjunctival orperiocular delivery of a prodrug”的US 2005/0009910，发明名称为“Biodegradablepolymers for lowering intraocular pressure”的US 20130071349，发明名称为“Tyrosine kinase microspheres”的US 8,481,069，发明名称为“Method of makingtyrosine kinase microspheres”的US 8,465,778，发明名称为“Sustained releaseintraocular implants containing tyrosine kinase inhibitors and relatedmethods”的US 8,409,607，发明名称为“Biodegradable intravitreal tyrosine kinaseimplants”的US 8,512,738和US 2014/0031408，发明名称为“Microsphere Drug DeliverySystem for Sustained Intraocular Release”的US 2014/0294986，发明名称为“MethodsFor Treating Retinopathy With Extended Therapeutic Effect”的US 8,911,768(Allergan,Inc.)；发明名称为“Preparation of injectable suspensions havingimproved injectability”的US 6,495,164(Alkermes Controlled Therapeutics,Inc.)；发明名称为“Biodegradable Microcapsules Containing Filling Material”的WO 2014/047439(Akina,Inc.)；发明名称为“Compositions And Methods For Drug Delivery”的WO2010/132664(Baxter International Inc.Baxter Healthcare SA)；发明名称为“Polymeric nanoparticles with enhanced drugloading and methods of usethereof”的US 2012/0052041(The Brigham and Women’s Hospital,Inc.)；发明名称为“Therapeutic Nanoparticles Comprising a Therapeutic Agent and Methods ofMaking and Using Same”US 2014/0178475、US 2014/0248358和US20140249158(BINDTherapeutics,Inc.)；发明名称为“Polymer microparticles for drug delivery”的US5,869,103(Danbiosyst UK Ltd.)；发明名称为“Pegylated Nanoparticles”的US 8628801(Universidad de Navarra)；发明名称为“Ocular drug delivery system”的US2014/0107025(Jade Therapeutics,LLC)；发明名称为“Agent delivering system comprisedof microparticle and biodegradable gel with an improved releasing profile andmethods of use thereof”的US 6,287,588，发明名称为“Bioactive agent deliveringsystem comprised of microparticles within a biodegradable to improve releaseprofiles”的US 6,589,549(Macromed,Inc.)；发明名称为“Nanoparticles andmicroparticles of non-linear hydrophilichydrophobic multiblock copolymers”的US 6,007,845和US 5,578,325(Massachusetts Institute of Technology)；发明名称为“Ophthalmic depot formulations for periocular or subconjunctivaladministration的US 2004/0234611、US 2008/0305172、US 2012/0269894和US20130122064(Novartis Ag)；发明名称为“Block polymer”的US 6,413,539(Poly-Med,Inc.)；发明名称为“Delivery of an agent to ameliorate inflammation”的US2007/0071756(Peyman)；发明名称为“Injectable Depot Formulations And Methods ForProviding Sustained Release Of Poorly Soluble Drugs Comprising Nanoparticles”的US 20080166411(Pfizer,Inc.)；发明名称为“Methods and compositions forenhanced delivery of bioactive molecules”的US 6,706,289(PR Pharmaceuticals,Inc.)；以及发明名称为“Microparticle containing matrices for drug delivery”的US8,663,674(Surmodics)。
活性化合物在治疗所选病症方面的用途
在一个方面，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物的有效量被用于治疗医学病症，所述医学病症是炎性或免疫疾患、由补体级联(包括级联功能异常)介导的病症(包括补体相关病症或旁路补体途径相关病症)、对细胞参与或响应于正常补体活性的能力有不良影响的细胞的病症或异常，或者不期望的补体介导的对医学治疗(诸如手术或其他医学程序或制药药物或生物制药药物施用、血液输注或者其他同种异体组织或流体施用)的响应。
补体介导的疾病或病症是这样的疾病或病症，其中补体的量或活性导致个体中发生疾病或病症。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症选自由以下组成的组：自身免疫性疾病、癌症、血液疾病、感染性疾病、炎性疾病、缺血再灌注损伤、神经变性疾病、神经变性病症、眼部疾病、肾脏疾病、移植物排斥、血管疾病和血管炎疾病。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是自身免疫性疾病。在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是癌症。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是感染性疾病。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是炎性疾病。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是血液疾病。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是缺血再灌注损伤。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是眼部疾病。在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是肾脏疾病。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是移植物排斥。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是抗体介导的移植物排斥。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是血管疾病。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是血管炎病症。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是神经变性疾病或病症。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病是神经变性疾病。
在一些实施方案中，所述补体介导的病症是神经变性病症。在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是Tau病变(tauopathy)。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗涉及补体激活的中枢神经系统(CNS)医学病症或外周神经系统病症。在实施方案中，所述CNS病症是获得性脑部或脊髓损伤，包括但不限于缺血再灌注损伤或中风、外伤性脑损伤(TBI)和脊髓损伤(SCI)。
在实施方案中，所述病症是神经变性病症。在实施方案中，所述病症是神经炎症病症。
在某些方面，本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗阿尔茨海默氏病(AD)。AD以两个标志病理学为特征：淀粉样-β(Aβ)斑块和包括高磷酸化Tau的神经元纤维缠结。最新的研究已牵涉到AD发病机制中的补体，包括识别编码补体蛋白簇连蛋白(CLU)和CR1(CR1)的基因中与迟发性AD风险相关的单核苷酸多态性(SNP)的全基因组关联研究。参见Carpanini等人,Therapeutic Inhibition of the Complement System inDiseases of the Central Nervous SysteM,Front.Immunol.,2019年3月4日。生物标志物研究还识别了血浆和/或CSF中的将AD与对照区分开并且预测进展至AD的风险的补体蛋白和激活产物。(同上)
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗某些形式的额颞痴呆，包括但不限于皮克氏病(Pick'sdisease)、散发性额颞痴呆和额颞痴呆伴与染色体17关联的帕金森病、进行性核上性麻痹(PSP)、皮质基底节变性(CBD)和亚急性硬化性全脑炎。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗多发性硬化(MS)。多发性硬化(MS)是北欧-高加索人群中年轻成人的神经残疾的最常见原因，其一生风险约为400分之一。C3已被证明沉积在MS患者的脑部中。T细胞克隆(TCC)已被证明与毛细血管内皮细胞(主要在斑块内)和相邻的白质相关联。还已证明了C激活局限于活动性髓鞘破坏区域，其中TCC专门沉积在此类区域中。C3d已被证明与低级别活动性脱髓鞘斑块中受破坏的髓鞘的短片段相关联地沉积，并且提供C对疾病进展以及急性炎症的贡献的证据。参见Ingram等人,Complement in multiple sclerosis:its role in diseaseand potential as a biomarker.Clin Exp Immunol.2009年2月；155(2):128-39。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗视神经脊髓炎(NMO)。视神经脊髓炎(NMO)是主要影响视神经和脊髓的炎性脱髓鞘疾病。它在传统上被视为MS的变体，最近已根据新标准使用表型亚型化与新开发的疾病生物标志物NMO-免疫球蛋白G(IgG)的组合对它进行了重新定义(对于NMO报告的敏感性为58-76％，且特异性为85-99％)。NMO患者具有比健康对照患者更高水平的C3a和抗C1q抗体。C3a水平与疾病活动性、神经残疾和水通道蛋白-4IgG相关。Nytrova等人,Complement activation inpatients with neuromyelitis optica.J Neuroimmunol.2014年9月15日；274(1-2):185-91。
在某些方面，有效量的如本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)。ALS由上和下(α)运动神经元的进行性丧失引起，导致外周神经系统中的神经肌肉接点(junction)去神经支配、进行性肌无力、萎缩、痉挛状态、呼吸衰竭，并最终导致麻痹和死亡。最近的研究显示出ALS死后组织的运动皮质和脊髓中的C1q蛋白增加；病理学区域中的C3激活片段和TCC；ALS运动皮质和脊髓中退化神经元和胶质的C4d和TCC染色以及病理学区域中的C5aR1上调。已经在脊髓和运动皮质中的被CR4阳性微胶质细胞包围的少突胶质细胞和退化神经突上发现C3d和C4d，并且C1q、C3和TCC已被证明即使在疾病过程的早期也存在于ALS供体中的肋间肌中的运动终板上。参见Carpanini等人,Therapeutic Inhibition of the Complement System in Diseases of the CentralNervous SysteM,Front.Immunol.,2019年3月4日。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗帕金森病(PD)。PD以黑质中的多巴胺能神经元的损失和形成该疾病的病理学标志路易体的蛋白质α-突触核蛋白的沉积物为特征。患者呈现静止性震颤、动作迟缓和强直。补体激活已与帕金森病中的α-突触核蛋白和路易体相关联；体外研究表明该疾病相关的剪接变体α-突触核蛋白112而不是全长蛋白引起补体的激活。在体内，已经报道了路易体中的C3d、C4d、C7和C9定位。最近，已经报道了iC3b和C9在路易体和黑化神经元中的沉积，并且iC3b免疫反应性已被证明随着正常衰老而增加，并且相比年龄匹配的对照组在PD中进一步升高。此外，已证明了CSF中的C3/Aβ42或FH/Aβ42的比率与帕金森病运动和认知症状的严重程度之间存在相关性。参见Carpanini等人,Therapeutic Inhibition of the Complement System inDiseases of the Central Nervous SysteM,Front.Immunol.,2019年3月4日。在一些实施方案中，待治疗的受试者患有帕金森病伴痴呆(PDD)。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗亨廷顿病(HD)。HD是以进行性运动症状、精神紊乱和痴呆为特征的常染色体显性的遗传性神经变性疾病。它是由HTT基因的外显子1中的三碱基对(CAG)重复序列(39–121重复序列对比正常范围的8–39重复序列)的扩增引起的，所述三碱基对(CAG)重复序列在蛋白质的N-末端翻译成聚谷氨酰胺束。这导致聚谷氨酰胺长度依赖性错误折叠和亨廷顿蛋白在纹状体和皮质(第3、5和6层)中的积累，随后这些区域中神经元损失，其扩散至海马体。研究显示HD尾状核和纹状体中的神经元、星形胶质细胞和髓鞘对iC3b和TCC中的C1q、C4、C3和新表位具有免疫反应性。编码早期补体成分C1q(c-链)、C1r、C3和C4、补体调节因子C1INH、簇集蛋白、MCP、DAF和CD59以及补体受体C3a和C5a的mRNA的表达已被证明在HD纹状体中上调，参见Carpanini等人,Therapeutic Inhibition of the Complement System in Diseases ofthe Central Nervous System,Front.Immunol.,2019年3月4日。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗嗜银颗粒性痴呆、英国型淀粉样血管病、脑淀粉样血管病、克雅氏病(Creutzfeldt-Jakobdisease)、拳击员痴呆、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、额颞叶变性、格斯特曼-施特劳斯勒-申克病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatz disease)、包涵体肌炎、多系统萎缩(MSA)、强直性肌营养不良症、C型尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease)、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、脑炎后帕金森病、朊蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮质下胶质增生、进行性核上性麻痹、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结型痴呆、多发梗塞性痴呆、缺血性中风、慢性外伤性脑病(CTE)、外伤性脑损伤(TBI)和中风。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗遗传性运动感觉神经病变(HMSN)。
在一些实施方案中，遗传性感觉神经病变是夏-马-图三氏病(Charcot-Marie-Tooth，CMT)。
在一些实施方案中，所述HSMN是1A型或1B型夏-马-图三氏病。
在一些实施方案中，所述HSMN是2型夏-马-图三氏病。
在一些实施方案中，所述HSMN的代-索二氏病(Dejerine-Sottas disease)(3型夏-马-图三氏病)。
在一些实施方案中，所述HSMN是雷夫叙姆病(Refsum disease)。
在一些实施方案中，所述HSMN是具有锥体特征的夏-马-图三氏病。在一些实施方案中，所述HSMN是6型夏-马-图三氏病。在一些实施方案中，所述HSMN是HMSN+视网膜色素变性。
在一些实施方案中，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗查格-施特劳斯综合征(Churg-Strauss syndrome)。
在一些实施方案中，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗外周动脉疾病(PAD)。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗重症肌无力伴CNS受累。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗路易体痴呆。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗患有朊病毒病的个体。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗白塞病(Behcet’s Disease)。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗先天性肌无力。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗亚急性硬化性全脑炎(SSPE)。
在某些方面，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗格林-巴利综合征(Guillain–Barrésyndrome)。
在某些方面，待治疗的CNS病症是脱髓鞘疾病，包括但不限于脱髓鞘髓鞘碎裂性疾病和脱髓鞘白质营养不良疾病。
在某些方面，待治疗的病症是脱髓鞘性髓细胞碎裂病(demyelinatingmyelonoclastic)，包括但不限于多发性硬化、视神经脊髓炎、视神经脊髓炎谱系病症(NMOSD)、特发性炎性脱髓鞘疾病(IIDD)、抗NMDA受体脑炎、急性播散性脑脊髓炎、抗MOG自身免疫性脑脊髓炎、慢性复发性炎性视神经炎(CRION)、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、免疫介导的脑脊髓炎、进行性多灶性白质脑病变(PML)；McDonalds阳性多发性硬化、急性出血性白质脑炎、拉斯穆森脑炎(Rasmussen's Encephalitis)、马尔堡多发性硬化(Marburgmultiple sclerosis)、假肿胀性和肿胀性多发性硬化、巴洛同心性硬化(Balo concentricsclerosis)、弥漫性髓鞘碎裂性硬化、孤立性硬化、伴有空洞性病灶的多发性硬化、骨髓皮质多发性硬化(MCMS)、非典型视神经-脊髓型多发性硬化、单纯脊髓型多发性硬化、HLADRB3*02:02多发性硬化、自身免疫性GFAP星形细胞病变、慢性炎性脱髓鞘性多神经病变(CIDP)、格林-巴利综合征、进行性炎性神经病变、Lewis-Sumner综合征、中枢和外周联合脱髓鞘(CCPD)、Bickerstaff脑干脑炎、Fisher综合征、三叉神经痛、NMDAR抗NMDA受体脑炎、原发性进行性MS(PPMS)、OPA1变异型多发性硬化、KIR4.1多发性硬化、水通道蛋白相关的多发性硬化、慢性脑脊髓静脉功能不全(CCSVI或CCVI)、弥漫性硬化和谢耳德氏病(Schilder'sdisease)。
在某些方面，待治疗的病症是脱髓鞘性白质营养不良疾病，包括但不限于脊髓炎、脑桥中央髓鞘溶解症(CPM)、脑桥外髓鞘溶解症、脊髓痨(tabes dorsalis)、进行性多灶性白质脑病变、白质消失的白质脑病变、白质脑病变伴球状轴索(leukoencephalopathy withneuroaxonal spheroids)、可逆性后白质脑病变综合征、伴有皮质下囊肿的巨脑性白质脑病变、伴有皮质下囊肿的巨脑性白质脑病变1、高血压白质脑病变、异染性白质营养不良、克拉伯病(Krabbe disease)、卡纳万病(Canavan disease)、X连锁肾上腺白质营养不良、亚历山大病(Alexander disease)、脑腱性黄瘤症、佩-梅二氏病(Pelizaeus–Merzbacherdisease)和雷夫叙姆病。
在一些实施方案中，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗伯格氏病(Buerger’s disease)(也称为闭塞性血栓性血管炎)。
在一些实施方案中，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗巨细胞动脉炎。
在一些实施方案中，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗雷诺氏病(Raynaud’s disease)。
在某些方面，待治疗的病症是外周神经系统的脱髓鞘疾病，包括但不限于格林-巴利综合征及其慢性对应症、慢性炎性脱髓鞘多神经病变、抗MAG外周神经病变、夏-马-图三氏病及其对应症、具有压迫性麻痹倾向的遗传性神经病变、铜缺乏相关疾患(外周神经病变、脊髓病变和罕见视神经病变)以及进行性炎性神经病变。
在某些方面，待治疗的病症是神经炎性病症。在某些实施方案中，待治疗的病症包括但不限于颅动脉炎；巨细胞动脉炎；霍尔姆斯-阿迪综合征(Holmes-Adie syndrome)；包涵体肌炎(IBM)；脑膜炎；神经副肿瘤综合征，包括但不限于朗伯-伊顿肌无力综合征(Lambert-Eaton myasthenic syndrome)、僵人综合征、脑脊髓炎(脑和脊髓的炎症)、重症肌无力、小脑变性、边缘性和/或脑干性脑炎、神经性肌强直和眼阵挛(涉及眼球运动)以及感觉神经病变；多肌炎；横贯性脊髓炎；血管炎，包括颞动脉炎；蛛网膜炎；金斯伯恩综合征(Kinsbourne syndrome)或眼阵挛肌阵挛综合征(OMS)；或圣维特斯舞蹈病(Saint VitusDance)或西登哈姆氏舞蹈(sydenham chorea)(SD)病。
在一些实施方案中，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于治疗横贯性脊髓炎。
在某些方面，待治疗的病症是外周神经病变。在一些实施方案中，所述外周神经病变是单神经病变。在一些实施方案中，所述神经病变是多神经病变。在一些实施方案中，所述多神经病变是远端轴突病变、糖尿病神经病变、脱髓鞘多神经病变、小纤维外周神经病变、多发性单神经炎、多发性多神经炎、自主神经病变或神经炎。
在一些实施方案中，有效量的本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐被用于自身免疫性血管疾病。在一些实施方案中，所述自身免疫性血管疾病是血管炎。在一些实施方案中，所述血管炎包括但不限于自身免疫性炎性血管炎、皮肤小血管血管炎、肉芽肿伴多血管炎、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、白塞病(
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disease)、川崎病(Kawasakidisease)、伯格氏病(Buerger's disease)和“有限的”肉芽肿伴多血管炎。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物被用于治疗动脉炎。在一些实施方案中，所述动脉炎包括但不限于巨细胞动脉炎、高安氏动脉炎(Takayasuarteritis)、颞动脉炎和结节性多动脉炎。
在一些实施方案中，提供了用于治疗肾小球肾炎的方法。在一些实施方案中，所述肾小球肾炎是膜性增殖性肾小球肾炎(MPGN)。在一些实施方案中，所述MPGN是I型MPGN。在一些实施方案中，所述MPGN是II型MPGN。在一些实施方案中，所述MPGN是III型MPGN。在一些实施方案中，所述MPGN是C3肾小球肾炎(C3G)。在一些实施方案中，所述MPGN是致密物沉积病(DDD)。在一些实施方案中，所述MPGN是C4沉积病症。
在一些实施方案中，所述肾小球肾炎是IC-MPGN。在一些实施方案中，所述肾小球肾炎是膜性肾小球肾炎。在一些实施方案中，所述肾小球肾炎是IgA肾病变。在一些实施方案中，所述肾小球肾炎是感染后肾小球肾炎。在一些实施方案中，所述肾小球肾炎是快速进行性肾小球肾炎，例如I型(古德帕斯丘综合征(Goodpasture syndrome))、II型或III型快速进行性肾小球肾炎。
在一些实施方案中，提供了用于治疗阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)的方法，其包括给宿主施用有效量的任选地呈药学上可接受的组合物形式的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体。
在一些实施方案中，提供了用于治疗遗传性血管性水肿(HAE)的方法，其包括给宿主施用有效量的任选地呈药学上可接受的组合物形式的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体。SERPING1基因中的突变引起I型和II型遗传性血管性水肿。遗传性血管性水肿是以严重肿胀(血管性水肿)反复发作为特征的病症。身体出现肿胀的最常见区域是四肢、面部、肠道和气道。SERPING1基因提供了制备C1抑制剂蛋白的说明，所述C1抑制剂蛋白对控制炎症是重要的。C1抑制剂阻断某些促进炎症的蛋白质的活性。引起I型遗传性血管性水肿的突变导致血液中C1抑制剂的水平降低，而引起II型的突变导致产生功能异常的C1抑制剂。在没有适当水平的功能性C1抑制剂的情况下，产生过量的称为缓激肽的蛋白质片段(肽)。缓激肽通过增加流体通过血管壁进入身体组织的渗漏而促进炎症。流体在身体组织中的过多积累导致在患有I型和II型遗传性血管性水肿的个体中所见的肿胀发作。
在一些实施方案中，提供了用于治疗冷凝集素疾病(CAD)的方法，其包括给宿主施用有效量的任选地呈药学上可接受的组合物形式的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体。CAD是罕见的自身免疫性溶血性疾患，该疾患具有由经典补体途径的C1激活驱动的潜在严重的急性和慢性后果。
在一些实施方案中，提供了用于治疗非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)的方法，其包括给宿主施用有效量的任选地呈药学上可接受的组合物形式的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体。非典型溶血性尿毒症综合征是主要影响肾功能的疾病。非典型溶血性尿毒症综合征可在任何年龄发生，导致在肾脏内的小血管中形成异常的血凝块(血栓)。如果这些凝块限制或阻断血流，则它们可能会导致严重的医疗问题。非典型溶血性尿毒症综合征以与异常凝血相关的三个主要特征为特征：溶血性贫血、血小板减少和肾衰竭。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗宿主中湿性或干性年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法，其包括施用有效量的任选地呈药学上可接受的组合物形式的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体。在另一个实施方案中，提供了用于治疗宿主中类风湿性关节炎的方法，其包括施用有效量的任选地呈药学上可接受的组合物形式的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗宿主中多发性硬化的方法，其包括施用有效量的任选地呈药学上可接受的组合物形式的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX的化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体。
如本文所公开的任选地呈药学上可接受的组合物形式的活性化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体还可用于与第二药剂组合(以同一或不同的剂型)或交替施用以用于改善或减少该第二药剂的副作用。
例如，在一些实施方案中，活性化合物可与过继性细胞转移疗法组合使用以减少与此种疗法相关的炎性响应，例如细胞因子介导的响应，诸如细胞因子响应综合征。
在一些实施方案中，所述过继性细胞转移疗法是用于治疗血液瘤或实体肿瘤(例如，B细胞相关性血液癌症)的嵌合抗原受体T细胞(CAR T)或树突细胞。
在一些实施方案中，所述血液瘤或实体肿瘤是急性淋巴母细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、胰腺癌、胶质母细胞瘤或表达CD19的癌症。
在一些实施方案中，所述过继性细胞转移疗法是非工程化T细胞疗法，其中所述T细胞已被激活和/或扩展成一个或多个病毒或肿瘤抗原。在一些实施方案中，所述相关炎性响应是细胞因子介导的响应。
在一些实施方案中，所述第二药剂是已转化成表达蛋白质的细胞，其中所述宿主中的蛋白质已突变或以其他方式具有受损的功能。在一些实施方案中，所述经转化的细胞包括CRISPR基因。
提供了另一个实施方案，其包括给宿主施用有效量的任选地呈药学上可接受的组合物形式的活性化合物或其药学上可接受的盐、前药、N-氧化物或经分离的异构体，以治疗眼部、肺部、胃肠道或其他病症。
本文所述的化合物中的任一种化合物(例如，式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX或XX中任一种的化合物)可以以任何所需的施用形式(包括经由玻璃体内、基质内、前房内、筋膜下、视网膜下、眼球后、眼球周、脉络膜上、脉络膜、脉络膜下、结膜、结膜下、巩膜上、后部近巩膜、巩膜、角膜周以及泪管注射，或通过粘液、粘蛋白或粘膜屏障)以立即释放或受控释放的方式施用到眼睛。在某些实施方案中，活性化合物包括亲脂性基团，诸如亲脂性酰基基团，其在聚合物药物递送系统(诸如聚乳酸、聚丙交酯-共-乙交酯、聚乙交酯或其他可侵蚀聚合物或它们的组合)中或者在用于眼部递送的另一种类型的亲脂性材料中被递送至眼睛中。在一些实施方案中，亲脂性活性分子在聚合物或其他形式的递送系统中比在眼部流体中更易溶。
在本公开的其他实施方案中，本文提供的活性化合物可被用于治疗或预防宿主中由补体介导的病症。作为实例，本公开包括用于治疗或预防由抗体-抗原相互作用、免疫性或自身免疫性病症的组分或由缺血性损伤诱发的补体相关病症的方法。本公开还提供了减少由经典补体途径介导或受经典补体途径影响的炎症或免疫响应(包括自身免疫响应)的方法。
在一些实施方案中，所述病症选自脂肪肝和源自脂肪肝的疾患，诸如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝脏炎症、肝硬化和肝衰竭。在本公开的一些实施方案中，提供了通过施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物来治疗宿主的脂肪肝疾病的方法。
在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物被用于在手术或其他医疗程序之前或期间调节免疫响应。一个非限制性实例是与急性或慢性移植体抗宿主病有关的用途，急性或慢性移植体抗宿主病是由器官移植、同种异体组织移植引起的常见并发症，并且也可能因输血而发生。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防皮肌炎的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防肌萎缩侧索硬化的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防腹主动脉瘤、血液透析并发症、溶血性贫血或血液透析的方法。
在另一个实施方案中，提供了通过施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物来治疗或预防响应于宿主中药物或生物治疗(例如，CART T细胞疗法或单克隆抗体疗法)的施用的细胞因子或炎性反应的方法。各种类型的细胞因子或炎性反应可能响应于许多因素诸如生物治疗剂的施用而发生。
在一些实施方案中，所述细胞因子或炎性反应是细胞因子释放综合征。在一些实施方案中，所述细胞因子或炎性反应是肿瘤溶解综合征(其也导致细胞因子释放)。细胞因子释放综合征的症状从发热、头痛和皮疹到支气管痉挛、低血压以及甚至心脏停搏。严重的细胞因子释放综合征被描述为细胞因子风暴，并且可能是致命的。
作为对若干单克隆抗体治疗剂输注的响应，已经观察到致命的细胞因子风暴。参见，Abramowicz D,等人.“Release of tumor necrosis factor,interleukin-2,andgamma-interferon in serum after injection of OKT3 monoclonal antibody inkidney transplant recipients”Transplantation(1989)47(4):606-8；Chatenoud L等人.“In vivo cell activation following OKT3 administration.Systemic cytokinerelease and modulation by corticosteroids”Transplantation(1990)49(4):697-702；以及Lim LC、Koh LP和Tan P.“Fatal cytokine release syndrome with chimeric anti-CD20 monoclonal antibody rituximab in a 71-year-old patient with chroniclymphocytic leukemia”J.Clin Oncol.(1999)17(6):1962-3。
本文还考虑了使用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物介导接受双特异性T细胞衔接器(BiTE)的患者中的不良响应。双特异性T细胞衔接器将T细胞导向靶标，并与癌细胞表面上的特异性抗原结合。例如，贝林妥欧单抗(Blinatumomab)(Amgen)是一种BiTE，最近已被批准作为费城染色体阴性的复发性或难治性急性淋巴母细胞白血病的二线疗法。贝林妥欧单抗是以4周的周期通过连续静脉输注给予的。BiTE剂的使用与包括细胞因子释放综合征在内的不良免疫响应相关联。与ACT相关的CRS中最显著升高的细胞因子包括IL-10、IL-6和IFN-γ(Klinger等人,Immunopharmacologic response of patients with B-lineage acute lymphoblastic leukemia to continuous infusion of Tcell-engagingCD19/CD3-bispecific BiTE antibody blinatumomab.Blood(2012)119:6226-6233)。
在另一个实施方案中，所述病症是表层巩膜炎、特发性表层巩膜炎、前表层巩膜炎或后表层巩膜炎。在一些实施方案中，所述病症是特发性前葡萄膜炎、HLA-B27相关葡萄膜炎、疱疹性角膜葡萄膜炎、波-施二氏综合征(Posner Schlossman syndrome)、富克斯(Fuch’s)异色性虹膜睫状体炎或巨细胞病毒前葡萄膜炎。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防IC-MPGN的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防遗传性血管性水肿(HAE)的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防冷凝集素疾病(CAD)的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防非典型溶血综合征(aHUS)的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防类风湿性关节炎的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防多发性硬化的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防重症肌无力的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)的方法。
在又一实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物施用给有需要的受试者来治疗或预防如下面所述的病症的方法，所述病症包括：
玻璃体炎、结节病、梅毒、结核病或莱姆病(Lyme disease)；视网膜血管炎、伊尔斯病(Eales disease)、结核病、梅毒或弓形体病；视神经网膜炎、病毒性视网膜炎或急性视网膜坏死；
水痘带状疱疹病毒、单纯性疱疹病毒、巨细胞病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)、扁平苔藓或登革热相关疾病(例如，出血性登革热)；伪装综合征、接触性皮炎、创伤诱发的炎症、UVB诱发的炎症、湿疹、环状肉芽肿或痤疮。
在另外的实施方案中，所述病症选自：急性心肌梗塞、动脉瘤、心肺转流、扩张性心肌病变、心肺转流手术期间的补体激活、冠状动脉疾病、支架放置后的再狭窄或经皮经腔冠状动脉成形术(PTCA)；抗体介导的移植物排斥、过敏性休克、过敏反应、同种异体移植、体液和血管移植物排斥、移植体功能障碍、移植体抗宿主病、格雷夫斯氏病(Graves'disease)、不良药物反应或慢性移植体血管病变；过敏性支气管肺曲霉病、过敏性神经炎、药物过敏、辐射诱发的肺损伤、嗜酸性粒细胞性肺炎、放射照相造影剂过敏、闭塞性细支气管炎或间质性肺炎；帕金森症-痴呆复合征、散发性额颞叶痴呆、伴有与17号染色体相关的帕金森症的额颞叶痴呆、额颞叶变性、单纯缠结痴呆、脑淀粉样血管病变、脑血管病症、某些形式的额颞叶痴呆、慢性创伤性脑病变(CTE)、伴有痴呆的帕金森病(PDD)、嗜银颗粒痴呆、拳击员痴呆、路易体痴呆(DLB)或多发梗塞性痴呆；克雅氏病、亨廷顿氏病、多灶性运动神经病变(MMN)、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病变、多肌炎、脑炎后帕金森症、亚急性硬化性全脑炎、伴有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元病、神经再生和伴有钙化的弥漫性神经原纤维缠结。
在一些实施方案中，所述病症选自：特应性皮炎、皮炎、皮肌炎大疱性类天疱疮、硬皮病、硬化性皮肌炎、银屑病性关节炎、寻常型天疱疮、盘状红斑狼疮、皮肤狼疮、冻疮样红斑狼疮或红斑狼疮-扁平苔藓重叠综合征；冷凝球蛋白血症型血管炎、肠系膜/肠血管病症、外周血管病症、抗中性粒细胞细胞浆抗体(ANCA)相关血管炎(AAV)、IL-2诱发的血管渗漏综合征或免疫复合物血管炎；血管性水肿、低血小板(HELLP)综合征、镰状细胞疾病、血小板输注无效(platelet refractoriness)、红细胞管型或典型或传染性溶血性尿毒症综合征(tHUS)；血尿症、出血性休克、药物诱发的血小板减少症、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、氮血症、血管和/或淋巴管炎症、旋磨术或迟发性溶血性输血反应；英国型淀粉样血管病变、伯格氏病、大疱性类天疱疮、C1q肾病变、癌症和毁灭性抗磷脂综合征。
在另一个实施方案中，所述病症选自：湿性(渗出性)AMD、干性(非渗出性)AMD、脉络膜视网膜变性、脉络膜新血管形成(CNV)、脉络膜炎、RPE功能丧失、视力丧失(包括视敏度或视野丧失)、源自AMD的视力丧失、响应于日光暴露的视网膜损害、视网膜变性、视网膜脱离、视网膜功能障碍、视网膜新血管形成(RNV)、早产儿视网膜病变、病理性近视或RPE变性；假晶状体大疱性角膜病变、症状性黄斑变性相关病症、视神经变性、光感受器变性、视锥变性、感受器细胞丧失、睫状体扁平部炎、巩膜炎、增殖性玻璃体视网膜病变或眼玻璃疣形成；慢性荨麻疹、查格-施特劳斯综合征(Churg-Strauss syndrome)、冷凝集素病(CAD)、皮质基底节变性(CBD)、冷球蛋白血症、睫状体炎、布鲁赫膜损害(damage of the Bruch’smembrane)、Degos病、糖尿病性血管病变、肝酶升高、内毒素血症、大疱性表皮松解症或获得性大疱性表皮松解症；原发性混合冷球蛋白血症、过多血尿素氮-BUN、局灶性节段性肾小球硬化、格斯特曼-施特劳斯勒-申克病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、巨细胞动脉炎、痛风、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatz disease)、桥本氏甲状腺炎、Henoch-Schonlein紫癜性肾炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis)或异常尿沉渣；肝炎、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎或人类免疫缺陷病毒(HIV)，更普遍的病毒感染，例如选自黄病毒科、逆转录病毒科、冠状病毒科、痘病毒科、腺病毒科、疱疹病毒科、杯状病毒科、呼肠孤病毒科、微小核糖核酸病毒科、披膜病毒科(Togaviridae)、正粘病毒科、弹状病毒科或肝脱氧核糖核酸病毒科(Hepadnaviridae)；脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、志贺毒素大肠杆菌相关的溶血性尿毒症综合征(STEC-HUS)、溶血性尿毒症综合征(HUS)；链球菌和链球菌感染后肾小球肾炎。
在进一步的实施方案中，所述病症选自：高脂血症、高血压、低白蛋白血症、低血容量性休克、低补体血症性荨麻疹性血管炎综合征、低磷血症(hypophosphastasis)、低血容量性休克、特发性肺炎综合征或特发性肺纤维化；包涵体肌炎、肠缺血、虹膜睫状体炎、虹膜炎、幼年慢性关节炎、川崎病(动脉炎)或脂尿症；膜增殖性肾小球肾炎(MPGN)I、显微镜下多血管炎、混合冷球蛋白血症、A型钼辅因子缺乏(MoCD)、胰腺炎、脂膜炎、皮克病、结节性多动脉炎(PAN)、进行性皮质下胶质增生、蛋白尿、肾小球滤过率(GFR)降低或肾血管病症；多器官衰竭、多系统萎缩(MSA)、肌强直性营养不良、C型尼曼-皮克病、慢性脱髓鞘性疾病或进行性核上性麻痹；脊髓损伤、脊髓性肌萎缩、脊椎关节病变、赖特综合征(Reiter'ssyndrome)、自发性胎儿丢失、复发性胎儿丢失、先兆子痫、突触核蛋白病变、高安氏动脉炎、产后甲状腺炎、甲状腺炎、I型冷球蛋白血症、II型混合冷球蛋白血症、III型混合冷球蛋白血症、溃疡性结肠炎、尿毒症、荨麻疹、静脉气栓(VGE)或韦格纳肉芽肿病；von)、Hippel-Lindau病、眼组织胞浆菌病、硬玻璃疣、软玻璃疣、色素结块和光感受器和/或视网膜色素上皮细胞(RPE)损失。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可用于治疗或预防选自以下的病症：自身免疫性卵巢炎、子宫内膜异位症、自身免疫性睾丸炎、奥德氏甲状腺炎(Ord’s thyroiditis)、自身免疫性肠病变、乳糜泻、桥本氏脑病变(Hashimoto’sencephalopathy)、抗磷脂综合征(APLS)(休斯综合征(Hughes syndrome))、再生障碍性贫血、自身免疫性淋巴增殖综合征(Canale-Smith综合征)、自身免疫性嗜中性粒细胞减少症、Evans综合征、恶性贫血、纯红细胞再生障碍、血小板减少症、痛性肥胖症(德尔肯氏病(Dercum’s disease))、成人发作性斯蒂尔病(adult onset Still’s disease)、强直性脊柱炎、CREST综合征、药物诱发的狼疮、嗜酸性筋膜炎(舒尔曼综合征(Shulman’ssyndrome))、费尔蒂综合征(Felty syndrome)、IgG4相关疾病、混合性结缔组织病(MCTD)、复发性风湿病(Hench-Rosenberg综合征)、Parry-Romberg综合征、Parsonage-Turner综合征、复发性多软骨炎(Meyenburg-Altherr-Uehlinger综合征)、腹膜后纤维化、风湿热、施尼茨勒综合征(Schnitzler syndrome)、纤维肌痛、神经性肌强直(艾萨克氏病(Isaac’sdisease))、副肿瘤变性、自身免疫性内耳病、梅尼埃病(Meniere’s disease)、间质性膀胱炎、自身免疫性胰腺炎、寨卡病毒相关病症、基孔肯雅病毒相关病症、亚急性细菌性心内膜炎(SBE IgA肾病变、IgA血管炎、风湿性多肌痛、类风湿性血管炎、斑秃、自身免疫性孕酮皮炎、疱疹样皮炎、结节性红斑、妊娠性类天疱疮、化脓性汗腺炎、硬化性苔癣、线状IgA病(LAD)、硬斑病、肌炎、急性痘疮样苔藓样糠疹(pityriasis lichenoides etvarioliformis acuta)、心梗后白癜风综合征(杜丝勒综合征(Dressler’s syndrome))、心包切开术后综合征、自身免疫性视网膜病变、Cogan综合征、Graves眼病变、木样结膜炎、莫伦氏溃疡(Mooren’s ulcer)、眼阵挛肌阵挛综合征、视神经炎、视网膜耳蜗脑血管病变(Susac综合征)、交感神经性眼炎、Tolosa-Hunt综合征、间质性肺病、抗合成酶综合征、艾迪生氏病(Addison’sdisease)、I型自身免疫性多内分泌腺病综合征(APS)、II型自身免疫性多内分泌腺病综合征(APS)、III型自身免疫性多内分泌腺病综合征(APS)、播散性硬化(多发性硬化，II型)、快速进展性肾小球肾炎(RPGN)、幼年类风湿性关节炎、起止点炎相关关节炎、反应性关节炎(赖特综合征)、自身免疫性肝炎或狼疮样肝炎、原发性胆汁性肝硬化(PBS)、原发性硬化性胆管炎、显微镜下结肠炎、潜伏性狼疮(未分化的结缔组织病(UCTD))、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性运动轴突神经病变、抗-n-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎、巴洛同心性硬化(谢耳德氏病)、Bickerstaff脑炎、慢性炎性脱髓鞘性多神经病变、特发性炎性脱髓鞘病、朗伯-伊顿肌无力综合征(Lambert-Eaton mysathenic syndrome)、Oshtoran综合征、与链球菌相关的儿科自身免疫性神经精神病症(PANDAS)、进行性炎性神经病变、不宁腿综合征、僵人综合征、Sydenhem综合征、横贯性脊髓炎、狼疮血管炎、白细胞破碎性血管炎、显微镜下多血管炎、多肌炎和眼睛的缺血-再灌注损伤。
可根据本文公开的组合物和方法治疗的眼睛病症的实例包括阿米巴角膜炎、真菌性角膜炎、细菌性角膜炎、病毒性角膜炎、盘状角膜炎(onchorcercal keratitis)、细菌性角结膜炎、病毒性角结膜炎、角膜营养不良疾病、富克斯角膜内皮营养不良(Fuchs'endothelial dystrophy)、舍格伦综合征(Sjogren's syndrome)、史蒂文斯-约翰逊综合征(Stevens-Johnson syndrome)、自身免疫性干眼病、环境性干眼病、角膜新血管形成疾病、角膜移植后排斥反应的预防和治疗、自身免疫性葡萄膜炎、感染性葡萄膜炎、后葡萄膜炎(包括弓形体病)、泛葡萄膜炎、玻璃体或视网膜的炎性疾病、眼内炎的预防和治疗、黄斑水肿、黄斑变性、年龄相关性黄斑变性、增殖性和非增殖性糖尿病性视网膜病变、高血压性视网膜病变、视网膜的自身免疫性疾病、原发性和转移性眼内黑色素瘤、其他眼内转移性肿瘤、开角型青光眼、闭角型青光眼、色素性青光眼，以及它们的组合。
在进一步的实施方案中，所述病症选自青光眼、糖尿病视网膜病变、水疱性皮肤病(包括大疱性类天疱疮、天疱疮和大疱性表皮松解症)、眼部疤痕性类天疱疮、葡萄膜炎、成人黄斑变性、糖尿病视网膜病视网膜色素变性(diabetic retinopa retinitispigmentosa)、黄斑水肿、糖尿病黄斑水肿、白塞氏葡萄膜炎(Behcet's uveitis)、多灶性脉络膜炎、福格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyangi-Harada syndrome)、中度葡萄膜炎(imtermediate uveitis)、鸟枪弹样视网膜脉络膜炎(birdshot retino-chorioditis)、交感性眼炎、眼部瘢痕性类天疱疮(ocular dicatricial pemphigoid)、眼部天疱疮、非动脉性缺血性视神经病变、术后炎症和视网膜静脉闭塞，以及中央视网膜静脉闭塞(CVRO)。
在一些实施方案中，补体介导的疾病包括眼科疾病(包括早期或新生血管性年龄相关性黄斑变性和地图样萎缩)、自身免疫性疾病(包括关节炎、类风湿性关节炎)、呼吸性疾病和心血管疾病。在其他实施方案中，本公开的化合物适合用于治疗与脂肪酸代谢相关的疾病和病症，包括肥胖和其他代谢病症。
可由如本文所述的活性化合物或其盐或组合物来治疗或预防的病症包括但不限于：遗传性血管性水肿、毛细血管渗漏综合征、溶血性尿毒症综合征(HUS)、神经病症、格林巴利综合征(Guillain Barre Syndrome)、中枢神经系统疾病及其他神经变性疾患、肾小球肾炎(包括膜增殖性肾小球肾炎)、SLE肾炎、增殖性肾炎、肝纤维化、组织再生和神经再生或Barraquer-Simons综合征；败血症的炎症影响、全身炎性响应综合征(SIRS)、不适当或非所需补体激活病症、在IL-2疗法期间白介素-2诱发的毒性、炎性病症、自身免疫性疾病的炎症、系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、关节炎、免疫复合物病症和自身免疫性疾病、系统性狼疮或红斑狼疮；缺血/再灌注损伤(I/R损伤)、心肌梗塞、心肌炎、缺血后再灌注疾患、球囊血管成形术、动脉粥样硬化、心肺转流或肾转流中的泵后综合征、肾缺血、主动脉重建后的肠系膜动脉再灌注、抗磷脂综合征、自身免疫性心脏病、缺血-再灌注损伤、肥胖症或糖尿病；阿尔茨海默痴呆、中风、精神分裂症、创伤性脑损伤、创伤、帕金森病、癫痫、移植物排斥、预防胎儿丢失、生物材料反应(例如在血液透析、移植中)、超急性同种异体移植体排斥、异种移植体排斥、移植、银屑病、烧伤、包括烧伤的热损伤或冻伤或挤压损伤；哮喘、过敏、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、囊性纤维化、成人呼吸窘迫综合征、呼吸困难、咯血、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺气肿、肺栓塞和梗塞、肺炎、纤维发生粉尘病、惰性粉尘和矿物质(例如，硅、煤尘、铍和石棉)、肺纤维化、有机粉尘病(organic dust disease)、化学损伤(由于刺激性气体和化学品，例如氯、光气、二氧化硫、硫化氢、二氧化氮、氨和盐酸)、烟雾损伤、热损伤(例如，烧伤、冷冻)、支气管收缩、过敏性肺炎、寄生虫病、古德帕斯丘综合征(抗肾小球基底膜肾炎)、肺血管炎、Pauci免疫性血管炎和免疫复合物相关炎症。
在一些实施方案中，提供了用于治疗宿主中镰状细胞的方法，其包括施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物。
在一些实施方案中，提供了用于治疗宿主中免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)或特发性血小板减少性紫癜(ITP)的方法，其包括施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物。
在一些实施方案中，提供了用于治疗宿主中ANCA血管炎的方法，其包括施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物。
在一些实施方案中，提供了用于治疗宿主中IgA肾病的方法，其包括施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物。
在一些实施方案中，提供了用于治疗宿主中快速进行性肾小球肾炎(RPGN)的方法，其包括施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物。
在一些实施方案中，提供了用于治疗宿主中狼疮肾炎的方法，其包括施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物。
在一些实施方案中，提供了用于治疗宿主中出血性登革热的方法，其包括施用有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物。
在另外的替代实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物被用于治疗自身免疫性病症。补体途径增强抗体和吞噬细胞从身体中清除微生物和受损细胞的能力。它是先天免疫系统的一部分，并且在健康个体中是基本过程。抑制补体途径将减少身体的免疫系统响应。因此，本公开的目标是通过给有需要的受试者施用有效剂量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物来治疗自身免疫性病症。
在一些实施方案中，所述自身免疫性病症是由补体系统的活性引起。在一些实施方案中，所述自身免疫性病症是由替代补体途径的活性引起。在一些实施方案中，所述自身免疫性病症是由经典补体途径的活性引起。在另一个实施方案中，所述自身免疫性病症是由不与补体系统直接相关的作用机制(诸如T淋巴细胞的过度增殖或细胞因子的过度产生)引起。
自身免疫性病症的非限制性实例包括：狼疮、同种异体移植体排斥、自身免疫性甲状腺疾病(诸如Graves病和桥本氏甲状腺炎)、自身免疫性葡萄膜炎、巨细胞动脉炎、炎性肠病(包括克罗恩病、溃疡性结肠炎、区域性肠炎、肉芽肿性肠炎、远端回肠炎、区域性回肠炎和末端回肠炎)、糖尿病、多发性硬化、恶性贫血、银屑病、类风湿性关节炎、结节病和硬皮病。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物被用于治疗狼疮。狼疮的非限制性实例包括红斑狼疮、皮肤狼疮、盘状红斑狼疮、冻疮样红斑狼疮和红斑狼疮扁平苔癣重叠综合征。
红斑狼疮是包括全身性病症和皮肤病症两者的疾病总分类。该疾病的全身性形式可以具有皮肤以及全身性表现。然而，还有仅有皮肤累及而没有全身性累及的疾病形式。例如，SLE是主要发生在女性中的未知病因学的炎性病症，并且以关节症状、蝶形红斑、复发性胸膜炎、心包炎、全身性淋巴结肿大、脾肿大以及CNS累及和进行性肾衰竭为特征。大部分患者(98％以上患者)的血清含有包括抗DNA抗体在内的抗核抗体。高滴度的抗DNA抗体基本上对SLE是特异性的。该疾病的常规治疗一直是施用皮质类固醇或免疫阻抑剂。
有3种形式的皮肤狼疮：慢性皮肤狼疮(也称为盘状红斑狼疮或DLE)、亚急性皮肤狼疮和急性皮肤狼疮。DLE是主要影响皮肤的毁容性慢性病症，具有显示红斑、毛囊堵塞、鳞屑、毛细血管扩张(telangiectasia)和萎缩的界限清楚的斑点和斑块。该疾患常常由日光暴露促成，并且早期病灶是红斑、直径5至10mm的圆形鳞状丘疹，并且显示出毛囊堵塞。DLE病灶最常见地出现在脸颊、鼻子、头皮和耳朵上，但它们也可能在躯干的上部、四肢的伸肌表面和口腔粘膜之上泛化。如果不进行治疗，中央病灶会萎缩并留下疤痕。与SLE不同，在DLE中几乎总是不存在针对双链DNA的抗体(例如，DNA结合测试)。
糖尿病可以指代1型或2型糖尿病。在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物是以有效量提供以治疗患有1型糖尿病的患者。在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物是以有效量提供以治疗患有2型糖尿病的患者。
1型糖尿病是自身免疫性疾病。当对抗感染的身体系统(免疫系统)攻击身体的一部分时，发生自身免疫性疾病。在1型糖尿病的情况下，胰腺则产生少量或不产生胰岛素。
在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症包括移植物排斥。在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症是抗体介导的移植物排斥。
在某些方面，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物被用于治疗包括但不限于癌症的增殖性病症。适合于施用本文所述的活性化合物或其盐的靶向癌症包括但不限于雌激素受体阳性癌症、HER2-阴性晚期乳腺癌、晚期转移性乳腺癌、脂肪肉瘤、非小细胞肺癌、肝癌、卵巢癌、成胶质细胞瘤、难治性实体肿瘤、成视网膜细胞瘤阳性乳腺癌以及成视网膜细胞瘤阳性子宫内膜癌、阴道癌和卵巢癌以及肺癌和支气管癌、结肠腺癌、直肠腺癌、中枢神经系统生殖细胞肿瘤、畸胎瘤、雌激素受体阴性乳腺癌、雌激素受体阳性乳腺癌、家族性睾丸生殖细胞肿瘤、HER2-阴性乳腺癌、HER2-阳性乳腺癌、男性乳腺癌、卵巢未成熟畸胎瘤、卵巢成熟畸胎瘤、卵巢单胚层和高度特化畸胎瘤、孕酮受体阴性乳腺癌、孕酮受体阳性乳腺癌、复发性乳腺癌、复发性结肠癌、复发性性腺外生殖细胞肿瘤、复发性性腺外非精原性生殖细胞肿瘤、复发性性腺外精原细胞瘤、复发性恶性睾丸生殖细胞肿瘤、复发性黑色素瘤、复发性卵巢生殖细胞肿瘤、复发性直肠癌、III期性腺外非精原性生殖细胞肿瘤、III期性腺外精原细胞瘤、III期恶性睾丸生殖细胞肿瘤、III期卵巢生殖细胞肿瘤、IV期乳腺癌、IV期结肠癌、IV期性腺外非精原性生殖细胞肿瘤、IV期性腺外精原细胞瘤、IV期黑色素瘤、IV期卵巢生殖细胞肿瘤、IV期直肠癌、睾丸未成熟畸胎瘤、睾丸成熟畸胎瘤。在特定实施方案中，靶向癌症包括雌激素受体阳性、HER2-阴性晚期乳腺癌、晚期转移性乳腺癌、脂肪肉瘤、非小细胞肺癌、肝癌、卵巢癌、成胶质细胞瘤、难治性实体肿瘤、成视网膜细胞瘤阳性乳腺癌以及成视网膜细胞瘤阳性子宫内膜癌、阴道癌和卵巢癌以及肺癌和支气管癌、转移性结肠直肠癌、具有CDK4突变或扩增的转移性黑色素瘤或顺铂难治性不可切除的生殖细胞肿瘤、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、恶性纤维组织细胞瘤、血管内皮瘤(hemangio sarcoma)、血管肉瘤、淋巴管肉瘤、间皮瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、鳞状细胞癌；表皮样癌、恶性皮肤附件肿瘤、腺癌、肝细胞瘤、肝细胞癌、肾细胞癌、肾上腺样瘤、胆管癌、移行细胞癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎细胞癌、间变性胶质瘤；多形性成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、成神经管细胞瘤、恶性脑)、膜瘤、恶性神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、甲状旁腺癌、甲状腺髓样癌、支气管类癌、嗜铬细胞瘤、胰岛细胞癌、恶性类癌、恶性副神经节瘤、黑色素瘤、梅克尔细胞瘤、叶状囊性肉瘤、唾液腺癌、胸腺癌、膀胱癌和威尔姆斯瘤(Wilms tumor)、血液病症或血液恶性肿瘤，包括但不限于髓系病症、淋巴病症、白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性疾病(MPD)、肥大细胞病症和骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)等，T细胞或NK细胞淋巴瘤，例如但不限于：外周T细胞淋巴瘤；间变性大细胞淋巴瘤，例如间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性、ALK阴性间变性大细胞淋巴瘤或原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤；血管免疫母细胞性淋巴瘤；皮肤T细胞淋巴瘤，例如蕈样真菌病、Sézary综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、原发性皮肤CD30+T细胞淋巴增殖性病症；原发性皮肤侵袭性嗜表皮CD8+细胞毒性T细胞淋巴瘤；原发性皮肤γ-δT细胞淋巴瘤；原发性皮肤小/中CD4+T细胞淋巴瘤和淋巴瘤样丘疹病；成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)；母细胞性NK细胞淋巴瘤；肠病变型T细胞淋巴瘤；血液脾γ-δT细胞淋巴瘤；淋巴母细胞性淋巴瘤；鼻NK/T细胞淋巴瘤；治疗相关的T细胞淋巴瘤；例如实体器官或骨髓移植后出现的淋巴瘤；T细胞幼淋巴细胞性白血病；T细胞大颗粒淋巴细胞白血病；NK细胞的慢性淋巴增殖病症；侵袭性NK细胞白血病；儿童全身性EBV+T细胞淋巴增殖疾病(与慢性活动性EBV感染相关)；种痘水疱病样淋巴瘤；成人T细胞白血病/淋巴瘤；肠病变相关T细胞淋巴瘤；肝脾T细胞淋巴瘤；或皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤。
在一些实施方案中，本文所述的方法可被用于治疗患有淋巴瘤或淋巴细胞或髓细胞增殖病症或异常的宿主，例如人。例如，可以对患有霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤的宿主施用如本文所述的方法。例如，宿主可患有非霍奇金淋巴瘤，诸如但不限于：AIDS相关淋巴瘤；间变性大细胞淋巴瘤；血管免疫母细胞性淋巴瘤；母细胞性NK细胞淋巴瘤；伯基特氏淋巴瘤；伯基特样淋巴瘤(小非裂解细胞淋巴瘤)；慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤；皮肤T细胞淋巴瘤；弥漫性大B细胞淋巴瘤；肠病变型T细胞淋巴瘤；滤泡性淋巴瘤；肝脾γ-δT细胞淋巴瘤；淋巴母细胞性淋巴瘤；套细胞淋巴瘤；边缘区淋巴瘤；鼻T细胞淋巴瘤；儿科淋巴瘤；外周T细胞淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；T细胞白血病；转化淋巴瘤；治疗相关的T细胞淋巴瘤；或华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'sMacroglobulinemia)，其是一种霍奇金淋巴瘤，诸如但不限于：结节性硬化经典霍奇金淋巴瘤(CHL)；混合细胞性CHL；淋巴细胞耗竭型CHL；富淋巴细胞CHL；淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤；或结节性淋巴细胞为主型HL、特异性B细胞淋巴瘤或增殖性病症，如但不限于：多发性骨髓瘤；弥漫性大B细胞淋巴瘤；滤泡性淋巴瘤；粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)；小细胞淋巴细胞性淋巴瘤；纵隔大B细胞淋巴瘤；结边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)；脾边缘区淋巴瘤(SMZL)；血管内大B细胞淋巴瘤；原发性渗出性淋巴瘤；或淋巴瘤样肉芽肿病；B细胞幼淋巴细胞性白血病；毛细胞白血病；不可归类的脾淋巴瘤/白血病；脾弥漫性红髓小B细胞淋巴瘤；毛细胞白血病-变异型；淋巴浆细胞性淋巴瘤；重链疾病，例如α重链疾病、γ重链疾病、μ重链疾病；浆细胞骨髓瘤；骨的孤立性浆细胞瘤；骨外浆细胞瘤；原发性皮肤滤泡中心淋巴瘤；富T细胞/组织细胞大B细胞淋巴瘤；与慢性炎症相关的DLBCL；老年人的爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)+DLBCL；原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤；腿型原发性皮肤DLBCL；ALK+大B细胞淋巴瘤；浆母细胞性淋巴瘤；HHV8相关多中心性大B细胞淋巴瘤；卡斯尔曼病(Castleman disease)；不可归类的B细胞淋巴瘤，其特征介于弥漫性大B细胞淋巴瘤之间；或不可归类的B细胞淋巴瘤，其特征介于弥漫性大B细胞淋巴瘤与经典霍奇金淋巴瘤之间，白血病，例如淋巴细胞或骨髓来源的急性或慢性白血病，如但不限于：急性淋巴母细胞性白血病(ALL)；急性骨髓性白血病(AML)；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；慢性骨髓性白血病(CML)；幼年型髓单核细胞性白血病(JMML)；毛细胞白血病(HCL)；急性早幼粒细胞性白血病(AML的亚型)；大颗粒淋巴细胞性白血病；或成人T细胞慢性白血病。在一些实施方案中，患者患有急性骨髓性白血病，例如未分化的AML(M0)；髓母细胞性白血病(M1；有/没有最小细胞成熟)；髓母细胞性白血病(M2；细胞成熟)；早幼粒细胞性白血病(M3或M3变异体[M3V])；髓单核细胞性白血病(M4或嗜酸性粒细胞增多的M4变异体[M4E])；单核细胞性白血病(M5)；红白血病(M6)；或巨核母细胞性白血病(M7)、小细胞肺癌、成视网膜细胞瘤、HPV阳性恶性肿瘤如宫颈癌和某些头颈癌、MYC扩增肿瘤诸如伯基特氏淋巴瘤和三阴性乳腺癌；某些类别的肉瘤、某些类别的非小细胞肺癌、某些类别的黑色素瘤、某些类别的胰腺癌、某些类别的白血病、某些类别的淋巴瘤、某些类别的脑癌、某些类别的结肠癌、某些类别的前列腺癌、某些类别的卵巢癌、某些类别的子宫癌、某些类别的甲状腺及其他内分泌组织癌、某些类别的唾液腺癌、某些类别的胸腺癌、某些类别的肾癌、某些类别的膀胱癌和某些类别的睾丸癌。
在某些方面，如本文所述的活性化合物或其盐可被用于保存器官或血液制品或者防止器官或血液制品受到损害。例如，本文所述的活性化合物或其盐可被用于防止已收获用于移植的器官、组织、细胞产品或血液制品受到损害。在一些实施方案中，该器官是心脏、肾脏、胰腺、肺、肝脏或肠。在一些实施方案中，该组织来源于角膜、骨、腱、肌肉、心脏瓣膜、神经、动脉或静脉或皮肤。在一些实施方案中，该血液制品是全血、血浆、红细胞或网织红细胞。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物预防或延迟个体中补体介导的疾病或病症的至少一种症状的发作。在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减轻或消除个体中补体介导的疾病或病症的至少一种症状。症状的实例包括但不限于与自身免疫性疾病、癌症、血液学疾病、感染性疾病、炎性疾病、局部缺血-再灌注损伤、神经变性疾病、神经变性病症、肾脏疾病、移植物排斥、眼部疾病、血管疾病或血管炎病症相关联的症状。该症状可以是神经症状，例如认知功能受损、记忆受损、运动功能丧失等。该症状也可以是个体的细胞、组织或流体中的C1s蛋白的活性。该症状也可以是个体的细胞、组织或流体中补体激活的程度。
在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或其组合物调节个体的细胞、组织或流体中的补体激活。在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或其组合物抑制个体的细胞、组织或流体中的补体激活。例如，在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用本文所述的化合物治疗之前个体中的补体激活相比，将个体中的补体激活抑制了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少C3在红细胞上的沉积；例如，在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少C3b、iC3b等在RBC上的沉积。在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物抑制补体介导的红细胞溶解。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少C3在血小板上的沉积；例如，在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少C3b、iC3b等在血小板上的沉积。
在一些实施方案中，施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物导致选自由以下组成的组的结果：(a)补体激活减少；(b)认知功能改善；(c)神经元损失减少；(d)神经元中磷酸-Tau水平降低；(e)胶质细胞激活减少；(f)淋巴细胞浸润减少；(g)巨噬细胞浸润减少；(h)抗体沉积减少，(i)胶质细胞损失减少；(j)少突细胞损失减少；(k)树突细胞浸润减少；(l)中性粒细胞浸润减少；(m)红细胞溶解减少；(n)红细胞吞噬减少；(o)血小板吞噬减少；(p)血小板溶解减少；(q)移植的移植体存活率提高；(r)巨噬细胞介导的吞噬减少；(s)视力改善；(t)运动控制改善；(u)血栓形成改善；(v)凝血改善；(w)肾功能改善；(x)抗体介导的补体激活减少；(y)自身抗体介导的补体激活减少；(z)贫血改善；(aa)脱髓鞘减少；(ab)嗜酸性粒细胞增多减少；(ac)C3在红细胞上的沉积减少(例如，C3b、iC3b等在RBC上的沉积减少)；和(ad)C3在血小板上的沉积减少(例如，C3b、iC3b等在血小板上的沉积减少)；和(ae)过敏毒素产生减少；(af)自身抗体介导的水疱形成减少；(ag)自身抗体诱发的瘙痒减少；(ah)自身抗体诱发的红斑减少；(ai)自身抗体介导的皮肤糜烂减少；(aj)输血反应导致的红细胞破坏减少；(ak)同种异体抗体导致的红细胞溶解减少；(al)输血反应导致的溶血减少；(am)同种异体抗体介导的血小板溶解减少；(an)输血反应导致的血小板溶解减少；(ao)肥大细胞激活减少；(ap)肥大细胞组胺释放减少；(aq)血管渗透性降低；(ar)水肿减轻；(as)移植的移植体内皮上的补体沉积减少；(at)移植的移植体内皮中的过敏毒素产生减少；(au)真皮-表皮接点的分离减少；(av)真皮-表皮接点中过敏毒素的产生减少；(aw)移植的移植体内皮中同种异体抗体介导的补体激活减少；(ax)抗体介导的神经肌肉接点的损失减少；(ay)神经肌肉接点处的补体激活减少；(az)神经肌肉接点处的过敏毒素产生减少；(ba)神经肌肉接点处的补体沉积减少；(bb)麻痹减轻；(bc)麻木减轻；(bd)膀胱控制增加；(be)肠控制增加；(bf)与自身抗体相关的死亡率降低；和(bg)与自身抗体相关的发病率降低。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，有效实现以下结果中的一者或多者与用活性化合物治疗之前个体中的结果的水平或程度相比减少了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％：(a)补体激活；(b)认知功能下降；(c)神经元损失；(d)神经元中的磷酸-Tau水平；(e)胶质细胞激活；(f)淋巴细胞浸润；(g)巨噬细胞浸润；(h)抗体沉积，(i)胶质细胞损失；(j)少突细胞损失；(k)树突细胞浸润；(l)中性粒细胞浸润；(m)红细胞溶解；(n)红细胞吞噬；(o)血小板吞噬；(p)血小板溶解；(q)移植的移植体排斥；(r)巨噬细胞介导的吞噬；(s)视力丧失；(t)抗体介导的补体激活；(u)自身抗体介导的补体激活；(v)脱髓鞘；(w)嗜酸性粒细胞增多。
一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，有效实现以下结果中的一者或多者与用活性化合物治疗之前个体中的结果的水平或程度相比改善了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％：a)认知功能；b)移植的移植体存活率；c)视力；d)运动控制；e)血栓形成；f)凝血；g)肾功能；和h)血细胞比容(红细胞计数)。
在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少个体中的补体激活。例如，在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物或其盐治疗之前个体中的补体激活相比，使个体中的补体激活减少了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
在一些实施方案中，施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物改善个体的认知功能。例如，在一些实施方案中，本文所述的活性化合物当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物治疗之前个体中的认知功能相比，使个体中的认知功能改善了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
在一些实施方案中，施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减小个体中认知功能的下降速率。例如，在一些实施方案中，活性化合物或其盐当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物或其盐治疗之前个体中的认知功能下降速率相比，使个体中的认知功能下降速率减小了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少个体中的神经元丢失。例如，在一些实施方案中，活性化合物或其盐当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物治疗之前个体中的神经元丢失相比，使个体中的神经元丢失减少了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少个体中的磷酸化Tau水平。例如，在一些实施方案中，活性化合物或其盐当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物或其盐治疗之前个体中的磷酸化-Tau水平相比，使个体中的磷酸化-Tau水平减少了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少个体中的胶质细胞激活。例如，在一些实施方案中，活性化合物或其盐当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物或其盐治疗之前个体中的胶质细胞激活相比，使个体中的胶质激活减少了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。在一些实施方案中，所述胶质细胞是星形胶质细胞或小胶质细胞。
在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少个体中的淋巴细胞浸润。例如，在一些实施方案中，活性化合物或其盐当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物或其盐治疗之前个体中的淋巴细胞浸润相比，使个体中的淋巴细胞浸润减少了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少个体中的巨噬细胞浸润。例如，在一些实施方案中，活性化合物或其盐当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物或其盐治疗之前个体中的巨噬细胞浸润相比，使个体中的巨噬细胞浸润减少了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少个体中的抗体沉积。例如，在一些实施方案中，活性化合物或其盐当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物或其盐治疗之前个体中的抗体沉积相比，使个体中的抗体沉积减少了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
在一些实施方案中，给个体施用如本文所述的活性化合物或其盐或组合物减少个体中的过敏毒素(例如，C3a、C4a、C5a)产生。例如，在一些实施方案中，活性化合物或其盐当作为单药疗法或按组合疗法以一个或多个剂量施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用活性化合物或其盐治疗之前个体中的过敏毒素产生水平相比，使个体中的过敏毒素产生减少了至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％。
本公开提供了本公开的活性化合物或其盐或包含本公开的活性化合物或其盐和药学上可接受的赋形剂的药物组合物治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的用途。在一些实施方案中，本公开提供了本公开的活性化合物或其盐治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的用途。在一些实施方案中，本公开提供了包含本公开的活性化合物或其盐和药学上可接受的赋形剂的药物组合物治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的用途。
组合疗法
在本公开的一个方面，如本公开所述的活性化合物或其盐或组合物可与有效量的至少一种另外的治疗剂组合或交替提供，或者在至少一种另外的治疗剂之后、与至少一种另外的治疗剂伴随或先于至少一种另外的治疗剂提供，以治疗本文列出的病症。以下提供了用于此类组合疗法的第二活性剂的非限制性实例。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与补体系统的至少一种另外的抑制剂或具有不同生物学作用机制的第二活性化合物组合或交替提供。在下文和本文中的一般描述中，无论何时使用指代如本文所述的活性化合物或其盐或组合物的术语中的任一个术语，都应该理解药学上可接受的盐、前药或组合物被视为包括在内，除非另有说明或与本文不一致。
在非限制性实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与蛋白酶抑制剂、可溶性补体调控剂、治疗性抗体(单克隆或多克隆)、补体组分抑制剂、受体激动剂、化疗剂或siRNA一起提供。
在其他实施方案中，本文所述的活性化合物是与针对肿瘤坏死因子(TNF)的抗体组合或交替施用，所述抗体包括但不限于英夫利西单抗
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阿达木单抗
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培塞利珠单抗/>
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戈利木单抗/>
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或受体融合蛋白诸如依那西普/>
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在一些实施方案中，用于组合疗法的剂是如上所指定的任何剂的生物仿制药(biosimilar)，包括但不限于/>
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(英夫利昔单抗生物仿制药)、
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(英夫利昔单抗生物仿制药)、/>
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(阿达木单抗生物仿制药)、
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(阿达木单抗生物仿制药)、/>
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(阿达木单抗生物仿制药)、/>
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(依那西普生物仿制药)和/>
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(依那西普生物仿制药)。
在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与抗-CD20抗体组合或交替施用，所述抗-CD20抗体包括但不限于利妥昔单抗
Figure BDA00042380791800022313
奥法妥木单抗
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托西莫单抗(tositumomab)/>
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奥妥珠单抗/>
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替伊莫单抗(ibritumomab)/>
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奥瑞珠单抗(ocrelizumab)/>
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或维妥珠单抗(veltuzumab)。在一些实施方案中，用于组合疗法的剂是如上所指定的任何剂的生物仿制药，包括但不限于/>
Figure BDA00042380791800022319
(利妥昔单抗生物仿制药)。
在替代实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与抗-IL6抗体组合或交替施用，所述抗-IL6抗体包括但不限于托珠单抗
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司妥昔单抗/>
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沙瑞卢单抗(sarilumab)/>
Figure BDA0004238079180002243
西鲁库单抗(sirukumab)、克拉扎珠单抗(clazakizumab)、沃巴利珠单抗(vobarilizumab)、奥洛珠单抗(olokizumab)和WBP216(MEDI5117)。在一些实施方案中，用于组合疗法的剂是如上所指定的任何剂的生物仿制药，包括但不限于BAT1806(托珠单抗生物仿制药)。
在替代实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与IL17抑制剂组合或交替施用，所述IL17抑制剂包括但不限于司库奇尤单抗(Cosentyx)、依奇珠单抗
Figure BDA0004238079180002244
布罗利尤单抗/>
Figure BDA0004238079180002245
比美珠单抗(bimekizumab)、ALX-0761、CJM112、CNTO6785、LY3074828、SCH-900117和MSB0010841。在一些实施方案中，用于组合疗法的剂是如上所指定的任何剂的生物仿制药。
在替代实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与p40(IL12/IL23)抑制剂组合或交替施用，所述p40(IL12/IL23)抑制剂包括但不限于乌司奴单抗
Figure BDA0004238079180002246
和布雷奴单抗(briakinumab)(ABT874)。在一些实施方案中，用于组合疗法的剂是如上所指定的任何剂的生物仿制药，包括但不限于FYB202(乌司奴单抗生物仿制药)和/>
Figure BDA0004238079180002247
(乌司奴单抗生物仿制药)。
在替代实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与IL23抑制剂组合或交替施用，所述IL23抑制剂包括但不限于瑞莎珠单抗(risankizumab)
Figure BDA0004238079180002248
替曲吉珠单抗(tildrakizumab)/>
Figure BDA0004238079180002249
古塞奇尤单抗/>
Figure BDA00042380791800022410
米吉珠单抗(mirakizumab)和布雷库单抗(brazikumab)。在一些实施方案中，用于组合疗法的剂是如上所指定的任何剂的生物仿制药。
在替代实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与抗干扰素α抗体组合或交替施用，所述抗干扰素α抗体例如但不限于西法木单抗(sifalimumab)、阿尼鲁单抗(anifrolumab)和罗利珠单抗(rontalizumab)。在一些实施方案中，用于组合疗法的剂是如上所指定的任何剂的生物仿制药。
在替代实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与激酶抑制剂组合或交替施用，所述激酶抑制剂例如但不限于JAK1/JAK3抑制剂，例如但不限于托法替尼
Figure BDA0004238079180002251
在替代实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与JAK1/JAK2抑制剂组合或交替施用，所述JAK1/JAK2抑制剂例如但不限于巴瑞替尼(baricitinib)/>
Figure BDA00042380791800022521
和芦可替尼(ruxolitinib)/>
Figure BDA0004238079180002252
在替代实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与抗VEGF剂组合或交替施用，所述抗VEGF剂例如但不限于：阿柏西普(
Figure BDA0004238079180002253
Regeneron Pharmaceuticals)；雷珠单抗(ranibizumab)(/>
Figure BDA0004238079180002254
Genentech和Novartis)；哌加他尼(pegaptanib)(
Figure BDA0004238079180002255
OSI Pharmaceuticals和Pfizer)；贝伐珠单抗(/>
Figure BDA0004238079180002256
Genentech/Roche)和ziv-阿柏西普/>
Figure BDA0004238079180002257
在替代实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与酪氨酸激酶抑制剂组合或交替施用，所述酪氨酸激酶抑制剂例如但不限于：拉帕替尼
Figure BDA0004238079180002258
舒尼替尼
Figure BDA0004238079180002259
阿昔替尼/>
Figure BDA00042380791800022510
培唑帕尼；索拉非尼/>
Figure BDA00042380791800022511
普纳替尼(ponatinib)
Figure BDA00042380791800022512
瑞戈非尼/>
Figure BDA00042380791800022513
卡博替尼(cabozantinib)/>
Figure BDA00042380791800022514
Figure BDA00042380791800022515
凡德他尼(vendetanib)/>
Figure BDA00042380791800022516
雷莫西尤单抗/>
Figure BDA00042380791800022517
仑伐替尼/>
Figure BDA00042380791800022518
西地尼布(cediranib)/>
Figure BDA00042380791800022519
乙酸阿奈可他(anecortane acetate)、乳酸角鲨胺(squalamine lactate)和皮质类固醇。
在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物可以与免疫检查点抑制剂组合或交替施用。检查点抑制剂的非限制性实例包括抗-PD-1或抗-PDL1抗体(例如，纳武利尤单抗
Figure BDA00042380791800022520
帕博利珠单抗/>
Figure BDA0004238079180002261
匹地利珠单抗(pidilizumab)、AMP-224(AstraZeneca和MedImmune)、PF-06801591(Pfizer)、MEDI0680(AstraZeneca)、PDR001(Novartis)、REGN2810(Regeneron)、SHR-12-1(Jiangsu Hengrui Medicine Company和Incyte Corporation)、TSR-042(Tesaro))和PD-L1/VISTA抑制剂CA-170(Curis Inc.)、阿替利珠单抗/>
Figure BDA0004238079180002262
德瓦鲁单抗/>
Figure BDA0004238079180002263
和KN035或者抗-CTLA4抗体(例如伊匹木单抗/>
Figure BDA0004238079180002264
曲美木单抗、AGEN1884和AGEN2041(Agenus))。
可以与本文所述的活性化合物组合使用的活性剂的非限制性实例包括但不限于：
蛋白酶抑制剂：血浆源性C1-INH浓缩物，例如
Figure BDA0004238079180002265
(Sanquin)、/>
Figure BDA0004238079180002266
(CSL Behring,Lev Pharma)、/>
Figure BDA0004238079180002267
(CSL Bering)、/>
Figure BDA0004238079180002268
重组人C1-抑制剂，例如/>
Figure BDA0004238079180002269
利托那韦(/>
Figure BDA00042380791800022610
Abbvie,Inc.)；
可溶性补体调控剂：可溶性补体调节剂1(TP10)(Avant Immunotherapeutics)；sCR1-sLex/TP-20(Avant Immunotherapeutics)；MLN-2222/CAB-2(MilleniumPharmaceuticals)；米考西普(Mirococept)(Inflazyme Pharmaceuticals)；
治疗性抗体：依库珠单抗
Figure BDA00042380791800022611
(Alexion Pharmaceuticals)；培克珠单抗(Pexelizumab)(Alexion Pharmaceuticals)；雷夫利珠单抗/>
Figure BDA00042380791800022612
(Alexion Pharmaceuticals)；BCD-148(Biocad)；ABP-959(Amgen)；SB-12(SamsungBioepsis)；奥法妥木单抗(Genmab A/S)；TNX-234(Tanox)；TNX-558(Tanox)；TA106(Taligen Therapeutics)；纽珠单抗(Neutrazumab)(G2 Therapies)；抗备解素(Anti-properdin)(Novelmed Therapeutics)；HuMax-CD38(Genmab A/S)；来自WO 2018/140956的抗备解素化合物(Alexion Pharmaceuticals)；
补体成分抑制剂：坎普他汀(Compstatin)/POT-4(Potentia Pharmaceuticals)；ARC1905(Archemix)；4(1MEW)APL-1,APL-2(Apellis)；CP40/AMY-101,PEG-Cp40(Amyndas)；依库珠单抗
Figure BDA0004238079180002271
(Alexion Pharmaceuticals)；培克珠单抗(AlexionPharmaceuticals)；雷夫利珠单抗/>
Figure BDA0004238079180002272
(Alexion Pharmaceuticals)；
多重激酶抑制剂：甲苯磺酸索拉非尼
Figure BDA0004238079180002273
甲磺酸伊马替尼/>
Figure BDA0004238079180002274
苹果酸舒尼替尼/>
Figure BDA0004238079180002275
普纳替尼/>
Figure BDA0004238079180002276
阿昔替尼/>
Figure BDA0004238079180002277
尼达尼布
Figure BDA0004238079180002278
盐酸普纳替尼/>
Figure BDA0004238079180002279
多韦替尼(Dovitinib)(TKI-258,OncologyVentures)；吉瑞替尼(gilteritnib)/>
Figure BDA00042380791800022710
利尼伐尼(Linifanib)(ABT-869)；克伦奥尼布(Crenolanib)(CP-868596)；马赛替尼(Masitinib)(AB1010)；替沃扎尼(Tivozanib)/>
Figure BDA00042380791800022711
二磷酸莫替沙尼(Motesanib Diphosphate)(AMG-706)；安姆伐替尼(Amuvatinib)(MP-470)；TSU-68(SU6668，奥兰替尼(Orantinib))；CP-673451；Ki8751；替拉替尼(Telatinib)(BAY 57-9352)；PP121；KRN 633；MK-2461；酪氨酸磷酸化抑制剂(Tyrphostin)(AG 1296)；番泻苷B；AZD2932；和曲匹地尔(Trapidil)；
抗因子H或抗因子B剂：抗-FB siRNA(Alnylam)；用于CFB和CFD(SomaLogic)的FCFD4514S(Genentech/Roche)SOMAmers；TA106(Alexion Pharmaceuticals)；5C6、NM8074(Novelmed)和AMY-301(Amyndas)；
补体C3或CAP C3转换酶靶向分子：TT30(CR2/CFH)(Alexion)；TT32(CR2/CR1)(Alexion Pharmaceuticals)；萘莫司他(Nafamostat)(FUT-175,Futhan)(TorriPharmaceuticals)；拜卡西奥单抗(bikaciomab)、NM9308(Novelmed)；CVF；HC-1496(InCode)ALXN1102/ALXN1103(TT30)(Alexion Pharmaceuticals)；rFH(Optherion)；H17C3(C3b/iC3b)(EluSys Therapeutics)；Mini-CFH(Amyndas)米考西普(APT070)；sCR1(CDX-1135)(Celldex)；CRIg/CFH；抗-CR3、抗-MASP2、抗-MASP3、抗C1s和抗-C1n分子：
Figure BDA0004238079180002281
(Takeda)；TNT003(Bioverativ/Sanofi)；BIVV009(fka TNT009；Bioverativ/Sanofi)；BIVV020(Bioverativ/Sanofi)；OMS721(Omeros)；和OMS906(Omeros)；
因子B和因子Bb抑制剂：IONIS-FB-LRx(Ionis Pharmaceuticals)；例如，如颁给Allergan的美国专利公布20190071492、颁给True North Therapeutics(目前为Sanofi)的国际公布WO2017176651、美国专利9,243,070(Novelmed)；NM8074(Novelmed)中所述；以及如下文进一步所述；
血浆激肽释放酶抑制剂：
Figure BDA0004238079180002282
和/>
Figure BDA0004238079180002283
缓激肽受体拮抗剂：
Figure BDA0004238079180002284
因子D抑制剂，如以下进一步描述。
受体拮抗剂：PMX-53(Peptech Ltd.)；JPE-137(Jerini)；JSM-7717(Jerini)；
其他：重组人MBL(rhMBL；Enzon Pharmaceuticals)；酰亚胺和戊二酰亚胺衍生物诸如沙利度胺、来那度胺、泊马度胺；可以与如本文所述的活性化合物或其盐或组合物组合或交替使用的另外的非限制性实例包括以下。
Figure BDA0004238079180002285
/>
Figure BDA0004238079180002291
/>
Figure BDA0004238079180002301
在一些实施方案中，用于组合疗法的剂是如上所指定的任何剂的生物仿制药。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与抑制使所施用的蛋白酶抑制剂发生代谢的酶的化合物一起提供。在一些实施方案中，化合物或盐可与利托那韦一起提供。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与终末补体抑制剂，例如补体C5抑制剂或C5转换酶抑制剂组合提供。在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与依库珠单抗(其是针对补体因子C5的单克隆抗体，并且由Alexion Pharmaceuticals以商品名
Figure BDA0004238079180002311
制造和销售)组合提供。依库珠单抗已获美国FDA批准用于治疗PNH和aHUS。在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与雷夫利珠单抗(revulizumab)(其是一种针对补体因子C5的单克隆抗体，并且由Alexion Pharmaceuticals以商品名/>
Figure BDA0004238079180002312
生产和销售)组合提供。雷夫利珠单抗已获美国FDA批准用于治疗PNH。另外的C5和C5转换酶抑制剂包括但不限于西地西兰(Alnylam)；帕泽利单抗(prozelimab)(Regeneron)；BCD-148(Biocad)；ABP-959(Amgen)；SB-12(Samsung Bioepis Co.,Ltd.)；LFG316(Novartis)；coversin(nomacopan；Akari))；齐鲁考普(Ra Pharma)；珂罗利单抗(SKY59；Roche/Chugai)；以及mubodina(AdiennePharma)。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物是与抗炎药、抗微生物剂、抗血管发生剂、免疫阻抑剂、抗体、类固醇、眼部抗高血压药或它们的组合组合施用。此类剂的实例包括阿米卡星、乙酸阿奈可他、蒽二酮、蒽环霉素、阿那曲唑(an azole)、两性霉素B、贝伐珠单抗、喜树碱、头孢呋辛、氯霉素、氯己定、二葡萄糖酸氯己定、克霉唑(clortrimazole)、克霉唑头孢菌素、皮质类固醇、地塞米松、氟美松(desamethazone)、益康唑、头孢他啶(eftazidime)、表鬼臼毒素、氟康唑、氟胞嘧啶、氟嘧啶、氟喹啉、加替沙星、糖肽、咪唑、伊曲康唑、伊维菌素，酮康唑，左氧氟沙星、大环内酯类，咪康唑、硝酸咪康唑、莫西沙星、那他霉素、新霉素、制霉菌素、氧氟沙星、聚六亚甲基双胍、泼尼松龙、乙酸泼尼松龙、哌加他尼、铂类似物、多粘菌素B(polymicin B)、羟乙磺酸丙氧苯脒(propamidineisethionate)、嘧啶核苷、雷珠单抗、乳酸角鲨胺、磺胺、曲安西龙、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、三氮唑、万古霉素、抗血管内皮生长因子(VEGF)剂、VEGF抗体、VEGF抗体片段、长春花生物碱、噻吗洛尔、倍他洛尔、曲伏前列素、拉坦前列素、贝美前列素、溴莫尼定、多佐胺、乙酰唑胺、毛果芸香碱、环丙沙星、阿奇霉素、庆大霉素、妥布霉素、头孢唑林、伏立康唑、丙氧鸟苷、西多福韦、膦甲酸、双氯芬酸、奈帕芬胺(nepafenac)、酮咯酸、布洛芬、吲哚美辛、氟米龙、利美索龙、anecortave、环孢菌素、甲氨蝶呤、他克莫司、抗-PDGFR分子以及它们的组合。
在本公开的一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可以与至少一种免疫阻抑剂组合或交替施用。作为非限制性实例的免疫阻抑剂可为钙调磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素)或子囊霉素(例如环孢菌素A
Figure BDA0004238079180002321
)、FK506(他克莫司)、吡美莫司、mTOR抑制剂(例如雷帕霉素或其衍生物，例如西罗莫司/>
Figure BDA0004238079180002322
依维莫司
Figure BDA0004238079180002323
替西罗莫司、佐他莫司、比欧莫司-7、比欧莫司-9)、雷帕霉素类似物(例如地磷莫司(ridaforolimus)、咪唑硫嘌呤、campath 1H)、S1P受体调节剂(例如芬戈莫德或其类似物)、抗IL-8抗体、霉酚酸或其盐(例如钠盐)或其前药(例如吗替麦考酚酯/>
Figure BDA0004238079180002324
)、OKT3(ORTHOCLONE/>
Figure BDA0004238079180002325
)、泼尼松、/>
Figure BDA0004238079180002326
Figure BDA0004238079180002327
布喹那钠、OKT4、T10B9.A-3A、33B3.1、15-脱氧精胍菌素、曲培莫司、来氟米特/>
Figure BDA0004238079180002328
CTLAI-Ig、抗-CD25、抗-IL2R、巴利昔单抗/>
Figure BDA0004238079180002329
达克珠单抗/>
Figure BDA00042380791800023210
mizorbine、甲氨蝶呤、地塞米松、ISAtx-247、SDZ ASM 981(吡美莫司、/>
Figure BDA00042380791800023211
)、CTLA4lg(阿巴西普)、贝拉西普、LFA3lg、依那西普(由Immunex作为/>
Figure BDA00042380791800023212
销售)、阿达木单抗
Figure BDA00042380791800023213
英夫利昔单抗/>
Figure BDA00042380791800023214
抗-LFA-1抗体、那他珠单抗/>
Figure BDA00042380791800023215
恩莫单抗、加维莫单抗、抗胸腺细胞免疫球蛋白、西利珠单抗、阿来西普依法珠单抗、pentasa、美沙拉嗪(mesalazine)、asacol、磷酸可待因、扑炎痛(benorylate)、芬布芬、萘普生、双氯芬酸、依托度酸和吲哚美辛、托珠单抗(Actemra)、司妥昔单抗(Sylvant)、司库奇尤单抗(secukibumab)(Cosentyx)、乌司奴单抗(Stelara)、瑞莎珠单抗(risankizumab)、西法木单抗、阿司匹林和布洛芬。
抗炎剂的实例包括甲氨蝶呤、地塞米松、地塞米松醇、地塞米松磷酸钠、乙酸氟甲龙、氟甲龙醇、依碳氯替泼诺(lotoprendol etabonate)、甲羟松、乙酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、二氟泼尼酯、利美索龙(rimexolone)、氢化可的松、乙酸氢化可的松、洛度沙胺氨丁三醇、阿司匹林、布洛芬、舒洛芬、吡罗昔康、美洛昔康、氟比洛芬、萘普生(naproxan)、酮洛芬、替诺昔康、双氯芬酸钠、富马酸酮替芬、双氯芬酸钠、奈帕芬胺、溴芬酸、氟比洛芬钠、舒洛芬、塞来昔布、萘普生、罗非昔布、糖皮质激素、双氯芬酸以及它们的任何组合。在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物是与选自以下的一种或多种非类固醇抗炎药(NSAID)组合：萘普生钠(Anaprox)、塞来昔布(Celebrex)、舒林酸(Clinoril)、奥沙普秦(Daypro)、双水杨酯(Disalcid)、二氟尼柳(Dolobid)、吡罗昔康(Feldene)、吲哚美辛(Indocin)、依托度酸(Lodine)、美洛昔康(Mobic)、萘普生(Naprosyn)、萘丁美酮(Relafen)、酮咯酸氨丁三醇(Toradol)、萘普生/艾司奥美拉唑(Vimovo)和双氯芬酸(Voltaren)以及它们的组合。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物是与Ω-3脂肪酸或过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)激动剂组合或交替施用的。Ω-3脂肪酸已知可通过抑制DGAT和通过刺激过氧化物酶体和线粒体β氧化来减少血清甘油三酯。已发现两种Ω-3脂肪酸二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)对PPAR-α和PPAR-γ具有高亲和力。海生油(例如，鱼油)是已被发现可调控脂质代谢的EPA和DHA的良好来源。已发现Ω-3脂肪酸对心血管疾病的危险因素(尤其是轻度高血压、高甘油三酯血症)和凝血因子VII磷脂复合物活性具有有益作用。Ω-3脂肪酸降低血清甘油三酯，增加血清HDL-胆固醇，降低收缩压和舒张压以及脉率，并且降低血液凝血因子VII-磷脂复合物的活性。进一步地，Ω-3脂肪酸似乎能被很好地耐受，而没有引起任何不良副作用。Ω-3脂肪酸的一种此种形式是来自含有DHA和EPA的鱼油的Ω-3长链多不饱和脂肪酸的浓缩物，并以商标
Figure BDA0004238079180002341
销售。此种形式的Ω-3脂肪酸描述于例如美国专利号5,502,077、5,656,667和5,698,594中，这些美国专利的公开内容通过引用方式并入本文。
过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)是与类视黄醇、类固醇和甲状腺激素受体相关的核激素受体超家族配体激活转录因子的成员。存在三种不同的PPAR亚型，它们是不同基因的产物，并且通常被命名为PPAR-α、PPAR-β/δ(或者仅δ)和PPAR-γ。刺激过氧化物酶体活性的药理学剂的一般类别称为PPAR激动剂，例如PPAR-α激动剂、PPAR-γ激动剂和PPAR-δ激动剂。一些药理学剂是PPAR激动剂的组合，诸如α/γ激动剂等，并且一些其他药理学剂具有激动剂/拮抗剂双重活性。贝特类诸如非诺贝特(fenofibrate)、苯扎贝特(bezafibrate)、氯非贝特(clofibrate)和吉非贝特是PPAR-α激动剂，并且被用于患者以减少富含甘油三酯的脂蛋白、增加HDL和减少致动脉粥样化致密的LDL。贝特类通常经口施用给此类患者。非诺贝特或2-[4-(4-氯苯甲酰基)苯氧基]-2-甲基-丙酸1-甲基乙酯多年来由于其在降低血液甘油三酯和胆固醇水平方面的功效而一直被认为是医学活性成分。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与抗-VEGF剂组合施用给有需要的受试者来治疗或预防年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法。抗VEGF剂的非限制性实例包括但不限于阿柏西普(
Figure BDA0004238079180002342
RegeneronPharmaceuticals)；雷珠单抗(/>
Figure BDA0004238079180002343
Genentech和Novartis)；哌加他尼(
Figure BDA0004238079180002344
OSI Pharmaceuticals和Pfizer)；贝伐珠单抗(Avastin；Genentech/Roche)；拉帕替尼/>
Figure BDA0004238079180002345
舒尼替尼/>
Figure BDA0004238079180002346
阿昔替尼/>
Figure BDA0004238079180002347
帕唑帕尼；索拉非尼/>
Figure BDA0004238079180002348
普纳替尼/>
Figure BDA0004238079180002349
瑞戈非尼/>
Figure BDA00042380791800023410
卡博替尼(cabozantinib)(Abometyx；/>
Figure BDA00042380791800023411
凡德他尼/>
Figure BDA00042380791800023412
雷莫西尤单抗/>
Figure BDA00042380791800023413
仑伐替尼/>
Figure BDA0004238079180002351
ziv-阿柏西普/>
Figure BDA0004238079180002352
西地尼布
Figure BDA0004238079180002353
乙酸阿奈可他、乳酸角鲨胺和皮质类固醇，包括但不限于曲安奈德。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与补体C5抑制剂组合施用给有需要的受试者来治疗或预防年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法，该补体C5抑制剂为例如本文和上文标题为“用于组合疗法的潜在治疗剂的非限制性实例”中描述的补体C5抑制剂，包括但不限于依库珠单抗(AlexionPharmaceuticals)；雷夫利珠单抗(Alexion Pharmaceuticals)；LFG316(Novartis/Morphosys)；西地西兰、西地西兰/ALN-CC5(Alnylam)；ARC1005(Novo Nordisk)；Coversin(Akari Therapeutics)；Mubodine(Adienne Pharma)；RA101348(Ra Pharma)；SOBI002(Swedish Orphan Biovitrum)；SOMAmers(SomaLogic)；Erdigna(Adienne Pharma)；ARC1905(Ophthotech)；MEDI7814(MedImmune)；NOX-D19(Noxxon)；IFX-1、CaCP29(InflaRx)；PMX53、PMX205(Cephalon,Teva)；CCX168(ChemoCentryx)；ADC-1004(AlligatorBioscience)；和抗-C5aR-151、NN8209；抗-C5aR-215、NN8210(Novo Nordisk)；帕泽利单抗(Regeneron)；BCD-148(Biocad)；ABP-959(Amgen)；SB-12(Samsung Bioepis Co.,Ltd.)；齐鲁考普(Ra Pharma)；以及珂罗利单抗(SKY59；Roche/Chugal)。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与抗备解素剂(例如，如上所述的抗备解素剂，包括但不限于NM9401(Novelmed))组合施用给有需要的受试者来治疗或预防年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与补体C3抑制剂组合施用给有需要的受试者来治疗或预防年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法，所述补体C3抑制剂为例如如上文所描述的补体C3抑制剂，包括但不限于坎普他汀或坎普他汀类似物，例如坎普他汀/POT-4(Potentia Pharmaceuticals)；ARC1905(Archemix)；4(1MEW)APL-1,APL-2(Apellis)；CP40/AMY-101,PEG-Cp40(Amyndas)补体C3或CAP C3转换酶靶向分子：TT30(CR2/CFH)(Alexion)；TT32(CR2/CR1)(AlexionPharmaceuticals)；萘莫司他(Nafamostat)(FUT-175,Futhan)(Torri Pharmaceuticals)；拜卡西奥单抗、NM9308(Novelmed)；CVF；HC-1496(InCode)ALXN1102/ALXN1103(TT30)(Alexion Pharmaceuticals)；rFH(Optherion)；H17 C3(C3b/iC3b)(EluSysTherapeutics)；Mini-CFH(Amyndas)米考西普(APT070)；sCR1(CDX-1135)(Celldex)；以及CRIg/CFH。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与抗因子H剂或抗因子B剂组合施用给有需要的受试者来治疗或预防年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法，所述抗因子H剂或抗因子B剂选自抗-FB siRNA(Alnylam)；用于CFB和CFD(SomaLogic)的FCFD4514S(Genentech/Roche)SOMAmers；TA106(AlexionPharmaceuticals)；5C6和AMY-301(Amyndas)。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与抗-MASP2、抗-C1s或抗-CR3分子组合施用给有需要的受试者来治疗或预防年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法，所述抗-MASP2、抗-C1s或抗-CR3分子例如但不限于：Cynryze(ViroPharma/Baxter)；TNT003(True North)；OMS721(Omeros)；OMS906(Omeros)；以及Imprime PGG(Biothera)。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与多重激酶抑制剂组合施用给有需要的受试者来治疗或预防年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法，所述多重激酶抑制剂例如如本文所述，包括但不限于甲苯磺酸索拉非尼
Figure BDA0004238079180002361
甲磺酸伊马替尼/>
Figure BDA0004238079180002362
苹果酸舒尼替尼/>
Figure BDA0004238079180002363
普纳替尼/>
Figure BDA0004238079180002364
阿昔替尼/>
Figure BDA0004238079180002365
尼达尼布/>
Figure BDA0004238079180002366
盐酸帕唑帕尼/>
Figure BDA0004238079180002367
多韦替尼(TKI-258,Oncology Ventures)；吉瑞替尼/>
Figure BDA0004238079180002371
利尼伐尼(ABT-869)；克伦奥尼布(CP-868596)；马赛替尼(AB1010)；替沃扎尼/>
Figure BDA0004238079180002372
二磷酸莫替沙尼(AMG-706)；安姆伐替尼(MP-470)；TSU-68(SU6668,奥兰替尼)；CP-673451；Ki8751；替拉替尼(BAY 57-9352)；PP121；KRN 633；MK-2461；酪氨酸磷酸化抑制剂(Tyrphostin)(AG1296)；番泻苷B；AZD2932；和曲匹地尔。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与补体C5抑制剂组合施用给有需要的受试者来治疗或预防冷凝集素疾病(CAD)的方法，所述补体C5抑制剂为例如本文和上文标题为“用于组合疗法的潜在治疗剂的非限制性实例”中描述的补体C5抑制剂，包括但不限于依库珠单抗(AlexionPharmaceuticals)；雷夫利珠单抗(Alexion Pharmaceuticals)；LFG316(Novartis/Morphosys)；西地西兰(cemdisiran西地西兰/ALN-CC5(Alnylam)；ARC1005(NovoNordisk)；Coversin(Akari Therapeutics)；Mubodine(Adienne Pharma)；RA101348(RaPharma)；SOBI002(Swedish Orphan Biovitrum)；SOMAmers(SomaLogic)；Erdigna(AdiennePharma)；ARC1905(Ophthotech)；MEDI7814(MedImmune)；NOX-D19(Noxxon)；IFX-1、CaCP29(InflaRx)；PMX53、PMX205(Cephalon,Teva)；CCX168(ChemoCentryx)；ADC-1004(AlligatorBioscience)；和抗-C5aR-151、NN8209；抗-C5aR-215、NN8210(Novo Nordisk)；帕泽利单抗(Regeneron)；BCD-148(Biocad)；ABP-959(Amgen)；SB-12(Samsung Bioepis Co.,Ltd.)；齐鲁考普(Ra Pharma)；以及珂罗利单抗(SKY59；Roche/Chugal)。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与抗备解素剂(例如，如上所述的抗备解素剂，包括但不限于NM9401(Novelmed))组合施用给有需要的受试者来治疗或预防冷凝集素疾病(CAD)的方法。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与补体C3抑制剂组合施用给有需要的受试者来治疗或预防冷凝集素疾病(CAD)的方法，所述补体C3抑制剂例如如上所述的补体C3抑制剂，包括但不限于坎普他汀或坎普他汀类似物，例如坎普他汀/POT-4(Potentia Pharmaceuticals)；ARC1905(Archemix)；4(1MEW)APL-1,APL-2(Apellis)；CP40/AMY-101,PEG-Cp40(Amyndas)补体C3或CAP C3转换酶靶向分子：TT30(CR2/CFH)(Alexion)；TT32(CR2/CR1)(Alexion Pharmaceuticals)；萘莫司他(Nafamostat)(FUT-175,Futhan)(Torri Pharmaceuticals)；拜卡西奥单抗、NM9308(Novelmed)；CVF；HC-1496(InCode)ALXN1102/ALXN1103(TT30)(AlexionPharmaceuticals)；rFH(Optherion)；H17 C3(C3b/iC3b)(EluSys Therapeutics)；Mini-CFH(Amyndas)米考西普(APT070)；sCR1(CDX-1135)(Celldex)；以及CRIg/CFH。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与抗因子H剂或抗因子B剂组合施用给有需要的受试者来治疗或预防冷凝集素疾病(CAD)的方法，所述抗因子H剂或抗因子B剂选自IONIS-FB-LRx(IonisPharmaceuticals)；抗-FB siRNA(Alnylam)；用于CFB和CFD(SomaLogic)的FCFD4514S(Genentech/Roche)SOMAmers；TA106(Alexion Pharmaceuticals)；5C6和AMY-301(Amyndas)。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与抗-MASP2、抗C1s或抗-C1n分子组合施用给有需要的受试者来治疗或预防冷凝集素疾病(CAD)的方法，所述抗-MASP2、抗C1s或抗-C1n分子例如但不限于
Figure BDA0004238079180002381
(Takeda)；/>
Figure BDA0004238079180002382
(Bering CSL)、/>
Figure BDA0004238079180002383
(Pharming)、/>
Figure BDA0004238079180002384
(Bering CSL)；TNT003(Bioverativ/Sanofi)；BIVV009(Bioverativ/Sanofi)；BIVV020(Bioverativ/Sanofi)；OMS721(Omeros)；OMS906(Omeros)；以及Imprime PGG(Biothera)。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与多重激酶抑制剂组合施用给有需要的受试者来治疗或预防冷凝集素疾病(CAD)的方法，所述多重激酶抑制剂例如如本文所述，包括但不限于甲苯磺酸索拉非尼
Figure BDA0004238079180002391
甲磺酸伊马替尼/>
Figure BDA0004238079180002392
苹果酸舒尼替尼/>
Figure BDA0004238079180002393
普纳替尼/>
Figure BDA0004238079180002394
阿昔替尼/>
Figure BDA0004238079180002395
尼达尼布/>
Figure BDA0004238079180002396
盐酸帕唑帕尼/>
Figure BDA0004238079180002397
多韦替尼(TKI-258,Oncology Ventures)；吉瑞替尼/>
Figure BDA0004238079180002398
利尼伐尼(ABT-869)；克伦奥尼布(CP-868596)；马赛替尼(AB1010)；替沃扎尼/>
Figure BDA0004238079180002399
二磷酸莫替沙尼(AMG-706)；安姆伐替尼(MP-470)；TSU-68(SU6668,奥兰替尼)；CP-673451；Ki8751；替拉替尼(BAY 57-9352)；PP121；KRN 633；MK-2461；酪氨酸磷酸化抑制剂(AG 1296)；番泻苷B；AZD2932；和曲匹地尔。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与补体系统的另外的抑制剂、或另一种具有不同生物作用机制的活性化合物组合施用给有需要的受试者来治疗或预防阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)的方法。在另一个实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与依库珠单抗或雷夫利珠单抗组合或交替施用给有需要的受试者来治疗或预防阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)的方法。
在另一个实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与CP40组合或交替施用给有需要的受试者来治疗或预防阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)的方法。
在一些实施方案中，所述另外的剂是聚乙二醇化CP40。CP40是肽抑制剂，该肽抑制剂显示出对C3b的强结合亲和力，并且抑制阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)红细胞的溶血。在一些实施方案中，所述另外的剂是补体成分抑制剂，例如但不限于坎普他汀/POT-4(Potentia Pharmaceuticals)；ARC1905(Archemix)；4(1MEW)APL-1、APL-2(Apellis)；CP40/AMY-101、PEG-Cp40(Amyndas)；PDGF抑制剂，例如但不限于甲苯磺酸索拉非尼；甲磺酸伊马替尼(STI571)；苹果酸舒尼替尼；普纳替尼(AP24534)；阿昔替尼；伊马替尼(STI571)；尼达尼布(BIBF 1120)；盐酸帕唑帕尼(GW786034HCl)；多韦替尼(TKI-258,CHIR-258)；利尼伐尼(ABT-869)；克伦奥尼布(CP-868596)；马赛替尼(AB1010)；替沃扎尼(AV-951)；二磷酸莫替沙尼(AMG-706)；安姆伐替尼(MP-470)；TSU-68(SU6668,奥兰替尼)；CP-673451；Ki8751；替拉替尼；PP121；帕唑帕尼；KRN 633；二乳酸多韦替尼(TKI-258)；MK-2461；酪氨酸磷酸化抑制剂(AG 1296)；乳酸多韦替尼(TKI258)；番泻苷B；舒尼替尼；AZD2932；和曲匹地尔；抗因子H剂或抗因子B剂，例如抗-FB siRNA(Alnylam)；用于CFB和CFD(SomaLogic)的FCFD4514S(Genentech/Roche)SOMAmers；TA106(Alexion Pharmaceuticals)；5C6和AMY-301(Amyndas)；补体C3或CAP C3转换酶靶向分子，例如但不限于TT30(CR2/CFH)(Alexion)；TT32(CR2/CR1)(Alexion Pharmaceuticals)；萘莫司他(FUT-175,Futhan)(TorriPharmaceuticals)；拜卡西奥单抗、NM9308(Novelmed)；CVF、HC-1496(InCode)ALXN1102/ALXN1103(TT30)(Alexion Pharmaceuticals)；rFH(Optherion)；H17 C3(C3b/iC3b)(EluSys Therapeutics)；Mini-CFH(Amyndas)米考西普(APT070)；sCR1(CDX-1135)(Celldex)；CRIg/CFH、抗-CR3、抗-MASP2、抗C1s或抗-C1n分子，例如但不限于Cinryze(Takeda)；TNT003(True North)；OMS721(Omeros)；OMS906(Omeros)；和Imprime PGG(Biothera)。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的包含如本文所述的活性化合物或其盐或组合物的组合物与补体系统的另外的抑制剂、或通过不同作用机制发挥作用的活性剂组合或交替施用给有需要的受试者来治疗或预防类风湿性关节炎的方法。
在另一个实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与甲氨蝶呤组合或交替施用给有需要的受试者来治疗或预防类风湿性关节炎的方法。
在某些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与至少一种选自以下的另外的治疗剂组合或交替施用：水杨酸酯，包括阿司匹林和双水杨酯
Figure BDA0004238079180002412
非类固醇抗炎药(NSAID)；环氧化酶(COX-1和COX-2)的非选择性抑制剂，包括双氯芬酸/>
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布洛芬
Figure BDA0004238079180002414
酮洛芬/>
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萘普生/>
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吡罗昔康(Feldene)、依托度酸/>
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吲哚美辛、奥沙普秦/>
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萘丁美酮
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和美洛昔康/>
Figure BDA0004238079180002418
选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂，包括塞来昔布
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改善病情抗风湿药(DMARD)，包括咪唑硫嘌呤/>
Figure BDA00042380791800024110
环孢菌素
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Figure BDA00042380791800024112
金盐/>
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羟氯喹/>
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来氟米特/>
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甲氨蝶呤
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青霉胺/>
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和柳氮磺吡啶/>
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生物药物，包括阿巴西普/>
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依那西普/>
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英夫利西单抗/>
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阿达木单抗/>
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和阿那白滞素/>
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皮质类固醇，包括倍他米松
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可的松/>
Figure BDA00042380791800024124
地塞米松/>
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甲泼尼龙/>
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泼尼松龙/>
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泼尼松/>
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和曲安西龙(Aristocort)；金盐，包括金诺芬(Auranofin)/>
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金硫葡糖(Aurothioglucose)/>
Figure BDA00042380791800024130
Aurolate；Myochrysine或它们的任何组合。
在一些实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与补体系统的另外的抑制剂、或通过不同作用机制发挥作用的活性剂组合或交替施用给有需要的受试者来治疗或预防多发性硬化的方法。
在另一个实施方案中，本公开提供了通过将有效量的如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与皮质类固醇组合或交替施用给有需要的受试者来治疗或预防多发性硬化的方法。
皮质类固醇的实例包括但不限于泼尼松、地塞米松、solumedrol和甲泼尼龙。在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与至少一种例如选自以下的抗多发性硬化药物组合：
Figure BDA0004238079180002421
(特立氟胺)、/>
Figure BDA0004238079180002422
(干扰素β-1a)、/>
Figure BDA0004238079180002423
(干扰素β-1b)、/>
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(乙酸格拉替雷(glatiramer acetate))、/>
Figure BDA0004238079180002425
(干扰素β-1b)、/>
Figure BDA0004238079180002426
(芬戈莫德)、/>
Figure BDA0004238079180002427
(阿仑珠单抗)、Novantrone(米托蒽醌)、/>
Figure BDA0004238079180002428
(聚乙二醇干扰素β-1a)、/>
Figure BDA0004238079180002429
(干扰素β-1a)、/>
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(富马酸二甲酯)、/>
Figure BDA00042380791800024211
(那他珠单抗(natalizumab))、/>(甲泼尼龙)、高剂量经口/>
Figure BDA00042380791800024213
(泼尼松)、H.P.ACTHAR/>
Figure BDA00042380791800024214
(ACTH)或它们的组合。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与另一种药剂组合使用以改善或减少该剂的副作用。例如，在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与过继性细胞转移疗法组合使用以减少与此类疗法相关的相关炎性响应，例如细胞因子介导的响应，诸如细胞因子释放综合征。在一些实施方案中，所述过继性细胞转移疗法包括使用嵌合抗原受体T细胞(CAR T)。在一些实施方案中，所述过继性细胞转移疗法包括使用嵌合抗原受体T细胞(CAR T)或树突细胞来治疗血液瘤或实体肿瘤，例如，B细胞相关性血液癌症。在一些实施方案中，所述血液瘤或实体肿瘤是急性淋巴母细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、胰腺癌、胶质母细胞瘤或表达CD19的癌症。
在另外的替代实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与依库珠单抗或雷夫利珠单抗组合提供以用于治疗PNH、aHUSs、STEC-HUS、ANCA-血管炎、AMD、CAD、C3肾小球病(例如DDD或C3GN)、慢性溶血、视神经脊髓炎或移植排斥。在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与坎普他汀或坎普他汀衍生物组合提供以用于治疗PNH、aHUSs、STEC-HUS、ANCA-血管炎、AMD、CAD、C3肾小球病(例如DDD或C3GN)、慢性溶血、视神经脊髓炎、呈抗水通道蛋白4(AQP4)抗体阳性的成人中的视神经脊髓炎谱系病症、重症肌无力、全身性重症肌无力或移植排斥。在一些实施方案中，所述另外的剂是补体成分抑制剂，例如但不限于坎普他汀/POT-4(Potentia Pharmaceuticals)；ARC1905(Archemix)；4(1MEW)APL-1、APL-2(Apellis)；CP40/AMY-101、PEG-Cp40(Amyndas)；PDGF抑制剂，例如但不限于甲苯磺酸索拉非尼；甲磺酸伊马替尼(STI571)；苹果酸舒尼替尼；普纳替尼(AP24534)；阿昔替尼；伊马替尼(STI571)；尼达尼布(BIBF 1120)；盐酸帕唑帕尼(GW786034HCl)；多韦替尼(TKI-258,CHIR-258)；利尼伐尼(ABT-869)；克伦奥尼布(CP-868596)；马赛替尼(AB1010)；替沃扎尼(AV-951)；二磷酸莫替沙尼(AMG-706)；安姆伐替尼(MP-470)；TSU-68(SU6668,奥兰替尼)；CP-673451；Ki8751；替拉替尼；PP121；帕唑帕尼；KRN 633；二乳酸多韦替尼(TKI-258)；MK-2461；酪氨酸磷酸化抑制剂(AG 1296)；乳酸多韦替尼(TKI258)；番泻苷B；舒尼替尼；AZD2932；和曲匹地尔；抗因子H剂或抗因子B剂，例如抗-FB siRNA(Alnylam)；用于CFB和CFD(SomaLogic)的FCFD4514S(Genentech/Roche)SOMAmers；TA106(AlexionPharmaceuticals)；5C6和AMY-301(Amyndas)；补体C3或CAP C3转换酶靶向分子，例如但不限于TT30(CR2/CFH)(Alexion)；TT32(CR2/CR1)(Alexion Pharmaceuticals)；萘莫司他(FUT-175,Futhan)(Torri Pharmaceuticals)；拜卡西奥单抗、NM9308(Novelmed)；CVF、HC-1496(InCode)ALXN 1102/ALXN1103(TT30)(Alexion Pharmaceuticals)；rFH(Optherion)；H17 C3(C3b/iC3b)(EluSys Therapeutics)；Mini-CFH(Amyndas)米考西普(APT070)；sCR1(CDX-1135)(Celldex)；CRIg/CFH、抗-CR3、抗-MASP2、抗C1s或抗-C1n分子，例如但不限于Cinryze(Takeda)；TNT003(True North)；OMS721(Omeros)；OMS906(Omeros)；和ImprimePGG(Biothera)。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与rituxan组合提供以用于治疗补体介导的病症。在一些实施方案中，所述补体介导的病症是例如类风湿性关节炎、肉芽肿伴多血管炎(GPA)(Wegener氏肉芽肿)和显微镜下多血管炎(MPA)。在一些实施方案中，所述病症是狼疮。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与环磷酰胺组合提供以用于治疗补体介导的病症。在一些实施方案中，所述病症是自身免疫性疾病。在一些实施方案中，所述补体介导的病症是例如类风湿性关节炎、肉芽肿伴多血管炎(GPA)(Wegener氏肉芽肿)和显微镜下多血管炎(MPA)。在一些实施方案中，所述病症是狼疮。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与常规的DLE治疗组合给药以用于治疗有需要的受试者的狼疮。
常规的DLE治疗的实例包括外用皮质类固醇膏剂或霜剂，诸如曲安奈德、氟轻松(fluocinolone)、氟氢缩松(flurandrenolide)、戊酸倍他米松或二丙酸倍他米松。可将耐药斑块与真皮内皮质类固醇一起注射。其他潜在的DLE治疗包括钙调磷酸酶抑制剂，诸如吡美莫司霜剂或他克莫司膏剂。特别耐药的病例可用全身性抗疟药物诸如羟氯喹(PLAQUENIL)来治疗。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与甲氨蝶呤组合提供以用于治疗狼疮。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与咪唑硫嘌呤组合提供以用于治疗狼疮。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与非类固醇抗炎药组合提供以用于治疗狼疮。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与皮质类固醇组合提供以用于治疗狼疮。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与贝利尤单抗(Benlysta)组合提供以用于治疗狼疮。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与羟氯喹(Plaquenil)组合提供以用于治疗狼疮。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与西法木单抗组合提供以用于治疗狼疮。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与OMS721(Omeros)组合提供以用于治疗补体介导的病症。在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与OMS906(Omeros)组合提供以用于治疗补体介导的病症。在一些实施方案中，所述补体介导的病症是例如血栓性血小板减少性紫癜(TTP)或aHUS。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与抗炎剂、免疫阻抑剂或抗细胞因子剂组合提供，以用于治疗或预防响应于药剂或生物治疗剂(例如过继性T细胞疗法(ACT)诸如CAR T细胞疗法或单克隆抗体疗法)的施用的细胞因子或炎性反应。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与皮质类固醇例如泼尼松、地塞米松、solumedrol和甲泼尼龙和/或靶向例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13和TGFβ的抗细胞因子化合物组合提供。
在一些实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与抗细胞因子抑制剂组合提供，所述抗细胞因子抑制剂包括但不限于阿达木单抗、英夫利昔单抗、依那西普、protopic、依法珠单抗(efalizumab)、阿来西普、阿那白滞素、司妥昔单抗、司库奇尤单抗、乌司奴单抗、戈利木单抗和托珠单抗或它们的组合。
可与如本文所述的活性化合物或其盐或组合物组合使用的另外的抗炎剂包括但不限于一种或多种非类固醇抗炎药(NSAID)；一种或多种细胞因子阻抑性抗炎药(CSAID)；CDP-571/BAY-10-3356(人源化抗-TNFα抗体；Celltech/Bayer)；cA2/英夫利昔单抗(嵌合抗-TNFα抗体；Centocor)；75kdTNFR-IgG/依那西普(75kD TNF受体-IgG融合蛋白；Immunex)；55kdTNF-IgG(55kD TNF受体-IgG融合蛋白；Hoffmann-LaRoche)；IDEC-CE9.1/SB210396(非消耗性灵长类化抗-CD4抗体；IDEC/SmithKline)；DAB 486-IL-2和/或DAB 389-IL-2(IL-2融合蛋白；Seragen)；抗-Tac(人源化抗-IL-2Rα；Protein Design Labs/Roche)；IL-4(抗炎细胞因子；DNAX/Schering)；IL-10(SCH 52000；重组IL-10、抗炎细胞因子；DNAX/Schering)；IL-4；IL-10和/或IL-4激动剂(例如，激动剂抗体)；IL-1RA(IL-1受体拮抗剂；Synergen/Amgen)；阿那白滞素
Figure BDA0004238079180002461
TNF-bp/s-TNF(可溶性TNF结合蛋白)；R973401(IV型磷酸二酯酶抑制剂)；MK-966(COX-2抑制剂)；伊洛前列素、来氟米特(抗炎和细胞因子抑制)；氨甲环酸(纤溶酶原激活的抑制剂)；T-614(细胞因子抑制剂)；前列腺素E1；替尼达普(非类固醇抗炎药)；萘普生(非类固醇抗炎药)；美洛昔康(非类固醇抗炎药)；布洛芬(非类固醇抗炎药)；吡罗昔康(非类固醇抗炎药)；双氯芬酸(非类固醇抗炎药)；吲哚美辛(非类固醇抗炎药)；柳氮磺胺吡啶；咪唑硫嘌呤；ICE抑制剂(酶白介素-1β转换酶的抑制剂)；zap-70和/或lck抑制剂(酪氨酸激酶zap-70或lck的抑制剂)；TNF-转换酶抑制剂；抗-IL-12抗体；抗-IL-18抗体；白介素-11；白介素-13；白介素-17抑制剂；金；青霉素胺；氯喹；苯丁酸氮芥；羟氯喹；环孢菌素；环磷酰胺；抗胸腺细胞球蛋白；抗-CD4抗体；CD5-毒素；经口施用的肽和胶原蛋白；氯苯扎利二钠；细胞因子调控剂(CRAB)HP228和HP466(HoughtenPharmaceuticals,Inc.)；ICAM-1反义硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸(ISIS 2302；IsisPharmaceuticals,Inc.)；可溶性补体受体1(TP10；T Cell Sciences,Inc.)；泼尼松；肝蛋白；聚硫酸糖胺聚糖；米诺环素；抗-IL2R抗体；海生和植物脂质(鱼和植物种子脂肪酸)；金诺芬；苯基丁氮酮；甲氯芬那酸；氟芬那酸；静脉内免疫球蛋白；齐留通；阿扎立平；霉酚酸(RS-61443)；他克莫司(FK-506)；西罗莫司(雷帕霉素)；氨普立糖(盐酸氨普立糖(therafectin))；克拉屈滨(2-氯脱氧腺苷)。
在具体的实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与皮质类固醇组合提供以用于治疗或预防响应于药物或生物治疗剂的施用的细胞因子或炎性反应。
在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与依那西普组合提供以用于治疗或预防响应于药物或生物治疗剂的施用的细胞因子或炎性反应。
在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与托珠单抗组合提供以用于治疗或预防响应于药物或生物治疗剂的施用的细胞因子或炎性反应。
在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与依那西普和托珠单抗组合提供以用于治疗或预防响应于药物或生物治疗剂的施用的细胞因子或炎性反应。
在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与英夫利西单抗组合提供以用于治疗或预防响应于药物或生物治疗剂的施用的细胞因子或炎性反应。
在另一个实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与戈利木单抗组合提供以用于治疗或预防响应于药物或生物治疗剂的施用的细胞因子或炎性反应。
在具体的实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与甲泼尼龙、咪唑硫嘌呤、麦考酚酯、利妥昔单抗、甲氨蝶呤、经口皮质类固醇、米托蒽醌、托珠单抗或C5抑制剂(诸如依库珠单抗或雷夫利珠单抗)或它们的组合提供以用于治疗NMO。
在具体的实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与卡比多巴-左旋多巴(一种多巴胺激动剂，包括但不限于普拉克索(Mirapex)、罗匹尼罗(Requip)和罗替戈汀(Neupro，作为贴剂给予)、阿扑吗啡(Apokyn)、MAO B抑制剂(例如司来吉兰(Eldepryl,Zelapar)、雷沙吉兰(Azilect))和沙芬酰胺(Xadago)、儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)抑制剂(例如恩他卡朋(Comtan)和托卡朋(Tasmar))、抗胆碱能药(例如苯扎托品(Cogentin)或三己芬迪)、或金刚烷胺或它们的组合组合提供，以用于治疗帕金森病。
在具体的实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与胆碱酯酶抑制剂、Namenda、利培酮(Risperdal)、奥氮平(Zyprexa)和喹硫平(Seroquel)、维生素E、舍曲林(Zoloft)、安非他酮(Wellbutrin)、西酞普兰(Celexa)、帕罗西汀(Paxil)或文拉法辛(Effexor)或它们的组合组合提供以用于治疗阿尔茨海默氏病。
在具体的实施方案中，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与利鲁唑(Rilutek)、依达拉奉(Radicava)或它们的组合组合提供以用于治疗ALS。
在一个方面，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物可与免疫调节剂组合提供以用于治疗癌症，所述免疫调节剂包括但不限于检查点抑制剂，包括作为非限制性实例的PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、PD-L2抑制剂、CTLA-4抑制剂、LAG-3抑制剂、TIM-3抑制剂、T-细胞激活的V-结构域Ig阻抑剂(VISTA)抑制剂、小分子、肽、核苷酸或其他抑制剂。在某些方面，所述免疫调节剂是抗体，诸如单克隆抗体。
在本文所述的方法中使用的免疫检查点抑制剂包括但不限于PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、PD-L2抑制剂、CTLA-4抑制剂、LAG-3抑制剂、TIM-3抑制剂和T细胞激活的V-结构域Ig阻抑剂(VISTA)抑制剂或它们的组合。
在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是PD-1抑制剂，该PD-1抑制剂通过与PD-1受体结合而阻断PD-1和PD-L1的相互作用，并且进而抑制免疫阻抑。在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是选自以下的PD-1免疫检查点抑制剂：纳武利尤单抗
Figure BDA0004238079180002491
帕博利珠单抗/>
Figure BDA0004238079180002492
匹地利珠单抗、AMP-224(AstraZeneca和MedImmune)、PF-06801591(Pfizer)、MEDI0680(AstraZeneca)、PDR001(Novartis)、REGN2810(Regeneron)、MGA012(MacroGenics)、BGB-A317(BeiGene)SHR-12-1(Jiangsu Hengrui MedicineCompany和Incyte Corporation)、TSR-042(Tesaro)和PD-L1/VISTA抑制剂CA-170(CurisInc.)。
在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是以有效量施用的PD-1免疫检查点抑制剂纳武利尤单抗
Figure BDA0004238079180002493
用于治疗霍奇金淋巴瘤、黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌或卵巢癌。纳武利尤单抗已获FDA批准用于转移性黑色素瘤、非小细胞肺癌和肾细胞癌。
在该实施方案的另一个方面，所述免疫检查点抑制剂是以有效量施用的PD-1免疫检查点抑制剂帕博利珠单抗
Figure BDA0004238079180002494
用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌或尿路上皮癌。
在这个实施方案的另外的方面，所述免疫检查点抑制剂是以有效量施用的PD-1免疫检查点抑制剂匹地利珠单抗(Medivation)，用于治疗难治性弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)或转移性黑色素瘤。
在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是PD-L1抑制剂，该PD-L1抑制剂通过与PD-L1受体结合而阻断PD-1和PD-L1的相互作用，并且进而抑制免疫阻抑。PD-L1抑制剂包括但不限于阿替利珠单抗、德瓦鲁单抗、KN035CA-170(Curis Inc.)和LY3300054(EliLilly)。在一些实施方案中，所述PD-L1抑制剂是阿替利珠单抗。在一些实施方案中，所述PD-L1抑制剂阻断PD-L1和CD80间的相互作用以抑制免疫阻抑。
在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是以有效量施用的PD-L1免疫检查点抑制剂阿替利珠单抗
Figure BDA0004238079180002501
用于治疗转移性膀胱癌、转移性黑色素瘤、转移性非小细胞肺癌或转移性肾细胞癌。
在这个实施方案的另一个方面，所述免疫检查点抑制剂是以有效量施用的德瓦鲁单抗(AstraZeneca和MedImmune)，用于治疗非小细胞肺癌或膀胱癌。
在该实施方案的又一方面，所述免疫检查点抑制剂是以有效量施用的KN035(Alphamab)，用于治疗PD-L1阳性实体肿瘤。PD-L1免疫检查点抑制剂的另外的实施例是BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)，但是截止2015年，该抑制剂的临床试验已被暂停。
在一个方面，所述免疫检查点抑制剂是与CTLA-4结合并且抑制免疫阻抑的CTLA-4免疫检查点抑制剂。CTLA-4抑制剂包括但不限于伊匹木单抗、曲美木单抗(AstraZenecaand MedImmune)、AGEN1884和AGEN2041(Agenus)。
在一些实施方案中，所述CTLA-4免疫检查点抑制剂是以有效量施用的伊匹木单抗
Figure BDA0004238079180002502
用于治疗转移性黑色素瘤、辅助黑色素瘤或非小细胞肺癌。
在另一个实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是LAG-3免疫检查点抑制剂。LAG-3免疫检查点抑制剂的实例包括但不限于BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)、GSK2831781(GlaxoSmithKline)、IMP321(Prima BioMed)、LAG525(Novartis)以及双重PD-1和LAG-3抑制剂MGD013(MacroGenics)。在这个实施方案的又一方面，所述免疫检查点抑制剂是TIM-3免疫检查点抑制剂。具体的TIM-3抑制剂包括但不限于TSR-022(Tesaro)。
其他与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症的免疫检查点抑制剂包括但不限于B7-H3/CD276免疫检查点抑制剂(诸如MGA217)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)免疫检查点抑制剂(诸如吲哚莫德(Indoximod)和INCB024360)、杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)免疫检查点抑制剂(诸如利瑞鲁单抗(Lirilumab)(BMS-986015))、癌胚抗原细胞粘附分子(CEACAM)抑制剂(例如，CEACAM-1、-3和/或-5)。WO 2010/125571、WO 2013/082366和WO 2014/022332中描述了示例性抗CEACAM-1抗体，例如单克隆抗体34B1、26H7和5F4；或它们的重组形式，如例如US 2004/0047858、美国专利号7,132,255和WO 99/052552中所述。在其他实施方案中，所述抗-CEACAM抗体与CEACAM-5结合，如例如Zheng等人PLoS One.2010年9月2日,5(9).pii:e12529(DOI:10:1371/journal.pone.0021146)中所述；或者与CEACAM-1和CEACAM-5交叉反应，如例如WO 2013/054331和US 2014/0271618中所述。还其他的检查点抑制剂可以是针对B和T淋巴细胞弱化因子分子(BTLA)的分子，例如如Zhang等人所述,当以相对于激活刺激物呈顺式而非反式形式存在时，针对B和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)的单克隆抗体对体外B细胞增殖没有影响，并且起到抑制体外T细胞增殖的作用,Clin Exp Immunol.2011年1月；163(1):77-87。
如本文所考虑的，本文所述的活性化合物或其药学上可接受的盐是以经口剂型的形式施用，并且可以与任何标准化疗剂治疗方式组合用于治疗癌症。在一些实施方案中，所述化疗剂抑制细菌生长。在一些实施方案中，施用的化疗剂是DNA损害化疗剂。在一些实施方案中，化疗剂是蛋白质合成抑制剂、DNA损害化疗剂、烷基化剂、拓扑异构酶抑制剂、RNA合成抑制剂、DNA复合物结合剂、硫醇盐烷基化剂、鸟嘌呤烷基化剂、微管蛋白结合剂、DNA聚合酶抑制剂、抗癌酶、RAC1抑制剂、胸苷酸合酶抑制剂、噁唑磷杂苯(oxazophosphorine)化合物、整联蛋白抑制剂(诸如西仑吉肽)、喜树碱或高喜树碱、抗叶酸剂或叶酸抗代谢物。
在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是拉帕替尼。
在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是奥希替尼。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是阿来替尼。
在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是MEK抑制剂。
在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是雄激素受体配体。
在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是BTK抑制剂。
在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是MEK抑制剂和RAF抑制剂。
在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是RAF抑制剂。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是瑞戈非尼。
在一些实施方案中，所述MEK抑制剂是比尼替尼(binimetinib)、司美替尼(Selumetinib)、Cl-040、PD-325901、PD035901或TAK-733。
在另一个实施方案中，所述MEK抑制剂是(Tramatenib)、U0126-EtOH、PD98059、匹马色替(pimasertib)、BIX 02188、AZD8330、PD318088、SL-327、瑞法替尼(Refametinib)、杨梅黄酮(Myricetin)、BI-847325、考比替尼(Cobimetinib)、APS-2-79HCl或GDC-0623。
在一些实施方案中，所述RAF抑制剂是PLX-4720、达拉非尼、GDC-0879、Lifrafenib、CCT196969、RAF265、AZ 628、NVP-BHG712、SB590885、ZM 336372、索拉非尼、GW5074、TAK-632、CEP-32496、康奈非尼(Encorafenib)、PLX7904、LY3009120、RO5126766或MLN2480。
在一些实施方案中，所述BTK抑制剂是CC-292、CNX-774、RN486、LFM-A13、ONO-4059、依鲁替尼、阿卡拉布替尼或CGI746。
在一些实施方案中，所述雄激素受体配体是MK-2866、阿帕他胺(Apalutamide)、安达林(Andarine)、勃地酮、庚酸睾酮、二氢睾酮、加利酮(Galertone)、脱氢表雄酮、乙酸环丙孕酮、乙酸甲地孕酮、表雄酮、AZD3514、螺内酯、乙酸氯地孕酮、ODM-201、EPI-001。
在一些实施方案中，所述EGFR抑制剂是拉帕替尼、阿法替尼、来那替尼、卡特替尼(Catertinib)、AG-490、CP-724714、达可替尼(Dacomitnib)、WZ4002、沙普替尼(Sapitinib)、CUDC-101、AG-1478、PD153035HCl、培利替尼(Pelitinib)、AC480、AEE788、AP26113、OSI-420、WZ3146、WZ8040、AST-1306、罗西替尼(Rociletinib)、Genisten、伐利替尼(Varlitinib)、埃克替尼(Icotinib)、TAK-285、WHI-P154、瑞香素(Daphnetin)、PD168393、酪氨酸磷酸化抑制剂9、CNX-2006、AG-18、西妥昔单抗、那扎替尼(Nazartinib)、NSC228155、AZ5104、波奇替尼(Poziotinib)、AZD3759、Lifirafenib、奥莫替尼(Olmutinib)、厄洛替尼、那喹替尼(Naquotinib)、EAI045或CL-387785。
在一些实施方案中，本文所述的活性化合物与DNA损害化疗剂组合用于治疗癌症。如本文所用，术语“DNA损害”化疗或化疗剂是指用细胞抑制剂或细胞毒性剂(即化合物)治疗以减少或消除不希望的细胞(例如癌细胞)的生长或增殖，其中所述剂的细胞毒性效应可以是以下中的一者或多者的结果：核酸嵌入或结合、DNA或RNA烷基化、RNA或DNA合成的抑制、另一种核酸相关活性(例如，蛋白质合成)的抑制或任何其他细胞毒性效应。此类化合物包括但不限于能够杀伤细胞的DNA损害化合物。“DNA损害”化疗剂包括但不限于烷基化剂、DNA嵌入剂、蛋白质合成抑制剂、DNA或RNA合成抑制剂、DNA碱类似物、拓扑异构酶抑制剂、端粒酶抑制剂和端粒DNA结合化合物。
例如，烷基化剂包括烷基磺酸酯，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，诸如苯佐替派(benzodizepa)、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，诸如六甲蜜胺、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟基甲基三聚氰胺；氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、环磷酰胺、雌莫司汀(estramustine)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、盐酸氧二氯甲基二乙胺(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺和尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；和亚硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀。
其他DNA损害化疗剂包括柔红霉素、多柔比星、伊达比星、表柔比星、丝裂霉素和链霉素。化疗抗代谢物包括吉西他滨、巯嘌呤、硫鸟嘌呤、克拉屈滨、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷、阿糖胞苷、喷司他丁、甲氨蝶呤、咪唑硫嘌呤、阿昔洛韦、腺嘌呤β-1-D-阿拉伯糖苷、氨甲蝶呤、氨基蝶呤、2-氨基嘌呤、阿非迪霉素、8-氮鸟嘌呤、重氮丝氨酸、6-氮尿嘧啶、2′-叠氮基-2′-脱氧核苷、5-溴脱氧胞苷、胞嘧啶β-1-D-阿拉伯糖苷、重氮氧正亮氨酸、二脱氧核苷类、5-氟脱氧胞苷、5-氟脱氧尿苷和羟基脲。
可与本文所述的活性化合物组合的化疗蛋白质合成抑制剂包括相思豆毒素、金精三羧酸、氯霉素、大肠杆菌素E3、环己酰亚胺、白喉毒素、伊短菌素A、依米丁(emetine)、红霉素、乙硫氨酸、氟化物、5-氟色氨酸、夫西地酸、鸟苷酰亚甲基二膦酸酯和鸟苷酰亚胺基二磷酸酯、卡那霉素、春雷霉素(kasugamycin)、黄色霉素和O-甲基苏氨酸。另外的蛋白质合成抑制剂包括蒴莲根毒素modeccin、新霉素、正缬氨酸、密旋霉素、巴龙霉素(paromomycine)、嘌呤霉素、蓖麻毒素、志贺毒素、焦土霉素、司帕霉素、壮观霉素、链霉素、四环素、硫链丝菌素和甲氧苄啶。
可与本文所述的活性化合物组合的DNA合成的抑制剂包括烷基化剂，诸如硫酸二甲酯、氮芥和硫芥；嵌入剂，诸如吖啶染料、放线菌素、蒽类、苯并芘、溴化乙锭、二碘化丙锭-交织；以及其他剂，诸如偏端霉素和纺锤菌素。诸如伊立替康、替尼泊苷、香豆霉素、萘啶酸、新生霉素和奥索利酸的拓扑异构酶抑制剂；包括秋水仙酰胺(colcemide)、米托蒽醌、秋水仙碱、长春碱和长春新碱在内的细胞分裂抑制剂；以及RNA合成抑制剂也可用作DNA损害化合物，该RNA合成抑制剂包括放线菌素D、α-鹅膏毒环肽(α-amanitine)及其他真菌鹅膏毒素、虫草素cordycepin(3′-脱氧腺苷)、二氯呋喃核糖基苯并咪唑、利福平、链伐立星(streptovaricin)和链霉溶菌素(streptolydigin)。
在一些实施方案中，可与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症的化疗剂是DNA复合物结合剂，诸如喜树碱或依托泊苷；硫醇盐烷基化剂，诸如亚硝基脲、BCNU、CCNU、ACNU或福莫司汀；鸟嘌呤烷基化剂，诸如替莫唑胺，微管蛋白结合剂，诸如长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春氟宁、念珠藻素52、软海绵素(诸如软海绵素B)、多拉司他汀(诸如多拉司他汀10和多拉司他汀15)、半海盘灵(hemiasterlin)(诸如半海盘灵A和半海盘灵B)、秋水仙碱、康普瑞汀、2-甲氧基雌二醇、E7010、紫杉醇、多西他赛、埃坡霉素、盘皮海绵内酯；DNA聚合酶抑制剂，诸如阿糖胞苷；抗癌酶(诸如天门冬酰胺酶)；Rac1抑制剂(诸如6-硫鸟嘌呤)；胸苷酸合酶抑制剂(诸如卡培他滨或5-FU)；噁唑磷杂苯化合物，诸如Cytoxan；整联蛋白抑制剂，诸如西仑吉肽(cilengitide)；抗叶酸剂，诸如普拉曲沙(pralatrexate)；叶酸抗代谢物，如培美曲塞；或喜树碱或高喜树碱，诸如二氟替康。
在一些实施方案中，所述拓扑异构酶抑制剂是I型抑制剂。在另一个实施方案中，所述拓扑异构酶抑制剂是II型抑制剂。
其他可与本文所述活性化合物组合用于治疗癌症的DNA损害化疗剂包括但不限于顺铂、过氧化氢、卡铂、丙卡巴肼(procarbazine)、异环磷酰胺、博来霉素、普利霉素、泰素、反式铂、塞替派、奥沙利铂等，以及相似的作用型剂。在一些实施方案中，所述DNA损害化疗剂选自由顺铂、卡铂、喜树碱和依托泊苷组成的组。
其他可与本文所述活性化合物组合的合适化疗剂包括但不限于放射性分子、毒素(也称为细胞毒素或细胞毒性剂，其包括对细胞活力有害的任何剂)、含有化疗化合物的剂和脂质体或其他囊泡。一般的抗癌药剂包括：长春新碱
Figure BDA0004238079180002561
脂质体长春新碱
Figure BDA0004238079180002562
阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷、ara-C或/>
Figure BDA0004238079180002563
)、L-天门冬酰胺酶
Figure BDA0004238079180002564
或PEG-L-天门冬酰胺酶(天门冬酰胺酶或/>
Figure BDA0004238079180002565
)、依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷/>
Figure BDA0004238079180002566
6-巯基嘌呤(6-MP或/>
Figure BDA0004238079180002567
)、泼尼松和地塞米松(Decadron)。另外的合适化疗剂的实例包括但不限于5-氟尿嘧啶、达卡巴嗪、烷基化剂、氨茴霉素(AMC)、抗有丝分裂剂、顺式二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、二氨基二氯铂、蒽环霉素、抗生素、抗代谢物、天门冬酰胺酶、活BCG(膀胱内)、硫酸博来霉素、加利车霉素、松胞菌素B、更生霉素(以前名为放线菌素)、盐酸多柔比星、柠檬酸柔红霉素、地尼白介素、二羟基蒽二酮、多西他赛、盐酸多柔比星、大肠杆菌L-天门冬酰胺酶、欧文氏菌属L-天门冬酰胺酶、依托泊苷嗜橙菌因子、磷酸依托泊苷、盐酸吉西他滨、盐酸伊达比星、干扰素α-2b、盐酸伊立替康、美登木素生物碱(maytansinoid)、二氯甲基二乙胺盐酸盐、盐酸美法仑、光神霉素、丝裂霉素C、米托坦、含卡莫司汀植入物的聚苯丙生20、盐酸丙卡巴肼、链脲霉素、替尼泊苷、塞替派、盐酸托泊替康、戊柔比星、硫酸长春碱、硫酸长春新碱和酒石酸长春瑞滨。
用于与本公开一起使用的另外的细胞毒性化疗剂包括：表柔比星、白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)、泰索帝、埃坡霉素、他氟泊苷、维莫德吉(vismodegib)、氮杂胞苷(azacytidine)、多西氟尿啶(doxifluridine)、长春地辛和长春瑞滨。
在一些实施方案中，可与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症的化疗剂是DNA复合物结合剂。在一些实施方案中，所述化疗剂是微管蛋白结合剂。在一些实施方案中，所述化疗剂是烷基化剂。在一些实施方案中，所述化疗剂是硫醇盐烷基化剂。
可与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症的另外的化疗剂可包括2-甲氧基雌二醇或2ME2、非纳索特(finasunate)、埃达珠单抗(etaracizumab)(MEDI-522)、HLL1、huN901-DM1、阿替莫德(atiprimod)、甲磺酸沙奎那韦、利托那韦、甲磺酸奈芬纳韦(nelfinavir mesylate)、硫酸茚地那韦、普利肽新(plitidepsin)、P276-00、替匹法尼(tipifarnib)、来那度胺、沙利度胺、泊马度胺、辛伐他汀和塞来昔布。可用于本公开的化疗剂包括但不限于曲妥珠单抗
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帕妥珠单抗(PERJETATM)、拉帕替尼
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吉非替尼/>
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厄洛替尼/>
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西妥昔单抗/>
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帕尼单抗/>
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凡德他尼/>
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维莫非尼/>
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伏立司他/>
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罗米地辛/>
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贝沙罗汀/>
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阿利维A酸
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维A酸/>
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卡非佐米(KyprolisTM)、普拉曲沙/>
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贝伐珠单抗/>
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Ziv-阿柏西普/>
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索拉非尼/>
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舒尼替尼/>
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帕唑帕尼/>
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瑞戈非尼/>
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和卡博替尼(CometriqTM)。
可与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症的另外的化疗剂包括但不限于钙调磷酸酶抑制剂(例如环孢菌素)或子囊霉素(例如环孢菌素A
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)、FK506(他克莫司)、吡美莫司、mTOR抑制剂(例如雷帕霉素或其衍生物，例如西罗莫司/>
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依维莫司/>
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替西罗莫司、佐他莫司、比欧莫司-7、比欧莫司-9)、雷帕霉素类似物(例如地磷莫司(ridaforolimus))、campath 1H、S1P受体调节剂、双重mTORC1和mTORC2抑制剂(例如维妥色替(Vistusertib)(AZD2014))(例如芬戈莫德或其类似物)、抗IL-8抗体、霉酚酸或其盐(例如钠盐)或它们的前药(例如吗替麦考酚酯/>
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)、OKT3(Orthoclone
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)、泼尼松、/>
Figure BDA00042380791800025726
布喹那钠、OKT4、T10B9.A-3A、33B3.1、15-脱氧精胍菌素、曲培莫司、来氟米特/>
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抗-CD25、抗-IL2R、巴利昔单抗/>
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达克珠单抗/>
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咪唑立宾、地塞米松、ISAtx-247、SDZ ASM 981(吡美莫司、
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)、阿巴西普、贝拉西普、LFA3lg、依那西普(由ImmuneXcite以/>
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销售)、阿达木单抗/>
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英夫利西单抗/>
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抗-LFA-1抗体、那他珠单抗
Figure BDA0004238079180002582
恩莫单抗、加维莫单抗、戈利木单抗、抗胸腺细胞免疫球蛋白、西利珠单抗、阿来西普、依法珠单抗、颇得斯安(Pentasa)、美沙拉嗪、安萨科(asacol)、磷酸可待因、扑炎痛、芬布芬、萘普生、双氯芬酸、依托度酸、吲哚美辛、达沙替尼/>
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尼洛替尼/>
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波舒替尼/>
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甲磺酸伊马替尼/>
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和普纳替尼(ICLUSIGTM)氨磷汀、甲磺酸多拉司琼、屈大麻酚、红细胞生成素-α、羟乙膦酸盐、非格司亭、氟康唑、乙酸戈舍瑞林、短杆菌肽D、格拉司琼、亚叶酸钙、利多卡因、美司钠(Mesna)、盐酸昂丹司琼、盐酸匹鲁卡品(pilocarpine HCl)、卟吩姆钠、伐拉尼布、1-去氢睾酮、别嘌醇钠、倍他米松、磷酸钠和乙酸倍他米松、亚叶酸钙、缀合的雌激素、右雷佐生、二溴甘露醇、酯化雌激素、雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、乙炔雌二醇、氟他胺、亚叶酸、糖皮质激素、乙酸亮丙瑞林、盐酸左旋咪唑、乙酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、甲睾酮、尼鲁米特、乙酸奥曲肽、帕米膦酸二钠、普鲁卡因、普萘洛尔、睾内酯、丁卡因、枸橼酸托瑞米芬和沙格司亭。
在一些实施方案中，可与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症的化疗剂是雌激素受体配体，诸如他莫昔芬、雷洛昔芬、氟维司群、双炔失碳酯、巴多昔芬、溴帕雌三醇(broparestriol)、氯烯雌酚醚、柠檬酸克罗米芬、环芬尼、拉索昔芬、奥美昔芬或托瑞米芬；雄激素受体配体，诸如比卡鲁胺、恩扎鲁胺、阿帕他胺、乙酸环丙孕酮、乙酸氯地孕酮、螺内酯、坎利酮、屈螺酮、酮康唑、托吡鲁胺、乙酸阿比特龙或西咪替丁；芳香酶抑制剂，诸如来曲唑、阿那曲唑或依西美坦；抗炎药，如泼尼松；氧化酶抑制剂，诸如别嘌呤醇；抗癌抗体；抗癌单克隆抗体；针对CD40的抗体，诸如鲁卡木单抗(lucatumumab)或达西珠单抗(dacetuzumab)；针对CD20的抗体，如利妥昔单抗；结合CD52的抗体，如阿仑珠单抗；结合整联蛋白的抗体，诸如伏洛昔单抗或那他珠单抗；针对白介素-6受体的抗体，诸如托珠单抗；白介素-2模拟物，诸如阿地白介素；靶向IGF1的抗体，如芬妥木单抗(figitumumab)；靶向DR4的抗体，诸如马帕木单抗(mapatumumab)；靶向TRAIL-R2的抗体，诸如来沙木单抗(lexatumumab)或杜拉乐明(dulanermin)；融合蛋白，诸如阿塞西普；B细胞抑制剂，诸如阿塞西普；蛋白酶体抑制剂，诸如卡非佐米、硼替佐米或马里佐米(marizomib)；HSP90抑制剂，诸如坦螺旋霉素(tanespimycin)；HDAC抑制剂，诸如伏立司他(vorinostat)、贝林司他或帕比司他(panobinostat)；MAPK配体，诸如他美匹莫德(talmapimod)；PKC抑制剂，诸如恩扎妥林(enzastaurin)；HER2受体配体，诸如曲妥珠单抗、拉帕替尼或帕妥珠单抗；EGFR抑制剂，诸如吉非替尼、厄洛替尼、西妥昔单抗、帕尼单抗或凡德他尼；天然产物，诸如罗米地新；类视黄醇，诸如贝沙罗汀、维A酸或阿利维A酸；受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂，诸如舒尼替尼、瑞戈非尼或帕唑帕尼；或VEGF抑制剂，诸如ziv-阿柏西普、贝伐珠单抗或多韦替尼。
可与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症，特别是用于治疗雌性生殖系统的异常组织诸如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌或子宫癌的另外的化疗剂包括雌激素抑制剂，包括但不限于SERM(选择性雌激素受体调节剂)、SERD(选择性雌激素受体降解剂)、完全雌激素受体降解剂或另一种形式的部分或完全雌激素拮抗剂。部分抗雌激素药如雷洛昔芬和他莫昔芬保留一些雌激素样作用(包括对子宫生长的雌激素样刺激)，并且在一些情况下在乳腺癌进展期间还保留了实际上刺激肿瘤生长的雌激素样作用。
相比之下，氟维司群是一种完全抗雌激素药，对子宫没有雌激素样作用，并且对他莫昔芬耐药肿瘤有效。抗雌激素化合物的非限制性实例提供于转让给Astra Zeneca的WO2014/19176，转让给Olema Pharmaceuticals的WO2013/090921、WO 2014/203129、WO 2014/203132和US2013/0178445，和美国专利号9,078,871、8,853,423和8,703,810，以及US2015/0005286、WO 2014/205136和WO 2014/205138。
抗雌激素化合物的另外的非限制性实例包括：SERMS，诸如双炔失碳酯、巴多昔芬、溴帕雌三醇、柠檬酸克罗米芬、环芬尼、拉索昔芬、奥美昔芬、雷洛昔芬、他莫昔芬、托瑞米芬和氟维司群；芳香酶抑制剂，诸如氨鲁米特、睾内酯、阿那曲唑、依西美坦、法倔唑、福美坦和来曲唑；以及抗促性腺激素类，诸如亮丙瑞林、西曲瑞克、烯丙雌醇、乙酸氯地孕酮、乙酸地马孕酮、地屈孕酮、乙酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、乙酸诺美孕酮、乙酸炔诺酮、孕酮和螺内酯。
可与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症，特别是用于治疗雄性生殖系统的异常组织(诸如前列腺癌或睾丸癌)的另外的化疗剂包括但不限于雄激素(诸如睾酮)抑制剂，包括但不限于选择性雄激素受体调节剂、选择性雄激素受体降解剂、完全雄激素受体降解剂或另一种形式的部分或完全雄激素拮抗剂。
在一些实施方案中，所述前列腺癌或睾丸癌对雄激素耐药。抗雄激素化合物的非限制性实例提供于WO 2011/156518和美国专利号8,455,534和8,299,112中。抗雄激素化合物的另外的非限制性实例包括：乙酸氯地孕酮、螺内酯、坎利酮、屈螺酮、酮康唑、托匹芦胺、乙酸阿比特龙和西咪替丁。
可与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症的化疗剂可包括激酶抑制剂，包括但不限于磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosinekinase)(BTK)抑制剂或脾酪氨酸激酶(Syk)抑制剂，或者它们的组合。
PI3k抑制剂是众所周知的。PI3激酶抑制剂的实例包括但不限于渥曼青霉素(Wortmannin)、去甲氧绿胶霉素、哌立福辛、艾代拉利司(idelalisib)、匹克利司(pictilisib)、Palomid 529、ZSTK474、PWT33597、CUDC-907和AEZS-136、度维利司(duvelisib)、GS-9820、GDC-0032(2-[4-[2-(2-异丙基-5-甲基-1,2,4-三唑-3-基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-d][1,4]苯并氧氮杂环庚三烯-9-基]吡唑-1-基]-2-甲基丙酰胺)、MLN-1117((2R)-1-苯氧基-2-丁烷基氢(S)-甲基膦酸酯；或甲基(氧代){[(2R)-l-苯氧基-2-丁烷基]氧基}鏻))、BYL-719((2S)-N1-[4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基乙基)-4-吡啶基]-2-噻唑基]-1,2-吡咯烷二甲酰胺)、GSK2126458(2,4-二氟-N-{2-(甲基氧基)-5-[4-(4-哒嗪基)-6-喹啉基]-3-吡啶基}苯磺酰胺)、TGX-221((±)-7-甲基-2-(吗啉-4-基)-9-(1-苯基氨基乙基)-吡啶并[1,2-a]-嘧啶-4-酮)、GSK2636771(2-甲基-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苄基)-6-吗啉代-1H-苯并[d]咪唑-4-甲酸二盐酸盐)、KIN-193((R)-2-((1-(7-甲基-2-吗啉代-4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-9-基)乙基)氨基)苯甲酸)、TGR-1202/RP5264、GS-9820((S)-1-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-单羟基丙-1-酮)、GS-1101(5-氟-3-苯基-2-([S)]-1-[9H-嘌呤-6-基氨基]-丙基)-3H-喹唑啉-4-酮)、AMG-319、GSK-2269557、SAR245409(N-(4-(N-(3-((3,5-二甲氧基苯基)氨基)喹喔啉-2-基)氨磺酰基)苯基)-3-甲氧基-4甲基苯甲酰胺)、BAY80-6946(2-氨基-N-(7-甲氧基-8-(3-吗啉代丙氧基)-2,3-二氢咪唑并[1,2-c]喹唑(quinaz))、AS 252424(5-[1-[5-(4-氟-2-羟基-苯基)-呋喃-2-基]-甲-(Z)-亚基]-噻唑烷-2,4-二酮)、CZ 24832(5-(2-氨基-8-氟-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-N-叔丁基吡啶-3-磺酰胺)、布帕瑞利司(buparlisib)(5-[2,6-二(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺)、GDC-0941(2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)-1-哌嗪基]甲基]-4-(4-吗啉基)噻吩并[3,2-d]嘧啶)、GDC-0980((S)-1-(4-((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-羟基丙-1-酮(也称为RG7422))、SF1126((8S,14S,17S)-14-(羧甲基)-8-(3-胍基丙基)-17-(羟基甲基)-3,6,9,12,15-五氧代基-1-(4-(4-氧代基-8-苯基-4H-色烯-2-基)吗啉代-4-鎓)-2-氧杂-7,10,13,16-四氮杂十八烷-18-酸酯)、PF-05212384、(N-[4-[[4-(二甲氨基)-1-哌啶基]羰基]苯基]-N'-[4-(4,6-二-4-吗啉基-1,3,5-三嗪-2-基)苯基]脲)、LY3023414、BEZ235(2-甲基-2-{4-[3-甲基-2-氧代基-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]苯基}丙腈)、XL-765(N-(3-(N-(3-(3,5-二甲氧基苯基氨基)喹喔啉-2-基)氨磺酰基)苯基)-3-甲氧基-4-甲基苯甲酰胺)和GSK1059615(5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亚甲基]-2,4-噻唑烷二酮)、PX886([(3aR,6E,9S,9aR,10R,11aS)-6-[[双(丙-2-烯基)氨基]甲亚基]-5-羟基-9-(甲氧基甲基)-9a,11a-二甲基-1,4,7-三氧代-2,3,3a,9,10,ll-六氢茚并[4,5h]异色烯-10-基]乙酸酯(也称为索诺利司(sonolisib)))和WO2014/071109中描述的结构。
BTK抑制剂是众所周知的。BTK抑制剂的实例包括依鲁替尼(也称为PCI-32765)(ImbruvicaTM)(1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基-苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮)、基于二苯胺基嘧啶的抑制剂诸如AVL-101和AVL-291/292(N-(3-((5-氟-2-((4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺)(AvilaTherapeutics)(参见全文并入本文的美国专利公布号2011/0117073)、达沙替尼([N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基氨基)噻唑-5-甲酰胺]、LFM-A13(α-氰基-β-羟基-β-甲基-N-(2,5-i溴苯基)丙烯酰胺)、GDC-0834([R-N-(3-(6-(4-(1,4-二甲基-3-氧代基哌嗪-2-基)苯基氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺]、CGI-560 4-(叔丁基)-N-(3-(8-(苯基氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)苯基)苯甲酰胺、CGI-1746(4-(叔丁基)-N-(2-甲基-3-(4-甲基-6-((4-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)-5-氧代基-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基)苯甲酰胺)、CNX-774(4-(4-((4-((3-丙烯酰胺基苯基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺)、CTA056(7-苄基-1-(3-(哌啶-1-基)丙基)-2-(4-(吡啶-4-基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-g]喹喔啉-6(5H)-酮)、GDC-0834((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基)氨基)-4-甲基-5-氧代基-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺)、GDC-0837((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-氧代基哌嗪-2-基)苯基)氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺)、HM-71224、ACP-196、ONO-4059(Ono Pharmaceuticals)、PRT062607(4-((3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)氨基)-2-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐)、QL-47(1-(1-丙烯酰基吲哚啉-6-基)-9-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[h][1,6]萘啶-2(1H)-酮)和RN486(6-环丙基-8-氟-2-(2-羟基甲基-3-{1-甲基-5-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-2-基氨基]-6-氧代-1,6-二氢-吡啶-3-基}-苯基)-2H-异喹啉-1-酮)、BGB-3111以及能够抑制BTK活性的其他分子，例如Akinleye等人，Journal of Hematology&Oncology,2013,6:59中公开的那些BTK抑制剂，该文献的全部内容以引用的方式并入本文。
Syk抑制剂是众所周知的，并且包括例如赛度替尼(Cerdulatinib)(4-(环丙基氨基)-2-((4-(4-(乙基磺酰基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺)、恩托替尼(entospletinib)(6-(1H-吲唑-6-基)-N-(4-吗啉代苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺福他替尼fostamatinib)([6-({5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基]-4-嘧啶基}氨基)-2,2-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-4H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-4-基]甲基二氢磷酸酯)、福他替尼二钠盐((6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,2-二甲基-3-氧代基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-4(3H)-基)甲基磷酸钠)、BAY61-3606(2-(7-(3,4-二甲氧基苯基)-咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基氨基)-烟酰胺盐酸盐)、RO9021(6-[(1R,2S)-2-氨基-环己基氨基]-4-(5,6-二甲基-吡啶-2-基氨基)-哒嗪-3-甲酸酰胺)、伊马替尼(Gleevec；4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-N-(4-甲基-3-{[4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]氨基}苯基)苯甲酰胺)、星孢菌素、GSK143(2-(((3R,4R)-3-氨基四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-(对甲苯基氨基)嘧啶-5-甲酰胺)、PP2(1-(叔丁基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)、PRT-060318(2-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-4-(间甲苯基氨基)嘧啶-5-甲酰胺)、PRT-062607(4-((3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)氨基)-2-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐)、R112(3,3'-((5-氟嘧啶-2,4-二基)双(氮杂烷二基))联苯酚)、R348(3-乙基-4-甲基吡啶)、R406(6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,2-二甲基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮)、YM193306(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643)、7-氮杂吲哚、白皮杉醇(piceatannol)、ER-27319(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643(其以其整体并入本文))、化合物D(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643(其以其整体并入本文))、PRT060318(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643(其以其整体并入本文))、木犀草素(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643(其以其整体并入本文))、芹菜素(apigenin)(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643(其以其整体并入本文))、槲皮素(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643(其以其整体并入本文))、漆黄素(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643(其以其整体并入本文))、杨梅黄酮(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643(其以其整体并入本文))、桑黄素(morin)(参见Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J.Med.Chem.2012,55,3614-3643(其以其整体并入本文))。
可与本文所述的活性化合物组合用于治疗癌症的化疗剂也可为B-细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白抑制剂。BCL-2抑制剂是本领域中已知的，并且包括例如ABT-199(4-[4-[[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基环己-1-烯-1-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[[3-硝基-4-[[(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基]氨基]苯基]磺酰基]-2-[(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基]苯甲酰胺)、ABT-737(4-[4-[[2-(4-氯苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[4-[[(2R)-4-(二甲氨基)-1-苯基硫烷基丁烷-2-基]氨基]-3-硝基苯基]磺酰基苯甲酰胺)、ABT-263((R)-4-(4-((4'-氯-4,4-二甲基-3,4,5,6-四氢-[1,1'-联苯基]-2-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-((4-吗啉代-1-(苯硫基)丁烷-2-基)氨基)-3((三氟甲基)磺酰基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺)、GX15-070(甲磺酸奥巴克拉，(2Z)-2-[(5Z)-5-[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)甲亚基]-4-甲氧基吡咯-2-亚基]吲哚；甲磺酸)))、2-甲氧基-抗霉素A3、YC137(4-(4,9-二氧代-4,9-二氢萘并[2,3-d]噻唑-2-基氨基)-苯基酯)、pogosin、2-氨基-6-溴-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基)-4H-色烯-3-甲酸乙酯、尼罗替尼-d3、TW-37(N-[4-[[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]磺酰基]苯基]-2,3,4-三羟基-5-[[2-(1-甲基乙基)苯基]甲基]苯甲酰胺)、阿朴棉子酚酮(Apogossypolone)(ApoG2)或G3139(奥利美生(Oblimersen))。
可与本文所述的活性化合物组合用于本文所考虑的方法用于治疗癌症的另外的化疗剂包括但不限于咪达唑仑、MEK抑制剂、RAS抑制剂、ERK抑制剂、ALK抑制剂、HSP抑制剂(例如，HSP70和HSP 90抑制剂或它们的组合)、RAF抑制剂、凋亡化合物、拓扑异构酶抑制剂，AKT抑制剂(包括但不限于MK-2206、GSK690693、哌立福辛(Perifosine)、(KRX-0401)、GDC-0068、曲西立滨、AZD5363、和厚朴酚(Honokiol)、PF-04691502和米替福新)，或FLT-3抑制剂(包括但不限于P406、多韦替尼、奎扎替尼(AC220)、安姆伐替尼(Amuvatinib)(MP-470)、坦度替尼(MLN518)、ENMD-2076和KW-2449)，或它们的组合。MEK抑制剂的实例包括但不限于曲美替尼/GSKl120212(N-(3-{3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H-基}苯基)乙酰胺)、司美替尼(6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-N-(2-羟基乙氧基)-3-甲基苯并咪唑-5-甲酰胺)、匹马色替(pimasertib)/AS703026/MSC1935369((S)-N-(2,3-二羟基丙基)-3-((2-氟-4-碘苯基)氨基)异烟酰胺)、XL-518/GDC-0973(1-({3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]苯基}羰基)-3-[(2S)-哌啶-2-基]氮杂环丁烷-3-醇)、瑞法替尼/BAY869766/RDEAl19(N-(3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-6-甲氧基苯基)-1-(2,3-二羟基丙基)环丙烷-1-磺酰胺)、PD-0325901(N-[(2R)-2,3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-苯甲酰胺)、TAK733((R)-3-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮)、MEK162/ARRY438162(5-[(4-溴-2-氟苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6甲酰胺)、R05126766(3-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)-4-吡啶基]甲基]-4-甲基-7-嘧啶-2-基氧基色烯-2-酮)、WX-554、R04987655/CH4987655(3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-5-((3-氧代-1,2-噁嗪烷-2-基)甲基)苯甲酰胺)或AZD8330(2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-1,5-二甲基-6-氧代基-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺)。RAS抑制剂的实例包括但不限于Reolysin和siG12DLODER。ALK抑制剂的实例包括但不限于克唑替尼、AP26113和LDK378。HSP抑制剂包括但不限于格尔德霉素或17-N-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)和根赤壳菌素(Radicicol)。
已知的ERK抑制剂包括SCH772984(Merck/Schering-Plough)、VTX-11e(Vertex)、DEL-22379、优立替尼(Ulixertinib)(BVD-523、VRT752271)、GDC-0994、FR 180204、XMD8-92和ERK5-IN-1。
Raf抑制剂是众所周知的，并且包括例如维莫非尼(N-[3-[[5-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]羰基]-2,4-二氟苯基]-1-丙烷磺酰胺)、甲苯磺酸索拉非尼(4-[4-[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基氨基]苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；4-甲基苯磺酸盐/酯)、AZ628(3-(2-氰基丙烷-2-基)-N-(4-甲基-3-(3-甲基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基氨基)苯基)苯甲酰胺)、NVP-BHG712(4-甲基-3-(1-甲基-6-(吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)苯甲酰胺)、RAF-265(1-甲基-5-[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]吡啶-4-基]氧基-N-[4-(三氟甲基)苯基]苯并咪唑并-2-胺)、2-Bromoaldisine(2-溴-6,7-二氢-1H,5H-吡咯并[2,3-c]氮杂环庚三烯-4,8-二酮)、Raf激酶抑制剂IV(2-氯-5-(2-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-咪唑-4-基)苯酚)和索拉非尼N-氧化物(4-[4-[[[[4-氯-3(三氟甲基)苯基]氨基]羰基]氨基]苯氧基]-N-甲基-2吡啶甲酰胺1-氧化物)。
可用于本公开的已知拓扑异构酶I抑制剂包括(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮单盐酸盐(托泊替康(topotecan))、(S)-4-乙基-4-羟基-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14-(4H,12H)-二酮(喜树碱)、(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-1,2,3,9,12,15-六氢-9-羟基-4-甲基-10H,13H-苯并(de)吡喃并(3',4':6,7)吲哚嗪并(1,2-b)喹啉-10,13-二酮(依沙替康(exatecan))、(7-(4-甲基哌嗪子基亚甲基)-10,11-亚乙基二氧基-20(S)-喜树碱(勒托替康)或(S)-4,11-二乙基-3,4,12,14-四氢-4-羟基-3,14-二氧代1H-吡喃并[3’,4’:6,7]-吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9-基-[1,4’联哌啶]-1’-甲酸酯(伊立替康)、(R)-5-乙基-9,10-二氟-5-羟基-4,5-二氢氧杂环庚三烯并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,15(1H,13H)-二酮(二氟替康)、(4S)-11-((E)-((1,1-二甲基乙氧基)亚胺基)甲基)-4-乙基-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并(3',4':6,7)吲哚嗪并(1,2-b)喹啉-3,14(4H)-二酮(吉马替康)、(S)-8-乙基-8-羟基-15-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-11,14-二氢-2H-[1,4]二噁英并[2,3-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(3H,8H)-二酮(勒托替康)、(4S)-4-乙基-4-羟基-11-[2-[(1-甲基乙基)氨基]乙基]-1H-吡喃并[3,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮(贝洛替康)、6-((1,3-二羟基丙烷-2-基)氨基)-2,10-二羟基-12-((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)-12,13-二氢-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7(6H)-二酮(艾特咔林(edotecarin))、8,9-二甲氧基-5-(2-N,N-二甲氨基乙基)-2,3-亚甲二氧基-5H-二苯并(c,h)(1,6)萘啶-6-酮(topovale)、苯并[6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11(13H)-酮(rosettacin)、(S)-4-乙基-4-羟基-11-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮(可司替康)、四{(4S)-9-[([1,4'-联哌啶基]-1'-羰基)氧基]-4,11-二乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基}N,N',N”,N”'-{甲烷四基四[亚甲基聚(氧乙烯)氧基(1-氧代基乙烯)]}四甘氨酸酯四盐酸盐(聚乙二醇伊立替康(etirinotecanpegol))、10-羟基-喜树碱(HOCPT)、9-硝基喜树碱(卢比替康)、SN38(7-乙基-10-羟基喜树碱)和10-羟基-9-硝基喜树碱(CPT109)、(R)-9-氯-5-乙基-5-羟基-10-甲基-12-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-4,5-二氢氧杂环庚三烯并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,15(1H,13H)-二酮(依洛替康(elmotecan))。
C5抑制剂组合
本文提供了用于治疗受试者中补体介导的病症的方法，所述方法包括将有效量的C5抑制剂与有效量的如本文所述的活性化合物组合或交替施用给受试者。
C5抑制剂是本领域已知的。在一些实施方案中，所述C5抑制剂是靶向C5的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述C5抑制剂是依库珠单抗(
Figure BDA0004238079180002681
Alexion Pharmaceuticals,Boston,MA，参见例如美国专利号9,352,035)或其生物仿制药分子。在一些实施方案中，所述C5抑制剂是雷夫利珠单抗(/>
Figure BDA0004238079180002682
Alexion Pharmaceuticals,Boston,MA，参见例如美国专利号9,371,377；9,079,949和9,633,574)或其生物仿制药。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂可以是但不限于：重组人微型抗体，例如
Figure BDA0004238079180002683
(单克隆抗体，Adienne Pharma和Biotech,Bergamo,Italy；参见美国专利号7,999,081)；coversin(nomacopan,Akari Therapeutics,London,England；参见例如Penabad等人Lupus,2012,23(12):1324-6)、LFG316(单克隆抗体，Novartis,Basel,Switzerland和Morphosys,Planegg,Germany；参见美国专利号8,241,628和8,883,158)；ARC-1905(聚乙二醇化的RNA适体，Ophthotech,Princeton,NJ和New York,NY；参见Keefe等人，NatureReviews Drug Discovery,9,537-550)、RA101348和齐鲁考普(大环肽，RaPharmaceuticals,Cambridge,MA)、SOBI002(亲和体(affibody)，Swedish OrphanBiovitrum,Stockholm,Sweden)、西地西兰(Si-RNA,Alnylam Pharmaceuticals,Cambridge,MA)、ARC1005(适体，Novo Nordisk,Bagsvaerd,Denmark)、SOMAmers(适体，SomaLogic,Boulder,Co)、SSL7(细菌蛋白毒素，参见，例如Laursen等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,107(8):3681-6)、MEDI7814(单克隆抗体，MedImmune,Gaithersburg,MD)、金精三羧酸、金精三羧酸衍生物(Aurin Biotech,Vancouver,BC，参见美国专利申请公布2013/003592)、珂罗利单抗(RG6107/SKY59；抗-C5再循环抗体，RochePharmaceuticals,Basel,Switzerland)；ALXN1210和ALXN5500(单克隆抗体，AlexionPharmaceuticals,Boston,MA)；TT30(融合蛋白，Alexion Pharmaceuticals,Boston,MA)；REGN3918(单克隆抗体，Regeneron,Tarrytown,NY)；ABP959(依库珠单抗生物仿制药，Amgen,Thousand Oaks,CA)；BCD-148(Biocad)；以及SB-12(Samsung Bioepis Co.,Ltd.)；或它们的组合。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是重组人微型抗体，例如
Figure BDA0004238079180002691
是由Adienne Pharma and Biotech开发的完全人源重组抗体C5。/>
Figure BDA0004238079180002692
描述于美国专利号7,999,081中。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是coversin。Coversin是一种重组蛋白，该重组蛋白源自在毛白钝缘蜱虱蝇(Ornithodoros moubata tick)的唾液中发现的蛋白质，该蛋白质目前由Akari Therapeutics开发为重组蛋白(也称为nomacopan)。Coversin描述于Penabad等人Lupus2012,23(12):1324-6中。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是特度鲁单抗(Tesidolumab)/LFG316。特度鲁单抗是Novartis和Morphosys开发的单克隆抗体。特度鲁单抗描述于美国专利号8,241,628和8,883,158中。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是ARC-1905。ARC-1905是Ophthotech开发的聚乙二醇化的RNA适体。ARC-1905描述于Keefe等人Nature Reviews Drug Discovery,9:537-550中。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是RA101348。RA101348是Ra Pharmaceuticals开发的大环肽。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是RA101495。RA101495(也称为齐鲁考普)是RaPharmaceuticals开发的大环肽。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是SOBI002。SOBI002是Swedish OrphanBiovitrum开发的亲和体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是ARC1005。ARC1005是Novo Nordisk开发的适体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是C5的SOMAmer。SOMAmer是SomaLogic开发的适体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是SSL7。SSL7是Laursen等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,107(8):3681-6中描述的细菌蛋白质毒素。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是MEDI7814。MEDI7814是MedImmune开发的单克隆抗体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是金精三羧酸。在另一个实施方案中，所述C5抑制剂是金精三羧酸衍生物。这些金精衍生物由Aurin Biotech开发，并在美国专利申请公布号2013/003592中进一步描述)。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是RG6107/SKY59。RG6107/SKY59是由RochePharmaceuticals开发的抗C5循环抗体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是雷夫利珠单抗
