CN116425735A - 2,4-二苯胺嘧啶衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种如通式Ⅰ所示的2,4‑二苯胺嘧啶衍生物或其旋光异构体，对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐或酯：
Description
技术领域
本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，涉及一种2,4-二苯胺嘧啶衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
癌症转移是癌细胞远离原发部位继续生长转移到远处组织器官继而形成新病灶的过程，是恶性肿瘤的主要生物学特征之一。具有不同程度侵袭/转移能力的肿瘤细胞是临床治疗癌症的主要障碍，在超过90％的病例中，癌细胞的转移扩散是导致患者死亡和预后差的重要原因。令人遗憾的是，对于转移性肿瘤，目前临床上尚缺乏有效的治疗和干预手段。
黏附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是肿瘤微环境中生长因子受体和整合素介导信号转导的多功能关键调节因子，可通过其激酶活性和支架功能调控肿瘤细胞的黏附、存活、增殖和迁移过程。FAK激酶抑制剂通过作用于选择性插入FAK的ATP结合口袋与FAK中心激酶区域结合，抑制FAK关键位点的磷酸化。迄今为止，已有多种FAK激酶抑制剂被报道具有良好的体内外抗肿瘤活性，有些已进入临床前或临床研究。临床研究结果表明这些激酶抑制剂的单药人体试验疗效不佳，联合用药能协同增强两种药物的抗癌作用。多种FAK激酶抑制剂临床前研究数据显示此类抑制剂虽具有优秀的抑制激酶活性的能力，但往往对FAK表达无法产生明显的影响。靶向FAK的PROTAC能同时水解FAK蛋白及抑制FAK激酶活性，具有纳摩尔级别的抑癌活性，动物模型给药都显示出优于小分子激酶抑制剂的抑癌能力，但其生物利用度低、难成药的缺陷，目前没有PROTAC进入临床研究，无法证实同时抑制FAK激酶及表达的临床试验疗效。
NO作为一种气体信号分子，由L-精氨酸、NADPH和O2等在人体内经一氧化氮合酶(NOS)作用下生成，在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着重要作用。在该过程中，高浓度NO通过自身介导巨噬细胞的杀肿瘤作用、产生自由基损伤DNA、影响细胞代谢、抑制血小板聚集等抗肿瘤作用机制抑制肿瘤的生长。值得注意的一点是，高浓度NO可通过激活p53等表达而诱导肿瘤细胞发生凋亡，同时p53上调已被证明是降低FAK表达的有效途径。因此NO的引入不仅能增强FAK的激酶活性，也具有在一定程度上抑制FAK表达的可能性。呋咱氮氧化合物(furoxans)作为一类重要的NO供体，在体内经酶或非酶作用释放NO，常用于与其他抗肿瘤药物或者其活性片段进行缀合，产生高水平的NO，二者协同增效发挥抗肿瘤活性。在此基础上，一种利用NO供体和FAK抑制剂协同干预TNBC转移的药物研究新策略应运而生。
发明内容
本发明的目的在于提供一种2,4-二苯胺嘧啶衍生物，其为一种包含NO供体片段的新型FAK激酶抑制剂，该类化合物可在保持FAK激酶抑制活性的基础上释放信号分子NO，确保FAK抑制剂与NO协同发挥抗肿瘤增殖、侵袭及转移作用。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：
第一方面，本发明要求保护通式Ⅰ所示的2,4-二苯胺嘧啶衍生物或其旋光异构体，对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐或酯：
其中：L选自：C1-C12直链或支链烷烃、取代的C1-C12直链或支链烷烃、C2-C6炔烃、取代的C2-C6炔烃、C2-C6烯烃、取代的C2-C6烯烃、C3-C8环烷烃、取代的C3-C8环烷烃、苯环、取代苯环；
所述取代的C1-C12直链或支链烷烃、取代的C2-C6炔烃、取代的C2-C6烯烃、取代的C3-C8环烷烃和取代苯环中的取代基选自：C1-C6直链或支链烷烃、卤素、氨基、羧基、苯基、苄基、苯基氧基、＝O、卤代烷基、羟基、烷氧基、芳基烷基、环烷基、烷基氨基。
在一些实施例中，所述L选自：C3-C12直链烷烃、取代的C3-C12直链烷烃、C2-C4炔烃、取代的C2-C4炔烃、C2-C4烯烃、取代的C2-C4烯烃、取代的C3-C6环烷烃；
所述取代的C3-C12直链烷烃、取代的C2-C4炔烃、取代的C2-C4烯烃、取代的C3-C6环烷烃和取代苯环中的取代基为1-3个，取代基选自：C1-C4烷烃。
在一些实施例中，所述取代的C3-C6环烷烃和取代苯环中的取代基为1-2个，所述取代的C3-C6环烷烃和取代苯环中的2个取代基的取代位置在间位或者对位。
在一些实施例中，所述L选自：
在一些实施例中，所述2,4-二苯胺嘧啶衍生物选自下列化合物：
4-(3-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丙氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ1)
4-(4-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丁氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ2)
4-(5-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)戊氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ3)
4-(6-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)己氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ4)
4-(7-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)庚氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ5)
4-(8-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)辛氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ6)
4-(9-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)壬氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ7)
4-(10-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)癸氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ8)
4-(11-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)十一烷氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ9)
4-(12-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)十二烷氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ10)
4-(3-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)-2,2-二甲基丙氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ11)
4-(3-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)-2-甲基丙氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ12)
4-(3-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丁氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ13)
4-((4-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丁-2-炔-1-基)氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ14)
4-((4-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丁-2-烯-1-基)氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ15)
4-((4-((2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)甲基)环己基)甲氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ16)
4-((4-((2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)甲基)苯甲基)氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ17)
4-(4-((2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)甲基)苯氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ18)
4-(3-((2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)甲基)苯氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ19)
4-(4-(2-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)乙基)苯氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ20)
下面药理实验中化合物的代号等同于此处代号所对应的化合物。
第二方面，本发明的另一目的在于提供本发明通式Ⅰ所述2,4-二苯胺嘧啶衍生物的制备方法，包括如下步骤：