Figure BDA0004238079180002701
在另一个实施方案中，所述C5抑制剂是ALXN5500。雷夫利珠单抗和ALXN5500是AlexionPharmaceuticals开发的单克隆抗体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是TT30。TT30是Alexion Pharmaceuticals许可的融合蛋白。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是ABP959。ABP959是Amgen开发的依库珠单抗生物仿制药单克隆抗体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是抗-C5 siRNA西地西兰。抗C5 siRNA是由Alnylam Pharmaceuticals开发的。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是
Figure BDA0004238079180002711
是Adienne Pharma开发的抗体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是avacincaptad
Figure BDA0004238079180002712
Avacincaptad聚乙二醇是Opthotech开发的适体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是SOBI005。SOBI005是Swedish OrphanBiovitrum开发的蛋白质。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是ISU305。ISU305是ISU ABXIS开发的单克隆抗体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是REGN3918。REGN3918是Regeneron开发的单克隆抗体。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是BCD-148。BCD是Biocad开发的依库珠单抗生物仿制药。
在一些实施方案中，所述C5抑制剂是SB-12。SB-12是Samsung Bioepis Co.,Ltd.开发的依库珠单抗生物仿制药。
C3抑制剂组合
本文提供了用于治疗受试者中补体介导的病症的方法，所述方法包括将有效量的C3抑制剂与有效量的本文所述的活性化合物组合或交替施用给受试者。
C3抑制剂是本领域中已知的。在一些实施方案中，本公开的化合物是与坎普他汀和/或坎普他汀类似物组合或交替施用。坎普他汀和坎普他汀类似物是已知的并且被发现是有用的C3抑制剂，参见美国专利号9,056,076、8,168,584、9,421,240、9,291,622、8,580,735、9371365、9,169,307、8,946,145、7,989,589、7,888,323、6,319,897以及美国专利申请公布号2016/0060297、2016/0015810、2016/0215022、2016/0215020、2016/0194359、2014/0371133、2014/0323407、2014/0050739、2013/0324482和2015/0158915。
在一些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有氨基酸序列ICVVQDWGHHCRT(SEQ.ID.NO.1)。
在另一个实施方案中，所述C3抑制剂是坎普他汀类似物。在一些实施方案中，所述坎普他汀类似物是序列Ac-ICV(1-mW)QDWGAHRCT(SEQ.ID.NO.2)的4(1MeW)/APL-1，其中Ac是乙酰基，并且1-mW是1-甲基色氨酸。
在另一个实施方案中，所述坎普他汀类似物是Cp40/AMY-101，其具有氨基酸序列yICV(1mW)QDW-Sar-AHRC-mI(SEQ.ID.NO.3)，其中y是D-酪氨酸，1mW是1-甲基色氨酸，Sar是肌氨酸，并且mI是N-甲基异亮氨酸。
在又一实施方案中，所述坎普他汀类似物是PEG-Cp40，其具有氨基酸序列PEG-yICV(1mW)QDW-Sar-AHRC-mI(SEQ.ID.NO.4)，其中PEG是聚乙二醇(40kDa)，y是D-酪氨酸，1mW是1-甲基色氨酸，Sar是肌氨酸，并且mI是N-甲基异亮氨酸。
在又一实施方案中，所述坎普他汀类似物是4(1MeW)POT-4。4(1MeW)POT-4是由Potentia开发的。
在又一实施方案中，所述坎普他汀类似物是AMY-201。AMY-201是由AmyndasPharmaceuticals开发的。
在一些实施方案中，本公开的化合物可以与C3抑制剂组合，所述C3抑制剂包含但不限于：H17(单克隆抗体，EluSys Therapeutics,Pine Brook,NJ)、米考西普(基于CR1的蛋白)、sCR1(基于CR1的蛋白，Celldex,Hampton,NJ)、TT32(基于CR-1的蛋白，AlexionPharmaceuticals,Boston,MA)、HC-1496(重组肽)、CB 2782(酶，Catalyst Biosciences,South San Francisco,CA)、APL-2(聚乙二醇化的合成环肽，Apellis Pharmaceuticals,Crestwood,KY)或它们的组合。
在一些实施方案中，所述C3抑制剂是H17。H17是EluSys Therapeutics正在开发的人源化单克隆抗体。H17描述于Paixao-Cavalcante等人J.Immunol.2014,192(10):4844-4851中。
在一些实施方案中，所述C3抑制剂是米考西普。米考西普是由InflazymePharmaceuticals开发的基于CR1的蛋白。
在一些实施方案中，所述C3抑制剂是sCR1。sCR1是由Celldex开发的CR1蛋白的可溶性形式。
在一些实施方案中，所述C3抑制剂是TT32。TT32是Alexion Pharmaceuticals许可的基于CR-1的蛋白。
在一些实施方案中，所述C3抑制剂是HC-1496。HC-1496是InCode开发的重组肽。
在一些实施方案中，所述C3抑制剂是CB 2782。CB 2782是源自CatalystBiosciences开发的人膜型丝氨酸蛋白酶1(MTSP-1)的新型蛋白酶。
在一些实施方案中，所述C3抑制剂是APL-2。APL-2是Apellis Pharmaceuticals开发的APL-1的聚乙二醇化型式。
补体因子B(CFB)抑制剂组合
本文提供了用于治疗补体介导的病症的方法，所述方法包括将CFB抑制剂与本公开的活性化合物组合或交替施用。CFB抑制剂是本领域已知的。
在一些实施方案中，本公开的化合物可与CFB抑制剂组合，所述CFB抑制剂包括但不限于：抗-FB SiRNA(Alnylam Pharmaceuticals,Cambridge,MA)；TA106(单克隆抗体，Alexion Pharmaceuticals,Boston,MA)；LNP023(小分子，Novartis,Basel,Switzerland)；SOMAmer(适体，SomaLogic,Boulder,CO)；拜卡西奥单抗(Bikaciomab)(NovelmedTherapeutics,Cleveland,OH)；complin(参见，Kadam等人，J.Immunol.2010,DOI:10.409/jimmunol.10000200)；Ionis-FB-LRx(缀合有配体的反义药物，Ionis Pharmaceuticals,Carlsbad,CA)或它们的组合。
在另一个实施方案中，可与本公开的化合物组合的CFB抑制剂包括在PCT/US17/39587中公开的那些。
在另一个实施方案中，可与如本文所述的本公开的化合物组合的CFB抑制剂包括在PCT/US17/014458中公开的那些。
在另一个实施方案中，可与如本文所述的本公开的化合物组合的CFB抑制剂包括在美国专利申请公开.第2016/0024079号；PCT国际申请WO 2013/192345；PCT国际申请WO2013/164802；PCT国际申请WO 2015/066241；PCT国际申请WO 2015/009616(均转让给Novartis AG)中公开的那些。
在一些实施方案中，所述CFB抑制剂是
Figure BDA0004238079180002741
在另一个实施方案中，所述CFB抑制剂是
Figure BDA0004238079180002751
在另一个实施方案中，所述CFB抑制剂是
Figure BDA0004238079180002752
在一些实施方案中，所述CFB抑制剂是抗FB siRNA。抗FB siRNA是AlnylamPharmaceuticals开发的。
在一些实施方案中，所述CFB抑制剂是TA106。TA106是Alexion Pharmaceuticals开发的单克隆抗体。
在一些实施方案中，所述CFB抑制剂是LNP023。LNP023是Novartis开发的CFB的小分子抑制剂。
在一些实施方案中，所述CFB抑制剂是complin。Complin是在Kadam等人J.Immunol.2010 184(12):7116-24中描述的肽抑制剂。
在一些实施方案中，所述CFB抑制剂是IONIS-FB-LRx。IONIS-FB-LRx是IonisPharmaceuticals开发的。
补体因子D(CFD)抑制剂组合
本文提供了用于治疗补体介导的病症的方法，所述方法包括将CFD抑制剂与本公开的活性化合物组合或交替施用。
在一些实施方案中，fD抑制剂可如BioCryst Pharmaceuticals在美国专利号6,653,340(发明名称为“Compounds useful in the complement,coagulate andkallikrein pathways and methods for their preparation”)中所述的那样使用，该专利描述了作为因子D的强效抑制剂的稠合双环化合物。
在一些实施方案中，fD抑制剂可如Novartis在PCT专利公布号WO 2012/093101(发明名称为“Indole compounds or analogues thereof useful for the treatment ofage-related macular degeneration”)中所述的那样使用。在另一个实施方案中，fD抑制剂可如Novartis PCT专利公布号WO2013/164802、WO2013/192345、WO2014/002051、WO2014/002052、WO2014/002053、WO2014/002054、WO2014/002057、WO2014/002058、WO2014/002059、WO2014/005150、WO2014/009833、WO2014/143638、WO2015/009616、WO2015/009977或WO2015/066241中所述的那样使用。
在一些实施方案中，fD抑制剂可如Bristol-Myers Squibb在PCT专利公布号WO2004/045518(发明名称为“Open chain prolyl urea-related modulators ofandrogen receptor function”)中所述的那样使用。
在一些实施方案中，fD抑制剂可如Japan Tobacco Inc.在PCT专利公布号WO1999/048492(发明名称为“Amide derivatives and nociceptin antagonists”)中所述的那样使用。
在一些实施方案中，fD抑制剂可如Ferring B.V.和Yamanouchi PharmaceuticalCo.LTD.在PCT专利公布号WO 1993/020099(发明名称为“CCK and/or gastrin receptorligands”)中所述的那样使用。
在一些实施方案中，所述fD抑制剂是如Genentech/Roche开发的单克隆抗体FCFD4515S。
在一些实施方案中，所述fD抑制剂是如Torri Pharmaceuticals开发的萘莫司他(FUT-175,Futhan)。
在一些实施方案中，所述fD抑制剂是如SomaLogic开发的针对因子D的适体(SOMAmer)。
在一些实施方案中，所述fD抑制剂是如Roche开发的单克隆抗体兰帕利珠单抗。
在一些实施方案中，所述fD抑制剂是如Vitrisa Therapeutics开发的针对因子D的适体。
在一些实施方案中，所述fD抑制剂是如Ra Pharmaceuticals开发的fD抑制剂。
在一些实施方案中，所述fD抑制剂包括在PCT/US17/014458中公开的药物。
在一些实施方案中，fD抑制剂可如Alexion Pharmaceuticals在PCT专利公布号WO1995/029697(发明名称为“Methods and compositions for the treatment ofglomerulonephritis and other inflammatory diseases”)中所述的那样使用。
在一些实施方案中，与本公开的化合物组合使用的fD抑制剂是在由AchillionPharmaceuticals在WO2015/130784；WO2015/130795；WO2015/130806；WO2015/130830；WO2015/130838；WO2015/130842；WO2015/130845；WO2015/130854；WO2016/044243；WO2017/035348；WO2017/035349；WO2017/035351；WO2017/035352；WO2017/035353；WO2017/035355；WO2017/035357；WO2017/035360；WO2017/035361；WO2017/035362；WO2017/035401；WO2017/035405；WO2017/035408；WO2017/035409；WO2017/035411；WO2017/035413；WO2017/035415；WO2017/035417；WO2017/035418；WO2018/160889；WO2018/160891；WO2018/160892；WO2019/028284；WO2019/028284；WO2019/227102；WO2020/041301；WO2020/051532或WO2020/051538中所述的那些中选择的。
在一些实施方案中，所述fD抑制剂是下式的化合物：
Figure BDA0004238079180002781
或其药学上可接受的盐。
其中：
Q是CH或N。
XF选自N和CH；
每个R1F独立地选自氢、C1-C3烷基(例如，甲基)和卤素(例如，溴、氯或氟)；
R2F选自氢和C1-C3烷基(例如，甲基)；
R3F选自C1-C3烷基(例如，甲基)、C1-C3卤代烷基和卤素(例如，溴、氯或氟)；
R4F选自氢、C1-C3烷基(例如，甲基)和卤素(例如，溴、氯或氟)；
R5F选自氢、C1-C3烷基(例如，甲基)、卤素(例如，溴、氯或氟)、-烷基-OH和氰基；以及
R32F选自
Figure BDA0004238079180002791
在一些实施方案中，所述fD抑制剂选自：
Figure BDA0004238079180002792
/>
Figure BDA0004238079180002801
/>
Figure BDA0004238079180002811
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述fD抑制剂选自：
Figure BDA0004238079180002821
或其药学上可接受的盐。
补体成分的泛抑制剂(Pan-inhibitor)
本文提供了用于治疗补体介导的病症的方法，所述方法包括将补体成分的泛抑制剂与本公开的化合物组合或交替施用。补体成分的泛抑制剂是本领域已知的。在一些实施方案中，所述抑制剂是FUT-175。
用于预防性或伴随性抗细菌疗法的组合
在本公开的一个方面，提供了用于治疗有需要的宿主的方法，所述方法包括在施用活性化合物或其盐或组合物治疗本文所述的病症中的任一种病症之前施用有效量的预防性抗细菌疫苗。在本公开的另一个方面，提供了用于治疗有需要的宿主的方法，所述方法包括在施用活性化合物或其盐或组合物治疗本文所述的病症中的任一种病症之前施用有效量的预防性抗细菌药物，诸如制药药物。在本公开的一个方面，提供了用于治疗有需要的宿主的方法，所述方法包括在施用活性化合物或其盐或组合物治疗本文所述的病症中的任一种病症之后施用有效量的抗细菌疫苗。在本公开的另一个方面，提供了用于治疗有需要的宿主的方法，所述方法包括在施用活性化合物或其盐或组合物治疗本文所述的病症中的任一种病症之后施用有效量的抗细菌药物，诸如制药药物。在一个实施方案中，所述病症是PNH、C3G或aHUS。在一个实施方案中，所述宿主已接受器官或其他组织或生物流体移植。在一个实施方案中，所述宿主还被施用了C5抑制剂，例如依库珠单抗。
在本公开的一个方面，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物是在预防性地施用对抗新感染的疫苗之后被伴随地施用给宿主受试者。在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症选自由以下组成的组：自身免疫性疾病、癌症、血液疾病、感染性疾病、炎性疾病、缺血再灌注损伤、神经变性疾病、神经变性病症、眼部疾病、肾脏疾病、移植物排斥、血管疾病和血管炎疾病。在一个实施方案中，所述补体介导的病症是PNH、C3G或aHUS。在一个实施方案中，所述受试者已接受器官或其他组织或生物流体移植。在一个实施方案中，所述受试者还被施用了依库珠单抗。
在本公开的一个方面，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物是在预防性地施用对抗细菌感染的疫苗时被伴随地施用给受试者。在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症选自由以下组成的组：自身免疫性疾病、癌症、血液疾病、感染性疾病、炎性疾病、缺血再灌注损伤、神经变性疾病、神经变性病症、眼部疾病、肾脏疾病、移植物排斥、血管疾病和血管炎疾病。在一个实施方案中，所述补体介导的病症是PNH、C3G或aHUS。在一个实施方案中，所述受试者已接受器官或其他组织或生物流体移植。在一个实施方案中，所述受试者还被施用了依库珠单抗。
在本公开的一个方面，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物被施用给受试者，并且在所述化合物或盐的施用时段期间，向所述受试者施用对抗细菌感染的疫苗。在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症选自由以下组成的组：自身免疫性疾病、癌症、血液疾病、感染性疾病、炎性疾病、缺血再灌注损伤、神经变性疾病、神经变性病症、眼部疾病、肾脏疾病、移植物排斥、血管疾病和血管炎疾病。在一个实施方案中，所述补体介导的病症是PNH、C3G或aHUS。在一个实施方案中，所述受试者已接受器官或其他组织或生物流体移植。在一个实施方案中，所述受试者还被施用了依库珠单抗。
在本公开的一个方面，在活性化合物施用持续时间内如本文所述的活性化合物或其盐或组合物与抗生素化合物组合施用给受试者。在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症选自由以下组成的组：自身免疫性疾病、癌症、血液疾病、感染性疾病、炎性疾病、缺血再灌注损伤、神经变性疾病、神经变性病症、眼部疾病、肾脏疾病、移植物排斥、血管疾病和血管炎疾病。在一个实施方案中，所述补体介导的病症是PNH、C3G或aHUS。在一个实施方案中，所述受试者已接受器官或其他组织或生物流体移植。在一个实施方案中，所述受试者还被施用了依库珠单抗。
在本公开的一个方面，如本文所述的活性化合物或其盐或组合物是在预防性地施用对抗新感染的疫苗之后，并且在活性化合物施用持续时间内与抗生素化合物组合地被施用给受试者。在一些实施方案中，所述补体介导的疾病或病症选自由以下组成的组：自身免疫性疾病、癌症、血液疾病、感染性疾病、炎性疾病、缺血再灌注损伤、神经变性疾病、神经变性病症、眼部疾病、肾脏疾病、移植物排斥、血管疾病和血管炎疾病。在一个实施方案中，所述补体介导的病症是PNH或aHUS。在一个实施方案中，所述受试者已接受器官或其他组织或生物流体移植。在一个实施方案中，所述受试者还被施用了依库珠单抗。在一个实施方案中，所述受试者在接受如本文所述的活性化合物或其盐或组合物之前被接种了对抗由细菌脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)引起的细菌感染的疫苗。在一个实施方案中，所述受试者被接种了对抗由细菌流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)引起的细菌感染的疫苗。在一个实施方案中，所述流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)是流感嗜血杆菌血清型B(Hib)。
在一个实施方案中，所述受试者被接种了对抗由肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)引起的细菌感染的疫苗。
在一个实施方案中，所述受试者被接种了对抗由细菌脑膜炎奈瑟球菌、流感嗜血杆菌或肺炎链球菌，或者脑膜炎奈瑟球菌、流感嗜血杆菌或肺炎链球菌中一者或多者的组合引起的细菌感染的疫苗。
在一个实施方案中，所述受试者被接种了对抗由细菌脑膜炎奈瑟球菌、流感嗜血杆菌和肺炎链球菌引起的细菌感染的疫苗。
在其他实施方案中，所述受试者被接种了对抗由选自革兰氏阴性菌的细菌引起的细菌感染的疫苗。
在一个实施方案中，所述受试者被接种了对抗由选自革兰氏阳性菌的细菌引起的细菌感染的疫苗。
在一个实施方案中，所述受试者被接种了对抗由以下细菌引起的细菌感染的疫苗：脑膜炎奈瑟球菌、流感嗜血杆菌或肺炎链球菌，或者脑膜炎奈瑟球菌、流感嗜血杆菌或肺炎链球菌中一者或多者的组合，以及(但不限于)炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、百日咳博代氏杆菌(Bordetella pertussis)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheria)、伯内特考克斯体(Coxiella burnetii)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、伤寒沙门菌(Salmonella typhi)、霍乱弧菌(Vibriocholerae)、嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)、尤因螨埃利希体(Ehrlichia ewingii)、沙费埃里希体(Ehrlichia chaffeensis)、犬埃里希体(Ehrlichiacanis)、腺热新立克次体(Neorickettsia sennetsu)、麻风分枝杆菌(Mycobacteriumleprae)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、梅罗尼疏螺旋体(Borrelia mayonii)、阿氏疏螺旋体(Borrelia afzelii)、嘎氏疏螺旋体(Borrelia garinii)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、梅毒密螺旋体(Treponema pallidum)、土拉热弗朗西丝菌(Francisella tularensis)和鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)中的一者或多者。
在一个实施方案中，所述受试者被接种了选自(但不限于)以下的一种或多种疫苗：伤寒活疫苗(Vivotif Berna Vaccine,PaxVax)、伤寒Vi多糖疫苗(Typhim Vi,Sanofi)、肺炎球菌23-多价疫苗PCV13(Pneumovax 23,Merck)、肺炎球菌7价疫苗PCV7(Prevnar,Pfizer)、肺炎球菌13价疫苗PCV13(Prevnar 13,Pfizer)、嗜血杆菌b缀合物(prp-t)疫苗(ActHIB,Sanofi；Hibrix,GSK)、嗜血杆菌b缀合物(h boc)疫苗(HibTITER,NeuronBiotech)、嗜血杆菌b缀合物(prp-omp)疫苗(PedvaxHIB,Merck)、嗜血杆菌b缀合物(prp-t)疫苗/脑膜炎球菌缀合物疫苗(MenHibrix,GSK)、嗜血杆菌b缀合物(prp-t)疫苗/脑膜炎球菌缀合物疫苗/乙型肝炎疫苗(Comvax,Merck)、脑膜炎球菌多糖疫苗(Menomune)、A/C/Y/W-135,Sanofi)、脑膜炎球菌缀合物疫苗/白喉CRM197缀合物(Menveo,GSK；Menactra,Sanofi)、脑膜炎球菌B组疫苗(Bexsero,GSK；Trumenba,Pfizer)、吸附炭疽疫(Biothrax,Emergent Biosolutions)、破伤风类毒素(Te Anatoxal Berna,Hendricks RegionalHealth)、膀胱内活卡介苗(TheraCys,Sanofi；Tice BCG,Organon)、口服活霍乱疫苗(Vachora,Sanofi；Dukoral,SBL Vaccines；ShanChol,Shantha Biotec；Micromedex,Truven Health)、吸收破伤风类毒素和白喉(Tdap；Decavac,Sanofi；Tenivac,Sanofi；td,Massachusetts Biological Labs)、白喉和破伤风毒素和百日咳(DTap；Daptacel,Sanofi；Infanrix,GSK；Tripedia,Sanofi)、白喉和破伤风毒素和百日咳/脊髓灰质炎(Kinrix,GSK；Quadrace,Sanofi)、白喉和破伤风毒素和百日咳破伤风/乙型肝炎/脊髓灰质炎(Pediarix,GSK)、白喉和破伤风毒素和百日咳/脊髓灰质炎、b型流感嗜血杆菌(Pentacel,Sanofi)和/或白喉和百日咳(Tdap；Boostrix,GSK；Adacel,Sanofi)，或它们的组合。
如上所述，接受本公开的化合物以治疗病症的受试者除本文所述的化合物之外还被预防性地施用了抗生素化合物。
在一个实施方案中，所述受试者在活性化合物施用持续时间内被施用了抗生素化合物以减少细菌感染的发展。
用于与本文所述的化合物伴随施用的抗生素化合物可以是可用于预防或减少细菌感染作用的任何抗生素。抗生素是本领域众所周知的，并且包括但不限于阿米卡星(Amikin)、庆大霉素(Garamycin)、卡那霉素(Kantrex)、新霉素(Neo-Fradin)、奈替米星(Netromycin)、妥布霉素(Nebcin)、巴龙霉素(Humatin)、链霉素、大观霉素(Trobicin)、格尔德霉素、除莠霉素、利福昔明(Xifaxan)、氯碳头孢(Lorabid)、厄他培南(Invanz)、多利培南(Doribax)、亚胺培南/西司他丁(Primaxin)、美罗培南(Merrem)、头孢羟氨苄(Duricef)、头孢唑林(Ancef)、头孢噻吩/头孢噻吩钠(Keflin)、头孢氨苄(Keflex)、头孢克洛(Distaclor)、头孢孟多酯(Mandol)、头孢西丁(Mefoxin)、头孢丙烯(Cefzil)、头孢呋辛(Ceftin,Zinnat)、头孢克肟(Cefspan)、头孢地尼(Omnicef,Cefdiel)、头孢托仑(Spectracef,Meiact)、头孢哌酮(Cefobid)、头孢噻肟(Claforan)、头孢泊肟(Vantin)头孢他啶(Fortaz)、头孢布烯(Cedax)、头孢唑肟(Cefizox)、头孢曲松(Rocephin)、头孢吡肟(Maxipime)、头孢罗膦(Teflaro)、头孢比罗(Zeftera)、替考拉宁(Targocid)、万古霉素(Vancocin)、替拉凡星(Vibativ)、达巴凡星(Dalvance)、奥利万星(Orbactiv)、克林霉素(Cleocin)、林可霉素(Lincocin)、达托霉素(Cubicin)、阿奇霉素(Zithromax,Sumamed,Xithrone)、克拉霉素(Biaxin)、地红霉素(Dynabac)、红霉素(Erythocin,Erythroped)、罗红霉素、醋竹桃霉素(Tao)、泰利霉素(Ketek)、螺旋霉素(Rovamycine)、氨曲南(Azactam)、呋喃唑酮(Furoxone)、呋喃妥因(Macrodantin,Macrobid)、利奈唑胺(Zyvox)、泊西唑利德、雷德唑胺、妥利唑胺、阿莫西林(Novamox,Amoxil)、氨苄西林(Principen)、阿洛西林、羧苄西林(Geocillin)、氯唑西林(Tegopen)、双氯西林(Dynapen)、氟氯西林(Floxapen)、美洛西林(Mezlin)、甲氧西林(Staphcillin)、萘夫西林(Unipen)、苯唑西林(Prostaphlin)、青霉素G(Pentids)、青霉素V(Veetids(Pen-Vee-K)、哌拉西林(Pipracil)、青霉素G(Pfizerpen)、替莫西林(Negaban)、替卡西林(Ticar)、阿莫西林/克拉维酸(Augmentin)、氨苄西林/舒巴坦(Unasyn)、哌拉西林/他唑巴坦(Zosyn)、替卡西林/克拉维酸(Timentin)、杆菌肽、粘菌素(Coly-Mycin-S)、多黏菌素B、环丙沙星(Cipro,Ciproxin,Ciprobay)、依诺沙星(Penetrex)、加替沙星(Tequin)、吉米沙星(Factive)、左氧氟沙星(Levaquin)、洛美沙星(Maxaquin)、莫西沙星(Avelox)、萘啶酸(NegGram)、诺氟沙星(Noroxin)、氧氟沙星(Floxin,Ocuflox)、曲伐沙星(Trovan)、格帕沙星(Raxar)、司帕沙星(Zagam)、替马沙星(Omniflox)、磺胺米隆(Sulfamylon)、磺胺醋酰(Sulamyd,Bleph-10)、磺胺嘧啶(Micro-Sulfon)、磺胺嘧啶银(Silvadene)、磺胺地托辛(Di-Methox,Albon)、磺胺甲噻二唑(Thiosulfil Forte)、磺胺甲噁唑(Gantanol)、磺胺、柳氮磺吡啶(Azulfidine)、磺胺异噁唑(Gantrisin)、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑(复方新诺明)(TMP-SMX)(Bactrim,Septra)、偶氮磺胺(Prontosil)、地美环素(Declomycin)、多西环素(Vibramycin)、米诺环素(Minocin)、土霉素(Terramycin)、四环素(Sumycin,Achromycin V,Steclin)、氯法齐明(Lamprene)、氨苯砜(Avlosulfon)、卷曲霉素(Capastat)、环丝氨酸(Seromycin)、乙胺丁醇(Myambutol)、乙硫异烟胺(Trecator)、异烟肼(I.N.H.)、吡嗪酰胺(Aldinamide)、利福平(Rifadin,Rimactane)、利福布汀(Mycobutin)、利福喷丁(Priftin)、链霉素、胂凡纳明(Salvarsan)、氯霉素(Chloromycetin)、磷霉素(Monurol,Monuril)、夫西地酸(Fucidin)、甲硝唑(Flagyl)、莫匹罗星(Bactroban)、平板霉素、奎奴普丁/达福普汀(Synercid)、甲砜霉素、替加环素(Tigacyl)、替硝唑(Tindamax Fasigyn)、甲氧苄啶(Proloprim,Trimpex)和/或泰斯巴汀(teixobactin)，或它们的组合。
在一个实施方案中，所述受试者被施用了选自以下的预防性抗生素：头孢菌素(例如头孢曲松或头孢噻肟)、氨苄西林-舒巴坦、青霉素G、氨苄西林、氯霉素、氟喹诺酮、氨曲南、左氧氟沙星、莫西沙星、吉米沙星、万古霉素、克林霉素、头孢唑林、阿奇霉素、美罗培南、头孢洛林、替加环素、克拉霉素、莫西沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、头孢呋辛酯(cefuroxime,axetil)、环丙沙星、利福平、米诺环素、螺旋霉素和头孢克肟，或者它们中的两种或更多种的组合。
本公开的化合物的制备工艺
缩写
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一般方法
所有非水反应均在干燥氩气或氮气气氛下使用无水溶剂进行。使用本文公开的两个液相色谱(LC)方法A或B中的一者确定了反应进展和目标化合物的纯度。起始物料、中间体和终产物的结构是通过标准分析技术(包括NMR波谱法和质谱法)确认的。
LC方法A
仪器：Waters Acquity超高效LC
柱：ACQUITY UPLC BEH C18 2.1×50 mm,1.7μm
柱温：40℃
流动相：溶剂A：H2O+0.05％ FA；溶剂B：CH3CN+0.05％ FA
流速：0.8ml/min
梯度：在15％ B下0.24min，3.5min梯度(15-85％ B)，然后在85％ B下0.5min。
检测：UV(210-410nm)和MS(SQ，ES+模式)
实施例1.本公开的化合物的非限制性合成实施例
以下方案是制备本公开的化合物的方法的非限制性实例。本领域技术人员将认识到，可以执行各种修改以制备类似物或以其他方式制备化合物。
方案1：(S)-N-((4-甲脒基(carbamimidoyl)噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟亚甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物1)的合成
Figure BDA0004238079180002931
步骤1：(S)-4-(二氟亚甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(1g,4.1mmol)在THF(40mL)中的溶液中添加CF2Br2(1.5mL,16.4mmol)和HMPT(2.98mL,16.4mmol)。然后，添加活化的锌末(1.07g,16.4mmol)和另一份的HMPT(0.2mL)，并在70℃下搅拌反应物4小时。将反应物冷却至20℃，并经celatom过滤。将滤液用20mL H2O稀释并用MTBE萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝100:1至30:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(500mg，收率44％)。LC/MS(ESI)(m/z)：178(M-100+H)+。
步骤2：(S)-4-(二氟亚甲基)吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(C)。将化合物B(300mg,1.08mmol)和HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)在10℃下搅拌2小时。将反应物真空浓缩从而得到呈黄色油状物的化合物C(230mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：178(M+H)+。
步骤3：(S)-4-(二氟亚甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(E)。在0℃、N2气氛下，向化合物C(230mg,1.07mmol)和化合物D(226mg,0.83mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.55mL,3.32mmol)，随后添加HOBt(224mg,1.66mmol)和EDCI(318mg,1.66mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝100:1至20:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物E(346mg，收率96.9％)。LC/MS(ESI)m/z:431(M+H)+。
步骤4：(S)-4-(二氟亚甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(F)。在0℃下，向化合物E(200mg,0.465mmol)在THF(2mL)、MeOH(0.5mL)和H2O(0.5mL)的溶液中添加LiOH·H2O(97.7mg,2.3mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1.5小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将水层用2M HCl水溶液酸化至pH＝3并用EtOAc洗涤两次。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物F(148mg，收率73.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:417(M+H)+。
步骤5：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟亚甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物1)。在0℃、N2气氛下向化合物F(80mg,0.192mmol)和化合物G(175mg,0.77mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.32mL,1.92mmol)，随后添加HOBt(78.3mg,0.58mmol)和EDCI(110mg,0.58mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物1(15mg，收率14.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.08–8.67(m,2H),8.45(s,1H),8.33(dd,J＝9.5,1.4Hz,1H),7.90(dd,J＝8.9,2.2Hz,2H),7.52–7.38(m,3H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.09(d,J＝7.8Hz,2H),7.07–7.01(m,2H),4.86–4.60(m,1H),4.51–4.32(m,3H),4.26–4.14(m,1H),4.07–4.02(m,1H),3.71–3.50(m,1H),3.11–2.86(m,1H),2.71–2.53(m,1H)；LC/MS(ESI)(m/z):554(M+H)+。
方案2：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物2)的合成
Figure BDA0004238079180002951
步骤1：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物2)。在0℃、N2气氛下，向化合物A(63mg,0.16mmol)和化合物B(37mg,0.24mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(103mg,0.8mmol)和T3P(203mg,0.32mmol，50重量％于EtOAc中)。将所得混合物在25℃下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释并用水和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物2(15.0mg，收率17.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.63(s,1H),8.71(d,J＝61.2Hz,2H),8.45–8.19(m,3H),7.76(d,J＝8.4Hz,2H),7.38–7.32(m,2H),7.15(t,J＝7.4Hz,1H),7.02(d,J＝8.0Hz,2H),6.90(d,J＝8.4Hz,2H),4.90–4.78(m,1H),4.68–4.41(m,2H),4.41–4.23(m,2H),3.20(dd,J＝4.8,4.8Hz,1H),2.41–2.28(m,2H),1.29(s,3H),1.28–1.25(m,1H),0.82(t,J＝5.6Hz,1H)；LC/MS(ESI)(m/z):533(M+H)+。
方案3：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物3)的合成
Figure BDA0004238079180002961
步骤1：4-(4-(甲基硫基)苯氧基)苯甲酸甲酯(C)。在25℃下，向化合物A(1.0g,7.13mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加化合物B(1.32g,8.56mmol)和Cs2CO3(11.6g,35.65mmol)。将混合物在120℃下搅拌16小时。将混合物冷却至25℃，并用EtOAc稀释。将有机层用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝9:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物3(1.36g，收率69.7％)。LC/MS(ESI)(m/z)：275(M+H)+。
步骤2：T4-(4-(甲基硫基)苯氧基)苯甲酸(D)。在0℃下向化合物C(1.36g,5.0mmol)在MeOH(10mL)和水(2mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(625mg,15mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩至1/5体积，用水稀释，并用MTBE洗涤两次。将水层用1NHCl水溶液酸化至pH～3，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物D(1.22g，收率94.6％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：261(M+H)+。
步骤3：(4-(4-(甲基硫基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酸甲酯(F)。在0℃、N2气氛下，向化合物D(475mg,1.83mmol)和化合物E(344mg,2.75mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(1.5mL,9.15mmol)、EDCI(700mg,3.66mmol)和HOBT(370mg,2.75mmol)。将反应物在室温下搅拌16小时并用EtOAc稀释。将混合物用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:2)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物F(560mg，收率92.6％)。LC/MS(ESI)m/z:332(M+H)+。
步骤4：(4-(4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酸甲酯(G)。在0℃、N2气氛下向化合物F(160mg,0.48mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加NH3/MeOH(0.1mL,0.72mmol)和PhI(OAc)2(358mg,1.10mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物G(170mg，收率97.1％)。LC/MS(ESI)m/z:363(M+H)+。
步骤5：(4-(4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酸(H)。在0℃下向化合物G(170mg,0.47mmol)在MeOH(5mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(61mg,1.41mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的化合物H(117mg，收率69.6％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：349(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)苯氧基)苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(J)。在0℃、N2气氛下向化合物H(117mg,0.34mmol)和化合物I(78mg,0.51mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.28mL,1.7mmol)、EDCI(129mg,0.68mmol)和HOBT(68mg,0.51mmol)。将反应物在室温下搅拌16小时并用EtOAc稀释。将混合物用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，并将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝94:6)进行纯化从而得到呈浅黄色固体的化合物J(83mg，收率50.9％)。LC/MS(ESI)m/z:486(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(K)。在0℃下向化合物J(83mg,0.17mmol)在MeOH(5mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(22mg,0.51mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物K(79mg，收率97.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：472(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(S-甲基-氨亚基替磺酰基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物3)。在0℃、N2气氛下向化合物K(80mg,0.17mmol)和化合物L(40mg,0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.14mL,0.85mmol)、EDCI(65mg,0.34mmol)和HOBT(46mg,0.34mmol)。将反应物在室温下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释，并用CHCl3/i-PrOH(3/1)萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝4:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物3(2.3mg，收率2.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),8.05–7.99(m,2H),7.93(d,J＝8.7Hz,2H),7.41(s,1H),7.24–7.19(m,2H),7.18–7.13(m,2H),4.58(s,1H),4.55(d,J＝3.0Hz,2H),4.36(q,J＝16.5Hz,2H),3.42(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),3.16(s,4H),2.42(t,J＝13.0Hz,1H),2.17(dd,J＝13.4,3.3Hz,1H),1.30(s,3H),1.15(dd,J＝5.6,2.5Hz,1H),0.81(t,J＝5.4Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:609(M+H)+。
方案4：(1S,3S,5S)-N-((4-((Z)-N’-甲氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物6)的合成
Figure BDA0004238079180002991
步骤1：5-(氨基甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒盐酸盐(B)。将化合物A(300mg,0.81mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓缩至干，溶解于DCM，并在减压下再次浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物B(167mg，收率99.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:172(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-N-((4-((Z)-N’-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(C)。在0℃下向化合物B(115mg,0.20mmol)和化合物3(50mg,0.13mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(82mg,0.63mmol)，随后添加EDCI(44mg,0.23mmol)和HOBt(26mg,0.19mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物C(5.3mg，收率7.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47(s,1H),8.67(t,J＝5.8Hz,1H),8.46(t,J＝5.8Hz,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,2H),7.64(d,J＝1.6Hz,1H),7.47–7.43(m,2H),7.24–7.20(m,1H),7.16(s,1H),7.11–7.09(m,2H),7.06–7.03(m,2H),5.71(s,2H),4.65(dd,J＝11.2,11.2Hz,1H),4.43–4.32(m,3H),4.04–3.98(m,1H),3.52–3.51(m,1H),2.28(t,J＝12.4Hz,1H),1.96(dd,J＝13.2,13.2Hz,1H),1.23(s,3H),1.21–1.20(m,1H),0.66(t,J＝5.2Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:548(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-N-((4-((Z)-N’-甲氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物6)。在0℃、N2气氛下向化合物C(37mg,0.068mmol)在甲苯(3mL)中的溶液中添加K2CO3(37mg,0.27mmol)、18-冠醚-6(2.0mg,0.007mmol)和MeI(10mg,0.068mmol)。将混合物在110℃下搅拌过夜。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物6(2.4mg，收率6.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,J＝8.8Hz,2H),7.43(t,J＝5.8Hz,1H),7.40–7.36(m,2H),7.33(d,J＝1.6Hz,1H),7.20–7.16(m,2H),7.11–7.07(m,1H),7.07–7.03(m,2H),7.02–6.99(m,2H),4.87(dd,J＝10.4,10.4Hz,1H),4.71(s,1H),4.59–4.54(m,1H),4.51–4.45(m,1H),4.38(dd,J＝10.0,10.0Hz,1H),3.84(s,3H),3.09(dd,J＝6.4,6.4Hz,1H),2.72(dd,J＝12.8,12.8Hz,1H),2.10–2.04(m,1H),1.31(s,3H),1.09(dd,J＝6.4,6.4Hz,1H),0.75(t,J＝6.0Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:562(M+H)+。
方案5：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-氧代-1-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物7)的合成
Figure BDA0004238079180003011
步骤1：(S)-5-氧代吡咯烷-2-甲酸苄酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(2.5g,19.4mmol)在苯甲醇(20mL)中的溶液中添加SOCl2(2.8mL,38.8mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将反应物在减压下浓缩至干，并将残余物通过硅胶柱色谱(己烷:EtOAc＝1:2)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(2.8g，66％收率)。LC/MS(ESI)m/z:220(M+H)+。
步骤2：(S)-5-氧代-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(D)。在室温、N2气氛下向化合物C(500mg,1.84mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(712.8mg,5.5mmol)、化合物B(613.2mg,2.8mmol)、HOBt(322.9mg,2.4mmol)和EDCI(493.8mg,2.5mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水(2×100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(己烷:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物D(110mg，13％收率)。LC/MS(ESI)m/z:473(M+H)+。
步骤3：(S)-5-氧代-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(E)。在室温、N2气氛下向化合物D(110mg,0.23mmol)在MeOH中的溶液中添加10％ Pd/C(20mg)，并将反应混合物在室温下在H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物E(71mg，80％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:483(M+H)+。
步骤4：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-氧代-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺(化合物7)。在室温、N2气氛下向化合物E(71mg,0.183mmol)和化合物F(522mg,2.75mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(141.6mg,1.1mmol)和T3P(349mg,0.549mmol，50重量％于EtOAc中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物7(3mg，3％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.00(s,1H),9.03(t,J＝5.7Hz,1H),8.75–8.69(m,1H),8.38–8.34(m,1H),7.92–7.89(m,2H),7.47–7.42(m,3H),7.24–7.21(m,1H),7.11–7.09(m,2H),7.07–7.04(m,2H),4.66–4.61(m,2H),4.54–4.49(m,1H),4.45–4.34(m,2H),2.69–2.55(m,2H),2.46–2.31(m,1H),2.01–1.87(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:520(M+H)+。
方案6：(1S,3S,5S)-N-((4-氨基甲酰基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物8)的合成
Figure BDA0004238079180003031
步骤1：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯-3-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(100mg,0.41mmol)在MeOH(1mL)和甲苯(2.5mL)中的溶液中逐滴添加TMSCHN2(0.41mL,0.84mmol,2M)。将反应物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用AcOH淬灭并在真空下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝50:1至3:1)进行纯化从而得到呈油状物的化合物B(100mg，收率94.5％)。LC/MS(ESI)m/z:256(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯盐酸盐(C)。将化合物B(100mg,0.41mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用醚洗涤，并用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空度下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物C(75mg，收率99.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:156(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]-己烷-3-甲酸甲酯(E)。在0℃下向化合物C(75mg,0.39mmol)和化合物D(106mg,0.39mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(252mg,1.95mmol)，随后添加EDCI(134mg,0.70mmol)、HOBt(79mg,0.59mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝10:1至2:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物E(120mg，收率75.1％)。LC/MS(ESI)m/z:409(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(F)。在0℃下向化合物E(120mg,0.29mmol)在THF(1mL)和MeOH(2mL)中的溶液中添加氢氧化锂(59mg,1.47mmol)在水(1mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌1.5小时。将混合物用水稀释并用EtOAc洗涤两次。将水层用0.5M HCl水溶液酸化至pH～5，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物F(115mg，收率99.3％)。LC/MS(ESI)m/z:395(M+H)+。
步骤5：5-(氨基甲基)噻吩-3-甲腈盐酸盐(H)。将化合物G(500mg,1.48mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL,4M)中的混合物在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物浓缩至干，用DCM洗涤，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的化合物H(200mg，收率98.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:139(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-((4-氰基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(I)。在0℃下向化合物F(115mg,0.29mmol)和化合物H(75mg,0.44mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(187mg,1.45mmol)，随后添加EDCI(100mg,0.52mmol)和HOBt(59mg,0.44mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物I(2.3mg，收率1.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(t,J＝5.6Hz,1H),8.57(t,J＝6.0Hz,1H),8.39(d,J＝1.2Hz,1H),7.91–7.88(m,2H),7.47–7.43(m,2H),7.30(d,J＝0.8Hz,1H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.10(d,J＝7.6Hz,2H),7.05–7.02(m,2H),4.66(dd,J＝11.2,11.2Hz,1H),4.43–4.38(m,2H),4.37–4.30(m,1H),4.03(dd,J＝16.8,16.8Hz,1H),3.59–3.48(m,1H),2.30(t,J＝12.4Hz,1H),1.97(dd,J＝13.6,13.6Hz,1H),1.23(s,3H),1.17(dd,J＝4.8,4.8Hz,1H),0.68(t,J＝5.4Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:515(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-N-((4-氨基甲酰基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物8)。在0℃、N2气氛下向化合物I(50mg,0.097mmol)在EtOH(2mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中添加(E)-乙醛肟(13mg,0.19mmol)、Pd(OAc)2(1mg,0.005mmol)和PPh3(2.5mg,0.09mmol)。将混合物在80℃下搅拌16小时。将混合物用H2O淬灭，并用CHCl3/i-PrOH(v:v＝3/1)萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物8(12.9mg，收率24.8％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.93(d,J＝1.5Hz,1H),7.84(d,J＝2.0Hz,1H),7.83(d,J＝2.0Hz,1H),7.41(dd,J＝8.4,7.6Hz,2H),7.36(d,J＝1.2Hz,1H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(dd,J＝8.6,0.9Hz,2H),7.01(t,J＝2.4Hz,1H),6.99(d,J＝2.2Hz,1H),4.82(dd,J＝11.4,3.3Hz,1H),4.50(s,2H),4.40(d,J＝16.5Hz,1H),4.27(d,J＝16.5Hz,1H),3.38(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),2.40(dd,J＝18.3,6.5Hz,1H),2.16(dd,J＝3.4,3.3Hz,1H),1.28(s,3H),1.15(dd,J＝5.4,2.0Hz,1H),0.77(d,J＝5.9Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:533(M+H)+。
方案7：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物9)的合成
Figure BDA0004238079180003071
步骤1：(S)-2,3-二氢-1H-吡咯-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-乙酯(B)。在-78℃、N2气氛下向化合物A(50g,194.34mmol)在甲苯(389mL)中的溶液中逐滴添加LiBHEt3(206mL,204.05mmol)，并将混合物在-78℃下搅拌1小时。在-78℃、N2气氛下将DIPEA(193.5mL,1.11mol)、DMAP(0.475g,3.89mmol)和TFAA(33mL,233mmol)添加到混合物中。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用冰水淬灭，并将有机层分离。将有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝100:1至20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(38.5g，收率82％)。LC/MS(ESI)(m/z)：242(M+H)+。
步骤2：(S)-4-甲酰基-2,3-二氢-1H-吡咯-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-乙酯(C)。在0℃、N2气氛下将DMF(49.3mL,639mmol)和POCl3(29.8mL,320mmol)的混合物搅拌30分钟。将混合物用DCM(360mL)稀释，并在0℃下添加化合物B(38.5g,160mmol)在DCM(50mL)中的溶液。将反应物在25℃下搅拌1.5小时，并用2M NaOH溶液淬灭。添加EtOAc并将混合物分离。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物C(39g，收率92％)。LC/MS(ESI)(m/z)：270(M+H)+。
步骤3：(S)-4-(羟基甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-乙酯(D)。在-70℃、N2气氛下向化合物C(39g,145mmol)在DCM(400mL)和甲醇(200mL)中的溶液中分批添加NaBH4(8.22g,217mmol)，并将混合物在0℃下搅拌半小时。将混合物用NH4Cl水溶液淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物D(33.6g，收率85.5％)。LC/MS(ESI)m/z:272(M+H)+。
步骤4：(3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(F)。在-20℃、N2气氛下向ZnEt2(46mL,46.1mmol)在DCM(150mL)中的溶液中逐滴添加ClCH2I(16.3g,92.3mmol)，并将混合物在-20℃下搅拌半小时。在-20℃下逐滴添加化合物E(7.5g,27.7mmol)和化合物D(5g,18.5mmol)在DCM中的混合物，并将混合物在-20℃下搅拌12小时。将反应物用冷NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物F(4.07g，收率77.5％)。LC/MS(ESI)m/z:286(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5R)-5-(((4-硝基苯甲酰基)氧基)甲基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(H)。在0℃下向化合物F(4.07g,14.26mmol)在THF(100mL)中的溶液中添加化合物G(3.44g,18.54mmol)和DMAP(5.23g,42.79mmol)，并在40℃下将混合物在微波反应器中搅拌16小时。将反应冷却至25℃，并倒入冰水中。将混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过SFC进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物H(2.25g，收率36.3％)。LC/MS(ESI)(m/z)：435(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5R)-5-(((4-硝基苯甲酰基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(I)。将化合物H(0.2g,0.46mmol)和HCl/1,4-二噁烷(5mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物I(0.15g，收率97.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:335(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5R)-5-(((4-硝基苯甲酰基)氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(K)。在0℃、N2气氛下向化合物I(0.15g,0.45mmol)和化合物J(0.134g,0.49mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.39mL,2.24mmol)和T3P(0.714g,1.13mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:3)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物K(0.17g，收率64.9％)。LC/MS(ESI)(m/z)：588(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(9)。向化合物K(171mg,0.29mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加K2CO3(80mg,0.58mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝95:5)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物L(123mg，收率96.8％)。LC/MS(ESI)(m/z)：425(M+H)+。
步骤9：(1S,3S,5R)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(M)。在0℃下向化合物L(0.11g,0.25mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加DHP(0.03mL,0.33mmol)和PPTS(19mg,0.08mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝96:4)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物M(118mg，收率92.2％)。LC/MS(ESI)m/z:509(M+H)+。
步骤10：(1S,3S,5R)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(11)。在0℃下向化合物M(118mg,0.23mmol)在MeOH(5mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(10mg,0.23mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N盐酸水溶液酸化至pH～3并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色半固体的化合物N(108mg，收率94.7％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：495(M+H)+。
步骤11：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)-5-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(12)。在0℃、N2气氛下向化合物N(136mg,0.28mmol)和O(640mg,0.42mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.27mL,1.68mmol)和T3P(0.53g,0.84mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物P(71mg，收率41.2％)。LC/MS(ESI)(m/z)：632(M+H)+。
步骤12：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物9)。向化合物P(60mg,0.1mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加PPTS(12mg,0.05mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v:v＝3/1)萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝9:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物9(2.4mg，收率4.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.93(d,J＝1.5Hz,1H),7.84(d,J＝2.0Hz,1H),7.83(d,J＝2.0Hz,1H),7.41(dd,J＝8.4,7.6Hz,2H),7.36(d,J＝1.2Hz,1H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(dd,J＝8.6,0.9Hz,2H),7.01(t,J＝2.4Hz,1H),6.99(d,J＝2.2Hz,1H),4.82(dd,J＝11.4,3.3Hz,1H),4.50(s,2H),4.40(d,J＝16.5Hz,1H),4.27(d,J＝16.5Hz,1H),3.38(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),2.40(dd,J＝18.3,6.5Hz,1H),2.16(dd,J＝13.4,3.3Hz,1H),1.28(s,3H),1.15(dd,J＝5.4,2.0Hz,1H),0.77(d,J＝5.9Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:548(M+H)+。
方案8：(1S,3S,5S)-2-((3-(乙酰胺基甲基)-4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((4-甲脒基-噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物10)
Figure BDA0004238079180003121
步骤1：4-氟-3-(羟基甲基)苯甲酸甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(2g,11mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中添加NaBH4(454mg,12mmol)，并将反应物在室温下搅拌1小时。将反应物用冰水淬灭并将混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物B(2g，收率98.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:299(M+H)+。
步骤2：3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-氟苯甲酸甲酯(C)。在室温、N2气氛下向化合物2(2g,10.8mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加咪唑(817mg,12mmol)和TBSCl(1.8g,12mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝100:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物C(2g，收率13％)。LC/MS(ESI)m/z:299(M+H)+。
步骤3：3-(羟基甲基)-4-苯氧基苯甲酸(D)。在室温、N2气氛下向化合物C(2g,6.71mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加Cs2CO3(4.3g,13.4mmol)和苯酚(694mg,7.4mmol)。将混合物在120℃下搅拌过夜。将反应物冷却至室温，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物D(430mg，收率26％)。LC/MS(ESI)m/z:243(M-H)-。
步骤4：(3-(羟基甲基)-4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸苄酯(F)。在室温、N2气氛下向化合物D(105mg,0.43mmol)和化合物E(130mg,0.64mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(333mg,2.58mmol)、HOBt(75mg,0.56mmol)和EDCI(115mg,0.60mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物F(130mg，收率77％)。LC/MS(ESI)m/z:392(M+H)+。
步骤5：(3-(羟基甲基)-4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(G)。在室温、N2气氛下向搅拌的化合物F(130mg,0.33mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(30mg,10重量％)，并将反应物在室温、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物G(85mg，收率85％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:302(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((3-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-4-苯氧基-苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(I)。在室温、N2气氛下向化合物G(85.0mg,0.27mmol)和化合物H(106mg,0.40mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(174.0mg,1.35mmol)和T3P(343mg,0.54mmol，50％于EtOAc中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物I(110mg，收率76％)。LC/MS(ESI)m/z:515(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((3-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-4-苯氧基-苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(I)。在0℃、N2气氛下向化合物I(110mg,0.21mmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加TEA(86.8mg,0.86mmol)和MsCl(48.3mg,0.42mmol)，并将混合物在0℃下搅拌1小时。将反应物用冰水淬灭并将所得混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物J(108mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤8：(1S,3S,5S)-2-((3-(叠氮基甲基)-4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(K)。在室温、N2气氛下向化合物J(108mg,0.21mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加NaN3(16.7mg,0.27mmol)，并将混合物在40℃下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭并将所得混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物K(100mg，收率87％)。LC/MS(ESI)m/z:540(M+H)+。
步骤9：(1S,3S,5S)-2-((3-(氨基甲基)-4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(L)。在室温、N2气氛下向化合物K(100mg,0.185mmol)在THF(3mL)和H2O(0.3mL)中的溶液中添加PPh3(145.4mg,0.555mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物10(44mg，收率46％)。LC/MS(ESI)m/z:514(M+H)+。
步骤10：(1S,3S,5S)-2-((3-(乙酰胺基甲基)-4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(M)。在0℃、N2气氛下向化合物L(44mg,0.086mmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加TEA(25.9mg,0.257mmol)和乙酰氯(10.0mg,0.128mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时并添加H2O。将混合物用DCM萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物M(40mg，收率85％)。LC/MS(ESI)m/z:556(M+H)+。
步骤11：(1S,3S,5S)-2-((3-(乙酰胺基甲基)-4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(N)。在室温、N2气氛下向搅拌的化合物M(40mg,0.072mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将反应物在H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物N(25mg，收率76％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:466(M+H)+。
步骤12：(1S,3S,5S)-2-((3-(乙酰胺基甲基)-4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(化合物10)。在室温、N2气氛下向化合物N(25mg,0.054mmol)和化合物O(15.4mg,0.081mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(35mg,0.27mmol)和T3P(68.7mg,0.108mmol，50％于EtOAc中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物10(10mg，收率31％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.47(s,1H),8.20(d,J＝1.3Hz,1H),7.89(d,J＝2.1Hz,1H),7.72(dd,J＝8.6,2.1Hz,1H),7.45–7.36(m,3H),7.20(t,J＝7.3Hz,1H),7.05(d,J＝8.0Hz,2H),6.81(d,J＝8.6Hz,1H),4.82(d,J＝3.3Hz,1H),4.60–4.50(m,2H),4.48(s,2H),4.34(q,J＝16.6Hz,2H),3.43–3.38(m,1H),2.42(t,J＝12.0Hz,1H),2.19(d,J＝3.3Hz,1H),1.97(s,3H),1.30(s,3H),1.18–1.11(m,1H),0.81(t,J＝6.0Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:603(M+H)+。
方案9：(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-((Z)-N’-硝基甲脒基)噻吩-2-基)-甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物11)的合成
Figure BDA0004238079180003161
步骤1：(Z)-5-(氨基甲基)-N’-硝基噻吩-3-甲脒(B)。在0℃下向化合物A(100mg,0.53mmol)在H2SO4(3mL)中的溶液中添加NH4NO3(127.2mg,1.59mmol)，并将反应物在室温下搅拌0.5小时。将反应物用冰水淬灭。将混合物用氨调节至pH～7，并向混合物中添加MeOH(20mL)。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物B(50mg，收率47.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤2：(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-((Z)-N’-硝基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物11)。在室温、N2气氛下向化合物B(50mg,0.25mmol)和化合物C(50mg,0.127mmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加DIPEA(81.9mg,0.635mmol)和T3P(162mg,0.254mmol，50％于EtOAc中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物11(8mg，收率11％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),7.86(d,J＝8.7Hz,2H),7.41(t,J＝7.8Hz,2H),7.21(dd,J＝14.9,7.6Hz,2H),7.07(d,J＝8.0Hz,2H),7.01(d,J＝8.7Hz,2H),4.81(d,J＝3.2Hz,1H),4.55(s,2H),4.32(s,2H),3.42(d,J＝3.8Hz,1H),2.43(t,J＝12.3Hz,1H),2.26–2.08(m,1H),1.29(t,J＝9.3Hz,3H),1.21–1.10(m,1H),0.84(d,J＝5.5Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:577(M+H)+。
方案10：((Z)-氨基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)亚甲基)氨基甲酸己酯(化合物12)的合成
Figure BDA0004238079180003181
步骤1：N-[(1Z)-氨基(5-{[双(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}噻吩-3-基)-甲亚基]氨基甲酸己酯(2)。在0℃、N2气氛下向化合物A(50mg,0.141mmol)在MeCN(2mL)中的溶液中添加DIPEA(0.06mL,0.366mmol)和氯甲酸己酯(23mg,0.141mmol)，并将反应物在25℃下搅拌2小时。将反应物过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝100:1至10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(32mg，收率47％)。LC/MS(ESI)m/z:384(M-100+H)+。
步骤2：(Z)-(氨基(5-(氨基甲基)噻吩-3-基)亚甲基)氨基甲酸己酯(3)。将化合物B(32mg,0.066mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌2小时，并将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物C(18mg，收率95％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:284(M+H)+。
步骤3：((Z)-氨基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)亚甲基)氨基甲酸己酯(化合物12)。在0℃、N2气氛下向化合物C(18mg,0.064mmol)和化合物D(25mg,0.064mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.06mL,0.318mmol)和T3P(121mg,0.191mmol，50重量％于EtOAc中)。将混合物在30℃下搅拌5小时，并用水淬灭。将混合物用EtOAc稀释并分离。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物12(1.2mg，收率2.86％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.07(d,J＝1.6Hz,1H),7.83(d,J＝8.8Hz,2H),7.43(dd,J＝25.2,16.0Hz,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,2H),7.00(d,J＝8.4Hz,2H),4.82(d,J＝3.2Hz,1H),4.57–4.49(m,2H),4.33(dd,J＝47.6,47.6Hz,2H),4.09(t,J＝7.0Hz,2H),3.38(dd,J＝6.0,6.0Hz,1H),2.41(t,J＝12.0Hz,1H),2.17(dd,J＝12.8,13.2Hz,1H),1.70–1.63(m,2H),1.41(dd,J＝13.2,14.8Hz,2H),1.35–1.30(m,4H),1.29(s,3H),1.17(dd,J＝6.0,6.0Hz,1H),0.91(t,J＝7.0Hz,3H),0.78(t,J＝5.8Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:660(M+H)+。
方案11：(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-((Z)-N’-(甲基磺酰基)甲脒基)-噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物13)的合成
Figure BDA0004238079180003191
步骤1：N-(叔丁氧基羰基)-N-({4-[(Z)-N’-甲烷磺酰基甲脒基]-噻吩-2-基}甲基)氨基甲酸叔丁酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物1(50mg,0.141mmol)在MeCN(3mL)中的溶液中添加DIPEA(0.06mL,0.366mmol)和甲烷磺酰氯(16mg,0.141mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝100:1至10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物2(47mg，收率77.1％)。LC/MS(ESI)m/z:334(M-100+H)+。
步骤2：(Z)-5-(氨基甲基)-N’-(甲基磺酰基)噻吩-3-甲脒(3)。将化合物B(47mg,0.108mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌3小时。将反应在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物C(25mg，收率98.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:234(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-((Z)-N’-(甲基磺酰基)甲脒基)噻吩-2-基)-甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物13)。在0℃、N2气氛下向化合物C(25mg,0.107mmol)和化合物D(42mg,0.107mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.10mL,0.536mmol)和T3P(205mg,0.321mmol)。将反应物在30℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物13(3.5mg，收率5.4％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(d,J＝1.2Hz,1H),7.83(d,J＝8.8Hz,2H),7.42(dd,J＝13.2,16Hz,3H),7.19(t,J＝7.6Hz,1H),7.07(d,J＝7.6Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),4.81(d,J＝3.2Hz,1H),4.58–4.49(m,2H),4.33(dd,J＝48.4,48.4Hz,2H),3.40–3.37(m,1H),2.98(s,3H),2.40(t,J＝12.0Hz,1H),2.16(dd,J＝13.2,13.2Hz,1H),1.29(s,3H),1.17–1.14(m,1H),0.78(t,J＝5.8Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:610(M+H)+。
方案12：(1S,3S,5S)-N-((4-(N-氰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物18)的合成
Figure BDA0004238079180003211
步骤1：5-(氨基甲基)-N-氨基甲酰基噻吩-3-甲脒盐酸盐(B)。将化合物A(100mg,0.36mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的溶液在室温下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物B(83mg，99.3％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:199(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-N-((4-(N-氰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物18)。在0℃、N2气氛下向化合物B(40mg,0.10mmol)和化合物C(30mg,0.15mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(77mg,0.6mmol)和T3P(191mg,0.3mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。添加EtOAc和水，并将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物18(1.9mg，3.3％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23–8.18(m,1H),7.88–7.81(m,2H),7.48–7.37(m,3H),7.24–7.19(m,1H),7.11–7.05(m,2H),7.04–6.98(m,2H),4.84–4.82(m,1H),4.59–4.55(m,2H),4.41–4.26(m,2H),3.43(dd,J＝6.0,6.0Hz,1H),2.50–2.37(m,1H),2.19(dd,J＝13.2,13.2Hz,1H),1.31(s,3H),1.17(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.82(t,J＝5.8Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:575(M+H)+。
方案12：(1S,3S,5S)-N-((4-(N-氨基甲酰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物19)的合成
Figure BDA0004238079180003221
步骤1：((4-(N-氰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(B)。在室温、N2气氛下向化合物A(1g,2.96mmol)在EtOH(10mL)中的溶液中添加氰胺一钠(189mg,2.96mmol)，并将反应物在80℃下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝20:1至1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(150mg，18.1％收率)。LC/MS(ESI)m/z:281(M+H)+。
步骤2：5-(氨基甲基)-N-氰基噻吩-3-甲脒(C)。在0℃下向化合物B(50mg,0.36mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1mL)，并将反应物在室温下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物C(32mg，99.5％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:181(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-N-((4-(N-氨基甲酰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物19)。在0℃、N2气氛下向化合物C(30mg,0.17mmol)和化合物D(32mg,0.08mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(62mg,0.48mmol)和T3P(153mg,0.24mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。添加EtOAc和水，并将混合物分离。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物19(1.2mg,2.7％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.13–8.08(m,1H),7.88–7.82(m,2H),7.46–7.40(m,3H),7.24–7.19(m,1H),7.11–7.07(m,2H),7.03–6.99(m,2H),4.85–4.82(m,1H),4.58–4.51(m,2H),4.42–4.27(m,2H),3.40(dd,J＝6.0,6.0Hz,1H),2.49–2.33(m,1H),2.18(dd,J＝13.2,13.2Hz,1H),1.30(s,3H),1.15(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.83–0.74(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:557(M+H)+。
方案13：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(甲氧基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物20)的合成
Figure BDA0004238079180003231
步骤1：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(400mg,0.92mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加K2CO3(254mg,1.84mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应物用EtOAc和H2O稀释并将混合物分离。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(220mg，收率88％)。LC/MS(ESI)(m/z)：272(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5R)-5-(甲氧基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-甲酯(3)。在0℃、N2气氛下向化合物B(50mg,0.18mmol)在DCE(2mL)中的溶液中添加AgOTf(71mg,0.27mmol)，随后添加CH3I(78mg,0.54mmol)和2,6-二-叔丁基吡啶(0.12mL,0.54mmol)，并将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物C(25mg，收率48.1％)。LC/MS(ESI)(m/z)：286(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-(甲氧基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(D)。将化合物C(25mg,0.09mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物D(16mg，93.7％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:186(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5R)-5-(甲氧基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(F)。在0℃、N2气氛下向化合物D(16mg,0.09mmol)和化合物E(26mg,0.1mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.09mL,0.54mmol)和T3P(165mg,0.27mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤。将混合物分离，并将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色固体的化合物F(30mg，81.1％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：439(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5R)-5-(甲氧基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]-己烷-3-甲酸(G)。在0℃下向化合物F(30mg,0.07mmol)在MeOH(5mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(6mg,0.14mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N将HCl水溶液酸化至pH～3并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色半固体的化合物G(21mg，72.4％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：425(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(甲氧基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物20)。在0℃、N2气氛下向化合物G(25g,0.06mmol)和化合物H(14mg,0.09mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.06mL,0.36mmol)和T3P(0.112mg,0.18mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O淬灭，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝9:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物20(2.1mg，6.4％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.87–7.80(m,2H),7.45–7.38(m,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(dd,J＝8.6,1.0Hz,2H),7.03–6.97(m,2H),4.57(dd,J＝14.0,6.7Hz,2H),4.39–4.28(m,2H),3.59(dd,J＝6.2,2.7Hz,1H),3.49(d,J＝10.3Hz,1H),3.41(d,J＝10.3Hz,1H),3.36(s,3H),2.64(t,J＝11.8Hz,1H),2.13(dd,J＝13.4,3.5Hz,1H),1.23(dd,J＝5.9,2.7Hz,1H),1.00(t,J＝5.6Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:562(M+H)+。
方案14：(3S,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物21)的合成
Figure BDA0004238079180003261
步骤1：(3S,6S)-6-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物A(50mg,0.18mmol)和化合物B(42mg,0.27mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.18mL,1.08mmol)和T3P(344mg,0.54mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用H2O淬灭并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝4:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物C(70mg，94.6％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：415(M+H)+。
步骤2：(3S,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]-庚烷-6-甲酰胺(2)。将化合物2(70mg,0.17mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在0℃下搅拌，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物3(50mg，94.3％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：315(M+H)+。
步骤3：(3S,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物21)。在0℃、N2气氛下向化合物3(56mg,0.18mmol)和化合物3a(53mg,0.20mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.18mL,1.08mmol)和T3P(340mg,0.54mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用H2O淬灭并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝4:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物21(1.8mg，1.8％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.49(s,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.87–7.82(m,2H),7.42(dd,J＝10.8,5.2Hz,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.08–7.04(m,2H),7.03–6.98(m,2H),4.66(dd,J＝8.7,4.2Hz,1H),4.59(s,2H),4.16(dt,J＝16.6,15.1Hz,2H),4.03–3.93(m,1H),3.78(dd,J＝10.6,4.2Hz,1H),2.59(dd,J＝12.5,9.0Hz,1H),2.04(dt,J＝15.0,4.6Hz,1H),1.58(ddd,J＝13.2,8.3,4.6Hz,1H),1.52–1.42(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:568(M+H)+。
方案15：(3R,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物22)的合成
Figure BDA0004238079180003271
步骤1：(3R,6S)-1,1-二氟-6-(((4-(1-氨亚基乙基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物A(50mg,0.18mmol)和化合物B(34.5mg,0.18mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.18mL,1.08mmol)和T3P(344mg,0.54mmol)。将混合物在30℃下搅拌3小时。添加EtOAc和水，并将混合物分离。将水层用EtOAc萃取两次，并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝100:1至5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物C(74mg，99.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:358(M-56+H)+。
步骤2：(3R,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-氮杂螺-[2.4]庚烷-6-甲酰胺(D)。将化合物C(74mg,0.18mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物D(56mg，99.0％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:315(M+H)+。
步骤3：(3R,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物22)。在0℃、N2气氛下向化合物D(56mg,0.18mmol)和化合物E(49mg,0.18mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.18mL,1.08mmol)和T3P(344mg,0.54mmol)。将混合物在30℃下搅拌16小时，并用水淬灭。将混合物用EtOAc萃取，并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物22(2.0mg，2.0％收率)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.22(dd,J＝18.0,17.2Hz,1H),7.87–7.79(m,2H),7.44(dd,J＝36.0,16.0Hz,3H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.09–7.04(m,2H),7.01(dd,J＝8.4,8.8Hz,2H),4.73(dd,J＝28.8,28.0Hz,1H),4.64–4.51(m,2H),4.18(dd,J＝44.0,48.0Hz,2H),4.00–3.82(m,2H),2.56–2.47(m,1H),2.17(dd,J＝32.0,31.2Hz,1H),1.64–1.51(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:568(M+H)+。
方案16：(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物23)的合成
Figure BDA0004238079180003291
步骤1：4-(甲基硫基)噻吩-2-甲醛(B)。在-40℃、N2气氛下向n-BuLi(21.1mL,33.7mmol)在THF(40mL)中的溶液中分批添加化合物A(4g,30.7mmol)。将混合物在0℃下搅拌10分钟并在室温下再搅拌10分钟。将混合物再次冷却至-70℃并添加DMF(2.82g,36.8mmol)。将反应物在-70℃下搅拌30分钟并用饱和NH4Cl淬灭。将混合物用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:0至10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(1.6g，32.9％收率)。LC/MS(ESI)m/z:159(M+H)+。
步骤2：(E)-2-甲基-N-((4-(甲基硫基)噻吩-2-基)亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(C)。将化合物B(1.3g,8.2mmol)、Ti(i-PrO)4(7.0g,24.6mmol)和叔丁烷亚磺酰胺(1.5g,12.3mmol)在DCM(13mL)中的混合物在室温下搅拌4小时，并将反应物用H2O淬灭。将混合物通过硅藻土塞过滤，并将滤液在EtOAc和水之间分配。将层分离并将有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到化合物C(1.8g，83.8％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI):m/z 262(M+H)+。
步骤3：N-((4-(甲基硫基)噻吩-2-基)甲基)新戊酰胺(D)。在0℃、N2气氛下向化合物C(1.8g,6.8mmol)在MeOH(18mL)中的溶液中分批添加NaBH4(0.52g,13.7mmol)。将反应物在室温下搅拌0.5小时，并用饱和NH4Cl溶液淬灭。将混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到化合物D(1.6g，88.9％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:264(M+H)+。
步骤4：N-((4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)噻吩-2-基)甲基)新戊酰胺(E)。在0℃、N2气氛下向化合物D(1.6g,6.0mmol)在MeOH(30mL)中的溶液中添加Ph(OAc)2(4.44g,13.8mmol)和NH3/MeOH(2.25mL,9.0mmol,4M)，并将混合物在室温下搅拌0.5小时。将反应物在减压下浓缩至干，并将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝1:0至10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物E(1.0g，56.1％收率)。LC/MS(ESI)m/z:295(M+H)+。
步骤5：(5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)(甲基)-l6-硫烷酮(sulfanone)(F)。将化合物E(0.4g,1.36mmol)和HCl/1,4-二噁烷(6mL)的混合物在室温下搅拌1小时，并将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物F(0.21g，84.0％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:191(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物23)。在室温、N2气氛下向化合物F(28.5mg,0.15mmol)和G(25mg,0.075mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(50.0mg,0.375mmol)和T3P(145mg,0.225mmol)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物23(5.0mg，12.0％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.02(d,J＝1.5Hz,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(dd,J＝8.5,7.5Hz,2H),7.34(s,1H),7.21(d,J＝7.4Hz,1H),7.07(dd,J＝8.6,1.0Hz,2H),7.02–6.99(m,2H),4.80(d,J＝3.4Hz,1H),4.54(dd,J＝19.4,3.5Hz,2H),4.40(dd,J＝16.5,3.5Hz,1H),4.27(dd,J＝16.6,2.6Hz,1H),3.39(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),3.11(d,J＝14.0Hz,3H),2.40(t,J＝12.4Hz,1H),2.19–2.12(m,1H),1.29(s,3H),1.16(t,J＝6.2Hz,1H),0.79(t,J＝5.9Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:567(M+H)+。
方案17：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟亚甲基)-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物26)
Figure BDA0004238079180003311
步骤1：(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(二氟亚甲基)吡咯烷-2-甲酸(B)。在0℃下向化合物A(100mg,0.36mmol)在MeOH(1mL)和THF(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(15mg,0.36mmol)在H2O(0.5mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将水层用0.5M HCl酸化并用EtOAc萃取两次。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物B(94mg，99％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:208(M-56+H)+。
步骤2：(S)-2-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-(二氟-亚甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(D)。在0℃、N2气氛下向化合物B(94mg,0.36mmol)和化合物C(111mg,0.71mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.37mL,2.14mmol)和T3P(682mg,1.07mmol)，并将混合物在30℃下搅拌5小时。将混合物用水稀释，并用CH3Cl/i-PrOH(V/V＝3/1)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝100:1至5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物D(60mg，42％收率)。LC/MS(ESI)m/z:301(M-100+H)+。
步骤3：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟亚甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(E)。将化合物D(60mg,0.15mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物E(45mg，100％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:301(M+H)+。
步骤4：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟亚甲基)-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物26)。在0℃、N2气氛下向化合物E(45mg,0.15mmol)和化合物F(36mg,0.15mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.16mL,0.9mmol)和T3P(286mg,0.45mmol)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释，并用CH3Cl/i-PrOH(V/V＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物26(3mg，4％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.22(t,J＝2.6Hz,1H),7.43(d,J＝26.4Hz,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,2H),6.92–6.87(m,3H),4.75–4.64(m,1H),4.63–4.50(m,2H),4.39–4.14(m,2H),4.08–3.92(m,4H),3.14–2.88(m,1H),2.74(dd,J＝45.6,46.0Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.11–2.03(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:520(M+H)+。
方案18：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物27)的合成
Figure BDA0004238079180003331
步骤1：(2S,4R)-2-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-甲氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物A(100mg,0.41mmol)和化合物B(126mg,0.82mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.41mL,2.46mmol)和T3P(391mg,1.23mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤。将有机层分离并用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物C(110mg，70.5％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：383(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-甲氧基吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(D)。将化合物C(110mg,0.29mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物D(92mg，99.8％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:283(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物27)。在0℃、N2气氛下向化合物D(40mg,0.13mmol)和化合物E(30mg,0.13mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.13mL,0.78mmol)和T3P(124mg,0.39mmol)。将反应物在室温下搅拌16小时。将混合物用CH3Cl/i-PrOH(V/V＝3/1)稀释，并且将有机层用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物27(2.2mg，3.5％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.24–8.22(m,1H),7.45(s,1H),7.25(t,J＝8.0Hz,2H),6.93–6.89(m,3H),4.60–4.53(m,2H),4.45(t,J＝8.0Hz,1H),4.12–4.08(m,1H),4.05–3.99(m,4H),3.74(d,J＝3.2Hz,2H),3.36(s,3H),2.50–2.46(m,2H),2.41–2.33(m,1H),2.11–2.01(m,3H)；LC/MS(ESI)m/z:502(M+H)+。
方案19：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物28)的合成
Figure BDA0004238079180003341
步骤1：(S)-4-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯(B)。将化合物A(500mg,2.06mmol)和HCl/1,4-二噁烷(5mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物2(294mg，100％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:144(M+H)+。
步骤2：(S)-4-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物B(294mg,2.06mmol)和NaHCO3(344.4mg,4.12mmol)在THF(5mL)和H2O(5mL)中的混合物中逐滴添加氯甲酸苄酯(455mg,2.68mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝10:1至3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物C(410mg，72％收率)。
步骤3：(S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-7,8-二甲酸7-苄酯8-甲酯(D)。在室温、N2气氛下向化合物C(410mg,1.48mmol)在甲苯(8mL)中的溶液中添加乙二醇(367mg,5.92mmol)和PTSA(141mg,0.74mmol)。将反应物在140℃下搅拌6小时。将混合物冷却至室温，用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝10:1至3:2)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物D(255mg，54％收率)。LC/MS(ESI)m/z:322(M+H)+。
步骤4：(S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(E)。在N2气氛下向搅拌的化合物D(255mg,0.795mmol)在MeOH中的溶液中添加10％ Pd/C(30mg)，并将反应物在室温、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物E(130mg，88％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:188(M+H)+。
步骤5：(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸甲酯(G)。在室温、N2气氛下向化合物F(15.0g,83.3mmol)在DMF(150mL)中的溶液中添加DIPEA(43.0g,333.2mmol)、甘氨酸甲酯盐酸盐(15.7g,124.9mmol)、HOBt(15.7g,116.6mmol)和EDCl(20.7g,108.3mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝:1至2:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物G(20.1g，96％收率)。LC/MS(ESI)m/z:252(M+H)+。
步骤6：(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(H)。在0℃下向化合物G(10.3g,41mmol)在MeOH(30mL)和水(10mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(3.5g,82mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1NHCl水溶液酸化至pH～3并过滤。将残余物用水洗涤，并在减压下干燥从而得到呈白色固体的化合物H(6.6g，68％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：238(M+H)+。
步骤7：(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(I)。在室温、N2气氛下向化合物H(110mg,0.464mmol)和化合物E(130.1mg,0.696mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(239mg,1.86mmol)和T3P(590mg,0.928mmol，50％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝5:1至1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物I(62mg，33％收率)。LC/MS(ESI)m/z:407(M+H)+。
步骤8：(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J)。在0℃下向化合物I(62mg,0.153mmol)在MeOH(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(6.6mg,0.153mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物J(50mg，84％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：393(M+H)+。
步骤9：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物28)。在室温、N2气氛下向化合物J(50mg,0.128mmol)和化合物K(36.3mg,0.191mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(49.5mg,0.384mmol)和T3P(163mg,0.256mmol，50％于EtOAc中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用CH3Cl/i-PrOH(V/V＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物28(3mg，5％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),8.20(s,1H),8.08(s,1H),7.42(s,1H),7.27(t,J＝7.9Hz,2H),6.93–6.86(m,3H),4.40(d,J＝5.7Hz,1H),4.38–4.31(m,1H),3.98–3.84(m,7H),3.78(dd,J＝16.9,5.0Hz,1H),3.69(d,J＝11.2Hz,1H),3.54(d,J＝10.8Hz,2H),2.34–2.26(m,3H),2.06–1.91(m,3H)；LC/MS(ESI)m/z:530(M+H)+。
方案20：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物29)的合成
Figure BDA0004238079180003381
步骤1：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在50℃、N2气氛下向化合物A(375mg,1.5mmol)和CuI(60mg,0.31mmol)在MeCN(5mL)中的混合物中添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(330mg,1.8mmol)在MeCN(1.5mL)中的溶液，并将混合物在50℃下搅拌过夜。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(160mg，35.5％收率)。LC/MS(ESI)m/z:296(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。将化合物B(60mg,0.20mmol)和HCl/1,4-二噁烷(5mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物C(35mg，87.5％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:196(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物C(35mg,0.18mmol)和化合物D(51mg,0.22mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.18mL,1.08mmol)和T3P(171mg,0.54mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝97:3)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物E(35mg，47.3％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：415(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(F)。在0℃下向化合物E(35mg,0.08mmol)在MeOH(5mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(3.6mg,0.08mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色半固体的化合物F(30mg，88.2％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：401(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物29)。在0℃、N2气氛下向化合物6(30mg,0.075mmol)和化合物F(18mg,0.11mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.07mL,0.45mmol)和T3P(143mg,0.23mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释，并用CHCl3/i-PrOH(V/V＝3/1)萃取两次。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝4:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物29(11.2mg，28％收率)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.49(s,1H),8.22(dd,J＝4.2,1.5Hz,1H),7.46(d,J＝21.9Hz,1H),7.27–7.19(m,2H),6.93–6.86(m,3H),6.48(dd,J＝80.6,68.2Hz,1H),4.94(dd,J＝7.5,4.1Hz,1H),4.58(ddd,J＝22.9,15.7,7.9Hz,3H),4.09–3.94(m,4H),3.93–3.84(m,1H),3.81–3.68(m,1H),2.44(ddd,J＝18.0,9.1,5.1Hz,3H),2.23–2.15(m,1H),2.12–2.02(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:538(M+H)+。
方案21：N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环-[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(化合物30)
Figure BDA0004238079180003401
步骤1：1-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-7-氮杂双环-[2.2.1]庚烷-7-甲酸叔丁酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物A(150mg,0.62mmol)和化合物B(145mg,0.93mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.6mL,3.72mmol)和T3P(1.2g,1.86mmol)，并将混合物在25℃搅拌16小时。将混合物用H2O稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝4:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物3(35mg，16.2％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：379(M+H)+。
步骤2：N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(D)。将化合物C(35mg,0.092mmol)和HCl/1,4-二噁烷(5mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物D(25mg，96.2％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:279(M+H)+。
步骤3：N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(化合物30)。在0℃、N2气氛下向化合物D(25mg,0.09mmol)和化合物F(26mg,0.11mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.09mL,0.54mmol)和T3P(171mg,0.27mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释，并用CHCl3/i-PrOH(V/V＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝4:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物30(2.0mg，4.5％收率)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.46(s,1H),8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.47(s,1H),7.23(dd,J＝9.6,6.5Hz,2H),6.92–6.85(m,3H),4.57(s,2H),4.50(t,J＝4.7Hz,1H),4.03–3.94(m,4H),2.44(t,J＝7.4Hz,2H),2.14–2.04(m,4H),1.98(t,J＝11.7Hz,2H),1.84–1.75(m,2H),1.71–1.62(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:498(M+H)+。
方案22：(E)-N-氰基-5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酸甲酯(化合物31)的合成
Figure BDA0004238079180003411
步骤1：N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-甲酰基噻吩-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(B)。在-5℃、N2气氛下向化合物A(400mg,1.18mmol)在DCM(7mL)中的溶液中添加DIBAL-H(1.54mL,1.54mmol)，并将混合物在-5℃下搅拌3小时。将混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，并在室温下搅拌过夜，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝50:1至5:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的化合物B(74mg，18.3％收率)。LC/MS(ESI)m/z:342(M+H)+。
步骤2：(E)-5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-N-氰基噻吩-3-氨亚基替甲酸甲酯(C)。在室温、N2气氛下向化合物B(74mg,0.22mmol)和NH2CN(37mg,0.88mmol)在MeOH(3mL)中的混合物中添加t-BuONa(84mg,0.88mmol)，并将混合物在30℃下搅拌30分钟。向混合物中添加NBS(156mg,0.88mmol)并将反应物在50℃下搅拌过夜。将反应物用冰水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的化合物C(35mg，53.8％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：240(M+H-56)+。
步骤3：(Z)-5-(氨基甲基)-N-氰基噻吩-3-氨亚基替甲酸甲酯(D)。在0℃下向化合物C(35mg,0.12mmol)在DCM(2.8mL)中的溶液中添加TFA(0.8mL)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物D(16mg，69.6％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:196(M+H)+。
步骤4：(E)-N-氰基-5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酸甲酯(化合物31)。在0℃、N2气氛下向化合物D(16mg,0.082mmol)和化合物E(39mg,0.098mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.09mL,0.49mmol)和T3P(156mg,0.25mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物31(1.9mg,4.1％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(t,J＝5.6Hz,1H),8.60(dd,J＝6.0,6.0Hz,1H),8.55(t,J＝6.0Hz,1H),7.91-7.87(m,2H),7.59(d,J＝18.4Hz,1H),7.48-7.43(m,2H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.12–7.08(m,2H),7.06–7.02(m,2H),4.70–4.63(m,1H),4.51–4.33(m,3H),4.03(dd,J＝16.8,16.8Hz,1H),3.95(d,J＝6.8Hz,3H),3.44(dd,J＝6.0,6.0Hz,1H),2.29(t,J＝12.4Hz,1H),1.99(dd,J＝13.2,13.2Hz,1H),1.23(s,3H),1.18(dd,J＝5.2,5.2Hz,1H),0.68(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)(m/z):572(M+H)+。
方案23：5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酸甲酯(化合物32)的合成
Figure BDA0004238079180003431
步骤1：5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]-己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酸甲酯(化合物32)。使HCl气体(由NaCl和浓H2SO4原位产生)通过化合物1(50mg,0.1mmol)在MeOH(5mL)中的溶液，并将HCl气流在25℃下保持0.5小时。将混合物用NaHCO3水溶液中和至pH＝8并用CHCl3/i-PrOH(v:v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物32(3mg，5.6％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.87–7.76(m,3H),7.44–7.34(m,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(dd,J＝8.6,0.9Hz,2H),7.01–6.94(m,2H),4.81(d,J＝3.3Hz,1H),4.50(s,2H),4.32(dd,J＝36.9,16.5Hz,2H),3.79(s,3H),3.38(d,J＝3.6Hz,1H),2.38(d,J＝13.0Hz,1H),2.17(dd,J＝13.4,3.3Hz,1H),1.28(s,3H),1.13(dd,J＝5.8,2.4Hz,1H),0.76(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:547(M+H)+。
方案24：N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(化合物16)
Figure BDA0004238079180003441
步骤1：7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1,7-二甲酸1-苄酯7-(叔丁基)酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(150mg,0.62mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加K2CO3(257mg,1.86mmol)和BnBr(160mg,1.86mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(200mg，收率97.1％)。LC/MS(ESI)m/z:332(M+H)+。
步骤2：7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸苄酯(C)。将化合物B(200mg,0.60mmol)和HCl/1,4-二噁烷(5mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物C(130mg，93.5％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:232(M+H)+。
步骤3：7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸苄酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物C(150mg,0.65mmol)和化合物D(211mg,0.78mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.64mL,3.9mmol)和T3P(1.2g,1.95mmol)，并将混合物在25℃搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:2)进行纯化从而得到呈黄色固体的E(205mg，65.3％收率)。LC/MS(ESI)m/z:485(M+H)+。
步骤4：7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(F)。在N2气氛下向化合物E(205mg,0.42mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物F(100mg，59.9％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：395(M+H)+。
步骤5：N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(化合物16)。在0℃、N2气氛下向化合物F(100mg,0.25mmol)和化合物G(59mg,0.38mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.25mL,1.5mmol)和T3P(242mg,0.75mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用CHCl3/i-PrOH(v:v＝3/1)萃取两次。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物16(2.0mg，1.5％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.50(s,1H),8.19(d,J＝1.6Hz,1H),7.87–7.80(m,2H),7.47(d,J＝1.3Hz,1H),7.44–7.38(m,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.09–7.04(m,2H),7.03–6.98(m,2H),4.59(s,3H),4.19(s,2H),2.19–1.97(m,4H),1.83(td,J＝10.4,3.4Hz,2H),1.73–1.63(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:532(M+H)+。
方案25：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物33)
Figure BDA0004238079180003461
步骤1：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(B)。将化合物A(175mg,0.49mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物B(124mg，98％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:256(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(D)。在0℃、N2气氛下向化合物B(124mg,0.43mmol)和化合物C(101mg,0.43mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.4mL,2.58mmol)和T3P(820mg,1.29mmol)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝100:1至20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物3(200mg，98％收率)。LC/MS(ESI)m/z:475(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(E)。在室温、H2气氛下向化合物D(200mg,0.42mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加10％Pd/C(70mg)并保持2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物E(162mg，收率100％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:385(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物33)。在0℃、N2气氛下向化合物E(50mg,0.13mmol)和化合物5(38mg,0.20mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.13mL,0.78mmol)和T3P(248mg,0.39mmol)，并将混合物在30℃下搅拌5小时。将混合物用水稀释，并用CH3Cl/i-PrOH(V/V＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物33(1.4mg，2％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,2H),8.23(dd,J＝4.4,4.4Hz,1H),7.46(t,J＝9.0Hz,1H),7.26–7.21(m,2H),6.91–6.87(m,3H),4.74–4.68(m,1H),4.62(dd,J＝3.6,5.6Hz,1H),4.57(d,J＝8.0Hz,4H),4.10–4.05(m,1H),4.00(dd,J＝7.6,8.8Hz,3H),3.96–3.86(m,1H),2.63–2.49(m,1H),2.48–2.43(m,2H),2.28–2.12(m,1H),2.07(t,J＝7.2Hz,2H)；LC/MS(ESI)m/z:522(M+H)+。
方案26：(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-(5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)噻吩-2-基)-甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物34)
Figure BDA0004238079180003481
步骤1：N-(叔丁氧基羰基)-N-{[4-(5-氧代-4H-1,2,4-噁二唑-3-基)噻吩-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(100mg,0.27mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的溶液中添加CDI(52mg,0.32mmol)和DBU(45mg,0.3mmol)，并将混合物在100℃下搅拌6小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(56mg，收率52％)。LC/MS(ESI)m/z:242(M-156+H)+。
步骤2：3-(5-(氨基甲基)噻吩-3-基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮(C)。将化合物B(56mg,0.14mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物C(27mg，97％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:198(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-(5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)噻吩-2-基)-甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物34)。在0℃、N2气氛下向化合物C(27mg,0.14mmol)和化合物D(55mg,0.14mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.14mL,0.84mmol)和T3P(267mg,0.42mmol)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释，并用CH3Cl/i-PrOH(V/V＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物34(1.5mg，2％收率)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.88–7.78(m,3H),7.44–7.37(m,2H),7.32(d,J＝1.2Hz,1H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.06(dd,J＝8.8,0.9Hz,2H),7.01–6.95(m,2H),4.82(d,J＝3.3Hz,1H),4.61–4.52(m,3H),4.33(dd,J＝33.6,37.2Hz,2H),3.39(dd,J＝6.0,6.0Hz,1H),2.40(t,J＝12.4Hz,1H),2.17(dd,J＝13.6,13.2Hz,1H),1.29(s,3H),1.14(dd,J＝6.0,5.6Hz,1H),0.78(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:574(M+H)+
方案27：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物36)的合成
Figure BDA0004238079180003491
步骤1：(2S,4S)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。向化合物A(750mg,3.0mmol)在MeCN(10mL)中的溶液中添加CuI(117mg,0.62mmol)，并将混合物在N2气氛下加热至50℃。将2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(653mg,3.6mmol)在MeCN(3.0mL)中的溶液逐滴添加到混合物中，并将混合物在50℃下搅拌过夜。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(150mg，16.7％收率)。LC/MS(ESI)m/z:296(M+H)+。
步骤2：(2S,4S)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。将化合物B(150mg,0.51mmol)和HCl/1,4-二噁烷(3mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物C(95mg，96.0％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:196(M+H)+。
步骤3：(2S,4S)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物C(95mg,0.49mmol)和化合物D(198mg,0.73mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(253mg,1.96mmol)和T3P(623mg,0.98mmol,50％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝100:1至20:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物E(190mg，87.0％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：449(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(F)。在0℃下向化合物E(190mg,0.39mmol)在MeOH(2mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(17mg,0.39mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N将HCl水溶液酸化至pH～3并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色半固体的化合物F(170mg，92.4％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：435(M+H)+。
步骤5：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物36)。在0℃、N2气氛下向化合物F(50mg,0.115mmol)和化合物G(33mg,0.173mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(59mg,0.46mmol)和T3P(146mg,0.23mmol,50％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用CHCl3/i-PrOH(v:v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝4:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物36(2.0mg，3.1％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.22(dd,J＝16.3,1.4Hz,1H),7.86(t,J＝8.3Hz,2H),7.45–7.39(m,2H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.08(d,J＝7.7Hz,2H),7.02(dd,J＝8.5,6.4Hz,2H),6.38(dd,J＝90.5,58.4Hz,1H),4.75(d,J＝7.9Hz,1H),4.68–4.56(m,3H),4.29(d,J＝16.6Hz,1H),4.15–3.99(m,2H),3.91(d,J＝11.1Hz,1H),2.57–2.50(m,1H),2.38–2.35(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:572(M+H)+。
方案28：(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-N,5-二甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物35)的合成
Figure BDA0004238079180003521
步骤1：5-甲酰基噻吩-3-甲腈(B)。在N2气氛下向化合物A(10g,52.3mmol)在NMP(200mL)中的溶液中添加氰化亚铜(14g,159.6mmol)和碘化亚铜(4.5g,23.6mmol)。将混合物加热至150℃保持8小时，并通过TLC(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)进行监测。将所得混合物在乙酸乙酯和饱和NH4Cl水溶液之间分配。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩至干从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶：20-50％的在石油醚中的乙酸乙酯)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的目标化合物B(1.3g，40％收率)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ9.95(d,J＝1.2Hz,1H),8.27(s,1H),7.94(d,J＝1.2Hz,1H)。
步骤2：5-[(甲基氨基)甲基]噻吩-3-甲腈(C)。在0℃、N2气氛下向化合物2(1.1g,8.0mmol)的溶液中添加MeNH2/MeOH溶液(1.9g,16.0mmol)和在甲醇中的MgSO4(200mg)，随后添加NaBH4(610mg,16.0mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，并通过TLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行监测，并将所得混合物在乙酸乙酯和饱和NH4Cl水溶液之间分配。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩至干从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶：10-30％的在二氯甲烷中的甲醇)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物C(710mg,4.6mmol，58％收率)。LC/MS(ESI)m/z:153(M+H)+。
步骤3：N-[(4-氰基噻吩-2-基)甲基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(D)。向化合物C(710mg,4.6mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加TEA(1.4g,14.0mmol)、DMAP(171mg,1.4mmol)和Boc2O(1.5g,7.0mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，并通过TLC(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行监测，并将所得混合物在减压下浓缩从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶：10-20％的在石油醚中的乙酸乙酯)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈黄色油状物的化合物D(1.12g,1.3mmol，95％收率)。LC/MS(ESI)m/z:253(M+H)+。
步骤4：N-{[4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基]甲基}-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(E)。向化合物D(1.1g,4.439mmol)和DIPEA(1.7g,13.3mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中添加盐酸羟胺(771mg,11.1mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，并通过TLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行监测，并将所得混合物在减压下浓缩从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶:5-15％的在二氯甲烷中的甲醇)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物E(1.7g，96.7％收率)。LC/MS(ESI)m/z:286(M+H)+。
步骤5：N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(F)。在H2气氛下向化合物E(825mg,2.9mmol)在甲醇中的溶液中添加雷尼镍(Raney Ni)。将混合物加热至30℃并搅拌3小时。将所得混合物过滤并在减压下浓缩从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶:10-25％的在二氯甲烷中的甲醇)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈黄色固体的化合物F(610mg，78％收率)。LC/MS(ESI)m/z:270(M+H)+。
步骤6：5-[(甲基氨基)甲基]噻吩-3-甲脒(G)。向化合物F(305mg,1.1mmol)在1,4-二噁烷中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(5mL)。将混合物在室温下搅拌2小时，并通过TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行监测，并将所得混合物在减压下浓缩从而得到呈白色固体的化合物G(180mg,1.064mmol,94％收率)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:170(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-N,5-二甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物35)。向化合物G(25mg,0.152mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(化合物H；30mg,0.076mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(59mg,0.456mmol)和T3P(145mg,0.228mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，并通过TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行监测，并将所得混合物在减压下浓缩从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶:5-15％的在二氯甲烷中的甲醇)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物35(4mg,0.007mmol，9.6％收率)。LC/MS(ESI)m/z:546(M+H)+；1H-NMR(400MHz,MeOD)δ8.52(s,1H),8.28(dd,J＝17.3,4.7Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,2H),7.42(dd,J＝13.0,5.3Hz,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,2H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),5.24(dd,J＝11.5,3.8Hz,1H),4.74(s,1H),4.66(s,1H),4.57(d,J＝16.7Hz,1H),4.22(d,J＝16.8Hz,1H),3.43(dt,J＝7.5,3.8Hz,1H),3.18–3.01(m,3H),2.55(t,J＝12.0Hz,1H),2.04–1.92(m,1H),1.38(dd,J＝5.4,2.4Hz,1H),1.31(d,J＝2.9Hz,3H),0.80(t,J＝5.2Hz,1H)。
方案29：(1S,3S,5S)-N-((4-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物37)的合成
Figure BDA0004238079180003551
步骤1：(1S,3S,5S)-N-((4-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物37)。在0℃、N2气氛下向化合物A(50.0mg,0.097mmol)在乙烷-1,2-二胺(2mL)中的混合物中添加P2S5(6.5mg,0.029mmol)，并将混合物在120℃下搅拌4小时。将混合物用H2O稀释并用CHCl3/i-PrOH(v:v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝4:1)进行纯化从而得到化合物37(50mg，92.3％收率)，通过制备型HPLC对其中20mg进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物(7.3mg)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.55(s,1H),8.18(d,J＝1.5Hz,1H),7.85–7.81(m,2H),7.44–7.40(m,2H),7.36(d,J＝1.3Hz,1H),7.24–7.18(m,1H),7.07(t,J＝1.6Hz,1H),7.06–7.05(m,1H),7.00(d,J＝2.0Hz,1H),6.99–6.98(m,1H),4.83(d,J＝3.4Hz,1H),4.55(d,J＝3.7Hz,2H),4.34(d,J＝9.5Hz,2H),3.92(s,4H),3.41(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),2.56–2.34(m,1H),2.17(dd,J＝13.4,3.4Hz,1H),1.30(s,3H),1.15(dd,J＝5.8,2.4Hz,1H),0.80(dd,J＝5.9,4.7Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:558(M+H)+。
方案30：(1S,3S,5S)-N-((4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物38)的合成
Figure BDA0004238079180003561
步骤1：(1S,3S,5S)-N-((4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物38)。向化合物37(20.0mg,0.036mmol)在乙腈(2mL)中的混合物中添加KMnO4(17.0mg,0.108mmol)和SiO2(28.7mg,800mg/mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物38(3.5mg，17.6％收率)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.84(dd,J＝9.1,5.6Hz,2H),7.66(d,J＝1.4Hz,1H),7.43(t,J＝8.0Hz,3H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.11–6.92(m,6H),4.84(d,J＝3.2Hz,1H),4.56(s,2H),4.44–4.27(m,2H),3.46–3.35(m,1H),2.42(t,J＝12.3Hz,1H),2.21(dd,J＝13.4,3.3Hz,1H),1.31(s,3H),1.18(dd,J＝5.7,2.5Hz,1H),0.78(t,J＝6.1Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:556(M+H)+。
方案31：5-(氨基甲基)噻吩-2-甲脒盐酸盐的合成
Figure BDA0004238079180003562
步骤1：5-(羟基甲基)噻吩-2-甲腈(B)。在0℃下向化合物A(500mg,3.64mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加NaBH4(179mg,4.74mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用H2O稀释并用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物A(428mg，84.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:140(M+H)+。
步骤2：5-(溴甲基)噻吩-2-甲腈(C)。在0℃下向化合物B(428mg,3.08mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加CBr4(1.1g,3.38mmol)和PPh3(893mg,3.38mmol)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物C(430mg，69.2％收率)。LC/MS(ESI)m/z:203(M+H)+。
步骤3：N-(叔丁氧基羰基)-N-{[5-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(D)。在0℃、N2气氛下向亚胺二甲酸二叔丁酯(600mg,2.77mmol)在无水THF(8mL)中的溶液中添加氢化钠(60％,127mg,3.19mmol)，并将混合物在0℃下搅拌40分钟。将在THF(2mL)中的化合物C(430mg,2.13mmol)添加到上面的混合物中，并将所得混合物在25℃下在N2气氛下再搅拌16小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过经由硅胶的柱色谱(用石油醚:乙酸乙酯＝4:1洗脱)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物D(320mg，40.5％收率)。LC/MS(ESI)m/z:239(M+H-100)+。
步骤4：N-(叔丁氧基羰基)-N-{[5-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(D)。在0℃下向化合物D(320mg,0.946mmol)在乙醇(5mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(366mg,2.84mmol)和盐酸羟胺(164mg,2.36mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。在反应完成后，将混合物用二氯甲烷稀释并用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物E(200mg，57％收率)。LC/MS(ESI)m/z:372(M+H)+。
步骤5：N-(叔丁氧基羰基)-N-[(5-甲脒基噻吩-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(F)。向化合物5(200mg,0.538mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加雷尼镍(1mL)和乙酸(0.5mL)，并将混合物在30℃下在H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物6(160mg，83.6％收率)。LC/MS(ESI)m/z:356(M+H)+。
步骤6：5-(氨基甲基)噻吩-2-甲脒盐酸盐。将化合物F(160mg,0.45mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的标题化合物(86mg，100％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:156(M+H)+。
方案32：(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物39)
Figure BDA0004238079180003581
步骤1：(5-{[双(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}噻吩-3-基)甲脒乙酸盐(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(100mg,0.27mmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加TEA(0.14mL,1.8mmol)和AcCl(0.03mL,0.27mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物倒入冰水中并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝100:1至1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(80mg，71.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:358(M-56+H)+。
步骤2：N-乙酰氧基-5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(C)。将化合物B(80mg,0.19mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物C(40mg，96.9％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:214(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物39)。在0℃、N2气氛下向化合物C(40mg,0.18mmol)和化合物D(74mg,0.18mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.19mL)和T3P(358mg,0.56mmol)，并将混合物在35℃下搅拌5小时。将混合物用EtOAc和水稀释。将混合物分离，并将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物39(7mg,6.33％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.87–7.82(m,2H),7.79(dd,J＝7.6,7.6Hz,1H),7.44–7.38(m,2H),7.35(dd,J＝5.2,5.2Hz,1H),7.22–7.17(m,1H),7.09–7.03(m,2H),7.02–6.97(m,2H),4.81(dd,J＝11.2,11.6Hz,1H),4.56–4.49(m,2H),4.39(t,J＝15.4Hz,1H),4.19(dd,J＝57.6,57.6Hz,1H),3.37(dd,J＝10.0,10.0Hz,1H),2.44–2.26(m,1H),2.23–2.10(m,4H),1.27(d,J＝3.1Hz,3H),1.16(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.76(t,J＝8.0Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:590(M+H)+。
方案33：N-{2-[(2S)-2-{[(4-甲脒基噻吩-2-基)氨基甲酰基]甲基}-吡咯烷-1-基]-2-氧代乙基}-4-苯氧基苯甲酰胺(化合物40)的合成
Figure BDA0004238079180003601
步骤1：4-氰基噻吩-2-甲酸(B)。向化合物A(2g,14.3mmol)在丙酮(20mL)中的溶液中逐滴添加CrO3和浓H2SO4(10mL,14.371mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜并通过TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行监测，将所得混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物B(1.45g，9.467mmol，65％收率)。LC/MS(ESI)m/z:154(M+H)+。
步骤2：N-(4-氰基噻吩-2-基)氨基甲酸叔丁酯(C)。向化合物B(900mg,5.8mmol)和TEA(1.2g,11.752mmol)在t-BuOH(10mL)中的溶液中逐滴添加DPPA(3.2g,11.7mmol)。将混合物加热并在90℃下搅拌过夜，并通过TLC(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行监测。将所得混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩至干从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶：10-25％的在石油醚中的乙酸乙酯)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物C(810mg，61％收率)。LC/MS(ESI)m/z:225(M+H)+。
步骤3：N-[4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基]氨基甲酸叔丁酯(D)。向化合物C(810mg,3.6mmol)在EtOH(10mL)中的溶液中添加DIPEA(1.4g,10.8mmol)和盐酸羟胺(627mg,9.0mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时并通过TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行监测，并将所得混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩至干从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶：5-15％的在DCM中的MeOH)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物D(780mg，84％收率)。LC/MS(ESI)m/z:258(M+H)+。
步骤4：N-(4-甲脒基噻吩-2-基)氨基甲酸叔丁酯(E)。向化合物D(780mg,3.031mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中添加乙酸(0.1mL)和雷尼镍(1mL在水中)。将混合物加热并在40℃下搅拌2小时，并通过TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行监测。将所得混合物在减压下浓缩至干从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶:10-30％的在二氯甲烷中的甲醇)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物E(710mg，97％收率)。LC/MS(ESI)m/z:242(M+H)+。
步骤5：5-氨基噻吩-3-甲脒(F)。向化合物E(300mg,1.2mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(2mL)。将混合物在室温下搅拌2小时，并通过TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行监测，并将所得混合物在减压下浓缩从而得到呈白色固体的化合物F(160mg，91％收率)。LC/MS(ESI)m/z:142(M+H)+。
步骤6：(2S)-2-{[(4-甲脒基噻吩-2-基)氨基甲酰基]甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(G)。向化合物F(160mg,1.1mmol)和[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]乙酸(519mg,2.3mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(878mg,6.8mmol)和T3P(2.1g,3.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时并通过TLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行监测，并将所得混合物在乙酸乙酯和NaHCO3水溶液之间分配。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶：5-15％的在二氯甲烷中的甲醇)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物G(100mg，25％收率)。LC/MS(ESI)m/z:353(M+H)+。
步骤7：N-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-[(2S)-吡咯烷-2-基]乙酰胺(H)。向化合物G(100mg,0.284mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL)。将混合物在室温下搅拌2小时，并通过TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行监测，将所得混合物在减压下浓缩从而得到呈白色固体的化合物H(70mg，97％收率)。LC/MS(ESI)m/z:253(M+H)+。
步骤8：N-{2-[(2S)-2-{[(4-甲脒基噻吩-2-基)氨基甲酰基]甲基}吡咯烷-1-基]-2-氧代乙基}-4-苯氧基苯甲酰胺(化合物40)。向化合物H(35mg,0.139mmol)和[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酸(75mg,0.277mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(107mg,0.832mmol)和T3P(264mg,0.416mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时并通过TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行监测，将所得混合物在(氯仿:异丙醇＝3:1)和NaHCO3水溶液之间分配。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩至干从而得到粗产物，通过柱色谱(硅胶：10-20％的在二氯甲烷中的甲醇)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物40(2mg,0.004mmol，2.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:506(M+H)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.84(dd,J＝21.1,5.4Hz,3H),7.42(dd,J＝8.5,7.5Hz,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.14–7.04(m,3H),7.03–6.99(m,2H),4.48(s,1H),4.22(d,J＝16.7Hz,1H),4.10(d,J＝16.8Hz,1H),3.70–3.53(m,2H),2.95(dd,J＝14.4,4.3Hz,1H),2.77–2.50(m,1H),2.14–2.01(m,3H),1.91(s,1H)。
方案34：(1S,3S,5S)-N-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)环丙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物41)的合成
Figure BDA0004238079180003631
步骤1：(4-溴噻吩-2-基)甲醇(B)的合成。在0℃、N2气氛下向化合物A(55.7g,291.6mmol)在MeOH(600mL)中的溶液中添加NaBH4(22.2g,583.1mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜并用饱和NH4Cl淬灭。将混合物用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层分离，用无水Na2SO4干燥，在减压下浓缩至干，并将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(55.6g,98.9％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.17(d,J＝1.4Hz,1H),7.17(d,J＝1.4Hz,1H),6.95–6.87(m,1H),6.96–6.85(m,1H),4.77(d,J＝4.9Hz,2H),4.77(d,J＝4.9Hz,2H),2.13(t,J＝5.4Hz,1H),2.13(t,J＝5.4Hz,1H)。
步骤2：4-溴-2-(氯甲基)噻吩(C)的合成。在0℃、N2气氛下向化合物B(11.0g,56.98mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中逐滴添加SOCl2(13.5g,114.0mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机层用水和盐水(2×100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物C(8.9g，73％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.21(d,J＝1.5Hz,1H),7.06–6.96(m,1H),4.73(d,J＝0.6Hz,2H)。
步骤3：2-(4-溴噻吩-2-基)乙腈(D)的合成。在室温、N2气氛下向化合物C(8.9g,42.08mmol)在乙腈中的溶液中添加氰化钾(4.93g,75.74mmol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌0.5小时。将混合物在85℃下搅拌过夜。将混合物过滤并在减压下浓缩至干，并通过快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物D(4.8g，56％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.18(d,J＝1.4Hz,1H),6.99(d,J＝1.2Hz,1H),3.88(d,J＝0.9Hz,2H)。
步骤4：1-(4-溴噻吩-2-基)环丙烷-1-甲腈(E)的合成。将化合物D(3.0g,14.85mmol)、1-溴-2-氯乙烷(3.2g,22.27mmol)和苄基三乙基氯化铵(68mg,0.3mmol)的混合物在室温下在N2气氛下搅拌0.5小时。添加在水(4mL)中的NaOH(3.56g,89.08mmol)，并将混合物在50℃下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速柱色谱进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物E(2.54g，75％收率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.10(d,J＝1.5Hz,1H),6.97(d,J＝1.5Hz,1H),1.77(q,J＝5.2Hz,2H),1.43(q,J＝5.3Hz,2H)。
步骤5：1-(4-溴噻吩-2-基)环丙烷-1-甲酸乙酯(F)的合成。在0℃、N2气氛下向化合物E(2.4g,10.52mmol)在乙醇(25mL)中的溶液中添加浓H2SO4。将混合物在90℃下搅拌16小时。将混合物用H2O淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物F(1.6g，收率55％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.09(d,J＝1.5Hz,1H),6.83(d,J＝1.5Hz,1H),4.15(q,J＝7.1Hz,2H),1.71(q,J＝4.1Hz,2H),1.30(q,J＝3.7Hz,2H),1.23(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤6：1-(4-溴噻吩-2-基)环丙烷-1-甲酸乙酯(G)的合成。在室温、N2气氛下向化合物E(1.5g,5.45mmol)在NMP(15mL)中的溶液中添加氰化锌(1.28g,10.90mmol)和Pd(PPh3)4(315mg,0.27mmol)，并将混合物在160℃下搅拌3小时。将混合物用冰水淬灭，并将有机层分离。将有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物G(1.1g，收率91％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(d,J＝1.3Hz,1H),7.04(d,J＝1.3Hz,1H),4.16(q,J＝7.1Hz,2H),1.77(q,J＝4.2Hz,2H),1.33(q,J＝4.2Hz,2H),1.23(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤7：1-(4-氰基噻吩-2-基)环丙烷-1-甲酸(H)的合成。在室温、N2气氛下向化合物G(1.1g,4.97mmol)在MeOH(12mL)中的溶液中添加在H2O(1mL)中的NaOH(0.40g,9.94mmol)，并将混合物在室温下搅拌4小时。将混合物用4N HCl淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层分离，用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物G(820mg，收率85％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.09(s,1H),7.17(s,1H),1.75(q,J＝4.1Hz,2H),1.38(q,J＝4.1Hz,2H)。
步骤8：(1-(4-氰基噻吩-2-基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(I)的合成。在室温、N2气氛下向化合物G(200mg,1.04mmol)和TEA(314mg,3.11mmol)在t-BuOH(2mL)中的溶液中添加DPPA(428mg,1.55mmol)，并将混合物在90℃下搅拌过夜。添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层分离，用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物I(100mg，收率36.5％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69(d,J＝0.8Hz,1H),6.93(s,1H),1.43(s,9H),1.35(s,2H),1.26(d,J＝4.9Hz,2H)。
步骤9：(1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)环丙基)-氨基甲酸叔丁酯(J)的合成。在室温、N2气氛下向化合物I(100mg,0.38mmol)和DIPEA(196mg,1.51mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中添加NH2OH-HCl(50mg,0.76mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物J(80mg，收率71.1％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.48(s,1H),7.02(s,1H),1.45(s,9H),1.26(d,J＝1.8Hz,2H),1.23(dd,J＝3.4,1.8Hz,2H)。
步骤10：(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(K)的合成。在室温、H2气氛下向化合物J(75mg,0.25mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中添加雷尼镍(0.5mL)，并将混合物在室温下搅拌4小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物K(60mg，收率84.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。(ESI)m/z:282(M+H)+
步骤11：5-(1-氨基环丙基)噻吩-3-甲脒(L)的合成。在室温、N2气氛下向化合物K(60mg,0.21mmol)在甲醇(1mL)中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的HCl(1.0M)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物L(40mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。(ESI)m/z:182(M+H)+
步骤12：(1S,3S,5S)-N-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)环丙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物41)的合成
在室温、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(30mg,0.076mmol)和化合物K(40mg,0.23mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(40mg,0.304mmol)和T3P(42mg,0.152mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取两次并分离。将合并的有机层在减压下浓缩至干，并通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物41(2.7mg，收率6.2％)。1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.11(d,J＝1.6Hz,1H),7.90–7.85(m,2H),7.45–7.39(m,2H),7.31(d,J＝1.6Hz,1H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(dd,J＝8.6,1.0Hz,2H),7.02(d,J＝8.8Hz,2H),4.79(dd,J＝11.4,3.5Hz,1H),4.40(d,J＝16.5Hz,1H),4.29(d,J＝16.5Hz,1H),3.41(dd,J＝5.9,2.4Hz,1H),2.41(t,J＝12.6Hz,1H),2.13(dd,J＝13.3,3.5Hz,1H),1.36(d,J＝3.5Hz,2H),1.31(s,5H),1.18(dd,J＝5.7,2.3Hz,1H),0.81(t,J＝5.3Hz,1H)。
方案34：(1S,3S,5S)-N-(3-甲氧基苄基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物42)的合成
Figure BDA0004238079180003671
步骤1：(1S,3S,5S)-N-(3-甲氧基苄基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物42)的合成。在室温、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(A；30mg,0.076mmol)和(3-甲氧基苯基)甲胺(B；16mg,0.114mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(40mg,0.304mmol)和T3P(42mg,0.152mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物42(18.5mg，47％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.87–7.78(m,2H),7.41(t,J＝8.0Hz,2H),7.18(dd,J＝20.2,7.7Hz,2H),7.06(d,J＝8.3Hz,2H),6.98(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(d,J＝2.4Hz,2H),6.75(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),4.83(d,J＝3.4Hz,1H),4.38(d,J＝16.0Hz,2H),4.31(d,J＝9.4Hz,2H),3.72(s,3H),3.49–3.35(m,1H),2.41(t,J＝12.4Hz,1H),2.16(dd,J＝13.3,3.4Hz,1H),1.29(s,3H),1.17(dd,J＝5.7,2.4Hz,1H),0.77(t,J＝5.6Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:514(M+H)+。
方案35：(1S,3S,5S)-N-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物43)的合成
Figure BDA0004238079180003681
步骤1：(1S,3S,5S)-N-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物43)的合成。在室温、N2气氛下向化合物A(30mg,0.076mmol)和化合物B(21mg,0.152mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(30mg,0.228mmol)和T3P(72mg,0.114mmol，50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物43(5.9mg，15％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.84–7.78(m,2H),7.44–7.39(m,2H),7.20(dd,J＝10.3,8.1Hz,3H),7.08–7.05(m,2H),7.00–6.96(m,2H),6.83(dd,J＝6.7,4.8Hz,2H),4.81(d,J＝3.3Hz,1H),4.38(d,J＝16.5Hz,1H),4.33–4.23(m,3H),3.74(d,J＝9.5Hz,3H),3.37(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),2.38(d,J＝11.7Hz,1H),2.16(dd,J＝13.3,3.3Hz,1H),1.27(d,J＝13.3Hz,3H),1.14(dd,J＝5.7,2.4Hz,1H),0.75(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:514(M+H)+。
方案36：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物44)
Figure BDA0004238079180003691
步骤1：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物44)。在0℃、N2气氛下向化合物A(50mg,0.2mmol)和化合物B(51mg,0.2mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(139mg,1.1mmol)和T3P(343mg,0.54mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌8小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物44(12.7mg，14.2％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.40(s,1H),7.26–7.21(m,2H),6.91–6.86(m,3H),4.79(dd,J＝11.6,12.0Hz,1H),4.51(dd,J＝22.4,26.4Hz,2H),4.16(dd,J＝32.4,32.0Hz,2H),3.99(t,J＝6.4Hz,2H),3.35–3.32(m,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.42–2.34(m,1H),2.15(dd,J＝13.6,13.6Hz,1H),2.09–2.02(m,2H),1.27(s,3H),1.12(dd,J＝6.0,5.6Hz,1H),0.79(t,J＝5.8Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:498(M+H)+。
方案37：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物45)
Figure BDA0004238079180003701
步骤1：(2S,4S)-4-(((4-(三氟甲基)苯基)-磺酰基)氧基)-吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物1(1g,4.1mmol)和4-(三氟甲基)苯磺酰氯(1.3g,5.3mmol)在DCM(10mL)中的混合物中添加TEA(494mg,4.9mmol)和DMAP(50mg,0.4mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时，然后用0℃下的1N HCl水溶液淬灭。将混合物用EtOAc萃取三次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(1.6g，收率86.5％)。LC/MS(ESI)m/z:354(M+H-Boc)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(乙酰基硫基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(C)。在25℃、N2气氛下向化合物B(1.6g,3.5mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加KSAc(806mg,7.1mmol)。将反应物在40℃下搅拌16小时，并然后用0℃下的1N HCl水溶液淬灭。将混合物用EtOAc萃取三次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物C(643mg,60.1％收率)；LC/MS(ESI)m/z:204(M+H-Boc)+。
步骤3：(2S,4R)-4-巯基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(D)。在0℃下向化合物C(643mg,2.1mmol)在MeOH(5mL)和DCM(0.5mL)中的溶液中添加K2CO3(293mg,2.1mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌2小时，并将溶剂在减压下蒸发。将残余物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物D(538mg，97.1％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:162(M+H-Boc)+。
步骤4：(2S,4R)-4-(甲基硫基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(E)。在25℃、N2气氛下向化合物D(538mg,2.1mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Mel(3g,21.2mmol)和NaHCO3(191mg,2.3mmol)，并将反应物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物E(314mg，55.3％收率)。LC/MS(ESI)m/z:176(M+H-Boc)+。
步骤5：(2S,4R)-4-(甲基硫基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(F)。将化合物E(314mg,1.1mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)的溶液中在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物F(199mg，99.6％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:176(M+H)+。
步骤6：(2R,4S)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(G)。在0℃、N2气氛下向化合物F(199mg,1.1mmol)和[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]-乙酸(308mg,1.1mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(881mg,6.8mmol)和T3P(2.2g,3.4mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物G(285mg，58.5％收率)。LC/MS(ESI)m/z:429(M+H)+。
步骤7：(2R,4S)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(H)。在0℃下向化合物G(185mg,0.4mmol)在MeOH(2mL)和THF(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(18mg,0.4mmol)在H2O(1mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌5小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将有机层弃去，并将水层用0.5M HCl水溶液酸化。将水层用EtOAc萃取两次，并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物H(148mg,82.7％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:415(M+H)+。
步骤8：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物45)。在0℃、N2气氛下向化合物H(148mg,0.3mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(67mg,0.4mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(277mg,2.1mmol)和T3P(681mg,1.1mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物45(5.2mg,2.64％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(dd,J＝17.2,17.2Hz,1H),7.86–7.82(m,2H),7.41(t,J＝8.0Hz,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.07–7.04(m,2H),7.01–6.98(m,2H),4.71–4.59(m,1H),4.58(s,2H),4.20(dd,J＝28.8,29.6Hz,2H),4.12–4.04(m,1H),3.64–3.48(m,2H),2.38–2.20(m,2H),2.18(s,3H)；LC/MS(ESI)m/z:552(M+H)+。
方案38：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物46)
Figure BDA0004238079180003731
步骤1：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物46)。在0℃、N2气氛下向化合物45(139mg,0.3mmol)在DCM(2mL)中的混合物中添加m-CPBA(131mg,0.8mmol)，并将混合物在25℃下搅拌4小时。在0℃下将混合物用Na2CO3水溶液稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物46(10.1mg，6.8％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(dd,J＝16.8,16.8Hz,1H),7.86–7.81(m,2H),7.45–7.37(m,3H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.06(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),7.03–6.97(m,2H),4.70(dd,J＝8.8,8.8Hz,1H),4.65–4.53(m,2H),4.33–4.18(m,2H),4.18–4.12(m,2H),4.11–3.91(m,1H),3.07(s,3H),2.90–2.70(m,1H),2.56–2.33(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:584(M+H)+。
方案39：(1S,3S,5S)-N-((S*)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物47)
Figure BDA0004238079180003741
步骤1：5-乙酰基噻吩-3-甲腈(B)。在25℃、N2气氛下向化合物A(3.0g,14.60mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(2.23g,18.98mmol)和Pd(PPh3)4(846mg,0.73mmol)。将混合物在80℃下搅拌16小时。将混合物冷却至25℃，并倒入冰水中。将混合物用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(0.6g，27.3％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：152(M+H)+。
步骤2：(R,E)-N-(1-(4-氰基噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(C)。在25℃、N2气氛下向(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(647mg,5.34mmol)在THF(6mL)中的溶液中添加化合物B(667mg,4.45mmol)在THF(6mL)中的混合物和Ti(OEt)4(2.84g,12.46mmol)。将混合物在70℃下搅拌16小时。将反应冷却至25℃，倒入盐水中并过滤。将滤饼用EtOAc洗涤两次。将滤液用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(PE EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物C(1.04g，92.0％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：255(M+H)+。
步骤3：(R)-N-((S*)-1-(4-氰基噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(D)。在-20℃、N2气氛下向化合物3(350mg,1.38mmol)在THF(5mL)中的溶液中分批添加NaBH4(78.5mg,2.07mmol)，并将混合物在25℃搅拌1小时。将混合物用0℃下的饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化并通过SFC进行进一步纯化从而得到呈无色油状物的化合物D(90mg，25.6％收率)。LC/MS(ESI)m/z:257(M+H)+。
步骤4：5-((S*)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(E)。向化合物D(90mg,0.35mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中添加NH2OH·HCl(61mg,0.88mmol)和DIPEA(0.17mL,1.05mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物E(100mg，98.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:290(M+H)+。
步骤5：5-((S*)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-3-甲脒(F)。在N2气氛下向化合物E(102mg,0.35mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和AcOH(0.1mL)。将混合物在25℃、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的化合物F(96mg，99.9％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：274(M+H)+。
步骤6：(S*)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(G)。将化合物F(96mg,0.35mmol)在HCl/1,4-二噁烷(6mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的化合物G(50mg，收率83.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:170(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-((S*)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物47)。在0℃、N2气氛下向化合物G(30mg,0.18mmol)和化合物H(70mg,0.18mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.17mL,1.08mmol)和T3P(339mg,0.54mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(DCM MeOH＝5:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物47(3.0mg，3.0％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.17(d,J＝1.6Hz,1H),7.86–7.78(m,2H),7.46–7.37(m,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.09–7.04(m,2H),7.01–6.96(m,2H),5.25(d,J＝6.9Hz,1H),4.82(d,J＝3.4Hz,1H),4.30(q,J＝16.2Hz,2H),3.50–3.40(m,1H),2.42(t,J＝12.5Hz,1H),2.17(dd,J＝13.3,3.3Hz,1H),1.64(t,J＝6.5Hz,3H),1.30(s,3H),1.15–1.11(m,1H),0.82(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:546(M+H)+。
方案40：(3’R,5’S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1’-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-[1,3’-联吡咯烷]-5’-甲酰胺(化合物48)的合成
Figure BDA0004238079180003771
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步骤1：(3’R,5’S)-[1,3’-联吡咯烷]-1’,5’-二甲酸1’-(叔丁基)酯5’-甲酯(B)。在-20℃下向化合物A(500mg,2.04mmol)和DIPEA(657mg,5.10mmol)在DCM(10mL)中的混合物中添加Tf2O(863mg,3.06mmol)。在-20℃下再搅拌45分钟后，一次性添加吡咯烷(435mg,6.12mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用1N NaOH水溶液(5mL)淬灭，用饱和NaHCO3水溶液稀释，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝25:1至20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(336mg，55.2％收率)。LC/MS(ESI)m/z:299(M+H)+。
步骤2：(3’R,5’S)-[1,3’-联吡咯烷]-5’-甲酸甲酯(C)。将化合物B(200mg,0.67mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物C(132.8mg，100％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:199(M+H)+。
步骤3：(3’R,5’S)-1’-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-[1,3’-联吡咯烷]-5’-甲酸甲酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物D(120mg,0.442mmol)和化合物C(132.8mg,0.664mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(171mg,1.33mmol)和T3P(563mg,0.885mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝100:1至10:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物E(180mg，90.1％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：452(M+H)+。
步骤4：(3’R,5’S)-1’-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-[1,3’-联吡咯烷]-5’-甲酸(F)。在0℃下向化合物E(180mg,0.399mmol)在MeOH(2mL)和水(0.5mL)的溶液中添加LiOH·H2O(17mg,0.399mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH＝3并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的化合物6(150mg，86.0％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：438(M+H)+。
步骤5：(3’R,5’S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1’-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-[1,3’-联吡咯烷]-5’-甲酰胺(化合物48)。在0℃、N2气氛下向化合物F(150mg,0.343mmol)和化合物G(98.6mg,0.514mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(132.7mg,1.03mmol)和T3P(436.1mg，0.686mmol，50重量％在乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝5:1至3:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物48(20.4mg，10.4％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.25(dd,J＝17.5,1.4Hz,1H),7.85(d,J＝8.6Hz,2H),7.54–7.38(m,3H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.7Hz,2H),7.03–6.97(m,2H),4.71(dd,J＝15.0,10.0Hz,1H),4.67–4.47(m,2H),4.31–3.95(m,5H),3.92–3.56(m,2H),3.52–3.33(m,1H),3.29–3.04(m,1H),2.73–2.43(m,2H),2.13(s,4H)；LC/MS(ESI)m/z:575(M+H)+。
方案41：(1S,3S,5S)-N-((R*)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物49)
Figure BDA0004238079180003791
步骤1：5-((1R*)-1-((叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(B)。向化合物A(120mg,0.47mmol)在EtOH(2.0mL)中的溶液中添加NH2OH·HCl(81mg,1.17mmol)和DIPEA(0.23mL,1.41mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(130mg，96.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:290(M+H)+。
步骤2：5-((1R*)-1-((叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-3-甲脒(C)。在N2气氛下向化合物B(130mg,0.45mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加雷尼镍(25mg)和AcOH(0.1mL)，并将混合物在25℃、H2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的化合物C(120mg，98％收率)。将粗产物未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：274(M+H)+。
步骤3：(R*)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(D)。将化合物C(120mg,0.43mmol)在HCl/1,4-二噁烷(6mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的化合物D(70mg，92％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:170(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-N-((R*)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物49)。在0℃、N2气氛下向化合物D(40mg,0.23mmol)和化合物E(40mg,0.10mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.23mL,2.80mmol)和T3P(191mg,0.30mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃搅拌16小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物49(6.0mg，10％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.12(s,2H),9.12(s,2H),8.86–8.56(m,3H),8.91–8.51(m,3H),8.39(d,J＝7.6Hz,1H),8.35(dd,J＝25.5,7.8Hz,2H),8.32(d,J＝8.0Hz,1H),7.88(t,J＝7.2Hz,2H),7.88(t,J＝7.2Hz,2H),7.55(d,J＝6.9Hz,1H),7.49–7.41(m,2H),7.23(t,J＝7.4Hz,1H),7.12–7.07(m,2H),7.06–7.01(m,2H),5.10(t,J＝7.0Hz,1H),4.67(dd,J＝11.4,2.9Hz,1H),4.30(dd,J＝16.3,5.7Hz,1H),4.04(dd,J＝16.3,5.5Hz,1H),3.51(d,J＝5.1Hz,1H),2.37–2.25(m,1H),2.02(dd,J＝13.3,2.9Hz,1H),1.49(dd,J＝24.4,6.9Hz,3H),1.23(s,3H),1.11(d,J＝2.9Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:546(M+H)+。
方案42：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物9)的合成
Figure BDA0004238079180003811
步骤1：(1S,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(B)。在0℃下向化合物A(600mg,1.4mmol)在MeOH(4mL)和THF(2mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(174mg,4.2mmol)在水(2mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用EtOAc洗涤两次，并将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物B(350mg，98.9％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：258(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物B(350mg,1.40mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加K2CO3(376mg,2.80mmol)和BnBr(349mg,2.10mmol)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物C(425mg，收率90.0％)。LC/MS(ESI)m/z:348(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(D)。将化合物C(425mg,1.22mmol)在HCl/1,4-二噁烷(6mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的化合物D(302mg，100％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:248(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(F)。在0℃、N2气氛下向化合物D(150mg,0.61mmol)和化合物E(165mg,0.61mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.60mL,3.66mmol)和T3P(1.16g,1.83mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝97:3)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物F(276mg，90.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:501(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]-己烷-3-甲酸(G)。在25℃、N2气氛下向化合物F(276mg,0.55mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg)，并将混合物在25℃、H2球囊下搅拌1小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物G(200mg，88.5％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：411(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物9)。在0℃、N2气氛下向化合物G(120mg,0.29mmol)和化合物H(68mg,0.44mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.29mL,1.74mmol)和T3P(558mg,0.87mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物9(2.0mg，17.9％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.21(s,1H),7.84(d,J＝8.7Hz,2H),7.41(t,J＝7.9Hz,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.9Hz,2H),7.00(d,J＝8.5Hz,2H),4.88(s,1H),4.61–4.49(m,2H),4.40–4.27(m,2H),3.66(d,J＝11.7Hz,1H),3.57–3.46(m,2H),2.68(t,J＝12.5Hz,1H),2.13(dd,J＝13.3,3.4Hz,1H),1.22(dd,J＝5.8,2.4Hz,1H),1.00(t,J＝5.7Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:548(M+H)+。
方案43：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物50)
Figure BDA0004238079180003831
步骤1：(2S,4R)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(1g,4.61mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TEA(0.6mL,4.61mmol)和TBSCl(694mg,4.61mmol)。将反应物在25℃下搅拌16小时，并用水淬灭。将混合物用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝至3:1)进行纯化从而得到呈油状物的化合物B(1.1g，收率72.1％)。LC/MS(ESI)m/z:232(M+H-Boc)+。
步骤2：(2S,4R)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(环丙基甲氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物B(1g,3.02mmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加NaH(519mg 12.9mmol,60重量％油分散体)，并将混合物在室温下搅拌30分钟。将(溴甲基)环丙烷(1.4g,10.5mmol)在0℃下添加到混合物中，并将反应物在25℃下搅拌7小时。将反应物用0℃下的水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝至3:1)进行纯化从而得到呈油状物的化合物C(651mg，收率55.9％)。LC/MS(ESI)m/z:286(M+H-Boc)+。
步骤3：(2S,4R)-4-(环丙基甲氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(D)。在0℃下向化合物C(651mg,1.69mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加TBAF(1.1g,3.38mmol)，并将反应物在25℃搅拌1.5小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝至3:1)进行纯化从而得到呈油状物的化合物D(369mg，收率53.2％)。LC/MS(ESI)m/z:172(M+H-Boc)+。
步骤4：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(环丙基甲氧基)吡咯烷-2-甲酸(E)。在25℃下向化合物D(320mg,1.18mmol)在MeCN(2mL)、CCl4(2mL)和H2O(3mL)中的溶液中添加NaIO4(1.0g,4.72mmol)，并将混合物在25℃下搅拌0.5小时。添加RuCl3(6mg,0.02mmol)并将反应物在25℃下再搅拌2小时。将沉淀过滤出并将固体用DCM洗涤。将滤液分离，并将水层用DCM萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物E(113mg，收率33.6％)。LC/MS(ESI)m/z:186(M+H-Boc)+。
步骤5：(2S,4R)-2-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-(环丙基甲氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(G)。在0℃、N2气氛下向化合物E(113mg,0.39mmol)和化合物F(73mg,0.47mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.4mL,2.34mmol)和T3P(744mg,1.17mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌5小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物G(88mg，收率53.6％)。LC/MS(ESI)m/z:322(M+H-Boc)+。
步骤6：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(环丙基甲氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(H)。将化合物G(88mg,0.21mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应物在减压下浓缩至干并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物H(66mg，收率98.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:322(M+H)+。
步骤7：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(环丙基甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物50)。在0℃、N2气氛下向化合物H(66mg,0.2mmol)和化合物I(56mg,0.2mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.2mmol)和T3P(382mg,0.6mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌5小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物50(3mg，收率2.50％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.84(d,J＝8.8Hz,2H),7.44–7.39(m,3H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.07–7.04(m,2H),7.02–6.98(m,2H),4.57(s,2H),4.50(t,J＝8.0Hz,1H),4.28(s,1H),4.21(s,2H),3.85–3.73(m,2H),3.35(d,J＝2.4Hz,2H),2.43–2.34(m,1H),2.11–2.02(m,1H),1.08–0.99(m,1H),0.57–0.50(m,2H),0.25–0.19(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:576(M+H)+。
方案44：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物51)
Figure BDA0004238079180003861
步骤1：(S)-4-(二氟亚甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(2g,8.23mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加CF2Br2(3mL,32.9mmol)和HMPT(6mL,32.9mmol)。将混合物温热至室温，并添加Zn(2.1g,32.9mmol)和HMPT(0.4mL)。将反应物在65℃下搅拌3.5小时，并将混合物通过硅藻土过滤，并用MTBE洗涤。将滤液用水洗涤，并将水层用MTBE萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈油状物的化合物B(1.02g，收率44.7％)。LC/MS(ESI)m/z:178(M+H-Boc)+。
步骤2：(S)-4-(二氟亚甲基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。将化合物B(500mg,1.8mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物C(319mg，收率99.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:178(M+H)+。
步骤3：(S)-4-(二氟亚甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物C(319mg,1.8mmol)和D(488mg,1.8mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(1.8mL,10.8mmol)和T3P(458mg,0.72mmol，50重量％于EtOAc中)。将所得混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物E(413mg，收率53.2％)。LC/MS(ESI)m/z:431(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(F)。在室温、N2气氛下向化合物E(413mg,0.96mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加Pd/C(145mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2气氛下搅拌2.5小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物F(411mg，收率99.0％)。LC/MS(ESI)m/z:433(M+H)+。
步骤5：(2S,4S)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(G)。在0℃下向化合物F(277mg,0.64mmol)在MeOH(2mL)和THF(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(25mg,0.64mmol)在H2O(1mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌3.5小时。将混合物在真空下浓缩，用H2O稀释并用EtOAc洗涤两次。将水层用0.5M HCl水溶液酸化至pH～3，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈油状物的化合物G(220mg，收率82.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:419(M+H)+。
步骤6：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物51)。在0℃、N2气氛下向化合物G(148mg,0.24mmol)和H(55mg,0.29mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.25mL,1.44mmol)和T3P(458mg,0.72mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌5小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物51(37mg，收率27.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.23(d,J＝19.6Hz,1H),7.84(d,J＝8.8Hz,2H),7.41(t,J＝8.0Hz,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,2H),7.00(dd,J＝7.6,8.8Hz,2H),6.15–5.83(m,1H),4.60(d,J＝21.6Hz,2H),4.50(t,J＝8.0Hz,1H),4.32–4.08(m,2H),4.07–3.97(m,1H),3.79–3.59(m,1H),3.05–2.76(m,1H),2.64–2.28(m,1H),2.14–1.88(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:556(M+H)+。
方案45：(1S,3S,5S)-N-(2-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物52)
Figure BDA0004238079180003891
步骤1：2-(4-溴噻吩-2-基)乙烷-1-胺(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(1g,4.97mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加BH3·THF(2.60mL,5.2mmol)，并将混合物在65℃下搅拌2小时。添加0.5N HCl水溶液(20mL)并将混合物在65℃下再搅拌30分钟。将混合物冷却至室温并添加6N HCl水溶液。将混合物用异丙醚洗涤并将有机层弃去。将水层用NaOH中和并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物B(1g，收率97.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:205(M+H)+。
步骤2：(2-(4-溴噻吩-2-基)乙基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸叔丁酯(C)。在25℃、N2气氛下向化合物B(1g,4.87mmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加TEA(2.75mL,19.6mmol)、DMAP(60mg,0.49mmol)和Boc2O(3.18g,14.6mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝50:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物3(800mg，收率50.0％)。LC/MS(ESI)m/z:353(M+H)+。
步骤3：N-(叔丁氧基羰基)-N-[2-(4-氰基噻吩-2-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(D)。在25℃、N2气氛下向化合物C(800mg,1.97mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(448mg,3.84mmol)和Pd(PPh3)4(344mg,0.296mmol)，并将混合物在160℃下搅拌3小时。将混合物冷却至25℃，倒入冰水并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝30:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物D(700mg，收率82％)。LC/MS(ESI)(m/z)：353(M+H)+。
步骤4：N-(叔丁氧基羰基)-N-{2-[4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(E)。在25℃、N2气氛下向化合物D(500mg,1.42mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加NH2OH·HCl(229mg,3.55mmol)和DIPEA(0.70mL,4.26mmol，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应物在减压下浓缩至干，并将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝20:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物E(440mg，收率80.5％)。LC/MS(ESI)m/z:386(M+H)+。
步骤5：N-(叔丁氧基羰基)-N-[2-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基]-氨基甲酸叔丁酯(F)。在25℃、N2气氛下向化合物E(440mg,1.14mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和AcOH(0.4mL)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈浅绿色固体的化合物F(170mg，收率40.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：370(M+H)+。
步骤6：5-(2-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(G)。将化合物F(170mg,0.46mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2.0mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的化合物G(70mg，收率90.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:170(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-(2-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物52)。在0℃、N2气氛下向化合物G(30mg,0.18mmol)和化合物H(70mg,0.18mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.17mL,1.08mmol)和T3P(339mg,0.54mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物52(3mg，收率3.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.04(d,J＝1.4Hz,1H),7.88–7.81(m,2H),7.45–7.38(m,2H),7.33(d,J＝1.2Hz,1H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(dd,J＝5.4,3.4Hz,2H),7.03–6.98(m,2H),4.78(dd,J＝11.4,3.1Hz,1H),4.31(q,J＝16.3Hz,2H),3.54–3.35(m,3H),3.07(t,J＝6.4Hz,2H),2.36(t,J＝13.0Hz,1H),2.15(dd,J＝13.4,3.1Hz,1H),1.28(s,3H),1.05(dd,J＝5.8,2.3Hz,1H),0.78(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:546(M+H)+。
方案46：(4-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)苯氧基)-苯基)(甲基)次膦酸(化合物53)的合成
Figure BDA0004238079180003921
步骤1：4-氟苯甲酸甲酯(B)。在0℃下向化合物A(5g,35.7mmol)在MeOH(70mL)中的溶液中添加H2SO4(1.0mL)，并将混合物在70℃下搅拌16小时。将混合物冷却至25℃并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝25:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(5.45g，收率99.1％)。
步骤2：4-(4-溴苯氧基)苯甲酸甲酯(C)。在25℃下向化合物B(2g,13.0mmol)和化合物C(2.46g,14.3mmol)在DMF(40mL)中的混合物中添加Cs2CO3(21.2g,65.0mmol)。将反应物在120℃下搅拌16小时，并冷却至25℃。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝9:1)进行纯化从而得到呈棕色固体的化合物D(3.8g，收率95.7％)。
步骤3：4-(4-溴苯氧基)苯甲酸(E)。在0℃下向化合物D(3.8g,12.4mmol)在MeOH(20mL)、THF(10mL)和水(10mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(2.6g,61.9mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩至1/5体积，用水稀释，并用MTBE洗涤两次。将水层用1NHCl水溶液酸化至pH～3，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物E(3.6g，收率99.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：291/293(M-H)-。
步骤4：(4-(4-溴苯氧基)苯甲酰基)甘氨酸甲酯(G)。在0℃、N2气氛下向化合物E(2.6g,8.90mmol)和甘氨酸甲酯(F；1.68g,13.4mmol)在DMF(50mL)中的混合物中添加DIPEA(7.3mL,44.5mmol)和HATU(6.8g,17.8mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:2)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物G(3.1g，收率96.9％)。LC/MS(ESI)m/z:364/366(M+H)+。
步骤5：(4-(4-溴苯氧基)苯甲酰基)甘氨酸(H)。在0℃下向化合物G(3.1g,8.5mmol)在MeOH(20mL)、THF(10mL)和水(10mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(1.8g,42.7mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩至1/5体积，用水稀释，并用MTBE洗涤两次。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物H(2.9g，收率97.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：350/352(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-2-((4-(4-溴苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(J)。在0℃、N2气氛下向化合物H(248mg,0.71mmol)和I(100mg,0.59mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.58mL,3.54mmol)和T3P(1.13g,1.77mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈棕色半固体的化合物J(188mg，收率63.5％)。LC/MS(ESI)m/z:501/503(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-2-((4-(4-(乙氧基(甲基)膦酰基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(K)。在25℃、N2气氛下向化合物J(60mg,0.12mmol)和DIPEA(0.1mL,0.6mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加甲基亚膦酸二乙酯(81.6mg,0.6mmol)和Pd(dppf)Cl2(4.4mg,0.006mmol)。将混合物在130℃下在微波反应器中搅拌4小时。将混合物冷却至25℃，并用H2O稀释。将混合物用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝100:1至3:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物K(50mg，收率79.4％)。LC/MS(ESI)m/z:529(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-2-((4-(4-(羟基(甲基)膦酰基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(L)。在0℃下向化合物K(50mg,0.09mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(12mg,0.27mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩至1/5体积，用水稀释，并用MTBE洗涤两次。将水层用1NHCl水溶液酸化至pH～3，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物L(40mg，收率88.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：473(M+H)+。
步骤9：(4-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)苯氧基)苯基)-(甲基)次膦酸(化合物53)。在0℃、N2气氛下向化合物L(40mg,0.08mmol)和M(20mg,0.13mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.08mL,0.48mmol)和T3P(81mg,0.24mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝4:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物53(7mg，收率13.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),8.05–7.99(m,2H),7.93(d,J＝8.7Hz,2H),7.41(s,1H),7.24–7.19(m,2H),7.18–7.13(m,2H),4.58(s,1H),4.55(d,J＝3.0Hz,2H),4.36(q,J＝16.5Hz,2H),3.42(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),3.16(s,4H),2.42(t,J＝13.0Hz,1H),2.17(dd,J＝13.4,3.3Hz,1H),1.30(s,3H),1.15(dd,J＝5.6,2.5Hz,1H),0.81(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:610(M+H)+。
方案47：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物54)的合成
Figure BDA0004238079180003951
步骤1：(2S,4S)-4-((甲基磺酰基)氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(2.0g,8.15mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加TEA(3.29g,32.62mmol)和MsCl(1.87g,16.31mmol)，并将混合物在0℃下搅拌1小时。将反应物用冰水淬灭并将所得混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到呈无色油状物的化合物2(2.64g，100％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤2：(2S,4S)-4-环戊基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(C)。在0℃、N2气氛下向CuI(177mg,0.93mmol)和LiOMe(352mg,9.28mmol)在THF(10mL)中的混合物中添加在THF(4mL)中的化合物B(1.5g,13.92mmol TEMED(52mg,0.45mmol)和在THF中的溴(环戊基)镁(14mL,13.92mmol,1mol/mL)。将混合物在0℃下搅拌过夜，并将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝100:1至15:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物C(80mg，5.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:198(M+H-100)+。
步骤3：(2S,4S)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸甲酯(D)。将化合物C(80mg,0.269mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用DCM稀释，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物D(53.06mg，100％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:198(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(F)。向化合物D(53mg,0.253mmol)和化合物E(75.6mg,0.279mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(98.1mg,0.76mmol)和T3P(322.4mg,0.507mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝5:1至1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物F(60mg，52.5％收率)。LC/MS(ESI)m/z:451(M+H)+。
步骤5：(2S,4S)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(G)。在0℃下向化合物F(60mg,0.133mmol)在甲醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(5.6mg,0.133mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物G(40mg，68.8％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：437(M+H)+。
步骤6：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物54)。向化合物G(40mg,0.133mmol)和化合物H(75.6mg,0.199mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(35.5mg,0.76mmol)和T3P(116.5mg,0.183mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用CHCl3/i-PrOH(v:v＝3/1)(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物54(2.0mg，3.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:574(M+H)+。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(t,J＝8.6Hz,1H),7.84(d,J＝8.7Hz,2H),7.52–7.36(m,3H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(d,J＝7.7Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),4.57(t,J＝9.0Hz,3H),4.26(dd,J＝16.7,6.8Hz,1H),4.14(dd,J＝16.7,9.1Hz,1H),3.94(t,J＝8.4Hz,1H),2.15(dd,J＝22.1,11.0Hz,2H),1.92–1.55(m,8H),1.23(dd,J＝22.3,15.2Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:574(M+H)+。
方案48：(6S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-[2-(4-苯氧基-丁酰胺基)-乙酰基]-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物55)的合成
Figure BDA0004238079180003981
步骤1：(S)-6-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(C)。在室温、N2气氛下向化合物A(300mg,1.24mmol)和化合物B(473.6mg,2.48mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(479mg,3.72mmol)和T3P(1.2g,1.86mmol，50重量％在乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物C(231mg，49.3％收率)。LC/MS(ESI)m/z:379(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(D)。将化合物C(231mg,0.61mmol)和4N HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用二氯甲烷稀释，并在真空下干燥从而得到化合物D(130mg，收率76.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:279(M+H)+。
步骤3：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物55)。在室温、N2气氛下向化合物D(130mg,0.41mmol)和化合物E(116.7mg,0.49mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(158.9mg,1.23mmol)和T3P(393.7mg,0.615mmol，50重量％在乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物55(2.1mg，1.04％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.42(s,1H),7.26–7.22(m,2H),6.92–6.89(m,2H),6.88(s,1H),4.62–4.55(m,3H),4.03–3.90(m,4H),3.67(d,J＝9.7Hz,1H),3.44(d,J＝9.7Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.35(dd,J＝12.8,8.8Hz,1H),2.09–2.04(m,2H),1.78(dd,J＝12.8,3.3Hz,1H),0.70–0.60(m,3H),0.50(dd,J＝10.0,7.0Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:498(M+H)+。
方案49：(3S,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物56)
Figure BDA0004238079180003991
步骤1：(3S,6S)-6-(((4-(N-((苄氧基)羰基)甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(C)。在室温、N2气氛下向化合物A(50mg,0.18mmol)和化合物B(64mg,0.22mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(70mg,0.54mmol)和T3P(172mg,0.27mmol，50重量％在乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物C(49mg，49.9％收率)。LC/MS(ESI)m/z:549(M+H)+。
步骤2：((5-(((3S,6S)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(D)。将化合物C(49mg,0.089mmol)和HCl/1,4-二噁烷(1mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用二氯甲烷稀释，并在真空下干燥从而得到化合物D(40mg，收率99.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:449(M+H)+。
步骤3：((5-(((3S,6S)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(F)。在室温、N2气氛下向化合物D(40mg,0.089mmol)和化合物E(25mg,0.107mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(35mg,0.267mmol)和T3P(86mg,0.134mmol，50重量％在乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物F(30mg，50.37％收率)。LC/MS(ESI)m/z:668(M+H)+。
步骤4：(3S,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物56)。向化合物F(30mg,0.045mmol)在甲醇(1mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1滴)和Pd/C(1mg)，并在室温下搅拌3小时。将反应物用饱和NaHCO3水溶液淬灭并将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物56(7.3mg，30.45％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.24(dd,J＝5.1,1.6Hz,1H),7.45(t,J＝13.2Hz,1H),7.24(dd,J＝9.5,6.6Hz,2H),6.92–6.89(m,2H),6.88(d,J＝0.9Hz,1H),4.64–4.56(m,3H),4.00(dd,J＝11.5,6.3Hz,4H),3.91(d,J＝9.9Hz,1H),3.69(dd,J＝10.5,4.2Hz,1H),2.57(dd,J＝13.0,9.3Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.09–2.05(m,2H),2.04–1.97(m,1H),1.56–1.40(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:534(M+H)+。
方案50：(3R,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物57)的合成
Figure BDA0004238079180004011
步骤1：(3R,6S)-6-(((4-(N-((苄氧基)羰基)甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(C)。在室温、N2气氛下向化合物A(50mg,0.18mmol)和化合物B(64mg,0.22mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(70mg,0.54mmol)和T3P(172mg,0.27mmol，50重量％在乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物C(30mg，30.94％收率)。LC/MS(ESI)m/z:549(M+H)+。
步骤2：((5-(((3R,6S)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(D)。将化合物C(30mg,0.055mmol)和HCl/1,4-二噁烷(1mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用DCM稀释，并在真空下干燥从而得到化合物D(23mg，收率98.78％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:449(M+H)+。
步骤3：((5-(((3R,6S)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(F)。在室温、N2气氛下向化合物D(23mg,0.051mmol)和化合物E(14mg,0.061mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(20mg,0.153mmol)和T3P(48mg,0.077mmol，50重量％在乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物F(30mg，87.60％收率)。LC/MS(ESI)m/z:668(M+H)+。
步骤4：(3R,6S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物58)。向化合物F(30mg,0.045mmol)在甲醇(1mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1滴)和Pd/C(1mg)，并在室温下搅拌3小时。将反应物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物57(3.4mg，21.3％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.24(dd,J＝5.1,1.6Hz,1H),7.45(t,J＝13.2Hz,1H),7.24(dd,J＝9.5,6.6Hz,2H),6.92–6.89(m,2H),6.88(d,J＝0.9Hz,1H),4.64–4.56(m,3H),4.00(dd,J＝11.5,6.3Hz,4H),3.91(d,J＝9.9Hz,1H),3.69(dd,J＝10.5,4.2Hz,1H),2.57(dd,J＝13.0,9.3Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.09–2.05(m,2H),2.04–1.97(m,1H),1.56–1.40(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:534(M+H)+。
方案51：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((3-苯氧基丙酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物58)的合成
Figure BDA0004238079180004031
步骤1：(1S,3S,5S)-3-(((4-(N-((苄氧基)羰基)甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物A(300mg,1.24mmol)和化合物B(360mg,1.24mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加DIPEA(964mg,7.46mmol)和T3P(1.187g,3.73mmol,50重量％于EtOAc中)，并将所得混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的合并有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝100:1至20:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物C(560mg，收率88.0％)。LC/MS(ESI)m/z:513(M+H)+。
步骤2：(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)-甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(D)。将化合物3(140mg,0.27mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的混合物在室温下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物D(110mg，收率97.6％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:413(M+H)+。
步骤3：(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((3-苯氧基丙酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物D(40mg,0.097mmol)和(3-苯氧基丙酰基)甘氨酸(22mg,0.097mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(75mg,0.10mmol)和T3P(93g,0.29mmol,50重量％于EtOAc中)，并将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝100:1至15:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物5(30mg，收率50.1％)。LC/MS(ESI)m/z:618(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((3-苯氧基-丙酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物58)。在室温、N2氛下向化合物E(30mg,0.049mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(1滴)，并将混合物在室温、H2气氛下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物58(3mg，收率12.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.41(s,1H),7.29–7.21(m,2H),6.92(t,J＝8.4Hz,3H),4.82–4.78(m,1H),4.56–4.43(m,2H),4.28–4.14(m,4H),3.36–3.33(m,1H),2.74(t,J＝6.2Hz,2H),2.39(t,J＝11.8Hz,1H),2.15(dd,J＝13.2,13.2Hz,1H),1.28(s,3H),1.14(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.81(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:484(M+H)+。
方案52：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物60)
Figure BDA0004238079180004051
步骤1：(2S)-4-羟基-4-(三氟甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(3g,12.4mmol)在THF(30mL)中的溶液中添加TMSCF3(3.6mL,24.8mmol)和TBAF(323mg,1.24mmol)。将反应物在25℃下搅拌16小时，并添加另外的TBAF(6.5g,24.8mmol)。将混合物在25℃下再搅拌3小时，并在减压下浓缩至干。将残余物用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝6:1至1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(2.25g，收率57.7％)。LC/MS(ESI)m/z:214(M+H-Boc)+。
步骤2：(2S)-4-羟基-2-(羟基甲基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物B(2.25g,7.2mmol)在THF(30mL)中的溶液中添加LiBH4(7.2mL,14.4mmol,2.0M于THF中)，并将反应物在25℃下搅拌2小时。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1至5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物C(1.9g，收率92.6％)。LC/MS(ESI)m/z:186(M+H-Boc)+。
步骤3：(2S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基-4-(三氟甲基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(D)。在0℃、N2气氛下向化合物C(1.9g,6.70mmol)在DCM(19mL)中的溶液中添加TEA(1.86mL,13.4mmol)、TBSCl(1.1g,7.37mmol)和DMAP(163mg,1.34mmol)，并将反应物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(2.3g，收率86.0％)。LC/MS(ESI)m/z:300(M+H-Boc)+。
步骤4：(S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物D(2g,5.00mmol)的溶液中添加NaH(340mg,8.50mmol,60％的在矿物油中的分散体)，并将混合物在0℃下搅拌20分钟。在0℃下将TsCl(1.43g,7.50mmol)添加到混合物中，并将反应物在25℃下搅拌1小时。将混合物冷却至-78℃并添加t-BuOK(10mL,10.0mmol,1.0M于THF中)。将反应物在25℃下再搅拌2小时，并用0℃下的水淬灭。将混合物用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝100:1至20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物E(1.7g，收率89.2％)。LC/MS(ESI)m/z:282(M+H-Boc)+。
步骤5：(S)-2-(羟基甲基)-4-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(F)。在0℃下向化合物E(700mg,1.84mmol)在THF(7mL)中的溶液中添加TBAF(1.2g,3.68mmol)，并将反应物在室温搅拌3小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物F(386mg，收率78.6％)。LC/MS(ESI)m/z:168(M+H-Boc)+。
步骤6：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(G)。在25℃、N2气氛下向化合物F(156mg,0.58mmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加[Ir(COD)Py3]PF6(9mg,0.01mmol)。将反应物在25℃、H2气氛下搅拌4小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝至5:1)进行纯化从而得到呈油状物的化合物G(123mg，收率78.3％)。LC/MS(ESI)m/z:214(M+H-56)+。
步骤7：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酸(H)。在0℃下向化合物H(113mg,0.42mmol)在MeCN(1mL)、CCl4(1mL)和H2O(1.5mL)中的溶液中添加NaIO4(360mg,1.68mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌0.5小时，并一次性添加RuCl3(2mg,0.008mmol)。将反应混合物搅拌2小时，同时保持温度为从18℃至24℃。将反应物用水稀释，然后滤出。将滤液用DCM萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物H(45mg，收率37.9％)。LC/MS(ESI)m/z:228(M+H-56)+。
步骤8：(2S,4R)-2-(((4-(N-((苄氧基)羰基)甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(J)。在25℃、N2气氛下向化合物H(45mg,0.16mmol)和化合物I(69mg,0.24mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,0.96mmol)和T3P(305mg,0.48mmol,50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，并将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物J(82mg，收率93.0％)。LC/MS(ESI)m/z:555(M+H)+。
步骤9：(氨亚基(5-(((2S,4R)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(K)。将化合物J(82mg,0.15mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的化合物11(67mg，收率99.7％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:455(M+H)+。
步骤10：(氨亚基(5-(((2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(L)。在0℃、N2气氛下向化合物K(67mg,0.15mmol)和化合物L(35mg,0.15mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.15mL,0.9mmol)和T3P(286mg,0.45mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌5小时。将混合物用饱和NaHCO3洗涤并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物L(64mg，收率64.4％)。LC/MS(ESI)m/z:674(M+H)+。
步骤11：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物60)。在0℃、N2气氛下向化合物M(64mg,0.1mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(22mg,35重量％)和HCl/1,4-二噁烷(0.05mL,4.0M)，并将反应物在25℃、H2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物60(15.7mg，收率30.6％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(dd,J＝5.2,5.2Hz,1H),7.43(t,J＝14.9Hz,1H),7.27–7.20(m,2H),6.92–6.86(m,3H),4.84–4.72(m,1H),4.69–4.60(m,1H),4.56(s,1H),4.14–3.89(m,5H),3.86–3.69(m,2H),2.50–2.44(m,2H),2.42–2.32(m,1H),2.30–2.20(m,1H),2.11–2.03(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:540(M+H)+。
方案53：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物59)
Figure BDA0004238079180004091
步骤1：(S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(B)。在25℃、N2气氛下向化合物A(500mg,1.31mmol)在EtOAc(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将混合物在25℃、H2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物2(400mg，收率80.3％)。LC/MS(ESI)(m/z)：384(M+H)+。
步骤2：(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(C)。在0℃下向化合物B(380mg,1.0mmol)在THF(4mL)中的溶液中添加TBAF(1mL,2.0mmol,2M于THF中)，并将混合物在0℃下搅拌2小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物C(260mg，收率96.3％)。LC/MS(ESI)m/z:270(M+H)+。
步骤3：(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酸(D)。在室温下向化合物C(260mg,0.96mmol)在H2O(1.5mL)、CCl4(1mL)和MeCN(1mL)中的溶液中添加NaIO4(0.823g,3.862mmol)。将混合物在室温下搅拌0.5小时，并一次性添加RuCl3·3H2O(0.005g,0.019mmol)。将反应混合物再搅拌2小时，同时保持温度为从18℃至24℃。将所得沉淀滤出并用DCM洗涤。将滤液分离，并将水层用DCM萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝100:1至10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物D(179mg，收率65.4％)。LC/MS(ESI)m/z:284(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-2-(((4-(N-((苄氧基)羰基)甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(F)。在0℃、N2气氛下向化合物D(50mg,0.17mmol)和化合物E(75mg,0.26mmol)在DMF(2.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.08mmol)和T3P(171mg,0.54mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化，从而得到呈黄色油状物的化合物F(120mg，收率70.0％)。LC/MS(ESI)m/z:555(M+H)+。
步骤5：(氨亚基(5-(((2S,4S)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺基)-甲基)-噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(G)。将化合物F(120mg,0.21mmol)和HCl/1,4-二噁烷(1mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的化合物G(100mg，收率96.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:455(M+H)+。
步骤6：(氨亚基(5-(((2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(三氟-甲基)-吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(I)。在0℃、N2气氛下向化合物G(70mg,0.15mmol)和化合物H(36mg,0.15mmol)在DMF(2.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.30mL,0.45mmol)和T3P(286mg,0.45mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物I(100mg，收率99.2％)。LC/MS(ESI)m/z:674(M+H)+。
步骤7：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物59)。在25℃、N2气氛下向化合物I(100mg,0.15mmol)在MeOH(2.0mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(1滴)，并将混合物在25℃、H2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物61(5.0mg，收率4.0％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(dd,J＝6.0,1.6Hz,1H),7.42(s,1H),7.26–7.20(m,2H),6.92–6.86(m,3H),4.87–4.86(m,1H),4.58(d,J＝21.2Hz,2H),4.50(t,J＝8.4Hz,1H),4.09(dd,J＝17.7,5.7Hz,2H),4.03–3.94(m,3H),3.66(t,J＝10.1Hz,1H),2.58(dt,J＝13.1,8.1Hz,1H),2.46(t,J＝7.4Hz,2H),2.13–1.97(m,3H)；LC/MS(ESI)m/z:540(M+H)+。
方案54：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(环己基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物61)
Figure BDA0004238079180004121
步骤1：(2S,4S)-2-(((4-(N-((苄氧基)羰基)甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-环己基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物A(50mg,0.17mmol)和化合物B(49mg,0.17mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.02mmol)和T3P(324mg,0.51mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌5小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物C(30mg，收率31.4％)。LC/MS(ESI)m/z:569(M+H)+。
步骤2：((5-(((2S,4S)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(D)。将化合物C(30mg,0.05mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物D(21mg，收率87.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:469(M+H)+。
步骤3：((5-(((2S,4S)-4-环己基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物D(21mg,0.04mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(12mg,0.04mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.04mL,0.24mmol)和T3P(76mg,0.12mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌3.5小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物E(20mg，收率63.1％)。LC/MS(ESI)m/z:722(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(环己基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物61)。在室温、N2气氛下向化合物E(20mg,0.03mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(7mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(2滴)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物61(5.1mg，收率31.3％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.23(s,1H),7.85–7.80(m,2H),7.44-7.37(m,3H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.08–7.04(m,2H),7.02–6.97(m,2H),4.87–4.85(m,1H),4.57(d,J＝9.6Hz,2H),4.53(d,J＝6.0Hz,1H),4.27(d,J＝16.8Hz,2H),4.11(d,J＝16.8Hz,2H),3.99–3.91(m,1H),2.29–2.07(m,2H),1.89–1.66(m,6H),1.33–1.20(m,4H),1.09–0.94(m,2H)。LC/MS(ESI)m/z:588(M+H)+。
方案55：(2S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物62)
Figure BDA0004238079180004141
步骤1：(2S)-4-羟基-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(B)。将化合物A(90mg,0.29mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物B(59mg，收率96.7％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:214(M+H)+。
步骤2：(2S)-4-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物B(55mg,0.24mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(56mg,0.24mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.24mL,1.44mmol)和T3P(458mg,0.72mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌5小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物C(87mg，收率83.7％)。LC/MS(ESI)m/z:433(M+H)+。
步骤3：(2S)-4-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酸(D)。在0℃下向化合物C(87mg,0.2mmol)在MeOH(1mL)、THF(0.5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(8mg,0.2mmol)，并将混合物在25℃下搅拌5小时。将混合物用水稀释并用EtOAc洗涤两次。将水层用0.5N HCl水溶液酸化至pH＝3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物D(43mg，收率51.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:419(M+H)+。
步骤4：(2S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)-4-(三氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物62)。在0℃、N2气氛下向化合物D(43mg,0.1mmol)和化合物E(23mg,0.12mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.1mL,0.6mmol)和T3P(191mg,0.3mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次，并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物62(3.5mg，收率6.1％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.20(s,1H),7.44(s,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,2H),6.91–6.86(m,3H),4.72(d,J＝8.4Hz,1H),4.64–4.60(m,1H),4.54–4.50(m,1H),4.09(d,J＝16.8Hz,1H),4.03–3.96(m,3H),3.91(dd,J＝12.0,13.6Hz,1H),3.80(d,J＝10.8Hz,1H),2.72–2.55(m,1H),2.46(t,J＝7.4Hz,2H),2.32(d,J＝13.6Hz,1H),2.09–2.02(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:556(M+H)+。
方案56：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(甲氧基甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物63)的合成
Figure BDA0004238079180004161
步骤1：(1S,3S,5R)-5-(甲氧基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(100mg,0.36mmol)在DCE(2mL)中的溶液中添加AgOTf(142mg,0.54mmol)、CH3I(156mg,0.11mmol)和2,6-二-叔丁基吡啶(0.24mL,0.11mmol)，并将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(86mg，收率81.1％)。LC/MS(ESI)(m/z)：286(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5R)-5-(甲氧基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(C)。将化合物B(86mg,0.0.30mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物C(50mg，收率89.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:186(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-(甲氧基甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物C(50mg,0.27mmol)和化合物D(70mg,0.27mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.27mL,1.62mmol)和T3P(516mg,0.81mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物E(90mg，收率82.6％)。LC/MS(ESI)(m/z)：405(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5R)-5-(甲氧基甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]-己烷-3-甲酸(F)。在0℃下向化合物E(90mg,0.22mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)、水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(14mg,0.33mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物F(80mg，收率92.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：391(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(甲氧基甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物63)。在0℃、N2气氛下向化合物F(80mg,0.20mmol)和化合物G(48mg,0.30mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.2mmol)和T3P(391mg,0.6mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次，并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物63(4mg，收率3.7％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(d,J＝1.2Hz,1H),7.40(s,1H),7.27–7.21(m,2H),6.90(dd,J＝7.6,5.4Hz,3H),4.81–4.79(m,1H),4.50(t,J＝12.8Hz,2H),4.17(q,J＝16.7Hz,2H),4.00(t,J＝6.3Hz,2H),3.51(dd,J＝6.1,2.7Hz,1H),3.47(d,J＝10.3Hz,1H),3.39(d,J＝10.3Hz,1H),3.35(s,3H),2.61(t,J＝12.7Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.15–2.03(m,3H),1.22(dd,J＝5.8,2.7Hz,1H),1.00(t,J＝5.6Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:528(M+H)+。
方案57：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-(对-甲苯基氧基)-丁酰基)-甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物64)的合成
Figure BDA0004238079180004181
步骤1：(S)-4-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯(B)。将化合物A(5.0g,20.55mmol)和HCl/1,4-二噁烷(20mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用二氯甲烷稀释，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的化合物B(2.94g，定量收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:144(M+H)+。
步骤2：(S)-4-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物B(2.9g,20.55mmol)和NaHCO3(34.4g,41.11mmol)在THF(15mL)和水(15mL)中的溶液中逐滴添加氯甲酸苄酯(45.58g,26.72mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(EtOAc:PE＝1:10至1:3)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物C(4.3g，收率75.4％)。LC/MS(ESI)m/z:278(M+H)+。
步骤3：(S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-7,8-二甲酸7-苄酯8-甲酯(D)。在室温下向化合物C(4.3g,15.51mmol)在甲苯(30mL)中的溶液中添加乙烷-1,2-二醇(3.85g,62.03mmol)和对甲苯磺酸(1.48g,7.75mmol)。将反应物在140℃、N2气氛下搅拌6小时。将混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(EtOAc:PE＝1:10至2:3)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物D(3.0g，60.2％收率)。LC/MS(ESI)m/z:322(M+H)+。
步骤4：(S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(E)。向搅拌的化合物D(3.0g,9.34mmol)在甲醇(15mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)，并将混合物在H2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩从而得到呈无色油状物的粗化合物E(1.7g，97.3％收率)，并未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:188(M+H)+。
步骤5：4-(对甲苯基氧基)丁酸叔丁酯(H)。在室温、N2气氛下向化合物F(500mg,4.62mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加化合物G(1.55g,6.94mmol)和K2CO3(1.60g,11.56mmol)。将混合物在120℃下搅拌过夜。将反应物冷却至室温，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用水(2×10mL)和盐水(2×10mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(EtOAc:PE＝1:20至1:10)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物H(720mg，62.2％收率)。
步骤6：4-(对甲苯基氧基)丁酸(9)。将化合物H(220mg,0.879mmol)和HCl/1,4-二噁烷(3mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用二氯甲烷稀释，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物I(170mg，定量收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:195(M+H)+。
步骤7：(4-(对-甲苯基氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(J)。向化合物I(170mg,0.875mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(164.8mg,1.313mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(338.7mg,2.626mmol)和T3P(1.11g,1.751mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(EtOAc:PE＝1:5至1:3)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物J(176mg，75.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:266(M+H)+。
步骤8：(4-(对甲苯基氧基)丁酰基)甘氨酸(K)。在0℃下向化合物J(120mg,0.452mmol)在甲醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(19.0mg,0.452mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物K(100mg，88.0％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：252(M+H)+。
步骤9：(S)-7-((4-(对-甲苯基氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(L)。向化合物K(100mg,0.398mmol)和化合物E(112mg,0.597mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(154mg,1.094mmol)和T3P(253mg,0.796mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机相用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(EtOAc:PE＝1:5至1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物L(140mg，83.7％收率)。LC/MS(ESI)m/z:421(M+H)+。
步骤10：(S)-7-((4-(对-甲苯基氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(M)。在0℃下向化合物L(140mg,0.333mmol)在甲醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(14.0mg,0.452mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物M(120mg，88.7％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：407(M+H)+。
步骤11：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-(对-甲苯基氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物64)。向化合物M(60mg,0.148mmol)和化合物N(42.4mg,0.221mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(57.1mg,0.443mmol)和T3P(187.8mg,0.295mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物64(2mg，2.5％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.19(t,J＝3.1Hz,1H),7.42(d,J＝27.5Hz,1H),7.01(d,J＝8.2Hz,2H),6.77-6.74(m,2H),4.59–4.51(m,3H),4.03–3.85(m,8H),3.71–3.57(m,2H),2.49–2.34(m,3H),2.24(d,J＝17.0Hz,3H),2.16(dd,J＝13.2,5.4Hz,1H),2.06–1.97(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:544(M+H)+。
方案58：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-(4-氟苯氧基)-丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物65)的合成
Figure BDA0004238079180004221
步骤1：4-(4-氟苯氧基)丁酸叔丁酯(C)。在N2气氛下将化合物A(500mg,4.46mmol)、化合物B(995mg,4.46mmol)、K2CO3(1.85g,13.38mmol)和KI(669mg,4.46mmol)在DMF(5mL)中的悬浮液加热至最高120℃，并在相同的温度下搅拌18小时。将反应悬浮液在乙酸乙酯和水之间分配。将有机层分离并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩至干从而得到粗产物。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至3:1)进行纯化从而得到呈油状物的4-(4-氟苯氧基)丁酸叔丁酯(580mg，51.2％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.98–6.92(m,2H),6.84–6.80(m,2H),3.95(t,J＝6.2Hz,2H),2.42(t,J＝7.3Hz,2H),2.04(td,J＝7.2,3.7Hz,2H),1.45(s,9H)。
步骤2：4-(4-氟苯氧基)丁酸(D)。将化合物C(240mg,0.94mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用二氯甲烷稀释，并在真空下干燥从而得到4-(4-氟苯氧基)丁酸(170mg，收率91.4％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:199(M+H)+。
步骤3：(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(F)。在室温、N2气氛下向4-(4-氟苯氧基)丁酸(D；170mg,0.72mmol)和化合物E(136mg,1.08mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加EDCI(276mg,1.44mmol)、HOBT(146mg,1.08mmol)和DIPEA(468mg,3.6mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯:乙酸乙酯＝10:1至3:1)进行纯化从而得到呈油状物的(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(F；110mg,57.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:270(M+H)+。
步骤4：(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸(G)。在0℃下向(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(F；110mg,0.41mmol)在甲醇(1mL)和水(0.25mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(51mg,0.22mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH＝3并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸(G；60mg，57.7％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：256(M+H)+。
步骤5：(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(I)。在0℃、N2气氛下向(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸(G；60mg,0.23mmol)和化合物H(65mg,0.35mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(89mg,0.69mmol)和T3P(222mg,0.35mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈油状物的(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(I；40mg，40.0％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：425(M+H)+。
步骤6：(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J)。在0℃下向(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(I；40mg,0.094mmol)在甲醇(1mL)和水(0.25mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(12mg,0.28mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH＝3并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J；30mg，77.8％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：410(M+H)+。
步骤7：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物65)。在0℃、N2气氛下向(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J；30mg,0.073mmol)和化合物K(21mg,0.11mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(37mg,0.26mmol)和T3P(70mg,0.11mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在35℃下搅拌18小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物65(1.1mg，2.7％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(t,J＝3.4Hz,1H),7.45(d,J＝26.7Hz,1H),6.97(t,J＝8.8Hz,2H),6.91–6.86(m,2H),4.62(s,2H),4.55(d,J＝4.1Hz,2H),4.06–3.96(m,6H),3.94(d,J＝12.0Hz,2H),3.70(d,J＝2.9Hz,2H),2.45(t,J＝7.4Hz,2H),2.21–2.17(m,1H),2.04(d,J＝6.2Hz,2H)；LC/MS(ESI)m/z:548(M+H)+。
方案59：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-4-(羟基-甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物66)的合成
Figure BDA0004238079180004251
步骤1：(2S,4R)-4-氟-4-(羟基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-吡咯烷-2-甲酸苄酯(B)。在0℃下向化合物A(210mg,0.83mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(197mg,0.83mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.87mL,4.98mmol)和T3P(1.58g,2.49mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈油状物的化合物B(380mg，97.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:473(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-氟-4-(羟基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(C)。在室温、N2气氛下向搅拌的化合物B(380mg,0.80mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg，10重量％)，并将反应物在室温、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物C(290mg，收率94.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:383(M+H)+。
步骤3：((5-(((2S,4R)-4-氟-4-(羟基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(D)。在0℃下向化合物C(290mg,0.76mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(194mg,0.76mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加DIPEA(0.80mL,4.55mmol)和T3P(1.45g,2.28mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(260mg，55.3％收率)。LC/MS(ESI)m/z:620(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-4-(羟基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物66)。在0℃下向化合物D(50mg,0.08mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1mL)，并将反应物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物66(5mg，12.9％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.26–8.19(m,1H),7.46(s,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,2H),6.93–6.84(m,3H),4.65–4.53(m,3H),4.11–3.72(m,8H),2.58–2.41(m,3H),2.20–2.01(m,3H)；LC/MS(ESI)m/z:520(M+H)+。
方案60：(1S,3S,5S)-N-((3-氨基苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物67)
Figure BDA0004238079180004261
步骤1：(1S,3S,5S)-N-((3-氨基苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物67)。在0℃下向化合物A(50mg,0.31mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(122mg,0.31mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.3mL,0.92mmol)和T3P(585mg,0.92mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物67(15mg，收率9.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.79–7.74(m,2H),7.66(d,J＝0.8Hz,1H),7.46–7.39(m,3H),7.28(d,J＝12.8Hz,1H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.08–7.04(m,2H),6.97–6.93(m,2H),4.88(d,J＝3.2Hz,1H),4.54–4.40(m,2H),4.39–4.25(m,2H),3.39(dd,J＝6.0,6.0Hz,1H),2.46–2.36(m,1H),2.19(dd,J＝12.8,13.6Hz,1H),1.29(s,3H),1.20–1.14(m,1H),0.79(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:540(M+H)+。
方案61：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-((S)-S-甲基氨亚基替磺酰基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物68)
Figure BDA0004238079180004281
步骤1：(2S,4R)-4-((S)-S-甲基氨亚基替磺酰基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(B)。在0℃下向化合物A(306mg,0.71mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加NH3/MeOH(0.15mL,1.07mmol,7M)和PhI(OAc)2(530mg,1.64mmol)。将反应物在室温下搅拌40分钟，并将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(180mg，收率55.4％)。LC/MS(ESI)m/z:460(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-((S)-S-甲基氨亚基替磺酰基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(C)。在0℃下向化合物B(180mg,0.39mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(16mg,0.39mmol)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水稀释并用EtOAc洗涤两次。将水层用0.5M HCl水溶液酸化，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物3(132mg，收率76.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:446(M+H)+。
步骤3：(氨亚基(5-(((2S,4R)-4-((S)-S-甲基氨亚基替磺酰基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(D)。在0℃下向化合物C(60mg,0.13mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(53mg,0.18mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.1mL,0.78mmol)和T3P(248mg,0.39mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物D(73mg，收率78.5％)。LC/MS(ESI)m/z:717(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-((S)-S-甲基氨亚基替磺酰基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物68)。在室温、N2气氛下向化合物D(73mg,0.1mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(26mg，10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(2滴)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物68(11mg，收率20.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.23(s,1H),7.84(d,J＝8.8Hz,2H),7.43–7.39(m,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),7.00(dd,J＝8.4,8.8Hz,2H),4.79–4.68(m,1H),4.66–4.54(m,2H),4.30–3.95(m,5H),3.07(s,3H),2.88–2.66(m,1H),2.60–2.39(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:583(M+H)+。
方案62：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物69)的合成
Figure BDA0004238079180004301
步骤1：(2S,4R)-4-苯氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下将PPh3(1.6g,6.12mmol)和苯酚(576mg,6.12mmol)添加到化合物A(1.0g,4.0mmol)在THF(15mL)中的溶液中。然后，将DIAD(3.2mL,6.12mmol)在0℃下缓慢地添加到反应混合物中，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝20:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(845mg，收率65.0％)。LC/MS(ESI)m/z:322(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-苯氧基吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。将化合物B(500mg,1.55mmol)和HCl/1,4-二噁烷(10mL,4M)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的化合物C(343mg，收率100.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:222(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(D)。在0℃下向化合物C(170mg,0.77mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(184mg,0.77mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.76mL,4.62mmol)和T3P(1.5g,2.31mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝30:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物D(330mg，收率97.6％)。LC/MS(ESI)m/z:441(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(E)。在0℃下向化合物D(330mg,0.75mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(47mg,1.12mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物D(300mg，收率93.75％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：427(M+H)+。
步骤5：(氨亚基(5-(((2S,4R)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(E)。在0℃下向化合物D(100mg,0.23mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(55mg,0.35mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.23mL,2.1mmol)和T3P(150mg,1.05mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物E(80mg，收率49.1％)。LC/MS(ESI)m/z:698(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物69)。在室温、N2气氛下向化合物E(80mg,0.11mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg，10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(2滴)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物69(10mg，收率15.4％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.22(s,1H),7.46(s,1H),7.33–7.19(m,4H),7.00–6.85(m,6H),5.09(s,1H),4.63–4.49(m,3H),4.08–3.74(m,6H),2.56–2.40(m,3H),2.21(ddd,J＝13.3,8.5,4.6Hz,1H),2.10–2.01(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:564(M+H)+。
方案63：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-4-(甲氧基-甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物72)的合成
Figure BDA0004238079180004321
步骤1：(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(B)。在0℃下向化合物A(350mg,0.99mmol)在DCE(6mL)中的溶液中添加AgOTf(382mg,1.49mmol)、CH3I(422mg,2.97mmol)和2,6-二-叔丁基吡啶(0.67mL,2.97mmol)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(60mg，收率16.5％)。LC/MS(ESI)(m/z)：368(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(C)。将化合物B(60mg,0.16mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物C(43mg，收率98.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:268(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-吡咯烷-2-甲酸苄酯(E)。在0℃下向化合物C(43mg,0.16mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(D；37mg,0.16mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.17mL,0.94mmol)和T3P(300mg,0.47mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤，并将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:2)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物E(53mg，收率69.3％)。LC/MS(ESI)(m/z)：487(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(F)。在室温、N2气氛下向化合物E(50mg,0.10mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(15mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2球囊下搅拌5小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物F(40mg，收率98.3％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：397(M+H)+。
步骤5：((5-(((2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(H)。在0℃下向化合物G(40mg,0.10mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(H；26mg,0.10mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.1mL,0.6mmol)和T3P(191mg,0.30mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物H(45mg，收率71.1％)。LC/MS(ESI)(m/z)：634(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物72)。在0℃下向化合物8(45mg,0.07mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物72(2.3mg，收率6.1％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.24(dd,J＝5.2,5.2Hz,1H),7.46(s,1H),7.28–7.21(m,2H),6.95–6.85(m,3H),4.65–4.51(m,3H),4.11–3.72(m,6H),3.70–3.57(m,2H),3.41(s,3H),2.65–2.37(m,3H),2.26–1.97(m,3H)；LC/MS(ESI)(m/z):534(M+H)+。
方案64：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(环己基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物73)
Figure BDA0004238079180004351
步骤1：(2S,4R)-2-(((4-(N-((苄氧基)羰基)甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-环己基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(B)。在0℃下向化合物A(50mg,0.17mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(49mg,0.17mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.02mmol)和T3P(324mg,0.51mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物B(27mg，收率27.8％)。LC/MS(ESI)m/z:569(M+H)+。
步骤2：((5-(((2S,4R)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(C)。将化合物B(27mg,0.05mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物C(22mg，收率95.7％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:469(M+H)+。
步骤3：((5-(((2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(D)。在0℃下向化合物C(22mg,0.05mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(13mg,0.05mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.05mL,0.3mmol)和T3P(95mg,0.15mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃、N2气氛下搅拌3.5小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物D(30mg，收率83.3％)。LC/MS(ESI)m/z:722(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(环己基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物73)。在室温、N2气氛下向化合物D(30mg,0.04mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(11mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(催化剂，2滴)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物73(3.3mg，收率13.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,2H),7.44–7.38(m,3H),7.20(t,J＝7.2Hz,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,2H),7.00(dd,J＝9.6,8.4Hz,2H),4.58–4.57(m,3H),4.35(dd,J＝10.0,9.6Hz,1H),4.27–4.13(m,4H),4.02–3.92(m,1H),2.55–2.37(m,1H),2.13–1.99(m,1H),1.76–1.66(m,5H),1.57–1.52(m,1H),1.30–1.19(m,4H),1.11–0.99(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:588(M+H)+。
方案65：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-甲氧基-丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物74)的合成
Figure BDA0004238079180004371
步骤1：(1S,3S,5R)-5-((2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-甲酯(C)。在0℃下向化合物A(130mg,0.48mmol)和Rh2(OAc)4(21mg,0.05mmol)在DCM(2mL)中的混合物中添加2-重氮乙酸苄酯(B；297mg,1.68mmol)在DCM(1mL)中的溶液，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物C(172mg，收率85.6％)。LC/MS(ESI)m/z:420(M+H)+。
步骤2：2-(((1S,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-3-(甲氧基羰基)-2氮杂双环-[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)乙酸(D)。在室温、N2气氛下向化合物C(172mg,0.41mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物D(130mg，收率96.3％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：330(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-((2-羟基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-甲酯(E)。在0℃下向化合物D(147mg,0.45mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加BH3·Me2S(0.9mL,1.8mmol,2M于THF中)，并将混合物在25℃、N2下搅拌1小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物E(86mg，收率61.4％)。LC/MS(ESI)m/z:316(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5R)-5-((2-((甲基磺酰基)氧基)乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-甲酯(F)。在0℃下向化合物E(140mg,0.44mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TEA(0.5mL,3.6mmol)和MsCl(0.14mL,1.76mmol)，并将混合物在0℃、N2下搅拌1小时。将混合物用DCM稀释并用盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物F(170mg，收率97.1％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:394(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-甲酯(G)。向化合物F(175mg,0.44mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加NaN3(72mg,1.1mmol)，并将混合物在40℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物G(134mg，收率88.7％)。LC/MS(ESI)m/z:341(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5R)-5-((2-氨基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-甲酯(H)。在室温、N2气氛下向化合物G(134mg,0.39mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10％wt)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物H(110mg，收率89.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：315(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-甲酯(I)。在0℃下向化合物H(110mg,0.35mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TEA(0.3mL,2.1mmol)和AcCl(0.07mL,1.05mmol)，并将混合物在0℃、N2下搅拌1小时。将混合物用DCM稀释并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝95:5)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物I(86mg，收率69.3％)。LC/MS(ESI)m/z:357(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(J)。将化合物I(86mg,0.24mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物J(60mg，收率96.8％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:257(M+H)+。
步骤9：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(L)。在0℃下向化合物J(62mg,0.24mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(K；72mg,0.26mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.24mL,1.44mmol)和T3P(460mg,0.72mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物L(92mg，收率74.8％)。LC/MS(ESI)m/z:510(M+H)+。
步骤10：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(M)。在0℃下向化合物M(92mg,0.18mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(11mg,0.27mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的化合物M(85mg，收率95.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：496(M+H)+。
步骤11：((5-(((1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(O)。在0℃下向化合物M(80mg,0.10mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(N；62mg,0.15mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.16mL,0.60mmol)和T3P(308mg,0.30mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝9:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物O(42mg，收率35.6％)。LC/MS(ESI)m/z:733(M+H)+。
步骤10：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物74)。在0℃下向化合物O(42mg,0.06mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(1mL)，并将溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，在真空下干燥，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物74(5mg，收率13.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.84(d,J＝8.8Hz,2H),7.41(dd,J＝9.3,6.7Hz,3H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.08–7.04(m,2H),7.02–6.98(m,2H),4.84–4.83(m,1H),4.55(d,J＝4.9Hz,2H),4.39–4.29(m,2H),3.62–3.57(m,2H),3.53(t,J＝5.6Hz,2H),3.46(d,J＝10.6Hz,2H),3.36(d,J＝5.5Hz,2H),2.67(t,J＝12.8Hz,1H),2.12(dd,J＝13.4,3.5Hz,1H),1.94(s,3H),1.22(dd,J＝5.9,2.6Hz,1H),1.01(t,J＝5.5Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:633(M+H)+。
方案66：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-甲氧基-丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物75)的合成
Figure BDA0004238079180004411
步骤1：(4-甲氧基丁酰基)甘氨酸苄酯(C)。在0℃下向化合物A(100mg,0.85mmol)和甘氨酸苄酯(B；256mg,1.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.84mL,5.1mmol)、EDCI(325mg,1.7mmol)和HOBT(171mg,1.28mmol)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物C(106mg，收率47.3％)。LC/MS(ESI)m/z:266(M+H)+。
步骤2：(4-甲氧基丁酰基)甘氨酸(D)。在室温、N2气氛下向化合物C(106mg,0.4mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物D(65mg，收率92.8％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：176(M+H)+。
步骤3：(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-2-((4-甲氧基丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(F)
在0℃下向化合物D(35mg,0.2mmol)和(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(E；82.4mg,0.2mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.2mmol)和T3P(382mg,0.6mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌5小时。将混合物用H2O稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝9:1)进行纯化从而得到呈白色半固体的化合物F(80mg，收率70.2％)。LC/MS(ESI)m/z:570(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-甲氧基丁酰基)-甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物75)
在室温、N2气氛下向化合物F(40mg,0.07mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(催化剂，2滴)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物75(5mg，收率16.3％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.24–8.23(d,J＝4.0Hz,1H),7.41(s,1H),4.79(dd,J＝11.4,3.3Hz,1H),4.59–4.46(m,2H),4.22–4.08(m,2H),3.40(t,J＝6.3Hz,2H),3.33(d,J＝2.4Hz,1H),3.31(s,3H),2.45–2.30(m,3H),2.15(dd,J＝13.4,3.3Hz,1H),1.88–1.80(m,2H),1.28(s,3H),1.13(dd,J＝5.7,2.4Hz,1H),0.80(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:436(M+H)+。
方案67：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物76)的合成
Figure BDA0004238079180004431
步骤1：4-[4-(甲基硫烷基)苯氧基]丁酸叔丁酯(B)。在室温下向化合物A(1g,7.13mmol)在丙酮(15mL)中的溶液中添加4-溴丁酸叔丁酯(1.59g,7.13mmol)、K2CO3(1.18g,8.56mmol)和NaI(107mg,0.713mmol)，并将反应物在60℃下搅拌16小时。将所得混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1至5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(1.43g，收率71.0％)。LC/MS(ESI)m/z:283(M+H)+。
步骤2：4-[4-(甲基硫烷基)苯氧基]丁酸(C)。将化合物B(1.43g,5.06mmol)在HCl/1,4-二噁烷(7mL)中的混合物在室温下搅拌2小时，并将所得混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物C(1.04g，收率90.7％)。LC/MS(ESI)m/z:227(M+H)+。
步骤3：2-{4-[4-(甲基硫烷基)苯氧基]丁酰胺基}乙酸甲酯(4)。在室温下向化合物C(1.04g,4.60mmol)和2-氨基乙酸甲酯(614mg,6.89mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(2.97g,23.0mmol)、EDCI(1.76g,9.19mmol)和HOBt(930mg,6.89mmol)，并将所得混合物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(1.01g，收率73.9％)。LC/MS(ESI)m/z:298(M+H)+。
步骤4：(4-(4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(E)。在室温下向化合物D(1.01g,3.40mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加NH3/MeOH(0.73mL,5.10mmol)和PhI(OAc)2(2.52g,7.81mmol)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物E(975mg，收率87.4％)。LC/MS(ESI)m/z:329(M+H)+。
步骤5：(4-(4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(F)。在0℃下向化合物E(975mg,2.97mmol)在THF(8mL)、MeOH(2mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(374mg,8.91mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将所得混合物用2N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物F(900mg，收率96.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:315(M+H)+。
步骤6：(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(S-甲基氨亚基替磺酰基)-苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)-氨基甲酸苄酯(G)。在室温下向化合物F(38.1mg,0.121mmol)和(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(100mg,0.121mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(94mg,0.727mmol)和T3P(231mg,0.364mmol,50重量％于EtOAc中)，并将反应物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物G(85mg，收率98.9％)。LC/MS(ESI)m/z:709(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(S-甲基-氨亚基替磺酰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物76)。在室温、N2气氛下向化合物7(85mg,0.12mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(催化剂，2滴)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物76(16mg，收率23.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.25(dd,J＝6.9,1.5Hz,1H),8.08–8.04(m,2H),7.43(d,J＝11.3Hz,1H),7.29(dd,J＝9.6,2.6Hz,2H),4.81–4.77(m,1H),4.58–4.50(m,2H),4.28–4.09(m,4H),3.72(s,3H),3.34(d,J＝2.4Hz,1H),2.49(t,J＝7.3Hz,2H),2.40(t,J＝12.4Hz,1H),2.18–2.11(m,3H),1.28(s,3H),1.17–1.15(m,1H),0.80(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:575(M+H)+。
方案68：N-({[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]氨基甲酰基}甲基)-2-[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰胺(化合物77)的合成
Figure BDA0004238079180004451
步骤1：(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基甘氨酸苄酯(B)。在室温下向化合物A(300mg,1.11mmol)和甘氨酸苄酯盐酸盐(274mg,1.66mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(714mg,5.53mmol)、EDCI(424mg,2.21mmol)和HOBt(224mg,1.66mmol)，并将反应物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1至1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(440mg，收率95.1％)。LC/MS(ESI)m/z:419(M+H)+。
步骤2：(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基甘氨酸(V)。在室温、N2气氛下向化合物B(440mg,1.05mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(40mg,10重量％)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物C(130mg，收率37.6％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:329(M+H)+。
步骤3：N-{5-[(2-{2-[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰胺基}-乙酰胺基)-甲基]噻吩-3-氨亚基替甲酰基(carboximidoyl)}氨基甲酸叔丁酯(D)。在室温下向化合物3(130mg,0.396mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(152mg,0.594mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(256mg,1.98mmol)、EDCI(152mg,0.792mmol)和HOBt(80.2mg,0.594mmol)，并将反应物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(130mg，收率58.0％)。LC/MS(ESI)m/z:566(M+H)+。
步骤4：N-(2-((2-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙基)-4-苯氧基苯甲酰胺(化合物77)。在0℃下向化合物D(65mg,0.115mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL)，并将反应物在室温下搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物77(12mg，收率22.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.86–7.83(m,2H),7.44–7.40(m,3H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.07–7.04(m,2H),7.01–6.99(m,2H),4.61(s,2H),4.03(s,2H),3.92(s,2H)；LC/MS(ESI)m/z:466(M+H)+。
方案69：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-(((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物78)的合成
Figure BDA0004238079180004471
步骤1：((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酸钠(B)。向氢氧化钠(1.22g,30.46mmol)在甲醇/H2O(10mL,V:V＝1:1)中的溶液中添加甘氨酸(2.29g,30.46mmol)。将混合物在室温下搅拌，直至甘氨酸完全溶解。然后，将(2R,3R,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己醛(A；5.0g,30.46mmol)添加到上面的混合物中。将混合物在室温下搅拌，直至化合物A完全溶解，并且在50至60℃、N2气氛下进一步搅拌5小时。在室温下将NaBH4(3.46g,91.38mmol)分批添加到上面的混合物中，并将所得混合物在室温下搅拌24小时。然后，将反应混合物冷却至0℃，并将混合物调节至pH～9，并且未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤2：N-(叔丁氧基羰基)-N-((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酸(C)。在0℃下向上面的混合物中添加碳酸二(叔丁基)酯(19.94g,91.38mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用浓HCl水溶液调节至pH＝4至5。将沉淀通过过滤去除，并将滤液浓缩至干。将残余物用乙醇稀释，并将形成的沉淀通过过滤去除。将此程序重复五次，并将溶液浓缩至干从而得到呈白色固体的N-(叔丁氧基羰基)-N-((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酸(C；1.76g,17.9％)。LC/MS(ESI)m/z:322(M-H)-。
步骤3：2-(溴甲基)噻唑-4-甲腈(E)。在室温下向2-甲基噻唑-4-甲腈(D；1.0g,8.05mmol)在四氯化碳(5mL)中的溶液中添加NBS(1.4g,8.05mmol)和BPO(97.5mg,0.403mmol)。将混合物在90℃、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(EtOAc/PE＝0:1至1:25)进行纯化从而得到呈无色油状物的2-(溴甲基)噻唑-4-甲腈(E；600mg,36.7％收率)。LC/MS(ESI)m/z:204(M+H)+。
步骤4：N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-氰基-1,3-噻唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(F)。在0℃、N2气氛下向亚胺二甲酸二叔丁酯(833.5mg,3.84mmol)在无水THF(10mL)中的溶液中添加NaH(160mg,60重量％)，并将混合物在0℃下搅拌20分钟。将在THF(3mL)中的2-(溴甲基)噻唑-4-甲腈(E；600mg,2.95mmol)添加到上面的混合物中，并将所得混合物在25℃、N2气氛下再搅拌16小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过经由硅胶的快速柱色谱(EtOAc＝0:1至1 25)进行纯化，从而得到呈白色固体的N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-氰基-1,3-噻唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(F；720mg,71.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:362(M+23)+。
步骤5：N-(叔丁氧基羰基)-N-{[4-(N-羟基甲脒基)-1,3-噻唑-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(G)。在0℃下向N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-氰基-1,3-噻唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(F；720mg,2.12)在甲醇(8mL)中的混合物中添加DIPEA(820.9mg,6.36mmol)和NH2OH.HCl(442.2mg,6.36mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。在完成反应后，将混合物浓缩至干并且用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(EtOAc:PE＝0:1至1:1)进行纯化，从而得到呈白色固体的N-(叔丁氧基羰基)-N-{[4-(N-羟基甲脒基)-1,3-噻唑-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(G；780mg,98.7％收率)。LC/MS(ESI)m/z:373(M+H)+。
步骤6：N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-甲脒基-1,3-噻唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(H)。向N-(叔丁氧基羰基)-N-{[4-(N-羟基甲脒基)-1,3-噻唑-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(G；780mg,2.09mmol)在甲醇(8mL)中的溶液中添加在水(1mL)和乙酸(0.5mL)中的雷尼镍，并将混合物在30℃、H2球囊下搅拌16小时。将反应混合物过滤，并将滤液浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(MeOH:DCM＝0:1至1:10)进行纯化从而得到呈黄色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-甲脒基-1,3-噻唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(H；420mg,56.2％收率)。LC/MS(ESI)m/z:357(M+H)+。
步骤7：N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-甲脒基-1,3-噻唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(I)。将N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-甲脒基-1,3-噻唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(105mg,0.295mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与二氯甲烷共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-甲脒基-1,3-噻唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(I；46mg，定量收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:157(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(K)。向(1S,3S,5S)-2-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(J；60mg,0.249mmol)和N-(叔丁氧基羰基)-N-[(4-甲脒基-1,3-噻唑-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(I；42.7mg,0.274mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加T3P(316.3g,0.497mmol,50％于乙酸乙酯中)和DIPEA(128mg,0.995mmol)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(MeOH:DCM＝1:10至1:6)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(K；31mg,32.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:380(M+H)+。
步骤9：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(L)。将(1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(K；31mg,0.082mmol)和HCl/1,4-二噁烷(1mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与二氯甲烷共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(L；23mg，定量收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:280(M+H)+。
步骤10：(2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)氨基甲酸叔丁酯(M)。向(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(L；23mg,0.083mmol)和N-(叔丁氧基羰基)-N-((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酸(C；26.7mg,0.083mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(53.3mg,0.413mmol)和T3P(187.8mg,0.165mmol,50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]-己-2-基)-2-氧代乙基)((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)氨基甲酸叔丁酯(M；15mg,30.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:585(M+H)+。
步骤11：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-(((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物78)。将(2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)氨基甲酸叔丁酯(M；15mg,0.026mmol)和HCl/1,4-二噁烷(1mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物78(5.5mg,44.2％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.62(d,J＝7.5Hz,1H),4.89(d,J＝3.5Hz,1H),4.71(s,2H),4.30(d,J＝16.1Hz,1H),4.10(d,J＝16.1Hz,1H),3.96(td,J＝7.7,3.8Hz,1H),3.84(d,J＝6.3Hz,1H),3.79(dd,J＝13.3,6.9Hz,1H),3.48–3.42(m,2H),3.28–3.19(m,2H),2.51(t,J＝12.6Hz,1H),2.17(dd,J＝13.4,3.4Hz,1H),1.31(s,4H),1.29(d,J＝6.3Hz,3H),0.84(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:485(M+H)+。
方案70：4-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸乙酯(化合物79)
Figure BDA0004238079180004521
步骤1：4-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸乙酯(B)。向化合物A(1g,6.02mmol)和4-溴丁酸叔丁酯(1.34g,6.02mmol)在丙酮(30mL)中的混合物中添加K2CO3(2.49g,18.1mmol)和NaI(225mg,1.51mmol)。将反应物在60℃下搅拌16小时，用EtOAc稀释，并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(775mg，收率41.8％)。
步骤2：4-(4-(乙氧基羰基)苯氧基)丁酸(C)。在0℃下向化合物B(775mg,2.52mmol)在1,4-二噁烷(7mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(7mL)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物C(580mg，收率91.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:251(M-H)-。
步骤3：4-(4-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸乙酯(D)。在室温下向化合物C(580mg,2.30mmol)和2-氨基乙酸苄酯(569mg,3.45mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(1.90mL,11.5mmol)、EDCI(882mg,4.60mmol)和HOBt(467mg,3.46mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(860mg，收率93.7％)。LC/MS(ESI)m/z:400(M+H)+。
步骤4：(4-(4-(乙氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(E)。在室温、N2气氛下向化合物D(860mg,2.16mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物E(640mg，收率95.9％)。LC/MS(ESI)m/z:310(M+H)+。
步骤5：4-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-((苄氧基)羰基)甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸乙酯(F)。在0℃下向化合物E(75mg,0.24mmol)和(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(100mg,0.24mmol)在DMF(2.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.24mL,1.44mmol)和T3P(458mg,0.72mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝12:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物F(145mg，收率85.9％)。LC/MS(ESI)(m/z)：704(M+H)+。
步骤6：4-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸乙酯(化合物79)。在25℃、N2气氛下向化合物F(70mg,0.01mmol)在MeOH(2.0mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(催化剂，2滴)，并将混合物在25℃、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物79(2.0mg，收率4.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(s,1H),7.99–7.91(m,2H),7.41(t,J＝9.2Hz,1H),7.01–6.95(m,2H),4.81–4.78(m,1H),4.51(q,J＝15.8Hz,2H),4.32(q,J＝7.1Hz,2H),4.14(dt,J＝12.4,11.5Hz,4H),2.47(t,J＝7.3Hz,2H),2.38(t,J＝12.4Hz,1H),2.18–2.05(m,3H),1.36(t,J＝7.1Hz,3H),1.28(s,3H),1.13(dd,J＝5.7,2.4Hz,1H),0.80(d,J＝4.9Hz 1H)；LC/MS(ESI)(m/z):570(M+H)+。
方案71：4-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(化合物80)
Figure BDA0004238079180004541
步骤1：4-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(化合物80)。在0℃下向化合物A(70mg,0.01mmol)在THF(1.0mL)、MeOH(0.5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(8.4mg,0.2mmol)，并将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc洗涤两次。将水层用0.5N HCl水溶液酸化，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物80(1.7mg，收率2.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(s,1H),8.01–7.89(m,2H),7.40(s,1H),6.97(d,J＝8.9Hz,2H),4.79–4.77(m,1H),4.57–4.44(m,2H),4.23–4.08(m,4H),3.35–3.32(m,1H),3.35–3.33(m,1H),2.48(t,J＝7.3Hz,2H),2.38(t,J＝11.7Hz,1H),2.18(dd,J＝12.3,4.7Hz,1H),2.14–2.08(m,2H),1.28(s,3H),1.12(d,J＝3.1Hz,1H),0.80(t,J＝5.3Hz,1H)；LC/MS(ESI)(m/z):542(M+H)+。
方案72：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((5-苯基戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物81)的合成
Figure BDA0004238079180004551
步骤1：2-(5-苯基戊酰胺基)乙酸苄酯(B)。在室温下向化合物A(500mg,2.81mmol)和2-氨基乙酸苄酯(695mg,4.21mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(1.8g,14.0mmol)、EDCI(1.1g,5.61mmol)和HOBt(568mg,4.21mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(910mg，收率99.7％)。LC/MS(ESI)m/z:326(M+H)+。
步骤2：(5-苯基戊酰基)甘氨酸(C)。在室温、N2气氛下向化合物B(910mg,2.80mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(200mg,10重量％)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物C(640mg，收率97.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:236(M+H)+。
步骤3：(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-苯基戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(D)。在0℃下向化合物C(57mg,0.12mmol)和(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(100mg,0.12mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(94mg,0.73mmol)和T3P(231mg,0.36mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(70mg，收率91.7％)。LC/MS(ESI)m/z:630(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((5-苯基-戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物81)。在室温、N2气氛下向化合物D(70mg,0.11mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(80mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(催化剂，2滴)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物81(20mg，收率36.3％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.22(d,J＝1.4Hz,1H),7.41(s,1H),7.25-7.21(m,2H),7.18-7.12(m,3H),4.79(d,J＝8.1Hz,1H),4.49(t,J＝12.7Hz,2H),4.15(q,J＝16.7Hz,2H),3.35-3.32(m,1H),2.62(t,J＝7.0Hz,2H),2.42-2.35(m,1H),2.28(d,J＝7.0Hz,2H),2.16(dd,J＝13.3,3.1Hz,1H),1.70-1.58(m,4H),1.27(s,3H),1.13-1.09(m,1H),0.78(t,J＝5.3Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:496(M+H)+。
方案73：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酰胺(化合物82)的合成
Figure BDA0004238079180004571
步骤1：(S)-4,4-二烯丙基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-乙酯(B)。在-70℃下向(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-乙酯(A；2.0g,7.77mmol)在THF(100mL)中的溶液中逐滴添加LiHMDS(15.5mL,15.5mmol,1mol于THF中)。将反应混合物在-70℃下搅拌1小时，之后添加烯丙基溴(1.88g,15.5mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，之后用稀乙酸(1.2mL于5mL水中)淬灭。将反应物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-4,4-二烯丙基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-乙酯(B；0.62g,23.6％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：338(M+H)+。
步骤2：(S)-1-氧代-2-氮杂螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(C)。在N2气氛下向(S)-4,4-二烯丙基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-乙酯(A；620mg,1.84mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中添加格拉布(Grubbs)第1代催化剂(75.6mg,0.092mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝30:1至5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-1-氧代-2-氮杂螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(C；440.0mg,77.4％收率)。LC/MS(ESI)m/z:310(M+H)+。
步骤3：(S)-1-氧代-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(D)。向搅拌的(S)-1-氧代-2-氮杂螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(C；440mg,1.42mmol)在乙醇(6mL)中的溶液中添加Pd/C(50mg,10重量％)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(S)-1-氧代-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(D；400mg,90.3％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:312(M+H)+。
步骤4：(S)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(E)。在0℃下向(S)-1-氧代-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(D；200mg,0.64mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加BH3·THF(2.6mL,2.57mmol,1M于THF中)。将混合物在60℃、N2气氛下搅拌过夜。将反应物冷却至室温，并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机相用水(2×10mL)和盐水(2×10mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至10:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的(S)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(110mg,57.6％收率)。LC/MS(ESI)m/z:298(M+H)+。
步骤5：(S)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(F)。将(S)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(E；110mg,0.37mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与二氯甲烷共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(S)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(F；74mg，定量收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:198(M+H)+。
步骤6：(S)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酸乙酯(H)。向(S)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(F；74mg,0.37mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(G；88mg,0.37mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加HATU(171mg,0.45mmol)和DIPEA(145mg,1.12mmol)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的(S)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酸乙酯(H；140mg,89.6％收率)。LC/MS(ESI)m/z:417(M+H)+。
步骤7：(S)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酸(I)。在0℃下向(S)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酸乙酯(H；140mg,0.34mmol)在甲醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(17mg,0.40mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(S)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酸(125mg，95.7％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：389(M+H)+。
步骤8：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酰胺(化合物82)。向(S)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酸(I；45mg,0.11mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(31mg,0.16mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(42mg,0.32mmol)和T3P(137mg,0.22mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物82(6.4mg，11.3％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.24(d,J＝5.8Hz,1H),7.47(d,J＝18.4Hz,1H),7.28–7.22(m,2H),6.94–6.88(m,3H),4.63–4.55(m,2H),4.42(t,J＝7.9Hz,1H),4.09–3.92(m,4H),3.51(dd,J＝31.7,9.9Hz,2H),2.51–2.45(m,2H),2.19(dd,J＝12.5,8.3Hz,1H),2.07(dd,J＝14.1,7.0Hz,2H),1.91(dd,J＝12.5,7.7Hz,1H),1.71–1.64(m,4H),1.63–1.51(m,3H),1.05(t,J＝7.2Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:526(M+H)+。
方案74：(S)-N-((5-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物83)的合成
Figure BDA0004238079180004601
步骤1：(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(C)。向4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(A；200mg,0.84mmol)和(S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(B；237mg,1.26mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(326mg,2.53mmol)和T3P(1.07g,1.69mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝100:1至15:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(C；320mg,93.4％收率)。LC/MS(ESI)m/z:407(M+H)+。
步骤2：(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(D)。在0℃下向(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(C；320mg,0.79mmol)在甲醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(33mg,0.79mmol)在水(0.5mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(D；300mg，97.1％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：393(M+H)+。
步骤3：(S)-N-((5-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物83)。向(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(D；40mg,0.10mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-2-甲脒盐酸盐(E；29mg,0.15mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(66mg,0.51mmol)和T3P(195mg,0.30mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物83(2.7mg,5.0％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),7.78(dd,J＝6.4,4.0Hz,1H),7.25–7.16(m,3H),6.92–6.88(m,3H),4.61(d,J＝1.2Hz,2H),4.58–4.52(m,1H),4.01–3.94(m,8H),3.70(d,J＝7.7Hz,2H),2.48–2.41(m,3H),2.22–2.15(m,1H),2.14(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:530(M+H)+。
方案75：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基苯丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物84)的合成
Figure BDA0004238079180004621
步骤1：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(B)。将化合物A(58mg,0.21mmol)和HCl/1,4-二噁烷(5mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的化合物B(36mg，收率98.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:172(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(D)。在0℃下向化合物B(36mg,0.21mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(C；56mg,0.23mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.26mmol)和T3P(413mg,0.65mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝30:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物D(70mg，收率85.4％)。LC/MS(ESI)m/z:391(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]-己烷-3-甲酸(E)。在0℃下向化合物D(70mg,0.18mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(11mg,0.27mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc洗涤。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取五次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的化合物E(60mg，收率89.6％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：377(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(羟基甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物84)。在0℃下向化合物E(60mg,0.16mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(37mg,0.24mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.16mL,0.96mmol)和T3P(304mg,0.48mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取五次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物84(10.0mg，收率12.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.22(s,1H),7.42(s,1H),7.26–7.22(m,2H),6.91–6.88(m,3H),4.83–4.81(m,1H),4.58–4.47(m,2H),4.24–4.11(m,2H),4.17(t,J＝6.0Hz,2H),3.68–3.63(m,2H),3.51–3.46(m,2H),2.65(t,J＝12.3Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.14–2.02(m,3H),1.24–1.19(m,1H),1.02–0.97(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:514(M+H)+。
方案76：(2S,4R)-4-(叠氮基甲基)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物85)的合成
Figure BDA0004238079180004641
步骤1：(2S,4R)-4-氟-4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(B)。在0℃下向化合物A(190mg,0.40mmol)在DCM(6mL)中的溶液中添加TEA(244mg,2.42mmol)和MsCl(139mg,1.21mmol)，并将反应物在0℃、N2下搅拌2小时。将混合物用冰水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物B(200mg，收率90.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:551(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(叠氮基甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(C)。在室温下向化合物B(200mg,0.36mmol)在DMF(9mL)中的溶液中添加NaN3(59mg,0.91mmol)，并将反应物在55℃搅拌2天。将混合物用冰水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝30:1至1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物C(100mg，收率55.3％)。LC/MS(ESI)m/z:498(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-(叠氮基甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(D)。在0℃下向化合物C(100mg,0.20mmol)在MeOH(1.2mL)、THF(0.6mL)和H2O(0.6mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(13mg,0.30mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc洗涤两次。将水层用0.5M HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的化合物D(80mg，收率97.7％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:408(M+H)+。
步骤4：((5-(((2S,4R)-4-(叠氮基甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(E)。在0℃下向化合物D(80mg,0.20mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(53mg,0.20mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.22mL,1.2mmol)和T3P(382mg,0.6mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物E(77mg，收率57.9％)。LC/MS(ESI)(m/z)：645(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-(叠氮基甲基)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物86)。将化合物E(25mg,0.04mmol)和HCl/1,4-二噁烷(2mL)的混合物在室温下搅拌8小时。将反应物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物85(3.9mg，收率18.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(s,1H),7.45(s,1H),7.26–7.22(m,2H),6.91–6.88(m,3H),4.67–4.52(m,3H),4.13–3.95(m,5H),3.83–3.62(m,3H),2.69–2.45(m,3H),2.20–2.05(m,3H)；LC/MS(ESI)m/z:545(M+H)+。
方案77：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)磺酰基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物86)的合成
Figure BDA0004238079180004661
步骤1：4,5-二溴噻吩-2-磺酰氯(B)。在0℃下向化合物A(3g,12.4mmol)和ClSO3H(2.2g,18.6mmol)的混合物中添加PCl5(2.6g,12.4mmol)，并将混合物在50℃、N2气氛下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈棕色固体的化合物B(4.2g，收率98.8％)。LC/MS(ESI)m/z:339(M+H)+。
步骤2：4,5-二溴噻吩-2-磺酰胺(C)。在室温下向化合物B(4.2g,12.3mmol)在丙酮(60mL)中的溶液中添加NH3·H2O(62.5mL,25重量％于水中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将混合物用EtOAc萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物C(3.1g，收率78.3％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:318(M-H)-。
步骤3：4-溴噻吩-2-磺酰胺(D)。在室温下向化合物C(2g,6.23mmol)在AcOH(3mL)和H2O(8mL)中的溶液中添加锌粉(0.9g,14.33mmol)，并将反应物在100℃、N2气氛下搅拌30分钟。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(1.3g，收率86.2％)。LC/MS(ESI)m/z:240(M-H)-。
步骤4：4-氰基噻吩-2-磺酰胺(E)。在室温下向化合物D(1g,4.13mmol)在NMP(20mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(970mg,8.26mmol)和Pd(PPh3)4(477mg,0.41mmol)，并将混合物在160℃、N2气氛下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈棕色固体的化合物E(210mg，收率27.0％)。LC/MS(ESI)m/z:187(M-H)-。
步骤5：N-羟基-5-氨磺酰基噻吩-3-甲脒(F)。在0℃下向化合物5(330mg,1.75mmol)在EtOH(10mL)中的溶液中添加NH2OH·HCl(0.3g,4.38mmol)和DIPEA(0.7g,5.26mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌15小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物6(380mg，收率98.0％)。LC/MS(ESI)m/z:220(M-H)-。