A、化合物Ⅱ与化合物Ⅲ在溶剂状态、一定温度下加酸反应得到化合物Ⅳ；
B、化合物Ⅳ与化合物Ⅴ在溶剂状态、加条件试剂，反应得到化合物Ⅰ。
本发明通式Ⅰ所述2,4-二苯胺嘧啶衍生物的合成路线如下：
其中：L定义如上。
在一些实施例中，所述步骤A中，溶剂为异丙醇、乙醇中的一种或两种；酸为盐酸；反应温度为90-100℃；
所述步骤B中，溶剂为无水N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的一种或两种；条件试剂为碳二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶中的一种或两种；反应温度为室温。
第三方面，本发明要求保护一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的2,4-二苯胺嘧啶衍生物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐及可药用的载体、佐剂或媒剂。
第四方面，所述的2,4-二苯胺嘧啶衍生物或其溶剂合物在制备预防和/或治疗肿瘤疾病的药物中的应用。
第五方面，所述的2,4-二苯胺嘧啶衍生物或其溶剂合物在制备NO供体型FAK激酶抑制剂中的应用。
第六方面，所述的2,4-二苯胺嘧啶衍生物或其溶剂合物在制备释放外源性高浓度NO强化药物中的应用。
本发明的有益效果：
本发明基于药物拼合原理首次设计、合成了一类NO供体型FAK激酶抑制剂，既是一种新一代的NO供体型化合物，也是一种新型FAK激酶抑制剂。不仅能通过抑制FAK激酶活性干涉癌细胞在体内外增殖、侵袭及转移的过程，也能同时释放外源性高浓度NO强化药物的抑癌能力。这类整合型前药分子具有较高的肿瘤特异性，使得FAK激酶抑制剂和NO在肿瘤细胞内特异性释放，避免了其单独使用时的低靶向性所造成的对正常细胞的毒副作用，解决了联合用药缺乏选择性及药物疗效可能降低的问题。含有目标化合物的药用组合物以及它们的医药用途，特别是预防和/或治疗肿瘤等疾病中，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明的2,4-二苯胺嘧啶衍生物抑制MDA-MB-231细胞的增殖情况；
图2为化合物Ⅰ6与FAK的结合模式(PDB ID:2JKK)；
图3为化合物Ⅰ6在体外抑制MDA-MB-231细胞的侵袭情况；
图4为化合物Ⅰ6抑制MDA-MB-231细胞的体外迁移情况；
图5为化合物Ⅰ6、TAE226和Ⅰ6(PTIO)在MDA-MB-231细胞中抑制局灶性粘附(FAs)和应力纤维(SFs)的形成情况；
图6为在MDA-MB-231细胞中，Ⅰ6对FAK及其下游分子的影响；
图7为化合物Ⅰ6体外诱导TNBC细胞凋亡情况；
图8为探针法测定化合物的NO释放情况以及化合物Ⅰ6，Ⅳ，Ⅴ6对MDA-MB-231细胞的抑制情况,；
图9为在MBA-MD-231肺转移实验模型中，化合物Ⅰ6的抑癌效果；
图10为化合物Ⅰ6在体内抑制三阴性乳腺癌转移结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1
2,4-二苯胺嘧啶衍生物的合成
2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酸(编号：Ⅳ)
将Ⅱ(3g,10mmol)和对氨基苯乙酸(1.9g,13mmol)溶于异丙醇(50ml)中，在0℃下加入12N HCl(30滴)，95℃搅拌18h，反应液冷却至室温，过滤，用异丙醇清洗滤饼，得到黄色固体盐酸Ⅳ(98％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.05(s,1H),10.01(s,1H),8.88(q,J＝4.5Hz,1H),8.61(d,J＝8.1Hz,1H),8.32(s,1H),7.80(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),7.56–7.50(m,2H),7.50–7.45(m,1H),7.25–7.21(m,2H),7.19(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),3.56(s,2H),2.81(d,J＝4.5Hz,3H).
4-(3-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丙氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ1)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ1(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(53％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.61(s,1H),9.46(s,1H),8.76(m,J＝6.1,5.2Hz,2H),8.22(s,1H),8.04–7.98(m,2H),7.91–7.84(m,1H),7.76(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),7.74–7.69(m,2H),7.60(m,J＝8.2Hz,2H),7.52–7.45(m,1H),7.19–7.15(m,2H),7.13(dd,J＝7.5,1.2Hz,1H),4.44(t,J＝6.1Hz,2H),4.17(t,J＝6.3Hz,2H),3.64(s,2H),2.81(d,J＝4.5Hz,3H),2.10(p,J＝6.2Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.83,169.20,159.32,159.20,157.53,155.91,140.23,139.06,137.60,136.63,131.92,130.49,129.96,128.78,128.52,127.42,123.27,122.25,121.65,121.03,110.94,105.75,68.66,61.06,27.82,26.80,8.94.HRMS(ESI)calcd for C31H28ClN7O8S[M+H]+:694.1465.
4-(4-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丁氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ2)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ2(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(51％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),9.47(s,1H),8.77(m,J＝4.4Hz,2H),8.21(s,1H),8.04–7.98(m,2H),7.86(m,J＝7.5Hz,1H),7.77(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.72(m,J＝7.9Hz,2H),7.64(m,J＝8.2Hz,2H),7.53–7.45(m,1H),7.19(m,J＝8.3Hz,2H),7.14(dd,J＝7.6Hz,1H),4.40(t,J＝6.1Hz,2H),4.11(t,J＝6.5Hz,2H),3.37(s,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H),1.80(tt,2H),1.69(tt,J＝11.6,5.7Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.89,169.38,159.27,158.16,155.46,155.01,139.80,139.48,137.67,136.55,131.88,130.45,129.74,128.76,128.44,127.99,122.37,121.90,121.18,120.06,110.91,105.48,72.57,65.86,26.78,25.05,24.96,15.21.HRMS(ESI)calcd for C32H30ClN7O8S[M+H]+:708.1592.
4-(5-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)戊氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ3)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ3(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(54％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),9.46(s,1H),8.77(m,J＝7.2,6.0Hz,2H),8.20(s,1H),8.01(m,J＝7.2,1.3Hz,2H),7.93–7.85(m,1H),7.78–7.71(m,3H),7.61(d,J＝8.2Hz,2H),7.53–7.44(m,1H),7.17(d,J＝8.8Hz,2H),7.13(dd,J＝8.1Hz,1H),4.35(t,J＝6.3Hz,2H),4.07(t,J＝6.5Hz,2H),3.61(s,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H),1.75–1.70(m,2H),1.66–1.59(m,2H),0.94–0.81(m,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.91,169.37,169.21,159.28,158.16,155.44,155.01,139.79,139.44,137.68,136.57,132.17,132.04,131.98,131.87,130.46,129.73,129.13,128.75,128.44,128.04,122.37,121.88,121.17,120.07,110.89,105.56,71.74,64.42,28.02,27.47,26.78,22.00,13.23.HRMS(ESI)calcd forC33H32ClN7O8S[M+H]+:722.1753.
4-(6-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)己氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ4)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ4(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(51％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),9.46(s,1H),8.79–8.73(m,2H),8.20(s,1H),8.00(d,J＝7.8Hz,2H),7.87(t,J＝7.5Hz,1H),7.74(dt,J＝15.4,7.8Hz,3H),7.63(d,J＝8.0Hz,2H),7.49(t,J＝8.0Hz,1H),7.16(dd,J＝21.8,7.5Hz,4H),4.34(t,J＝6.2Hz,2H),4.05(t,J＝6.6Hz,2H),3.61(s,2H),2.82(d,J＝4.4Hz,3H),1.71(t,J＝6.7Hz,2H),1.57(q,J＝6.7Hz,2H),1.33(d,J＝6.2Hz,4H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ171.91,169.37,159.29,158.17,155.45,155.03,139.79,139.45,137.71,136.55,131.87,130.44,129.72,128.74,128.44,128.08,122.37,121.88,121.18,120.07,110.87,105.57,71.80,64.52,28.45,28.19,25.29,25.03,23.08,15.21.HRMS(ESI)calcd for C34H34ClN7O8S[M+H]+:736.1920.
4-(7-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)庚氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ5)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ5(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(56％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),9.46(s,1H),8.76(dd,J＝9.6,5.5Hz,2H),8.20(s,1H),8.03–7.97(m,2H),7.92–7.85(m,1H),7.82–7.70(m,3H),7.61(d,J＝8.2Hz,2H),7.52–7.45(m,1H),7.20–7.06(m,3H),4.34(t,J＝6.3Hz,2H),4.05(t,J＝6.5Hz,2H),3.61(s,2H),2.81(d,J＝4.5Hz,3H),1.70(h,J＝6.6Hz,2H),1.57(t,J＝6.8Hz,2H),1.29(dt,J＝8.7,4.2Hz,6H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ171.90,169.37,159.30,158.16,155.44,155.05,139.78,139.44,137.70,136.58,131.88,130.47,129.71,128.75,128.73,128.45,128.09,122.39,121.89,121.18,120.05,110.87,105.35,71.87,64.57,28.51,28.48,28.19,25.64,25.35,23.09,14.77.HRMS(ESI)calcd for C35H36ClN7O8S[M+H]+:750.2065.
4-(8-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)辛氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ6)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ6(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(53％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),9.47(s,1H),8.76(q,J＝6.8,5.8Hz,2H),8.21(s,1H),8.04–7.97(m,2H),7.93–7.84(m,1H),7.74(dt,J＝8.4,7.1Hz,3H),7.62(d,J＝8.3Hz,2H),7.53–7.44(m,1H),7.18–7.10(m,3H),4.34(t,J＝6.3Hz,2H),4.04(t,J＝6.6Hz,2H),3.60(s,2H),2.81(d,J＝4.5Hz,3H),1.70(p,J＝6.5Hz,2H),1.56(q,J＝6.7Hz,2H),1.33–1.23(m,8H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.89,169.36,159.31,158.15,155.44,155.04,140.53,136.57,131.88,130.46,129.70,128.73,128.42,127.74,122.79,121.87,121.16,120.06,110.88,105.55,73.02,64.59,28.96,28.86,28.55,28.27,25.69,25.37,23.09,15.70.HRMS(ESI)calcd for C36H38ClN7O8S[M+H]+:764.2255.
4-(9-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)壬氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ7)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ7(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(48％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),9.47(s,1H),8.76(q,J＝4.7Hz,2H),8.21(s,1H),8.03–7.97(m,2H),7.88(t,J＝7.5Hz,1H),7.79–7.70(m,3H),7.62(d,J＝8.2Hz,2H),7.52–7.45(m,1H),7.20–7.07(m,3H),4.34(t,J＝6.4Hz,2H),4.03(t,J＝6.5Hz,2H),3.60(s,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H),1.70(p,J＝6.5Hz,2H),1.55(p,J＝6.6Hz,2H),1.25–1.20(m,10H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ171.87,169.36,159.31,158.17,155.44,155.05,139.80,139.44,137.71,136.56,131.87,130.45,129.69,128.72,128.44,128.09,122.37,121.88,121.16,120.06,110.87,105.55,71.90,64.58,29.28,28.99,28.88,28.59,28.28,25.75,25.43,22.56,14.41.HRMS(ESI)calcd for C37H40ClN7O8S[M+H]+:778.2437.
4-(10-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)癸氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ8)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ8(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(51％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.65(s,1H),9.47(s,1H),8.77(q,J＝4.6Hz,2H),8.21(s,1H),8.03–7.97(m,2H),7.92–7.85(m,1H),7.79–7.70(m,3H),7.62(d,J＝8.2Hz,2H),7.52–7.44(m,1H),7.19–7.11(m,3H),4.34(t,J＝6.3Hz,2H),4.03(t,J＝6.5Hz,2H),3.59(s,2H),2.81(d,J＝4.4Hz,3H),1.74–1.65(m,2H),1.54(t,J＝6.8Hz,2H),1.24–1.20(m,12H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ171.86,169.36,159.32,158.18,155.44,155.04,139.81,139.44,137.72,136.57,131.87,130.46,129.67,128.72,128.44,128.09,122.37,121.88,121.15,120.06,110.88,105.55,71.90,64.57,29.33,29.31,29.09,28.95,28.59,28.30,25.79,25.43,22.57,14.41.HRMS(ESI)calcd for C38H42ClN7O8S[M+H]+:792.2585.
4-(11-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)十一烷氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ9)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ9(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(49％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),9.47(s,1H),8.80–8.73(m,2H),8.22(d,J＝1.2Hz,1H),8.03–7.97(m,2H),7.89(t,J＝7.4Hz,1H),7.75(q,J＝7.4Hz,3H),7.62(d,J＝8.2Hz,2H),7.48(t,J＝7.9Hz,1H),7.17–7.03(m,4H),4.35(t,J＝6.3Hz,2H),4.02(t,J＝6.5Hz,2H),3.59(s,2H),2.81(d,J＝4.4Hz,3H),1.69(q,J＝6.8Hz,2H),1.53(d,J＝7.5Hz,2H),1.22(d,J＝12.4Hz,14H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.94,169.36,159.53,159.33,158.17,155.43,139.79,139.43,137.70,136.58,131.88,130.47,129.67,128.73,128.44,128.10,123.92,122.38,121.14,120.05,110.27,105.52,72.09,64.55,29.42,29.39,29.34,29.12,28.96,28.59,28.30,26.78,25.78,25.45.HRMS(ESI)calcd forC39H44ClN7O8S[M+H]+:806.2747.
4-(12-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)十二烷氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ10)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ10(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(46％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.66(s,1H),9.48(s,1H),8.80–8.73(m,2H),8.22(s,1H),8.04–7.97(m,2H),7.89(td,J＝7.3,1.3Hz,1H),7.80–7.70(m,3H),7.63(d,J＝1.8Hz,1H),7.53–7.44(m,1H),7.17–7.06(m,3H),4.35(t,J＝6.3Hz,2H),4.02(t,J＝6.5Hz,3H),3.59(s,2H),2.81(d,J＝4.5Hz,4H),1.71(t,J＝7.1Hz,2H),1.53(t,J＝6.8Hz,3H),1.22–1.15(m,16H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.85,169.36,159.33,157.77,155.43,155.05,139.81,139.44,137.70,136.57,131.87,130.46,129.67,128.73,128.44,128.08,124.83,122.37,120.03,119.47,110.88,105.53,71.90,64.54,29.47,29.43,29.39,29.11,28.98,28.58,28.30,26.78,25.78,25.44,22.58,14.42.HRMS(ESI)calcd for C40H46ClN7O8S[M+H]+:820.2885.