步骤6：5-氨磺酰基噻吩-3-甲脒(G)。在室温、N2气氛下向化合物F(380mg,1.72mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加雷尼镍(1mL，在水中的浆料)和AcOH(0.1mL)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物G(340mg，收率96.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:206(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)磺酰基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物86)。在0℃下向化合物G(100mg,0.24mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(192mg,0.24mmol)在DCM(5mL)中的混合物中添加TEA(147mg,1.46mmol)、DMAP(3mg,0.024mmol)和CMPI(93mg,0.37mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌48小时。将混合物用DCM稀释并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取五次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物86(1mg，收率0.71％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.57–8.55(m,1H),8.16–8.13(m,1H),7.87–7.83(m,2H),7.44–7.40(m,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.07–6.99(m,4H),4.74–4.71(m,1H),4.35–4.29(m,1H),4.26–4.17(m,1H),3.40–3.36(m,1H),2.50–2.39(m,1H),2.03–1.98(m,1H),1.28(s,3H),1.19–1.17(m,1H),0.85–0.75(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:582(M+H)+。
方案78：(1S,3S,5S)-2-((4-(4-(叔丁基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物87)的合成
Figure BDA0004238079180004691
步骤1：4-(4-(叔丁基)苯氧基)丁酸叔丁酯(B)。在室温下向化合物A(1g,6.66mmol)和4-溴丁酸叔丁酯(1.5g,6.66mmol)在丙酮(30mL)中的混合物中添加K2CO3(2.8g,19.97mmol)和NaI(250mg,1.66mmol)，并将混合物在60℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(580mg，收率29.8％)。
步骤2：4-(4-(叔丁基)苯氧基)丁酸(C)。在0℃下向化合物B(580mg,1.98mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(5mL)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物C(450mg，收率96.0％)。LC/MS(ESI)m/z:235(M-H)-。
步骤3：(4-(4-(叔丁基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸苄酯(D)。在0℃下向化合物C(450mg,1.90mmol)和2-氨基乙酸苄酯(0.5g,2.86mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(1.2g,9.52mmol)、EDCI(0.7g,3.81mmol)和HOBt(0.4g,2.86mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液稀释，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(600mg，收率82.2％)。LC/MS(ESI)m/z:384(M+H)+。
步骤4：(4-(4-(叔丁基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(E)。在室温、N2气氛下向化合物D(600mg,1.57mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物E(450mg，收率98.0％)。LC/MS(ESI)m/z:294(M+H)+。
步骤5：((5-(((1S,3S,5S)-2-((4-(4-(叔丁基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(F)。在0℃下向化合物E(36mg,0.12mmol)和(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(100mg,0.12mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(94mg,0.73mmol)和T3P(231mg,0.36mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物F(80mg，收率96.0％)。LC/MS(ESI)m/z:688(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-2-((4-(4-(叔丁基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-N-((4-甲脒基-噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物87)。在0℃、N2气氛下向化合物F(80mg,0.12mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(0.1mL)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物87(16mg，收率24.8％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(s,1H),7.40(s,1H),7.29–7.26(m,2H),6.83–6.81(m,2H),4.82–4.78(m,1H),4.57–4.46(m,2H),4.16(d,J＝12.0Hz,2H),3.98(t,J＝6.3Hz,2H),3.35–3.33(m,1H),2.48–2.44(m,2H),2.41–2.35(m,1H),2.16(dd,J＝13.3,3.2Hz,1H),2.09–2.02(m,2H),1.28(s,12H),1.12(dd,J＝5.5,2.3Hz,1H),0.80(t,J＝6.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:554(M+H)+。
方案79：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)-苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2,3-二氢-1H-吡咯-2-甲酰胺(化合物95)
Figure BDA0004238079180004711
步骤1：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐(B)。将(S)-2-(((4-(N-(叔丁氧基羰基)-甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(A；90mg,0.20mmol)在HCl/1,4-二噁烷(1mL)中的溶液在25℃下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐(B；44mg,88.0％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:251(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)-苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2,3-二氢-1H-吡咯-2-甲酰胺(化合物96)。在室温、N2气氛下向(4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(C；42mg,0.12mmol)和(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-2-甲酰胺盐酸盐(B；44mg,0.18mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(47mg,0.36mmol)和T3P(114mg,0.18mmol，50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2,3-二氢-1H-吡咯-2-甲酰胺(化合物95；1.1mg,1.5％收率)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.71(d,J＝9.2Hz,2H),7.40(s,1H),7.03(d,J＝8.9Hz,2H),6.08(dd,J＝6.4,2.1Hz,1H),5.85(dd,J＝6.3,2.2Hz,1H),5.12(s,1H),4.54(s,2H),4.45(s,2H),4.12–4.03(m,4H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.10(t,J＝6.9Hz,2H)；LC/MS(ESI)m/z:596(M+H)+。
方案80：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物96)
Figure BDA0004238079180004721
步骤1：4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酸叔丁酯(C)。向4-(五氟-λ6-硫烷基)苯酚(A；500mg,2.27mmol)和4-溴丁酸叔丁酯(B；506mg,2.27mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加K2CO3(941mg,6.81mmol)和NaI(340mg,2.27mmol)，并将反应物在120℃下搅拌16小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1至1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)-苯氧基)丁酸叔丁酯(C；550mg，收率66.7％)。LC/MS(ESI)m/z:363(M-H)-。
步骤2：4-(4-(五氟-l6-硫烷基)苯氧基)丁酸(D)。在0℃下向4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酸叔丁酯(C；550mg,1.52mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(5mL)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干，与二氯甲烷共蒸发两次，并在减压下干燥从而得到呈白色固体的4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酸(D；500mg，收率96.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:305(M-H)-。
步骤3：(4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(E)。向4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酸(D；500mg,1.63mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(308mg,2.45mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加DIPEA(632mg,4.89mmol)和T3P(1.56g,4.89mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(乙酸乙酯:石油醚＝1:5至1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)-丁酰基)甘氨酸甲酯(E；370mg,61.4％收率)。LC/MS(ESI)m/z:371(M+H)+。
步骤4：(4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(F)。在0℃下向(4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(E；370mg,0.98mmol)在甲醇(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(124mg,2.94mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(F；240mg,67.6％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：364(M+H)+。
步骤5：(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(H)。在0℃下向(4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(F；30mg,0.081mmol)和(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(G；40mg,0.10mmol)在DMF(1.0mL)中的混合物中添加DIPEA(31mg,0.24mmol)和T3P(78mg,0.12mmol，50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将反应物用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1至12:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)-甲基)-噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(H；20mg，收率32.8％)。LC/MS(ESI)(m/z)：758(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物96)。在25℃下向(氨亚基(5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)-丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(H；20mg,0.03mmol)在甲醇(1.0mL)中的溶液中添加Pd/C(2mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(1滴)，并将混合物在H2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(五氟-λ6-硫烷基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物96；4.5mg，收率28.1％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.73–7.69(m,2H),7.39(s,1H),7.02(d,J＝9.0Hz,2H),4.81–4.77(m,1H),4.58(s,1H),4.51(q,J＝15.8Hz,2H),4.21(d,J＝16.7Hz,1H),4.11(dd,J＝15.1,8.8Hz,3H),2.47(t,J＝7.3Hz,2H),2.38(t,J＝12.3Hz,1H),2.17–2.08(m,3H),1.28(s,3H),1.13(dd,J＝5.8,2.5Hz,1H),0.80(t,J＝5.5Hz,1H)；LC/MS(ESI)(m/z):624(M+H)+。
方案81：(8S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基戊酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物97)
Figure BDA0004238079180004751
步骤1：2-苯氧基丙醛(B)。向2-苯氧基丙烷-1-醇(A；3g,19.71mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中添加K2CO3(5g,59.13mmol)和DMP(17g,39.42mmol)，并将反应物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取两次。将层分离，并将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯:＝20:1至1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的2-苯氧基丙醛(B；2.0g，收率67.8％)。LC/MS(ESI)m/z:151(M+H)-。
步骤2：(E)-4-苯氧基戊-2-烯酸甲酯(C)。在室温下将2-苯氧基丙醛(B；1g,6.7mmol)和2-(三苯基-l5-膦烷亚基)乙酸甲酯(2.2g,6.7mmol)在甲苯(10mL)中的悬浮液加热到至多110℃，并在N2气氛下搅拌18小时。将混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝50:1至20:1)进行纯化从而得到(E)-4-苯氧基戊-2-烯酸甲酯(C；550mg，收率40％)。LC/MS(ESI)m/z:207(M+H)+。
步骤3：4-苯氧戊酸甲酯(D)。在25℃、N2气氛下向(E)-4-苯氧基戊-2-烯酸甲酯(C；550mg,2.7mmol)在甲醇(5.0mL)中的溶液中添加Pd/C(55mg,10重量％)，并将混合物在25℃、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝50:1至20:1)进行纯化从而得到4-苯氧基戊酸甲酯(D；300mg，收率53.2％)。LC/MS(ESI)(m/z)：209(M+H)+。
步骤4：4-苯氧基戊酸(E)。在0℃下向4-苯氧基戊酸甲酯(D；300mg,1.44mmol)在甲醇(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(181mg,4.32mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的4-苯氧基戊酸(280mg，98.2％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：195(M+H)+。
步骤5：(4-苯氧基戊酰基)甘氨酸甲酯(F)。在0℃下向4-苯氧基戊酸(E；280mg,1.44mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(271mg,2.16mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(558mg,4.32mmol)和T3P(1.37g,2.16mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将反应物用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1至12:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(4-苯氧基戊酰基)甘氨酸甲酯(F；220mg，收率57.4％)。LC/MS(ESI)(m/z)：266(M+H)+。
步骤6：(4-苯氧基戊酰基)甘氨酸(G)。在0℃下向(4-苯氧基戊酰基)甘氨酸酯(F；220mg,0.83mmol)在甲醇(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(104mg,2.49mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(4-苯氧基-戊酰基)甘氨酸(G；110mg，52.6％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：252(M+H)+。
步骤7：(8S)-7-((4-苯氧基戊酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(I)。在0℃下向(4-苯氧基戊酰基)甘氨酸(G；100mg,0.40mmol)和(S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(H；112mg,0.60mmol)在DMF(2.0mL)中的混合物中添加DIPEA(154mg,1.19mmol)和T3P(380mg,0.60mmol，50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将反应物用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1至12:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(8S)-7-((4-苯氧基戊酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(60mg，收率35.7％)。LC/MS(ESI)(m/z)：421(M+H)+。
步骤8：(8S)-7-((4-苯氧基戊酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J)。在0℃下向(8S)-7-((4-苯氧基戊酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(I；60mg,0.14mmol)在甲醇(0.75mL)和水(0.25mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(20mg,0.43mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用二氯甲烷(2×5mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(8S)-7-((4-苯氧基戊酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J；50mg,86.2％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：407(M+H)+。
步骤9：(8S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基戊酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物98)。向(8S)-7-((4-苯氧基-戊酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J；50mg,0.12mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(K；35mg,0.19mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(48mg,0.37mmol)和T3P(118mg,0.19mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。将合并的有机层用水(2×5mL)和盐水(2×5mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(8S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基戊酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(3.3mg,5.0％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.22(dd,J＝5.1,3.4Hz,1H),7.48–7.39(m,1H),7.25–7.20(m,2H),6.91–6.86(m,3H),4.61(s,1H),4.58–4.50(m,3H),4.46(d,J＝6.1Hz,1H),3.99–3.93(m,5H),3.69(s,2H),2.48–2.36(m,3H),2.20(d,J＝5.4Hz,1H),2.02–1.89(m,2H),1.27(dt,J＝6.1,2.0Hz,3H)；LC/MS(ESI)(m/z):544(M+H)+。
方案82：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物98)
Figure BDA0004238079180004791
步骤1：(2S,4R)-4-(甲基磺酰基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在0℃下向化合物B(400mg,1.45mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加mCPBA(883mg,4.36mmol,85％纯度)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用DCM稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物B(272mg，收率61.1％)。LC/MS(ESI)m/z:208(M-100+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(甲基磺酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。将化合物B(272mg,0.89mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物C(183mg，收率99.7％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:208(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(D)。在0℃下向化合物C(50mg,0.24mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(63mg,0.26mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.24mL,1.44mmol)和T3P(458mg,0.72mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃、N2气氛下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3:1)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物D(89mg，收率83.3％)。LC/MS(ESI)m/z:427(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(E)。在0℃下向化合物D(89mg,0.21mmol)在MeOH(1mL)、THF(0.5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(9mg,0.21mmol)，并将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用EtOAc洗涤。将水层用0.5M HCl水溶液酸化，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的化合物E(63mg，收率73.3％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:413(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(F)。在0℃下向化合物E(63mg,0.15mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(39mg,0.15mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.15mL,0.9mmol)和T3P(286mg,0.45mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃、N2气氛下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3:1)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物F(30mg，收率30.9％)。LC/MS(ESI)m/z:650(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物98)。将化合物F(30mg,0.05mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在30℃搅拌8小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物98(3.3mg，收率13.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝5.2Hz,1H),7.41(s,1H),7.26–7.20(m,2H),6.91–6.85(m,3H),4.70–4.64(m,1H),4.58(s,2H),4.13–4.05(m,4H),3.99(t,J＝5.8Hz,2H),3.97–3.81(m,1H),3.05(s,3H),2.74–2.68(m,1H),2.48–2.44(m,2H),2.42–2.34(m,1H),2.10–2.03(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:550(M+H)+。
方案83：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(氟-甲基)-1-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物99)的合成
Figure BDA0004238079180004811
步骤1：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(B)。在25℃下，将化合物2(190mg,0.54mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的混合物搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物B(136mg，98.6％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:256(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-{2-[4-(4-氟苯氧基)丁酰胺基]-乙酰基}吡咯烷-2-甲酸苄酯(C)。在0℃下向化合物B(136mg,0.53mmol)和[4-(4-氟苯氧基)丁酰胺基]乙酸(150mg,0.59mmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加DIPEA(0.56mL,3.2mmol)和T3P(509mg,1.60mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物C(195mg,74.3％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：493(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-{2-[4-(4-氟苯氧基)丁酰胺基]-乙酰基}-吡咯烷-2-甲酸(D)。在0℃、N2气氛下向化合物C(190mg,0.39mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加Pd/C(60mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2球囊下搅拌2.5小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物D(140mg，90.4％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：403(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-N-[(1R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基]-4-氟-4-(氟甲基)-1-{2-[4-(4-氟苯氧基)丁酰胺基]乙酰基}吡咯烷-2-甲酰胺(化合物99)。在0℃下向化合物D(146mg,0.36mmol)和5-[(1R)-1-氨基乙基]噻吩-3-甲脒(92mg,0.54mmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加DIPEA(0.38mL,2.18mmol)和T3P(693mg,1.09mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌18小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3:1)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物99(30mg，14.9％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.24(d,J＝1.2Hz,1H),7.56(d,J＝9.2Hz,1H),7.00–6.94(m,2H),6.91–6.87(m,2H),5.37–5.21(m,1H),4.78–4.72(m,1H),4.67–4.58(m,2H),4.20–3.91(m,6H),2.66–2.52(m,1H),2.49–2.44(m,2H),2.27–2.11(m,1H),2.11–2.04(m,2H),1.62(d,J＝7.2Hz,3H)；LC/MS(ESI)(m/z):554(M+H)+。
方案84：(S)-1-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-25-羧基-1,4,13,22,27-五氧代-6,9,15,18-四氧杂-3,12,21,26-四氮杂四十四烷-44-酸(化合物100)的合成
Figure BDA0004238079180004831
步骤1：(2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-((苄氧基)羰基)甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(B)。在0℃下向化合物A(80mg,0.19mmol)和[(叔丁氧基羰基)氨基]乙酸(44mg,0.25mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.20mL,1.16mmol)和T3P(370mg,0.58mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物B(100mg，90.5％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：570(M+H)+。
步骤2：((5-(((1S,3S,5S)-2-甘氨酰基-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基-)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(C)。将化合物B(57mg,0.1mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物C(46mg，97.9收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:470(M+H)+。
步骤3：17-{[(2S)-4-{[2-(2-{[(2-{2-[({2-[(1S,3S,5S)-3-({[4-({[(苄氧基)羰基]-氨基}氨亚基替甲酰基(methanimidoyl))噻吩-2-基]甲基}氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基]-2-氧代乙基}氨基甲酰基)甲氧基]乙氧基}乙基)氨基甲酰基]甲氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基}-1-甲氧基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酰基}十七酸甲酯(D)。在0℃下向化合物C(46mg,0.1mmol)和(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-5-甲氧基-4-(18-甲氧基-18-氧代十八酰胺基)-5-氧代戊酰胺基]-乙氧基}乙氧基)乙酰胺基]乙氧基}乙氧基)乙酸(114mg,0.15mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.087mL,0.5mmol)和HATU(57mg,0.15mmol)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌0.5小时。将混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(80mg，65.9％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：1214(M+H)+。
步骤4：17-{[(1S)-3-{[2-(2-{[(2-{2-[({2-[(1S,3S,5S)-3-{[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-氨基甲酰基}-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基]-2-氧代乙基}氨基甲酰基)甲氧基]乙氧基}乙基)-氨基甲酰基]甲氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基}-1-羧基丙基]-氨基甲酰基}十七酸(化合物100)。在0℃下向化合物D(80mg,0.066mmol)在MeOH(1.6mL)、THF(0.4mL)和H2O(0.4mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(8.4mg,0.2mmol)，并将混合物在25℃下搅拌30小时。将混合物用水稀释并用MTBE洗涤两次。将水层用0.5M HCl水溶液酸化，并通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物100(2.2mg，3.2％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.25(d,J＝1.6Hz,1H),7.44(d,J＝1.6Hz,1H),4.79(d,J＝3.2Hz,1H),4.59–4.49(m,2H),4.40–4.32(m,2H),4.19(d,J＝17.2Hz,1H),4.05(t,J＝3.6Hz,2H),4.00(d,J＝4.8Hz,2H),3.73–3.53(m,12H),3.45–3.40(m,2H),3.40–3.35(m,3H),2.44–2.10(m,8H),1.66–1.57(m,4H),1.33-1.27(m,29H),1.19(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.82(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:1052(M+H)+。
方案85：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((9,9-二氟-9H-芴-3-羰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物103)的合成
Figure BDA0004238079180004851
步骤1：3-溴螺[芴-9,2’-[1,3]二硫戊环](B)。在0℃下向3-溴-9H-芴-9-酮(A；750mg,2.89mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中添加乙烷-1,2-二硫醇(1.36g,14.5mmol)和BF3·Et2O(3mL)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用二氯甲烷(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至50:1)进行纯化从而得到呈白色固体的3-溴螺[芴-9,2’-[1,3]二硫戊环](B；900mg，92.7％收率)。
步骤2：3-溴-9,9-二氟-9H-芴(C)。在0℃下向N-碘琥珀酰亚胺(4.23g,18.79mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加HF-吡啶(1mL)，并将混合物在室温下搅拌10分钟。添加3-溴螺[芴-9,2’-[1,3]二硫戊环](B；900mg,2.68mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用水淬灭，并用二氯甲烷(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至50:1)进行纯化从而得到呈白色固体的3-溴-9,9-二氟-9H-芴(660mg，87.5％收率)。
步骤3：9,9-二氟-9H-芴-3-甲酸甲酯(D)。向3-溴-9,9-二氟-9H-芴(C；330mg,1.17mmol)和在甲醇(10mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(172mg,0.235mmol)和三乙胺(356mg,3.52mmol)。将混合物在50℃、CO气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50:1至20:1)进行纯化从而得到呈白色固体的9,9-二氟-9H-芴-3-甲酸甲酯(210mg，68.7％收率)。
步骤4：9,9-二氟-9H-芴-3-甲酸(E)。在0℃下向9,9-二氟-9H-芴-3-甲酸甲酯(210mg,0.81mmol)在四氢呋喃(6mL)和水(2mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(34mg,0.81mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的9,9-二氟-9H-芴-3-甲酸(E；190mg，95.6％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：247(M+H)+。
步骤5：((5-(((1S,3S,5S)-2-(3-氨基丙酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(G)。将((5-(((1S,3S,5S)-2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(F；47mg,0.092mmol)和HCl/1,4-二噁烷(1.5mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用二氯甲烷稀释，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的((5-(((1S,3S,5S)-2-(3-氨基丙酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(G；38.0mg，定量收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:413(M+H)+。
步骤6：((5-(((1S,3S,5S)-2-((9,9-二氟-9H-芴-3-羰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(H)。向9,9-二氟-9H-芴-3-甲酸(E；23mg,0.092mmol)和((5-(((1S,3S,5S)-2-(3-氨基丙酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)-甲基)氨基甲酸苄酯(G；38mg,0.092mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加T3P(117mg,0.18mmol，50％于乙酸乙酯中)和DIPEA(48mg,0.37mmol)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((5-(((1S,3S,5S)-2-((9,9-二氟-9H-芴-3-羰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(H；50mg,77.8％收率)。LC/MS(ESI)m/z:698(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((9,9-二氟-9H-芴-3-羰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物103)。在25℃、N2气氛下向((5-(((1S,3S,5S)-2-((9,9-二氟-9H-芴-3-羰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(H；50mg,0.072mmol)在MeOH(2.0mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(催化剂，2滴)，并将混合物在25℃、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物103(4.8mg，11.9％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22–8.17(m,2H),7.88(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.78(d,J＝7.7Hz,1H),7.73(d,J＝7.8Hz,1H),7.67(d,J＝7.5Hz,1H),7.60(t,J＝7.6Hz,1H),7.48(d,J＝7.5Hz,1H),7.42(s,1H),4.85(s,1H),4.58(d,J＝2.8Hz,2H),4.47–4.37(m,2H),3.46(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),2.45(t,J＝12.4Hz,1H),2.20(dd,J＝13.3,3.4Hz,1H),1.33(s,3H),1.21(dd,J＝5.8,2.3Hz,1H),0.85(t,J＝5.8Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:564(M+H)+。
方案86：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-(4-氟苯氧基)-丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物104)的合成
Figure BDA0004238079180004881
步骤1：4-(4-氟苯氧基)丁酸叔丁酯(C)。向4-氟苯酚(A；1.65g,14.72mmol)、4-溴丁酸叔丁酯(B；3.28g,14.72mmol)和K2CO3(14g,44.16mmol)在DMF(30mL)中的混合物中添加KI(2g,14.72mmol)。将反应物在120℃、N2气氛下搅拌18小时。在冷却至室温后，将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。将层分离并将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩至干从而得到粗产物，通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至3:1)对粗产物进行纯化从而得到呈油状物的4-(4-氟苯氧基)丁酸叔丁酯(C；3g,79.7％收率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.96(t,J＝8.7Hz,2H),6.82(dd,J＝9.1,4.3Hz,2H),3.95(t,J＝6.2Hz,2H),2.42(t,J＝7.3Hz,2H),2.04(dd,J＝13.6,6.9Hz,2H),1.45(s,9H)。
步骤2：4-(4-氟苯氧基)丁酸(D)。将4-(4-氟苯氧基)-丁酸叔丁酯(C；3g,11.7mmol)和HCl/1,4-二噁烷(20mL)的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到4-(4-氟苯氧基)丁酸(D；2g，收率91.4％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:199(M+H)+。
步骤3：(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(F)。在0℃、N2气氛下向4-(4-氟苯氧基)丁酸(D；2.1g,9.09mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(E；1.7g,13.64mmol)在DMF(15mL)中的混合物中添加DIPEA(5.9g,15.45mmol)和T3P(8.7g,13.64mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈油状物的(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(F；2.5g,93.3％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：270(M+H)+。
步骤4：(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸(G)。在0℃下向(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸甲酯(F；2.5g,9.28mmol)在MeOH(18mL)和水(6mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(1.2g,27.85mmol)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH＝3并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸(G；1.8g，75.9％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：256(M+H)+。
步骤5：(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(I)。在0℃、N2气氛下向(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸(G；100mg,0.39mmol)和(S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(H,109mg,0.59mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(151,1.17l)和T3P(372mg,0.59mmol，50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈油状物的(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(I；130mg，78.8％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：425(M+H)+。
步骤6：(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J)。在0℃下向(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(I；130mg,0.31mmol)在MeOH(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(39mg,0.92mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1NHCl水溶液酸化至pH＝3并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J；80mg，77.8％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：411(M+H)+。
步骤7：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)-甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物104)。在0℃、N2气氛下向(S)-7-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(J；80mg,0.19mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(60mg,0.29mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(126mg,0.97mmol)和T3P(248mg,0.39mmol，50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在35℃下搅拌18小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物104(15.7mg，14.4％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.52–7.50(m,1H),6.99–6.94(m,2H),6.90–6.86(m,2H),5.26(q,J＝6.7Hz,1H),4.52(dd,J＝8.8,6.6Hz,1H),4.00–3.94(m,8H),3.70(d,J＝3.3Hz,2H),2.47–2.38(m,3H),2.18(dd,J＝13.1,6.5Hz,1H),2.08–2.04(m,2H),1.56(d,J＝7.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:562(M+H)+。
方案87：(3S,6S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物105)
Figure BDA0004238079180004911
步骤1：(3S,6S)-6-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(C)。在室温、N2气氛下向(3S,6S)-5-(叔丁氧基羰基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸(A；50mg,0.18mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(B；55mg,0.27mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(70mg,0.54mmol)和T3P(172mg,0.27mmol，50重量％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到(3S,6S)-6-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(C；40mg,51.9％收率)。LC/MS(ESI)m/z:429(M+H)+。
步骤2：(3S,6S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(D)。将(3S,6S)-6-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(C；40mg,0.093mmol)和HCl/1,4-二噁烷(1mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到(3S,6S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(D；20mg，收率66.6％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:329(M+H)+。
步骤3：(3S,6S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1,1-二氟-5-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物105)。在室温、N2气氛下向(3S,6S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1,1-二氟-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(D；20mg,0.081mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(E；40mg,0.12mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(60mg,0.405mmol)和T3P(80mg,0.12mmol，50重量％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到化合物105(3.1mg，7.1％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.51(s,1H),7.26–7.21(m,2H),6.91–6.87(m,3H),5.29(dd,J＝17.7,11.3Hz,1H),4.66–4.58(m,1H),4.02–3.96(m,4H),3.89(d,J＝10.8Hz,1H),3.70(dd,J＝10.4,4.7Hz,1H),2.58–2.45(m,3H),2.12–2.04(m,3H),1.58(d,J＝7.0Hz,3H),1.50(ddd,J＝20.6,10.8,6.5Hz,2H)；LC/MS(ESI)m/z:548(M+H)+。
方案88：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物106)
Figure BDA0004238079180004921
步骤1：(2S,4R)-2-(((R)-1-(4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-4-甲氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(C)。在室温、N2气氛下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-甲酸(A；80mg,0.33mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸苄酯(B；102mg,0.40mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(255mg,1.98mmol)和T3P(629mg,0.99mmol，50重量％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到(2S,4R)-2-(((R)-1-(4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-4-甲氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(C；58mg,35.4％收率)。LC/MS(ESI)m/z:497(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-甲氧基吡咯烷-2-甲酰胺(D)。将(2S,4R)-2-(((R)-1-(4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-4-甲氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(C；58mg,0.12mmol)和HCl/1,4-二噁烷(1mL)的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-甲氧基吡咯烷-2-甲酰胺(D；32mg，收率94.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:297(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物106)。在室温、N2气氛下向(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-甲氧基吡咯烷-2-甲酰胺(D；32mg,0.11mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(38mg,0.16mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(85mg,0.66mmol)和T3P(209mg,0.33mmol，50重量％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物106；3.7mg,6.5％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.55(dd,J＝7.8,6.6Hz,1H),7.24(dt,J＝8.3,4.7Hz,2H),6.91–6.87(m,3H),5.35–5.21(m,1H),4.45(t,J＝8.1Hz,1H),4.13–4.04(m,2H),4.02–3.95(m,3H),3.76–3.67(m,2H),3.35(s,3H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.38(ddd,J＝10.5,7.9,2.1Hz,1H),2.11–1.99(m,3H),1.60(dd,J＝23.4,7.0Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:516(M+H)+。
方案89：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-(4-氟苯氧基)-丁酰基)甘氨酰基)-4-(甲基磺酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物107)
Figure BDA0004238079180004941
步骤1：(2S,4R)-1-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-4-(甲基磺酰基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯(B)。在0℃下向化合物A(133mg,0.64mmol)和(4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酸(180mg,0.71mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.6mL,3.84mmol)和T3P(1.2g,1.92mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物B(162mg，收率57％)。LC/MS(ESI)m/z:445(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-1-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-4-(甲基磺酰基)吡咯烷-2-甲酸(C)。在0℃下向化合物B(162mg,0.36mmol)在MeOH(1mL)、THF(0.5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(15mg,0.36mmol)，并将混合物在25℃下搅拌6小时。将混合物用水稀释并用EtOAc洗涤。将水层用0.5M HCl水溶液酸化，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物C(120mg，收率77.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:431(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-(4-氟苯氧基)-丁酰基)甘氨酰基)-4-(甲基磺酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物107)。在0℃下向化合物C(120mg,0.28mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(115mg,0.56mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.3mL,1.68mmol)和T3P(534mg,0.84mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃、N2气氛下搅拌8小时。将混合物用CHCl3/i-PiOH(v/v＝3/1)稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PiOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物108(13.5mg，收率8.3％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.49(s,1H),6.99–6.93(m,2H),6.90–6.85(m,2H),5.32–5.20(m,1H),4.66(dd,J＝8.4,8.4Hz,1H),4.12–4.06(m,4H),3.99–3.95(m,2H),3.92–3.76(m,1H),3.04(d,J＝14.0Hz,3H),2.89–2.69(m,1H),2.47–2.38(m,3H),2.08–2.02(m,2H),1.59(d,J＝7.2Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:582(M+H)+。
方案90：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物108)
Figure BDA0004238079180004961
步骤1：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在0℃下向化合物A(1g,4.08mmol)在MeCN(5mL)中的混合物中添加CuI(155mg,0.82mmol)和2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(872mg,4.9mmol)在MeCN(1.5mL)中的溶液。将反应物在50℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物B(233mg，收率19.4％)。LC/MS(ESI)m/z:196(M-100+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。将化合物B(233mg,0.79mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的化合物C(150mg，收率97.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:196(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(D)。在0℃下，向化合物C(150mg,0.77mmol)和(4-(4-氟-苯氧基)丁酰基)甘氨酸(196mg,0.77mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.8mL,4.62mmol)和T3P(1.5g,2.31mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃、N2气氛下搅拌4小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物L(155mg，收率46.5％)。LC/MS(ESI)m/z:433(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(E)。在0℃下向化合物D(150mg,0.35mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(15mg,0.35mmol)，并将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用EtOAc洗涤。将水层用0.5M HCl水溶液酸化，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的化合物E(70mg，收率47.9％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:419(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物109)。在0℃下向化合物E(70mg,0.17mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(70mg,0.34mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.02mmol)和T3P(320mg,0.51mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用CHCl3/i-PiOH(v/v＝3/1)稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PiOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物108(19.8mg，收率20.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.53(s,1H),6.98–6.94(m,2H),6.89–6.85(m,2H),6.49(t,J＝74.4Hz,1H),5.34–5.19(m,1H),5.00–4.95(m,1H),4.54(t,J＝8.0Hz,1H),4.07(d,J＝16.8Hz,1H),3.99–3.95(m,3H),3.90–3.95(m,1H),3.81–3.67(m,1H),2.42–3.95(m,3H),2.25–2.16(m,1H),2.09–2.00(m,2H),1.57(d,J＝8.0Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:570(M+H)+。
方案91：(2S,4S)-4-(氨基甲基)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物109)的合成
Figure BDA0004238079180004981
步骤1：((5-(((2S,4S)-4-(氨基甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(51mg,0.079mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将混合物在25℃、H2球囊下搅拌1.5小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物B(30mg，61.3％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：619(M+H)+。
步骤2：(2S,4S)-4-(氨基甲基)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物110)。将化合物B(30mg,0.048mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的混合物在30℃搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物109(6.6mg，收率26.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.25(d,J＝1.6Hz,1H),7.47(d,J＝1.6Hz,1H),7.27–7.24(m,2H),6.92–6.89(m,3H),4.87–4.53(m,3H),4.09–3.95(m,6H),3.51(dd,J＝19.2,19.2Hz,2H),2.79–2.63(m,1H),2.51–2.44(m,2H),2.29–2.05(m,3H)；LC/MS(ESI)(m/z):519(M+H)+。
方案92：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物110)的合成
Figure BDA0004238079180004991
步骤1：(2S,4R)-4-(1-乙氧基乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(2g,7.16mmol)在乙烯基乙醚(12mL)中的溶液中逐滴添加TFA(催化剂，0.04mL)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(850mg，收率33.8％)。LC/MS(ESI)m/z:352(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(乙烯基氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(C)。在0℃、N2气氛下向化合物B(850mg,2.42mmol)在DCM(10mL)中的溶液中逐滴添加TEA(759mg,7.50mmol)和TMSOTf(1.6g,7.26mmol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的C(400mg，收率54.2％)。LC/MS(ESI)m/z:306(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-环丙氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(D)。在0℃、N2气氛下向Et2Zn(1.7mL,1.7mmol，1M于己烷中)在DCM(10mL)中的溶液中逐滴添加CH2I2(0.13mL,1.61mmol)。将化合物C(200mg,0.66mmol)在DCM(5mL)中的溶液添加到混合物中，并将反应物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的D(140mg，收率66.9％)。LC/MS(ESI)m/z:320(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-环丙氧基吡咯烷-2-甲酸甲酯(E)。在室温、N2气氛下向化合物D(120mg,0.38mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)和HCl/1,4-二噁烷(催化剂，2滴)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物E(65mg，收率93.4％)。LC/MS(ESI)m/z:186(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-环丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(F)。在0℃、N2气氛下向化合物E(65mg,0.35mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(95mg,0.35mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(272mg,2.11mmol)和T3P(670mg,1.05mmol，50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物F(145mg，收率94.2％)。LC/MS(ESI)m/z:439(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-4-环丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(G)。在0℃下向化合物F(145mg,0.33mmol)在THF(2mL)、MeOH(0.5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(14mg,0.33mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干并用水稀释。将混合物用1N HCl水溶液酸化，并用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物G(100mg，收率71.2％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:425(M+H)+。
步骤7：((5-(((2S,4R)-4-环丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(H)。在0℃、N2气氛下向化合物G(100mg,0.24mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(60mg,0.24mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(183mg,1.41mmol)和T3P(450mg,0.71mmol，50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取三次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物H(30mg，收率19.2％)。LC/MS(ESI)m/z:662(M+H)+。
步骤8：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-环丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物110)。在0℃、N2气氛下向化合物H(30mg,0.045mmol)在DCM(2mL)中的溶液中逐滴添加TFA(0.5mL)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将所得混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物110(5mg，收率19.7％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.86–7.83(m,2H),7.43–7.40(m,3H),7.23–7.19(m,1H),7.08–7.05(m,2H),7.02–6.99(m,2H),4.58(s,2H),4.48(t,J＝8.0Hz,1H),4.39–4.36(m,1H),4.21(s,2H),3.89–3.79(m,2H),3.43–3.38(m,1H),2.45–2.39(m,1H),2.11–2.05(m,1H),0.60–0.50(m,4H)；LC/MS(ESI)m/z:562(M+H)+。
方案93：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物111)的合成
Figure BDA0004238079180005021
步骤1：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物112)。在0℃、N2气氛下向化合物A(100mg,0.23mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(40mg,0.23mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(182mg,1.41mmol)和T3P(448mg,0.70mmol，50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将所得混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物111(20mg，收率14.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.5Hz,1H),7.57(s,1H),7.32–7.21(m,4H),6.99–6.87(m,6H),5.29–5.23(m,1H),5.13–5.08(m,1H),4.60–4.55(m,1H),4.05–3.85(m,6H),2.56–2.51(m,1H)2.47–2.44(m,2H),2.23–2.19(m,1H),2.10–2.03(m,2H),1.57(d,J＝7.2Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:578(M+H)+。
方案94：N-(2-((1S,3S,5S)-3-(3-甲脒基-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-6-羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)-4-苯氧基苯甲酰胺(化合物112)的合成
Figure BDA0004238079180005031
步骤1：2,3-二溴-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(3g,12.5mmol)在AcOH(75mL)中的溶液中逐滴添加Br2(10g,62.7mmol)，并将反应混合物在80℃、N2气氛下搅拌16小时。将所得混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物B(3.6g，收率96.7％)。LC/MS(ESI)m/z:298(M+H)+。
步骤2：3-溴-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶(C)。在0℃、N2气氛下向化合物B(1g,3.37mmol)在AcOH(25mL)中的溶液中添加锌粉(438mg,6.73mmol)和12N HCl(0.5mL)，并将反应混合物在80℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取三次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物C(400mg，收率54.5％)。LC/MS(ESI)m/z:218/220(M+H)+。
步骤3：3-溴-4,7-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-6(5H)-甲酸叔丁酯(D)。在0℃、N2气氛下向化合物3(2.4g,11.0mmol)在THF(30mL)中的溶液中添加TEA(5.5g,55.0mmol)和Boc2O(3.6g,16.5mmol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(1.88g，收率53.7％)。LC/MS(ESI)m/z:318/320(M+H)+。
步骤4：3-氰基-4,7-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-6(5H)-甲酸叔丁酯(E)。在室温、N2气氛下向化合物D(1g,3.14mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(738mg,6.29mmol)和Pd(PPh3)4(363mg,0.31mmol)，并将反应混合物在80℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAC＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物E(170mg，收率20.5％)。LC/MS(ESI)m/z:265(M+H)+。
步骤5：3-(N-羟基甲脒基)-4,7-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-6(5H)-甲酸叔丁酯(F)。在0℃、N2气氛下向5(170mg,0.64mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中添加盐酸羟胺(112mg,1.61mmol)和DIPEA(249mg,1.93mmol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物F(170mg，收率88.9％)。LC/MS(ESI)m/z:298(M+H)+。
步骤6：3-甲脒基-4,7-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-6(5H)-甲酸叔丁酯(G)。在室温、N2气氛下向化合物F(170mg,0.57mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加雷尼镍(1mL，在水中的浆料)和AcOH(0.1mL)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物G(160mg，收率99.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:282(M+H)+。
步骤7：4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲脒(H)。在0℃下向化合物G(160mg,0.57mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(2mL)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物H(100mg，收率97.0％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:182(M+H)+。
步骤8：N-(2-((1S,3S,5S)-3-(3-甲脒基-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-6-羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)-4-苯氧基苯甲酰胺(化合物112)。在0℃、N2气氛下向化合物H(37mg,0.20mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(40mg,0.10mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(79mg,0.61mmol)和T3P(194mg,0.30mmol，50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物112(4mg，收率7.1％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),7.97(s,1H),7.87–7.84(m,2H),7.43–7.39(m,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.07–7.04(m,2H),7.01–6.98(m,2H),5.37–5.33(m,1H),4.57–4.51(m,2H),4.23–4.13(m,1H),4.00–3.91(m,1H),3.83–3.74(m,1H),3.50–3.43(m,2H),3.16–2.87(m,2H),2.61–2.45(m,1H),2.01(d,J＝3.8Hz,1H),1.32(d,J＝6.4Hz,3H),1.31–1.29(m,1H),0.82–0.78(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:558(M+H)+。
方案95：(2S,3S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-3-甲氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物113)的合成
Figure BDA0004238079180005061
步骤1：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(甲苯磺酰基氧基)吡咯烷-2-甲酸(B)。在0℃下向化合物A(100g,0.43mol)在THF(300mL)中的溶液中依次添加NaOH(104g,2.60mol)在H2O(400mL)中的溶液和TsCl(124g,0.65mol)在THF(300mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干并用水稀释。将水层用2N HCl酸化至pH～1并过滤。将滤饼在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物B(164g，收率98.2％)。LC/MS(ESI)m/z:386(M+H)+。
步骤2：(S)-1-(叔丁氧基羰基)-2,5-二氢-1H-吡咯-2-甲酸(C)。在0℃、N2气氛下向化合物B(147g,0.38mol)在THF(1.8mL)中的溶液中添加t-BuOK(110g,0.95mol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水稀释并在减压下浓缩至干。将混合物用2N HCl酸化至pH～4并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物C(40g，收率49.0％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：214(M+H)+。
步骤3：(S)-2,5-二氢-1H-吡咯-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(D)。在0℃、N2气氛下向化合物3(40g,0.19mol)在DMF(400mL)中的溶液中添加BnBr(34mL,0.28mol)和K2CO3(77.7g,0.57mol)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用饱和NH4水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝9:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物D(20.3g，收率35.7％)。LC/MS(ESI)m/z:304(M+H)+。
步骤4：(1S,2S,5R)-6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-苄酯3-(叔丁基)酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物D(18g,59.2mmol)在DCE(180mL)中的溶液中添加m-CPBA(28.3g,0.14mol,85％纯度)，并将混合物在90℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用饱和Na2S2O3水溶液淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝10:1至5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物E(5.68g，收率30.1％)。LC/MS(ESI)m/z:320(M+H)+。
步骤5：(1S,2S,5R)-6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苄酯(F)。在0℃、N2气氛下向化合物5(5.67g,17.7mmol)在DCM(40mL)中的溶液中添加TFA(20mL)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次并在真空下干燥从而得到呈棕色油状物的化合物6(3.8g，收率97.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:220(M+H)+。
步骤6：(1S,2S,5R)-6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸二苄酯(G)。在0℃、N2气氛下向化合物F(3.8g,17.3mmol)在THF(50mL)中的溶液中添加TEA(12.0mL,86.5mmol)和CbzCl(3.67mL,25.9mmol)，并将反应混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈棕色油状物的化合物G(3.64g，收率60.0％)。LC/MS(ESI)m/z:354(M+H)+。
步骤7：(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸二苄酯(H)。在0℃、N2气氛下向化合物G(550mg,1.56mmol)在THF(1mL)中的溶液中添加Et3N·3HF(5mL)，并将混合物在120℃、N2气氛下微波加热3小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈棕色油状物的化合物G(312mg，收率53.7％)。LC/MS(ESI)m/z:374(M+H)+。
步骤8：(2S,3S,4S)-4-氟-3-甲氧基吡咯烷-1,2-二甲酸二苄酯(I)。在0℃、N2气氛下向化合物H(104mg,0.28mmol)在DMF(3.0mL)中的溶液中添加NaH(12mg,0.29mmol,60％的在矿物油中的分散体)，并将混合物在0℃、N2气氛下搅拌30分钟。然后，将CH3I(152mg,1.06mmol)在0℃下添加到混合物中，并将混合物在0℃、N2气氛下再搅拌30分钟。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝9:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物I(56mg，收率51.8％)。LC/MS(ESI)m/z:388(M+H)+。
步骤9：(2S,3S,4S)-4-氟-3-甲氧基吡咯烷-2-甲酸甲酯苄酯(J)。将化合物9(56mg,0.14mmol)在HBr/AcOH(5mL,18％w/w)中的溶液在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的化合物J(30mg，收率82.2％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:254(M+H)+。
步骤10：(2S,3S,4S)-4-氟-3-甲氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(L)。在0℃、N2气氛下向化合物J(30mg,0.12mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(K；28mg,0.12mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.12mL,0.72mmol)和T3P(226mg,0.36mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物L(25mg，收率41.7％)。LC/MS(ESI)m/z:473(M+H)+。
步骤11：(2S,3S,4S)-4-氟-3-甲氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(M)。在室温、N2气氛下向化合物L(25mg,0.05mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌1.5小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物M(20mg，收率99.8％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：383(M+H)+。
步骤12：(2S,3S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-3-甲氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物113)。在0℃、N2气氛下向化合物M(20mg,0.05mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(N；12mg,0.075mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.05mL,0.30mmol)和T3P(99mg,0.15mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取五次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物113(5mg，收率18.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(d,J＝1.0Hz,1H),7.42(s,1H),7.24(t,J＝7.9Hz,2H),6.90(dd,J＝7.7,5.4Hz,3H),4.84–4.83(m,1H),4.68–4.59(m,1H),4.56(s,2H),4.24–4.18(m,1H),4.04–3.82(m,6H),3.39(s,3H),2.48–2.44(m,2H),2.10–2.03(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:520(M+H)+。
方案96：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酰胺(化合物114)的合成
Figure BDA0004238079180005101
步骤1：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酰胺(化合物115)。向(S)-2-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-3-甲酸(A；45mg,0.12mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(B；35mg,0.17mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(90mg,0.70mmol)和T3P(221mg,0.35mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物114(5.5mg，8.0％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.50(s,1H),8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.55(s,1H),7.24(dd,J＝13.0,5.4Hz,2H),6.91–6.87(m,3H),5.25(q,J＝6.9Hz,1H),4.39(t,J＝8.2Hz,1H),4.10–3.89(m,4H),3.49(dd,J＝40.4,10.0Hz,2H),2.46(t,J＝7.4Hz,2H),2.17(dd,J＝12.5,7.7Hz,1H),2.07(dd,J＝14.0,7.0Hz,2H),1.88(dd,J＝12.4,8.5Hz,1H),1.74–1.60(m,7H),1.57(d,J＝7.0Hz,3H),1.52(d,J＝6.5Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:540(M+H)+。
方案97：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-7-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物115)的合成
Figure BDA0004238079180005111
步骤1：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物116)。向(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(A；40mg,0.10mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(B；32mg,0.15mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(79mg,0.61mmol)和T3P(194mg,0.31mmol,50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物115(1.9mg，3.4％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.49(s,1H),8.22(d,J＝1.2Hz,1H),7.51(s,1H),7.22(td,J＝7.6,2.1Hz,2H),6.91–6.85(m,3H),5.25(d,J＝6.9Hz,1H),4.51(dd,J＝8.8,6.6Hz,1H),4.02–3.90(m,8H),3.73–3.65(m,2H),2.49–2.33(m,3H),2.17(dd,J＝13.1,6.5Hz,1H),2.10–2.02(m,2H),1.57(t,J＝14.0Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:544(M+H)+。
方案98：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物28)的合成
Figure BDA0004238079180005121
步骤1：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物28)。向(S)-7-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(A；85mg,0.22mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(B；62mg,0.33mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(168mg,1.30mmol)和T3P(413mg,0.65mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(18mg,15.7％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.22(t,J＝3.1Hz,1H),7.42(s,1H),7.24(dd,J＝9.4,6.7Hz,2H),6.92–6.87(m,3H),4.55(s,3H),4.02–3.88(m,8H),3.70(s,2H),2.50–2.37(m,3H),2.18(dd,J＝13.2,5.4Hz,1H),2.10–2.04(m,2H)；LC/MS(ESI)m/z:530(M+H)+。
方案99：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物116)的合成
Figure BDA0004238079180005131
步骤1：(S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5,6-二甲酸5-(叔丁基)酯6-甲酯(B)。在0℃下向(S)-5-(叔丁氧基羰基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸(A；500mg,2.08mmol)和K2CO3(856mg,6.22mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加碘甲烷(441mg,3.11mmol)并将混合物在室温下搅拌4小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5,6-二甲酸5-(叔丁基)酯6-甲酯(449mg,84.6％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：256(M+H)+。
步骤2：(S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸甲酯(C)。将(6S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5,6-二甲酸5-叔丁酯6-甲酯(449mg,1.76mmol)在4NHCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在25℃下搅拌1小时。将混合物浓缩至干从而得到呈白色固体的(S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸甲酯(C；375mg，83.5％收率)，其未经纯化即直接使用。LC/MS(ESI)(m/z)：156(M+H)+。
步骤3：5-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸甲酯(E)。向(4-苯氧基丁酰胺基)乙酸(D；308mg,1.30mmol)和(S)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸甲酯(C；372mg,1.95mmol)在二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(504mg,1.30mmol)和T3P(1.24g,1.95mmol)。将混合物在室温、氮气气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层用水(2×100mL)和盐水(2×100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE/EtOAc＝5:1至1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的5-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]-5-氮杂螺[2.4]-庚烷-6-甲酸甲酯(275mg，56.6％收率)。LC/MS(ESI)m/z:375(M+H)+。
步骤4：5-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸(F)。在0℃下向5-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸甲酯(E；275mg,0.73mmol)在甲醇(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH(92mg,2.20mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的5-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸(F；91mg，34.4％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：361(M+H)+。
步骤5：(6S)-N-[(1R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基]-5-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酰胺(化合物116)。向5-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-甲酸(F；91mg,0.25mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(G；64mg,0.38mmol)在二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液中添加DIPEA(126mg,0.97mmol)和T3P(241mg,0.38mmol，50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物116(1.8mg，1.4％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.24(d,J＝1.5Hz,1H),7.52(d,J＝5.0Hz,1H),7.23(dd,J＝9.6,6.3Hz,2H),6.91–6.87(m,3H),5.31–5.26(m,1H),4.58(dd,J＝8.6,4.2Hz,1H),4.02–3.96(m,4H),3.61(d,J＝9.7Hz,1H),3.50(d,J＝9.7Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.28(dd,J＝12.7,8.6Hz,1H),2.11–2.05(m,2H),1.84(dd,J＝12.8,4.2Hz,1H),1.60(t,J＝13.3Hz,3H),0.68–0.60(m,3H),0.55(dd,J＝12.6,5.7Hz,1H)；LC/MS(ESI)(m/z):512(M+H)+。
方案100：(1S,3S,5S)-N-((5-甲脒基吡啶-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物4)
Figure BDA0004238079180005151
步骤1：N-[(5-氰基吡啶-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(B)。将N-[(5-溴吡啶-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(A；1.0g,3.48mmol,1.0当量)、ZnCN((0.61g,5.22mmol,1.5当量)、三(二苄亚基丙酮)二钯(0)(0.32g,0.35mmol,0.1当量)、1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁(0.39g,0.70mmol,0.2当量)在DMF(6mL)中的溶液加热至125℃并搅拌1.5小时。将反应物冷却至室温，并然后用水和EtOAc稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到棕色油状物。通过Combi-Flash；40g柱，溶剂A＝己烷，溶剂B＝EtOAc，100％ A至30％ B进行纯化，得到呈棕色粘稠油状物的化合物B(0.8g,3.43mmol，收率98.48％)。LC/MS(ESI)m/z:234(M+H)+。
步骤2：N-{[5-(N-羟基甲脒基)吡啶-2-基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(C)。向化合物B(0.8g,3.43mmol,1.0当量)和盐酸羟胺(0.596g,8.57mmol,2.5当量)在乙醇(5mL)中的混合物中添加DIPEA(1.8mL,10.29mmol,3.0当量)。将反应物在室温下搅拌过夜，浓缩至干，并将残余物用水和CH2Cl2稀释。将两层分离，并将水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi-Flash；24g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈棕色固体的化合物C(0.4g,1.51mmol，收率43.80％)。LC/MS(ESI)m/z:267(M+H)+。
步骤3：N-[(5-甲脒基吡啶-2-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯(D)。向化合物C(0.4g,1.50mmol,1.0当量)在MeOH(5mL)中的溶液中添加乙酸(0.5mL)和雷尼镍(0.088g,1.50mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的氢气进行反填充。将反应物在30℃下搅拌16小时，通过硅藻土垫过滤并浓缩从而得到呈黄色固体的化合物D(0.3g,1.50mmol，收率79.79％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:251(M+H)+。
步骤4：6-(氨基甲基)吡啶-3-甲脒盐酸盐。将化合物D(0.3g,1.2mmol,1.0当量)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的溶液在室温下搅拌3小时。将反应混合物浓缩至干从而得到呈黄色固体的化合物E(172mg,1.15mmol，收率95.55％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:151(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-[(5-甲脒基吡啶-2-基)甲基]-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基-苯基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物4)。向化合物E(0.01g,0.025mmol,1.2当量)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)-甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(F；0.006g,0.03mmol,1.0当量)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(0.012g,0.03mmol,1.5当量)，随后添加DIPEA(0.02mL,0.10mmol,4.0当量)。将反应物在室温下搅拌0.5小时，并然后直接使用制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物4(6mg,0.038mmol，收率44.94％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(d,J＝9.3Hz,1H),8.72(t,J＝5.6Hz,1H),8.65–8.53(m,1H),8.42(s,1H),8.11(dd,J＝25.8,8.2Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,2H),7.53–7.40(m,3H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(dd,J＝26.8,8.1Hz,2H),4.75(dd,J＝11.5,3.2Hz,1H),4.51–4.32(m,3H),4.04(dd,J＝16.4,5.5Hz,1H),3.50–3.43(m,1H),2.33(t,J＝12.4Hz,1H),2.03(dd,J＝13.2,3.1Hz,1H),1.23(d,J＝11.7Hz,4H),0.69(t,J＝5.7Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:527(M+H)+。
方案101：(1S,3S,5S)-N-((6-氨基吡啶-3-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物5)
Figure BDA0004238079180005171
步骤1：N-[5-({[(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基]甲酰胺基}甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(B)。向化合物1(15mg,0.038mmol,1.0当量)和N-[5-(氨基甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯(10mg,0.05mmol,1.2当量)在DMF(1mL)中的混合物中添加HATU(22mg,0.057mmol,1.3当量)，随后添加DIPEA(0.03mL,0.15mmol,4.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟，并然后用水(1mL)稀释。将浑浊的混合物过滤，并将残余物溶解于CH2Cl2，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到呈白色固体的化合物B，其未经进一步纯化即用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:600(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-N-[(6-氨基吡啶-3-基)甲基]-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)-甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物5)。将TFA(1mL)添加到化合物B(23mg,0.04mmol,1.0当量)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌4小时，并然后浓缩至干。添加3M HCl(2mL)，并将反应混合物浓缩至干。将残余物直接通过HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物5(10mg,0.02mmol，收率52.19％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96–8.84(m,1H),8.75(t,J＝5.7Hz,1H),8.67–8.53(m,1H),8.42(s,2H),8.19–8.05(m,1H),7.89(dd,J＝8.2,5.9Hz,2H),7.54–7.40(m,3H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(dd,J＝27.4,8.2Hz,2H),4.75(dd,J＝11.5,3.1Hz,1H),4.52–4.32(m,3H),4.04(dd,J＝16.4,5.4Hz,1H),2.39–2.28(m,1H),2.10–1.99(m,1H),1.23(d,J＝11.7Hz,4H),0.69(t,J＝5.5Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:500(M+H)+。
方案102：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-(环己基氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物117)的合成
Figure BDA0004238079180005181
步骤1：叔丁基(4-(环己基氧基)丁氧基)二甲基甲硅烷(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(1g,10.0mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加NaH(800mg,20.0mmol，60％的在矿物油中的分散体)，并将混合物在0℃下搅拌30分钟。在0℃下将叔丁基(4-碘丁氧基)二甲基甲硅烷(3.14g,10.0mmol)在DMF(2mL)中的溶液添加到混合物中，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌2小时。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用MTBE萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝100:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物B(600mg，收率21.0％)。
步骤2：4-(环己基氧基)丁烷-1-醇(C)。在0℃下向化合物B(600mg,2.10mmol)在THF(6mL)中的溶液中添加TBAF(4.2mL,4.20mmol，1M于THF中)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1至5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物C(220mg，收率58.1％)。
步骤3：4-(环己基氧基)丁酸(D)。在0℃下向化合物C(220mg,1.22mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加PDC(1.37g,3.66mmol)，并将反应物在室温搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1至2:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物D(220mg，收率92.2％)。LC/MS(ESI)m/z:185(M-H)-。
步骤4：(4-(环己基氧基)丁酰基)甘氨酸苄酯(E)。在0℃、N2气氛下向化合物D(220mg,1.18mmol)和甘氨酸苄酯盐酸盐(238mg,1.18mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.97mL,5.90mmol)、HOBt(319mg,2.36mmol)和EDCI(452mg,2.36mmol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1至5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物E(155mg，收率39.4％)。LC/MS(ESI)m/z:334(M+H)+。
步骤5：(4-(环己基氧基)丁酰基)甘氨酸(F)。在室温、N2气氛下向化合物E(150mg,0.46mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(50mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物F(100mg，收率89.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:244(M+H)+。
步骤6：((5-(((2S,4R)-4-环丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物117)。在0℃、N2气氛下向化合物F(100mg,0.41mmol)和(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(114mg,0.41mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.41mL,2.46mmol)和T3P(782mg,1.23mmol，50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈黄色油状物的化合物117(8.9mg，收率4.31％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.24(d,J＝1.6Hz,1H),7.42(d,J＝0.8Hz,1H),4.82–4.78(m,1H),4.58–4.48(m,2H),4.22–4.09(m,2H),3.49(t,J＝6.4Hz,2H),3.33–3.30(m,2H),2.39–2.33(m,3H),2.20–2.17(m,1H),1.90–1.83(m,5H),1.75–1.72(m,2H),1.60–1.50(m,1H),1.28–1.24(m,10H),1.16–1.08(m,1H),0.82–0.80(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:504(M+H)+。
方案103：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物118)的合成
Figure BDA0004238079180005201
步骤1：(2S,4R)-4-(间-甲苯基氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(1g,4.08mmol)和间甲酚(661mg,6.12mmol)在THF(20mL)中的混合物中添加PPh3(1.6g,6.12mmol)和DIAD(1.3g,6.12mmol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(550mg，收率40.2％)。LC/MS(ESI)m/z:336(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(间-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。在0℃下向化合物B(550mg,1.64mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(3mL)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物C(380mg，收率98.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:236(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(D)。在0℃、N2气氛下向化合物C(380mg,1.62mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(383mg,1.62mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(1.3g,9.69mmol)和T3P(3.1g,4.85mmol，50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(470mg，收率64.0％)。LC/MS(ESI)m/z:455(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸(E)。在0℃下向化合物D(470mg,1.03mmol)在THF(4mL)、MeOH(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(43mg,1.03mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物在真空下浓缩至干，并用EtOAc洗涤。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物E(430mg，收率94.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:441(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基丁酰基)-甘氨酰基)-4-(间-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物118)。在0℃、N2气氛下向化合物E(100mg,0.23mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(38mg,0.23mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(176mg,1.36mmol)和T3P(433mg,0.68mmol，50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物118(11mg，收率8.1％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(d,J＝2.9Hz,1H),8.23(d,J＝1.3Hz,1H),7.57(s,1H),7.25–7.15(m,3H),6.91–6.87(m,3H),6.82–6.71(m,3H),5.38–5.22(m,1H),5.08–5.04(m,1H),4.59–4.55(m,1H),4.07–3.85(m,6H),2.55–2.42(m,3H),2.30(s,3H),2.24–2.17(m,1H),2.10–2.03(m,2H),1.57(d,J＝7.0Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:592(M+H)+。
方案104：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(4-氟-苯氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物119)的合成
Figure BDA0004238079180005231
步骤1：(2S,4R)-4-(4-氟苯氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(1g,4.08mmol)和4-氟苯酚(686mg,6.12mmol)在THF(20mL)中的混合物中添加PPh3(1.6g,6.12mmol)和DIAD(1.2g,6.12mmol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(680mg，收率49.1％)。LC/MS(ESI)m/z:340(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(4-氟苯氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。在0℃下向化合物B(680mg,2.0mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(3mL)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物3(470mg，收率98.0％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:240(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-(4-氟苯氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(D)。在0℃、N2气氛下向化合物C(470mg,1.97mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(466mg,1.97mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(1.5g,11.79mmol)和T3P(3.8g,5.89mmol，50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:2)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物D(590mg，收率65.5％)。LC/MS(ESI)m/z:459(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-(4-氟苯氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(E)。在0℃下向化合物D(590mg,1.29mmol)在THF(4mL)、MeOH(1mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(54mg,1.29mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用1N HCl水溶液洗涤。将混合物在真空下浓缩至干，并用EtOAc洗涤。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～3并用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物E(560mg,1.26mmol，收率97.9％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:445(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(4-氟苯氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物119)。在0℃、N2气氛下向化合物E(100mg,0.23mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(38mg,0.23mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(174mg,1.35mmol)和T3P(430mg,0.68mmol，50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物119(11mg，收率8.02％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(s,1H),7.67(s,1H),7.25–7.20(m,2H),7.07–7.01(m,2H),6.97–6.93(m,2H),6.91–6.87(m,3H),5.35–5.23(m,1H),5.05–5.00(m,1H),4.66–4.55(m,1H),4.09–3.87(m,6H),2.56–2.44(m,3H),2.24–2.17(m,1H),2.10–2.04(m,2H),1.57(d,J＝7.0Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:596(M+H)+。
方案105：(2S,4R)-N-[(1R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基]-4-氟-4-(氟甲基)-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物120)
Figure BDA0004238079180005251
步骤1：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(B)。在0℃、N2气氛下向化合物A(172mg,0.67mmol)和4-氧代-7-苯氧基庚酸(159mg,0.67mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加DIPEA(0.71mL,4.04mmol)和T3P(1.29g,2.02mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的化合物B(320mg，99.9％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：475(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸(C)。在室温、N2气氛下向化合物B(320mg,0.67mmol)在MeOH(7mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的化合物C(190mg，73.3％收率)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：385(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-[(1R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基]-4-氟-4-(氟甲基)-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物120)。在0℃、N2气氛下向化合物C(80mg,0.21mmol)和5-[(1R)-1-氨基乙基]噻吩-3-甲脒(53mg,0.31mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.22mL,1.25mmol)和T3P(397mg,0.62mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌1.5小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取三次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物120(11.4mg，10.2％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.56(s,1H),7.27–7.20(m,2H),6.93–6.86(m,3H),5.35–5.22(m,1H),4.75–4.69(m,1H),4.64–4.59(m,2H),4.14–3.84(m,6H),2.49–2.43(m,3H),2.25–2.04(m,3H),1.58(d,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS(ESI)(m/z)：536(M+H)+。
方案106：(1S,3S,5S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-(4-氟-苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物121)的合成
Figure BDA0004238079180005261
步骤1：(1S,3S,5S)-2-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(B)。在0℃下向(1S,3S,5S)-2-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(A；140mg,0.34mmol)在甲醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的混合物中添加LiOH·H2O(15mg,0.34mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-2-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(B；120mg,92.1％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：379(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物121)。向(1S,3S,5S)-2-((4-(4-氟苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酸(100mg,0.264mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(C；81.5mg,0.396mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加HATU(120.5mg,0.317mmol)和DIPEA(136.4mg,1.06mmol)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用水(2×30mL)和盐水(2×30mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物121(41mg，28.6％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(d,J＝1.4Hz,1H),7.49(s,1H),6.98–6.93(m,2H),6.89–6.85(m,2H),5.19(dd,J＝12.6,6.0Hz,1H),4.79(dd,J＝11.4,3.5Hz,1H),4.16(dd,J＝63.5,16.6Hz,2H),3.97(t,J＝6.2Hz,2H),2.45(t,J＝7.4Hz,2H),2.40(t,J＝9.5Hz,1H),2.14(dd,J＝13.3,3.5Hz,1H),2.08–2.03(m,2H),1.58(dd,J＝21.0,7.0Hz,3H),1.28(s,3H),1.19(dd,J＝5.5,2.3Hz,1H),0.78(t,J＝5.2Hz,1H)；LC/MS(ESI)m/z:530(M+H)+。
方案107：(1S,3S,5S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物122)的合成
Figure BDA0004238079180005281
步骤1：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(B)。将(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(A；350mg,1.3mmol)和HCl/1,4-二噁烷(4mL)的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(B；175mg，收率79.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:170(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(C)。在0℃、N2气氛下向(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(C；205mg,0.86mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(B；175mg,1.03mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(668mg,5.17mmol)和T3P(1.6g,2.59mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈油状物的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(D；300mg,90.1％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：389(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(E)。在0℃下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(D；300mg,0.77mmol)在MeOH(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(107g,2.55mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用1NHCl水溶液酸化至pH＝3，并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(E；270mg,97.1％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：361(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物122)。在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(100mg,0.28mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(86mg,0.42mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(180mg,1.4mmol)和HATU(129mg,0.34mmol)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物122(9.4mg,6.6％收率)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.49(d,J＝1.4Hz,1H),7.23(s,2H),6.90–6.87(m,3H),5.20(d,J＝6.9Hz,1H),4.78(d,J＝3.5Hz,1H),4.57(s,2H),4.24(d,J＝16.7Hz,1H),4.08(d,J＝16.6Hz,1H),3.99(d,J＝6.3Hz,2H),2.44(dt,J＝24.5,9.5Hz,4H),2.17–2.13(m,1H),2.11–2.03(m,3H),1.56(d,J＝7.0Hz,3H),1.20–1.18(m,1H),0.78(t,J＝5.4Hz,1H)；LC/MS(ESI)(m/z):512(M+H)+。
方案108：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物44)的合成
Figure BDA0004238079180005301
步骤1：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物44)。在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(A；94mg,0.26mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(B；75mg,0.39mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(202mg,1.57mmol)和HATU(119mg,0.31mmol)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物44；16mg,12.4％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.5Hz,1H),7.41(s,1H),7.23(d,J＝8.2Hz,2H),6.90(dd,J＝6.1,3.4Hz,3H),4.82–4.78(m,1H),4.52(d,J＝10.7Hz,2H),4.17(d,J＝15.9Hz,2H),4.00(s,2H),3.35–3.32(m,1H),2.46(d,J＝7.6Hz,2H),2.37(d,J＝13.0Hz,1H),2.16(dd,J＝13.4,3.3Hz,1H),2.09–2.04(m,2H),1.28(s,3H),1.12(dd,J＝5.7,2.4Hz,1H),0.80(s,1H)；LC/MS(ESI)(m/z):498(M+H)+。
方案109：(1S,3S,5S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((5-苯基戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物130)的合成
Figure BDA0004238079180005311
步骤1：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯盐酸盐(B)。将(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(A；100mg,0.39mmol)在HCl/1,4-二噁烷(1mL)中的溶液在25℃下搅拌1小时。将混合物浓缩至干从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯盐酸盐(B；66mg,99.4％收率)，其未经纯化即直接使用。LC/MS(ESI)m/z:170(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-苯基戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(D)。向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯盐酸盐(B；66mg,0.39mmol)和(C；5-苯基戊酰基)甘氨酸(110mg,0.47mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(403mg,3.12mmol)和T3P(372mg,1.17mmol,50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层用水(2×100mL)和盐水(2×100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到呈浅黄色油状物的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-苯基戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(D；98mg，65.1％收率)，其未经纯化即直接使用。LC/MS(ESI)m/z:387(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-苯氧基戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(E)。在0℃下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-苯基戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(D；98mg,0.25mmol)在甲醇(1.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(32mg,0.76mmol)的溶液，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-苯基戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(E；90mg,90.9％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:359(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((5-苯基-戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物130)。向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-苯基戊酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(E；43mg,0.116mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(F；19.6mg,0.116mmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(90mg,0.69mmol)和T3P(220mg,0.35mmol,50％于乙酸乙酯中)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层用水(2×100mL)和盐水(2×100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物130(1.6mg，2.5％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(dd,J＝7.1,1.6Hz,1H),7.43(t,J＝11.3Hz,1H),7.27–7.21(m,2H),6.90(dd,J＝10.4,4.6Hz,3H),4.62–4.55(m,2H),4.49–4.42(m,1H),4.06–3.93(m,4H),3.69(dt,J＝9.9,6.3Hz,1H),3.61(dd,J＝12.0,4.7Hz,1H),2.37–2.32(m,2H),2.25–2.17(m,1H),2.06–1.98(m,3H),1.81(dt,J＝6.6,3.4Hz,4H)；LC/MS(ESI)m/z:510(M+H)+。
方案110 4：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(二氟-甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物123)的合成
Figure BDA0004238079180005331
步骤1：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(B)。在0℃下向(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(A；2g,7.17mmol)在乙腈(20mL)中的混合物中添加碘化亚铜(272mg,1.43mmol)，随后添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(1.5g,8.6mmol)在乙腈中(6mL)中的溶液，并将混合物在50℃下搅拌16小时。将混合物用乙腈稀释并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(己烷:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(B；261mg，收率11.3％)。LC/MS(ESI)m/z:330(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C)。在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(B；261mg,0.79mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中添加Pd/C(26mg，10重量％)，并将反应物在室温、H2气氛下搅拌1小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C；143mg，收率92.8％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:196(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(D)。在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(C；143mg,0.73mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(174mg,0.73mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.7mL,4.38mmol)，随后添加T3P(1.4g,2.19mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用CHCl3:IPA＝3:1稀释，并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行纯化从而得到呈油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基-丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(D；250mg，收率82.7％)。LC/MS(ESI)m/z:415(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(E)。在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(D；250mg,0.6mmol)在甲醇(2mL)和四氢呋喃(1mL)中的溶液中添加LiOH(25mg,0.6mmol)在H2O(1mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将水层用0.5M HCl水溶液酸化，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(E；160mg，收率66.6％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:401(M+H)+
步骤5：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物123)。在0℃下向化合物E(70mg,0.18mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(44mg,0.26mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.08mmol)，随后添加T3P(343mg,0.54mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用CHCl3:IPA＝3:1稀释，并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物124(10.1mg，收率10.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(dd,J＝3.6,3.6Hz,1H),7.56–7.50(m,1H),7.26–7.20(m,2H),6.91–6.87(m,3H),6.68–6.27(m,1H),5.34–5.21(m,1H),4.98–4.94(m,1H),4.61–4.52(m,1H),4.07(d,J＝16.8Hz,1H),4.01–3.95(m,3H),3.91–3.85(m,1H),3.80–3.67(m,1H),2.50–2.41(m,3H),2.26–2.15(m,1H),2.11–2.04(m,2H),1.60(dd,J＝23.2,23.2Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:552(M+H)+。
方案111：(R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5,5-二甲基-3-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)噻唑烷-4-甲酰胺(化合物124)的合成
Figure BDA0004238079180005351
步骤1：(R)-5,5-二甲基噻唑烷-3,4-二甲酸4-苄酯3-(叔丁基)酯(B)。在0℃、N2气氛下向(R)-3-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基噻唑烷-4-甲酸(A；50mg,0.19mol)在DMF(3mL)中的溶液中添加BnBr(0.03mL,0.23mol)和K2CO3(79mg,0.57mol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次，并用NH4Cl水溶液洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝9:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(R)-5,5-二甲基噻唑烷-3,4-二甲酸4-苄酯3-(叔丁基)酯(B；85mg，收率67.2％)。LC/MS(ESI)m/z:352(M+H)+。
步骤2：(R)-5,5-二甲基噻唑烷-4-甲酸苄酯(C)。在25℃下向(R)-5,5-二甲基噻唑烷-3,4-二甲酸4-苄酯3-(叔丁基)酯(B；85mg,0.24mmol)在HCl/1,4-二噁烷(6mL)中的溶液中，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到呈白色固体的(R)-5,5-二甲基噻唑烷-4-甲酸苄酯(C；58mg，收率96.7％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:252(M+H)+。
步骤3：(R)-5,5-二甲基-3-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)噻唑烷-4-甲酸苄酯(E)。在0℃、N2气氛下向(R)-5,5-二甲基噻唑烷-4-甲酸苄酯(C；80mg,0.32mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(D；75mg,0.35mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.32mL,1.92mmol)和T3P(608mg,0.96mmol)，并将混合物在40℃下搅拌48小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝96:4)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(R)-5,5-二甲基-3-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)噻唑烷-4-甲酸苄酯(E；80mg，收率53.3％)。LC/MS(ESI)m/z:471(M+H)+。
步骤4：(R)-5,5-二甲基-3-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)噻唑烷-4-甲酸(F)。向(R)-5,5-二甲基-3-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)噻唑烷-4-甲酸苄酯(E；80mg,0.17mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并在H2气氛下脱气三次，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤，并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(R)-5,5-二甲基-3-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)噻唑烷-4-甲酸(F；40mg，收率61.5％)。将粗产物未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：381(M+H)+。
步骤5：(R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5,5-二甲基-3-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)噻唑烷-4-甲酰胺(化合物124)。在0℃、N2气氛下向(R)-5,5-二甲基-3-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)噻唑烷-4-甲酸(F；40mg,0.11mmol)和5-(氨基甲基)-噻吩-3-甲脒(G；25mg,0.17mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.08mL,0.66mmol)和T3P(200mg,0.33mmol)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取十次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物124(10mg，收率18.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(t,J＝2.7Hz,1H),7.42(s,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,2H),6.89(dd,J＝7.6,3.9Hz,4H),4.83–4.80(m,2H),4.56(d,J＝3.9Hz,2H),4.34(s,1H),4.11(dd,J＝35.0,16.9Hz,2H),4.02–3.98(m,2H),2.47(t,J＝7.1Hz,2H),2.08(dd,J＝13.7,6.6Hz,2H),1.56(d,J＝3.4Hz,3H),1.37(d,J＝5.5Hz,3H)；LC/MS(ESI)m/z:518(M+H)+。
方案112：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物125)的合成
Figure BDA0004238079180005371
步骤1：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物125)。在0℃下向化合物A(30mg,0.07mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(18mg,0.11mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(0.07mL,0.42mmol)，随后添加T3P(134mg,0.21mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用CHCl3:IPA＝3:1稀释并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物125(2.7mg，收率6.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.22(s,1H),7.50(s,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,2H),6.89(dd,J＝6.4,8.8Hz,3H),5.33–5.18(m,1H),4.67(dd,J＝8.4,8.4Hz,1H),4.12–4.05(m,4H),4.00(t,J＝6.2Hz,2H),3.87–3.71(m,1H),3.04(d,J＝14.0Hz,3H),2.86–2.68(m,1H),2.48–2.42(m,2H),2.11–2.04(m,2H),1.57(d,J＝7.0Hz,3H),1.05–0.98(m,1H)；LC/MS(ESI)m/z:564(M+H)+。
方案113：(1S,3S,5S)-2-((4-(苄氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物91)
Figure BDA0004238079180005381
步骤1：2-{[4-(苄氧基)苯基]甲酰胺基}乙酸甲酯(B)。向4-(苄氧基)苯甲酸(A；1.0g,3.78mmol,1.0当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸甲酯(0.52g,4.16mmol，1.1当量)、HATU(1.87g,4.91mmol，1.3当量)，最后添加DIPEA(1.98mL,11.33mmol，3.0当量)。将反应物搅拌20分钟，并然后用水(5mL)稀释。将固体通过过滤收集，然后干燥得到呈白色固体的化合物B(1.0g,3.34mmol，收率88.44％)。LC/MS(ESI)m/z:314(M+H)+。
步骤2：{[4-(苄氧基)苯基]甲酰胺基}乙酸(C)。向化合物B(0.2g,0.67mmol，1.0当量)在MeOH(6mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加LiOH(0.08g,3.34mmol，5当量)。将反应物在室温下搅拌1小时，浓缩去除MeOH，并然后用EtOAc(10mL)稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物C(0.17g,0.55mmol，收率82.88％)。LC/MS(ESI)m/z:286(M+H)+。
步骤3：(1R,2S,5S)-3-(2-{[4-(苄氧基)苯基]甲酰胺基}乙酰基)-1-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸乙酯(D)。向化合物C(0.07g,0.25mmol，1.0当量)在DMF(4mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(0.046g,0.27mmol，1.1当量)、HATU(0.121g,0.32mmol，1.3当量)和DIPEA(0.086mL,0.49mmol，3.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(2mL)和CH2Cl2(5mL)。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(2mL×3)萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi-Flash；12g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈黄色粘稠油状物的化合物D(0.07g，收率65.36％)。LC/MS(ESI)m/z:437(M+H)+。
步骤4：(1R,2S,5S)-3-(2-{[4-(苄氧基)苯基]甲酰胺基}乙酰基)-1-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]-己烷-2-甲酸(E)。向化合物4(0.07g,0.17mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH(0.008g,0.33mmol，2.0当量)。将反应物在室温下搅拌5小时，浓缩去除MeOH，并然后用CH2Cl2(3mL)稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(2mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈黄色固体的化合物E(0.055g,0.14mmol，收率81.27％)。LC/MS(ESI)m/z:409(M+H)+。
步骤5：(1R,2S,5S)-3-(2-{[4-(苄氧基)苯基]甲酰胺基}乙酰基)-N-[(4-甲脒基-噻吩-2-基)甲基]-1-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酰胺(化合物91)。向化合物E(0.04g,0.098mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)-噻吩-3-甲脒(0.02g,0.11mmol，1.1当量)、HATU(0.04g,0.11mmol，1.1当量)和DIPEA(0.05mL,0.29mmol，3.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物91(0.02g,0.033mmol，收率24.75％)。LC/MS(ESI)m/z:546(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(dt,J＝19.0,5.8Hz,2H),8.45(s,1H),8.36–8.29(m,1H),7.83(dd,J＝9.0,2.5Hz,2H),7.55–7.30(m,4H),7.08(dd,J＝9.1,2.8Hz,2H),5.17(s,2H),4.71–4.57(m,1H),4.50–4.40(m,1H),4.43–4.33(m,1H),4.31(dd,J＝16.6,5.6Hz,1H),4.02(td,J＝16.2,5.6Hz,1H),3.43(dd,J＝6.1,2.4Hz,1H),2.28(t,J＝12.3Hz,1H),2.00(dd,J＝13.2,3.1Hz,1H),1.25–1.08(m,4H),0.70–0.58(m,1H)。
方案114：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(三氟-甲基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物92)
Figure BDA0004238079180005401
步骤1：2-({4-[4-(三氟甲基)苯氧基]苯基}甲酰胺基)乙酸甲酯(B)。向4-[4-(三氟甲基)苯氧基]苯甲酸(A；1.0g,3.78mmol,1.0当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸甲酯(0.39g,3.12mmol,1.1当量)、HATU(1.40g,3.69mmol,1.3当量)，最后添加DIPEA(0.99mL,5.67mmol,2.0当量)。将反应物搅拌20分钟，并然后用水(5mL)稀释。将固体通过过滤收集，然后干燥从而得到呈白色固体的化合物B(0.91g,2.56mmol，收率90.87％)。LC/MS(ESI)m/z:354(M+H)+。
步骤2：(4-(4-(三氟甲基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酸(C)。向化合物B(0.9g,2.55mmol，1.0当量)在MeOH(9mL)和H2O(3mL)中的溶液中添加LiOH(0.31g,12.74mmol，5.0当量)。将反应物在室温下搅拌2小时，浓缩去除MeOH，并然后用EtOAc(10mL)稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物C(0.8g,2.36mmol，收率92.57％)。LC/MS(ESI)m/z:340(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-[2-({4-[4-(三氟甲基)苯氧基]苯基}甲酰胺基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(D)。向化合物C(0.05g,0.147mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(0.023g,0.13mmol，1.1当量)、HATU(0.07g,0.17mmol，1.3当量)和DIPEA(0.07mL,0.40mmol，3.0当量)。将反应物在室温下搅拌20分钟。添加水(1mL)和CH2Cl2(2mL)。将两层分离，并将水层用CH2Cl2萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过CombiFlash；12g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈黄色粘稠油状物的化合物D(0.06g，0.122mmol，收率91.31％)。LC/MS(ESI)m/z:491(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-[2-({4-[4-(三氟甲基)苯氧基]苯基}甲酰胺基)-乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(E)。向化合物D(0.05g,0.10mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH(0.005g,0.20mmol，2.0当量)。将反应物在室温下搅拌5小时，浓缩去除MeOH，并然后用CH2Cl2(3mL)稀释。将pH值用1NHCl调节至1。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(2mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈黄色固体的化合物E(0.045g,0.1mmol，收率95.46％)。LC/MS(ESI)m/z:463(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(三氟-甲基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物92)。向化合物E(0.045g,0.098mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)-噻吩-3-甲脒(0.021g,0.107mmol，1.1当量)、HATU(0.041g,0.107mmol，1.1当量)和DIPEA(0.051mL,0.292mmol，3.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物92(0.02g,0.033mmol，收率24.75％)。LC/MS(ESI)m/z:600(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(q,J＝11.0,8.4Hz,1H),8.55(t,J＝5.9Hz,1H),8.44(s,1H),8.37–8.29(m,1H),7.99–7.91(m,2H),7.78(d,J＝8.5Hz,2H),7.48(d,J＝15.7Hz,1H),4.67(dd,J＝11.4,3.0Hz,1H),4.46(dd,J＝13.9,7.7Hz,1H),4.44–4.31(m,2H),4.11–3.98(m,1H),3.44(dd,J＝5.9,2.4Hz,1H),2.29(t,J＝12.6Hz,1H),2.00(dd,J＝13.0,3.2Hz,1H),1.22(d,J＝11.3Hz,4H),0.62–0.70(m,1H)。
方案115：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((5-苯氧基吡啶甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物93)
Figure BDA0004238079180005421
步骤1：(5-苯氧基吡啶甲酰基)甘氨酸叔丁酯(B)。向5-苯氧基吡啶-2-甲酸(A；0.25g,1.16mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(0.23g,1.39mmol，1.2当量)、HATU(0.57g,1.51mmol，1.3当量)，最后添加DIPEA(0.61mL,3.49mmol，3当量)。将反应物在室温下搅拌20分钟，并然后用水(2mL)稀释。将固体通过过滤收集，用水洗涤，并然后干燥从而得到化合物B(0.35g,1.07mmol，收率91.75％)。LC/MS(ESI)m/z:329(M+H)+。
步骤2：(5-苯氧基吡啶甲酰基)甘氨酸(3)。在冰浴温度下将TFA(0.82mL)添加到化合物B在CH2Cl2(2mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时，并然后浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物C(0.25g,0.92mmol，收率86.15％)。LC/MS(ESI)m/z:273(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-苯氧基吡啶甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]-己烷-3-甲酸乙酯(D)。向化合物C(0.08g,0.28mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(0.04g,0.24mmol，1.0当量)、HATU(0.12g,0.31mmol，1.3当量)和DIPEA(0.08mL,0.47mmol，2.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(4mL)和CH2Cl2(5mL)。将两层分离，并将水层用CH2Cl2萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过CombiFlash；4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％A至5％ B进行纯化，得到化合物D(0.1g,0.236mmol，收率99.90％)。LC/MS(ESI)m/z:424(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-苯氧基吡啶甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(E)。向化合物D(0.1g,0.236mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH(0.011g,0.472mmol，2.0当量)。将反应物在室温下搅拌4小时，浓缩去除MeOH，并然后用CH2Cl2(3mL)稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(2mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物E(0.085g,0.215mmol，收率91.03％)。LC/MS(ESI)m/z:396(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((5-苯氧基吡啶甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物93)。向化合物5(0.03g,0.076mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒.HCl(0.017g,0.09mmol,1.2当量)、HATU(0.03g,0.08mmol,1.1当量)和DIPEA(0.04mL,0.23mmol,3.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物93(0.018g,0.034mmol，收率44.54％)。LC/MS(ESI)m/z:533(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(dt,J＝28.3,5.5Hz,2H),8.50–8.39(m,2H),8.36(dd,J＝5.3,1.4Hz,1H),8.06(dd,J＝8.6,5.2Hz,1H),7.58–7.45(m,2H),7.29(t,J＝7.5Hz,1H),7.24–7.16(m,2H),4.70(dd,J＝11.4,3.1Hz,1H),4.53–4.34(m,3H),4.15(ddd,J＝37.8,16.9,5.2Hz,1H),3.44(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),2.32(t,J＝12.2Hz,1H),2.13–1.94(m,1H),1.28–1.13(m,4H),0.62–0.70(m,1H)。
方案116：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(吡啶-3-基氧基)-苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物94)
Figure BDA0004238079180005441
步骤1：2-{[4-(吡啶-3-基氧基)苯基]甲酰胺基}乙酸甲酯(B)。向4-(吡啶-3-基氧基)苯甲酸(A；0.5g,2.32mmol,1.0当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸甲酯(0.35g,2.79mmol，1.1当量)、HATU(1.15g,3.02mmol，1.3当量)，最后添加DIPEA(1.01mL,5.81mmol，3.0当量)。将反应物搅拌20分钟，并然后用水(2mL)和EtOAc(5mL)稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过CombiFlash；24g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈灰白色固体的化合物B(0.54g,1.89mmol，收率81.19％)。LC/MS(ESI)m/z:287(M+H)+。
步骤2：{[4-(吡啶-3-基氧基)苯基]甲酰胺基}乙酸(C)。向化合物B(0.4g,1.4mmol，1.0当量)在MeOH(6mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加LiOH(0.17g,6.99mmol，5当量)。将反应物在室温下搅拌2小时，浓缩去除MeOH，并然后用CH2Cl2(10mL)稀释。将pH值用1NHCl调节至3。使产物从溶液中析出并将产物过滤，并然后干燥从而得到呈白色粉末的化合物C(0.29g,1.07mmol，收率76.24％)。LC/MS(ESI)m/z:273(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-(2-{[4-(吡啶-3-基氧基)苯基]甲酰胺基}乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(D)。向化合物C(0.07g,0.26mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(0.05g,0.28mmol，1.1当量)、HATU(0.13g,0.33mmol，1.3当量)和DIPEA(0.11mL,0.64mmol，2.5当量)。将反应物在室温下搅拌10分钟。添加水(2mL)和CH2Cl2(5mL)。将两层分离，并将水层用CH2Cl2萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Comb Flash；4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到化合物D(0.07g,0.165mmol，收率64.29％)。LC/MS(ESI)m/z:424(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-(2-{[4-(吡啶-3-基氧基)苯基]甲酰胺基}乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(E)。向化合物D(0.07g,0.17mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH(0.008g,0.33mmol，2当量)。将反应物在室温下搅拌5小时，浓缩去除MeOH，并然后用CH2Cl2(3mL)稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(2mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过CombiFlash；4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至10％ B进行纯化，得到呈白色固体的化合物E(0.06g,0.15mmol，收率91.80％)。LC/MS(ESI)m/z:396(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-(2-{[4-(吡啶-3-基氧基)苯基]甲酰胺基}乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物94)。向化合物E(0.06g,0.08mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)-噻吩-3-甲脒(0.032g,0.167mmol，1.1当量)、HATU(0.06g,0.17mmol，1.1当量)和DIPEA(0.08mL,0.46mmol，3.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物94(0.02g,0.038mmol，收率24.75％)。LC/MS(ESI)m/z:533(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(t,J＝5.7Hz,1H),8.56(t,J＝5.9Hz,1H),8.46(dd,J＝4.8,1.7Hz,4H),8.36(d,J＝9.0Hz,1H),8.00–7.90(m,3H),7.61–7.46(m,2H),7.13(dd,J＝8.9,2.3Hz,2H),4.07(dd,J＝16.5,5.6Hz,1H),3.49–3.43(m,1H),2.91(s,1H),2.71(m,2H),2.31(t,J＝12.5Hz,1H),2.02(dd,J＝12.8,3.4Hz,1H),1.24(d,J＝10.9Hz,4H),0.62–0.70(m,1H)。
方案117：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-(2-(1-氧代-5-苯氧基异吲哚啉-2-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物101)
Figure BDA0004238079180005461
步骤1：2-(5-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)乙酸叔丁酯(B)。在冰浴温度下将5-溴-2,3-二氢异吲哚-1-酮(A；0.5g,2.36mmol,1.1当量)在THF(5mL)中的溶液添加到在THF(25mL)中的经己烷洗涤的NaH(0.17g,7.074mmol,3.0当量)。将混合物在氩气下搅拌30分钟，然后添加2-溴乙酸叔丁酯(1.38g,7.07mmol,3.0当量)，并将反应物温热至室温并搅拌30分钟。将反应物用冰冷的水淬灭，将两层分离，并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到白色固体。使用100％ CH2Cl2至5％ MeOH通过CombiFlash柱色谱进行纯化，得到化合物B(0.73g,2.24mmol，收率94.91％)。LC/MS(ESI)m/z:327(M+H)+。
步骤2：2-(1-氧代-5-苯氧基异吲哚啉-2-基)乙酸叔丁酯(C)。将化合物B(0.1g,0.31mmol,1.0当量苯酚(0.043g,0.46mmol,1.5当量)、二甲基氨基乙酸盐酸盐(0.013g,0.092mmol,0.3当量)、碳酸铯(0.4g,1.23mmol,4.0当量)和碘化亚铜(I)(0.006g,1.23mmol,0.1当量)在二噁烷(5mL)中的混合物在密封管中加热过夜。将反应物冷却至室温，然后用水(5mL)和EtOAc(5mL)稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到黄色油状物。使用100％己烷至10％EtOAc通过CombiFlash柱色谱进行纯化，得到呈黄色油状物的化合物C(0.05g,0.15mmol,48.06％)。LC/MS(ESI)m/z:340(M+H)+。
步骤3：2-(1-氧代-5-苯氧基异吲哚啉-2-基)乙酸(D)。在冰浴温度下将TFA(0.14mL)添加到化合物3(0.06g,0.18mmol,1.0当量)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时并然后浓缩至干。添加3mL的3N HCl，并再次将混合物浓缩至干从而得到呈类黄色固体的化合物D(0.05g,0.18mmol，收率99.84％)。LC/MS(ESI)m/z:284(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-(2-(1-氧代-5-苯氧基异吲哚啉-2-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(F)。向化合物D(0.05g,0.18mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(E；0.03g,0.18mmol，1.0当量)、HATU(0.087g,0.229mmol，1.3当量)、)和DIPEA(0.062mL,0.35mmol,2.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(2mL)和EtOAc(5mL)。将两层分离，并将水层用EtOAc萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过CombiFlash，4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈黄色油状物的化合物F(0.058g,0.133mmol，收率75.63％)。LC/MS(ESI)m/z:435(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-(2-(1-氧代-5-苯氧基异吲哚啉-2-基)乙酰基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酸(G)。向化合物F(0.058,0.133mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH(0.006g,0.27mmol，2.0当量)。将反应物在室温下搅拌过夜，浓缩去除MeOH，并然后用EtOAc(3mL)稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(3mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物G(0.05g,收率92.15％)。LC/MS(ESI)m/z:407(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-(2-(1-氧代-5-苯氧基异吲哚啉-2-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物101)。
向化合物G(0.05g,0.12mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)-噻吩-3-甲脒(0.028g,0.15mmol，1.2当量)、HATU(0.05g,0.14mmol，1.1当量)和DIPEA(0.064mL,0.35mmol，3.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物101(0.02g,0.04mmol，收率29.90％)。LC/MS(ESI)m/z:544(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65(t,J＝5.9Hz,1H),8.40–8.32(m,2H),7.72(dd,J＝8.4,4.5Hz,1H),7.55–7.43(m,2H),7.29–7.18(m,3H),7.17–7.07(m,2H),4.67(dd,J＝11.4,3.1Hz,1H),4.64–4.30(m,3H),3.43(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),2.52(p,J＝1.9Hz,2H),2.31(t,J＝12.4Hz,1H),1.97(dd,J＝13.3,3.1Hz,1H),1.23(d,J＝10.6Hz,4H),0.65(t,J＝5.5Hz,1H)。
方案118：(1S,3S,5S)-N-[(2-氨基-1,3-噻唑-5-基)甲基]-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)-甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物102)
Figure BDA0004238079180005491
步骤1：(1S,3S,5S)-N-[(2-氨基-1,3-噻唑-5-基)甲基]-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)-甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物102)。向化合物A(0.04g,0.10mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基乙基)噻唑-2-胺(0.02g,0.11mmol,1.1当量)、HATU(0.04g,0.11mmol,1.1当量)和DIPEA(0.05mL,0.30mmol,3.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物102(0.025g,0.05mmol，收率48.76％)。LC/MS(ESI)m/z:506(M+H)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(t,J＝5.7Hz,1H),8.25–8.17(m,1H),7.90(dd,J＝8.9,2.3Hz,2H),7.44(t,J＝7.8Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(dd,J＝21.9,8.3Hz,2H),6.77(d,J＝2.2Hz,1H),6.73(s,1H),4.60(dd,J＝11.5,3.0Hz,1H),4.35(dd,J＝16.5,5.7Hz,1H),4.17(ddt,J＝24.0,15.2,7.8Hz,2H),4.01(dd,J＝16.5,5.5Hz,1H),3.54–3.37(m,1H),2.25(t,J＝12.4Hz,1H),1.94(dd,J＝13.2,3.0Hz,1H),1.21(d,J＝10.3Hz,4H),0.63–0.66(m,1H)。
方案119：(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-{2-[(5-苯氧基-1-苯并呋喃-2-基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物132)。
Figure BDA0004238079180005501
步骤1：2-[(5-溴-1-苯并呋喃-2-基)甲酰胺基]乙酸叔丁酯(B)。向5-溴-1-苯并呋喃-2-甲酸(A；1.3g,5.39mmol,1.0当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(1.085g,6.472mmol,1.2当量)、HATU(2.67g,7.01mmol,1.3当量)和DIPEA(2.091g,2.826mL,16.18mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水10mL，将固体通过过滤收集并干燥从而得到呈棕色粉末的化合物B(1.8g,5.08mmol，收率94.23％)。LC/MS(ESI)m/z:355(M+H)+。
步骤2：2-[(5-苯氧基-1-苯并呋喃-2-基)甲酰胺基]乙酸叔丁酯(C)。将化合物B(0.8g,2.26mmol,1.0当量)、苯酚(0.319g,3.39mmol,1.5当量)、二甲基氨基乙酸盐酸盐(0.095g,0.678mmol,0.3当量)、碳酸铯(2.94g,9.03mmol,4.0当量)和碘化亚铜(I)(0.043g,0.226mmol,0.1当量)在二噁烷(5mL)中的混合物在密封管中加热过夜。将反应物冷却至室温，然后用水(5mL)和EtOAc(5mL)稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到黄色油状物。使用100％己烷至20％ EtOAc通过CombiFlash柱色谱进行纯化，得到呈黄色油状物的化合物C(0.5g,1.361mmol,60.25％)。LC/MS(ESI)m/z:368(M+H)+。
步骤3：[(5-苯氧基-1-苯并呋喃-2-基)甲酰胺基]乙酸(D)。在冰浴温度下将TFA(0.25mL)添加到化合物C(0.12g,0.327mmol,1.0当量)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时并然后浓缩至干。添加3mL的3N HCl，并再次将混合物浓缩至干从而得到呈类黄色固体的化合物D(0.092g,0.327mmol，收率90.48％)。LC/MS(ESI)m/z:312(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(5-苯氧基-1-苯并呋喃-2-基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(E)
向化合物D(0.092g,0.295mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(0.05g,0.295mmol，1.0当量)、HATU(0.146g,0.384mmol，1.3当量)和DIPEA(0.129mL,0.739mmol，2.5当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(5mL)和EtOAc(5mL)。将两层分离，并将水层用EtOAc萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过CombiFlash，12g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％B进行纯化，得到呈黄色油状物的化合物E(0.1g,0.216mmol，收率73.18％)。LC/MS(ESI)m/z:467(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(5-苯氧基-1-苯并呋喃-2-基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(F)。向化合物E(0.11,0.238mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH(0.011g,0.476mmol，2.0当量)。将反应物在室温下搅拌过夜，浓缩去除MeOH，并然后用EtOAc(3mL)稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(3mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物F(0.1g,0.23mmol，收率96.78％)。LC/MS(ESI)m/z:435(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-{2-[(5-苯氧基-1-苯并呋喃-2-基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物131)。
向化合物F(0.09g,0.207mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)-噻吩-3-甲脒(0.044g,0.228mmol，1.1当量)、HATU(0.087g,0.228mmol，1.1当量)和DIPEA(0.145mL,0.829mmol，4.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物132(0.01g,0.017mmol，收率8.44％)。LC/MS(ESI)m/z:572(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(t,J＝5.9Hz,1H),8.46(s,1H),8.31(d,J＝9.3Hz,1H),7.71(d,J＝8.9Hz,1H),7.54(s,1H),7.47(d,J＝16.2Hz,1H),7.44–7.35(m,2H),7.24–7.09(m,1H),7.02(d,J＝8.0Hz,2H),4.71–4.63(m,1H),4.50–4.30(m,2H),4.13–3.98(m,2H),3.43(d,J＝5.3Hz,1H),3.17(s,1H),2.28(d,J＝12.2Hz,1H),2.08(s,1H),2.03–1.94(m,1H),1.32–1.11(m,3H),0.85(dt,J＝10.6,6.7Hz,1H),0.70(t,J＝5.4Hz,1H)。
方案120：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物17)
Figure BDA0004238079180005521
步骤1：(2S,4R)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(B)。在0℃下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)-吡咯烷-2-甲酸(A；0.1g,0.268mmol,1.0当量)在DMF(1.3mL)中的溶液中添加Cs2CO3(0.113g,0.348mmol,1.3当量)，随后添加苄基溴(0.06g,0.041mL,0.348mmol)。将所得混合物在RT下搅拌16h。通过添加水将反应物淬灭。将混合物溶入EtOAc中，将水层分离并用EtOAc萃取3次。将合并的有机层用水洗涤3次，然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥并在真空下浓缩。将残余物在硅胶上使用0-30％EtOAc/己烷进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(B；0.094g,0.203mmol，收率75.7％)。HPLC-MS(ESI):m/z[M+Na]+:486。Rt 4.61min.
步骤2：(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)-吡咯烷-2-甲酸苄酯(D)。在室温下向含有(2S,4R)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(B；0.038g,0.082mmol,1当量)的小瓶中添加4N的在二噁烷中的HCl(0.41mL,1.64mmol,20当量)，并将所得混合物搅拌3小时。然后，将挥发物在真空下去除从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-(4-(三氟甲基)苄基)-吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(0.033g,0.083mmol，收率100.7％)。HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:364。Rt 2.7min.
在0℃下向(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸C(0.027g,0.098mmol,1.2当量)和(2S,4R)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(0.033g,0.082mmol,1当量)在DMF(0.41mL)中的溶液中添加HATU(0.047g,0.123mmol,1.5当量)，随后添加DIPEA(0.071mL,0.41mmol,5当量)，并将所得混合物在0℃下搅拌45分钟。通过添加水将反应物淬灭。将混合物溶入EtOAc中，将水层分离，并用水再进行两次萃取以去除DMF。将合并的水层用Et2O进行反萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗物质悬浮于硅胶上，并使用0-100％ EtOAc/己烷进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(D；0.037g,0.06mmol，收率73.2％)。HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:617。Rt 4.4min.
步骤3：((2S,4R)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(F)。将(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(D；0.037g,0.06mmol,1当量)在乙醇(1mL)中的溶液通过用氩气鼓泡进行脱气。添加Pd/C(0.006g,0.006mmol,0.1当量)，并通过再一次使氩气鼓泡来对溶液进行脱气。然后，添加H2的球囊，从而直接鼓泡到溶液中，持续30秒。将所得悬浮液在RT下搅拌1小时。将混合物用氮气脱气，用DCM稀释，添加硅藻土，并将混合物在硅藻土垫上过滤，用DCM冲洗，然后用MeOH冲洗。将挥发物在真空下去除，从而得到呈无色固体的(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-2-甲酸(0.035g,0.066mmol，收率110.8％)，其按原样用于下一步骤中。HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:527。Rt 3.7min.
向在冰/NaCl浴中冷却的(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-2-甲酸(0.035g,0.066mmol,1.0当量)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加EDCI盐酸盐(0.016g,0.081mmol,1.2当量)，随后添加HOAT(0.009g,0.068mmol,1.0当量)。将反应物搅拌30分钟。添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒二盐酸盐(E；0.019g,0.068mmol,1.0当量)，随后逐滴添加4-甲基吗啉(0.022mL,0.203mmol,3.0当量)。将反应物搅拌20小时，并让反应物温热至室温。然后将反应物浓缩，并在3％ DCM/MeOH溶液和NaHCO3(饱和)的溶液之间分配。将有机层分离，并将水层用3％ DCM/MeOH萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗物质悬浮在硅胶上，并在如下条件下在Redisep金柱(12g)上进行纯化：使用15％至70％的梯度；A＝乙酸乙酯/B＝含20％ MeOH的EtOAc，其中t＝0时为15％ B。将不纯的级分汇集，并使用10％至50％的相同溶剂体系(其中t＝0时为10％ B)进行再纯化，从而得到(2S,4R)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(F；16mg,0.022mmol，收率32.8％)。HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:722.3，Rt＝3.74min。
步骤4：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物17)。将含有(2S,4R)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(4-(三氟甲基)-苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(F；16.7mg,0.023mmol,1.0当量)的烧瓶抽空并放在氩气下，随后添加乙酸(1mL)。将氩气鼓泡到溶液中，持续10分钟。然后，添加Pd/C 10％(0.002g,0.002mmol,0.1当量)，并使氩气鼓泡，持续5分钟。向反应物中添加H2，持续5分钟，然后允许该反应物在H2气氛下反应20小时。将反应物浓缩，添加MeOH，并将混合物通过45um特氟隆注射器式过滤器过滤并再次浓缩。添加MeOH(0.5mL)，并将溶液冷却至0℃。添加4N在二噁烷中的HCl(0.023mL,0.093mmol,4当量)，并将反应物搅拌2小时，然后将反应混合物浓缩，并在高真空下放置3小时。然后，将残余物悬浮在EtOAc中并搅拌16小时。将悬浮物通过过滤进行收集，并在高真空下干燥，从而得到呈米色固体的化合物17(9.2mg,0.013mmol,57.1％)。纯度96.2％,Rt＝9.82min)。1HNMR(400MHz,CD3OD):δ8.23(1H,d,J＝1.7Hz),8.19(1H,d,J＝1.6Hz),7.83(2H,d,J＝8.5Hz),7.58-7.62(2H,m),7.37-7.47(5H,m),7.21(1H,t,J＝7.4Hz),7.06(2H,d,J＝8.0Hz),7.00(2H,d,J＝8.4Hz),4.55-4.59(3H,m),4.10-4.21(2H,m),3.85(1H,dd,J＝9.9,7.5Hz),3.40(1H,t,J＝9.4Hz),2.69-2.90(3H,m),1.99-2.14(2H,m)。HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:664.3,Rt＝2.99min。