4-(3-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)-2,2-二甲基丙氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ11)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ11(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(59％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),9.46(s,1H),8.78(dd,J＝20.0,6.3Hz,2H),8.22(s,1H),8.01–7.96(m,2H),7.90–7.83(m,1H),7.78(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.75–7.67(m,2H),7.60(d,J＝8.2Hz,2H),7.51–7.44(m,1H),7.18–7.09(m,3H),4.12(s,2H),3.94(s,2H),3.63(s,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H),0.97(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.67,169.36,159.25,158.10,155.43,155.02,140.35,139.09,137.77,136.61,132.24,130.57,129.70,128.54,128.46,127.83,122.37,121.88,121.17,119.77,110.67,105.58,75.16,68.63,29.87,29.52,25.95,20.82,8.21.HRMS(ESI)calcd for C33H32ClN7O8S[M+H]+:722.1798.
4-(3-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)-2-甲基丙氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ12)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ12(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(51％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),9.47(s,1H),8.77(q,J＝4.5Hz,2H),8.22(s,1H),8.04–7.97(m,2H),7.87(t,J＝7.5Hz,1H),7.77(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.74–7.69(m,2H),7.62(d,J＝8.3Hz,2H),7.53–7.44(m,1H),7.19–7.08(m,3H),4.30(d,J＝5.8Hz,2H),4.06(d,J＝6.1Hz,2H),3.64(s,2H),2.82(d,J＝4.4Hz,3H),2.31(dp,J＝13.8,7.4,6.9Hz,1H),0.98(d,J＝6.9Hz,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.79,169.37,159.24,158.13,155.44,154.63,139.79,139.51,137.70,136.59,131.88,130.51,129.72,128.69,128.45,127.86,122.38,121.89,121.19,119.91,111.25,105.58,72.40,65.40,29.27,25.88,23.18,21.12.HRMS(ESI)calcd for C32H30ClN7O8S[M+H]+:708.1664.
4-(3-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丁氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ13)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ13(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(53％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),9.46(s,1H),8.77(q,J＝5.7,5.1Hz,2H),8.22(s,1H),8.02–7.94(m,2H),7.92–7.82(m,1H),7.77(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.74–7.69(m,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.54–7.44(m,1H),7.18–7.08(m,3H),4.18–4.07(m,4H),3.95(s,2H),3.62(s,2H),3.08–3.00(m,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.62,169.37,159.22,158.10,155.43,155.01,139.80,139.52,137.83,136.60,131.86,129.93,129.66,128.49,128.44,127.81,122.36,121.88,121.18,119.73,110.64,105.58,74.64,68.70,67.31,28.83,26.78,11.24.HRMS(ESI)calcd for C32H30ClN7O8S[M+H]+:708.1649.
4-((4-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丁-2-炔-1-基)氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ14)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ14(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(62％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),9.48(s,1H),8.76(d,J＝4.7Hz,1H),8.22(s,1H),8.04–7.99(m,2H),7.89(t,J＝7.6Hz,1H),7.79–7.71(m,3H),7.63(d,J＝8.2Hz,2H),7.54–7.47(m,1H),7.21–7.13(m,3H),5.25(s,J＝1.8Hz,2H),4.87(s,J＝1.8Hz,2H),3.70(s,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ171.21,169.37,158.48,158.16,155.46,155.06,147.54,147.33,139.76,139.58,137.42,136.70,131.92,130.52,129.84,128.83,128.45,127.48,122.44,121.91,120.09,119.47,111.16,105.60,85.07,76.93,67.46,59.53,29.51,26.78.HRMS(ESI)calcd for C32H26ClN7O8S[M+H]+:704.1313.
4-((4-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)丁-2-烯-1-基)氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ15)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ15(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(64％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),9.47(s,1H),8.81–8.72(m,2H),8.22(s,1H),8.05–7.98(m,2H),7.93–7.84(m,1H),7.76(d,J＝7.4Hz,2H),7.75–7.65(m,2H),7.62(d,J＝8.3Hz,2H),7.54–7.45(m,1H),7.25–7.10(m,3H),5.94–5.80(m,1H),5.06(d,J＝4.8Hz,2H),4.77–4.71(m,2H),4.20–4.08(m,1H),3.65(s,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H).13CNMR(101MHz,DMSO)δ171.27,170.52,158.99,158.16,155.45,155.07,139.76,139.49,137.56,136.62,132.18,132.06,131.90,130.45,129.79,128.78,128.44,127.80,122.42,121.89,121.20,120.07,111.14,105.58,66.94,60.67,28.81,27.58.HRMS(ESI)calcd forC32H28ClN7O8S[M+H]+:706.1504.
4-((4-((2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)甲基)环己基)甲氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ16)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ16(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(57％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),9.48(d,J＝2.9Hz,1H),8.77(q,J＝6.1,5.3Hz,2H),8.22(s,1H),8.04–7.96(m,2H),7.87(dd,J＝8.7,6.5Hz,1H),7.74(td,J＝8.5,8.0,5.2Hz,3H),7.63(dd,J＝8.6,3.1Hz,2H),7.49(td,J＝8.2,3.2Hz,1H),7.22–7.15(m,3H),4.28(d,J＝6.9Hz,1H),4.18(d,J＝5.6Hz,2H),4.01(d,J＝7.2Hz,1H),3.89(d,J＝6.4Hz,2H),3.63(s,2H),2.82(d,J＝4.4Hz,3H),1.75–1.67(m,2H),1.50–1.39(m,2H),0.99(dt,J＝13.6,8.7Hz,2H),0.82(dd,J＝26.3,7.9Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ172.74,168.94,158.86,158.15,155.44,155.26,153.21,139.78,139.44,137.73,136.56,131.36,130.48,129.74,129.11,128.46,127.67,122.40,121.52,121.00,119.45,110.81,105.72,75.97,72.84,69.15,66.29,30.58,28.50,28.05,26.79,25.07,24.57.HRMS(ESI)calcdfor C36H36ClN7O8S[M+H]+:762.2107.