方案121：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基-苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物14)
Figure BDA0004238079180005561
步骤1：((4-氰基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(B)。向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的100mL圆底烧瓶中添加5-(氨基甲基)-噻吩-3-甲腈盐酸盐(A；1.97g,11.3mmol,1.00当量THF(20mL)和水(7mL)。将所得溶液置冰浴中在0℃下搅拌。将碳酸钠(1.20g,11.3mmol,1.00当量)一次性添加，并将反应混合物在0℃下继续搅拌5分钟。将二碳酸二叔丁酯(5.43g,22.6mmol,2.00当量)添加到闪烁小瓶中，并溶解于四氢呋喃(4mL)。将所得溶液抽入注射器，并在0℃下逐滴添加到反应混合物中。将反应混合物在0℃下搅拌，经48小时的时间逐渐温热至RT。将反应混合物在真空下浓缩并用水稀释。将水溶液用EtOAc(3x)萃取。将合并的萃取液依次用1N HCl(水溶液1M NaOH(水溶液)和盐水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物使用10-50％的在己烷中的EtOAc的梯度通过硅胶柱色谱进行纯化从而得到呈白色固体的化合物B(2.44g,10.2mmol,90.5％收率)。Rf(30％的在己烷中的EtOAc)＝0.34；1H NMR(CDCl3,400MHz):δ7.81(1H,s),7.11(1H,s),5.01(1H,br s),4.45(2H,d,J＝6.2Hz),1.46(9H,s)；LC/MS(ESI+)m/z 240.1[M+H]+,260.1[M+Na]+,Rt＝2.97min。
步骤2：((4-(N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(C)。向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的250mL圆底烧瓶中添加化合物B(2.43g,10.2mmol,1.00当量)和无水EtOH(50mL)。将所得溶液置冰浴中在0℃下搅拌。将盐酸羟胺(1.77g,25.5mmol,2.50当量)一次性添加，随后经20分钟逐滴添加DIPEA(5.34mL,30.6mmol,3.00当量)。移除冰浴，并将反应混合物在RT下搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc稀释并用水(×2)洗涤。将合并的水洗涤液用EtOAc(×3)进行反萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩从而得到呈白色固体的叔丁基((4-(N’-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)(2.72g,10.0mmol,98.3％收率)，其不经进一步纯化即使用。LC/MS(ESI+)m/z 272.1[M+H]+,294.1[M+Na]+,Rt＝1.20min。
向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的100mL圆底烧瓶中添加叔丁基((4-(N’-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)(2.71g,10.0mmol,1.00当量)和乙酸(20mL)。添加乙酸酐(3.40mL,36.0mmol,3.6当量)，并将所得溶液在RT下搅拌1小时。将反应混合物在真空下浓缩并用EtOAc稀释。将溶液用饱和NaHCO3(水溶液)洗涤，用EtOAc(×2)对该NaHCO3(水溶液)进行反萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过从EtOAc/己烷中重结晶和随后使用50-70％的在己烷中的EtOAc的梯度进行母液的硅胶柱色谱分离的组合纯化，从而得到呈白色固体的化合物C(2.94g,9.4mmol,93.9％收率)。Rf(70％的在己烷中的EtOAc)＝0.32；1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ7.86(1H,s),7.52(1H,s),7.19(1H,s),6.68(2H,s),4.24(2H,d,J＝6.1Hz),2.12(3H,s),1.39(9H,s)；LC/MS(ESI+)m/z 314.1[M+H]+,337.1[M+Na]+,Rt＝2.53min.
步骤3：N-乙酰氧基-5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒二盐酸盐(D)。向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的100mL圆底烧瓶中添加化合物C(1.87g,5.97mmol,1.00当量)。将烧瓶密封，并在冰浴中冷却。添加氯化氢(4.0M于二噁烷中，29.2mL,117mmol,19.6当量)，并将反应混合物在0℃下搅拌，经16小时逐渐温热至RT。将反应混合物在真空下浓缩，并将粗产物在RT下在剧烈搅拌下悬浮于EtOAc中，持续5分钟。将悬浮液过滤，并将沉淀用另外的EtOAc洗涤，并在真空下干燥从而得到呈白色固体(双-HCl盐)的化合物D(1.70g,5.94mmol,99.5％收率)，其未经进一步纯化即使用。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.55(3H,br s),8.13(1H,s),7.55(1H,s),6.92(1H,br s),4.21(2H,s),2.13(3H,s)。LC/MS(ESI+)m/z 214.1[M+H]+,Rt＝0.26min.
步骤4：(2S,4S)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(F)。向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的10mL圆底烧瓶中添加化合物E(175mg,0.675mmol,1.00当量)和无水DMF(1.2mL)。将所得溶液置冰浴中在0℃下搅拌。将碳酸铯(286mg,0.877mmol,1.30当量)一次性添加，并将所得溶液在0℃下搅拌5分钟。添加苄基溴(0.10mL,0.877mmol,1.30当量)并将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，并在RT下搅拌3小时。将反应混合物用EtOAc稀释，并在硅藻土上过滤，用另外的EtOAc洗涤。将滤液在真空下浓缩到硅胶上。将粗混合物使用0-40％ EtOAc/己烷的梯度通过硅胶柱色谱进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物F(218mg,0.624mmol,92.4％收率)。LC/MS(ESI+)m/z 372.2[M+Na]+,Rt＝3.72min.
步骤5：(2S,4S)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(H)。向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的25mL圆底烧瓶中添加化合物F(132mg,0.378mmol,1.00当量)和无水二噁烷(0.6mL)。将所得溶液置冰浴中在0℃下搅拌。添加氯化氢(4.0M于二噁烷中，2.36mL,9.44mmol,25.0当量)，并将所得溶液在RT下搅拌3小时。将挥发物在真空下去除，从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(110mg,0.385mmol,101％收率)，其不经进一步纯化即使用。LC/MS(ESI+)m/z 250.2[M+H]+,Rt＝1.21min.
向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的25mL圆底烧瓶中添加化合物F(123mg,0.454mmol,1.20当量)、HATU(216mg,0.567mmol,1.50当量)和无水DMF(1.0mL)。将所得溶液置冰浴中在0℃下搅拌。逐滴添加DIPEA(79.0μL,0.454mmol,1.20当量)并将反应混合物在0℃下搅拌15分钟。将溶解于无水DMF(1.0mL)的(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(108mg,0.378mmol,1.00当量)添加到反应溶液中，随后逐滴添加DIPEA(0.25mL,1.44mmol,3.80当量)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时，用2M HCl(水溶液)(0.1mL)淬灭并用EtOAc稀释。将溶液依次用10％柠檬酸(水溶液饱和NaHCO3(水溶液)溶液和盐水(×3)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物使用0-100％的在己烷中的EtOAc的梯度通过硅胶柱色谱进行纯化从而得到呈淡黄色油状物的化合物H(171mg,0.34mmol,90.0％收率)。Rf(80％的在己烷中的EtOAc)＝0.29；LC/MS(ESI+)m/z 503.2[M+H]+,525.2[M+Na]+,Rt＝3.71min.
步骤6：(2S,4S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(I)。向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的25mL圆底烧瓶中添加化合物H(170mg,0.338mmol,1.00当量)和无水EtOH(3.3mL)。将所得溶液在RT下搅拌，并用N2脱气。添加10％ Pd/C(36mg)并将反应混合物再次用N2脱气。然后将反应混合物用H2吹扫并在RT、H2气氛下搅拌2小时。将反应混合物用N2脱气，用1:1CHCl3:EtOH溶液稀释，并在短硅藻土垫上过滤，用另外的CHCl3:EtOH冲洗。将滤液在真空下浓缩从而得到呈无色油状物的化合物(2S,4S)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(140mg,0.338mmol,定量)，其不经进一步纯化即使用。LC/MS(ESI+)m/z 413.1[M+H]+,Rt＝2.78min.
向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的25mL圆底烧瓶中添加化合物8.1(83.0mg,0.201mmol,1.00定量HOAt(27.0mg,0.201mmol,1.00定量)和无水DMF(2.0mL)。将所得溶液置冰-盐水浴中在-5℃下搅拌。添加EDC(46.3mg,0.241mmol,1.20当量)并将反应混合物在-5℃下搅拌30分钟。添加化合物D(60.5mg,0.211mmol,1.05当量)和NMM(44.0μL,0.402mmol,2.00当量)并将反应混合物在-5℃下搅拌，经16小时逐渐温热至RT。添加10％柠檬酸(水溶液)，并将反应混合物用EtOAc(×5)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过两轮硅胶色谱分离(第一轮使用3-10％的在CH2Cl2中的MeOH的梯度，第二轮使用5-10％的在EtOAc中的MeOH的梯度)进行纯化，从而得到呈白色泡沫状物的化合物I(83.0mg,0.137mmol,67.8％收率)。Rf(10％ MeOH于CH2Cl2中)＝0.42；HPLC(254nm)，纯度97.9％,Rt＝10.64min；LC/MS(ESI+)m/z 608.2[M+H]+,631.2[M+Na]+,Rt＝2.90min.
步骤7：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(化合物14)。向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的10mL圆底烧瓶中添加化合物I(22.0mg,0.036mmol,1.00当量)、乙酸(0.5mL)和乙酸酐(7.0μL,0.072mmol,2.00当量)。将所得溶液在RT下搅拌10分钟。添加10％ Pd/C(4.0mg)并将反应混合物用N2脱气。然后将反应混合物用H2吹扫并在RT、H2气氛下搅拌14小时。将反应混合物用N2脱气，用乙酸(0.5mL)稀释并用注射器式过滤器(0.45μm)过滤。将滤液在真空下浓缩从而得到呈琥珀色浆料的粗化合物14。将粗产物悬浮于EtOAc(5.0mL)中并在剧烈搅拌和超声下用氯化氢(4.0M于二噁烷中，1.0mL)处理。将悬浮液通过离心进行沉淀并小心地倾析。将沉淀物用另外的EtOAc(×2)洗涤，并将合并的上清液在真空下浓缩达50体积％以诱导沉淀。将沉淀通过离心/倾析进行分离并在真空下干燥从而得到化合物14(7.2mg,0.012mmol,34.2％收率)。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ8.21(1H,s),7.85(2H,d,J＝8.4Hz),7.40-7.43(3H,m),7.21(1H,t,J＝7.4Hz),7.07(2H,d,J＝8.0Hz),7.01(2H,d,J＝8.4Hz),4.58(2H,s),4.45(1H,t,J＝8.2Hz),4.09-4.25(2H,m),3.95(1H,t,J＝8.9Hz),3.40-3.47(3H,m),3.34(3H,s),2.65(1H,s),2.41-2.46(1H,m),1.76-1.81(1H,m)；HPLC(254nm)纯度95.0％,Rt＝8.84min；LC/MS(ESI+)m/z 550.2[M+H]+,572.2[M+Na]+,Rt＝2.14min.
方案122：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物15)
Figure BDA0004238079180005611
步骤1：(2S,4R)-2-(((4-((E)-N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(C)。在5mL小瓶中引入(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(A；40mg,0.137mmol,1当量)、(E)-N’-乙酰氧基-5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(B；0.039g,0.137mmol,1当量)、HOAT(0.028g,0.206mmol,1.5当量)和EDC·HCl(0.039g,0.206mmol,1.5当量)，将这些物质溶解于DMF(393.258μL,0.4M,9.831体积)。将反应物冷却至0℃，并逐滴添加4-甲基吗啉(0.069g,0.075mL,0.686mmol,5当量)。将反应物置于室温下搅拌1小时，对反应物的LC-MS分析显示起始物料完全转化。将混合物用乙酸乙酯萃取三次。将有机层聚集并用水和盐水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥并将溶剂在真空下蒸发，从而得到(2S,4R)-2-(((4-((E)-N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，其不经进一步纯化即使用。
步骤2：(2S,4R)-N-((4-((E)-N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-4-苯基-吡咯烷-2-甲酰胺二盐酸盐(D)。在25mL圆底烧瓶中引入(2S,4R)-2-(((4-((E)-N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(71mg,0.146mmol,1当量)，将其溶解于DCM(10mL,0.016M,141体积)。将在二噁烷中的HCl(4M)(0.73mmol,5当量)逐滴添加到搅拌的混合物中，并保持搅拌直至LC-MS分析显示起始物料完全消失。将HCl在室温、减压下蒸发，并然后将溶剂使用旋转蒸发器去除。得到呈白色固体的(2S,4R)-N-((4-((E)-N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺二盐酸盐，其不经进一步纯化即使用。
步骤3：(2S,4R)-N-((4-((E)-N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(F)。在5mL小瓶中引入(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(E；17.715mg,0.065mmol,1当量)、EDC·HCl(18.778mg,0.098mmol,1.5当量)、(2S,4R)-N-((4-((E)-N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺二盐酸盐(30mg,0.065mmol,1当量)和HOAT(0.013g,0.098mmol,1.5当量)，将这些物质溶解于DMF(0.5mL,0.131M,28.224体积)。将反应物冷却至0℃，并逐滴添加NMM(33.027mg,0.036mL,0.327mmol,5当量)。将反应物置于室温下搅拌，直至LC-MS分析显示起始物料完全转化。将混合物在减压下蒸发，重新溶解于DCM，并使用DCM/(DCM/MeOH 9:1溶液)作为洗脱剂通过快速色谱进行纯化。得到呈白色固体的(2S,4R)-N-((4-((E)-N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(F；25mg,0.039mmol，收率59.842％)。
步骤4：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物15)。在25mL圆底烧瓶中，将(2S,4R)-N-((4-((E)-N’-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(18mg,0.028mmol,1当量)溶解于乙酸(15mL,9.379e-4M)。将反应物用氮气吹扫，并将Pd/C(10％)(0.014mmol,0.5当量)添加到搅拌的混合物中。将氢气鼓泡到反应物中，并将反应物搅拌直至LC-MS分析显示起始物料完全转化。然后，将反应物用氮气吹扫，用10mL异丙醇稀释，并且在硅藻土垫上过滤。将粗混合物在乙酸乙酯中研磨，直至白色沉淀析出。将沉淀在烧结的玻璃过滤器上过滤，并最后重新溶解于异丙醇。将溶剂在真空下去除，得到呈灰白色固体的化合物15(15mg,0.023mmol，收率83％)。1H NMR(400MHz,CD3OD):δH 1H NMR(CH3OH-d4,400MHz):δH 8.54(2H,s),8.20(1H,s),7.85(3H,d,J＝8.5Hz),7.44-7.40(4H,m),7.34(5H,d,J＝4.3Hz),7.28-7.25(1H,m),7.21(1H,s),3.59-3.52(1H,m),4.29(1H,s),4.53(2H,t,J＝8.8Hz),7.03(5H,dd,J＝23.4,8.2Hz),4.60(3H,s),4.19(1H,s),3.67(1H,t,J＝10.4Hz),2.73-2.65(1H,m),2.06(1H,q,J＝11.4Hz)。纯度：93.5％,Rt＝8.91min.HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:582.3,Rt＝2.61min.
方案123：N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(化合物16)。
Figure BDA0004238079180005631
步骤1：7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1,7-二甲酸1-苄酯7-(叔丁基)酯(B)。向含有(7-(叔丁氧基羰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(A；0.15g,0.622mmol,1当量)和Cs2CO3(0.263g,0.808mmol,1.3当量)的小瓶中添加DMF(1.5mL)。将悬浮液冷却至0℃，之后添加苄基溴(0.096mL,0.808mmol,1.3当量)，并将所得不均匀混合物搅拌2小时。将反应物用EtOAc稀释，添加硅藻土，并将混合物在硅藻土上过滤。将残余物悬浮于硅胶上，并使用0-25％EtOAc/己烷进行纯化从而得到呈无色油状物的7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1,7-二甲酸1-苄酯7-叔丁酯(B；0.194g,0.585mmol，收率94.2％)，其结晶成无色固体。HPLC-MS(ESI):m/z[M+Na]+:354。Rt＝3.95min.
步骤2：7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸苄酯(D)。在0℃下向7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1,7-二甲酸1-苄酯7-叔丁酯(B；0.099g,0.3mmol,1当量)在二噁烷(0.298mL)中的溶液中添加4N在二噁烷中的HCl(1.5mL,6mmol,20当量)，并将所得混合物在RT下搅拌3小时。然后将挥发物在真空下去除，从而得到呈无色油状物的7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸苄酯盐酸盐(0.081g,0.303mmol，收率100.84％)。HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:232。Rt＝0.54min.
在0℃下向(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(C；0.065g,0.24mmol,1.2当量)和7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸苄酯盐酸盐(0.054g,0.2mmol,1当量)在DMF(0.35mL)中的溶液中添加HATU(0.114g,0.3mmol,1.5当量)，随后添加DIPEA(0.129g,0.174mL,1mmol,5当量)。将所得混合物在0℃下搅拌45分钟。通过添加水将反应物淬灭。将混合物溶入EtOAc中，将水层分离，并且用水再进行2次萃取以去除DMF。将合并的水层用Et2O进行反萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗物质悬浮于硅胶上，并使用0-100％ EtOAc/己烷进行纯化从而得到呈黄色油状物的7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸苄酯(D；0.073g,0.151mmol，收率75.3％)。HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:485。Rt＝3.95min.
步骤3.N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(F)。将7-((4-苯氧基苯甲酰基)-甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸苄酯(D；0.073g,0.151mmol,1当量)在乙醇(2.5mL)中的溶液用氩气脱气。然后添加Pd/C(0.016g,0.015mmol,0.1当量)，并将溶液再脱气一次。然后，添加H2球囊，从而直接在溶液中鼓泡30秒。将所得悬浮液在RT下搅拌1小时。将混合物用氮气脱气，用DCM稀释，添加硅藻土，并将混合物在硅藻土垫上过滤，用DCM冲洗，然后用EtOH冲洗。将挥发物在真空下去除，从而得到呈无色固体的7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(0.059g,0.15mmol，收率99.289％)，其按原样用于下一步骤中。HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:417。Rt＝3.09min.
向在冰/NaCl浴中冷却的7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(51.7mg,0.131mmol,1当量)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加EDCI盐酸盐(31.085mg,0.157mmol,1.2当量)，随后添加HOAT(18.021mg,0.131mmol,1当量)。将反应物搅拌30分钟。添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒二盐酸盐(E；37.51mg,0.131mmol,1当量)，随后逐滴添加4-甲基吗啉(39.775mg，0.043mL,0.393mmol,3当量)。将反应物搅拌20小时并让反应物温热至RT。然后将反应物浓缩，并在DCM和NaHCO3(饱和)溶液之间分配。将有机层分离，并将水层用DCM萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。添加DCM以产生浆料，对该浆料进行过滤。将固体(48mg)通过过滤收集。将滤液悬浮于硅胶上，并且在如下条件下在Redisep金柱(12g)上进行纯化：使用15％至70％的梯度；A＝乙酸乙酯/B＝含20％ MeOH的EA，其中t＝0时为15％ B。色谱分离为N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(F；0.06g,0.102mmol，收率77.9％)的组合收率提供了进一步的12mg。HPLC-MS(ESI):m/z[M+23]+:612.2。
步骤4.N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(化合物16)。将含有N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺(F；12mg,0.02mmol,1当量)的烧瓶抽空并放在氩气下，随后添加乙酸(1mL)。将氩气鼓泡到溶液中，持续10分钟。然后，添加Pd/C 10％(2.166mg,0.002mmol,0.1当量)，并将氩气鼓泡到溶液中，持续5分钟。将H2鼓泡到反应物中，持续5分钟，然后让该反应物在H2气氛下反应20小时。将反应混合物浓缩，添加MeOH，并将所得混合物通过45um特氟隆注射器式过滤器过滤并再次浓缩。添加MeOH(1mL)并将溶液冷却至0℃。添加4N在二噁烷中的HCl(25.438μL,0.102mmol,5当量)，并将反应物搅拌2小时，然后将反应物浓缩。然后，将反应物悬浮于EtOAc中并搅拌16小时。将悬浮液通过过滤收集，从而得到7mg粗产物，将该粗产物使用17/83MeOH/DCM通过制备型TLC进行进一步纯化从而得到呈米色固体的N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-甲酰胺盐酸盐(化合物16；3.2mg,0.0056mmol,27％)。纯度94.3％,Rt＝7.86min)。1H NMR(CH3OD,400MHz):1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.18(1H,s),7.84(2H,d,J＝8.5Hz),7.47(1H,s),7.42(2H,t,J＝7.8Hz),7.20(1H,t,J＝7.4Hz),7.01(2H,d,J＝8.5Hz),4.59(3H,s),4.19(2H,s),1.98-2.12(4H,m),1.80-1.85(2H,m),1.67-1.72(2H,m)。HPLC-MS(ESI):m/z[M+H]+:532.2,Rt＝2.39min.
方案124：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-(((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物24)
Figure BDA0004238079180005671
步骤1：(3R,4R,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-2-甲氧基-6-甲基四氢-2H-吡喃(B)。在0℃下向(3R,4R,5R,6S)-2-甲氧基-6-甲基四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇(A；3g,16.8mmol,1当量)在DMF中的溶液(168mL,0.1M,56.1体积)中添加60％在矿物油中的氢化钠(0.673g,52.19mmol,3.1当量)。将反应混合物搅拌60分钟。逐滴添加苄基溴(6mL,50.5mmol,3当量)。让反应混合物温热至室温并将反应混合物搅拌24小时。将过量的氢化钠用MeOH淬灭。将残余物溶解于乙酸乙酯和水。将有机层分离，用水洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，用Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将粗混合物通过正相色谱进行纯化。ISCO,(80g)。溶剂：EtOAc/己烷。梯度：0％ EtOAc(2CV 0％至10％ EtOAc(1CV 10％ EtOAc(8CV)，得到(3R,4R,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-2-甲氧基-6-甲基四氢-2H-吡喃(B；3.8g,8.472mmol，收率50.3％)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+Na]+:471.1,RT＝4.516min.
步骤2：(3R,4R,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-醇(C)。将(3R,4R,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-2-甲氧基-6-甲基四氢-2H-吡喃(B；0.82g,1.828mmol,1当量)在冰乙酸(5.5mL)中的溶液在RT下搅拌30分钟，之后添加4N在二噁烷中的HCl(0.5mL)。将所得混合物在80-85℃下搅拌30分钟。将反应混合物倒入100mL冰和水中，并将混合物用CH2Cl2(3×100mL)萃取。将合并的萃取液连续用饱和NaHCO3水溶液和饱和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱ISCO(40g)进行纯化。溶剂：EtOAc/己烷，梯度：50％ EtOAc(15min)，70％ EtOAc(9min)，得到呈无色油状物的(3R,4R,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-醇(3；0.24g,0.552mmol，收率30.2％)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+Na]+:475.2,Rt＝4.117min.
步骤3：((2S,3S,4S,5S)-2,3,4-三(苄氧基)-5-羟基己基)甘氨酸叔丁酯(D)。向(3R,4R,5S,6S)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-醇(C；720mg,1.657mmol,1当量)和甘氨酸叔丁酯(434.702mg,3.314mmol,2当量)在无水甲醇(16.5mL)中的溶液中添加冰乙酸(5.5mL)，随后添加分子筛(
Figure BDA0004238079180005681
200mg)。将混合物在室温下搅拌10分钟。将NaBH3CN(151.189mg,2.485mmol,1.5当量)一次性添加并将混合物在RT下搅拌3天。将反应混合物在真空下浓缩至最小体积。将残余物溶解于CH2Cl2并用1N NaOH中和。将有机相用Na2SO4干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱：ISCO,(40g)，溶剂：EtOAc/己烷，梯度：40％ EtOAc(9min)，然后50％ EtOAc(15min)进行纯化，得到呈透明浆料的((2S,3S,4S,5S)-2,3,4-三(苄氧基)-5-羟基己基)甘氨酸叔丁酯(D；770mg,1.401mmol，收率84.5％)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+H]+:550.3,Rt＝3.054min.
步骤4：((2S,3S,4S,5S)-2,3,4-三(苄氧基)-5-羟基己基)甘氨酸盐酸盐(E)。将((2S,3S,4S,5S)-2,3,4-三(苄氧基)-5-羟基己基)甘氨酸叔丁酯(D；770mg,1.4mmol,1当量)在含4N HCl的二噁烷中的溶液(4.6mL,0.3M,6.0体积)在室温下搅拌过夜。将溶剂在真空下去除，得到呈白色泡沫状物的((2S,3S,4S,5S)-2,3,4-三(苄氧基)-5-羟基己基)甘氨酸盐酸盐(E；730mg,1.377mmol，收率98.3％)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+H]+:494.2,Rt＝3.116min.
步骤5：N-(叔丁氧基羰基)-N-((2S,3S,4S,5S)-2,3,4-三(苄氧基)-5-羟基己基)-甘氨酸(F)。向25mL圆底烧瓶中添加((2S,3S,4S,5S)-2,3,4-三(苄氧基)-5-羟基己基)甘氨酸盐酸盐(D；148mg,0.279mmol,1当量)，将其溶解于二噁烷(1mL,0.279M,6.75体积)。将溶液放入0℃下的冰浴内并通过磁力进行搅拌。向此混合物中添加二碳酸二叔丁酯(79.22mg,0.363mmol,1.3当量)，随后添加碳酸钠(118.375mg,1.117mmol,4当量)在1mL水中的水溶液。将混合物温热至室温并搅拌6小时。完成后，将挥发物在减压下去除，并将剩余物质在乙酸乙酯(15mL)中稀释。将有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。将萃取液在真空下浓缩，并使用己烷/EtOAc/1％甲酸(从0％至100％EtOAc)通过快速色谱进行纯化。将含有产物的级分合并，并在真空下浓缩从而得到呈白色固体的N-(叔丁氧基羰基)-N-((2S,3S,4S,5S)-2,3,4-三(苄氧基)-5-羟基己基)甘氨酸(F；110mg,0.185mmol，收率66.3％)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+Na]+:616.3。
步骤6：N-(叔丁氧基羰基)-N-((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酸(G)。向25mL圆底烧瓶中添加N-(叔丁氧基羰基)-N-((2S,3S,4S,5S)-2,3,4-三(苄氧基)-5-羟基己基)甘氨酸(F；135mg,0.227mmol,1当量)，将其溶解于乙醇(1.5mL,0.152M,11.1体积)。该烧瓶配备有橡胶隔片，并将顶部用氮气吹扫。然后将Pd/C 10％w(60.495mg,0.057mmol,0.25当量)添加到混合物中。然后，将顶空用H2气体吹扫2分钟。然后将氢气球囊附接到该系统。将混合物在室温下搅拌18小时。最后，将混合物用3mL乙醇稀释，并且使该混合物通过注射器式过滤器。将残余物在真空下浓缩从而得到呈白色固体的N-(叔丁氧基羰基)-N-((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酸(G；65mg,0.201mmol，收率88％)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+Na]+:346.1。
步骤7：(1S,3S,5S)-3-(((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(J)。向25mL圆底烧瓶中添加(1S,3S,5S)-2-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(I；200mg,0.829mmol,1当量)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(315.168mg,0.829mmol,1当量)。将混合物溶解于N,N-二甲基乙酰胺(4mL,0.207M,20体积)，并且在冰浴中在0℃下通过磁力搅拌20分钟。向此溶液中添加N-乙酰氧基-5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒二盐酸盐(284.644mg,0.995mmol,1.2当量)，随后逐滴添加N-乙基二异丙胺(535.6mg,0.724mL,4.14mmol,5当量)。将混合物在0℃下搅拌2小时。完成后，将粗混合物用EtOAc(25mL)稀释，并将有机相用水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层在硫酸钠上干燥，并将溶剂在减压下蒸发。将残余物使用己烷/EtOAc(0％至100％)的梯度通过硅胶快速色谱进行纯化。将含有产物的级分合并，并在真空下浓缩，得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-3-(((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(J；348.6mg,0.799mmol，收率96.342％)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+Na]+:459.1。
步骤8：(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺盐酸盐(K)。向25mL RBF中投入(1S,3S,5S)-3-[({4-[N-(乙酰基氧基)甲脒基]噻吩-2-基}甲基)氨基甲酰基]-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(175mg,0.401mmol,1当量)。将固体部分地溶解于二噁烷(0.5mL)，并放入冰浴内。向该溶液中添加4M在二噁烷中的HCl(219.246mg,1.503mL,6.013mmol,15当量)。将混合物在0℃下搅拌2小时，之后形成粘稠的固体。然后将挥发物在减压下去除。将此程序再重复一次，以确保完全去保护。完成后，将混合物在真空下浓缩从而得到呈白色粉末的(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺盐酸盐(145mg,0.389mmol，收率97.561％)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+H]+:337.1。
步骤9：(2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)氨基甲酸叔丁酯(化合物25)。向25mL RBF中投入N-(叔丁氧基羰基)-N-((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酸(G；107mg,0.331mmol,1当量)和1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(125.825mg,0.331mmol,1当量)。将混合物溶解于N,N-二甲基-乙酰胺(DMAc)(2.5mL,0.132M,23.364体积)并且放入0℃下的冰浴内。将溶液搅拌5分钟，并添加(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]-己烷-3-甲酰胺盐酸盐(K；155.854mg,0.463mmol,1.4当量)。将混合物再搅拌5分钟，并然后逐滴添加N-乙基二异丙胺(213.84mg,0.289mL,1.655mmol,5当量)。将反应物在0℃下搅拌2小时。完成后，将所得粗物质在真空下浓缩，并将残余物通过SFC-HPLC进行纯化。得到呈淡黄色固体的(2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环-[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)氨基甲酸叔丁酯(化合物25；28mg,0.044mmol,13.185％收率)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+H]+:642.4。
步骤10：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-(((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺盐酸盐(化合物24)。向25mL圆底烧瓶中添加(2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)((2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基)氨基甲酸叔丁酯(20mg,0.031mmol,1当量)并且将其溶解于乙醇(1mL,0.031M,50体积)。该烧瓶配备有橡胶隔片，并将顶部用氮气吹扫。然后将碳负载Pd(6.633mg,0.006mmol,0.2当量)添加到混合物中。然后将顶空用氢气吹扫2分钟。然后将氢气球囊附接到该系统。将混合物在室温下搅拌2小时。最后，将混合物用3mL乙醇稀释，并且使该混合物通过注射器式过滤器。将残余物在真空下浓缩从而得到无色油状物，其不经进一步纯化即使用。
向含有来自上一反应的产物(18mg,0.031mmol,1当量)的25mL圆底烧瓶中添加乙醇(0.2mL,0.154M,11.1体积)。将溶液放入冰浴内并冷却至0℃。向该溶液中添加HCl(0.022g,0.154mL,0.617mmol,20当量；4M于二噁烷中)。将溶液在0℃下搅拌并且让溶液经6小时温热至室温。将反应物在真空下浓缩并将所得油状物用MTBE(1mL)研磨。将挥发物在真空下去除，从而得到呈淡黄色晶体的(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-(2-{[(2S,3S,4S,5S)-2,3,4,5-四羟基己基]氨基}乙酰基)-2-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-甲酰胺盐酸盐(化合物24；13.6mg,0.026mmol，收率85％)。HPLC-MS(ESI)(m/z)[M+H]+:484.2。
方案125：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-N-羟基-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物127)的合成
Figure BDA0004238079180005721
步骤1：((叔丁氧基羰基)氧基)((4-氰基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2)
向5-(溴甲基)噻吩-3-甲腈(300mg,1.49mmol)和((叔丁氧基羰基)氧基)氨基甲酸叔丁酯(384mg,1.64mmol)在CH2Cl2(30mL)中的混合物中添加1M NaOH水溶液(13.5mL)和TBAB(30mg,0.09mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用CH2Cl2稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝94:6)进行纯化从而得到呈无色油状物的((叔丁氧基羰基)氧基)((4-氰基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(460mg，收率87.1％)。LC/MS(ESI)m/z:355(M+H)+。
步骤2：((叔丁氧基羰基)氧基)((4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(3)
向((叔丁氧基羰基)氧基)((4-氰基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(460mg,1.30mmol)和NH2OH.HCl(226mg,3.25mmol)在EtOH(10mL)中的混合物中添加DIPEA(0.65mL,3.90mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝96:4)进行纯化从而得到呈无色油状物的((叔丁氧基羰基)氧基)((4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，收率79.7％)。LC/MS(ESI)m/z:388(M+H)+。
步骤3：((叔丁氧基羰基)氧基)((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(4)
向((叔丁氧基羰基)氧基)((4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(400mg,1.03mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将混合物在N2气氛下脱气3次，并在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的化合物4(360mg，收率94.5％)。将粗产物未经进一步纯化直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：372(M+H)+。
步骤4：5-((羟基氨基)甲基)噻吩-3-甲脒(5)
在25℃下向((叔丁氧基羰基)氧基)((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(360mg,0.97mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的5-((羟基氨基)甲基)噻吩-3-甲脒(150mg，收率90.4％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:172(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-N-羟基-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物127)
在0℃、N2气氛下向5-((羟基氨基)甲基)噻吩-3-甲脒(130mg,0.75mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(100mg,0.25mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.25mL,1.50mmol)和T3P(484mg,0.75mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(5×10mL,V/V＝3/1)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物127(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-N-羟基-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(10mg，收率7.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,2H),8.30(dd,J＝11.8,1.6Hz,1H),7.90–7.84(m,2H),7.53(d,J＝18.3Hz,1H),7.45–7.39(m,2H),7.21(dd,J＝10.6,4.2Hz,1H),7.06(dd,J＝8.6,1.0Hz,2H),7.04–6.98(m,2H),5.36(dd,J＝11.6,3.5Hz,1H),4.91(d,J＝5.5Hz,2H),4.56(d,J＝16.8Hz,1H),4.23(d,J＝16.7Hz,1H),3.41(dd,J＝5.9,2.4Hz,1H),2.48(t,J＝13.3Hz,1H),2.01(dd,J＝13.6,3.6Hz,1H),1.29(s,3H),1.25(d,J＝4.4Hz,1H),0.77(t,J＝5.2Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:548(M+H)+。
方案126：(2S,3S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物128)的合成
Figure BDA0004238079180005751
步骤1：(2S,3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟-3-羟基吡咯烷-2-甲酸(2)
向(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸二苄酯(200mg,0.54mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(40mg,10重量％)和Boc2O(175mg,0.81mmol)。将混合物在N2气氛下脱气三次，并且在室温、H2球囊下搅拌1.5小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟-3-羟基吡咯烷-2-甲酸(130mg，收率97.7％)。将粗产物直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：250(M+H)+。
步骤2：(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(3)
在0℃、N2气氛下向(2S,3S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氟-3-羟基吡咯烷-2-甲酸(130.0mg,0.52mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中添加BnBr(0.09mL,0.78mmol)和K2CO3(216.0mg,1.56mol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用EtOAc萃取两次，并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(160mg，收率90.4％)。LC/MS(ESI)m/z:340(M+H)+。
步骤3：(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基吡咯烷-2-甲酸苄酯(4)
在25℃下向(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(160mg,0.47mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到呈棕色油状物的(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基吡咯烷-2-甲酸苄酯(110mg，收率98.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:240(M+H)+。
步骤4：(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(6)
在0℃、N2气氛下向(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基吡咯烷-2-甲酸苄酯(127mg,0.53mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(138mg,0.58mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.52mL,3.18mmol)和T3P(1.0g,1.59mmol)，并将混合物在25℃搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(220mg，收率90.5％)。LC/MS(ESI)m/z:459(M+H)+。
步骤5：(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(7)
向(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(120mg,0.26mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(24mg,10重量％)。将混合物在N2气氛下脱气十次并在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(95mg，收率98.9％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：369(M+H)+。
步骤6：((5-(((2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(9)
在0℃、N2气氛下向(2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(40mg,0.11mmol)和((5-(氨基甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(55mg,0.22mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.11mL,0.66mmol)和T3P(207mg,0.33mmol)，并将混合物在25℃搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的((5-(((2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，收率30.3％)。LC/MS(ESI)m/z:606(M+H)+。
步骤7：(2S,3S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物128)
在0℃下向((5-(((2S,3S,4S)-4-氟-3-羟基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg,0.03mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1mL)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物128(2.0mg，收率11.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.47(d,J＝27.6Hz,1H),7.28–7.20(m,2H),6.90(dd,J＝7.6,5.3Hz,3H),5.01(d,J＝51.3Hz,1H),4.71–4.61(m,1H),4.56(dd,J＝10.0,7.0Hz,3H),4.07–3.88(m,6H),2.47(dd,J＝9.5,4.9Hz,2H),2.07(dd,J＝13.7,6.5Hz,2H)。LC/MS(ESI)m/z:506(M+H)+。
方案127：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-((二甲基氨基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物129)的合成
Figure BDA0004238079180005781
步骤1：(2S,4R)-4-氟-4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(2)
在0℃下向(2S,4R)-4-氟-4-(羟基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(100mg,0.28mmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加TEA(172mg,1.70mmol)，随后添加MsCl(97mg,0.85mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌2小时。将混合物用冰-水淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-氟-4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(120mg,98.3％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：433(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(叠氮基甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-叔丁酯(3)
向(2S,4R)-4-氟-4-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(120mg,0.28mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加NaN3(54mg,0.83mmol)，并将混合物在65℃下搅拌5天。将混合物用冰-水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝30:1至15:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(叠氮基甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-叔丁酯(60mg，收率57.0％)。LC/MS(ESI)m/z:379(M+H)+。
步骤3：(2S,4S)-4-(氨基甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-叔丁酯(4)
向(2S,4R)-4-(叠氮基甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-叔丁酯(60mg,0.16mmol)在THF(1.6mL)和H2O(1.6mL)中的溶液中添加PPh3(83mg,0.32mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用0.5M HCl水溶液酸化至pH5，并用乙酸乙酯洗涤两次。将水层用NaHCO3水溶液碱化至pH8，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的(2S,4S)-4-(氨基甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-叔丁酯(55mg，收率98.4％)。LC/MS(ESI)m/z:353(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-叔丁酯(5)
在0℃下向(2S,4S)-4-(氨基甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-叔丁酯(55mg,0.16mmol)在MeOH(2mL)中的混合物中添加NaBH3CN(20mg,0.31mmol)和甲醛(0.04mL,0.53mmol)。将反应物在25℃下搅拌2小时。完成反应后，将反应混合物用冰水淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝60:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(56mg，收率94.3％)。LC/MS(ESI)m/z:381(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟吡咯烷-2-甲酸苄酯(6)
将(2S,4S)-4-((二甲基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(56mg,0.15mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟吡咯烷-2-甲酸苄酯(40mg，收率96.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:281(M+H)+。
步骤6：(2S,4S)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸苄酯(7)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟吡咯烷-2-甲酸苄酯(40mg,0.14mmol)和(4-苯氧基丁酰胺基)乙酸(41mg,0.17mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.15mL,0.86mmol)和T3P(272mg,0.43mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝40:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4S)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸苄酯(45mg，收率63.1％)。LC/MS(ESI)(m/z)：500(M+H)+。
步骤7：(2S,4S)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸苄酯(8)
在0℃下向(2S,4S)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸苄酯(45mg,0.09mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(15mg,10重量％)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤，并将滤液在减压下浓缩从而得到呈浅黄色油状物的(2S,4S)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸苄酯(37mg,82.2％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：410(M+H)+。
步骤8：N-[5-({[(2S,4S)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-基]甲酰胺基}甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酰基]氨基甲酸叔丁酯(9)
在0℃、N2气氛下向(2S,4S)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸苄酯(35mg,0.085mmol)和N-[5-(氨基甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酰基]氨基甲酸叔丁酯(33mg,0.13mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.06mL,0.86mmol)和HATU(33mg,0.085mmol)，并将混合物在25℃搅拌2小时。将混合物用水洗涤并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化从而得到呈白色固体的N-[5-({[(2S,4S)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-基]甲酰胺基}甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酰基]氨基甲酸叔丁酯(30mg，收率54.3％)。LC/MS(ESI)(m/z)：647(M+H)+。
步骤9：(2S,4S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(化合物129)
将N-[5-({[(2S,4S)-4-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-基]甲酰胺基}甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酰基]氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.046mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在室温下搅拌5小时。将反应混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物129(1.5mg，收率5.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.41(s,2H),8.25–8.21(m,1H),7.48(d,J＝18.4Hz,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,2H),6.92–6.86(m,3H),4.62–4.51(m,3H),4.12–3.95(m,5H),3.84–3.71(m,1H),2.89–2.81(m,2H),2.64–2.54(m,1H),2.49–2.45(m,2H),2.40(s,6H),2.18–2.02(m,3H)。LC/MS(ESI)m/z:547(M+H)+。
方案128：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物131)的合成
Figure BDA0004238079180005821
步骤1：(2S,4R)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(2)
在0℃下向(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(1g,4.08mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加PPh3(1.6g,6.12mmol)。在N2气氛下添加对甲酚(661mg,6.12mmol)，随后添加DIAD(1.2g,6.12mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(880mg,64.4％收率)。LC/MS(ESI)m/z:336(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(3)
在N2气氛下向(2S,4R)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(880mg,2.62mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(610mg，收率98.8％)。LC/MS(ESI)m/z:236(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(4)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(610mg,2.59mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(615mg,2.59mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIPEA(2.0g,15.56mmol)和T3P(5.0g,7.78mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(380mg，收率32.2％)。LC/MS(ESI)m/z:455(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸(5)
在N2气氛下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(380mg,0.84mmol)在THF/MeOH/H2O(3mL/2mL/1mL)中的溶液中添加LiOH(35mg,0.84mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用1NHCl水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸(360mg，收率97.8％)。LC/MS(ESI)m/z:441(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物131)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(对-甲苯基氧基)吡咯烷-2-甲酸(50mg,0.11mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(73mg,0.57mmol)和PyBOP(59mg,0.11mmol)。在室温下搅拌15分钟后，在N2气氛下将(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(19mg,0.11mmol)添加到上面的混合物中，并将所得混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物131(12mg，收率17.9％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(t,J＝2.5Hz,1H),7.55(d,J＝14.0Hz,1H),7.23(dd,J＝11.2,4.8Hz,2H),7.10(d,J＝8.5Hz,2H),6.90–6.87(m,3H),6.82(dd,J＝8.5,2.0Hz,2H),5.35–5.23(m,1H),5.02(d,J＝18.7Hz,1H),4.58(dd,J＝16.7,8.5Hz,1H),4.00(dd,J＝13.3,7.1Hz,3H),3.93–3.84(m,2H),3.16(dd,J＝6.6,2.9Hz,1H),2.54–2.43(m,3H),2.26(d,J＝3.4Hz,3H),2.19(ddd,J＝13.4,8.8,4.6Hz,1H),2.09–2.04(m,2H),1.60(dd,J＝23.4,7.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:592(M+H)+。
方案129：(S)-N-((R)-1-(5-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物133)。
Figure BDA0004238079180005851
步骤1：(R,E)-N-(1-(5-氰基噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在25℃、N2气氛下向(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(898mg,7.41mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加5-乙酰基噻吩-2-甲腈(933mg,6.17mmol)在THF(10mL)中的混合物和Ti(OEt)4(4.91g,17.3mmol)。将混合物在70℃下搅拌16小时。将混合物倒入冰冷的盐水中并过滤。将滤饼用乙酸乙酯洗涤两次。将滤液用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(R,E)-N-(1-(5-氰基噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(760mg,48.7％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：255(M+H)+。
步骤2：(R)-N-((R)-1-(5-氰基噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在-20℃、N2气氛下向(R,E)-N-(1-(5-氰基噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(400mg,1.57mmol)在THF(4mL)中的溶液中分批添加NaBH4(90mg,2.36mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用0℃下的饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化，并通过SFC进行进一步纯化从而得到呈无色油状物的(R)-N-((R)-1-(5-氰基噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(260mg,64.7％收率)。LC/MS(ESI)m/z:257(M+H)+。
步骤3：5-((R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-N-羟基噻吩-2-甲脒
向(R)-N-((R)-1-(5-氰基噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(220mg,1.16mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中添加NH2OH·HCl(120mg,1.74mmol)和DIPEA(449mg,3.48mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的5-((R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-N-羟基噻吩-2-甲脒(170mg,50.7％收率)。LC/MS(ESI)m/z:290(M+H)+。
步骤4：5-((R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-2-甲脒
在N2气氛下向5-((R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-N-羟基噻吩-2-甲脒(170mg,0.58mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和乙酸(0.1mL)。将混合物在30℃、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的5-((R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-2-甲脒(80mg,50.6％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：274(M+H)+。
步骤5：(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-2-甲脒
将5-((R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-2-甲脒(80mg,0.29mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与二氯甲烷共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-2-甲脒(45mg,91.8％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:170(M+H)+。
步骤6：(S)-N-((R)-1-(5-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物133)
在0℃、N2气氛下向(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(35mg,0.09mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-2-甲脒(26mg,0.13mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(23mg,0.18mmol)、PyBop(65mg,0.13mmol)和6-氯-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(21mg,0.13mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(3×10mL,V/V＝3/1)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物133(4.6mg，9.4％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.79(d,J＝4.0Hz,1H),7.26-7.21(m,3H),6.89(dd,J＝6.1,3.5Hz,3H),5.29(q,J＝7.0Hz,1H),4.57-4.48(m,1H),3.99(ddd,J＝7.5,6.5,4.3Hz,8H),3.70(d,J＝4.9Hz,2H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.40(dd,J＝13.4,9.0Hz,1H),2.18(dd,J＝13.3,6.7Hz,1H),2.11-2.05(m,2H),1.60(t,J＝13.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:544(M+H)+。
方案130：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-(2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物134)的合成
Figure BDA0004238079180005871
步骤1：N-(2-羟基乙基)-4-苯氧基丁酰胺
在0℃下向4-苯氧基丁酸(500mg,2.78mmol)和2-氨基乙烷-1-醇(61mg,3.33mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(1.79g,13.88mmol)和HATU(1.58g,4.16mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的N-(2-羟基乙基)-4-苯氧基丁酰胺(350mg,56.3％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：224(M+H)+。
步骤2：N-(2-氧代乙基)-4-苯氧基丁酰胺
在0℃下向N-(2-羟基乙基)-4-苯氧基丁酰胺(50mg,0.23mmol)在DCM中的混合物中添加NaHCO3(38mg,0.49mmol)和戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(195mg,0.46mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用1N Na2S2O3水溶液淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的N-(2-氧代乙基)-4-苯氧基丁酰胺(20mg,40％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：222(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-(2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物134)
将N-(2-氧代乙基)-4-苯氧基丁酰胺(13mg,0.06mmol)、(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(17mg,0.06mmol)和2滴乙酸在MeOH(1mL)中的混合物在0℃下搅拌30分钟，并添加NaBH3CN(12mg,0.18mmol)。将所得混合物在30℃下搅拌4小时。将混合物用水淬灭并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈灰白色固体的(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-(2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(1.0mg,3.5％收率)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.25(d,J＝1.6Hz,1H),7.44(s,1H),7.23(dd,J＝8.7,7.4Hz,2H),6.92-6.86(m,3H),4.82-4.80(m,1H),4.59(s,2H),3.99(t,J＝6.2Hz,2H),3.64-3.57(m,1H),3.46(ddd,J＝9.2,4.6,1.1Hz,2H),3.33(s,2H),2.42(t,J＝7.5Hz,2H),2.37-2.28(m,1H),2.07-2.01(m,3H),1.60(s,1H),1.30(s,3H),0.86-0.75(m,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：484(M+H)+。
方案131：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(吗啉代甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物135)
Figure BDA0004238079180005891
步骤1：(1S,3S,5R)-5-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(2)
在0℃下向(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(300mg,1.05mmol)在DCM(5.0mL)中的溶液中添加TEA(1.44mL,10.5mmol)和MsCl(0.42mL,5.25mmol)，并将混合物在0℃下搅拌1.5小时。向混合物中添加水并且将混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5R)-5-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(254mg,66.3％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:364(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(3)
向(1S,3S,5R)-5-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(254mg,0.70mmol)和吗啉(0.12mL,1.40mmol)在ACN(5mL)中的混合物中添加TBAI(129mg,0.35mmol)，并将混合物在50℃下搅拌16小时。将混合物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈棕色油状物的(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(60mg,24.2％收率)。LC/MS(ESI)m/z:355(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯盐酸盐(4)
将(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(60mg,0.17mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的溶液在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(50mg,100％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:255(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(6)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(50mg,0.21mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(50mg,0.21mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.20mL,1.26mmol)和T3P(396mg,0.63mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(30mg,30％收率)。LC/MS(ESI)m/z:474(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(7)
在0℃下向(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(30mg,0.06mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化锂(8mg,0.09mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时。将水层用1N HCl水溶液酸化至PH＝3，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4,过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(25mg,89.3％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：446(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-(吗啉代甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物135)
向(1S,3S,5S)-5-(吗啉代甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(30mg,0.07mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(21mg,0.13mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加PyBOP(52mg,0.11mmol)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过TLC(DCM:MeOH＝10:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物135(2.0mg，收率5.1％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.87-7.82(m,2H),7.50(s,1H),7.45-7.40(m,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.08-7.04(m,2H),7.03-6.99(m,2H),5.23(q,J＝6.6Hz,1H),4.41(d,J＝16.4Hz,1H),4.26(d,J＝16.5Hz,1H),3.59(dd,J＝6.8,3.3Hz,2H),3.53(t,J＝5.6Hz,2H),3.46(d,J＝10.5Hz,1H),3.37(d,J＝4.3Hz,2H),2.69(dd,J＝15.0,9.7Hz,1H),2.11(dd,J＝13.4,3.7Hz,1H),1.95(d,J＝2.6Hz,3H),1.91(s,1H),1.58(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(dd,J＝5.8,2.8Hz,1H),0.98(t,J＝5.8Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:583(M+H)+。
方案132：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物136)的合成
Figure BDA0004238079180005921
步骤1：11,11,12,12-四甲基-2,5,10-三氧杂-11-硅杂十三烷
在0℃下向(2S,4S)-2-(4-溴-2-羟基苯基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯(2g,4.92mmol)和2-甲氧基乙醇(58mg,7.62mmol)在DMF(6mL)中的混合物中分批添加NaH(760mg,19mmol,60％的在矿物油中的分散体)，并将混合物在0℃下搅拌半小时。将叔丁基(4-碘丁氧基)二甲基甲硅烷(2.0g,6.35mmol)添加到混合物中，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用0℃下的饱和NH4Cl溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩至干从而得到呈无色油状物的11,11,12,12-四甲基-2,5,10-三氧杂-11-硅杂十三烷(0.5g,60.1％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤2：4-(2-甲氧基乙氧基)丁烷-1-醇
将11,11,12,12-四甲基-2,5,10-三氧杂-11-硅杂十三烷(1g,3.81mmol)在HCl/1,4-二噁烷(15mL,4M)中的溶液在室温下搅拌半小时。将反应混合物在真空下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的4-(2-甲氧基乙氧基)丁烷-1-醇(0.5g,88.5％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤3：4-(2-甲氧基乙氧基)丁酸
在0℃下向4-(2-甲氧基乙氧基)丁烷-1-醇(0.5g,3.37mmol)在丙酮(20mL)中的溶液中逐滴添加CrO3(2.7g,27mmol)在水(7mL)和H2SO4(2.3mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将反应物用异丙醇(10mL)淬灭，用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的4-(2-甲氧基乙氧基)丁酸(500mg,91％收率)。LC/MS(ESI)m/z:161(M-H)-。
步骤4：(4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰基)甘氨酸苄酯
向4-(2-甲氧基乙氧基)丁酸(400mg,2.46mmol 2-氨基乙酸苄酯(428mg,2.59mmol)和HATU(1.4g,3.69mmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加DIEA(954mg,7.40mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(PE:EtOAc＝3:1)进行进一步纯化从而得到呈黄色油状物的2-[4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰胺基]乙酸苄酯(0.5g,65％收率)。
步骤5：(4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰基)甘氨酸
在25℃下向2-[4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰胺基]乙酸苄酯(90mg,0.29mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)。将混合物在N2气氛下脱气三次，并在20℃、H2球囊下搅拌1小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的[4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰胺基]乙酸(65mg,81％收率)。LC/MS(ESI)m/z:220(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-2-((4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯
在0℃下向[4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰胺基]乙酸(60mg,0.27mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(51mg,0.30mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIEA(212mg,1.64mmol)，随后添加T3P(522mg,0.82mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-2-{2-[4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰胺基]乙酰基}-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(0.1g,98.3％收率)。LC/MS(ESI)m/z:371(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-2-((4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸
将(1S,3S,5S)-2-{2-[4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰胺基]乙酰基}-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(100mg,0.27mmol)和LiOH·H2O(34mg,0.81mmol)在MeOH(2mL)和水(1mL)中的混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用0.5M HCl酸化至pH～3，并在真空下浓缩至干从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-2-{2-[4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰胺基]乙酰基}-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(100mg,定量)。
步骤8：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物136)
在0℃下向(1S,3S,5S)-2-{2-[4-(2-甲氧基乙氧基)丁酰胺基]乙酰基}-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(100mg,0.29mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(45mg,0.29mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIEA(113mg,0.87mmol)，随后添加PyBOP(243mg,0.46mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将所得混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物136(0.5mg，收率0.35％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.42(s,1H),5.18(s,1H),4.79(dd,J＝11.5,3.4Hz,4H),4.53(d,J＝12.5Hz,2H),4.15(q,J＝16.7Hz,2H),3.58-3.53(m,4H),3.49(d,J＝6.2Hz,2H),3.36(s,3H),2.36(dd,J＝16.1,8.9Hz,3H),2.15(dd,J＝13.4,3.4Hz,1H),1.90-1.82(m,2H),1.13(dd,J＝5.8,2.5Hz,1H),0.81(t,J＝5.1Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:480(M+H)+。
方案133：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物138)的合成
Figure BDA0004238079180005961
步骤1：(2S,4R)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2)
向(2S,4R)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1g,2.20mmol)在2-碘丙烷(6mL)中的溶液中添加氧化银(763mg,3.29mmol)。将混合物在N2气氛下加热至至多60℃，并在60℃下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的标题(2S,4R)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(270mg,24.7％收率)。LC/MS(ESI)m/z:498(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3)
在N2气氛下向(2S,4R)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(270mg,0.54mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加TBAF(425mg,1.63mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的标题(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(110mg，收率78.2％)。LC/MS(ESI)m/z:260(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸(4)
在N2气氛下向(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(110mg,0.42mmol)在CCl4:MeCN:H2O＝1:1:1.5(3.5mL)中的溶液中添加NaIO4(363mg,1.70mmol)。在室温下搅拌30分钟后，将RuCl3(2mg,0.008mmol)添加到上面的混合物中，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的标题(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸(80mg，收率69.0％)。LC/MS(ESI)m/z:274(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(5)
在N2气氛下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸(80mg,0.29mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加Cs2CO3(105mg,0.32mmol)和苄基溴(50mg,0.29mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的标题(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(70mg,0.19mmol，收率65.8％)。LC/MS(ESI)m/z:364(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸苄酯(6)
在N2气氛下向(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(70mg,0.19mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的标题(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸苄酯(50mg，收率98.6％)。LC/MS(ESI)m/z:264(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(7)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸苄酯(50mg,0.19mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(52mg,0.19mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(147mg,1.14mmol)和T3P(362mg,0.57mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的标题(2S,4R)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(80mg，收率81.6％)。LC/MS(ESI)m/z:517(M+H)。
步骤7：(2S,4R)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(8)
在N2气氛下向(2S,4R)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(80mg,0.16mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的标题(2S,4R)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(50mg，收率75.7％)。LC/MS(ESI)m/z:427(M+H)。
步骤8：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物138)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(30mg,0.07mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(11mg,0.07mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(55mg,0.42mmol)和T3P(134mg,0.21mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物138(1.6mg，收率4.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(dd,J＝17.4,1.5Hz,1H),7.84(d,J＝8.8Hz,2H),7.52–7.38(m,3H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.03(ddd,J＝8.8,7.7,1.5Hz,4H),4.57(s,2H),4.51(t,J＝7.9Hz,1H),4.40–4.30(m,1H),4.23(d,J＝23.3Hz,2H),3.84(dd,J＝10.9,4.7Hz,1H),3.72(ddd,J＝20.8,12.1,4.2Hz,2H),2.33–2.18(m,1H),2.10–2.03(m,1H),1.17(d,J＝6.2Hz,6H)。LC/MS(ESI)m/z:564(M+H)+。
方案134：(1S,3S,5S)-N-((4-(氨亚基(2-(苯基磺酰基)肼基)甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((3-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物139)的合成
Figure BDA0004238079180005991
步骤1：5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]-己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酸甲酯(化合物2)。
将(1S,3S,5S)-N-((4-氰基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(45mg,0.087mmol)在室温、N2气氛下溶解于饱和HCl/MeOH(1mL)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应物在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((3-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酸甲酯(40mg，收率84.1％)，其未经进一步纯化而直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:547(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-N-((4-(氨亚基(2-(苯基磺酰基)肼基)甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物139)
将5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酸甲酯(40mg,0.073mmol)、苯磺酰肼(15mg,0.087mmol)和DIPEA(28mg,0.22mmol)在EtOH(1mL)中的混合物在80℃下搅拌2小时。将反应溶液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物139(1.6mg，收率3.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.94(d,J＝7.2Hz,1H),7.86–7.83(m,2H),7.76(d,J＝8.2Hz,1H),7.63(t,J＝7.3Hz,1H),7.56(t,J＝7.4Hz,2H),7.42(dd,J＝8.5,7.6Hz,2H),7.26(s,1H),7.21(d,J＝8.3Hz,2H),7.10–7.03(m,2H),7.03–6.97(m,2H),4.80(s,1H),4.50(d,J＝7.2Hz,2H),4.37(s,1H),4.28(d,J＝16.5Hz,1H),2.20–2.17(m,2H),2.05–2.01(m,3H),1.13(d,J＝3.2Hz,1H),0.76(d,J＝7.3Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:687(M+H)+。
方案135：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物140)的合成
Figure BDA0004238079180006011
步骤1：4,4,5,5-四甲基-2-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(2)
向3-(4-溴苯基)-3-甲基氧杂环丁烷(250mg,1.10mmol)和4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(419mg,1.65mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物中添加KOAc(324mg,3.3mmol)、Pd(dppf)Cl2(161mg,0.22mmol)。将混合物在80℃、N2气氛下搅拌2小时，之后添加20mL水，并将混合物用EA(20mL×2)进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50:1至10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的4,4,5,5-四甲基-2-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(300mg,99.5％收率)。LC/MS(ESI)m/z:275(M+H)+。
步骤2：4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯酚(3)
向4,4,5,5-四甲基-2-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(300mg,1.09mmol)在乙腈(3mL)中的溶液中添加过氧化氢脲(618mg,6.57mmol)、10％柠檬酸(0.6mL)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时，之后添加20mL水，并将混合物用EA(20mL×2)进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50:1至10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯酚(169mg,94.4％收率)。LC/MS(ESI)m/z:165(M+H)+。
步骤3：4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酸乙酯(4)
向4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯酚(169mg,1.02mmol)在NMP(2mL)中的混合物中添加4-溴丁酸乙酯(1.2g,6.12mmol)和K2CO3(853mg,6.12mmol)。将混合物在120℃、N2气氛下搅拌16小时，之后添加20mL水，并将混合物用EA(20mL×2)进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至3:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酸乙酯(261mg,91.9％收率)。LC/MS(ESI)m/z:279(M+H)+。
步骤4：4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酸(5)
在0℃下向4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酸酯(260mg,0.93mmol)在MeOH(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH(118mg,2.81mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH＝3，并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酸(133mg,57.1％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：251(M+H)+。
步骤5：(4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸苄酯(6)
在0℃下向4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酸(133mg,0.53mmol)和2-氨基乙酸苄酯(118mg,0.58mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(411mg,3.18mmol)和T3P(1.01g,1.59mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用1N饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的2-(5-苯氧基戊酰胺基)乙酸苄酯(165mg,78.3％收率)。LC/MS(ESI)(m/z)：398(M+H)+。
步骤6：(4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(7)
在室温、N2气氛下向2-(5-苯氧基戊酰胺基)乙酸苄酯(165mg,0.42mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(5-苯氧基戊酰胺基)乙酸(115mg,89.1％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:308(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(8)
在0℃下向(5-苯氧基戊酰胺基)乙酸(115mg,0.37mmol)和吡咯烷-2-甲酸甲酯(76mg,0.45mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(287mg,2.22mmol)和T3P(706mg,1.11mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(90mg,52.9％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：459(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(9)
在0℃下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(90mg,0.2mmol)在MeOH(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH(25.2mg,0.6mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(73mg,84.9％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：431(M+H)+。
步骤9：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物140)
在0℃下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(39mg,0.09mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(20mg,0.13mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(68mg,0.53mmol)和(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(141mg,0.27mmol)。将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(4-(3-甲基氧杂环丁-3-基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(3.9mg,7.6％收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(t,J＝3.2Hz,1H),7.43(d,J＝15.2Hz,1H),7.16–7.11(m,2H),6.93–6.88(m,2H),4.79(s,1H),4.62(s,4H),4.51(d,J＝9.9Hz,2H),4.17(q,J＝16.7Hz,2H),4.00(t,J＝6.3Hz,2H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.39(t,J＝11.8Hz,1H),2.15(dd,J＝13.4,3.3Hz,1H),2.12–1.97(m,3H),1.67(s,3H),1.28(s,3H),1.12(dd,J＝5.7,2.5Hz,1H),0.80(t,J＝5.9Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：568(M+H)+。
方案136：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物141)的合成
Figure BDA0004238079180006051
步骤1：(1S,3S,5R)-5-((2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(3)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(3.0g,10.53mmol)和Rh2(OAc)4(465mg,1.05mmol)在DCM(30mL)中的混合物中逐滴添加在DCM(10mL)中的2-重氮乙酸苄酯(6.52g,36.9mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(2.78g，收率61.0％)。LC/MS(ESI)m/z:434(M+H)+。
步骤2：2-(((1S,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-3-(乙氧基羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)乙酸(4)
向(1S,3S,5R)-5-((2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(2.78g,6.42mmol)在MeOH(35mL)中的溶液中添加Pd/C(400mg,10重量％)。将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的2-(((1S,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-3-(乙氧基羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)乙酸(2.1g，收率95.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：344(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-((2-羟基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(5)
在0℃下向2-(((1S,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-3-(乙氧基羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)乙酸(2.1g,6.12mmol)在THF(30mL)中的溶液中逐滴添加BH3·Me2S(9.2mL,18.4mmol,2M于THF中)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用0℃下的MeOH(10mL)淬灭，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-羟基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(1.67g，收率83.5％)。LC/MS(ESI)m/z:330(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5R)-5-((2-((甲基磺酰基)氧基)乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(6)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-羟基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(1.67g,5.08mmol)在DCM(30mL)中的溶液中添加TEA(7mL,50.8mmol)，随后逐滴添加MsCl(2.0mL,25.4mmol)，并将混合物在0℃下搅拌1小时。将混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-((甲基磺酰基)氧基)乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(2.0g，收率97.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:408(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(7)
向(1S,3S,5R)-5-((2-((甲基磺酰基)氧基)乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(2.0g,4.91mmol)在DMF(30.0mL)中的溶液中添加NaN3(800mg,12.28mmol)，并将混合物在40℃下搅拌16小时。将混合物用DCM稀释并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(1.6g，收率91.9％)。LC/MS(ESI)m/z:355(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5R)-5-((2-氨基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(8)
向(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(380mg,1.07mmol)在MeOH(7.0mL)中的溶液中添加Pd/C(40mg,10重量％)。将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-氨基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(300.0mg，收率85.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：329(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(9)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-氨基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(300mg,0.91mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TEA(0.76mL,5.49mmol)，随后逐滴添加AcCl(0.2mL,2.73mmol)，并将混合物在0℃下搅拌1小时。将混合物用DCM稀释，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝95:5)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(247mg，收率73.1％)。LC/MS(ESI)m/z:371(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(10)
将(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(247mg,0.67mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL,4M)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(180mg，收率99.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:271(M+H)+。
步骤9：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(12)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(90mg,0.33mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(99mg,0.36mmol)在DMF(5.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.33mL,1.98mmol)和T3P(636mg,0.99mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝95:5)进行纯化从而得到呈黄色固体的(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(100mg，收率57.5％)。LC/MS(ESI)m/z:524(M+H)+。
步骤10：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(13)
在0℃下向(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(100mg,0.19mmol)在MeOH(2mL)和THF(1mL)、水(1mL)中的溶液中添加氢氧化锂(11mg,0.27mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用CHCl3/i-PrOH(V/V＝3/1)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(85mg，收率90.4％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：496(M+H)+。
步骤11：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物141)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(80mg,0.16mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(41mg,0.24mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.16mL,0.96mmol)和T3P(308mg,0.48mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝9:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物141(5mg，收率4.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.87-7.82(m,2H),7.50(s,1H),7.45-7.40(m,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.08-7.04(m,2H),7.03-6.99(m,2H),5.23(q,J＝6.6Hz,1H),4.41(d,J＝16.4Hz,1H),4.26(d,J＝16.5Hz,1H),3.59(dd,J＝6.8,3.3Hz,2H),3.53(t,J＝5.6Hz,2H),3.46(d,J＝10.5Hz,1H),3.37(d,J＝4.3Hz,2H),2.69(dd,J＝15.0,9.7Hz,1H),2.11(dd,J＝13.4,3.7Hz,1H),1.95(d,J＝2.6Hz,3H),1.91(s,1H),1.58(d,J＝7.0Hz,3H),1.28(dd,J＝5.8,2.8Hz,1H),0.98(t,J＝5.8Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:647(M+H)+。
方案137：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物142)的合成
Figure BDA0004238079180006111
步骤1：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(3)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(90mg,0.33mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(79mg,0.36mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.33mL,1.98mmol)和T3P(636mg,0.99mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝95:5)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(85.0mg，收率52.1％)。LC/MS(ESI)m/z:490(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(4)
在0℃下向(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(85.0mg,0.17mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化锂(11mg,0.27mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用CHCl3/i-PrOH(V/V＝3/1)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(75mg，收率93.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：462(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物142)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-乙酰胺基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(75mg,0.16mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(27mg,0.24mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.16mL,0.96mmol)和T3P(310mg,0.48mmol)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(v/v＝3/1)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝9:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物142(8mg，收率8.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.50(dd,J＝3.4,2.1Hz,1H),7.27-7.20(m,2H),6.93-6.86(m,3H),5.31-5.15(m,1H),4.80(d,J＝3.6Hz,1H),4.25(d,J＝16.6Hz,1H),4.09(d,J＝16.6Hz,1H),4.00(t,J＝6.3Hz,2H),3.58(d,J＝10.4Hz,1H),3.53(t,J＝5.5Hz,3H),3.45(d,J＝10.4Hz,1H),3.37-3.33(m,2H),2.66(t,J＝12.3Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.15-2.04(m,3H),1.95(s,3H),1.59(dd,J＝20.9,7.0Hz,3H),1.29(dd,J＝5.7,2.6Hz,1H),1.00(t,J＝5.7Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:613(M+H)+。
方案138：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物147)
Figure BDA0004238079180006131
步骤1：(S)-4-(二氟亚甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(2)
在0℃下向(S)-4-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(4g,16.5mmol)在THF(40mL)中的溶液中添加CF2Br2(6mL,66.0mmol)和HMPT(12mL,66.0mmol)。将混合物温热至室温，添加Zn(4.2g,66.0mmol)和HMPT(1mL)。将反应物在65℃下搅拌4小时。将反应混合物过滤，并用MTBE萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-4-(二氟亚甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(1.7g，收率37.2％)。LC/MS(ESI)m/z:178(M-100+H)+。
步骤2：(S)-4-(二氟亚甲基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3)
在0℃下向(S)-4-(二氟亚甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(1.6g,5.80mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加LiBH4(5.8mL,2M于THF中)，并将反应混合物在0℃下搅拌2小时。将反应物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将粗残余物通过硅胶柱色谱(己烷:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色固体的(S)-4-(二氟亚甲基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.1g，收率76.5％)。LC/MS(ESI)m/z:150(M-100+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-(二氟甲基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4)
在0℃下(S)-4-(二氟亚甲基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.1g,4.42mmol)在乙酸乙酯(2mL)中的溶液中添加Pd/C(110mg,10重量％)，并将反应混合物在N2气氛下脱气三次，并在40℃、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(己烷:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色固体的(2S,4R)-4-(二氟甲基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(365mg，收率33.2％)。LC/MS(ESI)m/z:152(M-100+H)+。
步骤4：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(二氟甲基)吡咯烷-2-甲酸(5)
在25℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(365mg,1.45mmol)在MeCN(1mL)、CCl4(1mL)和H2O(1.5mL)中的溶液中添加NaIO4(1.2g,5.8mmol)。将所得混合物搅拌0.5小时，并添加RuCl3(8mg,0.03mmol)，并将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液用DCM洗涤。将有机层分离，并将水相用DCM萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(二氟甲基)吡咯烷-2-甲酸(263mg，收率68.5％)。LC/MS(ESI)m/z:166(M-100+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(6)
在0℃下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(二氟甲基)吡咯烷-2-甲酸(263mg,0.99mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加Cs2CO3(355mg,1.09mmol)，随后添加BnBr(0.12mL,1.19mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(己烷:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(220mg，收率62.7％)。LC/MS(ESI)m/z:256(M-100+H)+。
步骤6：(2S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(7)
将(2S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(220mg,0.62mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在0℃下搅拌，并然后温热至室温保持2小时。将反应混合物浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(2S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(158mg，收率99.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:256(M+H)+
步骤7：(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(8)
在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(51mg,0.20mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(47mg,0.20mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.20mmol)，随后添加T3P(382mg,0.60mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释，并用CHCl3/IPA(3/1,v/v)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(88mg，收率93.6％)。LC/MS(ESI)m/z:475(M+H)+。
步骤8：(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(9)
在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(88mg,0.19mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(9mg,10重量％)。将反应混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(66mg，收率92.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:385(M+H)+。
步骤9：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物147)
在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(66mg,0.17mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(40mg,0.26mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.02mmol)，随后添加T3P(324mg,0.51mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，用CHCl3/IPA(3/1,v/v)萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物147(1.1mg，收率1.3％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.13(s,1H),7.32(s,1H),7.16–7.12(m,2H),6.82–6.78(m,3H),6.11–5.61(m,1H),5.24(t,J＝4.8Hz,1H),4.46(s,3H),3.96–3.88(m,4H),3.76(d,J＝8.4Hz,1H),3.55(s,1H),2.40–2.34(m,3H),2.16(d,J＝7.6Hz,1H),2.09(d,J＝2.4Hz,2H)。LC/MS(ESI)m/z:522(M+H)+。
方案139：2-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)乙酸(化合物148)的合成
Figure BDA0004238079180006171
步骤1：(1S,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(2)
在0℃下向(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(3.17g,11.12mmol)在MeOH(10mL)、THF(10mL)和水(4mL)中的溶液中添加氢氧化锂(1.4g,16.68mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色固体的(1S,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(2.8g，收率98.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：258(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(3)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-2-(叔丁氧基羰基)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(2.8g,10.89mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加BnBr(1.55mL,13.07mmol)和K2CO3(3.0g,21.78mol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(3.5g，收率92.6％)。LC/MS(ESI)m/z:348(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(4)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(300mg,0.86mmol)和Rh2(OAc)4(38mg,0.086mmol)在DCM(4mL)中的混合物中逐滴添加在DCM(1mL)中的2-重氮乙酸乙酯(335mg,3.01mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(287mg，收率76.7％)。LC/MS(ESI)m/z:434(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯盐酸盐(5)
将(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(287mg,0.66mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL,4M)中的溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(240mg，收率99.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:334(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(7)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯盐酸盐(240mg,0.66mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(156mg,0.66mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.65mL,3.96mmol)和T3P(1.26g,1.98mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝95:5)进行纯化从而得到呈无色固体的(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(200mg，收率54.8％)。LC/MS(ESI)m/z:553(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(8)
向(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(200mg,0.36mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(40mg,10重量％)。将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(150mg，收率89.8％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：463(M+H)+。
步骤7：2-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)乙酸乙酯(10)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-乙氧基-2-氧代乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(150mg,0.32mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(82mg,0.48mmol)在DMF(3.0mL)中的溶液中添加DIPEA(0.3mL,1.92mmol)和T3P(618mg,0.96mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水稀释，并用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝9:1)进行纯化从而得到呈白色固体的2-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)乙酸乙酯(36mg，收率18.1％)。LC/MS(ESI)m/z:614(M+H)+。
步骤8：2-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)乙酸(化合物148)
在0℃下向2-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)乙酸乙酯(36mg,0.06mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化锂(3.6mg,0.09mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH3，并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物148(9.5mg，收率27.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(d,J＝1.5Hz,1H),7.51(s,1H),7.27-7.20(m,2H),6.92-6.84(m,3H),5.19(t,J＝7.0Hz,1H),4.81(d,J＝3.7Hz,1H),4.18(q,J＝16.7Hz,2H),3.99(t,J＝6.3Hz,2H),3.91(d,J＝2.1Hz,2H),3.67-3.62(m,1H),3.57(dd,J＝6.1,2.6Hz,1H),3.44(t,J＝14.5Hz,1H),2.75(t,J＝12.5Hz,1H),2.46(q,J＝7.1Hz,2H),2.14-2.02(m,3H),1.59(dd,J＝20.7,6.9Hz,3H),1.22(dd,J＝5.6,2.5Hz,1H),1.01(t,J＝5.9Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:586(M+H)+。
方案140：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物149)的合成
Figure BDA0004238079180006211
步骤1：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物149)
向(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(40mg,0.10mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加DIPEA(65mg,0.50mmol)和PyBOP(78mg,0.15mmol)，并将混合物在室温下搅拌30分钟。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用CHCl3/i-PrOH(5×10mL,v/v＝3/1)萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(3.7mg，收率6.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H,FA),8.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.55(d,J＝12.8Hz,1H),7.26–7.21(m,2H),6.91–6.87(m,3H),5.34–5.21(m,1H),4.58(t,J＝8.6Hz,2H),4.03–3.84(m,5H),3.69–3.62(m,2H),3.41(s,3H),2.56–2.44(m,3H),2.23–2.05(m,3H),1.60(dd,J＝22.8,22.8Hz,3H)。LC/MS(ESI)(m/z)：548(M+H)+。
方案141：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物150)
Figure BDA0004238079180006221
步骤1：(2S,4R)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-羟基-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(19.0g,86mmol)和1H-咪唑(11.71g,170mmol)在DMF(200mL)中的混合物中添加TBDPSCl(26.0g,95mmol)，并将混合物搅拌4小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(22g，收率56％)。LCMS(ESI)m/z＝456(M+H)+。
步骤2：(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(20.0g,43.9mmol)在DCM(200mL)中的溶液中添加DMP(18.6g,43.9mmol)和NaHCO3(3.5g,43.9mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(9.5g，收率47.8％)。LC/MS(ESI)(m/z)：454(M+H)+。
步骤3：(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在-78℃、N2气氛下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(8g,17.6mmol)在THF中的溶液中逐滴添加NaHMDS(606mg,3.3mmol)。将混合物搅拌30分钟，之后添加1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(1.2g,3.3mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，之后用水稀释，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的标题化合物(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(9.2g，收率87.2％)。LCMS(ESI)m/z＝586.2(M+H)+。
步骤4：(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(邻-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在0℃、N2气氛下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.0g,1.7mmol))和Pd(PPh3)4(200mg,0.17mmol)在1,4-二噁烷(10mL)/水(3mL)中的混合物中添加邻甲苯基硼酸(280mg,2.0mmol)和Na2CO3(540mg,5.1mmol)。将混合物在80℃下搅拌过夜，之后用水稀释，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(邻-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(520mg，收率57.6％)。LCMS(ESI)m/z＝528(M+H)+。
步骤5：(S)-2-(羟基甲基)-4-(邻-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(邻-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(520mg,0.98mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加TBAF(515mg,2.0mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-2-(羟基甲基)-4-(邻甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(230mg，收率80.7％)。LCMS(ESI)m/z＝290.2(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下向(S)-2-(羟基甲基)-4-(邻-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(110mg,0.38mmol)在MeOH(1.2mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(邻甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(100mg，收率90.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：292(M+H)+。
步骤7：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(邻甲苯基)吡咯烷-2-甲酸
将(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.69mmol)和NaIO4(440mg,2.06mmol)在CCl4(0.8mL)/CH3CN(0.8mL)/水(1.2mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌20分钟。向反应混合物中添加RuCl3(8mg,0.041mmol)并将反应混合物搅拌4小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(200mg，收率95.2％)。LCMS(ESI)m/z＝250(M+H-56)+。
步骤8：(2S,4R)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
在室温、N2气氛下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(200mg,0.69mmol)和Cs2CO3(670mg,2.06mmol)在DMF(2.5mL)中的混合物中添加苄基溴(129mg,0.76mmol)，并将反应混合物搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的2-(5-苯氧基戊酰胺基)乙酸苄酯(160mg，收率91.0％)。LCMS(ESI)m/z＝396(M+H)+。
步骤9：(2S,4R)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
将(2S,4R)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(160mg,0.40mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到(2S,4R)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(110mg，收率92.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:296(M+H)+。
步骤10：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃下向(2S,4R)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(110mg,0.37mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(132mg,0.56mmol)在DMF(1.3mL)中的混合物中添加DIPEA(288mg,2.24mmol)和T3P(356mg,1.12mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(77mg，收率40％)。LC/MS(ESI)(m/z)：515(M+H)+。
步骤11：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸
在室温下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(77mg,0.15mmol)在MeOH(1.2mL)中的溶液中添加Pd/C(70mg,10％wt)，并将混合物在H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(60mg，收率94.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：425(M+H)+。
步骤12：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物150)
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(60mg,0.14mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(33mg,0.21mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(110mg,0.85mmol)和PyBOP(90mg,0.17mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物150(8mg，收率10.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.46(s,1H),7.31(d,J＝7.8Hz,1H),7.26–7.22(m,2H),7.16(dt,J＝6.0,5.3Hz,3H),6.91–6.87(m,3H),4.51(d,J＝9.6Hz,1H),4.15(d,J＝16.8Hz,1H),4.08(d,J＝7.3Hz,1H),4.02–4.00(m,2H),3.98(d,J＝6.4Hz,1H),3.65–3.57(m,2H),2.47(t,J＝7.5Hz,2H),2.40(s,3H),2.35(d,J＝15.0Hz,1H),2.21–2.17(m,1H),2.12–2.07(m,2H),2.04(s,2H)。LCMS(ESI)m/z＝562(M+H)+。
方案142：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物151)
Figure BDA0004238079180006271
步骤1：(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(2)
在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(106mg,0.42mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(114mg,0.42mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.4mL,2.52mmol)和T3P(801mg,1.26mmol,50重量％于EtOAc中)。将所得混合物在35℃下搅拌5小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用水稀释至并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(210mg，收率99.4％)。LC/MS(ESI)m/z:509(M+H)+
步骤2：(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(3)
向(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(210mg,0.41mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(21mg,10％wt)，并将反应混合物在室温、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅色油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(144mg，收率83.3％)。LC/MS(ESI)m/z:419(M+H)+
步骤3：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物151)
在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(67mg,0.16mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(25mg,0.16mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.10mL,0.80mmol)和PyBOP(125mg,0.24mmol)。将混合物在25℃下搅拌半小时，然后用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(二氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(8.8mg，收率9.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.23(dd,J＝18.0,18.0Hz,1H),7.87–7.80(m,2H),7.51–7.36(m,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.09–7.02(m,2H),7.02–6.94(m,2H),6.14–5.79(m,1H),4.70–4.50(m,3H),4.30–4.01(m,2H),4.01–3.86(m,1H),3.79–3.59(m,1H),3.03–2.74(m,1H),2.46–2.24(m,1H),2.23–1.87(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:556(M+H)+。
方案143：(S)-1-((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)-27-羧基-6,15,24,29-四氧代-2,8,11,17,20-五氧杂-5,14,23,28-四氮杂四十六烷-46-酸(化合物152)的合成
Figure BDA0004238079180006291
步骤1：(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(2)
将(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(250mg,0.70mmol)在HCl/1,4-二噁烷(5mL,4M)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(178mg，收率98.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:255(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(4)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(178mg,0.70mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(166mg,0.70mmol)在DMF(5.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.70mL,4.20mmol)和T3P(1.34g,2.1mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝99:3)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(300mg，收率90.6％)。LC/MS(ESI)m/z:474(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(5)
在0℃下向(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(300mg,0.63mmol)在MeOH(3mL)和水(0.6mL)中的溶液中添加氢氧化锂(40mg,0.95mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(250mg，收率88.7％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：446(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(7)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(250mg,0.56mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(142mg,0.84mmol)在DMF(5.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.56mL,3.36mmol)和T3P(1.07g,1.68mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(110mg，收率34.1％)。LC/MS(ESI)m/z:597(M+H)+。
步骤5：((5-((R)-1-((1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)乙基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(8)
在0℃下向(1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(110mg,0.18mmol)在THF(5.0mL)中的溶液中添加在水(5.0mL)中的NaHCO3(154mg,1.80mmol)，随后逐滴添加Boc2O(121mg,0.54mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((5-((R)-1-((1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)乙基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(80mg，收率62.5％)。LC/MS(ESI)m/z:697(M+H)+。
步骤6：((5-((R)-1-((1S,3S,5R)-5-((2-氨基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)乙基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(9)
向((5-((R)-1-((1S,3S,5R)-5-((2-叠氮基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)乙基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.11mmol)在MeOH(5.0mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌1小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的((5-((R)-1-((1S,3S,5R)-5-((2-氨基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)乙基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(53.0mg，收率68.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：671(M+H)+。
步骤7：(S)-27-(叔丁氧基羰基)-1-((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)-6,15,24,29-四氧代-2,8,11,17,20-五氧杂-5,14,23,28-四氮杂四十六烷-46-酸叔丁酯(10)
在0℃、N2气氛下向((5-((R)-1-((1S,3S,5R)-5-((2-氨基乙氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)乙基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg,0.07mmol)和(S)-22-(叔丁氧基羰基)-43,43-二甲基-10,19,24,41-四氧代-3,6,12,15,42-五氧杂-9,18,23-三氮杂四十四烷酸(95mg,0.11mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.07mL,0.42mmol)和HATU(43mg,0.11mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-27-(叔丁氧基羰基)-1-((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)-6,15,24,29-四氧代-2,8,11,17,20-五氧杂-5,14,23,28-四氮杂四十六烷-46-酸叔丁酯(50mg，收率45.0％)。LC/MS(ESI)m/z:1499(M+H)+。
步骤8：(S)-1-((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)-27-羧基-6,15,24,29-四氧代-2,8,11,17,20-五氧杂-5,14,23,28-四氮杂四十六烷-46-酸(化合物152)
将(S)-27-(叔丁氧基羰基)-1-((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)-6,15,24,29-四氧代-2,8,11,17,20-五氧杂-5,14,23,28-四氮杂四十六烷-46-酸叔丁酯(50mg,0.03mmol)在DCM(2mL)中的溶液添加TFA(1mL)，并将溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-1-((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)-27-羧基-6,15,24,29-四氧代-2,8,11,17,20-五氧杂-5,14,23,28-四氮杂四十六烷-46-酸(8.0mg，收率18.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.41(s,1H),8.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.53(d,J＝6.6Hz,1H),7.29–7.19(m,2H),6.94–6.86(m,3H),5.20(q,J＝6.8Hz,1H),4.33–4.20(m,2H),4.12(d,J＝16.6Hz,1H),4.00(t,J＝5.2Hz,6H),3.69–3.62(m,8H),3.61–3.52(m,8H),3.48–3.42(m,5H),3.36(dd,J＝9.3,5.6Hz,2H),2.65(t,J＝12.4Hz,1H),2.48(t,J＝7.4Hz,2H),2.25(dt,J＝12.1,7.8Hz,6H),2.14–2.03(m,4H),1.95(dd,J＝14.4,7.9Hz,1H),1.63–1.54(m,7H),1.30(d,J＝10.7Hz,25H),1.25(d,J＝2.6Hz,1H),0.99(t,J＝5.7Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:1287(M+H)+。
步骤9：(S)-22-(叔丁氧基羰基)-43,43-二甲基-10,19,24,41-四氧代-3,6,12,15,42-五氧杂-9,18,23-三氮杂四十四烷酸(20)的合成
将化合物A(200mg,0.18mmol)用20％的在DCM中的HFIP(3mL)处理，并在室温下振摇3小时。将混合物过滤并将溶液用20％的在DCM中的HFIP(0.3mL)洗涤，并然后浓缩从而得到呈无色油状物的(S)-22-(叔丁氧基羰基)-43,43-二甲基-10,19,24,41-四氧代-3,6,12,15,42-五氧杂-9,18,23-三氮杂四十四烷酸(140mg,94.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:847(M+H)+。
方案144：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物155)
Figure BDA0004238079180006341
步骤1：(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在H2球囊下向(S)-2-(羟基甲基)-4-(邻-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(110mg,0.38mmol)在DCM(1.4mL)中的溶液中添加(1,5-环辛二烯)(吡啶)(三环己基膦)铱(I)六氟磷酸盐(CAS#64536-78-3)(20mg,0.025mmol)。将混合物搅拌4小时，之后用水稀释，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的标题化合物(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(60mg，收率54.2％)。LCMS(ESI)m/z＝292(M+H)+。
步骤2：(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(邻甲苯基)吡咯烷-2-甲酸
向在室温、N2气氛下的(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-(邻甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(112mg,0.38mmol)和NaIO4(245mg,1.15mmol)在CCl4(0.5mL)/CH3CN(0.5mL)/H2O(0.8mL)中的混合物中添加RuCl3(3.0mg,0.014mmol)。将混合物搅拌4小时，之后用水稀释，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的标题化合物(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(60mg，收率51.2％)。LCMS(ESI)m/z＝250(M+H-56)+。
步骤3：(2S,4S)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
在室温、N2气氛下向(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(127mg,0.42mmol)和Cs2CO3(149mg,0.46mmol)在DMF(1.2mL)中的混合物中添加苄基溴(85mg,0.50mmol)，并将混合物搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4S)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(30mg，收率18％)。LCMS(ESI)m/z＝396(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
将(2S,4S)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(30mg,0.068mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用DCM稀释并在真空下干燥从而得到(2S,4S)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(20mg，收率89.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:296(M+H)+。
步骤5：(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃下向(2S,4S)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(20mg,0.068mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(24mg,0.10mmol)在DMF(0.8mL)中的混合物中添加DIPEA(52mg,0.41mmol)和T3P(64mg,0.20mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(12mg，收率34.5％)。LC/MS(ESI)(m/z)：515(M+H)+。
步骤6：(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸
在室温下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(12mg,0.023mmol)在MeOH(1.0mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10％wt)，并将混合物在H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(4mg，收率41.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：425(M+H)+。
步骤7：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物155)
在0℃下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(4mg,0.0094mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(2mg,0.014mmol)在DMF(0.8mL)中的混合物中添加DIPEA(7mg,0.057mmol)和PyBOP(7mg,0.014mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物155(2mg，收率37.8％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.48(s,1H),8.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.47(d,J＝21.9Hz,1H),7.25(dd,J＝20.4,12.7Hz,3H),7.20–7.13(m,3H),6.89(dd,J＝7.9,4.1Hz,3H),4.68–4.62(m,2H),4.56(d,J＝15.6Hz,2H),4.15–4.04(m,2H),4.01(dd,J＝11.4,5.1Hz,3H),3.82(d,J＝9.8Hz,1H),3.59(t,J＝9.7Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.41–2.36(m,1H),2.31(d,J＝15.4Hz,3H),2.11–2.05(m,2H)。LCMS(ESI)m/z＝562(M+H)+。
方案145：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物156)
Figure BDA0004238079180006371
步骤1：(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下向(S)-2-(羟基甲基)-4-苯基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.72mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加(1,5-环辛二烯)(吡啶)(三环己基膦)铱(I)六氟磷酸盐(57mg,0.07mmol)，并将混合物在室温、H2球囊下搅拌12小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg，收率99.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：278(M+H)+。
步骤2：(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸
将(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.72mmol)和NaIO4(462mg,2.16mmol)在CCl4(0.8mL)/CH3CN(0.8mL)/水(1.2mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌20分钟，之后添加RuCl3(15mg,0.072mmol)。将混合物搅拌4小时，之后用水稀释，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的标题化合物(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(120mg，收率57％)。LCMS(ESI)m/z＝292(M+H)+。
步骤3：(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
在室温、N2气氛下向(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(120mg,0.41mmol)和Cs2CO3(400mg,1.22mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加苄基溴(76mg,0.44mmol)，并将反应混合物搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(150mg，收率96％)。LCMS(ESI)m/z＝382(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯
将(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(150mg,0.38mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用DCM稀释并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯(100mg,定量)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:282(M+H)+。
步骤5：(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃下向(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯(100mg,0.35mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(78mg,0.32mmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加DIPEA(123mg,1.98mmol)和T3P(1.22g,1.92mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯(100mg，收率62％)。LC/MS(ESI)(m/z)：501(M+H)+。
步骤6：(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸
在室温下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯(100mg,0.20mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10％wt)，并将混合物在H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(80mg，收率97％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：411(M+H)+。
步骤7：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物156)
在0℃下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(40mg,0.10mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(16mg,0.10mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(40mg,0.31mmol)和PyBOP(100mg,0.20mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(12.4mg，收率22.6％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.24(dd,J＝5.3,1.6Hz,1H),7.47(d,J＝27.0Hz,1H),7.38–7.29(m,4H),7.24(dd,J＝9.7,6.3Hz,3H),6.91(dd,J＝8.0,3.2Hz,3H),4.73–4.65(m,1H),4.61(s,2H),4.18–4.05(m,2H),4.05–3.98(m,3H),3.62(d,J＝3.1Hz,2H),2.48(t,J＝7.4Hz,2H),2.46–2.32(m,2H),2.12–2.04(m,2H).,LC/MS(ESI)(m/z):548(M+H)+。
方案146：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物157)
Figure BDA0004238079180006401
步骤1：(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(4-氟苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在N2气氛下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.0g,1.7mmol))和苯基硼酸(230mg,1.87mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(3mL)中的混合物中添加Na2CO3(540mg,5.1mmol)和Pd(PPh3)4(200mg,0.17mmol)，并将混合物在80℃下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EA＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-苯基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(800mg，收率91.7％)。LCMS(ESI)m/z＝514(M+H)+。
步骤2：(S)-2-(羟基甲基)-4-苯基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-苯基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(800mg,1.56mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加TBAF(1.22g,4.68mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-2-(羟基甲基)-4-苯基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(400mg，收率93％)。LCMS(ESI)m/z＝276(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下向(S)-2-(羟基甲基)-4-苯基-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.72mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg，收率99.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：278(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸
将(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.72mmol)和NaIO4(462mg,2.16mmol)在CCl4(0.8mL)/CH3CN(0.8mL)/水(1.2mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌20分钟，之后添加RuCl3(15mg,0.072mmol)。将混合物搅拌4小时，之后用水稀释，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的标题化合物(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(100mg，收率47％)。LCMS(ESI)m/z＝292(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-苯基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
在室温、N2气氛下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(100mg,0.34mmol)和Cs2CO3(331mg,1.02mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加苄基溴(64mg,0.37mmol)，并将反应混合物搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-苯基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(110mg，收率85％)。LCMS(ESI)m/z＝382(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯
将(2S,4R)-4-苯基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(110mg,0.28mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用DCM稀释并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(2S,4R)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯(100mg,粗品)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:282(M+H)+。
步骤7：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃下向(2S,4R)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯(100mg,0.35mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(78mg,0.32mmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加DIPEA(123mg,1.98mmol)和T3P(1.22g,1.92mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯(70mg，收率43％)。LC/MS(ESI)(m/z)：501(M+H)+。
步骤8：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸
在室温下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸苄酯(70mg,0.14mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10％wt)，并将混合物在H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(50mg，收率87％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：411(M+H)+。
步骤9：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物157)
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(50mg,0.12mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(18mg,0.12mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(46mg,0.36mmol)和PyBOP(124mg,0.24mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物157(13.3mg，收率20.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.22(dd,J＝3.4,1.6Hz,1H),7.50–7.42(m,1H),7.36–7.27(m,4H),7.24(dd,J＝15.1,7.5Hz,3H),6.92–6.84(m,3H),4.68–4.56(m,2H),4.54–4.44(m,1H),4.19–4.04(m,2H),4.03–3.89(m,3H),3.61(t,J＝10.3Hz,1H),3.55–3.38(m,1H),2.72–2.60(m,1H),2.47(t,J＝7.3Hz,2H),2.13–1.97(m,3H),LC/MS(ESI)(m/z):548(M+H)+。
方案147：(2S,4S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物158)
Figure BDA0004238079180006441
步骤1：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物158)
在0℃下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(40mg,0.10mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(16mg,0.10mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(40mg,0.31mmol)和PyBOP(100mg,0.20mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(11.5mg，收率19.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.24(d,J＝1.6Hz,1H),7.51(s,1H),7.35–7.28(m,4H),7.24(dd,J＝14.9,6.9Hz,3H),6.88(dd,J＝7.8,3.6Hz,3H),5.31(dt,J＝13.4,6.9Hz,1H),4.65(dd,J＝8.1,2.7Hz,1H),4.10(dd,J＝9.8,4.9Hz,1H),4.05(s,2H),3.99(d,J＝6.2Hz,2H),3.71–3.56(m,2H),2.47(dd,J＝9.2,5.6Hz,2H),2.37(dd,J＝15.0,7.0Hz,2H),2.07(dd,J＝13.9,7.0Hz,2H),1.60(t,J＝13.0Hz,3H),LC/MS(ESI)(m/z):562(M+H)+。
方案148：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物159)
Figure BDA0004238079180006451
步骤1：(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(4-氟苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在N2气氛下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.0g,1.7mmol))和(4-氟苯基)硼酸(280mg,2.0mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(3mL)中的混合物中添加Na2CO3(540mg,5.1mmol)和Pd(PPh3)4(200mg,0.17mmol)，并将混合物在80℃下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EA＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(4-氟苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(900mg，收率99.1％)。LCMS(ESI)m/z＝532(M+H)+。
步骤2：(S)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(4-氟苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(900mg,1.69mmol)在THF(3mL)中的溶液中添加TBAF(1.32g,5.07mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(500mg，收率100％)。LCMS(ESI)m/z＝294(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下向(S)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(250mg,0.85mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(25mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg，收率79.4％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：296(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸
将(2S,4R)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.67mmol)和NaIO4(440mg,2.06mmol)在CCl4(0.8mL)/CH3CN(0.8mL)/水(1.2mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌20分钟，之后添加RuCl3(8mg,0.041mmol)。将混合物搅拌4小时，之后用水稀释，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的标题化合物(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸(100mg，收率48％)。LCMS(ESI)m/z＝310(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
在室温、N2气氛下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸(100mg,0.31mmol)和Cs2CO3(90mg,0.93mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加苄基溴(58mg,0.35mmol)，并将反应混合物搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(110mg，收率89％)。LCMS(ESI)m/z＝399(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
将(2S,4R)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(110mg,0.26mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用DCM稀释并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(2S,4R)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(100mg,粗品)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:299(M+H)+。
步骤7：(2S,4R)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃下向(2S,4R)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(100mg,0.32mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(78mg,0.32mmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加DIPEA(255mg,1.98mmol)和T3P(620mg,50重量％于EA中,0.99mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(70mg，收率42％)。LC/MS(ESI)(m/z)：519(M+H)+。
步骤8：(2S,4R)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在室温下向(2S,4R)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(70mg,0.12mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将混合物在H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(30mg，收率58％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：429(M+H)+。
步骤9：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物159)
在0℃下向(2S,4R)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(30mg,0.07mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(11mg,0.07mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(54mg,0.42mmol)和PyBOP(218mg,0.21mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物159(5.8mg，收率14.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.22(d,J＝1.5Hz,1H),7.45(s,1H),7.34(dt,J＝8.6,4.3Hz,2H),7.27–7.21(m,2H),7.06(dd,J＝11.9,5.6Hz,2H),6.92–6.87(m,3H),4.58(d,J＝3.3Hz,2H),4.56–4.46(m,1H),4.27–4.03(m,2H),3.99(dd,J＝11.7,5.4Hz,3H),3.61–3.47(m,2H),2.74–2.60(m,1H),2.47(t,J＝7.3Hz,2H),2.08(t,J＝7.1Hz,2H),2.01(dd,J＝20.3,9.8Hz,1H),LC/MS(ESI)(m/z):566(M+H)+。
方案149：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物164)
Figure BDA0004238079180006491
步骤1：(2S,4S)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(S)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(250mg,0.85mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加(1,5-环辛二烯)(吡啶)(三环己基膦)铱(I)六氟磷酸盐(25mg,0.03mmol)，并将混合物在室温、H2球囊下搅拌12小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4S)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg，收率79.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：296(M+H)+。
步骤2：(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸
将(2S,4S)-4-(4-氟苯基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.67mmol)和NaIO4(440mg,2.06mmol)在CCl4(0.8mL)/CH3CN(0.8mL)/水(1.2mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌20分钟。向反应混合物中添加RuCl3(8mg,0.041mmol)并将反应混合物搅拌4小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的标题化合物(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸(60mg，收率29.0％)。LCMS(ESI)m/z＝310(M+H)+。
步骤3：(2S,4S)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
向(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸(60mg,0.19mmol)和Cs2CO3(189mg,0.58mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加苄基溴(36mg,0.21mmol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4S)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(70mg，收率90.3％)。LCMS(ESI)m/z＝399(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
将(2S,4S)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(70mg,0.17mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(2S,4S)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(70mg,定量)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:299(M+H)+。
步骤5：(2S,4S)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃下向(2S,4S)-4-(4-氟苯基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(70mg,0.23mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(55mg,0.23mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(180mg,1.40mmol)和T3P(440mg,0.70mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4S)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(40mg，收率33％)。LC/MS(ESI)(m/z)：519(M+H)+。
步骤6：(2S,4S)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在室温下向(2S,4S)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(40mg,0.07mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将混合物在H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(20mg，收率60％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：429(M+H)+。
步骤7：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物164)
在0℃下向(2S,4S)-4-(4-氟苯基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(20mg,0.04mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(7mg,0.04mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(130mg,0.14mmol)和PyBOP(48mg,0.09mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用水稀释，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物164(1.5mg，收率5.76％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,2H),8.23(d,J＝1.6Hz,1H),7.46(d,J＝27.4Hz,1H),7.34(dd,J＝8.8,5.4Hz,2H),7.27–7.19(m,2H),7.07(t,J＝8.8Hz,2H),6.94–6.84(m,3H),4.69–4.64(m,2H),4.15–4.08(m,2H),4.01(dd,J＝10.5,4.1Hz,3H),3.60(dd,J＝20.2,12.0Hz,2H),2.48(t,J＝7.4Hz,2H),2.36(d,J＝7.9Hz,2H),2.13–2.04(m,3H)。LCMS(ESI)m/z＝566(M+H)+。
方案150：3-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(化合物165)的合成
Figure BDA0004238079180006521
步骤1：3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(2)
向3-羟基苯甲酸甲酯(609mg,4.0mmol)、4-溴丁酸叔丁酯(4.5g,20.0mmol)在NMP(7mL)中的溶液中添加K2CO3(3.3g,24.0mmol)，并将反应混合物在120℃、N2气氛下搅拌过夜，用60mL水稀释，并将混合物用EtOAc(40mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速柱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(1.1g，收率93.7％)。
步骤2：4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酸(4)
将3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(1.1g,3.74mmol)在DCM(20mL)和TFA(11mL)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过快速柱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酸(850mg，收率95.1％)。LC/MS(ESI)m/z:239(M+H)+。
步骤3：3-(4-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(6)
在0℃下向4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酸(850mg,3.57mmol)、甘氨酸苄酯盐酸盐(860mg,4.28mmol)在DMF(8mL)中的混合物中添加DIPEA(2770mg,21.42mmol)和T3P(6.8g,10.7mmol,50％于EtOAc中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用1N饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的3-(4-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(800mg，收率58.1％)。LC/MS(ESI)(m/z)：386(M+H)+。
步骤4：3-(4-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(7)
向3-(4-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(800mg,2.08mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(80mg,10重量％)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的3-(4-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(593mg，收率96.7％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:296(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(A-1)
向(1S,3S,5S)-2-(叔丁氧基羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(180mg,0.7mmol)和(溴甲基)苯(192mg,1.1mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加K2CO3(317mg,2.3mmol)，并将反应混合物在80℃下搅拌2小时，用20mL水稀释，并将混合物用EA(40mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速柱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(240mg，收率97.1％)。LC/MS(ESI)m/z:288(M+H+56)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(8)
将(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(240mg,0.73mmol)在MeOH(2mL)和HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩从而得到呈黄色固体的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(194mg，收率99％)。LC/MS(ESI)m/z:232(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-2-((4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(9)
在0℃下向(4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(180mg,0.61mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(164mg,0.61mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(473mg,3.66mmol)和T3P(1.16g,1.83mmol,50％于EtOAc中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释并用1N饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速柱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-2-((4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(250mg，收率80.6％)。LC/MS(ESI)(m/z)：509(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-2-((4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(10)
向(1S,3S,5S)-2-((4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(240mg,0.47mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(30mg,10重量％)，并将反应物在室温、H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-2-((4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(185mg，收率94.1％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:419(M+H)+。
步骤9：3-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(12)
对于(1S,3S,5S)-2-((4-(3-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(100mg,0.24mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(69mg,0.36mmol)在DMF(1ml)中的混合物，在0℃下向该混合物中添加DIPEA(186mg,1.44mmol)和PyBop(187mg,0.36mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速柱(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化从而得到呈白色固体的3-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(81mg，收率61.0％)。LC/MS(ESI)(m/z)：556(M+H)+。
步骤10：3-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(化合物165)
在40℃下向3-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(70mg,0.13mmol)在MeOH(1mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH.H2O固体(16mg,0.38mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH＝3，并在减压下浓缩至干并通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物165(5.0mg，收率7.4％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.58(d,J＝7.6Hz,1H),7.52(s,1H),7.36(dd,J＝15.7,7.6Hz,2H),7.14(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),4.80–4.77(m,1H),4.55–4.43(m,2H),4.16(q,J＝16.6Hz,2H),4.05(t,J＝6.2Hz,2H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.37(t,J＝11.8Hz,1H),2.19–2.12(m,1H),2.11–2.05(m,2H),1.25(d,J＝15.0Hz,3H),1.19–0.96(m,2H),0.79(t,J＝5.8Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：542(M+H)+。
方案151：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物166)的合成
Figure BDA0004238079180006561
步骤1：(2S,4R)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2)
向(2S)-2-{[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基}-4-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3g,6.58mmol)在2-碘丙烷(20mL)中的溶液中添加氧化银(4.6g,19.75mmol)。将反应混合物在密封管中在60℃下搅拌16小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S)-2-{[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基}-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.3g，收率39.7％)。LC/MS(ESI)m/z:498(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3)
在N2气氛下向(2S)-2-{[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]甲基}-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.3g,2.61mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加TBAF(2.0g,7.84mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S)-2-(羟基甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(670mg，收率98.9％)。LC/MS(ESI)m/z:260(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸(4)
在0℃下向(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-异丙氧基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg,0.77mmol)在DCM/MeCN(5.5mL,10/1v/v)中的溶液中添加
Figure BDA0004238079180006571
分子筛(164mg)和NMO(181mg,1.54mmol)。在0℃下搅拌10分钟后，将TPAP(27mg,0.077mmol)在N2气氛下添加到上面的混合物中，并将反应混合物在0℃下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用H2O洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸(120mg，收率56.9％)。LC/MS(ESI)m/z:274(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(5)
在N2气氛下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸(120mg,0.44mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加Cs2CO3(157mg,0.48mmol)和CH3I(75mg,0.53mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用H2O洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(80mg，收率63.4％)。LC/MS(ESI)m/z:288(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(6)
在N2气氛下向(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯2-甲酯(80mg,0.28mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(65mg，收率100％)。LC/MS(ESI)m/z:188(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(7)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-异丙氧基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(65mg,0.28mmol)和(4-苯氧基丁酰胺基)乙酸(63mg,0.27mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(207mg,1.60mmol)和T3P(510mg,0.80mmol,50重量％于乙酸乙酯中)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，之后用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-异丙氧基-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸甲酯(90mg，收率82.9％)。LC/MS(ESI)m/z:407(M+H)+。
步骤7：(2S,4R)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(8)
向(2S,4R)-4-异丙氧基-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸甲酯(90mg,0.22mmol)在THF/MeOH/H2O(3mL,v/v＝4/1/1)中的溶液中添加LiOH(11mg,0.44mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌2小时。将混合物用水(5mL)稀释并用EtOAc洗涤两次。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～4并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-异丙氧基-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸(80mg，收率92.1％)。LC/MS(ESI)m/z:393(M+H)+。
步骤8：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-异丙氧基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物166)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-异丙氧基-1-[2-(4-苯氧基丁酰胺基)乙酰基]吡咯烷-2-甲酸(40mg,0.10mmol)和5-[(1R)-1-氨基乙基]噻吩-3-甲脒(17mg,0.10mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(66mg,0.51mmol)和PyBop(80mg,0.15mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物166(6mg，收率10.9％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.22(dd,J＝4.3,1.5Hz,1H),7.53(d,J＝11.6Hz,1H),7.26–7.21(m,2H),6.89(dd,J＝7.5,5.5Hz,3H),5.27(dq,J＝13.9,6.7Hz,1H),4.55–4.46(m,1H),4.31(s,1H),4.09–3.96(m,4H),3.74(dd,J＝12.2,6.2Hz,2H),3.59(d,J＝11.3Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.32–2.23(m,1H),2.11–2.02(m,3H),1.60(dd,J＝23.4,7.0Hz,3H),1.16(dd,J＝6.1,3.1Hz,6H)。LC/MS(ESI)m/z:544(M+H)+。
方案152：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物167)的合成
Figure BDA0004238079180006601
步骤1：(S,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2)
向4-溴噻吩-2-甲醛(5g,26.17mmol)和(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.5g,28.79mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加Ti(OiPr)4(11.2g,39.26mmol)。将反应混合物在N2气氛下加热至75℃，并在75℃下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(6.2g，收率80.0％)。LC/MS(ESI)m/z:294(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3)
在-78℃、N2气氛下向N-[(1E)-(4-溴噻吩-2-基)甲亚基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.2g,4.08mmol)在DCM(15mL)中的溶液中逐滴添加溴代(异丙基)镁(901mg,6.12mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(650mg，收率47.1％)。LC/MS(ESI)m/z:338(M+H)+。
步骤3：(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4)
向(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(650mg,1.92mmol)在NMP(10mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(451mg,3.84mmol)和Pd(PPh3)4(222mg,0.19mmol)。将反应混合物在N2气氛下加热至160℃，并在160℃下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(240mg，收率44.0％)。LC/MS(ESI)m/z:285(M+H)+。
步骤4：5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基丙基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(5)
在N2气氛下向(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(240mg,0.84mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中添加NH2OH盐酸盐(147mg,2.11mmol)和DIPEA(327mg,2.53mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基丙基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(70mg，收率26.1％)。LC/MS(ESI)m/z:318(M+H)+。
步骤5：5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基丙基)噻吩-3-甲脒(6)
在N2气氛下向5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基丙基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(70mg,0.22mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中添加雷尼镍(1mL)和AcOH(0.1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基丙基)噻吩-3-甲脒(60mg，收率90.3％)。LC/MS(ESI)m/z:302(M+H)+。
步骤6：(R)-5-(1-氨基-2-甲基丙基)噻吩-3-甲脒(7)
在N2气氛下向5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基丙基)噻吩-3-甲脒(60mg,0.20mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(R)-5-(1-氨基-2-甲基丙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(36mg，收率91.7％)。LC/MS(ESI)m/z:198(M+H)+。
步骤7：(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(9)
在0℃、N2气氛下向(S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(280mg,1.50mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(355mg,1.50mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIPEA(1.2g,8.98mmol)和T3P(2.9g,4.49mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(300mg，收率49.3％)。LC/MS(ESI)m/z:407(M+H)+。
步骤8：(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(10)
在N2气氛下向(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(50mg,0.12mmol)在THF:MeOH:H2O＝4:1:1(3mL)中的溶液中添加LiOH(6mg,0.25mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(40mg，收率82.9％)。LC/MS(ESI)m/z:393(M+H)+。
步骤9：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物167)
在0℃、N2气氛下向(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(36mg,0.092mmol)和(R)-5-(1-氨基-2-甲基丙基)噻吩-3-甲脒(18mg,0.092mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(59mg,0.46mmol)和PyBop(72mg,0.14mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物167(0.6mg，收率1.1％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.56(s,1H),8.25(d,J＝1.3Hz,1H),7.47(s,1H),7.24(t,J＝7.9Hz,2H),6.90(dd,J＝7.6,5.6Hz,3H),4.93(s,1H),4.58(t,J＝7.4Hz,2H),4.01–3.96(m,4H),3.90(dd,J＝11.1,6.0Hz,2H),3.68(t,J＝6.4Hz,2H),2.46(t,J＝7.4Hz,2H),2.39(dd,J＝13.4,9.2Hz,1H),2.21–2.13(m,2H),2.05(dt,J＝12.2,6.5Hz,3H),0.98–0.90(m,6H)。LC/MS(ESI)m/z:572(M+H)+。
方案153：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物168)的合成
Figure BDA0004238079180006651
步骤1：3-苯基氧杂环丁烷-3-醇(2)
在-60℃下向氧杂环丁烷-3-酮(5g,69.4mmol)在THF(25mL)中的溶液中添加苯基溴化镁(83mL,1M于THF中)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的3-苯基氧杂环丁烷-3-醇(8g，收率76.8％)。LC/MS(ESI)m/z:151(M+H)+。
步骤2：4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯酚(3)
在0℃下将3-苯基氧杂环丁烷-3-醇(8g,53.3mmol)和苯酚(6g,63.8mmol)在DCM(160mL)中的混合物中添加AlCl3(7g,52.6mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝3:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯酚(5g，收率41.6％)。LC/MS(ESI)m/z:227(M+H)+。
步骤3：4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯基三氟甲烷磺酸酯(4)
在0℃下向4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯酚(3g,13.2mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加TEA(4g,39.6mmol)和PhNTf2(7g,19.6mmol)，并将混合物在室温下搅拌12小时。将混合物用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯基三氟甲烷磺酸酯(5g，收率100％)。LC/MS(ESI)m/z:359(M+H)+。
步骤4：4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酸甲酯(5)
向4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯基三氟甲烷磺酸酯(1g,2.79mmol)在DMSO(10mL)和MeOH(10mL)中的溶液中添加TEA(2g,19.8mmol)和Pd(OAc)2(160mg,0.71mmol)，并将混合物在70℃、CO气氛下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:乙酸乙酯＝4:1)进行纯化从而得到呈白色固体的4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酸甲酯(510mg，收率68.1％)。LC/MS(ESI)m/z:269(M+H)+。
步骤5：4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酸甲酯(6)
在0℃下向4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酸甲酯(150mg,1.86mmol)在MeOH(5mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化锂(60mg,2.50mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酸(400mg，收率84.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：255(M+H)+。
步骤6：(4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酸甲酯(7)
在0℃、N2气氛下向4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酸(400mg,1.57mmol)和甘氨酸甲酯(180mg,2.02mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(1.2g,9.30mmol)和T3P(3g,9.43mmol,50％重量于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酸甲酯(400mg，收率78.2％)。LC/MS(ESI)m/z:326(M+H)+。
步骤7：(4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酸(8)
在0℃下向(4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酸甲酯(400mg,1.23mmol)在MeOH(3mL)和水(0.6mL)中的溶液中添加氢氧化锂(50mg,2.08mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酸(300mg，收率78.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：312(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(9)
在0℃下向(4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酸(120mg,0.38mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(65mg,0.38mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(300mg,2.32mmol)，随后添加T3P(360mg,1.13mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将所得混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(100mg，收率56.1％)。LC/MS(ESI)m/z:463(M+H)+。
步骤9：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(10)
将(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(100mg,0.21mmol)和LiOH·H2O(34mg,0.81mmol)在MeOH(2mL)和水(1mL)中的混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用0.5N HCl溶液酸化。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(50mg，收率52.8％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：435(M+H)+。
步骤10：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物168)
在0℃下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(3-苯基氧杂环丁-3-基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(50mg,0.11mmol)和(R)-5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(45mg,0.29mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(113mg,0.87mmol)，随后添加PyBOP(243mg,0.46mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将所得混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到粗产物，通过制备型HPLC对粗产物进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物168(0.5mg，收率1％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.19(d,J＝1.6Hz,1H),7.83(d,J＝8.5Hz,2H),7.43–7.34(m,5H),7.27(d,J＝7.6Hz,3H),5.28(dd,J＝20.9,6.0Hz,4H),4.82(s,1H),4.59–4.51(m,2H),4.34(d,J＝5.4Hz,2H),3.41(dd,J＝6.0,2.5Hz,1H),2.41(t,J＝12.4Hz,1H),2.17(dd,J＝13.3,3.2Hz,1H),1.29(s,3H),1.13(dd,J＝5.7,2.5Hz,1H),0.79(t,J＝6.5Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:572(M+H)+。
方案154：6-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)己酸(化合物169)的合成
Figure BDA0004238079180006691
步骤1：(1S,3S,5R)-5-((烯丙基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(2)
在0℃下向(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(300mg,0.86mmol)在DCE(5mL)中的溶液中添加AgOTf(333mg,1.29mmol)，随后添加3-碘丙-1-烯(0.24mL,2.58mmol)和2,6-二叔丁基吡啶(0.58mL,2.58mmol)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤并浓缩从而得到粗产物，其通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5R)-5-((烯丙基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(200mg，收率59.9％)。LC/MS(ESI)(m/z)：388(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5R)-5-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸甲基3-苄酯2-(叔丁基)酯(3)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((烯丙基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(200mg,0.52mmol)在DCM(8.0mL)中的溶液中添加格拉布第2代(108mg,0.13mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)进行纯化从而得到呈棕色油状物的(1S,3S,5R)-5-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(100mg，收率39.7％)。LC/MS(ESI)m/z:488(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5R)-5-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(4)
将(1S,3S,5R)-5-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-苄酯2-(叔丁基)酯(100mg,0.21mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈棕色油状物的(1S,3S,5R)-5-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(75mg，收率93.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:388(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5R)-5-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(6)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(75mg,0.19mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(50mg,0.21mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.19mL,1.14mmol)和T3P(370mg,0.57mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝96:4)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-(4-氟苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(60mg，收率51.2％)。LC/MS(ESI)m/z:607(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5R)-5-(((6-乙氧基-6-氧代己基)氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(7)
向(1S,3S,5R)-5-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(60mg,0.10mmol)在甲醇(5.0mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌1小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5R)-5-(((6-乙氧基-6-氧代己基)氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(50.0mg，收率98.0％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：519(M+H)+。
步骤6：6-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)己酸乙酯(8)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5R)-5-(((6-乙氧基-6-氧代己基)氧基)甲基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(50mg,0.10mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(24mg,0.15mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.1mL,0.60mmol)和T3P(184mg,0.30mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝7:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的6-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)己酸乙酯(50mg，收率76.9％)。LC/MS(ESI)m/z:670(M+H)+。
步骤7：6-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)己酸(化合物169)
在0℃下向6-(((1S,3S,5R)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-5-基)甲氧基)己酸乙酯(50mg,0.07mmol)在甲醇(3mL)和水(0.6mL)中的溶液中添加氢氧化锂(4.7mg,0.11mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物169(5mg，收率10.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.50(s,1H),7.25–7.20(m,2H),6.88(dd,J＝7.5,5.7Hz,3H),5.19(q,J＝7.4Hz,1H),4.57(s,1H),4.21(d,J＝16.6Hz,1H),4.11(d,J＝16.6Hz,1H),3.99(t,J＝6.3Hz,2H),3.51(d,J＝10.4Hz,1H),3.47(dt,J＝6.6,3.9Hz,3H),3.40(d,J＝10.3Hz,1H),2.65(t,J＝12.9Hz,1H),2.46(t,J＝7.4Hz,2H),2.21(t,J＝7.4Hz,2H),2.11–2.04(m,3H),1.58(dd,J＝20.4,7.1Hz,7H),1.45–1.38(m,2H),1.22(dd,J＝5.7,2.7Hz,1H),0.97(t,J＝6.3Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:642(M+H)+。
方案155：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物170)的合成
Figure BDA0004238079180006731
步骤1：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2)
在0℃下向(S)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(309mg,1.07mmol)在甲醇4mL)中的溶液中添加Pd/C(30mg,10重量％)，并将反应混合物在25℃、H2气氛下搅拌4小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅色油状物的(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(278mg，收率89.4％)。LC/MS(ESI)m/z:192(M-100+H)+。
步骤2：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(3)
在0℃下向(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(278mg,0.96mmol)在二氯甲烷(3mL)和MeCN(0.3mL)中的溶液中添加NMO(224mg,1.91mmol)和
Figure BDA0004238079180006732
分子筛(224mg)。将混合物搅拌10分钟，之后添加TPAP(34mg,0.10mmol)，并将反应物在25℃下搅拌1小时。将混合物用DCM稀释，用1N HCl溶液酸化，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅色油状物的(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(100mg，收率34.2％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:304(M+H)+
步骤3：(2S,4R)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(4)
在0℃下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(100mg,0.33mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加Cs2CO3(118mg,0.36mmol)，随后添加MeI(0.02mL,0.40mmol)，并将混合物在25℃下搅拌5小时。将混合物用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行干燥从而得到呈浅色油状物的(2S,4R)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(61mg，收率58.1％)。LC/MS(ESI)m/z:220(M-100+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(5)
将0℃下的(2S,4R)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(61mg,0.19mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用DCM洗涤，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(41mg，收率99.1％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:220(M+H)+
步骤5：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(6)
在0℃下向(2S,4R)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(41mg,0.19mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(53mg,0.22mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.14mmol)，随后添加T3P(363mg,0.57mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用乙酸乙酯萃取两次并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(80mg，收率96.4％)。LC/MS(ESI)m/z:439(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(7)
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(80mg,0.18mmol)在甲醇(1mL)和THF(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(8mg,0.18mmol)在水(0.5mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将水层用1N HCl溶液酸化，用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(66mg，收率86.8％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:425(M+H)+
步骤7：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物170)
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(66mg,0.16mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(30mg,0.19mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.1mL,0.80mmol)，随后添加PyBOP(125mg,0.24mmol)，并将混合物在25℃下搅拌30分钟。将混合物用乙酸乙酯萃取两次，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物170(7mg，收率7.8％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(dd,J＝3.2,2.8Hz,1H),7.49–7.41(m,1H),7.26–7.19(m,3H),7.15–7.06(m,3H),6.91–6.87(m,3H),4.60–4.56(m,2H),4.55–4.44(m,1H),4.18–4.08(m,2H),3.99(dd,J＝12.4,10.4Hz,3H),3.60(t,J＝10.4Hz,1H),3.52–3.42(m,1H),2.88–2.52(m,1H),2.47(t,J＝7.5Hz,2H),2.32(s,3H),2.11–1.98(m,3H)。LC/MS(ESI)m/z:562(M+H)+。
方案156：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物171)的合成
Figure BDA0004238079180006761
步骤1：(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(间-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(2)
在0℃下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(2g,3.42mmol)和间-甲苯基硼酸(465mg,3.42mmol)在1,4-二噁烷(14mL)和水(2mL)中的混合物中添加K2CO3(1.2g,8.55mmol)，随后添加Pd(PPh3)4(395mg,0.34mmol)，并将混合物在90℃下搅拌4小时。将混合物用乙酸乙酯稀释两次，并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(间-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.5g，收率83.3％)。LC/MS(ESI)m/z:471(M-56+H)+。
步骤2：(S)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(3)
在0℃下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(间-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.5g,2.80mmol)在THF(15mL)中的溶液中添加TBAF(5.7mL,1M于TBAF中)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释两次，并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(S)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(738mg，收率91.2％)。LC/MS(ESI)m/z:190(M-100+H)+。
步骤3：(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4)
在0℃下向(S)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(429mg,1.48mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加[Ir(cod)(PCy3)(py)]PF6(24mg,0.03mmol)，并将反应混合物在25℃、H2气氛下搅拌4天。将混合物过滤并在减压下浓缩至干。将粗残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(359mg，收率83.5％)。LC/MS(ESI)m/z:192(M-100+H)+。
步骤4：(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(5)
在0℃下向(2S,4S)-2-(羟基甲基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(359mg,1.23mmol)在DCM(3mL)和MeCN(0.3mL)中的溶液中添加NMO(288mg,2.46mmol)和
Figure BDA0004238079180006771
分子筛(288mg)。将混合物搅拌10分钟，并添加TPAP(43mg,0.12mmol)。将反应物在25℃下搅拌1小时，之后用DCM稀释，并将水层用1N HCl溶液酸化，用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(128mg，收率34.1％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:304(M+H)+
步骤5：(2S,4S)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(6)
在0℃下向(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(120mg,0.39mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加Cs2CO3(141mg,0.43mmol)，随后添加MeI(0.03mL,0.47mmol)，并将混合物在25℃下搅拌4.5小时。将混合物用乙酸乙酯萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行干燥从而得到呈浅色油状物的(2S,4S)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(80mg，收率64.5％)。LC/MS(ESI)m/z:220(M-100+H)+。
步骤6：(2S,4S)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(7)
将(2S,4S)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(80mg,0.25mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的溶液在室温下搅拌4小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，用DCM稀释，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(2S,4S)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(54mg，收率99.9％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:220(M+H)+
步骤7：(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(8)
在0℃下向(2S,4S)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(53mg,0.24mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(69mg,0.29mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.44mmol)，随后添加T3P(458mg,0.72mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在35℃下搅拌3小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用乙酸乙酯萃取两次并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(99mg，收率94.3％)。LC/MS(ESI)m/z:439(M+H)+。
步骤8：(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(9)
在0℃下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(99mg,0.23mmol)在甲醇(1mL)和THF(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(9mg,0.23mmol)在水(0.5mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将水层用1N HCl溶液酸化，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅色油状物的(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(46mg，收率47.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:425(M+H)+
步骤9：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物171)
在0℃下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-4-(间-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(46mg,0.11mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(25mg,0.13mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.1mL,0.66mmol)，随后添加T3P(209mg,0.33mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在35℃下搅拌4小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用乙酸乙酯萃取两次并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物171(6mg，收率9.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.21(d,J＝10.4Hz,1H),7.46(d,J＝26.0Hz,1H),7.27–7.18(m,4H),7.08(dd,J＝20.8,18.0Hz,2H),6.92–6.86(m,3H),4.65(d,J＝6.4Hz,1H),4.58(d,J＝9.6Hz,2H),4.14(dd,J＝23.6,16.4Hz,2H),4.00(dd,J＝10.0,10.8Hz,3H),3.59(d,J＝5.2Hz,1H),3.48(s,1H),2.50–2.45(m,2H),2.33(t,J＝8.4Hz,4H),2.16–1.98(m,3H)。LC/MS(ESI)m/z:562(M+H)+。
方案157：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物172)的合成
Figure BDA0004238079180006801
步骤1：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在0℃、N2气氛下向(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(110mg,0.42mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(90mg,0.46mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物中添加DIPEA(325mg,2.52mmol)和T3P(400mg,1.26mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(116mg，收率61.6％)。LC/MS(ESI)m/z:449(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(116mg,0.26mmol)在CH3OH(1.5mL)、THF(0.5mL)和水(0.5mL)中的混合物中添加LiOH·H2O(33mg,0.78mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH<3，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(94mg,83.4％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：435(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物172)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-(4-(三氟甲基)苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(80mg,0.18mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(40mg,0.24mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(142mg,1.10mmol)和PyBop(124mg,0.24mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物172(2.8mg，收率2.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.85(d,J＝8.9Hz,2H),7.52(s,1H),7.44–7.39(m,2H),7.21(d,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,2H),7.01(d,J＝8.9Hz,2H),6.51(s,1H),5.02(s,1H),4.57(s,1H),4.26(d,J＝16.7Hz,1H),4.14(d,J＝16.6Hz,1H),3.94(s,1H),3.88(s,1H),3.13(s,1H),2.19(s,3H),1.60(s,2H)。LC/MS(ESI)(m/z):586(M+H)+。
方案158：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物173)的合成
Figure BDA0004238079180006821
步骤1：(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃、N2气氛下向(S,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.0g,3.40mmol)在THF(10mL)中的溶液中逐滴添加环戊基溴化镁(6.8mL,6.80mmol)，并将反应混合物在-78℃下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝80:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(280mg，收率23.5％)和(S)-N-((S)-1-(4-溴噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(220mg，收率18.4％)。LC/MS(ESI)m/z:352/354(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(280mg,0.80mmol)在NMP(8mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(281mg,2.40mmol)和Pd(PPh3)4(185mg,0.16mmol)。将反应混合物在N2气氛下加热至160℃，并将反应混合物在160℃下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(88mg，收率37.0％)。LC/MS(ESI)m/z:299(M+H)+。
步骤3：5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)-N-羟基噻吩-3-甲脒
向(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(88mg,0.30mmol)在EtOH(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.15mL,0.89mmol)和NH2OH·HCl(48mg,0.69mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用冰水淬灭，并用DCM萃取两次，将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(54mg，收率55.2％)。LC/MS(ESI)m/z:332(M+H)+。
步骤4：5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒
在0℃下向5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(50mg,0.15mmol)在MeOH(3mL)和AcOH(0.02mL)中的溶液中添加雷尼镍(10mg)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈绿色油状物的5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒(45mg，收率95.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：316(M+H)+。
步骤5：(R)-5-(1-氨基-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒
将5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒(45mg,0.14mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的(R)-5-(1-氨基-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒(30mg，收率96.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:212(M+H)+。
步骤6：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物173)
在0℃、N2气氛下向(R)-5-(1-氨基-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒(30mg,0.14mmol)和(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(25mg,0.13mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.14mL,0.85mmol)和T3P(271mg,0.42mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将混合物用水淬灭，并用(CHCl3:异丙醇＝3:1)萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物173(1.0mg，收率1.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝1.2Hz,1H),7.50(s,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,2H),6.89(dd,J＝3.2,6.4Hz,3H),5.29–5.19(m,1H),4.61–4.50(m,2H),4.02–3.89(m,8H),3.73–3.65(m,2H),2.50–2.36(m,3H),2.10(m,J＝6.0,16.8,6.8Hz,3H),1.73–1.63(m,2H),1.00–0.92(m,6H)。LC/MS(ESI)(m/z):586(M+H)+。
方案159：(S)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物174)的合成
Figure BDA0004238079180006851
步骤1：(S)-N-((4-溴噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃、N2气氛下向(S,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.0g,3.40mmol)在THF(10mL)中的溶液中逐滴添加环戊基溴化镁(6.8mL,6.80mmol)，并将反应混合物在-78℃下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((4-溴噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(600mg，收率48.7％)。LC/MS(ESI)m/z:364/366(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向(S)-N-((4-溴噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(600mg,1.65mmol)在NMP(8mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(579mg,4.95mmol)和Pd(PPh3)4(381mg,0.33mmol)。将反应混合物在N2气氛下加热至160℃，并将反应混合物在160℃下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝200:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(150mg，收率29.4％)和(S)-N-((S)-(4-氰基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(120mg，收率23.5％)。LC/MS(ESI)m/z:311(M+H)+。
步骤3：5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒
在N2气氛下向(S)-N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(150mg,0.48mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中添加NH2OH盐酸盐(84mg,1.21mmol)和DIPEA(186mg,1.44mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。将水层用二氯甲烷萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝100:1)进行纯化从而得到呈白色固体的5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(70mg，收率42.5％)。LC/MS(ESI)m/z:344(M+H)+。
步骤4：5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒
在H2气氛下向5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(70mg,0.20mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和AcOH(一滴)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(65mg，收率99.4％)。LC/MS(ESI)m/z:328(M+H)+。
步骤5：(R)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒
将在N2气氛下的5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(carboximidamide)(65mg,0.20mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的溶液在室温下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(R)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(40mg，收率90.9％)。LC/MS(ESI)m/z:224(M+H)+。
步骤6：(S)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物174)
在0℃、N2气氛下向(R)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(40mg,0.18mmol)和(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(70mg,0.18mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(116mg,0.90mmol)和T3P(172mg,0.27mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物174(10mg，收率9.3％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.25–8.20(m,1H),7.51–7.46(m,1H),7.26–7.20(m,2H),6.90–6.86(m,3H),4.99–4.90(m,1H),4.63–4.50(m,1H),4.01–3.86(m,8H),3.71–3.64(m,2H),2.48–2.40(m,3H),2.40–2.32(m,1H),2.15–2.03(m,3H),1.91–1.77(m,1H),1.69–1.54(m,5H),1.36–1.22(m,2H)。LC/MS(ESI)m/z:598(M+H)+。
方案160：(S)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物175)的合成
Figure BDA0004238079180006881
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步骤1：(R,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2)
向4-溴噻吩-2-甲醛(2g,10.47mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.4g,11.52mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加Ti(i-PrO)4(4.5g,15.70mmol)。将混合物在N2气氛下加热至75℃，在75℃下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用H2O洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(R,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.8g，收率90.9％)。LC/MS(ESI)m/z:294(M+H)+。
步骤2：(R)-N-((R)-(4-溴噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3)
向(R,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1g,3.40mmol)和MeOH(218mg,6.80mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中添加Ph4BNa(1.40g,4.08mmol)和[Rh(Cl)(cod)]2(34mg,0.068mmol)。将混合物在N2气氛下加热至至多65℃，并将反应混合物搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用H2O洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(R)-N-((R)-(4-溴噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.2g,3.22mmol，收率94.9％)。LC/MS(ESI)m/z:372(M+H)+。
步骤3：N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4)
向(R)-N-((R)-(4-溴噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(600mg,1.61mmol)在NMP(10mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(378mg,3.22mmol)和Pd(PPh3)4(186mg,0.16mmol)。将混合物在N2气氛下加热至至多160℃，并搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(80mg，收率15.6％)。LC/MS(ESI)m/z:319(M+H)+。
步骤4：5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(5)
在N2气氛下向N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(80mg,0.25mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中添加NH2OH盐酸盐(44mg,0.63mmol)和DIPEA(98mg,0.75mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(50mg，收率56.6％)。LC/MS(ESI)m/z:352(M+H)+。
步骤5：5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(6)
在N2气氛下向5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(50mg,0.14mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加雷尼镍(1mL)和AcOH(0.1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(45mg，收率94.1％)。LC/MS(ESI)m/z:336(M+H)+。
步骤6：(R)-5-(氨基(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(7)
在N2气氛下向5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(45mg,0.13mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(R)-5-(氨基(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(30mg，收率96.8％)。LC/MS(ESI)m/z:232(M+H)。
步骤7：(S)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物175)
在0℃、N2气氛下向(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(51mg,0.13mmol)和(R)-5-(氨基(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(30mg,0.13mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(101mg,0.78mmol)和T3P(124mg,0.19mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物175(5mg，收率6.4％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.27(dd,J＝6.9,1.6Hz,1H),7.48(dd,J＝13.5,12.1Hz,1H),7.41–7.32(m,5H),7.23(ddd,J＝9.7,6.8,2.9Hz,2H),6.91–6.87(m,3H),6.43(d,J＝35.5Hz,1H),4.61(dd,J＝8.7,6.8Hz,1H),4.04–3.93(m,8H),3.76–3.68(m,2H),2.46(t,J＝7.4Hz,2H),2.38(dd,J＝13.1,8.8Hz,1H),2.26–2.12(m,1H),2.09–2.02(m,2H)。LC/MS(ESI)m/z:606(M+H)+。
方案161：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-苯基乙基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物176)
Figure BDA0004238079180006911
步骤1：(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-2-苯基乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃、N2气氛下向(S,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.0g,3.40mmol)在THF(10mL)中的溶液中逐滴添加苄基溴化镁(5.7mL,5.10mmol)，并将反应混合物在-78℃下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-2-苯基乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(291mg，收率22.4％)。LC/MS(ESI)m/z:386/388(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-苯基乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-2-苯基乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(240mg,0.62mmol)在NMP(3mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(146mg,1.25mmol)和Pd(PPh3)4(72mg,0.06mmol)。将反应混合物在N2气氛下加热至至多160℃，并搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-苯基乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(143mg，收率69.4％)。LC/MS(ESI)m/z:333(M+H)+。
步骤3：5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-苯基乙基)-N-羟基噻吩-3-甲脒
在N2气氛下向(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-苯基乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(143mg,0.43mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中添加NH2OH盐酸盐(75mg,1.08mmol)和DIPEA(0.2mL,1.29mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)进行纯化从而得到呈白色固体的5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-苯基乙基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(95mg，收率60.5％)。LC/MS(ESI)m/z:366(M+H)+。
步骤4：5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-苯基乙基)噻吩-3-甲脒
在H2气氛下向5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-苯基乙基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(95mg,0.26mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和AcOH(一滴)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-苯基乙基)噻吩-3-甲脒(83mg，收率91.24％)。LC/MS(ESI)m/z:350(M+H)+。
步骤5：(R)-5-(1-氨基-2-苯基乙基)噻吩-3-甲脒
将5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-苯基乙基)噻吩-3-甲脒(83mg,0.24mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(R)-5-(1-氨基-2-苯基乙基)噻吩-3-甲脒(58mg，收率98.3％)。LC/MS(ESI)m/z:246(M+H)+。
步骤6：(S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-苯基乙基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物176)
在0℃、N2气氛下向(R)-5-(1-氨基-2-苯基乙基)噻吩-3-甲脒(30mg,0.18mmol)和(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(30mg,0.08mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(0.06mL,0.40mmol)和T3P(61mg,0.10mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物176(1.9mg，收率3.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(d,J＝1.2Hz,1H),7.51(d,J＝12.4Hz,1H),7.28–7.19(m,7H),6.90–6.85(m,3H),5.44(dd,J＝9.6,9.6Hz,1H),4.46–4.38(m,1H),4.01–3.83(m,9H),3.67–3.55(m,2H),3.10–3.04(m,1H),2.44(t,J＝7.4Hz,2H),2.07(dd,J＝13.8,7.4Hz,3H),1.77–1.71(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:620(M+H)+。
方案162：(S)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物177)的合成
Figure BDA0004238079180006941
步骤1：5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(2)
在N2气氛下向(S)-N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(84mg,0.30mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中添加NH2OH盐酸盐(52mg,0.74mmol)和DIPEA(0.25mL,1.50mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用DCM稀释并用水洗涤。将水层用DCM萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝94:6)进行纯化从而得到呈白色固体的5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(90mg，收率95.7％)。LC/MS(ESI)m/z:316(M+H)+。
步骤2：5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(5)
在H2气氛下向5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(90mg,0.29mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和AcOH(一滴)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(75mg，收率94.9％)。LC/MS(ESI)m/z:300(M+H)+。
步骤3：(R)-5-(氨基(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(4)
将5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(75mg,0.25mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(R)-5-(氨基(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(45mg，收率91.8％)。LC/MS(ESI)m/z:196(M+H)+。
步骤4：(S)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物177)
在0℃、N2气氛下向(R)-5-(氨基(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(30mg,0.15mmol)和(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(50mg,0.13mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(0.1mL,0.78mmol)和T3P(97mg,0.15mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物177(5mg，收率6.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.24(dd,J＝4.9,1.6Hz,1H),7.59(t,J＝1.4Hz,1H),7.23(dd,J＝9.7,6.4Hz,2H),6.91–6.87(m,3H),4.67–4.53(m,1H),4.46(t,J＝12.7Hz,1H),4.05–3.95(m,8H),3.71(q,J＝10.5Hz,2H),2.44(dt,J＝12.6,8.1Hz,3H),2.20(dd,J＝13.1,6.7Hz,1H),2.08(dd,J＝14.1,6.7Hz,2H),1.32(ddd,J＝12.6,8.0,4.6Hz,1H),0.80–0.72(m,1H),0.63(ddd,J＝13.3,9.1,4.4Hz,1H),0.55–0.43(m,2H)。LC/MS(ESI)m/z:570(M+H)+。
方案163：(S)-N-((S)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物178)的合成
Figure BDA0004238079180006961
步骤1：(S)-N-((4-溴噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2)
在-78℃、N2气氛下向(S,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.0g,3.40mmol)在DCM(15mL)中的溶液中逐滴添加环丙基溴化镁(10.2mL,10.2mmol)，并将反应混合物在-78℃下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((4-溴噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.05g，收率92.1％)。LC/MS(ESI)m/z:336/338(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((S)-(4-氰基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3A)和(S)-N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3B)
向(S)-N-((4-溴噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.1g,3.28mmol)在NMP(11mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(1.16g,9.85mmol)和Pd(PPh3)4(759mg,0.66mmol)。将反应混合物在N2气氛下加热至100℃，并将反应混合物在100℃下搅拌16小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:2)进行纯化从而得到粗产物，通过SFC对该粗产物进行进一步纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((S)-(4-氰基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(140mg，收率56.0％)和(S)-N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(85mg，收率34.0％)。LC/MS(ESI)m/z:283(M+H)+。
步骤3：5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(4)
在N2气氛下向(S)-N-((S)-(4-氰基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(110mg,0.39mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中添加NH2OH盐酸盐(68mg,0.98mmol)和DIPEA(0.2mL,1.17mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。将水层用二氯甲烷萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝94:6)进行纯化从而得到呈白色固体的5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(120mg，收率98.4％)。LC/MS(ESI)m/z:316(M+H)+。
步骤4：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)新戊酰胺(5)
在H2气氛下向5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(120mg,0.38mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和AcOH(一滴)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)新戊酰胺(100mg，收率87.7％)。LC/MS(ESI)m/z:300(M+H)+。
步骤5：(S)-5-(氨基(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(6)
将(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)新戊酰胺(100mg,0.33mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(S)-5-(氨基(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(60mg，收率85.7％)。LC/MS(ESI)m/z:196(M+H)+。
步骤6：(S)-N-((S)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物178)
在0℃、N2气氛下向(S)-5-(氨基(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(30mg,0.15mmol)和(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(50mg,0.13mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(0.1mL,0.78mmol)和T3P(97mg,0.15mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物178(8mg，收率10.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.24(dd,J＝4.9,1.6Hz,1H),7.59(t,J＝1.4Hz,1H),7.23(dd,J＝9.7,6.4Hz,2H),6.91–6.87(m,3H),4.67–4.53(m,1H),4.46(t,J＝12.7Hz,1H),4.05–3.95(m,8H),3.71(q,J＝10.5Hz,2H),2.44(dt,J＝12.6,8.1Hz,3H),2.20(dd,J＝13.1,6.7Hz,1H),2.08(dd,J＝14.1,6.7Hz,2H),1.32(ddd,J＝12.6,8.0,4.6Hz,1H),0.80–0.72(m,1H),0.63(ddd,J＝13.3,9.1,4.4Hz,1H),0.55–0.43(m,2H)。LC/MS(ESI)m/z:570(M+H)+。
方案164：(S)-N-((S)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物179)的合成
Figure BDA0004238079180006991
步骤1：5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒
在N2气氛下向(S)-N-((S)-(4-氰基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(120mg,0.39mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中添加NH2OH盐酸盐(67mg,0.97mmol)和DIPEA(151mg,1.17mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷稀释并用水洗涤。将水层用二氯甲烷萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝100:1)进行纯化从而得到呈白色固体的5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环丙基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(100mg，收率75.8％)。LC/MS(ESI)m/z:344(M+H)+。
步骤2：5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒
在H2气氛下向5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(100mg,0.29mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和AcOH(一滴)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(70mg，收率73.7％)。LC/MS(ESI)m/z:328(M+H)+。
步骤3：(S)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒
将5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(70mg,0.21mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(S)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(45mg，收率94.3％)。LC/MS(ESI)m/z:224(M+H)+。
步骤4：(S)-N-((S)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物179)
在0℃、N2气氛下向(S)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(40mg,0.18mmol)和(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(70mg,0.18mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(116mg,0.90mmol)和T3P(172mg,0.27mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物179(2.0mg，收率1.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21–8.16(m,1H),7.43–7.36(m,1H),7.25–7.21(m,2H),6.90–6.87(m,3H),4.91(d,J＝10.0Hz,1H),4.52(dd,J＝9.2,9.2Hz,1H),4.02–3.92(m,8H),3.73–3.69(m,2H),2.48–2.43(m,3H),2.39–2.32(m,1H),2.14–2.04(m,3H),1.99–1.93(m,1H),1.69–1.57(m,5H),1.50–1.42(m,1H),1.30–1.23(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:598(M+H)+。
方案165：(1S,3S,5S)-2-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物180)的合成
Figure BDA0004238079180007011
步骤1：(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸甲酯
在0℃、N2气氛下向4-苯甲酰基苯甲酸(500mg,2.21mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(304mg,2.4mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(1.4g,11.05mmol)和HATU(1.26g,3.3mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸甲酯(650mg，收率98％)。LC/MS(ESI)m/z:298(M+H)+。
步骤2：(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸
在0℃下向(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸甲酯(650mg,2.19mmol)在甲醇(6mL)、THF(3mL)和水(3mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(277mg,6.59mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸(541mg，收率86.7％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：284(M+H)+。
步骤3：(1S,5S)-2-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯
在0℃、N2气氛下向(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸(116mg,0.407mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯盐酸盐(63mg,0.37mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(286mg,2.22mmol)和T3P(353mg,1.11mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,5S)-2-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(150mg，收率92.7％)。LC/MS(ESI)m/z:435(M+H)+。
步骤4：(1S,5S)-2-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸
在0℃下向(1S,5S)-2-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(150mg,0.35mmol)在甲醇(2mL)、THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(44mg,1.05mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1.5小时。将混合物用1NHCl水溶液酸化至pH～3，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(1S,5S)-2-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(121mg，收率86.4％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：407(M+H)+。
步骤5：(1S,5S)-2-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物180)
在0℃、N2气氛下向(1S,5S)-2-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(40mg,0.1mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(20mg,0.11mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(65mg,0.5mmol)和T3P(77mg,0.12mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物180(1.0mg，收率1.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.99(d,J＝8.4Hz,2H),7.86–7.79(m,4H),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.56(d,J＝7.9Hz,2H),7.50(s,1H),5.22(d,J＝6.8Hz,1H),4.82(s,1H),4.46(d,J＝8.2Hz,1H),4.30(d,J＝20.8Hz,1H),3.42–3.39(m,1H),2.44(t,J＝12.4Hz,1H),2.16(dd,J＝3.6,13.6Hz,1H),1.58(d,J＝6.0Hz,3H),1.31(s,3H),1.22(dd,J＝2.8,5.6Hz,1H),0.79(t,J＝6.1Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：558(M+H)+。
方案166：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物181)的合成
Figure BDA0004238079180007041
步骤1：(2S,4R)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(2)
在0℃、N2气氛下向(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸苄酯(150mg,0.55mmol)和(2S,4R)-4-苯氧基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(122mg,0.55mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.55mL,3.30mmol)和T3P(528mg,0.82mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝98:2)进行纯化从而得到呈黄色固体的(2S,4R)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(214mg，收率81.7％)。LC/MS(ESI)m/z:475(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(3)
在0℃下向(2S,4R)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(214mg,0.45mmol)在甲醇(3mL)和水(0.6mL)中的溶液中添加氢氧化锂(28mg,0.68mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(200mg，收率96.1％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：461(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物181)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(60mg,0.13mmol)和(R)-5-(1-(l2-氮烷基)乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(33mg,0.20mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.11mL,0.45mmol)和T3P(99mg,0.16mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物181(5mg，收率6.25％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.23(dd,J＝10.1,1.6Hz,1H),7.86–7.82(m,2H),7.55(dd,J＝4.7,3.4Hz,1H),7.44–7.39(m,2H),7.34–7.28(m,2H),7.23–7.18(m,1H),7.06(dd,J＝8.6,1.0Hz,2H),7.02–6.95(m,5H),5.27(q,J＝7.1Hz,1H),5.17(s,1H),4.62(t,J＝8.2Hz,1H),4.25(d,J＝16.6Hz,1H),4.18–4.11(m,1H),4.04–3.89(m,2H),2.57(dd,J＝13.9,8.0Hz,1H),2.26(ddd,J＝13.5,8.8,4.6Hz,1H),1.61(dd,J＝30.7,7.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:612(M+H)+。
方案167：(1S,3S,5S)-N-((4-氨基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物182)的合成
Figure BDA0004238079180007061
步骤1：(2-(噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2)
向2-(噻吩-2-基)乙烷-1-胺(15g,118mmol)在DCM(200mL)中的溶液中添加TEA(19g,147mmol)和二碳酸二叔丁酯(32g,146.7mmol)，并将混合物在室温下搅拌12小时。将混合物用水稀释并用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝8:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2-(噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(25g，收率93.2％)。LC/MS(ESI)m/z:172(M+H-56)+。
步骤2：(2-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(3)
在0℃下向(2-(噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(20g,88.1mmol)在CHCl3(200mL)中的混合物中分批添加NBS(17g,95.5mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的(2-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(15g，收率55.7％)。LC/MS(ESI)m/z:250(M+H-56)+。
步骤3：2-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-胺盐酸盐(4)
在0℃下向(2-(5-溴噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(10g,32.6mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(30mL,4M)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干，并将所得残余物用饱和NaHCO3水溶液中和，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的2-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-胺盐酸盐(6g，收率89％)。LC/MS(ESI)m/z:205(M+H)+。
步骤4：2-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(5)
在0℃下向2-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-胺(4g,19.5mmol)在DCM(60mL)中的溶液中添加三光气(1.9g,6.44mmol)，并将混合物搅拌0.5小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物溶解于DCM(20mL)并添加FeCl3(6.31g,39.0mmol)，并将所得混合物在50℃下搅拌2小时。将混合物用水稀释，并用DCM萃取两次，将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的2-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(1g，收率22％)。LC/MS(ESI)m/z:232(M+H)+。
步骤5：4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲腈(6)
向2-溴-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮(400mg,1.73mmol)和Zn(CN)2(607mg,5.19mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加Pd(PPh3)4(400mg,0.34mmol)。将混合物在N2气氛下脱气三次，并在120℃下搅拌12小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲腈(300mg，收率97％)。LC/MS(ESI)m/z:179(M+H)+。
步骤6：((4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(7)
向4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲腈(300mg,1.68mmol)和二碳酸二叔丁酯(800mg,3.66mmol)在THF(10mL)中的混合物中添加雷尼镍(500mg)，并将混合物脱气并在25℃、H2球囊下搅拌12小时。将混合物过滤，并将滤液用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(170mg，收率35％)。LC/MS(ESI)m/z:227(M+H-56)+。
步骤7：((4-硫代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(8)
向((4-氧代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(170mg,0.60mmol)在吡啶(5mL)中的溶液中添加P4S10(230mg,0.60mmol)，并将混合物在75℃下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)进行纯化从而得到呈黄色固体的((4-硫代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(80mg，收率44.6％)。LC/MS(ESI)m/z:143(M+H-56)+。
步骤8：((4-(甲基硫基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(9)
向((4-硫代-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.26mmol)和K2CO3(111mg,0.80mmol)在丙酮(3mL)中的混合物中添加MeI(76mg,0.53mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将所得混合物过滤，并将滤饼用乙酸乙酯(2×5mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩从而得到呈黄色油状物的((4-(甲基硫基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(80mg，收率96.3％)。LC/MS(ESI)m/z:313(M+H)+。
步骤9：((4-氨基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(10)
向((4-(甲基硫基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.25mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加NH3/MeOH(2mL,7M)，并将混合物在密封管中在75℃下搅拌4小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的((4-氨基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，收率83.3％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：226(M+H-56)+。
步骤10：2-(氨基甲基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-胺盐酸盐(11)
在0℃下向((4-氨基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(40mg,0.17mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL,4M)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩从而得到呈白色固体的2-(氨基甲基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-胺盐酸盐(40mg，收率100％)，其未经纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:182(M+H)+。
步骤11：(1S,3S,5S)-N-((4-氨基-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物182)
向2-(氨基甲基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-4-胺盐酸盐(24mg,0.11mmol)、(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(50mg,0.12mmol)和HATU(60mg,0.15mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(40mg,0.31mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将所得混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物182(2.2mg，收率3.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83(d,J＝8.9Hz,2H),7.44–7.40(m,2H),7.31(s,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,2H),6.99(d,J＝8.9Hz,2H),4.82(s,1H),4.52(s,2H),4.32(s,2H),3.62(t,J＝7.2Hz,2H),3.42(d,J＝3.5Hz,1H),3.11(dt,J＝14.5,4.4Hz,3H),2.41(t,J＝13.1Hz,1H),2.24–2.13(m,1H),1.30(s,3H),1.12(d,J＝3.4Hz,1H),0.80–0.78(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:558(M+H)+。
方案168：(2S,4R)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物183)的合成
Figure BDA0004238079180007101
步骤1：(2S,4R)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环丙基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物183)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(60mg,0.14mmol)和(R)-5-(氨基(环丙基)甲基)噻吩-3-甲脒(50mg,0.14mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.25mL,0.83mmol)和T3P(132mg,0.21mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物183(6mg，收率7.1％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.30–8.23(m,1H),7.88–7.83(m,2H),7.60(dd,J＝11.1,9.8Hz,1H),7.44–7.39(m,2H),7.21(dd,J＝10.6,4.2Hz,1H),7.08–7.04(m,2H),7.03–6.99(m,2H),6.74–6.29(m,1H),5.03(s,1H),4.74–4.59(m,1H),4.56–4.43(m,1H),4.25(t,J＝22.1Hz,1H),4.15(d,J＝16.7Hz,1H),3.96(dd,J＝11.5,4.6Hz,1H),3.89(d,J＝11.1Hz,1H),2.55–2.47(m,1H),2.40–2.20(m,1H),1.34–1.27(m,1H),0.83–0.74(m,1H),0.73–0.60(m,1H),0.50(ddt,J＝23.5,9.6,4.7Hz,2H)。LC/MS(ESI)m/z:612(M+H)+。
方案169：4-(((S)-1-((2-((1S,3S,5S)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-4-苯氧基丁-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物184)的合成
Figure BDA0004238079180007111
步骤1：N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸甲酯(2)
在0℃、N2气氛下向(叔丁氧基羰基)-L-高丝氨酸甲酯(400mg,1.7mmol)和苯酚(323mg,3.4mmol)在THF(10.0mL)中的混合物中添加PPh3(1.35g,5.1mmol)和DIAD(1.04g,5.1mmol)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸甲酯(297mg，收率56.0％)。LC/MS(ESI)m/z:310(M+H)+。
步骤2：N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸(3)
在0℃下向N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸甲酯(297mg,0.96mmol)在甲醇(3mL)和水(0.6mL)中的溶液中添加氢氧化锂(121mg,2.88mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸(218mg，收率77.0％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：296(M+H)+。
步骤3：N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸苄酯(4)
在0℃、N2气氛下向N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸(218mg,0.74mmol)和甘氨酸苄酯(225mg,1.11mmol)在DMF(5.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.6mL,0.55mmol)和HATU(421mg,1.11mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)进行纯化从而得到呈白色固体的N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸苄酯(143mg，收率43.9％)。LC/MS(ESI)m/z:443(M+H)+。
步骤4：O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸苄酯盐酸盐(5)
将N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸苄酯(143mg,0.32mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓缩至干，与二氯甲烷共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸苄酯盐酸盐(130mg，收率100％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:343(M+H)+。
步骤5：(S)-4-((1-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-4-苯氧基丁-2-基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(6)
在0℃、N2气氛下向O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸苄酯盐酸盐(130mg,0.32mmol)和4-甲氧基-4-氧代丁酸(64mg,0.48mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.27mL,1.60mmol)和HATU(147mg,0.38mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc(20mL)稀释，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-4-((1-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-4-苯氧基丁-2-基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(140mg，收率95.9％)。LC/MS(ESI)m/z:457(M+H)+。
步骤6：N-(4-甲氧基-4-氧代丁酰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸(7)
在0℃下向(S)-4-((1-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-4-苯氧基丁-2-基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(167mg,0.37mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将反应混合物在25℃、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的N-(4-甲氧基-4-氧代丁酰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸(127mg，收率94.8％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:367(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-2-(N-(4-甲氧基-4-氧代丁酰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(8)
在0℃、N2气氛下向N-(4-甲氧基-4-氧代丁酰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸(127mg,0.35mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(120mg,0.52mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.34mL,2.10mmol)和T3P(331mg,0.52mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5S)-2-(N-(4-甲氧基-4-氧代丁酰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(150mg，收率75.0％)。LC/MS(ESI)m/z:580(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-2-(N-(4-甲氧基-4-氧代丁酰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(9)
在0℃下向(1S,3S,5S)-2-(N-(4-甲氧基-4-氧代丁酰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(150mg,0.26mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将反应混合物在25℃、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈浅色油状物的(1S,3S,5S)-2-(N-(4-甲氧基-4-氧代丁酰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(120mg，收率95.2％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:490(M+H)+。
步骤9：4-(((S)-1-((2-((1S,3S,5S)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-4-苯氧基丁-2-基)氨基)-4-氧代丁酸苄酯甲酯(10)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-2-(N-(4-甲氧基-4-氧代丁酰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(65mg,0.13mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(34mg,0.20mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.11mL,0.65mmol)和T3P(101mg,0.16mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的4-(((S)-1-((2-((1S,3S,5S)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-4-苯氧基丁-2-基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(70mg，收率82.3％)。LC/MS(ESI)m/z:641(M+H)+。
步骤10：4-(((S)-1-((2-((1S,3S,5S)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-4-苯氧基丁-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物184)
向4-(((S)-1-((2-((1S,3S,5S)-3-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-4-苯氧基丁-2-基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(70mg,0.11mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加LiOH.H2O(6mg,0.16mmol)在水(0.6mL)中的溶液，并将混合物在30℃下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～4，并通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物184(6mg，收率8.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.43(s,1H),8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.64(s,1H),7.26–7.21(m,2H),6.91–6.88(m,3H),5.11(q,J＝7.2Hz,1H),4.81(d,J＝3.6Hz,1H),4.72(dd,J＝9.6,4.4Hz,1H),4.31(d,J＝16.6Hz,1H),4.06(ddd,J＝11.1,8.9,4.7Hz,2H),3.98(d,J＝16.6Hz,1H),3.35(dd,J＝5.9,2.3Hz,1H),2.62–2.55(m,2H),2.52–2.40(m,4H),2.12(dd,J＝13.3,3.7Hz,1H),2.04(ddd,J＝14.5,9.7,5.0Hz,1H),1.56(t,J＝9.2Hz,3H),1.29(s,4H),0.80(t,J＝5.4Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：627(M+H)+。
方案170：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物185)
Figure BDA0004238079180007161
步骤1：(2S,4R)-4-甲氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(2)
在0℃下，向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-甲酸(100mg,0.41mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加Cs2CO3(147mg,0.45mmol)，随后添加MeI(0.03mL,0.49mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用乙酸乙酯稀释两次，并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-甲氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(117mg，收率100％)。LC/MS(ESI)m/z:260(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-甲氧基吡咯烷-2-甲酸甲酯(3)
在0℃下，将(2S,4R)-4-甲氧基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(117mg,0.45mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在25℃下搅拌3小时。将反应混合物浓缩至干，用DCM洗涤，并在真空下干燥从而得到呈浅色油状物的(2S,4R)-4-甲氧基吡咯烷-2-甲酸甲酯(71mg，收率98.6％)。LC/MS(ESI)m/z:160(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(4)
在0℃下，在N2气氛下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-甲酸(71mg,0.45mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(121mg,0.45mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加T3P(859mg,1.35mmol,50重量％于乙酸乙酯中)和DIPEA(0.4mL,2.70mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸乙酯甲酯(130mg，收率70.3％)。LC/MS(ESI)m/z:413(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(5)
向(2S,4R)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸乙酯甲酯(130mg,0.32mmol)在THF/MeOH/H2O(4mL,v:v＝2/1/1)中的溶液中添加氢氧化锂水合物(13mg,0.32mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物浓缩至干，用水稀释并用乙酸乙酯洗涤两次。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～4，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(120mg，收率94.5％)。LC/MS(ESI)m/z:399(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-苯氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物185)
在0℃下，在N2气氛下向(2S,4R)-4-甲氧基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(50mg,0.13mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(25mg,0.15mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(0.06mL,0.39mmol)和T3P(124mg,0.20mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物185(1.8mg，收率2.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.22(dd,J＝7.6,7.6Hz,1H),7.88–7.82(m,2H),7.54(dd,J＝6.4,2.82Hz,1H),7.44–7.38(m,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),7.02–6.98(m,2H),5.31–5.22(m,1H),4.48(t,J＝8.0Hz,1H),4.19(t,J＝8.4Hz,2H),3.86–3.74(m,2H),3.37(s,3H),2.59–2.32(m,1H),2.20–2.01(m,1H),1.59(t,J＝15.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:550(M+H)+。
方案171：2-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(化合物186)的合成
Figure BDA0004238079180007181
步骤1：2-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(2)
在0℃下向2-羟基苯甲酸甲酯(1.0g,6.58mmol)和4-溴丁酸叔丁酯(1.5g,6.58mmol)在NMP(10mL)中的混合物中添加K2CO3(2.7g,19.7mmol)，并将混合物在120℃下搅拌24小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的2-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(1.0g，收率53.6％)。LC/MS(ESI)m/z:239(M-56+H)+。
步骤2：4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酸(3)
在0℃下向2-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(1.0g,3.54mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(3mL)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物浓缩至干，与二氯甲烷共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈黄色油状物的4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酸(842mg，收率99.9％)，其未经纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:239(M+H)+。
步骤3：2-(4-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(4)
在0℃下向4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酸(842mg,3.54mmol)在DMF(9mL)中的混合物中添加DIPEA(2.3mL,14.2mmol)，随后添加HATU(2.0g,5.31mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的2-(4-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(850mg，收率65.4％)。LC/MS(ESI)m/z:384(M+H)+。
步骤4：(4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(5)
在室温、N2气氛下向2-(4-((2-(苄氧基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(850mg,2.21mmol)在MeOH(8mL)中的溶液中添加Pd/C(50mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2气氛下搅拌3小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈浅色油状物的(4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(595mg，收率91.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:296(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-2-((4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(6)
在0℃下向(4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酸(260mg,0.90mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(209mg,0.90mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.9mL,5.40mmol)，随后添加T3P(1.7g,2.70mmol,50％于乙酸乙酯中)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤，并将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(1S,3S,5S)-2-((4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(432mg，收率94.5％)。LC/MS(ESI)m/z:509(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-2-((4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(7)
在N2气氛下向(1S,3S,5S)-2-((4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(432mg,0.85mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中添加Pd/C(40mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2气氛下搅拌1.5小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈浅黄色油状物的(1S,3S,5S)-2-((4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(328mg，收率92.4％)。LC/MS(ESI)m/z:419(M+H)+。
步骤7：2-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(8)
在0℃下向(1S,3S,5S)-2-((4-(2-(甲氧基羰基)苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(100mg,0.24mmol)和N-乙酰氧基-5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(101mg,0.48mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.2mL,1.20mmol)，随后添加HATU(134mg,0.36mmol)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯萃取两次，并用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的2-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(120mg，收率81.6％)。LC/MS(ESI)m/z:614(M+H)+。
步骤8：2-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(9)
在0℃下向2-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸甲酯(120mg,0.20mmol)在MeOH(1mL)和THF(0.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(12mg,0.30mmol)在水(0.5mL)中的溶液，并将混合物在30℃下搅拌24小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯洗涤两次。将水层用1M HCl水溶液酸化并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈黄色油状物的2-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(111mg，收率99.6％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:558(M+H)+。
步骤9：2-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(化合物186)
在N2气氛下向2-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(30mg,0.05mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(5mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的2-(4-((2-((1S,3S,5S)-3-(((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁氧基)苯甲酸(1.7mg，收率6.3％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.35(s,1H),8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.62(d,J＝1.2Hz,1H),7.47(dd,J＝6.8,7.6Hz,1H),7.31–7.27(m,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,1H),6.93(t,J＝7.4Hz,1H),4.80(d,J＝4.0Hz,1H),4.66(d,J＝17.2Hz,1H),4.31(dd,J＝29.2,29.2Hz,2H),4.12(s,1H),4.08–4.05(m,2H),3.34(s,1H),2.59–2.54(m,2H),2.46–2.39(m,1H),2.15–2.10(m,1H),2.08–2.04(m,2H),1.29(s,3H),1.27–1.24(m,1H),0.83(t,J＝5.9Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:542(M+H)+。
方案172：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物187)的合成
Figure BDA0004238079180007221
步骤1：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(30mg,0.12mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(32mg,0.12mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.12mL,0.72mmol)和T3P(224mg,0.354mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(59mg，收率98.7％)。LC/MS(ESI)(m/z)：508(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(59mg,0.012mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(10重量％,15mg)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌1小时。将混合物过滤，并将滤液在减压下浓缩从而得到呈浅色油状物的((2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(48mg，收率98.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：419(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物187)
在0℃下向((2S,4R)-4-氟-4-(氟甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(48mg,0.11mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(23mg,0.14mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.09mL,0.55mmol)和T3P(105mg,0.17mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用水洗涤并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物187(5.0mg，收率7.7％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(d,J＝10.4Hz,1H),7.84(t,J＝8.0Hz,2H),7.56(d,J＝9.6Hz,1H),7.44–7.39(m,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,2H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),5.39–5.22(m,1H),4.80–4.74(m,1H),4.69–4.59(m,2H),4.36–4.22(m,1H),4.18–4.08(m,2H),4.01–3.86(m,1H),2.83–2.53(m,1H),2.44–2.13(m,1H),1.62(dd,J＝29.6,29.6Hz,3H)。LC/MS(ESI)(m/z)：570(M+H)+。
方案173：(2S,4R)-N-((S)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物188)的合成
Figure BDA0004238079180007241
步骤1：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(2)
在0℃下，在N2气氛下向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(660mg,3.38mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(917mg,3.38mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加T3P(4.46g,10.15mmol)和DIPEA(2.62g,20.29mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(1.5g,3.35mmol，收率98.9％)。LC/MS(ESI)m/z:449(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(3)
在N2气氛下，向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(1.5g,3.35mmol)在THF/MeOH/H2O(v:v＝4:1:1,18mL)中的溶液中添加氢氧化锂(281mg,6.69mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用H2O洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(1.15g，收率79.1％)。LC/MS(ESI)m/z:435(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((S)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-甲基丙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物188)
在0℃下，在N2气氛下向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(77mg,0.18mmol)和(R)-5-(1-氨基-2-甲基丙基)噻吩-3-甲脒(35mg,0.18mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(138mg,1.06mmol)和T3P(339mg,0.53mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物188(5mg，收率4.6％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.24(dd,J＝9.4,1.5Hz,1H),7.87–7.80(m,2H),7.43(ddd,J＝20.0,9.4,8.5Hz,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.07–6.98(m,4H),6.50(td,J＝74.5,14.0Hz,1H),5.01–4.94(m,2H),4.70(dt,J＝22.3,7.6Hz,1H),4.14(dt,J＝24.8,16.7Hz,2H),3.95–3.68(m,2H),2.72–2.45(m,1H),2.23(ddt,J＝20.6,13.7,7.4Hz,2H),1.09–0.93(m,6H)。LC/MS(ESI)m/z:614(M+H)+。
方案174：2-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-((2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)乙酸甲酯(化合物189)的合成
Figure BDA0004238079180007261
步骤1：2-氨基-2-(4-溴噻吩-2-基)乙腈
向NH4Cl(13.87g,0.26mol)和KCN(9.53g,0.15mol)在NH3·H2O(200mL)中的混合物中添加4-溴噻吩-2-甲醛(20g,0.11mol)在Et2O(200mL)中的溶液，并将混合物在密封管中在60℃下搅拌16小时。将混合物用冰-水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的2-氨基-2-(4-溴噻吩-2-基)乙腈(13.0g，收率57.5％)。LC/MS(ESI)(m/z)：200/202(M-NH2)+。
步骤2：2-氨基-2-(4-溴噻吩-2-基)乙酸甲酯
向SOCl2(13.1mL,0.18mol)在MeOH(200mL)中的溶液中逐滴添加2-氨基-2-(4-溴噻吩-2-基)乙腈(13g,0.06mol)在MeOH(60mL)中的溶液，并将反应混合物在密封管中在90℃下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物用1.0N HCl水溶液酸化至pH～4并用乙酸乙酯萃取两次。将水层用Na2CO3水溶液碱化至pH～8，并用乙酸乙酯萃取两次，将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈黄色油状物的2-氨基-2-(4-溴噻吩-2-基)乙酸甲酯(7.8g，收率52.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：233/235(M-NH2)+。
步骤3：2-(4-溴噻吩-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸甲酯
在0℃下向2-氨基-2-(4-溴噻吩-2-基)乙酸甲酯(7.8g,31.33mmol)和(Boc)2O(20.49g,93.98mmol)在THF(60mL)和水(60mL)中的混合物中添加NaHCO3(26.32g,313.3mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的2-(4-溴噻吩-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸甲酯(10.9g，收率99.7％)。LC/MS(ESI)(m/z)：350/352(M+H)+。
步骤4：2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸甲酯
向2-(4-溴噻吩-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸甲酯(10.9g,31.23mmol)在DMF(160mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(10.96g,93.70mmol)和Pd(PPh3)4(5.415g,4.68mmol)。将反应混合物在90℃、N2气氛下搅拌6小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸甲酯(7.6g，收率82.2％)。LC/MS(ESI)m/z:297(M+H)+。
步骤5：2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)乙酸甲酯
向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸甲酯(800mg,2.70mmol)在EtOH(10mL)中的溶液中添加NH2OH盐酸盐(469mg,6.76mmol)和DIPEA(1.34mL,8.10mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用DCM稀释并用水洗涤。将水层用DCM萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)乙酸甲酯(460mg，收率51.9％)。LC/MS(ESI)m/z:330(M+H)+。
步骤6：2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙酸甲酯
向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)乙酸甲酯(460mg,1.40mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中添加雷尼镍(50mg)和AcOH(一滴)，并将反应混合物在30℃、H2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙酸甲酯(430mg，收率98.34％)。LC/MS(ESI)m/z:314(M+H)+。
步骤7：2-氨基-2-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙酸甲酯
将2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-甲脒基噻吩-2-基)
乙酸甲酯(100mg,0.32mmol)的溶液在室温、N2气氛下在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中搅拌2小时。将混合物浓缩至干，与二氯甲烷共蒸发两次，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的2-氨基-2-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙酸甲酯(60mg，收率88.2％)。LC/MS(ESI)m/z:214(M+H)+。
步骤8：2-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-((2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)乙酸甲酯(化合物189)
在0℃、N2气氛下向2-氨基-2-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙酸甲酯(60mg,0.28mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(97mg,0.23mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(180mg,1.40mmol)和T3P(133mg,0.42mmol,50重量％于乙酸乙酯中)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物189(1.6mg，收率0.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.38–8.28(m,1H),7.89–7.79(m,2H),7.68–7.54(m,1H),7.46–7.38(m,2H),7.24–7.18(m,1H),7.11–7.04(m,2H),7.04–6.96(m,2H),6.57–6.27(m,1H),5.04–4.99(m,1H),4.73–4.57(m,1H),4.32–4.10(m,2H),4.08–3.45(m,6H),2.56–2.43(m,1H),2.25(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:630(M+H)+。
方案175：2-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-((2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)乙酸(化合物190)的合成
Figure BDA0004238079180007301
步骤1：2-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-((2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺基)乙酸
向化合物189(40mg,0.064mmol)在甲醇(1.4mL)和四氢呋喃(0.7mL)中的溶液中添加氢氧化锂(5mg,0.13mmol)在水(0.7mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用1.0N盐酸溶液酸化至pH～5，并用乙酸乙酯萃取两次。将水层用制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物190(2.2mg，收率5.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23–8.13(m,1H),7.88–7.80(m,2H),7.58–7.38(m,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.08–7.04(m,2H),7.02–6.96(m,2H),6.71–6.24(m,1H),5.63–5.43(m,1H),5.05–4.95(m,1H),4.76–4.67(m,1H),4.36–4.08(m,2H),4.04–3.83(m,2H),2.55–2.41(m,1H),2.40–2.25(m,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：616(M+H)+。
方案176：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物191)的合成
Figure BDA0004238079180007311
步骤1：(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃下，在N2气氛下向(S,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.5g,5.12mmol)在THF(15mL)中的溶液中逐滴添加异丁基溴化镁(10.24mL,10.24mmol)，并将反应混合物在-78℃下搅拌2小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(407mg，收率23.9％)。LC/MS(ESI)m/z:352(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向(S)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(400mg,1.14mmol)在NMP(5mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(799.7mg,2.27mmol)和Pd(PPh3)4(197mg,0.17mmol)。将反应混合物在N2气氛下脱气三次，并在160℃下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(215mg，收率63.3％)。LC/MS(ESI)m/z:299(M+H)+。
步骤3：5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)-N-羟基噻吩-3-甲脒
向(S)-N-((R)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(210mg,0.70mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中添加DIPEA(271mg,2.12mmol)和NH2OH·HCl(112.9mg,1.75mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(46mg，收率19.7％)。LC/MS(ESI)m/z:332(M+H)+。
步骤4：5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒
在0℃下向5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(150mg,0.45mmol)在MeOH(2mL)和AcOH(0.02mL)中的溶液中添加雷尼镍(10mg)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩从而得到呈黄色油状物的5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒(140mg，收率98％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：316(M+H)+。
步骤5：(R)-5-(1-氨基-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒盐酸盐
将5-((R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒(140mg,0.44mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次并在真空下干燥从而得到呈白色固体的(R)-5-(1-氨基-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(120mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:212(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物191)
在0℃、N2气氛下向(R)-5-(1-氨基-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(47mg,0.19mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(66mg,0.15mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.157mL,0.95mmol)和PyBOP(148mg,0.28mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物191(1.4mg，收率1.19％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.21(s,1H),7.85(t,J＝7.5Hz,2H),7.52(d,J＝14.2Hz,1H),7.41(t,J＝8.0Hz,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.05(d,J＝7.7Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),6.50(dd,J＝81.9,66.9Hz,1H),5.35–5.22(m,1H),5.01(dd,J＝7.9,3.2Hz,1H),4.58(t,J＝7.9Hz,1H),4.21(s,1H),4.14(d,J＝16.6Hz,1H),3.95(dd,J＝11.4,4.5Hz,1H),3.87(d,J＝11.1Hz,1H),2.47(d,J＝8.6Hz,1H),2.20(dd,J＝12.2,6.9Hz,1H),1.91–1.82(m,1H),1.73–1.66(m,2H),1.01–0.93(m,6H)。LC/MS(ESI)(m/z)：628(M+H)+。
方案177：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物192)的合成
Figure BDA0004238079180007341
步骤1：(2S,4R)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(2)
在N2气氛下向(2S,4R)-4-(甲基硫基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(125mg,0.71mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(193mg,0.71mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(553mg,4.28mmol)和T3P(1.4g,2.14mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(210mg，收率68.7％)。LC/MS(ESI)m/z:429(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(3)
向(2S,4R)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(210mg,0.49mmol)在THF/MeOH/H2O(3mL,v:v＝4/1/1)中的溶液中添加LiOH(41mg,0.98mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩至干，并将残余物溶解于水(5mL)。将混合物用EtOAc洗涤，用1N HCl水溶液酸化至pH～4，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(200mg，收率98.5％)。LC/MS(ESI)m/z:415(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(4)
在N2气氛下向(2S,4R)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(200mg,0.48mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(82mg,0.48mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(374mg,2.90mmol)和T3P(461mg,0.72mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(40mg，收率14.7％)。LC/MS(ESI)m/z:566(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲基磺酰基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物192)
在N2气氛下向(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(20mg,0.035mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加m-CPBA(23mg,0.11mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物192(8mg，收率37.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.23(dd,J＝10.2,1.5Hz,1H),7.84(dd,J＝8.8,6.9Hz,2H),7.52(d,J＝22.7Hz,1H),7.42(t,J＝8.0Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.08–6.99(m,4H),5.37–5.22(m,1H),4.78–4.67(m,1H),4.27–4.12(m,4H),4.00(ddd,J＝20.2,15.1,7.9Hz,1H),3.06(d,J＝17.9Hz,3H),2.94–2.69(m,1H),2.60–2.36(m,1H),1.62(dd,J＝29.9,7.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:598(M+H)+。
方案178：(2S,4R)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物193)的合成
Figure BDA0004238079180007361
步骤1：(S)-N-((4-溴噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2)
在-78℃下，在N2气氛下向(S,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.5g,5.1mmol)在THF(15mL)中的溶液中逐滴添加环戊基溴化镁(10.2mL,10.2mmol)，并将反应混合物在-78℃下搅拌2小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:EtOAc＝80:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(S)-N-((4-溴噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(812mg，收率43.7％)。LC/MS(ESI)m/z:363(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3)
向(S)-N-((4-溴噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(810mg,2.23mmol)在NMP(10mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(1.59g,4.46mmol)和Pd(PPh3)4(387mg,0.335mmol)。将反应混合物在N2气氛下脱气三次，并在160℃下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝600:1)进行纯化，从而得到呈黄色油状物的(S)-N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(238mg，收率28.7％)。LC/MS(ESI)m/z:311(M+H)+。
步骤3：5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(4)
向(S)-N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(200mg,0.655mmol)在EtOH(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.324mL,1.965mmol)和NH2OH·HCl(106mg,1.64mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝1:2)进行纯化从而得到呈无色油状物的5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(117mg，收率53％)。LC/MS(ESI)m/z:344(M+H)+。
步骤4：5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(5)
在0℃下向5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(110mg,0.32mmol)在MeOH(2mL)和AcOH(0.02mL)中的溶液中添加雷尼镍(10mg)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩从而得到呈无色油状物的5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(90mg，收率86.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：328(M+H)+。
步骤5：(R)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(6)
将5-((R)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(90mg,0.28mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的(R)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(70mg，收率98.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:224(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物193)
在0℃、N2气氛下向(R)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒(30mg,0.15mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(52mg,0.14mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(97mg,0.75mmol)和PyBOP(117mg,0.225mmo)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物193(1.8mg，收率2.1％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.23(dd,J＝5.2,1.4Hz,1H),7.84(t,J＝9.2Hz,2H),7.50(d,J＝20.7Hz,1H),7.42(d,J＝7.7Hz,2H),7.20(t,J＝7.3Hz,1H),7.05(d,J＝7.8Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),6.69–6.32(m,1H),4.96(d,J＝9.6Hz,2H),4.59(t,J＝7.8Hz,1H),4.22–4.19(m,1H),4.14(d,J＝16.6Hz,1H),3.96–3.92(m,1H),3.86(d,J＝12.2Hz,1H),2.43(dd,J＝15.2,8.5Hz,2H),2.22–2.15(m,1H),1.89–1.82(m,1H),1.73–1.61(m,5H),1.59–1.53(m,2H)。LC/MS(ESI)(m/z)：586(M+H)+。
方案179：(4R,7S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酰胺(化合物194)和(4S,7S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酰胺(化合物195)
Figure BDA0004238079180007391
步骤1：(S)-4-亚甲基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(2)
向(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-亚甲基吡咯烷-2-甲酸(1.0g,4.4mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加K2CO3(2.43g,17.6mmol)和碘甲烷(0.55mL,8.8mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-4-亚甲基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(1.06g，收率100％)。LC/MS(ESI)m/z:242(M+H)+。
步骤2：(S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3)
在0℃下，在N2气氛下向(S)-4-亚甲基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(4.67g,19.4mmol)在THF(50mL)中的溶液中逐滴添加LiAlH4(27mL,27.2mmol,1M于THF中)，并将反应混合物在0℃下搅拌2小时。将混合物用0℃下的水(1mL 15％ NaOH水溶液(1mL)和水(3mL)连续淬灭。将混合物过滤，并将滤液浓缩至干从而得到呈浅色油状物的(S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.62g，收率63.9％)。LC/MS(ESI)m/z:214(M+H)+。
步骤3：(S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4)
在0℃、N2气氛下向(S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.62g,12.3mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加咪唑(2.51g,36.9mmol)和TBSCl(2.78g,18.5mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.0g，收率99.9％)。LC/MS(ESI)m/z:328(M+H)+。
步骤4：(6S)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-氧杂-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(5)
在0℃下向(S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.91g,15.0mmol)在DCM(40mL)中的溶液中添加m-CPBA(5.16g,30.0mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用饱和Na2S2O3水溶液淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(6S)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-氧杂-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(3.76g，收率73.0％)。LC/MS(ESI)m/z:344(M+H)+。
步骤5：(7S)-7-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(6)
在0℃下，向三甲基碘化亚砜鎓(trimethylsulfoxonium iodide)(4.82g,21.92mmol)在t-BuOH(20mL)中的溶液中添加t-BuOK(2.46g,21.92mmol)在t-BuOH(20mL)中的溶液，并将混合物在50℃下搅拌0.5小时。然后，添加(6S)-6-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-氧杂-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-甲酸叔丁酯(3.76g,10.96mmol)在t-BuOH(20mL)中的溶液，并将所得混合物在85℃下搅拌16小时。将反应混合物用冰水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈浅黄色油状物的(7S)-7-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(2.46g，收率63.1％)。LC/MS(ESI)m/z:358(M+H)+。
步骤6：(7S)-7-(羟基甲基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(7)
在0℃下向(7S)-7-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(2.46g,6.89mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加TBAF(13.78mL,13.78mmol,1M于THF中)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc(10mL)萃取，用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(7S)-7-(羟基甲基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(500mg，收率30.0％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：244(M+H)+。
步骤7：(7S)-6-(叔丁氧基羰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸(8)
向NaIO4(1.19g,5.56mmol)和RuCl3(77mg,0.37mmol)在水(5mL)中的混合物中添加(7S)-7-(羟基甲基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(450mg,1.85mmol)在丙酮(5mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应物用1M H2SO4水溶液酸化至pH～4，并用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩从而得到呈棕色油状物的(7S)-6-(叔丁氧基羰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸(330mg，收率69.3％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：258(M+H)+。
步骤8：(7S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6,7-二甲酸7-苄酯6-(叔丁基)酯(9)
向(7S)-6-(叔丁氧基羰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸(150mg,0.58mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加K2CO3(242mg,1.75mmol)和苄基溴(150mg,0.87mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的(7S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6,7-二甲酸7-苄酯6-(叔丁基)酯(200mg，收率99％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:348(M+H)+。
步骤9：(7S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸苄酯TFA盐(10)
向(7S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6,7-二甲酸7-苄酯6-(叔丁基)酯(200mg,0.58mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1mL)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈棕色油状物的(7S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸苄酯TFA盐(190mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:248(M+H)+。
步骤10：(7S)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸苄酯(11)
在0℃、N2气氛下向(7S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸苄酯TFA盐(190mg,0.58mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(157mg,0.58mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.6mL,3.05mmol)和T3P(1.2g,1.83mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(7S)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸苄酯(140mg，收率46.2％)。LC/MS(ESI)m/z:501(M+H)+。
步骤11：(7S)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸(12)
向(7S)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸苄酯(140mg,0.28mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩从而得到呈黄色油状物的(7S)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸(110mg，收率96.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：411(M+H)+。
步骤12：(4R,7S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酰胺(化合物194)和(4S,7S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酰胺(化合物195)
在0℃、N2气氛下向(7S)-6-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸(55mg,0.13mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(42mg,0.26mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.11mL,0.45mmol)和T3P(102mg,0.16mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水淬灭并用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物194(5mg，收率6.8％)和化合物195(1.1mg，收率1.5％)。化合物194：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.87–7.80(m,2H),7.42–7.39(m,2H),7.26(s,1H),7.24(s,1H),7.20(s,1H),7.18(s,1H),7.07(s,1H),7.05(s,1H),7.00(d,J＝4.8Hz,1H),4.59–4.45(m,5H),4.21(s,2H),4.08(t,J＝8.8Hz,1H),3.83(d,J＝11.4Hz,1H),2.86–2.78(m,1H),2.76–2.63(m,2H),2.14(dd,J＝13.5,8.3Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：548(M+H)+；化合物195 1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.87–7.80(m,2H),7.42–7.39(m,2H),7.26(s,1H),7.24(s,1H),7.20(s,1H),7.18(s,1H),7.07(s,1H),7.05(s,1H),7.00(d,J＝4.8Hz,1H),4.59–4.45(m,5H),4.21(s,2H),4.08(t,J＝8.8Hz,1H),3.83(d,J＝11.4Hz,1H),2.86–2.78(m,1H),2.76–2.63(m,2H),2.14(dd,J＝13.5,8.3Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：548(M+H)+。
方案180：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物196)
Figure BDA0004238079180007451
步骤1：(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(2)
在0℃下，在N2气氛下向(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(50mg,0.19mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(57mg,0.21mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加T3P(363mg,0.57mmol,50重量％于EtOAc中)和DIPEA(0.2mL,1.14mmol)，并将混合物在35℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(94mg，收率95.9％)。LC/MS(ESI)m/z:521(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(3)
在N2气氛下向(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(94mg,0.18mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌4小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(64mg，收率83.1％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:431(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物196)
在0℃下，在N2气氛下向(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(44mg,0.10mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(20mg,0.12mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加PyBOP(78mg,0.15mmol)和DIPEA(0.1mL,0.50mmol)，并将混合物在室温下搅拌0.5小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物196(3.8mg，收率6.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝9.6Hz,1H),7.84(dd,J＝8.8,15.2Hz,2H),7.55(d,J＝7.6Hz,1H),7.41(t,J＝7.2Hz,2H),7.20(t,J＝7.0Hz,1H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),7.00(d,J＝47Hz,2H),5.35–5.21(m,1H),4.60(t,J＝8.6Hz,1H),4.28(d,J＝16.8Hz,1H),4.13–3.99(m,2H),3.88(dd,J＝33.2,34.0Hz,1H),3.69(dd,J＝16.4,18.0Hz,2H),3.42(d,J＝4.8Hz,3H),2.59–2.43(m,1H),2.26–2.08(m,1H),1.57(d,J＝6.9Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:596(M+H)+。
方案181：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物197)
Figure BDA0004238079180007471
步骤1：(R)-(2-羟基-1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2)
在0℃下，在N2气氛下向(R)-(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(400mg,1.49mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中添加DIPEA(0.7mL,4.47mmol)和NH2OH·HCl(259mg,3.73mmol)，并将混合物在30℃下搅拌5小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(R)-(2-羟基-1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(440mg，收率98.2％)。LC/MS(ESI)m/z:302(M+H)+。
步骤2：(R)-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(3)
在N2气氛下向(R)-(2-羟基-1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(440mg,1.46mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和AcOH(一滴)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在30℃、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(R)-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(410mg，收率98.5％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:286(M+H)+。
步骤3：(R)-5-(1-氨基-2-羟基乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(4)
在0℃下，向(R)-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(410mg,1.44mmol)在HCl/1,4-二噁烷(4mL)中的溶液中，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的(R)-5-(1-氨基-2-羟基乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(320mg，收率100％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:186(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物197)
在0℃下，在N2气氛下向(R)-5-(1-氨基-2-羟基乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(60mg,0.27mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(117mg,0.27mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加PyBOP(211mg,0.41mmol)和DIPEA(0.2mL,1.35mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物197(19mg，收率11.7％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.27–8.18(m,1H),7.87–7.82(m,2H),7.60–7.54(m,1H),7.44–7.39(m,2H),7.22–7.18(m,1H),7.08–7.04(m,2H),7.02–6.98(m,2H),6.70–6.27(m,1H),5.34–5.19(m,1H),5.08–4.97(m,1H),4.75–4.61(m,1H),4.28–4.10(m,2H),3.99–3.93(m,1H),3.87(d,J＝5.8Hz,1H),3.85–3.71(m,2H),2.54–2.44(m,1H),2.35–2.19(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:602(M+H)+。