4-((4-((2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)甲基)苯甲基)氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ17)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ17(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(57％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),9.48(s,1H),8.76(q,J＝6.0,5.2Hz,2H),8.22(s,1H),8.01–7.96(m,2H),7.87(t,J＝7.5Hz,1H),7.76(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.71(t,J＝7.9Hz,2H),7.63(d,J＝8.2Hz,2H),7.49(d,J＝7.1Hz,1H),7.46–7.40(m,4H),7.21(d,J＝8.4Hz,2H),7.17–7.11(m,1H),5.47(s,2H),5.17(s,2H),3.71(s,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ171.75,169.37,159.11,158.15,155.46,155.03,139.75,139.50,137.59,137.33,136.60,134.47,131.90,130.48,129.84,128.86,128.75,128.44,127.86,124.83,124.61,122.43,121.92,121.23,120.07,119.47,111.02,105.57,72.58,65.83,31.66,30.62.HRMS(ESI)calcd for C36H30ClN7O8S[M+H]+:756.1754.
4-(4-((2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)甲基)苯氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ18)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ18(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(56％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),9.47(s,1H),8.76(t,J＝6.0Hz,2H),8.23(s,1H),8.07–8.00(m,2H),7.91(q,J＝8.5,7.9Hz,1H),7.80–7.73(m,3H),7.62(d,J＝8.2Hz,2H),7.49(t,J＝3.4Hz,1H),7.48–7.40(m,4H),7.19(d,J＝8.6Hz,2H),7.14(t,J＝7.5Hz,1H),5.16(s,2H),3.71(s,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ171.75,169.37,158.88,158.16,155.46,155.06,152.72,139.75,139.50,137.37,136.73,135.10,132.06,131.90,130.50,130.19,129.83,129.13,129.02,128.44,127.84,122.44,121.92,121.22,120.21,120.07,111.74,108.19,65.82,28.83,26.79.HRMS(ESI)calcdfor C35H28ClN7O8S[M+H]+:742.1510.
4-(3-((2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)甲基)苯氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ19)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ19(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(57％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),9.47(s,1H),8.77(q,J＝5.9,5.3Hz,2H),8.22(d,J＝4.4Hz,1H),8.08–8.02(m,1H),7.94–7.87(m,1H),7.80–7.71(m,3H),7.65–7.59(m,2H),7.53–7.27(m,5H),7.20(d,J＝8.5Hz,2H),7.16–7.10(m,1H),5.16(s,2H),3.72(s,2H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ172.35,169.38,158.79,158.16,155.46,154.83,153.13,139.76,139.52,139.18,137.38,136.71,131.50,130.73,130.48,129.84,129.01,128.44,127.77,126.26,122.41,121.91,120.98,120.07,119.67,119.31,110.37,106.03,66.80,30.61,27.34.HRMS(ESI)calcd for C35H28ClN7O8S[M+H]+:742.1476.
4-(4-(2-(2-(4-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)乙酰氧基)乙基)苯氧基)-3-(苯磺酰基)-1,2,5-恶二唑2-氧化物(编号：Ⅰ20)
将化合物Ⅳ(0.22mmol)和化合物Ⅴ20(0.22mmol)溶于无水DMF(2ml)中，加入碳二亚胺盐酸盐(0.44mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.05mmol)，室温搅拌1-6h后，DMF用水淬灭，然后用DCM(30ml×3)提取，用饱和盐(30ml×2)洗涤，有机相用无水碳酸钠干燥，减压蒸发。用柱层析纯化得到目标化合物为白色固体(61％)。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),9.45(s,1H),8.76(q,J＝5.0Hz,2H),8.20(s,1H),8.05(d,J＝7.8Hz,2H),7.91(t,J＝7.5Hz,1H),7.76(t,J＝7.3Hz,3H),7.61(d,J＝8.1Hz,2H),7.48(t,J＝7.9Hz,1H),7.31(m,4H),7.14(t,J＝7.8Hz,3H),4.27(t,J＝6.6Hz,2H),3.60(s,2H),2.93(q,J＝6.7,5.5Hz,2H),2.82(d,J＝4.4Hz,3H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ171.74,169.37,158.99,158.17,155.46,155.02,151.19,139.78,139.44,137.44,137.03,136.70,131.90,130.97,130.50,129.77,128.99,128.44,127.90,122.40,121.89,121.20,120.13,120.07,111.64,105.58,65.01,31.66,30.62,26.78.HRMS(ESI)calcd forC36H30ClN7O8S[M+H]+:756.1649.