方案182：(2S,4R)-N-((S)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物198)
Figure BDA0004238079180007491
步骤1：(S)-(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(2)
在0℃下，在N2气氛下向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸甲酯(3.5g,11.82mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中分批添加NaBH4(0.95g,23.64mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:EtOAc＝1:1)进行纯化并通过SFC进行进一步纯化从而得到呈无色油状物的(S)-(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g，收率37.5％)。LC/MS(ESI)m/z:269(M+H)+。
步骤2：(S)-(2-羟基-1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(3)
向(S)-(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.75mmol)在EtOH(5mL)中的混合物中添加DIPEA(0.6mL,3.75mmol)和NH2OH·HCl(129mg,1.88mmol)，并将混合物在30℃下搅拌4小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-(2-羟基-1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(220mg，收率98.2％)。LC/MS(ESI)m/z:302(M+H)+。
步骤3：(S)-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(4)
向(S)-(2-羟基-1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(220mg,0.74mmol)在MeOH(5mL)和AcOH(0.02mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩从而得到呈无色油状物的(S)-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，收率96.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：286(M+H)+。
步骤4：(S)-5-(1-氨基-2-羟基乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(6)
将(S)-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.70mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈浅黄色固体的(S)-5-(1-氨基-2-羟基乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(160mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:186(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-N-((S)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物198)
在0℃、N2气氛下向(S)-5-(1-氨基-2-羟基乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(46mg,0.21mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(60mg,0.14mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.11mL,0.70mmol)和T3P(106mg,0.17mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物198(20mg，收率24.1％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.12(d,J＝16.3Hz,1H),7.88–7.81(m,2H),7.52–7.39(m,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.09–7.04(m,2H),7.00(dd,J＝11.7,4.8Hz,2H),6.49(td,J＝74.4,17.8Hz,1H),5.28(dt,J＝38.8,5.8Hz,1H),5.00(s,1H),4.62(t,J＝7.8Hz,1H),4.25–4.14(m,2H),4.00(dd,J＝11.4,4.7Hz,1H),3.94–3.84(m,3H),2.62–2.43(m,1H),2.34–2.22(m,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：602(M+H)+。
方案183：6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸(化合物199)的合成
Figure BDA0004238079180007511
步骤1：(2S,4R)-4-((烯丙基氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
向(2S,4R)-4-氟-4-(羟基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(300mg,0.85mmol)在DCE(3mL)中的溶液中添加AgOTf(655mg,2.55mmol)，随后添加3-碘丙-1-烯(0.38mL,4.25mmol)和2,6-二-叔丁基吡啶(0.57mL,2.55mmol)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤，并将滤液浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-((烯丙基氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(200mg，收率59.9％)。LC/MS(ESI)(m/z)：394(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
向(2S,4R)-4-((烯丙基氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(200mg,0.51mmol)在干燥DCM(140mL)中的溶液中添加格拉布第2代催化剂(112mg,0.13mmol)和戊-4-烯酸乙酯(81mg,0.61mmol)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌8小时。将混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(45mg，收率18％)。LC/MS(ESI)m/z:494(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐
将(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(45mg,0.09mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(40mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:394(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-2-甲酸苄酯(40mg,0.09mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(28mg,0.10mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.08mL,0.50mmol)和T3P(197mg,0.30mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(38mg，收率63.2％)。LC/MS(ESI)m/z:647(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-4-(((6-乙氧基-6-氧代己基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(34mg,0.05mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(5mg,10重量％)，并将反应混合物在25℃、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-(((6-乙氧基-6-氧代己基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(32mg，收率100％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:559(M+H)+。
步骤6：6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸乙酯
在N2气氛下向(2S,4R)-4-(((6-乙氧基-6-氧代己基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(32mg,0.06mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.05mL,0.30mmol)和T3P(44mg,0.07mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸乙酯(34mg，收率85.0％)。LC/MS(ESI)m/z:710(M+H)+。
步骤7：6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸(化合物199)
向6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸乙酯(34mg,0.05mmol)在MeOH(2mL)和THF(1mL)和水(0.6mL)中的溶液中添加氢氧化锂(3.0mg,0.07mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用DCM萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物199(1.1mg，收率3.3％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.25(t,J＝2.8Hz,1H),7.84(t,J＝6.7Hz,2H),7.54(d,J＝9.6Hz,1H),7.41(t,J＝7.9Hz,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝8.4Hz,2H),7.03–6.97(m,2H),5.27(d,J＝7.0Hz,1H),4.61(s,1H),4.24(d,J＝16.6Hz,1H),4.14(d,J＝16.6Hz,1H),4.07–3.99(m,1H),3.97–3.88(m,1H),3.72(d,J＝7.0Hz,1H),3.66(d,J＝10.7Hz,1H),3.53(t,J＝6.3Hz,2H),2.58–2.48(m,1H),2.25(dd,J＝17.7,10.6Hz,3H),1.64(d,J＝5.1Hz,1H),1.62(s,1H),1.61–1.55(m,5H),1.41(dd,J＝15.2,8.4Hz,2H)。LC/MS(ESI)m/z:682(M+H)+。
方案184：(2S,4R)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物200)的合成
Figure BDA0004238079180007551
步骤1：N-乙酰氧基-5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(2)
在N2气氛下向5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(195mg,0.55mmol)在AcOH(1mL)中的溶液中添加DMAP(5mg)和Ac2O(1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(硅胶:40-60％的在PE中的EtOAc)进行纯化从而得到呈白色固体的N-乙酰氧基-5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(170mg，收率77.9％)。LC/MS(ESI)m/z:394(M+H)+。
步骤2：(R)-N-乙酰氧基-5-(氨基(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(3)
在N2气氛下向N-乙酰氧基-5-((1R)-((叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(170mg,0.43mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(R)-N-乙酰氧基-5-(氨基(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(140mg，收率100％)，其未经纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:290(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)(苯基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(4)
在N2气氛下向(R)-N-乙酰氧基-5-(氨基(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(68mg,0.21mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(93mg,0.21mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(166mg,1.29mmol)和PyBop(167mg,0.32mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-4-(甲基硫基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(150mg，收率99.2％)。LC/MS(ESI)m/z:706(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-N-((R)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物200)
向(2S,4R)-N-((R)-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)(苯基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(75mg,0.11mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)和AcOH(一滴)，并将反应混合物在30℃、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物200(20mg，收率29.1％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.32–8.21(m,1H),7.87–7.77(m,2H),7.54–7.34(m,8H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.08–6.98(m,4H),6.69–6.32(m,2H),5.00(s,1H),4.68(t,J＝7.8Hz,1H),4.32–4.13(m,2H),3.93(dt,J＝26.2,7.5Hz,2H),2.61–2.40(m,1H),2.28–2.14(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:648(M+H)+。
方案185：(1S,3S,5S)-N-((5-甲脒基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物201)的合成
Figure BDA0004238079180007571
步骤1：2-(2-((叔丁氧基羰基)甘氨酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯
在0℃下向(2-肼基-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.0g,15.87mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加NaHCO3(2.66g,31.74mmol)和2-氯-2-氧代乙酸乙酯(2.16g,15.87mmol)在THF(10mL)中的溶液，并将混合物在30℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈白色固体的2-(2-((叔丁氧基羰基)甘氨酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(2.5g，收率76.1％)。LC/MS(ESI)m/z:290(M+H)+。
步骤2：5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
在0℃下向2-(2-((叔丁氧基羰基)甘氨酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(2.16g,7.47mmol)和TEA(3.12mL,22.41mmol)在DCM(20mL)中的混合物中逐滴添加甲苯磺酰氯(2.14g,14.94mmol)在DCM(10mL)中的溶液，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(1.5g，收率75.0％)。LC/MS(ESI)m/z:272(M+H)+。
步骤3：5-(氨基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯盐酸盐
将5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(1.5g,5.54mmol)在HCl/1,4-二噁烷(10mL,4M)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的5-(氨基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(1.2g，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:172(M+H)+。
步骤4：5-(氨基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
将5-(氨基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯盐酸盐(1.2g,5.54mmol)在NH3/MeOH(10mL,7M)中的溶液在室温下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的5-(氨基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(786mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:143(M+H)+。
步骤5：((5-氨基甲酰基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下向5-(氨基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(789mg,5.54mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.8g,8.31mmol)在THF(20mL)中的混合物中逐滴添加NaHCO3(2.3g,27.7mmol)在H2O(10mL)中的溶液，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的((5-氨基甲酰基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，收率44.6％)。LC/MS(ESI)m/z:243(M+H)+。
步骤6：((5-氰基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下向((5-氨基甲酰基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,1.24mmol)和TFAA(781mg,3.72mmol)在THF(5mL)中的混合物中逐滴添加吡啶(1mL,12.4mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈棕色油状物的((5-氰基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(277mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:225(M+H)+。
步骤7：((5-(N-羟基甲脒基)-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向((5-氰基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(340mg,1.5mmol)在EtOH(5mL)中的混合物中添加DIPEA(1.25mL,7.5mmol)和NH2OH·HCl(264mg,3.75mmol)，并将混合物在30℃下搅拌4小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的((5-(N-羟基甲脒基)-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，收率41.0％)。LC/MS(ESI)m/z:258(M+H)+。
步骤8：((5-甲脒基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
向((5-(N-羟基甲脒基)-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(160mg,0.62mmol)在MeOH(5mL)和AcOH(0.02mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩从而得到呈无色油状物的((5-甲脒基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，收率80％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：242(M+H)+。
步骤9：5-(氨基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲脒盐酸盐
将((5-甲脒基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(120mg,0.50mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL,4M)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈浅黄色固体的5-(氨基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲脒盐酸盐(90mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:142(M+H)+。
步骤10：(1S,3S,5S)-N-((5-甲脒基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物201)
在0℃、N2气氛下向5-(氨基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-甲脒盐酸盐(71mg,0.40mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(78mg,0.20mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.16mL,1.0mmol)和T3P(151mg,0.24mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物201(5mg，收率5.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.50(s,1H),7.86–7.82(m,2H),7.42(dd,J＝8.5,7.5Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.08–7.05(m,2H),7.02–6.99(m,2H),4.71(s,2H),4.33(d,J＝7.3Hz,2H),3.41(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),2.44(t,J＝11.8Hz,1H),2.22(dd,J＝13.4,3.5Hz,1H),1.31(s,3H),1.23(dd,J＝5.8,2.5Hz,1H),0.82(t,J＝5.3Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：518(M+H)+。
方案186：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物202)
Figure BDA0004238079180007611
步骤1：(2S,4R)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸(33mg,0.12mol)和(4S)-4-(氟甲基)-4-甲基吡咯烷-2-甲酸苄酯(30mg,0.12mmol)在DMF(1.0mL)中的混合物中添加DIPEA(91mg,0.71mmol)和T3P(56mg,0.18mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用饱和NaHCO3溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(氟甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(53mg，收率86.3％)。LC/MS(ESI)(m/z)：449(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(氟甲基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(氟甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(53mg,0.60mmol)在MeOH(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH(25mg,0.61mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH＝3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(氟甲基)吡咯烷-2-甲酸(40mg，收率92.9％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：431(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(氟甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物202)
在0℃下向(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸(40mg,0.10mmol)和(4S)-4-(氟甲基)-4-甲基吡咯烷-2-甲酸苄酯(20mg,0.12mmol)在DMF(1.0mL)中的混合物中添加DIPEA(77mg,0.60mmol)和PyBop(78mg,0.15mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝12:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物202(5.5mg，收率9.4％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.25(d,J＝1.5Hz,1H),8.22(d,J＝1.6Hz,1H),8.01(d,J＝1.8Hz,1H),7.99(s,1H),7.86(s,1H),7.84(s,1H),7.81(s,1H),7.79(d,J＝1.4Hz,1H),7.67(d,J＝7.4Hz,1H),7.57(s,1H),7.55–7.54(m,1H),5.27(q,J＝7.1Hz,1H),4.80–4.73(m,2H),4.69–4.64(m,2H),4.35(d,J＝16.7Hz,1H),4.14(d,J＝6.0Hz,1H),3.91(dd,J＝14.5,6.6Hz,1H),2.65–2.56(m,1H),2.27–2.17(m,1H),1.58(d,J＝7.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)(m/z)：582(M+H)+。
方案187：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物203)
Figure BDA0004238079180007631
步骤1：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酰胺
在0℃下向(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸(116mg,0.41mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(80mg,0.41mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物中添加DIPEA(264mg,2.05mmol)和T3P(170mg,0.53mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用饱和NaHCO3溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(120mg，收率63.6％)。
步骤2：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(120mg,0.26mmol)在MeOH(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH(63mg,1.6mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH3，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸(110mg，收率94.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：446(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物203)
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(二氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸(45mg,0.10mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(17mg,0.10mmol)在DMF(1.0mL)中的混合物DIPEA(65mg,0.50mmol)和T3P(48mg,0.15mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用AcOEt萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝12:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物203(1.5mg，收率2.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.23(dd,J＝12.1,1.5Hz,1H),7.99(t,J＝8.7Hz,2H),7.88–7.76(m,4H),7.67(d,J＝7.4Hz,1H),7.54(dd,J＝12.8,4.6Hz,3H),6.50(td,J＝74.5,17.2Hz,1H),5.35–5.22(m,1H),5.03(s,1H),4.60(d,J＝7.9Hz,1H),4.23(dt,J＝22.5,11.3Hz,2H),4.00–3.86(m,2H),2.52–2.36(m,1H),2.28–2.15(m,1H),1.62(dd,J＝31.7,7.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)(m/z)：598(M+H)+。
方案188：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-甲基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物204)的合成
Figure BDA0004238079180007651
步骤1：(4-溴-5-甲基噻吩-2-基)甲醇
在0℃下，在N2气氛下向4-溴-5-甲基噻吩-2-甲醛(1.0g,4.90mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中分批添加NaBH4(0.37g,9.80mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(4-溴-5-甲基噻吩-2-基)甲醇(580mg，收率57.5％)。LC/MS(ESI)m/z:207/209(M+H)+。
步骤2：5-(羟基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲腈
向(4-溴-5-甲基噻吩-2-基)甲醇(400mg,1.94mmol)在NMP(6mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(500mg,4.27mmol)和Pd(PPh3)4(336mg,0.29mmol)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在160℃下搅拌4小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝20:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的5-(羟基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲腈(270mg，收率90.9％)。LC/MS(ESI)m/z:154(M+H)+。
步骤3：5-(叠氮基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲腈
在0℃下，在N2气氛下向5-(羟基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲腈(270mg,1.76mmol)在甲苯(6mL)中的溶液中添加DBU(670mg,4.41mmol)和DPPA(970mg,3.52mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌1.5小时。将混合物用冰-水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:EtOAc＝40:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的5-(叠氮基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲腈(280mg，收率89.2％)。LC/MS(ESI)m/z:179(M+H)+。
步骤4：5-(叠氮基甲基)-N-羟基-2-甲基噻吩-3-甲脒
在N2气氛下向5-(叠氮基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲腈(280mg,1.57mmol)在EtOH(8mL)中的溶液中添加DIPEA(0.78mL,4.71mmol)和NH2OH·HCl(273mg,3.93mmol)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(石油醚:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的5-(叠氮基甲基)-N-羟基-2-甲基噻吩-3-甲脒(270mg，收率81.3％)。LC/MS(ESI)m/z:212(M+H)+。
步骤5：5-(氨基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲脒
向5-(叠氮基甲基)-N-羟基-2-甲基噻吩-3-甲脒(70mg,0.33mmol)在MeOH(3mL)和AcOH(0.01mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在30℃、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩从而得到呈白色固体的5-(氨基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲脒(40mg，收率71.4％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：170(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-甲基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物204)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(47mg,0.12mmol)和5-(氨基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲脒(20mg,0.12mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.1mL,0.60mmol)和PyBOP(94mg,0.18mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)稀释两次，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物204(5.0mg，收率7.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.88–7.84(m,2H),7.46–7.39(m,2H),7.23–7.19(m,1H),7.08–7.00(m,5H),4.83–4.79(m,1H),4.50–4.42(m,2H),4.39–4.28(m,2H),3.50–3.39(m,1H),2.57(d,J＝5.1Hz,3H),2.45–2.35(m,1H),2.18–2.14(m,1H),1.30(s,3H),1.12(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.82–0.69(m,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：546(M+H)+。
方案189：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((4-(N-氨磺酰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物205)
Figure BDA0004238079180007671
步骤1：5-(((叔丁基亚磺酰基)氨基)甲基)噻吩-3-甲酰胺
向N-((4-氰基噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.0g,4.1mmol)在1,4-二噁烷(7.0mL)和水(3.0mL)中的溶液中添加NaOH(82mg,2.1mmol)。将混合物在N2气氛下脱气。将混合物在140℃下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用AcOEt萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:AcOEt＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的5-(((叔丁基亚磺酰基)氨基)甲基)噻吩-3-甲酰胺(400mg，收率37.3％)。LC/MS(ESI)m/z:261(M+H)+。
步骤2：5-(氨基甲基)噻吩-3-甲酰胺
将5-(((叔丁基亚磺酰基)氨基)甲基)噻吩-3-甲酰胺(400mg,1.5mmol)在HCl/1,4-二噁烷(4.0mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌30分钟。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到5-(氨基甲基)噻吩-3-甲酰胺盐酸盐(230mg，收率95.7％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:296(M+H)+。
步骤3：((4-氨基甲酰基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃、N2气氛下向5-(氨基甲基)噻吩-3-甲酰胺(230mg,1.47mmol)在THF(2.0mL)和水(1.0mL)中的溶液中添加Boc2O(960mg,4.4mmol)，并将混合物在25℃下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用AcOEt萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:AcOEt＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的((4-氨基甲酰基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(240mg，收率65.7％)。LCMS(ESI)m/z＝257(M+H)+。
步骤4：5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)噻吩-3-硫代氨亚基替甲酸(carbimidothioic acid)
在0℃、N2气氛下向((4-氨基甲酰基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(240mg,0.67mmol)在THF(3.0mL)中的溶液中添加劳森(Lawesson)试剂(327mg,0.81mmol)，并将混合物在25℃下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用AcOEt萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)噻吩-3-硫代氨亚基替甲酸(110mg，收率57.9％)。LCMS(ESI)m/z＝273(M+H)+。
步骤5：5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)噻吩-3-硫代氨亚基替甲酸甲酯
在0℃、N2气氛下向5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)噻吩-3-硫代氨亚基替甲酸(110mg,0.30mmol)在丙酮(1.5mL)中的溶液中添加CH3I(126mg,0.90mmol)，并将混合物在25℃下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用AcOEt萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:AcOEt＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)噻吩-3-硫代氨亚基替甲酸甲酯(110mg，收率95.1％)。LCMS(ESI)m/z＝287(M+H)+。
步骤6：((4-(N-氨磺酰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃、N2气氛下向5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)噻吩-3-硫代氨亚基替甲酸甲酯(110mg,0.35mmol)在EtOH(1.5mL)中的溶液中添加硫酰二胺(sulfuric diamide)(670mg,7.0mmol)，并将混合物在密封的压力管中在120℃下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用AcOEt萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:AcOEt＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的((4-(N-氨磺酰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，收率17.1％)。LCMS(ESI)m/z＝335(M+H)+。
步骤7：5-(氨基甲基)-N-氨磺酰基噻吩-3-甲脒
将((4-(N-氨磺酰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(18mg,53.9umol)在HCl/1,4-二噁烷(1mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌30分钟。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到呈白色固体的5-(氨基甲基)-N-氨磺酰基噻吩-3-甲脒盐酸盐(12mg，收率95.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:235(M+H)+
步骤8：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((4-(N-氨磺酰基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物205)
在0℃下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(24mg,61.4umol)和5-(氨基甲基)-N-氨磺酰基噻吩-3-甲脒(12mg,51.2mmol)在DMF(1.0mL)中的混合物中添加DIPEA(32mg,246umol)和PyBOP(32mg,61.4umol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将有机层用水稀释，用AcOEt萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝12:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物205(1.1mg，收率2.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.09(s,1H),8.02(t,J＝5.8Hz,1H),7.88–7.83(m,2H),7.44–7.39(m,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(d,J＝7.7Hz,2H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),5.34(t,J＝4.6Hz,1H),4.81(d,J＝3.3Hz,1H),4.51(d,J＝5.3Hz,1H),4.41(d,J＝16.5Hz,1H),4.28(d,J＝16.5Hz,1H),3.35(s,15H),2.40–2.34(m,1H),1.60(s,3H),1.17–1.15(m,1H),0.78(t,J＝6.0Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：611(M+H)+。
方案190：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物209)的合成
Figure BDA0004238079180007711
步骤1：(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在0℃、N2气氛下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(3.0g,5.1mmol)和Pd(dppf)Cl2(261mg,0.36mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物中添加4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(2.6g,10.2mmol)和AcOK(1.5g,15.4mmol)。将混合物在80℃下搅拌过夜，并未经纯化即直接用于下一步骤中。
步骤2：(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(噻唑-2-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
向上一步骤的混合物中添加2-溴噻唑(1.6g,10mmol)、Pd(PPh3)4(400mg,0.35mmol)、K2CO3(2.7g,20mmol)、1,4-二噁烷(5mL)和水(15mL)。将新混合物在N2气氛下脱气，并在100℃下搅拌3小时，之后用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(噻唑-2-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(980mg,两步收率36.7％)。LCMS(ESI)m/z＝521(M+H)+。
步骤3：(S)-2-(羟基甲基)-4-(噻唑-2-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(噻唑-2-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(980mg,1.9mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加TBAF(4.2mL,4.1mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液稀释，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(S)-2-(羟基甲基)-4-(噻唑-2-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(420mg，收率79.2％)。LCMS(ESI)m/z＝283(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下向(S)-2-(羟基甲基)-4-(噻唑-2-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(420mg,1.5mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(140mg,10重量％)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-2-(羟基甲基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(366mg，收率86.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：285(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸
向(S)-2-(羟基甲基)-4-(噻唑-2-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(366mg,1.3mmol)在丙酮(4.0mL)中的混合物中添加琼斯(Jones)氧化剂(0.7mL)，并在室温、N2气氛下搅拌20分钟。将混合物用饱和Na2S2O3水溶液淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸(220mg，收率57.1％)。LCMS(ESI)m/z＝299(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯
在室温、N2气氛下向(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸(120mg,0.39mmol)和K2CO3(216mg,1.6mmol)在DMF(2.0mL)中的混合物中添加碘甲烷(223mg,1.6mmol)，并搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(136mg，收率58.8％)。LCMS(ESI)m/z＝313(M+H)+。
步骤7：(2S,4R)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
将(2S,4R)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(136mg,0.43mmol)在HCl/1,4-二噁烷(1.5mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌30分钟。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到(2S,4R)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(82mg，收率89.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:213(M+H)+。
步骤8：(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在0℃下向(2S,4R)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(82mg,0.39mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(115mg,0.42mmol)在DMF(1.5mL)中的混合物中添加DIPEA(273mg,2.1mmol)和T3P(175mg,0.55mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(120mg，收率60.8％)。LC/MS(ESI)(m/z)：466(M+H)+。
步骤9：(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(60mg,0.13mmol)在MeOH(1.0mL)、THF(0.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中添加LiOH(31mg,0.78mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH＝3，用AcOEt萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸(40mg，收率68.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：452(M+H)+。
步骤10：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物209)
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(噻唑-2-基)吡咯烷-2-甲酸(40mg,0.089mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(21mg,0.13mmol)在DMF(1.3mL)中的混合物中添加DIPEA(69mg,0.53mmol)和T3P(37mg,0.12mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌2小时。将有机层用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物209(2.8mg，收率5.4％)。LC/MS(ESI)(m/z)：589(M+H)+。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,2H),8.21(t,J＝8.7Hz,1H),7.87–7.83(m,2H),7.72(dd,J＝14.8,3.3Hz,1H),7.52(dd,J＝11.8,3.4Hz,1H),7.42(t,J＝8.0Hz,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.7Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),4.59–4.51(m,3H),4.36–4.30(m,1H),4.29–4.15(m,2H),4.05–3.91(m,2H),2.31(dd,J＝22.1,9.6Hz,1H),2.15(dd,J＝38.3,30.6Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：589(M+H)+。
方案191：(2S,4R)-N-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物210)的合成
Figure BDA0004238079180007751
步骤1：2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸(2)
在0℃下向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸甲酯(150mg,0.51mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(64.3mg,1.53mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸(138mg，收率96.2％),其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：283(M+H)+。
步骤2：(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(3)
在0℃、N2气氛下向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸(130mg,0.46mmol)和盐酸甲胺(38mg,0.55mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(356mg,2.76mmol)和HATU(524mg,1.38mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，收率73.8％)。LC/MS(ESI)m/z:296(M+H)+
步骤3：(1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(4)
向(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.34mmol)在EtOH(2mL)中的混合物中添加DIPEA(132mg,1.02mmol)和NH2OH·HCl(54.8mg,0.85mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，收率90％)。LC/MS(ESI)m/z:329(M+H)+。
步骤4：(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(5)
向(1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.30mmol)在AcOH(2mL)中的混合物中添加Ac2O(2mL)和DMAP(5mg)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(83mg，收率73.6％)。LC/MS(ESI)m/z:371(M+H)+
步骤5：2-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-N-甲基乙酰胺(6)
将(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(80mg,0.22mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的(R)-5-(氨基(环戊基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(56mg，收率95.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:271(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-N-(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(7)
在0℃、N2气氛下向2-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-N-甲基乙酰胺(25mg,0.093mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(48.4mg,0.112mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(60mg,0.465mmol)和T3P(71mg,0.112mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-N-(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(34mg，收率52.7％)。LC/MS(ESI)m/z:687(M+H)+。
步骤7：(2S,4R)-N-(1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物210)向(2S,4R)-N-(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-(甲基氨基)-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(34mg,0.049mmol)在MeOH(2mL)中的混合物中添加Pd/C(5mg)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物210(2.0mg，收率6.4％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.30(s,1H),7.86–7.82(m,2H),7.57(d,J＝27.3Hz,1H),7.41(t,J＝8.0Hz,2H),7.20(t,J＝7.6Hz,1H),7.06(d,J＝8.1Hz,2H),7.00(dd,J＝8.8,3.3Hz,2H),6.52(t,J＝74.4Hz,1H),5.76(d,J＝8.6Hz,1H),5.03(d,J＝6.4Hz,1H),4.67–4.58(m,1H),4.20(t,J＝10.9Hz,2H),3.98(dd,J＝11.7,4.4Hz,1H),3.89(d,J＝10.0Hz,1H),2.72(d,J＝12.6Hz,3H),2.57–2.41(m,1H),2.31–2.24(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:629(M+H)+。
方案192：(3S,6S,8aS)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-氧代-6-(4-苯氧基苯甲酰氨基)八氢吲嗪-3-甲酰胺(化合物211)
Figure BDA0004238079180007781
步骤1：(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-8-((二苯基亚甲基)氨基)-5-氧代壬二酸9-(叔丁基)酯1-甲酯(2)
在0℃、N2气氛下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代庚-6-烯酸甲酯(1g,0.37mmol)和2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸叔丁酯(1.2g,4.05mmol)在THF(20mL)中的混合物中添加Cs2CO3(1.2g,3.68mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释。将水层用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-8-((二苯基亚甲基)氨基)-5-氧代壬二酸9-(叔丁基)酯1-甲酯(1.3g，收率65.0％)。LC/MS(ESI)m/z:567(M+H)+。
步骤2：(3S,6S,8aS)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代八氢吲嗪-3-甲酸叔丁酯(3)
向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-8-((二苯基亚甲基)氨基)-5-氧代壬二酸9-(叔丁基)酯1-甲酯(1.3g,2.29mmol)在MeOH(9mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)和AcOH(1mL)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化，从而得到呈浅色油状物的(3S,6S,8aS)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代八氢吲嗪-3-甲酸叔丁酯(307mg，收率37.9％)。LC/MS(ESI)m/z:355(M+H)+。
步骤3：(3S,6S,8aS)-6-氨基-5-氧代八氢吲嗪-3-甲酸叔丁酯(4)
将(3S,6S,8aS)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代八氢吲嗪-3-甲酸叔丁酯(307mg,0.87mmol)在HCl/二噁烷(4mL)中的溶液在25℃下搅拌2小时。将反应混合物浓缩从而得到呈白色固体的(3S,6S,8aS)-6-氨基-5-氧代八氢吲嗪-3-甲酸叔丁酯(200mg，收率90.9％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:255(M+H)+。
步骤4：(3S,6S,8aS)-5-氧代-6-(4-苯氧基苯甲酰氨基)八氢吲嗪-3-甲酸叔丁酯(5)
在0℃、N2气氛下向(3S,6S,8aS)-6-氨基-5-氧代八氢吲嗪-3-甲酸叔丁酯(200mg,0.79mmol)和4-苯氧基苯甲酸(169mg,0.79mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加T3P(1.5g,2.37mmol,50重量％于EtOAc中)和DIPEA(0.8mL,4.74mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(3S,6S,8aS)-5-氧代-6-(4-苯氧基苯甲酰氨基)八氢吲嗪-3-甲酸甲酯叔丁酯(77mg，收率21.7％)。LC/MS(ESI)m/z:451(M+H)+。
步骤5：(3S,6S,8aS)-5-氧代-6-(4-苯氧基苯甲酰氨基)八氢吲嗪-3-甲酸(6)
在0℃下向(3S,6S,8aS)-5-氧代-6-(4-苯氧基苯甲酰氨基)八氢吲嗪-3-甲酸叔丁酯(77mg,0.17mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1mL)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物浓缩从而得到呈黄色油状物的(3S,6S,8aS)-5-氧代-6-(4-苯氧基苯甲酰氨基)八氢吲嗪-3-甲酸(60mg，收率89.6％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:395(M+H)+。
步骤6：(3S,6S,8aS)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-氧代-6-(4-苯氧基苯甲酰氨基)八氢吲嗪-3-甲酰胺(化合物211)
在0℃、N2气氛下向(3S,6S,8aS)-5-氧代-6-(4-苯氧基苯甲酰氨基)八氢吲嗪-3-甲酸(60mg,0.15mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(28mg,0.18mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加T3P(171mg,0.23mmol,50重量％于EtOAc中)和DIPEA(0.1mL,0.75mmol)，并将混合物在室温下搅拌4小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物211(0.5mg，收率0.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,3H),8.19(d,J＝1.6Hz,1H),7.81(d,J＝9.2Hz,2H),7.48(s,1H),7.41(t,J＝16.0Hz,2H),7.20(t,J＝12.8Hz,1H),7.05(d,J＝8.0Hz,2H),6.98(d,J＝8.8Hz,2H),4.68–4.57(m,3H),4.52(d,J＝15.6Hz,1H),4.44(d,J＝9.3Hz,1H),2.31–2.23(m,2H),2.09–1.98(m,3H),1.91–1.78(m,3H)。LC/MS(ESI)m/z:532(M+H)+。
方案193：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物213)的合成
Figure BDA0004238079180007811
步骤1：(R)-(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(2)
在0℃、N2气氛下向NaH(31mg,0.78mmol)在THF(2mL)中的溶液中添加(R)-(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.37mmol)在THF(4mL)中的溶液，并将反应在室温下搅拌2小时。将CH3I(57mg,0.40mmol)添加到搅拌的反应混合物中。将混合物在室温下搅拌1小时，并然后加热到至多70℃保持2小时。将混合物用冰-水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(R)-(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(42mg，收率40.0％)。LC/MS(ESI)(m/z)：283(M+H)+。
步骤2：(R)-(1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(3)
向(R)-(1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(42mg,0.15mmol)在EtOH(3mL)中的混合物中添加DIPEA(58mg,0.45mmol)和NH2OH·HCl(26mg,0.37mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到呈浅色油状物的(R)-(1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(46mg，收率98.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：316(M+H)+。
步骤3：(R)-(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(4)
向(R)-(1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(46mg,0.15mmol)在AcOH(1.5mL)中的溶液中添加Ac2O(1.5mL)和DMAP(10mg)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝30:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(R)-(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(22mg，收率42.3％)。LC/MS(ESI)m/z:358(M+H)+
步骤4：(R)-N-乙酰氧基-5-(1-氨基-2-甲氧基乙基)噻吩-3-甲脒(5)
将(R)-(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯(20mg,0.056mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL,4M)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的(R)-N-乙酰氧基-5-(1-氨基-2-甲氧基乙基)噻吩-3-甲脒(14mg，收率97.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:258(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(6)
在0℃下向(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(24mg,0.054mmol)和(R)-N-乙酰氧基-5-(1-氨基-2-甲氧基乙基)噻吩-3-甲脒(14mg,0.054mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(35mg,0.27mmol)和T3P(51mg,0.081mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(20mg，收率54.5％)。LC/MS(ESI)(m/z)：674(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物213)
在0℃下向(2S,4R)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-甲氧基乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(20mg,0.03mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(5mg)。将化合物在N2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌1.5小时。将混合物过滤，并将滤液浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化，呈白色固体的化合物213(5.0mg，收率27.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.26–8.22(m,1H),7.87–7.82(m,2H),7.58(d,J＝4.8Hz,1H),7.42(t,J＝8.0Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,2H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),6.71–6.27(m,1H),5.48–5.33(m,1H),5.07–4.99(m,1H),4.77–4.61(m,1H),4.33–4.20(m,1H),4.16–4.07(m,1H),3.98–3.92(m,1H),3.89–3.85(m,1H),3.73–3.64(m,2H),3.44(s,3H),2.69–2.44(m,1H),2.42–2.22(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:616(M+H)+。
方案194：(2S,4R)-N-((R*)-2-氨基-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物214)的合成
Figure BDA0004238079180007841
步骤1：2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸(2)
在0℃下向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸甲酯(100mg,0.34mmol)在MeOH(2mL)、THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(14mg,1.02mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化溶液至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸(90mg，收率94.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：283(M+H)+。
步骤2：(2-氨基-1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(3)
在0℃、N2气氛下向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-氰基噻吩-2-基)乙酸(90mg,0.32mmol)和NH4Cl(21mg,0.38mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.4mL,1.92mmol)和HATU(365mg,0.96mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2-氨基-1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(85mg，收率95.1％)。LC/MS(ESI)m/z:282(M+H)+。
步骤3：(2-氨基-1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(4)
向(2-氨基-1-(4-氰基噻吩-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(85mg,0.30mmol)在EtOH(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.15mL,0.75mmol)和NH2OH·HCl(49mg,0.9mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化，并得到呈无色油状物的(2-氨基-1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，收率95％)。LC/MS(ESI)m/z:315(M+H)+。
步骤4：(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(5)
向(2-氨基-1-(4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(90mg,0.29mmol)在AcOH(2mL)中的混合物中添加Ac2O(2mL)和DMAP(5mg)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(45mg，收率44.1％)。LC/MS(ESI)m/z:357(M+H)+。
步骤5：2-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基乙酰胺盐酸盐(6)
将(1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(45mg,0.13mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的2-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基乙酰胺盐酸盐(40mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:257(M+H)+。
步骤6：(2S,4R)-N-((R*)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(7-2)和(2S,4R)-N-((S*)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(7-1)
在0℃、N2气氛下向2-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基乙酰胺盐酸盐(40mg,0.13mmol)和(2S,4R)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(61mg,0.14mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.10mL,0.59mmol)和T3P(89mg,0.14mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-N-((R*)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(15mg，收率11.5％)；LC/MS(ESI)m/z:673(M+H)+和(2S,4R)-N-((S*)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(25mg，收率19.1％)。LC/MS(ESI)m/z:673(M+H)+。
步骤7：(2S,4R)-N-((S*)-2-氨基-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物214)向(2S,4R)-N-((R*)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(15mg,0.02mmol)在MeOH(2mL)中的混合物中添加Pd/C(5mg,10重量％)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的(2S,4R)-N-((R*)-2-氨基-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(4.0mg，收率29.2％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.46(s,1H),8.24(d,J＝1.6Hz,1H),7.80–7.76(m,2H),7.56(t,J＝23.4Hz,1H),7.36(t,J＝7.9Hz,2H),7.15(t,J＝7.4Hz,1H),7.03–6.99(m,2H),6.95(dd,J＝8.8,1.6Hz,2H),6.46(t,J＝74.4Hz,1H),5.76(dd,J＝24.6,17.6Hz,1H),4.97(d,J＝3.6Hz,1H),4.64–4.52(m,1H),4.15(m,J＝16.7,9.6Hz,2H),3.95–3.88(m,1H),3.83(t,J＝8.3Hz,1H),2.49–2.35(m,1H),2.27–2.16(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:615(M+H)+。
方案195：(2S,4R)-N-((R*)-2-氨基-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物215)的合成
Figure BDA0004238079180007871
向(2S,4R)-N-((S*)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)-2-氨基-2-氧代乙基)-4-(二氟甲氧基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(25mg,0.037mmol)在MeOH(2mL)中的混合物中添加Pd/C(5mg,10重量％)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物215(5.0mg，收率21.9％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.29(d,J＝1.4Hz,1H),7.83(dd,J＝8.8,3.0Hz,2H),7.62(dd,J＝25.8,20.3Hz,1H),7.41(t,J＝7.9Hz,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.7Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),6.51(t,J＝74.4Hz,1H),5.81(dd,J＝25.1,17.8Hz,1H),5.03(s,1H),4.69–4.59(m,1H),4.29–4.12(m,2H),4.02–3.94(m,1H),3.88(d,J＝10.8Hz,1H),2.54–2.42(m,1H),2.32–2.23(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:615(M+H)+。
方案196：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-甲基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物216)的合成
Figure BDA0004238079180007881
步骤1：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-甲基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物216)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(43mg,0.12mmol)和5-(氨基甲基)-2-甲基噻吩-3-甲脒(20mg,0.12mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.1mL,0.60mmol)和PyBOP(94mg,0.18mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用CHCl3/i-PrOH(3/1,v/v)稀释两次，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物216(2.0mg，收率3.3％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.27–7.22(m,2H),7.03(s,1H),6.92–6.88(m,3H),4.77(dd,J＝11.2,11.2Hz,1H),4.47–4.40(m,2H),4.22–4.10(m,2H),4.01(t,J＝6.2Hz,2H),3.35–3.32(m,1H),2.58(s,3H),2.50–2.45(m,2H),2.41–2.33(m,1H),2.16–2.11(m,1H),2.10–2.04(m,2H),1.28(s,3H),1.11(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.83–0.77(m,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：512(M+H)+。
方案197：(S)-N-((S)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物217)的合成
Figure BDA0004238079180007891
步骤1：(S)-N-((S)-(4-溴噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2)
向(S,E)-N-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1g,3.40mmol)和MeOH(218mg,6.80mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中添加Ph4BNa(1.40g,4.08mmol)和[Rh(Cl)(cod)]2(34mg,0.068mmol)。将反应混合物在65℃、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-N-((S)-(4-溴噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.2g，收率94.9％)。LC/MS(ESI)m/z:372(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((S)-(4-氰基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3)
向(S)-N-((S)-(4-溴噻吩-2-基)(环戊基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(400mg,1.07mmol)在NMP(10mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(252mg,2.15mmol)和Pd(PPh3)4(186mg,0.16mmol)。将混合物在N2气氛下脱气三次，并在160℃下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-N-((S)-(4-氰基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(120mg，收率35.1％)。LC/MS(ESI)m/z:319(M+H)+。
步骤3：5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(4)
向N-((R)-(4-氰基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(120mg,0.38mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中添加NH2OH盐酸盐(65mg,0.94mmol)和DIPEA(146mg,1.13mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(100mg，收率75.5％)。LC/MS(ESI)m/z:352(M+H)+。
步骤4：5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(5)
在N2气氛下向5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(100mg,0.28mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加雷尼镍(20mg)和AcOH(0.1mL)，并将反应混合物在H2球囊下搅拌3小时。将混合物过滤，并将滤液在减压下浓缩从而得到呈白色固体的5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(95mg，收率99.5％)。LC/MS(ESI)m/z:336(M+H)+。
步骤5：(S)-5-(氨基(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(6)
在N2气氛下向5-((S)-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒(95mg,0.28mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL,4M)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(S)-5-(氨基(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(85mg，收率100％)。LC/MS(ESI)m/z:232(M+H)+。
步骤6：(S)-N-((S)-(4-甲脒基噻吩-2-基)(苯基)甲基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物217)
在N2气氛下向(S)-5-(氨基(苯基)甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(85mg,0.28mmol)和(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(110mg,0.28mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(218mg,1.69mmol)和T3P(268mg,0.42mmol,50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物217(10mg，收率5.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.49(s,1H),8.28–8.22(m,1H),7.47(dd,J＝22.2,5.9Hz,2H),7.41–7.31(m,4H),7.25–7.20(m,2H),6.89(dd,J＝7.5,5.7Hz,3H),6.51–6.35(m,1H),4.66(ddd,J＝14.5,9.3,4.5Hz,1H),4.06–3.55(m,11H),2.48–2.35(m,3H),2.31–2.14(m,1H),2.07–1.96(m,2H)。LC/MS(ESI)m/z:606(M+H)+。
方案198：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物218)的合成
Figure BDA0004238079180007921
步骤1：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(2)。
在0℃、N2气氛下向(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸(50mg,0.18mmol)和(2S,4R)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(64mg,0.22mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(113mg,0.87mmol)和T3P(167mg,0.26mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(85mg，收率91.4％)。LC/MS(ESI)m/z:533(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸(3)
在0℃下将(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(80mg,0.15mmol)在MeOH(2mL)和THF(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(19mg,0.45mmol)在水(1mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用水洗涤两次。将水层用0.5M HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸(60mg，收率86.7％)。LC/MS(ESI)(m/z)：443(M+H)+。
步骤5：(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物218)
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-氟-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸(60mg,0.14mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(35mg,0.21mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(90mg,0.69mmol)和T3P(106mg,0.17mmol,50％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物218(10.5mg，收率12.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.57(s,1H),8.26(t,J＝7.4Hz,1H),8.02(t,J＝8.1Hz,2H),7.88(d,J＝8.4Hz,2H),7.85–7.81(m,2H),7.70(dd,J＝10.6,4.3Hz,1H),7.61–7.56(m,3H),5.33(dq,J＝14.0,7.1Hz,1H),4.72–4.61(m,1H),4.37(d,J＝16.7Hz,1H),4.19(d,J＝16.6Hz,1H),4.09(dd,J＝19.7,12.4Hz,1H),4.00–3.88(m,1H),3.77(t,J＝7.6Hz,1H),3.72(d,J＝6.9Hz,1H),3.46(d,J＝6.4Hz,3H),2.58(td,J＝14.8,7.9Hz,1H),2.22(m,J＝36.8,14.5,9.6Hz,1H),1.65(dd,J＝32.4,7.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:595(M+H)+。
方案199：(S)-7-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物219)的合成
Figure BDA0004238079180007941
步骤1：(S)-7-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(2)
在0℃下，在N2气氛下向(S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(40mg,0.21mmol)和(4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酸(60mg,0.21mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加T3P(479mg,0.63mmol,50重量％于EtOAc中)和DIPEA(0.2mL,1.26mmol)，并将混合物在30℃下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(S)-7-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(72mg，收率76.6％)。LC/MS(ESI)m/z:453(M+H)+。
步骤2：(S)-7-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(3)
向(S)-7-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯(72mg,0.16mmol)在THF/MeOH/H2O(4mL,2/1/1)中的溶液中添加LiOH·H2O(7mg,0.16mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将混合物浓缩至干，用水稀释并用EtOAc洗涤两次。将水层用1N HCl水溶液酸化至pH～4，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(S)-7-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(50mg，收率72.5％)。LC/MS(ESI)m/z:439(M+H)+。
步骤3：(S)-7-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物219)
在0℃下，在N2气氛下向(R)-7-((4-苯甲酰基苯甲酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(60mg,0.14mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(35mg,0.21mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加PyBOP(109mg,0.21mmol)和DIPEA(0.1mL,0.42mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物219(5mg，收率6.1％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.24(dd,J＝10.0,10.0Hz,1H),8.01–7.98(m,2H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.81–7.78(m,2H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.57–7.51(m,3H),5.39–5.24(m,1H),4.56(dd,J＝8.8,8.4Hz,1H),4.20(d,J＝4.0Hz,1H),4.04–3.93(m,5H),3.83–3.75(m,2H),2.43(dd,J＝13.2,13.2Hz,1H),2.21(dd,J＝12.8,13.2Hz,1H),1.58(d,J＝7.0Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:590(M+H)+。
方案200：(S)-N-((S)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物221)的合成
Figure BDA0004238079180007961
步骤1：(S)-N-((S)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2)
向(S)-N-((S)-1-(4-溴噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(150mg,0.43mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(101mg,0.86mmol)和Pd(PPh3)4(75mg,0.06mmol)。将反应混合物在N2气氛下脱气三次，并在160℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-N-((S)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(107mg，收率84.3％)。LC/MS(ESI)m/z:299(M+H)+。
步骤2：5-((S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(3)
向(S)-N-((S)-1-(4-氰基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(100mg,0.34mmol)在EtOH(2mL)中的溶液中添加DIPEA(132mL,1.02mmol)和NH2OH·HCl(55mg,0.85mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈绿色油状物的5-((S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(61mg，收率55.0％)。LC/MS(ESI)m/z:332(M+H)+。
步骤3：5-((S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒(4)
在0℃下向5-((S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)-N-羟基噻吩-3-甲脒(61mg,0.18mmol)在MeOH(2mL)和AcOH(0.02mL)中的溶液中添加雷尼镍(10mg)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩从而得到呈绿色油状物的5-((S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒(56mg，收率96.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：316(M+H)+。
步骤4：(S)-5-(1-氨基-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(5)
将5-((S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒(56mg,0.18mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈无色油状物的(S)-5-(1-氨基-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(30mg，收率80.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:212(M+H)+。
步骤5：(S)-N-((S)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)-3-甲基丁基)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物221)
在0℃下向(S)-5-(1-氨基-3-甲基丁基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(30mg,0.14mmol)和(S)-7-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(44mg,0.11mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(92mg,0.70mmol)和PyBOP(111mg,0.21mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物221(2.7mg，收率3.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),8.18(dd,J＝12.9,1.6Hz,1H),7.38(d,J＝1.1Hz,1H),7.25–7.21(m,2H),6.91–6.86(m,3H),5.26(dd,J＝10.6,4.7Hz,1H),4.57(dd,J＝9.4,4.5Hz,1H),4.02–3.88(m,8H),3.73(q,J＝10.7Hz,2H),2.43(m,J＝11.0,7.5,3.9Hz,3H),2.17(dd,J＝13.1,4.6Hz,1H),2.06–1.96(m,3H),1.91–1.79(m,1H),1.69–1.61(m,1H),0.97(dd,J＝12.5,6.6Hz,6H)。LC/MS(ESI)m/z:586(M+H)+。
方案201：(1S,3S,5S)-N-((4-((E)-N,N’-二甲基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物222)的合成
Figure BDA0004238079180007981
步骤1：5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)噻吩-3-甲酸(2)
向((4-氰基噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g,8.39mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中添加NaOH(1.0g,25.17mmol)在水(10mL)中的溶液，并将混合物在100℃下搅拌16小时。将混合物用0.5MHCl水溶液酸化至pH～5，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈白色固体的5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)噻吩-3-甲酸(1.0g，收率46.3％)。LC/MS(ESI)(m/z)：258(M+H)+。
步骤2：((4-(甲基氨基甲酰基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(3)
在0℃下向5-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)噻吩-3-甲酸(1.0g,3.89mmol)和盐酸甲胺(0.39g,5.83mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(1.51g,11.67mmol)和HATU(2.22g,5.84mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((4-(甲基氨基甲酰基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.05g，收率100％)。LC/MS(ESI)m/z:271(M+H)+。
步骤3：((4-(甲基氨基硫代甲酰基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(4)
在0℃下向((4-(甲基氨基甲酰基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.05g,3.88mmol)在THF(20mL)中的混合物中添加劳森试剂(3.14g,7.76mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌24小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((4-(甲基氨基硫代甲酰基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(890mg，收率80.1％)。LC/MS(ESI)m/z:287(M+H)+。
步骤4：5-(氨基甲基)-N-甲基噻吩-3-硫代甲酰胺盐酸盐(5)
在0℃、N2气氛下向((4-(甲基氨基硫代甲酰基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(470mg,1.64mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1.0mL,4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的5-(氨基甲基)-N-甲基噻吩-3-硫代甲酰胺盐酸盐(370mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:187(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-(甲基氨基硫代甲酰基)噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(6)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(178mg,0.45mmol)和5-(氨基甲基)-N-甲基噻吩-3-硫代甲酰胺盐酸盐(200mg,0.90mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(175mg,1.35mmol)和T3P(426mg,0.67mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-(甲基氨基硫代甲酰基)噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(245mg，收率96.8％)。LC/MS(ESI)m/z:563(M+H)+。
步骤6：(Z)-N-甲基-5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-硫代氨亚基替甲酸甲酯(7)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-N-((4-(甲基氨基硫代甲酰基)噻吩-2-基)甲基)-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(45mg,0.08mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加MeI(23mg,0.16mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：577(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-((4-((E)-N,N’-二甲基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物222)
在0℃下向(Z)-N-甲基-5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-硫代氨亚基替甲酸甲酯(23mg,0.04mmol)在DMF(0.5mL)中的混合物中添加MeNH2/THF溶液(0.1mmol,0.1mL,1M于THF中)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物浓缩至干，并将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物222(3.2mg，收率14.3％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.48(s,1H),7.92(t,J＝7.5Hz,1H),7.87–7.84(m,2H),7.44–7.39(m,2H),7.24–7.18(m,2H),7.08–7.05(m,2H),7.03–6.99(m,2H),4.81(d,J＝3.3Hz,1H),4.60–4.53(m,2H),4.38–4.23(m,2H),3.49–3.38(m,1H),2.99(d,J＝2.6Hz,3H),2.94(d,J＝2.2Hz,3H),2.55–2.35(m,1H),2.16(dd,J＝13.4,3.4Hz,1H),1.30(s,3H),1.16–1.11(m,1H),0.82(dd,J＝17.3,11.3Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:560(M+H)+。
方案202：6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸(化合物234)的合成
Figure BDA0004238079180008021
步骤1：(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(300mg,0.77mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(120mg,0.51mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.42mL,2.55mmol)和T3P(966mg,1.53mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用水洗涤两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(DCM:MeOH＝40:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(261mg，收率83.9％)。LC/MS(ESI)m/z:613(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-(((6-乙氧基-6-氧代己基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-4-((((E)-6-乙氧基-6-氧代己-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(261mg,0.42mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将反应混合物在25℃、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(((6-乙氧基-6-氧代己基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(200mg，收率90.0％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:525(M+H)+。
步骤3：6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸乙酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-(((6-乙氧基-6-氧代己基)氧基)甲基)-4-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(170mg,0.32mmol)和(R)-N-乙酰氧基-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(147mg,0.64mmol)在DMF(5.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.27mL,1.62mmol)和T3P(619mg,0.96mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用水洗涤两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸乙酯(117mg，收率49.4％)。LC/MS(ESI)m/z:734(M+H)+。
步骤4：6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸乙酯
在0℃下向6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸乙酯(117mg,0.16mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(5mg,10重量％)，并将反应混合物在25℃、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸乙酯(100mg，收率93.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:676(M+H)+。
步骤5：6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸(化合物234)
在0℃下向6-(((3R,5S)-5-(((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-3-基)甲氧基)己酸乙酯(100mg,0.15mmol)在MeOH(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化锂(9mg,0.23mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物234(18mg，收率24.2％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.49(s,1H),8.24(t,J＝2.5Hz,1H),7.55(d,J＝10.9Hz,1H),7.26–7.20(m,2H),6.92–6.86(m,3H),5.28(dq,J＝13.7,6.9Hz,1H),4.62(dt,J＝17.3,8.2Hz,1H),4.12–3.80(m,6H),3.70(dd,J＝8.8,4.2Hz,1H),3.65(dd,J＝14.4,7.4Hz,1H),3.52(t,J＝6.3Hz,2H),2.57–2.42(m,3H),2.26(t,J＝7.4Hz,2H),2.23–2.01(m,3H),1.65–1.56(m,7H),1.45–1.37(m,2H)。LC/MS(ESI)m/z:648(M+H)+。
方案203：(1S,3S,5S)-N-((5-甲脒基噻唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-(2-(4-苯氧基苯甲酰氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物235)的合成
Figure BDA0004238079180008051
步骤1：(噻唑-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(2)
向噻唑-2-基甲胺(1g,8.77mmol)在THF和水(5mL)中的溶液中添加NaHCO3(2.2g,26.3mmol)和Boc2O(2.3g,10.5mmol)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(噻唑-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.6g，收率85.6％)。LC/MS(ESI)m/z:215(M+H)+。
步骤2：((5-溴噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(3)
在N2气氛下向(噻唑-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.66g,7.75mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加NBS(1.5g,8.52mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((5-溴噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.86g，收率81.9％)。LC/MS(ESI)m/z:293(M+H)+。
步骤3：((5-氰基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(4)
在N2气氛下向((5-溴噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(690mg,2.35mmol)在NMP(20mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(553mg,4.71mmol)和Pd(PPh3)4(408mg,0.35mmol)，并将反应混合物在120℃下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((5-氰基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(140mg，收率24.9％)。LC/MS(ESI)m/z:240(M+H)+。
步骤4：((5-(N-羟基甲脒基)噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(5)
在N2气氛下向((5-氰基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(140mg,0.59mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中添加NH2OH·HCl(102mg,1.46mmol)和DIPEA(227mg,1.76mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((5-(N-羟基甲脒基)噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(155mg，收率97.3％)。LC/MS(ESI)m/z:273(M+H)+。
步骤5：((5-(N-乙酰氧基甲脒基)噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(6)
在N2气氛下向((5-(N-羟基甲脒基)噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(155mg,0.57mmol)在AcOH(1mL)中的溶液中添加DMAP(5mg)和Ac2O(1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((5-(N-乙酰氧基甲脒基)噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(140mg，收率78.2％)。LC/MS(ESI)m/z:315(M+H)+。
步骤6：((5-甲脒基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(7)
向((5-(N-乙酰氧基甲脒基)噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(140mg,0.45mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((5-甲脒基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，收率96.4％)。LC/MS(ESI)m/z:257(M+H)+。
步骤7：2-(氨基甲基)噻唑-5-甲脒(8)
在N2气氛下向((5-甲脒基噻唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(110mg,0.43mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(1mL)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的2-(氨基甲基)噻唑-5-甲脒(66mg，收率98.5％)。LC/MS(ESI)m/z:157(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-N-((5-甲脒基噻唑-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物235)
在N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(83mg,0.21mmol)和2-(氨基甲基)噻唑-5-甲脒(33mg,0.21mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加DIPEA(164mg,1.27mmol)和T3P(202mg,0.32mmol,50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，并用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝5:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物235(10mg，收率8.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.43–8.38(m,1H),7.86–7.81(m,2H),7.42(t,J＝8.0Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.08–6.98(m,4H),4.91(d,J＝3.5Hz,1H),4.73(dd,J＝11.6,6.3Hz,2H),4.42–4.30(m,2H),3.49–3.42(m,1H),2.47(t,J＝12.6Hz,1H),2.25–2.09(m,1H),1.33(d,J＝3.9Hz,3H),1.23(dd,J＝5.8,2.4Hz,1H),0.85(t,J＝5.8Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:533(M+H)+。
方案204：(1S,3S,5S)-N-((4-((E)-N’-氰基-N-甲基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物236)的合成
Figure BDA0004238079180008081
步骤1：(1S,3S,5S)-N-((4-((E)-N’-氰基-N-甲基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物236)
在0℃下向(Z)-N-甲基-5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-硫代氨亚基替甲酸甲酯(23mg,0.04mmol)和DIPEA(16mg,0.12mmol)在DMF(0.25mL)中的混合物中添加氰胺(4mg,0.1mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物236(3.3mg，收率14.5％)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.93(d,J＝4.5Hz,1H),8.78–8.21(m,2H),8.05(dd,J＝6.6,1.5Hz,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,2H),7.45(t,J＝7.9Hz,2H),7.37–7.29(m,1H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.10(d,J＝7.7Hz,2H),7.04(d,J＝8.8Hz,2H),4.70–4.48(m,1H),4.45–4.34(m,2H),4.03(dd,J＝16.5,5.4Hz,1H),3.57–3.42(m,2H),2.83(dd,J＝8.2,3.8Hz,3H),2.36–2.25(m,1H),2.03–1.92(m,1H),1.23(d,J＝5.7Hz,3H),1.14–0.45(m,2H)。LC/MS(ESI)m/z:571(M+H)+。
方案205：(1S,3S,5S)-N-(3-甲脒基苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物237)的合成
Figure BDA0004238079180008091
步骤1：6-溴苯并[b]噻吩-3-甲腈(2)
在0℃、N2气氛下向苯并[b]噻吩-3-甲腈(1.0g,6.28mmol)在MeCN(10mL)中的混合物中逐滴添加在MeCN(4mL)中的Br2(804mg,5.02mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和Na2S2O3溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的6-溴苯并[b]噻吩-3-甲腈粗品(1.0g，收率66.9％)。LC/MS(ESI)m/z:238(M+H)+。
步骤2：(3-氰基苯并[b]噻吩-6-基)氨基甲酸叔丁酯(3)
在0℃、N2气氛下向6-溴苯并[b]噻吩-3-甲腈(1.0g，收率66.9％)在甲苯(15mL)中的混合物中添加氨基甲酸叔丁酯(804mg,5.02mmol)、Xantphos(804mg,5.02mmol)、Cs2CO3(804mg,5.02mmol)和Pd2(dba)3(4mL)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和Na2S2O3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的粗(3-氰基苯并[b]噻吩-6-基)氨基甲酸叔丁酯(700mg，收率66.9％)。LC/MS(ESI)m/z:275(M+H)+。
步骤3：6-氨基苯并[b]噻吩-3-甲腈盐酸盐(4)
在0℃、N2气氛下向(3-氰基苯并[b]噻吩-6-基)氨基甲酸叔丁酯(700mg,2.55mmol)在DCM(7mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(7.0mL,28mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色固体的6-氨基苯并[b]噻吩-3-甲腈盐酸盐(170mg，收率31.7％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:175(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-N-(3-氰基苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(6)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(120mg,0.32mmol)和6-氨基苯并[b]噻吩-3-甲腈盐酸盐(100mg,0.48mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(129mg,1.0mmol)和T3P(306mg,0.48mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈油状物的(1S,3S,5S)-N-(3-氰基苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(115mg，收率65.3％)。LC/MS(ESI)m/z:551(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-(3-(N-羟基甲脒基)苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(7)
向(1S,3S,5S)-N-(3-氰基苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(110mg,0.2mmol)和DIPEA(78mg,0.6mmol)在EtOH(5mL)中的混合物中添加盐酸羟胺(28mg,0.4mmol)，并将混合物在90℃下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-N-(3-(N-羟基甲脒基)苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(100mg，收率85.7％)。LC/MS(ESI)m/z:584(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-(3-(N-乙酰氧基甲脒基)苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(8)
向(1S,3S,5S)-N-(3-(N-羟基甲脒基)苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(100mg,0.17mmol)和Ac2O(1mL)在AcOH(1mL)中的混合物中添加DMAP(12mg,0.1mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(1S,3S,5S)-N-(3-(N-乙酰氧基甲脒基)苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(60mg，收率56.5％)。LC/MS(ESI)m/z:626(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-(3-甲脒基苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物237)
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-N-(3-(N-乙酰氧基甲脒基)苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(50mg,0.08mmol)在MeOH(5mL)中的混合物中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物237(8.3mg，收率18.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.44(s,1H),8.31(s,1H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.90(s,1H),7.88(s,1H),7.66(d,J＝6.9Hz,1H),7.41(s,2H),7.21(d,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.7Hz,2H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),4.99(s,1H),4.49(d,J＝16.6Hz,1H),4.31(d,J＝16.7Hz,1H),3.47(d,J＝11.7Hz,2H),2.35(s,1H),1.35(s,3H),1.29(s,1H),0.86(s,1H)。LC/MS(ESI)m/z:571(M+H)+。
方案206：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物238)的合成
Figure BDA0004238079180008131
步骤1：(S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在0℃下向(S)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(60mg,0.27mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(73mg,0.27mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(209mg,1.6mmol)和T3P(515mg,0.81mmol,50％于EtOAc中)。将混合物在室温、氮气气氛下搅拌1小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(50mg，收率38.7％)。LCMS(ESI)m/z＝473(M+H)+。
步骤2：(S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(50mg,0.10mmol)在MeOH(3mL)/水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(13mg,0.30mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(30mg，收率62.5％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：458(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物238)
在0℃下向(S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(邻-甲苯基)吡咯烷-2-甲酸(11mg,0.060mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(23mg,0.18mmol)和PyBOP(50mg,0.090mmol)。将混合物在室温、氮气气氛下搅拌1小时。将混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝1:1制备型HPLC和SFC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物238(5.0mg，收率13.9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.24(d,J＝1.5Hz,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,2H),7.57(s,1H),7.42(t,J＝8.0Hz,2H),7.34(d,J＝7.6Hz,1H),7.23–7.14(m,4H),7.07(d,J＝7.6Hz,2H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),5.38–5.23(m,1H),4.57–4.50(m,1H),4.36(d,J＝16.7Hz,1H),4.24–4.15(m,1H),4.11(d,J＝16.6Hz,1H),3.83–3.74(m,1H),3.69–3.62(m,1H),2.73–2.56(m,1H),2.41(d,J＝15.0Hz,3H),2.13–2.03(m,1H),1.61(t,J＝11.4Hz,3H)。LCMS(ESI)m/z＝610(M+H)+。
方案207：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-氟噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物239)的合成
Figure BDA0004238079180008151
步骤1：(4,5-二溴噻吩-2-基)甲醇(2)
在0℃下向4,5-二溴噻吩-2-甲醛(10.0g,37.45mmol)在MeOH(90mL)中的混合物中添加NaBH4(1.49g,39.33mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成反应后，将反应混合物用冰水淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝80:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(4,5-二溴噻吩-2-基)甲醇(9.9g，收率98.3％)。
步骤2：2-((4,5-二溴噻吩-2-基)甲氧基)四氢-2H-吡喃(3)
在0℃下向(4,5-二溴噻吩-2-基)甲醇(9.9g,36.67mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加PPTS(2.30g,9.17mmol)和DHP(4.62g,55.01mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用冰水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝100:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的2-((4,5-二溴噻吩-2-基)甲氧基)四氢-2H-吡喃(12.1g，收率93.2％)。
步骤3：2-((4-溴-5-氟噻吩-2-基)甲氧基)四氢-2H-吡喃(4)
在-78℃下，向t2-((4,5-二溴噻吩-2-基)甲氧基)四氢-2H-吡喃(6.38g,18.0mmol)在THF(180mL)中的溶液中添加-78℃的n-BuLi(9.37mL,23.44mmol,2.5M)，并将所得混合物在N2气氛下搅拌0.5小时。然后，添加NFSI(7.37g,23.44mmol)在THF(60mL)中的溶液，并将混合物在-78℃下搅拌，并在6小时内温热至-10℃。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速柱色谱(PE:EtOAc＝100:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的2-((4-溴-5-氟噻吩-2-基)甲氧基)四氢-2H-吡喃(4.0g，收率75.5％)。
步骤4：2-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)噻吩-3-甲腈(5)
向2-((4-溴-5-氟噻吩-2-基)甲氧基)四氢-2H-吡喃(3.0g,10.2mmol)在DMA(40mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(2.03g,17.35mmol)、dppf(2.83g,5.1mmol)、Zn(1.99g,30.6mmol)和Pd2(dba)3(1.76g,3.06mmol)。将混合物在N2气氛下脱气三次，并在90℃下搅拌12小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝50:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的2-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)噻吩-3-甲腈(2.0g，收率81.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.77(d,J＝3.2Hz,1H),4.72-4.69(m,2H),4.56(dd,J＝12.8,12.8Hz,1H),3.87–3.82(m,1H),3.59–3.53(m,1H),1.86–1.69(m,2H),1.68–1.58(m,3H),1.56–1.50(m,1H)。
步骤5：2-氟-5-(羟基甲基)噻吩-3-甲腈(6)
在0℃下向2-氟-5-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)噻吩-3-甲腈(2.0g,8.30mmol)在MeOH(20mL)中的混合物中添加PPTS(1.04g,4.15mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成反应后，将反应混合物用冰水淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈棕色油状物的2-氟-5-(羟基甲基)噻吩-3-甲腈(850mg，收率65.4％)。
步骤6：2-氟-5-甲酰基噻吩-3-甲腈(7)
在0℃下向2-氟-5-(羟基甲基)噻吩-3-甲腈(850mg,5.41mmol)在THF(10mL)中的混合物中添加DMP(2.75g,6.50mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。完成反应后，将反应混合物用冰水淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的2-氟-5-甲酰基噻吩-3-甲腈(670mg，收率79.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.80(d,J＝4.0Hz,1H),7.65(d,J＝3.2Hz,1H)。
步骤7：(S,E)-N-((4-氰基-5-氟噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8)
在0℃下向2-氟-5-甲酰基噻吩-3-甲腈(670mg,4.32mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(575mg,4.75mmol)和四异丙醇钛(2.45g,8.64mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用冰水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝15:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(S,E)-N-((4-氰基-5-氟噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(730mg，收率65.2％)。LC/MS(ESI)m/z:259(M+H)+。
步骤8：(S)-N-((4-氰基-5-氟噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(9)
在0℃下向(S,E)-N-((4-氰基-5-氟噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(730mg,2.83mmol)在MeOH(10mL)中的混合物中添加NaBH4(128mg,3.40mmol)，并将反应混合物在0℃下搅拌2小时。完成反应后，将反应混合物用冰水淬灭，并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝7:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(S)-N-((4-氰基-5-氟噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(610mg，收率83.0％)。LC/MS(ESI)m/z:261(M+H)+。
步骤9：5-(氨基甲基)-2-氟噻吩-3-甲腈盐酸盐(10)
将(S)-N-((4-氰基-5-氟噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(610mg,2.34mmol)在HCl/1,4-二噁烷(6mL)中的溶液在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的甲基5-(氨基甲基)-2-氟噻吩-3-甲腈盐酸盐(440mg，收率97.8％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:157(M+H)+。
步骤10：((4-氰基-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(11)
在0℃下向乙基5-(氨基甲基)-2-氟噻吩-3-甲腈盐酸盐(230mg,1.20mmol)和二碳酸二叔丁酯(522mg,2.40mmol)在THF(3mL)中的混合物中逐滴添加NaHCO3(1.01g,11.98mmol)在H2O(1mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝12:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的((4-氰基-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，收率98.0％)。LC/MS(ESI)m/z:257(M+H)+。
步骤11：((5-氟-4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(12)
向((4-氰基-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,1.17mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中添加NH2OH·HCl(203mg,2.93mmol)和DIPEA(453mg,3.51mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝60:1)进行纯化从而得到呈白色固体的((5-氟-4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(235mg，收率69.5％)。LC/MS(ESI)m/z:290(M+H)+。
步骤12：((4-(N-乙酰氧基甲脒基)-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(13)
向((5-氟-4-(N-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(220mg,0.80mmol)在AcOH(1.5mL)中的混合物中添加Ac2O(1.5mL)和DMAP(29mg)，并将混合物在30℃下搅拌5小时。将混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝80:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的((4-(N-乙酰氧基甲脒基)-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(220mg，收率83.5％)。LC/MS(ESI)m/z:332(M+H)+。
步骤13：((4-甲脒基-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(14)
向((4-(N-乙酰氧基甲脒基)-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(170mg,0.51mmol)在AcOH(20mL)中的溶液中添加甲酸铵(161mg,2.57mmol)和Pd/C(150mg,10重量％)，并将反应混合物在80℃、N2气氛下搅拌10分钟。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的((4-甲脒基-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，收率85.6％)。LC/MS(ESI)m/z:274(M+H)+。
步骤14：((4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(15)
在0℃下向((4-甲脒基-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(120mg,0.44mmol)和二碳酸二叔丁酯(287mg,1.32mmol)在THF(3mL)中的混合物中逐滴添加NaHCO3(443mg,5.27mmol)在H2O(1mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝30:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的((4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(134mg，收率81.7％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.19(d,J＝3.6Hz,1H),4.28(d,J＝4.8Hz,2H),1.67–1.52(m,18H)。LC/MS(ESI)m/z:374(M+H)+。
步骤15：((5-(氨基甲基)-2-氟噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(16)
将((4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(40mg,0.11mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的溶液在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的((5-(氨基甲基)-2-氟噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(29mg，收率85.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:274(M+H)+。
步骤16：((2-氟-5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(17)
在0℃、N2气氛下向((5-(氨基甲基)-2-氟噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(29mg,0.11mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(46mg,0.12mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.09mL,0.53mmol)和PyBOP(83mg,0.16mmol)，并将混合物在室温下搅拌0.5小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的N-[2-氟-5-({[(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基]甲酰胺基}甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酰基]氨基甲酸叔丁酯(35mg，收率50.8％)。LC/MS(ESI)m/z:650(M+H)+。
步骤17：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-氟噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物239)
在0℃、N2气氛下向N-[2-氟-5-({[(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(4-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基]甲酰胺基}甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酰基]氨基甲酸叔丁酯(35mg,0.054mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈黄色固体的化合物239(3.3mg，收率11.1％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.86(d,J＝8.8Hz,2H),7.42(t,J＝8.0Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(d,J＝7.6Hz,2H),7.03–6.97(m,3H),4.82(dd,J＝11.2,11.2Hz,1H),4.48–4.27(m,4H),3.49–3.40(m,1H),2.54–2.36(m,1H),2.21–2.03(m,1H),1.30(s,3H),1.12(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.81(t,J＝5.6Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:550(M+H)+。
方案208：(1S,3S,5S)-N-((R)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物240)的合成
Figure BDA0004238079180008211
步骤1：(R,E)-N-(1-(4-溴噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2)
向1-(4-溴噻吩-2-基)乙烷-1-酮(15g,73.1mmol)在THF(200mL)中的混合物中添加Ti(i-PrO)4(103.9g,365.5mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(22.15g,182.8mmol)，并将混合物在90℃下搅拌过夜。将混合物用水稀释，并用EtOAc萃取两次，将合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(R,E)-N-(1-(4-溴噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(17g，收率75.4％)。LC/MS(ESI)m/z:308(M+H)+。
步骤2：(R)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3)
在-30℃下向(R,E)-N-(1-(4-溴噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(17.0g,55.2mmol)在THF(200mL)中的溶液中分批添加NaBH4(6.29g,165.5mmol)。将混合物在-30℃、N2气氛下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到混合物。将混合物用EtOAc进行重结晶，得到呈白色固体的(R)-N-(1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8.1g，收率47.3％)，并通过Mosher方法确定绝对构型。LC/MS(ESI)m/z:310(M+H)+。
步骤3：(R)-2-甲基-N-((R)-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)噻吩-2-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(4)
在N2气氛下向(R)-N-((R)-1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(250mg,0.59mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(300mg,1.18mmol)、Pd(dppf)Cl2(25mg,0.03mmol)和KOAc(170mg,1.8mmol)，并将反应混合物在90℃下搅拌过夜。将反应溶液未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:358(M+H)+。
步骤4：(R)-N-((R)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(6)
在室温下向(R)-2-甲基-N-((R)-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)噻吩-2-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(0.59mmol,15mL)在1,4-二噁烷/H2O(20mL,4/1)中的溶液中添加2-溴-1H-咪唑(173mg,1.18mmol)、Na2CO3(125mg,1.18mmol)和Pd(PPh3)4(25mg,0.02mmol)，并将反应混合物在90℃、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用EtOAc萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(R)-N-((R)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(132mg,2步收率75.2％)。LC/MS(ESI)m/z:298(M+H)+。
步骤5：(R)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙烷-1-胺盐酸盐(9)
在室温下向(R)-N-((R)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(132mg,0.44mmol)在DCM(2.0mL)中的溶液中添加HCl/1,4-二噁烷(2.0mL)，并将混合物搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩从而得到呈棕色固体的(R)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙烷-1-胺盐酸盐(102mg,100％收率)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：177(M-NH2)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-((R)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物240)
在0℃下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(32mg,0.08mmol)、(R)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙烷-1-胺盐酸盐(34mg,0.15mmol)在DMF(0.5mL)中的混合物中添加DIPEA(36mg,0.28mmol)和PyBop(52mg,0.1mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物240(7.2mg，收率15.6％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.34(s,1H),7.81(dd,J＝11.4,8.8Hz,2H),7.69(s,1H),7.50(s,1H),7.42(dd,J＝8.4,7.6Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(dd,J＝7.7,6.7Hz,2H),7.01(s,2H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),5.33–5.20(m,1H),4.84(d,J＝3.4Hz,1H),4.41(d,J＝16.5Hz,1H),4.22(d,J＝16.5Hz,1H),3.38(dd,J＝5.9,2.4Hz,1H),2.43(t,J＝11.9Hz,1H),2.17(dd,J＝13.4,3.4Hz,1H),1.59(d,J＝6.9Hz,3H),1.29(s,3H),1.17(dd,J＝5.7,2.4Hz,1H),0.73(t,J＝5.4Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:570(M+H)+。
方案209：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(环己基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物241)
Figure BDA0004238079180008241
步骤1：(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-环己基吡咯烷-2-甲酸甲酯(40mg,0.19mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(51mg,0.19mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(147mg,1.1mmol)和HBTU(106mg,0.28mmol)，并将混合物在25℃搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(58mg，收率65.8％)。LC/MS(ESI)m/z:465(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(58mg,0.12mmol)在MeOH(2mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(30mg,0.75mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(50mg，收率92.6％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：451(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(环己基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物241)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(50mg,0.11mol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(27mg,0.16mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(71mg,0.55mmol)和PyBOP(62mg,0.12mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝8:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈无色油状物的化合物241(1.5mg，收率2.3％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.24(t,J＝3.7Hz,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,2H),7.49(d,J＝15.9Hz,1H),7.42(t,J＝8.0Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,2H),7.01(d,J＝8.7Hz,2H),5.34–5.24(m,1H),4.58(s,3H),4.20(t,J＝11.0Hz,2H),3.94(t,J＝8.4Hz,1H),2.23–2.14(m,2H),2.04(s,1H),1.94–1.88(m,1H),1.75(d,J＝12.4Hz,3H),1.57(d,J＝7.0Hz,3H),1.30(s,5H),1.03(d,J＝11.5Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：554(M+H)+。
方案210：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物242)的合成
Figure BDA0004238079180008261
步骤1：(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-环己基吡咯烷-2-甲酸甲酯(90mg,0.38mmol)和(4-苯氧基丁酰基)甘氨酸(80mg,0.38mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(294mg,2.3mmol)和HBTU(216mg,0.57mmol)，并将混合物在25℃搅拌2小时。将混合物用水稀释，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(40mg，收率24.5％)。LC/MS(ESI)m/z:431(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(40mg,93umol)在MeOH(2mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(22mg,0.56mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(30mg，收率77.5％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：417(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物242)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(15mg,36umol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(10mg,54umol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(23mg,0.18mmol)和PyBOP(21mg,40umol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝8:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物242(2.0mg，收率10.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.22(t,J＝3.4Hz,1H),7.43(d,J＝28.4Hz,1H),7.24(t,J＝7.9Hz,2H),6.90(dd,J＝7.3,5.2Hz,3H),4.60–4.50(m,4H),4.09(d,J＝16.9Hz,1H),3.99(dd,J＝10.6,4.2Hz,3H),3.89–3.83(m,1H),3.22(t,J＝9.8Hz,1H),2.46(t,J＝7.4Hz,2H),2.16–2.04(m,4H),1.73(d,J＝13.0Hz,6H),1.25(d,J＝11.5Hz,2H),1.10–0.82(m,3H)。LC/MS(ESI)(m/z)：554(M+H)+。
方案211：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物243)的合成
Figure BDA0004238079180008281
步骤1：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物243)。
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-环己基-1-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(15mg,36umol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(24mg,72umol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(28mg,0.22mmol)和PyBOP(24mg,47umol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝8:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物243(1.6mg，收率7.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(d,J＝1.4Hz,1H),7.47(s,1H),7.23(t,J＝8.0Hz,2H),6.91–6.87(m,3H),5.31–5.22(m,1H),4.61–4.47(m,4H),4.06–3.94(m,4H),3.86(dd,J＝17.2,8.8Hz,1H),3.19(dd,J＝26.3,16.5Hz,1H),2.47(t,J＝7.4Hz,2H),2.15–2.03(m,4H),1.73(d,J＝14.5Hz,5H),1.56(d,J＝7.0Hz,3H),1.30–1.20(m,4H)。LC/MS(ESI)(m/z)：568(M+H)+。
方案212：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物244)的合成
Figure BDA0004238079180008291
步骤1：(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐
将(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(700mg,2.9mmol)在HCl/1,4-二噁烷(10mL)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干从而得到(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(500mg，收率96.4％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:146(M+H)+。
步骤2：(2S,4S)-4-羟基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(500mg,2.8mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(750mg,2.8mmol)在DMF(8mL)中的混合物中添加DIPEA(2.2g,17mmol)和HBTU(1.6g,4.3mmol)，并将混合物在25℃搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化，从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-4-羟基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(1.1g，收率96.5％)。LC/MS(ESI)m/z:399(M+H)+。
步骤3：(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在N2气氛下向(2S,4S)-4-羟基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(1.0g,2.5mmol)在EtOAc(15mL)中的溶液中添加选择性氟试剂(selectfluor)(4.4g,12mmol)、AgOTf(6.4g,25mmol)、KF(1.5g,25mmol)、2-氟吡啶(2.4g,25mmol)和TMSCF3(3.5g,25mmol)，并将混合物在40℃下搅拌48小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(200mg，收率17.1％)。LCMS(ESI)m/z:467(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸
向(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(100mg,0.21mmol)在MeOH(2mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(33mg,0.81mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸(90mg，收率93.0％)，其直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)(m/z)：453(M+H)+。
步骤5：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物244)
在0℃、N2气氛下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸(90mg,0.20mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(46mg,0.30mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(155mg,1.2mmol)和PyBOP(114mg,0.22mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝8:1)进行纯化并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈白色固体的化合物244(1.2mg，收率1.0％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.19(s,1H),7.84(d,J＝8.7Hz,2H),7.41(d,J＝8.5Hz,3H),7.21(s,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,2H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),5.15(d,J＝3.7Hz,1H),4.66(dd,J＝12.6,5.4Hz,2H),4.29(d,J＝16.6Hz,1H),4.10–4.05(m,2H),3.99(d,J＝12.0Hz,1H),2.60(dd,J＝11.6,8.1Hz,1H),2.44(d,J＝13.6Hz,1H),2.03(d,J＝7.0Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:590(M+H)+。
方案213：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-氟噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物245)的合成
Figure BDA0004238079180008311
步骤1：((5-(氨基甲基)-2-氟噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(2)
将((4-(N-(叔丁氧基羰基)甲脒基)-5-氟噻吩-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(45mg,0.12mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的((5-(氨基甲基)-2-氟噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(32mg，收率97.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:274(M+H)+。
步骤2：((2-氟-5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(3)
在0℃、N2气氛下向((5-(氨基甲基)-2-氟噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(32mg,0.10mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(43mg,0.12mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.08mL,0.50mmol)和PyBOP(78mg,0.15mmol)，并将混合物在室温下搅拌0.5小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的((2-氟-5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，收率48.8％)。LC/MS(ESI)m/z:616(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-氟噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物245)
在0℃、N2气氛下向((2-氟-5-(((1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺基)甲基)噻吩-3-基)(氨亚基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.049mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物245(2.3mg，收率9.2％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.24(t,J＝8.0Hz,2H),6.97(d,J＝2.8Hz,1H),6.93–6.87(m,3H),4.80–4.77(m,1H),4.45–4.33(m,2H),4.24–4.08(m,2H),4.01(t,J＝6.2Hz,2H),3.35–3.33(m,1H),2.48(t,J＝7.6Hz,2H),2.43–2.33(m,1H),2.17–2.05(m,3H),1.28(s,3H),1.11(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.81(t,J＝5.8Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:516(M+H)+。
方案214：(2S,4S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物246)的合成
Figure BDA0004238079180008331
步骤1：(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(2)
在0℃下向(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(120mg,0.41mmol)和碘甲烷(175mg,1.24mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加K2CO3(85mg,0.62mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(94mg，收率74.7％)。LC/MS(ESI)m/z:306(M+H)+。
步骤2：(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(3)
将(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(90mg,0.30mmol)在HCl/1,4-二噁烷(3mL)中的溶液在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈白色固体的(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(50mg，收率63.6％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:206(M+H)+。
步骤3：(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸甲酯(4)
在0℃、N2气氛下向(2S,4S)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(50mg,0.24mmol)和((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(53mg,0.20mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.21mL,1.22mmol)和T3P(232mg,0.37mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸甲酯(80mg，收率89.5％)。LC/MS(ESI)m/z:459(M+H)+。
步骤4：(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(5)
在0℃下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸甲酯(80mg,0.17mmol)在MeOH(2mL)和THF(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(22mg,0.52mmol)在水(1mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用MTBE洗涤两次。将水层用0.5N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(139mg，收率82.0％)。LC/MS(ESI)(m/z)：445(M+H)+。
步骤5：(2S,4S)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(6)
在0℃、N2气氛下向(2S,4S)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(30mg,0.07mmol)和(R)-N-乙酰氧基-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(31mg,0.14mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.06mL,0.03mmol)和T3P(64mg,0.10mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(20mg，收率45.3％)。LC/MS(ESI)m/z:654(M+H)+。
步骤6：(2S,4S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物246)
向(2S,4S)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(20mg,0.03mmol)在MeOH(3mL)中的混合物中添加Pd/C(5mg,10重量％)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物246(5.0mg，收率27.4％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.25(t,J＝4.2Hz,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,2H),7.53(d,J＝14.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.9Hz,2H),7.35(d,J＝6.3Hz,4H),7.29–7.25(m,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.07(d,J＝7.7Hz,2H),7.02(d,J＝8.6Hz,2H),5.31(q,J＝6.9Hz,1H),4.69(d,J＝6.6Hz,1H),4.22(d,J＝10.5Hz,3H),3.67(t,J＝27.6Hz,2H),2.52–2.35(m,2H),1.64(dd,J＝32.4,6.9Hz,3H)。LC/MS(ESI)m/z:596(M+H)+。
方案215：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物247)的合成
Figure BDA0004238079180008361
步骤1：(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-甲酸甲酯
在室温下向(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-苄酯2-甲酯(850mg,1.1mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中添加Pd/C(90mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2气氛下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-甲酸甲酯(428mg，收率97.0％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：146(M+H)+。
步骤2：(2S,4R)-4-羟基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-甲酸甲酯(428mg,3.0mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(800mg,3.0mmol)在DMF(12mL)中的混合物中添加DIPEA(2.2g,17mmol)和HBTU(1.4g,3.8mmol)，并将混合物在25℃搅拌2小时。将混合物用水稀释，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化，从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-羟基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(1.0g，收率84.7％)。LC/MS(ESI)m/z:399(M+H)+。
步骤3：(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在40℃、N2气氛下向(2S,4R)-4-羟基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(1.0g,2.5mmol)在EtOAc(15mL)中的溶液中添加选择性氟试剂(selectfluor)(4.4g,12mmol)、AgOTf(6.4g,25mmol)、KF(1.5g,25mmol)、2-氟吡啶(2.4g,25mmol)和TMSCF3(3.5g,25mmol)，并将反应混合物搅拌48小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(300mg，收率25.7％)。LCMS(ESI)m/z＝467(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(100mg,0.21mmol)在MeOH(2mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH(33mg,0.81mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸(90mg，收率93.0％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：453(M+H)+。
步骤5：(2S,4S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物247)
在0℃、N2气氛下向(2S,4R)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(三氟甲氧基)吡咯烷-2-甲酸(50mg,0.22mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(100mg,0.66mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(170mg,1.3mmol)和PyBOP(148mg,0.29mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用水稀释，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝8:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈无色油状物的化合物247(10mg，收率7.7％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.22(t,J＝9.3Hz,1H),7.84(d,J＝8.7Hz,2H),7.51–7.38(m,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,2H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),5.18(s,1H),4.61–4.55(m,3H),4.27–4.09(m,2H),4.05–3.94(m,2H),2.60(dd,J＝44.9,34.0Hz,1H),2.44–2.25(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:590(M+H)+。
方案216：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物248)的合成
Figure BDA0004238079180008381
步骤1：(4-溴-5-碘噻吩-2-基)甲醇(2)
在N2气氛下向(4-溴噻吩-2-基)甲醇(10g,51.8mmol)在THF(80mL)和Ac2O(70mL)中的混合物中添加NIS(17.5g,77.7mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用饱和Na2S2O3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(4-溴-5-碘噻吩-2-基)甲醇(14g，收率84.7％)。LC/MS(ESI)m/z:301(M-OH)+。
步骤2：4-溴-5-碘噻吩-2-甲酸(3)
向(4-溴-5-碘噻吩-2-基)甲醇(11g,31.0mmol)在丙酮(100mL)中的溶液中添加琼斯试剂(27mL,84.8mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌18小时。将混合物用EtOAc稀释，用冰-水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到呈白色固体的4-溴-5-碘噻吩-2-甲酸(11g，收率95.8％)。LC/MS(ESI)m/z:232(M+H)+。
步骤3：4-溴-5-碘噻吩-2-甲酸甲酯(4)
在N2气氛下向4-溴-5-碘噻吩-2-甲酸(11g,33.0mmol)和碘甲烷(7.0g,49.6mmol)在DMF(100mL)中的混合物中添加K2CO3(13.7g,99.1mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的4-溴-5-碘噻吩-2-甲酸甲酯(7.6g，收率66.3％)。
步骤4：4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲酸甲酯(5)
在0℃下向4-溴-5-碘噻吩-2-甲酸甲酯(6.0g,17.3mmol)和2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸甲酯(13.3g,69.2mmol)在DMF(27mL)和HMPA(27mL)中的混合物中添加碘化铜(3.3g,17.3mmol)和KF(3g,51.7mmol)，并将混合物在100℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲酸甲酯(3.4g，收率68.0％)。
步骤5：(4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲醇(6)
向4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲酸甲酯(3.4g,11.762mmol)在MeOH(34mL)中的混合物中添加NaBH4(1.9g,47.1mmol)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲醇(2.9g，收率94.4％)。
步骤6：4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲醛(7)
在0℃下向(4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲醇(2.5g,9.6mmol)在DCM(25mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(8.1g,19.2mmol)，并将混合物在60℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化，从而得到呈无色油状物的4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲醛(1.7g，收率68.5％)。
步骤7：(S,E)-N-((4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8)
在N2气氛下向4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲醛(1.7g,6.6mmol)和(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.4g,19.7mmol)在THF(20mL)中的混合物中添加Ti(OiPr)4(11.2g,39.4mmol)，并将反应混合物在70℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到呈白色固体的(S,E)-N-((4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.0g，收率84.1％)。LC/MS(ESI)m/z:363(M+H)+。
步骤8：(S)-N-((4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(9)
向(S,E)-N-((4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.0g,5.5mmol)在MeOH(20mL)中的混合物中添加NaBH4(627mg,16.6mmol)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝10:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-N-((4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.4g，收率69.6％)。LC/MS(ESI)m/z:365(M+H)+。
步骤9：(S)-N-((4-氰基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(10)
向(S)-N-((4-溴-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.4g,3.8mmol)在NMP(3mL)中的溶液中添加Zn(CN)2(903mg,7.7mmol)和Pd(PPh3)4(666mg,0.57mmol)。将反应混合物在N2气氛下加热至110℃，并将反应混合物在110℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。将水层用EtOAc萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-N-((4-氰基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.1g，收率92.4％)。LC/MS(ESI)m/z:311(M+H)+。
步骤10：(S)-5-(((叔丁基亚磺酰基)氨基)甲基)-N-羟基-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒(11)
向(S)-N-((4-氰基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(600mg,1.9mmol)在EtOH(6mL)中的混合物中添加DIPEA(1.0mL,5.8mmol)和NH2OH·HCl(336mg,4.8mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-5-(((叔丁基亚磺酰基)氨基)甲基)-N-羟基-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒(590mg，收率88.9％)。LC/MS(ESI)m/z:344(M+H)+。
步骤11：(S)-N-乙酰氧基-5-(((叔丁基亚磺酰基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒(12)
向(S)-5-(((叔丁基亚磺酰基)氨基)甲基)-N-羟基-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒(590mg,1.7mmol)在AcOH(6mL)中的混合物中添加Ac2O(6mL)和DMAP(20mg)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-N-乙酰氧基-5-(((叔丁基亚磺酰基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒(557mg，收率84.1％)。LC/MS(ESI)m/z:386(M+H)+。
步骤12：N-乙酰氧基-5-(氨基甲基)-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(13)
将(S)-N-乙酰氧基-5-(((叔丁基亚磺酰基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒(120mg,0.30mmol)在HCl/1,4二噁烷(3mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥从而得到呈白色固体的N-乙酰氧基-5-(氨基甲基)-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(99.0mg，收率100％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:282(M+H)+。
步骤13：(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(14)
在0℃、N2气氛下向N-乙酰氧基-5-(氨基甲基)-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(40mg,0.14mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(50mg,0.13mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.12mL,0.71mmol)和T3P(136mg,0.21mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(28mg，收率33.3％)。LC/MS(ESI)m/z:658(M+H)+。
步骤14：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物248)
向(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(14mg,0.02mmol)在MeOH(4mL)中的混合物中添加Pd/C(5mg,10重量％)，并将混合物在N2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌0.5小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物248(0.8mg，收率6.3％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,2H),7.42(t,J＝7.9Hz,2H),7.22(dd,J＝16.7,9.2Hz,2H),7.07(d,J＝7.8Hz,2H),7.02(d,J＝8.7Hz,2H),4.81(d,J＝4.1Hz,1H),4.57(s,2H),4.33(s,2H),3.42(dd,J＝6.0,2.5Hz,1H),2.42(t,J＝12.8Hz,1H),2.16(dd,J＝13.8,2.5Hz,1H),1.30(s,3H),1.14–1.10(m,1H),0.82(t,J＝6.4Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:600(M+H)+。
方案217：(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-(2-{[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基}乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物249)的合成
Figure BDA0004238079180008441
步骤1：(R)-2-甲基-N-(氧杂环丁烷-3-亚基)丙烷-2-亚磺酰胺
在0℃下向3-氧杂环丁酮(6.2g,86.0mmol)在DCM(120mL)中的溶液中添加(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(20.9g,172.1mmol)和四异丙醇钛(49.1g,172.8mmol)，并将反应混合物在45℃下搅拌16小时。将混合物用冰水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝15:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(R)-2-甲基-N-(氧杂环丁烷-3-亚基)丙烷-2-亚磺酰胺(6.2g，收率41.1％)。LC/MS(ESI)m/z:176(M+H)+。
步骤2：(R)-2-甲基-N-[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃下向4-溴苯基苯基醚(4.26g,17.1mmol)在THF(90mL)中的溶液中添加n-BuLi(6.39mL,15.98mmol,2.5M)，并将混合物在N2气氛下搅拌1小时，之后添加(R)-2-甲基-N-(氧杂环丁烷-3-亚基)丙烷-2-亚磺酰胺(2.0g,11.41mmol)在THF(4mL)中的溶液，并将所得混合物在-78℃、N2气氛下搅拌0.5小时。将混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝40:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(R)-2-甲基-N-[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]丙烷-2-亚磺酰胺(3.7g，收率93.9％)。LC/MS(ESI)m/z:346(M+H)+。
步骤3：2-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基][3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基}乙酸甲酯
在-20℃下向(R)-2-甲基-N-[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]丙烷-2-亚磺酰胺(1.5g,4.34mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(7.60mL,7.60mmol,1M)，并将混合物在N2气氛下搅拌0.5小时。然后添加2-溴乙酸甲酯(1.33g,8.68mmol)，并将混合物在-20℃、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用冰-水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过Al2O3柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的2-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基][3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基}乙酸甲酯(680mg，收率37.5％)。LC/MS(ESI)m/z:418(M+H)+。
步骤4：{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基][3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基}乙酸