实施例2
本发明化合物Ⅰ1-Ⅰ20对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外抗增殖作用研究
采用MTT法对MDA-MB-231细胞进行抗增殖活性测试。TAE226作为阳性对照。以终密度(5×104Cells/mL)将细胞接种到96孔板中。24h后，用5μM测试化合物处理细胞，在37℃下孵育72h，孵育浓度不同。然后，在每孔中加入20μL MTT(5mg/mL)，继续孵育4h。最后，倒出培养液，每孔中加入150μL DMSO，溶解蓝紫色结晶甲臜，在570nm处测定吸光度。所有实验均进行三次，结果以平均值记录。抑制率(％)＝[(阴性对照组-实验组)/阴性对照组]×100％。
以TAE226为阳性对照，采用MTT法检测化合物8a-t对MDA-MB-231细胞的抑制作用，评价其体外抗三阴性乳腺癌活性。大多数被测试的化合物对MDA-MB-231细胞具有有效的抗增殖活性，在5μM浓度下，生长抑制率超过80％。一般来说，当连接体(R组)为直链脂肪烃类时，化合物比空间位阻增大或不饱和程度增大的化合物更有效。此外，化合物Ⅰ1-Ⅰ6为直链脂肪烃R基团，碳数小于8；与含衍生物的相应长链脂肪烃部分(Ⅰ7-Ⅰ10)相比，C8通常表现出更高的抑制活性。其中化合物Ⅰ3、Ⅰ5、Ⅰ6和Ⅰ12抑制MDA-MB-231细胞的增殖率大于92％，高于TAE226和其他16种化合物(图1)。
实施例3
本发明化合物Ⅰ3、Ⅰ5、Ⅰ6和Ⅰ12对不同TNBC细胞和正常细胞MCF-10A的抗增殖作用研究
采用MTT法检测化合物Ⅰ3、Ⅰ5、Ⅰ6和Ⅰ12其对MDA-MB-231、MDA-MB-157、MDA-MB-453细胞的增殖抑制作用。TAE226和9a作为阳性对照。将细胞以终密度(5×104个/mL)接种于96孔板。在24h结束时，用不同浓度的测试化合物处理细胞，并在37℃孵育72h。然后，每孔加入20μL MTT(5mg/mL)，继续孵育4h。最后，倒出培养基，每孔加入150μL DMSO，溶解蓝紫色结晶甲臜，在570nm分光光度法读取吸光度。所有实验均重复三次，将结果记录为平均值。抑制率(％)＝[(阴性对照组-实验组)/阴性对照组]×100％。采用GraphPad Prism软件计算IC50值。
选四种活性最高的化合物Ⅰ3、Ⅰ5、Ⅰ6和Ⅰ12对不同TNBC细胞(MDA-MB-453,MDA-MB-157和MDA-MB-231)的IC50值，并与TAE226进行对比(表1)。观察到这些化合物对三种癌细胞的抑制活性均强于TAE226，以及结构相近化合物9a。其中9a的结构为：
结果可知，化合物Ⅰ6的活性最强，尤其是MDA-MB-231(IC50＝0.122μM)，约为阳性药TAE226的8倍。
表1：化合物对三种三阴乳腺癌细胞MDA-MB-453、MDA-MB-157、MDA-MB-231和正常细胞MCF10A的抑制作用
实施例4
本发明化合物Ⅰ3、Ⅰ5、Ⅰ6和Ⅰ12对FAK激酶抑制活性研究
ADP-glo激酶实验筛选FAK抑制剂。5μL反应溶液包括2.6ng FAK，0.4μg/μL肽底物poly(4:1谷氨酸，酪氨酸)，25μM ATP和指定终浓度的测试化合物或阴性对照DMSO。根据制造商的说明在384孔板中执行测试。简单地说，将反应溶液在室温下孵育1h，然后加入5μLADP-glo试剂，在室温下孵育40min，以停止激酶反应并耗尽未消耗的ATP。最后，在孔中加入10μL激酶检测试剂，孵育30min，使ADP转化为ATP并产生发光信号。使用酶标仪(Flexstation 3)测量信号。使用Prism Graphpad软件计算IC50值。
表2：化合物对FAK激酶的抑制活性
说明化合物Ⅰ3、Ⅰ5、Ⅰ6和Ⅰ12对FAK激酶抑制活性与其对肿瘤的抑制作用不完全一致。
实施例5
本发明化合物Ⅰ6的分子对接研究
使用MOE 2018.01软件完成对接研究。利用Chem3D将配体转化为三维结构。下载TAE226结合的FAK激酶结构域的晶体结构(PDB:2JKQ)。我们将整个FAK酶定义为受体，并选择TAE226的结合位置作为位点球。通过OSS PyMol制备三维图像和可视化。结果如图2所示。
为了获得FAK催化激酶结构域中8f结合模式的详细信息，我们在分子操作环境(2019版)中使用共晶体结构(PDB:2JKQ)进行了分子对接研究。对接分析显示，化合物Ⅰ6恰好占据了atp结合口袋的位置，Ⅰ6与FAK的结合模式与TAE226相似。Ⅰ6和FAK的关键相互作用是由于Ⅰ6的2,4-二氨基嘧啶核心上的2-氨基与激酶铰链上的Cys502残基之间形成了二齿键。此外，Ⅰ6的芳香族官能团甲基氨甲酰部分与FAK激活环上DFG基序的Asp564残基和Asp550之间形成的氢键也有助于Ⅰ6与FAK激酶结构域的结合。
实施例6
本发明化合物Ⅴ6、Ⅳ及Ⅴ6+Ⅳ(1:1)对MDA-MB-231细胞的抗增殖作用研究
采用MTT法检测化合物Ⅰ3、Ⅰ5、Ⅰ6和Ⅰ12其对MDA-MB-231、MDA-MB-157、MDA-MB-453细胞的增殖抑制作用。TAE226作为阳性对照。将细胞以终密度(5×104个/mL)接种于96孔板。在24h结束时，用不同浓度的测试化合物处理细胞，并在37℃孵育72h。然后，每孔加入20μLMTT(5mg/mL)，继续孵育4h。最后，倒出培养基，每孔加入150μL DMSO，溶解蓝紫色结晶甲臜，在570nm分光光度法读取吸光度。所有实验均重复三次，将结果记录为平均值。抑制率(％)＝[(阴性对照组-实验组)/阴性对照组]×100％。采用GraphPad Prism软件计算IC50值。
鉴于化合物Ⅰ6由TAE226部分(Ⅳ)和苯磺酰呋喃部分(Ⅴ6)组成(图3)，我们检测了它们在体外对TNBC细胞的抑制活性。Ⅰ6对MDA-MB-231细胞的IC50值(0.126μM)显著小于单独化合物Ⅳ(1.95μM)、Ⅴ6(1.51μM)以及Ⅳ和Ⅴ6在等摩尔剂量下的组合(IC50＝1.22μM)。这些结果表明，Ⅰ6的抗增殖活性可能是由TAE226部分产生的FAK激酶抑制活性和苯磺酰呋咱部分产生NO的协同作用所致。
实施例7
本发明化合物Ⅰ3、Ⅰ5、Ⅰ6和Ⅰ12在细胞内NO生成能力研究
采用细胞消化计数法，制备浓度为5×104细胞/mL的细胞悬液，接种于6孔板。根据分组设置分别加入Ⅰ6(1、2、4μM)、Ⅰ3(4μM)、Ⅰ5(4μM)和Ⅰ12(4μM)，并设置阴性对照组。48h后，用0.25％胰酶消化收集细胞。用PBS洗涤细胞一次(以1000RPM离心5min)并将细胞浓度调整为1×106/ml。DAF-FM DA用无血清培养基按1∶1000稀释至终浓度5μM/L。收集细胞，悬浮在稀释的DAF-FM DA中，在37℃的培养箱中孵育20min。用无血清细胞培养液洗涤细胞3次，充分去除未进入细胞的DAF-FM DA。流式细胞术检测细胞内NO(Ex＝495nm；Em＝515nm)。
为了评估这些化合物的细胞内NO生成能力，并探讨其与MDA-MB-231细胞体外增殖的关系，首先使用DAF-FM DA荧光探针检测了NO释放水平。如图4A所示，化合物Ⅰ6释放NO呈剂量依赖性。此外，与阴性对照组和阳性对照组相比，含有NO供体的化合物在细胞内产生了不同水平的NO，最活性的化合物Ⅰ6释放的NO浓度最高，而活性较低的化合物产生的NO浓度相对较低(图4B)。此外，cPTIO预处理细胞会降低化合物Ⅰ6的抗增殖活性(图4C)。上述结果表明，抗增殖活性的有效性和选择性至少部分依赖于NO的释放。
实施例8
本发明化合物Ⅰ6对MDA-MB-231细胞侵袭的影响。
Transwell实验检测1、2、4μM化合物Ⅰ6对MDA-MB-231细胞运动的抑制作用。简单地说，使用不完全培养基将细胞密度调整为1×105细胞/mL。Transwell小室中加入100μL细胞悬液，下室中加入含20％FBS的培养基500μL。组织培养板在37.5％ CO2培养箱中孵育48h。然后，用0.1％结晶紫染色穿过基质胶涂层的小室的细胞。PBS冲洗干燥后，随机拍摄3张放大200倍的图像。所有实验均重复三次。
为了开发广泛的新型FAK抑制剂作为TNBC治疗药物，研究Ⅰ6对细胞迁移的影响是有价值的。为了确定Ⅰ6的体外抗转移效果，首先使用MDA-MB-231细胞进行了细胞迁移实验。我们再次选择TAE226作为阳性对照，结果显示，Ⅰ6抑制MDA-MB-231细胞侵袭呈剂量依赖性(图5A,B)，且Ⅰ6比相同浓度的TAE226更强。同时，Ⅰ3、Ⅰ5和Ⅰ12也具有明显比相同浓度的TAE226更强的抑制细胞侵袭的作用，Ⅰ1、Ⅰ2、Ⅰ4、Ⅰ13、Ⅰ14、Ⅰ15、Ⅰ16、Ⅰ17、Ⅰ20效果略差于Ⅰ6。
实施例9
本发明化合物Ⅰ6抑制MDA-MB-231细胞的迁移。
划痕实验检测化合物Ⅰ6对细胞迁移的抑制作用。将MDA-MB-231细胞在37℃的6孔板中培养直至浓度达到约80％。添加含有不同浓度化合物Ⅰ6(1、2、4μM)的新鲜培养基。在单层细胞中创建损伤线，并用PBS洗涤以去除细胞碎片。48h后显微镜下观察图像。每个实验至少进行3次。
为了评估化合物Ⅰ6对MDA-MB-231细胞迁移的抑制作用，采用细胞划痕实验。如图6所示，在划伤细胞单层48h后，未处理的MDA-MB-231细胞填充了大部分划伤区域，而Ⅰ6显著抑制了MDA-MB-231细胞的迁移，且呈剂量依赖性。Ⅰ6在8μM时迁移率为10.43％，远低于TAE226。同时，Ⅰ3、Ⅰ5和Ⅰ12也具有明显比相同浓度的TAE226更强的抑制细胞迁移的作用，Ⅰ1、Ⅰ2、Ⅰ4、Ⅰ13、Ⅰ14、Ⅰ15、Ⅰ16、Ⅰ17、Ⅰ20效果略差于Ⅰ6。
实施例10
本发明化合物Ⅰ6抑制MDA-MB-231细胞中局灶性粘连(FAs)和应激纤维(SFs)的形成。
将MDA-MB-231以1×105个细胞/孔的速度镀于含有无菌12mmΦ盖玻璃的12孔板中，并将其留CO2培养箱中过夜以便粘附。将细胞与测试化合物Ⅰ6孵育2h后，MDA-MB-231细胞样品(细胞旋浆或圆形盖片)在4％对甲醛固定液中浸泡30min或过夜以提高细胞通透性，然后在PBS中浸泡3次，每次3min。加入1％ BSA(50-100μl)并在室温下孵育20分钟。用PBS洗涤细胞3次后，盖玻片上的细胞在免疫组化湿箱中加入抗纽蛋白抗体孵育2h。再次用PBS洗涤细胞3次，然后用Alexa Fluor 488标记的抗纽蛋白抗体在暗室孵育1h，DAPI孵育30min，分别用于F-肌动蛋白和细胞核染色。然后，用荧光安装液将盖玻片安装到载玻片上。在Olympus显微镜下对5个表达区进行图像分析。
选择化合物Ⅰ6来确定可能的下游效应物(如黏附斑(focal adhesion，FAs)和应力纤维(stress fibers，SFs)等)，以了解这些化合物潜在的侵袭机制。在使用指示剂量的Ⅰ6和TAE226处理后，MDA-MB-231细胞用抗vinculin抗体染色，检测黏附斑(FAs，红色)，DAPI检测核(蓝色)，以及FITC偶联phalloidin检测F-actin应力纤维(SFs，绿色)。MDA-MB-231细胞萎缩，细胞FAs数量减少，肌动蛋白丝组织紊乱(图7)，明显强于TAE226处理组。然而，定量分析显示，PTIO处理组抑制作用低于对照组。这些数据清楚地表明，Ⅰ6对细胞运动的抑制是通过局部黏附破坏介导的，而NO在其中起着不可或缺的作用。其他化合物的机制也是相同。
实施例11
本发明化合物Ⅰ6诱导MDA-MB-231细胞中FAK及其下游信号的自磷酸化。
Western blot检测MDA-MB-231细胞中蛋白表达水平。将细胞接种到细胞培养皿中，在37℃孵育24h，然后加入1、2、4μM的Ⅰ6和4μM的Ⅰ6(cPTIO)，孵育48h。分别取出FAK、p-FAK(ABCAM)、AKT(ABCAM)、p-AKT(CST)、SRC(ABCAM)、p53(PROTEINTECH)、MMP2(ABCAM)、MMP9(CST)和ACTIN(ABCAM)，置于恒温金属浴中煮沸3～5min，离心后倒出。用移液管或样品针按所需顺序将蛋白样品和蛋白标记器添加到电泳凝胶上的孔中。将膜浸入制备好的一抗溶液(抗体稀释比例为1:1000)中孵育过夜。回收一抗，用20mL TBST室温洗涤膜10min，重复3次。根据一抗选择二抗。用5％脱脂乳TBST溶液按1:5000制备二抗，将膜浸泡在二抗溶液中室温孵育约1h。将胶片放入成像仪，设置参数，开始曝光，调整亮度和对比度，并保存图像。
为了进一步了解Ⅰ6抗tnbc活性的分子机制，我们使用TAE226作为对照，通过western blotting检测了Ⅰ6对MDA-MB-231细胞中FAK介导的信号通路的调节作用(图8)。我们观察到，虽然Ⅰ6没有改变MDA-MB-231细胞中FAK的表达水平，但Ⅰ6以剂量依赖性方式有效地抑制了Y397的自磷酸化。重要的是，在相同剂量下，Ⅰ6对Y397自磷酸化的调节作用显著强于TAE226，并被carboxy-PTIO预处理后减弱。这些结果表明，Ⅰ6对Y397自磷酸化的有效抑制作用，至少部分是由于Ⅰ6处理后产生的高水平NO抑制了整合素的表达。尽管Ⅰ6对TAE226对FAK激酶的抑制作用较弱，但它对Y397的自磷酸化具有更好的调节作用，这可能是因为除了Y397的自磷酸化外，FAK还可以被多种因素(如特定的生长因子和其他酪氨酸磷酸化位点)激活。此外，我们关注了Ⅰ6对p53表达的影响，而p53表达与FAK的激酶非依赖性功能相关。事实上，Ⅰ6处理产生的NO有利于增强p53的表达。TAE226可上调p53的表达，这是由于FAK和p53之间的反馈机制的调节。western blot结果显示，Ⅰ6通过降低p-AKT、MMP-2和MMP-9的相对表达量有效地阻断了FAK介导的信号通路，且呈剂量依赖性，效果优于TAE226。与之形成鲜明对比的是，羧基PTIO预处理显著减弱了Ⅰ6的抑制作用。因此，与TAE226相比，Ⅰ6对FAK信号通路中的效应靶点有更明显的作用，这可能是由于TAE226支架和呋氧嘧啶产生的高水平NO的协同作用，抑制了FAK的激酶催化功能和非激酶功能，最终导致了抗TNBC活性。