向2-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基][3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基}乙酸甲酯(380mg,0.91mmol)在MeOH(3mL)/THF(1.5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(115mg,2.73mmol)在H2O(1.5mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基][3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基}乙酸(360mg，收率98.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:404(M+H)+。
步骤5：{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基][3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基}乙酸
在N2气氛下向{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基][3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基}乙酸(360mg,0.89mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸酯(181mg,1.07mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加DIPEA(692mg,5.35mmol)和T3P(1.14g,1.78mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(45mg，收率9.1％)。LC/MS(ESI)m/z:555(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸
向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(45mg,0.081mmol)在MeOH(2mL)/THF(1mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(14mg,0.32mmol)在H2O(1mL)中的溶液，并将混合物在30℃下搅拌4小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(40mg，收率93.6％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:527(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-{2-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺
在0℃、N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(34mg,0.065mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(30mg,0.19mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.056mL,0.32mmol)和PyBOP(50mg,0.097mmol)，并将混合物在室温下搅拌0.5小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-{2-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(13mg，收率30.3％)。LC/MS(ESI)m/z:664(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-(2-{[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基}乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物249)
向(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-{2-[(2-甲基丙烷-2-亚磺酰基)[3-(4-苯氧基苯基)氧杂环丁-3-基]氨基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(12mg,0.018mmol)在DCM(1.2mL)中的溶液中添加TFA(0.4mL)，并在0℃下搅拌0.5小时。将混合物在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物249(1.3mg，收率12.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(s,1H),7.47–7.34(m,5H),7.13(t,J＝7.4Hz,1H),7.05–6.99(m,4H),4.94–4.92(m,2H),4.72–4.70(m,1H),4.58(d,J＝15.7Hz,2H),4.47(d,J＝15.2Hz,2H),3.46–3.37(m,2H),3.10–3.06(m,1H),2.40–2.34(m,1H),2.10–2.05(m,1H),1.23(s,3H),1.19(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.68(t,J＝5.4Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:560(M+H)+。
方案218：(1R,19S,25S,28S,E)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酰胺(化合物250)的合成
Figure BDA0004238079180008481
步骤1：(叔丁氧基羰基)-L-高丝氨酸甲酯(2)
向(叔丁氧基羰基)-L-高丝氨酸(10.0g,45.66mmol)和CH3I(4.3mL,68.49mmol)在DMF(100mL)中的混合物中添加DIPEA(23mL,136.98mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用NH4Cl水溶液洗涤两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(叔丁氧基羰基)-L-高丝氨酸甲酯(4.0g，收率37.7％)。LC/MS(ESI)m/z:234(M+H)+。
步骤2：N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸甲酯(3)
在0℃、N2气氛下向(叔丁氧基羰基)-L-高丝氨酸甲酯(4.0g,17.17mmol)和苯酚(3.23g,34.34mmol)在THF(50.0mL)中的混合物中添加PPh3(13.5g,51.51mmol)和DIAD(10.4g,51.51mmol)，并将混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝4:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸甲酯(4.37g，收率82.4％)。LC/MS(ESI)m/z:310(M+H)+。
步骤3：N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸(4)
在0℃下向N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸甲酯(1.37g,4.43mmol)在MeOH(12mL)和水(4mL)中的溶液中添加氢氧化锂(280mg,6.65mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩至干，并将残余物用水稀释，用MTBE洗涤两次。将残余物用1NHCl水溶液酸化至pH～3，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸(1.2g，收率92.3％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：296(M+H)+。
步骤4：N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸甲酯(5)
在N2气氛下向N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酸(1.2g,4.07mmol)和甘氨酸甲酯(770mg,6.10mmol)在DMF(15mL)中的混合物中添加HATU(2.3g,6.10mmol)和DIPEA(3.35mL,20.35mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸甲酯(1.0g，收率67.2％)。LC/MS(ESI)m/z:367(M+H)+。
步骤5：O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸甲酯盐酸盐(6)
将N-(叔丁氧基羰基)-O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸甲酯(1.0g,2.73mmol)在HCl/1,4-二噁烷(10mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸甲酯盐酸盐(700mg，收率84.5％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:267(M+H)+。
步骤6：O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酸甲酯(7)
在N2气氛下向O-苯基-L-高丝氨酰基甘氨酸甲酯盐酸盐(756mg,2.84mmol)和十一碳-10-烯酸(784mg,4.26mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加HATU(1.62g,4.26mmol)和DIPEA(2.34mL,14.20mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝1:1)进行纯化从而得到呈白色固体的O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酸甲酯(1.05g，收率85.4％)。LC/MS(ESI)m/z:433(M+H)+。
步骤7：O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酸(8)
在0℃下向O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酸甲酯(1.05g,2.43mmol)在MeOH(9mL)和水(3mL)中的溶液中添加氢氧化锂(308mg,7.29mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩至干，并将残余物用水稀释，用MTBE洗涤两次。将残余物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酸(950mg，收率98.1％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：419(M+H)+。
步骤8：(S)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)-7-((4'-甲基-[1,1'-联苯基]-3-羰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(9)
在N2气氛下向O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酸(968mg,2.31mmol)和(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯盐酸盐(879mg,3.47mmol)在DMF(20mL)中的混合物中添加DIPEA(1.90mL,11.55mmol)和T3P(4.4g,6.93mmol,50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝97:3)进行纯化从而得到呈棕色油状物的(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-(O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(1.32g，收率87.4％)。LC/MS(ESI)m/z:654(M+H)+。
步骤9：(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸乙酯(10)
向(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-(O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(700mg,1.07mmol)在干燥DCM(70mL)中的溶液中添加格拉布第1代催化剂(220mg,0.27mmol)，并将混合物在28℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝98:2)进行纯化从而得到呈黑色油状物的(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸乙酯(260mg，收率38.8％)。LC/MS(ESI)m/z:626(M+H)+。
步骤10：(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸(11)
在0℃下向(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸乙酯(490mg,0.78mmol)在MeOH(3mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化锂(50mg,1.18mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物浓缩至干，并将残余物用水稀释，用MTBE洗涤两次。将残余物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈棕色油状物的(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸(60mg，收率12.8％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：598(M+H)+。
步骤11：(1R,19S,25S,28S,E)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酰胺(化合物250)
在0℃、N2气氛下向(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸(60mg,0.10mmol)和(R)-5-(1-(l2-氮烷基)乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(52mg,0.30mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(78mg,0.60mmol)和PyBOP(80mg,0.15mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物250(1.4mg，收率10.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,3H),8.20(s,1H),7.49(s,1H),7.25–7.20(m,2H),6.90(d,J＝8.2Hz,3H),5.45(d,J＝27.7Hz,2H),5.20(m,1H),4.64(m,1H),4.22(d,J＝16.2Hz,1H),4.08(d,J＝16.3Hz,3H),3.68–3.63(m,2H),3.48(m,4H),2.64(m,1H),2.30(m,2H),2.22(m,1H),2.09(m,3H),2.01(m,2H),1.62(d,J＝6.0Hz,2H),1.57(d,J＝6.9Hz,4H),1.29(m,9H),1.14(m,2H),1.00(m,1H),0.88(d,J＝6.4Hz,2H)。LC/MS(ESI)(m/z)：749(M+H)+。
步骤12：(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(21)
在0℃下向(1S,3S,5R)-5-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(1.0g,3.51mmol)在DCE(30mL)中的溶液中添加AgOTf(2.69g,10.53mmol)，随后添加5-溴戊-1-烯(1.56g,10.53mmol)和2,6-二-叔丁基吡啶(4.02g,21.06mmol)，并将混合物在30℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物过滤并浓缩从而得到粗产物，通过快速色谱(PE:EtOAc＝5:1)对粗产物进行进一步纯化从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(1.0g，收率83.3％)。LC/MS(ESI)(m/z)：354(M+H)+。
步骤13：(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯盐酸盐(22)
将(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸2-(叔丁基)酯3-乙酯(1.0g,2.82mmol)在HCl/1,4-二噁烷(10mL)中的溶液在室温下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯盐酸盐(700mg，收率97.6％)，其未经进一步纯化即直接用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:254(M+H)+。
方案219：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物251)的合成
Figure BDA0004238079180008531
步骤1：(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(3)
在N2气氛下向N-乙酰氧基-5-(氨基甲基)-2-(三氟甲基)噻吩-3-甲脒(40mg,0.14mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(46mg,0.13mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(92mg,0.71mmol)和T3P(136mg,0.21mmol,50重量％于EtOAc中)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝7:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(15mg，收率18.8％)。LC/MS(ESI)m/z:624(M+H)+。
步骤2：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物251)
向(1S,3S,5S)-N-((4-(N-乙酰氧基甲脒基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(15mg,0.03mmol)在MeOH(3mL)中的混合物中添加Pd/C(5mg,10重量％)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在25℃、H2球囊下搅拌15小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物251(1.0mg，收率7.4％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,3H),6.93–6.86(m,3H),4.77(d,J＝3.2Hz,1H),4.63–4.55(m,3H),4.19(d,J＝16.5Hz,1H),4.12(d,J＝16.6Hz,1H),4.01(t,J＝6.2Hz,2H),2.47(t,J＝7.5Hz,2H),2.39(t,J＝12.4Hz,1H),2.16–2.05(m,3H),1.28(s,3H),1.11(dd,J＝5.8,2.1Hz,1H),0.81(t,J＝5.6Hz,1H)。LC/MS(ESI)m/z:566(M+H)+。
方案220：(2S,4S*)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物252)的合成
Figure BDA0004238079180008551
步骤1：(S)-4-亚甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
向(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-亚甲基吡咯烷-2-甲酸(15g,66mmol)在DMF(150mL)中的溶液中添加K2CO3(27g,198mmol)和BnBr(17g,99mmol)，并将反应混合物在室温、N2气氛下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-4-亚甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(11.2g，收率53.5％)。LCMS(ESI)m/z＝318(M+H)+。
步骤2：(2S)-4-(羟基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
将BH3·SMe2(7.3mL,73mmol)在2-甲基丁-2-烯(10.2g,146mmol)中的溶液在0℃下搅拌2小时，并在0℃下添加(S)-4-亚甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(11.6g,37mmol)在THF(4mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌20小时，并且添加乙醇(1.4mL)，并且将反应混合物冷却至0℃。快速添加NaOH(3M,12mL)，随后将混合物冷却至-10℃，并然后缓慢添加H2O2(30％,12mL)。将反应混合物搅拌3小时，并将水层和有机层分离。将水层用MTBE萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S)-4-(羟基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(6.6g，收率53.8％)。LCMS(ESI)m/z＝336(M+H)+。
步骤3：(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯和(2S,4R*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
在室温、N2气氛下向(2S)-4-(羟基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(2.0g,6.0mmol)在DCE(30mL)中的溶液中添加AgOTf(3.0g,12mmol)和碘甲烷(2.8g,18mmol)，并将反应混合物搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝4:1)和SFC进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(350mg，收率16.7％)，LCMS(ESI)m/z＝350(M+H)+和呈无色油状物的(2S,4R*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(110mg，收率5.2％)，LCMS(ESI)m/z＝350(M+H)+。
步骤4：(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐
将(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(350mg,1.0mmol)在HCl/1,4-二噁烷(4mL)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌30分钟。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥，从而得到(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(250mg，收率99.7％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:250(M+H)+。
步骤5：(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃、N2气氛下向(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(40mg,0.16mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(43mg,0.16mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(124mg,0.96mmol)和PyBOP(100mg,0.2mmol)，并将混合物在25℃搅拌1小时。将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S,4S*)-1-((4-(4-氟苯氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(60mg，收率74.7％)。LC/MS(ESI)m/z:503(M+H)+。
步骤6：(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在室温下向(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(55mg,1.1mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4S)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(40mg，收率88.3％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：413(M+H)+。
步骤7：(2S,4S*)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺
在0℃、N2气氛下向(2S,4S*)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(40mg,0.097mmol)和(R)-N-乙酰氧基-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(55mg,0.24mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(93mg,0.72mmol)和PyBOP(83mg,0.16mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(2S,4S*)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(23mg，收率38.2％)。LC/MS(ESI)m/z:622(M+H)+。
步骤8：(2S,4S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物252)
在室温下向(2S,4S)-N-((R)-1-(4-(N-乙酰氧基甲脒基)噻吩-2-基)乙基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(23mg,0.037mmol)在MeOH(1mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物252(6mg，收率28.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.55(s,1H),8.23(d,J＝10.2Hz,1H),7.85(d,J＝8.7Hz,2H),7.53(s,1H),7.41(t,J＝7.9Hz,2H),7.21(d,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.7Hz,2H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),5.26(q,J＝6.5Hz,1H),4.43(t,J＝8.2Hz,1H),4.27(d,J＝16.6Hz,1H),4.10(d,J＝16.6Hz,1H),3.97–3.91(m,1H),3.43(dt,J＝10.0,7.9Hz,3H),3.34(d,J＝7.5Hz,3H),2.68–2.60(m,1H),2.46–2.37(m,1H),1.76(dd,J＝15.4,5.9Hz,1H),1.60(t,J＝15.0Hz,3H)。LCMS(ESI)(m/z):564(M+H)+。
方案221：(2S,4R*)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物253)的合成
Figure BDA0004238079180008591
步骤1：(2S,4R*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐
将(2S,4R*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(110mg,0.31mmol)在HCl/1,4-二噁烷(1.0mL)中的混合物在室温、N2气氛下搅拌30分钟。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在减压下浓缩至干从而得到(2S,4R*)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(75mg，收率86.2％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:250(M+H)+。
步骤2：(2S,4R*)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在室温N2气氛下向(2S,4R)-4-(甲氧基甲基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(43mg,0.16mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(43mg,0.16mmol)在DMF(2.0mL)中的混合物中添加PyBOP(109mg,0.21mmol)和DIPEA(109mg,0.96mmol)并搅拌1小时。将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(60mg，收率74.7％)。LCMS(ESI)m/z＝503(M+H)+。
步骤3：(2S,4R*)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在室温下向(2S,4R*)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(60mg,0.11mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2气氛下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(40mg，收率88.3％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：413(M+H)+。
步骤4：(2S,4R)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物253)
在0℃下向(2S,4R*)-4-(甲氧基甲基)-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(20mg,0.048mmol)和(R)-5-(1-氨基乙基)噻吩-3-甲脒(16mg,0.096mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(37mg,0.29mmol)和PyBOP(32mg,0.062mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将有机层用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝8:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物253(5mg，收率18.5％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.23(d,J＝7.2Hz,1H),7.85(d,J＝8.7Hz,2H),7.50(d,J＝14.2Hz,1H),7.41(t,J＝8.0Hz,2H),7.20(t,J＝7.3Hz,1H),7.06(d,J＝7.8Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),5.26(d,J＝6.7Hz,1H),4.56–4.52(m,1H),4.18(s,2H),3.91–3.82(m,1H),3.49–3.40(m,3H),3.36(s,3H),2.80–2.58(m,1H),2.07(dd,J＝18.6,9.7Hz,2H),1.60(t,J＝15.6Hz,3H)。LC/MS(ESI)(m/z)：564(M+H)+。
方案222：(1S,3S,5S)-N-((S)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物254)的合成
Figure BDA0004238079180008611
步骤1：(S)-N-(1-(4-溴噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在85℃、N2气氛下向1-(4-溴噻吩-2-基)乙烷-1-酮(3g,15mmol)在THF(30mL)中的溶液中添加(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.8g,15mmol)和Ti(iPrO)4(9.6g,34mmol)，并将反应混合物搅拌4小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝4:1)进行纯化从而得到呈白色固体的(S)-N-(1-(4-溴噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.8g，收率61.9％)。LCMS(ESI)m/z＝310(M+H)+。
步骤2：(S)-N-((S)-1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在室温、N2气氛下向(S)-N-(1-(4-溴噻吩-2-基)乙亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.8g,9.1mmol)在THF(30mL)中的溶液中分批添加NaBH4(516mg,14mmol)并搅拌30分钟。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化并用EtOAc进行重结晶，从而得到呈白色固体的(S)-N-((S)-1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(700mg，收率24.9％)。LCMS(ESI)m/z＝310(M+H)+。
步骤3：(S)-2-甲基-N-((S)-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)噻吩-2-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺
在0℃下向(S)-N-((S)-1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(300mg,0.97mmol)和Pd(dppf)Cl2(71mg,0.097mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物中添加Pin2B2(480mg,1.9mmol)和CH3COOK(380mg,3.9mmol)。将混合物在N2气氛下脱气，并将反应混合物在85℃下搅拌2小时。将混合物未经纯化即直接用于下一步骤中。
步骤4：(S)-N-((S)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向上一步骤的混合物中添加2-溴-1H-咪唑(283mg,1.9mmol)、Pd(PPh3)4(112mg,0.097mmol)、Na2CO3(413mg,3.9mmol)、1,4-二噁烷(1mL)和水(3mL)。将混合物在N2气氛下脱气并在85℃下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈无色油状物的(S)-N-((S)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(220mg,两步收率76.4％)。LCMS(ESI)m/z＝298(M+H)+。
步骤5：(S)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙烷-1-胺盐酸盐
将(S)-N-((S)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(100mg,0.34mmol)在HCl/1,4-二噁烷(1mL)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌10分钟。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到(S)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙烷-1-胺盐酸盐(65mg，收率83.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:194(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-((S)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物254)
在0℃下向(S)-1-(4-(1H-咪唑-2-基)噻吩-2-基)乙烷-1-胺(65mg,0.34mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(134mg,0.34mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(263mg,2.0mmol)和PyBOP(194mg,0.37mmol)，并将混合物在室温、N2下搅拌2小时。将有机层用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(DCM:MeOH＝9:1)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物254(15mg，收率7.7％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.19(s,1H),7.80(t,J＝13.5Hz,3H),7.40(dd,J＝20.8,12.5Hz,3H),7.25–7.18(m,3H),7.04(d,J＝7.7Hz,2H),6.92(d,J＝8.8Hz,2H),5.28(d,J＝6.5Hz,1H),4.83–4.82(m,1H),4.32(s,2H),3.42(d,J＝3.6Hz,1H),2.43(t,J＝12.5Hz,1H),2.20(dd,J＝13.3,3.1Hz,1H),1.63(d,J＝7.0Hz,3H),1.30(s,3H),1.19(d,J＝3.4Hz,1H),0.83(d,J＝5.5Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：570(M+H)+。
方案223：(1R,19S,25S,28S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八烷-28-甲酰胺(化合物255)的合成
Figure BDA0004238079180008641
步骤1：(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-(O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(2)
在N2气氛下向O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酸(1.02g,2.44mmol)和(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯盐酸盐(830mg,2.68mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(2.0mL,12.20mmol)和T3P(4.6g,7.32mmol,50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝97:3)进行纯化从而得到呈棕色油状物的(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-(O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(1.1g，收率63.2％)。LC/MS(ESI)m/z:716(M+H)+。
步骤2：(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸苄酯(3)
向(1S,3S,5R)-5-((戊-4-烯-1-基氧基)甲基)-2-(O-苯基-N-(十一碳-10-烯酰基)-L-高丝氨酰基甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(600mg,0.84mmol)在干燥DCM(60mL)中的溶液中添加格拉布第1代催化剂(172mg,0.21mmol)，并将混合物在28℃、N2气氛下搅拌16小时。将混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝98:2)进行纯化从而得到呈黑色油状物的(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸苄酯(250mg，收率43.4％)。LC/MS(ESI)m/z:688(M+H)+。
步骤3：(1R,19S,25S,28S)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八烷-28-甲酸(4)
向(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸苄酯(65mg,0.09mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将反应混合物在25℃、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并浓缩从而得到呈棕色固体的(1R,19S,25S,28S)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八烷-28-甲酸(56mg，收率98.2％)。LC/MS(ESI)m/z:600(M+H)+。
步骤4：(1R,19S,25S,28S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八烷-28-甲酰胺(化合物255)
在0℃、N2气氛下向(1R,19S,25S,28S)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八烷-28-甲酸(57mg,0.10mmol)和(R)-5-(1-(l2-氮烷基)乙基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(48mg,0.30mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(74mg,0.60mmol)和PyBOP(74mg,0.15mmol)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物255(8mg，收率11.1％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.50(s,1H),8.20(d,J＝1.4Hz,1H),7.47(s,1H),7.22(t,J＝8.0Hz,2H),6.90(d,J＝8.0Hz,3H),5.29–5.16(m,1H),4.80(s,1H),4.62(dd,J＝8.7,5.7Hz,1H),4.35(d,J＝16.6Hz,1H),4.12–3.98(m,3H),3.73(d,J＝10.3Hz,1H),3.49(d,J＝4.7Hz,3H),3.26(d,J＝10.4Hz,1H),2.64(t,J＝12.7Hz,1H),2.37–2.21(m,3H),2.14–2.02(m,2H),1.71(s,1H),1.56(d,J＝6.9Hz,5H),1.34(d,J＝35.3Hz,18H),1.03(t,J＝5.6Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：751(M+H)+。
方案224：(1S,3S,5S)-N-((7-氨基噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物256)的合成
Figure BDA0004238079180008661
步骤1：4-溴-2-(甲氧基羰基)噻吩并[2,3-c]吡啶6-氧化物(2)
在0℃下向4-溴噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(1.0g,3.69mmol)在DCM(33mL)中的溶液中添加m-CPBA(1.07g,6.27mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌4小时。将混合物过滤并将滤液用饱和NaHCO3水溶液和水洗涤三次。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到呈黄色固体的4-溴-2-(甲氧基羰基)噻吩并[2,3-c]吡啶6-氧化物(570mg，收率53.8％)。LC/MS(ESI)m/z:288(M+H)+。
步骤2：4-溴-7-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(3)
向4-溴-2-(甲氧基羰基)噻吩并[2,3-c]吡啶6-氧化物(570mg,1.98mmol)在POCl3(6mL)中的溶液中，并将混合物在40℃下搅拌2小时。将混合物浓缩并用DCM稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:DCM＝5:1)进行纯化从而得到呈白色固体的4-溴-7-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(300mg，收率49.7％)。LC/MS(ESI)m/z:306(M+H)+。
步骤3：4-溴-7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(4)
向4-溴-7-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(300mg,0.98mmol)和(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(247mg,1.47mmol)在NMP(5.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.49mL,2.94mmol)，并将混合物在100℃下搅拌16小时。将混合物用H2O稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝5:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的4-溴-7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(64mg，收率14.9％)。LC/MS(ESI)m/z:437/439(M+H)+。
步骤4：7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(5)
向4-溴-7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(64mg,0.15mmol)在MeOH(2mL)和AcOH(0.5mL)中的溶液中添加Pd/C(10mg,10重量％)，并将反应混合物在25℃、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并浓缩从而得到呈黄色固体的7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(46g，收率86.8％)。LC/MS(ESI)m/z:359(M+H)+。
步骤5：7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酰胺(6)
向7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酸甲酯(46mg,0.13mmol)在NH3/MeOH(5mL,7M)中的溶液中，并将反应混合物在30℃下搅拌16小时。将混合物浓缩从而得到呈黄色固体的7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酰胺(43g，收率97.7％)。LC/MS(ESI)m/z:344(M+H)+。
步骤6：2-(氨基甲基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)噻吩并[2,3-c]吡啶-7-胺(7)
在0℃、N2气氛下向7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-甲酰胺(50mg,0.15mmol)在THF(3.0mL)中的溶液中缓慢添加LiAlH4(1.0mL,0.87mmol,1.0M于THF中)，并将混合物在70℃下搅拌16小时。将混合物用水、15％ NaOH水溶液、水(1/3/1)淬灭，用EtOAc稀释，并用水洗涤，并用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干从而得到呈黄色油状物的2-(氨基甲基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)噻吩并[2,3-c]吡啶-7-胺(30mg，收率62.5％)。将粗产物直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:330(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-((7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(8)
在N2气氛下向(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(45mg,0.11mmol)和2-(氨基甲基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)噻吩并[2,3-c]吡啶-7-胺(30mg,0.11mmol)在DMF(3mL)中的混合物中添加DIPEA(0.21mL,0.66mmol)和T3P(330mg,0.33mmol,50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-N-((7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(30mg，收率46.8％)。LC/MS(ESI)m/z:706(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-N-((7-氨基噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物256)
向(1S,3S,5S)-N-((7-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(30mg,0.04mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1mL)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发，并在真空下干燥。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物256(3.0mg，收率12.5％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.47(s,1H),7.83(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(d,J＝8.8Hz,1H),7.70(dd,J＝5.9,3.9Hz,1H),7.42(t,J＝7.9Hz,2H),7.22(dd,J＝17.0,9.6Hz,2H),7.02(ddd,J＝21.8,14.2,6.8Hz,4H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),4.71(d,J＝5.5Hz,1H),4.68(s,1H),4.58(s,1H),4.44–4.38(m,1H),4.34(d,J＝3.1Hz,1H),2.53–2.42(m,1H),2.22(dd,J＝13.3,3.2Hz,1H),2.12(dd,J＝13.5,5.0Hz,1H),1.31(d,J＝1.7Hz,3H),1.18(s,1H),0.84(dd,J＝26.1,5.6Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：556(M+H)+。
方案225：(11R,13S,15S)-N-((R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基)-64-(4-氟苯氧基)-2,5-二氧代-19-氧杂-14,4-二氮杂-1(4,1)-双环[3.1.0]己烷-6(1,3)-苯杂环二十蕃(benzenacycloicosaphane)-13-甲酰胺(化合物257)
Figure BDA0004238079180008701
步骤1：4-氟-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苄腈
在-78℃、N2气氛下向辛-7-烯-1-基三苯基溴化鏻(10.18g,22.53mmol)在THF(100mL)中的溶液中添加正丁基锂(9.76mL,24.41mmol)，并将混合物在0℃下搅拌30分钟。然后，在-78℃下将4-氟-3-甲酰基苄腈(2.8g,18.78mmol)在THF(30mL)中的溶液逐滴添加到搅拌的反应混合物中，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌3小时。将混合物用冰-水淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝80:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的4-氟-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苄腈(4.0g，收率87.6％)。LC/MS(ESI)m/z:244(M+H)+。
步骤2：4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苄腈
向4-氟-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苄腈(2.0g,8.22mmol)在DMSO(32mL)中的溶液中添加K2CO3(2.27g,16.44mmol)和4-氟苯酚(1.11g,9.86mmol)。将反应混合物在密封管中在120℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。将水层用EtOAc萃取并将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝85:1)进行纯化从而得到呈浅色油状物的4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苄腈(2.67g，收率96.8％)。LC/MS(ESI)m/z:336(M+H)+。
步骤3：4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯甲酸
在0℃下向4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苄腈(2.67g,7.96mmol)在EtOH(64mL)和水(56mL)中的溶液中添加NaOH(6.37g,159.20mmol)，并将混合物在90℃下搅拌16小时。将混合物用1NHCl水溶液酸化至pH＝3，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅色油状物的4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯甲酸(2.8g，收率99.2％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:355(M+H)+。
步骤4：2-{[4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯基]甲酰胺基}乙酸甲酯
在N2气氛下4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯甲酸(2.8g,7.9mmol)和2-氨基乙酸甲酯盐酸盐(1.19g,9.48mmol)在DCM(30mL)中的混合物中添加DIPEA(5.11g,39.5mmol)和HATU(4.51g,11.85mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶快速色谱(PE:EtOAc＝8:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的2-{[4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯基]甲酰胺基}乙酸甲酯(3.3g，收率98.2％)。LC/MS(ESI)m/z:426(M+H)+。
步骤5：{[4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯基]甲酰胺基}乙酸
向2-{[4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯基]甲酰胺基}乙酸甲酯(3.3g,7.76mmol)在THF/MeOH/H2O(40mL,2/1/1)中的溶液中添加LiOH(1.30g,31.02mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩至干，并将残余物用水稀释，用EtOAc洗涤两次。将水层用0.5N HCl水溶液酸化至pH～4，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈浅色油状物的{[4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯基]甲酰胺基}乙酸(2.90g，收率90.9％)。LC/MS(ESI)m/z:412(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5R)-2-(2-{[4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯基]甲酰胺基}乙酰基)-5-[(戊-4-烯-1-基氧基)甲基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯
在0℃下向(1S,3S,5R)-5-[(戊-4-烯-1-基氧基)甲基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯盐酸盐(840mg,2.39mmol)和{[4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯基]甲酰胺基}乙酸(820mg,1.99mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加DIPEA(1.74mL,9.95mmol)和T3P(2.53g,3.98mmol,50重量％于EtOAc中)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5R)-2-(2-{[4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯基]甲酰胺基}乙酰基)-5-[(戊-4-烯-1-基氧基)甲基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(950mg，收率67.4％)。LC/MS(ESI)m/z:709(M+H)+。
步骤7：(1R,7E,14Z,26S,29S)-17-(4-氟苯氧基)-21,24-二氧代-3-氧杂-22,25-二氮杂四环[23.2.2.116,20.01,26]三十碳-7,14,16,18,20(30)-五烯-29-甲酸苄酯
向(1S,3S,5R)-2-(2-{[4-(4-氟苯氧基)-3-[(1Z)-壬-1,8-二烯-1-基]苯基]甲酰胺基}乙酰基)-5-[(戊-4-烯-1-基氧基)甲基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(400mg,0.56mmol)在干燥DCM(320mL)中的溶液中添加格拉布第1代催化剂(465mg,0.56mmol)，并将混合物在25℃、N2气氛下搅拌48小时。将混合物在减压下浓缩至干，并将残余物通过快速色谱(DCM:MeOH＝60:1)和制备型HPLC进行纯化从而得到呈棕色固体的(1R,7E,14Z,26S,29S)-17-(4-氟苯氧基)-21,24-二氧代-3-氧杂-22,25-二氮杂四环[23.2.2.116,20.01,26]三十碳-7,14,16,18,20(30)-五烯-29-甲酸苄酯(30mg，收率7.8％)。LC/MS(ESI)m/z:681(M+H)+。
步骤8：(1R,26S,29S)-17-(4-氟苯氧基)-21,24-二氧代-3-氧杂-22,25-二氮杂四环[23.2.2.116,20.01,26]三十碳-16,18,20(30)-三烯-29-甲酸
向(1R,19S,25S,28S,E)-17,20,23-三氧代-19-(2-苯氧基乙基)-3-氧杂-18,21,24-三氮杂三环[22.2.2.01,25]二十八碳-7-烯-28-甲酸苄酯(20mg,0.029mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加Pd/C(5mg,10重量％)，并将反应混合物在室温、H2气氛下搅拌0.5小时。将混合物过滤并浓缩从而得到呈浅色油状物的(1R,26S,29S)-17-(4-氟苯氧基)-21,24-二氧代-3-氧杂-22,25-二氮杂四环[23.2.2.116,20.01,26]三十碳-16,18,20(30)-三烯-29-甲酸(14mg，收率80.1％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:595(M+H)+。
步骤9：(1R,26S,29S)-N-[(1R)-1-(4-甲脒基噻吩-2-基)乙基]-17-(4-氟苯氧基)-21,24-二氧代-3-氧杂-22,25-二氮杂四环[23.2.2.116,20.01,26]三十碳-16,18,20(30)-三烯-29-甲酰胺(化合物257)
在0℃、N2气氛下向(1R,26S,29S)-17-(4-氟苯氧基)-21,24-二氧代-3-氧杂-22,25-二氮杂四环[23.2.2.116,20.01,26]三十碳-16,18,20(30)-三烯-29-甲酸(12mg,0.02mmol)和5-[(1R)-1-氨基乙基]噻吩-3-甲脒(10mg,0.06mmol)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(16mg,0.0.12mmol)和T3P(10mg,0.016mmol)，并将混合物在40℃下搅拌过夜，之后将5-[(1R)-1-氨基乙基]噻吩-3-甲脒(10mg,0.061mmol)添加到反应混合物中并在40℃下搅拌10小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈棕色固体的化合物257(2.5mg，收率20.8％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.27–8.21(m,1H),7.82(s,1H),7.64–7.60(m,1H),7.56(s,1H),7.16–7.11(m,2H),7.02–6.97(m,2H),6.80–6.75(m,1H),5.36–5.33(m,1H),5.26–5.23(m,1H),4.27–4.23(m,2H),3.68–3.65(m,1H),3.59–3.52(m,2H),3.50–3.46(m,2H),3.41–3.39(m,1H),2.76–2.72(m,2H),2.66–2.61(m,1H),2.22–2.17(m,2H),2.10–2.01(m,5H),1.71–1.68(m,2H),1.65-1.63(m,4H),1.56–1.53(m,2H),1.35–1.33(m,8H),1.11(dd,J＝5.6,5.6Hz,1H),0.86–0.83(m,1H)。LC/MS(ESI)m/z:746(M+H)+。
方案226：(1S,3S,5S)-N-(3-甲脒基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物258)的合成
Figure BDA0004238079180008741
步骤1：2-氨基-4,7-二氢-5H-螺[苯并[b]噻吩-6,2’-[1,3]二氧戊环]-3-甲腈
在60℃、N2气氛下向1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(5g,32mmol)在EtOH(64mL)中的溶液中添加丙二腈(2.1g,32mmol)、硫(8.9g,35mmol)和NaAlO2(130mg,1.6mmol)并搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝2:1)进行纯化，得到呈黄色固体的2-氨基-4,7-二氢-5H-螺[苯并[b]噻吩-6,2’-[1,3]二氧戊环]-3-甲腈(6.2g，收率82.2％)。LCMS(ESI)m/z＝237(M+H)+。
步骤2：4,7-二氢-5H-螺[苯并[b]噻吩-6,2'-[1,3]二氧戊环]-3-甲腈
在100℃、N2气氛下向2-氨基-4,7-二氢-5H-螺[苯并[b]噻吩-6,2’-[1,3]二氧戊环]-3-甲腈(5g,32mmol)在1,4-二噁烷(60mL)中的溶液中添加亚硝酸异戊酯(3.3g,28mmol)，并将反应混合物搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(PE:EtOAc＝3:1)进行纯化从而得到呈棕色固体的4,7-二氢-5H-螺[苯并[b]噻吩-6,2’-[1,3]二氧戊环]-3-甲腈(2.8g，收率49.2％)。LCMS(ESI)m/z＝222(M+H)+。
步骤3：6-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲腈
将4,7-二氢-5H-螺[苯并[b]噻吩-6,2’-[1,3]二氧戊环]-3-甲腈(2.8g,13mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2.5mL)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩至干，再次用DCM稀释并在真空下干燥从而得到6-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲腈(1.5g，收率66.9％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:178(M+H)+。
步骤4：6-氨基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲腈
在室温、N2气氛下向6-氧代-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲腈(1.4g,7.9mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中添加NH4COOH(2g,32mmol)和NaBH3CN(347mg,5.5mmol)并搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝15:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的6-氨基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲腈(260mg，收率18.5％)。LCMS(ESI)m/z＝179(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-(3-氰基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺
在0℃、N2气氛下向6-氨基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲腈(62mg,0.35mmol)和(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(125mg,0.32mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(248mg,1.9mmol)和HBTU(160mg,0.42mmol)，并将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释并用水洗涤两次。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝12:1)进行纯化从而得到(1S,3S,5S)-N-(3-氰基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(120mg,61.9％)。LC/MS(ESI)m/z:555(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-(3-(N-羟基甲脒基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺
在室温、N2气氛下向(1S,3S,5S)-N-(3-氰基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(120mg,0.22mmol)在EtOH(1.5mL)中的溶液中添加NH2OH.HCl(38mg,0.54mmol)和DIPEA(168mg,1.3mmol)，并将反应混合物搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝10:1)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(1S,3S,5S)-N-(3-(N-羟基甲脒基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(76mg，收率58.8％)。LCMS(ESI)m/z＝588(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-(3-(N-乙酰氧基甲脒基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺
在室温、N2气氛下向(1S,3S,5S)-N-(3-(N-羟基甲脒基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(76mg,0.13mmol)在AcOH(0.5mL)和Ac2O(0.5mL)中的混合物中添加4-(吡咯烷-1-基)吡啶(1.9mg,0.013mmol)，并将反应混合物搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶柱色谱(DCM:MeOH＝12:1)进行纯化从而得到呈黄色固体的(1S,3S,5S)-N-(3-(N-乙酰氧基甲脒基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(60mg，收率73.4％)。LCMS(ESI)m/z＝630(M+H)+。
步骤8：(1S,3S,5S)-N-(3-甲脒基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物258)
在室温下向(1S,3S,5S)-N-(3-(N-乙酰氧基甲脒基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-6-基)-5-甲基-2-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(60mg,0.095mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg,10重量％)，并将混合物在室温、H2气氛下搅拌2小时。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干，并通过制备型HPLC进行纯化从而得到呈白色固体的化合物258(35mg，收率64.5％)。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),7.91–7.84(m,3H),7.41(t,J＝7.9Hz,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝8.1Hz,2H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),4.80–4.76(m,1H),4.58(s,2H),4.38–4.25(m,2H),3.16–3.07(m,1H),2.80(d,J＝14.8Hz,3H),2.39(t,J＝12.4Hz,1H),2.13(ddd,J＝56.7,30.9,6.7Hz,3H),1.30(s,3H),1.19(dd,J＝24.1,3.3Hz,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：572(M+H)+。
方案227：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((3-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物137)。
Figure BDA0004238079180008781
步骤1：2-[(3-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酸叔丁酯(2)
向3-苯氧基苯甲酸,1(1g,4.67mmol,1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(0.67g,5.14mmol,1.1当量HATU(2.31g,6.07mmol,1.3当量)和DIPEA(3.26mL,18.67mmol,4当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水(10mL)，将固体通过过滤收集，并然后干燥从而得到呈白色固体的化合物2(1.2g,3.67mmol，收率78.59％)。LC/MS(ESI)m/z:328(M+H)+。
步骤2：(3-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(3)
在冰浴温度下将TFA(2.34mL)添加到化合物2(1g,3.05mmol,1当量)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时，并然后浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物3(0.8g,2.95mmol，收率96.72％)。LC/MS(ESI)m/z:272(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((3-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(4)
向化合物3(0.1g,0.37mmol，1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸乙酯(0.062g,0.37mmol，1当量)、HATU(0.18g,0.48mmol，1.3当量)和DIPEA(0.16mL,0.92mmol，2.5当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(5mL)和CH2Cl2(5mL)。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(5mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈黄色油状物的化合物4(0.12g,0.28mmol，收率77.05％)。LC/MS(ESI)m/z:423(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-{2-[(3-苯氧基苯基)甲酰胺基]乙酰基}-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(5)
向化合物4(0.12g,0.28mmol，1当量)在MeOH(3mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH(0.014g,0.57mmol，2当量)。将反应物在室温下搅拌过夜，浓缩去除MeOH，并然后用CH2Cl2(3mL)稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(3mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物5(0.1g,0.25mmol，收率89.29％)。LC/MS(ESI)m/z:395(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((3-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物137)。
向化合物5(35mg,0.09mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(44mg,0.29mmol,1.1当量)、HATU(37mg,0.01mmol,1.1当量)和DIPEA(62μL,0.36mmol,4当量)。将反应物在室温下搅拌20分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物137(13mg,0.024mmol，收率27.56％)。LC/MS(ESI)m/z:532(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.75(q,J＝7.9,6.9Hz,1H),8.54(t,J＝5.8Hz,1H),8.42(s,1H),8.33(d,J＝9.5Hz,1H),7.65(d,J＝7.7Hz,1H),7.56–7.37(m,6H),7.24–7.13(m,2H),7.04(d,J＝8.0Hz,2H),4.63(td,J＝13.2,12.3,4.4Hz,1H),4.49–4.29(m,2H),4.02(dd,J＝16.4,5.9Hz,1H),2.28(t,J＝12.3Hz,1H),1.98(dd,J＝13.2,3.0Hz,1H),1.21(s,3H),0.70–0.58(m,2H)。
方案228.(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((6-苯氧基烟酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物143)。
Figure BDA0004238079180008801
步骤1：(6-苯氧基烟酰基)甘氨酸叔丁酯(2)
向4-(吡啶-2-基氧基)苯甲酸1(0.5g,2.32mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(0.46g,3.49mmol，1.5当量HATU(1.325g,3.49mmol，1.5当量)，最后添加DIPEA(1.62mL,9.29mmol，4当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(10mL)。将产物作为粘稠的油状物滤出(crushed out)，并溶解于CH2Cl2，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到化合物2(0.65g,1.98mmol，收率85.20％)。LC/MS(ESI)m/z:329(M+H)+。
步骤2：(6-苯氧基烟酰基)甘氨酸(3)
在冰浴温度下将TFA(1.0mL)添加到化合物2(0.6g,1.83mmol,1.0当量)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌3小时，并然后浓缩至干从而得到呈类黄色固体的化合物3(0.45g,1.65mmol，收率90.45％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:273(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((6-苯氧基烟酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(4)
向化合物3(0.1g,0.37mmol，1.1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(0.09g,0.40mmol，1.0当量)、HATU(0.18g,0.48mmol，1.3当量)和DIPEA(0.16mL,0.92mmol，2.5当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(4mL)和EtOAc(5mL)。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Comb Flash；4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到化合物4(0.13g,0.27mmol，收率72.95％)。LC/MS(ESI)m/z:486(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((6-苯氧基烟酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(5)
向化合物4(50mg,0.103mmol,1当量)在EtOAc(2mL)中的溶液中添加10％ Pd/C(11mg,0.0103mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的H2回填。将反应物在室温下搅拌过夜，并然后浓缩从而得到呈黄色固体的化合物5(35mg,0.09mmol，收率85.95％)。LC/MS(ESI)m/z:396(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((6-苯氧基烟酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物143)
向化合物5(35mg,0.09mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(19mg,0.1mmol,1.1当量)、HATU(37mg,0.1mmol,1.1当量)和DIPEA(62μL,0.35mmol,4.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物143(0.010g,0.019mmol，收率21.11％)。LC/MS(ESI)m/z:533(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(s,1H),8.86(t,J＝5.7Hz,1H),8.80(s,1H),8.63(d,J＝2.6Hz,1H),8.56(t,J＝5.9Hz,2H),8.42(s,1H),8.33(d,J＝10.2Hz,2H),8.26(dd,J＝8.6,2.5Hz,2H),7.56–7.31(m,2H),7.25(t,J＝7.4Hz,2H),7.10(d,J＝8.6Hz,2H),4.66(dd,J＝11.4,3.1Hz,2H),4.52–4.23(m,2H),4.05(dd,J＝16.6,5.3Hz,3H),3.62–3.50(m,1H),3.48–3.32(m,2H),2.29(t,J＝12.5Hz,1H),1.99(dd,J＝13.1,3.1Hz,1H),1.22(s,3H),1.07–0.85(m,1H),0.77–0.55(m,1H)。
方案229.(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((2-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物145)
Figure BDA0004238079180008821
/>
步骤1：(2-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸叔丁酯(2)
向2-苯氧基苯甲酸,1(1.2g,5.60mmol,1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(1.13g,6.72mmol,1.1当量)、HATU(2.77g,7.28mmol,1.3当量)和DIPEA(2.94mL,16.81mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水(10mL)，将固体通过过滤收集，并然后干燥从而得到呈白色固体的化合物2(1.5g,4.58mmol，收率81.79％)。LC/MS(ESI)m/z:328(M+H)+。
步骤2：(2-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(3)
在冰浴温度下将TFA(2.34mL)添加到化合物2(1g,3.06mmol,1当量)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时，并然后浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物3(0.8g,2.95mmol，收率96.55％)。LC/MS(ESI)m/z:272(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((2-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(4)
向化合物3(0.21g,0.56mmol，1.1当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(0.1g,0.43mmol，1当量)、HATU(0.21g,0.56mmol，1.3当量)和DIPEA(0.23mL,1.3mmol，2.5当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(5mL)并将液体倾出。将EtOAc(5mL)添加到残余物中，并用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到呈黄色油状物的化合物4(0.19g,0.39mmol，收率90.69％)，其被用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:485(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((2-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(5)
向化合物4(0.19g,0.39mmol,1当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加10％ Pd/C(0.042g,0.039mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的H2回填。将反应物在室温下搅拌过夜，并然后浓缩从而得到呈黄色固体的化合物5(0.15g,0.38mmol，收率97.44％)。LC/MS(ESI)m/z:395(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((2-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物145)。
向化合物5(0.15g,0.38mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(0.08g,0.42mmol,1.1当量)、HATU(0.16g,0.42mmol,1.1当量)和DIPEA(0.27mL,1.52mmol,4当量)。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物145(10mg,0.019mmol，收率4.95％)。LC/MS(ESI)m/z:532(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.02(s,1H),8.63–8.47(m,1H),8.34(d,J＝1.9Hz,2H),7.91(t,J＝7.0Hz,2H),7.63–7.37(m,2H),7.22(q,J＝7.5Hz,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,1H),6.87(dd,J＝8.4,4.3Hz,1H),4.65(dd,J＝11.6,2.9Hz,2H),4.53–4.27(m,3H),4.13(dd,J＝17.2,5.0Hz,1H),3.51–3.30(m,2H),2.39–2.22(m,1H),1.98(d,J＝13.9Hz,1H),1.20(s,3H),0.80–0.7(m,1H)0.67(t,J＝5.7Hz,1H)。
方案230.(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物153)。
Figure BDA0004238079180008841
步骤1：(4-(吡啶-2-基氧基)苯甲酰基)甘氨酸叔丁酯(2)
向4-(吡啶-2-基氧基)苯甲酸1(0.85g,3.95mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(0.79g,4.74mmol，1.2当量)、HATU(0.57g,1.51mmol，1.3当量)，最后添加DIPEA(2.76mL,15.78mmol，3当量)。将反应物在室温下搅拌20分钟。添加水(5mL)和EtOAc(5mL)，将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；24g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈淡黄色固体的化合物2(1.05g,3.2mmol，收率80.96％)。LC/MS(ESI)m/z:329(M+H)+。
步骤2：(4-(吡啶-2-基氧基)苯甲酰基)甘氨酸(3)
在冰浴温度下将TFA(2.33mL)添加到化合物2(1.0g,3.05mmol,1.0当量)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时，并然后浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物3(0.8g,2.94mmol，收率96.39％)。LC/MS(ESI)m/z:273(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(吡啶-2-基氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(4)
向化合物3(0.13g,0.48mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(0.2g,0.43mmol，1.0当量)、HATU(0.21g,0.56mmol，1.3当量)和DIPEA(0.23mL,1.3mmol，3.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(4mL)和EtOAc(5mL)。将两层分离，并将水层用EtOAc萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Comb Flash；4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到化合物4(0.12g,0.25mmol，收率57.16％)。LC/MS(ESI)m/z:486(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(吡啶-2-基氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(5)
向化合物4(120mg,0.25mmol,1当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加10％ Pd/C(26mg,0.025mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的H2回填。将反应物在室温下搅拌过夜，通过硅藻土垫过滤，并然后浓缩从而得到呈黄色固体的化合物5(85mg,0.21mmol，收率84.0％)。LC/MS(ESI)m/z:396(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(吡啶-2-基氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物153)
向化合物5(36mg,0.09mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(16mg,0.1mmol,1.1当量)、HATU(38mg,0.1mmol,1.1当量)和DIPEA(64μL,0.36mmol,4.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物153(15mg,0.028mmol，收率31.11％)。LC/MS(ESI)m/z:533(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.96(s,1H),8.70(t,J＝5.7Hz,2H),8.66(s,1H),8.55(t,J＝5.9Hz,1H),8.44–8.40(s,1H),8.33(d,J＝10.4Hz,1H),8.18(d,J＝5.0Hz,1H),7.97–7.78(m,2H),7.46(s,2H),7.19(t,J＝8.0Hz,2H),7.10(d,J＝8.2Hz,2H),4.67(dd,J＝11.3,3.1Hz,2H),4.53–4.16(m,2H),4.06(dd,J＝16.5,5.8Hz,2H),3.71–3.47(m,1H),2.29(t,J＝12.5Hz,2H),2.00(dd,J＝13.5,3.1Hz,1H),1.22(d,J＝11.2Hz,3H),0.81–0.60(m,2H)。
方案231.(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物154)。
Figure BDA0004238079180008871
步骤1：(4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酰基)甘氨酸叔丁酯(2)
向4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酸1(1g,3.53mmol,1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(0.59g,3.53mmol,1.1当量)、HATU(1.75g,4.59mmol,1.3当量)和DIPEA(1.85mL,10.59mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水(10mL)，将固体通过过滤收集，并然后干燥从而得到呈白色固体的化合物2(1.2g,3.03mmol，收率85.84％)。LC/MS(ESI)m/z:397(M+H)+。
步骤2：(4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酰基)甘氨酸(3)
在冰浴温度下将TFA(2.32mL)添加到化合物2(1.2g,3.03mmol,1当量)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时，并然后浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物3(1.0g,2.94mmol，收率97.06％)。LC/MS(ESI)m/z:341(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(4)
向化合物3(0.18g,0.52mmol，1.1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(0.11g,0.48mmol，1当量)、HATU(0.2g,0.53mmol，1.3当量)和DIPEA(0.25mL,1.43mmol，3当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(5mL)和EtOAc(5mL)。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈黄色油状物的化合物4(0.18g,0.33mmol，收率68.38％)。LC/MS(ESI)m/z:554(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(5)
向化合物4(0.18g,0.33mmol,1当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加10％ Pd/C(35mg,0.033mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的H2回填。将反应物在室温下搅拌过夜，通过硅藻土垫过滤，并将滤液浓缩从而得到呈黄色固体的化合物5(0.12g,0.26mmol，收率79.69％)。LC/MS(ESI)m/z:464(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物154)。
向化合物5(120mg,0.26mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(55mg,0.29mmol,1.1当量)、HATU(108mg,0.29mmol,1.1当量)和DIPEA(181μL,1.04mmol,4当量)。将反应物在室温下搅拌20分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物154(40mg,0.07mmol，收率26.92％)。LC/MS(ESI)m/z:601(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.95(s,1H),8.74(t,J＝5.6Hz,1H),8.70(s,1H),8.58(s,1H),8.55(t,J＝6.0Hz,1H),8.32(s,1H),8.27(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),7.95(d,J＝8.4Hz,2H),7.46(s,1H),7.40–7.15(m,3H),4.68(dd,J＝11.2,3.0Hz,2H),4.59–4.29(m,4H),4.07(dd,J＝16.5,5.8Hz,2H),3.57(dd,J＝17.8,5.8Hz,1H),3.45(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),3.07–2.82(m,1H),2.44(dd,J＝13.7,6.8Hz,1H),2.29(t,J＝12.5Hz,2H),(d,J＝6.5Hz,3H),0.68(t,J＝5.6Hz,2H)。
方案232.(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-(环己基氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物160)。
Figure BDA0004238079180008891
步骤1：(4-(环己基氧基)苯甲酰基)甘氨酸叔丁酯(2)
向4-(环己基氧基)苯甲酸1(1g,4.54mmol,1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(0.77g,5.90mmol,1.3当量)、HATU(2.24g,5.90mmol,1.3当量)和DIPEA(2.38mL,13.62mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水(10mL)，将固体通过过滤收集，并然后干燥从而得到呈白色固体的化合物2(1.3g,3.9mmol，收率85.88％)。LC/MS(ESI)m/z:334(M+H)+。
步骤2：(4-(环己基氧基)苯甲酰基)甘氨酸(3)
在冰浴温度下将TFA(2.98mL)添加到化合物2(1.3g,3.9mmol,1当量)在CH2Cl2(6mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时并然后浓缩至干。添加5mL的3M HCl，并将混合物浓缩从而得到呈白色固体的化合物3(1.0g,3.61mmol，收率92.49％)。LC/MS(ESI)m/z:278(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-2-((4-(环己基氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(4)
向化合物3(0.09g,0.33mmol，1.1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(0.07g,0.30mmol，1当量)、HATU(0.15g,0.39mmol，1.3当量)和DIPEA(0.16mL,0.91mmol，3当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(5mL)。将滤液倾出，并将残余物溶解于EtOAc，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈棕色油状物的化合物4(0.13g,0.27mmol，收率87.56％)。LC/MS(ESI)m/z:491(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-2-((4-(环己基氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(5)
向化合物4(0.13g,0.27mmol,1当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加10％ Pd/C(28mg,0.026mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的H2回填。将反应物在室温下搅拌过夜，通过硅藻土垫过滤，并将滤液浓缩从而得到呈棕色固体的化合物5(0.09g,0.23mmol，收率85.19％)。LC/MS(ESI)m/z:401(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-2-((4-(环己基氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物160)
向化合物5(60mg,0.15mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(32mg,0.17mmol,1.1当量)、HATU(63mg,0.17mmol,1.1当量)和DIPEA(0.11mL,0.6mmol,4当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物160(18mg,0.033mmol，收率22.0％)。LC/MS(ESI)m/z:538(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.95(s,1H),8.57–8.43(m,1H),8.34(d,J＝8.2Hz,1H),7.80(dd,J＝9.0,3.0Hz,1H),7.49(d,J＝13.0Hz,1H),6.98(dd,J＝8.6,3.6Hz,1H),4.67(dd,J＝11.3,3.0Hz,1H),4.50–4.25(m,2H),4.01(td,J＝15.9,5.5Hz,1H),3.45–3.39(m,3H),2.28(t,J＝12.4Hz,1H),2.10–1.87(m,6H),1.79–1.66(m,3H),1.54(d,J＝10.3Hz,2H),1.42(q,J＝11.4Hz,4H),1.16(s,3H),0.90–0.84,(m,1H),0.70–0.54(m,1H)。
方案233.(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((5-(吡啶-3-基氧基)吡啶甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物162)
Figure BDA0004238079180008911
步骤1：(5-(吡啶-3-基氧基)吡啶甲酰基)甘氨酸叔丁酯(2)
向5-(吡啶-3-基氧基)吡啶甲酸1(0.5g,2.31mmol,1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯盐酸盐(0.46g,2.78mmol,1.1当量)、HATU(1.32g,3.47mmol,1.3当量)和DIPEA(1.21mL,6.94mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水(10mL)，将固体通过过滤收集，并然后干燥从而得到呈白色固体的化合物2(0.46g,1.4mmol，收率60.6％)。LC/MS(ESI)m/z:330(M+H)+。
步骤2：(5-(吡啶-3-基氧基)吡啶甲酰基)甘氨酸(3)
在冰浴温度下将TFA(0.53mL)添加到化合物2(0.23g,0.7mmol,1当量)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时并然后浓缩至干。添加5mL的3M HCl并将混合物浓缩从而得到呈白色固体的化合物3(0.180g,0.66mmol,收率94.29％)。LC/MS(ESI)m/z:274(M+H)+。
步骤3：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-(吡啶-3-基氧基)吡啶甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(4)
向化合物3(0.13g,0.43mmol，1.1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(0.09g,0.39mmol，1当量HATU(0.19g,0.51mmol，1.3当量)和DIPEA(0.27mL,1.56mmol，3当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(5mL)和EtOAc(5mL)。将两层分离，并将水层用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈黄色油状物的化合物4(0.15g,0.31mmol，收率72.09％)。LC/MS(ESI)m/z:487(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((5-(吡啶-3-基氧基)吡啶甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(5)
向化合物4(0.15g,0.31mmol,1当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加10％ Pd/C(33mg,0.031mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的H2回填。将反应物在室温下搅拌过夜，通过硅藻土垫过滤，并然后浓缩从而得到呈棕色固体的化合物5(0.12g,0.303mmol，收率97.74％)。LC/MS(ESI)m/z:397(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((5-(吡啶-3-基氧基)吡啶甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物162)。
向化合物5(50mg,0.13mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(27mg,0.14mmol,1.1当量HATU(53mg,0.14mmol,1.1当量)和DIPEA(88μL,0.51mmol,4当量)。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物162(10mg,0.019mmol，收率14.61％)。LC/MS(ESI)m/z:534(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(d,J＝5.0Hz,1H),8.61(t,J＝5.8Hz,1H),8.58–8.40(m,3H),8.36(s,1H),8.08(dd,J＝8.8,5.0Hz,1H),7.72–7.56(m,2H),7.58–7.38(m,2H),4.67(dd,J＝11.3,3.1Hz,2H),4.53–4.16(m,2H),4.06(dd,J＝16.5,5.8Hz,2H),3.71–3.47(m,1H),2.29(t,J＝12.5Hz,2H),2.00(dd,J＝13.5,3.1Hz,1H),1.22(d,J＝11.2Hz,3H),0.81–0.60(m,2H)。
方案234.(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-[2-(1-氧代-6-苯氧基-3H-异吲哚-2-基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物144)
Figure BDA0004238079180008931
步骤1：2-(6-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)乙酸叔丁酯(2)
在冰浴温度下将6-溴-2,3-二氢异吲哚-1-酮,1(1g,4.72mmol,1.0当量)在THF(15mL)中的溶液添加到在THF(25mL)中的经己烷洗涤的NaH(0.57g,14.15mmol,3.0当量)中。将混合物在氩气下搅拌30分钟，然后添加2-溴乙酸叔丁酯(2.76g,14.15mmol,3.0当量)，并将反应物温热至室温并搅拌30分钟。将反应物用冰冷的水淬灭，将两层分离，并将水层用EtOAc(20mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过CombFlash；24g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到化合物2(1.2g,3.68mmol，收率77.97％)。LC/MS(ESI)m/z:327(M+H)+。
步骤2：2-(1-氧代-6-苯氧基-3H-异吲哚-2-基)乙酸叔丁酯(3)
将化合物2(1g,3.1mmol,1.0当量)、苯酚(0.43g,4.6mmol,1.5当量)、二甲基氨基乙酸盐酸盐(0.13g,0.92mmol,0.3当量)、Cs2CO3(4g,12.3mmol,4.0当量)和碘化亚铜(I)(0.06g,0.32mmol,0.1当量)在二噁烷(10mL)中的混合物在密封管中加热至90℃过夜。将反应物冷却至室温，然后用水(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc(20mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到黄色油状物。通过Combi-Flash；24g柱，溶剂A＝己烷，溶剂B＝EtOAc，100％己烷至30％ EtOAc进行纯化，得到呈黄色油状物的化合物3(0.74g,2.18mmol,71.12％)。LC/MS(ESI)m/z:340(M+H)+。
步骤3：(1-氧代-6-苯氧基-3H-异吲哚-2-基)乙酸(4)
在冰浴温度下将TFA(1.58mL)添加到化合物3(0.35g,1.03mmol,1.0当量)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时并然后浓缩至干。添加5mL的3N HCl，并再次将混合物浓缩至干从而得到呈类黄色固体的化合物4(0.27g,0.953mmol，收率92.42％)。LC/MS(ESI)m/z:284(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-[2-(1-氧代-6-苯氧基-3H-异吲哚-2-基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(6)
向化合物4(0.14g,0.48mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(5)(0.1g,0.43mmol，1.0当量)、HATU(0.21g,0.56mmol，1.3当量)和DIPEA(0.23mL,1.3mmol，3.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(5mL)和EtOAc(5mL)。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；4g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈黄色油状物的化合物6(0.2g,0.40mmol，收率93.16％)。LC/MS(ESI)m/z:497(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-[2-(1-氧代-6-苯氧基-3H-异吲哚-2-基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(7)
向6(100mg,0.20mmol,1.0当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加5％ Pd/C(43mg,0.02mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的H2回填。将反应物在室温下搅拌1小时，并然后通过硅藻土垫过滤。将滤液浓缩，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的化合物7(75mg,0.18mmol，收率90.0％)。LC/MS(ESI)m/z:407(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-[2-(1-氧代-6-苯氧基-3H-异吲哚-2-基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物144)
向化合物7(70mg,0.17mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(29mg,0.19mmol,1.1当量)、HATU(72mg,0.19mmol,1.1当量)和DIPEA(0.12mL,0.69mmol,4.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物144(20mg,0.04mmol，收率23.53％)。LC/MS(ESI)m/z:544(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(s,1H),8.62(t,J＝5.8Hz,1H),8.45(s,1H),8.32(d,J＝6.1Hz,1H),7.63(t,J＝6.5Hz,1H),7.50(s,1H),7.47–7.39(m,2H),7.31(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),7.24–7.11(m,2H),7.07(d,J＝8.0Hz,2H),4.86(d,J＝10.9Hz,1H),4.69–4.60(m,1H),4.57(d,J＝9.3Hz,1H),4.54–4.35(m,2H),4.33(dd,J＝15.4,5.7Hz,1H),4.21(d,J＝3.9Hz,1H),3.41(dd,J＝6.0,2.4Hz,1H),2.29(t,J＝12.6Hz,1H),1.95(dd,J＝13.2,3.2Hz,1H),1.21(s,3H),0.66–0.60(m,2H)。
方案235.(1S,3S,5S)-N-[(4-甲脒基噻吩-2-基)甲基]-5-甲基-2-[2-(1-氧代-6-苯氧基-3,4-二氢异喹啉-2-基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物161)
Figure BDA0004238079180008961
步骤1：2-(6-溴-1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2-基)乙酸叔丁酯(2)
在冰浴温度下将6-溴-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-酮,1(1g,4.42mmol,1.0当量)在THF(15mL)中的溶液添加到在THF(25mL)中的经己烷洗涤的NaH(0.53g,13.27mmol,3.0当量)中。将混合物在氩气下搅拌30分钟，然后添加2-溴乙酸叔丁酯(2.59g,13.27mmol,3.0当量)，并将反应物温热至室温并搅拌1小时。将反应物用冰冷的水淬灭，将两层分离，并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到呈棕色粉末的化合物2(1.2g,3.53mmol，收率79.74％)。LC/MS(ESI)m/z:341(M+H)+。
步骤2：2-(1-氧代-6-苯氧基-3,4-二氢异喹啉-2-基)乙酸叔丁酯(3)
将化合物2(1g,2.94mmol,1.0当量)、苯酚(0.83g,8.82mmol,3当量)、二甲基氨基乙酸盐酸盐(123mg,0.88mmol,0.3当量)、Cs2CO3(3.83g,11.76mmol,4.0当量)和碘化亚铜(I)(56mg,0.29mmol,0.1当量)在二噁烷(20mL)中的混合物在密封管中加热至90℃过夜。将反应物冷却至室温，然后用水(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc(25mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈棕色油状物的化合物3(0.95g,2.69mmol，91.54％)。LC/MS(ESI)m/z:354(M+H)+。
步骤3：(1-氧代-6-苯氧基-3,4-二氢异喹啉-2-基)乙酸(4)
在冰浴温度下将TFA(2.06mL)添加到化合物3(0.95g,2.69mmol,1.0当量)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时，并然后浓缩至干从而得到呈淡黄色固体的化合物4(0.7g,2.36mmol，收率87.62％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:298(M+H)+。
步骤4：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-[2-(1-氧代-6-苯氧基-3,4-二氢异喹啉-2-基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(6)
向化合物4(0.11g,0.38mmol，1.1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(5)(0.08g,0.35mmol，1.0当量)、HATU(0.17g,0.45mmol，1.3当量)和DIPEA(0.18mL,1.04mmol，3.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(5mL)，将液体倾出，并将残余物溶于EtOAc，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到呈棕色油状物的化合物6(0.15g,0.29mmol，收率84.03％)，其未经进一步纯化即用于下一反应中。LC/MS(ESI)m/z:511(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-[2-(1-氧代-6-苯氧基-3,4-二氢异喹啉-2-基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(7)
向化合物6(0.13g,0.25mmol,1.0当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加10％ Pd/C(27mg,0.025mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的H2回填。将反应物在室温下搅拌过夜，并然后通过硅藻土垫过滤。将滤液浓缩，并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的化合物7(0.09g,0.21mmol，收率84.0％)。LC/MS(ESI)m/z:421(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-(2-(1-氧代-6-苯氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物162)。
向化合物7(90mg,0.21mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(45mg,0.24mmol,1.1当量)、HATU(90mg,0.24mmol,1.1当量)和DIPEA(0.15mL,0.86mmol,4.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物162(30mg,0.054mmol，收率25.71％)。LC/MS(ESI)m/z:558(M+H).1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),8.60(t,J＝5.8Hz,1H),8.38(d,J＝9.5Hz,1H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.51–7.43(m,2H),7.24(t,J＝7.4Hz,1H),7.13(d,J＝7.9Hz,2H),6.97–6.86(m,2H),4.68(dd,J＝11.3,3.1Hz,1H),4.59(d,J＝16.3Hz,1H),4.54–4.32(m,4H),3.58(t,J＝6.7Hz,2H),3.39(d,J＝3.6Hz,1H),2.96(dq,J＝15.9,7.1Hz,2H),2.53(d,J＝2.6Hz,2H),2.30(t,J＝12.4Hz,1H),2.00(dd,J＝13.3,3.1Hz,1H),1.25(s,3H),1.23(d,J＝4.7Hz,1H),0.66(q,J＝8.0Hz,1H)。
方案236.(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-((2-氟吡啶-4-基)氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物206)
Figure BDA0004238079180008981
步骤1：4-((2-氟吡啶-4-基)氧基)丁酸(2)
向2-氟吡啶-4-醇,1(0.71g,6.28mmol,2当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加4-溴丁酸叔丁酯(0.7g,3.14mmol 1.0当量)和K2CO3(1.08g,7.84mmol,2.5当量)。将反应物在室温、氩气下搅拌24小时，并然后用水(10mL)和EtOAc(10mL)稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；24g柱，溶剂A＝己烷，溶剂B＝EtOAc，100％ A至20％ B进行纯化，得到化合物2(0.75g,2.94mmol,46.81％收率)。LC/MS(ESI)m/z:256(M+H)+。
步骤2：4-((2-氟吡啶-4-基)氧基)丁酸(3)
将TFA(2.22mL)添加到化合物2(0.75g,2.94mmol,1.0当量)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌3小时，并然后浓缩从而得到呈白色固体的化合物3(0.55g,2.76mmol，93.88％收率)。LC/MS(ESI)m/z:200(M+H)+
步骤3：(4-((2-氟吡啶-4-基)氧基)丁酰基)甘氨酸叔丁酯(4)
向化合物3(0.4g,2.01mmol,1.0当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加甘氨酸叔丁酯盐酸盐(0.40g,2.41mmol,1.2当量)、HATU(1g,2.63mmol,1.3当量)，最后添加DIPEA(0.88mL,5.02mmol,3.0当量)。将反应物在室温下搅拌20分钟，并然后用水(10mL)和CH2Cl2(10mL)稀释。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到黄色油状物。通过Comb Flash；24g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到化合物4(0.5g,1.60mmol，79.73％收率)。LC/MS(ESI)m/z:313(M+H)+
步骤4：(4-((2-氟吡啶-4-基)氧基)丁酰基)甘氨酸(5)
将TFA(1.0mL)添加到化合物4(0.5g,1.6mmol,1.0当量)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，并然后浓缩。添加4M HCl(5mL)，将混合物浓缩并在真空下干燥从而得到呈白色固体的化合物5(0.38g,1.48mmol,92.77％收率)。LC/MS(ESI)m/z:257(M+H)+。
步骤5：(S)-7-((4-((2-氟吡啶-4-基)氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸苄酯(6)
向化合物5(96.03mg,0.38mmol,1.1当量)和(8S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸苄酯(90mg,0.34mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.18mL,1.02mmol,3当量)和HATU(168mg,0.44mmol,1.3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。将混合物用H2O稀释并用CH2Cl2萃取两次。将合并的有机萃取液用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干。通过Comb Flash；12g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至5％ B进行纯化，得到呈白色粘稠固体的化合物6(120mg,0.24mmol，70.44％收率)。LC/MS(ESI)m/z:502(M+H)+
步骤6：(S)-7-((4-((2-氟吡啶-4-基)氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(7)
向化合物6(120mg,0.24mmol,1.0当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加10％ Pd/C(25mg,0.024mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并用球囊中的H2回填，并在H2气氛下搅拌12小时。将混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的化合物7(90mg，0.22mmol，收率91.67％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:412(M+H)+。
步骤7：(S,E)-7-((4-((2-氟吡啶-4-基)氧基)丁酰基)甘氨酰基)-N-((4-(N’-羟基甲脒基)噻吩-2-基)甲基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(8)
向化合物7(90mg,0.22mmol,1.0当量)和[[5-(氨基甲基)噻吩-3-氨亚基替甲酰基]氨基]乙酸酯盐酸盐(80mg,0.3mmol,1.1当量)在DMF(2mL)中的混合物中添加DIPEA(0.204mL,1.17mmol,4当量)和HATU(122mg,0.32mmol,1.1当量)。将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用H2O稀释并用CH2Cl2(10mL×3)萃取。将合并的有机萃取液用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过Comb Flash；12g柱，溶剂A＝CH2Cl2，溶剂B＝MeOH，100％ A至10％ B％进行纯化，得到化合物8(25mg,0.041mmol，收率18.75％)。LC/MS(ESI)m/z:607(M+H)+。
步骤8：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-((2-氟吡啶-4-基)氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物206)
向配备有包覆有特氟隆的磁力搅拌棒的10mL圆底烧瓶中添加化合物8(25.0mg,0.041mmol,1.0当量乙酸(0.5mL)和乙酸酐(8.0μL,0.08mmol,2.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌10分钟。添加10％Pd/C(4.4mg,0.0041mmol,0.1当量)，以及反应混合物。将烧瓶抽空，并用球囊中的H2回填，并在室温下搅拌14小时。将反应物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩，并然后直接通过HPLC纯化从而得到化合物206(2.5mg,0.005mmol，收率12.2％)。LC/MS(ESI)m/z:549(M+H)+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.02(s,1H),8.55(dt,J＝19.0,5.8Hz,2H),8.45(s,1H),8.36–8.29(m,1H),7.83(dd,J＝9.0,2.5Hz,2H),7.55–7.30(m,2H),7.08(dd,J＝9.1,2.8Hz,2H),5.17(s,2H),4.71–4.57(m,1H),4.50–4.40(m,1H),4.43–4.33(m,4H),4.31(dd,J＝16.6,5.6Hz,1H),4.02(td,J＝16.2,5.6Hz,1H),3.43(dd,J＝6.1,2.4Hz,2H),2.32–2.26(m,2H),2.11–1.89(m,2H)
方案237.(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(萘-1-基氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物207)
Figure BDA0004238079180009021
步骤1：4-(萘-1-基氧基)丁酸叔丁酯(2)
向萘-1-醇,1(905mg,6.28mmol,2当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加4-溴丁酸叔丁酯(0.70g,3.14mmol 1.0当量)和K2CO3(1.08g,7.84mmol,2.5当量)。将反应物在室温、氩气下搅拌24小时，并然后用水(10mL)和EtOAc(10mL)稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；24g柱，溶剂A＝己烷，溶剂B＝EtOAc，100％ A至20％ B进行纯化，得到化合物2(0.79g,2.76mmol,87.56％收率)。LC/MS(ESI)m/z:287(M+H)+。
步骤2：4-(萘-1-基氧基)丁酸(3)
在冰浴温度下将TFA(1.70mL)添加到化合物2(0.65g,2.27mmol,1.0当量)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌3小时，并然后浓缩至干从而得到呈类黄色固体的化合物3(0.5g,2.17mmol，收率95.66％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:231(M+H)+。
步骤3：(4-(萘-1-基氧基)丁酰基)甘氨酸叔丁酯(4)
向化合物3(0.5g,2.17mmol,1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(0.54g,3.26mmol,1.5当量HATU(1.24g,3.26mmol,1.5当量)和DIPEA(1.14mL,6.51mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水(10mL)，将固体通过过滤收集，并然后干燥从而得到呈白色固体的化合物4(0.6g,1.75mmol，收率80.61％)。LC/MS(ESI)m/z:344(M+H)+。
步骤4：(4-(萘-1-基氧基)丁酰基)甘氨酸(5)
在冰浴温度下将TFA(1.0mL)添加到化合物4(0.50g,1.46mmol,1.0当量)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时，并然后浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物5(0.39g,1.36mmol，收率93.07％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:288(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(萘-1-基氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(6)
向化合物5(0.14g,0.5mmol,1.1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(0.07g,0.45mmol,1.0当量HATU(0.22g,0.59mmol,1.3当量)和DIPEA(0.24mL,1.35mmol,3.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，并然后添加水(5mL)并将液体倾出。将残余物溶于EtOAc，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到呈棕色油状物的化合物6(0.12g,0.283mmol,62.89％收率)。LC/MS(ESI)m/z:425(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-(萘-1-基氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(7)
向化合物6(0.18g,0.42mmol,1.0当量)在MeOH(3mL)水(1mL)中的溶液中添加LiOH(11mg,0.45mmol,1.1当量)。将反应物在室温下搅拌过夜，并浓缩去除MeOH，并然后用EtOAc稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物7(0.16g,0.39mmol，92.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:411(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-(萘-1-基氧基)丁酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物207)。
向化合物7(30mg,0.073mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(17mg,0.09mmol,1.2当量HATU(33mg,0.089mmol,1.2当量)和DIPEA(0.04mL,0.23mmol,3.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物207(0.02g,0.04mmol，收率50.0％)。LC/MS(ESI)m/z:548(M+H)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),8.55(dt,J＝19.0,5.8Hz,2H),8.45(s,1H),8.36–8.29(m,1H),7.83(dd,J＝9.0,2.5Hz,2H),7.55–7.30(m,6H),7.08(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),5.17(s,1H),4.71–4.57(m,2H),4.50–4.40(m,1H),4.43–4.33(m,2H),4.31(dd,J＝16.6,5.6Hz,1H),4.02(td,J＝16.2,5.6Hz,1H),3.43(dd,J＝6.1,2.4Hz,1H),2.28(t,J＝12.3Hz,1H),2.00(dd,J＝13.2,3.1Hz,1H),1.91(s,3H),0.70–0.58(m,2H)。
方案238.(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-(4-环丙基苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物208)
Figure BDA0004238079180009051
步骤1：4-(4-环丙基苯氧基)丁酸叔丁酯(2)
向4-环丙基苯酚,1(0.6g,4.0mmol,2当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加4-溴丁酸叔丁酯(0.7g,3.0mmol 1.0当量)和K2CO3(1.0g,7.24mmol,2.5当量)。将反应物在室温、氩气下搅拌24小时，并然后用水(10mL)和EtOAc(10mL)稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；24g柱，溶剂A＝己烷，溶剂B＝EtOAc，100％ A至20％ B进行纯化，得到化合物2(0.80g,3.00mmol,90.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:277(M+H)+，呈白色固体。
步骤2：4-(4-环丙基苯氧基)丁酸(3)
在冰浴温度下将TFA(1.0mL)添加到化合物2(0.5g,1.81mmol,1.0当量)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌3小时，并然后浓缩至干从而得到呈类黄色固体的化合物3(0.38g,1.73mmol，收率95.35％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:221(M+H)+。
步骤3：(4-(4-环丙基苯氧基)丁酰基)甘氨酸叔丁酯(4)
向化合物3(0.3g,1.36mmol,1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸叔丁酯(0.30g,1.77mmol,1.3当量HATU(0.80g,2.10mmol,1.5当量)和DIPEA(0.71mL,4.1mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水(5mL)，将固体通过过滤收集，并然后干燥从而得到化合物4(0.4g,1.0mmol，收率90.0％)。LC/MS(ESI)m/z:334(M+H)+。
步骤4：(4-(4-环丙基苯氧基)丁酰基)甘氨酸(5)
在冰浴温度下将TFA(0.9mL)添加到化合物4(0.4g,1.20mmol,1.0当量)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中。将反应物在室温下搅拌2小时，并然后浓缩至干从而得到呈白色固体的化合物5(0.29g,1.05mmol，收率87.2％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:278(M+H)+。
步骤5：(S)-7-((4-(4-环丙基苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸苄酯(6)
向化合物5(0.15g,0.54mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(8S)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸苄酯(0.16g,0.61mmol,1.10当量HATU(0.27g,0.71mmol,1.3当量)和DIPEA(0.28mL,1.60mmol,3.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。将水(5mL)添加到反应物中。将浑浊的混合物过滤，并将残余物溶解于EtOAc，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩从而得到呈黄色油状物的化合物6(0.23g,0.44mmol，收率81.0％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:523(M+H)+。
步骤6：(S)-7-((4-(4-环丙基苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(7)
向化合物6(0.2g,0.383mmol,1.0当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加5％ Pd/C(0.0815g,0.0383mmol,0.1当量)。将烧瓶抽空，并然后用球囊中的H2回填。将反应物在室温下搅拌过夜，并然后通过硅藻土垫过滤。将滤液浓缩，并在真空下干燥从而得到呈棕色固体的化合物7(0.15g,0.347mmol，收率90.62％)。LC/MS(ESI)m/z:433(M+H)+。
步骤7：(S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-7-((4-(4-环丙基苯氧基)丁酰基)甘氨酰基)-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酰胺(化合物208)
向(8S)-7-[2-[4-(4-环丙基苯氧基)丁酰基氨基]乙酰基]-1,4-二氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-8-甲酸(60mg,0.14mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(29mg,0.15mmol,1.1当量)、HATU(63mg,0.17mmol,1.2当量)和DIPEA(97μL,0.56mmol,4当量)。将反应物在室温下搅拌10分钟，然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物208(0.02g,0.17mmol，收率30.0％)。LC/MS(ESI)m/z:570(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(s,1H),8.57(t,J＝5.9Hz,1H),8.35(d,J＝5.7Hz,1H),8.04(d,J＝6.2Hz,1H),7.48(d,J＝13.1Hz,1H),6.97(d,J＝8.2Hz,2H),6.79(d,J＝8.3Hz,2H),4.60(d,J＝8.4Hz,1H),4.48(d,J＝5.7Hz,2H),4.09–3.74(m,4H),3.75–3.64(m,2H),3.54(d,J＝10.9Hz,2H),3.17(m,1H),2.89(d,J＝17.6Hz,2H),2.50(m,1H),2.41–2.18(m,4H),2.01(dd,J＝13.0,6.7Hz,2H),1.95–1.72(m,4H),0.93–0.74(m,2H),0.68–0.50(m,2H)。
方案239.(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-((S)-1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物212)
Figure BDA0004238079180009081
步骤1：(S)-4-(1-苯基乙氧基)苯甲酸甲酯(3)
向在冰浴温度下的(1R)-1-苯基乙醇(0.5g,4.1mmol,1.0当量)和4-羟基苯甲酸甲酯(0.69g,4.51mmol,1.1当量)在THF(10mL)中的溶液中添加PPh3(2.26g,8.61mmol,2.1当量)，随后添加偶氮二甲酸二异丙酯(1.61mL,8.2mmol,2.0当量)。将反应物在室温下搅拌16小时，用饱和NH4Cl淬灭，然后用EtOAc稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；12g柱，溶剂A＝己烷，溶剂B＝EtOAc，100％ A至10％ B进行纯化，得到化合物3(0.6g,2.34mmol,57.16％收率)。LC/MS(ESI)m/z:257(M+H)+。
步骤2：(S)-4-(1-苯基乙氧基)苯甲酸(4)
向化合物3(0.7g,2.73mmol,1.00当量)在MeOH(12mL)和水(4mL)中的溶液中添加LiOH(0.2g,8.2mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌过夜。将反应物浓缩以去除MeOH，并然后用EtOAc稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物4(0.60g,2.48mmol，90.84％收率)。LC/MS(ESI)m/z:243(M+H)+。
步骤3：(S)-(4-(1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酸甲酯(5)
向化合物4(0.5g,2.07mmol,1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-氨基乙酸甲酯盐酸盐(0.31g,2.48mmol,1.2当量)、HATU(1.02g,2.69mmol,1.3当量)和DIPEA(1.2mL,6.21mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水(10mL)并将混合物搅拌10分钟。使产物析出并将液体倾出，将残余物溶解于EtOAc，用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩从而得到呈白色固体的5(0.5g,1.60mmol，收率77.29％)。LC/MS(ESI)m/z:314(M+H)+。
步骤4：(S)-(4-(1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酸(6)
向化合物5(0.4g,1.28mmol,1.0当量)在MeOH(6mL)和水(2mL)中的溶液中添加LiOH(0.1g,4.13mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌过夜。然后将反应物浓缩以去除MeOH并用EtOAc稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物6(0.3g,1.0mmol，78.39％收率)。LC/MS(ESI)m/z:300(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-((S)-1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(7)
向化合物6(0.08g,0.27mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(0.05g,0.32mmol，1.2当量)、HATU(0.13g,0.35mmol，1.3当量)和DIPEA(0.1mL,0.6mmol，3.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水(5mL)和EtOAc(5mL)。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi-Flash；4g柱，溶剂A＝己烷，溶剂B＝EtOAc，100％ A至25％ B进行纯化，得到呈棕色油状物的化合物7(0.08g,0.18mmol，收率67.96％)。LC/MS(ESI)m/z:437(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-((S)-1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(8)
向化合物7(0.08g,0.18mmol,1.00当量)在MeOH(3mL)水(1mL)中的溶液中添加LiOH(5mg,0.21mmol,1.1当量)。将反应物在室温下搅拌过夜。然后将反应物浓缩以去除MeOH并用EtOAc稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物8(0.07g,0.2mmol，90％收率)。LC/MS(ESI)m/z:423(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-((S)-1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物212)
向化合物8(0.07g,0.17mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(0.035g,0.19mmol,1.1当量)、HATU(0.08g,0.20mmol,1.2当量)和DIPEA(0.12mL,0.68mmol,4.0当量)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物212(0.02g,0.04mmol，24.1％收率)。LC/MS(ESI)m/z:560(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝5.0Hz,1H),8.41(s,1H),8.33(d,J＝6.2Hz,1H),7.72(d,J＝8.6Hz,1H),7.47(d,J＝11.8Hz,1H),7.41(d,J＝7.7Hz,1H),7.34(t,J＝7.5Hz,1H),7.25(t,J＝7.3Hz,1H),6.96(dd,J＝9.0,3.2Hz,1H),5.60(q,J＝6.3Hz,1H),4.84(d,J＝10.9Hz,1H),4.65(dd,J＝11.3,3.0Hz,1H),4.53–4.18(m,2H),4.02(d,J＝5.6Hz,1H),3.98(d,J＝5.5Hz,1H),3.59–3.46(m,1H),3.40(d,J＝5.7Hz,1H),2.42–2.17(m,1H),1.99(dd,J＝13.3,3.0Hz,1H),1.57(d,J＝6.3Hz,3H),1.21(s,3H),1.13(d,J＝5.3Hz,1H),0.63(t,J＝5.6Hz,1H)。
方案240.(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-((S)-1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物223)
Figure BDA0004238079180009111
步骤1：(R)-4-(1-苯基乙氧基)苯甲酸甲酯(3)
向在冰浴温度下的(1S)-1-苯基乙醇(500mg,4.1mmol,1.0当量)和4-羟基苯甲酸甲酯(0.69g,4.51mmol,1.1当量)在THF(10mL)中的溶液中添加PPh3(2.26g,8.61mmol,2.1当量)，随后添加偶氮二甲酸二异丙酯DIAD(1.65mL,8.2mmol,2.0当量)将反应物在室温下搅拌16小时并用饱和NH4Cl淬灭，并然后用EtOAc稀释。将两层分离，并将水层用EtOAc(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。通过Combi Flash；24g柱，溶剂A＝己烷，溶剂B＝EtOAc，100％ A至10％ B进行纯化，得到化合物3(0.6g,2.34mmol,57.16％收率)。LC/MS(ESI)m/z:257(M+H)+。
步骤2：(R)-4-(1-苯基乙氧基)苯甲酸(4)
向化合物3(0.5g,1.95mmol,1.0当量)在MeOH(6mL)水(2mL)中的溶液中添加LiOH(0.14g,5.85mmol,3.0当量)。将反应物在室温下搅拌过夜，并浓缩去除MeOH，并然后用EtOAc稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物4(0.42g,1.74mmol，89.0％收率)。LC/MS(ESI)m/z:243(M+H)+。
步骤3：(R)-(4-(1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酸甲酯(5)
向化合物4(0.4g,1.65mmol,1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加甘氨酸甲酯盐酸盐(0.25g,1.98mmol,1.2当量HATU(0.94g,2.48mmol,1.5当量)和DIPEA(0.86mL,4.95mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌1小时。添加水(10mL)，将固体通过过滤收集，并然后干燥从而得到呈浅棕色固体的化合物5(0.49g,1.56mmol，收率94.55％)。LC/MS(ESI)m/z:314(M+H)+。
步骤4：(R)-(4-(1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酸(6)
向化合物5(0.4g,1.28mmol,1.0当量)在MeOH(6mL)水(2mL)中的溶液中添加LiOH(0.1g,3.83mmol,3当量)。将反应物在室温下搅拌过夜。然后将反应物浓缩以去除MeOH并用EtOAc稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈白色固体的化合物6(0.31g,1.04mmol，收率81.0％)。LC/MS(ESI)m/z:300(M+H)+。
步骤5：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-((R)-1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(7)
向化合物6(0.22g,0.74mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加(1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸甲酯(0.14g,0.90mmol，1.2当量HATU(0.36g,0.95mmol，1.3当量)和DIPEA(0.38mL,2.18mmol，3.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟。水(5mL)并将液体倾出。将残余物溶于EtOAc，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过Combi-Flash；12g柱，溶剂A＝己烷，溶剂B＝EtOAc，100％ A至25％ B进行纯化，得到呈棕色油状物的化合物7(0.26g,0.6mmol，收率81.08％)。LC/MS(ESI)m/z:437(M+H)+。
步骤6：(1S,3S,5S)-5-甲基-2-((4-((R)-1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(8)
向化合物7(0.2g,0.46mmol,1.0当量)在MeOH(3mL)水(1mL)中的溶液中添加LiOH(0.012g,0.5mmol,1.1当量)。将反应物在室温下搅拌过夜。然后将反应物浓缩以去除MeOH，并然后用EtOAc稀释。将pH值用1N HCl调节至1。将两层分离，并将水层用EtOAc(5mL×2)萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩从而得到呈黄色粘稠固体的化合物8(0.15g,0.36mmol，78.26％收率)。LC/MS(ESI)m/z:423(M+H)+。
步骤7：(1S,3S,5S)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-5-甲基-2-((4-((S)-1-苯基乙氧基)苯甲酰基)甘氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(化合物223)。
向化合物8(0.15g,0.36mmol,1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒盐酸盐(0.08g,0.39mmol,1.1当量)、HATU(0.16g,0.42mmol,1.1当量)和DIPEA(0.2mL,1.09mmol,3.0当量)。将反应物在室温下搅拌30分钟，并然后直接通过HPLC进行纯化从而得到化合物223(15mg,0.03mmol，7.5％收率)。LC/MS(ESI)m/z:560(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,1H),8.51(q,J＝5.8Hz,1H),8.32(s,1H),7.73(dd,J＝9.0,2.5Hz,2H),7.58–7.15(m,4H),6.96(dd,J＝8.9,3.1Hz,2H),5.60(q,J＝6.3Hz,1H),4.70–4.52(m,1H),4.50–4.18(m,2H),4.09–3.92(m,1H),2.90(d,J＝8.5Hz,1H),2.50(s,3H),2.28(q,J＝11.9Hz,1H),1.57(d,J＝6.3Hz,3H),1.20(d,J＝8.8Hz,2H),1.15–1.08(s,3H),0.90(d,J＝5.7Hz,1H),0.65(t,J＝5.7Hz,1H)。
方案241：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物260)的合成
Figure BDA0004238079180009141
步骤1：(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(环戊-1-烯-1-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.5g,2.6mmol)和环戊-1-烯-1-基硼酸(290mg,2.6mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(5mL)中的混合物中添加Pd(PPh3)4(210mg,0.18mmol)和Na2CO3(827mg,7.8mmol)。将混合物在N2气氛下脱气三次，并在85℃下搅拌2小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过柱色谱(SiO2，0-2％ EtOAc于PE中)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(环戊-1-烯-1-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.2g，收率91.5％)。LCMS(ESI)m/z:504(M+H)+。
步骤2：(2S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-环戊基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(环戊-1-烯-1-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.2g,2.4mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加TBAF(4.7mL,4.7mmol)，并将混合物在室温、N2气氛下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(硅胶，0-30％ EtOAc于PE中)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(S)-4-(环戊-1-烯-1-基)-2-(羟基甲基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(530mg，收率83.4％)。LCMS(ESI)m/z:268(M+H)+。
步骤3：(2S)-4-环戊基-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(S)-4-(环戊-1-烯-1-基)-2-(羟基甲基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(530mg,2.0mmol)在MeOH(7mL)中的溶液中添加Pd/C(140mg,10重量％)，将混合物在N2气氛下脱气三次，并在室温、H2球囊下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S)-4-环戊基-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(450mg，收率83.4％)，其直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)(m/z)：270(M+H)+。
步骤4：(2S)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S)-4-环戊基-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(450mg,2.0mmol)在丙酮(10mL)中的混合物中添加琼斯氧化剂(Jones oxidant)(0.9mL,新制备)，并将混合物在室温下搅拌20分钟。将混合物用饱和Na2S2O3水溶液淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈黄色油状物的(2S)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸(500mg,粗品)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LCMS(ESI)m/z:284(M+H)+。
步骤5：(2S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸
向(2S)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸(500mg,粗品)在THF(10mL)和水(2mL)中的溶液中添加Boc2O(1.4g,6.6mmol)和NaHCO3(550mg,6.6mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(硅胶，0-7％的在DCM中的MeOH)进行纯化从而得到呈无色油状物的(2S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸(400mg，两个步骤的收率84.6％)。LCMS(ESI)m/z:284(M+H)+。
步骤6：(2S)-4-环戊基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯
向(2S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸(400mg,1.7mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加Cs2CO3(1.6g,5.1mmol)和BnBr(870mg,5.1mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过柱色谱(硅胶，0-30％的在PE中的EtOAc)进行纯化从而得到呈黄色油状物的(2S)-4-环戊基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(330mg，收率51.8％)。LCMS(ESI)m/z:374(M+H)+。
步骤7：(2S)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐
将(2S)-4-环戊基吡咯烷-1,2-二甲酸2-苄酯1-(叔丁基)酯(100mg,0.27mmol)在HCl/1,4-二噁烷(2mL)中的溶液在室温、N2气氛下搅拌30分钟。将反应混合物在减压下浓缩至干，与DCM共蒸发两次并在真空下干燥从而得到呈黄色固体的(2S)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(70mg，收率95.0％)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z:274(M+H)+。
步骤8：(2S,4S)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯
在0℃、N2气氛下向(2S)-4-环戊基吡咯烷-2-甲酸苄酯盐酸盐(70mg,0.26mmol)和(4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酸(70mg,0.26mmol)在DMF(1mL)中的混合物中添加DIPEA(168mg,1.3mmol)和PyBOP(135mg,0.26mmol)，并将混合物在25℃搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(硅胶，0-30％的在PE中的EtOAc)进行纯化，并通过制备型HPLC进行进一步纯化从而得到呈黄色固体的(2S,4S)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(92mg，收率67.2％)。LC/MS(ESI)m/z:527(M+H)+。
步骤9：(2S,4R)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸
在0℃下向(2S,4S)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸苄酯(92mg,0.17mmol)在MeOH(1.5mL)和水(1.0mL)中的溶液中添加LiOH.H2O(42mg,1.0mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用1N HCl水溶液酸化至pH～3，并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干从而得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(70mg，收率94.4％)，其直接用于下一反应中。LCMS(ESI)(m/z):437(M+H)+。
步骤10：(2S,4R)-N-((4-甲脒基噻吩-2-基)甲基)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物260)
在0℃下向(2S,4R)-4-环戊基-1-((4-苯氧基苯甲酰基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲酸(40mg,0.09mmol)和5-(氨基甲基)噻吩-3-甲脒(27mg,0.17mmol)在DMF(0.7mL)中的混合物中添加DIPEA(67mg,0.52mmol)和PyBOP(50mg,0.096mmol)，并将混合物在室温下搅拌1小时。将有机层用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩至干。将残余物通过快速色谱(硅胶，0-10％的在DCM中的MeOH)进行纯化从而得到呈白色固体的化合物260(6mg，收率12.0％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.09(s,1H),7.84(d,J＝8.6Hz,2H),7.41(t,J＝7.9Hz,3H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(d,J＝7.9Hz,2H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),4.62(d,J＝14.8Hz,1H),4.56(s,2H),4.39(d,J＝8.8Hz,1H),4.26(d,J＝16.5Hz,1H),4.14(d,J＝16.5Hz,1H),3.97–3.91(m,1H),2.43(dd,J＝12.3,6.9Hz,1H),2.13(dd,J＝43.0,19.6Hz,3H),1.78(s,3H),1.67–1.57(m,4H),1.25–1.22(m,1H)。LC/MS(ESI)(m/z)：574(M+H)+。
实施例2.本公开的化合物的非限制性实例
表1列出具有表征数据的示例性补体途径。实施例3的测定被用于确定化合物的IC50。还有其他标准补体测定可用。三个***用于表示IC50小于100纳摩尔的化合物；两个**表示IC50大于100纳摩尔且小于1微摩尔的化合物，一个*表示IC50大于1微摩尔的化合物。
表1.本公开的化合物的非限制性实例
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实施例3.人C1s酶测定
将最终浓度1.16nM的人补体C1s酶(由人血清纯化制备，Complement Technology,Inc.)在50mM Tris,1M NaCl,pH 7.5中在室温下与各种浓度的试验化合物一起温育5分钟。添加合成底物Z-L-Lys-SBzl和DTNB(Ellman试剂)添加至每一者的最终浓度为100μM。使用微板分光光度计以30秒间隔记录在405nm处的吸光度(A405)，持续30分钟。IC50值是通过对随试验化合物浓度变化的补体C1s反应速率的非线性回归来计算的。
实施例4.溶血测定
溶血测定先前由Dodds,A.W.And和SiM,R.B.(1997)；Morgan,B.P.(2000)进行了描述。在测定之前，通过滴定确定了达到抗体致敏绵羊红细胞(EA)100％裂解所需的正常人血清(NHS)的最佳浓度。EA是绵羊红细胞，该绵羊红细胞具有结合在其表面上的兔IgM抗绵羊红细胞抗体。在测定中，将NHS(Complement Technology)稀释于GVB++缓冲液(0.1％明胶、5mM巴比妥、145mM NaCl、0.025％NaN3、pH 7.3、0.15mM氯化钙和0.5mM氯化镁，ComplementTechnology)，并在室温下与各种浓度的试验化合物一起温育2分钟。添加新悬浮于GVB++中的EA(Complement Technology)至最终浓度为1×108个细胞/毫升，并将反应物在37℃下温育60分钟。阳性对照反应(100％裂解)由含有NHS和EA但不含试验化合物的GVB++组成；阴性对照反应(0％裂解)由仅含EA的GVB++构成。将样本以2000g离心3分钟并收集上清液。使用微板分光光度计记录在405nm处的吸光度(A405)。IC50值是通过对随试验化合物浓度变化的溶血百分比的非线性回归来计算的。
已参考各种具体的实施方案来描述本专利说明书。然而，本领域的普通技术人员应理解，在不脱离如所附权利要求书所阐述的本发明的范围的情况下，可以进行各种修改和改变。因此，本专利说明书应被视为说明性的而非限制性的，并且所有此类修改都旨在包括在所附权利要求书的范围内。

Claims (64)

1.一种化合物，其选自：
Figure FDA0004238079170000011
Figure FDA0004238079170000021
Figure FDA0004238079170000031
Figure FDA0004238079170000041
Figure FDA0004238079170000051
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体；其中：
每个n均独立地为0、1、2或3；
每个m均独立地为0、1、2或3；
o是0、1或2；
Figure FDA0004238079170000052
是单键或双键；
Z是CH2、C(CH2)或C(O)；
X1选自S、O和N(R30)；
X2选自键、N(R30)和-O-N(R30)-；
X3选自N和C(R17)；
X4选自N和C(R18)；
其中X3和X4中只有一者可以为N；
X5是C、Si或S；
X6选自
Figure FDA0004238079170000061
Figure FDA0004238079170000062
X7选自O、S、N(R30)和CR5R6；
每个X8和X9均独立地选自O、S、NR30、CR9R10、CR5R6和CH2；其中X8和X9两者不能为相同基团；
X10选自
Figure FDA0004238079170000063
X11选自N和CR1；
X12选自N和CR2；
R1和R2独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R1和R2基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R3和R4独立地选自氢、硝基、-S(O)2R31、CN、C(O)R31、-SR30和-OR30；
或者R3和R4取而代之地组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；
R5和R6各自独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、-OR30、-N(R30)2和COR31，其中当位于彼此相邻的碳上时，R5和R6基团可任选地被碳碳双键替代；
或者，当n是1时，R5和R6与它们所附接的碳一起被-SO2-替代；
或者R5和R6与它们所附接的碳原子一起组合形成环丙基；
R7、R8、R9、R10、R11和R12独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、-S(O)(NR31)(R31)、碳环、杂环、芳基和杂芳基，除氢和卤素以外的所述R7、R8、R9、R10、R11和R12基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代；
或者R7和R8可与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R7和R8可与它们所附接的碳一起形成
Figure FDA0004238079170000071
或羰基；
或者R9和R10可与它们所附接的原子一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R9和R10可与它们所附接的原子一起形成
Figure FDA0004238079170000081
或羰基；
或者R11和R12可与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R11和R12可与它们所附接的碳一起形成
Figure FDA0004238079170000082
或羰基；
或者R7和R9与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R9和R11与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
或者，当X5是S时，R9和R10不存在；
每个R13均独立地选自氢、C1-C6烷基和OH；
或者R13和R26与它们所附接的原子一起形成任选地被R27取代的杂环；
或者R13与其所附接的氮原子一起被-O-替代；
每个R13′和R13″独立地选自氢和C1-C6烷基；
或者R13′和R14与它们所附接的原子一起组合形成含有一个N的5或6元杂环；
R14、R15和R16独立地选自氢、卤素、SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷基芳基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、碳环、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基，除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R14、R15和R16基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、碳环、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R17和R18独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
或者R17和R18与它们所附接的碳一起形成双键；
R19和R20独立地选自氢、C1-C6烷基、C5-C10双环碳环、C4-C6杂环、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-N(R30)2、-(CH2)n-R33和
Figure FDA0004238079170000091
R21选自C1-C6卤代烷基、-O-C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基、-O-C1-C6烷基、-S(O)(NR31)R31、碳环、芳基、-O-芳基、杂芳基、-O-碳环或-O-杂芳基，所述R21基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代；
R22选自-C1-C6烷基-R23、-C2-C6烯基-R23、-C2-C6炔基-R23、-杂芳基-R23、-碳环-R23和双环环烷基-R23，所述R22中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R23选自氢、糖、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31和-S(O)R31、-S(O)2R31；
每个R25均独立地选自氢、SF5、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、-S(O)(NR31)R31、-P(O)(OR31)R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R25基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R26选自
Figure FDA0004238079170000101
Figure FDA0004238079170000102
Figure FDA0004238079170000111
R27选自-OR30、S-甲基氨亚基替磺酰基、
Figure FDA0004238079170000112
Figure FDA0004238079170000113
R29选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基和杂芳基，除氢和卤素以外的所述R29基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
每个R30均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、碳环、芳基、杂芳基、杂环和C(O)R31，除C(O)R31以外的每个R30均任选地被1、2、3或4个选自C1-C6烷基、卤素、SF5、-C(O)R31、-N(R30)2、芳基、杂芳基、-OR32、和-S(O)(NR31)R31和碳环的取代基取代；
或者
Figure FDA0004238079170000114
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
每个R31均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR32、-SR32、-N(R32)2、杂环、芳基和杂芳基；
每个R32均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；
每个R33均独立地选自氢、胍、杂芳基、芳基、-C6H5-OR30；-OR30、-SR30、-SeR30、-N(R30)2和-C(O)R31；
R34选自
Figure FDA0004238079170000121
Figure FDA0004238079170000122
Figure FDA0004238079170000123
并且
R35选自C3-C10烷基或C3-C10卤代烷基。
2.如权利要求1所述的化合物，其中对于式I和式II的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，并且R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000131
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000132
或羰基；
i.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000133
或羰基；
j.R7和R9与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R8或R10不是氢；
k.R9和R11与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10或R12不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.X6选自
Figure FDA0004238079170000134
n.R3和R4中至少一者是CN、硝基、-S(O)2R31、-SR30或C(O)R31；
o.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；或
p.R27是
Figure FDA0004238079170000141
并且/>
Figure FDA0004238079170000142
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
其中对于X和式XI的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，并且R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000143
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000144
或羰基；
i.R9和R11与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
j.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000151
或羰基；
k.R7和R9与它们所附接的原子一起形成3至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.R22被至少三个OR30基团取代；
n.R23是糖；
o.R3和R4中至少一者是CN、硝基、-S(O)2R31、-SR30或C(O)R31；
p.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；或
q.R27是
Figure FDA0004238079170000152
并且/>
Figure FDA0004238079170000153
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
其中对于式XIV的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X1是O或N(R30)；
b.R14不是氢；
c.R1不是氢；
d.R2不是氢；
e.R3不是氢；或者
f.R4不是氢。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0004238079170000161
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体。
4.如权利要求1或2所述的化合物，其中所述化合物具有式：
Figure FDA0004238079170000171
/>
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体。
5.如权利要求1或2所述的化合物，其具有式：
Figure FDA0004238079170000172
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体。
6.如权利要求1或2所述的化合物，其选自：
Figure FDA0004238079170000181
/>
Figure FDA0004238079170000191
/>
Figure FDA0004238079170000201
/>
Figure FDA0004238079170000211
其中R21选自C1-C6烷基和-O-C1-C6烷基；
每个R25均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R1和R2基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R14、R15和R16独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷基芳基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基，除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R14、R15和R16基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代。
7.一种化合物，其选自：
Figure FDA0004238079170000221
/>
Figure FDA0004238079170000231
/>
Figure FDA0004238079170000241
/>
Figure FDA0004238079170000251
或其药学上可接受的盐、前药或经分离的异构体；其中：
每个n均独立地为0、1、2或3；
每个m均独立地为0、1、2或3；
o是0、1或2；
Figure FDA0004238079170000252
是单键或双键；
Z是CH2、C(CH2)或C(O)；
X1选自S、O和N(R30)；
X2选自键、N(R30)和-O-N(R30)-；
X3选自N和C(R17)；
X4选自N和C(R18)；
其中X3和X4中只有一者可以为N；
X5是C、Si或S；
X6选自
Figure FDA0004238079170000261
Figure FDA0004238079170000262
X7选自O、S、N(R30)和CR5′R6′；
每个X8和X9均独立地选自O、S、NR30、CR9R10、CR5R6和CH2；其中X8和X9两者不能为相同基团
X11选自N和CR1；
X12选自N和CR2；
R1和R2独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R1和R2基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R3和R4独立地选自氢、硝基、-S(O)2R31、C(O)R31、-SR30和-OR30；
或者R3和R4取而代之地组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；
R5、R5′、R6和R6′各自独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、-OR30、-N(R30)2和C(O)R31，其中当位于彼此相邻的碳上时，R5和R6基团可任选地被碳碳双键替代；
或者，当n是1时，R5和R6与它们所附接的碳一起被-SO2-替代；
或者R5和R6与它们所附接的碳原子一起组合形成环丙基；
R7、R8、R9、R10、R11和R12独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、-S(O)(NR31)R31、碳环、杂环、芳基和杂芳基，除氢和卤素以外的所述R7、R8、R9、R10、R11和R12基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代；
或者R7和R8可与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R7和R8可与它们所附接的碳一起形成
Figure FDA0004238079170000281
或羰基；/>
或者R9和R10可与它们所附接的原子一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R9和R10可与它们所附接的原子一起形成
Figure FDA0004238079170000282
或羰基；
或者R11和R12可与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环，其中所述碳环螺环和杂环螺环任选地被一个或多个卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30或-N(R30)2取代；
或者R11和R12可与它们所附接的碳一起形成
Figure FDA0004238079170000283
或羰基；
或者R7和R9与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R9和R11与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；
或者R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
或者，当X5是S时，R9和R10不存在；
每个R13独立地选自氢、C1-C6烷基和OH；
或者R13和R26与它们所附接的原子一起形成任选地被R27取代的杂环；
或者R13与其所附接的氮原子一起被-O-替代；
每个R13′和R13″均独立地选自氢和C1-C6烷基；
或者R13′和R14与它们所附接的原子一起组合形成含有一个N的5或6元杂环；
R14、R15和R16独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-C1-C6烷基芳基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、碳环、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基，除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R14、R15和R16基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、碳环、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R17和R18独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
或者R17和R18与它们所附接的碳一起形成双键；
R19和R20独立地选自氢、C1-C6烷基、C5-C10双环碳环、C4-C6杂环、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-N(R30)2、-(CH2)n-R33和
Figure FDA0004238079170000291
R21选自C1-C6烷基和-O-C1-C6烷基；
R22选自-C1-C6烷基-R23、-C2-C6烯基-R23、-C2-C6炔基-R23、-杂芳基-R23、-芴基-R23和双环环烷基-R23，所述R22中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R23选自氢、糖、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31和-S(O)2R31；并且
每个R25均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、-S(O)(NR31)R31、-P(O)(OR31)R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基；除氢、卤素、氰基和硝基以外的所述R1和R2基团中的每一个均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；
R26选自
Figure FDA0004238079170000301
Figure FDA0004238079170000302
R27选自
Figure FDA0004238079170000311
Figure FDA0004238079170000312
/>
每个R30均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、碳环、芳基、杂芳基、杂环和C(O)R31，除C(O)R31以外的每个R30均任选地被1、2、3或4个选自C1-C6烷基、卤素、SF5、-C(O)R31、-N(R30)2、芳基、-OR32、-S(O)(NR31)R31和碳环的取代基取代；
或者
Figure FDA0004238079170000313
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
每个R31均独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR32、-SR32、-N(R32)2、杂环、芳基和杂芳基；
每个R32均独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；以及
每个R33均独立地选自氢、胍、杂芳基、芳基、-C6H5-OR30；-OR30、-SR30、-SeR30、-N(R30)2、-C(O)R31。
8.如权利要求7所述的化合物，其中对于式I和式II的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，并且R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000321
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000322
或羰基；
i.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000323
或羰基；
j.R7和R9与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10或R12不是氢；
k.R9和R11与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R8或R10不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.X6选自
Figure FDA0004238079170000331
n.R3和R4中的至少一者是CN、-SR30硝基、-S(O)2R31或C(O)R31；
o.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；
p.R27是
Figure FDA0004238079170000332
并且/>
Figure FDA0004238079170000333
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
其中对于X和式XI的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X3是C(R17)并且X4是C(R18)；
b.R17选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和-N(R30)2；
c.X5是Si；
d.X5是S，并且R7、R8、R11和R12中的至少两者不是氢，R7和R8中不超过一者是卤素，并且R11和R12中不超过一者是卤素；
e.Z是C(CH2)；
f.Z是CH2；
g.R7和R8与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000341
或羰基；
h.R9和R10与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000342
或羰基；
i.R9和R11与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
j.R11和R12与它们所附接的碳一起形成3至6元碳环螺环；含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至6元杂环螺环；
Figure FDA0004238079170000343
或羰基；
k.R7和R9与它们所附接的原子一起形成4至8元碳环或含有1或2个独立地选自N、O和S的杂原子的4至8元杂环；并且R10不是氢；
l.R7和R11与它们所附接的原子一起形成1或2个碳桥；
m.R22被至少三个OR30基团取代；
n.R23是糖；
o.R3和R4中的至少一者是-SR30或C(O)R31；
p.R3和R4组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的咪唑；或任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30和氧代基的取代基取代的二氢咪唑；或
q.R27是
Figure FDA0004238079170000351
并且/>
Figure FDA0004238079170000352
中的R30和R4与每一者所附接的N和O原子以及所述N和O原子所附接的碳原子一起组合形成任选地被1、2或3个独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和-OR30的取代基取代的噁二唑；
其中对于式XIV的化合物，满足以下中的至少一者：
a.X1是O或N(R30)；
b.R14不是氢；
c.R1不是氢；
d.R2不是氢；
e.R3不是氢；或者
f.R4不是氢。
9.如权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R5和R6与它们所附接的碳一起是
Figure FDA0004238079170000353
10.如权利要求1-9所述的化合物，其中R5是甲基，并且R6是H。
11.如权利要求1-9所述的化合物，其中R5是H，并且R6是H。
12.如权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中每个m均独立地为0或1。
13.如权利要求1-12中任一项所述的化合物，其中Z是C(O)。
14.如权利要求1-13中任一项所述的化合物，其中X1是S。
15.如权利要求1-14中任一项所述的化合物，其中X2是键。
16.如权利要求1-15中任一项所述的化合物，其中X3是C(R17)。
17.如权利要求1-16中任一项所述的化合物，其中X4是N。
18.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中X5是C。
19.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中X5是Si。
20.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中X5是S，并且R9和R10不存在。
21.如权利要求1-20中任一项所述的化合物，其中X6是
Figure FDA0004238079170000361
22.如权利要求1-21中任一项所述的化合物，其中X7是O。
23.如权利要求1-27中任一项所述的化合物，其中X8是CH并且X9是N。
24.如权利要求1-23中任一项所述的化合物，其中X11和X12两者都为CH。
25.如权利要求1-23中任一项所述的化合物，其中X11和X12中的一者是CH，并且另一者是N。
26.如权利要求1-25中任一项所述的化合物，其中R1和R2独立地选自氢、卤素、-OR30、-SR30、-N(R30)2和C1-C6烷基。
27.如权利要求1-25中任一项所述的化合物，其中R1和R2均为氢。
28.如权利要求1-27中任一项所述的化合物，其中R3和R4均为氢。
29.如权利要求1-28中任一项所述的化合物，其中R9和R11与它们所附接的原子一起组合形成
Figure FDA0004238079170000371
30.如权利要求1-28中任一项所述的化合物，其中R9和R10与它们所附接的碳一起形成
Figure FDA0004238079170000372
其中R32是氟。
31.如权利要求1-29中任一项所述的化合物，其中R10选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31和-S(O)2R31，除氢和卤素以外的每个R10均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代。
32.如权利要求1-29中任一项所述的化合物，其中R10选自碳环、芳基和杂芳基，所述碳环、芳基和杂芳基中的每一者均任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基、硝基和叠氮基的取代基取代。
33.如权利要求1-29中任一项所述的化合物，其中R10是氢、甲基、叠氮基甲基、-OR30或环烷基。
34.如权利要求1-29中任一项所述的化合物，其中R9和R10与它们所附接的碳原子一起是
Figure FDA0004238079170000373
或者R9和R10组合形成螺环；或者R9和R10与它们所附接的碳一起形成环丙基，所述环丙基任选地被一个或多个卤素取代。
35.如权利要求1-34中任一项所述的化合物，其中R12是氢。
36.如权利要求1-35中任一项所述的化合物，其中R8是氢。
37.如权利要求1-36中任一项所述的化合物，其中R13是氢、C1-C6烷基或OH；或者R13和R26与它们所附接的原子一起形成任选地被R27取代的杂环；或者R13与其所附接的氮原子一起被-O-替代。
38.如权利要求1-37中任一项所述的化合物，其中R13′是氢、C1-C6烷基，或者R13′和R14与它们所附接的原子一起组合形成含有一个N的5或6元杂环。
39.如权利要求1-38中任一项所述的化合物，其中R13″是氢。
40.如权利要求1-39中任一项所述的化合物，其中R14是氢、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基或-OR30。
41.如权利要求40所述的化合物，其中R14是-O-苯基。
42.如权利要求1-41中任一项所述的化合物，其中R15是氢、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基或-OR30。
43.如权利要求42所述的化合物，其中R15是-O-苯基。
44.如权利要求1-43中任一项所述的化合物，其中R16是氢、C1-C6烷基、卤素、C1-C6卤代烷基或-OR30。
45.如权利要求44所述的化合物，其中R16是-O-苯基。
46.如权利要求1-45中任一项所述的化合物，其中R17是氢。
47.如权利要求1-46中任一项所述的化合物，其中R18是氢。
48.如权利要求1-47中任一项所述的化合物，其中R19选自氢、C1-C6烷基、C5-C10双环碳环、C4-C6杂环、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-N(R30)2、-(CH2)n-R33和
Figure FDA0004238079170000391
49.如权利要求1-48中任一项所述的化合物，其中R20选自氢、C1-C6烷基、C5-C10双环碳环、C4-C6杂环、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-N(R30)2、-(CH2)n-R33和
Figure FDA0004238079170000392
50.如权利要求1-49中任一项所述的化合物，其中R21是C1-C6卤代烷基；-O-C1-C6卤代烷基；苯基，其任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代；或者是杂芳基，其任选地被1、2、3或4个独立地选自SF5、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代。
51.如权利要求50所述的化合物，其中R21连同其所附接的碳一起是
Figure FDA0004238079170000393
52.如权利要求1-51中任一项所述的化合物，其中R22是-C1-C6烷基-R23、双环环烷基-R23、-杂芳基-R23或-碳环-R23，其中R22任选地被1、2、3或4个独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、C1-C6卤代烷基、-OR30、-SR30、-N(R30)2、-C(O)R31、-S(O)R31、-S(O)2R31、杂环、芳基、杂芳基、氰基和硝基的取代基取代。
53.如权利要求1-52中任一项所述的化合物，其中R23是-OR30。
54.如权利要求1-53中任一项所述的化合物，其中R25是氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR30、SF5、S-甲基氨亚基替磺酰基或甲基次膦酰基。
55.如权利要求1-54所述的化合物，其中R25是-O-苯基。
56.如权利要求1-55中任一项所述的化合物，其中R26选自：
Figure FDA0004238079170000401
57.如权利要求1-56中任一项所述的化合物，其中R27是
Figure FDA0004238079170000402
58.一种化合物，其选自表1的化合物中的任一种化合物或其药学上可接受的盐。
59.一种药物组合物，其包含权利要求1-58中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
60.一种治疗补体介导的病症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-59中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
61.如权利要求60所述的方法，其中所述受试者是人。
62.如权利要求60或61所述的方法，其中所述病症是由C1s介导的。
63.如权利要求60-62中任一项所述的方法，其中所述病症是C3肾小球病、眼科病症、年龄相关性黄斑变性(AMD)、阵发性夜间血红蛋白尿、血管性水肿、遗传性血管性水肿、自身免疫性溶血性贫血或冷凝集素疾病。
64.如权利要求60-62中任一项所述的方法，其中所述病症选自遗传性血管性水肿1型、遗传性血管性水肿2型、创伤、炎症、脓毒症、多器官功能不全综合征、内毒素血症、终末期肾脏疾病、肾衰竭、移植体功能延迟、缺血再灌注损伤、视神经脊髓炎、普通可变型免疫缺陷、抗体介导的排斥、移植体排斥、哮喘、过敏性哮喘、血管神经性水肿、急性ACE诱导性血管性水肿、肾移植和急性肾损伤。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023069301A1 (en) * 2021-10-18 2023-04-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of complement factor d inhibitor for treatment of lupus nephritis and immunoglobulin a nephropathy
TW202345806A (zh) 2022-03-31 2023-12-01 美商艾伯維有限公司 噻唑并〔５，４－ｂ〕吡啶ｍａｌｔ－１抑制劑
CN114605310B (zh) * 2022-04-09 2024-05-07 都创(上海)医药科技股份有限公司 一种氮杂五元环并三元环羧酸酯衍生物及其盐的合成方法
TW202404950A (zh) * 2022-04-21 2024-02-01 大陸商上海先通生物科技有限公司 纖維母細胞活化蛋白(fap)抑制劑
CN114788830B (zh) * 2022-06-08 2024-01-23 东阳市人民医院 一种能够抑制弓形虫增殖的小分子抑制剂的应用
CN115318267B (zh) * 2022-10-17 2022-12-09 南通特乃博高新材料有限公司 一种小孔活性氧化铝粉的制备方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7193065B2 (en) * 2001-07-13 2007-03-20 Roche Diagnostics Operations, Inc. Protease inhibitor conjugates and antibodies useful in immunoassay
US7385066B2 (en) * 2005-03-16 2008-06-10 Janssen Pharmaceutica N.V. Thiophene sulfoximines, compositions thereof, and methods of treating complement-mediated diseases and conditions
KR20160116018A (ko) * 2014-02-25 2016-10-06 아칠리온 파르마세우티칼스 인코포레이티드 보체 매개 질환의 치료를 위한 아미드 화합물
AU2020245434A1 (en) * 2019-03-22 2021-09-30 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compounds for the treatment of complement mediated disorders

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