实施例12
本发明化合物Ⅰ6诱导MDA-MB-231细胞凋亡。
取对数生长期MDA-MB-231细胞接种于6孔板(1×105个/孔)。待细胞贴壁后，加入相应含药培养基。收集细胞，PBS洗涤，FITC-Annexin-V和PI染色。采用流式细胞仪(BECKMANCOULTER CytoFLEX)检测细胞凋亡。
既往研究表明，FAK和NO均可通过调控凋亡相关信号和蛋白(如p53)的表达，诱导癌细胞凋亡。考虑到杂交种和TAE226对癌细胞的抗肿瘤活性与激酶抑制活性不一致，我们进一步研究Ⅰ6对MDA-MB-231细胞凋亡的诱导作用，以更好地阐明这些化合物抑制细胞增殖的机制。
如图9所示，化合物Ⅰ6显著增加MDA-MB-231细胞的凋亡程度，且呈剂量依赖性，在0.1、0.2和0.4μM浓度下，其凋亡率分别为18.58％、25.98％和71.02％，且Ⅰ6诱导细胞凋亡的能力明显强于对照TAE226。同时，Ⅰ3、Ⅰ5和Ⅰ12也具有明显比相同浓度的TAE226更强的诱导细胞凋亡的能力，Ⅰ1、Ⅰ2、Ⅰ4、Ⅰ13、Ⅰ14、Ⅰ15、Ⅰ16、Ⅰ17、Ⅰ20效果略差于Ⅰ6。
实施例13
本发明化合物Ⅰ6在体内抑制三阴性乳腺癌转移
采用尾静脉接种MDA-MB-231细胞的方法建立肺转移瘤模型。将小鼠随机分为4组(n＝4/组)。化合物Ⅰ6(15和30mg/kg)和TAE226(30mg/kg)溶解于0.5％ CMC-Na的混悬液中，从成功建立模型开始每天给药(po)，共6周。每3天记录体重。取肺组织行HE染色并拍照。
肿瘤转移涉及的复杂生理事件是导致抗癌治疗失败的最主要原因。因此，我们在尾静脉实验MDA-MB-231转移瘤动物模型上评价了化合物Ⅰ6的体内抗肿瘤活性。小鼠接种24h后随机分为治疗组(n＝3)，每天分别给予Ⅰ6(15mg/kg、30mg/kg)或阳性对照TAE226(30mg/kg)治疗，随访6周。结果显示，化合物Ⅰ6在治疗期间没有导致体重显著下降且小鼠体重均高于阳性药组(图10C)。肺是乳腺癌最常见的转移部位之一。以肺表面转移的总数作为初步定量分析。如图10B所示，Ⅰ6具有明显的抑制肿瘤转移作用，且优于同剂量阳性对照TAE226。为了更直观地测量肿瘤负荷，采集肺器官进行H&E染色分析(图10D)。值得注意的是，化合物Ⅰ6抑制了肝转移瘤的大小和数量。肿瘤组织组织学分析显示，各给药组肿瘤细胞均有部分坏死，出现核固缩和核溶解现象，以Ⅰ6(30mg/kg)组最为明显。同时，Ⅰ3、Ⅰ5和Ⅰ12也具有明显比相同浓度的TAE226更强的抑制肿瘤转移作用，Ⅰ1、Ⅰ2、Ⅰ4、Ⅰ13、Ⅰ14、Ⅰ15、Ⅰ16、Ⅰ17、Ⅰ20效果略差于Ⅰ6。
本发明设计并合成了一系列NO供体型FAK激酶抑制剂I1～I20，均具有良好的抗三阴乳腺癌体外活性，其中I3、I5、I6和I12的体外抗增殖活性优于阳性药TAE226，尤其是化合物I6，其抗MDA-MB-231细胞的IC50值是TAE226的8倍。进一步研究药物作用机制，化合物I6通过抑制FAK磷酸化和增强p53表达破坏局部黏附浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞的侵袭、转移能力，同时也浓度依赖性地促进肿瘤细胞凋亡。探究NO的协同作用过程中发现化合物抗增值活性与细胞内NO释放量成正比。小鼠体内实验结果表明，化合物I6在确保安全性的基础上能有效抑制三阴乳腺癌转移。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种2,4-二苯胺嘧啶衍生物，或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述2,4-二苯胺嘧啶衍生物如通式Ⅰ所示：
其中：L选自：C1-C12直链或支链烷烃、取代的C1-C12直链或支链烷烃、C2-C6炔烃、取代的C2-C6炔烃、C2-C6烯烃、取代的C2-C6烯烃、C3-C8环烷烃、取代的C3-C8环烷烃、苯环、取代苯环；
所述取代的C1-C12直链或支链烷烃、取代的C2-C6炔烃、取代的C2-C6烯烃、取代的C3-C8环烷烃和取代苯环中的取代基选自：C1-C6直链或支链烷烃、卤素、氨基、羧基、苯基、苄基、苯基氧基、＝O、卤代烷基、羟基、烷氧基、芳基烷基、环烷基、烷基氨基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述L选自：C3-C12直链烷烃、取代的C3-C12直链烷烃、C2-C4炔烃、取代的C2-C4炔烃、C2-C4烯烃、取代的C2-C4烯烃、取代的C3-C6环烷烃；
所述取代的C3-C12直链烷烃、取代的C2-C4炔烃、取代的C2-C4烯烃、取代的C3-C6环烷烃和取代苯环中的取代基为1-3个，取代基为C1-C4烷烃。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述取代的C3-C6环烷烃和取代苯环中的取代基为1-2个，所述取代的C3-C6环烷烃和取代苯环中的2个取代基的取代位置在间位或者对位。
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自以下化合物：所述L选自：
5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自以下化合物：
6.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，通式Ⅰ所示的化合物的合成路线如下：
所述制备方法包括以下步骤：
A、化合物Ⅱ与化合物Ⅲ在溶剂状态、一定温度下加酸反应得到化合物Ⅳ；
B、化合物Ⅳ与化合物Ⅴ在溶剂状态、加条件试剂，反应得到化合物Ⅰ。
7.根据权利要求6所述化合物的制备方法，其特征在于，
所述步骤A中，溶剂为异丙醇、乙醇中的一种或两种；酸为盐酸；反应温度为90-100℃；所述步骤B中，溶剂为无水N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的一种或两种；条件试剂为碳二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶中的一种或两种；反应温度为室温。
8.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1-5任一项所述的化合物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐及可药用的载体、佐剂或媒剂。
9.如权利要求1-5任一项所述的所述化合物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肿瘤药物、NO供体型FAK激酶抑制剂或释放外源性高浓度NO强化药物中的应用。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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